FI118792B - Käyttöjä T-solutoleranssin indusoinniksi kudos- tai elinsiirrännäiselle - Google Patents
Käyttöjä T-solutoleranssin indusoinniksi kudos- tai elinsiirrännäiselle Download PDFInfo
- Publication number
- FI118792B FI118792B FI964272A FI964272A FI118792B FI 118792 B FI118792 B FI 118792B FI 964272 A FI964272 A FI 964272A FI 964272 A FI964272 A FI 964272A FI 118792 B FI118792 B FI 118792B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- cell
- cells
- allogeneic
- tissue
- donor
- Prior art date
Links
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 title claims description 86
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 title claims description 50
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 title claims description 24
- 230000006698 induction Effects 0.000 title description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 188
- 101000868215 Homo sapiens CD40 ligand Proteins 0.000 claims description 137
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 claims description 136
- 101000759376 Escherichia phage Mu Tail sheath protein Proteins 0.000 claims description 135
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 74
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 53
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 46
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 42
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 42
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 42
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 39
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 34
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 26
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 24
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 24
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 claims description 22
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 20
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 17
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 16
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 16
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims description 15
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims description 15
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 claims description 14
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 12
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 12
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 11
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 11
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 claims description 9
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 9
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 9
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 101710131437 Gene 39 protein Proteins 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 210000001821 langerhans cell Anatomy 0.000 claims 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 24
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 19
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 230000006870 function Effects 0.000 description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 13
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 12
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 11
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 230000000961 alloantigen Effects 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000018704 Chitinase-3-Like Protein 1 Human genes 0.000 description 6
- 108010066813 Chitinase-3-Like Protein 1 Proteins 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 5
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 210000005104 human peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 4
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- -1 ··· Proteins 0.000 description 4
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 3
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 2
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 2
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 2
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 2
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010048748 Graft loss Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 2
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N Streptozotocin Natural products O=NN(C)C(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- PZJSVHARXVPCTD-UHFFFAOYSA-N fluoro(propoxy)phosphinic acid Chemical compound CCCOP(O)(F)=O PZJSVHARXVPCTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 2
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000270609 Caretta caretta Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 206010011968 Decreased immune responsiveness Diseases 0.000 description 1
- 101000756636 Dictyostelium discoideum Major actin Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 208000007241 Experimental Diabetes Mellitus Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102400000321 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 101150017040 I gene Proteins 0.000 description 1
- 235000003332 Ilex aquifolium Nutrition 0.000 description 1
- 235000002296 Ilex sandwicensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002294 Ilex volkensiana Nutrition 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 1
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 101710126321 Pancreatic trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 101100497639 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) CYR1 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 101000588258 Taenia solium Paramyosin Proteins 0.000 description 1
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000005059 dormancy Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 210000003297 immature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000002175 menstrual effect Effects 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000006938 muscular dystrophy Diseases 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 238000007500 overflow downdraw method Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 125000000446 sulfanediyl group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037317 transdermal delivery Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/001—Preparations to induce tolerance to non-self, e.g. prior to transplantation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/37—Digestive system
- A61K35/39—Pancreas; Islets of Langerhans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
- A61K39/4621—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells immunosuppressive or immunotolerising
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/46433—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/46434—Antigens related to induction of tolerance to non-self
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/26—Universal/off- the- shelf cellular immunotherapy; Allogenic cells or means to avoid rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
Description
118792 Käyttöjä T-solutoleransein indusoinniksi kudos- tai elin-siirrännäiselle
Keksinnön tausta 5 Antigeenispesifisten T-solujen aktivoitumisen ja solukloonien kasvun käynnistämiseksi on kahden antigeeniä esittävän solun (AP-solun) tuottaman signaalin päästävä elimistössä lepotilassa olevien T-lymfosyyttien pinnalle. [Jenkins, M. ja Schwartz, R., J. Exp. Med. 165 (1987) 302 -10 319; Mueller, D. L., et ai., J. Immunol. 144 (1990) 3701 - 3709; Williams, I. R. ja Unanue, E. R., J. Immunol. 145 (1990) 85 - 93] . Ensimmäinen signaali, joka tekee im muunivasteesta spesifisen, syntyy τ-solureseptorin (TCR) välityksellä sen jälkeen kun immunologinen järjestelmä on 15 tunnistanut MHC-kompleksin (Major Histocompatibility Complex) yhteydessä esitetyn vieraan antigeenisen peptidin. Toinen signaali, josta käytetään nimitystä apustimulaa-tiosignaali, käynnistää T-solujen lisääntymisen ja muuttaa ne toimintakykyisiksi [Schwartz, R. H., Science 248 (1990) 20 1349 - 1356]. Apustimulaatio ei ole antigeenispesifinen ei kä MHC-kompleksin suhteen rajoittuva ja sen arvellaan muo- *· " dostuvan AP-solujen yhtenä omana erillisenä tai useampina ·· J *·· erillisinä molekyyleinä solun pinnalla ilmentämän molekyy- • · ί,*·· Iin vaikutuksesta [Jenkins, M. K., et ai., J. Immunol. 140 *:* 25 (1988) 3324 - 3330; Linsley, P. S., et ai., J. Exp. Med.
··*· : 173 (1991) 721 - 730; Gimmi, C. D., et ai., Proc. Natl.
···
Acad. Sei. USA 88 (1991) 6575 - 6579; Young, J. W., et ai., J. Clin. Invest. 90 (1992) 229 - 237; Koulova, L. , et ai., #v< J. Exp. Med. 173 (1991) 759 - 762; Reiser, H., et ai., *:.V 30 Proc. Natl. Acad. Sei. USA 89 (1992) 271 - 275; • · **··* van-Seventer, GA., et ai., J. Immunol. 144 (1990) 4579 - *t1J 4586; LaSalle, J. M., et ai., J. Immunol. 147 (1991) 774 - 80; Dustin, M. I., et ai., J. Exp. Med. 169 (1989) 503; Ar- ··♦ . mitage, R. J., et ai., Nature 357 (1992) 80 - 82; Liu, Y., • · · *: " 35 et ai., J. Exp. Med. 175 (1992) 437 - 445]. Yksi apustimu- • · · laatioreaktiotie, jonka katsotaan saavan aikaan T-solujen 118792 2 aktivaation, sisältää T-solujen pinnalla olevan CD28-molekyylin. Tämä molekyyli voi ottaa vastaan B-solujen tai muiden AP-solujen pinnalla olevan ligandin tuottaman apu-stimulaatiosignaalin. CD28:n ligandeja ovat B-lymfosyytti-5 aktivaatioantigeenien B7-ryhmän jäsenet (kuten B7-1 ja/tai B7-2 [Freedman, A. S., et ai., J. Immunol. 137 (1987) 3260 - 3267; Freeman, G. J., et ai., J. Immunol. 143 (1989) 2714 - 2722; Freeman, G. J., et ai., J. Exp. Med. 174 (1991) 625 - 631; Freeman, G. J., et ai., Science 262 10 (1993) 909 - 911; Azuma, M., et ai., Nature 366 (1993) 76 - 79; Freeman, G. J., et ai., J. Exp. Med. 178 (1993) 2185 -2192]. B7-1 ja B7-2 ovat myös vielä yhden molekyylin, CTLA 4: n, ligandeja, joka molekyyli esiintyy aktivoitujen T-solujen pinnalla, vaikkakin CTLA4:n osuus apustimulaati-15 ossa on epäselvä.
Kun antigeenispesifinen signaali on tullut T-soluun yhdessä apustimulaatiosignaalin kanssa, niin tämä johtaa T-solun aktivaatioon, johon voi sisältyä sekä T-solujen lisääntyminen että sytokiinien erittyminen. Silloin kun anti-20 geenispesifinen signaali on tästä poiketen tullut T-soluun ilman apustimulaatiosignaalia, niin tämän arvellaan indu- • · · *· " soivan T-soluun reagoimattomuustilan eli anergian, mikä ·* : ’·· näin ollen indusoi T-solussa antigeenispesifisen tolerans- • · • · · „ •t ·· sin, *:1 25 T-solujen ja B-solujen välisillä vuorovaikutuksilla ·»·* ; ;1· on keskeinen osuus immuunireaktioissa. Humoraalisen immuni- * · · teetin indusoituminen kateenkorvasta riippuvaisia anti-geenejä vastaan vaatii "avuksi" auttaja-T-soluja (näistä käytetään tämän jälkeen nimitystä Th-solut). vaikkakin Th- • · · *,* 30 solujen vapauttamat liukoiset molekyylit (esimerkiksi lym- • · *·1·* fokiinit, kuten IL-4 ja IL-5) avustavat jossakin määrin J·1: B-lymfosyyttejä, niin B-solujen aktivaatio tarvitsee myös :***: B-solujen ja T-solujen välistä solujen kosketuksesta riip- ··* .* . puvaista vuorovaikutusta. Hirohata, et ai., J. Immunol. 140 • * · ; * 35 (1988) 3736 - 3744; Bartlett, et ai., J. Immunol. 143 • · · ’· (1989) 1745 - 1754. Tämä viittaa siihen, että B-solujen ak- 118792 3 tivaatioon sisältyy pakollinen vuorovaikutus B-solujen ja Th-solujen pinnalla esiintyvien molekyylien kesken. T-solujen molekyyli(t) toimii(vat) tästä syystä T-solun solujen kosketuksesta riippuvaisten auttaja-efektoritoimin-5 tojen välikappaleena. Käsitystä solujen kosketuksesta riippuvaisesta vuorovaikutuksesta B-solujen ja T-solujen pinnalla olevien molekyylien kesken tukee lisäksi se havainto, että aktivoituneiden T-solujen eristetyt plasmamembraanit voivat tuottaa B-solujen aktivaatioon tarvittavia auttaja-10 toimintoja. Brian, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85 (1988) 564 - 568; Hodgkin, et ai., J. Immunol. 145 (1990) 2025 -2034,- Noelle, et ai., J. Immunol. 146 (1991) 1118 - 1124.
On tunnistettu molekyyli, CD40, joka esiintyy kyp-symättömien ja kypsien B-lymfosyyttien pinnalla ja joka 15 vasta-aineisiin silloitettuna käynnistää B-solujen lisääntymisen. Valle, et ai., Eur. J. Immunol. 19 (1989) 1463 - 1467; Gordon, et ai., J. Immunol. 140 (1988) 1425 - 1430,-Gruber, et ai., J. Immunol. 142 (1989) 4144 - 4152. CD40:tä vastaava DNA-molekyyli on kloonattu ja luonnehdittu. Sta-20 menkovic, et ai., EMBO J. 8 (1989) 1403 - 1410. CD40:n li-gandia, gp39:ää (tästä käytetään myös nimitystä CD40:n li- *. ’ί gandi eli CD40L) vastaava DNA-molekyyli on myös kloonattu ·♦ • *·· ja luonnehdittu. Armitage, et ai.. Nature 357 (1992) 80 - ϊ/.ϊ 82; Lederman, et ai., J. Exp. Med. 175 (1992) 1091 - 1101; ··· 25 Hollenbaugh, et ai., EMBO J. 11 (1992) 4313 - 4319. gp39- ·*·· ; j*j proteiini ilmentyy aktivoitujen mutta ei lepovaiheessa ole- *·· vien CD4+Th-solujen pinnalla. Spriggs, et ai., J. Exp. Med.
* · » 176 (1992) 1543 - 1550; Lane, et ai., Eur. J. Immunol. 22 .. (1992) 2573 - 2578; Roy, et ai., J. Immunol. 151 (1993) 1 - i * * 1/. 30 14. Solut, joihin on transfektoitu gp39-geeni ja jotka il- • · *·;·* mentävät pinnallaan gp39-proteiinia, voivat laukaista *:**: B-solujen lisääntymisen ja yhdessä muiden stimuloivien sig- naalien kanssa voivat käynnistää vasta-aineiden muodostumi- • * · .* . sen. Armitage, et ai., Nature 357 (1992) 80 - 82; Hoi- • · ♦ 35 lenbaugh, et ai., EMBO J. 11 (1992) 4313 - 4319.
• · · • ·· • · 118792 4
Keksinnön yhteenveto
Solun pinnalla esiintyvät molekyylit, jotka toimivat T-solujen solujen kosketuksesta riippuvaisten auttaja-efektoritoimintojen välikappaleina, ovat tärkeitä sellais-5 ten immuunivasteiden indusoimiselle, joissa tarvitaan T-solujen apua. Esimerkiksi T-solujen pinnalla esiintyvän gp39:n vuorovaikutuksella B-solujen pinnalla esiintyvän CD40:n kanssa on keskeinen osuus antigeeniä vastaan suunnattujen B-soluvasteiden aktivoimisessa. Tämä keksintö pe-10 rustuu ainakin osaksi siihen löytöön, että T-solujen solujen kosketuksesta riippuvaisten auttaja-efektoritoimintojen välikappaleina toimivilla solun pinnan molekyyleillä on myös ratkaiseva osuus T-solujen vasteessa alloantigeenejä vastaan. Erityisesti on tehty se löytö, että kun gp39:n 15 vuorovaikutus sellaisen allogeenisen solun pinnalla olevan ligandin kanssa, joka esittää alloantigeenejä T-solulle, estetään, niin tämä voi sopivissa olosuhteissa saada aikaan toleranssin T-solussa. T-solulle alloantigeenejä esittävältä solulta vaaditaan edullisesti sitä, että solun pinnalla 20 olevan gp39:n ligandin ja T-solun pinnalla olevan gp39:n välinen vuorovaikutus kykenee tuottamaan T-solun aktivaati- • · *.**: oon tarvittavia signaaleja. Kun allogeenisen solun pinnalla ·· • 1·· olevan gp39:n ligandin vuorovaikutus T-solun pinnalla ole- ί\ί van gp39:n kanssa estetään, niin tämä estää T-solun akti- • · ··· 25 vaation ja saa pikemminkin aikaan alloantigeenispesifisen • · · . T-solun toleranssin. Tässä keksinnössä kuvatulla tavalla • · · tehtävää T-solun toleranssin indusoimista alloantigeenejä • f » vastaan voidaan käyttää valmistelevana hoito-ohjelmana ku- . . dosten tai elinten siirtoa varten.
• * » 30 Tämän mukaisesti keksintö koskee a) allogeenisen • · *·;·1 tai ksenogeenisen solun, joka ilmentää vähintään yhtä luo- ·;·*: vuttajan antigeeniä ja jonka pinnalla esiintyy ligandi, jo- :***; ka osallistuu vuorovaikutukseen vastaanottajan T-solun pin- • · · . nalla esiintyvän gp39:n kanssa, ja b) gp39:n antagonistin • · · " 35 käyttöä valmistettaessa yhdistettyä valmistetta samanai- • 1 1 * 1; kaista, erillistä tai peräkkäistä käyttöä varten luovutta- 118792 5 jän kudokseen tai elimeen kohdistuvan T-solutoleranssin in-dusoimiseksi tämän kudoksen tai elimen vastaanottajassa sillä edellytyksellä, että kun allogeeninen tai ksenogeeni-nen solu on allogeeninen solu, luovuttajan kudos tai elin 5 käsittää haiman solusaarekkeita, maksaa, munuaista, sydäntä, keuhkoa, ihoa, lihasta, hermokudosta, mahaa tai suolta. Antagonisti estää T-solun pinnalla esiintyvän molekyylin ja tämän allogeenisen tai ksenogeenisen solun pinnalla sijaitsevan ligandin välisen vuorovaikutuksen.
10 Tämä keksintö koskee myös a) allogeenisen tai kse nogeenisen solun, joka ilmentää vähintään yhtä luovuttajan antigeeniä ja jonka pinnalla esiintyy ligandi, joka osallistuu vuorovaikutukseen vastaanottajan T-solun pinnalla esiintyvän gp39:n kanssa, ja b) gp39:n antagonistin, ja c) 15 luovuttajan haiman solusaarekesolujen käyttöä valmistettaessa yhdistettyä valmistetta samanaikaista, erillistä tai peräkkäistä käyttöä varten diabeteksen hoidossa.
Lisäksi keksintö koskee a) luovuttaja-allogeenisen solun, joka ilmentää vähintään yhtä luovuttajan antigeeniä 20 ja jonka pinnalla esiintyy ligandi, joka osallistuu vuorovaikutukseen vastaanottajan T-solun pinnalla esiintyvän • · gp39:n kanssa, ja b) gp39:ää vastaan suunnatun vasta-aineen »* • 1·· käyttöä valmistettaessa yhdistettyä valmistetta samanai- :\i kaista, erillistä tai peräkkäistä käyttöä varten luovutta- ··· 25 jän kudokseen tai elimeen kohdistuvan T-solutoleranssin in- ···· . dusoimiseksi tämän kudoksen tai elimen vastaanottajassa, «·« jolloin luovuttaja-allogeeninen solu ja gp39:ää vastaan • » » suunnattu vasta-aine annetaan vastaanottajalle ennen kudok- . . sen tai elimen siirtoa, jolloin luovuttajan kudos tai elin • · · 30 käsittää haiman solusaarekkeita, maksaa, munuaista, sydän- • * '···1 tä, keuhkoa, ihoa, lihasta, hermokudosta, mahaa tai suolta.
*:··: Vielä lisäksi tämä keksintö koskee gp39:n anta- :2: gonistin käyttöä sellaisen valmisteen valmistamiseksi, joka .* . on tarkoitettu luovuttajan kudokseen tai elimeen kohdistu- • · · *j 35 van T-solutoleranssin indusoimiseksi vastaanottajassa, joka • · · 2 *· tullaan altistamaan allogeenisille tai ksenogeenisille so- 118792 6 luille, jotka ilmentävät vähintään yhtä luovuttajan antigeeniä ja joiden pinnalla esiintyy ligandi, joka osallistuu vuorovaikutukseen vastaanottajan T-solun pinnalla esiintyvän gp39:n kanssa, sillä edellytyksellä, että kun allo-5 geeniset tai ksenogeeniset solut ovat allogeenisia soluja, luovuttajan kudos tai elin käsittää haiman solusaarekkeita, maksaa, munuaista, sydäntä, keuhkoa, ihoa, lihasta, hermo-kudosta, mahaa tai suolta.
Keksinnön mukaisesti antagonisti on molekyyli, joka 10 estää T-solun pinnalla esiintyvän gp39:n vuorovaikutuksen allogeenisen tai ksenogeenisen solun pinnalla esiintyvän gp39:n ligandin kanssa. Erityisen edullinen gp39:n antagonisti on gp39:ää vastaan suunnattu vasta-aine. Toisessa so-vellutusmuodossa gp39:n antagonisti on gp39:n ligandin liu-15 koinen muoto, esimerkiksi liukoinen CD40. Vastaanottajalle annettava allogeeninen tai ksenogeeninen solu on edullisesti lymfoidisolu, esimerkiksi B-solu. Vaihtoehtoisesti allogeeninen tai ksenogeeninen solu on pieni lepovaiheessa oleva B-solu. Vastaanottajana olevalle potilaalle annetaan al-20 logeenistä tai ksenogeenistä solua ja antagonistia (esimerkiksi gp39:ää vastaan suunnattua vasta-ainetta) tyypilli- • · sesti ennen kudoksen tai elimen siirtoa vastaanottajaan.
Φ* • *·· Esimerkiksi potilaalle annetaan luovuttajan kudoksesta tai it*.j elimestä peräisin olevia lymfoidisolu ja (esimerkiksi B- ··· 25 soluja) yhdessä antagonistin kanssa ennen kudoksen tai eli- • .*. men siirtoa vastaanottajaan.
···
Lyhyt kuvaus piirroksista *·* *
Kuvio 1 on graafinen esitys, joka kuvaa siirretty- . . jen haiman solusaarekeallograftien elinkykyä kemiallisin • « · ;]·* 30 keinoin diabeettisiksi tehdyissä hiirissä, joita on käsi- • · telty etukäteen pelkällä gp39:ää vastaan suunnatulla vasta-*:*·: aineella tai joita on esikäsitelty pelkillä fraktioimatto- ;**'· millä tai fraktioiduilla allogeenisillä pernasoluilla.
s·· .* . Kuviot 2A ja 2B ovat graafisia esityksiä, jotka ku- • · *; ** 35 vaavat siirrettyjen haiman solusaarekeallograftien elinky- • · · '· *! kyä määritettynä veriplasman glukoosikonsentraation piene- 118792 7 nemisenä kemiallisin keinoin diabeettisiksi tehdyissä hiirissä, joita on käsitelty etukäteen yhdellä annoksella fraktioituja allogeenisia pernasoluja yhdessä gp39:ää vastaan suunnatun vasta-aineen (MRl) kanssa käsittelyn ollessa 5 joko kaksi viikkoa (osakuvio A) tai seitsemän viikkoa (osa-kuvio B). Kukin käyrä edustaa yksittäisestä hiirestä peräisin olevia koetuloksia. Avoimet symbolit merkitsevät vastaanottajia, jotka menettivät saarekeallograftin spontaanisti. Täytetyt symbolit esittävät hiiriä, joiden saareke-10 siirteet olivat toimintakykyisiä kokeiden päättyessä.
Kuviot 3 A, B ja C ovat virtaussytometrisia profiileja, jotka kuvaavat kuuden tunnin ajan aktivoitujen ihmisen periferaalisen veren lymfosyyttien värjäytymistä joko CD40lg:lla (osakuvio A), mAb 4D9-8:lla (osakuvio B) tai mAb 15 4D9-9:lla (osakuvio C).
Kuviot 4 A, B ja C ovat virtaussytometrisiä profiileja, jotka kuvaavat kuuden tunnin ajan aktivoitujen ja syklosporiini A:n läsnä ollessa viljeltyjen ihmisen periferaalisen veren lymfosyyttien värjäytymistä mAb 4D9-8:lla 20 (osakuvio A), mAb 4D9-9:llä (osakuvio B) tai CD40lg:llä (osakuvio C).
• « *.**· Kuviot 5 A ja B ovat virtaussytometrisiä profiile- ·· • *·· ja, jotka kuvaavat kuuden tunnin ajan aktivoitujen ihmisen i\j periferaalisen veren lymfosyyttien värjäytymistä CD40lg:lla ·{· 25 leimalla varustamattoman mAb4D9-8:n (osakuvio A) tai lei- . maila varustamattoman mAb 4D9-9:n (osakuvio B) läsnä olles- • · · • tt ··· S3..
• · ·
Kuvio 6 on graafinen esitys, joka esittää liukoi-.. sella gp39:llä ja iL4:llä indusoidun humaani-B-solun li- • m · 30 sääntymisen inhibitiota viljeltäessä soluja humaani-gp39 :ää • · *···* vastaan suunnattujen mAb-molekyylien 4D9-8, 4D9-9, 24-31, *:··; 24-43, 89-76 tai 89-79 läsnä ollessa.
·***· Kuvio 7 on graafinen esitys, joka esittää allos- «·φ 4.* , pesifistä sekalymfosyyttiviljelmän (mixed lymphocyte res- ; *! 35 ponse) inhibitiota viljeltäessä soluja humaani-gp39:ää vas- * * · • *· • · 118792 8 taan suunnattujen mAb-molekyylien 24-31 tai 89-79:n läsnä ollessa.
Keksinnön yksityiskohtainen selitys Tässä keksinnössä on kuvattu luovuttajan kudokseen 5 tai elinsiirteeseen kohdistuvan T-solutoleranssin aikaansaamista siirteen vastaanottajassa in vivo -olosuhteissa. Tähän sisältyy a) allogeenisen tai ksenogeenisen solun, joka ilmentää vähintään yhtä luovuttajan antigeeniä ja jonka pinnalla esiintyy ligandi, joka osallistuu vuorovaikutuk-10 seen vastaanottajan T-solun pinnalla esiintyvän gp39:n kanssa, ja b) gp39:n antagonistin käyttö valmistettaessa yhdistettyä valmistetta samanaikaista, erillistä tai peräkkäistä käyttöä varten luovuttajan kudokseen tai elimeen kohdistuvan T-solutoleranssin indusoimiseksi tämän kudoksen 15 tai elimen vastaanottajassa sillä edellytyksellä, että kun allogeeninen tai ksenogeeninen solu on allogeeninen solu, luovuttajan kudos tai elin käsittää haiman solusaarekkeita, maksaa, munuaista, sydäntä, keuhkoa, ihoa, lihasta, hermo-kudosta, mahaa tai suolta.
20 Tässä keksinnössä termi "vastaanottaja" tarkoittaa potilasta, jolle kudoksen tai elimen siirtoa ollaan par- • · :.*·· haillaan suorittamassa tai tämä on jo suoritettu. Tässä ·· • *.. keksinnössä "allogeeninen" solu on solu, joka tulee sen sa- man lajin eri yksilöltä kuin mihin vastaanottaja kuuluu ja * · ··· 25 joka ilmentää "alloantigeenejä", jotka poikkeavat vastaan- ···· . .·. ottajan solujen ilmentämistä antigeeneistä. "Ksenogeeninen" #·* * .···, solu tulee vastaanottajan eläinlajista poikkeavalta lajilta • » · ja tämä ilmentää "ksenoantigeenejä", jotka poikkeavat vas- . . taanottajan solujen ilmentämistä antigeeneistä. "Luovutta- • * * *^** 30 jän antigeenit" tarkoittavat tässä keksinnössä vastaanotta- • · *···* jaan siirrettäväksi tarkoitetun luovuttajan kudoksen tai *:··· elinsiirteen ilmentämiä antigeenejä. Luovuttajan antigeenit .**·. voivat siirteen lähtömateriaalin mukaan olla alloantigeene- i·· .· , jä tai ksenoantigeenejä. Vastaanottajalle osana siedätys- « » « *· *· 35 hoito-ohjelmaa annettu alloantigeeninen tai ksenoantigeeni- • · · *. *ί nen solu ilmentää luovuttajan antigeenejä, toisin sanoen se 118792 9 ilmentää joitakin tai kaikkia niitä samoja antigeenejä, joita luovuttajan siirrettävässä kudoksessa tai elimessä esiintyy. Allogeeninen tai ksenogeeninen solu tulee edullisesti kudoksen tai elinsiirteen luovuttajalta mutta tämä 5 voi tulla yhdestä tai useammasta materiaalilähteestä, joilla on yhteisiä antigeenisiä determinantteja luovuttajan kanssa.
Osana siedätyshoito-ohjelmaa vastaanottajalle annetaan allogeenisen tai ksenogeenisen solun lisäksi sen 10 τ-solujen pinnalla olevan molekyylin antagonisteja, joka toimii solujen kosketuksesta riippuvaisten auttajaefektori-toimintojen välikappaleena. Tässä keksinnössä määritellyllä tavalla on molekyyli tai reseptori, joka toimii solujen kosketuksesta riippuvaisten auttaja-efektoritoimintojen vä-15 likappaleena, molekyyli, joka ilmentyy Th-solun pinnalla ja joka osallistuu itsensä ja efektorisolun (esimerkiksi B-solun) pinnalla olevan ligandin väliseen vuorovaikutukseen, jossa molekyylin vuorovaikutus ligandinsa kanssa on välttämätön efektorisoluvasteen (esimerkiksi B-solujen ak-20 tivaation) muodostumiselle. Sen lisäksi, että tällainen molekyyli osallistuu efektorisoluvasteisiin, on sen tai re- • 1 \1·· septorin havaittu tässä keksinnössä osallistuvan antigeeniä ϊ vastaan suunnattuun T-soluvasteeseen. Se T-solun pinnalla :1·.· oleva molekyyli, joka toimii solujen kosketuksesta riippu- « · •ϊ. 25 vaisen auttaja-efektoritoiminnon välikappaleena, on gp39.
···· . .·. Tämän mukaan tämän keksinnön mukaiset käytöt sisältävät ·β· ♦ .··1. edullisissa sovellutusmuodoissa sen, että siirteen vastaan- • · 1 ottajalle annetaan allogeenista tai ksenogeenista solua ja gp39:n antagonistia. Allogeenisen tai ksenogeenisen solun • · f *^1‘ 30 aikaansaama vastaanottajan T-solujen aktivaatioon sisältyy • · '··»1 vastaanottajan T-solujen pinnalla olevan gp39:n ja allo- ·:1·; geenisen tai ksenogeenisen solun pinnalla olevan gp39:n li- gandin välinen vuorovaikutus. Kun tämä vuorovaikutus gp39:n ··· ,1 , antagonistia käyttäen estetään, niin allogeenisen tai kse- • · · *· 1| 35 nogeenisen solun ilmentämät luovuttajan antigeenit eivät ί aktivoi vastaanottajan T-soluja vaan nämä tulevat pikemmin- 118792 10 kin toleranteiksi luovuttajan antigeeneille. Kun vastaanottajassa saadaan muodostumaan toleranssi luovuttajan antigeenejä kohtaan, niin tämä tekee mahdolliseksi saavuttaa suotuisat tulokset luovuttajan kudoksen tai elimen siirros-5 sa eikä immuunijärjestelmä hylji luovuttajan siirrettä.
Tämän keksinnön useat eri kohteet on kuvattu seu-raavissa alakappaleissa.
I gp39:n antagonistit Tämän keksinnön mukaisesti annetaan gp39:n anta-10 gonistia vastaanottajalle sen vuorovaikutuksen estämiseksi, joka tapahtuu vastaanottajan T-solujen pinnalla olevan gp39:n ja vastaanottajalle annettavan allogeenisen tai kse-nogeenisen solun, kuten B-solun, pinnalla olevan gp39:n li-gandin välillä. Gp39:n antagonisti määritellään molekyylik-15 si, joka estää tämän vuorovaikutuksen. gp39:n antagonisti voi olla gp39:ää vastaan suunnattu vasta-aine (esimerkiksi gp39:ää vastaan suunnattu monoklonaalinen vasta-aine), gp39:ää vastaan suunnatun vasta-aineen fragmentti tai johdannainen (esimerkiksi Fab- tai F(ab)'2-fragmentit, kimee-20 riset vasta-aineet tai humanisoidut vasta-aineet), gp39:n ligandin liukoiset muodot (esimerkiksi liukoinen CD40), • · !.*·: gp39:n ligandin fuusioproteiinin liukoiset muodot (esimer- : kiksi liukoinen CD40lg) tai farmaseuttiset aineet, jotka ·’·,· keskeyttävät gp39:n ja CD40:n välisen vuorovaikutuksen tai • · 25 estävät sen.
···· . A. Vasta-aineet • · *
Nisäkäs (esimerkiksi hiiri, hamsteri tai kaniini) • · · voidaan immunisoida gp39-proteiinin tai -proteiinifragmen-. , tin (esimerkiksi peptidifragmentin) immunogeenisella muo- « · i *·*·* 30 dolla, mikä saa aikaan vasta-ainevasteen syntymisen nisäk- • · · • · käässä. Immunogeeninä voidaan myös käyttää solua, joka il- « ·;··· mentää pinnallaan gp39-.ää. Vaihtoehtoisia immunogeene j ä ovat puhdistettu gp39-proteiini tai -proteiinifragmentit.
gp39 voidaan puhdistaa gp39:ää ilmentävästä solusta taval- • · « *· *J 35 lisillä puhdistusmenetelmillä. Lisäksi gp39:n cDNAita [Ar- • · *.**: mitage, et ai., Nature 357 (1992) 80 - 82; Lederman, et 118792 11 ai., J. Exp. Med. 175 (1992) 1091 - 1101; Hollenbaugh, et ai., EMBO J. 11 (1992) 4313 - 4319] voidaan ilmentää isän-täsolussa, esimerkiksi bakteereissa tai nisäkässolulinjässä, ja gp39-proteiini voidaan puhdistaa soluviljelmistä ta-5 vanomaisin menetelmin. Vaihtoehtoisesti voidaan gp39- peptidejä syntetoida gp39:n aminohapposekvenssin [tämä on kuvattu julkaisuissa Armitage, et ai., Nature 357 (1992) 80 - 82; Lederman, et ai., J. Exp. Med. 175 (1992) 1091 -1101; Hollenbaugh, et ai., EMBO J. 11 (1992) 4313 - 4319] 10 perusteella tunnettuja menetelmiä käyttäen (esimerkiksi syntetoimalla kemiallisesti F-moc-menetelmällä tai T-boc-menetelmällä). Menetelmiä proteiinin tekemiseksi immuno-geeniseksi ovat menetelmät, joilla proteiineja konjugoidaan kantaja-aineisiin, tai muut tällä alalla tunnetut menetel-15 mät. Proteiinia voidaan esimerkiksi antaa adjuvantin läsnä ollessa. Immunisoitumisen edistymistä voidaan seurata havaitsemalla vasta-ainetiittereitä veriplasmasta tai seerumista. Vasta-ainepitoisuuksien määrittämiseen voidaan käyttää tavallista ELISA-määritystä tai jotakin muuta immuno-20 määritystä, jossa antigeeninä käytetään immunogeeniä.
Immunisoinnin jälkeen voidaan saada antiseerumeja, • * ja seerumista voidaan haluttaessa eristää polyklonaalisia vasta-aineita. Monoklonaalisten vasta-aineiden valmistami- •\· seksi voidaan vasta-ainetta tuottavia soluja (lymfosyytte- • · 25 jä) ottaa talteen immunisoidusta eläimestä ja nämä voidaan . ,·, fuusioida myeloomasoluihin tavanomaisilla somaattisten so- • · · \Y. lujen fuusiointimenetelmillä, mikä siten tekee nämä solut · · • · · * jatkuvasti kasvaviksi ja näistä saadaan hybridoomasoluja. Nämä menetelmät ovat tällä alalla tunnettuja. Esimerkkejä • · · '·'·* 30 näistä ovat alun perin Kohlerin ja Milsteinin kehittämä • ♦ hybridoomamenetelmä [Nature 256 (1975) 495 - 497] sekä muut menetelmät, kuten humaani-B-soluhybridoomamenetelmä [Koz- .···, bar, et ai., Immunol. Today 4 (1983) 72], monoklonaalisten • · *·* humaani-vasta-aineiden valmistamiseen käytettävä EBV- • · ·. *ϊ 35 hybridoomamenetelmä [Cole, et ai., Monoclonal Antibodies in • ·
Cancer Therapy (1985) (Allen R. Bliss, Inc., s. 77 - 96] ja kombinatoriaalisten vasta-ainekirjastojen seulonta [Huse, et al., Science 246 (1989) 1275]. Hybridoomasoluista voi 118792 12 daan seuloa immunokemiallisesti esiin proteiinin tai peptidin kanssa spesifisesti reagoivia vasta-aineita tuottavat 5 solut ja näistä voidaaan eristää monoklonaalisia vasta- aineita.
Termiin vasta-aine on tässä keksinnössä tarkoitettu sisältyvän tämän fragmentit, jotka reagoivat spesifisesti gp39-proteiinin tai tästä peräisin olevan peptidin kanssa 10 tai gp39-fuusioproteiinin kanssa. Vasta-aineita voidaan fragmentoida tavanomaisin menetelmin ja fragmenteille voidaan suorittaa seulonta samalla tavoin kuin mitä edellä oli kuvattu kokonaisten vasta-aineiden kyseessä ollessa. Esimerkiksi F (ab') 2-fragmentteja voidaan valmistaa käsittele-15 mällä vasta-ainetta pepsiinillä. Tulokseksi saatua F(ab')2-fragmenttia voidaan käsitellä niin, että disulfidisillat pelkistyvät, mistä saadaan Fab'-fragmentteja. Tarkoituksena on lisäksi se, että tämän keksinnön mukainen vasta-aine sisältää gp39:ää vastaan suunnatun osan sisältäviä bispesifi-20 siä ja kimeerisiä molekyylejä.
Kun ihmisissä käytetään terapeuttisiin tarkoituk- « · ί/·· siin vasta-aineita, joita on valmistettu sellaisten eläin- lajien yksilöissä, jotka eivät kuulu ihmislajiin, niin ih- ;*·.· misen elimistö tunnistaa ne vaihtelevassa määrin vieraiksi * · 25 ja potilaassa voi syntyä immuunivaste. Yksi yleistä im- • M· . .·, muunisupressiota edullisempi lähestymistapa tämän ongelman • · * y.‘.' vähentämiseksi tai poistamiseksi on valmistaa kimeerisiä • · · ' vasta-ainejohdannaisia, toisin sanoen vasta-ainemolekyy- lejä, jossa eläimestä peräisin oleva ei-humaani vaihteleva • * * *·*·* 3 0 alue on yhdistetty ihmisen muuttumattomaan alueeseen. Ki- • · · *...* meeriset vasta-ainemolekyylit voivat sisältää esimerkiksi ...·· hiiren, rotan tai jonkin muun lajin vasta-aineesta peräisin ,···. olevan antigeeniä sitovan domeenin ja ihmisen muuttumatto- m mat alueet. Kimeeristen vasta-aineiden valmistamiseksi on * · *. *: 35 kuvattu useita erilaisia lähestymistapoja, joita voidaan • · \**: käyttää sellaisten kimeeristen vasta-aineiden valmistami- 118792 13 seen, jotka sisältävät gp39:n tunnistavan iitimunoglobuliinin vaihtelevan alueen. Tätä kysymystä on käsitelty esimerkiksi julkaisuissa Morrison, et ai., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 81 (1985) 6851; Takeda, et ai.. Nature 314 (1985) 452; Ca-5 billy, et ai., US-patenttijulkaisu nro 4 816 567; Boss, et ai., US-patenttijulkaisu nro 4 816 397; Tanaguchi, et ai., EP-patenttijulkaisu 171 496; EP-patenttijulkaisu 173 494, GB-patenttijulkaisu 2 177 096B. Tällaisten kimeeristen vasta-aineiden odotetaan olevan potilaassa vähemmän immuno-10 geenisiä kuin vastaavan ei-kimeerisen vasta-aineen.
gp39-proteiinin tai peptidin kanssa spesifisesti reagoivat monoklonaaliset tai kimeeriset vasta-aineet voidaan terapeuttisiin tarkoituksiin ihmisille vielä lisäksi humanisoida valmistamalla ihmisen vaihtelevan alueen sisäl-15 täviä kimeeroita, joissa osia vaihtelevista alueista, erityisesti vasta-ainetta sitovan domeenin kehys (framework) -alueet, ovat peräisin ihmiseltä ja ainoastaan runsaasti vaihtelevat alueet ovat peräisin muista eläinlajeista kuin ihmislajista. Tällaisia muunnettuja immunoglobuliinimole-20 kyylejä voidaan valmistaa millä tahansa tällä alalla tunnetuista useista menetelmistä [esimerkiksi Teng, et ai., Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 80 (1983) 7308 - 7312; Kozbor, et ai., immunology Today 4 (1983) 7279; Olsson, et ai., .*.4| Meth. Enzymol. 92 (1982) 3 - 16], ja niitä valmistetaan 25 edullisesti PCT-julkaisuissa W092/06 193 .tai EP 0 239 401 ] t.# kuvattujen ohjeiden mukaisesti. Humanisoidut vasta-aineet • · · "I voivat olla kaupallisesti valmistettuja ja näitä tuottavat • t · • * · * esimerkiksi yhtiö Scotgen Limited, 2 Holly Road, Twickenham, Middlesex, Iso-Britannia.
• · • · · 30 Vielä yksi menetelmä gp39-proteiinia tai -peptidiä • · · vastaan reagointikykyisten spesifisten vasta-aineiden tai ....: vasta-ainefragmenttien valmistamiseksi on seuloa gp39- ,···, proteiinilla tai -peptidillä immunoglobuliinigeenejä tai • · *" näiden osia koodaavia bakteereissa ilmennettyjä ilmentämis- • · ·.*·: 35 kirjastoja. Esimerkiksi täydellisiä Fab- fragment te ja, VH- • * :.*·· alueita ja FV-alueita voidaan ilmentää bakteereissa käyttä- 1 1 8792 14 en faagi-ilmentämiskirjastoja. Näitä kysymyksiä on käsitelty esimerkiksi julkaisuissa Ward, et ai.. Nature 341 (1989) 544 - 546,- Huse, et ai., Science 246 (1989) 1275 - 1281 ja McCafferty, et ai., Nature 348 (1990) 552 - 554. Kun täl-5 laisia kirjastoja seulotaan esimerkiksi gp39-peptidillä, voidaan tunnistaa gp39:n kanssa reagoivia immunoglobuliini-fragmentteja. Vaihtoehtoisesti voidaan vasta-aineiden tai näiden fragmenttien valmistamiseen käyttää SCID-hu-hiirtä (tämä on saatavilla yhtiöstä Genpharm).
10 Esimerkissä 2 kuvataan yksityiskohtaisesti menetel miä sellaisten gp39:ää, mukaan lukien humaani-gp39:ää ja muriini-gp39:ää, vastaan suunnattujen monoklonaalisten vasta-aineiden valmistamiseksi, joita on tarkoitus käyttää tämän keksinnön mukaisesti.
15 Tämän keksinnön mukaiset monoklonaaliset humaani- gp39:ää vastaan suunnatut vasta-aineet ovat edullisia käytettäväksi antigeenispesifisen T-solutoleranssin aikaansaamiseen. Edullisia vasta-aineita ovat esimerkissä 2 kuvatut monoklonaaliset vasta-aineet 3E4, 2H5, 2H8, 4D9-8, 4D9-9, 20 24-31, 24-43, 89-76 ja 89-79. Erityisen edullisia vasta- aineita ovat monoklonaaliset vasta-aineet 89-76 ja 24-31.
89-76- ja 24-31-vasta-aineita tuottavat 89-76- ja 24-31- ·*·„ hybridoomat talletettiin 2.9.1994 kumpikin erikseen Buda- ;*.t| pestin sopimuksen ehtojen mukaisesti talletuslaitokseen • · 25 American Type Culture Collection, Parklawn Drive, Rockvil-le, MD. 89-76-hybridoomalle annettiin ATCC:n hakunumero * · · !" HB11713 ja 24-31-hybridoomalle annettiin ATCC:n hakunumero » i * HB11712. 24-31- ja 89-76-vasta-aineet ovat IgGl-isotyyppiä.
Vielä yhdessä sovellutusmuodossa tämän keksinnön • · *.V 30 mukaisiin käyttöihin tarkoitettu humaani-gp39:ää vastaan ··· ·...· suunnattu mAb sitoo monoklonaalisten vasta-aineiden 3E4, 2H5, 2H8, 4D9-8, 4D9-9, 24-31, 24-43, 89-76 tai 89-79 tun- .···. nistamaa epitooppia. Humaani-gp39 :ää vastaan suunnattu mAb • · *·* sitoo edullisemmin monoklonaalisen vasta-aineen 24-31 tai • V*: 35 monoklonaalisen vasta-aineen 89-76 tunnistamia epitooppeja.
• · ·/·· mAb:n kyky sitoa minkä tahansa edellä mainituista vasta- 15 1 1 8792 aineista tunnistamaa epitooppia voidaan määrittää tavanomaisin ristikkäisin kompetitiomäärityksin. Esimerkiksi vasta-aine, joka sitoo samaa epitooppia kuin minkä mAb 24-31 tunnistaa, kilpailee leimalla varustetun 24-31:n kanssa 5 sitoutumisesta aktivoituihin T-soluihin, kun taas vasta-aine, joka sitoutuu eri epitooppiin kuin minkä mAb 24-31 tunnistaa, ei kilpaile leimalla varustetun 24-31:n sitoutumisesta aktivoituihin T-soluihin.
B* gp39:n liukoiset ligandit 10 Muita gp39:n antagonisteja, joita voidaan antaa T-solutoleranssin aikaansaamiseksi, ovat gp39:n ligandin liukoiset muodot. gp39:n monovalenttinen liukoinen ligandi, kuten liukoinen CD40, voi sitoutua gp39:ään, mikä tämän vaikutuksesta estää gp39:n vuorovaikutuksen CD40:n kanssa. 15 Termi "liukoinen" viittaa siihen, että ligandi ei assosioidu pysyvästi solumembraaniin. gp39:n liukoista ligandia voidaan valmistaa syntetoimalla se kemiallisesti tai edullisesti käyttäen yhdistelmä-DNA-menetelmiä esimerkiksi ilmentämällä ainoastaan solunulkoista domeenia (tästä puuttu-20 vat transmembraanidomeeni ja sytoplasminen domeeni). Edullinen gp39:n liukoinen ligandi on liukoinen CD40. Vaihtoeh-toisesti voi gp39:n liukoinen ligandi olla fuusioproteiinin • * muodossa. Tällainen fuusioproteiini sisältää vähintään osan • gp39:n ligandista toiseen molekyyliin kiinnittyneenä.
25 CD40:ää voidaan esimerkiksi ilmentää fuusioproteiinina im- munoglobuliinin kanssa (toisin sanoen CD40lg-fuusioprote- ·** iinina). Edullisessa sovellutusmuodossa valmistetaan fuu- • · · *·* ’ sioproteiini, joka sisältää CD40:n solunulkoisen domeeni- osan aminohapporyhmät liitettynä immunoglobuliinin raskaan ·.*.· 30 ketjun, esimerkiksi Cyl:n, sarana-, CH2- ja CH3-alueita • · · !)t)! vastaavan sekvenssin aminohapporyhmiin CD40Ig-fuusioprote- iinin muodostamiseksi [tätä kysymystä on käsitelty esimer- • · kiksi julkaisuissa Linsley, et ai., J. Exp. Med. 1783 '*:·* (1991) 721 - 730; Capon, et ai.. Nature 337 (1989) 525 - * · *.**: 35 531; ja Capon, julkaisu US 5 116 964] . Fuusioproteiinia :\j voidaan valmistaa syntetoimalla sitä kemiallisesti tai 118792 16 edullisesti CD40:n. cDNA:han perustuvilla yhdistelmä-DNA-menetelmillä [Stamenkovic, et ai., EMBO J. 8 (1989) 1403 -1410] .
II Antigeenispesifisen toleranssin indusoimiseen 5 soveltuvat solut Tämä keksintö perustuu ainakin osaksi siihen havaintoon, että kun allogeeniset solut esittävät alloanti-geenejä T-soluille gp39:n antagonistin läsnä ollessa, niin tuloksena on alloantigeenejä vastaan suunnattu T-soluto-10 leranssi. Soluja, jotka kykenevät saamaan aikaan toleranssin tällä mekanismilla ovat solut, jotka esittävät antigeeniä ja aktivoivat τ-soluja gp39:n kanssa tapahtuvan vuorovaikutuksen perusteella (toisin sanoen T-solujen pinnalla olevan gp39:n ja antigeeniä esittävän solun pinnalla olevan 15 gp39:n ligandin välinen vuorovaikutus on välttämätön asi aankuuluvien T-soluaktivaatiosignaalien saattamiseksi T-so-luun). Kun allogeenisen tai ksenogeenisen solun pinnalla olevan ligandin vuorovaikutus vastaanottajan T-solujen pinnalla olevan gp39:n kanssa estetään, niin tämä estää allo-20 tai ksenoantigeenien aiheuttaman T-solujen aktivaation ja pikemminkin indusoi T-solutoleranssin näitä antigeenejä !t*.i kohtaan. Kun gp39:n välityksellä tapahtuva T-solun aktivaa- ·*·.. tio estetään, niin tämä voi estää apustimulaatiomolekyylien (esimerkiksi B-solun pinnalla oleva B7-ryhmän molekyylien) • · 25 muodostumisen käynnistymisen allogeenisen tai ksenogeenisen solun pinnalla, niin että solu lähettää T-solulle anti- • » · "I geenisen signaalin ilman apustimulaatiosignaalia, mikä si- * * ten saa aikaan toleranssin.
Tämän mukaan tämän keksinnön mukaisissa käytöissä • · · **.* 30 vastaanottajalle annetaan allogeenistä tai ksenogeenistä solua. Allogeeninen tai ksenogeeninen solu kykenee esittä- mään antigeenin vastaanottajan T-soluille ja se on esimer- ,···, kiksi B-lymfosyytti, "ammattimainen" antigeeniä esittävä • · '!* solu (esimerkiksi monosyytti, dendriittisolu, Langerhansin • · * *. *! 35 solu) tai jokin muu sellainen solu, joka esittää antigeenin • Φ !.*·· immuunijärjestelmän soluille (näitä ovat esimerkiksi kera- 118792 17 tinosyytti, endoteelisolu, astrosyytti, fibroblast!, oligo-dendrosyytti). Lisäksi on edullista, että allogeenisen tai ksenogeenisen solun kyky stimuloida apustimulaatiosignaalin muodostumista vastaanottajan T-soluissa on normaalia pie-5 nempi. Esimerkiksi allogeenisesta tai ksenogeenisesta solusta voi puuttua kyky ilmentää apustimulaatiomolekyylejä, kuten B7-proteiiniryhmää (esimerkiksi B7-1 ja B7-2), tai näiden ilmentyminen voi olla hyvin vähäistä. Apustimulaa-tiomolekyylien ilmentyminen niiden potentiaalisten allo-10 geenisten tai ksenogeenisten solujen pinnalla, joita on määrä käyttää tämän keksinnön mukaisesti, voidaan määrittää vakiomenetelmin, kuten esimerkiksi virtaussytometrian avulla apustimulaatiomolekyylejä vastaan suunnattuja vasta-aineita käyttäen.
15 Edullisia allogeenisia tai ksenogeenisia soluja T-solutoleranssin aikaansaamiseksi ovat lymfoidisolut, esimerkiksi periferaalisen veren lymfosyytit tai pernan solut. Edullisia T-solutoleranssin aikaansaamiseen soveltuvia lym-foidisoluja ovat B-solut. B-soluja voidaan puhdistaa solu-20 jen sekapopulaatiosta (esimerkiksi periferaalisessa veressä tai pernassa esiintyvistä muista solutyypeistä) käyttämällä i\j normaaleja solujen erotusmenetelmiä. Esimerkiksi kiinnitty- ·*·,. vät solut voidaan poistaa viljelemällä pernasoluja muovi- .'.J maljoilla ja ottamalla talteen maljoihin kiinnittymättä 25 jäävä solupopulaatio. T-solut voidaan poistaa solujen seka-populaatioista käsittelemällä niitä tätä T-solua vastaan * · ·
Hl suunnatulla vasta-aineella (esimerkiksi anti-Thyl.1:llä • * • ja/tai anti-Thyl.2:11a) ja komplementilla. Yhdessä sovellu-tusmuodossa antigeeniä esittävinä soluina käytetään lepo- *.V 30 vaiheessa olevia lymfoidisoluja, esimerkiksi lepovaiheessa olevia B-soluja. Lepovaiheessa olevia lymfoidisoluja, kuten lepovaiheessa olevia B-soluja, voidaan eristää tällä alalla ,···, tunnetuin menetelmin esimerkiksi niiden pienen koon ja ti-
• I
heyden perusteella. Lepovaiheessa olevia lymfoidisoluja :,**i 35 voidaan eristää esimerkiksi vastavirtasentrifugointiin pe- • · V*: rustuvalla elutriaatiolla esimerkissä 1 kuvatulla tavalla.
118792 18
Vastavirtasentrifugointiin perustuvaa elutriaatiota käyttäen voidaan saada talteen lepovaiheessa olevien pienien lym-foidisolujen populaatio, josta T-soluvasteitä aktivoivat solut on on poistettu, ottamalla talteen virtausnopeuden 5 4-19 ml/min kohdalla ja edullisesti 19 ml/min kohdalla (nopeudella 3200 kierrosta minuutissa) oleva(t) fraktio(t). Vaihtoehtoisesti voidaan pieniä lepovaiheessa olevia lymfosyyttejä (esimerkiksi B-soluja) eristää askeltiheysgra-dienttisentrifugoinnilla, esimerkiksi käyttäen Ficoll- tai 10 Percoll-gradienttia, ja lepovaiheessa olevia pieniä lymfosyyttejä sisältävä kerros voidaan ottaa talteen sentrifu-goinnin jälkeen. Pienet lepovaiheessa olevat B-solut voidaan myös erottaa aktivoiduista B-soluista määrittämällä aktivoitujen B-solujen pinnalla esiintyvien apustimulaa-15 tiomolekyylien, kuten B7-l:n ja/tai B7-2:n, ilmentyminen tavallisia menetelmiä (esimerkiksi immunofluoresenssia) käyttäen.
Vastaanottajalle annetut allogeeniset tai ksenogee-niset solut toimivat ainakin osaksi siten, että ne esittä-20 vät luovuttajan antigeenejä T-soluille. Nämä solut ilmentävät siten antigeenejä, joita myös luovuttajan kudos tai • · *. *: elin ilmentää. Tämä voidaan saada aikaan tyypillisesti ♦ · : *·· käyttämällä luovuttajan kudoksesta tai elinsiirteestä saa- • · ί/.j tuja allogeenisia tai ksenogeenisia soluja. Voidaan esimer- *:* 25 kiksi eristää luovutettavasta kudoksesta tai elimestä pe- φφφφ ; räisin olevia periferaalisen veren lymfoidisoluja, B-soluja φφφ tai pernasoluja, joita voidaan käyttää tämän keksinnön mu- φ karsissa käytöissä. Allogeenisiä tai ksenogeenisiä soluja voidaan vaihtoehtoisesti hankkia käyttöön jostakin muusta φ # φ I.* 30 materiaalilähteestä kuin kudoksen tai elimen luovuttajalta φ φ **"* sikäli kuin näissä soluissa on kudoksen tai elimen luovut- m *:1: tajan kanssa yhteisiä antigeenisiä determinantteja. Voidaan esimerkiksi käyttää sellaisia allogeenisia tai ksenogeeni- φφφ . siä soluja, jotka ilmentävät niitä (useimpia tai kaikkia) * * 35 samoja MHC-kompleksin antigeenejä kuin mitä luovuttajan ku- φ φ φ *: dos tai elin ilmentää. Siten voidaan käyttää sellaisista 118792 19 materiaalilähteistä peräisin olevia allogeenisia tai kseno-geenisia soluja, joiden MHC-haplotyyppi on määritetty yhteensopivaksi kudoksen tai elimen luovuttajan (tämä on esimerkiksi siirteen luovuttajan läheinen sukulainen) suhteen. 5 III Solujen ja gp39:n antagonistien antaminen T-solutoleranssi elintä tai kudossiirrettä kohtaan voidaan saada aikaan tämän keksinnön mukaisesti antamalla siirteen vastaanottajalle gp39:n antagonistia sekä sellaista allogeenistä tai ksenogeenistä solua, joka ilmentää luo-10 vuttajan antigeenejä ja osallistuu gp39:n välityksellä vuorovaikutukseen vastaanottajan T-solujen kanssa. Edullisessa sovellutusmuodossa vastaanottajalle annetaan samalla kertaa tai yhtäaikaisesti allogeenistä tai ksenogeenistä solua ja gp39:n antagonistia. Vaihtoehtoisesti voidaan gp39:n anta-15 gonistia antaa ennen allogeenisten tai ksenogeenisten solujen antamista, esimerkiksi silloin kun antagonisti on vasta-aine, jonka puoliintumisaika on pitkä. Antagonistia ja allogeenisiä tai ksenogeenisiä soluja annetaan edullisessa sovellutusmuodossa vastaanottajalle ennen elimen tai kudok-20 sen siirtoa vastaanottajaan (toisin sanoen vastaanottajalle suoritetaan esikäsittely antagonistilla ja soluilla). Esi- *. *: merkiksi allogeenisiä tai ksenogeenisiä soluja ja anta- ·· • ’·· gonistia voidaan antaa useita päiviä (esimerkiksi viidestä • · kahdeksaan päivää) ennen kudoksen tai elimen siirtoa.
··· 25 Yhden allogeenisten solujen annoksen antamisen (an- ···· • ·*. tagonistiin yhdistettynä) on havaittu riittävän luovuttajan ··· kudokseen tai elimeen kohdistuvan T-solutoleranssin aikaan- *·* * saamiselle (ks. esimerkki 1). Annettu solumäärä voi olla eri suuruinen käytetyn solutyypin, kudos- tai elinsiirre- • · Γ 30 tyypin, vastaanottajan painon, vastaanottajan yleisen ter-*·;** veydentilan ja muiden alan ammattikokemuksen perusteella *:**: tunnettujen muuttujien mukaan. Tämän keksinnön mukaisesti :***: käytettäväksi soveltuva sopiva solujen lukumäärä voidaan .* , määrittää alan ammattikokemuksen perusteella millä tahansa • · · [ *j 35 tavanomaisella menetelmällä (esimerkiksi esimerkissä 1 ku-* * * *· *: vatulla tavalla) . Solut annetaan sellaisessa muodossa ja 118792 20 käyttäen sellaista antotietä, joka soveltuu T-solutolerans-sin aikaansaamiseen vastaanottajassa. Solut voidaan antaa fysiologisesti hyväksyttävässä liuoksessa, kuten puskuroidussa fysiologisessa suolaliuoksessa tai tätä vastaavassa 5 kantaja-aineessa. Solut annetaan edullisesti suonensisäisesti .
Tämän keksinnön mukaisesti antagonistia annetaan T-solutoleranssin aikaansaamiseksi potilaalle in vivo -olosuhteissa tapahtuvaan farmaseuttisen aineen annosteluun so-10 veltuvassa biologisesti yhteensopivassa muodossa. Termi "in vivo -olosuhteissa tapahtuvaan annosteluun soveltuva biologisesti yhteensopiva muoto" tarkoittaa annettavan antagonistin muotoa, jossa yhdisteen terapeuttiset vaikutukset ovat mahdollisia toksisia vaikutuksia suuremmat. Termin po-15 tilas piiriin on tarkoituksena kuulua elävät organismit, esimerkiksi nisäkkäät, joissa immuunivaste voidaan saada syntymään. Esimerkkejä potilaista ovat ihmiset, koirat, kissat, hiiret, rotat ja näiden transgeeniset muodot. gp39:n antagonistia voidaan annostella missä tahansa farma-20 kologisessa muodossa mahdollisesti farmaseuttisesti hyväksyttävän kantaja-aineen kanssa. Annettavan antagonistin te- • · ·.**: rapeuttisesti aktiiviseksi määräksi määritellään halutun ·· • *·· tuloksen (esimerkiksi T-solutoleranssin) tuottava määrä tä- i/.j hän tarvittavia annostuksia ja antamisen kestoa käyttäen.
·· 25 Terapeuttisesti aktiivinen määrä gp39:n antagonistia voi
MM
• esimerkiksi olla eri suuruinen sellaisten tekijöiden mu-* · · kaan, joita ovat sairauden vaihe, potilaan ikä, sukupuoli ja paino ja antagonistin kyky saada aikaan haluttu vaste .. potilaassa. Annostuksessa käytettäviä hoito-ohjelmia voi- • · » *.; 30 daan tarkentaa optimaalisen terapeuttisen vasteen aikaan- • · *“·" saamiseksi. Voidaan esimerkiksi antaa päivittäin useita *:**: osa-annoksia tai annosta voidaan pienentää vastaavassa suh- :***: teessä hoitotilanteen vaatimusten osoittamalla tavalla. Ku- ·«· .* . ten esimerkissä 1 anti-gp39-vasta-aineella suoritettavan • · · ; *\ 35 käsittelyn kyseessä ollessa on kuvattu, voi tehokas hoito- • · · *· *! ohjelma sisältää sen, että vasta-ainetta ryhdytään antamaan 118792 21 ennen kudoksen tai elimen siirtoa (esimerkiksi viidestä kahdeksaan päivää ennen siirtoa), minkä jälkeen vasta-ainetta annetaan uudelleen (esimerkiksi joka toinen päivä) useiden viikkojen ajan (esimerkiksi kahdesta seitsemään 5 viikkoon) siirron suorittamisesta.
Aktiivista yhdistettä (esimerkiksi antagonistia, kuten vasta-ainetta) voidaan antaa sopivalla tavalla, kuten käyttämällä injektiota (ihonalaista injektiota, suonensisäistä injektiota ja muita näitä vastaavia injektioita), 10 antamalla yhdistettä oraalisesti, inhalaation muodossa, levittämällä transdermaalisesti tai antamalla sitä rektaali-sesti. Aktiivinen yhdiste voidaan annostelutien mukaan päällystää jollakin materiaalilla yhdisteen suojaamiseksi entsyymien, happojen ja muiden luonnollisten olosuhteiden 15 vaikutukselta, jotka voivat inaktivoida yhdisteen. Edullinen annostelutie on käyttää suonensisäistä injektiota.
gp39:n antagonistin annostelemiseksi käyttämällä jotakin muuta annostelutietä kuin parenteraalista antamista voi olla tarpeellista päällystää antagonisti sen inaktivoi-20 tumisen estävällä materiaalilla tai antaa antagonistia yhtä aikaa sen inaktivoitumisen estävän materiaalin kanssa. An- • · *.**: tagonistia voidaan esimerkiksi antaa potilaalle sopivassa ·· • *·· kantaja-aineessa tai laimentimessa, minkä yhteydessä anne- taan samalla entsyymi-inhibiittoreita, tai se voi olla val-•J* 25 mistettuna sopivaan kantaja-aineeseen, kuten liposomeihin.
M·· . .·. Farmaseuttisesti hyväksyttäviä laimentimia ovat fysiologi- • * · nen suolaliuos ja vesipitoiset puskuriliuokset. Entsyymi- *·* * inhibiittoreja ovat haiman trypsiini-inhibiittori, di-iso- , . propyylifluorifosfaatti (DEP) ja trasyloli. Liposomeja ovat • · · 30 vesi-öljy-vesi-emulsiot sekä tavanomaiset liposomit [Stre- • m ’·**’ jän, et ai., J. Neuroimmuno 1. 7, 27).
·:·*: Aktiivista yhdistettä voidaan myös antaa parente- :***; raalisesti tai intraperitoneaalisesti. Dispersioita voidaan «·φ .* . myös valmistaa glyseroliin, nestemäisiin polyetyleeniglyko- • 4 m 35 leihin ja näiden seoksiin ja öljyihin. Tavallisissa varas- • · · *· *· tointi- ja käyttöolosuhteissa nämä valmisteet voivat sisäl- 118792 22 tää mikro-organismien kasvun ehkäisemiseen tarkoitettua säilyteainetta.
injektiokäyttöön soveltuvia farmaseuttisia koostumuksia ovat steriilit vesipitoiset liuokset (materiaalien 5 ollessa vesiliukoisia) tai dispersioita ja steriilejä jauheita steriilien injektioliuosten tai dispersion valmistamiseksi ex tempore -menetelmällä. Kaikissa tapauksissa koostumuksen on oltava steriili ja sen täytyy olla siinä määrin juoksevaa, että sen käsittely ruiskun avulla on vai-10 vatonta. Sen on oltava valmistus- ja varastointiolosuhteissa stabiili ja siinä on käytettävä säilyteaineita mikro-organismien, kuten bakteerien ja sienten, kontaminoivaa vaikutusta vastaan. Kantaja-aine voi olla liuotin tai dis-pergointimedium, joka sisältää esimerkiksi vettä, etanolia, 15 polyolia (esimerkiksi glyserolia, propyleeniglykolia ja nestemäistä polyetyleeniglykolia tai jotakin muuta näitä vastaavaa materiaalia) ja näiden sopivia seoksia. Juokse-vuus voidaan pitää sopivana esimerkiksi käyttämällä päällystettä, kuten lesitiiniä, säilyttämällä vaadittu partik-20 kelikoko dispersion kyseessä ollessa ja käyttämällä pinta-aktiivisia aineita. Mikro-organismien vaikutuksen ehkäise- • · *. *i miseen voidaan käyttää useita erilaisia antibakteriaalisia ·· • '·· ja antifungaalisia aineita, esimerkiksi parabenejä, kloori- i\j butanolia, fenolia, askorbiinihappoa, timerosaalia ja muita *·* 25 näitä vastaavia materiaaleja. Monissa tapauksissa on edul- *··· • ·*. lista lisätä koostumuksiin isotonisia aineita, esimerkiksi • · · ' sokereita, polyalkoholeja, kuten mannitolia, sorbitolia ja • · · natriumkloridia. injektiokoostumukset voidaan saada absor-. . hoitumaan pitkän ajan kuluessa käyttämällä absorptiota vii- • t · • · · 30 västävää ainetta, esimerkiksi aluminiummonostearaattia ja · *·;·* gelatiinia.
*:**: Steriilejä injektioliuoksia voidaan valmistaa li- säämällä tarvittava määrä aktiivista yhdistettä (esimerkik- *· * ,* . si gp39:n antagonistia) sopivaan liuottimeen yhdessä edellä « · · ‘l *| 35 luetellun ainesosan tai ainesosien yhdistelmän kanssa sen • · » *· " mukaan, millaista on tarpeellista käyttää, minkä jälkeen 118792 23 materiaali steriilisuodatetaan. Dispersiot valmistetaan tavallisesti lisäämällä aktiivinen yhdiste steriiliin kantaja-aineeseen, joka sisältää perusdipergointimediumia ja edellä esitetystä luettelosta peräisin olevia muita halut-5 tuja ainesosia. Sellaisten steriilien jauheiden kyseessä ollessa, jotka on tarkoitettu steriilien injektioliuosten valmistamiseen, ovat edullisia menetelmiä vakuumikuivaus ja ilmakuivaus, joista saadaan jauhetta, joka sisältää aktiivista ainesosaa (esimerkiksi antagonistia) sekä mitä tahan-10 sa muuta haluttua ainesosaa, joka on tehty tämän etukäteen steriilisuodatetusta liuoksesta.
Kun aktiivinen yhdiste on suojattu sopivalla tavalla edellä olevan kuvauksen mukaisesti, niin proteiinia voidaan antaa oraalisesti, esimerkiksi käyttäen inerttiä lai-15 menninta tai elimistössä sulavaa syötäväksi kelpaavaa kantaja-ainetta. Tässä keksinnössä "farmaseuttisesti hyväksyttävä kantaja-aine" sisältää kaikenlaiset liuottimet, dis-pergointiaineet, päällysteet, antibakteriaaliset ja anti-fungaaliset aineet, isotoniset ja absorptiota pitkittävät 20 aineet ja muut näitä vastaavat aineet. Tällaisten mediumien ja aineiden käyttö farmaseuttisesti aktiivisten aineiden · valmistamiseen on tällä alalla tunnettua. Lukuun ottamatta • * • *·· sitä tilannetta, että jokin tavanomainen medium tai aine ei ole yhteensopiva aktiivisen yhdisteen kanssa, niin näitä • · ··· 25 ajatellaan käytettäväksi terapeuttisissa koostumuksissa.
·»·· ..*. Koostumuksiin voidaan myös lisätä vaikutukseltaan täydentä- ·*« viä aktiivisia yhdisteitä.
• « «
On erityisen edullista formuloida parenteraalisesti , . käytettävät koostumukset kerta-annoksen muotoon, jotta ne • * * ·[·' 30 ovat vaikeuksitta annettavissa ja jotta niiden annoksesta • * ’·;·* saadaan yhdenmukainen. Tässä keksinnössä tarkoittaa kerta- *;·*: annos lääkemuoto fysikaalisesti erillisiä annoksia, jotka .***. soveltuvat kerta-annoksiksi hoidettaville nisäkkäisiin kuu- *·» .· . luville potilaille; kukin kerta-annos sisältää ennakolta • · · ’’ 35 määrätyn määrän aktiivista yhdistettä, jonka on laskettu • · · *· *: tuottavan halutun terapeuttisen vaikutuksen vaadittuun far- 118792 24 maseuttiseen kantaja-aineeseen yhdistettynä. Tämän keksinnön mukaisten kerta-annoslääkemuotojen koostumus määräytyy ja on suoraan riippuvainen (a) aktiivisen yhdisteen ainutlaatuisista ominaisuuksista ja aikaansaatavasta tietystä 5 nimenomaisesta terapeuttisesta vaikutuksesta, ja (b) yhdisteiden valmistamisen alalla luontaisista rajoituksista tällaisen potilaiden herkkyyden hoitamiseen tarkoitetun aktiivisen yhdisteen yhdistämisessä muihin materiaaleihin.
Tässä keksinnössä kuvatun siedätyshoito-ohjelman 10 jälkeen tai tämän ohjelman kuluessa siirretään luovuttajan kudos tai elin tavanomaisin menetelmin siirteen vastaanottajaan.
IV Tämän keksinnön käyttömuodot Tämän keksinnön mukaiset käytöt ovat sovellettavis-15 sa suureen määrään useita erilaisia kudossiirto- ja elin-siirtotilanteita. Keksintöä voidaan käyttää T-solutole-ranssin aikaansaamiseen tai kudos- tai elinsiirteen, kuten haiman solusaarekkeiden, maksan, munuaisen, sydämen, keuhkojen, ihon, lihaksen, hermokudoksen, mahan ja suolen, vas-20 taanottajassa. Tätä keksintöä voidaan siten käyttää sellaisten sairauksien tai tilojen hoidoissa, joihin liittyy * · kudoksen tai elimen siirto (esimerkiksi maksan siirto hy- ·» • *· perkolesterolemian hoitamiseksi, lihassolujen siirto lihas- dystrofian hoitamiseksi, hermokudoksen siirto Huntingtonin ··· 25 taudin tai Parkinsonin taudin hoitamiseksi, ja muiden näitä «Mt . vastaavien tautien hoitamiseksi). Edullisessa sovellutus- • · · ··· muodossa siirrettävä kudos sisältää haiman solusaarekkeita.
• · « Tämän mukaisesti tämä keksintö kattaa haiman solusaarekkei- .. den käyttöön perustuvan yhdistetyn valmisteen valmistamisen • · · *·]·* 30 diabeteksen hoitoon. Tämä käyttö sisältää sen, että X) ai- • » *··*’ logeenisiä tai ksenogeenisiä soluja, jotka ilmentävät luo- ·;·*· vuttajan antigeenejä, 2) vastaanottajan T-solujen pinnalla ."*· ilmentyvän sellaisen molekyylin antagonistia, kuten gp39:n ··· / . antagonistia (esimerkiksi gp39:ää vastaan suunnattua vasta- • · · *· " 35 ainetta), joka toimii solujen kosketuksesta riippuvaisen • · · *·*· auttaja-efektoritoiminnon välikappaleena, ja 3) luovuttajan 118792 25 haiman solusaarekkeita käytetään valmistettaessa sellaista yhdistettyä valmistetta, joka on tarkoitettu diabeteksen hoitoon. Allogeenisia tai ksenogeenisia soluja ja antagonisteja sisältävää valmistetta on edullista antaa vas-5 taanottajalle ennen haiman solusaarekkeen antamista.
Tätä keksintöä kuvataan lisäksi seuraavan esimerkin avulla, jonka ei ole katsottava rajoittavan tätä keksintöä. Kaikkien tässä patenttihakemusjulkaisussa siteerattujen kirjallisuusviitteiden, patenttijulkaisujen ja patenttiha-10 kemusjulkaisujen sisältö on liitetty tähän keksintöön siihen oikeuttavien säännösten nojalla.
Esimerkki 1
Haiman solusaarekeallografteja vastaan suunnatun toleranssin indusointi käsittelemällä vastaanottajaa allo-15 geenisillä soluilla ja anti-gp39:lla
Nykyiset allotrasplantaatiotutkimukset perustuvat yleiseen immunosupressioon, joka heikentää immuuniefektori-toimintoja epäspesifisesti. immunosupressiiviset farmaseuttiset aineet voivat kuitenkin saada aikaan merkittäviä si-20 vuvaikutuksia. On lisäksi osoitettu, ettei tällä ratkaisutavalla saada tuloksia suoritettaessa Langerhansin saarek- • · \’*i keiden allotransplantaatio diabeteksen hoitamiseksi [tätä ·· ! *.. on käsitelty esimerkiksi julkaisussa Robertson, R. P., N.
·*·.: Engl. Med. 327 (1992) 1861]. Jyrsijöillä voivat hoidot, • · ·!· 25 joissa käytetään τ-soluja vastaan suunnattuja vasta- ···· , .·. aineita, antaa mahdollisuuden saavuttaa myönteisiä tuloksia #t· * #··*ί solusaarekeallograftien siirrossa mutta tämäkin lähestymis- • · · tapa tuottaa yhtenäisen yleisen immunosupression [Carpen- .. ter, C. B., N. Engl. J. Med. 322 (1990) 1224, Roark, J. H., *·]·* 30 et ai., Trasplantation 54 (1992) 1098; Kahan, B. D., Curr.
• · *···* Opin. Immunol. 4 (1992) 553]. Tässä esimerkissä saatiin so- * ····· lusaarekeallografteihin kohdistuva toleranssi aikaan siir- teen vastaanottajassa manipuloimalla alloantigeenin esittä- ··» • t mistä T-soluille siten, että näiden aktivaatio estyi. So- • · · ’ " 35 lusaarekeallograftien elinkykyä kemiallisin keinoin dia- • · • · · • ·· • · 118792 26 beettisiksi tehdyissä C57BL/6 (H-2b) -hiirissä tutkittiin käyttäen menetelmiä, jotka olivat:
Diabeteksen aiheuttaminen
Koiraspuoliset C57B1/6J (H-2b) -hiiret tehtiin dia-5 beettisiksi ruiskuttamalla niihin suonensisäisesti strepto-tsootosiinia (140 mg/kg). Pysyvä diabetes varmistettiin osoittamalla veriplasman glukoosikonsentraation olevan > 400 mg/dl kolmena kertana yhden viikon aikana. Allogeenisten pernasolujen fraktiointi 10 Siirteen vastaanottajien esikäsittelyyn tarkoitetut luovuttajan allogeeniset solut otettiin käänteishyljinnän ehkäisemiseksi käyttöön (C57 x BALB/c) (H-2b/d) Fi-hybridi-eläimistä. Pienten lymfosyyttisolujen eristämiseksi poistettiin punasolut pernasolususpensiosta, joka oli peräisin 15 8 viikon ikäisistä naaraspuolisista (C57 x BALB/c) Fi- hiiristä, ja solut fraktioitiin koon mukaan elutriaatiolla julkaisuissa Tony, H. P., et ai., J. Exp Med. 161 (1985) 223; ja Gosselin, E.J., et ai., J. Immuol. 140 (1988) 1408 kuvatulla tavalla. Lyhyesti mainittuna pieniä lymfosyyttejä 20 eristetään vastavirtasentrifugointiin perustuvalla elutriaatiolla esimerkiksi käyttäen mallin J-6B-sentrifugia • » (Beckman Instruments, Palo Alto, CA) . Noin 1 - 5 x ·· o • *·· 10 solua 8 ml:ssa viljelymediumia tai tasapainotettua suo- laliuosta, joka sisältää 1,5 % fetaalista naudanseerumia, • · ··· 25 käsitellään deoksiribonukleaasilla, pipetoidaan elutriaa- **«· . tiokammioon käyttämällä alkuun vastavirtavirtausnopeutena ··· 13,5 ml minuutissa ja käyttämällä sentrifugia 4 °C:ssa va- • 9 · kionopeudella, jonka suuruus on 3 200 kierrosta minuutissa.
, . Piensolufraktio, joka sisältää vain muutamia kontaminoivia ! S ! 30 suuria soluja, eluoituu tyypillisesti kohdalla 14 - 19 ml • · **;·* minuutissa, vaikkakin täsmällinen virtausnopeus voi olla ·:*·; riippuvainen solujen suspendointiin käytetystä mediumista.
·***· Tässä keksinnössä kuvatuissa kokeissa koottiin piensolu- ,* , fraktio talteen virtausnopeuden 19 ml/min kohdalla (kier- • * · *| 35 rosnopeudella 3 200 kierrosta minuutissa) . Tähän fraktioon • ♦ · *· ** ei ollut jäänyt lainkaan säteilytystä (3000 radia) kestävää 118792 27 apusolutoimintaa sellaisella määrityksellä määritettynä, jossa käytettiin T-solulinjoja, jotka olivat spesifisiä joko kaniinin IgG:n ja H2d:n (CDC35:n) suhteen tai allo-reagoivia H2b:n (DlO.G4:n) suhteen. Pienet solut ja frakti-5 oimattomat solut pestiin kaksi kertaa seerumittomassa mediumissa ja ne injektoitiin allograftin vastaanottajien häntälaskimoon. Kokeessa käytettiin noin 40 - 100 x 106 fraktioimatonta (C57 x BALB/c) Fi (H-2b/d) -eläimistä peräisin olevaa pernasolua tai 40 - 100 x 106 elutrioitua pientä 10 (C57 x BALB/c)Fi (H-2b/d) -eläimistä peräisin olevaa per nasolua.
Siirteen vastaanottajien esikäsittely
Siirteen vastaanottajia esikäsiteltiin joko frakti-oimattomilla allogeenisillä (C57 x BALB/c) Fi (H-2b/d)-perna-15 soluilla, elutrioiduilla pieniläpimittaisilla "fraktion 19" pernasoluilla, joista APC-aktiivisuus oli poistettu (nämä oli eristetty edellä kuvatulla tavalla), gp39:ää vastaan suunnatulla monoklonaalisella vasta-aineella (MRl, ks. esimerkki 2, koe 3) tai allogeenisten solujen ja gp39:ää vas-20 taan suunnatun vasta-aineen yhdistelmällä. Fraktion 19 solut tutkittiin kahdella eri annosalueella, pienellä annok-!.’·· sella, jonka suuruus oli 40 - 44 x 10 solua, tai suurella | annoksella, jonka suuruus oli 77 - 88 χ 106 solua. Kontrol- :*·.! lieläimiin ei annettu allogeenisiä soluja eikä niitä käsi- • · ··· 25 telty vasta-aineella. Allogeenisiä soluja annettiin siir- ···· ..·. teen vastaanottajiin injektoimalla niitä häntälaskimoon 5 - .···. 8 päivää ennen solusaarekeallograftin siirtoa. Käsittely • » * MRl-vasta-aineella suoritettiin käyttäen annoksena 250 pg , . hiirtä kohti kaksi kertaa viikossa alkaen 7 päivää ennen • · · 30 solusaarekkeiden siirtoa ja jatkaen näin 2-7 viikon ajan • · ’···* tai siihen asti, kunnes siirre menetettiin. Ensimmäinen *:*·· vasta-aineinjektio annettiin tyypillisesti samana päivänä kuin ensimmäinen allogeenisten pernasolujen injektio.
··* .· . Solusaarekeallograftin siirto s · · *· *· 3 5 Allogeenisiä BALB/c (H-2 ) -solusaarekkeita eris- **· · I · · · *. *ί tettiin modifioidulla kollagenaasikäsittelymenetelmällä 118792 28 [Gottlieb, P. A., et al., Diabetes 39 (1990) 643]. Solusaa-rekkeita, joiden annoksena käytettiin 30 saareketta ruu-miinpainogrammaa kohti, siirrettiin välittömästi niiden eristämisen jälkeen vastaanottajana toimivien C57B1/6J 5 (H-2b) -hiirten munuaiskapselin alle. Siirteen ' elinkyky määriteltiin kykynä säilyttää veriplasman glukoosikonsent-raatio tasolla < 200 mg/dl.
Tulokset
Ensimmäisessä koesarjassa solusaarekeallograftin 10 vastaanottajia käsiteltiin joko pelkillä allogeenisilla pernasoluilla tai pelkällä gp39:ää vastaan suunnatulla vasta-aineella. Kuten kuviossa 1 on esitetty, niin pernasolu-esikäsittelyn puuttuessa tapahtui kaikille solusaarekeallo-grafteille hyijintä 13 päivän kuluessa siirrosta (9 ± 15 2 päivää; vaihteluväli 5-13 päivää; N = 23) . Solusaarek- keiden havaittiin myös olevan heikosti elinkykyisiä eläimissä, joita oli käsitelty ainoastaan sellaisilla fraktioi-mattomilla pernasoluilla, jotka sisälsivät normaalia APC-aktiivisuutta (6 ± 3 päivää; vaihteluväli 4-12 päivää; 20 N = 7) tai pienillä annoksilla (40 - 44 x 106 solua) frak tion 19 pernasoluja, joista AP-solut oli poistettu (7 ± • * !.*·· 3 päivää; vaihteluväli 3-14 päivää, N = 16) . Kun suurempi j annos fraktion 19 pieniä splenosyyttejä, joista AP-solut !*·,; oli poistettu (75 - 88 x 106 solua), oli injektoitu eläi- • * ··· 25 meen, niin allograftin elossapysymisaika piteni (19 ± ···· . .·. 10 päivää; vaihteluväli 7-40 päivää; N = 16) . Tämä vaiku- ♦ ··* .···. tus siirteen elossapysymisen kestoon oli tilastollisesti • * » merkittävä (f3(58 = 17,3 p < 0,001, verrattuna ryhmiin, joi- , . ta ei oltu suoritettu mitään käsittelyä, koko pernan käsit- • · · 30 tävillä verensiirroilla tai pienemmällä annoksella fraktion • · *···* 19 pernasoluja), mutta tämä ei ollut pysyvää. Se, että al- ····· logeenisten solusaarekkeiden elossapysyminen piteni mutta ·***· oli rajallista niissä diabeettisissa vastaanottajissa, ··· / . joille annettiin fraktion 19 pieniä soluja, joista AP-solut • · · *·*: 35 oli poistettu, viittaa siihen, että nämä solut eivät yksi- • · · *· *i nään kykene pitämään allograftia elossa, vielä yhtä siir- 118792 29 teen vastaanottajien kohorttia käsiteltiin fraktion 20 soluilla, joiden määrä oli 77 - 88 x 106. Tämä fraktio koostui suurimmaksi osaksi pienistä lymfosyyteistä, mutta se eroaa fraktion 19 populaatiosta siinä mielessä, että se si-5 sältää määritettävissä olevan APC-toiminnon. Näiden solujen vastaanottajat (n = 6) hylkivät kaikki siirteitään nopeasti (keskiarvo = 8,5 päivää, vaihteluväli 6 - 12). Toista siirteen vastaanottajaryhmää käsiteltiin yksinomaan gp39:ää vastaan suunnatulla monoklonaalisella vasta-aineella, 10 MRl:llä. Kuvio 1 kuvaa sitä, että solusaarekeallograftit menetettiin 15 päivän kuluessa 7:ssä niistä 11 hiirestä, joita oli käsitelty pelkästään gp39:ää vastaan suunnatulla mAb:lla. Jäljellä olevilla neljällä hiirellä olivat siirteet toimintakykyisiä kokeen päättyessä päivänä 48. Nämä 15 tulokset osoittavat, että pelkän gp39:ää vastaan suunnatun MRl-vasta-aineen antaminen vastaanottajalle voi pidentää solusaarekeallograftin elinkykyä (keskiarvo = 20,19 päivää; vaihteluväli 9:stä määrittelemättömän suureksi; N = 5. Keston pidentymisaste oli tilastollisesti samanlainen kuin mi-20 tä oli saatu aikaan käyttäen suurempaa pelkkien fraktion 19 pernasolujen annosta ja merkittävästi pidempi kuin mitä • § !.*·· saatiin aikaan kolmessa muussa ryhmässä (p < 0,05).
Edellä kuvattu koesarja osoitti, että käsittely ;*·.· pelkillä fraktion 19 pernasoluilla, joista AP-solut oli <· · 25 poistettu, tai pelkällä gp39:ää vastaan suunnatulla mAh:11a ···» . ,·. voi parantaa haiman solusaarekeallograftin elossa pysymistä • * · verrattuna tällaisen käsittelyn poisjättöön. Kumpikaan kä- • · · * sittely ei kuitenkaan itsessään ollut tehokas indusoimaan , . solusaarekeallografteihin kohdistuvaa pitkäkestoista tole- • · *·]·* 30 ranssia vastaanottajissa. Seuraavissa koesarjoissa yhdis- tettiin käsittely allogeenisilla pernasoluilla vastaanotta-·:··· jän käsittelyyn anti-gp39:llä. Kun allogeenisia pernasoluja .***. ja anti-gp39:ää annettiin yhdistettynä, niin tämän havait- • · ··· tiin olevan tehokkaampaa kuin kumpikaan reagenssi yksinään.
• · *· " 35 Tulokset on esitetty kuviossa 2, jossa kukin käyrä edustaa • ♦ *.*·: koetuloksia yksittäisestä hiirestä. Avoimet symbolit tar- 118792 30 koittavat vastaanottajia, joissa solusaarekeallografti menetettiin spontaanisti. Täytetyt symbolit tarkoittavat hiiriä, joissa solusaarekesiirteet olivat toimintakykyisiä kokeen lopetushetkellä. Kuvio 2 (osakuvio B) esittää, että 5 siirre saatiin pysymään toimintakykyisenä määräämättömän ajan kaikissa niissä eläimissä, joita oli käsitelty 7 viikon ajan gp39:ää vastaan suunnatulla MAB:lla ja yhdellä injektiolla sellaisia fraktion 19 pernasoluja, joista ap-solut oli poistettu (n = 6). Kun tätä menettelyä muutettiin 10 vähentämällä anti-gp39-käsittelyn kestoa, niin suotuisa vaikutus siirteen elinkykyyn heikkeni mutta ei hävinnyt. Siirre saatiin pysymään toimintakykyisenä määräämättömän ajan kuudella kahdeksasta vastaanottajasta silloin, kun gp39:ää vastaan suunnattua mAbrta annettiin vain kahden 15 viikon ajan fraktion 19 pernasoluihin yhdistettynä (kuvio 2, osakuvio A) . Siirteen havaittiin myös pysyvän toimintakykyisenä määräämättömän ajan vastaanottajilla, joita oli käsitelty 2 tai 7 viikon ajan anti-gp39:11a yhdistettynä yhteen injektioon fraktioimattornia allogeenisiä pernasolu-20 ja.
Solusaarekesiirteen toiminnan varmistamiseksi ja • · *.**: sen varmistamiseksi, etteivät jäljellä olevat solusaarek- • '·· keet, joita streptotsootosiinikäsittely ei ollut tuhonnut, :\j eivät erittäneet insuliinia, poistettiin ne munuaiset, jot- ··· 25 ka sisälsivät kapselin alle siirrettyjä siirteitä. Kaikissa ··»* . .*. tapauksissa yksipuolinen munuaisten poisto sai kolmen päi- ·»· vän kuluessa aikaan hyperglykemian uusiutumisen • · · (> 300 mg/dl).
. . Solusaarekesiirteet ja natiivi haima tutkittiin
• · S
·.* 30 histologisesti kaikista eläimistä joko siirteen menettämi- • * *··4* sen yhteydessä tai kokeen päättyessä. Niiden vastaanottaji- *:**: en munuaisten solusaarekeallograftien histologisissa leik- ·**· keessä, joille oli annettu fraktioituja allogeenisiä pieniä .* * lymfosyyttejä ja joita oli käsitelty jatkuvasti (7 viikkoa) I 1^· l 35 MRl-mAb:lla, esiintyi runsaasti kokonaisia solusaarekkeita, f · · *· jotka olivat havaittavissa munuaiskapselin pinnan alla ja 3i 1 1 8792 joissa ei esiintynyt mononukleaarisolujen kudokseen tunkeutumista ja jotka sisälsivät selvästi jyväsekkäitä insuliini- ja glukagonipositiivisia soluja. Tästä poiketen esiintyi sellaisten vastaanottajien munuaisissa olevien solusaa-5 rekeallograftien histologisissa leikkeissä, joita oli käsitelty pelkällä gp39:ää vastaan suunnatulla mAb:lla, luonteenomainen voimakas mononukleaarisolutulehdus ja tähän liittyvä solusaarekesolujen tuhoutuminen. Solusaarekkeiden morfologia oli kaikissa isäntien haimoissa yhtenäisellä ta-10 valla yhdenmukainen sen käsityksen suhteen, että näillä esiintyi streptotsootosiinidiabetes.
Esimerkki 2: gp39 :ää vastaan suunnattujen vasta-aineiden valmistaminen ja luonnehtiminen
Koe 1 - Humaani-gp39 tää vastaan suunnatut vasta- 15 aineet
Antigeenispesifisen T-solutoleranssin indusoimisek-si potilaaseen on edullista antaa humaani-gp39:ää vastaan suunnattua vasta-ainetta. Humaani-gp39:ää vastaan suunnattujen hiiressä tehtyjen monoklonaalisten vasta-aineiden ai-20 kaansaarniseen käytettiin seuraavaa menetelmää. Balb/c-hii- riä immunisoitiin täydelliseen Freundin adjuvanttiin (CFA) ϊ\ϊ valmistetulla liukoisella gp39-fuusioproteiinilla, gp39- ·*·.. CD8:lla. Hiiriä käsiteltiin sitten 6 viikkoa myöhemmin liu- •\j koisella gp39-CD8:11a, joka oli valmistettu epätäydelliseen • · .i. 25 Freundin adjuvanttiin (IFA) . Liukoista gp39-CD8:aa annet- , ,·. tiin liukoisessa muodossa 4 viikkoa sekundaarisen im- • · » munisoinnin jälkeen. Hiirille annettiin tästä 2 viikon ku- * · * ' luttua tehosteannos aktivoituja periferaalisen veren hu- maanilymfosyyttejä, minkä jälkeen tästä kahden viikon ku- • · « *·*·* 30 luttua annettiin vielä viimeinen tehosteannos, jossa käy- #·· tettiin liukoista gp39-CD8:aa. Splenosyytit fuusioitiin va- kiomenetelmiin kuuluvana toimenpiteenä NS-l-fuusio-osapuo- ,···, leen 4. päivänä viimeisen immunisoinnin jälkeen.
• · *" Kloonit, jotka tuottivat humaani-gp39:ää vastaan • · " 35 suunnattuja vasta-aineita, valittiin monilähtökohtaisen ·,*·· seulontamenetelmän perusteella. Kloonit seulottiin aluksi 118792 32 käyttäen sitoutumismääritystä maljoilla, joissa käytettiin gp39-CD8:aa. Tämän jälkeen positiiviset kloonit seulottiin CD8-kontrollifuusioproteiinia (CD72-CD8) vastaan. Kloonit, jotka tuottivat positiivisen tuloksen maljoilla suoritetus-5 sa CD8-CD72-sitoutumismäärityksessä, hylättiin. Jäljelle jääneet kloonit seulottiin tämän jälkeen lepovaiheessa olevien ja 6 tunnin ajan aktivoitujen periferaalisen veren hu-maanilymfosyyttien (PBL) päällä käyttäen virtaussytometri-analyysiä. Hybridoomat, jotka värjäsivät aktivoituja mutta 10 eivät lepovaiheessa olevia PBL-soluja, katsottiin positiivisiksi. Jäljellä olevista klooneista tutkittiin lopuksi niiden kyky estää CD40lg:n sitoutuminen maljaan sidottuun gp3 9:ään.
Ensimmäisessä vaiheessa seulottiin gp39-CD8:aa ja 15 CD72-CD8:aa vastaan maljoilla suoritettavissa sitoutumis-määrityksissä noin 300 kloonia. Näistä klooneista havaittiin 30:n havaitsevan maljaan sitoutuneen gp39:n eikä CD8:aa. Näistä klooneista seulottiin tämän jälkeen niiden kyky havaita aktivoitujen humaani-PBL-solujen pinnalla 20 esiintyvä gp39. Noin 15 kloonia havaitsi molekyylin aktivoitujen PBL-solujen mutta ei lepovaiheessa olevien solujen • a */*: pinnalla. Spesifisyys varmistettiin lisäksi määrittämällä näiden kloonien kyky estää maljaan sidotun gp39:n havaitse-;*·.· minen CD40ig:n avulla. Kolme tutkitusta 10:stä kloonista • a 25 estävät CD40lg:n sitoutumisen tässä määrityksessä. Nämä aaee , ,·, kloonit olivat 3E4, 2H5 ja 2H8. Nämä kloonit ovat edullisia I · * käytettäväksi tämän keksinnön mukaisesti. Klooneista, jotka • · · tutkimusten tulosten mukaan olivat positiivisia aktivoitu-. . jen mutta ei lepovaiheessa olevien PBL-solujen suhteen, • a e *·*·* 30 seulottiin myös niiden reagoivuus aktivoidun rotan T-solu- *...* kloonin, POMC8:n, kanssa. Kloonissa 2H8 ilmentyi risti- ·:··· reagoivuutta tämän rotan T-solulinjan kanssa.
.***. Koe 2 - Humaani-gp39 sfiä vastaan suunnatut vasta- • * • aa * aineet • a a a a *· “ 35 Samanlaista immunisaatiomenetelmää kuin mikä oli a a *.*·: kuvattu kokeessa 1 käytettiin muiden humaani-gp39 :ää vas- 33 1 1 8792 taan suunnattujen vasta-aineiden valmistamiseen. Yksi Balb/c-hiiri immunisoitiin CFArhan valmistetulla liukoisella gp39-CD8:lla ja sitä käsiteltiin 4 viikkon kuluttua tästä aktivoiduilla periferaalisen veren humaanilymfosyyteillä 5 6 tunnin ajan. Hiirelle annettiin sitten tehosteannos käyt täen liukoista gp39-CD8:aa, mikä tapahtui 4 päivää ennen splenosyyttien fuusiointia NS-1-fuusio-osapuoleen vakiome-netelmiä käyttäen. Hybridoomakloonien seulonta suoritettiin värjäämällä ne virtaussytometrissa kuuden tunnin ajan akti-10 voiduilla humaani-PBL-soluilla. Valikoitiin kloonit, jotka saivat aikaan aktivoitujen mutta eivät lepovaiheessa olevien humaani-PBL-solujen värjäytymisen. Jatkotutkimukseen valittiin kuusi kloonia, kloonit 4D9-8, 4D9-9, 24-31, 24-43, 89-76 ja 89-79.
15 Valittujen vasta-aineiden spesifisyys varmistettiin useilla määrityksillä. Ensimmäiseksi virtaussytometrinen analyysi osoitti, että kaikki kuusi mAb-molekyyliä värjäävät aktivoituja mutta eivät lepovaiheessa olevia periferaalisen veren τ-soluja (ks. kuvio 3B ja 3C, jotka toimivat 20 edustavana esimerkkinä ja jotka kuvaavat aktivoitujen T-so-lujen värjäytymistä 4D9-8:lla ja 4D9-9:lla, mainitussa jär- • · · *· " jestyksessä ilmoitettuna). Kunkin kuuden vasta-aineen tun- ·· ί *·· nistaman molekyylin ilmentyminen on havaittavissa neljän • · !,*·; tunnin kuluessa aktivaatiosta, se on huipussaan 6-8 tun- *:* 25 nin välillä aktivaation jälkeen eikä se ole havaittavissa «··» : ·*; 24 tuntia aktivaation jälkeen. Kaikki kuusi mAb-molekyyliä ··· tunnistavat aktivoitujen CD3+-PBL-solujen pinnalla ilmenty-vän molekyylin, jotka solut ovat pääasiassa CD4+-fenotyyppiä mutta osa CD8+-T-soluista ilmentää myös tätä • · · 3 0 molekyyliä. Kaikkien näiden kuuden mAb-molekyylin tunnista- » · *;1 man molekyylin ilmentyminen inhiboituu silloin, kun vilje- *"*: lymediumissa käytetään syklosporiini A:ta, samoin kuin on asianlaita gp39:n ilmentymisen suhteen (ks. kuvio 4a ja 4B, • · · . jotka toimivat edustavana esimerkkinä ja joissa kuvataan • ·· I * 35 syklosporiini11a käsiteltyjen T-solujen värjäytymistä 4D9- • · · *· 8:11a ja 4D9-9:lla, mainitussa järjestyksessä ilmoitettu- 118792 34 na). Näiden mAb-molekyylien tunnistaman molekyylin ilmenty-miskinetiikka ja ilmentymisen jakaantuminen ovat identtisiä gp39:n vastaavien ominaisuuksien suhteen havaittuna käyttämällä humaani CD40Ig-fuusioproteiinia. Lisäksi kaikki kuusi 5 mAb-molekyyliä estävät gp39:n värjäytymisen CD40lg:lla (ks. kuvio 5A ja 5B, jotka toimivat edustavina esimerkkeinä ja joissa kuvataan sitä, miten gp39:n värjäytyminen CD40lg:lla inhiboituu 4D9-8:n ja 4D9-9:n läsnä ollessa, mainitussa järjestyksessä ilmoitettuna). Kaikki kuusi mAb-molekyyliä 10 tunnistavat ELISA-määrityksissä gp39-CD8:n, joka on gp39-molekyylin liukoinen fuusiomuoto. Lisäksi kaikki kuusi mAb-molekyyliä saavat aikaan sellaisen molekyylin immunosaostu-misen, jonka koko on noin 36 kd ja joka on peräisin 35S-leimalla varustetuista aktivoidusta humaani-PBL-soluista. 15 Immunosaostunut molekyyli on identtinen humaani-CD40lg-fuusioproteiinin saostaman molekyylin suhteen.
Kuuden valitun mAb:n (4D9-8, 4D9-9, 24-31, 24-43, 89-76 ja 89-79) toiminnallinen aktiivisuus määritettiin seuraavasti. Ensimmäiseksi määritettiin mAb-molekyylien ky-20 ky inhiboida IL-4:n ja liukoisen gp39:n kanssa viljeltyjen puhdistettujen humaani-B-solujen lisääntymistä. Puhdistet- • t * *· *ϊ tuja humaani-B-soluja viljeltiin gp39:n ja lL-4:n kanssa i* : ’·· käyttäen puhdistettuja monoklonaalisia vasta-aineita tai !,*·· CD40lg:tä annoksina, jotka olivat alueella 0 - 12,5 μg/ml.
t*;· 25 B-solujen lisääntyminen määritettiin kolmen päivän viljelyn ; jälkeen käyttämällä tymidiinin kerääntymistä soluihin. Tu- Φ · lokset (nämä on esitetty kuviossa 6) osoittavat, että kaik- • · · ki kuusi mAb-molekyyliä voivat inhiboida gp39:n ja IL-4:n t*m·' aikaansaamaa B-solujen lisääntymistä. mAb-molekyylit 89-76 • · · *,I 30 ja 24-31 olivat tehokkaimpia indusoidun B-solujen lisäänty- • · **"* misen inhiboimisessa.
*"*: Seuraavaksi tutkittiin näiden mAb-molekyylien kyky inhiboida B-solujen erilaistumista määritettynä anti- ·«· t.| . CD3:lla aktivoitujen T-solujen ja IL-2:n aikaansaamana Ig- • ·* , * 35 molekyylien muodostumisena. Puhdistettuja IgD -humaam-B- • · · 1 soluja valmistettiin käyttämällä positiivista selektiota 118792 35 FACS:n avulla ja niitä viljeltiin tämän jälkeen CD3:a vastaan suunnattujen aktivoitujen (mitomysiini C:llä käsiteltyjen) humaani-T-solujen ja lL-2:n kanssa kuuden päivän ajan käyttäen viljelymediumissa gp39:ää vastaan suunnattuja 5 puhdistettuja monoklonaalisia vasta-aineita annoksina 0 -10 μ3/πι1 tai jättämällä nämä molekyylit pois viljelymediu-mista. IgM:n, IgG:n ja IgA:n muodostuminen 6. päivänä määritettiin ELISA:11a. Tulokset (nämä on esitetty edempänä taulukossa 1) osoittavat, että kaikki kuusi vasta-ainetta 10 voivat inhiboida T-soluista riippuvaista B-solujen erilaistumista IgM:n, lgG:n ja IgA:n muodostumisen avulla määritettynä .
• · · • ·· • · ·« • · • ·· • · ! · · * ·· • a ··· *··» · · • · · ·*· »•t • · · *.· · :*·*· • · · • * • »· t ···«« • · *#· •\ : • ·· • * !1 * \ *: 118792 36
Taulukko 1
immunoglobuliinin muodostuminen mAb pg/ml IgM IgG IgA
ei mitään - 17 500 6 710 4 471 4D9-8 0,1 4 813 2 130 2 819 1.0 4 394 2 558 1 519 10.0 1 081 389 396 4D9-9 0,1 3 594 919 1 731 1.0 2 659 1 233 1 606 10.0 374 448 266 24-31 0,1 3 863 981 344 1.0 1 287 314 165 10.0 1 120 596 23 24-43 0,1 6 217 4 132 432 • · • · ..**** 1,0 3 193 2 130 192 • · • · · Φ 10.0 7 021 1 252 1 081 • · « ...*" 89-76 0,1 3 783 1 069 344 • * * 'Ϊ. 1,0 2 180 352 171 * · · « # · 10.0 818 551 19 • · !.V 89-79 0,1 9 763 1 924 3 021 • · a • · • · " 1,0 2 314 460 156 • · .···. 10,0 183 135 434 • · »·* a • s • t · l ; Sen vaikutuksen tutkimiseksi, joka gp39:ää vastaan • * · 1 *· suunnatuilla mÄb-molekyyleillä °η T-soluvasteisiin, lisät- 118792 37 tiin mAb-molekyylejä tavallisiin sekalymfosyyttiviljelmiin (MLR). 300 000 periferaalisen veren humaanilymfosyyttiä (reagoivat solut = R) viljeltiin yhdessä 100 000 säteilyte-tyn allogeenisen periferaalisen veren lymfosyytin (stimu-5 laattorit = S) kanssa viljelymediumissa, joka sisälsi gp39:ää vastaan suunnattuja mAb-molekyylejä (10 μg/ml) tai josta nämä oli jätetty pois. viljelmille annettiin 3H-tymidiinipulssi 4., 5. ja 6. päivänä ja ne koottiin talteen 18 tuntia tämän jälkeen. Kaikki kuusi humaani-gp39:ää vas-10 taan suunnattua mAb-molekyyliä inhiboivat allospesifisiä vasteita määritettynä MLR:n avulla (ks. kuvio 7, joka toimii edustavana esimerkkinä ja jossa on kuvattu allos-pesifisten vasteiden inhiboituminen silloin, kun R-soluja ja S-soluja inkuboidaan 24-31:n tai 89-76:n länsä ollessa; 15 positiivisina kontrolleina käytettiin CTLA4-immunoglobulii-nifuusioproteiinia ja CD28:aa vastaan suunnattua mAb:ta).
Sen määrittämiseksi, tunnistavatko nämä kuusi mAb-molekyyliä humaani-gp39-molekyylin pinnalla esiintyviä erillisiä epitooppeja, suoritettiin silloituskokeita. Akti-20 voidut humaani-PBL-solut tehtiin ensin toimintakyvyttömiksi . . kullakin näistä kuudesta mAb-molekyylistä (25 ug/ml konju- *· goimatonta vasta-ainetta). Solut pestiin ja ne värjättiin • · • ** sitten käyttäen 10 pg/ml biotiiniin konjugoitua vasta- *. 1: ainetta, minkä jälkeen nämä saatettiin reagoimaan fykoeryt- ,,1·1 25 riiniin konjugoidun avidiinin (PE-Αν) kanssa. Solujen vär- jäytyminen PE-Av:lla analysoitiin FACSrlla. Tulokset on :T: esitetty alla taulukossa 2.
• · ::: • « t·· : : ··« • · ·« =...: ·· • · • « • 1 · * ·· • · 118792 38
Taulukko 2
Estävä Värjäykseen käytetty vasta-aine vasta- aine 4D9-9 4D9-9 24-31 24-43 89-76 89-79 ei mi- +++ +++ ++++ ++++ ++++ ++++ tään 4D9-8 EM - ++++ ++++ +++ +++ 4D9-9 +++ EM +++ ++++ +++ +++ 24-31 + + EM +++ ++ ++ 24-43 + + +++ EM ++ + 89 — 76 + + +++ +++ EM +++
89-79 + ++ +++ +++ +++ EM
Symboli + esittää värjäytymisen voimakkuutta ja positiivisten solujen prosenttimäärää (++++ = MI > 200; +++ = MI > J4*.j 5 125; ++ = MI > 50; + = MI > 25; - = ei mitään taustan ylit- tävää värjäytymistä) . EM = ei määritetty.
a · • m · • ♦· • · .S. Kaikki vasta-aineet estivät CD40Ig:n sitoutumisen . ,·, aktivoituihin humaani-PBL-soluihin. Taulukossa 2 esitetyt • · · 10 tulokset osoittavat kuitenkin selvästi, että jotkin vasta- • » » • · » • aineet eivät kykene estämään muiden vasta-aineiden sitoutumista aktivoituihin humaani-PBL-soluihin, mikä viittaa sii- • ♦ · *·*·* hen, että ne tunnistavat erillisiä epitooppeja humaani-
• M
gp39-molekyylien pinnalla.
.···! 15 89-76- ja 24-31-hybridoomat, jotka tuottivat 89-76- .··*. ja 24-31-vasta-aineita, mainitussa järjestyksessä ilmoitet- • φ * tuna, talletettiin Budapestin sopimuksen ehtojen mukaisesti • · · *· *! 2.9.1994 talletuslaitokseen American Type Culture Collecti- • m \*·· on, Parklawn Drive, Rockville, Md. 89-76-hybridoomalle an- 118792 39 nettiin ATCCm hakunumero HB11713 ja 24-31-hybridoomalle annettiin ATCC:n hakunumero HB11712.
Koe 3 - Hiiren gp39:ä& vastaan suunnatut vasta- aineet 5 Tämän keksinnön yhdessä sovellutusmuodossa gp39:n antagonisti on hiiren gp39:ää vastaan suunnattu monoklonaa-linen vasta-aine, MRl. Monoklonaalisen MRl-vasta-aineen valmistamiseen käytettiin seuraavaa menetelmää ja tätä voidaan käyttää muiden gp39:ää vastaan suunnattujen vastalo aineiden valmistamiseen.
Hamstereita immunisoitiin intraperitoneaalisesti viikon välein kuuden viikon ajan aktivoiduilla Thl-soluilla (dl. 6), joiden määrä oli 5 - 106. Kun hiiren Thl-soluja vastaan suunnatun seerumin tiitteri oli suurempi kuin noin 15 1:10 000, niin suoritettiin solufuusioita polyetyleenigly- kolin avulla käyttäen hamsterissa tehtyjä immunosp1enosyyt-tejä ja NS-l:tä. Kasvavia hybridoomia sisältävistä kuopista peräsin olevat supernatantit seulottiin virtaussytometriaa käyttäen lepovaiheessa olevien ja aktivoitujen Thl-solujen 20 päällä. Yksi nimenomainen hybridooma, joka tuotti sellaista mAb-molekyyliä, joka tunnisti selektiivisesti aktivoidun • · • · · *· ** Th:n, otettiin jatkotutkimuksiin ja tämä jatkokloonattiin ·· j '·* MRl:n aikaansaamiseksi. MRl:tä valmistettiin askitesnes- • 9 *.*·· teessä ja se puhdistettiin ioninvaihto-HPLC:n avulla. MRl- •I* 25 hybridooma on talletettu talletuslaitokseen American Type • *t· : ·*· Culture Collection ja sille on annettu hakunumero HB11048.
»·· ·*:*. Vastaavat sovellutuemuodot • · *
Alan ammattikokemuksen perusteella on selvää tai #. · sen perusteella kyetään pelkin rutiinikokein havaitsemaan • 9 · 30 monia tämän keksinnön spesifisiä sovellutusmuotoja vastaa- • · *···* via sovellutusmuotoja, jotka on kuvattu tässä julkaisussa.
*ί**ί Nämä vastaavat sovellutusmuodot on tarkoitettu kuulumaan seuraavien patenttivaatimusten piiriin. Kaikkien tässä pa- t·· .* · tenttihakemusjulkaisussa siteerattujen kirjallisuusviittei- ·· * l 35 den ja patenttihakemusjulkaisujen sisältö on liitetty tähän • · » *· *· keksintöön siihen oikeuttavien säännösten nojalla.
Claims (28)
118792 40 1. a) Allogeenisen tai ksenogeenisen solun, joka ilmentää vähintään yhtä luovuttajan antigeeniä ja jonka 5 pinnalla esiintyy ligandi, joka osallistuu vuorovaikutukseen vastaanottajan T-solun pinnalla esiintyvän gp39:n kanssa, ja b) gp39:n antagonistin käyttö valmistettaessa yhdistettyä valmistetta salo manaikaista, erillistä tai peräkkäistä käyttöä varten luovuttajan kudokseen tai elimeen kohdistuvan T-solutole-ranssin indusoimiseksi tämän kudoksen tai elimen vastaanottajassa sillä edellytyksellä, että kun allogeeninen tai ksenogeeninen solu on allogeeninen solu, luovuttajan kudos 15 tai elin käsittää haiman solusaarekkeita, maksaa, munuaista, sydäntä, keuhkoa, ihoa, lihasta, hermokudosta, mahaa tai suolta. 2. a) Allogeenisen tai ksenogeenisen solun, joka ilmentää vähintään yhtä luovuttajan antigeeniä ja jonka 20 pinnalla esiintyy ligandi, joka osallistuu vuorovaikutukseen vastaanottajan T-solun pinnalla esiintyvän gp39:n » · :.*·* kanssa, ja j b) gp39:n antagonistin, ja :**,· c) luovuttajan haiman solusaarekesolujen • · 25 käyttö valmistettaessa yhdistettyä valmistetta sa- ···* . ,·, manaikaista, erillistä tai peräkkäistä käyttöä varten dia- beteksen hoidossa. • · ·
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että antagonisti on gp39:ää vastaan • · · '·*·* 30 suunnattu vasta-aine. *·· • · *φ..* 4. a) Luovuttaja-allogeenisen solun, joka ilmentää ····· vähintään yhtä luovuttajan antigeeniä ja jonka pinnalla .***, esiintyy ligandi, joka osallistuu vuorovaikutukseen vas- / t taanottajan T-solun pinnalla esiintyvän gp39:n kanssa, ja • · · *· *· 35 b) gp39:ää vastaan suunnatun vasta-aineen i'* S • ·· • · 118792 41 käyttö valmistettaessa yhdistettyä valmistetta samanaikaista, erillistä tai peräkkäistä käyttöä varten luovuttajan kudokseen tai elimeen kohdistuvan T-solutole-ranssin indusoimiseksi tämän kudoksen tai elimen vastaanot-5 tajassa, jolloin luovuttaja-allogeeninen solu ja gp39:ää vastaan suunnattu vasta-aine annetaan vastaanottajalle ennen kudoksen tai elimen siirtoa, jolloin luovuttajan kudos tai elin käsittää haiman solusaarekkeita, maksaa, munuaista, sydäntä, keuhkoa, ihoa, lihasta, hermokudosta, mahaa 10 tai suolta.
5. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että allogeeninen tai ksenogee-ninen solu on lymfoidisolu.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen käyttö, 15 tunnettu siitä, että lymfoidisolu on B-solu.
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että B-solu on lepovaiheessa oleva B-solu.
8. Jonkin patenttivaatimuksen 1 tai 5-7 mukainen 20 käyttö, tunnettu siitä, että allogeenista tai kse- nogeenista solua ja antagonistia annetaan vastaanottajalle • e ·,*·; ennen kudoksen tai elimen siirtoa. ··
9. Jonkin patenttivaatimuksen 1 tai 4-8 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että kudos tai elin käsit- • · ··· 25 tää haiman solusaarekkeita. »··· , .·. 10. Jonkin patenttivaatimuksen 1 tai 4-8 mukainen ,···, käyttö, tunnettu siitä, että kudos tai elin on va- • · · littu joukosta maksa, munuainen, sydän, keuhkot, iho, li- , . has, hermokudos, maha ja suoli. • · ·
11. Jonkin patenttivaatimuksen 3 - 10 mukainen • t *···* käyttö, tunnettu siitä, että gp39:ää vastaan suun- ····· nattu vasta-aine on monoklonaalinen vasta-aine. .***; 12. Patenttivaatimuksen 11 mukainen käyttö, • •Φ ,*4 tunnettu siitä, että monoklonaalinen vasta-aine on • # · *; *| 35 saatavissa hybridoomasolulinjasta MR1, joka on tallennettu V*: numerolla ATCC HB11048. 118792 42
13. Patenttivaatimuksen 11 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että monoklonaalinen vasta-aine on kimeerinen monoklonaalinen vasta-aine.
14. Patenttivaatimuksen 11 mukainen käyttö, 5 tunnettu siitä, että monoklonaalinen vasta-aine on humanisoitu monoklonaalinen vasta-aine.
15. Jonkin patenttivaatimuksen 3 - 14 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että gp39:ää vastaan suunnattu vasta-aine on humaani-gp39:ää vastaan suunnattu vas- 10 ta-aine.
16. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että gp39:n antagonisti on gp39:n ligandin liukoinen muoto.
17. Patenttivaatimuksen 16 mukainen käyttö, 15 tunnettu siitä, että gp39:n ligandin liukoinen muo to on CD40:n fuusioproteiini.
18. Gp39:n antagonistin käyttö sellaisen valmisteen valmistamiseksi, joka on tarkoitettu luovuttajan kudokseen tai elimeen kohdistuvan T-solutoleranssin indusoimiseksi 20 vastaanottajassa, joka tullaan altistamaan allogeenisille tai ksenogeenisille soluille, jotka ilmentävät vähintään • « ·,**! yhtä luovuttajan antigeeniä ja joiden pinnalla esiintyy li- M | *.» gandi, joka osallistuu vuorovaikutukseen vastaanottajan :\i T-solun pinnalla esiintyvän gp39*.n kanssa, sillä edellytyksin 25 sellä, että kun allogeeniset tai ksenogeeniset solut ovat ···« , ,·. allogeenisia soluja, luovuttajan kudos tai elin käsittää «·* haiman solusaarekkeita, maksaa, munuaista, sydäntä, keuh- • · · koa, ihoa, lihasta, hermokudosta, mahaa tai suolta. , . 19. Patenttivaatimuksen 18 mukainen käyttö, • · · *;];* 30 tunnettu siitä, että allogeeniset tai ksenogeeniset • · *···* solut, jotka ilmentävät vähintään yhtä luovuttajan antigeeni··· nia, käsittävät lymfoidisoluja tai antigeenin esittäviä so- ;···; luja. ··· ,· , 20. Patenttivaatimuksen 19 mukainen käyttö, • · · *· *· 35 tunnettu siitä, että lymfoidisolu on B - lymfosyytti. • · · • ·· • · 118792 43
21. Patenttivaatimuksen 19 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että antigeenin esittävä solu on valittu monosyyteistä, dendriittisoluista, Langerhansin soluista, kerätinosyyteistä, endoteelisoluista, astrosyyteis- 5 tä, fibroblasteista ja oligodendrosyyteistä.
22. Patenttivaatimuksen 19 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että antigeenin esittävä solu on B-solu.
23. Patenttivaatimuksen 18 mukainen käyttö, 10 tunnettu siitä, että luovuttajan kudos tai elin käsittää haiman solusaarekkeita, maksaa, munuaista, sydäntä, keuhkoa, ihoa, lihasta, hermokudosta, mahaa tai suolta.
24. Gp39:n antagonistin käyttö sellaisen lääkeaineen valmistamiseksi, joka on tarkoitettu diabeteksen hoi- 15 toon potilaalla, joka tullaan altistamaan luovuttajan haiman solusaarekkesoluille ja allogeenisille tai ksenogeeni-sille soluille, jotka ilmentävät vähintään yhtä luovuttajan antigeeniä ja joiden pinnalla esiintyy ligandi, joka osallistuu vuorovaikutukseen vastaanottajan T-solun pinnalla 20 esiintyvän gp39:n kanssa.
25. Patenttivaatimuksen 24 mukainen käyttö, • · ·,*·· tunnettu siitä, että allogeenisiin tai ksenogeeni- M ♦ siin soluihin, jotka ilmentävät vähintään yhtä luovuttajan :*·,· antigeeniä, lukeutuu dendriittisoluja, monosyyttejä, Lan- • · ··· 25 gerhansin soluja sekä lymfoidisoluja kuten B-lymfosyyttejä. ···· . .·, 26. Jonkin patenttivaatimuksen 18 - 25 mukainen ··· .···, käyttö, tunnettu siitä, että gp39:n antagonisti on • · · gp39:ää vastaan suunnattu vasta-aine tai liukoinen CD40:n . . fuusioproteiini. t · «
27. Patenttivaatimuksen 26 mukainen käyttö, • · *···* tunnettu siitä, että vasta-aine on gp39:ää vastaan ····· suunnattu monoklonaalinen vasta-aine. .·1. 28. Patenttivaatimuksen 27 mukainen käyttö, ··· /, tunnettu siitä, että monoklonaalinen vasta-aine on • · · *· *· 35 on kimeerinen vasta-aine tai humanisoitu monoklonaalinen · ♦ · t *J vasta-aine. 118792 44
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/234,987 US5683693A (en) | 1994-04-25 | 1994-04-25 | Method for inducing T cell unresponsiveness to a tissue or organ graft with anti-CD40 ligand antibody or soluble CD40 |
| US23498794 | 1994-04-25 | ||
| US9504832 | 1995-04-25 | ||
| PCT/US1995/004832 WO1995028957A2 (en) | 1994-04-25 | 1995-04-25 | Methods for inducing t cell tolerance to a tissue or organ graft |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI964272A0 FI964272A0 (fi) | 1996-10-23 |
| FI964272A FI964272A (fi) | 1996-12-19 |
| FI118792B true FI118792B (fi) | 2008-03-31 |
Family
ID=22883593
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI964272A FI118792B (fi) | 1994-04-25 | 1996-10-23 | Käyttöjä T-solutoleranssin indusoinniksi kudos- tai elinsiirrännäiselle |
Country Status (34)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US5683693A (fi) |
| EP (2) | EP0757557B1 (fi) |
| JP (1) | JP2974415B2 (fi) |
| KR (1) | KR100468330B1 (fi) |
| CN (1) | CN1134266C (fi) |
| AP (1) | AP764A (fi) |
| AT (1) | ATE288281T1 (fi) |
| AU (1) | AU710925B2 (fi) |
| BG (1) | BG62121B1 (fi) |
| BR (1) | BR9507509A (fi) |
| CA (1) | CA2188672A1 (fi) |
| CZ (1) | CZ291266B6 (fi) |
| DE (1) | DE69533984T2 (fi) |
| DK (1) | DK0757557T3 (fi) |
| EE (1) | EE03516B1 (fi) |
| ES (1) | ES2237757T3 (fi) |
| FI (1) | FI118792B (fi) |
| GE (1) | GEP20022648B (fi) |
| HU (1) | HU221752B1 (fi) |
| IS (1) | IS2118B (fi) |
| LT (1) | LT4309B (fi) |
| LV (1) | LV11785B (fi) |
| MD (1) | MD1444B2 (fi) |
| NO (2) | NO319787B1 (fi) |
| NZ (1) | NZ284905A (fi) |
| OA (1) | OA10591A (fi) |
| PL (1) | PL180031B1 (fi) |
| PT (1) | PT757557E (fi) |
| RO (1) | RO114743B1 (fi) |
| RU (1) | RU2169009C2 (fi) |
| SI (1) | SI9520057A (fi) |
| SK (1) | SK136996A3 (fi) |
| UA (1) | UA44892C2 (fi) |
| WO (1) | WO1995028957A2 (fi) |
Families Citing this family (41)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5474771A (en) | 1991-11-15 | 1995-12-12 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Murine monoclonal antibody (5c8) recognizes a human glycoprotein on the surface of T-lymphocytes, compositions containing same |
| US7070777B1 (en) | 1991-11-15 | 2006-07-04 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Method for inhibiting inflammation with an antibody that binds the 5C8 protein |
| US6472510B1 (en) | 1992-02-14 | 2002-10-29 | Bristol-Myers Squibb Company | CD40 receptor ligands |
| NZ273207A (en) * | 1993-09-02 | 1997-09-22 | Dartmouth College | Igg antibodies gp39 (cd40) |
| KR100398819B1 (ko) * | 1993-09-02 | 2004-02-05 | 트러스티스 오브 다트마우스 칼리지 | gp39길항제를포함하는약제조성물 |
| US5683693A (en) | 1994-04-25 | 1997-11-04 | Trustees Of Dartmouth College | Method for inducing T cell unresponsiveness to a tissue or organ graft with anti-CD40 ligand antibody or soluble CD40 |
| US5876950A (en) * | 1995-01-26 | 1999-03-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Monoclonal antibodies specific for different epitopes of human GP39 and methods for their use in diagnosis and therapy |
| US6001358A (en) * | 1995-11-07 | 1999-12-14 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Humanized antibodies to human gp39, compositions containing thereof |
| US6440418B1 (en) * | 1995-11-07 | 2002-08-27 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Methods of treating autoimmune diseases with gp39-specific antibodies |
| US6340459B1 (en) | 1995-12-01 | 2002-01-22 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Therapeutic applications for the anti-T-BAM (CD40-L) monoclonal antibody 5C8 in the treatment of reperfusion injury in non-transplant recipients |
| WO1997034633A1 (en) * | 1996-03-20 | 1997-09-25 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for inhibiting an immune response by blocking the gp39/cd40 and ctla4/cd28/b7 pathways and compositions for use therewith |
| NZ337073A (en) * | 1997-01-10 | 2001-01-26 | Biogen Inc | use of an anti CD40L compound to treat a patient with an autoimmune disease or chronic immune system disorder |
| EP1754490A3 (en) * | 1997-06-20 | 2010-01-20 | Biogen Idec MA Inc. | CD 154 blockage therapy for pancreatic islet tissue transplantation in primates |
| HUP0003160A3 (en) * | 1997-06-20 | 2002-09-30 | Biogen Idec Ma Inc Cambridge | The use of cd40:cd154-binding inhibiting agent for the preparation of pharmaceuticals used for enhancing of tolerance against tissue graft after pangreatic islet tissue transplantation |
| US20050031611A1 (en) * | 1998-05-08 | 2005-02-10 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Transplant tolerance by costimulation blockade and T-cell activation-induced apoptosis |
| KR100711210B1 (ko) * | 1998-07-30 | 2007-04-24 | 리젼츠 오브 더 유니버시티 오브 미네소타 | ｇｐ３９ 길항제를 사용한 동종 또는 이종 Ｔ-세포의 생체외 처리 |
| US20020199218A1 (en) * | 1999-08-19 | 2002-12-26 | Daphne Goring | Proline-rich extensin-like receptor kinases |
| RU2162297C1 (ru) * | 1999-11-25 | 2001-01-27 | Камакин Владислав Владимирович | Способ индивидуального подбора оптимального питания человека |
| WO2001079555A2 (en) | 2000-04-14 | 2001-10-25 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Roles of jak/stat family members in tolerance induction |
| CN1441675A (zh) | 2000-05-12 | 2003-09-10 | 贝斯以色列护理医疗中心有限公司 | 免疫抑制组合物及方法 |
| EP1289554A4 (en) * | 2000-06-02 | 2004-05-26 | Univ Minnesota | IMMUNOTHERAPEUTIC PROCESS FOR PREVENTING REJECTION OF ISLAND CELLS |
| EP1299542A2 (en) * | 2000-06-06 | 2003-04-09 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Non-agonistic antibodies to human gp39, compositions containing, and therapeutic use thereof |
| US20040022787A1 (en) | 2000-07-03 | 2004-02-05 | Robert Cohen | Methods for treating an autoimmune disease using a soluble CTLA4 molecule and a DMARD or NSAID |
| AU2001273174B2 (en) | 2000-07-03 | 2006-05-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for treating rheumatic diseases using a soluble CTLA4 molecule |
| CA2364983A1 (en) * | 2000-12-13 | 2002-06-13 | John R. Coleman | Nucleic acid molecules and polypeptides for catabolism of abscisic acid |
| WO2002078743A1 (en) * | 2001-02-16 | 2002-10-10 | University Of Rochester | Compositions and methods for reducing tranfusion reactions |
| US7597895B2 (en) * | 2001-02-20 | 2009-10-06 | The Governing Council Of The University Of Toronto | Signal peptides, nucleic acid molecules and methods for treatment of caries |
| US7556807B2 (en) | 2001-02-20 | 2009-07-07 | Kane Biotech, Inc. | Signal peptides, nucleic acid molecules and methods for treatment of caries |
| AU2002305716B2 (en) | 2001-05-23 | 2007-10-25 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for protecting allogeneic islet transplant using soluble CTLA4 mutant molecules |
| US7498171B2 (en) | 2002-04-12 | 2009-03-03 | Anthrogenesis Corporation | Modulation of stem and progenitor cell differentiation, assays, and uses thereof |
| PT1517921E (pt) * | 2002-06-28 | 2006-09-29 | Domantis Ltd | Ligandos duplamente especificos com semi-vida no soro aumentada |
| CA2542984A1 (en) * | 2003-07-07 | 2005-01-27 | David H. Wagner | Methods for predicting development of auto-immune diseases and treatment of same |
| US7563443B2 (en) | 2004-09-17 | 2009-07-21 | Domantis Limited | Monovalent anti-CD40L antibody polypeptides and compositions thereof |
| EP1795587A1 (en) * | 2005-12-07 | 2007-06-13 | Schuler, Gerold, Prof. Dr. | Method for the direct culture of dendritic cells without a preceding centrifugation step |
| RU2445975C2 (ru) * | 2006-03-02 | 2012-03-27 | Алексион Фармасьютикалз, Инк. | Продление срока выживаемости аллотрансплантата путем ингибирования активности комплемента |
| FR2934140B1 (fr) * | 2008-07-25 | 2010-09-03 | Seb Sa | Couvercle d'appareil electromenager de cuisson comportant un sous-ensemble de filtration |
| MX2012000086A (es) | 2009-06-26 | 2012-06-12 | Soricimed Biopharma Inc | Peptidos derivados de soricidi y metodos para la la deteccion de canceres trpv-6 y suministro de farmaco. |
| WO2013013708A1 (en) | 2011-07-26 | 2013-01-31 | Fundació Institut D'investigació Biomèdica De Bellvitge | Treatment of acute rejection in renal transplant |
| US9888673B2 (en) | 2014-12-10 | 2018-02-13 | Regents Of The University Of Minnesota | Genetically modified cells, tissues, and organs for treating disease |
| RU2580640C1 (ru) * | 2014-12-25 | 2016-04-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный научный центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В.И. Шумакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ профилактики гуморального отторжения при аво-несовместимой трансплантации печени детям раннего возраста |
| RU2688172C1 (ru) * | 2018-04-05 | 2019-05-20 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Московской области "Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского" (ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) | Способ профилактики отторжения трансплантата трупной почки |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0408859B1 (en) * | 1989-05-23 | 1995-08-09 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Monoclonal antibodies to activated endothelial cells |
| US5690933A (en) * | 1989-05-31 | 1997-11-25 | Glaxo Wellcome Inc. | Monoclonal antibodies for inducing tolerance |
| ATE239790T1 (de) * | 1991-10-25 | 2003-05-15 | Immunex Corp | Antikörper gegen cd40-l |
| US5474771A (en) * | 1991-11-15 | 1995-12-12 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Murine monoclonal antibody (5c8) recognizes a human glycoprotein on the surface of T-lymphocytes, compositions containing same |
| CA2089229C (en) * | 1992-02-14 | 2010-04-13 | Alejandro A. Aruffo | Cd40cr receptor and ligands therefor |
| AU5098493A (en) * | 1992-08-21 | 1994-03-15 | Schering Corporation | Cd40 ligand, anti cd40 antibodies, and soluble cd40 |
| US5540926A (en) * | 1992-09-04 | 1996-07-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Soluble and its use in B cell stimulation |
| US5597563A (en) * | 1992-09-04 | 1997-01-28 | Beschorner; William E. | Method induction of antigen-specific immune tolerance |
| FI934751A (fi) * | 1992-10-30 | 1994-05-01 | Bristol Myers Squibb Co | Extracellulaera matrisreceptorligander som modulerar leukocytfunktioner |
| KR100398819B1 (ko) * | 1993-09-02 | 2004-02-05 | 트러스티스 오브 다트마우스 칼리지 | gp39길항제를포함하는약제조성물 |
| NZ273207A (en) * | 1993-09-02 | 1997-09-22 | Dartmouth College | Igg antibodies gp39 (cd40) |
| US5869049A (en) * | 1993-09-02 | 1999-02-09 | Trustees Of Dartmouth College | Methods of inducing T cell unresponsiveness to bone marrow with gp39 antagonists |
| US5683693A (en) * | 1994-04-25 | 1997-11-04 | Trustees Of Dartmouth College | Method for inducing T cell unresponsiveness to a tissue or organ graft with anti-CD40 ligand antibody or soluble CD40 |
-
1994
- 1994-04-25 US US08/234,987 patent/US5683693A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-04-25 AT AT95917593T patent/ATE288281T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-04-25 JP JP7527745A patent/JP2974415B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-04-25 EP EP95917593A patent/EP0757557B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-25 RO RO96-02051A patent/RO114743B1/ro unknown
- 1995-04-25 WO PCT/US1995/004832 patent/WO1995028957A2/en active IP Right Grant
- 1995-04-25 GE GEAP19953439A patent/GEP20022648B/en unknown
- 1995-04-25 CN CNB951935623A patent/CN1134266C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-04-25 PT PT95917593T patent/PT757557E/pt unknown
- 1995-04-25 CA CA002188672A patent/CA2188672A1/en not_active Abandoned
- 1995-04-25 RU RU96122475/14A patent/RU2169009C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-04-25 PL PL95317022A patent/PL180031B1/pl unknown
- 1995-04-25 KR KR1019960705968A patent/KR100468330B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1995-04-25 EE EE9600162A patent/EE03516B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1995-04-25 AP APAP/P/1996/000906A patent/AP764A/en active
- 1995-04-25 SK SK1369-96A patent/SK136996A3/sk unknown
- 1995-04-25 DK DK95917593T patent/DK0757557T3/da active
- 1995-04-25 AU AU23585/95A patent/AU710925B2/en not_active Ceased
- 1995-04-25 SI SI9520057A patent/SI9520057A/sl unknown
- 1995-04-25 DE DE69533984T patent/DE69533984T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-04-25 HU HU9602924A patent/HU221752B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1995-04-25 NZ NZ284905A patent/NZ284905A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-04-25 EP EP05075209A patent/EP1530973A3/en not_active Withdrawn
- 1995-04-25 BR BR9507509A patent/BR9507509A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-04-25 MD MD97-0009A patent/MD1444B2/ro unknown
- 1995-04-25 ES ES95917593T patent/ES2237757T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-25 UA UA96114392A patent/UA44892C2/uk unknown
- 1995-04-25 CZ CZ19963125A patent/CZ291266B6/cs unknown
-
1996
- 1996-10-18 NO NO19964440A patent/NO319787B1/no unknown
- 1996-10-22 IS IS4378A patent/IS2118B/is unknown
- 1996-10-23 FI FI964272A patent/FI118792B/fi active
- 1996-10-24 OA OA60909A patent/OA10591A/en unknown
- 1996-11-19 BG BG100991A patent/BG62121B1/bg unknown
- 1996-11-25 LT LT96-165A patent/LT4309B/lt not_active IP Right Cessation
- 1996-11-25 LV LVP-96-440A patent/LV11785B/en unknown
-
1997
- 1997-08-05 US US08/906,332 patent/US5902585A/en not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-01-05 US US09/227,081 patent/US6375950B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-10-07 US US10/962,033 patent/US7501124B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2005
- 2005-03-04 NO NO20051182A patent/NO20051182L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI118792B (fi) | Käyttöjä T-solutoleranssin indusoinniksi kudos- tai elinsiirrännäiselle | |
| FI105528B (fi) | Menetelmiä antigeenispesifisen T-solutoleranssin indusoimiseksi | |
| KR100353639B1 (ko) | 항원-특이적t세포의내성을유도하는방법 | |
| KR19990022650A (ko) | 사람 ｂ7.1 및/또는 ｂ7.2 영장류화된 형태에 특이적인 원숭이 단일클론성 항체 및 이의 약제학적 조성물 | |
| US7476385B2 (en) | Methods of inhibiting IgE responses to thymus-dependent antigens with the anti-gp39 antibody MR1 | |
| FI106927B (fi) | Menetelmä sen määrittämiseksi, onko antigeeni TD-antigeeni vai TI-2-antigeeni | |
| US20010033840A1 (en) | Methods for inducing T cell tolerance to a tissue or organ graft | |
| WO2001000679A2 (en) | Methods for inducing t cell non-responsiveness to a tissue or organ graft | |
| MXPA96005051A (en) | Methods to induce tolerance to t cells for a tissue grafting uórg | |
| AU7371801A (en) | Methods of prolonged suppression of humoral immunity |