FI113866B

FI113866B - 1,2-silloitettu 1H-imidatso[4,5-c]kinoliini-4-amiineja

Info

Publication number: FI113866B
Application number: FI972967A
Authority: FI
Inventors: Kyle J Lindstrom
Original assignee: Minnesota Mining & Mfg
Priority date: 1995-01-12
Filing date: 1997-07-11
Publication date: 2004-06-30
Also published as: IL116566A0; JPH10512256A; KR19980701297A; SK282145B6; CZ220497A3; CA2209487A1; IL116566A; NO972801D0; CA2209487C; HU221430B; ATE192153T1; US5482936A; HUT77667A; DE69516540T2; WO1996021663A1; ES2145318T3; NO972801L; NO3198A; MX9705283A; NO20003198D0

Description

, 113866 1,2-silloitettu lH-imidatso[4,5-c] kinoliini-4-amiineja

Keksinnön tausta

Keksinnön ala 5 Tämä keksintö koskee 1,2 silloitettuja lH-imidatso- [4,5-c]kinoliiniamiiniyhdisteitä. Toiselta aspektilta tämä keksintö koskee immunosäätely-yhdisteitä. Toiselta aspektilta tämä keksintö koskee farmaseuttisia koostumuksia, jotka sisältävät tällaisia yhdisteitä, ja tällaisten yhdis-10 teiden käyttöä.

Läheisen tekniikan kuvaus

Tietyt lH-imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinit tunnetaan viruksenvastaisina aineina ja/tai immunosäätelyainei-na. Tällaisia yhdisteitä esitetään esim. US-patenteissa nro 15 4 689 338, 4 929 624, 5 037 986, 5 266 575, 5 268 376, 5 346 905, EP-hakemuksessa nro 0 385 630 A2 ja W092/15 582 (Gerster et ai.). US-patenttijulkaisu 5 494 916(Lindström et ai.) esittää immunosäätelyaineimidatsopyridiiniamiineja, joilla on kaava NH2 : : : R Ri ’ 20 • · '. ·: jossa Ri valitaan ryhmästä, joka koostuu vedystä; ; ·· CHRxRy:stä, jossa Rx on vety ja Ry valitaan ryhmästä, joka » t / : koostuu haarautumattoman ketjun, haarautuneen ketjun tai syklisestä alkyylistä, joka sisältää 1 - noin 10 hiiliato-j. 25 mia, haarautumattoman ketjun tai haarautuneen ketjun alke-.nyylistä, joka sisältää 2 - noin 10 hiiliatomia, haarautumattoman ketjun tai haarautuneen ketjun hydroksialkyylistä, I t · joka sisältää 1 - noin 6 hiiliatomia, alkoksialkyylistä, *...· jossa alkoksiryhmä sisältää 1 - noin 4 hiiliatomia ja al- . 30 kyyliryhmä sisältää 1 - noin 6 hiiliatomia, ja fenyylietyy- • · · .···. listä; ja -CH=CRZRZ: sta, jossa kukin Rz on itsenäisesti haa- • · • · t 113866 2 rautumattoman ketjun, haarautuneen ketjun tai syklinen al-kyyli, jossa on 1 - noin 6 hiiliatomia.

US-patentti nro 5 352 784 (Nickolaides et ai.) esittää immunosäätelyaine-6,7 - fuusioituneita sykloalkyyli-5 imidatsopyridiiniamiineja.

Keksinnön yhteenveto 1H-imidatso[4,5-c]kinoliini-4-amiinit ovat yhdisteitä, joilla on yleinen runkokaava I, jossa on esitetty numerointisysteemi: NH-> m-

:iqP

10 8

Tämä keksintö tarjoaa yhdisteitä ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja, jotka on muodollisesti johdettu silloittamalla lH-imidatso[4,5]kinoliini-4-amii-nien 1- ja 2-asemat. Erityisesti tämä keksintö tarjoaa yh-15 disteitä, joilla on kaava II

nh2

v:= JDC

o·! (n\" ) « · • · jossa Z on kuten alla yksityiskohtaisesti määritellään, ja , niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.

» « ;i(: 20 Tämä keksintö tarjoaa myös farmaseuttisen formulaa- • · *···* tion, joka käsittää: (i) kaavan II mukaisen yhdisteen mää- *,·· rässä, joka on tehokas saamaan aikaan interferonin biosyn- teesin eläimessä, ja (ii) farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan. Tämä keksintö tarjoaa edelleen kaavan II mukaisen *;;;* 25 yhdisteen käytön sellaisen lääkkeen valmistuksessa, joka on • » *·..* tarkoitettu saamaan aikaan interferonin biosynteesin.

3 113866

Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus Tämä keksintö tarjoaa yhdisteitä, joilla on kaava II, jossa Z valitaan ryhmästä, joka koostuu seuraavista: -(CH2)n-, jossa n on 1 - 4, 5 - (CH2) a-C (RiR2) (CH2)b- , jossa a ja b ovat kokonaislu kuja ja a + b on 0 - 3, Ri on vety ja R2 on alkyyli, jossa on 1 - 4 hiiliatomia, ja - (CH2) a- (Y) - (CH2)b_ , jossa a ja b ovat kokonaislu ku j a ja a + b on 0 - 3, ja Y on O, 10 ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.

Kun Z on -(CH2)n-, kuten edellä on määritelty, se on edullisesti alkyleeni, jossa on 1, 2 tai 3 hiiliatomia.

Kun Z on - (CH2) a-C (RiR2) (CH2)b-, kuten edellä on määritelty, R2 on edullisimmin metyyli. Kun Z on - (CH2) a- (Y) - (CH2) b-, 15 kuten edellä on määritelty, a + b on edullisesti 1.

Edullisiin keksinnön yhdisteisiin kuuluvat: 8,9,10,11-tetrahydropyrido[11,2':1,2]imidatso[4,5-c]kinolin-6-amiini, so.

NH2

li CPO

• * * Y’ 20 10-metyyli-8,9,10,11-tetrahydropyrido[11,21:1,2]- ’· ”· imidatso [4,5-c] kinolin-6-amiini, so.

NH2

o p Q

ch3 8H-9,10,11,12-tetrahydroheksametyleeni-imino-25 [1' , 2 1 :1,2] imidatso [4,5-c] kinolin-6-amiini, so.

4 113866 NH2

ÄVx qPO

9,10-dihydro-8H-pyrrolo[1', 2 ':1,2]imidatso[4,5-c]-kinolin-4-amiini , so.

NH2 5 ja 10,ll-dihydro-8H-[1,4]-oksatsino[4',3':1,2]imi datso [4,5-c]kinolin-6-amiini, so .

NH2 (gr .. Reaktiokaavio I havainnollistaa keksinnön yhdistei- • ·« * , 10 den valmistusta. Substituoimaton kaavan XI mukainen yhdiste "'· on tunnettu kaupallisesti saatavilla oleva yhdiste ja muut "·’ ' kaavan XI mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa alan ämmät- ·. ·; timiehen tuntemilla menetelmillä ja ne esitetään julkai- • ’·· suissa Chem. Ber. 1927, 60, 1108 (Kohler) ja J. Heterocy- : 15 clic Chem. 1988, 25, 857 (Kappe) .

Kohdassa (i) 3-nitrokinoliini-2,4-disulfonaatti j. valmistetaan saattamalla ensin 2,4-dihydroksi-3-nitrokino- liini reagoimaan sulfonyylihalogenidin tai edullisesti sul-fonihappoanhydridin kanssa. Sopiviin sulfonyylihalogenidei- » · 2 0 hin kuuluvat alkyylisulfonyylihalogenidit, kuten metaani- ,.· sulfonyylikloridi ja trif luorimetaanisulf onyylikloridi, ja : aryylisulfonyylihalogenidit, kuten bentseenisulfonyyliklo- .··, ridi, p-bromibentseenisulfonyylikloridi ja p-tolueenisulfo- nyylikloridi. Sopiviin sulfonihappoanhydrideihin kuuluvat 5 113866 ne, jotka vastaavat edellä mainittuja sulfonyylihalogenide-ja. Erityisen edullinen sulfonihappoanhydridi on trifluori-metaanisulfonihappoanhydridi.

Reaktio-olosuhteet käsittävät edullisesti kaavan XI 5 mukaisen yhdisteen yhdistämisen ensin emäksen kanssa, edullisesti tertiäärisen amiiniemäksen ylimäärän kanssa (esim. trialkyyliamiiniemäs, kuten trietyyliamiini), ja edullisesti sopivassa liuottimessa, kuten dikloorimetaanissa, ja sitten sulfonyylihalogenidin tai sulfonihappoanhydridin li-10 säyksen. Lisäys suoritetaan edullisesti kontrolloidulla tavalla (esim. tipoittain) ja alennetussa lämpötilassa (esim. noin 0 °C:ssa) .

• · • »· • · · • » · • · · • 1 · t · • · · • 1 • · t · I · • · < • » 6 113866

Reaktiokaavio I

OH OTf Λ /N°2 JL N02

JO JO

Qj 0H or+-h

XII

(ϋ) #N(BZ); O lQfNH: » QJ NH:

XIV XIII

(iv)

V

:·. N(Bz)2 Ϊ NCBz); :T: — JOrVcH,

Ok O' J

,: · vo Or· lOJJ ch2 t : ·.. xv ^ '--"

XVI

:: ; (vi) f nh2 :·· jj&V-^

J: tT\J

Π • · 7 113866

Disulfonaatti saatetaan sitten reagoimaan tert-butyyliamiinin kanssa, edullisesti tertiäärisen amiiniemäk-sen ylimäärän ollessa läsnä liuottimessa, kuten dikloori-metaanissa, jolloin saadaan kaavan XII mukainen yhdiste.

5 Reaktio voidaan suorittaa lisäämällä tertiäärinen amiini-emäs reaktioseokseen, joka saadaan kohdan (i) ensimmäisestä osasta, jäähdyttämällä alennettuun lämpötilaan (esim. 0 °C) ja lisäämällä tert-butyyliamiini kontrolloidulla tavalla (esim. tipoittain). Reaktio voidaan suorittaa myös lisää-10 mällä tert-butyyliamiini disulfonaatin ja tertiäärisen amiiniemäksen liuokseen liuottimessa, kuten dikloorime-taanissa. Reaktio voidaan suorittaa suhteellisen alhaisissa lämpötiloissa, esim. noin 0 °C:ssa, jotta vähennetään ei-toivottujen 2-aminoitujen ja 2,4-diaminoitujen sivutuottei-15 den määrää. Joskus on tarpeen tai toivottavaa kuumentaa reaktioseosta lisäyksen jälkeen, jotta reaktio menee loppuun .

Kohdassa (ii) kaavan XII mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan dibentsyyliamiinin kanssa. Reaktio voidaan suo- 20 rittaa laittamalla lähtöaine ja dibentsyyliamiini inerttiin liuottimeen, kuten bentseeniin, tolueeniin tai ksyleeniin, : '·· ja kuumentamalla sellaisessa lämpötilassa ja sellaisen ajan, joka on riittävä saamaan aikaan sulf onaattiryhmän korvautuminen dibentsyyliamiinilla, tällaisen lämpötilan ja ;'· · 25 ajan alan ammattimies valitsee helposti. Tert-butyyliryhmä • · poistetaan sitten kuumentamalla polaarisessa liuottimessa, kuten metanolissa, hapon, kuten kloorivetyhapon, ollessa ♦ * · läsnä.

. Nitroryhmä pelkistetään sitten aminoryhmäksi. Mene- » * · ·;;; 30 telmät tällaista pelkistystä varten ovat alan ammattimie- ♦ « ’·;** helle hyvin tuttuja. Edullinen menetelmä käsittää Ni2B:n ··· muodostamisen in situ natriumboorihydridistä ja NiCl2:sta metanolissa, jolloin saadaan pelkistysaineliuos. Nitroyh-diste lisätään pelkistysaineliuokseen, jolloin saadaan ai- • » · • i 8 113866 kaan nitroryhmän pelkistys. Tuote on kaavan XIII mukainen yhdiste.

Kohdassa (iii) kaavan XIII mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan etikkahapon tai sen ekvivalentin kanssa, 5 jolloin saadaan kaavan XIV mukainen syklisoitu yhdiste. Sopiviin ekvivalentteihin etikkahapolle kuuluvat vastaavat asetyylihalogenidit ja ortoesterit. Kun käytetään etikka-happoa tai ortoesteriekvivalenttia, reaktio voidaan suorittaa liuottimen ollessa poissa tai inertissä liuottimes-10 sa, kuten ksyleenissä tai tolueenissa, kuumentaen riittävästi (esim. noin 80 - 150 °C:ssa riippuen liuottimesta, jos sitä on) , jolloin ajetaan pois kaikki alkoholi tai vesi, joka on muodostunut reaktion sivutuotteena. Kun käytetään asetyylihalogenidia, reaktio suoritetaan edullises-15 ti etikkahapossa kuumentaen.

Kohdassa (iv) kaavan XIV mukainen syklisoitu yhdiste substituoidaan ensin 1-asemassa aikoksimetyyliryhmällä (-CH20R', jossa R' on alkyyli, kuten etyyli), jotta suojataan 1-typpi. Substituutio voidaan suorittaa käsittelemäl-20 lä kaavan XIV mukaista yhdistettä natriumhydridillä ja halogeenimetyylialkyylieetterillä, kuten kloorimetyyli-;·, etyylieetterillä. Saatava 1-suojattu yhdiste substituoi daan sitten 2-metyyliryhmään kaavan -ZC1 ryhmällä, jolloin • * ·

Dl saadaan kaavan XV mukainen yhdiste. Tämä voidaan saada ai- • « · *j’ ’ 25 kaan metalloimalla 1-suojatun yhdisteen 2-metyyliryhmä, '· ‘5 esim. käsittelemällä n-butyylilitiumilla tetrahydrofuraa- : ” nissa, sitten lisäämällä alkylointiaine, jolla on kaava *. : X'-ZC1, jossa X' on helpommin poistuva ryhmä kuin kloori (esim. X' voi olla bromi). Toinen sopiva menetelmä 2-me-:· 30 tyyliryhmään substituoimiseksi käsittää metalloinnin, h saattamisen reagoimaan epoksidin, kuten etyleenioksidin, , kanssa ja 2-(hydroksialkyyli)yhdisteen muuttamisen vastaa- ; vaksi halogenidiksi saattamalla se reagoimaan kloorausai- neen, kuten tionyylikloridin, kanssa inertissä liuotti-: 3 5 messa.

> · 113866 9

Kohdassa (v) kaavan XV mukaisen yhdisteen 1-asemas-ta poistetaan suojaus, esim. kuumentamalla HCl:n ollessa läsnä liuottimessa, kuten metanolissa. Saatava 1-vety-yhdiste syklisoidaan sitten klooriryhmän muodollisella kor-5 vaamisella 1-typellä. Käsittely natriumjodidilla polaarisessa liuottimessa, kuten asetonissa, neutraloivan emäksen (esim. kaliumkarbonaatin) ollessa läsnä on sopiva keino syklisaation aikaansaamiseksi. Saadaan kaavan XVI mukainen yhdiste.

10 Kohdassa (vi) kaavan XVI mukainen yhdiste hydroge- nolysoidaan, jolloin saadaan vastaava kaavan II mukainen 4-aminoyhdiste. Tavanomaiset hyvin tunnetut hydrausolosuh-teet ovat sopivia. Edulliset olosuhteet käsittävät kuumentamisen muurahaishapossa Pd(OH)2/C:n ollessa läsnä.

15 Reaktiokaavio II esittää reitin tiettyihin keksin nön yhdisteisiin, jotka eivät ole vastaanottavaisia valmistukselle reaktiokaavio I:n kautta.

• »· • * · • ♦ · • * · • » • » · 1 * * · * 10 113866

Reaktiokaavio II

N(Bz): N(Bz)2 1 NH-, n

Ä ' JO>H

p NHi 0j h XIII 503 (¾

'F

N(Bz)2 N(Bz)2

jnn;^o^-oc(Wl XXycH'OH

ort .« gi ^OR' "*- OR· XXIII ^°31 (iv)

T

•: " N(Bz)2

rl1: iorN>^o^OH

:=::: yPH

XXIV

• t ( • * · 5

Kohdassa (i) kaavan XIII mukainen yhdiste syklisoi-daan käyttäen muurahaishappoa tai sen ekvivalenttia, kuten • · T ortoformiaattia (esim. trietyyliortoformiaattia), jolloin saadaan kaavan XXI mukainen yhdiste [katso esim. reaktio-10 kaavion I kohta (iii) ] . Kohdassa (ii) kaavan XXI mukainen , .·, yhdiste suojataan 1-asemassa, kuten edellä kuvataan reak- • t » tiokaavion I kohdan (iv) yhteydessä. Suojattu tuote formy- • · loidaan sitten 2-asemassa metalloimalla ensin polaarisessa n 113866 liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa, esim. saattamalla reagoimaan n-butyylilitiumin kanssa, ja sitten käsittelemällä formaldehydillä. Kohta (iii) käsittää kaavan XXII mukaisen yhdisteen 2-substituentin homologoimisen esim.

5 saattamalla se reagoimaan l-bromi-2-(trifenyylimetoksi)-etaanin kanssa. Kaavan XXIII mukainen tuote voidaan jatkaa kaavan II mukaiseksi yhdisteeksi suojaryhmien happokataly-soidulla hydrolyysillä, jolloin saadaan kaavan XXIV mukainen yhdiste, muuttamalla 2-substituentissa oleva hydrok-10 syyliryhmä sopivaksi poistuvaksi ryhmäksi syklisoimalla (esim. kuten kuvataan edellä reaktiokaavion I kohdan (v) yhteydessä) ja pelkistävällä pilkkomisella, kuten edellä kuvataan reaktiokaavion I kohdan (iv) yhteydessä.

Kaavan II mukaiset yhdisteet, jotka eivät ole vas-15 taanottavaisia valmistukselle reaktiokaavioissa I tai II kuvattujen reittien kautta, tai muuten tässä kuvatulla tavalla, voidaan valmistaa käyttäen havainnollistettujen kaavioiden muunnelmia, jotka käsittävät hyvin tunnettuja synteettisiä vaihtoehtoja, kohtien järjestyksen muuttami-20 sen ja niiden kaltaisia.

Kaavan II mukainen tuoteyhdiste voidaan eristää ta- ;· vanomaisilla keinoilla, jotka esitetään US-patentissa nro • i · 4 689 338 (Gerster), kuten esimerkiksi poistamalla liuo- t i · ;;; tin ja uudelleenkiteyttämällä sopivasta liuottimesta • * * '·' ’ 25 (esim. N,N-dimetyyliformamidista) tai liuotinseoksesta, • i * ’· · tai liuottamalla sopivaan liuottimeen (kuten metanoliin) : ’’* ja saostamalla uudelleen lisäämällä toinen liuotin, johon : yhdiste on liukenematon.

Kaavan II mukaista yhdistettä voidaan käyttää vi-30 ruksenvastaisena aineena itsessään tai sitä voidaan käyttää farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan, kuten vetyklo-ridin, divetysulfaatin, trivetyfosfaatin, vetynitraatin, metaanisulfonaatin tai muun farmaseuttisesti hyväksyttävän hapon suolan muodossa. Kaavan II mukaisen yhdisteen farma-35 seuttisesti hyväksyttävä suola voidaan valmistaa helposti, i2 1 13866 yleensä yhdisteen reaktiolla ekvimolaarisen määrän kanssa suhteellisen vahvaa happoa, edullisesti epäorgaanista happoa, kuten kloorivety-, rikki- tai ortofosforihappoa, tai orgaanista happoa, kuten metaanisulfonihappoa, polaarises-5 sa liuottimessa. Suolan eristämistä helpotetaan lisäämällä liuotin, kuten dietyylieetteri, johon suola on liukenematon.

Keksinnön yhdiste voidaan formuloida erilaisia an-tamisreittejä varten (esim. oraalinen antaminen tabletil-10 la, kapselilla, oraalisella suspensiolla tai niiden kaltaisilla, paikallinen, ihon läpi vaikuttava tai parente-raalinen) yhdistämällä terapeuttisesti tehokas määrä kaavan II mukaista yhdistettä sopivan farmaseuttisesti hyväksyttävän vehikkelin kanssa, mukaan lukien kaikki adjuvan-15 tit ja täyteaineet, jotka ovat sopivia valittua annosmuo-toa varten. Sopiviin formulaatioihin kuuluvat parenteraa-liset liuokset, paikalliset voiteet, geelit ja salvat, ja oraaliset tabletit ja kapselit. Menetelmät tällaisten farmaseuttisten koostumusten valmistamiseksi ovat alan ammat-20 timiehen hyvin tuntemia ja ne esitetään esim. julkaisussa Remington's Pharmaceutical Sciences. 18. painos, 1990, Mack Publishing Company, A.R. Gennaro, toim. Siis tietyt

• t I

formulaatiot, jotka ovat sopivia valittua antamisreittiä * »

varten, voi alan ammattimies helposti identifioida ja val-* 25 mistaa. Kiinteä annosmuoto esimerkiksi sisältää kaavan II

« I

’· : mukaisen yhdisteen ja yhden tai useamman laimentimen * · l " (esim. dikalsiumfosfaatti, kalsiumsulfaatti, laktoosi, V · mannitoli, selluloosa, kaoliini, natriumkloridi, tärkke lys, sakkaroosi, inositoli, sorbitoli), sideaineen (esim.

• 30 tärkkelys, gelatiini, sakkaroosi, glukoosi, dekstroosi, melassi, laktoosi, luonnolliset ja synteettiset kumit), voiteluaineen (esim. talkki, magnesiumstearaatti, kalsium-stearaatti, steariinihappo, hydratut kasvisöljyt, polyety-leeniglykolit), hajottavan aineen (esim. maissitärkkelys, ; 35 perunatärkkelys, savet, selluloosa, alginaatit), väriai- t 13 113866 neen ja makuaineen. Parenteraalinen liuos sisältää kaavan II mukaisen yhdisteen ja farmaseuttisesti hyväksyttävän vesipitoisen vehikkelin, mukaan lukien sopivat täyteaineet, kuten hapot (kloorivetyhappo, maitohappo, etikkahap-5 po, asparagiinihappo tai niiden seokset) tai emäkset (nat-riumhydroksidi), jotka ovat riittäviä saavuttamaan pH 2 -noin 6, ja tonisuuden säätelyaineet (esim. sorbitoli tai glyseriini), jotta formulaatio on isotoninen seerumin kanssa. Paikalliset tai ihon läpi vaikuttavat formulaatiot 10 sisältävät kaavan II mukaisen yhdisteen voiteessa, salvassa tai paineherkässä sideainekoostumuksessa. Voide voi sisältää pehmittäviä aineita (esim. setyylialkoholi, stea-ryylialkoholi, vaseliini, kevyt mineraaliöljy, asetyloitu lanoliini), emulgointiaineita (esim. ei-ioniset pinta-ak-15 tiiviset aineet, kuten polysorbaatti 60, sorbitaanimono-stearaatti), sakeuttamisaineita (esim. montmorilliniitti-savet tai pitkäketjuiset alkoholit, kuten setearyylialko-holi, setyylialkoholi ja stearyylialkoholi) ja säilöntäaineita (esim. metyyliparaben, propyyliparaben, bentsyylial-20 koholi) määrissä, jotka alan ammattimies helposti valitsee. Salva sisältää salvapohjan (esim. polyetyleeniglyko-li, vaseliini) ja pehmittäviä aineita ja sakeuttamisai- • ! · neita.

• t » « · · ;;; Se määrä kaavan II mukaista yhdistettä, joka muo- • * * *·’ ’ 25 dostaa terapeuttisesti tehokkaan määrän, vaihtelee käyte- *. : tyn yhdisteen, halutun terapeuttisen vaikutuksen, hoidet- * ’·· tavan sairaustilan, annosohjeen ja antamisreitin mukaan, v · Yleensä kaavan II mukainen yhdiste on läsnä parenteraali- sessa formulaatiossa määrässä noin 0,1 - 10 paino-% las- 30 kettuna formulaation kokonaispainosta. Samalla tavalla oraalinen tabletti tai kapseli sisältää yleensä noin 0,5 -50 paino-% ja paikallinen tai ihon läpi vaikuttava formulaatio sisältää noin 0,1 - 10 paino-%. Alan ammattimies valitsee helposti tietyt formulaatiot.

14 113866

Lukuisia kaavan II mukaisia yhdisteitä testattiin ja niiden havaittiin aiheuttavan interferonin biosynteesin ihmissoluissa ja hiirissä. Nämä tulokset viittaavat siihen, että ainakin tietyt keksinnön yhdisteet voisivat olla 5 käyttökelpoisia hoidettaessa virussairauksia (esim. hepatiitti, herpes, syylät) ja sairauksia, kuten nivelreumaa, rokahtumaa, psoriasista, multippeli skleroosia, itsenäistä trombosytemiaa, syöpää, kuten perussolukarsinoomaa, ja muita neoplastisia sairauksia.

10 Alla olevien esimerkkien on tarkoitus havainnollis taa keksintöä. Rakenteet vahvistettiin ydinmagneettisen resonanssin spektroskopialla.

Esimerkki 1 8,9,10,11-tetrahydropyrido[1',2':1,2]imidatso[4,5-15 c]kinolin-6-amiini

Osa A

Trietyyliamiini (84 ml, 0,6 mol) lisättiin 3-nitro- 2,4-kinoliinidiolin (40 g, 0,194 mol) suspensioon metylee-nikloridissa (12 0 0 ml) . Saatu liuos jäähdytettiin jäähau-20 teessä ja trifluorimetaanisulfonihappoanhydridi (67,2 ml, 0,40 mol) lisättiin. Kun lisäys oli tehty, reaktioseosta kuumennettiin höyryhauteella 10 minuutin ajan, sitten jäähdytettiin uudelleen jäähauteessa. Tert-butyyliamiini » * · (42 ml, 0,4 mol) lisättiin, sitten reaktioseosta kuumen- * t · *·' ' 25 nettiin höyryhauteella 15 minuutin ajan. Reaktioseos pes- tiin vesipitoisella natriumbikarbonaatilla (500 ml) , kui- * ‘·* vattiin magnesiumsulfaatilla, sitten väkevöitiin käyttäen !,> tyhjöä. Väkevöite vietiin silikageelikerroksen läpi ja silikageeli eluoitiin metyleenikloridilla. Metyleeniklo-30 ridiliuos haihdutettiin käyttäen tyhjöä, jolloin saatiin 54 g [4- (1,1-dimetyylietyyli) amino-3-nitrokinolin-2-yyli] -trifluorimetaanisulfonaattia.

Osa B

Trietyyliamiini (19,2 ml, 0,137 mol) lisättiin [4-35 (1,1-dimetyylietyyli)amino-3-nitrokinolin-2-yyli]trifluo- * t is 113866 rimetaanisulfonaatin (54 g, 0,137 mol) liuokseen toluee-nissa (noin 1 1). Dibentsyyliamiini (27 ml, 0,137 mol) lisättiin ja reaktioseosta kuumennettiin palautusjäähdyt-täen noin 2 tunnin ajan. Reaktioseos väkevöitiin käyttäen 5 tyhjöä. Jäännös laimennettiin metanolilla (900 ml). Kloo-rivetyhappo (100 ml, 6 N) lisättiin ja reaktioseosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen 1 tunnin ajan. Reaktioseosta sekoitettiin ympäristön lämpötilassa yön yli. Saatu sakka eristettiin suodattamalla, pestiin metanolilla ja 10 sitten kuivattiin, jolloin saatiin 42,1 g N2,N2-bis (fenyy-limetyyli)-3-nitrokinoliini-2,4-diamiinin vetykloridia keltaisena kiinteänä aineena.

Osa C

Natriumboorihydridi (5,5 g, 0,147 mmol) lisättiin 15 varovasti liuokseen, joka sisälsi nikkeli(II)kloridihyd-raattia (11,9 g, 0,05 mol) metanolissa (1200 ml). N2,N2-bis (fenyylimetyyli) -3-nitrokinoliini-2,4-diamiinin vety-kloridi (42,1 g, 0,1 mol) vietiin metyleenikloridin (400 ml) ja metanolin (200 ml) seokseen ja lisättiin nikkelibo-20 raattireagenssiin. Lisää natriumboorihydridiä lisättiin varovasti, kunnes muodostunut vaahto oli väritöntä. Reak-tioseos suodatettiin Celite™-suodatusainekerroksen läpi. Suodos väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Jäännös jakouutettiin

t * I

metyleenikloridilla ja vedellä. Metyleenikloridikerros ; t 25 kuivattiin magnesiumsulfaatilla, sitten väkevöitiin käyt- * s » ’· '· täen tyhjöä. Jäännös vietiin dietyylieetteriin (noin 1 200 ^ ” ml) . Kloorivetyhappoa kuplitettiin eetteriliuoksen läpi • · 5 minuutin ajan. Saatu sakka otettiin talteen ja kuivat tiin, jolloin saatiin 32 g N2,N2-bis (fenyylimetyyli) kino-3 0 liini-2,3,4-triamiinin vetykloridia.

Osa D

Trietyyliamiini (3,6 ml, 25,6 mmol) lisättiin N2,N2-; bis(fenyylimetyyli)kinoliini-2,3,4-triamiininvetykloridin (5 g, 12,8 mmol) suspensioon etikkahapossa (120 ml). Ase-: 35 tyylikloridi (0,91 ml, 12,8 mmol) lisättiin ja reaktio- » ie 113866 seosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen 5-6 tunnin ajan, sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Jäännös jakouu-tettiin dietyylieetterillä ja kylläisellä vesipitoisella natriumbikarbonaatilla. Eetterikerros kuivattiin, sitten 5 väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Jäännös puhdistettiin pylväs-kromatografiällä (silikageeli eluoiden metyleenikloridil-la, joka sisälsi 1 - 5 % tilavuus/tilavuus etyyliasetaattia) , jolloin saatiin noin 2,4 g N,N-bis(fenyylimetyyli)- 2-metyyli-lH-imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinia.

10 Osa E

Natriumhydridin (0,064 g, 2 mmol) suspensio tetra-hydrofuraanissa (15 ml) jäähdytettiin jäähauteessa. N,Iibis (fenyylimetyyli) -2-metyyli-lH-imidatso [4,5-c] kinolin-4-amiini (0,5 g, 1,32 mmol) lisättiin ja reaktioseoksen an-15 nettiin lämmetä huoneenlämpötilaan 20 minuutin ajan. Kloo-rimetyylietyylieetteri lisättiin ja reaktioseosta sekoitettiin 30 minuutin ajan. Reaktioseos laimennettiin dietyylieetterillä, pestiin kahdesti vedellä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja sitten väkevöitiin käyttäen tyh-20 jöä. Jäännös puhdistettiin pyiväskromatografiällä (silikageeli eluoiden metyleenikloridilla), jolloin saatiin 0,43 g N,N-bis(fenyylimetyyli)-l-etoksimetyyli-2-metyyli-lH-imidatso [4,5-c] kinolin-4-amiinia.

;;; osa f '·* 25 Käyttäen typpiatmosfääriä, N,N-bis (fenyylimetyyli) - • * t ’·'· l-etoksimetyyli-2-metyyli-lH-imidatso[4,5-c]kinolin-4- i '·· amiinin (1,12 g, 2,56 mmol) liuos tetrahydrofuraanissa (20 V : ml) jäähdytettiin -78 °C:seen. Butyylilitium (1,03 ml 2,5 M:sta heksaaneissa, 2,56 mmol) lisättiin ja reaktioseosta ’:· 30 sekoitettiin 5 minuutin ajan. l-bromi-3-klooripropaani (2,7 ml, 25 mmol) lisättiin ja reaktioseoksen annettiin lämmetä ympäristön lämpötilaan. Kun reaktio oli mennyt loppuun, kuten osoitetaan ohutkerroskromatografiällä (silikageeli, 30-%:inen etyyliasetaatti heksaaneissa tila-35 vuus/tilavuus), reaktioseos laimennettiin dietyylieette- i7 1 13866 rillä ja vedellä. Eetterikerros erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Saatu jäännös puhdistettiin pyiväskromatografiällä (silikageeli eluoiden 10 - 20-%:isella etyyliasetaatilla 5 heksaaneissa tilavuus/tilavuus), jolloin saatiin 0,76 g Ν,Ν-bis (fenyylimetyyli) -2- (4-klooributyyli) -1-etoksimetyy-li-lH-imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinia.

Osa G

Metanoli (useita millilitroja) lisättiin N,N-bis-10 (fenyylimetyyli) -2- (4-klooributyyli) -1-etoksimetyyli-lH- imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinin (0,76 g, 1,5 mmol) suspensioon 3 N kloorivetyhapossa (20 ml). Reaktioseosta kuumennettiin höyryhauteella 4 tunnin ajan, sitten jakouutet-tiin metyleenikloridilla ja vesipitoisella kylläisellä 15 natriumbikarbonaatilla. Metyleenikerros erotettiin, kui vattiin magnesiumsulfaatilla ja sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä, jolloin saatiin 0,64 g Ν,Ν-bis(fenyylimetyyli) -2 -(4-klooributyyli)-lH-imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinia .

20 Osa H

Natriumjodidi (1 g, 6 mmol) ja kaliumkarbonaatti y (0,8 g, 6 mmol) lisättiin Ν,Ν-bis(fenyylimetyyli)-2-(4- • · · klooributyyli)-lH-imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinin (0,55 « * « grammaa, 1,2 mmol) liuokseen asetonissa. Reaktioseosta ’·' 25 kuumennettiin palautusjäähdyttäen 4 tunnin ajan, suodatet- » * · '· h tiin ja sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Jäännös puh- : '· distettiin flash-kromatografiällä (silikageeli eluoiden v · 10 - 15-%:isella etyyliasetaatilla heksaaneissa tilavuus/ tilavuus). Ydinmagneettisen resonanssin spektroskopia ·· 30 osoitti jodivälituotteen mahdollisen läsnäolon, joten jäännös vietiin asetoniin, yhdistettiin natriumjodidin ja kaliumkarbonaatin kanssa ja kuumennettiin palautusjäähdyttäen yön yli. Reaktioseosta käsiteltiin, jolloin saatiin 0,38 g Ν,Ν-bis (fenyylimetyyli)-8,9,10,11-tetrahydro [1', 2 ' : 35 1: 2] imidatso [4,5-c] kinolin-4-amiinia.

Osa I

ie 113866

Palladiumhydroksidi hiilellä (0,35 g) lisättiin N,N-bis (fenyylimetyyli) -8,9,10,11-tetrahydro [1',2' :1:2] -imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinin (0,38 g, 0,9 mmol) liuok-5 seen muurahaishapossa (noin 15 ml). Reaktioseosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen 3 vuorokauden ajan, sitten laimennettiin metyleenikloridilla ja tehtiin emäksiseksi (noin pH 9) 10-%:isella natriumhydroksidilla. Metyleeni-kloridikerros erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla 10 ja sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä, jolloin saatiin valkoinen kiinteä aine. Materiaali puhdistettiin pylväs-kromatografiällä (silikageeli eluoiden 4 - 10-%:isella me-tanolilla metyleenikloridissa tilavuus/tilavuus), jolloin saatiin kiinteä aine. Kiinteä aine suspendoitiin metylee-15 nikloridiin (20 ml), sitten eristettiin suodattamalla ja kuivattiin, jolloin saatiin 70 mg 8,9,10,11-tetrahydropy-rido [1', 2' :1,2]imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinia kiinteänä aineena, sp. 275 - 278 °C. Laskettu C14H14N4 + 0,2 CH2Cl2:lle: % C, 66,81; % H, 5,69; % N, 21,95; todettu: % C, 67,06; 20 % H, 5,60; % N, 22,18.

Esimerkki 2 ;·, 10-metyyli-8,9,10,11-tetrahydropyrido [l',2':l,2]- imidatso [4,5-c] kinolin-6-amiini

Osa A

** ’ 25 N,N-bis(fenyylimetyyli)-l-etoksimetyyli-2-metyyli- '· "> lH-imidatso [4,5-c] kinolin-4-amiinin (1,8 g, 4,12 mmol, : ” esimerkki 1 osa E) liuos tetrahydrofuraanissa (40 ml) ·.· : jäähdytettiin -78 °C:seen. Butyylilitium (1,7 ml 2,5 M:sta heksaaneissa, 4,2 mmol) lisättiin ja reaktioseosta sekoi- ;· 30 tettiin 20 minuutin ajan. l-bromi-3-kloori-2-metyylipro- paani (4,8 ml, 41 mmol) lisättiin ja reaktioseoksen annet- , tiin lämmetä ympäristön lämpötilaan 1 tunnin jakson aika- > · ; na. Reaktioseos laimennettiin dietyylieetterillä ja vedel lä. Eetterikerros erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaa-; 35 tiliä ja sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Saatu jäännös * i i9 1 13866 puhdistettiin flash-kromatografiällä (silikageeli eluoiden 5 - 20-%:isella etyyliasetaatilla heksaaneissa tilavuus/ tilavuus), jolloin saatiin 0,65 g Ν,Ν-bis(fenyylimetyyli)- 2- (4-kloori-3-metyylibutyyli) -1-etoksimetyyli-lH-imidatso- 5 [4,5-c]kinolin-4-amiinia.

Osa B

Kloorivetyhappo (80 ml, 6 N) lisättiin Ν,Ν-bis(fenyylimetyyli) -2- (4-kloori-3-metyylibutyyli) -1-etoksimetyy-li-lH-imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinin (0,64 g, 1,2 mmol) 10 suspensioon metanolissa (40 ml). Reaktioseosta kuumennet tiin palautusjäähdyttäen 2 tunnin ajan (kaikki metanoli ajettiin pois tämän jakson aikana), laimennettiin metylee-nikloridilla ja sitten tehtiin emäksiseksi 10-%:isella natriumhydroksidilla. Metyleenikloridikerros erotettiin, 15 kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja sitten väkevöitiin, jolloin saatiin noin 0,5 g Ν,Ν-bis(fenyylimetyyli)-2-(4-kloori-3 -metyylibutyyli) -1H-imi dat so [4,5-c] kinol in-4 -amiinia .

Osa C

20 Suuri ylimäärä (noin 10-kertainen) sekä natriumjo- didia että kaliumkarbonaattia lisättiin Ν,Ν-bis(fenyylime- tyyli) -2- (4-kloori-3-metyylibutyyli) -lH-imidatso [4,5-c] ki- nolin-4-amiinin (noin 0,5 g) liuokseen asetonissa (noin 75 ml) . Reaktioseosta kuumennettiin palautus jäähdyttäen yön ; , 25 yli, laimennettiin lisäasetonilla, suodatettiin ja sitten • * *; ’· väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Jäännös pestiin metyleeniklo- ’ ” ridilla, jolloin saatiin tuote talteen suoloista, sitten V · puhdistettiin pylväskromatografiällä (silikageeli eluoiden 3- %:isella etyyliasetaatilla metyleenikloridissa tilavuus/ 30 tilavuus), jolloin saatiin 0,35 g N,N-bis(fenyylimetyyli)- 8,9,10,11-tetrahydro-10-metyylipyrido[1',2':1,2]imidatso-[4,5-c]kinolin-4-amiinia.

Osa D

Palladiumhydroksidi hiilellä (0,35 g) lisättiin : 35 Ν,Ν-bis (fenyylimetyyli)-8,9,10,11 -tetrahydro-10-metyylipy- 20 113866 rido[1'2':1:2]imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinin (0,35 g, 0,809 mmol) liuokseen muurahaishapossa (noin 15 ml) . Reak-tioseosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen 3 vuorokauden ajan, laimennettiin metanolin ja veden seoksella ja sitten 5 suodatettiin Celite™-suodatusaineen läpi. Suodos väkevöi-tiin käyttäen tyhjöä ja tehtiin emäksiseksi 10-%:isella natriumhydroksidilla. Saatu sakka eristettiin suodattamalla, sitten puhdistettiin pyiväskromatografiällä (silikagee-li eluoiden 2 -5-%:isella metanolilla metyleenikloridissa 10 tilavuus/tilavuus), jolloin saatiin 0,1 g 10-metyyli- 8,9,10,11-tetrahydropyrido[1',2':1,2]imidatso[4,5-c]kino-lin-6-amiinia kiinteänä aineena, sp. 279 - 281 °C. Laskettu Ci5Hi6N4:lle: % C, 71,40; % H, 6,39; % N, 22,20; todettu: % C, 71,10; % H, 6,46; % N, 22,25.

15 Esimerkki 3 8H-9,10,11,12-tetrahydroheksametyleeni-imino [11,21: 1,2]imidatso[4,5-c]kinolin-6-amiinin hydraatti

Osa A

N,N-bis(fenyylimetyyli)-l-etoksimetyyli-2-metyyli- 20 lH-imidatso [4,5-c]kinolin-4-amiinin (1,5 g, 3,43 mmol, esimerkki 1 osa E) liuos tetrahydrofuraanissa (30 ml) jäähdy-: *· tettiin -78 °C:seen. Butyylilitium (1,4 ml 2,5 M:sta hek- saaneissa, 3,5 mmol) lisättiin tipoittain, minkä jälkeen ·> · lisättiin l-bromi-4-klooributaani (4 ml, 34 mmol). Reak- : 25 tioseoksen annettiin lämmetä ympäristön lämpötilaan, sitten ·*·,. se vaimennettiin dietyylieetterillä ja vedellä. Eetteriker- ros erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Saatu jäännös puhdistettiin . pyiväskromatografiällä (silikageeli eluoiden 10-%:isella » 30 etyyliasetaatilla heksaaneissa tilavuus/tilavuus), jolloin ; saatiin 1,5 g N,N-bis(fenyylimetyyli)-2-(5-klooripentyyli)- ’!* 1-etoksimetyyli-1H-imidatso [4,5-c] kinolin-4-amiinia .

: : Osa B

h N,N-bis(fenyylimetyyli)-2-(5-klooripentyyli)-1- • · « 35 etoksimetyyli-1H-imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinin (1,5 g, • · 113866 21 3 mmol) suspensiota 6 N kloorivetyhapossa (100 ml) kuumennettiin palautusjäähdyttäen tunnin ajan. Reaktioseos jäähdytettiin, laimennettiin metyleenikloridilla, tehtiin emäksiseksi 10-%:isella natriumhydroksidilla ja sitten 5 uutettiin metyleenikloridilla (400 ml yhteensä). Metylee-nikloridiuutteet yhdistettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä, jolloin saatiin noin 1,3 g Ν,Ν-bis (f enyy lime tyyli) -2-(5-klooripentyy-li)-lH-imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinia.

10 Osa C

Käyttäen esimerkin 2 osan C menetelmää Ν,Ν-bis(fe-nyylimetyyli) -2- (5-klooripentyyli) - lH-imidatso [4,5-c] ki-nolin-4-amiini (1,3 g, 3 mmol) syklisoitiin, jolloin saatiin 1,1 g Ν,Ν-bis(fenyylimetyyli)-8H-9,10,11,12-tetrahyd-15 roheksametyleeni-imino [1' , 2' :1,2]imidatso[4,5-c]kinolin-6- amiinia valkoisena kiinteänä aineena.

Osa D

Palladiumhydroksidi hiilellä (1 g) lisättiin Ν,Ν-bis (fenyylimetyyli)-8H-9,10,11,12-tetrahydroheksametylee-20 ni-imino[1',2':1:2]imidatso[4,5-c]kinolin-6-amiinin (1 g, 2,3 mmol) liuokseen muurahaishapossa (noin 30 ml). Reak-tioseosta kuumennettiin palautus jäähdyttäen 4 vuorokauden ajan, suodatettiin, pestiin metanoli/metyleenikloridilla • · · ja sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Jäännös jakouutet-; t 25 tiin metyleenikloridilla ja 10-%:isella natriumhydroksi- ’· ’· dilla. Metyleenikloridikerros erotettiin, kuivattiin mag- * · ! ** nesiumsulfaatilla ja sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä.

I I I

V · Jäännös puhdistettiin pylväskromatografiällä (silikageeli eluoiden 3 - 10-%:isella metanolilla metyleenikloridissa :· 30 tilavuus/tilavuus), jolloin saatiin 0,4 g 8H-9,10,11,12- ’· tetrahydroheksametyleeni-imino[1',2' :1,2]imidatso[4,5-c]- kinolin-6-amiinin hydraattia valkoisena kiinteänä aineena, > » ; sp. 237 - 240 °C. Laskettu C15H16N4 + 1/3 H20:lle: % C, 69,74; % H, 6,50; % N, 21,69; todettu: % C, 69,74; % H, ; 35 6,27; % N, 21,37.

113866 22

Esimerkki 4 9,10-dihydro-8H-pyrrolo[1',2' :1,2]imidatso[4,5-c]-kinolin-4-amiinin hydraatti

Osa Ά 5 Ν,Ν-bis(fenyylimetyyli)-1-etoksimetyyli-2-metyyli- lH-imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinin (1,7 g, 3,9 mmol, esimerkki 1 osa E) liuos tetrahydrofuraanissa (50 ml) jäähdytettiin -78 °C:seen. Butyylilitium (1,6 ml 2,5 M:sta hek-saaneissa, 4,1 mmol) lisättiin tipoittain ja reaktioseosta 10 sekoitettiin 5 minuutin ajan. Etyleenioksidi valutettiin reaktioseoksen pinnalle. 10 minuutin kuluttua reaktioseok-sen annettiin lämmetä ympäristön lämpötilaan. Etyleeniok-sidilisäys pysäytettiin, kun reaktiolämpötila saavutti 0 °C:n. Reaktio vaimennettiin dietyylieetterillä ja vedel-15 lä. Eetterikerros erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaa tilla ja sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Saatu jäännös puhdistettiin pyiväskromatografiällä (silikageeli eluoiden 5 - 10-%:isella etyyliasetaatilla metyleenikloridissa tilavuus/ tilavuus) , jolloin saatiin 1,4 g Ν,Ν-bis(fenyylime-20 tyyli) -2- (3-hydroksipropyyli) -1-etoksimetyyli-lH-imidatso- [4,5-c]kinolin-4-amiinia.

:v Osa B

* · · . Tionyylikloridi (5 ml, 68 mmol) lisättiin Ν,Ν-bis- • · · .’ji (fenyylimetyyli) -2- (3-hydroksipropyyli) -1-etoksimetyyli- • · · \ . 25 lH-imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiiniin (1 g, 2,1 mmol) ja i < t it* · reaktioseosta sekoitettiin nopeasti, kunnes ohutkerroskro- * " matografia (silikageeli, 10-%:inen etyyliasetaatti mety- V * leenikloridissa tilavuus/tilavuus) osoitti, että reaktio oli mennyt loppuun. Reaktioseos laimennettiin metyleeni-30 kloridilla, sitten neutraloitiin 10-%:isella natriumhyd-roksidilla ja natriumbikarbonaatilla. Metyleenikerros erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Jäännös puhdistettiin pyiväskromatograf iällä (silikageeli eluoiden 10 - 30-%:isella etyy- } 35 liasetaatilla heksaaneissa tilavuus/tilavuus), jolloin 23 1 13866 saatiin 1 g N,N-bis(fenyylimetyyli)-2 -(3-klooripropyyli)-1-etoksimetyyli-lH-imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinia.

Osa C

Ν,Ν-bis(fenyylimetyyli)-2-(3-klooripropyyli)-1-5 etoksimetyyli-lH-imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinin (1 g, 2,0 mmol) suspensiota 6 N kloorivetyhapossa (80 ml) kuumennettiin palautusjäähdyttäen 2 tunnin ajan ja sitten sekoitettiin ympäristön lämpötilassa yön yli. Reaktioseos neutraloitiin 10-%:isella natriumhydroksidilla, sitten 10 uutettiin metyleenikloridilla. Uute kuivattiin magnesium- sulfaatilla, sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä, jolloin saatiin 0,8 g Ν,Ν-bis(fenyylimetyyli)-2-(3-klooripropyy-li)-lH-imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinia.

Osa D

15 Kaliumkarbonaatti (10 x ylimäärä) ja natriumjodidi (5 x ylimäärä) lisättiin N,N-bis(fenyylimetyyli)-2 -(3 -klooripropyyli)-lH-imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinin (0,8 grammaa, 1,8 mmol) liuokseen asetonissa. Reaktioseosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen 2 tunnin ajan, suodatet-20 tiin ja sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Jäännös jako-uutettiin metyleenikloridilla ja vedellä. Metyleeniklori-;·, dikerros erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Jäännös puhdistettiin • ♦ pyiväskromatografiällä (silikageeli eluoiden 10 - 30-pro-I , 25 senttisellä etyyliasetaatilla heksaaneissa tilavuus/tila- « I t ’· ’· vuus) , jolloin saatiin 0,25 g Ν,Ν-bis (fenyylimetyyli)- • ** 9,10-dihydro-8H-pyrrolo[1',2':1,2]imidatso[4,5-c]kinolin- V * 4-amiinia.

Osa E

;· 30 Palladiumhydroksidi hiilellä (0,5 g) lisättiin N,N- bis (fenyylimetyyli)-9,10-dihydro-8H-pyrrolo [1', 2' :1:2]imi-datso[4,5-c]kinolin-4-amiinin (0,25 g, 0,62 mmol) liuok-; seen muurahaishapossa (75 ml) . Reaktioseosta kuumennettiin ;·’ palautus j äähdyttäen 4 vuorokauden ajan, sitten laimennet- 35 tiin metanolilla ja suodatettiin. Suodos väkevöitiin käyt- •

t I

113866 24 täen tyhjöä, sitten sekoitettiin veden ja natriumbikarbonaatin kanssa. Harmaa sakka eristettiin suodattamalla. Suodos väkevöitiin. Saatu jäännös lietettiin metanolin ja metyleenikloridin seoksen kanssa ja sitten suodatettiin.

5 Suodos yhdistettiin aikaisemmin eristetyn harmaan sakan kanssa, sitten puhdistettiin pylväskromatografiällä (sili-kageeli eluoiden 3 - 5-%:isella metanolilla metyleeniklo-ridissa tilavuus/tilavuus), jolloin saatiin 80 mg N,N-bis-(fenyyl ime tyyli) -9,10-dihydro-8H-pyrrolo [1' , 2 ' : 1: 2] imidat-10 so [4,5-c]kinolin-4-amiinia valkoisena kiinteänä aineena, sp. 275 - 277 °C. Analyysi laskettu C13H12N4 + 1/3 H20:lle: % C, 67,81; % H, 5,54; % N, 24,33; todettu: % C, 67,80; % H, 5,26; % N, 24,28.

Esimerkki 5 15 10,ll-dihydro-8H-[1,4]-oksatsino[4',3':1,2]imidat-

so[4,5-c]kinolin-6-amiini Osa A

N2, N2-bis(fenyylimetyyli)kinoliini-2,3,4-triamiinin vetykloridin (10 g, 25,6 mmol, esimerkki 1 osa C) suspen- 20 siota trietyyliortoformaatissa (40 ml) kuumennettiin noin 120 °C:ssa 30 minuutin ajan, jäähdytettiin ympäristön läm- j’. potilaan ja sitten laimennettiin dietyylieetterillä. Saatu . sakka eristettiin suodattamalla, sitten jakouutettiin am- « ( * moniumhydroksidilla ja metyleenikloridilla. Metyleeniklo-\ . 25 ridikerros erotettiin, pestiin kahdesti vedellä, kuivat- • 4 · * tiin magnesiumsulfaatilla ja sitten väkevöitiin käyttäen " tyhjöä, jolloin saatiin 8,6 g N,N-bis (fenyylimetyyli)-1H- *. : imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinia tummanruskeana kiinteänä aineena.

30 Osa B

N,N-bis(fenyylimetyyli)-1H-imidatso[4,5-c]kinolin-. 4-amiinin (2 g, 5,49 mmol) liuos tetrahydrofuraanissa (10 ; ml) lisättiin natriumhydridin (0,21 g, 6,58 mmol) suspen sioon tetrahydrofuraanissa (25 ml) . 30 minuutin kuluttua : 35 kloorimetyylietyylieetteri (0,61 ml, 6,58 mmol) lisättiin % 113866 25 ja reaktioseosta sekoitettiin 2 tunnin ajan. Reaktioseos laimennettiin dietyylieetterillä, pestiin vedellä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä, jolloin saatiin raakatuote ruskeana öljynä. Öljy 5 puhdistettiin pyiväskromatografiällä (silikageeli eluoiden 20 - 30-%:isella etyyliasetaatilla heksaaneissa tilavuus/ tilavuus), jolloin saatiin 1,77 g N,N-bis(fenyylimetyyli)-1-etoksimetyyli-lH-imidatso[4,5-c]kinolin-4-amiinia val-koisena/kullanruskeana kiinteänä aineena.

10 Osa C

Butyylilitium (1,6 ml 2,5 M:sta heksaaneissa, 4 mmol) lisättiin jäähdytettyyn (hiilihappojää/asetoni- haude) Ν,Ν-bis(fenyylimetyyli)-1-etoksimetyyli-lH-imidat- so [4,5-c]kinolin-4-amiinin (1,7 g, 4 mmol) liuokseen tet- 15 rahydrofuraanissa. Värin muutosta ei havaittu. Reaktioseos lämmitettiin-20 °C:seen (hiilihappojää/hiilitetrakloridi) ja reaktioseoksen väri muuttui punaiseksi. Formaldehydi- kaasu, joka oli sekoitettu typen virtaan, lisättiin reak- tioseokseen. Useiden minuuttien kuluttua reaktioseos muut- 20 tui kiinteäksi massaksi ja jäähaude poistettiin. Reaktio- seoksen annettiin lämmetä ympäristön lämpötilaan ja reak- I*. tioseoksen väri muuttui punaisesta keltaiseksi. Reaktio- . ,·, seos laimennettiin dietyylieetterillä ja vedellä. Eetteri- • · kerros erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja sit- • · i ; . 25 ten väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Jäännös puhdistettiin • » » • < · it* 1 pyi väskromatograf iällä (silikageeli eluoiden 10 - 20-pro- * • ” senttisellä etyyliasetaatilla heksaaneissa tilavuus/tila- ** ’ vuus), jolloin saatiin 1 g 4-bis(fenyylimetyyli)amino-1- etoksimetyyli-lH-imidatso[4,5-c]kinolin-2-metanoiia.

’ 3 0 Osa D

: Natriumhydridi (0,11 g, 3,3 mmol) lisättiin 4-bis- (fenyylimetyyli)amino-l-etoksimetyyli-lH-imidatso [4,5-c]- ; kinolin-2-metanolin (1 g, 2,21 mmol) liuokseen N,N-dime- » • tyyliformamidissa (15 ml) ja saatua seosta sekoitettiin 10 : 35 minuutin ajan. l-bromi-2-(trityylioksi)etaani lisättiin ja • 113866 26 sekoitusta jatkettiin ympäristön lämpötilassa 3-4 tunnin ajan. Reaktio vaimennettiin dietyylieetterillä ja vedellä. Eetterikerros erotettiin, pestiin useita kertoja vedellä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja sitten väkevöitiin 5 käyttäen tyhjöä. Jäännös puhdistettiin pylväskromatogra-fiällä (silikageeli eluoiden 10 - 30-%:isella etyyliasetaatilla heksaaneissa tilavuus/tilavuus), jolloin saatiin 1,1 g Ν,Ν-bis (fenyylimetyyli)-l-etoksimetyyli-2-[ (2-trife-nyylimetoksi) etoksi] metyyli - lH-imidat so [4,5-c] kinolin-4-10 amiinia.

Osa E

Ν,Ν-bis(fenyylimetyyli)-l-etoksimetyyli-2-[(2-tri- fenyylimetoksi) etoksi] metyyli - 1H-imidatso [4,5-c] kinolin-4- amiinin (1,1 g, 1,5 mmol) suspensiota 6 N kloorivetyhapos- 15 sa (25 ml) kuumennettiin höyryhauteella 1,5 tunnin ajan.

Reaktioseos neutraloitiin pH-arvoon 7, sitten uutettiin metyleenikloridilla. Uute kuivattiin, sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Jäännös puhdistettiin pylväskromatogra- fiällä (silikageeli eluoiden 10 - 50-%:isella etyyliase- 20 taatilla heksaaneissa tilavuus/tilavuus), jolloin saatiin 0,5 g Ν,Ν-bis (fenyylimetyyli) -2-(2-hydroksietoksi)metyyli- :·, lH-imidatso [4,5-c] kinolin-4-amiinia.

» * ·

. Osa F

• * ! ! Trietyyliamiini (0,17 ml, 1,25 mmol) lisättiin N,N- • · | t 25 bis (fenyylimetyyli) -2-(2-hydroksietoksi) metyyli-lH-imidat-• - · *· '· so [4,5-c] kinolin-4-amiinin (0,5 g, 1,14 mmol) liuokseen % ! '* metyleenikloridissa (20 ml). Metaanisulfonyylikloridi • » · (0,09 ml, 1,14 mmol) lisättiin ja reaktioseosta sekoitet tiin ympäristön lämpötilassa 1 tunnin ajan. Reaktioseos 30 laimennettiin metyleenikloridilla, pestiin vedellä, kui- vattiin magnesiumsulfaatilla ja sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä, jolloin saatiin 0,6 g Ν,Ν-bis(fenyylimetyy- • · li)-2-(2-metyylisulfonyylioksietoksi)metyyli-lH-imidatso-[4,5-c]kinolin-4-amiinia.

> 113866 27

Osa G

Ylimäärä kaliumkarbonaattia ja ylimäärä natriumjo-didia lisättiin Ν,Ν-bis(fenyylimetyyli)-2-(2-metyylisul-fonyylioksietoksi)metyyli -1H-imidatso[4,5-c]kinolin-4-amii-5 nin (0,6 g, 1,14 mmol) liuokseen asetonissa (200 ml). Reak-tioseosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen yön yli, sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Jäännös jakouutettiin mety-leenikloridilla (150 ml) ja vedellä (50 ml) . Metyleeniklo-ridikerros erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja 10 sitten väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Jäännös puhdistettiin pyiväskromatografiällä (silikageeli eluoiden 10:10:80 tilavuus/ tilavuus/ tilavuus metyleenikloridi:etyyliasetaatti:- heksaaneilla) , jolloin saatiin 0,42 g Ν,Ν-bis(fenyylime-tyyli)-10,11-dihydro-8H-[1,4]-oksatsino[4',3':1,2]imidatso-15 [4,5-c]kinolin-6-amiinia valkoisena kiinteänä aineena.

Osa H

Palladiumhydroksidi hiilellä (0,5 g) lisättiin Ν,Ν-bis(fenyylimetyyli)-10,ll-dihydro-8H-[1,4]-oksatsino-[4',3':1:2]imidatso[4,5-c]kinolin-6-amiinin (0,4 g, 0,95 20 mmol) liuokseen muurahaishapossa (noin 40 ml) . Reaktio-seosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen 6 vuorokauden • » • ·· ajan, sitten laimennettiin metanolilla ja suodatettiin : : Celite™-suodatusainekerroksen läpi. Suodos tehtiin emäksi- seksi ammoniumhydroksidilla, sitten väkevöitiin käyttäen .'.j 25 tyhjöä. Jäännös vietiin metanolin ja metyleenikloridin :\ seokseen. Silikageeli lisättiin ja saatu seos väkevöitiin käyttäen tyhjöä. Kiinteä aine asetettiin pylvääseen ja • · · eluoitiin 2 - 5-%:isella metanolilla metyleenikloridissa, jolloin saatiin valkoinen kiinteä aine. Ydinmagneettisen ·;;; 30 resonanssin spektrit olivat yhdenmukaisia halutun tuotteen '··* formiaattisuolan kanssa. Suola vietiin 5-%:iseen kloorive- *· tyhappoon ja kuumennettiin höyryhauteella 30 minuutin ajan. Seos tehtiin emäksiseksi 10-%:isella natriumhydrok-\ sidilla. Saatu sakka eristettiin suodattamalla, pestiin 113866 28 vedellä ja kuivattiin käyttäen tyhjöä, jolloin saatiin 75 mg 10, ll-dihydro-8H- [1,4] -oksatsino [4 ' , 3 ' : 1:2] imidatso-[4,5-c]kinolin-6-amiinia kiinteänä aineena, sp. 258 259 °C. Analyysi laskettu C13H12N40: lie % C, 64,99; % H, 5 5,03; % N, 23,32; todettu: % C, 64,61; % H, 4,88; % N, 23,18.

Interferonin (a) induktio ihmissoluissa

In vitro ihmisen verisolusysteemiä käytettiin arvioimaan interferonin induktiota keksinnön yhdisteillä.

10 Aktiivisuus perustuu viljelyväliaineeseen eritetyn interferonin mittaukseen. Interferoni mitataan bioanalyysillä.

Verisolujen valmistaminen viljelyä varten

Kokoveri otettiin laskimopunktuurilla EDTA-vacutai-ner-putkiin. Perifeerisen veren mononukleaariset solut 15 (PBM:t) erotetaan kokoverestä käyttäen joko LeucoPREP™

Brand Cell Separation Tubesia (saatavissa Becton Dickin-sonilta) tai Ficoll-Paque®-liuosta (saatavissa Pharmacia LKB Biotechnology Inc:stä, Piscataway, NJ). PBM:t suspen-doidaan 1 x 106/ml RPMI 1640 väliaineeseen (saatavissa 20 GIBC0:sta, Grand Island, NY), joka sisältää 25 mM HEPES:ä (N-2-hydroksietyylipiperatsiini-N' - 2- etaanisulfonihappo) ja L-glutamiinia (l-%:inen penisilliini-streptomysiini-liuos lisätty), johon on lisätty 10 % lämpöinaktivoitua (56 °C 30 minuutin ajan) autologista seerumia. 200 μ1:η ’ 25 erät PBM-suspensiota lisätään 96-kuoppaisiin (tasapohja) ’· "· MicroTest III -steriileihin kudosviljelylevyihin.

Yhdisteen valmistus V * Yhdisteet liuotetaan etanoliin, dimetyylisulfoksi diin tai kudosviljelyveteen, sitten laimennetaan kudosvil-|· 30 jelyvedellä, 0,01 N natriumhydroksidilla tai 0,01 N kloo- .* rivetyhapolla (liuottimen valinta riippuu testattavan yh disteen kemiallisista ominaispiirteistä.). Etanoli- tai ; DMSO-pitoisuuden ei tulisi ylittää loppupitoisuutta 1 % viljelykuoppiin lisäystä varten. Yhdisteet testataan aluk-; 35 si pitoisuusalueella noin 0,1 - 5 μg/ml. Yhdisteet, jotka 29 1 13866 osoittavat induktion pitoisuudessa 0,5 μg/ml, testataan sitten laajemmalla pitoisuusalueella.

Inkubointi

Koeyhdisteen liuos lisätään tilavuudessa (alle tai 5 yhtä suuri kuin 50 μΐ) kuoppiin, jotka sisältävät 200 μΐ laimennettua kokoverta tai PBMta väliaineessa. Liuotin ja/tai väliaine lisätään kontrollikuoppiin (kuopat, joissa ei ole koeyhdistettä) ja kun tarvitaan säätämään kunkin kuopan lopputilavuus 250 μΙιΆΆη. Levyt peitetään muovikan-10 silla, käsitellään vortexilla varovasti ja sitten inkuboi-daan 48 tunnin ajan 37 °C:ssa 5-%:isessa hiilidioksidiat-mosfäärissä.

Erotus

Inkuboinnin jälkeen levyt peitetään parafilmilla ja 15 sitten sentrifugoidaan 1 000 rpm 10 - 15 minuutin ajan 4 °C:ssa Damon IEC Model CRU-5000 -sentrifugilla. Väliaine (noin 200 μΐ) poistetaan 4-8 kuopasta ja yhdistetään 2 ml:n steriileihin pakastusviaaleihin. Näytteitä säilytetään -70 °C:ssa, kunnes ne analysoidaan.

20 Interferonin analyysi/laskenta

Interferoni määritetään bioanalyysillä käyttäen ;·, A549-ihmisen keuhkosyöpäsoluja, jotka on ärsytetty enkefa- lomyokardiitilla. Bioanalyysimenetelmän yksityiskohdat on ;;; kuvattu julkaisussa G.L. Brennan ja L.H. Kronenberg, "Au- 25 tomated Bioassay of Interferons in Micro-test Plates", '· V Biotechniques, June/July, 78, 1983, joka sisällytetään • tähän viittauksella. Lyhyesti sanottuna menetelmä on seu- :, · raava: interferonilaimennoksia ja A549-soluja inkuboidaan 37 °C:ssa 12 - 24 tunnin ajan. Inkuboidut solut infektoi-·· 30 daan enkefalomyokardiittiviruksen siirrosteella. Infektoi- tuja soluja inkuboidaan vielä lisäjakso 37 °C:ssa ennen kuin määritetään määrä virussytopaattista vaikutusta varten. Virussytopaattinen vaikutus kvantifioidaan värjäämäl-lä, minkä jälkeen spektrofotometrisillä absorbanssimit-35 tauksilla. Tulokset ilmaistaan alfa-vertailuyksikkoinä/ml 113866 30 laskettuna arvosta, joka saadaan NIH HU IF-L -standardille. Interferoni identifioitiin olennaisesti kaikki interferoni alfana testaamalla shakkilautaneutralointianalyy-sissä kani-anti-ihminen-interferonia (beeta) ja vuohi-an-5 ti-ihminen-interferonia (alfa) vastaan käyttäen A549-solu-jen yksinkertaisia kerroksia, jotka oli ärsytetty enkefa-lomyokardiittiviruksella. Tulokset esitetään alla olevassa taulukossa, jossa merkinnän poissaolo osoittaa, että yhdistettä ei testattu siinä tietyssä annospitoisuudessa. 1 » · 113866 31 S1 Ϊ? ^ S «o -

»n ^ ro CN

3 4J - S O O g § O

S -.O tn o *n 2 ” en n fe ,_i *** e « tn 5 Λ 3 >1 3 H 3 oj------

O |H -H

M -H O

£ <0 +J

u -4-1 "H

O W Oi O o 2 O

tf< 0) 10 ΰ ^ ^ N ~ Έ > O o ^

•H S

H C

• · H

• I · __ I

2, cn ! ! m — :

. 1 (1) I

-P M WQ):n3 ;1 -H£+J — (N ro m

Ό -H 03 Λ 03 -H

,· >i Φ X I

113866 32

Interferonin induktio hiirissä Tätä menetelmää käytettiin arvioimaan keksinnön yhdisteiden kykyä saada aikaan interferonin biosynteesi hiirissä.

5 Kutakin testattavaa annostasoa varten kolmelle ryh mälle (kolme hiirtä ryhmää kohti) koirashiiriä (ei paastolla pidettyjä) annetaan oraalisesti yhdistettä. Yhden tunnin kuluttua verta otetaan silmämunantakaisesta laski-mopunoksesta ja yhdistetään. Veri sentrifugoidaan ja see-10 rumi otetaan talteen ja jaetaan näytteisiin. Seeruminäytteitä varastoidaan pakastettuna -70 °C:ssa, kunnes ne analysoidaan. Tämä menetelmä toistetaan 2 tuntia annoksen jälkeen toisen ryhmän hiirillä ja 4 tuntia annoksen jälkeen kolmannen ryhmän hiirillä.

15 Näytteet analysoidaan kuten edellä kuvataan inter feronin induktion ihmissoluissa analyysin yhteydessä. Tulokset ilmaistaan alla olevassa taulukossa α/β-vertailuyk-sikköä/ml laskettuna arvosta, joka saadaan hiiren MU-l-IF-standardille. Tulokset esitetään alla olevassa taulukossa, 20 jossa tulokset, jotka merkitään "<" tietty luku, osoittavat, että interferoni ei ollut havaittavissa määrissä, ;·. jotka ovat analyysin alemman herkkyystason yläpuolella.

113866 33

Interferonin induktio hiirissä

Yhdiste Annos Vertailuyksikköä/ml esimerkistä (mg/kg) 1 h 2 h 4 h 5 1 0,3 <250 <250 <250 1 1,0 480 480 <250 1 3,0 480 1 300 330 1 10,0 1 600 4 300 480 3 0,3 <380 <380 <380 10 3 1,0 <380 <380 <380 3 3,0 1 100 820 <380 3 10,0 1 500 2 900 660 4 0,3 <520 520 <520 4 1,0 1 100 1 100 <520 15 4 3,0 2 700 3 500 <520 ' . 4 10,0 4 700 11 000 <520 • i · 5 0,3 <310 <310 <310 * · 5 1,0 310 <310 <310 5 3,0 1 100 1 200 310 • · • · — — --- 20 5 10,0 1 700 2 100 630 *. Epäsuora in vitro viruksen vastainen aktiivisuus

Alla kuvattu koemenetelmä osoittaa keksinnön yhdis-; teiden kyvyn inhiboida virusinfektion etenemistä.

.* 25 Kokoveri otettiin laskimopunktuurilla EDTA-vacu- tainer-putkiin. Perifeerisen veren mononukleaariset solut • 113866 34 (PBM:t) eristetään käyttäen Ficoll-Paque®-liuosta (saatavissa Pharmacia LKB Biotechnology Inc:stä, Piscataway, NJ) . PBM:t pestään fosfaattipuskurisuolaliuoksella, sitten laimennetaan RPMI 1640 väliaineella (saatavissa 5 GIBCO:sta, Grand Island, NY) ja 10-%:isella naudansikiö-seerumilla, jolloin saadaan loppupitoisuus 2,5 x 106 solua/ ml. 1 ml:n erät PBM:a väliaineessa laitetaan 15 ml:n poly-propyleeniputkiin. Koeyhdiste liuotetaan dimetyylisulfoksidiin, sitten laimennetaan RPMI 1640 -väliaineella. Koe-10 yhdisteen liuos lisätään putkiin, jotka sisältävät PBM:t, jolloin saadaan loppupitoisuus välillä 0,05 - 1,0 μg/ml. Kontrolliputket eivät saa yhtään koeyhdistettä. Putkia inkuboidaan sitten 24 tuntia 37 °C:ssa 5-%:isessa hiilidi-oksidiatmosfäärissä. Inkuboinnin jälkeen putkia sentrifu-15 goidaan 400 x g 5 minuutin ajan. Supernatantti poistetaan.

PBM: t kasvatetaan 100 μΐ-.ssa RPMI 1640 -väliainetta ja sitten infektoidaan 100 μΐ-.lla, joka sisältää 105-kudosvil-jelmän 50-%:isesti tarttuvia annoksia rakkulasuutulehdus-virusta (VSV). Putkia inkuboidaan 30 minuuttia 37 °C:ssa, 20 jolloin sallitaan viruksen adsorptio. Yksi ml RPMI 1640 -väliainetta lisätään kuhunkin putkeen ja putkia inkuboi-;·. daan 48 tuntia 37 °C:ssa. Putket pakastetaan, sitten su- latetaan solujen hajottamiseksi. Putkia sentrifugoidaan • · · 400 x g 5 minuutin ajan, jolloin poistetaan solujäte, sit- 113866 35

In vitro viruksen vastainen aktiivisuus

Yhdiste VSV-saannon inhibitio esimerkistä

Annospitoisuus (^g/ml) 0,05 0,1 0,5 1,0 1 8,0 8,0 8,0 5 2 -- 2,0 4,0 5,0 1 ·

Claims

113866 1. 1,2-silloitettu lH-imidatso[4,5-c]kinoliini-4- amiiniyhdiste, jolla on kaava II 5 nh2 ÄH g U jossa Z valitaan ryhmästä, joka koostuu seuraavista: -(CH2)n-, jossa n on 1 - 4, - (CH2) a-C (RiR2) (CH2)b-, jossa a ja b ovat kokonaislu-10 kuja ja a + b on 0 - 3, Rx on vety ja R2 on alkyyli, jossa on 1 - 4 hiiliatomia, ja - (CH2) a- (Y) - (CH2)b- , jossa a ja b ovat kokonaislukuja jaa + bonO - 3, ja Y on O, ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, jossa Z on -(CH2)n- ja n on 1 - 3, ja sen farmaseuttisesti hyväksyt- • '·· tävät suolat. : : : 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, jossa Z on - (CH2) a-C (R2R2) (CH2)b-, jossa a ja b ovat kokonaislukuja 20 ja a + b on 0 - 3, R2 on vety ja R2 on alkyyli, jossa on :\ 1-4 hiiliatomia, ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävät • t · .··· suolat. • » · • # ·

3. Förening enligt patentkrav 1, väri Z är -(CH2)a- C(RiR2) (CH2)b-, väri a och b är heltal och a + b är 0 - 3, ‘1*; Ri är väte och R2 är alkyl med 1-4 kolatomer, och dess : 20 f armaceutiskt godtagbara salter. * · :·, 4. Förening enligt patentkrav 1, väri Z är - (CH2) a- (Y) - (CH2) b-/ väri a och b är heltal och a + b är * · 0-3, och Y är 0, och dess farmaceutiskt godtagbara salter . * · ·· : 25 5. Förening enligt patentkrav 4, väri a + b är 1, • « “...· och dess f armaceutiskt godtagbara salter. j. 6. Förening enligt patentkrav 1, vilken väljs frän en grupp bestäende av följande: •( 8,9,10,11-tetrahydropyrido [1 1 , 2 ' : 1,2] imidazo- ‘ ·* 30 [4,5-c] kinolin-6-amin, 113866 10-metyl- 8,9,10 ,11-tetrahydropyrido[ 1 ' , 2 ' : 1,2 ] -imidazo[4,5-c]kinolin-6-amin, 8H-9,10,11,12-tetrahydrohexametylenimino-[1' ,2 1 :1,2]imidazo[4,5-c]kinolin-6-amin, 5 9,10-dihydro-8H-pyrrolo[1',2':1,2]imidazo[4,5-c]- kinolin-4-amin, 10,11-dihydro-8H-[1,4]-oxazino [4',31 :1,2]imidazo-[4,5-c]kinolin-6-amin, och deras farmaceutiskt godtagbara salter.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, jossa Z , on - (CH2) a- (Y) - (CH2) b~, jossa a ja b ovat kokonaislukuja ja » » · ·;;· 25 a + b on 0 - 3, ja Y on O, ja sen farmaseuttisesti hyväk- t i syttävät suolat.

·· 5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen yhdiste, jossa a + b on 1, ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat. 1 > » » I » 113866

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, joka valitaan ryhmästä, joka koostuu seuraavista: 8.9.10.11- tetrahydropyrido[1',2':1,2]imidatso-[4,5-c]kinolin-6-amiini, 5 10-metyyli-8,9,10,11-tetrahydropyrido[11,2' : 1,2 ] - imidatso[4,5-c]kinolin-6-amiini, 8H-9,10,11,12-tetrahydroheksametyleeni-imino-[1' ,2 ' :1,2]imidatso[4,5-c]kinolin-6-amiini, 9,10-dihydro-8H-pyrrolo[1',2':1,2]imidatso[4,5-c]-10 kinolin-4-amiini, 10.11- dihydro-8H-[1,4]-oksatsino[41,3':1,2]imidatso [4,5-c]kinolin-6-amiini , ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.

7. Farmaceutisk formulation, vilken omfattar: (i) en förening enligt patentkrav 1 i en mängd, som är effek-tiv för att ästadkomma interferons biosyntes i ett djur, och (ii) en farmaceutisk godtagbar vehikel.

7. Farmaseuttinen formulaatio, joka käsittää: (i) 15 patenttivaatimuksen 1 mukaisen yhdisteen määrässä, joka on tehokas saamaan aikaan interferonin biosynteesin eläimessä, ja (ii) farmaseuttisesti hyväksyttävän vehikkelin.

8. Patenttivaatimuksen 1 mukaisen yhdisteen käyttö sellaisen lääkkeen valmistukseen, joka on tarkoitettu saa- 20 maan aikaan interferonin biosynteesin. » I ♦ • I · • 1 · » » · * 1 # » ♦ • · • ♦ · • ' · • · * · · 113866 1. 1,2-tvärbunden ΙΗ-imidazo[4,5-c]kinolin-4-amin-förening med formeln II 5 nh2 lxv-, väri Z väljs frän en grupp bestäende av följande: - (CH2) n- / väri n är 1 - 4, - (CH2) a-C (RiR2) (CH2)b-/ väri a och b är heltal och a 10. b är 0 - 3, Ri är väte och R2 är alkyl med 1-4 kolato- mer, och - (CH2) a-(Y) - (CH2) b-/ väri a och b är heltal och a + b är 0 - 3, och Y är 0, och dess farmaceutiskt godtagbara salter. 15 2. Förening enligt patentkrav 1, väri Z är -(CH2)n- och n är 1 - 3, och dess farmaceutiskt godtagbara salter.

8. Användning av en förening enligt patentkrav 1 15 för framställning av ett sädant läkemedel som är avsett för att ästadkomma interferons biosyntes. ► · · * · i · * f » I I • · * · < · I 1 * · * • · i · • 1 · ♦ » · i I · * · < t · * » 1 I I I I I I • · · • I I I