FI110842B

FI110842B - Menetelmä määritellyn lipidijärjestelmän sisältävän farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi

Info

Publication number: FI110842B
Application number: FI935273A
Authority: FI
Inventors: Monica Einarsson; Christer Mattsson; Haakan Nyqvist
Original assignee: Pharmacia Ab
Priority date: 1992-03-27
Filing date: 1993-11-26
Publication date: 2003-04-15
Also published as: JP3577312B2; RU2128505C1; EP0591492B1; NZ251488A; HU219240B; MX9301716A; HUT70405A; DK0591492T3; CA2102494C; NO934284L; CA2102494A1; IL105017A; JPH06508155A; NO934284D0; ATE165971T1; AU3912493A; FI935273A; HU9303357D0; DE69318503D1; NO305537B1

Description

110842

Menetelmä määritellyn lipidijärjestelmän sisältävän farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi - Förfarande för framställning av en farmaceutisk komposition innehällande ett definierat lipidsystem 5

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää farmaseuttisten koostumusten valmistamiseksi, jotka sisältävät määrätyn, ainakin kahden lipidikomponentin muodostaman lipidijärjestelmän, jossa 10 vähintään yksi lipidikomponenteista on amfifaattinen ja polaarinen ja yksi on ei-polaarinen, joissa koostumuksissa farmaseuttisesti aktiivinen yhdiste on hepariini, sen fragmentti tai johdannainen. Tämän lisäksi koostumukset sisältävät vesipitoista liuotinta sellaisen määrän, että erillisiä lipidipar-15 tikkeleita on läsnä. Mainitut koostumukset voidaan soveltaa erilaisiin antotapoihin, kuten esimerkiksi rektaaliseen, suun kautta tapahtuvaan, bukkaaliseen, kielenalaiseen, ihon läpi tapahtuvaan j.n.e. antoon.

20 Keksintö perustuu polaarisuudeltaan erilaisista luokista valit-: " tujen ainakin kahden komponentin määrättyyn lipidijärjestel mään, jota kuvataan ruotsalaisessa patenttihakemuksessa SE : : 9003100-6 ja jossa yhdisteistä ainakin yksi on amfifaattinen ja : polaarinen ja yksi on ei-polaarinen.

; : : 25 Amfifaattinen ja polaarinen yhdiste on kaksoiskerroksen muodos tava, ja erillisiä lipidipartikkeleita muodostuu spontaanisti lipidijärjestelmästä, kun se on vuorovaikutuksissa veden ylimäärän kanssa tai vettä sisältävien liuottimien kanssa.

·, ; Määrätty lipidikomponentti on lipidi, jonka kemiallinen koos- 3 0 tumus on tunnettu ja säädelty. Tämä selitetään yksityiskoh-taisemmin alla sekä esimerkeissä.

Ominaisuus "kaksoiskerroksen muodostava" on hyvin tunnettu fy-sikaalinen parametri, ja se voidaan saada aikaan sopivin fysi-kokemiallisin menetelmin (esim. pintatasapainotusmentelmällä) . h.’. 35 Muodostetut, irralliset lipidipartikkelit voidaan osoittaa 2 110842 fysikaalisin ja/tai kemiallisin menetelmin, kuten esimerkiksi polaroitua valoa käyttävän mikroskoopin, kuva-analyysin tai diffraktiomenetelmien avulla.

Lipidikoostumuksen muuntelu saa aikaan säätelymekanismin, jonka 5 avulla lipidipartikkelit muodostuvat, ja siihen liittyen lipidipartikkelin muodostumisnopeus toimii säätelevänä tekijänä partikkelin sisään suljettujen tai siihen liitettyjen bioaktiivisten materiaalien välittömälle tai viivästyneelle vapautumiselle.

10

Keksinnössä käytetään seuraavia määritelmiä: lipidit - yleinen nimitys luonnonmukaisille tai synteettisille yhdisteille, jotka käsittävät asyylikantajia, kuten esimerkiksi glyserolia, sfingosiinia, kolesterolia ja muita yhdisteitä tai 15 niiden johdannaisia, joihin yksi tai useampia rasvahappoja voi olla liittynyt. Termiin voidaan lukea kuuluviksi myös samankaltaisia molekyylejä, jotka sisältävät huomattavan hiilive-tyosan.

2 0 Lipidipartikkelin muodostaviin järjestelmiin käytetyt lipidit : voidaan ryhmitellä eri lipidiluokkiin niiden polaarisuuden perusteella, nimittäin: ei-polaariset lipidiluokat - joilla ei ole polaarisia pääryhmiä • · 25 tai hydrofiilinen osa, joka on niin pieni tai steerisesti esty nyt, ettei se voi olla vuorovaikutuksissa veden kanssa. Ei-po-laaristen rakenneosien esimerkkejä ovat hiilivedyt tai turpoa-mattomat amfifiiliset yhdisteet, kuten esimerkiksi mono-, di-ja triglyserolit, kolesteroli, rasva-alkoholit tai koleste-·. ·. 30 roliesterit.

,··· polaariset lipidiluokat - kuten esimerkiksi fosfolipidit tai ____; glykolipidit, joilla on merkittävästä polaarisesta rakenne- .. osasta johtuvaa pintaliukoisuutta. Spesifisten, veden kanssa • *.· 35 tapahtuvien vuorovaikutusten perusteella polaariset lipidiluo- kat jaetaan edelleen vastaavasti turpoavien ja liukoisten, 3 110842 amfifiilisten yhdisteiden alaluokkiin.

amfifaattiset tai amfifiiliset lipidiluokat - kuten esimerkiksi fosfolipidit ja glykolipidit, joilla on pinta-aktiivisuutta.

5 kaksoiskerroksen muodostavat lipidiluokat - amfifaattiset lipidit, joita ovat esimerkiksi PC (fosfatidyylikoliini) sfin-gomyeliini, PI (fosfatidyyli-inositoli) tai PE (fosfatidyyli-etanoliamiini), joilla molekyyligeometria on sellainen, että ne 10 veden läsnäollessa muodostavat ensisijaisesti kaksikerroksisia rakenteita.

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää sellaisen farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi, joka sisältää 15 a) hyvin määritellyn lipidijärjestelmän, jossa on ainakin kaksi lipidikomponenttia, jolloin (i) ainakin yksi lipidikomponenteista on amfifaattinen, polaarinen ja kaksoiskerroksen muodostava valittuna fosfatidyylikoliinin ja muiden fosfolipidien joukosta ja on I'. ; 20 läsnä määränä 1-90 paino-% lipidijärjestelmästä, ;·, (ii) yksi on ei-polaarinen lipidikomponentti valittuna . mono-, di- tai triglyseridien joukosta, joilla on määri- tellyt ketjunpituudet alueelta 6-18 hiiliatomia; b) terapeuttisesti tehokkaan määrän hepariinia tai sen frag- - 25 menttia tai johdannaista, jota on läsnä määränä 1-200 paino-% V lipidijärjestelmän suhteen; ja c) vesipitoista liuotinta, jota on läsnä sellaisena määränä, että muodostuu yksittäisiä ja erillisiä lipidipartikkeleita.

. . Keksinnön mukaisesti tämä farmaseuttinen koostumus voidaan » · 30 valmistaa siten, että lipidikomponenttien sekoitettuun seok-·; , seen lisätään hepariinin tai sen fragmentin tai johdannaisen : liuos, sen jälkeen lisätään vesipitoista liuotinta ja tuloksena olevaa seosta käsitellään mekaanisesti, tai vaihtoehtoisesti ..V sekoitetaan hepariinia tai sen fragmenttia tai johdannaista 35 vesipitoisen liuottimen kanssa ennen kuin seos lisätään 4 110842 sekoitettuihin lipidikomponentteihin.

Esillä olevan keksinnön mukaiseen lipidijärjestelmään käytetyt lipidit koostuvat lipidiluokkien seoksista, joille niiden erilaiset polaarisuudet ovat ominaisia. Polaariset lipidit, 5 valittuna fosfatidyylikoliinin ja muiden fosfolipidien joukosta ja ei-polaariset lipidit valittuna mono-, di- tai triglyse-ridien joukosta, joilla on määritellyt ketjunpituudet alueelta 6-18 hiiliatomia ovat järjestelmän päärakenneosia. Tätä hyvin määriteltyä, yllä määritellyistä eri luokista peräisin olevien 10 lipidien seosta ei tulisi sekoittaa kaupallisten tuotteiden, kuten esimerkiksi soijapapuöljyn, maissiöljyn tai soijalesi-tiinin ja munalesitiinin kanssa. Tarkoin määriteltyjen lipidi-luokkien saamiseksi kaupallinen öljy fraktioidaan, ja sitten eri lipidiluokat sekoitetaan alla esitetyissä esimerkeissä 15 yksityiskohtaisemmin selitetyllä tavalla. Synteettisesti valmistettujen lipidien käyttö on toinen tapa saada tarkoin määriteltyjä lipidejä.

I lii li II

Lipidien johdannaisia voidaan sen lisäksi käyttää myös yllä '·, 20 mainittuihin lipideihin yhdistettyinä. Yksi tällaisista esi- merkeistä on fosfatidyylietanoliamiiniin kytketty polyety-; ,* leeniglykoli, jonka on osoitettu injektion jälkeen pidentävän liposomien kiertoaikaa verivirrassa. Toinen esimerkki sellai-\ ; sesta johdannaisesta on palmitoyylikarnitiini, joka toimii 25 suolessa bioaktiivisten aineiden absorption lisääjänä.

Lipidikantajajärjestelmien muodostamisen aloittamiseksi sopivalla tavalla bioaktiivinen aine sekoitetaan valittuun lipi- * · :/ diin, minkä jälkeen sen kanssa sekoitetaan polaarisuudeltaan ; 30 erilainen lipidi. Tätä polaarisuuden/ei-polaarisuuden muutosta voidaan jatkaa niin monta kierrosta kuin on tarpeellista tar-koin määritellyssä tapauksessa, johon polaarisuudeltaan erilaisten lipidien alue sisältyy.

.35 Edullinen tapa sisällyttää bioaktiivinen aine lipidikantaja- s 110842 järjestelmään on sekoittaa se amfifiilisiin lipideihin, siinä tarkoituksessa, että luodaan homogeeninen formulaatio, jossa amf ifiilisten lipidien määrä on 1 - 90 painoprosentin alueella. Sellaisen amfifiilisen lipidin tulee pystyä spontaaniin kak-5 soiskerroksen muodostukseen. Sen esimerkkejä ovat amfifiiliset ja polaariset lipidiluokat, kuten esimerkiksi fosfatidyyli-koliini, fosfatidyyliglyseroli, fosfatidyyli-inositoli tai fosfatidyyliseriini tai niiden seokset.

10 Lipidikantajajärjestelmän suunnitteluun ei kuulu ainoastaan lipidiluokkien sopiva valinta ja/tai yhdistäminen, räätälöinti kunkin bioaktiivisen aineen liuottamiseksi, vaan myös rasvahappojen jakaantumisen, eli käytettyihin lipidiluokkiin kiinnitettyjen asyyliryhmien, sopiva valinta. Kuten alla esitetyis-15 tä esimerkeistä on nähtävissä, asyyliryhmien vaihtelu antaa erilaisia fysikokemiallisia ominaisuuksia.

Voidaan vaikuttaa nopeuteen, jolla lipidipartikkelit muodostuvat annetussa, vesipitoisessa ympäristössä sijaitsevasta jär-; 20 jestelmästä, ja sitä voidaan säädellä muuttamalla kaksois- kerroksen muodostavan lipidipääluokan geometrista muotoa, se ·*·,· on, tehokasta pääryhmäaluetta hiilivetyhäntien steerisen kon- r formaation suhteen.

· ’» ! 25 Toinen tapa vaikuttaa lipidipartikkeleiden muodostumiseen ja säädellä sitä on muuntaa lipidijärjestelmän ei-polaarisen osan hiilivetyketjujen rakennetta, täten juoksevuutta. Tämä vaikuttaa endogeenisten, amfifaattisten lipidien ja ulkosyntyisen vesiväliaineen vuorovaikutuksen nopeuteen.

30 i i

Esillä olevan keksinnön mukaisesti yllä kuvattua, tarkoin ’ · määriteltyä lipidijärjestelmää käytetään farmaseuttisessa koos- • · » tumuksessa, joka sisältää hepariinia, sen fragmentin tai '·’ johdannaisia vesipitoisen liuottimen kanssa.

» ,’V 35 Ilmaisu "hepariini" merkitsee mitä tahansa hepariinijaetta tai ,··· -luokkaa, joka on peräisin luonnonmukaisista, biosynteettisistä » * i 6 110842 tai geeniteknologisista lähteistä, samoin mikä tahansa johdannainen, se on hepariinin esterit ja "sen fragmentti", merkitsee mitä tahansa hepariinin pienimolekyylipainoista fragmenttia tai sen johdannaista, kemiallisesti muunnetut, syn-5 teettiset, hepariinin kaltaiset oligosakkaridit mukaan luettuina .

Monien ei-parenteraalisten antotapojen yhteydessä on ilmennyt huomattavia vaikeuksia hepariinien huonon bioabsorption voittamisessa.

10 Esillä olevan keksinnön kohteena on ratkaista tämä ongelma aikaansaamalla mainittuun lipidijärjestelmään perustuva, joustava koostumus.

Toisena keksinnön kohteena on saada aikaan koostumus, joka soveltuu hyvin hepariinien pitkäkestoisen itseannostelun tarkoi-15 tuksenmukaisiin muotoihin vaihtoehtona parenteraaliselle annolle.

Sellaista koostumusta voidaan käyttää suun kautta tapahtuvaan, rektaaliseen, bukkaaliseen, kielenalaiseen, nasaaliseen, ihonalaiseen tai johonkin transmembraaniseen tai trandermaaliseen ‘ 20 antoon sovellettujen valmisteiden tuotantoon lisäämällä kunkin antotavan suhteen sopivia vehikkeleitä, liuottimia tai kantaja-,'Ί aineita.

Am f ifaattinen ja polaarinen yhdiste on mieluummin fosfatidyy-25 likoliini, ja ei-polaarinen lipidi valitaan mono-, di- tai triglyseridien joukosta, joilla on määritellyt ketjunpituudet alueelta 6-18 hiiliatomia.

Koostumuksen veden määrän tulisi olla tarkoitukseltaan sel-:/·* 30 lainen, että erillisiä lipidipartikkeleita muodostuu. Tämä ehto on tutkittava kunkin lipidi jär jestelmän suhteen, koska todellinen raja-arvo lipidipartikkeleiden muodostumiseksi jär-jestelmässä riippuu lipidikomponenttien koostumuksesta ja luon-' teestä sekä järjestelmän avulla annettavan bioaktiivisen : ’: 35 komponentin luonteesta.

7 110842

Lipidien kokoonpano ja järjestelmään sisällytettävän bioaktiivisen lääkkeen polaarisuus ovat tärkeimmät seikat lipidijärjestelmän komponentteja valittaessa.

Absorptiota voidaan säädellä vaihtelemalla glyseridien ketjun 5 pituutta kuuden ja kahdeksantoista hiiliatomin välillä, mieluummin kuuden ja kahdentoista hiiliatomin välillä. Polaarisuu-den sekä rakenneosien eri tavalla varattujen ryhmien valinta myös voi vaikuttaa lipidipartikkelin muodostumiseen. Lipidipartikkelit voivat olla seospopulaatio, joka sisältää 10 erilaisia yksi-, kaksi- ja monikerroksisia rakenteita, kuten esimerkiksi misellejä, liposomeja ja suurempia, monikerroksisia rakenteita.

Tunnetaan hyvin monia tekniikan tason mukaisia menetelmiä, joilla voidaan säädellä sekä populaation kokoaluetta että ra-15 kennetta, kuten esimerkiksi äänikäsittely, jäädytyssulatus, säädelty sekoittaminen sekä erilaiset kokoalueeseen vaikuttavat laitteet. Sellaisten laitteiden tarve on otettava huomioon erikseen kunkin antomuodon ja kunkin koostumuksen avulla annettavan, terapeuttisesti aktiivisen yhdisteen suhteen.

; 20 Lipidipartikkelipopulaation koostumukseen vaikuttavat myös li- ; ' pidimateriaalin valinta, sen polaarisuus, hiiliketjujen pituus .'[ (pituudet) sekä muut tekijät, kuten yllä esitetään.

; j : Esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistetussa koostumuksessa yhdiste on hepariini tai sen fragmentti ja lipidijärjestelmä 25 edullisesti sisältää fosfatidyylikoliinin amfifiilisenä yhdisteenä sekä monoglyseridin ei-polaarisena komponenttina.

Amf ifiilisten yhdisteiden määrä koostumuksessa on alueella 1-90 painoprosenttia, mieluummin 1-50 painoprosenttia ja mieluiten :.··· 30 5-50 painoprosenttia lipidijär jestelmän suhteen. Edullinen : hepariinifragmentti on Fragmin", joka on pienimolekyylipainoi- .)·' nen hepariinif ragmentti, jonka Kabi Pharmacia on valmistanut sian hepariinista konrolloidulla typpihappodepolymerointimene-telmällä, katso EP 14184.

| 35 Fragmin" voi olla liuoksen tai suspension muodossa, kun se li- sätään koostumuksen muihin komponentteihin tai sekoitetaan 8 110842 niiden kanssa. Se voidaan lisätä oleellisesti vedettömän lipi-dimatriisin kanssa, ennen kuin koostumuksen muut ainesosat lisätään.

FragminK liukenee veteen erittäin hyvin, ja sellaisia vesi-5 liuoksia pidetään stabiileina.

Sopivia täyteaineita lisäämällä on mahdollista valmistaa Frag-mininR ominaisuuksien perusteella monia valmisteita, jotka perustuvat tarkoin määriteltyyn lipidijärjestelmään. Sellaiset valmisteet voidaan soveltaa peräaukon kautta tapahtuvaan käyt-10 töön vaahtojen, peräruiskeiden, kapseleiden ja peräpuikkojen muodossa tai käytettäviksi erilaisina valmisteina, jotka on valmistettu erityisesti suun kautta tapahtuvaan, bukkaaliseen, kielenalaiseen, nasaaliseen, transdermaaliseen ja ihonalaiseen antoon tai yleisesti antoon, joka yleensä tapahtuu limakalvojen 15 kautta. Esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistettu koostumus, joka sisältää FragminRia ja tarkoin määriteltyjä lipidejä, soveltuu myös depotvalmisteiden valmistukseen pitkitetyn vapautumisen aikaansaamiseksi, esimerkiksi ihon läpi tapahtuvaa antamista varten, tai käytettäviksi huokoisiin polymeeri-20 matriiseihin, joilla on sellaisia ominaisuuksia, että ne tarttuvat limakalvooon esim. bukkaalista antamista varten. Valmisteet ovat käyttökelpoisia monia hyvin erilaisia patolo-: gisia tiloja, kuten esimerkiksi veritukkotulppaumasairauksia, infarktia edeltävää rintakipua, sepelvaltimo-sydänsairauksia, .·.· 25 tulehdusssairauksia, tromboflibiittiä, autoimmuunisairauksia, arterioskleroosia tai hoidettaessa sairauksia, joihin liittyy metastaaseja tai angiogeneesiä.

Alan ammattimiehelle tulee olemaan selvää mikä tahansa koostumusten soveltaminen yllä mainittuihin antotapoihin mitä ’· 30 tahansa yllä mainittua hoitoa varten.

Yllä mainituissa antomuodoissa FragminRin kokonaisannos voi olla erittäin suuri, ja ainoastaan biologinen hyväksikäytet-tävyys samoin kuin terapeuttinen ja kliininen soveltuvuus • · antoon rajoittavat sitä, ja annoksen tulee olla suuruudeltaan : . 35 sellainen, että se siedetään hyvin.

9 110842

Esimerkkejä kliinisistä annoksista ovat 120 IU kehonpainon kilogrammaa kohti kaksi kertaa päivässä syvien laskimoperäisten tromboosien ollessa kysymyksessä sekä tromboosin ennalta ehkäisyä varten (potilailla, joilla vaara on vähäinen) 2500 IU 5 päivässä tai 5000 IU päivässä (potilailla, joilla vaara on suuri).

FragminRin määrä lipidien suhteen on alueella 1-200 (pai-no/paino), mieluummin 2-80 (paino/paino).

Jos koostumuksen lipidien määrän on oltava vähäinen, lisään-10 tynyt absorptiovaikutus heikkenee, mikä voidaan hyvittää lisätyllä FragminRin määrällä samojen seerumitasojen saamiseksi annon jälkeen.

Tämä laaja konsentraatioalue, joka tekee mahdolliseksi sen, että FragmininR määrän suhde lipidiin nousee aina arvoon 200 15 (paino/paino) saakka, ilmaisee koostumukseen sovellettavien komponenttien joustavuutta erilaisille potilastyypeille annettavien, sopivien annosmuotojen suhteen.

FragminRin liukoisuus ja stabiilius helpottavat koostumuksen soveltamista sopivaan antomuotoon, ja lisäksi on olemassa 20 voimakas todiste siitä, että FragminRilla saattaa olla stabi-, ’· loiva vaikutus koostumuksen lipidipartikkelipopulaatioon, mikä luultavasti johtuu FragminRin suuresta, negatiivisesta . varaustiheydestä.

i *. ! 2 5 Seuraavat esimerkit, joita ei tule pitää keksintöä rajoitta- • vina, osoittavat, että koostumuksissa FragminRia on esimer keissä määriteltyjen lipidien kanssa suhteissa, joissa on 25 prosenttia fosfatidyylikoliinia amfifiilisenä yhdisteenä ja 75 % monoglyseridiä ei-polaarisena yhdisteenä.

!,'· 30 Koostumukset annetaan niiden lisäksi tulevan, vesipohjaisen : ’ liuottimen erilaisten määrien kanssa in vivo peräaukon kautta tai pohjukaissuoleen. Pohjukaissuoleen annettavissa koostu-muksissa vesipitoisuus voi vaihdella yhdestä paino-osasta neljään paino-osaan koostumuksen lipidirakenneosien suhteen, j * . 35 FragminRin painosuhde tutkitun lipidin määrään nähden oli kahdesta aina kahteensataan (2 - 200).

10 1 10842

Alla esitetyt esimerkit 1-5, rajoittamatta esillä olevan keksinnön suojapiiriä, valaisevat lipidijärjestelmän lipidi-rakenneosien vaihtelua lipidejä ja niiden yhdistelmiä valit-5 taessa, silloin kun bioaktiivisia yhdisteitä ei ole mukana.

Alla esitetyt esimerkit 6-7 esittävät fosfatidyylikoliinista, glyserolin estereistä ja FragminRista koostuvan, tarkoin määritellyn lipidijärjestelmän valmistusta. Alussa nämä koos-10 tumukset eivät sisällä vesipohjaista liuotinta sellaista määrää, että lipidipartikkelin muodostuminen tapahtuu suoraan ja spontaanisti.

Esimerkki 8 esittää seuraavissa esimerkeissä käytettyä eläin-15 mallia sekä FragminRin biologista hyväksikäytettävyyttä pohju-kaissuoleen tai peräaukon kautta tapahtuvan annon jälkeen, silloin kun lipidijärjestelmä ei ole mukana.

Esimerkki 9 osoittaa, että FragminRin absorptio pohjukais-20 suolessa on lisääntynyt merkittävästi, kun FragminR on sisällytetty lipidijärjestelmään.

Esimerkki 10 osoittaa, että absorptio pohjukaissuolessa on : . 25 lisääntynyt, kun ennen antoa lisätään ulkopuolista vettä.

•j Esimerkki 11 osoittaa, että absorptio pohjukaissuolessa on lisääntynyt samalla tavalla myös, kun esimerkissä 10 esitetty vesi vaihdetaan saman määrän kanssa fysiologista keittosuola-liuosta.

30

Esimerkki 12 osoittaa, että lipidijärjestelmään sisällytetyn · FragminRin rektaalinen absorptio on merkittävästi suurempi kuin fysiologiseen keittosuolaliuokseen liuotetun FragminRin ’ absorptio lipidijärjestelmän puuttuessa.

:!·' 35

Esimerkki 13 osoittaa, että ulkopuolisen veden tai fysiologisen n 110842 keittosuolan lisäämisellä lipidijärjestelmään on positiivinen vaikutus rektaaliseen absorptioon.

Esimerkit 14 ja 15 osoittavat, että absorboituakseen pohju-5 kaissuolesta tai peräsuolesta FragminRin ei tarvitse välttämättä olla sisällytetty lipidijärjestelmään ennen veteen tai keittosuolaan tapahtuvaa liuottamista.

Esimerkki 16 valaisee sitä, että tutkitut, kaupallisesti 10 saatavat lipidit antavat vähäisemmän peräsuolesta tapahtuva absorption kuin tarkoin määritellyt lipidit.

Esimerkki 17 esittää absorption vertailua, kun FragminKin ja lipidin suhteet vaihtelevat, ja osoittaa, että peräsuolessa ta-15 pahtuva absorptio on voimakasta lipidin ja FragminRin laajalla konsentraatioalueella.

Esimerkki 18 esittää lipidijärjestelmän sisältävien valmisteiden välillä suoritettua hepariinin ja FragminRin absorption 20 vertailua.

Esimerkki 19 osoittaa, että koostumuksen muodostamisen jälkeen liuos voidaan varastoida vaihtelevan mittaisia aikoja ilman, että varastoinnilla on merkittävää vaikutusta absorptio-25 ominaisuuksiin.

Esimerkit 20-21 osoittavat, että FragminRin aktiivisuus säilyy ja sen absorptio on tehokasta vielä koostumuksen pidennetyn varastoinnin jälkeen.

. 30

Tulokset osoittavat, että tarkoin määritelty lipidijärjestelmä . lisää absorptiota pohjukaissuolessa ja pohjukaissuoleen annetun

FragminRin tehokkain absorptio saavutetaan koostumuksen suurimmalla, tutkitulla vesipitoisuudella. Komponenttien tut-35 kitut pitoisuudet antoivat suotuisia tuloksia. Kuitenkin voi olla mahdollista optimoida olosuhteita vielä lisää.

i2 110842

Syyt lisääntyneeseen absorptioon voivat olla siinä, että saavutetaan suurempi kosketuspinta-ala koostumuksen ja suolen membraanien välillä, mutta luultavasti se voi johtua myös li-pidipartikkelipopulaation edullisesta rakennekoostumuksesta 5 kyseessä olevassa laimennusasteessa.

Lipidipartikkelit voivat myös suojata lääkettä entsymaattiselta pilkkoutumiselta suolistossa, sekä siinä tapauksessa että lipidipartikkelit kantavat lääkettä tai jos niitä on muutoin läsnä liuoksessa. Suuri, läsnäoleva lipidien määrä voi saartaa 10 FragminKia pilkkovat entsyymit, ja sellaisessa tapauksessa FragminP voi olla lipidipartikkeleiden ulkopuolella hyvin suojattuna. Kuitenkin kun lipidipartikkeleiden määrä on pieni, voi olla edullista sulkea Fragmin” lipidipartikkeleiden sisälle.

15 Entsyymi-inhibiittorit ovat keksinnön mukaisten koostumusten mahdollisia lisäaineita.

On myös huomattu, että absorptio on voimakasta ottamatta lukuun sitä, onko FragminK alunperin liuoksessa vapaana vai lipidipartikkeleihin sisällytettynä. On osoitettu myös erin- , 2 0 omaisia absorptiotuloksia, sen jälkeen kun FragminR-koostu- • muksia on annettu peräsuolen kautta lipidijärjestelmän kanssa läsnäolevan veden tai keittosuolan pitoisuuden laajalla alueella. Nämä tulokset ovat verrattavissa ihonalaisiin ruiskei-siin, jotka nykyisin ovat yleisin antotapa.

25 Myös on osoitettu, että tarkoin määritelty lipidijärjestelmä on edullinen kaupallisiin lipideihin verrattuna koostumuksen säätelyn ja stabiloinnin sekä absorption lisääntymisen suhteen tarkasteltuna.

On myös havaittu, että muodostuneiden partikkeleiden koko voi 30 vaihdella huomattavasti vaikuttamatta FragminRin suotuisiin absorptio-ominaisuuksiin. Koostumusten on osoitettu olevan yhtä käyttökelpoisia lyhyiden ja pitkien ajanjaksojen kuluttua ,.· niiden valmistuksesta.

• * Esillä olevan keksinnön mukaiset koostumukset tekevät mahdol- 35 liseksi hepariinin absorption lisääntymisen, kun niitä annetaan i3 110842 lipidijärjestelmän kanssa. Esillä olevassa keksinnössä käytetty, tarkoin määritelty lipidijärjestelmä on edullinen myös siksi, että sen erittäin tarkoin määritellyt rakenneosat tekevät biologisen absorption mahdolliseksi ja myös lääkkeen 5 vapautumisen sekä liukenemisen tarkemmin säädellyksi.

Tämä tarkoittaa, että sopivien lipidirakenneosien valinta lipi-diluokista tekee mahdolliseksi saavuttaa parempi absorption kontrolli. Huomataan myös, että voimakas absorptio voidaan saada vieläpä, jos FragminRia ei sisällytetä lipidijärjestel-10 mään valmistuksen aikana, mutta se lisätään lipidikoostumukseen liuoksena ravistelun ja äänikäsittelyn aikana.

Johtopäätöksessä täytyy ottaa huomioon, että tarkoin määrättyyn lipidijärjetelmään perustuvat koostumukset sekä hepariinit tai hepariinifragmentit ovat yllättävän suotuisia lisääntyneen 15 absorption suhteen, ja ne antavat edullisen mahdollisuuden säädellä absorption nopeutta.

Erilaiset muunnokset ja samanarvoisuudet ovat selviä alan ammattimiehelle, ja niitä voidaan käyttää esillä olevan kek-20 sinnön mukaisissa yhdisteissä, koostumuksissa ja menetelmissä t ·. poikkeamatta keksinnön piiristä ja hengestä, ja sen tähden on ymmärrettävää, että esillä oleva keksintö ei rajoitu spesifisiin esimerkkeihin ja niissä esitettyihin sovellutusmuotoihin.

• · 25 Esimerkki 1 ♦ .* 1,25 g soijapavun fosfolipidejä (I) lisättiin 1,25 g:aan glyseridiseosta (II) ja sekoitettiin varovaisesti 12 tunnin ajan 60°C:ssa. Sitten lisättiin 2,5 g triglyseridiä (III) ja kokonaisseosta sekoitettiin yhden tunnin ajan 60°C:ssa.

» · 14 1 10842 co ^ o O o λ: o (0 a -n a o to a ,ρ a

rO dP m P

> i 'in Λ

IQ O 00 >. in P

(d p inO' -p > o ρ -p ^ o -H -H -P co o

(d -P 4-1 -P 4-1 4-) (d H

Öä 4J -P -P 4-> 4-) 4-) P P

-H '— jj jj jJ (d jj -H (d id ;rd Ό p4-i4-)pp4-)pppp

-P PPP4-)P4-)(1)(D-P:P

p Η Ρ Ρ -Ρ Ρ Ρ i—li—I to :(d <u co >iPPgitiidoo-Hg co ρ paps-HQJdiööoio

>, g ft id ιί id U H -H -rl > -H

rH P idr^rHaWOrHrHpld Ö1 4J Λί (da

-P OOOOHCNOOCOO

P O ...............H X

Eh "ΟίΝΐηοοοοοοοοοο

00 Η rH i—It—I r-I H H Eh W

H

HO O

h m m m cn

H

h oo ro in ,,. m m cn

‘ , o o H

h o o oo ch in ; ‘ m ^ cn h m ,, o o o o h t ____

* · H

p

H

[0 -Ρ -H

p S r-H 4-) S ρ o -p

p "P "P Pi p -P

pi P rH -Ρ -P rP -P

CO -P O to a 0 -P H

O -P p Ο -P P rP o

O rPidpHDOP

,, χ o pi -P co p ω ’ , * X O) I pj >1 CD CO lid

.,, P -P -P -P 0) Ip to >1 P

*, PrHrPi—t CO Ö) ip rH ip *· ip ip i>i -P -P rH Ö) ip

• * oipipipprpöi-ρ S

P^lTiTlPip-PH CO

rH ·Ρ ·Ρ "P P ip 1—I ip "P

-PPlpIpliHCOiplP P

. OPPP0P>icn p

-HPiipiipiaocoP O

a— ωωωιΰΡ-Η x , , -P Ö1 O O O -P O -P P o

j — IPhlPWSQEH X

15 110842

Esimerkki 2 1,25 g soijapavun fosfolipidejä (I) lisättiin 1,25 g:aan glyseridiseosta (II) ja sekoitettiin 12 tunnin ajan 60°C:ssa. Sitten lisättiin 2,50 g triglyseridiä (III), ja kokonaiseosta 5 sekoitettiin yhden tunnin ajan 60°C:ssa.

15 110842 16 ld vo o - v - - o

00 O O OH

LO -sh i cd 0 "n

Q O

a a (0 a

Λ <G

<o — X

> dP (0 ω i -h > (0 O -H -H -H -U in p 3 4-) 4-1 -rl -P 4-) <0

•H 4-> -Ή -H 4-> -P -P (0 P

f! (G (04-l4-)(0-P-HlG(0:(0

-H a (G4-l4-)(0(04-l(0ö<0P

O'-" H (0 (0 -P (04-4 QJ 1) -H :(0

-H f0 (0 -H p iG i—li—I W **iG

PW PPPg<G(000-rig id o aaprHajtucöou}

Ifl g Ιβ Ιβ J) ID U ri -rl -H > -rl >i3 ,YA!riatGOririp(0

H 4-1 (G 3 I

Οι ω οοοοοΗο4ηωο

-h o H M

PO ooocnvooooooooooO

E-ι Αί rlrlrlrlrlrlrlE"*P4

H

H O LO

LD 04

04 H

H Lfl ,. , H mm 04

... VO VO

. . * " ·. rH

O O

:,: ; o LO oo 0^ ίο in , . , H H* ΓΟ rl O 04 04

• O O O O O H

4-1

1 -H

3 -H I Ό -H

4-4 3 "H -H rH -H

ω -h ω a 0 -H H

O -H O -P P rH O

O rH 3 rl φ O P

: A! o -h o ω p qj x i -h i a p >ι ω ω :to 3 -h -h 3 -h a Φ h ω >i p \ f0 rlrl-rlrl(0[flÖ4i>irH :(0

. . Ai rl N Ή ^ Ä ’rl ·Ή H 0l "‘(G

... O κ’Ίκ'ιβκ'Ι-ΗΡι-ΗΟΐ-Η g 3 ΌΌίσΌ 4-) (G >i -H rH ω > · rl r-' -rl -r| -H -rl -P fG rH rl !>t -rl -HÖ1-P4-IH4-) (G rl IQ >i >i (0 ‘: Ό ^ (0 (0 o (0 <c o to >ι ω 3

-rl HHHHÖHH-rHlOiaOmiG O

1 ’ aWtflW<0[flH[fllä<0-H y

.’. -H 3 004-1000 -H O -HP O

,· agaaoDPH-pawsatH x 17 1 10842

Esimerkki 3 1.25 g soijapavun fosfolipidejä (I) lisättiin 1,25 g:aan glyseridiseosta (II) ja sekoitettiin 12 tunnin ajan 60°C:ssa.

5

Lipidiluokan koostumus (g) I II

Fosfatidyylikoliini 0,40

Fosfatidyylietanoliamiini 0,35 10 Fosfatidyyli-inositoli 0,18

Neutraaleja lipidejä 0,32

Monoasyyliglyseroli 0,63

Diasyyliglyseroli 0,63

Triasyyliglyseroli 15 Kokonaismäärä 1,25 1,25

Esimerkki 4 1.25 g soijapavun fosfolipidejä (I) lisättiin 1,25 g:aan glyseridiseosta (II) ja 0,16 g:aan etanolia. Kokonaisseosta 20 sekoitettiin varovaisesti 6 tunnin ajan 60°C:ssa. Lisättiin 0.16 g triglyseridiä (III), ja kokonaisseosta sekoitettiin vielä tunnin ajan kohotetussa lämpötilassa.

i “ Lipidiluokan koostumus (g) I II III

'. 25 ·,· j Fosfatidyylikoliini 0,40 !v: Fosfatidyylietanoliamiini 0,35

Fosfatidyyli-inositoli 0,18

Neutraaleja lipidejä 0,32 ; · ,3,0 Monoasyyliglyseroli 0,63

Diasyyliglyseroli 0,63

Triasyyliglyseroli 0,16

Kokonaismäärä 1,25 1,25 0,16 , 35 ie 110842

Esimerkki 5 2.50 g soijapavun fosfatidyylikoliinia (I) ja 7,50 g mono-glyseridiä (II) sekoitettiin varovaisesti kuuden (6) tunnin 5 ajan 60°C:ssa. Vettä lisättiin 1,25 g, ja sekoittamista jatkettiin vielä tunnin ajan kohotetussa lämpötilassa.

Lipidiluokan koostumus (g) I II

10 Fosfatidyylikoliini 2,50

Monoasyyliglyseroli 7,50

Kokonaismäärä 2,50 7,50 15 Esimerkki 6 2.50 g soijapavun fosfatidyylikoliinia (I) ja 7,50 g mono-glyseridiä (II) sekoitettiin varovaisesti kuuden tunnin (6) ajan 60°C:ssa. Lisättiin 1,25 g FragminR-liuosta (120 mg/g vettä), ja sekoittamista jatkettiin vielä tunnin ajan kohote- 20 tussa lämpötilassa.

. , Lipidiluokan koostumus (g) I II

. * • '* Fosfatidyylikoliini 2,50 • · *.2:5 Monoasyyliglyseroli 7,50 t · i · · > I * ' t I * i : Kokonaismäärä 2,50 7,50 » * * f · ·

Esimerkki 7 :\3P 2,50 g soijapavun fosfatidyylikoliinia (I) ja 7,50 g mono- ' glyseridiä (II) sekoitettiin 60°C:ssa kuuden (6) tunnin ajan.

* * »

Lisättiin 0,625 g FragminR-liuosta (120 mg/g vettä), ja se- « koittamista jatkettiin kohotetussa lämpötilassa vielä tunnin :’ · ajan.

.

fit t * * I t i9 110842

I (M N N O

0 *- *· - » o

ft 00 H O O H

ft C- CM

3 A

3 3 > ·Γ1 01 o (0 ft

l-ι (X

3

C A

H --—. <0 »—I o\° OI -H 01 MO -P (Ö Q) C A -H -H M :3

01 -H 3 -P -P M

>i (0 3 -P -P 3 :3 r-l ft rl (fl (Ö Ή Ϊ3 O' ^ >i id id ra g •H M M M -H 01 H 111 ft ft 3 O ·Η >ι 3 3 (0 3 > 3

>i g Ai Ai rH M C

01 3 3 0 3 -P O O O 01 Ai ora ri o CO CO O fM O Ui 0 O rl rl g Ai

H

o o in in v » ? »

HO O

: ,e in m * , - v

\ \\ (N CN

» * * · » » · ? * » *if * I f f I f * > 01

3 Ή "H

P C |H

01 -HO

. O -HM

; * ; O H 0) ’ Ai OOl

Ai >i :3 : : : c -h h m ‘ 3 r-l O' -3 A! >i -H :3 .. I 0 >i H g 3 Ό >i 01

* rH -H Ui "H

; -H -PO) 3

Ό 3 3 C

-H (H O 0 , ft r-. oi C A! ... -H G> O O 0

iJ w IM S W

20 110 8 4 2

Vedessä, 37°C:ssa muodostuneiden lipidipartikkeleiden koko-jakauma määritettiin Malvern-laitteella esimerkkiä 15 varten. Formulaatiota ravisteltiin varovaisesti vedessä 17 tunnin 5 ajan, ja sitten se sentrifugoitiin lipidifaasin erottamiseksi vesifaasista. Saatiin seuraava tulos.

Koko % 10 <1 μ,ΊΆ 36 >1 μιη, <2μιη 60

Esimerkki 8 Eläinmalli 15 Kaikissa kokeissa käytettiin 2,5 - 3,5 kg:n painoisia Uuden Seelannin valkoisia kaneja ja niiden molempia sukupuolia. 12 tunnin mittaisen paaston jälkeen jokainen eläin rauhoitettiin laskimonsisäisellä Hyponorm-ruiskeella (0,1 ml/kg, Janssen Pharmaceuticals, Belgia) sekä ihonalaisella Atropine-ruis-20 keella (0,5 mg/kg, Kabi Pharmacia, Sweden). Kanit nukutettiin Mebumalilla, 20 mg/kg. Tämän jälkeen nukutusta pidettiin yllä tarvittaessa. Eläimiltä ajettiin karvat ja avattiin keski-. . vatsa. Koeyhdisteet ruiskutettiin suoraan pohjukaissuoleen, · minkä jälkeen vatsaontelo suljettiin. Rektaalinen anto suori- • 25 tettiin ruiskulla, joka oli liitetty kanin peräsuolessa suo-*. ritettavaa käyttöä varten suunniteltuun muoviputkeen. Annos ·,: ; tarkistettiin punnitsemalla ruisku ja yhdistämällä putket \ '/· ennen koeyhdisteiden antamista ja sen jälkeen. Verinäytteet (1 ml) koottiin 0,25, 0,5, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 4, 5, 6, 30 7, 8, 9 ja 10 tunnin kuluttua korvavaltimoon sijoitetun ka- tetrin avulla, ja ne sekoitettiin natriumsitraatin kanssa ,··.·. 0,04-molaariseksi, lopulliseksi konsentraatioksi. Putket * * · säilytettiin jäiden päällä, kunnes niitä sentrifugoitiin * * nopeudella 800 g, 10 minuutin ajan. Plasman anti-FXa-aktiivi-'35 suus määritettiin alkunopeusmäärityksen avulla käyttämällä , härän FXa:ta (Kabi Pharmacia) sekä kromogeenisubstraattia S- 2222.

21 110842

FragminRin näennäinen biologinen hyväksikäytettävyys pohju-kaissuoleen tai rektaalisesti suoritetun annon jälkeen ilmaistaan anti-FXa-aktiivisuuskäyrän alla sijaitsevan pinnan 5 murto—osana, se on (Αϋ0ρΟ^υ)ς3^ββν1οιβθη annettu/rektaalinen) sekä (AUCihonalainen) :nä, viimeksi mainitun määritettiin olevan 5,14+0,34 mielivaltaista yksikköä 6 kanilla niiden saadessa FragminRia ihonalaisena ruiskeena 2 mg/kg:n suuruisena annoksena.

10

FragminRin biologinen hyväksikäytettävyys lipidien puuttuessa Neljällä kanilla tutkittiin pohjukaissuoleen suoritetun annon jälkeen FragminRin biologinen hyväksikäytettävyys siinä tapauksessa, että lipidijärjestelmä puuttui. Kaksi kaniinia sai 15 FragminRia 25mg/kg jauheena, joka oli suljettu pohjukaissuolessa mahaportin tasolle asetettuun gelatiinikapseliin. Jäljelle jäävät kaksi kania saivat fysiologiseen keittosuola-liuokseen liuotettua FragminRia, joka ruiskutettiin suoraan pohjukaissuoleen (kokonaisannos 10 mg/kg). Millään näillä 20 eläimillä ei voitu havaita yhtään anti-FXa-aktiivisuutta 8 -10 tunnin mittaisen tarkkailujakson aikana.

FragminRin biologinen hyväksikäytettävyys tutkittiin kolmella (3) kaniinilla. FragminR liuotettiin fysiologiseen keitto-suolaliuokseen ja ruiskutettiin suoraan peräsuoleen » · · 25 10 mg/kg:n annoksena. Kahdella näistä kaneista ei ollut ha- ’’ ’/ väittävää anti-FXa-aktiivisuutta, mutta yhdellä niistä aktii- ’· visuutta oli 0,2 IU/ml 45 minuutin ajan, mikä vastaa biolo- gista hyväksikäytettävyyttä, joka on vähemmän kuin yksi pro-· sentti.

30

Johtopäätös. Pohjukaissuoleen suoritetun ja rektaalisen annon jälkeen FragminRin biologinen hyväksikäytettävyys lisäävien 1 , lisäaineiden puuttuessa on vähemmän kuin yksi (1) prosentti.

’’’’is • I · * » » 22 110842

Esimerkki 9

Esimerkkien 5-7 mukaisesti lipidijärjestelmään sisällytetyn FragminRin absorptio pohjukaissuolessa tutkittiin kahdeksalla 5 kanilla. Kymmenen minuuttia ennen pohjukaissuoleen suoritettavaa antamista FragminR-lipidijärjestelmä sekoitettiin veden kanssa sellaisena määränä, että yksittäisiä lipidipartikke-leita muodostui. Seoksen koostumus oli seuraava: 1 paino-osaa FragminRia + 1 paino-osaa tislattua vettä. Vesi-lipidijärjes-10 telmää ravisteltiin voimakkaasti 5-10 minuutin ajan, ja sitten se jätettiin seisomaan huoneenlämpötilaan vielä 10 minuutiksi ennen pohjukaissuoleen suoritettavaa ruiskutusta. Frag-minRin pitoisuus oli 2 prosenttia lipidin painosta. Kaikki kanit saivat seuraavat annokset: FragminRia 25 mg/kg, lipide-15 jä 1250 mg/kg ja tislattua vettä 1250 mg/kg. Tässä kokeessa kaikilla kaneilla oli plasmassa havaittavia tasoja anti-FXa-aktiivisuutta. Maksimaalinen plasmakonsentraatio (Cmaks>) saavutettiin 0,5 - 1,5 tunnin kuluessa, ja se oli alueella 0,37 IU/ml - 1,76 IU/ml. Keskimääräinen absorptio tässä ko-20 keessa oli 4,7 + 3,0 %.

Johtopäätös: FragminRin absorptio pohjukaissuolessa lisääntyy • .· merkittävästi, kun FragminR sisällytetään lipidijärjestel- λ ’ mään, verrattuna tilanteeseen, jossa lipidit puuttuvat jär- 25 jestelmästä.

Esimerkki 10 : Tämä koe oli täydelleen yhtäläinen esimerkissä 9 kuvatun v kokeen kanssa, paitsi että FragminR-lipidijärjestelmä sekoi- 30 tettiin suuremman vesimäärän kanssa. Seoksen koostumus oli seuraava: yksi (1) paino-osaa FragminR-lipidiä + 4 paino-osaa tislattua vettä. FragminRin pitoisuus oli 2 prosenttia lipi-• , din painosta. Kaikki kanit (n=9) saivat seuraavat annokset: FragminRia 25 mg/kg, lipidejä 1250 mg/kg ja tislattua vettä '35 5000 mg/kg ( 5ml). Tässä kokeessa kaikilla kaneilla oli ; plasmassa havaittavia tasoja anti-FXa-aktiivisuutta. Cmakg> 23 110 8 4 2 saavutettiin 0,75 - 1,5 tunnissa, ja se oli alueella 0,73 IU/ml - 3,79 IU/ml). Keskimääräinen absorptio oli tässä kokeessa 14,7 + 5,6 %.

5

Johtopäätös: FragminRin absorptio pohjukaissuolessa lisääntyy merkittävästi, kun lipidijärjestelmä (sisältäen FragminRin) sekoitetaan veden kanssa, ennen kuin se ruiskutetaan pohju-kaissuoleen.

10

Esimerkki 11 Tämä koe oli täysin yhtäläinen esimerkissä 10 kuvatun tutkimuksen kanssa, paitsi että FragminR-lipidijärjestelmä sekoitettiin neljän osan kanssa fysiologista keittosuolaliuosta 15 saman määrän sijasta tislattua vettä. Tämä tehtiin sen seikan tutkimiseksi, oliko FragminR-lipidi-vesijärjestelmän ioni-vahvuudella mitään vaikutusta FragminRin absorptiooon pohjukaissuolessa. Seoksella oli seuraava koostumus: yksi (1) paino-osa FragminR-lipidiä + neljä (4) paino-osaa fysiolo-20 gista keittosuolaliuosta. FragminRin pitoisuus oli 2 prosenttia lipidin painosta. Kaikki kanit (n=10) saivat seuraavan annoksen: FragminRia 25 mg/kg, lipidejä 1250 mg/kg ja fysio-• .· logista keittosuolaliuosta 5000 mg/kg. Tässä kokeessa kaikil la kaneilla oli havaittavia tasoja anti-FXa-aktiivisuutta ?5 plasmassa. Cmaks> saavutettiin 0,75 - 1,5 tunnin kuluessa, ja • “· se oli alueella 0,62 IU/ml - 2,60 IU/ml. Keskimääräinen ab- : sorptio oli tässä kokeessa 13,4 ± 7,3 %.

» · ♦ V : Johtopäätös: FragminRin pohjukaissuolensisäinen absorptio 30 lisääntyy merkittävästi, kun FragminR-lipidijärjestelmä se- koitetaan fysiologisen keittosuolaliuoksen kanssa.

* * , Esimerkki 12

Lipidijärjestelmään sisällytetyn FragminRin rektaalinen ab-'35 sorptio tutkittiin viidellä kanilla. Lipidijärjestelmää ruis-: kutettiin ilman vettä suoraan peräsuoleen 100 mg/kg:n suu- » · t : ruisena annoksena FragminRin annoksen ollessa 2 mg/kg. Tässä 24 110 8 4 2 kokeessa kaikilla kaneilla oli plasmassa havaittavia anti-FXa-aktiivisuuden tasoja. Cmaks saavutettiin 1,5 - 2,5 tunnin kuluessa, ja se oli alueella 0,53 - 1,98 IU/ml. Keskimää-5 räinen absorptio tässä kokeessa oli 67,0+18,2 %.

Johtopäätökset. Lipidijärjestelmään sisällytetyn FragminRin rektaalinen absorptio ilman vesiliuoksen lisäystä on dramaattisesti suurempaa kuin kuin fysiologiseen keittosuolaliuok-10 seen yksinään liuotetun FragminRin rektaalinen absorptio.

Esimerkki 13

Ulkoisen veden tai fysiologisen keittosuolan lisäämisellä lipidijärjestelmään oli positiivinen vaikutus pohjukais-15 suolessa tapahtuvaan absorptioon (katso esimerkit 9, 10 ja 11). Tämä koe suoritettiin sen seikan tutkimiseksi, voitiinko samanlainen vaikutus nähdä rektaalisen antamisen jälkeen. 10 minuuttia ennen peräsuoleen tapahtuvaa antamista FragminR-lipidijärjestelmä sekoitettiin 4 osan kanssa fysiologista 20 keittosuolaliuosta esimerkissä 11 kuvatulla tavalla. Seoksen koostumus oli seuraava: 1 paino-osa FragminR-lipidijärjestel-mää + 4 paino-osaa fysiologista keittosuolaliuosta. Frag-. t· minRin pitoisuus oli 2 prosenttia lipidin painosta. Tämä , ‘ koostumus tutkittiin 7 + 7 kanilla vastaavasti FragminRin ( 25 annoksilla 2 ja 5 mg/kg. Lipidiannos oli 100 ja 250 mg/kg, ja '· "· fysiologisen keittosuolaliuoksen määrä oli 400 ja 1000 mg/kg.

Tulokset esitetään yhteenvetona alla sijaisevassa taulukossa.

Γ · ’: I I · : Annos AUC cmaks. Absorptio 30 (mg/kg) (IU/mlxh) (IU/ml) (%) 2 4,4 1,43+0,51 85,6+29,7 5 11,8 2,89±0,78 91,6+30,0 i ’ ’ Johtopäätös. Lipijärjestelmään sisällytetyn ja ulkoisen keit-•35 tosuolaliuoksen kanssa sekoitetun FragminRin rektaalinen ab- . sorptio oli lähes yhtä suuri kuin absorptio, joka havaittiin 25 110 8 4 2 ihonalaisen ruiskeen jälkeen, joka antotapa on nykyisin Frag-minRille yleisin. FragminRin rektaalinen absorptio osoittaa hyvää suhdetta annokseen, koska 2,5-kertainen lisäys annoksen 5 määrässä antaa samanlaisen lisäyksen AUC:ssä ja Cmaks :ssa, kun taas absorptionopeus on vakio.

Esimerkki 14

Kaikissa yllä kuvatuissa kokeissa FragminR sisällytettiin 10 lipidijärjestelmään ennen veden tai fysiologisen keittosuolan lisäystä järjestelmään. Seuraavissa kokeissa käytettiin tarkalleen samaa lipidijärjestelmää, mutta FragminRia ei sisällytetty siihen. Tätä lipidikoostumusta ilman FragminRia nimitetään seuraavassa tarkastelussa "plasebolipideiksi".

15 Plasebolipidien kanssa sekoitetun FragminRin absorptiota pohjukaissuolessa tutkittiin 7 kanilla. FragminR-jauhe liuotettiin fysiologiseen keittosuolaliuokseen 5 mg/ml:n (5 %) lopulliseksi pitoisuudeksi. Neljä paino-osaa tätä FragminR-liuosta sekoitettiin yhden paino-osan kanssa plasebolipidiä. 20 FragminRin pitoisuus tässä seoksessa oli 2 prosenttia lipidin painosta, mikä vastaa samaa FragminR:lipidi-suhdetta kuin esimerkeissä 11 - 15. Seosta ravisteltiin voimakkaasti 5-10 • ,· minuutin ajan, tai vaihtoehtoisesti sitä äänikäsiteltiin * sopivan mittainen aika ennen pohjukaissuolen sisään tapah- • · , ?5 tuvaa ruisketta. Kaikki kanit saivat seuraavan annoksen:

» « I

'* " FragminRia 25 mg/kg, lipidejä 1250 mg/kg ja tislattua vettä i · · > · ’· 5000 mg/kg. Kaikkien kanien plasmassa oli tässä kokeessa ! havaittavia tasoja anti-FXa-aktiivisuutta. Maksimaalinen * * » v : plasman konsentraatio (Cmak8-j saavutettiin 0,5 - 2,0 tunnis- 30 sa, ja sen alue oli 0,53 IU/ml - 3,55 IU/ml. Keskimääräinen absorptio tässä kokeessa oli 13 + 8 %.

I · * * · • > Johtopäätös. Tämä koe osoittaa, että absorboituakseen pohju-kaissuolesta FragminRin ei välttämättä tarvitse olla sisäl- * · · · » '35 lytetty lipidijärjestelmään ennen veden lisäystä. Plasebo-; lipidien ja veden tai keittosuolan seos, joka sisältää liuo- : tettua FragminRia, absorboituu samassa määrin. Suotuisat t » 26 110 8 4 2 tulokset saadaan sekä ravistelemalla koostumusta että ääni-käsittelemällä sitä.

5 Esimerkki 15

Plasebolipidien kanssa sekoitetun FragminRin rektaalista absorptiota tutkittiin kuudella (6) kanilla. Seos valmistettiin esimerkissä 14 kuvatulla tavalla, ja se ruiskutettiin rektaalisesti seuraavana annoksena: FragminRia 2 mg/kg, lipi-10 dejä 100 mg/kg ja fysiologista keittosuolaliuosta 400 mg/ml. Tässä kokeessa kaikilla kaneilla oli plasmassa havaittavia anti-FXa-aktiivisuuden tasoja. Cmaks saavutettiin 0,5 - 2,0 tunnissa, ja se oli alueella 0,59 - 1,95 IU/ml. Keskimääräinen absorptio tässä kokeessa oli 64,2 + 31 %.

15

Johtopäätös: Tämä koe osoittaa esimerkin 14 mukaisesti, että absorboituakseen peräsuolesta FragminRin ei tarvitse välttämättä aluksi sisältyä lipidijärjestelmään. Plasebolipidien ja keittosuolan seos, joka sisältää liuenneen FragminRin, absor-20 hoituu myös suuremmassa määrin kuin FragminR ilman lipidejä. (Vertaa esimerkkiin 13).

Esimerkki 16 ' Kaupallisesti saatavien lipidien kanssa sekoitetun Frag- *. 25 minRin rektaalinen absorptio tutkittiin neljällä (4) kanilla.

* * *

’· Käytettiin seuraavia kaupallisia lipidejä: IMWIT0R MG 742 (MG

i.: Huls AG:Itä, sisältää 50 % monoglyseridejä ja 50 % di- ja ; V triglyseridejä asyyliradikaalien kanssa, jotka ovat pääasias- ’ sa peräisin kapryyli- ja kapriinihaposta, sekä fosfatidyyli-30 koliinia Zigma PC (P-5394 Sigmalta, sisältää 84 % PC:tä, 13 % ·’; PE:tä ja 3 % muita rakenneosia) . Kaupalliset lipidit sekoi- I * tettiin fysiologisen keittosuolaliuoksen kanssa esimerkeissä ' 14 ja 15 kuvatulla tavalla, ja ne ruiskutettiin rektaalisesti seuraavana annoksena: FragminRia 2 mg/kg, lipidejä 100 mg/kg 35 ja fysiologista keittosuolaliusta 400 mg/kg. Tässä kokeessa ; kahdella kanilla neljästä ei ollut plasmassa mitään havaitta- ,·. : vaa anti-FXa-aktiivisuutta, ja kahdella oli alhaisia tasoja, 27 1 10842 jotka olivat alueella 0,13 IU/ml - 0,25 IU/ml. Keskimääräinen absorptio tässä kokeessa oli 0,7 + 1,5 % (mukaan luettuina ne, joilla ei ollut havaittavaa absorptiota).

5

Johtopäätös: Kun erittäin tarkasti määritelty lipidijärjestelmä vaihdettiin epäpuhtaampiin lipideihin, joista se oli puhdistettu, rektaalisessa absorptiossa havaittiin myös dramaattinen väheneminen, joka havainnollista sitä, että yllä 10 esitetyissä esimerkeissä kuvattu lipidien vaikutus ei ole lipidien vaikutus yleensä, vaan se voidaan lukea tarkoin määritetystä lipidijärjestelmästä johtuvaksi.

Esimerkki 17 15 Yllä kuvatuissa esimerkeissä FragminRin määrän suhde lipidien määrään on aina ollut 2 mg/kg ruumiin painoa 100 mg/kg:aa kohti ruumiin painoa. Seuraava esimerkki suunniteltiin rek-taalisen absorption tutkimiseksi FragminR:lipidi-suhteen funktiona. Yksi osa plasebolipidijärjestelmää sekoitettiin 20 neljän (4) osan kanssa fysiologista keittosuolaliuosta, joka sisälsi esimerkissä 16 kuvattua, liuotettua FragminRinia mutta jota oli varastoitu 16 tunnin ajan. Saatiin suurempi , , FragminR:lipidi-suhde lisäämällä keittosuolaan liuotettua , ' FragminRia. Tutkittiin seuraavat koostumukset rektaalisen t '' 25 absorption suhteen: I * » » * • * I · «I f t % t * t I * · i * · 30 i i t II· I * i ! * * * I * t r t «lii» I · tl** • 35 • i » I * » 1 *

I * I

• * » 28 1 10 8 4 2

Ryhmä FragminR/li- mg FragminRia/100mg mg keitto- nro pidi (mg/kg) lipidiä suolal./kg 1 (n=8) 2:100 2 400 5 2 (n=9) 2:50 4 200 3 (n=8) 2:25 8 100 4 (n=7) 2:10 20 40 5 (n=8) 2:5 40 40* 6 (n=8) 2:2,5 80 40* 10 7 (n=4) 2:1 200 15* * Johtuu käytännöllisistä syistä (liian pienet tilavuudet), lipidipitoisuuksia ei voitu pitää vakioina.

15 n on tutkittujen kanien lukumäärä.

Saatiin seuraavat tulokset: s 110842 ^ m 04 η σι σι ^ κ ^ \ < Ο σίΓ^Γ^ΟΟίΝΟΗ

*Η rH (N rH ι—I fsj rH

(¾ +ι +ι +ι +ι +ι +ι +ι

U

O 04 ro ο ιη r-ι ιη ο~ (/3 Is V ^ ^ S κ Λ η ισ n o co Ο

«JoVoint^cot^co^cM

«a* in ^ νο ro csj v ^ ^ ^ k ^ v o o o o o o o ^ H +| +| +| +| +| +| +| d^Ht-Hvococovoco £ ΪΖ) S S s s s s s

OHHHHHHOO

n h in n· (n h vo

k k W v S k S

iH rH rH tH H rH O

+l +l +l +l +l +l +l .' _ U o vo ό 04 o- o o a |3 V ». V V «k V s

rtj nM^nnojH

*. · i 1

* . * . erH

:.: : n , Ή : · : a . . ·Η

.. · <—I

: ; : >».

• c

•H

e a) & T3

’,·.·. (dXlCM^COOOOO

: .· s-i 3 oi ^ co o fe W og :ιβ e . · xJOHOjfo-^invoO'

>1 M « G

30 110 8 4 2

Johtopäätökset: Kaikki tutkitut FragminR-lipidikoostumukset antoivat voimakkaan rektaalisen absorption, mikä osoittaa, että FragminRin ja lipidien konsentraatio kuvatussa järjes-5 telmässä antavat lisääntyneen absorption verrattuna Frag-minRiin ilman lipidejä. Lipidikoostumuksella on lisäävää vaikutusta FragminRin rektaaliseen absorptioon.

Esimerkki 18 10 FragminR on pienimolekyylipainoinen hepariinifragmentti, joka on valmistettu säädellyn typpihappodepolymerointimenetelmän avulla sian hepariinista. Useat tutkijat ovat osoittaneet, että hepariini absorboituu huonosti (<l%) suussa tai pohjukaissuolessa tapahtuneen absorption jälkeen. Esillä olevan 15 tutkimuksen tarkoituksena on selvittää, voisiko lipidijärjes-telmä lisätä hepariinin rektaalista absorptiota. Kokeellinen menettely oli täsmälleen sama kuin kuin esimerkissä 14 kuvattu menettely, paitsi että FragminR vaihdettiin hepariiniin. Kahdeksan kania sai seuraavat annokset: hepariinia 2 mg/kg, 20 lipidejä 100 mg/kg ja tislattua vettä 400 mg/kg. Tässä kokeessa kaikilla kaneilla oli plasmassa havaittavia tasoja anti-FXa-aktiivisuutta. Plasman maksimaalinen konsentraatio (Cmake.) saavutettiin 0,5 - 2,0 tunnissa, ja se oli alueella • ·* 0,12 IU/ml - 0,53 IU/ml. Keskimääräinen absorptio tässä ko- i ’-'25 keessa oli 15,7 % + 8 %.

* * i Johtopäätökset: Hepariinin rektaalinen absorptio lisääntyy Γ·': huomattavasti, kun sen liuos sekoitetaan lipidijärjestelmän kanssa. Absorption aste on kuitenkin merkittävästi vähäisempi 30 kuin FragminRin, kun absorboitumista verrataan identtisissä ... olosuhteissa. Tämä osoittaa, että hepariiniperäisten molekyy- lien absorptiotapa riippuu koosta tai spesifisestä vuorovai-kutuksesta, mikä antaa mahdollisuuksia suunnitella ja kont-rolloida annettavia valmisteita.

-:-3:5 3i 110842

Esimerkki 19

Kaikkia tähän mennessä kuvattuja näytteitä ruiskutettiin 10 minuutin kuluttua FragminR-lipidi-vesikoostumuksen valmistuk-5 sen jälkeen.

Kolme kaniinia jotka saivat lipidi-keittosuolakoostumusta, joka sisälsi 4 prosenttia FragminRia, tarkastettiin sen seikan varmistamiseksi, oliko koostumuksen valmistamisen ja sen 10 antamisen välisellä ajalla mitään vaikutusta absorptioon.

Seos valmistettiin kuten esimerkissä 14, mutta sen lisäksi sen annettiin seisoa 16 tunnin ajan, ennen kuin se ruiskutettiin rektaalisesti annoksena, jossa oli FragminRia 2 mg/kg, 15 lipidejä 50 mg/kg ja fysiologista keittosuolaliuosta 200 mg/kg kehonpainoa. Tässä kokeessa kaikilla kaneilla oli plasmassa havaittavia tasoja anti-FXa-aktiivisuutta. CmakS4 saavutettiin 0,5 - 2,0 tunnissa, ja se oli alueella 0,72 - 1,90 IU/ml, keskiarvon ollessa 1,12 IU/ml. Keskimääräinen absorp-20 tio tässä kokeessa oli noin 65 %.

Johtopäätös: Tulokset havainnollistavat, että muodostamisen jälkeen koostumus voidaan antaa sen seisottua eri mittaisia . ·' aikoja ilman, että seisottaminen vaikuttaa koostumuksen ab- • '**25 sorptio-ominaisuuksiin.

» · · • · : Esimerkki 20 » · · t I'·’: In vitro kokeet suoritettiin FragminR-anti-FXa-aktiivisuuteen • · kohdistuvan lipidikoostumuksen vaikutuksen tutkimiseksi va-30 rastointiajan funktiona. FragminR sisällytettiin lipidijär- ... jestelmään yllä olevissa esimerkeissä määritellyllä tavalla.

FragminRin konsentraatio oli 2 painoprosenttia lipidien suh- \ teen. Yksi paino-osa FragminR-lipidiä ja 4 paino-osaa tislat- tua vettä sekoitettiin ravistelemalla ja annettiin seisoa 6 ·:·35 viikon ajan. FragminR-aktiivisuus määritettiin säännöllisesti tämän jakson aikana. Alkuaktiivisuudet olivat vastaavasti 85 32 110842 IU/mg (sarja 1) ja 78 IU/mg (sarja 2) , ja 6 viikon kuluttua olivat 96 IU/mg (sarja 1) ja 85 IU/mg (sarja 2).

5 Johtopäätös: Tulokset osoittavat, että FragminR-aktiivisuus säilyi koostumuksen pidennetyn varastoinnin aikana.

Esimerkki 21

Sama menettely kuin esimerkissä 19 suoritettiin neljällä 10 kanilla käytämällä lipidi-keittosuolakoostumusta, jossa oli 2 prosenttia FragminRia. Annettu annos FragminRia oli 2 mg/kg sekä lipidejä 100 mg/kg ja keittosuolaliuosta 200 mg/kg. Kaikilla eläimillä oli plasmassa havaittavia tasoja anti-Fx-aktiivisuutta. Cmak8# saavutettiin 0,75 - 1,5 tunnin kulues-15 sa, ja se oli alueella 0,82 IU/ml - 0,86 IU/ml, keskiarvon ollessa 0,86 IU/ml. Keskimääräinen absorptio tässä kokeessa oli noin 48 %.

Johtopäätös: Dispersio oli helppo annostella ja säätää las-20 kettuja tilavuuksia varten, ja se osoitti, että FragminRin absorptio oli lisääntynyt.

• · » * · * · · · I * t · * i · »ti I * * I ·

Claims

33 110842 Patentt ivaat imukset

1. Menetelmä sellaisen farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi, joka sisältää a) hyvin määritellyn lipidijärjestelmän, jossa on ainakin 5 kaksi lipidikomponenttia, jolloin (i) ainakin yksi lipidikomponenteista on amfifaattinen, polaarinen ja kaksoiskerroksen muodostava valittuna fosfatidyylikoliinin ja muiden fosfolipidien joukosta ja on läsnä määränä 1-90 paino-% lipidijärjestelmästä, 10 (ii) yksi on ei-polaarinen lipidikomponentti valittuna mono-, di- tai triglyseridien joukosta, joilla on määritellyt ketjunpituudet alueelta 6-18 hiiliatomia; b) terapeuttisesti tehokkaan määrän hepariinia tai sen fragmenttia tai johdannaista, jota on läsnä määränä 1-200 15 paino-% lipidijärjestelmän suhteen; ja c) vesipitoista liuotinta, jota on läsnä sellaisena määränä, että muodostuu yksittäisiä ja erillisiä lipidipartikkeleita, ; tunnettu siitä, että lipidikomponenttien sekoitettuun ; ·. 20 seokseen lisätään hepariinin tai sen fragmentin tai joh- :'·· dannaisen liuos, sen jälkeen lisätään vesipitoista liuotin- : ta ja tuloksena olevaa seosta käsitellään mekaanisesti, tai vaihtoehtoisesti sekoitetaan hepariinia tai sen fragmenttia ! tai johdannaista vesipitoisen liuottimen kanssa ennen kuin 25 seos lisätään sekoitettuihin lipidikomponentteihin.

2. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att man till kompositionen sätter lämpliga hjälpämnen för oral, 2. rektal, buccal, sublingual, nasal, subkutan eller transder-' : mal administrering eller för administrering tili slemhinne- , · membran.

. 3. Förfarande enligt patentkrav 1 eller 2, kännetecknat av att de amfifatiska och polära lipidkomponenterna föreligger 25 i en mängd om 1-50 vikt-% av lipidsystemet.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että koostumukseen lisätään sopivia apuaineita suun kautta tapahtuvaa, rektaalista, bukkaalista, kielenalaista, ,··· nenän kautta tapahtuvaa, ihonalaista tai transdermaalista ; · 30 tai limakalvoille tapahtuvaa antoa varten. ·;·) 3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tun- nettu siitä, että amfifaattiset ja polaariset lipidikom-'ponentit ovat läsnä määränä, joka on 1 - 50 paino-% lipidi-··' järjestelmästä. 110842

4. Förefarande enligt nägot av de föregäende patentkraven, kännetecknat av att den icke-polära lipidkomponenten bestär antingen av: a) en triglycerid med väsentligen en blandning av 8:0 kap-30 rylat och 10:0 kaprat och/eller b) en diglycerid med väsentligen en blandning av 8:0 kap- ·/ rylat och 10:0 kaprat och/eller c) en monoglycerid med väsentligen en blandning av 8:0 kap-rylat och 10:0 kaprat. 110842 3 6

4. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ei-polaarinen lipidikomponentti koostuu joko a) triglyseridistä, joka on pääasiallisesti 8:0 kaprylaatin 5 ja 10:0 kapraatin seos, ja/tai b) diglyseridistä, joka on pääasiallisesti 8:0 kaprylaatin ja 10:0 kapraatin seos, ja/tai c) monoglyseridistä, joka on pääasiallisesti 8:0 kaprylaatin ja 10:0 kapraatin seos.

5. Förefarande enligt nägot av de föregäende patentkraven, kannetecknat av att den amfifatiska och polära lipidkompo-nenten är en fosfatidylkolin, och den icke-polära komponen-ten är en monoglycerid, som huvudsakligen är sammansatt av 5 8:0 kaprylat och 10:0 kaprat.

5. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen menetel mä, tunnettu siitä, että amfifaattinen ja polaarinen lipidikomponentti on fosfatidyylikoliini ja ei-polaarinen komponentti on monoglyseridi, joka pääasiallisesti koostuu 8:0 kaprylaatista ja 10:0 kapraatista.

6. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen menetel mä, tunnettu siitä, että hepariini tai sen fragmentti tai johdannainen on läsnä määränä 4-80 paino-% lipidijärjestelmän suhteen.

7. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen menetel-20 mä, tunnettu siitä, että hepariini on pienimolekyylipai-: : noinen fragmentti, jonka molekyylimassa on olennaisesti ·’: 2000 - 10000 daltonia. 25 1. Förfarande för framställning av en farmaceutisk • * komposition innefattande a) ett väl definierat lipidsystem som har ätminstone tvä lipidkomponenter, där (i) ätminstone en av lipidkomponenterna är amfifatisk, • · 30 polär och dubbelskiktbildande vald bland : ·' fosfatidylkolin och andra fosfolipider, och föreligger i en mängd om 1-90 vikt-% av lipidsystemet, 110842 (ii) en är icke-polär lipidkomponent vald frän klasser-na av mono-, di- eller triglycerider som har definier-ade kedjelängder inom intervallet 6 tili 18 kolatomer, b) en terapeutiskt effektiv mängd av ett heparin eller ett 5 fragment eller derivat därav föreliggande i en mängd om 1- 200 vikt-% med avseende pä lipidsystemet; och c) ett vatteninnehällande lösningsmedel, föreliggande i en mängd sadan att individuella och diskreta lipidpartiklar bildas, 10 kännetecknat av att man sätter en lösning av heparin eller ett fragment eller ett derivat därav tili en omrörd bland-ning av lipidkomponenterna, därefter tillsätter det vatteninnehällande lösningsmedlet och behandlar den resulterande blandningen mekaniskt eller alternativt blandar heparinet 15 eller ett fragment eller ett derivat därav med det vatteninnehällande lösningsmedlet innan man sätter blandningen tili de omrörda lipidkomponenterna.

6. Förefarande enligt nägot av de föregäende patentkraven, kännetecknat av att heparinet eller ett fragment eller ett derivat därav föreligger i en mängd om 4-80 vikt-% med av-seende pä lipidsystemet. 10

7. Förefarande enligt nägot av de föregäende patentkraven, kännetecknat av att heparinet är ett lägmolekylärt fragment med en molekylmassa om väsentligen 2000-10000 Dalton.