FI106205B - Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten adenosiinijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

106205

Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten adenosiini-johdannaisten valmistamiseksi Tämä keksintö kohdistuu uusien tuotteiden adenosiini-5 johdannaisten valmistamiseen. Johdannaisilla on yleiskaava (I) , joka on esitetty alla, ja tarpeen tullen niihin kuuluu myös niiden additiosuolat, erityisesti farmaseuttisesti hyväksyttävät additiosuolat .

10

Kyseisillä yhdisteillä on hyvin arvokas farmakologinen profiili siinä määrin, kuin niillä on toisaalta erityisesti kipua lievittäviä ominaisuuksia ja toisaalta korkeaa verenpainetta lievittäviä ominaisuuk-15 siä.

Näillä adenosiinijohdannaisilla on yleiskaava (I): l‘

R..J* JL .NH

'I W

I / N

. . 25 R· w • · · ' f • a · • a

: OH OH

• aa a a a a a a a a « ·

Kaava (I) • ·:· 30 • · · · jossa: • « · ^ - Rj on vetyatomi, halogeeniatomi, alempi alkyyli- ..... radikaali, alempi O-alkyyliradikaali, alempi S- a « alkyyliradikaali tai fenyyliradikaali, ja se voi • · **:*’ 35 olla indolin 2-, 4-, 5-, 6- tai 7-asemassa; < - n on välillä 0-4 oleva kokonaisluku; - R, on alempi alkyyliradikaali, alempi alkenyyli- ( l t * radikaali, alempi alkynyyliradikaali, C3-C7-syklo-alkyyliradikaali tai alempi O-alkyyliradikaali; • « • · · 106205 - fenyyli- tai naftyyliradikaali, joka on substituoi- maton tai substituoitu yhdestä neljään identtisellä tai erilaisella substituentilla, jotka on valittu seuraavasta joukosta: halogeeniatomi, nitro-, 5 alempi alkyyli-, alempi 0-alkyyli- tai alempi S-alkyyliryhmä ja ryhmä -NR7R8, jolloin R7 ja R8 ovat vetyatomi tai alempi alkyyliradikaali; - heterosyklinen radikaali, joka on pyridiini tai tiofeeni, joka on substituoimaton tai substituoitu 10 yhdestä neljään identtisellä tai erilaisella substituentilla, jotka on valittu seuraavasta joukosta: halogeeniatomi, nitro-, alempi alkyyli-, alempi 0-alkyyli- tai alempi S-alkyyliryhmä, - tai muussa tapauksessa, kun n on yhtä kuin 2, 3 tai 15 4, ryhmä -NR9R10, jolloin R9 ja R10 ovat samanaikai sesti alempi alkyyliradikaali tai muodostavat yhdessä sen typpiatomin kanssa, johon ne ovat kiinnittyneinä, heterosyklisen ryhmän, joka on valittu morfoliinin, piperidiinin ja pyrrolidiinin jou- 20 kosta; - R3 ja R4, jotka ovat identtisiä tai erilaisia, ovat vetyatomi tai alempi alkyyliradikaali; ja - R5 on ryhmä -NHRn, jolloin Ru on alempi alkyyliradikaali, C3-C7-sykloalkyyliradikaali, alempi 25 alkyyliketju, jossa on alkoholin tai eetterin muo- : dostava funktionaalinen ryhmä, tai muussa tapauk- .·. ; sessa ryhmä - (CH2)n-NR9R10, jossa n, R9 ja R10 ovat ku- • « f ten edellä on määritelty.

* » • · • · · *··· 30 Edullisesti keksinnön mukaiset johdannaiset ovat • · · —' • « · edellä annetun kaavan (I) johdannaisia, joissa - R on vetyatomi, halogeeniatomi, alempi alkyyli- • · · radikaali, alempi 0-alkyyliradikaali, alempi S-

Ml alkyyliradikaali tai fenyyliradikaali, ja voi si-:\\ 35 jäitä indolin 2- tai 5-asemassa; '..!t - n on kokonaisluku 0, 1 tai 2; « t - R2 on alempi alkyyliradikaali, alempi alkenyyli- «Il : radikaali, alempi alkynyyliradikaali, C3-C7-syklo- :]]]: alkyyliradikaali tai alempi 0-alkyyliradikaali; 106205 - fenyyli- tai naftyyliradikaali, joka on substituoi- maton tai substituoitu yhdellä tai kahdella identtisellä tai erilaisella substituentilla, jotka on valittu seuraavasta joukosta: halogeeniatomi, 5 nitro-, alempi alkyyli- tai alempi O-alkyyliryhmä ja ryhmä -NR7R8, jolloin R7 ja Rs ovat vetyatomi tai alempi alkyyliradikaali; - heterosyklinen radikaali, joka on pyridiini tai tiofeeni, joka on substituoimaton tai substituoitu 10 halogeeniatomilla, - tai muussa tapauksessa, kun n = 2, ryhmä -NR9R10 jolloin R9 ja R10 ovat samanaikaisesti alempi alkyyliradikaali tai muodostavat yhdessä sen typpi-atomin kanssa, johon ne ovat kiinnittyneet, hete- 15 rosyklisen ryhmän, joka on valittu morfoliinin, piperidiinin ja pyrrolidiinin joukosta; - R3 ja R4, jotka ovat identtisiä tai erilaisia, ovat vetyatomi tai alempi alkyyliradikaali; ja - Rs on ryhmä -NHR^, jolloin Rn on alempi alkyyli- 20 radikaali, C3-C7-sykloalkyyliradikaali, alempi alkyyliketju, jossa on alkoholin tai eetterin muodostava funktionaalinen ryhmä.

Selityksessä ja patenttivaatimuksissa alempi alkyyli- 25 radikaali käsitetään suoraksi tai haarautuneeksi ;\j hiilivetyketjuksi, jossa on 1 - 6 hiiliatomia. Alempi • · : alkyyliradikaali on esimerkiksi metyyli-, etyyli-, • · · propyyli-, isopropyyli-, butyyli-, isobutyyli-, tert- • Jl' butyyli-, pentyyli-, isopentyyli-, heksyyli- tai iso- ““ 30 heksyyliradikaali.

• » t • · «

Selityksessä ja patenttivaatimuksissa alempi alkyyli- »1« *...· radikaali käsitetään suoraksi tai haarautuneeksi • · « hiilivetyket juksi, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, ja 35 jossa on kaksoissidos, kuten esimerkiksi etenyyli- ft » [·1’# ryhmä, ja alempi • 4 • e f

M

• · ·

• » I

• « « « » w * » • » 4 106205 alkynyyliradikaali käsitetään suoraksi tai haaroittuneeksi hiilivetuketjuksi, jossa on 1 - 6 hiiliatomia ja jossa on kolmoissidos, kuten esimerkiksi etynyyliryhmä.

5 C3-C7-sykloalkyyliradikaali käsitetään tyydyttyneeksi sykliseksi radikaaliksi, ja se on edullisesti syklo-propyyli-, syklobutyyli-, syklopentyyli-, syklohek-syyli- tai sylkoheptyyliradikaali.

10 Halogeeni käsitetään kloori-, bromi-, jodi- tai fluori-atomiksi.

Alempi alkyyliryhmä, joka sisältää alkoholin muodostavan funktionaalisen ryhmän, käsitetään alemmaksi 15 alkyyliketjuksi, jossa yksi vetyatomi on korvattu hydroksyyliryhmällä. Tällainen ketju on esimerkiksi l-hydroksi-2-metyylipropan-2-yyli-ketju.

Alempi alkyyliketju, joka sisältää eetterin muodostavan 20 funktionaalisen ryhmän, käsitetään alemmaksi alkyyli ket juksi, jossa yksi vetyatomi on korvattu alemmalla O-alkyyliryhmällä. Tällainen ketju on esimerkiksi 2-metoksietyyliketju.

i I i * I

: 25 Ottaen huomioon itse adenosiinin terapeuttinen teho, t · ; lukuisia tämän nukleosidin johdannaisia on kuvattu f I » / / kirjallisuudessa. Esimerkkeinä voidaan mainita seuraa- • * ' vat dokumentit: ♦ · # * * * * - Journal of Medicinal Chemistry 1973, voi. 16, no.

^ 1 30 4, S. 358 - 64 - FR 2 154 527 - EP 0 267 878 - wo 88/03 148 » ' - WO 88/03 147 l.:> 35 - WO 86/00 310 - WO 92/05 177 1 « \\· - Biochemical Pharmacology 1974, voi. 23, s. 2283- *:··: 89 5 106205 - US 4,167,565 - EP O 232 813 - US 5,023,244 5 Näiden lukuisten dokumenttien joukossa on mainittu oleellisesti vain kaksi johdannaista, jossa indoli on adenosiinin 6-asemassa.

Täten julkaisussa Journal of Medicinal Chemistry julkais-10 tu artikkeli ja patentti FR 2 154 527 kuvaavat molemmat samaa tuotetta: N-6-[2-(indol-3-yyli)etyyli]adenosiini (johdannainen A) :

Cox.

I I ') HOCHj 0 p

OH OH

Johdannainen A

I i

J i I

1 4 I

« I

.’.j 25 ja artikkeli julkaisussa Biochemical Pharmacology kuvaa I l /, · 5-metoksitryptamiinijohdannaista, joka on mainittu

» «I

.·/* myös dokumentissa FR 2 154 527 (johdannainen B) : f « f * » • » «

’··' CHjO

’·“ 30 XXTiV, |l N) »il S - ti

OH OH

r « « ·

< I

Johdannainen B

6 106205

Voidaan huomata, että artikkeli julkaisussa Journal of Medicinal Chemistry kuvaa johdannaisella A olevan verihiutaleiden aggregaatiota estävää tehoa, kun taas 5 ranskalainen patentti mainitsee vaikutukset keskushermostoon, verenkiertoon ja sydämeen olematta sen tarkempi. Biochemical Pharmacology esittää, että johdannaisella B on antilipolyyttistä tehoa.

10 Voidaan havaita, että kuvatuissa yhdisteissä toisaalta indolijohdannaisia ei ole koskaan substituoitu indolin typpiatomissa ja toisaalta adenosiinin sokeri on koskematon .

15 Nyt hakija on huomannut, että indolirenkaan typpiatomin substituointi yhdistettynä sokerin primäärisen alkoholin muuntamiseen funktionaaliseksi amidiryhmäksi antaa yllättäen ja odottamatta tuotteita, joilla on erityisen arvokas farmakologinen profiili erityisesti 20 analgesian alalla.

Yhdessä muunnoksessa on vetyatomi.

Toisessa muunnoksessa R^ on metyyliradikaali.

Toisessa muunnoksessa R]_ on metoksiradikaali.

: 25 Yhdessä muunnoksessa n on arvoltaan 0.

I · I « I

: Toisessa muunnoksessa n on arvoltaan 1.

• · · • · Toisessa muunnoksessa n on arvoltaan 2.

• · · • · · .! Yhdessä muunnoksessa Ro on metoksiradikaali.

• · · ^ • · ‘ Toisessa muunnoksessa R2 on syklopentaaniradikaali.

« « · 30 Toisessa muunnoksessa R2 on isopropyyliradikaali.

• · · *·* ' Toisessa muunnoksessa R2 on 2,5-dimetyylif enyyli- radikaali.

Toisessa muunnoksessa R2 on piperidiiniradikaali.

• · · : : : Yhdessä muunnoksessa R3 on vetyatomi.

s,·, 35 Yhdessä muunnoksessa R4 on vetyatomi.

« · · M Toisessa muunnoksessa R4 on metyyliradikaali.

*;* Yhdessä muunnoksessa R5 on N-syklopropyyliamiini- V." radikaali.

* · 7 106205

Keksinnön erityisen edulliset yhdisteet on valittu johdannaisista, joilla on kaavat

_ ^ NH

CH-V J l\ Ϊ π

OH OH

^ JO nJvnv X SXr O oox

Vf

OH OH

• · L £ ji V·: VXX I T*> Λν_N N O Ϊ -:i’ Ot°x rr

OH OH

• · · · • · « • · 8 106205 L L > CH3\^J ρ. Ν0 ϊ ΤΤ ^ ^"^CH. \|ΐ/ OH ΟΗ α ^ΝΗ J N'^V'N, ι k X >

k >OXJ

Ck H

OH OH

:/.: CH'vv^;r\_^\^NH

Γν T |TN> ·!· CH3X^\^ r\ o ^

φ T T

^^CH· kj/ *::: oh oh s 106205

. NH

CH30 I

il I

UAX ζχ> ^/'''CH, j\l_1/

OH OH

ll il CHJ 1| y “χχ1 ^:fj

OH OH

^ I I Ch/n L Γ > :·'·: [\_,ΓΝ ο Ϊ

!M

:.’·: \_|/

; ·’ OH OH

• · · • · · · :T: CX/H,rV\ Ο1: AX"Xr

;·:·: OH OH

• * 10 106205

Keksinnön mukaisesti kaavan (I) yhdisteet voidaan syntetisoida seuraavalla tavalla:

Amiinin, jolla on kaava (II) : 5 R, wyy-

10 I

(CHj)n r2

Kaava (II) 15 jossa R-l, R2, R3, R4 ja n ovat kuten edellä on määritelty, reaktio 6-halogeenipuriiniribosidien kanssa, joilla on kaava (III): 20 ? kX;> NT “Η

K

v·: 25 Nj • · ruo or,4 • · • ( » \\ / Kaava (III) « * · * ♦ • e • · e ...I 30 jossa X on halogeeniatomi, edullisesti kloori tai bromi, • 00 V · R]_2 on ryhmä COR5, jossa R5 on kuten edellä on määritel ty, tai CH2OH-ryhmä, ja R13 ja R14 ovat alkoholin Ψ muodostavan funktionaalisen ryhmän suojausryhmiä, kuten esimerkiksi asetyyli, bentsoyyli tai bentsyyli, tai ne 35 voivat yhdessä muodostaa muun suojausryhmän, esimerkiksi Ψ 1 1 dioksolaanirakenteisen ryhmän, reaktion tapahtuessa liuottimessa, kuten esimerkiksi alkoholissa tai aproot-: tisessa liuottimessa kuten dimetyyliformamidissa, emäksen • « 11 106205 kuten trietyyliamiini, pyridiini tai natrium-, kalium-tai kalsiumkarbonaatti läsnäollessa, tai muussa tapauksessa kaavan (II) amiinin kahden ekvivalentin läsnäollessa, välillä 20° ja 140°C olevassa lämpötilassa, antaa 5 yhdisteitä, joilla on kaava (IV):

Ra R>c\,_ CöR'VV\ io I | (CH2)n I L>°\

|W

15 R„0 OR14

Kaava (IV) jossa Rl4 R2, R3, R4, Ri2 / R13, R14 ja n ovat kuten 20 edellä on määritelty.

Jos kaavan (II) indoliamiinijohdannaisella on asymmetria-keskus, on ajateltava joko yhdisteiden raseemista muotoa tai optisesti aktiivista muotoa. Jos on toivottavaa ; 25 saada optisesti aktiivista johdannaista, stereoisomeerien < t c ^ erottamisesta huolehditaan indoliamiinivaiheessa ennen » * · » · · ’ kytkemistä kaavan (III) 6-halogeenipuriiniribosideihin, » « r / ja tämä tapahtuu optisen isomeerin erotuksen perinteisin « * < ' ·* menetelmin, jotka ovat tuttuja alan ammattimiehille, ...ί 30 esimerkiksi optisesti aktiivisen viinihapon kanssa * r * V ’ muodostettujen suolojen uudelleenkiteytyksellä. Sen jälkeen kun optisesti aktiiviset tartraatit on erotettu, Ί' optisesti aktiivinen viinihapostaan vapautettu emäs * t * i kytketään kaavan (III) 6-halogeenipuriiniribosideihin.

i' 35 * t t

Tapauksessa, jossa radikaali R12 on CH2OH-ryhmä, se voidaan hapettaa kromitrioksidilla menetelmällä, joka ; : on kuvattu julkaisussa: R.R. SCHMIDT ja H.J. FRITZ, • f · · · « · 106205 12

Chem. Ber. 1970, 103. 1867, tai kaliumpermanganaatilla vesipohjaisen ammoniakin läsnäollessa menetelmällä, joka on kuvattu julkaisussa: P.J. HARPER ja A. HAMPTON, J. Org. Chem. 1970, 3J5, no. 5, 1688, minkä jälkeen 5 saatu ribouronihappo muunnetaan happokloridiksi esimerkiksi reaktiossa tionyylikloridin kanssa, ja sitten amidiksi reaktiossa amiinin kanssa menetelmin, jotka ovat alan ammattimiehille tuttuja. Sekundääristen alkoholien OR13 ja OR14 suojan poisto voidaan suorittaa 10 eri menetelmin, esimerkiksi emäksisessä väliaineessa kuten ammoniakkia sisältävässä alkoholissa, tai happamassa väliaineessa kuten normaalisessa kloorivetyhappoliuok-sessa tai muuraha ishappoliuoksessa, lämpötiloissa, jotka ovat välillä 0° - 70°C, riippuen suojausryhmien 15 luonteesta.

Nämä reaktiovaiheet mahdollistavat kaavan (IV) johdannaisten muunnoksen kaavan (I) johdannaisiksi.

20 Kaavan (II) yhdisteet voidaan saada: joko indolietyyliamiinijohdannaisten suoralla alky-laatiolla, jolloin niillä on kaava (V): Y'i 25 ^ Y.1

.! / NT

4 t ·

f / H

t i »» • f « * · 3 0 Kaava (V) Ψ jossa Rlf R3 ja R4 ovat kuten edellä on määritelty ja j I « « jotka ovat kaupallisesti saatavilla tai joiden synteesi « on kuvattu seuraavassa kirjallisuudessa: P.L. JULIAN, 3 5 E.W. MEYER ja H.C. PRINTY, Heterocyclic Compounds, ../ John Wiley and Sons, Inc. New York, 1952, vol. 3, luku //. 1, s. 51-57, ja J. HARLEY-MASON ja A.H. JACKSON, J.

• < < · 13 106205

Chem. Soc. 1954, 1165, johdannaisten kanssa, joilla on kaava (VI):

R2-(CH2)n-Y

5

Kaava (VI) jossa R2 ja n ovat kuten edellä on määritelty ja Y on halogeeniatomi, edullisesti kloori tai bromi, metalli) laatin muodostavan aineen, kuten natrium- tai litium-hydridin läsnäollessa tai natrium- tai kalium-alkoholaatin läsnäollessa, orgaanisessa liuottimessa kuten alkoholissa tai dimetyyliformamidissa tai N-metyylipyrrolidonissa, välillä 0° - 60°C olevissa 15 lämpötiloissa; tai 3-formyyli-indolin alkyloinnilla, jolloin sillä on kaava (VII):

R< CHO

20 _/

Caj

H

« « « • « · · Kaava (VII) .* 25 • · · • · * * jossa Ri on kuten edellä on määritelty, edellä mainit- • · · tujen kaavan (VI) johdannaisten kanssa metallaatin • · · *·* ' muodostavan aineen, kuten natrium- tai litiumhydridin läsnäollessa, tai natrium- tai kaliumalkoholaatin tai ♦ 30 natrium- tai kaliumkarbonaatin läsnäollessa, orgaani-: sessa liuottimessa, kuten alkoholissa tai dimetyylifor- A*. mamidissa, johdannaisten saamiseksi, joilla on kaava (VIII): « # • « « 14 106205 R,

X CHO

XX_/ L l ί 5 (CH2)n r2 10 Kaava (VIII) jossa R-l, R2 ja n ovat kuten edellä on määritelty.

Näiden johdannaisten annetaan sitten reagoida sopivan 15 nitroalkaanin kanssa ammoniumasetaatin läsnäollessa, jotta saataisiin nitrovinyyli-indoleita, joilla on kaava (IX): ψ

20 R, I

V ~i N°2 I ί R·

XX

« · « 1 4 | 0’i (CHJn

... 25 I

» · · *·’ ' Kaava (IX) 30 jossa R1( R2, R3, R4 ja n ovat kuten edellä on määri-·/· · telty.

• · 1 • 4 · Nämä johdannaiset pelkistetään sitten katalyyttisellä • « hydrogenaatiolla Raney-nikkelin läsnäollessa, tai « · :.V 35 litiumalumiinihydridillä, jotta saataisiin yhdisteet, joilla on kaava (II).

15 106205

Muita indolietyyliamiinijohdannaisten syntetisointiin tarkoitettuja menetelmiä on yleisesti kuvattu kirjallisuudessa ja niitä voidaan käyttää. Esimerkki, joka voidaan mainita, on synteesimenetelmä, jossa oksalyyli-5 kloridin annetaan reagoida sopivan indolin kanssa, seuraavan viitteen mukaan: M.E. SPEETER ja W.C. ANTHONY, J. Am. Chem. Soc. 1954, 76., 6208, ja sitten tuote amidoidaan ja pelkistetään funktionaalinen amidiryhmä litiumalumiinihydridillä.

10

Kaavan (VII) 3-formyyli-indolit, joita käytetään näissä synteeseissä, ovat kaupallisesti saatavilla tai ne ovat alan ammattimiesten tuntemia, esimerkiksi seuraavasta viitteestä: Organic Syntheses Coll. voi. IV, 539, tai 15 niitä voidaan saada menetelmin, joita on kuvattu kirjallisuudessa, esimerkiksi lähteessä: Organic Syntheses

Coll. voi. IV, 542.

Kaavan (III) 6-halogeenipuriinit valmistetaan inosiinis-20 tä menetelmin, joita on kuvattu seuraavassa kirjal lisuudessa: R.R. SCHMIDT ja H.J. FRITZ, Chem. Ber. 1970, 103, 1867, : H.M. KISSMAN ja M.J. WEISS, J. Org. Chem. 1956, 21, .·. : 1053, • « « ! : 25 B.R. BAKER, K. HEWSON, H.J. THOMAS ja J.A. JOHNSON JR, • · J. Org. Chem. 1957, 22, 954, ja • ·' J. ZEMLICKA ja F. SORM, Coll. Czech. Chem. Commun.

•••j’ 1965, 30, (6), 1880.

• · · • · · 30 Edellä määritellyt kaavan (I) yhdisteet ja niiden additiosuolat, erityisesti farmaseuttisesti hyväksyt-tävät additiosuolat, omaavat hyvän affiniteetin adeno- • · · ..*. siinireseptoreihin. Tämä affiniteetti antaa niille • · · hyvän kipua lievittävän tehon, mutta myös korkeaa • « ’·;·* 35 verenpainetta lievittävät ominaisuudet.

• » » Nämä ominaisuudet oikeuttavat kaavan (I) johdannaisten * · » soveltamisen terapiassa.

16 106205

Farmaseuttinen koostumus käsittää edellä määritellyn kaavan (I) ainakin yhden yhdisteen tai yhden sen farmaseuttisesi hyväksyttävän additiosuolan farmaseuttisesti tehokkaan määrän, joka voidaan sisäl-5 lyttää farmaseuttisesti hyväksyttävään täyteainee seen, kuljettimeen tai kantajaan.

näitä koostumuksia voidaan ottaa suuontelon tai peräsuolen kautta tai ruoansulatuskanavan ulkopuolista 10 kautta tai ihon läpi tai silmän kautta.

Nämä koostumukset voivat olla kiinteitä tai nestemäisiä ja ne voivat olla ihmislääketieteessä yleisesti käytetyissä farmaseuttisissa muodoissa, kuten esimer-15 kiksi yksinkertaisina tai päällystettyinä tabletteina, gelatiinikapseleina, rakeina, peräpuikkoina, ruiskutettavina valmisteina, ihon läpäisevinä järjestelminä ja silmänesteinä. Ne valmistetaan tavanomaisin menetelmin. Aktiivinen pääainesosa, joka koostuu 20 ainakin yhden edellä määritellyn kaavan (I)mukaisen yhdisteen tai yhden sen farmaseuttisesti hyväksyttävän additiosuolan farmaseuttisesti tehokkaasta määrästä, voidaan sisällyttää niihin täyteaineiden mu-, . kana, joita tavallisesti käytetään näissä farmaseut- ; ; 25 tisissa koostumuksissa, kuten talkki, arabikumi, lak- toosi, tärkkelys, magnesiumstearaatti, polyvidoni, selluloosajohdannaiset, kaakaovoi, puolisynteettiset • '.· glyseridit, vesipohjaiset tai ei-vesipohjaiset kul- ,.)·* jettimet, eläin- tai kasvikunnasta peräisin olevat 30 rasva-aineet, glykolit, eri kostutusaineet, disper- santit tai emulgaattorit, silikonigeelit, tietyt po- .·*·. lymeerit tai kopolymeerit, säilöntäaineet, makuaineet • · .···. ja värit.

» « »· · :V 35 Käyttämällä menetelmällä valmistettua johdannaista saadaan farmaseuttinen koostumus, jolla on kipua lie-vittävää tehoa, jolloin sillä saadaan erityisesti ki- • · « ,··. vun hyvä hoito. Koostumus käsittää farmaseuttisesti • · tehokkaan määrän ainakin yhtä edellä annetun kaavan 106205 (I) mukaista yhdistettä, tai yhtä sen farmaseuttisesti hyväksyttävää additiosuolaa, joka voi olla sisällytettynä farmaseuttisesti hyväksyttävään täyteaineeseen, kuljettimeen tai kantajaan tai olla ilman 5 niitä.

Käyttämällä menetelmällä valmistettua johdannaista saadaan farmaseuttinen koostumus, jolla on korkeaa verenpainetta lievittävää tehoa, jolloin sillä saa-10 daan aikaan hyvä korkean verenpaineen hoito. Koostumus käsittää farmaseuttisesti tehokkaan määrän ainakin yhtä edellä annetun kaavan (I) mukaista yhdistettä, tai yhtä sen farmaseuttisesti hyväksyttävää additiosuolaa, joka voi olla sisällytettynä farma-15 seuttisesti hyväksyttävään täyteaineeseen, kuljetti meen tai kantajaan tai olla ilman niitä.

Farmaseuttinen koostumus voidaan valmistaa menetelmällä, joka käsittää edellä määritellyn kaavan (I) 20 mukaisen ainakin yhden yhdisteen tai yhden sen farmaseuttisesti hyväksyttävän additiosuolan farmaseuttisesti tehokkaan määrän sisällyttämisen farmaseuttisesti hyväksyttävään täyteaineeseen, kuljettimeen tai , , kantajaan. Yhdessä suoritusmuodossa valmistetaan far- 25 maseuttinen koostumus, jolla on kipua lievittävää

Iti '· " vaikutusta ja jolla saadaan erityisesti hyvä kivun « « ·.'·: hoito. Toisessa suoritusmuodossa valmistetaan farma- j seuttinen koostumus, jolla on korkeaa verenpainetta my lievittävää tehoa ja jolla saadaan erityisesti hyvä :*·*: 30 korkean verenpaineen hoito.

.···. Toisessa muunnoksessa farmaseuttinen koostumus muo- • « dostetaan gelatiinikapseleiksi tai tableteiksi, jotka • · *!* sisältävät 5 - 300 mg aktiivista ainesosaa, tai ruis- • · · : *.· 35 kutettaviksi valmisteiksi, jotka sisältävät 0,1 mg - ♦ · · h..: 100 mg aktiivista ainesosaa. Voidaan käyttää myös .·♦·, sellaisia annosmuotoja kuin peräpuikot, salvat, voi- !.. teet , geelit tai aerosolivalmisteet.

« · • « « 18 106205

Menetelmässä nisäkkäiden terapeuttiseksi käsittelemiseksi annetaan terapeuttisesti tehokas määrä ainakin yhtä edellä määriteltyä kaavan (I) mukaista yhdistettä tai yhtä sen farmaseuttisesti hyväksyttävää ad-5 ditiosuolaa tälle nisäkkäälle. Yhdessä tämän käsittelymenetelmän muunnoksessa kaavan (I) yhdiste, joko sellaisenaan tai liittyneenä farmaseuttisesti hyväksyttävään täyteaineeseen, muodostetaan gelatiini-kapseleiksi tai tableteiksi, jotka sisältävät 5-300 10 mg aktiivista ainesosaa suun kautta tapahtuvaan antoon, tai ruiskutettaviksi valmisteiksi, jotka sisältävät 0,1-100 mg aktiivista ainesosaa, tai peräpuikoiksi, salvoiksi, voiteiksi, geeleiksi tai aerosoli-valmisteiksi .

15

Ihmisten ja eläinten terapiassa kaavan (I) yhdisteet ja niiden suolat voidaan antaa sellaisinaan tai liittyneinä fysiologisesti hyväksyttävään täyteaineeseen missä tahansa muodossa, erityisesti gelatiini-20 kapseleiden tai tablettien muodossa suun kautta tapahtuvaan antoon tai ruiskutettavan liuoksen muodossa ruoansulatuskanavan ulkopuoliseen antoon. Voidaan ajatella myös muita antomuotoja, kuten peräpuikkoja, . . salvoja, voiteita, geelejä tai aerosolivalmisteita.

Y'| 25 • '· Kuten selityksen lopussa olevista farmakologisista ·’.*·: testeistä käy selvästi ilmi, keksinnön mukaisia yh-

• » I

« disteitä voidaan antaa ihmisterapiassa edellä mainit- *:· tuja tarkoituksia varten suun kautta tabletteina tai ··»» 30 gelatiinikapseleina, jotka sisältävät 5 mg - 300 mg aktiivista ainesosaa, tai ruoansulatuskanavan ulko- .···. puolisesti ruiskutettavina valmisteina, jotka sisäl- • · tävät 0,1 mg - 100 mg aktiivista ainesosaa, jolloin • ♦ *Γ antokertoja on yksi tai useampi päivässä aikuiselle • · · : \* 35 henkilölle, jonka paino on 60 - 70 kg.

« I * • 4 * 19 106205

Eläinterapiassa käytettävä päivittäisannos tulisi olla normaalisti 0,1 - 50 mg kiloa kohti suun kautta ja 0,01 - 1 mg kiloa kohti suonensisäisesti annettuna.

5 Muita keksinnön piirteitä ja etuja tulee selville enemmän seuraavasta eräiden esimerkkien selostuksesta, joiden ei ole tarkoitus millään tavalla rajoittaa keksintöä, vaan ne on annettu havainnollistamistarkoituksessa.

10

Esimerkki 1: β-D-r ibof uranuronamido-l-(6-kloori-9H-purin-9-yyli)-N-syklopropyyli-l-deoksi- 2,3-0-(1-metyylietylideeni)

O

11 /1 15 Kaava (III): X = Cl, R12: C—NH } R13'R14: isopropylideeni 20 g 21,31-0—isopropylideeni—6—klooripuriini—51 —uroni— 20 happoa, joka on valmistettu artikkelin SCHMIDT R.R. ja FRITZ H.J., Chem. Ber. 1970, 103(6), 1867-71, mukaan : 500 ml:ssa vedetöntä CHCI3, joka on tasapainotettu < « 4·# ; amyleenillä, lämmitetään palautus jäähdytyksessä 5 h

* « I

1 I ajan 86 ml:n S0C12 ja 10 ml:n vedetöntä DMF läsnäollessa.

!: i: 25 • » * * ·* SOCl2-ylimäärä ja liuottimet tislataan. Jäännös otetaan « · · ···· talteen 200 ml: 11a vedetöntä kloroformia ja lisätään

«M

V · tipoittain typpi-ilmakehässä 150 ml:n CHCI3 ja 41 ml:n syklopropyyliaminia seokseen, joka on jäähdytetty 5°C:een •j* 30 edeltäkäsin. Reaktioseoksen lämpötila pidetään 10°C:n alapuolella happokloridin lisäyksen aikana.

« · « · · • · ·

Seos jätetään reagoimaan edelleen 30 min ajaksi, minkä • · *·;·" jälkeen se pestään kolme kertaa laimealla HCl-liuoksella :V: 35 ja sitten natriumbikarbonaattiliuoksella. Lopullinen ·;··; pesu vedellä, jota seuraa kuivaus ja liuottimen haih dutus, antaa 26,3 g ruskeata öljyä.

20 106205

Puhdistus kromatografiällä silikageelissä (eluentti: CH2CI2 90 %/asetoni 10 %) antaa 15,7 g 6-D-ribofura- nuronamido-1-(6-kloori-9H-purin-9-yyli)-N-syklopro-pyyli-l-deoksi-2,3-0-(1-metyylietylideeni):ä amorfisen 5 kiinteän aineen muodossa.

Esimerkkien 2-4 yhdisteet valmistettiin esimerkin 1 menetelmällä käyttäen asiaan kuuluvia amiineja: 10 Esimerkki 2: β-D-ribofuranuronamido-1-(6—kloori—9H- purin-9-yyli)—l-deoksi-N-etyyli-2,3-0-(1-metyylietylideeni)

O

II

Kaava (III): X = Cl, R12: C—NH—CHa—CH, , 15 R13'R14: isopropylideeni

Kellertävä öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 95 %/metanoli 5 %), jolloin saatiin kiinteää ainetta, joka suli 20 91°C:ssa.

;‘.j Esimerkki 3: β-D-ribof uranuronamido-1- ( 6-kloori-9H- /. ; purin-9-yyli)-1-deoksi-N-(l-hydroksi-2- • · < : metyylipropan-2-yyli)-2,3-0-(l-metyyli- .* 2 5 etylideeni) : ·' 0 CH3

··· Il I

Kaava (III): X = Cl, R12 : C —NH—C—CH2—OH , * ch3 r13'R14: isopropylideeni 30 *»♦ : : : Ruskea öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silika- geelissä (eluentti: kloroformi 90 %/metanoli 10 %) .

* * * • « » * * · ·** Esimerkki 4: β-D-ribof uranuronamido-1-(6—kloori-9H— 35 purin-9-yyli)-l-deoksi-N-isopropyyli-2,3- *:**: O-(l-metyylietylideeni) 106205

21 O

° CH,

Kaava (III): X = Cl, R12: C—NH—CH^ CH3 r13·r14: isopropylideeni 5 Oranssinvärinen öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluentti: CHCI3 90 %/asetoni 10 %).

Esimerkki 5: l-(4-klooribentsyyli)-3-formyyli-indoli 10 Kaava (VIII): R^ = H, n = 1, R2 = 4-kloori- fenyyli

Liuos, jossa oli 58 g 3-formyyli-indolia, 55,9 g K2C03 ja 70,9 g p-klooribentsyylikloridia 200 xnlrssa DMF 15 lämmitettiin palautusjäähdytyksessä 2 h ajan. Jäähdytyksen jälkeen seos kaadettiin 2 litraan vettä ja trituroi-tiin. Saatu saostuma suodatettiin, pestiin vedellä ja otettiin tämän jälkeen talteen isopropanolilla, suodatettiin, puristettiin kokoon ja pestiin pentaanilla, jolloin 20 saatiin 120 g kerman väristä kiinteää ainetta.

; Puhdistus uudelleenkiteytyksellä etanolissa antoi 84,4 1 · ( ! I g 1-(4-klooribentsyyli)-3-formyyli-indolia, joka suli Ί 122 °C: ssa.

‘‘ '· 25 «· * « » » • ·' Seuraavat esimerkkien 6-16 yhdisteet valmistettiin • · · esimerkin 5 menetelmällä: • M I · * • * 4 t

Esimerkki 6: l-bentsyyli-3-formyyli-indoli ·:» 30 • ··« .*·*· Kaava (VIII): Rj_ = H, n = 1, R2 = fenyyli 9 11«

'·*;* Uudelleenkiteytys etanolissa. Sulamispiste: lll°C

« · "···* (kirjallisuus: 113 - 114°C, A. KALIR ja S. SZARA, J.

.•Y: 35 Med. Chem. (1966), voi. 9, s. 793).

M*'· • 1

Esimerkki 7: 1- (2,6-diklooribentsyyli) -3-formyyli-indoli 22 106205

Kaava (VIII): R± = H, n = 1, R2 = 2,6- dikloorifenyyli 5

Uudelleenkiteytys 2-metoksietanolissa. Sulamispiste: 160 °C.

Esimerkki 8: 1-(naft-l-yylimetyyli)-3-formyyli-indoli 10

Kaava (VIII): R1 = H, n = 1, R2 = naftyyli

Raaka kiinteä aine, jota käytettiin sellaisenaan seuraa-vassa vaiheessa.

15

Esimerkki 9: 3-formyyli-l-(pyrid-3-yyli)indoli

Kaava (VIII): R^ = H, n = 1, R2 = pyrid- 3-yyli 20

Puhdistus kromatografiällä silikageelissä (eluentti: ; CHCI3 95 %/metanoli 5 %) . Sulamispiste: 88°C.

• 1 1 4 t t r i « « t « « *. ! Esimerkki 10: 1-(4-metyylibentsyyli) -3-formyyli-indoli ’* 25 11 « 5 Kaava (VIII): R2 = H, n = 1, R2 = 4- metyylif enyyli

• I

r » · t

Raaka kiinteä aine, jota käytettiin sellaisenaan seuraa-··· 30 vassa vaiheessa. Sulamispiste: 118°C.

1»«· » « * I I 1 ( 1 r *

Esimerkki 11: 1-(3,4-dimetyylibentsyyli)-3-formyyli-' ·''' indoli »11 • · • * 35 Kaava (VIII): R = H, n = 1, R2 = 3,4- dimetyylifenyyli 23 106205

Ruskea öljy, jota käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa.

Esimerkki 12: 1-(2,5-dimetyylibentsyyli)-3-formyyli-5 indoli

Kaava (VIII): = H, n = 1, R2 = 2,5- d imetyylifenyyli 10 Raaka kiinteä aine, jota käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa. Sulamispiste: 139°C.

Esimerkki 13: 1-(2-metoksietyyli)-3-formyyli-indoli 15 Kaava (VIII): R1 = H, n = 2, R2 = metoksi

Ruskea öljy, jota käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa.

20 Esimerkki 14: l-syklopentyyli-3-formyyli-indoli ; Kaava (VIII): R^ = H, n = 0, R2 = syklopen- j tyyli t i t .* .* 25 Ruskea öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silika- • · · • ·* geelissä (eluentti: kloroformi 90 %/metanoli 10 %).

• · · • m· • · · · Esimerkki 15: 3-formyyli-l-isopropyyli-indoli ·;· 3 0 Kaava (VIII): Ri = H, n = 0, Ro = iso- :T: propyyli · f

Ruskea öljy, jota käytettiin sellaisenaan seuraavassa *·;·" vaiheessa.

: V: 35

Esimerkki 16: 3-formyyli-l-(2-N-morfolinoetyyli)indoli 24 106205

Kaava (VIII): % = H, n = 2, R2 = N- morfolino

Kiinteä aine, jota käytettiin sellaisenaan seuraavassa 5 vaiheessa. Sulamispiste: 80°C.

Esimerkki 17: 1-(4-klooribentsyyli)-3-(2—nitrovinyyli)— indoli 10 Kaava (IX): = H, n = 1, R2 = 4-kloori-

fenyyli, R3 = R4 = H

80,9 g 1-(4-klooribentsyyli)-3-formyyli-indolia, joka oli valmistettu esimerkissä 5, 18 g ammoniumasetaattia 15 ja 300 ml nitrometaania lämmitettiin palautusjäähdytyksessä 30 min ajan.

Jäähdytyksen jälkeen tuli näkyviin oranssinvärinen saostuma. Se suodatettiin ja pestiin vedellä ja tämän 20 jälkeen isopropanolilla ja heksaanilla, jolloin saatiin 81,1 g oranssinvärisiä kiteitä, jotka olivat l-(4-: kloor ibentsyy li )-3-( 2-nitrovinyyli) indolia. Sulamis- _·ι < piste: 178°C.

.1 .* 25 Esimerkkien 18 - 28 nitrovinyyli-indolit valmistettiin • · · • ·’ esimerkin 17 menetelmällä.

• · · » • · · · • · · V ; Esimerkki 18: l-bentsyyli-3-(2-nitrovinyyli)indoli 30 Kaava (IX): R^ = H, n = 1, R2 = fenyyli, :T: r3 = r4 = h • ·

Sulamispiste: 130°C.

: : : 35 Esimerkki 19: 1-(2,6-diklooribentsyyli) -3-(2-nitro- ·:··· vinyyli) indoli 25 106205

Kaava (IX): = H, n = 1, R2 = 2,6-di-

kloorifenyyli, R3 = R4 = H

Sulamispiste: 170°C.

5

Esimerkki 20: 1-naftyylimetyyli-3-(2-nitrovinyyli) -indoli

Kaava (IX): R^ = H, n = 1, R2 = naftyyli,

10 R3 = R4 = H

Sulamispiste: 196°C.

Esimerkki 21: 1-(pyrid-3-yylimetyyli)-3-(2-nitrovinyy- 15 li)indoli

Kaava (IX): R^ = H, n = 1, R2 = pyrid-

3-yyli, R3 = R4 = H

20 Sulamispiste: 165 - 170 °C.

.·, Esimerkki 22: 1-(4-metyylibentsyyli)-3-(2-nitrovinyy-

« C I

! I li)indoli < l [l .· 25 Kaava (IX): R]^ = H, n = 1, R2 = 4-metyyli- ♦ · ·

• ·* fenyyli, R3 = R4 = H

• « · ··*« • · ·

Oranssinvärinen Öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi) 95 %/isopropyyli- *:* 30 amiini 5 %) .

« ··· • · · • · « • · ·

Esimerkki 23: 1-(3,4-dimetyylibentsyyli)-3-(2-nitro-;.; vinyyli)indoli : 35 Kaava (IX): R4 = H, n = 1, R2 = 3,4-dime-

·;·*: tyylifenyyli, R3 = R4 = H

Sulamispiste: 135°C.

Esimerkki 24: 1- (2,5-dimetyylibentsyyli) -3-nitrovinyyli- indoli 26 106205

Kaava (IX): R3 = H, n = 1, R2 = 2,5-dime-5 tyylifenyyli, R3 = R4 = H

Sulamispiste: 145°C.

Esimerkki 25: 1-(2-metoksietyyli)-3-(2—nitrovinyyli) — 10 indoli

Kaava (IX): R3 = H, n = 2, R2 = metoksi,

R3 = r4 = H

15 Sulamispiste: 132°C.

Esimerkki 26: l-syklopentyyli-3-(2-nitrovinyyli)indoli

Kaava (IX): R3 = H, n = 0, R2 = syklo-20 pentyyli, R3 = R4 = H

Oranssinvärinen öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä ,·, silikageelissä. Eluentti: metyleenikloridi.

< r ‘ Esimerkki 27: 1—isopropyyli-3—(2-nitrovinyyli)indoli * 25 ·· · • * t : 1* Kaava (IX): = H, n = 0, R2 = isopro- pyyii, r3 = r4 = h • · · » * 9 * · «

Oranssinvärinen öljy, jota käytettiin sellaisenaan ·;· 30 seuraavassa vaiheessa.

« · · · »«· • ♦ « • · «

Esimerkki 28: 1- (2-N-morf olinoetyyli)-3-(2-nitrovinyy-·[; li) indoli :V: 3 5 Kaava (IX): R^ = H, n = 2, R2 = N-mor-

·:··· folino, R3 = R4 = H

Sulamispiste 114°C.

Esimerkki 29: 1-(4-klooribentsyyli)-3-(2-aminoetyyli) - indoli 27 106205

Kaava (II): R^ = H, n = 1, R2 = 4-kloori-5 fenyyli, R3 = R4 = H

52,5 g L1AIH4 lisättiin pieninä määrinä 500 ml:aan vedetöntä THF. Lämpötila jätettiin nousemaan 50°C:een. Tähän liuokseen lisättiin jäähdyttämättä tipoittain 10 liuosta, jossa oli 78,2 g esimerkissä 17 valmistettua 1- (4-klooribentsyyli) -3- (2-nitrovinyyli) indolia 1000 ml:ssa vedetöntä THF.

Seosta lämmitettiin palautusjäähdytyksessä 1 h 30 min 15 ajan ja se jäähdytettiin. Kyllästettyä vesipohjaista Na2S04-liuosta lisättiin tipoittain, ja seos suodatettiin Celite 545:llä. Dekantoinnin jälkeen orgaaninen faasi väkevöitiin, jolloin saatiin oranssinväristä öljyä.

20

Yhdiste puhdistettiin ensin tislaamalla (kiehumispiste: ,·, ! 180 - 188°C 0,1 mm elohopean alla), ja tämän jälkeen ! ! uudelleenkiteyttämällä hydrokloridi etanolissa, jolloin ! ! saatiin 38,1 g 1-(4-klooribentsyyli)-3-(2-aminoetyyli)- h / 25 indolihydrokloridia. Emäksen sulamispiste: 87®C. Hydrok- • · · • ·* loridin sulamispiste: 212°C.

• · · • · · · • · 1 *.·* · Esimerkki 30: 1-(4-klooribentsyyli)-3-(2-aminoetyyli) - indoli ·:· 30 • · · · j’:*: Kaava (II): Rx = H, n = 1, R2 = 4-kloori-

fenyyli, R3 = R4 = H

1 1 t < < < < 4 44« 10 g 3-aminoetyyli-indolia liuotettiin 50 cm3: iin DMF. :V: 35 Tämän jälkeen lisättiin 5,6 g NaH (60 %). Seosta sekoi- • j··j tettiin 30 min ajan huoneenlämpötilassa.

28 106205

Lisättiin tipoittain liuosta, jossa oli 11,2 g p-kloori-bentsyylikloridia 10 ml:ssa DMF. Seosta kuumennettiin 55°C:ssa 2 h ajan ja se jäähdytettiin. Liukenematon materiaali suodatettin pois. Suodos väkevöitiin tyh-5 jiössä, ja jäännös otettiin talteen metyleenikloridilla ja se pestiin vedellä. Kuivauksen jälkeen orgaaninen faasi väkevöitiin, jolloin saatiin 20,4 g ruskeaa öljyä.

Puhdistus kromatografiällä silikageelissä (eluentti: 10 CHC13 95 %/isopropyyliamiini 5 %) antoi 9,7 g l-(4- k loor i bent syy li) - 3 - (2-aminoetyyli) indolia . Hydroklo-ridin sulamispiste: 214°C.

Seuraavat esimerkkien 31 - 45 yhdisteet valmistettin 15 jollakin esimerkin 29 tai 30 menetelmällä:

Esimerkki 31: l-bentsyyli-3-(2-aminoetyyli)indoli

Kaava (II): Rq_ = H, n = 1, R2 = fenyyli, 20 R3 = R4 = H

Hydrokloridi, joka puhdistettiin uudelleenkiteytyksellä ; isopropanolissa. Sulamispiste: 176 - 178°C.

« a a · 1 ; Esimerkki 32: 1- (2,6-diklooribentsyyli) -3-(2-aminoetyy- *· ”· 25 li) indoli • · · • · • ·

Kaava (II): R]_ = H, n = 1, R2 = 2,6-di- • · ·

ί kloorifenyyli, R3 = R4 = H

··· 30 Sulamispiste: 68°C.

• ·· · • · · • · · • · ·

Esimerkki 33: l-naftyylimetyyli-3-(2-aminoetyyli)indoli ♦ · · • a

Kaava (II): R3 = H, n = 1, R2 = naftyyli,

35 R3 = r4 = H

• · a 1 a a 29

Oranssinvärinen öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 95 %/isopropyyli- amiini 5 %).

106205 5 Esimerkki 34: 1-(pyrid-3-yylimetyyli)-3-(2-aminoetyy- li)indoli

Kaava (II): R]_ = H, n = l, R2 = pyrid-

3-yyli, R3 = R4 = H

10 Öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 95 %/isopropyyliamiini 5 %).

Esimerkki 35: 1-(4-metyylibentsyyli)-3-(2-aminoetyy-15 li)indoli

Kaava (II): R^ = H, n = 1, R2 = 4-metyyli- . fenyyli, R3 = R4 = H

20 Oranssinvärinen öljy, joka puhdistettiin kromatograf iällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 95 %/isopropyyli amiini 5 %) .

; Esimerkki 36: 1-(3,4-dimetyylibentsyyli)-3-(2-amino- 25 etyyli) indoli • · · • · * *

Kaava (II): = H, n = 1, R2 = 3,4-di-

*.·’ : metyylifenyyli, R3 = R4 = H

·;· 30 Väritön öljy, joka puhdistettiin kromatograf iällä • · · · ·*·’; silikageelissä (eluentti: metyleenikloridi 95 %/iso- propyyliamiini 5 %) .

t t i • · ’·;·* Esimerkki 37: 1-(2,5-dimetyylibentsyyli) -3-(2-amino- 35 etyyli) indoli

Kaava (II): Rx = H, n = 1, R2 = 2,5-di-metyylifenyyli, R3 = R4 = H

4

Oranssinvärinen öljy, joka puhdistettiin kromatogra- f iällä silikageelissä (eluentti: metyleenikloridi 95 %/isopropyyliamiini 5 %}.

30 106205 5 Esimerkki 38: 1-(2-metoksietyyli)-3-(2-am±noetyyli) indoli

Kaava (II): R^ = H, n = 2, R2 = metoksi,

R3 - R4 = H

10 Oranssinvärinen öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 90 %/isopropyyli- amiini 10 %).

Esimerkki 39: l-syklopentyyli-3-(2-aminoetyyli)indoli 15

Kaava (II): = H, n = 0, R2 = syklo-

pentyyli, R3 = R4 = H

Kellertävä öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä 20 silikageelissä (eluentti: kloroformi 95 %/isopropyy liamiini 5 %) .

« t l

Esimerkki 40: l-isopropyyli-3-(2-aminoetyyli) indoli i · 4 « 25 Kaava (II): Rj_ = H, n = 0, R2 = isopro- : V pyyli, R3 = R4 = h »»» ♦ *»· • » « V : Oranssinvärinen öljy, joka puhdistettiin kromatograf iällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 95 %/isopropyyli- ··· 30 amiini 5 %) .

• m* • » · * * · • · ·

Esimerkki 41: 1-(2-N, N-dimetyy 1 iaminoetyyli) -3-(2- « · · *·’·’ aminoetyyli) indoli • · » » « 35 Kaava (II): R^ = H, n = 2, R2 = N,N- dimetyyliamino, R3 = r4 = h

Oranssinvärinen öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 95 %/isopropyyli- amiini 5 %).

106205 31 5 Esimerkki 42: 1- (2-N-xnorfolinoetyyli) -3-(2-aminoetyy- li)indoli

Kaava (II): R^ = H, n = 2, R2 = N-mor-folino, R3 = R4 = H

10

Oranssinvärinen öljy, joka puhdistettiin kromatograf iällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 95 %/isopropyyli-amiini 5 %) .

15 Esimerkki 43: 1- (2-N-piperidinoetyyli) -3-(2-aminoetyyli) - indoli

Kaava (II): R^ = H, n = 2, R2 = N-piperi-dino, R3 = R4 — H

20

Oranssinvärinen öljy, joka puhdistettiin kromatogra-f iällä silikageelissä (eluentti: metyleenikloridi 95 %/isopropyyliamiini 5 %).

[ l. 25 Esimerkki 44: 1- (N-pyrrolidinoetyyli) -3-(2-aminoetyy- : li) indoli *«· c »t »t *T: Kaava (II): Rx = H, n = 2, R2 = N-pyr- rolidino, R3 = R4 = H 30 ^ ·

Oranssinvärinen öljy, joka puhdistettiin kromatogra-

» » I

• fialla silikageelissä (eluentti: metyleenikloridi 95 %/isopropyyliamiini 5 %) .

a · f 4 .'.*. 35 Esimerkki 45: 1—(3,4—diklooribentsyyli)—3-(2—aminoetyy- li) indoli • a 32 106205

Kaava (II): = H, n = 1, R2 = 3,4-di-

kloorifenyyli, R3 = R4 = H

Sulamispiste: 196°C.

5

Esimerkki 46: B-D-ribofuranuronamido-l-[6-[[2-[1-(4-klooribentsyyli) indol-3-yyli] etyyli] -amino ] -9H-purin-9-yyli] -N-syklopropyyli— 1—deoksi-2,3—0—(1—metyylietylideeni) 10

Kaava (IV): R-j_ = H, n = 1, R2 = 4-kloori-fenyyli, R3 = R4 = H,

n A

r12 = C—NH L—^ - 15 \

R13'R14 - A

/ CH,

Typpivirtauksen alla 49 g 1-(4-klooribentsyyli)-3-(2-20 aminoetyyli)indolihydrokloridia, joka oli valmistettu jollain esimerkkien 29 tai 30 menetelmällä, suspen-doitiin 100 ml:aan etanolia. Suspensio neutraloitiin 5,1 ml:11a trietyyliamiinia, minkä jälkeen 4,1 g fi-D-r ibof uranuronamido-1- (6-kloori-9H-purin-9-yyli) -N- * · 25 syklopropyyli-l-deoksi-2,3-0- (1-metyylietylideeni) : ä, 4 ♦ · ! ·* joka oli valmistettu esimerkissä 1, lisättiin.

<

«•I

t

MM

M» */ · Koko seosta lämmitettiin palautusjäähdytyksessä 7 h ajan ja se jätettiin seisomaan yön yli. Liuotin haih- *«· 30 dutettiin pois, ja jäännös otettiin talteen kloroformil- * · · · .'f’. la, pestiin vedellä, kuivattiin ja väkevöitiin. Saadulle * kiinteälle aineelle suoritettiin kromatografia silika- « « \ geelissä (eluentti: kloroformi 90 %/metanoli 10 %) , • « jolloin saatiin 7,2 g amorfia kiinteää ainetta.

iY: 35 t ·

Esimerkkien 47 - 59 johdannaiset valmistettiin amor- feina kiinteinä aineina esimerkin 46 menetelmällä käyttäen esimerkin 1 uronamidia: 33 106205

Esimerkki 47: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-l-deoksi-l-[6-[[2-[l-(2-metoksietyyli)in-dol-3-yy li ] etyyli ] amino ] -9H-purin-9-yyli ] - 2.3- 0-(1-metyylietylideeni) 5

Kaava (IV): R]_ = H, n = 2, R2 = metoksi, R3 = R4 = H,

n A

r12 = C—NH-, 10 pu \ /CH>

R13'R14 ~ A

/ CH3

Esimerkki 48: 6-D-ribofuranuronamido-l-[6-[ [2-[l-syk-lopentyyli-indol-3-yyli]etyyli]amino]-15 9H-purin-9-yyli ] -N-syklopropyyli-l-deoksi- 2.3- 0-(1-metyylietylideeni)

Kaava (IV): R^ = H, n = 0, R2 = syklo-pentyyli, R3 = R4 = H,

2° O

11 A

r12 = C—NH-* :M x ch3 ;0i Rl3'Rl4 = Äh, • « 25 • · • ·

Esimerkki 49: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-l-deoksi-l-[6-[ [2-[ 1-isopropyyli-indol- ♦ · · 3-yyli]etyyli]amino]-9H-purin-9-yyli]- 2.3- 0-(1-metyylietylideeni) • ♦ · 30 ♦ ♦ » V : Kaava (IV): Rx = H, n = 0, R2 = isopro- pyy li, r3 = r4 = h, • · .···. o /’ R12 = C—NH-Δ .

35 \ ÄHj • * r13 >R14 = c x ch, 34 106205

Esimerkki 50: β-D-r ibof uranuronamido-N-syklopropyyli-l-deoksi-i-[ 6 - [ [2 - [ 1- (4-metyylibentsyy-li) indol-3-yyli] etyyli] amino]-9H-purin-9-yyli]-2,3-0-(l-metyylietylideeni) 5

Kaava (IV): = H, n = 1, R2 = 4-metyyli- fenyyli, R3 = R4 = H, N Λ R12 = C—NH · 10 \ CH3 R13'R14 = / CH3

Esimerkki 51: β-D-r ibof uranuronamido-N-syklopropyyli-l-deoksi-l- [6-[ [2-[l-(3 r4-dimetyylibent-15 syyli) indol-3-yyli]etyyli]amino]-9H-purin- 9-yyli] -2,3—0— (1—metyyli etylideeni)

Kaava (IV): Rx = H, n = 1, R2 = 3,4-dime- tyylifenyyli, R3 = R4 = H,

20 O

H A

r12 = C—NH-^ x ch,

R13 · R14 - /CN

V / ch3 ‘ 2 5 Esimerkki 52: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli- t t * : *.· l-deoksi-l-[ 6—[ [2—[1— (2,5—dimetyylibent- m #.*·* syyli) indol-3-yyli]etyyli]amino]-9H—purin- 9-yyli] -2,3-0-(l-metyylietylideeni) 30 Kaava (IV): R^ - H, n = 1, R2 = 2,5-dime- tyylifenyyli, R3 = R4 = H, ♦ · ·

0 A

il Λ ··* Ri2 = C—NH-* V \ aCHj :V: 35 R13 ’r14 - ,cx / CH: 35 106205

Esimerkki 53: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-l-deoksi-l- [ 6-[ [ 2 - [ 1- (2-N-morfolinoetyyli) -indol-3-yyli]etyyli]amino]-9H-purin-9-yyli]—2,3-0-(1-metyylietylideeni) 5

Kaava (IV): R^ = H, n = 2, R2 = morfo-lino, R3 = R4 = H, Π λ r12 = C—NH , 10 \ A> R13'R14 - XC\ X CH3

Esimerkki 54: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-15 l-deoksi-l-[6-[[2-[1-(2-N,N-dimetyyli- aminoetyy 1 i) indol-3-yy 1 i ] etyyli] amino] -9H-purin-9-yyli] -2,3-0- (1-metyylietylideeni) 2 0 Kaava (IV): R-j_ = H, n = 2, R2 = N,N- dimetyyliamino, R3 = R4 = H,

. . O

' ·.: Il Λ ; ; r12 = c—NH—t—a .

\r/CH*

. 25 R13,R14 - yC

: · : ' CHj • »

Esimerkki 55: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-: ·* : l-deoksi-2,3-0- (1-metyylietylideeni) -1- [ 6— [ [ 2— [ 1— (2-N-piperidinoetyyli) indol-3-30 yyli]etyyli]amino]-9H-purin-9-yyli] • · · · • · · • · · • · ·

Kaava (IV): R3 = H, n = 2, R2 = N-piperi-'·'·* dino, R3 = R4 = H,

O

H A

35 R12 = c—NH-f—^ .

\ ,CH*

R13 tr14 - A

/ CH3 36 106205

Esimerkki 56: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-l-deoksi-2,3-0- (1-metyylietylideeni) -1-[ 6 - [ [ 2 - [ 1- (2-N-pyrrolidinoetyyli) indol- 3-yyli]etyyli]amino]-9H-purin-9-yyli] 5

Kaava (IV): Rj_ = H, n = 2, R2 = N-pyr- rolidino, R3 = R4 = H, ° Λ R^2 — C—NH-^^ > 10 \ /CHi R13'R14 = / CH3

Esimerkki 57: β-D-ribof uranuronamido-N-syklopropyyli-15 l-deoksi-1- [6-[ [2-[1-(3,4-diklooribent- syyli) indol-3-yyli] etyyli]amino]-9H-purin-9-yyli]~2,3-0-(l-metyylietylideeni)

Kaava (IV): Rx = H, n = 1, R2 = 3,4-di-20 kloorifenyyli, R3 = R4 = H, H Λ r12 = C—NH ^ · . \ /CH> . ; Ri3· Ri4 - /Cv 25 • · « • « « • · • · ..!** Esimerkki 58: β-D-ribofuranuronamido-N—syklopropyyli— • m V ·* i-deoksi-2,3-0-(1-metyylietylideeni)-1- [ 6- [ (2- [ 1- (pyrid-3-yylimetyyli) indol-3- ·*· 30 yyli]etyyli]amino]-9H—purin-9— yyli] • · · « • · · • · « • · ·

Kaava (IV): R^ = H, n = 1, R2 = pyrid- 3-yyli, r3 = R4 = H, :ϊ:: il a : : ; 35 R12 = c—NH—^ · •:-i \ /CH3 r13 ' r14 _ /C\ / CH3 37 106205

Esimerkki 59: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-l-deoksi-2,3-0- (1-metyylietylideeni) —1— [6—[[2 —[1—(naft-l-yylimetyyli)indo1-3-yyli]etyyli]amino]-9H-puri n-9-yyli] 5

Kaava (IV) : R3 = H, n = 1, R2 = naft-1-yyli, R3 = R4 = H,

O

11 A

r12 = C—NH-1—* .

10 x ch5 r13'R14 = / ch3

Esimerkin 60 yhdiste valmistettiin esimerkin 46 menetel-15 mällä käyttäen esimerkissä 3 valmistettua uronamidia:

Esimerkki 60: β-D-ribofuranuronamido-l-[6-[[2-[1-(4-klooribentsyyli) indol-3-yyli] etyyli] amino ] -9H-pur in-9-yyli] -1-deoksi-N- (1,1-2 0 dimetyyli-2-hydroksietyyli) -2,3-0- (metyyli- etylideeni) ; ; Kaava (IV): R3 = H, n = 1, R2 = 4-kloori- ; fenyyli, R3 = R4 = H, V-i 25 CH,

** * I

Ϊ V R-, 2 = C—NH—C—CHjOH , S in, r13 f R14 - /C\ 30 X CH· • · · « • · ♦ ♦ · ♦ • « *

Esimerkki 61: β-D-ribofuranuronamido-l-[6-[(2-[1-(4- • · klooribentsyyli) indol-3-yyli]etyyli]ami-no] -9H-purin-9-yyli]-N-syklopropyyli-l-35 deoksi * · »

Kaava (I): R3 = H, n = 1, R2 = 4-kloori-fenyyli, R3 = R4 = H, 38 106205 R5 = — NH— 7,2 g esimerkissä 46 saatua puriinia sijoitetaan 135 5 mlraan 1 N HCl. Seos lämmitetään 60°C:ssa 3 h ajan ja jäähdytetään. Liuos dekantoidaan vesifaasin erottamiseksi muodostuneesta enemmän tai vähemmän viskoosista kumista. Vesifaasi neutraloidaan natriumbikarbonaattiliuoksella ja uutetaan kloroformilla. Orgaaniset faasit yhdistetään 10 aikaisemmin saadun kumin kanssa. Seos pestään vedellä, kuivataan ja väkevöidään 7 g:n saamiseksi kermanväristä kiinteää ainetta.

Yhdiste puhdistetaan kromatografiällä silikageelissä 15 (eluentti: kloroformi 95%/metanoli 5%) 3,7 g: n saami seksi β-D-ribofuranuronamido-l-[6-[[2-[l-(4-klooribent-syyli) indol-3-yyli] etyyli ] amino] -9H-purin-9-yyli]-N-syklopropyyli-l-deoksia. Empiirinen kaava: C30H30ClN7OA. Sulamispiste: 225°C. Sama yhdiste 61 20 voidaan saada hydrolysoimalla muurahaishappovällaineessa (212 ml 50% liuosta) lämmittämällä 70°C:ssa 75 min.

, , ajan.

< | 1; Esimerkkien 62-75 yhdisteet valmistettiin esimerkin 61 25 mukaan.

t * » * · · • · * *

Esimerkki 62: β-D-ribofuranuronamido-1-[6-[ [2-[ 1-(4-: klooribentsyyli) indol-3-yyli]etyyli]ami no] -9H-purin-9-yyli]-l-deoksi-N-(l,1-.j. 3 0 dimetyyli-2-hydroksietyyli) * · · » * i • · «

Kaava (I): = H, n = 1, R2 = 4-kloori- '··· fenyyli, R3 = R4 = H, CH3 ·; i

35 R5 = —NH —C—CH3OH

ch3 39 106205

Puhdistettiin kromatografiällä kaksi kertaa peräkkäin silikageelissä (eluentti: kloroformi 90%/metanoli 10%). Empiirinen kaava: C31H34C1N705 . Sulamispiste: 189°C.

5 Esimerkki 63: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli- l-deoksi-l-[6-[[2-[l-(2-metoksietyyli)in-dol-3-yyli]etyyli]amino]-9H-purin-9-yyli]

Kaava (I): R^ = H, n = 2, R2 = metoksi, 10 R3 = R4 = H, R5 = -NH-

Puhdistettu kromatografiällä silikageelissä (eluentti: 15 kloroformi 95%/metanoli 5%). Empiirinen kaava: C26H31N7°5· Sulamispiste: 132°C.

Esimerkki 64: β-D-ribofuranuronamido-1-[6-[ [2-[l-syk-lopentyyli-indol-3—yyli]etyyli]amino]— 2 0 9H-purin-9-yyli]-N-syklopropyyli-l-deoksi

Kaava (I): R^ = H, n = 0, R2 = syklopen-tyyli, R3 = R4 = H, 2 5 R5 = -NH- «· « ^ • · · • · • · 9

Puhdistettu kromatograf iällä silikageelissä (eluentti: ϊ Γ: kloroformi 95%/metanoli 5%). Empiirinen kaava: C28H33N704 . Sulamispiste: 141°C.

30 • · · ·

Esimerkki 65: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli- i i t l-deoksi-l-[6-[ [2-[ 1-isopropyyli-indol- 3-yyli]etyyli]amino]-9H-purin-9-yyli] « t · • · « · · i 35 Kaava (I): = H, n = 0, R2 = isopro- pyylif R3 = R4 = H' » · R5 = -NH- 40 106205

Puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluent-ti: kloroformi 90%/metanoli 10%). Empiirinen kaava: C26H31N704. Sulamispiste: 135°C.

5 Esimerkki 66: β-D-ribofuranuronamido—N-syklopropyyli- 1-deoks i-1-[6-[[2-[1-(4 -metyylibentsyy-li) indo 1-3-yyli]etyyli]amino]— 9H-purin-9-yyli] 10 Kaava (I): R1 = H, n = 1, R2 = 4-metyyli- fenyyli, R3 = R4 = H, R5 = NH-<^j 15

Puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluent-ti: kloroformi 90%/metanoli 10%). Empiirinen kaava: C3 1 H33N70A ·Η20. Sulamispiste: 144°C.

2 0 Esimerkki 67: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli- 1-deoksi-l-[6-[ [2-[l-(3,4-dimetyy 1 ibentsyy-ι·ι . li) indol-3-yyli]etyyli]amino]-9H-purin-9- : yyii] » * t t < < * < 25 Kaava (I) : R^ = H, n = 1, R2 = 3,4-dime- i .* tyylifenyyli, R3 = R4 = H, • · « « ♦ **» :T: r5 = —nh— •j. 30 Puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluent- • * · · ,T, ti: kloroformi 95%/metanoli 5%). Empiirinen kaava: C32H35N704 *H20. Sulamispiste: 134°C.

< « i I * · t *

Esimerkki 68: β-D-ribof uranur onamido-N-syklopropyyli-.V. 35 l-deoksi-l-[ 6-[ [2-[l-(2/5-dimetyylibent- syyli) indol-3-yyli]etyyli]amino]-9H-purin-9-yyii] 41 106205

Kaava (I): R^ = H, n = 1, R2 = 2,5-dime-tyylifenyyli, R3 = R4 = H, R5 = —NH- 5

Puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluent-ti: kloroformi 95%/metanoli 5%). Empiirinen kaava: c32H35N7°4 *°· 5H20. Sulamispiste: 130°C.

10 Esimerkki 69: β-D-ribof uranuronamido-N-syklopropyyli- 1-deoksi-l- [ 6- [ [ 2- [ 1— (2-N-morf olinoetyyli) -indol-3 -yyli ] etyyli] amino] -9H-purin-9-yyli]

Kaava (I): R]_ = H, n = 2, R2 = N-mor- 15 folino, R3 = R4 = H, R5 = -NH-

Puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluent-20 ti: kloroformi 95%/metanoli 5%). Empiirinen kaava: C29H36N805 *0.5H20. Sulamispiste: 109-ll0°C.

Esimerkki 70: B-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-1-deoksi-l-[6-[[2-[1-(2-N,N-dimetyyli-25 aminoetyyli) indol-3-yyli]etyyli]amino]- k «* · i V 9H-purin-9-yyli] *· · « «1·» : Kaava (I): R3 = H, n = 2, R2 = N,N-dime- tyyliamino, R3 = R4 = H, 30 r5 = -«H—<1 4 $ * » 4 * 4 ’**·’ Puhdistettiin kromatograf iällä silikageelissä (eluent-

• M

ti: kloroformi 80%/isopropyyliamiini 20%) . Empiirinen 35 kaava: C27H34N804 *0.5H20. Sulamispiste: 112°C.

4 n«ii 42 106205

Esimerkki 71: β-D-ribof uranuronamido-N-syklopropyyli-l-deoksi-1- [ 6 - [ [ 2 - [ 1- (2-N-piperidino-etyyli)indol-3-yyli]etyyli]amino]-9H-purin-9-yyli] 5

Kaava (I): R1 = H, n = 2, R2 = piperi-dino, R3 - R4 = H, R5 = —NH- 10

Puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluent-ti: kloroformi 80%/metanoli 20%). Empiirinen kaava: C30H38N8°4 · Sulamispiste: 109°C.

15 Liuosta, jossa oli 11 g tällä tavalla valmistettua yhdistettä 100 ml:ssa etanolia lisättiin tipoittain liuokseen, jossa oli 3,7 g sitruunahappoa 40 ml:ssa etanolia. Seosta sekoitettiin 1 h ajan huoneenlämpötilassa. Muodostunut kiinteä aine suodatettiin pois, 20 pestiin etanolilla ja kuivattiin, jolloin saatiin 10,6 g 3-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-l-deoksi-l-[6-[[2 -[1-(2-N-piperidinoetyyli)indol-3-yyli]etyyli]a-mino]-9H-purin-9-yyli] sitraattia. Empiirinen kaava: ,'.j C30H38N8O4 · C6H807 . Sulamispiste: 138°C.

25 • • ^ Esimerkki 72: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli- • · 1-deoksi-l-[6-[[2-[1-(2-N-pyrrolidino-

«M

‘I” etyyli)indol-3-yyli]etyyli]amino]-9H- ’·’ ’ purin-9-yyli] 30

Kaava (I) : R1 = H, n = 2, R2 = N-pyr- V · rolidino, R3 = R4 = H, < ( * « · « « f t .

,'''. R5 = —NH

35 .·.· Puhdistettu kromatograf iällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 80%/metanoli 20%) . Empiirinen kaava: C29H36N804.0.5H20. Sulamispiste: 126°C.

43 106205

Esimerkki 73: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-l-deoksi-1-[6-[[ 2- [1-(3,4-diklorobent-syyli) indol-3-yyli]etyyli]amino]-9H-purin-9-yyii] 5

Kaava (I): R]_ = H, n = 1, R2 = 3,4-dik-lorofenyyli, R3 = R4 = H,

R5 = NH

10

Puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluent-ti: kloroformi 95%/metanoli 5%). Empiirinen kaava: C30H29C12N7°4 *°· 8H20. Sulamispiste: 140°C.

15 Esimerkki 74: β-D-r ibofuranuronamido-N-syklopropyyli- l-deoksi-l- [6- [ [2-[ 1— (pyrid-3-yylimetyyli) -indol-3-yyli] etyyli] amino] -9H-purin-9-yyli]

Kaava (I): R^ = H, n = 1, R2 = pyrid-3- 20 yyii, R3 = R4 = h,

R5 = NH

I f I i i I il i ·

Puhdistettiin uudelleenkiteytyksellä 2-metoksietanolis-: 25 sa. Empiirinen kaava: C29H3 0 N804 · O . 5CH3 OCH2 CH2 OH .

Sulamispiste: 239°C.

• · • ·

III

*1** Esimerkki 75: β-D-ribofuranuronamido—N-syklopropyyli- • · · *** * 1-deoksi-l-[6-[ [2-[ 1-(naft-l-yylimetyy- 30 li) indol-3-yyli]etyyli]amino]-9H-purin- 9-yyli] • ♦ · • · « • · ·

Kaava (I): = H, n = 1, R2 = naft-1- .···. yylif R3 = R4 = H/ « · 35 \V R5 = -NH- • · 44 106205

Puhdistettu kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 95%/metanoli 5%) , jota seurasi uudelleen-kiteytys isopropanolissa. Empiirinen kaava: C34H33N70^ .

Sulamispiste: 168°C.

5

Esimerkki 76: N6— [2 — [ 1— (4-klooribentsyyli) indol-3-yyli]etyyli]adenosiini

Kaava (IV): = H, n = 1, R2 = 4-kloori- 10 fenyyli, R3 = R4 = H, R12 =

CH2OH, R13 = R14 = H

4,5 g 1-(4-klooribentsyyli)-3-(2-aminoetyyli)-indoli-hydrokloridia, joka oli valmistettu esimerkissä 29 tai 15 30, sijoitetaan 100 ml:aan etanolia. 2,1 g trietyyli- amiinia ja sitten 2 g 6-klooriadenosiinia lisättiin. Koko seosta lämmitettiin palautusjäähdytyksellä 6 h ajan ja se jäähdytettiin. Saatu saostuma suodatettiin pois ja pestiin etanolilla ja sitten eetterillä. Uudel-20 leenkiteytys etanolissa antaa 2,5 g N6-[2-[l-(4-kloori-bentsyyli)indol-3-yyli]etyyli]adenosiinia. Sulamispiste: 181°C.

' Esimerkkien 77 ja 78 yhdisteet valmistettiin esimerkin 25 76 mukaan.

• · ♦ » ·

Esimerkki 77: N6-[2-[l-bentsyyli-indol-3-yyli]etyyli]-adenosiini • · e 30 Kaava (IV): R4 = H, n = 1, R2 = fenyyli, r3 = r4 = h, r12 = ch2oh,

* R13 = r14 = H

Puhdistettu uudelleenkiteytyksellä etanolissa. Sula-'·' 35 mispiste: 158°C.

‘ Esimerkki 78: N6-[2-[l-(2,6-diklooribentsyyli) indol-3- yyli]etyyli]adenosiini 45 106205

Kaava (IV): R3 = H, n = 1, R2 = 2,6-di-kloorifenyyli, R3 = R4 = H,

Rl2 = CH2OH, R13 = R14 = H, 5 Puhdistettu uudelleenkiteytyksellä etanolissa. Sula mispiste: 192°C.

Esimerkkien 76, 77 ja 78 alkoholit voidaan hapettaa hapoksi reaktiolla hapettavan aineen kanssa, kuten 10 kromitrioksidin kanssa asetonissa rikkihapon läsnäol lessa, tai kaliumpermanganaatin kanssa vedessä ammoniakin läsnäollessa. Tämän jälkeen niistä saadaan vastaavat happokloridit tionyylikloridin kanssa tapahtuneen reaktion jälkeen, ja sitten samaa tyyppiä kuin esimer-15 keissä 61, 62, 73 tai 75 olevat ribofuranuronamidijohdannaiset reaktiolla sopivien amiinien kanssa.

Esimerkkien 79-100 yhdisteet valmistettiin esimerkin 61 menetelmällä.

20

Esimerkki 79: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-1-deoksi-l- [6-[ [2-[l- (pyrid-2-yylimetyy-li) indol-3-yyli ] etyyli] amino]-9H-purin-; 9-yyli] \ : 25

Kaava (I): Rj_ = H, n = 1, R2 = pyrid-2- ♦ · : yyii, r3 = r4 = h, • · · · • « · R5 = -NH- 30

Puhdistettu kolmessa peräkkäisessä pylväässä (eluentti: • · · · kloroformi 90%/metanoli 10%, kloroformi 80%/isopropyy- liamiini 20% ja metyleenikloridi 90%/metanoli 10%) .

/··, Empiirinen kaava: C29H30N8O4. Sulamispiste: 122°C.

*:* 35 46 106205

Esimerkki 80: β-D-ribofuranuronamido—1—[6-[[2-[1-(4— klooribentsyyli) -5-kloori-indol—3— yyli]-etyyli ] amino] -9H-purin-9-yyli]-N-syklo-propyyli-l-deoksi 5

Kaava (I):R1 = 5-Cl, n = 1, R2 = 4- kloorifenyyli, R3 = R4 = H, R5 = NH- 10

Puhdistettu kiteytyksellä isopropanoli/eetteri -seoksessa. Empiirinen kaava: C30H29Cl2N7O4 . Sulamispiste: 154°C.

Esimerkki 81: B-D-ribofuranuronamido-l-[6-[ [2-[l-(2,5-15 dimetyylibentsyyli) -5-kloori-indol-3- yyli]etyyli]amino]-9H-purin-9-yyli]-N-syk1opropyy1i-1-deoksi

Kaava (I): R;l = 5-C1, n = 1, R2 = 2,5-di-metyylifenyyli, R3 = R4 = H, 20 R5 = NH-

Uudelleenkiteytys etanolissa eläinhiilikäsittelyllä. Empiirinen kaava: C32H34C1N704 · 1.1H20. Sulamispiste: 25 139 °C.

• « «· · ♦ · ^ Esimerkki 82: β-D-ribofuranuronamido-1-[6-[[2-[1—(4— **” klooribentsyyli) indol-3-yyli ] etyyli] - • e « ·*° amino]-9H-purin-9-yyli]-1-deoksi-N—(2— 30 metoksietyyli) • · · »«·» : Kaava (I): R-^ = H, n = 1, R2 = 4-kloori- fenyyli, R3 = R4 = H, R5 = (!-t -nh-ch2-ch2-och3 · 35 :.V Puhdistettu käsittelemällä kuumalla etanolilla. Em- piirinen kaava: C30H32ClN7O5 . Sulamispiste: 193°C.

47 106205

Esimerkki 83: β-D-ribof uranuronamido-N-syklopropyyli-1-deoksi-l - [6-[ [2 - [l-allyyli-indol-3-yyli]etyyli]amino]-9H-purin-9-yyli] 5 Kaava (I) : Rx = H, n = 1, R2 = -CH=CH2, R3 = R4 = H,

R5 = NH

10 Puhdistettu kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 90%/metanoli 10%) . Empiirinen kaava: C26H29N704·0.9H20. Sulamispiste: 117°C.

Esimerkki 84: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-15 1-deoksi-l- [ 6- [ [2- [ 1- (prop-2-ynyyli) in- dol-3-yy li] etyyli] amino] -9H-purin-9-yyli]

Kaava (I): Rx = H, n = 1, R2 = -CsCH, R3 = r4 = H, 20 R5 = NH <^j

Puhdistettu kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 90%/metanoli 10%). Empiirinen kaava: 25 C26H2γΝ7°4 ·H2O. Sulamispiste: 123°C.

« · - ·♦ ♦ • · · • · 1 Esimerkki 85: β-D-ribofuranuronamido-N— syklopropyyli- • · · *··· 1-deoksi-l - [ 6-[ [2-[l-(2,5-dimetyylibent- • » · *·* * syyli)-5-metyyli-indol-3-yyli]etyyli]- 3 0 amino]-9H-purin-9-yyli] • · · • · · «

Kaava (I): R-^ = 5-CH3/ n = 1, R2 = 2,5-di-metyylifenyyli, R3 = R4 = H, Γ**: 35 R5 = -NH- ’"*! Puhdistettu kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 90%/metanoli 10%). Empiirinen kaava: 48 106205 C33H37N7O4 ’ 0.8H20. Sulamispiste: 129°C.

Esimerkki 86: β-D-ribofuranuronamido—N-syklopropyyli— 1-deoksi-l- [ 6-[ [2-[1- (2,5-dimetyylibent-5 syyli)-5—metoksi-indol-3-yyli]etyyli]— amino]-9H-purin-9-yyli]

Kaava (X): = 5-OCH3 , n = 1, R2 = 2,5-di- metyylifenyyli, R3 = R4 = H, 10 R5 = -NH-

Puhdistettu kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 90%/metanoli 10%). Empiirinen kaava: 15 C33H37N705·0.1H20. Sulamispiste: 182°C.

Esimerkki 87: β-D-ribofuranuronamido-N—syklopropyyli— 1-deoksi-l-[6-[ [2-[l-(2,5-dimetyylibent-syyli)-2-metyyli-indol-3-yyli]etyyli]-20 amino]-9H-purin-9-yyli]

Kaava (I): R^ = 2-CH3, n = 1, R2 = 2,5-di-metyylifenyyli, R3 = R4 = H, ·, 2 5 R5 = -NH- • · - «· t • · · • · * * Puhdistettu kromatografiällä silikageelissä (eluentti: ···· kloroformi 90%/metanoli 10%) . Empiirinen kaava: *·* C33H37N704 · 0.7H20. Sulamispiste: 144°C.

30

Esimerkki 88: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-: l-deoksi-l-[6-[ [2-[l-(4-metoksibentsyyli)- r ·' · t indol-3-yyli ] etyyli] amino] -9H-pur in-9-yy li ] 35 Kaava (I): R1 = H, n = 1, R2 = 4-OCH3- !.V fenyyli, R3 = R4 = H, R5 = -NH- 49 106205

Puhdistettu kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 90%/metanoli 10%). Empiirinen kaava: c31 H33N705 · 0.8H20. Sulamispiste: 134°C.

5 Esimerkki 89: B-D-ribofuranuronamido-1-[6-[[2-[1-syklo- p e n ty y 1 i - 2 -metyyli-indol-3 -yyli] etyyli ] -amino] -9H-purin-9-yyli] -N-syklopropyyli-1-deoksi 10 Kaava (I): = 2-CH3, n = 0, R2 = syklo- pentyyli, R3 = R4 = H, % = — NH- 15 Puhdistettu kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 90%/metanoli 10%) . Empiirinen kaava: c29H35N704 . Sulamispiste: 140°C.

Esimerkki 90: β-D-r ibof uranuronamido-N-syklopropyyli— 20 1-deoksi-l-[6-[[2-[1-(2-N,N-dimetyyli- aminobentsyyli) indol-3-yyli] etyyli] amino] -9H-purin-9-yy1i]

Kaava (I): Rj_ = H, n = 1, R2 = 2-N,N- 25 dimetyyliaminofenyyli, R3 = R4 = H, t · 1 » *

Rc = -NH- « « · » · · « 30 Puhdistettu kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 90%/metanoli 10%) . Empiirinen kaava: iT: c32H36N8°4 · Sulamispiste: 128-129ÖC.

« • 1 # · « ♦ 4 * M Esimerkki 91: β-D-r ibof uranuronamido-N-syklopropyyli- » » '·** 35 l-deoksi-l-[ 6-[ [2-[l-(3-nitrobentsyyli)- • » indol-3-yyli]etyyli]amino]-9H-purin-9- ·:·: yyli] 50 106205

Kaava (I):R1 = H, n = 1, R2 = 3-N02- fenyyli, R3 = R4 = H, R5 = —NH- 5

Puhdistettu kromatografiällä kaksi kertaa peräkkäin (eluentti: kloroformi 90%/metanoli 10% ja metyleenik- loridi 90%/metanoli 10%). Empiirinen kaava: C3 0H3 0N8 06 · 0.3H20. Sulamispiste: 129°C.

10

Esimerkki 92: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-1-deoksi-l - [ 6—[ [1- [1- (2,5-dime tyyli bent-syyli) indol-3-yyli]propan-2-yyli]amino]-9H-purin-9-yy1i] 15

Kaava (I): R^ = H, n = 1, R2 = 2,5-di- metyylifenyyli, R3 = H, R4 = CH3/ 20 R5 ---NH-

Puhdistettu kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 90%/metanoli 10%). Empiirinen kaava: C33H37N704. Sulamispiste: 135°C.

/·, 25 y .* Esimerkki 93: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli- ' l-deoksi-l-[6-[ [1-[1-(syklopentyyli-indol- i·· 3-yy li ] propan-2-yyli ] amino] -9H-purin-9- ; yyii] 30

Kaava (I): R4 = H, n = 0, R2 - syklo- i ! : pentyyli, R3 = H, R4 = CH3, » i · I t ? ···, r5 = -NH- ’·*/* 35 t f V.·* Puhdistettu kromatograf iällä silikageelissä (eluentti: ‘: kloroformi 90%/metanoli 10%). Empiirinen kaava: C29H35N704. Sulamispiste: 130°C.

51 106205

Esimerkki 94: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-1-deoksi-l- [ 6-[ [2-[l-(2# 5-dimetyylibent— syyli)indol-3-yyli]propyyli]amino]-9H-purin-9-yyli] 5

Kaava (I): = H, n = 1, R2 = 2,5-dimetyy- lifenyyli, R3 = CH3 , R4 = H, R5 = -NH- 10

Puhdistettu kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 95%/metanoli 5%). Empiirinen kaava: C33H37N7°4 · Sulamispiste: 137°C.

15 Esimerkki 95: β-D-ribof uranuronamido-N-syklopropyyli- l-deoksi-1- [ 6-[ [2-[ 1- (2,5-dimetyylibent-syyli)-2-fenyyli-indol-3-yyli]etyyli]-amino]-9H-purin-9-yyli] 20 Kaava (X): R3 = 2-fenyyli, n = 1, R2 = 2,5- dimetyylifenyyli, R3 = R4 - H, R5 = —NH- 25 Puhdistettu kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 90%/metanoli 10%) . Empiirinen kaava: I · 1 ' ·' C38H39N704. Sulamispiste: 136°C.

< »* o » · · e

Hi * Esimerkki 96: β-D-ribofuranuronamido—N-syklopropyyli- 3 0 l-deoksi-l-[ 6-[ [2-[l-(2,5—dimetyylibent- syyli)-5-tiometyyli—indol-3-yyli]etyyli]- i*': amino] -9H-purin-9-yyli] » « > f t f 1

Kaava (I): R3 = 5-SCH3, n = 1, R2 = 2,5-

« I

'35 dimetyylifenyyli, R3 = R4 = H, * t « 1 1 * « -

' i *" Ϊ R5 = NH <^J

52 106205

Empiirinen kaava: C3 3 H3 7N704 S · O . 8H20. Sulamispiste: 137 °C-

Esimerkki 97: β-D-ribofuranuronamido-l-[6-[[2-[1-(5-5 klooritien-2-yyli) indol-3—yyli]etyyli]- amino ] — 9H-purin-9-yyli] -N-syklopropyyli-1-deoksi

Kaava (I): R^ = H, n = 1, R2 = 5-kloori-10 tien-2-yyli, R3 = R4 = H, R5 = — NH—<

Puhdistettu kromatografiällä silikageelissä (eluentti: 15 kloroformi 90%/metanoli 10%). Empiirinen kaava: C28H28C1N704S·1H20. Sulamispiste: 137°C.

Esimerkki 98: B-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-1— [ 6— [ [2- [ 1— (syklopropyylimetyyli) indol-20 3-yyli]etyyli]amino]-9H-purin-9-yyli]- 1-deoksi

Kaava (I): R^ = H, n = 1, R2 = syklopro-pyyli, R3 = R4 = H, 25 V·: r5 = —nh— • · • · ..)·* Empiirinen kaava: C27H3 λ N704 · 0.5H20. Sulamispiste: 134°C.

♦ « · • · · • · · 30 Esimerkkien 99-118 johdannaiset valmistettiiin amor- ··· feina kiinteinä aineina esimerkin 46 menetelmällä • ··· käyttämällä sopivaa kaavan (III) mukaista uronamidia.

Esimerkki 99: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-35 1-deoksi-l-[6-[ [2-[ 1-(pyrid-2-yylime- : V: tyyli) indol-3-yyli]etyyli]amino]-9H-purin- .... j 9-yyli]-2,3-O-(1—metyylietylideeni) 53 106205

Kaava (IV): = H, n = 1, R2 = pyrid-2- yyli, R3 = R4 = H,

O

n r12 = C —NH-<" , 5 \ /CH< R13'R14 = 10 Esimerkki 100: β-D-ribofuranuronamido-1-[6-[ [2-[ 1-(4- klooribentsyyli)-5-kloori-indol-3-yyli]-etyyli ] amino ] -9H-purin-9-yyli] -N-syklo-propyyli-l-deoksi-2,3-0-(1-metyylietyli-deeni) 15

Kaava (IV): Rx = 5-C1, n = 1, R2 = 4- kloorifenyyli, R3 = R4 = H,

O

Il /1 r12 = C—NH-<" , 20 \ /CHj R13'R14 = /C\ / CH3 25 Esimerkki 101: β-D-ribofuranuronamido-1-[6—[[2-[1-(2,5- » « 4 *· *1 dimetyylibentsyyli)-5-kloori-indol-3- *· · ; yyli] etyyli] amino]-9H-purin-9-yyli]-N- syklopropyyli-l-deoksi-2,3-0- (1-metyyli- • · · ::: etylideeni) 30

Kaava (IV): Rx = 5-Cl, n = 1, R2 = 2,5-di- • · · « metyylifenyyli, R3 = R4 = H, • · ·

O

H /i • · r12 — C — NH , 35 :Y: χ CH, r13 · r14 = /C\ / ch3 54 106205

Esimerkki 102: B-D-ribofuranuronamido-l-[6-[ [2-[l-(4-klooribentsyyli)indol-3-yyli]etyyli]-amino] -9H-purin-9-yyli ] -l-deoksi-N-(2-metoksietyyli)-2,3-0-(1-metyylietyli-5 deeni)

Kaava (IV): = H, n = 1, R2 = 4-kloori- fenyyli, R3 = R4 = H,

O

II

10 R12 = C—NH—CH—CHä—OCH, , \ CH, R13 tR14 - σ κ CH, 15 Esimerkki 103: B-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli- l-deoksi-1-[6-([2-[l-allyyli-indol-3-yyli ] etyyli ) amino] -9H-purin-9-yyli] -2,3—0—(1—metyylietylideeni) 20 Kaava (IV): R^ = H, n = 1, R2 = ete- nyyli, R3 - R4 = H,

O

il ^1 r12 = C—NH , 25 χ /CH, ·: r13 f r14 = C\ :*·*: κ CH, • ·

Esimerkki 104: B-D-ribof uranuronamido-N-syklopropyyli- 30 1-deoksi-l- [ 6—[ [2-[l-propargyyli-indol— 3-yyli] etyyli] amino ] -9H-purin-9-yyli]- .···. 2,3-0-(1-metyylietylideeni) • · · V.: Kaava (IV): R-j_ = H, n = 1, R2 = ety- 35 nyyli, R3 = R4 = H,

O

n r12 = C—NH-<" , 55 106205 \ /CHj R13 ' R14 = .C\ / ch3 5

Esimerkki 105: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-1-deoksi-l-[6-[[2-[l-(2,5-dimetyylibent-syyli) -5-metyyli-indol-3-yyli]etyyli]-amino ] -9H-purin-9-yyli] -2,3-0- (1-metyy-10 lietylideeni)

Kaava (IV): R± = 5-CH3, n = 1, R2 = 2,5-dimetyylifenyyli, R3 = R4 = H, 15 0 II ^ r12 = C—NH--<" , \ /CHa R13'r14 = 2 0 CHj

Esimerkki 106: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-1-deoksi-l-[ 6-[ [2-[l-(2,5-dimetyyli-bentsyyli)-5-metoksi-indol-3-yyli] etyyli]-2 5 amino] — 9H-purin-9-yyli] -2,3-0- (1—metyyli— etylideeni) « # • · ..'.V Kaava (IV): R± = 5-OCH3, n = 1, R2 = • « · : 2,5-dimetyylif enyyli, R3 = 30 R4 = H, .:. o n /1 R12 = C—NH—, \ CH> 35 r13 > R14 = c' .v. / ch3 56 106205

Esimerkki 107: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-1-deoksi-l- [6-[ [2 - [ 1- (2,5-dimetyyli-bentsyyli) -2-metyyli-indol-3-yyli] etyyli] -amino]-9H-purin-9-yyli]-2 f 3-0-(l-metyyli-5 etylideeni)

Kaava (IV): Rx = 2-CH3, n = 1, R2 = 2,5—dimetyylifenyyli, R3 = R4 = H, 10 o il ^ r12 = C—NH-—, x CH3 R13'R14 = (/ 15 X XCH3

Esimerkki 108: β-D-ribofuranuronamido-N-syk 1 opropyy 1 i-1-deoks i-1- [6-[ [ 2 - [ 1- (4-metoksibent-syyli) indol-3-yyli] etyyli]amino]-9H-20 purin-9-yyli ] -2,3-0-(l-metyylietyli- deeni)

Kaava (IV): R4 = H, n = 1, R2 = 4-OCH3- fenyyli, R3 = R4 = H,

25 O

\ *: Il /i r12 = c —NH-<" .

• · \ « » o · ·

• · « P

:V: \ /CH^

R13·R14 = .CN

3 0 CH> « ♦ · • · · · • · · V : Esimerkki 109: β-D-ribof uranuronamido-1-[ 6-[ [2—[1- syklopentyy li-2 -metyyli-indol-3-yyli]-'· · ·' ety y li] amino] -9H-pur in-9-yyl i ] -N-syklo- *** 3 5 propyyli-l-deoksi—2,3-0- (1-metyylietyli- ·.·.· deeni) 57 106205

Kaava (IV): = 2-CH3, n = O, R2 = syklopentyyli, R3 = R4 = H,

O

il r12 = C-NH-<J , 5 \ /CH> R13'R14 - /Cx / CH3

Esimerkki 110: B-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-10 1-deoksi-l-[6-[ [2-[ 1-(2-N,N-dimetyyli- aminobentsyyli) indol-3-yyli] etyyli] -amino ] -9H-pur in-9-yy 1 i ] -2,3 -O- (1-metyyli-etylideeni) 15 Kaava (IV): Rx = H, n = 1, R2 = 2-N,N- diitietyyliaminofenyyli, R3 = R4 = H,

O

Il r12 = C—NH-<" .

20 \ /CHi

R13·R14 “ C

/ nch3 2 5 Esimerkki 111: B-D-r ibof uranuronamido-N-syklopropyyli-'· *· 1-deoksi-l-[6-[ [2-[l-(3-nitrobentsyyli)in- ’ .* dol-3-yyli ] etyyli] amino]-9H-purin-9- o ..! Γ yy1i]-2,3-O-(1-metyy1iety1ideeni) f » » • « · 30 Kaava (IV): R3 = H, n = 1, R2 = 3-nitro- ·;· fenyyli, R3 = R4 = H, • · · ·

O

il R12 = C—NH-<T .

35 v ^CH3 R13'R14 = /C\ / ch3 58 106205

Esimerkki 112: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli-l-deoksi-1-[6-[[1-[1-(2,5-dimetyylibent-syyli)indol-3-yyli]propan-2-yyli]amino]-9H-purin-9-yyli]-2,3-0-(1-metyylietyli-5 deeni)

Kaava (IV): R-j_ = H, n = 1, R2 = 2,5- dimetyylifenyyli, R3 = H, 10 R4 = CH3,

O

il /1 R12 = C —NH-<" , \ CH3

15 R13'R14 = X

/ ch,

Esimerkki 113: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli— 1-deoksi-l- [ 6- [ [ 1- [ 1-syklopentyyli-indol- 2 0 3-yyli ] propan-2-yyli] amino] -9H—purin—9- yyli]-2,3-0-(1-metyylietylideeni)

Kaava (IV): R3 = H, n = 0, R2 = syklo-pentyyli, R3 = H, R4 = CH3,

25 O

r12 = C — NH .

• < ♦ • · « ··· \ CHj * R13 <R14 - /C\ 3 0 ^3 • » · • » · · V* Esimerkki 114: β-D-ribof uranuronamido-N-syklopropyyli- . ·, ·. 1-deoksi-l-[6-[[2-[l-(2,5-dimetyylibent- ,···, syyli) indol-3-yyli] propyyli]amino]-9H- 35 purin-9-yyli ]-2,3-0-(1-metyylietyli- \V deeni) 59 106205

Kaava (IV): Rx = H, n = 1, R2 = 2,5-dimetyylif enyyli, R3 = CH3, R4 = H,

O

il 5 Ri2 = c —NH , \ /CH>

R13'R14 - /CN

/ ch3 10 Esimerkki 115: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli- 1-deoksi-l-[6-[[2-[1-(2,5-dimetyylibent-syyli) -2-f enyyli-indo 1-3-yyli] etyyli ]-amino] -9H-purin-9-yyli] -2,3-0- (1-metyyli-etylideeni) 15

Kaava (TV): R·]^ = 2-fenyyli, n = 1, R2 = 2.5- dimetyylifenyyli, R3 = R4 = H,

O

il /d 20 R12 = C —NH <" , \ ,CH’ :'·<. R13 > R14 - /C\ ; ; x ch3 f t 25 « · « .* Esimerkki 116: β-D-ribofuranuronamido-N-syklopropyyli- * * * ' ‘ l-deoksi-l-[6-[[2-[l-(2/5-dimetyylibent- * · o syyli) -5-tiometyyli-indol-3-yyli] etyy-*** ’ li] amino ] — 9H—purin—9-yyli ] —2,3-O- (1 — 30 metyylietylideeni) * · « • * · « :T: Kaava (IV): Rx = 5-SCH3, n = 1, R2 = 2.5- dimetyylifenyyli, R3 = Ϊ:' r4 = h,

3 5 O

il

Ri2 — C — NH "CT i 60 106205 \ ^ R13'r14 - /Cx X CHj 5

Esimerkki 117: β-D-ribofuranuronamido-1—[6— [ [2—[1— (5— klooritien-2-yyli) indol-3-yyli] etyyli] -amino]-9H-purin-9-yyli]-N-syklopropyyli-l-deoksi-2,3-0-(1-metyylietylideeni) 10

Kaava (IV): R4 = H, n = 1, R2 = 5-kloori- tien-2-yyli, R3 = R4 = H,

O

n r12 = c — NH·-<J , 15 _ \ /CH>

R13'R14 - C

/ ch3 2 0 Esimerkki 118: β-D-ribofur'anuronamido-N-syklopropyyli- l-[6-[[2-[l-(syklopropyylimetyyli)indol- 3-yyli]etyyli]amino]-9H-purin-9-yyli]—1— deoksi-2,3-0-(1-metyylietylideeni) ' ] 25 Kaava (IV): R4 = Η, n = 1, R2 = syklo- 4 i / propyyli, R3 = R4 = H, 9 9 t

! .* O

.:. „ll/i ...: R12 = c —NH-O , :T:

3 0 OH

\ /CH3 R13' r14 - Xcx ·::: / ch5 ft · 9 f ft « t • 4 ‘ ‘•V Seuraavat esimerkkien 119-138 yhdisteet valmistettiin 35 jollakin esimerkkien 29 tai 30 menetelmällä.

• · 1 I * 4

Esimerkki 119: 3-(2-aminoetyyli) -5-kloori-(2,5-dimetyyli-bentsyyli)indoli 61 106205

Kaava (II): R3 = 5-C1, n = 1, R2 = 2,5-di-metyylifenyyli, R3 = R4 = H

Ruskea öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silika-5 geelissä (eluentti: kloroformi 95%/isopropyyliamiini 5%) .

Esimerkki 120: 3-(2-aminoetyyli)-1-allyyli-indoli

Kaava (II): R3 = H, n = 1, R2 = ete-

10 nyyli, R3 = R4 = H

Ruskea öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silika-geelissä (eluentti: kloroformi 95%/isopropyyliamiini 5%) .

Esimerkki 121: 3-(2-aminoetyyli)-l-(pyrid-2-yylimetyyli)-15 indoli

Kaava (II): R3 = H, n = 1, R2 = pyrid-2-yyli, R3 = R4 = H

20 Puhdistettu kromatografiällä silikageelissä (eluentti: CHCl3 95%/isopropyyliamiini 5%). Sulamispiste: 237°C.

Esimerkki 122: 3-(2-aminoetyyli) -5-kloori-l-(4-kloori-bentsyyli)indoli . 25 !; / Kaava (II): Rx = 5-Cl, n = 1, R2 = 4-

f '* kloorifenyyli, R3 - R4 = H

• j. λ e * * · · #tt V * Hydrokloridi puhdistettiin uudelleenkiteyttämällä 30 etanolista. Sulamispiste: 204°C.

rn • » * ·

Esimerkki 123: 3-(2-aminoetyyli)-1-propargyyli-indoli \ i 1 c

Kaava (II): R^ = H, n = 1, R2 = ety- t 4

’‘l’’ 35 nyyli, R3 = R4 = H

* 1

« k t k 4 I

• » ··,"] Ruskea öljy puhdistettiin kromatograf iällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 95 % / isopropyyliamiini 5 %).

62 106205

Esimerkki 124: 3- ( 2-aminoetyyli) -1- (2,5-dime tyyli ben t-syyli)-5-metyyli-indoli

Kaava (II) : R3 = 5-CH3, n = 1, R2 = 5 2,5-dimetyylifenyyli, R3 =

R4 = H

Hydrokloridi puhdistettiin kiteyttämällä eetteristä. Sulamispiste: 198°C.

10

Esimerkki 125: 3-(2-aminoetyyli)-l-(2,5—dimetyylibent-syyli)-5-metoksi-indoli

Kaava (II): Rx = 5-OCH3, n = l, R2 = 15 2,5-dimetyylifenyyli, R3 =

R4 = H

Amorfinen valkoinen kiinteä aine, joka puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 20 95 % / metanoli 5 %).

Esimerkki 126: 3-(2-aminoetyyli)-1-(2,5-dimetyylibent-, syyli)-2—metyyli-indoli 25 Kaava (II): Rx = 2-CH3, n = 1, R2 = • · 2,5-dimetyylif enyyli, R3 =

R4 = H

·»·· » · ·

Hydrokloridi puhdistettiin kiteyttämällä eetteristä.

30 Sulamispiste: 250°C.

• · · • · · · • · · 5.; · Esimerkki 127: 3-(2-aminoetyyli) -1-(4-metoksibentsyyli)- indoli # 35 Kaava (II): Rx = H, n = 1, R2 = 4-OCH3~

fenyyli, R3 = R4 = H

63 106205

Ruskea öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silika-geelissä (eluentti: kloroformi 95 % / isopropyyliamiini 5 %) .

5 Esimerkki 128: 3-(2-aminoetyyli)-l-syklopentyyli-2- metyyli-indoli

Kaava (II): = 2-CH3, n = 0, R2 =

syklopentyyli, R3 = R4 = H

10

Raaka oranssinvärinen öljy, jota käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa.

Esimerkki 129: 3-(2-aminoetyyli)-2—fenyyli—indoli 15

Kaava (V): R^ = 2-fenyyli, R3 = R4 = H

Hydrokloridi puhdistettiin kiteyttämällä isopropanolis-ta. Sulamispiste: 266°C.

20

Esimerkki 130: 3-( 2-aminoetyyli)-1-(2,5-dimetyylibent-syyli)-2-fenyyli-indoli

Kaava (II): R3 = 2-fenyyli, n = 1, R2 = 25 2,5—dimetyylifenyyli, R3 =

:*.·! R4 = H

• · • · · ”” Ruskea öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silika- geelissä (eluentti: kloroformi 95 % / isopropyyliamiini 30 5 %) .

» · · « · · · • · · : Esimerkki 131: 3-(2-aminoetyyli)-1-(2-N,N-dimetyyliami- nobentsyyli) indoli < t 35 Kaava (II): R3 = H, n = 1, R2 = 2-N,N- dimetyy liaminof enyyli, R3 =

R4 = H

64 106205

Ruskea öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silika-geelissä (eluentti: kloroformi 95 % / isopropyyliamiini 5 %) .

5 Esimerkki 132: 3- (2-aminoetyyli) -l-(3-nitrobentsyyli) - indoli

Kaava (II): R-j_ = H, n = 1, R2 = 3-N02-

fenyyli, R3 = R4 = H

10

Ruskea öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silika-geelissä (eluentti: kloroformi 95 % / isopropyyliamiini 5 %) .

15 Esimerkki 133: 3-(2-aminopropyyli)-1-(2,5-dimetyyli- bentsyyli)indoli

Kaava (II): R4 = H, n = 1, R2 = 2,5- dimetyylifenyyli, R3 = H, 20 R4 = CH3

Valkoinen kiinteä aine, joka kiteytettiin isopropyyli-eetteristä. Sulamispiste: 87°C.

25 Esimerkki 134: 3-(2-aminopropyyli)-1-syklopentyyli- • « indoli « « • « * · · .···. Kaava (II): R]_ = H, n = 0, R2 = syklo- • · · pentyyli, R3 = H, R4 = CH3 30 • · · ·;;; Raaka oranssinvärinen öljy, jota käytettiin sellaise- • · « *·* * naan seuraavassa vaiheessa.

Esimerkki 135: 3-(aminopropan-2-yyli)-1-(2,5-dimetyyli-35 bentsyyli)indoli • · · 65 106205

Kaava (II): Rx = H, n = 1, R2 = 2,5- dimetyylifenyyli, R3 = CH3,

R4 = H

5 Öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 95 % / isopropyyliamiini 5 %) .

Hydrokloridi kiteytettiin isopropanolista. Empiirinen kaava: C20H2i,Nz «HCl. Sulamispiste: 178°C.

10 Esimerkki 136: 3-(aminoetyyli)-l-[5-klooritien-2-yyli)- metyyli]indoli

Kaava (II): R]_ = H, n = 1, R2 = 5-kloori-tien-2-yyli, R3 = R4 = H 15

Ruskea öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silikageelissä (eluentti: kloroformi 95 %/isopropanoli 5 %).

Esimerkki 137: 3- (aminoetyyli) -1- (syklopropyylimetyyli) -20 indoli

Kaava (II): R^ = H, n = 1, R2 = syklo-propyyli, R3 = R4 = H

25 Ruskea öljy, joka puhdistettiin kromatograf iällä silika- • · ' geelissä (eluentti: kloroformi 95 %/isopropanoli 5 %) .

• « • · • · ♦ *!” Esimerkki 138: 3- (2-aminoetyyli) -l-(2,5-dimetyylibent- « * · *** ’ syyli)-5-tiometyyli-indoli 30 ..ΙΓ Kaava (II): Ri = 5~SCH3, n = 1, R2 = m· : 2,5-dimetyylif enyyli, R3 =

.·*.·. R4 = H

35 Ruskea öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silika-geelissä (eluentti: kloroformi 95 % /isopropyyliamiini 5 %) .

66 106205

Esimerkkien 139—143 nitrovinyyli-indolit valmistettiin esimerkin 17 mukaisella menetelmällä:

Esimerkki 139: 1-(2,5—dimetyylibentsyyli)—2—metyyli-5 3-(2-nitrovinyyli)indoli

Kaava (IX): Ri = 2-CH3, n = 1, R2 = 2,5-dimetyylifenyyli, R3 = R4 = H

10 Oranssinvärinen kiinteä aine, jota käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa. Sulamispiste: 180°C.

Esimerkki 140: 1-(syklopentyyli)-2-metyyli-3-(2-nitrovinyyli) indoli 15

Kaava (IX): R^ = 2-CH3, n = 0, R2 =

syklopentyyli, R3 = R4 = H

Oranssinvärinen öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä 20 silikageelissä (eluentti: kloroformi).

Esimerkki 141: 2-fenyyli-3-(2-nitrovinyyli)indoli

Kaava (IX): R^ = 2-fenyyli, n = 0, R2 = 25 H, R3 = R4 = H

• · · • * • ·

Oranssinvärinen kiinteä aine, jota käytettiin sellaise-.··*. naan seuraavassa vaiheessa. Sulamispiste: 180°C.

» i » , 30 Esimerkkien 142 ja 143 yhdisteet saadaan esimerkin 17 « · · •••j mukaisella menetelmällä käyttäen nitrometaanin asemes- • · · ’·* * ta nitroetaania:

Esimerkki 142: l-(2/5-dimetyylibentsyyli) -3-(2-metyyli-35 2-nitrovinyyli)indoli

Kaava (IX): R^ = H, n = 1, R2 = 2,5- 67 106205 dimetyylifenyyli, R3 = H, R4 = CH3

Keltainen kiinteä aine, joka kiteytettiin vedestä.

5 Sulamispiste: 160°C.

Esimerkki 143: l-syklopentyyli-3-(2-metyyli-2-nitro-vinyyli)indoli 10 Kaava (XX): R^ - H, n = 0, R2 = syklo- pentyyli, R3 = H, R4 = CH3

Keltainen kiinteä aine, joka kiteytettiin isopropa-nolista. Sulamispiste: 135°C.

15

Seuraavat esimerkkien 144 ja 146 tuotteet valmistettiin esimerkin 5 mukaisella menetelmällä käyttäen lähtöaineina sopivasti substituoituja 3-formyyli-indoleja: 20 Esimerkki 144: 1-(2,5-dimetyylibentsyyli)-3-formyyli- 2-metyy1i-indo1i

Kaava (VIII): Rx - 2-CH3, n = 1, R2 = 2,5-dimetyylifenyyli 25 • · -

Keltainen kiinteä aine, joka kiteytettiin eetteristä ♦ · .j. ja jota käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa.

*111 Sulamispiste: 155°C.

« · · • · o 30 Esimerkki 145: 1-(syklopentyyli)-3-formyyli-2-metyyli- • · · ··.: indoli • · · • · · • · · .*!*« Kaava (VIII): Rx = 2-CH3, n = 0, R2 = « « ,<··, syklopentyyli

Ruskea öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silika-geelissä (eluentti: kloroformi 95 % / metanoli 5 %) .

\ 35 68 106205

Esimerkki 146: 3-formyyli-2-fenyyli-indoli

Kaava (VIII): = 2-fenyyli, n = O, R2 = H 5

Kermanvärinen kiinteä aine, jota käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa ja joka saatiin julkaisussa J. Med. Chem. (1964), 7, 735 kuvatulla menetelmällä.

Sulamispiste: 253°C.

10

Seuraava esimerkin 147 yhdiste valmistettiin esimerkin 1 mukaisella menetelmällä käyttäen 2-metoksietyyli-amiinia: 15

Esimerkki 147: B-D-ribofuranuronamido-l-(6-kloori-9H-purin-9-yyli) -1-deoksi-N- (2-metoksi-etyyli)-2,3-0-(1-metyylietylideeni)

O

20 Kaava (III): X = Cl, R12 = C—NH—CHa—CH,—OCH3 , \ /CH> r13'r14 - t/ / ch3 . Ruskea öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä silika- i 25 geelissä (eluentti: kloroformi 95 % / metanoli 5 %) .

• · • · · * · · » · • ·

Esimerkin 148 yhdiste valmistettiin amorfisen kiinteän * · » · aineen muotoon esimerkin 46 mukaisella menetelmällä * · » käyttäen esimerkin 2 mukaista uronamidia: 30 • · · *··· Esimerkki 148: β-D-ribofuranuronamido-l-deoksi-l-Γ6-

M* L

’·* ' [ [ 2-[ 1- (2,5-dimetyylibentsyyli) indol- :Y; 3-yyli] etyyli] amino ]-9H-purin-9-yyli]- f « ;' ’'; -N-etyyli-2,3-0-(1-metyylietylideeni) 35 « « • « « *·'·' Kaava (IV): R1 = H, n = 1, R2 = 2,5-di- ♦ « · · · metyylifenyyli, R3 = R4 = H, 69 106205

O

II

r12 = C—NH—CH|—CH3 , \ /CH> R13'R14 - /C\ 5 / CH3

Esimerkin 149 yhdiste valmistettiin esimerkin 61 mukaisella menetelmällä: 10 Esimerkki 149: B-D-ribofruranuronamido-l-deoksi-l-[6- [[2-[l-(2,5-dimetyylibentsyyli)indol- 3-yyli] etyyli] amino] -9H-purin-9-yyli]-N-etyyli 15 Kaava (I): R^ = H, n = 1, R2 = 2,5- dimetyylifenyyli, R3 = R4 = H, R5 = -NH-CH2-CH3

Empiirinen kaava: C31 H35N704·0,4H20. Sulamispiste: 133°C.

20

FARMAKOLOGIA

Esimerkkien tuotteitten farmakologista aktiivisuutta arvioitiin kahdella eri lähestymistavalla: sitoutuminen , 25 adenosiinireseptoreihin ja/tai kipua lievittävän ak- • · - tiivisuuden osoitus fenyylibentsokinonitestillä.

• * » · * • * * 'I" I Menetelmä I f 1 I I f * 30 1. Sitoutuminen adenosiinireseptoreihin e « · · 1«·· » · » V ; Periaate < 1 < Λ t C * « ·.

(···, Esimerkkien tuotteitten afiniteetti rotan keskeisten 1 « 35 A1 - ja A2-adenosinergisiin reseptoreihin määritetään V.' kilpailevalla tekniikalla käyttäen radioaktiivista ligandia, joka sitoutuu spesifisesti joko A1-reseptoreihin ([3H] PIA) tai A2-reseptoreihin ([3H] NECA).

70 106205

Menetelmä - Menetelmä A1 -reseptorien tutkimiseksi 5 - Membraanin valmistus

Kun eläin on tapettu katkaisemalla pää, aivot poistetaan nopeasti ja pestään kylmässä isotoonisessa liuoksessa. Molemmat puoliskot erotetaan toisistaan ja 10 punnitaan, ja molemmat sijoitetaan polyallomeeriputkeen, joka sisältää 25 tilavuutta kylmää homogenointipuskuria. Homogenointi suoritetaan käyttämällä Ultra-Turrax -laitetta 30 sekunnin ajan (3 kertaa 10 sekuntia 10 sekunnin välein, 70% maksiminopeudesta). Saatu hienonnettu mate-15 riaali sentrifugoidaan arvossa 1000 g (= 3000 rpm) 10 min. ajan 4°C:ssa.

Supernatantti sentrifugoidaan jälleen arvossa 48000 g (= n. 20000 rpm) 20 min. ajan 4°C:ssa.

20

Kun tämä vaihe on saatettu loppuun, jäännös otetaan talteen neljällä tilavuudella homogenointipuskuria, se suspendoidaan uudelleen käyttämällä Vortex-laitetta ja homogenisoidaan Ultra-Turrax -laitteella. Tämän jälkeen , 25 lisätään adenosiinideaminaasia nopeudella 1 U/ml eli 1 # · - μΐ/ml homogenaattia käyttämällä 10 μΐ Hamilton-ruiskua.

« · » m < 1*1 t Ί" Tämän käsittelyn jälkeen homogenaattia ravistetaan 30 • « min. ajan huoneenlämpötilassa ja sitten sentrifugoidaan 30 arvossa 80000 g (= n. 20000 rpm) 30 min. ajan 4°C:ssa.

·* 4 * * »·« • A · V · Saatu jäännös suspendoidaan uudelleen 10 tilavuuteen homogenointipuskuria ja johdetaan Ultra-Turrax -laitteen /·, läpi 20 sekunnin ajan (2 kertaa 10 sekuntia 10 sekunnin a ( 35 välein, 70% maksiminopeudesta).

«li t Tällä tavalla valmistettu homogenaatti käytetään kilpaileviin testeihin. Se säilytetään 4°C:ssa, jos tutkimukset 71 106205 suoritetaan samana päivänä, tai se varastoidaan -20°C:ssa 10 ml määrissä.

- Kilpaileva testi 5

Sen jälkeen kun homogenaatti on sulatettu huoneenlämpö-tilassa, se johdetaan Potter-myllyn läpi (6 manuaalista edestakaista liikettä, nopeus 6), laimennetaan suhteessa 2/5 inkubointipuskuriin ja sijoitetaan vesihauteeseen, 10 jonka lämpötila on säädetty termostaatilla 4°C:een, ja sitä ravistellaan kokeen loppuun asti.

50 μΐ ainetta [3H] PIA 100 nM:ssa eli 2,5 nM lopullisessa reaktioväliaineessa aiheuttaen 1/40 laimennuksen ja 50 15 μΐ esimerkin tuotetta asianomaisissa väkevyyksissä (10'5 M ja 10'7 M) lisätään reaktioputkiin. Reaktio aloitetaan lisäämällä 1 ml homogenaattia ja 900 μΐ inkubointipuskuria# Menetelmä on identtinen kaikille tutkituille beetasalpaajille.

20

Putkea ravistellaan ja inkuboidaan vesihauteessa 20°C:ssa 30 min. ajan. Kun inkubointi on päätöksessään, putkien /.· sisällöt suodatetaan Whatman GF/B -paperilla. Kukin putki x ,·., pestään kaksi kertaa 2 ml: 11a huuhtelupuskuria ja tämän

f I

25 jälkeen itse suodattimet huuhdellaan 3 ml: 11a samaa » ’ i. - ,! puskuria.

4 · · V · • f « «·· »'·’ Suodattimet siirretään tämän jälkeen laskuripulloihin »« λ i.* * ja 10 ml nestemäistä tuikeainetta (Ready Solv HP/b, 30 Beckman) lisätään.

IIX

«

Mf» iT: Ravistelun jälkeen pullot varastoidaan jääkaapissa yli Λ yön ja radioaktiivisuus määritetään tämän jälkeen i i < nestetuikelaskurissa.

i i ‘•J·’ 35 *·,!t! Kullekin tutkitulle väkevyydelle suoritettiin 3 koetta.

Aineen [3H] PIA ei-spesifinen sitoutuminen määritetään mittaamalla 10'5 M fenyyli-isopropyyliadenosiinin (PIA) i 72 106205 läsnäollessa suodattimessa pysyneen radioaktiivisuuden määrä. Ei-spesifisen sitoutumisen arvo vähennetään systemaattisesti kokeiden arvoista.

5 - Menetelmä A2 -reseptorien tutkimiseksi - Membraanin valmistus

Eläimen pään katkaisun jälkeen aivot poistetaan nopeasti 10 ja pestään kylmässä isotoonisessa liuoksessa. Molemmat puoliskot erotetaan toisistaan ja aivojuovio poistetaan niistä kummastakin (Bruns et ai., 1986), punnitaan ja sijoitetaan polyallomeeriputkeen, joka sisältää 10 tilavuutta kylmää homogenointipuskuria. Kudosta homoge-15 noidaan Ultra-Turrax -laitteella 30 sekunnin ajan (3 kertaa 10 sekuntia 10 sekunnin välein, 70% maksiminopeudesta) . Jauhettu materiaali sentrifugoidaan arvossa 50000 g (= n. 20500 rpm) 10 min. ajan 4°C:ssa.

20 Saatu jäännös suspendoidaan uudelleen 10 tilavuuteen homogenointipuskuria käyttämällä Vortex-laitetta, ja se homogenoidaan Ultra-Turrax -laitteella (5-10 sekuntia, 70% maksiminopeudesta).

25 Tämän jälkeen lisätään adenosiinideaminaasia nopeudel- ·. 1i la 1 U/ml eli 1 μΐ/ml homogenaattia käyttämällä 10 μΐ • · · • V Hamilton-ruiskua. Tällä tavoin käsiteltyä homogenaattia « ravistellaan huoneenlämpötilassa 30 min. ajan.

• « · • · · « 30 Kun inkubointi on täydellinen, homogenaatti sentrifugoi- daan arvossa 50000 g (= n. 20500 rpm) 10 min. 4°C:ssa.

φ·;·# Jäännös otetaan talteen 5 tilavuudella kylmää homoge- • · < nointipuskuria ja johdetaan Ultra-Turrax -laitteen läpi • « (2 kertaa 10 sekuntia 10 sekunnin välein, 70% maksimi-35 nopeudesta) ja tällä tavoin valmistettu homogenaatti jäädytetään lopuksi -70°C:ssa.

• · · • « · < · « • · 73 106205 - Kilpaileva testi

Sen jälkeen kun homogenaatti on sulatettu huoneenlämpötilassa, lisätään 15 tilavuutta inkubointipuskuria. 5 Homogenaattia ravistellaan Vortex-laitteella, johdetaan Potter-myllyn läpi (6 edestakaista liikettä, nopeus 6) , laimennetaan suhteessa 1/10 laimennuspuskuriin ja lopulta se sijoitetaan vesihauteeseen, jonka lämpötila on säädetty termostaatilla 4°C:ksi ja sitä ravistellaan 10 kokeen loppuun asti.

50 μΐ ainetta [3H] NECA väkevyydessä 160 nM eli 4 nM lopullisessa reaktioväliaineessa mahdollistaen laimennuksen 1/40, ja 50 μΐ esimerkin tuotetta asianomaisissa 15 väkevyyksissä (10'5 M ja 10'7 M) johdetaan reaktioput-kiin. Reaktio aloitetaan lisäämällä 1 ml homogenaattia ja 900 μΐ inkubointipuskuria. Menettely on samanlainen kaikille tutkituille yhdisteille.

20 Putkia ravistellaan ja inkuboidaan vesihauteessa 25eC:ssa 60 min. ajan. Inkuboinnin päätyttyä putkien sisällöt suodatetaan Whatman GF/B -paperilla. Kukin putki pestään kahdesti 2 ml:ssa huuhtelupuskuria, minkä jälkeen itse suodattimet huuhdellaan 3 ml:11a tätä samaa puskuria 25 ennen siirtoa laskuripulloihin.

• · · -• · · • · • · « • 10 ml nestemäistä tuikeainetta (Ready Solv HP/b, Beckman) ·:* lisätään kaikkiin pulloihin. Näitä ravistellaan ja varas- ·*♦*: toidaan jääkaapissa yli yön. Radioaktiivisuus määritetään * 30 nestetuikelaskurilla.

»·*

Kullekin tutkitulle väkevyydelle suoritetaan kolme • « e koetta. Aineen [3H] NECA ei-spesifi sitoutuminen määri-•.v tetään mittaamalla 5 μΚ N-etyylikarboksamidoadenosiinin • 4 · 35 (NECA) läsnäollessa suodattimessa säilyneen radioak-tiivisuuden määrä. Ei-spesifin sitoutumisen arvo vähen- • · · netään systemaattisesti kokeiden arvoista.

74 106205 - Tietojen käsittely

Tulokset on ilmaistu kullekin tuotteelle leimatun radioligandin prosentuaalisina korvautumisina (n = 3) 5 väkevyyksillä 10'5 M ja 10"7 M.

2. Fenyylibentsokinonitesti

Menetelmä 10

Fenyylibentsokinonin vatsakalvonsisäinen ruiskutus aiheuttaa hiirissä vääntely- ja ojenteluliikkeitä. Kipua lievittävät aineet estävät tai vähentävät tätä oiretta, jota voidaan pitää diffuusin vatsakivun ilmentymänä.

15 0,02% fenyylibentsokinoniliuosta vedessä annetaan määrä I ml/100 g. Esimerkkien tuotteet annetaan suun kautta tunti ennen fenyylibentsokinonin ruiskutusta. Kunkin hiiren ojentelu-ja vääntelyliikkeet lasketaan 5 min.

20 pitkän havaintojakson aikana.

II Tulokset

Kokeiden tulokset osoittavat esimerkkien tuotteiden af-25 finiteetin adenosiinireseptoreihin, ja niiden kipua lie- ·.*·· vittävät ominaisuudet on esitetty taulukoissa 1 ja 2.

«· · • · · « · • · ♦ » · · ♦ ·· » · · • · · • · · ···· ♦ · · • · · * t « < « « * « « « « • « « · « • a

Taulukko 1 75 106205

Tuote peräisin Leimatun ligandin korvautumis-% AI A2

1E-5M 1E-7M 1E-5M 1E-7M

Esimerkki 61 98 47 91 30

Esimerkki 63 98 61 90 19

Esimerkki 64 96 21 90 28

Esimerkki 65 87 4 91 14

Esimerkki 66 97 37 89 21

Esimerkki 67 96 29 83 13

Esimerkki 68 93 26 84 9

Esimerkki 69 93 63 90 12

Esimerkki 70 100 91 94 44

Esimerkki 71 99 91 96 44 (sitraatti)

Esimerkki 71 99 94 92 46 (emäs)

Esimerkki 85 100 50 71 3

Esimerkki 86 100 16 91 17

Esimerkki 87 56 5 60 7

Esimerkki 92 96 21 84 9

Esimerkki 93 96 45 85 22

Taulukko 2

Tuote peräisin Fenyylibentsokinonitesti 50%:n inhibition annos mg/kg p.o.

Esimerkki 61 0.90

Esimerkki 63 10 ··/ Esimerkki 64 0.3 : .* Esimerkki 65 0.3

Esimerkki 66 3

Esimerkki 67 3 : Esimerkki 68 2.4

Esimerkki 71 7.3 (sitraatti) ··· Esimerkki 85 0.9 *”! Esimerkki 86 « 60 V * Esimerkki 87 1.2

Esimerkki 92 3.6 :Y: Esimerkki 93 2 « « • · « • · • · · · · 76 106205 III Toksikologia

Esimerkkien tuotteiden sietäminen testattiin rotilla suun kautta tapahtuneen annon jälkeen. Sen havaittiin 5 olevan hyvä annokseen 100 mg/kg asti.

IV Johtopäätös Tässä keksinnössä kuvattujen esimerkkien tuotteilla on 10 erityisen arvokkaita kipua lievittäviä ominaisuuksia, joiden alkuperäinen toimintamekanismi on tulosta vuorovaikutuksesta adenosiinireseptoreiden kanssa.

« < « · · -* · · ♦ · «« · ♦ · · « · • · « · · *·♦· *#· • · · * 1 · * ·· 1 «··· ♦ ♦ · « ♦ · « « * « « • · · · · • 1

Claims (9)

106205

1. Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten adenosiini-johdanaisten valmistamiseksi, joilla on yleis-5 kaava (I): B, B. * JL NH 6^/S^2 I f ')

10. I 'T R'^°n OH OH

15 Kaava {I) jossa: - R7 on vetyatomi, halogeeniatomi, alempi alkyyli-radikaali, alempi O-alkyyliradikaali, alempi S-alkyyliradikaali tai fenyyliradikaali,ja se voi 20 olla indolin 2-, 4-, 5-, 6- tai 7-asemassa; - n on välillä 0-4 oleva kokonaisluku; - R2 on alempi alkyyliradikaali, alempi alkenyyli-radikaali, alempi alkynyyliradikaali, Cj-C^-syklo- ·.·: alkyyliradikaali tai alempi O-alkyyliradikaali; « I :. 25 - fenyyli- tai naftyyliradikaali, joka on substituoi- maton tai substituoitu yhdestä neljään identtisellä tai erilaisella substituent il la, jotka on valittu • « •i. seuraavasta joukosta: halogeeniatomi, nitro-, »«·» alempi alkyyli-, alempi 0-alkyyli- tai alempi S-al- • · · 30 kyyliryhmä ja ryhmä -NR7Rg, jolloin R7 ja R8 ovat vetyatomi tai alempi alkyyliradikaali; - heterosyklinen radikaali, joka on pyridiini tai • « *··/* tiofeeni, joka on substituoimaton tai substituoitu :***: yhdestä neljään identtisellä tai erilaisella •‘"j 35 substituentilla, jotka on valittu seuraavasta jou- • Il kosta: halogeeniatomi, nitro-, alempi alkyyli-, • tl ·,, alempi 0-alkyyli- tai alempi S-alkyyliryhmä; « < ♦ 4 • 4 4 106205 - tai muussa tapauksessa, kun n on yhtä kuin 2, 3 tai 4, ryhmä -NR9R10, jolloin R9 ja R10 ovat samanaikaisesti alempi alkyyliradikaali tai muodostavat yhdessä sen typpiatomin kanssa, johon ne ovat kiin- 5 nittyneinä, heterosyklisen ryhmän, joka on valittu morfoliinin, piperidiinin ja pyrrolidiinin joukosta; - R3 ja R4, jotka ovat identtisiä tai erilaisia, ovat vetyatomi tai alempi alkyyliradikaali; ja

10. Rs on ryhmä -NHRn, jolloin Ru on alempi alkyyli radikaali, C3-C7-sykloalkyyliradikaali, alempi alkyyliketju, jossa on alkoholin tai eetterin muodostava funktionaalinen ryhmä, tai muussa tapauksessa ryhmä - (CH2)n-NR9R10, jossa n, R9 ja R10 ovat ku- 15 ten edellä on määritelty. tunnettu siitä, että se käsittää amiinin, jolla on kaava:

20 Cxj t. . . (CH,)n • · · I J Rj ; : 25 % I J • < f I I l « 1 I ** jossa R3, R2, R3, R4 ja n ovat kuten edellä on määri- i«« ···! telty, reaktion 6-halogeenipuriiniribosidien kanssa, V : joilla on kaava; X

30 JL m !-! i 1 > o VS :·!·. V R„o or„ ·*’; jossa x on halogeeniatomi, R12 on ryhmä COR5, jossa R5 ti· on kuten edellä on määritelty, tai CH2OH-ryhmä, ja Rl3 106205 ja R14 ovat suojausryhmiä, kuten esimerkiksi asetyyli, bentsoyyli tai bentsyyli, tai ne voivat yhdessä muodostaa muun suojausryhmän, esimerkiksi dioksolaani-rakenteisen ryhmän, reaktion tapahtuessa liuotti-5 messa, kuten esimerkiksi alkoholissa tai dimetyyli-formamidissa, emäksen kuten trietyyliamiini, pyri-diini tai natrium-, kalium- tai kalsiumkarbonaatti läsnäollessa, tai muussa tapauksessa mainitun amiinin kahden ekvivalentin läsnäollessa, välillä 20° ja 140° 10 olevassa lämpötilassa, minkä jälkeen alkoholien suojan poisto voidaan suorittaa eri alan ammattimiehen tuntemin menetelmin, esimerkiksi emäksisessä väliaineessa kuten ammoniakkia sisältävässä alkoholi-liuoksessa, tai happamassa väliaineessa kuten normaa-15 lisessa kloorivetyhappoliuoksessa tai muurahaishappo-liuoksessa, lämpötiloissa, jotka ovat välillä 0° - 170°, riippuen suojausryhmien luonteesta.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu 20 siitä, että - R1 on vetyatomi, halogeeniatomi, alempi alkyyli- radikaali, alempi O-alkyyliradikaali, alempi S- alkyyliradikaali tai fenyyliradikaali, ja voi si- ,·, ; jäitä indolin 2- tai 5-asemassa; * · · .* ! 25 - n on kokonaisluku 0, 1 tai 2; • « I ; - R2 on alempi alkyyliradikaali, alempi alkenyyli- a « < '· radikaali, alempi alkynyyliradikaali, C3-C7-syklo- : alkyyliradikaali tai alempi O-alkyyliradikaali; - fenyyli- tai naftyyliradikaali, joka on substituoi- V; 30 maton tai substituoitu yhdellä tai kahdella ident tisellä tai erilaisella substituentilla, jotka on :***: valittu seuraavasta joukosta: halogeeniatomi, ··» .***. nitro-, alempi alkyyli- tai alempi 0-alkyyliryhmä ja ryhmä -NR7R8, jolloin R7 ja R8 ovat vetyatomi tai : ·' 35 alempi alkyyliradikaali; - heterosyklinen radikaali, joka on pyridiini tai ;*·*; tiofeeni, joka on substituoimaton tai substituoitu .·*·. halogeeniatomilla, • · • · · 106205 - tai muussa tapauksessa, kun n = 2, ryhmä -NR9R10 jolloin R9 ja R10 ovat samanaikaisesti alempi alkyyliradikaali tai muodostavat yhdessä sen typpi-atomin kanssa, johon ne ovat kiinnittyneet, hete- 5 rosyklisen ryhmän, joka on valittu morfoliinin, piperidiinin ja pyrrolidiinin joukosta; - R3 ja R4, jotka ovat identtisiä tai erilaisia, ovat vetyatomi tai alempi alkyyliradikaali; ja - R5 on ryhmä -NHRU, jolloin Ru on alempi alkyyli- 10 radikaali, C3-C7-sykloalkyyliradikaali, alempi alkyyliketju, jossa on alkoholin tai etterin muodostava funktionaalinen ryhmä.

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, 15 tunnettu siitä, että Rx on vetyatomi tai radikaali, joka on valittu metyylin tai metoksin joukosta.

4. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että n on luku 0, 1 tai 2. 20

5. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R2 on radikaali, joka on valittu metoksin, syklopentaanin, isopropyylin, 2,5- . ; dimetyylifenyylin ja piperidiinin joukosta. y·· 25

6. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, · t tunnettu siitä, että R on vetyatomi. • · · • · • ·

7. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, 30 tunnettu siitä, että R4 on vetyatomi tai metyyli- radikaali .

• · · • · • · • · · ,···, 8. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, • · tunnettu siitä, että R5 on N-syklopropyyliamiini- « * « : ·' 35 radikaali. • · • · « • · « « « f * » • · β1 106205

9. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan (I) yhdiste on valittu seuraavien johdannaisten joukosta: ^ X J N^V\ l Ϊ ) ch30 J ^ ^ X>-N /? yf OH OH Li J n-Aj-\ L £ > ό J Vf OH OH «4 V·; ^ lv , [ Π n-X-n -;i· L X > ^ D>-hV°o H / \ • · *·:·* OH OH « · 4 * · 4 4 4» 106205 CT/Αλ ch-a^Y rv_^No f YT ^hY>n y OH OH kAJ /r\ ^Y Li) Y i\ N"n-O f ΥγΑ rY p OH OH 4 4 « ;"v XJCj rYr\ ··· I y ···· A·. YY >in&n o ^^CH· \J • a a :...: OH OH • · « « a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a a 83 106205 XCj ΧγΛ i £ y CHrON ° Ϊ T I ^^CH, |γ_|/ OH OH CXI rlr\ X CHC II / CH,^ J ^ TX ^^εΗ· X OH OH • « • 1 I t * « C t ( « 1 I < t I 1 • · · · · • · .·:1. I I ch5I,X\^n *·1 · ^ N rr \ I k XJ CH3. J ^ NX N K YT Xx .:" tj !·1·. OH OH • « • · · • « « • « « « · · · • · • 1 · I | \ 106205 ό J w OH OH 10 15 < » < I I < I I I «tr • « r • t • « • a ( • II • · • * · • · · * » • · • · · • Mtl Ml • · · III • « · • t • · ·« · • · · • • · • t » r » i ς ( « < * < : t 0 c t < % f ( t t < < r i I I I Patentkrav: 106205