ES2913470T3 - Métodos de tratamiento de cáncer de mama AR+ - Google Patents

Abstract

Un compuesto que es RAD140 (Compuesto III): **(Ver fórmula)** una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un método para tratar el cáncer de mama AR+/ER+.

Description

DESCRIPCIÓN

Métodos de tratamiento de cáncer de mama AR+

ANTECEDENTES

La US2014/350102, Coss et al., Steroids 2014, 90(16), p.94-100, y la US2016/128988 se refieren al uso de ciertos moduladores selectivos de los receptores de andrógenos en el tratamiento de ciertos cánceres de mama.

Miller et al, ACS Medicinal Chemistry Letters 2010, 2(2) p.124-129, se refiere al "Diseño, síntesis y caracterización preclínica del modulador selectivo del receptor de andrógenos (SARM) RAD140".

La relación entre los andrógenos y el cáncer de mama se reconoce desde hace algún tiempo. En el pasado, la terapia con andrógenos se ha usado para tratar el cáncer de mama en mujeres con resultados mixtos. Como el cáncer de mama evoluciona rápidamente para desarrollar resistencia a los tratamientos hormonales antiestrógenos, hay una necesidad urgente de desarrollar un nuevo tratamiento para el cáncer de mama.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La invención proporciona un compuesto que es RAD140 (Compuesto III):

una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un método para tratar el cáncer de mama AR+/ER+.

El compuesto III es un modulador selectivo del receptor de andrógenos (SARM). En algunas realizaciones, los cánceres de mama son positivos tanto para el receptor de andrógenos como para el receptor de estrógeno (AR+/ER+). En ciertas realizaciones, los cánceres de mama son positivos para AR, ER y el receptor de progesterona (AR+/ER+/PR+). En ciertas realizaciones, los cánceres de mama que expresan AR no dan positivo para Her2 (Her2-). En ciertas realizaciones, los cánceres de mama comprenden una o más mutaciones en el ER como se divulga en la presente. En ciertas realizaciones, la una o más mutaciones del ER afectan a la capacidad del dominio de unión al ligando del ER para unirse a ligandos que tienen afinidad por el ER no mutado (ER de tipo salvaje). En ciertas realizaciones, los cánceres de mama inicialmente positivos para ER pueden perder la expresión tumoral de ER. En ciertas realizaciones, el sujeto es una mujer premenopáusica o posmenopáusica. En ciertas realizaciones, el SARM usado para tratar el cáncer de mama se usa en combinación con un inhibidor de ciclina celular y, en algunas realizaciones, el inhibidor de ciclina celular es un inhibidor de CDK4 y/o CDK6 (inhibidor de CDK4/6). En ciertas realizaciones, el SARM se usa en combinación con un inhibidor de mTOR. En ciertas realizaciones, el inhibidor de mTOR es un inhibidor de mTOR2 y/o mTOR3. En algunos casos, el SARM se administra por vía oral. En algunas realizaciones, el inhibidor de ciclina celular y/o inhibidor de mTOR se administra por vía oral. En ciertas realizaciones, el SARM y el inhibidor de mTOR o el SARM y el inhibidor de CDK4/6 se combinan en un kit. En algunas realizaciones, el SARM y el inhibidor de mTOR o el SARM y el inhibidor de CDK4/6 se formulan conjuntamente.

En algunas realizaciones, el inhibidor de ciclina celular es un inhibidor de CDK4/CDK6 seleccionado del grupo que consiste de palbociclib, ribociclib, trilaciclib y abemaciclib. En ciertas realizaciones, el inhibidor de CDK4/CDK6 es un compuesto que inhibe tanto CDK4 como CDK6 con una IC50<250 nM o <100 nM o <50 nM. En ciertas realizaciones, el inhibidor de mTOR (TORC1 y/o TORC2) se selecciona del grupo que consiste de sirolimus, temsirolimus, everolimus, ridafarolimus y MLN0128. En ciertas realizaciones, se divulga que la invención usa una combinación del SARM junto con un inhibidor de PARP y, en algunas realizaciones, el inhibidor de PARP es talazoparib, veliparib, niraparib, beigene290, E7449, KX01, ABT767, CK102, JPI289, KX02, IMP4297, SC10914, NT125, PJ34, VPI289, ANG-3186. En ciertas realizaciones, se describe que la invención usa una combinación del SARM junto con un inhibidor de BCL2 y, en algunas realizaciones, el inhibidor de BCL-2 es venetoclax, navitoclax, ABT737, G3139 o S55746. En ciertas realizaciones, se describe que la invención usa una combinación de SARM junto con un inhibidor de MCL1 y, en algunas realizaciones, el inhibidor de MCL-1 es ácido 7-(5-((4-(4-(N,N-dimetilsulfamoil)piperazin-1 -il)fenoxi)metil)-1,3-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-1 -(2-morfolinoetil)-3-(3-(naftalen-1 -iloxi)propil)-1H-indol-2-carboxílico, S63845, omacataxina, seliciclib, UMI-77, AT101, sabutoclax, ^{t W - 3 7 .} En realizaciones particulares, la invención usa una combinación de un SARM junto con un inhibidor de PI3K.

En algunas realizaciones, el cáncer de mama no tiene tratamiento previo. En algunas realizaciones, el cáncer de mama aún no ha sido tratado con ninguna terapia endocrinológica. En ciertas realizaciones, el cáncer de mama es resistente a por lo menos una terapia previa. En algunas realizaciones, el tratamiento previo para el que se ha desarrollado resistencia es una terapia antiestrógenos, por ejemplo, por lo menos uno de un inhibidor de la aromatasa, un modulador selectivo del receptor de estrógeno (SERM) o un degradador selectivo del receptor de estrógeno (SERD). En ciertas realizaciones, el sujeto (por ejemplo, mujer) es posmenopáusica y ha progresado con la terapia endocrina previa que incluye, sin limitación, SERD (por ejemplo, fulvestrant, RAD1901, AZD9496); SERM (por ejemplo, tamoxifeno, toremifeno), inhibidores de la aromatasa y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, el sujeto (por ejemplo mujer) tiene cáncer de mama metastásico pero aún no ha sido tratada. En algunas realizaciones, el sujeto (por ejemplo, mujer) tiene mama metastásica y ha progresado después de una terapia endocronológica previa. En algunas realizaciones, el sujeto (por ejemplo, mujer) tiene mama metastásica y ha progresado después del tratamiento con un inhibidor de mTOR, un inhibidor de CDK4/6 o un inhibidor de PIK3.

Ciertas realizaciones de los compuestos para su uso como se define en las reivindicaciones comprenden los pasos de medir un nivel de referencia de expresión de ARNm o expresión de proteína de ZBTB16 en un sujeto con cáncer de mama ER+/AR+, tratando con un agonista de AR o un modulador selectivo del receptor de andrógenos como se define en las reivindicaciones, medir el nivel de ZBTB16 (que codifica la proteína PLZF) después del tratamiento, y si el nivel de ZBTB16 después del tratamiento ha aumentado, continuar el tratamiento con el agonista AR o el modulador selectivo del receptor de andrógenos. En ciertas realizaciones, el sujeto es una mujer, por ejemplo, una mujer premenopáusica o posmenopáusica.

También se describe en la presente en algunas realizaciones un kit de diagnóstico que contiene reactivos para medir la expresión de ARNm o proteína de ZBTB16.

En la presente se describe un método para identificar a un sujeto que es probable que responda a la terapia con agonistas de AR divulgada en la presente, que comprende los pasos de medir un nivel de referencia de expresión de ARNm o proteína de ZBTB16, tratar con un agonista de AR (por ejemplo, SARM) durante un período de tiempo que comprende por lo menos una administración, midiendo el nivel de expresión del ARNm de ZBTB16 después de la terapia con agonistas de AR e identificando al sujeto que es probable que responda a la terapia con agonistas de AR si se produce un aumento en la expresión de ARNm de ZBTB16. En algunas realizaciones, el punto de corte de expresión para determinar la capacidad de respuesta es por lo menos un aumento de x2 veces, un aumento de x4 veces; un aumento de x8 veces, un aumento de x10 veces; un aumento de x25 veces; un aumento de 50 veces o un aumento de >1 x 100 veces.

En ciertas realizaciones, la invención proporciona compuestos para su uso como se define en las reivindicaciones para tratar a una mujer con cáncer de mama, en donde dicha mujer expresa una o más mutaciones en el receptor de estrógeno, por ejemplo, una mutación del gen ERa (ESR1). Tales mutaciones pueden incluir proteínas de fusión en las que parte del receptor de estrógeno se ha fusionado con una parte o la totalidad de otra proteína. En algunas realizaciones, se evalúa primero a dicha mujer para una o más de dichas mutaciones y/o fusiones y si da positivo para una o más mutaciones y/o fusiones, se la trata con el SARM, ya sea como monoterapia o con una o más agentes quimioterapéuticos adicionales como se describe en la presente. En algunas realizaciones el sujeto expresa una PI3K mutada.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

Figura 1: El compuesto III ("RAD140") en combinación con el inhibidor de CDK inhibió el crecimiento de cáncer de mama ER+/AR+ en ratones con xenoinjertos derivados de pacientes (PDx).

Figura 2 : La administración combinada de RAD140 con inhibidor de CDK o inhibidor de mTOR inhibió el crecimiento de cáncer de mama ER+/AR+ en ratones con xenoinjerto derivado de la línea celular (CDx).

Figura 3 : RAD140 redujo el crecimiento del cáncer de mama ER+/AR+ en ratones PDx y fue más eficaz que el fulvestrant.

Figura 4 : RAD140 redujo el crecimiento del cáncer de mama ER+/AR+ en ratones PDx.

Figuras 5A-5B: Aumento de la expresión del ARNm de ZBTB16 en el tratamiento del cáncer de mama con RAD140. Figura 5A: Aumento de la expresión de ARNm de ZBTB16 en el tratamiento con RAD140 de células de cáncer de mama T47D in vitro. Figura 5B: Aumento de la expresión del ARNm de ZBTB16en el tratamiento con RAD140 del cáncer de mama AR+/ER+ in vivo (PDx N° 2).

Figura 6 : Efectos de inhibición de RAD140, palbociclib y una combinación de RAD140 y palbociclib en el tumor PDx en modelos WHIM 18 que albergan la fusión ESR1-YAP1 y una mutación E545K en PIK3CA.

Figura 7 : RAD140 inhibió el crecimiento de xenoinjertos derivados de pacientes con cáncer de mama ER+/AR+ en el mismo modelo PDX que se usó en la Figura 3.

Figura 8 : RAD140 inhibió el crecimiento de xenoinjertos derivados de pacientes con cáncer de mama ER+/AR+ en el mismo modelo que se usó en la Figura 1.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

El RAD140 es un SARM no esteroide disponible por vía oral con un perfil de selectividad tisular distinto. El análisis funcional in vitro mostró que RAD140 es un potente agonista de AR, comparable a la dihidrotestosterona en las células de cáncer de mama. Como se expone en la sección de Ejemplos a continuación, un tratamiento de un SARM (por ejemplo, RAD140) solo (Ejemplos 3 y 4; Ejemplos 7 y 8) o en combinación con un inhibidor de CDK4/6 (por ejemplo, palbociclib en los Ejemplos 1 y 2) o un inhibidor de mTOR (por ejemplo, everolimus en el Ejemplo 2) inhibió eficazmente el crecimiento de cáncer de mama ER+/AR+ en múltiples ratones PDx y/o CDx. El análisis molecular del espécimen de tumor de xenoinjerto reveló una supresión sustancial del receptor de progesterona (PR), en consonancia con informes anteriores sobre la diafonía entre las vías de AR y ER (la señalización de ER regula por incremento PR), pero también demostró una potente activación de la vía AR en tumores tratados con RAD140. Además, se observó aumento en la expresión de ARNm de ZBTB16 en el tratamiento con RAD140 de cáncer de mama AR+/ER+ in vivo (PDx N° 2) e in vitro (células de cáncer de mama T47D); mientras que PDx N°2 tratado con SERD (fulvestrant) no mostró una inducción apreciable de la expresión del ARNm de ZBTB16 (Ejemplo 5). Un tratamiento de un SARM (por ejemplo, RAD140) solo (Ejemplo 6) o en combinación con un inhibidor de CDK4/6 (por ejemplo, palbociclib) inhibió eficazmente el crecimiento de cáncer de mama ER+/PR+/AR+/HER- en ratones WHlM18 PDx que inicialmente expresaban la fusión ESR-1 YAP.

Más específicamente, RAD140 inhibió inesperadamente el crecimiento tumoral en los cuatro modelos de PDx (PDx N°1 (AR+/ER+/PR+/Her2-), PDx N°2 (AR+/ER+), PDx N°3 (AR+/ER+) y WHIM18 PDx ER+/PR+/AR+/HER-)) y los modelos de CDx (ZR75 CDx derivado de la línea celular cancerosa ZR-75-1 (AR+/ER+) (Ver ejemplos).

RAD140 solo mostró inhibición del crecimiento tumoral (TGI) para el cáncer de mama ER+/PR+/AR+/HER-en WHIM18 PDx que era altamente resistente al potente degradador de ER fulvestrant (Ejemplo 6). Inesperadamente, la administración de RAD140 en combinación con un inhibidor de CDK4/6 (por ejemplo, palbociclib) resultó en efectos de TGI mejorados que el tratamiento de RAD140 o palbociclib solos. Además, en los modelos PDx N°1 (Ejemplo 1) y CDx (Ejemplo 2), la administración de RAD140 en combinación con un inhibidor de CDK4/6 (por ejemplo, palbociclib) dio de nuevo como resultado inesperado efectos de TGI mejorados en comparación con el tratamiento de RAD140 o palbociclib solos (Ejemplo 2). En modelos de CDx (Ejemplo 2), la administración de RAD140 en combinación con un inhibidor de mTOR (por ejemplo, everolimus) también dio como resultado efectos de TGI mejorados en comparación con el tratamiento de RAD140 o palbociclib solos (Ejemplo 2). Por tanto, es probable que los SARM (por ejemplo, RAD140) sean una estructura principal endocrina eficaz que potencia el RGI del tratamiento de cáncer AR+/ER+ y/o ER+/PR+/AR+/HER-, incluyendo los resistentes a terapia endocrina o menos sensible a terapia endocrina (por ejemplo, SERD como fulvestrant) y también potencian fuertemente las actividades de agentes eficaces como un inhibidor de cdk4/6, un inhibidor de m-TOR, inhibidores de PI3k, inhibidores de PARP, inhibidores de BCL-2, inhibidores de MCL-1, o cualquier combinación de los mismos.

En base a los resultados proporcionados en la presente, la invención proporciona el Compuesto III para su uso en métodos para tratar tumores AR+ en un sujeto con necesidad de ello administrando al sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de un agonista de AR (por ejemplo, SARM como RAD140), o sales farmacéuticamente aceptables o solvatos farmacéuticamente aceptables (por ejemplo, hidratos) de los mismos. Ciertas realizaciones comprenden además administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más segundos agentes terapéuticos como se describe en la presente, por ejemplo, inhibidores de CDK4/6, inhibidores de mTOR, inhibidores de PARP, inhibidores de PIK3, inhibidores de ^{B c L - 2} e inhibidores de MCL-1.

También se proporciona el Compuesto III para uso en métodos para tratar el cáncer de mama en un sujeto que comprende los siguientes pasos:

a) determinar un nivel de referencia de ARNm y/o proteína de ZBTB16;

b) administrar un agonista del receptor de andrógenos;

c) tratar al sujeto con el agonista de AR y luego volver a probar el nivel de ARNm y/o proteína de ZBTB16 para proporcionar un primer nivel de ARNm y/o proteína de ZBTB16; y

d) continuar con la administración del agonista de AR si el primer nivel es más alto que el nivel de referencia de ARNm y/o proteína de ZBTB16.

Los ejemplos de los sujetos incluyen, sin limitación, mamíferos, por ejemplo, humanos. En ciertas realizaciones, los sujetos son mujeres, por ejemplo, mujeres premenopáusicas así como mujeres posmenopáusicas. En ciertas realizaciones, los sujetos han progresado con la terapia endocrina previa incluyendo, sin limitación, SERD (por ejemplo, fulvestrant, RAD1901, AZD9496); SERM (por ejemplo, tamoxifeno, toremifeno), inhibidores de la aromatasa (por ejemplo, arimidex, letrozol, aromasina o combinaciones de los mismos, ya sean directos o secuenciales). En algunas realizaciones, los sujetos tienen cáncer de mama metastásico y han progresado con la terapia endocrina previa (por ejemplo, SERD, SERM, inhibidores de la aromatasa o combinaciones de los mismos). En ciertas realizaciones, el sujeto (por ejemplo, una mujer) tiene cáncer de mama primario o metastásico y ha progresado con un inhibidor de cdk4/6, un inhibidor de mTOR o un inhibidor de PI3K. En algunas realizaciones, la mujer no ha sido tratada para cáncer de mama y se le administra RAD140, ya sea solo o en combinación con uno de los otros agentes mencionados en la presente.

La presencia de AR, ER y/o PR en células tumorales o tejido tumoral de cáncer de mama puede evaluarse fácilmente, por ejemplo, mediante inmunohistoquímica (IHC). Ciertas realizaciones de los métodos divulgados en la presente comprenden además determinar que el tumor expresa AR y, opcionalmente, uno o más de otros receptores (por ejemplo, ER, PR y Her2), especialmente ESR1. Además, los métodos divulgados en la presente abren la puerta a nuevos regímenes de tratamiento que no dependen de vías que probablemente ya hayan sido tratadas para generar resistencia (por ejemplo, resistencia a los antiestrógenos).

Mutación del gen ERa (ESR1)

La resistencia a la terapia hormonal en el cáncer de mama ER+ a menudo va a acompañada de varias mutaciones en el receptor de estrógeno. En algunos casos, estos receptores mutados dan como resultado una resistencia aumentada o incluso una resistencia completa al tratamiento antiestrógenos/antiendocrinológico cuando dicha resistencia se produce como resultado del tratamiento con un inhibidor de la aromatasa, un SERM antiestrógenos como el tamoxifeno o un degradador del receptor de estrógeno (SERD) como fulvestrant. Aunque en algunos casos, la resistencia al tratamiento antiestrógeno se acompaña de la pérdida completa de la señalización del receptor de estrógeno a través de la pérdida del propio receptor, sin embargo, en muchos casos el receptor mutado todavía emite señales a través de la vía ER. Las razones de la resistencia a los antiestrógenos incluyen ejemplos en los que el receptor de estrógeno está mutado de una manera en la que muestra una afinidad reducida por los ligandos directamente competitivos (es decir, Y537S ESR1, D538G) o que pierde parte o la totalidad de su dominio de unión al ligando (LBD) pero todavía retiene suficiente de otros dominios funcionales (por ejemplo, dominio de unión a ADN, dominio AF1 y/o la región bisagra) de tal manera que el receptor, incluso cuando no se une al ligando (o ni siquiera puede unirse al ligando), retiene la actividad constitutiva, lo que significa que el receptor permanece efectivamente encendido. En algunos casos, esto se produce cuando se producen translocaciones cromosómicas que dan como resultado productos de fusión de genes en los que el dominio de unión del ligando del RE se trunca o elimina y otro gen o gen parcial se sustituye en su lugar, lo que da como resultado un receptor constitutivamente activo que no requiere la unión del ligando. Se ha demostrado que las células tumorales que albergan tales alteraciones genéticas son resistentes a los agentes terapéuticos dirigidos a ER LBD. Tales células mutantes pueden enriquecerse con el tiempo. Además, se sabe que algunas de las mutaciones preexisten al tratamiento con antiestrógenos/SERD/inhibidores de la aromatasa. Un sujeto que exprese tales receptores puede tener un mayor riesgo de una respuesta deficiente al tratamiento anti-ER convencional, pero es un candidato excelente para la terapia con agonistas de AR o SARM como se describe en la presente. Por tanto, un paciente puede ser candidato para un tratamiento de primera línea o un tratamiento adyuvante con agonista de AR o SARM cuando el sujeto expresa tal mutación o fusión. En ciertas realizaciones, se prueba a un sujeto para determinar la expresión de una mutación o fusión candidata para determinar si se le debe tratar con configuración neoadyuvante, adyuvante o de primera línea donde aún no ha sido tratada con un agente endocrinológico. El uso de primera línea del SARM puede ser como monoterapia o en combinación con por lo menos un agente seleccionado del grupo que consiste de inhibidores de CDK (por ejemplo, inhibidores de CDK 4/6), inhibidores de mTOR (por ejemplo, inhibidores de mTORc 1 y/o 2), inhibidores de PARP, inhibidores de PIK3, inhibidores de BCL-2 e inhibidores de MCL-1. Antes de los métodos descritos en la presente, estas mutaciones eran particularmente problemáticas ya que impiden el tratamiento con agentes antiestrogénicos que son de primera línea para pacientes con cáncer de mama ER+. Como resultado, los pacientes a menudo proceden con agentes citotóxicos y experimentan un curso de su enfermedad que a menudo se acelera y es mucho más difícil de tratar. Un aspecto importante de esta divulgación es que los agonistas de AR descritos en la presente pueden tratar eficazmente sujetos que albergan tal ER mutante.

En ciertas realizaciones, los agonistas de AR para su uso como se define en las reivindicaciones se usan para tratar sujetos que tienen cáncer de mama AR+/ER+ que comprende una o más mutaciones de ER. En ciertas realizaciones, estas mutaciones afectan a la capacidad del dominio de unión a ligandos para unirse a ligandos que tienen afinidad por el ER no mutado. En ciertas realizaciones de esta invención, dicho ER tiene una o más mutaciones puntuales en el dominio de unión al ligando que reducen o eliminan la unión a ligandos de ER que se unen normalmente del tipo agonistas y/o antagonistas que incluyen SERM y SERD, y en algunos casos tienen actividad de señalización de ER constitutiva, por ejemplo, resistente a los inhibidores de la aromatasa también. En ciertas realizaciones, el receptor mutado tiene un dominio de unión a ligandos que está parcial o completamente ausente. En algunas realizaciones, dicho receptor mutante es un receptor de fusión entre una parte de ESR1 y parte o la totalidad de otra proteína. En ciertas realizaciones, dicho receptor mutante es capaz de señalizar a través de vías de ER a pesar de no poder unirse al ligando o tener una afinidad atenuada por los ligandos que se unen al ER no mutado. En algunas realizaciones, el mutante o la fusión retiene la función del ER del dominio de unión al ADN.

En ciertas realizaciones, el sujeto expresa por lo menos un gen de fusión de ER descrito específicamente. En una realización, el gen comprende un producto de mutación E545K en PIK3CA, un producto de fusión ESR1-AKAP12, un producto de fusión génica ESR1-CCDC170, un producto de fusión génica ESR1-YAP1, un producto de fusión génica ESR1-POLH, un producto de fusión génica ESR1-PCDH11X, o combinaciones de los mismos. En una realización particular, el sujeto expresa una fusión ESR1-YAP1. En ciertas realizaciones, se evalúan los primeros cánceres o tumores de mama del sujeto para determinar si el sujeto alberga una o más mutaciones de fusión del gen ER en una o más muestras de sus células cancerosas. Si el sujeto alberga de hecho una o más de las mutaciones de ER descritas, el sujeto es un candidato para el tratamiento de acuerdo con los compuestos y métodos de esta invención. En algunas realizaciones de esta invención, el sujeto ya ha sido tratado con una o más terapias previas y, en algunas realizaciones, dicha terapia previa comprende una terapia antiestrógenos que utiliza, por ejemplo, un inhibidor de la aromatasa, un SERM o un SERD. En algunas realizaciones, el sujeto con la mutación indicada no ha sido tratado previamente en absoluto por su cáncer de mama o no ha sido tratado previamente con un antiestrógenos. En ciertas realizaciones, el sujeto tiene una o más de las mutaciones/fusiones que comprometen la función de unión al ligando o la actividad de ESR1.

En ciertas realizaciones, el sujeto es inicialmente positivo para ER y luego pierde la expresión tumoral de ER. En algunas realizaciones, dicha expresión perdida se produjo después del transcurso de uno o más tratamientos previos. En ciertas realizaciones, dichos uno o más tratamientos previos comprendían el tratamiento con un antiestrógeno que además comprende uno o más de un inhibidor de la aromatasa, un SERM y un SERD. En ciertas realizaciones, dicho sujeto que ha perdido la expresión de ER en el tumor expresa el receptor de progesterona (PR).

Ciertas realizaciones comprenden además un paso de diagnóstico en donde dicho sujeto se evalúa primero para una o más mutaciones/fusiones como se describe en la presente. Si se considera que la mutación/fusión cumple con un punto de corte predeterminado, el sujeto es candidato para el tratamiento con agonista de AR/SARM, ya sea como monoterapia o como combinación, como se describe en la presente. En algunas realizaciones, el mutante o la fusión incluye la fusión ESR1 -YAP y/o realizaciones estrechamente relacionadas.

Agonistas de AR

Los métodos divulgados en la presente no se limitan a una única clase de compuestos sino que incluyen, en el ámbito más amplio, compuestos que tienen afinidad por el receptor de andrógenos y pueden expresar por lo menos alguna actividad androgénica clásica, en términos generales considerados como agonistas de AR. Una manera de discernir dicha actividad preclínicamente, por ejemplo, es en un ensayo de Herschberger en ratas, donde los efectos del posible agonista de AR se evalúan frente a un fondo de castración para determinar si el compuesto tiene un efecto estimulante sobre los tejidos objetivo de los andrógenos, como el elevador del ano, próstata y/o vesículas seminales. Los agonistas de AR pueden ser esteroideos o no esteroideos, selectivos o no. Los agonistas de AR incluyen un agonista de AR esteroideo como testosterona (y ésteres de la misma), DHT (y ésteres de la misma), fluoximesterona, oxandrolona, estanzolol, metandrostenolona, metiltestosterona, oximetolona, nandrolona (y ésteres de la misma). En la invención, el agonista de AR es el SARM Compuesto III. En ciertas realizaciones, los SARM demuestran eficacia en los criterios de valoración tumorales a pesar de tener un impulso de andrógenos reducido en otros tejidos (por ejemplo, próstata) u otros perfiles de expresión que dan como resultado resultados no deseados como virilización e hirsutismo en mujeres. En ciertas realizaciones, los SARM se presentan a menudo con un impulso reducido sobre las elevaciones de las enzimas hepáticas y/o cambios posiblemente perjudiciales en los niveles de colesterol como HD1 disminuido y/o LDL aumentado. En ciertas realizaciones, los SARM no son esteroideos y no presentan la responsabilidad de clase potencial de los esteroides alquilados en 17alfa, aunque todavía tienen una buena actividad oral en general. En ciertas realizaciones, los SARM proporcionan tratamientos eficaces que son menos o no virilizantes. En ciertas realizaciones, no es probable que los SARM estimulen el eje hormonal central. En ciertas realizaciones, los SARM (es decir, el Compuesto III) pueden atravesar la barrera hematoencefálica (la ''BBB''). En ciertas realizaciones, los SARM que pueden atravesar la BBB tienen efectos supresores en el eje hormonal central y disminuyen en lugar de aumentar la producción ovárica de esteroides sexuales, por ejemplo, estrógenos como estrona y estradiol, así como precursores intracrinos como DHEA, androstenediona, etc. En ciertas realizaciones de los métodos divulgados en la presente, los SARM pueden usarse generalmente para tratar a mujeres premenopáusicas con cáncer de mama así como a mujeres posmenopáusicas con cáncer de mama. En ciertas realizaciones, los SARM supresores (es decir, el Compuesto III) proporcionan beneficios adicionales para el SNC en mujeres premenopáusicas o posmenopáusicas que tienen cáncer de mama. En ciertas realizaciones, los agonistas de AR (por ejemplo, SARM) divulgados en la presente aumentan la masa muscular magra y/o el apetito. Por tanto, los agonistas de AR (por ejemplo, SARM) divulgados en la presente pueden ser beneficiosos cuando el estado caquéxico del cáncer o el desgaste son una preocupación.

Los SARM incluyen 2-cloro-4-[[(1 fí,2fí)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo (J Med Chem 2016; 59(2) 750), PF-06260414, enobosarm, BMS-564929, LGD-4033, AC-262356, JNJ-28330835, S-40503, GSK-2881078, RAD140, AZD-3514, MK4541, LG121071, GLPG0492, NEP28, YK11, MK0773, ACP-105, LY-2452473, S-101479, S-40542, S-42, LGD-3303 y los SARM divulgados en la US8.067.448 y la US9.133.182. Además, los SARM incluyen compuestos de acuerdo con la Fórmula I divulgada en la presente (por ejemplo, Compuesto II y Compuesto III) y compuestos de acuerdo con la Fórmula IV divulgada en la presente.

Los compuestos de acuerdo con la Fórmula I incluyen compuestos que tienen la estructura de Fórmula I:

sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde:

R^{x =} CN;

R^y = CF³ o Cl;

R^z = CH³, CH²CH³ o Cl; o

R^y y R^z juntos forman:

R^a , es H, F, Cl, CN, OH u OSO³ ; y

R¹ y R² se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y metilo.

El compuesto de acuerdo con la Fórmula I es el Compuesto III (RAD140):

sales farmacéuticamente aceptables del mismo, o solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo.

Los compuestos de acuerdo con la fórmula IV descritos en la presente incluyen:

sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde:

R^x es CN, Cl, Br o NO² ;

R^y es CH³ , CF³ o halógeno;

R^z es hidrógeno, alquilo C^1-3 opcionalmente sustituido, alquenilo C^2-3 opcionalmente sustituido, hidroxialquilo C^1-3 opcionalmente sustituido, haloalquilo C^1-3 opcionalmente sustituido, NO², NH² , OMe, halógeno u OH;

P¹ es hidrógeno o un grupo metabólicamente lábil;

Ra y Rb son cada uno independientemente hidrógeno o alquilo C^1-3; y

x es o

Los ejemplos de sustitución opcional incluyen, sin limitación, 1-3 átomos de halógeno.

Un ejemplo de un SARM es un compuesto de acuerdo con la fórmula IV, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R^x es CN.

Un ejemplo de un SARM es un compuesto de acuerdo con la Fórmula IV, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R^x es CN; R^y es Cl o CF3; R^z es hidrógeno, Cl o CH3; P¹ es (C=O)-alquilo C^1-6 o hidrógeno; y Ra y Rb son cada uno independientemente hidrógeno o -CH³.

Un ejemplo de un SARM es un compuesto de acuerdo con la Fórmula IV, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R^x es CN; R^y es Cl o CF3; R^z es hidrógeno, Cl o CH3; P¹ es (C=O)-alquilo C^1-6 o hidrógeno; y Ra y Rb son ambos hidrógeno.

Terapia de combinación de agonistas de AR e inhibidores de mTOR

La vía de la fosfoinositida 3-quinasa (PI3K)/proteína quinasa B (AKT)/objetivo mamífero de rapamicina (mTOR) es una vía de señalización intracelular importante en la regulación del ciclo celular. La activación frecuente de la vía PI3K/AKT/mTOR en el cáncer y su papel crucial en el crecimiento y la supervivencia celular suponen un desafío para encontrar una cantidad apropiada de proliferación frente a la diferenciación para utilizar este equilibrio en el desarrollo de diversas terapias. Ver, por ejemplo, Gitto et al., "Recent insights into the pathophysiology of mTOR pathway dysregulation," Res. Rep. Bio., 2:1-16 (2015).

Los inhibidores de la vía PI3K se han mostrado prometedores cuando se administran en combinación con otras terapias. Por ejemplo, el everolimus, como un inhibidor alostérico de mTOR, fue el primer inhibidor de mTOR aprobado en combinación con AI exemestano (aromasina), para mujeres posmenopáusicas con cáncer de mama avanzado con receptor hormonal positivo (HR+), HER2-(estudio BOLERO-2) en 2012. Se están desarrollando agentes dirigidos a otros componentes de la vía PI3K para tratar el cáncer HR+, por ejemplo, inhibidores duales competitivos con ATP de PI3K y mTOR (por ejemplo, BEZ235, GDC-0980), inhibidores pan-PI3K que inhiben las cuatro isoformas de PI3K de clase I (por ejemplo, BKM120, GDC-0941), inhibidores específicos de isoforma de las varias isoformas de PI3K (por ejemplo, BYL719, GDC-0032), inhibidores alostéricos y catalíticos de AKT (MK2206, GDC-0068, GSK2110183, GSK2141795, AZD5363), e inhibidores competitivos de ATP de solo mTOR (AZD2014, MLN0128, y CC-223). Dienstmann et al., "Picking the point of inhibition: a comparative review of PI3K/AKT/mTOR pathway inhibitors,'' Mol. Cancer Ther., 13(5):1021 -31 (2014).

A pesar de su gran potencial, los efectos secundarios indeseables asociados con los inhibidores de mTOR han impedido su desarrollo como terapias eficaces contra el cáncer. Kaplan et al., "Strategies for the management of adverse events associated with mTOR inhibitors," Transplant Rev (Orlando), 28(3): 126-133 (2014); y Pallet et al., "Adverse events associated with mTOR inhibitors," Expert Opin. Drug Saf. 12(2): 177-186 (2013).

Además, sigue habiendo una necesidad de terapias dirigidas más duraderas y eficaces que puedan superar los desafíos asociados con las terapias endocrinas actuales, a la vez que proporcionen beneficios adicionales al combinarse con un segundo agente terapéutico (por ejemplo, everolimus y otros agentes dirigidos a la vía PI3K/AKT/mTOR) para combatir el cáncer en estadio avanzado y/o con resistencia a tratamientos previos.

En algunas realizaciones, el segundo agente terapéutico se dirige a la vía PI3K/AKT/mTOR y puede ser un inhibidor de mTOR, un inhibidor dual de mTOR, un inhibidor de PI3K/mTOR o un inhibidor de mTOR2 y/o mTOR3. En algunas realizaciones, el segundo agente terapéutico es un derivado de rapamicina (también conocido como rapalog) como rapamicina (sirolimus o rapamune, Pfizer), everolimus (Affinitor o RAD001, Novartis), ridaforolimus (AP23573 o MK-8669, Merck y ARIAD Pharmaceuticals), temsirolimus (Torisel o CCI779, Pfizer), incluyendo los solvatos (por ejemplo, hidratos) y sales de los mismos. En algunas realizaciones, el segundo agente terapéutico es un inhibidor de mTOR dual que inhibe tanto mTORC1 como mTORC2, como MLN0128, CC115 y CC223 (Celgene), OSI-027 (OSI Pharmaceuticals) y AZD8055 y AZD2014 (AstraZeneca), incluyendo los solvatos (por ejemplo, hidratos) y sales de los mismos. En algunas realizaciones, el segundo agente terapéutico es un inhibidor de PI3K/mTOR como GDC-0980, SAR245409 (XL765), LY3023414 (Eli Lilly), NVP-BEZ235 (Novartis), NVP-BGT226 (Novartis), SF1126, y PKI-587 (Pfizer), incluyendo solvatos (por ejemplo, hidratos) y sales de los mismos.

En ciertas realizaciones, puede usarse más de uno de los segundos agentes terapéuticos divulgados anteriormente en combinación con el Compuesto III. Por ejemplo, puede usarse un inhibidor de mTOR junto con otro inhibidor de mTOR o con un inhibidor de PI3K/mTOR. Además, se sabe en la técnica que los segundos agentes terapéuticos divulgados anteriormente, incluyendo los inhibidores de mTOR, los inhibidores duales de mTOR y los inhibidores de PI3K/mTOR, pueden administrarse con otros agentes activos para mejorar la eficacia del tratamiento, por ejemplo, y pueden usarse en combinación con inhibidores de JAK2 (Bogani et al., PLOS One, 8(1): e54826 (2013)), chemotherapy agents (Yardley, Breast Cancer (Auckl) 7: 7-22 (2013)). En consecuencia, los segundos agentes terapéuticos también incluyen estos agentes activos auxiliares.

La Figura 2 ilustra la eficacia mejorada obtenida cuando se usó everolimus, un inhibidor de mTOR, en combinación con un SARM RAD140 en un modelo in vivo

Terapia de combinación de agonistas de AR e inhibidores de CDK

Se ha informado que los reguladores del ciclo celular, como las ciclinas y las quinasas dependientes de ciclina (CDK), tienen efectos sobre la expresión de ER. Lamb et al., "Los reguladores del ciclo celular ciclina D1 y CDK4/6 tienen funciones divergentes dependientes del receptor de estrógeno en la migración del cáncer de mama y la actividad similar a las células madre", Cell Cycle 12(15): 2384-2394 (2013). Los inhibidores selectivos de CDK4/6 (por ejemplo, ribociclib, abemaciclib y palbociclib) han permitido que los tipos de tumores en los que CDK4/6 tiene un papel fundamental en la transición del ciclo celular de la fase G1 a la S se dirijan con una eficacia mejorada y menos efectos adversos a células normales O'Leary et al., "Treating cancer with selective CDK4/6 inhibitors," Nat. Rev. Clin. Oncol. (2016), publicado en línea el 31 de marzo de 2016 (http://www.nature.com/nrclinonc/journal/vaop/ncurrent/full/nrclinonc.2016.26.html). Los inhibidores de CDK4/6 selectivos demostraron las mejores respuestas cuando se probaron en combinación con la terapia endocrina para ER en pacientes con cáncer de mama positivo para ER. A este respecto, resulta aconsejable tener en cuenta que las vías de AR pueden cruzarse con las vías de ER y posiblemente, bajo ciertas condiciones, antagonizar con la actividad del ER de una manera diferente al antagonismo de ER directo.

El palbociclib en combinación con el inhibidor de la aromatasa letrozol (estudio PALoMA-1/TRIO 18) fue aprobado para el tratamiento del cáncer de mama avanzado con receptor hormonal positivo par a(HR) (HR+), negativo para HER2 (HER2-) como terapia de base endocrina inicial en mujeres posmenopáusicas en febrero de 2015. En febrero de 2016, se aprobó el palbociclib en combinación con SERD fulvestrant (estudio PALOMA-3) para el tratamiento de pacientes con cáncer de mama metastásico o avanzado ER+, HER2- que habían progresado con terapia endocrina previa. La FDA concedió al inhibidor de CDK4/6 abemaciclib (LY2835219) una designación de terapia innovadora como monoterapia para pacientes con tratamiento previo intensivo con cáncer de mama avanzado positivo para HR refractario, en base a los datos de un estudio de fase I (estudio JPBA). Actualmente están en desarrollo combinaciones adicionales de inhibidores selectivos de CDK4/6 (por ejemplo, ribociclib, abemaciclib y palbociclib) con terapias endocrinas ER-(por ejemplo, AI, SERM y SERD). Sin embargo, parece que hasta ahora faltan estudios clínicos o preclínicos que demuestren la inesperada eficacia combinada entre los SARM y los inhibidores de cdk4/6.

Además, los inhibidores de CDK4/6 muestran toxicidades que pueden requerir terapia intermitente (O'Leary). Por lo tanto, sigue habiendo una necesidad de terapias dirigidas de combinación eficaces y alternativas que puedan superar los desafíos asociados con las terapias endocrinas actuales, a la vez que proporcionen beneficios adicionales al combinarse con inhibidores de CDK4/6 para combatir el cáncer de mama, particularmente en etapa avanzada y/o con resistencia a tratamientos previos o con mutaciones identificadas como terapia pre-previa existente o después de una terapia previa que hace que el objetivo ESR1 sea susceptible de intervención androgénica (incluyendo los SARM) donde otras terapias endocrinológicas son generalmente menos eficaces o no son eficaces en absoluto, particularmente aquellas que dependen de un efecto antiestrogénico directo como un inhibidor de la aromatasa, SERM o SERD.

En ciertas realizaciones, los inhibidores de CDK4 y/o CDK6 incluyen, sin limitación, palbociclib, abemaciclib, ribociclib y AMG925.

La ilustración in vivo de este concepto de un agonista de AR (por ejemplo, SARM) combinado con un inhibidor de CDK4/CDK6 (por ejemplo, palbociclib) puede verse en la Figura 1. Como se indica en la Figura 1, el SARM RAD140 tiene una capacidad de supresión tumoral muy eficaz, similar a una monoterapia con palbociclib. Inesperadamente, una terapia de combinación de RAD140 y palbociclib proporcionó una TGI mejorada en comparación con la monoterapia con RAD140 o palbociclib. Por tanto, una terapia de combinación de agonistas de AR e inhibidores de CDK4/6 puede proporcionar una actividad mejorada y un marcado beneficio clínico para el tratamiento del cáncer de mama AR+. De manera similar, la Figura 6 demuestra eficacia solo o con palbociclib en el modelo WHIM18 que expresa inicialmente la fusión ESR1 -YAP donde el fulvestrant (como SERD) fue ineficaz solo y no mejoró la eficacia de palbociclib en la terapia de combinación de fulvestrant-palbociclib.

Administración y formulaciones

Con respecto a la administración de los compuestos y combinaciones de acuerdo con la invención, los agonistas de AR (es decir, el Compuesto III) o solvatos o sales de los mismos y los inhibidores de CDK4 y/o CDK6 (por ejemplo, ribociclib, abemaciclib y palbociclib) o los inhibidores de mTOR, inhibidores de PI3K, inhibidores de PARP, inhibidores de MCL-1 y/o inhibidores de BCL2 divulgados en la presente se administran en combinación a un sujeto con necesidad de ello. La frase "en combinación" significa que el Compuesto III puede administrarse antes, durante o después de la administración de los inhibidores de CDK4 y/o CDK6 o inhibidores de mTOR, inhibidores de PI3K, inhibidores de PARP, inhibidores de MCL-1 y/o inhibidores de BCL2. Por ejemplo, el Compuesto III y el inhibidor de CDK4 y/o CDK6 o inhibidor de mTOR, inhibidores de PI3K, inhibidores de ^pA^r P, inhibidores de MCL-1 y/o inhibidores de BCL2 pueden administrarse con aproximadamente una semana de diferencia, con aproximadamente 6 días de diferencia, con aproximadamente 5 días de diferencia, con aproximadamente 4 días de diferencia, con aproximadamente 3 días de diferencia, con aproximadamente 2 días de diferencia, con aproximadamente 24 horas de diferencia, con aproximadamente 23 horas de diferencia, con aproximadamente 22 horas de diferencia, con aproximadamente 21 horas de diferencia, con aproximadamente 20 horas de diferencia, con aproximadamente 19 horas de diferencia, con aproximadamente 18 horas de diferencia, con aproximadamente 17 horas de diferencia, con aproximadamente 16 horas de diferencia, con aproximadamente 15 horas de diferencia, con aproximadamente 14 horas de diferencia, con aproximadamente 13 horas de diferencia, con aproximadamente 12 horas de diferencia, con aproximadamente 11 horas de diferencia, con aproximadamente 10 horas de diferencia, con aproximadamente 9 horas de diferencia, con aproximadamente 8 horas de diferencia, con aproximadamente 7 horas de diferencia, con aproximadamente 6 horas de diferencia, con aproximadamente 5 horas de diferencia, con aproximadamente 4 horas de diferencia, con aproximadamente 3 horas de diferencia, con aproximadamente 2 horas de diferencia, con aproximadamente 1 hora de diferencia, con aproximadamente 55 minutos de diferencia, con aproximadamente 50 minutos de diferencia, con aproximadamente 45 minutos de diferencia, con aproximadamente 40 minutos de diferencia, con aproximadamente 35 minutos de diferencia, con aproximadamente 30 minutos de diferencia, con aproximadamente 25 minutos de diferencia, con aproximadamente 20 minutos de diferencia, con aproximadamente 15 minutos de diferencia, con aproximadamente 10 minutos de diferencia o con aproximadamente 5 minutos de diferencia. En ciertas realizaciones, el Compuesto III y los inhibidores de CDK4 y/o CDK6 o inhibidores de mTOR, inhibidores de PI3K, inhibidores de PARP, inhibidores de MCL-1 y/o inhibidores de BCL2 se administran al sujeto de manera simultánea o sustancialmente simultánea. En ciertas de estas realizaciones, el Compuesto III y el inhibidor de CDK4 y/o CDK6 (por ejemplo, ribociclib, abemaciclib y palbociclib) o los inhibidores de mTOR (por ejemplo, sirolimus, temsirolimus, everolimus, ridafarolimus y MLN0128), los inhibidores de PI3K, los inhibidores de PARP, los inhibidores de MCL-1 y/o los inhibidores de BCL2 divulgados en la presente pueden administrarse como parte de una única formulación. Se incluyen kits en los que el Compuesto III y uno o más de los agentes adicionales descritos en la presente están contenidos dentro de un kit juntos, por ejemplo, como una disposición de envase conjunto. A modo de ejemplo no limitativo, los kits que contienen RAD140 con un inhibidor de CDK4/6, un inhibidor de m-TOR, un inhibidor de PI3K, un inhibidor de PARP, un inhibidor de MCL-1 y/o un inhibidor de BCL2 como los detallados en la presente están incluidos dentro del alcance.

En algunas realizaciones, la combinación del Compuesto III y un único inhibidor de CDK4 y/o CDK6 o inhibidor de mTOR, inhibidor de PI3K, inhibidor de PARP, inhibidor de MCL-1 y/o inhibidor de BCL2 se administra a un sujeto. En ciertas realizaciones, la combinación del Compuesto III y un inhibidor de CDK4/CDK6 y un inhibidor de mTOR, un inhibidor de PI3K, un inhibidor de PARP, un inhibidor de MCL-1 y/o un inhibidor de BCL2 se administran juntos a un sujeto. Las formulaciones del Compuesto III usadas en los métodos divulgados en la presente se han divulgado de manera general en la bibliografía. En particular, la US8.067.448 divulga cómo elaborar los compuestos y los métodos de formulación generales útiles para formular compuestos de acuerdo con la Fórmula I, el Compuesto II y el Compuesto III. DE manera similar, la US9.133.182 divulga cómo elaborar los compuestos de acuerdo con la Fórmula IV y formularlos en general. En los casos en que no se disponga de orientación o asesoramiento sobre formulación específicos, pueden aplicarse algunos principios generales para la formulación. Por ejemplo, los compuestos y las combinaciones de los métodos divulgados actualmente pueden formularse en formas de dosificación unitaria, es decir, unidades físicamente discretas adecuadas como dosificación unitaria para sujetos que se están sometiendo a tratamiento, cada unidad conteniendo una cantidad predeterminada de material activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, opcionalmente en asociación con un portador farmacéutico adecuado. La forma de dosificación unitaria puede ser para una sola dosis diaria o una de múltiples dosis diarias (por ejemplo, aproximadamente de 1 a 4 o más veces al día). Cuando se usan múltiples dosis diarias, la forma de dosificación unitaria puede ser la misma o diferente para cada dosis. En ciertas realizaciones, los compuestos pueden formularse para liberación controlada.

Los compuestos y combinaciones para su uso en los métodos divulgados actualmente pueden formularse de acuerdo con cualquier método convencional disponible. Los ejemplos de formas de dosificación preferidas incluyen un comprimido, un polvo, un gránulo imperceptible, un gránulo, un comprimido recubierto, una cápsula, un jarabe, un trocisco, un inhalante, un supositorio, un inyectable, una pomada, una pomada oftálmica, una gota para los ojos, una gota nasal, una gota para el oído, una cataplasma, una loción y similares. En la formulación, pueden usarse aditivos usados generalmente como un diluyente, un aglutinante, un disgregante, un lubricante, un colorante, un agente aromatizante y, si es necesario, un estabilizante, un emulsificante, un potenciador de la absorción, un surfactante, un ajustador de pH, un antiséptico, un antioxidante y similares. Además, la formulación también se lleva a cabo combinando composiciones que se usan generalmente como materia prima para la formulación farmacéutica, de acuerdo con los métodos convencionales. Los ejemplos de estas composiciones incluyen, por ejemplo, (1) un aceite como aceite de soja, sebo de vaca y glicérido sintético; (2) hidrocarburos como parafina líquida, escualeno y parafina sólida; (3) aceite de éster como ácido octildodecilo mirístico y ácido isopropílico mirístico; (4) alcohol superior como alcohol cetoestearílico y alcohol behenílico; (5) una resina de silicona; (6) un aceite de silicona; (7) un surfactante como éster de ácido graso de polioxietileno, éster de ácido graso de sorbitán, éster de ácido graso de glicerina, éster de ácido graso de polioxietileno sorbitán, aceite de ricino de polioxietileno sólido y copolímero de bloque de polioxietileno polioxipropileno; (8) macromolécula soluble en agua como hidroxietilcelulosa, ácido poliacrílico, polímero de carboxivinilo, polietilenglicol, polivinilpirrolidona y metilcelulosa; (9) alcohol inferior como etanol e isopropanol; (10) alcohol multivalente como glicerina, propilenglicol, dipropilenglicol y sorbitol; (11) un azúcar como glucosa y azúcar de caña; (12) un polvo inorgánico como ácido silícico anhidro, silicato de aluminio y magnesio y silicato de aluminio; (13) agua purificada, y similares. Los aditivos para su uso en las formulaciones anteriores pueden incluir, por ejemplo, 1) lactosa, almidón de maíz, sacarosa, glucosa, manitol, sorbitol, celulosa cristalina y dióxido de silicio como diluyente; 2) alcohol polivinílico, éter polivinílico, metilcelulosa, etilcelulosa, goma arábiga, tragacanto, gelatina, goma laca, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, polivinilpirrolidona, copolímero de bloque de polipropilenglicol-polioxietileno, meglumina, citrato de calcio, dextrina, pectina y similares como aglutinante; 3) almidón, agar, polvo de gelatina, celulosa cristalina, carbonato cálcico, bicarbonato sódico, citrato cálcico, dextrina, péctica, carboximetilcelulosa/calcio y similares como disgregante; 4) estearato de magnesio, talco, polietilenglicol, sílice, aceite vegetal condensado y similares como lubricante; 5) cualquier colorante cuya adición sea farmacéuticamente aceptable es adecuado como colorante; 6) cacao en polvo, mentol, aromatizante, aceite de menta, canela en polvo como agente aromatizante; 7) antioxidantes cuya adición sea farmacéuticamente aceptada como el ácido ascórbico o el alfa-tofenol.

Los compuestos y combinaciones para su uso en la invención pueden formularse en una composición farmacéutica como uno o más de los compuestos activos descritos en la presente y un portador fisiológicamente aceptable (también denominado portador o solución o diluyente farmacéuticamente aceptable). Tales portadores y soluciones incluyen sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de compuestos usados en los métodos de la presente invención, y mezclas que comprenden dos o más de tales compuestos, sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos y solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos. Tales composiciones se preparan de acuerdo con procedimientos farmacéuticos aceptables como los descritos en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a edición, ed. Alfonso R. Gennaro, Mack Publishing Company, Eaton, Pa. (1985).

El término "portador farmacéuticamente aceptable" se refiere a un portador que no provoca una reacción alérgica u otro efecto adverso en los pacientes a los que se administra y que es compatible con los demás ingredientes de la formulación. Los portadores farmacéuticamente aceptables incluyen, por ejemplo, diluyentes, excipientes o portadores farmacéuticos seleccionados adecuadamente con respecto a la forma de administración pretendida y consistentes con las prácticas farmacéuticas convencionales. Por ejemplo, los portadores/diluyentes sólidos incluyen, pero no se limitan a, una goma, un almidón (por ejemplo, almidón de maíz, almidón pregelatinizado), un azúcar (por ejemplo, lactosa, manitol, sacarosa, dextrosa), un material celulósico (por ejemplo, celulosa microcristalina), un acrilato (por ejemplo, polimetilacrilato), carbonato de calcio, óxido de magnesio, talco o mezclas de los mismos. Los portadores farmacéuticamente aceptables pueden comprender además cantidades menores de sustancias auxiliares como agentes humectantes o emulsificantes, conservantes o tampones, que potencian la vida útil o eficacia del agente terapéutico.

Los agonistas de AR (por ejemplo, SARM) y/o inhibidores de CDK4/6 y/o inhibidores de mTOR, inhibidores de PI3K, inhibidores de PARP, inhibidores de MCL-1 y/o inhibidores de BCL2 en forma libre pueden convertirse en una sal, si es necesario, mediante métodos convencionales. El término "sal" usado en la presente no está limitado siempre que la sal sea farmacológicamente aceptable; los ejemplos preferidos de sales incluyen una sal de hidrohaluro (por ejemplo, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato y similares), una sal de ácido inorgánico (por ejemplo, sulfato, nitrato, perclorato, fosfato, carbonato, bicarbonato y similares), una sal de carboxilato orgánico (por ejemplo, sal de acetato, sal de maleato, sal de tartrato, sal de fumarato, sal de citrato y similares), una sal de sulfonato orgánico (por ejemplo, sal de metanosulfonato, sal de etanosulfonato, sal de bencenosulfonato, sal de toluenosulfonato, sal de canforsulfonato y similares), una sal de aminoácido (por ejemplo, sal de aspartato, sal de glutamato y similares), una sal de amonio cuaternario, una sal de metal alcalino (por ejemplo, sal de sodio, sal de potasio y similares), una sal de metal alcalinotérreo (sal de magnesio, sal de calcio y similares) y similares. Además, como "sal farmacológicamente aceptable" de los compuestos descritos en la presente se prefieren la sal de clorhidrato, la sal de sulfato, la sal de metanosulfonato, la sal de acetato y similares.

En ciertas realizaciones, el Compuesto III y los inhibidores de CDK4/6 y/o mTOR, inhibidores de PI3K, inhibidores de PARP, inhibidores de MCL-1 y/o inhibidores de BCL2 divulgados en la presente pueden estar en forma de profármaco, lo que significa que deben experimentar alguna alteración (por ejemplo, oxidación o hidrólisis) para alcanzar su forma activa.

La administración de los compuestos y/o combinaciones divulgados en la presente puede realizarse mediante vías descritas anteriormente para esos compuestos, aunque en general como transdérmica, subcutánea, intravenosa, intranasal, pulmonar y oral. La vía oral es la vía preferida para las combinaciones de esta invención.

Una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación de un agonista de AR (por ejemplo, SARM) e inhibidor de CDK4/6 y/o inhibidor de mTOR, inhibidor de PI3K, inhibidor de PARP, inhibidor de ^m C^l-1 y/o inhibidor de BCL2 es una cantidad que, cuando se administra un intervalo de tiempo particular, da como resultado el logro de uno o más puntos de referencia terapéuticos (por ejemplo, ralentización o detención del crecimiento del tumor, lo que da como resultado la regresión del tumor, el cese de los síntomas, etc.). La combinación para su uso en los métodos divulgados actualmente puede administrarse a un sujeto una vez o varias veces. En aquellas realizaciones en las que los compuestos se administran varias veces, pueden administrarse a un intervalo establecido, por ejemplo, diariamente, cada dos días, semanalmente o mensualmente. Alternativamente, pueden administrarse a intervalos irregulares, por ejemplo, según sea necesario en base a los síntomas, la salud del paciente, y similares. Puede administrarse una cantidad terapéuticamente eficaz de la combinación una vez al día durante un día, por lo menos 2 días, por lo menos 3 días, por lo menos 4 días, por lo menos 5 días, por lo menos 6 días, por lo menos 7 días, por lo menos 10 días, o por lo menos 15 días. Opcionalmente, el estado del cáncer o la regresión del tumor se monitoriza durante o después del tratamiento, por ejemplo, mediante una exploración FES-PET del sujeto. La dosificación de la combinación administrada al sujeto puede aumentarse o disminuirse dependiendo del estado del cáncer o la regresión del tumor detectados.

El experto en la técnica puede determinar fácilmente esta cantidad, ya sea sobre la base de un sujeto individual (por ejemplo, la cantidad de un compuesto necesaria para lograr un punto de referencia terapéutico particular en el sujeto que se está tratando) o sobre la base de una población (por ejemplo, la cantidad de un compuesto necesaria para lograr un punto de referencia terapéutico particular en el sujeto medio de una población dada). Idealmente, la cantidad terapéuticamente eficaz no excede la dosificación máxima tolerada en la que el 50% o más de los sujetos tratados experimentan náuseas, hirsutismo, voz ronca u otras reacciones más graves que impidan la administración del fármaco en el futuro. Una cantidad terapéuticamente eficaz puede variar para un sujeto dependiendo de una variedad de factores, incluyendo la variedad y el alcance de los síntomas, el sexo, la edad, el peso corporal o la salud general del sujeto, el modo de administración y el tipo de sal o solvato, la variación en la susceptibilidad al fármaco, el tipo específico de la enfermedad y similares. Un medio de demostrar la respuesta aguda a los regímenes de tratamiento presentes es analizar la expresión del receptor de progestina. Se ha descubierto que el Compuesto III usado en la presente invención lleva a una expresión disminuida del receptor de progestina que indica una respuesta al agente. En base a los extensos datos de eficacia preclínica en xenoinjertos de ratón presentados en los ejemplos, el cálculo y la divulgación de las dosis clínicas humanas eficaces previstas para el SARM RAD140 se describen en el Ejemplo 9.

Los ejemplos de métodos divulgados en la presente tienen propósitos ilustrativos y, por lo tanto, la invención no se limita a las realizaciones ejemplificadas.

Ejemplos

Ejemplo 1: SARM RAD140 en combinación con el inhibidor de CDK inhibió el crecimiento de cáncer de mama positivo para ER y AR en ratones PDx (Figura 1)

Material y métodos:

El modelo N° 1 de PDx mantenido por una Organización de Investigación por Contrato (CRO) se caracterizó como AR+/ER+/PR+/Her2- mediante IHC y micromatrices de chips genéticos. Se implantaron subcutáneamente cortes de tumores donantes en los costados de ratones desnudos hembra intactos (n=7). Los animales portadores de tumores de tamaños entre 60 y 256 mm3 se distribuyeron aleatoriamente en cuatro grupos de tratamiento. Los animales de cada grupo recibieron vehículo (círculo, Figura 1), RAD140 100 mg/kg dos veces al día (bid) (triángulo, Figura 1), palbociclib 75 mg/kg una vez al día (qd) (cuadrado, Figura 1), o una combinación de RAD140 100 mg/kg (bid) con palbociclib 75 mg/kg (qd) (diamante, Figura 1), respectivamente. Todos los compuestos de prueba se administraron por vía oral durante 42 días consecutivos. El volumen tumoral se midió dos veces a la semana y se calculó el % de inhibición del crecimiento tumoral (TGI). Los animales que portaban tumores de un tamaño superior a 2000 mm3 fueron sacrificados según las normas de bienestar animal. Al final del estudio, se recogieron muestras de plasma y tumor para análisis de farmacocinética y farmacodinámica. Los ratones fueron suplementados con estradiol añadido a su agua para estimular el crecimiento de los tumores.

Resultados:

El tratamiento con RAD140 o palbociclib solo llevó a la inhibición del crecimiento tumoral con aproximadamente un 53% de TGI (inhibición del crecimiento tumoral), respectivamente (Figura 1). La administración combinada de SARM e inhibidor de CDK4/6 produjo una TGI del 70% el día 28, momento en el que el número de animales en el grupo tratado con vehículo cayó por debajo de 6 debido a la terminación ética de ratones con tumores más grandes. La combinación de RAD140 y palbociclib continuó mostrando un potente efecto supresor de tumores hasta el final del estudio (día 42). El TGI del criterio de valoración estimado fue superior al 70%. No se observó un grado apreciable de pérdida de peso relacionada con el tratamiento con RAD140 (datos no mostrados).

En resumen, el tratamiento con un SARM solo mostró una inhibición tumoral comparable a la de palbociclib en ratones portadores de cáncer de mama AR+/ER+/PR+/Her2-. La administración combinada de RAD140 con palbociclib produjo un efecto inhibidor del crecimiento mejorado en estos xenoinjertos que el RAD140 y el palbociclib solos, respectivamente. Estos resultados indican que la administración combinada de un SARM con o sin un inhibidor de CDK4/6 es eficaz en tumores mamarios ER+/AR+, y que una combinación con un CDK4/6 potenció la TGI más que el SARM y el inhibidor de CKD4/6 cuando se administran solos, respectivamente.

Ejemplo 2: la administración de SARM RAD140 en combinación con un inhibidor de CDK o un inhibidor de mTOR inhibió el crecimiento de cáncer de mama positivo para ER y AR en ratones CDx (Figura 2) Material y métodos:

ZR-75-1 es un modelo de línea celular de cáncer de mama usado frecuentemente que es ER+/AR+. El modelo parental ZR-75-1 CDx (modelo ZR75) se estableció inyectando células ZR-75-1 (tumores de donantes) en el costado de ratones desnudos hembra. El estado ER+/AR+ de estos tumores de donantes se confirmó usando inmunotransferencia (IB) e IHC. Se implantaron subcutáneamente cortes de tumor de donante en los costados de ratones desnudos hembra intactos (n=7). Después de la distribución aleatoria de los tumores de xenoinjerto establecidos, los animales de cada grupo recibieron vehículo (diamante, Figura 2), RAD140 100 mg/kg (bid) (cuadrado, Figura 2), palbociclib 45 mg/kg (qd) (triángulo, Figura 2), una combinación de RAD140 100 mg/kg (bid) con palbociclib 45 mg/kg (qd) (estrella, Figura 2), everolimus 2,5 mg/kg (qd) ("X”, Figura 2), o una combinación de RAD140 100 mg/kg (bid) con everolimus 2,5 mg/kg (qd) (círculo, Figura 2), respectivamente. Todos los compuestos de prueba se administraron por vía oral durante 28 días consecutivos. Los tumores de xenoinjerto ZR75-1 en animales fueron respaldados por gránulos de estradiol (0,18 mg de liberación en 90 días, Innovative Research America). El volumen tumoral se midió dos veces a la semana y se calculó el % de TGI. Los animales portadores de tumores de un tamaño mayor de 2000 mm3 fueron sacrificados según las normas de bienestar animal. Al final del estudio, se recogieron muestras de plasma y tumor para análisis de farmacocinética y farmacodinámica.

Resultados:

El tratamiento con RAD140, palbociclib o everolimus solo llevó a la inhibición del crecimiento tumoral con TGI del 52%, 84% o 75%, respectivamente (Figura 2). La combinación de RAD140 y palbociclib o everolimus mostró un potente efecto supresor de tumores hasta el final del estudio (día 28). Los TGI del criterio de valoración para la combinación RAD140-palbociclib y la combinación RAD140-everolimus fueron del 96% y del 101%, respectivamente. No se observó un grado apreciable de pérdida de peso relacionada con el tratamiento con RAD140 (datos no mostrados).

En resumen, el tratamiento con RAD140 solo mostró actividad antitumoral en ratones CDx con cáncer de mama ER+/AR+. La administración combinada de RAD140 o con palbociclib o con everolimus produjo un efecto mejorado inhibidor del crecimiento en estos xenoinjertos que el RAD140, palbociclib o everolimus solos, respectivamente. Estos resultados indican que una administración combinada de SARM RAD140 solo o en combinación con el inhibidor de CDK4/6 o mTOR es eficaz en tumores mamarios ER+/AR+.

Ejemplo 3: SARM redujo el crecimiento del cáncer de mama ER y AR en modelos PDx y fue más eficaz que el fulvestrant (Figura 3)

Material y métodos:

El modelo N°2 de PDx mantenido por una CRO se caracterizó como AR+/ER+ usando IHC y micromatrices de chips genéticos. Se implantaron subcutáneamente cortes de tumor donante en los costados de ratones desnudos hembra intactos (n=10). Después de la aleatorización de los xenoinjertos establecidos, los animales de cada grupo recibieron vehículo (diamante, Figura 3), RAD140 100 mg/kg diarios (qd) (cuadrado, Figura 3), fulvestrant 1 mg por semana (qw) (círculo, Figura 3), o una combinación de RAD140 100 mg/kg (qd) con fulvestrant 1 mg (qw) (estrella, Figura 3), respectivamente. RAD140 se administró por vía oral durante 42 días consecutivos y fulvestrant se administró por vía subcutánea una vez a la semana durante 6 semanas. El volumen tumoral se midió dos veces por semana y se calculó el % de TGI. Los animales que tenían tumores de un tamaño superior a 2000 mm3 fueron sacrificados según las normas de bienestar animal. Los modelos PDx se suplementaron con estradiol añadido a su agua para estimular el crecimiento de los tumores. Al final del estudio, se recogieron muestras de plasma y tumor para análisis de farmacocinética y farmacodinámica.

Resultados:

El tratamiento con RAD140 solo llevó a la inhibición del crecimiento tumoral con aproximadamente un 76% de TGI (Figura 3). El fulvestrant solo llevó a un 59% de TGI. La administración combinada de RAD140 y fulvestrant produjo una TGI del 76%, similar al observado con RAD140 solo. No se observó un grado apreciable de pérdida de peso relacionada con el tratamiento con SARM (datos no mostrados).

En resumen, el SARM solo mostró una actividad antitumoral más eficaz que un SERD (por ejemplo, fulvestrant, un fármaco de referencia para los cánceres de mama ER+). La administración combinada de SARM y fulvestrant no mostró una mejora en la eficacia en ratones PDx con cáncer de mama ER+/AR+ más allá de lo que demostró RAD140 solo.

Ejemplo 4: RAD140 redujo el crecimiento de cáncer de mama positivo para ER y AR en modelos PDx (Figura 4)

Material y métodos:

El modelo N° 3 de PDx mantenido por una CRO se caracterizó como AR+/ER+ usando IHC y micromatrices de chips genéticos. Se implantaron subcutáneamente cortes de tumor donante en los costados de ratones desnudos hembra intactos (n=10). Después de la aleatorización de los xenoinjertos establecidos, los animales de cada grupo recibieron vehículo (diamante, Figura 4) o RAD140 100 mg/kg (bid) (triángulo, Figura 4) durante 45 días. A los ratones PDx se les añadió estradiol al agua para estimular el crecimiento de los tumores.

Resultados:

El tratamiento con RAD140 llevó a la inhibición del crecimiento tumoral con TGI al 49% (Figura 4). No se observó un grado apreciable de pérdida de peso relacionada con el tratamiento con RAD140 (datos no mostrados).

En resumen, estos resultados indican que un SARM inhibe el crecimiento de tumores mamarios ER+/AR+.

: RAD140 induce la expresión de ZBTB16 del gen objetivo de AR en células de cáncer de mama

y xenoinjerto derivado del paciente (PDx) (Figura 5)

Material y métodos:

El modelo N° 2 de PDX se trató como se describe en el Ejemplo 3 y se recogieron muestras de tumor congeladas 6 h después de la última dosis. Las células de cáncer de mama T47D positivas para ER y AR se incubaron en medios suplementados con suero extraído con carbón dextrano (CSS) al 5% durante 48 h antes del tratamiento con vehículo (DMSO), RAD140 a 1 nM, 10 nM, 100 nM, 1000 nM o D^hT a 1 nM o 10 nM. Veinticuatro horas después del tratamiento, se recogieron las células. El ARN se extrajo de las muestras tumorales congeladas de las células PDX N° 2 y T47D mencionadas anteriormente usando un kit Qiagen RNeasy. La PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR) se realizó usando los conjuntos de cebador/sonda para el gen objetivo AR ZBTB16 (que codifica la proteína PLZF) y GAPDH (control interno) (Applied Biosystems/ThermoScientific).

Resultados:

El tratamiento de células T47D in vitro con RAD140 llevó a un aumento dependiente de la dosis en la expresión del ARNm de ZBTB16 ("Figura 5A), con el tratamiento de 1000 nM llevando a un aumento de aproximadamente 130 veces en comparación con el de las células tratadas con vehículo. El andrógeno natural DHT también llevó a una inducción de este gen de 300 a 500 veces. Esto respalda aún más que RAD140 es un potente agonista de AR. Consistentemente, en PDX N°2 tratado con RAD140 100 mg/kg (mpk) qd durante 45 días, también se observó una inducción de ~25 veces del gen ZBTB16 en comparación con los tumores tratados con vehículo (Figura 5B). Por el contrario, el fulvestrant, un SERD y antagonista de la vía ER, no llevó a un aumento apreciable en la expresión del gen ZBTB16 (Figura 5B). ZBTB16/PLZF se ha implicado en el cáncer de próstata como un supresor de tumores que se suprime en tumores recurrentes después de la terapia de privación de andrógenos (ADT, también conocida como castración). Estos resultados sugieren que el SARM RAD140 activó la transcripción del gen objetivo AR en células de cáncer de mama. Más importante, RAD140 suprimió el crecimiento del cáncer de mama induciendo ciertos genes supresores de tumores, incluyendo pero no limitados a, ZBTB16/PLZF.

Ejemplo 6: RAD140 fue eficaz en los modelos WHIM18 PDx con y sin palbociclib

El modelo de PDx WHIM18 es un xenoinjerto derivado del paciente de un tumor de cáncer de mama trasplantado en ratones desnudos hembra atímicos. Los xenoinjertos WHIM18 eran ER+/PR+/AR+/HER- y crecieron independientemente del estrógeno exógeno (por ejemplo, 17p-estradiol). Los modelos de PDx WHIM18 fueron altamente resistentes al potente degradador de ER fulvestrant. El modelo de PDx WHIM18 albergaba la fusión ESR1-YAP1 y una mutación E545K en PIK3CA.

Se evaluó la eficacia de RAD140 o fulvestrant solo y en combinación con palbociclib en modelos de PDx WHIM18 durante 56 días (8 semanas) de tratamiento. El criterio de valoración primario fue el crecimiento tumoral. El plasma con EDTA y los tejidos tumorales se recogieron después de la última dosis.

Materiales y métodos

Se implantó a ratones desnudos atímicos consanguíneos hembra (The Jackson Laboratory 007850) (DOB 19-7-16) una suspensión de células individuales de 1,5 x 106 células WHIM18, pase 9. Las células se mezclaron 1:1 con DMEM: Matrigel (Corning REF 354234) en un volumen total de 100 pl/ratón. Una vez que los tumores alcanzaron un volumen medio de aproximadamente 100-300 mm3 (media real = 179,9), se aleatorizaron 60 ratones por volumen tumoral en 1 de 6 grupos de tratamiento (10 ratones/grupo) usando el software TumorManager™ de Biopticon el día 62 después de la implantación de células.

A cada ratón se le administró una dosis según el régimen de dosificación descrito en la Tabla 1 durante 56 días: se dosificó el vehículo de carboximetilcelulosa al 0,5% (CMC, Sigma C4888), RAD140 o palbociclib mediante alimentación forzada oral una vez al día; el fulvestrant se dosificó mediante inyección subcutánea una vez cada siete días. Los volúmenes de las dosis se calcularon en base al peso medio semanal de los animales para cada grupo, como se muestra en la Tabla 1. Se preparó CMC al 0,5% disolviendo 2,5 g en 400 ml de agua estéril tibia, se calentó con agitación hasta que se disolvió, qs a 500 ml con agua estéril almacenada a 4° C.

Tabla 1: Regímenes de dosificación con modelos de PDx WHIM18

La composición de RAD140 para la administración en este ejemplo se preparó añadiendo una cantidad apropiada de CMC al 0,5% a RAD140 con agitación continua a 4° C mientras se protegía de la luz. La composición de RAD140 se preparó semanalmente.

La composición de palbociclib para administración en este ejemplo se preparó añadiendo una cantidad adecuada de solución salina estéril (cloruro de sodio al 0,9% para inyección NDC 0409-7983-03) a palbociclib con agitación. La composición de palbociclib se agitó continuamente a 4° C hasta que se disolvió el palbociclib. La composición de palbociclib se preparó semanalmente.

Los volúmenes de los tumores se midieron dos veces a la semana usando TumorImager™ de Biopticon, los volúmenes se calcularon usando el software TumorManager™ correspondiente. Los ratones se pesaron una vez a la semana durante la primera mitad del estudio (27 días). Los ratones se pesaron dos veces a la semana una vez que mostraron pérdida de peso. Además, se pesó diariamente cualquier ratón con pérdida de peso corporal (BWL)>5% en comparación con el día 0 o que mostraba signos clínicos significativos (por ejemplo, postura encorvada, aspecto desaliñado). La dosificación se suspendió para cualquier ratón que tuviese un BWL>15% en comparación con el día 0; y la dosificación se reanudó cuando el peso corporal de los ratones se restableció a BWL<15%.

Los ratones se retiraron del estudio si estaban moribundos, si el volumen de su tumor excedía los 2000 mm3 o si perdían >20% de su peso corporal en comparación con el día 0. Si era posible, se tomaron muestras al final del estudio y se registró el tiempo de la última dosis y el tiempo de retirada.

Los animales restantes se sacrificaron el día 56 aproximadamente 6 horas después de la última dosis. La última dosis de fulvestrant se administró la mañana de la retirada. La retirada real fue entre 6-9 horas. La sangre se recogió mediante punción cardíaca inmediatamente después de la muerte mediante CO2 y se colocó en tubos EDTA centrifugados a 2000 g durante 10 minutos a 4° C. El plasma se transfirió a un tubo Eppendorf y se almacenó a -80° C.

Después de la extracción de sangre, los tumores se extirparon y pesaron. Para cada tumor, la mitad del tumor se colocó en formalina tamponada neutra (NBF) al 10% y la otra mitad del tumor se colocó en un tubo Eppendorf, se congeló instantáneamente en N2 líquido y luego se almacenó a -80° C. Todo el tejido recogido para bloques incrustados en parafina y fijados en formalina (FFPE) se fijó en formalina tamponada neutra (NBF) durante 24-48 horas y luego se transfirió a etanol al 70% antes de enviarse para ser procesado en bloques FFPE.

Resultados:

Los resultados del experimento in vivo se muestran gráficamente en la Figura 6. Las reducciones relativas en la proliferación tumoral se muestran con las estadísticas a continuación en las Tablas 2 y 3.

La inhibición del crecimiento tumoral (TGI, en %) se calculó con respecto al grupo de vehículo el día 56 (Tabla 2, Formulación 1)

Tabla 2: % de TGI de modelos de PDx WHIM18

tratados con RAD140, fulvestrant, palbociclib,

RAD140 palbociclib y fulvestrant palbociclib

La prueba t de Student se calculó en Excel usando una distribución de dos colas y una varianza igual de dos muestras del volumen tumoral delta del día 56 al día 0.

Tabla 3: valores p calculados a partir de la prueba t de Student del % de TGI de modelos de PDx WHIM18 tratados con RAD140, fulvestrant, palbociclib, RAD140

palbociclib y fulvestrant palbociclib

La administración de RAD140 a una dosis de 100 mg/kg solo o en combinación con palbociclib inhibió el crecimiento de tumores de cáncer de mama HER2-, ER+, PR+ implantados en ratones desnudos atímicos hembra (WHIM 18 PDx) (Figura 6). La combinación de RAD140 con palbociclib parece ser más eficaz que cualquiera de los dos fármacos por sí solos. No se observó toxicidad aparente en ninguno de los grupos.

Ejemplo 7

En el modelo N° 2 de PDx, es decir, el mismo modelo de PDx que se describe en el Ejemplo/Figura 3, RAD140 administrado en dosis más bajas, 1 mg/kg dos veces al día o 10 mg/kg dos veces al día, llevó a una inhibición sustancial del crecimiento tumoral, a juzgar por los valores de TGI de ~81% en ambos grupos.

Ejemplo 8

En el modelo N° 1 de PDx, es decir, el mismo modelo de PDx que se describe en el Ejemplo/Figura 1, RAD140 administrado en dosis más bajas, 1 mg/kg dos veces al día, 3 mg/kg dos veces al día o 10 mg/kg dos veces al día, llevó a una inhibición sustancial del crecimiento tumoral, según los valores de TGI del 49%, 65% y 57%, respectivamente.

Ejemplo 9

Se demostró que RAD140 tiene una buena actividad en un xenoinjerto de tumor PDx trasplantado en ratones desnudos. La actividad fue significativa en un intervalo de 1 mg/kg a 100 mg/kg. Teniendo en cuenta los niveles de exposición específicos en ratones y el modelo farmacocinético de especies cruzadas a partir de parámetros farmacocinéticos tanto conocidos como derivados, puede calcularse un intervalo de dosis en pacientes femeninas. En particular, se demostró que todas las dosis entre 1 mg/kg (bid) y 100 mg/kg (bid) tienen buena eficacia en uno o más modelos descritos en los ejemplos de la presente. En base a la vida media entre especies y la estabilidad de los microsomas, se predice que RAD140 será eficaz como una dosis oral una vez al día con un intervalo de dosis entre 5 mg y 500 mg. Por ejemplo, se cree que la dosis eficaz en ratones de 10 mg/kg (qd) se traduce efectivamente en una dosis de aproximadamente 50 mg qd en una mujer de 60 kg. Como un intervalo de 1 mg/kg a 100 mg/kg (bid) demostró ser eficaz, un intervalo más amplio de 10 mg a 1000 mg es clínicamente relevante. En particular, dentro de este intervalo puede verse que también se admiten intervalos adicionales de 10 mg-250 mg, 25 mg-250 mg, 25-500. De manera similar, los puntos de dosis individuales que caen en cualquier lugar dentro del intervalo son bien soportados, de tal manera que se soporta cualquier punto específico dentro del intervalo, entero o no entero. Por ejemplo, se contemplan específicamente dosis como 12,5 mg, 17,5 mg, etc., así como dosis como 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg y 500 mg. A modo de ejemplos no limitados adicionales, una dosis de 10 mg, 15 mg, 20 mg, 25 mg, 50 mg, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500 mg. Se predice que la dosificación QD de las dosis descritas será bastante adecuada, ya que se prevé a partir de estudios farmacocinéticos en animales que RAD140 tenga una vida media larga adecuada para la dosificación una vez al día, aunque la dosificación bid también funcionaría PERO las dosis dadas anteriormente para una única administración diaria se dividen en dos ya que se darían dos veces al día.

Claims (13)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto que es RAD140 (Compuesto III):

una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un método para tratar el cáncer de mama AR+/ER+.

2. El compuesto para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto se administra por vía oral.

3. El compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en donde:

(i) el sujeto se trata en un entorno adyuvante;

(ii) el sujeto ha tenido progresión de la enfermedad después del tratamiento con uno o más agentes endocrinológicos; opcionalmente en donde dichos uno o más agentes endocrinológicos se seleccionan del grupo que consiste de SERM, SERD, progestágenos, inhibidores de la aromatasa y combinaciones de los mismos; o (iii) dicho sujeto ha tenido una progresión de la enfermedad después del tratamiento con uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste de inhibidores de CDK4/6, inhibidores de mTOR, inhibidores de BCL-2, inhibidores de PI3K y combinaciones de los mismos.

4. El compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el compuesto se dosifica entre 10 y 500 mg, 10 mg y 250 mg, o 25 mg y 250 mg al día; opcionalmente en donde la dosis es una vez al día.

5. El compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el sujeto expresa ESR1 que comprende una o más mutaciones.

6. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 5, en donde:

(i) dicha mutación afecta a la afinidad de unión de los ligandos en comparación con ESR1 no mutado; opcionalmente en donde dicha mutación da como resultado una afinidad de estradiol reducida por el ESR1 mutado en comparación con el ESR1 no mutado; y/o

(ii) dicha mutación señaliza el ligando dependientemente o el ligando independientemente a través de la vía de ESR1; y/o

(iii) dicha mutación da como resultado una proteína de fusión que contiene por lo menos 10 aminoácidos continuos de una secuencia de un ESR1 no mutado y por lo menos 10 aminoácidos continuos de otra proteína humana; y/o

(iv) dicha mutación da como resultado que ESR1 pierda 10 o más aminoácidos consecutivos de su secuencia de aminoácidos del dominio de unión a ligando normal (no mutado); y/o

(v) dicha mutación comprende una o más mutaciones seleccionadas del grupo que consiste de ESR1-AKAP12, ESR1-CCDC170, ESR1-YAP1, ESR1-POLH, ESR1-PCDH11X y combinaciones de las mismas.

7. El compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el tratamiento comprende además la administración de un inhibidor de CDK4/6; donde opcionalmente dicho inhibidor de CDK4/6 tiene una IC50 de <100^ü nM frente a CDK4 y CDK6.

8. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 7, en donde dicho inhibidor de CDK4/6 se selecciona del grupo que consiste de palbociclib, ribociclib, trilaciclib, abemaciclib y AMG925.

9. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde dicho inhibidor de CDK4/6 es palbociclib.

10. El compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde dicho tratamiento comprende además la administración de:

(i) un inhibidor de mTOR; opcionalmente en donde dicho inhibidor de mTOR se selecciona del grupo que consiste de sirolimus, temsirolimus, everolimus, ridafarolimus y MLN0128; o

(ii) un inhibidor de PI3K; opcionalmente en donde dicho inhibidor de PI3K es BEZ235, GDC-0980, BKM120, GDC-0941, BYL719, GDC-0032, MK2206, GDC-0068, GSK2110183, GSK2141795, AZD5363, AZD2014, MLN0128 o CC-223; o

(iii) un inhibidor de PARP; opcionalmente en donde dicho inhibidor de PARP es talazoparib, veliparib, niraparib, beigene290, E7449, KX01, ABT767, CK102, JPI289, KX02, IMP4297, SC10914, NT125, PJ34, VPI289 o ANG-3186; o

(iv) un inhibidor de MCL-1; opcionalmente en donde dicho inhibidor de MCL-1 es ácido 7-(5-((4-(4-(N,N-dimetilsulfamoil)piperazin-1 -il)fenoxi)metil)-1,3-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-1 -(2-morfolinoetil)-3-(3-(naftalen-1 -iloxi)propil)-1 H-indol-2-carboxílico, S63845, omacataxina, seliciclib, UMI-77, AT101, sabutoclax o TW -37; o (v) un inhibidor de BCL-2; opcionalmente en donde dicho inhibidor de BCL-2 es venetoclax, navitoclax, ABT737, G3139 o S55746.

11. El compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde dicho sujeto es una mujer; opcionalmente en donde dicha mujer es una mujer premenopáusica o una mujer posmenopáusica.

12. El compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde dicho cáncer de mama está localizado, avanzado o metastásico.

13. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho tratamiento comprende además la administración de un agente terapéutico seleccionado del grupo que consiste de rapamicina, everolimus, ridaforolimus, temsirolimus, MLN0128, CC115, CC223, OSI-027, AZD8055, AZD2014, GDC-0980, SAR245409, LY3023414, NVP-BEZ235, NVP-BGT226, SF1126 y PKI-587.