RU2769527C2

RU2769527C2 - Способы лечения ar+ рака молочной железы

Info

Publication number: RU2769527C2
Application number: RU2018144427A
Authority: RU
Inventors: Гари ХАТТЕРСЛЕЙ; Джамаль САЕХ; Цзиян Юй; Крис МИЛЛЕР; Тиру БИХАНИ
Original assignee: Эллипсес Фарма Лтд
Priority date: 2016-06-22
Filing date: 2017-06-20
Publication date: 2022-04-01
Also published as: IL292659A; SI3474841T1; RU2018144427A; JP2019518765A; IL263678A; US20240207234A1; EP3474841A4; DK3474841T3; SG11201811225RA; EP3474841B1; JP2023055861A; KR20220035276A; KR102397890B1; EP4066827A1; WO2017223115A1; US20170368036A1; PL3474841T3; AU2017281038A1; EP3474841A1; BR112018076001A2

Abstract

Изобретение относится к применению соединения формулы III, его фармацевтически приемлемых солей или его фармацевтически приемлемого сольвата для лечения AR+/ER+ рака молочной железы у субъекта. Технический результат - лечение AR+/ER+ рака молочной железы. 33 з.п. ф-лы, 8 ил., 3 табл., 10 пр.

Description

ПРИОРИТЕТНАЯ ЗАЯВКА

По этой заявке испрашивается приоритет по Предварительной Заявке США No. 62/353,350, поданной 22 июня 2016 г., Предварительной Заявке США No. 62/377,497, поданной 19 августа 2016 г., и Предварительной Заявке США No. 62/461,546, поданной 21 февраля 2017 г., все из которых включены в настоящий документ посредством ссылки во всей их полноте, включая чертежи.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Связь между андрогенами и раком молочной железы была подтверждена некоторое время назад. В прошлом андрогенная терапия применялась для лечения рака молочной железы у женщин с переменным успехом. Поскольку рак молочной железы быстро развивается с приобретением устойчивости к гормональному лечению антиэстрогенами, существует острая необходимость в разработке нового лечения рака молочной железы.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В одном аспекте изобретение относится к способам лечения субъекта (напр., человека) с раком молочной железы, экспрессирующим рецептор андрогена (AR+ рак молочной железы), посредством введения одного или более агонистов AR. В некоторых вариантах выполнения изобретения агонист AR представляет собой селективный модулятор рецептора андрогена (SARM). В некоторых вариантах выполнения изобретения рак молочной железы является положительным как для рецептора андрогена, так и для рецептора эстрогена (AR+/ER+). В определенных вариантах выполнения способов, раскрытых в настоящем документе, рак молочной железы является положительным для AR, ER и рецептора прогестерона (AR+/ER+/PR+). В определенных вариантах выполнения изобретения рак молочной железы, экспрессирующий AR, не дает положительного результата теста на Her2 (Her2^-). В определенных вариантах выполнения изобретения рак молочной железы содержит одну или более мутаций в ER, как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах выполнения изобретения одна или более мутаций ER влияют на способность лигандсвязывающего домена ER связывать лиганды, имеющие сродство с немутантным ER (ER дикого типа). В определенных вариантах выполнения изобретения рак молочной железы, первоначально положительный по ER, может терять опухолевую экспрессию ER. В определенных вариантах выполнения изобретения субъект представляет собой женщину в пременопаузе или постменопаузе. В определенных вариантах выполнения изобретения SARM, используемый для лечения рака молочной железы, применяют в комбинации с ингибитором клеточного циклина, а в некоторых вариантах ингибитор клеточного циклина является ингибитором CDK4 и/или CDK6 (ингибитор CDK4/6). В определенных вариантах выполнения изобретения SARM используется в комбинации с ингибитором mTOR. В определенных вариантах выполнения изобретения ингибитор mTOR представляет собой ингибитор mTOR2 и/или mTOR3. В определенных случаях SARM назначается перорально. В определенных вариантах выполнения изобретения ингибитор клеточного циклина и/или ингибитор mTOR вводят перорально. В определенных вариантах выполнения изобретения SARM и mTOR или SARM и ингибитор CDK4/6 объединяют вместе в набор. В определенных вариантах выполнения изобретения совместно вводят SARM и mTOR или SARM и ингибитор CDK4/6.

В определенных вариантах выполнения изобретения SARM является стероидным или нестероидным, и в определенных вариантах выполнения изобретения SARM является нестероидным. В некоторых вариантах выполнения изобретения SARM по настоящему изобретению выбран из группы, состоящей из энобосарма, BMS-564929, LGD-4033, АС-262,356, JNJ-28330835, S-40503, LY-2452473 и GSK-2881078. В определенных вариантах выполнения способов, раскрытых в настоящем документе, SARM, используемые в соответствии со способами по настоящему изобретению, описываются родом соединений, представленных Формулой I и Формулой IV, как раскрыто в настоящем документе.

В определенных вариантах выполнения способов, раскрытых в настоящем документе, ингибитор клеточного циклина представляет собой ингибитор CDK4/CDK6, выбранный из группы, состоящей из палбоциклиба, рибоциклиба, трилациклиба и абемациклиба. В определенных вариантах выполнения изобретения ингибитор CDK4/CDK6 представляет собой соединения, которые ингибируют как CDK4, так и CDK6 с IC₅₀<250 нМ или <100 нМ или <50 нМ. В определенных вариантах выполнения способов, раскрытых в настоящем документе, ингибитор mTOR (TORC1 и/или TORC2) выбран из группы, состоящей из сиролимуса, темсиролимуса, эверолимуса, ридафаролимуса и MLN0128. В определенных вариантах выполнения изобретения в способах лечения рака молочной железы применяется комбинация SARM вместе с ингибитором PARP, и в определенных вариантах выполнения изобретения ингибитором PARP является талазопариб, велипариб, нирапариб, beigene290, Е7449, KX01, АВТ767, CK102, JPI289, KX02, IMP4297, SC10914, NT125, PJ34, VPI289, ANG-3186. В определенных вариантах выполнения изобретения описаны способы лечения рака молочной железы с применением комбинации SARM вместе с ингибитором BCL2, и в некоторых вариантах выполнения изобретения ингибитор BCL-2 представляет собой венетоклакс, навитоклакс, АВТ737, G3139 или S55746. В определенных вариантах выполнения изобретения описаны способы лечения рака молочной железы с применением комбинации SARM вместе с ингибитором MCL1, и в определенных вариантах выполнения изобретения ингибитор MCL-1 представляет собой 7-(5-((4-(4-(N,N-Диметилсульфамоил)пиперазин-1-ил)фенокси)метил)-1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил)-1-(2-морфолиноэтил)-3-(3-(нафталин-1-илокси)пропил)-1Н-индол-2-карбоновую кислоту, S63845, омакатаксин, селициклиб, UMI-77, АТ101, сабутоклакс, TW-37. В конкретных вариантах выполнения изобретения в способах лечения рака молочной железы применяется комбинация SARM вместе с ингибитором PI3K.

В некоторых вариантах выполнения способов, раскрытых в настоящем документе, рак молочной железы является ранее не леченным. В некоторых вариантах выполнения изобретения рак молочной железы еще не подвергался какой-либо эндокринологической терапии. В определенных вариантах выполнения способов, раскрытых в настоящем документе, рак молочной железы является устойчивым по меньшей мере к одной предшествующей терапии. В некоторых вариантах выполнения изобретения предшествующее лечение, для которого развилась резистентность, представляет собой антиэстрогенную терапию, напр., по меньшей мере одним из ингибиторов ароматазы, селективного модулятора рецептора эстрогена (SERM) или селективного деструктора рецептора эстрогена (SERD). В определенных вариантах выполнения изобретения субъект (напр., женщина) находится в постменопаузе и прошел предшествующую эндокринную терапию, включая, без ограничения, SERD (напр., фулвестрант, RAD1901, AZD9496); SERM (напр., тамоксифен, торемифен), ингибиторы ароматазы и их комбинации. В некоторых вариантах выполнения изобретения субъект (напр., женщина) имеет метастатический рак молочной железы, но еще не лечился. В некоторых вариантах выполнения изобретения субъект (напр., женщина) имеет метастатическую молочную железу и прогрессирование после предшествующей эндокронологической терапии. В некоторых вариантах выполнения изобретения субъект (напр., женщина) имеет метастатическую молочную железу и прогрессирование после лечения ингибитором mTOR, или ингибитором CDK4/6, или ингибитором PIK3.

В определенных вариантах выполнения изобретение относится к способу лечения рака молочной железы, включающему этапы измерения базового уровня экспрессии ZBTB16 мРНК или экспрессии белка у субъекта с ER+/AR+ раком молочной железы, лечения агонистом AR или селективным модулятором рецептора андрогена, как описано в настоящем документе, измерение уровня ZBTB16 (кодирующий белок PLZF) после лечения и, если уровень ZBTB16 после лечения увеличился, продолжение лечения с помощью агониста AR или селективного модулятора рецептора андрогена. В определенных вариантах выполнения изобретения субъектом является женщина, напр., женщина в пременопаузе или в постменопаузе.

Также изобретение относится к диагностическому набору Isa, содержащему реагенты для измерения экспрессии мРНК ZBTB16 или белка.

Изобретение относится к способу идентификации субъекта, который, вероятно, может реагировать на терапию агонистом AR, раскрытую в настоящем документе, включающему этапы измерения базового уровня экспрессии мРНК ZBTB16 или экспрессии белка, лечения агонистом AR (напр., SARM) в течении периода времени, включающего по меньшей мере одно введение, измерения уровня экспрессии ZBTB16 мРНК после терапии агонистом AR и выявления субъекта, который, вероятно, реагирует на терапию агонистом AR, если произошло увеличение экспрессии ZBTB16 мРНК. В некоторых вариантах выполнения изобретения порог отсечения экспрессии для определения ответной реакции составляет по меньшей мере 2× кратное увеличение, 4× кратное увеличение; 8× кратное увеличение, 10× кратное увеличение; 25× кратное увеличение; 50× кратное увеличение или увеличение в >1×100 раз.

В определенных вариантах выполнения изобретения предложен способ лечения женщины с раком молочной железы, где указанная женщина экспрессирует одну или более мутаций в рецепторе эстрогена, напр., мутацию гена ERα (ESR1). Такие мутации могут включать слитые белки, где часть рецептора эстрогена была слита с частью или полностью с другим белком. В некоторых вариантах выполнения изобретения предлагается способ лечения женщины с раком молочной железы, в котором указанную женщину сначала оценивают на наличие одной или более из указанных мутаций и/или слияний, и если она дает положительный результат на одну или более мутаций и/или слияний, ее лечат агонистом AR, например, SARM, либо в виде монотерапии, либо с одним или более дополнительными химиотерапевтическими средствами, как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах выполнения изобретения субъект экспрессирует мутированный PI3K.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фигура 1: Соединение III («RAD140») в комбинации с ингибитором CDK ингибирует рост ER+/AR+ рака молочной железы у мышей с полученным от пациента ксенотрансплантатом (PDx).

Фигура 2: Комбинированное введение RAD140 с ингибитором CDK или ингибитором mTOR ингибировало рост ER+/AR+ рака молочной железы у мышей с полученным из клеточной линии ксенотрансплантатом (CDx).

Фигура 3: RAD140 снижал рост ER+/AR+ рака молочной железы у мышей PDx и был более эффективным, чем фулвестрант.

Фигура 4: RAD140 снижал рост ER+/AR+ рака молочной железы у мышей PDx.

Фигуры 5А-5В: Увеличение экспрессии ZBTB16 мРНК при лечении RAD140 рака молочной железы. Фигура 5А: Увеличение экспрессии ZBTB16 мРНК при лечении RAD140 клеток рака молочной железы T47D in vitro. Фигура 5В: Увеличение экспрессии ZBTB16 мРНК при лечении RAD140 AR+/ER+ рака молочной железы in vivo (PDx #2).

Фигура 6: Эффекты ингибирования RAD140, палбоциклиба и комбинации RAD140 и палбоциклиба на опухоль PDx в моделях WHIM 18, несущих слияние ESR1-YAP1 и мутацию Е545K в PIK3CA.

Фигура 7: RAD140 ингибировал рост ксенотрансплантата полученного от пациента с ER+/AR+, раком молочной железы, в той же модели PDX, что и на Фигуре 3.

Фигура 8: RAD140 ингибировал рост ксенотрансплантата, полученного от пациента с ER+/AR+ раком молочной железы, в той же модели, что и на Фигуре 1.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

RAD140 представляет собой перорально доступный нестероидный SARM с отчетливым профилем тканевой селективности. Функциональный анализ in vitro показал, что RAD140 является мощным агонистом AR, сравнимым с дигидротестостероном в клетках рака молочной железы. Как указано в разделе Примеры ниже, лечение SARM (напр., RAD140) отдельно (Примеры 3 и 4; Примеры 7 и 8) или в комбинации с ингибитором CDK4/6 (напр., палбоциклибом в Примерах 1 и 2) или с ингибитором mTOR (напр., эверолимусом в Примере 2) эффективно ингибировало рост ER+/AR+ рака молочной железы у множества мышей PDx и/или CDx. Молекулярный анализ образца опухоли ксенотрансплантата выявил значительное подавление рецептора прогестерона (PR), что согласуется с предыдущими сообщениями о перекрестных помехах между AR- и ER-путями (передача сигналов ER усиливает PR), но также продемонстрировал мощную активацию AR-пути в опухолях, обработанных RAD140. Кроме того, увеличение экспрессии ZBTB16 мРНК наблюдалось при лечении RAD140 AR+/ER+ рака молочной железы in vivo (PDx #2) и in vitro (клетки рака молочной железы T47D); тогда как PDx #2, обработанный SERD (фулвестрант), не обнаруживал заметной индукции экспрессии ZBTB16 мРНК (Пример 5). Лечение SARM (напр., RAD140) отдельно (Пример 6) или в комбинации с ингибитором CDK4/6 (напр., палбоциклибом) эффективно ингибировало рост ER+/PR+/AR+/HER- рака молочной железы у мышей WHIM18 PDx, изначально экспрессирующих слияние ESR-1 YAP.

Более конкретно, RAD140 неожиданно ингибировал рост опухоли во всех четырех моделях PDx (PDx #1 (AR+/ER+/PR+/Her2-), PDx #2 (AR+/ER+), PDx #3 (AR+/ER+) и WHIM18 PDx (ER+/PR+/AR+/HER-)) и моделях CDx (ZR75 CDx, полученные из линии раковых клеток ZR-75-1 (AR+/ER+) (см. примеры).

RAD140 в отдельности показал ингибирование роста опухоли (TGI) в отношении ER+/PR+/AR+/HER- рака молочной железы в WHIM18 PDx, который был высоко устойчивым к сильному ER-деструктору фульвестранту (Пример 6). Неожиданно, введение RAD140 в комбинации с ингибитором CDK4/6 (напр., палбоциклибом) приводило к усилению эффектов TGI по сравнению с лечением только RAD140 или только палбоциклибом. Кроме того, в моделях PDx #1 (Пример 1) и CDx (Пример 2) введение RAD140 в комбинации с ингибитором CDK4/6 (напр., палбоциклибом) снова неожиданно привело к усилению эффектов TGI по сравнению с лечением только RAD140 или только палбоциклибом. В моделях CDx (Пример 2) введение RAD140 в комбинации с ингибитором mTOR (напр., эверолимусом) также приводило к усилению эффектов TGI по сравнению с лечением только RAD140 или только палбоциклибом (Пример 2). Таким образом, SARM (напр., RAD140), вероятно, являются эффективным эндокринным остовом, который усиливает TGI при лечении AR+/ER+ и/или ER+/PR+/AR+/HER- рака, включая эндокринную резистентность или меньшую чувствительность к эндокринной терапии (напр., SERD, такими как фулвестрант), а также сильно усиливает активность эффективных агентов, таких как ингибитор cdk4/6, ингибитор m-TOR, ингибиторы PI3k, ингибиторы PARP, ингибиторы BCL-2, ингибиторы MCL-1 или любые их комбинации.

На основании результатов, представленных в настоящем документе, предложены способы лечения AR+ опухоли у субъекта, нуждающегося в этом, путем введения субъекту терапевтически эффективного количества агониста AR (напр., SARM, такого как RAD140), или его фармацевтически приемлемых солей или фармацевтически приемлемых сольватов. (напр., гидратов). В определенных вариантах выполнения изобретения способы дополнительно включают введение субъекту терапевтически эффективного количества одного или более вторых терапевтических агентов, как описано в настоящем документе, напр., ингибиторов CDK4/6, ингибиторов mTOR, ингибиторов PARP, ингибиторов PIK3, ингибиторов BCL-2 и ингибиторов MCL-1.

Также предложены способы лечения рака молочной железы у субъекта, включающие следующие этапы:

a) определение базового уровня ZBTB16 мРНК и/или белка;

b) введение агониста рецептора андрогена;

c) лечение субъекта с помощью агониста AR и затем повторное тестирование уровня мРНК ZBTB16 и/или белка для обеспечения первого уровня мРНК ZBTB16 и/или белка; и

d) продолжение введения агониста AR, если первый уровень выше базового уровня мРНК ZBTB16 и/или белка.

Примеры субъектов включают, без ограничения, млекопитающих, напр. человека. В определенных вариантах выполнения изобретения субъектами способов, раскрытых в настоящем документе, являются женщины, напр. женщины в пременопаузе, а также женщины в постменопаузе. В определенных вариантах выполнения изобретения субъекты для способов, раскрытых в настоящем документе, прогрессировали в предшествующей эндокринной терапии, включая, без ограничения, SERD (напр., фулвестрант, RAD1901, AZD9496); SERM (напр., тамоксифен, торемифен), ингибиторы ароматазы (напр., аримидекс, летрозол, аромазин или их комбинации, или прямые, или последовательные). В некоторых вариантах выполнения изобретения субъекты имеют метастатический рак молочной железы и прогрессировали при предшествующей эндокринной терапии (напр., SERD, SERM, ингибиторами ароматазы или их комбинациями). В некоторых вариантах выполнения изобретения субъект (напр., женщина) имеет первичный или метастатический рак молочной железы и прогрессировал от ингибитора cdk4/6, ингибитора mTOR или ингибитора PI3K. В некоторых вариантах выполнения изобретения женщина не лечилась от рака молочной железы, и агонист AR (напр., SARM), как описано в настоящем документе (напр., RAD140), вводят либо отдельно, либо в комбинации с одним из других агентов, упомянутых в настоящем документе.

Присутствие AR, ER и/или PR в опухолевых клетках рака молочной железы или опухолевой ткани может быть легко оценено, напр., с помощью иммуногистохимии (IHC). Определенные варианты выполнения способов, раскрытых в настоящем документе, дополнительно включают определение опухоли, экспрессирующей AR, и, необязательно, один или более других рецепторов (напр., ER, PR и Her2), особенно ESR1. Более того, способы, раскрытые в настоящем документе, открывают дверь к новым схемам лечения, не зависящим от путей, которые, вероятно, уже были превращены в резистентность (напр., резистентность к антиэстрогенам).

Мутация гена ERa (ESR1)

Устойчивость к гормональной терапии при ER+ раке молочной железы часто сопровождается различными мутациями в рецепторе эстрогена. В некоторых случаях эти мутированные рецепторы приводят к повышенной резистентности или даже полной резистентности к антиэстрогенному/антиэндокринологическому лечению, когда такая резистентность возникает в результате лечения ингибитором ароматазы, антиэстрогеном SERM, таким как тамоксифен или деструктором рецептора эстрогена (SERD), таким как фулвестрант. Хотя в некоторых случаях устойчивость к лечению антиэстрогенами сопровождается полной потерей передачи сигналов рецептора эстрогена из-за потери самого рецептора, однако, во многих случаях мутированный рецептор все еще сигнализирует по пути ER. Причины устойчивости к антиэстрогенам включают примеры, когда рецептор эстрогена мутирует таким образом, что он проявляет пониженную аффинность к непосредственно конкурентным лигандам (т.е., Y537S ESR1, D538G) или что он теряет часть или весь свой лиганд-связывающий домен (LBD), но все еще сохраняет достаточное количество других функциональных доменов (напр., ДНК-связывающего домена, домена AF1 и/или шарнирной области), так что рецептор, даже если он не связан лигандом (или не способен даже связывать лиганд), сохраняет конститутивную активность, означающую, что рецептор эффективно остается включенным. В некоторых случаях это происходит, когда происходят хромосомные транслокации, приводящие к продуктам слияния генов, когда лиганд-связывающий домен ER усекается или удаляется, а другой ген или частичный ген замещается на его место, что приводит к конститутивно активному рецептору, который не требует связывания лиганда. Было продемонстрировано, что опухолевые клетки, несущие такие генетические изменения, являются устойчивыми к терапевтическим агентам, нацеленным на ER LBD. Такие мутантные клетки могут быть обогащены с течением времени. Также известно, что некоторые из мутаций уже существуют до лечения антиэстрогенами/SERD/ингибиторами ароматазы. Субъект, экспрессирующий такие рецепторы, может подвергаться большему риску плохого ответа на традиционное лечение против ER, но он является отличным кандидатом для применения агониста AR или терапии SARM, как описано в настоящем документе. Таким образом, пациент может быть кандидатом на лечение первой линии или адъювантное лечение агонистом AR или SARM, когда субъект экспрессирует такую мутацию или слияние. В определенных вариантах выполнения изобретения субъекта тестируют на экспрессию потенциальной мутации или слияния, чтобы определить, следует ли лечить ее в неоадъювантной, адъювантной или в первой линии, где она еще не лечилась эндокринологическим агентом. Применение SARM в первой линии может быть либо в качестве монотерапии, либо в комбинации по меньшей мере с одним агентом, выбранным из группы, состоящей из ингибиторов CDK (напр., ингибиторов CDK 4/6), ингибиторов mTOR (напр., mTORc 1 и/или 2), ингибиторов PARP, ингибиторов PIK3, ингибиторов BCL-2 и ингибиторов MCL-1. До описанных в настоящем документе способов эти мутации были особенно проблематичными, поскольку они исключали лечение антиэстрогенными агентами, которые являются первой линией для пациентов с ER+ раком молочной железы. В результате пациенты часто переходят к цитотоксическим агентам и переносят течение своего заболевания, которое часто ускоряется и намного труднее лечится. Важным аспектом по настоящему изобретению является то, что агонисты AR, описанные в настоящем документе, могут эффективно лечить субъектов, несущих такой мутированный ER.

В определенных вариантах выполнения способов, раскрытых в настоящем документе, агонисты AR, раскрытые в настоящем документе, используются для лечения субъектов, имеющих AR+/ER+ рак молочной железы, который включает одну или более мутаций ER. В определенных вариантах выполнения изобретения эти мутации влияют на способность лигандсвязывающего домена связывать лиганды, имеющие сродство с немутантным ER. В определенных вариантах выполнения данного изобретения указанный ER имеет одну или более точечных мутаций в лигандсвязывающем домене, которые уменьшают или устраняют связывание с нормально связывающимися лигандами ER типа агонистов и/или антагонистов, включая SERM и SERD, и в некоторых случаях имеют конститутивную сигнальную активность ER, напр., устойчивую также к ингибиторам ароматазы. В определенных вариантах выполнения изобретения мутированный рецептор имеет лиганд-связывающий домен, который частично или полностью отсутствует. В некоторых вариантах выполнения изобретения указанный мутантный рецептор представляет собой рецептор слияния между частью ESR1 и частью или всем другим белком. В определенных вариантах выполнения изобретения указанный мутантный рецептор способен передавать сигналы через пути ER несмотря на то, что он не способен связывать лиганд или обладает ослабленным сродством к лигандам, которые связывают немутантный ER. В некоторых вариантах выполнения изобретения мутант или слияние сохраняет ER функции ДНК-связывающего домена.

В определенных вариантах выполнения способов, раскрытых в настоящем документе, субъект экспрессирует по меньшей мере один конкретно описанный ген ER-слияния. В одном варианте выполнения изобретения ген содержит продукт мутации E545K в PIK3CA, продукт слияния ESR1-AKAP12, продукт слияния гена ESR1-CCDC170, продукт слияния гена ESR1-YAP1, продукт слияния гена ESR1-POLH, продукт слияния гена ESR1-PCDH11X или их комбинации. В конкретном варианте выполнения изобретения субъект экспрессирует слияние ESR1-YAP1. В определенных вариантах выполнения изобретения субъект имеет его/ее первый рак или опухоль молочной железы для того, чтобы определить, имеет ли субъект одну или более мутаций слияния гена ER в одном или более образцах своих раковых клеток. Если субъект действительно обладает одной или более описанными мутациями ER, он является кандидатом на лечение в соответствии с соединениями и способами по настоящему изобретению. В некоторых вариантах выполнения данного изобретения субъект уже лечился одной или более предшествующими терапиями, а в некоторых вариантах указанная предшествующая терапия включает антиэстрогенную терапию с применением, напр., ингибитора ароматазы, SERM или SERD. В некоторых вариантах выполнения изобретения субъект с указанной мутацией вообще не подвергался предшествующему лечению от рака молочной железы или не подвергался предшествующему лечению антиэстрогеном. В определенных вариантах выполнения изобретения субъект имеет одну или более мутаций/слияний, которые нарушают функцию связывания лиганда или активность ESR1.

В определенных вариантах выполнения изобретения субъект изначально является положительным на ER, а затем теряет опухолевую экспрессию ER. В некоторых вариантах выполнения изобретения указанная потеря экспрессии произошла после курса одного или более предшествующих лечений. В определенных вариантах выполнения изобретения указанные одно или более предшествующих лечений включали лечение антиэстрогеном, дополнительно включающее один или более ингибиторов ароматазы, SERM и SERD. В определенных вариантах выполнения изобретения указанный субъект, который утратил экспрессию ER в опухоли, действительно экспрессирует рецептор прогестерона (PR).

В определенных вариантах выполнения способов, раскрытых в настоящем документе, способ, раскрытый в настоящем документе, дополнительно включает этап диагностики, на котором указанного субъекта сначала оценивают на наличие одной или более мутаций/слияний, как описано в настоящем документе. Если считается, что мутация/слияние соответствует заранее установленному отсечению, субъект является кандидатом на лечение агонистом AR/SARM либо в виде монотерапии, либо в комбинации, как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах выполнения изобретения мутант или слияние включает слияние ESR1-YAP и/или тесно связанные варианты выполнения.

Агонисты AR

Раскрытые в настоящем документе способы не ограничиваются каким-либо одним классом соединений, а включают в себя в самом широком объеме соединения, которые имеют сродство к рецептору андрогена и могут экспрессировать по меньшей мере некоторую классическую активность андрогена, широко рассматриваемую как агонисты AR. Например, один из способов определения такой активности в доклинических условиях заключается в анализе на крысах Гершбергера, где эффекты предполагаемого агониста AR оценивают на фоне кастрации для того, чтобы определить, оказывает ли соединение стимулирующее действие на ткани-мишени андрогена, такие как леватор заднего прохода (levator ani), простата и/или семенные пузырьки. Агонисты AR могут быть стероидными или нестероидными, селективными или нет. В некоторых вариантах выполнения изобретения агонист AR представляет собой стероидный агонист AR, такой как тестостерон (и его сложные эфиры), DHT (и его сложные эфиры), флуоксиместерон, оксандролон, станзолол, метандростенелон, метилтестостерон, оксиметолон, нандролон (и их сложные эфиры). В определенных вариантах выполнения изобретения агонисты AR представляют собой SARM (напр., RAD140). В определенных вариантах выполнения изобретения SARM демонстрируют эффективность на конечных точках опухоли несмотря на снижение андрогенного стимула в других тканях (напр., простате) или других профилях экспрессии, что приводит к нежелательным результатам, таким как вирилизация и гирсутизм у женщин. В определенных вариантах выполнения изобретения SARM часто присутствуют с уменьшенным стимулом к повышению уровня ферментов печени и/или необязательно с вредными изменениями уровней холестерина, такими как снижение HD1 и/или увеличение LDL. В определенных вариантах выполнения изобретения SARM являются нестероидными и не представляют потенциальной классовой ответственности 17альфа-алкилированных стероидов, хотя в целом они все еще имеют хорошую пероральную активность. В определенных вариантах выполнения изобретения SARM обеспечивают эффективные способы лечения, которые являются менее вирилизующими или не вирилизующими. В определенных вариантах выполнения изобретения SARM вряд ли будут стимулировать обратную связь по центральной гормональной оси. В определенных вариантах выполнения изобретения SARM (напр., RAD140) могут пересекать гематоэнцефалический барьер («ГЭБ»). В определенных вариантах выполнения изобретения SARM, которые могут пересекать ГЭБ, оказывают подавляющее действие на центральную гормональную ось и уменьшают, а не увеличивают продукцию половых стероидов в яичниках, напр., эстрогенов, таких как эстрон и эстрадиол, а также внутрикринных предшественников, таких как DHEA, андростендион и т.д. В определенных вариантах выполнения способов, раскрытых в настоящем документе, SARM можно обычно использовать для лечения женщин в пременопаузе с раком молочной железы, а также для женщин в постменопаузе с раком молочной железы. В определенных вариантах выполнения изобретения супрессивные SARM (напр., RAD140) обеспечивают дополнительные преимущества для ЦНС у женщин в пременопаузе или постменопаузе, страдающих раком молочной железы. В определенных вариантах выполнения изобретения раскрытые в настоящем документе агонисты AR (напр., SARM) увеличивают мышечную массу и/или аппетит. Таким образом, агонисты AR (напр., SARM), раскрытые в настоящем документе, могут быть полезными, когда существует проблема кахетического состояния или истощения при раке.

Не желая быть связанными примером, некоторые из SARM, рассматриваемых в способах, раскрытых в настоящем документе, включают, без ограничения, 2-хлор-4-[[(1R,2R)-2-гидрокси-2-метилциклопентил]амино]-3-метилбензонитрил (J Med Chem 2016; 59 (2)750), PF-06260414, энобосарм, BMS-564929, LGD-4033, AC-262356, JNJ-28330835, S-40503, GSK-2881078, RAD140, AZD-3514, MK4541, LG121071, GLPG0492, NEP28, YK11, MK0773, ACP-105, LY-2452473, S-101479, S-40542, S-42, LGD-3303 и SARM, раскрытые в US 8,067,448 и US 9,133,182, которые включены в настоящий документ посредством ссылки. Кроме того, SARM, подходящие для способов, раскрытых в настоящем документе, включают соединения согласно Формуле I, раскрытые в настоящем документе (напр., Соединение II и Соединение III), и соединения согласно Формуле IV, раскрытые в настоящем документе, которые могут применяться отдельно или в комбинации с одним или более агентами, выбранными из группы, состоящей из ингибиторов CDK (напр., ингибиторов CDK4/6), ингибиторов mTOR (напр., ингибиторов mTORc 1 и/или ингибиторов mTORc 2), ингибиторов PARP, ингибиторов PIK3, ингибиторов BCL-2, ингибиторов MCL-1 и их комбинаций, для лечения AR+ рака молочной железы у субъекта.

Соединения согласно Формуле I включают соединения, имеющие структуру Формулы I:

их фармацевтически приемлемые соли и их фармацевтически приемлемые сольваты, где:

R_x = CN;

R_y = CF₃ или Cl;

R_z = СН₃, CH₂CH₃ или Cl; или

R_y и R_z вместе образуют:

или

;

R_a' представляет собой Н, F, Cl, CN, ОН или OSO₃; и

R₁ и R₂ каждый независимо выбран из водорода и метила.

В определенных вариантах выполнения изобретения соединение согласно Формуле I представляет собой Соединение II или Соединение III (RAD140):

его фармацевтически приемлемую соль или его фармацевтически приемлемый сольват.

В определенных вариантах выполнения изобретения соединения согласно Формуле IV включают:

R_x представляет собой CN, Cl, Br или NO₂;

R_y представляет собой СН₃, CF₃ или галоген;

R_z представляет собой водород, необязательно замещенный C_1-3 алкил, необязательно замещенный С_2-3 алкенил, необязательно замещенный С_1-3 гидроксиалкил, необязательно замещенный C_1-3 галогеналкил, NO₂, NH₂, ОМе, галоген или ОН;

P₁ представляет собой водород или метаболически лабильную группу;

R_a и R_b каждый независимо представляет собой водород или C_1-3 алкил; и

X представляет собой O.

Примеры необязательного замещения включают, без ограничения, 1-3 атома галогена.

В определенных вариантах выполнения изобретения SARM представляет собой соединение согласно Формуле IV, его фармацевтически приемлемую соль или его фармацевтически приемлемый сольват, где R_x представляет собой CN.

В определенных вариантах выполнения изобретения SARM представляет собой соединение согласно Формуле IV, его фармацевтически приемлемую соль или его фармацевтически приемлемый сольват, где R_x представляет собой CN; R_y представляет собой Cl или CF₃; R_z представляет собой водород, Cl или СН₃; P₁ представляет собой (C=O)-C_1-6 алкил или водород; и R_a и R_b каждый независимо представляет собой водород или -СН₃.

В определенных вариантах выполнения изобретения SARM представляет собой соединение согласно Формуле IV, его фармацевтически приемлемую соль или его фармацевтически приемлемый сольват, где R_x представляет собой CN; R_y представляет собой Cl или CF₃; R_z представляет собой водород, Cl или СН₃; P₁ представляет собой (C=O)-C_1-6 алкил или водород; и R_a и R_b оба являются водородом.

Комбинированная терапия агонистами AR и ингибиторами mTOR

Путь фосфоинозитид-3-киназа (PI3K)/протеинкиназа В (AKT)/мишень млекопитающего рапамицина (mTOR) является внутриклеточным сигнальным путем, важным для регуляции клеточного цикла. Частая активация пути PI3K/AKT/mTOR при раке и его решающая роль в росте и выживании клеток создают проблему в поиске подходящего количества пролиферации по сравнению с дифференциацией для того, чтобы использовать этот баланс при разработке различных методов лечения. См., напр., Gitto et al., "Recent insights into the pathophysiology of mTOR pathway dysregulation," Res. Rep. Bio., 2:1-16 (2015).

Ингибиторы пути PI3K показали многообещающие результаты при применении в комбинации с другими методами лечения. Например, эверолимус, как аллостерический ингибитор mTOR, был первым ингибитором mTOR, одобренным в комбинации с AI экземестаном (аромазином) для женщин в постменопаузе с распространенным гормон-рецептор-положительным (HR+) HER2- раком молочной железы (исследование BOLERO-2) в 2012. Агенты, нацеленные на другие компоненты пути PI3K, находятся в стадии разработки для лечения HR+ рака, напр., АТР-конкурентные, двойные ингибиторы PI3K и mTOR (напр., BEZ235, GDC-0980), ингибиторы pan-PI3K, которые ингибируют все четыре изоформы класса I PI3K (напр., BKM120, GDC-0941), изоформ-специфические ингибиторы различных изоформ PI3K (напр., BYL719, GDC-0032), аллостерические и каталитические ингибиторы AKT (MK2206, GDC-0068, GSK2110183, GSK2141795, AZD5363) и АТР-конкурентные ингибиторы только mTOR (AZD2014, MLN0128 и СС-223). Dienstmann et al., "Picking the point of inhibition: a comparative review of PI3K/AKT/mTOR pathway inhibitors," Mol. Cancer Ther., 13(5): 1021-31 (2014).

Несмотря на их большой потенциал, нежелательные побочные эффекты, связанные с ингибиторами mTOR, препятствуют их развитию в качестве эффективных методов лечения рака. Kaplan et al., "Strategies for the management of adverse events associated with mTOR inhibitors," Transplant Rev (Orlando), 28(3): 126-133 (2014); и Pallet et al., "Adverse events associated with mTOR inhibitors," Expert Opin. Drug Saf. 12(2): 177-186 (2013).

Кроме того, по-прежнему существует потребность в более длительных и эффективных целевых методах лечения, которые могут преодолеть проблемы, связанные с современными эндокринными методами лечения, при этом обеспечивая дополнительные преимущества путем сочетания со вторыми терапевтическими агентами (напр., эверолимусом и другими агентами, нацеленными на путь PI3K/AKT/mTOR) для борьбы с раком на поздней стадии и/или с резистентностью к предшествующему лечению.

В некоторых вариантах выполнения изобретения второй терапевтический агент направлен на путь PI3K/AKT/mTOR и может быть ингибитором mTOR, двойным ингибитором mTOR, ингибитором PI3K/mTOR или ингибитором mTOR2 и/или mTOR3. В некоторых вариантах выполнения изобретения второй терапевтический агент представляет собой производное рапамицина (также известное как рапалог), такое как рапамицин (сиролимус или рапамун, Pfizer), эверолимус (Affinitor или RAD001, Novartis), ридафоролимус (АР23573 или MK-8669, Merck и ARIAD Pharmaceuticals), темсиролимус (Torisel или CCI779, Pfizer), включая сольваты (напр., гидраты) и их соли. В некоторых вариантах выполнения изобретения второй терапевтический агент представляет собой двойной ингибитор mTOR, который ингибирует как mTORC1, так и mTORC2, такой как MLN0128, СС115 и СС223 (Celgene), OSI-027 (OSI Pharmaceuticals) и AZD8055 и AZD2014 (AstraZeneca), включая сольваты (напр., гидраты) и их соли. В некоторых вариантах выполнения изобретения второй терапевтический агент представляет собой ингибитор PI3K/mTOR, такой как GDC-0980, SAR245409 (XL765), LY3023414 (Eli Lilly), NVP-BEZ235 (Novartis), NVP-BGT226 (Novartis), SF1126 и PKI-587 (Pfizer), включая сольваты (напр., гидраты) и их соли.

В определенных вариантах выполнения изобретения более одного из вторых терапевтических агентов, раскрытых выше, можно применять в комбинации с агонистами AR (напр., SARM), раскрытыми в настоящем документе, напр., соединениями согласно Формуле I, соединениями согласно Формуле IV, Соединением II и Соединением III. Например, ингибитор mTOR можно применять вместе с другим ингибитором mTOR или с ингибитором PI3K/mTOR. Также в данной области техники известно, что вторые терапевтические агенты, раскрытые выше, включая ингибиторы mTOR, двойные ингибиторы mTOR и ингибиторы PI3K/mTOR, можно вводить с другими активными агентами для повышения эффективности лечения, напр., можно использовать в комбинации с ингибиторами JAK2 (Bogani et al., PLOS One, 8(1): e54826 (2013)), химиотерапевтическими средствами (Yardley, Breast Cancer (Auckl) 7: 7-22 (2013)). Соответственно, вторые терапевтические агенты также включают эти вспомогательные активные агенты.

Фигура 2 иллюстрирует повышенную эффективность, полученную при использовании ингибитора mTOR эверолимуса в комбинации с SARM RAD140 на модели in vivo.

Комбинированная терапия агонистами AR и ингибиторами CDK

Сообщалось, что регуляторы клеточного цикла, такие как циклины и циклинзависимые киназы (CDK), оказывают влияние на экспрессию ER. Lamb et al., "Cell cycle regulators cyclin D1 and CDK4/6 have estrogen receptor-dependent divergent functions in breast cancer migration and stem cell-like activity," Cell Cycle 12(15): 2384-2394 (2013). Селективные ингибиторы CDK4/6 (напр., рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб) позволили типам опухолей, в которых CDK4/6 играет ключевую роль в переходе клеточного цикла фазы G1-в-S, быть нацеленными с улучшенной эффективностью и меньшим количеством неблагоприятных эффектов для нормальных клеток.

et al., "Treating cancer with selective CDK4/6 inhibitors," Nat. Rev. Clin. Oncol. (2016), published online 31 March 2016 (hppt://www.nature.com/nrclinonc/journal/vaop/ncurrent/full/nrclinonc.2016.26.html). Селективные ингибиторы CDK4/6 продемонстрировали лучшие ответы при тестировании в комбинации с ER-эндокринной терапией у пациентов с ER-положительным раком молочной железы. В связи с этим полезно иметь в виду, что пути AR могут пересекаться с путями ER и, необязательно, при некоторых условиях противодействовать активности ER другим способом, чем прямой антагонизм ER.

Палбоциклиб в комбинации с ингибитором ароматазы летрозолом (исследование PALoMA-1/TRIO 18) был одобрен для лечения гормонального (HR)-позитивного (HR+) HER2-негативного (HER2-) прогрессирующего рака молочной железы в качестве начальной терапии на основе эндокринной системы у женщины в постменопаузе в феврале 2015 года. В феврале 2016 года палбоциклиб в комбинации с SERD фулвестрантом (исследование PALOMA-3) был одобрен для лечения пациентов с ER+, HER2- или прогрессирующим метастатическим раком молочной железы, у которых прогрессировала предшествующая эндокринная терапия. FDA предоставило ингибитору CDK4/6 абемациклиб (LY2835219) революционное обозначение терапии в качестве монотерапии для пациентов с тяжелой предварительной терапией с рефрактерным HR-положительным прогрессирующим раком молочной железы, основываясь на данных исследования I фазы (исследование JPBA). В настоящее время разрабатываются дополнительные комбинации селективных ингибиторов CDK4/6 (напр., рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб) с ER-эндокринной терапией (напр., AI, SERM и SERD). Тем не менее, похоже, что клинические или доклинические исследования, демонстрирующие неожиданную комбинированную эффективность между SARM и ингибиторами cdk4/6, по-прежнему отсутствуют.

Кроме того, ингибиторы CDK4/6 демонстрируют токсичность, что может потребовать прерывистой терапии (

). Таким образом, остается потребность в эффективных и альтернативных комбинированных терапиях, которые могут преодолеть проблемы, связанные с современными эндокринными терапиями, при этом обеспечивая дополнительные преимущества в комбинации с ингибиторами CDK4/6 для борьбы с раком молочной железы, особенно на поздней стадии и/или с резистентностью к предшествующим лечениям или с мутациями, идентифицированными как существующие до предшествующей терапии или после предшествующей терапии, которые делают мишень ESR1 поддающейся андрогенному вмешательству (включая SARM), где другие эндокринологические способы лечения, как правило, менее эффективны или неэффективны вообще, особенно те, которые основаны на прямом антиэстрогенном эффекте, такие как ингибитор ароматазы, SERM или SERD.

В пределенных вариантах выполнения изобретения ингибиторы CDK4 и/или CDK6 включают, без ограничения, палбоциклиб, абемациклиб, рибоциклиб и AMG925.

Иллюстрацию in vivo этой концепции агониста AR (напр., SARM) в комбинации с ингибитором CDK4/CDK6 (напр., палбоциклибом) можно увидеть на Фигуре 1. Как показано на Фигуре 1, SARM RAD140 обладает очень эффективной способностью подавлять опухоль, аналогично монотерапии с применением палбоциклиба. Неожиданно, комбинированная терапия с помощью RAD140 и палбоцилиба обеспечила повышенный TGI по сравнению с монотерапией RAD140 или палбоцилибом. Таким образом, комбинированная терапия агонистами AR и ингибиторами CDK4/6 может обеспечить улучшенную активность и заметную клиническую пользу для лечения AR+ рака молочной железы. Аналогично, на Фигуре 6 показана эффективность в отдельности или в комбинации с палбоцилибом в модели WHIM18, первоначально экспрессирующей слияние ESR1-YAP, где фулвестрант (как SERD) был неэффективен в отдельности и не повышал эффективность палбоциклиба в комбинированной терапии фульвестрант-палбоцилиб.

Введение и составы

Что касается введения соединений и комбинаций в соответствии со способами, раскрытыми в настоящем документе, агонисты AR (напр., SARM) или их сольваты или соли и ингибиторы CDK4 и/или CDK6 (напр., рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб) или ингибиторы mTOR, ингибиторы PI3K, ингибиторы PARP, ингибиторы MCL-1 и/или ингибиторы BCL2, описанные в настоящем документе, вводят в комбинации нуждающемуся субъекту. Фраза «в комбинации» означает, что агонисты AR (напр., SARM), раскрытые в настоящем документе, могут вводиться до, во время или после введения ингибиторов CDK4 и/или CDK6 или ингибиторов mTOR, ингибиторов PI3K, ингибиторов PARP, ингибиторов MCL-1 и/или ингибиторов BCL2. Например, агонисты AR (напр., SARM) и ингибитор CDK4 и/или CDK6 или ингибитор mTOR, ингибиторы PI3K, ингибиторы PARP, ингибиторы MCL-1 и/или ингибиторы BCL2 можно вводить с интервалом примерно одна неделя, с интервалом около 6 дней, с интервалом около 5 дней, с интервалом около 4 дня, с интервалом около 3 дня, с интервалом около 2 дня, с интервалом около 24 часа, с интервалом около 23 часа, с интервалом около 22 часа, с интервалом около 21 час, с интервалом около 20 часов, с интервалом около 19 часов, с интервалом около 18 часов, с интервалом около 17 часов, с интервалом около 16 часов, с интервалом около 15 часов, с интервалом около 14 часов, с интервалом около 13 часов, с интервалом около 12 часов, с интервалом около 11 часов, с интервалом около 10 часов, с интервалом около 9 часов, с интервалом около 8 часов, с интервалом около 7 часов, с интервалом около 6 часов, с интервалом около 5 часов, с интервалом около 4 часа, с интервалом около 3 часа, с интервалом около 2 часа, с интервалом около 1 часа, с интервалом около 55 минут, с интервалом около 50 минут, с интервалом около 45 минут, с интервалом около 40 минут, с интервалом около 35 минут, с интервалом около 30 минут, с интервалом около 25 минут, с интервалом около 20 минут, с интервалом около 15 минут, с интервалом около 10 минут или с интервалом около 5 минут. В определенных вариантах выполнения изобретения агонисты AR (напр., SARM) и ингибиторы CDK4 и/или CDK6 или ингибиторы mTOR, ингибиторы PI3K, ингибиторы PARP, ингибиторы MCL-1 и/или ингибиторы BCL2 вводят субъекту одновременно или по существу одновременно. В определенных из этих вариантов выполнения изобретения агонисты AR (напр., SARM) и ингибитор CDK4 и/или CDK6 (напр., рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб) или ингибиторы mTOR (напр., сиролимус, темсиролимус, эверолимус, ридафаролимус и MLN0128), ингибиторы PI3K, ингибиторы PARP, ингибиторы MCL-1 и/или ингибиторы BCL2, описанные в настоящем документе, могут быть введены как часть одной композиции. Включены наборы, в которых агонист AR и один или более дополнительных агентов, описанных в настоящем документе, содержатся в наборе вместе, например, совместно упакованы. В качестве неограничивающего примера, наборы содержат RAD140 с ингибитором CDK4/6, ингибитором m-TOR, ингибитором PI3K, ингибитором PARP, ингибитором MCL-1 и/или ингибитором BCL2, такими как подробно описанные в настоящем документе.

В некоторых вариантах выполнения изобретения комбинацию одного агониста AR (напр., SARM) и одного ингибитора CDK4 и/или CDK6 или ингибитора mTOR, ингибитора PI3K, ингибитора PARP, ингибитора MCL-1 и/или ингибитора BCL2 вводят субъекту. В определенных вариантах выполнения изобретения комбинацию одного агониста AR (напр., SARM) и ингибитора CDK4/CDK6 и ингибитора mTOR, ингибитора PI3K, ингибитора PARP, ингибитора MCL-1 и/или ингибитора BCL2 вводят субъекту вместе. Составы агонистов AR (напр., SARM), применяемые в способах, раскрытых в настоящем документе, в целом были раскрыты в литературе, и эти идеи включены в настоящее описание посредством общей ссылки. В частности, в US 8,067,448 раскрыто, как получить соединения, и раскрыты общие способы получения составов, пригодных для приготовления рецептур с соединениями согласно Формуле I, Соединением II и Соединением III, и он включен в настоящее описание посредством ссылки. Аналогично, в US 9,133,182 раскрыто, как получить соединения согласно Формуле IV и включить их в рецептуры в целом, и он включен в настоящее описание посредством ссылки. В тех случаях, когда конкретные рекомендации или указания по составлению рецептур отсутствуют, могут применяться некоторые общие принципы. Например, соединения и комбинации раскрытых способов могут быть составлены в единичные дозированные формы, что означает физически дискретные единицы, подходящие в качестве единичной дозировки для субъектов, подвергающихся лечению, причем каждая единица содержит заранее определенное количество активного материала, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта необязательно в комбинации с подходящим фармацевтическим носителем. Единичная дозированная форма может быть предназначена для однократной суточной дозы или быть одной из множества суточных доз (напр., для введения от около 1 до 4 или более раз в сутки). Когда используют несколько суточных доз, единичная дозированная форма может быть одинаковой или разной для каждой дозы. В определенных вариантах выполнения изобретения соединения могут быть составлены для контролируемого высвобождения.

Соединения и комбинации для применения в раскрытых в настоящем документе способах могут быть составлены в соответствии с любым доступным общепринятым способом. Примеры предпочтительных лекарственных форм включают таблетку, порошок, тонкую гранулу, гранулу, таблетку с покрытием, капсулу, сироп, троше, ингалянт, суппозиторий, инъекционный раствор, мазь, глазную мазь, глазные капли, капли для носа, капли для ушей, катаплазму, лосьон и тому подобное. В составе обычно используются добавки, такие как разбавитель, связующее, дезинтегрант, смазывающее вещество, краситель, ароматизатор и, если необходимо, стабилизатор, эмульгатор, усилитель абсорбции, поверхностно-активное вещество, регулятор pH, антисептик, антиоксидант и тому подобное. Кроме того, приготовление также осуществляется путем объединения композиций, которые обычно используются в качестве сырья для фармацевтического состава, в соответствии с общепринятыми способами. Примеры этих композиций включают, напр., (1) масло, такое как соевое масло, говяжий жир и синтетический глицерид; (2) углеводород, такой как жидкий парафин, сквалан и твердый парафин; (3) эфирное масло, такое как октилдодецилмиристиновая кислота и изопропилмиристиновая кислота; (4) высший спирт, такой как цетостеариловый спирт и бегениловый спирт; (5) силиконовую смолу; (6) силиконовое масло; (7) поверхностно-активное вещество, такое как сложный эфир полиоксиэтилена и жирной кислоты, сложный эфир сорбитана и жирной кислоты, сложный эфир глицерина и жирной кислоты, сложный эфир полиоксиэтиленсорбитана и жирной кислоты, твердое полиоксиэтиленовое касторовое масло и блок-сополимер полиоксиэтилен-полиоксипропилен; (8) водорастворимую макромолекулу, такую как гидроксиэтилцеллюлоза, полиакриловая кислота, карбоксивиниловый полимер, полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон и метил целлюлоза; (9) низший спирт, такой как этанол и изопропанол; (10) многовалентный спирт, такой как глицерин, пропиленгликоль, дипропиленгликоль и сорбитол; (11) сахар, такой как глюкоза и тростниковый сахар; (12) неорганический порошок, такой как безводная кремниевая кислота, силикат алюминия-магния и силикат алюминия; (13) очищенную воду и тому подобное. Добавки для применения в вышеуказанных составах могут включать, напр., 1) лактозу, кукурузный крахмал, сахарозу, глюкозу, маннит, сорбит, кристаллическую целлюлозу и диоксид кремния в качестве разбавителя; 2) поливиниловый спирт, поливиниловый эфир, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, гуммиарабик, трагакант, желатин, шеллак, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, поливинилпирролидон, блок-сополимер полипропиленгликоль-полиоксиэтилен, меглумин, цитрат кальция, декстин, пектин и тому подобное в качестве связующего вещества; 3) крахмал, агар, желатиновый порошок, кристаллическую целлюлозу, карбонат кальция, бикарбонат натрия, цитрат кальция, декстрин, пектик, карбоксиметилцеллюлозу/кальций и тому подобное в качестве дезинтегранта; 4) стеарат магния, тальк, полиэтиленгликоль, диоксид кремния, конденсированное растительное масло и тому подобное в качестве смазывающего вещества; 5) любые красители, добавление которых является фармацевтически приемлемым, которые являются подходящими красителями; 6) какао-порошок, ментол, ароматизатор, масло мяты перечной, порошок корицы в качестве ароматизатора; 7) антиоксиданты, добавление которых является фармацевтически приемлемым, такие как аскорбиновая кислота или альфа-тофенол.

Соединения и комбинации для применения в раскрытых в настоящем документе способах могут быть составлены в фармацевтическую композицию в виде любого одного или более активных соединений, описанных в настоящем документе, с физиологически приемлемым носителем (также называемым фармацевтически приемлемым носителем, или раствором, или разбавителем). Такие носители и растворы включают фармацевтически приемлемые соли и сольваты соединений, используемых в способах по настоящему изобретению, и смеси, содержащие два или более таких соединений, фармацевтически приемлемые соли соединений и фармацевтически приемлемые сольваты соединений. Такие композиции получают в соответствии с приемлемыми фармацевтическими процедурами, такими как описанные в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th edition, ed. Alfonso R. Gennaro, Mack Publishing Company, Eaton, Pa. (1985), который включен в настоящий документ посредством ссылки.

Термин «фармацевтически приемлемый носитель» относится к носителю, который не вызывает аллергическую реакцию или другой неблагоприятный эффект у пациентов, которым он вводится, и который совместим с другими ингредиентами в составе. Фармацевтически приемлемые носители включают, например, фармацевтические разбавители, эксципиенты или носители, подходящим образом выбранные с точки зрения предполагаемой формы введения и соответствующие традиционной фармацевтической практике. Например, твердые носители/разбавители включают, но без ограничения, камедь, крахмал (напр., кукурузный крахмал, прежелатинизированный крахмал), сахар (напр., лактозу, маннит, сахарозу, декстрозу), целлюлозный материал (напр., микрокристаллическую целлюлозу), акрилат (напр., полиметилакрилат), карбонат кальция, оксид магния, тальк или их смеси. Фармацевтически приемлемые носители могут дополнительно содержать незначительные количества вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие агенты, консерванты или буферы, которые увеличивают срок годности или эффективность терапевтического агента.

Агонисты AR (напр., SARM), и/или ингибитор CDK4/6, и/или ингибиторы mTOR, ингибиторы PI3K, ингибиторы PARP, ингибиторы MCL-1, и/или ингибиторы BCL2 в свободной форме могут быть превращены в соль, если это необходимо, обычными способами. Используемый в настоящем документе термин «соль» не ограничен при условии, что соль является фармакологически приемлемой; предпочтительные примеры солей включают гидрогалогенидную соль (напр., гидрохлорид, гидробромид, гидройодид и тому подобное), соль неорганической кислоты (напр., сульфат, нитрат, перхлорат, фосфат, карбонат, бикарбонат и тому подобное), органическую карбоксилатную соль (напр., ацетатная соль, малеатная соль, тартратная соль, фумаратная соль, цитратная соль и тому подобное), органическую сульфонатную соль (напр., метансульфонатная соль, этансульфонатная соль, бензолсульфонатная соль, толуолсульфонатная соль, камфорсульфонатная соль и тому подобное), соль аминокислоты (напр., аспартатная соль, глутаматная соль и тому подобное), соль четвертичного аммония, соль щелочного металла (напр., соль натрия, соль калия и тому подобное), соль щелочноземельного металла (соль магния, соль кальция и тому подобное) и тому подобное. Кроме того, гидрохлоридная соль, сульфатная соль, метансульфонатная соль, ацетатная соль и тому подобное являются предпочтительными в качестве «фармакологически приемлемой соли» соединений, раскрытых в настоящем документе.

В определенных вариантах выполнения изобретения агонисты AR (напр., SARM) и ингибиторы CDK4/6 и/или mTOR, ингибиторы PI3K, ингибиторы PARP, ингибиторы MCL-1 и/или ингибиторы BCL2, описанные в настоящем документе, могут находиться в форме пролекарства, что означает, что оно должно претерпеть некоторые изменения (напр., окисление или гидролиз) для достижения его активной формы.

Введение соединений и/или комбинаций, раскрытых в данном описании, может быть осуществлено путями, описанными ранее для этих соединений, в общем, такими как, трансдермальное, подкожное, внутривенное, интраназальное, легочное и пероральное. Пероральное введение является предпочтительным путем для комбинированных способов по данному изобретению.

Терапевтически эффективное количество комбинации агониста AR (напр., SARM) и ингибитора CDK4/6 и/или ингибитора mTOR, ингибитора PI3K, ингибитора PARP, ингибитора MCL-1 и/или ингибитора BCL2 в раскрытых в настоящем документе способах представляет собой такое количество, при котором при введении в течение определенного промежутка времени достигается один или более терапевтических ориентиров (напр., замедление или остановка роста опухоли, приводящая к регрессии опухоли, прекращению симптомов и т.д.). Комбинация для применения в раскрытых в настоящем документе способах может вводиться субъекту один раз или более раз. В тех вариантах выполнения изобретения, в которых соединения вводят несколько раз, их можно вводить с установленным интервалом, напр., ежедневно, через день, еженедельно или ежемесячно. Альтернативно, их можно вводить с нерегулярным интервалом, напр., по мере необходимости, исходя из симптомов, состояния здоровья пациента и тому подобного. Терапевтически эффективное количество комбинации можно вводить раз в день, по меньшей мере в 2 дня, по меньшей мере в 3 дня, по меньшей мере в 4 дня, по меньшей мере в 5 дней, по меньшей мере в 6 дней, по меньшей мере в 7 дней, по меньшей мере в 10 дней или по меньшей мере в 15 дней. Необязательно, состояние рака или регрессию опухоли контролируют во время или после лечения, например, сканированием FES-PET субъекта. Дозировка комбинации, вводимой субъекту, может быть увеличена или уменьшена в зависимости от состояния рака или обнаруженной регрессии опухоли.

Специалист в данной области может легко определить это количество либо на основе индивидуального субъекта (напр., количество соединения, необходимое для достижения определенного терапевтического ориентира у субъекта, которого лечат), либо на популяционной основе (напр., количество соединения, необходимое для достижения определенного терапевтического ориентира для среднего субъекта из данной популяции). В идеале, терапевтически эффективное количество не должно превышать максимально допустимой дозы, при которой 50% или более подвергнутых лечению субъектов испытывают тошноту, гирсутизм, охриплость голоса или другие более серьезные реакции, которые мешают дальнейшему введению лекарственного средства. Терапевтически эффективное количество может варьироваться для субъекта в зависимости от множества факторов, включая разнообразие и степень симптомов, пол, возраст, массу тела или общее состояние здоровья субъекта, способ введения и тип соли или сольвата, изменение восприимчивости к препарату, конкретный тип заболевания и тому подобное. Одним из способов демонстрации острого ответа на существующие схемы лечения является анализ экспрессии рецептора прогестина. Было обнаружено, что агонисты AR (напр., SARM), используемые в настоящих способах, приводят к снижению экспрессии рецептора прогестина, что указывает на реакцию на агент. На основании обширных данных доклинической эффективности на ксенотрансплантатах мыши, представленных в примерах, расчет и раскрытие прогнозируемых эффективных клинических доз для человека в случае SARM RAD140 описаны в Примере 9.

Примеры способов, раскрытых в настоящем документе, приведены для иллюстративных целей, и, следовательно, изобретение не ограничено приведенными в качестве примера вариантами выполнения.

Примеры

Пример 1: SARM RAD140 в комбинации с ингибитором CDK ингибировал рост ER- и AR-положительного рака молочной железы у мышей PDx (Фигура 1)

Материал и Способы:

Модель PDx #1, поддерживаемая Contract Research Organization (CRO), была охарактеризована как AR+/ER+/PR+/Her2- с использованием IHC и микропанели генного чипа. Донорские опухолевые срезы имплантировали подкожно в бока интактных самок голых мышей (n=7). Животные с опухолями размером 60-256 мм³ были рандомизированы на четыре группы лечения. Животные каждой группы получали носитель (кружок, Фигура 1), RAD140 100 мг/кг два раза в день (bid) (треугольник, Фигура 1), палбоциклиб 75 мг/кг один раз в день (qd) (квадрат, Фигура 1) или комбинацию RAD140 100 мг/кг (два раза в день) с палбоциклибом 75 мг/кг (один раз в день) (ромб, Фигура 1) соответственно. Все тестируемые соединения вводили перорально в течение 42 дней подряд. Объем опухоли измеряли два раза в неделю и рассчитывали % ингибирования роста опухоли (TGI). Животных с опухолями размером более 2000 мм³ подвергали эвтаназии в соответствии с нормативами по гуманному обращению с животными. В конце исследования были взяты образцы плазмы и опухоли для анализа фармакокинетики и фармакодинамики. Мышам давали эстрадиол, добавляемый в их воду, для того, чтобы стимулировать рост опухолей.

Результаты:

Лечение только RAD140 или только палбоциклибом приводило к ингибированию роста опухоли приблизительно на 53% TGI (ингибирование роста опухоли) соответственно (Фигура 1). Комбинированное введение SARM и ингибитора CDK4/6 приводило к TGI 70% на 28-й день, после чего количество животных в группе, получавшей носитель, снизилось до менее 6 из-за уничтожения мышей с более крупными опухолями в этических целях. Комбинация RAD140 и палбоциклиба продолжала проявлять сильный опухолевый супрессивный эффект до конца исследования (день 42). Расчетная конечная точка TGI была выше чем 70%. Не наблюдалось заметной степени потери массы, связанной с лечением RAD140 (данные не показаны).

Таким образом, лечение только SARM продемонстрировало ингибирование опухоли, сравнимое с лечением палбоциклибом у несущих PDx мышей с AR+/ER+/PR+/Her2- раком молочной железы. Комбинированное введение RAD140 с палбоциклибом приводило к усилению эффекта ингибирования роста в этих ксенотрансплантатах, по сравнению с RAD140 и палбоциклибом, вводимых по-отдельности, соответственно. Эти результаты показывают, что комбинированное введение SARM с или без ингибитора CDK4/6 является эффективным при опухолях ER+/AR+ молочной железы, и что комбинация с CDK4/6 увеличивает TGI в большей степени, чем при введении ингибиторов SARM и CKD4/6 по-отдельности соответственно.

Пример 2. Введение SARM RAD140 в комбинации с ингибитором CDK или ингибитором mTOR ингибировало рост ER- и AR-положительного рака молочной железы у мышей CDx (Фигура 2).

Материал и Способы:

ZR-75-1 является часто используемой моделью линии клеток рака молочной железы, которая представляет собой ER+/AR+. Родительская модель CDx ZR-75-1 (модель ZR75) была получена путем инъекции клеток ZR-75-1 (донорских опухолей) в бок самкам голых мышей. ER+/AR+ Статус этих донорских опухолей был подтвержден с помощью иммуноблоттинга (IB) и IHC. Донорские опухолевые срезы имплантировали подкожно в бока интактных самок голых мышей (n=7). После рандомизации полученных ксенотрансплантатных опухолей животные каждой группы получали носитель (ромб, Фигура 2), RAD140 100 мг/кг (bid) (квадрат, Фигура 2), палбоциклиб 45 мг/кг (qd) (треугольник, Фигура 2), комбинацию RAD140 100 мг/кг (bid) с палбоциклибом 45 мг/кг (qd) (звезда, Фигура 2), эверолимус 2,5 мг/кг (qd) («X», Фигура 2) или комбинацию RAD140 100 мг/кг (bid) с эверолимусом 2,5 мг/кг (qd) (кружок, Фигура 2) соответственно. Все тестируемые соединения вводили перорально в течение 28 дней подряд. Опухоли ксенотрансплантата ZR75-1 у животных поддерживались пеллетами эстрадиола (0,18 мг, 90-дневное высвобождение, Innovative Research America). Объем опухоли измеряли два раза в неделю и рассчитывали %TGI. Животных с опухолями размером более 2000 мм³ подвергали эвтаназии в соответствии с нормативами по гуманному обращению с животными. В конце исследования были взяты образцы плазмы и опухоли для анализа фармакокинетики и фармакодинамики.

Результаты:

Лечение только RAD140, палбоциклибом или эверолимусом приводило к ингибированию роста опухоли с TGI 52%, 84% или 75% соответственно (Фигура 2). Комбинация RAD140 и палбоциклиба или эверолимуса показала сильный эффект подавления опухоли до конца исследования (день 28). Конечные TGI для комбинации RAD140-палбоциклиб и комбинации RAD140-эверолимус составили 96% и 101% соответственно. Не наблюдалось заметной степени потери массы, связанной с лечением RAD140 (данные не показаны).

В итоге, лечение только RAD140 показало противоопухолевую активность у мышей CDx с ER+/AR+ раком молочной железы. Комбинированное введение RAD140 с палбоциклибом или эверолимусом приводило к увеличению роста ингибирующего эффекта в этих ксенотрансплантатах по отношению к RAD140, палбоциклибу или эверолимусу по-отдельности соответственно. Эти результаты указывают на то, что комбинированное введение SARM RAD 140 отдельно или в комбинации с ингибитором CDK4/6 или mTOR является эффективным при опухолях ER+/AR+ молочной железы.

Пример 3: SARM уменьшал рост ER и AR рака молочной железы на моделях PDx и был более эффективным, чем фулвестрант (Фигура 3)

Материал и Способы:

Модель PDx #2, поддерживаемая CRO, была охарактеризована как AR+/ER+ с применением IHC и микропанели генного чипа. Донорские опухолевые срезы имплантировали подкожно в бока интактным самкам голых мышей (n=10). После рандомизации установленных ксенотрансплантатов, животные каждой группы получали носитель (ромб, Фигура 3), RAD140 100 мг/кг в день (qd) (квадрат, Фигура 3), фулвестрант 1 мг в неделю (qw) (кружок, Фигура 3) или комбинацию RAD140 100 мг/кг (qd) с фулвестрантом 1 мг (qw) (звезда, Фигура 3) соответственно. RAD140 вводили перорально в течение 42 дней подряд, а фулвестрант вводили подкожно один раз в неделю в течение 6 недель. Объем опухоли измеряли два раза в неделю и рассчитывали %TGI. Животных с опухолями размером более 2000 мм³ подвергали эвтаназии в соответствии с нормативами по гуманному обращению с животными. Модели PDx были дополнены эстрадиолом, добавленным в их воду для того, чтобы стимулировать рост опухолей. В конце исследования были взяты образцы плазмы и опухоли для анализа фармакокинетики и фармакодинамики.

Результаты:

Лечение только RAD140 приводило к ингибированию роста опухоли приблизительно до 76% TGI (Фигура 3). Только фулвестрант привел к 59% TGI. Комбинированное введение RAD140 и фулвестранта дало TGI 76% аналогично тому, что наблюдалось только с RAD140. Не наблюдалось заметной степени потери массы, связанной с лечением SARM (данные не показаны).

В итоге один SARM показал более эффективную противоопухолевую активность, чем SERD (напр., фулвестрант, стандартное лекарственное средство для лечения ER+ рака молочной железы). Комбинированное введение SARM и фулвестранта не показало улучшения в эффективности у мышей PDx с ER+/AR+ раком молочной железы по сравнению с тем, что продемонстрировал один RAD140.

Пример 4: RAD140 снижал рост ER- и AR-положительного рака молочной железы в моделях PDx (Фигура 4)

Материал и Способы:

Модель PDx #3, поддерживаемая CRO, была охарактеризована как AR+/ER+ с применением IHC и микропанели генного чипа. Донорские опухолевые срезы имплантировали подкожно в бока интактным самкам голых мышей (n=10). После рандомизации установленных ксенотрансплантатов животные каждой группы получали носитель (ромб, Фигура 4) или RAD140 100 мг/кг (bid) (треугольник, Фигура 4) в течение 45 дней. Мыши PDx получали эстрадиол, добавленный к их воде для того, чтобы стимулировать рост опухолей.

Результаты:

Лечение RAD140 привело к ингибированию роста опухоли до 49% TGI (Фигура 4). Не наблюдалось заметной степени потери массы, связанной с лечением RAD140 (данные не показаны).

В итоге, эти результаты указывают на то, что SARM ингибирует рост ER+/AR+ опухолей молочной железы.

Пример 5: RAD140 индуцирует экспрессию гена-мишени ZBTB16 AR в клетках ER+/AR+ рака молочной железы и ксенотрансплантате (PDx). полученном от пациента (Фигура 5)

Материал и Способы:

Модель PDX #2 обрабатывали, как описано в Примере 3, и образцы замороженной опухоли собирали через 6 ч после последней дозы. Клетки рака молочной железы T47D, положительные на ER и AR, инкубировали в среде, дополненной 5% сывороткой, очищенной на угле-декстране (CSS), в течение 48 часов перед обработкой носителем (DMSO), RAD140 при 1 нМ, 10 нМ, 100 нМ, 1000 нМ или DHT при 1 нМ или 10 нМ. Через двадцать четыре часа после обработки клетки собирали. РНК выделяли из замороженных образцов опухолей из клеток PDX #2 и T47D, упомянутых выше, с использованием набора Qiagen RNeasy. Количественную ПЦР в реальном времени (qPCR) проводили с применением наборов праймеров/зондов для целевого гена ZBTB16 AR (кодирующего белок PLZF) и GAPDH (внутренний контроль) (Applied Biosystems/ThermoScientific).

Результаты:

Обработка клеток T47D in vitro с помощью RAD140 привела к дозозависимому увеличению экспрессии ZBTB16 мРНК (Фигура 5А), причем при 1000 нМ привела к приблизительно 130-кратному увеличению по сравнению с таковой в клетках, обработанных носителем. Природный андрогенный DHT также приводил к 300-500-кратной индукции этого гена. Это также подтверждает, что RAD140 является сильным агонистом AR. Соответственно, в PDX #2, обработанных RAD140 100 мг/кг qd в течение 45 дней, также наблюдалась ~25-кратная индукция гена ZBTB16 по сравнению с таковой в опухолях, обработанных носителем (Фигура 5 В). Напротив, фулвестрант, SERD и антагонист пути ER, не приводили к значительному увеличению экспрессии гена ZBTB16 (Фигура 5В). ZBTB16/PLZF был вовлечен в рак предстательной железы как опухолевый супрессор, который подавляется в рецидивирующих опухолях после андрогенной депривационной терапии (ADT, aka кастрация). Эти результаты позволяют предположить, что SARM RAD140 активировал транскрипцию гена-мишени AR в клетках рака молочной железы. Что еще более важно, RAD140 подавлял рост рака молочной железы, индуцируя определенные гены-супрессоры опухоли, включая, но не ограничиваясь, ZBTB16/PLZF.

Пример 6: RAD140 был эффективен в моделях WHIM18 PDx с палбоциклибом и без него

Модель WHIM18 PDx представляет собой ксенотрансплантат опухоли молочной железы, полученный от пациента, который трансплантирован бестимусным самкам голых мышей. Ксенотрансплантаты WHIM18 являлись ER+/PR+/AR+/HER- и росли независимо от экзогенного эстрогена (напр., 17β-эстрадиола). Модели WHIM18 PDx обладают высокой устойчивостью к мощному ER-деструктору фулвестранту. Модель WHIM18 PDx содержала слияние ESR1-YAP1 и мутацию E545K в PIK3CA.

Эффективность RAD140 или фулвестранта отдельно и в комбинации с палбоциклибом в моделях WHIM18 PDx оценивали в течение 56 дней (8 недель) лечения. Первичной конечной точкой был рост опухоли. Плазму и опухолевые ткани собирали в ЭДТА после последней дозы.

Материалы и Способы

Самкам Нелинейных Бестимусных Голых Мышей (The Jackson Laboratory 007850) (DOB 7-19-16) имплантировали суспензию отдельных клеток из 1,5×10⁶ клеток WHIM18, пассаж 9. Клетки смешивали 1:1 DMEM : Matrigel (Corning REF 354234) в общем объеме 100 мкл/мышь. Как только опухоли достигли среднего объема приблизительно 100-300 мм³ (фактическое среднее = 179,9), 60 мышей были рандомизированы по объему опухоли в 1 из 6 групп лечения (10 мышей на группу) с применением программного обеспечения Biopticon TumorManager™ на 62 день после имплантации клеток.

Каждой мыши вводили режим дозирования, описанный в Таблице 1, в течение 56 дней: носитель 0,5% карбоксиметилцеллюлозу (CMC, Sigma С4888), RAD140 или палбоциклиб вводили перорально через желудочный зонд один раз в день; фулвестрант вводили подкожно один раз каждые семь дней. Объемы доз рассчитывали на основе средней недельной массы животных для каждой группы, как показано в Таблице 1. Готовили 0,5% CMC, растворяя 2,5 г в 400 мл теплой стерильной воды, нагревали при перемешивании до полного растворения, доводили до 500 мл стерильной водой, хранящейся при 4°C.

Композицию RAD140 для введения в этом примере готовили путем добавления подходящего количества 0,5% CMC к RAD140 при постоянном перемешивании при 4°С при защите от света. Композицию RAD140 готовили еженедельно.

Композицию палбоциклиба для введения в этом примере готовили путем добавления подходящего количества стерильного физиологического раствора (0,9% хлорида натрия для инъекций NDC 0409-7983-03) к палбоциклибу при перемешивании. Композицию палбоциклиба непрерывно перемешивали при 4°С до растворения палбоциклиба. Композицию палбоциклиба готовили еженедельно.

Объемы опухолей измеряли два раза в неделю с применением Biopticon TumorImager™, объемы рассчитывали с применением соответствующего программного обеспечения TumorManager™. Мышей взвешивали один раз в неделю в течение первой половины исследования (27 дней). Мышей взвешивали два раза в неделю, как только они показали потерю массы. Кроме того, любую мышь с потерей массы тела (BWL) ≥5% по сравнению с Днем 0 или с выраженными клиническими признаками (напр., сгорбленная осанка, неряшливость) взвешивали ежедневно. Дозирование было приостановлено для любых мышей, у которых BWL≥15% по сравнению с Днем 0; и дозирование было возобновлено, когда масса тела мышей восстановилась до BWL≤15%.

Мышей исключали из исследования, если они становились умирающими, если их объем опухоли превышал 2000 мм³ или если они потеряли ≥20% своей массы тела по сравнению с Днем 0. Если это было возможно то, отбирали образцы для исследования и записывали время последней дозы и время приема.

Остальные животные были умерщвлены на 56 день приблизительно через 6 часов после последней дозы. Последнюю дозу фулвестранта давали утром в день умерщвления. Фактически умерщвляли между 6-9 часами. Кровь собирали с помощью пункции сердца сразу же после умерщвления посредством CO₂ и помещали в пробирки с ЭДТА, центрифугировали при 2000g в течение 10 минут при 4°С. Плазму переносили в пробирку Эппендорфа и хранили при -80°С.

После сбора крови опухоли иссекали и взвешивали. Для каждой опухоли половину опухоли помещали в 10% Нейтральный Буферный Формалин (NBF), а другую половину опухоли помещали в пробирку Эппендорфа, быстро замораживали в жидком N₂ и затем хранили при -80°С. Все ткани, собранные для блоков с фиксированием формалином на парафине (FFPE), фиксировали в нейтральном буферном формалине (NBF) в течение 24-48 часов, а затем переносили в 70% этанол перед отправкой для обработки в блоки FFPE.

Результаты:

Результаты эксперимента in vivo представлены графически на Фигуре 6. Относительное снижение пролиферации опухоли показано со статистикой ниже в Таблицах 2 и 3.

Ингибирование роста опухоли (TGI, в %) рассчитывали относительно группы носителя в день 56 (Таблица 2, Состав 1)

Т-критерий Стьюдента был рассчитан в excel с применением двустороннего распределения и двухвыборочной равной дисперсии объема дельта-опухоли День 56 - День 0.

Введение RAD140 в дозе 100 мг/кг отдельно или в комбинации с палбоцилибом ингибировало рост опухолей HER2-, ER+, PR+ рака молочной железы, имплантированных самкам бестимусных голых мышей (WHIM18 PDx) (Фигура 6). Комбинация RAD140 с палбоциклибом, по-видимому, более эффективна, чем один из препаратов. Никакой явной токсичности не наблюдалось ни в одной из групп.

Пример 7

В модели PDx #2, т.е. той же модели PDx, как описано в Примере/Фигуре 3, RAD140, вводимый в более низких дозах как 1 мг/кг два раза в день, так и 10 мг/кг два раза в день, приводил к существенному ингибированию роста опухоли согласно оценке значений TGI ~81% в обеих группах.

Пример 8

В модели PDx #1, т.е. той же модели PDx, которая описана в Примере/Фигуре 1, RAD140, вводимый в более низких дозах, 1 мг/кг два раза в день, 3 мг/кг два раза в день или 10 мг/кг два раза в день, приводил к существенному ингибированию роста опухоли. Судя по значениям TGI 49%, 65% и 57% соответственно.

Пример 9

Было продемонстрировано, что RAD140 обладает хорошей активностью в трансплантированном ксенотрансплантате опухоли PDx у голых мышей. Активность была значительной в диапазоне от 1 мг/кг до 100 мг/кг. Принимая во внимание конкретные уровни воздействия на мышей и фармакокинетическое моделирование между видами по известным и полученным фармакокинетическим параметрам, можно рассчитать диапазон доз для пациентов-женщин. В частности, было продемонстрировано, что дозы между 1 мг/кг (двукратное применение) и 100 мг/кг (двукратное применение) имеют хорошую эффективность в одной или более моделях, описанных в приведенных в настоящем документе примерах. Исходя из периода полужизни для разных видов и стабильности микросом, прогнозируется, что RAD140 будет эффективен в виде пероральной дозы один раз в день с диапазоном доз от 5 мг до 500 мг. Например, считается, что эффективная доза для мышей 10 мг/кг (в сутки) эффективно переводится в дозу приблизительно 50 мг в сутки для женщины весом 60 кг. Поскольку диапазон от 1 мг/кг до 100 мг/кг (два раза в сутки) был показан эффективным, более широкий диапазон от 10 мг до 1000 мг является клинически значимым. В частности, в пределах этого диапазона можно видеть, что также поддерживаются дополнительные диапазоны 10 мг - 250 мг, 25 мг - 250 мг, 25-500. Точно так же отдельные точки дозы, попадающие в любое место в пределах диапазона, хорошо поддерживаются, так что поддерживаются любые конкретные точки в пределах диапазона, целые или нецелые. Например, конкретно рассматриваются дозы, такие как 12,5 мг, 17,5 мг и так далее, а также такие дозы, как 10 мг, 25 мг, 50 мг, 75 мг, 100 мг, 150 мг, 200 мг, 300 мг, 400 мг и 500 мг. В качестве дополнительных неограничивающих примеров доза 10 мг, 15 мг, 20 мг, 25 мг, 50 мг, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500 мг. Предполагается, что дозировка QD описанных доз является вполне адекватной, так как согласно фармакокинетическим исследованиям на животных RAD140 рассчитан на длительный период полувыведения, подходящий для однократного ежедневного дозирования, хотя дозировка с двойным назначением также работает, НО дозы, указанные выше для однократного ежедневного введения, разделены на две, так как они будут даваться дважды в день.

Пример 10:

Способ 1: Способ лечения AR+/ER+ рака молочной железы у субъекта, включающий введение субъекту соединения согласно Формуле I

его фармацевтически приемлемых солей или его фармацевтически приемлемого сольвата, где:

R_x = CN;

R_y = CF₃ или Cl;

R_z = СН₃, CH₂CH₃ или Cl; или

R_y и R_z вместе образуют:

R_a' представляет собой Н, F, Cl, CN, ОН или OSO₃-; и

R₁ и R₂ каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода и метила.

Способ 2: Способ согласно способу 1, где соединение согласно Формуле I представляет собой Соединение II:

Способ 3. Способ согласно способу 1, где соединение согласно Формуле I представляет собой RAD140 (Соединение III):

Способ 4. Способ по любому одному из способов 1-3, где введение осуществляется пероральным путем.

Способ 5. Способ по любому одному из способов 1-4, где указанным субъектом является женщина.

Способ 6. Способ согласно способу 5, где указанная женщина является женщиной в пременопаузе.

Способ 7. Способ согласно способу 5, где указанная женщина является женщиной в постменопаузе.

Способ 8. Способ по любому одному из способов 1-7, где субъекта лечат в адъювантных условиях.

Способ 9. Способ по любому одному из способов 1-7, где субъект имеет прогрессирование заболевания после лечения одним или более эндокринологическими агентами.

Способ 10. Способ согласно способу 9, где указанные один или более эндоринологических агентов выбраны из группы, состоящей из SERM, SERD, прогестинов, ингибиторов ароматазы и их комбинаций.

Способ 11. Способ по любому одному из способов 1-7, где указанный субъект имеет прогрессирование заболевания после лечения одним или более агентами, выбранными из группы, состоящей из ингибиторов CDK4/6, ингибиторов mTOR, ингибиторов BCL-2, ингибиторов PI3K и их комбинаций.

Способ 12. Способ по любому одному из способов 1-11, где указанный рак молочной железы является локализованным, распространенным или метастатическим раком молочной железы.

Способ 13. Способ по любому одному из способов 3-12, где указанный RAD140 вводится в дозе от 10 до 500 мг, от 10 до 250 мг или от 25 до 250 мг в день.

Способ 14. Способ согласно способу 13, где доза составляет один раз в день.

Способ 15. Способ по любому одному из способов 1-14, где субъект экспрессирует ESR1, включая одну или более мутаций.

Способ 16. Способ согласно способу 15, где указанная мутация влияет на аффинность связывания лигандов по сравнению с немутантным ESR1.

Способ 17. Способ согласно способу 16, где указанная мутация приводит к снижению сродства эстрадиола к мутантному ESR1 по сравнению с немутантным ESR1.

Способ 18. Способ по любому одному из способов 15-17, где указанная мутация сигнализирует лиганд-зависимо или лиганд-независимо через путь ESR1.

Способ 19. Способ по любому одному из способов 15-18, где указанная мутация приводит к получению слитого белка, содержащего по меньшей мере 10 непрерывных аминокислот из последовательности немутантного ESR1 и по меньшей мере 10 непрерывных аминокислот из другого белка человека.

Способ 20. Способ по любому одному из способов 15-19, где указанная мутация приводит к тому, что в ESR1 отсутствует 10 или более последовательных аминокислот из аминокислотной последовательности его нормального (немутантного) лигандсвязывающего домена.

Способ 21. Способ по любому одному из способов 15-20, где указанная мутация включает одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из ESR1-AKAP12, ESR1-CCDC170, ESR1-YAP1, ESR1-POLH, ESR1-PCDH11X и их комбинаций.

Способ 22. Способ по любому одному из способов 1-21, где лечение дополнительно включает введение ингибитора CDK4/6.

Способ 23. Способ согласно способу 22, где указанный ингибитор CDK4/6 имеет IC₅₀<100 нМ против CDK4 и CDK6.

Способ 24. Способ по любому одному из способов 1-23, где указанный ингибитор CDK4/6 выбран из группы, состоящей из палбоциклиба, рибоциклиба, трилациклиба и абемациклиба.

Способ 25. Способ по любому одному из способов 1-21, где указанное лечение дополнительно включает введение ингибитора mTOR.

Способ 26. Способ согласно способу 25, где указанный ингибитор mTOR выбран из группы, состоящей из сиролимуса, темсиролимуса, эверолимуса, ридафаролимуса и MLN0128.

Способ 27. Способ по любому одному из способов 1-21, дополнительно включающий введение ингибитора PI3K.

Способ 28. Способ согласно способу 27, где указанным ингибитором PI3K является BEZ235, GDC-0980, BKM120, GDC-0941, BYL719, GDC-0032, MK2206, GDC-0068, GSK2110183, GSK2141795, AZD5363, AZD2014, MLN0128 или СС-223.

Способ 29. Способ по любому из способов 1-21, дополнительно включающий введение ингибитора PARP.

Способ 30. Способ согласно способу 29, где указанным ингибитором PARP является талазопариб, велипариб, нирапариб, beigene290, Е7449, KX01, АВТ767, CK102, JPI289, KX02, IMP4297, SC10914, NT125, PJ34, VPI289 или ANG-3186.

Способ 31. Способ по любому одному из способов 1-21, дополнительно включающий введение ингибитора MCL-1.

Способ 32. Способ согласно способу 31, где указанным ингибитором MCL-1 является 7-(5-((4-(4-(N,N-Диметилсульфамоил)пиперазин-1-ил)фенокси)метил)-1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил)-1-(2-морфолиноэтил)-3-(3-(нафталин-1-илокси)пропил)-1Н-индол-2-карбоновая кислота, S63845, омакатаксин, селициклиб, UMI-77, ATI 01, сабутоклакс или TW-37.

Способ 33. Способ по любому одному из способов 1-21, дополнительно включающий введение ингибитора BCL-2.

Способ 34. Способ согласно способу 33, где указанный ингибитор BCL-2 представляет собой венетоклакс, навитоклакс, АВТ737, G3139 или S55746.

Способ 35. Способ по любому одному из способов 1-7 или 12-34, где указанное лечение представляет собой лечение первой линии в неадъювантных условиях.

Способ 36. Набор, содержащий агонист AR по любому одному из способов 1-3 и один или более агентов, выбранных из группы, состоящей из ингибиторов PARP, ингибиторов mTOR, ингибиторов CDK4/6, ингибиторов PI3K, ингибиторов BCL2, ингибиторов MCL-1 и их комбинаций.

Способ 37. Способ лечения AR+/ER+ рака молочной железы у субъекта, включающий введение стероидного или нестероидного агониста AR вместе с одним или более агентами, выбранными из группы, состоящей из ингибиторов mTOR, ингибиторов CDK4/6, ингибиторов PI3K, ингибиторов PARP, ингибиторов BCL2, ингибиторов MCL-1 и их комбинаций.

Способ 38. Способ согласно способу 37, где указанный агонист AR представляет собой стероидный агонист AR.

Способ 39. Способ согласно способу 38, где указанный агонист AR представляет собой селективный модулятор рецептора андрогена.

Способ 40. Способ согласно способу 39, где указанный селективный модулятор рецепторов андрогена выбран из группы, состоящей из 2-хлор-4-[[(1R,2R)-2-гидрокси-2-метилциклопентил]амино]-3-метил-бензонитрила, PF-06260414, энобосарма, BMS-564929, LGD-4033, АС-262356, JNJ-28330835, S-40503, GSK-2881078, AZD-3514, MK4541, LG121071, GLPG0492, NEP28, YK11, MK0773, АСР-105, LY-2452473, S-101479, S-40542, S-42 и LGD-3303.

Способ 41. Способ по любому одному из способов 37-40, где лечение проводится в адъювантных условиях.

Способ 42. Способ по любому одному из способов 37-40, где указанное лечение представляет собой первую линию в неадъювантных условиях.

Способ 43. Способ по любому одному из способов 37-40, где указанный субъект имеет прогрессирование заболевания после лечения предшествующей эндокринологической терапии.

Способ 44. Способ по любому одному из способов 37-40 или способу 43, где указанный субъект имел прогрессирование заболевания после лечения агентом, выбранным из группы, состоящей из ингибиторов mTOR, ингибиторов CDK4/6, ингибиторов PI3K, ингибиторов PARP, ингибиторов BCL2, ингибиторов MCL-1 и их комбинаций.

Способ 45. Способ по любому одному из способов 37-44, где указанным субъектом является женщина.

Способ 46. Способ согласно способу 45, где указанная женщина является женщиной в пременопаузе.

Способ 47. Способ согласно способу 45, где указанная женщина является женщиной в постменопаузе.

Способ 48. Способ по любому одному из способов 37-47, где указанный рак молочной железы локализован.

Способ 49. Способ по любому одному из способов 37-47, где указанный рак молочной железы является распространенным или метастатическим.

Способ 50. Способ по любому одному из способов 37-49, где указанным ингибитором m-TOR является сиролимус, темсиролимус, эверолимус, ридафаролимус или MLN0128.

Способ 51. Способ по любому одному из способов 37-50, где указанным ингибитором CDK4/6 является палбоциклиб, рибоциклиб, трилациклиб или абемациклиб.

Способ 52. Способ по любому одному из способов 37-51, где указанным ингибитором PI3K является BEZ235, GDC-0980, BKM120, GDC-0941, BYL719, GDC-0032, MK2206, GDC-0068, GSK2110183, GSK2141795, AZD5363, AZD2014, MLN0128 или CC-223.

Способ 53. Способ по любому одному из способов 37-52, где указанным ингибитором PARP является талазопариб, велипариб, нирапариб, beigene290, Е7449, KX01, АВТ767, CK102, JPI289, KX02, IMP4297, SC10914, NT125, PJ34, VPI289 или ANG-3186.

Способ 54. Способ по любому одному из способов 37-53, где указанным ингибитором MCL-1 является 7-(5-((4-(4-(N,N-Диметилсульфамоил)пиперазин-1-ил)фенокси)метил)-1,3-диметил-1Н-пиразол-4-ил)-1-(2-морфолиноэтил)-3-(3-(нафталин-1-илокси)пропил)-1Н-индол-2-карбоновая кислота, S63845, омакатаксин, селициклиб, UMI-77, AT101, сабутоклакс или TW-37.

Способ 55. Способ по любому одному из способов 37-54, где указанным ингибитором BCL-2 является венетоклакс, навитоклакс, АВТ737, G3139 или S55746.

Способ 56. Способ по любому одному из способов 37-55, где активные агенты вводят вместе.

Способ 57. Способ по любому одному из способов 35-56, где активные агенты вводят в одном составе.

Способ 58. Набор, пригодный для лечения рака молочной железы, содержащий агонист AR или селективный модулятор рецепторов андрогена и один или более агентов, выбранных из группы, состоящей из ингибиторов mTOR, ингибиторов CDK4/6, ингибиторов PI3K, ингибиторов PARP, ингибиторов BCL2, ингибиторов MCL-1 и их комбинаций.

Способ 59. Способ лечения AR+/ER+ рака молочной железы у субъекта, где указанный субъект несет одну или более мутаций ESR1, причем указанный способ включает введение агониста AR.

Способ 60. Способ согласно способу 59, где указанный агонист AR является нестероидным.

Способ 61. Способ согласно способу 60, где указанным агонистом AR является селективный модулятор рецепторов андрогена.

Способ 62. Способ согласно способу 61, где указанный селективный модулятор рецепторов андрогена выбран из группы, состоящей из 2-хлор-4-[[(1R,2R)-2-гидрокси-2-метилциклопентил]амино]-3-метил-бензонитрила, PF-06260414, энобосарма, BMS-564929, LGD-4033, АС-262356, JNJ-28330835, S-40503, GSK-2881078, AZD-3514, MK4541, LG121071, GLPG0492, NEP28, YK11, MK0773, АСР-105, LY-2452473, S-101479, S-40542, S-42 и LGD-3303.

Способ 63. Способ по любому одному из способов 58-62, где указанная мутация влияет на аффинность связывания лигандов по сравнению с немутантным ESR1.

Способ 64. Способ по любому одному из способов 59-63, где указанная мутация приводит к снижению аффинности эстрадиола к мутантному ESR1 по сравнению с немутантным ESR1.

Способ 65. Способ по любому одному из способов 59-64, где указанная мутация сигнализирует лиганд-зависимо или лиганд-независимо через путь ESR1.

Способ 66. Способ по любому одному из способов 59-65, где указанная мутация приводит к слитому белку, содержащему по меньшей мере 10 непрерывных аминокислот из последовательности немутантного ESR1 и по меньшей мере 10 непрерывных аминокислот из другого белка человека.

Способ 67. Способ по любому одному из способов 59-66, где указанная мутация приводит к тому, что в ESR1 отсутствует 10 или более последовательных аминокислот из аминокислотной последовательности его нормального (немутантного) лигандсвязывающего домена.

Способ 68. Способ по любому одному из способов 59-67, где указанная мутация представляет собой слияние, выбранное из группы, состоящей из ESR1-AKAP12, ESR1-CCDC170, ESR1-YAP1, ESR1-POLH, ESR1-PCDH11X и их комбинаций.

Способ 69. Способ по любому одному из способов 59-68, где введение осуществляется пероральным путем.

Способ 70. Способ по любому одному из способов 59-69, где указанное лечение проводится в адъювантных условиях.

Способ 71. Способ по любому одному из способов 59-69, где указанное лечение представляет собой первую линию в неадъювантных условиях.

Способ 72. Способ по любому одному из способов 59-69, где указанный субъект имеет прогрессирование заболевания после лечения предшествующей эндокринологической терапией.

Способ 73. Способ по любому одному из способов 59-69 или 72, где указанный субъект имеет прогрессирование заболевания после лечения одним или более агентами, выбранными из группы, состоящей из ингибиторов mTOR, ингибиторов CDK4/6, ингибиторов PI3K, ингибиторов PARP, ингибиторов BCL2, ингибиторов MCL-1 и их комбинаций.

Способ 74. Способ по любому одному из способов 59-73, где указанным субъектом является женщина.

Способ 75. Способ согласно способу 74, где указанная женщина является женщиной в пременопаузе.

Способ 76. Способ согласно способу 74, где указанная женщина является женщиной в постменопаузе.

Способ 77. Способ по любому одному из способов 59-76, где указанный рак молочной железы локализован.

Способ 78. Способ по любому одному из способов 59-76, где указанный рак молочной железы является распространенным или метастатическим.

Способ 79. Способ по любому одному из способов 59-78, где лечение дополнительно включает введение ингибитора CDK4/6.

Способ 80. Способ согласно способу 79, где указанный ингибитор CDK4/6 имеет IC₅₀<100 нМ против CDK4 и CDK6.

Способ 81. Способ согласно способу 79, где указанный ингибитор CDK4/6 выбран из группы, состоящей из палбоциклиба, рибоциклиба, трилациклиба и абемациклиба.

Способ 82. Способ по любому одному из способов 59-78, где указанное лечение дополнительно включает введение ингибитора mTOR.

Способ 83. Способ согласно способу 82, где указанный ингибитор mTOR выбран из группы, состоящей из сиролимуса, темсиролимуса, эверолимуса, ридафаролимуса и MLN0128.

Способ 84. Способ по любому одному из способов 59-78, дополнительно включающий введение ингибитора PI3K.

Способ 85. Способ согласно способу 84, где указанным ингибитором PI3K является BEZ235, GDC-0980, BKM120, GDC-0941, BYL719, GDC-0032, MK2206, GDC-0068, GSK2110183, GSK2141795, AZD5363, AZD2014, MLN0128 или СС-223.

Способ 86. Способ по любому одному из способов 59-78, дополнительно включающий введение ингибитора PARP.

Способ 87. Способ согласно способу 86, где указанным ингибитором PARP является талазопариб, велипариб, нирапариб, beigene290, Е7449, KX01, АВТ767, CK102, JPI289, KX02, IMP4297, SC10914, NT125, PJ34, VPI289 или ANG-3186.

Способ 88. Способ по любому одному из способов 59-78, дополнительно включающий введение ингибитора MCL-1.

Способ 89. Способ согласно способу 88, где указанным ингибитором MCL-1 является 7-(5-((4-(4-(N,N-Диметилсульфамоил)пиперазин-1-ил)фенокси)метил)-1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил)-1-(2-морфолиноэтил)-3-(3-(нафталин-1-илокси)пропил)-1Н-индол-2-карбоновая кислота, S63845, омакатаксин, селициклиб, UMI-77, АТ101, сабутоклакс или TW-37.

Способ 90. Способ по любому одному из способов 59-78, дополнительно включающий введение ингибитора BCL-2.

Способ 91. Способ согласно способу 90, где указанным ингибитором BCL-2 является венетоклакс, навитоклакс, АВТ737, G3139 или S55746.

Способ 92. Способ по любому одному из способов 59-91, где указанное лечение представляет собой лечение первой линии в неадъювантных условиях.

Способ 93. Способ лечения субъекта от рака молочной железы, включающий:

1) тестирование субъекта на одну или более мутаций ESR1; и

2) если субъект дает положительный результат на одну или более мутаций ESR1, лечение субъекта согласно способу любому из способов 1-35, 37-57, 59-92.

Способ 94. Способ согласно способу 93, где указанная мутация приводит к снижению сродства эстрадиола к мутантному ESR1 по сравнению с немутантным ESR1.

Способ 95. Способ согласно способу 93 или способу 94, где указанная мутация сигнализирует лиганд-зависимо или лиганд-независимо через путь ESR1.

Способ 96. Способ по любому одному из способов 93-95, где указанная мутация приводит к слитому белку, содержащему по меньшей мере 10 непрерывных аминокислот из последовательности немутантного ESR1 и по меньшей мере 10 непрерывных аминокислот из другого белка человека.

Способ 97. Способ по любому одному из способов 93-95, где указанная мутация приводит к тому, что в ESR1 отсутствует 10 или более последовательных аминокислот из аминокислотной последовательности его нормального (немутантного) лигандсвязывающего домена.

Способ 98. Способ согласно способу 93, где указанная мутация представляет собой слияние, выбранное из группы, состоящей из ESR1-AKAP12, ESR1-CCDC170, ESR1-YAP1, ESR1-POLH, ESR1-PCDH11X и их комбинаций.

Способ 99. Способ по любому одному из способов 1-35, 37-57, 59-98, где указанный субъект сначала тестируют на базовые уровни экспрессии ZBTB16 мРНК или белка, а затем повторно тестируют на уровни экспрессии ZBTB16 мРНК или белка после периода лечения, и если уровни увеличились по сравнению с исходным уровнем, рекомендуют субъекту продолжить терапию.

Способ 100. Способ согласно способу 99, где указанный период лечения составляет по меньшей мере 3 дня ежедневного введения агониста AR.

Способ 101. Способ согласно способу 100, где указанный период составляет по меньшей мере одну неделю ежедневного введения агониста AR.

Способ 102. Способ по любому одному из способов 99-101, где отношение уровня пост-обработки к уровню преобработки составляет >3.

Способ 103. Способ согласно способу 102, где отношение составляет >10.

Способ 104. Способ согласно способу 103, где отношение составляет >50.

Claims

1. Применение соединения согласно формуле III

III,

его фармацевтически приемлемых солей или его фармацевтически приемлемого сольвата для лечения AR+/ER+ рака молочной железы у субъекта.

2. Применение по п. 1, где соединение согласно формуле III вводят пероральным путем.

3. Применение по любому из пп. 1 или 2, где указанным субъектом является женщина.

4. Применение по п. 3, где указанная женщина является женщиной в пременопаузе.

5. Применение по п. 3, где указанная женщина является женщиной в постменопаузе.

6. Применение по любому из пп. 1-5, где субъекта лечат в адъювантных условиях.

7. Применение по любому одному из пп. 1-5, где субъект имеет прогрессирование заболевания после лечения одним или более эндокринологическими агентами.

8. Применение по п. 7, где указанные один или более эндокринологических агентов выбраны из группы, состоящей из SERM, SERD, прогестинов, ингибиторов ароматазы и их комбинаций.

9. Применение по любому из пп. 1-5, где указанный субъект имеет прогрессирование заболевания после лечения одним или более агентами, выбранными из группы, состоящей из ингибиторов CDK4/6, ингибиторов mTOR, ингибиторов BCL-2, ингибиторов PI3K и их комбинаций.

10. Применение по любому из пп. 1-9, где указанный рак молочной железы является локализованным, распространенным или метастатическим раком молочной железы.

11. Применение по любому из пп. 1-10, где указанное соединение согласно формуле III вводится в дозе от 10 до 500 мг, от 10 до 250 мг или от 25 до 250 мг в день.

12. Применение по п. 11, где доза составляет один раз в день.

13. Применение по любому из пп. 1-12, где субъект экспрессирует ESR1, включающий одну или более мутаций.

14. Применение по п. 13, где указанная мутация влияет на аффинность связывания лигандов по сравнению с немутантным ESR1.

15. Применение по п. 14, где указанная мутация приводит к снижению сродства эстрадиола к мутантному ESR1 по сравнению с немутантным ESR1.

16. Применение по любому из пп. 13-15, где указанная мутация сигнализирует лиганд-зависимо или лиганд-независимо через путь ESR1.

17. Применение по любому из пп. 13-16, где указанная мутация приводит к получению слитого белка, содержащего по меньшей мере 10 непрерывных аминокислот из последовательности немутантного ESR1 и по меньшей мере 10 непрерывных аминокислот из другого белка человека.

18. Применение по любому из пп. 13-17, где указанная мутация приводит к тому, что в ESR1 отсутствует 10 или более последовательных аминокислот из аминокислотной последовательности его нормального (немутантного) лигандсвязывающего домена.

19. Применение по любому из пп. 13-18, где указанная мутация включает одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из ESR1-AKAP12, ESR1-CCDC170, ESR1-YAP1, ESR1-POLH, ESR1-PCDH11X и их комбинаций.

20. Применение по любому из пп. 1-19, дополнительно включающее введение ингибитора CDK4/6.

21. Применение по п. 20, где указанный ингибитор CDK4/6 имеет IC50 < 100 нМ против CDK4 и CDK6.

22. Применение по любому из пп. 20-21, где указанный ингибитор CDK4/6 выбран из группы, состоящей из палбоциклиба, рибоциклиба, трилациклиба, абемациклиба и AMG925.

23. Применение по любому из пп. 1-19, дополнительно включающее введение ингибитора mTOR.

24. Применение по п. 23, где указанный ингибитор mTOR выбран из группы, состоящей из сиролимуса, темсиролимуса, эверолимуса, ридафаролимуса и MLN0128.

25. Применение по любому из пп. 1-19, дополнительно включающее введение ингибитора PI3K.

26. Применение по п. 25, где указанным ингибитором PI3K является BEZ235, GDC- 0980, BKM120, GDC-0941, BYL719, GDC-0032, MK2206, GDC-0068, GSK2110183, GSK2141795, AZD5363, AZD2014, MLN0128 или CC-223.

27. Применение по любому из пп. 1-19, дополнительно включающее введение ингибитора PARP.

28. Применение по п. 27, где указанным ингибитором PARP является талазопариб, велипариб, нирапариб, beigene290, E7449, KX01, ABT767, CK102, JPI289, KX02, IMP4297, SC10914, NT125, PJ34, VPI289 или ANG-3186.

29. Применение по любому из пп. 1-19, дополнительно включающее введение ингибитора MCL-1.

30. Применение по п. 29, где указанным ингибитором MCL-1 является 7-(5-((4-(4-(N,N-Диметилсульфамоил)пиперазин-1-ил)фенокси)метил)-1,3-диметил-1Н-пиразол-4-ил)-1-(2- морфолиноэтил)-3-(3-(нафталин-1-илокси)пропил)-1Н-индол-2-карбоновая кислота, S63845, омакатаксин, селициклиб, UMI-77, AT101, сабутоклакс или TW-37.

31. Применение по любому из пп. 1-19, дополнительно включающее введение ингибитора BCL-2.

32. Применение по п. 31, где указанный ингибитор BCL-2 представляет собой венетоклакс, навитоклакс, ABT737, G3139 или S55746.

33. Применение по любому из пп. 1-5 или 10-32, где указанное лечение представляет собой лечение первой линии в неадъювантных условиях.

34. Применение по п. 1, дополнительно включающее введение терапевтического агента, выбранного из группы, состоящей из рапамицина, эверолимуса, ридафоролимуса, темсиролимуса, MLN0128, CC115, CC223, OSI-027, AZD8055, AZD2014, GDC-0980, SAR245409, LY3023414, NVP-BEZ235, NVP-BGT226, SF1126 и PKI-587.