ES2899581T3 - Compuestos y métodos para la modulación de quinasas e indicaciones para estos - Google Patents

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Abstract

Un compuesto que tiene la Fórmula I: **(Ver fórmula)** o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: Z2 es alquinilo C2-10 opcionalmente sustituido con Rb, arilo C6-14, cicloalquilo C3-10, cicloalquenilo C3-10, heterocicloalquilo de 3-12 miembros, heterocicloalquenilo de 3-12 miembros o heteroarilo de 5-10 miembros, en donde cada arilo C6-14, cicloalquilo C3-10, cicloalquenilo C3-10, heterocicloalquilo de 3-12 miembros, heterocicloalquenilo de 3-12 miembros o heteroarilo de 5-10 miembros está opcionalmente sustituido con 1-3 grupos R1; Z3 es hidrógeno o halo; Z5 es: **(Ver fórmula)** cada R1 es independientemente hidrógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-10, -C(O)-cicloalquilo C3-10, -C(O)- alquilo C1-6, ciano, ciano-alquilo C1-6, ciano-cicloalquilo C3-10, ciano-cicloalquilo C3-10-alquilo C1-6, hidroxi, alcoxi C1-6, alcoxi C1-6-alquilo C1-6, hidroxi-alquilo C1-6, halo, halo-alquilo C1-6, oxo, arilo C6-14, arilo C6-14- alquilo C1-6, cicloalquilsulfonilo C3-10, alquisulfonilo C1-6, alquisulfonilo C1-6-alquilo C1-6, alquilcarbonilamino C1-6-alquilo C1-6, alquilsulfonilamino C1-6-alquilo C1-6, heterocicloalquilo de 3-12 miembros opcionalmente sustituido con 1-2 Ra, heterocicloalquilo de 3-12 miembros-alquilo C1-6, -NR6R7, -alquileno C1-6-NR6R7, - C(O)O-alquilo C1-6, heterocicloalquilo de 3-12 miembros opcionalmente sustituido con 1-2 grupos Rd groups, o heteroarilo de 5-10 miembros opcionalmente sustituido con 1-2 grupos Re; R6 es hidrógeno, alquilo C1-6, alquilcarbonilo C1-6, alquilsulfonilo C1-6, cicloalquilamino de 5-7 miembros o cicloalquilo C3-10, en donde cada uno de alquilo C1-6, alquilcarbonilo C1-6, alquilsulfonilo C1-6, cicloalquilamino de 5-7 miembros y cicloalquilo C3-10 están opcionalmente sustituidos con 1-3 grupos G, R7 es hidrógeno o alquilo C1-6 opcionalmente sustituido con 1-3 grupos G; o R6 y R7, junto con el átomo de N al que están unidos, se unen para formar un resto heterocicloalquilo de 3-12 miembros o heteroarilo de 5-10 miembros, en donde 1-2 átomos de carbono del resto heterocicloalquilo o heteroarilo están sustituidos con 1-2 grupos G; cada G es independientemente alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, halo, amino, -NH-alquilo C1-6, -N(alquilo C1- 6)2, (alquileno C1-6)-N(H)-alquilo C1-6, -(alquileno C1-6)-amino, -CN, -C(O)-alquilo C1-6, -C(O)-O-alquilo C1-6, -CO2H, -C(O)-N(H)-alquilo C1-6, oxo, -N(H)-C(O)-alquilo C1-6, -C(=NH)-NH2, -OH, -N(H)-C(O)-O-alquilo C1- 6, -N(H)-C(O)-N(H)-alquilo C1-6, -N(H)-S(O)2-alquilo C1-6, -S(O)2- alquilo C1-6, hidroxi-alquilo C1-6, cicloalquilo C3-10, -N(H)-cicloalquilo C3-6, alcoxi C1-6, heterocicloalquilo de 3-12 miembros o heteroarilo de 5-10 miembros, cada Ra es independientemente alquilo C1-6, oxo, halo o hidroxi; Rb es halo, cicloalquilo C3-6, arilo C6-14, heteroarilo de 5-10 miembros, -NR6R7 o hidroxi; cada Rd es independientemente alquilo C1-6, halo, oxo, alquilaminosulfonilo C1-6, alquilsulfonilo C1-6, alquilcarbonilo C1-6, hidroxi alquilo C1-6 o hidroxi; y cada Re es independientemente alquilo C1-6, halo o hidroxi; siempre que cuando G es cicloalquilo C3-10, Z2 es alquinilo opcionalmente sustituido con cicloalquilo C3-C6, -NR6R7 o hidroxi.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos y métodos para la modulación de quinasas e indicaciones para estos
Campo
La presente divulgación se refiere a las proteínas quinasas y los compuestos que modulan selectivamente las quinasas y los usos para las mismas. Las modalidades particulares contemplan indicaciones de enfermedades que son susceptibles al tratamiento mediante la modulación de la actividad de quinasas por los compuestos de la presente divulgación.
Antecedentes
La tirosina quinasa 3 similar a FMS (FLT3) está mutada en aproximadamente un tercio de los casos de leucemia mieloide aguda. Las mutaciones FLT3 más frecuentes en la leucemia mieloide aguda son las mutaciones por duplicación interna en tándem (ITD) en el dominio yuxtamembrana (23 %) y las mutaciones puntuales en el dominio tirosina quinasa (10 %). La mutación del dominio quinasa más frecuente es la sustitución de ácido aspártico en la posición 838 (equivalente al residuo de ácido aspártico humano en la posición 835) con una tirosina (FLT3/D835Y), lo cual convierte el ácido aspártico en tirosina. Aunque ambas mutaciones activan constitutivamente FLT3, los pacientes con una mutación ITD tienen un pronóstico mucho más precario. Se ha demostrado previamente que los ratones con inserción génica FLT3/D835Y sobreviven significativamente más tiempo que los ratones con inserción génica FLT3/ITD. La mayoría de estos ratones desarrollan neoplasias mieloproliferativas con un fenotipo menos agresivo.
Las mutaciones secundarias en el dominio de la tirosina quinasa (KD) son una de las causas más comunes de resistencia clínica adquirida a los inhibidores de la tirosina quinasa de molécula pequeña (TKI) en el cáncer humano. Los esfuerzos farmacéuticos recientes se centran en el desarrollo de inhibidores de quinasa de "tipo II", los cuales se unen a una conformación de quinasa inactiva relativamente no conservada y explotan un sitio alostérico adyacente a la región de unión de ATP como un medio potencial para aumentar la selectividad de la quinasa. Las mutaciones en FLT3 son la alteración genética común en pacientes con leucemia mieloide aguda (a Ml ) (TCGA, N Engl J Med.
2013, 368: 2059-74) y se componen principalmente de mutaciones de duplicación interna en tándem (ITD) que activan constitutivamente (de 1 a 100 aminoácidos) en el dominio yuxtamembrana y, en menor medida, mutaciones puntuales, típicamente dentro del lazo de activación de la quinasa. Las mutaciones secundarias de KD en FLT3-ITD que pueden causar resistencia a los inhibidores de FLT3 de tipo II altamente potentes, como quizartinib, que logró una tasa de remisión completa compuesta (CRc) de aproximadamente el 50 % en pacientes con AML de FLT3-ITD+ en recaída o refractaria a la quimioterapia tratados en grandes estudios de monoterapia de fase II (Tallman y otros, Blood, 2013; 122:494). Un cribado de mutagénesis de saturación in vitro de FLT3-ITD identificó cinco mutaciones de KD resistentes a quizartinib en tres residuos: el residuo F691 "guardián" y dos posiciones de aminoácidos dentro del lazo de activación de la quinasa (D835 e Y842), un espectro de mutaciones sorprendentemente limitado para un inhibidor de tipo II. Posteriormente se identificaron mutaciones en dos de estos residuos (F691L y D835V/Y/F) en cada una de las ocho muestras analizadas en el momento de la resistencia clínica adquirida a quizartinib (Smith y otros, Nature, 2012; 485: 260-3). Este hallazgo validó a FLT3 como un objetivo terapéutico en la AML. El inhibidor multiquinasa de tipo II sorafenib, el cual también tiene alguna actividad clínica en FLT3-ITD AML, es ineficaz contra todos los mutantes que causan resistencia a quizartinib identificados, además de otras isoformas mutantes (Smith y otros). El inhibidor de tipo I crenolanib se identificó como un inhibidor de tipo I de mutantes D835 resistentes a quizartinib (Zimmerman y otros, Blood, 2013; 122: 3607-15); sin embargo, ningún inhibidor de FLT3 ha demostrado una inhibición equipotente del mutante F691L, lo cual incluye el inhibidor ponatinib de ABL/FLT3, el cual fue diseñado para retener la actividad contra el mutante T315I de control problemático en BCR-ABL (Smith y otros, Blood, 2013; 121: 3165-71).
Se ha descrito que los compuestos de 2,5-azaindol son activos contra dianas específicas. El documento de Estados Unidos 2013/0158049 describe compuestos de azaindol 2,5 sustituidos que modulan específicamente los canales de calcio activados por liberación de calcio (CRAC). En otro ejemplo, la Patente de Estados Unidos No. 6 770 643 describe compuestos de azaindol 2,5 sustituidos que inhiben selectivamente la quinasa Syk. En otro ejemplo, la Patente de Estados Unidos No. 8 785 489 describe compuestos de azaindol 2,5 sustituidos que inhiben la metaloproteasa MMP-13.
El documento WO 2013/092467 A1 describe compuestos para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias asociadas con la inhibición de IL-2 mediante la modulación de canales de calcio activados por la liberación de calcio (CRAC), y métodos para fabricar y usar los compuestos para el tratamiento de enfermedades asociadas con los canales CRAC.
El documento EP 2738172 A1 describe compuestos que son inhibidores de la actividad del canal CRAC, y composiciones farmacéuticas que los contienen, procesos para su preparación y su uso en terapia.
El documento US 2006/030583 A1 describe moduladores de pirrolo-piridin quinasa y los métodos de uso de los moduladores de pirrolo-piridin quinasa para tratar enfermedades mediadas por la actividad quinasa.
En la actualidad existe una necesidad desde hace mucho tiempo de nuevos inhibidores de FLT3 que puedan superar los inconvenientes de los inhibidores de FLT3 conocidos en la técnica. Existe una necesidad adicional de nuevos inhibidores de FLT3 que sean selectivos para FLT3 sobre otras dianas de quinasas para superar los inconvenientes de los inhibidores de FLT3 conocidos en la técnica.
Resumen
La presente divulgación se refiere a compuestos que modulan selectivamente quinasas FLT3, composiciones de las mismas y usos para las mismas. Las modalidades particulares contemplan los compuestos de la presente divulgación para su uso en el tratamiento de las indicaciones de las enfermedades, los cuales son apropiados para el tratamiento por modulación de la actividad quinasa.
Una modalidad de la divulgación se refiere a nuevos compuestos de azaindol 2,5 sustituidos, como se describe en este documento, o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde estos nuevos compuestos pueden modular FLT3. Los nuevos compuestos de azaindol 2,5 sustituidos descritos en este documento pueden modular el FLT3 que tiene una mutación ITD y opcionalmente una mutación F691L y/o una mutación D835Y. Los compuestos descritos en el presente documento son selectivos para la quinasa FLT3 sobre la quinasa c-kit. Los compuestos descritos en el presente documento modulan el receptor (TGF-p) tipo 2 (TGFBR2).
Otra modalidad de la divulgación se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto que tiene cualquiera de las Fórmulas descritas en esta divulgación, que incluye cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o Tabla 2, o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos, y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.
Otra modalidad de la divulgación se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto que tiene cualquiera de las Fórmulas descritas en esta divulgación, que incluye cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o Tabla 2, o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos, otro agente terapéutico y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.
Otra modalidad de la divulgación se refiere a un compuesto que tiene cualquiera de las Fórmulas descritas en esta divulgación, que incluye cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o la Tabla 2, o una sal farmacéuticamente aceptable, un solvato, un análogo deuterado, un tautómero o un estereoisómero del mismo, o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento de la leucemia mieloide aguda, eliminación de células madre y mielopreparación para el transplante de células madre, esclerosis múltiple progresiva primaria, síndrome del dolor regional complejo, distrofia simpática refleja, distrofia muscular, distrofia muscular de duchenne, causalgia, neuroinflamación, trastornos neuroinflamatorios, olvido benigno, HIV, demencia de tipo binswager, demencia con cuerpos de lewy, prosencefalia, microencefalia, microencepahy, parálisis cerebral, hidrocéfalo congénito, hidropesía abdominal, parálisis supranuclear progresiva, glaucoma, trastornos de adicción, dependencias, alcoholismo, temblores, enfermedad de Wilson, demencias vasculares, demencia multiinfarto, demencia frontotemporal, pseudodemencia, cáncer de vejiga, carcinoma de células basales, colangiocarcinoma, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer esofágico, sarcoma de Ewing, cáncer gástrico, glioma, carcinoma hepatocelular, linfoma de Hodgkin, carcinoma de laringe, leucemia, cáncer hepático, cáncer de pulmón, melanoma, mesotelioma, cáncer de páncreas, cáncer rectal, cáncer renal, carcinoma de células escamosas, linfoma de células T, cáncer de tiroides, leucemia monocítica, feocromocitoma, tumor de células nerviosas periféricas malignas, tumores malignos de la vaina de los nervios periféricos, (MPNST), neurofibromas cutáneos y plexiformes, fibromas, fibromas uterinos, leiomiosarcoma, cáncer papilar tirideo, cáncer anaplásico de tiroides, cáncer medular de tiroides, cáncer medular de tiroides, cáncer folicular de tiroides, carcinoma de células de Hurthle, cáncer de tiroides, ascitis, ascitis maligna, mesotelioma, tumores de las glándulas salivares, carcinoma mucoepidermoide de las de las glándulas salivares, carcinoma de células acínicas de las glándulas salivares, tumores estromales gastrointestinales (GIST), tumores que causan derrames en espacios potenciales del cuerpo, derrames pleurales, derrames pericárdicas, derrames peritoneales también conocidas como ascitis, tumores de células gigantes (GCT), GCT de hueso, angiogénesis tumoral, o crecimiento tumoral paracrino.
Otra modalidad de la divulgación se refiere a un compuesto que tiene cualquiera de las Fórmulas descritas en esta divulgación, que incluye cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o la Tabla 2, o una sal, un solvato, un análogo deuterado, un tautómero o un estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección mediada por un receptor (TGF-p) tipo 2.
Otra modalidad de la divulgación se refiere a una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de un sujeto que padece una enfermedad o afección como se describe en este documento, la composición farmacéutica que comprende un compuesto que tiene cualquiera de las Fórmulas descritas en esta divulgación, que incluye cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o Tabla 2, o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos, y otro agente terapéutico, en donde el otro agente terapéutico se selecciona de: i) un agente alquilante seleccionado de la adozelesina, altretamina, bizelesina, busulfán, carboplatino, carbocuona, carmustina, clorambucilo, cisplatino, ciclofosfamida, dacarbazina, estramustina, fotemustina, hepsulfam, ifosfamida, improsulfán, irofulven, lomustina, meloretamina, melfalán, oxaliplatino, piposulfán, semustina, estreptozocina, temozolomida, tiotepa y treosulfán; ii) un antibiótico seleccionado de la bleomicina, dactinomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina, menogaril, mitomicina, mitoxantrona, neocarzinostatina, pentostatina y plicamicina; un antimetabolito, que incluye, pero no se limita a, la azacitidina, capecitabina, cladribina, clofarabina, citarabina, decitabina, floxuridina, fludarabina, 5-fluorouracilo, ftorafur, gemcitabina, hidroxiurea, mercaptopurina, metotrexato, nelarabina, pemetrexed, raltitrexed, tioguanina, y trimetrexato; iii) una inmunoterapia seleccionada de un inhibidor de IDO (ejemplos no limitantes de un inhibidor de IDO incluyen el indoximod y NLG 919), o un agente de terapia con anticuerpos seleccionado de alemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, galiximab, gemtuzumab, panitumumab, pertuzumab, rituximab, tositumomab, trastuzumab y ibritumomab tiuxetán 90 Y; una hormona o un antagonista de hormonas, que incluye, entre otros, el anastrozol, andrógenos, buserelina, dietilestilbestrol, exemestano, flutamida, fulvestrant, goserelina, idoxifeno, letrozol, leuprolida, magestrol, raloxifeno, tamoxifeno y toremifeno; iv) un taxano seleccionado de DJ-927, docetaxel, TPI 287, paclitaxel y DHA-paclitaxel; v) un retinoide seleccionado de la alitretinoína, bexaroteno, fenretinida, isotretinoína y tretinoína; vi) un alcaloide seleccionado del etopósido, homoharringtonina, tenipósido, vinblastina, vincristina, vindesina y vinorelbina; vii) un agente antiangiogénico seleccionado del AE-941 (GW786034, Neovastat), ABT-510, 2-metoxiestradiol, lenalidomida y talidomida; viii) un inhibidor de la topoisomerasa seleccionado de la amsacrina, edotecarina, exatecán, irinotecán (también metabolito activo SN-38 (7-etil-10-hidroxicamptotecina)), rubitecán, topotecán y 9-aminocamptotecina; ix) un inhibidor de quinasa seleccionado del erlotinib, gefitinib, flavopiridol, mesilato de imatinib, lapatinib, sorafenib, malato de sunitinib, AEE-788, AG-013736, AMG 706, AMN107, BMS-354825, BMS-599626, UCN-01 (7-hidroxistaurosporina), vemurafenib, dabrafenib, trametinib, cobimetinib, selumetinib y vatalanib; x) un inhibidor de la transducción de señales dirigido seleccionado de bortezomib, geldanamicina y rapamicina; xi) un modificador de la respuesta biológica seleccionado de imiquimod, interferón-alfa e interleucina-2; y xii) un agente quimioterapéutico seleccionado de 3-AP (3-amino-2-carboxialdehído tiosemicarbazona), altrasentán, aminoglutetimida, anagrelida, asparaginasa, briostatina-1, cilengitida, elesclomol, mesilato de eribulina (E7389), ixabepilona, lonidamina, masoprocol, mitoguanazona, oblimersen, sulindac, testolactona, tiazofurina, inhibidores de mTOR (por ejemplo, sirolimus, temsirolimus, everolimus, deforolimus), inhibidores de PI3K (por ejemplo, BEZ235, Gd C-0941, XL147, XL765), inhibidores de Cdk4 (por ejemplo, PD-332991), inhibidores de Akt, Inhibidores de Hsp90 (por ejemplo, geldanamicina, radicicol, tanespimicina), inhibidores de farnesiltransferasa (por ejemplo, tipifarnib) e inhibidores de aromatasa (anastrozol letrozol exemestano); xiii) un inhibidor de Mek; xiv) un inhibidor de tirosina quinasa como se describe en el presente documento; o xv) un inhibidor de EGFR.
Descripción detallada
I. Definiciones
Como se usa en el presente documento se aplican las siguientes definiciones a menos que se indique claramente lo contrario:
Se indica aquí que, como se usa en esta divulgación y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "una" y "el/la" incluyen una referencia a los plurales a menos que el contexto indique claramente lo contrario.
A menos que un punto de unión indique lo contrario, los restos químicos enumerados en las definiciones de las variables de Fórmula I de esta divulgación, y todas las modalidades de la misma, deben leerse de izquierda a derecha, en donde el lado derecho está directamente unido a la estructura parental definida. Sin embargo, si se muestra un punto de unión en el lado izquierdo del resto químico (por ejemplo, -alquiloxi-(alquilo C1-C25)), entonces el lado izquierdo de este resto químico se une directamente al resto original como se definió. Se asume que cuando se consideran descripciones genéricas de compuestos de los descritos en este documento con el propósito de construir un compuesto, tal construcción da como resultado la creación de una estructura estable. Es decir, un experto en la técnica reconocería que teóricamente algunas construcciones que normalmente no se considerarían como compuestos estables (es decir, estéricamente prácticas y/o sintéticamente factibles).
"Halógeno" o "halo" se refiere a todos los halógenos, es decir, cloro (Cl), flúor (F), bromo (Br) o yodo (I).
"Hidroxilo" o "hidroxi" se refiere al grupo -OH. El término "oxo" se refiere a C(O) o —O' .
El término "heteroátomo" se entiende que incluye oxígeno (O), nitrógeno (N) y azufre (S).
El término "alquilo", por sí mismo o como parte de otro sustituyente, significa, a menos que se indique lo contrario, un hidrocarburo de cadena lineal o ramificada, que tiene el número de átomos de carbono designado (es decir, C1-6 significa de uno a seis carbonos). Los grupos alquilo representativos incluyen los grupos alquilo de cadena lineal y ramificada que tienen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 átomos de carbono. Otros grupos alquilo representativos incluyen grupos alquilo de cadena lineal y ramificada que tienen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo y similares. Para cada una de las definiciones en el presente documento (por ejemplo, alquilo, alcoxi, arilalquilo, cicloalquilalquilo, heterocicloalquilalquilo, heteroarilalquilo), cuando no se incluye un prefijo para indicar el número de átomos de carbono en una porción alquilo, el resto o porción alquilo del mismo tendrá 12 o menos átomos de carbono de cadena principal u 8 o menos átomos de carbono de cadena principal o 6 o menos átomos de carbono de cadena principal. Por ejemplo, alquilo C1-6 se refiere a un hidrocarburo lineal o ramificado que tiene 1, 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono e incluye, pero no se limita a, alquilo C1-2, alquilo C1-4, alquilo C2-6, alquilo C2-4, alquilo C1-6, alquilo C2-8, alquilo C1-7, alquilo C2-7 y alquilo C3-6. El término "deuteroalquilo" se refiere a un análogo deuterado de un grupo alquilo. El término "haloalquilo" se refiere a un alquilo sustituido con de uno a siete átomos de halógeno. El término Haloalquilo incluye el monohaloalquilo o polihaloalquilo. Por ejemplo, el término "haloalquilo C1-6" se entiende que incluye trifluorometilo, difluorometilo, fluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 4-clorobutilo, 3-bromopropilo y similares. Si bien se entiende que las sustituciones están unidas en cualquier átomo disponible para producir un compuesto estable, cuando el alquilo opcionalmente sustituido es un grupo R de un resto como -OR (por ejemplo, alcoxi), -SR (por ejemplo, tioalquilo), -NHR (por ejemplo, alquilamino), -C(O)NHR, y similares, la sustitución del grupo alquilo R es tal que la sustitución del carbono alquilo unido a cualquier O, S o N del resto (excepto cuando N es un átomo de anillo heteroarilo) excluye sustituyentes que darían como resultado que cualquier O, S o N del sustituyente (excepto cuando N es un átomo del anillo heteroarilo) se una al carbono de alquilo unido a cualquier O, S o N del resto. El término alquilo pretende abarcar alquenilo y alquinilo como se definen en el presente documento.
El término "alquileno" por sí mismo o como parte de otro sustituyente significa un resto de hidrocarburo divalente saturado lineal o ramificado derivado de un alcano que tiene el número de átomos de carbono indicado en el prefijo. Por ejemplo, (es decir, C1-6 significa de uno a seis carbonos; alquileno C1-6 se entiende que incluye el metileno, etileno, propileno, 2-metilpropileno, pentileno, hexileno y similares). El término alquileno C1-4 incluye metileno -CH2-, etileno -CH2CH2-, propileno -CH2CH2CH2-, e isopropileno -CH(CH3) CH2-, -CH2CH(CH3)-, -CH2-(CH2)2CH2-, -CH2-CH(CH3) CH2-, -CH2-C(CH3)2-, -CH2-CH2CH(CH3)-. Típicamente, un grupo alquilo (o alquileno) tendrá de 1 a 24 átomos de carbono, de preferencia aquellos grupos que tengan 10 o menos, 8 o menos, o 6 o menos átomos de carbono. Cuando no se incluye un prefijo para indicar el número de átomos de carbono en un resto alquileno, el resto de alquileno o porción del mismo tendrá 12 o menos átomos de carbono de cadena principal u 8 o menos átomos de carbono de cadena principal, 6 o menos átomos de carbono de cadena principal o 4 o menos átomos de carbono de cadena principal, o 3 o menos átomos de carbono de cadena principal, o 2 o menos átomos de carbono de cadena principal, o 1 átomo de carbono.
El término "alquenilo" se refiere a un radical de hidrocarburo monovalente lineal o un radical de hidrocarburo monovalente ramificado que tiene el número de átomos de carbono indicado en el prefijo y que contiene al menos un doble enlace. Por ejemplo, alquenilo (C2-C6) se entiende que incluye etenilo, propenilo y similares. El término "alquinilo" se refiere a un monorradical de un hidrocarburo insaturado, en algunas modalidades, que tiene de 2 a 20 átomos de carbono (en algunas modalidades, de 2 a 10 átomos de carbono, por ejemplo, de 2 a 6 átomos de carbono) y que tiene de 1 a 6 triples enlaces carbono-carbono, por ejemplo, 1, 2 o 3 triples enlaces carbonocarbono. En algunas modalidades, los grupos alquinilo incluyen el etinilo (-C=CH), propargilo (o propinilo, es decir, -CECCH3) y similares. Cuando no se incluye un prefijo para indicar el número de átomos de carbono en una porción alquenilo o alquinilo, el resto alquenilo o alquinilo o porción del mismo tendrá 12 o menos átomos de carbono de cadena principal u 8 o menos átomos de carbono de cadena principal, 6 o menos átomos de carbono de cadena principal o 4 o menos átomos de carbono de cadena principal. El término "alquenileno" se refiere a un radical de hidrocarburo monovalente lineal o un radical de hidrocarburo monovalente ramificado que tiene al menos un doble enlace y el número de átomos de carbono indicado en el prefijo. De manera similar, el término "alquinileno" se refiere a un radical de hidrocarburo monovalente lineal o un radical de hidrocarburo monovalente ramificado que contiene al menos un enlace triple y que tiene el número de átomos de carbono indicado en el prefijo. Ejemplos de tales grupos alquilo insaturados incluyen el vinilo, 2-propenilo, crotilo, 2-isopentenilo, 2-(butadienilo), 2,4-pentadienilo, 3-(1,4-pentadienilo), etinilo, 1- y 3-propinilo, 3-butinilo y los homólogos e isómeros superiores.
El "cicloalquilo" o "carbociclo" por sí mismo o como parte de otro sustituyente, a menos que se indique de otra manera, se refiere a sistemas de anillos de carbono monocíclicos, bicíclicos o tricíclicos no aromáticos saturados o insaturados que tienen el número de átomos de carbono indicado en el prefijo o si no se especifica, que tienen 3-10, además 3-8, y además 3-6, miembros de anillo por anillo, tales como el ciclopropilo, ciclopentilo, ciclohexilo, 1-ciclohexenilo, adamantilo y similares, donde uno o dos átomos de carbono del anillo pueden reemplazarse opcionalmente por un carbonilo. El cicloalquilo se refiere a anillos de hidrocarburo que tienen el número indicado de átomos del anillo (por ejemplo, cicloalquilo C3-8 significa tres a ocho átomos de carbono del anillo). El "cicloalquilo" o "carbociclo" puede formar un anillo puenteado o un anillo espiro. El grupo cicloalquilo puede tener uno o más enlaces dobles o triples, en cuyo caso se denominarían cicloalquenilo y cicloalquinilo respectivamente. El término "cicloalquilcarbonilo" se refiere a un grupo -cicloalquil-C(O)-, en donde cicloalquilo es como se define en el presente documento. El término "alquilcarbonilo" se refiere a -alquil-C(O)-, en donde alquilo es como se define en el presente documento.
El "cicloalquilalquilo" se refiere a un grupo -(alquileno)-cidoalquilo donde el alquileno como se define en el presente documento tiene el número indicado de átomos de carbono o si no se especifica, que tiene seis o menos, preferentemente cuatro o menos átomos de carbono de cadena principal; y cicloalquilo es como se define en el presente documento, que tiene el número indicado de átomos de carbono o si no se especifica, que tiene 3-10, y también de 3-8, y también de 3-6, miembros del anillo por anillo. El cicloalquilo C3-8-alquilo C1-2 pretende tener de 3 a 8 átomos de carbono del anillo y de 1 a 2 átomos de carbono de cadena de alquileno. El cicloalquilalquilo ilustrativo incluye, por ejemplo, el ciclopropilmetileno, ciclobutiletileno, ciclobutilmetileno y similares.
El "cicloalquenilo" por sí mismo o como parte de otro sustituyente, a menos que se indique de otra manera, se refiere a un sistema de anillos de carbono monocíclico, bicíclico o tricíclico no aromático que tiene el número de átomos de carbono indicado en el prefijo o si no se especifica, que tiene de 3-10, y también de 3-8, y también de 3-6, miembros del anillo por anillo, que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono. El cicloalquenilo ilustrativo incluye, por ejemplo, el 1-ciclohexenilo, 4-ciclohexenilo, 1-ciclopentenilo, 2-ciclopentenilo y similares.
El "alcoxi" se refiere a un grupo -O-alquilo, donde alquilo es como se define en el presente documento. El término "alcoxialquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno o más, tal como de uno a tres grupos alcoxi. El "cicloalcoxi" se refiere a un grupo -O-cicloalquilo, donde cicloalquilo es como se define en el presente documento. Si bien se entiende que las sustituciones en alcoxi están unidas a cualquier átomo disponible para producir un compuesto estable, la sustitución de alcoxi es tal que el O, S o N (excepto cuando N es un átomo de anillo heteroarilo), no está unido al carbono de alquilo unido al alcoxi O. Además, cuando el alcoxi se describe como un sustituyente de otro resto, el oxígeno de alcoxi no está unido a un átomo de carbono que está unido a un O, S o N del otro resto (excepto cuando N es un átomo del anillo heteroarilo), o a un carbono de alqueno o alquino del otro resto. El término "hidroxialquilo" o "hidroxialquileno" se refiere a un alquilo o alquileno como se define en el presente documento sustituido por al menos un grupo hidroxi como se define en el presente documento. El término "carboxilalquilo" se refiere a un grupo -C(O) -alquilo, en donde el alquilo es como se define en el presente documento. El término "alcoxicarbonilo" se refiere a un grupo -C(O) -alcoxi, en donde el alcoxi es como se define en el presente documento. El término "cianoalquilo" o "cianoalquileno" se refiere a un alquilo o alquileno como se define en el presente documento sustituido por al menos un grupo ciano como se define en el presente documento. El término "cianocicloalquilo" se refiere a un grupo cicloalquilo como se define en el presente documento sustituido con al menos un grupo ciano, y el término "cianocicloalquilalquilo" se refiere a un grupo cicloalquilalquilo como se define en el presente documento sustituido con al menos un grupo ciano.
El término "amino" o "amina" indica el grupo -NH2. El término "ciano" se refiere al grupo - CN.
El "alquilamino" se refiere a un grupo -NH-alquilo, donde alquilo es como se define en el presente documento. Los grupos alquilamino ilustrativos incluyen CH3NH-, etilamino y similares.
El "alquilsulfonilo" se refiere a un grupo -SO2-alquilo, donde alquilo es como se define en el presente documento. Los grupos alquilsulfonilo ilustrativos incluyen CH3 SO2 -, etil SO2 - y similares.
El "alquilsulfonilalquilo" se refiere a un grupo -alquil-SO2-alquilo, donde alquilo es como se define en el presente documento. Los grupos alquilsulfonilalquilo ilustrativos incluyen CH3 SO2-CH2 -, acetato de SO2-CH2-, y similares. El "dialquilamino" se refiere a un grupo —N(alquilo)(alquilo), donde cada alquilo es independientemente como se define en el presente documento. Los grupos dialquilamino ilustrativos incluyen dimetilamino, dietilamino, etilmetilamino y similares. El "cicloalquilamino" indica el grupo -NRddRee, donde Rdd y Ree se combinan con el nitrógeno para formar un anillo heterocicloalquilo de 5-7 miembros, donde el heterocicloalquilo puede contener un heteroátomo adicional dentro del anillo, tal como O, N, o S, y también puede estar adicionalmente sustituido con alquilo. Alternativamente, el "cicloalquilamino" se refiere a un grupo -NH-cicloalquilo, donde el cicloalquilo es como se define en el presente documento. El término "cicloalquilaminocarbonilo" se refiere a un grupo cicloalquilamino-C(O), donde el cicloalquilamino es como se define en el presente documento.
El "arilo" por sí mismo o como parte de otro sustituyente, a menos que se indique de otra manera, se refiere a un radical de hidrocarburo aromático poliinsaturado monocíclico, bicíclico o policíclico que contiene de 6 a 14 átomos de carbono del anillo, que puede ser un solo anillo o múltiples anillos (hasta tres anillos), los cuales se fusionan juntos o enlazan covalentemente. Los ejemplos no limitantes de grupos arilo no sustituidos incluyen el fenilo, 1-naftilo y 2-naftilo. El término "arileno" se refiere a un arilo divalente, en donde el arilo es como se define en el presente documento.
El "arilalquilo" o "aralquilo" se refiere a -(alquileno)-arilo, donde el grupo alquileno es como se define en el presente documento y tiene el número indicado de átomos de carbono, o si no se especifica, que tiene seis o menos átomos de carbono de cadena principal o cuatro o menos átomos de carbono de cadena principal; y el arilo es como se define en el presente documento. Los ejemplos de arilalquilo incluyen el bencilo, fenetilo, 1-metilbencilo y similares.
El "heteroarilo" por sí mismo o como parte de otro sustituyente se refiere a un radical de anillo aromático monocíclico que contiene 5 o 6 átomos del anillo, o un radical aromático bicíclico que tiene de 8 a 10 átomos, que contiene uno o más, de 1-4, de 1-3, de 1-2, heteroátomos seleccionados independientemente del grupo que consiste en el O, S y N. El heteroarilo también pretende incluir S o N oxidados, tales como sulfinilo, sulfonilo y N-óxido de un nitrógeno del anillo terciario. Un átomo de carbono o nitrógeno es el punto de unión de la estructura del anillo heteroarilo de manera que se produce un compuesto estable. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen, pero no se limitan a, piridilo, piridazinilo, pirazinilo, indolizinilo, benzo[b]tienilo, quinazolinilo, purinilo, indolilo, quinolinilo, pirimidinilo, pirrolilo, pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo, tienilo, isoxazolilo, oxatiadiazolilo, isotiazolilo, tetrazolilo, imidazolilo, triazolilo, furanilo, benzofurilo, indolilo, triazinilo, quinoxalinilo, cinolinilo, ftalazinilo, benzotriazinilo, bencimidazolilo, benzopirazolilo, benzotriazolilo, bencisoxazolilo, isobenzofurilo, isoindolilo, indolizinilo, benzotriazinilo, tienopiridinilo, tienopirimidinilo, pirazolopirimidinilo, imidazopiridinas, benzotiaxolilo, benzotienilo, quinolilo, isoquinolilo, indazolilo, pteridinilo y tiadiazolilo. El "heteroarilo que contiene nitrógeno" se refiere al heteroarilo en donde cualquiera de los heteroátomos es N.
El "heteroarileno" por sí mismo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un heteroarilo divalente, donde el heteroarilo es como se define en el presente documento.
El "heteroarilalquilo" se refiere a -(alquileno)-heteroarilo, donde el grupo alquileno es como se define en el presente documento y tiene el número indicado de átomos de carbono, o si no se especifica, que tiene seis o menos átomos de carbono de cadena principal, o cuatro o menos átomos de carbono de cadena principal; y el heteroarilo es como se define en el presente documento.
El "heterocicloalquilo" se refiere a un grupo cicloalquilo no aromático saturado o no saturado que contiene de uno a cinco heteroátomos del anillo seleccionados de N, O y S, en donde los átomos de nitrógeno y azufre están opcionalmente oxidados, y el(los) átomo(s) de nitrógeno está(n) opcionalmente cuaternizado(s), los átomos del anillo restantes son C, donde uno o dos átomos de C pueden reemplazarse opcionalmente por un carbonilo. El heterocicloalquilo puede ser un sistema del anillo monocíclico, bicíclico o policíclico de 3 a 12, o de 4 a 10 átomos del anillo, o de 5 a 8 átomos del anillo en el cual de uno a cinco átomos del anillo son heteroátomos seleccionados de -N=, -N-, -O-, -S-, -S(O)-, o -S(O)2- y además en donde uno o dos átomos del anillo están opcionalmente reemplazados por un grupo -C(O)-. El heterocicloalquilo también puede ser un anillo de alquilo heterocíclico fusionado (que incluye grupos espirocíclicos) con un anillo cicloalquilo, uno arilo o uno heteroarilo. Los ejemplos no limitantes de grupos heterocicloalquilo incluyen pirrolidinilo, piperidinilo, imidazolidinilo, benzofuranilo, pirazolidinilo, morfolinilo, oxetanilo y similares. Puede unirse un grupo heterocicloalquilo al resto de la molécula a través de un carbono del anillo o un heteroátomo. El término "heterocicloalquileno" se refiere a un heterocicloalquilo divalente, en donde el heterocicloalquilo es como se define en el presente documento. El término "heterocicloalquilsulfonilo" se refiere a un grupo -S (O)2 -heterocicloalquilo en donde el heterocicloalquilo es como se define en el presente documento. El "heterocicloalquenilo" se refiere a un grupo heterocicloalquilo como se define en el presente documento que contiene al menos un grupo alquenilo como se define en el presente documento.
El término "heterocicloalquileno" por sí mismo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un heterocicloalquilo divalente, donde el heterocicloalquilo es como se define en el presente documento.
El "heterocicloalquilalquilo" o "heterociclilalquilo" se refiere a -(alquileno)-heterocicloalquilo, donde el grupo alquileno es como se define en el presente documento y tiene el número indicado de átomos de carbono, o si no se especifica, que tiene seis o menos átomos de carbono de cadena principal o cuatro o menos átomos de carbono de cadena principal; y heterocicloalquilo es como se define en el presente documento.
El término "alquilcarbonilaminoalquilo" se refiere a alquil-C(O)-NH-alquileno, en donde el alquilo y alquileno son como se definen en el presente documento. El término "alquilsulfonilo" se refiere a un grupo alquilo unido al resto molecular original a través de un grupo sulfonilo. El término "cicloalquilsulfonilo" se refiere a un grupo cicloalquilo unido al resto molecular original a través del grupo sulfonilo. El término "alquilsulfonilaminoalquilo" se refiere a alquil-S(O)2 -NH-alquileno, en donde el alquilo y alquileno son como se definen en el presente documento. El término "aminocarbonilalquilo" se refiere a H2N-C(O)- alquileno, en donde el alquileno es como se define en el presente documento. El término "alquilaminosulfonilo" se refiere a un -grupo alquilo-NH-SO2, en donde alquilo es como se define en este documento y el resto molecular original está unido a través del grupo sulfonilo. El término "alquilaminoalquilo" se refiere a un grupo alquil-NH-alquileno, en donde alquilo y alquileno son como se definen en el presente documento.
El "grupo protector" se refiere a una agrupación de átomos que cuando se une a un grupo reactivo en una molécula enmascara, reduce o previene esa reactividad. Pueden encontrarse ejemplos de grupos protectores enT.W. Greene and P.G. Wuts, PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC CHEMISTRY, (Wiley, 4th ed. 2006), Beaucage and Iyer, Tetrahedron 48:2223-2311 (1992), and Harrison and Harrison et al., COMPENDIUM OF SYNTHETIC ORGANIC METHODS, Vols. 1-8 (John Wiley and Sons. 1971-1996). Los grupos protectores de amino representativos incluyen el formilo, acetilo, trifluoroacetilo, bencilo, benciloxicarbonilo (CBZ), ferc-butoxicarbonilo (Boc), trimetilsililo (TMS), 2-trimetilsililo-etanosulfonilo (SES), tritilo y grupos tritilo sustituidos, aliloxicarbonilo, 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (FMOC), nitro-veratriloxicarbonilo (NVOC), tri-isopropilsililo (TIPS), fenilsulfonilo y similares (véase también, Boyle, A.
L. (Editor), carbamatos, amidas, derivados de N-sulfonilo, grupos de fórmula -C(O)OR, en donde R es, por ejemplo, metilo, etilo, t-butilo, bencilo, feniletilo, CH2=CHCH2- y similares, grupos de la fórmula -C(O)R', en donde R' es, por ejemplo, metilo, fenilo, trifluorometilo, y similares, grupos de la fórmula -SO2R", en donde R" es, por ejemplo, tolilo, fenilo, trifluorometilo, 2,2,5,7,8-pentametilcroman-6-ilo, 2,3,6-trimetil-4-metoxifenilo y similares, y grupos que contienen silanilo, tales como 2-trimetilsililetoximetilo, t-butildimetilsililo, triisopropilsililo y similares,CURRENT PROTOCOLS IN NUCLEIC ACID CHEMISTRY, John Wiley and Sons, Nueva York, Volumen 1,2000).
El término "opcional" u "opcionalmente", tal como se usa en toda la divulgación, significa que el evento o circunstancia descrita posteriormente puede producirse o no, y que la descripción incluye casos en los que se produce el evento o circunstancia y casos en los que no se produce. Por ejemplo, la frase "el grupo aromático está opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes alquilo" significa que el alquilo puede, pero no necesita estar presente, y la descripción incluye situaciones en las que el grupo aromático está sustituido con un grupo alquilo y situaciones en las que el grupo aromático no está sustituido con el grupo alquilo.
Como se usa en el presente documento, el término "composición" se refiere a una formulación adecuada para la administración a un sujeto animal pretendido para fines terapéuticos que contiene al menos un compuesto farmacéuticamente activo y al menos un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.
El término "aceptable farmacéuticamente" indica que el material indicado no tiene propiedades que pudiern provocar que un médico prudente evite razonablemente la administración del material a un paciente, al tomar en consideración la enfermedad o las afecciones a tratar y la vía de administración respectiva. Por ejemplo, se requiere comúnmente que dicho material sea esencialmente estéril, por ejemplo, para inyectables.
El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sal que es aceptable para la administración a un paciente, tal como un mamífero (por ejemplo, sales que tienen seguridad aceptable en mamíferos para un régimen de dosificación dado). Dichas sales pueden derivarse de bases inorgánicas u orgánicas farmacéuticamente aceptables y de ácidos inorgánicos u orgánicos farmacéuticamente aceptables, en dependencia de los sustituyentes particulares encontrados en los compuestos descritos en el presente documento. Cuando los compuestos de la presente divulgación contienen funcionalidades relativamente ácidas, pueden obtenerse sales de adición de base mediante el contacto de la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente de la base deseada, ya sea pura o en un solvente inerte adecuado. Las sales derivadas de bases inorgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen aluminio, amonio, calcio, cobre, férrico, ferroso, litio, magnesio, mangánico, manganoso, potasio, sodio, zinc y similares. Las sales derivadas de bases orgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen las sales de aminas primarias, secundarias, terciarias y cuaternarias, que incluye las aminas sustituidas, aminas cíclicas, aminas de origen natural y similares, tales como la arginina, betaína, cafeína, colina, N, N'-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina, N,N'-dibenziletilendiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, meglumina (N-metilglucamina) y similares. Cuando los compuestos de la presente divulgación contienen funcionalidades relativamente básicas, pueden obtenerse sales de adición de ácido mediante el contacto de la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado ya sea puro o en un solvente inerte adecuado. Las sales derivadas de ácidos farmacéuticamente aceptables incluyen el acético, trifluoroacético, propiónico, ascórbico, bencenosulfónico, benzoico, camfosulfónico, cítrico, etanosulfónico, fumárico, glicólico, glucónico, glucorónico, glutámico, hippúrico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónico, láctico, lactobiónico, maleico, málico, mandélico, metanosulfónico, múcico, naftalenosulfónico, nicotínico, nítrico, pamoico, pantoténico, fosfórico, succínico, sulfúrico, hidroyódico, carbónico, tartárico, p-toluenosulfónico, pirúvico, aspártico, benzoico, antranílico, mesílico, salicílico, p-hidroxibenzoico, fenilacético, embónico (pamoico), etanosulfónico, bencenosulfónico, 2-hidroxietanosulfónico, sulfanílico, esteárico, ciclohexilaminosulfónico, algénico, hidroxibutírico, galactárico y galacturónico y similares.
También se incluyen sales de aminoácidos tales como arginato y similares, y sales de ácidos orgánicos como ácidos glucurónicos o galactunóricos y similares (véase, por ejemplo, Berge, S. M. y otros, "Pharmaceutical Salts", J. Pharmaceutical Science, 1977, 66:1-19). Ciertos compuestos específicos de la presente divulgación contienen funcionalidades básicas y ácidas que permiten que los compuestos se conviertan en sales de adición de base o de ácido.
Las formas neutras de los compuestos pueden regenerarse mediante el contacto de la sal con una base o ácido y al aislar el compuesto original de la manera convencional. La forma original del compuesto difiere de las diversas formas de sal en ciertas propiedades físicas, tal como la solubilidad en solventes polares, pero por otra parte las sales son equivalentes a la forma original del compuesto para los fines de la presente divulgación.
Como se usa en el presente documento en relación con los compuestos de la divulgación, el término "sintetizar" y términos similares significan la síntesis química a partir de uno o más materiales precursores.
Los compuestos de la presente divulgación también pueden contener proporciones no naturales de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen dichos compuestos. Por ejemplo, los compuestos pueden estar radiomarcados con isótopos radiactivos, tales como por ejemplo el tritio (3H), yodo-125 (125I), carbono-14 (14C), carbono-11(11C) o flúor-18 (18F). Se pretende que todas las variaciones isotópicas de los compuestos de la presente divulgación ya sean radiactivas o no, estén abarcadas dentro del alcance de la presente divulgación.
El término "deuterado" como se usa en el presente documento solo o como parte de un grupo, significa átomos de deuterio sustituidos. El término "análogo deuterado", como se usa en el presente documento solo o como parte de un grupo, significa átomos de deuterio sustituidos en lugar de hidrógeno. El análogo deuterado de la divulgación puede ser un derivado sustituido totalmente o parcialmente con deuterio. En algunas modalidades, el derivado sustituido con deuterio de la divulgación contiene un grupo alquilo, arilo o heteroarilo total o parcialmente sustituido con deuterio.
La divulgación también abarca compuestos marcados isotópicamente de la presente divulgación que son idénticos a los enumerados en el presente documento, pero por el hecho de que uno o más átomos son reemplazados por un átomo que tiene una masa atómica o un número de masa diferente de la masa atómica o número de masa generalmente encontrado en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en los compuestos de la presente divulgación incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como, pero no se limitan a, 2H (deuterio, D), 3H (tritio), 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl y 125I. A menos que se indique lo contrario, cuando una posición se designa específicamente como "H" o "hidrógeno", se entiende que la posición tiene hidrógeno en su composición isotópica de abundancia natural o sus isótopos, tal como deuterio (D) o tritio (3H). Ciertos compuestos marcados isotópicamente de la presente divulgación (por ejemplo, los marcados con 3H y 14C) son útiles en ensayos de distribución en tejido de compuestos y/o sustratos. Los isótopos de tritio (es decir, 3H) y carbono-14 (es decir, 14C) y flúor-18 (18F) son útiles por su facilidad de preparación y detectabilidad. Además, la sustitución con isótopos más pesados tal como el deuterio (es decir, 2H) puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica (por ejemplo, un aumento de la vida media in vivo o reducción de los requisitos de dosificación) y, por lo tanto, puede preferirse en algunas circunstancias. Los compuestos marcados isotópicamente de la presente divulgación generalmente pueden prepararse al seguir procedimientos análogos a los descritos en los Esquemas y en los Ejemplos del presente documento más abajo, mediante la sustitución de un reactivo marcado isotópicamente con un reactivo marcado no isotópicamente.
El término "profármacos" significa cualquier compuesto que libera un fármaco original activo de acuerdo con la Fórmula I in vivo cuando dicho profármaco se administra a un sujeto mamífero. Los profármacos de un compuesto de Fórmula I se preparan al modificar los grupos funcionales presentes en el compuesto de Fórmula I de tal manera que las modificaciones pueden escindirse in vivo para liberar el compuesto original. Los profármacos pueden prepararse al modificar los grupos funcionales presentes en los compuestos de tal manera que las modificaciones se escinden, ya sea en la manipulación rutinaria o in vivo, a los compuestos originales. Los profármacos incluyen los compuestos de Fórmula I en donde un grupo hidroxi, amino, carboxilo o sulfhidrilo en un compuesto de Fórmula I está unido a cualquier grupo que pueda escindirse in vivo para regenerar el grupo hidroxilo, amino o sulfhidrilo libre, respectivamente. Los ejemplos de profármacos incluyen, pero no se limitan a, los ésteres (p. Ej., derivados de acetato, formiato y benzoato), amidas, guanidinas, carbamatos (p. Ej., N, N-dimetilaminocarbonilo) de grupos funcionales hidroxi en los compuestos de Fórmula I y similares. La preparación, selección y uso de profármacos se discute en T. Higuchi and V. Stella, "Pro-drugs as Novel Delivery Systems," Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series; "Design of Prodrugs", ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985; y en Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987.
El término "tautómero" significa compuestos producidos por el fenómeno en donde un protón de un átomo de una molécula se desplaza a otro átomo. Véase, Jerry March, Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structures, 4ta Edición, John Wiley & Sons, páginas 69-74 (1992). Los tautómeros también se refieren a uno de dos o más isómeros estructurales que existen en equilibrio y se convierten fácilmente de una forma isomérica a otra. Los ejemplos incluyen tautómeros ceto-enol, tales como acetona/propen-2-ol, tautómeros imina-enamina y similares, tautómeros de cadena anular, tales como la glucosa/2,3,4,5,6-pentahidroxi-hexanal y similares, las formas tautoméricas de los grupos heteroarilo que contienen una disposición de átomos del anillo -N=C(H)-NH, tales como los pirazoles, imidazoles, bencimidazoles, triazoles y tetrazoles. Cuando el compuesto contiene, por ejemplo, un grupo ceto u oxima o un resto aromático, puede producirse isomerismo tautomérico ('tautomerismo'). Los compuestos descritos en el presente documento pueden tener uno o más tautómeros y, por consiguiente, incluyen varios isómeros. Un experto en la técnica reconocerá que son posibles otras disposiciones de átomos del anillo tautoméricos. Todas estas formas isoméricas de estos compuestos se incluyen expresamente en la presente divulgación.
El término "isómeros" significa compuestos que tienen una Fórmula molecular idéntica pero que difieren en la naturaleza o secuencia de enlace de sus átomos o en la disposición de sus átomos en el espacio. Los isómeros que difieren en la disposición de sus átomos en el espacio se denominan "estereoisómeros". Los términos "estereoisómero" y "estereoisómeros" se refieren a compuestos que existen en diferentes formas estereoisoméricas si poseen uno o más centros asimétricos o un enlace doble con sustitución asimétrica y, por consiguiente, pueden producirse como estereoisómeros individuales o como mezclas. Los estereoisómeros incluyen enantiómeros y diastereómeros. Los estereoisómeros que no son imágenes especulares entre sí se denominan "diastereoisómeros" y los que son imágenes especulares no superponibles entre sí se denominan "enantiómeros". Cuando un compuesto tiene un centro asimétrico, por ejemplo, está unido a cuatro grupos diferentes, es posible un par de enantiómeros. Un enantiómero puede caracterizarse por la configuración absoluta de su centro asimétrico y se describe mediante las reglas de secuenciación R y S de Cahn y Prelog, o por la forma en que la molécula gira el plano de la luz polarizada y se designa como dextrorrotatorio o levorrotatorio (es decir, como isómeros (+) o (-), respectivamente). Un compuesto quiral puede existir ya sea como enantiómero individual o como una mezcla del mismo. Una mezcla que contiene proporciones iguales de enantiómeros se denomina "mezcla racémica". A menos que se indique lo contrario, se pretende que la descripción incluya estereoisómeros individuales, así como mezclas. Los procedimientos para la determinación de la estereoquímica y la separación de los estereoisómeros son bien conocidos en la técnica (véase el análisis en el Capítulo 4 de ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY, 6ta edición J. March, John Wiley and Sons, Nueva York, 2007), difieren en la quiralidad de uno o más estereocentros.
Ciertos compuestos de la presente divulgación pueden existir en formas no solvatadas, así como también en formas solvatadas, que incluyen las formas hidratadas. El término "hidrato" se refiere a un complejo formado por la combinación de moléculas de agua con moléculas o iones del soluto. El término "solvato" se refiere a un complejo formado por la combinación de moléculas del solvente con moléculas o iones del soluto. El solvente puede ser un compuesto orgánico, un compuesto inorgánico o una mezcla de ambos. El solvato se entiende que incluye hidrato. Algunos ejemplos de solventes incluyen, pero no se limitan a, metanol, N, N-dimetilformamida, tetrahidrofurano, dimetilsulfóxido y agua. En general, las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y se abarcan dentro del alcance de la presente divulgación. Ciertos compuestos de la presente divulgación pueden existir en múltiples formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas físicas son equivalentes para los usos contemplados por la presente divulgación y se destinan a estar dentro del alcance de la presente divulgación.
La "forma sólida" se refiere a una preparación sólida (es decir, una preparación que no es ni gas ni líquido) de un compuesto farmacéuticamente activo que es adecuada para la administración a un sujeto animal pretendido con fines terapéuticos. La forma sólida incluye cualquier complejo, tal como una sal, un cocristal o un complejo amorfo, así como cualquier polimorfo del compuesto. La forma sólida puede ser sustancialmente cristalina, semicristalina o sustancialmente amorfa. La forma sólida puede administrarse directamente o usarse en la preparación de una composición adecuada que tenga propiedades farmacéuticas mejoradas. Por ejemplo, la forma sólida puede usarse en una formulación que comprende al menos un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.
Como se usa en el presente documento en relación con la secuencia de aminoácidos o de ácidos nucleicos, el término "aislado" indica que la secuencia está separada de al menos una porción de las secuencias de aminoácidos y/o ácidos nucleicos con las que normalmente estaría asociada.
En conexión con secuencias de aminoácidos o nucleicas, el término "purificado" indica que la molécula sujeto constituye una proporción significativamente mayor de las biomoléculas en una composición que la proporción observada en una composición anterior, por ejemplo, en un cultivo celular. La mayor proporción puede ser 2 veces, 5 veces, 10 veces o más de 10 veces, con respecto a la proporción encontrada en la composición anterior.
En el contexto del uso, prueba o tamizaje de compuestos que son o pueden ser moduladores, el término "poner en contacto" significa que se provoca que el(los) compuesto(s) esté(n) lo suficientemente cerca de una molécula, complejo, célula, tejido, organismo u otro material especificado de manera que puedan producirse interacciones de unión potenciales y/o reacción química entre el compuesto y otro material especificado.
Como se usa en el presente documento, el término "sujeto" se refiere a un organismo vivo que se trata con compuestos como se describe en el presente documento, que incluye, pero no se limita a, cualquier mamífero, tal como un ser humano, otros primates, animales deportivos, animales de interés comercial tal como ganado, animales de granja tales como caballos o mascotas tales como perros y gatos.
El término "administración" se refiere a la administración oral, administración como supositorio, contacto tópico, administración intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intralesional, intranasal o subcutánea, o la implantación de un dispositivo de liberación lenta, por ejemplo, una mini bomba osmótica, a un sujeto. La administración se realiza por cualquier vía, que incluye la parenteral y transmucosal (por ejemplo, bucal, sublingual, palatal, gingival, nasal, vaginal, rectal o transdérmica). La administración parenteral incluye, por ejemplo, intravenosa, intramuscular, intraarteriolar, intradérmica, subcutánea, intraperitoneal, intraventricular e intracraneal. Otros modos de suministro incluyen, pero no se limita a, el uso de formulaciones liposomales, infusión intravenosa, parches transdérmicos, etc.
En el presente contexto, el término "terapéuticamente eficaz" o "cantidad eficaz" indica que un compuesto o material o cantidad del compuesto o material cuando se administra es suficiente o eficaz para prevenir, aliviar o mejorar uno o más síntomas de una enfermedad, trastorno o afección médica que se trata, y/o para prolongar la supervivencia del sujeto que se trata y/o prolongar la supervivencia del sujeto que se trata. La cantidad terapéuticamente eficaz variará en dependencia del compuesto, la enfermedad, trastorno o afección y su gravedad y la edad, peso, etc., del mamífero a tratar. En general, se indica que se obtienen resultados satisfactorios en sujetos a una dosificación diaria de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 g/kg de peso corporal del sujeto. En algunas modalidades, una dosis diaria varía de aproximadamente 0,10 a 10,0 mg/kg de peso corporal, de aproximadamente 1,0 a 3,0 mg/kg de peso corporal, de aproximadamente 3 a 10 mg/kg de peso corporal, de aproximadamente 3 a 150 mg/kg de peso corporal, de aproximadamente 3 a 100 mg/kg de peso corporal, de aproximadamente 10 a 100 mg/kg de peso corporal, de aproximadamente 10 a 150 mg/kg de peso corporal, o de aproximadamente 150 a 1000 mg/kg de peso corporal. La dosificación puede administrarse convenientemente, por ejemplo, en dosis divididas hasta cuatro veces al día o en forma de liberación sostenida.
Por "ensayo" se entiende la creación de condiciones experimentales y la recopilación de datos con respecto a un resultado particular de la exposición a condiciones experimentales específicas. Por ejemplo, las enzimas pueden analizarse en función de su capacidad para actuar sobre un sustrato detectable. Puede analizarse un compuesto en función de su capacidad para unirse a una molécula o moléculas diana en particular.
Como se usa en el presente documento, los términos "ligando" y "modulador" se usan de manera equivalente para referirse a un compuesto que cambia (es decir, aumenta o disminuye) la actividad de una biomolécula diana, por ejemplo, una enzima tal como una quinasa. Generalmente, un ligando o modulador será una molécula pequeña, donde "molécula pequeña se refiere a un compuesto con un peso molecular de 1500 Daltons o menos, o 1000 Daltons o menos, 800 Daltons o menos, o 600 Daltons o menos. Por tanto, un "ligando mejorado" es uno que posee mejores propiedades farmacológicas y/o farmacocinéticas que un compuesto de referencia, donde un experto en la técnica relevante puede definir "mejor" para un sistema biológico o uso terapéutico particular.
El término "se une" en relación con la interacción entre una diana y un compuesto de unión potencial indica que el compuesto de unión potencial se asocia con la diana en un grado estadísticamente significativo en comparación con la asociación con proteínas en general (es decir, unión no específica). Por tanto, el término "compuesto de unión" se refiere a un compuesto que tiene una asociación estadísticamente significativa con una molécula diana. En algunas modalidades, un compuesto de unión interactúa con una diana específica con una constante de disociación (Kd) de 1 mM o menos, 1 pM o menos, 100 nM o menos, 10 nM o menos, o 1 nM o menos. En el contexto de los compuestos que se unen a una diana, los términos "mayor afinidad" y "selectivo" indican que el compuesto se une más fuertemente que un compuesto de referencia, o que el mismo compuesto en una condición de referencia, es decir, con una constante de disociación más baja. En algunas modalidades, la mayor afinidad es al menos una afinidad de al menos 2, 3, 4, 5, 8, 10, 50, 100, 200, 400, 500, 1000 o 10000 veces.
Los términos "previene", "prevenir", "prevención" y las variaciones gramaticales de los mismos, como se usan en el presente documento, se refieren a un procedimiento para retardar o prevenir parcial o completamente la aparición o recurrencia de una enfermedad, trastorno o afección y/o uno o más de sus síntomas acompañantes o impedir que un sujeto adquiera o vuelva a adquirir un trastorno o afección o reducir el riesgo de un sujeto de adquirir o volver a adquirir un trastorno o afección o uno o más de sus síntomas acompañantes.
La "forma de dosificación unitaria" se refiere a una composición destinada a una sola administración para tratar a un sujeto que padece de una enfermedad o afección médica. Cada forma de dosificación unitaria típicamente comprende cada uno de los ingredientes activos de esta divulgación más excipientes farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de formas de dosificación unitarias son tabletas individuales, cápsulas individuales, polvos a granel, soluciones líquidas, pomadas, cremas, gotas para los ojos, supositorios, emulsiones o suspensiones. El tratamiento de la enfermedad o afección puede requerir la administración periódica de formas de dosificación unitarias, por ejemplo: una forma de dosificación unitaria dos o más veces al día, una con cada comida, una cada cuatro horas u otro intervalo, o solo una por día. La expresión "forma de dosificación unitaria oral" indica una forma de dosificación unitaria diseñada para ser tomada por vía oral.
Además, las abreviaturas como se usan en el presente documento tienen los significados respectivos de la manera siguiente:
Figure imgf000012_0002
II. Compuestos
La modalidad 1 de esta divulgación se refiere a un compuesto de Fórmula I:
Figure imgf000012_0001
o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
Z2 es alquinilo C2-i0 opcionalmente sustituido con Rb’ arilo C6-14, cicloalquilo C3-io, cicloalquenilo C3-io, heterocicloalquilo de 3-12 miembros, heterocicloalquenilo de 3-12 miembros, o heteroarilo de 5-10 miembros, en donde cada arilo C6-14, cicloalquilo C3-10, cicloalquenilo C3-10, heterocicloalquilo de 3-12 miembros, heterocicloalquenilo de 3-12 miembros o heteroarilo de 5-10 miembros está opcionalmente sustituido con 1-3 grupos R 1 ;
Z 3 es hidrógeno o halo;
Z 5 es:
Figure imgf000013_0001
cada R 1 es independientemente hidrógeno, alquilo Ci-6, cicloalquilo C 3 -i 0 , cicloalquilo -C(O)-C 3 -i 0 , -alquilo C(O)-Ci -6 , ciano, ciano-alquilo C1- 6 , ciano cicloalquilo C 3-10 - alquilo C1- 6 , hidroxi, alcoxi C1-6, alcoxi C1-6- alquilo C1-6, hidroxi- alquilo C1- 6 , halo, halo-alquilo C1-6, oxo, arilo C6-14, arilo C6-14- alquilo C1-6, cicloalquilsulfonilo C3-10, alquilsulfonilo C1-6, alquilsulfonilo C1-6-alquilo C1-6, alquilcarbonilamino-alquilo C1-6, alquilsulfonilamino C1-6-alquilo C1-6, heterocicloalquilo de 3-12 miembros opcionalmente sustituido con 1-2 Ra, heterocicloalquilo de 3-12 miembros -alquilo C1-6, -NR 6 R 7 ,-alquileno C1-6--NR 6 R 7 ,-C(O)O- alquilo C1-6, heterocicloalquilo de 3-12 miembros opcionalmente sustituido con 1-2 grupos Rd, o heteroarilo de 5-10 miembros opcionalmente sustituidos con 1-2 grupos Re;
El R 6 es hidrógeno, alquilo C1-6, alquilcarbonilo C1-6, alquilsulfonilo C1-6, cicloalquilamino de 5-7 miembros o cicloalquilo de C3-10, en donde cada uno de alquilo C1-6, alquilcarbonilo C 1-6 , alquilsulfonilo C 1-6 , cicloalquilamino de 5-7 miembros y cicloalquilo C 3-10 están opcionalmente sustituidos con 1-3 grupos G,
El R 7 es hidrógeno o alquilo C1-6 opcionalmente sustituido con 1-3 grupos G;
o R 6 y R 7 , junto con el átomo de N al que están unidos, se unen para formar un resto heterocicloalquilo de 3-12 miembros o un heteroarilo de 5-10 miembros, en donde 1-2 átomos de carbono del resto heterocicloalquilo o heteroarilo están sustituidos con 1-2 grupos G;
cada G es independientemente alquilo C1-6, haloalquilo -C 1 -C 6 , halo, amino, alquilo -NH-C 1-6 , -N(alquilo C 1-6 ) 2 , alquilo (alquileno C 1-6 )-N(H)-alquilo C 1-6 , -(alquileno C 1-6 )-amino, -CN, -C(O)-alquilo C 1-6 , -C(O)-alquilo C 1-6 , -CO2H, -C(O)-N(H)-alquilo C1-6, oxo, alquilo C1-6-N(H)-C(O), -C(=NH)-NH2, -OH, -N(H)-C(O)-O-alquilo C1-6, -N(H)-C(O)-N(H)-alquilo C 1-6 , -N(H)-S(O) 2 -alquilo C1-6, -S (O) 2 -alquilo C1-6, hidroxi-alquilo C1-6, cicloalquilo C3-10, -n (h)-cicloalquilo C 3-6 , alcoxi C1-6, heterocicloalquilo de 3 a 12 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros, cada Ra es independientemente alquilo C1-6, oxo, halo, o hidroxi;
Rb es halo, cicloalquilo C 3 -C 6 , arilo C6-14, heteroarilo de 5-10 miembros, -NR 6 R 7 , o hidroxi;
cada Rd es independientemente alquilo Ci- C 6 , halo, oxo, alquilaminosulfonilo Ci -6 , alquilsulfonilo C1-6,
alquilcarbonilo C1-6, hidroxi-alquilo C1-6, o hidroxi; y
cada Re es independientemente alquilo C 1-6 , halo o hidroxi;
siempre que cuando G es cicloalquilo C 3 - 1 o, Z 2 es alquinilo opcionalmente sustituido con cicloalquilo C3-C 6 , -NR 6 R 7 , o hidroxi.
La modalidad 2 de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 1, en donde:
Z 2 es etinileno opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, arilo C6-14, -alquileno -C1-C6-NR 6 R 7 o hidroxi-C1-6 alquileno; o
Z 2 es fenilo, ciclohexanilo, ciclohexenilo, pirazolilo, pirimidinilo, tiazolilo, piridilo, piridazinilo, pirrolilo,
dihidropirrolilo, dihidropiranilo, dihidropiradinilo, tetrahidropiridilo, dihidrotiopiranilo, óxido de dihidrotiopiranilo, o
dióxido de dihidrotiopiranilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con 1-2 grupos R 1 ;
El R 1 es hidrógeno, cicloalquilo C3-10, -C(O)-cicloalquilo C 3-10 , alquilo C1-6, ciano, hidroxi, alcoxi C1-6, halo, haloalquilo C 1 - 6 , oxo, fenilo, heterocicloalquilo de 3-12 miembros, heterocicloalquilo de 3-12 miembros- alquilo C 1 - 6 ,
alquileno C1-6--NR 6 R 7 , -C(O)OC-alquilo C 1 - 6 , o heteroarilo de 5-10 miembros opcionalmente sustituido con 1-2
grupos Re;
cada G es independientemente alquilo C 1-6 , halo, amino, -NH- alquilo C 1 - 6 , -N(alquilo C 1 - 6 ) 2 , -(alquileno C 1 - 6 )-N(H)-alquilo C1-6, -CN, -C(O)-alquilo C1-6, -C(O)-N(H)-alquilo C1-6, -N(H)-C(O)-alquilo C1-6, -C(=NH)- NH2, -N(H)-C(O)-oC alquilo C 1 - 6 , -N(H)-C(O)-N(H) - alquilo C 1 - 6 , -N(H)-S(O) 2 - alquilo C 1 - 6 , -S(O) 2 -alquilo C 1 - 6 , c C 3 - 6 , -N(H)-cicloalquilo C 3 - 6 , alcoxi C 1 -C 6 , heterocicloalquilo de 5-6 miembros o heteroarilo de 5-6 miembros,
siempre que cuando G es cicloalquilo C 3 - 6 , Z 2 está opcionalmente sustituido con alquilo C 1 - 6 , cicloalquilo C 3 - 6 ,
alquileno-C 1 -C 6 -NR 6 R 7 , o hidroxialquileno C 1 - 6 ; y
cada Ra independientemente oxo, halo o hidroxi.
La modalidad X(a) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 1 o 2, en donde Z 5 es el
resto (i) o (ii) en la Modalidad 1.
La modalidad X(b) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 1 o 2, en donde Z 5 es el
resto (iii) o (iv) en la Modalidad 1.
La modalidad X(c) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 1 o 2, en donde Z 5 es el
resto (i) en la Modalidad 1.
La modalidad X(d) de la presente divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 1 o 2, en donde
Z 5 es el resto (ii) en la Modalidad 1.
La modalidad X(e) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 1 o 2, en donde Z 5 es el
resto (iii) en la Modalidad 1.
La modalidad X(f) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 1 o 2, en donde Z 5 es el
resto (iv) en la Modalidad 1.
La modalidad 3(a) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1,2 y
X(a) X(f), en donde Z 2 es:
Figure imgf000015_0001
(m i) (xxiv)
en donde
m es 0-2;
n es 0-3;
R 8 es hidrógeno, alquilo Ci - 6 , -C(O)O- alquilo Ci- 6 , cicloalquilo C 3-6, -C(O) cicloalquilo C 3-6, arilo C6-14 -alquilo
C1-6, heterocicloalquilo de 5-6 miembros-alquilo C1-6 o haloalquilo C1-6; y
R 9 es alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, cicloalquilo
Figure imgf000015_0002
3-6, arilo C6-14, -alquileno C1-6 -NR 6 R 7 , hidroxi-alq hidroxi.
La modalidad 3(b) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1, 2,
X(a) -X(f) y 3(a), en donde Z 2 es el resto (viii), (ix), (x), (xxii), (xxiii) o (xxiv) en la Modalidad 3(a).
La modalidad 3(c) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2,
X(a) -X(f) y 3(a), en donde Z 2 es el resto (xi), (xii), (xiii) o (xiv) en la Modalidad 3(a).
La modalidad 3(d) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2,
X(a) -X(f) y 3(a), en donde Z 2 es el resto (xv), (xvi), (xvii) o (xviii) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3(e) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2,
X(a)-X(f) y 3(a), en donde Z 2 es el resto (vii) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3(f) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2,
X(a)-X(f) y 3 (a), en donde Z 2 es el resto (viii) en la Modalidad 3 (a).
Modalidad 3(g) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1,2, X(a)-X(f) y 3(a), en donde Z 2 es el resto (ix) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3(h) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2,
X(a)-X(f) y 3(a), en donde Z 2 es el resto (x) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3(i) de la presente divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades
1.2, X(a)-X(f) y 3(a), en donde Z 2 es el resto (xi) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3(j) de la presente divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades
1.2, X(a)-X(f) y 3(a), en donde Z 2 es el resto (xii) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3(k) de la presente divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades
1.2, X(a)-X(f) y 3(a), en donde Z 2 es el resto (xiii) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3(1) de la presente divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades
1.2, X(a)-X(f) y 3(a), en donde Z 2 es el resto (xiv) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3(m) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2,
X(a)-X(f) y 3(a), en donde Z 2 es el resto (xv) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3(n) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2,
X(a)-X(f) y 3(a), en donde Z 2 es el resto (xvi) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3(o) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2,
X(a)-X(f) y 3(a), en donde Z 2 es el resto (xvii) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3(p) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2, X(a)-X(f) y 3(a), en donde Z2 es el resto (xviii) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3(q) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1, 2, X(a)-X(f) y 3 (a), en donde Z2 es el resto (xix) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3(r) de la presente divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1.2, X(a)-X(f) y 3(a), en donde Z2 es el resto (xx) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3(s) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2, X(a)-X(f) y 3(a), en donde Z2 es el resto (xxi) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3(t) de esta modalidad se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1, 2, X(a) -X(f) y 3 (a), en donde Z2 es el resto (xxii) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3 (u) de la presente divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1.2, X(a)-X(f) y 3(a), en donde Z2 es el resto (xiii) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 3(v) de la presente divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1.2, X(a)-X(f) y 3(a), en donde Z2 es el resto (xxiv) en la Modalidad 3 (a).
La modalidad 4 de la presente divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2, X(a)-X(f) y 3(a)-3 (v), en donde R1 es alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, cicloalquilo C3-6, alquileno -Ci -3-CN, ciano, -(alquileno Ci-3)-alcoxi Ci-3, heterocicloalquilo de 3-12 miembros, cicloalquilo -C(O)-C3-6.
La modalidad 5(a) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1,2, X (a) X (f), 3 (a)-3 (v) y 4, en donde R1 es -CH3, -CHF2, -CH2F, -CF3, ciclopropilo, alquileno -C1-3 -CN, ciano, metoxi-(C1-3 alquileno)-, piperidinil, morfolinil, tetrahirofuranil, o -C(O)-ciclopropilo.
La modalidad 5(b) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1, 2, X(a)-X(f), 3(a)-3(v), 4 y 5(a), en donde R1 es -CH3, -CHF2, -CH2F o -CF3.
La modalidad 5(c) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2, X(a)-X(f), 3(a)-3(v), 4 y 5(a), en donde R1 es -CH3.
La modalidad 5(d) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1, 2, X(a)-X(f), 3(a)-3(v), 4 y 5(a), en donde R1 es -CHF2.
La modalidad 5(e) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1,2, X (a) -X(f), 3(a)-3(v), 4 y 5(a), en donde R1 es -CH2F.
La modalidad 5(f) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2, X(a)-X(f), 3(a)-3(v), 4 y 5(a), en donde R1 es -CF3.
La modalidad 5(g) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2, X(a)-X(f), 3(a)-3(v) y 4, en donde R1 es ciclopropilo.
La modalidad 5(h) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2, X(a)-X(f), 3(a)-3(v) y 4, en donde R1 - alquileno (C1-C3 -Cn o ciano.
La modalidad 5(i) de la presente divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1.2, X(a)-X(f), 3(a)-3(v) y 4, en donde R1 is metoxi-alquileno (C1-C3)-.
La modalidad 5(j) de la presente divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1.2, X(a)-X(f), 3(a)-3(v) y 4, en donde R1 es piperidinil, morfolinil, o tetrahidrofuranil.
La modalidad 5(k) de la presente divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1.2, X(a)-X(f), 3(a)-3(v) y 4, en donde R1 es -C(O)-ciclopropilo.
La modalidad 6 de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1, 2 y 3 (a) que tiene una de las siguientes Fórmulas:
Figure imgf000017_0001
o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable de la misma, en donde R9 es alquilo Ci-6, haloalquilo Ci-6, cicloalquilo C3-6, fenilo, -(alquileno Ci-6)-NR6R7, o hidroxialquileno C1-4.
La modalidad 7(a) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1, 2, X(a)-X(f), 3(a)-3(v), 4 y 5(a)-5(k) que tenga una de las siguientes fórmulas:
Figure imgf000018_0001
Figure imgf000019_0001
o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada uno de R1a, R1b, R1c, R1d, R1e, y R1f son tan definidas como R1 en cualquiera de las Modalidades 1,2, X(a)-X(f), 3(a)-3(v), 4 y 5(a)-5(k).
La modalidad 7(b) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7(a) que tiene la Fórmula V(a), o una sal, un solvato, un tautómero, un isómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo.
La modalidad 7(c) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7(a) que tiene la Fórmula V(b), o una sal, un solvato, un tautómero, un isómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo
La modalidad 7(d) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7(a) que tiene la Fórmula V(c), o una sal, un solvato, un tautómero, un isómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo.
La modalidad 7(e) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7(a) que tiene la Fórmula V(d), o una sal, un solvato, un tautómero, un isómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo.
La modalidad 7(f) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7(a) que tiene la Fórmula
V(e), o una sal, un solvato, un tautómero, un isómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo.
La modalidad 7(g) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7(a) que tiene la Fórmula V(f), o una sal, un solvato, un tautómero, un isómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptables del mismo.
La modalidad 7(h) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7(a) que tiene la Fórmula V(g), o una sal, un solvato, un tautómero, un isómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable
del mismo.
La modalidad 7(i) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7(a) que tiene la Fórmula
V(h), o una sal, un solvato, un tautómero, un isómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo.
La modalidad 7(j) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7 (a) que tiene la Fórmula V(aa), o una sal, un solvato, un tautómero, un isómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo.
La modalidad 7(k) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7(a) que tiene la Fórmula V(bb), o una sal, un solvato, un tautómero, un isómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo.
La modalidad 7(1) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7(a) que tiene la Fórmula V(cc), o una sal, un solvato, un tautómero, un isómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptables del mismo.
La modalidad 7(m) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7(a) que tiene la Fórmula V(dd), o una sal, un solvato, un tautómero, un isómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo
La modalidad 7(n) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7(a) que tiene la Fórmula V(ee), o una sal, un solvato, un tautómero, un isómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo
La modalidad 7(o) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7(a) que tiene la Fórmula V(ff), o una sal, un solvato, un tautómero, un isómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable
del mismo
La modalidad 7(p) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7(a) que tiene la Fórmula V(gg), o una sal, un solvato, un tautómero, un isómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo
La modalidad 7(q) de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7(a) que tiene la Fórmula V(hh), o una sal, un solvato, un tautómero, un isómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo
La modalidad 8 de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 7(a), en donde:
R1a es hidrógeno, ciclopropilo, -OC(H)(CH3)2, morfolinilo, -CF3, -CHF2 o F;
R1b es hidrógeno, F, ciano, ciclopropilo o cianociclopropilo;
R1c es hidrógeno, ciclopropilo, metoxi, -OC(H)(CH3)2, pirrolidinilo, etoxi, --CH3, -CF3 o -CHF2;
R1d es hidrógeno o -CH3;
R1e es hidrógeno, metoxi, ciclopropilo, morfolinilo, -CF3, -CHF2, -CH3, pirrolidinilo o F;
R1f es hidrógeno o ciclopropilo; y
R 8 es hidrógeno, -CH(CH3)2, -C(O)OC(CH3)3, ciclopropilo, -C(O)ciclopropilo, -(CH2)i-2-fenilo, -(CH2)i-2-morfolinilo, -(CH2)i-2-tetrahidrofuranilo, -(CH2)i-2-piperidinilo, CH3, -CF3 o -CHF2.
La modalidad 9 de esta divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2, 3(a),
4, 5(a), 6, 7(a) y 8, en donde G es amino, -N(H)C(O)-alquilo C1-6, -C(O)-N(H)-alquilo C1-6, -N(H)-C(O)-N(H)-alquilo
C1-6, -N(H)-S(O)2- alquilo C1-6, -N(H)-alquilo C1-6, -N(alquilo C1-6)2, -C(=NH)-NH2, -OH, alquilo C1-6, halo, -N(H)-cicloalquilo C3-6, -alcoxi C1-6, hetericicloalquilo de 4-6 miembros, heteroarilo de 5-6 miembros, -CN, -C(O)-alquilo C1-6, o - alquileno C1-3 -N(H)-alquilo C1-3.
La modalidad 10 de la presente divulgación se refiere al compuesto de acuerdo con la Modalidad 9, en donde G es amino, —N(H)C(O)-alquilo C1-4, -C(O)-N(H)-alquilo C1-4, -N(H)-C(O)-N(H)-alquilo C1-4, -N(H)-S(O)2-alquilo C1-3, —N(H)-CH3, -N(Ch 3)2, -C(=NH)-NH2, -Oh , -alquilo C1-3, -CF3, fluoro, -N(H)-cicloalquilo C3-6, -alcoxi C1-3, morfolinilo, imidazolilo, -CN, -C(O)-alquilo C1-3, o -alquileno C1-2-N(H)-CH3.
La modalidad 11 de la presente divulgación se refiere a un compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades descritas en el presente documento, en donde Ra es oxo, fluoro, cloro, o hidroxi.
Esta divulgación se refiere a un compuesto de la Tabla 1:
TABLA 1
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o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los compuestos anteriores.
La modalidad 12 de esta divulgación se refiere a un compuesto de la Tabla 2:
TABLA 2
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o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los compuestos anteriores.
La modalidad 13 de esta divulgación se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1,2, X(a)-X(f), 3(a)-3(v), 4, 5(a)-5(k), 6, 7(a)-7(q), 8, 9, 10, 11 y 12 y un portador farmacéuticamente aceptable.
La modalidad 14 de esta divulgación se refiere a la composición farmacéutica de la Modalidad 13 que comprende además un segundo agente farmacéutico seleccionado del grupo que consiste en un agente antiproliferativo, un agente antiinflamatorio, un agente inmunomodulador y un agente inmunosupresor.
La modalidad 15 de esta divulgación se refiere a la composición farmacéutica de la Modalidad 14, en donde el segundo agente farmacéutico es i) un agente alquilante seleccionado de adozelesina, altretamina, bizelesina, busulfán, carboplatino, carbocuona, carmustina, clorambucilo, cisplatino, ciclofosfamida, dacarbazina, estramustina, fotemustina, hepsulfam, ifosfamida, improsulfán, irofulven, lomustina, mecloretamina, melfalán, oxaliplatino, piposulfán, semustina, estreptozocina, temozolomida, tiotepa y treosulfán; ii) un antibiótico seleccionado de bleomicina, dactinomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina, menogaril, mitomicina, mitoxantrona, neocarzinostatina, pentostatina y plicamicina; un antimetabolito, que incluye, pero no se limita a, azacitidina, capecitabina, cladribina, clofarabina, citarabina, decitabina, floxuridina, fludarabina, 5-fluorouracilo, ftorafur, gemcitabina, hidroxiurea, mercaptopurina, metotrexato, nelarabina, pemetrexed, raltitrexed, tioguanina y trimetrexato; iii) un agente de terapia con anticuerpos seleccionado de alemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, galiximab, gemtuzumab, panitumumab, pembrolizumab, pertuzumab, rituximab, tositumomab, trastuzumab e ibritumomab tiuxetán 90 Y; una hormona o antagonista de hormonas, que incluye, entre otros, anastrozol, andrógenos, buserelina, dietilestilbestrol, exemestano, flutamida, fulvestrant, goserelina, idoxifeno, letrozol, leuprolida, magestrol, raloxifeno, tamoxifeno y toremifeno; iv) un taxano seleccionado de DJ-927, docetaxel, TPI 287, paclitaxel y DHA-paclitaxel; v) un retinoide seleccionado de alitretinoína, bexaroteno, fenretinida, isotretinoína y tretinoína; vi) un alcaloide seleccionado de etopósido, homoharringtonina, tenipósido, vinblastina, vincristina, vindesina y vinorelbina; vii) un agente antiangiogénico seleccionado de AE-941 (GW786034, Neovastat), ABT-510, 2- metoxiestradiol, lenalidomida y talidomida; viii) un inhibidor de la topoisomerasa seleccionado de amsacrina, edotecarina, exatecán, irinotecán (también metabolito activo SN-38 (7-etil-10-hidroxi-camptotecina)), rubitecán, topotecán y 9-aminocamptotecina; ix) un inhibidor de quinasa seleccionado de erlotinib, gefitinib, flavopiridol, mesilato de imatinib, lapatinib, sorafenib, malato de sunitinib, AEE-788, AG-013736, AMG 706, AMN107, BMS-354825, BMS-599626, UCN-01 (7-hidroxistaurosporina), vemurafenib, dabrafenib, trametinib, cobimetinib, selumetinib y vatalanib; x) un inhibidor de la transducción de señales dirigido seleccionado de bortezomib, geldanamicina y rapamicina; xi) un modificador de la respuesta biológica seleccionado de imiquimod, interferón-a e interleucina-2; xii) un inhibidor de IDO (por ejemplo, indoximod); y xiii) un agente quimioterapéutico seleccionado de 3- AP (3-amino-2-carboxialdehído tiosemicarbazona), altrasentán, aminoglutetimida, anagrelida, asparaginasa, briostatina-1, cilengitida, elesclomol, mesilato de eribulina (E7389), ixabepilona, lonidamida, masoprocol, mitoguanazona, oblimersen, sulindac, testolactona, tiazofurina, inhibidores de mTOR (por ejemplo, sirolimus, temsirolimus, everolimus, deforolimus), inhibidores de PI3K (por ejemplo, BEZ235, GDC-0941, XL147, XL765), inhibidores de Cdk4 (por ejemplo, PD-332991), inhibidores de Akt, Inhibidores de Hsp90 (por ejemplo, geldanamicina, radicicol, tanespimicina), inhibidores de farnesiltransferasa (por ejemplo, tipifarnib) e inhibidores de Aromatasa (anastrozol letrozol exemestano); xiii) un inhibidor de Mek; xiv) un inhibidor de tirosina quinasa como se describe en el presente documento; o xv) un inhibidor de EGFR.
La modalidad 16 de esta divulgación se refiere a un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1, 2, X(a)-X(f), 3(a)-3(v), 4, 5(a)-5(k), 6, 7(a)-7(q), 8, 9, 10, 11 y 12, o una sal farmacéuticamente aceptable, un solvato, un análogo deuterado, un tautómero o un estereoisómero del mismo, o una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 13-15 para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección modulada por una proteína quinasa FLT3, en donde la enfermedad es una enfermedad inflamatoria, una afección inflamatoria, una enfermedad autoinmunitaria o cáncer.
La modalidad 17 de esta divulgación se refiere a un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1,2, X(a)-X(f), 3(a)-3(v), 4, 5(a)-5(k), 6, 7(a)-7(q), 8, 9, 10, 11 y 12, o una sal, un solvato, un análogo deuterado u tautómero o un estereoisómero del mismo farmacéuticamente estable, o una composición farmacéutica de acuerdo con calquiera de las Modalidades 13-15 para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediada por la proteína quinasa FLT3, en donde la enfermedad o afección es la leucemia mieloide aguda, ablación de células madre y mielopreparación para trasplante de células madre, esclerosis múltiple progresiva primaria, síndrome de dolor regional complejo, distrofia simpática refleja, distrofia muscular, distrofia muscular de Duchenne, causalgia, neuroinflamación, trastornos neuroinflamatorios, olvido benigno, HIV, demencia de tipo binswanger, demencia con cuerpos de Lewy, prosencefalia, microencefalia, parálisis cerebral, hidrocefalia congénita, hidropesía abdominal, parálisis supranuclear progresiva, glaucoma, trastornos de adicción, dependencias, alcoholismo, temblores, enfermedad de Wilson, demencias vasculares, demencia por infarto múltiple, demencia fronto temporal, pseudodemencia, cáncer de vejiga, carcinoma de células basales, colangiocarcinoma, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, sarcoma de Ewing, cáncer gástrico, glioma, carcinoma hepatocelular, linfoma de Hodgkin, carcinoma laríngeo, leucemia, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, melanoma, mesotelioma, cáncer de páncreas, cáncer rectal, cáncer renal, carcinoma de células escamosas, linfoma de células T, cáncer de tiroides, leucemia monocítica, feocromocitoma, tumores malignos de células de nervios periféricos, tumores malignos de la vaina del nervio periférico (MPNST), neurofibromas cutáneos y plexiformes, tumor leiomioadenomatoide, fibromas, fibromas uterinos, leiomiosarcoma, cáncer papilar de tiroides, cáncer anaplásico de tiroides, cáncer medular de tiroides, cáncer folicular de tiroides, carcinoma de células de hurtle, cáncer tiroideo, ascitis, ascitis maligna, mesotelioma, tumores de glándulas salivales, carcinoma mucoepidermoide de la glándula salival, carcinoma de células acínicas de la glándula salival, tumores del estroma gastrointestinal (GIST), tumores que causan derrames en espacios potenciales del cuerpo, derrames pleurales, derrames pericárdicos, derrames peritoneales también conocidos como ascitis, tumores de células gigantes (GCT), GCT de hueso, angiogénesis tumoral o crecimiento tumoral paracrino.
La modalidad 18 de esta divulgación se refiere a un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1,2, X(a)-X(f), 3(a)-3(v), 4, 5(a)-5(k), 6, 7(a)-7(q), 8, 9, 10, 11 y 12, o una sal farmacéuticamente aceptable, un solvato, un análogo deuterado, un tautómero o un estereoisómero del mismo, o una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 13-15 para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección mediada por una proteína quinasa FLT3, en donde la enfermedad o afección son trastornos de almacenamiento lisosómico seleccionados del grupo que consiste en mucolipidosis, alfa-manosidosis; aspartilglucosaminuria; enfermedad de Batten; beta-manosidosis; cistinosis; enfermedad de Danon; enfermedad de Fabry; enfermedad de Farber; fucosidosis; galactosialidosis; enfermedad de Gaucher; gangliosidosis; enfermedad de Krabbe; leucodistrofia metacromática; trastornos de mucopolisacaridosis; aspartilglucosaminuria; enfermedad de Batten; beta-manosidosis; cistinosis; enfermedad de Danon; enfermedad de Fabry; enfermedad de Farber; fucosidosis; galactosialidosis; enfermedad de Gaucher; gangliosidosis; enfermedad de Krabbe; leucodistrofia metacromática; trastornos de mucopolisacaridosis; mucolipidosis tipo I (Sialidosis); mucolipidosis tipo II (enfermedad de células I); mucolipidosis tipo III (polidistrofia pseudo-Hurler); mucolipidosis tipo IV; deficiencia múltiple de sulfatasa; Tipos A, B, C de Niemann-Pick; enfermedad de Pompe (enfermedad por almacenamiento de glucógeno); picnodisostosis; enfermedad de Sandhoff; enfermedad de Schindler; enfermedad de Salla/enfermedad por almacenamiento de ácido siálico; Tay-Sachs; y enfermedad de Wolman.
La modalidad Y(a) de esta divulgación se refiere al método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 16-18, en donde la proteína quinasa FLT3 es una forma mutada que comprende una mutación de duplicación en tándem interna (ITD) de FLT3.
La modalidad Y(b) de esta divulgación se refiere al método de acuerdo con la modalidad Y(a), en donde la proteína quinasa FLT3 mutada comprende además una mutación D835, una mutación F691L o mutaciones tanto D835 como F691L.
La modalidad Y(c) de esta divulgación se refiere al método de acuerdo con la Modalidad Y(b), en donde la proteína quinasa FLT3 mutada comprende además una mutación D835Y, una mutación F691L o mutaciones tanto D835Y como F691L.
La modalidad 19 de esta divulgación se refiere a un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Modalidades 1-12, o una sal farmacéuticamente aceptable, un solvato, un análogo deuterado, un tautómero o un estereoisómero del mismo, o una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las modalidades 13-15 para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección mediada por un receptor (TGF-p) tipo 2, en donde la enfermedad o afección es fibrosis, enfermedad cardiovascular o cáncer. En una sub-modalidad de la Modalidad 19, el cáncer es cáncer de mama, cáncer de páncreas, carcinoma hepatocelular o cáncer de vejiga. En otra submodalidad de la Modalidad 19, el tratamiento del cáncer es la inmunoterapia del cáncer mediante la inhibición del receptor (TGF-p) tipo 2.
III. General
La presente divulgación se refiere a compuestos de Fórmula I, que incluyen uno o más de los compuestos P-0001 a P-0215, y cualquier otro compuesto como se describe en el presente documento, que sea útil como inhibidor de un FLT3 oncogénico o un mutante de FLT3, y el uso de los compuestos en el tratamiento de un sujeto que padece enfermedades mediadas por una quinasa FLT3 mutada. La presente divulgación también se refiere a compuestos de Fórmula I, que incluyen uno cualquiera o más de los compuestos P-0001 a P-0215, y cualquier otro compuesto como se describe en el presente documento, que sea selectivo para FLT3 sobre c-KIT.
Los compuestos que incluyen un grupo ciano o cianoalquilo en sustituyentes particulares dentro de cualquiera de las fórmulas descritas en esta divulgación, que incluyen uno cualquiera o más de los compuestos enumerados en las Tablas 1 o 2, exhiben una potencia sorprendente e inesperada contra FLT3. Los compuestos que incluyen un grupo ciano o cianoalquilo en sustituyentes particulares dentro de cualquiera de las fórmulas descritas en esta divulgación, que incluyen uno cualquiera o más de los compuestos enumerados en las Tablas 1 o 2, exhiben una potencia sorprendente e inesperada contra FLT3 ITD. En una modalidad, los compuestos que tienen un grupo ciano o cianoalquilo como parte de la variable Z5, como se describe dentro de cualquiera de las fórmulas en esta divulgación, que incluye uno o más de los compuestos enumerados en las Tablas 1 o 2, exhiben una potencia sorprendente e inesperada contra FLT3. En otra modalidad, los compuestos que tienen un grupo ciano o cianoalquilo como parte de la variable Z5, como se describe dentro de cualquiera de las fórmulas en esta divulgación, que incluye uno o más de los compuestos enumerados en las Tablas 1 o 2, exhiben una potencia sorprendente e inesperada contra FLT3 ITD.
La quinasa FLT3 es un receptor de tirosina quinasa involucrado en la regulación y estimulación de la proliferación celular. Ver, por ejemplo, Gilliland y otros, Blood 100: 1532-42 (2002). La quinasa FLT3 es un miembro de la familia de receptores de tirosina quinasa del receptor de clase III (RTKIII) y pertenece a la misma subfamilia de tirosina quinasas que c-kit, c-fms y los receptores a y p del factor de crecimiento derivado de plaquetas. Ver, por ejemplo, Lyman y otros, FLT3 Ligand en THE CYTOKINE HANDBOOK 989 (Thomson y otros, Eds. 4a Ed.) (2003). La quinasa FLT3 tiene cinco dominios similares a las inmunoglobulinas en su región extracelular, así como una región de inserción de 75-100 aminoácidos en el medio de su dominio citoplasmático. La quinasa FLT3 se activa tras la unión del ligando FLT3, lo que provoca la dimerización del receptor. La dimerización de la quinasa FLT3 por el ligando FLT3 activa la actividad quinasa intracelular, así como una cascada de sustratos corriente abajo que incluyen Stat5, Ras, fosfatidilinositol-3-quinasa (PI3K), PLCy, Erk2, Akt, MAPK, SHC, SHP2 y SHIP. Ver, por ejemplo, Rosnet y otros, Acta Haematol. 95: 218 (1996); Hayakawa y otros, Oncogene 19: 624 (2000); Mizuki y otros, Blood 96: 3907 (2000); y Gilliand y col., Curr. Opin. Hematol. 9: 274-81 (2002). Tanto el ligando de FLt 3 soluble como el unido a la membrana se unen, dimerizan y posteriormente activan la quinasa FLT3.
En las células normales, las células hematopoyéticas inmaduras, típicamente las células CD34+, la placenta, las gónadas y el cerebro expresan la quinasa FLT3. Ver, por ejemplo, Rosnet y otros, Blood 82: 1110-19 (1993); Small y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos 91: 459-63 (1994); y Rosnet y otros, Leukemia 10: 238-48 (1996). Sin embargo, la estimulación eficaz de la proliferación a través de la quinasa FLT3 normalmente requiere otros factores de crecimiento hematopoyéticos o interleucinas. La quinasa FLT3 también juega un papel crítico en la función inmunológica a través de su regulación de la proliferación y diferenciación de células dendríticas. Ver, por ejemplo, McKenna y otros, Blood 95: 3489-97 (2000).
Numerosas neoplasias hematológicas expresan la quinasa FLT3, la más prominente de las cuales es la AML. Ver, por ejemplo, Yokota y otros, Leukemia 11: 1605-09 (1997). Otras neoplasias que expresan FLT3 incluyen las leucemias linfoblásticas agudas de células precursoras de B, leucemias mielodisplásicas, leucemias linfoblásticas agudas de células T y leucemias mielógenas crónicas. Ver, por ejemplo, Rasko y otros, Leukemia 9: 2058-66 (1995). Las mutaciones de la quinasa FLT3 asociadas con neoplasias hematológicas son mutaciones activadoras. En otras palabras, la quinasa fLT3 se activa constitutivamente sin necesidad de unión y dimerización por el ligando FLT3 y, por lo tanto, estimula a la célula para que crezca de forma continua.
Varios estudios han identificado inhibidores de la actividad quinasa FLT3 que también inhiben la actividad quinasa de receptores relacionados, por ejemplo, el receptor de VEGF (VEGFR), receptor de PDGF (PDGFR) y quinasas de receptor de kit. Ver, por ejemplo, Mendel y otros, Clin. Cancer Res. 9: 327-37 (2003)); O'Farrell y otros, Blood 101: 3597-605 (2003); y Sun y otros, J. Med. Chem. 46: 1116-19 (2003). Dichos compuestos inhiben eficazmente la fosforilación mediada por la quinasa FLT3, la producción de citocinas y la proliferación celular, lo que da como resultado la inducción de la apoptosis. Ver, por ejemplo, Spiekermann y otros, Blood 101: 1494-1504 (2003). Además, dichos compuestos tienen una potente actividad antitumoral in vitro e in vivo.
En algunas modalidades, el FLT3 oncogénico o FLT3 mutante está codificado por un gen FLT3 con una mutación de duplicación interna en tándem (ITD) en la yuxtamembrana como se describe en la Patente de Estados Unidos No. 6 846 630. En determinadas modalidades, el FLT3 oncogénico o FLT3 mutante codificado por FLT3 con las mutaciones ITD tiene una o más mutaciones en los residuos F691, D835, Y842 o combinaciones de los mismos. En algunas modalidades, FLT3 oncogénico o FLT3 mutante tiene una o más mutaciones seleccionadas de F691L, D835V/Y, Y842C/H o sus combinaciones.
En algunas modalidades, el sujeto tiene una mutación del gen FLT3 que codifica un mutante FLT3 que tiene una sustitución de aminoácidos en los residuos F691, D835, Y842 o combinaciones de los mismos. En ciertos casos, la sustitución de aminoácidos se selecciona de F691L, D835V/Y, Y842C/H o combinaciones de los mismos.
En algunas modalidades, la divulgación proporciona un método para inhibir un FLT3 oncogénico o un FLT3 mutante. El método incluye poner en contacto la quinasa FLT3 con un compuesto como se describe en el presente documento. En algunas modalidades, el FLT3 oncogénico o FLT3 mutante está codificado por un gen FLT3 que tiene una mutación ITD. En algunas modalidades, el FLT3 oncogénico o FLT3 mutante codificado por el gen FLT3 con mutaciones ITD tiene una o más mutaciones en los residuos F691, D835, Y842 o sus combinaciones. En algunas modalidades, el FLT3 oncogénico o FLT3 mutante tiene una o más mutaciones seleccionadas de F691L, D835V/Y, Y842C/H o sus combinaciones. En otra modalidad, el mutante FLT3 oncogénico está codificado por un gen FLT3 que tiene una mutación ITD. En otra modalidad, el mutante oncogénico FLT3 está codificado por un gen FLT3 que tiene una mutación ITD y una mutación F691L. En otra modalidad, el mutante oncogénico FLT3 está codificado por un gen FLT3 que tiene una mutación ITD y una mutación D835Y. En otra modalidad, el mutante oncogénico FLT3 está codificado por un gen FLT3 que tiene una mutación ITD, una mutación F691L y una mutación D835Y.
Los cánceres hematológicos, también conocidos como neoplasias hematológicas o hematopoyéticas, son cánceres de la sangre o de la médula ósea; que incluyen la leucemia y linfoma. La leucemia mielógena aguda (LMA) es una leucemia de células madre hematopoyéticas clonal que representa aproximadamente el 90 % de todas las leucemias agudas en adultos con una incidencia de 3,9 por 100000 (ver p. Ej., Lowenberg otros, N. Eng. J. Med.
341: 1051-62 (1999) y Lopesde Menezes y col., Clin. Cancer Res. (2005), 11(14): 5281-5291). Si bien la quimioterapia puede producir remisiones completas, la tasa de supervivencia sin enfermedad a largo plazo para la LMA es de aproximadamente el 14 %, con aproximadamente 7400 muertes por LMA cada año en los Estados Unidos. Aproximadamente el 70 % de los blastos de AML expresan FLT3 de tipo salvaje y de aproximadamente el 25 % a aproximadamente el 35 % expresan mutaciones del receptor de quinasa FLT3 que dan como resultado el FLT3 constitutivamente activo. Se han identificado dos tipos de mutaciones activadoras en pacientes con AML: duplicaciones internas en tándem (ITD) y mutación puntual en el lazo activador del dominio quinasa. Las mutaciones de FLT3-ITD en pacientes con AML es indicativo de un mal pronóstico para la supervivencia, y en los pacientes que están en remisión, las mutaciones de FLT3-ITD son el factor más importante que afecta negativamente la tasa de recaída, ya que el 64 % de los pacientes que tienen la mutación recaen dentro de los 5 años (ver Current Pharmaceutical Design (2005), 11:3449-3457. La importancia pronóstica de las mutaciones de FLT3 en los estudios clínicos sugiere que FLT3 desempeña un papel determinante en la AML y puede ser necesario para el desarrollo y mantenimiento de la enfermedad. La leucemia de linaje mixto (MLL) implica translocaciones de la banda q23 del cromosoma 11 (11q23) y ocurre en aproximadamente el 80 % de las neoplasias hematológicas malignas infantiles y el 10 % de las leucemias agudas en adultos. Aunque se ha demostrado que cierta translocación 11q23 es esencial para la inmortalización de los progenitores hematopoyéticos in vitro, se requiere un evento genotóxico secundario para desarrollar leucemia. Existe una fuerte concordancia entre la expresión del gen de fusión FLT3 y MLL, y el gen sobreexpresado de manera más consistente en MLL es FLT3. Además, se ha demostrado que FLT3 activado junto con la expresión del gen de fusión MLL induce leucemia aguda con un período de latencia corto (ver Ono, y otros, J. of Clinical Investigation (2005), 115: 919-929). Por lo tanto, se cree que FLT3 está significativamente involucrado en el desarrollo y mantenimiento de MLL (ver Armstrong y otros, Cancer Cell (2003), 3: 173-183).
La mutación FLT3-ITD también está presente en aproximadamente el 3 % de los casos de síndrome mielodisplásico del adulto y algunos casos de leucemia linfocítica aguda (LLA) (Current Pharmaceutical Design (2005), 11:3449-3457).
Se ha demostrado que FLT3 es una proteína cliente de Hsp90, y se ha demostrado que 17AAG, un antibiótico de ansamicina de benzoquinona que inhibe la actividad de Hsp90, interrumpe la asociación de FLT3 con Hsp90. Se encontró que el crecimiento de células leucémicas que expresan mutaciones FLT3 o FLT3-ITD de tipo salvaje se inhibe mediante el tratamiento con 17 "AAG (Yao, y otros, Clinical Cancer Research (2003), 9: 4483-4493).
Se ha encontrado que los inhibidores de TGFBR2, tales como ITD-1, pueden ser valiosos para tratar enfermedades asociadas con procesos patológicos tales como cáncer, fibrosis o enfermedad cardiovascular (que incluye la enfermedad cardiovascular del adulto). (Willems y otros, Cell Stem Cell (3 de agosto de 2012); 11 (2): 242-252). También se ha descubierto que la neutralización de TGFBR2 tiene una potente actividad antimetastásica e inhibe el cáncer de páncreas. (Ostapoff y otros, Cancer Res; 74(18); 1-12). Además, se ha encontrado que la inhibición de TGFBR2 puede inhibir la progresión del carcinoma hepatocelular (HCC). (Dituri y otros, PLOS ONE, (junio de 2013), vol. 8, número 6, e67109). El TGFBR2 también se expresa en gran medida en las células de cáncer de mama, por lo que los inhibidores de TGFBR2 pueden inhibir la proliferación de células de cáncer de mama. Gaoy otros, PLOS ONE (9 de noviembre de 2015), http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0141412. Además, se ha descubierto que la ablación de la señalización de TGF-p puede suprimir la progresión del cáncer de vejiga. Liang y otros, Scientific Reports (6:29479) DOI: 10.1038/srep29479. Los ligandos y receptores de TGF-p tienen una potente actividad inmunosupresora en células T y células NK, y los antagonistas de TGF-p pueden suprimir significativamente la tumorigénesis y mejorar en gran medida la eficacia de la quimioterapia inmunoduladora en modelos preclínicos. (Simposio Satélite de Isarna Therapeutics CIMT, 7 de mayo de 2014).
Los compuestos descritos en el presente documento son útiles para el tratamiento o la prevención de neoplasias hematológicas, que incluyen, pero no se limitan a, la leucemia mieloide aguda (AML); leucemia de linaje mixto (MLL); leucemia promielocítica aguda; leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, sarcoma mieloide; leucemia linfocítica aguda de células T (TALL); Leucemia linfocítica aguda de tipo de células B (B-ALL); leucemia mielomonocítica crónica (CMML); síndrome mielodisplásico; trastornos mieloproliferativos; otros trastornos proliferativos, que incluyen, pero no se limitan a, cáncer; trastornos autoinmunitarios; y trastornos de la piel, como psoriasis y dermatitis atópica.
En otra modalidad, la presente divulgación también proporciona un método para modular la actividad de FLT3 al poner en contacto un FLT3 o un FLT3 mutante con la administración de una cantidad eficaz de un compuesto que tiene cualquiera de las Fórmulas descritas en esta divulgación, que incluye cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o la Tabla 2, o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos. En algunas modalidades, el compuesto se proporciona a un nivel suficiente para modular la actividad del FLT3 en al menos un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % o superior al 90 %. En muchas modalidades, el compuesto estará a una concentración de aproximadamente 1 pM, 100 pM o 1 mM, o en un rango de 1-100 nM, 100-500 nM, 500-1000 nM, 1-100 pM, 100- 500 pM o 500-1000 pM. En algunas modalidades, el contacto se lleva a cabo in vitro. En otras modalidades, el contacto se lleva a cabo in vivo.
Como se usa en el presente documento, el término "enfermedad o afección mediada por FLT3" se refiere a una enfermedad o afección en la cual la función biológica de FLT3 afecta el desarrollo y/o curso de la enfermedad o afección, y/o en la cual la modulación de FLT3 altera el desarrollo, curso y/o síntomas. Estas mutaciones atenúan la actividad de la tirosina quinasa intrínseca del receptor en diferentes grados y son modelos del efecto de modulación de la actividad de FLT3. Una enfermedad o afección mediada por FLT3 incluye una enfermedad o afección para la cual la inhibición de FLT3 proporciona un beneficio terapéutico, por ejemplo, en donde el tratamiento con inhibidores de FLT3, que incluyen los compuestos descritos en el presente documento, proporcionan un beneficio terapéutico al sujeto que padece o está en riesgo de la enfermedad o afección.
La referencia a los residuos de aminoácidos particulares en el polipéptido FLT3 humano se define por la numeración correspondiente a la secuencia de FLT3 en GenBank NP004110.2 (SEQ ID NO:1). La referencia a posiciones de nucleótidos particulares en una secuencia de nucleótidos que codifica todo o una parte de FLT3 se define por la numeración correspondiente a la secuencia proporcionada en GenBank NM_44119 (SEQ ID NO:2).
Los términos "FLT3", (también referido en el presente documento como Flt3) o "FLT3 quinasa" o "proteína quinasa FLT3", significan una quinasa enzimáticamente activa que contiene una porción con mayor que 90 % de identidad de secuencia aminoacídica con los residuos de aminoácidos que incluyen el sitio de unión ATP de FLT3 de longitud completa (por ejemplo, FLT3 humano, por ejemplo, la secuencia NP_004110.2 , SEQ ID NO:1), para un alineamiento máximo sobre un segmento de longitud igual; o que contiene una porción con mayor que 90 % de identidad de secuencia aminoacídica con al menos 200 aminoácidos contiguos de FLT3 nativo y retiene la actividad quinasa. En algunas modalidades, la identidad de secuencia es al menos 95, 97, 98, 99 o incluso 100 %. En algunas modalidades, el nivel especificado de identidad de secuencia se encuentra en una secuencia de al menos 100-500, al menos 200-400 o al menos 300 residuos de aminoácidos contiguos de longitud. A menos que se indique lo contrario, el término incluye referencia a c-FLT3 de tipo salvaje, variantes alélicas y formas mutadas (por ejemplo, que tienen mutaciones activantes).
Los términos "enfermedades o trastornos mediados por FLT3" incluirán enfermedades asociadas con o que impliquen la actividad de FLT3, por ejemplo, la hiperactividad de FLT3, y las afecciones que acompañan a estas enfermedades. El término "hiperactividad de FLT3" se refiere a 1) expresión de FLT3 en células que normalmente no expresan FLT3; 2) expresión de FLT3 por células que normalmente no expresan v; 3) aumento de la expresión de FLT3 que conduce a una proliferación celular no deseada; o 4) mutaciones que conducen a la activación constitutiva de FLT3. Los ejemplos de "enfermedades o trastornos mediados por FLT3" incluyen trastornos que resultan de la sobreestimulación de FLT3 o de una cantidad anormalmente alta de actividad de FLT3, debido a una cantidad anormalmente alta de FLT3 o mutaciones en FLT3. Se sabe que la hiperactividad de FLT3 se ha implicado en la patogénesis de varias enfermedades, que incluyen enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias, trastornos de proliferación celular, trastornos neoplásicos y cánceres como se describe en este documento.
El término "proporción alélica FLT3-ITD" se refiere al porcentaje de alelos de ADN tumoral que albergan la mutación FLT3-ITD normalizada al porcentaje de células blásticas en una muestra de paciente. En una modalidad, una relación alélica FLT3-ITD baja es cuando menos del 25 % de los alelos de ADN tumoral normalizados es un alelo FLT3-ITD. En determinadas modalidades, una relación alélica de FLT3-ITD intermedia es aquella en la que entre el 25 % y el 50 % de los alelos de ADN tumoral normalizados es un alelo de FLT3-ITD. En determinadas modalidades, una relación alélica de FLT3-ITD alta es cuando más del 50 % de los alelos de ADN tumoral normalizados es un alelo de FLT3-ITD.
Las "células que contienen la mutación FLT3/ITD" incluyen cualquiera de las células que tienen una mutación por duplicación en tándem ausente en humanos sanos en una región de exones 14 a 15 en una región yuxtamembrana de FLT3, es decir, células que expresan con alta expresión ARNm derivado de la mutación, células que expresan la proteína FLT3 mutante, etc. Las "células cancerosas que contien la mutación FLT3/ITD" incluyen cualquiera de las células cancerosas que tienen una mutación por duplicación en tándem ausente en humanos sanos en una región de los exones 14 a 15 en una región de yuxtamembrana de FLT3, es decir, células cancerosas que expresan altamente ARNm derivado de la mutación, células cancerosas que tienen señales de crecimiento incrementadas derivadas de FLT3 causadas por la mutación, células cancerosas que expresan altamente la proteína FLT3 mutante, etc. Las "células leucémicas que contien la mutación FLT3/ITD" incluyen cualquiera de las células leucémicas que tienen una mutación por duplicación en tándem ausente en humanos sanos en una región de los exones 14 a 15 en una región de yuxtamembrana de FLT3, es decir, células leucémicas que expresan altamente ARNm derivado de la mutación, células leucémicas que tienen señales de crecimiento incrementadas derivadas de FLT3 causadas por la mutación, células leucémicas que expresan altamente la proteína FLT3 mutante, etc.
Los términos "modular", "modulación" y similares se refieren a la capacidad de un compuesto para aumentar o disminuir la función y/o expresión de una proteína quinasa como FLT3, donde dicha función puede incluir actividad reguladora de la transcripción y/o unión a la proteína. La modulación puede ocurrir in vitro o in vivo. Dicha actividad se indica típicamente en términos de una concentración inhibidora (IC50) o concentración de excitación (EC50) del compuesto para un inhibidor o activador, respectivamente, con respecto a, por ejemplo, la proteína quinasa. La modulación, como se describe en este documento, incluye la inhibición, antagonismo, antagonismo parcial, activación, agonismo o agonismo parcial de una función o característica asociada con FLT3, ya sea directa o indirectamente, y/o la regulación positiva o negativa de la expresión de FLT3, ya sea directamente. o indirectamente. En otra modalidad, la modulación es directa. Los inhibidores o antagonistas son compuestos que, por ejemplo, se unen a, bloquean parcial o totalmente la estimulación, disminuyen, previenen, inhiben, retrasan la activación, inactivan, desensibilizan o regulan negativamente la transducción de señales. Los activadores o agonistas son compuestos que, por ejemplo, se unen, estimulan, aumentan, abren, activan, facilitan, mejoran la activación, activan, sensibilizan o regulan positivamente la transducción de señales.
La capacidad de un compuesto para inhibir la función de FLT3 puede demostrarse en un ensayo bioquímico, por ejemplo, un ensayo de unión o un ensayo basado en células.
También en el contexto de compuestos que se unen a una diana biomolecular, el término "mayor especificidad" indica que un compuesto se une a una diana especificada en mayor medida que a otra biomolécula o biomoléculas que pueden estar presentes en condiciones de unión relevantes, donde la unión a tales otras biomoléculas produce una actividad biológica diferente a la de unirse a la diana especificada. Normalmente, la especificidad se refiere a un conjunto limitado de otras biomoléculas, por ejemplo, en el caso de FLT3, otras tirosinas quinasas o incluso otro tipo de enzimas. En modalidades particulares, la mayor especificidad es al menos 2, 3, 4, 5, 8, 10, 50, 100, 200, 400, 500 o 1000 veces mayor especificidad.
Como se usa en el presente documento en relación con compuestos de unión o ligandos, el término "específico para la quinasa FLT3", "específico para FLT3" y términos de importación similar significan que un compuesto particular se une a FLT3 en una extensión estadísticamente mayor que a otras quinasas que pueden estar presente en una muestra particular. Además, cuando se indica una actividad biológica distinta de la unión, el término "específico para FLT3" indica que un compuesto particular tiene un mayor efecto biológico asociado con la unión de FLT3 que con otras tirosina quinasas, por ejemplo, inhibición de la actividad quinasa. La especificidad también es con respecto a otras biomoléculas (no limitadas a tirosina quinasas) que pueden estar presentes en una muestra particular. El término "específico para FLT3kinasa", "específico para FLT3" y términos de igual importancia significan que un compuesto particular se une a FLT3 en un grado estadísticamente mayor que a otras quinasas que pueden estar presentes en una muestra particular. Además, cuando se indica una actividad biológica distinta de la unión, el término "específico para FLT3" indica que un compuesto particular tiene un mayor efecto biológico asociado con la unión de FLT3 que con otras tirosina quinasas, por ejemplo, inhibición de la actividad quinasa. La especificidad también es con respecto a otras biomoléculas (no limitadas a tirosina quinasas) que pueden estar presentes en una muestra particular.
El término "terapia contra el cáncer de primera línea" se refiere a la terapia administrada a un sujeto como un régimen inicial para reducir el número de células cancerosas. La terapia de primera línea también se conoce como terapia de inducción, terapia primaria y tratamiento primario. La terapia de primera línea comúnmente administrada para la LMA es la terapia basada en citarabina en la que la citarabina se administra a menudo en combinación con uno o más agentes seleccionados de daunorrubicina, idarrubicina, doxorrubicina, mitoxantrona, tipifarnib, tioguanina o gemtuzumab ozogamicina. Los regímenes habituales utilizados en la terapia basada en citarabina incluyen la terapia "7 3" o "5 2" que comprende la administración de citarabina con una antraciclina como daunorrubicina o idarrubicina. Otra terapia de primera línea es la terapia basada en clofarabina en la que se administra clofarabina, a menudo en combinación con una antraciclina como daunorrubicina, idarrubicina o doxorrubicina. Otra terapia de primera línea para la LMA es la terapia basada en etopósido en la que se administra etopósido, a menudo en combinación con mitoxantrona y, opcionalmente, con citarabina. Otra terapia de primera línea para la AML (para el subtipo M3, también llamada leucemia promielocítica aguda) es el ácido transretinoico (ATRA). Se reconoce que lo que los expertos en la técnica consideran "terapia de primera línea" evolucionará a medida que se desarrollen y prueben nuevos agentes anticancerígenos en la clínica. Un resumen de los enfoques actualmente aceptados para el tratamiento de primera línea se describe en las Pautas de Práctica Clínica en Oncología de la NCCN para la leucemia mieloide aguda y las pautas del NCI sobre el tratamiento de la leucemia mieloide aguda (consulte, por ejemplo, http://www.cancer.gov/cancertopics/pdq/treatment/adultAML/HealthProfessional/page7).
El término "terapia contra el cáncer de segunda línea" se refiere a un tratamiento contra el cáncer que se administra a un sujeto que no responde a la terapia de primera línea, es decir, a menudo se administra una terapia de primera línea o que tiene una recurrencia del cáncer después de estar en remisión. En determinadas modalidades, la terapia de segunda línea que puede administrarse incluye una repetición de la terapia inicial exitosa contra el cáncer, que puede ser cualquiera de los tratamientos descritos en "terapia contra el cáncer de primera línea". En determinadas modalidades, la terapia de segunda línea es la administración de gemtuzumab ozogamicina. En determinadas modalidades, los fármacos en investigación también pueden administrarse como terapia de segunda línea en un entorno de ensayo clínico. Un resumen de los enfoques actualmente aceptados para el tratamiento de segunda línea se describe en las Pautas de Práctica Clínica en Oncología de la NCCN para la leucemia mieloide aguda y las pautas del NCI sobre el tratamiento de la leucemia mieloide aguda (consulte, por ejemplo, http://www.cancer.gov/cancertopics/pdq/treatment/adultAML/HealthProfessional/page5).
El término "refractario" se refiere a cuando un sujeto no responde o es resistente a la terapia o tratamiento del cáncer. La terapia contra el cáncer puede ser de primera línea, de segunda línea o cualquier tratamiento administrado posteriormente. En determinadas modalidades, refractario se refiere a una condición en la que un sujeto no logra la remisión completa después de dos intentos de inducción. Un sujeto puede ser refractario debido a la resistencia intrínseca de una célula cancerosa a una terapia particular, o el sujeto puede ser refractario debido a una resistencia adquirida que se desarrolla durante el curso de una terapia particular.
IV. Ensayos de unión
Los métodos de la presente divulgación pueden implicar ensayos que sean capaces de detectar la unión de compuestos a una molécula diana. Dicha unión se encuentra en un nivel estadísticamente significativo, con un nivel de confianza de al menos el 90 %, o al menos el 95, 97, 98, 99 % o un nivel de confianza mayor que la señal del ensayo que representa la unión a la molécula diana, es decir, se distingue del valor base. En algunas modalidades, los controles se utilizan para distinguir la unión de la diana de la unión no específica. Se conoce una gran variedad de ensayos indicativos de unión para diferentes tipos de diana y pueden usarse para esta divulgación.
Los compuestos de unión pueden caracterizarse por su efecto sobre la actividad de la molécula diana. Por tanto, un compuesto de "baja actividad" tiene una concentración inhibidora (IC50) o una concentración eficaz (CE50) superior a 1 j M en condiciones estándar. Por "actividad muy baja" se entiende un IC50 o CE50 de por encima de 100 j M en condiciones estándar. Por "actividad extremadamente baja" se entiende un IC50 o CE50 de por encima de 1 mM bajo condiciones estándar. Por "actividad moderada" se quiere decir un IC50 o CE50 de 200 nM a 1 mM bajo condiciones estándar. Por "actividad moderadamente alta" se entiende un IC50 o CE50 de 1 nM a 200 nM. Por "alta actividad" se entiende un IC50 o EC50 de por debajo de 1 nM en condiciones estándar. El IC50 o CE50 se define como la concentración de compuesto a la que el 50 % de la actividad de la molécula diana (por ejemplo, enzima u otra proteína) que se mide es perdido o ganado en relación con el rango de actividad observada cuando ningún compuesto está presente. La actividad puede medirse mediante el uso de métodos conocidos por los expertos en la técnica, por ejemplo, al medir cualquier producto o señal detectable producido por la ocurrencia de una reacción enzimática, u otra actividad por una proteína que se mide.
Por "señal de fondo" en referencia a un ensayo de unión se entiende la señal que se registra en condiciones estándar para el ensayo particular en ausencia de un compuesto de prueba, estructura molecular o ligando que se una a la molécula diana. Los expertos en la técnica se darán cuenta de que existen métodos aceptados y están ampliamente disponibles para determinar la señal de fondo.
Por "desviación estándar" se entiende la raíz cuadrada de la varianza. La varianza es una medida de la dispersión de una distribución. Se calcula como la desviación cuadrada promedio de cada número de su media. Por ejemplo, para los números 1, 2 y 3, la media es 2 y la varianza es:
o2 = (1-2)2 + (2-2)2 (3-2)2 = 0,667
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Resonancia de plasmones de superficie
Los parámetros de unión pueden medirse mediante el uso de la resonancia de plasmón de superficie, por ejemplo, con un BIAcore® chip (Biacore, Japón) recubierto con componentes de unión inmovilizados. La resonancia de plasmón de superficie se usa para caracterizar las constantes microscópicas de asociación y disociación de la reacción entre un sFv u otro ligando dirigido contra moléculas diana. Dichos métodos se describen generalmente en las siguientes referencias. Vely F. y otros, (2000) BIAcore® analysis to test phosphopeptide-SH2 domain interactions, Methods in Molecular Biology. 121:313-21; Liparoto y otros, (1999) Biosensor analysis of the interleukin-2 receptor complex, Journal of Molecular Recognition. 12:316-21; Lipschultz y otros, (2000) Experimental design for analysis of complex kinetics using surface plasmon resonance, Methods. 20(3):310-8; Malmqvist., (1999) BIACORE: an affinity biosensor system for characterization of biomolecular interactions, Biochemical Society Transactions 27:335-40; Alfthan, (1998) Surface plasmon resonance biosensors as a tool in antibody engineering, Biosensors & Bioelectronics. 13:653-63; Fivash y otros, (1998) BIACORE for macromolecular interaction, Current Opinion in Biotechnology. 9:97-101; Price y otros; (1998) Summary report on the ISOBM TD-4 Workshop: analysis of 56 monoclonal antibodies against the MUC1 mucin. Tumour Biology 19 Suppl 1:1-20; Malmqvist y otros, (1997) Biomolecular interaction analysis: affinity biosensor technologies for functional analysis of proteins, Current Opinion in Chemical Biology. 1:378-83; O'Shannessy y otros, (1996) Interpretation of deviations from pseudo-first-order kinetic behavior in the characterization of ligand binding by biosensor technology, Analytical Biochemistry. 236:275-83; Malmborg y otros, (1995) BIAcore as a tool in antibody engineering, Journal of Immunological Methods. 183:7-13; Van Regenmortel, (1994) Use of biosensors to characterize recombinant proteins, Developments in Biological Standardization. 83:143-51; and O'Shannessy, (1994) Determination of kinetic rate and equilibrium binding constants for macromolecular interactions: a critique of the surface plasmon resonance literature, Current Opinions in Biotechnology. 5:65-71.
El BIAcore® utiliza las propiedades ópticas de la resonancia de plasmón de superficie (SPR) para detectar alteraciones en la concentración de proteínas unidas a una matriz de dextrano que se encuentra en la superficie de una interfaz de chip sensor de oro/vidrio, una matriz de biosensor de dextrano. En resumen, las proteínas se unen covalentemente a la matriz de dextrano a una concentración conocida y se inyecta un ligando para la proteína a través de la matriz de dextrano. La luz infrarroja cercana, dirigida al lado opuesto de la superficie del chip sensor, se refleja y también induce una onda evanescente en la película de oro, lo que a su vez provoca una caída de intensidad en la luz reflejada en un ángulo particular conocido como ángulo de resonancia. Si se altera el índice de refracción de la superficie del chip sensor (por ejemplo, mediante la unión del ligando a la proteína unida), se produce un cambio en el ángulo de resonancia. Este cambio de ángulo puede medirse y se expresa como unidades de resonancia (RU) de modo que 1000 RU es equivalente a un cambio en la concentración de proteína de superficie de 1 ng/mm2 Estos cambios se muestran con respecto al tiempo a lo largo del eje y de un sensorgrama, que representa la asociación y disociación de cualquier reacción biológica.
Ensayos de Cribado de Alto Rendimiento (HTS)
El HTS normalmente utiliza ensayos automatizados para buscar en un gran número de compuestos una actividad deseada. Normalmente, los ensayos de HTS se utilizan para encontrar nuevos fármacos mediante la detección de sustancias químicas que actúan sobre una enzima o molécula en particular. Por ejemplo, si una sustancia química inactiva una enzima, podría resultar eficaz para prevenir un proceso en una célula que causa una enfermedad. Los métodos de alto rendimiento permiten a los investigadores analizar miles de productos químicos diferentes contra cada molécula objetivo muy rápidamente mediante el uso de sistemas de manipulación robótica y análisis automatizado de resultados.
Como se usa en el presente documento, "cribado de alto rendimiento" o "HTS" se refiere al cribado rápido in vitro de un gran número de compuestos (bibliotecas); generalmente decenas a cientos de miles de compuestos, mediante el uso de ensayos de cribado robóticos. El Cribado de rendimiento ultra alto (uHTS) generalmente se refiere al cribado de alto rendimiento acelerado a más de 100000 pruebas por día.
Para lograr un cribado de alto rendimiento, es conveniente almacenar las muestras en un soporte o plataforma de contenedores múltiples. Un portador multicontenedor facilita las reacciones de medición de una pluralidad de compuestos candidatos simultáneamente. Pueden usarse microplacas de pocillos múltiples como portador. Tales microplacas de pozos múltiples y los métodos para su uso en numerosos ensayos son conocidos en la técnica y están disponibles comercialmente.
Los ensayos de cribado pueden incluir controles con fines de calibración y confirmación de la manipulación adecuada de los componentes del ensayo. Por lo general, se incluyen los pocillos en blanco que contienen todos los reactivos, pero ningún miembro de la biblioteca química. Como otro ejemplo, puede incubarse un inhibidor (o activador) conocido de una enzima para la que se buscan moduladores con una muestra del ensayo, y la disminución (o aumento) resultante en la actividad enzimática puede utilizarse como comparador o control. Se apreciará que los moduladores también pueden combinarse con los activadores o inhibidores enzimáticos para encontrar moduladores que inhiban la activación o represión enzimática que de otro modo es causada por la presencia del modulador enzimático conocido.
Medición de Reacciones Enzimáticas y de Unión Durante los Ensayos de Detección
Las técnicas para medir la progresión de las reacciones enzimáticas y de unión, por ejemplo, en portadores multicontenedores, son conocidas en la técnica e incluyen, pero no se limitan a, las siguientes.
Los ensayos espectrofotométricos y espectrofluorométricos son bien conocidos en la técnica. Ejemplos de tales ensayos incluyen el uso de ensayos colorimétricos para la detección de peróxidos, como se describe en Gordon, A. J. and Ford, R. A., (1972) The Chemist's Companion: A Handbook Of Practical Data, Techniques, And References, John Wiley and Sons, N.Y., Página 437.
Puede usarse espectrometría de fluorescencia para controlar la generación de productos de reacción. La metodología de fluorescencia es generalmente más sensible que la metodología de absorción. El uso de sondas fluorescentes es bien conocido por los expertos en la técnica. Para obtener reseñas, consulte Bashford y otros, (1987) Spectrophotometry and Spectrofluorometry: A Practical Approach, pp. 91-114, IRL Press Ltd.; and Bell, (1981) Spectroscopy In Biochemistry, Vol. I, pp. 155-194, CRC Press.
En los métodos espectrofluorométricos, las enzimas se exponen a sustratos que cambian su fluorescencia intrínseca cuando se procesan por la enzima diana. Normalmente, el sustrato no es fluorescente y se convierte en un fluoróforo a través de una o más reacciones. Como ejemplo no limitativo, la actividad de SMase puede detectarse mediante el uso del Amplex® Red reagent (Molecular Probes, Eugene, OR). Para medir la actividad de la esfingomielinasa mediante el uso de Amplex® Red, ocurren las siguientes reacciones. Primero, SMase hidroliza la esfingomielina para producir ceramida y fosforilcolina. En segundo lugar, la fosfatasa alcalina hidroliza la fosforilcolina para producir colina. En tercer lugar, la colina se oxida mediante colina oxidasa a betaína. Finalmente, e1H2O2, en presencia de peroxidasa de rábano picante, reacciona con Amplex® Rojo para producir el producto fluorescente, resorufina, y la señal del mismo se detecta mediante el uso de espectrofluorometría.
La polarización de fluorescencia (FP) se basa en una disminución en la velocidad de rotación molecular de un fluoróforo que se produce al unirse a una molécula más grande, como una proteína receptora, lo que permite la emisión fluorescente polarizada por el ligando unido. La FP se determina empíricamente al medir los componentes vertical y horizontal de la emisión de fluoróforo después de la excitación con luz polarizada plana. La emisión polarizada aumenta cuando se reduce la rotación molecular de un fluoróforo. Un fluoróforo produce una señal polarizada más grande cuando se une a una molécula más grande (es decir, un receptor), lo que ralentiza la rotación molecular del fluoróforo. La magnitud de la señal polarizada se relaciona cuantitativamente con el grado de unión del ligando fluorescente. Por consiguiente, la polarización de la señal "unida" depende del mantenimiento de la unión de alta afinidad.
La FP es una tecnología homogénea y las reacciones son muy rápidas, que tardan segundos o minutos en alcanzar el equilibrio. Los reactivos son estables y pueden prepararse grandes lotes, lo que da como resultado una alta reproducibilidad. Debido a estas propiedades, la FP ha demostrado ser altamente automatizable, a menudo se realiza con una sola incubación con un solo reactivo trazador-receptor premezclado. Para una revisión, vea Owicki y otros, (1997), Application of Fluorescence Polarization Assays in High-Throughput Screening, Genetic Engineering News, 17:27.
La FP es particularmente deseable ya que su lectura es independiente de la intensidad de emisión (Checovich, W. J., y otros, (1995) Nature 375:254-256; Dandliker, W. B., y otros, (1981) Methods in Enzymology 74:3-28) y, por tanto, es insensible a la presencia de compuestos coloreados que apagan la emisión de fluorescencia. La FP y FRET (ver más abajo) son adecuados para identificar compuestos que bloquean las interacciones entre los receptores de esfingolípidos y sus ligandos. Ver, por ejemplo, Parkery otros, (2000) Development of high throughput screening assays using fluorescence polarization: nuclear receptor-ligand-binding and kinase/phosphatase assays, J Biomol Screen 5:77-88.
Los fluoróforos derivados de esfingolípidos que pueden usarse en ensayos de PF están disponibles comercialmente. Por ejemplo, Molecular Probes (Eugene, o R) actualmente vende esfingomielina y un fluoróforo de ceramida. Estos son, respectivamente, N-(4,4-difluoro-5,7-dimetil-4-bora-3a, 4a-diaza-s-indaceno-3-pentanoil) esfingosilfosfocolina (BODIPY® FL C5-esfingomielina); N-(4,4-difluoro-5,7-dimetil-4-bora-3a, 4a-diaza-s-indaceno-3-dodecanoil) esfingosilfosfocolina (BODIPY® FL C12-esfingomielina); y N-(4,4-difluoro-5,7-dimetil-4-bora-3a, 4a-diaza-sindaceno-3-pentanoil) esfingosina (BODIPY ® FL C5-ceramida). La Patente de Estados Unidos No. 4 150 949, (Inmunoensayo para gentamicina), describe gentamicinas marcadas con fluoresceína, que incluyen fluoresceintiocarbanil gentamicina. Pueden prepararse fluoróforos adicionales al usar métodos bien conocidos por el experto en la materia.
Los lectores de fluorescencia normales-y-polarizada de ejemplo incluyen el Polarión sistema de polarización de fluorescencia POLARION® (Tecan AG, Hombrechtikon, Suiza). Se encuentran disponibles lectores de placas multipocillo generales para otros ensayos, como el lector VERSAMAX® y el espectrofotómetro de placa de pocillos múltiples SPECTRAMAX® (ambos de Molecular Devices).
La transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET) es otro ensayo útil para detectar interacciones y se ha descrito. Ver, por ejemplo, Heim y otros, (1996) Curr. Biol. 6:178-182; Mitra y otros, (1996) Gene 173:13-17; and Selviny otros, (1995) Meth. Enzymol. 246:300-345. La FRET detecta la transferencia de energía entre dos sustancias fluorescentes muy próximas, que tienen longitudes de onda de excitación y emisión conocidas. Como ejemplo, una proteína puede expresarse como una proteína de fusión con proteína verde fluorescente (GFP). Cuando dos proteínas fluorescentes están próximas, como cuando una proteína interactúa específicamente con una molécula diana, la energía de resonancia puede transferirse de una molécula excitada a la otra. Como resultado, el espectro de emisión de la muestra cambia, lo que puede medirse con un fluorómetro, como un fluorómetro multipocillo fMAX (Molecular Devices, Sunnyvale Calif.).
El ensayo de centelleo de proximidad (SPA) es un ensayo particularmente útil para detectar una interacción con la molécula diana. El SPA se utiliza ampliamente en la industria farmacéutica y se ha descrito (Hanselman y otros, (1997) J. Lipid Res. 38: 2365-2373; Kahl y otros, (1996) Anal. Biochem. 243: 282-283; Undenfriend y otros, (1987) Anal. Biochem. 161: 494-500). Ver también Patentes de Estados Unidos No. 4 626 513 y 4 568 649, y Patente Europea No. 0 154 734. Un sistema disponibe comercialmente utiliza placas recubiertas centelleantes FLASHPLATE® (NEN Life Science Products, Boston, MA).
La molécula diana puede unirse a las placas de centelleo mediante una variedad de medios bien conocidos. Hay disponibles placas centelleantes que se derivatizan para unirse a proteínas de fusión como las proteínas de fusión GST, His6 o Flag. Cuando la molécula diana es un complejo proteico o un multímero, una proteína o subunidad puede unirse a la placa primero, luego los otros componentes del complejo se agregan más tarde bajo condiciones de unión, lo cual da como resultado un complejo unido.
En un ensayo de SPA típico, los productos génicos del conjunto de expresión se habrán marcado radiactivamente y se habrán añadido a los pocillos, y se les habrá permitido interactuar con la fase sólida, que es la molécula diana inmovilizada y el recubrimiento centelleante de los pocillos. El ensayo puede medirse inmediatamente o dejar que alcance el equilibrio. De cualquier manera, cuando un radiomarcaje se acerca lo suficiente al recubrimiento centelleante, produce una señal detectable por un dispositivo como un contador de centelleo de microplacas TOPCOUNT NXT® (Packard BioScience Co., Meriden Conn.). Si un producto de expresión radiomarcado se une a la molécula diana, el radiomarcaje permanece en la proximidad del centelleante el tiempo suficiente para producir una señal detectable.
Por el contrario, las proteínas marcadas que no se unen a la molécula diana, o que se unen sólo brevemente, no permanecerán cerca del centelleante el tiempo suficiente para producir una señal por encima del fondo. Cualquier tiempo pasado cerca del centelleo causado por el movimiento Browniano aleatorio tampoco resultará en una cantidad significativa de señal. Asimismo, el radiomarcador residual no incorporado utilizado durante la etapa de expresión puede estar presente, pero no generará una señal significativa porque estará en solución en lugar de interactuar con la molécula diana. Por lo tanto, estas interacciones no vinculantes causarán un cierto nivel de señal de fondo que puede eliminarse matemáticamente. Si se obtienen demasiadas señales, se pueden agregar sal u otros modificadores directamente a las placas de ensayo hasta que se obtenga la especificidad deseada (Nichols y otros, (1998) Anal. Biochem. 257: 112-119).
V. Ensayos de Actividad Quinasa
Pueden utilizarse varios ensayos diferentes para la actividad quinasa para analizar moduladores activos y/o determinar la especificidad de un modulador para una quinasa o grupo o quinasas en particular. Además del ensayo mencionado en los ejemplos más abajo, un experto en la técnica conocerá otros ensayos que pueden utilizarse y pueden modificar un ensayo para una aplicación particular. Por ejemplo, numerosos documentos sobre quinasas describen ensayos que pueden usarse.
Ensayos alternativos adicionales pueden emplear determinaciones de unión. Por ejemplo, este tipo de ensayo puede realizarse o bien en un formato de transferencia de energía de resonancia fluorescente (FRET), o mediante el uso de un formato de AlphaScreen (ensayo de proximidad luminescente homogéneo amplificado) al variar los reactivos de donante y aceptor que se unen a la estreptavidina o anticuerpos específicos para el fósforo.
VI. Formas o Derivados de Compuestos Alternativos
(a) Isómeros, Profármacos y Metabolitos Activos
Los compuestos contemplados en el presente documento se describen con referencia tanto a fórmulas genéricas como a compuestos específicos. Además, los compuestos en la presente descripción pueden existir en varias formas o derivados diferentes, todos dentro del alcance de la presente divulgación. Estos incluyen, por ejemplo, tautómeros, estereoisómeros, mezclas racémicas, regioisómeros, sales, profármacos (por ejemplo, ésteres de ácido carboxílico), formas solvatadas, diferentes formas cristalinas o polimorfos y metabolitos activos.
(b) Tautómeros, Estereoisómeros, Regioisómeros y Formas Solvatadas
Se entiende que algunos compuestos pueden exhibir tautomerismo. En dichos casos, las Fórmulas proporcionadas en el presente documento representan expresamente solo una de las posibles formas tautoméricas. Por consiguiente, debe entenderse que las fórmulas proporcionadas en el presente documento pretenden representar cualquier forma tautomérica de los compuestos representados y no deben limitarse simplemente a la forma tautomérica específica representada por los dibujos de las Fórmulas.
De igual manera, algunos de los compuestos de acuerdo con la presente divulgación pueden existir como estereoisómeros, es decir, que tienen la misma conectividad atómica de átomos enlazados covalentemente pero que difieren en la orientación espacial de los átomos. Por ejemplo, los compuestos pueden ser estereoisómeros ópticos, que contienen uno o más centros quirales, y, por consiguiente, pueden existir en dos o más formas estereoisoméricas (por ejemplo, enantiómeros o diastereómeros). Por lo tanto, dichos compuestos pueden estar presentes como estereoisómeros simples (es decir, esencialmente libres de otros estereoisómeros), racematos y/o mezclas de enantiómeros y/o diastereómeros. Como otro ejemplo, los estereoisómeros incluyen isómeros geométricos, tal como la orientación cis o trans de los sustituyentes en los carbonos adyacentes de un enlace doble. Todos estos estereoisómeros simples, racematos y mezclas de los mismos se pretende que estén dentro del alcance de la presente divulgación. A menos que se especifique lo contrario, todas dichas formas estereoisoméricas están incluidas dentro de las Fórmulas proporcionadas en el presente documento.
En algunas modalidades, un compuesto quiral de la presente divulgación está en una forma que contiene al menos 80 % de un isómero simple (60 % de exceso enantiomérico ("e.e.") o exceso diastereomérico ("d.e")), o al menos 85 % (70 % e.e. o d.e.), 90 % (80 % e.e. o d.e.), 95 % (90 % e.e. o d.e.), 97,5 % (95 % e.e. o d.e.), o 99 % (98 % e.e. o d.e.). Como generalmente entienden los expertos en la técnica, un compuesto ópticamente puro que tiene un centro quiral es uno que consiste esencialmente en uno de los dos enantiómeros posibles (es decir, es enantioméricamente puro), y un compuesto ópticamente puro que tiene más de un centro quiral es uno que es a la vez diastereoméricamente puro y enantioméricamente puro. En algunas modalidades, el compuesto está presente en forma ópticamente pura.
Para compuestos en los que la síntesis implica la adición de un solo grupo en un doble enlace, particularmente un doble enlace carbono-carbono, la adición puede ocurrir en cualquiera de los átomos con enlaces dobles. Para tales compuestos, la presente divulgación incluye ambos regioisómeros.
(c) Profármacos y Metabolitos
Además de las presentes fórmulas y compuestos descritos en el presente documento, la divulgación también incluye profármacos (profármacos generalmente farmacéuticamente aceptables), derivados metabólicos activos (metabolitos activos) y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Los profármacos son compuestos o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos que, cuando se metabolizan en condiciones fisiológicas o cuando se convierten mediante solvólisis, producen el compuesto activo deseado. Los profármacos incluyen, sin limitación, ésteres, amidas, carbamatos, carbonatos, ureidos, solvatos o hidratos del compuesto activo. Típicamente, el profármaco es inactivo o menos activo que el compuesto activo, pero puede proporcionar una o más de las ventajosas propiedades de manipulación, administración y/o metabolismo. Por ejemplo, algunos profármacos son ésteres del compuesto activo; durante la metabolisis, el grupo éster se escinde para producir el fármaco activo. Además, algunos profármacos se activan enzimáticamente para producir el compuesto activo, o un compuesto que, tras una reacción química adicional, produce el compuesto activo.
En este contexto, un ejemplo común de profármaco es un éster de alquilo de un ácido carboxílico. En relación con los compuestos de esta divulgación, otros ejemplos incluyen, sin limitación, un derivado de amida o carbamato en el nitrógeno pirrol (es decir, N1) del núcleo de azaindol.
Como se describe en The Practice of Medicinal Chemistry, Ch. 31-32 (Ed. Wermuth, Academic Press, San Diego, CA, 2001), los profármacos pueden dividirse conceptualmente en dos categorías no exclusivas, profármacos bioprecursores y profármacos portadores. Generalmente, los profármacos bioprecursores son compuestos que son inactivos o tienen baja actividad en comparación con el correspondiente compuesto farmacológico activo, que contienen uno o más grupos protectores y se convierten en una forma activa por metabolismo o solvólisis. Tanto la forma de fármaco activo como cualquier producto metabólico liberado deberían tener una toxicidad aceptablemente baja. Por lo general, la formación de un compuesto de fármaco activo implica un proceso o reacción metabólica que es uno de los siguientes tipos:
Reacciones oxidativas: Las reacciones oxidativas se ejemplifican sin limitación a reacciones tales como la oxidación de alcohol, carbonilo y funcionalidades ácidas, hidroxilación de carbonos alifáticos, hidroxilación de átomos de carbono alicíclicos, oxidación de átomos de carbono aromáticos, oxidación de dobles enlaces carbono-carbono, oxidación de grupos funcionales que contienen nitrógeno, oxidación de silicio, fósforo, arsénico y azufre, N-desalquilación oxidativa, O- y S-desalquilación oxidativa, desaminación oxidativa, así como otras reacciones oxidativas.
Reacciones reductoras: Las reacciones reductoras se ejemplifican sin limitación a reacciones tales como la reducción de funcionalidades carbonilo, reducción de funcionalidades alcohol y dobles enlaces carbono-carbono, reducción de grupos funcionales que contienen nitrógeno y otras reacciones de reducción.
Reacciones sin cambio en el estado de oxidación: Las reacciones sin cambio en el estado de oxidación se ejemplifican sin limitación a reacciones tales como hidrólisis de ésteres y éteres, escisión hidrolítica de enlaces simples carbono-nitrógeno, escisión hidrolítica de heterociclos no aromáticos, hidratación y deshidratación en enlaces múltiples, nuevos enlaces atómicos que resultan de reacciones de deshidratación, deshalogenación hidrolítica, eliminación de la molécula de haluro de hidrógeno y otras reacciones similares.
Los profármacos portadores son compuestos farmacológicos que contienen un resto de transporte, por ejemplo, que mejora la captación y/o la entrega localizada a un sitio(s) de acción. Deseablemente para tal profármaco portador, el enlace entre el resto de fármaco y el resto de transporte es un enlace covalente, el profármaco es inactivo o menos activo que el compuesto de fármaco, el profármaco y cualquier resto de transporte de liberación son aceptablemente no tóxicos. Para los profármacos en los que se pretende que el resto de transporte mejore la captación, normalmente la liberación del resto de transporte debería ser rápida. En otros casos, es deseable utilizar un resto que proporcione una liberación lenta, por ejemplo, ciertos polímeros u otros restos, tales como las ciclodextrinas. (Ver, por ejemplo, Cheng y otros, Publicación de Patente de Estados Unidos No. 2004/0077595.) Tales profármacos portadores son a menudo ventajosos para los fármacos administrados por vía oral. Los profármacos portadores pueden usarse, por ejemplo, para mejorar una o más de las siguientes propiedades: aumento de la lipofilicidad, aumento de la duración de los efectos farmacológicos, aumento de la especificidad del sitio, disminución de la toxicidad y reacciones adversas y/o mejora en la formulación del medicamento (por ejemplo, estabilidad, solubilidad en agua, supresión de una propiedad organoléptica o fisicoquímica indeseable). Por ejemplo, la lipofilicidad se puede incrementar mediante la esterificación de grupos hidroxilo con ácidos carboxílicos lipófilos o de grupos de ácido carboxílico con alcoholes, por ejemplo, alcoholes alifáticos. Wermuth, supra.
Los profármacos pueden pasar de la forma de profármacos a la forma activa en un solo paso o pueden tener una o más formas intermedias que pueden tener actividad o pueden ser inactivas.
Los metabolitos, por ejemplo, los metabolitos activos, se superponen con los profármacos como se describió anteriormente, por ejemplo, profármacos bioprecursores. Por tanto, tales metabolitos son compuestos farmacológicamente activos o compuestos que se metabolizan adicionalmente a compuestos farmacológicamente activos que son derivados resultantes del proceso metabólico en el cuerpo de un sujeto. De estos, los metabolitos activos son compuestos derivados farmacológicamente activos. Para los profármacos, el compuesto profármaco es generalmente inactivo o de menor actividad que el producto metabólico. Para los metabolitos activos, el compuesto original puede ser un compuesto activo o puede ser un profármaco inactivo.
Los profármacos y metabolitos activos pueden identificarse al usar técnicas de rutina conocidas en la técnica. Ver, por ejemplo, Bertolini y otros, 1997, J. Med. Chem., 40: 2011-2016; Shan y otros, 1997, J Pharm Sci 86 (7): 756-757; Bagshawe, 1995, Drug Dev. Res., 34: 220-230; Wermuth, supra.
(d) Sales farmacéuticamente aceptables
Los compuestos pueden formularse como o estar en forma de sales farmacéuticamente aceptables. Las formas de sal farmacéuticamente aceptables contempladas incluyen, sin limitación, mono, bis, tris, tetraquis, etc. Las sales farmacéuticamente aceptables no son tóxicas en las cantidades y concentraciones a las que se administran. La preparación de dichas sales puede facilitar el uso farmacológico al alterar las características físicas de un compuesto sin evitar que ejerza su efecto fisiológico. Las alteraciones útiles en las propiedades físicas incluyen disminuir el punto de fusión para facilitar la administración transmucosal y aumentar la solubilidad para facilitar la administración de concentraciones más altas del fármaco.
Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales de adición de ácido como aquellas que contienen sulfato, cloruro, clorhidrato, fumarato, maleato, fosfato, sulfamato, acetato, citrato, lactato, tartrato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato, ciclohexilsulfamato y quinato. Las sales pueden obtenerse a partir de ácidos tales como el ácido clorhídrico, ácido maleico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido sulfámico, ácido acético, ácido cítrico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido malónico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido ciclohexilsulfámico, ácido fumárico y ácido quínico.
Las sales farmacéuticamente aceptables también incluyen las sales de adición de base como las que contienen benzatina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etanolamina, t-butilamina, etilendiamina, meglumina, procaína, aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio, amonio, alquilamina y zinc, cuando están presentes grupos funcionales ácidos, tales como el ácido carboxílico o fenol. Por ejemplo, véase Remington's Pharmaceutical Sciences, 19a edición, Mack Publishing Co., Easton, PA, vol. 2, pág. 1457, 1995. Dichas sales pueden prepararse mediante el uso de las bases correspondientes apropiadas.
Las sales farmacéuticamente aceptables pueden prepararse mediante técnicas estándar. Por ejemplo, la forma de base libre de un compuesto puede disolverse en un solvente adecuado, tal como en una solución acuosa o alcoholacuosa que contiene el ácido apropiado y aislarse después mediante la evaporación de la solución. En otro ejemplo, puede prepararse una sal mediante la reacción de la base y el ácido libre en un solvente orgánico.
De esta forma, por ejemplo, si el compuesto particular es una base, la sal farmacéuticamente aceptable deseada puede prepararse mediante cualquier método adecuado disponible en la técnica, por ejemplo, el tratamiento de la base libre con un ácido inorgánico, tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico o ácido fosfórico, o con un ácido orgánico, tal como ácido acético, ácido maleico, ácido succínico, ácido mandélico, ácido fumárico, ácido malónico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido glicólico, ácido salicílico, un ácido piranosidílico, tal como ácido glucurónico o ácido galacturónico, un alfa-hidroxiácido, tal como ácido cítrico o ácido tartárico, un aminoácido, tal como ácido aspártico o ácido glutámico, un ácido aromático, tal como ácido benzoico o ácido cinámico, un ácido sulfónico, tal como ácido p-toluenosulfónico o ácido etanosulfónico.
De manera similar, si el compuesto particular es un ácido, la sal aceptable farmacéuticamente aceptable deseada puede prepararse mediante cualquier método adecuado, por ejemplo, tratamiento del ácido libre con una base inorgánica u orgánica, tal como una amina (primaria, secundaria o terciaria), un hidróxido de metal alcalino o hidróxido de metal alcalinotérreo. Los ejemplos ilustrativos de sales adecuadas incluyen las sales orgánicas derivadas a partir de aminoácidos, tales como L-glicina, L-lisina y L-arginina, amoníaco, aminas primarias, secundarias y terciarias, y aminas cíclicas, tales como hidroxietilpirrolidina, piperidina, morfolina o piperazina y sales inorgánicas derivadas de sodio, calcio, potasio, magnesio, manganeso, hierro, cobre, zinc, aluminio y litio.
La sal farmacéuticamente aceptable de los diferentes compuestos puede presentarse como un complejo. Los ejemplos de complejos incluyen el complejo 8-cloroteofilina (análogo a, por ejemplo, dimenhidrinato: complejo de difenhidramina 8-cloroteofilina (1:1); Dramamine) y diversos complejos de inclusión de ciclodextrina.
A menos que se especifique lo contrario, la especificación de un compuesto en el presente documento incluye sales aceptables farmacéuticamente de dicho compuesto.
(e) Otras formas de compuestos
En el caso de los agentes que son sólidos, los expertos en la materia entienden que los compuestos y las sales pueden existir en diferentes formas cristalinas o polimórficas, o pueden formularse como cocristales, o pueden estar en una forma amorfa, o puede ser cualquier combinación de los mismos (por ejemplo, parcialmente cristalino, parcialmente amorfo o mezclas de polimorfos), todos los cuales están destinados a estar dentro del alcance de la presente divulgación y fórmulas especificadas. Mientras que las sales se forman por la adición de ácido/base, es decir, una base libre o ácido libre del compuesto de interés forma una reacción ácida/base con una base de adición o ácido de adición correspondiente, respectivamente, lo que da como resultado una interacción de carga iónica, los cocristales son una nueva especie química que se forma entre compuestos neutros, lo que da como resultado el compuesto y una especie molecular adicional en la misma estructura cristalina.
En algunos casos, los compuestos de la divulgación forman complejos con un ácido o una base, que incluyen sales de adición de bases tales como amonio, dietilamina, etanolamina, etilendiamina, dietanolamina, t-butilamina, piperazina, meglumina; sales de adición de ácido, tales como acetato, acetilsalicilato, besilato, camsilato, citrato, formiato, fumarato, glutarato, hidroclorato, maleato, mesilato, nitrato, oxalato, fosfato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato y tosilato; y aminoácidos tales como alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, glutamina, ácido glutámico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina o valina. Al combinar el compuesto de la divulgación con el ácido o la base, se forma preferentemente un complejo amorfo en lugar de un material cristalino tal como una sal o cocristal típico. En algunos casos, la forma amorfa del complejo se facilita por un procesamiento adicional, tal como por secado por pulverización, procedimientos mecanoquímicos tales como la compactación por rodillo o la irradiación con microondas del compuesto original mezclado con el ácido o la base. Dichos procedimientos también pueden incluir la adición de sistemas de polímeros iónicos y/o no iónicos, que incluyen, pero no se limitan a, acetato succinato de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMCAS) y copolímero de ácido metacrílico (por ejemplo, Eudragit® L100-55), que además estabilizan la naturaleza amorfa del complejo. Dichos complejos amorfos proporcionan varias ventajas. Por ejemplo, la disminución de la temperatura de fusión en relación con la base libre facilita el procesamiento adicional, tal como la extrusión por fusión en caliente, para mejorar aún más las propiedades biofarmacéuticas del compuesto. Además, el complejo amorfo es fácilmente friable, lo que proporciona una compresión mejorada para la carga del sólido en forma de cápsula o tableta.
Además, las fórmulas están destinadas a cubrir formas hidratadas o solvatadas, así como no hidratadas o no solvatadas de las estructuras identificadas. Por ejemplo, los compuestos indicados incluyen formas tanto hidratadas como no hidratadas. Otros ejemplos de solvatos incluyen las estructuras en combinación con un solvente adecuado, tal como isopropanol, etanol, metanol, dimetilsulfóxido, acetato de etilo, ácido acético o etanolamina.
VII. Formulaciones y Administración
Los procedimientos y compuestos se usarán típicamente en la terapia para sujetos humanos. Sin embargo, también pueden usarse para tratar indicaciones similares o idénticas en otros sujetos animales. En este contexto, los términos "sujeto", "sujeto animal" y similares se refieren a vertebrados humanos y no humanos, por ejemplo, mamíferos, como primates no humanos, animales deportivos y comerciales, por ejemplo, equinos, bovinos, porcinos, ovinos, roedores y mascotas, por ejemplo, caninos y felinos.
Las formas de dosificación adecuadas, en parte, dependen del uso o la vía de administración, por ejemplo, oral, transdérmica, transmucosa, inhalante o por inyección (parenteral). Dichas formas de dosificación deberían permitir que el compuesto llegue a las células objetivo. Otros factores son bien conocidos en la técnica e incluyen consideraciones tales como la toxicidad y las formas de dosificación que retardan que el compuesto o la composición ejerzan sus efectos. Las técnicas y formulaciones generalmente pueden encontrarse en The Science and Practice of Pharmacy, 21ra edición, Lippincott, Williams and Wilkins, Philadelphia, PA, 2005.
Pueden usarse portadores o excipientes para producir composiciones. Los portadores o excipientes pueden elegirse para facilitar la administración del compuesto. Los ejemplos de portadores incluyen carbonato de calcio, fosfato de calcio, diversos azúcares tales como lactosa, glucosa o sacarosa, tipos de almidón, derivados de la celulosa, gelatina, aceites vegetales, polietilenglicoles y solventes fisiológicamente compatibles. Los ejemplos de disolventes fisiológicamente compatibles incluyen soluciones estériles de agua para inyección (WFI), solución salina y dextrosa. Los compuestos pueden administrarse por diferentes vías que incluyen intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, intramuscular, oral, transmucosa, rectal, transdérmica o inhalada. En algunas modalidades, los compuestos pueden administrarse por vía oral. Para la administración oral, por ejemplo, los compuestos pueden formularse en formas de dosificación oral convencionales, tales como cápsulas, tabletas, y preparaciones líquidas tales como jarabes, elíxires y gotas concentradas.
Para inhalantes, los compuestos de la divulgación pueden formularse como polvo seco o una solución, suspensión o aerosol adecuado. Los polvos y las soluciones pueden formularse con aditivos adecuados conocidos en la técnica. Por ejemplo, los polvos pueden incluir una base de polvo adecuada tal como lactosa o almidón, y las soluciones pueden comprender propilenglicol, agua estéril, etanol, cloruro de sodio y otros aditivos, tales como ácido, álcali y sales tampón. Dichas soluciones o suspensiones pueden administrarse por inhalación por pulverización, bomba, atomizador, o nebulizador, y similares. Los compuestos de la divulgación también pueden usarse en combinación con otros tratamientos inhalados, por ejemplo corticosteroides tales como propionato de fluticasona, dipropionato de beclometasona, acetónido de triamcinolona, budesonida y furoato de mometasona; agonistas beta tales como albuterol, salmeterol y formoterol; agentes anticolinérgicos tales como bromuro de ipratroprio o tiotropio; vasodilatadores tales como treprostinal e iloprost; enzimas tales como ADNasa; proteínas terapéuticas; anticuerpos de inmunoglobulina; un oligonucleótido, tal como ADN o ARN monocatenarios o bicatenarios, ARNip; antibióticos tales como tobramicina; antagonistas del receptor muscarínico; antagonistas de leucotrienos; antagonistas de citocinas; inhibidores de proteasa; cromolina sódica; nedocril sódico; y cromoglicato de sodio.
Pueden obtenerse preparaciones farmacéuticas para uso oral, por ejemplo, al combinar los compuestos activos con excipientes sólidos, al triturar opcionalmente una mezcla resultante y procesar la mezcla de gránulos, después de añadir componentes auxiliares adecuados, si se desea, para obtener comprimidos o núcleos de grageas. Los excipientes adecuados son, en particular, cargas tales como azúcares, que incluyen lactosa, sacarosa, manitol, o sorbitol; preparaciones de celulosa, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina, goma de tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio (CMC) y/o polivinilpirrolidona (PVP: povidona). Si se desea, pueden añadirse agentes desintegrantes, tales como polivinilpirrolidona reticulada, agar o ácido algínico, o una sal de los mismos, tal como alginato de sodio.
Los núcleos de grageas se proporcionan con revestimientos adecuados. Para este propósito, pueden usarse soluciones de azúcar concentradas, que opcionalmente pueden contener, por ejemplo, goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol (PEG) y/o dióxido de titanio, soluciones de laca y solventes orgánicos adecuados o mezclas de solventes. Pueden añadirse colorantes o pigmentos a los comprimidos o recubrimientos de grageas para identificación o para caracterizar diferentes combinaciones de dosis de compuesto activo.
Las preparaciones farmacéuticas que pueden usarse por vía oral incluyen cápsulas de ajuste a presión hechas de gelatina ("cápsulas de gel"), así como cápsulas selladas blandas hechas de gelatina y un plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas de ajuste a presión pueden contener los ingredientes activos mezclados con carga tal como lactosa, aglutinantes tales como almidones y/o lubricantes tales como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizantes. En cápsulas blandas, los compuestos activos pueden disolverse o suspenderse en líquidos adecuados, tales como aceites grasos, parafina líquida o polietilenglicoles (PEG) líquidos. Además, pueden agregarse estabilizadores.
En algunas modalidades, puede usarse inyección (administración parenteral), por ejemplo, intramuscular, intravenosa, intraperitoneal y/o subcutánea. Para inyección, los compuestos de la divulgación se formulan en soluciones líquidas estériles, tales como tampones o soluciones fisiológicamente compatibles, tales como solución salina, solución de Hank o solución de Ringer. Además, los compuestos pueden formularse en forma sólida y volverse a disolver o suspenderse antes de su uso. También pueden producirse formas liofilizadas.
La administración también puede ser por medios transmucosos, tópicos, transdérmicos o inhalantes. Para la administración transmucosa, tópica o transdérmica, se utilizan en la formulación penetrantes apropiados para la barrera a permear. Dichos penetrantes son generalmente conocidos en la técnica e incluyen, por ejemplo, para la administración transmucosal, sales biliares y derivados de ácido fusídico. Además, pueden usarse detergentes para facilitar la permeación. La administración transmucosal, por ejemplo, puede ser a través de aerosoles nasales o supositorios (rectales o vaginales).
Las composiciones tópicas de esta divulgación se formulan como aceites, cremas, lociones, pomadas y similares mediante la elección de portadores apropiados conocidos en la técnica. Los portadores adecuados incluyen aceites vegetales o minerales, vaselina blanca (parafina blanda blanca), grasas o aceites de cadena ramificada, grasas animales y alcohol de alto peso molecular (mayor que C12). En otra modalidad, los vehículos son aquellos en los que el ingrediente activo es soluble. Además, pueden incluirse emulsionantes, estabilizantes, humectantes y antioxidantes, así como agentes que imparten color o fragancia, si se desea. Las cremas para aplicación tópica se formulan preferentemente a partir de una mezcla de aceite mineral, cera de abejas autoemulsionante y agua en la que se mezcla el ingrediente activo, disuelto en una pequeña cantidad de solvente (por ejemplo, un aceite). Además, la administración por medios transdérmicos puede comprender un parche o apósito transdérmico tal como un vendaje impregnado con un ingrediente activo y opcionalmente uno o más portadores o diluyentes conocidos en la técnica. Para administrarse en forma de un sistema de suministro transdérmico, la administración de la dosificación será continua en lugar de intermitente durante todo el régimen de dosificación.
Las cantidades de los diversos compuestos a ser administrados pueden determinarse por procedimientos estándar al considerar factores tales como el IC50 del compuesto, la semivida biológica del compuesto, la edad, tamaño y peso del sujeto, y la indicación que se trata. Los expertos en la técnica conocen bien la importancia de estos y otros factores. Generalmente, una dosis estará entre aproximadamente 0,01 y 50 mg/kg, o 0,1 y 20 mg/kg del sujeto que se trata. Pueden usarse dosis múltiples.
Los compuestos de la divulgación también pueden usarse en combinación con otros tratamientos para tratar la misma enfermedad. Dicho uso combinado incluye la administración de los compuestos y uno o más de otros tratamientos en diferentes momentos, o la coadministración del compuesto y uno o más de otros tratamientos. En algunas modalidades, la dosificación puede modificarse para uno o más de los compuestos de la divulgación u otros tratamientos usados en combinación, por ejemplo, la reducción de la cantidad dosificada en relación con un compuesto o tratamiento usado solo, por procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica.
Se entiende que el uso en combinación incluye el uso con otros tratamientos, fármacos, procedimientos médicos, etc., donde el otro tratamiento o procedimiento puede administrarse en diferentes momentos (por ejemplo, dentro de un corto tiempo, tal como en cuestión de horas (por ejemplo, 1, 2, 3, 4-24 horas), o dentro de un tiempo más largo (por ejemplo, 1-2 días, 2-4 días, 4-7 días, 1-4 semanas)) que un compuesto de la presente divulgación, o al mismo tiempo que un compuesto de la divulgación. El uso en combinación también incluye el uso con un tratamiento o procedimiento médico que se administra una vez o con poca frecuencia, tal como una cirugía, junto con un compuesto de la divulgación administrado dentro de un tiempo corto o más largo antes o después del otro tratamiento o procedimiento. En algunas modalidades, la presente divulgación proporciona el suministro de compuestos de la divulgación y uno o más de otros fármacos terapéuticos suministrados por una vía de administración diferente o por la misma vía de administración. El uso en combinación para cualquier vía de administración incluye la administración de un compuesto de la divulgación y uno o más de otros fármacos terapéuticos suministrados por la misma vía de administración juntos en cualquier formulación, que incluyen las formulaciones en donde los dos compuestos están químicamente enlazados de tal manera que mantienen su actividad terapéutica cuando se administran. En una modalidad, la otra farmacoterapia puede coadministrarse con uno o más compuestos de la divulgación. El uso en combinación por coadministración incluye la administración de coformulaciones o formulaciones de compuestos unidos químicamente, o la administración de dos o más compuestos en formulaciones separadas dentro de un corto tiempo entre sí (por ejemplo, dentro de una hora, 2 horas, 3 horas, hasta 24 horas), administrados por las mismas o diferentes vías. La coadministración de formulaciones separadas incluye la coadministración mediante administración a través de un dispositivo, por ejemplo, el mismo dispositivo inhalante, la misma jeringa, etc., o la administración desde dispositivos separados dentro de un corto tiempo entre sí. Las coformulaciones de los compuestos de la divulgación y uno o más tratamientos con fármacos adicionales administrados por la misma vía incluyen la preparación de los materiales juntos de tal manera que puedan administrarse mediante un dispositivo, que incluye los compuestos separados combinados en una formulación, o compuestos que se modifican de modo que se unan químicamente, pero aún mantengan su actividad biológica. Tales compuestos unidos químicamente pueden tener un enlace que se mantiene sustancialmente in vivo, o el enlace puede romperse in vivo, lo cual separa los dos componentes activos.
En determinadas modalidades, el paciente tiene 60 años o más y recae después de una terapia contra el cáncer de primera línea. En determinadas modalidades, el paciente tiene 18 años o más y recae o es refractario después de una terapia contra el cáncer de segunda línea. En determinadas modalidades, el paciente tiene 60 años o más y es refractario primario a una terapia contra el cáncer de primera línea. En determinadas modalidades, el paciente tiene 70 años o más y no ha sido tratado previamente. En determinadas modalidades, el paciente tiene 70 años o más y no es elegible y/o es poco probable que se beneficie de la terapia del cáncer.
En determinadas modalidades, la cantidad terapéuticamente eficaz utilizada en los métodos proporcionados en este documento es de al menos 10 mg por día de un compuesto que tenga cualquiera de las fórmulas descritas en esta divulgación, que incluye cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o la Tabla 2, o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos. En determinadas modalidades, la cantidad terapéuticamente eficaz es 10, 50, 90, 100, 135, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000, 2200, 2500 mg por dosis. En otras modalidades, la cantidad terapéuticamente eficaz es 10, 50, 90, 100, 135, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000, 2200, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000 mg por día o más. En determinadas modalidades, el compuesto se administra de forma continua. En determinadas modalidades, el compuesto se administra en una o más dosis diarias (como una vez al día, dos veces al día, tres veces al día, cuatro veces al día y similares) o semanalmente (como una vez a la semana, dos veces a la semana, tres veces a la semana, cuatro veces por semana y similares).
En determinadas modalidades, se proporciona en este documento un compuesto que tiene cualquiera de las fórmulas descritas en esta divulgación, incluido cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o la Tabla 2, o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado de cualquiera de estos compuestos farmacéuticamente aceptables, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección mediada por FLT3 o FLT3 oncogénico administrando a un mamífero que padece una enfermedad o afección con al menos 10, 50, 90, 100, 135, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000, 2200, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000 mg por día, y en donde el compuesto se administra con el estómago vacío.
VIII. Compuestos para Uso en el tratamiento de Afecciones Mediadas por Quinasas FLT3 o c-Kit
En otra modalidad, la presente divulgación proporciona un compuesto para su uso en el tratamiento de un sujeto que padece o está en riesgo de enfermedades o afecciones mediadas por la proteína quinasa FLT3 o c-Kit. El compuesto para su uso incluye administrar al sujeto una cantidad eficaz de uno o más compuestos que tienen cualquiera de las fórmulas descritas en esta divulgación, que incluye cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o Tabla 2, o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos, o una composición farmacéutica de los mismos. En determinadas modalidades, el compuesto para su uso involucra administrar al sujeto una cantidad eficaz de cualquiera o más compuestos como se describe en el presente documento en combinación con uno o más tratamientos adicionales para la enfermedad o afección. Los ejemplos no limitativos de una enfermedad o afección mediada por la proteína quinasa FLT3 incluyen as enfermedades o afecciones ilustrativas incluyen, la leucemia mieloide aguda, ablación de células madre y mielopreparación para trasplante de células madre, esclerosis múltiple progresiva primaria, síndrome de dolor regional complejo, distrofia simpática refleja, distrofia muscular, distrofia muscular de Duchenne, causalgia, neuroinflamación, trastornos neuroinflamatorios, olvido benigno, HIV, demencia de tipo binswanger, demencia con cuerpos de Lewy, prosencefalia, microencefalia, parálisis cerebral, hidrocefalia congénita, hidropesía abdominal, parálisis supranuclear progresiva, glaucoma, trastornos de adicción, dependencias, alcoholismo, temblores, enfermedad de Wilson, demencias vasculares, demencia por infarto múltiple, demencia fronto temporal, pseudodemencia, cáncer de vejiga, carcinoma de células basales, colangiocarcinoma, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, sarcoma de Ewing, cáncer gástrico, glioma, carcinoma hepatocelular, linfoma de Hodgkin, carcinoma laríngeo, leucemia, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, melanoma, mesotelioma, cáncer de páncreas, cáncer rectal, cáncer renal, carcinoma de células escamosas, linfoma de células T, cáncer de tiroides, leucemia monocítica, feocromocitoma, tumores malignos de células de nervios periféricos, tumores malignos de la vaina del nervio periférico (MPNST), neurofibromas cutáneos y plexiformes, tumor leiomioadenomatoide, fibromas, fibromas uterinos, leiomiosarcoma, cáncer papilar de tiroides, cáncer anaplásico de tiroides, cáncer medular de tiroides, cáncer folicular de tiroides, carcinoma de células de hurtle, cáncer tiroideo, angiosarcomas, liposarcomas, ascitis, ascitis maligna, mesotelioma, tumores de glándulas salivales, carcinoma mucoepidermoide de la glándula salival, carcinoma de células acínicas de la glándula salival, tumores del estroma gastrointestinal (GIST), tumores que causan derrames en espacios potenciales del cuerpo, derrames pleurales, derrames pericárdicos, derrames peritoneales también conocidos como ascitis, tumores de células gigantes (GCT), GCT de hueso, angiogénesis tumoral o crecimiento tumoral paracrino.
En un aspecto, la divulgación proporciona un compuesto para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesita, al administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más compuestos como se describe en el presente documento, un profármaco de tal compuesto, una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto o profármaco, o una formulación farmacéuticamente aceptable de tal compuesto o profármaco. El compuesto puede estar solo o puede ser parte de una composición. En una modalidad, la divulgación proporciona un compuesto para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesita, al administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más compuesto (s) como se describe en el presente documento, un profármaco de dicho compuesto, una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o profármaco, o una formulación farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o profármaco en combinación con uno o más tratamientos adicionales adecuados para la enfermedad o afección.
En otra modalidad de esta divulgación, la enfermedad o afección que puede tratarse con uno o más compuestos que tienen cualquiera de las fórmulas descritas en esta divulgación, que incluye cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o la Tabla 2, o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos, es un trastorno de almacenamiento lisosómico. Los ejemplos no limitantes de trastornos de almacenamiento lisosómico incluyen la mucolipodosis, alfamanosidosis, cistinosis, enfermedad de Danon, enfermedad de Fabry, enfermedad de Farber, fucosidosis, galactosialidosis, enfermedad de Gaucher, gangliosidosis (por ejemplo, gangliosidosis GM1 y gangliosidosis GM2 variante AB), enfermedad de Krabbe, leucodistrofia metacromática, trastornos de mucopolisacaridosis (por ejemplo, MPS 1-síndrome de Hurler, MPS II-síndrome de Hunter, MPS III-Sanfilippo (A, B, C, D), MPS IVA-Morquio, MpS IX-deficiencia de la hialuronidasa, MPS VI-Maroteaux-Lamy, o MPS VII-síndrome de Sly), mucolipidosis tipo I (Sialidosis), mucolipidosis tipo II (enfermedad de células I); mucolipidosis tipo III (polidistrofia pseudo-Hurler), mucolipidosis tipo IV, deficiencia múltiple de sulfatasa; Niemann-Pick tipos A, B, C, enfermedad de Pompe (enfermedad de almacenamiento de glucógeno), picnodisostosis, enfermedad de Sandhoff, enfermedad de Schindler; enfermedad de Salla/almacenamiento de ácido siálico; enfermedad de Tay-Sachs; y enfermedad de Wolman.
En aspectos y modalidades que involucran el tratamiento de una enfermedad o afección con uno o más compuestos descritos en el presente documento, la divulgación proporciona compuestos para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección mediada por y FLT3 en un sujeto que lo necesite (por ejemplo, un mamífero tal como un ser humano, otros primates, animales de deporte, animales de interés comercial como ganado, animales de granja como caballos o mascotas como perros y gatos), por ejemplo, una enfermedad o afección caracterizada por actividad anormal de FLT3 (por ejemplo, actividad de quinasa). En algunas modalidades, los compuestos para el uso pueden involucrar administrar al sujeto que padece o está en riesgo de una enfermedad o afección mediada por FLT3 una cantidad eficaz de uno o más compuesto(s) como se describe en el presente documento. En otra modalidad, la quinasa FLT3 es una forma mutada. En otra modalidad, la mutación en la quinasa FLT3 es una mutación por duplicación interna en tándem (ITD). En otra modalidad, la mutación FLT3 incluye además D835Y, F691L o tanto D835Y como F691L. En otra modalidad, la enfermedad o afección se selecciona de leucemia mieloide aguda, leucemia linfocítica aguda o leucemia mielógena crónica.
En algunas modalidades, la presente divulgación proporciona un método para inhibir la quinasa FLT3 mutante, tal como FLT3 ITD y mutantes FLT3 resistentes a fármacos tales como D835Y y F691L. El método incluye poner en contacto uno o más compuestos que tienen cualquiera de las Fórmulas descritas en esta divulgación, que incluye cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o la Tabla 2, o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un deuterado farmacéuticamente aceptables. análogo de cualquiera de estos compuestos, o una composición farmacéutica del mismo, con una célula o una proteína quinasa mutante FLT3 in vitro o in vivo.
En determinadas modalidades, la presente divulgación proporciona el uso de uno o más compuestos que tienen cualquiera de las Fórmulas descritas en esta divulgación, incluyendo cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o Tabla 2, o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos, o una composición farmacéutica del mismo, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o afección como se describe en el presente documento. En otras modalidades, la presente divulgación proporciona un compuesto que tiene cualquiera de las Fórmulas descritas en esta divulgación, que incluye cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o la Tabla 2, o una sal farmacéuticamente aceptable, un solvato, un tautómero, un estereoisómero, un análogo deuterado de cualquiera de estos compuestos, o una composición que comprende un compuesto que tiene cualquiera de las Fórmulas descritas en esta divulgación, que incluye cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o Tabla 2, o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección como se describe en el presente documento.
En determinadas modalidades, la enfermedad o afección es cáncer. En determinadas modalidades, la enfermedad o afección es un tumor sólido. En otra modalidad más, la enfermedad o afección es un tumor transmitido por la sangre. En otra modalidad más, la enfermedad o afección es leucemia. En determinadas modalidades, la leucemia es leucemia mieloide aguda. En determinadas modalidades, la leucemia es leucemia linfocítica aguda. En otra modalidad más, la leucemia es una leucemia refractaria o resistente a fármacos.
En determinadas modalidades, la leucemia resistente a fármacos es leucemia mieloide aguda resistente a fármacos. En determinadas modalidades, el mamífero que tiene leucemia mieloide aguda resistente a fármacos tiene una mutación activa de FLT3. En otra modalidad más, la leucemia mieloide aguda resistente a fármacos tiene una mutación de duplicación interna en tándem (ITD) de FLT3. En otra modalidad más, la leucemia mieloide aguda resistente a fármacos tiene una mutación de duplicación en tándem interna (ITD) de FLT3 y una mutación D835Y resistente a fármacos. En otra modalidad más, la leucemia mieloide aguda resistente a fármacos tiene una mutación de duplicación interna en tándem (ITD) de FLT3 y una mutación F691L resistente a fármacos. En otra modalidad más, la leucemia mieloide aguda resistente a fármacos tiene una mutación de duplicación interna en tándem (ITD) de FLT3 y mutaciones D835Y y F691L resistentes a fármacos.
VII. Tratamiento de Combinación
Los moduladores de proteína quinasa pueden combinarse de manera útil con otro compuesto farmacológicamente activo, o con dos o más de otros compuestos farmacológicamente activos, particularmente en el tratamiento del cáncer. En una modalidad, la composición incluye uno cualquiera o más compuestos como se describe en el presente documento junto con uno o más compuestos que son terapéuticamente eficaces para la misma indicación de enfermedad, en donde los compuestos tienen un efecto sinérgico sobre la indicación de enfermedad. En una modalidad, la composición incluye cualquiera o más compuestos eficaces para tratar un cáncer como se describe en el presente documento y uno o más de otros compuestos que son eficaces para tratar el mismo cáncer, en donde además los compuestos son sinérgicamente eficaces para tratar el cáncer.
En algunas modalidades, la presente divulgación proporciona una composición que comprende uno o más compuestos que tienen cualquiera de las Fórmulas descritas en esta divulgación, que incluye cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o Tabla 2, o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos, o una composición farmacéutica de los mismos, y uno o más agentes. En algunas modalidades, el uno o más agentes se seleccionan de un agente alquilante, que incluye, pero no se limita a, adozelesina, altretamina, bendamustina, bizelesina, busulfano, carboplatino, carboquona, carmofur, carmustina, clorambucilo, cisplatino, ciclofosfamida, dacarbazina, estramustina, etoglucid, fotemustina, hepsulfam, ifosfamida, improsulfán, irofulven, lomustina, manosulfán, mecloretamina, melfalán, mitobronitol, nedaplatino, nimustina, oxaliplatino, piposulfán, prednimustina, procarbazina, ranimustina, satraplatino, semustina, estreptozocina, temozolomida, tiotepa, treosulfán, triaziquona, trietilenomelamina, tetranitrato de triplatino, trofosfamida, y uramustina; un antibiótico, que incluye, pero no se limita a, aclarubicina, amrubicina, bleomicina, dactinomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, elsamitrucina, epirrubicina, idarrubicina, menogaril, mitomicina, neocarzinostatina, pentostatina, pirarrubicina, plicamicina, valrubicina y zorrubicina; un antimetabolito, que incluye, pero no se limita a, aminopterina, azacitidina, azatioprina, capecitabina, cladribina, clofarabina, citarabina, decitabina, floxuridina, fludarabina, 5-fluorouracilo, gemcitabina, hidroxiurea, mercaptopurina, metotrexato, nelarabina, pemetrexed, raltitrexed, tegafur-uracilo, tioguanina, trimetoprima, trimetrexato y vidarabina; una inmunoterapia, una terapia de anticuerpos, que incluye, pero no se limita a, alemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, galiximab, gemtuzumab, panitumumab, pertuzumab, rituximab, brentuximab, tositumomab, trastuzumab, ibritumomab tiuxetán 90 Y, ipilimumab y tremelimumab; una hormona o antagonista hormonal, que incluye, pero no se limita a, anastrozol, andrógenos, buserelina, dietilestilbestrol, exemestano, flutamida, fulvestrant, goserelina, idoxifeno, letrozol, leuprolida, magestrol, raloxifeno, tamoxifeno y toremifeno; un taxano, que incluye, pero no se limita a, DJ-927, docetaxel, TPI 287, larotaxel, ortataxel, paclitaxel, DHA-paclitaxel y tesetaxel; un retinoide, que incluye, pero no se limita a, alitretinoína, bexaroteno, fenretinida, isotretinoína y tretinoína; un alcaloide, que incluye, pero no se limita a, demecolcina, homoharringtonina, vinblastina, vincristina, vindesina, vinflunina y vinorelbina; un agente antiangiogénico, que incluye, pero no se limita a, AE-941 (GW786034, Neovastat), ABT-510, 2-metoxiestradiol, lenalidomida y talidomida; un inhibidor de topoisomerasa, que incluye, pero no se limita a, amsacrina, belotecán, edotecarina, etopósido, fosfato de etopósido, exatecán, irinotecán (además el metabolito activo SN-38 (7-etil-10-hidroxi-camptotecina)), lucantona, mitoxantrona, pixantrona, rubitecán, tenipósido, topotecán y 9-aminocamptotecina; un inhibidor de quinasa, que incluye, pero no se limita a, axitinib (AG 013736), dasatinib (BMS 354825), erlotinib, gefitinib, flavopiridol, mesilato de imatinib, lapatinib, difosfato de motesanib (AMG 706), nilotinib (AMN107), seliciclib, soranefib, malato de sunitinib, AEE-788, BMS-599626, UCN-01 (7-hidroxistaurosporina), vemurafenib, dabrafenib, selumetinib y vatalanib; un inhibidor de transducción de señales dirigida que incluye, pero no se limita a bortezomib, geldanamicina y rapamicina; un modificador de respuesta biológica, que incluye, pero no se limita a, imiquimod, interferón-alfa e interleucina-2; y otros quimioterapéuticos, que incluyen, pero no se limitan a 3-AP (3-amino-2-carboxialdehído tiosemicarbazona), altrasentán, aminoglutetimida, anagrelida, asparaginasa, briostatina-1, cilengitida, elesclomol, mesilato de eribulina (E7389), ixabepilona, lonidamina, masaprocol, mitoguanazona, oblimersen, sulindac, testolactona, tiazofurina, inhibidores de mTOR (por ejemplo, sirolimus, temsirolimus, everolimus, deforolimus), inhibidores de PI3K (por ejemplo, BEZ235, GDC-0941, XL147, XL765), inhibidores de Cdk4 (por ejemplo, PD-332991), inhibidores de Akt, inhibidores de Hsp90 (por ejemplo, tanespimicina) e inhibidores de farnesiltransferasa (por ejemplo, tipifarnib); inhibidores de MEK (por ejemplo, AS703026, AZD6244 (selumetinib), AZD8330, BIX02188, C11040 (PD184352), D-87503, GSK1120212 (JTP-74057), PD0325901, PD318088, PD98059, PDEA119 (BAY 869766), TAK-733).
En otra modalidad, cada compuesto para uso proporcionado en el presente documento puede comprender además la administración de un segundo agente terapéutico. En determinadas modalidades, el segundo agente terapéutico es un agente anticanceroso. En determinadas modalidades, el segundo agente terapéutico es un inhibidor de proteína quinasa; En determinadas modalidades, un inhibidor de tirosina quinasa; y en otra modalidad más, un segundo inhibidor de la quinasa FLT3, que incluye, pero no se limita a, Sunitinib, Cediranib, base libre XL-184 (Cabozantinib, Ponatinib (AP24534), PHA-665752, Dovitinib (TKI258, CHIR-258), AC220 (Quizartinib), TG101209, KW-2449, AEE788 (NVP-AEE788), MP-470 (Amuvatinib), TSU-68 (SU6668, Orantinib, ENMD-2076, diclorhidrato de vatalanib (PTK787) y tandutinib (MLN518).
En una modalidad, la presente divulgación proporciona compuestos para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección mediada por la quinasa FLT3, que incluye la quinasa FLT3 mutante (como la FLT3 ITD y las mutantes de FLT3 resistentes a fármaco D835Y y F691L), al administrar al sujeto una cantidad eficaz de una composición que incluye uno o más compuestos como se describe en el presente documento en combinación con uno o más tratamientos adicionales adecuados para tratar la enfermedad.
En otra modalidad, la presente divulgación proporciona un compuesto para su uso en el tratamiento de un cáncer en un sujeto que lo necesita al administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto o una composición que incluye uno o más compuestos como se describe en el presente documento, en combinación con uno o más tratamientos o procedimientos médicos adicionales eficaces para tratar el cáncer. Otros tratamientos o procedimientos médicos incluyen el tratamiento anticáncer adecuado (por ejemplo, tratamiento con fármacos, tratamiento con vacunas, tratamiento génico, tratamiento fotodinámico) o procedimiento médico (por ejemplo, cirugía, tratamiento de radiación, calentamiento por hipertermia, trasplante de médula ósea o de células madre). En una modalidad, el uno cualquiera o más tratamientos o procedimientos médicos anticáncer adecuados se seleccionan de un tratamiento con un agente quimioterapéutico (por ejemplo, fármaco quimioterapéutico), un tratamiento de radiación (por ejemplo, rayos x, rayos y, o haz de electrones, protones, neutrones o de partículas a), calentamiento por hipertermia (por ejemplo, microondas, ultrasonido, ablación por radiofrecuencia), tratamiento con vacuna (por ejemplo, vacuna contra el carcinoma hepatocelular del gen AFP, vacuna del vector adenoviral AFP, AG-858, vacuna contra el cáncer de mama con secreción de GM-CSF alogénica, vacunas de péptidos de células dendríticas), tratamiento génico (por ejemplo, vector Ad5CMV-p53, adenovector que codifica MDA7, adenovirus 5-factor de necrosis tumoral alfa), tratamiento fotodinámico (por ejemplo, ácido aminolevulínico, motexafina lutecio), cirugía o trasplante de médula ósea y células madre.
IX. Kits
En otra modalidad, la presente divulgación proporciona kits que incluyen uno o más compuestos que tienen cualquiera de las Fórmulas descritas en esta divulgación, que incluyen cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o Tabla 2, o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos, o una composición farmacéutica de los mismos. En algunas modalidades, el compuesto o composición está envasado, por ejemplo, en un vial, botella, matraz, que puede estar envasado adicionalmente, por ejemplo, dentro de una caja, sobre o bolsa; el compuesto o composición está aprobado por la Administración de Fármacos y Alimentos de los Estados Unidos o una agencia reguladora similar para la administración a un mamífero, por ejemplo, un ser humano; el compuesto o composición está aprobado para la administración a un mamífero, por ejemplo, un ser humano, para una enfermedad o afección mediada por proteína quinasa; los kits descritos en el presente documento pueden incluir instrucciones escritas para su uso y/u otra indicación de que el compuesto o composición es adecuado o está aprobado para la administración a un mamífero, por ejemplo, un ser humano, para una enfermedad o afección mediada por proteína quinasa; y el compuesto o composición puede envasarse en forma de dosis unitaria o de dosis única, por ejemplo, píldoras, cápsulas de dosis única o similares.
X. Diagnóstico Complementario
La divulgación proporciona un método para (1) identificar la presencia de un tumor en un paciente; y (2) tratar al paciente, identificado como que necesita el tratamiento, al administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más compuestos que tienen cualquiera de las Fórmulas descritas en esta divulgación, que incluye cualquiera de los compuestos enumerados en la Tabla 1 o la Tabla 2, o una composición farmacéutica del mismo. El tumor puede identificarse al emplear un biomarcador tumoral. Los biomarcadores tumorales también pueden ser útiles para establecer un diagnóstico específico, como determinar si los tumores son de origen primario o metastásico. Para hacer esta distinción, las alteraciones cromosómicas que se encuentran en las células ubicadas en el sitio del tumor primario pueden evaluarse frente a las que se encuentran en el sitio secundario. Si las alteraciones coinciden, el tumor secundario puede identificarse como metastásico; mientras que, si las alteraciones difieren, el tumor secundario puede identificarse como un tumor primario distinto.
El tumor puede identificarse mediante una biopsia. Los ejemplos no limitativos de biopsias que pueden emplearse incluyen la biopsia por aspiración con aguja fina, biopsia con aguja gruesa, biopsia asistida por vacío, biopsia guiada por imágenes, biopsia quirúrgica, biopsia incisional, biopsia endoscópica y biopsia de médula ósea.
La identificación del tumor puede realizarse mediante imágenes por resonancia magnética (IRM), que es una prueba que utiliza campos magnéticos para producir imágenes detalladas del cuerpo.
La identificación del tumor puede realizarse mediante una gammagrafía ósea. La identificación del tumor puede ser una tomografía computarizada (TC), también llamada exploración CAT.
La identificación del tumor puede realizarse mediante una exploración PET-CT integrada que combina imágenes de una exploración por tomografía por emisión de positrones (PET) y una exploración por tomografía computarizada (TC) que se han realizado al mismo tiempo mediante el uso de la misma máquina.
La identificación del tumor puede realizarse mediante una ecografía, que es una prueba de imágenes que utiliza ondas sonoras de alta frecuencia para localizar un tumor dentro del cuerpo.
Los diagnósticos complementarios que pueden usarse para ayudar a tratar a los pacientes, como una forma de medicina personalizada, pueden emplearse al identificar a un paciente que tiene un mutante FLT3 que está codificado por un gen FLT3 que tiene una mutación ITD. El diagnóstico complementario que puede utilizarse para ayudar a tratar a los pacientes, como una forma de medicina personalizada, puede emplearse al identificar a un paciente que tiene un mutante oncogénico de FLT3 que está codificado por un gen FLT3 que tiene una mutación ITD y una mutación F691L resistente a fármacos. El diagnóstico complementario que puede usarse para ayudar a tratar a los pacientes, como una forma de medicina personalizada, puede emplearse al identificar a un paciente que tiene un mutante oncogénico FLT3 que está codificado por un gen FLT3 que tiene una mutación ITD y una mutación D835Y resistente al fármaco. El diagnóstico complementario que puede utilizarse para ayudar a tratar a los pacientes, como una forma de medicina personalizada, puede emplearse al identificar a un paciente que tiene un mutante oncogénico FLT3 que está codificado por un gen FLT3 que tiene una mutación ITD, una mutación F691L resistente a fármacos y una mutación resistente al fármaco D835Y.
XI. Manipulación de FLT3
Las técnicas para la manipulación de ácidos nucleicos, tales como, por ejemplo, subclonación, sondas de marcaje (por ejemplo, marcaje de cebadores aleatorios al usar polimerasa de Klenow, traducción de mellas, amplificación), secuenciación, hibridación y similares están bien descritas en la literatura científica y de patentes, ver, p.ej, Sambrook, ed., Molecular Cloning: a Laboratory Manual (2nd ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, (1989); Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel, ed. John Wiley & Sons, Inc., New York (1997); Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology: Hybridization With Nucleic Acid Probes, Part I. Theory and Nucleic Acid Preparation, Tijssen, ed. Elsevier, N.Y. (1993).
Las secuencias de ácidos nucleicos pueden amplificarse de acuerdo con que sea necesario para uso adicional al usar métodos de amplificación, tales como PCR, métodos isotérmicos, métodos de círculo rodante, etc., que son bien conocidos por el experto en la materia. Ver, por ejemplo, Saiki, "Amplification of Genomic DNA" in PCR Protocols, Innis et al., Eds., Academic Press, San Diego, CA 1990, pp 13-20; Wharam y cols., Nucleic Acids Res.
2001 Jun 1;29(11): E54-E54; Hafner et al., Biotechniques 2001 Apr;30(4):852-6, 858, 860 passim; Zhong y cols., Biotechniques 2001 Apr; 30(4):852-6, 858, 860 passim.
Los ácidos nucleicos, vectores, cápsides, polipéptidos y similares pueden analizarse y cuantificarse mediante cualquiera de los medios generales bien conocidos por los expertos en la técnica. Estos incluyen, por ejemplo, métodos bioquímicos analíticos como RMN, espectrofotometría, radiografía, electroforesis, electroforesis capilar, cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), cromatografía en capa fina (TLC) y cromatografía de hiperdifusión, varios métodos inmunológicos, por ejemplo, reacciones de precipitación en gel o fluidos, inmunodifusión, inmunoelectroforesis, radioinmunoensayos (RIA), ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA), ensayos inmunofluorescentes, análisis Southern, análisis Northern, análisis de transferencia por puntos, electroforesis en gel (por ejemplo, SDS-PAGE), ácido nucleico o diana o señal métodos de amplificación, radiomarcaje, recuento de centelleo y cromatografía de afinidad.
La obtención y manipulación de ácidos nucleicos usados para practicar los métodos de la divulgación puede realizarse al clonar a partir de muestras genómicas y, si se desea, seleccionar y reclonar insertos aislados o amplificados de, por ejemplo, clones genómicos o clones de ADNc. Las fuentes de ácido nucleico utilizadas en los métodos de la presente divulgación incluyen bibliotecas genómicas o de ADNc contenidas en, por ejemplo, cromosomas artificiales de mamíferos (MAC), véase, por ejemplo, Patentes de Estados Unidos Nos. 5721 118; 6 025 155; cromosomas artificiales humanos, véase, por ejemplo, Rosenfeld (1997) Nat. Gineta. 15: 333-335; cromosomas artificiales de levadura (YAC); cromosomas artificiales bacterianos (BAC); Cromosomas artificiales P1, ver, p. Ej., Woon (1998) Genómica 50: 306-316; Vectores derivados de P1 (PAC), ver, p. Ej., Kern (1997) Biotechniques 23: 120-124; cósmidos, virus recombinantes, fagos o plásmidos.
Los ácidos nucleicos usados para practicar los métodos de la presente divulgación pueden unirse operativamente a un promotor. Un promotor puede ser un motivo o una serie de secuencias de control de ácido nucleico que dirigen la transcripción de un ácido nucleico. Un promotor puede incluir secuencias de ácido nucleico necesarias cerca del sitio de inicio de la transcripción, como, en el caso de un promotor de tipo polimerasa II, un elemento TATA. Un promotor también incluye opcionalmente elementos potenciadores o represores distales que pueden ubicarse hasta varios miles de pares de bases desde el sitio de inicio de la transcripción. Un promotor "constitutivo" es un promotor que está activo en la mayoría de las condiciones ambientales y de desarrollo. Un promotor "inducible" es un promotor que se encuentra bajo regulación ambiental o de desarrollo. Un promotor "específico de tejido" está activo en ciertos tipos de tejido de un organismo, pero no en otros tipos de tejido del mismo organismo. El término "operativamente enlazado" se refiere a un enlace funcional entre una secuencia de control de la expresión de ácidos nucleicos (como un promotor o una matriz de sitios de unión de factores de transcripción) y una segunda secuencia de ácidos nucleicos, en donde la secuencia de control de la expresión dirige la transcripción del ácido nucleico correspondiente a la segunda secuencia.
Los ácidos nucleicos usados para practicar los métodos de la presente divulgación también pueden proporcionarse en vectores de expresión y vehículos de clonación, por ejemplo, secuencias que codifican los polipéptidos usados para practicar los métodos de la presente divulgación. Los vectores de expresión y los portadores de clonación utilizados para practicar los métodos de la presente divulgación pueden comprender partículas virales, baculovirus, fagos, plásmidos, fagémidos, cósmidos, fósmidos, cromosomas artificiales bacterianos, ADN viral (por ejemplo, vaccinia, adenovirus, virus de la viruela fétida, pseudorrabia y derivados). de SV40), cromosomas artificiales basados en PI, plásmidos de levadura, cromosomas artificiales de levadura y cualquier otro vector específico para huéspedes específicos de interés (como bacilos, Aspergillus y levaduras). Los vectores usados para practicar los métodos de la presente divulgación pueden incluir secuencias de ADN cromosómicas, no cromosómicas y sintéticas. Los expertos en la técnica conocen un gran número de vectores adecuados y están disponibles comercialmente.
Los ácidos nucleicos usados para practicar los métodos de la presente divulgación pueden clonarse, si se desea, en cualquiera de una variedad de vectores al usar métodos biológicos moleculares rutinarios; se describen métodos para clonar ácidos nucleicos amplificados in vitro, por ejemplo, Patente de Estados Unidos No. 5426 039. Para facilitar la clonación de secuencias amplificadas, los sitios de enzimas de restricción pueden "construirse" en un par de cebadores de PCR. Los vectores pueden introducirse en un genoma o en el citoplasma o el núcleo de una célula y expresarse mediante una variedad de técnicas convencionales, bien descritas en la literatura científica y de patentes. Ver, por ejemplo, Roberts (1987) Nature 328: 731; Schneider (1995) Protein Expr. Purif. 6435: 10; Sambrook, Tijssen o Ausubel. Los vectores pueden aislarse de fuentes naturales, obtenerse de fuentes tales como bibliotecas ATCC o GenBank, o prepararse mediante métodos sintéticos o recombinantes. Por ejemplo, los ácidos nucleicos usados para practicar los métodos de la presente divulgación pueden expresarse en casetes de expresión, vectores o virus que se expresan de manera estable o transitoria en células (por ejemplo, sistemas de expresión episomal). Los marcadores de selección pueden incorporarse en casetes de expresión y vectores para conferir un fenotipo seleccionable en células y secuencias transformadas. Por ejemplo, los marcadores de selección pueden codificar el mantenimiento y la replicación episomal de manera que no se requiera la integración en el genoma del huésped.
En una modalidad, los ácidos nucleicos usados para practicar los métodos de la presente divulgación se administran in vivo para la expresión in situ de los péptidos o polipéptidos usados para practicar los métodos de la divulgación. Los ácidos nucleicos pueden administrarse como "ADN desnudo" (ver, p. Ej., Patente de Estados Unidos No. 5580 859) o en forma de un vector de expresión, por ejemplo, un virus recombinante. Los ácidos nucleicos pueden administrarse por cualquier vía, que incluye peri o intratumoralmente, como se describe a continuación. Los vectores administrados in vivo pueden derivar de genomas virales, incluidos virus de ADN y ARN con o sin envoltura modificados recombinantemente, seleccionados entre baculoviridiae, parvoviridiae, picornoviridiae, herpesveridiae, poxviridae, adenoviridiae o picornnaviridiae. También pueden emplearse vectores quiméricos que aprovechan los méritos ventajosos de cada una de las propiedades del vector parental (véase, por ejemplo, Feng (1997) Nature Biotechnology 15: 866-870). Dichos genomas virales pueden modificarse mediante técnicas de ADN recombinante para incluir los ácidos nucleicos usados para practicar los métodos de la presente divulgación; y se puede diseñar adicionalmente para que sea deficiente en replicación, replicación condicional o competente en replicación. En modalidades alternativas, los vectores se derivan del adenovirus (por ejemplo, vectores incompetentes para la replicación derivados del genoma del adenovirus humano, véase, por ejemplo, Patentes de Estados Unidos No. 6 096718; 6110458; 6113913; 5631 236); genomas adenoasociados virales y retrovirales. Los vectores retrovirales pueden incluir los basados en el virus de la leucemia murina (MuLV), el virus de la leucemia del mono gibón (GaLV), el virus de la inmunodeficiencia de simios (SIV), el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y combinaciones de los mismos; ver, por ejemplo, Patentes de Estados Unidos No. 6 117 681; 6 107 478; 5 658 775; 5 449 614; Buchscher (1992) J. Virol. 66: 2731-2739; Johann (1992) J. Virol. 66: 1635-1640). Los vectores basados en virus adenoasociados (AAV) pueden usarse para transducir células con ácidos nucleicos diana, por ejemplo, en la producción in vitro de ácidos nucleicos y péptidos, y en procedimientos de terapia génica in vivo y ex vivo; ver, por ejemplo, Patentes de Estados Unidos No. 6110456; 5474935; Okada (1996) Gene Ther. 3: 957-964.
La presente divulgación también se refiere al uso de proteínas de fusión y ácidos nucleicos que las codifican. Un polipéptido usado para practicar los métodos de la presente divulgación puede fusionarse con un péptido o polipéptido heterólogo, tal como péptidos de identificación N-terminal que imparten características deseadas, tales como mayor estabilidad o purificación simplificada. Los péptidos y polipéptidos usados para practicar los métodos de la presente divulgación también pueden sintetizarse y expresarse como proteínas de fusión con uno o más dominios adicionales enlazados a ellos para, por ejemplo, producir un péptido más inmunogénico, para aislar más fácilmente un péptido sintetizado recombinantemente, para identificar y aislar anticuerpos y células B que expresan anticuerpos, y similares. Los dominios que facilitan la detección y la purificación incluyen, por ejemplo, péptidos quelantes de metales como los tractos de polihistidina y módulos de histidina-triptófano que permiten la purificación de metales inmovilizados, dominios de proteína A que permiten la purificación de inmunoglobulina inmovilizada y el dominio utilizado en el sistema de purificación por afinidad/extensión FLAGS (Immunex Corp, Seattle WA). La inclusión de secuencias enlazadoras escindibles tales como Factor Xa o enteroquinasa (Invitrogen, San Diego CA) entre un dominio de purificación y el péptido o polipéptido que comprende el motivo para facilitar la purificación. Por ejemplo, un vector de expresión puede incluir una secuencia de ácido nucleico que codifica un epítopo unida a seis residuos de histidina seguida de una tiorredoxina y un sitio de escisión de enteroquinasa (ver p. Ej., Williams (1995) Bioquímica 34: 1787-1797; Dobeli (1998) Protein Expr. Purif. 12: 404-414). Los residuos de histidina facilitan la detección y purificación, mientras que el sitio de escisión de la enteroquinasa proporciona un medio para purificar el epítopo del resto de la proteína de fusión. En una modalidad, un ácido nucleico que codifica un polipéptido usado para practicar los métodos de la presente divulgación se ensambla en la fase apropiada con una secuencia líder capaz de dirigir la secreción del polipéptido traducido o fragmento del mismo. La tecnología perteneciente a los vectores que codifican proteínas de fusión y la aplicación de proteínas de fusión están bien descritas en la literatura científica y de patentes, ver, por ejemplo, Kroll (1993) DNA Cell. Biol. 12: 441-53.
Los ácidos nucleicos y polipéptidos usados para practicar los métodos de la presente divulgación pueden unirse a un soporte sólido, por ejemplo, para su uso en métodos de detección y diagnóstico. Los soportes sólidos pueden incluir, por ejemplo, membranas (por ejemplo, nitrocelulosa o nailon), una placa de microtitulación (por ejemplo, PVC, polipropileno o poliestireno), un tubo de ensayo (vidrio o plástico), una varilla (por ejemplo, vidrio, PVC, polipropileno, poliestireno, látex y similares), un tubo de microcentrífuga o una perla de vidrio, sílice, plástico, metal o polímero u otro sustrato, como papel. Un soporte sólido usa una columna que comprende un metal (por ejemplo, cobalto o níquel) que se une con especificidad a una etiqueta de histidina diseñada sobre un péptido.
La adhesión de moléculas a un soporte sólido puede ser directa (es decir, la molécula contacta con el soporte sólido) o indirecta (un "enlazador" está unido al soporte y la molécula de interés se une a este enlazador). Las moléculas pueden inmovilizarse covalentemente (p. Ej., Al utilizar grupos tiol reactivos individuales de residuos de cisteína (ver, p. Ej., Colliuod (1993) Bioconjugate Chem. 4: 528-536) o no covalentemente pero específicamente (por ejemplo, a través de anticuerpos inmovilizados (ver, por ejemplo, Schuhmann (1991) Adv. Mater. 3: 388-391; Lu (1995) Anal. Chem. 67: 83-87; the biotin/strepavidin system (see, e.g., Iwane (1997) Biophys. Biochem. Res. Comm. 230: 76-80); metal chelating, e.g., Langmuir-Blodgett films (see, e.g., Ng (1995) Langmuir 11:4048-55); metal-chelating selfassembled monolayers (see, e.g., Sigal (1996) Anal. Chem. 68: 490-497) for binding of polyhistidine fusions.
La unión indirecta puede lograrse al usar una variedad de enlazadores que están disponibles comercialmente. Los extremos reactivos pueden ser cualquiera de una variedad de funcionalidades que incluyen, pero no se limitan a: extremos que reaccionan con amino tales como ésteres activos de N-hidroxisuccinimida (NHS), imidoésteres, aldehídos, epóxidos, haluros de sulfonilo, isocianato, isotiocianato y haluros de nitroarilo; y extremos que reaccionan con tiol tales como piridil disulfuros, maleimidas, tioftalimidas y halógenos activos. Los reactivos de reticulación heterobifuncionales tienen dos extremos reactivos diferentes, p. Ej., un extremo reactivo con amino y un extremo reactivo con tiol, mientras que los reactivos homobifuncionales tienen dos extremos reactivos similares, p. Ej., Bismaleimidohexano (BMH) que permite la reticulación de compuestos que contienen sulfhidrilo. El espaciador puede tener una longitud variable y ser alifático o aromático. Los ejemplos de reactivos de reticulación homobifuncionales disponibles comercialmente incluyen, pero no se limitan a, los imidoésteres tales como dihidrocloruro de dimetil adipimidato (DMA); diclorhidrato de dimetil pimelimidato (DMP); y diclorhidrato de suberimidato de dimetilo (DMS). Los reactivos heterobifuncionales incluyen agentes de acoplamiento de ésteres activos halógeno-NHS activos disponibles comercialmente, tales como bromoacetato de N-succinimidilo y (4-yodoacetil)aminobenzoato de N-succinimidilo (SIAB) y los derivados de sulfosuccinimidilo tales como (4-yodoacetil)aminobenzoato de sulfosuccinimidilo (Pierce). Otro grupo de agentes de acoplamiento son los agentes heterobifuncionales y escindibles con tiol tales como 3-(2-pirididitio) propionato de N-succinimidilo (SPDP) (Pierce Chemicals, Rockford, IL).
También pueden usarse anticuerpos para unir polipéptidos y péptidos usados para practicar los métodos de la presente divulgación a un soporte sólido. Esto puede hacerse directamente al unir anticuerpos específicos de péptidos a la columna o puede hacerse al crear quimeras de proteínas de fusión que comprenden péptidos que contienen motivos unidos a, por ejemplo, un epítopo conocido (por ejemplo, un marcador (por ejemplo, FLAG, myc) o una secuencia de dominio constante de inmunoglobulina apropiada (una "inmunoadhesina", ver, p. ej., Capon (1989) Nature 377: 525-531 (1989).).
Los ácidos nucleicos o polipéptidos usados para practicar los métodos de la presente divulgación pueden inmovilizarse o aplicarse a una matriz. Las matrices pueden usarse para rastrear o monitorear bibliotecas de composiciones (porejemplo, moléculas pequeñas, anticuerpos, ácidos nucleicos, etc.) por su capacidad para unirse o modular la actividad de un ácido nucleico o un polipéptido usado para practicar los métodos de la presente. divulgación. Por ejemplo, en una modalidad de la divulgación, un parámetro monitorizado es la expresión de la transcripción de un gen que comprende un ácido nucleico usado para practicar los métodos de la presente divulgación. Una o más, o todas las transcripciones de una célula pueden medirse por hibridación de una muestra que comprende transcriptos de la célula, o ácidos nucleicos representativos o complementarios de las transcripciones de una célula, por hibridación con ácidos nucleicos inmovilizados en una matriz, o " biochip". Mediante el uso de una "matriz" de ácidos nucleicos en un microchip, algunas o todas las transcripciones de una célula pueden cuantificarse simultáneamente. Alternativamente, también pueden usarse matrices que comprenden el ácido nucleico genómico para determinar el genotipo de una cepa de nueva ingeniería obtenida mediante los métodos de la presente divulgación. También pueden usarse matrices de polipéptidos para cuantificar simultáneamente una pluralidad de proteínas.
Los términos "matriz" o "micromatriz" o "biochip" o "chip" como se usan en este documento son una pluralidad de elementos diana, cada elemento diana comprende una cantidad definida de uno o más polipéptidos (incluidos anticuerpos) o ácidos nucleicos inmovilizados en un área de una superficie de sustrato. Al poner en práctica los métodos de la presente divulgación, puede incorporarse en su totalidad o en parte cualquier matriz y/o método conocido de fabricación y uso de matrices, o variaciones de la misma, como se describe, por ejemplo, en las Patentes de Estados Unidos No. 6277628; 6277489; 6261 776; 6258606; 6054270; 6048695; 6045996; 6 022963; 6013440; 5965452; 5959098; 5856174; 5830645; 5770456; 5632957; 5556752; 5143854; 5807 522; 5 800 992; 5 744 305; 5 700 637; 5 556 752; 5 434 049; ver también, por ejemplo, los documentos WO 99/51773; WO 99/09217; WO 97/46313; WO 96/17958; ver también, por ejemplo, Johnston (1998) Curr. Biol. 8: R171-R174; Schummer (1997) Biotechniques 23: 1087-1092; Kern (1997) Biotechniques 23: 120-124; Solinas-Toldo (1997) Genes, Chromosomes & Cancer 20: 399-407; Bowtell (1999) Nature Genetics Supp. 21: 25-32. Ver también publicado Solicitudes de Patente de Estados Unidos No. 20010018642; 20010019827; 20010016322; 20010014449; 20010014448;20010012537; 20010008765.
Células Huésped y Células Transformadas
La presente divulgación también proporciona una célula transformada que comprende una secuencia de ácido nucleico utilizada para practicar los métodos de la presente divulgación, por ejemplo, una secuencia que codifica un polipéptido utilizado para practicar los métodos de la presente divulgación, o un vector utilizado para practicar los métodos de la presente divulgación. La célula huésped puede ser cualquiera de las células huésped familiares para los expertos en la técnica, que incluye las células procariotas, células eucariotas, tales como células bacterianas, células fúngicas, células de levadura, células de mamíferos, células de insectos o células vegetales. Las células bacterianas ejemplares incluyen E. coli, Streptomyces, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium y varias especies dentro de los géneros Pseudomonas, Streptomyces y Staphylococcus. Las células de insectos ejemplares incluyen Drosophila S2 y Spodoptera Sf9. Las células animales ejemplares incluyen CHO, COS o melanoma de Bowes o cualquier línea celular humana o de ratón. La selección de un hospedero apropiado está dentro de las capacidades de los expertos en la técnica.
Los vectores pueden introducirse en las células hospedadoras al usar cualquiera de una variedad de técnicas, que incluyen transformación, transfección, transducción, infección viral, pistolas de genes o transferencia de genes mediada por Ti. Los métodos particulares incluyen transfección con fosfato cálcico, transfección mediada por DEAE-Dextrano, lipofección o electroporación.
Las células huésped manipuladas pueden cultivarse en medios de nutrientes convencionales modificados de acuerdo con sea apropiado para activar promotores, seleccionar transformantes o amplificar los genes usados para practicar los métodos de la presente divulgación. Después de la transformación de una cepa huésped adecuada y el crecimiento de la cepa huésped a una densidad celular apropiada, el promotor seleccionado puede inducirse por medios apropiados (por ejemplo, cambio de temperatura o inducción química) y las células pueden cultivarse durante un período adicional para permitirles producir el polipéptido deseado o un fragmento del mismo.
Las células pueden recolectarse por centrifugación, romperse por medios físicos o químicos, y el extracto crudo resultante se retiene para una purificación adicional. Las células microbianas empleadas para la expresión de proteínas pueden romperse mediante cualquier método conveniente, que incluye ciclos de congelacióndescongelación, sonicación, alteración mecánica o uso de agentes de lisis celular. Dichos métodos son bien conocidos por los expertos en la técnica. El polipéptido o fragmento expresado puede recuperarse y purificarse a partir de cultivos de células recombinantes mediante métodos que incluyen la precipitación con sulfato de amonio o etanol, extracción con ácido, cromatografía de intercambio aniónico o catiónico, cromatografía de fosfocelulosa, cromatografía de interacción hidrófoba, cromatografía de afinidad, cromatografía de hidroxiapatita y cromatografía de lectina. Las etapas de replegamiento de proteínas pueden usarse, de acuerdo con sea necesario, para completar la configuración del polipéptido. Si se desea, puede emplearse cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) para las etapas finales de purificación.
También pueden emplearse varios sistemas de cultivo de células de mamífero para expresar proteína recombinante. Los ejemplos de sistemas de expresión de mamíferos incluyen las líneas COS-7 de fibroblastos de riñón de mono y otras líneas celulares capaces de expresar proteínas a partir de un vector compatible, como las líneas celulares C127, 3T3, CHO, HeLa y BHK.
Las construcciones en las células hospedadoras pueden usarse de una manera convencional para producir el producto génico codificado por la secuencia recombinante. En dependencia del hospedador empleado en un procedimiento de producción recombinante, los polipéptidos producidos por las células hospedadoras que contienen el vector pueden estar glicosilados o no glicosilados. Los polipéptidos usados para practicar los métodos de la presente divulgación pueden incluir o no también un residuo de aminoácido de metionina inicial.
También pueden emplearse sistemas de traducción sin células para producir un polipéptido usado para practicar los métodos de la presente divulgación. Los sistemas de traducción libres de células pueden usar ARNm transcritos a partir de una construcción de ADN que comprende un promotor unido operativamente a un ácido nucleico que codifica el polipéptido o fragmento del mismo. En algunas modalidades, la construcción de ADN puede linealizarse antes de realizar una reacción de transcripción in vitro. El ARNm transcrito se incuba luego con un extracto de traducción libre de células apropiado, tal como un extracto de reticulocitos de conejo, para producir el polipéptido deseado o fragmento del mismo.
Los vectores de expresión pueden contener uno o más genes marcadores seleccionables para proporcionar un rasgo fenotípico para la selección de células hospedadoras transformadas como el dihidrofolato reductasa o la resistencia a la neomicina para el cultivo de células eucariotas, o como la resistencia a la tetraciclina o ampicilina en E. coli.
Para la expresión transitoria en células de mamífero, puede incorporarse ADNc que codifica un polipéptido de interés en un vector de expresión de mamífero, por ejemplo, pcDNA1, que está disponible comercialmente en Invitrogen Corporation (San Diego, CA, EE.UU.; Número de catálogo V490-20). Se trata de un vector plásmido multifuncional de 4,2 kb diseñado para la expresión de ADNc en sistemas eucariotas y el análisis de ADNc en procariotas; en el vector se incorporan el promotor y potenciador de CMV, el segmento de empalme y la señal de poliadenilación, un origen de replicación del virus SV40 y Polyoma, y el origen M13 para rescatar ADN monocatenario para la secuenciación y mutagénesis, los promotores de ARN Sp6 y T7 para la producción de transcritos de ARN sentido y antisentido y un origen de plásmido de alta copia similar a Col E1. Un polienlazador se localiza apropiadamente corriente abajo del promotor c Mv (y 3 'del promotor T7).
El inserto de ADNc puede liberarse primero del fagémido anterior incorporado en los sitios de restricción apropiados en el polienlazador pcDNAI. Se puede realizar la secuenciación a través de las uniones para confirmar la orientación adecuada del inserto en pcDNAI. A continuación, el plásmido resultante puede introducirse para expresión transitoria en una célula hospedadora de mamífero seleccionada, por ejemplo, las células de tipo fibroblasto derivadas de mono del linaje COS-1 (disponibles en American Type Culture Collection, Rockville, Maryland como ATCC CRL 1650).
Para la expresión transitoria del ADN que codifica la proteína, por ejemplo, las células COS-1 pueden transfectarse con aproximadamente 8 g de ADN por 106 células c Os , por transfección de ADN mediada por DEAE y se trataron con cloroquina de acuerdo con los procedimientos descritos por Sambrook y otros, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor NY, págs. 16.30-16.37. Un método de ejemplo es el siguiente. Brevemente, las células COS-1 se cultivan en placa a una densidad de 5 x 106 células/placa y luego se cultivan durante 24 horas en medio DMEM/F12 suplementado con FBS. Luego se retira el medio y las células se lavan en PBS y luego en medio. A continuación, se aplica una solución de transfección que contiene DEAE dextrano (0,4 mg/mL), cloroquina 100 pM, NuSerum al 10 %, ADN (0,4 mg/mL) en medio DMEM/F12 sobre las células en un volumen de 10 mL. Después de la incubación durante 3 horas a 37 °C, las células se lavan en PBS y medio como se acaba de describir y luego se someten a choque durante 1 minuto con DMSO al 10 % en medio DMEM/F12. Las células se dejan crecer durante 2-3 días en medio suplementado con FBS al 10 %, y al final de la incubación, las placas se colocan en hielo, se lavan con PBS enfriado con hielo y luego se retiran raspando. A continuación, las células se recogen mediante centrifugación a 1000 rpm durante 10 minutos y el sedimento celular se congela en nitrógeno líquido, para su uso posterior en la expresión de proteínas. El análisis de transferencia Northern de una alícuota descongelada de células congeladas puede usarse para confirmar la expresión del ADNc que codifica el receptor en las células almacenadas.
De manera similar, también se pueden preparar líneas celulares transfectadas de manera estable, por ejemplo, al usar dos tipos de células diferentes como huésped: CHO K1 y CHO Pro5. Para construir estas líneas celulares, puede incorporarse ADNc que codifica la proteína relevante en el vector de expresión de mamífero pRC/CMV (Invitrogen), que permite una expresión estable. La inserción en este sitio coloca el ADNc bajo el control de expresión del promotor del citomegalovirus y corriente arriba del sitio de poliadenilación y terminador del gen de la hormona del crecimiento bovino, y en un vector control que comprende el gen de resistencia a la neomicina (impulsado por el promotor temprano de SV40) como marcador seleccionable.
Un protocolo ejemplar para introducir plásmidos construidos como se describe anteriormente es el siguiente. Las células CHO huésped se siembran primero a una densidad de 5 * 105 en 10 % de medio MEM suplementado con FBS. Después de crecimiento durante 24 horas, se agrega medio fresco a las placas y tres horas más tarde, las células se transfectan al usar el procedimiento de coprecipitación de ADN-fosfato de calcio (Sambrook y otros, supra). Brevemente, se mezclan 3 pg de ADN y se incuban con una solución tamponada de calcio durante 10 minutos a temperatura ambiente. Se agrega un volumen igual de solución tamponada de fosfato y la suspensión se incuba durante 15 minutos a temperatura ambiente. A continuación, la suspensión incubada se aplica a las células durante 4 horas, se retira y las células se someten a choque con medio que contiene glicerol al 15 %. Tres minutos más tarde, las células se lavan con medio y se incuban durante 24 horas en condiciones normales de crecimiento. Las células resistentes a la neomicina se seleccionan en medio alfa-MEM complementado con FBS al 10 % que contiene G418 (1 mg/mL). Las colonias individuales de células resistentes a G418 se aíslan aproximadamente 2-3 semanas después, se seleccionan clonalmente y luego se propagan con fines de ensayo.
Ejemplos
Los ejemplos siguientes representan el procedimiento sintético general para los compuestos descritos en este documento. La síntesis de los compuestos descritos en el presente documento no está limitada por estos ejemplos y esquemas. Un experto en la técnica sabrá que pueden usarse otros procedimientos para sintetizar los compuestos descritos en este documento, y que los procedimientos descritos en los ejemplos y esquemas son solo uno de tales procedimientos. En las descripciones siguientes, un experto en la técnica reconocería que las condiciones de reacción específicas, los reactivos añadidos, los disolventes y las temperaturas de reacción pueden modificarse para la síntesis de compuestos específicos que caen dentro del alcance de esta divulgación. A menos que se especifique lo contrario, los compuestos intermediarios en los ejemplos a continuación, que no contienen una descripción de cómo se fabrican, están disponibles comercialmente para un experto en la técnica, o pueden ser sintetizados por el experto en la materia al utilizar moléculas precursoras y sintéticas disponibles comercialmente y métodos conocidos en la técnica.
A menos que se especifique lo contrario, los compuestos intermediarios en los ejemplos a continuación, que no contienen una descripción de cómo se fabrican, están disponibles comercialmente para un experto en la técnica, o pueden ser sintetizados por el experto en la materia al utilizar el conocimiento y las técnicas conocidas en la materia. En la mayoría de los casos, pueden usarse técnicas alternativas. Los ejemplos pretenden ser ilustrativos y no son limitantes o restrictivos del alcance de la divulgación.
Ejemplos Sintéticos
Abreviaturas y acrónimos estándar de acuerdo con se definen en J. Org. Chem. 200772 (1): 23A-24A se utilizan en el presente documento. Otras abreviaturas y acrónimos usados en este documento se describen anteriormente. Ejemplo 1
El compuesto P-0013 se prepara en cuatro pasos a partir de 5-bromo-2-fenil-1H-pirrolo[2,3-b]piridina 1, ácido 6-bromopicolínico 3 y tere -butilpiperidin-4-ilcarbamato 4 como se muestra en el esquema 1.
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Paso 1 - Preparación de 2-fenil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina, 2: Al 5-bromo-2-fenil-1H-pirrolo[2,3-b]piridina 1 (21 g, 77 mmol) y 4,4,5,5-tetrametil-2-(4,4,5,5-tetrametil -1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,3,2-dioxaborolano (23,43 g, 92 mmol) en DMF (308 mL) se añadió acetato de potasio (22,64 g, 231 mmol) y \ complejo [1,1'-Bis(difenilpbosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) diclorometano (6,28 g, 7,69 mmol) y la mezcla se calentó a 110 °C durante la noche. Después de enfriar, la reacción se vertió en agua (10 volúmenes), se diluyó con acetato de etilo y se filtró a través de Celite al lavar la torta con acetato de etilo. La capa orgánica se separó y se concentró a presión reducida. El residuo bruto se trituró con MTBE y el sólido se recogió por filtración, lo cual dio como resultado el compuesto 2 (12 g, 49 % de rendimiento) en forma de un sólido marrón.
Paso 2- Preparación de N-[1-(6-bromopiridin-2-carbonil) -4-piperidil] carbamato de terc-butilo, 5: Al ácido 6-bromopicolínico (0,3 g, 1,49 mmol) 3 en tetrahidrofurano (5 mL) se añadió HBTU (0,2 g, 0,53 mmol), seguido de trietilamina (0,2 mL, 1,43 mmol). La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos. A esta suspensión se le añadió piperidin-4-ilcarbamato de terc-butilo (0,35 g, 1,75 mmol) 4 en N, N-dimetilformamida (1 mL). La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en agua. El precipitado se recogió, se lavó con acetato de etilo y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar el compuesto 5 como un sólido blanquecino (0,2 g, 35 %). MS ESI [M (-BOC) H ]+ = 284,85/286,55.
Paso 3 - Preparación de N-[1-[6-(2-fenil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)piridin-2-carbonil]-4-piperidil] carbamato de tercbutilo, P-0017: A una mezcla de 2-fenil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina (0,10 g, 0,31 mmol) 2, N-[1-(6-aminopiridin-2-carbonil)-4-piperidil]carbamato de terc-butilo (0,099 mg, 0,31 mmol) 5 y complejo de [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) diclorometano (24 mg, 0,031 mmol) en dioxano (3 mL) se añadió hidróxido de potasio acuoso (1 mL, 1 M). La mezcla de reacción se irradió en un reactor de microondas a 130 °C durante 20 minutos. La mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se recogió, se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de la filtración del agente de secado y la evaporación del disolvente, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar el compuesto P-0017 en forma de un sólido blanquecino (0,07 g, 45 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 498,00.
Etapa 4 - Preparación de (4-amino-1-piperidil)-[6-(2-fenil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-2-piridil]metanona. P-0013: A una solución de N-[1-[6-(2-fenil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) piridme-2-carbonil]-4-piperidil] carbamato de terc-butilo (0,06 g, 0,12 mmol) P-0017 en tetrahidrofurano (3 mL) se añadió ácido clorhídrico (2 mL, 4 M). La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa para proporcionar el compuesto P-0013 en forma de un sólido blanco (19 mg, 39 %). MS ESI [M+H+]+ = 397,90.
Los siguientes compuestos pueden prepararse mediante la ruta sintética representada en el Esquema 1: P-0003, P-0002, P-0005, P-0006, P-0030, P-0032, P-0034, P-0035, P-0046, P-0047, P-0048, P-0050, P-0098 y P-0140.
Ejemplo 2
El compuesto P-0049 se prepara en cuatro pasos a partir de 1-(bencenosulfonil)-5-bromo-2-yodo-pirrolo[2,3-b]piridina 8, 1,3-dimetil-4-(4,4,5, 5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il) pirazol 9, ácido 6-bromopiridin-2-carboxílico 12 y N-metil-N-pirrolidin-3-il-carbamato de terc-butilo 13 como se muestra en el esquema 2.
Figure imgf000068_0001
Paso 1- Preparación de 1-(bencenosulfonil)-5-bromo-2-(1,3-dimetilpirazol-4-il) pirrolo[2,3-b]piridina, 10: Una mezcla de 1-(bencenosulfonil)-5 -bromo-2-yodo-pirrolo[2,3-b]piridina 8 (0,5 g, 1,08 mmol), 1,3-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)pirazol 9 (0,31 g, 1,4 mmol), carbonato de potasio acuoso (1,08 mL, 2,5 M), tetraquis(trifenilfosfino)paladio (0) (0,06 g, 0,05 mmol) en dioxano se agitó a 80 °C durante 18 h. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho corto de Celite. El filtrado se distribuyó entre acetato de etilo y una solución de cloruro de amonio (acuosa saturada). La capa orgánica se recogió y se lavó con salmuera, luego se secó sobre sulfato de magnesio. Después de eliminar el agente de secado por filtración y evaporación del disolvente, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar el compuesto 10 como un aceite incoloro (0,11 g, 24 %).
Paso 2-Preparación de 1-(bencenosulfonil)-2-(1,3-dimetilpirazol-4-il)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il) pirrolo[2,3-b]piridina, 11: Una mezcla de 1-(bencenosulfonil)-5-bromo-2-(1,3-dimetilpirazol-4-il) pirrolo[2,3-b]piridina 10 (110 mg, 0,26 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,3,2-dioxaborolano (80,96 mg, 0,32 mmol), complejo de diclorometano de [1,1'-bis (difenilfosfino) ferroceno] dicloropaladio (II) (0,04 g, 0,05 mmol) y acetato de potasio (0,05 mL, 0,77 mmol) en DMF con nitrógeno y se dejó agitar a 90 °C durante 18 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El pH del filtrado se ajustó con ácido clorhídrico acuoso (1 N) y luego se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se recogió y se lavó con salmuera, luego se secó sobre sulfato de magnesio. Después de eliminar el agente de secado por filtración y evaporación del disolvente, el residuo se secó al vacío para proporcionar el compuesto 11. Este material se utilizó en la siguiente etapa de reacción sin más purificación (0,1 g, 80 %).
Paso 3 - Preparación de N-[1-(6-bromopiridin-2-carbonil) pirrolidin-3-il]-N-metilcarbamato de terc-butilo, 14: Una mezcla de ácido 6-bromopiridin-2-carboxílico 12 (0,6 g, 2,97 mmol), trietilamina (1,45 mL, 10,4 mmol) y HBTU (1,18 g, 3,11 mmol) en THF se dejaron agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos. A continuación, a esta mezcla se le añadió N-metil-N-pirrolidin-3-il-carbamato 13 de terc-butilo (0,65 g, 3,25 mmol). La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 18 h. El pH de la mezcla de reacción se ajustó con ácido clorhídrico acuoso (1 N) y luego se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera, luego se secó sobre sulfato de magnesio. Después de la eliminación de agente secante y el solvente, el residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice para proporcionar el compuesto 14 (430 mg, 38 %).
Etapa 4 - Preparación de [6-[2-(1,3-dimetilpirazol-4-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il]-2-piridil]-[3-(metilamin) pirrolidin-1-il]metanona, P-0049: Una mezcla de 1-(bencenosulfonil)-2-(1,3-dimetilpirazol-4-il)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1, 3,2-dioxaborolan-2-il) pirrolo[2,3-b]piridina 11 (100 mg, 0,21 mmol), N-[1-(6-bromopiridin-2-carbonil) pirrolidin-3-il]-N-metilcarbamato de terc-butilo 14 (72,3 mg, 0,19 mmol), carbonato potásico acuoso (0,2 mL, 2,5 M) y \ complejo [1,1'-bis (difenilfosfino) ferroceno] dicloropaladio (II) diclorometano (0,03 g, 0,04 mmol) en DMF se dejó agitar a 115 °C durante 30 minutos con irradiación de microondas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El pH del filtrado se ajustó con cloruro de amonio acuoso y luego se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera, luego se secó sobre sulfato de magnesio. Después de eliminar el agente de secado y el disolvente, el residuo se secó al vacío para proporcionar el compuesto 15 que se usó sin purificación adicional. Al compuesto 15 en THF se le añadió hidróxido de potasio en metanol (1,5 mL, 1 N). La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente por dos horas. El pH de la mezcla de reacción se ajustó con ácido clorhídrico acuoso (1 N) y luego se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se recogió y se lavó con salmuera y luego se secó sobre sulfato de magnesio. Después de eliminar el agente de secado y el disolvente, el residuo se secó al vacío para proporcionar el compuesto 16 que se usó sin purificación adicional.
Al compuesto 16 en DCM se le añadió TFA (0,3 mL). La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente por dos horas. La mezcla de reacción se secó al vacío después de eliminar el disolvente a presión reducida. El residuo se distribuyó entre diclorometano y una solución saturada de bicarbonato de sodio. La capa orgánica se recogió y se lavó con salmuera, luego se secó sobre sulfato de magnesio. Después de la eliminación del agente secante y el solvente, el residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice de fase reversa para proporcionar el compuesto P-0049 (9 mg, 10 %). MS ESI [M+H+]+ = 416,30.
Los siguientes compuestos pueden prepararse mediante la ruta sintética representada en el esquema 2: P-0001, P-0055, P-0058, P-0060, P-0061, P-0062, P-0112, P-0113, P-0064, P-0065, P-0116, P-0130, P-0133, P-0134, P-0144, P-0145, P-0152, P-0153, P-0154, P-0155 y P-0158.
Ejemplo 3
El Compuesto P-0100 y el Compuesto 28 se preparan a partir de 1-(bencenosulfonil)-5-bromo-2-fenil-pirrolo[2,3-b]piridina 18 (preparado de manera análoga al esquema 2), 6-bromopicolinato de metilo 20 como se muestra en el esquema 3.
Figure imgf000070_0001
Etapa 1: Preparación de 2-fenil-1 -(fenilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina, 19: una mezcla de 1-(bencenosulfonil)-5-bromo-2-fenil-pirrolo[2,3-b]piridina 18 (50 g, 121 mmol), bis(pinacolato)diboro (36,9 g, 145 mmol, 1,2 equiv.), acetato de potasio (35,6 g, 363 mmol) y \complejo de [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) diclorometano (9,88 g, 12,10 mmol) en DMF (484 ml) a 80 °C durante 4 horas. Después de enfriar, la reacción se vertió en agua (4 L) y se diluyó con acetato de etilo (1 L). La capa orgánica se separó, se filtró a través de Celite al lavar la torta con acetato de etilo (200 mL). Los filtrados combinados se concentraron a presión reducida. El residuo bruto se disolvió en una cantidad mínima de diclorometano y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice al eluir con un gradiente de acetato de etilo del 0 al 100 % en heptanos. El producto se trituró con MTBE (-100 mL) para dar el compuesto 19 (26,7 g, 48 % de rendimiento) en forma de un sólido rosa.
Etapa 2 - Preparación de 6-(2-fenil-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)picolinato de metilo, 21: Una suspensión de 2-fenil-1-(fenilsulfonilo)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina 19 (16,7 g, 36,3 mmol), 6-bromopicolinato de metilo 20 (9,40 g, 43,5 mmol), carbonato de potasio (15,04 g, 109 mmol) y complejo [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno] dicloropaladio (II) diclorometano (1,48 g, 1,81 mmol) en dioxano (150 mL) y agua (30 mL) se calentó a 90 °C durante 2 horas. La reacción se diluyó con acetato de etilo (500 mL) y agua (500 mL). La capa orgánica se separó y se concentró a presión reducida para dar el producto bruto que se disolvió en una cantidad mínima de diclorometano y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice, al eluir con un gradiente de acetato de etilo del 0 al 100 % en heptanos para dar el compuesto 21 (15 g, 88 % de rendimiento) como una espuma de color tostado.
Etapa 3-Preparación de ácido 6-(2-fenil-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolínico, 2 M de hidróxido de litio 22 (160 mL, 319 mmol) se añadieron a una solución de 6-(2-fenil-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)picolinato de metilo 21 (15 g, 31,9 mmol) en THF (320 mL). La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se vertió en HCl acuoso 1 N (0,5 L) y se extrajo con acetato de etilo (500 mL). La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera y se concentró a presión reducida. El producto bruto se disolvió en una cantidad mínima de diclorometano y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice, al eluir con un gradiente de metanol del 0 al 10 % en diclorometano. El sólido similar a una espuma se trituró con una mezcla 1 a 1 de heptanos y MTBE (~ 100 ml) para dar el compuesto 22 (12,5 g, rendimiento del 86%) en forma de un sólido blanquecino.
Paso 4 - Preparación de ácido 6-(2-fenil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolínico, 23: Se añadió fluoruro de tetrabutilamonio trihidratado (20,78 g, 65,9 mmol) a una solución de ácido 6 - (2-fenil-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolínico 22 (7,5 g, 16,47 mmol) en THF (165 mL). Se dejó que la reacción se agitara a temperatura ambiente durante el fin de semana, momento en el que la CL/EM indicó que la reacción se había completado en su mayor parte. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se trituró con diclorometano (~ 50 mL) y se filtró para proporcionar la sal de tetrabutilamonio del producto que se suspendió en agua (200 mL) y se acidificó con HCl acuoso 1 N (~ 10 mL). El precipitado fino resultante se filtró, se lavó con agua (~ 100 mL) y se secó al vacío a 50 °C durante la noche para dar el compuesto 23 (1,9 g, 37 % de rendimiento) como un sólido blanco. Etapa 5-Preparación de 6-[1-(bencenosulfonil)-2-fenil-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il]-N-(2-ciano-2-metil-propil) piridina-2-carboxamida, 25: Al ácido 6-[1-(bencenosulfonil)-2-fenil-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il]piridin-2-carboxílico 22 (0,4 g, 0,88 mmol) en tetrahidrofurano (10 mL) se añadió HBTU (0,4 g, 1,1 mmol), seguido de trietilamina (0,5 mL, 3,6 mmol). La suspensión se dejó agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos. A esta suspensión se le añadió 3-amino-2,2-dimetilpropanonitrilo 24 (0,1 g, 1,43 mmol) en tetrahidrofurano (3 mL). La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se vertió en agua, y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se recogió, se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de la eliminación del agente secante y el solvente, el residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice para proporcionar el compuesto 25 como un sólido blanco.
Etapa 6 - Preparación de N-(2-ciano-2-metil-propil)-6-(2-fenil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) piridin-2-carboxamida, P-0100: La 6-[1-(bencenosulfonil)-2-fenil-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il]-N-(2-ciano-2-metil-propil) piridin-2-carboxamida 25 se disolvió en THF (20 mL) ya esta solución se le añadió fluoruro de tetrabutilamonio en THF (1 N, 2 mL, 2 mmol). La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se separó, se lavó con agua (4 x 100 mL), salmuera y se secó sobre sulfato de sodio. Después de eliminar el agente de secado y el disolvente, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar N-(2-ciano-2-metil-propil)-6-(2-fenil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) piridin-2-carboxamida P-0100 como un sólido blanquecino (0,23 g, 66 %). m S (ESI)[M+H+]+= 395,90. Etapa 7 - Preparación de 2-oxa-7-azaespiro [4.4] nonan-7-il-) 6-(2-fenil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-2-piridil]metanona, 28: Al ácido 6-(2-fenil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) piridin-2-carboxílico 23 (21 mg, 0,07 mmol) en tetrahidrofurano (3 mL) se le añadió HBTU (25 mg, 0,066 mmol), seguido de trietilamina (0,1 mL, 0,72 mmol). La suspensión se dejó agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos. A esta suspensión se le añadió 8-oxa-3-azaespiro [4,4]nonano 27 (10 mg, 0,08 mmol). La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se vertió en agua, y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se recogió, se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de la eliminación del agente secante y el solvente, el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar el compuesto 28 como un sólido amarillo pálido (10 g, 34 %). MS (ESI) [M+H+]+= 424,90.
Los siguientes compuestos pueden prepararse mediante la ruta sintética representada en el esquema 3: P-0015, P-0013, P-0017, P-0018, P-0020, P-0023, P-0024, P-0025, P-0026, P-0031, P-0033, P-0036, P-0037, P-0038, P-0040, P-0041, P-0045, P-0046, P-0043, P-0057, P-0051, P -0052, P-0054, P-0066, P-0067, P-0068, P-0069, P-0075, P-0076, P-0077, P-0078, P-0079, P-0080, P-0081 , P-0082, P-0083, P-0084, P-0085, P-0087, P-0089, P-0090, P-0091, P-0092, P-0093, P-0094, P-0095, P -0096, P-0097, P-0098, P-0099, P-0100, P-0101, P-0102, P-0103, P-0104, P-0105, P-0106, P-0110, P-0111 , P-0114, P-0115, P-0117, P-0118, P-0119, P-0120, P-0122, P-0124, P-0128, P-0129, P-0137, P-0146, P -0149, P-0150, P-0156 y P-0151.
Ejemplo 4
El compuesto P-0012 se prepara a partir de ácido 5-bromo-1H-indazol-3-carboxílico 29, piperidin-4-ilcarbamato de tere- butilo 4 y 2-fenil-1-(fenilsulfonil)-5-(4,4,5, 5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina 19 como se muestra en el Esquema 4.
Figure imgf000072_0001
Etapa 1 - Preparación de N-[1-(5-bromo-1H-indazol-3-carbonil) -4-piperidil] carbamato de terc-butilo, 30: Una solución de ácido 5-bromo-1H-indazol-3-carboxílico se dejó agitar 29 (1 g, 4,15 mmol) y HBTU (2,36 g, 6,22 mmol) en dimetilformamida (20 mL) a temperatura ambiente durante 40 minutos. Se añadieron N-(4-piperidil) carbamato de terc-butilo (1,08 g, 5,39 mmol) y N, N-diisopropiletilamina (1,08 ml, 6,22 mmol) y se dejó agitar la reacción a temperatura ambiente durante 18 h. La reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar N-[1-(5-bromo-1H-indazol-3-carbonil) -4-piperidil] carbamato de terc-butilo 30 (0,80 g, 46 %).
Etapa 2-Preparación de (1-(5-(2-fenil-1-(fenilsulfonil)-1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-1H-indazol-3-carbonilo) piperidin-4-il) carbamato de terc-butilo, 32: La 1-(bencenosulfonil)-2-fenil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il) pirrolo[2,3 -b]piridina 19 (630 mg, 1,37 mmol), N-[1-(5-bromo-1H-indazol-3-carbonil) -4-piperidil] carbamato de terc-butilo 30 (695 mg, 1,64 mmol), y el complejo de 1,1'-bis (difenilfosfino) ferroceno-paladio (ii) dicloruro y diclorometano (0,11 g, 0,14 mmol) se combinaron y se dejó agitar en 1,4-dioxano (13 mL). Luego, se añadió carbonato de potasio 1 M (4,11 mL) mediante una jeringa. La reacción se irradió en un reactor de microondas a 120 °C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de Celite. La solución orgánica bruta se evaporó sobre gel de sílice, se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (0-15 % de metanol/diclorometano) para proporcionar (1-(5-(2-fenil-1-(fenilsulfonN)-1H-pirrolo[2,3-b]pindin-5-il)-1H-indazol-3-carbonil) piperidin-4-il) carbamato de terc-butilo 32.
Etapa 3: Preparación de (4-amino-1-piperidil)-[5-(2-fenil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-1H-indazol-3-il]metanona, P-0012: A una solución de (1 -(5-(2-fenil-1 -(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-1H-indazol-3 -carbonil) piperidin-4-il) carbamato de terc-butilo 32 en tetrahidrofurano (10 mL) se añadió hidróxido potásico en metanol (solución 1 M, 3 mL) y la mezcla de reacción se dejó en agitación durante 3 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se acidificó con HCl acuoso 1 M y luego se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a sequedad. Este producto bruto se disolvió en una solución al 25 % de ácido trifluoroacético en diclorometano (6 mL) y se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró sobre gel de sílice. La purificación mediante cromatografía en columna de fase inversa C18 (0-45 % de acetonitrilo/agua) proporcionó el producto deseado, que se purificó adicionalmente mediante trituración con metanol para producir (4-amino-1-piperidil)-[5-(2-fenil-1H -pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-1H-indazol-3-il]metanona P-0012 (89 mg, 15 % en los pasos 2 y 3).
Los siguientes compuestos se pueden preparar mediante la ruta sintética representada en el esquema 4: P-0011, P-0016, P-0019, P-0021, P-0022, P-0027, P-0028, P-0029, P-0039, P-0044, P-0042, P-0056, P-0053 y P-0059.
Ejemplo 5
El compuesto P-0008 se prepara a partir de 5-bromo-2-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina 34 como se muestra en el Esquema 5.
Figure imgf000073_0001
Etapa 1 - Preparación de 3-[1-(bencenosulfonil)-5-bromo-pirrolo[2,3-b]piridin-2-il] prop-2-in-1-ol, 35: Una mezcla de 5-bromo -2-yodo-1 -(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina 34 (250 mg, 0,54 mmol), prop-2-in-1 -ol (34 mg, 0,62 mmol), trietilamina (0,75 mL, 5,4 mmol), yoduro de cobre (15 mg, 0,08 mmol) y complejo de [1,1'-bis (difenilfosfino) ferroceno] dicloropaladio (II) diclorometano (30 mg, 0,038 mmol) en THF se dejó agitar a temperatura ambiente temperatura durante 18 h. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho corto de Celite. El filtrado se repartió entre acetato de etilo y ácido clorhídrico acuoso (1 N). La capa orgánica se recogió y se lavó con salmuera, luego se secó sobre sulfato de magnesio. Después de la eliminación del agente secante y el solvente, el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar 3-[1-(bencenosulfonN)-5-bromo-pirrolo[2,3-b]piridin-2- il]prop-2-in-1-ol 35 (70 mg, 33 %).
Etapa 2: Preparación de 3-[1-(bencenosulfonil)-2-(3-hidroxiprop-1-inil) pirrolo[2,3-b]piridin-5-il]-N-ciclopropilbencenosulfonamida, 36: Una mezcla de 3-[1-(bencenosulfonil)-5-bromo-pirrolo[2,3-b]piridin-2-il] prop-2-in-1-ol 35 (70 mg, 0,18 mmol), ácido [3-(ciclopropilsulfamoil)fenil] borónico (65 mg, 0,27 mmol), carbonato de potasio acuoso (0,17 mL, 2,5 M) y complejo de [1,1'-bis (difenilfosfino) ferroceno] dicloropaladio (II) diclorometano (0,020 g, 0,025 mmol) en acetonitrilo se dejó agitar a 130 °C durante 30 minutos con irradiación de microondas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. El pH del filtrado se ajustó con cloruro de amonio acuoso y luego se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se recogió y se lavó con salmuera, luego se secó sobre sulfato de magnesio. Después de eliminar el agente de secado y el disolvente, el residuo se secó al vacío para proporcionar 3-[1-(bencenosulfonil)-2-(3-hidroxiprop-1-inil) pirrolo[2,3-b]piridin-5-il]-N-ciclopropil-bencenosulfonamida 36.
Etapa 3 - Preparación de N-ciclopropil-3-[2-(3-hidroxiprop-1-inil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il] bencenosulfonamida, P-0008: Para 3-[ 1-(bencenosulfonil)-2-(3-hidroxiprop-1-inil) pirrolo[2,3-b]piridin-5-il]-N-ciclopropil-bencenosulfonamida 36 en THF se añadió hidróxido de potasio en metanol (1,0 mL, IN). La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente por dos horas. El pH de la mezcla de reacción se ajustó con ácido clorhídrico acuoso (1 N) y luego se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera, luego se secó sobre sulfato de magnesio. Después de eliminar el agente de secado y el disolvente, el residuo se secó al vacío para proporcionar N-ciclopropil-3- [2-(3-hidroxiprop-1-inil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il]bencenosulfonamida P-0008 (8 mg, 12 % en las etapas 2 y 3). Los siguientes compuestos pueden prepararse mediante la ruta sintética representada en el Esquema 5: P-0004, P-0009, P-0010, P-0014, P-0175, P-0176 y P-0177.
Ejemplo 6
El compuesto 48 se prepara a partir de 6-bromopicolinaldehído 38 y 5-bromo-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina 41 como se muestra en el Esquema 6.
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Etapa 1 - Preparación de (6-bromopiridin-2-il) metanol, 39: Se añadió borohidruro de sodio (20,34 g, 538 mmol) en porciones a una solución de 6-bromopicolinaldehído 38 (100 g, 538 mmol) en metanol (1,2 L) al mantener la temperatura por debajo de los 20 °C. Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, el disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se repartió entre acetato de etilo (2 L) y agua (2 L). La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera saturada (1 L) y se secó sobre sulfato de sodio. El sulfato de sodio se eliminó por filtración y el filtrado se concentró a presión reducida para dar (6-bromopiridin-2-il) metanol 39 (92,8 g, 92 % de rendimiento) como un aceite amarillo que solidificó lentamente hasta un sólido blanquecino.
Etapa 2 - Preparación de 2-Bromo-6 -(((triisopropilsilil) oxi) metil) piridina, 40: Se añadieron secuencialmente imidazol (45,0 g, 661 mmol) y cloruro de triisopropilsililo (103 mL, 481 mmol) a una solución de (6-bromopiridin-2-il) metanol 39 (82,8 g, 440 mmol) en diclorometano (1,65 L) a temperatura ambiente. Después de agitar durante la noche, la mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (2 L) y se lavó con agua (2 L) y salmuera saturada (1 L). La capa orgánica se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en diclorometano y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice, al eluir con un gradiente de acetato de etilo del 0 al 25 % en heptanos para dar 2-Bromo-6 -(((triisopropilsilil) oxi) metil) piridina 40 (151 g, rendimiento del 100%) como un aceite transparente.
Etapa 3-Preparation de 1 -(fenilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina, 42: Bis(pinacolato)diboro (111 g, 437 mmol), acetato de potasio (107 g, 1090 mmol) y complejo [1,1'-bis (difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) diclorometano (29,8 g, 36,5 mmol) se añadieron secuencialmente a una solución de 1-(bencenosulfonil)-5-bromo-pirrolo[2,3-b]piridina 41 (123 g, 365 mmol) en DMF (1,46 L). La mezcla se dejó agitar a 80 °C durante 4 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la reacción se vertió en agua (15 L) y se diluyó con acetato de etilo (4 L). La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida para dar 1-(fenilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina 42 como un sólido de color tostado que se usó sin purificación adicional.
Etapa 4-Preparación de 1-(fenilsulfonil)-5-(6-(((triisopropilsilil)oxi)metil)piridin-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina, 43: Una suspensión de 1-(Fenilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina 42 (140 g teórico, 364 mmol), 2-Bromo-6-(((triisopropilsilil)oxi)metil)piridina 40 (151 g, 438 mmol), carbonato de potasio (151 g, 1093 mmol) y complejo de [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno] dicloropaladio (II) diclorometano (14,88 g, 18,22 mmol) en dioxano (1,5 l) y agua (304 mL) se dejó agitar a 90 °C durante 4 horas. La reacción se diluyó con acetato de etilo (1 L) y agua (1 L). La capa orgánica se separó y se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en diclorometano y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice, al eluir con un gradiente de acetato de etilo del 0 al 50 % en heptanos para dar 1-(fenilsulfonil)-5-(6 -(((triisopropilsilil) oxi) metil) piridin-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina 43 (99 g, rendimiento del 52 %) como un sólido blanquecino.
Etapa 5 - Preparación de 2-yodo-1-(fenilsulfonil)-5-(6 - (((triisopropilsilil) oxi) metil) piridin-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina, 44: Se añadió gota a gota n-butil litio 2,5 M en hexanos (76 mL, 190 mmol) a una solución de 1-(fenilsulfonil)-5-(6 -(((triisopropilsilil) oxi) metil) piridin-2-il)-1H- pirrolo[2,3-b]piridina 43 (99 g, 189 mmol) en THF anhidro (1 L) y se mantuvo la temperatura interna por debajo de -70 °C. Después de agitar la reacción durante 1 hora, se inactivó una alícuota de la mezcla con óxido de deuterio y se analizó mediante 1H RMN para confirmar la desprotonación completa. Se añadió yodo (96 g, 378 mmol) como un sólido en una porción a -78 °C. La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente con agitación durante 12 horas. La reacción se detuvo con una solución saturada de tiosulfato de sodio (1 L) y se diluyó con acetato de etilo (1 L). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (1 L) y se concentró a presión reducida para dar 2-yodo-1 -(fenilsulfonil)) - 5-(6 -(((triisopropilsilil) oxi) metil) piridin-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina 44 (123 g, rendimiento del 100 %) como una espuma amarilla que se usó sin purificación adicional.
Etapa 6-Preparación de (6-(2-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) piridin-2-il) metanol, 45: 4 N de HCl en dioxano (562 mL, 2248 mmol) a una solución de 2-yodo-1-(fenilsulfonil)-5-(6 -(((triisopropilsilil) oxi) metil) piridin-2-il)-1H-pirrolo[2, 3-b]piridina 44 (112 g, 173 mmol) en N, N-dimetilacetamida (1,73 L). Se dejó agitar la solución durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se vertió lentamente en bicarbonato de sodio saturado (12 L) y se diluyó con acetato de etilo (4 L). La capa orgánica se separó y se concentró a presión reducida para dar (6-(2-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) piridin-2-il) metanol crudo 45 como un aceite marrón que se usó sin purificación adicional.
Etapa 7 - Preparación de 6-(2-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolinaldehído, 46: Se utilizó peryodinano de Dess-Martin (110 g, 259 mmol) añadido a una solución de (6-(2-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)piridin-2-il) metanol 45 (85 g teórico, 173 mmol) en THF (1,73 L) a temperatura ambiente. Se dejó agitar la solución durante 2 horas. La reacción se vertió en bicarbonato de sodio saturado (1,5 L) y se diluyó con acetato de etilo (1 L). La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera saturada (1 L), se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se trituró con diclorometano (500 mL) y se filtró para dar 6-(2-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolinaldehído 46 (46,8 g, 55 % de rendimiento) como un sólido blanquecino.
Etapa 8 - Preparación de ácido 6-(2-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolínico, 47: Se añadió monopersulfato de oxona (32,3 g, 105 mmol) a una solución de 6-(2-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolinaldehído 46 (25,7 g, 52,5 mmol) en DMF (263 mL) a temperatura ambiente. Se dejó agitar la suspensión durante 2 horas. La reacción se vertió en agua (2 L) y se diluyó con acetato de etilo (1 L). La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera saturada (1 L), se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se suspendió con diclorometano (200 mL) y se concentró a presión reducida. La mezcla se diluyó con MTBE (200 mL) y se filtró para dar ácido 6-(2-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolínico 47 (23,5 g, Rendimiento del 89 %) como un sólido blanco.
Etapa 9 - Preparación de ácido 6-(2-yodo-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolínico, 48: Se añadió fluoruro de tetrabutilamonio trihidratado (58,7 g, 186 mmol) a una solución de ácido 6 -(2-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolínico 47 (23,5 g, 46,5 mmol) en THF (465 mL). La reacción se dejó agitar a 40 °C durante 2 horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se trituró con diclorometano y se filtró para dar la sal de tetrabutilamonio del producto. Este sólido se suspendió en agua (500 mL) y se acidificó con HCl acuoso 1 N (~ 50 mL) lo cual dio como resultado un precipitado fino que se filtró, se lavó con agua y se secó al vacío a 50 °C durante la noche para dar ácido 6-(2- yodo-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolínico 48 (10,3 g, rendimiento del 61 %) como un sólido blanco.
Ejemplo 7
El compuesto P-0164 y el compuesto P-0185 se preparan a partir de ácido 6-(2-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolínico 47 y ácido 6-(2- yodo-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolínico 48 como se muestra en el Esquema 7.
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Etapa 1 - Preparación de N-(2-cianopropan-2-il)-6-(2-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo) 2,3-b]piridin-5-il) picolinamida, 50: En un matraz de fondo redondo, se disolvieron ácido 6-[1-(bencenosulfonN)-2-yodo-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il]piridin-2-carboxílico 47 (3 g, 5,94 mmol) y HBTU (3,04 g, 8,02 mmol) en tetrahidrofurano (125 mL). La reacción se dejó agitar durante 60 min. A continuación, se añadió 2-amino-2-metilpropanonitrilo 49 (0,75 g, 8,92 mmol) como una solución de tetrahidrofurano y después se añadió gota a gota trietilamina (2,9 mL, 20,79 mmol). Se dejó agitar la reacción a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con cloruro de amonio saturado acuoso, luego se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio. Después de filtrar y concentrar a presión reducida, el residuo se trituró inicialmente con dimetilformamida para proporcionar 955 mg, y el filtrado se concentró a sequedad y se trituró con acetato de etilo para proporcionar 800 mg adicionales de 6-[1-(bencenosulfonil)-2 -yodo-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il]-N-(1 -ciano-1-metil-etil) piridin-2-carboxamida 50 como un sólido blanco.
Etapa 2-Preparación de N-(2-cianopropan-2-il)-6-(2-(1-isopropil-3-metil-1H-pirazol-4-il)-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)picolinamida, 52: Una mezcla de 6-[1-(bencenosulfonil)-2-yodo-pirrolo[2,3-b]piridin-5-N]-N-(1-ciano-1-metiletil)piridin-2-carboxamida 50 (200 mg, 0,35 mmol), 1-isopropil-3-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan -2-il)pirazol 51 (0,13 g, 0,52 mmol), carbonato de potasio acuoso 2,5 M (0,42 mL) y complejo de diclorometano dicloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio (II) (33 mg, 0,04 mmol) en DMF se lavó abundantemente con argón, se tapó en un vial de microondas y se calentó a 70 °C durante 3 h. La reacción se filtró a través de Celite, luego se distribuyó entre acetato de etilo y cloruro de amonio acuoso. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio. Después de la filtración, la cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo al 0-100 % en hexano) proporcionó N-(2-cianopropan-2-il)-6-(2-(1-isopropil-3-metil-1H-pirazol-4- il)-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)picolinamida 52.
Etapa 3: Preparación de N-(2-cianopropan-2-il)-6-(2-(1-isopropil-3-metil-1H-pirazol-4-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolinamida, 53: Se añadió N-(2-cianopropan-2-il)-6-(2-(1-isopropil-3-metil-1H-pirazol-4-il)-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolinamida 52 a KOH 1 N (en MeOH, 2 mL) y THF (5 mL) a temperatura ambiente. Después de 2 horas, la reacción se concentró y luego se repartió entre diclorometano y HCl 1 N (acuoso). La capa orgánica se separó y se lavó con agua, luego con salmuera, luego se secó sobre sulfato de magnesio y se filtró. El material resultante se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol al 0-5 % en DCM) para proporcionar N-(2-cianopropan-2-il)-6-(2-(1-isopropil-3-metil-1H-pirazol)-4-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolinamida 53 (95 mg, 63 % en los pasos 2 y 3).
Etapa 4 - Preparación de N-(2-cianopropan-2-il)-6-(2-yodo-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolinamida, 54: Al ácido 6-(2- yodo-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) piridin-2-carboxílico 48 (3 g, 8,22 mmol) en DMF (50 mL) se añadió HBTU (3,2 g, 8,44 mmol) seguido de trietilamina (3 mL, 21,5 mmol). La suspensión se dejó agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos. A esta suspensión se le añadió 2-amino-2-metilpropanonitrilo 49 (0,8 g, 9,5 mmol) en DMF (1 mL). La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante tres días. La mezcla se vertió lentamente en agua helada. El precipitado se recogió mediante filtración y se lavó con acetato de etilo para proporcionar N-(2-cianopropan-2-il)-6-(2-yodo-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolinamida 54 como un sólido de color amarillo pálido (2,2 g). El filtrado se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se recogió, se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de eliminar el agente de secado y el disolvente, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar N-(2-cianopropan-2-il)-6-(2-yodo-1H-pirrolo[2,3-b]piridina adicional -5-il) picolinamida 54 como un sólido blanquecino (0,5 g).
Etapa 5: Preparación de N-(2-cianopropan-2-il)-6-(2-(1-(difluorometil)-1H-pirazol-4-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)picolinamida, P-0164: La N-(2-cianopropan-2-il)-6-(2-yodo-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)picolinamida 54 (0,3 g, 0,7 mmol), 1 -(difluorometil) -4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirazol (0,25 g, 1,02 mmol), carbonato de potasio 2,5 M (0,97 mL) y el complejo de diclorometano [1,1'-bis (difenilfosfino) ferroceno] dicloropaladio (II) (0,06 g, 0,08 mmol) en DMF se lavó abundantemente con argón, se tapó en un vial de microondas y se calentó a 105 °C durante 50 min. La reacción se enfrió, se filtró con Celite y se distribuyó entre acetato de etilo y cloruro de amonio acuoso. La capa orgánica se separó y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró. La purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol al 0-5 % en diclorometano) proporcionó N-(2-cianopropan-2-il)-6-(2-(1-(difluorometil)-1H-pirazol-4-il)-1H -pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolinamida P-0164 (0,17 g, 58 %).
Etapa 6 - Preparación de 6-[3-cloro-2-[1-(difluorometil) pirazol-4-il]-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il]-N-(1-ciano -1 -metil-etil) piridin-2-carboxamida, P-0185: Una solución de N-(1 -ciano-1-metil-etil)-6-[2-[1 -(difluorometil) pirazol-4-ilo] -1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il]piridin-2-carboxamida P-0164 (50 mg, 0,12 mmol) en t Hf (3 mL) se agitó en un baño de agua helada. A esta solución se le añadió 1-cloropirrolidin-2,5-diona (19 mg, 0,14 mmol). La mezcla de reacción se dejó agitar y calentar a temperatura ambiente durante cinco horas. La mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se recogió, se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio. Después de la eliminación del agente secante y el solvente, el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar el 6-[3-cloro-2-[1-(difluorometil) pirazol-4-il]-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il]-N-(1-ciano-1-metil-etil) piridin-2-carboxamida P- 0 1 8 5 como un sólido blanquecino (38 mg, 70 %). m S (ESI)[M+H+]+ = 455,85. Los siguientes compuestos pueden prepararse mediante la ruta sintética representada en el esquema 7: P-0125, P-0126, P-0127, P-0138, P-0139, P-0147, P-0148, P-0142, P-0143 , P-0163, P-0165, P-0166, P-0167, P-0168, P-0169, P-0170, P-0171, P-0172, P-0173, P-0174, P-0178, P -0183, P-0184, P-0187, P-0193, P-0194, P-0189, P-0190, P-0191, P-0192, P-0195, P-0196, P-0197, P-0199, P-0200, P-0201, P-0202, P-0199, P-0203, P-0204, P-0205, P-0206, P-0207, P-0208, P-0209, P-0210 y P-0211.
Ejemplo 8
El compuesto P-0188 se prepara a partir de 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridina 57 y N-(2-cianopropano -2-il)-6-(2-yodo-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolinamida 50 como se muestra en el Esquema 8.
Figure imgf000078_0001
Etapa 1 - Preparación de 1-(ciclopropilsulfonil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridina, 59: En un matraz de fondo redondo se disolvió clorhidrato de 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridina 57 (300 mg, 1,22 mmol) en tetrahidrofurano (60 mL). A esta mezcla se le añadió cloruro de ciclopropanosulfonilo 58 (257 mg, 1,83 mmol), seguido de trietilamina (0,17 mL, 1,22 mmol) y una cantidad catalítica de 4-dimetilaminopiridina. La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante dos horas. Se inactivó con agua y se distribuyó entre acetato de etilo y agua. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se filtró. La mezcla bruta se adquirió como un sólido por concentración de la capa orgánica hasta la sequedad. Esto proporcionó 1 -(ciclopropilsulfonil) -4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridina 59 (347 mg, 91 %), que se utilizó sin más purificación.
Etapa 2: Preparación de N-(2-cianopropan-2-il)-6-(2-(1-(ciclopropilsulfonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1-(fenilsulfonil) - 1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)picolinamida, 60: En un matraz de fondo redondo se disolvió 6-[1-(bencenosulfonil)-2-yodo-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il]-N-(1-ciano-1-metil-etil)piridin-2-carboxamida 50 (250 mg, 0,44 mmol), 1 -ciclopropilsulfonil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,6-dihidro-2H-piridina 59 (137,04 mg, 0,44 mmol), tetraquis (trifenilfosfina) paladio (0) (0,04 g, 0,04 mmol) y carbonato de potasio 1 M (1,31 mL) en dimetilformamida (80 mL). La reacción se dejó agitar a 60 °C durante seis horas. La reacción se neutralizó con ácido clorhídrico 1 N y luego se distribuyó entre acetato de etilo y agua. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio. Después de la filtración, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar N-(2-cianopropan-2-il)-6-(2-(1-(ciclopropilsulfonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4- il)-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)picolinamida 60.
Etapa 3: Preparación de N-(1-ciano-1-metil-etil)-6-[2-(1-ciclopropilsulfonil-3,6-dihidro-2H-piridin-4-il)-1H-pirrolo [2, 3-b]piridin-5-il]piridin-2-carboxamida, P-0188: A la N-(2-cianopropan-2-il)-6-(2-(1-(ciclopropilsulfonil)-1,2,3 6-tetrahidropiridin-4-il)-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il) picolinamida 60 (277 mg, 0,44 mmol teórico) en tetrahidrofurano (50 mL) se añadió fluoruro de tetrabutilamonio (1,31 mL, 1 M). La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente por dos horas. La reacción se interrumpió con bicarbonato de sodio saturado y se distribuyó entre acetato de etilo y agua. La capa orgánica se lavó repetidamente con salmuera, después se secó sobre sulfato de magnesio y se filtró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar un producto bruto. El producto bruto se trituró con metanol para proporcionar N-(1-ciano-1-metil-etil)-6-[2-(1-tetrahidrofuran-3-ilpirazol-4-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il]piridin-2-carboxamida P-0188 como un sólido blanco (68 mg, 32 % para los pasos 2 y 3). MS (ESI) [M+H+]+ = 491,30.
Los siguientes compuestos pueden prepararse mediante la ruta sintética representada en el esquema 8: P-0070, P-0074, P-0123, P-0131, P-0132, P-0135, P-0136, P-0141, P-0157, P-0159, P-0160, P-0161, P-0162, P-0179, P-0180, P-0181, P-0182 y P-0186.
Ejemplo 9
El compuesto P-0121 se prepara a partir del cloruro de 6-bromopiridin-2-sulfonilo 62 y la 2-fenil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina 2 como se muestra en el Esquema 9.
Figure imgf000079_0001
Etapa 1- Preparación de 1 -((6-bromopiridin-2-il)sulfonM)pirrolidin-3-carbonitrilo, 64: Al cloruro de 6-bromopiridina-2-sulfonilo (100 mg, 0,39 mmol) se le añadió pirrolidina-3-carbonitrilo (37,48 mg, 0,39 mmol) y diclorometano (2 mL). La reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos. La reacción se inactivó con solución de bicarbonato de sodio y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a sequedad para proporcionar 1 -((6-bromopiridin-2-il) sulfonil) pirrolidin-3-carbonitrilo 64. Este material se utilizó en el siguiente paso sin más purificación.
Etapa 2 - Preparación de 1-1[6-(2-fenil]-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-2-piridil]suifonil]pirrolidina-3-carbonitrilo, P-0121: En un vial de microondas se disolvió 2-fenil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina 2 (65 mg, 0,2 mmol), 1-[(6-bromo-2-piridil) sulfonil] pirrolidina-3-carbonitrilo 64 (77,02 mg, 0,24 mmol), complejo dicloruro de 1,1 '-bis (difenilfosfino) ferroceno-paladio (II) diclorometano (17,19 mg, 0,02 mmol) y solución de carbonato de potasio (0,61 mL, 1 M) en N, N-dimetilformamida (3 mL). La reacción se dejó agitar a 125 °C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y se concentró a presión reducida. El producto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar un producto bruto que se trituró con metanol para producir 1-[[6-(2-fenil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-2- piridil] sulfonil] pirrolidin-3-carbonitrilo P-0121 (16 mg, 18 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 430,25.
Los siguientes compuestos pueden prepararse mediante la ruta sintética representada en el esquema 9: P-0007, P-0063, P-0071, P-0072, P-0073, P-0086, P-0088, P-0107, P-0108 y P-0109.
Los compuestos P-0212-P-0215 pueden prepararse mediante los esquemas apropiados descritos anteriormente. Ejemplos Biológicos
Ejemplo 10: Ensayos basados en células de la actividad quinasa FLT3
Los inhibidores de FLT3 pueden evaluarse mediante el uso de la línea celular MOLM-14, de leucemia mieloide aguda que expresa endógenamente FLT3 ITD o derivados de la línea celular AML FLT3 humana que adquirió la mutación D835y (lazo de activación) de F691L (guardián) después de la selección en dosis crecientes del inhibidor FLT3 AC220. Los inhibidores de FLT3 también pueden evaluarse al usar células que se diseñan para expresar el FLT3 mutante. Para las células modificadas genéticamente, se transfectaron células murinas Ba/F3 con mutaciones FLT3 ITD/D835Y de longitud completa. Las células BA/F3 parentales dependen de la interleucina-3 (IL-3) para la supervivencia, y la introducción de las construcciones FLT3 hizo que estas células fueran dependientes de la actividad quinasa FLT3 cuando se cultivaron en ausencia de IL-3. Los ensayos de crecimiento de células BA/F3 diseñados pueden realizarse en presencia o ausencia de IL-3, para evaluar la inhibición del compuesto de FLT3 o para detectar la presencia de actividad fuera del objetivo, respectivamente. Los inhibidores de la actividad de la quinasa FLT3 reducen o eliminan la señalización oncogénica de FLT3, lo que reduce la proliferación celular. Esta inhibición se mide como una función de la concentración de compuesto para evaluar los valores de IC50.
Las líneas celulares utilizadas en los ensayos de proliferación son las siguientes en la Tabla 3:
TABLA 3
Figure imgf000080_0001
Las células se sembraron a 1 x 104 células por pocillo de una placa de cultivo celular de 96 pocillos en 50 L de medio de cultivo celular. Los compuestos se disolvieron en DMSO a una concentración de 0,5 mM y se diluyeron en serie 1:3 para un total de ocho puntos y se agregaron a las células hasta concentraciones finales de 1, 0,33, 0,11, 0,37, 0,12, 0,0041, 0,0014 y 0,00046 |jM en 100 |jL de medio de cultivo celular (concentración final de DMSO al 0,2 %). Algunos de los compuestos más potentes se ejecutaron en un rango 10 veces menor. Las células se incubaron a 37 °C, 5 % de CO2 durante tres días. El tampón CellTiter-Glo (catálogo de ensayo de viabilidad celular de Promega # G7573) y el sustrato se equilibraron a temperatura ambiente, y se reconstituyó enzima/sustrato Luciferasa de Luciérnaga Recombinante/luciferina de escarabajo. Las placas de células se equilibraron a temperatura ambiente durante 30 minutos, luego se lisaron mediante la adición de un volumen equivalente de reactivo Celltiter-Glo Reagent. La placa se mezcló durante 10 minutos en un agitador de placas para lisar las células. Las placas se leyeron en un Tecan M1000 mediante el uso del protocolo de luminiscencia modificado para leer 0,1 s por pocillo. La lectura de luminiscencia evalúa el contenido de ATP, que se correlaciona directamente con el número de células de tal manera que la lectura como una función de la concentración del compuesto se usó para determinar el valor IC50.
Para determinar el efecto de los compuestos sobre la actividad catalítica de FLT3, se han establecido ensayos de quinasas que utilizan enzimas recombinantes y tecnología AlphaScreen®. También se midió la actividad catalítica de la actividad de c-kit para determinar la selectividad de los compuestos. Cuando las quinasas son catalíticamente activas, fosforilan un sustrato peptídico biotinilado en residuos de tirosina. Al usar la tecnología AlphaScreen®, la capacidad de los compuestos para afectar la actividad catalítica de las quinasas se puede medir cuantitativamente. El sustrato peptídico es inmovilizado por las perlas del donante de estreptavidina AlphaScreen® y, tras la fosforilación por una tirosina quinasa, puede unirse a las perlas del aceptor de anti-fosfotirosina (PY20) AlphaScreen®. Tras la excitación de estas perlas con luz láser a 680 nm, se produce oxígeno singlete. Este oxígeno singlete se apaga rápidamente, a menos que las perlas del aceptor de anti-fosfotirosina (PY20) AlphaScreen® estén muy cerca, en cuyo caso puede medirse una señal de proximidad a 580 nm. En presencia de actividad catalítica, hay una señal de proximidad muy fuerte. Los inhibidores de quinasa selectivos afectan a una disminución de esta señal de proximidad a través de una disminución de la fosforilación de tirosina del sustrato peptídico. Las enzimas recombinantes se adquirieron de las siguientes fuentes comerciales como se resume en la Tabla 4:
TABLA 4
Figure imgf000080_0002
El ensayo se realizó como se resume a continuación. Los tampones utilizados se resumen en la Tabla 5.
TABLA 5
Figure imgf000081_0001
Sustrato
Péptido poli (Glu4-Tyr), conjugado de biotina [Biotina-GG (EEEEY)1üEE]
UBI/Millipore #12-440
Concentración final = 30 nM
Trifosfato de adenosina (ATP)
Sigma #A-3377
Concentración final para la determinación de IC50 = 10 pM (FLT3-D835Y o FLT3-ITD) o 100 pM (c-KIT) Reactivo de detección
Kit de ensayo de fosfotirosina (PY20) AlphaScreen®
Perkin-Elmer # 6760601M
Concentración final = 10 pg/mL
Protocolo IC50
Diluir los compuestos en DMSO a una concentración final de 20X.
Añadir 1 pl de compuesto a cada pocillo de la placa de reacción de 384 pocillos (Perkin Elmer # 6005359).
Mezclar la enzima y el sustrato del Péptido Poli (Glu4-Tyr) a una concentración final de 1,33 veces en el tampón de ensayo.
Mezclar ATP a una concentración final 5X en tampón de ensayo.
Agregar 15 pL de mezcla de enzima/sustrato a la placa de reacción.
Agregar 4 pL de ATP a la placa de reacción. Centrifugar durante 1 minuto, agite para mezclar e incube como se resume en la Tabla 6:
TABLA 6
Figure imgf000081_0002
Mezclar perlas Donante de Estreptavidina a una concentración final 6X en tampón de parada/detección.
Añada 5 pL de perlas de Donante de estreptavidina a la placa de reacción. Centrifugar durante 1 minuto, agitar para mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 20 minutos.
Mezclar perlas de Aceptor de anti-fosfotirosina (PY20) a una concentración final 6X en tampón de parada/detección. Agregar 5 pL de perlas de anti-fosfotirosina (PY20) a la placa de reacción.
Centrifugar 1 minuto, agitar para mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 60 minutos.
Leer la placa en el lector de etiquetas múltiples Wallac EnVision™ 2103.
Ejemplo 11: Ensayo bioquímico de TGFpR2
El IC50 de ciertos compuestos en esta divulgación contra TGFpR2 se llevó a cabo bajo contrato en Thermo Fisher Scientific, Life Sciences Solutions como parte de su servicio de perfiles SelectScreen™. El ensayo TGFpR2 utilizó el ensayo LanthaScreen® Europium Kinase Binding Assay. La unión de un conjugado de Alexa Fluor® Tracer 199 (100 nM) a TGFBR2 (5 nM) se detectó mediante la adición de un anticuerpo anti-etiqueta marcado con Eu (5 nM) en tampón de quinasa A (50 mM HEPES pH 7,5, 0,01 % BRIJ- 35, MgCl210 mM, EGTA 1 mM) y DMSO final al 1 %. La unión del trazador y el anticuerpo a una quinasa dio como resultado un alto grado de FRET, mientras que el desplazamiento del trazador con un inhibidor de la quinasa dio como resultado una pérdida de FRET. El porcentaje de inhibición se calculó a partir de la relación de emisión de Alexa Fluor® y Europium de acuerdo con lo documentado por Thermo Fisher (www.thermofisher.com/kinaseprofiling). El IC50 de ciertos compuestos en esta divulgación se determinó al analizar una serie de diluciones del compuesto en duplicado en cinco concentraciones (1,0, 0,25, 0,062, 0,015 y 0,0039 M) y ajustar los datos de inhibición con un modelo de ajuste de la curva sigmoidal. En otra modalidad de esta divulgación, los números de compuesto P-0164, P-0165, P-0166, P-0168, P-0185, P-0201, P-0204 y P-0205 tienen TGFPR2 valores de IC50 que van desde 0,0001 M a 10 pM.
La siguiente Tabla 7 proporciona datos que indican la actividad inhibidora bioquímica de KIT, FLT3 ITD, D835Y y F69L para compuestos de ejemplo como se describe en el presente documento. En la siguiente tabla, se proporciona la actividad como sigue: ++ = 0,0001 pM <IC 50 <10 pM; + = 10 pM <IC 50 <50 pM, = 50 pM <IC 50 <100 pM.
TABLA 7
Figure imgf000083_0001
Figure imgf000084_0001
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Figure imgf000089_0001
Otro aspecto de esta divulgación se refiere a uno o más compuestos de la Tabla 1 o la Tabla 2 que son más del doble de potentes para FLT3 que KIT. Otro aspecto de esta divulgación se refiere a uno o más compuestos de la Tabla 1 o la Tabla 2 que son más de 3 veces más potentes para FLT3 que KIT. Otro aspecto de esta divulgación se refiere a uno o más compuestos de la Tabla 1 o la Tabla 2 que son más de 5 veces más potentes para FLT3 que KIT. Otro aspecto de esta divulgación se refiere a uno o más compuestos de la Tabla 1 o la Tabla 2 que son más de 10 veces más potentes para FLT3 que KIT. Otro aspecto de esta divulgación se refiere a uno o más compuestos de la Tabla 1 o la Tabla 2 que son más de 100 veces más potentes para FLT3 que KIT. Otro aspecto de esta divulgación se refiere a uno o más compuestos de la Tabla 1 o la Tabla 2 que son más de 1000 veces más potentes para FLT3 que KIT.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto que tiene la Fórmula I:
    Figure imgf000094_0001
    o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
    Z2 es alquinilo C2-10 opcionalmente sustituido con Rb, arilo C6-14, cicloalquilo C3-10, cicloalquenilo C3-10, heterocicloalquilo de 3-12 miembros, heterocicloalquenilo de 3-12 miembros o heteroarilo de 5-10 miembros, en donde cada arilo C6-i4, cicloalquilo C3-i0, cicloalquenilo C3-i0, heterocicloalquilo de 3-12 miembros, heterocicloalquenilo de 3-12 miembros o heteroarilo de 5-10 miembros está opcionalmente sustituido con 1-3 grupos R1;
    Z3 es hidrógeno o halo;
    Z5 es:
    Figure imgf000094_0002
    cada R1 es independientemente hidrógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-1o, -C(O)-cicloalquilo C3-1o, -C(O)-alquilo C1-6, ciano, ciano-alquilo C1-6, ciano-cicloalquilo C3-10, ciano-cicloalquilo C3-10-alquilo C1-6, hidroxi, alcoxi C1-6, alcoxi C1-6-alquilo C1-6, hidroxi-alquilo C1-6, halo, halo-alquilo C1-6, oxo, arilo C6-14, arilo C6-14-alquilo C1-6, cicloalquilsulfonilo C3-10, alquisulfonilo C1-6, alquisulfonilo C1-6-alquilo C1-6, alquilcarbonilamino C1-6-alquilo C1-6, alquilsulfonilamino C1-6-alquilo C1-6, heterocicloalquilo de 3-12 miembros opcionalmente sustituido con 1-2 Ra, heterocicloalquilo de 3-12 miembros-alquilo C1-6, -NR6R7, -alquileno C1-6-NR6R7, -C(O)O-alquilo C1-6, heterocicloalquilo de 3-12 miembros opcionalmente sustituido con 1-2 grupos Rd groups, o heteroarilo de 5-10 miembros opcionalmente sustituido con 1-2 grupos Re;
    R6 es hidrógeno, alquilo C1-6, alquilcarbonilo C1-6, alquilsulfonilo C1-6, cicloalquilamino de 5-7 miembros o cicloalquilo C3-10, en donde cada uno de alquilo C1-6, alquilcarbonilo C1-6, alquilsulfonilo C1-6, cicloalquilamino de 5-7 miembros y cicloalquilo C3-10 están opcionalmente sustituidos con 1-3 grupos G, R7 es hidrógeno o alquilo C1-6 opcionalmente sustituido con 1-3 grupos G;
    o R6 y R7, junto con el átomo de N al que están unidos, se unen para formar un resto heterocicloalquilo de 3-12 miembros o heteroarilo de 5-10 miembros, en donde 1-2 átomos de carbono del resto heterocicloalquilo o heteroarilo están sustituidos con 1-2 grupos G;
    cada G es independientemente alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, halo, amino, -NH-alquilo C1-6, -N(alquilo C1-6)2, (alquileno C1-6)-N(H)-alquilo C1-6, -(alquileno C1-6)-amino, -CN, -C(O)-alquilo C1-6, -C(O)-O-alquilo C1-6, -CO2H, -C(O)-N(H)-alquilo C1-6, oxo, -N(H)-C(O)-alquilo C1-6, -C(=NH)-NH2 , -OH, -N(H)-C(O)-O-alquilo Ci-6, -N(H)-C(O)-N(H)-alquilo C1-6, -N(H)-S(O)2-alquilo C1-6, -S(O)2- alquilo C1-6, hidroxi-alquilo C1-6, cicloalquilo C3-1o, -N(H)-cicloalquilo C3-6, alcoxi C1-6, heterocicloalquilo de 3-12 miembros o heteroarilo de 5-10 miembros,
    cada Ra es independientemente alquilo C1-6, oxo, halo o hidroxi;
    Rb es halo, cicloalquilo C3-6, arilo C6-14, heteroarilo de 5-10 miembros, -NR6R7 o hidroxi;
    cada Rd es independientemente alquilo C1-6, halo, oxo, alquilaminosulfonilo C1-6, alquilsulfonilo C1-6, alquilcarbonilo C1-6, hidroxi alquilo C1-6 o hidroxi; y
    cada Re es independientemente alquilo C1-6, halo o hidroxi;
    siempre que cuando G es cicloalquilo C3-10, Z2 es alquinilo opcionalmente sustituido con cicloalquilo C3-C6, -NR6R7 o hidroxi.
    El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde:
    Z2 es etinileno opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 cicloalquilo, arilo C6-14, -alquileno C1-C6-NR6R7 o hidroxi-alquileno C1-6; o
    Z2 es fenilo, ciclohexanilo, ciclohexenilo, pirazolilo, pirimidinilo, tiazolilo, piridilo, piridazinilo, pirrolilo, dihidropirrolilo, dihidropiranilo, dihidropiradinilo, tetrahidropiridilo, dihidrotiopiranilo, óxido de dihidrotiopiranilo o dióxido de dihidrotiopiranilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con 1-2 grupos R1;
    R1 es hidrógeno, cicloalquilo C3-10, -C(O)-cicloalquilo C 3-10, alquilo C1-6, ciano, hidroxi, alcoxi C1-6, halo, halo-alquilo C1-6, oxo, fenilo, heterocicloalquilo de 3-12 miembros, heterocicloalquilo de 3-12 miembrosalquilo C1-6, -alquileno C1-6-NR6R7, -C(O)O-alquilo C1-6 o heteroarilo de 5-10 miembros opcionalmente sustituido con 1-2 grupos Re;
    cada G es independientemente alquilo C1-6, halo, amino, -NH-alquilo C1-6, -N(alquilo C1-6)2, -(alquileno C1-6)-N(H)-alquilo C1-6, -CN, -C(O)-alquilo C1-6, -C(O)-N(H)-alquilo C1-6, -N(H)-C(O)-alquilo C1-6, -C(=NH)-NH2 , -N(H)-C(O)-O-alquilo C1-6 , -N(H)-C(O)-N(H)-alquilo C1-6, -N(H)-S(O)2-alquilo C1-6, -S(O)2-alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, -N(H)-cicloalquilo c 3-6, alcoxi C1-C6, heterocicloalquilo de 5-6 miembros o heteroarilo de 5-6 miembros, siempre que cuando G es cicloalquilo C3-6, Z2 está opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, -alquileno C1-C6-NR6R7 o hidroxialquileno C1-6 ; y
    cada Ra es independientemente oxo, halo o hidroxi.
    El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde Z2 es:
    Figure imgf000096_0001
    en donde
    m es 0-2;
    n es 0-3;
    R8 es hidrógeno, alquilo Ci-6, -C(O)O-alquilo Ci-6, cicloalquilo C3-6, -C(O)-cicloalquilo C3-6, aril alquilo C1-6, heterocicloalquilo de 5-6 miembros-alquilo C1-6 o haloalquilo C1-6; y
    R9 es alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, arilo C6-14, alquileno C1-6-NR6R7, hidroxi-alquileno C1-6 o hidroxi.
    El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde R1 es alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, cicloalquilo C3-6, alquileno C1-3-CN, ciano, -(alquileno C1-3)-alcoxi C1-3, heterocicloalquilo de
    3-12 miembros, -C(O)-cicloalquilo C3-6.
    El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde R1 es -CH3, -CHF2, -CH2 F, -CF3 , ciclopropilo, -alquileno C1-3-CN, ciano, metoxi-(alquileno C1-3)-, piperidinilo, morfolinilo, tetrahidrofuranilo o -C(O)-ciclopropilo.
    El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores que tiene una de las siguientes
    fórmulas:
    Figure imgf000097_0001
    o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R9 es alquilo C 1 - 6 , haloalquilo C 1 - 6 , cicloalquilo C 3 - 6 , fenilo, -(alquileno C 1 - 6 )-hidroxi-alquileno C 1 - 4 .
    El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5 que tiene una de las siguientes fórmulas:
    Figure imgf000097_0002
    Figure imgf000098_0001
    Figure imgf000099_0001
    o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada uno de R1a, R1b, R1c, R1d, R1e y R1f son como se define como R1 en cualquier una de las reivindicaciones 1-5.
    8. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 7, en donde:
    R1a es hidrógeno, ciclopropilo, -OC(H)(CH3)2, morfolinilo, -CF3, -CHF2 o F;
    R1b es hidrógeno, F, ciano, ciclopropilo o cianociclopropilo;
    R1c es hidrógeno, ciclopropilo, metoxi, -OC(H)(CH3)2, pirrolidinilo, etoxi, -CH3, -CF3 o -CHF2 ;
    R1d es hidrógeno o -CH3 ;
    R1e es hidrógeno, metoxi, ciclopropilo, morfolinilo, -CF3, -CHF2, -CH3, pirrolidinilo o F;
    R1f es hidrógeno o ciclopropilo; y
    R8 es hidrógeno, -CH(CH3)2, -C(O)OC(CH3)3, ciclopropilo, -C(O)ciclopropilo, -(CH2)1-2-fenilo, -(CH2)1-2-morfolinilo, -(CH2)1-2-tetrahidrofuranilo, -(CH2)1-2-piperidinilo, -CH3, -CF3 o -Ch F2.
    9. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde G es amino, -N(H)C(O)-alquilo C1-6, -C(O)-N(H)-alquilo C1-6, - N(H)-C(O)-N(H)-alquilo C1-6, -N(H)-S(O)2-alquilo C1-6, -N(H)-alquilo C1-6, -N(alquilo C1-6)2, -C(=Nh)-NH2, -OH, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, halo, -N(H)-cicloalquilo C3-6, -alcoxi C1-6, heterocicloalquilo de 4-6 miembros, heteroarilo de 5-6 miembros, -CN, -C(O)-alquilo C1-6 o -alquileno C1-3-N(H)-alquilo C1-3.
    10. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde G es amino, -N(H)C(O)-alquilo C1-4 , -C(O)-N(H)-alquilo C1-4, -N(H)-C(O)-N(H)-alquilo C1-4 , -N(H)-S(O)2-alquilo C1-3, -N(H)-CH3, -N(CH3)2, -C(=NH)-NH2 , -OH, -alquilo C1-3 , -CF3, flúor, -N(H)-cicloalquilo C3-6, -alcoxi C1-3, morfolinilo, imidazolilo, -CN, -C(O)-alquilo C1-3 o -alquileno C1-2-N(H)-CH3.
    11. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde Ra es oxo, fluoro, cloro o hidroxi.
    12. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 que tiene una de los siguientes compuestos:
    Figure imgf000100_0001
    Figure imgf000101_0001
    o una sal, un solvato, un tautómero, un estereoisómero o un análogo deuterado farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los compuestos anteriores.
    13. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-12 y un portador farmacéuticamente aceptable.
    14. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 13, que comprende además un segundo agente farmacéutico seleccionado del grupo que consiste en un agente antiproliferativo, un agente antiinflamatorio, un agente inmunomodulador y un agente inmunosupresor.
    15. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 14, en donde el segundo agente farmacéutico es i) un agente alquilante seleccionado de adozelesina, altretamina, bizelesina, busulfán, carboplatino, carbocuona, carmustina, clorambucilo, cisplatino, ciclofosfamida, dacarbazina, estramustina, fotemustina, hepsulfam, ifosfamida, improsulfán, irofulven, lomustina, mecloretamina, melfalán, oxaliplatino, piposulfán, semustina, estreptozocina, temozolomida, tiotepa y treosulfán; ii) un antibiótico seleccionado de bleomicina, dactinomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina, menogaril, mitomicina, mitoxantrona, neocarzinostatina, pentostatina y plicamicina; un antimetabolito seleccionado del grupo que consiste en azacitidina, capecitabina, cladribina, clofarabina, citarabina, decitabina, floxuridina, fludarabina, 5-fluorouracilo, ftorafur, gemcitabina, hidroxiurea, mercaptopurina, metotrexato, nelarabina, pemetrexed, raltitrexed, tioguanina y trimetrexato; iii) un agente de terapia con anticuerpos seleccionado de alemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, galiximab, gemtuzumab, panitumumab, pembrolizumab, pertuzumab, rituximab, tositumomab, trastuzumab e ibritumomab tiuxetán 90 Y; una hormona o antagonista hormonal seleccionado del grupo que consiste en anastrozol, andrógenos, buserelina, dietilestilbestrol, exemestano, flutamida, fulvestrant, goserelina, idoxifeno, letrozol, leuprolida, magestrol, raloxifeno, tamoxifeno y toremifeno; iv) un taxano seleccionado de DJ-927, docetaxel, TPI 287, paclitaxel y DHA-paclitaxel; v) un retinoide seleccionado de alitretinoína, bexaroteno, fenretinida, isotretinoína y tretinoína; vi) un alcaloide seleccionado de etopósido, homoharringtonina, tenipósido, vinblastina, vincristina, vindesina y vinorelbina; vii) un agente antiangiogénico seleccionado de AE-941 (GW786034, Neovastat), ABT-510, 2-metoxiestradiol, lenalidomida y talidomida; viii) un inhibidor de la topoisomerasa seleccionado de amsacrina, edotecarina, exatecán, irinotecán, SN-38 (7-etil-10-hidroxi-camptotecina)), rubitecán, topotecán y 9-aminocamptotecina; ix) un inhibidor de quinasa seleccionado de erlotinib, gefitinib, flavopiridol, mesilato de imatinib, lapatinib, sorafenib, malato de sunitinib, AEE-788, AG-013736, AMG 706, AMN107, BMS-354825, BMS-599626, UCN-01 (7-hidroxistaurosporina), vemurafenib, dabrafenib, trametinib, cobimetinib selumetinib y vatalanib; x) un inhibidor de la transducción de señales dirigido seleccionado de bortezomib, geldanamicina y rapamicina; xi) un modificador de la respuesta biológica seleccionado de imiquimod, interferón-alfa e interleucina-2; xii) un inhibidor de IDO; y xiii) un agente quimioterapéutico seleccionado de 3-AP (3-amino-2-carboxialdehído tiosemicarbazona), altrasentán, aminoglutetimida, anagrelida, asparaginasa, briostatina-1, cilengitida, elesclomol, mesilato de eribulina (E7389), ixabepilona, lonidamina, masoprocol, mitoguanazona, oblimersen, sulindac, testolactona, tiazofurina, un inhibidor de mTOR, un inhibidor de PI3K, un inhibidor de Cdk4, un inhibidor de Akt, un inhibidor de Hsp90, un inhibidor de farnesiltransferasa y un inhibidor de aromatasa (anastrozol letrozol exemestano); xiii) un inhibidor de Mek; xiv) un inhibidor de la tirosina quinasa; o xv) un inhibidor de EGFR.
    16. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-12, o una sal, un solvato, un análogo deuterado, un tautómero o un estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-15 para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria, una afección inflamatoria, una enfermedad autoinmunitaria o cáncer.
    17. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-12, o una sal, un solvato, un análogo deuterado, un tautómero o un estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-15 para su uso en el tratamiento de la leucemia mieloide aguda, ablación de células madre y mielopreparación para trasplante de células madre, esclerosis múltiple progresiva primaria, síndrome de dolor regional complejo, distrofia simpática refleja, distrofia muscular, distrofia muscular de Duchenne, causalgia, neuroinflamación, trastornos neuroinflamatorios, olvido benigno, HIV, demencia de tipo binswanger, demencia con cuerpos de Lewy, prosencefalia, microencefalia, parálisis cerebral, hidrocefalia congénita, hidropesía abdominal, parálisis supranuclear progresiva, glaucoma, trastornos de adicción, dependencias, alcoholismo, temblores, enfermedad de Wilson, demencias vasculares, demencia por infarto múltiple, demencia fronto temporal, pseudodemencia, cáncer de vejiga, carcinoma de células basales, colangiocarcinoma, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, sarcoma de Ewing, cáncer gástrico, glioma, carcinoma hepatocelular, linfoma de Hodgkin, carcinoma laríngeo, leucemia, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, melanoma, mesotelioma, cáncer de páncreas, cáncer rectal, cáncer renal, carcinoma de células escamosas, linfoma de células T, cáncer de tiroides, leucemia monocítica, feocromocitoma, tumores malignos de células de nervios periféricos, tumores malignos de la vaina del nervio periférico (MPNST), neurofibromas cutáneos y plexiformes, tumor leiomioadenomatoide, fibromas, fibromas uterinos, leiomiosarcoma, cáncer papilar de tiroides, cáncer anaplásico de tiroides, cáncer medular de tiroides, cáncer folicular de tiroides, carcinoma de células de hurtle, cáncer tiroideo, ascitis, ascitis maligna, mesotelioma, tumores de glándulas salivales, carcinoma mucoepidermoide de la glándula salival, carcinoma de células acínicas de la glándula salival, tumores del estroma gastrointestinal (GIST), tumores que causan derrames en espacios potenciales del cuerpo, derrames pleurales, derrames pericárdicos, derrames peritoneales también conocidos como ascitis, tumores de células gigantes (GCT), GCT de hueso, angiogénesis tumoral o crecimiento tumoral paracrino.
    18. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-12, o una sal, un solvato, un análogo deuterado, un tautómero o un estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-15 para su uso en el tratamiento de trastornos de almacenamiento lisosómico seleccionados del grupo que consiste en mucolipidosis, alfamanosidosis; aspartilglucosaminuria; enfermedad de Batten; beta-manosidosis; cistinosis; enfermedad de Danon; enfermedad de Fabry; enfermedad de Farber; fucosidosis; galactosialidosis; enfermedad de Gaucher; gangliosidosis; enfermedad de Krabbe; leucodistrofia metacromática; trastornos de mucopolisacaridosis; aspartilglucosaminuria; enfermedad de Batten; beta-manosidosis; cistinosis; enfermedad de Danon; enfermedad de Fabry; enfermedad de Farber; fucosidosis; galactosialidosis; enfermedad de Gaucher; gangliosidosis; enfermedad de Krabbe; leucodistrofia metacromática; trastornos de mucopolisacaridosis; mucolipidosis tipo I (sialidosis); mucolipidosis tipo II (enfermedad de células I); mucolipidosis tipo III (polidistrofia pseudo-Hurler); mucolipidosis tipo IV; deficiencia múltiple de sulfatasa; Tipos A, B, C de Niemann-Pick; enfermedad de Pompe (enfermedad por almacenamiento de glucógeno); picnodisostosis; enfermedad de Sandhoff; enfermedad de Schindler; enfermedad de Salla/enfermedad por almacenamiento de ácido siálico; Tay-Sachs; y enfermedad de Wolman.
    19. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-12, o una sal, un solvato, un análogo deuterado, un tautómero o un estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-15 para su uso en el tratamiento de fibrosis, enfermedad cardiovascular o cáncer.
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