ES2841123T3 - Formulación del compuesto de la hormona de crecimiento - Google Patents

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Formulacion Del Compuesto de la Hormona De Crecimiento
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Abstract

Una composición farmacéutica que comprende 2-20 mg/mL del conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina, una solución reguladora, un conservante y 0,5 - 5,0 mg/mL de poloxámero 188, en donde el pH de la composición es 6,5-7,0 y en donde el conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina tiene la siguiente fórmula: A-W-B-Q-GH GH representa un compuesto/proteína hormona de crecimiento A es un residuo de unión a la albúmina B es un espaciador hidrofílico Q es un grupo químico que enlaza GH y B, W es un grupo químico que enlaza B y A. y "-" es un enlace covalente en donde el residuo de unión a la albúmina, A, se selecciona de **(Ver fórmula)**

Description

DESCRIPCIÓN
Formulación del compuesto de la hormona de crecimiento
Campo técnico
La presente solicitud se refiere a las composiciones farmacéuticas o formulaciones de compuestos de la hormona de crecimiento.
Antecedentes de la invención
La hormona de crecimiento (GH) es una hormona polipeptídica secretada por la glándula pituitaria anterior en los mamíferos. En dependencia de la especie, la GH es una proteína compuesta de aproximadamente 190 residuos de aminoácidos que corresponde a un peso molecular de aproximadamente 22 kDa. La GH se une a y señaliza a través de los receptores de la superficie celular, los receptores de la GH (GHR). La GH juega una función clave en la promoción del crecimiento, el mantenimiento de la composición normal del cuerpo, el anabolismo y el metabolismo de los lípidos. También tiene efectos directos sobre el metabolismo intermediario, tales como la disminución de la captación de glucosa, el aumento de la lipólisis, el aumento de la captación de aminoácidos y la síntesis de proteínas. La hormona también ejerce efectos sobre otros tejidos que incluyen el tejido adiposo, el hígado, el intestino, el riñón, el esqueleto, el tejido conectivo y el músculo.
La GH se clasifica como una proteína de empaquetamiento en cuatro hélices que presenta una topología “arribaarriba-abajo-abajo” con dos enlaces disulfuro conservados. Específicamente, la Gh madura humana de tipo salvaje (hGH que se identifica por SEQ ID NO: 1)) se compone de 191 residuos de aminoácidos y tiene cuatro residuos de cisteína en las posiciones 53, 165, 182 y 189, que estabilizan la estructura tridimensional de la proteína al formar dos puentes disulfuro intramoleculares que conectan C53 con C165 y C182 con C189, respectivamente.
La hGH recombinante (somatropina) está disponible comercialmente como, por ejemplo: Genotropin® (Pfizer), Nutropin® y Protropin® (Genentech), Humatrope® (Eli Lilly), Serostim® (Serono), Norditropin® (Novo Nordisk), Omnitrope® (Sandoz), Nutropin Depot® (Genentech y Alkermes). Adicionalmente, un análogo con un residuo de metionina adicional en el extremo N-terminal también se comercializa como, por ejemplo: Somatonorm® (Pharmacia Upjohn/Pfizer).
La hormona de crecimiento se usa para tratar las deficiencias de la hormona de crecimiento, pero desafortunadamente la hGH y las formas recombinantes descritas anteriormente tienen una vida media relativamente corta, lo que significa que los pacientes que reciben tratamiento con la hormona de crecimiento típicamente necesitan administraciones diarias de la hormona de crecimiento. Además, por ser la hormona de crecimiento una proteína, la forma de administración es una inyección que representa un inconveniente diario para los pacientes.
Con el fin de proporcionar un producto más conveniente, se puede buscar una formulación de liberación sostenida o alternativamente, es deseable proporcionar un compuesto de hormona de crecimiento con una vida media prolongada.
La hGH ha estado sujeta a una amplia mutagénesis y diversas modificaciones en los intentos de producir análogos y conjugados de la hGH de la presente con propiedades químicas o biológicas alteradas que incluyen mutantes estabilizados por proteasa, mutantes de cisteína, y versiones PEGiladas de la hormona de crecimiento tal como se describió en los documentos US 2003/0162949, WO 02/055532 y WO06/048777.
La búsqueda de compuestos de la hormona de crecimiento con mayor funcionalidad, tal como un aumento de la vida media, tiene por objeto reducir la cantidad de compuesto necesario y la frecuencia de administración del fármaco terapéutico. Además, tales compuestos de la hormona de crecimiento se han descrito en los documentos WO11/089255 y WO11/015649.
Aunque los compuestos de la hormona de crecimiento con mayor vida media están disponibles, y funcionales en un entorno experimental, los compuestos deben ponerse a disposición de los pacientes en una formulación que permita el uso seguro y conveniente de los mismos.
Breve descripción de la invención
La presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la hormona de crecimiento con una vida media prolongada, que es adecuada para un almacenamiento de larga duración. La composición farmacéutica puede comprender un conjugado de la hormona de crecimiento, en particular un conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina. La naturaleza química de dichos conjugados de la hormona de crecimiento proporciona un desafío adicional para el químico que busca una composición farmacéutica que cumpla con el requisito y los deseos de la industria y los pacientes, por ejemplo, una composición que puede prepararse, manipularse y almacenarse fácilmente de preferencia también a temperatura ambiente y que permite una dosificación fácil y menos frecuente. La presente invención se refiere a una composición farmacéutica que mantiene la estabilidad durante períodos prolongados de estrés que incluyen la agitación y la temperatura elevada como una medida de la estabilidad de la composición.
La composición farmacéutica de acuerdo con un primer aspecto de la invención se define en la reivindicación 1 y comprende un conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina, una solución reguladora, un conservante y poloxámero 188 de 0,5 - 5,0 mg/mL, en donde el pH de la composición es 6,5-7,0 y en donde el conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina tiene la siguiente fórmula:
A-W-B-Q-GH
GH representa un compuesto/proteína hormona de crecimiento
A es un residuo de unión a la albúmina
B es un espaciador hidrofílico
Q es un grupo químico que enlaza GH y B,
W es un grupo químico que enlaza B y A.
y “-“ es un enlace covalente
en donde el residuo de unión a la albúmina se selecciona de
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En modalidades adicionales la composición comprende un conservante, tal como fenol y un agente isotónico, tal como manitol.
El compuesto de la hormona de crecimiento puede ser un conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina que incluye una cadena lateral de unión a la albúmina (AB) y la proteína hormona de crecimiento (GH) que se unen covalentemente (-) entre sí, como se representa por la fórmula a B-GH.
Los ejemplos de dichos conjugados incluyen moléculas, en donde AB- se une a GH a través de un residuo de cisteína en la GH. El conjugado de la composición puede describirse con la siguiente fórmula: A-W-B-Q-GH, en donde GH representa un compuesto o proteína hormona de crecimiento, A es un residuo de unión a la albúmina, B es un espaciador hidrofílico, Q es un grupo químico que une GH y B, W es un grupo químico que une B y A y “-“ es un enlace covalente.
La concentración del conjugado puede ser tal como 2-15 mg/mL y la composición puede ser para administración subcutánea tal como una vez a la semana, por ejemplo, la composición puede ser para su uso en un método de tratamiento por administración subcutánea una vez a la semana.
La composición de la invención es para su uso en un método de tratamiento de las deficiencias de la hormona de crecimiento o una enfermedad o trastorno donde el paciente se beneficiará de un nivel aumentado de la hormona de crecimiento circulante. Un segundo aspecto de la invención es la composición del primer aspecto de la invención para su uso en un método de tratamiento de la deficiencia de la hormona de crecimiento (g Hd ) o la deficiencia de la hormona de crecimiento en adultos (AGHD).
Además, los aspectos se refieren a un método de preparación de la composición farmacéutica descrita en la presente descripción, la preparación de dicha composición farmacéutica para su uso en los métodos de tratamiento, y en particular para su uso en los métodos de tratamiento de las deficiencias de la hormona de crecimiento.
Otro aspecto se refiere al uso de un compuesto de la hormona de crecimiento para la fabricación de la composición farmacéutica descrita en la presente descripción.
Además, se describe un método de tratamiento que comprende la administración de dicha composición farmacéutica, para el tratamiento de las deficiencias de la hormona de crecimiento o una enfermedad o trastorno donde el paciente se beneficia de un mayor nivel de actividad de la hormona de crecimiento circulante.
La invención se define por las reivindicaciones. Cualquier contenido que quede fuera del alcance de las reivindicaciones se proporciona únicamente con fines de información.
Cualquier referencia a los métodos de tratamientos se refiere a los compuestos, las composiciones farmacéuticas y los medicamentos de la presente invención para su uso en un método de tratamiento de un cuerpo humano o animal mediante terapia.
Listado de secuencias
SEQ ID NO: 1: hGH 1-191 madura (Somatotropina) (se hace referencia en la presente descripción como hGH para abreviar) FPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKYSFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISL LLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLK NYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGF
Breve descripción de los dibujos
En estas Figuras, solo las composiciones de la reivindicación 1, que comprenden poloxámero 1880,5-5,0 mg/mL, en donde el pH es 6,5-7,0, están de acuerdo con la invención.
La Figura 1 muestra el contenido de HMWP en las composiciones farmacéuticas que comprende poloxámero 188 0,0 o 3 mg/mL durante un período de almacenamiento de 90 días a 5 °C en soluciones reguladoras con diferentes pH.
La Figura 2 muestra el contenido de la HMWP en las composiciones farmacéuticas que comprenden varios tensioactivos en diferentes concentraciones en composiciones con pH 6,0. Se muestra el contenido de la HMWP medido durante el almacenamiento a 5 °C durante un período de 90 días.
La Figura 3 muestra el contenido de la HMWP en una serie de composiciones con varias cantidades de tensioactivo (poloxámero 188) a pH 6,2 y 6,8. Se muestra el contenido de la HMWP medido durante el almacenamiento a 30 °C durante un período de 180 días.
La Figura 4 muestra la DO a 340 nm de una serie de composiciones farmacéuticas que comprenden varias cantidades de poloxámero (0, 1,0, 3,0 mg/mL) y con variación en el pH (6,2, 6,5 y 6,8) después del estrés físico (pipeteo y agitación). Las figuras A y B representan los mismos datos, pero con enfoque en diferentes partes del eje izquierdo, ya que B es una ampliación del intervalo bajo para visualizar las mediciones del intervalo bajo. La Figura 5 muestra la DO a 340 nm de series de las composiciones farmacéuticas que comprenden diferentes compuestos de la hormona de crecimiento, que son hGH t S, GH L101C, y el Conjugado I.
La Figura 6 muestra la puntuación media de la desviación estándar del IGF-I en sujetos japoneses (A) y sujetos no asiáticos (B).
Descripción
La presente solicitud se refiere a las composiciones farmacéuticas de los compuestos de la hormona de crecimiento. La composición o formulación de acuerdo con la invención debe ser capaz de acomodar el compuesto de la hormona de crecimiento tanto durante la producción como durante el almacenamiento de la formulación sin causar una pérdida sustancial de la actividad, modificación o de otras maneras una influencia negativa del compuesto de la hormona de crecimiento.
Un aspecto de la presente invención se refiere a la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1 que comprende un conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina.
La composición farmacéutica puede prepararse como una composición líquida, en donde las composiciones líquidas pueden ser tales como una solución, una suspensión o una emulsión.
En modalidades adicionales tales composiciones son composiciones acuosas que comprenden al menos 50 % p/p de agua, tal como 50-80 % p/p, tal como 50-70 % p/p, tal como 50-60 % p/p de agua.
Conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina
Con el fin de acomodar la administración menos frecuente de un conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina con relación a la hGH recombinante, el conjugado debe formularse en una concentración suficientemente alta. La concentración del conjugado puede describirse en mg/mL o en concentraciones molares, de las cuales esta última puede considerarse más precisa debido a la variación en el peso molecular que depende de la cadena lateral del ligando de la albúmina.
La composición farmacéutica de acuerdo con la invención comprende un conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina en una concentración de 2,0 mg/mL a 20,0 mg/mL, tal como 3,0-10,0 mg/mL. En dependencia de la dosificación requerida puede ser ventajoso ser capaz de almacenar las composiciones farmacéuticas con varias concentraciones del ingrediente activo, por ejemplo, el conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina. En una modalidad la concentración es, tal como 6,0-8,0 mg/mL o tal como 6,0-7,0 mg/mL. En una modalidad la concentración del conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina es 6,7 mg/mL. En modalidades alternativas la concentración del conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina es 2-5 mg/mL, tal como 2,5-4 mg/mL. En una alternativa adicional, la concentración del conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina es 8-12 mg/mL, tal como 9-11 mg/mL. En una modalidad preferida la composición y la concentración de los componentes adicionales de la composición farmacéutica permanece inalterada mientras que solo se ajusta la concentración del conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina.
El conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina se obtiene al conjugar una cadena lateral de unión a albúmina con la proteína hormona de crecimiento. El conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina puede comprender, por lo tanto, una cadena lateral de unión a albúmina (AB) y la proteína hormona de crecimiento (GH) que se unen covalentemente (-) entre sí, como se representa por la fórmula AB-GH. La cadena lateral de unión a albúmina (AB) se compone de un residuo de unión a la albúmina (A) y de un espaciador (B) enlazados entre sí por una entidad química (W). El enlazamiento a la hormona de crecimiento es a través de un grupo químico Q. El conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina se describe por lo tanto por la fórmula extendida: GH-Q-B-W-A. En una modalidad, la composición de acuerdo con la invención comprende un conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina de la fórmula: GH-Q-B-W-A.
Para cualquier compuesto de la hormona de crecimiento que incluye mutaciones o modificaciones, es importante considerar si esos cambios afectan a la actividad en comparación con la hormona de crecimiento ts. Se dispone de múltiples pruebas para la persona experta y para el propósito de la presente solicitud, los compuestos, proteínas o conjugados de la hormona de crecimiento se consideran todos biológicamente activos, tales como capaces de estimular el receptor de la hormona de crecimiento que puede medirse en un ensayo BAF o en estudios en ratón o rata conocidos en la técnica y descritos en documentos tales como WO2011/089255. Se observa que la actividad en algunos ensayos puede disminuir en comparación con la hormona de crecimiento de tipo salvaje, pero el aumento de la vida media debido a los cambios estructurales en la molécula puede contrarrestar esto, lo que resulta en una molécula con un efecto prolongado.
La hormona de crecimiento humana (hGH) se usa en la presente descripción para describir la secuencia de la proteína hormona de crecimiento madura humana de 191 residuos de aminoácidos como se define por la SEQ ID NO: 1.
Aunque se toleran las mutaciones en la secuencia de la hormona de crecimiento humana, se prefiere un número mínimo de mutaciones que pueden expresarse como el nivel de identidad con la SEQ ID NO:1. En una modalidad la GH del conjugado es al menos 95 % idéntica a la hGH, tal como 96 %, tal como 97 %, tal como 98 % o tal como 99 % idéntica a la hGH.
En modalidades adicionales la GH de los conjugados tiene a lo máximo 4 mutaciones puntuales, tal como a lo máximo 3 mutaciones puntuales en comparación con la hGH, tal como a lo máximo 2 mutaciones puntuales o tal como exactamente 1 mutación puntual en comparación con la hGH.
El enlazamiento de la cadena lateral de unión a albúmina a la GH puede ser a través de un residuo de tipo salvaje o de un residuo de aminoácido mutante.
En una modalidad, la hormona de crecimiento (GH) comprende una mutación puntual en cualquiera de los aminoácidos AA 98-105 en comparación con la hormona de crecimiento humana. En una modalidad, la hormona de crecimiento (GH) comprende una mutación de Cys, que es la sustitución de un residuo ts por una cisteína en la secuencia de la GH. En una modalidad, la GH comprende una mutación de Cys en cualquiera de los aminoácidos AA 98-105 en comparación con la hormona de crecimiento humana.
En una modalidad, la hormona de crecimiento (GH) incluye la mutación L101C.
En una modalidad la cadena lateral (AB) se une a la hormona de crecimiento a través de un residuo de aminoácido en el lazo 2 (L2, AA99-106) o los residuos correspondientes en una variante de la hormona de crecimiento.
En una modalidad, la composición de acuerdo con la invención comprende un conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina que tiene la siguiente fórmula: A-W-B-Q-GH, en donde
GH representa un polipéptido de la hormona de crecimiento,
A es un residuo de unión a la albúmina,
B es un espaciador hidrofílico,
W es un grupo químico que enlaza A y B,
Q es un grupo químico -NH-C(O)-(CH2)- que une GH y B
y “-“ es un enlace covalente.
En una de estas modalidades A-W-B-Q- se une a la GH a través de un residuo de Cys en la GH, que puede ser tal como a una mutación de Cys que introduce un residuo de Cys adicional.
En una modalidad A-W-B-Q- se une al L101C de la GH.
En una modalidad adicional A se selecciona de:
Figure imgf000006_0001
en donde * indica la unión a B a través de W. En una modalidad adicional W tiene la fórmula: Wa-Wb, en donde W a se selecciona de -C(O)NH-, -NHC(O)-, -C(O)NHCH2-, -CH2NHC(O)-, -C(O)NHS(O)2-, -S(O)2NHC(O)-, -OC(O)NH-, -NHC(O)O-, -C(O)CH2-, -CH2C(O)-, -C(O)CH=CH-, -CH=CHC(O)-, -(CH2)-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, y W b se selecciona de -CH2-C6Hi 2-C(=O)-, -OEG-, -Lys, -Glu, -Y-Glu- , -CH-, -CH-(CH2-SOa H)-C(O)-, -S(O)2-(CH2 )3-C(O)-, o un enlace de valencia.
En una modalidad adicional W se selecciona de -C(O)NH-, -NHC(O)-, -C(O)NHCH2-, -CH2NHC(O)-, -C(O)NHS(O)2-, -S(O)2NHC(O)-, -OC(O)NH-, -NHC(O)O-, -C(O)CH2-, -CH2C(O)-, -C(O)CH=CH-, -CH=CHC(O)-, -(CH2), -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, o un enlace de valencia. En una modalidad adicional W es -C(O)NH-S(O)2-(Ch 2 )3-C(O)-.
De acuerdo con la invención, B es un espaciador hidrofílico. La naturaleza hidrofílica de B aumenta la solubilidad en agua de la cadena lateral de unión a la albúmina (AB- o A-W-B-Q-) y el conjugado resultante de la hormona de crecimiento. Por lo tanto, tales cadenas laterales y compuestos son muy adecuados para las soluciones acuosas tanto durante el procesamiento como para el almacenamiento. Por lo tanto, al menos una parte del compuesto tendrá tendencia a interactuar con las moléculas de agua y por lo tanto, se disolverá en agua y en otras sustancias o solventes polares.
En una modalidad, el espaciador B comprende al menos un motivo OEG, el radical del ácido 8-amino-3,6-dioxaoctánico, es decir -NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-C(O)-.
En otra modalidad más específica el espaciador hidrofílico (B) comprende al menos dos motivos OEG. La orientación de tal motivo(s) OEG es en una modalidad de manera que -C(O)- está más cerca al compuesto de la hormona de crecimiento, mientras que -NH- está más cerca al residuo de unión a la albúmina.
En modalidades adicionales que comprenden dos motivos OEG los dos motivos tienen una orientación idéntica o una orientación diferente. En una modalidad dos de tales motivos OEG se ubican adyacentes entre sí mientras que en modalidades alternativas tales motivos OEG están separados por uno o más átomos enlazados covalentemente.
En una modalidad, el espaciador hidrofílico comprende al menos un residuo de ácido glutámico. El aminoácido ácido glutámico comprende dos grupos de ácido carboxílico. Su grupo gamma-carboxilo puede usarse para formar un enlace amida con el grupo épsilon-amino de la lisina, o con un grupo amino de una molécula de OEG, si está presente, o con el grupo amino de otro residuo de Glu, si está presente. El grupo alfa-carboxilo puede usarse alternativamente para formar un enlace amida similar con el grupo épsilon-amino de la lisina, o con un grupo amino de una molécula de OEG, si está presente, o con el grupo amino de otro residuo de Glu, si está presente. El grupo amino de Glu puede, a su vez, formar un enlace amida con el grupo carboxilo del residuo de unión a la albúmina, o con el grupo carboxilo de un motivo de OEG, si está presente, o con el grupo gamma carboxilo o el grupo alfa carboxilo de otro Glu, si está presente. El enlace del grupo amino de un Glu con un grupo gamma-carboxi de un segundo Glu puede referirse como un motivo "gamma-Glu".
En una modalidad el espaciador hidrofílico comprende al menos un motivo OEG-Glu combinado (-NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-C(O)NH-CH(C(O)OH)-(CH2)2-C(O)-) o al menos un motivo Glu-OEG combinado (-NH-CH(C(O)OH)-(CH2)2-C(O)NH-(c H2)2-O-(Ch2)2-O-CH2-C(O)-) o una combinación de los mismos, en donde tales motivos Glu-OEG y OEG-Glu pueden separarse por uno o más átomos enlazados covalentemente o unidos directamente entre sí por un enlace amida del Glu que forma un gamma-Glu.
En una modalidad el espaciador hidrofílico comprende al menos un motivo OEG-Glu combinado (-NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-C(O)NH-CH(C(O)OH)-(CH2 )4-NH-) o al menos un motivo Lys-OEG combinado (-NH-CH(C(O)OH)-(CH2 )4-NHC(O)-CH2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-NH-) o una combinación de los mismos, donde tales motivos Lys-OEG y OEG-Lys pueden separarse por uno o más átomos enlazados covalentemente.
En una modalidad adicional B tiene la fórmula;
-X1-X2-X3-
en donde
X i , X2 y X3 se seleccionan independientemente de un enlace de valencia y los elementos de -OEG-, -Lys-, -Glu- y -y-Glu- que pueden todos unirse a través de enlaces peptídicos, donde X3 es preferentemente un -OEG- o -Lys-.
En una modalidad B tiene la fórmula;
-X1-X2-X3-X4-,
en donde
X4 es -NH-CH(-COOH)-(CH2 )4 NH-,
X3 es -OEG-,
X2 es -y-Glu-y-Glu- y
X i es -OEG-.
En una modalidad B tiene la fórmula;
-X1-X2-X3-X4-,
en donde
X4 es -NH-CH(-COOH)-(CH2 )4 NH-,
X3 es -OEG-,
X2 es -y-Glu-y-Glu- y
X i es un enlace de valencia.
En una modalidad B tiene la fórmula;
-X1-X2-X3-,
en donde
X i es -W i -[(CHR1 )n-W2 ]m 1-{[(CH2 )n l E1]m 2-[(CHR2 )l2 -W3 ]m 3}n 2-,
X2 es -[(CHR3 )l3 -W4 ]m 4-{[(CH2 )n 3 E2]m 5-[(CHR4 )l4 -W5 ]m 6}n 4-,
X3 es -[(CHR5 )l5 -W6 ]m 7-,
I1, I2, I3, I4, e I5 se seleccionan independientemente de 0-16,
m1, m3, m4, m6 y m7 se seleccionan independientemente de 0-10,
m2 y m5 se seleccionan independientemente de 0-16,
n1, n2, n3 y n4 se seleccionan independientemente de 0-6,
R1 , R2 , R3 , R4 y R5 se seleccionan independientemente de hidrógeno, -C(O)OH, -C(O)NH2 , -S(O)OH, -S(O)2OH, -CH2S(O)2OH, -NH-C(=NH)-NH2 o C1-6-alquilo; en donde los grupos alquilo se sustituyen opcionalmente con -C(O)OH, -C(O)NH2 , -S(O)OH, -S(O)2(OH), -CN u -OH,
E1 y E2 se seleccionan independientemente de -O-, -N(R6 )-, -N(C(O)R7 )- o un enlace de valencia; en donde R6 y R7 representan independientemente hidrógeno o C1-6-alquilo,
de W1 a W6 se seleccionan independientemente de -C(O)NH-, -NHC(O)-, -(CH2)s 1C(O)NH-,
-C(O)NHCH2-, -CH2 NHC(O)-, -C(O)NHS(O)2-, -S(O)2 NHC(O)-, -OC(O)NH-, -NHC(O)O-, -C(O)CH2-, -CH2 C(O)-, -C(O)CH=CH-, -CH=CHC(O)-, -(cH 2)s2-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, o un enlace de valencia; en donde s1 y s2 son independientemente 0, 1, 2, 3 o 4.
En una modalidad adicional I1, I2, I3, I4 e I5 son independientemente 0-6. En una modalidad adicional m1, m3, m4, m6 y m7 son independientemente 0-6. En una modalidad adicional, m2 y m5 son independientemente 0-10. En una modalidad adicional, n1, n2, n3 y n4 son independientemente 0-4. En una modalidad adicional, E1 y E2 se seleccionan independientemente de -O- o -N(R6 )- o un enlace de valencia.
En una modalidad adicional, de W 1 a W 6 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en -C(O)NH-, -NHC(O)-, -CH2NHC(O)-, -(CH2)s 1C(O)NH-, -C(O)NHS(O)2-, -S(O)2NHC(O)-, -NHC(O)C1-6-alquilo, -C(O)NHC1-6-alquilo o un enlace de valencia; en donde el grupo alquilo se sustituye opcionalmente con oxo.
En una modalidad adicional, R1 , R2 , R3 , R4 y R5 se seleccionan independientemente de hidrógeno, -C(O)OH, -C(O)NH2 , -S(O)2OH o C1-6-alquilo; en donde el grupo C1-6-alquilo se sustituye opcionalmente con -C(O)OH, -C(O)NH2 o -S(O)2 OH.
En una modalidad adicional, -{[(CH2 )n 1 E1]m 2-[(CHR2 )i2 -W3 ]m 3}n 2- y -{[(CH2 )n 3 E2]m 5-[(CHR4 )i4 -W5 ]m 6}n 4-, en donde E1 y E2 son -O-, se seleccionan de
Figure imgf000008_0001
en donde * se entiende que denota un punto de unión, es decir, un enlace abierto.
En una modalidad adicional, B se selecciona de:
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En una modalidad adicional, el conjugado de GH se selecciona de:
Figure imgf000010_0001
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Excipientes farmacéuticos
Como se describió en la presente descripción anteriormente, la presente invención se refiere a la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1 que comprende un conjugado de la hormona de crecimiento y un tensioactivo capaz de estabilizar la formulación.
La composición puede comprender además excipientes farmacéuticos, tales como agente(s) de tonicidad, agente(s) quelante(s), estabilizantes y tensioactivos adicionales. Por conveniencia se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20ma edición, 2000.
En una modalidad de la invención la composición farmacéutica es una formulación líquida. En una modalidad de la invención la composición farmacéutica es una composición acuosa, es decir una composición donde el componente se disuelve o suspende en agua. Tal composición es típicamente una solución o una suspensión. Si la composición comprende componentes que no se pueden disolver en agua la composición puede ser una emulsión de dos líquidos, frecuentemente agua y un aceite o un líquido a base de ácido graso. En otra modalidad, la composición farmacéutica es una composición liofilizada, a la que el médico o el paciente añaden solventes y/o diluentes antes del uso.
Es bien sabido que la hormona de crecimiento humana es una proteína inestable que reacciona a los cambios de pH tanto por desaminación como por agregación. Por lo tanto, es de gran interés determinar para el nuevo compuesto de la hormona de crecimiento qué pH y composición de la solución reguladora proporcionan una alta estabilidad, La composición de la invención tiene un pH de 5,0-8,0, tal como de 6,0-7,5, tal como de 6,5-7,0. El pH también puede ser 6,6-6,9 o 6,7-6,9. En modalidades adicionales el pH de la composición es 6,6, 6,7, 6,8, 6,9 o 7,0.
En una modalidad adicional de la invención la solución reguladora se selecciona del grupo que consiste en acetato de sodio, carbonato de sodio, citrato, glicilglicina, histidina, glicina, lisina, arginina, dihidrógeno fosfato de sodio, hidrógeno fosfato de disodio, fosfato de sodio y tris(hidroximetil)-aminometano, bicina, tricina, ácido málico, succinato, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido aspártico o las mezclas de los mismos. En una modalidad, la composición farmacéutica no incluye glicina. En una modalidad, la composición comprende histidina como solución reguladora.
En una modalidad, la composición comprende histidina y tiene un pH de 6,5-7,0.
En una modalidad, la concentración de histidina es de 0,5 mg/mL a 2 mg/mL, tal como de 0,6-1,0 mg/mL, tal como de 0,6-0,8 mg/mL, o de 0,6-0,7 mg/mL, tal como 0,65-0,70 mg/mL o aproximadamente 0,7 mg/mL. En una modalidad alternativa la concentración de histidina es de 1,0-2,0 mg/mL, o tal como de 1,5-1,8 mg/mL, o tal como de 1,5-1,6 mg/mL, tal como aproximadamente 1,5 mg/mL.
La hormona de crecimiento y, en particular, los conjugados de la hormona de crecimiento muestran una tendencia no deseada a agregarse. En el presente caso, el ligando hidrofóbico de la albúmina enlazado a la hormona de crecimiento puede crear una mayor tendencia a la agregación de la molécula cuando se diluye en una composición farmacéutica.
Un tensioactivo puede ayudar a aumentar la solubilidad en agua de las sustancias hidrofóbicas o aceitosas o de cualquier otra manera aumentar la miscibilidad de dos sustancias con diferentes hidrofobicidades y, por lo tanto, la solubilidad opuesta. Un tensioactivo puede ayudar además a disminuir la agregación por la interacción entre el tensioactivo y la molécula de proteína en una composición farmacéutica líquida. En una modalidad de la descripción, la composición comprende un tensioactivo.
En una modalidad adicional de la descripción, el tensioactivo es un polímero de bloque de polioxipropilenopolioxietileno. En una modalidad, el tensioactivo se selecciona de tensioactivos no iónicos, tales como poloxámeros que incluyen Pluronic® F68, poloxámero 188 y 407 y Triton X-100. En una modalidad, el tensioactivo se selecciona de los derivados de polioxietileno y polietileno tales como los derivados alquilados y alcoxilados (tweens, por ejemplo, Tween-20, Tween-40, Tween-80 y Brij-35). En una modalidad, el tensioactivo es polisorbato 80. En una modalidad, la composición de la invención comprende un tensioactivo seleccionado de poloxámero 188 y polisorbato 80. En la presente invención, el tensioactivo es poloxámero 188. En una modalidad, la composición descrita comprende 0,1 -5,0 mg/mL de tensioactivo, tal como 0,5-3,0 mg/mL de tensioactivo, tal como poloxámero 188 o polisorbato 80.
En una modalidad, la composición comprende 1 mg/mL de poloxámero 188.
En una modalidad, la composición descrita comprende histidina y tiene un pH de 6,5-7,0 e incluye un tensioactivo. En una modalidad, la composición descrita comprende histidina y tiene un pH de 6,5-7,0 y comprende 0,1 - 5,0 mg/mL de poloxámero 188, tal como 1,0. - 3,0 mg/mL de poloxámero 188, o 3 mg/mL. La composición de la invención comprende 0,5-5,0 mg/mL de poloxámero 188.
De acuerdo con la invención, la composición comprende un conservante farmacéuticamente aceptable. En una modalidad adicional de la invención, el conservante se selecciona del grupo que consiste en fenol, o-cresol, m-cresol, p-cresol, p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, 2-fenoxietanol, p-hidroxibenzoato de butilo, 2-feniletanol, alcohol bencílico, clorobutanol, y tiomersal, bronopol, ácido benzoico, imidourea, clorohexidina, deshidroacetato de sodio, clorocresol, p-hidroxibenzoato de etilo, cloruro de bencetonio, clorfenesina (3-(pclorfenoxi)propano-1,2-diol) o las mezclas de los mismos.
En una modalidad, la composición comprende fenol.
En una modalidad adicional de la invención el conservante está presente en una concentración de 0,1 mg/mL a 20 mg/mL. En una modalidad adicional de la invención el conservante está presente en una concentración de 0,1 mg/mL a 5 mg/mL. En una modalidad la composición de acuerdo con la invención comprende 2,0-4,0 mg/mL de fenol, tal como 3,0-4,0 mg/mL de fenol.
Método de preparación de una composición farmacéutica
Como punto de partida para la preparación de una composición farmacéutica, el conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina se proporciona en una solución, normalmente una solución acuosa. Esta solución inicial es preferentemente muy concentrada para permitir la dilución durante la preparación de las composiciones farmacéuticas. En una modalidad, la solución inicial del conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina es más de 15 mg/mL, tal como 15-30 mg/mL, o tal como 15-25 mg/mL.
El método habitual de preparación es disolver los excipientes (solución reguladora, tensioactivo, agente isotónico y conservante en agua) en una solución reguladora 2X que incluye cada excipiente en la concentración doble de la concentración de las composiciones finales. En dependencia de la concentración de la solución del conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina (solución inicial) se añade un volumen adecuado de esto para incluir la cantidad requerida para alcanzar la concentración de las composiciones farmacéuticas finales. La mezcla puede realizarse añadiendo lentamente la solución compuesta y asegurando la mezcla continua por agitación. Finalmente, se añade agua para alcanzar el volumen total. El pH puede ajustarse en diferentes etapas, tal como una o más de la solución compuesta, la solución reguladora 2X y la composición farmacéutica final.
El experto sabrá cómo modificar los métodos de diversas maneras, tales como ajustar las concentraciones de la solución reguladora 2X si se requiere una relación de mezcla diferente o si uno o más de los componentes de la composición final ya están presentes en la solución compuesta, por lo tanto, la concentración de dichos componentes en la solución reguladora 2X debe ser menor que el doble de la concentración final.
El Ejemplo 8 y 9 en la presente descripción describen la preparación de las composiciones de la GH con ajustes al método general anterior. Una información clave es la necesidad de evitar mezclar la GH con una alta concentración de fenol.
Métodos de tratamiento
Como se describió en la sección de antecedentes, los productos de la hormona de crecimiento son adecuados para el tratamiento de las deficiencias de la hormona de crecimiento. Básicamente una composición farmacéutica de acuerdo con la invención puede ser para su uso en el tratamiento de cualquier enfermedad o trastorno donde el paciente se beneficiará de un aumento en la actividad de la hormona de crecimiento circulante. En los tratamientos actuales se administra una proteína de la hormona de crecimiento. Como alternativa, pueden administrarse los compuestos de la hormona de crecimiento con una vida media prolongada para proporcionar la actividad de la hormona de crecimiento.
Un aspecto de la descripción se refiere al uso de la composición de la hormona de crecimiento para la fabricación de un medicamento para el tratamiento, en particular el tratamiento de la deficiencia de la hormona de crecimiento en niños y/o adultos u otras enfermedades o estados donde el paciente se beneficia de un nivel aumentado de la hormona de crecimiento como se describe en la presente descripción.
Otro aspecto se refiere a la preparación de la composición farmacéutica descrita en la presente descripción para su uso en un método de tratamiento; así como también la composición farmacéutica para su uso en un método de tratamiento.
En tales modalidades, la composición farmacéutica de acuerdo con la invención es para su uso en un método de tratamiento o prevención de la deficiencia de la hormona de crecimiento en niños y/o adultos. Otras enfermedades o trastornos donde una concentración aumentada de la hormona de crecimiento circulante puede ser útil también pueden tratarse o prevenirse mediante el uso de la composición farmacéutica de la invención. En una modalidad, la composición farmacéutica de la invención es para su uso en un método para tratar enfermedades o estados donde se observa un beneficio del aumento en la cantidad de hormona de crecimiento circulante. Tales enfermedades o estados incluyen la deficiencia de la hormona de crecimiento (GHD); el síndrome de Turner; el síndrome de Prader-Willi (PWS); el síndrome de Noonan; el síndrome de Down; la enfermedad renal crónica, la artritis reumatoide juvenil; la fibrosis quística, la infección por VIH en niños que reciben tratamiento HAART (niños con VIH/HALS); los niños que nacen pequeños para la edad gestacional (s Ga ); la estatura pequeña en niños que nacen con muy bajo peso al nacer (VLBW) excepto SGA; la displasia esquelética; la hipocondroplasia; la acondroplasia; la estatura pequeña idiopática (ISS); la GHD en adultos; las fracturas en o de los huesos largos, tal como la tibia, el peroné, el fémur, el húmero, el radio, el cúbito, la clavícula, el metacarpo, el metatarso, y los dedos; las fracturas en o de los huesos esponjosos, tal como el cráneo, la base de la mano, y la base del pie; los pacientes después de una cirugía de tendones o ligamentos en por ejemplo la mano, la rodilla, o el hombro; los pacientes que tienen o padecen de osteogénesis por distracción; los pacientes después de un reemplazo de cadera o disco, la reparación del menisco, las fusiones espinales o la fijación de la prótesis, tal como en la rodilla, la cadera, el hombro, el codo, la muñeca o la mandíbula; los pacientes en los que se han fijado materiales de osteosíntesis, como clavos, tornillos y placas; los pacientes sin unión o con una mala unión de las fracturas; los pacientes después de una osteotomía, por ejemplo de la tibia o del 1er dedo del pie; los pacientes después del implante de injertos; la degeneración del cartílago articular en la rodilla causado por trauma o artritis; la osteoporosis en los pacientes con síndrome de Turner; la osteoporosis en los hombres; los pacientes adultos en diálisis crónica (APCD); la enfermedad cardiovascular asociada con el estado de mal nutrición en APCD; la reversión de la caquexia en APCD; el cáncer en APCD; la enfermedad pulmonar crónica obstructiva en APCD; el VIH en APCD; los ancianos con APCD; la enfermedad hepática crónica en APCD, el síndrome de fatiga en APCD; la enfermedad de Crohn; IBD, UC, la función hepática afectada; los hombres con infecciones por VIH; el síndrome del intestino corto; la obesidad central; el síndrome de lipodistrofia asociado al VIH (HALS); la infertilidad masculina; los pacientes después de una cirugía mayor electiva, la desintoxicación del alcohol/fármacos o el trauma neurológico; el envejecimiento; la ancianidad débil; la osteoartritis; el cartílago con daño traumático; la disfunción eréctil; la fibromialgia; los trastornos de memoria; la depresión; la lesión cerebral traumática; la hemorragia subaracnoidea; muy bajo peso al nacer; el síndrome metabólico; la miopatía glucocorticoide; o la estatura pequeña debido al tratamiento con glucocorticoides en niños. Las hormonas de crecimiento también se han usado para la aceleración de la cicatrización del tejido muscular, el tejido nervioso o las heridas; la aceleración o mejora del flujo sanguíneo al tejido dañado; o la disminución de la velocidad de infección en el tejido dañado.
En una modalidad, el compuesto de la hormona de crecimiento y sus composiciones son para el tratamiento de la GHD en niños, la GHD en adultos (AGHD), el síndrome de Turner (TS), el síndrome de Noonan, la estatura baja idiopática (ISS), la pequeñez para la edad gestacional (SGA), el síndrome de Prader-Willi (PWS), la insuficiencia renal crónica (CRI), la displasia esquelética, la deficiencia de SHOX, el desgaste del SIDA, la lipodistrofia asociada al VIH (HARS), el síndrome del intestino corto que se incluye opcionalmente, la enfermedad dependiente de esteroides, la fibrosis quística y la fibromialgia.
En una modalidad, el conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina es para su uso en la fabricación de una composición farmacéutica como se describió en la presente descripción.
En una modalidad, la presente descripción se refiere a un método para el tratamiento de las enfermedades o estados mencionados anteriormente, en donde la actividad de la composición farmacéutica de acuerdo con la descripción es útil para tratar dichas enfermedades o estados. La administración de la composición farmacéutica, por ejemplo, el conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina, da como resultado un beneficio terapéutico asociado con un aumento en la cantidad del compuesto de la hormona de crecimiento circulante en el paciente. En una modalidad dicho método comprende, administrar a un paciente una cantidad efectiva de la composición farmacéutica que comprende un conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina mejorando de esta manera los síntomas de dicho paciente.
En una modalidad, la presente descripción se refiere a un método que comprende la administración a un paciente que lo necesita, de una cantidad efectiva de una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica de acuerdo con la descripción. La presente descripción proporciona por lo tanto un método para tratar estas enfermedades o estados, el método que comprende administrar a un paciente que lo necesita una cantidad terapéuticamente efectiva de un conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina en una composición farmacéutica de acuerdo con la presente descripción.
Una "cantidad terapéuticamente efectiva" de un compuesto de la invención como se usa en la presente descripción se refiere a una cantidad suficiente para curar, aliviar o detener parcialmente las manifestaciones clínicas de una enfermedad dada y sus complicaciones. Una cantidad adecuada para lograr esto se define como "cantidad terapéuticamente efectiva".
Las cantidades efectivas para cada propósito dependerán, por ejemplo, de la gravedad de la enfermedad o la lesión, así como también del peso, la edad y el estado general del sujeto.
Como se describió en la presente descripción, el conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina de la composición farmacéutica tiene una vida media extendida destinada a aumentar la exposición en el paciente al compuesto después de cada dosificación y el régimen de administración de la composición farmacéutica debe ajustarse para alcanzar una exposición efectiva.
En una modalidad, la composición farmacéutica es para la administración por inyecciones subcutáneas.
En una modalidad, la composición farmacéutica es para su uso en un método de tratamiento por inyecciones subcutáneas.
Como la respuesta del IGF-1 es una marca distintiva de la funcionalidad de la GH, la dosificación terapéuticamente efectiva puede estimarse en base a la respuesta del IFG-1 de un conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina dado. Como se observa en la Figura 6, la administración del conjugado da como resultado respuestas del IGF-1 dependiente de la dosis con niveles elevados del IGF-1 en todas las dosis, lo que demuestra que tales compuestos son adecuados para la administración una vez a la semana.
En una modalidad, la composición farmacéutica es para su uso en un método de tratamiento que administra el conjugado de hormona de crecimiento en una cantidad de aproximadamente 0,01-2,0 mg/kg por dosificación. En los adultos la composición puede ser para administrar 0,02-0,10 mg/kg, o tal como 0,02-0,08 mg/kg o tal como 0,03­ 0,06, 0,02-0,05 mg/kg o tal 0,02-0,04 mg/kg del conjugado de la hormona de crecimiento por dosificación. En modalidades adicionales, la composición farmacéutica es para su uso en un método de tratamiento en el que se administran 0,05-0,18 mg/kg tal como 0,08-0,16 mg/kg del conjugado de hormona de crecimiento por dosificación si el sujeto que lo necesita es un niño. Como se observa, el intervalo puede ser más amplio para los adultos y también puede depender del género, aunque normalmente dentro del intervalo de 0,01-0,08 mg/kg.
Las opciones de tratamiento actuales son principalmente inyecciones una vez al día con uno de varios productos recombinantes de la hormona de crecimiento.
En una modalidad la composición farmacéutica es para su uso en un método de tratamiento por administración aproximadamente una vez a la semana, o cada 7 días, o quizás incluso para la administración una vez cada 10 días.
Ejemplos
Un conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina puede prepararse de acuerdo con los métodos estándar. La proteína hormona de crecimiento se expresa en un huésped adecuado, tal como E. coli y se purifica. La reacción de conjugación puede realizarse de acuerdo con los métodos conocidos en la técnica por el experto. Los métodos generales útiles para la preparación de tales conjugados se presentan más abajo, que incluyen detalles relacionados con los conjugados específicos descritos en la presente descripción. El experto puede adaptar los métodos para preparar conjugados alternativos basados en el conocimiento general en la técnica.
Método general para la preparación de la proteína hormona de crecimiento
El gen que codifica la proteína hormona de crecimiento se insertó de manera recombinante en un vector plasmídico. Una cepa adecuada de E. coli se transforma subsecuentemente mediante el uso del vector plasmídico. La GH humana o las variantes de la GH pueden expresarse con una metionina N-terminal o como una fusión de MEAE de la que se escinde subsecuentemente la secuencia MEAE.
La reserva de células se preparó en glicerol al 25 % y se almacenó a -80 °C. La cepa de reserva en glicerol se inoculó en placas LB y subsecuentemente se incubó a 37 °C durante toda la noche. El contenido de cada placa se lavó con medio LB y se diluyó en 500 mL de medio LB para la expresión. Los cultivos se incubaron a 37 °C con agitación a 220 rpm hasta que se alcanzó una DO600 de 0,6. La inducción subsiguiente se realizó mediante el uso de IPTG 0,2 mM a 25 °C durante 6 horas. Las células se colectaron finalmente por centrifugación.
Las células se suspendieron subsecuentemente en Tris-HCl 10 mM, pH = 9,0 que contiene 0,05 % de Tween 20, EDTA 2,5 mM y urea 4 M, y se lisaron mediante el uso de un disruptor a 30 kPSI. Si se expresa una molécula de la GH con una cisteína libre (para la conjugación), se incluye cisteamina 10 mM en la solución reguladora de suspensión. El sobrenadante se colectó por centrifugación y subsecuentemente se sometió a purificación cromatográfica.
La purificación se realizó mediante el uso de la cromatografía de intercambio iónico e interacción hidrofóbica, seguido por la eliminación del marcador peptídico mediante el uso de la dipeptidil peptidasa I humana (hDPPI) expresada a partir de la célula CHO. La purificación final se logró por isoprecipitación y cromatografía de intercambio iónico.
La purificación puede lograrse, además, mediante el uso de la cromatografía de intercambio iónico, la cromatografía de interacción hidrofóbica, la cromatografía de afinidad, la cromatografía de exclusión por tamaño y las técnicas de separación basadas en membranas conocidas por un experto en la técnica.
Preparación de las variantes de GH de una única cys que incluye GH(L101C):
Después de la purificación inicial como se describió anteriormente, las variantes pueden tener parte de su cisteína libre bloqueada con glutatión y cistamina. El desbloqueo se realizó enzimáticamente mediante el uso de la glutaredoxina II (Grx2) en una solución reguladora de equilibrio que contiene GSH y GSSG. La GH (L101C) desbloqueada se separó del GSH/GSSG de bajo peso molecular mediante el intercambio de la solución reguladora en una columna de Sephadex G25.
Caracterización química de la proteína de los compuestos purificados de la hormona de crecimiento.
La proteína intacta purificada se analizó mediante el uso de MALDI-MS para confirmar que la masa observada correspondió a la masa teórica deducida a partir de la secuencia de aminoácidos.
Los enlaces disulfuro de enlazamientos esperados pueden demostrarse por mapeo de péptidos mediante el uso de la digestión con tripsina y AspN seguido por el análisis de MALDI-MS de la digestión antes y después de la reducción de los enlaces disulfuro con DTT.
Preparación de la cadena lateral de unión a la albúmina
Cadena lateral (I)
4-(1H-Tetrazol-16-il-hexadecanoilsulfamoil)butanoil-OEG-YGlu-YGlu-OEG-Ne(C(O)CH2Br)Lys-OH (I):
Figure imgf000015_0001
La cadena lateral (I) se sintetizó en un soporte sólido de acuerdo con el esquema 1, en la escala de 1 mM mediante el uso de la química estándar péptido-Fmoc en un sintetizador ABI433. El péptido se ensambló en una resina Fmoc-Lys(MTT)-Wang mediante el uso de los aminoácidos protegidos Fmoc-OEG-OH y Fmoc-Glu-OtBu. El ácido 4-(16-1H-Tetrazol-5-il-hexadecanoilsulfamoil)butírico se acopló manualmente mediante el uso de DIC/NHS en DCM/NMP, 2 eq. durante toda la noche, la prueba de TNBS mostró que la reacción se completó. La resina se trató después con 50 mL de DCM/TFA/TIS/agua (94:2:2:2) en un arreglo de flujo continuo hasta que desapareció el color amarillo, ~20 min. seguido por el lavado y la neutralización con DIPEA/d Mf . El ácido bromo acético (4 mM) en DCM/NMP (1:1) se activó con una mezcla de n Hs y DIC a 1 mM, se filtró y se añadió a la resina con la adición de DIPEA 1 mM adicional. La reacción se completó después de 1 hora. La resina se trató con 80 mL de TFA/TIS/agua (95:2,5:2,5) durante 1 hora. Se evaporó con una corriente de N2 , se precipitó por la adición de Et2O y se lavó con Et2O y se secó. El producto crudo se purificó en HPLC preparativa (2 corridas), con un gradiente de 30-80 % de 0,1 TFA / MeCN frente a 0,1 % de TFA en agua. Las fracciones se colectaron y liofilizaron con ~50 % de MeCN proporcionando la cadena lateral (I). TOF-MS: masa 1272,52 (M+1)
Esquema 1
Figure imgf000016_0002
» Piperídina
Figure imgf000016_0001
Figure imgf000016_0003
Figure imgf000016_0004
Cadena lateral (II)
De manera similar como se describió anteriormente, la cadena lateral (II) siguiente se preparó mediante el uso de Fmoc-Lys(Mtt)-OH y la resina Wang. TOF-MS: masa 844,84 (M+1)
Figure imgf000016_0005
Método general para conjugar una cadena lateral de unión a la albúmina con la proteína hormona de crecimiento El acoplamiento de una proteína GH que tiene una única cys libre interna (GH-SH) con una cadena lateral de unión a la albúmina (AB-Halo) como se describió anteriormente.
a) Liberación de la GH-SH (VII) a través de la reducción del disulfuro (VI) con un agente reductor selectivo adecuado:
b) Alquilación de la GH-SH libre (VII) con un ligando de la albúmina activado con halógeno (VIII) que permite conjugar la hormona de crecimiento con el AB enlazado a “-S -“ de un único residuo de Cys.
Figure imgf000016_0006
Conjugación de la cadena lateral de unión a la albúmina con la GH (101C) con la cadena lateral (I)
La cadena lateral de unión a la albúmina (78 mg/ 5 eq) se disolvió en 170 mL de la solución reguladora HEPES/EDTA con hidroxipropil-13-ciclodextrina al 5 % y se añadió m Tp (2,1 mL, 1 %) y NaCl 0,5 M (6,34 g).
A esta mezcla se añadió la GH(L101C) concentrada (1 eq, 46 mL) y la mezcla se dejó durante toda la noche a temperatura ambiente. La solución se volvió turbia durante la noche. Como la HPLC indicó que el material de partida no reaccionó, se añadieron otros 5 eq. del ligando de la albúmina del ejemplo 5 disuelto en un mínimo de n Mp . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas adicionales. Para más detalles sobre el método de conjugación y purificación se hace referencia al documento WO 11/089255.
El conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina I y II, que se muestra más abajo, se obtuvo mediante el uso del método descrito anteriormente.
Figure imgf000017_0001
Los métodos alternativos pueden usarse para preparar los conjugados de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina alternativos como se describió anteriormente en el documento WO11/015649 que incluye las conjugaciones C-terminales N-terminales y las conjugaciones en sitios específicos de la cadena a los residuos de Gln o Lys mediante el uso de una reacción de transglutaminasa. Además, para la conjugación de la única Cys como se describió anteriormente puede aplicarse un proceso de conjugación alternativo, tal como se describió en el documento WO11/050923.
Determinación del contenido de HMWP por cromatografía de exclusión por tamaño (SEC-HPLC)
El procedimiento analítico es una prueba de cromatografía de exclusión por tamaños (SE-HPLC), donde las muestras se analizan mediante el uso de una columna TSK G2000 SWxl, la elución isocrática mediante el uso de una solución reguladora de fosfato de sodio/ isopropanol y la subsecuente detección UV a 215 nm. El % de HMWP se calcula con relación al área total integrada
Inspección visual
Las muestras (volumen mínimo de 2 mL) almacenadas en frascos de vidrio o cartuchos (tipo I) se inspeccionan bajo una lámpara de diseño y en una cámara de luz. El aspecto visual de las muestras se cuantifica por una puntuación visual con criterios de claridad y partículas en una puntuación de 1 a 5 donde 1 es transparente y sin partículas y 5 se refiere a muestras con precipitado visible.
Determinación de los agregados de proteínas mediante el uso de la densidad óptica (DO)
La densidad óptica de las muestras se mide a 340 nm mediante el uso de un espectrofotómetro UV-VIS Varian Cary 100 Bio.
Determinación de las partículas mediante el uso de imágenes de microflujo (MFI)
La cuantificación de las partículas por tamaño y morfología en la solución no diluida (1 mL) se realizó mediante el uso de la microscopía de flujo en el microscopio de flujo para imágenes de microflujo MFI 5000. Se realizó la cuantificación y caracterización de las partículas subvisibles >2 pm, >10 pm y > 25 pm. También se aplicó un filtro (circularidad 0­ 0,85) que eliminaba las posibles burbujas de aire y las gotas de silicona.
En los siguientes ejemplos, solo las composiciones de la reivindicación 1, que comprenden 0,5-5,0 mg/mL de poloxámero 188, y con un pH de 6,5-7,0, están de acuerdo con la invención; las composiciones que no están de acuerdo con la reivindicación 1 se describen con fines ilustrativos.
Ejemplo 1
La estabilidad de una formulación del Conjugado I, descrita anteriormente, se investigó a un pH diferente (pH 6,0 y 6,6) que incluye diferentes tensioactivos y la variación de la concentración del tensioactivo y la solución reguladora (histidina). El estudio se realizó como un estudio de diseño del experimento (DoE).
La formulación probada incluye además del conjugado I de la hormona de crecimiento un tensioactivo y la solución reguladora histidina en una concentración de 0,68 mg/mL o 1,55 mg/mL, que incluye también 40 mg/mL de manitol y 3,0 mg/mL de fenol.
La cantidad de HMWP (proteína de alto peso molecular) se midió a lo largo de 90 días, en las muestras de los puntos de tiempo 0, 30, 60 y 90 días a 5 °C. Se obtuvieron datos similares a 25 °C. El contenido de HMWP se mide por cromatografía de exclusión por tamaño (SEC-HPLC) mediante el uso de una columna de gel TSK G3000 SWXL, una fase móvil de fosfato de sodio / isopropanol pH 7,0 con una elución isocrática y la subsecuente detección UV a 215 nm.
La Figura 1 muestra que el poloxámero 188 estabiliza la formulación en el momento de la preparación. Se encontraron mayores cantidades de HMWP en el tiempo cero (t=0) en las formulaciones sin poloxámero 188. Sin embargo, el nivel de HMWP en las formulaciones de polisorbato 80 y las formulaciones sin tensioactivo se redujo a niveles comparables a los de las formulaciones con poloxámero analizadas después de un mes de almacenamiento a 5 °C.
La Figura 2 muestra que 3 mg/mL de poloxámero 188 es superior a 1,0 mg/mL de polisorbato 80 a pH bajo.
Ejemplo 2
Se realizó un estudio de manufacturabilidad preparando las formulaciones del conjugado I.
Figure imgf000018_0001
La preparación de la sustancia farmacológica del conjugado líquido I (que incluye la solución reguladora histidina) se ajustó a pH 6,5 y 7,1 en un volumen de aproximadamente 40 % del volumen final. La solución reguladora (histidina, manitol, poloxámero y fenol) de aproximadamente un 60 % de volumen se ajustó a pH 6,8. Después de mezclar las dos soluciones, la formulación final se ajustó a un pH de 6,8. Las formulaciones a pH 6,8, preparadas a partir de las preparaciones que tienen diferentes pH, se siguieron en un estudio de estabilidad durante 1 mes de almacenamiento a 25 °C. Se analizaron las muestras obtenidas en el tiempo = 0, 1 día, 2 semanas y 1 mes. Todas las muestras aparecieron claras a la inspección visual y el % de HMPW medido de SE-HPLC se proporciona en la tabla más abajo.
Tabla 1. Evaluación de la formulación del conjugado I, pH 6,8
Figure imgf000018_0002
No se observó ninguna diferencia clara en los niveles de HMWP entre las formulaciones dependientes del pH de las soluciones de DS conjugadas con GH durante la preparación de las formulaciones del producto final. Todas las formulaciones muestran un nivel similar de HMWP en el momento de la preparación y una estabilidad similar en el estudio de estabilidad acelerada donde se probó la estabilidad durante 1 mes de almacenamiento a 25 °C. En las formulaciones preparadas a partir de DS con un pH de 6,5 podría observarse una ligera tendencia a que las formulaciones con mayores cantidades de poloxámero 188 (1,0 mg/mL y 3,0 mg/mL) desarrollen una mayor cantidad de HMWP con el tiempo.
Se espera que la estabilidad casi similar de todas las formulaciones se deba a un pH casi comparable en las formulaciones después de mezclar las soluciones reguladoras y las soluciones DS, ya que la solución reguladora (pH 6,8) comprende aproximadamente el 60 % de la solución del producto final.
Ejemplo 3
Las formulaciones del Conjugado I se realizaron con una variación en la concentración de poloxámero 188 (1,0, 3,0 y 5,0 mg/mL) en la solución reguladora histidina, que incluye manitol y fenol (0,68 mg/mL de histidina, 44 mg/mL de manitol y 3 mg/mL de fenol). La estabilidad a 30 °C a pH 6,2, 6,8 y 7,4 se probó por la medición de HMWP. El estudio se realizó como un estudio de diseño del experimento (DoE).
Como se ve en la figura 3, las muestras mostraron una cantidad igual de HMWP a tiempo 0. (T=0). El análisis estadístico de los datos de HMWP no halló ningún efecto significativo del poloxámero después de 4 semanas de almacenamiento a 30 °C. Sin embargo, se observó una tendencia a que la formulación con una mayor cantidad de poloxámero desarrollara una mayor cantidad de HMWP con el tiempo a pH 6,2 y 6,8, lo que indica que debe evitarse la alta concentración de poloxámero 188 si la composición es para un almacenamiento a largo plazo. Los datos de pH 7,4 no se incluyen en la figura, ya que el efecto del pH es dominante, lo que da como resultado una formación de HMWP generalmente baja.
Ejemplo 4
El efecto a pH 6,2, 6,5 y 6,8 se estudió en el siguiente experimento. Las formulaciones del Conjugado I se realizaron con una variación en la concentración de poloxámero 188 (0,0, 1,0, 3,0 mg/mL) y con una variación en el pH (6,2, 6,5 y 6,8). Otros componentes de las composiciones probadas fueron como en el Ejemplo 3. Las muestras se estresaron físicamente con cizallamiento a temperatura ambiente durante 7 días. Las muestras se tomaron después de 3 y 6 horas y después de 1, 2, 5, 6 y 7 días. Las otras muestras se estresaron al pipetear 25 veces. Todas las muestras se examinaron visualmente y se analizaron además por DO (densidad óptica) a 340 nm.
Como se observa en la figura 4, las muestras sin poloxámero 188 mostraron un aumento diferenciado en la DO 340 en comparación con las muestras con poloxámero 1881,0 y 3,0 mg/mL tanto en el estudio de agitación como en el de pipeteo. La tendencia se confirmó a todos los niveles de pH. La figura 4A muestra los resultados completos, mientras que la figura 4B muestra sólo la medida de DO 340 baja. Además, la puntuación visual mostró claramente que las muestras sin poloxámero estaban turbias y la turbidez aumentaba a pH decrecientes.
Ejemplo 5
Los experimentos similares al Ejemplo 4 a pH 6,2 y 6,8 se realizaron mediante el uso de tres compuestos de la hormona de crecimiento adicionales. La hormona de crecimiento humana de tipo salvaje (hGH TS), el Conjugado I y una variante de la hormona de crecimiento que incluye una mutación de la Cys 101 (GH L101C) que también es la proteína GH del Conjugado I. Como se observa en las Figuras 5A, 5B y 5C se confirmaron las conclusiones anteriores. El bajo contenido de tensioactivo mejora la estabilidad de la composición tanto inicialmente como después del estrés, según se probó durante 7 días. Para el Conjugado I, las muestras sin poloxámero parecían depender específicamente del pH. Por la puntuación visual, se observó un aumento de la turbidez con la disminución del pH.
Ejemplo 6
La evaluación de las imágenes de microflujo (MFI) se usó para medir la formación de partículas en las composiciones de la hormona de crecimiento. Las muestras (1 mL) se midieron en un microscopio de flujo para imágenes de microflujo MFI 5000. Como se indicó anteriormente, se incluyeron en la evaluación los siguientes compuestos: Hormona de crecimiento humana de tipo salvaje (hGH), Conjugado I, Conjugado II y la variante L101C de la hormona de crecimiento (GH L101C).
El efecto estabilizador del poloxámero 188 se evaluó con 6,7 mg/mL del compuesto de la hormona de crecimiento a pH 6,2 y pH 6,8.
El estudio se configura como un estudio de estabilidad en estrés con muestras en agitación durante un máximo de 7 días a temperatura ambiente. Las composiciones de la hormona de crecimiento a pH 6,2 y 6,8 que incluyen 0,0, 1,0 o 3,0 mg/mL de poloxámero 188 y las mediciones se realizaron a T=0 y T=2 (2 días). Todas las composiciones comprendían 0,68 mg/mL de histidina, 44,0 mg/mL de manitol y 3 mg/mL de fenol. Los datos obtenidos a T=0 se incluyen en la tabla 1, mientras que los datos obtenidos después de dos días (T=2) se incluyen en la tabla 2, más abajo.
Tabla 1 - Número de partículas a T=0
Figure imgf000019_0001
Continuación
Figure imgf000020_0001
Tabla 2 - Número de partículas a T=2. N/A indica que no fue posible medir el número de partículas debido a que había demasiadas partículas.
Figure imgf000020_0002
Se concluyó que el poloxámero 188 suprime la formación de partículas en toda la composición del compuesto de la hormona de crecimiento probada. Además, una mayor concentración (3 mg/mL en comparación con 1 mg/mL) de poloxámero 188 tiene un efecto más fuerte en la formación de partículas. Para los conjugados de la GH, el pH parece tener un efecto pronunciado en la supresión de las partículas ya que se obtienen mejores resultados a pH 6,8 que a pH 6,2, lo que reduce la ventaja de una alta concentración de poloxámeros. Se llegó a una conclusión similar por la inspección visual.
Ejemplo 7
Se realizó un ensayo aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo, de dosis múltiples y de aumento escalonado de la dosis en sujetos varones sanos japoneses y no asiáticos, para evaluar la seguridad, la tolerabilidad y los parámetros farmacocinéticos (FC) y farmacodinámicos (FD).
Cuatro cohortes de 16 sujetos recibieron dosis por administración subcutánea con el conjugado 1 (n=12) o el placebo (n=4) una vez a la semana durante 4 semanas consecutivas (números iguales de sujetos japoneses y no asiáticos). La dosificación fue de 0,02, 0,08, 0,16 y 0,24 mg/kg en las cohortes individuales. El compuesto se proporcionó como una formulación liofilizada y reconstituida antes del uso.
La farmacocinética del conjugado I se evaluó después de la cuarta (4ta) dosis. Se observó un aumento dependiente de la dosis de las concentraciones plasmáticas medias del conjugado 1 (no se muestran los datos). Los parámetros farmacodinámicos de la administración del conjugado I se evaluaron por la medición de la respuesta del IGF-I (sistema de inmunodiagnóstico (IDS)).
Se observaron las respuestas del IGF-I e IGFBP-3 dependientes de la dosis, con los niveles elevados de IGF-I en todas las dosis. Los perfiles medios de la puntuación de la desviación estándar (SDS) del IGF-I (Figura 6) indican que el conjugado I puede ser adecuado para la dosificación una vez a la semana. Además, muestran que se indujo una respuesta del IGF-I clínicamente relevante a una dosis < 0,08 mg/kg.
Ejemplo 8
La composición farmacéutica puede prepararse al mezclar una preparación del conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina con los excipientes requeridos. El siguiente proceso es útil cuando el punto inicial es una preparación líquida del conjugado.
Composición final:
Conjugado I de hormona de crecimiento (6,7 mg/mL)
Poloxámero 1881,0 mg/mL
histidina 0,68 mg/mL
manitol 44 mg/mL
fenol 4,0 mg/mL
El pH de la formulación es 6,8
Soluciones concentradas:
21,3 y 20,5 mg/mL del Conjugado I de la hormona de crecimiento (en 0,68 mg/mL de histidina) (lote NLfK040501 y NLfK040503)
poloxámero 18820 mg/mL (en WFI)
Solución reguladora: manitol 110 mg/mL, fenol e histidina 10 mg/mL, en donde la concentración de histidina está en dependencia del volumen/cantidad de DS usado.
HCl para ajustar el pH
La preparación del conjugado I (que incluye la solución reguladora de histidina) se pesó y se añadió poloxámero 188 como una solución concentrada. Se añadió WFI a la solución para alcanzar el 55 % del volumen final. Se preparó una solución reguladora que incluye manitol, histidina, fenol y ácido clorhídrico para ajustar el pH. La solución reguladora (40 % del volumen final) se añadió al conjugado I y la solución de poloxámero 188, dando como resultado el 95 % del volumen final. Se midió el pH (y se ajustó si era necesario) y finalmente se añadió WFI para alcanzar el volumen final.
Durante la preparación, las muestras se tomaron del conjugado I y la solución de poloxámero 188 y de la formulación intermedia y la composición farmacéutica final. El contenido de proteínas de alto peso molecular (% HMWP) se midió por SE-HPLc (tabla 1) y se encontró que era bajo durante todo el proceso. La composición farmacéutica final parecía clara e incolora.
Tabla 1 - HMWP (%) de las preparaciones del Conjugado 1, muestras en proceso y formulación final
Figure imgf000022_0001
Ejemplo 9
En otro estudio, el fenol se incluyó en una solución reguladora de fenol a concentraciones variables (5, 10 y 30 mg/mL) y se introdujo en la preparación del conjugado I. Como se observa más abajo, el uso de 30 mg/mL de fenol dio un aumento del % de HmW p en la formulación final. El nivel de HMWP está en dependencia de la concentración del conjugado I en la solución y la concentración de fenol.
Soluciones concentradas y excipientes:
Preparación del Conjugado I (lote IHJe12-021): 18,0 mg/mL
Soluciones de fenol 30 mg/mL, 10 mg/mL y 5 mg/mL
poloxámero 50 mg/mL
Manitol (en polvo).
Histidina
Para cada formulación se preparó una solución de fenol e histidina que incluye la cantidad total de fenol e histidina para alcanzar la concentración deseada en la formulación final. La preparación del Conjugado I, en cantidad para alcanzar la cantidad total en la formulación final, se añadió a las soluciones de fenol-histidina, se tomaron muestras en proceso, y subsecuentemente se añadieron poloxámero 188 y manitol en cantidades para alcanzar la concentración deseada en la formulación final. Los estudios anteriores (no mostrados) habían revelado problemas de solubilidad si se incluían poloxámero 188 y manitol en la solución reguladora. Finalmente se añadió w Fi para alcanzar el volumen final y el pH se ajustó con ácido clorhídrico.
Formulaciones finales:
Conjugado I de la hormona de crecimiento 2,0, 3,3; 6,7; y 10 mg/mL
Poloxámero 1881,0 mg/mL
histidina 0,68 mg/mL
manitol 44 mg/mL
fenol 3,0 mg/mL
pH 6,3.
La Tabla 2 muestra la HMWP (%) en las muestras en proceso y las formulaciones finales en dependencia de la concentración inicial de fenol y la concentración de la GH. El nivel inicial de la HMWP de la preparación del conjugado I fue del 3,7 %. Se obtuvo un contenido muy alto de la HMWP cuando se mezcló una concentración alta de fenol con una concentración baja de conjugado de la hormona de crecimiento.
Figure imgf000022_0002

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Una composición farmacéutica que comprende 2-20 mg/mL del conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina, una solución reguladora, un conservante y 0,5 - 5,0 mg/mL de poloxámero 188, en donde el pH de la composición es 6,5-7,0 y en donde el conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina tiene la siguiente fórmula:
    A-W-B-Q-GH
    GH representa un compuesto/proteína hormona de crecimiento
    A es un residuo de unión a la albúmina
    B es un espaciador hidrofílico
    Q es un grupo químico que enlaza GH y B,
    W es un grupo químico que enlaza B y A.
    y “-“ es un enlace covalente
    en donde el residuo de unión a la albúmina, A, se selecciona de
    Figure imgf000023_0001
    2. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la composición comprende 0,5-4,0 mg/mL de poloxámero 188.
    3. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la composición comprende 1,0-3,0 mg/mL de poloxámero 188.
    4. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el conservante se selecciona del grupo que consiste en fenol, o-cresol, m-cresol, p-cresol, p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, 2-fenoxietanol, p-hidroxibenzoato de butilo, 2-feniletanol, alcohol bencílico, clorobutanol, y tiomersal, bronopol, ácido benzoico, imidourea, clorohexidina, deshidroacetato de sodio, clorocresol, p-hidroxibenzoato de etilo, cloruro de bencetonio, clorfenesina (3-(p-clorfenoxi)propano-1,2-diol) o mezclas de los mismos.
    5. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde la solución reguladora se selecciona del grupo que consiste en: citrato, glicilglicina, histidina, glicina, lisina y arginina.
    6. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composición comprende la solución reguladora histidina.
    7. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composición no comprende glicina.
    8. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el pH de la composición es 6,8.
    9. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composición comprende 2,0-4,0 mg/mL de fenol o 3,0-4,0 mg/mL de fenol.
    10. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composición comprende un agente isotónico, tal como un alcohol de azúcar.
    11. La composición de acuerdo con la reivindicación 10, en donde el agente isotónico es el manitol.
    12. La composición de acuerdo con la reivindicación 10, en donde la composición comprende 20-50 mg/mL o tal como 40-45 mg/mL de manitol.
    13. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el grupo químico Q es NH-C(O)-(CH2)-.
    14. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la GH comprende al menos una mutación puntual en comparación con la hormona de crecimiento humana.
    15. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la GH comprende una mutación puntual en cualquiera de los aminoácidos AA 98-105 en comparación con la hormona de crecimiento humana.
    16. La composición de acuerdo con la reivindicación 14, en donde la mutación puntual en la GH es una mutación de la Cys.
    17. La composición de acuerdo con la reivindicación 14, en donde la GH incluye la mutación L101C.
    18. La composición de acuerdo con la reivindicación 17, en donde A-W-B-Q- se une a la L101C de la GH.
    19. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina se selecciona del grupo de:
    Figure imgf000024_0001
    Figure imgf000025_0001
    y ligando de la albúmina, 0,5-2 mg/mL de poloxámero 188, 0,5-2 mg/mL de histidina, 35-50 mg/mL de manitol y 2-5 mg/mL de fenol.
    21. La composición de acuerdo con la reivindicación 1 que comprende
    5-10 mg/mL del conjugado de la hormona de crecimiento y ligando de la albúmina,
    1-3 mg/mL de poloxámero 188,
    0,5-1,0 mg/mL de la solución reguladora de histidina,
    40-45 mg/mL de manitol y
    3-4 mg/mL de fenol.
    22. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composición es para su uso en un método de tratamiento de la deficiencia de la hormona de crecimiento (GHD) o la deficiencia de la hormona de crecimiento en adultos (AGHD).
    23. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 22, en donde la composición es para su uso en un método de tratamiento mediante la administración una vez a la semana.
    24. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 22 o la reivindicación 23, en donde la composición es para su uso en un método de tratamiento de la deficiencia de la hormona de crecimiento (GHD) o la deficiencia de la hormona de crecimiento en adultos (AGHD) mediante la administración una vez a la semana de una dosis de 0,01-0,08 mg/kg.
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ES14715022T Active ES2841123T3 (es) 2013-04-05 2014-04-04 Formulación del compuesto de la hormona de crecimiento

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US (1) US11045523B2 (es)
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ES (1) ES2841123T3 (es)
WO (1) WO2014166836A1 (es)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2011208625C1 (en) 2010-01-22 2022-08-18 Novo Nordisk Health Care Ag Growth hormones with prolonged in-vivo efficacy
WO2016092550A2 (en) * 2014-12-10 2016-06-16 Opko Biologics Ltd. Methods of producing long acting ctp-modified polypeptides
WO2017218450A1 (en) * 2016-06-13 2017-12-21 The University Of North Carolina At Chapel Hill Optimized cln1 genes and expression cassettes and their use
CN115845079B (zh) * 2022-11-24 2023-07-18 武汉禾元生物科技股份有限公司 一种重组人血清白蛋白与重组人生长激素的偶联物及其制备方法

Family Cites Families (133)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8504099D0 (en) * 1985-02-18 1985-03-20 Wellcome Found Physiologically active substances
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
GB8610551D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Hoffmann La Roche Polypeptide & protein derivatives
JPH0665280B2 (ja) 1987-03-04 1994-08-24 味の素株式会社 タンパクゲル化剤及びそれを用いるタンパクのゲル化方法
US5096885A (en) * 1988-04-15 1992-03-17 Genentech, Inc. Human growth hormone formulation
ATE198353T1 (de) 1988-08-24 2001-01-15 American Cyanamid Co Stabilisierung von somatotropinen durch modifikation von cystein-resten durch orts- spezifische mutagenese oder chemische derivatisierung
US5079230A (en) 1988-09-12 1992-01-07 Pitman-Moore, Inc. Stable bioactive somatotropins
CA2345497A1 (en) 1988-10-28 1990-04-28 Genentech, Inc. Growth hormone variants and method for forming growth hormone variants
US5534617A (en) 1988-10-28 1996-07-09 Genentech, Inc. Human growth hormone variants having greater affinity for human growth hormone receptor at site 1
US6780613B1 (en) 1988-10-28 2004-08-24 Genentech, Inc. Growth hormone variants
ATE193541T1 (de) 1989-03-20 2000-06-15 Gen Hospital Corp Insulinotropes hormon
US5101018A (en) 1989-06-12 1992-03-31 International Minerals & Chemical Corp. Method for recovering recombinant proteins
DE3930696A1 (de) 1989-09-14 1991-03-28 Hoechst Ag Gallensaeurederivate, verfahren zu ihrer herstellung, verwendung als arzneimittel
US5545618A (en) 1990-01-24 1996-08-13 Buckley; Douglas I. GLP-1 analogs useful for diabetes treatment
DE69129226T2 (de) 1990-01-24 1998-07-30 Douglas I Buckley Glp-1-analoga verwendbar in der diabetesbehandlung
US5951972A (en) 1990-05-04 1999-09-14 American Cyanamid Company Stabilization of somatotropins and other proteins by modification of cysteine residues
ES2113354T3 (es) 1990-05-04 1998-05-01 American Cyanamid Co Estabilizacion de somatotropinas y otras proteinas por modificacion de residuos de cisteina.
JP2849773B2 (ja) 1990-08-27 1999-01-27 天野製薬株式会社 ストレプトミセス属由来のトランスグルタミナーゼの製造法
DK220890D0 (da) 1990-09-14 1990-09-14 Ole Buchardt Fremgangsmaade til fremstilling af c-terminalt amiderede peptider
ATE164395T1 (de) 1990-12-03 1998-04-15 Genentech Inc Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
JP3267293B2 (ja) 1990-12-03 2002-03-18 ジェネンテク，インコーポレイテッド 改変された結合性を有する変異タンパク質の豊富化法
IT1251895B (it) 1991-09-27 1995-05-26 Eniricerche Spa Mutanti dell'ormone della crescita umano e loro impiego
EP0555649B1 (en) 1992-01-14 2004-12-08 Ajinomoto Co., Inc. Gene encoding transglutaminase derived from fish
ATE359824T1 (de) * 1992-07-31 2007-05-15 Genentech Inc Wässrige formulierung enthaltend menschliches wachstumshormon
ZA936811B (en) 1992-10-28 1995-03-15 Upjohn Co Somatotropin modifications
US5359030A (en) 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5849535A (en) 1995-09-21 1998-12-15 Genentech, Inc. Human growth hormone variants
JP3758187B2 (ja) 1994-01-28 2006-03-22 味の素株式会社 マガキ由来のトランスグルタミナーゼ
JP3720363B2 (ja) 1994-08-26 2005-11-24 ノボザイムス アクティーゼルスカブ 微生物のトランスグルタミナーゼ、それらの産生及び使用
WO1996010089A1 (fr) 1994-09-29 1996-04-04 Ajinomoto Co., Inc. Modification d'un peptide et d'une proteine
DE4437604A1 (de) 1994-10-21 1996-04-25 Basf Ag Konjugate aus einem Poly- oder Oligopeptid und einer niedermolekularen lipophilen Verbindung
EP0871712B1 (en) 1995-01-19 2003-08-27 Novozymes A/S Transglutaminases from oomycetes
JP3669390B2 (ja) 1995-02-09 2005-07-06 味の素株式会社 バチルス属細菌由来のトランスグルタミナーゼ
US5869602A (en) 1995-03-17 1999-02-09 Novo Nordisk A/S Peptide derivatives
US5681846A (en) * 1995-03-17 1997-10-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Extended stability formulations for paclitaxel
US20020077461A1 (en) 1996-04-24 2002-06-20 Soren Bjorn Pharmaceutical formulation
US20070179096A1 (en) * 1996-04-24 2007-08-02 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical Formulation
US6458924B2 (en) 1996-08-30 2002-10-01 Novo Nordisk A/S Derivatives of GLP-1 analogs
WO1998008872A1 (en) 1996-08-30 1998-03-05 Novo Nordisk A/S Glp-2 derivatives
US6268343B1 (en) 1996-08-30 2001-07-31 Novo Nordisk A/S Derivatives of GLP-1 analogs
PT944648E (pt) 1996-08-30 2007-06-26 Novo Nordisk As Derivados do glp-1.
CN1231675A (zh) 1996-09-26 1999-10-13 味之素株式会社 修饰的生理活性蛋白及含有该蛋白的药物组合物
US5985627A (en) 1997-02-28 1999-11-16 Carlsberg Laboratory Modified carboxypeptidase
JPH1156378A (ja) 1997-06-11 1999-03-02 Nippon Chem Res Kk 変異型ヒト成長ホルモンとその用途
PT996629E (pt) 1997-06-25 2006-12-29 Applied Research Systems Análogos de hormonas glicoproteicas reticulados com ligações dissulfito, sua preparação e utilização
WO1999003887A1 (en) 1997-07-14 1999-01-28 Bolder Biotechnology, Inc. Derivatives of growth hormone and related proteins
JPH1192499A (ja) 1997-09-22 1999-04-06 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd ヒト成長ホルモン変異体
US6136536A (en) 1997-10-29 2000-10-24 Genetics Institute, Inc. Rapid generation of stable mammalian cell lines producing high levels of recombinant proteins
JP2002508162A (ja) 1998-02-27 2002-03-19 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ Ｎ末端を短縮したｇｌｐ−１誘導体
WO1999043361A1 (en) 1998-02-27 1999-09-02 Novo Nordisk A/S Glp-2 derivatives with helix-content exceeding 25 %, forming partially structured micellar-like aggregates
JP2002506792A (ja) 1998-02-27 2002-03-05 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ Ｎ末端修飾ｇｌｐ−１誘導体
AU3247799A (en) 1998-02-27 1999-09-15 Novo Nordisk A/S Glp-1 derivatives of glp-1 and exendin with protracted profile of action
JP2002504518A (ja) 1998-02-27 2002-02-12 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ 部分的に構造化されたミセルー様凝集体を形成する、２５％を超えるヘリックス−含有率を有するｇｌｐ−１誘導体
US6656922B2 (en) 1998-05-28 2003-12-02 Mediplex Corporation, Korea Oral delivery of macromolecules
US6358705B1 (en) 1998-07-16 2002-03-19 Novo Nordisk A/S Method of making proteins in transformed yeast cells
BR9915961A (pt) 1998-12-07 2001-08-21 Sod Conseils Rech Applic Análogos de glp-1
DK1180121T3 (da) 1999-05-17 2004-03-01 Conjuchem Inc Langtidsvirkende insulinotrope peptider
US6309663B1 (en) 1999-08-17 2001-10-30 Lipocine Inc. Triglyceride-free compositions and methods for enhanced absorption of hydrophilic therapeutic agents
EP1198565A1 (en) 1999-07-07 2002-04-24 Maxygen Aps A method for preparing modified polypeptides
US6528486B1 (en) 1999-07-12 2003-03-04 Zealand Pharma A/S Peptide agonists of GLP-1 activity
EP1076066A1 (en) 1999-07-12 2001-02-14 Zealand Pharmaceuticals A/S Peptides for lowering blood glucose levels
GB2355009A (en) 1999-07-30 2001-04-11 Univ Glasgow Peptides conjugated to bile acids/salts
US20040001827A1 (en) 2002-06-28 2004-01-01 Dennis Mark S. Serum albumin binding peptides for tumor targeting
WO2001051071A2 (en) 2000-01-11 2001-07-19 Novo Nordisk A/S Transepithelial delivery of glp-1 derivatives
ATE428445T1 (de) 2000-02-11 2009-05-15 Bayer Healthcare Llc Gerinnungsfaktor vii oder viia konjugate
CA2405709A1 (en) 2000-04-12 2001-10-25 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
JP4873818B2 (ja) 2000-05-16 2012-02-08 ボルダー バイオテクノロジー， インコーポレイテッド 遊離システイン残基を含有するタンパク質をリフォールディングする方法
US20020142964A1 (en) 2000-11-02 2002-10-03 Nissen Torben Lauesgaard Single-chain polypeptides
SI1355942T1 (sl) 2000-12-07 2009-02-28 Lilly Co Eli Glp-1 fuzijski proteini
US20060183197A1 (en) 2001-01-11 2006-08-17 Andersen Kim V Variant growth hormone molecules conjugated with macromolecules compounds
JP2004524020A (ja) 2001-01-11 2004-08-12 マキシゲン・エイピーエス 改良された成長ホルモン分子
FR2819810B1 (fr) 2001-01-23 2004-05-28 Pf Medicament Peptides non glycosyles derives de la proteine g du vrs et leur utilisation dans un vaccin
US6858580B2 (en) 2001-06-04 2005-02-22 Nobex Corporation Mixtures of drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
DE60234193D1 (de) 2001-06-14 2009-12-10 Scripps Research Inst Stabilisierte faktor viii mit gentechnisch konstruierten disulfidbindungen
JP5562510B2 (ja) 2001-06-28 2014-07-30 ノヴォ ノルディスク アー／エス 修飾ｇｌｐ−１の安定な処方剤
EP1423136A4 (en) 2001-08-10 2007-07-25 Epix Pharm Inc POLYPEPTIDE CONJUGATES HAVING INCREASED CIRCULATION HALF-VIES
AR036711A1 (es) 2001-10-05 2004-09-29 Bayer Corp Peptidos que actuan como agonistas del receptor del glp-1 y como antagonistas del receptor del glucagon y sus metodos de uso farmacologico
MXPA04004385A (es) 2001-11-12 2004-11-29 Univ Cardiff Variaciones de hormona de crecimiento en humanos y sus usos.
BR0214451A (pt) 2001-11-20 2006-05-30 Pharmacia Corp conjugados do hormÈnio do crescimento humano quimicamente modificado
JP2003199569A (ja) 2001-12-17 2003-07-15 Food Industry Research & Development Inst ストレプトベルティシリウム・ラダカヌムのトランスグルタミナーゼ遺伝子及び該遺伝子によってコードされるトランスグルタミナーゼ
FR2836382B1 (fr) 2002-02-28 2004-08-13 Biomerieux Sa Nouveaux agents de couplages, leurs conjugues, ainsi que l'utilisation de ces conjugues dans des methodes de diagnostic
WO2004065621A1 (en) 2002-03-01 2004-08-05 Dyax Corp. Kdr and vegf/kdr binding peptides and their use in diagnosis and therapy
EA200401345A1 (ru) 2002-04-10 2005-08-25 Эли Лилли Энд Компани Лечение гастропареза
CA2483478A1 (en) 2002-04-30 2003-11-13 Maxygen Holdings Ltd. Factor vii or viia polypeptide variants
EP1539960B1 (en) 2002-09-09 2010-04-28 Hanall Pharmaceutical Co., Ltd. Protease-resistant modified interferon alpha polypeptides
JP2007524579A (ja) 2003-02-19 2007-08-30 ソシエテ・ドゥ・コンセイユ・ドゥ・ルシェルシュ・エ・ダプリカーション・シャンティフィック・エス・ア・エス Ｇｌｐ−１の類似体
JP2007524584A (ja) 2003-05-09 2007-08-30 ノボ　ノルディスク　アクティーゼルスカブ 肥満の治療に使用するペプチド
WO2005014035A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Novo Nordisk Health Care Ag Use of galactose oxidase for selective chemical conjugation of protractor molecules to proteins of therapeutic interest
CN101380476A (zh) 2003-09-19 2009-03-11 诺沃挪第克公司 治疗肽的清蛋白结合型衍生物
WO2005027978A2 (en) 2003-09-19 2005-03-31 Novo Nordisk A/S Albumin-binding derivatives of therapeutic peptides
RU2401276C2 (ru) 2003-09-19 2010-10-10 Ново Нордиск А/С Производные глюкагон-подобного пептида-1 (glp-1)
EP1667724A2 (en) 2003-09-19 2006-06-14 Novo Nordisk A/S Albumin-binding derivatives of therapeutic peptides
CN100580087C (zh) 2003-10-10 2010-01-13 诺和诺德医疗保健公司 肽的缀合
DE602004026113D1 (de) 2003-12-18 2010-04-29 Novo Nordisk As Glp-1-verbindungen
CA2550050A1 (en) 2003-12-18 2005-06-30 Novo Nordisk A/S Novel glp-1 analogues linked to albumin-like agents
DK2842576T3 (en) 2004-01-21 2017-10-16 Novo Nordisk Healthcare Ag Transglutaminase-mediated peptide conjugation
US20070105770A1 (en) 2004-01-21 2007-05-10 Novo Nordisk A/S Transglutaminase mediated conjugation of peptides
MXPA06008496A (es) 2004-02-02 2007-01-30 Ambrx Inc Polipeptidos de interferon humano modificados y sus usos.
UA89781C2 (uk) 2004-04-07 2010-03-10 Арес Трейдінг С.А. Рідкий склад гормона росту
US7906137B2 (en) 2004-05-21 2011-03-15 Mediplex Corporation, Korea Delivery agents for enhancing mucosal absorption of therapeutic agents
KR20070029247A (ko) 2004-07-08 2007-03-13 노보 노르디스크 에이/에스 폴리펩티드 연장 태그
US20090176967A1 (en) 2004-08-02 2009-07-09 Novo Nordisk Healthcare A/G Conjugation of FVII
WO2006037810A2 (en) 2004-10-07 2006-04-13 Novo Nordisk A/S Protracted glp-1 compounds
US7998930B2 (en) 2004-11-04 2011-08-16 Hanall Biopharma Co., Ltd. Modified growth hormones
KR101224781B1 (ko) 2004-12-22 2013-01-21 암브룩스, 인코포레이티드 비천연적으로 코딩된 아미노산을 포함하는 인간 성장호르몬의 조제물
JP2008533104A (ja) 2005-03-18 2008-08-21 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ Ｇｌｐ−１受容体の二量体ペプチドアゴニスト
TWI372629B (en) 2005-03-18 2012-09-21 Novo Nordisk As Acylated glp-1 compounds
WO2006097538A1 (en) 2005-03-18 2006-09-21 Novo Nordisk A/S Extended glp-1 compounds
WO2006134148A2 (en) 2005-06-15 2006-12-21 Novo Nordisk Health Care Ag Transglutaminase mediated conjugation of growth hormone
EP1893632B1 (en) 2005-06-17 2015-08-12 Novo Nordisk Health Care AG Selective reduction and derivatization of engineered factor vii proteins comprising at least one non-native cysteine
EP1919946A1 (en) 2005-08-18 2008-05-14 Novo Nordisk Health Care AG Transglutaminase variants with improved specificity
JP2009506096A (ja) * 2005-08-30 2009-02-12 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アーゲー ペグ化成長ホルモンの液状調製物
CN1939534B (zh) * 2005-09-27 2010-12-01 长春金赛药业股份有限公司 含有人生长激素或人粒细胞巨噬细胞刺激因子的用于治疗损伤和溃疡的外用制剂
KR20080108416A (ko) 2006-01-19 2008-12-15 암브룩스, 인코포레이티드 조절된 면역원성을 갖는 비천연 아미노산 폴리펩티드
WO2007093594A1 (en) 2006-02-14 2007-08-23 Novo Nordisk Health Care Ag Coupling of polypeptides at the c-terminus
CN101495155A (zh) 2006-07-07 2009-07-29 诺沃-诺迪斯克保健股份有限公司 新的蛋白结合物及其制备方法
ES2745411T3 (es) 2006-07-27 2020-03-02 Wang Nai Fang Compuestos y composiciones de arilsulfanilo para administración de agentes activos
US20090318349A1 (en) 2006-08-18 2009-12-24 Novo Nordisk Health Care Ag Transglutaminase variants with improved specificity
US20080095837A1 (en) 2006-08-31 2008-04-24 Emisphere Technologies, Inc. Human growth hormone formulations
AU2007289344B2 (en) 2006-08-31 2011-04-14 Novartis Ag Pharmaceutical compositions comprising hGH for oral delivery
WO2008101240A1 (en) 2007-02-16 2008-08-21 Emisphere Technologies, Inc. Compounds having a cyclic moiety and compositions for delivering active agents
ES2532116T3 (es) 2007-09-05 2015-03-24 Novo Nordisk A/S Péptidos derivados con A-B-C-D y sus usos terapéuticos
US8560066B2 (en) * 2007-12-11 2013-10-15 Washington University Method and device for three-stage atrial cardioversion therapy
AU2009279090A1 (en) * 2008-08-06 2010-02-11 Novo Nordisk Health Care Ag Conjugated proteins with prolonged in vivo efficacy
EP2324056A1 (en) 2008-09-09 2011-05-25 Novo Nordisk Health Care AG Growth hormone conjugate with increased stability
CN102149411A (zh) 2008-09-12 2011-08-10 诺沃—诺迪斯克有限公司 酰化肽或蛋白的方法
JP5816097B2 (ja) 2009-01-22 2015-11-18 ノヴォ・ノルディスク・ヘルス・ケア・アーゲー 安定な成長ホルモン化合物
CN102333788A (zh) 2009-02-19 2012-01-25 诺沃—诺迪斯克有限公司 因子viii的修饰
US8841249B2 (en) 2009-08-06 2014-09-23 Novo Nordisk A/S Growth hormones with prolonged in-vivo efficacy
DE102009051215A1 (de) 2009-10-29 2011-05-12 Li-Tec Battery Gmbh Windkraftanlage mit Batterieanordnung
AU2011208620B2 (en) 2010-01-22 2015-04-16 Novo Nordisk Health Care Ag Stable growth hormone compounds
AU2011208625C1 (en) 2010-01-22 2022-08-18 Novo Nordisk Health Care Ag Growth hormones with prolonged in-vivo efficacy
US20130012684A1 (en) 2010-02-16 2013-01-10 Novo Nordisk A/S Purification Method

Also Published As

Publication number Publication date
JP2016520545A (ja) 2016-07-14
ES2841123T8 (es) 2022-02-08
US20160058879A1 (en) 2016-03-03
EP2981282B1 (en) 2020-11-04
CN105120887A (zh) 2015-12-02
WO2014166836A8 (en) 2014-11-27
US11045523B2 (en) 2021-06-29
WO2014166836A1 (en) 2014-10-16
JP6464145B2 (ja) 2019-02-06
EP2981282A1 (en) 2016-02-10

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