KR20220125289A - Fgf-21 접합체 제제 - Google Patents

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KR20220125289A
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토마스 팜
메르나즈 코스라비
산케트 파트케
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브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
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Abstract

본 출원은 PEG화 FGF-21, 예를 들어 FGF-21 접합체, 및 1종 이상의 안정화제, 예컨대 킬레이트화제 DPTA를 포함하는 제약 제제를 제공한다. 제제는 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트 80을 포함시키고/거나 pH를 약 7.1로 조정함으로써 추가로 안정화될 수 있다. 또한, 제조 방법, 치료 방법, 및 키트가 제공된다.

Description

FGF-21 접합체 제제
EFS-WEB을 통해 전자 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원과 함께 제출된, 전자 제출된 서열 목록 (파일명: 3338_208PC03_SeqListing.txt; 크기: 11,049 바이트; 및 생성일: 2021년 1월 5일)의 내용은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
기술분야
본 출원은 특히, 예를 들어 피하 투여를 포함한 다양한 경로를 통한 투여를 위한, FGF-21 폴리펩티드, 예를 들어 PEG화 FGF-21 폴리펩티드 (PEG-FGF-21)를 포함하고, 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA), 계면활성제 (예를 들어, PS80)를 사용하여 안정화되고, 특정 pH 범위 (예를 들어, 약 7.1)를 갖는 제제에 관한 것이다.
섬유모세포 성장 인자 (FGF)는 다수의 생리적 기능에 있어 결정적 역할을 하는 발달 및 성체 조직에서 (Baird et al., Cancer Cells, 3:239-243, 1991) 폭넓게 발현되는 폴리펩티드이다 (McKeehan et al., Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 59:135-176, 1998; Burgess, W. H. et al., Annu. Rev. Biochem. 58:575-606 (1989). 문헌에 따르면, FGF 패밀리는 적어도 22개의 구성원으로 이루어진다 (Reuss et al., Cell Tissue Res. 313:139-157 (2003)).
FGF-21은 섬유증과 연관된 질환 및 상태의 치료에 사용될 수 있다. 섬유증은 기관 또는 조직에서의 과도한 섬유 결합 조직의 형성이다. 과도한 섬유 조직의 침착은 기관 또는 조직 기능의 손상을 초래할 수 있는 병리적 상태와 연관된다. 이환 기관은 폐 (폐 섬유증)), 간 (간 섬유증), 신장 (신장 섬유증), 및 심장 (심장 섬유증)을 포함할 수 있다. 섬유증은 또한 관절, 피부, 장, 골수 등을 포함한 다른 조직 및 기관에 영향을 미칠 수 있다. 예시적인 섬유증성 상태 또는 질환은 간에 영향을 미치는 비알콜성 지방간염 (NASH); 신장에 영향을 미치는 당뇨병성 신장 질환 및 당뇨병성 신장병; 및 심장에 영향을 미치는 대사성 심부전을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, NASH는 알콜을 소비하지 않거나 거의 소비하지 않는 사람들의 간에서의 지방 축적, 염증 및 손상을 특징으로 하고, 질환은 간 경화증을 초래할 수 있다. NASH는 종종 특정 지질의 상승된 혈액 수준 및 당뇨병 또는 당뇨병전증을 갖는 과체중 또는 비만인 중년의 사람에서 진단되는 경향이 있다.
FGF-21은 생체내에서는 단백질분해되고, 시험관내에서는 응집물을 형성하고, 탈아미드화되는 경향이 있는 것으로 보고되었고 (Gimeno and Moller, Trends Endocrinol Metab. 2014 June; 25(6):303-11; 미국 특허 번호 8,361,963; Hecht et al., PLoS One. 2012; 7(11):e49345; 미국 특허 공개 번호 2007/0293430; WO 2006/0065582), 이는 잠재적으로 FGF-21을 함유하는 제약 조성물의 사용-수명을 제한한다. 치료적 폴리펩티드의 응집물 및 탈아미드화된 형태는 잠재적으로 면역원성을 증가시킬 수 있다 (문헌 [U.S. Department of Health and Human Services, "Immunogenicity Assessment for Therapeutic Protein Products", August 2014]; [Subramanyam (ed.), "Therapeutic Protein Immunogenicity Focus Group Newsletter", American Association of Pharmaceutical Scientists, Vol. 1, Issue 3 (December 2011)] 참조).
본 개시내용은 특히, FGF-21 폴리펩티드, 특히 변이체 FGF-21 폴리펩티드를 포함하는 제약 제제의 제조와 연관된 문제를 해결하는 제약 제제의 필요성을 다룬다.
본 개시내용은 (i) 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 모이어티에 접합된 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21) 폴리펩티드 ("FGF-21 접합체") 및 (ii) 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제를 포함하는 제약 제제이며, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제를 함유하지 않는 참조 제제와 비교하여 개선된 안정성을 갖고, 여기서 FGF-21 접합체는 하기 화학식 (I):
Figure pct00001
(여기서 n은 임의의 정수임)
을 포함하는 것인 제약 제제를 제공한다.
일부 측면에서, PEG 모이어티는 FGF-21 폴리펩티드 내의 비-천연 아미노산에 접합된다. 일부 측면에서, FGF-21 폴리펩티드 내의 비-천연 아미노산은 페닐알라닌 유도체이다. 일부 측면에서, 페닐알라닌 유도체는 파라-아세틸-L-페닐알라닌이다.
일부 측면에서, FGF-21 활성을 갖는 FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 3의 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 비-천연 아미노산은 서열식별번호: 3에 상응하는 아미노산 잔기 109에 존재한다. 일부 측면에서, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1에 기재된 서열을 포함한다. 일부 측면에서, FGF-21 접합체는 서열식별번호: 2의 화합물에 상응한다.
일부 측면에서, 화학식 (I)에서 n은 약 500 내지 약 900개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 600 내지 약 800개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 650 내지 약 750개의 에틸렌 글리콜 단위, 또는 약 670 내지 약 690개의 에틸렌 글리콜 단위이다. 일부 측면에서, n은 약 670 내지 약 690개의 에틸렌 글리콜 단위, 예를 들어, 약 681개의 에틸렌 글리콜 단위이다.
일부 측면에서, FGF-21 접합체는 서열식별번호: 4의 화합물에 상응한다. 일부 측면에서, FGF-21 접합체는 L 입체형태이다. 일부 측면에서, FGF-21 접합체는 D 입체형태이다. 일부 측면에서, FGF-21 접합체는 약 1 mg/ml 내지 약 40 mg/ml의 농도로 존재한다. 일부 측면에서, FGF-21 접합체는 약 10 mg/ml 또는 약 20 mg/ml의 농도로 존재한다. 일부 측면에서, FGF-21 접합체는 약 20 mg/ml의 농도로 존재한다.
일부 측면에서, FGF-21 접합체는 단위 용량당 약 1 mg 내지 약 40 mg의 양으로 존재한다. 일부 측면에서, FGF-21 접합체는 단위 용량당 약 1 mg, 단위 용량당 약 5 mg, 단위 용량당 약 10 mg, 단위 용량당 약 20 mg, 또는 단위 용량당 약 40 mg의 양으로 존재한다. 일부 측면에서, FGF-21 접합체는 단위 용량당 약 10 mg 또는 약 20 mg의 양으로 존재한다.
일부 측면에서, 제약 제제는 하기 중 하나 이상을 나타낸다:
(a) 40℃에서 약 1개월 동안 저장 시 참조 제제와 비교하여 보다 낮은 폴리펩티드 탈아미드화 속도;
(b) 40℃에서 약 1개월 동안 저장 시 참조 제제와 비교하여 보다 낮은 고분자량 (HMW) 폴리펩티드 응집 속도; 또는
(c) (a) 및 (b) 둘 다.
일부 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제는 하나 이상의 메티오닌의 산화를 방지하거나 완화시킨다. 일부 측면에서, 메티오닌은 FGF-21 폴리펩티드의 메티오닌 1 (Met1) 및/또는 메티오닌 169 (Met169)에 상응한다. 일부 측면에서, 킬레이트화제에 의해 25℃ 및/또는 40℃에서 메티오닌 산화가 방지되거나 완화된다. 일부 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제는 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DTPA)이다. 일부 측면에서, DTPA 양이온 킬레이트화제는 약 10 μM 내지 약 100 μM DTPA, 약 20 μM 내지 약 90 μM DTPA, 약 30 μM 내지 약 80 μM DTPA, 약 25 μM 내지 약 75 μM DTPA, 또는 약 40 μM 내지 약 60 μM DTPA, 또는 약 30 μM 내지 약 70 μM DTPA, 또는 약 40 μM 내지 약 70 μM DTPA의 양으로 존재한다. 일부 측면에서, DTPA 양이온 킬레이트화제는 약 40 μM, 약 45 μM, 약 50 μM, 약 55 μM, 또는 약 60 μM DTPA의 양으로 존재한다.
일부 측면에서, 제제의 pH는 6.5 초과, 6.6 초과, 6.7 초과, 6.8 초과, 6.9 초과, 7.0 초과, 7.1 초과, 7.2 초과, 7.3 초과, 7.4 초과, 또는 7.5 초과이다. 일부 측면에서, pH는 약 6.7 내지 약 7.5, 약 6.8 내지 약 7.5, 약 6.9 내지 약 7.4, 약 7.0 내지 약 7.3, 약 7.1 내지 7.2, 약 7.1 내지 약 7.3, 약 7.1 내지 약 7.4, 또는 약 7.1 내지 약 7.5이다. 일부 측면에서, pH는 약 6.7, 약 6.8, 약 6.9, 약 7.0, 약 7.1, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4, 또는 약 7.5이다. 일부 측면에서, 제약 제제는 6.5의 pH를 갖는 참조 제제보다 더 안정적이다.
일부 측면에서, 제약 제제는 계면활성제를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 계면활성제는 비이온성 계면활성제이다. 일부 측면에서, 비음이온성 계면활성제는 폴리소르베이트이다. 일부 측면에서, 폴리소르베이트는 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트 (폴리소르베이트 80)이다. 일부 측면에서, 폴리소르베이트 80 계면활성제는 약 0.01% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.02% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.03% 내지 약 0.08% (w/v), 약 0.04% 내지 약 0.07% (w/v), 또는 약 0.05% 내지 약 0.06% (w/v)의 양으로 존재한다. 일부 측면에서, 폴리소르베이트 80 계면활성제는 적어도 약 0.01% (w/v), 적어도 약 0.02% (w/v), 적어도 약 0.03% (w/v), 적어도 약 0.04% (w/v), 적어도 약 0.05% (w/v), 적어도 약 0.06% (w/v), 적어도 약 0.07% (w/v), 적어도 약 0.08% (w/v), 적어도 약 0.09% (w/v) 또는 적어도 약 0.1% (w/v)의 양으로 존재한다. 일부 측면에서, 계면활성제는 진탕기 상에서 교반될 때 미립자 및/또는 기포 형성을 완화시킨다.
일부 측면에서, 제약 제제는 아미노산 완충제를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 아미노산 완충제는 히스티딘이다. 일부 측면에서, 히스티딘 완충제는 약 10 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 20 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 30 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 40 mM 내지 약 70 mM 히스티딘, 약 10 mM 내지 약 30 mM 히스티딘, 약 15 mM 내지 약 25 mM 히스티딘, 약 17.5 내지 약 22.5 히스티딘, 또는 약 40 mM 내지 약 60 mM 히스티딘의 양으로 존재한다. 일부 측면에서, 히스티딘 완충제는 약 10 mM 히스티딘, 약 15 mM 히스티딘, 약 20 mM 히스티딘, 약 25 mM 히스티딘, 약 30 mM 히스티딘, 약 35 mM 히스티딘, 약 40 mM 히스티딘, 약 45 mM 히스티딘 또는 약 50 mM 히스티딘의 양으로 존재한다.
일부 측면에서, 제약 제제는 삼투 조절제를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 삼투 조절제는 당을 포함한다. 일부 측면에서, 당은 수크로스이다. 일부 측면에서, 수크로스 삼투 조절제는 약 100 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 200 mM 내지 약 900 mM, 약 300 mM 내지 약 800 mM, 약 400 mM 내지 약 700 mM, 또는 약 500 mM 내지 약 600 mM의 양으로 존재한다. 일부 측면에서, 수크로스 삼투 조절제는 약 100 mM 수크로스, 약 200 mM 수크로스, 약 300 mM 수크로스, 약 400 mM 수크로스, 약 500 mM 수크로스, 약 600 mM 수크로스, 약 700 mM 수크로스, 약 800 mM 수크로스, 약 900 mM 수크로스, 또는 약 1M 수크로스의 양으로 존재한다.
일부 측면에서, 제제는 피하 투여를 위해 제제화된다. 일부 측면에서, 제제는 안전 시린지를 사용하는 피하 투여를 위해 제제화된다. 일부 측면에서, 제제는 매일 또는 매주 투여를 위해 제제화된다. 일부 측면에서, 제제는 수성 제제이다.
본 개시내용은 하기를 포함하고:
(i) FGF-21 접합체;
(ii) 약 10 mM 내지 약 50 mM 농도의 히스티딘;
(iii) 약 100 mM 내지 약 1 M 농도의 수크로스;
(iv) 약 0.01% 내지 약 0.1% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
(v) 약 10 μM 내지 약 100 μM 농도의 DTPA;
제제의 pH가 약 6.7 내지 약 7.5이고,
FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
Figure pct00002
(여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
을 포함하는 것인 제약 제제를 제공한다.
본 개시내용은 또한 하기를 포함하고:
(i) FGF-21 접합체;
(ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘;
(iii) 약 600 mM 농도의 수크로스;
(iv) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
(v) 약 50 μM 농도의 DTPA;
pH가 약 7.1이고,
FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
Figure pct00003
(여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
을 포함하는 것인 제약 제제를 제공한다.
또한 하기를 포함하고:
(i) FGF-21 접합체;
(ii) 20 mM 농도의 히스티딘;
(iii) 600 mM 농도의 수크로스;
(iv) 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
(v) 50 μM 농도의 DTPA
pH가 7.1이고,
FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
Figure pct00004
(여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
을 포함하는 것인 제약 제제를 제공한다.
본 개시내용은 하기를 포함하고:
(i) FGF-21 접합체;
(ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘; 및
(iii) 약 600 mM 농도의 수크로스;
pH가 약 7.0이고,
FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
Figure pct00005
(여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
을 포함하는 것인 제약 제제를 제공한다.
본 개시내용은 하기를 포함하고:
(i) FGF-21 접합체;
(ii) 20 mM 농도의 히스티딘; 및
(iii) 600 mM 농도의 수크로스;
pH가 7.0이고,
FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
Figure pct00006
(여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
을 포함하는 것인 제약 제제를 제공한다.
본 개시내용은 또한 하기를 포함하고:
(i) 약 10 mg/mL 농도의 FGF-21 접합체;
(ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘;
(iii) 약 600 mM 농도의 수크로스;
(iv) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
(v) 약 50 uM 농도의 DTPA;
pH가 약 7.1이고,
FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
Figure pct00007
(여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
을 포함하는 것인 제약 제제를 제공한다.
본 개시내용은 또한 하기를 포함하고:
(i) 약 20 mg/mL 농도의 FGF-21 접합체;
(ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘;
(iii) 약 600 mM 농도의 수크로스;
(iv) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
(v) 약 50 uM 농도의 DTPA;
pH가 약 7.1이고,
FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
Figure pct00008
(여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
을 포함하는 것인 제약 제제를 제공한다.
본 개시내용은 하기를 포함하고:
(i) 10 mg/mL 농도의 FGF-21 접합체;
(ii) 20 mM 농도의 히스티딘;
(iii) 600 mM 농도의 수크로스;
(iv) 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
(v) 50 uM 농도의 DTPA;
pH가 7.0이고,
FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
Figure pct00009
(여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
을 포함하는 것인 제약 제제를 제공한다.
본 개시내용은 하기를 포함하고:
(i) 20 mg/mL 농도의 서열식별번호: 2 또는 4의 PEG-FGF21;
(ii) 20 mM 농도의 히스티딘;
(iii) 600 mM 농도의 수크로스;
(iv) 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
(v) 50 uM 농도의 DTPA;
pH가 7.0이고,
FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
Figure pct00010
(여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
을 포함하는 것인 제약 제제를 제공한다.
본 개시내용은 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제를 혼합하는 것을 포함하는, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 모이어티에 접합된 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21) 폴리펩티드 ("FGF-21 접합체")를 포함하는 제약 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공하며, 여기서 제제는 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제를 함유하지 않는 참조 제제와 비교하여 개선된 안정성을 갖고, FGF-21 접합체는 하기 화학식 (I):
Figure pct00011
(여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
을 포함한다.
본원에 개시된 방법의 일부 측면에서, PEG 모이어티는 FGF-21 폴리펩티드 내의 비-천연 아미노산에 접합된다. 일부 측면에서, FGF-21 폴리펩티드 내의 비-천연 아미노산은 파라-아세틸-L-페닐알라닌이다. 일부 측면에서, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1의 FGF-21 폴리펩티드이다. 일부 측면에서, FGF-21 접합체는 L 입체형태이다. 일부 측면에서, FGF-21 접합체는 D 입체형태이다. 일부 측면에서, 안정성의 개선은 (i) 폴리펩티드 물리적 안정성의 증가, (ii) 폴리펩티드 화학적 안정성의 증가, 또는 (iii) (i) 및 (ii) 둘 다를 포함한다. 일부 측면에서, 물리적 안정성의 증가는 (i) 폴리펩티드 응집의 방지 또는 감소, (ii) 폴리펩티드 단편화의 방지 또는 감소, 또는 (iii) (i) 및 (ii) 둘 다를 포함한다. 일부 측면에서, 화학적 안정성의 증가는 (i) 폴리펩티드 탈아미드화의 방지 또는 감소, (ii) 폴리펩티드 산화의 방지 또는 감소, 또는 (iii) (i) 및 (ii) 둘 다를 포함한다. 일부 측면에서, 안정성의 개선은 (a) 40℃에서 약 1개월 동안 저장 시 참조 제제와 비교하여 보다 낮은 폴리펩티드 탈아미드화 속도; (b) 40℃에서 약 1개월 동안 저장 시 참조 제제와 비교하여 보다 낮은 고분자량 (HMW) 폴리펩티드 응집 속도; 또는 (c) (a) 및 (b) 둘 다를 포함한다. 일부 측면에서, 안정성의 개선은 하나 이상의 메티오닌의 산화를 방지하거나 완화시키는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 메티오닌은 FGF-21 폴리펩티드의 Met1 및/또는 Met169에 상응한다. 일부 측면에서, 25℃ 및/또는 40℃에서 메티오닌 산화가 방지되거나 완화된다.
본원에 개시된 방법의 일부 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제는 DTPA이다. 일부 측면에서, DTPA 양이온 킬레이트화제는 약 10 μM 내지 약 100 μM DTPA, 약 20 μM 내지 약 90 μM DTPA, 약 25 μM 내지 약 75 μM DTPA, 약 40 μM 내지 약 60 μM DTPA, 약 30 μM 내지 약 70 μM DTPA, 약 30 μM 내지 약 80 μM DTPA, 또는 약 40 μM 내지 약 70 μM의 양으로 존재한다. 일부 측면에서, DTPA 양이온 킬레이트화제는 약 40 μM, 약 45 μM, 약 50 μM, 약 55 μM, 또는 약 60 μM DTPA의 양으로 존재한다.
본원에 개시된 방법의 일부 측면에서, 방법은 pH를 6.5 초과, 6.6 초과, 6.7 초과, 6.8 초과, 6.9 초과, 또는 7.0 초과로 조정하는 것을 추가로 포함한다. 일부 측면에서, pH는 약 6.8 내지 약 7.5, 또는 약 6.9 내지 약 7.4, 또는 약 7.0 내지 약 7.3, 또는 약 7.1 내지 7.2, 또는 약 7.1 내지 약 7.3, 또는 약 7.1 내지 약 7.4, 또는 약 7.1 내지 약 7.5로 조정된다. 일부 측면에서, 조정된 pH는 약 6.8, 약 6.9, 약 7.0, 약 7.1, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4, 또는 약 7.5이다. 일부 측면에서, 제제는 6.5의 pH를 갖는 참조 제제보다 더 안정하다.
본원에 개시된 방법의 일부 측면에서, 방법은 계면활성제를 혼합하는 것을 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 계면활성제는 비이온성 계면활성제이다. 일부 측면에서, 비음이온성 계면활성제는 폴리소르베이트이다. 일부 측면에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 80이다. 일부 측면에서, 폴리소르베이트 80 계면활성제는 약 0.01% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.02% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.03% 내지 약 0.08% (w/v), 약 0.04% 내지 약 0.07% (w/v), 또는 약 0.05% 내지 약 0.06% (w/v)의 양으로 혼합된다. 일부 측면에서, 폴리소르베이트 80 계면활성제는 적어도 약 0.01% (w/v), 적어도 약 0.02% (w/v), 적어도 약 0.03% (w/v), 적어도 약 0.04% (w/v), 적어도 약 0.05% (w/v), 적어도 약 0.06% (w/v), 적어도 약 0.07% (w/v), 적어도 약 0.08% (w/v), 적어도 약 0.09% (w/v) 또는 적어도 약 0.1% (w/v)의 양으로 혼합된다. 일부 측면에서, 계면활성제는 진탕기 상에서 교반될 때 미립자 형성 및/또는 기포 형성을 완화시킨다.
본원에 개시된 방법의 일부 측면에서, 방법은 아미노산 완충제를 혼합하는 것을 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 아미노산 완충제는 히스티딘이다. 일부 측면에서, 히스티딘 완충제는 약 10 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 20 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 30 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 40 mM 내지 약 70 mM 히스티딘, 약 10 mM 내지 약 30 mM 히스티딘, 약 15 mM 내지 약 25 mM 히스티딘, 약 17.5 mM 내지 약 22.5 mM 히스티딘, 또는 약 40 mM 내지 약 60 mM 히스티딘의 양으로 혼합된다. 일부 측면에서, 히스티딘 완충제는 약 10 mM 히스티딘, 약 15 mM 히스티딘, 약 20 mM 히스티딘, 약 25 mM 히스티딘, 약 30 mM 히스티딘, 약 35 mM 히스티딘, 약 40 mM 히스티딘, 약 45 mM 히스티딘 또는 약 50 mM 히스티딘의 양으로 혼합된다.
본원에 개시된 방법의 일부 측면에서, 방법은 삼투 조절제를 혼합하는 것을 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 삼투 조절제는 당을 포함한다. 일부 측면에서, 당은 수크로스이다. 일부 측면에서, 수크로스 삼투 조절제는 약 100 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 200 mM 내지 약 900 mM 수크로스, 약 300 mM 내지 약 800 mM 수크로스, 약 400 mM 내지 약 700 mM 수크로스, 또는 약 500 mM 내지 약 600 mM 수크로스의 양으로 혼합된다. 일부 측면에서, 수크로스 삼투 조절제는 약 100 mM 수크로스, 약 200 mM 수크로스, 약 300 mM 수크로스, 약 400 mM 수크로스, 약 500 mM 수크로스, 약 600 mM 수크로스, 약 700 mM 수크로스, 약 800 mM 수크로스, 약 900 mM 수크로스, 또는 약 1 M 수크로스의 양으로 혼합된다.
일부 측면에서, 제제는 수성 제제이다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 방법에 따라 제조된 제약 제제를 제공한다.
본 개시내용은 또한 하기를 포함하고:
(i) FGF-21 접합체;
(ii) 약 10 mM 내지 약 50 mM 농도의 히스티딘;
(iii) 약 100 mM 내지 약 1 M 농도의 수크로스;
(iv) 약 0.01% 내지 약 0.1% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
(v) 약 10 μM 내지 약 100 μM 농도의 DTPA;
제제의 pH가 약 6.7 내지 약 7.5이고,
FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
Figure pct00012
(여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
을 포함하는 것인 바이알을 제공한다.
본 개시내용은 또한 하기를 포함하고:
(i) 약 5 mg 내지 약 20 mg의 FGF-21 접합체;
(ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘; 및
(iii) 약 600 mM 농도의 수크로스;
pH가 약 7.0이고,
FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
Figure pct00013
(여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
을 포함하는 것인 바이알을 제공한다.
본 개시내용은 또한 하기를 포함하고:
(i) 약 10 mg 내지 약 20 mg의 FGF-21 접합체;
(ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘;
(iii) 약 600 mM 농도의 수크로스;
(iv) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
(v) 약 50 uM 농도의 DTPA;
pH가 약 7.1이고,
FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
Figure pct00014
(여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
을 포함하는 것인 바이알을 제공한다.
본 개시내용은 또한 하기를 포함하고:
(i) 약 10 mg의 FGF-21 접합체;
(ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘;
(iii) 약 600 mM 농도의 수크로스;
(iv) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
(v) 약 50 uM 농도의 DTPA;
pH가 약 7.1이고,
FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
Figure pct00015
(여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
을 포함하는 것인 바이알을 제공한다.
본 개시내용은 또한 하기를 포함하고:
(i) 약 20 mg의 FGF-21 접합체;
(ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘;
(iii) 약 600 mM 농도의 수크로스;
(iv) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
(v) 약 50 uM 농도의 DTPA;
pH가 약 7.1이고,
FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
Figure pct00016
(여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
을 포함하는 것인 바이알을 제공한다.
본 개시내용은 또한 (i) 본원에 개시된 제약 제제 또는 본원에 개시된 바이알, 및 (ii) 사용 지침서를 포함하는 키트 또는 제조 물품을 제공한다.
본 개시내용은 또한 섬유증 및/또는 당뇨병과 연관된 질환 또는 상태의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 본원에 개시된 제약 제제, 본원에 개시된 바이알, 또는 본원에 개시된 키트를 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 섬유증 및/또는 당뇨병과 연관된 질환 또는 상태를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 질환 또는 상태는 당뇨병이다. 일부 측면에서, 당뇨병은 2형 당뇨병이다. 일부 측면에서, 질환 또는 상태는 비알콜성 지방간염 (NASH)이다. 일부 측면에서, 대상체에게 유효량의 제약 제제를 투여하는 것은 간 경직도를 감소시키거나, 체지방률을 감소시키거나, 체중을 감소시키거나, 간 중량-대-체중 비를 감소시키거나, 간 지질 함량을 감소시키거나, 간 섬유증 면적을 감소시키거나, 공복 혈액 글루코스 수준을 감소시키거나, 공복 트리글리세리드 수준을 감소시키거나, LDL 콜레스테롤 수준을 감소시키거나, ApoB 수준을 감소시키거나, ApoC 수준을 감소시키거나, HDL 콜레스테롤을 증가시키거나, 또는 그의 임의의 조합을 유발한다. 일부 측면에서, FGF-21 접합체는 약 20 mg의 균일 용량으로 투여된다. 일부 측면에서, FGF-21 접합체는 1주의 투여 간격으로 투여된다. 일부 측면에서, 제약 제제는 피하 투여된다. 일부 측면에서, 제약 제제는 안전 시린지를 사용하여 피하 투여된다. 일부 측면에서, 대상체에게 제약 제제를 투여하는 것은 비치료 대상체 또는 제약 제제의 투여 전의 대상체에서의 수준과 비교하여
(i) 간 지방 수준의 감소;
(ii) 간 손상 수준의 감소;
(iii) 섬유증 수준의 감소;
(iv) 섬유증 바이오마커 혈청 Pro-C3 (N-말단 유형 III 콜라겐 프로펩티드) 수준의 감소;
(v) 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT) 수준의 감소;
(vi) 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST) 수준의 감소,
(vii) 혈청 아디포넥틴 수준의 증가;
(viii) 혈장 LDL 수준의 감소;
(ix) 혈장 HDL 수준의 증가;
(x) 혈장 트리글리세리드의 수준의 감소;
(xi) 간 경직도 수준의 감소; 또는
(xii) 그의 임의의 조합
을 유발한다.
일부 측면에서, FGF-21 폴리펩티드는 약 30 kDa인 PEG에 접합될 수 있다.
도 1a 및 1b는 제제 조성에 따른 PEG-FGF-21의 탈아미드화를 나타낸다. 도 1a는 펜테트산 (DTPA) 또는 폴리소르베이트 80가 없는 제제에서의 탈아미드화를 나타낸다. 도 1b는 펜테트산 (DTPA) 및 폴리소르베이트 80을 포함하는 제제에서의 탈아미드화를 나타낸다.
도 2a 및 2b는 50 μM DTPA (또한 펜테트산으로서 공지됨)의 존재 및 부재 하의 메티오닌 1 (도 2a) 및 메티오닌 169 (도 2b)에서의 PEG-FGF-21 폴리펩티드의 금속 촉매된 산화를 나타낸다.
도 3a 및 3b는 PEG-FGF-21 응집에 대한 pH의 효과를 나타낸다. 도 3a는 시간, pH, 및 사용되는 완충 시스템의 함수로서의 응집을 나타낸다. 도 3b는 상이한 온도 및 시간 (5℃, 14개월; 25℃, 1개월; 40℃, 1일) 및 상이한 pH에서의 응집을 나타낸다.
도 4a 및 4b는 제제 조성에 따른 PEG-FGF-21의 응집을 나타낸다. 도 4a는 펜테트산 (DTPA) 또는 폴리소르베이트 80가 없는 제제에서의 응집을 나타낸다. 도 4b는 펜테트산 (DTPA) 및 폴리소르베이트 80을 갖는 제제에서의 응집을 나타낸다.
도 5는 300 rpm 오비탈 진탕기에서 24h 동안 (좌측) 또는 손목 진탕에서 6h 동안 (우측) 후에 PS80이 없는 보다 고농도의 PEG-FGF-21이 탁하게 변하였음을 보여준다. 0.01% 내지 0.1% (w/v)의 폴리소르베이트 80의 첨가는 샘플의 탁도를 감소시켰다.
도 6은 본 개시내용의 PEG화 FGF-21 접합체; 특히 FGF-21 접합체의 비-천연 아미노산이 파라-아세틸-페닐알라닌, 예를 들어 파라-아세틸-L-페닐알라닌인 예의 개략도를 나타낸다. n은 PEG 중합체에 함유된 에틸렌 글리콜 단위의 수를 나타낸다.
도 7은 FGF-21 폴리펩티드 (예를 들어, 비-천연 아미노산, 예컨대 파라-아세틸-페닐알라닌을 포함하는 FGF-21 폴리펩티드)에 부위 특이적 방식으로 융합 또는 접합되어 본 개시내용의 FGF-21 접합체를 생성할 수 있는 681개의 에틸렌 글리콜 단위를 포함하는 특이적 PEG 링커의 개략도를 나타낸다.
본 개시내용은 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21) 접합체, 예를 들어 예컨대 PEG-FGF-21 (예를 들어, 서열식별번호: 2 또는 4)을 포함하는 안정화된 제약 제제를 제공한다. 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제, 예컨대 DTPA의 존재는 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21에서 하나 이상의 아미노산 잔기, 예를 들어 메티오닌의 산화를 완화시키는 것으로 관찰되었다.
본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제제 중 DTPA의 혼입은 또한 저장 동안 FGF-21 폴리펩티드의 탈아미드화 속도를 낮추고, 또한 저장 동안 고분자량 응집 속도를 감소시킨다. 제제의 pH를 7.1로 조정함으로써 추가의 안정화가 달성될 수 있다. 또한, 제제는 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트 80을 첨가함으로써 추가로 안정화될 수 있다.
본 개시내용은 또한, 개시된 제제의 제조 방법, 뿐만 아니라 개시된 방법을 적용함으로써 제조된 제제를 제공한다. 또한, 섬유증과 연관된 질환, 예를 들어, NASH 및 당뇨병의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 대한 개시된 안정화된 제제의 투여를 포함하는, 섬유증과 연관된 질환, 예를 들어, NASH 및 당뇨병의 치료 또는 예방 방법이 제공된다.
정의
본 개시내용을 보다 쉽게 이해할 수 있도록, 특정 용어가 먼저 정의된다. 본 출원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 달리 명시적으로 제공되는 경우를 제외하고는, 하기 용어 각각은 하기에 기재되는 의미를 가질 것이다. 추가의 정의는 본 출원 전반에 걸쳐 기재된다.
본 개시내용은 그룹 중 정확히 하나의 구성원이 주어진 생성물 또는 공정에서 존재하는, 사용되는, 또는 다른 방식으로 그에 관련되는 측면을 포함한다. 본 개시내용은 그룹 구성원 중 하나 초과 또는 모두가 주어진 생성물 또는 공정에서 존재하는, 사용되는, 또는 다른 방식으로 그에 관련되는 측면을 포함한다.
단수형은 문맥에서 명백히 달리 지시하지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다. 단수형, 뿐만 아니라 용어 "하나 이상", 및 "적어도 하나"는 본원에서 상호교환가능하게 사용될 수 있다. 특정 측면에서, 단수형은 "단일"을 의미한다. 다른 측면에서, 단수형은 "둘 이상" 또는 "다수"를 포함한다. 따라서, 예를 들어, "FGF-21 접합체"의 언급은 하나 이상의 이러한 단백질 또는 접합체의 언급이고, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 그의 등가물 등을 포함한다.
또한, "및/또는"은 본원에서 사용되는 경우 다른 것들을 갖거나 갖지 않는 두 특정된 특징 또는 구성요소 각각의 구체적 개시로서 고려되어야 한다. 따라서, 본원에서 "A 및/또는 B" 등의 어구에서 사용되는 바와 같이 용어 "및/또는"은 "A 및 B", "A 또는 B", "A" (단독), 및 "B" (단독)를 포함하도록 의도된다. 마찬가지로, "A, B, 및/또는 C" 등의 어구에서 사용되는 바와 같이 용어 "및/또는"은 하기 측면 각각을 포함하도록 의도된다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A (단독); B (단독); 및 C (단독).
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "약"은, 부분적으로 값 또는 조성이 측정되는 또는 결정되는 방식, 즉 측정 시스템의 한계에 따라 달라지는, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정되는 바와 같은 특정 값 또는 조성에 대한 허용가능한 오차 범위 내에 있는 값 또는 조성에 대한 것이다. 예를 들어, "약"은 관련 기술분야의 관행에 따라 1 이상의 표준 편차 이내를 의미할 수 있다. 대안적으로, "약"은 20%까지의 범위를 의미할 수 있다. 또한, 특히 생물학적 시스템 또는 공정과 관련하여, 용어는 최대 10배 크기 또는 최대 5배의 값을 의미할 수 있다. 본 출원 및 청구범위에 특정 값 또는 조성이 제공되는 경우, 달리 언급되지 않는 한, "약"의 의미는 그 특정 값 또는 조성에 대한 허용가능한 오차 범위 내에 있는 것으로 가정되어야 한다. 용어 "약"이 수치 범위와 함께 사용되는 경우, 이는 경계를 기재된 수치 초과 및 미만으로 확장함으로써 그 범위를 수정한다. 따라서, "약 10-20"은 "약 10 내지 약 20"을 의미한다. 일반적으로, 용어 "약"은 수치를, 예를 들어, 10 퍼센트 위 또는 아래의 (더 높은 또는 낮은) 변동만큼 언급된 값 초과 및 미만으로 수정할 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용이 관련되는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, 문헌 [Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press]; [The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press]; 및 [Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press]은 통상의 기술자에게 본 개시내용에서 사용되는 많은 용어의 일반 사전을 제공한다.
본원에서 측면이 용어 "포함하는"으로 기재되는 부분에서는, "이루어진" 및/또는 "본질적으로 이루어진"의 용어로 기재된 다른 방식의 유사한 측면이 또한 제공됨을 이해한다.
단위, 접두사, 및 기호는 이들의 국제 단위계 (SI: Systeme International de Unites) 허용 형태로 표시된다. 수치 범위는 범위를 정의하는 숫자에 대해 포함적이다. 달리 지시되지 않는 한, 아미노산 서열은 좌측에서 우측으로 아미노에서 카르복시 배향으로 기재된다. 본원에 제공되는 제목은 본 개시내용의 다양한 측면의 제한이 아니며, 이는 전체적으로 명세서를 참조하여 제공될 수 있다. 따라서, 바로 하기에 정의되는 용어는 전체적으로 명세서를 참조하여 보다 완전히 정의된다.
아미노산은 본원에서 이들의 통상적으로 공지된 3 문자 기호에 의해 또는 IUPAC-IUB 생화학 명명 위원회 (IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission)에 의해 권고되는 1-문자 기호에 의해 언급된다. 달리 지시되지 않는 한, 아미노산 서열은 좌측에서 우측으로 아미노에서 카르복시 배향으로 기재된다.
응집: 용어 "응집"은 폴리펩티드, 예를 들어 본원에 개시된 FGF-21 접합체의 FGF-21 폴리펩티드 모이어티, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21이 다른 분자 (예컨대 동일한 폴리펩티드의 다른 분자)와 비-공유 연결 복합체를 형성함으로써 고분자량 복합체를 형성하는 경향을 지칭한다. 응집물의 형성을 측정하는 예시적인 방법은 본원 실시예에 기재된 바와 같은 분석용 크기 배제 크로마토그래피를 포함한다. 예를 들어, 감소된 응집을 갖는 폴리펩티드를 식별하기 위해, 참조 화합물에 대하여 응집의 상대적 양이 결정될 수 있다. 또한 예를 들어, 예를 들어 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21이 감소된 응집을 갖는 제제를 식별하기 위해, 참조 제제에 대하여 응집의 상대적 양이 결정될 수 있다.
아미노산 치환: 용어 "아미노산 치환"은 모 서열 또는 참조 서열 (예를 들어, 야생형 서열) 내에 존재하는 아미노산 잔기가 또 다른 아미노산 잔기로 대체되는 것을 지칭한다. 아미노산은, 예를 들어, 화학적 펩티드 합성을 통해 또는 관련 기술분야에 공지된 재조합 방법을 통해, 모 서열 또는 참조 서열 (예를 들어, 야생형 폴리펩티드 서열)에서 치환될 수 있다. 따라서, "위치 X에서의 치환"의 언급은 위치 X에 존재하는 아미노산의 대안적 아미노산 잔기로의 치환을 지칭한다. 일부 측면에서, 치환 패턴은 표식 AnY에 따라 기재될 수 있고, 여기서 A는 위치 n에 자연적으로 또는 원래 존재하는 아미노산에 상응하는 단일 문자 코드이고, Y는 치환 아미노산 잔기이다. 다른 측면에서, 치환 패턴은 표식 An(YZ)에 따라 기재될 수 있고, 여기서 A는 위치 n에 자연적으로 또는 원래 존재하는 아미노산을 치환하는 아미노산 잔기에 상응하는 단일 문자 코드이고, Y 및 Z는 A를 대체할 수 있는 대안적 치환 아미노산 잔기들이다.
본 개시내용의 문맥에서, 치환 (이들이 아미노산 치환으로서 언급되는 경우에도)은 핵산 수준에서 수행되고, 즉, 아미노산 잔기의 대안적 아미노산 잔기로의 치환은 제1 아미노산을 코딩하는 코돈을 제2 아미노산을 코딩하는 코돈으로 치환함으로써 수행된다.
대략: 본원에서 사용되는 바와 같이, 하나 이상의 관심 값에 적용되는 용어 "대략"은, 언급된 참조 값과 유사한 값을 지칭한다. 특정 측면에서, 용어 "대략"은, 달리 언급되지 않는 한 또는 문맥으로부터 달리 명백하지 않은 한 (이러한 숫자가 가능한 값의 100%를 초과하는 경우를 제외하고), 언급된 참조 값의 양 방향으로 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 그 미만 내에 있는 (이들 초과 또는 미만의) 값의 범위를 지칭한다.
연관된: 본원에서 질환과 관련하여 사용되는 바와 같이, 용어 "연관된"은 해당 증상, 측정, 특징, 또는 상태가 그 질환의 진단, 발달, 존재, 또는 진행과 관련됨을 의미한다. 연관은 질환과 인과적으로 관련될 수 있으나 반드시 그러할 필요는 없다.
생물학적 활성: 본원에 개시된 분자, 예를 들어 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21에 적용되는 용어 "생물학적 활성"은, 살아있는 유기체와 관련되는 생물학적 시스템, 경로, 분자, 또는 상호작용의 임의의 물리적 또는 생화학적 특성에 영향을 미칠 수 있는 임의의 물질을 의미한다. 특히, 본원에서 사용되는 바와 같이, 생물학적 활성 분자는, 인간 또는 다른 동물에서, 질환 또는 상태, 예를 들어, 섬유증과 연관된 질환 또는 상태의 진단, 치유, 경감, 치료, 또는 방지를 위해 의도된, 또는 다른 방식으로는 인간 또는 동물의 신체적 또는 정신적 복지를 향상시키기 위한 임의의 물질을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
보존적 아미노산 치환: "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 염기성 측쇄 (예를 들어, 리신, 아르기닌, 또는 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산 또는 글루탐산), 비대전된 극성 측쇄 (예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 또는 시스테인), 비극성 측쇄 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 또는 트립토판), 베타-분지형 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 또는 히스티딘)를 포함한 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 관련 기술분야에서 정의되었다. 따라서, 폴리펩티드 내의 아미노산이 동일한 측쇄 패밀리로부터의 또 다른 아미노산으로 대체된 경우, 아미노산 치환은 보존적인 것으로 고려된다. 또 다른 측면에서, 아미노산의 스트링이 측쇄 패밀리 구성원의 순서 및/또는 조성이 상이한 구조적으로 유사한 스트링으로 보존적으로 대체될 수 있다.
비-보존적 아미노산 치환은 (i) 양전기 측쇄를 갖는 잔기 (예를 들어, Arg, His 또는 Lys)가 음전기 잔기 (예를 들어, Glu 또는 Asp)로 치환된 또는 그에 의해 대체된, (ii) 친수성 잔기 (예를 들어, Ser 또는 Thr)가 소수성 잔기 (예를 들어, Ala, Leu, Ile, Phe 또는 Val)로 치환된 또는 그에 의해 대체된, (iii) 시스테인 또는 프롤린이 임의의 다른 잔기로 치환된 또는 그에 의해 대체된, 또는 (iv) 벌키 소수성 또는 방향족 측쇄를 갖는 잔기 (예를 들어, Val, His, Ile 또는 Trp)가 보다 작은 측쇄를 갖는 잔기 (예를 들어, Ala 또는 Ser) 또는 측쇄를 갖지 않는 잔기 (예를 들어, Gly)로 치환된 또는 그에 의해 대체된 것들을 포함한다.
다른 아미노산 치환이 또한 사용될 수 있다. 예를 들어, 아미노산 알라닌에 대하여, 치환은 D-알라닌, 글리신, 베타-알라닌, L-시스테인 및 D-시스테인 중 임의의 하나로부터 취할 수 있다. 리신에 대하여, D-리신, 아르기닌, D-아르기닌, 호모-아르기닌, 메티오닌, D-메티오닌, 오르니틴, 또는 D-오르니틴 중 임의의 하나로 대체될 수 있다. 일반적으로, 단리된 폴리펩티드의 특성의 변화를 유도할 것으로 예상될 수 있는 기능적으로 중요한 영역에서의 치환은 (i) 극성 잔기, 예를 들어, 세린 또는 트레오닌이 소수성 잔기, 예를 들어, 류신, 이소류신, 페닐알라닌, 또는 알라닌으로 (또는 그에 의해) 치환된; (ii) 시스테인 잔기가 임의의 다른 잔기로 (또는 그에 의해) 치환된; (iii) 양전기 측쇄를 갖는 잔기, 예를 들어, 리신, 아르기닌 또는 히스티딘이 음전기 측쇄를 갖는 잔기, 예를 들어, 글루탐산 또는 아스파르트산으로 (또는 그에 의해) 치환된; 또는 (iv) 벌키 측쇄를 갖는 잔기, 예를 들어, 페닐알라닌이 이러한 측쇄를 갖지 않는 잔기, 예를 들어, 글리신으로 (또는 그에 의해) 치환된 것들이다. 상기 비-보존적 치환 중 하나가 단백질의 기능적 특성을 변경시킬 수 있는 가능성은 또한 단백질의 기능적으로 중요한 영역에 대한 치환의 위치와 상관된다 (따라서 일부 비-보존적 치환은 생물학적 특성에 영향을 주지 않거나 거의 주지 않을 수 있음).
보존된: 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "보존된"은, 각각, 비교되는 둘 이상의 서열의 동일한 위치에서 변경되지 않고 나타나는 것들인 폴리펩티드 서열의 아미노산 잔기를 지칭한다. 상대적으로 보존된 아미노산은 서열 내의 다른 곳에서 나타나는 뉴클레오티드 또는 아미노산보다 더 많은 관련 서열 사이에서 보존되는 것들이다.
일부 측면에서, 둘 이상의 서열은 이들이 서로 100% 동일한 경우에 "완전히 보존된" 또는 "동일한" 것으로 언급된다. 일부 측면에서, 둘 이상의 서열은 이들이 서로 적어도 70% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 90% 동일한, 또는 적어도 95% 동일한 경우에 "고도로 보존된" 것으로 언급된다. 일부 측면에서, 둘 이상의 서열은 이들이 서로 약 70% 동일한, 약 80% 동일한, 약 90% 동일한, 약 95%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 경우에 "고도로 보존된" 것으로 언급된다. 일부 측면에서, 둘 이상의 서열은 이들이 서로 적어도 30% 동일한, 적어도 40% 동일한, 적어도 50% 동일한, 적어도 60% 동일한, 적어도 70% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 90% 동일한, 또는 적어도 95% 동일한 경우에 "보존된" 것으로 언급된다. 일부 측면에서, 둘 이상의 서열은 이들이 서로 약 30% 동일한, 약 40% 동일한, 약 50% 동일한, 약 60% 동일한, 약 70% 동일한, 약 80% 동일한, 약 90% 동일한, 약 95% 동일한, 약 98% 동일한, 또는 약 99% 동일한 경우에 "보존된" 것으로 언급된다. 서열의 보존은 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드의 전체 길이에 적용될 수 있거나 그의 일부, 영역 또는 특징에 적용될 수 있다.
탈아미드화: 용어 "탈아미드화"는, 폴리펩티드 내의 아미노산 잔기가 자발적으로 탈아미드화 반응에 놓임으로써, 아미노산의 화학적 구조를 변화시키고, 잠재적으로 폴리펩티드의 기능에 영향을 미치는 경향을 지칭한다. 탈아미드화를 측정하는 예시적인 방법은 본원 실시예에 개시되어 있다. 예를 들어, 감소된 탈아미드화를 갖는 폴리펩티드를 식별하기 위해, 참조 화합물에 대하여 탈아미드화의 상대적 양이 결정될 수 있다. 또한 예를 들어, 예를 들어 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21 접합체가 감소된 탈아미드화를 갖는 제제를 식별하기 위해, 참조 제제에 대하여 탈아미드화의 상대적 양이 결정될 수 있다.
섬유증과 연관된 질환: 용어 "섬유증과 연관된 질환"은, 섬유증이 나타나는 것으로 관찰된, 또는 섬유증이 질환 병인, 진행, 또는 증상과 연관되는 것으로 공지된 또는 그와 같이 여겨지는, 또는 섬유증이 질환 진행에 따라 나타나는 것으로 공지된 또는 그와 같이 여겨지는 질환, 장애, 및 상태를 포함한다.
섬유증은 췌장, 폐, 심장, 신장, 간, 눈, 신경계, 골수, 림프절, 심내막심근, 또는 후복막강 등의 기관 및 조직에 이환될 수 있다. 예시적인 섬유증과 연관된 질환은 비알콜성 지방간염 (NASH), 간 섬유증, 전-경변증, 경변증, 미만성 폐실질성 질환, 낭포성 섬유증, 폐 섬유증, 진행성 거대 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 주입 섬유증, 신장 섬유증, 만성 신장 질환, 당뇨병성 신장 질환, 국소 분절 사구체경화증, 막성 신장병, IgA 신장병, 골수섬유증, 심부전, 대사성 심부전, 심장 섬유증, 백내장 섬유증, 백내장, 안구 흉터, 췌장 섬유증, 피부 섬유증, 장 섬유증, 장 협착, 심내막심근 섬유증, 심방 섬유증, 종격 섬유증, 크론병, 후복막 섬유증, 켈로이드, 신성 전신 섬유증, 경피증, 전신 경화증, 관절섬유증, 페이로니 증후군, 듀프이트렌 구축, 당뇨병성 신경증, 유착성 관절낭염, 알콜성 간 질환, 지방간염, 바이러스성 간염, 담관 질환, 원발성 혈색소침착증, 약물-관련 경변증, 잠원성 경변증, 윌슨병, 및, 알파 1-항트립신 결핍증, 간질성 폐질환 (ILD), 인간 섬유증성 폐 질환, 황반 변성, 망막 망막병증, 유리체 망막병증, 심근 섬유증, 그레이브스 눈병, 약물 유도 맥각중독, 심혈관 질환, 아테롬성경화증/재발협착증, 비후 흉터, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 및 염증성 장 질환 (콜라겐성 결장염을 포함하나 이에 제한되지는 않음)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 측면에서, 섬유증과 연관된 질환은 간 섬유증, 신장 섬유증, 폐 섬유증 및 심장 섬유증을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 섬유증과 연관된 질환은 간 섬유증일 수 있다. 일부 측면에서, 섬유증과 연관된 질환은 NASH일 수 있다.
유효량: 본원에 사용된 용어, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제제의 "유효량"은 유익하거나 목적하는 결과, 예를 들어 임상 결과를 달성하기에 충분한 양이고, 따라서 "유효량"은 적용되는 문맥에 따라 달라진다. 예를 들어, NASH를 치료하는 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21의 투여와 관련하여, FGF-21 접합체의 유효량은 예를 들어 간 지방, 간 손상 또는 섬유증을 개선시키기에 (예를 들어, 비치료 대상체에서의 수준과 비교하여 또는 치료 투여 전의 대상체에서의 수준과 비교하여 간 지방, 간 손상 또는 섬유증을 감소시키기에) 충분한 양이다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 제제 중 FGF-21 폴리펩티드의 양은 슬로프 분광분석법(Slope Spectroscopy), 예를 들어 0.87 (mL/(mg*cm))의 흡광 계수를 사용하여 280 nm에서 SoloVPE 피브레트(Fibrette) (씨 테크놀로지스, 인크.(C Technologies, Inc.); P/N OF0002-P50) (SoloVPE 일회용 UV 플라스틱 용기 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OC0009-1))가 장착된 애질런트 캐리(Agilent Cary) 60 UV-Vis 분광광도계에 의한 측정에 기초한다.
일부 측면에서, NASH를 치료하기 위한 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21의 유효량은 비치료 대상체에서의 수준과 비교하여 또는 치료 투여 전의 대상체에서의 수준과 비교하여 하기 중 하나 이상의 섬유증 바이오마커의 수준을 변화시킬 수 있다: 예를 들어, 혈청 Pro-C3의 감소; ALT 또는 AST의 감소; 혈청 아디포넥틴의 증가; 혈장 LDL의 감소; 혈장 HDL의 증가; 혈장 트리글리세리드 수준의 감소, 또는 그의 임의의 조합.
용어 "유효량"은 "유효 용량", "치료 유효량", 또는 "치료 유효 용량"과 상호교환가능하게 사용될 수 있다.
본 개시내용의 방법 및 투여량과 관련하여 "균일 용량"은 환자의 체중 또는 체표면적 (BSA)과 관계없이 환자에게 투여되는 용량을 의미한다. 따라서, 균일 용량은 mg/kg 용량으로서 제공되지 않고, 오히려 분자의 절대량, 예를 들어 mg으로서 제공된다. 균일 용량과 대조적으로, 본원에 언급된 용어 "체중-기준 용량"은 환자에게 투여되는 용량이 환자의 체중을 기준으로 하여 계산된다는 것을 의미한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 균일 용량 중 FGF-21 폴리펩티드의 양은 슬로프 분광분석법, 예를 들어 0.87 (mL/(mg*cm))의 흡광 계수를 사용하여 280 nm에서 SoloVPE 피브레트 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OF0002-P50) (SoloVPE 일회용 UV 플라스틱 용기 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OC0009-1))가 장착된 애질런트 캐리 60 UV-Vis 분광광도계에 의한 측정에 기초한다.
FGF-21 활성: 용어 "FGF-21 활성"은 FGF-21 접합체 (예를 들어, 본 개시내용의 PEG화 FGF-21 접합체)에서 FGF-21 폴리펩티드의 적어도 하나의 생물학적 활성을 지칭한다. 용어 "생물학적 활성"은 바이러스, 박테리아, 박테리오파지, 트랜스포손, 프리온, 곤충, 진균, 식물, 동물 및 인간을 포함하나 이에 제한되지는 않는 유기체와 관련된 생물학적 시스템, 경로, 분자 또는 상호작용의 임의의 물리적 또는 생화학적 특성에 영향을 미치는 분자, 예를 들어 FGF-21 폴리펩티드 (예를 들어, 본원에 개시된 FGF-21 접합체 또는 FGF-21 접합체 중 FGF-21 폴리펩티드, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21)의 능력을 지칭한다.
예를 들어, 생물학적 활성은 야생형 FGF-21에 의해 수행되는 임의의 생물학적 기능을 포함한다. 분자가 야생형 FGF-21 (예컨대 서열식별번호: 3의 야생형 FGF-21 폴리펩티드)의 적어도 하나의 생물학적 활성을 갖는지 여부를 결정하는 예시적인 방법은 미국 출원 공보 번호 2017/0189486 (그 전문이 본원에 참조로 포함됨)의 실시예 5 및 17에 개시된 방법을 비롯한 관련 기술분야에 공지된 임의의 기능적 검정을 포함할 수 있다.
참조 화합물: 생물학적 활성의 상대적 수준은, 예를 들어 생물학적 활성을 갖거나 또는 의도된 치료 용도를 위한 충분히 높은 생물학적 활성을 갖는, 예를 들어 참조 화합물의 EC50보다 5배 미만, 10배 미만, 20배 미만, 50배 미만 또는 100배 미만 더 높은 EC50을 갖는 폴리펩티드를 확인하기 위해 참조 화합물과 비교하여 결정될 수 있다. 생물학적 활성의 상대적 수준은 또한, 예를 들어 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21이 생물학적 활성을 갖거나 또는 의도된 치료 용도를 위한 충분히 높은 생물학적 활성을 갖는, 예를 들어 참조 제제 중의 상응하는 FGF-21의 EC50보다 5배 미만, 10배 미만, 20배 미만, 50배 미만 또는 100배 미만 더 높은 EC50를 갖는 제제를 확인하기 위해 참조 제제와 비교하여 결정될 수 있다.
본원에 기재된 참조 화합물은 본원에 기재된 바와 같은 변형, 예컨대 PEG화가 결여된 상응하는 FGF-21 서열일 수 있다. 예를 들어, 참조 화합물은 야생형 FGF-21, 또는 변이체 FGF-21 폴리펩티드 서열 (예를 들어, 아미노산 치환, 예컨대 Q109의 비-천연 아미노산, 예컨대 파라-아세틸-L-페닐알라닌으로의 대체를 갖는 야생형 FGF-21)일 수 있지만, PEG 접합체 모이어티는 없다. 따라서, 일부 측면에서, 참조 화합물은 본원에 기재된 PEG 모이어티에 연결되지 않은 적어도 1개의 비-천연 아미노산을 함유할 수 있다. 일부 측면에서, PEG 모이어티는 원위 메톡시 (-O-CH3) 기를 포함한다.
본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21에 대한 예시적인 참조 화합물은 비제한적으로 서열식별번호: 3의 야생형 FGF-21 및 서열식별번호: 1의 변이체 FGF-21 폴리펩티드를 포함한다.
일부 측면에서, 참조 화합물은 추가의 아미노산 치환, 결실, 및/또는 삽입을 함유할 수 있다. 일부 측면에서, 비교는 폴리펩티드의 PEG화 또는 비-PEG화 형태로 수행될 수 있고; 전자의 경우에, 비교는 비-천연 아미노산을 포함하거나 포함하지 않는 폴리펩티드로 수행될 수 있다.
동일성: 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "동일성"은, 중합체 분자 사이의, 예를 들어, 폴리펩티드 분자 사이의 전체적 단량체 보존을 지칭한다. 임의의 추가의 수식어구가 없는 용어 "동일한" (예를 들어, 단백질 A가 단백질 B와 동일함)은 서열이 100% 동일함 (100% 서열 동일성)을 의미한다. 두 서열을, 예를 들어, "70% 동일한" 것으로 기재하는 것은, 이들을, 예를 들어, "70% 서열 동일성"을 갖는다고 기재하는 것과 동등하다.
두 폴리펩티드 서열의 퍼센트 동일성의 계산은, 예를 들어, 최적의 비교를 위해 두 서열을 정렬시킴으로써 수행될 수 있다 (예를 들어, 최적의 정렬을 위해 제1 및 폴리펩티드 서열 중 하나 또는 둘 다에 갭이 도입될 수 있고, 비-동일 서열은 비교를 위해 무시될 있음). 특정 측면에서, 비교를 위해 정렬된 서열의 길이는 참조 서열의 길이의 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 100%이다. 이어서, 상응하는 아미노산 위치에서의 아미노산을 비교한다.
제1 서열에서의 위치가 제2 서열에서의 상응하는 위치와 동일한 아미노산에 의해 점유되는 경우, 분자는 그 위치에서 동일한 것이다. 두 서열 사이의 퍼센트 동일성은, 두 서열의 최적의 정렬을 위해 도입되어야 하는 각각의 갭의 길이, 및 갭의 수를 고려하여, 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다. 서열의 비교 및 두 서열 사이의 퍼센트 동일성의 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다.
적합한 소프트웨어 프로그램은 다양한 공급원으로부터, 또한 단백질 및 뉴클레오티드 서열 둘 다의 정렬에 대하여 입수가능하다. 퍼센트 서열 동일성을 결정하기 위한 하나의 적합한 프로그램은 bl2seq이며, 이는 미국 정부의 국립 생명 공학 정보 센터 BLAST 웹 사이트 (blast.ncbi.nlm.nih.gov)로부터 입수가능한 프로그램의 BLAST 모음의 부분이다. Bl2seq는 BLASTN 또는 BLASTP 알고리즘을 사용하여 두 서열 사이의 비교를 수행한다. BLASTN은 핵산 서열의 비교에 사용되며, BLASTP는 아미노산 서열의 비교에 사용된다. 다른 적합한 프로그램은, 예를 들어, Needle, Stretcher, Water, 또는 Matcher이며, 이는 생물정보학 프로그램의 EMBOSS 모음의 부분이며 또한 유럽 생물정보학 연구소 (EBI) (www.ebi.ac.uk/Tools/psa)로부터 입수가능하다. 서열 정렬은 관련 기술분야에 공지된 방법, 예컨대 MAFFT, Clustal (ClustalW, Clustal X 또는 Clustal Omega), MUSCLE 등을 사용하여 수행될 수 있다.
폴리펩티드 참조 서열과 정렬되는 단일 폴리펩티드 표적 서열 내의 상이한 영역은 각각 그들 자체의 퍼센트 서열 동일성을 가질 수 있다. 퍼센트 서열 동일성 값은 소수점 첫째 자리로 반올림에 유의한다. 예를 들어, 80.11, 80.12, 80.13, 및 80.14는 80.1로 반올림되며, 80.15, 80.16, 80.17, 80.18, 및 80.19는 80.2로 반올림된다. 또한, 길이 값은 항상 정수임에 유의한다.
특정 측면에서, 제2 아미노산 서열에 대한 제1 아미노산 서열의 백분율 동일성 (%ID)은 %ID = 100 x (Y/Z)로서 계산되고, 여기서 Y는 제1 및 제2 서열의 정렬 (시각적 검사에 의해 또는 특정 서열 정렬 프로그램에 의해 정렬됨)에서 동일한 매치로서 스코어링된 아미노산 잔기의 수이고, Z는 제2 서열 내의 잔기의 총 수이다. 제1 서열의 길이가 제2 서열의 길이보다 더 긴 경우, 제2 서열에 대한 제1 서열의 퍼센트 동일성은 제1 서열에 대한 제2 서열의 퍼센트 동일성보다 더 높을 것이다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는, 퍼센트 서열 동일성의 계산을 위한 서열 정렬의 생성이 1차 서열 데이터에 의해서만 구동되는 2원 서열-서열 비교로 제한되지 않음을 인지할 것이다. 또한, 서열 정렬은 이질적 공급원으로부터의 데이터, 예컨대 구조 데이터 (예를 들어, 결정학적 단백질 구조), 기능 데이터 (예를 들어, 돌연변이의 위치), 또는 계통발생 데이터와 서열 데이터를 통합함으로써 생성될 수 있음을 인지할 것이다. 다중 서열 정렬을 생성하기 위해 이질적 데이터를 통합하는 적합한 프로그램은 www.tcoffee.org에서 입수가능한 T-Coffee이며, 이는 대안적으로, 예를 들어, EBI로부터 입수가능하다. 퍼센트 서열 동일성을 계산하기 위해 사용되는 최종 정렬은 자동적으로 또는 수동적으로 큐레이션될 수 있음을 인지할 것이다.
생체내 단백질분해성 분해: 용어 "생체내 단백질분해성 분해"는 살아있는 시스템으로 도입 시 (예를 들어, 유기체로 주입 시) 상기 유기체에서 나타나는 프로테아제로부터 유래될 수 있는 폴리펩티드의 절단을 지칭한다. 단백질분해는 잠재적으로 폴리펩티드의 생물학적 활성 또는 반감기에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들어, 야생형 FGF-21은 C-말단에서 절단에 놓일 수 있으며, 이는 말단절단된, 불활성 폴리펩티드를 생성한다.
FGF-21의 생체내 단백질분해를 측정하는 예시적인 방법은 미국 출원 공개 번호 US2017/0189486의 실시예 10에 기재된 메조 스케일 디스커버리(Meso Scale Discovery; MSD)-기반 전기화학발광 면역흡착 검정 (ECLIA)이다. 생체내 또는 시험관내 단백질분해의 상대량은, 예를 들어 감소된 생체내 단백질분해를 갖는 폴리펩티드를 확인하기 위해 참조 화합물과 비교하여 결정될 수 있다. 생체내 단백질분해의 상대량은 또한, 즉 본원에 개시된 FGF-21 접합체의 FGF-21 폴리펩티드 모이어티, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21이 감소된 시험관내 단백질분해를 갖는 제제를 확인하기 위해 참조 제제와 비교하여 결정될 수 있다.
단리된: 본원에 사용된 용어 "단리된"은 (자연에서든 또는 실험 설정에서든) 그와 회합된 성분 중 적어도 일부로부터 분리된 물질 또는 실체 (예를 들어, 폴리펩티드)를 지칭한다. 단리된 물질 (예를 들어, 단백질)은 이들이 회합된 물질에 대하여 다양한 수준의 순도를 가질 수 있다.
연결된: 용어 "연결된", "융합된", "접합된" 및 "부착된"은 상호교환가능하게 사용되고, FGF-21 폴리펩티드, 예를 들어 본원에 개시된 변이체 FGF-21 폴리펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1의 FGF-21 폴리펩티드)에 공유 융합 또는 연쇄 (내부 삽입 포함)된 PEG 모이어티 (예를 들어, ~30 kD PEG 모이어티)를 지칭한다.
본 개시내용의 문맥에서, FGF-21 폴리펩티드, 예를 들어 본원에 개시된 변이체 FGF-21 폴리펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1의 FGF-21 폴리펩티드) 및 PEG 모이어티는 화학적 합성의 결과로서 "융합"될 수 있다.
본 개시내용의 문맥에서, 용어 "접합체" 또는 "접합"은 2개의 분자 엔티티 (예를 들어, FGF-21 폴리펩티드, 예를 들어 본원에 개시된 변이체 FGF-21 폴리펩티드 및 중합체 모이어티, 예컨대 PEG)가 화학적으로 연결된 것을 나타낸다. 일부 특정한 측면에서, 본원에 개시된 화학식 (I)에 제시된 바와 같이 FGF-21 폴리펩티드 및 PEG 모이어티는 옥심 연결을 통해 연결된다. 일부 측면에서, PEG 모이어티는 원위 메톡시 (-O-CH3) 기를 포함한다.
돌연변이: 본 개시내용의 내용에서, 상기에 정의된 바와 같은 용어 "돌연변이" 및 "아미노산 치환" (때때로 간단히 "치환"으로서 언급됨)은 상호교환가능한 것으로 고려된다.
비-천연 아미노산: "비-천연 아미노산"은 20종의 통상적인 아미노산 또는 피롤리신 또는 셀레노시스테인 중 하나가 아닌 아미노산을 지칭한다. 용어 "비-천연 아미노산"과 동의어로 사용될 수 있는 다른 용어는 "비-천연 코딩 아미노산", "비천연 아미노산", "비-자연 발생 아미노산" 및 그의 다양한 하이픈화 및 비-하이픈화 버전이다.
용어 "비-천연 아미노산"은 또한 자연 코딩 아미노산 (20종의 통상의 아미노산을 포함하나 이에 제한되지는 않음)의 변형 (예를 들어, 번역후 변형)에 의해 발생하지만 그 자체가 번역 복합체에 의해 성장하는 폴리펩티드 쇄에 자연적으로 혼입되지는 않는 아미노산을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이러한 비-천연 아미노산의 예는 N-아세틸글루코사미닐-L-세린, N-아세틸글루코사미닐-L-트레오닌 및 O-포스포티로신을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본 개시내용의 한 구체적 측면에서, 비-천연 아미노산은 파라-아세틸-페닐알라닌이다. 본 개시내용의 한 구체적 측면에서, 비-천연 아미노산은 파라-아세틸-L-페닐알라닌이다. 본 개시내용의 한 구체적 측면에서, 비-천연 아미노산은 파라-아세틸-D-페닐알라닌이다.
환자: 본원에 사용된 바와 같이, "환자"는 치료를 추구하거나 필요로 할 수 있는, 치료를 요구하는, 치료를 수용하고 있는, 치료를 수용할 대상체, 또는 특정 질환 또는 상태에 대하여 훈련된 전문가에 의해 관리 중인 대상체를 지칭한다.
제약 조성물: 용어 "제약 조성물"은 활성 성분 (예를 들어, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21)의 생물학적 활성이 효과적이도록 하는 형태로 존재하고, 조성물이 투여될 대상체에게 허용되지 않는 독성인 추가의 성분 (예를 들어, 부형제 및 물)을 함유하지 않는 제제를 지칭한다. 이러한 조성물은 멸균될 수 있다.
제약상 허용되는: 본원에서 어구 "제약상 허용되는"은, 합리적인 이익/위험 비에 상응하여 과도한 독성, 자극, 알러지 반응 또는 다른 문제점 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 타당한 의학적 판단의 범주 내의 이들 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 지칭하는 것으로 사용된다. 일반적으로, 동물에서의, 또한 보다 특히 인간에서의 사용에 대한 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의한 승인 (또는 미국 약전 또는 다른 일반적으로 인식되는 약전에 기재된)은, 이들 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태가 제약상 허용되는 것임을 의미한다. 치료 목적상 안전한 것으로 일반적으로 허용되는 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태는 "치료상 허용되는" 것이다.
제약상 허용되는 부형제: 본원에서 사용되는 바와 같이, 어구 "제약상 허용되는 부형제"는, 대상체에서 실질적으로 비독성 및 비-염증성인 특성을 갖는, 본원에 기재된 활성 화합물 이외의 임의의 성분 (예를 들어, 활성 화합물을 현탁 또는 용해시킬 수 있는 비히클)을 지칭한다. 부형제는, 예를 들어 킬레이트화제, 계면활성제, 완충제, 삼투 조절제, 산화방지제, 유화제, 충전제 (희석제), 보존제, 흡착제, 현탁제 또는 분산제, 감미제, 및 수화수를 포함할 수 있다. 치료 목적상 안전한 것으로 일반적으로 허용되는 부형제는 "치료상 허용되는 부형제"이다.
제약상 허용되는 염: 본 개시내용은 또한 본원에 기재된 화합물의 제약상 허용되는 염을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "제약상 허용되는 염"은, 모 화합물이 기존의 산 또는 염기 모이어티를 그의 염 형태로 전환시킴으로써 (예를 들어, 유리 염기 기를 적합한 유기 산과 반응시킴으로써) 변형된 개시된 화합물의 유도체를 지칭한다. 제약상 허용되는 염의 예는, 아민 등의 염기성 잔기의 미네랄 또는 유기 산 염; 카르복실산 등의 산성 잔기의 알칼리 또는 유기 염 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다
폴리펩티드: 용어 "폴리펩티드", "펩티드", 및 "단백질"은 임의의 길이의 아미노산의 중합체를 지칭하기 위해 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 중합체는 변형된 아미노산을 포함할 수 있다. 용어는 또한 자연적으로 또는 개입; 예를 들어, 디술피드 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작 또는 변형, 예컨대 표지 성분과의 접합에 의해 변형된 아미노산 중합체를 포함한다. 또한, 예를 들어, 아미노산의 하나 이상의 유사체 (예를 들어, 자연적이 아닌 아미노산, 예컨대 호모시스테인, 오르니틴, p-아세틸페닐알라닌, D-아미노산, 및 크레아틴)을 함유하는 폴리펩티드, 뿐만 아니라 관련 기술분야에 공지된 다른 변형물이 정의 내에 포함된다. 특정한 측면에서, 본원에 개시된 폴리펩티드는 FGF-21 폴리펩티드이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어는, 임의의 크기, 구조, 또는 기능의 단백질, 폴리펩티드, 및 펩티드를 지칭한다. 폴리펩티드는 유전자 생성물, 자연 발생 폴리펩티드, 합성 폴리펩티드, 동족체, 오르토로그, 파라로그, 이들의 단편 및 다른 등가물, 변이체, 및 유사체를 포함한다. 폴리펩티드는 단일 폴리펩티드일 수 있거나 다분자 복합체, 예컨대 이량체, 삼량체 또는 사량체일 수 있다. 이들은 또한 단일 쇄 또는 다중 쇄 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 가장 통상적으로 디술피드 연결이 다중 쇄 폴리펩티드에서 나타난다. 용어 폴리펩티드는 또한, 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 자연 발생 아미노산의 인공적 화학 유사체인 아미노산 중합체에 적용될 수 있다. 일부 측면에서, "펩티드"는 50개 이하의 아미노산 길이, 예를 들어, 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 또는 50개의 아미노산 길이를 가질 수 있다.
방지: 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "방지"는 질병, 장애 및/또는 상태의 개시를 부분적으로 또는 완전히 지연시키는 것; 특정 질환, 장애, 및/또는 상태의 하나 이상의 증상, 특징, 또는 임상적 표명의 개시를 부분적으로 또는 완전히 지연시키는 것; 특정 질환, 장애, 및/또는 상태의 하나 이상의 증상, 특징, 또는 표명의 개시를 부분적으로 또는 완전히 지연시키는 것; 특정 질환, 장애 및/또는 상태로부터의 진행을 부분적으로 또는 완전히 지연시키는 것; 및/또는 질환, 장애, 및/또는 상태와 연관된 병적 측면의 발달 위험을 감소시키는 것을 지칭한다. 일부 측면에서, 본 출원에 개시된 제약 제제는 섬유증과 연관된 질환 또는 상태, 예컨대 NASH 또는 당뇨병의 개시를 방지하거나, 증상을 방지하거나, 또는 합병증을 방지하기 위해 사용될 수 있다.
예방적: 본원에서 사용되는 바와 같이, "예방적"은 질환 또는 상태의 개시를 방지하기 위해, 또는 섬유증과 연관된 질환 또는 상태, 예를 들어, NASH의 증상을 방지하거나 지연시키기 위해 사용되는 치료적 또는 작용 과정을 지칭한다. 일부 측면에서, 본 출원에 개시된 제약 제제는 예방적으로 사용될 수 있다.
예방: 본원에서 사용되는 바와 같이, "예방"은 건강을 유지하고 섬유증과 연관된 질환 또는 상태, 예를 들어, NASH 또는 당뇨병의 개시를 방지하거나 지연시키기 위해, 또는 질환 또는 상태와 연관된 증상을 방지하거나 지연시키기 위해 취해지는 조치를 지칭한다.
재조합: "재조합" 폴리펩티드 또는 단백질은 재조합 DNA 기술을 통해 생성된 폴리펩티드 또는 단백질을 지칭한다. 조작된 숙주 세포에서 발현되는 재조합 생성된 폴리펩티드 및 단백질은, 임의의 적합한 기술에 의해 분리된, 분별된, 또는 부분적으로 또는 실질적으로 정제된 네이티브 또는 재조합 폴리펩티드와 같이, 본 개시내용의 목적상 단리된 것으로 고려된다. 본원에 개시된 변이체 FGF-21은 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 재조합 생성될 수 있다. 본원에 개시된 단백질 및 펩티드는 또한 화학적으로 합성될 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 접합체에 유용한 FGF-21 폴리펩티드 (예를 들어, 비-천연 아미노산을 포함하는 FGF-21 폴리펩티드, 예를 들어 서열식별번호: 1의 FGF-21)는 박테리아 숙주에 의해 재조합적으로 생산된다.
유사성: 본원에 사용된 용어 "유사성"은 중합체 분자 사이의, 예를 들어 폴리펩티드 분자 사이의 전체적 관련성을 지칭한다. 중합체 분자의 서로에 대한 퍼센트 유사성의 계산은 관련 기술분야에서 이해되는 바와 같이 보존적 치환을 고려하는 것을 제외하고는, 퍼센트 동일성의 계산과 동일한 방식으로 수행될 수 있다.
용해도: 용어 "용해도"는 또 다른 물질에 용해될 수 있는 물질의 양, 예를 들어 수용액에 용해될 수 있는 야생형 FGF-21 (예를 들어, 서열식별번호: 3의 FGF-21 폴리펩티드), 변이체 FGF-21 (예를 들어, 비-천연 아미노산을 포함하는 FGF-21 폴리펩티드, 예를 들어 서열식별번호: 1의 FGF-21 폴리펩티드), 또는 본 개시내용의 FGF-21 접합체 (예를 들어, 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 FGF-21 폴리펩티드)의 양을 지칭한다.
야생형, 변이체 FGF-21 폴리펩티드 또는 FGF-21 접합체의 용해도를 측정하는 예시적인 방법은 미국 출원 공개 번호 US2017/0189486의 실시예 8에 기재된 플러그 유동 용해도 시험이다. 상대 용해도는, 예를 들어 증가된 용해도를 갖는 폴리펩티드를 확인하기 위해 참조 화합물과 비교하여 결정될 수 있다. 일부 측면에서, 상대 용해도는, 예를 들어 폴리펩티드가 증가된 용해도를 갖는 제제를 확인하기 위해 참조 제제와 비교하여 결정될 수 있다.
대상체: "대상체" 또는 "개체" 또는 "동물" 또는 "포유류"는, 진단, 예후, 또는 요법이 요망되는 임의의 대상체, 특히 포유류 대상체를 의미한다. 포유류 대상체는 인간, 가축, 농장 동물, 동물원 동물, 스포츠 동물, 애완 동물, 예컨대 개, 고양이, 기니아 피그, 토끼, 래트, 마우스, 말, 소, 젖소; 영장류, 예컨대 유인원, 원숭이, 오랑우탄, 및 침팬지; 개과 동물, 예컨대 개 및 늑대; 고양이과 동물, 예컨대 고양이, 사자, 및 호랑이; 말과 동물, 예컨대 말, 당나귀, 및 얼룩말; 곰, 식용 동물, 예컨대 젖소, 돼지, 및 양; 유제류, 예컨대 사슴 및 기린; 설치류, 예컨대 마우스, 래트, 햄스터 및 기니아 피그 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 측면에서, 포유류는 인간 대상체이다. 다른 측면에서, 대상체는 인간 환자이다. 특정 측면에서, 대상체는 생체내, 시험관내 또는 생체외에서 본원에 기재된 방법에 적용가능한 인간 환자 또는 그의 세포이다.
앓고 있는: 질환, 장애, 및/또는 상태를 "앓고 있는" 개체는 질환, 장애, 및/또는 상태의 하나 이상의 증상을 갖는 것으로 진단된 또는 이를 나타내는 것이다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 제제는 섬유증과 연관된 질환 또는 상태, 예컨대 NASH 또는 당뇨병을 앓고 있는 대상체에게 투여될 수 있다.
걸리기 쉬운: 질환, 장애, 및/또는 상태에 "걸리기 쉬운" 개체는 질환, 장애, 및/또는 상태를 갖는 것으로 진단되지 않았고/거나 이들의 증상을 나타내지 않을 수 있으나 질환 또는 그의 증상이 발달하는 경향을 갖는다. 일부 측면에서, 질환, 장애, 및/또는 상태 (예를 들어, 암)에 걸리기 쉬운 개체는 하기 중 하나 이상을 특징으로 할 수 있다: (1) 질환, 장애, 및/또는 상태의 발달과 연관된 유전적 돌연변이; (2) 질환, 장애, 및/또는 상태의 발달과 연관된 유전적 다형성; (3) 질환, 장애, 및/또는 상태와 연관된 단백질 및/또는 핵산의 증가된 및/또는 감소된 발현 및/또는 활성; (4) 질환, 장애, 및/또는 상태의 발달과 연관된 습관 및/또는 생활방식; (5) 질환, 장애, 및/또는 상태의 가족력; 및 (6) 질환, 장애, 및/또는 상태의 발달과 연관된 미생물에 대한 노출 및/또는 그로의 감염.
일부 측면에서, 질환, 장애, 및/또는 상태에 걸리기 쉬운 개체는 질환, 장애, 및/또는 상태를 발달시킬 것이다. 일부 측면에서, 질환, 장애, 및/또는 상태에 걸리기 쉬운 개체는 질환, 장애, 및/또는 상태를 발달시키지 않을 것이다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 제제는 섬유증과 연관된 질환 또는 상태, 예컨대 NASH 또는 당뇨병에 걸리기 쉬운 대상체에게 투여될 수 있다.
치료 작용제: 용어 "치료 작용제" 또는 "작용제"는, 대상체에게 투여 시, 치료적, 진단적, 및/또는 예방적 효과를 갖고/거나 요망되는 생물학적 및/또는 약리적 효과를 끌어내는 분자 엔티티를 지칭한다. 예를 들어, 일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체 (예를 들어, 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21)는 치료 작용제일 수 있다. 일부 측면에서, 작용제는 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21 중 적어도 하나와 조합 요법의 일부로서 공동-투여되는 또 다른 분자이다.
치료 유효량: 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료 유효량"은, 감염, 질환, 장애, 및/또는 상태를 앓고 있는 또는 그에 걸리기 쉬운 대상체에게 투여 시, 감염, 질환, 장애, 및/또는 상태를 치료하고/거나, 그의 증상을 개선시키고/거나, 진단하고/거나, 방지하고/거나, 그의 개시를 지연시키기에 충분한, 전달되는 작용제 (예를 들어, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21, 또는 FGF-21 접합체를 포함하는 제제)의 양을 의미한다. 일반적으로, 치료 유효량의 투여는 치료 유효 결과를 제공할 것으로 예상된다.
치료 유효 결과: 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료 유효 결과"는, 감염, 질환, 장애, 및/또는 상태를 앓고 있는 또는 그에 걸리기 쉬운 대상체에서 감염, 질환, 장애, 및/또는 상태를 치료하고/거나, 그의 증상을 개선시키고/거나, 진단하고/거나, 방지하고/거나, 그의 개시를 지연시키기에 충분한 결과를 의미한다.
치료하다, 치료, 요법: 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하다" 또는 "치료" 또는 "요법" 또는 이들의 문법적 변형은, 섬유증과 연관된 질환 또는 상태, 예를 들어, NASH 또는 당뇨병의 하나 이상의 증상 또는 특징을 부분적으로 또는 완전히 방지하고/거나, 경감시키고/거나, 개량시키고/거나, 개선시키고/거나, 완화시키고/거나, 그의 개시를 지연시키고/거나, 그의 진행을 억제하고/거나, 그의 중증도를 감소시키고/거나, 그의 발병률을 감소시키는 것을 지칭한다. 예를 들어, 섬유증과 연관된 질환을 "치료하는" 것은 질환 또는 상태 또는 그의 증상에 대한 증상 방지, 증상 개량, 개시 지연 등을 지칭할 수 있다. 치료는, 질환, 장애, 및/또는 상태와 연관된 병적 측면의 발달 위험을 감소시키기 위해, 질환, 장애, 및/또는 상태의 징후를 나타내지 않는 대상체 및/또는 질환, 장애, 및/또는 상태의 단지 조기 징후를 나타내는 대상체에게 투여될 수 있다.
ug, uM, uL: 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "ug", "uM", 및 "uL"은 각각 "μg", "μM", 및 "μL"과 상호교환가능하게 사용된다.
본 개시내용의 다양한 측면이 하기의 하위섹션에서 추가로 상세하게 기재된다.
I. FGF-21 접합체 제제
본 개시내용은 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21) 접합체 및 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제, 예를 들어 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DTPA)을 포함하는 제약 제제를 제공하고, 여기서 제제는 참조 제제와 비교하여 개선된 안정성을 갖는다. 용어 "참조 제제"는 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제를 함유하지 않는 것을 제외하고는 "시험 제제" (참조 제제와 비교되는 제제)와 동일한 성분 및 특성 (예를 들어, pH, 온도)을 포함하는 제제를 지칭한다.
용어 "FGF-21 접합체"는 PEG 모이어티에 연결된 FGF-21 폴리펩티드 모이어티를 포함하는 접합체를 지칭한다. 일부 측면에서, PEG 모이어티는 원위 메톡시 (-O-CH3) 기를 포함한다. 용어 "FGF-21 폴리펩티드"는 일반적으로 야생형 FGF-21 폴리펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 3의 폴리펩티드) 및 "변이체 FGF-21 폴리펩티드" 둘 다를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "PEG-FGF-21 접합체" 또는 "PEG-FGF-21"은 옥심 연결을 통해 변이체 FGF-21 폴리펩티드 모이어티에 연결된 PEG 모이어티를 포함하는 PEG화 FGF-21 형태를 지칭한다. 본 개시내용의 예시적인 PEG-FGF-21 접합체는 하기 표 4에서 서열식별번호: 2 또는 5 및 서열식별번호: 4 또는 6에 제시된다.
표 1: 예시적인 FGF-21 서열
Figure pct00017
관련 기술분야에 공지된 수많은 FGF-21, 예를 들어 미국 특허 번호 8,012,931 및 9,434,788 (둘 다 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 개시된 것이 본원에 개시된 PEG화 FGF-21 접합체 제제에 사용될 수 있다. 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21)은 문헌에 기재되어 있다 (Nishimura et al., Biochimica et Biophysica Acta, 1492:203-206 (2000); WO 01/36640; 및 WO 01/18172, 및 미국 특허 공개 번호 20040259780, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨). 다른 FGF와 달리, FGF-21은 증식 및 종양형성 효과를 갖지 않는 것으로 보고되었다 (Ornitz and Itoh, Genome Biology 2001, 2(3):reviews3005.1-3005.12).
일부 측면에서, 본 개시내용에 유용한 FGF-21 폴리펩티드는 N 말단에 메티온을 갖지 않는, 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4에 기재된 아미노산 서열을 포함한다.
FGF-21의 다수의 다형체가 확인되었다. 류신 또는 프롤린이 미국 특허 공개 번호 20010012628 및 미국 특허 번호 6,716,626에서 동일한 위치에 기재되었다. 1개의 아미노산 (류신)이 상이한 N-말단 리더 또는 신호 서열은 미국 특허 번호 6,716,626 및 미국 특허 공개 번호 20040259780에 제시되어 있다. FGF-21 변이체 또는 돌연변이체는 미국 특허 번호 6,716,626; 미국 특허 공개 번호 2005/0176631, 2005/0037457, 2004/0185494, 2004/0259780, 2002/0164713, and 2001/0012628; WO 01/36640; WO 03/011213; WO 03/059270; WO 04/110472; WO 05/061712; WO 05/072769; WO 05/091944; WO 05/113606; WO 06/028595; WO 06/028714; WO 06/050247; WO 06/065582; WO 06/078463; WO01/018172; WO09/149171; WO10/042747; WO12/066075; WO11/154349; WO13/052311; WO13/188181 (이들은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 개시된 것들을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "변이체 FGF-21" 및 "변이체 FGF-21 폴리펩티드"는 적어도 하나의 아미노산 위치에서 참조 야생형 FGF-21 폴리펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 3의 야생형 인간 FGF-21)와 상이하고, 전형적으로 섬유모세포 성장 인자 21의 적어도 하나의 생물학적 활성을 갖는 FGF-21 폴리펩티드, 뿐만 아니라 그의 생물학적 활성과 관계없이 FGF-21 유사체, FGF-21 이소형, FGF-21 모방체, FGF-21 단편, 하이브리드 FGF-21 단백질, 융합 단백질, 올리고머 및 다량체, 상동체, 글리코실화 패턴 변이체, 스플라이스 변이체 및 뮤테인을 지칭한다. 상기 용어는 자연 발생 및 비-자연 발생 변이체 둘 다, 예를 들어 야생형 FGF-21 폴리펩티드, 예를 들어 서열식별번호: 3의 폴리펩티드 내의 아미노산의 비-천연 아미노산 (예를 들어, 파라-아세틸-L-페닐알라닌)으로의 치환으로부터 생성된 변이체를 포괄한다. 치환은 예를 들어 재조합 발현 또는 화학적 또는 효소적 합성의 결과일 수 있다. 일부 측면에서, 본 개시내용의 변이체 FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1의 폴리펩티드를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진다.
본 개시내용의 변이체 FGF-21 폴리펩티드는 1개 이상의 아미노산 치환, 부가 또는 결실을 포함하는 FGF-21 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, 본 개시내용의 변이체 FGF-21 폴리펩티드는 1개 이상의 아미노산 치환 (예를 들어, 자연 발생 또는 비-자연 발생 아미노산에 의함), 결실 (말단 또는 내부 결실), 또는 변형, 예컨대 이종 모이어티의 부착 (아미노산 서열에서의 삽입/삽입 또는 측쇄 부착에 의한 C-말단, N-말단 또는 내부 부착)을 포함한다. 용어 변이체 FGF-21 폴리펩티드는 또한 다형성 (예를 들어, 자연 발생 FGF-21 서열 변이체), 예를 들어 FGF-21의 P-형태 또는 L-형태를 포괄한다.
자연-발생 FGF-21 폴리펩티드에서의 매우 다양한 아미노산 위치에서의 치환이 기재되어 있다. 용해도 또는 안정성을 조정하거나, 효능제 활성을 증가시키거나, 생체내 또는 시험관내 반감기를 증가시키거나, 프로테아제 내성을 증가시키거나, 폴리펩티드를 길항제로 전환시키거나, 면역원성 또는 독성을 감소시키거나, 정제 또는 제조가능성을 용이하게 하거나, 또는 그의 임의의 조합을 유발하는 치환을 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 치환은 또한 용어 변이체 FGF-21 폴리펩티드에 포괄된다.
용어 변이체 FGF-21 폴리펩티드는 또한 자연-발생 FGF-21 폴리펩티드의 생물학적 활성 단편, 생물학적 활성 변이체 및 입체이성질체 뿐만 아니라 자연-발생 FGF-21의 효능제, 모방체 및 길항제 변이체 및 그의 폴리펩티드 융합체를 포함한다. 아미노 말단, 카르복실 말단 또는 둘 다에 추가의 아미노산을 포함하는 융합체는 용어 변이체 FGF-21 폴리펩티드에 포괄된다.
예시적인 융합체는 예를 들어, 예를 들어 리더 또는 신호 펩티드 또는 그의 일부가 결여된 FGF-21의 성숙 형태의 재조합 발현으로부터 생성된 FGF-21 폴리펩티드의 N-말단에 메티오닌이 연결되는 메티오닐 FGF-21 (메티오닌은 예를 들어 이. 콜라이에서의 재조합 발현으로부터 생성된 FGF-21의 N-말단에 연결됨), 정제 목적을 위한 융합체 (폴리-히스티딘 또는 친화성 에피토프를 포함하나 이에 제한되지는 않음)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
용어 변이체 FGF-21 폴리펩티드는 또한 글리코실화 FGF-21 폴리펩티드, 예컨대 비제한적으로 임의의 아미노산 위치에서 글리코실화된 폴리펩티드, 폴리펩티드의 N-연결 또는 O-연결 글리코실화 형태를 포함한다. 단일 뉴클레오티드 변화를 함유하는 변이체는 또한 FGF-21의 생물학적 활성 변이체로서 간주된다. 추가로, 스플라이스 변이체가 또한 포함된다.
용어 변이체 FGF-21 폴리펩티드는 또한 화학적 수단에 의해 연결되거나 또는 융합 단백질로서 발현된, 임의의 하나 이상의 비변형 또는 변형된 FGF-21 또는 임의의 다른 폴리펩티드, 단백질, 탄수화물, 중합체, 소분자, 링커, 리간드, 또는 임의의 유형의 다른 생물학적 활성 분자의 FGF-21 이종이량체, 동종이량체, 이종다량체 또는 동종다량체, 뿐만 아니라 예를 들어 생물학적 활성을 유지하는 특이적 결실 또는 다른 변형을 함유하는 폴리펩티드 유사체를 포함한다.
일부 측면에서, 변이체 FGF-21 폴리펩티드는 FGF-21 폴리펩티드의 그의 수용체에 대한 친화도를 증가시키는 부가, 치환 또는 결실을 포함한다. 유사하게, 용어 변이체 FGF-21 폴리펩티드는 화학적 또는 효소적 절단 서열, 프로테아제-절단된 서열, 반응성 기, 항체-결합 도메인 (FLAG 또는 폴리-His를 포함하나 이에 제한되지는 않음) 또는 다른 친화도 기반 서열 (FLAG, 폴리-His, GST 등을 포함하나 이에 제한되지는 않음) 또는 검출 (GFP를 포함하나 이에 제한되지는 않음), 정제, 조직 또는 세포 막을 통한 수송, 전구약물 방출 또는 활성화, FGF-21 폴리펩티드 크기 감소, 또는 폴리펩티드의 다른 형질을 개선시키는 연결된 분자 (비오틴을 포함하나 이에 제한되지는 않음)를 포함한다.
일부 측면에서, 변이체 FGF-21 폴리펩티드는 N 말단에 메티온을 갖지 않는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3, 또는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3의 아미노산 서열과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 폴리펩티드는 FGF-21 활성을 갖는다. 일부 측면에서, 변이체 FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 6에 기재된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 측면에서, 변이체 FGF-21 폴리펩티드는 N 말단에 메티온을 갖지 않는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3, 또는 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3의 아미노산 서열과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로 이루어지거나 또는 본질적으로 이루어지며, 여기서 폴리펩티드는 FGF-21 활성을 갖는다. 일부 측면에서, 변이체 FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 6에 기재된 아미노산 서열로 본질적으로 이루어진다.
이러한 정의에 포함되는 변이체 FGF-21 폴리펩티드는, 예를 들어 적어도 하나의 비-천연 아미노산을 포함하는 변이체 FGF-21 폴리펩티드를 포함한다. 일부 측면에서, 비-천연 아미노산은 아미노옥시 유도체와의 반응시에 안정한 옥심 연결을 형성할 수 있는 아미노산, 예를 들어, p-아세틸페닐알라닌, m-아세틸페닐알라닌, p-(3-옥소부테노일)-L-페닐알라닌, p-(2-아미노-3-히드록시에틸)페닐알라닌 등이다. 일부 측면에서, 비-천연 아미노산은 p-아세틸페닐알라닌이다. 일부 측면에서, 비-천연 아미노산은 p-아세틸-L-페닐알라닌이다.
일부 측면에서, 하나 이상의 비-천연 아미노산은 야생형 FGF-21의 하기 위치 중 하나 이상에 혼입된다: 위치 1 앞 (즉, N-말단), 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182 (즉, 단백질의 카르복실 말단) (서열식별번호: 3에 상응하는 아미노산 위치).
일부 구체적 측면에서, 본 개시내용의 변이체 FGF-21은 변형된 FGF-21 폴리펩티드 서열식별번호: 1, 즉 야생형 FGF-21의 글루타민 109가 비-천연 파라-아세틸-L-페닐알라닌 아미노산으로 치환된 것인 서열식별번호: 3의 야생형 FGF-21의 유도체이다.
일부 구체적 측면에서, 본 개시내용의 FGF-21 폴리펩티드는 FGF-21 폴리펩티드 (서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 3)의 N 말단에서의 메티온이 제거되도록 변형된다: 서열식별번호: 5 또는 6.
상기 개시된 바와 같이, 본 개시내용의 변이체 FGF-21 폴리펩티드는 PEG (폴리에틸렌 글리콜) 모이어티에 연결될 수 있다. 본원에 개시된 변이체 FGF-21 폴리펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1의 FGF-21 폴리펩티드)에 대한 PEG의 연결은 비변형된 형태와 비교하여 증가 또는 조정된 혈청 (생체내) 반감기, 또는 증가 또는 조정된 치료 반감기, 조정된 면역원성 또는 독성, 조정된 물리적 회합 특징, 예컨대 응집 및 다량체 형성, 변경된 수용체 결합, 하나 이상의 결합 파트너에 대한 변경된 결합, 및 변경된 수용체 이량체화 또는 다량체화를 포함하나 이에 제한되지는 않는 변화를 유발할 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 변이체 FGF-21 (예를 들어, 서열식별번호: 1의 FGF-21 폴리펩티드)에 대한 PEG의 연결은 참조 화합물, 예컨대 비접합 형태의 변이체 FGF-21 폴리펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1의 FGF-21 폴리펩티드) 또는 야생형 FGF-21 (예를 들어, 서열식별번호: 3의 FGF-21 폴리펩티드)과 비교하여, 흡수 속도의 증가, 독성의 감소, 용해도의 개선, 단백질 응집의 감소, PEG화 FGF-21의 생물학적 활성 및/또는 표적 선택성의 증가, 제조성의 증가, 및/또는 면역원성의 감소를 포함하나 이에 제한되지는 않는 약동학적 또는 생물물리학적 특성을 개선 또는 변경시킨다 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,179,337 참조). 일부 측면에서, 적어도 1개의 링커가 변이체 FGF-21 폴리펩티드 모이어티와 PEG 모이어티 사이에 개재될 수 있다. 일부 측면에서, PEG 모이어티는 원위 메톡시 (-O-CH3) 기를 포함한다.
FGF-21 또는 FGF 패밀리 구성원(들)의 결정 구조 및 FGF 수용체와의 그의 상호작용의 검사는, 어떠한 특정 아미노산 잔기가 용매에 완전히 또는 부분적으로 접근가능한 측쇄를 갖는지를 나타낼 수 있다. 이들 위치에서의 비-천연 아미노산의 측쇄는 단백질 표면으로부터 멀어지고 용매로 나와 PEG에 연결될 수 있다.
PEG는 야생형 FGF-21 폴리펩티드 또는 변이체 FGF-21 폴리펩티드의 하기 아미노산 위치 중 하나 이상에 연결될 수 있다: 위치 1 앞 (즉 N-말단), 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182 (즉, 단백질의 카르복실 말단) (서열식별번호: 3에 상응하는 아미노산 위치). 일부 측면에서, PEG는 상기 개시된 임의의 위치에서 자연 발생 아미노산을 치환하는 비-천연 아미노산, 예를 들어, 페닐알라닌 유도체 예컨대 파라-아세틸-L-페닐알라닌의 측쇄에 부착된다.
본 개시내용의 PEG는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드, 모노 C1-C10 알콕시 또는 그의 아릴옥시 유도체 (본원에 참조로 포함된 미국 특허 번호 5,252,714에 기재됨), 모노메톡시-폴리에틸렌 글리콜, 이산 PEG, 폴리프로필렌 옥시드/에틸렌 옥시드 공중합체, 폴리알킬렌 글리콜 및 그의 유도체, 폴리알킬렌 글리콜의 공중합체 및 그의 유도체, 또는 그의 혼합물을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 측면에서, PEG는 분지형 구조를 가질 수 있다. 분지형 PEG는, 예를 들어 미국 특허 번호 5,643,575; 문헌 [Morpurgo et al., Appl. Biochem. Biotechnol. 56:59-72 (1996); Vorobjev et al., Nucleosides Nucleotides 18:2745-2750 (1999); and Caliceti et al., Bioconjug. Chem. 10:638-646 (1999)]에 기재되어 있다.
일부 측면에서, PEG의 분자량은 약 30 kDa이다. 목적하는 프로파일 (예를 들어, 목적하는 지속 방출의 지속기간, 생물학적 활성 (존재하는 경우)에 대한 효과, 취급 용이성, 항원성의 정도 또는 결여 및 단백질 또는 유사체에 대한 폴리에틸렌 글리콜의 다른 공지된 효과)에 따라 다른 크기가 사용될 수 있다. 일부 측면에서, PEG의 분자량은 약 28 kDa, 약 29 kDa, 약 30 kDa, 약 31 kDa, 또는 약 32 kDa이다. 일부 측면에서, PEG의 분자량은 약 28 kDa 내지 약 29 kDa, 약 29 kDa 내지 약 30 kDa, 약 30 kDa 내지 약 31 kDa, 또는 약 31 kDa 내지 약 32 kDa이다. PEG (뿐만 아니라 FGF-21 접합체)의 분자량을 결정하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 임의의 공지된 방법, 예를 들어 질량 분광측정법 (예를 들어, MALDI-TOF 및/또는 ESI)을 사용하여 본 개시내용에 대한 PEG의 분자량을 측정할 수 있다.
일부 측면에서, PEG는 약 600개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 610개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 620개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 630개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 640개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 650개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 660개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 670개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 680개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 690개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 700개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 710개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 720개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 730개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 740개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 750개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 760개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 770개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 780개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 790개의 에틸렌 글리콜 단위, 또는 약 800개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는다.
일부 측면에서, PEG는 약 600개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 610개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 610개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 620개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 620개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 630개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 630개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 640개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 640개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 650개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 650개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 660개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 660개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 670개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 670개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 680개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 680개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 690개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 690개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 700개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 700개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 710개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 710개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 720개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 720개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 730개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 730개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 740개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 740개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 750개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 750개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 760개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 760개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 770개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 770개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 780개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 780개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 790개의 에틸렌 글리콜 단위, 또는 약 790개의 에틸렌 글리콜 단위 내지 약 800개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는다.
일부 측면에서, PEG는 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 696, 697, 698, 699, 또는 700개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는다.
일부 구체적 측면에서, PEG 모이어티는 옥심 연결을 통해 본 개시내용의 변이체 FGF-21 폴리펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1의 FGF-21 폴리펩티드)에 연결된다. 일부 측면에서, PEG 모이어티는 PEG 분자의 반응성 기 (예를 들어, 도 7에 제시된 바와 같은 30 kDa 메틸 PEG681 아미노옥시 분자의 아미노옥시 기)와 변이체 FGF-21 폴리펩티드 내의 비-천연 아미노산의 반응성 기 (예를 들어, 변이체 FGF-21 폴리펩티드의 서열의 아미노산 위치 109에서의, 예를 들어 p-아세틸-페닐알라닌의 아세틸 기) 사이에 형성된 옥심 연결을 통해 본 개시내용의 변이체 FGF-21 폴리펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1의 변이체 FGF-21 폴리펩티드)에 연결된다. 일부 측면에서, 비-천연 아미노산은 서열식별번호: 3의 Gln109를 대체하는 파라-아세틸-L-페닐알라닌이다. 일부 측면에서, PEG 모이어티는 원위 메톡시 (-O-CH3) 기를 포함한다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 제제 중 FGF-21 접합체는 서열식별번호: 2의 PEG-FGF-21, 즉 야생형 FGF-21 (서열식별번호: 3)의 글루타민 109가 파라-아세틸-L-페닐알라닌으로 대체된 것인 서열식별번호: 1의 FGF-21, 및 PEG 모이어티, 예를 들어 분자량이 약 28 kDa 내지 약 32kDa, 예를 들어 약 30 kDa이고 옥심 연결을 통해 파라-아세틸-L-페닐알라닌에 공유 부착된 선형 PEG이다. 일부 측면에서, PEG 모이어티는 원위 메톡시 (-O-CH3) 기를 포함한다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 제제 중 FGF-21 접합체는 서열식별번호: 2의 PEG-FGF-21, 즉 (i) 야생형 FGF-21 (서열식별번호: 3)의 글루타민 109가 파라-아세틸-L-페닐알라닌으로 대체된 것인 서열식별번호: 1의 FGF-21, 및 (ii) PEG 모이어티, 예를 들어 분자량이 약 28 kDa 내지 약 32 kDa, 예를 들어 약 30 kDa이고 옥심 연결을 통해 파라-아세틸-L-페닐알라닌에 공유 부착된 선형 PEG를 포함하는 FGF-21 접합체이다. 일부 측면에서, PEG 모이어티는 원위 메톡시 (-O-CH3) 기를 포함한다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 제제 중 FGF-21 접합체는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21, 즉 야생형 FGF-21 (서열식별번호: 3)의 글루타민 109가 파라-아세틸-L-페닐알라닌으로 대체된 것인 서열식별번호: 1의 FGF-21, 및 681개의 에틸렌 글리콜 단위를 포함하고 옥심 연결을 통해 파라-아세틸-L-페닐알라닌에 공유 부착된 PEG 모이어티이다. 일부 측면에서, PEG 모이어티는 원위 메톡시 (-O-CH3) 기를 포함한다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 제제 중 FGF-21 접합체는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21, 즉 (i) 야생형 FGF-21 (서열식별번호: 3)의 글루타민 109가 파라-아세틸-L-페닐알라닌으로 대체된 것인 서열식별번호: 1의 FGF-21, 및 (ii) 681개의 에틸렌 글리콜 단위를 포함하고 옥심 연결을 통해 파라-아세틸-L-페닐알라닌에 공유 부착된 PEG 모이어티를 포함하는 FGF-21 접합체이다. 일부 측면에서, PEG 모이어티는 원위 메톡시 (-O-CH3) 기를 포함한다.
따라서, 본 개시내용의 일부 구체적 측면에서, 본원에 개시된 제제 중 FGF-21 접합체는 (i) 서열식별번호: 1의 FGF-21 폴리펩티드 모이어티, 및 (ii) 681개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는 PEG 모이어티, 즉 분자량이 대략 30 kDa이고 옥심 연결을 통해 위치 109에서 파라-아세틸-L-페닐알라닌에 공유 부착되는 PEG 모이어티를 포함한다. 일부 측면에서, PEG 모이어티는 원위 메톡시 (-O-CH3) 기를 포함한다.
일부 측면에서, 옥심 연결은 변이체 FGF-21에 존재하는 비-천연 아미노산의 반응성 기 (예를 들어, p-아세틸-페닐알라닌의 아세틸 기)와 PEG 분자의 반응성 기 (예를 들어, 도 7에 제시된 바와 같은 원위 메톡시 기를 포함하는 30 kDa PEG681아미노옥시 분자의 아미노옥시 기) 사이의 화학 반응에 의해 형성된다. 일부 측면에서, 비-천연 아미노산은 시험관내 전사 및 번역을 사용하거나, 화학적 합성을 사용하거나 또는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 변이체 FGF-21 폴리펩티드에 재조합적으로 (예를 들어, 원핵 세포 배양물에서의 발현에 의해) 혼입될 수 있다. 일부 측면에서, PEG 분자는 아미노산 (예를 들어, p-아세틸-페닐알라닌)에 화학적으로 연결될 수 있고, PEG-아미노산은 후속적으로, 예를 들어 화학적 합성을 통해 FGF-21 폴리펩티드에 혼입될 수 있다. 일부 측면에서, PEG 분자는 원위 메톡시 (-O-CH3) 기를 포함한다.
효모 발현을 통한 FGF-21 폴리펩티드의 생산은 과거에 O-연결된 글리코실화의 존재에 의해 방해받았으며, 이는 O-연결된 글리코실화 부위를 제거하기 위해 부위-특이적 돌연변이유발을 필요로 하였다. FGF-21 폴리펩티드는 또한 포유동물 세포 배양물에서 재조합적으로 생산되는 경우에 상당한 정도의 글리코실화를 나타낸다. 따라서, 일부 측면에서, 본 개시내용의 변이체 FGF-21 폴리펩티드는 원핵 세포 배양물에서 재조합적으로 생성된다. 따라서, 일부 측면에서, 본 개시내용의 변이체 FGF-21 폴리펩티드는 글리코실화되지 않는다.
상기 개시된 바와 같이, 본 개시내용은 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21 및 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제, 예를 들어 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DTPA)을 포함하는 제약 제제를 제공한다. 용어 "킬레이트화제" 또는 "양이온 킬레이트화제"는 상호교환가능하고, 원래의 금속 이온의 것과 상이한 화학적 특성을 갖는 새로운 착물 이온을 형성함으로써 용액 시스템으로부터 금속 이온을 제거할 수 있는 임의의 물질을 지칭한다. 특히, 본원에 개시된 양이온 킬레이트화제는 2가 금속, 예를 들어 Ca++에 특이적으로 결합하는 킬레이트화제이다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체 제제는 하나 이상의 안정성 개선, 예를 들어 보다 낮은 탈아미드화 속도 및/또는 보다 낮은 응집 속도를 나타낸다. 예를 들어, FGF-21 접합체 제제에 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제, 예컨대 DTPA를 포함시키는 것은, 참조 제제와 비교하여 특정 온도 (예를 들어, 40℃)에서 특정 기간 (예를 들어, 1개월) 동안 저장 시 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21의 탈아미드화 속도를 낮출 수 있다.
일부 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)는 참조 제제와 비교하여 약 25℃, 약 30℃, 약 35℃, 약 40℃ 또는 약 45℃에서 보관된 제약 제제에서 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21의 탈아미드화 속도를 낮출 수 있다. 일부 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)는 참조 제제와 비교하여 25℃ 초과, 30℃ 초과, 35℃ 초과, 약 40℃ 또는 약 45℃의 온도에서 보관된 제약 제제에서 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21의 탈아미드화 속도를 낮출 수 있다.
일부 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)는 참조 제제와 비교하여 약 20℃ 내지 약 25℃, 약 25℃ 내지 약 30℃, 약 30℃ 내지 약 35℃, 또는 약 40℃ 내지 약 45℃에서 보관된 제약 제제에서 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21의 탈아미드화 속도를 낮출 수 있다.
일부 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)는 참조 제제와 비교하여 상기 개시된 온도 또는 온도 범위에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월 또는 약 4개월 동안 저장 후 제약 제제에서 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21의 탈아미드화 속도를 낮출 수 있다.
구체적 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)는 참조 제제와 비교하여 40℃에서 약 1개월 동안 저장된 제약 제제에서 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21의 탈아미드화 속도를 낮출 수 있다.
일부 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)는 참조 제제와 비교하여 약 25℃, 약 30℃, 약 35℃, 약 40℃ 또는 약 45℃에서 보관된 제약 제제에서 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21의 고분자량 (HMW) 응집 속도를 낮출 수 있다. 일부 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)는 참조 제제와 비교하여 25℃ 초과, 30℃ 초과, 35℃ 초과, 약 40℃ 또는 약 45℃의 온도에서 보관된 제약 제제에서 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21의 HMW 응집 속도를 낮출 수 있다.
일부 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)는 참조 제제와 비교하여 약 20℃ 내지 약 25℃, 약 25℃ 내지 약 30℃, 약 30℃ 내지 약 35℃, 또는 약 40℃ 내지 약 45℃에서 보관된 제약 제제에서 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21의 HMW 응집 속도를 낮출 수 있다.
일부 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)는 참조 제제와 비교하여 상기 개시된 온도 또는 온도 범위에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월 또는 약 4개월 동안 저장 후 제약 제제에서 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21의 HMW 응집 속도를 낮출 수 있다. 구체적 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)는 참조 제제와 비교하여 40℃에서 약 1개월 동안 저장된 제약 제제에서 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21의 HMW 응집 속도를 낮출 수 있다.
일부 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제, 예를 들어 DTPA는 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21에서 하나 이상의 아미노산, 예를 들어 메티오닌의 산화를 방지하거나 완화시킨다. 특정 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제, 예를 들어 DTPA는 25℃ 및/또는 40℃에서 서열식별번호: 3의 아미노산 1 및/또는 아미노산 169 (또는 서열식별번호: 1, 2 또는 4의 상응하는 아미노산)의 산화를 방지하거나 완화시킨다.
일부 구체적 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제는 DTPA이다. 펜테트산 또는 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DTPA)은 5개의 카르복시메틸 기를 갖는 디에틸렌트리아민 백본으로 이루어진 아미노폴리카르복실산이다. DTPA의 짝염기는 금속 양이온에 대한 높은 친화도를 갖는다. 따라서, 5가 음이온 DTPA5-는, 각각의 질소 중심 및 각각의 COO--기가 배위에 대한 중심으로서 카운팅된다고 가정하면 잠재적으로 여덟자리 리간드이다. 그의 착물에 대한 형성 상수는 EDTA에 대한 것보다 약 100 더 크다.
킬레이팅제로서, DTPA는 최대 8개의 결합을 형성함으로써 금속 이온 주위를 둘러싼다. 그러나, 전이 금속은, 통상적으로 8개 미만의 배위 결합을 형성한다. 따라서, 금속과의 착물 형성 후, DTPA는, 그의 유도체 펜데티드에 의해 나타나는 바와 같이, 여전히 다른 시약에 결합하는 능력을 갖는다. 예를 들어, 그의 구리(II)와의 착물에서, DTPA는 3개의 아민 중심 및 5개의 카르복실레이트 중 3개를 활용하여 여섯자리 방식으로 결합한다.
일부 다른 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제는 또 다른 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제, 예컨대 에틸렌디아민 아세트산 (EDTA), 에틸렌 글리콜-비스(β-아미노에틸에테르)-N,N,N',N'-테트라아세트산 (EGTA), 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산 (DOTA), 또는 관련 화합물, 예를 들어, 티욱세탄 (탄소 백본이 이소티오시아네이토벤질 및 메틸 기를 함유하는 DTPA의 변형된 버전)일 수 있다. 관련 기술분야에 공지된 DTPA 및 EDTA와 관련된 다른 킬레이팅제는 아미드 기의 질소가 하나 이상의 C1-18 알킬 기에 의해 치환될 수 있는 것들, 예를 들어 DTPA.BMA 및 EDTA.BMA이다.
일부 측면에서, DTPA 양이온 킬레이트화제는 약 10 μM 내지 약 100 μM, 15 μM 내지 약 95 μM, 약 20 μM 내지 약 90 μM, 약 25 μM 내지 약 85 μM, 약 30 μM 내지 약 80 μM, 약 35 μM 내지 약 75 μM, 약 40 μM 내지 약 70 μM, 약 45 μM 내지 약 65 μM, 약 50 μM 내지 약 60 μM, 약 25 μM 내지 약 75 μM, 약 40 μM 내지 약 60 μM, 약 30 μM 내지 약 70 μM, 또는 약 40 μM 내지 약 75 μM의 양으로 존재한다.
일부 측면에서, DTPA 양이온 킬레이트화제는 약 10 μM, 약 15 μM, 약 20 μM, 약 25 μM, 약 30 μM, 약 35 μM, 약 40 μM, 약 45 μM, 약 50 μM, 약 55 μM, 약 60 μM, 약 65 μM, 약 70 μM, 약 75 μM, 약 80 μM, 약 85 μM, 약 90 μM, 약 95 μM 또는 약 100 μM의 양으로 존재한다.
일부 측면에서, DTPA 양이온 킬레이트화제는 적어도 약 15 μM, 적어도 약 20 μM, 적어도 약 25 μM, 적어도 약 30 μM, 적어도 약 35 μM, 적어도 약 40 μM, 적어도 약 45 μM, 적어도 약 50 μM, 적어도 약 55 μM, 적어도 약 60 μM, 적어도 약 65 μM, 적어도 약 70 μM, 또는 적어도 약 75 μM의 양으로 존재한다.
구체적 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제, 예를 들어, DTPA는 50 μM의 양으로 존재한다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 제제의 pH는 약 6.5 초과, 약 6.6 초과, 약 6.7 초과, 약 6.8 초과, 약 6.9 초과, 약 7.0 초과, 약 7.1 초과, 약 7.2 초과, 약 7.3 초과, 약 7.4 초과, 또는 약 7.5 초과이다. 일부 측면에서, 제제의 pH는 6.5 초과, 6.6 초과, 6.7 초과, 6.8 초과, 6.9 초과, 7.0 초과, 7.1 초과, 7.2 초과, 7.3 초과, 7.4 초과, 또는 7.5 초과이다. 일부 측면에서, 제제의 pH는 약 6.5, 약 6.6, 약 6.7, 약 6.8, 약 6.9, 약 7.0, 약 7.1, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4, 또는 약 7.5이다.
일부 측면에서, 제제의 pH는 약 6.5 내지 약 7.5, 약 6.6 내지 약 7.5, 약 6.7 내지 약 7.5, 약 6.8 내지 약 7.5, 약 6.9 내지 약 7.5, 약 7.0 내지 약 7.5, 약 7.1 내지 약 7.5, 약 7.2 내지 약 7.5, 약 7.3 내지 약 7.5, 약 7.4 내지 약 7.5, 약 6.5 내지 약 7.4, 약 6.5 내지 약 7.3, 약 6.5 내지 약 7.2, 약 6.5 내지 약 7.1, 약 6.5 내지 약 7.0, 약 6.5 내지 약 6.9, 약 6.5 내지 약 6.8, 약 6.5 내지 약 6.7, 약 6.6 내지 약 7.4, 약 6.7 내지 약 7.4, 약 6.8 내지 약 7.4, 약 6.9 내지 약 7.4, 약 7.0 내지 약 7.4, 약 7.1 내지 약 7.4, 약 7.2 내지 약 7.4, 약 7.3 내지 약 7.4, 약 6.5 내지 약 7.3, 약 6.6 내지 약 7.3, 약 6.7 내지 약 7.3, 약 6.7 내지 약 7.3, 약 6.8 내지 약 7.3, 약 6.9 내지 약 7.3, 약 7.0 내지 약 7.3, 약 7.1 내지 약 7.3, 약 7.2 내지 약 7.3, 약 6.5 내지 약 7.2, 약 6.6 내지 약 7.2, 약 6.7 내지 약 7.2, 약 6.8 내지 약 7.2, 약 6.9 내지 약 7.2, 약 7.0 내지 약 7.2, 약 7.1 내지 약 7.2, 약 6.9 내지 약 7.1, 또는 약 7.0 내지 약 7.1이다.
일부 측면에서, 제제의 pH는 약 6.8, 약 6.9, 약 7.0, 약 7.1, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4, 또는 약 7.5이다. 일부 측면에서, 제약 제제는 6.5의 pH를 갖는 참조 제제보다 더 안정적이다.
일부 측면에서, 제약 제제는 계면활성제를 추가로 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "계면활성제"는, 물 또는 수용액 중에 용해 또는 현탁 시 표면 장력을 감소시키는, 또는 두 액체 사이의 또는 액체와 고체 사이의 계면 장력을 감소시키는 임의의 화합물, 전형적으로는 양친매성 분자를 의미한다.
본 개시내용의 문맥에서, 계면활성제는 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21을 포함하는 용액 중에서 계면 응력 및 전단을 감소시키는 임의의 화합물이다.
일부 측면에서, 계면활성제는 비이온성 계면활성제이고, 즉, 중성 용액 중에서 알짜 전하를 갖지 않는 경향이 있는 계면활성제이다. 일부 측면에서, 비음이온성 계면활성제는 폴리소르베이트이다. 폴리소르베이트는 계면-유도된 응집에 대항하여 단백질을 안정화시키고 단백질의 표면 흡착을 최소화하기 위해 단백질 제약에서 폭넓게 사용되는 비-이온성 계면활성제의 중요한 부류이다 (Wang W 2005. Protein aggregation and its inhibition in biopharmaceutics. Int J Pharm 289 (1-2):1-30). 폴리소르베이트는 폴리옥시에틸렌 (POE) 소르비탄의 지방 산 에스테르로 구성된 양친매성, 비-이온성 계면활성제이다. 상업적으로 입수가능한 폴리소르베이트는 주로 소르비탄 POE 지방 산 에스테르를 함유하는 화학적으로 다양한 혼합물이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "폴리소르베이트"는, 전형적으로 에틸렌 옥시드와 공중합된, 소르비톨 및 그의 무수물의 올레에이트 에스테르를 지칭한다. 예시적인 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20 (트윈(TWEEN) 20; PS20) (폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노라우레이트); 폴리소르베이트 40 (트윈 40; PS40) (폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노팔미테이트); 폴리소르베이트 60 (트윈 60; PS60) (폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노스테아레이트); 및 폴리소르베이트 80 (트윈 80; PS80) (폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트)이다.
'폴리옥시에틸렌' 부분에 이어지는 숫자 20은 분자 내에서 나타나는 옥시에틸렌 -(CH2CH2O)- 기의 총 수를 지칭한다. '폴리소르베이트' 부분에 이어지는 숫자는 분자의 폴리옥시에틸렌 소르비탄 부분과 회합된 지방 산의 유형에 관한 것이다. 모노라우레이트는 20으로 표시되고, 모노팔미테이트는 40으로, 모노스테아레이트는 60으로, 또한 모노올레에이트는 80으로 표시된다. 일부 측면에서, 비-이온성 계면활성제는, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방 산 에스테르의 경우에 대략 적어도 0.01 mg/ml의 양인 임계 미셀 농도 (CMC) 초과의 양으로 존재한다. 문헌 [Wan and Lee, Journal of Pharm Sci, 63, p.136, 1974] 참조. 본원 명세서 전반에 걸쳐 계면활성제 농도 (%)는 (w/v)에 상응한다.
일부 측면에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 80 (PS80)이다. 일부 측면에서, 폴리소르베이트 80 계면활성제는 약 0.01% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.02% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.03% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.04% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.05% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.06% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.07% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.08% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.09% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.02% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.03% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.04% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.05% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.06% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.07% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.08% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.03% 내지 약 0.08% (w/v), 약 0.04% 내지 약 0.08% (w/v), 약 0.05% 내지 약 0.08% (w/v), 약 0.06% 내지 약 0.08% (w/v), 약 0.07% 내지 약 0.08% (w/v), 약 0.04% 내지 약 0.07% (w/v), 약 0.05% 내지 약 0.07% (w/v), 약 0.06% 내지 약 0.07% (w/v), 또는 약 0.05% 내지 약 0.06% (w/v)의 양으로 존재한다.
일부 측면에서, 폴리소르베이트 80 계면활성제는 적어도 약 0.01% (w/v), 적어도 약 0.02% (w/v), 적어도 약 0.03% (w/v), 적어도 약 0.04% (w/v), 적어도 약 0.05% (w/v), 적어도 약 0.06% (w/v), 적어도 약 0.07% (w/v), 적어도 약 0.08% (w/v), 적어도 약 0.09% (w/v) 또는 적어도 약 0.1% (w/v)의 양으로 존재한다.
일부 측면에서, 계면활성제, 예를 들어, 폴리소르베이트 80은, 예를 들어, 진탕기 상에서 제제 교반 시에 미립자 및/또는 기포 형성을 경감시킨다. 일부 측면에서, 제제 중의 계면활성제, 예를 들어, 폴리소르베이트 80의 존재는, 미립자 형성을, 참조 제제 중의 미립자 형성의 수준에 비해, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 100%만큼 감소시킬 수 있다. 일부 측면에서, 제제 중의 계면활성제, 예를 들어, 폴리소르베이트 80의 존재는, 기포 형성을, 참조 제제 중의 기포 형성의 수준에 비해, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 100%만큼 감소시킬 수 있다.
일부 측면에서, 제약 제제는 아미노산 완충제를 추가로 포함한다. 아미노산은, 이들이 용이하게 대사가능한 자연적으로 존재하는 물질이기 때문에 제약 응용에서 완충제로서 유리하게 사용될 수 있다. 또한, 완충제로서 사용되는 아미노산은 또한 제제가 동결-건조되는 경우 비정질 상 중의 단백질을 보호할 수 있다. 적합한 아미노산 완충제는 히스티딘, 리신, 및/또는 아르기닌을 함유할 수 있다. 히스티딘은 약 pH 7에서 우수한 완충 용량을 갖는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "히스티딘"은 L-히스티딘 또는 D-히스티딘, 히스티딘의 용매화 형태, 히스티딘의 수화 형태 (예를 들어, 일수화물), 또는 히스티딘의 무수 형태, 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 본 개시내용의 제제 중의 다른 적합한 완충제는, 몇가지만 언급하면, 글루타메이트, 트리스(Tris), 또는 숙시네이트이다.
일부 구체적 측면에서, 아미노산 완충제는 L-히스티딘이다.
일부 측면에서, 히스티딘 완충제는 약 10 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 15 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 20 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 25 mM 내지 약 100 mM, 약 30 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 35 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 40 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 45 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 50 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 55 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 60 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 65 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 70 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 75 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 80 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 85 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 90 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 또는 약 95 mM 내지 약 100 mM 히스티딘의 양으로 존재한다.
일부 측면에서, 히스티딘 완충제는 약 20 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 25 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 30 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 35 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 40 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 45 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 50 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 55 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 60 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 65 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 70 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 75 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 80 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 85 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 30 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 35 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 40 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 45 mM 내지 약 80 mM 히스티딘의 양으로 존재한다.
일부 측면에서, 히스티딘 완충제는 약 50 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 55 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 60 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 65 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 70 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 75 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 40 mM 내지 약 70 mM 히스티딘, 약 45 mM 내지 약 70 mM 히스티딘, 약 50 mM 내지 약 70 mM 히스티딘, 약 55 mM 내지 약 70 mM 히스티딘, 약 60 mM 내지 약 70 mM 히스티딘, 약 65 mM 내지 약 70 mM 히스티딘, 약 10 mM 내지 약 30 mM 히스티딘, 약 15 mM 내지 약 30 mM 히스티딘, 약 20 mM 내지 약 30 mM 히스티딘, 약 25 mM 내지 약 30 mM 히스티딘, 약 15 mM 내지 약 25 mM 히스티딘, 또는 약 20 mM 내지 약 25 mM의 양으로 존재한다.
일부 측면에서, 히스티딘 완충제는 약 15 mM 내지 약 20 mM 히스티딘, 약 40 mM 내지 약 60 mM 히스티딘, 약 45 mM 내지 약 60 mM 히스티딘, 약 50 mM 내지 약 60 mM 히스티딘, 약 15.5 mM 내지 약 24.5 mM 히스티딘, 약 16 mM 내지 약 24 mM 히스티딘, 약 16.5 mM 내지 약 23.5 mM 히스티딘, 약 17 mM 내지 약 23 mM 히스티딘, 약 17.5 mM 내지 약 22.5 mM 히스티딘, 약 18 mM 내지 약 22 mM 히스티딘, 약 18.5 mM 내지 약 21.5 mM 히스티딘, 약 19 mM 내지 약 21 mM 히스티딘, 또는 약 19.5 mM 내지 약 20.5 mM 히스티딘의 양으로 존재한다.
일부 측면에서, 히스티딘 완충제는 약 10 mM 히스티딘, 약 11 mM 히스티딘, 약 12 mM 히스티딘, 약 13 mM 히스티딘, 약 14 mM 히스티딘, 약 15 mM 히스티딘, 약 16 mM 히스티딘, 약 17 mM 히스티딘, 약 18 mM 히스티딘, 약 19 mM 히스티딘, 약 20 mM 히스티딘, 약 21 mM 히스티딘, 약 22 mM 히스티딘, 약 23 mM 히스티딘, 약 24 mM 히스티딘, 약 25 mM 히스티딘, 약 26 mM 히스티딘, 약 27 mM 히스티딘, 약 28 mM 히스티딘, 약 29 mM 히스티딘, 약 30 mM 히스티딘, 약 31 mM 히스티딘, 약 32 mM 히스티딘, 약 33 mM 히스티딘, 약 34 mM 히스티딘, 약 35 mM 히스티딘, 약 36 mM 히스티딘, 약 37 mM 히스티딘, 약 38 mM 히스티딘, 약 39 mM 히스티딘, 약 40 mM 히스티딘, 약 41 mM 히스티딘, 약 42 mM 히스티딘, 약 43 mM 히스티딘, 약 44 mM 히스티딘, 약 45 mM 히스티딘, 약 46 mM 히스티딘, 약 47 mM 히스티딘, 약 48 mM 히스티딘, 약 49 mM 히스티딘, 또는 약 50 mM 히스티딘의 양으로 존재한다.
일부 측면에서, 제약 제제는 삼투 조절제 (또한 관련 기술분야에서 등장화제로서 공지됨)를 추가로 포함한다. 본 개시내용에 따라, 삼투 조절제 (등장화제)는 폴리올, 사카라이드, 탄수화물, 염, 예컨대 염화나트륨, 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 예시적인 폴리올은 약 600 kD 미만 (예를 들어, 120 내지 400 kD 범위)인 분자량을 갖는 것들, 예를 들어, 만니톨, 트레할로스, 소르비톨, 에리트리톨, 이소말트, 락티톨, 말티톨, 크실리톨, 글리세롤, 락티톨, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 이노시톨, 또는 이들의 혼합물을 포함한다.
사카라이드 또는 탄수화물 삼투 조절제는 모노사카라이드, 디사카라이드 및 폴리사카라이드 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 일부 측면에서, 사카라이드 또는 탄수화물은 프룩토스, 글루코스, 만노스, 수크로스, 소르보스, 크실로스, 락토스, 말토스, 수크로스, 덱스트란, 풀룰란, 덱스트린, 시클로덱스트린, 가용성 전분, 히드록시에틸 전분, 수용성 글루칸, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 삼투 조절제는 환원 당 또는 비-환원 당 또는 이들의 혼합물의 군으로부터 선택된 사카라이드를 포함한다. 일부 측면에서, 삼투 조절제 등장화제는 비-환원 당, 바람직하게는 수크로스, 트레할로스, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 당을 포함한다. 일부 구체적 측면에서, 비-환원 당은 수크로스이다.
일부 측면에서, 수크로스 삼투 조절제는 약 100 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 200 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 300 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 400 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 500 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 600 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 700 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 800 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 900 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 200 mM 내지 약 900 mM 수크로스, 약 300 mM 내지 약 900 mM 수크로스, 약 400 mM 내지 약 900 mM 수크로스, 약 500 mM 내지 약 900 mM 수크로스, 약 600 mM 내지 약 900 mM 수크로스, 약 700 mM 내지 약 900 mM 수크로스, 약 800 mM 내지 약 900 mM 수크로스, 약 300 mM 내지 약 800 mM 수크로스, 약 400 mM 내지 약 800 mM 수크로스, 약 500 mM 내지 약 800 mM 수크로스, 약 600 mM 내지 약 800 mM 수크로스, 약 700 mM 내지 약 800 mM 수크로스, 약 400 mM 내지 약 700 mM 수크로스, 약 500 mM 내지 약 700 mM 수크로스, 약 600 mM 내지 약 700 mM 수크로스, 또는 약 500 mM 내지 약 600 mM 수크로스의 양으로 존재한다.
일부 측면에서, 수크로스 삼투 조절제는 약 100 mM 수크로스, 약 150 mM 수크로스, 약 200 mM 수크로스, 약 250 mM 수크로스, 약 300 mM 수크로스, 약 350 mM 수크로스, 약 400 mM 수크로스, 약 450 mM 수크로스, 약 500 mM 수크로스, 약 550 mM 수크로스, 약 600 mM 수크로스, 약 650 mM 수크로스, 약 700 mM 수크로스, 약 750 mM 수크로스, 약 800 mM 수크로스, 약 850 mM 수크로스, 약 900 mM 수크로스, 약 950 mM 수크로스, 또는 약 1 M 수크로스의 양으로 존재한다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21은 약 1 mg/ml 내지 약 40 mg/ml의 농도로 존재한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21은 약 10 mg/ml, 약 20 mg/ml, 약 30 mg/ml 또는 약 40 mg/ml의 농도로 존재한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 제제 중 FGF-21 접합체의 농도는 슬로프 분광분석법, 예를 들어 0.87 (mL/(mg*cm))의 흡광 계수를 사용하여 280 nm에서 SoloVPE 피브레트 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OF0002-P50) (SoloVPE 일회용 UV 플라스틱 용기 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OC0009-1))가 장착된 애질런트 캐리 60 UV-Vis 분광광도계에 의한 측정에 기초한다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 약 1 mg/ml 내지 5 mg/ml, 약 5 mg/ml 내지 약 10 mg/ml, 약 10 mg/ml 내지 약 15 mg/ml, 약 15 mg/ml 내지 약 20 mg/ml, 약 20 mg/ml 내지 약 25 mg/ml, 약 25 mg/ml 내지 약 30 mg/ml, 약 30 mg/ml 내지 약 35 mg/ml, 또는 약 35 mg/ml 내지 약 40 mg/ml의 농도로 존재한다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 약 1 mg/ml, 약 2 mg/ml, 약 3 mg/ml, 약 4 mg/ml, 약 5 mg/ml, 약 6 mg/ml, 약 7 mg/ml, 약 8 mg/ml, 약 9 mg/ml, 약 10 mg/ml, 약 11 mg/ml, 약 12 mg/ml, 약 13 mg/ml, 약 14 mg/ml, 약 15 mg/ml, 약 16 mg/ml, 약 17 mg/ml, 약 18 mg/ml, 약 19 mg/ml, 약 20 mg/ml, 약 21 mg/ml, 약 22 mg/ml, 약 23 mg/ml, 약 24 mg/ml, 약 25 mg/ml, 약 26 mg/ml, 약 27 mg/ml, 약 28 mg/ml, 약 29 mg/ml, 약 30 mg/ml, 약 31 mg/ml, 약 32 mg/ml, 약 33 mg/ml, 약 34 mg/ml, 약 35 mg/ml, 약 36 mg/ml, 약 37 mg/ml, 약 38 mg/ml, 약 39 mg/ml 또는 약 40 mg/ml의 농도로 존재한다. 구체적 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 약 10 mg/ml의 농도로 존재한다. 구체적 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 약 20 mg/ml의 농도로 존재한다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21의 농도는 관련 기술분야에 공지된 방법, 또는 본 명세서의 실시예 섹션에 개시된 구체적인 방법에 따라 결정된다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 용량당 약 1 mg 내지 약 40 mg의 양으로 본원에 개시된 제제에 존재한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 본원에 개시된 제제 중에 용량당 약 1 mg 내지 약 5 mg, 용량당 약 5 mg 내지 약 10 mg, 또는 용량당 약 10 mg 내지 약 15 mg, 용량당 약 15 mg 내지 약 20 mg, 또는 용량당 약 20 mg 내지 약 25 mg, 용량당 약 25 mg 내지 약 30 mg, 또는 용량당 약 30 mg 내지 약 35 mg, 또는 용량당 약 35 mg 내지 약 40 mg의 양으로 존재한다. 일부 측면에서, 용량은 균일 용량이다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 제제 중 FGF-21 접합체의 양은 슬로프 분광분석법, 예를 들어 0.87 (mL/(mg*cm))의 흡광 계수를 사용하여 280 nm에서 SoloVPE 피브레트 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OF0002-P50) (SoloVPE 일회용 UV 플라스틱 용기 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OC0009-1))가 장착된 애질런트 캐리 60 UV-Vis 분광광도계에 의한 측정에 기초한다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 본원에 개시된 제제에 용량당 약 19 mg 내지 약 21 mg, 용량당 약 18 mg 내지 약 22 mg, 용량당 약 17 mg 내지 약 23 mg, 용량당 약 16 mg 내지 약 24 mg, 용량당 약 15 mg 내지 약 25 mg, 용량당 약 14 mg 내지 약 26 mg, 용량당 약 13 mg 내지 약 27 mg, 용량당 약 12 mg 내지 약 28 mg, 용량당 약 11 mg 내지 약 29 mg, 또는 용량당 약 10 mg 내지 약 30 mg의 양으로 존재한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 용량당 40 mg 초과의 양으로 본원에 개시된 제제에 존재한다. 일부 측면에서, 용량은 균일 용량이다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 본원에 개시된 제제에 용량당 약 1 mg, 용량당 약 2 mg, 용량당 약 3 mg, 용량당 약 4 mg, 용량당 약 5 mg, 용량당 약 6 mg, 용량당 약 7 mg, 용량당 약 8 mg, 용량당 약 9 mg, 용량당 약 10 mg, 용량당 약 11 mg, 용량당 약 12 mg, 용량당 약 13 mg, 용량당 약 14 mg, 용량당 약 15 mg, 용량당 약 16 mg, 용량당 약 17 mg, 용량당 약 18 mg, 용량당 약 19 mg, 용량당 약 20 mg, 용량당 약 21 mg, 용량당 약 22 mg, 용량당 약 23 mg, 용량당 약 24 mg, 용량당 약 25 mg, 용량당 약 26 mg, 용량당 약 27 mg, 용량당 약 28 mg, 용량당 약 29 mg, 용량당 약 30 mg, 용량당 약 31 mg, 용량당 약 32 mg, 용량당 약 33 mg, 용량당 약 34 mg, 용량당 약 35 mg, 용량당 약 36 mg, 용량당 약 37 mg, 용량당 약 38 mg, 용량당 약 39 mg, 또는 용량당 약 40 mg의 양으로 존재한다. 구체적 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 용량당 약 10 mg의 양으로 본원에 개시된 제제에 존재한다. 구체적 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 용량당 약 20 mg의 양으로 본원에 개시된 제제에 존재한다. 일부 측면에서, 용량은 균일 용량이다.
일부 측면에서, 제약 제제는 피하 투여를 위해 제제화된다. 하기에 논의되는 바와 같이, 본원에 개시된 다른 제약 제제는 다른 경로를 통해 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 제약 제제는 피하 투여를 위해, 예를 들어 안전 시린지를 사용하여 제제화된다. 일부 측면에서, 제제는 매일 또는 매주 투여, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6일마다, 매주, 또는 2주마다 투여를 위해 제제화된다. 일부 측면에서, 제제는 수성 제제이다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 (i) 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21; (ii) 약 10 mM 내지 약 50 mM 농도의 히스티딘; (iii) 약 100 mM 내지 약 1M 농도의 수크로스; (iv) 약 0.01% 내지 약 0.1% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (v) 약 10 μM 내지 약 100 μM 농도의 DTPA를 포함하고, pH가 약 6.7 내지 약 7.5인 제약 제제를 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 (i) 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 6의 PEG-FGF-21; (ii) 약 10 mM 내지 약 50 mM 농도의 히스티딘; (iii) 약 100 mM 내지 약 1M 농도의 수크로스; (iv) 약 0.01% 내지 약 0.1% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (v) 약 10 μM 내지 약 100 μM 농도의 DTPA를 포함하고, pH가 약 6.7 내지 약 7.5인 제약 제제를 제공한다.
또한, (i) 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21; (ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘; (iii) 약 600 mM 농도의 수크로스; (iv) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (v) 약 50 μM 농도의 DTPA를 포함하고, pH가 약 7.1인 제약 제제가 제공된다.
또한, (i) 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21; (ii) 20 mM 농도의 히스티딘; (iii) 600 mM 농도의 수크로스; (iv) 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (v) 50 μM 농도의 DTPA를 포함하고, pH가 7.1인 제약 제제가 제공된다.
또한, (i) 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21; (ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘; 및 (iii) 약 600 mM 농도의 수크로스를 포함하고, pH가 약 7.0인 제약 제제가 제공된다.
또한, (i) 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21; (ii) 20 mM 농도의 히스티딘; 및 (iii) 600 mM 농도의 수크로스를 포함하고, pH가 7.0인 제약 제제가 제공된다.
일부 구체적 측면에서, 본 개시내용은 (i) 약 10 mg/mL 농도의 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21; (ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘; (iii) 약 600 mM 농도의 수크로스; (iv) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (v) 약 50 uM 농도의 DTPA를 포함하고, pH가 약 7.1인 제약 제제를 제공한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 제제 중 FGF-21 접합체의 농도는 슬로프 분광분석법, 예를 들어 0.87 (mL/(mg*cm))의 흡광 계수를 사용하여 280 nm에서 SoloVPE 피브레트 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OF0002-P50) (SoloVPE 일회용 UV 플라스틱 용기 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OC0009-1))가 장착된 애질런트 캐리 60 UV-Vis 분광광도계에 의해 측정된다.
또한, (i) 약 20 mg/mL 농도의 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21; (ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘; (iii) 약 600 mM 농도의 수크로스; (iv) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (v) 약 50 uM 농도의 DTPA를 포함하고, pH가 약 7.1인 제약 제제가 제공된다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 제제 중 FGF-21 접합체의 농도는 슬로프 분광분석법, 예를 들어 0.87 (mL/(mg*cm))의 흡광 계수를 사용하여 280 nm에서 SoloVPE 피브레트 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OF0002-P50) (SoloVPE 일회용 UV 플라스틱 용기 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OC0009-1))가 장착된 애질런트 캐리 60 UV-Vis 분광광도계에 의해 측정된다.
또한, (i) 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 10 mg/mL 농도의 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21; (ii) 20 mM 농도의 히스티딘; (iii) 600 mM 농도의 수크로스; (iv) 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (v) 50 uM 농도의 DTPA를 포함하고, pH가 7.1인 제약 제제가 제공된다.
또한, (i) 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 20 mg/mL 농도의 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21; (ii) 20 mM 농도의 히스티딘; (iii) 600 mM 농도의 수크로스; (iv) 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (v) 50 uM 농도의 DTPA를 포함하고, pH가 7.1인 제약 제제가 제공된다.
본 개시내용은 또한 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21을 포함하는 제제의 안정성을 개선시키는 임의의 방법에 따라 제조된 제약 제제를 제공한다.
구체적 측면에서, 본 개시내용은 20 mM 히스티딘, 600 mM 수크로스, 50 uM DTPA 및 0.05% PS80 중 20 g/L 농도의 서열식별번호: 4 또는 6의 FGF-21 접합체를 포함하는 제약 제제 (pH 7.1)를 제공한다. 구체적 측면에서, 본 개시내용은 20 mM 히스티딘, 600 mM 수크로스, 50 uM DTPA 및 0.05% PS80 (w/v) 중 10 g/L 농도의 서열식별번호: 4 또는 6의 FGF-21 접합체를 포함하는 제약 제제 (pH 7.1)를 제공한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 제제 중 FGF-21 접합체의 농도는 슬로프 분광분석법, 예를 들어 0.87 (mL/(mg*cm))의 흡광 계수를 사용하여 280 nm에서 SoloVPE 피브레트 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OF0002-P50) (SoloVPE 일회용 UV 플라스틱 용기 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OC0009-1))가 장착된 애질런트 캐리 60 UV-Vis 분광광도계에 의해 측정된다.
일부 측면에서, 제제는 동결된다. 일부 측면에서, 제제는 백, 예를 들어 클램 쉘 백에 저장된다. 일부 측면에서, 백, 예를 들어 클램 쉘 백은 6L 내지 12L의 부피를 갖는다.
일부 측면에서, 제제는 바이알에 함유된다. 일부 측면에서, 제제는 시린지 내에 함유된다. 일부 측면에서, 시린지는 안전 시린지이다. 일부 측면에서, 시린지는 사전-충전가능한 시린지이다. 일부 측면에서, 시린지는 BD 네오팩(Neopak)TM 사전-충전가능한 시린지이다. 일부 측면에서, 제제는 자기-주사 장치에 함유된다.
일부 측면에서, 시린지 (예를 들어, 사전-충전가능한 시린지) 또는 자기-주사 장치는 20 mM 히스티딘, 600 mM 수크로스, 50 uM DTPA, 및 0.05% PS80 (w/v) 중 10 g/L 농도의 서열식별번호: 4 또는 6의 FGF-21 접합체를 포함하는 제약 제제 (pH 7.1) 1 mL를 포함한다. 일부 측면에서, 시린지 (예를 들어, 사전-충전가능한 시린지) 또는 자기-주사 장치는 20 mM 히스티딘, 600 mM 수크로스, 50 uM DTPA 및 0.05% PS80 중 20 g/L 농도의 서열식별번호: 4 또는 6의 FGF-21 접합체를 포함하는 제약 제제 (pH 7.1) 1 mL를 포함한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 제제 중 FGF-21 접합체의 농도는 슬로프 분광분석법, 예를 들어 0.87 (mL/(mg*cm))의 흡광 계수를 사용하여 280 nm에서 SoloVPE 피브레트 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OF0002-P50) (SoloVPE 일회용 UV 플라스틱 용기 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OC0009-1))가 장착된 애질런트 캐리 60 UV-Vis 분광광도계에 의해 측정된다.
II. 제조 방법
본 개시내용은 또한, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제, 예를 들어 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제의 안정성을 개선 또는 증진시키는 방법을 제공하며, 여기서 제제는 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제를 함유하지 않는 참조 제제와 비교하여 개선된 안정성을 갖는다. 이들 안정화 방법은 (i) 제제로 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제를 혼합하는 것, (ii) 폴리소르베이트 계면활성제, 예를 들어 폴리소르베이트 80를 혼합하는 것, (iii) 제제의 pH를 대략 7.1로 조정하는 것, 또는 (iv) 그의 임의의 조합을 포함한다.
일부 측면에서, 본원에 기재된 제약 제제는 (i) 약 10 mg/mL의 최종 농도를 달성하는 양의 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21; (ii) 약 20 mM의 최종 농도를 달성하는 양의 히스티딘; (iii) 약 600 mM의 최종 농도를 달성하는 양의 수크로스; (iv) 약 0.05% (w/v)의 최종 농도를 달성하는 양의 폴리소르베이트 80; 및 (v) 약 50 uM의 최종 농도를 달성하는 양의 DTPA를 혼합하고; pH를 약 7.1로 조정하는 방법에 의해 제조된다.
일부 측면에서, 본원에 기재된 제약 제제는 (i) 약 20 mg/mL의 최종 농도를 달성하는 양의 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21; (ii) 약 20 mM의 최종 농도를 달성하는 양의 히스티딘; (iii) 약 600 mM의 최종 농도를 달성하는 양의 수크로스; (iv) 약 0.05% (w/v)의 최종 농도를 달성하는 양의 폴리소르베이트 80; 및 (v) 약 50 uM의 최종 농도를 달성하는 양의 DTPA를 혼합하고; pH를 약 7.1로 조정하는 방법에 의해 제조된다.
일부 측면에서, 본원에 기재된 제약 제제는 (i) 10 mg/mL의 최종 농도를 달성하는 양의 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21; (ii) 20 mM의 최종 농도를 달성하는 양의 히스티딘; (iii) 600 mM의 최종 농도를 달성하는 양의 수크로스; (iv) 0.05% (w/v)의 최종 농도를 달성하는 양의 폴리소르베이트 80; 및 (v) 50 uM의 최종 농도를 달성하는 양의 DTPA를 혼합하고; pH를 7.1로 조정하는 방법에 의해 제조된다.
일부 측면에서, 본원에 기재된 제약 제제는 (i) 20 mg/mL의 최종 농도를 달성하는 양의 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 5 또는 서열식별번호: 4 또는 6의 PEG-FGF-21; (ii) 20 mM의 최종 농도를 달성하는 양의 히스티딘; (iii) 600 mM의 최종 농도를 달성하는 양의 수크로스; (iv) 0.05% (w/v)의 최종 농도를 달성하는 양의 폴리소르베이트 80; 및 (v) 50 uM의 최종 농도를 달성하는 양의 DTPA를 혼합하고; pH를 7.1로 조정하는 방법에 의해 제조된다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "혼합"은 관련 기술분야에 공지된 임의의 수단에 의해 개시된 농도에 도달하기 위해 미리 정해진 순서 없이 본원에 개시된 제제의 성분들을 조합하는 것을 지칭한다. 예를 들어, 본원에 개시된 제약 제제 중의 부형제는 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 용액에 순차적으로 또는 동시에 첨가될 수 있다. 대안적으로, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 농축된 용액을 제제 중 부형제의 전부 또는 일부를 포함하는 용액에 첨가할 수 있다. 다른 측면에서, 부형제는, 예를 들어 투석 또는 여과를 사용하여 제제에 혼입될 수 있다.
일부 측면에서, 개시된 방법의 적용으로부터 유래되는 안정성에서의 개선은, 예를 들어, (i) 참조 제제와 비교하여 물리적 안정성의 증가, (ii) 참조 제제와 비교하여 화학적 안정성의 증가, 또는 (iii) 그의 조합을 포함한다.
일부 측면에서, 물리적 안정성의 증가는 (i) FGF-21 폴리펩티드 응집의 방지 또는 감소, (ii) FGF-21 폴리펩티드 단편화의 방지 또는 감소, 또는 (iii) 그의 조합을 포함한다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 조성물에서 관찰된 FGF-21 폴리펩티드 응집은 참조 제제에서 관찰된 FGF-21 폴리펩티드 응집의 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 또는 약 10%이다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 조성물에서 관찰된 FGF-21 폴리펩티드 응집은 참조 제제에서 관찰된 FGF-21 폴리펩티드 응집의 90% 미만, 85% 미만, 80% 미만, 75% 미만, 70% 미만, 65% 미만, 60% 미만, 55% 미만, 50% 미만, 45% 미만, 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 또는 10% 미만이다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 조성물에서 관찰된 FGF-21 폴리펩티드 단편화는 참조 제제에서 관찰된 FGF-21 폴리펩티드 단편화의 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 또는 약 10%이다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 조성물에서 관찰된 FGF-21 폴리펩티드 단편화는 참조 제제에서 관찰된 FGF-21 폴리펩티드 단편화의 90% 미만, 85% 미만, 80% 미만, 75% 미만, 70% 미만, 65% 미만, 60% 미만, 55% 미만, 50% 미만, 45% 미만, 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 또는 10% 미만이다.
일부 측면에서, 화학적 안정성의 증가는 (i) FGF-21 폴리펩티드 탈아미드화의 방지 또는 감소, (ii) FGF-21 폴리펩티드 산화의 방지 또는 감소, 또는 (iii) 그의 조합을 포함한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 조성물에서 관찰된 FGF-21 폴리펩티드 탈아미드화는 참조 제제에서 관찰된 FGF-21 폴리펩티드 탈아미드화의 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 또는 약 10%이다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 조성물에서 관찰된 FGF-21 폴리펩티드 탈아미드화는 참조 제제에서 관찰된 FGF-21 폴리펩티드 탈아미드화의 90% 미만, 85% 미만, 80% 미만, 75% 미만, 70% 미만, 65% 미만, 60% 미만, 55% 미만, 50% 미만, 45% 미만, 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 또는 10% 미만이다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 조성물에서 관찰된 FGF-21 폴리펩티드 산화는 참조 제제에서 관찰된 FGF-21 폴리펩티드 산화의 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 또는 약 10%이다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 조성물에서 관찰된 FGF-21 폴리펩티드 산화는 참조 제제에서 관찰된 FGF-21 폴리펩티드 산화의 90% 미만, 85% 미만, 80% 미만, 75% 미만, 70% 미만, 65% 미만, 60% 미만, 55% 미만, 50% 미만, 45% 미만, 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 또는 10% 미만이다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 제제를 안정화시키는 (안정성을 개선 또는 증진시키는) 방법은 분해 수준 뿐만 아니라 분해 속도를 저하시킬 수 있다: 예를 들어, 개시된 방법은 참조 제제와 비교하여, 폴리펩티드 탈아미드화 속도를 저하시키거나, FGF-21 폴리펩티드 산화 속도를 저하시키거나, FGF-21 폴리펩티드 응집 속도를 저하시키거나, FGF-21 폴리펩티드 단백질분해 분해 속도를 저하시키거나, 또는 그의 임의의 조합일 수 있다.
예를 들어, 본원에 개시된 제약 제제 중 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제, 예컨대 DTPA의 혼합물은 참조 제제와 비교하여 특정 온도에서 특정 기간 동안 저장 시 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21의 탈아미드화 속도를 낮출 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제에 대한 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)의 혼합물은 제약 제제가 예를 들어 약 25℃, 약 30℃, 약 35℃, 약 40℃ 또는 약 45℃에서 저장 시 참조 제제와 비교하여 FGF-21 접합체의 탈아미드화 속도를 낮출 수 있다.
일부 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)는 제약 제제가 25℃ 초과, 30℃ 초과, 35℃ 초과, 약 40℃ 또는 약 45℃의 온도에서 저장 시 참조 제제와 비교하여 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21의 탈아미드화 속도를 낮출 수 있다.
일부 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)는 제약 제제가 약 20℃ 내지 약 25℃, 약 25℃ 내지 약 30℃, 약 30℃ 내지 약 35℃, 또는 약 40℃ 내지 약 45℃에서 저장 시 참조 제제와 비교하여 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21의 탈아미드화 속도를 낮출 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제에 대한 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)의 혼합물은 제약 제제가 상기 개시된 온도 또는 온도 범위에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월 또는 약 4개월 동안 저장 시 참조 제제와 비교하여 FGF-21 접합체의 탈아미드화 속도를 낮출 수 있다.
구체적 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제에 대한 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)의 혼합물은 제약 제제가 40℃에서 약 1개월 동안 저장 시 참조 제제와 비교하여 FGF-21 접합체의 탈아미드화 속도를 낮출 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제에 대한 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)의 혼합물은 제약 제제가 약 25℃, 약 30℃, 약 35℃, 약 40℃ 또는 약 45℃에서 저장 시 참조 제제와 비교하여 FGF-21 접합체의 고분자량 (HMW) 응집 속도를 낮출 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제에 대한 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)의 혼합물은 제약 제제가 25℃ 초과, 30℃ 초과, 35℃ 초과, 약 40℃ 또는 약 45℃의 온도에서 저장 시 참조 제제와 비교하여 FGF-21 접합체의 HMW 응집 속도를 낮출 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제에 대한 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)의 혼합물은 제약 제제가 약 20℃ 내지 약 25℃, 약 25℃ 내지 약 30℃, 약 30℃ 내지 약 35℃, 또는 약 40℃ 내지 약 45℃의 온도에서 저장 시 참조 제제와 비교하여 FGF-21 접합체의 HMW 응집 속도를 낮출 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제에 대한 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)의 혼합물은 제약 제제가 상기 개시된 온도 또는 온도 범위에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월 또는 약 4개월 동안 저장 시 참조 제제와 비교하여 FGF-21 접합체의 HMW 응집 속도를 낮출 수 있다.
구체적 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제에 대한 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)의 혼합물은 제약 제제가 40℃에서 약 1개월 동안 저장 시 참조 제제와 비교하여 FGF-21 접합체의 HMW 응집 속도를 낮출 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제에 대한 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)의 혼합물은 FGF-21 접합체에서 1종 이상의 메티오닌의 산화를 방지하거나 완화시킬 수 있다.
특정한 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제에 대한 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 (예를 들어, DTPA)의 혼합물은, 예를 들어 25℃ 및/또는 40℃에서 서열식별번호: 3 (야생형 FGF-21)의 아미노산 1 및/또는 아미노산 169 또는 서열식별번호: 1, 2, 4 또는 본 개시내용에 따른 임의의 다른 FGF-21 접합체의 상응하는 아미노산의 산화를 방지하거나 완화시킬 수 있다.
개시된 방법은 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제 DTPA를 사용할 수 있다. 그러나, 일부 다른 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제는, 예를 들어, 또 다른 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제, 예컨대 EDTA, EGTA, DOTA, DTPA-관련 화합물, 예컨대 티욱세탄, 또는 관련 기술분야에 공지된 DTPA 및 EDTA와 관련된 임의의 킬레이팅제, 예를 들어 DTPA.BMA 및 EDTA.BMA일 수 있다.
일부 측면에서, DTPA 양이온 킬레이트화제는 약 10 μM 내지 약 100 μM, 15 μM 내지 약 95 μM, 약 20 μM 내지 약 90 μM, 약 25 μM 내지 약 85 μM, 약 30 μM 내지 약 80 μM, 약 35 μM 내지 약 75 μM, 약 40 μM 내지 약 70 μM, 약 45 μM 내지 약 65 μM, 약 50 μM 내지 약 60 μM, 약 25 μM 내지 약 75 μM, 약 40 μM 내지 약 60 μM, 약 30 μM 내지 약 70 μM, 또는 약 40 μM 내지 약 75 μM의 양으로 혼합될 수 있다.
일부 측면에서, DTPA 양이온 킬레이트화제는 약 10 μM, 약 15 μM, 약 20 μM, 약 25 μM, 약 30 μM, 약 35 μM, 약 40 μM, 약 45 μM, 약 50 μM, 약 55 μM, 약 60 μM, 약 65 μM, 약 70 μM, 약 75 μM, 약 80 μM, 약 85 μM, 약 90 μM, 약 95 μM 또는 약 100 μM의 양으로 혼합될 수 있다.
일부 측면에서, DTPA 양이온 킬레이트화제는 적어도 약 15 μM, 적어도 약 20 μM, 적어도 약 25 μM, 적어도 약 30 μM, 적어도 약 35 μM, 적어도 약 40 μM, 적어도 약 45 μM, 적어도 약 50 μM, 적어도 약 55 μM, 적어도 약 60 μM, 적어도 약 65 μM, 적어도 약 70 μM, 또는 적어도 약 75 μM의 양으로 혼합될 수 있다.
구체적 측면에서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제, 예를 들어, DTPA는, 50 μM의 양으로 혼합된다.
본원에 개시된 방법의 일부 측면에서, 제제의 pH는 약 6.5 초과, 약 6.6 초과, 약 6.7 초과, 약 6.8 초과, 약 6.9 초과, 약 7.0 초과, 약 7.1 초과, 약 7.2 초과, 약 7.3 초과, 약 7.4 초과, 또는 약 7.5 초과의 pH로 조정된다.
일부 측면에서, 제제의 pH는 6.5 초과, 6.6 초과, 6.7 초과, 6.8 초과, 6.9 초과, 7.0 초과, 7.1 초과, 7.2 초과, 7.3 초과, 7.4 초과, 또는 7.5 초과의 pH로 조정된다.
일부 측면에서, 제제의 pH는 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 또는 7.5의 pH로 조정된다.
일부 측면에서, 제제의 pH는 약 6.5 내지 약 7.5, 약 6.6 내지 약 7.5, 약 6.7 내지 약 7.5, 약 6.8 내지 약 7.5, 약 6.9 내지 약 7.5, 약 7.0 내지 약 7.5, 약 7.1 내지 약 7.5, 약 7.2 내지 약 7.5, 약 7.3 내지 약 7.5, 약 7.4 내지 약 7.5, 약 6.5 내지 약 7.4, 약 6.5 내지 약 7.3, 약 6.5 내지 약 7.2, 약 6.5 내지 약 7.1, 약 6.5 내지 약 7.0, 약 6.5 내지 약 6.9, 약 6.5 내지 약 6.8, 약 6.5 내지 약 6.7, 약 6.6 내지 약 7.4, 약 6.7 내지 약 7.4, 약 6.8 내지 약 7.4, 약 6.9 내지 약 7.4, 약 7.0 내지 약 7.4, 약 7.1 내지 약 7.4, 약 7.2 내지 약 7.4, 약 7.3 내지 약 7.4, 약 6.5 내지 약 7.3, 약 6.6 내지 약 7.3, 약 6.7 내지 약 7.3, 약 6.7 내지 약 7.3, 약 6.8 내지 약 7.3, 약 6.9 내지 약 7.3, 약 7.0 내지 약 7.3, 약 7.1 내지 약 7.3, 약 7.2 내지 약 7.3, 약 6.5 내지 약 7.2, 약 6.6 내지 약 7.2, 약 6.7 내지 약 7.2, 약 6.8 내지 약 7.2, 약 6.9 내지 약 7.2, 약 7.0 내지 약 7.2, 약 7.1 내지 약 7.2, 약 6.9 내지 약 7.1, 또는 약 7.0 내지 약 7.1의 pH로 조정된다.
일부 측면에서, 제제의 pH는 약 6.8, 약 6.9, 약 7.0, 약 7.1, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4, 또는 약 7.5의 pH로 조정된다. 일부 측면에서, 제약 제제는, pH 조정 후, 6.5의 pH를 갖는 참조 제제보다 더 안정적이다.
일부 측면에서, 제제의 pH는 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 또는 7.5의 pH로 조정된다. 일부 측면에서, 제약 제제는, pH 조정 후, 6.5의 pH를 갖는 참조 제제보다 더 안정적이다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21를 포함하는 제약 제제의 안정성을 개선시키는 방법은 계면활성제를 혼합하는 것을 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 혼합된 계면활성제는 비이온성 계면활성제, 즉, 중성 용액 중에서 알짜 전하를 갖지 않는 경향이 있는 계면활성제이다. 일부 측면에서, 혼합된 비음이온성 계면활성제는 폴리소르베이트이다. 일부 측면에서, 비-이온성 계면활성제는, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방 산 에스테르의 경우에 대략 적어도 0.01 mg/ml의 양인 임계 미셀 농도 (CMC) 초과의 양으로 혼합된다. 문헌 [Wan and Lee, Journal of Pharm Sci, 63, p.136, 1974] 참조. 본 발명의 방법의 일부 측면에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 80 (PS80)이다.
일부 측면에서, PS80 계면활성제는 약 0.01% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.02% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.03% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.04% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.05% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.06% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.07% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.08% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.09% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.02% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.03% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.04% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.05% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.06% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.07% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.08% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.03% 내지 약 0.08% (w/v), 약 0.04% 내지 약 0.08% (w/v), 약 0.05% 내지 약 0.08% (w/v), 약 0.06% 내지 약 0.08% (w/v), 약 0.07% 내지 약 0.08% (w/v), 약 0.04% 내지 약 0.07% (w/v), 약 0.05% 내지 약 0.07% (w/v), 약 0.06% 내지 약 0.07% (w/v), 또는 약 0.05% 내지 약 0.06% (w/v)의 양으로 제약 제제에 혼합된다.
일부 측면에서, 폴리소르베이트 80 계면활성제는 적어도 약 0.01% (w/v), 적어도 약 0.02% (w/v), 적어도 약 0.03% (w/v), 적어도 약 0.04% (w/v), 적어도 약 0.05% (w/v), 적어도 약 0.06% (w/v), 적어도 약 0.07% (w/v), 적어도 약 0.08% (w/v), 적어도 약 0.09% (w/v) 또는 적어도 약 0.1% (w/v)의 양으로 혼합된다. 일부 측면에서, 계면활성제, 예를 들어, PS80은, 예를 들어, 제제 교반 시에 (예를 들어, 진탕기 상에서) 미립자 형성 및/또는 기포 형성을 경감시키거나 방지하기에 충분한 양으로 혼합된다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21를 포함하는 제약 제제의 안정성을 개선시키는 방법은 아미노산 완충제, 예를 들어, 히스티딘 (즉, L-히스티딘, D-히스티딘, 용매화된 히스티딘, 수화된 히스티딘, 무수 히스티딘, 또는 이들의 혼합물)을 혼합하는 것을 추가로 포함한다.
일부 측면에서, 히스티딘 완충제는 약 10 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 15 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 20 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 25 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 30 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 35 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 40 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 45 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 50 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 55 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 60 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 65 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 70 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 75 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 80 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 85 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 90 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 95 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 20 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 25 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 30 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 35 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 40 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 45 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 50 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 55 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 60 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 65 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 70 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 75 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 80 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 85 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 30 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 35 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 40 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 45 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 50 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 55 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 60 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 65 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 70 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 75 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 40 mM 내지 약 70 mM 히스티딘, 약 45 mM 내지 약 70 mM 히스티딘, 약 50 mM 내지 약 70 mM 히스티딘, 약 55 mM 내지 약 70 mM 히스티딘, 약 60 mM 내지 약 70 mM 히스티딘, 약 65 mM 내지 약 70 mM 히스티딘, 약 10 mM 내지 약 30 mM 히스티딘, 약 15 mM 내지 약 30 mM 히스티딘, 약 20 mM 내지 약 30 mM 히스티딘, 약 25 mM 내지 약 30 mM 히스티딘, 약 15 mM 내지 약 25 mM 히스티딘, 약 20 mM 내지 약 25 mM, 약 15 mM 내지 약 20 mM 히스티딘, 약 40 mM 내지 약 60 mM 히스티딘, 약 45 mM 내지 약 60 mM 히스티딘, 약 50 mM 내지 약 60 mM 히스티딘, 약 15.5 mM 내지 약 24.5 mM 히스티딘, 약 16 mM 내지 약 24 mM 히스티딘, 약 16.5 mM 내지 약 23.5 mM 히스티딘, 약 17 mM 내지 약 23 mM 히스티딘, 약 17.5 mM 내지 약 22.5 mM 히스티딘, 약 18 mM 내지 약 22 mM 히스티딘, 약 18.5 mM 내지 약 21.5 mM 히스티딘, 약 19 mM 내지 약 21 mM 히스티딘, 또는 약 19.5 mM 내지 약 20.5 mM 히스티딘의 양으로 혼합된다.
일부 측면에서, 히스티딘 완충제는 약 10 mM 히스티딘, 약 11 mM 히스티딘, 약 12 mM 히스티딘, 약 13 mM 히스티딘, 약 14 mM 히스티딘, 약 15 mM 히스티딘, 약 16 mM 히스티딘, 약 17 mM 히스티딘, 약 18 mM 히스티딘, 약 19 mM 히스티딘, 약 20 mM 히스티딘, 약 21 mM 히스티딘, 약 22 mM 히스티딘, 약 23 mM 히스티딘, 약 24 mM 히스티딘, 약 25 mM 히스티딘, 약 26 mM 히스티딘, 약 27 mM 히스티딘, 약 28 mM 히스티딘, 약 29 mM 히스티딘, 약 30 mM 히스티딘, 약 31 mM 히스티딘, 약 32 mM 히스티딘, 약 33 mM 히스티딘, 약 34 mM 히스티딘, 약 35 mM 히스티딘, 약 36 mM 히스티딘, 약 37 mM 히스티딘, 약 38 mM 히스티딘, 약 39 mM 히스티딘, 약 40 mM 히스티딘, 약 41 mM 히스티딘, 약 42 mM 히스티딘, 약 43 mM 히스티딘, 약 44 mM 히스티딘, 약 45 mM 히스티딘, 약 46 mM 히스티딘, 약 47 mM 히스티딘, 약 48 mM 히스티딘, 약 49 mM 히스티딘, 또는 약 50 mM 히스티딘의 양으로 혼합된다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21를 포함하는 제약 제제의 안정성을 개선시키는 방법은 삼투 조절제 (등장화제)를 혼합하는 것을 추가로 포함한다. 본 개시내용에 따르면 삼투 조절제 (등장화제)는 폴리올, 사카라이드, 탄수화물, 염, 예컨대 염화나트륨, 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 예시적인 폴리올은 약 600 kD 미만 (예를 들어, 120 내지 400 kD 범위)인 분자량을 갖는 것들, 예를 들어, 만니톨, 트레할로스, 소르비톨, 에리트리톨, 이소말트, 락티톨, 말티톨, 크실리톨, 글리세롤, 락티톨, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 이노시톨, 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 사카라이드 또는 탄수화물 삼투 조절제는 모노사카라이드, 디사카라이드 및 폴리사카라이드 또는 이들의 혼합물을 포함한다.
일부 측면에서, 사카라이드 또는 탄수화물은 프룩토스, 글루코스, 만노스, 수크로스, 소르보스, 크실로스, 락토스, 말토스, 수크로스, 덱스트란, 풀룰란, 덱스트린, 시클로덱스트린, 가용성 전분, 히드록시에틸 전분, 수용성 글루칸, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 측면에서, 삼투 조절제는 환원 당 또는 비-환원 당 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 사카라이드를 포함한다. 일부 측면에서, 삼투 조절제 등장화제는, 바람직하게는 수크로스, 트레할로스, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 비-환원 당인 사카라이드를 포함한다. 일부 구체적 측면에서, 비-환원 당은 수크로스이다.
일부 측면에서, 수크로스 삼투 조절제는 약 100 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 200 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 300 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 400 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 500 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 600 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 700 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 800 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 900 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 200 mM 내지 약 900 mM 수크로스, 약 300 mM 내지 약 900 mM 수크로스, 약 400 mM 내지 약 900 mM 수크로스, 약 500 mM 내지 약 900 mM 수크로스, 약 600 mM 내지 약 900 mM 수크로스, 약 700 mM 내지 약 900 mM 수크로스, 약 800 mM 내지 약 900 mM 수크로스, 약 300 mM 내지 약 800 mM 수크로스, 약 400 mM 내지 약 800 mM 수크로스, 약 500 mM 내지 약 800 mM 수크로스, 약 600 mM 내지 약 800 mM 수크로스, 약 700 mM 내지 약 800 mM 수크로스, 약 400 mM 내지 약 700 mM 수크로스, 약 500 mM 내지 약 700 mM 수크로스, 약 600 mM 내지 약 700 mM 수크로스, 또는 약 500 mM 내지 약 600 mM 수크로스의 양으로 혼합된다.
일부 측면에서, 수크로스 삼투 조절제는 약 100 mM 수크로스, 약 150 mM 수크로스, 약 200 mM 수크로스, 약 250 mM 수크로스, 약 300 mM 수크로스, 약 350 mM 수크로스, 약 400 mM 수크로스, 약 450 mM 수크로스, 약 500 mM 수크로스, 약 550 mM 수크로스, 약 600 mM 수크로스, 약 650 mM 수크로스, 약 700 mM 수크로스, 약 750 mM 수크로스, 약 800 mM 수크로스, 약 850 mM 수크로스, 약 900 mM 수크로스, 약 950 mM 수크로스, 또는 약 1 M 수크로스의 양으로 혼합된다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 방법에 유용한 FGF-21 접합체는 서열식별번호: 3 (야생형 인간 FGF-21)의 아미노산 서열과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 아미노산 서열 동일성을 갖는 FGF-21 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 FGF-21 폴리펩티드는 FGF-21 활성을 갖는다.
일부 측면에서, FGF-21 접합체는 서열식별번호: 2의 PEG-FGF-21, 즉 야생형 FGF-21 (서열식별번호: 3)의 글루타민 109가 파라-아세틸-L-페닐알라닌로 대체된 것인 서열식별번호: 1의 FGF-21 및 PEG 모이어티, 예를 들어 옥심 연결을 통해 파라-아세틸-L-페닐알라닌에 공유 부착된 약 28 kDa 내지 약 32kDa, 예를 들어 약 30 kDa의 분자량을 갖는 선형 PEG이다. 일부 측면에서, FGF-21 접합체는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21, 즉 야생형 FGF-21 (서열식별번호: 3)의 글루타민 109가 파라-아세틸-L-페닐알라닌으로 대체된 것인 서열식별번호: 1의 FGF-21 및 옥심 연결을 통해 파라-아세틸-L-페닐알라닌에 공유 부착된, 681개의 에틸렌 글리콜 단위를 포함하는 PEG 모이어티이다.
본원에 개시된 방법의 일부 측면에서, FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 약 1 mg/ml 내지 약 40 mg/ml의 농도로 존재한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 약 10 mg/ml, 약 20 mg/ml, 약 30 mg/ml 또는 약 40 mg/ml의 농도로 존재한다. 일부 구체적 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 약 10 mg/ml의 농도로 존재한다. 일부 구체적 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 약 20 mg/ml의 농도로 존재한다.
일부 측면에서, 제제는 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21 약 1mL을 약 10 mg/ml의 농도로 포함한다. 일부 측면에서, 제제는 약 1mL의 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 약 20 mg/ml의 농도로 포함한다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21의 농도는 관련 기술분야에 공지된 방법, 또는 본 명세서의 실시예 섹션에 개시된 구체적인 방법에 따라 결정된다.
본원에 개시된 방법의 일부 측면에서, 제제는 피하 투여를 위해 제제화된다. 일부 측면에서, 제제는 안전 시린지로의 피하 투여를 위해 제제화된다. 일부 측면에서, 제제는 매일 또는 매주 투여를 위해 제제화된다. 일부 측면에서, 제제는 수성 제제이다.
본 개시내용은 (i) 약 10 mM 내지 약 50 mM 농도의 히스티딘; (ii) 약 100 mM 내지 약 1M 농도의 수크로스; (iii) 약 0.01% 내지 약 0.1% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 약 10 μM 내지 약 100 μM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21 (예를 들어, 10 mg/mL 또는 20 mg/mL의 농도)을 포함하고, pH가 약 6.7 내지 약 7.5인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (i) 약 15 mM 내지 약 45 mM 농도의 히스티딘; (ii) 약 200 mM 내지 약 900mM 농도의 수크로스; (iii) 약 0.02% 내지 약 0.09% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 약 20 μM 내지 약 90 μM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21 (예를 들어, 10 mg/mL 또는 20 mg/mL의 농도)을 포함하고, pH가 약 6.8 내지 약 7.4인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (i) 약 15 mM 내지 약 40 mM 농도의 히스티딘; (ii) 약 300 mM 내지 약 800mM 농도의 수크로스; (iii) 약 0.03% 내지 약 0.08% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 약 30 μM 내지 약 80 μM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21 (예를 들어, 10 mg/mL 또는 20 mg/mL의 농도)을 포함하고, pH가 약 6.9 내지 약 7.3인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (i) 약 15 mM 내지 약 30 mM 농도의 히스티딘; (ii) 약 400 mM 내지 약 800mM 농도의 수크로스; (iii) 약 0.04% 내지 약 0.07% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 약 40 μM 내지 약 70 μM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21 (예를 들어, 10 mg/mL 또는 20 mg/mL의 농도)을 포함하고, pH가 약 7 내지 약 7.2인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (i) 약 15 mM 내지 약 25 mM 농도의 히스티딘; (ii) 약 500 mM 내지 약 700mM 농도의 수크로스; (iii) 약 0.04% 내지 약 0.06% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 약 45 μM 내지 약 55 μM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21 (예를 들어, 10 mg/mL 또는 20 mg/mL의 농도)을 포함하고, pH가 약 7 내지 약 7.1인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 제약 제제 중 FGF-21 접합체의 농도는 슬로프 분광분석법, 예를 들어 0.87 (mL/(mg*cm))의 흡광 계수를 사용하여 280 nm에서 SoloVPE 피브레트 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OF0002-P50) (SoloVPE 일회용 UV 플라스틱 용기 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OC0009-1))가 장착된 애질런트 캐리 60 UV-Vis 분광광도계에 의해 측정된다.
본 개시내용은 또한 (i) 약 20 mM 농도의 히스티딘; (ii) 약 600 mM 농도의 수크로스; (iii) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 약 50 μM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21 (예를 들어, 10 mg/mL 또는 20 mg/mL의 농도)을 포함하고, pH가 약 7.1인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 (i) 20 mM 농도의 히스티딘; (ii) 600 mM 농도의 수크로스; (iii) 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 50 μM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21 (예를 들어, 10 mg/mL 또는 20 mg/mL의 농도)을 포함하고, pH가 7.1인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (i) 약 20 mM 농도의 히스티딘; 및 (ii) 약 600 mM 농도의 수크로스를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21 (예를 들어, 10 mg/mL 또는 20 mg/mL의 농도)을 포함하고, pH가 약 7.0인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (i) 20 mM 농도의 히스티딘; 및 (ii) 600 mM 농도의 수크로스를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21 (예를 들어, 10 mg/mL 또는 20 mg/mL의 농도)을 포함하고, pH가 7.0인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (i) 약 20 mM 농도의 히스티딘; (ii) 약 600 mM 농도의 수크로스; (iii) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 약 50 uM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 약 10 mg/mL의 농도로 포함하고, pH가 약 7.1인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (i) 약 20 mM 농도의 히스티딘; (ii) 약 600 mM 농도의 수크로스; (iii) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 약 50 uM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 약 20 mg/mL의 농도로 포함하고, pH가 약 7.1인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (i) 20 mM 농도의 히스티딘; (ii) 600 mM 농도의 수크로스; (iii) 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 50 uM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 약 10 mg/mL의 농도로 포함하고, pH가 7.1인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (i) 20 mM 농도의 히스티딘; (ii) 600 mM 농도의 수크로스; (iii) 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 50 uM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 약 20 mg/mL의 농도로 포함하고, pH가 7.1인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 (i) 약 20 mM 농도의 히스티딘; (ii) 약 600 mM 농도의 수크로스; (iii) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 약 50 μM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 6의 PEG-FGF-21 (예를 들어, 10 mg/mL 또는 20 mg/mL의 농도)을 포함하고, pH가 약 7.1인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 (i) 20 mM 농도의 히스티딘; (ii) 600 mM 농도의 수크로스; (iii) 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 50 μM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 6의 PEG-FGF-21 (예를 들어, 10 mg/mL 또는 20 mg/mL의 농도)을 포함하고, pH가 7.1인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (i) 약 20 mM 농도의 히스티딘; 및 (ii) 약 600 mM 농도의 수크로스를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 6의 PEG-FGF-21 (예를 들어, 10 mg/mL 또는 20 mg/mL의 농도)을 포함하고, pH가 약 7.0인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (i) 20 mM 농도의 히스티딘; 및 (ii) 600 mM 농도의 수크로스를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 6의 PEG-FGF-21 (예를 들어, 10 mg/mL 또는 20 mg/mL의 농도)을 포함하고, pH가 7.0인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (i) 약 20 mM 농도의 히스티딘; (ii) 약 600 mM 농도의 수크로스; (iii) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 약 50 uM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 6의 PEG-FGF-21을 약 10 mg/mL 농도로 포함하고 pH가 약 7.1인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (i) 약 20 mM 농도의 히스티딘; (ii) 약 600 mM 농도의 수크로스; (iii) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 약 50 uM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 6의 PEG-FGF-21을 약 20 mg/mL 농도로 포함하고, pH가 약 7.1인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (i) 20 mM 농도의 히스티딘; (ii) 600 mM 농도의 수크로스; (iii) 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 50 uM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 6의 PEG-FGF-21을 약 10 mg/mL의 농도로 포함하고, pH가 7.1인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 (i) 20 mM 농도의 히스티딘; (ii) 600 mM 농도의 수크로스; (iii) 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및 (iv) 50 uM 농도의 DTPA를 혼합하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 6의 PEG-FGF-21을 약 20 mg/mL의 농도로 포함하고, pH가 7.1인 제제의 안정성을 개선시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 제약 제제에 포함된 개별 부형제 (예를 들어, DTPA, PS80, 히스티딘, 수크로스, 또는 그의 조합)의 농도는 완성된 제약 제제의 최종 부피 단위당 그의 제조 과정에서 제약 제제에 첨가된 개별 부형제의 양 (예를 들어, 중량, 몰 등)인 것으로 결정/계산될 수 있다. 다른 실시양태에서, 제약 제제에 포함된 부형제 (예를 들어, DTPA, PS80, 히스티딘, 수크로스, 또는 그의 조합)의 농도는 제약 제제 중 개별 부형제의 실제 양을 기준으로 한다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 제조 방법은 약 10 mg 또는 약 20 mg/mL 농도의 본원에 개시된 제제, 예를 들어 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21, 20 mM 농도의 히스티딘, 600 mM 농도의 수크로스, 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80, 및 50 uM 농도의 DTPA를 포함하고, pH가 7.1인 제제를 용기에 전달하는 것을 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 제조 방법은 약 10 mg 또는 약 20 mg/mL 농도의 본원에 개시된 제제, 예를 들어 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 6의 PEG-FGF-21, 20 mM 농도의 히스티딘, 600 mM 농도의 수크로스, 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80, 및 50 uM 농도의 DTPA를 포함하고, pH가 7.1인 제제를 용기에 전달하는 것을 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 용기는 바이알이다. 일부 측면에서, 용기는 백, 예를 들어 클램 쉘 백이다. 일부 측면에서, 백, 예를 들어 클램 쉘 백은 6L 내지 12L의 부피를 갖는다. 일부 측면에서, 용기는 시린지이다. 일부 측면에서, 시린지는 안전 시린지이다. 일부 측면에서, 시린지는 사전-충전가능한 시린지이다. 일부 측면에서, 시린지는 BD 네오팩(Neopak)TM 사전-충전가능한 시린지이다. 일부 측면에서, 용기는 자기-주사 장치이다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 약 10 mg 또는 약 20 mg/mL의 농도로 포함하는 제제 약 1 mL가 용기 (예를 들어, 바이알, 시린지 또는 자기-주사 장치)에 주입된다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 6의 PEG-FGF-21을 약 10 mg 또는 약 20 mg/mL의 농도로 포함하는 제제 약 1 mL가 용기 (예를 들어, 바이알, 시린지 또는 자기-주사 장치)에 주입된다. 일부 측면에서, 용기는 다중 용량, 예를 들어 다중 1 mL 용량을 함유한다.
III. 치료 방법
본 개시내용은 또한 섬유증 및/또는 당뇨병과 연관된 질환 또는 상태의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 섬유증 및/또는 당뇨병과 연관된 질환 또는 상태를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 질환 또는 상태는 당뇨병, 예를 들어 제2형 당뇨병이다. 일부 측면에서, 질환 또는 상태는 비알콜성 지방간염 (NASH)이다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 본원에 개시된 치료 또는 예방 방법에서 용량 (예를 들어, 1 mL 용량 또는 그의 배수) 당 약 1 mg 내지 약 40 mg의 양으로 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 용량에 대한 FGF-21 접합체의 양은 슬로프 분광분석법, 예를 들어 0.87 (mL/(mg*cm))의 흡광 계수를 사용하여 280 nm에서 SoloVPE 피브레트 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OF0002-P50) (SoloVPE 일회용 UV 플라스틱 용기 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OC0009-1))가 장착된 애질런트 캐리 60 UV-Vis 분광광도계에 의한 측정에 기초한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 본원에 개시된 치료 또는 예방 방법에서 용량 (예를 들어, 1 mL 용량 또는 그의 배수)당 약 1 mg 내지 약 5 mg, 또는 용량당 약 5 mg 내지 약 10 mg, 또는 용량당 약 10 mg 내지 약 15 mg, 또는 용량당 약 15 mg 내지 약 20 mg, 또는 용량당 약 20 mg 내지 약 25 mg, 또는 용량당 약 25 mg 내지 약 30 mg, 또는 용량당 약 30 mg 내지 약 35 mg, 또는 용량당 약 35 mg 내지 약 40 mg의 양으로 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 본원에 개시된 치료 또는 예방 방법에서 용량 (예를 들어, 1 mL 용량 또는 그의 배수)당 40 mg 초과의 양으로 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 용량은 균일 용량이다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 본원에 개시된 치료 또는 예방 방법에서 용량당 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg 또는 약 40 mg의 양으로 사용될 수 있다. 구체적 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 본원에 개시된 치료 또는 예방 방법에서 용량 (예를 들어, 1 mL 용량 또는 그의 배수)당 약 10 mg의 양으로 사용될 수 있다. 구체적 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21은 본원에 개시된 치료 또는 예방 방법에서 용량 (예를 들어, 1 mL 용량 또는 그의 배수)당 약 20 mg의 양으로 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 용량은 균일 용량이다.
일부 측면에서, 제약 제제는, 예를 들어 안전 시린지 또는 자동-주사기를 사용하여 피하로 투여된다. 일부 측면에서, 제약 제제는 매일 또는 매주 투여된다.
일부 측면에서, 대상체에게 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제의 유효량을 투여하는 것은 간 경직도를 감소시키거나, 체지방률을 감소시키거나, 체중을 감소시키거나, 간 중량-대-체중 비를 감소시키거나, 간 지질 함량을 감소시키거나, 간 섬유증 면적을 감소시키거나, 공복 혈액 글루코스 수준을 감소시키거나, 공복 트리글리세리드 수준을 감소시키거나, LDL 콜레스테롤 수준을 감소시키거나, ApoB 수준을 감소시키거나, ApoC 수준을 감소시키거나, HDL 콜레스테롤을 증가시키거나, 또는 그의 임의의 조합을 유발한다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 치료 방법에 따라 대상체에게 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제를 투여하는 것은 비치료 대상체 또는 제약 제제의 투여 전의 대상체에서의 수준과 비교하여 (i) 간 지방 수준의 감소; (ii) 간 손상 수준의 감소; (iii) 섬유증 수준의 감소; (iv) 섬유증 바이오마커 혈청 Pro-C3 (N-말단 유형 III 콜라겐 프로펩티드) 수준의 감소; (v) 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT) 수준의 감소; (vi) 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST) 수준의 감소; (vii) 혈청 아디포넥틴 수준의 증가; (viii) 혈장 LDL 수준의 감소; (ix) 혈장 HDL 수준의 증가; (x) 혈장 트리글리세리드 수준의 감소; (xi) 간 경직도 수준의 감소; 또는 (xii) 그의 임의의 조합을 유발한다.
본 개시내용은 섬유증과 연관된 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 섬유증과 연관된 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 섬유증과 연관된 질환은 췌장, 폐, 심장, 신장, 간, 눈, 신경계, 골수, 림프절, 심내막심근, 및/또는 후복막강 등의 기관 및 조직에 영향을 미칠 수 있다. 일부 측면에서, 섬유증과 연관된 질환은 간 섬유증 또는 전-경변증일 수 있다. 일부 측면에서, 섬유증과 연관된 질환은 하기로부터 선택될 수 있다: 비알콜성 지방간염 (NASH), 경변증, 미만성 폐실질성 질환, 낭포성 섬유증, 폐 섬유증, 진행성 거대 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 주입 섬유증, 신장 섬유증, 만성 신장 질환, 당뇨병성 신장 질환, 국소 분절 사구체경화증, 막성 신장병, IgA 신장병, 골수섬유증, 심부전, 급성 심부전, 만성 심부전, 대사성 심부전, 심장 섬유증, 백내장 섬유증, 백내장, 안구 흉터, 췌장 섬유증, 피부 섬유증, 장 섬유증, 장 협착, 심내막심근 섬유증, 심방 섬유증, 종격 섬유증, 크론병, 후복막 섬유증, 켈로이드, 신성 전신 섬유증, 경피증, 전신 경화증, 관절섬유증, 페이로니 증후군, 듀프이트렌 구축, 당뇨병성 신경증, 유착성 관절낭염, 알콜성 간 질환, 지방간염, 바이러스성 간염, 담관 질환, 원발성 혈색소침착증, 약물-관련 경변증, 잠원성 경변증, 윌슨병, 및, 알파 1-항트립신 결핍증, 간질성 폐질환 (ILD), 인간 섬유증성 폐 질환, 간 섬유증, 황반 변성, 망막 망막병증, 유리체 망막병증, 심근 섬유증, 그레이브스 눈병, 약물 유도 맥각중독, 심혈관 질환, 아테롬성경화증/재발협착증, 비후 흉터, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 및 염증성 장 질환 (콜라겐성 결장염을 포함하나 이에 제한되지는 않음). 일부 측면에서, 섬유증과 연관된 질환은 폐 질환, 폐암, 약물 요법, 화학요법, 또는 방사선 요법 중 하나 이상으로부터 유래된다. 일부 측면에서, 섬유증과 연관된 질환은 노화, 심장 마비, 뇌졸중, 심근 손상, 또는 좌심실 기능장애 중 하나 이상으로부터 유래된다. 일부 측면에서, 섬유증과 연관된 질환은 신장 섬유증, 사구체 신염, 만성 신장 질환, 만성 신부전, 및 전신 루푸스와 관련된 신염, 암, 신체적 장애, 독소, 대사 질환, 면역 질환, 또는 당뇨병성 신장병으로부터 선택될 수 있다. 일부 측면에서, 섬유증과 연관된 질환은 외상, 척수 손상, 감염, 수술, 허혈 손상, 심장 마비, 화상, 환경 오염물 노출, 폐렴, 결핵, 또는 급성 호흡 장애 증후군 중 하나 이상으로부터 유래된다. 일부 측면에서, 섬유증과 연관된 질환은 폐 섬유증, 간질성 폐질환, 인간 섬유증성 폐 질환, 특발성 폐 섬유증, 간 섬유증, 심장 섬유증, 심근 섬유증, 황반 변성, 망막 망막병증, 유리체 망막병증, 그레이브스 눈병, 약물 유도 맥각중독, 심혈관 질환, 아테롬성경화증/재발협착증, 켈로이드 및 비후 흉터, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 염증성 장 질환, 콜라겐성 결장염, 안구 흉터 및 백내장 섬유증으로부터 선택될 수 있다. 일부 측면에서, 섬유증과 연관된 질환은 NASH, 간 섬유증, 및 경변증으로부터 선택될 수 있다. 일부 측면에서, 섬유증과 연관된 질환은 NASH일 수 있다. 일부 측면에서, 섬유증과 연관된 질환은 당뇨병성 신장 질환, 만성 신장 질환, 및 신장 섬유증으로부터 선택될 수 있다. 일부 측면에서, 섬유증과 연관된 질환은 대사성 심부전 및 심장 섬유증으로부터 선택될 수 있다. 일부 측면에서, 섬유증과 연관된 질환은 폐 섬유증일 수 있다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 간 지방 분율의 감소를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제의 유효량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 임의로 대상체는 NASH가 발생할 위험이 있거나 또는 NASH로 진단된 것인, 상기 대상체에서 간 지방 분율을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 간 경직도의 감소, 체지방률의 감소, 체중의 감소, 간 중량-대-체중 비의 감소, 간 지질 함량의 감소, 간 섬유증 면적의 감소, 공복 혈액 글루코스 수준의 감소, 공복 트리글리세리드의 감소, LDL 콜레스테롤의 감소, ApoB의 감소, ApoC의 감소, 및/또는 HDL 콜레스테롤의 증가를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제의 유효량을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 임의로 대상체는 NASH가 발생할 위험이 있거나 또는 NASH로 진단된 것인, 상기 대상체에서 간 경직도를 감소시키고/거나, 체지방률을 감소시키고/거나, 체중을 감소시키고/거나, 간 중량-대-체중 비를 감소시키고/거나, 간 지질 함량을 감소시키고/거나, 간 섬유증 면적을 감소시키고/거나, 공복 혈액 글루코스 수준을 감소시키고/거나, 공복 트리글리세리드를 감소시키고/거나, LDL 콜레스테롤을 감소시키고/거나, ApoB를 감소시키고/거나, ApoC를 감소시키고/거나, HDL 콜레스테롤을 증가시키는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 아디포넥틴 수준의 증가를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제의 유효량을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 임의로 상기 대상체는 NASH가 발생할 위험이 있거나 또는 NASH로 진단된 것인, 상기 대상체에서 아디포넥틴 수준을 증가시키는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 NASH와 연관된 1종 이상의 증상의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 NASH와 연관된 1종 이상의 증상을 치료하는 방법을 제공한다.
또한, NASH의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 서열식별번호: 1을 포함하며 그의 비-천연 p-아세틸-페닐알라닌 잔기가 옥심 연결을 통해 약 28 kDa 내지 약 32 kDa의 분자량을 갖는 PEG 모이어티에 연결되는 것인 변이체 FGF-21 폴리펩티드를 포함하는 본원에 개시된 제약 제제의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 NASH를 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 측면에서, 비-천연 p-아세틸-페닐알라닌은 야생형 FGF-21 (서열식별번호: 3)의 글루타민 109를 치환한다. 일부 측면에서, PEG 모이어티는 약 30 kDa의 분자량을 갖는다. 일부 측면에서, PEG 모이어티는 약 600 내지 약 800개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는다. 일부 측면에서, PEG 모이어티는 PEG681이다.
일부 구체적 측면에서, 본 개시내용은 NASH의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 FGF-21 접합체를 포함하는 본원에 개시된 제약 제제의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 NASH를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 대상체는 NASH CRN 섬유증 스테이지 1-3을 나타낼 수 있으며, 이는 임의로 간 생검에 의해 결정된다. 일부 측면에서, 치료 전에 대상체는 적어도 약 60의 지방 간 지수를 나타낼 수 있다. 일부 측면에서, 치료 전에 대상체는 적어도 10%의 간 지방 분율 백분율을 나타낼 수 있으며, 이는 임의로 자기 공명 이미징에 의해 결정된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 제1형 당뇨병 또는 제2형 당뇨병의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 제1형 당뇨병 또는 제2형 당뇨병을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 비만의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 비만을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 글루코스 및 지질 항상성, 글루코스 흡수, GLUT 1 발현, 및/또는 글루코스, 트리글리세리드, 인슐린 또는 글루카곤의 혈청 농도 중 적어도 하나의 조절을 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 글루코스 및 지질 항상성, 글루코스 흡수, GLUT 1 발현, 및/또는 글루코스, 트리글리세리드, 인슐린 또는 글루카곤의 혈청 농도 중 적어도 하나를 조절하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 인슐린 감수성의 증가, 아디포넥틴 수준의 증가, 혈액 글루코스 수준의 감소, 글루카곤 수준의 감소, 트리글리세리드 수준의 감소, 프룩토사민 수준의 감소, 저밀도 콜레스테롤 수준의 감소, 또는 C-반응성 단백질 수준의 감소를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 인슐린 감수성의 증가, 아디포넥틴 수준의 증가, 혈액 글루코스 수준의 감소, 글루카곤 수준의 감소, 트리글리세리드 수준의 감소, 프룩토사민 수준의 감소, 저밀도 콜레스테롤 수준의 감소, 또는 C-반응성 단백질 수준의 감소 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 비만, 당뇨병, 췌장염, 인슐린 저항성, 고인슐린혈증, 글루코스 불내성, 고혈당증, 대사 증후군, 글루코스 내성 장애, 부적절한 글루코스 클리어런스, 고혈당, 및 프라더-윌리(Prader-Willi) 증후군으로부터 선택된 상태 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 상기 상태 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 A형 인슐린 저항성, C형 인슐린 저항성 (HAIR-AN 증후군으로도 알려짐), 랩슨-멘덴홀(Rabson-Mendenhall) 증후군, 도노휴(Donohue) 증후군 또는 요정증, 고안드로겐혈증, 다모증 또는 흑색 극세포증으로부터 선택된 인슐린 관련 상태 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 상기 상태 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 주사를 통해 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 피하 주사, IV 주사, 복강내 주사 또는 근육내 주사를 통해, 예를 들어 시린지 (예컨대 안전 시린지) 또는 자동-주사기를 사용하여 투여될 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 약 1일 1회의 빈도로, 또는 약 1일 1회보다 덜 빈번하게 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 1주에 약 2회의 빈도로, 또는 1주에 약 2회보다 덜 빈번하게 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 1주에 약 1회의 빈도로, 또는 1주에 약 2회보다 덜 빈번하게 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 2주에 약 1회의 빈도로, 또는 1주에 약 2회보다 덜 빈번하게 투여될 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 약 3주에 1회의 빈도로, 또는 약 1주에 2회보다 덜 빈번하게 투여될 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 1개월에 약 1회의 빈도로, 또는 1개월에 약 1회보다 덜 빈번하게 투여될 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 4주에 1회의 빈도로 투여될 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 약 1일 1회의 빈도로 투여될 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 1주에 약 1회의 빈도로 투여될 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 용량당 본원에 개시된 FGF-21 접합체 약 1 mg, 약 2 mg, 약 5 mg, 약 10 mg, 약 15 mg, 약 20 mg, 약 25 mg, 약 30 mg, 약 35 mg, 약 40 mg, 약 45 mg, 약 50 mg, 약 55 mg, 약 60 mg, 약 65 mg, 약 70 mg, 약 75 mg, 약 80 mg, 약 85 mg, 약 90 mg, 약 95 및 약 100 mg으로부터 선택된 양으로 투여될 수 있다. 구체적 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 약 10 mg/용량 (예를 들어, 1 mL 용량 또는 그의 배수)의 양으로 투여될 수 있다. 구체적 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 약 20 mg/용량 (예를 들어, 1 mL 용량 또는 그의 배수)의 양으로 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 용량은 균일 용량이다.
예를 들어, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 본원의 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 수용자 대상체의 체중 kg 당 약 0.1 내지 100 mg의 농도로 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 약 0.5-5 mg의 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21 / 수용자 대상체의 체중 kg의 농도로 대상체에게 투여될 수 있다. 또 다른 측면에서, 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제는 수용 대상체에게 1일 1회 내지 2주 1회의 빈도, 예컨대 약 1주 1회 또는 2회, 2일마다 1회, 3일마다 1회, 4일마다 1회, 5일마다 1회, 또는 6일마다 1회의 빈도로 투여될 수 있다.
본 개시내용의 제약 제제, 즉 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제제는 비경구, 예를 들어 피하 또는 정맥내를 포함하나 이에 제한되지는 않는 주사 또는 임의의 다른 형태의 주사 또는 주입을 포함하나 이에 제한되지는 않는 단백질 또는 펩티드에 적합한 임의의 통상적인 경로에 의해 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 제약 제제는 시린지, 예를 들어 안전 시린지를 사용하여 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 제약 제제는 자동-주사기를 사용하여 투여될 수 있다.
IV. 제조 물품 및 키트
본 개시내용은 또한 (i) 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 FGF-21 제약 제제, 및 (ii) 사용 지침서를 포함하는 물품 또는 제조 물품 또는 키트를 제공한다. 일부 측면에서, 제조 물품 또는 키트는 용기를 포함할 수 있다. 적합한 용기는, 예를 들어, 병, 바이알, 시린지 및 시험관을 포함한다. 일부 측면에서, 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리, 플라스틱 또는 금속으로부터 형성될 수 있다. 일부 측면에서, 용기는 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제, 예를 들어 액체 제제를 보유한다. 일부 측면에서, 용기는 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 6의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제, 예를 들어 액체 제제를 보유한다.
용기 상의 또는 그에 회합된 라벨은 재구성 및/또는 사용에 대한 지시사항을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 라벨은 본원에 개시된 FGF-21 접합체, 예를 들어 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 PEG-FGF-21을 포함하는 제약 제제가 상기 기재된 바와 같은 단백질 농도로 희석되어야 함을 나타낼 수 있다. 라벨은 제제가 피하 투여에 유용하거나 피하 투여용으로 의도된 피하 제제임을 추가로 나타낼 수 있다.
일부 측면에서, 제제를 보유하는 용기는, 예를 들어 피하 제제의 반복 투여 (예를 들어, 2 내지 6회 투여, 또는 그 초과)를 가능하게 하는 다중-사용 바이알일 수 있다. 대안적으로, 용기는 예를 들어 피하 제제를 함유하는 사전-충전된 시린지일 수 있다.
제조 물품 또는 키트는, 예를 들어, 용매를 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 제조 물품은 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질, 예컨대 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 시린지, 및 사용 지침서가 있는 포장 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 키트 또는 제조 물품은 시린지 (예를 들어, 안전 시린지)를 포함한다. 일부 측면에서, 키트 또는 제조 물품은 자동-주사기를 포함한다.
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발명의 내용 및 요약서 섹션이 아닌, 구체적인 내용 섹션이, 청구범위를 해석하기 위해 사용되도록 의도됨을 인지하여야 한다. 발명의 내용 및 요약서는 본 발명자(들)에 의해 고려되는 본 개시내용의 하나 이상의, 그러나 모두는 아닌 예시적인 측면을 기재할 수 있고, 그에 따라, 이들은 어떠한 방식으로든 본 개시내용 및 첨부된 청구범위를 제한하도록 의도되지 않는다.
본 개시내용은 특정된 기능 및 이들의 관계의 실행을 나타내는 기능적 빌딩 블록의 보조 하에 상기에 기재되었다. 이들 기능적 빌딩 블록의 경계는 설명의 편의성을 위해 본원에서 임의적으로 정의되었다. 특정된 기능 및 이들의 관계가 적절히 수행되는 한 대안적 경계가 정의될 수 있다.
구체적 측면의 상기 설명은 본 개시내용의 일반적 성질을 매우 상세히 드러낼 것이며, 다른 것들은 관련 기술분야의 기술 내의 지식을 적용함으로써, 본 개시내용의 일반적 개념으로부터 벗어나지 않으면서, 과도한 실험 없이, 이러한 구체적 측면을 다양한 응용을 위해 쉽게 변형시키고/거나 적합화할 수 있다. 따라서, 이러한 적합화 및 변형은, 본원에 제공된 교시 및 지침을 기반으로 하여, 개시된 측면의 의미 및 등가물의 범위 내에 있는 것으로 의도된다. 본원에서 사용되는 어구 또는 용어는 설명을 위한 것이며 제한을 위한 것이 아니고, 그에 따라 본 명세서의 용어 또는 어구는 교시 및 지침에 비추어 통상의 기술자에 의해 해석되어야 함을 이해하여야 한다.
본 개시내용의 범주 및 범위는 상기에 기재된 예시적인 측면 중 임의의 것에 의해 제한되지 않아야 하며, 단지 하기 청구범위 및 그의 등가물에 따라 정의되어야 한다.
본 출원 전반에 걸쳐 인용될 수 있는 모든 인용된 참고문헌 (참고문헌, 특허, 특허 출원, 및 웹사이트 포함)의 내용은 그에 인용된 참고문헌과 같이 임의의 목적을 위해 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함된다.
실시예
실시예 1
PEG-FGF-21 제제 개발
초기 연구를 위해, PEG-FGF-21을 20 mM 트리스, 250 mM 수크로스 중 7.5 mg/mL (pH 8.3)로 제제화하였다. 이 제제에서 관찰된 높은 탈아미드화 속도는 약물 제품의 -20℃에서의 동결 저장을 필요로 하였다. 따라서, 약물 제품의 2-8℃에서의 저장을 가능하게 하는 즉시 사용가능한 (RTU) 제제를 개발하기 위해 추가의 작업을 수행하였다.
PEG-FGF-21 (서열식별번호: 2)은 도 6에 도시된 바와 같이 원위 메톡시 기를 포함하는 선형 30-kDa PEG 모이어티를 변이체 FGF-21 (서열식별번호: 1)에 부위-특이적 방식으로 부착시켜, 도 6에 도시된 분자 접합체 구조를 생성함으로써 제조되었으며, 여기서 파라-아세틸-페닐알라닌은 L 입체형태를 갖는다. 부위-특이적 PEG화를 달성하기 위해, 활성화된 PEG를 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 FGF-21 분자의 위치 109에서의 비-천연 아미노산, 파라-아세틸-L-페닐알라닌 (pAF)과 반응시켜 화학적으로 안정한 옥심-연결된 PEG-단백질 접합체를 형성하였다. 활성화된 PEG는 예를 들어 니폰 오일 앤드 패츠 캄파니, 리미티드 (Nippon Oil & Fats Co.,Ltd., 일본 도쿄)를 비롯한 다수의 공급원으로부터 상업적으로 입수가능하다.
보다 낮은 제제 pH는 분자의 응집 속도를 증가시키는 것으로 나타났지만, 보다 높은 제제 pH는 탈아미드화 속도를 증가시키는 것으로 나타났다. 10 mg/mL의 표적 단백질 농도에서, pH 7.0은 응집 속도와 탈아미드화 속도 사이에서 최선의 균형인 것으로 나타났다. 수크로스 농도 증가는 응집에 대항하여 분자를 추가로 안정화시키는 것으로 나타났다.
추가의 연구를 위해 선택된 제제는 20 mM L-히스티딘, 600 mM 수크로스 중 10 mg/mL PEG-FGF-21 (pH 7.0)이었다. 환자당 20 mg의 매주 용량을 고려하여, 사전-충전 시린지 중 보다 고농도 약물 제품이 개발되었다. 보다 고농도 약물 제품을 가능하게 하기 위해, 제제의 추가의 최적화가 필수적이었다.
보다 고농도 제제의 초기 개발은 3 mL I형 유리 바이알에서 수행하였다. 20 mM L-히스티딘, 600 mM 수크로스 중 15 mg/mL 및 22 mg/mL PEG-FGF-21 (pH 7.0)의 교반 시, 기포 포착이 관찰되었고, 용액이 점점 더 탁해졌다 (도 5, 좌측 이미지). 문제를 경감시키기 위한 시도로, 폴리소르베이트 80을 사용하였다. 폴리소르베이트 80은 기포 포착을 방지할 수 있었다 (도 5, 우측 이미지). 따라서, PEG-FGF-21의 고농도 제제에 폴리소르베이트 80을 0.05% (w/v)의 농도로 첨가하였다.
산화는 PEG-FGF-21의 중요한 품질 속성이고, C-말단 근처의 메티오닌-169의 산화는 수용체 결합 및 그에 따라 분자의 활성을 파괴한다. 금속 촉매된 산화는 단백질이 산화될 수 있는 메카니즘 중 하나이다. 세포 배양으로부터의 잔재, 스테인레스강 용기와의 접촉, 부형제 중의 불순물, 사전-충전가능 시린지의 형성 공정 등으로 인해 단백질 제제 중에 미량 농도의 금속이 존재할 수 있다.
PEG-FGF-21이 금속 촉매된 산화에 대해 감수성인지의 여부를 시험하기 위해, 0.05 mM 펜테트산 (디에틸렌트리아민펜타아세트산, DTPA)의 존재 또는 부재 하에 금속 칵테일 (250 ppm Fe, 10 ppm Cu, 15 ppm Cr, 15 ppm Ni, 10 ppm Mo)이 첨가된 샘플 및 첨가되지 않은 샘플을 각각 25℃에서 1개월 및 40℃에서 2주 동안 인큐베이션하고, 메티오닌 1 및 메티오닌 169의 산화 수준을 트립신 펩티드 맵핑에 의해 결정하였다 (도 2a 및 2b).
펜테트산 (DTPA)의 부재 하에, 두 메티오닌 잔기 모두의 상당한 산화가 금속이 첨가되지 않은 샘플에서도 관찰되었으며, 금속 칵테일로 스파이킹된 샘플에서는 산화 수준이 훨씬 더 높았다. 50 μM 펜테트산을 갖는 샘플에서는, 각각의 메티오닌에 대하여 산화 수준 증가가 관찰되지 않았다. 이는 PEG-FGF-21이 금속 촉매된 산화에 대해 감수성이고 이미 미량 수준의 금속이 제제 중에 존재함을 시시한다. 펜테트산은 제제 중에 존재하는 금속뿐만 아니라 제제 중으로 스파이킹된 추가의 금속을 효과적으로 킬레이팅하고, 메티오닌 1 및 169의 금속 촉매된 산화를 방지하였다. 따라서, PEG-FGF-21의 고농도 제제에 50 μM 펜테트산을 첨가하였다.
보다 고농도 제제에 대하여 pH를 최적화하기 위해, 본 발명자들은 pH 6.3 내지 8.5에서 수집된 PEG-FGF-21의 응집 데이터를 검토하였으며, 이는 응집 속도가 pH 6.8 미만에서 급속히 증가하였음을 보여준다 (도 3a 및 3b). 따라서, 본 발명자들은 고농도 제제에 대한 표적 pH를 pH 7.0 내지 pH 7.1로 증가시켰다.
새로운 고농도 제제를 이전 제제와 비교하기 위해, 20 mM L-히스티딘, 600 mM 수크로스, 0.05 mM 펜테트산, 0.05% (w/v) 폴리소르베이트 80 중 20 mg/mL의 PEG-FGF-21 (pH 7.0) (pH 최적화 이전)을 안정성에 배치하고, 20 mM L-히스티딘, 600 mM 수크로스 중 22.5 mg/mL의 PEG-FGF-21 (pH 7.0)과 비교하였다.
도 4a 및 4b, 도 1a 및 1b에 제시된 바와 같이, PEG-FGF-21 제제에 대한 폴리소르베이트 80 및 펜테트산의 첨가는 모든 온도에서 보다 낮은 응집 속도 및 40℃에서 보다 적은 탈아미드화를 제공하였다.
시험 방법
응집: 상업적으로 입수가능한 분석용 컬럼 (토소(Tosoh) TSK 겔 G3000SWXL, 7.8 x 300 mm, P/N: 08541)이 장착된 상업적으로 입수가능한 시스템 (예를 들어, PDA 검출기를 갖는 에질런트 테크놀로지스(Agilent Technologies) 1100 시리즈 HPLC 시스템 또는 PDA 검출기를 갖는 워터스 알리언스(Waters Alliance) e2695 시리즈 HPLC) 상의 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 응집을 시험하였다. 0.8 ml/min의 유량으로 95% 포스페이트 완충 염수 (PBS) 및 5% 에탄올의 이동 상을 사용하여 단백질 단량체로부터 고분자량 종을 분리하였다. 샘플을 PBS로 0.5 mg/mL의 단백질 농도로 희석하고, 0.01 mg (0.02 mL)을 각각의 실험에 주입하였다. 기기 소프트웨어를 사용하여 고분자량 피크의 면적을 모든 관찰된 피크의 총 면적으로 나누어 응집물의 양을 결정하였다.
탈아미드화: 상업적으로 입수가능한 분석용 컬럼 (애질런트 바이오 왁스(Agilent Bio WAX), 비-다공성, 5 μm 컬럼, 4.6 x 250 mm, P/N: 5190-2487)이 장착된 상업적으로 입수가능한 시스템 (예를 들어, PDA 검출기를 갖는 에질런트 테크놀로지스 1100 시리즈 HPLC 시스템 또는 PDA 검출기를 갖는 워터스 알리언스 e2695 시리즈 HPLC) 상의 음이온 교환 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 탈아미드화를 시험하였다. 이동 상 A는 20 mM 트리스, pH 8.2로 이루어졌고, 이동 상 B는 20 mM 트리스, 500 mM 염화나트륨, pH 8.2로 이루어졌다. 1.0 ml/min의 유량으로 20분에 걸쳐 2% B로부터 67% B까지의 선형 구배를 사용하여 하전된 단백질 변형물을 분리하였다. 샘플을 이동 상 A로 1 mg/mL의 단백질 농도로 희석하고, 0.075 mg (0.075 mL)을 각각의 실험에 주입하였다. 기기 소프트웨어를 사용하여 산성 변형물 피크의 면적을 모든 관찰된 피크의 총 면적으로 나누어 탈아미드화의 양을 결정하였다.
산화: 트립신 펩티드 맵핑에 의해 산화를 시험하였다. 단백질 샘플을 트립신으로 소화시킨 후, 생성된 펩티드를, 상업적으로 입수가능한 분석용 컬럼 (워터스 액퀴티(Waters Acquity) C18 BEH 펩티드 RP UPLC 컬럼, 2.1 x 150 mm, 1.7-μm 입자 크기, 130-Å 기공 크기 P/N: 186003556)이 장착된 상업적으로 입수가능한 시스템 (예를 들어, 워터스 액퀴티 UPLC) 상의 역상 초-고성능 액체 크로마토그래피에 의해 분리하였다. 이동 상 A는 물 중 0.2% 트리플루오로아세트산 (TFA)으로 이루어졌고, 이동 상 B는 아세토니트릴 중 0.2% TFA로 이루어졌다. 0.3 ml/min의 유량으로 60℃의 온도에서 27분에 걸쳐 10% B로부터 40% B까지의 복합 구배를 사용하여 트립신 펩티드를 분리하였다. 기기 소프트웨어를 사용하여 산화된 펩티드 피크의 면적을 산화된 및 상응하는 비-산화된 피크의 총 면적으로 나누어 산화의 양을 결정하였다.
미립자 형성 및 기포 형성: 시각적 관찰.
PEG-FGF-21의 농도: 본원에 개시된 제약 제제 중 PEG-FGF-21의 농도는 슬로프 분광분석법, 예를 들어 0.87 (mL/(mg*cm))의 흡광 계수를 사용하여 280 nm에서 SoloVPE 피브레트 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OF0002-P50) (SoloVPE 일회용 UV 플라스틱 용기 (씨 테크놀로지스, 인크.; P/N OC0009-1))가 장착된 애질런트 캐리 60 UV-Vis 분광광도계에 의해 측정하였다. 본 개시내용 전반에 걸친 PEG-FGF-21 용량은 이러한 방식으로 측정된 제약 제제를 기준으로 한다. 슬로프 분광분석법은 또한 PEG-FGF-21 뿐만 아니라 일반적으로 임의의 FGF-21 접합체에도 적용가능하다.
pH의 결정: pH는 표준 방법 (USP<791>)에 따라 결정하였다.
부형제의 농도: 본원에 개시된 제약 제제 중의 개개의 부형제 (예를 들어, DTPA, PS80, 히스티딘, 수크로스)의 농도를 완성된 제약 제제의 최종 부피 단위당 그의 제조 과정에서 제약 제제에 첨가된 개개의 부형제의 양 (중량, 몰 등)인 것으로 결정/계산하였다. 대안적으로, 부형제의 농도는 제약 제제 중의 개개의 부형제의 실제 양을 기준으로 할 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY <120> FGF-21 CONJUGATE FORMULATIONS <130> 3338.208PC03/ELE/C-K <150> US 62/958,580 <151> 2020-01-08 <160> 6 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 182 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Q109 modified FGF-21 <220> <221> misc_feature <222> (109)..(109) <223> Wild-type Q109 replaced with para-acetyl-L-phenylalanine <400> 1 Met His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln 1 5 10 15 Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala 20 25 30 His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln 35 40 45 Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile 50 55 60 Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp 65 70 75 80 Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe 85 90 95 Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Xaa Ser Glu Ala 100 105 110 His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asn Lys Ser Pro His Arg Asp 115 120 125 Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro 130 135 140 Pro Ala Pro Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp 145 150 155 160 Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Met Val Gly Pro Ser Gln Gly Arg 165 170 175 Ser Pro Ser Tyr Ala Ser 180 <210> 2 <211> 182 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PEGylated Q109pAF FGF-21 <220> <221> misc_feature <222> (109)..(109) <223> poly(ethylene glycol) via oxime linkage <400> 2 Met His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln 1 5 10 15 Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala 20 25 30 His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln 35 40 45 Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile 50 55 60 Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp 65 70 75 80 Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe 85 90 95 Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Xaa Ser Glu Ala 100 105 110 His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asn Lys Ser Pro His Arg Asp 115 120 125 Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro 130 135 140 Pro Ala Pro Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp 145 150 155 160 Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Met Val Gly Pro Ser Gln Gly Arg 165 170 175 Ser Pro Ser Tyr Ala Ser 180 <210> 3 <211> 182 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FGF-21 wild type sequence <400> 3 Met His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln 1 5 10 15 Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala 20 25 30 His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln 35 40 45 Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile 50 55 60 Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp 65 70 75 80 Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe 85 90 95 Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala 100 105 110 His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asn Lys Ser Pro His Arg Asp 115 120 125 Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro 130 135 140 Pro Ala Pro Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp 145 150 155 160 Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Met Val Gly Pro Ser Gln Gly Arg 165 170 175 Ser Pro Ser Tyr Ala Ser 180 <210> 4 <211> 182 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PEGylated Q109pAF FGF-21 with 681 unit PEG (PEG681) <220> <221> misc_feature <222> (109)..(109) <223> wherein ON- is the oxime linkage <400> 4 Met His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln 1 5 10 15 Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala 20 25 30 His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln 35 40 45 Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile 50 55 60 Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp 65 70 75 80 Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe 85 90 95 Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Xaa Ser Glu Ala 100 105 110 His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asn Lys Ser Pro His Arg Asp 115 120 125 Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro 130 135 140 Pro Ala Pro Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp 145 150 155 160 Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Met Val Gly Pro Ser Gln Gly Arg 165 170 175 Ser Pro Ser Tyr Ala Ser 180 <210> 5 <211> 181 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> without Met Q109pAF FGF-21 PEGylated <220> <221> misc_feature <222> (108)..(108) <223> wherein Xaa is linked to a 28-32 kDa PEG <400> 5 His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val 1 5 10 15 Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His 20 25 30 Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser 35 40 45 Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln 50 55 60 Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly 65 70 75 80 Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg 85 90 95 Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Xaa Ser Glu Ala His 100 105 110 Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asn Lys Ser Pro His Arg Asp Pro 115 120 125 Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro 130 135 140 Ala Pro Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val 145 150 155 160 Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Met Val Gly Pro Ser Gln Gly Arg Ser 165 170 175 Pro Ser Tyr Ala Ser 180 <210> 6 <211> 181 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> without Met Q109pAF FGF-21 PEGYLATED PEG=PEG681 <220> <221> Misc_feature <222> (108)..(108) <223> wherein Xaa is linked to PEG681 (linear PEG comprising 681 ethylene glycol units) via an oxime linkage, e.g., formed by reaction between the acetyl group of pAF and the aminooxy group of the 30kDa methyl PEG681 aminooxy molecule <400> 6 His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val 1 5 10 15 Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His 20 25 30 Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser 35 40 45 Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln 50 55 60 Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly 65 70 75 80 Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg 85 90 95 Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Xaa Ser Glu Ala His 100 105 110 Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asn Lys Ser Pro His Arg Asp Pro 115 120 125 Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro 130 135 140 Ala Pro Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val 145 150 155 160 Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Met Val Gly Pro Ser Gln Gly Arg Ser 165 170 175 Pro Ser Tyr Ala Ser 180

Claims (111)

  1. (i) 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 모이어티에 접합된 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21) 폴리펩티드 ("FGF-21 접합체") 및 (ii) 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제를 포함하는 제약 제제이며, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제를 함유하지 않는 참조 제제와 비교하여 개선된 안정성을 갖고, 여기서 FGF-21 접합체는 하기 화학식 (I):
    Figure pct00018

    (여기서 n은 임의의 정수임)
    을 포함하는 것인 제약 제제.
  2. 제1항에 있어서, PEG 모이어티가 FGF-21 폴리펩티드 내의 비-천연 아미노산에 접합되는 것인 제약 제제.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, FGF-21 폴리펩티드 내의 비-천연 아미노산이 페닐알라닌 유도체인 제약 제제.
  4. 제3항에 있어서, 페닐알라닌 유도체가 파라-아세틸-L-페닐알라닌인 제약 제제.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, FGF-21 폴리펩티드가 서열식별번호: 3의 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 상기 폴리펩티드는 FGF-21 활성을 갖는 것인 제약 제제.
  6. 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 비-천연 아미노산이 서열식별번호: 3에 상응하는 아미노산 잔기 109에 존재하는 것인 제약 제제.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, FGF-21 폴리펩티드가 서열식별번호: 1에 기재된 서열을 포함하는 것인 제약 제제.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, FGF-21 접합체가 서열식별번호: 2의 화합물에 상응하는 것인 제약 제제.
  9. 제1항 또는 제8항에 있어서, n이 약 500 내지 약 900개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 600 내지 약 800개의 에틸렌 글리콜 단위, 약 650 내지 약 750개의 에틸렌 글리콜 단위, 또는 약 670 내지 약 690개의 글리콜 단위인 제약 제제.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, n이 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681인 제약 제제.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, FGF-21 접합체가 서열식별번호: 4의 화합물에 상응하는 것인 제약 제제.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, FGF-21 접합체가 L 입체형태인 제약 제제.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, FGF-21 접합체가 약 1 mg/ml 내지 약 40 mg/ml의 농도로 존재하는 것인 제약 제제.
  14. 제13항에 있어서, FGF-21 접합체가 약 10 mg/ml 또는 약 20 mg/ml의 농도로 존재하는 것인 제약 제제.
  15. 제14항에 있어서, FGF-21 접합체가 약 20 mg/ml의 농도로 존재하는 것인 제약 제제.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, FGF-21 접합체가 단위 용량당 약 1 mg 내지 약 40 mg의 양으로 존재하는 것인 제약 제제.
  17. 제16항에 있어서, FGF-21 접합체가 단위 용량당 약 1 mg, 단위 용량당 약 5 mg, 단위 용량당 약 10 mg, 단위 용량당 약 20 mg, 또는 단위 용량당 약 40 mg의 양으로 존재하는 것인 제약 제제.
  18. 제16항에 있어서, FGF-21 접합체가 단위 용량당 약 10 mg 또는 약 20 mg의 양으로 존재하는 것인 제약 제제.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 40℃에서 약 1개월 동안 저장 시 참조 제제와 비교하여 보다 낮은 폴리펩티드 탈아미드화 속도;
    (b) 40℃에서 약 1개월 동안 저장 시 참조 제제와 비교하여 보다 낮은 고분자량 (HMW) 폴리펩티드 응집 속도; 또는
    (c) (a) 및 (b) 둘 다
    중 하나 이상을 나타내는 제약 제제.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제가 하나 이상의 메티오닌의 산화를 방지하거나 완화시키는 것인 제약 제제.
  21. 제20항에 있어서, 메티오닌이 FGF-21 폴리펩티드의 Met1 및/또는 Met169에 상응하는 것인 제약 제제.
  22. 제20항 또는 제21항에 있어서, 25℃ 및/또는 40℃에서 메티오닌 산화가 방지되거나 완화되는 것인 제약 제제.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제가 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DTPA)인 제약 제제.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, DTPA 양이온 킬레이트화제가 약 10 μM 내지 약 100 μM DTPA, 약 20 μM 내지 약 90 μM DTPA, 약 30 μM 내지 약 80 μM DTPA, 약 25 μM 내지 약 75 μM DTPA, 또는 약 40 μM 내지 약 60 μM DTPA, 또는 약 30 μM 내지 약 70 μM DTPA, 또는 약 40 μM 내지 약 70 μM DTPA의 양으로 존재하는 것인 제약 제제.
  25. 제23항 또는 제24항에 있어서, DTPA 양이온 킬레이트화제가 약 40 μM, 약 45 μM, 약 50 μM, 약 55 μM 또는 약 60 μM DTPA의 양으로 존재하는 것인 제약 제제.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, pH가 6.5 초과, 6.6 초과, 6.7 초과, 6.8 초과, 6.9 초과, 7.0 초과, 7.1 초과, 7.2 초과, 7.3 초과, 7.4 초과 또는 7.5 초과인 제약 제제.
  27. 제26항에 있어서, pH가 약 6.7 내지 약 7.5, 약 6.8 내지 약 7.5, 약 6.9 내지 약 7.4, 약 7.0 내지 약 7.3, 약 7.1 내지 7.2, 약 7.1 내지 약 7.3, 약 7.1 내지 약 7.4, 또는 약 7.1 내지 약 7.5인 제약 제제.
  28. 제27항에 있어서, pH가 약 6.7, 약 6.8, 약 6.9, 약 7.0, 약 7.1, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4 또는 약 7.5인 제약 제제.
  29. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, pH 6.5인 참조 제제보다 더 안정한 제약 제제.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 계면활성제를 추가로 포함하는 제약 제제.
  31. 제30항에 있어서, 계면활성제가 비이온성 계면활성제인 제약 제제.
  32. 제31항에 있어서, 비이온성 계면활성제가 폴리소르베이트인 제약 제제.
  33. 제32항에 있어서, 폴리소르베이트가 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트 (폴리소르베이트 80)인 제약 제제.
  34. 제33항에 있어서, 폴리소르베이트 80 계면활성제가 약 0.01% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.02% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.03% 내지 약 0.08% (w/v), 약 0.04% 내지 약 0.07% (w/v), 또는 약 0.05% 내지 약 0.06% (w/v)의 양으로 존재하는 것인 제약 제제.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 폴리소르베이트 80 계면활성제가 적어도 약 0.01% (w/v), 적어도 약 0.02% (w/v), 적어도 약 0.03% (w/v), 적어도 약 0.04% (w/v), 적어도 약 0.05% (w/v), 적어도 약 0.06% (w/v), 적어도 약 0.07% (w/v), 적어도 약 0.08% (w/v), 적어도 약 0.09% (w/v) 또는 적어도 약 0.1% (w/v)의 양으로 존재하는 것인 제약 제제.
  36. 제30항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 진탕기 상에서 교반될 때 계면활성제가 미립자 및/또는 기포 형성을 완화시키는 것인 제약 제제.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 완충제를 추가로 포함하는 제약 제제.
  38. 제37항에 있어서, 아미노산 완충제가 히스티딘인 제약 제제.
  39. 제38항에 있어서, 히스티딘 완충제가 약 10 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 20 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 30 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 40 mM 내지 약 70 mM 히스티딘, 약 10 mM 내지 약 30 mM 히스티딘, 약 15 mM 내지 약 25 mM 히스티딘, 약 17.5 내지 약 22.5 히스티딘, 또는 약 40 mM 내지 약 60 mM 히스티딘의 양으로 존재하는 것인 제약 제제.
  40. 제38항 또는 제39항에 있어서, 히스티딘 완충제가 약 10 mM 히스티딘, 약 15 mM 히스티딘, 약 20 mM 히스티딘, 약 25 mM 히스티딘, 약 30 mM 히스티딘, 약 35 mM 히스티딘, 약 40 mM 히스티딘, 약 45 mM 히스티딘 또는 약 50 mM 히스티딘의 양으로 존재하는 것인 제약 제제.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 삼투 조절제를 추가로 포함하는 제약 제제.
  42. 제41항에 있어서, 삼투 조절제가 당을 포함하는 것인 제약 제제.
  43. 제42항에 있어서, 당이 수크로스인 제약 제제.
  44. 제43항에 있어서, 수크로스 삼투 조절제가 약 100 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 200 mM 내지 약 900 mM, 약 300 mM 내지 약 800 mM, 약 400 mM 내지 약 700 mM, 또는 약 500 mM 내지 약 600 mM의 양으로 존재하는 것인 제약 제제.
  45. 제43항 또는 제44항에 있어서, 수크로스 삼투 조절제가 약 100 mM 수크로스, 약 200 mM 수크로스, 약 300 mM 수크로스, 약 400 mM 수크로스, 약 500 mM 수크로스, 약 600 mM 수크로스, 약 700 mM 수크로스, 약 800 mM 수크로스, 약 900 mM 수크로스 또는 약 1M 수크로스의 양으로 존재하는 것인 제약 제제.
  46. 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 피하 투여를 위해 제제화된 제약 제제.
  47. 제46항에 있어서, 안전 시린지를 사용한 피하 투여를 위해 제제화된 제약 제제.
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 매일 또는 매주 투여를 위해 제제화된 제약 제제.
  49. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 수성 제제인 제약 제제.
  50. 하기를 포함하고:
    (i) FGF-21 접합체;
    (ii) 약 10 mM 내지 약 50 mM 농도의 히스티딘;
    (iii) 약 100 mM 내지 약 1 M 농도의 수크로스;
    (iv) 약 0.01% 내지 약 0.1% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
    (v) 약 10 μM 내지 약 100 μM 농도의 DTPA;
    제제의 pH가 약 6.7 내지 약 7.5이고,
    FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
    Figure pct00019

    (여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
    을 포함하는 것인 제약 제제.
  51. 하기를 포함하고:
    (i) FGF-21 접합체;
    (ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘;
    (iii) 약 600 mM 농도의 수크로스;
    (iv) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
    (v) 약 50 μM 농도의 DTPA;
    pH가 약 7.1이고,
    FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
    Figure pct00020

    (여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
    을 포함하는 것인 제약 제제.
  52. 하기를 포함하고:
    (i) FGF-21 접합체;
    (ii) 20 mM 농도의 히스티딘;
    (iii) 600 mM 농도의 수크로스;
    (iv) 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
    (v) 50 μM 농도의 DTPA
    pH가 7.1이고,
    FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
    Figure pct00021

    (여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
    을 포함하는 것인 제약 제제.
  53. 하기를 포함하고:
    (i) FGF-21 접합체;
    (ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘; 및
    (iii) 약 600 mM 농도의 수크로스;
    pH가 약 7.0이고,
    FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
    Figure pct00022

    (여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
    을 포함하는 것인 제약 제제.
  54. 하기를 포함하고:
    (i) FGF-21 접합체;
    (ii) 20 mM 농도의 히스티딘; 및
    (iii) 600 mM 농도의 수크로스;
    pH가 7.0이고,
    FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
    Figure pct00023

    (여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
    을 포함하는 것인 제약 제제.
  55. 하기를 포함하고:
    (i) 약 10 mg/mL 농도의 FGF-21 접합체;
    (ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘;
    (iii) 약 600 mM 농도의 수크로스;
    (iv) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
    (v) 약 50 uM 농도의 DTPA;
    pH가 약 7.1이고,
    FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
    Figure pct00024

    (여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
    을 포함하는 것인 제약 제제.
  56. 하기를 포함하고:
    (i) 약 20 mg/mL 농도의 FGF-21 접합체;
    (ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘;
    (iii) 약 600 mM 농도의 수크로스;
    (iv) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
    (v) 약 50 uM 농도의 DTPA;
    pH가 약 7.1이고,
    FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
    Figure pct00025

    (여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
    을 포함하는 것인 제약 제제.
  57. 하기를 포함하고:
    (i) 10 mg/mL 농도의 FGF-21 접합체;
    (ii) 20 mM 농도의 히스티딘;
    (iii) 600 mM 농도의 수크로스;
    (iv) 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
    (v) 50 uM 농도의 DTPA;
    pH가 7.0이고,
    FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
    Figure pct00026

    (여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
    을 포함하는 것인 제약 제제.
  58. 하기를 포함하고:
    (i) 20 mg/mL 농도의 서열식별번호: 2 또는 4의 PEG-FGF21;
    (ii) 20 mM 농도의 히스티딘;
    (iii) 600 mM 농도의 수크로스;
    (iv) 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
    (v) 50 uM 농도의 DTPA;
    pH가 7.0이고,
    FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
    Figure pct00027

    (여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
    을 포함하는 것인 제약 제제.
  59. 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제를 혼합하는 것을 포함하는, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 모이어티에 접합된 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21) 폴리펩티드 ("FGF-21 접합체")를 포함하는 제약 제제의 안정성을 개선시키는 방법이며, 여기서 제제는 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제를 함유하지 않는 참조 제제와 비교하여 개선된 안정성을 갖고,
    FGF-21 접합체는 하기 화학식 (I):
    Figure pct00028

    (여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
    을 포함하는 것인 방법.
  60. 제59항에 있어서, PEG 모이어티가 FGF-21 폴리펩티드 내의 비-천연 아미노산에 접합되는 것인 방법.
  61. 제60항에 있어서, FGF-21 폴리펩티드 내의 비-천연 아미노산이 파라-아세틸-L-페닐알라닌인 방법.
  62. 제59항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, FGF-21 폴리펩티드가 서열식별번호: 1의 FGF-21 폴리펩티드인 방법.
  63. 제59항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, FGF-21 접합체가 L 입체형태인 방법.
  64. 제59항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 안정성의 개선이 (i) 폴리펩티드 물리적 안정성의 증가, (ii) 폴리펩티드 화학적 안정성의 증가, 또는 (iii) (i) 및 (ii) 둘 다를 포함하는 것인 방법.
  65. 제64항에 있어서, 물리적 안정성의 증가가 (i) 폴리펩티드 응집의 방지 또는 감소, (ii) 폴리펩티드 단편화의 방지 또는 감소, 또는 (iii) (i) 및 (ii) 둘 다를 포함하는 것인 방법.
  66. 제65항에 있어서, 화학적 안정성의 증가가 (i) 폴리펩티드 탈아미드화의 방지 또는 감소, (ii) 폴리펩티드 산화의 방지 또는 감소, 또는 (iii) (i) 및 (ii) 둘 다를 포함하는 것인 방법.
  67. 제59항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 안정성의 개선이
    (a) 40℃에서 약 1개월 동안 저장 시 참조 제제와 비교하여 보다 낮은 폴리펩티드 탈아미드화 속도;
    (b) 40℃에서 약 1개월 동안 저장 시 참조 제제와 비교하여 보다 낮은 고분자량 (HMW) 폴리펩티드 응집 속도; 또는
    (c) (a) 및 (b) 둘 다
    중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
  68. 제59항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 안정성의 개선이 하나 이상의 메티오닌의 산화를 방지하거나 완화시키는 것을 포함하는 것인 방법.
  69. 제68항에 있어서, 메티오닌이 FGF-21 폴리펩티드의 Met1 및/또는 Met169에 상응하는 것인 방법.
  70. 제68항 또는 제69항에 있어서, 25℃ 및/또는 40℃에서 메티오닌 산화가 방지되거나 완화되는 것인 방법.
  71. 제59항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노폴리카르복실산 양이온 킬레이트화제가 DTPA인 방법.
  72. 제71항에 있어서, DTPA 양이온 킬레이트화제가 약 10 μM 내지 약 100 μM DTPA, 약 20 μM 내지 약 90 μM DTPA, 약 25 μM 내지 약 75 μM DTPA, 약 40 μM 내지 약 60 μM DTPA, 약 30 μM 내지 약 70 μM DTPA, 약 30 μM 내지 약 80 μM DTPA, 또는 약 40 μM 내지 약 70 μM의 양으로 존재하는 것인 방법.
  73. 제71항 또는 제72항에 있어서, DTPA 양이온 킬레이트화제가 약 40 μM, 약 45 μM, 약 50 μM, 약 55 μM 또는 약 60 μM DTPA의 양으로 존재하는 것인 방법.
  74. 제59항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, pH를 6.5 초과, 6.6 초과, 6.7 초과, 6.8 초과, 6.9 초과, 또는 7.0 초과로 조정하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  75. 제74항에 있어서, pH가 약 6.8 내지 약 7.5, 또는 약 6.9 내지 약 7.4, 또는 약 7.0 내지 약 7.3, 또는 약 7.1 내지 7.2, 또는 약 7.1 내지 약 7.3, 또는 약 7.1 내지 약 7.4, 또는 약 7.1 내지 약 7.5로 조정되는 것인 방법.
  76. 제75항에 있어서, 조정된 pH가 약 6.8, 약 6.9, 약 7.0, 약 7.1, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4 또는 약 7.5인 방법.
  77. 제74항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 제제가 pH 6.5인 참조 제제보다 더 안정한 것인 방법.
  78. 제59항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 계면활성제를 혼합하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  79. 제78항에 있어서, 계면활성제가 비이온성 계면활성제인 방법.
  80. 제79항에 있어서, 비이온성 계면활성제가 폴리소르베이트인 방법.
  81. 제80항에 있어서, 폴리소르베이트가 폴리소르베이트 80인 방법.
  82. 제81항에 있어서, 폴리소르베이트 80 계면활성제가 약 0.01% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.02% 내지 약 0.09% (w/v), 약 0.03% 내지 약 0.08% (w/v), 약 0.04% 내지 약 0.07% (w/v), 또는 약 0.05% 내지 약 0.06% (w/v)의 양으로 혼합되는 것인 방법.
  83. 제81항 또는 제82항에 있어서, 폴리소르베이트 80 계면활성제가 적어도 약 0.01% (w/v), 적어도 약 0.02% (w/v), 적어도 약 0.03% (w/v), 적어도 약 0.04% (w/v), 적어도 약 0.05% (w/v), 적어도 약 0.06% (w/v), 적어도 약 0.07% (w/v), 적어도 약 0.08% (w/v), 적어도 약 0.09% (w/v) 또는 적어도 약 0.1% (w/v)의 양으로 혼합되는 것인 방법.
  84. 제79항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 진탕기 상에서 교반될 때 계면활성제가 미립자 형성 및/또는 기포 형성을 완화시키는 것인 방법.
  85. 제59항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 완충제를 혼합하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  86. 제85항에 있어서, 아미노산 완충제가 히스티딘인 방법.
  87. 제86항에 있어서, 히스티딘 완충제가 약 10 mM 내지 약 100 mM 히스티딘, 약 20 mM 내지 약 90 mM 히스티딘, 약 30 mM 내지 약 80 mM 히스티딘, 약 40 mM 내지 약 70 mM 히스티딘, 약 10 mM 내지 약 30 mM 히스티딘, 약 15 mM 내지 약 25 mM 히스티딘, 약 17.5 mM 내지 약 22.5 mM 히스티딘, 또는 약 40 mM 내지 약 60 mM 히스티딘의 양으로 혼합되는 것인 방법.
  88. 제86항 또는 제87항에 있어서, 히스티딘 완충제가 약 10 mM 히스티딘, 약 15 mM 히스티딘, 약 20 mM 히스티딘, 약 25 mM 히스티딘, 약 30 mM 히스티딘, 약 35 mM 히스티딘, 약 40 mM 히스티딘, 약 45 mM 히스티딘 또는 약 50 mM 히스티딘의 양으로 혼합되는 것인 방법.
  89. 제59항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 삼투 조절제를 혼합하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  90. 제89항에 있어서, 삼투 조절제가 당을 포함하는 것인 방법.
  91. 제90항에 있어서, 당이 수크로스인 방법.
  92. 제91항에 있어서, 수크로스 삼투 조절제가 약 100 mM 내지 약 1 M 수크로스, 약 200 mM 내지 약 900 mM 수크로스, 약 300 mM 내지 약 800 mM 수크로스, 약 400 mM 내지 약 700 mM 수크로스, 또는 약 500 mM 내지 약 600 mM 수크로스의 양으로 혼합되는 것인 방법.
  93. 제91항 또는 제92항에 있어서, 수크로스 삼투 조절제가 약 100 mM 수크로스, 약 200 mM 수크로스, 약 300 mM 수크로스, 약 400 mM 수크로스, 약 500 mM 수크로스, 약 600 mM 수크로스, 약 700 mM 수크로스, 약 800 mM 수크로스, 약 900 mM 수크로스 또는 약 1M 수크로스의 양으로 혼합되는 것인 방법.
  94. 제59항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 제제가 수성 제제인 방법.
  95. 제59항 내지 제94항 중 어느 한 항의 방법에 따라 제조된 제약 제제.
  96. 하기를 포함하고:
    (i) FGF-21 접합체;
    (ii) 약 10 mM 내지 약 50 mM 농도의 히스티딘;
    (iii) 약 100 mM 내지 약 1 M 농도의 수크로스;
    (iv) 약 0.01% 내지 약 0.1% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
    (v) 약 10 μM 내지 약 100 μM 농도의 DTPA;
    제제의 pH가 약 6.7 내지 약 7.5이고,
    FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
    Figure pct00029

    (여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
    을 포함하는 것인 바이알.
  97. 하기를 포함하고:
    (i) 약 5 mg 내지 약 20 mg의 FGF-21 접합체;
    (ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘; 및
    (iii) 약 600 mM 농도의 수크로스;
    pH가 약 7.0이고,
    FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
    Figure pct00030

    (여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
    을 포함하는 것인 바이알.
  98. 하기를 포함하고:
    (i) 약 10 mg 내지 약 20 mg의 FGF-21 접합체;
    (ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘;
    (iii) 약 600 mM 농도의 수크로스;
    (iv) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
    (v) 약 50 uM 농도의 DTPA;
    pH가 약 7.1이고,
    FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
    Figure pct00031

    (여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
    을 포함하는 것인 바이알.
  99. 하기를 포함하고:
    (i) 약 10 mg의 FGF-21 접합체;
    (ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘;
    (iii) 약 600 mM 농도의 수크로스;
    (iv) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
    (v) 약 50 uM 농도의 DTPA;
    pH가 약 7.1이고,
    FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
    Figure pct00032

    (여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
    을 포함하는 것인 바이알.
  100. 하기를 포함하고:
    (i) 약 20 mg의 FGF-21 접합체;
    (ii) 약 20 mM 농도의 히스티딘;
    (iii) 약 600 mM 농도의 수크로스;
    (iv) 약 0.05% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80; 및
    (v) 약 50 uM 농도의 DTPA;
    pH가 약 7.1이고,
    FGF-21 접합체가 하기 화학식 (I):
    Figure pct00033

    (여기서 n은 약 670 내지 약 690, 예를 들어 약 681이고, FGF-21 폴리펩티드는 서열식별번호: 1을 포함함)
    을 포함하는 것인 바이알.
  101. (i) 제1항 내지 제58항 및 제95항 중 어느 한 항의 제약 제제 또는 제96항 내지 제100항 중 어느 한 항의 바이알, 및 (ii) 사용 지침서를 포함하는 키트 또는 제조 물품.
  102. 섬유증 및/또는 당뇨병과 연관된 질환 또는 상태의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제58항 및 제95항 중 어느 한 항의 제약 제제, 제96항 내지 제100항 중 어느 한 항의 바이알 및 제101항의 키트를 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 섬유증 및/또는 당뇨병과 연관된 질환 또는 상태를 치료 또는 예방하는 방법.
  103. 제102항에 있어서, 질환 또는 상태가 당뇨병인 방법.
  104. 제103항에 있어서, 당뇨병이 제2형 당뇨병인 방법.
  105. 제102항에 있어서, 질환 또는 상태가 비알콜성 지방간염 (NASH)인 방법.
  106. 제102항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 유효량의 제약 제제를 투여하는 것이 간 경직도를 감소시키거나, 체지방률을 감소시키거나, 체중을 감소시키거나, 간 중량-대-체중 비를 감소시키거나, 간 지질 함량을 감소시키거나, 간 섬유증 면적을 감소시키거나, 공복 혈액 글루코스 수준을 감소시키거나, 공복 트리글리세리드 수준을 감소시키거나, LDL 콜레스테롤 수준을 감소시키거나, ApoB 수준을 감소시키거나, ApoC 수준을 감소시키거나, HDL 콜레스테롤을 증가시키거나, 또는 그의 임의의 조합을 유발하는 것인 방법.
  107. 제102항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, FGF-21 접합체가 약 20 mg의 균일 용량으로 투여되는 것인 방법.
  108. 제107항에 있어서, FGF-21 접합체가 1주의 투여 간격으로 투여되는 것인 방법.
  109. 제102항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 제약 제제가 피하로 투여되는 것인 방법.
  110. 제109항에 있어서, 제약 제제가 안전 시린지를 사용하여 피하로 투여되는 것인 방법.
  111. 제102항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에 대한 제약 제제의 투여가 비치료 대상체 또는 제약 제제의 투여 전의 대상체에서의 수준과 비교하여
    (i) 간 지방 수준의 감소;
    (ii) 간 손상 수준의 감소;
    (iii) 섬유증 수준의 감소;
    (iv) 섬유증 바이오마커 혈청 Pro-C3 (N-말단 유형 III 콜라겐 프로펩티드) 수준의 감소;
    (v) 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT) 수준의 감소;
    (vi) 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST) 수준의 감소,
    (vii) 혈청 아디포넥틴 수준의 증가;
    (viii) 혈장 LDL 수준의 감소;
    (ix) 혈장 HDL 수준의 증가;
    (x) 혈장 트리글리세리드의 수준의 감소;
    (xi) 간 경직도 수준의 감소; 또는
    (xii) 그의 임의의 조합
    을 유발하는 것인 방법.
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