CN115279341A

CN115279341A - 胰高血糖素类似物的液体制剂

Info

Publication number: CN115279341A
Application number: CN202180021174.4A
Authority: CN
Inventors: 杰斯珀·斯科博格·维拉德森; 蒂内·伊丽莎白·戈特沙尔克博芬
Original assignee: Zealand Pharma AS
Current assignee: Zealand Pharma AS
Priority date: 2020-03-16
Filing date: 2021-03-16
Publication date: 2022-11-01
Also published as: CL2022002472A1; BR112022018462A2; WO2021185821A1; TW202200190A; EP4121003A1; CA3171184A1; CO2022014452A2; AR121581A1; US20210283053A1; KR20220154110A; AU2021236878A1; PE20230258A1; IL295977A; MX2022011227A; JP2023518052A

Abstract

本发明涉及胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或其衍生物的制剂；以及其例如在治疗低血糖症中的医学用途。特别地，本发明涉及胰高血糖素类似物的稳定的水性液体制剂，其包含使其适于作为液体长期储存并且能够以单剂量(SD)或多剂量(MD)制剂使用的赋形剂的组合。

Description

胰高血糖素类似物的液体制剂

技术领域

本发明涉及胰高血糖素类似物的制剂及其例如在治疗低血糖症中的医学用途。特别地，本发明涉及胰高血糖素类似物的稳定的水性液体制剂。

背景技术

人前胰高血糖素原是158个氨基酸的前体多肽，其在组织中被有区别地进行加工以形成许多结构相关的胰高血糖素原来源的肽，包括胰高血糖素(glucagon，Glu)、胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)、胰高血糖素样肽-2(glucagon-likepeptide-2，GLP-2)和胃泌酸调节素(oxyntomodulin，OXM)。这些分子参与广泛多种的生理功能，包括血糖稳态、胰岛素分泌、胃排空和肠生长以及对食物摄取的调节。

天然胰高血糖素是29个氨基酸的肽，其对应于前胰高血糖素原的第53至81位氨基酸。胰高血糖素通过与肝细胞上的胰高血糖素受体结合、使肝经由糖原分解释放以糖原形式储存的葡萄糖来帮助维持血液中的葡萄糖水平。随着这些储存被耗尽，胰高血糖素还刺激肝通过糖异生来合成另外的葡萄糖。该葡萄糖被释放到血流中，阻止了低血糖症的发生。这导致了胰高血糖素或胰高血糖素类似物的治疗制剂的开发，所述制剂旨在用于在糖尿病对象中缓解急性低血糖症的“拯救(rescue)”的情况中，例如治疗已接受过高剂量的胰岛素的对象。然而，由于天然胰高血糖素本身的物理和化学稳定性相对较低，因此目前市售的大多数胰高血糖素产品都以冷冻干燥的固体制剂(其需要在紧接着使用之前在合适的液体介质中重构)的形式提供。由于低血糖症对象可表现出头晕和/或意识错乱的症状，或者在一些情况下甚至可变得无意识或半意识，这意味着他们可能无法进行或完成必需的初始液体重构以及使随后的胰高血糖素制剂的注射成为问题。因此，在发生过度胰高血糖素聚集之前，在有限的可用时间内，这种重构和注射可能必须由没有加工产品经验的另一个人来进行。

这导致在该领域中努力产生胰高血糖素类似物的制剂，所述制剂除了在胰高血糖素受体处具有令人满意的高活性外，还在液体制剂中是足够可溶的(特别是在生理pH值下，其中天然胰高血糖素在中性pH下基本上不溶)并且是物理和化学稳定的，能够立即使用而无需重构。这些类似物(i)可有利地以适于立即注射的即用型(ready-to-use)液体药物制剂的形式提供，并且(ii)可以能够在使用之前储存(包括在环境条件下由相关对象或患者携带)足够长的时间段。

WO 2011/117417(Novo Nordisk A/S)公开了经修饰的胰高血糖素肽，其在胰高血糖素1至29的第25位氨基酸处包含突变，抵抗水溶液中的聚集。

WO 2016/133863(Eli Lilly and Company)描述了用于经鼻施用的胰高血糖素的散剂组合物，其在以XRPD中峰为特征的相中包含环糊精和磷脂表面活性剂。

WO 2019/110838(Adocia)涉及胰高血糖素、带有羧酸盐填充剂和疏水基团的共聚氨基酸的制剂。

WO 2008/084237(Arecor Limited)描述了水性蛋白质组合物，其中所使用的置换缓冲剂的pKa比蛋白质稳定时的pH大至少一个单位。

WO 2014/016300(Zealand Pharma A/S)公开了适合用于液体制剂的胰高血糖素类似物，其中与天然人胰高血糖素相比，该类似物具有提高的溶解性和/或稳定性。WO2014/016300中描述的胰高血糖素类似物之一被称为达西高血糖素(dasiglucagon)，并且正在临床试验中作为针对严重低血糖症的即用型治疗，用于治疗1型糖尿病和用于治疗先天性高胰岛素血症。

等,Diabetes Care,2017(https://doi.org/10.2337/dc17-1402)中公开了达西高血糖素的药代动力学和药效学特征以及与

的比较。

WO 2017/053822(Xeris Pharmaceuticals,Inc.)公开了使用二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)作为非质子极性溶剂体系的天然胰高血糖素肽的液体制剂。也可添加电离稳定赋形剂来提高溶解性。WO2014/124151(Xeris Pharmaceuticals,Inc.)公开了胰高血糖素肽在DMSO中的液体制剂，其另外地包含冷冻保护剂，例如海藻糖，以保护制剂免受冻融循环。然而，在这些制剂的溶剂体系中使用DMSO具有数个明显的缺点，因为其使制剂的黏度相对较高，使得注射困难，并导致不期望的副作用，例如皮肤反应、皮肤干燥、头痛、头晕、困倦、恶心、呕吐、腹泻、便秘、呼吸问题、视力问题、血液问题和变态反应。DMSO还引起大蒜样味道、呼吸和体味。此外，DMSO溶解塑料和橡胶，这在当通过递送装置(例如，注射笔、注射器或泵系统)进行施用时可能是不利的。在一些情况下，DMSO与15％至20％的共溶剂(例如丙二醇或乙醇)组合使用，以避免含有80％至100％DMSO的制剂的相对较高的冷冻温度。然而，如果在使用DMSO和共溶剂的制剂中包含超过5％的水，则会降低制剂中胰高血糖素的化学稳定性。

因此，改善胰高血糖素类似物的制剂，特别是提供能够长期储存而不会发生肽的活性单体形式的过度水平的物理和化学降解并且其克服了与胰高血糖素或胰高血糖素类似物的现有制剂相关的一些缺点的稳定的液体制剂，仍然是本领域中的问题。

发明概述

广义地讲，本发明基于实施例中报道的研究，所述研究已探究和鉴定了能够用于胰高血糖素类似物的水性液体制剂的赋形剂，所述水性液体制剂适合用于作为液体长期储存，并且能够以单剂量(single-dose，SD)或多剂量(multi-dose，MD)制剂使用。

在这些研究中，本发明人发现用于胰高血糖素类似物的制剂中的缓冲剂对包含胰高血糖素类似物，特别是达西高血糖素的水性制剂的稳定性具有重要作用。本文中公开的实验表明TRIS、Bis-TRIS、ACES和MES缓冲剂和/或乙酸盐、柠檬酸盐或琥珀酸盐缓冲剂在弱酸性至中性pH下为胰高血糖素类似物制剂提供化学稳定性，如通过对降解产物进行检测和定量所确定的。对降解谱的比较分析表明，这些缓冲剂相对于其他受试缓冲剂体系(例如组氨酸或磷酸盐)提供了提高的稳定性，即使在制剂以其他方式具有相同的pH的情况下也是如此，即由缓冲剂提供的稳定性至少部分独立于其pH调节特性。重要的是，在其中制剂还包含防腐剂例如间甲酚的本发明的一些方面中，液体形式的制剂具有长期稳定性，并且因此适合用于多次给药。这开辟了以药物递送装置，并且特别是单剂量或多剂量递送装置，例如预填充注射器、注射器装置、注射笔、可调节剂量自动注射器、一次性自动注射器、可佩戴式注射器或输注泵的形式提供胰高血糖素类似物的制剂的可行性，从而以更简单、更安全和患者更友好的装置为患者提供即用型制剂。

因此，在第一方面中，本发明提供了包含胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物的稳定的水性液体药物制剂，所述胰高血糖素类似物是：

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH；

其中该制剂包含：

(a)胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物，其以约0.5mg/mL至约10mg/mL的浓度存在；

(b)TRIS、Bis-TRIS、ACES或MES，其作为缓冲剂以约25mM至约75mM的浓度存在；

(c)氯化钠，其作为张力调节剂并且以约50mM至约600mM的浓度存在；以及

(d)约5.6至约7.0的pH。

在另一个方面中，本发明提供了包含胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物的稳定的水性液体药物制剂，所述胰高血糖素类似物是：

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH；

其中该制剂包含：

(a)胰高血糖素类似物，其以约0.5mg/mL至约10mg/mL的浓度存在；

(b)TRIS、Bis-TRIS、ACES或MES，其作为缓冲剂以约25mM至约75mM的浓度存在；和/或柠檬酸盐、乙酸盐或琥珀酸盐，其作为缓冲剂以约1mM至约30mM的浓度存在；

(d)约5.6至约7.0的pH。

在包含胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物的制剂的一些实施方案中，该制剂包含以约0.1mg/mL至约1.0mg/mL，例如约0.1mg/mL、约0.2mg/mL、约0.3mg/mL、约0.4mg/mL、约0.5mg/mL、约0.6mg/mL、约0.7mg/mL、约0.8mg/mL、约0.9mg/mL或约1.0mg/mL的浓度存在的胰高血糖素类似物、其可药用盐或其衍生物。

在一些方面中，本发明人发现TRIS、Bis-TRIS、ACES或MES缓冲剂能够独立于由缓冲剂提供的制剂的pH而直接使胰高血糖素类似物化学稳定。可相对于在相同测试条件下在磷酸盐缓冲剂和/或组氨酸缓冲剂中的相应制剂中的胰高血糖素类似物的稳定性来确定直接化学稳定提高的事实。

在另一个方面中，本发明提供了用于产生本发明的稳定的水性液体药物组合物的方法。

在另一个方面中，本发明提供了递送装置，其包含含有本发明的胰高血糖素类似物的稳定的水性液体制剂。举例来说，递送装置包括预填充注射器、注射器装置、注射笔、可调节剂量自动注射器、一次性自动注射器、可佩戴式注射器或输注泵。

在另一个方面中，本发明提供了制品或药盒，其包含容纳本发明的稳定的水性液体药物组合物的容器。

在另一个方面中，本发明提供了本发明的胰高血糖素类似物的稳定的水性液体制剂，其用于治疗。

在另一个方面中，本发明提供了用于治疗疾病或病症的本发明的胰高血糖素类似物的稳定的水性液体制剂，所述疾病或病症选自低血糖症(包括但不限于严重低血糖症、急性低血糖症和慢性低血糖症)、2型糖尿病、糖耐量受损、1型糖尿病、肥胖症、冠心病、动脉粥样硬化、高血压、血脂异常、肝脂肪变性、β-阻滞剂中毒、胰岛素瘤或冯·吉尔克氏病。特别地，该制剂可用于治疗多种形式的低血糖症，例如其中低血糖症选自糖尿病性低血糖症、急性胰岛素诱导的低血糖症、高胰岛素血症性低血糖症、非糖尿病性低血糖症、反应性低血糖症、空腹低血糖症、药物诱导的低血糖症、先天性高胰岛素血症性低血糖症、酒精诱导的低血糖症、胃旁路术诱导的低血糖症(包括但不限于在Roux-en-Y胃旁路术之后的餐后低血糖症)、减肥后低血糖症或妊娠期间发生的低血糖症，该方法包括向有治疗需要的患者施用治疗有效量的本发明的胰高血糖素类似物的稳定的水性液体制剂。

在一些实施方案中，严重低血糖症以非常低的血糖为特征。在一些实施方案中，对急性低血糖症的治疗包括治疗严重低血糖症的急性发作，包括但不限于以非常低的血糖为特征的严重低血糖症的发作。

在另一个方面中，本发明提供了治疗患有选自以下的疾病或病症的患者的方法：低血糖症(包括但不限于严重低血糖症、急性低血糖症和慢性低血糖症)、2型糖尿病、糖耐量受损、1型糖尿病、肥胖症、冠心病、动脉粥样硬化、高血压、血脂异常、肝脂肪变性、β-阻滞剂中毒、胰岛素瘤或冯·吉尔克氏病。特别地，该制剂可用于治疗多种形式的低血糖症，例如其中低血糖症选自：糖尿病性低血糖症、急性胰岛素诱导的低血糖症、高胰岛素血症性低血糖症、非糖尿病性低血糖症、反应性低血糖症、空腹低血糖症、药物诱导的低血糖症、先天性高胰岛素血症性低血糖症、酒精诱导的低血糖症、胃旁路术诱导的低血糖症、减肥后低血糖症(包括但不限于在Roux-en-Y胃旁路术之后的餐后低血糖症)或妊娠期间发生的低血糖症，该方法包括向有治疗需要的患者施用治疗有效量的本发明的胰高血糖素类似物的稳定的水性液体制剂。

在另一个方面中，本发明提供了本发明的胰高血糖素类似物的稳定的水性液体制剂在制备用于治疗选自以下的疾病或病症的药物中的用途：低血糖症(包括但不限于严重低血糖症、急性低血糖症和慢性低血糖症)、2型糖尿病、糖耐量受损、1型糖尿病、肥胖症、冠心病、动脉粥样硬化、高血压、血脂异常、肝脂肪变性、β-阻滞剂中毒、胰岛素瘤或冯·吉尔克氏病。特别地，该制剂可用于治疗多种形式的低血糖症，例如其中低血糖症选自：糖尿病性低血糖症、急性胰岛素诱导的低血糖症、高胰岛素血症性低血糖症、非糖尿病性低血糖症、反应性低血糖症、空腹低血糖症、药物诱导的低血糖症、先天性高胰岛素血症性低血糖症、酒精诱导的低血糖症、胃旁路术诱导的低血糖症(包括但不限于在Roux-en-Y胃旁路术之后的餐后低血糖症)、减肥后低血糖症或妊娠期间发生的低血糖症，该方法包括向有治疗需要的患者施用治疗有效量的本发明的胰高血糖素类似物的稳定的水性液体制剂。

在一些实施方案中，使用根据本发明的制剂进行治疗的患者不处于饥饿状态，不患有肾上腺功能不全，和/或不患有慢性低血糖症。在一些实施方案中，使用根据本发明的制剂进行治疗的患者没有经历肝糖原降低。在一些实施方案中，使用根据本公开内容的制剂进行治疗的患者在他或她的肾上腺中不具有肿瘤，包括但不限于嗜铬细胞瘤。在一些实施方案中，使用根据本发明的制剂进行治疗的患者在他或她的胰腺中不具有肿瘤，包括但不限于胰岛素瘤。

在一些实施方案中，使用根据本公开内容的制剂进行治疗的患者的年龄为六岁或更大。

在另一个方面中，本发明提供了用于产生包含胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物的稳定的水性液体药物制剂的方法，所述胰高血糖素类似物是：

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH；

该方法包括配制以下以产生稳定的水性液体药物制剂：(a)胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物，其以约0.5mg/mL至约10mg/mL的浓度存在；(b)TRIS、Bis-TRIS、ACES或MES，其作为缓冲剂以约25mM至约75mM的浓度存在；(c)氯化钠，其作为张力调节剂并且以约50mM至约600mM的浓度存在；(d)约5.6至约7.0的pH；以及任选的(e)间甲酚，其浓度为约1.0mg/mL至约5.0mg/mL。在一些优选实施方案中，该方法提供了能够在2至8℃下稳定储存至少6个月、至少12个月、至少18个月或至少24个月的稳定的水性液体药物制剂。

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH；

在一些实施方案中，胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或其衍生物以约0.1mg/mL至约1.0mg/mL，例如约0.1mg/mL、约0.2mg/mL、约0.3mg/mL、约0.4mg/mL、约0.5mg/mL、约0.6mg/mL、约0.7mg/mL、约0.8mg/mL、约0.9mg/mL或约1.0mg/mL的浓度存在。

在另一个方面中，本发明提供了包含胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物的稳定水性液体药物制剂的用途，所述胰高血糖素类似物是：

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH；

其用于提供当在2至8℃下储存时稳定24个月的水性液体药物制剂，其中该制剂包含以下以产生稳定的水性液体药物制剂：

(a)胰高血糖素类似物，其以约0.5mg/mL至约10mg/mL的浓度存在；

(c)氯化钠，其作为张力调节剂并且以约50mM至约600mM的浓度存在；

(d)约5.6至约7.0的pH；以及任选的

(e)间甲酚，其浓度为约1.0mg/mL至约5.0mg/mL。

在一些实施方案中，胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物以约0.1mg/mL至约1.0mg/mL，例如约0.1mg/mL、约0.2mg/mL、约0.3mg/mL、约0.4mg/mL、约0.5mg/mL、约0.6mg/mL、约0.7mg/mL、约0.8mg/mL、约0.9mg/mL或约1.0mg/mL的浓度存在。

在另一些方面中，本发明涉及包含胰高血糖素类似物的水性液体药物制剂，其基本上由胰高血糖素类似物和如本文中限定的制剂的其他组分组成或者由其组成。鉴于本公开内容，本发明的另一些方面和实施方案对于本领域技术人员将是明显的。

本文中使用的“和/或”应被认为具体公开了在具有或不具有另一个的情况下的两个指出的特征或组件中的每一个。例如“A和/或B”被认为具体公开了以下中的每一者：(i)A、(ii)B、以及(iii)A和B，就如同每一者在本文中单独陈述一样。

除非上下文中另外指示，否则对上文列出特征的描述和限定不限于本发明的任何具体方面或实施方案，并且同等地适用于所描述的所有方面和实施方案。

发明详述

定义

除非另外说明，否则为在上文书面描述中使用的具体术语提供以下定义。

在说明书和权利要求书通篇，使用了用于天然氨基酸的常规单字母和三字母代码。本发明的肽中的所有氨基酸残基优选地具有L-构型，但是，也可存在D-构型氨基酸。Aib代表α-氨基异丁酸。

胰高血糖素类似物

术语“天然胰高血糖素”是指具有以下序列的天然人胰高血糖素：H-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-OH(SEQ ID NO：1)。

本发明制剂中使用的优选化合物至少具有胰高血糖素激动剂活性。这可在体外测定中评估，例如，如在WO 2014/016300中所述，其中细胞环AMP(cAMP)的产生用于在胰高血糖素类似物的存在下监测人胰高血糖素受体活性。

本文中公开的序列是这样的序列：在序列的氨基端(N端)处并入“Hy-”部分并且在序列的羧基端(C端)处并入“-OH”部分。在这样的情况下，并且除非另外指出，否则在所讨论序列N端处的“Hy-”部分表示氢原子，而序列C端处的“-OH”部分表示羟基。

与天然胰高血糖素相比，存在于本发明的制剂中的胰高血糖素类似物具有一个或更多个氨基酸替换、缺失、倒位或添加。该定义还包括同义术语胰高血糖素模拟物和/或胰高血糖素激动剂。此外，本发明的类似物可另外地具有其氨基酸侧基、α-碳原子、末端氨基基团或末端羧酸基团中的一个或更多个化学修饰。化学修饰包括但不限于：添加化学部分、产生新键和去除化学部分。氨基酸侧基处的修饰包括但不限于：赖氨酸ε-氨基基团的酰化，精氨酸、组氨酸或赖氨酸的N-烷基化，谷氨酸或天冬氨酸羧酸基团的烷基化，以及谷氨酰胺或天冬酰胺的脱酰胺化。末端氨基的修饰包括但不限于：脱氨基、N-低级烷基、N-二-低级烷基和N-酰基修饰。末端羧基基团的修饰包括但不限于：酰胺、低级烷基酰胺、二烷基酰胺和低级烷基酯修饰。本文中优选的低级烷基为C₁-C₄烷基。此外，一个或更多个侧基或端基可被普通技术的肽化学家已知的保护基保护。氨基酸的α-碳可被单甲基化或二甲基化。

在一些方面中，本发明的液体制剂使用由下式表示的胰高血糖素类似物或者其可药用盐或衍生物：

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH(SEQ ID NO：2)，化合物1。

在三字母氨基酸代码中，该胰高血糖素类似物(达西高血糖素)由下式表示：

H-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Aib-Ala-Arg-Ala-Glu-Glu-Phe-Val-Lys-Trp-Leu-Glu-Ser-Thr-OH

如WO 2014/016300中所报道的，化合物1(SEQ ID NO：2)在人胰高血糖素受体处表现出体外激动剂活性，其中EC₅₀值分别为0.0095nM和0.030nM。

应理解，本发明的肽(药物物质)也可以以盐或另一些衍生物的形式提供。如定义中所述，盐包括可药用盐。

本发明的胰高血糖素类似物的另一些衍生物包括具有金属离子(例如Mn²⁺和Zn²⁺)的配位络合物、酯(例如体内可水解的酯)、游离酸或碱、水合物、前药或脂质。使用本领域公知的技术，可在化合物中存在的羟基或羧酸基团与合适的羧酸或醇反应配偶体(reactionpartner)之间形成酯。作为化合物的前药的衍生物可在体内或体外转化为母体化合物之一。通常来说，化合物的至少一种生物活性将在化合物的前药形式中降低，并且可通过前药的转化以释放化合物或其代谢物而活化。前药的一些实例包括使用保护基，所述保护基可在原位被去除而释放活性化合物或用于抑制体内药物的清除。

本发明制剂中使用的胰高血糖素类似物可使用本领域公知的固相肽合成技术合成。举例来说，这可使用Tentagel S PHB-Thr(tBu)树脂(1.13g，0.24mmol/g)、COMU作为偶联剂、DMF作为溶剂以及如上所述的Fmoc-化学物在CEM Liberty肽合成仪(CEM LibertyPeptide Synthesizer)上进行。序列中使用了假脯氨酸Fmoc-Phe-Thr(Ψ，Me，Me pro)-OH(在第6/7位)和Fmoc-Glu-Ser(Ψ，Me，Me pro)-OH(在第15/16位)。合成之后，可从树脂切割胰高血糖素类似物，并在Gemini-NX柱(5cm，C18，10微米)上进行纯化，其中缓冲剂A(0.1％水性TFA)和缓冲剂B(含有0.1％TFA和90％MeCN的水溶液)的混合物的流量为35ml/分钟。可将合并的级分冻干并在进一步纯化之前重新溶解在水中。产品的纯度可通过分析型HPLC确定，并且单同位素质量可通过MS确定。

胰高血糖素类似物的制剂

如本文中所述，根据本发明的稳定的水性液体药物制剂包含胰高血糖素类似物、缓冲剂、张力调节剂，并且被配制成具有与施用于患者的生理上相容的pH。在一些实施方案中，本发明的制剂还包含防腐剂，例如使得能够产生多剂量制剂。在以下实例中，本发明人确定了用于配制本发明组合物的缓冲剂的选择对其长期稳定性具有决定性作用，并且许多常用的缓冲剂包括磷酸盐缓冲剂、组氨酸缓冲剂、马来酸和Milli-Q水(Milli-Q water，MQW)不在水性液体制剂中提供足够的稳定性，例如以在25℃下储存13、26或52周。然而，其他类型的缓冲剂，特别是TRIS、Bis-TRIS、ACES或MES缓冲剂能够用于配制胰高血糖素类似物的稳定的水性液体制剂。本文中所述的实验还发现，由这些缓冲剂提供的稳定性能够直接使胰高血糖素类似物化学稳定，即以独立于由缓冲剂提供的制剂的pH的方式。这种作用可在相同的测试条件下相对于磷酸盐缓冲剂和/或组氨酸缓冲剂来确定。

在IUPAC命名法中，TRIS缓冲剂是指(三(羟甲基)氨基甲烷或2-氨基-2-(羟甲基)丙烷-1,3-二醇)。

在IUPAC命名法中，Bis-TRIS缓冲剂是指(双-三甲烷或2-[双(2-羟乙基)氨基]-2-(羟甲基)丙烷-1,3-二醇)。

在IUPAC命名法中，ACES缓冲剂是指(N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙磺酸或2-(氨基甲酰基甲基氨基)乙磺酸)。

在IUPAC命名法中，MES缓冲剂是指(2-(N-吗啉代)乙磺酸或作为2-吗啉-4-基乙磺酸。

可用作这些缓冲剂的替代或补充的另一些缓冲剂包括柠檬酸盐、乙酸盐或琥珀酸盐，例如以柠檬酸钠、乙酸钠或琥珀酸钠的形式。优选地，这些缓冲剂以约1mM至约30mM，更优选约10mM至约30mM的浓度，并且更优选以约15mM的浓度存在。所使用的实际浓度可以考虑缓冲剂是单独使用或组合使用。

导致本发明的实验工作表明，胰高血糖素类似物的稳定制剂可避免在液体制剂中包含极性非质子溶剂，例如使用如在WO 2017/053822和WO 2014/124151中使用的二甲基亚砜(DMSO)，其会给使用中的制剂带来不利因素。因此，优选地，本发明的制剂基本上不包含非质子极性溶剂，并且更优选地，所述制剂基本上不包含二甲基亚砜(DMSO)。在一些特别优选的实施方案中，水是用于制备所述水性液体制剂的唯一溶剂。

本文中所述的工作还表明，与基于使用DMSO(任选地与共溶剂组合)的制剂的经验相反，可产生其中存在水而基本上不影响制剂中的胰高血糖素类似物的化学或物理稳定性的制剂。本发明的液体药物制剂的一些特别有用的实施方案是水性制剂，即包含水的制剂。这样的制剂可以是以水性溶液剂或水性混悬剂的形式。本发明的水性药物制剂的一些优选实施方案是水性溶液剂。在本发明的上下文中，术语“水性制剂”将通常是指包含以下作为溶剂的制剂：以重量计至少50％(50％w/w)的水，更优选至少75％w/w的水，更优选至少80％w/w的水，更优选至少85％w/w的水，更优选至少90％w/w的水，最优选至少95％w/w的水。同样，术语“水溶液剂”将通常是指包含至少50％w/w水的溶液剂，并且术语“水性混悬剂”是指包含至少50％w/w水的混悬剂。在某些实施方案中，本发明的水性制剂基本上不包含非质子极性溶剂，例如二甲基亚砜(DMSO)。在这个意义上，基本上意指水性制剂包含按体积计少于5％(v/v)的非质子溶剂，更优选按体积计少于2％(v/v)的非质子溶剂，并且甚至更优选按体积计少于1％(v/v)的非质子溶剂。根据某些实施方案，水是用于制备水性液体制剂的唯一溶剂。

在本发明的一些方面中，胰高血糖素类似物、其可药用盐和/或衍生物的稳定的水性液体制剂包含：

(a)胰高血糖素类似物，其以约0.5mg/mL至约10mg/mL的浓度存在；

(d)约5.6至约7.0的pH。

在包含胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物的制剂的一些实施方案中，所述制剂包含以约0.1mg/mL至约1.0mg/mL，例如约0.1mg/mL、约0.2mg/mL、约0.3mg/mL、约0.4mg/mL、约0.5mg/mL、约0.6mg/mL、约0.7mg/mL、约0.8mg/mL、约0.9mg/mL或约1.0mg/mL的浓度存在的胰高血糖素类似物、其可药用盐或其衍生物。

术语“可药用载体”包括任何标准药用载体或稀释剂，例如在适合用于经口、经肺、经直肠、经鼻、表面、皮下、肌内、静脉内、腹膜内、皮内、经皮或经阴道施用的组合物或制剂中使用的那些。用于治疗用途的可药用载体在制药领域中是公知的，并且描述于例如Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.(A.R.Gennaroedit.1985)中。液体制剂通常采用未缓冲或缓冲的水溶液作为载体。例如，可使用微酸性、微碱性或生理pH下的无菌盐水或磷酸盐缓冲盐水(phosphate-buffered saline，PBS)。相关的pH缓冲剂包括三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)、2-[双(2-羟乙基)氨基]-2-(羟甲基)丙烷-1,3-二醇(Bis-TRIS)、2-(氨基甲酰基甲基氨基)乙磺酸(ACES)、马来酸、2-吗啉-4-基乙磺酸(MES)及其混合物。该术语还涵盖了在美国药典(US Pharmacopeia)中列出的用于动物或人的任何试剂。

在本发明的上下文中，术语“可药用盐”是指对将用其治疗的患者或对象无害的盐。这样的盐通常是酸加成盐或碱式盐。酸加成盐包括有机酸的盐和无机酸的盐。合适的酸加成盐的一些非限制性实例包括盐酸盐、磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐和柠檬酸盐。碱式盐的一些实例包括其中阳离子选自以下的盐：碱金属离子，例如钠和钾离子；碱土金属离子，例如钙离子；以及经取代的铵离子，例如NR(R’)₃ ⁺类型的铵离子，其中R和R’独立地表示任选地经取代的C_1-6烷基、任选地经取代的C_2-6烯基、任选地经取代的芳基或任选地经取代的杂芳基。可药用盐的另一些实例描述于Remington’s Pharmaceutical Sciences,第17版.Ed.Alfonso R.Gennaro(编辑),Mack Publishing Company,Easton,PA,U.S.A.,1985和最新的版本，以及Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology中。

如在本发明的上下文中使用的术语“治疗”(以及其其他语法变体)是指用于获得有益或期望的临床结果的方法。出于本发明的目的，有益或期望的临床结果包括但不限于症状的缓解、疾病程度的降低、疾病状态的稳定(即不恶化)、疾病进展的延迟或减慢、疾病状态的改善或缓和、以及缓解(无论是部分的或全部的)，无论是可检出的还是不可检出的。“治疗”还可指与没有治疗的情况下的预期存活相比存活的延长。“治疗”是以预防病症的发生或改变病症的病理状况为目的进行的干预。因此，“治疗”是指治疗性治疗和预防或防范措施二者。如在预防或防范措施的上下文中所使用的，药物制剂不需要完全预防疾病或病症的发生。需要治疗的那些包括已经患有病症的那些，以及要预防病症发生的那些。“治疗”还意指与没有治疗相比，抑制或减轻病理状况或症状(例如体重增加或低血糖症)的提高，并且未必意味着暗示完全停止相关病症。

“稳定的”制剂是这样的制剂：在所述制剂中在其中的肽在储存之后基本上保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性。优选地，制剂在储存之后基本上保持其物理和化学稳定性以及其生物活性。通常基于制剂的预期保质期来选择储存期。本发明的制剂作为稳定的液体制剂，例如稳定的水性液体制剂提供。用于测量蛋白质稳定性的多种分析技术在本领域中是可用的，并且在例如Peptide and Protein Drug Delivery,247-301,Vincent Lee Ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,Pubs.(1991)和Jones,A.Adv.Drug Delivery Rev.10:29-90(1993)中综述。在本发明中，“稳定的”制剂包括这样的制剂：其中在制剂已在2至8℃下储存至少18个月之后，制剂中至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少95％，更优选至少96％，更优选至少97％，更优选至少98％，并且最优选至少99％的胰高血糖素类似物未降解。也可在加速条件下测试稳定性，其通常使用提高的储存温度来评估在缩短时间段内的稳定性。例如，在25℃下储存(有时称为在加速条件下)可用于评估在13、26、39或52周期间内的稳定性。作为比较，使用其他缓冲剂例如磷酸盐缓冲剂或组氨酸缓冲剂导致在储存相应时间之后的稳定性水平通常低于80％。

稳定性可在所选的温度下持续所选的时间段来测量，例如使用升高的温度来降低测试制剂所跨越的时间。一般而言，在2至8℃的温度下储存表示在正常冷藏条件下储存。在某些实施方案中，制剂在这样的条件下稳定至少6个月，更优选至少12个月，更优选至少18个月，更优选至少24个月。稳定性可以以多种不同方式定性和/或定量地评价，其包括评价聚集体形成(例如，使用尺寸排阻色谱、UV光散射、动态光散射、圆二色性、通过测量浊度和/或通过目视检查)；通过使用阳离子交换色谱、图像毛细管等电聚焦(image capillaryisoelectric focusing，icIEF)或毛细管区带电泳评估电荷不均一性；氨基端或羧基端序列分析；质谱分析；SDS-PAGE分析以比较还原抗体和完整抗体；肽图(例如胰蛋白酶的或LYS-C)分析；评估抗体的生物活性或抗原结合功能；等；不稳定性可涉及以下的任何一种或更多种：聚集、脱酰胺化(例如Asn脱酰胺化)、氧化(例如Met氧化)、异构化(例如Asp异构化)、裁剪(clipping)/水解/片段化(例如铰链区片段化)、琥珀酰亚胺形成、未配对的半胱氨酸、N端延伸、C端加工、糖基化差异、加合物形成等。

如果肽在例如目视检查颜色和/或澄清度时，或者如通过UV光散射、动态光散射、圆二色性或通过尺寸排阻色谱测量时，未显示出聚集、沉淀和/或变性的迹象(或极少的迹象)，则该肽在药物制剂中“保持其物理稳定性”，并且被认为仍然保持其生物活性。

如果在给定的时间下化学稳定性使得肽被认为仍然保持其生物活性，则该肽在药物制剂中“保持其化学稳定性”，如下文所定义。化学稳定性可通过检测和定量肽的化学改变形式来评估。化学改变可涉及异构化、氧化、尺寸修饰(例如裁剪)，其可使用例如HPLC或尺寸排阻色谱、SDS-PAGE和/或质谱进行评价。化学改变的其他类型包括电荷改变(例如由于脱酰胺化而发生)，其可例如通过HPLC或离子交换色谱或icIEF来评价。

如本文公开的，本发明的胰高血糖素类似物或者其可药用盐或衍生物的稳定的水性液体制剂通常包含：

(a)胰高血糖素类似物或者其可药用盐或其衍生物，其以约0.5mg/mL至约10mg/mL的浓度存在；

(c)氯化钠，其作为张力调节剂并且以约50mM至约200mM的浓度存在；以及

(d)约5.6至约7.0的pH。

举例来说，在一些实施方案中，胰高血糖素类似物以约1.0mg/mL或约4.0mg/mL的浓度存在。

优选地，在本发明的稳定的水性液体制剂中，TRIS、Bis-TRIS或ACES作为缓冲剂以约50mM的浓度存在。

优选地，在本发明的稳定的水性液体制剂中，氯化钠作为张力调节剂以约50mM至约600mM的浓度、以约50mM至约500mM的浓度、以约150mM至约200mM的浓度或以约60mM至约120mM的浓度存在。

优选地，在本发明的稳定的水性液体制剂中，所述制剂具有约5.8至6.7的pH，或约6.0至7.0的pH，并且更优选约6.0或约6.5的pH。在本文中公开的一些实施方案中，单剂量(SD)制剂具有约6.5的pH，而旨在用于多剂量使用的制剂具有约6.0或约6.5的pH。

优选地，在本发明的稳定的水性液体制剂中，所述制剂不包含选自盐酸、硝酸、硫酸或其组合的电离稳定赋形剂。

优选地，在本发明的稳定的水性液体制剂中，所述制剂是即用型制剂。

优选地，在本发明的稳定的水性液体制剂中，所述制剂在2至8℃下稳定至少6个月、至少12个月、至少18个月或至少24个月。优选地，在本发明的稳定的水性液体制剂中，制剂中的胰高血糖素类似物在2至8℃下储存18个月之后保持其生物活性的至少约90％。虽然在2至8℃下的储存反映了从产生至最终使用在冷藏条件下的储存，但本发明的液体制剂优选在环境条件下，例如在销售给最终使用者与施用之间的时间期间具有长期储存稳定性。

优选地，在本发明的稳定的水性液体制剂中是无菌的。

优选地，在本发明的稳定的水性液体制剂中，所述制剂通过注射例如通过皮下注射施用于对象。

优选地，在本发明的稳定的水性液体制剂中，缓冲剂是TRIS或Bis-TRIS。

在一些方面中，本发明的稳定的水性液体制剂可还包含防腐剂。优选地，防腐剂是间甲酚，任选地浓度为约1.0mg/mL至约5.0mg/mL。

在一个方面中，本发明提供了稳定的水性液体制剂，其中胰高血糖素类似物以约0.75mg/mL至约1.25mg/mL的浓度存在，TRIS以约40mM至约60mM的浓度存在，氯化钠作为张力调节剂以约150mM至约200mM的浓度存在并且所述制剂具有约6.0至约7.0的pH。在该方面中，优选地，所述稳定的水性液体制剂包含以约1.0mg/mL的浓度存在的胰高血糖素类似物，以约50mM的浓度存在的TRIS，作为张力调节剂以约175mM的浓度存在的氯化钠，并且所述制剂具有约6.5的pH。所述制剂通常被预期作为单剂量制剂。

在另一个方面中，本发明提供了稳定的水性液体制剂，其中胰高血糖素类似物以约3.0至5.0mg/mL的浓度存在，TRIS以约40mM至约60mM的浓度存在，氯化钠作为张力调节剂以约60mM至约120mM的浓度存在，间甲酚作为防腐剂以约3.0mg/mL至约4.0mg/mL的浓度存在，并且所述制剂具有约6.0至约7.0的pH。在该方面中，优选地，胰高血糖素类似物以约4mg/mL的浓度存在，TRIS以约50mM的浓度存在，氯化钠作为张力调节剂以约90mM的浓度存在，间甲酚作为防腐剂以约3.0至约4.0mg/mL的浓度存在，并且所述制剂具有约6.5的pH。在该方面中，所述制剂通常被预期作为多剂量制剂，并且因此包含防腐剂。多剂量制剂的一个实例具有约6.5的pH、4.0mg/mL的达西高血糖素、以约50mM TRIS的浓度存在的TRIS、作为张力调节剂以约90mM的浓度存在的氯化钠，以及作为防腐剂以约3.15mg/mL的浓度存在的间甲酚。

在另一个方面中，本发明提供了稳定的水性液体制剂，其中胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物以约3.0至5.0mg/mL的浓度存在，TRIS、Bis-TRIS、ACES或MES作为缓冲剂以约25mM至约75mM的浓度存在，和/或柠檬酸盐、乙酸盐或琥珀酸盐作为缓冲剂以约1mM至约30mM的浓度存在，氯化钠作为张力调节剂以约50mM至约150mM的浓度存在，间甲酚作为防腐剂以约3.0mg/mL至约4.0mg/mL的浓度存在，并且所述制剂具有约6.0至7.0的pH。在该方面中，优选地，胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物以约4mg/mL的浓度存在，TRIS、Bis-TRIS、ACES、MES缓冲剂以约50mM的浓度存在，或者柠檬酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂和/或琥珀酸盐缓冲剂以约15mM的浓度存在，氯化钠作为张力调节剂以约90mM的浓度存在，间甲酚作为防腐剂以约3.0至约4.0mg/mL的浓度存在，并且所述制剂具有约6.5的pH。

本文中使用的术语“稳定的制剂”是指具有提高的物理稳定性、提高的化学稳定性或提高的物理和化学稳定性的制剂。

本文中使用的术语“物理稳定性”是指作为使肽(例如本发明的化合物)暴露于应力和/或与不稳定的界面和表面(例如疏水性表面和界面)相互作用的结果，所述肽以形成所述肽的可溶性或不溶性聚集体的趋势的量度。水性肽制剂的物理稳定性可通过在将填充到合适容器(例如盒或小瓶)中的制剂暴露于不同温度下的机械/物理应力(例如搅拌)持续不同的时间段之后，通过目视检查和/或浊度测量来评价。当制剂表现出看得见的浊度时，就肽聚集而言，该制剂可被分类为物理上不稳定的。或者，可通过技术人员公知的简单的浊度测量来评价制剂的浊度。

水性肽制剂的物理稳定性也可通过使用作为肽的构象状态的光谱探针而发挥作用的试剂来评价。探针优选是优先与肽的非天然构象异构体结合的小分子。这样的小分子光谱探针的一个实例是硫黄素T(Thioflavin T)，其是已被广泛用于检测淀粉样原纤维的荧光染料。在存在原纤维以及可能还有其他肽构型时，硫黄素T当与肽的原纤维形式结合时在约450nm处产生新的激发最大值并在约482nm处产生增强的发射。未结合的硫黄素T在所涉及的波长下是基本上无荧光的。

本文中使用的术语“化学稳定性”是指关于肽结构中的共价/手性化学变化的肽稳定性，该化学变化导致化学降解产物的形成，其与天然肽结构相比具有潜在的较低的生物效力和/或潜在的提高的免疫原性。根据天然肽的类型和详细性质以及该肽所暴露的环境，可形成多种化学降解产物。在实践中，如本领域技术人员公知的，通常不能完全避免肽制剂中化学降解的消除，并且在储存和使用这样的制剂的期间，经常看到提高量的化学降解产物的形成。许多肽易受降解过程的影响，在该降解过程中，谷氨酰胺残基或天冬酰胺残基中的侧链酰胺基团被水解以形成游离羧酸。其他降解途径涉及高分子量转化产物的形成，在所述高分子量转化产物中，两个或更多个肽分子通过转酰胺基作用和/或二硫键相互作用变得彼此共价结合，导致形成共价结合的寡聚体和聚合物降解产物(参见，例如，Stability of Protein Pharmaceuticals,Ahern.T.J.and Manning M.C.,Plenum Press,New York1992)。此外，肽主链的水解导致肽片段是公知的。氧化(例如，甲硫氨酸残基的氧化)是肽的化学降解的另一种形式。肽制剂的化学稳定性可通过在暴露于不同环境条件之后的多个时间点时测量化学降解产物的量来评价(例如，降解产物的形成通常可通过升高温度来促进)。每种单独的降解产物的量可通过分离降解产物以生成“降解谱”来确定。通常使用多种色谱技术(例如SEC-HPLC和/或RP-HPLC)基于分子尺寸和/或电荷进行分离。寡聚体可以是共价寡聚体或非共价寡聚体。共价寡聚体是两个或更多个分子通过共价化学键连接，并且因此键通常是不可逆的。相反，在非共价寡聚体中，一个或更多个分子通过非共价化学键(例如离子相互作用、疏水相互作用等)的相互作用连接在一起。虽然在一些情况下这可以是可逆的，但是通常相互作用如此强烈以至于其实际上是不可逆的，并且如共价寡聚体导致活性药物物质在药学上不可用。

在低pH下，胰高血糖素本身的化学不稳定性主要归因于天冬氨酸残基的异构化和切割、谷氨酰胺残基的脱酰胺作用和甲硫氨酸的氧化。一般而言，Asn和Gln的脱酰胺作用通过环状酰亚胺环中间体发生在高pH下，在约pH 7.4的生理pH值下具有显著的速率，该环状酰亚胺环中间体可打开以分别形成L-Asp和L-isoAsp或L-Glu和L-isoGlu。环状酰亚胺环中间体也可导致形成少量相应的D-异构体，表明环状酰亚胺的缓慢外消旋作用。

在低于生理pH的pH值下，Asn和Gln的脱酰胺作用的速率降低，但随着pH的降低，由Asp和Glu形成环状酰亚胺的速率以及因此的异构化的速率提高。在pH 4和pH 6之间，环状酰亚胺的形成最大。环状酰亚胺中间体的形成也可以导致肽序列的切割。

如上所述，“稳定的制剂”因此可以是指具有提高的物理稳定性、或提高的化学稳定性、或提高的物理和化学稳定性的制剂。一般而言，制剂在使用和储存期间(按照推荐的使用和储存条件)应该是稳定的，至少直至达到指定的失效期。

在本发明的液体药物制剂的某些实施方案中，所述制剂在至少2周的使用和至少6个月的储存下是稳定的。在另一些实施方案中，制剂在至少2周的使用和至少一年的储存下是稳定的。在另一些实施方案中，制剂在至少2周的使用和至少两年的储存下是稳定的。在另一些实施方案中，制剂在至少4周的使用和至少两年的储存下，或甚至在至少4周的使用和超过3年的储存下是稳定的。本发明的这样的药物制剂的一些特别有用的实施方案在至少6周的使用和至少3年的储存下是稳定的。在这个方面，出于本段落的目的，术语“使用”是指出于将所述制剂用于治疗目的的目的，将药物制剂从储存中取出，并且从而使其经受不同的环境条件(光、暗、温度、搅动等的条件)，而出于本段落的目的，术语“储存”是指在非搅拌的条件下在不超过约5℃的温度下在冰箱或冷冻器中储存。技术工作者将理解这些药物制剂可经受的使用和储存条件的典型范围。

如本文中所述，本发明的胰高血糖素类似物的稳定的水性液体制剂包含提供pH的缓冲剂和张力调节剂。根据常规药学实践，本发明的制剂是无菌的和/或不含还原剂。本发明的液体制剂是水性液体制剂。

本文中使用的术语“缓冲剂”表示使药物制剂的pH稳定的可药用试剂。合适的缓冲剂是本领域公知的，并且可见于文献中。在一些优选实施方案中，缓冲剂选自TRIS缓冲剂、Bis-TRIS缓冲剂、ACES缓冲剂或MES缓冲剂和/或柠檬酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂或琥珀酸盐缓冲剂，因为这些缓冲剂提供了其中胰高血糖素类似物溶解且不变得黏稠、浑浊或使肽药物沉淀的稳定制剂。在一些优选实施方案中，缓冲剂是TRIS或Bis-TRIS。通常，缓冲剂将以25mM至约75mM的浓度存在。在某些实施方案中，缓冲剂将以约50mM的浓度存在。在某些实施方案中，TRIS、Bis-TRIS、ACES或MES缓冲剂独立于制剂的pH提供对胰高血糖素类似物的直接化学稳定。在另一些实施方案中，如在相同测试条件下相对于磷酸盐缓冲剂和/或组氨酸缓冲剂所确定的，TRIS、Bis-TRIS、ACES或MES缓冲剂提供了改善的直接化学稳定。在另一些实施方案中，特别是与其中存在防腐剂例如金属甲酚的多剂量制剂相关的实施方案中，缓冲剂还包括使用约1mM至约30mM浓度的柠檬酸盐、乙酸盐或琥珀酸盐。在一些实施方案中，相对于在相同测试条件下评价的所述TRIS、BIS-TRIS、ACES或MES缓冲剂被替换为相同浓度和pH的磷酸盐缓冲剂和/或组氨酸缓冲剂的制剂，所述制剂提供了改善的化学稳定。例如，该制剂在25℃下储存52周后可具有这样的降解谱，在此之后，在25℃下储存52周之后，所述制剂包含以下中的一者或更多者：少于5％的Pyro-Glu 4-29、少于7％的Trp/Tyr氧化、少于4％的犬尿氨酸、少于5％的F-4-29+F5-29和/或少于2％的F3.29，其中所有百分比均通过HPLC测定。

本文中使用的术语“张力调节剂”表示用于调节制剂的张力的可药用张力剂。本发明的制剂优选地是等渗的，即其具有与人血清基本上相同的渗透压。制剂中使用的张力调节剂优选地是氯化钠。张力调节剂的浓度将取决于制剂的其他组分的浓度，尤其是在制剂旨在是等渗的情况下。通常来说，氯化钠将作为张力调节剂以约50mM至600mM的浓度使用。在某些实施方案中，在本发明制剂中作为张力调节剂存在的氯化钠的浓度可以是约10mM至约150mM，例如约20mM至约130mM、约50mM至约125mM、约75mM至约120mM、约90mM至约115mM或约110mM。在某些实施方案中，在本发明制剂中作为张力调节剂存在的氯化钠的浓度可以是约150mM至约200mM，任选约175mM。在一个优选实施方案中，氯化钠可以作为张力调节剂存在于这样的制剂中，其包含浓度为约50mM至约150mM，并且最优选浓度为约90mM或者约75mM或约125mM的防腐剂。

通常，选择本发明的液体制剂的组分和量以提供具有约5.6的pH或约6.0至约7.0的pH的制剂。在一个优选实施方案中，制剂可具有约6.2至约6.8的pH。更优选地，所述制剂可具有约6.3至约6.7的pH。更优选地，所述制剂可具有约6.4至约6.6的pH。作为替代或补充，对于单剂量和多剂量制剂二者，所述制剂可具有约6.5的pH。

在某些实施方案中，本发明的制剂还包含防腐剂。在一些优选实施方案中，防腐剂是间甲酚，其以约1.0mg/mL至约5.0mg/mL的浓度，更优选以约2.0mg/mL至约4.0mg/mL的浓度并且最优选以约3.0mg/mL至约4.0mg/mL的浓度存在。防腐剂的量取决于能够有效杀灭一系列细菌类型的需要，如监管批准所需的。

本发明的制剂具有通过色谱分离(例如通过尺寸排阻色谱(size-exclusionchromatography，SEC)和/或反相色谱(reverse-phase chromatography，RPC))确定的降解谱。特别地，本文中所述实验的进一步发现是，在25℃下储存52周之后，产生根据本发明的稳定制剂的缓冲剂的降解产物谱非常相似，而不产生稳定制剂的缓冲剂的降解产物谱是不同的。在下表中，使用HPLC测量了降解产物的％。

Pyro-Glu(4至29)是其中第4位的Gln的主链氮与侧链酰胺反应并形成内部内酰胺环。随后水解第3位的Ser与内酰胺化的Glu部分之间的酰胺键以产生降解产物，其中前三个氨基酸已被切除并且在N端具有Pyro-Glu部分。Tyr/Trp的氧化导致在Tyr和Trp的芳环中并入羟基。犬尿氨酸是公知的Trp残基的氧化产物。琥珀酸的加成涉及达西高血糖素对马来酸缓冲剂中双键的加成。FX¹-X²是含有氨基酸X¹至X²的片段。

总之，与磷酸盐、组氨酸和马来酸相比，TRIS、Bis-TRIS、MES和ACES保护达西高血糖素免于水解和氧化，并且在TRIS、Bis-TRIS、MES与达西高血糖素之间没有显著反应。在52周内形成少量(在25℃下52周之后为0.9％)与ACES(+165Da)缩合的达西高血糖素。

因此，在一些方面中，如通过HPLC确定的，本发明的制剂在25℃下储存52周之后将具有少于5％的Pyro-Glu 4-29，更优选少于4％，更优选少于3％、更优选少于2％、更优选少于1％并且最优选少于0.5％。

因此，在一些情况下，如通过HPLC确定的，本发明的制剂在25℃下储存52周之后将具有少于7％的Trp/Tyr氧化，更优选少于更优选少于5％，更优选少于4％，更优选少于3％，更优选少于2％，更优选少于1％并且最优选少于0.5％。

因此，在一些情况下，如通过HPLC确定的，本发明的制剂在25℃下储存52周之后将具有少于4％的犬尿氨酸；更优选少于3％，更优选少于2％，更优选少于1％并且最优选少于0.5％。

因此，在一些情况下，如通过HPLC确定的，本发明的制剂在25℃下储存52周之后将具有少于5％的F-4-29+F5-29，更优选少于4％，更优选少于3％，更优选少于2％，更优选少于1％并且最优选少于0.5％。

因此，在一些情况下，如通过HPLC确定的，本发明的制剂在25℃下储存52周之后将具有少于2％的F3.29，更优选少于1％并且最优选少于0.5％。

在一个方面中，所述稳定的水性液体制剂包含浓度为约0.75mg/mL至约1.25mg/mL的胰高血糖素类似物、浓度为约40mM至约60mM的TRIS、作为张力调节剂浓度为约150mM至约200mM的氯化钠，并且所述制剂具有约6.2至约6.8的pH。

在另一个方面中，所述稳定的水性液体制剂包含浓度为约3.0至5.0mg/mL的胰高血糖素类似物、浓度为约40mM至约60mM的TRIS、作为张力调节剂浓度为约60mM至约120mM的氯化钠，作为防腐剂浓度为约3.0mg/mL至约4.0mg/mL的间甲酚，并且所述制剂具有约6.0的pH。

在某些实施方案中，胰高血糖素类似物的稳定液体制剂是即用型制剂。本文中使用的术语“即用型”是指在通过指定的施用途径使用之前，不需要用规定量的稀释剂(例如注射用水或其他合适的稀释剂)进行构造或稀释的制剂。

医学病症

本发明的胰高血糖素类似物药物制剂可用于治疗或预防多种病症或障碍。任选地，制剂可与一种或更多种另外的治疗活性物质组合使用。因此，相关的治疗用途包括：治疗或预防低血糖症(包括但不限于急性低血糖症、慢性低血糖症或严重低血糖症)、2型糖尿病(包括2型糖尿病的疾病进展)、糖耐量受损、1型糖尿病、肥胖症(包括与超重或肥胖有关的疾病或状态)、冠心病、动脉粥样硬化、高血压、血脂异常、肝脂肪变性、β-阻滞剂中毒、胰岛素瘤和冯·吉尔克氏病；预防对象超重；减轻体重；减少食物摄取；增加能量消耗；延缓从糖耐量受损(impaired glucose tolerance，IGT)至2型糖尿病的进展；延缓从2型糖尿病至需要胰岛素的糖尿病的进展；调节食欲或诱导饱腹感(包括治疗贪食症(bulimia)和治疗暴食症(binge-eating))；以及防止在成功体重减轻之后体重反弹。作为一般原则，本发明的药物制剂可用于控制血糖水平。

根据本发明能够治疗或预防的多种形式的低血糖症是糖尿病性低血糖症、急性胰岛素诱导的低血糖症、高胰岛素性低血糖症、严重低血糖症、非糖尿病性低血糖症、反应性低血糖症、空腹低血糖症、药物诱导的低血糖症、先天性高胰岛素性低血糖症、酒精诱导的低血糖症、胃旁路术诱导的低血糖症(包括但不限于在Roux-en-Y胃旁路术之后的餐后低血糖症)、减肥后低血糖症或妊娠期间发生的低血糖症。

在另一个实施方案中，包含本发明的胰高血糖素类似物的液体制剂包含在递送装置中。在一些实施方案中，递送装置是预填充注射器、注射器装置、注射笔、可调节剂量自动注射器、一次性自动注射器、可佩戴式注射器或输注泵。

本发明的制剂可以以多种剂型，例如溶液剂、混悬剂或乳剂施用，并且可用于配制控制释放、持续释放、延长释放、延缓释放或缓慢释放的药物递送系统。更具体但非排他性地，本发明的药物制剂可与本领域技术人员公知的肠胃外控制释放和持续释放系统结合使用。在该方面中，可一般性参考Handbook of Pharmaceutical Controlled Release(Wise,D.L.,ed.,Marcel Dekker,New York,2000)和Drugs and the Pharmaceutical Sciencesvol.99:Protein Formulation and Delivery(MacNally,E.J.,ed.,Marcel Dekker,NewYork,2000)。

(本发明的液体药物制剂的)肠胃外施用可例如使用注射器(例如笔样注射器(pen-like syringe)和/或预充注射器)通过皮下、肌内、腹膜内或静脉内注射来进行。(本发明的液体药物制剂的)肠胃外施用可例如使用自动注射器(例如包含注射器的自动注射器)通过皮下、肌内、腹膜内或静脉内注射来进行。自动注射器可以是单次使用的或多次使用的，并且可提供(和/或被配置以提供)一个或更多个剂量的液体药物制剂。在一些实施方案中，通过将本公开内容的制剂注射到患者的下腹部、臀部、大腿或上臂(包括但不限于外上臂)中来进行肠胃外施用。或者，肠胃外施用可使用输注泵发生，所述输注泵例如以由对象或患者所携带并且包含含有本发明的液体制剂的储器和用于将制剂递送至/施用于对象或患者的输注泵的装置或系统的形式，或以相应的适合于植入到对象或患者体内的小型装置的形式。

在一些情况下，可通过向患者施用单剂量的制剂或通过向患者施用多剂量来治疗患者。在一些情况下，可向患者施用第一剂量的制剂，并随后施用第二剂量的制剂。在一些情况下，可向患者施用第一剂量的制剂，并随后施用第二剂量的制剂，并随后施用一个或更多个另外的剂量的制剂(例如，第三剂量并且可以是第四剂量或另外的剂量)。

实施例

提供以下实施例以举例说明本发明的优选方面并且不旨在限制本发明的范围。

实施例1

材料和方法

达西高血糖素的合成

达西高血糖素由Bachem AG合成。达西高血糖素制剂由Zealand Pharma,A/S,Denmark制备和分析。或者，可如WO 2014/016300(Zealand Pharma A/S)中所述(其内容通过引用整体并入)合成胰高血糖素类似物。

化学稳定性实验

将达西高血糖素溶解在MilliQ水中以达到25mg/mL的储备浓度。通过将肽储备溶液(937μL)等分到管中，随后添加缓冲剂组分的储备溶液，并随后添加MiliQ水至90％的体积来制备制剂。测量pH并根据需要调整然后添加MiliQ水以获得最终体积。然后使用Minisart高流量0.2um过滤器过滤所有制剂。将经过滤的溶液用氮气鼓泡并等分到小瓶中，每个小瓶中含有1.0mL。将小瓶翻转(crimp)并放置在稳定室中。

将所述制剂在5℃和25℃下在加速条件下进行测试，并在第0、9、13、26、34、39和52周时进行测试。制剂的纯度通过HPLC确定，并且降解产物谱通过LC-MS分析确定。

本发明的单剂量(SD)制剂的组合物在表1和表5中示出。所有制剂均含有mg/mL的达西高血糖素并在pH 6.5下配制。制剂1至3探究了制剂中不同氯化钠量的作用，而制剂4至10探究了用于制备制剂的缓冲剂的作用。制剂11是Milli-Q水中的对照制剂，并且制剂12被设计为多剂量制剂，其通过与单剂量制剂进行比较而包含在本研究中。制剂12(MD制剂)的组合物为pH 6.5、4.0mg/mL的胰高血糖素类似物、50mM TRIS、90mM NaCl和3.15mg/mL间甲酚。

本发明的多剂量制剂的组合物在表2至表4和表6中示出。所述制剂均包含间甲酚和4mg/mL达西高血糖素，并且在pH 6.0或pH 6.5下配制。表2a、表3a和表4a报道了HPLC测定的结果。表2b、表3b和表4b报道了SEC测定的结果。

表2中的制剂探究了在pH 6.0和pH 6.5以及两种浓度的氯化钠(90mM和125mM)作为等张调节剂下，使用不同缓冲剂(Tris、Bis-TRIS、MES、柠檬酸钠、乙酸钠和琥珀酸钠)对制剂稳定性的作用。

表3、表4和表6中的制剂与表2中列出的那些相似，并探究了在pH6.0和pH 6.5以及一种浓度的氯化钠(75mM)作为等张调节剂下，使用缓冲剂的组合对制剂稳定性的作用。

HPLC

通过HPLC来测定达西高血糖素样品的纯度。在Dionex Ultimate3000HPLC系统上分析样品。Chromeleon被用作分析软件。使用Kinetex C8柱(150mm×4.6mm，2.6μm)从降解产物中分离达西高血糖素。流动相由A：在MilliQ水(MQW)中的0.45％TFA(V/V)和B：在MeCN/MQW(90:10)中的0.45％TFA(V/V)组成。在40分钟内梯度为35％至38％B，流量为0.5mL/分钟。柱温箱温度设置为30℃，检测器波长设置为220nm，并且注入2μL。

SEC

在Dionex Ultimate 3000HPLC系统(Thermo Fisher)上进行尺寸排阻色谱(SEC)实验，使用等度洗脱(isocratic elution)以流量为0.5mL/分钟来测定制剂中寡聚体的存在。流动相由MQW中的0.1％TFA、45％乙腈组成。用于检测的波长为215nm。注入量为2μg肽。用于SEC分析的柱是TSKgel SuperSW2000(TOSOH Corporation)，4μm，30×4.6mm，并且柱温为25℃。运行时间为12分钟。

结果

在25℃下在加速条件下储存52周之后，获得了制剂中剩余达西高血糖素的纯度％的以下结果。

稳定性研究表明，相对于其他缓冲剂和对照(Milli-Q水)，TRIS、Bis-TRIS、ACES和MES缓冲剂在25℃下储存52周之后全部产生可接受的稳定性水平，尽管加速应力条件用于实验，但80％或更多的达西高血糖素仍保持完整，考虑了实验中所使用的加速储存条件。

对于多剂量制剂，包含间甲酚、TRIS、Bis-TRIS、ACES或MES，以及柠檬酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂或琥珀酸盐缓冲剂，为制剂提供了良好的稳定性水平，如通过HPLC和SEC评估的。

表5

表5b

鉴于现有技术中报道的关于对包含水的胰高血糖素制剂稳定的挑战，所述观察结果是令人惊讶的。

所述结果也是出乎意料的，因为虽然TRIS和Bis-TRIS具有相似的化学结构，但ACES和MES的结构不同。

该实验还表明，液体肽制剂中通常使用的缓冲剂，即磷酸盐、组氨酸和马来酸不能分别提供能够长期储存(75％、68％和57％)的达西高血糖素保持完整的制剂。

该实验还表明，可包含适量的NaCl作为张力调节剂而不影响由在具有四种缓冲剂的情况下提供的稳定性。

数据显示单剂量(SD)制剂(每周0.31％，制剂1)与多剂量(MS)制剂(每周0.32％，制剂12)之间的达西高血糖素损失趋势相似。

实验还表明，可在制剂中包含防腐剂(间甲酚)，同时保持储存稳定性，允许开发多剂量制剂和与递送装置结合使用的制剂。

实施例2-在Roux-en-Y胃旁路术之后达西高血糖素改善了餐后低血糖症

餐后低血糖症是在Roux-en-Y胃旁路术(Roux-en-Y gastric bypass，RYGB)后常见且使人虚弱的并发症，并且尚不存在有效的治疗。在概念验证研究中，我们探究了达西高血糖素(新的稳定的胰高血糖素类似物)对RYGB之后餐后低血糖症的作用。本研究的主要目的是在具有确认的餐后低血糖症的经RYGB手术个体中，检查两种剂量的达西高血糖素对餐后最低血糖浓度(PG)和低血糖症(<3.9mmol/l)中花费的时间的作用。

材料和方法

具有确认的症状性餐后低血糖症(通过6天连续葡萄糖监测验证PG<3.5mmol/l)的10名经RYGB手术个体(2名男性，8名女性；BMI 34.6(21.8至39.0)kg/m²；年龄46(29至67)岁；HbA_1c 32(29至42)mmol/mol；自手术后的时间为9.3(6至11.5)年；自手术后体重减轻53.9(25.1至92.0)kg)完成了双盲、随机、交叉研究，其包含三个单独的治疗日，各自包括标准化的液体混合的膳食测试(25kJ/kg体重；50E％碳水化合物、35E％脂肪和15E％蛋白质)。在餐后PG峰值之后(使用对象特异性线性回归模型，PG恢复至空腹水平的预计时间点之前约10分钟)，施用安慰剂、80或200μg达西高血糖素(D_80μg和D_200μg)的皮下注射。通过爱丁堡低血糖症症状量表(Edinburgh Hypoglycaemia Symptom Scale)，在固定时间间隔进行血液采样和低血糖症状评估。使用线性混合模型和Tukey校正模型分析数据以进行多重比较。

结果

与安慰剂相比，在药物施用之后，用D_80μg和D_200μg二者的治疗显著提高了最低PG(安慰剂：3.0±0.2mmol/l；D_80μg：3.9±0.3mmol/l；D_200μg：4.5±0.2mmol/l；p＝0.002和p＝0.0002)和PG增量AUC(iAUC_{70至240分钟})(安慰剂：752±19分钟×mmol/l；D_80μg：917±22分钟×mmol/l；D_200μg：992±28分钟×mmol/l；p<0.0001和p<0.0001)。此外，与安慰剂(<3.9mmol/l)相比，两种剂量均降低了低血糖症中花费的时间(安慰剂：62.0±8分钟；D_80μg：27.5±12分钟；D_200μg：14.0±9分钟；p＝0.05和p＝0.003)。5名参与者在安慰剂施用之后经历了2级低血糖症(<3.1mmol/l)，而在施用D_200μg之后参与者均未经历这种情况(在2级低血糖症中花费的时间(n＝5)：安慰剂：31.0±5分钟；D_80μg：7±5分钟；D_200μg：0.0±0分钟；p>0.05和p＝0.01)。在三个研究日之间，低血糖症状没有显著变化。

结论

达西高血糖素的单剂量施用有效地改善餐后低血糖症，并代表了用于管理RYGB之后餐后低血糖症的有前景的新的治疗选择。

参考文献

本文中提及的所有参考文献均通过引用整体明确并入。

WO 2014/016300(Zealand Pharma A/S)

et al，Diabetes Care，2017(https://doi.org/10.2337/dc17-1402).

WO 2017/053822(Xeris Pharmaceuticals，Inc.)

WO 2014/124151(Xeris Pharmaceuticals，Inc.)

WO 2016/133863(Eli Lilly and Company)

WO 2019/110838(Adocia)

WO 2008/084237(Arecor Limited)

表1

制剂12(MD制剂)是pH 6.5，4.0mg/mL达西高血糖素，50mM TRIS，90mM NaCl和3.15mg/mL间甲酚。

表2

表2a

*在5℃下沉淀

表2b

*在5℃下沉淀

表2c

表2d

表3

表3a

*在5℃下沉淀

表3b

*在5℃下沉淀

表3c

表3d

表4

表4a

*在5℃下沉淀

表4b

*在5℃下沉淀

与对照制剂相比，所有含乙酸盐的制剂的DLS和吸光度均可接受。

表4c

表4d

表6

表6a

表6b

序列表

<110> ZEALAND PHARMA A/S

<120> 胰高血糖素类似物的液体制剂

<130> 007371412

<140> 20163408.6

<141> 2020-03-16

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(16)

<223> Xaa = Aib

<400> 1

His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa

1 5 10 15

Ala Arg Ala Glu Glu Phe Val Lys Trp Leu Glu Ser Thr

20 25

Claims

1.稳定的水性液体药物制剂，其包含胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物，所述胰高血糖素类似物是：

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH

其中所述制剂包含：

(a)所述胰高血糖素类似物，其以约0.5mg/mL至约10mg/mL的浓度存在；

(b)TRIS、ACES或MES，其作为缓冲剂以约25mM至约75mM的浓度存在；和/或柠檬酸盐、乙酸盐或琥珀酸盐，其作为缓冲剂以约1mM至约30mM的浓度存在；

(d)约5.6至约7.0的pH。

2.权利要求1所述的稳定的水性液体制剂，其中所述TRIS、ACES或MES缓冲剂独立于由所述缓冲剂提供的所述制剂的pH而直接使所述胰高血糖素类似物化学稳定。

3.权利要求1或权利要求2所述的稳定的水性液体制剂，其中相对于在相同测试条件下评价的所述TRIS、ACES或MES缓冲剂被替换为相同浓度和pH的磷酸盐缓冲剂和/或组氨酸缓冲剂的制剂，所述制剂提供了改善的化学稳定性。

4.前述权利要求中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述制剂在25℃下储存52周之后具有这样的降解谱，在此之后所述制剂在25℃下储存52周之后包含以下中的一者或更多者：少于5％的Pyro-Glu 4-29、少于7％的Trp/Tyr氧化、少于4％的犬尿氨酸、少于5％的F-4-29+F5-29和/或少于2％的F3.29，其中所有百分比均通过HPLC测定。

5.前述权利要求中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述制剂具有这样的降解谱，其中所述胰高血糖素类似物不发生马来酸的琥珀酸加成。

6.前述权利要求中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述制剂基本上不包含非质子极性溶剂。

7.前述权利要求中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述制剂基本上不包含二甲基亚砜(DMSO)。

8.前述权利要求中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中水是用于制备所述水性液体制剂的唯一溶剂。

9.前述权利要求中任一项所述的制剂，其中所述胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物以约0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.7mg/mL、1.0mg/mL或约4.0mg/mL的浓度存在。

10.前述权利要求中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述TRIS、ACES或MES缓冲剂作为缓冲剂以约50mM的浓度存在。

11.前述权利要求中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述氯化钠作为张力调节剂以约150mM至约200mM的浓度或以约50mM至约150mM的浓度存在。

12.前述权利要求中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述制剂具有约5.8至6.7的pH，任选地其中所述制剂具有约6.5的pH。

13.前述权利要求中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述制剂不包含选自盐酸、硝酸、硫酸或其组合的电离稳定赋形剂。

14.前述权利要求中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述制剂是即用型制剂。

15.前述权利要求中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述制剂在2至8℃下稳定至少6个月、至少12个月、至少18个月或至少24个月。

16.权利要求15所述的稳定的水性液体制剂，其中在2至8℃下储存18个月之后，所述制剂中的胰高血糖素类似物保持其生物活性的至少约90％。

17.前述权利要求中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述制剂是无菌的和/或不含还原剂。

18.前述权利要求中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述制剂被配制成用于通过注射施用于对象。

19.权利要求18所述的稳定的水性液体制剂，其中所述注射是皮下注射。

20.前述权利要求中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述缓冲剂是TRIS。

21.前述权利要求中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其还包含防腐剂。

22.权利要求21所述的稳定的水性液体制剂，其中所述防腐剂是间甲酚，任选地浓度为约1.0mg/mL至约5.0mg/mL。

23.权利要求1至19中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物以约0.75mg/ml至约1.25mg/mL的浓度存在，所述TRIS、ACES或MES缓冲剂以约40mM至约60mM的浓度存在，氯化钠作为张力调节剂以约150mM至约200mM的浓度存在，并且所述制剂具有约6.0至约6.8的pH。

24.权利要求23所述的稳定的水性液体制剂，其中所述胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物以约1.0mg/mL的浓度存在，TRIS以约50mM的浓度存在，氯化钠作为张力调节剂以约175mM的浓度存在，并且所述制剂具有约6.5的pH。

25.权利要求1至22中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物以约3.0至5.0mg/mL的浓度存在，TRIS、ACES或MES缓冲剂以约40mM至约60mM的浓度存在，氯化钠作为张力调节剂以约50mM至约150mM的浓度存在，间甲酚作为防腐剂以约3.0mg/mL至约4.0mg/mL的浓度存在，并且所述制剂具有约6.0至7.0的pH。

26.权利要求25所述的稳定的水性液体制剂，其中所述胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物以约4mg/mL的浓度存在，TRIS以约50mM的浓度存在，氯化钠作为张力调节剂以约90mM的浓度存在，间甲酚作为防腐剂以约3.0至约4.0mg/mL的浓度存在，并且所述制剂具有约6.5的pH。

27.权利要求1至22中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物以约3.0至5.0mg/mL的浓度存在，TRIS、ACES或MES作为缓冲剂以约25mM至约75mM的浓度存在，和/或柠檬酸盐、乙酸盐或琥珀酸盐作为缓冲剂以约1mM至约30mM的浓度存在，氯化钠作为张力调节剂以约50mM至约150mM的浓度存在，间甲酚作为防腐剂以约3.0mg/mL至约4.0mg/mL的浓度存在，并且所述制剂具有约6.0至7.0的pH。

28.权利要求27所述的稳定的水性液体制剂，其中所述胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物以约4mg/mL的浓度存在，TRIS、ACES、MES缓冲剂以约50mM的浓度存在，或者柠檬酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂和/或琥珀酸盐缓冲剂以约15mM的浓度存在，氯化钠作为张力调节剂以约90mM的浓度存在，间甲酚作为防腐剂以约3.0至约4.0mg/mL的浓度存在，并且所述制剂具有约6.5的pH。

29.权利要求1至28中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述缓冲剂还包含柠檬酸盐、乙酸盐或琥珀酸盐。

30.权利要求1至29中任一项所述的稳定的水性液体制剂，其中所述柠檬酸盐、乙酸盐或琥珀酸盐以10mM至30mM的浓度存在于所述制剂中。

31.递送装置，其包含权利要求1至30中任一项所述的液体制剂。

32.权利要求30所述的递送装置，其中所述递送装置是预填充注射器、注射器装置、注射笔、可调节剂量自动注射器、一次性自动注射器、可佩戴式注射器或输注泵。

33.权利要求1至30中任一项所述的胰高血糖素类似物的制剂，其用于治疗。

34.权利要求1至30中任一项所述的胰高血糖素类似物的制剂，其用于治疗选自以下的疾病或病症：低血糖症(包括但不限于严重低血糖症、急性低血糖症、慢性低血糖症)、2型糖尿病、糖耐量受损、1型糖尿病、肥胖症、冠心病、动脉粥样硬化、高血压、血脂异常、肝脂肪变性、β-阻滞剂中毒、胰岛素瘤或冯·吉尔克氏病。

35.权利要求33或权利要求34所述的用于治疗方法的胰高血糖素类似物的制剂，其中所述疾病或病症是低血糖症。

36.权利要求35所述的用于治疗方法的胰高血糖素类似物的制剂，其中所述低血糖症选自：糖尿病性低血糖症、急性胰岛素诱导的低血糖症、严重低血糖症、非糖尿病性低血糖症、反应性低血糖症、空腹低血糖症、药物诱导的低血糖症、酒精诱导的低血糖症、胃旁路术诱导的低血糖症(包括但不限于在Roux-en-Y胃旁路术之后的餐后低血糖症)或妊娠期间发生的低血糖症。

37.权利要求33至36中任一项所述的用于治疗方法的胰高血糖素类似物的制剂，其中所述胰高血糖素类似物用于治疗人患者。

38.治疗患者的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用权利要求1至30中任一项所述的制剂。

39.在患者中治疗疾病和病症的方法，所述疾病和病症选自低血糖症(包括但不限于严重低血糖症、急性低血糖症、慢性低血糖症)、2型糖尿病、糖耐量受损、1型糖尿病、肥胖症、冠心病、动脉粥样硬化、高血压、血脂异常、肝脂肪变性、β-阻滞剂中毒、胰岛素瘤或冯·吉尔克氏病，所述方法包括向有此需要的患者施用权利要求1至30中任一项所述的制剂。

40.权利要求39所述的方法，其中所述疾病或病症是低血糖症。

41.权利要求40所述的方法，其中所述低血糖症选自：糖尿病性低血糖症、急性胰岛素诱导的低血糖症、严重低血糖症、非糖尿病性低血糖症、反应性低血糖症、空腹低血糖症、药物诱导的低血糖症、酒精诱导的低血糖症、胃旁路术诱导的低血糖症(包括但不限于在Roux-en-Y胃旁路术之后的餐后低血糖症)或妊娠期间发生的低血糖症。

42.权利要求38至41中任一项所述的方法，其中所述患者是人。

43.用于产生包含胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物的稳定的水性液体药物制剂的方法，所述胰高血糖素类似物是：

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH；

所述方法包括配制以下以产生所述稳定的水性液体药物制剂：(a)所述胰高血糖素类似物或者其可药用盐和/或衍生物，其以约0.5mg/mL至约10mg/mL的浓度存在；(b)TRIS、ACES或MES，其作为缓冲剂以约25mM至约75mM的浓度存在；和/或柠檬酸盐、乙酸盐或琥珀酸盐，其作为缓冲剂以约1mM至约30mM的浓度存在；(c)氯化钠，其作为张力调节剂并且以约50mM至约600mM的浓度存在；(d)约6.0至约7.0的pH；以及任选的(e)间甲酚，其浓度为约1.0mg/mL至约5.0mg/mL。

44.通过权利要求43所述的方法产生的制剂，其中所述制剂是权利要求1至30中任一项所述的稳定的水性液体制剂。