ES2599318T3

ES2599318T3 - Formulaciones de pepticuerpos terapéuticos liofilizados

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Publication number: ES2599318T3
Application number: ES07775901.7T
Authority: ES
Inventors: William J. Callahan; Richard L. Remmele, Jr.; Gayathri Ratnaswamy; Ramil F. Latypov; Dingjiang Liu
Original assignee: Amgen Inc
Current assignee: Amgen Inc
Priority date: 2006-04-21
Filing date: 2007-04-20
Publication date: 2017-02-01
Anticipated expiration: 2027-04-20
Also published as: PL2018183T3; EP2594284A1; HRP20161653T1; PT2018183T; TW200744624A; UA99815C2; EP2594285A1; JP2009534392A; TNSN08391A1; SI2018183T1; US20090258017A1; LT2018183T; US20160143852A1; JP2018150380A; CN101484185A; BRPI0710508B1; US10166189B2; NO344947B1; GEP20156253B; IL194653A0

Abstract

Composicion de pepticuerpos liofilizada que comprende un tampon, un agente de carga, un agente estabilizante y un tensioactivo; en la que dicho tampon esta compuesto por un agente tamponante del pH, en la que: a) dicho agente tamponante del pH es histidina 10 mM y el pH es de 5,0; dicho agente de carga es manitol al 4% p/v; dicho agente estabilizante es sacarosa al 2% p/v; y dicho tensioactivo es polisorbato 20 al 0,004% p/v; o b) dicho agente tamponante del pH es histidina 10 mM y el pH es de 7,0; dicho agente de carga es manitol al 4% p/v; dicho agente estabilizante es sacarosa al 2% p/v; y dicho tensioactivo es polisorbato 20 al 0,01% p/v; o c) dicho agente tamponante del pH es histidina 10 mM y el pH es de 5,0; dicho agente de carga es manitol al 2,5% p/v; y dicho agente estabilizante es sacarosa al 3,5% p/v; o d) dicho agente tamponante del pH es histidina 10 mM y el pH es de 4,5; dicho agente de carga es manitol al 4% p/v; dicho agente estabilizante es sacarosa al 2% p/v; y dicho tensioactivo es polisorbato 20 al 0,004% p/v; o e) dicho agente tamponante del pH es histidina 20 mM y el pH es de 5,0; dicho agente de carga es manitol al 4,0% p/v; y dicho agente estabilizante es sacarosa al 2,0% p/v; y en la que dicho pepticuerpo comprende una estructura expuesta en la formula I, Formula I: [(X1)a-F1-(X2)b]-(L1)c-WSPd en la que: F1 es un dominio Fc; X1 se selecciona de: P1-(L2)e- P2-(L3)f -P1-(L2)e- P3-(L4)g-P2-(L3)f -P1-(L230 )e- y P4-(L5)h-P3-(L4)g-P2-(L3)f-P1-(L2)e; X2 se selecciona de: -(L2)e-P1, -(L2)e-P1-(L3)f-P2, -(L2)e-P1-(L3)f-P2-(L4)g-P3, y -(L2)e-P1-(L3)f-P2-(L4)g-P3-(L5)h-P4; en la que P1, P2, P3 y P4 son cada uno independientemente secuencias de peptidos farmacologicamente activos; L1, L2, L3, L4 y L5 son cada uno independientemente grupos de union; a, b, c, e, f, g y h son cada uno independientemente 0 o 1, con la condicion de que al menos uno de a y b sea 1; d es 0, 1 o mayor de 1; y WSP es un polimero soluble en agua, cuya union se realiza en cualquier resto reactivo en F1.

Description

DESCRIPCIÓN

Formulaciones de pepticuerpos terapéuticos liofilizados

Campo de la invención

De manera general, la invención se refiere a formulaciones de pepticuerpos terapéuticos liofilizados y a métodos 5 para producir una composición liofilizada que comprende pepticuerpos terapéuticos.

Antecedentes de la invención

Las proteínas recombinantes son una clase emergente de agentes terapéuticos. Tales agentes terapéuticos recombinantes han generado avances en la modificación química y la formulación de proteínas. Se han identificado modificaciones que pueden proteger proteínas terapéuticas, principalmente bloqueando su exposición a enzimas

10 proteolíticas. Las modificaciones de proteínas también pueden aumentar la estabilidad, el tiempo de circulación y la actividad biológica de la proteína terapéutica. Un artículo de revisión que describe la modificación de proteínas y proteínas de fusión es Francis (1992), Focus on Growth Factors 3:4-10 (Mediscript, Londres).

Una modificación útil es la combinación de un polipéptido con un dominio “Fc” de un anticuerpo. Los anticuerpos comprenden dos partes funcionalmente independientes, un dominio variable conocido como “Fab”, que se une a 15 antígeno, y un dominio constante conocido como “Fc”, que está relacionado con funciones efectoras tales como activación de complemento y ataque por células fagocitarias. Un Fc tiene una semivida en suero larga, mientras que un Fab tiene una vida corta. Capon et al. (1989), Nature 337: 525-31. Véase también, por ejemplo, la patente estadounidense n.º 5.428.130. Cuando se construye junto con un pepticuerpo o proteína terapéutico, un dominio Fc puede proporcionar una semivida más larga o incorporar funciones tales como unión a receptor de Fc, unión a

20 proteína A, fijación de complemento y quizás incluso transferencia a través de la placenta, citado anteriormente. La tabla 1 resume el uso de fusiones de Fc con proteínas terapéuticas conocidas en la técnica.

Tabla 1 – Fusión de Fc con proteínas terapéuticas

Forma de Fc: Pareja de fusión Implicaciones terapéuticas Referencia

lgG1: Extremo N-terminal de CD30-L enfermedad de Hodgkin; linfoma anaplásico; leucemia de células T patente estadounidense n.º 5.480.981

Fcγ2a murino: IL-10 antiinflamatorio; rechazo de trasplante Zheng et al. (1995), J. Immunol. 154: 5590-600

IgG1: Receptor de TNF choque séptico Fisher et al. (1996), N. Engl. J. Med. 334: 16971702; Van Zee, K. et al. (1996), J. lmmunol. 156: 2221-30

lgG, lgA, IgM o IgE (excluyendo el primer dominio): Receptor de TNF inflamación, trastornos autoinmunitarios patente estadounidense n.º 5.808.029, concedida el 15 de septiembre de 1998

IgG1: Receptor de CD4 SIDA Capon et al. (1989), Nature 337: 525-31

IgG1, IgG3: Extremo N-terminal de IL-2 anticancerígeno, antiviral Harvill et al. (1995), Immunotech. 1: 95-105

IgG1: Extremo C-terminal de OPG osteoartritis; densidad ósea documento WO 97/23614, publicado el 3 de julio de 1997

IgG1: Extremo N-terminal de leptina antiobesidad documento PCT/US 97/23183, presentado el 11 de diciembre de 1997

IgCγ1 humana: CTLA-4 trastornos autoinmunitarios Linsley (1991), J. Exp. Med. 174:561-9

También se han estudiado péptidos y proteínas de fusión o conjugados con polietilenglicol (“PEG”) para su uso en productos farmacéuticos, en implantes artificiales y otras aplicaciones en las que la biocompatibilidad es importante.

25 Se han propuesto diversos derivados de PEG que tienen un resto activo para permitir que PEG se una a productos farmacéuticos e implantes y a moléculas y superficies en general. Por ejemplo, se han propuesto derivados de PEG para acoplar PEG a superficies para controlar la humectación, la acumulación de estática y la unión de otros tipos de moléculas a la superficie, incluyendo proteínas o residuos de proteínas.

En otros estudios, se ha mostrado que el acoplamiento de PEG (“pegilación”) es deseable para superar obstáculos 30 encontrados en el uso clínico de moléculas biológicamente activas. La publicación de PCT publicada n.º WO

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péptido (por ejemplo, estructura en disolución). Estas técnicas se denominan de manera colectiva “diseño racional”. En una técnica de este tipo, se realiza una serie de péptidos en la que se sustituye un único residuo cada vez por alanina. Esta técnica se denomina comúnmente “paseo con alanina” o una “exploración con alanina”. Cuando se sustituyen dos residuos (contiguos o separados), se denomina “paseo con alanina doble”. Las sustituciones de aminoácido resultantes pueden usarse solas o en combinación para dar como resultado una nueva entidad peptídica con propiedades terapéuticas favorables.

También puede usarse un análisis estructural de la interacción proteína-proteína para sugerir péptidos que imitan la actividad de unión de ligandos proteicos grandes. En un análisis de este tipo, la estructura cristalina puede sugerir la identidad y orientación relativa de residuos críticos del ligando proteico grande, a partir de lo cual puede diseñarse un péptido. Véase, por ejemplo, Takasaki et al. (1997), Nature Biotech. 15: 1266-70. Estos y otros métodos relacionados se denominan “análisis estructural de proteínas”. Estos métodos analíticos también pueden usarse para investigar la interacción entre una proteína receptora y péptidos seleccionados mediante presentación en fagos, lo cual puede sugerir una modificación adicional de los péptidos para aumentar la afinidad de unión.

Conceptualmente, pueden identificarse compuestos miméticos peptídicos de cualquier proteína usando presentación en fagos y los otros métodos mencionados anteriormente. También se han usado estos métodos para el mapeo de epítopos, para la identificación de aminoácidos críticos en interacciones proteína-proteína, y como candidatos para el descubrimiento de nuevos agentes terapéuticos. Por ejemplo, Cortese et al. (1996), Curr. Opin. Biotech. 7: 616

21. Ahora están usándose bibliotecas de péptidos muy frecuentemente en estudios inmunológicos, tales como mapeo de epítopos. Kreeger (1996), The Scientist 10(13): 19-20.

Resulta de particular interés el uso de bibliotecas de péptidos y otras técnicas en el descubrimiento de péptidos farmacológicamente activos. En la tabla 2 se resumen varios de tales péptidos identificados en la técnica. En las publicaciones mencionadas se describen los péptidos. Se describe la actividad farmacológica de los péptidos, y en muchos casos va seguida por un término abreviado para los mismos entre paréntesis. Algunos de estos péptidos se han modificado (por ejemplo, para formar dímeros reticulados en el extremo C-terminal). Normalmente, se examinaron bibliotecas de péptidos para determinar la unión a un receptor para una proteína farmacológicamente activa (por ejemplo, receptor de EPO). En al menos un caso (CTLA4), se examinó la biblioteca de péptidos para determinar la unión a un anticuerpo monoclonal.

Tabla 2 – Péptidos farmacológicamente activos

Forma de péptido: Pareja de unión /proteína de interés1 Actividad farmacológica Referencia

unido con enlaces disulfuro intrapeptídicos: receptor de EPO compuesto mimético de EPO Wrighton et al. (1996), Science 273: 458-63; patente estadounidense n.º 5.773.569, concedida el 30 de junio de 1998 a Wrighton et al.

dímero reticulado en el extremo C-terminal: receptor de EPO compuesto mimético de EPO Livnah et al. (1996), Science 273: 464-71; Wrighton et al. (1997), Nature Biotechnology 15: 1261-5; solicitud de patente internacional WO 96/40772, publicada el 19 de diciembre de 1996

lineal: receptor de EPO compuesto mimético de EPO Naranda et al. (1999), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96: 7569-74; documento WO 99/47151, publicado el 23 de septiembre de 1999

lineal: c-Mpl compuesto mimético de TPO Cwirla et al. (1997) Science 276: 1696-9; patente estadounidense n.º 5.869.451, concedida el 9 de febrero de 1999; patente estadounidense n.º 5.932.946, concedida el 3 de agosto de 1999

1 El péptido asociado (por ejemplo, receptor de EPO, receptor de IL-1) puede unirse a, o imitar, la proteína indicada en esta columna. Las referencias indicadas para cada una aclaran si los péptidos se unen a, o imitan, la molécula.

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dímero reticulado en el extremo C-terminal: c-Mpl compuesto mimético de TPO Cwirla et al. (1997), Science 276: 1696-9

dímero unido con enlaces disulfuro: estimulación of hematopoyesis (“compuesto mimético de G-CSF”) Paukovits et al. (1984), Hoppe-Seylers Z. Physiol. Chem. 365: 303-11; Laerum et al. (1988), Exp. Hemat. 16: 274-80

dímero unido con alquileno: compuesto mimético de G-CSF Bhatnagar et al. (1996), J. Med. Chem. 39: 3814-9; Cuthbertson et al. (1997), J. Med. Chem. 40: 287682; King et al. (1991), Exp. Hematol. 19:481; King et al. (1995), Blood 86 (Sup. 1): 309a

lineal: receptor de IL-1 enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias (“antagonista de IL-1” o “compuesto mimético de IL-1ra”) patente estadounidense n.º 5.608.035; patente estadounidense n.º 5.786.331; patente estadounidense n.º 5.880.096; Yanofsky et al. (1996), Proc. Natl. Acad. Sci. 93: 7381-6; Akeson et al. (1996), J. Biol. Chem. 271: 30517 -23; Wiekzorek et al. (1997), Pol. J. Pharmacol. 49: 107-17; Yanofsky (1996), PNAs, 93:7381-7386.

lineal: factor tímico sérico (FTS) estimulación de linfocitos (“compuesto mimético de FTS”) Inagaki-Ohara et al. (1996), Cellular Immunol. 171: 30-40; Yoshida (1984), Int. J. Immunopharmacol, 6:1416.

unido con enlaces disulfuro intrapeptídicos: AcM frente a CTLA4 compuesto mimético de CTLA4 Fukumoto et al. (1998), Nature Biotech. 16: 267-70

exocíclico: receptor de TNF-α antagonista de TNF-α Takasaki et al. (1997), Nature Biotech. 15:126670; documento WO 98/53842, publicado el 3 de diciembre de 1998

lineal: receptor de TNF-α antagonista de TNF-α Chirinos-Rojas (1998), J. Imm., 5621-5626.

unido con enlaces disulfuro intrapeptídicos: C3b inhibición de activación del complemento; enfermedades autoinmunitarias (“antagonista de C3b”) Sahu et al. (1996), J. Immunol. 157: 884-91; Morikis et al. (1998), Protein Sci. 7: 619-27

lineal: vinculina procesos de adhesión celular: crecimiento celular, diferenciación celular, cicatrización de heridas, metástasis tumoral (“unión a vinculina”) Adey et al. (1997) Biochem. J. 324: 523-8

lineal: proteína de unión a C4 (C4BP) antitrombótico Linse et al. (1997), J. Biol. Chem. 272: 14658-65

lineal: receptor de urocinasa procesos asociados con la interacción de urocinasa con su receptor (por ejemplo, angiogénesis, invasión y metástasis de células tumorales ); (“antagonista de UKR”) Goodson et al. (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. 91: 7129-33; solicitud internacional WO 97/35969, publicada el 2 de octubre de 1997

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lineal: Mdm2, Hdm2 inhibición de la inactivación de p53 mediada por Mdm2 o hdm2; antitumoral (“antagonista de Mdm/hdm”) Picksley et al. (1994), Oncogene 9: 2523-9; Bottger et al. (1997) J. Mol. Biol. 269: 744-56; Bottger et al. (1996), Oncogene 13: 2141-7

lineal: p21WAF1 antitumoral imitando la actividad de p21WAF1 Ball et al. (1997), Curr. Biol. 7:71-80

lineal: farnesil transferasa anticancerígeno impidiendo la activación del oncogén ras Gibbs et al. (1994), Cell 77:175-178

lineal: dominio efector de Ras anticancerígeno inhibiendo la función biológica del oncogén ras Moodie et al. (1994), Trends Genet 10: 44-48 Rodriguez et al. (1994), Nature 370:527-532

lineal: dominios SH2/SH3 anticancerígeno inhibiendo el crecimiento tumoral con tirosina cinasas activadas; tratamiento de estados patológicos mediados por SH3 (“antagonista de SH3”) Pawson et al (1993), Curr. Biol. 3:434-432; Yu et al. (1994), Cell 76:933-945; Rickles et al. (1994), EMBO J. 13:5598-5604; Sparks et al. (1994), J. Biol. Chem. 269: 23853-6; Sparks et al. (1996), Proc. Natl. Acad. Sci. 93: 15404; patente estadounidense n.º 5.886.150, concedida el 23 de marzo de 1999; patente estadounidense n.º 5.888.763, concedida el 30 de marzo de 1999

lineal: p16INK4 anticancerígeno imitando la actividad de p16; por ejemplo, inhibiendo el complejo de ciclina D-Cdk (“compuesto mimético de p16”) Fåhraeus et al. (1996), Curr. Biol. 6:84-91

lineal: Src, Lyn inhibición de la activación de mastocitos, estados relacionados con lgE, hipersensibilidad de tipo I (“antagonista de mastocitos”) Stauffer et al. (1997), Biochem. 36: 9388-94

lineal: proteasa de mastocitos tratamiento de trastornos inflamatorios mediados por la liberación de triptasa 6 (“inhibidores de proteasas de mastocitos”) solicitud internacional WO 98/33812, publicada el 6 de agosto de 1998

lineal: antígeno de núcleo de VHB (HBcAg) tratamiento de infecciones virales por VHB (“anti-VHB”) Dyson & Muray (1995), Proc. Natl. Acad. Sci. 92: 2194-8

lineal: selectinas adhesión de neutrófilos; enfermedades inflamatorias (“antagonista de selectina”) Martens et al. (1995), J. Biol. Chem. 270: 2112936; solicitud de patente europea EP 0 714 912, publicada el 5 de junio de 1996

lineal, ciclizado: calmodulina antagonista de calmodulina Pierce et al. (1995), Molec. Diversity 1: 259-65; Dedman et al. (1993), J. Biol. Chem. 268: 2302530; Adey & Kay (1996), Gene 169: 133-4

lineal, ciclizado: integrinas direccionamiento a tumores; tratamiento para estados relacionados con solicitudes internacionales WO 95/14714, publicada el 1 de junio de 1995; WO

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acontecimientos celulares mediados por integrinas, incluyendo agregación plaquetaria, trombosis, cicatrización de heridas, osteoporosis, reparación de tejidos, angiogénesis (por ejemplo, para el tratamiento de cáncer), e invasión tumoral (“unión a integrina”): 97/08203, publicada el 6 de marzo de 1997; WO 98/10795, publicada el 19 de marzo de 1998; WO 99/24462, publicada el 20 de mayo de 1999; Kraft et al. (1999), J. Biol. Chem. 274: 1979-1985

cíclico, lineal: fibronectina y componentes de la matriz extracelular de células T y macrófagos tratamiento de estados inflamatorios y autoinmunitarios documento WO 98/09985, publicado el 12 de marzo de 1998

lineal: somatostatina y cortistatina tratamiento o prevención de tumores productores de hormonas, acromegalia, gigantismo, demencia, úlcera gástrica, crecimiento tumoral, inhibición de secreción de hormonas, modulación del sueño o la actividad neuronal solicitud de patente europea 0 911 393, publicada el 28 de abril de 1999

lineal: lipopolisacárido bacteriano antibiótico; choque séptico; trastornos modulables por CAP37 patente estadounidense n.º 5.877.151, concedida el 2 de marzo de 1999

lineal o cíclico, incluyendo D-aminoácidos: pardaxina, melitina antipatógeno documento WO 97/31019, publicado el 28 de agosto de 1997

lineal, cíclico: VIP impotencia, trastornos neurodegenerativos documento WO 97/40070, publicado el 30 de octubre de 1997

lineal: CTL cáncer documento EP 0 770 624, publicado el 2 de mayo de 1997

lineal: THF-gamma2 Burnstein (1988), Biochem., 27:4066-71.

lineal: Amilina Cooper (1987), Proc. Natl. Acad. Sci., 84:8628-32.

lineal: Adrenomedulina Kitamura (1993), BBRC, 192:553-60.

cíclico, lineal: VEGF antiangiogénico; cáncer, artritis reumatoide, retinopatía diabética, psoriasis (“antagonista de VEGF”) Fairbrother (1998), Biochem., 37:1775417764.

cíclico: MMP inflamación y trastornos autoinmunitarios; crecimiento tumoral (“inhibidor de MMP”) Koivunen (1999), Nature Biotech., 17:768-774.

fragmento de HGH: tratamiento de la obesidad patente estadounidense n.º 5.869.452

Equistatina: inhibición de la agregación plaquetaria Gan (1988), J. Biol. Chem., 263:19827-32.

lineal: autoanticuerpo frente a SLE SLE documento WO 96/30057, publicado el 3 de octubre de 1996

GD1alfa: supresión de la metástasis tumoral lshikawa et al. (1998), FEBS Lett. 441 (1): 20-4

anticuerpos antifosfolípidos, contra beta-2-glicoproteína-I (β2GPI): activación de células endoteliales, síndrome antifosfolipídico (APS), fenómenos Blank et al. (1999), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96: 5164-8

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tromboembólicos, trombocitopenia, y pérdida fetal recurrente

lineal: cadena beta de receptor de células T diabetes documento WO 96/11214, publicado el 18 de abril de 1996.

antiproliferativo, antiviral: documento WO 00/01402, publicado el 13 de enero de 2000.

antiisquémico, liberador de hormona del crecimiento: documento WO 99/62539, publicado el 9 de diciembre de 1999.

antiangiogénico: documento WO 99/61476, publicado el 2 de diciembre de 1999.

lineal: agonista de la apoptosis; tratamiento de trastornos asociados con células T (por ejemplo, enfermedades autoinmunitarias, infección viral, leucemia de células T, linfoma de células T) documento WO 99/38526, publicado el 5 de agosto de 1999.

lineal: clase II del MHC tratamiento de enfermedades autoinmunitarias patente estadounidense n.º 5.880.103, concedida el 9 de marzo de 1999.

lineal: andrógeno R, p75, MJD, DCC, huntingtina proapoptótico, útil en el tratamiento del cáncer documento WO 99/45944, publicado el 16 de septiembre de 1999.

lineal: factor de von Willebrand; factor VIII inhibición de interacción con el factor VIII; anticoagulantes documento WO 97/41220, publicado el 29 de abril de 1997.

lineal: LLP1 de lentivirus antimicrobiano patente estadounidense n.º 5.945.507, concedida el 31 de agosto de 1999.

lineal: péptido inductor de sueño delta trastornos del sueño Graf (1986), Peptides 7:1165.

lineal: proteína C reactiva (CRP) inflamación y cáncer Barna (1994), Cancer Immunol. Immunother. 38:38 (1994).

lineal: péptidos activadores de espermatozoides esterilidad Suzuki (1992), Comp. Biochem. Physiol. 1028:679.

lineal: angiotensinas factores hematopoyéticos para estados hematocitopénicos del cáncer, SIDA, etc. Lundergan (1999), J. Periodontal Res. 34(4):223-228.

lineal: gp41 de VIH-1 anti-SIDA Chan (1998), Cell 93:681684.

lineal: PKC inhibición de la resorción ósea Moonga (1998), Exp. Physiol. 83:717-725.

lineal: defensinas (HNP-1, 2, 3, 4) antimicrobiano Harvig (1994), Methods Enz. 236: 160-172.

lineal: p185HER2/neu, C-erbB-2 compuesto mimético de AHNP; antitumoral Park (2000), Nat. Biotechnol. 18:194-198.

lineal: gp130 antagonista de IL-6 documento WO 99/60013, publicado el 25 de noviembre de 1999.

lineal: colágeno, otras proteínas relacionadas con la artritis, de articulaciones, cartílago enfermedades autoinmunitarias documento WO 99/50282, publicado el 7 de octubre de 1999.

lineal: proteína de la envoltura de VIH-1 tratamiento de enfermedades degenerativas documento WO 99/51254, publicado el 14 de octubre de 1999.

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neurológicas

lineal: IL-2 trastornos autoinmunitarios (por ejemplo, rechazo de injerto, artritis reumatoide) documento WO 00/04048, publicado el 27 de enero de 2000; documento WO 00/11028, publicado el 2

de marzo de 2000.

Los péptidos identificados mediante el examen de bibliotecas de péptidos se han considerado “candidatos” en el desarrollo de agentes terapéuticos en vez de usarse como agentes terapéuticos en sí mismos. Como otras proteínas y péptidos, se eliminarán rápidamente in vivo o bien mediante filtración renal, mecanismos de aclaramiento celular en el sistema reticuloendotelial o degradación proteolítica. (Francis (1992), Focus on Growth Factors 3: 4-11). Como resultado, la técnica actualmente usa los péptidos identificados para validar dianas farmacológicas o como armazones para el diseño de compuestos orgánicos que podrían no haberse identificado de manera igual de fácil o rápida mediante examen de bibliotecas químicas. Lowman (1997), Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 26: 401-24; Kay et al. (1998), Drug Disc. Today 3: 370-8.

Normalmente, los péptidos purificados sólo son ligeramente estables en un estado acuoso y experimentan degradación química y física dando como resultado una pérdida de actividad biológica durante el procesamiento y el almacenamiento. Adicionalmente, las composiciones de péptidos en disolución acuosa experimentan hidrólisis, tal como desamidación y escisión de enlaces peptídicos. Estos efectos representan un grave problema para péptidos terapéuticamente activos que se pretenden administrar a seres humanos dentro de un intervalo de dosificación definido basándose en la actividad biológica. El documento WO 2004/092215 describe métodos de tratamiento usando pepticuerpos específicos que pueden unirse a angiopoyetina-2 (Ang-2) humana. El documento WO 01/83525 se refiere a la fusión de dominios Fc con péptidos biológicamente activos y describe que la unión al vehículo aumenta la semivida del péptido, que de lo contrario se degradaría rápidamente in vivo. El documento WO 97/04801 se refiere a formulaciones de proteínas liofilizadas isotónicas. El documento WO 98/14476 se refiere a composiciones farmacéuticas que contienen un ligando de mpl. El documento WO 96/24369 se refiere a composiciones y métodos para obtener preparaciones concentradas de IL-12 y formulaciones de IL-12 adecuadas para su almacenamiento y administración. Liao Xiangmin et al. (2005), Pharmaceutical Research. Vol. 22, n.º 11, págs. 1978-1985, describen la influencia de la concentración del principio farmacéutico activo sobre el estado físico de manitol en sistemas congelados y acuosos.

La administración de péptidos purificados sigue siendo una estrategia de tratamiento prometedora para muchas enfermedades que afectan a la población humana. Sin embargo, no se ha abordado la capacidad del pepticuerpo terapéutico para permanecer como una composición farmacéutica estable a lo largo del tiempo en una variedad de condiciones de almacenamiento y después ser eficaz para pacientes in vivo. Por tanto, sigue existiendo una necesidad en la técnica de proporcionar pepticuerpos terapéuticos en formulaciones estables que son útiles como agentes terapéuticos para el tratamiento de enfermedades y trastornos.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona formulaciones útiles para la liofilización de pepticuerpos terapéuticos, dando como resultado un producto de pepticuerpo terapéutico altamente estable. El producto de pepticuerpo terapéutico estable es útil como agente terapéutico en el tratamiento de individuos que padecen trastornos o estados que pueden beneficiarse de la administración del pepticuerpo terapéutico. La presente invención se define por las reivindicaciones.

En particular, la invención proporciona una composición de pepticuerpos terapéuticos liofilizada que comprende un tampón, un agente de carga, un agente estabilizante, y un tensioactivo; en la que el tampón está compuesto por un agente tamponante del pH, en la que:

a) dicho agente tamponante del pH es histidina 10 mM y el pH es de 5,0;

dicho agente de carga es manitol al 4% p/v;

dicho agente estabilizante es sacarosa al 2% p/v; y

dicho tensioactivo es polisorbato 20 al 0,004% p/v; o

b) dicho agente tamponante del pH es histidina 10 mM y el pH es de 7,0;

dicho agente de carga es manitol al 4% p/v;

dicho agente estabilizante es sacarosa al 2% p/v; y

dicho tensioactivo es polisorbato 20 al 0,01% p/v; o

c) dicho agente tamponante del pH es histidina 10 mM y el pH es de 5,0;

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aspartato. En otra realización, se proporciona el método mencionado anteriormente en el que el agente de carga se selecciona del grupo que consiste en manitol, glicina, sacarosa, dextrano, polivinilpirrolidona, carboximetilcelulosa, lactosa, sorbitol, trehalosa o xilitol. En otra realización, se proporciona el método mencionado anteriormente en el que el agente estabilizante se selecciona del grupo que consiste en sacarosa, trehalosa, manosa, maltosa, lactosa, glucosa, rafinosa, celobiosa, gentiobiosa, isomaltosa, arabinosa, glucosamina, fructosa, manitol, sorbitol, glicina, HCl de arginina, compuestos polihidroxilados, incluyendo polisacáridos tales como dextrano, almidón, hidroxietil-almidón, ciclodextrinas, N-metil-pirolideno, celulosa y ácido hialurónico, cloruro de sodio.

A menos que se especifique en las reivindicaciones, en el método mencionado anteriormente el tensioactivo puede seleccionarse del grupo que consiste en laurilsulfato de sodio, dioctilsulfosuccinato de sodio, dioctilsulfonato de sodio, ácido quenodesoxicólico, sal de sodio de N-lauroilsarcosina, dodecilsulfato de litio, sal de sodio de ácido 1octanosulfónico, cloato de sodio hidratado, desoxicolato de sodio, sal de sodio de ácido glicodesoxicólico, cloruro de benzalconio o cloruro de bencetonio, cloruro de cetilpiridinio monohidratado, bromuro de hexadeciltrimetilamonio, CHAPS, CHAPSO, SB3-10, SB3-12, digitonina, Triton X-100, Triton X-114, lauromacrogol 400, estearato de polioxilo 40, aceite de ricino hidrogenado con polioxietileno 10, 40, 50 y 60, monoesterato de glicerol, polisorbato 20, 40, 60, 65 y 80, lecitina de soja, DOPC, DMPG, DMPC, y DOPG; éster de ácido graso de sacarosa, metilcelulosa y carboximetilcelulosa. En otra realización del método de la invención, la concentración de pepticuerpo terapéutico es de entre aproximadamente 0,25 mg/ml y 250 mg/ml.

En otra realización, se proporciona un método mencionado anteriormente en el que el agente tamponante del pH es histidina 10 mM y en el que el pH es de 5,0; en el que el agente de carga es manitol al 4% p/v; en el que el agente estabilizante es sacarosa al 2% p/v; y en el que el tensioactivo es polisorbato 20 al 0,004% p/v. En otra realización, se proporciona el método mencionado anteriormente en el que P1 comprende una secuencia expuesta en la tabla 6. En otra realización, se proporciona el método mencionado anteriormente en el que la concentración de pepticuerpo terapéutico es de 0,5 mg/ml.

En otra realización, se proporciona un método mencionado anteriormente en el que el agente tamponante del pH es histidina 10 mM y en el que el pH es de 7,0; en el que el agente de carga es manitol al 4% p/v; en el que el agente estabilizante es sacarosa al 2% p/v; y en el que el tensioactivo es polisorbato 20 al 0,01% p/v. En otra realización, se proporciona el método mencionado anteriormente en el que P1 comprende una secuencia expuesta en la tabla 32. En otra realización, se proporciona el método mencionado anteriormente en el que la concentración de pepticuerpo terapéutico es de 30 mg/ml.

En el presente documento se da a conocer además un método mencionado anteriormente en el que el agente tamponante del pH es histidina 20 mM y en el que el pH es de 5,0; en el que el agente de carga es manitol al 3,3% p/v; en el que el agente estabilizante es sacarosa al 2% p/v; y en el que el tensioactivo es polisorbato 20 al 0,01% p/v. En otra realización del método de la invención, P1 comprende una secuencia expuesta en la tabla 4. En otra realización del método de la invención, la concentración de pepticuerpo terapéutico es de 100 mg/ml.

En otra realización, se proporciona un método mencionado anteriormente en el que el agente tamponante del pH es histidina 10 mM y en el que el pH es de 5,0; en el que el agente de carga es manitol al 2,5% p/v; y en el que el agente estabilizante es sacarosa al 3,5% p/v. En otra realización, se proporciona el método mencionado anteriormente en el que P1 comprende una secuencia expuesta en la tabla 31. En otra realización, se proporciona el método mencionado anteriormente en el que la concentración de pepticuerpo terapéutico es de 30 mg/ml.

En otra realización de la invención, se proporciona un método mencionado anteriormente en el que la composición se selecciona del grupo que consiste en: a) histidina 10 mM, pH 4,7, manitol al 4% y sacarosa al 2%, con y sin polisorbato 20 al 0,004%; y b) histidina 10 mM, pH 5, manitol al 4% y sacarosa al 2%, con y sin polisorbato 20 al 0,004%. En otra realización, se proporciona el método mencionado anteriormente en el que P1 comprende una secuencia expuesta en las tablas 21-24. En todavía otra realización, se proporciona el método mencionado anteriormente en el que la concentración de pepticuerpo terapéutico se selecciona del grupo que consiste en 1, 30, 85 y 100 mg/ml.

En otra realización, se proporciona un método mencionado anteriormente que comprende además, antes de la liofilización, las etapas de: b) ajustar el pH de la disolución a un pH de entre aproximadamente 4,0 y aproximadamente 8,0; c) preparar una disolución que contiene el pepticuerpo terapéutico; d) someter a intercambio de tampón la disolución de la etapa (c) en la disolución de la etapa (b); e) añadir una cantidad apropiada de un tensioactivo; y f) liofilizar la mezcla de la etapa (e).

En otra realización, se proporciona el método mencionado anteriormente en el que se proporciona un método para preparar una composición de pepticuerpos terapéuticos reconstituida que comprende las etapas de: a) liofilizar una composición de pepticuerpos terapéuticos mencionada anteriormente; y b) reconstituir la composición de pepticuerpos terapéuticos liofilizada.

En otra realización, se proporciona un kit para preparar una composición farmacéutica acuosa que comprende un primer recipiente que tiene una composición de pepticuerpos terapéuticos liofilizada mencionada anteriormente, y un segundo recipiente que tiene un disolvente fisiológicamente aceptable para la composición liofilizada.

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su inclusión, los excipientes son un componente integral de un producto terminado y por tanto se necesita que sean seguros y se toleren bien por los pacientes. Para fármacos de proteínas, la elección de excipientes es particularmente importante porque pueden afectar tanto a la eficacia como a la inmunogenicidad del fármaco. Por tanto, se necesita desarrollar formulaciones de proteínas con una selección apropiada de excipientes que proporcionan estabilidad, seguridad y comerciabilidad adecuadas.

Una formulación liofilizada está compuesta habitualmente por un tampón, un agente de carga y un estabilizador. La utilidad de un tensioactivo puede evaluarse y seleccionarse en casos en los que la agregación durante la etapa de liofilización o durante la reconstitución llega a ser un problema. Se incluye un agente tamponante apropiado para mantener la formulación dentro de zonas estables de pH durante la liofilización. En la tabla A se proporciona una comparación de los componentes excipientes en formulaciones de proteínas líquidas y liofilizadas.

Tabla A: Componentes excipientes de formulaciones de proteínas liofilizadas

Componente excipiente: Función en la formulación liofilizada

Tampón: o Mantener el pH de la formulación durante la liofilización y tras la reconstitución

Agente de tonicidad / estabilizador: o Los estabilizadores incluyen crio y lioprotectores o Los ejemplos incluyen polioles, azúcares y polímeros o Los crioprotectores protegen a las proteínas frente a estreses de congelación o Los lioprotectores estabilizan las proteínas en el estado secado por congelación

Agente de carga: o Usado para potenciar la elegancia del producto y para prevenir reventones o Proporciona resistencia estructural a la torta de liofilización o Los ejemplos incluyen manitol y glicina

Tensioactivo: o Empleado si la agregación durante el procedimiento de liofilización es un problema o Puede servir para reducir los tiempos de reconstitución o Los ejemplos incluyen polisorbato 20 y 80

Antioxidante: o Habitualmente no se emplea, las reacciones moleculares en la torta de liofilización se retardan en gran medida

Iones de metales/agente quelante: o Puede incluirse si se incluye un ion de metal específico sólo como cofactor o cuando se requiere el metal para la actividad proteasa o Generalmente no se necesitan agentes quelantes en formulaciones de liofilización

Conservante: o Únicamente para formulaciones de múltiples dosis o Proporciona protección frente al crecimiento microbiano en la formulación o Se incluye habitualmente en el diluyente de reconstitución (por ejemplo, bWFI)

El principal desafío en el desarrollo de formulaciones para proteínas terapéuticas es estabilizar el producto frente a los estreses de fabricación, envío y almacenamiento. El papel de los excipientes de formulación es proporcionar estabilización frente a estos estreses. También pueden emplearse excipientes para reducir la viscosidad de formulaciones de proteínas con alta concentración con el fin de permitir su administración y potenciar la conveniencia para los pacientes. En general, pueden clasificarse excipientes basándose en los mecanismos mediante los cuales estabilizan proteínas frente a diversos estreses químicos y físicos. Algunos excipientes se usan para aliviar los efectos de un estrés específico o para regular una propensión particular de una proteína específica. Otros excipientes tienen efectos más generales sobre las estabilidades físicas y covalentes de proteínas. Los excipientes descritos en el presente documento se organizan o bien por su tipo químico o bien por su papel funcional en las formulaciones. Se proporcionan breves descripciones de los modos de estabilización cuando se comenta cada tipo de excipiente.

Dadas las enseñanzas y directrices proporcionadas en el presente documento, los expertos en la técnica sabrán qué cantidad o intervalo de excipiente puede incluirse en cualquier formulación particular para obtener una formulación biofarmacéutica de la invención que fomente la retención de la estabilidad del producto biofarmacéutico. Por ejemplo, la cantidad y el tipo de una sal que va a incluirse en una formulación biofarmacéutica de la invención puede seleccionarse basándose en la osmolalidad deseada (es decir, isotónica, hipotónica o hipertónica) de la disolución final así como las cantidades y osmolalidad de los otros componentes que van a incluirse en la formulación. De manera similar, mostrando a modo de ejemplo con referencia al tipo de poliol o azúcar incluido en una formulación, la cantidad de un excipiente de este tipo dependerá de su osmolalidad.

A modo de ejemplo, la inclusión de sorbitol a aproximadamente el 5% puede lograr isotonicidad mientras que se necesita aproximadamente el 9% de un excipiente de sacarosa para lograr isotonicidad. La selección de la cantidad

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especie iónica. La serie de Hofmeister se originó en la década de 1880 como una manera de clasificar en orden los electrolitos basándose en su capacidad para precipitar proteínas (Cacace M.G., et al., Quarterly Reviews of Biophysics., 30(3): 241-277 (1997)). En este informe, la serie de Hofmeister se usa para ilustrar una escala de efectos de estabilización de proteínas mediante cosolutos iónicos y no iónicos. En la tabla C, los cosolutos se ordenan con respecto a sus efectos generales sobre proteínas en estado de disolución, desde estabilizantes (cosmótropos) hasta desestabilizantes (caótropos). En general, las diferencias en cuanto a los efectos en los aniones son mucho mayores que las observadas para los cationes, y, para ambos tipos, los efectos son más evidentes a concentraciones superiores a las que son aceptables en formulaciones parenterales. Comúnmente se usan altas concentraciones de cosmótropos (por ejemplo, sulfato de amonio >1 molar) para precipitar proteínas de una disolución mediante un proceso denominado “precipitación por sales” en el que el cosmótropo se excluye preferiblemente de la superficie de la proteína reduciendo la solubilidad de la proteína en su conformación nativa (plegada). La eliminación o dilución de la sal devolverá la proteína a la disolución. El término “solubilización por sales” se refiere al uso de iones desestabilizantes (tales como guanidina y cloruro, por ejemplo) que aumentan la solubilidad de proteínas mediante solvatación de los enlaces peptídicos de la estructura principal de la proteína. Aumentar las concentraciones del caótropo favorecerá la conformación en estado desnaturalizado (desplegado) de la proteína a medida que aumenta la solubilidad de la cadena peptídica. La eficacia relativa de iones en cuanto a la “solubilización por sales” y la “precipitación por sales” define su posición en la serie de Hofmeister.

Con el fin de mantener la isotonicidad en una formulación parenteral, las concentraciones de sales se limitan generalmente a menos de 150 mM para combinaciones de iones monovalentes. En este intervalo de concentración, el mecanismo de estabilización por sales se debe probablemente al apantallamiento de fuerzas intramoleculares de repulsión electrostática o fuerzas intermoleculares de atracción (apantallamiento de Debye-Huckel). Resulta interesante que se ha mostrado que las sales caótropicas son más eficaces en la estabilización de la estructura de la proteína que concentraciones similares de cosmótropos mediante este mecanismo. Se cree que los aniones caótropicos se unen más fuertemente que los iones cosmótropicos. Con respecto a la degradación covalente de proteínas, se esperan efectos diferenciales de fuerza iónica sobre este mecanismo según la teoría de Debye-Huckel. Por consiguiente, los informes publicados de estabilización de proteínas mediante cloruro de sodio van acompañados por aquellos en los que el cloruro de sodio aceleró la degradación covalente. Los mecanismos mediante los cuales las sales afectan a la estabilidad de la proteína son específicos de la proteína y pueden variar significativamente en función del pH de la disolución. Un ejemplo en el que un excipiente puede ser útil para permitir la administración de un fármaco de proteína es el de algunas formulaciones de anticuerpos de alta concentración. Recientemente, se ha mostrado que las sales son eficaces en la reducción de la viscosidad de tales formulaciones (Liu J., et al., J. Pharm Sci., 94(9): 1928-40 (2005); fe de erratas en: J Pharm Sci., 95(1): 234-5 (2006)).

Tabla C: La serie de Hofmeister de sales

Cosoluto: Escalas de estabilización

Anión: Catión Otro

F: (CH3)4N+ Glicerol/sorbitol Estabilización (precipitación por sales) Desestabilización (solubilización por sales) Cosmótropo Caótropo

PO4 -: (CH3)2NH+ Sacarosa/trehalosa

SO4 -: NH4 + TMAO

CHCOO -: K+

Cl -: Na+

Br -: Cs+

I -: Li+

Mg2+: Guanidina

Ca2+: Arginina

Ba2+: Urea

Aminoácidos

Los aminoácidos han encontrado un uso versátil en formulaciones de proteínas como tampones, agentes de carga, estabilizadores y antioxidantes. Se emplean histidina y ácido glutámico para tamponar formulaciones de proteínas en el intervalo de pH de 5,5-6,5 y 4,0-5,5, respectivamente. El grupo imidazol de la histidina tiene un pKa = 6,0 y el grupo carboxilo de la cadena lateral del ácido glutámico tiene un pKa de 4,3 lo que hace que sean adecuados para tamponar en sus respectivos intervalos de pH. El acetato, el tampón más comúnmente usado en el intervalo de pH ácido de 4,0-5,5, se sublima durante la liofilización y por tanto no debe usarse en formulaciones secadas por congelación. El ácido glutámico es particularmente útil en tales casos (por ejemplo, Stemgen®). La histidina se encuentra comúnmente en formulaciones de proteínas comercializadas (por ejemplo, Xolair®, Herceptin®, Recombinate®). Proporciona una buena alternativa al citrato, un tampón que se sabe que produce escozor tras la inyección. Resulta interesante que también se ha notificado que la histidina tiene un efecto de estabilización sobre ABX-IL8 (un anticuerpo IgG2) con respecto a la agregación cuando se usa a altas concentraciones en presentaciones tanto líquidas como liofilizadas (Chen B, et al., Pharm Res., 20(12): 1952-60 (2003)). También se observó que la histidina (hasta 60 mM) reducía la viscosidad de una formulación de alta concentración de este anticuerpo. Sin embargo, en el mismo estudio, los autores observaron un aumento de la agregación y alteración del color en formulaciones que contenían histidina durante estudios de congelación-descongelación del anticuerpo en

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II. Ligandos de IL-10: IL-10, BCRF-1, HSV-IL-10 II. IL-10R

III. Interferones: 1. IFN-α1, α2, α4, m, t, IFN-β3 2. IFN-γ III. R de interferón 1. IFNAR 2. IFNGR

IV. IL-1 y ligandos de tipo IL-1: 1. IL-1α, IL-1β, IL-1Ra 2. IL-18, IL-18BP IV. IL-1R 1. IL-1R, IL-1RAcP 2. IL-18R, IL-18RAcP

V. Familia de TNF: 1. TNF-α, TNF-β (LT), FASL, CD40L, CD30L, CD27L, OX40L, OPGL, TRAIL, APRIL, AGP-3, BLys, TL5, Ntn-2, KAY, neutrocina α 3. R de NGF/TNF4 TNF-RI, AGP-3R, DR4, DR5, OX40, OPG, TACI, CD40, FAS, ODR

VI. Quimiocinas: 1. Quimiocinas α: IL-8, GRO α, β, γ, IF-10, PF-4, SDF-1 2. Quimiocinas β: MIP1α, MIP1β, MCP1,2,3,4, RANTES, eotaxina 3. Quimiocinas γ: linfotactina 4. R de quimiocinas 1. CXCR 2. CCR 3. CR 4. DARC5

VII. Factores de crecimiento: 1.1 SCF, M-CSF, PDGF-AA, AB, BB, KDR, FLT-1, FLT-3L, VEGF, SSV-PDGF, HGF, SF 1.2 FGKα, FGFβ 1.3 EGF, TGF-α, VV-F19 (de tipo EGF) 1.4 IGF-I, IGF-II, Insulina 1.5 NGF, BDNF, NT-3, NT-46 2. TGF-β1, β2, β3 VII. RKF 1. Subfamilia de TK 1.1 IgTK III R, VEGF-RI, VEGF-RII 1.2 IgTK IV R 1.3 TK-I rico en cisteína 1.4 TK-II, IGF-RI ricos en cisteína 1.5 TK V nudo de cisteína 2. Subfamilia de serinatreonina cinasa (STKS)7

Otras proteínas de interés como objetivos para la generación de péptidos en la presente invención incluyen las siguientes: αvβ3 5 αvβ1 Ang-2 B7 B7RP1 CRP1 10 Calcitonina

STAT y moléculas distintas de receptor relacionadas. Se han clonado IL-14, IL-16 e IL-18 pero según el código de receptor siguen sin asignar.3 Los receptores de TNF usan múltiples moléculas intracelulares diferenciadas para la transducción de señales incluyendo “dominio de muerte” de FAS R y TNF-□R de 55 kDa que participa en sus efectos citotóxicos. R de NGF/TNF puede unirse tanto a NGF como a factores relacionados así como a ligandos de TNF. Los receptores de quimiocinas son siete receptores de dominio transmembrana (7TM, serpentina). Están acoplados a proteína G.4 El antígeno del grupo sanguíneo Duffy (DARC) es un receptor de eritrocitos que puede unirse a diversas quimiocinas. IL-1R pertenece a la superfamilia de inmunoglobulinas pero sus característicos de acontecimientos de transducción de señales siguen sin estar claros.5 Las citocinas neurotróficas también pueden asociarse con receptores de NGF/TNF. 6 STKS pueden abarcar muchos otros factores relacionados con TGF-β que permanecen no asignados. Las proteínas cinasas son una parte intrínseca del dominio intracelular de la familia de receptores cinasas. Las enzimas participan en la transmisión de señales a través de los receptores.

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X7 se selecciona del grupo que consiste en Arg y Lys;

X8 se selecciona del grupo que consiste en Gln, Asn, y Glu;

X9 se selecciona del grupo que consiste en Trp, Tyr y Phe;

X10 se selecciona del grupo que consiste en Leu, Ile, Val, Ala, Phe, Met y Lys;

L1 es un grupo de unión tal como se describe en el presente documento; y

n es0 ó1;

y sales fisiológicamente aceptables de los mismos.

En una realización, L1 comprende (Gly)n, en el que n es de 1 a 20, y cuando n es mayor de 1, hasta la mitad de los residuos Gly puede sustituirse por otro aminoácido seleccionado de los restantes 19 aminoácidos naturales o un estereoisómero de los mismos.

Además de la estructura principal X2-X10 expuesta anteriormente para TMP1 y TMP2, también son posibles otras estructuras relacionadas en las que se añade uno o más de los siguientes a la estructural principal TMP1 y/o TMP2: X1 se une al extremo N-terminal y/o X11, X12, X13 y/o X14 se unen al extremo C-terminal, en el que X1, X12, X13, y X14 son de la siguiente manera:

X1 se selecciona del grupo que consiste en lle, Ala, Val, Leu, Ser, y Arg;

X11 se selecciona del grupo que consiste en Ala, Ile, Val, Leu, Phe, Ser, Thr, Lys, His, y Glu;

X12 se selecciona del grupo que consiste en Ala, Ile, Val, Leu, Phe, Gly, Ser, y Gln;

X13 se selecciona del grupo que consiste en Arg, Lys, Thr, Val, Asn, Gln, y Gly; y

X14 se selecciona del grupo que consiste en Ala, Ile, Val, Leu, Phe, Thr, Arg, Glu, y Gly.

Los compuestos TMP que pueden usarse en conjunción con la presente invención se componen de, es decir, comprenden, al menos 9 subunidades (X2-X10), en el que X2-X10 comprenden la estructura principal. Las subunidades X2-X14 son aminoácidos independientemente seleccionados de entre los 20 aminoácidos naturales, sin embargo, la invención abarca compuestos en los que X2-X14 se seleccionan independientemente del grupo de aminoácidos no naturales atípicos bien conocidos en la técnica. Se identifican aminoácidos específicos para cada posición. Por ejemplo, X2 puede ser Glu, Asp, Lys, o Val. Se usan abreviaturas tanto de tres letras como de una única letra para aminoácidos en el presente documento; en cada caso, las abreviaturas son las estándares que se usan para los 20 aminoácidos naturales o variaciones bien conocidas de las mismas. Estos aminoácidos pueden tener estereoquímica L o D (excepto por Gly, que no es ni L ni D), y los TMP (así como todos los demás compuestos de la invención) pueden comprender una combinación de estereoquímicas. La invención también proporciona moléculas de TMP inversas (así como para todos los demás péptidos dados a conocer en el presente documento) en las que la secuencia del extremo amino terminal al extremo carboxilo terminal de los aminoácidos está invertida. Por ejemplo, el inverso de una molécula que tiene la secuencia normal X1-X2-X3 sería X3-X2-X1. La invención también proporciona moléculas TMP retroinversas (así como para todas las demás moléculas de la invención descritas en el presente documento) en las que, como un TMP inverso, la secuencia del extremo amino terminal al extremo carboxilo terminal de aminoácidos está invertida y los residuos que normalmente son enantiómeros “L” en TMP se alteran a la forma del estereoisómero “D”.

Ejemplos de compuestos TMP que pueden usarse en conjunción con la presente invención por tanto incluyen sin limitación los siguientes compuestos:

IEGPTLRQWLAARA-GPNG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 993)

IEGPTLRQCLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQCLAARA (cíclico) (SEQ. ID NO: 994)

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IEGPTLRQCLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQCLAARA (lineal) (SEQ ID NO 995) IEGPTLRQALAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQALAARA (SEQ. ID NO: 996) IEGPTLRQWLAARA-GGGKGGGG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 997) IEGPTLRQWLAARA-GGGK(BrAc)GGGG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 998) IEGPTLRQWLAARA-GGGCGGGG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 999)

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IEGPTLRQWLAARA-GGGK(PEG) GGGG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 1000) IEGPTLRQWLAARA-GGGC(PEG) GGGG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 1001) IEGPTLRQWLAARA-GGGNGSGG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 1002) IEGPTLRQWLAARA-GGGCGGGG-IEGPTLRQWLAARA

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IIEGPTLRQWLAARA-GGGCGGGG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 1003) IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 1004) Fc-IEGPTLRQWLAARA-GPNG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 1005) Fc-IEGPTLRQWLAARA-GPNG-IEGPTLRQWLAARA-Fc (SEQ. ID NO: 1006) IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARA-Fc (SEQ. ID NO: 1007) Fc-GG-IEGPTLRQWLAARA-GPNG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 1008) Fc-IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 1009)

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Fc-IEGPTLRQCLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQCLAARA (lineal) (SEQ. ID NO: 1011) Fc-IEGPTLRQALAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQALAARA (SEQ. ID NO: 1012) Fc-IEGPTLRQWLAARA-GGGKGGGG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 1013) Fc-IEGPTLRQWLAARA-GGGCGGGG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 1014) Fc-IEGPTLRQWLAARA-GGGNGSGG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 1015) Fc-IEGPTLRQWLAARA-GGGCGGGG-IEGPTLRQWLAARA

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Fc-IEGPTLRQWLAARA-GGGCGGGG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 1016)

Fc-GGGGG-IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARA (SEQ. ID NO: 1017)

Derivados

La invención también contempla derivatizar la parte de péptido y/o vehículo (tal como se describe a continuación) de los compuestos. Tales derivados pueden mejorar la solubilidad, absorción, semivida biológica, y similares de los compuestos. Los restos pueden alternativamente eliminar o atenuar cualquier efecto secundario no deseado de los compuestos y similares. Ejemplos de derivados incluyen compuestos en los que:

1.: El compuesto o alguna parte del mismo es cíclico. Por ejemplo, la parte de péptido puede modificarse para contener dos o más residuos Cys (por ejemplo, en el grupo de unión), que podrían ciclizar por formación de enlaces disulfuro. Para citas a referencias sobre la preparación de derivados ciclizados, véase la tabla 2.

2.: El compuesto está reticulado o se hace incapaz de reticular entre moléculas. Por ejemplo, la parte de péptido puede modificarse para contener un residuo Cys y así ser capaz de formar un enlace disulfuro intermolecular con una molécula similar. El compuesto también puede reticularse a través de su extremo C-terminal, como en la molécula mostrada a continuación.

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Claims

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