ES2562959T3

ES2562959T3 - Tienopirimidinas que contienen un grupo alquilo sustituido para composiciones farmacéuticas

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Publication number: ES2562959T3
Application number: ES11705567.3T
Authority: ES
Inventors: Armin Heckel; Frank Himmelsbach; Joerg Kley; Thorsten Lehmann-Lintz; Norbert Redemann; Achim Sauer; Leo Thomas; Dieter Wiedenmayer; Phillip Black; Wesley Blackaby; Ian Linney; Matthias Austen; John Danilewicz; Martin Schneider; Kay Schreiter
Original assignee: Evotec International GmbH
Current assignee: Evotec International GmbH
Priority date: 2010-02-26
Filing date: 2011-02-25
Publication date: 2016-03-09
Anticipated expiration: 2031-02-25
Also published as: EP2539343A1; CN102858783A; JP5575275B2; EA201201192A1; WO2011104340A1; US20110212103A1; IL221164A0; MX2012009851A; AR080328A1; CL2012002319A1; JP2013520474A; KR20120131171A; EP2539343B1; TW201141483A; US8853193B2; UY33245A; CA2791114A1; AU2011219764A1; BR112012021453A2

Abstract

Un compuesto de fórmula general**Fórmula** en la que X es CH o N, R1 es un átomo de hidrógeno o halógeno o CN o un alquilo C1-3 o un grupo CONH2, R2 es un grupo alquilo C1-6 de cadena lineal o ramificada que está sustituido independientemente con uno o dos átomos de flúor, o uno o dos grupos trifluorometilo, tetrahidropiranilo, ciclopropilo, H2N-CO-, R5NHCO- o (R5)2-NCO-, en la que el grupo ciclopropilo mencionado anteriormente puede estar sustituido con uno o dos F o -CH2-CN, y en la que los dos grupos R5 junto con el átomo de N al cual están unidos pueden formar un anillo de 4 a 8 miembros, en el que un átomo de carbono puede estar remplazado por O, S, SO, SO2 y/o que puede estar sustituido con OH, NH2, N(alquilo C1-3)2, NH(alquilo C1-3), CF3 o alquilo C1-3. o un grupo alquilo C2-6 de cadena lineal o ramificada que está independientemente sustituido en la posición 2 a 6 con uno o dos grupos hidroxi, alcoxi C1-3, amino, CN, R5NH-, (R5)2N-, R5OCONH-, R5CONH-, R5SO2NH-, R5NHCONH-, en los que R5 es un grupo alquilo C1-5, preferentemente un grupo alquilo C1-4, más preferentemente Me, i-Pr o t-Bu, cada uno opcionalmente sustituido con un grupo CF3, NH2, NH(alquilo C1-3), N(alquilo C1-3)2 o MeO-, y en los que los átomos de hidrógeno de cualquiera de los restos NH mencionados anteriormente pueden estar reemplazados por metilo, R3 es un grupo alquilo C1-2 y R4 es un grupo carboxi, alcoxi C1-3-carbonilo, -CONH2, -CONHR7, -CONH-OR7, -CONH-SO2R7 o -CO-NH-L-R6, en el que L es -(CH2)n-, -CH2-C≡C-CH2, o R6 es OH, -NH2, -NHR7, -N(R7)2, -NH-CO2R7 o una amina cíclica de 3 a 6 miembros, tal como pirrolidina o piperidina, n es 2 o 3 y R7 es alquilo C1-4, preferentemente metilo, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable.

Description

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fluoroarabina, gemcitabina, tioguanina, capecitabina, combinaciones tales como adriamicina/daunorrubicina, arabinósido de citosina/citarabina, 4-HC, u otras fosfamidas.

Otros compuestos particularmente preferidos son compuestos tales como clemastina, difenhidramina, dimenhidrinato, prometazina, cetirizina, astemizol, levocabastina, loratidina, terfenadina, ácido acetilsalicílico, salicilato sódico, salsalato, diflunisal, ácido salicilsalicílico, mesalazina, sulfasalazina, osalazina, acetaminofeno, indometacina, sulindaco, etodolaco, tolmetina, ketorolaco, betametasona, budesonida, ácido cromoglicínico, dimeticona, simeticona, domperidona, metoclopramid, acemetacina, oxaceprol, ibuprofeno, naproxeno, ketoprofeno, flubriprofeno, fenoprofeno, oxaprozina, ácido mefenámico, ácido meclofenámico, fenilbutazona, oxifenbutazona, azapropazona, nimesulida, metamizol, leflunamida, eforicoxib, lonazolaco, misoprostol, paracetamol, aceclofenaco, valdecoxib, parecoxib, celecoxib, propifenazona, codeína, oxaprozina, dapsona, prednisona, prednisolona, triamcinolona, dexibuprofeno, dexametasona, flunisolida, albuterol, salmeterol, terbutalina, teofilina, cafeína, naproxeno, sulfato de glucosamina, etanorcept, ketoprofeno, adalimumab, ácido hialurónico, indometacina, dimaleato de proglumetacina, hidroxicloroquina, cloroquina, infliximab, etofenamato, auranofina, oro, cloruro de [224Ra]radio, ácido tiaprofénico, dexketoprofeno(trometamol), cloprednol, aurotiomalato sódico, aurotioglucosa, colchicina, alopurinol, probenecid, sulfinpirazona, benzbromarona, carbamazepina, lornoxicam, fluorocortolona, diclofenaco, efalizumab, idarrubicina, doxorrubicina, bleomicina, mitomicina, dactinomicina, daptomicina, citarabina, fluorouracilo, fluoroarabina, gemcitabina, tioguanina, capecitabina, adriamidina/daunorrubicina, arabonósido de citosina/citarabina, 4-HC, u otras fosfamidas, penicilamina, una preparación de ácido hialurónico, arteparona, glucosamina, MTX, fragmentos soluble del receptor de TNF (tales como etanorcept (Enbrel)) y anticuerpos contra TNF (tales como infliximab (Remicade), natalizumab (Tysabri) y adalimumab (Humira)).

Los expertos en la materia apreciarán que los compuestos de la invención y el agente terapéutico adicional pueden formularse en una forma de dosificación única, o pueden presentarse en formas deferentes de dosis y puede administrarse de forma concomitante (es decir, a la misma vez) o secuencialmente.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden estar en cualquier forma adecuada para el procedimiento pretendido de administración.

Los compuestos de la presente invención pueden administrarse por vía oral, parenteral, tal como broncopulmonar, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intratecal, transdérmica, transmucosa, subdural, local o tópica mediante iontoforesis, sublingual, por pulverización de inhalación, aerosol o rectal y similares en formulaciones monodosis que comprenden opcionalmente excipientes farmacéuticamente aceptables convencionales.

Los excipientes que pueden usarse en la formulación de las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden medios, vehículos, diluyentes, disolventes tales como alcoholes monohídricos tales como etanol, isopropanol y alcoholes polihídricos tales como glicoles y aceites comestibles tales como aceite de soja, aceite de coco, aceite de oliva, aceite de cártamo, aceite de algodón, ésteres oleosos tales como oleato de etilo, miristato de isopropilo; aglutinantes, adyuvantes, solubilizantes, agentes espesantes, estabilizantes, disgregantes, emolientes, agentes lubricantes, agentes tamponantes, emulsionantes, agentes humectantes, agentes de suspensión, agentes edulcorantes, colorantes, aromas, agentes de recubrimiento, conservantes, antioxidantes, agentes de procesamiento, modificadores del suministro de fármacos y potenciadores tales como fosfato de calcio, estearato de magnesio, talco, monosacáridos, disacáridos, almidón, gelatina, celulosa, metilcelulosa, carboximetil celulosa sódica, dextrosa, hidroxipropil-β-ciclodextrina, polivinilpirrolidona, ceras de bajo punto de fusión, resinas de intercambio iónico.

Otros excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados se describen en Remington’s Pharmaceutical Sciences, 15ª Ed., Mack Publishing Co., Nueva Jersey (1991).

Las formas de dosificación para administración oral incluyen comprimidos, cápsulas, grageas, píldoras, obleas, gránulos, líquidos orales tales como jarabes, suspensiones, soluciones, emulsiones, polvo para reconstitución.

Las formas de dosificación para administración parenteral incluyen soluciones o emulsiones acuosas u oleaginosas para infusión, soluciones acuosas u oleaginosas, suspensiones o emulsiones para jeringas de inyección prellenadas, y/o polvos para reconstitución.

Las formas de dosificación para administración local/tópica comprenden insuflaciones, aerosoles, aerosoles de dosis medida, sistemas terapéuticos transdérmicos, parches medicinales, supositorios rectales, y/u óvulos.

La cantidad del compuesto de la presente invención que puede combinarse con los excipientes para formular una forma de dosificación única variará según el huésped tratado y el modo particular de administración.

Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden producirse de un modo conocido per se para los expertos en la materia como se describe, por ejemplo, en Remington’s Pharmaceutical Sciences, 15ª Ed., Mack Publishing Co., Nueva Jersey (1991).

En un aspecto adicional de la invención, se proporciona el uso de un compuesto de tienopirimidina de la presente

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enfermedad a tratarse, la actividad del compuesto particular aplicado, forma de dosificación, modo de aplicación y medicación concomitante. La cantidad terapéuticamente eficaz para una situación dada se determinará fácilmente por experimentación rutinaria y pertenece a las habilidades y criterio del clínico o médico habitual.

Abreviaturas

CDI:: carbonildiimidazol

TEA:: trietilamina

HATU:: hexafluorofosfato de (2-(7-aza-1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio)

TBTU:: 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluroniotetrafluorborato

THF:: tetrahidrofurano

EE:: etilacetato

ACN:: acetonitrilo

EtOH:: etanol

MeOH:: metanol

DCM:: cloruro de metileno

DMF:: N,N-dimetilformamida

EtOAc:: acetato de etilo

HCl:: ácido clorhídrico

t-BuOH:: tert-butanol

DTAD:: azodicarboxilato de di-terc-butilo

DEAD:: azodicarboxilato de dietilo

DIAD:: azodicarboxilato de diisopropilo

LiHMDS:: hexametildisilazano de litio

DIPEA:: diisopropiletil amina

EDC:: 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida

TFA:: ácido trifluoro acético

Salmuera:: solución saturada de cloruro sódico en agua

ta:: temperatura ambiente

min:: minuto

Ejemplos

Intermedio I

2-(2-amino-5-fluorofenoxi)propilcarbamato de terc-butilo

1.1 2-(5-fluoro-2-nitofenoxi)propilcarbamato de terc-butilo

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Se disolvieron 2-nitro-5-fluorofenol (3,0 g) y terc-butil-N-(2-hidroxipropil)carbamato en THF (20 ml) y se añadieron trifenilfosfina (7,5 g) y di-terc-butil-azodicarboxilato. La reacción exotérmica se enfrió en un baño de hielo. Después la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2h. La mezcla se concentró a vacío y el residuo se purificó por medio de cromatografía (gel de sílice/diclorometano:éter de petróleo 1:2). Las fracciones se combinaron y se concentró a vacío. El residuo se disolvió en diclorometano y se lavó con NaOH 1 M. La fase orgánica se separó, se secó, se filtró y se concentró a vacío.

Rendimiento: 3,12 g Espectro de masas IEN: m/z = 315 (M+H)+

I.2: 2-(2-Amino-5-fluorofenoxi)propilcarbamato de terc-butilo

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A una solución de 2-(5-fluoro-2-nitrofenoxi)propilcarbamato de terc-butilo (3,1 g) en MeOH (5 ml) se añadió paladio sobre carbono al 10 % (300 mg) y la mezcla de reacción se hidrogenó a temperatura ambiente a 50 psi (0,34 Mpa). El catalizador se filtró y el filtrado se concentró a vacío.

Rendimiento: 2,5 g Espectro de masas IEN: m/z = 285 (M+H)+

Intermedio II 2-Hidroxibutilcarbamato de terc-butilo

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Se disolvió 1-amino-2-butanol (1,0 g) en diclorometano (50,0 ml) y se añadió dicarbonato de di-(terc-butilo) (2,6 g). 10 La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4h, después se lavó con NaOH 1 M. La fase orgánica se separó y se concentró a vacío.

Rendimiento: 1,8 g

Intermedio III 4-(4-Fluoro-2-hidroxifenilamino)-5-metil-tienol[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

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15 Se combinaron éster metílico de ácido 4-cloro-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico (0,5 g), 2-amino-5-fluorofenol (265,0 mg), ácido p-toluensulfónico monohidratado (75,0 mg) y dioxano (5,0 ml) en un tubo de microondas. La mezcla se calentó a 140 ºC durante 15 minutos bajo irradiación de microondas. Después la mezcla se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y se formó un precipitado. El precipitado se recogió por medio de filtración, se lavó con dioxano, metanol y Et2O para dar lugar al compuesto del título.

20 Rendimiento: 605,0 g Espectro de masas IEN: m/z = 334 (M+H)+

Intermedio IV

4-(2-Hidroxipiridin-3-ilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

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Preparado de forma análoga al ejemplo I-2 usando 4-(5-fluoro-2-nitrofenoxi)-2-metilpentan-2-ol. Rendimiento: 2,12 g

Espectro de masas IEN: m/z = 228 (M+H)+ Intermedio IX 2-(1.1.1-Trifluoropropan-2-iloxi)piridin-3-amina

IX. 1,3-Nitro-2-(1,1,1-trifluoropropan-2-iloxi)piridina

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Se disolvió 1,1,1-trifluoro-2-propanol (3,2 g) en THF (4,0 ml) y se enfrió hasta 0 ºC. Después, se añadió LiHMDS

10 (1 M en THF, 28,3 ml) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a 0 ºC durante 20 minutos. Una solución de 2fluoro-3-nitropiridina (4,0 g) en THF (1 ml) se añadió y la mezcla se agitó durante la noche. Se inactivó por medio de la adición de una solución saturada de NH4Cl y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se secó y se concentró a vacío.

Rendimiento: 6,24 g 15 Espectro de masas IEN: m/z = 237 (M+H)+

IX. 2 2-(1.1.1-Trifluoropropan-2-iloxi)piridin-3-amina

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Se disolvió 3-nitro-(1,1,1-trifluoropropan-2-iloxi)piridina (6,2 g) en metanol (500 ml) y se añadió níquel Raney (1,0 g). La mezcla de reacción se hidrogenó a temperatura ambiente y 5 bar. El catalizador se filtró y el filtrado se concentró 20 a vacío.

Rendimiento: 4,83 g Espectro de masas IEN: m/z = 207 (M+H)+

Intermedio X

2-(1,3-Difluoropropan-2-iloxi)-4-fluoroanilina

25 X. 1 2-(1,3-Difluoropropan-2-iloxi)-4-fluoro-1-nitrobenceno

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Preparado de forma análoga al ejemplo IX.1 usando 2,4-difluoronitrobenceno. Rendimiento: 11,96 g

X.2 2-(1,3-Difluoropropan-2-iloxi)-4-fluoroanilina

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5: Preparado de forma análoga al ejemplo IX.2

Rendimiento: Espectro de masas IEN:: 4,42 g m/z = 206 (M+H)+

Intermedio XI

2-(2-Fluoroproxi)piridin-3-amina

10: XI.1 2-(2-Fluoropropoxi)-3-nitropiridina

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Se disolvió 2-fluoropropan-1-ol (93,6 mg) en THF (10 ml). Se añadió LiHMDS en THF (1 M; 1,2 ml) y la reacción se agitó durante 15 minutos. Después, se añadió una solución de 2-fluoro-3-nitro-piridina (142 mg) en THF y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche.

15 Un solución acuosa de K2CO3 (2 M; 750 µl) se añadió a la mezcla de reacción y se filtró sobre Alox B. El filtrado se concentró a vacío.

Rendimiento: 200 mg Tiempo de retención HPLC: 2,05 min. Procedimiento HPLC: 003_CC_ZQ6

20 XI.2 2-(2-Fluoropropoxi)piridin-3-amina

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Se disolvió 2-(2-fluoropropoxi)-3-nitropiridina (199,97 mg) en una mezcla de THF (10 ml) y metanol (5 ml). Se añadió Pd/C (20 mg) y la mezcla se hidrogenó a temperatura ambiente durante 4h y 3 bar. La mezcla se concentró a vacío.

Rendimiento: 153 mg Tiempo de retención de HPLC: 1,50 min Procedimiento HPLC: 002_CC_ZQ4

Intermedio XII

2-(1-Metoxipropan-2-iloxi)piridin-3-amina

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Se agitaron éster metílico de ácido 4-cloro-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico (15,0 mg), 4-fluoro-2metoxianilina (9,5 g), ácido clorhídrico 4 M en dioxano (4,5 ml) y dioxano (100,0 ml) a 100 ºC durante la noche. Después la mezcla se filtró y el sólido se secó a vacío.

Rendimiento: 24,0 g Espectro de masas IEN: m/z = 348 (M+H)+

XVIII.2 Éster metílico de ácido 4-(4-fluoro-2-hidroxi-fenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico

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El producto resultante de XVIII.1 (24,0 g) se disolvió en DCM (500 ml) y se enfrió con un baño de hielo seco. A la

10 mezcla se añadió gota a gota lentamente tribromuro de boro (35 ml) y se agitó durante 30 min. La mezcla se dejó enfriar hasta temperatura ambiente durante la noche. Después la mezcla se enfrió con un baño de hielo seco. Se añadieron 100 ml de etanol gota a gota a la mezcla y se agitó durante 30 min. y se concentró.

El residuo se suspendió en metanol y se agitó a reflujo durante 1 hora.

La mezcla se filtró y se secó a vacío.

15 Rendimiento: 18,6 g Espectro de masas IEN: m/z = 334 (M+H)+ Tiempo de retención de HPLC: 2,16 min Procedimiento HPLC: 007_CC_ZQ5

XVIII.3 Éster metílico de ácido 4-[2-(1-terc-butoxicarbonil-etoxi)-4-fluoro-fenilamino]-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-620 carboxílico

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Al producto resultante de XVIII.2 (2,0 g) se añadió éster terc-butílico de ácido 2-bromopropiónico (1,4 g), carbonato de cesio (4,8 g) y ACN (50 ml). La mezcla se agitó a 60 ºC durante 2 horas. Después se añadió agua y la mezcla se filtró.

Rendimiento: 2,1 g Espectro de masas IEN: m/z = 462 (M+H)+

XVIII.4 Éster metílico de ácido 4-[2-(1-carboxi-etoxi)-4-fluoro-fenilamino]-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico

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Se disolvió 1,3-difluoro-propan-2-ol (4,2 g) bajo argón en THF (250 ml) y se enfrió a 0 ºC. Se añadió LiHMDS (28 ml) a la mezcla y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Después se enfrió la mezcla a 0 ºC y se añadió 3fluoro-4-nitrobenzonitrilo (1,95 ml) en porciones y se agitó durante 2 horas. La mezcla se vertió en agua y se extrajo con DCM. La fase orgánica se lavó con agua, se secó y se concentró.

Rendimiento: 4,9 g

XIX.2 4-Amino-3-(2-fluoro-1-fluorometil-etoxi)-benzonitrilo

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Se agitaron 3-(2-fluoro-1-fluorometil-etoxi)-4-nitro-benzonitrilo (1,45 g), cloruro de estaño (II) dihidratado (4,00 g) y 10 etanol (60 ml) a 100 ºC durante 2 horas. La mezcla se vertió en agua y se extrajo con DCM. La fase orgánica se lavó con agua, se secó y se concentró. Rendimiento: 1,04 g Intermedio XXIV Amida de ácido 4-cloro-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico

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XXIV.1 Éster metílico de ácido 5-amino-4-ciano-3-metil-tiofen-2-carboxílico

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A una mezcla de metilacetoacetato (80,9 ml), malonitrilo (49,5 g), azufre (24 g) en metanol (750 ml) se añadió morfolina (139,4 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. Después la mezcla se agitó a 20 reflujo durante 3,5 horas. Después de ese tiempo la mezcla se enfrió con un baño de hielo y se filtró. El sólido se lavó con metanol y se secó en horno a 60 ºC.

Rendimiento: 88,2 g Espectro de masas IEN: m/z = 197 (M+H)+

XXIV.2 Éster metílico de ácido 5-metil-4-oxo-3,4-dihidro-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico

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Al producto de XXIV.1 (70 g) se añadió ácido fórmico (875 ml) y la mezcla se agitó a reflujo durante la noche. La mezcla se enfrió de nuevo, se vertió en agua con hielo y se filtró. El sólido se lavó con agua y una pequeña parte de metanol. Después el residuo se trituró con dietiléter.

Rendimiento: 72,98 g Espectro de masas IEN: m/z = 225 (M+H)+

XXIV.3 Ácido 5-metil-4-oxo-3,4-dihidro-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico

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El producto de XXIV.2 (1 g), hidróxido de sodio 4 M (5 ml) y metanol se agitaron a reflujo durante 1 hora. A 10 temperatura ambiente se añadieron 5 ml de ácido clorhídrico 4 M y la mezcla se filtró. El sólido se lavó con agua y se secó a 60 ºC en un horno durante la noche.

Rendimiento: 950 mg Espectro de masas IEN: m/z = 211 (M+H)+

XXIV.4 Cloruro de 4-cloro-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carbonilo

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Se añadió DMF (0,2 ml) a una mezcla del producto de XXIV.3 (1 g) y cloruro de tionilo (10 ml). La mezcla se agitó a reflujo durante 1 hora. Después la mezcla se concentró.

Rendimiento: 1,2 g

XXIV.5 Amida de ácido 4-cloro-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico

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El producto de XXIV.4 (1 g) se disolvió caliente en ACN (10 ml). La mezcla se añadió gota a gota a una solución enfriada en hielo de amoníaco condensado (20 ml) y se agitó durante 15 min. La mezcla se filtró. El sólido se lavó

con agua y se secó en horno a 50 ºC.

Rendimiento: Espectro de masas IEN: 25 Tiempo de retención HPLC: Procedimiento HPLC:: 677 mg 0,766 mM2-SB m/z = 226 (M+H)+ in C18

Intermedio XXVI

3-(2-Amino-5-fluoro-fenoxi)-2-metil-butan-2-ol

XXVI.1 2-Metil-butan-2,3-diol

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Se disolvió 3-hidroxi-3-metil-2-butanon (5 ml) en etanol (20 ml). Se añadió PtO2 (100 mg) y la mezcla se hidrogenó a temperatura ambiente durante 4 h y 3 bar. La mezcla se concentró a vacío.

Rendimiento: 3,87 g

XXVI.2 3-(5-Fluoro-2-nitro-fenoxi)-2-metil-butan-2-ol

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Se preparó de forma análoga al ejemplo XX.2 usando el producto de XXVI.1 (0,9 ml).

Rendimiento: 1,7 g Espectro de masas IEN: m/z = 261 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 1,185 min Procedimiento HPLC: M2-SB-C18

XXVI.3 3-(2-Amino-5-fluoro-fenoxi)-2-metil-butan-2-ol

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Preparado de forma análoga al ejemplo XI.2 usando el producto de XXVI.2 (1,7 g).

Rendimiento: 1,45 g Espectro de masas IEN: m/z = 214 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 0,681 min Procedimiento HPLC: M2-SB-C18

Compuesto 1

2-(5-Fluoro-2-(5-metil-6-(metilcarbamoil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)fenoxi)propilcarbamato de terc-butilo

1.1 4-(2-(1-terc-butoxicarbonilamino)propan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

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Compuesto 2

2.1. Trifluoroacetato de 4-(2-(1-aminopropan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

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5 Se disolvió 4-(2-(1-ter-butoxicarbonilamino)propan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6carboxilato de metilo (500 mg) en una solución de ácido trifluoroacético al 25 % en diclorometano (10 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2h y después se concentró a vacío.

10: Rendimiento: Espectro de masas IEN: m/z = Tiempo de retención HPLC: Procedimiento HPLC: 460 mg 391 (M+H)+ 1,31 min A_9

Análogos adicionales de 2:

Los compuestos listados de la tabla 2 se sintetizaron de forma análoga al ejemplo 2.1 usando los correspondientes derivados protegidos BOC que se muestran en la Tabla 1.

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Compuesto 3 4-(4-Fluoro-2-(1-(metilsulfonamido)propan-2-iloxi)fenilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

3.1. 4-(4-Fluoro-(2-(1-metilsulfonamido)propan-2-iloxi)fenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

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A una solución de trifluoroacetato de 4-(2-(1-aminopropan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6carboxilato de metilo (80 mg) y trietilamina (55 µl) en diclorometano (1,5 ml) se añadió cloruro de metanosulfonilo (16 µl). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después la reacción se interrumpió con agua y

metanol. La fase orgánica se separó y se concentró a vacío.

10: Rendimiento: Espectro de masas IEN: m/z = Tiempo de retención HPLC: Procedimiento HPLC: 68 mg 469 (M+H)+ 1,99 min A_9

Análogos adicionales del compuesto 3:

Los compuestos listados en la tabla 3 se sintetizaron de forma análoga al ejemplo 3.1 usando la amina apropiada y 15 el correspondiente cloruro.

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Compuesto 4

Tri-fluoroacetato de 4-(2-(1-dimetilamino)propan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

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5 Se disolvió trifluoroacetato de 4-(2-(1-aminopropan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6carboxilato de metilo (100 mg) en THF (2,5 ml). Se añadió NaOH (4 M; 55 µl) y formaldehído al 37 % en agua (55 µl). La mezcla se agitó unos pocos minutos. Después se añadió triacetoxiborohidrato de sodio (220 mg) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Después la mezcla se concentró a vacío. El residuo se disolvió en diclorometano y se lavó con NaOH acuoso (1 M). La fase orgánica se separó y se concentró a vacío. El producto se

10 purificó por medio de cromatografía-RP (agua con ácido trifluoroacético al 0,2 %/metanol 72-100 %) para obtener el compuesto del título.

Rendimiento: 83 mg Espectro de masas IEN: m/z = 419 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 1,32 min

15 Procedimiento HPLC: A_9

Compuesto 5

2-(2-(6-Carbamoil-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)-5-fluorofenoxi)propilcarbamato de terc-butilo

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Se disolvió ácido 4-(2-(1-terc-butoxicarbonilamino)propan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6

20 carboxílico (250 mg) y TBTU (170 mg) en DMF (3 ml) y se añadió trietilamina (190 µl). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 min, después se añadieron 0,5 ml de amoníaco concentrado. La reacción se agitó durante 2 h. Después la mezcla de reacción se concentró a vacío y se purificó por medio de cromatografía-RP (agua con ácido trifluoroacético al 2 %/metanol 72-100 %) para proporcionar el compuesto del título.

Rendimiento: 55 mg

25 Espectro de masas IEN: m/z = 476 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 1,80 min Procedimiento HPLC: A_9

Compuesto 6

Trifluoroacetato de (R) y (S)-4-(2-(1-aminopropan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-630 carboxamida

6.1. 2-(2-(6-Carbamoil-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)-5-fluorofenoxi)propilcarbamato de (R) y (S)-terc-butilo

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Enantiómero B

Rendimiento: 11 mg Espectro de masas IEN: m/z = 376 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 1,16 min Procedimiento HPLC: A_9

Compuesto 7

Trifluoroacetato de ácido 4-(2-(1-aminopropan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico

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Sintetizado de forma análoga al ejemplo 2-1 a partir de ácido 4-(2-(1-terc-butoxicarbonil-amino)propan-2-iloxi)-410 fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico.

Rendimiento: 89 mg Espectro de masas IEN: m/z = 377 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 1,26 min Procedimiento HPLC: A_9

15 Compuesto 8

4-(4-Fluoro-2-(1-(3,3,3-trifluoropropilamino)propan-2-iloxi)fenilamino-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxamida

8.1. Trifluoroacetato de 4-(2-(1-aminopropan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxamida

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Se disolvió 2-(2-(6-carbamoil-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)-5-fluorofenoxi)propilcarbamato de terc-butilo 20 (740 mg) en diclorometano (20 ml) y se añadió ácido trifluoroacético (4 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se concentró a vacío para proporcionar el compuesto del título.

Rendimiento: 667 mg Espectro de masas IEN: m/z = 376 (M+H)+

8.2. 4-(4-Fluoro-2-(1-(3,3,3-trifluoropropilamino)propan-2-ilopi)fenilamino-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxamida

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Se disolvió 2,2,2-trifluoroacetato de 4-(2-(1-Aminopropan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6carboxamida (200 mg) en THF (20 ml) y se añadieron tampón a pH 5 (2 ml), 3,3,3-trifluoropropanal (50,4 mg) y cianoborohidruro de sodio (30,8 mg).

5 La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 días. El residuo se diluyó con 10 ml de agua, después el disolvente orgánico se evaporó. La fracción acuosa residual se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se separó, se secó y se concentró a vacío.

Rendimiento: 190 mg Espectro de masas IEN: m/z = 472 (M+H)+ 10 Tiempo de retención HPLC: 1,38 min Procedimiento HPLC: A_10

Compuesto 9

Clorhidrato de 4-(2-(2-aminoetoxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

9.1. 4-(2-(2-(Terc-butoxicarbonilamino)etoxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

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15

Se suspendieron 4-(4-fluoro-2-hidroxifenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo (80,0 mg), Bocamino-etanol (50,0 mg) y trifenilfosfina ligada a polímero (240,0 mg) en THF (3,0 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 min. Después se añadió azodicarboxilato de di-terc-butilo (165,0 mg) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. A esta reacción se añadió celite, la mezcla resultante se filtró a

20 través de celite y el filtrado se concentró a vacío. El residuo se purificó por medio de cromatografía-RP (agua con ácido trifluoro-acético al 0,2 %/metanol 59-100 %)

Rendimiento: 25,0 mg Espectro de masas IEN: m/z = 477 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 2,12 min

25 Procedimiento HPLC: A_9

9.2 Clorhidrato de 4-(2-(2-aminoetoxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

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Sintetizado de forma análoga al ejemplo 9.2 usando 4-(2-(1-(terc-butoxicarbonilamino)butan-2-iloxi)-4fluorofenilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo.

Rendimiento: 21 mg

5 Espectro de masas IEN: m/z = 405 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 1,38 min Procedimiento HPLC: A_9

Compuesto 11

Clorhidrato de 4-(2-(1-aminopropan-2-iloxi)-piridin-3-ilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

10 11.1 4-(2-(1-Terc-butoxicarbonilamino)propan-2-iloxi)piridin-3-ilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

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Preparado de forma análoga al ejemplo 9.1 usando 4-(2-hidroxipiridin-3-ilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6carboxilato de metilo y N-(2-hidroxipropil)-carbamato de terc-butilo.

Rendimiento: 65 mg Espectro de masas IEN: m/z = 474 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 1,97 min Procedimiento HPLC: A_9

11.2 Clorhidrato de 4-(2-(1-aminopropan-2iloxi)-piridin-3-ilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

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Preparado de forma análoga al ejemplo 9.2 usando 4-(2-(1-terc-butoxicarbonil-amino)-propan-2-iloxi)piridin-3ilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo.

Rendimiento: 14 mg Espectro de masas IEN: m/z = 374 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 1,29 min Procedimiento HPLC: A_9

Compuesto 12

Clorhidrato de 4-(2-(4-aminobutan-2iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

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10 Se disolvió éster metílico de ácido 4-cloro-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico (1,25 g), 3-(2-amino-5fluorofenoxi)butilcarbamato de terc-butilo (1,7 g) y ácido p-toloilsulfónico (175 mg) en dioxano (30 ml) y la solución se calentó a reflujo durante la noche. Después la mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se trató con ácido trifluoroacético al 25 % en diclorometano y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La solución se concentró a vacío y el residuo se disolvió en diclorometano y se lavó con bicarbonato sódico. La fase orgánica se separó, se

15 secó y se concentró a vacío. El residuo se trituró con Et2O y el precipitado se filtró.

Rendimiento: 2,14 g Espectro de masas IEN: m/z = 405 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 1,36 min Procedimiento HPLC: A_9

20 Compuesto 13

4-(4-Fluoro-2-(4-(metilsulfonamido)butan-2iloxi)fenilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

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Se disolvieron clorhidrato de 4-(2-(4-aminobutan-2iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo (80 mg) y trietilamina (65 µl) en diclorometano (1,5 ml) y se añadió cloruro de metanosulfonilo (18 µl). La

25 mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después la mezcla se diluyó con agua y algo de etanol. La fase orgánica se separó y se concentró a vacío. El residuo se purificó por medio de cromatografía-RP (agua con ácido trifluoroacético al 0,2 %/metanol 59-100 %).

Rendimiento: 33 mg Espectro de masas IEN: m/z = 483 (M+H)+ 30 Tiempo de retención HPLC: 1,94 min Procedimiento HPLC: A_9

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Compuesto 14

Trifluoroacetato de 4-(2-(dimetilamino)butan-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

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5 Preparado de forma análoga al ejemplo 4.1 usando clorhidrato de 4-(2-(4-aminobutan-2iloxi)-4-fluorofenilamino)-5metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo.

Rendimiento: 53 mg Espectro de masas IEN: m/z = 433 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 1,38 min

10 Procedimiento HPLC: A_9

Compuesto 15

Trifluoroacetato de 4-(2-((4-aminobutan-2iloxi)piridin-3ilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

15.1 4-(2-((4-((Terc-butoxicarbonil)amino)butan-2iloxi)piridin-3ilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

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15

Preparado de forma análoga al ejemplo 1.1 usando éster metílico de ácido 4-cloro-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6carboxílico y 3-(3-aminopiridin-2iloxi)butilcarbamato de terc-butilo.

Rendimiento: 1 g Espectro de masas IEN: m/z = 488 (M+H)+

20 15.2 Trifluoroacetato de 4-(2-((4-aminobutan-2iloxi)piridin-3-ilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

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Preparado de forma análoga al ejemplo 1.2 a partir de trifluoroacetato de 4-(2-((4-aminobutan-2iloxi)piridin-3ilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo.

Rendimiento: 100 mg

5 Espectro de masas IEN: m/z = 388 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 1,26 min Procedimiento HPLC: A_10

Compuesto 16

Bis-trifluoroacetato de 4-(2-(4-aminobutan-2-iloxi)piridin-3-ilamino)-N-(3-dimetilamino)propil)-5-metiltieno[2,310 d]pirimidin-6-carboxamida

16.1 Ácido 4-(2-(4-(terc-butoxicarbonilamino)butan-2iloxi)piridin-3ilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico

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Se disolvió 4-(2-(4-(terc-butoxicarbonilamino)butan-2iloxi)piridin-3ilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo (600 mg) en metanol (10 ml) y se añadió NaOH (1 M; 2,5 ml). La mezcla de reacción se calentó a reflujo

15 durante 15 minutos. Después se enfrió a temperatura ambiente y se añadió HCl (1 M; 2,5 ml). El metanol se evaporó y el residuo se disolvió en diclorometano. La mezcla se lavó con agua. La fase orgánica se secó y se concentró a vacío. El residuo se trituró con Et2O.

Rendimiento: 390 mg Espectro de masas IEN: m/z = 474 (M+H)+

20 16.2 Trifluoroacetato de ácido 4-(2-(4-aminobutan-2iloxi)piridin-3ilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico

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Compuesto 24 4-(2-(1,3-Difluoropropan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-N-(metilsulfonil)tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxamida

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Se disolvió ácido 4-(2-(1,3-difluoropropan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico

5 (197 mg), 4-dimetilaminopiridina (76 mg) y clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (125 mg) en diclorometano (20 ml). Se añadió metanosulfonamida (59,5 mg) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24h. La mezcla se lavó con solución de KHSO4. La fase orgánica se separó, se secó y se concentró a vacío. El residuo se purificó por medio de cromatografía (diclorometano:metanol:NH3 80:20:1). Las fracciones se recogieron y se trituraron con éter diisopropílico.

10 Rendimiento: 57 mg Espectro de IEN: m/z = 475 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 3,11 min Procedimiento HPLC: AC 1

Compuesto 25

15 Clorhidrato de N-((trans)-2-aminociclopropil)-4-(2-(1,3-difluoropropan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metiltieno[2,3d]pirimidin-6-carboxamida

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Se disolvió (trans)-2-(4-(2-(1,3-difluoropropan[2,3-d]pirimidin-6-carboxamido)ciclopropil carbamato de terc-butilo (130 mg) en dioxano (8 ml) y se añadió una solución de HCl en dioxano (4 M; 1,34 ml). La reacción se agitó a 20 temperatura ambiente durante la noche. Se añadió éter dietílico y el precipitado se filtró y se lavó con Et2O para proporcionar el compuesto del título.

Rendimiento: 97 mg Espectro de IEN: m/z = 452 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 2,10 min

25 Procedimiento HPLC: AC 1

Compuesto 26

N-(3-(Dimetilamino)propil-4-(4-fluoro-(2-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metoxi)fenilamino)-5-metil-tieno[2.3-dlpirimidin-6carboxamida

26.1 Metil-4-(4-fluoro-2-((tetrahidro-2-H-piran-4-il)metoxi)fenilamino-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato Se disolvió 4-(4-fluoro-2-hidroxifenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo (100 mg) en DMF (2 ml). Se añadieron 4-bromometiltetrahidropirano (107 mg) y carbonato de potasio (83 mg). La reacción se agitó a 60 ºC durante la noche. Después la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con agua y salmuera. El disolvente se retiró a vacío y el residuo se trituró con Et2O.

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Rendimiento: 130 mg Espectro de IEN: m/z = 432 (M+H)+

26.2 Ácido 4-(4-fluoro-2-((tetrahidro-2-H-piran-4-il)metoxi)fenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico

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10 Se disolvió metil-4-(4-fluoro-2-((tetrahidro-2-H-piran-4-il)metoxi)fenilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato (82 mg) y NaOH (2 M; 0,5 ml) en etanol (2 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después la reacción se diluyó con diclorometano y HCl (2 M). La suspensión se filtró, se lavó con salmuera y éter. El residuo se secó a vacío sobre P2O5.

Rendimiento: 41 mg

15 26.3 N-(3-(Dimetilamino)propil-4-(4-fluoro-2-((tetrahidro-2-H-piran-4-il)metoxi)fenilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin6-carboxamida

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Se añadió HATU (36 mg) a una solución de ácido 4-(4-fluoro-2-((tetrahidro-2-H-piran-4-il)metoxi)fenilamino)-5metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico (36 mg) y DIPEA (17 µl) en DMF (1 ml). La mezcla de reacción se agitó

20 durante 40 min a temperatura ambiente. Después se añadió 3-(dimetilamino)propilamina (49 µl). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se diluyó con EtOAc y se lavó con agua y salmuera. La fase orgánica se concentró a vacío. El residuo se suspendió en Et2O, se filtró y se secó.

Rendimiento: 40 mg Espectro masas IEN: m/z = 502 (M+H)+

25

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Compuesto 29.4:

Preparado de forma análoga al ejemplo 29.3 usando ácido 4-(2-(2-hidroxietoxi)piridin-3-ilamino)-5-metiltieno[2,3d]pirimidin-6-carboxílico y la correspondiente amina.

Estructura: Nombre Rendimiento Masa Tiempo de Retención Procedimiento HPLC Amina

Clorhidrato de N-(3-(dimetilamino)propil)-4-(2-(2-hydroxietoxi) piridin-3-ilamino)-5metiltieno[2,3-d]pirimidin-6carboxamida: 26 mg 431 1,54 004_CC_ ZQ6

Compuesto 30 4-(2-(2,2-Difluoroetoxi)piridin-3-ilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxamida.

30.1 Metil-4-(2-(2,2-difluoroetoxi)piridin-3-ilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato

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Preparado de forma análoga al ejemplo 28.1 a partir de 2-(2,2-difluoroetoxi)piridin-3-amina (171 mg) y éster metílico 10 de ácido cloro-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico (190 mg).

Rendimiento: 376 mg Tiempo de retención HPLC: 2,35 min Procedimiento HPLC: 002_CC_ZQ4

30.2 Ácido 4-(2-(2,2-difluoroetoxi)piridin-3-ilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico

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15

Preparado de forma análoga al ejemplo 28.2 a partir de metil-4-(2-(2,2-difluoroetoxi)piridin-3-ilamino)-5metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato (376 mg).

Rendimiento: 220 mg Espectro de masas IEN: m/z = 367 (M+H)+ 20 Tiempo de retención HPLC: 1,91 min Procedimiento HPLC: 007_CC_ZQ7

30.4 4-(2-(2,2-Difluoroetoxi)piridin-3-ilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxamida

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Preparado de forma análoga al ejemplo 28.3 a partir de ácido 4-(2-(2,2-difluoroetoxi)piridin-3-ilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico (36,6 mg) y amoníaco en dioxano (0,5 M; 2 ml).

Rendimiento: 18 mg

5 Espectro de masas IEN: m/z = 366 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 2,09 min Procedimiento HPLC: 004_CC_ZQ6

Análogos adicionales de 30:

Preparados de forma análoga al ejemplo 30.3 a partir de ácido 4-(2-(2,2-difluoroetoxi)piridin-3-ilamino)-510 metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico y la correspondiente amina.

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Compuesto 31 4-(2-(1-Etilamino)-1-oxopropan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxamida

31.1 Metil-4-(2-(1-terc-butoxi-1-oxopropan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato

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5 Se disolvió 4-(4-fluoro-2-hidroxifenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo (100 mg) y carbonato de cesio (240 mg) en acetonitrilo (2 ml) y se añadió éster terc-butílico de ácido 2-bromopropiónico. La mezcla se agitó a 60 ºC durante 2h. Después la reacción se inactivó con agua y el precipitado se recogió por medio de filtración. La torta residual se lavó con agua y unas pocas gotas de metanol.

Rendimiento: 103 mg 10 Espectro de masas IEN: m/z = 462 (M+H)+

31.2 Ácido 2-(5-fluoro-2-(6-(metoxicarbonil)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)fenoxi)propanoico

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Preparado de forma análoga al ejemplo 8.1 usando metil-4-(2-(1-terc-butoxi-1-oxopropan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato (2,1 g) y ácido trifluoroacético al 50 % en diclorometano (20 ml).

Rendimiento: 1,9 mg Espectro de masas IEN: m/z = 406 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 1,96 min Procedimiento HPLC: A_9

31.3 Metil-4-(2-(1-etilamino)-1-oxopropan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato

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20

A una solución de ácido 2-(5-fluoro-2-(6-(metoxicarbonil)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)fenoxi)propanoico (500 mg) y TBTU (400 mg) en acetonitrilo (10 ml) se añadió trietilamina (430 µl). La mezcla se agitó durante 20 min. Después se añadió etilamina (2 M; 1,5 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después la mezcla de reacción se diluyó con metanol y se purificó por medio de cromatografía.

25 Rendimiento: 360 mg Espectro de masas IEN: m/z = 433 (M+H)+

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Compuesto 32

4-(2-(1-(2-(Dimetilamino)etilamino)-1-oxopropan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

32.1 4-(2-(1-(2-(Dimetilamino)etilamino)-1-oxopropan-2-iloxi)-4-fluorofenilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6carboxilato de metilo

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Preparado de forma análoga al ejemplo 32.3 a partir de ácido 2-(5-fluoro-2-(6-(metoxicarbonil)-5-metiltieno[2,3d]pirimidin-4-ilamino)fenoxi)propanoico (200 mg) y 2-dimetilaminoetilamina (70 µl).

Rendimiento: 136 mg

10 Espectro de masas IEN: m/z = 476 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 2,17 min Procedimiento HPLC: A_4

Compuestos 32.2 -32.35:

Etapa 1

15 Se disolvieron 4-(4-fluoro-2-hidroxifenilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo (667 mg) y el correspondiente alcohol (por ejemplo, etilenglicol 3 eq = 372 mg) en THF (30 ml). Bajo atmósfera de nitrógeno, se añadieron trifenilfosfina (1,1 g) y azodicarboxilato de diisopropilo (844 µl) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante tres días. Se añadió una alícuota adicional del alcohol, azodicarboxilato de diisopropilo y trifenilfosfina y la reacción se agitó durante la noche. Después la mezcla de reacción se filtró y se lavó con

20 diclorometano:metanol 9:1. El filtrado se concentró a vacío y el residuo se purificó por medio de cromatografía para proporcionar los ésteres intermedios.

imagen110

Etapa 2:

Los ésteres intermedios (etapa 1) se disolvieron en una mezcla de metanol (10 ml)/THF (5 ml) y se añadió NaOH

25 (1 M; 5 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante tres días. El disolvente se concentró a vacío y el residuo se neutralizó con HCl (1 M; 5 ml) y el precipitado se recogió por medio de filtración. La torta filtrante se secó, se suspendió en acetonitrilo, se acidificó con HCl y se concentró a vacío para proporcionar los ácidos intermedios (a-I).

imagen111

Compuesto final: Producto intermedio R1 Tiempo de retención Procedimiento HPLC

32.2: a 2,69 004_CC_ZQ7

32.3: b 2,42 004_CC_ZQ6

32.4: c 2,76 004_CC_ZQ7

32.5: d 2,47 004_CC_ZQ7

32.6: e 2,8 004_CC_ZQ7

32.7: f 2,82 004_CC_ZQ7

32.8: g 2,55 004_CC_ZQ7

32.9: h 2,62 004_CC_ZQ7

32.10: i 2,86 004_CC_ZQ7

32.11: j 2,79 004_CC_ZQ7

(Continuación)

32.12: k 2,82 004_CC_ZQ7

32.13: l imagen112 2,68 003_CC_ZQ7

Etapa 3

Se disolvió el ácido y una base de Hünig (25 µl) en DMF (3 ml). Tras unos pocos minutos se añadió HATU (42 mg). A esta mezcla se añadió N,N-dimetil-1,3-propanodiamina (19 µl). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se purificó por medio de cromatografía para proporcionar el compuesto 35.

imagen113

Los siguientes compuestos se sintetizaron de la siguiente manera: (Continuación) (Continuación)

Compuesto final: Producto intermedio NR2R3 Masa Tiempo de retención Procedimiento HPLC

32.14: a 456 1,98 002_CC_ZQ4

32.15: a imagen114 497 1,76 002_CC_ZQ4

32.16: b 486 1,78 002_CC_ZQ4

32.17: c 383 2,01 002_CC_ZQ4

32.18: c imagen115 427 2,00 002_CC_ZQ4

32.19: c 468 1,77 002_CC_ZQ4

32.20: d 453 2,07 002_CC_ZQ4

32.21: d 409 2,07 002_CC_ZQ4

32.22: d 494 1,82 002_CC_ZQ4

32.23: e 453 2,02 002_CC_ZQ4

32.24: e 494 1,79 002_CC_ZQ4

32.25: e 408 2,04 002_CC_ZQ4

32.26: f 464 1,80 002_CC_ZQ4

32.27: f 422 2,03 002_CC_ZQ4

32.28: f 378 2,05 002_CC_ZQ4

32.29: g 451 1,87 002_CC_ZQ4

32.30: g 407 1,89 002_CC_ZQ4

32.31: g 492 1,67 002_CC_ZQ4

32.32: h 363 1,97 002_CC_ZQ4

32.33: h 407 1,96 002_CC_ZQ4

32.34: h 448 1,73 002_CC_ZQ4

32.35: i 476 1,81 002_CC_ZQ4

32.36: i 435 2,06 002_CC_ZQ4

32.37: i 391 2,08 002_CC_ZQ4

32.38: j 500 1,80 002_CC_ZQ4

32.39: k 464 1,8 002_CC_ZQ4

32.40: l 514 2,71 003_CC_ZQ7

32.41: l 526 2,68 003_CC_ZQ7

32.42: l 540 2,81 003_CC_ZQ7

El ácido f y la base de Hünig (15 µl) se disolvieron en DMF (2 ml). Tras unos pocos minutos se añadió TBTU (21,2 mg). A esta mezcla se añadió la amina (0,07 mol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se purificó por medio de cromatografía.

imagen116

imagen117

33.3 Clorhidrato de 4-(2-((1-cianometil)ciclopropil)metoxi)piridin-3-ilamino)-N-(3-(dimetilamino)propil)-5-metiltieno[2,3-dlpirimidin-6-carboxamida

imagen118

Preparado de forma análoga al ejemplo 32.3 usando ácido 4-(2-((1-(cianometil)ciclopropil)metoxi)piridin-3-ilamino)-55 metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico (42,5 mg) y N,N-dimetil-1,3-propanodiamina (17 mg).

Rendimiento: 42,7 mg Espectro de masas IEN: m/z = 480 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 1,69 min Procedimiento HPLC: 004_CC_ZQ6

10 Compuesto 33.4:

Preparado de forma análoga al ejemplo 32.3 usando ácido 4-(2-((1-(cianometil)ciclopropil)-metoxi)piridin-3-ilamino)5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico y amoníaco.

Estructura: Nombre Rendimiento Masa Tiempo de retención Procedimiento HPLC

imagen119: 4-(2-((1-(cianometil)ciclopropil)metoxi)piridin3-ilamino)-5-metiltieno[2,3d]pirim idin-6-carboxamida 18,5 mg 395 2,00 004_CC_ZQ6

15 Compuesto 34

Clorhidrato de 4-(2-((2,2-difluorociclopropilmetoxi)piridin-3-ilamino)-N-(3-(dimetilamino)propil-5-metiltieno[2,3d]pirimidin-6-carboxamida

34.1 4-(2-((2,2-Difluorociclopropil)metoxi)piridin-3-ilamino)-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo

imagen120

20 Preparado de forma análoga al ejemplo 32.1 usando 2-((2,2-difluorociclopropil)metoxi)piridin-3-amina (200 mg) y

éster metílico de ácido cloro-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico (194 mg).

Rendimiento: 57 mg Tiempo de retención HPLC: 2,49 min Procedimiento HPLC: 004_CC_ZQ6

34.2 Ácido 4-(2-((2,2-difluorociclopropil)metoxi)piridin-3-ilamino)-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico

imagen121

Preparado de forma análoga al ejemplo 32 Etapa 2 usando 4-(2-(2,2-difluorociclopropil)metoxi)piridin-3-ilamino)-5metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxilato de metilo (56 mg).

Rendimiento: 110 mg Tiempo de retención HPLC: 2,37 min Procedimiento HPLC: 004_CC_ZQ6

34.3 Clorhidrato de 4-(2-((2,2-difluorociclopropil)metoxi)piridin-3-ilamino)-N-(3-dimetilamino)-5-metil-tieno[2,3d]pirimidin-6-carboxamida

imagen122

15 Preparado de forma análoga al ejemplo 32.3 a partir de ácido 4-(2-(2,2)difluorociclopropil)-metoxi)piridin-3-ilamino)-5metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico (27 mg) y N,N-dimetil-1,3-propanodiamina (11 mg).

Rendimiento: 8,6 mg Espectro de masas IEN: m/z = 477 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 1,83 min

20 Procedimiento HPLC: 004_CC_ZQ6

Compuesto 34.4:

Preparado de forma análoga al ejemplo 32.3 usando ácido 4-(2-((2,2-difluorociclopropil)metoxi)piridin-3-ilamino)-5metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico.

Estructura: Nombre Rendimiento Masa Tiempo de retención Procedimient o HPLC

4-(2-((2,2difluorociclopropil)metoxi)-piridin-3ilamino)-5metiltieno[2,3d]pirimidin-6-carboxamida: 4 mg 392 2,19 004_CC_ZQ6

Compuesto 39 Ácido 4-[2-(1-etilcarbamoil-etoxi)-4-fluoro-fenilamino]-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico

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Al intermedio XVIII (0,36 g) en THF:metanol 1:1 (20 ml) se añadió hidróxido de sodio 1 M (2,00 ml) y se agitó a 50 ºC durante la noche. Después la mezcla se acidificó por medio de la adición de ácido clorhídrico y se concentró. El

residuo se diluyó con agua, se filtró y el sólido se lavó con dietiléter.

10: Rendimiento: Espectro de masas IEN: Tiempo de retención HPLC: Procedimiento HPLC: 0,30 g m/z = 419 (M+H)+ 2,65 min A_4

Compuesto 40

(3-Dimetil-amino-propil)-amida de ácido 4-[2(1-etilcarbamoil-etoxi)-4-fluoro-fenilamino]-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-615 carboxílico

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Preparado de forma análoga al ejemplo 5 usando ácido 4-[2-(1-etilcarbamoil-etoxi)-4-fluoro-fenilamino]-5metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico (60 mg) y N,N-dimetil-1,3-propanodiamina (24 µl).

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El producto de 57.1 (115 mg) y TBTU (70 mg) se disolvieron en DMF (1,5 ml). Se añadió TEA (75 µl) y la mezcla se agitó durante 5 min a temperatura ambiente. Se añadió etanolamina (20 µl) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Posteriormente, la mezcla se diluyó con metanol. La purificación se logró por medio de

5 cromatografía. Las fracciones combinadas se concentraron. Un mezcla de DCM:TFA = 50:50 se añadió al residuo y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Después la mezcla se concentró. Una solución de ácido clorhídrico se añadió y la mezcla se concentró.

Rendimiento: 70 mg Espectro de masas IEN: m/z = 491 (M+H)+

10 Tiempo de retención HPLC: 1,92 min Procedimiento HPLC: A_9

Compuesto 58

Éster metílico de ácido 4-{2-[1-(2-amino-etilcarbamoil)-etoxi]-4-fluoro-fenilamino}-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6carboxílico

imagen137

58.1 Éster metílico de ácido 4-{2-[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-etilcarbamoil)-etoxi-4-fluoro-fenilamino}-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico

imagen138

Preparado de forma análoga al ejemplo 56.1 usando el producto de 55 (170 mg) y N-(2-aminoetil)carbamato de terc20 butilo (90 µl).

Rendimiento: 135 mg Espectro de masas IEN: m/z = 548 (M+H)+

58.2. Éster metílico de ácido 4-{2-[1-(2-amino-etilcarbamoil-etoxi]-4-fluoro-fenilamino}-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6carboxílico

imagen139

5

Preparado de forma análoga al ejemplo 56.2 usando el producto de 57.3 (170 mg).

Rendimiento: 28 mg Espectro de masas IEN: m/z = 448 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 1,83 min

10 Procedimiento HPLC: A_9

Compuesto 59

(2-Hidroxi-etil)amida de ácido 4-{2-[1-(2-amino-etilcarbamoil)-etoxi]-4-fluoro-fenilamino}-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin6-carboxílico

imagen140

15 59.1 Ácido 4-{2-[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-etilcarbamoil)-etoxi]-4-fluoro-fenilamino}-5-metil-tieno[2,3-d]pirimidin-6carboxílico

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Preparado de forma análoga al ejemplo 57.1 usando el producto de 58 (90 mg).

Rendimiento: 73 mg Espectro de masas IEN: m/z = 534 (M+H)+

imagen142

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Se agitaron amida de ácido 4-cloro-5-metil-tieno-[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico (intermedio XXIV) (100 mg), intermedio XXVI (120 mg) y ácido p-toluensulfónico (5 mg) en dioxano (2 ml) a 100 ºC durante 6 horas. Después, la mezcla se filtró. El sólido se lavó con metanol.

5 Rendimiento: 145 mg Espectro de masas IEN: m/z = 405 (M+H)+ Tiempo de retención HPLC: 1,245 min Procedimiento HPLC: M2-SB-C18

Compuesto 61

10 Éster metílico de ácido 4-[2-(1-etilcarbamoil-etoxi)-4-fluoro-fenilamino}-5-metiltieno[2,3-d]pirimidin-6-carboxílico

imagen144

Se disolvieron el producto de 55 (500 mg) y TBTU (400 mg) en ACN (10 ml). Se añadió TEA (430 µl) y la mezcla se agitó durante 20 min. a temperatura ambiente antes de añadir etilamina (1,5 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después la mezcla se diluyó con metanol. La purificación se logró por medio de

15: cromatografía.

Rendimiento: Espectro de masas IEN: Tiempo de retención HPLC: Procedimiento HPLC:: 360 mg m/z = 433 (M+H)+ 1,89 min A_9

20 Se preparó el siguiente compuesto de forma análoga al ejemplo 61 usando el producto de 55 y la correspondiente amina.

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En un ejemplo, el sustrato de quinasa puede tener elementos, diseñados o endógenos, para facilitar su unión o detección para generar una señal que sea adecuada para el análisis del estado de fosforilación de los sustratos. Estos elementos pueden ser, aunque sin limitación, una molécula de biotina o derivado de la misma, un resto de glutatión-S-transferasa, un resto de seis o más restos consecutivos de histidina, una secuencia de aminoácidos o

5 hapteno para que funcione como marca epitópica, un fluorocromo, una enzima o fragmento enzimático. El sustrato de quinasa puede ligarse a estos u otros elementos con un brazo espaciador molecular para evitar la impedancia estérica.

En otro ejemplo, el sustrato de quinasa puede marcarse con un fluoróforo. La unión del reactivo al sustrato marcado en solución puede seguirse mediante la técnica de polarización de fluorescencia como se describe en la bibliografía.

10 En una variación de este ejemplo, una molécula de seguimiento fluorescente puede competir con el sustrato por el analito para detectar la actividad quinasa mediante una técnica que es conocida para los expertos en la materia como polarización de fluorescencia indirecta.

En otro ejemplo más, se usa gama-ATP radiactiva en la reacción de quinasa, y el efecto del agente de ensayo sobre la incorporación de fosfato radiactivo en el sustrato de ensayo se determina respecto a condiciones de control.

15 Se ha demostrado que los compuestos de la invención muestran bajos valores de CI50 en ensayos de selección biológica in vitro como se describe en el ejemplo 2a para la inhibición de la actividad quinasa de Mnk 1 y/o Mnk 2. La siguiente tabla contiene los resultados de ensayo para compuestos ejemplares.

Ejemplo: CI50 de MNK2 [nM] Ejemplo CI50 de MNK2 [nM]

1-2: 52 20-2 25

1-3: 342 20-3 59

1-4: 294 21-2 15

1-5: 459 21-3 11

2-1: 70 21-4 54

2-2: 41 21-5 42

2-3: 50 21-6 12

2-4: 23 21-7 24

3-1: 41 21-8 20

3-2: 204 22-3 296

3-3: 18 23-1 78

3-4: 261 23-2 6

3-5: 443 23-3 4

4: 3144 23-4 8

5: 230 23-5 13

6-1: 164 23-6 10

6-2: 90 23-7 17

7: 14 23-8 8

8-1: - 23-9 7

8-2: 64 23-10 7

9-2: 577 24 7

(Continuación) (Continuación)

Ejemplo: CI50 de MNK2 [nM] Ejemplo CI50 de MNK2 [nM]

10-2: 229 25 12

11-2: 418 26-3 790

12: 52 27-2 33

13: 90 27-3 58

13-2: 471 27-4 73

13-3: 677 28-3 26

13-4: 898 28-4 78

14: 1017 28-5 93

15-2: 174 29-3 86

16-2: 8 29-4 288

16-3: 74 30-2 20

16-4: 44 30-3 18

17: - 30-4 48

18-2: 691 30-5 57

19-1: 1526 31-3 77

19-2: 1166 31-4 19

20-1: 142 31-5 11

31-6: 13 33 47

31-7: 20 33-4 16

32-1: 267 34 54

32-2: 19 34-4 15

32-3: - 39 19

32-4: 13 40 20

32-5: 8 41 31

32-6: 23 42 70

32.7: 5 43 62

32-8: - 44 24

32-9: 13 45 20

32-10: 18 46 84

32-11: 14 47 125

32-12: 12 48 12

32-13: - 49 8

32-14: 65 50 13

Ejemplo: CI50 de MNK2 [nM] Ejemplo CI50 de MNK2 [nM]

32-15: 78 51 10

32-16: 66 52 25

32-17: 16 53 7

32-18: 30 54 11

32-19: 23 55 5403

32-20: 19 56 314

32-21: 8 57 110

32-22: 36 58 119

32-23: 26 59 29

32-24: 25 60 37

32-25: 13 61 77

32-26: 7 62 267

32-27: 7 63 17

32-28: 3

32-29: 170

32-30: 56

32-31: 146

32-32: 27

32-33: 65

32-34: 69

32-35: 35

32-36: 25

32-37: 8

32-38: 26

32-39: 35

32-40: 13

32-41: 25

32-42: 12

32-43: 12

32-44: 6

32-45: 11

Procedimientos de HPLC:

Procedimiento A_10

Waters ZQ 2000; bomba Waters 1515; detector Waters PDA 996; inyector Waters 2747 DAD 200-420 nm 5 fases móviles:

A: Agua con ácido fórmico al 0,10 %

B: Acetonitrilo con ácido fórmico al 0,10 % tiempo en minutos % A % B caudal en ml/min 0,00 95 5 1,50 2,00 0 100 1,50 2,50 0 100 1,50 2,60 95 5 1,50

Fase estacionaria: X-terra EM C18; 4,6 x 30 mm * 2,5 µm

10 Procedimiento AC1

Waters ZQ 2000; bomba Waters 1515; detector Waters PDA 996; inyector Waters 2747 DAD 210-420 nm fases móviles:

A: Agua con ácido fórmico al 0,10 % 15 B: Acetonitrilo con ácido fórmico al 0,10 % tiempo en minutos % A % B caudal en ml/min 0,00 95 5 1,00 0,10 95 5 1,00 3,10 2 98 1,00

4,50 2 98 1,00 5,00 95 5 1,00

Fase estacionaria: X-terra EM C18; 4,6x30mm*2,5 µm

Procedimiento A_9

(procedimiento de conmutación pos/neg)

20 Waters ZQ 2000; bomba Waters 1515; detector Waters PDA 996; inyector Waters 2747 DAD 200-420 nm

fases móviles:

A: Agua con ácido fórmico al 0,10 %

25

imagen149

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Procedimiento 003_CC_ZQ6

Los análisis de EM RP-HPLC se han realizado en un espectrómetro de masas Waters ZQ2000, Alliance 2695, PDA2996 HP1100 HPLC + DAD (intervalo de longitud de onda (nm): 210 a 500) y As 2700 Fases móviles:

5 A: Agua con TFA al 0,10 %

B: MeOH tiempo en minutos % A % B caudal en ml/min 0,00 95 5 1,50 1,3 0 100 1,50 3,00 0 100 1,50 3,40 95 5 1,50

Fase estacionaria: Waters, Sunfire, C18, 3,5 µm, 4,6 x 50 mm. Temperatura de columna: constante a 40 ºC. 10 Detección de serie de diodo es al intervalo de longitud de onda de 210-500 nm.

Procedimiento 004_CC_ZQ6

Los análisis de EM RP-HPLC se han realizado en un espectrómetro de masas Waters ZQ2000, Alliance 2695, PDA2996 HP1100 HPLC + DAD (intervalo de longitud de onda (nm): 210 a 500) y 2700 As Fases móviles:

15 A: Agua con TFA al 0,1 %

B: MeOH tiempo en minutos % A % B caudal en ml/min 0,00 80202 1,7 0 1002 2,5 0 1002 2,6 80202

Fase estacionaria: Waters, Sunfire, C18, 3,5 µm, 4,6 x 50 mm. Temperatura de columna: 60 ºC. 20 Detección de serie de diodo es al intervalo de longitud de onda de 210-500 nm.

Procedimiento 004_CC_ZQ7

25 A: Agua con TFA al 0,15 %

B: MeOH tiempo en minutos % A % B caudal en ml/min 0,00 95 5 1,5 1,5 955 1,5 2,0 0 100 1,5

Fase estacionaria: Waters, Sunfire, C18, 3,5 µm, 4,6 x 50 mm. Temperatura de columna: 40 ºC.

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Claims

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