ES2562462T3 - Formas cristalinas de 3-(2,6-dicloro-3,5-dimetoxifenil)-1-{6-[4-(4-etilpiperazin-1-il)-fenilamino]-pirimidin-4-il}-1-metilurea y sus sales - Google Patents

Abstract

Una sal de ácido monofosfórico del compuesto de Fórmula I:**Fórmula**

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

DESCRIPCION

Formas cristalinas de 3-(2,6-dicloro-3,5-dimetoxifenil)-1-{6-[4-(4-etilpiperazin-1-il)-fenilamino]-pirimidin-4-il}-1- metilurea y sus sales

Campo de la invencion

La presente tecnolog^a se refiere a polimorfos anhidros, polimorfos hidratados y formas amorfas de sales de 3-(2,6- didoro-3,5-dimetoxifenil)-1-{6-[4-(4-etilpiperazin-1-il)-fenilamino]-pirimidin-4-il}-1-metilurea, metodos para prepararlos, composiciones que los contienen y su uso para tratamiento. En las reivindicaciones se describen las realizaciones de la invencion.

Antecedentes

La 3-(2,6-dicloro-3,5-dimetoxifenil)-1-{6-[4-(4-etilpiperazin-1-il)-fenilamino]-pirimidin-4-il}-1-metil-urea (descrita en el documento USSN 11/570983, presentado el 23 de junio de 2005, correspondiente al documento WO2006/00420, y espedficamente en el documento WO2007/071752) tiene la estructura de la Formula I:

imagen1

El compuesto de Formula I es un inhibidor de protema-cinasa y es util en el tratamiento de enfermedades proliferativas en las que intervengan protema-cinasas. En particular, el compuesto de Formula I inhibe cinasas FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, KDR, HER1, HER2, Bcr-Abl, Tie2 y Ret. Es util, por tanto, en el tratamiento de canceres, entre ellos LMA, neoplasia melanodtica, cancer de mama, cancer de colon, cancer de pulmon (en especial cancer de pulmon microdtico), cancer de prostata o sarcoma de Kaposi.

Es bien sabido que la forma cristalina del ingrediente activo farmaceutico (IAF, siglas inglesas API) de un farmaco particular es, frecuentemente, un factor importante en la facilidad de preparacion, higroscopicidad, estabilidad, solubilidad, estabilidad durante el almacenamiento, facilidad de formulacion, velocidad de disolucion en fluidos gastrointestinales y biodisponibilidad in vivo del farmaco. Se presentan formas cristalinas cuando la misma composicion material cristaliza en una disposicion reticular diferente, originando distintas propiedades termodinamicas y estabilidades, espedficas de la forma cristalina particular. Las formas cristalinas pueden incluir tambien diferentes hidratos o solvatos del mismo compuesto. Para decidir cual de las formas es preferible, se comparan las numerosas propiedades de las formas y se elige la forma preferida basandose en las muchas variables de propiedades ffsicas. Es totalmente posible que pueda ser preferible una forma en determinadas circunstancias en donde se consideren cnticos ciertos aspectos tales como la facilidad de preparacion, estabilidad, etc. En otras situaciones, se puede preferir una forma diferente con vistas a una mayor velocidad de disolucion y/o biodisponibilidad mas elevada. Aun no es posible predecir si un compuesto particular o una sal de un compuesto formaran polimorfos, si alguno de tales polimorfos sera adecuado para uso comercial en una composicion terapeutica, o cual o cuales de los polimorfos presentara dichas propiedades deseables.

Compendio

Se describen en la presente memoria formas cristalinas y amorfas del compuesto de Formula I, composiciones que incluyen las formas cristalinas y amorfas y metodos para preparar las formas cristalinas y amorfas y las composiciones. La presente tecnologfa describe ademas metodos para usar las formas cristalinas y amorfas de compuestos de Formula I y sus composiciones, para tratar diversas enfermedades, entre ellas, pero sin limitacion, las que pueden prevenirse, inhibirse o mejorarse por la inhibicion de actividad de cinasa seleccionada de cinasas FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, KDR, HER1, HER2, Bcr-Abl, Tie2 y Ret.

Breve descripcion de los dibujos

Figuras 1A-E. Difractogramas de DRXP (difractometna de rayos X en polvo, siglas inglesas XRPD) de la base libre (Figura 1A) del compuesto de Formula I y sus sales de fosfato: forma A (Figura 1B); y forma B (Figura 1C), el monohidrato de base libre (Figura 1D) y el dihidrato de hidrocloruro (Figura 1E).

Figuras 2A y 2B. Termogramas de CDB (calorimetna diferencial de barrido, siglas inglesas DSC) del compuesto de Formula I como la base libre anhidra (Figura 2A) y como la sal de fosfato (forma A, Figura 2B).

Figuras 3A - 3C. Termogramas de ATG (analisis termogravimetrico, siglas inglesas TGA) del compuesto de Formula I como la base libre anhidra (Figura 3A), como la sal de fosfato (forma A, Figura 3B) y como la sal de hidrocloruro (dihidrato, Figura 3C).

Figuras 4A-4C. Isotermas de sorcion-desorcion para el compuesto de Formula I como la base libre anhidra (Figura 5 4A), como la sal de fosfato (forma A, Figura 4B) y como la base libre monohidrato (Figura 4C) obtenidas mediante

SDV (sorcion dinamica de vapor, siglas inglesas DVS) a 25°C.

Figuras 5A y 5B. Micrograffas de MEB (microscopfa electronica de barrido, siglas inglesas SEM) del compuesto de Formula I como la base libre cristalina (Figura 5A) y como la sal de fosfato (forma A, Figura 5B).

Figura 6. Espectro IR-TF (infrarrojo por transformada de Fourier, siglas inglesas FT-IR) de la sal de fosfato (forma A) 10 del compuesto de Formula I.

Figura 7. Termogramas CDB y ATG del monohidrato de base libre.

Figuras 8A y 8B. Espectros Raman del compuesto de Formula I como la base libre anhidra (Figura 8A) y como el monohidrato de la base libre (Figura 8B).

Figura 9. Estructura por rayos X en monocristal de la celda elemental de la forma de monohidrato de base libre del 15 compuesto de Formula I.

Descripcion detallada

En un aspecto, la presente tecnologfa proporciona formas cristalinas anhidras e hidratadas del compuesto de Formula I (la base libre):

imagen2

20 y, como realizacion de la invencion segun se define en las reivindicaciones, sales de fosfato del mismo.

En una realizacion descrita solo con fines de referencia, la presente tecnologfa proporciona una forma cristalina anhidra de la base libre que tiene un patron de difraccion de rayos X en polvo que comprende un pico caractenstico, en terminos de 20, a aproximadamente 12°. En otra realizacion descrita solo con fines de referencia, el patron de difraccion de rayos X en polvo comprende ademas uno o varios picos caractensticos, en terminos de 20, 25 seleccionados de picos a aproximadamente 10,5°, aproximadamente 15,2°, aproximadamente 19,5° y aproximadamente 21,0°. Por tanto, el patron de difraccion de rayos X en polvo para una forma anhidra de la base libre puede comprender uno, dos, tres, cuatro o cinco picos caractensticos, en terminos de 20, seleccionados de picos a aproximadamente 10,5°, aproximadamente 12,0°, aproximadamente 15,2°, aproximadamente 19,5° y aproximadamente 21,0°. El patron de difraccion de rayos X en polvo puede incluir ademas uno, dos o tres picos 30 caractensticos adicionales, en terminos de 20, seleccionados de picos a aproximadamente 11,9°, aproximadamente

21,3° y aproximadamente 22,6°. En otra realizacion descrita solo con fines de referencia, la forma anhidra cristalina de la base libre tiene un patron de difraccion de rayos X en polvo sustancialmente como el mostrado en la Figura 1A. Tal como se utilizan en la presente memoria, los terminos "aproximadamente" y "sustancialmente" indican, con respecto a valores de 20, que tales valores para picos individuales pueden variar en ± 0,4°. En algunas 35 realizaciones, los valores de 20 para picos individuales pueden variar en ± 0,2°.

Se puede caracterizar termicamente la forma cristalina anhidra de la base libre. En una realizacion descrita solo con fines de referencia, la forma cristalina anhidra de la base libre tiene un termograma de calorimetna diferencial de barrido (CDB) que muestra un inicio de una endotermia a aproximadamente 217°C. En otra realizacion descrita solo con fines de referencia, la forma cristalina anhidra de la base libre tiene un termograma de calorimetna diferencial de 40 barrido sustancialmente como el mostrado en la Figura 2A. Tal como se utilizan en la presente memoria, los terminos "aproximadamente" y "sustancialmente" indican, con respecto a rasgos tales como endotermias, exotermias, desplazamientos de lmea de base, etc., que sus valores pueden variar en ± 2°C. Respecto a la CDB, la variacion en las temperaturas observadas dependera de la velocidad de cambio de temperatura, asf como de la tecnica de preparacion de la muestra y del instrumento particular empleado. Por tanto, los valores indicados en la 45 presente memoria que se refieren a termogramas de CDB pueden variar en ± 4°C.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

Tambien se puede caracterizar mediante espectroscop^a Raman la forma cristalina anhidra de la base libre. En una realizacion descrita solo con fines de referencia, la forma cristalina anhidra de la base libre presenta picos Raman caractensticos a aproximadamente 2.950, aproximadamente 1.619, aproximadamente 1.539, aproximadamente 1.297, aproximadamente 1.233, aproximadamente 1.191 y aproximadamente 998 cm-1. En algunas realizaciones descritas solo con fines de referencia, la forma cristalina anhidra de la base libre presenta uno o varios picos Raman caractensticos adicionales a aproximadamente 3.067, aproximadamente 2.927, aproximadamente 2.828, aproximadamente 1.690, aproximadamente 1.585, aproximadamente 1.458, aproximadamente 1.385, aproximadamente 1.358, aproximadamente 1.098, aproximadamente 1.062, aproximadamente 819, aproximadamente 778, aproximadamente 695, aproximadamente 668, aproximadamente 637, aproximadamente 498, aproximadamente 468 y aproximadamente 420 cm-1. En otra realizacion descrita solo con fines de referencia, la forma cristalina anhidra de la base libre tiene un espectro Raman sustancialmente como el mostrado en la Figura 8A. Tal como se utilizan en la presente memoria, los terminos "aproximadamente" y "sustancialmente" indican, con respecto a valores de numero de onda, que tales valores para picos individuales pueden variar en ±2 cm-1.

En un aspecto descrito solo con fines de referencia, la presente tecnologfa proporciona un monohidrato cristalino de la base libre que tiene un patron de difraccion de rayos X en polvo que comprende un pico caractenstico, en terminos de 20, a aproximadamente 20,3°. En otra realizacion descrita solo con fines de referencia, el patron de difraccion de rayos X en polvo comprende ademas uno o varios picos caractensticos, en terminos de 20, seleccionados de picos a aproximadamente 21,2° y 19°. En otra realizacion descrita solo con fines de referencia, el patron de difraccion de rayos X en polvo comprende ademas uno o varios picos caractensticos, en terminos de 20, seleccionados de picos a aproximadamente 4,7°, aproximadamente 9,4° y aproximadamente 11,0°. Por tanto, el patron de difraccion de rayos X en polvo para una forma de monohidrato de la base libre puede comprender uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis picos caractensticos, en terminos de 20, seleccionados de picos a aproximadamente 4,7°, aproximadamente 9,4°, aproximadamente 11,0°, aproximadamente 18,8°, aproximadamente 20,3° y aproximadamente 21,2°. El patron de difraccion de rayos X en polvo para una forma de monohidrato de la base libre puede incluir adicionalmente uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis o siete picos caractensticos, en terminos de 20, seleccionados de picos a aproximadamente 11,8°, aproximadamente 15,3°, aproximadamente 16,2°, aproximadamente 19,1°, aproximadamente 22,3°, aproximadamente 22,8° y aproximadamente 25,3°. En otra realizacion descrita solo con fines de referencia, la forma de monohidrato cristalino de la base libre tiene un patron de difraccion de rayos X en polvo sustancialmente como el mostrado en la Figura 1D.

Se puede caracterizar termicamente la forma de monohidrato cristalino de la base libre. En una realizacion descrita solo con fines de referencia, la forma de monohidrato cristalino de la base libre tiene un termograma de CDB que muestra un inicio de una endotermia a aproximadamente 211°C. En otra realizacion descrita solo con fines de referencia, la forma de monohidrato cristalino de la base libre tiene un termograma de CDB y/o un termograma de ATG sustancialmente como los mostrados en la Figura 7. El termograma de ATG de la Figura 7 demuestra que, basandose en la perdida de aproximadamente 0,2 mg de una masa de muestra de 6,7 mg, es decir, una perdida de peso de 3,1%, se pierde una molecula de agua (peso molecular 18) del monohidrato (peso molecular 578; y 18/578*100 = 3,1%).

Tambien se puede caracterizar mediante espectroscopfa Raman la forma de monohidrato cristalino de la base libre. En una realizacion descrita solo con fines de referencia, la forma cristalina anhidra de la base libre presenta picos Raman caractensticos a aproximadamente 2.957, aproximadamente 2.831, aproximadamente 1.618,

aproximadamente 1.511, aproximadamente 1.465, aproximadamente 1.361, aproximadamente 1.229,

aproximadamente 1.186 y aproximadamente 994 cm-1. En algunas realizaciones descritas solo con fines de referencia, la forma cristalina anhidra de la base libre presenta picos Raman caractensticos adicionales a aproximadamente 1.580, aproximadamente 1.415, aproximadamente 1.312, aproximadamente 1.284,

aproximadamente 1.184, aproximadamente 1.057, aproximadamente 854, aproximadamente 721, aproximadamente 661 y aproximadamente 624 cm-1. En otra realizacion descrita solo con fines de referencia, la forma de monohidrato cristalino de la base libre tiene un espectro Raman sustancialmente como el mostrado en la Figura 8B.

En otro aspecto, y como realizacion de la invencion, la presente tecnologfa proporciona una sal de acido monofosforico (o fosfato) cristalina anhidra del compuesto de Formula I:

imagen3

En otra realizacion segun la invencion, la sal de acido monofosforico cristalina anhidra es de forma A, que tiene un patron de difraccion de rayos X en polvo que comprende un pico caractenstico, en terminos de 20, a

5

10

15

20

25

30

35

40

aproximadamente 15°. En otra realizacion segun la invencion, el patron de difraccion de rayos X en polvo comprende ademas uno o varios picos caractensticos, en terminos de 20, seleccionados de picos a aproximadamente 13,7°, aproximadamente 16,8°, aproximadamente 21,3° y aproximadamente 22,4°. En otra realizacion segun la invencion, el patron de difraccion de rayos X en polvo comprende ademas uno o varios picos caractensticos, en terminos de 20, seleccionados de picos a aproximadamente 9,2°, aproximadamente 9,6°, aproximadamente 18,7°, aproximadamente 20,0°, aproximadamente 22,9° y aproximadamente 27,2°. En otra realizacion segun la invencion, la forma cristalina anhidra (forma A) de una sal de acido monofosforico (o sal de fosfato) del compuesto de Formula I tiene un patron de difraccion de rayos X en polvo que comprende al menos tres picos caractensticos, en terminos de 20, seleccionados de picos a aproximadamente 13,7°, aproximadamente 15°, aproximadamente 16,8°, aproximadamente 21,3° y aproximadamente 22,4°. Por tanto, el patron de difraccion de rayos X en polvo para la forma A de la sal de fosfato puede comprender uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez u once picos caractensticos, en terminos de 20, seleccionados de picos a aproximadamente 9,2°, aproximadamente 9,6°, aproximadamente 13,7°, aproximadamente 15°, aproximadamente 16,8°, aproximadamente 18,7°, aproximadamente 20,0°, aproximadamente 21,3° y aproximadamente 22,4°, aproximadamente 22,9° y aproximadamente 27,2°. En otra realizacion segun la invencion, la forma cristalina anhidra (forma A) de la sal de fosfato tiene un patron de difraccion de rayos X en polvo sustancialmente como el mostrado en la Figura 1B.

Se puede caracterizar termicamente la forma cristalina anhidra de la sal de fosfato (forma A). En una realizacion segun la invencion, la forma cristalina anhidra de la sal de fosfato (forma A) tiene un termograma de calorimetna diferencial de barrido que muestra un inicio de una endotermia a aproximadamente 184°C. En otra realizacion segun la invencion, la forma cristalina anhidra de la sal de fosfato (forma A) tiene un termograma de calorimetna diferencial de barrido sustancialmente como el mostrado en la Figura 2B.

En otro aspecto segun la invencion, la presente tecnologfa proporciona una sal de acido monofosforico cristalina anhidra de forma B, que tiene un patron de difraccion de rayos X en polvo que comprende uno o varios picos caractensticos, en terminos de 20, seleccionados de picos a aproximadamente 9,3°, aproximadamente 12,5°, aproximadamente 13,4°, aproximadamente 15,8° y aproximadamente 17°. En un realizacion segun la invencion, la forma B de la sal de fosfato tiene un patron de difraccion de rayos X en polvo sustancialmente como el mostrado en la Figura 1C.

En un aspecto descrito solo con fines de referencia, la presente tecnologfa proporciona la forma amorfa de la sal de acido monofosforico del compuesto de Formula I:

imagen4

El patron de DRXP de la forma amorfa de la sal de acido monofosforico del compuesto de Formula I no manifiesta picos caractensticos. No se ha observado por CDB ninguna transicion vftrea aparente para la forma amorfa, pero durante el ATG la muestra comenzo a descomponerse a aproximadamente 115°C, una temperatura muy inferior a la de la forma A de la sal de fosfato cristalina.

En otro aspecto mas descrito solo con fines de referencia, la presente tecnologfa proporciona la sal de acido clorhudrico (o hidrocloruro) del compuesto de Formula I:

imagen5

En una realizacion, la sal de hidrocloruro es el dihidrato cristalino. El dihidrato puede tener un patron de difraccion de rayos X en polvo que comprenda uno o varios picos caractensticos, en terminos de 20, seleccionados de picos a aproximadamente 10,9°, aproximadamente 12,1°, aproximadamente 14,8°, aproximadamente 20,5°, aproximadamente 22° y aproximadamente 25,1°. En algunas realizaciones descritas solo con fines de referencia, la

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

sal de hidrocloruro tiene un patron de difraccion de rayos X en polvo sustancialmente como el mostrado en la Figura 1E.

Ademas de las tecnicas descritas en lo que antecede para caracterizar formas cristalinas de la presente tecnologfa, tambien la DRXP, difraccion de rayos X en monocristal, CDB, sorcion dinamica de vapor (SDV), morfologfa cristalina, resonancia magnetica nuclear en estado solido, dispersion Raman, espectroscopfa infrarroja (IR), pueden ser utiles para la caracterizacion de otras formas cristalinas o amorfas de la presente tecnologfa.

En otro aspecto segun la invencion, la presente tecnologfa proporciona un metodo para preparar la forma cristalina anhidra de la sal de fosfato de forma A, que comprende poner en contacto una suspension de un compuesto de Formula I (la base libre):

imagen6

con acido fosforico para proporcionar la forma cristalina anhidra de la sal de fosfato de forma A. En una realizacion, la suspension del compuesto de Formula I comprende isopropanol. En otra realizacion, el metodo comprende ademas cristalizar la forma cristalina anhidra de la sal de fosfato de forma A desde la suspension. En otra realizacion de la invencion, el metodo comprende ademas aislar la forma A cristalina anhidra cristalizada.

En algunas realizaciones de la invencion del metodo, el acido fosforico puesto en contacto esta presente en una cantidad de aproximadamente 1 equivalente a aproximadamente 10 equivalentes, de aproximadamente 2 equivalentes a aproximadamente 9 equivalentes, de aproximadamente 3 equivalentes a aproximadamente 8 equivalentes o de aproximadamente 4 equivalentes a aproximadamente 7 equivalentes, con respecto a la cantidad molar de la base libre puesta en contacto. En otras realizaciones de la invencion, el acido fosforico puesto en contacto esta presente en una cantidad de aproximadamente 2 equivalentes a aproximadamente 4 equivalentes o a aproximadamente 3 equivalentes con respecto a la cantidad molar de la base libre puesta en contacto. En ciertas realizaciones, se hacen reaccionar o se ponen en contacto la suspension de la base libre y el acido fosforico de aproximadamente 2 horas a aproximadamente 40 horas, de aproximadamente 4 horas a aproximadamente 20 horas o de aproximadamente 8 horas a aproximadamente 10 horas. En ciertas realizaciones de la invencion, se hacen reaccionar la base libre y el acido fosforico a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 25°C a aproximadamente 100°C, de aproximadamente 40°C a aproximadamente 85°C o de aproximadamente 55°C a aproximadamente 70°C. En ciertas realizaciones de invencion, se hacen reaccionar la base libre y el acido fosforico a una temperatura a la cual un disolvente empleado en la reaccion refluye. En ciertas realizaciones, la reaccion se lleva a cabo empleando reaccionantes y uno o varios disolventes que estan sustancialmente exentos de agua (es decir, casi completamente exentos de agua).

Se puede someter adicionalmente la forma cristalina anhidra de la sal de fosfato de forma A obtenida por los metodos de la presente tecnologfa a pasos tales como, por ejemplo, secado, purificacion, etc. Se pueden someter los cristales aislados a secado a una temperatura adecuada. En una realizacion de la invencion, se secan los cristales a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 20°C a aproximadamente 80°C. En algunas realizaciones de la invencion, se secan los cristales a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 30°C a aproximadamente 70°C. En algunas realizaciones de la invencion, se secan los cristales a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 40°C a aproximadamente 60°C. En una realizacion de la invencion, se secan los cristales bajo presion reducida en el intervalo, por ejemplo, de aproximadamente 10 mbar - aproximadamente 40 mbar. El paso de secado se puede llevar a cabo durante un penodo de tiempo adecuado. Por tanto, en una realizacion de la invencion se secan los cristales durante un penodo de aproximadamente 1 a aproximadamente 72 horas, de aproximadamente 2 a aproximadamente 36 horas o de aproximadamente 4 a aproximadamente 18 horas. En algunas realizaciones de la invencion, se secan los cristales durante aproximadamente 48 horas.

Se puede utilizar la sal de fosfato del compuesto de Formula I para preparar el monohidrato de la base libre. Por ejemplo, se puede disolver la sal de fosfato en una disolucion acuosa de una base inorganica, tal como hidroxido de amonio acuoso. Con el tiempo, la base libre se separa por precipitacion como un monohidrato cristalino. Opcionalmente, se pueden emplear pasos adicionales tales como filtracion, lavado y secado, para aislar el monohidrato de base libre cristalino, de la misma manera que como se aislo la sal de fosfato tal como se ha descrito mas arriba.

Se pueden aislar formas cristalinas de la presente tecnologfa en forma sustancialmente pura. Con "sustancialmente pura" se quiere significar que mas de 50% en peso de la 3-(2,6-dicloro-3,5-dimetoxifenil)-1-{6-[4-(4-etilpiperazin-1-il)-

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

fenilamino]-pirimidin-4-il}-1-metilurea esta presente en una de las formas cristalinas descritas en la presente memoria. En algunas realizaciones descritas solo con fines de referencia de las formas cristalinas aisladas o sustancialmente puras de la presente tecnologfa, la 3-(2,6-dicloro-3,5-dimetoxifenil)-1-(6-[4-(4-etilpiperazin-1-il)- fenilamino]-pirimidin-4-il}-1-metilurea esta presente al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 95%, al menos aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98% o al menos aproximadamente 99% en peso de la forma indicada. Por ejemplo, en ciertas realizaciones de la invencion, la presente tecnologfa proporciona sales de fosfato de la base libre en donde al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 95%, al menos

aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98% o al menos aproximadamente 99% en peso de la sal de fosfato total de la base libre esta presente como forma A, forma B o (descrita solo con fines de referencia) la forma amorfa. En otras realizaciones descritas solo con fines de referencia, la presente tecnologfa proporciona la base libre tal que al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 95%, al menos aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98% o al menos aproximadamente 99% en peso del total de la base libre esta presente como la base libre anhidra cristalina, el monohidrato cristalino de la base libre o la forma amorfa de la base libre. En otras realizaciones mas descritas solo con fines de referencia, la presente tecnologfa proporciona sales de hidrocloruro de la base libre en donde al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 95%, al menos

aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98% o al menos aproximadamente 99% en peso del total es la forma amorfa o la forma de dihidrato cristalino de la sal de hidrocloruro.

La presente tecnologfa proporciona tambien composiciones farmaceuticas y medicamentos que se pueden preparar mezclando una o varias formas cristalinas anhidras o hidratadas o amorfas (de, por ejemplo, descrita solo con fines de referencia la base libre, como realizacion de la invencion las sales de fosfato o descritas solo con fines de referencia las sales de hidrocloruro de la misma) de la presente tecnologfa, con vehnculos, excipientes, aglutinantes, diluyentes o similares farmaceuticamente aceptables, para tratar ciertas enfermedades tal como se describe en la presente memoria.

Por tanto, en otro aspecto, la presente tecnologfa proporciona composiciones que comprenden una forma cristalina anhidra o hidratada o una forma amorfa de la presente tecnologfa y un vehnculo, excipiente y/o diluyente farmaceuticamente aceptable. En una realizacion descrita solo con fines de referencia, la forma cristalina anhidra es del compuesto de Formula I como la base libre. En una realizacion descrita solo con fines de referencia, la forma cristalina hidratada es el monohidrato del compuesto de Formula I como la base libre. En una realizacion de la invencion, la forma cristalina anhidra es de la sal de acido monofosforico del compuesto de Formula I. En otra realizacion de la invencion, la forma cristalina anhidra de la sal de acido monofosforico es de forma A. En otra realizacion de la invencion, la forma cristalina anhidra de la sal de acido monofosforico es de forma B. En una realizacion descrita solo con fines de referencia, la sal de acido monofosforico del compuesto de Formula I es amorfa. En otra realizacion descrita solo con fines de referencia, la forma es de la sal de hidrocloruro del compuesto de Formula I. En una realizacion ilustrativa descrita solo con fines de referencia, la sal de hidrocloruro es la forma de dihidrato cristalino o la forma amorfa.

Tales composiciones pueden estar en forma de, por ejemplo, granulos, polvos, comprimidos, capsulas, jarabe, supositorios, inyecciones, emulsiones, elixires, suspensiones o disoluciones. En una realizacion, la composicion esta sustancialmente exenta de agua. Las composiciones en cuestion pueden estar formuladas para diversas vfas de administracion, por ejemplo administracion por via oral y parenteral. La administracion parenteral o sistemica incluye, pero sin limitacion, inyecciones subcutaneas, intravenosas, intraperitoneales e intramusculares. Las siguientes formas farmaceuticas se indican a modo de ejemplo y no deben considerarse limitantes de la presente tecnologfa.

Las formas farmaceuticas inyectables incluyen generalmente suspensiones oleosas o suspensiones acuosas que se pueden preparar utilizando un agente dispersante o humectante adecuado y un agente suspensionante. Las formas inyectables pueden estar en fase de disolucion o en forma de una suspension, que se prepara con un disolvente o diluyente. Los disolventes o vehnculos aceptables incluyen agua esterilizada, disolucion de Ringer o una disolucion salina acuosa isotonica. En ciertas realizaciones, ya sea descritas solo con fines de referencia o bien como parte de la invencion con respecto a las sales de acido monofosforico, tales formas Inyectables acuosas se preparan (o se reconstituyen) inmediatamente antes de su administracion al sujeto. Como alternativa, se pueden emplear como disolventes o agentes suspensionantes aceites esteriles. Tfpicamente, el aceite o acido graso es no volatil, con inclusion de aceites naturales o sinteticos, acidos grasos y mono-, di- o tri-gliceridos.

Para inyeccion, las composiciones farmaceuticas y/o medicamentos pueden ser un polvo adecuado para ser reconstituido con una disolucion adecuada tal como se ha descrito mas arriba. Los ejemplos de ello incluyen, pero sin limitacion, polvos liofilizados, secados en secadero rotativo o secados por pulverizacion, polvos amorfos, granulos, precipitados o material en forma de partfculas. Para inyeccion, las composiciones farmaceuticas pueden contener opcionalmente estabilizantes, modificadores del pH, tensioactivos, modificadores de la biodisponibilidad y sus combinaciones.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Para administracion oral, bucal y sublingual, son aceptables como formas farmaceuticas solidas polvos, suspensiones, granulos, comprimidos, pfldoras, capsulas, capsulas de gelatina (en ingles, "gelcap") y comprimidos oblongos (en ingles, "caplet"). Se pueden preparar, por ejemplo, mezclando una o varias formas cristalinas anhidras de la presente tecnologfa con al menos un aditivo tal como un almidon u otro aditivo. Son aditivos adecuados sacarosa, lactosa, azucar de celulosa, manitol, maltitol, dextrano, almidon, agar, alginatos, quitinas, quitosanos, pectinas, goma tragacanto, goma arabiga, gelatinas, colagenos, casema, albumina, polfmeros sinteticos o semisinteticos o gliceridos. Opcionalmente, las formas farmaceuticas orales pueden contener otros ingredientes para ayudar a la administracion, tales como un diluyente inactivo o lubricantes tales como estearato de magnesio, o conservantes tales como parabeno o acido sorbico o antioxidantes tales como acido ascorbico, tocoferol o cistema, un agente desintegrante, aglutinantes, espesantes, tampones, edulcorantes, agentes saborizantes o agentes perfumantes. Tambien se pueden tratar adicionalmente comprimidos y pfldoras con materiales de revestimiento adecuados conocidos en la tecnica.

Las formas farmaceuticas lfquidas para la administracion oral pueden estar en forma de emulsiones, jarabes, elixires, suspensiones y disoluciones farmaceuticamente aceptables, que pueden contener un diluyente inactivo, tal como agua. Se pueden preparar composiciones farmaceuticas y medicamentos en forma de suspensiones o disoluciones lfquidas utilizando un lfquido esteril tal como, pero sin limitacion, un aceite, agua, un alcohol y sus combinaciones. Para la administracion oral o parenteral se pueden agregar tensioactivos, agentes suspensionantes o agentes emulsionantes, farmaceuticamente adecuados. En ciertas realizaciones, las formas farmaceuticas lfquidas, en particular las formas cristalinas de la sal de monofosfato de base libre, estan sustancialmente exentas de agua.

Como se ha senalado mas arriba, las suspensiones pueden incluir aceites. Tales aceites incluyen, pero sin limitacion, aceite de cacahuete, aceite de ajonjolf, aceite de semilla de algodon, aceite de mafz y aceite de oliva. La preparacion en suspension puede contener tambien esteres de acidos grasos tales como oleato de etilo, miristato de isopropilo, gliceridos de acido graso y gliceridos de acido graso acetilados. Las suspensiones de composiciones farmaceuticas pueden incluir alcoholes tales como, pero sin limitacion, etanol, alcohol isopropflico, alcohol hexadedlico, glicerol y propilenglicol. En las composiciones farmaceuticas en suspension tambien se pueden emplear eteres tales como, pero sin limitacion, poli(etilenglicol), hidrocarburos de petroleo tales como aceite mineral y petrolato; y agua.

Ademas de estas formas farmaceuticas representativas descritas en lo que antecede, los excipientes y veldculos farmaceuticamente aceptables son generalmente conocidos para los especialistas en la tecnica y, por tanto, se incluyen en la presente tecnologfa. Tales excipientes y veldculos estan descritos, por ejemplo, en "Remingtons Pharmaceutical Sciences" Mack Pub. Co., New Jersey (1991), que se incorpora en la presente memoria por referencia.

Se pueden disenar las composiciones farmaceuticas de la presente tecnologfa para que sean de accion breve, de liberacion rapida, de accion prolongada y de liberacion sostenida, como se describe a continuacion. Por tanto, tambien se pueden preparar las composiciones farmaceuticas para liberacion controlada o para liberacion lenta.

Se pueden administrar las presentes composiciones en una forma de liberacion prolongada, con el fin proporcionar un efecto de almacenamiento y/o liberacion prolongados. Asf pues, se pueden comprimir en granulos o cilindros las composiciones farmaceuticas y medicamentos, e implantarlos intramuscularmente o subcutaneamente como inyecciones de deposito o en forma de implantes tales como estents. Tales implantes pueden utilizar materiales inertes conocidos tales como siliconas y polfmeros biodegradables.

Se pueden ajustar las dosis espedficas en funcion de la existencia de enfermedades, de la edad, peso corporal, estado general de salud, sexo y dieta del sujeto, intervalos de administracion, vfas de administracion, velocidad de excrecion y combinaciones de farmacos. Cualquiera de las formas farmaceuticas antes indicadas que contienen cantidades terapeuticamente eficaces estan muy dentro de los lfmites de la experimentacion rutinaria y, por tanto, muy dentro del alcance de la presente tecnologfa.

En algunas otras realizaciones descritas solo con fines de referencia, la presente tecnologfa proporciona composiciones que comprenden la base libre del compuesto de Formula I en donde al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 95%, al menos aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98% o al menos aproximadamente 99% en peso de la base libre total de la composicion esta presente como la forma anhidra o como la forma de monohidrato. En realizaciones adicionales descritas solo con fines de referencia, las composiciones de la presente tecnologfa consisten esencialmente en la base libre, donde al menos aproximadamente 95%, al menos aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98% o al menos aproximadamente 99% de la base libre esta presente en la composicion como la forma anhidra, o como la forma de monohidrato.

En algunas otras realizaciones que son realizaciones de la invencion, la presente tecnologfa proporciona composiciones que comprenden la sal de fosfato de la base libre en donde al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 95%, al menos aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98% o al menos

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

aproximadamente 99% en peso de la sal de fosfato total de la base libre de la composicion esta presente como forma A, como forma B o, descrita solo con fines de referencia, como la forma amorfa. En realizaciones adicionales, las composiciones de la presente tecnologfa consisten esencialmente en una sal de fosfato de la base libre, donde al menos aproximadamente 95%, al menos aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98% o al menos aproximadamente 99% de la sal de fosfato de la base libre esta presente en la composicion como forma A, como forma B o, descrita solo con fines de referencia, como la forma amorfa.

En algunas realizaciones descritas solo con fines de referencia, la presente tecnologfa proporciona composiciones que comprenden la sal de hidrocloruro de la base libre en donde al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 95%, al menos aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98% o al menos aproximadamente 99% en peso de la sal de hidrocloruro total de la base libre en la composicion esta presente como el dihidrato o como la forma amorfa. En realizaciones adicionales descritas solo con fines de referencia, las composiciones de la presente tecnologfa consisten esencialmente en una sal de hidrocloruro de la base libre, donde al menos aproximadamente 95%, al menos aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98% o al menos aproximadamente 99% de la sal de fosfato de la base libre esta presente en la composicion como el dihidrato o como la forma amorfa.

En otro aspecto descrito solo con fines de referencia, la presente tecnologfa proporciona un metodo de tratamiento que comprende administrar una cantidad terapeuticamente eficaz de una forma cristalina anhidra o hidratada o una forma amorfa o una composicion que comprende una forma cristalina anhidra o hidratada o forma amorfa de la presente tecnologfa a un sujeto que padece una enfermedad, cuya patologfa y/o smtomas de dicha enfermedad puedan prevenirse, inhibirse o mejorarse por la inhibicion de una actividad de cinasa en donde la cinasa se selecciona del grupo consistente en FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, KDR, HER1, HER2, Bcr-Abl, Tie2 y Ret. En otra realizacion descrita solo con fines de referencia, la presente tecnologfa proporciona el uso de las formas cristalinas anhidras o hidratadas, las formas amorfas o las composiciones que incluyen las formas cristalinas anhidras o hidratadas o formas amorfas de la presente tecnologfa en la fabricacion de un medicamento para tratar una enfermedad en un sujeto en donde la actividad de cinasa de FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, kDr, HER1, HER2, Bcr-Abl, Tie2 y Ret contribuye a la patologfa y/o smtomas de la enfermedad. En algunas realizaciones de la presente tecnologfa, la cinasa se selecciona del grupo consistente en FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4.

Dentro del contexto de la presente tecnologfa, "tratamiento" significa un alivio, en todo o en parte, de smtomas asociados con un trastorno o enfermedad, o retardar o detener el avance adicional o el empeoramiento de los smtomas, o procurar prevenir o preservar de la enfermedad o trastorno a un sujeto en riesgo de desarrollar la enfermedad o trastorno. Tales enfermedades o trastornos incluyen, pero sin limitacion, carcinoma de los rinones, hngado, glandulas adrenales, vejiga, mama, estomago, ovarios, colon, recto, prostata, pancreas, pulmones, vagina o tiroides; sarcoma; glioblastoma; leucemia; tumores del cuello o cabeza; psoriasis; hiperplasia prostatica; o neoplasia.

Por ejemplo, dentro del contexto de tratar enfermedades que incluyen un trastorno donde intervienen cinasas, como se ha descrito mas arriba, un tratamiento satisfactorio puede incluir un alivio de smtomas o el retardo o detencion del avance de la enfermedad, medidos por una disminucion de los niveles o la actividad de una o varias cinasas correspondientes. Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresion "una cantidad terapeuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de la forma cristalina anhidra o hidratada o forma amorfa del compuesto de Formula I (con inclusion de la base libre), o la forma cristalina anhidra o forma amorfa de la sal de fosfato del compuesto de Formula I, la sal de hidrocloruro del compuesto de Formula I (con inclusion del dihidrato o la forma amorfa) o composiciones que las incluyan, que alivie, en todo o en parte, smtomas asociados con el trastorno o enfermedad tratados, o retarde o detenga el avance adicional o empeoramiento de sus smtomas, o prevenga o proporcione profilaxis contra la enfermedad o trastorno en un sujeto en riesgo de desarrollar la enfermedad o trastorno. Un sujeto es cualquier animal que pueda beneficiarse de la administracion de cualquiera de las formas del compuesto de Formula I o una composicion que lo incluya, como se ha descrito en la presente memoria. En algunas realizaciones descritas solo con fines de referencia, el sujeto es un maiMfero, por ejemplo un ser humano, un primate, un perro, un gato, un caballo, una vaca, un cerdo, un roedor, como por ejemplo una rata o un raton. Tfpicamente, el mamffero es un ser humano.

Una cantidad terapeuticamente eficaz de una forma cristalina anhidra o hidratada, o una forma amorfa, o una composicion que comprenda cualquiera de tales formas de la presente tecnologfa descritas solo con fines de referencia o en el caso de las sales de acido monofosforico para uso en los metodos de tratamiento descritos y reivindicados segun la invencion puede variar dependiendo de la via de administracion y la forma farmaceutica. Las cantidades eficaces de las formas cristalinas anhidras o hidratadas o formas amorfas de los compuestos de Formula I se encuentran tfpicamente en el intervalo de aproximadamente 0,01 a 100 mg/kgMa, y mas tfpicamente en el intervalo de aproximadamente 0,05 a 25 mg/kgMa. Tfpicamente, la forma cristalina anhidra o hidratada, la forma amorfa y la composicion que comprende tales formas de la presente tecnologfa descritas solo con fines de referencia o reivindicadas segun la invencion, se seleccionan a fin de proporcionar composiciones farmaceuticas que presenten indices terapeuticos elevados. El mdice terapeutico es la relacion en dosis entre los efectos toxico y terapeutico, que puede expresarse como la relacion entre la DL50 y la DE50. La DL50 es la dosis letal para 50% de la poblacion, y la DE50 es la dosis terapeuticamente eficaz en 50% de la poblacion. La DL50 y la DE50 se determinan mediante procedimientos farmaceuticos estandar en cultivos de celulas animales o animales experimentales.

5

10

15

20

25

30

35

40

La presente tecnologfa, descrita asf de manera general, se entendera con mas facilidad por referencia a los ejemplos siguientes de referencia y de la invencion, que se ofrecen a modo de ilustracion y no se pretende que sean limitantes de la presente tecnolog^a.

EJEMPLOS

A lo largo de la presente descripcion se emplean las siguientes abreviaturas con respecto a la terminologfa qmmica

y biologica:

DCM:

Diclorometano

DMSO:

Dimetilsulfoxido

CDB:

Calorimetna diferencial de barrido

SDV:

Sorcion dinamica de vapor

EM-IES:

Espectrometna de masas con ionizacion por electrospray

IR-TF:

Espectroscopfa infrarroja por transformada de Fourier

CLAR:

Cromatograffa lfquida de alta resolucion (siglas inglesas HPLC)

IPA:

Isopropanol

M:

Molar

MeOH:

Metanol

HCl N:

HCl normal

RMN:

Espectroscopfa de resonancia magnetica nuclear (siglas inglesas NMR)

H. R.:

Humedad relativa

t. a.:

Temperatura ambiente

MEB:

Microscopfa electronica de barrido

ATG:

Analisis termogravimetrico

UV:

Ultravioleta

DRXP:

Difraccion de rayos X en polvo

Metodos generales, instrumentos y estandares empleados Valor de pH

Se determino el pH de una disolucion de la manera que se ilustra: se transfirieron a un vial de 20 ml aproximadamente 10 mg de la base libre o su sal, y se anadieron a ello 10 ml del tampon correspondiente o agua. Se agito continuamente la disolucion mientras se media el pH. La medida del pH se puede realizar por diversos metodos, por ejemplo utilizando microelectrodos de pH.

Determinacion de la solubilidad

Se equilibro un exceso de base libre (base libre de Formula I), su sal de fosfato (la sal de acido monofosforico de la base libre) u otra sal de acido, en disolventes durante 1 dfa a 25 ± 0,5°C. Se filtro la suspension resultante, y se utilizo el filtrado para determinar la solubilidad mediante CLAR.

Disolucion intrmseca

Las medidas de velocidad intrmseca de disolucion se llevaron a cabo en conjuntos de punzon y matriz VanKel de 0,5 cm2, con una presion de compresion de 0,9 toneladas (2.000 libras). Se midio la disolucion utilizando un sistema de disolucion con optica de fibra (C Technologies, Inc.) y un espectrofotometro UV/visible Cary, con una velocidad de agitacion de 200 r. p. m. Se mantuvo el medio de disolucion a 37± 0,5°C y se realizaron las medidas de concentracion a 260 nm.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Higroscopicidad

Se midio la higroscopicidad a partir de isotermias de sorcion/desorcion utilizando el instrumento Surface Measurement Systems DVS-1 a 25 ± 0,5°C. Se evaluaron muestras a diversas humedades, entre ellas 75%, 85% y 95%.

Comportamiento de polimorfismo

Se agitaron suspensiones de muestras a alta velocidad durante 24 horas a 25 ± 0,5°C, se filtraron y se analizo mediante DRXP el solido recogido.

Metodo de CLAR

Instrumento: Waters; columna: Symmetry C18, diametro de partfcula 3,5 micrometros, 4,6 x 75 mm; temperatura de columna: 35°C; caudal: 1 mL/minuto; fase movil: A = TFA al 0,1% en agua y B = acetonitrilo; deteccion: UV 254 nm; cantidad inyectada: aproximadamente 2 microgramos; diluyente: acetonitrilo/acido fosforico acuoso al 0,2% 60:40 (v/v); y gradiente: de 10 a 70% de B en el transcurso de 10 minutos.

Metodo de ATG

Instrumento: TA Instruments Q500; intervalo de temperaturas: de temperatura ambiente a 300°C; velocidad de barrido: 10°C/minuto; flujo de nitrogeno: 60 ml/minuto. Mettler TGA 850; intervalo de temperaturas: de temperatura ambiente a 300°C; velocidad de barrido: 20°C/minuto; flujo de nitrogeno: 40 mL/minuto;

Metodo de MEB

Instrumento: Jeol JSM 6300.

Metodo de CDB

Instrumento: TA Instruments Q1000; intervalo de temperaturas: de temperatura ambiente a 210°C; velocidad de barrido: 10°C/minuto; flujo de nitrogeno: 60 mL/minuto;

Metodo de cristalograffa de rayos X

Difractometro de tres drculos Bruker AXS con radiacion Cu(Ka) monocromada en grafito procedente de un generador de tubo sellado y foco fino y un detector CCD Smart 6000 que utiliza el software SMART. El tratamiento de datos y el afinamiento global de la celda se realizaron con Saint. Se aplico una correccion semiempmca de absorcion, basandose en las intensidades de reflexiones relacionadas con la simetna, medidas con distintas disposiciones angulares. Se resolvieron las estructuras mediante metodos dobles de reciclado de espacio y posteriores smtesis DF, y se afinaron sobre la base de mmimos cuadrados de matriz entera en F2 utilizando el paquete de programas sHeLXTL.

Metodo de DRXP

Instrumento: Bruker D8 Advance; irradiacion: Cu Ka (30 kV, 40 mA); ranura variable V12 mm; amplitud de barrido 2 - 40° (valor de 2zeta); velocidad de barrido 0,3 s por paso. Como alternativa, se utilizo el instrumento XDS2000 de Scintag, Inc.; irradiacion: Cu Ka, (45 kV, 40 mA); rendija de divergencia: 3 mm y 2 mm; rendija de medicion: 0,3 mm y 0,2 mm; cortador 0,02 grados; tiempo de barrido: 6 minutos (3 minutos por cuadro); amplitud de barrido: 2° - 35° o 40° (valor de 2 zeta); velocidad de barrido 0,5°/minuto (valor de 2 zeta).

Metodo de IR

Instrumento: Thermo Magna 560; modo: transmision; amplitud de barrido: 4.000 cm-1 - 600 cm-1.

Metodo de Raman

Instrumento: Bruker Vertex 70 FTIR; APT: 3,5 mm; 64 barridos; RES 2.

Discriminacion de sales

Ejemplo 1: Discriminacion de sales de acido de la base libre de Formula I.

Se realizo un experimento de discriminacion de sales con la base libre de Formula I (preparada como se describe en el Ejemplo 2 a continuacion) y una diversidad de acidos distintos: acido acetico, acido benzoico, acido cftrico, acido fumarico, acido hipurico, acido bromhHdrico, acido clorhndrico, acido lactico (D,L), acido maleico, acido malico (L), acido malonico, acido metanosulfonico, acido fosforico, acido naftaleno-1,5-disulfonico, acido fosforico, acido succmico, acido sulfurico, acido tartarico (D) y acido tartarico (L). Se disolvio la base libre (30 mg) en 12 mL de THF. Se distribuyeron partes alfcuotas de 0,1 ml de esta disolucion en un bloque de cristalizacion con formato de 96 pocillos (bloque Zinsser Crissy). Se anadieron a cada pocillo aproximadamente 0,25 mg de la base libre y tambien

5

10

15

20

25

30

se anadieron a cada pocillo 0,044 ml de una disolucion 0,01 M en acetona de los correspondientes acidos. Se cubrio el bloque con una tapa precortada y despues se dejo que la mezcla de disolventes se evaporase durante aproximadamente 10 horas a temperatura ambiente.

Los intentos con acido acetico, acido benzoico, acido cftrico, acido hipurico, acido lactico, acido maleico y acido malico proporcionaron solidos con el mismo patron de DRXP que la base libre o solidos amorfos. Se obtuvieron solidos de baja cristalinidad con acido fumarico, acido bromhndrico, acido naftaleno-1,5-disulfonico, acido sulfurico o acido tartarico. Para el acido fosforico, en etanol de 95% se obtuvo una forma salina cristalina como realizacion de la invencion. Por su cristalinidad o eventual facilidad de smtesis, se evaluaron adicionalmente en cuanto a cristalinidad e higroscopicidad solidos formados con acido fosforico, acido clorhndrico, acido malonico, acido metanosulfonico y acido succmico.

Se hallo que la sal de fosfato (una realizacion de la invencion) era sumamente cristalina. Su higroscopicidad, evaluada mediante isotermas de sorcion/desorcion de SDV, indico que, incluso a H. R. 95%, se observo un incremento de peso debido a la absorcion de agua inferior a 2%. A H. R. 75% y 85%, se observo un incremento de peso inferior a 1%.

Para la sal de hidrocloruro descrita solo con fines de referencia, se observaron varios patrones de DRXP, lo que indica la presencia de mas de un polimorfo. La mayona de estas sales tema baja cristalinidad. Se identifico el dihidrato como la mas cristalina. La sal de hidrocloruro era mas higroscopica que la sal de fosfato. En una forma de la sal de hidrocloruro, se observo mediante SDV un incremento de peso de aproximadamente 4,1% (H. R. 75%) a aproximadamente 16,9% (H. R. 95%).

En cuanto a las sales de malonato descritas solo con fines de referencia, se identificaron cuatro formas basandose en sus patrones de DRXP observados. La unica ulteriormente evaluada mostro un cristal fragil, se preparo solo una vez, tema un aspecto mojado y era higroscopica (incremento de peso de aproximadamente 10% en todas las humedades probadas).

En cuanto a la sal de acido metanosulfonico (o mesilato) descrita solo con fines de referencia, se observaron varios patrones de DRXP, de los cuales solo uno pudo prepararse de manera consistente, pero era higroscopico (presentaba un incremento de peso de aproximadamente 2,6% a 10% por SDV). De manera analoga, la sal de succinato tambien era higroscopica (presentaba un incremento de peso de aproximadamente 4,1% a 10% por SDV).

En la Tabla 1 a continuacion se muestran resultados de un ensayo inicial de solubilidad en tampon de pH 3 y en agua. La sal de fosfato era mas soluble que las sales de metanosulfonato, malonato y succinato en tampon de pH 3 y en agua. La sal de fosfato era tambien mas soluble en agua que la base libre.

Tabla 1

Tipo de sal/base libre

Medio/disolvente Solubilidad (mg/ml)

Metanosulfonato

Tampon de pH 3 0,003

Malonato

Tampon de pH 3 0,003

Succinato

Tampon de pH 3 0,002

Fosfato (realizacion de la invencion)

Tampon de pH 3 0,039

Metanosulfonato

Agua 0,87

Malonato

Agua 0,92

Succinato

Agua 0,27

Fosfato (realizacion de la invencion)

Agua 1,7

Base libre

Tampon de pH 3 0,20

Base libre

Agua 0,001

5

10

15

20

25

30

35

40

Smtesis quimica

Ejemplo de referencia 2: Preparacion de la base libre del compuesto de Formula I.

imagen7

A. N-[4-(4-Etilpiperazin-1-il)-fenil]-N'-metilpirimidin-4,6-diamina

Se calienta en un tubo cerrado, a 150°C y durante 5 horas, una mezcla de 4-(4-etilpiperazin-1-il)-anilina (1 g, 4,88 mmol), (6-cloropirimidin-4-il)-metilamina (1,81 g, 12,68 mmol, 1,3 eq.), y HCl 4N en dioxano (15 ml). Se concentra la mezcla de reaccion y se diluye con DCM y una disolucion acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Se separa la capa acuosa y se eXtrae con DCM. Se lava con salmuera la fase organica, se seca (sulfato de sodio), se filtra y se concentra. La purificacion del residuo mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (DCM/MeOH, 93:7), seguida de trituracion en dietileter, proporciona el compuesto del tftulo en forma de un solido blanco: EM-IES: 313,2 [MH]+; tR= 1,10 minutos (gradiente J); CCF: Rf = 0,21 (DCM/MeOH, 93:7).

B. 4-(4-Etilpiperazin-1-il)-anilina

Se agita durante 7 horas a t. a. una suspension de 1-etil-4-(4-nitrofenil)-piperazina (6,2 g, 26,35 mmol) y mquel Raney (2 g) en MeOH (120 mL), bajo una atmosfera de hidrogeno. Se filtra la mezcla de reaccion a traves de un lecho de Celite y se concentra para proporcionar 5,3 g del compuesto del tftulo en forma de un solido violeta: EM-IES: 206,1 [MH]+; CCF: Rf = 0,15 (DCM/MeOH + NHsaq al 1%, 9:1).

C. 1-Etil-4-(4-nitrofenil)-piperazina

Se calienta a 80°C durante 15 horas una mezcla de 1-bromo-4-nitrobenceno (6 g, 29,7 mmol) y 1 -etilpiperazina (7,6 ml, 59,4 mmol, 2 eq.). Tras enfriar a t. a., se diluye la mezcla de reaccion con agua y DCM/MeOH, 9:1. Se separa la capa acuosa y se extrae con DCM/MeOH, 91. Se lava la fase organica con salmuera, se seca (sulfato de sodio), se filtra y se concentra. La purificacion del residuo mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (DCM/MeOH + NH3aq al 1%, 9:1) proporciona 6,2 g del compuesto del tftulo en forma de un solido amarillo: EM-IES: 236,0 [MH]+; tR = 2,35 minutos (pureza: 100%, gradiente J); CCF: Rf = 0,50 (DCM/MeOH + NHsaq al 1%, 9:1).

D. (6-Cloropirimidin-4-il)-metilamina

Se preparo este material mediante un procedimiento publicado en la bibliograffa (J. Appl. Chem. 1955, 5, 358) modificado: a una suspension de 4,6-dicloropirimidina comercialmente disponible (20 g, 131,6 mmol, 1,0 eq.) en isopropanol (60 ml) se anade metilamina al 33% en etanol (40,1 ml, 328,9 mmol, 2,5 eq.) a un ritmo tal que la temperatura interna no sube por encima de 50°C. Una vez completada la adicion, se agito la mezcla de reaccion durante 1 hora a temperatura ambiente. Despues se anade agua (50 ml) y se enfna a 5°C en un bano de hielo la suspension formada. Se separa por filtracion el producto precipitado y se lava con isopropanol/agua 2:1 frio (45 ml) y agua. Se seca bajo vado, a 45°C y durante una noche el material recogido, para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un polvo incoloro: tR = 3,57 minutos (pureza: >99%, gradiente A), eM-|Es: 144,3/146,2 [Mh]+.

E. 3-(2,6-Dicloro-3,5-dimetoxifenil)-1-{6-[4-(4-etilpiperazin-1-il)-fenilamino]-pirimidin-4-il}-1-metilurea

Se preparo el compuesto del tftulo anadiendo isocianato de 2,6-dicloro-3,5-dimetoxifenilo (1,25 eq.) a una disolucion de N-[4-(4-etilpiperazin-1-il)-fenil]-N'-metilpirimidin-4,6-diamina (2,39 g, 7,7 mmol, 1 eq.) en tolueno y agitando la mezcla de reaccion durante 1,5 horas a reflujo. La purificacion del producto bruto mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (DCM/MeOH + NH3aq al 1%, 95:5) proporciona el compuesto del tftulo en forma de un solido blanco: EM-IES: 560,0/561,9 [MH]+; tR = 3,54 minutos (pureza: 100%, gradiente J); CCF: Rf= 0,28 (DCM/MeOH + NH3aq al 1%, 95:1). Analisis: C26H31N7O3CU calc. C 55,72% H 5,57% N 17,49% O 8,56% Cl 12,65%; hallado C 55,96% H 5,84% N 17,17% O 8,46% Cl 12,57%. Se caracterizo el compuesto del tftulo mediante DRXP, metodos termicos y otros, como se describe mas adelante.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Ejemplo 3: Preparacion de la forma A de sal de acido monofosforico del compuesto de Formula I.

A un matraz de fondo redondo se agregaron 3-(2,6-dicloro-3,5-dimetoxifenil)-1-{6-[4-(4-etilpiperazin-1-il)-fenilamino]- pirimidin-4-il}-1-metilurea (134 g, 240 mmol) e IPA (2.000 ml). Se agito y se calento a 50°C la suspension y se anadio a la misma, en porciones, una disolucion de acido fosforico (73,5 g, 750 mmol) en agua (2.000 ml). Se agito la mezcla a 60°C durante 30 minutos y se filtro a traves de un lecho de polipropileno. Se lavo el lecho con IPA/agua caliente (1:1, 200 ml) y se combinaron los filtrados. A esta disolucion transparente se anadio IPA (6.000 ml) y se agito la mezcla a reflujo durante 20 minutos, se enfrio lentamente hasta la temperatura ambiente (25° C) y se agito durante 24 horas. Se recogio por filtracion el producto salino blanco, se lavo con IPA (2 x 500 ml) y se seco en una estufa a 60° C bajo presion reducida durante dos dfas, para proporcionar la sal de fosfato (forma A), 110 g. Rendimiento 70%. Pureza >98% por CLAR. Analisis: C26H34N7OyCl2P, calc. C 47,42% H 5,20% N 14,89% O 17,01% Cl 10,77% P 4,70%; hallado C 47,40% H 5,11% N 14,71% O 17,18% Cl 10,73% P 4,87%. Se caracterizo el compuesto del tftulo mediante DRXP, metodos termicos y otros, como se describe mas adelante.

Ejemplo de referencia 4: Preparacion de la forma monohidrato de base libre del compuesto de Formula I.

A un matraz de fondo redondo de 4 bocas, de 22 L, se agrego, a 18° C y bajo una atmosfera de nitrogeno, hidroxido de amonio 15 M (10 L, 15 mol). A la disolucion se anadio en porciones, a 18°C y en el transcurso de 1 hora, la sal de fosfato de 3-(2,6-dicloro-3,5-dimetoxifenil)-1 -{6-[4-(4-etilpiperazin-1 -il)fenilamino]-pirimidin-4-il}-1 -metilurea (660 g, 1.002 mol; preparada mediante el metodo del Ejemplo 3) en forma de solido. Se agito a 18°C durante 16 horas la suspension blanca resultante. Se tomo una muestra y se analizo mediante 1H-RMN para confirmar la conversion completa de la sal de fosfato a base libre. El analisis mediante RMN mostro una conversion completa a la base libre. Se filtro la mezcla a traves de un embudo de vidrio sinterizado de 3 L, con una frita gruesa (40-60 ASTM). La filtracion fue lenta, requiriendo ~3 horas a causa del fino tamano de partfcula de la base libre solida. Se lavo el solido con agua desionizada (1 L). Este lavado tambien fue muy lento (requirio 1,5 horas). Se seco a 60°C bajo vado (5 Torr) el solido, durante 16 horas, para proporcionar 642 g de base libre (114% del teorico, teorico = 561,1 g). Se resuspendio el solido seco en agua desionizada (10,5 L) a 18°C durante 3 horas. Se filtro el solido a traves de un embudo de vidrio sinterizado de 3 L, con una frita gruesa (40-60 ASTM). Se enjuago la torta del filtro con agua desionizada (2 L). Se seco a 60° C bajo vado (5 Torr) el solido, durante 16 horas, para proporcionar la base libre en forma de un monohidrato (559 g, 96,7% del teorico para un monohidrato).

Caracterizacion de las formas cristalinas

Ejemplo 5: Propiedades fisicoquimicas de la base libre descrita solo con fines de referencia, de la sal de fosfato (forma A) como realizacion de la invencion y del hidrocloruro descrito solo con fines de referencia.

A. Base libre (Ejemplo de referencia)

La base libre anhidra mostro buena cristalinidad (respecto al espectro de DRXP, vease la Figura 1A). Era ligeramente higroscopica y, cuando se calento a un ritmo de 10°C/minuto, fundio a 217°C (inicio) con posterior descomposicion (respecto al termograma de CDB, vease la Figura 2A). El ATG de la base anhidra se muestra en la Figura 3A, y la perdida de peso observada es consistente con la forma anhidra. No era soluble en medios acuosos a pH elevado (aprox. 0,00004 mg/mL en tampon de pH 6,8 y aprox. 0,00009 mg/mL, con pH 6,67, en agua), y de escasamente a ligeramente soluble en disolventes organicos comunes. En HCl 0,1 N, la base libre anhidra cambia a otra forma (probablemente una forma de hidrocloruro). La forma de monohidrato de la base libre tambien mostro buena cristalinidad (respecto al espectro de DRXP, vease la Figura 1D). En la Figura 5A se muestra una micrograffa de MEB de la base libre anhidra.

B. Sal de fosfato (forma A)

La sal de fosfato mostro buena cristalinidad (respecto al espectro de DRXP, vease la Figura 1B (sal de fosfato (forma A)). Era ligeramente higroscopica y, cuando se calento a un ritmo de 10°C/minuto, fundio a 184,0°C (inicio) con posterior descomposicion (vease la Figura 2B (sal de fosfato (forma B))). En la Figura 3B se muestra el termograma de ATG de la sal de fosfato, y la perdida de peso observada es consistente con la forma anhidra. No era soluble en tampon de pH 6,8 (aprox. 0,00009 mg/mL) pero, a diferencia de la base libre, era soluble en agua (1,3 mg/mL). Era escasamente soluble en disolventes organicos comunes. A continuacion se presentan estudios adicionales de solubilidad. En la Figura 6 se muestra el espectro IR-TF de la sal de fosfato (forma A). En la sal de fosfato se detecto hasta 0,6% de disolvente residual (isopropanol). En la Figura 5B se muestra una micrograffa de MEB de la sal de fosfato, forma A.

C. Sal de hidrocloruro de la base libre (Ejemplo de referencia)

La sal de hidrocloruro mostro cristalinidad moderada (respecto al espectro de DRXP, vease la Figura IE) en la forma de dihidrato. En la Figura 3C se muestra el termograma de ATG, y la perdida de peso observada es consistente con la forma de dihidrato. El hidrocloruro es higroscopico, y la forma presente es un dihidrato. En el Ejemplo 8, Tabla 3D, se presentan estudios de solubilidad.

Ejemplo 6: Forma amorfa de la sal de fosfato de la base libre (Ejemplo de referencia).

Se mezclaron aproximadamente 40 mg de sal de fosfato (forma A) con 4 ml de tetrahidrofurano/agua (1:1) a 25°C. Tras agitar durante una noche, se filtro la disolucion. Sin agitar, se puso el filtrado transparente bajo flujo de nitrogeno, para secarlo. Se evaluo adicionalmente, mediante CDB y ATG, el solido obtenido tras la evaporacion del 5 disolvente. No se observo ninguna transicion vftrea aparente en el termograma de CDB cuando se sometio a calentamiento desde -40°C a 140°C. En el termograma de ATG, se observo que la muestra comenzo a descomponerse a ~115°C, una temperatura mucho mas baja que la de la forma A de la sal de fosfato cristalina. Vease tambien el Ejemplo 15 mas adelante.

Ejemplo 7: Determinacion de las velocidades intrinsecas de disolucion.

10 Se determino la velocidad intrmseca de disolucion para la sal de fosfato en agua, pH=6,8 y HCl 0,1 N, como realizacion de la invencion, y para el monohidrato de base libre, descrito solo con fines de referencia, a pH=6,8, 4,5 y HCl 0,1 N. Las mediciones se realizaron en un instrumento VanKel utilizando un espectrofotometro uV/visible Cary (Tabla 2). La sal de fosfato demostro mayores velocidades intrinsecas de disolucion en agua y HCl 0,1 N que la base libre.

15 Tabla 2

Velocidades intrmsecas de disolucion

Muestra

Sal de fosfato (forma A) Base libre (monohidrato) (Ejemplo de referencia)

Masa de muestra

aproximadamente 100 mg aproximadamente 100 mg

Longitud de onda para deteccion

290 nm 290,2 nm

Rotacion de disco

200 r. p. m. 50 r. p. m.

Temperatura

37°C 37°C

Tiempo de medida

20-60 minutos 400 minutos

Medio de disolucion

Valor de velocidad intrmseca de disolucion, mg/minuto/cm2

HCl 0,1 N

1,0661 (base libre anhidra: 0,28) 0,3132

pH = 6,8

0,0056 0,0026

pH = 4,5

n. d. 0,0001

Agua

0,3279 (base libre anhidra: 0,01) n. d.

n. d. - no determinado

Ejemplo de referencia 8: Solubilidad en medios acuosos

Se midio la solubilidad de la base libre anhidra y de la base libre monohidrato en diversos medios acuosos (por ejemplo, tampon de pH 6,8, tampon de pH 4,5 y tampon de pH 1), incluidos fluidos humanos simulados y reales. 20 En las Tablas 3A-3C a continuacion se muestran las composiciones de los fluidos simulados.

FGS (Fluido gastrico simulado), pH 2,0

Excipiente

Cantidad/volumen objetivo para 1 litro

NaCI

2 g

Triton X-100

1 g

HCI 0,1 M

100 ml

Agua purificada

c. s.

Tabla 3B

Fluido intestinal simulado (FIS) en estado de ayuno (siglas inglesas FaSSIF), pH 6,5

Excipiente

Cantidad molar [mM] Cantidad objetivo [g/1 l]

Acido fosforico (del 85%)

28,6 (como del 100%) 3,30 (como del 85%)

Taurocolato de sodio

3 1,65

Lecitina

0,75 0,59

NaCl

105,8 6,186

NaOH

c. s

Agua purificada

c. s

5 Tabla 3C

Fluido intestinal simulado (FIS) en estado alimentado (siglas inglesas FeSSIF), pH 6,5

Excipiente

Cantidad molar [mM] Cantidad objetivo [g/1 l]

Acido acetico glac.

144 8,65

Taurocolato de sodio

15 8,25

Lecitina

3,75 2,954

NaCl

202 11,87

NaOH

c. s

(continuacion)

Fluido intestinal simulado (FIS) en estado alimentado (siglas inglesas FeSSIF), pH 6,5

Excipiente

Cantidad molar [mM] Cantidad objetivo [g/1 l]

Agua purificada

c. s

Los fluidos humanos se obtuvieron de 12 sujetos humanos. Se evaluo la solubilidad de la manera antes descrita, al 5 cabo de 24 horas. En las Tablas 4A y 4B a continuacion estan tabulados los resultados.

Tabla 4A

Solubilidad de base libre anhidra

Medio

Solubilidad en mg/ml tras 24 horas

Fluido gastrico simulado (FGS)

0,0497

Fluido intestinal simulado (FIS) en estado de ayuno

0,001

Fluido intestinal simulado (FIS) en estado alimentado

0,148

HCl a pH 1

0,052

Acetato a pH 4,5

0,008

Fosfato a pH 6,8

<L. d. c.*

Fluido gastrico humano (FGH)

0,001

Fluido intestinal humano (FIH) en estado de ayuno

0,002

FIH en estado alimentado

0,004

*<L. d. c.: por debajo del lfmite de cuantificacion

Solubilidad de base libre monohidrato

Medio

Solubilidad en mg/ml tras 24 horas

FGS

0,020

FIS en estado de ayuno

0,003

FIS en estado alimentado

0,459

HCl a pH 1

0,103

Acetato a pH 4,5

0,054

Fosfato a pH 6,8

<L. d. c.*

FGH

0,002

FIH en estado de ayuno

0,019

FIH en estado alimentado

0,040

*<L. d. c.: por debajo del lfmite de cuantificacion

Se llevaron a cabo estudios de solubilidad a 24 horas de la sal de fosfato en medios acuosos y en fluidos humanos. Resultados para la sal de fosfato sin equilibracion previa (Tabla 4C) y con equilibracion durante 24 horas en HCl a 5 pH 1 (Tabla 4D). Estas ultimas condiciones mostraron que la sal de fosfato se convertfa en la sal de HCl durante este tiempo.

Tabla 4C

Solubilidad de sal de fosfato

Medio

Solubilidad en mg/ml tras 24 horas

FGS

0,088

FIS en estado de ayuno

0,003

FIS en estado alimentado

1,067

HCl a pH 1

0,089

Acetato a pH 4,5

0,731

Fosfato a pH 6,8

<L. d. c.*

FGH

0,0115

FIH en estado de ayuno

0,00223

FIH en estado alimentado

0,00141

*<L. d. c.: por debajo del lfmite de cuantificacion

Solubilidad de sal de hidrocloruro resultante de equilibracion de sal de fosfato a pH 1, con HCl

Medio

Solubilidad en mg/ml tras 24 horas

FGS

0,073

FIS en estado de ayuno

0,003

FIS en estado alimentado

0,248

HCl a pH 1

0,075

Acetato a pH 4,5

0,822

Fosfato a pH 6,8

<L. d. c.*

FGH

0,0348

FIH en estado de ayuno

0,0154

FIH en estado alimentado

0,0109

*<L. d. c.: por debajo del lfmite de cuantificacion

Ejemplo de referencia 9: Espectroscopia Raman-TF de la base libre del compuesto de Formula I.

Se realizo la espectroso^a Raman-TF de las formas de base libre monohidrato y cristalina anhidra del compuesto 5 de Formula I como se ha descrito mas arriba. En la Figura 8A se muestra el espectro Raman de la forma de base libre anhidra del compuesto de Formula I. Los picos de la Figura 8A incluyen 3.067, 2.950, 2.927, 2.854, 2.828, 1.690, 1.619, 1.585, 1.539, 1.458, 1.409, 1.385, 1.358, 1.297, 1.233, 1.191, 1.098, 1.062, 998, 819, 778, 742, 695, 668, 637, 498, 468 y 420 cm-1. En la Figura 8B se muestra el espectro Raman de la base libre monohidrato. Los picos de la Figura 8B incluyen 2.957, 2.831, 1.618, 1.580, 1.511, 1.465, 1.415, 1.361, 1.312, 1.284, 1.229, 1.186, 10 1.148, 1.057, 994, 854, 721, 661 y 624 cm-1.

Ejemplo de referencia 10: Analisis cristalografico por rayos X en monocristal de la forma de monohidrato cristalino de la base libre del compuesto de Formula I

Se realizo el analisis cristalografico por rayos X en monocristal de la forma de monohidrato cristalino de la base libre del compuesto de Formula I como se ha descrito mas arriba. En la Tabla 5 a continuacion y en la Figura 9 se 15 muestran los resultados del analisis.

5

10

15

20

25

Tamano del cristal (mm)

0,16 x 0,08 x 0,06

Dimensiones de celda en angstroms (A) y grados (°)

a = 7,7615(2) A b = 9,3168(2) A c = 37,8111(8) A a = 90° P = 91,439(2)° Y = 90° V = 2733,35(11) A3

Grupo espacial

P21/c

Moleculas/celda unitaria

4

Densidad

1,362

Demostracion de la estabilidad de las formas cristalinas Ejemplo 11: Estabilidad en disolucion.

Se ensayo la estabilidad de la base libre en disolucion, en tampones que abarcaban de pH 1a pH 9, durante 1 semana a 50°C. A pH 5 y superiores, la base libre (Ejemplo de referencia) era estable y, tras descontar impurezas menores iniciales, la degradacion fue menor que 2%. A pH 3, la degradacion fue aproximadamente 4% y a pH 1 la degradacion fue aproximadamente 15%. Tambien se ensayo la estabilidad en agua y varios disolventes organicos (1 semana a 50°C). La base libre era estable en isopropanol, y mostro una degradacion de aproximadamente 6 a 7% en acetonitrilo y metanol.

La sal de fosfato, forma A, como realizacion de la invencion, era estable en isopropanol y acetonitrilo, y mostro una degradacion de aproximadamente 8% en metanol. En agua, la base libre era estable, pero la sal de fosfato mostro una degradacion de aproximadamente 45%. Esto no afecta a la administracion de la sal de fosfato por via oral; de hecho, como se demuestra mas adelante, la sal de fosfato tiene aproximadamente una biodisponibilidad doble que la base libre. Sin quedar vinculados por el mecanismo, la diferencia en estabilidad entre la base libre y la sal de fosfato puede deberse a la mayor solubilidad acuosa de la sal de fosfato en comparacion con la base libre, asf como la tendencia de la sal de fosfato a provocar el descenso del pH del agua, que pueden aumentar la velocidad de degradacion. Tanto la base libre como la sal de fosfato mostraron la mayor degradacion en acetonitrilo/agua 1:1 (alrededor de 8% y 70%, respectivamente).

Basandose en el analisis por CLAR-EM, parece que se hidroliza la funcionalidad de urea de la base libre, como se muestra a continuacion, originando dos productos de hidrolisis principales. Los dos picos de degradacion principales segun CLAR-EM mostraban los iones moleculares esperados (MH+ = 313 para el pico de CLAR a 2,1 minutos, y MH+ = 222 para el pico de CLAR a 8,6 minutos). Como confirmacion adicional, se inyecto en el aparato de CLAR una muestra autentica de 2,6-dicloro-3,5-dimetoxianilina, y el tiempo de retencion y el espectro UV mostraron concordancia satisfactoria con el pico de degradacion que elrna mas tarde en CLAR.

Esquema 1: Ruta de degradacion en agua propuesta

imagen8

5

10

15

20

25

Formula empirica: C26H31CI2N7O3 Masa exacta: 559,1865 Peso molecular: 560,4754

imagen9

Formula empirica: C17H24N6 Masa exacta: 312,2062 Peso molecular: 312,4127

Formula empirica: CsHgCl2NO2 Masa exacta: 221,0010 Peso molecular: 222,0686

Ejemplo 12: Estabilidad en estado solido

Se sometieron a estres las muestras, en estado solido, durante una semana a 80°C, en recipientes hermeticamente cerrados y bajo humedad relativa de 75%. Se demostro que las formas cristalinas de la base libre anhidra descrita solo con fines de referencia y la sal de fosfato (forma A) (realizacion de la invencion) eran estables en estado solido, solas y en presencia de excipientes en forma de una mezcla al 1%. La cantidad de productos de degradacion de la base libre anhidra, evaluada mediante CLAR, era 1% o inferior (basada en las areas de pico), mientras que la degradacion de la sal de fosfato ascendfa a 1,4% o inferior. El analisis por DRXP de cada polimorfo no mostro cambio de forma.

Ejemplo 13: Efecto de equilibracion con disolventes A. Temperatura ambiente

Se equilibraron aproximadamente 20 mg de la sal de fosfato (forma A) (realizacion de la invencion) con 2 ml de diversos disolventes durante al menos 24 horas a temperatura ambiente. Despues se filtro la disolucion y se seco el residuo durante una noche a 50°C bajo vado general. Se investigo mediante DRXP el solido obtenido. No se observo ningun patron de DRXP nuevo para los disolventes enumerados en la Tabla 6. Estos resultados demuestran la estabilidad polimorfica de la sal de fosfato (forma A).

Se equilibro la base libre, descrita solo con fines de referencia, en agua, etanol, isopropanol, acetato de etilo y acetona y, como antes, se analizo mediante DRXP. No se observo ningun patron de DRXp nuevo.

Tabla 6

Disolventes utilizados para experimentos de equilibracion a 25°C

Disolventes

Metanol

Etanol abs

Etanol de 95%

2-Propanol

Acetonitrilo

(continuacion)

Disolventes utilizados para experimented de equilibracion a 25°C

Acetona

Tetrahidrofurano

Tolueno

Cloruro de metileno

Dioxano

DMF

DMSO

Agua

Metanol/Agua 9:1

Metanol/Agua 1:1

Metanol/Agua 1:9

Etanol/Agua 50:50

Etanol/Agua 10:90

2-Propanol/Agua 90:10

2-Propanol/Agua 50:50

Disolventes

2-Propanol/Agua 10:90

Acetona/Agua 50:50

Acetona/Agua 10:90

Acetonitrilo/Agua 90:10

Acetonitrilo/Agua 50:50

Acetonitrilo/Agua 10:90

Tetrahidrofurano/Agua 1:1

Tetrahidrofurano/Agua 1:9

B. 50°C

Tambien se equilibraron aproximadamente 20 mg de la sal de fosfato (forma A) (realizacion de la invencion), a aproximadamente 50°C, con 2 ml de disolvente durante al menos 24 horas. Despues se filtro la disolucion y se seco el residuo durante una noche a 50°C bajo vado general. Se investigo mediante DRXP el solido obtenido. No se 5 observo ningun patron de DRXP nuevo para ninguno de los disolventes enumerados en la Tabla 7. Estos resultados demuestran la estabilidad polimorfica de la sal de fosfato (forma A).

Tabla 7

Disolventes utilizados para experimentos de equilibracion a 50°C

Disolventes

Metanol

Etanol abs

Etanol de 95%

2-Propanol

Acetonitrilo

Acetona

Acetato de etilo

Acetato de propilo

Tetrahidrofurano

Tolueno

Dioxano

Metil-t-butileter

DMSO

Agua

Metanol/Agua 90:10

Metanol/Agua 50:50

Metanol/Agua 10:90

Etanol/Agua 50:50

Etanol/Agua 10:90

2-Propanol/Agua 90:10

2-Propanol/Agua 50:50

5

10

15

20

25

(continuacion)

Disolventes utilizados para experimented de equilibracion a 50°C

2-Propanol/Agua 10:90

Acetona/Agua 90:10

Acetona/Agua 50:50

Acetona/Agua 10:90

Acetonitrilo/Agua 90:10

Acetonitrilo/Agua 50:50

Acetonitrilo/Agua 10:90

Tetrahidrofurano/Agua 90:10

Tetrahidrofurano/Agua 50:50

Tetrahidrofurano/Agua 10:90

Ejemplo 14: Efecto de cristalizacion desde disoluciones saturadas calientes

Se disolvieron aproximadamente 20 mg de la sal de fosfato (forma A) en 2 ml de disolvente a 60°C. Se filtro la disolucion. Se enfrio en un bano de hielo el filtrado transparente obtenido, y se agito. Se recogio el precipitado en un filtro, se seco y se investigo mediante DRXP. No se observo cambio en la forma polimorfica tras cristalizacion desde disoluciones 1:1 de agua con metanol, etanol, 2-propanol, acetona y tetrahidrofurano. Solo con el uso de DMSO se aprecio mediante DRXP un cambio de forma. Estos resultados demuestran la estabilidad polimorfica de la sal de fosfato (forma A).

Ejemplo 15: Efecto de cristalizacion por evaporacion

A. 25°C

Se mezclaron aproximadamente 20 mg de la sal de fosfato (forma A) con 2 ml de disolvente a 25°C. Tras agitar durante una noche, se filtro la disolucion. Se dispuso el filtrado bajo flujo de nitrogeno para evaporar el disolvente. Se recogio el solido residual y se investigo. La susodicha evaporacion se realizo sin agitacion. Tras evaporacion desde THF/agua (1:1) sin agitacion, se obtuvo una vez un solido con patron de DRXP similar al de la forma B (vease la Figura 1C). Con posterioridad, en estas condiciones se obtuvo material amorfo, en lugar de forma B. Analogamente, se obtuvo material amorfo (descrito solo con fines de referencia) de la cristalizacion evaporativa de disoluciones 1:1 de agua con etanol, 2-propanol, acetona y tetrahidrofurano. Cuando se agito la disolucion durante la evaporacion, se obtuvo consistentemente forma A; lo que demuestra la estabilidad polimorfica de la forma cristalina de la sal de fosfato (forma A).

B. 50°C

Se realizaron los mismos experimentos (como se ha descrito mas arriba para la evaporacion a 25°C) a 50°C. En estas condiciones se obtuvo material amorfo, descrito solo con fines de referencia, de solo algunas de las soluciones no agitadas. Tal como se muestra en la Tabla 8, otras disoluciones no agitadas proporcionaron forma A. Tambien se obtuvo forma A cuando se agito la disolucion, lo que demuestra la estabilidad polimorfica de la forma cristalina de la sal de fosfato (forma A).

5

10

15

20

25

30

35

Efecto de cristalizacion por evaporacion a 50°C

Disolvente

Resultado de DRXP

Metanol/Agua 1:1

-

Etanol/Agua 1:1

Amorfo

2-Propanol/Agua 1:1

-

Acetona/Agua 1:1

-

Acetonitrilo/Agua 1:1

Amorfo

Tetrahidrofurano/Agua 1:1

-

"-": sin cambio detectado

Ejemplo 16: Efecto de precipitacion por adicion de disolvente

Se ensayaron dos combinaciones distintas de disolventes. Se disolvio la sal de fosfato (forma A) en DMSO, en el cual su solubilidad era elevada. Se anadio a la disolucion un disolvente (el antisolvente) en el cual la forma A era sumamente insoluble. Se recogio el precipitado en un filtro, se seco y se investigo mediante DRXP. No se observo cambio de forma para ninguno de los siguientes disolventes: metanol, etanol, isopropanol, acetona, acetonitrilo, THF, acetato de etilo, acetato de propilo, tolueno, metil-t-butileter, 1,4-dioxano, cloruro de metileno. Estos resultados demuestran la estabilidad polimorfica de la forma cristalina de la sal de fosfato (forma A).

Ejemplo 17: Estabilidad bajo compresion

Se comprimio la sal de fosfato (forma A, 300 mg) durante 5 minutos a 1,8 toneladas (4.000 libras) con una prensa hidraulica (diametro de los comprimidos 8 mm). No se observo mediante DRXP cambio de la modificacion cristalina. Estos resultados demostraron la estabilidad de la forma cristalina de la sal de fosfato (forma A).

Ejemplo 18: Estabilidad bajo granulacion

A la sal de fosfato (forma A) dispuesta en un mortero se anadio gota a gota un disolvente (agua o etanol) hasta que el solido del mortero estuvo suficientemente humedo, y se molio utilizando una mano de mortero hasta obtener una consistencia pastosa. Se seco la pasta en torno a 40°C y bajo presion reducida durante > 8 horas. Se evaluaron mediante DRXP los solidos, y no se observaron cambios en los espectros de DRXP. Estos resultados demostraron la estabilidad de la forma cristalina de la sal de fosfato (forma A).

Ejemplo 19: Estabilidad bajo calentamiento y enfriamiento

Esta se observo realizando un segundo experimento de DSC tras enfriar la masa fundida. El inicio de la fusion se aprecio a 183,2°C. La muestra comenzo a descomponerse a 185,9°C, justo despues del inicio de la fusion. No se llevaron a cabo pruebas ulteriores.

Ejemplo 20: Experimentos de sorcion y desorcion de agua

Se sometieron la base libre (anhidra y monohidrato) descrita solo con fines de referencia y su sal de fosfato (forma A) (realizacion de la invencion) a ciclo de sorcion y desorcion utilizando un instrumento de la marca VTI. Se recogieron los solidos despues del experimento y se analizaron. Las Figuras 3A (base libre) y 3B (sal de fosfato (forma A)) muestran la isoterma de sorcion-desorcion de agua registrada en un instrumento de ATG. En las Figuras 4A (base libre, anhidro), 4B (sal de fosfato (forma A) y 4C (base libre, monohidrato) se ofrecen las graficas de SDV. La maxima absorcion de agua para la sal de fosfato (forma A) fue inferior a 2% (es decir, 0,7%) a 25°C hasta una humedad relativa (H. R.) de 95% (vease la Tabla 9). La maxima absorcion de agua para el monohidrato fue inferior a 1,4% a 25°C hasta una H. R. de 95%. El monohidrato, con un contenido aproximado de agua de 3%, no se pudo secar completamente durante el experimento, pero el agua que se pudo extraer se reabsorbfa reversiblemente. Se encontro que la meseta de existencia de la forma de monohidrato estaba entre 10% y 95% de H. R., con una ligera histeresis en el segundo ciclo de desorcion.

Ensayo de SDV para sal de fosfato

Humedad relativa (%)

Aumento de peso en la desorcion (%) Aumento de peso en la adsorcion (%)

0

0,000 0,000

5

0,091 0,016

25

0,507 0,165

50

0,738 0,309

75

1,022 0,437

85

1,245 0,495

95

1,547 0,653

85

1,421 0,520

75

1,275 0,467

50

0,705 0,334

25

0,447 0,177

5

0,048 0,000

Propiedades terapeuticas superiores de la sal de fosfato Ejemplo 21: Propiedad farmacocinetica de la sal de fosfato

5 La mayor solubilidad en agua de la sal de fosfato (realizacion de la invencion) en comparacion con la base libre (y otras sales de acido, como se ha descrito en lo que antecede; descrita solo con fines de referencia) condujo al desarrollo de una formulacion (o composicion) en disolucion, lo que no hubiera sido factible con la base libre a causa de las restricciones de solubilidad. Para este experimento, se preparo la sal de fosfato de la manera siguiente. En un vial de vidrio se disolvieron 10,7 mg de la base libre en 4 ml de THF. Se anadio acido fosforico (1,76 ml) en acetona 10 (0,01 M). Se calento la mezcla a 50°C durante aproximadamente 2 minutos. Se dejo abierto el vial para que se

evaporase parcialmente a temperatura ambiente. Durante la noche se formo una suspension, que se filtro proporcionando aproximadamente 5,5 mg de un polvo casi blanco. A continuacion (Tabla 10) se encuentran tabuladas las biodisponibilidades, en ratas, de los agentes activos (la base libre y su sal de fosfato), formulados de diversas maneras.

15

Parametros farmacocineticos

Base libre i.v. [5 mg/kg] Base libre p.o., disolucion coloidal* [10 mg/kg] Base libre p.o., suspension** [8,57 mg/kg] Sal de fosfato p.o., disolucion*** [10 mg/kg] Sal de fosfato p.o., suspension** [8,57 mg/kg]

C5 min [pmol/L± E.E.]

0,972 ± 0,404 -- -- -- --

Cmax [pmol/L ± E.E.]

-- 0,154 ± 0,026 0,202 ± 0,021 0,263 ± 0,083 0,150 ± 0,031

Cultima [pmol/L ± E.E.]

+1 CO CO 0 0 0 0 o' o~ 0,010 ± 0,005 0,077 ± 0,038 0,148 ± 0,018 0,062 ± 0,006

tmax [h]

-- 3,0 2,0 4,0 3,0

tultimo [h]

24 24 8 8 8

ti/2 de eliminacion terminal [h]

4,5 5,2 4,3 4,8 4,4

Cl [L/h/kg]

3,6 -- -- -- --

Vss [L/kg]

9,6 -- -- -- --

ABC (area bajo la curva) (0 - ~) [h-pmoi/L]

2,47 1,44 1,55 2,52 1,23

ABC (0 - ~) dosis A [(h|jmol/L)/(mg/kg)]

0,49 0,14 0,18 0,25 0,14

Biodisponibilidad f [%]

29 37 ± 11 51 29 ± 3

* La disolucion de base libre esta basada en agua, etanol y Cremophor EL.

** Las suspensiones se prepararon en agua que contema 0,5% de HPMC.

*** La disolucion de sal de fosfato se preparo en PEG300/tampon de acetato de pH 4,7 (1:1 en volumen).

Claims (17)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   REIVINDICACIONES

   1. Una sal de acido monofosforico del compuesto de Formula I:

   imagen1
2. 2. La sal de acido monofosforico segun la reivindicacion 1 que es la sal de acido monofosforico cristalina anhidra.
3. 3. La sal de acido monofosforico cristalina anhidra segun la reivindicacion 2 que tiene la forma A en donde la forma A tiene un patron de difraccion de rayos X en polvo (DRXP) que comprende un pico caractenstico, en terminos de 20, a 15 ± 0,4°;

   donde, o bien utilizando el instrumento Bruker D8 Advance, irradiacion: Cu Ka a 30 kV, 40 mA, ranura variable V12 mm, amplitud de barrido 2 - 40° (valor de 2 zeta), velocidad de barrido 0,3 s por paso, o bien

   utilizando el instrumento XDS2000 de Scintag, irradiacion: Cu Ka a 45 kV, 40 mA, rendija de divergencia 3 mm y 2 mm, rendija de medicion: 0,3 mm y 0,2 mm, cortador 0,02 grados, tiempo de barrido: 6 minutos con 3 minutos por cuadro, amplitud de barrido: 2° - 35° o 40° (valor de 2 zeta) y velocidad de barrido 0,5°/minuto (valor de 2 zeta), se puede utilizar para la DRXP.
4. 4. La sal de acido monofosforico cristalina anhidra de forma A segun la reivindicacion 3, en donde el patron de difraccion de rayos X en polvo comprende ademas uno o varios picos caractensticos, en terminos de 20, seleccionados de picos a 13,7 ± 0,4°, 16,8 ± 0,4°, 21,3 ± 0,4° y 22,4 ± 0,4°.
5. 5. La sal de acido monofosforico cristalina anhidra de forma A segun la reivindicacion 4, en donde el patron de difraccion de rayos X en polvo comprende ademas uno o varios picos caractensticos, en terminos de 20, seleccionados de picos a 9,2 ± 0,4°, 9,6 ± 0,4°, 18,7 ± 0,4°, 20,0 ± 0,4°, 22,9 ± 0,4° y 27,2 ± 0,4°.
6. 6. Una forma cristalina anhidra denominada forma A segun la reivindicacion 4 de una sal de acido monofosforico del compuesto de Formula I:

   imagen2

   en donde la forma cristalina anhidra A tiene un patron de difraccion de rayos X en polvo (DRXP) que comprende al menos 3 picos caractensticos, en terminos de 20, seleccionados de picos a 13,7°, 15°, 16,8°, 21,3° y 22,4°; en donde, con respecto a valores de 20, tales valores para picos individuales pueden variar en ± 0,4°,

   donde, o bien el empleo del instrumento Bruker D8 Advance, irradiacion: Cu Ka a 30 kV, 40 mA, ranura variable V12 mm, amplitud de barrido 2 - 40° (valor de 2 zeta), velocidad de barrido 0,3 s por paso, o bien

   el empleo el instrumento XDS2000 de Scintag, irradiacion: Cu Ka a 45 kV, 40 mA, rendija de divergencia 3 mm y 2 mm, rendija de medicion: 0,3 mm y 0,2 mm, cortador 0,02 grados, tiempo de barrido: 6 minutos con 3 minutos por cuadro, amplitud de barrido: 2° - 35° o 40° (valor de 2 zeta) y velocidad de barrido 0,5°/minuto (valor de 2 zeta), se pueden utilizar para la DRXP.
7. 7. La forma cristalina anhidra segun una cualquiera las reivindicaciones 3-6 que tiene un patron de difraccion de rayos X en polvo como el mostrado en la Figura 1B.
8. 8. La forma cristalina anhidra segun una cualquiera las reivindicaciones 3-6 que tiene un termograma de calorimetna diferencial de barrido (CDB) que muestra un inicio de una endotermia a 184 ± 2°C;

   5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   donde para el CDB se puede utilizar el instrumento TA Q1000, intervalo de temperaturas: de temperatura ambiente a 210°C, velocidad de barrido: 10°C/minuto y flujo de nitrogeno: 60 mL/minuto.
9. 9. La forma cristalina anhidra segun una cualquiera las reivindicaciones 3-6 que tiene un termograma de calorimetna diferencial de barrido (CDB) como el mostrado en la Figura 2B;

   donde para el CDB se puede utilizar el instrumento TA Q1000, intervalo de temperaturas: de temperatura ambiente a 210°C, velocidad de barrido: 10°C/minuto y flujo de nitrogeno: 60 mL/minuto.
10. 10. La sal de acido monofosforico cristalina anhidra segun la reivindicacion 2 que tiene forma B en donde la forma B tiene un patron de difraccion de rayos X en polvo que comprende uno o varios picos caractensticos, en terminos de 20, seleccionados de picos a 9,3 ± 0,4°, 12,5 ± 0,4°, 13,4 ± 0,4°, 15,8 ± 0,4° y 17 ± 0,4°;

    en donde, o bien utilizando el instrumento Bruker D8 Advance, irradiacion: Cu Ka a 30 kV, 40 mA, ranura variable V12 mm, amplitud de barrido 2 - 40° (valor de 2 zeta), velocidad de barrido 0,3 s por paso, o bien

    utilizando el instrumento XDS2000 de Scintag, irradiacion: Cu Ka a 45 kV, 40 mA, rendija de divergencia 3 mm y 2 mm, rendija de medicion: 0,3 mm y 0,2 mm, cortador 0,02 grados, tiempo de barrido: 6 minutos con 3 minutos por cuadro, amplitud de barrido: 2° - 35° o 40° (valor de 2 zeta) y velocidad de barrido 0,5°/minuto (valor de 2 zeta), se puede utilizar para la DRXP.
11. 11. La forma cristalina anhidra segun la reivindicacion 10 que tiene un patron de difraccion de rayos X en polvo como el mostrado en la Figura 1C.
12. 12. Un metodo para preparar la forma cristalina anhidra A segun una cualquiera de las reivindicaciones 2-6, que comprende poner en contacto una suspension de un compuesto de Formula I:

    imagen3

    con acido fosforico para proporcionar la forma cristalina anhidra A.
13. 13. El metodo segun la reivindicacion 12, que comprende ademas cristalizar la forma cristalina anhidra A desde la suspension.
14. 14. El metodo segun la reivindicacion 13, en donde la suspension del compuesto de Formula I comprende isopropanol.
15. 15. El metodo segun la reivindicacion 12, que comprende ademas aislar la forma cristalina anhidra A cristalizada.
16. 16. Una composicion que comprende la forma cristalina segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-11 y un vehuculo, excipiente o diluyente farmaceuticamente aceptable.
17. 17. Una forma cristalina segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o una composicion segun la reivindicacion 16 para uso en un metodo de tratamiento que comprende administrar una cantidad terapeuticamente eficaz de la forma cristalina o amorfa segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-30 o la composicion segun la reivindicacion 35 a un sujeto que padece una enfermedad cuya patologfa y/o smtomas de dicha enfermedad puedan prevenirse, inhibirse o mejorarse por la inhibicion de una actividad de cinasa en donde la cinasa se selecciona del grupo consistente en FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, KDR, HER1, HER2, Bcr-Ab1, Tie2 y Ret, en donde la enfermedad se selecciona de carcinoma de los rinones, hngado, glandulas adrenales, vejiga, mama, estomago, ovarios, colon, recto, prostata, pancreas, pulmones, vagina o tiroides; sarcoma; glioblastoma; leucemia; tumores del cuello o cabeza; psoriasis; hiperplasia prostatica; o neoplasia.