TWI526440B

TWI526440B - ３－（２，６－二氯－３，５－二甲氧基－苯基）－１－｛（６－［４－（４－乙基－六氫吡－１－基）－苯胺基］－吡啶－４－基｝－１－甲基尿素之結晶型及其鹽

Info

Publication number: TWI526440B
Application number: TW099142438A
Authority: TW
Inventors: 喬格柏格豪森; 普瑞莎德科特斯瓦瑞卡帕; 約瑟夫麥卡納; 喬爾史賴德; 雷恩吳; 杜正明; 法蘭克史多瓦瑟
Original assignee: 諾華公司
Priority date: 2009-12-07
Filing date: 2010-12-06
Publication date: 2016-03-21
Also published as: CN102639510A; HK1171016A1; CN111269186A; DK2509963T3; TN2012000263A1; WO2011071821A1; ES2562462T3; HRP20160126T1; PL2509963T3; JO3061B1; JP5714024B2; NZ600070A; US20120245182A1; NZ700778A; CA2781431A1; IL220012A0; SI2509963T1; KR101787784B1; CN111100077A; BR112012013784A8

Description

3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{(6-[4-(4-乙基-六氫吡 -1-基)-苯胺基]-吡啶-4-基}-1-甲基尿素之結晶型及其鹽

本發明關於一種3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-六氫吡嗪-1-基)-苯胺基]-嘧啶-4-基}-1-甲基尿素之無水多形體、水合多形體及非結晶型，其鹽，製備其等之方法，含有其等之組合物及使用其等之治療方法。

3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-六氫吡嗪-1-基)-苯胺基]-嘧啶-4-基}-1-甲基尿素(描述於2005年6月23日申請之USSN 11/570983中，其已以引用的方式併入本文中)具有式I之結構：

式I化合物係蛋白激酶抑制劑，適用於治療藉由蛋白激酶介導之增生性疾病。特定言之，式I化合物抑制FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、KDR、HER1、HER2、Bcr-Abl、Tie2及Ret激酶。因此，其係用於治療包括以下之癌症：AML、黑色素細胞瘤、乳癌、結腸癌、肺癌(尤其小細胞肺癌)、前列腺癌或卡波西(Kaposi)肉瘤。

已熟知特定藥物之活性醫藥成份(API)之結晶型通常係以下之重要決定因素：藥物之易製備性、吸濕性、安定性、溶解性、儲存安定性、易調配性、在胃腸液中之溶解速率及活體內生物可利用性。當相同組合物之物質以不同的晶格排列結晶時即形成結晶型，針對特定結晶型會出現不同熱力學性質及安定性。結晶型亦可包括相同化合物之不同水合物或溶劑合物。在確定何種形式較佳時，比較各形式之多種性質，並基於諸多物理性質變量選擇較佳的形式。很可能在某些情況以其中一種形式較佳(若認為某些態樣(諸如易製備性、安定性等)具關鍵性時)。在其他情況中，則可能針對較高溶解速率及/或較佳生物可利用性，以另一種不同形式較佳。尚無法預測特定化合物或化合物之鹽是否將形成多形體，任何此等多形體是否適合用在商業用途之治療組合物中，或何種多晶型將顯示所希望之性質。

本文提供式I化合物之結晶體及非晶型，包括結晶體及非結晶型之組合物，及製備結晶體及非結晶型之方法，及其組合物。本發明進一步提供一種使用式I化合物之結晶體或非結晶型及其組合物用於治療各種疾病之方法，包括(但不限於)可藉由抑制選自FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、KDR、HER1、HER2、Bcr-Abl、Tie2及Ret激酶之激酶活性預防、抑制或緩解之彼等疾病。

在一態樣中，本發明提供一種式I化合物(游離鹼)之無水及水合結晶型：

及其磷酸鹽。

在一實施例中，本發明提供一種游離鹼之無水結晶型，其具有包含約12°處之特徵峰(以2θ表示)之X-射線粉末繞射圖。在另一實施例中，該X-射線粉末繞射圖進一步包含一或多個選自約10.5°、約15.2°、約19.5°及約21.0°處之特徵峰(以2θ表示)。因此，游離鹼之無水形式之X-射線粉末繞射圖可包含一、二、三、四或五個選自約10.5°、約12.0°、約15.2°、約19.5°及約21.0°處之特徵峰(以2θ表示)。該X-射線粉末繞射圖可進一步包括一、二或三個額外選自約11.9°、約21.3°及約22.6°處之特徵峰(以2θ表示)。在另一實施例中，游離鹼之無水結晶型具有實質上如圖1A所顯示之X-射線粉末繞射圖。如本文所使用之關於2θ值之術語「約」及「實質上」意指各峰值可能有±0.4°之變異。在某些實施例中，各峰之2θ值可能有±0.2°之變異。

游離鹼之無水結晶型可以熱表示特徵。在一個實施例中，游離鹼之無水結晶型具有顯示在約217℃開始吸熱之差示掃描量熱(DSC)曲線圖。在另一實施例中，該游離鹼之無水結晶型具有實質上如圖2A所顯示之差示掃描量熱曲線圖。本文所使用之關於特性(諸如吸熱、放熱、基線移位等)之術語「約」及「實質上」意指其值可能有±2℃之變異。對於DSC而言，所觀察到之溫度變化將取決於溫度變化速率以及樣品製備技術及所使用之特定儀器。因此，本文所記錄關於DSC熱曲線圖之值可能有±4℃之變異。

游離鹼之無水結晶型亦可由拉曼(Raman)光譜法測定特徵。在一個實施例中，游離鹼之無水結晶型顯示特徵拉曼峰在約2950、約1619、約1539、約1297、約1233、約1191及約998 cm^-1。在某些實施例中，游離鹼之無水結晶型顯示一或多個其他特徵拉曼峰在約3067、約2927、約2828、約1690、約1585、約1458、約1385、約1358、約1098、約1062、約819、約778、約695、約668、約637、約498、約468及約420 cm^-1。在另一實施例中，游離鹼之無水結晶型具有實質上如圖8A顯示之拉曼光譜。本文所使用之關於波數值之術語「約」及「實質上」意指各峰之值可能有±2 cm^-1之變異。

在一態樣中，本發明提供一種游離鹼之結晶單水合物，其具有包含根據2θ在約20.3°之特徵峰之X-射線粉末繞射圖。在另一實施例中，該X-射線粉末繞射圖進一步包含一或多個特徵峰根據2θ選自在約21.2°及19°之峰。在另一實施例中，該X-射線粉末繞射圖進一步包含一或多個特徵峰根據2θ選自在約4.7°、約9.4°及約11.0°之峰。因此，游離鹼之單水合物形式之X-射線粉末繞射圖可包含一、二、三、四、五或六個特徵峰根據2θ選自在約4.7°、約9.4°、約11.0°、約18.8°、約20.3°及約21.2°之峰。游離鹼之單水合物形式之X-射線粉末繞射圖可另外包括一、二、三、四、五、六或七個特徵峰根據2θ選自在約11.8°、約15.3°、約16.2°、約19.1°、約22.3°、約22.8°及約25.3°之峰。在另一實施例中，游離鹼之結晶單水合物形式具有實質上如圖1D顯示之X-射線粉末繞射圖。

可量熱測定游離鹼之結晶單水合物之特徵。在一實施例中，游離鹼之結晶型單水合物具有在約211℃下開始吸熱之DSC熱曲線圖。在另一實施例中，該游離鹼之結晶型單水合物具有實質上如圖7所顯示之DSC熱曲線圖及/或TGA熱曲線圖。圖7之TGA熱曲線圖顯示，基於6.7 mg樣品質量損失0.2 mg或損失3.1重量%，單水合物(分子量578；及18/578×100=3.1%)中已損失水分子(分子量18)。

游離鹼之單水合物結晶型亦可藉由拉曼光譜法測定其特徵。在一實施例中，游離鹼之單水合物結晶型在約2957、約2831、約1618、約1511、約1465、約1361、約1229、約1186及約994 cm^-1處顯示特徵性拉曼峰。在某些實施例中，游離鹼之無水結晶型在約1580、約1415、約1312、約1284、約1184、約1057、約854、約721、約661及約624 cm^-1處顯示其他特徵性拉曼峰。在另一實施例中，游離鹼之單水合物結晶型具有實質上如圖8B顯示之拉曼光譜。

在另一態樣中，本發明提供一種式I化合物之無水結晶型單磷酸鹽(或磷酸鹽)：

在另一實施例中，無水結晶型單磷酸鹽係形式A，其具有包含約15°處之特徵峰(以2θ表示)之X-射線繞射圖。在另一實施例中，該X-射線繞射圖進一步包含一或多個選自約13.7°、約16.8°、約21.3°及約22.4°處之特徵峰(以2θ表示)。在另一實施例中，該X-射線繞射圖進一步包含一或多個選自約9.2°、約9.6°、約18.7°、約20.0°、約22.9°及約27.2°處之特徵峰(以2θ表示)。在另一實施例中，式I化合物之單磷酸鹽(或磷酸鹽)之無水結晶型(形式A)具有包含至少三個選自約13.7°、約15°、約16.8°、約21.3°及約22.4°處之特徵峰(以2θ表示)之X-射線粉末繞射圖，峰。因此，磷酸鹽之形式A之X-射線粉末繞射圖可包含一、二、三、四、五、六、七、八、九、十或十一個選自約9.2°、約9.6°、約13.7°、約15°、約16.8°、約18.7°、約20.0°、約21.3°及約22.4°、約22.9°、及約27.2°處之特徵峰(以2θ表示)。在另一實施例中，磷酸鹽之無水結晶型(形式A)具有實質上如圖1B顯示之X-射線粉末繞射圖。

可量熱測定磷酸鹽之無水結晶型(形式A)之特徵。在一實施例中，磷酸鹽之無水結晶型(形式A)具有在約184℃下開始吸熱之差示掃描量熱曲線圖。在另一實施例中，該磷酸鹽之無水結晶型(形式A)具有實質上如圖2B所顯示之差示掃描量熱曲線圖。

在另一態樣中，本發明提供一種形式B之無水結晶型單磷酸鹽，其具有包含一或多個選自約9.3°、約12.5°、約13.4°、約15.8°及約17°處之特徵峰(以2θ表示)之X-射線粉末繞射圖。在一實施例中，該磷酸鹽之形式B具有實質上如圖1C中顯示之X-射線粉末繞射圖。

在一態樣中，本發明提供一種式I化合物之單磷酸鹽之非結晶型：

式I化合物之單磷酸鹽之非結晶型XRPD不顯示特徵峰。藉由DSC觀察到非結晶型沒有顯著玻璃態化轉變，但在TGA期間，在約115℃(遠低於結晶磷酸鹽之形式A)下樣品開始分解。

在另一態樣中，本發明提供一種式I化合物之氫氯酸鹽(或鹽酸鹽)：

在一實施例中，鹽酸鹽係結晶二水合物。該二水合物可具有包含一或多個選自約10.9°、約12.1°、約14.8°、約20.5°、約22°及約25.1°處之特徵峰(以2θ表示)之X-射線粉末繞射圖。在某些實施例中，鹽酸鹽具有實質上如圖1E所顯示之X-射線粉末繞射圖。

除了以上描述之用於測定本發明結晶型之特徵之技術外，XRPD、單晶X-射線繞射、DSC、動態蒸氣吸附(DVS)、晶體形態、固態核磁共振、拉曼散射、紅外(IR)光譜法亦可用於測定本發明其他結晶或非結晶型之特徵。

在另一態樣中，本發明提供一種製備形式A之磷酸鹽之無水結晶型之方法，其包括由含式I化合物(游離鹼)之懸浮液：

與磷酸接觸，產生形式A之磷酸鹽之無水結晶型。在一實施例中，式I化合物之懸浮液包含異丙醇。在另一實施例中，該方法進一步包括使形式A之磷酸鹽無水結晶型自懸浮液中結晶。在另一實施例中，該方法進一步包括分離結晶之形式A無水結晶型。

在該方法之某些實施例中，所接觸之磷酸含量係相對於所接觸游離鹼莫耳量之約1當量至約10當量之間，約2當量至約9當量之間，約3當量至約8當量之間，或約4當量至約7當量之間。在其他實施例中，所接觸之磷酸含量係相對於所接觸游離鹼莫耳量之約2當量至約4當量之間，或約3當量。在某些實施例中，游離鹼之懸浮液與磷酸反應或接觸約2小時至約40小時，約4小時至約20小時，或約8小時至約10小時。在某些實施例中，游離鹼與磷酸係在約25℃至約100℃，約40℃至約85℃，或約55℃至約70℃之溫度範圍內反應。在某些實施例中，游離鹼與磷酸係在反應所採用溶劑之回流溫度下反應。在某些實施例中，使用反應物及一或多種實質上不含水(即幾乎完全不含水)之溶劑進行反應。

藉由本發明之方法獲得之形式A之磷酸鹽無水結晶型可進一步進行以下步驟，諸如(例如)乾燥、純化等。所分離之結晶體可在合適的溫度下乾燥。在一實施例中，結晶體係在約20℃至約80℃之間之溫度下乾燥。在某些實施例中，結晶體係在約30℃至約70℃之間之溫度下乾燥。在某些實施例中，結晶體係在約40℃至約60℃之間之溫度下乾燥。在一實施例中，結晶體係在(例如)約10 mbar至約40 mbar之間減壓乾燥。乾燥步驟可進行適當的時間。因此，在一實施例中，結晶體係乾燥約1至約72小時，約2至約36小時或約4至約18小時。在某些實施例中，結晶體係乾燥約48小時。

式I化合物之磷酸鹽可用於製備游離鹼之單水合物。例如，磷酸鹽可溶於無機鹼之水溶液(諸如氫氧化銨水溶液)中。一段時間後，游離鹼以結晶單水合物沉澱析出。可視需要採用額外步驟(諸如過濾、清洗及乾燥)分離結晶游離鹼單水合物，如同上述磷酸鹽之分離法。

可分離實質上呈純形式之本發明之結晶型。「實質上純」意指超過50重量%之3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-六氫吡嗪-1-基)-苯胺基]-嘧啶-4-基}-1-甲基尿素係以本文揭示之結晶型之一存在。在本發明之所分離或實質上純結晶型之某些實施例中，3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-六氫吡嗪-1-基)-苯胺基]-嘧啶-4-基}-1-甲基尿素係以至少約60重量%、至少約70重量%、至少約80重量%、至少約90重量%、至少約95重量%、至少約97重量%、至少約98重量%或至少約99重量%指定形式存在。例如，在某些實施例中，本發明提供一種游離鹼之磷酸鹽，其中游離鹼之總磷酸鹽中至少約50重量%、至少約70重量%、至少約80重量%、至少約90重量%、至少約95重量%、至少約97重量%、至少約98重量%或至少約99重量%係呈形式A、形式B或非結晶型存在。在其他實施例中，本發明提供一種游離鹼，以使總游離鹼中至少約50重量%、至少約70重量%、至少約80重量%、至少約90重量%、至少約95重量%、至少約97重量%、至少約98重量%或至少約99重量%係呈結晶無水游離鹼、游離鹼之結晶單水合物、或游離鹼之非結晶型存在。在其他實施例中，本發明提供一種游離鹼之鹽酸鹽，其中總量中至少約50重量%、至少約70重量%、至少約80重量%、至少約90重量%、至少約95重量%、至少約97重量%、至少約98重量%或至少約99重量%係鹽酸鹽之非結晶型或結晶型二水合物。

本發明亦提供一種醫藥組合物及藥劑，其可藉由將一或多種本發明之無水或水合結晶型或非結晶型(例如，游離鹼、其磷酸鹽或其鹽酸鹽)與醫藥上可接受的載劑、賦形劑、黏合劑、稀釋劑或類似物混合而製備，以治療某些如本文描述之疾病。

因此，在另一態樣中，本發明提供一種組合物，其包含本發明之無水或水合結晶型或非結晶型及醫藥上可接受的載劑、賦形劑及/或稀釋劑。在一實施例中，該無水結晶型係呈游離鹼之式I化合物。在一實施例中，水合結晶型係呈游離鹼之式I化合物之單水合物。在另一實施例中，無水結晶型係式I化合物之單磷酸鹽。在另一實施例中，單磷酸鹽之無水結晶型係形式A。在另一實施例中，單磷酸鹽之無水結晶型係形式B。在一實施例中，式I化合物之單磷酸鹽係非晶型。在另一實施例中，該形式係式I化合物之鹽酸鹽。在闡述性實施例中，鹽酸鹽係結晶二水合物或非晶型。

該組合物可呈以下形式(例如)：粒劑、粉劑、錠劑、膠囊、糖漿、栓劑、注射液、乳劑、酏劑、懸浮液或溶液。在一實施例中，該組合物實質上不含水。可調配成現成組合物，用於多種投藥路徑，例如，藉由口服及非經腸投藥。非經腸及全身投藥包括(但不限於)皮下、靜脈內、腹膜內及肌肉內注射。藉由實例提供以下劑型且不應視為本發明之限制。

注射劑型通常包括油性懸浮液或水性懸浮液，其可使用合適的分散劑或潤濕劑及懸浮劑製備。注射劑型可呈溶液狀態或呈懸浮液形式，其利用溶劑或稀釋劑製備。可接受的溶劑或載劑包括無菌水、林格氏(Ringer)溶液或等滲生理食鹽水溶液。在某些實施例中，該水性注射形式係在投與患者前立即製備(或復水)。或者，無菌油液可用作溶劑或懸浮劑。該油或脂肪酸通常係非揮發性，包括天然或合成油、脂肪酸、單酸-、二酸-及三酸-甘油酯。

用於注射時，醫藥組合物及/或藥劑可呈適合利用上述合適溶液復水之粉末。此等實例包括(但不限於)冷凍乾燥、旋轉乾燥或噴霧乾燥之粉末、非結晶粉末、顆粒、沉澱物或微粒。用於注射時，醫藥組合物可視需要包含安定劑、pH調節劑、表面活性劑。生物可利用性改質劑及其等之組合。

用於經口、經頰及舌下投藥時，可接受之固體劑型為粉劑、懸浮劑、粒劑、錠劑、丸劑、膠囊、膠囊錠及膜衣錠。其可藉由(例如)將一或多種本發明之無水結晶型與至少一種添加劑(諸如澱粉或其他添加劑)混合製備。合適的添加劑係蔗糖、乳糖、纖維素糖、甘露醇、麥芽糖醇、葡聚糖、澱粉、瓊脂、藻酸鹽、幾丁質、殼聚糖、果膠、黃蓍膠、阿拉伯膠、明膠、膠原蛋白、酪蛋白、白蛋白、合成或半合成聚合物或甘油酯。口服劑型視需要可包含其他成份以輔助投藥，諸如非活性稀釋劑、或潤滑劑(諸如硬脂酸鎂)、或防腐劑(諸如對羥基苯甲酸酯或山梨酸)、或抗氧化劑(諸如抗壞血酸、生育酚或半胱胺酸)、崩解劑、黏合劑、增稠劑、緩衝劑、甜味劑、調味劑或香料劑。錠劑及丸劑可進一步利用此項技術中已知之合適的塗層材料處理。

用於口服投藥之液體劑型可呈醫藥上可接受的乳劑、糖漿、酏劑、懸浮液及溶液形式，其可包含非活性稀釋劑(諸如水)。醫藥組合物及藥劑可使用無菌液體製備成液體懸浮液或溶液，諸如(但不限於)油、水、醇及其等之組合。可添加醫藥上合適的表面活性劑、懸浮劑、乳化劑，用於口服或非經腸投藥。在某些實施例中，液體劑型(尤其游離鹼單磷酸鹽之結晶型)實質上不含水。

如上述之懸浮液可包括油。該油包括(但不限於)花生油、芝麻油、棉籽油、玉米油及橄欖油。懸浮液製劑亦可包含脂肪酸之酯，諸如油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、脂肪酸甘油酯及乙醯化之脂肪酸甘油酯。醫藥組合物之懸浮液可包括醇，諸如(但不限於)乙醇、異丙醇、十六烷基醇、甘油及丙二醇。懸浮液醫藥組合物亦可使用醚(諸如(但不限於)聚(乙二醇)、石油烴(諸如礦物油及礦脂))；及水。

除了上述代表性劑型外，醫藥上可接受的賦形劑及載劑通常係熟習此項技術者已知，且因此包括在本發明中。該等賦形劑及載劑係描述於(例如)「Remingtons Pharmaceutical Sciences」Mack Pub. Co.,New Jersey(1991)中，其以引用的方式併入本文中。

本發明之醫藥組合物可設計為如以下描述之短效、快速釋放、長效及持續釋放之組合物。因此，亦可製備用於控制釋放或緩慢釋放之醫藥組合物。

可呈延長釋放形式投與現成組合物，以提供長期儲存及/或遞送作用。因此，醫藥組合物及藥劑可壓製成丸劑或圓柱形，且植入肌肉內或皮下，作為儲存注射液或植入物(諸如支架)。該等植入物可使用已知之惰性材料，諸如聚矽氧及生物可降解之聚合物。

可依患者之疾病狀況、年齡、體重、整體健康狀況、性別及飲食、劑量間隔時間、投藥路徑、排泄速率及藥物之組合調整特定劑量。含有治療有效量之任何以上劑型均在常規實驗之範圍內，因此完全在本發明之範圍內。

在某些實施例中，本發明提供一種包含式I化合物之游離鹼之組合物，其中至少約50重量%、至少約70重量%、至少約80重量%、至少約90重量%、至少約95重量%、至少約97重量%、至少約98重量%或至少約99重量%之組合物中總游離鹼係呈非結晶型，或呈單水合物形式存在。在其他實施例中，本發明之組合物基本上由游離鹼組成，其中至少約95重量%、至少約97重量%、至少約98重量%或至少約99重量%之游離鹼係以無水型或呈單水合物形式存在於組合物中。

在某些其他實施例中，本發明提供一種包含游離鹼之磷酸鹽之組合物，其中至少約50重量%、至少約70重量%、至少約80重量%、至少約90重量%、至少約95重量%、至少約97重量%、至少約98重量%、或至少約99重量%之組合物中之游離鹼之總磷酸鹽係以形式A、形式B或以非結晶型存在。在其他實施例中，本發明之組合物基本上由游離鹼之磷酸鹽組成，其中至少約95重量%、至少約97重量%、至少約98重量%或至少約99重量%之游離鹼之磷酸鹽係以形式A、形式B或以非結晶型存在於組合物中。

在某些實施例中，本發明提供一種包含游離鹼之鹽酸鹽之組合物，其中至少約50重量%、至少約70重量%、至少約80重量%、至少約90重量%、至少約95重量%、至少約97重量%、至少約98重量%、或至少約99重量%之組合物中之游離鹼之總鹽酸鹽係以二水合物、或以非結晶型存在。在其他實施例中，本發明之組合物基本上由游離鹼之鹽酸鹽組成，其中至少約95重量%、至少約97重量%、至少約98重量%或至少約99重量%之游離鹼之鹽酸鹽係以二水合物或以非結晶型存在於組合物中。

在另一態樣中，本發明提供一種治療方法，其包含將治療有效量之本發明無水或水合結晶型、或非結晶型、或包含本發明無水或水合結晶型或非結晶型之組合物投至患病之個體，該疾病之病理及/或症狀可由抑制激酶活性預防、抑制或改善，其中該激酶係選自由FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、KDR、HER1、HER2、Bcr-Ab1、Tie2及Ret組成之群。在另一實施例中，本發明提供本發明無水或水合結晶型、非結晶型或包括本發明無水或水合結晶型或非結晶型之組合物之用途，其用於製備治療個體疾病之藥劑，其中FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、KDR、HER1、HER2、Bcr-Ab1、Tie2及Ret之激酶活性導致疾病之病理及/或症狀。在本發明之某些實施例中，該激酶係選自由FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4組成之群。

本發明中之治療意指緩解完全或部分與病症或疾病相關之症狀，或減緩或遏止此等症狀進一步進展或惡化，或為處於發展疾病或病症風險之個體預防或避免疾病或病症。該疾病或病症包括(但不限於)腎癌、肝癌、腎上腺癌、膀胱癌、乳癌、胃癌、卵巢癌、結腸癌、直腸癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、陰道癌、甲狀腺癌；肉瘤；神經膠質母細胞瘤；白血病；頸或頭腫瘤；牛皮癬；前列腺增生；或贅瘤(neoplasia)。

例如，在治療包括如上述激酶所介導病症之疾病中，成功的治療可包括緩解症狀或減緩或遏止疾病之進展，如由一或多種相應激酶之濃度及活性減少所測得。本文所使用之「治療有效量」意指式I化合物(包括游離鹼)之無水或水合結晶型或非結晶型、或式I化合物之磷酸鹽之無水結晶型或非結晶型、或式I化合物之鹽酸鹽(包括二水合物或非結晶型)或包括彼等之組合物緩解完全或部分與所治療之病症或疾病相關之症狀，或減緩或遏止其症狀進一步進展或惡化，或為處於發展疾病或病症之風險之個體防止或提供預防疾病或病症之量。個體係可由本文揭示之任何形式之式I化合物或包括其之組合物之投藥而獲益之動物。在某些實施例中，個體係哺乳動物，例如人、靈長類動物、狗、貓、馬、牛、豬、齧齒動物(諸如大鼠或小鼠)。哺乳動物通常係人。

無水或水合結晶型、或非結晶型、或包含本發明任何此等形式之組合物之治療有效量可依投藥路徑及劑型變化。式I化合物之無水或水合結晶型或非結晶型之有效量通常降至約0.01至100 mg/kg/天之間，及更特定言之約0.05至25 mg/kg/天。通常選擇無水或水合結晶型、非結晶型及包含本發明該等形式之組合物，以提供顯示高治療指數之醫藥組合物。治療指數係毒性及治療作用之間之劑量比率，可採用LD₅₀及ED₅₀之間之比率表示。LD₅₀係致死50%人群時之劑量及ED₅₀係有效治療50%人群時之劑量。藉由動物細胞培養物或實驗動物中之標準醫藥方法確定LD₅₀及ED₅₀。

本說明書中提及之所有公開案、專利申請案、已頒佈之專利及其他文獻係以引用的方式併入本文中，該引用的程度就如同已特定地及個別地將各個公開案、專利申請案、已頒佈之專利或其他文獻之整體揭示內容以引用的方式併入一般。藉由引入方式併入之文獻中所包含之定義中已經排除與本揭示內容相反之定義。

因此，參照以下實例將更容易理解本發明之一般說明，其藉由闡述之方式提供且不用於限制本發明。

實例

本發明使用以下化學及生物學術語之縮寫：

DCM：二氯甲烷

DMSO：二甲基亞碸

DSC：差示掃描量熱測定

DVS：動態蒸氣吸附

ESI-MS：電噴霧離子化質譜

FT-IR：傅利葉(Fourier)變換紅外光譜

HPLC：高效液相層析

IPA：異丙醇

M：莫耳濃度

MeOH：甲醇

N HCl：HCl當量

NMR：核磁共振光譜

RH：相對濕度

RT：室溫

SEM：掃描電子顯微鏡法

TGA：熱重量分析

UV：紫外線

XRPD：X-射線粉末繞射

所使用之常規方法、儀器及標準物 pH值

如以下示例確定溶液之pH：將約10 mg游離鹼或其鹽轉移至20 ml玻璃瓶，且將10 ml相應的緩衝液或水加至其中。當測定pH時，連續攪拌溶液。可藉由多種方法(諸如，藉由微量pH電極)進行pH之測定。

溶解度之確定

在25±0.5℃下使過量游離鹼(式I游離鹼)、其磷酸鹽(游離鹼之單磷酸鹽)、或其他酸鹽在溶劑中平衡1天。過濾所產生之漿液且藉由HPLC測定濾液溶解度。

固有溶解度

在0.5 cm²之VanKel衝床及2000磅壓錠壓力之模具中測定固有溶解速率。使用光纖溶解系統(C technologies Inc.)及Cary UV/VIS分光光度計，與200 rpm之攪拌速率測定溶解度。溶液介質維持在37±0.5℃下且在260 nm處進行濃度測定。

吸濕性

在25±0.5℃下使用表面測定系統DVS-1，由吸附/解吸附等溫線測定吸濕性。在不同濕度下(包括75%、85%及95%)評估樣品。

多形性行為

在25±0.5℃下高速攪拌樣品漿達24小時，過濾且藉由XRPD分析所收集之固體。

HPLC方法

裝置：Waters；管柱：對稱性C18，3.5微米微粒直徑，4.6×75 mm；管柱溫度：35度；流速：1 mL/分鐘；流動相：A=含0.1% TFA之水及B=乙腈；檢測：UV 254 nm；注射量：約2微克；稀釋劑：60:40(v/v)乙腈/0.2%磷酸水溶液；及梯度：10至70% B，歷時10分鐘。

TG方法

儀器：TA儀器Q500；溫度範圍：室溫至300℃；掃描速率：10℃/分鐘；氮氣流量：60 ml/分鐘。Mettler TGA 850；溫度範圍：室溫至300℃；掃描速率：20℃/分鐘；氮氣流量：40 ml/分鐘。

SEM方法

儀器：Jeol JSM 6300。

DSC方法

儀器：TA儀器Q1000；溫度範圍：室溫至210℃；掃描速率：10℃/分鐘；氮氣流速：60 mL/分鐘。

X-射線結晶測定方法

採用具有來自細焦點密封管產生器之石墨-單色光Cu(K_α)-輻射之Bruker AXS三圈繞射儀及使用SMART軟體之Smart 6000 CCD檢測器。利用Saint進行數據處理及全面晶胞細部處理。基於不同角度設定下所測定與對稱性相關之反射強度，採用半經驗吸收值校正。藉由雙重空間再循環方法且隨後的DF分析法測定該結構，且使用SHELXTL程序序列，基於全矩陣最小平方(以F²表示)進行精算。

XRPD方法

儀器：Bruker D8 Advance，輻射：Cu Kα(30 kV，40 mA)；可變狹縫V12 mm；掃描範圍：2至40°(2θ值)；掃描速率：0.3 s/步驟。或者，使用Scintag,Inc.之XDS2000；輻射：Cu Kα(45 kV，40 mA)；發散限幅：3 mm及2 mm；測定限幅：0.3 mm及0.2 mm；斬波機0.02 grd；掃描時間：6分鐘(每個範圍3分鐘)；掃描範圍：2°至35°或40°(2θ值)；掃描速率0.5°/分鐘(2θ值)。

IR方法

儀器：Thermo Magna 560；方式：透射；掃描範圍：4000 cm^-1至600 cm^-1。

拉曼方法

儀器：Bruker Vertex 70 FTIR；APT：3.5 mm；掃描64次；RES 2。

鹽之篩選法 實例1：篩選式I游離鹼之酸鹽

利用式I游離鹼(由以下實例2中之描述製備)及以下諸多不同的酸進行鹽篩選實驗：乙酸、苯甲酸、檸檬酸、富馬酸、馬尿酸、氫溴酸、鹽酸、乳酸(D、L)、馬來酸、蘋果酸(L)、丙二酸、甲磺酸、磷酸、萘-1,5-二磺酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸(D)、及酒石酸(L)。將游離鹼(30 mg)溶於12 mL THF中。將0.1 ml此溶液之等分試樣分佈於96孔式(Zinsser Crissy板)結晶板中。取約0.25 mg游離鹼遞送至各孔；亦將0.044 ml之0.01 M含相應酸之丙酮溶液加至各孔中。利用預開口蓋子覆蓋結晶板，隨後在室溫下約10小時，讓溶劑混合物蒸發。

試圖利用乙酸、苯甲酸、檸檬酸、馬尿酸、乳酸、馬來酸及蘋果酸產生具有與游離鹼或非結晶型固體相同之XRPD圖形之固體。利用富馬酸、氫溴酸、萘-1,5-二磺酸、硫酸或酒石酸獲得低結晶度固體。對於磷酸而言，由190酒精度乙醇中獲得結晶鹽形式。基於結晶度或最終的合成難易度，進一步評估由磷酸、鹽酸、丙二酸、甲磺酸及琥珀酸形成之固體之結晶度及吸濕性。

發現磷酸鹽具高結晶度。如藉由DVS吸附/解吸附等溫線評估吸濕性，其顯示即使在95% RH下，因吸收水所觀察到之增重小於2重量%。在75%及85% RH下，觀察到之增重小於1重量%。

對於鹽酸鹽而言，觀察到幾種XRPD圖形，其顯示存在多於一種多形體。多數此等鹽具有低結晶度。確定大多數結晶為二水合物。鹽酸鹽比磷酸鹽更易吸濕。其中一種鹽酸鹽形式中，藉由DVS觀察到增重約4.1重量%(75% RH)至約16.9重量%(95% RH)。

對於丙二酸鹽而言，基於其所觀察到之XRPD圖形，確定有四種形式。進一步評估其中一種，證實為易碎之結晶，僅製備一次，呈濕型態，且吸濕(在所有測試濕度下均增重約10重量%)。

對於甲磺酸鹽而言，觀察到數種XRPD圖形，其中僅一種具一致性，但是其吸濕(由DVS顯示增重約2.6重量%至10重量%)。同樣，琥珀酸鹽亦吸濕(由DVS顯示增重約4.1重量%至10重量%)。

在pH 3緩衝液及水中之初溶解度測試結果係在以下表1中顯示。在pH 3緩衝液及水中，磷酸鹽比甲磺酸鹽、丙二酸鹽及琥珀酸鹽更易溶解。在水中，磷酸鹽亦比游離鹼更易溶解。

化學合成法 實例2：式I化合物之游離鹼之製備

A. N-[4-(4-乙基-六氫吡嗪-1-基)-苯基]-N'-甲基-嘧啶-4,6-二胺

在密封管中加熱含4-(4-乙基-六氫吡嗪-1-基)-苯胺(1 g，4.88 mmol)、(6-氯-嘧啶-4-基)-甲基-胺(1.81 g，12.68 mmol，1.3當量)及4 N HCl之二噁烷溶液之混合物至150℃達5小時。濃縮反應混合物，利用DCM及飽和的碳酸氫鈉水溶液稀釋。分離水層並利用DCM萃取。利用鹽水清洗有機相，乾燥(硫酸鈉)、過濾並濃縮。藉由矽膠管柱層析(DCM/MeOH，93:7)純化殘留物，隨後在二乙醚中研製，獲得呈白色固體之標題化合物：ESI-MS:313.2[MH]⁺；t_R=1.10分鐘(梯度J)；TLC:R_f=0.21(DCM/MeOH,93:7)。

B. 4-(4-乙基六氫吡嗪-1-基)-苯胺

在室溫於氫氣氛圍下，攪拌1-乙基-4-(4-硝基-苯基)-六氫吡嗪(6.2 g，26.35 mmol)及阮內(Raney)鎳(2 g)於MeOH(120 mL)中之懸浮液達7小時。通過矽藻土襯墊過濾反應混合物，且濃縮，獲得5.3 g呈紫色固體之標題化合物：ESI-MS:206.1[MH]⁺；TLC:R_f=0.15(DCM/MeOH+1% NH₃ ^aq,9:1)。

C. 1-乙基-4-(4-硝基-苯基)-六氫吡嗪

加熱1-溴-4-硝基苯(6 g，29.7 mmol)及1-乙基六氫吡嗪(7.6 ml，59.4 mmol，2當量)至80℃達15小時。冷卻至室溫後，利用水及DCM/MeOH 9:1稀釋反應混合物。分離水層且利用DCM/MeOH 9:1萃取。利用鹽水清洗有機相，乾燥(硫酸鈉)、過濾並濃縮。藉由矽膠管柱層析(DCM/MeOH+1% NH₃ ^aq,9:1)純化殘留物，獲得6.2 g呈黃色固體之標題化合物：ESI-MS:236.0[MH]⁺；t_R=2.35分鐘(純度：100%，梯度J)；TLC:R_f=0.50(DCM/MeOH+1% NH₃ ^aq,9:1)。

D.(6-氯-嘧啶-4-基)-甲基-胺

修改文獻(J. Appl. Chem. 1955,5,358)中公開之步驟，製備此材料：在保持內部溫度不會上升超過50℃之速率下，將33%甲胺之乙醇溶液(40.1 ml，328.9 mmol，2.5當量)加至自商品購得之4,6-二氯嘧啶(20 g，131.6 mmol，1.0當量)於異丙醇(60 ml)之懸浮液中。添加完成後，在室溫下攪拌反應混合物1小時。然後，加水(50 ml)並在冰浴中冷卻所形成之懸浮液至5℃。濾出所沉澱之產物，利用冷異丙醇/水2:1(45 ml)及水清洗。在45℃下真空乾燥所收集之材料過夜，獲得呈無色粉末之標題化合物。t_R=3.57分鐘(純度：>99%，梯度A)，ESI-MS:144.3/146.2[MH]⁺。

E.(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-六氫吡嗪-1-基)-苯胺基]-嘧啶-4-基}-1-甲基尿素)

藉由將異氰酸2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基酯(1.25當量)加至N-[4-(4-乙基-六氫吡嗪-1-基)-苯基]-N'-甲基-嘧啶-4,6-二胺(2.39 g，7.7 mmol，1當量)於甲苯中之溶液中，且在回流下攪拌該反應混合物1.5小時，製備標題產物。藉由矽膠管柱層析(DCM/MeOH+1% NH₃ ^aq，95:5)純化粗產物，獲得呈白色固體之標題化合物：ESI-MS:560.0/561.9[MH]⁺；t_R=3.54分鐘(純度：100%，梯度J)；TLC:R_f=0.28(DCM/MeOH+1% NH₃ ^aq,95:5)。分析：C₂₆H₃₁N₇O₃Cl₂,計算值C 55.72%、H 5.57%、N 17.49%、O 8.56%、Cl 12.65%；實測值C 55.96%、H 5.84%、N 17.17%、O 8.46%、Cl 12.57%。藉由如以下描述之XRPD、量熱法及其他方法測定標題化合物之特徵。

實例3：式I化合物之單磷酸鹽形式A之製備

將3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-{6-[4-(4-乙基六氫吡嗪-1-基)苯胺基]-嘧啶-4-基}-1-甲基尿素(134 g，240 mmol)及IPA(2000 ml)加至圓底燒瓶中。攪拌該懸浮液且加熱至50℃，並將磷酸(73.5 g，750 mmol)於水(2000 ml)之溶液分批加至其中。在60℃下攪拌該混合物30分鐘。且通過聚丙烯襯墊過濾。利用溫熱IPA/水(1:1，200 ml)清洗襯墊且合併濾液。將IPA(6000 ml)加至此清澈溶液中，且在回流下攪拌該混合物20分鐘，緩慢冷卻至室溫(25℃)，並攪拌24小時。藉由過濾收集白色鹽產物，利用IPA(2×500 ml)清洗且在60℃烘箱中減壓乾燥2天，以提供磷酸鹽(形式A)110 g。產率70%。藉由HPLC測定之純度>98%。分析：H₃₄N₇O₇Cl₂P，計算值C 47.42%、H 5.20%、N 14.89%、O 17.01%、Cl 10.77%、P 4.70%；實測值C 47.40%、H 5.11%、N 14.71%、O 17.18%、Cl 10.73%、P 4.87%。藉由如以下描述之XRPD、量熱法及其他方法測定標題產物之特徵。

實例4：式I化合物之游離鹼單水合物形式之製備

在18℃及氮氣氛圍下，將15 M氫氧化銨(10 L，15莫耳)注入22升四頸圓底燒瓶中。於18℃下，在1小時內，將呈固體之3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-{6-[4-(4-乙基六氫吡嗪-1-基)苯胺基]嘧啶-4-基}-1-甲基尿素之磷酸鹽(660 g，1.002莫耳；藉由實例3之方法製備)分批加至溶液中。在18℃下攪拌所產生之白色懸浮液16小時。移除樣品且藉由¹H NMR檢驗，以確定磷酸鹽完全轉化為游離鹼。NMR顯示完全轉化為游離鹼。通過3 L具有粗玻璃砂之燒結玻璃漏斗(40-60 ASTM)過濾混合物。由於固體游離鹼之粒徑細小，因此過濾緩慢(需要約3小時)。利用去離子水(1 L)清洗固體。清洗亦極緩慢(需要1.5小時)。在60℃於真空下(5托)乾燥該固體16小時，獲得642 g游離鹼(理論值之114%，理論值=561.1 g)。在18℃下，於去離子水中將經乾燥之固體重新調成漿狀物3小時。通過3 L具有粗玻璃砂之粗砂燒結玻璃漏斗(40-60 ASTM)過濾固體。利用去離子水(2 L)沖洗濾餅。在60℃於真空下(5托)乾燥固體16小時，獲得呈單水合物之游離鹼(559 g，單水合物之理論值之96.7%)。

結晶型之特徵分析 實例5：游離鹼、磷酸鹽(形式A)及鹽酸鹽之物理化學性質

A .　游離鹼

無水游離鹼顯示良好的結晶度(對於XRPD光譜，參見圖1A)。其輕微吸濕，及以10℃/分鐘加熱時，在217℃下熔解(開始)及隨後分解(對於DSC熱曲線圖，參見圖2A)。對於無水鹼之TGA係在圖3A中顯示，且所觀察到之重量損失係與無水形式一致。其不溶於高pH之水性介質(在pH 6.8緩衝液中為約0.00004 mg/mL及在pH 6.67之水中為約0.00009 mg/mL)，於普通有機溶劑中則為難溶至微溶。在0.1 N HCl中，無水游離鹼改變為其他形式(類似鹽酸鹽形式)。游離鹼之單水合物形式亦顯示良好的結晶度(對於XRPD光譜，參見圖1D)。無水游離鹼之SEM顯微照片係顯示於圖5A中。

B.　磷酸鹽(形式A)

磷酸鹽顯示良好的結晶度(對於XRPD光譜，參見圖1B(磷酸鹽形式(形式A)))。其輕微吸濕，且以10℃/分鐘加熱時，在184.0℃下熔解(開始)及隨後分解(參見圖2B(磷酸鹽(形式A)))。磷酸鹽之TGA係在圖3B中顯示，且所觀察到之重量損失係與無水形式一致。其在pH 6.8緩衝液中不溶解(約0.00009 mg/mL)，但是，與游離鹼不同，其溶於水(1.3 mg/mL)。其難溶於普通有機溶劑。以下顯示其他溶解度研究。磷酸鹽(形式A)之FT-IR光譜示於圖6中。在磷酸鹽中檢測到高達0.6%之殘留溶劑(異丙醇)。磷酸鹽形式A之SEM顯微照片係顯示於圖5B中。

C.　游離鹼之鹽酸鹽

呈二水合物形式之鹽酸鹽顯示中等結晶度(對於XRPD光譜，參見圖1E)。TGA係顯示於圖3C中，且所觀察到之重量損失係與二水合物形式一致。鹽酸鹽吸濕且顯示的形式係二水合物。實例8，表3D中顯示溶解度試驗結果。

實例6：游離鹼之磷酸鹽之非結晶型

在25℃下，約40 mg磷酸鹽(形式A)與4 ml四氫呋喃/水(1:1)混合。攪拌過夜後，過濾溶液。在無攪拌之情況下，將澄清的濾液置於氮氣流下乾燥。藉由DSC及TGA進一步評估溶劑蒸發後獲得之固體。當自-40℃加熱至140℃時，在DSC溫度記錄上未觀察到明顯的玻璃態化轉變。在TGA溫度記錄上，觀察到在約115℃下樣品開始分解，遠低於結晶磷酸鹽之形式A。亦參見以下實例15。

實例7：測定固有溶解速率

測定磷酸鹽於水，pH=6.8及0.1 N HCl中及游離鹼單水合物於pH=6.8、4.5及0.1 N HCl中之固有溶解速率。在VanKel儀器上使用Cary UV/VIS分光光度計進行測定(表2)。在水及0.1 N HCl中，磷酸鹽比游離鹼顯示出較快的固有溶解速率。

實例8：於水性介質中之溶解度

在不同水性介質(例如，pH 6.8緩衝液，pH 4.5緩衝液、pH 1緩衝液)(包括模擬的及真實的人類流體)中測定無水單水合物及單水合物游離鹼之溶解度。模擬的流體組合物係在以下表3A至3C中顯示。

自12名人類受試者中收集人類流體。24小時後如以上描述評估溶解度。結果係在以下表4A及4B中顯示。

在24小時時，在水性介質及人類流體中進行磷酸鹽之溶解度研究。無預先平衡(表4C)及在pH 1 HCl中平衡24小時(表4D)之磷酸鹽之結果。後者條件顯示磷酸鹽在此段時間內轉變為HCl鹽。

實例9：式I化合物之游離鹼之FT-拉曼光譜

如以上描述進行式I化合物之單水合物及無水結晶型游離鹼之FT-拉曼光譜。式I化合物之無水游離鹼之拉曼光譜係在圖8A中顯示。圖8A中之峰包括3067、2950、2927、2854、2828、1690、1619、1585、1539、1458、1409、1385、1358、1297、1233、1191、1098、1062、998、819、778、742、695、668、637、498、468、420 cm^-1。單水合物游離鹼之拉曼光譜係在圖8B中顯示。圖8B中之峰包括2957、2831、1618、1580、1511、1465、1415、1361、1312、1284、1229、1186、1148、1057、994、854、721、661、624 cm^-1。

實例10：式I化合物之游離鹼之結晶型單水合物之單晶X-射線結晶分析

如以上描述進行式I化合物之游離鹼之結晶型單水合物之單晶X-射線結晶分析。分析結果係在以下表5及表9中顯示。

結晶型安定性之證實 實例11：溶解安定性

在50℃下，於pH 1至pH 9之間之緩衝液中測試游離鹼之溶解安定性達1周。在pH 5及更高下，游離鹼安定，且經過計算少量初始雜質後，其降解度係小於2%。在pH 3下，降解度係約4%，且在pH 1下，降解度係約15%。亦在水及某些有機溶劑中測試安定性(在50℃下1周)。游離鹼在異丙醇中安定，且在乙腈及甲醇中顯示約6至7%降解度。

磷酸鹽(形式A)係在異丙醇及乙腈中安定，且在甲醇中顯示約8%降解度。在水中，游離鹼安定，但是磷酸鹽顯示約45%降解度。此點不影響經口投與磷酸鹽；事實上，如以下顯示，磷酸鹽之生物可利用性比游離鹼高約2倍。在不受機轉限制下，游離鹼及磷酸鹽之間之安定性差異可能在於磷酸鹽高於游離鹼之水溶解度，及磷酸鹽可導致水之pH下降之趨勢，其可增加降解速率。游離鹼及磷酸鹽在1:1之乙腈/水中皆顯示最高的降解度(分別約8%及70%)。

基於HPLC-MS分析，游離鹼之尿素官能度出現水解，產生如以下顯示之兩種主要水解產物。HPLC-MS之兩個主要的降解峰顯示預期之分子態離子(2.1分鐘處之HPLC峰之MH⁺=313，及8.6分鐘處之HPLC峰MH⁺=222)。如進一步證實，亦將標準樣品2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯胺注射入HPLC中，且滯留時間及UV光譜顯示與後來洗脫的HPLC降解峰具有令人滿意之一致性。

實 例12：固態安定性

取固態樣品，在80℃之密閉容器及75%相對濕度之條件下處理1周。在單獨及在占混合物1%之賦形劑之存在下，呈固態之無水游離鹼及磷酸鹽(形式A)之結晶型顯示安定。如藉由HPLC評估，無水游離鹼之降解產物量係1%或更少(基於峰面積計算)，且磷酸鹽之降解量為1.4%或更少。各多形體之XRPD未顯示形式變化。

實例13：與溶劑平衡之效果

A.　室溫

由約20 mg磷酸鹽(形式A)與2 ml不同溶劑，在室溫下平衡至少24小時。然後過濾溶液，且在50℃及吸塵器真空下乾燥殘留物過夜。藉由XRPD研究所獲得之固體。對於表6中列舉之溶劑未觀察到新穎的XRPD圖形。此結果證實磷酸鹽(形式A)之多形體安定性。

游離鹼係在水、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯及丙酮中平衡，且藉由XRPD分析。未觀察到新穎的XRPD圖形。

B. 50℃

亦由約20 mg磷酸鹽(形式A)與2 ml溶劑在50℃下平衡至少24小時。然後過濾溶液且在50℃及吸塵器真空下乾燥殘留物過夜。藉由XRPD研究所獲得之固體。對於表7中列舉之溶劑未觀察到新穎的XRPD圖形。此結果證實磷酸鹽(形式A)之多形體安定性。

實例14：自熱飽和溶液中結晶之效果

取約20 mg磷酸鹽(形式A)溶於60℃之2 ml溶劑中。過濾溶液。在冰浴中冷卻所獲得之澄清濾液並攪拌。在過濾器上收集沉澱物，乾燥且藉由XRPD研究。自1:1水與甲醇、乙醇、2-丙醇、丙酮及四氫呋喃之溶液中結晶時，未觀察到多晶型發生改變。僅在使用DMSO時，由XRPD觀察到形式變化。此結果證實磷酸鹽(形式A)之多形體安定性。

實例15：藉由蒸發之結晶法之效果

A. 25℃

取約20 mg磷酸鹽(形式A)與25℃之2 ml溶劑混合。攪拌過夜後，過濾溶液。將濾液置於氮氣流下，以蒸發溶劑。收集殘留的固體並研究。在無攪拌之情況下進行上述蒸發法。在無攪拌之情況下，自THF/水(1:1)中蒸發時，立即獲得類似B形式之XRPD圖形之固體(參見圖1C)。隨後，在此等條件下，獲得非晶型材料，而非形式B。同樣，由1:1之水與乙醇、2-丙醇、丙酮及四氫呋喃之溶液蒸發結晶法獲得非晶型材料。當在蒸發期間攪拌溶液時，始終獲得形式A；證實磷酸鹽(形式A)之結晶型之多形體安定性。

B. 50℃

在50℃下進行相同的實驗(如以上25℃蒸發法所描述)。在此等條件下，僅自某些未攪拌之溶液中獲得非結晶型材料。如表8所顯示，其他未攪拌之溶液產生形式A。當攪拌溶液時，亦獲得形式A，證實磷酸鹽(形式A)之結晶型之多形體安定性。

實例16：藉由添加溶劑造成沉澱之效果

測試兩種不同溶劑組合。磷酸鹽(形式A)係溶於DMSO中，其中其溶解度高。將對形式A溶解度極低之溶劑(反溶劑)加至溶液中。在過濾器上收集沉澱物，乾燥且藉由XRPD研究。對於任何以下溶劑均未觀察到形式之改變：甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮、乙腈、THF、乙酸乙酯、乙酸丙酯、甲苯、甲基第三丁基醚、1,4-二噁烷、二氯甲烷。此等結果證實磷酸鹽(形式A)之結晶型之多形體安定性。

實例17：壓縮下之安定性

在4000磅液壓下壓縮磷酸鹽(形式A，300 mg)(錠劑直徑8 mm)。藉由XRPD未觀察到結晶改質之變化。此結果證實磷酸鹽(形式A)之結晶型之安定性。

實例18：製粒時之安定性

將溶劑(水及乙醇)逐滴加至置於研缽中之磷酸鹽(形式A)中，直至研缽中之固體充分濕潤，且使用研杵研磨，直至獲得類似糊狀物之稠度。在約40℃及減壓下乾燥該糊狀物>8小時。藉由XRPD評估固體，且未觀察到XRPD光譜之變化。此結果證實磷酸鹽(形式A)之結晶型之安定性。

實例19：加熱及冷卻下之安定性

在熔融淬火後，根據第二次DSC操作觀察此結果。在183.2℃下開始熔解。就在開始熔解之後，樣品即在185.9℃下開始分解。未進行進一步測試。

實例20：水吸附及解吸附實驗

使用VTI牌儀器，使游離鹼(無水及單水合物)及其磷酸鹽(形式A)進行吸附及解吸附循環。實驗後收集固體且分析。圖3A(游離鹼)及3B(磷酸鹽(形式A))顯示TGA儀器上記錄之水吸附-解吸附等溫線。DVS圖係顯示於圖4A(游離鹼，無水)、4B(磷酸鹽(形式A))及4C(游離鹼，單水合物)中。在25℃及至高達95%相對濕度(rh)下，磷酸鹽(形式A)之最大水吸收量小於2%(即0.7%)(參見表9)。在25℃及至高達95% RH下，單水合物之最大水吸收量小於1.4%。在實驗期間，水含量約3%之單水合物不會完全乾燥，但是可移除之水會被可逆性再吸收。發現在10%至95% RH之間，單水合物之存在進入穩定狀態，且在第二次解吸附循環時出現輕微停滯現象。

磷酸鹽優越治療性質 實例21：磷酸鹽之藥物動力學性質

水溶性高於游離鹼(及如以上描述之其他酸鹽)之磷酸鹽可開發成調配物溶液(或組合物)，此點係受到溶解度限制之游離鹼無法達成。對於此實驗，如下製備磷酸鹽。在玻璃瓶中，將10.7 mg游離鹼溶於4 ml THF中。添加磷酸(1.76 ml)之丙酮溶液(0.01 M)。加熱混合物至50℃達約2分鐘。在室溫下敞開放置玻璃瓶，部分蒸發過夜。形成懸浮液，過濾，獲得約5.5 mg灰白色粉末。下表(表10)顯示經各種不同方式調配之活性劑(游離鹼及其磷酸鹽)在大鼠中之生物可利用性。

圖1A至E係式I化合物之游離鹼(圖1A)及其磷酸鹽：形式A(圖1B)；及形式B(圖1C)、游離鹼單水合物(圖1D)及鹽酸鹽二水合物(圖1E)之XRPD；

圖2A及2B係呈無水游離鹼(圖2A)及呈磷酸鹽(形式A，圖2B)之式I化合物之DSC熱曲線圖；

圖3A至3C係呈無水游離鹼(圖3A)、呈磷酸鹽(形式A，圖3B)及呈鹽酸鹽(二水合物，圖3C)之式I化合物之TGA熱曲線圖；

圖4A至4C係在25℃下藉由DVS收集之呈無水游離鹼(圖4A)、呈磷酸鹽(形式A，圖4B)及呈單水游離鹼(圖4C)之式I化合物之吸附-解吸附等溫線；

圖5A及5B係呈結晶游離鹼(圖5A)及呈磷酸鹽(形式A，圖5B)之式I化合物之SEM顯微照片；

圖6係式I化合物之磷酸鹽(形式A)之FT-IR光譜；

圖7係游離鹼單水合物之DSC及TGA熱曲線圖；

圖8A及8B係呈無水游離鹼(圖8A)及呈游離鹼之單水合物(圖8B)之式I化合物之拉曼(Raman)光譜；及

圖9係式I化合物之游離鹼單水合物形式之單位晶格之單晶X-射線結構。

(無元件符號說明)

Claims

一種式I化合物之單磷酸鹽，
如請求項1之單磷酸鹽，其係無水結晶單磷酸鹽。
如請求項1之無水結晶單磷酸鹽，其具有形式A，其中形式A具有包含根據2θ在約15°之特徵峰之X-射線粉末繞射圖；及/或一或多個特徵峰根據2θ選自在約13.7°、約16.8°、約21.3°及約22.4°之峰。
如請求項3之形式A之無水結晶單磷酸鹽，其中該X-射線粉末繞射圖進一步包含一或多個特徵峰根據2θ選自在約9.2°、約9.6°、約18.7°、約20.0°、約22.9°及約27.2°之峰。
一種式I化合物單磷酸鹽之無水結晶型(形式A)，其中該無水結晶型A具有包含至少3個特徵峰根據2θ選自在約13.7°、約15°、約16.8°、約21.3°及約22.4°之峰之X-射線粉末繞射圖。
如請求項5之單磷酸鹽之無水結晶型，其中該X-射線粉末繞射圖進一步包含一或多個特徵峰根據2θ選自在約9.2°、約9.6°、約13.7°、約15°、約16.8°、約18.7°、約20.0°、約21.3°、約22.4°、約22.9°及約27.2°之峰。
如請求項3至5中任一項之無水結晶型，其具有在約184℃下開始吸熱之差示掃描量熱曲線圖。
一種式I化合物之單磷酸鹽之無水結晶型，其具有在約184℃下開始吸熱之差示掃描量熱曲線圖。
如請求項1之無水結晶單磷酸鹽，其具有形式B，其中形式B具有包含一或多個特徵峰根據2θ選自在約9.3°、約12.5°、約13.4°、約15.8°及約17°之峰之X-射線粉末繞射圖。
一種式I化合物之單磷酸鹽之非結晶型，
一種製備如請求項1至4中任一項之無水結晶型A之方法，其包含式I化合物之懸浮液：與磷酸接觸，以提供無水結晶型A。
一種組合物，其包含如請求項1至10中任一項之結晶型或非結晶型，及醫藥上可接受的載劑、賦形劑或稀釋劑。
一種如請求項1至10中任一項之結晶型或非結晶型或如請求項12之組合物用於製備治療個體疾病之藥劑之用途，其中FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、KDR、HER1、HER2、Bcr-Abl、Tie2及/或Ret之激酶活性導致該疾病之病理及/或症狀。