CN101242843A - 作为激酶调节剂的氨基嘧啶类化合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及式I的氨基嘧啶化合物,其中R3、B、Z、r和R1如文中定义,这些化合物用作蛋白质酪氨酸激酶调节剂,特别是FLT3和/或c-kit和/或TrkB抑制剂,这些化合物用于降低或抑制细胞或受试者中FLT3和/或c-kit和/或TrkB激酶活性,以及这些化合物用于预防或治疗受试者所患细胞增殖性病症和/或与FLT3和/或c-kit和/或TrkB有关的病症。本发明还涉及包含本发明化合物的药物组合物和治疗病症如癌症和其他细胞增殖性病症的方法。
Description
相关申请的交叉引用
该申请要求2005年6月10日提交的美国临时申请专利号60/689,715的优先权和2005年12月16日提交的美国临时申请专利号60/751,083的优先权,其通过全文引用结合至本全部公开中。
发明领域
本发明涉及用作蛋白酪氨酸激酶调节剂的新化合物。更具体地,本发明涉及用作FLT3和/或c-kit和/或TrkB抑制剂的新化合物。
发明背景
本发明涉及作为酪氨酸激酶(包括FLT3、c-kit和/或TrkB)抑制剂的氨基嘧啶类。已报导具有有效治疗性质的嘧啶类有:US5104877和WO9214468(用于治疗牛皮癣的[(四唑基二苯基)甲基氨基]嘧啶甲酸和相关化合物的制备);DE10108480和WO2002068413(杀虫剂吡唑基嘧啶的制备);WO2002050066、WO2002066461、WO2002068415、US6653300、US2003036543、US6664247、US2003055068、US2003078275、US6653301、US2003105090、US2003004164、US6656939、US2003022885、US6727251、US2004116454、US2004157893、US2004132781和US2004167141;US6107301(用作蛋白激酶抑制剂的吡唑化合物,及其治疗用途)和US6342503(作为CRF抑制剂的1-N-烷基-N-芳基嘧啶胺类的制备);WO2001085700、WO2001085700和US2003171374(作为HIV复制抑制剂的取代氨基嘧啶类和三嗪类的制备);WO2001085699、WO2001085699和US2003186990(抑制HIV复制的嘧啶类的前药的制备);WO2001022938(用作杀病毒剂的吖嗪基氨基苯甲腈类和相关化合物的制备);WO2000027825、US2003114472和US2004039005(用作HIV复制抑制剂的芳基氨基嘧啶类的制备);WO2004058762、WO2004058762和US2004152739(作为抑制有丝分裂原激活蛋白激酶-激活蛋白激酶-2化合物的吡咯并吡啶酮类的制备);WO2003094920(防止性HIV传播的杀微生物的嘧啶或三嗪化合物);WO2004005283和US2004097531(用作JNK蛋白激酶抑制剂的咪唑基嘧啶和相关化合物的制备);还见:Wardakhan,Wagnat W.,Fleita,Daisy H.,Mohareb,Rafat M.,Reaction of 4-aryl-3-thiosemicarbazides with phenylisothiocyanate:a facile synthesis of thiazole,pyrazole and pyrimidinederivatives(4-芳基-3-硫代氨基脲与异硫氰酸苯酯的反应:噻唑、吡唑和嘧啶衍生物的简便合成),Journal of the Chinese Chemical Society(台北)(1999),46(1),97-104;和Taylor,Edward C.,Ehrhart,Wendell A.,Tomlin,Clive O.S,Rampal,Jang B,A novel ring-switching amination:conversion of 4-amino-5-cyanopyrimidine to4,6-diamino-5-cyanopyrimidine(新型的环转化胺化:4-氨基-5-氰基嘧啶转化为4,6-二氨基-5-氰基嘧啶),Heterocycles(1987),25(1),343-5。还见:JP9274290(显像剂和加工卤化银摄像材料的方法);DE10060412、WO2002046151和US2004082586(用作杀虫剂的3,4-二氢-2H-吡咯类);WO2004039785和US2004152896(通过铜-介导的芳基胺化制备吡咯烷基乙胺化合物的方法)。
蛋白激酶为信号转导途经的酶组件,其将ATP的末端磷酸基催化转移至蛋白质的酪氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸残基的羟基上。因此,具有抑制蛋白激酶功能的化合物为评价蛋白激酶激活作用的生理学上结果的有价值的手段。正常或突变的蛋白激酶在哺乳动物中过度或不适当的表达已经成为广泛研究的课题并已证明其在许多疾病发生中起重要作用,包括糖尿病、血管生成、牛皮癣、再狭窄、眼部疾病、精神分裂症、类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、心血管疾病和癌症。同样还研究了激酶抑制的强心作用。总之,蛋白激酶抑制剂在人和动物疾病治疗中具有特别的用途。
Trk家族受体酪氨酸激酶(TrkA、TrkB和TrkC)为介导神经营养因子家族的肽激素的生物作用的信号受体。该生长因子家族包括神经生长因子(NGF)、脑源性生长营养因子(BDNF)和两种神经营养因子(NT)(NT-3和NT-4)。TrkB用作BDNF和NT-4的受体。BDNF促进正常神经组件(如视网膜细胞和神经胶质细胞)的增殖、分化和存活。
最近有报导TrkB激活有效和特定地抑制了不依赖贴壁细胞死亡(失巢凋亡现象)(见Nature,2004年8月26日,430(7003):973-4;1034-40)。不依赖贴壁细胞的存活使得肿瘤细胞通过体循环迁移并在远端器官生长。该迁移过程经常成为癌症治疗的失败和癌症死亡的原因。其他研究也表明TrkB的激动剂BDNF能阻断顺铂诱发细胞死亡(见Cancer Lett,2003年4月10日;193(1):109-14)。总之,这些结果表明TrkB调节为治疗良性和恶性增殖疾病特别是肿瘤疾病的具有吸引力的靶点。
受体酪氨酸激酶c-kit及其配体干细胞因子(SCF)为血细胞生成、黑素形成和生育所必需。SCF作用在造血系统的多级水平上促进细胞存活、增殖、分化、粘着和功能性活动。这在肥大细胞和红细胞系谱系中尤为重要,而且也作用于多效性干细胞和祖细胞、巨核细胞和淋巴祖细胞亚型(见Int J Biochem Cell Biol,1999年10月,31(10):1037-51)。c-kit的自然突变以及SCF/c-kit途径的自分泌/旁分泌活化机制与不同的恶性肿瘤有关。c-kit的活化通过促进肿瘤生长和减少程序性细胞死亡促成转移。此外,c-kit在胃肠道间质瘤(GISTs)中频繁突变和活化,和c-kit的配体介导活化存在于某些肺癌中(见Leuk Res,2004年5月;28 Suppl 1:S11-20)。所述c-kit受体也在64%新生急性骨髓性白血病(AMLs)和95%再发AMLs中超过10%的胚细胞上表达。C-kit介导AML中的增殖和抗细胞凋亡作用(见Curr Hematol Rep,2005年1月,4(1):51-8)。
C-Kit表达在许多不同的人恶性肿瘤中已证实,包括肥大细胞增生病、肥大细胞白血病、胃肠道间质瘤、鼻腔鼻窦天然杀伤/T-细胞淋巴瘤、精原细胞瘤、无性细胞瘤、甲状腺癌、小细胞肺癌、恶性黑色素瘤、腺样囊性癌、卵巢癌、急性骨髓性白血病、间变性大细胞淋巴瘤、血管肉瘤、子宫内膜癌、儿科T-细胞ALL、淋巴瘤、乳腺癌和前列腺癌。见Heinrich,Michael C等,综述文章:Inhibition of KITTyrosine Kinase Activity:A Novel Molecular Approach to the Treatmentof KIT-Positive Malignancies(KIT酪氨酸激酶活性的抑制:治疗KIT阳性恶性肿瘤的新型分子学方法)。
Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)配体(FLT3L)为影响多发性疾病的造血细胞(multiple hematopoietic lineages)发展的一种细胞因子。通过FLT3L与在造血干细胞和祖细胞上表达的FLT3受体(也称为胎肝激酶-2(flk-2)和STK-1、受体酪氨酸激酶(RTK))结合产生这些影响。FLT3基因编码膜结合RTK,所述RTK在正常血细胞形成过程中对细胞增殖、分化和凋亡具有重要作用。FLT3基因主要由早期meyloid和淋巴祖细胞表达。见McKenna,Hilary J等,缺损flt3配体的小鼠具有缺陷性造血作用,影响造血祖细胞、树状突细胞和天然杀伤细胞,Blood,2000年6月;95:3489-3497;Drexler,H.G.和H.Quentmeier(2004),″FLT3:receptor and ligand(FLT3:受体和配体)″,Growth Factors,22(2):71-3。
FLT3配体由骨髓基质细胞和其他细胞表达并与其他生长因子协同刺激干细胞、祖细胞、树状突细胞和天然杀伤细胞增殖。
造血疾病为这些系统的恶化前疾病并包括,例如骨髓增生病如血小板增多症、原发性血小板增多症(ET)、特发性骨髓外化生、骨髓纤维化(MF)、骨髓纤维化伴骨髓外化生(MMM)、慢性特发性骨髓纤维化(IMF)和真性红细胞增多症(PV)、血细胞减少症和恶化前骨髓增生异常综合征。见Stirewalt,D.L.和J.P.Radich(2003),″The role of FLT3in haematopoietic malignancies(在造血恶性肿瘤中FLT3的作用)″,NatRev Cancer,3(9):650-65;Scheijen,B.和J.D.Griffin(2002),″Tyrosinekinase oncogene in normal hematopoiesis and hematological disease(在正常血细胞生成和血液疾病中酪氨酸激酶癌基因)″,Oncogene,21(21):3314-33。
血液恶性肿瘤为人体血液形成和免疫系统、骨髓和淋巴组织的癌症。然而在正常骨髓中,FLT3表达限于早期祖细胞,在血液恶性肿瘤中,FLT3高度表达或FLT3突变引起FLT3受体和下游分子途径不受控制的诱导,可能为Ras激活作用。血液恶性肿瘤包括白血病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也称为霍奇金淋巴瘤)和骨髓瘤-例如急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、急性早幼粒细胞白血病(APL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、慢性中性粒细胞白血病(CNL)、急性未分化白血病(AUL)、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、前淋巴细胞白血病(PML)、儿童粒-单细胞白血病(JMML)、成人T-细胞ALL、AML伴有骨髓三系细胞增生异常(AML/TMDS)、混合性白血病(MLL)、骨髓增生异常综合征(MDSs)、骨髓增生障碍(MPD)、多发性骨髓瘤(MM)和髓样肉瘤。见Kottaridis,P.D.,R.E.Gale等(2003),″Flt3 mutations and leukaemia(Flt3突变和白血病)″,Br J Haematol,122(4):523-38。髓样肉瘤也与FLT3突变有关。见Ansari-Lari,Ali等,FLT3 mutations in myeloid sarcoma(在髓样肉瘤中的FLT3突变),British Journal of Haematology,2004年9月,126(6):785-91。
在约30%急性骨髓性白血病患者和少数急性淋巴细胞白血病或骨髓增生异常综合征患者中检测到FLT3的突变。FLT3突变的患者因缩短了还缓和时间和减少了无瘤生存率而预后不良。两种已知的激活FLT3突变的类型:一种类型为在受体接近膜区域中4-40个氨基酸的复制(ITD突变)(25-30%的患者),另一种类型为在激酶区域中的点突变(5-7%患者)。多数突变通常涉及受体近膜区域内小型的氨基酸串连重复并产生了酪氨酸激酶活性。在鼠科髓细胞中突变体FLT3受体的表达导致致命的骨髓增生综合征,并且前期的研究(Blood,2002;100:1532-42)表明突变体FLT3与其他白血病癌基因协同获得更具攻击性的表现型。
总之,这些结果表明个别激酶FLT3和c-kit且尤其是包括FLT3和c-kit的激酶组类的特异性抑制剂提供了治疗造血疾病和血液恶性肿瘤的有吸引力的靶点。
本领域已知的FLT3激酶抑制剂包括AG1295和AG1296;Lestaurtinib(也称为CEP 701,以前称为KT-5555,Kyowa Hakko,授权给Cephalon);CEP-5214和CEP-7055(Cephalon);CHIR-258(Chiron公司);EB-10和IMC-EB10(ImClone Systems Inc.);GTP14564(MerkBiosciences UK);米哚妥林(也称为PKC 412 Novartis AG);MLN608(Millennium USA);MLN-518(以前称为CT53518,CORTherapeutics Inc.,授权给Millennium Pharmaceuticals Inc.);MLN-608(Millennium Pharmaceuticals Inc.);SU-11248(Pfizer USA);SU-11657(Pfizer USA);SU-5416和SU5614;THRX-165724(TheravanceInc.);AMI-10706(Theravance Inc.);VX-528和VX-680(VeftexPharmaceuticals USA,授权给Novartis(瑞士),Merck & Co USA);和XL 999(Exelixis USA)。以下PCT国际申请和美国专利申请公开了其他的激酶调节剂,包括FLT3调节剂:WO2002032861、WO2002092599、WO2003035009、WO2003024931、WO2003037347、WO2003057690、W02003099771、WO2004005281、WO2004016597、WO2004018419、WO2004039782、WO2004043389、WO2004046120、WO2004058749、WO2004058749、WO2003024969和美国专利申请号20040049032。
还见Levis,M.,Tse KF等,2001,A FLT3 tyrosine kinase inhibitoris selectively cytotoxic to acute myeloid leukemia blasts harboring FLT3internal tandem duplication mutations(FLT3酪氨酸激酶抑制剂对含FLT3内部串连重复突变的急性髓性白血病胚细胞的选择性细胞毒性),Blood,98(3):885-7;Tse KF等,Inhibition of FLT3-mediatedtransformation by use of a tyrosine kinase inhibitor(通过使用酪氨酸激酶抑制剂抑制FLT3-介导的转化),Leukemia,2001年7月,15(7):1001-10;Smith,B.Douglas等,Single-agent CEP-701,a novel FLT3inhibitor,shows biologic and clinical activity in patients with relapsed orrefractory acute myeloid leukemia(单一试剂CEP-701,新FLT3抑制剂,显示在复发性或顽固性急性髓性白血病患者中的生物学和临床活性),Blood,2004年5月;103:3669-3676;Griswold,Ian J等,Effectsof MLN518,A Dual FLT3 and KIT Inhibitor,on Normal and MalignantHematopoiesis(MLN518,双重FLT3和KIT抑制剂,对正常和恶性血细胞生成的作用),Blood,2004年7月,[Epub ahead of print];Yee,KevinW.H.等,SU5416 and SU5614 inhibit kinase activity of wild-type andmutant FLT3 receptor tyrosine kinase(SU5416和SU5614抑制野生型和突变型FLT3受体酪氨酸激酶的激酶活性),Blood,2002年9月,100:2941-294;O′Farrell,Anne-Marie等,SU11248 is a novel FLT3 tyrosinekinase inhibitor with potent activity in vitro and in vivo(SU11248为体外和体内有效活性的新型的FLT3酪氨酸激酶抑制剂),Blood,2003年5月,101:3597-3605;Stone,R.M.等,PKC 412 FLT3 inhibitor therapyin AML:results of a phase II trial(PKC 412 FLT3抑制剂在AML中治疗:II阶段试验结果),Ann Hematol,2004;83 Suppl 1:S89-90;和Murata,K.等,Selective cytotoxic mechanism of GTP-14564,a noveltyrosine kinase inhibitor in leukemia cells expressing a constitutivelyactive Fms-like tyrosine kinase 3(FLT3)(GTP-14564的选择性细胞毒性机制,表达结构性活性的Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)的白血病细胞中新型酪氨酸激酶抑制剂),J Biol Chem,2003年8月29日;278(35):32892-8;Levis,Mark等,Novel FLT3 tyrosine kinase inhibitors(新型的FLT3酪氨酸激酶抑制剂),Expert Opin.Investing.Drugs(2003),12(12),1951-1962;Levis,Mark等,Small Molecule FLT3 TyrosineKinase Inhibitors(小分子FLT3酪氨酸激酶抑制剂),CurrentPharmaceutical Design,2004,10,1183-1193。
发明概述
本发明提供了新的作为蛋白酪氨酸激酶调节剂的氨基嘧啶类(式I化合物),特别是FLT3和/或c-kit和/或TrkB抑制剂,和这些化合物用于减少或抑制细胞或受试者中FLT3和/或c-kit和/或TrkB的激酶活性中的用途,以及这些化合物用于预防或治疗受试者所患细胞增殖疾病和/或与FLT3和/或c-kit和/或TrkB相关的疾病中的用途。
本发明的一例证为包括式I化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。本发明的另一例证为通过混合任一式I化合物与药学上可接受的载体而制备的药物组合物。
本发明的其他特征和优点将由以下本发明的详细描述和由权利要求而显而易见。
发明详述
定义
如文中所用,以下术语具有以下含义(特殊情况下说明书将给出其他定义):
术语“烯基”,无论单独使用或作为取代基的一部分,例如“C1-4烯基(芳基)”,是指具有至少一个碳-碳双键的部分不饱和支链或直链的一价烃基,其中通过母体烷基分子的两相邻碳原子各除去一个氢原子得到双键且从单一碳原子上除去一个氢原子得到自由基。各原子可围绕双键以顺式(Z)或反式(E)构型取向。代表性的烯基包括,但不限于乙烯基、丙烯基、烯丙基(2-丙烯基)、丁烯基等。实例包括C2-8烯基或C2-4烯基。
术语“Ca-b”(其中a和b为指定碳原子数目的整数)是指烷基、烯基、炔基、烷氧基或环烷基,或指某些基团中的烷基部分,其中烷基含a-b个碳原子。例如C1-4表示含1、2、3或4个碳原子的基团。
术语“烷基”,无论单独使用或作为取代基的一部分,是指饱和支链或直链的一价烃基,其中通过从单一碳原子上除去一个氢原子得到自由基。除非特别说明(例如通过使用限制术语如“末端碳原子”),否则取代基变量可取代在任何碳原子上。代表性的烷基包括,但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基等。实例包括C1-8烷基、C1-6烷基和C1-4烷基。
术语“烷基氨基”是指通过从烷基胺(如丁基胺)的氮上除去一个氢原子形成的自由基,和术语“二烷基氨基”是指通过从仲胺(如二丁基胺)的氮上除去一个氢原子形成的自由基。在两种情况中,与分子剩余部分的连接点为氮原子。
术语“炔基”,无论单独使用或作为取代基的一部分,是指具有至少一个碳-碳三键的部分不饱和支链或直链的一价烃基,其中通过母体烷基分子的两相邻碳原子各除去两个氢原子得到三键且从单一碳原子上除去一个氢原子得到自由基。代表性的炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基等。实例包括C2-8炔基或C2-4炔基。
术语“烷氧基”是指饱和或部分不饱和的支链或直链的一价烃醇基团,通过从从母体烷烃、烯烃或炔烃上的羟基上除去一个氢原子得到。对于具体的饱和度,术语“烷氧基”、“烯基氧基”和“炔基氧基”使用与烷基、烯基和炔基的定义一致。实例包括C1-8烷氧基或C1-4烷氧基。
术语“烷氧基醚基”是指饱和的支链或直链的一价烃醇基,其通过从羟醚的醇氧取代基羟基上除去一个氢原子得到。实例包括1-羟基-2-甲氧基-乙烷基团和1-(2-羟基-乙氧基)-2-甲氧基-乙烷基团。
术语“芳烷基”是指含芳基取代基的C1-6烷基。实例包括苄基、苯基乙基或2-萘基甲基。与分子剩余部分的连接点为烷基。
术语“芳族的”是指具有不饱和、共轭π电子体系的环状烃环系。
术语“芳基”是指芳族环状的烃环基团,其通过从环系的单一碳原子上除去一个氢得到。代表性的芳基包括苯基、萘基、芴基、茚基、薁基、蒽基等。
术语“芳氨基”是指被芳基(如苯基)取代的氨基(如氨)。与分子剩余部分的连接点为氮原子。
术语“芳氧基”是指被芳基(如苯基)取代氧原子的基团。与分子剩余部分的连接点为氧原子。
术语“苯稠合的环烷基”是指其中一个环为苯基且另一个环为环烷基或环烯基环的二环稠合环系基团。代表性的苯稠合环烷基包括茚满基、1,2,3,4-四氢-萘基、6,7,8,9-四氢-5H-苯并环庚基、5,6,7,8,9,10-六氢-苯并环辛烯基等。苯稠合环烷基环系为芳基的子集。
术语“苯稠合的杂芳基”是指其中一个环为苯基且另一个环为杂芳基环的二环稠合环系基团。代表性的苯稠合杂芳基包括吲哚基、二氢吲哚基、异吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、吲唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、2,3-二氮杂萘基、喹唑啉基等。苯稠合杂芳基环为杂芳基的子集。
术语“苯稠合的杂环基”是指其中一个环为苯基且另一个环为杂环基环的二环稠合环系基团。代表性的苯稠合杂环基包括1,3-苯并二氧杂环戊烯基(也已知为1,3-亚甲二氧基苯基)、2,3-二氢-1,4-苯并二氧杂环己烯基(也已知为1,4-亚乙二氧基苯基)、苯并-二氢呋喃基、苯并-四氢吡喃基、苯并-二氢噻吩基等。
术语“羧基烷基”是指烷基化的羧基如叔丁氧基羰基,其中与分子剩余部分的连接点为羰基。
术语“杂环二酮基”是指带有两个氧代基取代基的杂环化合物。实例包括噻唑烷二酮基、唑烷二酮基和吡咯烷二酮基。
术语“环烯基”是指部分不饱和的环烷基,其通过从含至少一个碳-碳双键的烃环系中除去一个氢原子得到。实例包括环己烯基、环戊烯基和1,2,5,6-环辛二烯基。
术语“环烷基”是指饱和或部分不饱和的单环或二环烃环基团,其通过从单一环碳原子上除去一个氢原子得到。代表性的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基和环辛基。其他实例包括C3-8环烷基、C5-8环烷基、C3-12环烷基、C3-20环烷基、萘烷基和2,3,4,5,6,7-六氢-1H-茚基。
术语“稠合环系”是指二环分子,其中有两个邻近原子同时存在于两个环状部分中。可任选存在杂原子。实例包括苯并噻唑、1,3-苯并二氧杂环戊烯和萘烷。
用作环系前缀的术语“杂”是指至少一个环碳原子被一个或多个独立选自N、S、O或P的原子代替。实例包括其中1、2、3或4个环成员为氮原子的环;或0、1、2或3个环成员为氮原子和一个环成员为氧或硫原子的环。
术语“杂芳烷基”是指含杂芳基取代基的C1-6烷基。实例包括呋喃基甲基和吡啶基丙基。与分子剩余部分的连接点为烷基。
术语“杂芳基”是指通过从杂芳环系的一个环碳原子上除去一个氢而得到的基团。代表性的杂芳基包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异唑基、异噻唑基、二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲嗪基、吲哚基、异吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基(phthalzinyl)、喹唑啉基、喹啉基、1,8-萘啶基、蝶啶基等。
术语“杂芳基-稠合的环烷基”是指二环稠合环系基团,其中所述环中一个为环烷基且另一个为杂芳基。代表性的杂芳基-稠合的环烷基包括5,6,7,8-四氢-4H-环庚烯并(b)噻吩基、5,6,7-三氢-4H-环己烯并(b)噻吩基、5,6-二氢-4H-环戊烯并(b)噻吩基等。
术语“杂芳氧基”是指被杂芳基(如吡啶基)取代的氧原子基团。与分子剩余部分的连接点为氧原子。
术语“杂环基”是指饱和或部分不饱和单环基团,其通过从单一碳或氮环原子上除去一个氢原子得到。代表性的杂环基团包括2H-吡咯、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吡咯烷基、1,3-二氧杂环戊烷基、2-咪唑啉基(也称为4,5-二氢-1H-咪唑基)、咪唑烷基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、四唑基、哌啶基、1,4-二氧杂环己烷基、吗啉基、1,4-二硫杂环己烷基、硫代吗啉基、1,1-二氧化硫代吗啉基、哌嗪基、氮杂环庚烷基、六氢-1,4-二氮杂环庚烯基等。
术语“氧代基”是指氧原子基团;所述氧原子具有两个连接同一原子、最优选碳原子上开放的键价。氧代基为烷基的适当取代基。例如含氧代基取代基的丙烷为丙酮或丙醛。杂环也可被氧代基取代。例如唑烷基被氧代基取代为唑烷酮。
术语“取代的”是指一个或多个氢原子被一个或多个功能基团部分取代的核心分子。取代不限于核心分子,还可存在于取代基团上,其中取代基团成为连接基团。
术语“独立选择的”是指选自一组取代基的一个或多个取代基,其中所述取代基可相同或不同。
本发明公开中使用的取代基命名法为首先指明连接点的原子,随后是连接基团至末端链原子,从左至右命名,大体上如:
(C1-6)烷基C(O)NH(C1-6)烷基(Ph)
或首先指明端链原子,随后是连接基团原子至含连接点的原子命名,大体上如:
Ph(C1-6)烷基酰氨基(C1-6)烷基
两种方法均指下式基团:
从取代基上画入环系中的直线表示可连接任一适宜的环原子的键。
当任何变量(例如R4)在式I的任何实施方案中出现超过一次时,各自定义为独立定义。
文中术语″包含″、″包括″和″含有″以其开放、非限制含义使用。
命名法
除有特别说明外,使用本领域技术人员众所周知的命名规则得到化合物名称,通过参考标准IUPAC命名法,如Nomenclature of OrganicChemistry,Sections A,B,C,D,E,F and H(有机化学命名法A、B、C、D、E、F和H部分)(Pergamon出版,Oxford,1979,著作权1979IUPAC)或A Guide to IUPAC Nomenclature of Organic Compounds(有机化合物IUPAC命名指南)(推荐1993),(Blackwell Scientific Publications,1993,著作权1993IUPAC);或市售的软件包如Autonom(命名法软件的商标,提供于由CambridgeSoft.com上市的ChemDraw Ultraofficesuite);和ACD/Index NameTM(商品命名法软件的商标,由AdvancedChemistry Development,Inc.,Toronto,Ontario上市)。
缩写
文中所用以下缩写将具有以下含义(其他缩写在说明书需要之处给出):
ATP 三磷酸腺苷
Boc 叔丁氧基羰基
DCM 二氯甲烷
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
DIEA 二异丙基乙基胺
DTT 二硫苏糖醇
EDC 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺·盐酸盐
EDTA 乙二胺四乙酸
EtOAc 乙酸乙酯
FBS 胎牛血清
FP 荧光偏振
GM-CSF 粒细胞和巨噬细胞集落刺激因子
HBTU 六氟磷酸O-苯并三唑-1-基-N,N,N’,N’-四甲基脲
HOBT 1-羟基苯并三唑水合物
HPβCD 羟丙基β-环糊精
HRP 辣根过氧化物酶
i-PrOH 异丙醇
LC/MS(ESI) 液相色谱/质谱(电喷射离子化作用)
MeOH 甲醇
NMM N-甲基吗啉
NMR 核磁共振
PS 聚苯乙烯
PBS 磷酸盐缓冲盐水
RPMI Rosewell Park Memorial Institute
RT 室温
RTK 受体酪氨酸激酶
NaHMDS 六甲基二甲硅烷基氨基钠
SDS-PAGE 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳
TEA 三乙胺
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
式I
本发明包括式I化合物及其氮氧化物、药学上可接受的盐、溶剂化物、几何异构体和立体化学异构体,:
式I
其中:
r为1或2;
Z为NH、N(烷基)或CH2;
B为苯基、杂芳基(其中所述杂芳基优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、硫代吡喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡啶基-氮氧化物或吡咯基-氮氧化物,且最优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基或吡嗪基),或9-10元苯稠合的杂芳基(其中所述9-10元苯稠合的杂芳基优选为苯并噻唑基、苯并唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基或苯并[b]噻吩基);
R1为:
其中n为1、2、3或4;
Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选被R5取代的杂芳基(其中所述杂芳基优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、硫代吡喃基、吡啶基、嘧啶基、三唑基、吡嗪基、吡啶基-氮氧化物或吡咯基-氮氧化物,且最优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基、三唑基或吡嗪基)、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选被R5取代的唑烷酮基、任选被R5取代的吡咯烷酮基、任选被R5取代的哌啶酮基、任选被R5取代的杂环二酮基、任选被R5取代的杂环基(其中所述杂环基优选为吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、咪唑烷基、噻唑烷基、唑烷基、四氢吡喃基、四氢硫代吡喃基、硫代吗啉基、1,1-二氧化硫代吗啉基、哌啶基、吗啉基或哌嗪基)、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx或-SO2NRwRx;
Rw和Rx独立地选自:氢、烷基、烯基、芳烷基(其中所述芳烷基的芳基部分优选为苯基)或杂芳烷基(其中所述杂芳烷基的杂芳基部分优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、硫代吡喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡啶基-氮氧化物或吡咯基-氮氧化物,且最优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基或吡嗪基),或Rw和Rx可任选一起形成任选含选自O、NH、N(烷基)、SO2、SO或S的杂部分的5-7元环,优先选自以下基团:
Ry选自:氢、烷基、烯基、环烷基(其中所述环烷基优选为环戊基或环己基)、苯基、芳烷基(其中所述芳烷基的芳基部分优选为苯基)、杂芳烷基(其中所述杂芳烷基的杂芳基部分优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、硫代吡喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡啶基-氮氧化物或吡咯基-氮氧化物,且最优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基或吡嗪基)或杂芳基(其中所述杂芳基优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、硫代吡喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡啶基-氮氧化物或吡咯基-氮氧化物,且最优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基或吡嗪基);
R5为1、2或3个独立选自以下基团的取代基:卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、C(1-4)烷基-OH或烷基氨基;和
R3为一个或多个独立选自以下基团的取代基:氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、硫基、硝基、任选被R4取代的环烷基(其中所述环烷基优选为环戊基或环己基)、任选被R4取代的杂芳基(其中所述杂芳基优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡喃基、硫代吡喃基、吡啶基、嘧啶基、三唑基、吡嗪基、吡啶基-氮氧化物或吡咯基-氮氧化物;且最优选为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、唑基、吡啶基、嘧啶基、三唑基或吡嗪基)、烷基氨基、任选被R4取代的杂环基(其中所述杂环基优选为四氢吡啶基、四氢吡嗪基、二氢呋喃基、二氢嗪基、二氢吡咯基、二氢咪唑基、氮杂基(azepenyl)、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、咪唑烷基、噻唑烷基、唑烷基、四氢吡喃基、四氢硫代吡喃基、哌啶基、吗啉基或哌嗪基)、-O(环烷基)、任选被R4取代的吡咯烷酮基、任选被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、卤代烷基、任选被R4取代的杂芳氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫代烷基或-SO2烷基;其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基或烷基氨基。
下文所用术语″式I化合物”所指还包括其氮氧化物、药学上可接受的盐、溶剂化物、几何异构体和立体化学异构体。
式I的实施方案
在本发明的一实施方案中:氮氧化物任选出现在一个或多个N-1或N-3(见下图1a环编号)上。
图1a
图1a表明在本说明书中使用的1-8编号的环原子。
在本发明的一实施方案中,在5位的肟基(-O-N=C-)可为E或Z构型。
本发明的优选实施方案为其中存在一个或多个以下限定的式I化合物:
r为1或2;
Z为NH、N(烷基)或CH2;
B为苯基或杂芳基;
R1为:
其中n为1、2、3或4;
Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选被R5取代的唑烷酮基、任选被R5取代的吡咯烷酮基、任选被R5取代的哌啶酮基、任选被R5取代的杂环二酮基、任选被R5取代的杂环基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx或-SO2NRwRx;
Rw和Rx独立地选自:氢、烷基、烯基、芳烷基或杂芳烷基,或Rw和Rx可任选一起形成任选含选自O、NH、N(烷基)、SO2、SO或S的杂部分的5-7元环;
Ry选自:氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基或杂芳基;
R5为1、2或3个独立选自以下基团的取代基:卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH或烷基氨基;和
R3为一个或多个独立选自以下基团的取代基:氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、硫基、硝基、任选被R4取代的环烷基、任选被R4取代的杂芳基、烷基氨基、任选被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选被R4取代的吡咯烷酮基、任选被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、卤代烷基、任选被R4取代的杂芳氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫代烷基或-SO2烷基;其中R4独立地选自:卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基或烷基氨基。
本发明的其他优选实施方案为其中存在一个或多个以下限定的式I化合物:
r为1或2;
Z为NH或CH2;
B为苯基或杂芳基;
R1为:
其中n为1、2、3或4;
Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选被R5取代的唑烷酮基、任选被R5取代的吡咯烷酮基、任选被R5取代的哌啶酮基、任选被R5取代的杂环二酮基、任选被R5取代的杂环基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx或-SO2NRwRx;
Rw和Rx独立地选自:氢、烷基、烯基、芳烷基或杂芳烷基,或Rw和Rx可任选一起形成任选含选自O、NH、N(烷基)、SO2、SO或S的杂部分的5-7元环;
Ry选自:氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基或杂芳基;
R5为1、2或3个独立选自以下基团的取代基:卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH或烷基氨基;和
R3为一个或多个独立选自以下基团的取代基:氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、任选被R4取代的环烷基、任选被R4取代的杂芳基、任选被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选被R4取代的苯氧基、任选被R4取代的杂芳氧基、二烷基氨基或-SO2烷基;其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基或烷基氨基。
本发明的另一实施方案为其中存在一个或多个以下限定的式I化合物:
r为1或2;
Z为NH或CH2;
B为苯基或杂芳基;
R1为:
其中n为1、2、3或4;
Ra为氢、烷氧基、任选被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选被R5取代的唑烷酮基、任选被R5取代的吡咯烷酮基、任选被R5取代的杂环基、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry或-SO2NRwRx;
Rw和Rx独立地选自:氢、烷基、烯基、芳烷基或杂芳烷基,或Rw和Rx可任选一起形成任选含选自O、NH、N(烷基)、SO2、SO或S的杂部分的5-7元环;
Ry选自:氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基或杂芳基;
R5为1、2或3个独立选自以下基团的取代基:卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH或烷基氨基;和
R3为一个或多个独立选自以下基团的取代基:氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、任选被R4取代的环烷基、任选被R4取代的杂芳基、任选被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选被R4取代的苯氧基、任选被R4取代的杂芳氧基、二烷基氨基或-SO2烷基;其中R4独立地选自卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基或烷基氨基。
本发明特别优选的方案为其中存在一个或多个以下限定的式I化合物:
r为1;
Z为NH或CH2;
B为苯基或杂芳基;
R1为
其中n为1、2、3或4;
Ra为氢、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、杂芳基、任选被R5取代的杂环基-CONRwRx、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)或-N(Rw)C(O)ORx;
Rw和Rx独立地选自:氢、烷基、烯基、芳烷基或杂芳烷基,或Rw和Rx可任选一起形成任选含选自O、NH、N(烷基)、SO2、SO或S的杂部分的5-7元环;
Ry选自:氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基或杂芳基;
R5为一个选自以下基团的取代基:-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基或-C(1-4)烷基-OH;和
R3为一个独立选自以下基团的取代基:烷基、烷氧基、卤素、环烷基、杂环基、-O(环烷基)、苯氧基或二烷基氨基。
本发明最优选的方案为其中存在一个或多个以下限定的式I化合物:
r为1;
Z为NH或CH2;
B为苯基或吡啶基;
R1为:
其中n为1、2、3或4;
Ra为氢、二烷基氨基、任选被R5取代的杂环基-CONRwRx、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)或-NRwSO2Ry;
Rw和Rx独立地选自:氢、烷基、烯基、芳烷基、杂芳烷基,或Rw和Rx可任选一起形成任选含选自O、NH、N(烷基)、SO2、SO或S的杂部分的5-7元环;
Ry选自:氢、烷基、烯基、环烷基、芳烷基、杂芳烷基或杂芳基;
R5为一个独立选自以下基团的取代基:-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基或C(1-4)烷基-OH;和
R3为一个独立选自以下基团的取代基:烷基、烷氧基、杂环基、环烷基或-O(环烷基)。
药学上可接受的盐
本发明化合物还可以药学上可接受的盐的形式存在。
对于在药物中的使用,本发明化合物的盐是指无毒的“药学上可接受的盐”。FDA批准的药学上可接受的盐的形式(参考International J.Pharm.,1986年,33,201-217;J.Pharm.Sci.,1977年1月,66(1),第1页)包括药学上可接受的酸性/阴离子盐或碱性/阳离子盐。
药学上可接受的酸性/阴离子盐包括,但不限于乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、酒石酸氢盐、溴化物、依地酸钙盐、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、柠檬酸盐、二盐酸盐、依地酸盐、乙二磺酸盐、丙酸酯十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、glyceptate、葡糖酸盐、谷氨酸盐、对羟乙酰氨基苯基胂酸盐、己基间苯二酚盐、hydrabamine、氢溴酸盐、盐酸盐、羟萘酸盐、碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式醋酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、teoclate、甲苯磺酸盐和三乙基碘化物。有机或无机酸还包括,但不限于氢碘酸、高氯酸、硫酸、磷酸、丙酸、羟乙酸、甲磺酸、羟基乙磺酸、草酸、2-萘磺酸、间甲苯磺酸、环己烷氨基磺酸、己糖酸或三氟乙酸。
药学上可接受的碱/阳离子盐包括,但不限于铝离子、2-氨基-2-羟甲基-丙-1,3-二醇(还称为三(羟甲基)氨基甲烷、氨基丁三醇(tromethane)或“TRIS”)、氨、苄星、叔丁基胺、钙离子、葡萄糖酸钙、氢氧化钙、氯普鲁卡因、胆碱、胆碱碳酸氢盐、氯化胆碱、环己基胺、二乙醇胺、乙二胺、锂盐、LiOMe、L-赖氨酸、镁盐、葡甲胺、NH3、NH4OH、N-甲基-D-葡萄糖胺、哌啶、钾盐、叔丁醇钾、氢氧化钾(水溶液)、普鲁卡因、喹啉、钠盐、碳酸钠、2-乙基己酸钠(SEH)、氢氧化钠、三乙醇胺(TEA)或锌盐。
前药
本发明化合物的前药包括在本发明范围内。通常,这些前药为在体内易于转化为活性化合物的官能衍生物。因此,在本发明治疗方法中,术语“给药”将包括用具体公开的化合物或虽然未具体公开但显而易见地包括在本发明范围内的化合物或其前药治疗、改善或预防文中所述综合征、病症或疾病的方法。选择和制备合适的前药衍生物的常规方法如例如“Design of Prodrugs(前药的设计)”,H.Bundgaard编辑,Elsevier,1985所述。
立体化学异构体
本领域技术人员将认识到式I化合物在其结构中可具有一个或多个不对称碳原子。所述化合物的单一对映异构体形式、外消旋混合物和一种对映体过量的对映异构体混合物将包括在本发明范围内。
文中所用术语″单一对映异构体″定义了式I化合物及其氮氧化物、加成盐、季铵盐或生理学上官能衍生物所有可能的纯手性形式。
立体化学纯异构形式可通过本领域已知的原理的应用得到。非对映异构体可通过物理分离方法(如分步结晶和色谱技术)分离,和对映异构体可通过非对映异构体盐和光活性酸或碱的选择结晶或通过手性色谱分离。纯的立体异构体还可由适当的立体化学纯的起始原料制备或通过立体选择反应制备。
术语“异构体”是指具有相同组成和分子量但物理和/或化学性质不同的化合物。这些物质具有相同的原子数目和种类但结构不同。结构的差异可在结构中(几何异构体)或可旋转偏振光平面(对映异构体)。
术语“立体异构体”是指不同原子空间排列的相同结构的异构体。对映异构体和非对映异构体为立体异构体的实例。
术语“手性”是指分子的结构特征,该结构使得分子不能与其镜像叠加。
术语“对映异构体”是指互为镜像且不可重叠的一对分子。
术语“非对映异构体”是指不为镜像的立体异构体。
符号″R″和″S″表示手性碳原子上取代基的构型。
术语“外消旋化合物”或“外消旋混合物”是指由等摩尔量的两种对映异构体类型组成的组合物,其中所述组合物不具有光活性。
术语“纯手性的”是指对映异构体纯度的状态。
术语“光活性”是指纯手性分子或手性分子的非外消旋混合物使偏振光平面旋转的角度。
术语“几何异构体”是指取代原子相对于碳-碳双键、环烷基环或桥二环系不同取向的异构体。碳-碳双键各例的取代基原子(不为H)可为E或Z构型。在″E″(对侧)构型中,取代基在碳-碳双键的对侧;在″Z″(同侧)构型中,取代基在碳-碳双键的同侧。连接碳环的取代基原子(不为氢)可为顺式或反式构型。在″顺式″构型中,取代基在环平面的同侧;在″反式″构型中,取代基在环平面的对侧。含有“顺式”和“反式”类型的混合物的化合物称为“顺式/反式”。
应当理解的是用于制备本发明化合物的不同取代基的立体异构体、几何异构体及其混合物为市售,或可由市售的起始原料合成制备,或可制备成异构体混合物随后使用本领域普通技术人员众所周知的技术拆分得到。
异构体描述符号″R″、″S″、″E″、″Z″、″顺式″和″反式″如文中所述用于表明相对于核心分子的原子构型并按文献(IUPACRecommendations for Fundamental Stereochemistry(Section E)(IUPAC对于基本立体化学的建议,E部分),Pure Appl.Chem.,1976,45:13-30)所定义使用。
本发明化合物可通过异构体-特异性合成或由异构体混合物拆分制备。常规的拆分技术包括使用光活性盐形成异构体对的各异构体的游离碱(随后将游离碱分步结晶和再生)形成异构体对的各异构体的酯或酰胺(随后色谱分离并除去手性助剂)或使用制备TLC(薄层色谱法)或手性HPLC柱拆分起始原料或最终产物的异构体混合物。
多晶型物和溶剂化物
此外,本发明化合物可具有一种或多种多晶形或无定形晶体形式并且诸如此类的形式将包括在本发明范围内。此外,一些化合物可形成溶剂化物例如与水(即水合物)或与常用有机溶剂,并且诸如此类的形式将包括在本发明范围内。文中所用术语″溶剂化物″是指一种或多种本发明化合物与一种或多种溶剂分子的物理结合。这种物理结合涉及离子和共价结合(包括氢键)的不同程度。在某些情况中,溶剂化物可被分离,例如当一种或多种溶剂分子结合在晶状固体的晶格中时。术语″溶剂化物″包括溶液相和可分离的溶剂化物。适宜的溶剂化物实例包括乙醇化物、甲醇化物等。本发明化合物的溶剂化物包括在本发明的范围内。因此,在本发明的治疗方法中,术语“给药”将包括用具体公开的化合物或虽然未具体公开但显而易见地包括在本发明范围内的化合物或其溶剂化物治疗、改善或预防文中所述综合征、病症或疾病的方法。
氮氧化物
采用将三价氮转化为氮氧化物形式的现有技术已知方法,式I化合物可转化为相应的氮氧化物形式。所述N-氧化反应通常可通过式I的起始原料与适当的有机或无机过氧化物反应进行。适当的无机过氧化物包括例如过氧化氢、碱金属过氧化物或碱土金属过氧化物,例如过氧化钠、过氧化钾;适当的有机过氧化物可包括过氧酸,例如过氧化苯甲酸或卤代过氧化苯甲酸(例如3-氯过氧化苯甲酸)、过氧链烷酸(例如过氧乙酸)、烷基过氧化氢(例如叔丁基过氧化氢)。适宜的溶剂为例如水;低级醇例如乙醇等;烃例如甲苯、酮如2-丁酮;卤代烃如二氯甲烷以及这些溶剂的混合物。
互变异构形式
一些式I化合物还可以其互变异构形式存在。虽然这些形式未明确地在本申请中指明,但是其将包括在本发明范围内。
本发明化合物的制备
在任何制备本发明化合物的过程中,保护在任何关注分子上的敏感或活性基团可为必须和/或希望的。这可通过常规保护基团的方法实现,如Protecting Groups(保护基团),P.Kocienski,Thieme MedicalPublishers,2000年;和T.W.Greene和P.G.M.Wuts,Protective Groupsin Organic Synthesis(在有机合成中的保护基团),第三版,WileyInterscience,1999中所述。保护基团可使用本领域已知的方法在后续方便步骤中脱去。
通用反应流程
式I化合物可由本领域技术人员已知的方法制备。以下反应流程仅旨在表示本发明的实例,而绝非限制本发明。
式I化合物,其中B、Z、r、R1和R3如式I定义,可通过流程1所示的一般合成路线合成。在Vilsmeier反应条件下(DMF/POCl3)通过处理嘧啶-4,6-二醇II可得到4,6-二氯-嘧啶-5-甲醛III,随后通过用氨处理可得到关键中间体4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛IV。在25℃-150℃下、溶剂(如DMSO)中、碱(如二异丙基乙基胺)存在下,IV用环状胺V处理,可得到嘧啶VI。在溶剂(如MeOH)中,VI用适合的R1ONH2处理,可得到最终产物I。虽然仅画出了式I的反式,但可预期到在最终反应中可形成反式和顺式几何异构体。所述异构体可通过柱色谱分离并由于相应的肟的次甲基氢Ha的1HNMR化学位移(图1b)而在光谱上有差异。
反式异构体 顺式异构体
图1b
与顺式异构体的Ha次甲基氢的化学位移比较,主要的反式异构体的实测1HNMR谱显示出Ha次甲基氢的化学位移的更低磁场特征。反式和顺式肟异构体的Ha氢的1H化学位移可观察到的差异与本领域已知文献相符(Biorg.Med.Chem.Lett,2004,14,5827-5830)。
流程1
反应物R1ONH2(其中R1如式I中定义)为市售或可通过流程2a所示的反应顺序制备。在溶剂(如DMSO)中,通过用适合的亲电子试剂R1LG(其中LG可为离去基团如溴或碘)与碱(如KOH)将苯亚甲基VII烷基化可得到苯亚甲基中间体VIII,随后在酸性(如4N HCl)条件下处理,得到所需反应物R1ONH2。制备反应物R1ONH2的相关方法(其中n、R1和Ra如式I中定义)如流程2b所示。在溶剂(如DMSO)中,通过用适合的亲电子试剂PGO(CH2)nLG(其中PG为已知的醇保护基团,LG可为离去基团如溴或碘)与碱(如KOH)将苯亚甲基VII烷基化可得到O-烷基化的苯亚甲基。在标准条件下将技术人员已知的醇保护基团脱保护,将醇转化为本领域技术人员已知的适合的离去基团如甲磺酸基团,随后用适合的亲核杂环、杂芳基、胺、醇、磺酰胺或硫醇进行SN2置换反应,随后通过酸介导的脱苯亚甲基反应可得到反应物R1ONH2。如果Ra亲核试剂为硫醇,将硫醇进一步氧化可得到相应的亚砜和砜。如果Ra亲核试剂为氨基,氮用适合的酰化剂或磺酰化试剂酰化,可得到相应的酰胺、氨基甲酸酯、脲和磺酰胺。如果所需Ra为COORy或CONRwRx,它们可由相应的羟基得到。羟基氧化为酸,随后在本领域已知的条件下形成酯或酰胺,可得到其中Ra为COORy或CONRwRx的实例。
流程2a
流程2b
其中:
LG为离去基团
Nuc为亲核基团
PG为保护基团
所述胺反应物V(其中Z为NH或N(烷基)和B、r和R3如式I中定义)可通过流程3a所示的反应顺序制备。用适合的酰化剂X(其中LG可为对硝基苯氧基、氯、溴或咪唑)将N-Boc二胺IX酰化,可得到酰化的中间体XI。在酸性条件下除去N-Boc保护基团可得到所需的胺V。酰化剂X为市售或可如流程3a所示制备。在碱(如三乙胺)的存在下,通过用适合的酰化剂(如羰基二咪唑或氯甲酸间硝基苯酯(其中LG可为氯、咪唑或对硝基苯氧基))处理适合的R3BZH(其中Z为NH或N(烷基)),可得到X。许多R3BZH反应物为市售或可由已知的众多方法制备(例如Tet Lett 1995,36,2411-2414)。获得V(其中Z为CH2和B、r和R3如式I中定义)的其他方法如流程3b中所示。使用标准的偶合剂(如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺·盐酸盐(EDC)或1-羟基苯并三唑(HOBT)将环状胺IX与适合的R3BCH2CO2H偶联,可得到酰化的中间体XI。在酸性条件下脱去N-Boc保护基团可得到所需的胺V。
流程3a
Z为NH或N(烷基)
LG为离去基团
流程3b
Z为CH2
或者,式I化合物(其中B、Z、r、R1和R3如式I中定义)可如流程4中所示一般合成路径合成。在溶剂(如乙腈)中、碱(如二异丙基乙基胺)存在下,4-氯嘧啶IV用适合的二胺IX处理,可得到嘧啶XII。在溶剂(如MeOH)中,5-甲醛嘧啶XII用适合的R1ONH2处理,可得到中间体XIII,随后通过酸处理脱去N-Boc保护基团可得到二氨基嘧啶XIV。在碱(如二异丙基乙基胺)存在下,通过用适合的反应物X(其中Z为NH或N(烷基)和LG可为氯、咪唑或对硝基苯氧基)将XIV酰化可得到最终产物I,或当Z为CH2,使用标准的偶合剂(如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺·盐酸盐(EDC)或1-羟基苯并三唑(HOBT)与适合R3BCH2CO2H偶联,可得到最终产物I。虽然仅画出了式I的反式,但可预期到在反应步骤中可形成反式和顺式几何异构体。所述异构体可通过柱色谱分离并在光谱上有差异。
流程4
或者,式I化合物(其中Z为NH和B、r、R1和R3如式I中定义)可如流程5中所示一般合成路径合成。在溶剂(如乙腈)中、碱(如二异丙基乙基胺)存在下,4-氯嘧啶IV用适合的二胺IX处理可得到嘧啶XII。在溶剂(如MeOH)中,5-甲醛嘧啶XII用适合的R1ONH2处理可得到中间体XIII,随后通过酸处理脱去N-Boc保护基团可得到二氨基嘧啶XIV。在碱(如二异丙基乙基胺)存在下,XIV用适合的R3BNCO酰化得到最终产物I。虽然仅画出了式I的反式,但可预期到在反应步骤中可形成反式和顺式几何异构体。所述异构体可通过柱色谱分离并在光谱上有差异。
流程5
或者,式I化合物(其中Z为NH和B、r、R1和R3如式I中定义)可如流程6中所示一般合成路径合成。在溶剂(如乙腈)中、碱(如二异丙基乙基胺)存在下,4-氯嘧啶IV用适合的二胺IX处理可得到嘧啶XII。通过酸处理脱去N-Boc保护基团可得到二氨基嘧啶XV,随后在碱(如二异丙基乙基胺)存在下其可用适合的试剂X(其中LG可为氯、咪唑或对硝基苯氧基)酰化得到嘧啶XVI。在溶剂(如MeOH)中,5-甲醛嘧啶XVI用适合的R1ONH2处理可得到最终产物I。虽然仅画出了式I的反式,但可预期到在最终产物中可形成反式和顺式几何异构体。所述异构体可通过柱色谱分离并在光谱上有差异。
流6
LG为离去基团
典型化合物
以下列出了通过上述方法合成的本发明代表性的化合物。在此之后将介绍具体化合物的合成实施例。优选的化合物为编号1、2、7、12、13、16、17、18、19、27的化合物;特别优选的化合物为编号1、2、7、12和17的化合物。
实施例1
4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺
a.4,6-二氯-嘧啶-5-甲醛
将DMF(3.2mL)和POCl3(10mL)的混合物于0℃下搅拌1小时,用4,6-二羟基嘧啶(2.5g,22.3mmol)处理,随后在环境温度下搅拌0.5小时。将该非均质混合物于回流下加热3小时,随后减压除去挥发物。将残余物倾入冰水中并用乙醚萃取六次。有机相用NaHCO3水溶液洗涤,经Na2SO4干燥并浓缩,得到黄色固体(3.7g,95%)。1H NMR(CDCl3)δ10.46(s,1H),8.90(s,1H).
b.4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛
将氨鼓泡通入4,6-二氯-嘧啶-5-甲醛(1g,5.68mmol)在甲苯(100mL)中的溶液中10分钟,随后将该溶液于室温下搅拌过夜。将黄色沉淀滤出,用EOAc洗涤并真空干燥,得到纯的产物(880mg,99%)。
1H NMR(DMSO-d6)δ10.23(s,1H),8.72(br,1H),8.54(br,1H),8.38(s,1H).
方法A:
a.4-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
往4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛(446.8mg,2.85mmol)在CH3CN(2mL)中的悬浮液中加入哌嗪-1-甲酸叔丁酯(583.1mg,3.13mmol),随后加入DIEA(736.7mg,5.7mmol)。将该反应混合物于100℃下搅拌。2小时后,将其冷却至室温并将沉淀滤出,用CH3CN(3×4mL)洗涤并真空干燥,得到白色粉末状的标题化合物(818mg,93.6%)。
1H NMR(DMSO-d6)δ9.75(s,1H),8.28.(br,1H),8,07(s,1H),7.83(br,1H),3.59(m,4H),3.43(m,4H),1.41(s,9H);
C14H22N5O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值308.2;实测值308.2。
b.4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将4-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(59.1mg,0.19mmol)和MeONH2·HCl(52mg,0.62mmo1)在MeOH(1.5mL)中的混合物于75℃下搅拌0.5小时,随后将该溶剂减压蒸发。粗制残余物经快速硅胶层析纯化(洗脱液:EtOAc),得到白色固体状的标题化合物(48mg,74.6%)。
1H NMR(CDCl3)δ8.19(s,1H),8.11(s,1H),3.95(s,3H),3.53(t,J=5.10Hz,4H),3.33(t,J=5.10Hz,4H),1.47(s,9H);
C15H25N6O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值337.2;实测值337.3。
c.4-氨基-6-哌嗪-1-基-嘧啶-5-O-甲基-甲醛肟·三氟乙酸盐
4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(22.1mg,0.066mmol)用50%TFA/CH2Cl2(4mL)处理。14小时后,将该混合物蒸发并真空干燥,得到标题化合物。
1H NMR(CD3OD)δ8.29(s,1H),8.15(s,1H),4.00(s,3H),3.93(t,J=5.16Hz,4H),3.35(t,J=5.37Hz,4H);
C10H17N6O(MH)+LC/MS(ESI)计算值237.1;实测值237.2。
d.(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯
在短暂的冰浴冷却下,往4-异丙氧基苯胺(9.06g,60.0mmol)在CH2Cl2(120mL)和吡啶(30mL)中的溶液中经约1分钟分批加入氯甲酸4-硝基苯酯(10.9g,54.0mmol)并搅拌。在室温下搅拌1小时后,该均质溶液用CH2Cl2(300mL)稀释,随后用0.6MHCl(1×750mL)和0.025MHCl(1×1L)洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)并浓缩,得到淡紫-白色固体状的标题化合物(16.64g,98%)。
1H NMR(CDCl3)δ8.31-8.25(m,2H),7.42-7.32(m,4H),7.25-7.20(m,2H),6.93(br s,1H),2.90(sep,J=6.9Hz,1H),1.24(d,J=6.9Hz,6H).
C16H17N2O5(MH)+LC/MS(ESI)计算值317.1;实测值633.2(2MH)+。
e.4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺
往4-氨基-6-哌嗪-1-基-嘧啶-5-O-甲基-甲醛肟·三氟乙酸盐(23mg,0.066mmol)和(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯(22.8mg,0.072mmol)在CH3CN(1.5mL)中的混合物中加入DIEA(17mg,0.13mmol)。将该混合物于搅拌下回流加热3小时,随后将溶剂减压蒸发。黄色残余物经快速硅胶层析纯化(洗脱液:EtOAc),得到白色固体状的标题化合物(12.7mg,46.8%)。
1H NMR(CDCl3)δ8.19(s,1H),8.12(s,1H),7.21(d,J=8.93Hz,2H),6.81(d,J=8.94Hz,2H),6.45(br,1H),4.46(m,1H),3.96(s,3H),3.58(m,4H),3.42(m,4H),1.30(d,J=6.06Hz,6H);
LC/MS(ESI)计算值C20H28N7O3(MH)+414.2;实测值414.2.
方法B:
f.4-(4-异丙氧基-苯基氨基甲酰基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将哌嗪-1-甲酸叔丁酯(267.4mg,1.44mmol)和(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯(432.1mg,1.36mmol)在CH3CN(2mL)中的混合物于回流下加热2小时,随后将其冷却至室温。将该沉淀滤出,用CH3CN(3×3mL)洗涤,随后真空干燥,得到白色固体状的产物(459mg,93%)。
1H NMR(CD3OD)δ7.20(d,J=8.81Hz,2H),6.82(d,J=8.93Hz,2H),4.52(sep,J=6.03Hz,1H),3.48(m,8H),1.48(s,9H),1.27(d,J=6.04Hz,6H);
LC/MS(ESI)C19H30N3O4(MH)+计算值364.2;实测值364.4。
g.哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺
4-(4-异丙氧基-苯基氨基甲酰基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(169mg,0.47mmol)用50%TFA/CH2Cl2(15mL)处理。2小时后,将其减压蒸发,随后残余物用在MeOH中的2MNH3中和。高压蒸去溶剂,得到标题化合物(119mg,97%)。
1H NMR(CD3OD)δ7.22(d,J=8.83Hz,2H),6.83(d,J=8.92Hz,2H),4.52(sep,J =6.02Hz,1H),3.76(t,J=4.98Hz,4H),3.24(t,J=4.99Hz,4H),1.27(d,J=6.03Hz,6H);
C14H22N3O2(MH)+LC/MS(ESI)计算值264.2;实测值264.3。
h.4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺
往哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺(302.1mg,1.15mmol)和4-氨基-6-氯-嘧啶-5-甲醛(157mg,1.0mmol)在DMSO(2mL)中的混合物中加入DIEA(258.5mg,2.0mmol)。将该混合物于100℃下保持搅拌2小时,随后加入MeONH2·HCl(167mg,2.0mmol)。将得到的混合物于100℃下加热0.5小时。将其用水稀释并用CH2Cl2萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤,干燥(Na2SO4),随后减压浓缩。粗制油状物经快速硅胶层析纯化(洗脱液:EtOAc),得到标题化合物(45mg,11%)。
1H NMR(CDCl3)δ8.19(s,1H),8.12(s,1H),7.21(d,J=8.93Hz,2H),6.81(d,J=8.94Hz,2H),6.45(br,1H),4.46(m,1H),3.96(s,3H),3.58(m,4H),3.42(m,4H),1.30(d,J=6.06Hz,6H);
C20H28N7O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值414.2;实测值414.4。
实施例2
4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺
a.4-氨基-6-哌嗪-1-基-嘧啶-5-甲醛·三氟乙酸
4-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(235mg,0.76mmol)用50%TFA/CH2Cl2(10mL)处理,随后将该混合物搅拌过夜。将其减压蒸发,得到白色固体,其为纯净物并直接用于下一步骤。
1H NMR(CD3OD)δ9.83(s,1H),8.29(s,1H),4.22(t,J=5.23Hz,4H),3.42(t,J=5.42Hz,4H);
C9H14N5O(MH)+LC/MS(ESI)计算值208.1;实测值208.1。
b.4-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺
往4-氨基-6-哌嗪-1-基-嘧啶-5-甲醛·三氟乙酸盐(0.76mmol)和(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯(253.7mg,0.80mmol)在CH3CN中的混合物中加入DIEA(396mg,3.06mmol)。将该混合物于100℃下加热2小时,将其冷却至室温。将沉淀滤出,用CH3CN(2×2mL)和EtOAc(2×1mL)洗涤,随后真空干燥,得到浅黄色固体状的标题化合物(120mg,41%)。
1H NMR(CDCl3)δ9.88(s,1H),8.73(br,1H),8.17(s,1H),7.22(d,J=8.97Hz,2H),6.84(d,J=8.98Hz,2H),6.50(br,1H),6.25(br,1H),4.49(m,1H),3.85(m,4H),3.66(m,4H),1.31(d,J=6.06Hz,6H);
C19H25N6O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值385.2;实测值385.2。
c.O-(2-吗啉-4-基-乙基)-二苯甲酮肟
在室温下,往KOH粉(1.24g,22mmol)和二苯甲酮肟(1.97g,10mmol)在DMSO(23mL)中的悬浮液中分批加入N-(2-氯乙基)吗啉·盐酸盐(2.10g,11mmol)。将该反应混合物于室温下保持搅拌3天,用水稀释,随后用乙醚萃取。有机相用盐水洗涤,干燥(Na2SO4),蒸发,得到几乎纯的产物。
1H NMR(CDCl3)δ7.32-7.50(m,10H),4.35(t,J=5.59Hz,2H),3.69(t,J=4.52Hz,4H),2.74(m,2H),2.49(m,4H);
C19H23N2O2(MH)+LC/MS(ESI)计算值311.2;实测值311.2。
d.O-(2-吗啉-4-基-乙基)-羟胺·二盐酸盐
将O-(2-吗啉-4-基-乙基)-二苯甲酮肟(2.5g,8.06mmol)在6NHCl(13.5mL)中的悬浮液于搅拌下回流加热。2小时后,将该混合物冷却至室温,随后用EtOAc萃取几次。将水相真空蒸发至干,得到标题化合物(740mg,63%)。
1H NMR(DMSO-d6)δ4.45(t,J=4.49Hz,2H),3.89(t,J=4.48Hz,4H),3.47(t,J=4.64Hz,2H),3.29(m,4H);
C6H15N2O2(MH)+LC/MS(ESI)计算值147.1;实测值147.1。
e.4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺
将4-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺(20.9mg,0.054mmol)和O-(2-吗啉-4-基-乙基)-羟胺·二盐酸盐(12mg,0.054mmol)在MeOH(1mL)中的混合物于100℃下加热0.5小时,随后除去溶剂。将残余物在EtOAc和水间分配。将有机萃取液干燥(Na2SO4)并蒸发,随后残余物经制备TLC纯化(5%MeOH/EtOAc),得到白色固体状的所需化合物(16.4mg,58.9%)。
1H NMR(CD3OD)δ8.24(s,1H),8.08(s,1H),7.21(d,J=8.79Hz,2H),6.83(d,J=9.03Hz,2H),4.52(m,1H),4.34(t,J=5.63Hz,2H),3.71(t,J=4.84Hz,4H),3.63(m,4H),3.43(m,4H),2.75(t,J=5.60Hz,2H),2.57(t,J=4.96Hz,4H),1.28(d,J=6.05Hz,6H);
C25H37N8O4(MH)+LC/MS(ESI)计算值513.2;实测值513.3。
实施例3
4-{6-氨基-5-[(3-羟基-丙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺
a.O-(3-羟基-丙基)-二苯甲酮肟
采用实施例2c的合成方法。
1H NMR(CDCl3)δ7.30-7.52(m,10H),4.35(t,J=5.83Hz,2H),3.73(t,J=5.85Hz,2H),1.95(m,2H).
b.3-氨基氧基-丙-1-醇·盐酸盐
采用实施例2d的合成方法。
1H NMR(CD3OD)δ4.26(t,J=6.75Hz,2H),3.66(t,J=6.11Hz,2H),2.51(m,2H).
c.4-{6-氨基-5-[(3-羟基-丙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺
如实施例2e所述制备,不同之处在于用3-氨基氧基-丙-1-醇代替O-(2-吗啉-4-基-乙基)-羟胺。
1H NMR(CD3OD)δ8.22(s,1H),8.08(s,1H),7.21(d,J=8.95Hz,2H),6.83(d,J=9.01Hz,2H),4.52(m,1H),4.28(t,J=6.48Hz,2H),3.69(t,J=6.35Hz,2H),3.63(m,4H),3.43(m,4H),1.94(m,2H),1.28(d,J=6.04Hz,6H).
C22H32N7O4(MH)+LC/MS(ESI)计算值458.2;实测值458.2。
实施例4
4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-哌啶-1-基-苯基)-甲酰胺
a.(4-哌啶-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯
基本上如实施例1d所述制备,不同之处在于用4-哌啶基苯胺和甲苯溶剂。经快速硅胶层析纯化(5∶2己烷/EtOAc→EtOAc→9∶1DCM/MeOH),得到灰色粉末状的目标化合物(1.416g,73%)。
1HNMR(CDCl3)δ8.31-8.25(m,2H),7.42-7.36(m,2H),7.34-7.28(m,2H),6.97-6.90(m,2H),6.82(br s,1H),3.17-3.09(m,4H),1.77-1.66(m,4H),1.63-1.54(m,2H).
C18H19N3O4(MH+)LC/MS(ESI)计算值342.1;实测值342.2。
b.4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-哌啶-1-基-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例1e所述制备,不同之处在于用(4-哌啶-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯。
1H NMR(CDCl3)δ8.20(s,1H),8.14(s,1H),7.29(m,4H),7.07(br,2H),6.46(br,1H),3.97(s,3H),3.61(m,4H),3.46(m,4H),3.15(m,4H),1.52-1.86(m,6H);
C20H31N8O2(MH)+LC/MS(ESI)计算值439.3;实测值439.2。
实施例5
4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-吗啉-4-基-苯基)-甲酰胺
a.(4-吗啉-4-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯
在空气中、冰浴上,将4-吗啉代苯胺(1.01g,5.68mmol)和CaCO3(743mg,7.42mmol)(10微米粉末)的混合物用氯甲酸4-硝基苯酯(1.49g,7.39mmol)在CH2Cl2(7.5mL)中的溶液处理。室温下搅拌1小时后,在冰浴中将粘稠、易搅拌的反应浆液搅拌1-2分钟。随后将该浆状液用9∶1CH2Cl2/MeOH(7.5mL)稀释并直接负载在快速硅胶柱上(95∶5CH2Cl2/MeOH)得到0.7g原料。其通过用热甲苯(25mL)研磨进一步纯化,得到浅橄榄绿粉末状的标题化合物(444mg,23%)。
1H NMR(CDCl3)δ8.31-8.25(m,2H),7.42-7.31(m,4H),6.95-6.85(m,3H),3.89-3.84(m,4H),3.16-3.11(m,4H).
b.4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-吗啉-4-基-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例1e中所述制备,不同之处在于使用(4-吗啉-4-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯。
1H NMR(CDCl3)δ8.20(s,1H),8.13(s,1H),7.22(m,4H),6.87(br,2H),6.26(br,1H),3.97(s,3H),3.86(t,J=4.80Hz,4H),3.60(m,4H),3.47(t,J=4.47Hz,4H),3.10(m,4H);
C21H29N8O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值441.2;实测值441.3。
实施例6
4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺
a.2-环丁氧基-5-硝基-吡啶
在0℃下,将2-氯-5-硝基吡啶(7.12g,45.0mmol)和环丁醇(3.40g,47.2mmol)在THF(30mL)中的混合物剧烈搅拌的同时在空气中经约10-20秒分三批加入NaH(1.18g,46.7mmol)(注意:大量的气体放出)。反应残余物用另外的THF(5mL)洗下,随后在正氩气压力下、冰浴中搅拌1-2分钟或更长时间。随后移去冰浴并将该褐色均质溶液搅拌1小时。将该反应混合物于80℃下减压浓缩,往其中加入0.75MEDTA(四钠盐)(150mL),随后用CH2Cl2(1×100mL,1×50mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4),浓缩,往其中加入MeOH(2×100mL),随后在60℃下减压浓缩,静置结晶得到稠厚的黑色琥珀油状的标题化合物(7.01g,80%)。
1H NMR(CDCl3)δ9.04(dd,J=2.84和0.40Hz,1H),8.33(dd,J=9.11和2.85Hz,1H),6.77(dd,J=9.11和0.50Hz,1H),5.28(m,1H),2.48(m,2H),2.17(m,2H),1.87(m,1H),1.72(m,1H).
b.6-环丁氧基-吡啶-3-基胺
小心地用氩气冲洗装有10%重量Pd/C(485mg)的烧瓶的同时沿烧瓶边缘缓慢加入MeOH(50mL),随后以每次约5mL分批加入2-环丁氧基-5-硝基-吡啶(4.85g,25mmol)(如前一步骤制备)在MeOH(30mL)中的溶液(注意:在空气的存在下往Pd/C中大量加入挥发性有机物会着火)。随后将该烧瓶抽真空一次,接着在室温、H2气囊压力下搅拌2小时。随后将该反应物过滤,将澄清的琥珀色滤液浓缩,往其中加入甲苯(2×50mL)除去残余的MeOH,随后减压浓缩,得到具有微弱甲苯味的半透明深褐色油状的粗制标题化合物(4.41g)。
1H NMR(CDCl3)δ7.65(d,J=3.0Hz,1H),7.04(dd,J=8.71和2.96Hz,1H),6.55(d,J=8.74Hz,1H),5.04(m,1H),2.42(m,2H),2.10(m,2H),1.80(m,1H),1.66(m,1H).
计算值C9H13N2O(MH+)LC-MS(ESI)计算值165.1;实测值165.2。
c.(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯
在室温下,6-环丁氧基-吡啶-3-基胺(4.41g,25mmol)(如以上步骤制备)和CaCO3(3.25g,32.5mmol)(10微米粉末)的混合物一次性用氯甲酸4-硝基苯酯(5.54g,27.5mmol)在甲苯(28mL)中的均质溶液处理,随后搅拌2小时。随后将该反应混合物直接负载在快速硅胶柱上(95∶5DCM/MeOH→9∶1DCM/MeOH),得到5.65g原料,其通过与热甲苯(1×200mL)研磨进一步纯化,得到标题化合物(4.45g,54%)。
1H NMR(CDCl3)δ8.32-8.25(m,2H),8.12(d,1H),7.81(m,1H),7.42-7.36(m,2H),6.85(brs,1H),6.72(d,1H),5.19-5.10(m,1H),2.50-2.40(m,2H),2.19-2.07(m,2H),1.89-1.79(m,1H),1.75-1.61(m,1H).
C16H15N3O5(MH+)LC-MS(ESI)计算值330.1;实测值330.1。
d.4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺
如实施例1e所述制备,不同之处在于使用(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯。
1H NMR(DMSO-d6)δ8.55(s,1H),8.14(s,1H),8.12(d,J=2.74Hz,1H),8.10(s,1H),7.73(dd,J=8.72和2.72Hz,1H),7.48(br,1H),6.69(d,J=8.86Hz,1H),5.05(m,1H),3.91(s,3H),3.54(m,4H),3.34(m,4H),2.36(m,2H),2.00(m,2H),1.75(m,1H),1.61(m,1H);
C20H27N8O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值427.2;实测值427.2。
实施例7
4-氨基-6-{4-[2-(4-异丙基-苯基)-乙酰基]-哌嗪-1-基}-嘧啶-5-O-甲基-甲醛肟
往粗的4-氨基-6-哌嗪-1-基-嘧啶-5-O-甲基-甲醛肟·三氟乙酸盐(45.3mg,0.13mmol)(如实施例1c制备)和(4-异丙基-苯基)-乙酸(23mg,0.13mmol)在无水THF(2mL)中的混合物中加入HOBT(25.7mg,0.17mmol),随后加入HBTU(63.6mg,0.17mmol)和DIEA(83.4mg,0.65mmol)。将该混合物于室温下搅拌过夜并减压浓缩。将粗料直接负载在制备TLC板上纯化(5%MeOH/EtOAc)(8.6mg,16.7%)。
1H NMR(CDCl3)δ8.16(s,1H),8.05(s,1H),7.17(m,4H),3.95(s,3H),3.75(m,2H),3.73(s,2H),3.55(t,J=4.81Hz,2H),3.38(t,J=4.98Hz,2H),3.26(t,J=4.79Hz,2H),2.89(sep,J=6.81Hz,1H),1.24(d,J=6.92Hz,6H);
C21H29N6O2(MH)+LC/MS(ESI)计算值397.2;实测值397.3。
实施例8
4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙基-苯基)-甲酰胺
a.(4-异丙基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯
在短时间冰浴下,往4-异丙基苯胺(3.02g,22.3mmol)在CH2Cl2(40mL)和吡啶(10mL)中的溶液中经约30秒分批加入氯甲酸4-硝基苯酯(4.09g,20.3mmol)并搅拌。室温下搅拌1小时后,该均质溶液用CH2Cl2(100mL)稀释并用0.6M HCl(1×250mL)、0.025MHCl(1×400mL)、水(1×100mL)和1M NaHCO3(1×100mL)洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)并浓缩,得到浅粉红色固体状的标题化合物(5.80g,95%)。
1H NMR(CDCl3)δ8.31-8.25(m,2H),7.42-7.32(m,4H),7.25-7.20(m,2H),6.93(br s,1H),2.90(h,J=6.9Hz,1H),1.24(d,J=6.9Hz,6H).
C16H16N2O4(2MH)+LC/MS(ESI)计算值601.2;实测值601.3。
b.哌嗪-1-N-(4-异丙基-苯基)-甲酰胺
哌嗪-1-甲酸叔丁酯(186mg,1.0mmol)和(4-异丙基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯(300mg,1.0mmol)在CH3CN(1.5mL)中的混合物于回流下加热2小时,随后减压浓缩。残余物用50%TFA/CH2Cl2(5mL)处理,随后将该溶液搅拌过夜。将有机溶剂蒸发,随后残余物用在MeOH中的2MNH3中和。在将溶剂蒸发后,残余物在EtOAc和水间分配,随后将有机相干燥并浓缩。得到的物质经快速硅胶柱层析纯化(EtOAc→10%MeOH/EtOAc),得到标题化合物(126mg,51%)。
1H NMR(CD3OD)δ7.25(d,J=8.53Hz,2H),7.15(d,J=8.69Hz,2H),3.75(t,J=5.17Hz,4H),2.85(sep,J=6.91Hz,1H),1.21(d,J=6.93Hz,6H);
C14H22N3O(MH)+LC/MS(ESI)计算值248.2;实测值248.2。
c.4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙基-苯基)-甲酰胺
采用1h的合成方法,不同之处在于使用哌嗪-1-N-(4-异丙基-苯基)-甲酰胺代替哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺。
1H NMR(CD3OD)δ8.20(s,1H),8.08(s,1H),7.25(d,J=8.63Hz,2H),7.14(d,J=8.35Hz,2H),3.96(s,3H),3.64(m,4H),3.42(m,4H),2.85(sep,J=6.92Hz,1H),1.22(d,J=6.93Hz,6H);
C20H28N7O2(MH)+LC/MS(ESI)计算值398.2;实测值398.3。
实施例9
4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺(-C=N-O-为反式构型)
a.4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(-C=N-O-为反式构型)
将4-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(135.1mg,0.44mmol)和EtONH2·HCl(128.6mg,1.32mmol)在MeOH(1.5mL)中的混合物于90℃下搅拌0.5小时,随后将溶剂减压除去。残余物在CH2Cl2和水间分配,随后将有机相干燥(Na2SO4)。溶剂蒸发得到白色固体,经1HNMR(CDCl3)确定其为两种异构体的混合物(2∶1比例)。经制备TLC纯化(洗脱液:EtOAc)得到两种纯的异构体。主要异构为反式异构体(就-C=N-O-构型而言)(87.7mg,56.9%)。
1HNMR(CDCl3)δ8.13(s,1H),8.04(s,1-H),4.21(q,J=7.06Hz,2H),3.54(m,8H),1.47(s,9H),1.33(t,J=7.04Hz,3H);
C16H27N6O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值351.2;实测值351.3。
b.4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(-C=N-O-为顺式构型)
如实施例9a所述制备。得到次要的异构体并称为顺式异构体(就-C=N-O-构型而言)(40mg,26%)。
1H NMR(CDCl3)δ8.13(s,1H),7.17(s,1H),4.33(q,J=7.17Hz,2H),3.65(m,4H),3.53(m,4H),1.48(s,9H),1.35(t,J=7.04Hz,3H);
C16H27N6O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值351.2;实测值351.3。
c.4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺(-C=N-O-为反式构型)
4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(反式异构体)(36.8mg,0.105mmol)用50%TFA/CH2Cl2(1.3mL)处理2小时,随后减压除去溶剂。将得到的原料重溶解在CH3CN(2mL)中,与(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯(36.5mg,0.12mmol)和DIEA(54.3mg,0.42mmol)混合物。将该反应混合物于95℃下加热1小时,浓缩,随后残余物经快速硅胶柱层析纯化(EtOAc→5%MeOH/EtOAc),得到白色固体状的标题化合物(14.4mg,32%)。
1HNMR(CDCl3)δ8.20(s,1H),8.15(s,1H),7.23(d,J=8.88Hz,2H),6.84(d,J=8.92Hz,2H),6.30(br,1H),4.49(sep,J=6.08Hz,1H),4.21(q,J=7.05Hz,2H),3.61(m,4H),3.45(m,4H),1.34(t,J=7.18Hz,3H),1.32(d,J=6.30Hz,6H);
C21H30N7O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值428.2;实测值428.3。
实施例10
4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺(-C=N-O-为顺式构型)
如实施例9c所述制备,不同之处在于使用4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯的顺式异构体代替其反式异构体。
1H NMR(CDCl3)δ8.24(s,1H),7.27(s,1H),7.22(d,J=8.97Hz,2H),6.84(d,J=8.96Hz,2H),6.22(br,1H),5.60(br,2H),4.48(sep,J=6.19Hz,1H),4.33(q,J=7.06Hz,2H),3.57(m,8H),1.36(t,J=7.08Hz,3H),1.31(d,J=6.05Hz,6H);
C21H30N7O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值428.2;实测值428.3。
实施例11
4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-哌啶-1-基-苯基)-甲酰胺
如实施例9c中所述制备,不同之处在于使用(4-哌啶-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯。
1H NMR(CDCl3)δ8.20(s,1H),8.15(s,1H),7.27(m,4H),7.04(br,2H),6.43(br,1H),4.21(q,J=7.07Hz,2H),3.62(m,4H),3.45(t,J=4.82Hz,4H),3.13(m,4H),1.54-1.84(m,6H),1.34(t,J=7.06Hz,3H);
C23H33N8O2(MH)+LC/MS(ESI)计算值453.3;实测值453.3.
实施例12
4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺
如实施例9c中所述制备,不同之处在于使用(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯。
1H NMR(CDCl3)δ8.20(s,1H),8.15(s,1H),7.96(d,J=2.65Hz,1H),7.73(dd,J=8.84和2.74Hz,1H),7.26(br,2H),6.66(d,J=9.03Hz,1H),6.27(br,1H),5.10(m,1H),4.21(q,J=7.05Hz,2H),3.61(m,4H),3.47(m,4H),2.43(m,2H),2.11(m,2H),1.82(m,1H),1.65(m,1H),1.33(t,J=7.07Hz,3H);
C21H29N8O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值441.2;实测值441.3。
实施例13
4-氨基-6-{4-[2-(4-异丙基-苯基)-乙酰基]-哌嗪-1-基}-嘧啶-5-O-乙基-甲醛肟(-C=N-O-为反式构型)
4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(反式和顺式异构体的混合物,37mg,0.11mmol)用50%TFA/CH2Cl2(1.5mL)处理2小时,随后减压除去有机溶剂。得到的原料不需纯化直接用于以下偶联反应。往以上原料和(4-异丙基-苯基)-乙酸(18.7mg,0.11mmol)在THF(3mL)中的混合物中加入HOBT(20.9mg,0.14mmol),随后加入HBTU(51.9mg,0.14mmol)和DIEA(67.9mg,0.53mmol)。将该反应溶液于室温下搅拌过夜,随后浓缩。残余物直接进行制备TLC的纯化(5%MeOH/EtOAc)得到两种产物,其表示为反式和顺式异构体的混合物(就-C=N-O-构型而言)。主要的异构体为白色固体(5.3mg,12.3%分离产率)。
1H NMR(CDCl3)δ8.16(s,1H),8.07(s,1H),7.18(m,4H),4.20(q,J=7.08Hz,2H),3.75(m,2H),3.74(s,2H),3.57(t,J=5.05Hz,2H),3.37(t,J=5.08Hz,2H),3.25(t,J=5.06Hz,2H),2.89(sep,J=7.25Hz,1H),1.32(t,J=7.05Hz,3H),1.23(d,J=6.92Hz,6H);
C22H31N6O2(MH)+LC/MS(ESI)计算值411.2;实测值411.3。
实施例14
4-氨基-6-{4-[2-(4-异丙基-苯基)-乙酰基]-哌嗪-1-基}-嘧啶-5-O-乙基-甲醛肟(-C=N-O-为顺式构型)
如实施例13中所述制备,次要的异构体为白色固体(1.8mg,4.2%分离产率)。
1H NMR(CDCl3)δ8.21(s,1H),7.22(s,1H),7.18(m,4H),4.31(q,J=7.10Hz,2H),3.74(s,2H),3.73(m,2H),3.54(m,2H),3.39(m,2H),3.30(m,2H),2.89(sep,J=7.08Hz,1H),1.34(t,J=7.07Hz,3H),1.23(d,J=6.92Hz,6H);
C22H31N6O2(MH)+LC/MS(ESI)计算值411.2;实测值411.3。
实施例15
4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-吗啉-4-基-苯基)-甲酰胺
如实施例9c中所述制备,不同之处在于使用(4-吗啉-4-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.16(s,1H),8.10(s,1H),7.20-7.27(m,4H),6.85-6.91(br,2H),6.23(br,1H),4.22(q,J=7.08Hz,2H),3.82-3.89(m,4H),3.54-3.64(m,8H),3.06-3.14(m,4H),1.33(t,J=7.09Hz,3H).
C22H31N8O3(MH+)LC-MS(ESI)计算值455.2;实测值455.2。
实施例16
4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-2-氧代基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺
如实施例2c中所述制备,不同之处在于使用2-氨基氧基-1-吗啉-4-基-乙酮·盐酸盐代替O-(2-吗啉-4-基-乙基)-羟胺。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.45(s,1H),8.24(s,1H),8.23(s,1H),7.82(br,2H),7.31(d,J=8.95Hz,2H),6.80(d,J=8.94Hz,2H),4.91(s,2H),4.50(m,1H),3.55(m,4H),3.32-3.46(m,8H),3.31(m,4H),1.22(d,J=6.03Hz,6H).
C21H35N8O5(MH+)LC-MS(ESI)计算值527.3;实测值527.1.
实施例17
4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(6-环戊氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺
a.2-环戊氧基-5-硝基-吡啶
在0℃冰浴中、搅拌下,往2-氯-5-硝基吡啶(7.01g,44.4mmol)在THF(30mL)和环戊醇(3.9g,45.3mmol)的溶液中经约30秒分批加入氢化钠(1.3g,54.2mmol)。0℃下搅拌5分钟后,移去冰浴并将该反应物于室温下搅拌3小时。随后将其真空浓缩,将残余物溶解在DCM中并用1MNaHCO3充分洗涤,随后经无水Na2SO4干燥,过滤并真空浓缩。粗品经快速柱层析纯化(硅胶,9∶1己烷:乙酸乙酯),得到纯的2-环戊氧基-5-硝基-吡啶(0.4g,4%)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ9.07(s,1H),8.32(m,1H),6.74(d,1H),5.53(m,1H),2.00(m,2H),1.81(m,4H),1.66(m,2H).
b.6-环戊氧基-吡啶-3-基胺
往2-环戊氧基-5-硝基-吡啶(0.3099g,1.49mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中加入10%Pd/C(90mg)。将该溶液脱气,随后在氢气气氛下保持搅拌过夜。其经过硅藻土垫过滤,随后将滤液蒸发,得到褐色油状的所需产物(248mg,94%产率)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ7.69(d,1H),7.04(m,1H),6.56(d,1H),5.25(m,1H),1.93(m,2H),1.78(m,4H),1.60(m,2H).
C10H14N2OLC/MS(ESI)计算值178.23;实测值[M+41+1]+220.0。
c.(6-环戊氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯
往6-环戊氧基-吡啶-3-基胺(0.248g,1.39mmol)在THF(2mL)中的溶液中分批加入氯甲酸4-硝基苯酯(0.280g,1.39mmol)。在室温下搅拌1小时后,在有机层中形成大量的沉淀。过滤有机层,得到浅粉色固体状的标题化合物(0.368g,77%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ11.1(s,1H),9.11(s,1H),9.04(d,1H),8.26(d,2H),7.40(d,2H),7.14(d,1H),5.36(m,1H),2.11(m,2H),1.97(m,2H),1.84(m,2H),1.71(m,2H).
d.4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(6-环戊氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺
基本上如实施例6d所述制备,不同之处在于使用(6-环戊氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯代替(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯。
1H NMR(CDCl3)δ8.20(s,1H),8.13(s,1H),7.97(d,J=2.74Hz,1H),7.71(dd,J=8.87 and 2.82Hz,1H),6.65(d,J=8.87Hz,1H),6.31(br,1H),5.30(m,1H),3.96(s,3H),3.61(m,4H),3.45(m,4H),1.93(m,2H),1.78(m,4H),1.60(m,2H);
C21H29N8O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值441.2;实测值441.3。
实施例18
4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-甲酰胺
a.(4-吡咯烷-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯·盐酸盐
在室温下往搅拌的4.9g(30.4mmol)4-吡咯烷-1-基-苯基胺在70mL无水THF中的溶液中滴加6.4g(32mmol)氯甲酸4-硝基苯酯在16mL无水THF中的溶液。在加入完成后,将该混合物搅拌1小时,随后过滤。沉淀首先用无水THF(2×10mL)洗涤,随后用无水DCM(3×10mL)洗涤并真空干燥,得到10g类白色的固体。
1H-NMR(300MHz,CD3OD):10.39(s,1H),8.32(d,2H),7.73(d,2H),7.60(d,2H),7.48(d,2H),3.86-3.68(bs,4H),2.35-2.24(bs,4H).LC/MS(ESI):328(MH)+.
b.4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例1e所述制备,不同之处在于使用(4-吡咯烷-1-基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯。
1H NMR(CD3OD)δ8.20(s,1H),8.08(s,1H),7.11(d,J=8.77Hz,2H),6.53(d,J=8.91Hz,2H),3.96(s,3H),3.61(m,4H),3.42(m,4H),3.24(m,4H),2.01(m,4H);
C21H29N8O2(MH)+LC/MS(ESI)计算值425.2;实测值425.1。
实施例19
4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-环己基-苯基)-甲酰胺
a.(4-环己基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯
基本上如实施例8a所述制备,不同之处在于使用4-环己基苯胺代替4-异丙基苯胺。
1H NMR(DMSO-d6)δ10.37(br,1H),8.30(d,J=9.30Hz,2H),7.52(d,J=9.00Hz,2H),7.41(d,J=8.10Hz,2H),7.18(d,J=8.70Hz,2H),1.18-1.82(11H).
b.4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-环己基-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例1e所述制备,不同之处在于使用(4-环己基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯。
1H NMR(CDCl3)δ8.20(s,1H),8.13(s,1H),7.24(d,J=8.55Hz,2H),7.13(d,J=8.50Hz,2H),6.35(br,1H),3.96(s,3H),3.60(m,4H),3.44(m,4H),2.45(m,1H),1.83(m,4H),1.73(m,1H),1.37(m,4H),1.24(m,1H);
C23H32N7O2(MH)+LC/MS(ESI)计算值438.3;实测值438.3。
实施例20
4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-氯-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例1e所述制备,不同之处在于使用异氰酸4-氯苯酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯。
1H NMR(CDCl3)δ8.20(s,1H),8.13(s,1H),7.30(d,J=9.00Hz,2H),7.25(d,J=9.00Hz,2H),6.42(br,1H),3.96(s,3H),3.61(m,4H),3.46(m,4H);
C17H21ClN7O2(MH)+LC/MS(ESI)计算值390.1;实测值390.2。
实施例21
4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-苯氧基-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例1e所述制备,不同之处在于使用异氰酸4-苯氧基苯酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯。
1H NMR(CDCl3)δ8.20(s,1H),8.14(s,1H),7.31(m,4H),7.07(m,1H),6.97(m,4H),6.35(br,1H),3.97(s,3H),3.62(m,4H),3.47(m,4H);
C23H26N7O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值448.2;实测值448.2。
实施例22
4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-二甲基氨基-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例1e所述制备,不同之处在于使用异氰酸4-N,N-二甲基氨基苯酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯。
1H NMR(CDCl3)δ8.21(s,1H),8.14(s,1H),7.18(d,J=9.04Hz,2H),6.70(d,J=9.06Hz,2H),6.16(br,1H),3.97(s,3H),3.59(m,4H),3.45(m,4H),2.91(s,6H);
C19H27N8O2(MH)+LC/MS(ESI)计算值399.2;实测值399.3。
实施例23
4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙基-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例1e所述制备,不同之处在于使用异氰酸4-异丙基苯酯代替(4-异丙氧基-苯基)-氨基甲酸4-硝基-苯酯。
1H NMR(CDCl3)δ8.21(s,1H),8.14(s,1H),7.25(d,J=8.44Hz,2H),7.16(d,J=8.38Hz,2H),6.31(br,1H),3.97(s,3H),3.61(m,4H),3.45(m,4H),2.87(m,1H),1.22(d,J=6.92Hz,6H);
C20H28N7O2(MH)+LC/MS(ESI)计算值398.2;实测值398.3。
实施例24
4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-[1,4]二氮杂环庚烷-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例1e所述制备,不同之处在于使用4-氨基-6-[1,4]二氮杂环庚烷-1-基-嘧啶-5-O-甲基-甲醛肟代替4-氨基-6-哌嗪-1-基-嘧啶-5-O-甲基-甲醛肟。
1H NMR(CDCl3)δ8.09(2H),7.20(d,J=8.99Hz,2H),6.82(d,J=8.97Hz,2H),6.29(br,1H),4.47(m,1H),3.95(s,3H),3.79(m,2H),3.75(m,2H),3.68(t,J=5.57Hz,2H),3.57(t,J=6.01Hz,2H),2.06(m,2H),1.30(d,J=6.06Hz,6H);
C21H30N7O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值428.2;实测值428.3。
实施例25
4-{6-氨基-5-[(2-氨基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例2e所述制备,不同之处在于使用O-(2-氨基-乙基)-羟胺·二盐酸盐代替O-(2-吗啉-4-基-乙基)-羟胺·二盐酸盐。
1H NMR(CDCl3)δ8.20(2H),7.22(d,J=8.96Hz,2H),6.83(d,J=8.99Hz,2H),6.32(br,1H),4.48(m,1H),4.19(t,J=5.18Hz,2H),3.60(m,4H),3.45(m,4H),3.04(t,J=5.17Hz,2H),1.31(d,J=6.06Hz,6H);
C21H31N8O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值443.2;实测值443.3。
实施例26
4-(6-氨基-5-{[2-(3-乙基-脲基)-乙氧基亚氨基]-甲基}-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺
往4-{6-氨基-5-[(2-氨基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺(44.7mg,0.101mmol)在CH3CN(1.5mL)中的溶液中加入异氰酸乙酯(10.8mg,0.152mmol)。将该混合物搅拌1小时,随后将溶剂蒸发。残余物用水和MeOH洗涤,真空干燥,得到白色固体状的所需化合物。
1HNMR(DMSO-d6)δ8.40(br,1H),8.14(s,1H),8.08(s,1H),7.45(br,2H),7.28(d,J=9.03Hz,2H),6.77(d,J=9.08Hz,2H),5.92(t,J=5.99Hz,1H),5.85(t,J=5.02Hz,1H),4.48(m,1H),4.07(t,J=5.53Hz,2H),3.22-3.54(10H),2.97(m,2H),1.20(d,J=6.02Hz,6H),0.94(t,J=7.14Hz,3H);
C24H36N9O4(MH)+LC/MS(ESI)计算值514.3;实测值514.3。
实施例27
4-{6-氨基-5-[(2-甲磺酰基氨基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺
往4-{6-氨基-5-[(2-氨基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺(70.8mg,0.16mmol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入MsCl(45.8mg,0.4mmol)和DIEA((77.6mg,0.6mmol)。将该反应物搅拌1小时,将其在CH2Cl2和水间分配。将CH2Cl2萃取物蒸发,随后粗制残余物经快速硅胶柱层析纯化(洗脱液:5%MeOH/EtOAc),得到所需产物。
1H NMR(CDCl3)δ8.20(s,1H),8.16(s,1H),7.24(d,J=8.92Hz,2H),6.83(d,J=8.99Hz,2H),6.45(br,1H),5.23(m,1H),4.47(m,1H),4.29(t,J=5.36Hz,2H),3.60(m,4H),3.47(m,4H),3.32(m,2H),3.00(s,3H),1.30(d,J=6.05Hz,6H);
C22H33N8O4S(MH)+LC/MS(ESI)计算值521.2;实测值521.3。
实施例28
4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-2-氧代基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例2e所述制备,不同之处在于使用2-氨基氧基-1-吗啉-4-基-乙酮·盐酸盐代替O-(2-吗啉-4-基-乙基)-羟胺·二盐酸盐。
1H NMR(DMSO-d6)δ8.26(br,1H),8.20(s,1H),8.14(s,1H),7.60(br,2H),7.19(d,J=8.97Hz,2H),6.48(d,J=9.59Hz,2H),4.88(s,2H),3.54(m,8H),3.30-3.47(8H),3.16(m,4H),1.92(m,4H);
C26H36N9O4(MH)+LC/MS(ESI)计算值538.3;实测值538.3。
实施例29
4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-吗啉-4-基-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例5b所述制备,不同之处在于使用O-(2-吗啉-4-基-乙基)-羟胺·二盐酸盐代替甲氧基胺·盐酸盐。
1H NMR(CDCl3)δ8.21(s,1H),8.18(s,1H),7.25(d,J=9.07Hz,2H),6.88(d,J=9.07Hz,2H),6.22(br,1H),4.30(t,J=5.84Hz,2H),3.86(t,J=4.66Hz,4H),3.74(t,J=4.60Hz,4H),3.60(m,4H),
C26H38N9O4(MH)+LC/MS(ESI)计算值540.3;实测值540.3。
实施例30
4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺
基本上如实施例6d所述制备,不同之处在于使用O-(2-吗啉-4-基-乙基)-羟胺·二盐酸盐代替甲氧基胺·盐酸盐。
1H NMR(CDCl3)δ8.21(s,1H),8.18(s,1H),7.96(d,J=2.68Hz,1H),7.74(dd,J=8.83 and 2.79Hz,1H),6.67(d,J=9.16Hz,1H),6.24(br,1H),5.11(m,1H),4.30(t,J=5.64Hz,2H),3.74(m,4H),3.61(m,4H),3.45(m,4H),2.73(t,J=5.71Hz,2H),2.54(m,4H),2.44(m,2H),2.12(m,2H),1.59-1.82(2H);
C25H36N9O4(MH)+LC/MS(ESI)计算值526.3;实测值526.2。
实施例31
4-{6-氨基-5-[(2-氨基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺
基本上如实施例6d所述制备,不同之处在于使用O-(2-氨基-乙基)-羟胺·二盐酸盐代替甲氧基胺·盐酸盐。
1H NMR(CDCl3)δ8.21(s,1H),8.20(s,1H),7.96(d,J=2.26Hz,1H),7.74(dd,J=8.83 and 2.78Hz,1H),6.67(d,J=8.86Hz,1H),6.31(br,1H),5.10(m,1H),4.20(t,J =5.22Hz,2H),3.61(m,4H),3.45(m,4H),3.04(m,2H),2.42(m,2H),2.11(m,2H),1.59-1.87(2H);
C21H30N9O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值456.2;实测值456.2。
实施例32
4-{6-氨基-5-[(2-氨基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-吗啉-4-基-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例5b所述制备,不同之处在于使用O-(2-氨基-乙基)-羟胺·二盐酸盐代替甲氧基胺·盐酸盐。
1H NMR(CDCl3)δ8.21(s,1H),8.20(s,1H),7.25(d,J=9.05Hz,2H),6.87(d,J=9.05Hz,2H),6.23(br,1H),4.20(t,J=5.25Hz,2H),3.86(t,J=4.69Hz,4H0,3.62(m,4H),3.46(m,4H),3.11(t,J=4.86Hz,4H),3.04(t,J=5.62Hz,2H);
C22H32N9O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值470.3;实测值470.2。
实施例33
4-{6-氨基-5-[(2-甲磺酰基氨基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺
基本上如实施例27所述制备,不同之处在于使用4-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-N-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺代替4-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺。
1H NMR(CDCl3)δ8.20(s,1H),8.16(s,1H),7.99(d,J=3.19Hz,1H),7.74(dd,J=8.82 and 2.78Hz,1H),6.65(d,J=8.83Hz,1H),6.57(s,1H),5.28(br,1H),5.08(m,1H),4.30(t,J=4.68Hz,2H),3.61(m,4H),3.45(m,6H),3.00(s,3H),2.42(m,2H),2.11(m,2H),1.59-1.87(2H);
C22H32N9O5S(MH)+LC/MS(ESI)计算值534.2;实测值534.2。
实施例34
4-{6-氨基-5-[(2-氨基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例2e所述制备,不同之处在于使用O-(2-氨基-乙基)-羟胺·二盐酸盐代替O-(2-吗啉-4-基-乙基)-羟胺·二盐酸盐。
1H NMR(CDCl3)δ8.21(s,1H),8.20(s,1H),7.16(d,J=8.85Hz,2H),6.51(d,J=8.89Hz,2H),4.19(t,J=5.08Hz,2H),3.58(m,4H),3.45(m,4H),3.26(m,4H),3.04(t,J=5.30Hz,2H),1.99(m,4H);
C22H32N9O2(MH)+LC/MS(ESI)计算值454.3;实测值454.2。
实施例35
4-{6-氨基-5-[(2-甲磺酰基氨基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例27所述制备,不同之处在于使用4-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-甲酰胺代替4-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺。
1H NMR(CD3OD)δ8.26(s,1H),8.08(s,1H),7.11(d,J=8.94Hz,2H),6.53(d,J=9.00Hz,2H),4.26(t,J=5.22Hz,2H),3.62(m,4H),3.50(m,2H),3.44(m,4H),3.24(m,4H),2.97(s,3H),2.00(m,4H);
C23H34N9O4S(MH)+LC/MS(ESI)计算值532.2;实测值532.1。
实施例36
4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例2e所述制备,不同之处在于使用4-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-甲酰胺代替4-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺。
1H NMR(CD3OD)δ8.24(s,1H),8.08(s,1H),7.11(d,J=8.96Hz,2H),6.53(d,J=8.97Hz,2H),4.34(t,J=5.53Hz,2H),3.71(t,J=4.86Hz,4H),3.62(m,4H),3.43(m,4H),3.24(m,4H),2.75(t,J=5.70Hz,2H),2.57(m,4H),2.01(m,4H);
C26H38N9O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值524.3;实测值524.3。
实施例37
4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙基-苯基)-甲酰胺
基本上如实施例2e所述制备,不同之处在于使用4-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-N-(4-异丙基-苯基)-甲酰胺代替4-(6-氨基-5-甲酰基-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺。
1H NMR(CD3OD)δ8.25(s,1H),8.09(s,1H),7.26(d,J=8.57Hz,2H),7.14(d,J=8.43Hz,2H),4.37(t,J=6.36Hz,2H),3.74(t,J=4.75Hz,4H),3.65(m,4H),3.44(m,4H),2.84(m,3H),2.66(m,4H),1.22(d,J=6.92Hz,6H);
C25H37N8O3(MH)+LC/MS(ESI)计算值497.2;实测值497.3。
生物活性
体外测定
为测定本发明范围内化合物的生物活性进行以下代表性的体外测定。它们以非限定的形式阐述本发明。
FLT3酶活性、MV4-11增殖和Baf3-FLT3磷酸化的抑制例证了FLT3酶的特异性抑制和依赖于FLT3活性的细胞过程。Baf3细胞增殖的抑制被用作本发明范围内化合物的FLT3、c-Kit和TrkB不依赖细胞毒性的试验。文中所有实施例表现出对FLT3激酶和FLT3-依赖细胞响应明显和特异性的抑制。文中实施例还在酶活性测定中表现出TrkB和c-kit激酶的特异性抑制。本发明化合物还为细胞可渗透的。
FLT3荧光偏振激酶分析
为测定本发明化合物在体外激酶测定中的活性,使用以下荧光偏振(FP)试验方案进行测定人FLT3受体(a.a.571-993)的分离激酶区域的抑制。FLT3 FP测定利用了由Invitrogen提供的Panvera磷酸-酪氨酸激酶试剂盒(Green)中包括的荧光素标记的磷酸肽和抗-磷酸酪氨酸抗体。当FLT3磷酸化polyGlu4Tyr时,荧光素标记的磷酸肽从抗-磷酸酪氨酸抗体上被磷酸化的polyGlu4Tyr代替,从而降低了FP值。在室温、下述条件下,将FLT3激酶反应培养30分钟:10nM FLT3571-993、20ug/mL polyGlu4Tyr、150uM ATP、5mM MgCl2、在DMSO中的1%化合物。加入EDTA使激酶反应终止。加入荧光素标记的磷酸肽和抗-磷酸酪氨酸抗体,随后于室温下培养30分钟。
所有数据点为三份样品的平均值。抑制和IC50数据分析用GraphPad Prism,使用多参数、S形剂量-响应(变量斜率)等式非线性回归拟合进行。激酶抑制IC50表示与DMSO溶媒空白对照品比较产生50%激酶活性抑制的化合物剂量。
c-Kit荧光偏振激酶测定
本发明化合物还为c-Kit特异性抑制剂。选择优选的式I化合物用作c-Kit抑制剂,采用以下方法使用体外激酶测定法测定在以下荧光偏振(FP)试验方案中人c-kit受体的分离激酶区域的抑制。所述c-kit测定利用了由Invitrogen提供的Panvera磷酸-酪氨酸激酶试剂盒(Green)中包括的荧光素标记的磷酸肽和抗-磷酸酪氨酸抗体。当c-Kit磷酸化polyGlu4Tyr时,荧光素标记的磷酸肽从抗-磷酸酪氨酸抗体上被磷酸化的polyGlu4Tyr代替,因此降低了FP值。在室温、下述条件下,将c-kit激酶反应培养45分钟:1nM c-kit(ProQinase,批号SP005)、100ug/mL polyGlu4Tyr、50uM ATP、5mM MgCl2、1mM DTT、0.01%Tween-20、1%DMSO或在100nM Hepes中的化合物、pH7.5。加入EDTA使激酶反应终止。加入荧光素标记的磷酸肽和抗-磷酸酪氨酸抗体,随后于室温下培养30分钟并读出荧光偏振数值。所有数据点为三份样品的平均值。抑制和IC50数据分析用GraphPad Prism,使用多参数、S形剂量-响应(变量斜率)等式非线性回归拟合进行。激酶抑制IC50表示与DMSO溶媒空白对照品比较产生50%激酶活性抑制的化合物剂量。
TrkB荧光偏振激酶测定(TrkB IC50数据)
本发明化合物还为TrkB特异性抑制剂。选择优选的式I化合物用作TrkB抑制剂实施以下方法。所述TrkB测定利用了由Invitrogen提供的Panvera磷酸-酪氨酸激酶试剂盒(Green)中包括的荧光素标记的磷酸肽和抗-磷酸酪氨酸抗体。当TrkB磷酸化polyGlu4Tyr时,荧光素标记的磷酸肽从抗-磷酸酪氨酸抗体上被磷酸化的polyGlu4Tyr代替,因此降低了FP值。在室温、下述条件下,将TrkB激酶反应培养30分钟:50nM TrkB(新鲜,编号14-507M)、20ug/mL polyGlu4Tyr、150uM ATP、5mM MgCl2、1%在DMSO中的化合物。加入EDTA使激酶反应终止。加入荧光素标记的磷酸肽和抗-磷酸酪氨酸抗体,随后于室温下培养30分钟。所有数据点为三份样品的平均值。抑制和IC50数据分析用GraphPad Prism,使用多参数、S形剂量-响应(变量斜率)等式非线性回归拟合进行。激酶抑制IC50表示与DMSO溶媒空白对照品比较产生50%激酶活性抑制的化合物剂量。
MV4-11和Baf3细胞增殖的抑制
为了评价本发明化合物的细胞效能,FLT3特异性生长抑制的测定在白血病细胞系MV4-11(ATCC编号:CRL-9591)中进行。MV4-11细胞获自11q23易位导致的MLL基因重排并伴有FLT3-ITD突变(AML亚型M4)(1,2)的儿童急性单核细胞性白血病患者。MV4-11细胞没有活性FLT3ITD则不能生长和存活。
通过测定本发明化合物的非特异性生长抑制,用Baf3(IL-3依赖、鼠类b-细胞淋巴瘤细胞系)作对照来证实本发明化合物的选择性。
为测定试验化合物的增殖抑制,使用基于荧光酶的CellTiterGlo试剂(Promega),其基于总细胞ATP浓度定量总细胞数。将MV4-11和Baf3细胞各自以每孔10,000个细胞接种在含青霉素/链霉素、10%FBS和1ng/ml GM-CSF或1ng/ml IL-3的100ul RPMI介质中。
往细胞中加入化合物稀释液或0.1%DMSO溶媒(空白对照)并让所述细胞在标准细胞生长条件下(37℃,5%CO2)生长72小时。对于MV4-11细胞在50%血浆中生长的活性测定,将细胞以每孔10,000个细胞接种在生长介质和人血浆的1∶1混合物中(最终体积100μL)。为测定总细胞生长,往各孔中加入等体积的CellTiterGlo试剂(按照供应商的说明书),并定量发光度。0天的细胞数的荧光计数(相对光单位,RLU)与第3天(生长和/或化合物处理72小时)总细胞数的荧光计数比较的差值定量总细胞生长。百分之百的生长抑制定义为0天RLU读数。百分之零抑制定义为生长第3天DMSO溶媒空白对照的RLU信号。所有数据点为三份样品的测定的平均值。生长抑制的IC50表示产生第3天DMSO溶媒空白对照的总细胞生长50%抑制的化合物的剂量。抑制和IC50数据分析用GraphPad Prism,使用多参数、S形剂量-响应(变量斜率)等式非线性回归拟合进行。
MV4-11细胞表达FLT3内部串连重复突变,从而其生长完全依赖于FLT3活性。强抗MV4-11细胞活性为本发明所需性质。反之,Baf3细胞增殖受细胞因子IL-3驱动从而用作试验化合物的非特异性毒性对照。本发明所有化合物实例在3uM剂量显示<50%的抑制(未包括数据),这表明所述化合物不具有细胞毒性并对FLT3有良好的选择性。
基于细胞的FLT3受体酶联免疫吸附测定
采用以下方法测定FLT配体诱导的野生型FLT3磷酸化的特异性细胞抑制:过度表达FLT3受体的Baf3FLT3细胞获自Dr.MichaelHeinrich(Oregon Health and Sciences University)。Baf3 FLT3细胞系通过亲代Baf3细胞(依赖细胞因子IL-3生长的鼠类B细胞淋巴瘤系)与野生型FLT3稳定转染产生。在不存在IL-3和存在FLT3配体下就生长能力选择细胞。
在37℃、5%CO2中Baf3细胞保持在含10%FBS、青霉素/链霉素和10ng/ml FLT配体的RPMI1640中。为测定野生型FLT3受体活性直接抑制和磷酸化,研发出了与研究其他RTKs(3,4)类似的方法夹心酶联免疫分析方法(sandwich ELISA method)。将200μL Baf3 FLT3细胞(1×106/mL)接种在含0.5%血清和0.01ng/mL IL-3的RPMI 1640的96孔碟中并培养16小时,随后与化合物或DMSO溶媒培养1小时。细胞于37℃下用100ng/mL Flt配体(R&D Systems,编号308-FK)处理10分钟。将细胞打碎、洗涤和溶解在添加磷酸酶(Sigma,编号P2850)和蛋白酶抑制剂(Sigma,编号P8340)的100ul裂解缓冲液(50mMHepes、150mM NaCl、10%丙三醇、1%Triton-X-100、10mM NaF、1mMEDTA、1.5mM MgCl2、10mM焦磷酸钠)中。溶解产物通过在4℃下1000xg离心5分钟澄清。将细胞溶解产物转移到涂有50ng/孔的抗FLT3抗体(Santa Cruz,编号sc-480)并用SeaBlock试剂(Pierce,编号37527)阻断的白壁96孔酶标板(Costar,编号9018)。溶胞产物于4℃下培养2小时。板用每孔200ul的PBS/0.1%Triton-X-100洗涤3次。随后板与HRP-结合的抗-磷酸酪氨酸抗体(Clone 4G10,UpstateBiotechnology,编号16-105)1∶8000的稀释剂于室温下培养1小时。将板用每孔200ul的PBS/0.1%Triton-X-100洗涤3次。使用Berthold微孔板光度计按照制造商的说明书用Super Signal Pico试剂(Pierce,编号37070)进行信号检测。所有数据点为三份样品的平均值。在0.1%DMSO对照存在下,Flt配体刺激FLT3磷酸化的总相对光单位(RLU)定义为0%抑制而100%抑制定义为基态溶胞产物的总RLU。抑制和IC50数据分析用GraphPad Prism,使用多参数、S形剂量-响应(变量斜率)等式非线性回归拟合进行。
生物学方法的参考文献
1.Drexler HG,The Leukemia-Lymphoma Cell Line Factsbook(白血病-淋巴瘤细胞系的Factsbook),Academic Pres:San Diego,CA,2000年。
2.Quentmeier H,Reinhardt J,Zaborski M,Drexler HG,FLT3mutations in acute myeloid leukemia cell lines(在急性髓细胞样白血病细胞系中FLT3的突变),Leukemia,2003年1月,17:120-124。
3.Sadick,MD,Sliwkowski,MX,Nuijens,A,Bald,L,Chiang,N,Lofgren,JA,Wong WLT,Analysis of Heregulin-Induced ErbB2Phosphorylation with a High-Throughput Kinase Receptor ActivationELISA mmunsorbent Assay(通过高通量激酶受体激活酶联免疫吸附测定分析调蛋白诱导的ErbB2磷酸化),Analytical Biochemistry,1996;235:207-214。
4.Baumann CA,Zeng L,Donatelli RR,Maroney AC,Developmentof a quantitative,high-throughput cell-based enzyme-linkedimmunosorbent assay for detection of colony-stimulating factor-1receptor tyrosine kinase inhibitors(定量、高通量基于细胞的酶联免疫吸附测定分析用于检测集落刺激因子-1受体酪氨酸激酶抑制剂的发展),J Biochem Biophys Methods,2004;60:69-79。
生物学数据
FLT3生物学数据
本发明的代表性化合物的活性如下表所示。所有活性单位为μM并具有以下变化范围:FLT3激酶:±10%;MV4-11和Baf3-FLT3:±20%。
编号 | 化合物 | FLT3激素(μM) | MV4-11(μM) | BaF3ELISA(μM) |
1 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺 | 0.05 | 0.079 | 0.017 |
编号 | 化合物 | FLT3激素(μM) | MV4-11(μM) | BaF3ELISA(μM) |
2 | 4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺 | 0.036 | 0.177 | 0.081 |
3 | 4-{6-氨基-5-[(3-羟基-丙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺 | 0.26 | 0.283 | 0.072 |
4 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-哌啶-1-基-苯基)-甲酰胺 | 0.05 | 0.089 | 0.155 |
5 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-吗啉-4-基-苯基)-甲酰胺 | 0.34 | 0.515 | 0.105 |
6 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺 | 0.075 | 0.111 | 0.104 |
7 | 4-氨基-6-{4-[2-(4-异丙基-笨基)-乙酰基]-哌嗪-1-基}-嘧啶-5-0-甲基-甲醛肟 | 0.014 | 0.024 | 0.002 |
8 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙基-苯基)-甲酰胺 | 0.082 | 0.147 | 0.189 |
9 | 4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺(-C=N-O-为反式构型) | 0.018 | 0.077 | 0.022 |
10 | 4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺(-C=N-O-为顺式构型) | 0.12 | 0.075 | 0.267 |
11 | 4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-哌啶-1-基-苯基)-甲酰胺 | 0.049 | 0.058 | 0.026 |
12 | 4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺 | 0.058 | 0.065 | 0.063 |
编号 | 化合物 | FLT3激素(μM) | MV4-11(μM) | BaF3ELISA(μM) |
13 | 4-氨基-6-{4-[2-(4-异丙基-苯基)-乙酰基]-哌嗪-1-基}-嘧啶-5-O-乙基-甲醛肟(-C=N-O-构型为反式) | 0.008 | 0.013 | 0.116 |
14 | 4-氨基-6-{4-[2-(4-异丙基-苯基)-乙酰基]-哌嗪-1-基}-嘧啶-5-O-乙基-甲醛肟(-C=N-O-构型为顺式) | 0.024 | 0.029 | 0.158 |
15 | 4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-吗啉-4-基-苯基)-甲酰胺 | 0.126 | 0.35 | 0.735 |
16 | 4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-2-氧代基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺 | 0.486 | 0.268 | 0.187 |
17 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(6-环戊氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺 | 0.018 | 0.112 | 0.068 |
18 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-甲酰胺 | 0.003 | 0.099 | 0.312 |
19 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-环己基-苯基)-甲酰胺 | 0.099 | 0.052 | 0.012 |
20 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-氯-苯基)-甲酰胺 | 1.37 | >1 | 0.11 |
21 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-苯氧基-苯基)-甲酰胺 | 0.496 | 0.068 | 0.102 |
22 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-二甲基氨基-苯基)-甲酰胺 | 1.87 | 0.472 | 0.058 |
23 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙基-苯基)-甲酰胺 | 0.015 | 0.098 | 0.008 |
24 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-[1,4]二氮杂环庚烷-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺 | 0.122 | 0.66 | 0.016 |
编号 | 化合物 | FLT3激素(μM) | MV4-11(μM) | BaF3ELISA(μM) |
25 | 4-{6-氨基-5-[(2-氨基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺 | 1.15 | 2.0 | 未测定 |
26 | 4-(6-氨基-5-{[2-(3-乙基-脲基)-乙氧基亚氨基]-甲基}-嘧啶-4-基)-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺 | 未测定 | >1 | 未测定 |
27 | 4-{6-氨基-5-[(2-甲磺酰基氨基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺 | 0.146 | 0.415 | 0.028 |
28 | 4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-2-氧代基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-甲酰胺 | 0.3 | 0.458 | 0.066 |
29 | 4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-吗啉-4-基-苯基)-甲酰胺 | >10 | 3.0 | 未测定 |
30 | 4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺 | 1.74 | 2.5 | 未测定 |
31 | 4-{6-氨基-5-[(2-氨基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺 | 1.45 | 1.3 | 0.206 |
32 | 4-{6-氨基-5-[(2-氨基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-吗啉-4-基-苯基)-甲酰胺 | 5.15 | 0.79 | 0.077 |
33 | 4-{6-氨基-5-[(2-甲磺酰基氨基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺 | 1.15 | 2.8 | 未测定 |
34 | 4-{6-氨基-5-[(2-氨基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-甲酰胺 | 1.51 | 2.5 | 未测定 |
编号 | 化合物 | FLT3激素(μM) | MV4-11(μM) | BaF3ELISA(μM) |
35 | 4-{6-氨基-5-[(2-甲磺酰基氨基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-甲酰胺 | 0.15 | 0.554 | 0.025 |
36 | 4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-甲酰胺 | 4.04 | 0.362 | 0.530 |
37 | 4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙基-苯基)-甲酰胺 | 未测定 | 未测定 | 未测定 |
TrkB生物学数据
本发明的代表性化合物的活性如下表所示。所有活性单位为μM并具有以下变化范围:TrkB IC50:±10%。
编号 | 化合物 | TrkBIC50μM |
1 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺 | 0.8 |
2 | 4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺 | 10.1 |
3 | 4-{6-氨基-5-[(3-羟基-丙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺 | 1.3 |
4 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-哌啶-1-基-苯基)-甲酰胺 | 4 |
5 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-吗啉-4-基-苯基)-甲酰胺 | 8.4 |
6 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺 | 3.5 |
编号 | 化合物 | TrkBIC50μM |
7 | 4-氨基-6-{4-[2-(4-异丙基-苯基)-乙酰基]-哌嗪-1-基}-嘧啶-5-O-甲基-甲醛肟 | 0.5 |
8 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙基-苯基)-甲酰胺 | 1.1 |
9 | 4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺(-C=N-O-为反式构型) | 0.6 |
10 | 4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺(-C=N-O-为顺式构型) | 11 |
11 | 4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-哌啶-1-基-苯基)-甲酰胺 | 2.6 |
12 | 4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(6-环丁氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺 | 1.6 |
13 | 4-氨基-6-{4-[2-(4-异丙基-苯基)-乙酰基]-哌嗪-1-基}-嘧啶-5-O-乙基-甲醛肟(-C=N-O-为反式构型) | 2.2 |
14 | 4-氨基-6-{4-[2-(4-异丙基-苯基)-乙酰基]-哌嗪-1-基}-嘧啶-5-O-乙基-甲醛肟(-C=N-O-为顺式构型) | 1.4 |
15 | 4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-吗啉-4-基-苯基)-甲酰胺 | 7.76 |
16 | 4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-2-氧代基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺 | 11.1 |
17 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(6-环戊氧基-吡啶-3-基)-甲酰胺 | 0.8 |
18 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-甲酰胺 | 2.6 |
19 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-环己基-苯基)-甲酰胺 | 1.68 |
编号 | 化合物 | TrkBIC50μM |
20 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-氯-苯基)-甲酰胺 | 15.6 |
21 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-苯氧基-苯基)-甲酰胺 | 7.4 |
c-kit生物学数据
本发明的代表性化合物的活性如下表所示。所有活性单位为nM并具有以下变化范围:C-Kit IC50:±10%。
编号 | 化合物 | c-kitIC50nM |
1 | 4-[6-氨基-5-(甲氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺 | 10.5 |
2 | 4-{6-氨基-5-[(2-吗啉-4-基-乙氧基亚氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-哌嗪-1-N-(4-异丙氧基-苯基)-甲酰胺 | 26 |
11 | 4-[6-氨基-5-(乙氧基亚氨基-甲基)-嘧啶-4-基]-哌嗪-1-N-(4-哌啶-1-基-苯基)-甲酰胺 | 5.1 |
治疗/预防方法
本发明的另一方面,本发明的化合物可用于抑制细胞或受试者中酪氨酸激酶活性(包括Flt3活性和/或c-kit活性和/或TrkB活性),或降低激酶活性(包括Flt3活性和/或c-kit活性和/或TrkB活性),或用于治疗受试者中与FLT3和/或c-kit和/或TrkB激酶活性或表达有关的病症。
在该方面的一实施方案中,本发明提供了一种降低或抑制细胞中FLT3和/或c-kit和/或TrkB激酶活性的方法,所述方法包括使所述细胞与式I化合物接触的步骤。本发明还提供了一种降低或抑制受试者中FLT3和/或c-kit和/或TrkB激酶活性的方法,所述方法包括给予所述受试者式I化合物的步骤。本发明进一步提供了一种抑制细胞中细胞增殖的方法,所述方法包括使所述细胞与式I化合物接触的步骤。
通过本领域众所周知的方法可测定细胞或受试者中FLT3、c-kit或TrkB的激酶活性,如文中所述FLT3激酶测定、文中所述c-kit激酶测定和文中所述TrkB激酶测定。
文中所用术语“受试者”是指为治疗、观察或试验对象的动物、优选哺乳动物、最优选人。
文中所用术语“接触”是指往细胞中加入化合物使得化合物被细胞吸收。
在该方面的另一实施方案中,本发明提供了用于治疗存在(或易于)发展为细胞增殖性病症或与FLT3和/或c-kit和/或TrkB有关的病症的风险的受试者的预防和治疗方法。
在一实例中,本发明提供了预防受试者所患细胞增殖性病症或与FLT3和/或c-kit和/或TrkB有关病症的方法,所述方法包括给予受试者包含式I化合物和药学上可接受的载体的预防有效量的药物组合物。所述预防药可在细胞增殖性病症或与FLT3和/或c-kit和/或TrkB有关的病症的症状特征出现之前给予,这样预防病症或疾病或延缓了病症或疾病的进程。
在另一实例中,本发明涉及治疗受试者所患细胞增殖性病症或与FLT3和/或c-kit和/或TrkB有关病症的方法,所述方法包括给予受试者包含式I化合物和药学上可接受的载体的治疗有效量的药物组合物。所述治疗药可在这些病症的症状特征出现时给予,这样所述治疗药用作细胞增殖性病症或与FLT3和/或c-kit和/或TrkB相关病症的补偿治疗。
术语“预防有效量”是指研究人员、兽医、医生或其他临床医师所寻找的抑制或延缓受试者发病的活性化合物或药物的量。
文中所用术语“治疗有效量”是指研究人员、兽医、医生或其他临床医师所寻找的引发受试者生物学或医学反应(其包括减轻所治病症或疾病症状)的活性化合物或药物的量。
确定本发明的药物组合物的治疗和预防有效量的方法为本领域已知。
文中所用术语“组合物”是指包括特定量的特定成分的产品,以及由特定量的特定成分组合直接或间接产生的任何产品。
文中所用术语“与FLT3有关的病症”或“与FLT3受体有关的病症”或“与FLT3受体酪氨酸激酶有关的病症”将包括与FLT3活性有关或涉及FLT3活性(例如FLT3的过度活性)的疾病,以及伴随这些疾病的症状。术语″FLT3的过度活性″是指1)在通常不表达FLT3细胞中的FLT3表达;2)由通常不表达FLT3细胞产生的FLT3表达;3)导致不需要细胞增殖的增多的FLT3表达;或4)导致FLT3结构性活化的突变。“与FLT3有关的病症”的实例包括由于异常大量FLT3或FLT3突变引起过度刺激FLT3而导致的病症,或由于异常大量FLT3或FLT3突变引起大量FLT3活性而导致的病症。已知FLT3的过度活性牵涉许多疾病(包括细胞增殖性病症、肿瘤性疾病和下列癌症)的发病机理。
术语“细胞增殖性病症”是指在多细胞生物体中一种或多种细胞的亚型的不需要的细胞增殖,其导致多细胞生物的损害(即不适或减少预期寿命)。细胞增殖性病症可在不同类型的动物和人中发生。例如文中所用“细胞增殖性病症”包括肿瘤和其他细胞增殖性病症。
文中所用“肿瘤性疾病”是指异常或不受控制的细胞生长导致的肿瘤。肿瘤性疾病实例包括,但不限于造血性疾病,例如骨髓增生障碍如血小板增多症、原发性血小板增多症(ET)、特发性骨髓外化生、骨髓纤维化(MF)、骨髓纤维化伴骨髓外化生(MMM)、慢性特发性骨髓纤维化(IMF)和真性红细胞增多症(PV)、血细胞减少症和恶化前骨髓增生异常综合征;癌症如神经胶质瘤、肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、前列腺癌、胃癌、食管癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌;和血液恶性肿瘤包括脊髓发育不良、多发性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。血液恶性肿瘤实例包括,例如白血病、淋巴瘤(霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也称为霍奇金淋巴瘤)和骨髓瘤-例如急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、急性早幼粒细胞白血病(APL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、慢性中性粒细胞白血病(CNL)、急性未分化白血病(AUL)、间变大细胞淋巴瘤(ALCL)、前淋巴细胞白血病(PML)、儿童粒-单细胞白血病(JMML)、成人T-细胞ALL、AML伴有骨髓三系细胞增生异常(AML/TMDS)、混合性白血病(MLL)、骨髓增生异常综合征(MDSs)、骨髓增生障碍(MPD)和多发性骨髓瘤(MM)。
其他细胞增殖性病症实例包括,但不限于动脉粥样硬化(Libby P,2003年,“Vascular biology of atherosclerosis:overview and state of theart(动脉粥样硬化的血管生物学:技术的回顾和现状)”,Am J Cardiol91(3A):3A-6A);移植诱导的血管病变(Helisch A,Schaper W,2003年,Arteriogenesis:the development and growth of collateral arteries(动脉生成:侧支动脉的发生和生长),Microcirculation,10(1):83-97);黄斑变性(Holz FG等,2004年,“Pathogenesis of lesions in lateage-related macular disease(老龄有关的斑疹疾病中损害的发病机理)”,Am J Ophthalmol,137(3):504-10);新内膜增生和再狭窄(Schiele TM等,2004年,“Vascular restenosis-striving for therapy(血管再狭窄-striving for therapy)”,Expert Opin Pharmacother,5(11):2221-32);肺纤维化(Thannickal VJ等,2003年,“Idiopathic pulmonary fibrosis:emerging concepts on pharmacotherapy(特发性肺纤维化:药物疗法新出现的概念)”,Expert Opin Pharmacother,5(8):1671-86);肾小球性肾炎(Cybulsky AV,2000年,“Growth factor pathways in proliferativeglomerulonephritis(在增生性肾小球性肾炎中的生长因子途径)”,CHrrOpin Nephrol Hypertens,9(3):217-23);肾小球硬化症(Harris RC等,1999,“Molecular basis of injury and progression in focalglomerulosclerosis(局灶性肾小球硬化症中损伤和进程的分子基础)”,Nephron,82(4):289-99);肾发育不良和肾纤维化(woolf AS等,2004年,“Evolving concepts in human renal dysplasia(人肾发育不良中展开的概念”,J Am Soc Nephrol,15(4):998-1007);糖尿病性视网膜病(Grant MB等,2004,“The role of growth factors in the pathogenesis ofdiabetic retinopathy(生长因子在糖尿病性视网膜病发病机理中的作用)”,Expert Opin Investig Drugs,13(10):1275-93)和类风湿性关节炎(Sweeney SE,Firestein GS,2004年,Rheumatoid arthritis:regulationof synovial inflammation(类风湿性关节炎:滑液炎症的调节),Int JBiochem Cell Biol,36(3):372-8)。
文中所用术语“与TrkB有关的病症”或“与TrkB受体有关的病症”或“与TrkB受体酪氨酸激酶有关的病症”将包括与TrkB活性有关或涉及TrkB活性(例如TrkB的过度活性)的疾病,以及伴随这些疾病的症状。术语″TrkB的过度活性″是指1)在通常不表达TrkB细胞中的TrkB表达;2)由通常不表达TrkB细胞产生的TrkB表达;3)导致不需要细胞增殖的增多的TrkB表达;或4)导致粘附不依赖细胞存活的增多的TrkB表达;5)导致TrkB结构性活化的突变。“与TrkB有关的病症”的实例包括1)由于异常大量TrkB或TrkB突变引起过度刺激TrkB而导致的病症,或2)由于异常大量TrkB或TrkB突变引起的大量TrkB活性而导致的病症。
与TrkB有关的病症包括许多的疾病,包括癌症如,但不限于成神经细胞瘤、维尔姆斯瘤、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌和肺癌。见,例如Brodeur GM,(2003),“Neuroblastoma:biological insights into aclinical enigma(成神经细胞瘤:临床之迷的生物学洞察)”,NatRevCancer,3(3):203-16;Eggerl A等,(2001),“Expression of theneurotrophin receptor TrkB is associated with unfavorable outcome inWilms′tumor(神经营养因子受体TrkB的表达与维尔姆斯瘤恶化结果有关)”,J Clin Oncol,19(3):689-96;Descamps S等,(2001),“Nervegrowth factor stimulates proliferation and survival of human breast cancercells through two distinct signaling pathways(神经生长因子通过两种不同的信号途径刺激人乳腺癌细胞增殖和存活)”,J Biol Chem,276(21):17864-70;Bardelli A等,(2003),“Mutational analysis of thetyrosine kinome in colorectal cancers(结肠直肠癌中酪氨酸激酶组的突变分析)”,Science 300(5621):949;Weeraratna AT等,(2000),“Rationalbasis for Trk inhibition therapy for prostate cancer(Trk抑制治疗用于前列腺癌治疗的合理性基础)”,Prostate 45(2):140-8,19(3):689-96;Ricci等,(2001),“Neurotrophins and neurotrophin receptors in humanlung cancer(人肺癌中神经营养因子和神经营养因子受体)”,Am JRespir Cell Mol Biol,25(4):439-46。
文中所用术语“与c-kit有关的病症”或“与c-kit受体有关的病症”或“与c-kit受体酪氨酸激酶有关的病症”将包括与c-kit活性有关或涉及c-kit活性(例如c-kit的过度活性)的疾病,以及伴随这些疾病的症状。术语″c-kit的过度活性″是指1)在通常不表达c-kit细胞中的c-kit表达;2)由通常不表达c-kit细胞产生的c-kit表达;3)导致不需要细胞增殖的增多的c-kit表达;或4)导致c-kit结构性活化的突变。与“c-kit有关的病症”的实例包括由于异常大量c-kit或c-kit突变引起过度刺激c-kit而导致的病症,或由于异常大量c-kit或c-kit突变引起大量c-kit活性而导致的病症。
与c-Kit有关的病症包括大量的疾病,如肥大细胞增生病、肥大细胞白血病、胃肠道间质瘤、鼻窦天然杀伤细胞/T-细胞淋巴瘤、精原细胞瘤、无性细胞瘤、甲状腺癌;小细胞肺癌、恶性黑色素瘤、腺样囊性癌、卵巢癌、急性骨髓性白血病、间变性大细胞淋巴瘤、血管肉瘤、子宫内膜癌、儿科T-细胞ALL、淋巴瘤、乳腺癌和前列腺癌。见Heinrich,Michael C等,综述文献:Inhibition of KIT Tyrosine KinaseActivity:A Novel Molecular Approach to the Treatment ofKIT-Positive Malignancies(KIT酪氨酸激酶活性的抑制:治疗KIT阳性恶性肿瘤的新分子学方法)。
在该方面的其他实施方案中,本发明包括治疗或预防受试者所患细胞增殖性病症或与FLT3和/或c-kit和/或TrkB有关的病症发生的联合治疗。联合治疗包括给予受试者治疗或预防有效量的式I化合物和一种或多种抗细胞增殖治疗(包括化学治疗、放射治疗、基因治疗和免疫治疗)。
在本发明的一实施方案中,本发明化合物可与化疗联合给予。文中所用化疗是指包括化疗药的治疗。在文中公开的联合治疗方法中可使用不同的化疗药。示例性的化疗药包括,但不限于:铂化合物(例如顺铂、卡铂、奥沙利铂);紫杉烷化合物(例如紫杉醇、多西他赛);喜树碱化合物(依替立康、托泊替康);长春花碱(例如长春新碱、长春碱、长春瑞滨);抗肿瘤核苷衍生物(例如5-氟尿嘧啶、亚叶酸、吉西他滨、卡培他滨);烷化剂(例如环磷酰胺、卡莫司汀、洛莫司汀、塞替派);表鬼臼毒素/鬼臼毒素(例如依托泊苷、替尼泊苷);芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、依西美坦);抗雌激素化合物(例如他莫昔芬、氟维司群)、抗叶酸剂(例如premetrexed disodium);低甲基化剂(hypomethylating agents)(例如阿扎胞苷);生物制品(例如吉姆单抗、西妥昔单抗、利妥昔单抗、pertuzumab、曲妥单抗、贝伐单抗、erlotinib);抗生素/蒽环类抗生素(例如伊达比星、放线菌素D、博来霉素、柔红霉素、阿霉素、丝裂霉素C、放线菌素D、去甲柔红霉素、道诺霉素);抗代谢物(例如氨蝶呤、氯苯吩嗪、阿糖胞苷、甲氨蝶呤);微管结合剂(例如考布他汀、秋水仙碱、诺考达唑);拓扑异构酶抑制体(例如喜树碱)。其他有用的药物包括维拉帕米、钙离子拮抗剂,这些药物被发现与抗肿瘤药结合能有效地在耐化疗药的肿瘤细胞中建立起化学敏感性并发挥这些药物在药物敏感肿瘤中的潜在活性。见SimpsonWG,The calcium channel blocker verapamil and cancerchemotherapy(钙离子通道阻滞剂维拉帕米和癌症的化学治疗),CellCalcium,1985年12月;6(6):449-67。此外,仍将出现有效与本发明化合物联合使用的化疗药。
在本发明的另一实施方案中,本发明化合物可与放射治疗联合给予。文中所用“放射治疗”是指包含将需要此等治疗的受试者暴露于放射线的治疗。这些治疗为本领域技术人员所熟知。放射治疗的适当流程将与临床治疗中已使用的流程类似,其中所述放射治疗可单独使用或与其他化学治疗联用。
在本发明的另一实施方案中,本发明化合物可与基因治疗联合给予。文中所用“基因治疗”是指靶向参与肿瘤发展的特定基因的治疗。可能的基因治疗策略包括修复缺陷性肿瘤抑制基因、对应编码生长因子及其受体的基因的反义DNA的细胞转导或转染、基于RNA的策略如核酶、RNA诱饵、反义信使RNAs和小干扰RNA(siRNA)分子和所谓的′自杀基因′。
在本发明的另一实施方案中,本发明化合物可与免疫治疗联合给予。文中所用“免疫治疗”是指通过这些蛋白质的特异性抗体靶向参与肿瘤发展的特定蛋白质的治疗。例如在癌症治疗中已使用抗血管内皮生长因子单克隆抗体。
如果除本发明化合物外使用第二种药物,则两种药物可以任何顺序连续地、几乎在同一时间同时给予(例如以分割或整体组合物给药),或按分开给药方案给予。在后一情况中,两种化合物在一段时间内给予,并且所给的量和方式足以保证获得有效或协同作用。应当理解的是优选的给药方法和顺序以及联合给药的各成分的各自的剂量和方案将取决于与本发明化合物联用的具体化疗药、其给药途径、所治的具体肿瘤、所治的具体宿主。
如本领域普通技术人员所理解的,在适当的化疗药的剂量通常近似于或少于在临床治疗中已使用的剂量,其中化疗药单独给予或与其他化疗药联用。
本发明技术人员可容易地使用常规方法并考虑到文中所给信息确定给药的最佳方法和顺序、剂量和方案。
仅为示例,铂化合物最好以每平方米体表面积1-500mg(mg/m2)的剂量给予,例如50-400mg/m2,具体地顺铂每疗程以每疗程约75mg/m2和卡铂以每疗程约300mg/m2的剂量给予。顺铂口服不吸收,因此必须经静脉、皮下、瘤内或腹膜内注射给予。
仅为示例,紫杉烷化合物最好以每平方米体表面积50-400mg(mg/m2)的剂量给予,例如75-250mg/m2,具体地紫杉醇以每疗程约175-250mg/m2和多烯紫杉醇以每疗程约75-150mg/m2的剂量给予。
仅为示例,喜树碱化合物最好以每平方米体表面积0.1-400mg(mg/m2)的剂量给予,例如1-300mg/m2,具体地伊立替康以每疗程约100-350mg/m2和托泊替康以每疗程约1-2mg/m2的剂量给予。
仅为示例,长春花碱最好以每平方米体表面积2-30mg(mg/m2)的剂量给予,具体地长春碱每疗程以每疗程约3-12mg/m2,长春新碱以每疗程约1-2mg/m2,和长春瑞滨以每疗程约10-30mg/m2的剂量给予。
仅为示例,抗肿瘤核苷衍生物最好以每平方米体表面积200-2500mg(mg/m2)的剂量给予,例如700-1500mg/m2。5-氟尿嘧啶(5-FU)通常以200-500mg/m2(优选3-15mg/kg/天)的剂量范围静脉给予。吉西他滨最好以每疗程约800-1200mg/m2的剂量给予和卡培他滨最好以每疗程约1000-2500mg/m2的剂量给予。
仅为示例,烷化剂最好以每平方米体表面积100-500mg(mg/m2)的剂量给予,例如120-200mg/m2,具体地环磷酰胺以每疗程约100-500mg/m2的剂量,苯丁酸氮芥以每疗程约0.1-0.2mg/kg体重的剂量,卡莫司汀以每疗程约150-200mg/m2的剂量,和洛莫司汀以每疗程约100-150mg/m2的剂量给予。
仅为示例,鬼臼毒素衍生物最好以每平方米体表面积30-300mg(mg/m2)的剂量给予,例如50-250mg/m2,具体地依托泊苷以每疗程约35-100mg/m2的剂量和替尼泊苷以每疗程约50-250mg/m2的剂量给予。
仅为示例,蒽环类抗生素衍生物最好以每平方米体表面积10-75mg(mg/m2)的剂量给予,例如15-60mg/m2,具体地阿霉素以每疗程约40-75mg/m2的剂量,柔红霉素以每疗程约25-45mg/m2的剂量,伊达比星以每疗程约10-15mg/m2的剂量给予。
仅为示例,抗雌激素化合物最好以每天约1-100mg的剂量给予,这取决于具体的药物和所治病症。他莫昔芬最好以5-50mg、优选10-20mg的剂量每天两次口服给药,持续足够长时间的治疗来获得和保持治疗效果。托瑞米芬最好以约60mg的剂量每天一次口服给药,持续足够长时间的治疗来获得和保持治疗效果。阿那曲唑最好以约1mg的剂量每天一次口服给药。屈洛昔芬最好以约20-100mg的剂量每天一次口服给药。雷洛昔芬最好以约60mg的剂量每天一次口服给药。依西美坦最好以约25mg的剂量每天一次口服给药。
仅为示例,生物制品最好以每平方米体表面积约1-5mg(mg/m2)的剂量给予,或如有不同按本领域已知剂量给予。例如曲妥单抗最好以每疗程1-5mg/m2特别是2-4mg/m2的剂量给药。
剂量可例如每疗程一次、两次或多次给予,其可重复例如每7、14、21或28天。
本发明化合物可全身例如静脉、口服、皮下、肌内、皮内或胃肠道外给予受试者。本发明化合物还可局部给予受试者。局部给药系统的非限定性实例包括管腔内医疗器械(包括血管内给药导管、wires、药理学支架和腔内敷膜)的使用。本发明化合物还可联合靶向药物给予受试者以在靶位获得化合物的局部高浓度。此外,为保持所述药物或试剂与靶组织接触数小时至数星期,本发明化合物可制备成速释或缓释制剂。
本发明还提供了一种药物组合物,所述组合物包括式I化合物和药学上可接受的载体。所述药物组合物可含约0.1mg-1000mg、优选约100-500mg的化合物并且可制成适合所选给药方式的任何形式。
术语″药学上可接受的″是指当适当地给予动物、人时不产生有害、过敏或其他不良反应的分子实体和组合物。兽医上的使用同样包括在本发明范围内和″药学上可接受的″制剂包括临床和/或兽医使用的剂型。
载体包括必需和惰性的药学辅料,包括但不限于粘合剂、助悬剂、润滑剂、矫味剂、甜味剂、防腐剂、染料和包衣料。适宜口服给药的组合物包括固体形式如丸剂、片剂、锭剂、胶囊(各自包括立即释放、定时释放和持续释放剂型)、颗粒剂和散剂,和液体形式如溶液剂、糖浆剂、酏剂、乳剂和混悬剂。用于胃肠道外给药的形式包括无菌溶液、乳剂和混悬剂。
本发明的药物组合物还包括缓慢释放本发明化合物的药物组合物。所述组合物包括缓释的载体(通常为聚合物载体)和本发明的化合物。
缓释的生物可降解的载体为本领域众所周知。这些材料可形成包含一种或多种活性化合物的颗粒并在适宜的环境下(例如水性、酸性、碱性等)缓慢降解/溶解从而在体液中降解/溶解并在此处释放一种或多种活性化合物。这些颗粒优选为纳米微粒(即直径范围为约1-500nm,优选直径为约50-200nm,且最优选直径为约100nm)。
本发明还提供了制备本发明药物组合物的方法。作为活性成分的式I化合物按照常规的药物配制技术与药学载体充分混合,所述载体可采用的不同形式,这取决于给药(例如口服或胃肠道外如肌内给药)所需的剂型。在制备口服剂型的组合物中,可使用任何常用药物介质。因此,对于液体口服制剂(如混悬剂、酏剂和溶液剂),适宜的载体和添加剂包括水、乙二醇、油脂、醇类、矫味剂、防腐剂、着色剂等;对于固体口服制剂(如散剂、胶囊、锭剂、软胶囊和片剂),适宜的载体和添加剂包括淀粉、蔗糖、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。因为其易于给药,片剂和胶囊代表了最佳的口服剂量单位形式,在此种情况中明显地使用固体药学载体。如果需要,片剂可使用标准技术包糖衣或肠溶衣。对于胃肠道外给药,载体通常包括无菌水,虽然为了例如助溶或防腐还可包括其他成分。还可制备可注射混悬剂,在此种情况中可使用适当的液体载体、助悬剂等。对于缓释制剂,通常首先将缓释载体(通常为高分子的载体)和本发明的化合物溶解或分散在有机溶剂中。随后将得到的有机溶液加至水溶液中得到水包油型乳剂。优选所述水溶液包括一种或多种表面活性剂。接着将有机溶剂从水包油型乳剂中蒸发得到含缓释载体和本发明化合物的颗粒的胶状悬浮液。
文中药物组合物每剂量单位(例如片剂、胶囊、散剂、注射剂、一茶匙容量等)含释放上述有效量所必需的活性成分的量。文中药物组合物每剂量单位(例如片剂、胶囊、散剂、注射剂、栓剂、一茶匙容量等)含每天约0.01mg-200mg/kg体重。优选范围为每天约0.03-约100mg/kg体重,最优选范围为每天约0.05-约10mg/kg体重。所述化合物可按照每天1-5次的给药方案给予。但是,剂量可根据患者的需求、所治病症的严重程度和所使用的化合物变化。可使用每日给予或post-periodic给药。
优选这些组合物为对于口服、胃肠道外、鼻内、舌下或直肠给药,或对于吸入或吹入给药的剂量单位形式如片剂、丸剂、胶囊、散剂、颗粒剂、无菌注射用溶液剂或悬浮剂、计量气雾剂或液体喷雾剂、滴剂、安瓿、自动注射器装置或栓剂。或者,所述组合物可以适宜的一周一次或一月一次给药;可采用例如活性化合物的不溶盐如癸酸盐得到肌内注射的长效制剂。对于制备固体组合物(如片剂),将主要活性成分与药学载体混合形成含本发明化合物或其药学上可接受的盐的均质混合物的固体剂型,所述药学载体为例如常规片剂成分如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸二钙或树胶以及其他药学稀释剂如水。当谈及处方设计的组合物为均质时,这意味着活性成分均匀地分散在整个组合物中这样所述组合物可容易地分割为同等有效的剂型(如片剂、丸剂和胶囊)。随后将该固体处方设计的组合物分割成含0.1-约500mg本发明的活性成分的上述类型的剂型单位。新组合物的片剂或丸剂可包衣或混合,得到长效优势的剂型。例如所述片剂或丸剂可包含内部剂量成分和外部剂量成分,后者以外壳的形式覆于前者上。可通过用于抵抗胃内崩解的肠溶层将两成份分开并让内部成分完整地进入十二指肠或延迟释放。不同的材料可用于这些肠溶层或肠包衣,这些材料包括大量的高分子酸和材料如虫胶、乙酰基醇和醋酸纤维素。
用于口服或注射给药的可掺合式I化合物的液体形式包括水溶液,适当矫味的糖浆剂,水性或油性悬浮液和含食用油(如棉子油、芝麻油、椰子油或花生油)的矫味乳剂以及酏剂和类似的药学载体。用于水性悬浮液的适宜的分散剂或助悬剂包括合成和天然树胶如黄芪胶、阿拉伯胶、海藻酸盐、右旋糖酐、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或明胶。在适宜的矫味助悬剂或分散剂中液体形式还可包括合成和天然树胶如黄芪胶、阿拉伯胶、甲基纤维素等。对于胃肠道外给药,需要的是无菌混悬剂和溶液剂。当希望静脉给药时,则使用通常含适宜防腐剂的等渗制剂。
最好,式I化合物可以单次日剂量给予或可将总日剂量分为每日2、3或4次给予。此外,本发明化合物可以鼻内形式给药,经局部使用适宜的鼻内给药装置,或经本领域普通技术人员众所周知的经皮贴剂给药。为了以透皮释药系统的形式给药,当然在整个给药方案中剂量给予为持续而不是间断的。
比方说,对于以片剂或胶囊形式的口服给药,活性药物成分可与口服、无毒的药学上可接受的惰性载体如乙醇、丙三醇、水等混合。而且,如需要或必需,适宜的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂也可掺合在所述混合物中。适宜的粘合剂包括,但不限于淀粉、明胶、天然糖类(如葡萄糖或β乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成的树胶(如阿拉伯胶、黄芪胶)或油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括,但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、皂土、黄原胶等。
本发明产物的曰剂量可在每天1-5000mg/成人的宽范围内变化。对于口服给药,优选组合物为含0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100、150、200、250和500mg的活性成分的片剂形式,剂量根据所治疗患者的症状进行调节。药物的有效量通常为每天约0.01mg/kg-约200mg/kg体重的剂量水平。特别地,范围为每天约0.03-约15mg/kg体重,且更特别地,每天约0.05-约10mg/kg体重。本发明的化合物可按高达每天4次或更多次的给药方案给予,优选每天1-2次给予。
本领域技术人员可容易地确定给予的最佳剂量,并且该剂量将根据使用的具体化合物、给药方式、制剂浓度、给药方式和疾病症状进展变化。此外,与具体所治疗患者有关的因素(包括病人年龄、重量、食谱和给予时间)将导致调整剂量的需要。
本发明化合物还可以脂质体传递系统的形式给予,如小单室脂质体、大单室脂质体和多室脂质体。脂质体可由不同脂质形成,包括但不限于两性脂质如磷酸卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、心磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰肌醇、二酰基三甲基铵丙烷、二酰基二甲基铵丙烷和硬脂酰胺,中性脂质如甘油三酯,及其混合物。它们可包含胆固醇或可不含胆固醇。
本发明化合物还可局部给予。可使用任何给药装置,如血管内给药导管、wires、药理学支架和腔内敷膜。用于此种装置的给药系统可包括局部输注导管,其以给药者控制的速度传递药物。
本发明提供了一种包括管腔内医疗器械(优选支架)和治疗量的本发明化合物的释药装置。
术语“支架”是指能由导管输送的任何装置。支架常规用于防止由于身体异常(如外伤引起的血管组织不需要向内生长)导致的血管闭合。其通常具有适合留在管内腔减轻阻塞的管形、可展开的网格结构。支架具有接触内腔壁的表面和暴露内腔的表面。接触内腔壁的表面为管的外表面和暴露内腔的表面为管的内表面。所述支架可为聚合体、金属或聚合体和金属,且其可任选为生物可降解的。
通常,支架以非展开的形式插入内腔,随后自动或在另一装置的帮助下原位展开。膨胀的一般方法通过使用包埋有导管的血管形成术气囊,为使与血管壁组分有关的梗阻物断裂和破碎并得到扩大的内腔该气囊在狭窄血管或体内通道(body passageway)内膨胀。还可使用如U.S.6,776,796(Falotico等)中所述自动展开支架。支架与防止炎症和增殖的药物、试剂或化合物的复合体可提供对血管形成术后再狭窄最有效的治疗。
本发明化合物可以众多方法并采用任何数量的生物相容性材料掺合至支架或附着在支架上。在一示例性实施方案中,所述化合物直接掺合至高分子基质中,如聚合物多吡咯,随后将其涂覆在支架外表面。所述化合物扩散通过聚合物从基质中释出。本领域详细介绍了支架和涂覆药物在支架上的方法。在另一示例性实施方案中,支架首先涂覆含所述化合物、乙烯-共-醋酸乙烯酯和聚甲基丙烯酸丁酯的溶液的基底层。随后,支架进一步涂覆仅含聚甲基丙烯酸丁酯的外层。外层作为扩散屏障来防止化合物释放过快和进入外围组织。外层或外涂层的厚度决定了所述药物从基质中释放的速度。在WIPO公布号WO9632907、U.S.公布号2002/0016625以及其中公开的参考文献中详细介绍了支架和涂覆方法。
本发明化合物和生物相容性材料/聚合物的溶液可以众多方式掺合在支架中或结合在支架上。例如将所述溶液喷在支架上或可将支架浸入所述溶液中。在一优选实施方案中,将所述溶液喷在支架上随后干燥。在另一示例性实施方案中,可将所述溶液电荷在一极上并将支架电荷在相反一极上。在该方法中,所述溶液和支架相互吸引。在使用该种喷涂方法中,可减少浪费并可获得更易控制的涂覆厚度。化合物优选为仅附着在接触一组织的支架的外表面。但是,对于一些化合物,可涂覆整个支架。支架所用化合物的剂量和控制药物释放聚合物涂层均对药物有效性为重要的。所述化合物优选在支架上保持至少3天至高达约6个月或更多,优选7-30天。
任何数量的非可侵蚀性生物相容性聚合物可与本发明化合物联用。重要的是不同的支架可使用不同的聚合物。例如上述乙烯-共-乙酸乙烯酯和聚甲基丙烯酸丁酯基质与不锈钢支架配合良好。其他聚合物可与其他材料(包括表现超弹性质的材料如镍钛合金)的形成的支架更有效地使用。
再狭窄对于冠状动脉形成术后显著的发病率和死亡率负有责任。再狭窄发生经过包括弹性回缩、血栓形成、内膜增生和细胞外基质重塑的四进程。最近几种生长因子被确定为在导致再狭窄进程中起一定作用。(见Schiele TM等,2004,“Vascular restenosis-striving fortherapy(血管再狭窄-striving for therapy)”,Expert Opin Pharmacother,5(11):2221-32)。以及TrkB配体BDNF和神经营养因子以及TrkB由血管平滑肌细胞和上皮细胞表达(见Ricci A等,2003,“Neurotrophins and neurotrophin receptors in human pulmonaryarteries(在人肺动脉中的神经营养因子和神经营养因子受体)”,J VascRes,37(5):355-63;还见Kim H等,2004,“Paracrine and autocrinefunctions of brain-derived neurotrophic factor(BDNF)and nerve growthfactor(NGF)in brain-derived endothelial cells(在脑源性上皮细胞中的脑源性神经生长因子(BDNF)和神经生长因子的旁分泌和自分泌功能)”,J Biol Chem,279(32):33538-46)。此外,TrkB可在外周血管生成和内膜增生中起作用因其能抑制失巢凋亡现象和抑制延长细胞存活(见Douma S等,2004年,“Suppression of anoikis and inductionof metastasis by the neurotrophic receptor TrkB(神经营养因子受体TrkB对失巢凋亡现象和转移诱导的抑制)”,Nature,430(7003):1034-9)。因此,在冠状动脉血管形成术中和后使用涂层支架抑制TrkB为一有效的治疗策略。
因此,本发明提供了一种治疗受试者所患与TrkB有关病症(包括血管壁中再狭窄、内膜增生或炎症)的方法,所述方法包括给予受试者治疗有效量的本发明化合物,所述化合物通过管腔内医疗器械如支架控制释放。
体内腔引入支架的方法为众所周知并且本发明的涂有所述化合物的支架优选使用导管引入。如本领域普通技术人员所理解的,方法将基于支架植入的部位微有变化。对于冠状支架植入,将带有支架的气囊式导管插入冠状动脉并将支架放置在所需位置。气囊膨胀,将支架展开。当支架展开,支架接触内腔壁。一旦支架定位,将气囊泄气并除去。支架保持载有所述化合物的内腔接触表面直接与内腔壁表面直接接触的位置。支架植入如需要可与抗凝结治疗联用。
在本发明支架中使用的药物释放的最佳条件可因所用不同的局部释药系统以及所用化合物的性质和浓度而变化。可优化的条件包括例如化合物浓度、释药体积、释药速率、血管壁厚度、邻近膨胀压、齿孔数量和大小以及药物释放导管气囊适合度。可优化在损伤部位抑制平滑肌细胞增殖的条件,这样不发生由于再狭窄而显著性的动脉阻塞,如测定的,例如通过平滑肌细胞增殖能力,或通过血管阻力或内腔直径的改变。最佳条件可基于动物模型研究数据使用常规计算方法确定。
给予本发明化合物的其他可选择方法可通过将所述化合物与靶向药物结合,所述靶向药物靶向共轭物至预期的作用位点即血管上皮细胞或肿瘤细胞。可使用抗体或非抗体靶向药物。由于靶向药物与相应的结合对象的特异性相互作用,本发明化合物可在或靠近靶位处高局部浓度给予并因此在靶位上更有效地治疗所述疾病。
抗体靶向药物包括抗体或其抗原结合片断,其结合肿瘤细胞、肿瘤脉管系统或或肿瘤间质的可靶向或可进入的成分。肿瘤细胞、肿瘤脉管系统或或肿瘤间质的″可靶向或可进入的成分″优选为表面表达的、表面可进入的或表面定位的成分。抗体靶向药物还包括抗体或其抗原结合片断,其结合由坏死肿瘤细胞释放的细胞内成分。优选这些抗体为单克隆抗体或其抗原结合片断,其结合一种或多种在可诱导可渗透的细胞中或在基本上所有的肿瘤和正常细胞的cell ghosts中存在的,但在哺乳动物正常活细胞外部不存在或不可进入的不溶性细胞内抗原。
文中所用术语“抗体”广泛地指任何免疫结合剂如IgG、IgM、IgA、IgE、F(ab’)2,单价片断如Fab’、Fab、Dab以及基因工程抗体如重组抗体、人化抗体、双特异性抗体等。所述抗体可为多克隆或单克隆,虽然优选单克隆。本领域已知的对任何实体瘤类型的细胞表面具有免疫特异性的抗体的范围很广泛(见授权给Thorpe等的US专利号5,855,866中Summary Table on monoclonal antibodies for solidtumors(实体瘤的单克隆抗体的概括表))。制备和分离抗肿瘤抗体的方法为本领域技术人员所已知。(见授权给Thorpe等的US专利号5,855,866,和授权给Thorpe等的US专利号6,34,2219)。
治疗部分共轭结合抗体的技术为众所周知(见例如Amon等,″Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In CancerTherapy(肿瘤治疗中药物免疫靶向的单克隆抗体)″,MonoclonalAntibodies And Cancer Therapy,Reisfeld等编辑,第243-56页(AlanR.Liss,Inc.1985);Hellstrom等,″Antibodies For Drug Delivery(用于药物传递的抗体)″,Controlled Drug Delivery(第二版),Robinson等编辑,第623-53页(Marcel Dekker,Inc.1987);Thorpe,″AntibodyCarriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review(在癌症治疗中细胞毒素剂的抗体载体的综述)″,Monoclonal Antibodies′84:Biological And Clinical Applications,Pinchera等编辑,第475-506页(1985))。还可使用类似的技术将本发明化合物与非抗体靶向药物连接。本领域技术人员将知道或能确定与非抗体靶向药物如小分子、低聚肽、多糖或其他聚阴离子化合物形成共轭物的方法。
虽然任何在血液中能适度稳定的结合部分都可用于将本发明化合物与靶向药物连接,但是优选生物学上可释放的键和/或选择性可裂解的间隔基或连接键。“生物学可释放键”和“选择性可裂解的间隔基或连接键”在循环中仍具有适当的稳定性,但仅或优先地在某些条件下即在某种环境中或在与特定的试剂的接触中为可释放的、可裂解的或可水解。这些键包括例如U.S.专利号5,474,765和5,762,918中所述的二硫键和三硫键和酸敏感键和包括U.S.专利号5,474,765和5,762,918中所述的肽键、酯键、酰胺键、磷酸二酯键和苷键。这些选择性释放设计的特征促使所述化合物在预期靶位从结合物中持续释放。
本发明提供了一种药物组合物,所述组合物包括有效量的与靶向药物结合的本发明化合物和药学上可接受的载体。
本发明还包括一种治疗与FLT3和/或c-kit和/或TrkB有关的病症(特别是肿瘤)的方法,所述方法包括给予受试者治疗有效量的与靶向药物结合的式I化合物。
当蛋白质如抗体或生长因子或多糖用作靶向药物时,它们优选以可注射组合物形式给予。可注射抗体溶液经2分钟至约45分钟,优选10-20分钟注射进入静脉、动脉或脊髓液。在某些情况中,皮内和腔内给予最好用于限制在靠近皮肤特定的区域和/或特定的体腔的肿瘤。此外,鞘内给予可用于位于脑内的肿瘤。
与靶向药物结合的本发明化合物的治疗有效剂量取决于个体、疾病类型、疾病状况、给予方法和其他临床变量。使用获自动物模型的数据可容易地确定有效剂量。在转为临床实验前,荷有实体瘤的试验动物经常用于优化适当的治疗剂量。已知这些模型在预测有效抗癌策略中是相当可靠的。例如荷有实体瘤的小鼠被广泛用于临床前试验来确定具有抗肿瘤作用并最小毒性治疗药的工作范围。
为阐述本发明虽然以上说明书通过提供实例指出了本发明的原则,但应理解的是本发明的实施包括在以下权利要求及其等价物的范围内的所有通常的变化、调整和/或修正。
Claims (72)
1.一种下式I化合物及其氮氧化物、药学上可接受的盐、溶剂化物、几何异构体和立体化学异构体:
其中:
r为1或2;
Z为NH、N(烷基)或CH2;
B为苯基、杂芳基或9-10元苯稠合杂芳基;
R1为:
其中n为1、2、3或4;
Ra为氢、烷氧基、苯氧基、苯基、任选被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选被R5取代的唑烷酮基、任选被R5取代的吡咯烷酮基、任选被R5取代的哌啶酮基、任选被R5取代的杂环二酮基、任选被R5取代的杂环基、-COORy、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SRy、-SORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-NRwSO2Rx、-SO3Ry、-OSO2NRwRx或-SO2NRwRx;
Rw和Rx独立地选自:氢、烷基、烯基、芳烷基或杂芳烷基,或Rw和Rx可任选一起形成任选含选自O、NH、N(烷基)、SO2、SO或S的杂部分的5-7元环;
Ry选自:氢、烷基、烯基、环烷基、苯基、芳烷基、杂芳烷基或杂芳基;
R5为1、2或3个独立选自以下基团的取代基:卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基、-C(1-4)烷基-OH或烷基氨基;和
R3为一个或多个独立选自以下基团的取代基:氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、硫基、硝基、任选被R4取代的环烷基、任选被R4取代的杂芳基、烷基氨基、任选被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选被R4取代的吡咯烷酮基、任选被R4取代的苯氧基、-CN、-OCHF2、-OCF3、-CF3、卤代烷基、任选被R4取代的杂芳氧基、二烷基氨基、-NHSO2烷基、硫代烷基或-SO2烷基;其中R4独立地选自:卤素、氰基、三氟甲基、氨基、羟基、烷氧基、-C(O)烷基、-CO2烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基或烷基氨基。
3.权利要求2的化合物,其中B为苯基或杂芳基。
4.权利要求1的化合物,其中B为苯基或杂芳基。
5.权利要求4的化合物,其中Z为NH或CH2;和R3为一个或多个独立选自以下基团的取代基:氢、烷基、烷氧基、卤素、烷氧基醚、羟基、任选被R4取代的环烷基、任选被R4取代的杂芳基、任选被R4取代的杂环基、-O(环烷基)、任选被R4取代的苯氧基、任选被R4取代的杂芳氧基、二烷基氨基或-SO2烷基。
6.权利要求5的化合物,其中Ra为氢、烷氧基、任选被R5取代的杂芳基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、任选被R5取代的唑烷酮基、任选被R5取代的吡咯烷酮基、任选被R5取代的杂环基、-CONRwRx、-N(Rw)CON(Ry)(Rx)、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)、-N(Rw)C(O)ORx、-N(Rw)CORy、-SO2Ry、-NRwSO2Ry或-SO2NRwRx。
7.权利要求6的化合物,其中r为1;Ra为氢、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、杂芳基、任选被R5取代的杂环基、-CONRwRx、-SO2Ry、-NRwSO2Ry、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)或-N(Rw)C(O)ORx;R5为一个独立选自-C(O)烷基、-SO2烷基、-C(O)N(烷基)2、烷基或-C(1-4)烷基-OH的取代基;和R3为一个独立选自烷基、烷氧基、卤素、环烷基、杂环基、-O(环烷基)、苯氧基或二烷基氨基的取代基。
8.权利要求7的化合物,其中B为苯基或吡啶基;Ra为氢、二烷基氨基、任选被R5取代的杂环基、-CONRwRx、-N(Ry)CON(Rw)(Rx)或-NRwSO2Ry;和R3为一个独立选自烷基、烷氧基、杂环基、环烷基或-O(环烷基)的取代基。
11.一种药物组合物,所述组合物包含权利要求1-10的化合物和药学上可接受的载体。
12.作为药物的权利要求1-10中任一项的化合物。
13.权利要求1-10中任一项的化合物在制备治疗细胞增殖性病症药物中的用途。
14.一种降低细胞中FLT3激酶活性的方法,所述方法包括使所述细胞与权利要求1-10的化合物接触的步骤。
15.一种抑制细胞中FLT3激酶活性的方法,所述方法包括使所述细胞与权利要求1-10的化合物接触的步骤。
16.一种降低细胞中TrkB激酶活性的方法,所述方法包括使所述细胞与权利要求1-10的化合物接触的步骤。
17.一种抑制细胞中TrkB激酶活性的方法,所述方法包括使所述细胞与权利要求1-10的化合物接触的步骤。
18.一种降低细胞中c-Kit激酶活性的方法,所述方法包括使所述细胞与权利要求1-10的化合物接触的步骤。
19.一种抑制细胞中c-Kit激酶活性的方法,所述方法包括使所述细胞与权利要求1-10的化合物接触的步骤。
20.一种降低受试者中FLT3激酶活性的方法,所述方法包括给予所述受试者权利要求1-10的化合物的步骤。
21.一种抑制受试者中FLT3激酶活性的方法,所述方法包括给予所述受试者权利要求1-10的化合物的步骤。
22.一种降低受试者中TrkB激酶活性的方法,所述方法包括给予所述受试者权利要求1-10的化合物的步骤。
23.一种抑制受试者中TrkB激酶活性的方法,所述方法包括给予所述受试者权利要求1-10的化合物的步骤。
24.一种降低受试者中c-Kit激酶活性的方法,所述方法包括给予所述受试者权利要求1-10的化合物的步骤。
25.一种抑制受试者中c-Kit激酶活性的方法,所述方法包括给予所述受试者权利要求1-10的化合物的步骤。
26.一种预防受试者所患与FLT3有关的病症的方法,所述方法包括给予受试者预防有效量的包含权利要求1-10的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
27.一种预防受试者所患与TrkB有关的病症的方法,所述方法包括给予受试者预防有效量的包含权利要求1-10的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
28.一种预防受试者所患与c-Kit有关的病症的方法,所述方法包括给予受试者预防有效量的包含权利要求1-10的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
29.一种治疗受试者所患与FLT3有关的病症的方法,所述方法包括给予受试者治疗有效量的包含权利要求1-10的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
30.一种治疗受试者所患与TrkB有关的病症的方法,所述方法包括给予受试者治疗有效量的包含权利要求1-10的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
31.一种治疗受试者所患与c-Kit有关的病症的方法,所述方法包括给予受试者治疗有效量的包含权利要求1-10的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
32.权利要求26的方法,所述方法还包括给予化疗药。
33.权利要求26的方法,所述方法还包括给予基因治疗。
34.权利要求26的方法,所述方法还包括给予免疫治疗。
35.权利要求26的方法,所述方法还包括给予放射治疗。
36.权利要求27的方法,所述方法还包括给予化疗药。
37.权利要求27的方法,所述方法还包括给予基因治疗。
38.权利要求27的方法,所述方法还包括给予免疫治疗。
39.权利要求27的方法,所述方法还包括给予放射治疗。
40.权利要求28的方法,所述方法还包括给予化疗药。
41.权利要求28的方法,所述方法还包括给予基因治疗。
42.权利要求28的方法,所述方法还包括给予免疫治疗。
43.权利要求28的方法,所述方法还包括给予放射治疗。
44.权利要求29的方法,所述方法还包括给予化疗药。
45.权利要求29的方法,所述方法还包括给予基因治疗。
46.权利要求29的方法,所述方法还包括给予免疫治疗。
47.权利要求29的方法,所述方法还包括给予放射治疗。
48.权利要求30的方法,所述方法还包括给予化疗药。
49.权利要求30的方法,所述方法还包括给予基因治疗。
50.权利要求30的方法,所述方法还包括给予免疫治疗。
51.权利要求30的方法,所述方法还包括给予放射治疗。
52.权利要求31的方法,所述方法还包括给予化疗药。
53.权利要求31的方法,所述方法还包括给予基因治疗。
54.权利要求31的方法,所述方法还包括给予免疫治疗。
55.权利要求31的方法,所述方法还包括给予放射治疗。
56.一种治疗受试者所患细胞增殖性病症的方法,所述方法包括通过管腔内医疗器械控制释放给药,给予受试者治疗有效量的权利要求1-10的化合物。
57.一种治疗受试者所患与FLT3有关的病症的方法,所述方法包括通过管腔内医疗器械控制释放给药,给予受试者治疗有效量的权利要求1-10的化合物。
58.一种治疗受试者所患与TrkB有关的病症的方法,所述方法包括通过管腔内医疗器械控制释放给药,给予受试者治疗有效量的权利要求1-10的化合物。
59.一种治疗受试者所患与c-Kit有关的病症的方法,所述方法包括通过管腔内医疗器械控制释放给药,给予受试者治疗有效量的权利要求1-10的化合物。
60.权利要求56的方法,其中所述管腔内医疗器械包括支架。
61.权利要求57的方法,其中所述管腔内医疗器械包括支架。
62.权利要求58的方法,其中所述管腔内医疗器械包括支架。
63.权利要求59的方法,其中所述管腔内医疗器械包括支架。
64.一种药物组合物,所述组合物包含有效量的与靶向药物结合的权利要求1-10的化合物和药学上可接受的载体。
65.一种治疗细胞增殖性病症的方法,所述方法包括给予受试者治疗有效量的与靶向药物结合的权利要求1-10的化合物。
66.一种治疗与FLT3有关的病症的方法,所述方法包括给予受试者治疗有效量的与靶向药物结合的权利要求1-10的化合物。
67.一种治疗与TrkB有关的病症的方法,所述方法包括给予受试者治疗有效量的与靶向药物结合的权利要求1-10的化合物。
68.一种治疗与c-Kit有关的病症的方法,所述方法包括给予受试者治疗有效量的与靶向药物结合的权利要求1-10的化合物。
69.一种联合药物,所述联合药物包含化疗药和权利要求1-10中任一项的化合物。
72.一种药物组合物,所述组合物包含用权利要求70-71的方法制备的产物。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20080813 |