ES2535521T3 - Composición farmacéutica - Google Patents

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende a. oxitocina (SEQ ID NO:1), y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma según SEQ ID NO:2, así como sales de la misma farmacéuticamente aceptables; y b. al menos un éter de celulosa no iónico; en donde SEQ ID NO:2 es X1-X2-X3-X4-Asn-Cys-X5-X6-X7-X8-NH2 en donde X1 se selecciona del grupo que consiste en Cys, y nada; X2 se selecciona del grupo que consiste en Tyr, Phe, y nada; X3 se selecciona del grupo que consiste en Ile, Val, Hoph, Phe, Cha, y nada; X4 se selecciona del grupo que consiste en Gln, Ser, Thr, Cit, Arg y Daba; X5 se selecciona del grupo que consiste en Pro y nada; X6 se selecciona del grupo que consiste en Ile, Leu, nada, Val, Hos, Daba, Thr, Arg y Cit; X7 se selecciona del grupo que consiste en Gly, nada, y Ala; X8 se selecciona del grupo que consiste en Gly y nada; en donde dicha composición farmacéutica tiene un pH dentro del intervalo entre 3 y 4, con la condición de que dicha variante de oxitocina no sea vasopresina (SEQ ID NO:7).

Description

DESCRIPCIÓN

Composición farmacéutica

Campo de la invención

La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas basadas en éteres de celulosa no iónicos, y más específicamente a tales composiciones farmacéuticas que comprenden oxitocina, y/o fragmentos y/o variantes de la 5 misma, como se describe en la presente memoria, teniendo dichas composiciones farmacéuticas una estabilidad mejorada. La oxitocina es un polipéptido natural bien conocido en la técnica que posee varias aplicaciones terapéuticas, como en el tratamiento de trastornos y cánceres en el climaterio, especialmente condiciones pre-cancerosas, asociadas con ellos.

Antecedentes 10

La oxitocina fue una de las primeras hormonas peptídicas en ser aislada y secuenciada. Es un nonapéptido con dos restos de cisteína que forman un puente disulfuro entre las posiciones 1 y 6 y tiene por fórmula

Oxitocina (SEQ ID NO: 1)

Durante mucho tiempo los únicos efectos atribuidos a la oxitocina fueron sus efectos estimulantes sobre la eyección 15 de la leche y las contracciones uterinas, pero en las últimas décadas se ha demostrado que la oxitocina ejerce un amplio espectro de efectos dentro del sistema nervioso central, SNC. Se ha sugerido que la oxitocina participa en el control de los procesos de memoria y aprendizaje y de varios tipos de comportamientos tales como la alimentación, locomoción, así como el comportamiento maternal y sexual. También se sugiere que la oxitocina participa en el control de las funciones cardiovasculares, termorregulación, umbral del dolor y equilibrio de fluidos, así como en la 20 cicatrización de las heridas. Hay evidencia también de que la oxitocina está involucrada en el control de varios procesos inmunológicos. Se ha demostrado también que las inyecciones de oxitocina provocan una disminución de la presión sanguínea y un aumento de peso con efectos duraderos tras administración repetitiva. Como sustancia estimulante central, la oxitocina desempeña una función importante en la interacción entre la madre y su progenie en mamíferos. Los productos también se pueden usar como profilácticos en seres humanos jóvenes, por ejemplo, ya en 25 los recién nacidos o en niños pequeños para prevenir el desarrollo de enfermedades más adelante en la vida, enfermedades que dependen de las condiciones de estrés durante la vida fetal. Tales afecciones pueden ser enfermedades de corazón/vasos sanguíneos tales como derrame cerebral, infarto cardiaco, hipertensión y diabetes. En el cuerpo humano la oxitocina se produce en el núcleo paraventricular, NPV, y en el núcleo supraóptico, NSO, del hipotálamo. Se diferencia en solamente dos aminoácidos de la vasopresina, la cual se produce también en estos 30 núcleos. Las neuronas magnocelulares oxitocinérgicas del NSO y NPV envían axones a la pituitaria posterior desde la cual se libera la oxitocina a la circulación. Las neuronas parvocelulares que se originan en el NPV se proyectan hacia múltiples áreas dentro del SNC. Las células productoras de oxitocina están inervadas por neuronas colinérgicas, catecolaminérgicas, serotoninérgicas además de peptidérgicas. Se ha demostrado la presencia de oxitocina en diferentes tejidos fuera del cerebro, como el útero, ovarios, testículos, timo, médula adrenal y páncreas 35 y se sugiere que la oxitocina ejerce efectos locales en estos órganos. Existe una secreción paralela de oxitocina en las regiones del cerebro y en la circulación en respuesta a algunos estímulos tales como la succión, sin embargo otros estímulos pueden causar la activación separada de neuronas oxitocinérgicas que terminan en el cerebro o en la pituitaria.

Los éteres de celulosa se nombran después, y están basados en celulosa que es un material renovable y el 40 compuesto químico de naturaleza orgánica más común. Hay una amplia gama de éteres de celulosa disponibles en el mercado, tanto iónicos y no iónicos, por ejemplo carboximetilcelulosa sódica, hidroxietiletilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxietilmetilcelulosa e hidroxipropilmetilcelulosa.

Los éteres de celulosa se usan como aditivos en aplicaciones tan diversas como alimentación, pintura, recuperación del petróleo, papel, cosméticos, medicamentos, adhesivos, impresión, agricultura, cerámicas, textiles, detergentes y 45 materiales de construcción. Los éteres de celulosa mejoran la calidad del producto en estas aplicaciones y actúan como espesantes, agentes de retención de agua, asistentes de suspensión, coloides protectores, formadores de película o termoplásticos en productos tan diversos como pinturas de dispersión, lodos de perforación, helados, revestimiento de comprimidos, pasta de papel y adhesivo de baldosas.

Los éteres de celulosa no iónicos tales como metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa (también conocido como 50 hipromelosa) y metilhidroxietilcelulosa, se usan ampliamente en la industria farmacéutica debido a su capacidad de espesar, unir y retener agua, además de emulsionar y suspender partículas y formar películas. Se puede encontrar más información sobre éteres de celulosa no iónicos por ejemplo en WO92/09307.

La estructura peptídica de la oxitocina la hace vulnerable a la degradación y se trata de un hecho bien conocido el que las composiciones farmacéuticas que comprenden oxitocina deben ser almacenadas en un ambiente frío (alrededor de 4ºC) para evitar una degradación y/o agregación substancial perdiendo de este modo su función biológica. Por ejemplo, según se recomienda Syntocinon® (Novartis), una disolución acuosa concentrada de oxitocina para inyección/infusión, debe mantenerse normalmente a 2-8ºC. La fecha de caducidad a 25ºC para este 5 producto se limita a 3 meses. Otro ejemplo es Syntocinon® espray nasal, el cual también debe ser almacenado a 2-8ºC. Estas formulaciones acuosas comprenden tampones, conservantes, ácidos, sal, co-disolventes y otros aditivos solubles en agua pero no agentes gelificantes.

Formulaciones previas con oxitocina que comprenden el agente iónico gelificante carboximetilcelulosa (CMC) sódica se han demostrado que no proporcionan un ambiente adecuado para la oxitocina. Esto se ilustra por ejemplo en la 10 sección experimental de la presente solicitud.

Por consiguiente, en vista de los problemas asociados con las composiciones farmacéuticas anteriores que comprenden oxitocina, hay una necesidad en la técnica de superar o al menos mitigar alguna de las desventajas en la técnica proporcionando composiciones farmacéuticas en donde se mejore la estabilidad de la oxitocina. Tales composiciones farmacéuticas facilitarán un almacenamiento más conveniente, tal como a temperatura ambiente, y 15 también debe conservar su actividad biológica durante un periodo de tiempo más largo.

Compendio de la invención

Los problemas planteados aquí arriba ahora se han resuelto mediante la presente invención, la cual se explica adicionalmente en esta memoria.

Por consiguiente, la presente invención se refiere a nuevas composiciones farmacéuticas que comprenden oxitocina, 20 y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma como se describe en esta memoria, además de sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, y al menos un éter de celulosa no iónico, como se describe en esta memoria, en donde dicha composición farmacéutica tiene un pH dentro del intervalo entre 3 y 4.

Sorprendentemente se ha demostrado que el éter de celulosa no iónico neutro, tal como hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), mejora significativamente la estabilidad de la oxitocina en una composición farmacéutica, proporcionando 25 de este modo una composición farmacéutica excelente para uso farmacéutico. Por consiguiente, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden oxitocina (SEQ ID NO:1), y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma según SEQ ID NO:2, o como se define de otro modo en esta memoria, además de sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y al menos un éter de celulosa no iónico tal como hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC). 30

El efecto estabilizante del éter de celulosa no iónico está además apoyado por dicha composición farmacéutica que posee un pH bajo, tal como dentro del intervalo entre alrededor de 3 y 4, tal como dentro del intervalo entre alrededor de 3 y 3,5. Esto hará que sea posible almacenar la oxitocina a temperatura ambiente durante periodos de tiempo más largos que los previamente posibles, cuando se encuentra presente en tal composición farmacéutica. Un ambiente favorable para el péptido de oxitocina en tal composición farmacéutica también debería repercutir 35 positivamente en su actividad biológica mejorando de este modo su efecto terapéutico porque está presente más sustancia biológicamente activa en la misma a lo largo del tiempo.

Por tanto, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden oxitocina (SEQ ID NO:1), y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma según SEQ ID NO:2, además de sales de la misma farmacéuticamente aceptables y al menos un éter de celulosa no iónico, tal como hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), 40 teniendo dicha composición farmacéutica un pH dentro del intervalo entre alrededor de 3 y 4, tal como alrededor de 3 y 3,5, o si no como se ejemplifica en esta memoria, en donde se ha mejorado la estabilidad de la oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma, con la condición de que dicha variante de oxitocina no sea vasopresina (SEQ ID NO:7). No se conocía previamente, y es muy deseable, la capacidad de un éter de celulosa no iónico, tal como HPMC, de estabilizar la oxitocina, ya que había una necesidad percibida desde hace tiempo en la 45 técnica de disponer de composiciones farmacéuticas que comprenden oxitocina que no siempre necesiten ser almacenadas en un ambiente frío, y las cuales son de ese modo más fáciles de manejar.

La presente invención también se refiere a los usos médicos de una composición farmacéutica como se describe en esta memoria, tal como en el tratamiento de la atrofia vaginal. Por tanto, en otros aspectos de la presente invención también se refiere al uso de oxitocina, y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma y al menos un éter de 50 celulosa no iónico como se describe en esta memoria, en la fabricación de un medicamento, teniendo dicho medicamento un pH dentro del intervalo entre alrededor de 3 y 4 para el tratamiento de un trastorno del climaterio, tal como la atrofia vaginal. Además, la invención se refiere a un método para la preparación de dicha composición farmacéutica.

Descripción detallada

Definiciones

Cada vez que se hace referencia en la presente memoria a “oxitocina”, “péptido de oxitocina” y/o “molécula de oxitocina”, esto incluye oxitocina (SEQ ID NO:1) y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma como en esta memoria se define según la fórmula general SEQ ID NO:2, o cualquier otra variante y/o fragmento como se menciona en esta memoria, además de análogos y/o homólogos de la misma, con la condición de que dicha variante 5 de oxitocina no sea vasopresina (SEQ ID NO:7). Cada vez que se contemple un fragmento, variante u homólogo de una molécula/péptido de oxitocina se ha de entender que tal variante, fragmento u homólogo engloba una actividad biológica comparable a la molécula de oxitocina en sí misma (SEQ ID NO:1). Como ejemplo, se puede demostrar que una sustancia posee actividad de oxitocina mediante la realización de pruebas que muestran la actividad de la sustancia real, p. ej. mediante la realización de un protocolo aleatorio de doble ciego cruzado como se describe en 10 WO0178758 (Ejemplo 1).

Por consiguiente, una “variante” de oxitocina como se menciona en la presente memoria, se refiere a un péptido que ha sido modificado en su estructura de aminoácidos en comparación con la molécula de oxitocina en que algunas posiciones de aminoácidos, pueden haber sido alteradas mediante la introducción de otros aminoácidos en tales posiciones, tales como aminoácidos naturales o no naturales como se ejemplifica en esta memoria, o puede haber 15 sido alargado añadiendo uno o más aminoácido(s) natural(es) o no natural(es) a cualquiera de los extremos del péptido. Además, también se pueden haber realizado otras variaciones estructurales en los péptidos presentes como se menciona en la presente memoria, tales como modificaciones sintéticas. Dicha “variante” aún mantiene una actividad biológica similar a la oxitocina y dicha variante de oxitocina también se estabiliza estando presente en una composición farmacéutica según la presente invención. 20

Es más, un “fragmento” de oxitocina, como se menciona en la presente memoria es un péptido que comprende una parte de la secuencia de aminoácidos de la oxitocina, pero en donde uno o más aminoácidos pueden haber sido eliminados de uno o ambos extremos amino terminales. Este término también se refiere a un fragmento de una variante de oxitocina como se define en SEQ ID NO:2, lo que significa por tanto que también está abarcado en la presente invención cualquier fragmento de un péptido presentado en SEQ ID NO:2. 25

Un “agente regulador del pH” es cualquier agente, tal como un agente líquido, tal como un líquido acuoso, que es capaz de regular y/o mantener el pH de dicha composición farmacéutica, en donde dicho pH se mantiene aproximadamente en un intervalo seleccionado, cuyo intervalo seleccionado se ejemplifica en esta memoria. Tal agente regulador del pH puede ser, por ejemplo, un tampón, tal como un tampón citrato, lactato o fosfato. Un “tampón” es un compuesto iónico, generalmente una sal de un ácido o base débil, añadido a una disolución para 30 resistir los cambios en su acidez o alcalinidad y estabilizar así su pH. Una disolución tampón es una disolución que contiene tal compuesto. Otros ejemplos de agentes reguladores del pH son ácidos y bases orgánicos e inorgánicos, tales como el ácido acético, ácido cítrico, ácido fosfórico, ácido clorhídrico e hidróxido sódico.

Se sabe que la oxitocina sufre problemas debido a la degradación y/o agregación que hacen que sea preferible almacenar las composiciones farmacéuticas que comprenden oxitocina en un ambiente frío para evitar que pierda su 35 actividad biológica. Sorprendentemente, ahora se ha demostrado que es posible preparar composiciones farmacéuticas que comprenden oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma, como se ilustra en SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2, con estabilidad mejorada mediante la utilización de al menos un éter de celulosa no iónico como portador de dicha molécula de oxitocina, en combinación con un pH bajo. Por consiguiente, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden oxitocina (SEQ ID NO:1), y/o uno o más 40 fragmento(s) y/o variante(s) de la misma según SEQ ID NO:2, o como se defina de otro modo en la presente memoria, con la condición de que dicha variante de oxitocina no sea vasopresina (SEQ ID NO:7), además de sales de la misma farmacéuticamente aceptables y al menos un éter de celulosa no iónico, tal como hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC).

Cuando se hace referencia a una estabilidad mejorada de dicha composición farmacéutica, es la estabilidad de la 45 sustancia biológica, esto es, oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma, como se define en la presente memoria, la que es mejorada. Por lo tanto, de otra manera, debe mejorarse la actividad biológica y el efecto terapéutico de la composición farmacéutica presentada en esta memoria, evitando demasiada degradación y/o agregación, u otros cambios estructurales de la sustancia oxitocina.

Sin estar ligado a una teoría específica, el éter de celulosa no iónico, que es una molécula sin carga, parece 50 estabilizar la molécula de oxitocina evitando con ello interferencias innecesarias, esto es, con dicha molécula de oxitocina. Además, el uso de un pH adecuado, tal como un pH dentro del intervalo entre alrededor de 3 y 4, tal como dentro del intervalo entre alrededor de 3 y 3,5, contribuye aún más al efecto estabilizador del éter de celulosa no iónico sobre la oxitocina. Por lo tanto, otra vez sin desear estar ligado a una teoría específica, el pH bajo parece no solamente estabilizar la oxitocina misma, sino que es también favorable para la parte del éter de celulosa no iónico 55 de la composición.

En combinación, esto proporciona una excelente composición para uso farmacéutico, en donde se debe incrementar y prolongar la actividad biológica y/o terapéutica de la oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma, ejemplificada en esta memoria. Esta composición farmacéutica es también más fácil de manejar por el usuario, ya que debido a su mejorada estabilidad, no siempre necesita ser almacenada en un ambiente frío, sino que puede en cambio mantenerse más convenientemente a temperatura ambiente, p.ej. durante su uso o 5 almacenamiento, reteniendo aun su actividad biológica.

El efecto estabilizador de un éter de celulosa no iónico sobre la molécula de oxitocina en una composición farmacéutica de la presente invención está en contraposición con otros portadores farmacéuticos usados, tal como por ejemplo carboximetilcelulosa sódica (CMC), en cuya formulación se ha visto que la oxitocina se degrada y/o agrega más rápidamente (adviértase por ejemplo los ejemplos comparativos en la sección experimental). Sin estar 10 ligado a una teoría específica, esto puede ser debido al hecho de que el polímero CMC está negativamente cargado y puede considerarse como un polianión que podría interaccionar desfavorablemente con el péptido de oxitocina.

Por consiguiente, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende

a. oxitocina (SEQ ID NO:1), y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma según SEQ ID NO:2, además de sales de la misma farmacéuticamente aceptables; y 15

b. al menos un éter de celulosa no iónico;

en donde SEQ ID NO:2 es

X1-X2-X3-X4-Asn-Cys-X5-X6-X7-X8-NH2

en donde

X1 se selecciona del grupo que consiste en Cys, y nada; 20

X2 se selecciona del grupo que consiste en Tyr, Phe, y nada;

X3 se selecciona del grupo que consiste en Ile, Val, Hoph, Phe, Cha, y nada;

X4 se selecciona del grupo que consiste en Gln, Ser, Thr, Cit, Arg y Daba;

X5 se selecciona del grupo que consiste en Pro y nada;

X6 se selecciona del grupo que consiste en Ile, Leu, nada, Val, Hos, Daba, Thr, Arg y Cit; 25

X7 se selecciona del grupo que consiste en Gly, nada y Ala;

X8 se selecciona del grupo que consiste en Gly y nada;

en donde dicha composición farmacéutica tiene un pH dentro del intervalo entre alrededor de 3 y alrededor de 4, con la condición de que dicha variante de oxitocina no sea vasopresina (SEQ ID NO:7).

En un aspecto de la presente invención, cuando X1 es Cys entonces se forma un puente disulfuro entre X1 y Cys. 30

Por consiguiente, se ha de entender que cuando X1 en la fórmula (I) es cisteína (Cys) entonces el grupo tiólico de X1 puede formar un puente disulfuro con el grupo tiólico de la cisteína que se encuentra entre la asparagina (Asn) y el X5 formando de ese modo una estructura cíclica de fórmula (Ia):

En un aspecto adicional, se proporciona una composición farmacéutica que comprende oxitocina (SEQ ID NO:1) e 35 hidroxipropilmetilcelulosa, y en donde el pH de dicha composición farmacéutica está dentro del intervalo entre alrededor de 3 y 4, tal como entre alrededor de 3 y 3,5, o como se ejemplifica en otra parte en esta memoria.

En un aspecto adicional, la presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que consiste en un éter de celulosa no iónico y oxitocina (SEQ ID NO:1), y/o una variante y/o un fragmento de la misma, como se presenta en esta memoria (SEQ ID NO:2), así como sales de la misma farmacéuticamente aceptables, y un agente 40 regulador del pH, en donde dicha composición farmacéutica tiene un pH dentro del intervalo entre alrededor de 3 y 4, tal como el intervalo alrededor de 3 y alrededor de 3,5, con la condición de que dicha variante de oxitocina no sea vasopresina (SEQ ID NO:7). En un aspecto, dicha composición farmacéutica consiste en oxitocina (SEQ ID NO:1), hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), y un agente regulador del pH, en donde dicha composición farmacéutica tiene un pH dentro del intervalo entre alrededor de 3 y 4, tal como entre alrededor de 3 y 3,5, o como se ejemplifica en otra 45

parte en esta memoria. En un aspecto, dicho agente regulador del pH es un tampón, tal como un tampón citrato o un lactato.

En un aspecto de la presente invención, dicha composición farmacéutica comprende oxitocina, esto es cuando X1 es Cys, X2 es Tyr, X3 es Ile, X4 es Gln, X5 es Pro, X6 es Leu, X7 es Gly y X8 es nada en SEQ ID NO:2, (Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2) (SEQ ID NO:1). 5

Se pueden seleccionar una o más variante(s) y/o fragmento(s) de oxitocina de dicha composición farmacéutica (SEQ ID NO:2) a partir del grupo que consiste en los siguientes compuestos, así como sales de la misma farmacéuticamente aceptables.

Mesotocina: Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Ile-Gly-NH2 (SEQ ID NO:3)

X1 es Cys, X2 es Tyr, X3 es Ile, X4 es Gln, X5 es Pro, X6 es Ile, X7 es Gly y X8 es nada; 10

Isotocina: Cys-Tyr-Ile-Ser-Asn-Cys-Pro-Ile-Gly-NH2 (SEQ ID NO:4)

X1 es Cys, X2 es Tyr, X3 es Ile, X4 es Ser, X5 es Pro, X6 es Ile, X7 es Gly y X8 es nada;

Anetocina: Cys-Phe-Val-Arg-Asn-Cys-Pro-Thr-Gly-NH2 (SEQ ID NO:5) 15

X1 es Cys, X2 es Phe, X3 es Val, X4 es Arg, X5 es Pro, X6 es Thr, X7 es Gly y X8 es nada;

Vasotocina: Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2 (SEQ ID NO:6)

X1 es Cys, X2 es Tyr, X3 es Ile, X4 es Gln, X5 es Pro, X6 es Arg, X7 es Gly y X8 es nada;

20

x

Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-NH2 (SEQ ID NO:8)

X1 es Cys, X2 es Tyr, X3 es Ile, X4 es Gln y X5- X8 es nada;

Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-NH2 (SEQ ID NO:9) 25

X1 es Cys, X2 es Tyr, X3 es Ile, X4 es Gln, X5 es Pro, y X6 - X8 es nada;

Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-NH2 (SEQ ID NO:10)

X1 es Cys, X2 es Tyr, X3 es Ile, X4 es Gln, X5 es Pro, X6 es Leu, y X7 -X8 es nada;

30

Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2 (SEQ ID NO:11)

X1 es nada, X2 es Tyr, X3 es Ile, X4 es Gln, X5 es Pro, X6 es Leu, X7 es Gly y X8 es nada;

Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2 (SEQ ID NO12)

X1-X2 es nada, X3 es Ile, X4 es Gln, X5 es Pro, X6 es Leu, X7 es Gly y X8 es nada; 35

Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2 (SEQ ID NO:13)

X1-X3 es nada, X4 es Gln, X5 es Pro, X6 es Leu, X7 es Gly y X8 es nada;

Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-NH2 (SEQ ID NO:14)

X1-X2 es nada, X3 es Ile, X4 es Gln, X5 es Pro, y X6-X8 es nada;

Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-Gly-NH2 (SEQ ID NO:15)

X1 es Cys, X2 es Tyr, X3 es Ile, X4 es Gln, X5 es Pro, X6 es Leu, X7 es Gly y X8 es Gly; 5

Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Leu-NH2 (SEQ ID NO:16)

X1-X3 es nada, X4 es Gln, X5 es Pro, X6 es Leu, X7 es Leu y X8 es nada;

Cys-Tyr-Val-Thr-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2 (SEQ ID NO:17) 10

X1 es Cys, X2 es Tyr, X3 es Val, X4 es Thr, X5 es Pro, X6 es Leu, X7 es Gly y X8 es nada;

Cys-Tyr-Hoph-Thr-Asn-Cys-Pro-Val-Gly-NH2 (SEQ ID NO:18)

X1 es Cys, X2 es Tyr, X3 es Hoph, X4 es Thr, X5 es Pro, X6 es Val, X7 es Gly y X8 es nada;

15

Cys-Tyr-Phe-Cit-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2 (SEQ ID NO:19)

X1 es Cys, X2 es Tyr, X3 es Phe, X4 es Cit, X5 es Pro, X6 es Leu, X7 es Gly y X8 es nada;

Cys-Tyr-Cha-Arg-Asn-Cys-Pro-Hos-Ala-NH2 (SEQ ID NO:20)

X1 es Cys, X2 es Tyr, X3 es Cha, X4 es Arg, X5 es Pro, X6 es Hos, X7 es Ala y X8 es nada; 20

Cys-Tyr-Val-Daba-Asn-Cys-Pro-Daba-Ala-NH2 (SEQ ID NO:21)

X1 es Cys, X2 es Tyr, X3 es Val, X4 es Daba, X5 es Pro, X6 es Cit, X7 es Ala, y X8 es nada;

Cys-Tyr-Hoph-Daba-Asn-Cys-Pro-Cit-Ala-NH2 (SEQ ID NO:22) 25

X1 es Cys, X2 es Tyr, X3 es Hoph, X4 es Daba, X5 es Pro, X6 es Cit, X7 es Ala y X8 es nada;

Cys-Tyr-Phe-Arg-Asn-Cys-Pro-Val-Ala-NH2 (SEQ ID NO:23)

X1 es Cys, X2 es Tyr, X3 es Phe, X4 es Arg, X5 es Pro, X6 es Val, X7 es Ala y X8 es nada;

y 30

Cys-Tyr-Cha-Cit-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2 (SEQ ID NO:24)

X1 es Cys, X2 es Tyr, X3 es Cha, X4 es Cit, X5 es Pro, X6 es Arg, X7 es Gly y X8 es nada;

Por consiguiente, en un aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica, en donde dichos uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de oxitocina es/son seleccionados a partir del grupo que consiste en los 35 péptidos que corresponden a SEQ ID NO:3-6 y SEQ ID NO:8-24.

Los aminoácidos no naturales en dichas sustancias tienen las siguientes estructuras:

Ciclohexilalanina, en esta memoria mencionada como Cha,

Homofenilalanina, en esta memoria mencionada como Hoph,

5

Citrulina, en esta memoria mencionada como Cit,

Ácido diaminobutírico, en esta memoria mencionado como Daba, y 10

Homoserina, en esta memoria mencionada como Hos,

Cuando se dice que una posición en SEQ ID NO:2 es “nada”, significa que representa un enlace sencillo entre los elementos (letra, átomo o grupo). 5

También se podrían usar otras variantes de oxitocina en las composiciones farmacéuticas según la presente invención, tales como variantes naturales o modificadas artificialmente, análogos, y/o derivados de oxitocina, mesotocina, isotocina, y/o anetocina. Tales variantes se podrían obtener mediante adición, inserción, eliminación, o sustitución de al menos un aminoácido en estas hormonas. Otras sustancias incluyen precursores, metabolitos tales como derivados metabólicos p.ej. productos de degradación metabólica, agonistas, o análogos de las sustancias 10 mencionadas en esta memoria que presentan las mismas propiedades.

Los derivados metabólicos o productos de degradación metabólica pueden ser péptidos tipo oxitocina, p.ej. con nueve aminoácidos tales como oxitocina, mesotocina, isotocina, y anetocina de los cuales se han eliminado uno o más aminoácidos de cualquiera de los extremos carboxilo terminal o amino terminal, o de ambos extremos, carboxilo terminal y amino terminal, tales como de 1 a 3 aminoácidos de cada extremo terminal. En ciertos aspectos, podrían 15 haber sido eliminados uno, dos o tres aminoácidos del extremo carboxilo terminal, esto es, Gly solamente, Gly y Leu, o Gly, Leu y Pro. Preferiblemente podrían haber sido eliminados uno, dos o tres aminoácidos del extremo amino terminal, esto es, Cys solamente, Cys y Tyr, o Cys, Tyr e Ile.

En ciertos aspectos, podrían haber sido eliminados uno, dos o tres aminoácidos de ambos extremos, del extremo carboxilo terminal, esto es, Gly solamente, Gly y Leu, o Gly, Leu y Pro, y uno, dos o tres aminoácidos podrían haber 20 sido eliminados del extremo amino terminal, esto es, Cys solamente, Cys y Tyr, o Cys, Tyr e Ile. Se podría comprobar que estas variantes son análogos de oxitocina, mesotocina, isotocina o anetocina mediante métodos inmunológicos, p.ej. RIA (radioinmunoensayo), IRMA (métodos radiométricos), RIST (test radioinmunoabsorbente), y RAST (test radioalergoabsorbente). La invención también incluye variantes de oxitocina que tienen al menos un 50, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98, o 99 % de identidad de secuencia con oxitocina, presentando dichas variantes 25 actividad de oxitocina, como se define en esta memoria, con la condición de que dicha variante de oxitocina no sea vasopresina (SEQ ID NO:7).

Se ha aislado la anetocina a partir de la lombriz de tierra, como se describe en Oumi T, Ukena K, Matsushima O, Ikeda T, Fujita T, Minakata H, Nomoto K. Annetocin: an oxytocin-related peptide isolated from the earthworm, Eisenia foetida, Biochem Biophys Res Commun 1994, January 14; 198(1): 393-399. 30

También hay una posibilidad de crear nuevos compuestos con actividad oxitocina por medio de simulación por ordenador. Los métodos de simulación por ordenador son conocidos por el experto en la técnica, p.ej. como se describe en EP 0660 210 A2.

La invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende oxitocina o una variante de la misma en ambas formas, D- y L-, además de racematos de la misma. En ciertos aspectos la invención se refiere a la 35 forma L-. Se podría convertir la forma D- en la forma L- mediante inversión de la secuencia peptídica de la misma. Estos y los péptidos de arriba se pueden producir por métodos conocidos por el experto en la técnica, p.ej. según Merrifield, P.B., “Solid Phase Synthesis”, Angew. Chemie. 1985, No. 97, p. 801.

Las composiciones farmacéuticas según la invención podrían, en ciertas circunstancias, contener sustancias que amplían o fortalecen los efectos de la oxitocina. Tales sustancias podrían aumentar la liberación de oxitocina y/o el 40 miembro o la afinidad de los receptores de oxitocina, tal como estrógeno o fármacos que tienen un efecto [alfa]2-agonista, tal como la clonidina.

Cabe señalar que las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos según a la invención están incluidas dentro del alcance de la invención. Ejemplos de sales de los compuestos son sales farmacéuticamente aceptables de adición de ácido y de base. 45

La expresión “sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables” se pretende que sea cualquier sal de adición de ácido orgánico o inorgánico no tóxico de los compuestos de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:2, y/o cualesquiera otras variantes y/o fragmentos de oxitocina descritos en esta memoria, con la condición de que dicha variante de oxitocina no sea vasopresina (SEQ ID NO:7). Ejemplos de ácidos inorgánicos ilustrativos que forman sales apropiadas son ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico y sales metálicas de ácidos tales como 5 monohidrógeno ortofosfato sódico e hidrógenosulfato potásico. Ejemplos de ácidos orgánicos ilustrativos que forman sales apropiadas son ácidos mono-, di- y tri- carboxílicos. Ejemplos de tales ácidos son ácido acético, ácido glicólico, ácido láctico, ácido pirúvico, ácido malónico, ácido succínico, ácido glutárico, ácido fumárico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido maleico, ácido hidroximaleico, ácido benzoico, ácido hidroxibenzoico, ácido fenilacético, ácido cinámico, ácido salicílico, ácido 2-fenoxibenzoico, y ácidos sulfónicos tales como ácido p-10 toluenosulfónico, ácido metanosulfónico y ácido 2-hidroxietanosulfónico. Tales sales podrían estar o bien en forma hidratada o anhidra. Las sales de adición de ácido de estos compuestos son generalmente solubles en agua y en disolventes orgánicos hidrofílicos diferentes y, comparadas con la forma de base libre de las mismas, generalmente presentan puntos de fusión más altos.

La expresión “sales de adición de base farmacéuticamente aceptables” se pretende que sea cualquier sal de adición 15 de base orgánica o inorgánica no tóxica de los compuestos de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:2, y/o cualesquiera otras variantes y/o fragmentos de oxitocina como se describe en esta memoria, con la condición de que dicha oxitocina no sea vasopresina (SEQ ID NO:7). Ejemplos de bases inorgánicas ilustrativas que forman sales apropiadas son hidróxidos y carbonatos de metales alcalinos o alcalinotérreos tales como hidróxido sódico, carbonato sódico, hidróxido potásico, carbonato potásico, hidróxido cálcico, carbonato cálcico, hidróxido magnésico, carbonato 20 magnésico y amoniaco. Ejemplos de bases orgánicas ilustrativas que forman sales apropiadas son metilamina, dimetilamina, trimetilamina y picolina. Podrían formarse o bien sales mono- o dibásicas con dichos compuestos. Las sales de adición de base de estos compuestos son generalmente solubles en agua y en distintos disolventes orgánicos hidrofílicos y, comparadas con la forma de base libre de las mismas, generalmente presentan puntos de fusión más altos. 25

Los éteres de celulosa no iónicos de la composición farmacéutica de la presente invención están basados en celulosa, que se ha modificado químicamente con el fin de alcanzar la solubilidad en agua mediante sustitución de varios grupos en el esqueleto de celulosa. Los sustituyentes se caracterizan por no tener carga eléctrica cuando se disuelven en agua a un pH neutro.

Las propiedades de los éteres de celulosa no iónicos se determinan por el peso molecular (p.ej. el grado de 30 polimerización), el tipo de sustituyentes y también por el número y distribución de los sustituyentes a lo largo de la molécula. De ahí que, dependiendo de la oxitocina y/o fragmento y/o variante de la misma que está presente en la composición farmacéutica, el éter de celulosa no iónico puede tener propiedades que varían y se determinarán según las circunstancias imperantes.

Los éteres de celulosa según la presente invención son no iónicos, en donde los grupos alquilo y/o hidroxialquilo 35 están unidos a las unidades de anhidroglucosa mediantes enlaces éter, que forman hidroxialquilalquilcelulosas, en donde los grupos alquilo tienen de 1 a 4 átomos de carbono.

Los éteres de celulosa representativos para su uso en las composiciones farmacéuticas según la presente invención son metilcelulosa (MC), hidroxietilmetil celulosa (HEMC), hidroxipropilmetil celulosa (HPMC), hidroxietiletilcelulosa (HEEC), e hidroxipropilcelulosa (HPC). Estos polímeros tienen sustituyentes que son o bien no polares (p.ej. metilo) 40 o ligeramente polares (p.ej. hidroxietilo), que en combinación con el esqueleto hidrofílico de celulosa proporcionan un polímero anfifílico.

Por consiguiente, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas en donde el al menos un éter de celulosa no iónico se selecciona a partir de uno o más de los siguientes éteres de celulosa: MC, HPMC, HEEC, HEMC y/o HPC, o como se ejemplifica adicionalmente en esta memoria. En un aspecto de una composición 45 farmacéutica según la presente invención, dicho éter de celulosa no iónico es hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC).

El pH de una composición farmacéutica según la presente invención, y aplicable a todas las realizaciones y aspectos de la misma definidos en esta memoria puede estar en el intervalo entre alrededor de 3 y 4,5, tal como entre alrededor de 3,5 y alrededor de 4,5, entre alrededor de 3,5 y 4, entre alrededor de 3 y 4, entre alrededor de 3 y 3,5, entre alrededor de 3 y 3,1, entre alrededor de 3 y 3,2, entre alrededor de 3 y 3,3, entre alrededor de 3 y 3,4, entre 50 alrededor de 3 y 3,6, entre alrededor de 3 y 3,7, entre alrededor de 3 y 3,8, entre alrededor de 3 y 3,9, entre alrededor de 3,1 y 3,2, entre alrededor de 3,1 y 3,3, entre alrededor de 3,1 y 3,4, entre alrededor de 3,1 y 3,5, entre alrededor de 3,1 y 3,6, entre alrededor de 3,1 y 3,7, entre alrededor de 3,1 y 3,8, entre alrededor de 3,1 y 3,9, entre alrededor de 3,2 y 3,3, entre alrededor de 3,2 y 3,4, entre alrededor de 3,2 y 3,5, entre alrededor de 3,2 y 3,6, entre alrededor de 3,2 y 3,7, entre alrededor de 3,2 y 3,8, entre alrededor de 3,2 y 3,9, entre alrededor de 3,3 y 3,5, entre 55 alrededor de 3,3 y 3,6, entre alrededor de 3,3 y 3,7, entre alrededor de 3,3 y 3,8, o entre alrededor de 3,3 y 4. Cabe señalar que estos valores no son exactos, lo que significa que pueden variar ligeramente en torno a los valores proporcionados.

El pH de una composición farmacéutica definida en esta memoria se puede regular añadiendo un agente regulador del pH a dicha composición farmacéutica, tal como un tampón. En el contexto de la presente invención, dicho tampón puede ser un tampón lactato, un tampón citrato, un tampón fosfato, o una mezcla de los mismos, pero no se limita a los mismos.

La concentración de un tampón que se va a añadir a la composición farmacéutica según la invención puede estar 5 entre 20 y 100 mM, tal como entre alrededor de 25 mM y 100 mM, o alrededor de 25 a 50 mM, o alrededor de 25 a 75 mM, o alrededor de 50 a 70 mM, en una disolución acuosa, pero no se limita a éstas. Cabe señalar que estos valores no son exactos, lo que significa que pueden variar ligeramente en torno a los valores proporcionados. Dependiendo del pH que se necesita y del tampón que se usa en la composición farmacéutica según la presente invención, la concentración del tampón variará de acuerdo con lo anterior. 10

En un aspecto de la presente invención, una composición farmacéutica comprende oxitocina (SEQ ID NO:1) e hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), opcionalmente en combinación con tampones, otros agentes reguladores del pH o componentes adicionales ejemplificados en esta memoria, tal como un conservante, tal como ácido benzoico. En un aspecto, el pH de dicha composición de oxitocina y HPMC está dentro del intervalo entre alrededor de 3-4, tal como alrededor de 3-3,5, alrededor de 3,1 a 3,6, o alrededor de 3 a 3,8, o como se define adicionalmente en esta 15 memoria.

En una composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención, la concentración de oxitocina y/o un fragmento y/o una variante de la misma como se define en esta memoria puede estar entre alrededor de 0,1 a 1,5 mg/g, tal como alrededor de 0,5 a alrededor de 1,5 mg/g, alrededor de 0,5 a alrededor de1 mg/g, alrededor de 0,5 a alrededor de 1,2 mg/g, alrededor de 0,2 a alrededor de 0,5 mg/g, alrededor de 0,1 a alrededor de 0,8 mg/g, o 20 alrededor de 0,2 a alrededor de 1,2 mg/g de la composición farmacéutica total definida en esta memoria.

Aquí, mg/g se puede considerar aproximadamente equivalente a mg/ml, con respecto a la composición farmacéutica que se está utilizando. Por consiguiente, la concentración de oxitocina y/o un fragmento y/o una variante de la misma como se define en esta memoria puede estar entre alrededor de 0,1 a 1,5 mg/ml, tal como alrededor de 0,5 a alrededor de 1,5 mg/ml, alrededor de 0,5 a alrededor de 1 mg/ml, alrededor de 0,5 a alrededor de 1,2 mg/ml, 25 alrededor de 0,2 a alrededor de 0,5 mg/ml, alrededor de 0,1 a alrededor de 0,8 mg/ml, o alrededor de 0,2 a alrededor de 1,2 mg/ml de la composición farmacéutica total definida en esta memoria. Por tanto, esto significa que 1ml de la composición farmacéutica total puede contener entre alrededor de 0,1 a 1,5 mg/ml de oxitocina.

En un aspecto, una composición farmacéutica según la presente invención comprende alrededor de: 1 mg/g de oxitocina, alrededor de 2% en peso de hidroxipropilmetilcelulosa en tampón citrato o lactato alrededor de 25 mM, y 30 opcionalmente alrededor de 1mg/g de ácido benzoico.

En otro aspecto, una composición farmacéutica según la presente invención comprende alrededor de 0,9 mg/g de oxitocina, alrededor de 1,1 mg/g de ácido benzoico y alrededor de 2% en peso de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) en tampón lactato alrededor de 25 mM.

El pH de las composiciones farmacéuticas descritas aquí anteriormente están dentro del intervalo entre alrededor de 35 3 y 4, tal como alrededor de 3 a alrededor de 3,5 o alrededor de 3,1 a alrededor de 3,6 o alrededor de 3,2 a alrededor de 3,5, como se ejemplifica adicionalmente en esta memoria.

La concentración del al menos un éter de celulosa no iónico, tal como hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), se proporciona en relación con el agente regulador del pH de la composición farmacéutica, tal como un tampón, presentado en esta memoria, p.ej. 2% en peso o 3% en peso de éter de celulosa no iónico en tampón 25 mM 40 proporciona una cierta viscosidad debida a la cantidad del al menos un éter de celulosa no iónico presente en dicho tampón. Por consiguiente, la concentración del éter de celulosa no iónico se presenta en % en peso (%p) en dicho tampón o en otro agente regulador del pH. En la composición farmacéutica total, la cantidad de éter de celulosa no iónico es algo menor debido a la adición de la sustancia terapéutica (oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma descrita aquí) a dicha composición. 45

La concentración de oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma definida en esta memoria se proporciona en relación con el total de la composición farmacéutica, esto es, el tampón y el éter de celulosa no iónico, y opcionalmente otros aditivos tales como un conservante. De ahí que, 1 mg/g de oxitocina quiere decir que 1 mg de oxitocina está presente en 1 g total de composición farmacéutica. Además, como se mencionó previamente aquí, 1 mg/ml quiere decir que 1 mg de oxitocina está presente en 1 ml total de composición farmacéutica. 50

En el contexto de la presente invención, una forma de dosificación de oxitocina, y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma administrada a un paciente en necesidad de la misma puede comprender entre alrededor de 50 y 600 UI de oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma como se define en esta memoria, tales como alrededor de 100, 200, 250, 300, 350 o 400 UI. Una unidad internacional (UI) de oxitocina es el equivalente a aproximadamente 1,67 microgramos de péptido puro. Por consiguiente, una composición de 1 g de gel 55 de oxitocina, 400 UI, es equivalente a alrededor de 0,67 mg/g (Ph Eur).

La presente invención también se refiere a las composiciones farmacéuticas descritas en esta memoria para su uso como medicamentos. En un aspecto de la presente invención, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende oxitocina (SEQ ID NO:1), y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma según SEQ ID NO:2, con la condición de que dicha variante no sea vasopresina (SEQ ID NO:7), además de sales de la misma farmacéuticamente aceptables e hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), opcionalmente en combinación con 5 tampones, otros agentes reguladores del pH y/u otros componentes adicionales ejemplificados en esta memoria, tales como un conservante tal como ácido benzoico, para su uso como un medicamento. Tal composición farmacéutica tiene un pH dentro del intervalo ejemplificados en esta memoria. Un ejemplo de un uso médico de las composiciones de la presente invención es para uso vaginal, tal como atrofia vaginal. Tal uso médico de oxitocina se muestra por los autores de la presente invención en WO0178758. 10

Ejemplos de otros usos médicos de oxitocina para los que son útiles las composiciones farmacéuticas según la presente invención se refieren en WO02102832, WO02067974, WO03017922, WO0018424, WO9843661, WO9843662, y WO9843660. Por tanto, la presente invención también se refiere a una composición farmacéutica presentada en esta memoria para un uso médico ejemplificado en cualquiera de los documentos de patente arriba mencionados. Tales usos médicos son p.ej. generar eustasis, cáncer in situ y cervicitis, inflamación, regeneración 15 celular, cicatrización de heridas, preferencia y crear aceptación; y para el tratamiento del dolor, cuando una composición farmacéutica según la presente invención quiere decir que es adecuada para su uso en el tratamiento de tal estado patológico, tal como cuando un tratamiento tópico es adecuado para el tratamiento de la misma.

Mediante la expresión “eustasis” se hace referencia a un estado psicofisiológico, esto es, una combinación de un estado psicológico y fisiológico. El estado psicológico se caracteriza por interacciones sociales tranquilas y positivas 20 tales como confianza, por ejemplo durante la lactancia materna. El estado fisiológico se caracteriza por relajación muscular, actividad cardiovascular rebajada y actividad gastrointestinal aumentada. Aparte, la frecuencia del pulso y la presión sanguínea se mantienen a un nivel bajo, saludable y equilibrado, y el tracto gastrointestinal controlado vagalmente está activado, promoviendo la digestión y el almacenamiento de nutrientes.

Mediante la expresión “cáncer in situ y cervicitis” se hace referencia a consecuencias de enfermedades en vagina y 25 cuello del útero que se originan a partir de infecciones, así como inflamaciones. En el contexto de la invención, cáncer in situ se refiere al cuello del útero. Tales enfermedades incluyen, además del cáncer in situ y cervicitis, también estados de enfermedad precancerosos, carcinoma de células escamosas, y coilocitosis. Por cáncer in situ se quiere decir una entidad neoplásica en donde las células tumorales están confinadas en el epitelio de origen, sin invasión de la membrana basal. Por cervicitis se quiere decir inflamación del cuello uterino, esto es, el extremo 30 inferior y estrecho del útero, entre el istmo y el orificio externo del útero. El epitelio del cuello del útero es bastante diferente del epitelio del resto del útero. La coilocitosis es una consecuencia del virus del herpes.

Las composiciones farmacéuticas definidas aquí están todas incluidas para uso tópico, tal como para uso vaginal. Cuando es para uso vaginal, esto podría ser para el tratamiento de un trastorno del climaterio, tal como atrofia vaginal o cualquiera de los otros trastornos mencionados en WO0178758. Por tanto, en un aspecto, la presente 35 invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende oxitocina (SEQ ID NO:1), y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma según SEQ ID NO:2, con la condición de que dicha variante no sea vasopresina (SEQ ID NO:7), además de sales de la misma farmacéuticamente aceptables e hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), opcionalmente en combinación con tampones, otros agentes reguladores del pH o componentes adicionales ejemplificados en esta memoria, tales como ácido benzoico para uso vaginal, tal como 40 para el tratamiento de un trastorno del climaterio, p.ej. atrofia vaginal. El pH de tal composición farmacéutica puede estar dentro del intervalo de alrededor de 3 a alrededor de 4, tal como alrededor de 3 a alrededor de 3,5, alrededor de 3,1 a alrededor de 3,6, o alrededor de 3,1 a alrededor de 3,8, o como se ejemplifica en otra parte en la presente memoria.

En todos los aspectos de la presente invención se ha de entender que cada vez que se hace referencia a un cierto 45 uso médico de dicha composición farmacéutica, tal como en el uso en el tratamiento de la atrofia vaginal, esto también se refiere al uso de oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma, definidos en esta memoria, y al menos un éter de celulosa no iónico en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad determinada, tal como se ejemplifica en esta memoria, en donde dicho medicamento tiene un pH dentro del intervalo entre alrededor de 3 y 4, tal como alrededor de 3 y 3,5, como se ejemplifica adicionalmente en la 50 presente memoria.

Como se muestra en esta memoria, la presencia de al menos un éter de celulosa no iónico en la composición farmacéutica mejora eficazmente la estabilidad de la molécula de oxitocina en la misma. Así que, la presente invención también se refiere al uso de al menos un éter de celulosa no iónico para estabilizar, alternativamente mejorar, la estabilidad de una composición farmacéutica que comprende oxitocina (SEQ ID NO:1) y/o uno o más 55 fragmento(s) y/o variante(s) de oxitocina, como se define en SEQ ID NO:2, o como se define en otra parte en esta memoria, con la condición de que dicha variante de oxitocina no sea vasopresina (SEQ ID NO:7). En un aspecto, la invención se refiere al uso del al menos un éter de celulosa no iónico hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) para estabilizar, alternativamente mejorar, la estabilidad de una composición farmacéutica que comprende oxitocina (SEQ ID NO:1) y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de oxitocina, así como sales de los mismos farmacéuticamente 60 aceptables como se define en SEQ ID NO:2, o como se define en otra parte en esta memoria, con la condición de

que dicha variante no sea vasopresina (SEQ ID NO:7), comprendiendo dicha composición farmacéutica opcionalmente además un tampón, otros agentes reguladores de pH o componentes adicionales ejemplificados en esta memoria, tal como un conservante. Como se ha mencionado anteriormente en la presente memoria, la combinación de usar un pH bajo en la composición farmacéutica mejora aún más el efecto estabilizador del al menos un éter de celulosa no iónico. Sin estar ligado a una teoría específica, el al menos un éter de celulosa no 5 iónico parece estabilizar la molécula de oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma definidos en esta memoria haciendo que sea menos propensa a la degradación y/o agregación u otros cambios estructurales, al no interferir potencialmente con la molécula de oxitocina.

Cada vez que se hace referencia a estabilidad/efecto estabilizante mejorado en esta memoria, esto puede significar la reducción de agregación y/o degradación u otros cambios estructurales de la molécula de oxitocina en la 10 composición farmacéutica aquí definida, aunque no está ligado a esta teoría específica. De acuerdo con tal teoría, una reducción en agregación y/o degradación u otros cambios estructurales va acompañada de una mejora de la estabilidad de la molécula de oxitocina. Esta mejoría en estabilidad por parte de una composición farmacéutica que comprende al menos un éter de celulosa no iónico se ilustra adicionalmente en la sección experimental que comprende ejemplos comparativos con el gel CMC. 15

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un método para preparar una composición farmacéutica con estabilidad mejorada que comprende las etapas de:

a) preparar una disolución tampón y ajustar el pH de la misma,

b) añadir oxitocina (SEQ ID NO:1) y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma de acuerdo con SEQ ID NO:2, o como se define en otra parte en el esta memoria, con la condición de que dicha variante de 20 oxitocina no sea vasopresina (SEQ ID NO:7), así como sales de la misma farmacéuticamente aceptables, a dicho tampón, y

c) añadir al menos un éter de celulosa no iónico a la disolución obtenida en la etapa b);

en donde se añade opcionalmente un conservante, tal como el ácido benzoico, a la disolución tampón de la etapa a) antes de que dicha oxitocina (SEQ ID NO:1) y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma de acuerdo con 25 SEQ ID NO:2, o como se define en otra parte en el esta memoria sea/sean añadidas a dicha disolución tampón y en donde el pH de dicha composición farmacéutica se regula para caer dentro del intervalo entre alrededor de 3 y alrededor de 4, tal como dentro del intervalo de alrededor de 3 y alrededor de 3,5, o como se ejemplifica en otra parte en esta memoria. Tras la etapa c), la disolución se deja por un tiempo para obtener una disolución viscosa o un gel. Normalmente, dicha disolución viscosa o gel se obtiene después de 1-2 días. Dicho método también contempla 30 en algunos aspectos el uso de otros agentes reguladores de pH distintos de tampones, tales como ácidos y bases orgánicos e inorgánicos, tales como ácido acético, ácido cítrico, ácido fosfórico y ácido clorhídrico e hidróxido sódico, los cuales serían utilizados por tanto en la etapa a) de dicho método.

En el presente método, lo que se pretende es que sea la estabilidad de la oxitocina, y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma descritos aquí lo que se mejore preparando la composición junto con al menos un éter de 35 celulosa no iónico. En un aspecto del presente método, dicho al menos un éter de celulosa no iónico es hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC). En un aspecto, el método se refiere a preparar una composición farmacéutica que comprende oxitocina (SEQ ID NO:1) e hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC).

La administración de una molécula de oxitocina se puede facilitar en ciertos aspectos mediante la aplicación en la piel de tacto, presión, masaje, calor o luz infrarroja, lo que conduce a aumentar la permeabilidad de la piel. Hirvonen, 40 J., Kalia, Y N, and Gay, R H. Transdermal delivery of peptides by iontophoresis. Nat Biotechnol December 1996; 14(13): 1710-1713 describe cómo aumentar el transporte de un fármaco a través de la piel usando la fuerza motriz de un campo eléctrico aplicado. La iontoforesis se puede ver afectada por un pH ligeramente básico.

Hay diferentes procesos descritos para la producción sintética de oxitocina; se describen procesos comerciales por ejemplo en U.S. Pat. Nos. 2.938.991 y 3.076.797. 45

En un aspecto de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende:

a. oxitocina (SEQ ID NO:1), y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma de acuerdo con SEQ ID NO:2, así como sales de los mismos farmacéuticamente aceptables; y

b. al menos un éter de celulosa no iónico;

en donde SEQ ID NO:2 es 50

X1-X2-X3-X4-Asn-Cys-X5-X6-X7-X8-NH2

en donde

X1 se selecciona del grupo que consiste en Cys, y nada;

X2 se selecciona del grupo que consiste en Tyr, Phe, y nada;

X3 se selecciona del grupo que consiste en Ile, Val, Hoph, Phe, Cha, y nada;

X4 se selecciona del grupo que consiste en Gln, Ser, Thr, Cit, Arg y Daba;

X5 se selecciona del grupo que consiste en Pro y nada;

X6 se selecciona del grupo que consiste en Ile, Leu, nada, Val, Hos, Daba, Thr, Arg y Cit; 5

X7 se selecciona del grupo que consiste en Gly, nada, y Ala;

X8 se selecciona del grupo que consiste en Gly y nada;

en donde la oxitocina y/o dicho(s) uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma está/n presente(s) en una cantidad de alrededor de 0,1 a 1,5 mg/g, tal como de 0,5 a alrededor de 1,5 mg/g, alrededor de 0,5 a alrededor de 1 mg/g, alrededor de 0,5 a alrededor de 1,2 mg/g, alrededor de 0,2 a alrededor de 0,5 mg/g, alrededor de 0,1 a 10 alrededor de 0,8 mg/g o alrededor de 0,2 a alrededor de 1,2 mg/g de composición total y en donde dicho al menos un éter de celulosa no iónico está presente en una cantidad alrededor de 1-3 % en peso, tal como 2% en peso o 3% en peso en un agente regulador de pH, tal como un tampón, teniendo dicho tampón una concentración de alrededor de 25 mM hasta alrededor de 100 mM. En un aspecto, al menos dicho éter de celulosa no iónico es hidroxipropilmetilcelulosa, con la condición de que dicha variante de oxitocina no sea vasopresina (SEQ ID NO:7). 15

En algunos aspectos, las composiciones farmacéuticas según la presente invención pueden comprender opcionalmente otros componentes, tales como componentes inertes o componentes que tienen una función física y biológica. En algunos aspectos, está presente adicionalmente un antibiótico o un analgésico en una composición farmacéutica según la invención.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende alrededor de 1 20 mg/g de oxitocina, alrededor de 2% en peso de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) en tampón citrato o lactato alrededor de 25 mM y opcionalmente alrededor de 1 mg/g de ácido benzoico y en donde el pH de dicha composición es alrededor de 3.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende alrededor de 1 mg/g de oxitocina, alrededor de 2% en peso de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) en tampón lactato alrededor de 25 25 mM y en donde el pH de dicha composición es alrededor de 3,8.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende alrededor de 0,9 mg/g de oxitocina, alrededor de 1,1 mg/g de ácido benzoico, alrededor de 2% en peso de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) en tampón lactato alrededor de 25 mM y en donde el pH de dicha composición es alrededor de 3,8.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende oxitocina, 30 hidroxipropilmetilcelulosa, un tampón citrato o lactato y opcionalmente ácido benzoico. En un aspecto, dicha composición farmacéutica comprende aproximadamente: 1 mg/g de oxitocina, alrededor de 2% en peso de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) en tampón citrato o lactato alrededor de 25 mM, y opcionalmente alrededor de 1 mg/g de ácido benzoico.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende aproximadamente: 35 1 mg/g de oxitocina, 2% en peso de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) en tampón lactato 25 mM, y opcionalmente 1 mg/g de ácido benzoico.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende aproximadamente: 0,8 mg/g de oxitocina, 3% en peso de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) en tampón lactato 22 mM, y opcionalmente 1 mg/g de ácido benzoico. 40

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende aproximadamente: 0,4 mg/g de oxitocina, 3% en peso de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) en tampón lactato 22 mM, y opcionalmente 1 mg/g de ácido benzoico.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende aproximadamente: 0,2 mg/g de oxitocina, 3% en peso de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) en tampón lactato 22 mM, y opcionalmente 45 1 mg/g de ácido benzoico.

Como se ha mencionado anteriormente en esta memoria, una forma de dosificación de una composición farmacéutica que comprende oxitocina (SEQ ID NO:1), y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma como se definen en esta memoria, puede contener entre 50 y 600 UI de oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma como aquí se definen, tales como 100, 200, 250, 300, 350 o 400 UI. 50

La presente invención también se refiere a un kit que comprende una composición farmacéutica que consiste en

a. oxitocina (SEQ ID NO:1), y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma según SEQ ID NO:2, con la condición de que dicha variante de oxitocina no sea vasopresina (SEQ ID NO:7), además de sales de la misma farmacéuticamente aceptables; y

b. al menos un éter de celulosa no iónico;

y un dispensador para dispensar dicha composición farmacéutica opcionalmente en combinación con las 5 instrucciones de uso de dicha composición farmacéutica, en donde el pH de dicha composición farmacéutica está dentro del intervalo entre alrededor de 3 y 4, o como se ejemplifica en otra parte en esta memoria. En un kit tal como se presenta en esta memoria, se puede usar cualquier composición farmacéutica definida en esta memoria. Dicho dispensador presente en dicho kit puede estar p.ej. en forma de tubo de plástico. El kit también puede comprender uno o más contenedores que contienen cada uno, uno o más de un portador, coadyuvante y diluyente 10 farmacéuticamente aceptables.

La composición farmacéutica descrita en esta memoria puede ser p.ej. una composición acuosa que comprende la oxitocina y el éter de celulosa no iónico.

La presente invención se ilustra en la siguiente sección experimental.

Sección experimental 15

Estudios de estabilidad de la oxitocina bajo condiciones de estrés en tampones citrato/lactato con Na-CMC/HPMC a 70ºC

Compendio

Se estudió la estabilidad de la oxitocina en tampón citrato con o sin ácido benzoico y con o sin Na-CMC a 70ºC 20 durante dos semanas.

En otro grupo de muestras se estudió la estabilidad de la oxitocina en tampón citrato con o sin ácido benzoico y con o sin HPMC (Hipromelosa o hidroxipropilmetilcelulosa) a 70ºC durante tres semanas.

En un tercer grupo de muestras se estudió la estabilidad de la oxitocina en tampón lactato con HPMC y con o sin ácido benzoico a 70ºC durante dos semanas. 25

Antecedentes

Se ha estudiado previamente la estabilidad de la oxitocina en soluciones acuosas de diferentes pHs1. En este estudio se concluyó que la mejor estabilidad se obtenía a pH 4,5. En un estudio reciente de estabilidad2 se mostró que la estabilidad de la oxitocina es muy dependiente de la formulación y de las condiciones de almacenamiento.

En un tercer estudio, se estudió la estabilidad de la oxitocina en tampón lactato y tampón citrato, respectivamente, 30 con ácido benzoico como conservante en lugar de los parabenos usados en estudios previos3. Los parabenos pueden causar degradación del agente gelificante Na-CMC4. No obstante, se observó una viscosidad disminuida también con ácido benzoico.

En el presente estudio se estudió el efecto del agente gelificante (Na-CMC/HPMC) en tampón citrato/lactato y con o sin ácido benzoico como conservante. 35

Equipo

Sistema de HPLC según Ph. Eur. 2.2.29

Sistema de HPLC: Alliance 2695 de Waters, detección UV a 220 nm

Columna: YMC-PAC ODS-A C18 250* 4,6 mm, 5m

Fase móvil: A: 15,6 g/l de dihidrógenofosfato sódico 40

B: Acetonitrilo:agua (50:50)

Software de cromatografía: versión MassLynx 4.1 de Waters

pHmetro: Jenway 370

Sustancias químicas

Acetonitrilo grado S de HPLC (ACN), Rathburn chemicals

Agua esterilizada, Baxter

Dihidrógenofosfato sódico, Merck, 6346

Oxitocina se obtuvo de Grindeks, Riga, Letonia 5

Preparación de la muestra

La disolución tampón se preparó disolviendo la cantidad apropiada de ácido cítrico o ácido láctico en agua destilada, alrededor de 90% del volumen total. Se ajustó el pH al valor deseado mediante adición gota a gota de NaOH 5 M (ac.) con agitación magnética. Finalmente, se transfirió la disolución a un matraz aforado y se ajustó el volumen a un 10 volumen final con agua destilada.

El ácido benzoico conservante se pesó en un matraz aforado y se añadió el volumen requerido de disolución tampón. El ácido benzoico se disolvió, después de sellar el matraz, mediante tratamiento del matraz en un baño de ultrasonidos caliente (50ºC) durante alrededor de 30 min. Después de enfriar a temperatura ambiente se añadió oxitocina a la disolución transparente y se disolvió mediante agitación moderada. Finalmente se añadió la cantidad 15 requerida de éter de celulosa no iónico y se agitó la mezcla a mano, luego se dejó hinchar y disolver a temperatura ambiente para dar una disolución/gel viscosa.

Las muestras finales se almacenaron en viales de vidrio con tapones de caucho butílico y sellos de aluminio.

Muestra

Composición

ACA101108-1

1,0 mg/g de oxitocina en tampón citrato 100 mM, pH 3,1

ACA101108-2

1,2 mg/g de oxitocina + 1,0 mg/g de ácido benzoico en tampón citrato 100 mM, pH 3,1

ACA101108-3

1,0 mg/g de oxitocina + 1,0 mg/g de ácido benzoico + Na-CMC al 2,6% en tampón citrato 100 mM, pH 3,1

ACA101108-4

1,0 mg/g de oxitocina + Na-CMC al 2,6% en tampón citrato 100 mM, pH 3,1

ACA101123-1

1,0 mg/g de oxitocina en tampón citrato 25 mM, pH 3,10

ACA101123-2

1,0 mg/g de oxitocina + 1,0 mg/g de ácido benzoico en tampón citrato 25 mM, pH 3,10

ACA101123-3

1,0 mg/g de oxitocina + 1,0 mg/g de ácido benzoico + HPMC al 2,0% en tampón citrato 25 mM, pH 3,10

ACA101123-4

1,0 mg/g de oxitocina + HPMC al 2,0% en tampón citrato 25 mM, pH 3,10

ACA101207-1

1,0 mg/g de oxitocina + HPMC al 2,0% en tampón lactato 25 mM, pH 3,79

ACA101207-2

0,9 mg/g de oxitocina + 1,1 mg/g de ácido benzoico + HPMC al 2,0% en tampón lactato 25 mM, pH 3,79

20

Procedimiento experimental

Las muestras se almacenaron a diferentes temperaturas y se sacaron muestras para su análisis según el esquema de estabilidad de abajo. Antes del análisis, se diluyeron 30 mg de cada una de las muestras líquidas con 1,00 ml de fase móvil A y después fueron inyectadas en un sistema de HPLC.

Análisis 25

Todas las muestras se inspeccionaron visualmente y se midieron sus valores de pH antes de su análisis.

HPLC

Fase móvil:

A: 15,6 g/l de dihidrógenofosfato sódico

B: Acetonitrilo:agua (50:50)

5

Parámetros del perfil de gradiente:

Tiempo (min)

A (%) B (%)

0

95,0 5,0

1

95,0 5,0

30,0

5,0 95,0

40,0

5,0 95,0

45,0

95,0 5,0

Flujo: 1,00 ml

Volumen de inyección: 20 l

Disolución de lavado del inyector: Agua:Acetonitrilo 10

Evaluación

Todas las muestras se inspeccionaron primero visualmente y se analizaron los cambios en el color o tendencias a la precipitación y cambios en viscosidad. Después se midió el pH y las muestras se analizaron más a fondo para determinar el contenido de oxitocina y ácido benzoico. Se determinaron las concentraciones frente a curvas estándar externas para oxitocina y ácido benzoico, respectivamente. Todas las muestras se prepararon por duplicado y se 15 analizaron posteriormente mediante una única inyección en HPLC (EXP-11-AJ1634).

Resultados

Tabla 1a)-c): pH, contenido de oxitocina y ácido benzoico de las muestras de las series ACA101108 después de hasta 2 semanas de almacenamiento. ND= no determinado.

20

Tiempo 0

Muestra

pH Ácido benzoico mg/g % Oxitocina mg/g %

ACA101108-1

3,15 x x 0,93 100

ACA101108-2

3,12 1,30 108 1,18 100

ACA101108-3

3,73 1,27 127 0,96 100

ACA101108-4

3,8 x x 0,93 100

Tabla 1a)

1 semana 70º

Muestra

pH Ácido benzoico mg/g % Oxitocina mg/g %

ACA101108-1

3,10 x x 0,36 38,7

ACA101108-2

3,07 1,11 93 0,47 39,8

ACA101108-3

3,81 1,07 107 0,23 24

ACA101108-4

3,82 x x 0,24 25,8

Tabla 1b)

2 semanas 70º

Muestra

pH Ácido benzoico mg/g % Oxitocina mg/g %

ACA101108-1

ND x x 0,29 31,1

ACA101108-2

ND 1,12 112 0,34 28,8

ACA101108-3

ND 1,13 113 0,15 15,6

ACA101108-4

ND x x 0,20 25,1

Tabla 1c) 5

Tabla 2a)-d): pH, contenido de oxitocina y ácido benzoico de las muestras de las series ACA101123 después de hasta 3 semanas de almacenamiento.

Tiempo 0

Muestra

pH Ácido benzoico mg/g % Oxitocina mg/g %

ACA101123-1

3,25 x x 0,98 100

ACA101123-2

3,22 0,95 95 0,94 100

ACA101123-3

3,25 0,87 87 0,88 100

ACA101123-4

3,31 x x 0,86 100

Tabla 2a) 10

1 semana 70º

Muestra

pH Ácido benzoico mg/g % Oxitocina mg/g %

ACA101123-1

ND x x 0,75 76,5

ACA101123-2

ND 1,20 120 0,77 81,9

ACA101123-3

ND 1,12 112 0,74 84,1

ACA101123-4

ND x x 0,78 90,7

Tabla 2b)

2 semanas 70º

Muestra

pH Ácido benzoico mg/g % Oxitocina mg/g %

ACA101123-1

3,31 x x 0,52 53,1

ACA101123-2

3,29 1,04 109 0,52 55,3

ACA101123-3

3,25 0,98 112 0,50 56,8

ACA101123-4

3,32 x x 0,50 58,1

Tabla 2c)

3 semanas 70º

Muestra

pH Ácido benzoico mg/g % Oxitocina mg/g %

ACA101123-1

3,30 x x 0,46 46,9

ACA101123-2

3,25 1,18 124 0,51 54,3

ACA101123-3

3,31 0,82 94,3 0,43 48,9

ACA101123-4

3,33 x x 0,47 54,7

Tabla 2d) 5

Tabla 3a)-c): pH, contenido de oxitocina y ácido benzoico de las muestras de las series ACA101207 después de hasta 2 semanas de almacenamiento.

Tiempo 0

Muestra

pH Ácido benzoico mg/g % Oxitocina mg/g %

ACA101207-1

4,17 x x 0,98 100

ACA101207-2

3,88 1,06 100 0,95 100

Tabla 3a)

5

1 semana 70º

Muestra

pH Ácido benzoico mg/g % Oxitocina mg/g %

ACA101207-1

3,98 x x 0,58 59,2

ACA101207-2

3,78 1,00 94,3 0,58 61,1

Tabla 3b)

2 semanas 70º

Muestra

pH Ácido benzoico mg/g % Oxitocina mg/g %

ACA101207-1

3,75 x x 0,50 51,0

ACA101207-2

3,67 1,06 100,00 0,51 53,7

Tabla 3c)

Tabla 4. Apariencia y viscosidad de las muestras después de hasta 3 semanas de almacenamiento. 10

Almacenamiento

ACA101108-1 ACA 101108-2

Apariencia

Viscosidad Apariencia Viscosidad

Temperatura

Tiempo

70ºC

2 semanas Clara NA Clara NA

Almacenamiento

ACA101108-3 ACA101108-4

Apariencia

Viscosidad Apariencia Viscosidad

Temperatura

Tiempo

70ºC

2 semanas Ligeramente amarilla Muy baja viscosidad Clara Muy baja viscosidad

Almacenamiento

ACA101123-1 ACA 101123-2

Apariencia

Viscosidad Apariencia Viscosidad

Temperatura

Tiempo

70ºC

3 semanas Clara NA Clara NA

Almacenamiento

ACA101123-3 ACA101123-4

Apariencia

Viscosidad Apariencia Viscosidad

Temperatura

Tiempo

70ºC

3 semanas Ligeramente amarilla Muy baja viscosidad Muy ligeramente amarilla Muy baja viscosidad

Almacenamiento

ACA101207-1 ACA 101207-2

Apariencia

Viscosidad Apariencia Viscosidad

Temperatura

Tiempo

70ºC

2 semanas Muy ligeramente amarilla Baja viscosidad Ligeramente amarilla Baja viscosidad

Discusión

En el anterior estudio de estabilidad de la oxitocina se investigó la tasa de degradación a diferentes valores de pH. 5 Este estudio indicó que la degradación de la oxitocina en una disolución acuosa tamponada de pH3, almacenada a 70ºC durante 7 días era alrededor de 15% (% área). La degradación correspondiente a pH4 fue aproximadamente del 35% (% área). En la tabla 1 anterior se indica que la degradación de la oxitocina es significativamente más extensa bajo condiciones comparables de pH, ca 60% y 75%, respectivamente. Estos datos indican que la estabilidad de la oxitocina podría ser dependiente no solamente del pH sino también del tipo de ácido usado para 10 tamponar. Es más, los datos sugieren que la Na-CMC en sí misma tiene un impacto negativo sobre la estabilidad.

La Tabla 2 indica los datos del análisis de las soluciones de oxitocina en las que se ha reemplazado la Na-CMC por un derivado de celulosa neutro, HPMC, y en las que el tampón es citrato 25 mM. Estos datos, de nuevo, indican una estabilidad significativamente mejor de la oxitocina y la degradación correspondiente está en la magnitud de alrededor del 20%. La Tabla 3 muestra la degradación correspondiente de la oxitocina en una formulación que 15 contiene HPMC en la que se usa lactato como agente tampón. Estos datos indican una estabilidad de la oxitocina similar en lactato y en citrato bajo condiciones comparables de pH. Las formulaciones anteriores en las que se usaba lactato en combinación con Na-CMC tuvieron como resultado precipitación y turbidez en las formulaciones. Esto no se ve en las formulaciones donde se usó HPMC junto con lactato, Tabla 4.

De la Tabla 4 se puede concluir que las formulaciones con ácido benzoico son ligeramente más amarillentas que las 20 formulaciones sin este conservante. Las formulaciones basadas en lactato son ligeramente más viscosas que las formulaciones basadas en citrato después de almacenamiento a 70ºC.

Los estudios anteriormente presentados también indican que el ácido benzoico es compatible con la oxitocina y los ingredientes usados.

Conclusiones 25

Este estudio muestra que la estabilidad de la oxitocina en un ambiente ácido sigue esencialmente el patrón visto antes, esto es, se ve una mejor estabilidad a pH 3 que a pH 4. Se concluye que la ocitocina es más estable en formulaciones con HPMC como agente gelificante que con Na-CMC. La viscosidad de las formulaciones disminuye tras el almacenamiento a 70ºC para ambos agentes gelificantes. La estabilidad de la oxitocina es similar en lactato y en citrato bajo condiciones comparables de pH. Se concluye que el ácido benzoico es un conservante adecuado. 30

Referencias

1. Hawe A. et al., Towards heat-stable oxytocin formulations: Analysis of degradation kinetics and identification of degradation products, Pharmaceutical Research, 2009, 26: 1679-1688.

2. Stability study of oxytocin in aqueous solutions and dry powder, Labagon AB, 2010.

3. Fawcett JP, et al., Binding of parabens to sodium carboxymethylcellulose in oral liquid formulations, Aust. J. 5 Hosp. Pharm., 1996, 26: 552-554.

4. WO/92/09307

5. Hirvonen, J., Kalia, YN, and Gay, RH. Transdermal delivery of peptides by iontophoresis. Nat. Biotechnol. December 1996; 14(13): 1710-1713.

Claims (26)

1. REIVINDICACIONES

   1. Una composición farmacéutica que comprende

   a. oxitocina (SEQ ID NO:1), y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma según SEQ ID NO:2, así como sales de la misma farmacéuticamente aceptables; y

   b. al menos un éter de celulosa no iónico; 5

   en donde SEQ ID NO:2 es

   X1-X2-X3-X4-Asn-Cys-X5-X6-X7-X8-NH2

   en donde

   X1 se selecciona del grupo que consiste en Cys, y nada;

   X2 se selecciona del grupo que consiste en Tyr, Phe, y nada; 10

   X3 se selecciona del grupo que consiste en Ile, Val, Hoph, Phe, Cha, y nada;

   X4 se selecciona del grupo que consiste en Gln, Ser, Thr, Cit, Arg y Daba;

   X5 se selecciona del grupo que consiste en Pro y nada;

   X6 se selecciona del grupo que consiste en Ile, Leu, nada, Val, Hos, Daba, Thr, Arg y Cit;

   X7 se selecciona del grupo que consiste en Gly, nada, y Ala; 15

   X8 se selecciona del grupo que consiste en Gly y nada;

   en donde dicha composición farmacéutica tiene un pH dentro del intervalo entre 3 y 4, con la condición de que dicha variante de oxitocina no sea vasopresina (SEQ ID NO:7).
2. 2. Una composición farmacéutica según la reivindicación 1, en donde dichos uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la oxitocina es/son seleccionados del grupo que consiste en los péptidos correspondiente a SEQ ID NO:3-6 y 8-20 24.
3. 3. Una composición farmacéutica según la reivindicación 1 o 2, en donde dicho pH está dentro del intervalo entre 3 y 3,8, tal como entre 3 y 3,5, o 3 y 3,3.
4. 4. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el pH de dicha composición se regula mediante la adición de un agente regulador del pH a dicha composición. 25
5. 5. Una composición farmacéutica según la reivindicación 4, en donde dicho agente regulador del pH es un tampón.
6. 6. Una composición farmacéutica según la reivindicación 5, en donde dicho tampón es un tampón lactato o un tampón citrato.
7. 7. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, que comprende además un conservante, tal como ácido benzoico. 30
8. 8. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicho al menos un éter de celulosa no iónico se selecciona a partir del grupo que consiste en metilcelulosa (MC), hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), hidroxipropilcelulosa (HPC), hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), hidroxietiletil celulosa (HEEC), e hidroxietilmetil celulosa (HEMC).
9. 9. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-8, que comprende oxitocina (SEQ ID 35 NO:1) e hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC).
10. 10. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la concentración de oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma según se define en la reivindicación 1 es alrededor de 0,1-0,8 mg/g de dicha composición farmacéutica.
11. 11. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la concentración 40 de oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma según se define en la reivindicación 1 es alrededor de 1 mg/g de dicha composición farmacéutica.
12. 12. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3, comprendiendo dicha composición alrededor de:

    1 mg/g de oxitocina

    2% en peso de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) en tampón citrato o lactato 25 mM, y opcionalmente

    1 mg/g de ácido benzoico.
13. 13. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la dósis de oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma para ser administrada está entre alrededor de 50 y 5 600 UI de oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma como se define en la reivindicación 1, tal como alrededor de 100, 200, 250, 300, 350 o 400 UI.
14. 14. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores para su uso como medicamento.
15. 15. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores para uso tópico. 10
16. 16. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores para uso vaginal.
17. 17. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores para uso en el tratamiento de un trastorno del climaterio, tal como la atrofia vaginal.
18. 18. El uso de al menos un éter de celulosa no iónico para mejorar la estabilidad de una composición farmacéutica que comprende oxitocina (SEQ ID NO:1), y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma según SEQ ID 15 NO:2, como se define en la reivindicación 1 o 2.
19. 19. El uso según la reivindicación 18, en donde dicha composición farmacéutica es como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-13.
20. 20. Un método para la preparación de una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-13 o 23-25 con estabilidad mejorada que comprende las etapas de: 20

    a) preparar una disolución tampón y ajustar el pH de la misma,

    b) añadir oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma como se define en la reivindicación 1 o 2, a dicha disolución tampón, y después de eso

    c) añadir al menos un éter de celulosa no iónico a la disolución obtenida en la etapa b);

    en donde opcionalmente se añade un conservante, tal como ácido benzoico, a la disolución tampón de 25 la etapa a) antes de añadir dicha oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma a dicha disolución tampón,

    y en donde el pH de dicha composición farmacéutica se regula para que caiga dentro del intervalo entre 3 y 4, tal como dentro del intervalo de 3 y 3,5.
21. 21. Un método según la reivindicación 20, para la preparación de una composición farmacéutica según cualquiera 30 de las reivindicaciones 1-13 o 23-25
22. 22. Un método según cualquiera de las reivindicaciones 20-21, en donde dicho al menos un éter de celulosa no iónico es hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC).
23. 23. Una composición farmacéutica que comprende

    a. oxitocina (SEQ ID NO:1), y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma según SEQ ID NO:2, así 35 como sales de la misma farmacéuticamente aceptables; y

    b. al menos un éter de celulosa no iónico;

    en donde SEQ ID NO:2 es

    X1-X2-X3-X4-Asn-Cys-X5-X6-X7-X8-NH2

    en donde 40

    X1 se selecciona del grupo que consiste en Cys, y nada;

    X2 se selecciona del grupo que consiste en Tyr, Phe, y nada;

    X3 se selecciona del grupo que consiste en Ile, Val, Hoph, Phe, Cha, y nada;

    X4 se selecciona del grupo que consiste en Gln, Ser, Thr, Cit, Arg y Daba;

    X5 se selecciona del grupo que consiste en Pro y nada;

    X6 se selecciona del grupo que consiste en Ile, Leu, nada, Val, Hos, Daba, Thr, Arg y Cit;

    X7 se selecciona del grupo que consiste en Gly, nada, y Ala;

    X8 se selecciona del grupo que consiste en Gly y nada;

    en donde dicha oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma según SEQ ID NO:2, o una de 5 sus sales de la misma farmacéuticamente aceptables está/n presentes en dicha composición farmacéutica en una concentración de alrededor de 0,5 hasta alrededor de 1,5 mg/g de la composición farmacéutica total, y dicho al menos un éter de celulosa no iónico está presente en una cantidad de alrededor de 1-3% en peso, tal como alrededor de 2 o 3% en peso, en una agente regulador del pH, tal como un tampón, teniendo dicho agente regulador del pH una concentración de entre alrededor de 25 mM hasta alrededor de 100 mM, con la 10 condición de que dicha variante de oxitocina no es vasopresina (SEQ ID NO:7).
24. 24. Una composición como se define en la reivindicación 23, en donde la oxitocina y/o uno o más fragmento(s) y/o variante(s) de la misma según SEQ ID NO:2, o una sal de la misma farmacéuticamente aceptable está(n) presentes en dicha composición farmacéutica en una concentración de alrededor de 0,1 a alrededor de 0,8 mg/g de la composición farmacéutica total. 15
25. 25. Una composición farmacéutica según la reivindicación 23 o 24, en donde dicho al menos un éter de celulosa no iónico es hidroxipropilmetilcelulosa y está presente en una cantidad de alrededor de 2% en peso, en un tampón con una concentración de alrededor de 25 mM, siendo dicho tampón un tampón lactato o un tampón citrato.
26. 26. Un kit que comprende una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1-13 o 23-25 y un dispensador para dicha composición farmacéutica, opcionalmente en combinación con instrucciones para el uso de 20 dicha composición farmacéutica.

    imagen1