ES2532007T3

ES2532007T3 - Formulación para combinación de HGH y rhIGF-1

Info

Publication number: ES2532007T3
Application number: ES10784450.8T
Authority: ES
Inventors: Enona Gopinath; Susan Park; Tsutomu Arakawa; Joël Richard; Fabio Fais
Original assignee: Ipsen Pharma SAS
Current assignee: Ipsen Pharma SAS
Priority date: 2009-11-17
Filing date: 2010-11-17
Publication date: 2015-03-23
Anticipated expiration: 2030-11-17
Also published as: JP6143827B2; IN2012DN02861A; JP2016020395A; JP6084036B2; WO2011060922A1; AU2010321225B2; US20120270782A1; JP2013510893A; EP2501367A1; HK1175711A1; RU2012124985A; MX2012005195A; AU2010321225A1; UA108994C2; BR112012011539A8; KR101614983B1; KR20120104251A; CA2780554A1; CA2780554C; BR112012011539A2

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende IGF-1 y GH y * un agente antiagregante; * un tampón; * un tensioactivo no iónico; * un conservante; y * un modificador de la tonicidad o un agente de carga en la que el agente antiagregante es arginina presente en la composición en una concentración que oscila de 80 mM a 200 mM, el tampón se selecciona de histidina o citrato a una concentración que oscila de 1 a 50 mM, y el modificador de la tonicidad es cloruro sódico a una concentración de 0 a 150 mM.

Description

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intervalo de concentración de alrededor de 120 a alrededor de 160 mM o a una concentración de alrededor de 150 mM.

El pH se ajusta a un valor que oscila de alrededor de 5 a alrededor de 7, preferiblemente de alrededor de 5,5 a alrededor de 6,5, más preferiblemente de alrededor de 5,8 a 6,2. En el contexto de los valores de pH, el término "alrededor de" significa que el valor de pH puede variar en ± 0,2 o ± 0,1. El pH de una disolución se puede ajustar mediante cualquier medio adecuado, tal como, p.ej., añadiendo una cantidad adecuada de una disolución ácida tal como, p.ej., citrato o, preferiblemente, HCl.

El pH a usar de acuerdo con la presente invención puede ser, p.ej., 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, preferiblemente es 5,8, 6,2 o alrededor de 6,5.

En una realización adicional, el osmolito o modificador de la tonicidad es una sal inorgánica. La sal inorgánica es cloruro sódico, presente en la composición a una concentración de 0 a 150 mM, preferiblemente en una concentración de 1 a 50 mM.

Además, el conservante se puede seleccionar de la lista: fenol, alcohol bencílico, m-cresol, clorobutanol. Los conservantes preferidos son fenol o alcohol bencílico. El conservante puede estar presente en la composición a una concentración del 0,1 al 5 % (p/p), preferiblemente 0,2 al 2 % (p/p) o aún más preferiblemente 1%.

El tensioactivo de la composición descrita en la presente invención se selecciona, p.ej., de la lista: polisorbato (Tween) o un poloxámero tal como polisorbato 80, polisorbato 20 o poloxámero 188. El tensioactivo es no iónico, más preferiblemente es un polisorbato (Tween) tal como polisorbato 80, polisorbato 20 o un poloxámero tal como poloxámero 188, más preferiblemente polisorbato 20 o poloxámero 188 en un intervalo de concentración de alrededor del 0,01 al 3 % (p/p), preferiblemente de alrededor del 0,03 al 0,50 % (p/p) y más preferiblemente de alrededor del 0,2% (p/p).

Además, el tampón se puede seleccionar de tampones farmacéuticamente aceptables adecuados que confieren un pH de 5 a 6,5, tales como citrato sódico o histidina o ambos; preferiblemente tampones acetato, tampones citrato, tampones fosfato, aminoácidos tales como histidina y todas las sales de los mismos. El tampón se selecciona de citrato o histidina. El tampón está presente en la composición final a una concentración entre 1 y 50 mM, y más preferiblemente de 10 mM a 20 mM.

De acuerdo con la invención, las cantidades de IGF-1 y GH son de alrededor de 2 a 40 mg/ml (IGF-1) y de alrededor de 1 a 12 mg/ml (hGH) respectivamente, las cantidades preferidas son de alrededor de 5 a 20 mg/ml (IGF-1) y de alrededor de 2 a 8 mg/ml (hGH). Las cantidades adicionalmente preferidas son de alrededor de 10 mg/ml de IGF-1 y de alrededor de 3 mg/ml de hGH, o de alrededor de 13,2 mg/ml de IGF-1 y de 2 mg/ml de GH.

La proporción en peso de IGF-1:GH (p/p) oscila preferiblemente de 1:1 a 9:1, o de manera alternativa de 1:9 a 1:1. Más preferiblemente, la proporción en peso de IGF-1:GH (p/p) se selecciona de la lista: 9:1 (p/p); 6:1 (p/p); 3:1 (p/p); 2:1; 3:7 (p/p); 1:1 (p/p); 1:2 (p/p); 1:5 (p/p); 7:3 (p/p); 9:1 (p/p).

Las proporciones en peso más preferidas de IGF-1:GH (p/p) se seleccionan de 1,1:1, 2,2:1, 3,3:1 y 6,6:1. En una realización, la composición comprende una combinación de rhIGF-1 y rhGH en una concentración de alrededor de 10 a 30 mg/ml (IGF-1) y de alrededor de 1 a 12 mg/ml (rhGH) respectivamente, y una proporción en peso de IGF-1:GH de entre alrededor de 9:1 y 1:9 (p/p), alrededor del 0,01 al 3 % (p/p) de un tensioactivo, opcionalmente alrededor del 0,1 al 5 % (p/p) de un conservante, alrededor de 1 a 150 mM de un tampón, preferiblemente citrato o histidina, un agente antiagregante tal como arginina o lisina en un intervalo de concentración de 80 a 200 mM. Opcionalmente, la composición puede comprender también uno o dos modificadores de la tonicidad tales como NaCl, KCl a una concentración de alrededor de 0 a 150 mM para NaCl y KCl y/o agentes de carga tales como trehalosa, manitol, sorbitol o sacarosa del 1 al 10 % (p/p) de manitol, sorbitol, trehalosa o sacarosa.

Además, la invención se refiere a un proceso para la preparación de una composición farmacéutica que comprende una combinación de IGF-1 y GH.

En las formulaciones farmacéuticas según la presente invención, la hormona del crecimiento humana y el factor de crecimiento similar a insulina se producen preferiblemente mediante medios recombinantes.

En una realización adicional, IGF-1 y GH, preferiblemente en una composición según la presente invención, se pueden administrar al paciente, cada uno en cantidades eficaces o cada uno en cantidades que son sub-óptimas, pero que cuando se combinan son eficaces. Preferiblemente, tales cantidades son alrededor de 25 a 250 microgramos de IGF-1/kg de peso corporal/día y alrededor de 0,05 a 0,5 mg de GH/kg de peso corporal/semana.

Preferiblemente, la administración de la formulación farmacéutica es mediante inyección, y la inyección es preferiblemente parenteral, tal como por medio de una vía subcutánea, intramuscular, intravenosa o por infusión, y la composición farmacéutica se usará lo más preferiblemente en forma de inyección rápida diaria, y es preferiblemente una formulación de liberación inmediata (IRF).

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El paciente a tratar es preferiblemente un mamífero, en particular un ser humano, pero puede ser también un animal.

En una realización adicional, la invención proporciona el uso de la composición en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad caracterizado por un incremento o el control de la cantidad de hormona del crecimiento en el plasma.

En particular, la invención proporciona métodos y composiciones para el tratamiento de la deficiencia de la hormona del crecimiento (GHD); Síndrome de Turner, síndrome de Prader-Willi (PWS); talla baja en niños nacidos con un peso al nacer muy bajo (VLBW), GHD en adultos. También para un trastorno endocrino, por ejemplo que comprende administrar a un paciente que padece un trastorno metabólico caracterizado por una actividad o señalización parcial de la hormona del crecimiento endógena una cantidad de factor de crecimiento similar a insulina 1 (IGF-1) y una cantidad de hormona del crecimiento (GH) que son eficaces en la terapia de combinación para mejorar una anormalidad metabólica en el paciente. En el que el paciente tiene síndrome de talla baja idiopática adulta (ISS), en el que el paciente recibe IGF-1 en una única administración al día y recibe GH en una única administración al día, y en el que el paciente recibe la administración de IGF-1 y GH de manera contemporánea.

La invención también proporciona métodos y composiciones para niños que padecen trastornos del crecimiento caracterizados por una actividad o señalización parcial de la hormona del crecimiento endógena. Estos crecimientos que provocan trastornos en la infancia persisten en la edad adulta, y los adultos afectados pueden padecer una diversidad de trastornos metabólicos.

Según la presente invención, hGH y hIGF-1 se usan como un medicamento o como una composición farmacéutica.

Una ventaja valiosa de la presente invención es proporcionar composiciones que se pueden usar precargadas en un recipiente, tal como jeringas, o formulaciones listas para su uso.

Ejemplo 1

Ensayos de solubilidad

Se prepararon mezclas de Increlex® (disolución de 10 mg/ml, formulada en tampón acetato 50 mM a pH 5,4) y Nutropin AQ® (disolución de 5 mg/ml, formulada en tampón citrato 10 mM a pH 6) en proporciones en volumen que oscilaron de 9:1 a 1:9. Las mezclas mostraron grados variables de precipitación visible inmediatamente o en unas pocas horas desde la mezcla. El análisis mediante espectroscopía de masas de los precipitados formados en las mezclas de Nutropin AQ® e Increlex® reveló la presencia de ambas proteínas en los precipitados. En la Tabla 1 se recogen observaciones y resultados relacionados con la claridad de las co-mezclas preparadas a partir de productos comercializados de IGF-1 (Increlex®) y GH (Nutropin AQ®)

Tabla 1

Proporción (v:v): Increlex (mL) Nutropin AQ (mL) Observaciones

Inicial (20 MAR. 08): 24 horas (21 MAR. 08) 1 semana (27 MAR. 08)

9:1: 3,6 0,4 Precipitado en suspensión muy tenue pH=5,42 Precipitado en suspensión muy tenue Precipitado en suspensión muy tenue

5:1: 3,6 0,72 Precipitado en suspensión tenue pH=5,51 Precipitado en suspensión tenue Precipitado en suspensión tenue

2:1: 3,6 1,8 Precipitado en suspensión pH=5,57 Precipitado en suspensión Precipitado en suspensión

1:1: 2,0 2,0 Precipitado en suspensión pH=5,64 Precipitado en suspensión Claro con película gelatinosa sobre el vidrio

1:2: 1,8 3,6 Precipitado turbio, intenso pH=5,74 Claro con película gelatinosa sobre el vidrio Claro con película gelatinosa sobre el vidrio

1:5: 0,72 3,6 Precipitado en suspensión pH=5,85 Precipitado intenso, grueso Claro con película gelatinosa sobre el vidrio

1:9: 0,40 3,6 Precipitado en suspensión pH=5,94 Precipitado en suspensión Precipitado en suspensión

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Se confirmó que la solubilidad de IGF-1 fue mayor de 20 mg/ml a lo largo del intervalo de pH de las mezclas (5,45,9), lo que indica que la solubilidad de IGF-1 no provoca el precipitado observado. Se descubrió que la solubilidad de GH en tampones citrato, acetato o histidina en el intervalo de pH depende del tampón. Los resultados demuestran una disminución pronunciada de la solubilidad de las disoluciones de GH tamponadas con acetato a

5 valores de pH por debajo de 5,6, lo que puede contribuir a la precipitación observada en las mezclas que resultan de las disoluciones.

Sin embargo, las mezclas de Nutropin AQ® con placebo de Increlex® (que no contiene IGF-1, pero es por otra parte idéntico en composición a Increlex®), o las mezclas de Increlex® con el placebo de Nutropin AQ® (que no contiene GH, pero es por otra parte idéntico en composición a Nutropin AQ®) permanecen claras en comparación, lo que

10 indica que la solubilidad reducida de las proteínas también puede estar relacionada con la interacción entre las dos proteínas. Además, Increlex® diluido con placebo de Increlex® hasta una concentración final de 2,5 mg/mL se puede mezclar con Nutropin AQ® en proporciones IGF-1:hGH de 2,2:1 o más sin precipitación, lo que indica que la interacción entre las proteínas es reversible.

Ejemplo 2

15 Comparación y preparación de composiciones de co-mezclas tamponadas en citrato a diversos pH

Se disolvió hGH liofilizada en un tampón citrato 10 mM a pH 6, que contenía cloruro sódico 150 mM y 0,2% de polisorbato 20, hasta una concentración final de 5 mg/ml. Las disoluciones de IGF-1 en los diferentes tampones de formulación mostrados en la Columna 1 de la Tabla 1 se prepararon mediante diálisis del IGF-1 en el tampón respectivo o mediante reconstitución de IGF-1 liofilizado en el tampón. La concentración final de las disoluciones de

20 IGF-1 antes de mezclarlas con las disoluciones de GH fue 10 mg/ml. Las disoluciones de GH e IGF-1 se mezclaron en las diversas proporciones mostradas en la Tabla 2.

El aspecto visual de las co-mezclas preparadas de GH en un tampón citrato con IGF-1 en diversos tampones a pH 5,4 y 6 se recoge en la Tabla 2.

Tabla 2

Formulación de IGF-1: Proporción de mezcla de hGH:IGF-1 Aspecto visual de las mezclas después de 1-2 semanas a 5 ºC

Citrato 10 mM, pH 5,4: 1:9 Claro

3:7: Claro

1:1: Algunas partículas

7:3: Partículas

9:1: Disolución turbia

Citrato 20 mM, pH 6: 1:9 Claro

3:7: Partículas tenues

1:1: Partículas tenues

7:3: Partículas tenues

9:1: Partículas tenues al mezclar

Citrato 50 mM, pH 5,4: 1:9 Claro

3:7: Claro

1:1: Partículas tenues

7:3: Algunas partículas

9:1: Disolución turbia

Acetato 10 mM, pH 5,4: 1:9 Claro

3:7: Ligeramente turbio, claro después de mezclar

1:1: Disolución ligeramente turbia

7:3: Disolución turbia

9:1: Disolución turbia

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Acetato 50 mM, pH 5,4: 1:9 Claro

3:7: Partículas muy tenues

1:1: Partículas

7:3: Suspensión turbia

9:1: Suspensión turbia

Fosfato 10 mM, pH 6: 1:9 Claro después de mezclar

3:7: Disolución turbia

1:1: Disolución turbia

7:3: Disolución turbia

9:1: Disolución turbia

Fosfato 50 mM, pH 6: 1:9 Ligeramente turbio, claro después de mezclar

3:7: Turbio después de mezclar

1:1: Partículas

7:3: Suspensión turbia

9:1: Suspensión turbia

Histidina 10 mM, pH 5,4: 1:9 Claro

3:7: Ligeramente turbio después de mezclar

1:1: Ligeramente turbio después de mezclar

7:3: Disolución turbia

9:1: Disolución turbia

Histidina 50 mM, pH 5,4: 1:9 Claro

3:7: Prácticamente claro al mezclar

1:1: Partículas

7:3: Suspensión turbia

9:1: Suspensión turbia

Histidina 10 mM, pH 6: 1:9 Claro

3:7: Claro

1:1: Ligeramente turbio

7:3: Ligeramente turbio después de mezclar

9:1: Disolución turbia

Histidina 50 mM, pH 6: 1:9 Claro

3:7: Disolución turbia

1:1: Disolución turbia

7:3: Disolución turbia

9:1: Disolución turbia

Las observaciones registradas en la Tabla 2 demuestran que las disoluciones de IGF-1 en los diversos tampones producen precipitación cuando se mezclan con la GH formulada en tampón citrato a pH 6.

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Ejemplo 3

Preparación de composiciones y ensayos de claridad de la composición tamponada con citrato

Se dializaron por separado disoluciones de aproximadamente 19 mg/ml de cada proteína (IGF-1 y hGH) en un tampón citrato 10 mM a pH 6,0 que contenía arginina 10 mM. Tras una diálisis durante la noche, se determinaron las 5 concentraciones de la disolución mediante la medida de la absorbancia ultravioleta (UV) a 280 nm. Las concentraciones finales de las disoluciones de IGF-1 y hGH fueron 14 y 21 mg/ml, respectivamente. Se constituyeron alícuotas individuales de cada disolución con los excipientes restantes como se muestra en la Tabla 3, y se diluyeron hasta una concentración de proteína final de 10 mg/ml. Cada par de disoluciones de proteínas formuladas individualmente (IGF-1 y hGH) se mezclaron en una proporción 1:1, para preparar mezclas que 10 contuvieron 5 mg/ml de cada proteína. Después de preparar las dos mezclas de proteínas, se añadió uno de los dos tensioactivos a las formulaciones de proteínas individuales y a las co-mezclas, hasta las concentraciones finales. Las disoluciones se inspeccionaron después de 72 horas de refrigeración. Las dos mezclas que permanecieron claras en este punto (composiciones de formulaciones marcadas como A2 y A10 en la Tabla 3) se almacenaron en el refrigerador y se inspeccionaron de nuevo para confirmar que permanecieron claras después de 70 días de 15 almacenamiento. En la Tabla 3 se recogen los resultados de los ensayos del aspecto de las formulaciones de citrato

después de 72 horas a 5 °C.

Tabla 3:

ID de la muestra: Excipientes IGF-1 (10 mg/ml) hGH (10 mg/ml) Co-mezcla (5 mg/ml de IGF-1 + 5 mg/ml de hGH)

Claridad de la disolución después de 72 horas

A1: Arginina 10 mM, 0,2% de Polisorbato 20, NaCl 150 mM, 1% de BzOH, Citrato 10 mM, pH 6,0 Sí No No

A2: Arginina 100 mM, 0,2% de Polisorbato 20, NaCl 50 mM, 1% de BzOH, Citrato 10 mM, pH 6,0 Sí Sí Sí

A3: Arginina 10 mM, 0,2% de Polisorbato 20, NaCl 150 mM, 0,25% de Fenol, Citrato 10 mM, pH 6,0 Sí No No

A4: Arginina 10 mM, 0,3% de Poloxámero 188, NaCl 150 mM, 1% de BzOH, Citrato 10 mM, pH 6,0 Sí No No

A5: Arginina 100 mM, 0,3% de Poloxámero 188, NaCl 150 mM, 1% de BzOH, Citrato 10 mM, pH 6,0 Sí No No

A6: Arginina 10 mM, 0,03% de Poloxámero 188, NaCl 150 mM, 1% de BzOH, Citrato 10 mM, pH 6,0 Sí No No

A7: Arginina 100 mM, 0,03% de Poloxámero 188, NaCl 150 mM, 1% de BzOH, Citrato 10 mM, pH 6,0 Sí No No

A8: Arginina 10 mM, 0,3% de Poloxámero 188, NaCl 75 mM, 2,5% de Manitol, 1% de BzOH, Citrato 10 mM, pH 6,0 Sí No No

A9: Arginina 10 mM, 0,3% de Poloxámero 188, 5% de Manitol, 1% de BzOH, Citrato 10 mM, pH 6,0 Sí No No

A10: Arginina 100 mM, 0,3% de Poloxámero 188, 5% de Manitol, 1% de BzOH, Citrato 10 mM, pH 6,0 Sí Sí Sí

Las dos formulaciones claras (A2 y A10) contuvieron ión argininio 100 mM añadido, y poca o ninguna cantidad de

20 cloruro sódico añadido. Dos formulaciones, marcadas como A1 y A9 en la Tabla 3, que fueron casi idénticas en composición a A2 y A10, respectivamente, pero que contuvieron una cantidad inferior de ión argininio añadido (10 mM), no permanecieron claras.

Ejemplo 4

Preparación y ensayo de claridad comparativo de una composición tamponada con histidina

25 Se dializó una disolución de 19 mg/ml de IGF-1 en un tampón Histidina 10 mM a pH 5,6 que contenía arginina 10 mM. Tras la diálisis, se determinó la concentración de la disolución mediante la medida de la absorbancia ultravioleta (UV) a 280 nm, que fue 18 mg/ml. La disolución se constituyó con cantidades adecuadas de arginina, alcohol bencílico, tensioactivo (Polisorbato 20 o Poloxámero 188), cloruro sódico, y manitol adicionales para preparar las

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composiciones de las formulaciones marcadas como B1 a B8 en la Tabla 4. Se usaron alícuotas de las formulaciones de IGF-1 solo para reconstituir la hormona del crecimiento liofilizada para preparar las formulaciones correspondientes que contenían 5 mg/ml de cada proteína. Se observó el aspecto de las disoluciones tras la refrigeración a 5 °C durante 24 horas. Todas las formulaciones mostraron cierta precipitación en este punto, excepto las tres formulaciones marcadas como B3, B4 y B8 en la Tabla 4. Estas formulaciones se almacenaron en el refrigerador durante otros 65 días, y permanecieron claras al final de ese tiempo. En la Tabla 4 se recogen las formulaciones tamponadas con histidina a pH 5,6 tras 24 horas a 5 °C.

Tabla 4

ID de la: IGF-1 (5 mg/ml) Co-mezcla (5 mg/mL de IGF-1 + 5 mg/mL de hGH)

muestra: Excipientes Claridad de la disolución después de 72 horas

B1: Arginina 10 mM, 0,2% de Polisorbato 20, NaCl 150 mM, 1% de BzOH, Histidina 10 mM, pH 5,6 Sí No

B2: Arginina 10 mM, 0,02% de Polisorbato 20, NaCl 150 mM, 1% de BzOH, Histidina 10 mM, pH 5,6 Sí No

B3: Arginina 100 mM, 0,02% de Polisorbato 20, NaCl 50 mM, 1% de BzOH, Histidina 10 mM, pH 5,6 Sí Sí

B4: Arginina 100 mM, 0,3% de Poloxámero 188 20, NaCl 50 mM, 1% de BzOH, Histidina 10 mM, pH 5,6 Sí Sí

B5: Arginina 10 mM, 0,3% de Poloxámero 188 20, NaCl 150 mM, 1% de BzOH, Histidina 10 mM, pH 5,6 Sí No

B6: Arginina 10 mM, 0,03% de Poloxámero 188 20, NaCl 150 mM, 1% de BzOH, Histidina 10 mM, pH 5,6 Sí No

B7: 0,3% de Poloxámero 188 20, 5% de Manitol, 1% de BzOH, Histidina 10 mM, pH 5,6 Sí No

B8: Arginina 100 mM, 0,3% de Poloxámero 188, 5% de Manitol, 1% de BzOH, Histidina 10 mM, pH 5,6 Sí Sí

10 Las tres mezclas de formulaciones que permanecieron claras contuvieron ión argininio 100 mM. La mezcla de formulación marcada como B7, que corresponde exactamente a la composición de la formulación B8 en la Tabla 4 pero sin arginina añadida, mostró precipitación al observarla después de 24 horas de refrigeración, mientras la formulación B8 permaneció clara. De forma similar, la mezcla de formulación marcada como B4 en la Tabla 4 permaneció clara después de una refrigeración prolongada, mientras la formulación B2, que contuvo solamente

15 Arginina 10 mM y cloruro sódico adicional, no permaneció clara.

Ejemplo 5

Preparación de una composición tamponada con histidina a pH 6

Se dializaron por separado disoluciones de aproximadamente 19 mg/ml de cada proteína (IGF-1 y hGH) en un tampón histidina 10 mM a pH 6 que incluyó arginina 10 mM. Tras una diálisis durante la noche, se determinaron las 20 concentraciones de la disolución mediante la medida de la absorbancia ultravioleta (UV) a 280 nm. Las concentraciones finales de las disoluciones de IGF-1 y hGH tras la diálisis fueron 11 y 21 mg/ml, respectivamente. Las disoluciones se constituyeron individualmente con cantidades adecuadas de arginina, alcohol bencílico, tensioactivo (Polisorbato 20 o Poloxámero 188), cloruro sódico y manitol adicionales para preparar las dos composiciones de las formulaciones marcadas como C1 y C2 en la Tabla 5. Las formulaciones de proteínas

25 individuales se mezclaron en una proporción 1:1 para preparar las co-mezclas, y se observó el aspecto de las 6 disoluciones tras la refrigeración a 5 °C durante 72 horas. Ambos grupos de formulaciones de la hormona del crecimiento y las co-mezclas mostraron cierta precipitación, posiblemente debida a la concentración salina elevada (150 mM) en estas formulaciones. En la Tabla 5 se recoge la formulación tamponada con histidina a pH 6 tras 72 horas a 5 °C.

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Tabla 5:

Claridad de la disolución después de 72 horas

C1: Arginina 100 mM, 0,3% de Poloxámero 188, NaCl 150 mM, 1% de BzOH, Histidina 10 mM, pH 6,0 Sí No No

C2: 0,3% de Poloxámero 188, NaCl 150 mM, 1% de BzOH, Histidina 10 mM, pH 6,0 Sí No No

Ejemplo 6

Preparación y comparación de una composición tamponada con citrato e histidina

5 Se prepararon dos formulaciones con cada proteína (IGF-1 y GH), a concentraciones finales de proteínas de 20 mg/ml (IGF-1) y 6 mg/ml (GH), respectivamente:

Formulación 1: Citrato 10 mM, 0,2% de Polisorbato 20, 1% de Alcohol Bencílico, Arginina 100 mM, NaCl 50 mM, pH 6,2

Formulación 2: Histidina 10 mM, Arginina 100 mM, 0,3% de Poloxámero 188, 1% de Alcohol Bencílico, NaCl 10 50 mM, pH 5,8

Las formulaciones se prepararon mediante intercambio de tampones de cada proteína mediante filtración de flujo tangencial, en cada uno de los dos tampones (tampón 1 y tampón 2), para preparar cuatro disoluciones de reserva a las concentraciones mostradas en la Tabla 6. En la Tabla 6 se recoge la preparación de las disoluciones de reserva para la formulación.

15 Tabla 6:

Sistema Tampón: Concentración de proteína tras el intercambio de tampones (mg/ml)

IGF-1: GH

Tampón 1: Citrato 10 mM, NaCl 50 mM, Arginina 100 mM pH 6,0: 38 mg/ml 15 mg/ml

Tampón 2: Histidina 10 mM, NaCl 50 mM, Arginina 100 mM pH 5,6: 29 mg/ml 14 mg/ml

Se añadió un tampón adicional y disoluciones de reserva de tensioactivo a cada disolución de reserva con mezcla suave, seguido de la adición de la cantidad adecuada de BzOH puro (alcohol bencílico) para llevar a cabo la composición final de las formulaciones 1 y 2 con cada proteína. Las concentraciones de proteínas de las 20 formulaciones de IGF-1 y hGH fueron 20 mg/ml y 6 mg/ml, respectivamente. Las cuatro formulaciones (dos formulaciones de IGF-1 y dos formulaciones de hGH) se diluyeron después y/o se mezclaron para llevar a cabo las formulaciones finales y las co-mezclas de la Tabla 7. Las disoluciones se almacenaron después a 2-8 °C hasta su dilución/colocación en viales posterior. Todas las disoluciones de proteínas se filtraron de manera estéril mediante el uso de membranas PES y después se alicuotaron en viales de vidrio de 3 ml. Los viales se taparon, se sellaron con

25 cierres a presión y se almacenaron durante hasta 8 semanas en el refrigerador. Se estudió el aspecto de cada disolución a intervalos de 2 semanas durante 8 semanas. Al final de las 8 semanas, las 14 disoluciones todavía estuvieron claras e incoloras. En la Tabla 7 se recogen los resultados del aspecto visual de las formulaciones de citrato e histidina que contenían arginina 100 mM.

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Tabla 7

Formulaciones de Citrato: Citrato 10 mM, 0,2% de Polisorbato 20, 1% de Alcohol Bencílico, Arginina 100 mM, NaCl 50 mM, pH 6,2

ID: Proporción hGH IGF-1 Aspecto de la disolución

GH:IGF-1: (mg/ml) (mg/ml) Inmediatamente después de mezclar Después de 8 semanas a 5 ºC

CA1: 1:1,1 3 3,3 Disolución Clara, Incolora Disolución Clara, Incolora

CA2: 1:4 2,5 10 Disolución Clara, Incolora Disolución Clara, Incolora

CA3: GH solo 3 - Disolución Clara, Incolora Disolución Clara, Incolora

CA4: IGF-1 solo - 10 Disolución Clara, Incolora Disolución Clara, Incolora

CC1: 1:1,1 4,5 5 Disolución Clara, Incolora Disolución Clara, Incolora

CC2: GH solo 6 - Disolución Clara, Incolora Disolución Clara, Incolora

CC3: IGF-1 solo - 20 Disolución Clara, Incolora Disolución Clara, Incolora

Formulaciones de Histidina: Histidina 10 mM, Arginina 100 mM, 0,3% de Poloxámero 188, 1% de Alcohol Bencílico, NaCl 50 mM, pH 5,8

ID: Proporción hGH IGF-1 Aspecto de la disolución

HB1: 1:1,1 3 3,3 Disolución Clara, Incolora Disolución Clara, Incolora

HB2: 1:4 2,5 10 Disolución Clara, Incolora Disolución Clara, Incolora

HB3: GH solo 3 - Disolución Clara, Incolora Disolución Clara, Incolora

HB4: IGF-1 solo - 10 Disolución Clara, Incolora Disolución Clara, Incolora

HD1: 1:1,1 4,5 5 Disolución Clara, Incolora Disolución Clara, Incolora

HD2: GH solo 6 - Disolución Clara, Incolora Disolución Clara, Incolora

HD3: IGF-1 solo - 20 Disolución Clara, Incolora Disolución Clara, Incolora

Se verificó la estabilidad química de las composiciones a lo largo del periodo de ocho semanas mediante un análisis periódico de las formulaciones y de las co-mezclas. Se almacenaron refrigeradas a 5 °C y a 25 °C, para detectar los 5 productos de degradación principales, limitantes de la estabilidad, de IGF-1 (des-Gly,Pro-IGF-1) y GH (GH desamidada), y la comparación de las tasas de degradación con las tasas establecidas para los controles registrados, estables a largo plazo, Increlex® (IGF-1, líquido para inyección) y Nutropin AQ® (GH, líquido para inyección). Las tasas de degradación se muestran en las Tablas 8 y 9. Las formulaciones no muestran ninguna tendencia a la degradación lenta de IGF-1 a 5 °C a lo largo del periodo de tiempo de 8 semanas; sin embargo, las

10 formulaciones nuevas y las co-mezclas almacenadas a 25 °C muestran una estabilidad comparable a las tasas de degradación aceleradas típicas observadas para Increlex®. La desamidación de GH en las formulaciones nuevas y en las co-mezclas muestra tasas comparables con los controles de Nutropin AQ®, tanto a 5 °C como a 25 °C.

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Tabla 8

Formulación: hGH (mg/mL IGF-1 (mg/mL) Excipientes Tasa de degradación (% de incremento de DGP-IGF-1 por semana) a 25 ºC

CA1: 3 3,3 Citrato 10 mM, 0,2% de Polisorbato 20, 1% de Alcohol Bencílico, Arginina 100 mM, NaCl 50 mM, pH 6,2 1,04E-01

CA2: 2,5 10 1,05E-01

CA4: 10 9,02E-02

CC1: 4,5 5 8,49E-02

CC3: 20 8,96E-02

HB1: 3 3,3 Histidina 10 mM, Arginina 100 mM, 0,3% de Poloxámero 188, 1% de Alcohol Bencílico, NaCl 50 mM, pH 5,8 8,17E-02

HB2: 2,5 10 8,72E-02

HB4: 10 7,31E-02

HD1: 4,5 5 7,96E-02

HD3: 20 6,78E-02

Increlex*: 10 Acetato 50 mM, 0,2% de Polisorbato 20, 0,9% de Alcohol Bencílico, NaCl 100 mM, pH 5,4 1,19E-01

* Tasa de degradación media de 15 lotes

Tabla 9

Formulación: hGH (mg/mL IGF-1 (mg/mL) Excipientes Tasa de desamidación (% de incremento por semana)

a 5 ºC: a 25 ºC

CA1: 3 3,3 Citrato 10 mM, 0,2% de Polisorbato 20, 1% de Alcohol Bencílico, Arginina 100 mM, NaCl 50 mM, pH 6,2 1,91E-02 2,85E-01

CA2: 2,5 10 2,09E-02 3,25E-01

CA3: 3 1,56E-02 2,71E-01

CC1: 4,5 5 2,48E-02 3,04E-01

CC2: 6 2,36E-02 3,00E-01

HB1: 3 3,3 Histidina 10 mM, Arginina 100 mM, 0,3% de Poloxámero 188, 1% de Alcohol Bencílico, NaCl 50 mM, pH 5,8 1,53E-02 1,33E-01

HB2: 2,5 10 2,01E-02 1,62E-01

HB3: 3 1,43E-02 1,22E-01

HD1: 4,5 5 1,66E-02 1,51E-01

HD2: 6 1,99E-02 1,44E-01

Nutropin AQ: 5 Citrato 10 mM, 0,2% de Polisorbato 20, 0,25% de Fenol, NaCl 150 mM, pH 6,0 2,12E-02 2,99E-01

Ejemplo 7 Preparación y comparación de composiciones de IGF-1 tamponadas con histidina Se prepararon dos formulaciones con IGF-1 a una concentración final de proteína de 20 mg/ml (IGF-1): Formulación 1: Histidina 20 mM, 0,2% de Polisorbato 20, 1% de Alcohol Bencílico, Arginina 150 mM, pH 5,8 Formulación 2: Histidina 50 mM, 0,2% de Polisorbato 20, 1% de Alcohol Bencílico, Arginina 150 mM, pH 5,8

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Tabla 11

Temp: Meses Fecha deEnsayo/Retirada1 MesesExactos Increlex (% deMonómero) rhIGF-1 solo (%de Monómero) Nutropin (% deMonómero) rhGH solo (% deMonómero) 1:2,2 Co-form. (%de Monómero) 1:6,6 Co-form. (%de Monómero)

IGF-1: GH IGF-1 GH IGF-1 GH IGF-1 GH IGF-1 GH IGF-1 GH

n/a: 0 22 oct. 09 0,000 99,5 - 99,7 - - 99,9 - 100,0 99,5 100,0 99,6 100,0

5 °C: 3 27 ene. 10 3,189 99,3 - 99,5 - - 99,6 - 99,9 99,5 100,0 99,6 100,0

6: 03 may. 10 6,345 99,9 - 99,9 - - 99,5 - 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0

15 °C: 1 18 nov. 09 0,888 99,6 -- NE NE - 99,5 NE NE 99,4 100,0 99,5 100,0

3: 18 ene. 10 2,893 99,4 -- NE NE - 99,4 - 99,8 99,4 99,9 99,4 100,0

6: 16 abr. 10 5,786 99,9 -- NE NE - 99,1 - 99,9 100,0 100,0 100,0 100,0

25 °C: 1 18 nov. 09 0,888 99,5 - 99,5 - - 99,7 NE NE 99,2 100,0 99,3 100,0

3: 18 ene. 10 2,893 98,9 - 98,8 - - 98,5 - 98,8 99,0 99,4 99,2 100,0

6: 16 abr. 10 5,786 99,2 - 98,4 - - 99,7 NE NE 97,9 98,0 98,6 98,9

40 °C: 1 18 nov. 09 0,888 97,7 - 95,0 - - 98,0 - 98,0 93,3 97,6 94,5

3: 18 ene. 10 2,893 92,3 - 83,2 - - 91,9 - 94,3 92,9 93,9 88,3

1 Debido a que las muestras se almacenan a 5 °C hasta el ensayo, la fecha del ensayo se usa para analizar la tendencia de los datos de 5 °C y la fecha de retirada seusa para analizar la tendencia de los datos de estabilidad acelerada para obtener la mayor exactitud. NE: La muestra no se ensayó

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Estos datos se han producido mediante cromatografía de exclusión por tamaño y proporcionan las estabilidades a los 1, 3 y 6 meses. Ejemplo 9: Establecimiento de un proceso de co-formulación alternativa de rhIGF-1 y rhGH

1. Materiales y método

1.1. Materiales de partida

Se usaron los siguientes materiales de partida en el estudio, y se representan en la Tabla 12: 12 -Materiales de partida

Material: Proveedor

rhGH: Genentech

rhIGF-1: Lonza

Acido cítrico: Sigma

Arginina-HCl: Merck

Fenol: Merck

Poloxámero 188: BASF

Sacarosa: Beghin Say

Hidróxido sódico: Merck

WFI: Cooper

Viales de 5 mL VB tipo lio.: Schott

Tapones de 13 mm: West -CTSU

Cierres alu. de 13 mm: West

10 1.2. Equipo Se empleó el siguiente equipo para el estudio: -Autoclave FEDEGARI, -Botellas de polietileno (PE) estériles Nalgene, ref. 2019, -Casetes BIOMAX PES, ref. : PXB005A50 para diafiltración,

15 -Sala blanca, campana de flujo laminar,

-Equipo de filtración de flujo tangencial Cogent µScale MILLIPORE,

-Filtros MILLEX (33 mm) de PES de 0,22 µm (MILLIPORE),

-Filtros MILLEX (33 mm) de PVDF de 0,22 µm (MILLIPORE),

-Vasos de precipitados de vidrio, 20 -Probetas,

-Agitadores magnéticos,

-Micropipetas P1000,

-Estufa FEDEGARI,

-Equipo de observación de viales conforme a la Farmacopea,

25 -Bomba FLEXICON PF6 n° 212118,

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imagen9

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Tabla 14:

Composiciones de formulación y co-formulación

Composiciones

Formulación de GH individual: Formulación de IGF-1 individual Proporción de coformulación de IGF-1 / GH 1,1:1 Proporción de coformulación de IGF-1 / GH 6,6:1

pH: 5,8 5,8

Tampón: Histidina 20 mM

Bicarbonato Na: 7,5 mM - 5,6 mM 2,5 mM

Tensoactivo: Polisorbato 20 0,2%

Conservante: Alcohol bencílico 1%

Agente estabilizante: Arginina 150 mM

6 mg/mL: 20 mg/mL 5:4,5 (mg :mg)/ mL 13,2:2 (mg :mg)/ mL

Ejemplo 10 Procesos de preparación para una co-formulación de rhIGF-1 y rhGH

5 rhGH en bruto (sustancia farmacológica o SF) es una disolución de 20 mg/ml en tampón bicarbonato a una concentración 7,5 mM. rhlGF-1 en bruto (SF) es una disolución de 25-35 mg/ml en tampón citrato 200 mM. Se prepararon 3 tipos diferentes de procesos como sigue (a continuación denominados proceso I, y procesos

alternativos A y B): Etapas del proceso I: 10 -diafiltración de rhGH y rhIGF-1 para el intercambio de tampones (tampón de SF original frente a Histidina (His) 20 mM / Arginina (Arg) 150 mM pH 5,8), -para cada proteína individual, la composición se llevó a cabo en el siguiente orden de introducción:

•: adición de tampón de intercambio para ajustar la concentración de SF,

•: adición de la disolución de polisorbato PS 20,

15 • adición de la disolución de alcohol bencílico (AB), -co-mezcla de las formulaciones individuales para producir una co-formulación estable. Etapas del proceso A: -diafiltración de rhGH y rhIGF-1 para el intercambio de tampones (tampón de SF original frente a Histidina (His)

20 mM / Arginina (Arg) 150 mM pH 5,8), 20 -la composición final para cada proteína se llevó a cabo en el siguiente orden de introducción:

•: tampón concentrado,

•: disolución de tensioactivo,

•: disolución de conservante,

• WFI (agua para inyección), 25 • agente de carga (si lo hay),

• sustancia farmacológica diafiltrada,

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• corrección del pH con ácido cítrico (o HCl),

• WFI hasta el volumen final. -co-mezcla de las formulaciones individuales para producir una co-formulación estable. Etapas del proceso B:

5 -diafiltración de rhIGF-1 para el intercambio de tampones (tampón de SF original frente a Histidina (His) 20 mM / Arginina (Arg) 150 mM pH 5,8), -no hay diafiltración de rhGH en bruto, sino formulación directa de rhGH en bruto (es decir, adición de la SF rhGH a la mezcla de excipientes sin intercambio de tampones). -La composición final se llevó a cabo siguiendo el mismo orden de introducción de componentes que en el 10 proceso A. -co-mezcla de las formulaciones individuales para producir una co-formulación estable.

Claims

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