KR19980701351A - 성장호르몬 및 Ｘ-Ｌｙｓ를 함유하는 안정화된 약제조제물(A STABILIZED PHARMACEUTICAL FORMULATION COMPRISING A GROWTH HORMONE AND X-Lys - Google Patents

Abstract

성장호르몬 및 X-Lys(여기서 X는 아미노산 잔기), 첨가제 또는 완충물질을 함유하는 약제조제물은 탈아미드화, 산화 및 펩티드 결합의 절단에 대하여 매우 높은 안정성을 보인다. 생성물의 안정성은 동결건조 상태 또는 용해된 또는 재용해된 조제물의 형태로의 주위온도에서의 저장 및 운반을 가능하게 한다.

Description

성장호르몬 및 Ｘ-Ｌｙｓ를 함유하는 안정화된 약제조제물

인간 및 일반적인 가축 유래의 성장호르몬은 약 191 아미노산의 단백질이며, 하수체의 전방 로프(lope)로부터 합성되고 분비된다. 인간 성장호르몬은 191 아미노산으로 구성된다.

성장호르몬은 체세포성장의 조절 뿐만아니라 단백질, 탄수화물 및 지질의 물질대사의 조절에도 관련되어 있는 주요 호르몬이다. 성장호르몬의 주된 효과는 성장촉진이다.

성장호르몬에 의해 영향받는 기관계는 골격, 결합조직, 근육 및 간, 장 및 신장과 같은 내장을 포함한다.

예를 들면 인간 성장호르몬(hGH)과 Met-hGH의 현재의 산업규모의 생산의 증가를 가능하게 하는 재조합기술과 성장호르몬 유전자의 클로닝의 개발이전까지는 인간 성장호르몬은 인간 사체의 하수체로부터의 추출에 의해 얻을 수 밖에 없었다. 비록 단신(성장호르몬 결핍, 정상적 단신 및 터너 증후군에 기인함), 성인에서의 성장호르몬 결핍, 불임증, 화상 치료, 상처 치료, 발육이상, 뼈의 결합, 골다공증, 산발성 위출혈 및 위관절 등에 대한 치료방법의 하나로 제안되어 왔으나, 성장호르몬의 매우 제한된 공급량때문에 아동기의 종적 성장 촉진과 왜소발육증의 치료에 대한 사용이 제한되었다.

또한 성장호르몬은 가축의 성장속도의 증가나 인간 소비용으로 도축될 동물의 지방비율의 감소를 위하여 제안되어 왔다.

성장호르몬의 약제조제물은 불안정한 경향이 있다. 특히 성장호르몬의 용액에서 탈아미드화되거나 술폰산화된 생성물과 같은 분해 생성물 및 이량체 및 중합체 형태가 형성된다.

hGH의 주 분해반응은 1) 직접적 가수분해에 의하거나 환식 숙신이미드 중간물질을 경유하여 L-asp-hGH, L-iso-asp-hGH, D-asp-hGH 및 D-iso-asp-hGH의 다양한 양을 형성하는 탈아미드화(참고문헌 1-3), 2) 위치 14 및 125에서의 메티오닌 잔기의 산화(참고문헌 4-9)이다. 용액내에서와 마찬가지로 동결건조 상태의 hGH의 주 분해산물은 탈아미드화된 hGH이다.

탈아미드화는 위치 149의 Asn에서 특히 잘 일어나며, 위치 152 및 99에서는 보다 적게 일어난다.

또한 hGH은 위치 14 및 125에서 쉽게 산화되며, 특히 용액내에서 더 잘 된다(4-8).

술폭시화물을 형성하는 용액내에서의 hGH의 산화는 일반적으로 조제물내에 용해되어 있는 산소에 기인한다. 증류수내의 산소의 용해도는 약 200 μM이다(9). 4 IU/ml으로 이루어진 조제물내의 hGH 농도가 60 nM hGH에 해당하는 1.3 mg/ml이면, 일반적 저장조건에서 산소는 hGH의 산화에 필요한 화학양론적 양의 약 3000배의 과량으로 존재할 것이다. 조제물을 용기에 주입하고 포장하기 전에 완충액의 탈기체화에 의해 문제를 해결하는 것은 용이하지 않다.

현재, 이들 탈아미드화형 및 산화형의 hGH가 독성이거나 변형된 생물학적 활성 또는 수용체 결합능력을 가질 것이라고는 믿어지지 않으나, 술폭시화물의 구조 안정화가 천연 hGH에 비하여 감소하는 효과에 대한 징후가 있다.

hGH을 함유하는 안정한 용해된 조제물의 개발을 위하여 반응의 조절방법 뿐만아니라 탈아미드화와 술폭시화물의 형성속도를 아는 것이 중요하다.

분해반응의 동력학은 온도, pH 및 hGH 조제물에서의 다양한 첨가물이나 보조제와 유관하다.

불안정성때문에 현재에 성장호르몬은 분해를 최소화시키기 위해서 동결건조시키고, 사용을 위해 복원시키기 전까지 4℃에서 동결건조 상태로 저장된다.

현재에 hGH을 함유하는 동결건조 약제조제물은 환자에 의해 복원된 후 14일간까지 4℃에서 사용기간동안 용액으로서 저장되며, 이 동안 다소간의 분해가 일어날 것이다.

더우기 동결건조된 성장호르몬의 복원과정은 환자에게 어려운 경향이 있다.

따라서 현재에는 성장호르몬을 사용전에 가능한 한 늦게 복원하며 동결건조 상태로 저장 및 운반하는 것이 바람직한 것으로 여겨진다. 제조자에서부터 약국까지의 일련의 과정에서, 예를 들면 2년까지의 장기간 보존기간을 허용하는 4℃와 같은 조절된 저온에서 조제물을 취급하는 경향이 있다.

그러나 자가-약물치료를 위한 연장된 펜(pen)시스템의 사용 및 확장된 사용분야는 충분한 냉각이 전혀 유용하지 못한 조건하에서 최종 사용자에 대하여 충분히 긴 기간동안 안정한 조제물이 요구된다.

바람직하게 조제물은 동결건조된 상태로서 약 한달동안 그리고 추가적으로 카트리지 사용 예정기간동안 펜장치내에서 한달동안 복원상태로 최종사용자에게 안정해야한다.

따라서 소정기간동안 상대적으로 높은 온도에서 동결건조상태로 안정하고 추가적으로 용액내에서 상대적으로 높은 온도에서의 사용기간동안 안정한 성장호르몬의 좀더 안정한 조제물이 요구되고 있다. 이러한 안정화는 성장호르몬의 투약을 진료소로부터, 상기한 바와 같이 최적의 저장이 유용하지 못한 개인의 가정으로 옮길 때 매우 중요하다.

더우기 환자에 의한 취급을 용이하게 하기위하여 성장호르몬 투약형태의 펜장치의 사용으로의 이행은 성장호르몬을 함유하는 안정한 용해된 조제물을 요구한다. 성장호르몬을 함유하는 안정한 용해된 조제물은 환자에게 사용되는 펜장치에 대해 적합한 카트리지형태로서 곧바로 사용할 수 있도록 생산되며, 따라서 환자들은 조제물의 복원이 불필요하며, 따라서 조제물의 멸균복원을 위한 기술 및 멸균장비 뿐만아니라 복원용 적합한 부형제 및 동결건조 조제물 등을 사용해야할 필요성이 없을 것이다.

안전을 이유로 조제물의 사용직전 동결건조 조제물의 복원을 피하는 것이 바람직하다.

더우기 성장호르몬 조제물의 생산시 동결건조 단계를 피하는 것이 이점이 있을 것이다. 동결건조는 시간 및 비용을 필요로 하는 공정이며 동결건조기의 제한된 용적에 의해 종종 생산시의 병목이 된다.

따라서 용해된 hGH 조제물을 저장기간 및 한달까지의 사용기간동안 안정하도록 하기 위해 분해과정 비율의 감소가 필요한 것이다.

hGH 안정화를 위한 종래시도는 이량체 생성의 방지에 있어서 완전히 성공적이지는 못하였다. 이량체 생성과 관련된 문제는 예로써 Becker, G. W.,Biotechnology and Applied Biochemisty9, 478(1987)에 기재되어 있다.

국제 특허 공보 WO 89/09614호 및 호주 특허명세서 30771/89호는 인간성장호르몬, 글리신 및 마니톨을 함유하는 안정한 약제조제물을 개시한다. 그러한 조제물은 복원후의 사용기간동안 뿐만아니라 동결건조상태에서 일반적 공정 및 저장동안 향상된 안정성을 보인다.

공개된 유럽 특허명세서 303 746호는 동물 성장호르몬을 불용성물질의 생성감소 및 수용액 환경에서의 가용 활성도의 보존을 위해 다양한 안정제로 안정화되는 것과, 그러한 안정제는 몇몇 폴리올, 아미노산, 생리적 pH에서 대전된 측기를 가지는 아미노산의 중합체 및 콜린염 등을 포함하는 것을 개시한다. 폴리올은 비환원당, 당알콜, 당산, 펜타에리스리톨, 락토즈, 수용성 덱스트란 및 피콜(Ficoll)로 이루어지는 군; 아미노산은 글리신, 사르코신, 리신 또는 그들의 염, 세린, 아르기닌 또는 그들의 염, 베타인, N,N-디메틸-글리신, 아스파르트산 또는 그들의 염, 글루탐산 또는 그들의 염으로 이루어지는 군; 생리적 pH에서 대전된 측기를 가지는 아미노산의 중합체는 폴릴리신, 폴리아스파르트산, 폴리글루탐산, 폴리아르기닌, 폴리히스티딘, 폴리오르니틴 및 그들의 염 염으로 이루어지는 군; 콜린 유도체는 염화콜린, 이수소시트르산콜린, 타르트산수소콜린, 중탄산콜린, 시트르산삼콜린, 아스코르브산콜린, 보르산콜린, 글루콘산콜린, 인산콜린, 황산이콜린 및 뮤크산이콜린 등으로 이루어지는 군으로부터 각각 선택된다.

미국 특허명세서 4,917,685호는 EP 303746에서 언급된 바와 같은 동일한 안정제를 사용하는 성장호르몬을 함유하는, 이식되도록 설계된 운반도구를 개시하였다.

공개된 유럽 특허명세서 374,120호는 hGH 및 세 수산기를 지닌 폴리올을 함유하는 안정화된 조제물을 개시한다. 글리세롤 및 트리스(히드록시메틸)아미노메탄이 언급된다. 또한 폴리올과 함께 완충제로서 히스티딘히드로클로라이드의 존재가 개시된다.

국제특허명세서 WO 93/12811은 동결건조 분말이나 아스파라긴을 함유하는 수용액의 형태로서 성장호르몬의 안정화된 조제물을 개시한다.

국제특허명세서 WO 93/12812는 동결건조 분말이나 히스티딘을 함유하는 수용액의 형태로서 성장호르몬의 안정화된 조제물을 개시한다. 그러한 조제물에서 탈아미드화는 인산완충제을 함유하는 성장호르몬의 대응 조제물에 대하여 25 내지 30% 감소한다.

국제특허명세서 WO 93/19776호는 인산완충제을 함유하는 조제물보다 안정한 시트르산을 완충제로서 함유하는 성장호르몬을 함유하는 단백질 조제물을 개시한다. 또한 조제물은 글리신과 알라닌과 같은 아미노산 및/또는 마니톨이나 기타 당알콜 및/또는 글리세롤 및/또는 기타 탄수화물 및 추가적으로 벤질알콜과 같은 방부제를 함유한다.

국제특허명세서 WO 94/03198호는 인간성장호르몬, 완충제, 비이온성 계면활성제 및 추가적으로 중성염, 마니톨 또는 방부제를 함유하는 안정된 조제물 수용액을 개시한다.

본 발명은 성장호르몬을 함유하는 안정화된 약제조제물, 그러한 조제물의 제조방법, 성장호르몬의 조제물의 안정화를 위한 X-Lys(여기서 X는 아미노산 잔기)의 사용에 관한 것이다.

발명의 간단한 설명

X-Lys(여기서 X는 아미노산 잔기)를 함유하는 인간성장호르몬의 조제물이 탈아미드화에 대하여 매우 높은 안정성을 보이는 것은 매우 놀라운 발견이었다. 생성물의 안정성은 저장 및 운반을 동결건조상태 또는 조제물의 용해되거나 재용해된 형태를 허용한다.

발명의 약제조제물은, 예를 들면 비경구적 또는 경구적 투여와 같은 적합한 경로에서의 투여, 또는, 예를 들면 코 투여와 같은 점막으로의 투여를 위하여 조제된다. 약제조제물은 물약병이나 카트리지 또는 미리 채워진 주사기나 펜장치와 같은 기타 적합한 용기내에 함유된 사용량의 형태로 제공된다.

따라서 발명의 조제물은 증류수나 주사를 위한 물과 같은 종래의 부형제를 사용하여 복원시키는 동결건조된 분말의 형태 또는 성장호르몬을 함유하는 용액의 형태이다. 그러한 부형제는 m-크레졸과 벤질알콜과 같은 종래의 방부제를 포함한다.

X는 바람직하게는 천연적으로 발생하는 아미노산 잔기, 더욱 바람직하게는 천연적으로 발생하는 α-아미노산 잔기, 바람직하게는 Ala, Gly, Val, Glu, Met, Arg, Asp, Leu 또는 Ser이며, 가장 바람직하게는 Ala, Val, Glu, Met 또는 Asp이다.

발명의 바람직한 구체예는 X-Lys(여기서 X는 아미노산 잔기)를 함유하며, 그리고 성장호르몬의 완충된 수용액 형태로 캐리어를 더 함유하는 인간성장호르몬의 약제조제물의 형태이다. 그러한 조제물은 곧바로 사용할 수 있는 형태이며, 수용액으로서 아무런 대량분해가 없이 저장 및 운반된다.

성장호르몬 용액내에서 사용되는 완충제은 예를 들면 히스티딘, 시트르산, 타르타르산 또는 인산완충제이다.

안정성을 이유로 용액의 pH는 바람직하게는 약 2 내지 약 8의 간격내의 값으로 조정되며, 더욱 바람직하게는 5 내지 7의 pH, 가장 바람직하게는 약 6.8이다.

안정화효과를 얻기위하여 X-Lys(여기서 X는 아미노산 잔기)를 100 mM까지의 양으로 첨가하는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 1 내지 10 mM의 양으로, 더욱 바람직하게는 2 내지 6 mM, 가장 바람직하게는 3 내지 5 mM의 양으로 첨가하는 것이다.

발명의 약제조제물은 삼투성을 조정하기 위해 염을 더 함유하며, 추가적으로 부형제를 함유하여, 예를 들면 동결건조 및 사용전 조제물의 복원시의 동결건조된 조제물의 신속하고 완전한 용해와 같은 공정을 용이하게 한다.

부형제는 락토즈, 트레할로즈 및 수크로즈와 같은 이당류, 솔비톨이나 마니톨과 같은 당알콜, Dextran^ⓡ40, Dextran^ⓡ70 또는 Dextran^ⓡ75 및 Ficoll^ⓡ과 같이 상품화되어 있는 중합체와 같은 다당류 및 폴리에틸렌글리콜 또는 폴리비닐알콜과 같은 다가알콜 또는 이들의 둘 또는 그 이상의 조합으로부터 선택된다.

추가적 관점에서 본 발명은 성장호르몬 및 X-Lys(여기서 X는 상기한 의미를 지님)를 함유하는 약제조제물의 제조방법에 관한 것이며, 여기서 벤질알콜을 추가적으로 함유하는 탈이온수내에 X-Lys(여기서 X는 상기한 의미를 지님)를 용해하는 것, 성장호르몬을 첨가하는 것 그리고 pH를 약 2 내지 약 8로 맞추는 것에 의해 성장호르몬을 X-Lys(여기서 X는 상기한 의미를 지님)를 함유한 용액내에 용해시킨다.

pH는 성장호르몬에 대해 역효과가 없는 산을 첨가하는 것에 의해 조정하며, 바람직하게는, 예를 들면 염산, 황산 또는 질산과 같은 무기산이나 아세트산과 같은 유기산이 생리학적으로 적합하다.

발명의 방법의 구체예에서 염과 부형제를 추가적으로 첨가하며, 이어서 용액을 용기에 넣고 동결건조시킨다.

본 발명의 또다른 관점은 성장호르몬의 안정화된 조제물의 조제를 위한 X-Lys(여기서 X는 아미노산 잔기)의 사용에 관한 것이다.

본 명세서에서 성장호르몬은 새, 소, 말, 인간, 양, 돼지, 연어, 송어 또는 다랑어 성장호르몬과 같은 어느 근원으로부터의 성장호르몬이며, 바람직하게는 소, 인간 또는 돼지 성장호르몬이며, 가장 바람직하게는 인간성장호르몬이다. 발명대로 사용된 성장호르몬은, 예를 들면 종래방법에 의한 하수체의 추출에 의한 것과 같은 천연 공급원으로부터 단리되는 천연 성장호르몬 또는, 예를 들면Biotech and Bioeng. 36, 1-11(1990)에서 E.B. Jensen 및 S. Carlesn에 의해 명시된 바와 같은 재조합방법에 의해 생산된 성장호르몬이다. 또한 성장호르몬은 하나 또는 그 이상의 아미노산이 결실된 성장호르몬의 끝을 자른 형태; 치환이 항원성이나 감소된 활동과 같은 역효과가 없는 길이로, 천연 분자내에서 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기가 또다른 아미노산 잔기, 바람직하게는 천연 아미노산 잔기에 의해 치환된 유사물; 또는 예를 들면 Met-hGH와 같은 N- 또는 C-말단신장을 가지는 그들의 유도체이다.

용어 성장호르몬의 사용량은 투여 양생법에서 치료효과를 제공하는 양을 나타낸다. 여기서 조제물은 곧바로 사용할 수 있는 조제물에 대하여 계산되는, 적어도 약 0.1 mg/ml, 바람직하게는 약 10 mg/ml 이상, 바람직하게는 약 1 mg/ml 내지 약 40 mg/ml, 더욱 바람직하게는, 예를 들면 1 mg/ml 내지 약 5 mg/ml와 같은 약 1 mg/ml 내지 25 mg/ml의 hGH의 양을 함유도록 제조된다. 예를 들면, 저하수체성 왜소발육증에 걸린 인간에 대한 투여에서 이들 조성물의 사용을 위하여 이들 조제물은, 의도하는 치료를 위하여 현재 고려되는 용량 양생법에 대응하여 약 0.1 mg/ml 내지 10 mg/ml를 함유한다. 농도 범위는 발명에 대해 결정적이지 않으며 투여를 감독하는 의사에 따라 다를 수 있다.

본 발명에 따라 사용되는 X-Lys(여기서 X는 아미노산 잔기)는 바람직하게는 자연적으로 생성되는 알파 아미노산 잔기를 포함한다. 아미노산(들)은 l 또는 d 아미노산(들)이거나 그들의 혼합물이다.

본 명세서에서 고 안정성은 조제물이 인산완충액을 함유하는 종래의 조제물보다 안정하며, 바람직하게는 WO 93/12812에 개시된 바와 같이 hGH의 탈아미드화가 인산완충액에 비하여 약 20% 감소되는, 히스티딘을 안정제로 함유하는 대응하는 조제물처럼 안정한 경우 획득된다.

발명의 방법에서 사용되는 용제는 물, 에틸, n-프로필 또는 이소프로필, 부틸알콜과 같은 알콜 또는 그들의 혼합물이다. 용제는 m-크레졸 또는 벤질알콜과 같은 방부제를 함유한다.

발명의 상세한 설명

발명을 하기한 발명을 설명하는 실시예에서 상세하게 설명한다. 그들은 첨부된 청구의 범위에 의해 결정되는 발명의 관점을 제한하는 것으로 고려되지 않는다.

실시예 1

탈아미드화의 감소

탈아미드화 속도를 4℃ 및 25℃에서 2 mg/ml hGH를 함유하는 hGH 조제물에 대하여 pH 6.8에서 5 mM Ala-Lys, Gly-Lys, Val-Lys, Glu-Lys, Met-Lys, Arg-Lys 또는 Asp-Lys의 존재하에서 pH 6.8에서의 히스티딘과 비교하여 시험하였다.

hGH 조제물을 8 mg hGH을 2 ml의 디펩티드 또는 히스티딘의 10 mM 용액에 용해하는 것에 의해 제조하였다. 이어서 2 ml 3%의 벤질알콜을 첨가하여 2 mg/ml hGH, 5 mM 디펩티드 또는 히스티딘, 1.5% 벤질알콜, pH 6.8(HCl 또는 NaOH를 첨가하여 조정)의 최종 조제물을 제조하였다.

하기한 표 1에서 명시된 hGH 조제물을 37℃에서 7일간 저장하였고, 탈아미드화된 hGH의 양을 IE-HPLC를 사용하여 분석하였다. 결과를 하기 표 1에 보인다.

조제물	시작 pH/종료 pH/% 디스아미도	탈아미드화된 hGH의 수정된 양*	His와 비교한 탈아미드화된 hGH의 양
Ala-Lys	6.8/7.0/14.8	13.5	102
Gly-Lys	6.8/7.2/17.8	15.8	124
Val-Lys	6.8/6.9/13.3	12.4	91
Glu-Lys	6.8/6.9/11.8	10.9	93
Met-Lys	6.8/6.8/13.0	12.7	99
Arg-Lys	6.8/6.9/14.5	13.6	116
Asp-Lys	6.8/6.9/12.7	12.1	92
히스티딘	6.8/6.9/13.2	13.1	100
*6.8로부터의 0.1 pH 단위편차당 1%로 수정된 디스아미도시작 물질내의 탈아미드화된 hGH의 양: 2.0%

상기 표 1로부터 hGH의 탈아미드화는 Ala-Lys, Val-Lys, Glu-Lys, Met-Lys 또는 Asp-Lys의 첨가에 의해 적어도 히스티딘의 첨가에 의해 얻어진 수준까지(인산완충제에 비교하여 25 내지 30%, 비교 상기의 WO 93/12812)감소되는 것으로 나타났으며, hGH의 탈아미드화는 Gly-Lys 또는 Arg-Lys의 첨가에 의해 인산완충제에 비하여 적어도 같은 수준까지 감소하는 것으로 나타났다.

상기 결과는 탈아미드화 속도가 100 mM까지의 낮은 농도, 바람직하게는 1 내지 10 mM, 더욱 바람직하게는 2 내지 6 mM 및 가장 바람직하게는 3 내지 5 mM로 Ala-Lys, Val-Lys, Glu-Lys, Met-Lys 또는 Asp-Lys을 첨가하는 것에 의해 매우 큰 범위까지 감소하는 것을 보인다. 따라서 탈아미드화 속도는 인산완충제를 Ala-Lys, Val-Lys, Glu-Lys, Met-Lys 또는 Asp-Lys으로 치환하는 것에 의해 30% 이상까지 감소된다.

방부제로서 벤질알콜을 사용하는 것은 탈아미드화 속도에 영향이 없는 것으로 보인다.

실시예 2

탈아미드화의 감소

탈아미드화 속도를 4℃ 및 25℃에서 2 mg/ml hGH를 함유하는 hGH 조제물에 대하여 pH 6.8에서 5 mM Asp-Lys 또는 Val-Lys의 존재하에서 pH 6.8에서의 히스티딘과 비교하여 시험하였다.

hGH 조제물을 8 mg hGH을 2 ml의 디펩티드 또는 히스티딘의 10 mM 용액에 용해하는 것에 의해 제조하였다. 이어서 2 ml 3%의 벤질알콜을 첨가하여 2 mg/ml hGH, 5 mM 디펩티드 또는 히스티딘, 1.5% 벤질알콜, pH 6.8(HCl 또는 NaOH를 첨가하여 조정)의 최종 조제물을 제조하였다.

하기한 표에서 명시된 hGH 조제물을 37℃에서 7일간 저장하였고, 탈아미드화된 hGH의 양을 IE-HPLC를 사용하여 분석하였다. 결과를 하기 표들에 보인다.

조제물	시작 pH/종료 pH	탈아미드화된 hGH의 수정된 양*)	His와 비교한 탈아미드화된 hGH의 양
Asp-Lys	6.8/6.9	12.1	92
히스티딘	6.8/7.0	13.1	100
*)6.8로부터의 0.1 pH 단위편차당 1%로 수정된 디스아미도시작 물질내의 탈아미드화된 hGH의 양: 1.0%

조제물	시작 pH/종료 pH	탈아미드화된 hGH의 수정된 양*)	His와 비교한 탈아미드화된 hGH의 양
Val-Lys	6.8/6.9	12.4	94
히스티딘	6.8/6.9	13.2	100
*)6.8로부터의 0.1 pH 단위편차당 1%로 수정된 디스아미도시작 물질내의 탈아미드화된 hGH의 양: 1.0%

상기 표 1로부터 hGH의 탈아미드화는 Asp-Lys 및 Val-Lys의 첨가에 의해 적어도 히스티딘의 첨가에 의해 얻어진 수준까지(인산완충제에 비교하여 25 내지 30%, 비교 상기의 WO 93/12812)감소되는 것으로 나타났다.

상기 결과는 탈아미드화 속도가 100 mM까지의 낮은 농도, 바람직하게는 1 내지 10 mM, 더욱 바람직하게는 2 내지 6 mM 및 가장 바람직하게는 3 내지 5 mM로 Asp-Lys 또는 Val-Lys을 첨가하는 것에 의해 매우 큰 범위까지 감소하는 것을 보인다. 따라서 탈아미드화 속도는 인산완충제를 Asp-Lys 또는 Val-Lys으로 치환하는 것에 의해 30% 이상까지 감소된다.

방부제로서 벤질알콜을 사용하는 것은 탈아미드화 속도에 영향이 없는 것으로 보인다.

참고문헌

1) Y.-C.J. Wang and M.A. Hanson. Parenteral Formulations of Proteins and Peptides: Stability and Stabilizers. J. Parenteral Science and Technology 42(Suppl.)(1988) 53-525.

2) M.C. Manning, K. Patel, R.T. Borchardt. Stability of Protein Pharmaceuticals. Pharmaceutical Research 6(11)(1989) 903-918.

3) B.A. Johnson, J.M. Shirokawa, W.S. Hancock, M.W. Spellman, L.J. Basa and D.W. Asward. J.Biol.Chem., 264, 1462-71(1989).

4) L.C. Teh et al., J.Biol.Chem., 262, 785-794(1987).

5) G.W. Becher et al., Biotech.Appl.Biochem., 10, 326-337(1988).

6) R.A. Houghten et al., Arch.Biochem.Biophys., 178, 350-355(1977).

7) R.M. Riggin et al., Anal.Biochem., 167, 199-209(1987).

8) P. Gellerfors et al., Acta Paediatr.Scand(suppl), 370, 93-100(1990).

9) M.J. Kaufman, Pharm.Res., 7(3) 289-292(1990).

Claims (17)

1. 성장호르몬 및 X-Lys(여기서 X는 아미노산 잔기)를 함유하는 것을 특징으로 하는 약제조제물.
2. 제 1 항에 있어서, X-Lys(여기서 X는 아미노산 잔기)를 함유하는 성장호르몬의 완충된 수용액의 형태로 캐리어를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 약제조제물.
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, pH가 약 2 내지 약 8의 간격내의 값으로 조정되는 것을 특징으로 하는 약제조제물.
4. 상기 항 중 어느 한 항에 있어서, X-Lys(여기서 X는 아미노산 잔기)의 농도가 약 100 mM까지인 것을 특징으로 하는 약제조제물.
5. 상기 항 중 어느 한 항에 있어서, 염 및 당류를 더 함유하는 것을 특징으로 하는 약제조제물.
6. 상기 항 중 어느 한 항에 있어서, 성장호르몬이 hGH인 것을 특징으로 하는 약제조제물.
7. X-Lys를 함유하는 용액에 성장호르몬의 첨가를 포함하는 것을 특징으로 하는 제 1 항의 약제조제물의 제조방법.
8. 성장호르몬 조제물을 안정화하기에 유효한 양의 X-Lys의 첨가를 포함하는 것을 특징으로 하는 성장호르몬 조제물의 안정화 방법.
9. 제 7 항 또는 제 8 항에 있어서, X-Lys를 함유하는 용액이 X-Lys를 탈이온수에 용해하여 얻어지는 것을 특징으로 하는 방법.
10. 상기 항 중 어느 한 항에 있어서, X-Lys를 함유하는 용액이 벤질알콜도 또한 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
11. 상기 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조제물의 pH치를 약 2 내지 약 8로의 조정을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
12. 상기 항 중 어느 한 항에 있어서, 염의 첨가를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
13. 상기 항 중 어느 한 항에 있어서, 부형제의 첨가를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
14. 상기 항 중 어느 한 항에 있어서, 성장호르몬 및 X-Lys를 함유하는 용액의 용기로의 충전 및 상기 용액의 동결건조를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
15. 성장호르몬의 안정화 조제물의 조제를 위한 X-Lys(여기서 X는 아미노산 잔기)의 사용.
16. 성장호르몬에 의해 영향받을 수 있는 환자의 질병을 치료하기 위한 방법으로서, 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항의 약제조제물을 상기 질병의 치료에 유효한 양으로의 환자 치료를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
17. 여기에서 개시되는 어느 신규한 특징 또는 특징들의 조합.