ES2482094T5 - Administración extendida de genes a neuronas motoras mediante inyección periférica de vectores AAV - Google Patents
Administración extendida de genes a neuronas motoras mediante inyección periférica de vectores AAV Download PDFInfo
- Publication number
- ES2482094T5 ES2482094T5 ES08836776T ES08836776T ES2482094T5 ES 2482094 T5 ES2482094 T5 ES 2482094T5 ES 08836776 T ES08836776 T ES 08836776T ES 08836776 T ES08836776 T ES 08836776T ES 2482094 T5 ES2482094 T5 ES 2482094T5
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- aav
- vector
- aav vector
- cells
- injection
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 title claims description 53
- 238000002347 injection Methods 0.000 title claims description 38
- 239000007924 injection Substances 0.000 title claims description 38
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 title claims description 31
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 title description 10
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 title description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 60
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 49
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 31
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 23
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 19
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 18
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 claims description 14
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 13
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 claims description 12
- 208000002320 spinal muscular atrophy Diseases 0.000 claims description 11
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 claims description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 7
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 5
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 claims description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000005264 motor neuron disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000023345 Autoimmune Diseases of the Nervous System Diseases 0.000 claims description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 2
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 claims description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 2
- 208000033868 Lysosomal disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015439 Lysosomal storage disease Diseases 0.000 claims description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 claims description 2
- 239000002870 angiogenesis inducing agent Substances 0.000 claims description 2
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims description 2
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims description 2
- 208000018360 neuromuscular disease Diseases 0.000 claims description 2
- 231100000189 neurotoxic Toxicity 0.000 claims description 2
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 claims description 2
- 208000019116 sleep disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 claims description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 62
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 53
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 45
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 43
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 27
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 23
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 20
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 20
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 18
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 18
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 14
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 13
- 210000002987 choroid plexus Anatomy 0.000 description 13
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 12
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 12
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 12
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 12
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 11
- 108010058699 Choline O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 10
- 102100023460 Choline O-acetyltransferase Human genes 0.000 description 10
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 7
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 239000013644 scAAV2 vector Substances 0.000 description 7
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 7
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 7
- 210000003059 ependyma Anatomy 0.000 description 6
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 6
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 6
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 6
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 6
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 5
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 5
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 5
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 5
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 5
- 210000001353 entorhinal cortex Anatomy 0.000 description 5
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 5
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 5
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 4
- QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N isopentane Chemical compound CCC(C)C QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 4
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 4
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 3
- 210000004289 cerebral ventricle Anatomy 0.000 description 3
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 3
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 3
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 3
- 210000001753 habenula Anatomy 0.000 description 3
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 3
- 238000003365 immunocytochemistry Methods 0.000 description 3
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 210000003442 median eminence Anatomy 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- -1 p-glucuronidase Proteins 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 210000002804 pyramidal tract Anatomy 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 241001655883 Adeno-associated virus - 1 Species 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 206010068597 Bulbospinal muscular atrophy congenital Diseases 0.000 description 2
- 108090000932 Calcitonin Gene-Related Peptide Proteins 0.000 description 2
- 102000004414 Calcitonin Gene-Related Peptide Human genes 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 102100039289 Glial fibrillary acidic protein Human genes 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 102100021244 Integral membrane protein GPR180 Human genes 0.000 description 2
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 2
- 208000027747 Kennedy disease Diseases 0.000 description 2
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000011755 Phosphoglycerate Kinase Human genes 0.000 description 2
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 2
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 2
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 101001099217 Thermotoga maritima (strain ATCC 43589 / DSM 3109 / JCM 10099 / NBRC 100826 / MSB8) Triosephosphate isomerase Proteins 0.000 description 2
- 208000006269 X-Linked Bulbo-Spinal Atrophy Diseases 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000013216 cat model Methods 0.000 description 2
- AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N dimethyl butane Natural products CCCC(C)C AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 2
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 2
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000009126 molecular therapy Methods 0.000 description 2
- 210000000337 motor cortex Anatomy 0.000 description 2
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 208000022074 proximal spinal muscular atrophy Diseases 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 239000013609 scAAV vector Substances 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-L (5-bromo-4-chloro-1h-indol-3-yl) phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP([O-])(=O)[O-])=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QVZVEEALAXDABJ-UHFFFAOYSA-N 4-(trifluoromethyl)-2-[5-(trifluoromethyl)-2,3-dihydrobenzimidazol-1-yl]phenol Chemical compound OC1=CC=C(C(F)(F)F)C=C1N1C2=CC=C(C(F)(F)F)C=C2NC1 QVZVEEALAXDABJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800000263 Acidic protein Proteins 0.000 description 1
- 241001164825 Adeno-associated virus - 8 Species 0.000 description 1
- 241000649044 Adeno-associated virus 9 Species 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000014461 Ataxins Human genes 0.000 description 1
- 108010078286 Ataxins Proteins 0.000 description 1
- 206010003805 Autism Diseases 0.000 description 1
- 208000020706 Autistic disease Diseases 0.000 description 1
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 description 1
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 1
- 102400000967 Bradykinin Human genes 0.000 description 1
- 101150077194 CAP1 gene Proteins 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008025 Cerebellar ataxia Diseases 0.000 description 1
- 208000010693 Charcot-Marie-Tooth Disease Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N Fluorine atom Chemical compound [F] YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000015872 Gaucher disease Diseases 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 201000004311 Gilles de la Tourette syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000053171 Glial Fibrillary Acidic Human genes 0.000 description 1
- 102000034615 Glial cell line-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 108091010837 Glial cell line-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 208000010055 Globoid Cell Leukodystrophy Diseases 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001005139 Homo sapiens Protein limb expression 1 homolog Proteins 0.000 description 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 1
- 208000015178 Hurler syndrome Diseases 0.000 description 1
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020843 Hyperthermia Diseases 0.000 description 1
- 208000028226 Krabbe disease Diseases 0.000 description 1
- 101150058308 LIX1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 206010056886 Mucopolysaccharidosis I Diseases 0.000 description 1
- 206010056893 Mucopolysaccharidosis VII Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 101100438378 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) fac-1 gene Proteins 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000021384 Obsessive-Compulsive disease Diseases 0.000 description 1
- 206010033864 Paranoia Diseases 0.000 description 1
- 208000027099 Paranoid disease Diseases 0.000 description 1
- 206010033892 Paraplegia Diseases 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 102100026042 Protein limb expression 1 homolog Human genes 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 208000033526 Proximal spinal muscular atrophy type 3 Diseases 0.000 description 1
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000032930 Spastic paraplegia Diseases 0.000 description 1
- 208000009415 Spinocerebellar Ataxias Diseases 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 102000001435 Synapsin Human genes 0.000 description 1
- 108050009621 Synapsin Proteins 0.000 description 1
- 101710192266 Tegument protein VP22 Proteins 0.000 description 1
- 208000000323 Tourette Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000016620 Tourette disease Diseases 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N argon Substances [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000004562 autosomal dominant cerebellar ataxia Diseases 0.000 description 1
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 1
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 210000003164 cauda equina Anatomy 0.000 description 1
- 208000015114 central nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 238000001218 confocal laser scanning microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000000877 corpus callosum Anatomy 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000003619 fibrillary effect Effects 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004884 grey matter Anatomy 0.000 description 1
- CPBQJMYROZQQJC-UHFFFAOYSA-N helium neon Chemical compound [He].[Ne] CPBQJMYROZQQJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000036031 hyperthermia Effects 0.000 description 1
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 201000003723 learning disability Diseases 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- HRLIOXLXPOHXTA-UHFFFAOYSA-N medetomidine Chemical compound C=1C=CC(C)=C(C)C=1C(C)C1=CN=C[N]1 HRLIOXLXPOHXTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002140 medetomidine Drugs 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000001767 medulla oblongata Anatomy 0.000 description 1
- 210000002418 meninge Anatomy 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 208000025919 mucopolysaccharidosis type 7 Diseases 0.000 description 1
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 1
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 description 1
- 208000021722 neuropathic pain Diseases 0.000 description 1
- JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N nitro blue tetrazolium(2+) Chemical compound COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000009844 retrograde axon cargo transport Effects 0.000 description 1
- 230000007441 retrograde transport Effects 0.000 description 1
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 description 1
- 230000007958 sleep Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000031998 transcytosis Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 208000032527 type III spinal muscular atrophy Diseases 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0083—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the administration regime
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Anesthesiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
Description
DESCRIPCIÓN
Administración extendida de genes a neuronas motoras mediante inyección periférica de vectores AAV
La presente divulgación se refiere a composiciones y métodos para administrar genes a células del sistema nervioso central en mamíferos. La divulgación también se refiere a métodos para tratar trastornos de neuronas motoras en mamíferos a través de la expresión de genes terapéuticos. La invención parte del inesperado descubrimiento de que una inyección periférica de vectores AAV conduce a una circunvalación de la barrera hematoencefálica y a una infección masiva de neuronas motoras, así como de otras células del sistema nervioso central. La invención también se puede usar en cualquier mamífero, incluyendo sujetos humanos.
Introducción
Las enfermedades de las neuronas motoras (NM), tal como la atrofia muscular espinal (AME), la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) o la enfermedad de Kennedy, son trastornos neurodegenerativos que se caracterizan por la degeneración selectiva de NMs en la espina dorsal, el bulbo raquídeo y/o el córtex motor (Monani 2005; Pasinelli y Brown 2006); (MacLean, Warne et al. 1996). No existe tratamiento para estas enfermedades, principalmente debido a que la administración de fármacos a NM a través de inyecciones sistémicas está dificultada por la presencia de la barrera hematoencefálica (BBB, del inglés “blood-brain-barrier”). Esta barrera anatómica y fisiológica está formada por uniones tensadas entre las células endoteliales de los capilares del sistema nervioso central (SNC) y evita el paso fácil de moléculas entre la circulación y el SNC (Scherrmann 2002). La administración alternativa a NMs de proteínas recombinantes inyectadas directamente en el parénquima del SNC también es difícil debido a la invasividad del procedimiento quirúrgico, lo que dificulta una potencial aplicación clínica.
El fracaso de la farmacología clásica ha llevado a la comunidad científica a desarrollar nuevas estrategias terapéuticas basadas, en particular, en tecnología de transferencia de genes usando vectores virales. Sin embargo, los vectores virales convencionales generalmente no atraviesan la BBB, y las primeras estrategias de transferencia génica propuestas incluían la administración intratecal o inyecciones directas de los vectores en el parénquima de la espina dorsal (Davidson, PNAS 2000) (Azzouz, Hottinger et al. 2000). Sin embargo, estas estrategias invasivas no consiguieron producir una transducción extendida en el SNC eficiente. También se usó la inyección de los vectores virales en los ventrículos cerebrales con el objetivo de transducir las células epiteliales del plexo coroideo y el epéndimo, que median en la secreción de las proteínas terapéuticas en el fluido cerebroespinal (CSF del inglés “cerebrospinal fluid”) y posterior difusión a través del parénquima del SNC (Passini y Wolfe 2001). Sin embargo, la difusión de las proteínas recombinantes a todo el tejido nervioso dista de ser óptima y, nuevamente, los riesgos potenciales relativos al procedimiento quirúrgico son un obstáculo para la aplicación clínica de este método. Posteriormente se desarrolló una estrategia alternativa no invasiva usando transporte axonal retrógrado de vectores virales a NM mediante inyecciones intramusculares (i.m.). De hecho, vectores génicos tales como adenovirus, vector adeno-asociado (AAV) o virus de equinemia pseudotipados con la glicoproteína G de la rabia (EIAV) fueron transportados a lo largo de los axones de las NM tras inyecciones i.m., y se usaron con éxito para transducir NM inferiores en animales experimentales (Finiels et al., 1995; Kaspar et al., 2003; Azzouz et al., 2004). Sin embargo, el valor clínico de este método sigue siendo cuestionable debido, concretamente, al gran número tanto de sitios de inyección como de partículas víricas que serían necesarios para dirigirse a NM en patologías que afecten a la mayor parte de las unidades motoras del paciente.
Fu et al. (Molecular Therapy, vol. 8, n°6, 2003, p. 911-917) describen la distribución global y la dispersión amplia de la expresión transgénica tras infusión de un vector AAV2 y manitol. Inagaki et al. (Molecular Therapy, vol. 14, n°1, 2006, p. 45-53) describen una comparación de la transducción de vectores AAV8 y AAV9 en ratones. Kaspar et al. (Science, vol. 301, n° 5634, 2003, p. 839-842) describen la administración de I<g>F-1 y GDNF mediante transporte retrógrado a neuronas motoras de un vector AAV inyectado intramuscularmente. Boulis et al. (Neurobiology of disease, vol. 14, n° 3, 2003, p. 535-541) describen la inyección en nervios periféricos de vectores a AAV para expresar genes terapéuticos en neuronas del SNC.
Con el fin de contrarrestar estas dificultades, nosotros evaluamos la eficacia de la transducción para NM de nuevos serotipos y genomas de AAV tras administración intramuscular (i.m.), intravenosa (i.v.) e intraperitoneal (i.p.) en ratones. En particular, comparamos la eficacia de vectores AAV recombinantes de cadena sencilla y autocomplementarios (ssAAV y scAAV, respectivamente) de serotipo 1 y 9 para la mediación de la transducción de SNC en ratones.
Nuestros principales resultados demuestran que los vectores scAAV recombinantes que comprenden una cápside derivada de AAV9 son particularmente efectivos para transducir NMs de espina dorsal tras administración i.v. en ratones. Además, mostramos la viabilidad de este método en un modelo animal de mayor tamaño, un modelo de gato doméstico de AME recesiva autosomal similar a la AME humana de tipo III, asociada a carencias del gen LIX1 (Fyfe et al., 2006). Nuestro método también permite transducir otras células del SNC, que incluyen células gliales, neuronas del hipocampo y del núcleo habenular, y astocitos. Esta invención, por tanto, demuestra por vez primera que es posible transferir genes de interés a NMs tras una inyección i.v. individual en ratones de un vector AAV9 de doble cadena auto-complementario o de un vector AAV pseudotipado que comprende un genoma de AAV de cadena doble auto-complementario derivado de un serotipo de AAV diferente del serotipo AAV9 y una cápside derivada de una cápside de AAV9, logrando una amplia administración génica a la espina dorsal y/u otras células nerviosas, por tanto, ofreciendo nuevas vías para el tratamiento de enfermedades de NMs.
Sumario de la invención
La presente invención se refiere a nuevas composiciones y métodos para la administración de productos terapéuticos al SNC usando vectores AAV recombinantes. Más específicamente, la invención se refiere a la materia objeto definida en las reivindicaciones.
Leyendas de las figuras
Figura 1. Administración génica extendida a músculos y SNC de ratones neonatales tras inyección intramuscular de AAV (azul: tinción histoquímica de mSEAP). Secciones transversales representativas de (a) músculo gastrocnemio, (b) cerebro (3er ventrículo) y (c) espina dorsal a los 3 días (PN4) ó 7 días (PN8) tras inyección de ss- ó scAAV1 ó AAV9.
NI: no inyectado; PN4: post-natal 4; PN8: post-natal 8; ss: cadena sencilla; sc: auto-complementario. Barra de escala (b, c) 100 pm.
Figura 2. Administración génica extendida a músculos y SNC de ratones neonatales tras inyección intramuscular de AAV (azul: tinción histoquímica de mSEAP). Secciones representativas de tejido de (a) músculo de diafragma, (b) 3er ventrículo cerebral (flechas: células de plexo coroideo que expresan mSEAP; cabezas de flecha: células ependimarias), (c) parénquima de SNC (flechas: células neuronales).
NI: no inyectado; PN4: post-natal 4; PN8: post-natal 8; ss: cadena sencilla; sc: auto-complementario. Barra de escala (a, b, c) 100 pm; (d) 40 pm.
Figura 3. La administración intraperitoneal de AA9-GFP auto-complementario media en la transducción del SNC en ratones neonatales. Secciones transversales representativas de cerebro y espina dorsal tratadas para inmunohistoquímica de GFP 7 días después de la administración de AAV. Se detectó expresión transgénica en (a) células epiteliales del plexo coroideo, (b) células del hipocampo con morfología neuronal (cabeza de flecha y recuadro superior) y glial (flecha y recuadro inferior), (c) células del córtex entorrinal (las flechas indican células con una morfología neuronal típica), (d, e) células de la espina dorsal (la flecha indica una célula marcada con GFP con morfología de neurona motora)), y (f) fibras sensoriales de la espina dorsal cervical. Barra de escala 40 pm.
Figura 4. La administración intramuscular de vectores AA9 auto-complementarios permite la transducción de células del SNC en ratones neonatales. Las secciones histológicas de cerebro y espina dorsal fueron tratadas con inmunohistoquímica de GFP 7 días después de la inyección de AAV. Se detectó expresión transgénica en (a) células epiteliales del plexo coroideo (flechas) y del epéndimo (cabezas de flecha), (b, c) células neurales del septum, y (d, e) del córtex entorrinal, y (f) el tracto corticoespinal al nivel de la decusación piramidal de la espina dorsal cervical (flechas). Barra de escala 20 pm.
Figura 5. La administración intravenosa de vectores AA9 auto-complementarios media en la expresión de GFP en el SNC en ratones neonatales. Fotomicrografías representativas de secciones histológicas de cerebro y espina dorsal tratadas para inmunohistoquímica de GFP 7 días después de la inyección de AAV. Se detectaron células positivas en GFP en (a) células epiteliales del plexo coroideo (flecha) y el epéndimo (cabezas de flecha), (c) vasos sanguíneos cerebrales, (d, f) células del hipocampo con morfología neuronal (flecha) y glial (cabeza de flecha), (g) células de tipo neurona del córtex entorrinal. Se transdujo de manera eficiente muchos cuerpos celulares (flechas) y fibras celulares (cabezas de flecha) de tipo neurona por toda la espina dorsal en los niveles (h) cervical, (i) torácico y (j) lumbar. No se observó tinción en el SNC de los ratones no inyectados, tal como se muestra en secciones representativas de (b) el 3er ventrículo o (e) el hipocampo o (k-m) la espina dorsal. Barra de escala (a, b) 100 pm, (c, d, f) 40 pm, (e, g) 100 pm, (h-m) 20 pm.
Figura 6. Los vectores de AAV9 de cadena sencilla que expresan GFP median en la expresión transgénica en el SNC de ratones neonatales. Fotomicrografías representativas de secciones de cerebro y espina dorsal de ratones neonatales para inmunohistoquímica de GFP 3 semanas después de inyección i.v. de vectores ssAAV9. Células positivas en GFP en (a) el plexo coroideo (asterisco), el hipocampo (cabeza de flecha y recuadro) y el núcleo habenular (flecha), (b) eminencia media y (c-e) células de tipo neurona motora de la espina dorsal ventral. Paneles de barra de escala b: 100 pm; c, d, e: 20 pm.
Figura 7. Los vectores AAV9 recombinantes median en la expresión transgénica en el SNC de ratones adultos. Secciones cerebrales coronales representativas de ratones C57bl6 adultos 4 semanas después de administración intravenosa de 3x1011 (b) ó 1x1012 (c-h) genoma de vector de scAAV9 (a, c), ssAAV9 (b), scAAV1 (d) y ssAAV1 (e) que expresan mSEAP; paneles de barra de escala g, h, j: 100 pm; paneles i, k, l: 20 pm.
Figura 8. Los vectores AAV9 inyectados intravenosamente median en la expresión transgénica en la espina dorsal de ratones adultos. Secciones transversales representativas de espina dorsal de ratones C57bl6 adultos 4 semanas después de administración intravenosa de 1x1012 genoma de vector de ssAAV9 (a, b), scAAV9 (c, g) que expresan mSEAP.
Barras de escala (a,b,e): 40 gm, recuadros: 20 gm; (c,d): 100 gm; (f): 50 gm; (g): 20 gm.
Figura 9. La inyección intravenosa de AAV9-GFP en gatos de LIX-1 media en la expresión transgénica a lo largo de toda la espina dorsal. Se observaron secciones transversales representativas de espina dorsal de gato heterocigoto LIX1 de 2 días de edad usando microscopía confocal de barrido con láser (Fig. 9 a,c) ó tratadas para inmunohistoquímica de GFP (Fig. 9 b, d) 10 días después de inyección de scAAV9 que expresa GFP (en la vena yugular.
Barras de escala (a): 200 gm; (b, d): 50 gm; (c): 100 gm.
Figura 10: La inyección intravenosa de AAV9 que expresa GFP (1,5 x 1012 partículas que contienen genoma de vector de scAAV9-CMV-eGFP) en gatos LIX-1 media en la expresión transgénica en neuronas motoras. Un análisis de inmunotinción doble usando anticuerpos contra GFP y colina acetil transferasa (ChAT) demostró que, tanto en cachorros de gato afectados por AME (a-c) como no afectados (d-f), una parte significativa de las células positivas en GFP eran neuronas motoras.
Figura 11. La transducción extendida en espina dorsal está mediada por la administración i.v. de scAAV9 altamente concentrada en ratones adultos.
Alta expresión de GFP en células neuronales (flechas) y gliales (cabezas de flecha) en (a-c) secciones de ganglios de espina dorsal cervical y (d,e) lumbar, (f) de raíz dorsal tratadas para inmunotinción de GFP 4 semanas después de inyección i.v. de 2x1012 vg scAAV9. (g-l) El análisis de inmunofluorescencia doble para (g, j) GFP y (h, k) GFAP (proteína ácida fibrilar glial, un marcador de astrocitos, rojo) muestra la expresión de GFP en algunos astrocitos (las cabezas de flecha indican células doblemente marcadas). (i, l) Fusión. Barras de escala (a, b, d-l): 50 gm, (c): 20 gm.
Descripción detallada de la invención
La administración génica extendida a la espina dorsal es un reto importante para el tratamiento de enfermedades de neuronas motoras (NM) tal como la atrofia muscular espinal (AME) o la esclerosis lateral amiotrófica (ELA). En la presente memoria, describimos una nueva metodología de transferencia génica que permite una transducción de NM eficiente tras una única inyección periférica de vectores AAV recombinantes. Inyectamos vectores AAV recombinantes de cadena sencilla (ss) y auto-complementarios (sc) de serotipo 1 y 9 intraperitonealmente, intramuscularmente o intravenosamente (i.v.) en ratones neonatales o adultos, y analizamos la expresión transgénica en el sistema nervioso central (SNC). Se observó que ambos vectores recombinantes, ssAAV9 y scAAV9, se dirigen a células cerebrales neurales y epiteliales y, de forma destacada, a neuronas motoras y células gliales de la espina dorsal. Las fibras sensoras dorsales y los ganglios de raíz dorsales también se vieron altamente transducidos. La eficacia de transducción más impresionante se obtuvo con vectores scAAV9 inyectados i.v. Confirmamos adicionalmente la capacidad de scAAV9 inyectado i.v. para circunvalar la barrera hematoencefálica y transducir neuronas motoras en un modelo felino de AME. Esta estrategia representa el primer procedimiento no invasivo que logra una administración transgénica extendida a la espina dorsal, ofreciendo nuevas posibilidades para el tratamiento de enfermedades de NM.
Vectores AAV
Dentro del contexto de la presente divulgación, el término “vector AAV” designa a cualquier vector que comprenda o derive de componentes de AAV y que sea adecuado para infectar células de mamífero, preferiblemente células humanas. El término vector AAV designa típicamente una particular vírica (o virión) de tipo AAV que comprende al menos una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína terapéutica. Como se discutirá más adelante, en la presente divulgación, el AAV puede derivar de varios serotipos, que incluyen combinaciones de serotipos (es decir, AAV “pseudotipado”) o de varios genomas (p.ej. de cadena sencilla o auto-complementarios). Adicionalmente, el vector AAV puede ser de replicación defectuosa y/o estar dirigido.
El virus adeno-asociado (AAV) es un parvovirus dependiente, de aproximadamente veinte nanómetros de tamaño. Como otros parvovirus, el AAV es un virus de ADN no envuelto de cadena sencilla, que tiene un genoma de aproximadamente 5000 nucleótidos de longitud, que contiene dos marcos de lectura abiertos. El marco de lectura abierto a mano izquierda codifica para las proteínas responsables de la replicación (Rep), mientras que el marco de lectura abierto a mano derecha codifica las proteínas estructurales de la cápsida (Cap). Los marcos de lectura abierta están flanqueados por dos secuencias ITR, que actúan como origen de replicación del genoma viral. Además, el genoma también contiene una secuencia de empaquetamiento, que permite el empaquetamiento del genoma viral en una cápsida de AAV.
El AAV requiere funciones de co-ayuda (que pueden ser proporcionadas, p.ej., por un adenovirus, o por células de empaquetamiento o plásmidos colaboradores adecuados) para obtener una infección productiva en células cultivadas. En ausencia de dichas funciones de ayuda, los viriones de AAV esencialmente entran en las células, migran hacia el núcleo como una molécula de ADN de cadena sencilla, y se integran en el genoma de las células. El AAV tiene un amplio rango de hospedantes para infección, que incluye células humanas, es ubicuo en humanos y es completamente no patogénico.
Se han diseñado, producido y usado vectores AAV para mediar en la administración de gene a sujetos humanos, incluyendo propósitos terapéuticos. Actualmente se están desarrollando ensayos clínicos en varios países que usan vectores AAV. Típicamente, los vectores AAV para uso en transferencia génica comprenden un genoma de AAV defectuoso en replicación que carece de secuencias víricas codificadoras Rep y Cap funcionales. Dichos vectores AAV de replicación defectuosa más preferiblemente carecen de la mayoría o de todas las secuencias codificadoras Rep y Cap, y esencialmente retienen una o dos secuencias ITR de AAV y una secuencia de empaquetamiento. Los métodos para producir dichos vectores AAV se han descrito en la bibliografía, incluyendo el uso de células de empaquetamiento, virus o plásmidos auxiliares y/o sistemas de baculovirus (Samulski et al., (1989) J. Virology 63, 3822; Xiao et al., (1998) J. Virology 72, 2224; Inoue et al., (1998) J. Virol. 72, 7024; WO 98/22607; WO 2005/072364). También se han publicado métodos para producir vectores AAV pseudotipados (p.ej., WO 00/28004), así como diversas modificaciones o formulaciones de vectores AAV, para reducir su inmunogenicidad durante la administración in vivo (véase, p.ej., WO 01/23001; WO 00/73316; WO 04/112727; WO 05/005610; WO 99/06562). Los vectores AAV pueden prepararse o derivar de varios serotipos de AAVs, que pueden incluso mezclarse entre ellos o con otros tipos de virus para producir virus AAV quiméricos (p.ej. pseudotipados).
El vector AAV9 de cadena doble auto-complementario o el vector AAV pseudotipado que comprende un genoma de AAV de cadena doble auto-complementario derivado de un serotipo de AAV diferente del serotipo AAV9 y una cápsida derivada de una cápsida de AAV9 para uso en la presente invención deriva de un virus AAV humano.
En otra realización particular, el vector AAV9 es un vector AAV9 pseudotipado. El vector AAV9 pseudotipado según la presente invención comprende un genoma de AAV derivado de un serotipo de AAV (por ejemplo, AAV2), y una cápsida derivada del serotipo AAV9. Los ejemplos específicos de dichos vectores AAV pseudotipados incluyen, sin limitación, vectores que comprenden un genoma derivado de AAV2 en una cápsida derivada de AAV9.
Según la presente descripción, el vector AAV puede comprender una cápsida modificada, que incluya proteínas o péptidos de origen no vírico o que estén modificados estructuralmente para alterar el tropismo del vector. Como ejemplo particular, la cápsida puede incluir un ligando de un receptor particular, o un receptor de un ligando particular, para dirigir al vector hacia el(los) tipo(s) de célula(s) que expresa(n) dicho receptor o ligando, respectivamente.
En los vectores AAV usados en la presente invención, el genoma de AAV es un ácido nucleico de cadena doble auto-complementario (McCarty et al., Gene Therapy, 2001).
Como se ha discutido anteriormente, el genoma derivado de AAV comprende un ácido nucleico que codifica una proteína terapéutica. Típicamente, el ácido nucleico también comprende secuencias reguladoras que permiten la expresión y, preferiblemente, la secreción de la proteína codificada, tal como, p.ej., un promotor, potenciador, señal de poliadenilacion, sitios de entrada de ribosoma internos (IRES), secuencias que codifican dominios de transducción de proteínas (PTD), y similares. A este respecto, el ácido nucleico comprende una región promotora, ligada operativamente a una secuencia codificadora, para provocar o mejorar la expresión de la proteína terapéutica en neuronas motoras de la espina dorsal. Dicho promotor puede ser ubicuo, específico de tejido, fuerte, débil, regulado, quimérico, etc., para permitir una producción eficiente y adecuada de la proteína en el tejido infectado. El promotor puede ser homólogo a la proteína codificada, o heterólogo, lo que incluye promotores celulares, víricos, fúngicos, vegetales o sintéticos. Los promotores para uso en la presente invención serán funcionales en neuronas motoras. Los ejemplos de dichos promotores regulados incluyen, sin limitación, promotores que contengan elementos Tet on/off, promotores inducibles por rapamicina y promotores de metalotioneína. Los ejemplos de promotores específicos para las neuronas motoras incluyen el promotor del Péptido Relacionado a Gen de Calcitonina (CGRP), un conocido factor derivado de neurona motora. Otros promotores funcionales en neuronas motoras incluyen los promotores de Colina Acetil Transferasa (ChAT), Enolasa Específica de Neurona (NSE), Sinapsina o promotores ubicuos que incluyen Elementos Silenciadores Específicos de Neuronas (NRSE). Los ejemplos de promotores ubicuos incluyen promotores virales, particularmente el promotor CMV, el promotor RSV, el promotor SV40, etc. y promotores celulares tales como el promotor PGK (fosfoglicerato quinasa).
En una realización preferida, el ácido nucleico comprende una secuencia líder que permite la secreción de la proteína codificada. La fusión del transgén de interés con una secuencia que codifica un péptido de señal de secreción (normalmente localizado en el extremo N de polipéptidos secretados) permitirá la producción de la proteína terapéutica en una forma que pueda ser secretada desde la célula transducida al CSF. Los ejemplos de dichos péptidos señal incluyen la albúmina, la p-glucuronidasa, la proteasa alcalina o los péptidos señal secretores de fibronectina.
Según otra realización específica, el transgén se fusiona a secuencias de PTD, tal como las secuencias Tat o VP22, a fin de causar o mejorar la secreción de la proteína terapéutica desde de las células transducidas y la re-captación por las células colindantes.
En una realización particular, el ácido nucleico comprende, ligado operativamente, un promotor y una secuencia líder, para permitir la expresión y la secreción de la proteína codificada.
En una realización particular adicional, el ácido nucleico comprende, ligado operativamente, un promotor, una secuencia líder y una secuencia PTD, para permitir la expresión y la secreción de la proteína codificada.
Según la invención, el promotor es específico o funcional en neuronas motoras, es decir, permite la expresión (preferencial) del transgén en dichas células.
Como se ha discutido anteriormente, los vectores AAV pueden producirse mediante técnicas conocidasper seen la técnica, como se ilustra en más detalle en los ejemplos.
Administración periférica
La invención se basa en el inesperado descubrimiento de que se puede lograr una expresión extendida y efectiva de genes en el interior de neuronas motoras de la espina dorsal con técnicas no invasivas, a través de la administración periférica de vectores AAV.
Según la invención, la administración periférica incluye, inyección i.m., i.v. o i.p.
Las dosis de vectores AAV pueden adaptarse fácilmente por parte del especialista, p.ej., dependiendo de la enfermedad, el sujeto, el esquema de tratamiento, etc. Típicamente, se administran entre 109 y 1014 genomas virales (unidades de transducción) por dosis en ratones, preferiblemente entre aproximadamente 1011 y 1013.
Típicamente, las dosis de vectores AAV a administrar en humanos pueden oscilar entre 1011 y 1017 genomas virales, preferiblemente entre 1013 y 1016.
Una dosis efectiva preferida dentro del contexto de esta invención es una dosis que permite una transducción óptima de las neuronas motoras de la espina dorsal.
El vector AAV puede administrarse en cualquier forma adecuada, tanto en disolución o suspensión líquida, como en forma de sólido adecuado para disolución o suspensión en un líquido antes de la inyección, como en forma de gel o de emulsión. Los vectores AAV se formulan típicamente con cualquier excipiente, vehículo, adyuvante, diluyente, etc. farmacéuticamente aceptable. Para inyección, el excipiente puede ser un líquido, disolución isotónica, tampón, tal como agua esterilizada y libre de pirógeno, o una disolución salina tamponada con fosfato esterilizada y libre de pirógeno. Para inhalación, el excipiente puede darse en forma particulada.
Los vectores AAV se administran típicamente en una cantidad “terapéuticamente efectiva”, es decir, una cantidad que sea suficiente para aliviar (p.ej., disminuir, reducir) al menos uno de los síntomas asociados al estado de enfermedad, o para proporcionar una mejoría de la condición del sujeto. Debería destacarse que se pueden llevar a cabo administraciones repetidas, si se requiere, usando la misma ruta de administración periférica o diferente, y/o los mismos serotipos de AAV o distintos.
Los inventores han demostrado por primera vez que un vector AAV9 de cadena doble auto-complementario o un vector AAV pseudotipado que comprende un genoma de AAV de cadena doble auto-complementario derivado de un serotipo de AAV diferente del serotipo AAV9 y una cápsida derivada de una cápsida de AAV9, administrado periféricamente, atraviesa la barrera hematoencefálica y provoca una infección sustancial de células de SNC. Este efecto se obtiene sin la necesidad de usar agentes disruptores de la barrera hematoencefálica. Los ejemplos de agentes disruptivos de la barrera hematoencefálica incluyen hipertermia, manitol, bradiquinina y NS1619.
Por consiguiente, en una realización particular, la invención se refiere a un uso o método como se ha definido anteriormente, que comprende la administración periférica de un vector AAV9 de cadena doble auto-complementario o un vector AAV pseudotipado que comprende un genoma de AAV de cadena doble auto-complementario derivado de un serotipo de AAV diferente del serotipo AAV9 y una cápsida derivada de una cápsida de AAV9, donde no se implementa ningún agente de disrupción de la barrera hematoencefálica. Además, la invención se refiere a un uso o método como se ha definido anteriormente, en el que no se inyecta manitol al sujeto.
Alternativamente, en otra realización particular, la invención se refiere a un uso o método como el definido anteriormente, que además comprende la disrupción de la barrera hematoencefálica con un agente o proceso de disrupción de la barrera hematoencefálica, para aumentar aún más el paso de los vectores scAAV implementados en la presente invención a través de la barrera hematoencefálica.
Trastorno de Neuronas Motoras
La invención muestra, por vez primera, que un vector AAV9 de cadena doble auto-complementario o un vector AAV pseudotipado que comprende un genoma de AAV de cadena doble auto-complementario derivado de un serotipo de AAV diferente del serotipo AAV9 y una cápsida derivada de una cápsida AAV9 administrada periféricamente atraviesa la barrera hematoencefálica y provoca una infección sustancial de células del SNC, particularmente de neuronas motoras a lo largo de la espina dorsal. Los resultados presentados demuestran que la infección es efectiva desde el segmento cervical hasta el segmento lumbar de la espina dorsal, proporcionando de este modo una administración génica extendida en las neuronas motoras.
La invención se puede usar para tratar una variedad de trastornos a través de la administración de un producto terapéutico a las células del SNC, que incluyen neuronas motoras. El producto terapéutico puede ser cualquier proteína, péptido o ARN que pueda aliviar o reducir los síntomas que resultan de la ausencia o defecto en una proteína en una célula o sujeto, o que de otro modo confiere un beneficio a un sujeto. Los ejemplos de proteínas terapéuticas incluyen factores de crecimiento, citocinas, hormonas, neurotransmisores, enzimas, factores antiapoptóticos, factores angiogénicos y cualquier proteína que se sepa que está mutada en trastornos patológicos tales como la proteína de “supervivencia de neurona motora” (SMN). Los ejemplos de ARN terapéutico incluyen ARN o ARNi antisentido dirigido a ARNs mensajeros que codifican para proteínas que tengan un interés terapéutico en cualquiera de las enfermedades mencionadas en la presente memoria más adelante. Por ejemplo, un ARNi dirigido a la enzima superóxido dismutasa puede ser codificado por un vector AAV como el definido anteriormente, en vista del tratamiento de ELA.
Dependiendo del producto terapéutico, la invención se puede usar para tratar varias enfermedades, que incluyen cualquier enfermedad que pueda ser tratada o prevenida por la expresión de proteínas terapéuticas en tejidos nerviosos. Dichas enfermedades incluyen trastornos del SNC, preferiblemente seleccionados entre enfermedades neurodegenerativas, enfermedades neuromusculares, enfermedades lisosomales, traumas, lesiones de médula ósea, dolor (que incluye dolor neuropático), cánceres del sistema nervioso, enfermedades desmielinizantes, enfermedades autoinmunes del sistema nervioso, síndromes neurotóxicos, trastornos del sueño.
Los ejemplos específicos de enfermedades incluyen la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington, el síndrome de Tourette, esquizofrenia, enfermedad de Sly, enfermedad de Hunter, demencia, paranoia, trastorno obsesivo compulsivo, dificultades en el aprendizaje, esclerosis lateral amiotrófica, atrofia muscular espinal, enfermedad de Charcot-Marie-Tooth, ataxia espinocerebelar, paraplegia espástica, enfermedad de Kennedy, glioblastoma, neuroblastoma, autismo, enfermedad de Gaucher, enfermedad de Hurler, enfermedad de Krabbe y alteraciones del comportamiento (p.ej., trastornos del sueño, la percepción o cognitivos). La invención se puede usar en cualquier mamífero, particularmente en sujetos humanos, incluyendo adultos, para tratamiento preventivo o curativo.
Otros aspectos y ventajas de la presente invención se describirán en la siguiente sección experimental, que deberán considerarse meramente como ilustrativa, y no limitativa, del alcance de esta solicitud.
Ejemplos
Materiales y Métodos
Animales. se compraron ratones C57Bl/6 (de seis a ocho semanas de edad, hembras) adultas y preñadas a Charles River Laboratories (Les Oncins, Francia). Los neonatos fueron inyectados el día del nacimiento (post-natal 1, PN1). Los criadores de gatos con AME (animales heterocigotos y afectados) fueron obtenidos del Dr. Fyfe (Laboratory of Comparative Medical Genetics, Michigan, EE.UU.) y se fueron albergados en el Center of Boisbonne en la Escuela Veterinaria de Nantes. El genotipado de las crías de gato con AME se llevó a cabo como se ha descrito previamente (Fyfe, Menotti-Raymond et al. 2006). Los experimentos fueron aprobados por el comité de ética regional (CREEA). Todos los experimentos con animales fueron llevados a cabo según las guías Europeas para el cuidado humano y el uso de animales experimentales.
Preparación de vector.
Se generaron vectores AAV2/1 y AAV2/9 pseudotipados mediante empaquetamiento de genomas recombinantes basados en AAV2 de cadena sencilla (ss) y auto-complementarios (sc) en AAV1 y 9 cápsidas. Resumidamente, los vectores fueron producidos usando una transfección de tres plásmidos libre de virus colaborador en células HEK293 con (1) el plásmido colaborador de adenovirus, (2) el plásmido de empaquetamiento AAV que codifica los genes rep2 y cap1 ó 9 (pLTRC02 para AAV1 y p5E18-VD2/9 para AAV9), (3) el plásmido de vector AAV2 que contiene mSeAP o GFP (bajo control del promotor temprano inmediato de citomegalovirus (CMV IE)) como genoma ss ó sc (Xiao, Li et al. 1998). Este último plásmido se construyó eliminando la secuencia D y el sitio de resolución terminal (trs) de una de las repeticiones terminales invertidas. Los vectores recombinantes fueron purificados mediante ultracentrifugación doble de CsCl seguida de diálisis contro disolución salina tamponada de fosfato. Se cuantificaron las partículas físicas mediante PCR en tiempo real para vectores inyectados en ratones y mediante hibridación de dot blot para vectores inyectados en crías de gato, y los títulos de vectores se expresaron como genoma vírico por mililitro (vg/mL).
Inyecciónin vivode los vectores AAV
Se inyectó a ratones neonatos el día del nacimiento (post natal 1, PN1). Para las inyecciones i.m., se inyectaron disoluciones de vector AAV (ssAAV2/1 (n=2), ssAAV2/9 (n=2), scAAV2/1 (n=2) ó scAAV2/9 (n=3)) que codifican mSeAP o GFP en los músculos tríceps y gastrocnemio (1 sitio de inyección por músculo, 5 pL por inyección, 8 x 10+9 a 2 x 10+10 genoma viral por ratón). Para las inyecciones i.p., se inyectaron disoluciones víricas (ssAAV2/1, n=2, ssAAV2/9, n=1, scAAV2/1, n=1 y scAAV2/9, n=2) que codifican mSeAP o GFP en la cavidad peritoneal de ratones C57Bl/6 de un día de edad (100 pL, de 3 x 10+10 a 10+11 genoma viral por ratón). Para las inyecciones i.v., se inyectó a ratones C57Bl/6 de un día de edad en la vena temporal con el vector scAAV2/9-GFP (50 pL, 1,5 x 10+10 genoma viral por ratón, n=3). Se inyectó a ratones C57Bl/6 adultos en la vena de la cola con vector scAAV2/9-mSeAP ó scAAV2/9-GFP (500 pL, 3 x 10+11 vg por ratón, n=3).
A los dos días del nacimiento, se inyectó un total de 1,5 x 10+12 partículas que contienen genoma de vector de scAAV9-CMV-eGFP en la vena yugular de una cría de gato afectada por AME y una cría de gato heterocigota de AME.
Perfusión y procesamiento de tejido para histología
Se extrajeron músculos, cerebros y espinas dorsales en los días 1 (PN2), 3 (PN4) ó 7 (PN8) tras la inyección de ratones neonatos, ó 7 y 35 días después de inyección en ratones adultos. Los ratones C57Bl6 adultos fueron anestesiados (10 mg/kg de xilazina, 100 mg/kg de quetamina) y fueron perfundidos intracardialmente con disolución salina tamponada con fosfato (PBS) 0,1 M seguido de paraformaldehído al 4 % (PFA) en PBS. Los tejidos fueron extraídos y fijados posteriormente durante 4 h en la misma disolución antes de ser transferidos durante una noche a 4°C en sacarosa al 15 % para cerebros y músculos y 30 % de sacarosa para las espinas dorsales. Los neonatos fueron decapitados y los tejidos fueron sumergidos en PFA al 4 % durante 4 h antes de ser crioprotegidos durante una noche a 4°C. Las muestras fueron congeladas en isopentano frío (-50°C) y se cortaron secciones en serie en un criostato y se almacenaron a -80°C para posterior análisis.
A los 10 días de la inyección, los gatos fueron anestesiados (150 pg/kg de medetomidina, 10 mg/kg de quetamina) y perfundidos transcardialmente con 10 mL de disolución salina tamponada con fosfato seguido de 100 mL de PFA al 4%. Se extrajeron los cerebros y las espinas dorsales y se cortaron en láminas coronales de 5 mm, después se post fijaron en PFA 4% seguido de una crioprotección durante una noche en sacarosa al 30%, y a continuación se congelaron sobre hielo seco en un compuesto OCT. Las láminas de espina dorsal fueron cortadas en intervalos de 1x100 pm seguido de 5x10 pm en un criostato. Se usaron secciones de cien pm de espesor para el examen de señal GFP mediante microscopía confocal, y se usaron secciones de 10 pm de espesor para la inmunocitoquímica. Evaluación de expresión transgénica
Para la histoquímica de mSeAP, se extrajeron músculos, cerebros y espinas dorsales de ratones neonatos en los días 1, 3 y 7 p.i., se congelaron en isopentano frío (-50°C) y se mantuvieron a -80°C para uso extemporal. Se recolectaron los cerebros y las espinas dorsales de animales adultos a los 35 días p.i. y se trataron en las mismas condiciones. Se realizaron secciones de tejido de 16 pm de espesor para cerebro y espina dorsal, y de 8 pm de espesor para músculos en un criostato y se procesaron posteriormente para expresión transgénica. Las secciones se fijaron con un 0,5% de glutaraldehído, se lavaron con PBS y se desactivó térmicamente fosfatasa alcalina endógena durante 30 minutos a 65°C. A continuación las secciones fueron incubadas durante una noche a 37°C en 0,165 mg/mL de 5-bromo-4-cloro-3-indolilfosfato y 0,33 mg/mL de tetrazolio de nitroazul en Tris-HCl 100 mM, NaCl 100 mM y MgCl<2>50 mM, se contratiñe con hematoxilina-eosina y se monta con Eukit.
Para la inmunohistoquímica de GFP en ratones, se lavaron secciones en PBS y se incubaron durante 30 minutos en una disolución de peróxido de hidrógeno (disolución de Bloqueo de Peroxidasa, Dako) para inhibición de las peroxidasas endógenas. Tras lavar en PBS, las secciones fueron bloqueadas durante una hora a temperatura ambiente en PBS con suero de cabra al 10 % (Dako) y un 0,4 % de Triton, y a continuación se incubaron durante una noche con un anti-GFP policlonal de conejo (Abcam; 1:3000). Se usó un anticuerpo secundario conjugado a biotina (Vectastaína, 1:200) y el kit Vectastain Elite ABC, y se reveló la tinción de DAB con el kit de sustrato para peroxidasa (Vector Laboratories). Las secciones fueron deshidratadas en alcohol y xileno, y se montaron con Eukit. La inmunocitoquímica de GFP en gatos se realizó sobre secciones congeladas de espina dorsal de 10 pm. Resumidamente, las secciones de espina dorsal fueron permeabilizadas con Tween 20 al 0,2 % en PBS (pH 7,4), bloqueadas con un 5 % de suero de cabra, incubadas dos noches a 4°C con anticuerpo policlonal AB3080 de GFP (Chemicon, 1:50) e incubadas con un anticuerpo anti-conejo de cabra biotinilado. El inmunomarcaje fue revelado tras una incubación con el complejo estreptavidina-peroxidasa usando el sustrato de peroxidasa diaminobenzidina. Las secciones fueron contrateñidas con hematoxilina.
La colina acetiltransferasa de neuronas motoras fue marcada con anticuerpo ChAT policlonal de cabra de colina acetiltransferasa (ChAT) (AB144P, Chemicon, Francia, 1:100). Resumidamente, se bloquearon secciones de espina dorsal con un 1 % de suero de conejo en PBS/Tx100 al 0,4 %, se incubó una noche a temperatura ambiente con el anticuerpo primario y se incubó con un anticuerpo anti-cabra de conejo biotinilado. El inmunomarcaje fue revelado tras una incubación con estreptavidina Alexa 555 flúor y se cubrieron secciones con medio Mowiol (Calbiochem, EE.UU.) para ser observadas en microscopía confocal.
Microscopía de barrido confocal de láser
La expresión de GFP y la inmunocitoquímica fueron observadas con un microscopio confocal de barrido láser Nikon TE-2000, equipado con un láser de ion argón azul y un láser de neón de helio que emiten rayos monocromáticos a 488 nm (verde) y 543 nm (rojo), respectivamente. Los portas fueron escaneados en serie usando un objetivo X20 sumergido en agua. Cada imagen fue registrada en un canal separado (canal verde para GFP y canal rojo para estreptavidina 555) y se superpusieron para permitir la detección de señales fluorescentes co-localizadas.
Ejemplo 1. Inyección intramuscular de vectores AAV que expresan mSEAP en ratones neonatales
En primer lugar, evaluamos el potencial de los vectores ss- ó sc-AAV de serotipo 1 y 9 para transducir las células del SNC tras inyección i.m. El ssAAV1, ssAAV9, scAAV1 ó scAAV9 que codifican la fosfatasa alcalina murina secretada (mSEAP) bajo el promotor de citomegalovirus (CMV) fueron inyectados en los músculos tríceps y gastrocnemio de ratones C57BI6 de un día de edad (8■ 10+9 a 210+10 genoma vírico por ratón, 3 ratones por grupo). Los tejidos inyectados de músculo, cerebro y espina dorsal fueron extraídos 1, 3 ó 7 días después de la inyección y se analizaron para determinar la expresión de mSEAP usando histoquímica.
La expresión de mSEAP se detectó en los músculos inyectados 3 y 7 días después de la inyección de cada serotipo de AAV, excepto para el ssAAV9, el nivel de expresión aumentó drásticamente con el tiempo (Fig. 1a). En el SNC, se detectó expresión transgénica solo después de inyección i.m. de scAAV9. De forma interesante, se detectó expresión de mSEAP en las células epiteliales del plexo coroideo (Fig. 1b), que desempeñan un papel crucial en la secreción y la eliminación de muchas proteínas y toxinas en el fluido cerebroespinal (CSF) (Redzic, 2005). La expresión de mSEAP en el plexo coroideo se observó en tan solo 3 días desde la inyección (PN4), y los niveles de expresión volvieron a aumentar con el tiempo. También se localizó una débil expresión transgénica dentro y alrededor de los vasos sanguíneos del cerebro y la espina dorsal tras inyección i.m. del vector scAAV9 (Fig. 1c).Ejemplo 2. Inyección intraperitoneal de vectores AAV que expresan mSEAP en el ratón neonatal
A continuación analizamos si la administración i.p. de ssAAV1, ssAAV9, scAAV1 y scAAV9 en ratones C57Bl6 de un día de edad (100 pL, 310+10 a 110+11 genomas virales por ratón) podrían mediar en la expresión transgénica en el SNC 1, 3 ó 7 días después de la inyección.
Se detectó un nivel bajo de expresión de mSEAP en las fibras de músculo de diafragma de ratones inyectados con ssAAV1 a los 3 días post-inyección, que fue similar a lo observado con scAAV1 (Fig. 2a), y con ambos vectores 7 días después de la inyección. (Fig. 2a). El ssAAV9 transduce unas pocas fibras musculares sólo a los 21 días post inyección, mientras que se observó una intensa tinción de mSEAP en el diafragma cuando se usa scAAV9 desde los 3 días post-inyección (Fig. 2a). Este elevado nivel de transducción también se observó en otros músculos tales como el tríceps braquial o el músculo gastrocnemio (datos no mostrados).
Las células epiteliales del plexo coroideo y el epéndimo aparecieron claramente marcadas tras inyección con scAAV9 (Fig. 2b). Además se observó una transducción robusta en dichas regiones a los 7 días post-inyección (Fig. 2b). También se observó expresión transgénica en las meninges y en los vasos sanguíneos a los 7 días post inyección, tanto en el cerebro como a lo largo de la espina dorsal, y fue superior a lo observado tras inyección i.m. (Fig. 2c). De forma interesante, también se detectó expresión de mSEAP en algunas células neurales del cerebro y la espina dorsal (Fig. 2d). En conjunto, estos resultados indican que los vectores scAAV9 inyectados i.m. ó i.p. que expresan la proteína mSEAP pueden dirigirse de forma eficaz al SNC, especialmente a células epiteliales del plexo coroideo y el epéndimo.
Ejemplo 3. Expresión transgénica en el SNC tras inyección i.m. ó i.p. de scAAV9-GFP en el ratón neonatalPuesto que el mSEAP es una proteína secretada, la expresión transgénica observada en las células del SNC tras inyección periférica de AAV podría ser el resultado de una transcitosis proteínica más que de una transducción celular del AAV. Por tanto, verificamos si se podrían obtener resultados similares usando una proteína no secretada. Se inyectó un vector scAAV9 recombinante que expresa la “proteína fluorescente verde” (GFP) en ratones neonatales bien intraperitonealmente (3 ■ 10+10 vg por ratón, 100 pL) o intramuscularmente (810+9 vg en 20 pL por ratón, 5 pL por músculo). Siete días después, y de forma similar a lo observado con scAAV9-mSEAP, se observó expresión de GFP en el plexo coroideo y en células del epéndimo localizadas en los ventrículos del cerebro (Fig. 3a y Fig. 4a). Adicionalmente, en este caso encontramos muchas células neurales positivas en GFP en varias regiones cerebrales localizadas, en particular, próximas a los ventrículos. Los cuerpos celulares y las fibras celulares del hipocampo (Fig. 3b), el septum (Fig.4b,c) y el córtex entorrinal (Fig. 3c, Fig.4d-e) resultaron transducidos de forma efectiva.
Cabe destacar que se detectó expresión de GFP en células de la espina dorsal a los 7 días tras la administración de AAV, incluyendo en células con fenotipo de tipo neurona motora (Fig. 3d,e). También se observó una fuerte expresión de GFP en fibras del tracto corticoespinal que cruza al nivel cervical de la espina dorsal (Fig. 3f y 4h). Probablemente, la transducción de estas fibras es el resultado del ataque a las NMs superiores, cuyos somas están localizados en el córtex motor y que también parecían inmunopositivas para GFP (Fig. 3d). Globalmente, se detectó un número mayor de células inmunopositivas para GFP en el SNC tras inyección i.p. que tras inyección i.m., debido a la diferencia de eficacia entre las rutas de inyección o al mayor título de vector usado en el procedimiento i.p.
Ejemplo 4. Expresión transgénica en el SNC tras inyección intravenosa de scAAV9 que expresa GFP en ratones neonatales
Puesto que el vector recombinante scAAV9 resultó ser el más eficiente para mediar en la transducción celular del SNC tras administración i.m. ó i.p., evaluamos si ésta podría mejorarse usando la ruta i.v. de administración.
De este modo se inyectaron vectores scAAV9 que expresan GFP en la vena temporal de ratones C57Bl6 de un día de edad (50 pL, 1,5 10+10 genomas víricos por ratón) y se extrajeron los tejidos del SNC y se procesaron para inmunotinción 7 días después de ello. Se detectó una fuerte expresión de GFP en el plexo coroideo y las células del epéndimo (Fig. 5a) y en los vasos sanguíneos del cerebro (Fig. 5c). Nuevamente, obtuvimos expresión de GFP dentro de células de fenotipo neurona y de fenotipo glial a lo largo del cerebro, en particular del córtex entorrinal (Fig. 5d) y el hipocampo (Fig. 5e,f).
Se observó un nivel muy elevado de expresión transgénica a lo largo de la espina dorsal (desde el segmento cervical hasta el segmento lumbar) en células con un fenotipo y localización de neurona motora (espina dorsal ventral) (Fig. 5h-i). Esto probablemente es el resultado de la difusión del vector a través de los vasos sanguíneos desde la circulación hacia el parénquima cerebral, y/o del transporte de anterógrado axonal desde las regiones superiores del SNC.
A continuación determinamos si el ssAAV9 también podría cruzar la BBB y transducir las células del SNC tras administración i.v., o si esta propiedad es específica del genoma de cadena doble. Con este objetivo, se inyectaron vectores ssAAV9 que expresan GFP en la vena temporal de ratones neonatales y se analizó la expresión de GFP 3 semanas después (a fin de permitir la conversión de genoma en ADN de cadena doble). De forma similar a lo observado con scAAV9, el ssAAV9-GFP demostró mediar en la transducción de células del SNC tras administración i.v., aunque su eficacia fue inferior a la del scAAV9. Nuevamente, las células del plexo coroideo y el epéndimo expresaron grandes cantidades de GFP y se observó que muchas regiones del cerebro próximas a los ventrículos cerebrales eran transducidas (Fig. 6a). Por ejemplo, se detectaron neuronas positivas en GFP en el hipocampo y el núcleo habenular (Fig. 6a) y en la eminencia mediana (Fig. 6b). Cabe destacar que se observó que algunas células de tipo neurona motora expresaban GFP en la espina dorsal ventral (Fig. 6c-e). También se observó que unas pocas células del SNC expresaban GFP tras administración i.m. ó i.p. del ssAAV9 recombinante (datos no mostrados). Considerados en conjunto, estos datos sugieren una capacidad inesperada de los vectores AAV de serotipo 9 -tanto convencionales como auto-complementarios- para atravesar la BBB y transducir las células del SNC en ratones neonatales, incluyendo las neuronas motoras inferiores, tras una única inyección intravenosa en el ratón neonatal.
Ejemplo 5. Inyección intravenosa de vectores ss y scAAV9 en ratones adultos
Puesto que la BBB no está completamente formada en ratones neonatales, evaluamos si la capacidad de los vectores AAV9 para transducir células neurales en ratones recién nacidos se mantenía en ratones adultos. Se inyectaron vectores ss y sc AAV9 que codifican para mSEAP (31011 vg ó 11012 vg por ratón) en la vena de la cola de ratones adultos y se analizó la expresión transgénica en el SNC cuatro semanas después. Tras la administración i.v. de scAAV9-mSEAP, se observó una expresión sostenida del transgén en muchas regiones cerebrales tal como la eminencia media (Fig. 7f), el hipocampo (Fig. 7g) o el cuerpo calloso (Fig. 7h).
Cabe destacar que hubo muchas células y fibras positivas para mSEAP a lo largo de la espina dorsal tras la administración i.v. de vectores AAV recombinantes de serotipo 9 (Fig. 8a-g). Nuevamente, se observó un mayor nivel de expresión transgénica con el vector sc- que con el vector convencional ssAAV9 (Fig. 8a,b frente a 8c-g). Inyecciones similares con scAAV9-GFP demostraron la superioridad del scAAV9 para la administración génica sistémica a la espina dorsal. Se observó que un número elevado se expresaba cuatro semanas después de la inyección i.v. de 2x1012 vg de scAAV9, se expresó GFP en la espina dorsal tanto en células neuronales como gliales, como demuestra la inmunotinción de la proteína ácida fibrilar (GFAP), un marcador de astrocitos (Fig. 11).
Por lo tanto, nuestros resultados muestran una transducción eficaz de las células del SNC, que incluyen NMs inferiores y células gliales, tras administración intravenosa de vectores AAV9 recombinantes en ratones adultos en los que la BBB está formada completamente. Esto enfatiza la propiedad particular de estos vectores de pasar desde la circulación al parénquima del SNC a través de la BBB, logrando una transferencia génica extendida a las células nerviosas.
Ejemplo 6. Inyección intravenosa de AAV9-GFP en un modelo de animal grande
La validación de esta nueva estrategia de transferencia génica al SNC en modelos animales grandes es un prerrequisito para una potencial aplicación en ensayos clínicos con humanos.
Evaluamos la expresión transgénica en la espina dorsal de crías de gato LIX-1 después de una administración intravenosa de vectores scAAV9 recombinantes. Se inyectó a gatitos de dos días de edad (un homocigoto LIX-1 y un heterocigoto) en la vena yugular con scAAV9 que expresa GFP. Díez días después, se analizaron secciones de tejido de espina dorsal para determinar la expresión de GFP usando microscopía confocal de barrido.
Se observó una fuerte señal de GFP a lo largo de la espina dorsal desde la parte cervical hasta elcauda equinatanto en la materia gris como en la blanca, resultando similar el modelo de expresión tanto en animales afectados como heterocigotos. Las fibras nerviosas del fascículo gracilis y los tractos sensoriales dorsales cutáneos expresaron niveles elevados de GFP (Fig. 9a). Además, se detectó la expresión de GFP en una serie de cuerpos celulares en la espina dorsal ventral, tras observación de fluorescencia de GFP (Fig. 9a,c) y análisis inmunohistoquímico (Fig. 9b-d). Un análisis de inmunotinción doble con anticuerpos contra GFP y colina acetil transferasa (ChAT) demostró que, tanto en gatitos afectados por AME como en no afectados, una parte significativa de las células positivas para GFP eran neuronas motoras (Fig. 10).
Referencias
Azzouz, M., A. Hottinger, et al. (2000). “Increased motoneuron survival and improved neuromuscular function in transgenic ALS mice after intraspinal injection of an adeno-associated virus encoding Bcl-2”. Hum Mol Genet 9(5): 803-11.
Azzouz, M., et al., (2004). “Lentivector-mediated SMN replacement in a mouse model of spinal muscular atrophy”. J Clin Invest. 114(12): 1726-31.
Boillee, S., K. Yamanaka, et al. (2006). “Onset and progression in inherited ALS determined by motor neurons and microglia”. Science 312(5778): 1389-92.
Cearley, C. N. y J. H. Wolfe (2006). “Transduction characteristics of adeno-associated virus vectors expressing cap serotypes 7, 8, 9, and Rh10 in the mouse brain”. Mol Ther 13(3): 528-37.
Daly, T. M., C. Vogler, et al. (1999). “Neonatal gene transfer leads to widespread correction of pathology in a murine model of lysosomal storage disease”. Proc Natl Acad Sci USA 96(5): 2296-300.
Fu, H., J. Muenzer, et al. (2003). “Self-complementary adeno-associated virus serotype 2 vector: global distribution and broad dispersion of AAV-mediated transgene expression in mouse brain”. Mol Ther 8(6): 911-7.
Fyfe, J. C., M. Menotti-Raymond, et al. (2006). “An approximately 140-kb deletion associated with feline spinal muscular atrophy implies an essential LIX1 function for motor neuron survival”. Genome Res 16(9): 1084-90.
Inagaki, K., S. Fuess, et al. (2006). “Robust systemic transduction with AAV9 vectors in mice: efficient global cardiac gene transfer superior to that of a Av 8”. Mol Ther 14(1): 45-53.
Kaspar, B.K., et al. (2003). “Retrograde viral delivery of IGF-1 prolongs survival in a mouse ALS model”. Science 301: 839-42.
MacLean, H. E., G. L. Warne, et al. (1996). “Spinal and bulbar muscular atrophy: androgen receptor dysfunction caused by a trinucleotide repeat expansion”. J Neurol Sci 135(2): 149-57.
McCarty, D. M., H. Fu, et al. (2003). “Adeno-associated virus terminal repeat (TR) mutant generates selfcomplementary vectors to overcome the rate-limiting step to transduction in vivo”. Gene Ther 10(26): 2112-8.
Monani, U. R. (2005). “Spinal muscular atrophy: a deficiency in a ubiquitous protein; a motor neuron-specific disease”. Neuron 48(6): 885-96.
Pasinelli, P. y R. H. Brown (2006). “Molecular biology of amyotrophic lateral sclerosis: insights from genetics”. Nat Rev Neurosci 7(9): 710-23.
Passini, M. A. y J. H. Wolfe (2001). “Widespread gene delivery and structure-specific patterns of expression in the brain after intraventricular injections of neonatal mice with an adeno-associated virus vector”. J Virol 75(24): 12382-92.
Scherrmann, J. M. (2002). “Drug delivery to brain via the blood-brain-brain”. Vascul Pharmacol. 38: 349-54.
Xiao, X., J. Li, et al. (1998). “Production of high-titer recombinant adeno-associated virus vectors in the absence of helper adenovirus”. J Virol 72(3): 2224-32.
Claims (7)
1. Un vector AAV que comprende un gen terapéutico para uso en un método para tratar un trastorno de las neuronas motoras en un sujeto, en donde dicho vector AAV se administra mediante inyección intraperitoneal (i.p.), intramuscular (i.m.) o intravenosa (i.v.), preferiblemente inyección intravenosa, a dicho sujeto, causando dicha administración infección de las neuronas motoras de la espina dorsal y expresión del gen en las neuronas motoras de la espina dorsal, donde dicho vector AAV es:
- un vector AAV9 de cadena doble auto-complementario, o
- un vector AAV pseudotipado que comprende un genoma de AAV de cadena doble auto-complementario procedente de un serotipo de AAV diferente del serotipo AAV9 y una cápsida derivada de una cápsida de AAV9; y
donde el gen terapéutico está ligado operativamente a un promotor específico o funcional en neuronas motoras.
2. El vector AAV de la reivindicación 1, donde el vector AAV es un vector AAV2/9 que comprende un genoma derivado de AAV2 en una cápsida derivada de AAV9.
3. El vector AAV de la reivindicación 1 o 2, donde el vector AAV comprende un genoma AAV con defecto de replicación que carece de secuencias víricas codificadoras Rep y Cap.
4. El vector AAV de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el gen codifica un ARN terapéutico, o una proteína terapéutica seleccionada entre factores de crecimiento, citocinas, hormonas, neurotransmisores, enzimas, factores anti-apoptóticos, factores angiogénicos y la proteína de “supervivencia de neuronas motoras” (SMN).
5. El vector AAV de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde el trastorno se selecciona entre enfermedades neurodegenerativas, enfermedades neuromusculares, dolor, enfermedades lisosomales, traumas, lesiones de médula ósea, cánceres del sistema nervioso, enfermedades desmielinizantes, enfermedades autoinmunes del sistema nervioso, síndromes neurotóxicos, trastornos del sueño.
6. El vector AAV de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la expresión de la proteína terapéutica está controlada por un promotor ubicuo, regulado y/o específico de tejido.
7. El vector AAV de la reivindicación 5, donde el gen codifica la proteína SMN y el trastorno es atrofia muscular espinal (AME).
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP07301435 | 2007-10-05 | ||
| EP07301435A EP2058401A1 (en) | 2007-10-05 | 2007-10-05 | Widespread gene delivery to motor neurons using peripheral injection of AAV vectors |
| PCT/EP2008/063297 WO2009043936A1 (en) | 2007-10-05 | 2008-10-03 | Widespread gene delivery to motor neurons using peripheral injection of aav vectors |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2482094T3 ES2482094T3 (es) | 2014-08-01 |
| ES2482094T5 true ES2482094T5 (es) | 2024-06-03 |
Family
ID=39186802
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES12180951T Active ES2727034T3 (es) | 2007-10-05 | 2008-10-03 | Administración extendida de genes a neuronas motoras mediante inyección periférica de vectores AAV |
| ES19158152T Active ES2924892T3 (es) | 2007-10-05 | 2008-10-03 | Administración extendida de genes a neuronas motoras mediante inyección periférica de vectores AAV |
| ES08836776T Active ES2482094T5 (es) | 2007-10-05 | 2008-10-03 | Administración extendida de genes a neuronas motoras mediante inyección periférica de vectores AAV |
Family Applications Before (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES12180951T Active ES2727034T3 (es) | 2007-10-05 | 2008-10-03 | Administración extendida de genes a neuronas motoras mediante inyección periférica de vectores AAV |
| ES19158152T Active ES2924892T3 (es) | 2007-10-05 | 2008-10-03 | Administración extendida de genes a neuronas motoras mediante inyección periférica de vectores AAV |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US9926574B2 (es) |
| EP (5) | EP2058401A1 (es) |
| JP (2) | JP5620819B2 (es) |
| CN (2) | CN105087650A (es) |
| CA (2) | CA2701561C (es) |
| CY (2) | CY1125608T1 (es) |
| DK (2) | DK3505635T3 (es) |
| ES (3) | ES2727034T3 (es) |
| FI (1) | FI2212424T4 (es) |
| FR (2) | FR20C1057I2 (es) |
| HR (2) | HRP20220992T3 (es) |
| HU (2) | HUE059864T2 (es) |
| LT (2) | LT3505635T (es) |
| NO (1) | NO2022048I1 (es) |
| PL (2) | PL3505635T3 (es) |
| PT (3) | PT3505635T (es) |
| SI (2) | SI2212424T1 (es) |
| WO (1) | WO2009043936A1 (es) |
Families Citing this family (98)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20120322861A1 (en) | 2007-02-23 | 2012-12-20 | Barry John Byrne | Compositions and Methods for Treating Diseases |
| EP2019143A1 (en) * | 2007-07-23 | 2009-01-28 | Genethon | CNS gene delivery using peripheral administration of AAV vectors |
| EP2058401A1 (en) * | 2007-10-05 | 2009-05-13 | Genethon | Widespread gene delivery to motor neurons using peripheral injection of AAV vectors |
| CA2965198C (en) | 2008-01-15 | 2021-02-16 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Markers of acute myeloid leukemia stem cells |
| US9217155B2 (en) | 2008-05-28 | 2015-12-22 | University Of Massachusetts | Isolation of novel AAV'S and uses thereof |
| US11219696B2 (en) | 2008-12-19 | 2022-01-11 | Nationwide Children's Hospital | Delivery of polynucleotides using recombinant AAV9 |
| US9415121B2 (en) | 2008-12-19 | 2016-08-16 | Nationwide Children's Hospital | Delivery of MECP2 polynucleotide using recombinant AAV9 |
| SI2424991T1 (sl) | 2009-05-02 | 2018-11-30 | Genzyme Corporation | Genska terapija za nevrodegenerativne motnje |
| US8734809B2 (en) | 2009-05-28 | 2014-05-27 | University Of Massachusetts | AAV's and uses thereof |
| CA3050894C (en) | 2010-04-23 | 2022-10-18 | University Of Massachusetts | Multicistronic expression constructs |
| WO2011133901A2 (en) | 2010-04-23 | 2011-10-27 | University Of Massachusetts | Aav-based treatment of cholesterol-related disorders |
| EP2826860B1 (en) * | 2010-04-23 | 2018-08-22 | University of Massachusetts | CNS targeting AAV vectors and methods of use thereof |
| CN103189507A (zh) * | 2010-10-27 | 2013-07-03 | 学校法人自治医科大学 | 用于向神经系统细胞导入基因的腺相关病毒粒子 |
| EP2699680B1 (en) | 2011-04-21 | 2017-12-27 | University of Massachusetts | Raav-based compositions and methods for treating alpha-1 anti-trypsin deficiencies |
| US20130039888A1 (en) * | 2011-06-08 | 2013-02-14 | Nationwide Children's Hospital Inc. | Products and methods for delivery of polynucleotides by adeno-associated virus for lysosomal storage disorders |
| EP3818991A3 (en) * | 2012-06-19 | 2021-07-14 | University of Florida Research Foundation, Inc. | Compositions and methods for treating diseases |
| WO2013190059A1 (en) * | 2012-06-21 | 2013-12-27 | Association Institut De Myologie | Widespread gene delivery of gene therapy vectors |
| BR112015002168A2 (pt) | 2012-08-01 | 2017-11-07 | Nationwide Childrens Hospital | liberação intratecal de vírus 9 adeno-associado recombinante |
| CA2885216A1 (en) | 2012-09-17 | 2014-03-20 | The Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Compositions and methods for treating amyotrophic lateral sclerosis |
| CN105377039A (zh) * | 2013-05-15 | 2016-03-02 | 明尼苏达大学董事会 | 腺相关病毒介导的基因向中枢神经系统转移 |
| EP4219727A3 (en) | 2013-08-27 | 2023-09-06 | Research Institute at Nationwide Children's Hospital | Products and methods for treatment of amyotrophic lateral sclerosis |
| EP3065784A4 (en) | 2013-11-05 | 2017-05-10 | The Research Institute at Nationwide Children's Hospital | COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING NF- kB AND SOD-1 TO TREAT AMYOTROPHIC LATERAL SCLEROSIS |
| US9890365B2 (en) * | 2014-03-09 | 2018-02-13 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions useful in treatment of ornithine transcarbamylase (OTC) deficiency |
| EP2933335A1 (en) * | 2014-04-18 | 2015-10-21 | Genethon | A method of treating peripheral neuropathies and motor neuron diseases |
| US10689653B2 (en) | 2014-06-03 | 2020-06-23 | University Of Massachusetts | Compositions and methods for modulating dysferlin expression |
| JP6872479B2 (ja) | 2014-07-31 | 2021-05-19 | アソシアシオン・アンスティテュ・ドゥ・ミオロジーＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｄｅ Ｍｙｏｌｏｇｉｅ | 筋萎縮性側索硬化症の処置 |
| EP3200830B1 (en) | 2014-10-03 | 2020-09-09 | University of Massachusetts | High efficiency library-identified aav vectors |
| US10370432B2 (en) | 2014-10-03 | 2019-08-06 | University Of Massachusetts | Heterologous targeting peptide grafted AAVS |
| BR112017007737A2 (pt) | 2014-10-21 | 2018-01-30 | Univ Massachusetts | variantes de aav recombinantes e usos das mesmas |
| MX2017006216A (es) | 2014-11-14 | 2018-08-29 | Voyager Therapeutics Inc | Composiciones y métodos para tratar la esclerosis lateral amiotrófica (ela). |
| CN114480440A (zh) | 2014-11-21 | 2022-05-13 | 北卡罗来纳-查佩尔山大学 | 靶向中枢神经系统的aav载体 |
| CA2967468A1 (en) | 2014-12-16 | 2016-06-23 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Gene therapy for juvenile batten disease |
| WO2016131009A1 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-18 | University Of Massachusetts | Compositions and methods for transient delivery of nucleases |
| ES2755725T3 (es) * | 2015-04-08 | 2020-04-23 | Us Health | Terapia génica viral como tratamiento para una enfermedad o un trastorno por almacenamiento de colesterol |
| CA3021949C (en) | 2015-04-24 | 2023-10-17 | University Of Massachusetts | Modified aav constructs and uses thereof |
| JP7097070B2 (ja) * | 2015-10-01 | 2022-07-07 | ゴレイニ インコーポレイテッド | クロライドチャネルの標的発現及びその使用方法 |
| CA3001574A1 (en) * | 2015-10-21 | 2017-04-27 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Codon-optimized reduced-size atp7a cdna and uses for treatment of copper transport disorders |
| US11253576B2 (en) | 2015-10-22 | 2022-02-22 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for treating metabolic imbalance in neurodegenerative disease |
| US11426469B2 (en) | 2015-10-22 | 2022-08-30 | University Of Massachusetts | Prostate-targeting adeno-associated virus serotype vectors |
| EP3368054A4 (en) | 2015-10-28 | 2019-07-03 | Voyager Therapeutics, Inc. | REGULATORY EXPRESSION USING THE ADENO-ASSOCIATED VIRUS (AAV) |
| CA3011939A1 (en) | 2016-02-02 | 2017-08-10 | University Of Massachusetts | Method to enhance the efficiency of systemic aav gene delivery to the central nervous system |
| EP4094780A3 (en) | 2016-02-12 | 2023-02-08 | University of Massachusetts | Anti-angiogenic mirna therapeutics for inhibiting corneal neovascularization |
| US11207426B2 (en) | 2016-04-05 | 2021-12-28 | University Of Massachusetts | Compositions and methods for selective inhibition of grainyhead-like protein expression |
| EP3452104A1 (en) | 2016-04-15 | 2019-03-13 | The Trustees of The University of Pennsylvania | Gene therapy for treating mucopolysaccharidosis type ii |
| US11413356B2 (en) | 2016-04-15 | 2022-08-16 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for treating metabolic imbalance |
| RU2764919C2 (ru) | 2016-06-13 | 2022-01-24 | Дзе Юниверсити Оф Норт Каролина Эт Чепел Хилл | Оптимизированные гены и экспрессионные кассеты cln1, и их применение |
| US11882815B2 (en) | 2016-06-15 | 2024-01-30 | University Of Massachusetts | Recombinant adeno-associated viruses for delivering gene editing molecules to embryonic cells |
| EP3831281A1 (en) | 2016-08-30 | 2021-06-09 | The Regents of The University of California | Methods for biomedical targeting and delivery and devices and systems for practicing the same |
| US10457940B2 (en) | 2016-09-22 | 2019-10-29 | University Of Massachusetts | AAV treatment of Huntington's disease |
| KR20190075964A (ko) | 2016-10-13 | 2019-07-01 | 유니버시티 오브 매사추세츠 | Aav 캡시드 설계 |
| CN108524952A (zh) * | 2017-03-06 | 2018-09-14 | 复旦大学 | 腺相关病毒aav9及其在制备治疗戈谢氏病的制剂中的用途 |
| CA3061652A1 (en) | 2017-05-05 | 2018-11-08 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (als) |
| JP7229989B2 (ja) | 2017-07-17 | 2023-02-28 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッド | 軌道アレイガイドシステム |
| KR20200044793A (ko) | 2017-08-03 | 2020-04-29 | 보이저 테라퓨틱스, 인크. | Aav의 전달을 위한 조성물 및 방법 |
| EP3684938A1 (en) | 2017-09-22 | 2020-07-29 | The Trustees of the University of Pennsylvania | Gene therapy for treating mucopolysaccharidosis type ii |
| WO2019079242A1 (en) | 2017-10-16 | 2019-04-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | TREATMENT OF AMYOTROPHIC LATERAL SCLEROSIS (ALS) |
| JP7502991B2 (ja) | 2017-10-16 | 2024-06-19 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッド | 筋萎縮性側索硬化症（ａｌｓ）の治療 |
| JP2021502123A (ja) * | 2017-11-08 | 2021-01-28 | アヴェクシス インコーポレーテッド | ウイルスベクターの調製手段及び方法並びにその使用 |
| US10610606B2 (en) | 2018-02-01 | 2020-04-07 | Homology Medicines, Inc. | Adeno-associated virus compositions for PAH gene transfer and methods of use thereof |
| CN112041437A (zh) | 2018-02-19 | 2020-12-04 | 同源药物公司 | 用于恢复f8基因功能的腺相关病毒组合物和其使用方法 |
| BR112020020195A2 (pt) | 2018-04-03 | 2021-01-19 | Stridebio, Inc. | Vetores de vírus com evasão de anticorpos |
| SG11202009452WA (en) | 2018-04-03 | 2020-10-29 | Stridebio Inc | Antibody-evading virus vectors |
| US12054724B2 (en) | 2018-04-10 | 2024-08-06 | President And Fellows Of Harvard College | AAV vectors encoding clarin-1 or GJB2 and uses thereof |
| MA52631A (fr) | 2018-05-15 | 2021-03-24 | Voyager Therapeutics Inc | Compositions et méthodes pour le traitement de la maladie de parkinson |
| WO2019222329A1 (en) | 2018-05-15 | 2019-11-21 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for delivery of aav |
| EP3793615A2 (en) | 2018-05-16 | 2021-03-24 | Voyager Therapeutics, Inc. | Directed evolution of aav to improve tropism for cns |
| EP3818161A1 (en) | 2018-07-02 | 2021-05-12 | Voyager Therapeutics, Inc. | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis and disorders associated with the spinal cord |
| WO2020010035A1 (en) | 2018-07-02 | 2020-01-09 | Voyager Therapeutics, Inc. | Cannula system |
| CA3107462A1 (en) | 2018-07-24 | 2020-01-30 | Voyager Therapeutics, Inc. | Systems and methods for producing gene therapy formulations |
| EP3861113A1 (en) | 2018-10-04 | 2021-08-11 | Voyager Therapeutics, Inc. | Methods for measuring the titer and potency of viral vector particles |
| WO2020077165A1 (en) | 2018-10-12 | 2020-04-16 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for delivery of aav |
| SG11202107645RA (en) | 2019-01-18 | 2021-08-30 | Voyager Therapeutics Inc | Methods and systems for producing aav particles |
| CA3127019A1 (en) * | 2019-02-05 | 2020-08-13 | The Trustees Of Princeton University | Recombinant nucleic acids containing alphaherpesvirus promoter sequences |
| CN109706176A (zh) * | 2019-03-12 | 2019-05-03 | 青岛大学附属医院 | 可靶向转染背根神经节卫星胶质细胞腺病毒载体构建方法 |
| AR118465A1 (es) | 2019-03-21 | 2021-10-06 | Stridebio Inc | Vectores de virus adenoasociados recombinantes |
| AU2020248116A1 (en) * | 2019-03-28 | 2021-10-14 | President And Fellows Of Harvard College | Engineered adeno-associated (AAV) vectors for transgene expression |
| EP3997227A1 (en) * | 2019-07-10 | 2022-05-18 | Locanabio, Inc. | Rna-targeting knockdown and replacement compositions and methods for use |
| JP2022545534A (ja) * | 2019-08-29 | 2022-10-27 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | ヒト血液脳関門を通過するためのアデノ随伴ウイルスベクター |
| WO2021046155A1 (en) | 2019-09-03 | 2021-03-11 | Voyager Therapeutics, Inc. | Vectorized editing of nucleic acids to correct overt mutations |
| TW202128736A (zh) | 2019-10-17 | 2021-08-01 | 美商史崔德生物公司 | 用於治療ｃ型尼曼—匹克病之腺相關病毒載體 |
| TW202140791A (zh) | 2020-01-13 | 2021-11-01 | 美商霍蒙拉奇醫藥公司 | 治療苯酮尿症之方法 |
| CN116249712A (zh) | 2020-04-15 | 2023-06-09 | 沃雅戈治疗公司 | Tau结合化合物 |
| KR20230022175A (ko) | 2020-05-13 | 2023-02-14 | 보이저 테라퓨틱스, 인크. | Aav 캡시드의 향성 방향변경 |
| TW202208632A (zh) | 2020-05-27 | 2022-03-01 | 美商同源醫藥公司 | 用於恢復ｐａｈ基因功能的腺相關病毒組成物及其使用方法 |
| CN112121179A (zh) * | 2020-09-15 | 2020-12-25 | 山东兴瑞生物科技有限公司 | 一种组合物及其在治疗脊髓性肌萎缩症中的应用 |
| WO2022187548A1 (en) | 2021-03-03 | 2022-09-09 | Voyager Therapeutics, Inc. | Controlled expression of viral proteins |
| CN115708866A (zh) * | 2021-08-23 | 2023-02-24 | 中国科学院深圳先进技术研究院 | 骨源因子rankl在制备调控中枢神经系统稳态的药物或药物组合物中的应用 |
| WO2023044483A2 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-23 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of her2 positive cancer |
| AU2022379918A1 (en) | 2021-11-02 | 2024-04-18 | Voyager Therapeutics, Inc. | Aav capsid variants and uses thereof |
| WO2023091948A1 (en) | 2021-11-17 | 2023-05-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | Aav capsid variants and uses thereof |
| IL314156A (en) | 2022-02-08 | 2024-09-01 | Voyager Therapeutics Inc | Adeno-associated virus capsid variants and their uses |
| TW202417466A (zh) | 2022-06-02 | 2024-05-01 | 美商航海家醫療公司 | Ａａｖ蛋白殼變異體及其用途 |
| WO2024006741A1 (en) | 2022-06-28 | 2024-01-04 | Voyager Therapeutics, Inc. | Aav capsid variants and uses thereof |
| WO2024011112A1 (en) | 2022-07-06 | 2024-01-11 | Voyager Therapeutics, Inc. | Aav capsid variants and uses thereof |
| WO2024030976A2 (en) | 2022-08-03 | 2024-02-08 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for crossing the blood brain barrier |
| CN116064671A (zh) * | 2022-08-10 | 2023-05-05 | 深圳先进技术研究院 | 一种基因递送系统将基因递送到小胶质细胞的应用 |
| WO2024059739A1 (en) | 2022-09-15 | 2024-03-21 | Voyager Therapeutics, Inc. | Tau binding compounds |
| WO2024145474A2 (en) | 2022-12-29 | 2024-07-04 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for regulating mapt |
Family Cites Families (38)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL122349A0 (en) | 1995-06-07 | 1998-04-05 | Univ Yale | Adeno-associated viral vectors |
| US20040076613A1 (en) | 2000-11-03 | 2004-04-22 | Nicholas Mazarakis | Vector system |
| FR2756297B1 (fr) | 1996-11-22 | 1999-01-08 | Centre Nat Rech Scient | Procede de production de virus recombinants |
| AU8672198A (en) | 1997-07-31 | 1999-02-22 | Chiron Corporation | Method enabling readministration of aav vector via immunosuppression of host |
| ES2340230T3 (es) | 1998-11-10 | 2010-05-31 | University Of North Carolina At Chapel Hill | Vectores viricos y sus procedimientos de preparacion y administracion. |
| US6498244B1 (en) | 1999-05-28 | 2002-12-24 | Cell Genesys, Inc. | Adeno-associated virus capsid immunologic determinants |
| JP2003523320A (ja) | 1999-09-29 | 2003-08-05 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | ウイルスベクターの迅速なｐｅｇ改変方法、高められた遺伝子形質導入のための組成物、高められた物理的安定性を伴う組成物、およびそのための用途 |
| US6582692B1 (en) * | 1999-11-17 | 2003-06-24 | Avigen, Inc. | Recombinant adeno-associated virus virions for the treatment of lysosomal disorders |
| NZ522840A (en) | 2000-06-01 | 2004-12-24 | Univ North Carolina | A parvovirus vector that carries a duplexed genome resulting in co-packaging of strands of plus and minus polarity tethered together |
| ATE438414T1 (de) | 2000-06-01 | 2009-08-15 | Univ North Carolina | Verfahren und zusammensetzungen zur kontrollierter abgabe von rekombinant parvovirus vektoren |
| US20050032219A1 (en) | 2001-07-03 | 2005-02-10 | Patrick Aubourg | Methods of administering vectors to synaptically connected neurons |
| NZ532635A (en) * | 2001-11-13 | 2007-05-31 | Univ Pennsylvania | A method of identifying unknown adeno-associated virus (AAV) sequences and a kit for the method |
| AU2002359284A1 (en) * | 2001-12-17 | 2003-06-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adeno-associated virus (aav) serotype 9 sequences, vectors containing same, and uses therefor |
| AU2002359786A1 (en) * | 2001-12-19 | 2003-07-09 | Hiroaki Mizukami | Adeno-associated virus-mediated delivery of gdnf to skeletal muscles |
| CA2471812C (en) * | 2001-12-21 | 2012-09-04 | The Salk Institute For Biological Studies | Targeted retrograde gene delivery to motor neurons |
| US6998118B2 (en) * | 2001-12-21 | 2006-02-14 | The Salk Institute For Biological Studies | Targeted retrograde gene delivery for neuronal protection |
| AU2004227358B8 (en) * | 2003-03-31 | 2009-12-10 | Targeted Genetics Corporation | Compounds and methods to enhance rAAV transduction |
| US20050059044A1 (en) * | 2003-06-03 | 2005-03-17 | Graham Michael Wayne | Double-stranded nucleic acid |
| PL2657248T3 (pl) | 2003-06-19 | 2017-09-29 | Genzyme Corporation | Wiriony AAV o zmniejszonej immunoreaktywności i ich zastosowanie |
| US9441244B2 (en) | 2003-06-30 | 2016-09-13 | The Regents Of The University Of California | Mutant adeno-associated virus virions and methods of use thereof |
| DK2292780T3 (en) | 2003-09-30 | 2017-12-04 | Univ Pennsylvania | Clades and sequences of adeno-associated virus (AAV), vectors containing them, and uses thereof |
| AU2004281764B2 (en) * | 2003-10-14 | 2011-04-07 | Neurologix Research, Inc. | Methods and compositions for the treatment of neurological disease |
| US8734810B2 (en) | 2003-10-29 | 2014-05-27 | Allergan, Inc. | Botulinum toxin treatments of neurological and neuropsychiatric disorders |
| WO2005056807A2 (en) * | 2003-12-04 | 2005-06-23 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services, National Institutes Of Health | Bovine adeno-associated viral (baav) vector and uses thereof |
| WO2005072364A2 (en) | 2004-01-27 | 2005-08-11 | University Of Florida | A modified baculovirus expression system for production of pseudotyped raav vector |
| JP2007531537A (ja) * | 2004-04-06 | 2007-11-08 | セダーズ−シナイ メディカル センター | アポリポタンパク質ａ−ｉおよびアポリポタンパク質ａ−ｉｍｉｌａｎｏをコードする組換えアデノ随伴ウイルスベクターによる血管疾患の予防および処置 |
| JP2008503590A (ja) * | 2004-06-21 | 2008-02-07 | メドトロニック・インコーポレーテッド | 組成物を細胞にデリバリーするための医学用システム及び方法 |
| US20060110364A1 (en) * | 2004-08-20 | 2006-05-25 | Ludwig Institute For Cancer Research | Vector-mediated delivery of polynucleotides encoding soluble VEGF receptors |
| WO2006119432A2 (en) | 2005-04-29 | 2006-11-09 | The Government Of The U.S.A., As Rep. By The Sec., Dept. Of Health & Human Services | Isolation, cloning and characterization of new adeno-associated virus (aav) serotypes |
| ES2394482T3 (es) | 2005-05-02 | 2013-02-01 | Genzyme Corporation | Terapia génica para trastornos de la médula espinal |
| US7867484B2 (en) | 2006-01-27 | 2011-01-11 | University Of North Carolina At Chapel Hill | Heparin and heparan sulfate binding chimeric vectors |
| US20070280906A1 (en) | 2006-06-03 | 2007-12-06 | Ognjen Petras | Method to generate mirrored adenoassociated viral vectors |
| US20100221225A1 (en) * | 2007-02-23 | 2010-09-02 | University Of Florida Research Foundation, Inc | Compositions and methods for treating glycogen storage diseases |
| WO2008150459A1 (en) | 2007-05-30 | 2008-12-11 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | A method for transducing cells with primary cilia |
| EP2019143A1 (en) | 2007-07-23 | 2009-01-28 | Genethon | CNS gene delivery using peripheral administration of AAV vectors |
| MX2010001608A (es) | 2007-10-01 | 2010-03-15 | Alcon Res Ltd | Suministro mediado por aav auto-complementario de moléculas de arn interferente para tratar o evitar trastornos oculares. |
| EP2058401A1 (en) * | 2007-10-05 | 2009-05-13 | Genethon | Widespread gene delivery to motor neurons using peripheral injection of AAV vectors |
| US11219696B2 (en) * | 2008-12-19 | 2022-01-11 | Nationwide Children's Hospital | Delivery of polynucleotides using recombinant AAV9 |
-
2007
- 2007-10-05 EP EP07301435A patent/EP2058401A1/en not_active Withdrawn
-
2008
- 2008-10-03 ES ES12180951T patent/ES2727034T3/es active Active
- 2008-10-03 HU HUE19158152A patent/HUE059864T2/hu unknown
- 2008-10-03 ES ES19158152T patent/ES2924892T3/es active Active
- 2008-10-03 DK DK19158152.9T patent/DK3505635T3/da active
- 2008-10-03 CA CA2701561A patent/CA2701561C/en active Active
- 2008-10-03 LT LTEP19158152.9T patent/LT3505635T/lt unknown
- 2008-10-03 CN CN201510438197.1A patent/CN105087650A/zh active Pending
- 2008-10-03 PL PL19158152.9T patent/PL3505635T3/pl unknown
- 2008-10-03 JP JP2010527467A patent/JP5620819B2/ja active Active
- 2008-10-03 CN CN2008801174130A patent/CN101883859A/zh active Pending
- 2008-10-03 CA CA2999607A patent/CA2999607A1/en not_active Abandoned
- 2008-10-03 SI SI200831238T patent/SI2212424T1/sl unknown
- 2008-10-03 PL PL08836776T patent/PL2212424T3/pl unknown
- 2008-10-03 HR HRP20220992TT patent/HRP20220992T3/hr unknown
- 2008-10-03 ES ES08836776T patent/ES2482094T5/es active Active
- 2008-10-03 EP EP21161090.2A patent/EP3854878A1/en active Pending
- 2008-10-03 US US12/734,016 patent/US9926574B2/en active Active
- 2008-10-03 SI SI200832199T patent/SI3505635T1/sl unknown
- 2008-10-03 WO PCT/EP2008/063297 patent/WO2009043936A1/en active Application Filing
- 2008-10-03 EP EP12180951.1A patent/EP2527457B1/en not_active Revoked
- 2008-10-03 PT PT191581529T patent/PT3505635T/pt unknown
- 2008-10-03 EP EP08836776.8A patent/EP2212424B2/en active Active
- 2008-10-03 EP EP19158152.9A patent/EP3505635B1/en active Active
- 2008-10-03 PT PT88367768T patent/PT2212424E/pt unknown
- 2008-10-03 PT PT12180951T patent/PT2527457T/pt unknown
- 2008-10-03 DK DK08836776.8T patent/DK2212424T3/da active
-
2014
- 2014-07-01 JP JP2014136031A patent/JP6309373B2/ja active Active
- 2014-07-07 HR HRP20140643AT patent/HRP20140643T1/hr unknown
-
2017
- 2017-09-22 US US15/713,347 patent/US20180066283A1/en active Pending
-
2019
- 2019-08-09 US US16/536,503 patent/US11767538B2/en active Active
-
2020
- 2020-11-17 FR FR20C1057C patent/FR20C1057I2/fr active Active
- 2020-11-17 FI FIEP08836776.8T patent/FI2212424T4/fi active
-
2022
- 2022-08-16 CY CY20221100551T patent/CY1125608T1/el unknown
- 2022-11-16 LT LTPA2022525C patent/LTPA2022525I1/lt unknown
- 2022-11-16 HU HUS2200047C patent/HUS2200047I1/hu unknown
- 2022-11-16 CY CY2022034C patent/CY2022034I2/el unknown
- 2022-11-16 NO NO2022048C patent/NO2022048I1/no unknown
- 2022-11-17 FR FR22C1056C patent/FR22C1056I1/fr active Active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2482094T5 (es) | Administración extendida de genes a neuronas motoras mediante inyección periférica de vectores AAV | |
| JP6887008B2 (ja) | 脊髄疾患の遺伝子療法 | |
| ES2686504T3 (es) | Terapia génica para trastornos neurodegenerativos | |
| ES2887076T3 (es) | Terapia génica para trastornos neurometabólicos | |
| ES2605305T3 (es) | Vectores de AAV que se dirigen al SNC y métodos de uso de los mismos | |
| US20160361440A1 (en) | Widespread gene delivery of gene therapy vectors |