ES2341318T3 - Nuevos derivados del acido mandelico y su uso como inhibidores de trombina. - Google Patents

Nuevos derivados del acido mandelico y su uso como inhibidores de trombina. Download PDF

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Abstract

Un compuesto seleccionado de: Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) de la fórmula **(Ver fórmula)** Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH) de la fórmula **(Ver fórmula)** o Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab de la fórmula **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos.

Description

Nuevos derivados del ácido mandélico y su uso como inhibidores de trombina.
Campo de la invención
Esta invención se refiere a nuevos compuestos farmacéuticamente útiles, en particular a compuestos que son, y/o a compuestos que se metabolizan en compuestos que son, agentes inhibidores competitivos de serina-proteasas semejantes a la tripsina, especialmente la trombina, a su uso como medicamentos, a composiciones farmacéuticas que los contienen y a rutas sintéticas para su producción.
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Antecedentes
La coagulación de la sangre es el procedimiento clave implicado tanto en la hemostasis (es decir, la prevención de la pérdida de sangre por un vaso dañado) como en la trombosis (es decir, la formación de un coágulo de sangre en un vaso sanguíneo, que algunas veces conduce a la obstrucción del vaso).
La coagulación es el resultado de una serie compleja de reacciones enzimáticas. Una de las últimas etapas en esta serie de reacciones es la conversión de la proenzima protrombina en la enzima activa trombina.
Se sabe que la trombina juega un papel central en la coagulación. Activa a las plaquetas, llevando a la agregación de las plaquetas, convierte el fibrinógeno en monómeros de fibrina, que se polimerizan espontáneamente para dar polímeros de fibrina, y activa el factor XIII, el cual a su vez reticula los polímeros para formar fibrina insoluble. Además, la trombina activa el factor V y el factor VIII lo que conduce a una generación de trombina a partir de protrombina por "retroalimentación positiva".
Inhibiendo la agregación de las plaquetas y la formación y reticulación de la fibrina, sería de esperar que los agentes inhibidores efectivos de la trombina presentaran actividad antitrombótica. Además, sería de esperar que la actividad antitrombótica aumentara mediante la inhibición efectiva del mecanismo de retroalimentación positiva.
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Técnica anterior
El desarrollo inicial de los inhibidores de trombina de bajo peso molecular ha sido descrito por Claesson en Blood Coagul. Fibrinol. (1994) 5, 411.
Blombäck et al. (en J. Clin. Lab. Invest. 24, supl. 107, 59, (1969)) han descrito agentes inhibidores de la trombina basados en la secuencia de aminoácidos situada alrededor del sitio de escisión de la cadena A\alpha del fibrinógeno. De las secuencias de aminoácidos discutidas, estos autores sugirieron que la secuencia tripéptida Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, de aquí en adelante denominada la secuencia P3-P2-P1) sería el agente inhibidor más efectivo.
Los agentes inhibidores de la trombina basados en derivados dipeptidílicos con una \alpha,\omega-aminoalquil-guanidina en la posición P1 son conocidos por la patente de EE.UU. Nº 4.346.078 y la solicitud de patente internacional WO 93/11152. También se ha informado de derivados dipeptidílicos similares, estructuralmente relacionados. Por ejemplo, la solicitud de patente internacional WO 94/29336 describe compuestos con, por ejemplo, aminometil-benzamidinas, aminoalquil-amidinas cíclicas y aminoalquil-guanidinas cíclicas en la posición P1 (la solicitud de patente internacional WO 97/23499 describe profármacos de algunos de estos compuestos); la solicitud de patente europea 0.648.780 describe compuestos, por ejemplo, con aminoalquil-guanidinas cíclicas en la posición P1.
Los agentes inhibidores de la trombina basados en derivados peptidílicos, que también tienen aminoalquil-guanidinas cíclicas (por ejemplo, 3- o 4-aminometil-1-amidino-piperidina) en la posición P1 son conocidos por las solicitudes de patente europea 0.468.231, 0.559.046 y 0.641.779.
Los agentes inhibidores de la trombina basados en derivados tripeptidílicos con aldehído de arginina en la posición P1 fueron descritos en primer lugar en la solicitud de patente europea 0.185.390.
Más recientemente, se ha informado de derivados peptidílicos basados en aldehído de arginina, modificados en la posición P3. Por ejemplo, la solicitud de patente internacional WO 93/18060 describe hidroxiácidos, la solicitud de patente europea 0.526.877 des-aminoácidos, y la solicitud de patente europea 0.542.525 ácidos O-metil-mandélicos en la posición P3.
También son conocidos los agentes inhibidores de las serina-proteasas (por ejemplo, la trombina) basados en cetonas electrófílas en la posición P1. Por ejemplo, la solicitud de patente europea 0.195.212 describe \alpha-ceto-ésteres y amidas de peptidilo, la solicitud de patente europea 0.362.002 fluoroalquilamida-cetonas, la solicitud de patente europea 0.364.344 \alpha,\beta,\delta-tricetocompuestos y la solicitud de patente europea 0.530.167 derivados de \alpha-alcoxicetona de arginina en la posición P1.
Otros inhibidores de serina-proteasas semejantes a la tripsina, estructuralmente diferentes, basados en derivados de arginina con ácido borónico en el extremo C-terminal y sus análogos de isotiouronio son conocidos por la solicitud de patente europea 0.293.881.
Más recientemente, se han descrito agentes inhibidores de la trombina basados en derivados de peptidilo en la solicitud de patente europea 0.669.317 y en las solicitudes de patentes internacionales WO 95/35309, WO 95/23609, WO 96/25426, WO 97/02284, solicitudes WO 95/35309, WO 95/23609, WO 96/25426, WO 97/02284, WO 97/46577, WO 96/32110, WO 96/31504, WO 96/03374, WO 98/06740, WO 97/49404, WO 98/57932, WO 99/29664, WO 00/35869 y WO 00/42059.
En particular, el documento WO 97/02284 y el documento WO 00/42059 describen agentes inhibidores de la trombina con ácidos mandélicos sustituidos en la posición P3.
Sin embargo, sigue existiendo la necesidad de agentes inhibidores efectivos de las serina-proteasas semejantes a la tripsina, tales como la trombina. También hay una necesidad de compuestos que tengan un perfil farmacocinético favorable y que sean selectivos para inhibir la trombina con respecto a otras serina-proteasas, en particular las implicadas en la hemostasis. Sería de esperar que los compuestos que presentan actividad inhibidora competitiva hacia la trombina fueran especialmente útiles como anticoagulantes y por lo tanto en el tratamiento terapéutico de la trombosis y trastornos relacionados.
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Descripción de la invención
Según la invención se proporciona un compuesto seleccionado de
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) de la fórmula
1 
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Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH) de la fórmula
2 
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o Ph(3-Cl)(5-OCH-F_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab de la fórmula
3
o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos.
Se proporciona un compuesto de la fórmula I
4
en la que
R^{a} representa -OH o -CH_{2}OH;
R^{2} representa uno o dos sustituyentes alcoxi C_{1-3}, y las partes alquilo de tales sustituyentes están ellas mismas sustituidas con uno o más sustituyentes fluoro (esto es, R^{2} representa uno o dos grupos fluoroalcoxi (C_{1-3}));
Y representa -CH_{2}- o -(CH_{2})_{2}-; y
R^{3} representa un fragmento estructural de la fórmula I(i) o I(ii):
5
en la que
R^{4} representa H o uno o más sustituyentes fluoro; y uno o dos de X_{1}, X_{2}, X_{3} y X_{4} representan -N- y los otros representan -CH-,
o uno de sus derivados farmacéuticamente aceptables.
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La expresión "derivados farmacéuticamente aceptables" incluye las sales farmacéuticamente aceptables (por ejemplo, sales de adición de ácido).
Las abreviaturas se listan al final de esta memoria descriptiva. Las líneas onduladas sobre los enlaces de los fragmentos de las fórmulas I(i) y I(ii) significan las posiciones del enlace de los fragmentos.
Los grupos halo que R^{1} puede representar incluyen, fluoro, cloro, bromo y yodo. Para evitar dudas, en la representación de al menos un grupo opcional halo, R^{1} puede no estar presente (y por tanto estar reemplazado por H, para que se cumplan las reglas de las valencias) o puede representar uno o más átomos halo.
Cuando R^{3} representa un fragmento estructural de la fórmula I(i) en la que R^{4} representa uno o más sustituyentes fluoro, los compuestos preferidos de la fórmula I incluyen aquellos en los que R^{4} representa un único sustituyente fluoro en la posición 2 o 3, o dos sustituyentes fluoro en cualquiera de las posiciones 2 y 5 o, más preferiblemente, en las posiciones 2 y 6 (donde las posiciones del sustituyente se determinan en relación al punto de unión del fragmento estructural de la fórmula I(i) al resto de la molécula (esto es, al grupo -NHCH_{2}-)).
Cuando R^{3} representa un fragmento estructural de la fórmula I(ii), los compuestos preferidos de la fórmula I incluyen aquellos en los que:
(a)
uno de X_{1}, X_{2}, X_{3} y X_{4} representa -N- y los otros representan -CH-; o
(b)
X_{1} y X_{3}, o X_{2} y X_{4}, representan ambos -N- y los otros dos (según sea apropiado) representan -CH-.
Los compuestos preferidos de la fórmula I incluyen aquellos en los que:
R^{1} representa un único sustituyente fluoro, cloro o bromo;
R^{2} representa alcoxi C_{1-2} sustituido con uno o más sustituyentes fluoro, tales como -OCHF_{2}, -OCF_{3}, -OCH_{2}CF_{3}, -OCH_{2}CHF_{2}, -OCH_{2}CH_{2}F o -OCH(CH_{2}F)_{2};
R^{3} representa un fragmento estructural de la fórmula I(i);
R^{4} representa H.
Los compuestos más preferidos de la fórmula I incluyen aquellos en los que:
R^{a} representa OH;
R^{1} representa un único sustituyente cloro;
R^{2} representa -OCF_{3}, preferiblemente -OCH_{2}CHF_{2}, o más preferiblemente -OCHF_{2}, o -OCH_{2}CH_{2}F.
Los puntos preferidos de sustitución de R^{1} y R^{2} sobre el grupo fenilo relevante de los compuestos de la fórmula I incluyen las dos meta-posiciones relativas al punto de unión de dicho grupo fenilo al resto de la molécula (esto es, en la posición 3 y/o en la posición 5 (preferiblemente sustitución 3,5) relativa al átomo de carbono que lleva el grupo I- o \vartheta-hidroxiácido).
Los compuestos de la fórmula I que se pueden mencionar incluyen aquellos en que:
R^{2} representa uno o dos sustituyentes alcoxi C_{1-2} y las partes alquilo de dichos sustituyentes están ellas mismas sustituidas con uno o más sustituyentes fluoro; o
R^{2} representa uno o dos sustituyentes alcoxi C_{3}, y las partes alquilo de dichos sustituyentes están ellas mismas sustituidas con uno o más sustituyentes fluoro.
Los compuestos de la fórmula I se pueden fabricar según técnicas bien conocidas por los expertos en la técnica, por ejemplo, como se describe de aquí en adelante.
Según otro aspecto, se proporciona un procedimiento para la preparación de un compuesto de la fórmula I, que comprende:
(i)
el acoplamiento de un compuesto de la fórmula II,
6
\quad
en la que R^{a}, R^{1} y R^{2} son como se han definido anteriormente en esta memoria, con un compuesto de la fórmula III,
7
\quad
en la que Y y R^{3} son como se han definido anteriormente, por ejemplo, en presencia de un agente de acoplamiento (por ejemplo, cloruro de oxalilo en DMF, EDC, DCC, HBTU, HATU, PyBOP o TBTU), una base apropiada (por ejemplo, piridina, DMAP, TEA, 2,4,6-colidina o DIPEA) y un disolvente orgánico adecuado (por ejemplo, diclorometano, acetonitrilo, EtOAc o DMF);
(ii)
el acoplamiento de un compuesto de la fórmula IV,
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8 
\vskip1.000000\baselineskip
\quad
en la que R^{a}, R^{1}, R^{2} e Y son como se han definido anteriormente con un compuesto de la fórmula V,
VR^{3}CH_{2}NH_{2}
\quad
en la que R^{3} es como se ha definido antes, por ejemplo, en condiciones como las descritas en el procedimiento (i) anterior;
(iii)
para los compuestos de la fórmula I en la que R^{1} no está presente, la reducción de un compuesto correspondiente de la fórmula Ia, como se define más adelante, en la que R^{5} representa OR^{6}, donde R^{5} y R^{6} son como se definen más adelante, por ejemplo, por hidrogenación en presencia de un catalizador adecuado (por ejemplo, un catalizador metálico soportado tal como Pd/C (por ejemplo, Pd al 10% (p/p) sobre C)) y un disolvente apropiado (por ejemplo, un alcohol alquílico inferior (por ejemplo, C_{1-6}) tal como etanol), y opcionalmente en presencia de un ácido adecuado (por ejemplo, ácido acético) y/o como se describe en Synth. Comm. (1998) 4351; o
(iv)
la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula XVIA o XVIB, como se define más adelante, con una fuente adecuada de amoníaco (por ejemplo, acetato de amonio o amoníaco gas) en condiciones conocidas por los expertos en la técnica, tales como por reacción de un intermedio de imidoato de etilo (formado por reacción de un compuesto de la fórmula XVIA o XVIB con HCl(g) en etanol) con amoníaco gas en etanol, o en las condiciones descritas en Tetrahedron Lett. 40, 7067 (1999), las descripciones de dicho documento se incorporan aquí como referencia (por ejemplo, para la preparación de los compuestos de la fórmula I en la que R^{3} representa un fragmento estructural de la fórmula I(ii) en la que X_{2} o X_{4} representa N, la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula XVIB con acetato de amonio (por ejemplo, 1 a 30 equivalentes de acetato de amonio) en presencia de N-acetil-cisteína (por ejemplo, 1 a 30 equivalentes de N-acetil-cisteína) y un disolvente apropiado (por ejemplo, un alcohol alquílico inferior (por ejemplo, C_{1-6}) tal como metanol)).
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Los compuestos de la fórmula II se pueden obtener usando técnicas conocidas y/o convencionales.
Por ejemplo, los compuestos de la fórmula II en la que R^{a} representa OH se pueden preparar por reacción de un aldehído de la fórmula VI,
9
en la que R^{1} y R^{2} son como se han definido anteriormente con:
(a)
un compuesto de la fórmula VII,
VIIR''CN
\quad
en la que R'' representa H o (CH_{3})_{3}Si, por ejemplo a temperatura ambiente o a temperatura elevada (p. ej. inferior a 100ºC) en presencia de un disolvente orgánico adecuado (p. ej., cloroformo o cloruro de metileno) y, si es necesario, en presencia de una base adecuada (p. ej., TEA) y/o un sistema catalítico adecuado (p. ej., cloruro de bencilamonio o yoduro de cinc, o usando un catalizador quiral, por ejemplo, como se describe en Chem. Rev., (1999) 99, 3649), seguido de hidrólisis en condiciones que son bien conocidas para los expertos en la técnica (p. ej., como se describe más adelante);
(b)
NaCN o KCN, por ejemplo, en presencia de NaHSO_{3} y agua, seguido de hidrólisis;
(c)
cloroformo, por ejemplo, a temperatura elevada (p. ej., por encima de la temperatura ambiente pero por debajo de 100ºC) en presencia de un disolvente orgánico adecuado (p. ej., cloroformo) y, si es necesario, en presencia de un sistema catalítico adecuado (p. ej., cloruro de bencilamonio), seguido de hidrólisis;
(d)
un compuesto de la fórmula VIII,
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10 
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\quad
en la que M representa Mg o Li, seguido de escisión oxidante (por ejemplo, ozonolisis o catalizada por osmio o rutenio) en condiciones que son bien conocidas por los expertos en la técnica; o
(e)
tris(metiltio)metano en condiciones que son bien conocidas por los expertos en la técnica, seguido de hidrólisis en presencia de, por ejemplo, HgO y HBF_{4}.
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Los compuestos de la fórmula II en la que R^{a} representa -CH_{2}OH se pueden preparar por reducción de un compuesto de la fórmula IX,
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11 
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en la que R representa alquilo C_{1-6} o alquil C_{1-3}-fenilo y R^{1} y R^{2} son como se han definido anteriormente en esta memoria, por ejemplo, a temperatura ambiente o inferior a temperatura ambiente en presencia de un agente reductor adecuado (por ejemplo, borohidruro de sodio) y un disolvente orgánico apropiado (por ejemplo, metanol, etanol, THF o sus mezclas), seguido por hidrólisis del intermedio resultante éster del ácido trópico de la fórmula IXA,
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12 
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en la que R, R^{1} y R^{2} son como se han definido antes, en condiciones que son bien conocidas por los expertos en la técnica, por ejemplo, como se describen más adelante. Los expertos podrán apreciar que las etapas de reducción e hidrólisis se pueden realizar como un procedimiento de recipiente único, por ejemplo, como se describe más
adelante.
Los compuestos de la fórmula II en la que R^{a} representa -OH se pueden preparar alternativamente por oxidación de un compuesto de la fórmula IXB,
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13 
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o uno de sus derivados que está opcionalmente protegido en el grupo hidroxilo secundario, en la que R^{1} y R^{2} son como se han definido antes, en presencia de un agente oxidante adecuado (por ejemplo, una combinación de un oxidante por radicales libres adecuado (tal como TEMPO) y una sal hipoclorito apropiada (tal como hipoclorito de sodio)) en condiciones conocidas por los expertos en la técnica, por ejemplo, entre -10ºC y temperatura ambiente, en presencia de un disolvente adecuado (por ejemplo, agua, acetona o una mezcla de las mismas), una sal apropiada (por ejemplo, un haluro de metal alcalino tal como bromuro de potasio) y una base adecuada (por ejemplo, un carbonato o hidrogenocarbonato de metal alcalino, tal como hidrogenocarbonato de sodio).
Las formas enantioméricas del compuesto de la fórmula II en la que R^{a} representa -OH (esto es, aquellos compuestos que tienen diferentes configuraciones de sustituyentes sobre el átomo de C \alpha- con respecto al grupo CO_{2}H) se pueden separar mediante una etapa de derivatización enantioespecífica. Esto se puede lograr, por ejemplo, mediante un procedimiento enzimático. Dichos procedimientos enzimáticos incluyen, por ejemplo, transesterificación del grupo \alpha-OH entre la temperatura ambiente y la temperatura de reflujo (por ejemplo, entre 45 y 65ºC) en presencia de una enzima adecuada (por ejemplo, Lipase PS Amano), un éster apropiado (por ejemplo, acetato de vinilo) y un disolvente adecuado (por ejemplo, metil-terc-butil-éter). El isómero derivatizado se puede separar entonces del isómero sin reaccionar por técnicas de separación convencionales (por ejemplo, cromatografía).
Los grupos añadidos a los compuestos de la fórmula II en dicha etapa de derivatización se pueden eliminar antes de cualquiera de las reacciones posteriores o en cualquiera de las etapas posteriores de la síntesis de los compuestos de la fórmula I. Los grupos adicionales se pueden separar utilizando técnicas convencionales (por ejemplo, para ésteres del grupo \alpha-OH, hidrólisis en condiciones conocidas por los expertos en la técnica (por ejemplo, entre temperatura ambiente y temperatura de reflujo en presencia de una base adecuada (por ejemplo, NaOH) y un disolvente apropiado (por ejemplo, MeOH, agua o sus mezclas))).
Las formas enantiómeras del compuesto de la fórmula II en el que R^{a} representa -CH_{2}OH se pueden separar por técnicas cromatográficas quirales (por ejemplo, HPLC quiral).
Los compuestos de la fórmula III se pueden preparar por acoplamiento de un compuesto de la fórmula X,
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14 
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en la que Y es como se ha definido antes, con un compuesto de la fórmula V, como se ha definido antes, por ejemplo, en condiciones similares a las descritas aquí para la preparación de los compuestos de la fórmula I.
Los compuestos de la fórmula IV se pueden preparar por acoplamiento de un compuesto de la fórmula II como se ha definido antes, con un compuesto de la fórmula X como se ha definido antes, por ejemplo, en condiciones similares a las descritas aquí para la preparación de los compuestos de la fórmula I.
\newpage
Los compuestos de la fórmula VI se pueden obtener utilizando técnicas conocidas y/o convencionales. Por ejemplo, se pueden preparar por:
(i)
metalación (en la que el metal puede ser, por ejemplo, un metal alcalino, tal como Li, o preferiblemente un metal divalente tal como Mg) de un compuesto de la fórmula XI,
15
\quad
en la que Hal representa un átomo de halógeno seleccionado de Cl, Br y I y R^{1} y R^{2} son como se han definido aquí antes, seguido por la reacción con una fuente adecuada del grupo formilo (tal como N,N-dimetilformamida), por ejemplo, en las condiciones descritas más adelante;
(ii)
reducción de un compuesto de la fórmula XII,
16
\quad
en la que R^{1} y R^{2} son como se han definido aquí anteriormente, en presencia de un agente reductor adecuado (por ejemplo, DIBAL-H); o
(iii)
oxidación de un compuesto de la fórmula XIII,
17
\quad
en la que R^{1} y R^{2} son como se han definido antes, en presencia de un agente oxidante adecuado (por ejemplo, MnO_{2}, clorocromato de piridinio, una combinación de DMSO y cloruro de oxalilo, o complejo de SO_{3} y piridina en DMSO).
Los compuestos de la fórmula IX se pueden preparar a partir del correspondiente acetato de fenilo (que puede ser obtenido, por ejemplo, a partir de la correspondiente acetofenona, como se describe en J. Am. Chem. Soc. 98, 6750 (1976) o a partir del correspondiente cianuro de bencilo por procedimientos hidrolíticos estándar) por técnicas convencionales, por ejemplo, análogamente a las técnicas descritas en J. Org. Chem. 54, 3831 (1989) y/o como se describe más adelante.
Los compuestos de la fórmula IXB se pueden preparar por dihidroxilación de un compuesto correspondiente de la fórmula XIIIA
18
en la que R^{1} y R^{2} son como se han definido anteriormente, en presencia de un agente dihidroxilante adecuado (por ejemplo, un reactivo o mezcla de reactivos que proporcione OsO_{4}, tal como AD-mix-\alpha o, particularmente, AD-mix-\beta), por ejemplo, en condiciones conocidas por los expertos en la técnica, tales como a una temperatura entre -10ºC y temperatura ambiente en presencia de un disolvente apropiado (por ejemplo, agua, terc-butanol o una mezcla de los mismos). Cuando se emplean oxidantes asimétricos tales como AD-mix-\alpha o AD-mix-\beta, este método se puede utilizar para preparar compuestos de la fórmula IXB que tengan configuraciones específicas de los grupos (es decir, R o S) sobre ambos átomos de C a los que se unen los grupos hidroxilo primario y secundario.
Los compuestos de la fórmula XIIIA se pueden preparar por la reacción de un compuesto de la fórmula XI correspondiente, como se ha definido antes en este documento, con una fuente adecuada del anión vinilo (por ejemplo, tributil(vinil)estaño) bajo condiciones conocidas por los expertos en la técnica, por ejemplo, a temperatura entre temperatura ambiente y temperatura de reflujo (por ejemplo, 50ºC) en presencia de un disolvente apropiado (por ejemplo, tolueno), un agente de acoplamiento adecuado (por ejemplo, un complejo de coordinación de paladio(0) tal como tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0)) y opcionalmente en presencia de un catalizador apropiado (por ejemplo, 2,6-di-terc-butil-4-metilfenol).
Los compuestos de las fórmulas V, VII, VIII, X, XI, XII y XIII o bien están comercialmente disponibles, son conocidos en la bibliografía, o bien se pueden obtener por analogía con los procedimientos descritos aquí, o por procedimientos sintéticos convencionales, de acuerdo con técnicas estándar, a partir de materiales de partida fácilmente disponibles utilizando reactivos y condiciones de reacción apropiados. Los compuestos de las fórmulas Ia, XVIA y XVIB se pueden obtener por procedimientos descritos más adelante.
Los sustituyentes sobre el anillo fenilo en los compuestos de la fórmula I, II, III, IV, V, VI, IX, IXA, IXB, XI, XII, XIII y XIIIA se pueden introducir y/o interconvertir utilizando métodos muy conocidos para los expertos en la técnica por medio de interconversiones de grupos funcionales estándar, de acuerdo con técnicas estándar, a partir de materiales de partida fácilmente disponibles usando los reactivos y las condiciones de reacción apropiados.
Por ejemplo, los compuestos de las fórmulas I, II, IV, VI, IXA, XI, XII y XIII se pueden preparar a partir de los correspondientes compuestos de las fórmulas XIVA, XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG y XIVH, respectivamente,
19
en las que R^{a}, R, R^{1}, R^{3}, Y y Hal (como sea apropiado) son como se han definido anteriormente en esta memoria, por ejemplo:
(a)
por reacción con un haloalcano fluorado correspondiente (por ejemplo, un cloroalcano fluorado), por ejemplo, a temperatura ambiente o más alta (por ejemplo, a reflujo) en presencia de una base adecuada (por ejemplo, terc-butóxido de potasio, KOH o NaOH, por ejemplo, en solución acuosa) y un disolvente orgánico apropiado (por ejemplo, THF, cloroformo o i-propanol); o
(b)
por reacción con un compuesto de la fórmula XIVJ,
XIVJR^{x}S(O)_{2}OR^{y}
\quad
en la que R^{x} representa alquilo C_{1-4}, perfluoroalquilo C_{1-4} o fenilo (opcionalmente sustituido con metilo, nitro o halo) y R^{y} es CH_{2}CF_{3}, CH_{2}CHF_{2}, CH_{2}CH_{2}F o CH(CH_{2}F)_{2}, por ejemplo, en presencia de una base adecuada (por ejemplo, K_{2}CO_{3}) y un disolvente apropiado (por ejemplo, DMF), por ejemplo, en ambos casos, como se describe más adelante.
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Los expertos podrán apreciar que estas transformaciones de grupos funcionales también se pueden realizar en una etapa temprana de la síntesis global de los compuestos de las fórmulas II, IV, VI, IXA, XI, XII y XIII (esto es, sobre precursores apropiados de los compuestos de las fórmulas XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG y XIVH, respectivamente).
Los compuestos de las fórmulas XIVA, XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG, XIVH y XIVJ o bien están comercialmente disponibles, son conocidos en la bibliografía, o bien se pueden obtener por analogía con los procedimientos descritos aquí, o por procedimientos sintéticos convencionales, de acuerdo con técnicas estándar, a partir de materiales de partida fácilmente disponibles utilizando reactivos y condiciones de reacción apropiados. Por ejemplo, los compuestos de las fórmulas XIVA, XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG y XIVH se pueden obtener por desprotección de los correspondientes fenoles protegidos (en los que el grupo protector puede ser, por ejemplo, metilo, alilo, bencilo o terc-butilo) en condiciones estándar. Además, los compuestos de la fórmula XIVD en la que R^{1} es un único sustituyente cloro, se pueden obtener a partir de benceno di- o trihalo sustituido (por ejemplo, 1-Br, 3-Cl, 5-F-benceno, por sustitución del átomo de flúor con un grupo metoxi (por ejemplo, por reacción con NaOMe en 1-metil-2-pirrolidinona/metanol a temperatura elevada), reemplazamiento del grupo bromo con un grupo formilo (por ejemplo, como se ha descrito antes para la preparación de los compuestos de la fórmula VI), y después desmetilación (por ejemplo, utilizando PhSH en 1-metil-2-pirrolidinona en presencia de K_{2}
CO_{3})).
También, los compuestos de la fórmula I en la que R^{1} está ausente, se pueden preparar a partir de los correspondientes compuestos de la fórmula I (o a través de sus precursores apropiados) en la que R^{1} representa halo (tal como cloro), por ejemplo, por hidrogenación en condiciones conocidas por los expertos en la técnica.
Los compuestos de la fórmula I se pueden aislar de sus mezclas de reacción usando técnicas convencionales.
Los derivados farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la fórmula I incluyen también derivados "protegidos", y/o compuestos que actúan como profármacos de los compuestos de la fórmula I.
Los compuestos que pueden actuar como profármacos de los compuestos de la fórmula I que se pueden mencionar, incluyen los compuestos de la fórmula Ia,
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20 
\newpage
en la que R^{3a} representa un fragmento estructural de la fórmula I(iii) o I(iv):
21
en la que R^{5} representa OR^{6} o C(O)OR^{7};
R^{6} representa H, alquilo C_{1-10}, alquilarilo C_{1-3} o alquiloxiarilo C_{1-3} (las partes alquilo de los dos últimos grupos están opcionalmente interrumpidas por uno o más átomos de oxígeno, y las partes arilo de los dos últimos grupos están opcionalmente sustituidas con uno o más sustituyentes seleccionados de halo, fenilo, metilo o metoxi, y estos tres últimos grupos están también opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes halo);
R^{7} representa alquilo C_{1-10} (cuyo último grupo está opcionalmente interrumpido por uno o más átomos de oxígeno), o alquilarilo C_{1-3} o alquiloxiarilo C_{1-3} (las partes alquilo de los dos últimos grupos están opcionalmente interrumpidas por uno o más átomos de oxígeno, y las partes arilo de los dos últimos grupos están opcionalmente sustituidas con uno o más sustituyentes seleccionados de halo, fenilo, metilo o metoxi, y estos tres últimos grupos están también opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes halo); y
R^{a}, R^{1}, R^{2}, Y, R^{4}, X_{1}, X_{2}, X_{3} y X_{4} son como se han definido anteriormente, y sus derivados farmacéuticamente aceptables.
La expresión "derivados farmacéuticamente aceptables" de los compuestos de la fórmula Ia incluye las sales farmacéuticamente aceptables (por ejemplo, sales de adición de ácido).
Las líneas onduladas sobre los enlaces de los fragmentos de las fórmulas I(iii) y I(iv) significan las posiciones de enlace de los fragmentos.
Los grupos alquiloxiarilo que R^{6} y R^{7} pueden representar comprenden un grupo alquilo y un grupo arilo unidos por medio de un átomo de oxígeno. Los grupos alquilarilo y alquiloxiarilo están unidos al resto de la molécula mediante la parte alquilo de estos grupos, parte alquilo que puede (si hay un número suficiente (es decir, tres) de átomos de carbono) ser de cadena ramificada. Las partes arilo de los grupos alquilarilo y alquiloxiarilo que R^{6} y R^{7} pueden representar, o estar sustituidos con ellas, incluyen grupos carbocíclicos y heterocíclicos aromáticos, tales como fenilo, naftilo, piridinilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiadiazolilo, indolilo y benzofuranilo y similares.
Los grupos alquilo que R^{6} y R^{7} pueden representar, pueden ser de cadena lineal o, cuando hay un número suficiente (esto es, un mínimo de tres) de átomos de carbono, pueden ser de cadena ramificada y/o cíclicos. Además, cuando hay un número suficiente de átomos de carbono (esto es, un mínimo de cuatro), tales grupos alquilo también pueden ser parte cíclicos/acíclicos. Tales grupos alquilo también pueden ser saturados o, cuando hay un número suficiente de átomos de carbono (esto es, un mínimo de dos), pueden ser insaturados.
Los grupos halo con los cuales pueden estar sustituidos R^{6} y R^{7} incluyen fluoro, cloro, bromo y yodo.
Cuando R^{5} representa C(O)OR^{7}, los grupos R^{7} preferidos incluyen:
(a)
grupos alquilo C_{3-6} lineales, ramificados o cíclicos, por ejemplo, un grupo cicloalquilo C_{4-6};
(b)
grupos alquil C_{1-2}-arilo, tales como el grupo bencilo, opcionalmente sustituidos como se indicó antes en la presente memoria.
Los compuestos preferidos de la fórmula Ia incluyen aquellos en los que R^{5} representa OR^{6}
Cuando R^{5} representa OR^{6}, los grupos R^{6} preferidos incluyen:
(a)
un átomo de H;
(b)
alquilo C_{1-8} (por ejemplo C_{1-6}) lineal, ramificado o cíclico, no sustituido, tal como alquilo C_{1-3} lineal (por ejemplo, etilo o, particularmente, metilo), alquilo C_{3-8} ramificado (por ejemplo, i-propilo, i-butilo o 4-heptilo) o alquilo C_{4-7} cíclico (es decir, cicloalquilo C_{4-7}, por ejemplo, ciclobutilo o ciclohexilo);
(c)
un grupo alquil C_{1-3}-oxifenilo (por ejemplo, alquil C_{2}-oxifenilo), cuyo grupo fenilo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes como se ha indicado antes en este documento (por ejemplo, trifluorometilo);
(d)
un grupo alquil C_{1-2}-arilo (por ejemplo, metilarilo), en el que el grupo arilo es fenilo, piridinilo o isoxazolilo, cuyos tres últimos grupos están opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes como se ha indicado antes en este documento (por ejemplo, metoxi, metilo, bromo y/o cloro).
Los compuestos preferidos de la fórmula Ia incluyen aquellos en los que R^{5} representa OR^{6} y R^{6} representa alquilo C_{1-6} (por ejemplo, C_{1-4}) lineal, ramificado (como sea apropiado), o cíclico (como sea apropiado), tal como metilo, etilo, n-propilo, i-propilo o ciclobutilo.
Los compuestos de la fórmula Ia se pueden preparar por uno o más de los siguientes métodos:
(a)
reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula II como se ha definido antes con un compuesto de la fórmula XV,
22
\quad
en la que Y y R^{3a} son como se han definido anteriormente, por ejemplo, en condiciones similares a las descritas antes para la síntesis de los compuestos de la fórmula I;
(b)
reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula IV como se ha definido antes con un compuesto de la fórmula XVI,
XVIR^{3a}CH_{2}NH_{2}
\quad
en la que R^{3a} es como se ha definido antes, por ejemplo, en condiciones similares a las descritas anteriormente para la síntesis de los compuestos de la fórmula I;
(c)
para los compuestos de la fórmula Ia en la que R^{5} representa OH, la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula XVIA o XVIB,
\vskip1.000000\baselineskip
23 
\vskip1.000000\baselineskip
\quad
en la que R^{a}, R^{1}, R^{2}, R^{4}, Y, X_{1}, X_{2}, X_{3} y X_{4} son como se han definido anteriormente, con hidroxilamina, por ejemplo, en condiciones conocidas por los expertos en la técnica;
(d)
para los compuestos de la fórmula Ia en la que R^{5} representa OR^{6}, la reacción de un derivado protegido de un compuesto correspondiente de la fórmula I que es, por ejemplo, un compuesto de la fórmula XVII,
\vskip1.000000\baselineskip
24 
\vskip1.000000\baselineskip
\quad
en la que R^{3b} representa un fragmento estructural de la fórmula I(v) o I(vi):
\vskip1.000000\baselineskip
25 
\vskip1.000000\baselineskip
\quad
en la que R^{b} representa, por ejemplo, -CH_{2}CH_{2}-Si(CH_{3})_{3} o bencilo, o uno de sus tautómeros, y R^{a}, R^{1}, R^{2}, Y, R^{4}, X_{1}, X_{2}, X_{3} y X_{4} son como se han definido anteriormente, con un compuesto de la fórmula XVIII,
XVIIIR^{6}ONH_{2}
\quad
en la que R^{6} es como se ha definido antes, o una de sus sales de adición de ácido, por ejemplo a una temperatura entre temperatura ambiente y temperatura de reflujo en presencia de un disolvente orgánico apropiado (por ejemplo, THF, CH_{3}CN, DMF o DMSO), seguido por la separación del grupo -C(O)OR^{b} en condiciones conocidas por los expertos en la técnica (por ejemplo, haciendo reaccionar con QF o TFA (por ejemplo, como se describe más adelante));
(e)
para los compuestos de la fórmula Ia en la que R^{5} representa OH, la reacción de un compuesto de la fórmula XVII, como se ha definido antes, en la que R^{b} representa bencilo con hidroxilamina, o una de sus sales de adición de ácido, por ejemplo, en condiciones que serán bien conocidas por los expertos en la técnica;
(f)
para los compuestos de la fórmula Ia en la que R^{5} representa COOR^{7}, la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula I como se ha definido antes con un compuesto de la fórmula XIX,
XIXL^{1}COOR^{7}
\quad
en la que L^{1} representa un grupo saliente adecuado, tal como halo o nitrofenilo (por ejemplo, 4-nitrofenilo), y R^{7} es como se ha definido antes, por ejemplo, a temperatura ambiente o aproximadamente a temperatura ambiente en presencia de una base adecuada (por ejemplo, NaOH, por ejemplo, en solución acuosa) y un disolvente orgánico apropiado (por ejemplo, cloruro de metileno); o
(g)
para los compuestos de la fórmula Ia en la que R^{5} representa OCH_{3} o OCH_{2}CH_{3}, la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula Ia en la que R^{5} representa OH con sulfato de dimetilo o sulfato de dietilo, respectivamente, por ejemplo, en presencia de una base adecuada (por ejemplo, un hidróxido de metal alcalino tal como KOH (por ejemplo, en solución acuosa, por ejemplo al 50% en peso)) y un catalizador apropiado (por ejemplo, un haluro de amonio cuaternario como cloruro de benciltrimetilamonio (por ejemplo, en solución de CH_{2}Cl_{2} o THF, por ejemplo al 10% en peso)).
\newpage
Las líneas onduladas sobre los enlaces de los fragmentos de las fórmulas I(v) y I(vi) significan las posiciones de enlace de los fragmentos.
Los compuestos de las fórmulas XVIA y XVIB se pueden preparar por la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula II, como se ha definido antes, con un compuesto de la fórmula XIXA o XIXB,
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26 
\vskip1.000000\baselineskip
en las que R^{4}, Y, X_{1}, X_{2}, X_{3} y X_{4} son como se han definido anteriormente, por ejemplo, en condiciones similares a las descritas antes para la síntesis de los compuestos de la fórmula I.
Los compuestos de las fórmulas XVIA y XVIB se pueden preparar alternativamente por la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula IV, como se ha definido antes, con un compuesto de la fórmula XIXC o XIXD,
\vskip1.000000\baselineskip
27 
\vskip1.000000\baselineskip
en las que R^{4}, X_{1}, X_{2}, X_{3} y X_{4} son como se han definido anteriormente, por ejemplo, en condiciones similares a las descritas antes en esta memoria para la síntesis de los compuestos de la fórmula I.
Los compuestos de la fórmula XVII se pueden preparar por la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula II, como se ha definido antes, con un compuesto de la fórmula XX,
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28 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que Y y R^{3b} son como se han definido anteriormente, por ejemplo, en condiciones similares a las descritas antes para la síntesis de los compuestos de la fórmula I.
\newpage
De forma alternativa, los compuestos de la fórmula XVII se pueden preparar por la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula I con un compuesto correspondiente a un compuesto de la fórmula XIX en el que, en lugar de R7, el grupo R^{b} está presente, en el que R^{b} es como se ha definido anteriormente en esta memoria, por ejemplo, en las condiciones descritas antes con respecto a la preparación de los compuestos de la fórmula Ia.
Los compuestos de las fórmulas XV y XX se pueden preparar por la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula X como se ha definido antes, con un compuesto de la fórmula XVI como se ha definido antes, o con un compuesto de la fórmula XXI, respectivamente,
XXIR^{3b}CH_{2N}H_{2}
en la que R^{3b} es como se ha definido antes, por ejemplo, en condiciones similares a las descritas antes para la síntesis de los compuestos de la fórmula I.
Los compuestos de las fórmulas XVI, XVIII, XIX, XIXA, XIXB, XIXC, XIXD y XXI o bien están comercialmente disponibles, son conocidos en la bibliografía, o bien se pueden obtener por analogía con los procedimientos descritos aquí, o por procedimientos sintéticos convencionales, de acuerdo con técnicas estándar, a partir de materiales de partida fácilmente disponibles utilizando reactivos y condiciones de reacción apropiados. Por ejemplo, los compuestos de las fórmulas XIXA y XIXB se pueden preparar por la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula XIXC o XIXD (como sea apropiado) con un compuesto de la fórmula X, por ejemplo, en condiciones similares a las descritas antes.
Los compuestos de las fórmulas I y Ia, como se han definido antes, y sus derivados, se denominan de aquí en adelante "los compuestos".
Los compuestos preferidos incluyen por tanto los compuestos de los ejemplos descritos más adelante. A este respecto, los compuestos que se pueden mencionar incluyen:
Ph(3-Cl)(5=OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt);
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr);
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr);
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu);
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH);
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(COOcPentilo);
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z);
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH_{2}-3-(5-Me-isoxazol));
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH_{2}-3-piridina);
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiBu);
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt);
Ph(3-Cl) (5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn);
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcHexilo);
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu);
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH_{2}CH_{2}OPh(3-CF_{3}));
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Cl));
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(3-MeO));
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(2-Br));
Ph(3-C1)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Me));
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-4-heptilo);
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(S)CH(CH_{2}OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(S)CH(CH_{2}OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(S)CH(CH_{2}OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCH(CH_{2}F)_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH(CH_{2}F)_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Br)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl,5-OCH_{2}CHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH);
Ph(3-Cl,5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH);
Ph(3-Cl,5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab;
Ph(3-Cl,5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab(OMe);
Ph(3-Cl,5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-((2-amidino)-5-piridinilo);
Ph(3-Cl,5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-((2-metoxiamidino)-5-piridinilo);
Ph(3-Cl,5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-((5-amidino)-2-pirimidinilo);
Ph(3-Cl,5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-((5-metoxiamidino)-2-pirimidinilo);
Ph(3-Cl,5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F);
Ph(3-Cl,5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF);
Ph(3-Cl,5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF)(OMe);
Ph(3-Cl,5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF); y
Ph(3-Cl,5-OCCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF)(OMe).
Los compuestos de la invención pueden presentar tautomerismo. Todas las formas tautómeras y sus mezclas están incluidas dentro del alcance de la invención. Las formas tautómeras particulares que se pueden mencionar incluyen las conectadas con la posición del doble enlace en la funcionalidad amidina en un compuesto de la fórmula Ia, y la posición del sustituyente R^{5}.
Los compuestos de la invención también contienen dos o más átomos de carbono asimétricos y por lo tanto pueden presentar isomería óptica y/o diastereoisomería. Los diastereoisómeros se pueden separar usando técnicas convencionales, por ejemplo, cromatografía. Los diversos estereoisómeros se pueden aislar por separación de una mezcla racémica u otra mezcla de los compuestos usando técnicas convencionales, por ejemplo HPLC. Alternativamente, los isómeros ópticos deseados se pueden fabricar por reacción de los materiales de partida apropiados ópticamente activos en condiciones que no provoquen racemización o epimerización, o por derivatización, por ejemplo, con un ácido homoquiral seguido por separación de los derivados diastereoisómeros por medios convencionales (por ejemplo, HPLC, cromatografía sobre sílice).
Los compuestos en los que el fragmento
29
está en la configuración S son los preferidos.
Los compuestos preferidos incluyen aquellos en los que el fragmento estructural
30
está en la configuración R cuando R^{a} representa -OH o está en la configuración S cuando R^{a} representa -CH_{2}OH.
Las líneas onduladas en los enlaces de los dos fragmentos anteriores significan las posiciones de enlace de los fragmentos.
Los compuestos que se pueden mencionar incluyen Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-CH(OH)C(O)-Aze-Pab (en el que, en esta ocasión, Aze simboliza azetidina-2-carboxilato (esto es, en conformaciones (R)- y/o (S)-), así como los compuestos equivalentes en los que, en lugar de un átomo de hidrógeno en la unidad amidino en Pab, está presente el grupo -OR^{6} (como se ha definido antes) en el que R^{6} representa alquilo C_{1-3} (esto es, Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe), Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt), Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr) o Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr)). Los compuestos que se pueden mencionar además incluyen aquellos que no son los compuestos específicos identificados en el párrafo anterior.
Los expertos en la técnica apreciarán que en los procedimientos descritos antes y que se describen de aquí en adelante, los grupos funcionales de los compuestos intermedios pueden necesitar ser protegidos por grupos protectores.
Los grupos funcionales que es deseable proteger, incluyen los grupos hidroxi, amino y ácido carboxílico. Los grupos protectores adecuados para hidroxi incluyen opcionalmente grupos alquilo opcionalmente sustituidos y/o insaturados (por ejemplo, metilo, alilo, bencilo o terc-butilo), grupos trialquilsililo o diarilalquilsililo (por ejemplo, t-butildimetilsililo, t-butildifenilsililo o trimetilsililo) y tetrahidropiranilo. Los grupos protectores adecuados del grupo ácido carboxílico incluyen ésteres de alquilo C_{1-6} o de bencilo. Los grupos protectores adecuados de los grupos amino y amidino incluyen los grupos t-butiloxicarbonilo, benciloxicarbonilo o 2-trimetilsililetoxicarbonilo (Teoc). Los átomos de nitrógeno del grupo amidino también pueden estar protegidos con grupos hidroxi o alcoxi, y pueden estar mono o diprotegidos.
La protección y desprotección de grupos funcionales puede ocurrir antes o después del acoplamiento, o antes o después de cualquier otra reacción de los esquemas mencionados anteriormente.
Los grupos protectores se pueden separar según técnicas que son bien conocidas por los expertos en la técnica y como se describe más adelante.
Los expertos en la técnica apreciarán que, con el fin de obtener los compuestos de la invención de una manera alternativa, y, en algunas ocasiones, más conveniente, las etapas individuales del procedimiento mencionadas antes se pueden realizar en un orden diferente, y/o las reacciones individuales se pueden realizar en una etapa diferente en la ruta global (es decir, se pueden añadir sustituyentes y/o realizar transformaciones químicas sobre compuestos intermedios diferentes a los mencionados antes en la presente memoria junto con una reacción particular). Esto puede negar, o hacer necesaria, la necesidad de grupos protectores.
El tipo de química implicada dictará la necesidad, y el tipo, de grupos protectores así como la secuencia para conseguir la síntesis.
El uso de grupos protectores está completamente descrito en "Protective Groups in Organic Chemistry", editado por J W F McOmie, Plenum Press (1973), y "Protective Groups in Organic Synthesis", 3ª edición, T.W. Greene & P.G.M. Wutz, Wiley-Interscience (1999).
Los derivados protegidos de los compuestos de la invención se pueden convertir químicamente en compuestos de la invención usando técnicas estándar de desprotección (por ejemplo, hidrogenación). El experto en la técnica también apreciará que ciertos compuestos de la fórmula Ia también se pueden denominar "derivados protegidos" de los compuestos de la fórmula I.
Uso médico y farmacéutico
Los compuestos de la invención pueden tener actividad farmacológica como tales.
Sin embargo, otros compuestos de la invención pueden no tener tal actividad, pero se pueden administrar parenteral u oralmente, y pueden ser metabolizados después en el cuerpo para formar compuestos que sean farmacológicamente activos. Tales compuestos (que también incluyen compuestos que pueden tener alguna actividad farmacológica, pero que esa actividad es apreciablemente menor que la de los compuestos "activos" en los que se metabolizan), pueden por lo tanto ser descritos como "profármacos" de los compuestos activos.
Así, los compuestos de la invención son útiles porque tienen actividad farmacológica y/o son metabolizados en el cuerpo tras la administración oral o parenteral para formar compuestos que tienen actividad farmacológica. Los compuestos de la invención están por lo tanto indicados como productos farmacéuticos.
Según otro aspecto de la invención, se proporcionan así los compuestos de la invención para usar como productos farmacéuticos.
En particular, los compuestos de la invención son agentes inhibidores potentes de la trombina como tales y/o (por ejemplo, en el caso de profármacos), son metabolizados tras la administración para formar agentes inhibidores potentes de la trombina, por ejemplo, como se puede demostrar en los ensayos descritos más adelante.
Por "profármaco de un inhibidor de la trombina", se incluyen los compuestos que forman un inhibidor de la trombina, en una cantidad experimentalmente detectable, y dentro de un tiempo predeterminado (por ejemplo, aproximadamente 1 hora), después de la administración oral o parenteral (véase, por ejemplo, el ensayo E más adelante) o, alternativamente, después de la incubación en presencia de microsomas hepáticos (véase, por ejemplo, el ensayo G más adelante).
Así, se espera que los compuestos de la invención sean útiles en las afecciones en las que se requiera la inhibición de la trombina y/o en las afecciones en las que esté indicada una terapia anticoagulante, incluyendo las siguientes:
El tratamiento y/o profilaxis de la trombosis y la hipercoagulabilidad en la sangre y/o en los tejidos de animales incluyendo el hombre. Se sabe que la hipercoagulabilidad puede conducir a enfermedades tromboembólicas. Las afecciones asociadas con la hipercoagulabilidad y las enfermedades tromboembólicas que se pueden mencionar incluyen la resistencia heredada o adquirida a la proteína C activada, tal como la mutación del factor V (factor V de Leiden), y deficiencias heredadas o adquiridas en antitrombina III, proteína C, proteína S, cofactor II de la heparina. Otras afecciones que se sabe que están asociadas con la hipercoagulabilidad y la enfermedad tromboembólica incluyen anticuerpos antifosfolípidos circulantes (Lupus anticoagulante), homocisteinemia, trombocitopenia inducida por la heparina y defectos en la fibrinolisis, así como los síndromes de coagulación (por ejemplo, coagulación intravascular diseminada (CID)) y lesión vascular en general (por ejemplo, debida a la cirugía).
El tratamiento de afecciones en las que hay un exceso indeseable de trombina sin signos de hipercoagulabilidad, por ejemplo, en enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer.
Los estados patológicos particulares que se pueden mencionar incluyen el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de la trombosis venosa (por ejemplo, VTP) y de la embolia pulmonar, trombosis arterial (por ejemplo, en el infarto de miocardio, angina inestable, el ictus basado en la trombosis y la trombosis arterial periférica), y embolia sistémica normalmente desde la aurícula durante la fibrilación auricular (p. ej., fibrilación auricular no valvular) o desde el ventrículo izquierdo después del infarto de miocardio transmural, o provocada por insuficiencia cardíaca congestiva; la profilaxis de reoclusión (es decir, trombosis) después de la trombolisis, la angioplastia transluminal percutánea (ATP) y las operaciones de derivación coronaria; la prevención de la retrombosis después de microcirugía y cirugía vascular en general.
Indicaciones adicionales incluyen el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de la coagulación intravascular diseminada provocada por bacterias, traumatismo múltiple, intoxicación o cualquier otro mecanismo; el tratamiento anticoagulante cuando la sangre está en contacto con superficies extrañas en el cuerpo tales como los injertos vasculares, endoprótesis vasculares, catéteres vasculares, válvulas prostéticas mecánicas y biológicas, o cualquier otro dispositivo médico; y el tratamiento anticoagulante cuando la sangre está en contacto con dispositivos médicos fuera del cuerpo tal como durante la cirugía cardiovascular usando una máquina corazón-pulmón o en hemodiálisis; el tratamiento terapéutico y/o profiláctico del síndrome idiopático y el síndrome de distrés respiratorio en adultos, fibrosis pulmonar tras el tratamiento con radiación o quimioterapia, shock séptico, septicemia, respuestas inflamatorias, las cuales incluyen, pero sin limitarse a ellas, edema, ateroesclerosis aguda o crónica tal como enfermedad arterial coronaria y la formación de placas ateroescleróticas, enfermedad cerebral arterial, infarto cerebral, trombosis cerebral, embolia cerebral, enfermedad arterial periférica, isquemia, angina (incluyendo la angina inestable), daño por reperfusión, restenosis después de la angioplastia transluminal percutánea (PTA) y cirugía coronaria de derivación de las arterias.
Los compuestos de la invención que inhiben a la tripsina y/o a la trombina también pueden ser útiles en el tratamiento de la pancreatitis.
Los compuestos de la invención están así indicados en el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de estas afecciones.
Los compuestos de la invención se administrarán normalmente oral, intravenosa, subcutánea, bucal, rectal, dérmica, nasal, traqueal y bronquialmente, por cualquier otra ruta parenteral o vía de inhalación, en la forma de preparaciones farmacéuticas que comprenden el compuesto de la invención como una base libre, o como una sal de adición de ácidos orgánicos o inorgánicos no tóxica farmacéuticamente aceptable, en una forma de dosificación farmacéuticamente aceptable.
La vía de administración preferida de los compuestos de la invención es la vía oral. Las preparaciones farmacéuticas preferidas incluyen las composiciones farmacéuticas de liberación modificada que comprenden los compuestos de la invención. La expresión composición farmacéutica de "liberación modificada" deberá ser entendida por los expertos en la técnica como incluyendo toda composición en la que el comienzo y/o velocidad de liberación del fármaco (esto es, el compuesto de la invención) es alterado con manipulaciones galénicas, y por tanto incluye la definición proporcionada en la Farmacopea de los Estados Unidos (USP XXII) en las páginas xliii y xliv de la parte del prefacio/preámbulo, la descripción relevante de dicho documento se incorpora aquí como referencia.
Las formulaciones de liberación modificada adecuadas pueden ser por tanto preparadas por los expertos de acuerdo con las técnicas convencionales de la farmacia (véase, por ejemplo, Pharmaceutisch Weekblad Scientific Edition, 6, 57 (1984); Medical Applications of Controlled Release, Vol II, eds. Langer and Wise (1984) Bocaraton, Florida, en las páginas 1 a 34; Industrial Aspects of Pharmaceuticals, ed. Sandel, Swedish Pharmaceutical Press (1993) en las páginas 93 a 104; y las páginas 191 a 211 de "Pharmaceutics: The Science of Dosage Form Design", ed. M. E. Aulton (1988) (Churchill Livingstone)).
Las formulaciones de liberación modificada preferidas incluyen por tanto aquellas en las que un compuesto apropiado de la invención está embebido en una matriz polimérica. A este respecto, se prefiere que las formulaciones que incluyen los compuestos de la invención se proporcionen para administración oral en la forma de un sistema de liberación modificada llamado de "hinchamiento", o un sistema de liberación modificada de "matriz gelificante", en la que el compuesto de la invención se proporciona junto con un polímero que se hincha en un medio acuoso (esto es, un "componente gelificante hidrófilo").
En particular se prefiere que los compuestos de la invención se formulen juntos en una composición de matriz gelificante que comprende iota-carragenato y uno o más polímeros gelificantes neutros.
El iota-carragenato está preferiblemente presente en dicha preparación preferida a un nivel de más del 15% en peso. Los grados preferidos de iota-carragenato incluyen el grado farmacéutico de iota-carragenato (disponible de FMC Biopolymer), que tiene una viscosidad de no menos de 5 centipoises (cps), preferiblemente en el intervalo 5-10 cps (para una solución al 1,5% calentada a 82ºC, después de lo cual se mide la viscosidad a 75ºC con un viscosímetro Brookfield LV provisto de una aguja #1 y operando a una velocidad de 30 rpm), y el grado técnico de iota-carragenato (disponible de Fluka Biochemica), que preferiblemente tiene una viscosidad de no menos de 14 mPa.s, para una solución acuosa al 0,3% calentada a 20ºC, después de lo cual se mide la viscosidad utilizando un viscosímetro de caída de bola, de tipo Haake, utilizado junto con un termostato Lauda C3 y Hakke Mess-System III, y utilizando bolas de acero inoxidable recubiertas de oro de densidad 7,8 g/cm^{3}.
El polímero gelificante neutro puede ser un único polímero neutro erosionable, o una mezcla de más de uno, que tienen propiedades gelificantes y que tienen una solubilidad sustancialmente independiente del pH. El polímero gelificante neutro, preferiblemente, está presente en la formulación a un nivel de más del 10% pero preferiblemente más del 20% en peso.
Los polímeros gelificantes neutros adecuados incluyen óxido de polietileno (PEO), derivados y miembros de la familia PEO (por ejemplo, polietilenglicol (PEG), preferiblemente que existen en la naturaleza en estado sólido, de peso molecular o viscosidad adecuados). Si se utiliza como un único polímero gelificante neutro, un óxido de polietileno tiene preferiblemente un peso molecular de \geq 4 millones (4 M), correspondiente a un intervalo de viscosidad de la solución acuosa de 1650-5500 mPa.s (o 1650-5500 cps; medida para una solución acuosa al 1% a 25ºC, utilizando un viscosímetro Brookfield RVF, con aguja No. 2, a 2 rpm). Otros ejemplos de óxido de polietileno adecuado incluyen un óxido de polietileno de peso molecular de aproximadamente 5 millones (5 M), correspondiente a un intervalo de viscosidad de la solución acuosa de 5500 - 7500 mPa.s, o un óxido de polietileno de peso molecular de aproximadamente 8 millones (8 M), correspondiente a un intervalo de viscosidad de la solución acuosa de 10000-15000 mPa.s. Este intervalo cubre el valor de la viscosidad típica de la solución (en cps) medida a 25ºC, dada para este polímero, en la USP 24/NF 19, 2000 edición, pp. 2285-2286. Si se utiliza PEG como único polímero gelificante neutro, preferiblemente tiene un peso molecular alto, por ejemplo, un peso molecular de aproximadamente 20000, correspondiente a un intervalo de viscosidad de 2700-3500 mPa.s (o 2700-3500 cps), medida utilizando una solución acuosa al 50% (p/p) a 20ºC, utilizando un viscosímetro capilar (Ubbelohde o equivalente). [Ref: European Pharmacopoeia 3rd Ed., 2000, Supplement, pp. 908-909].
Otros polímeros gelificantes adecuados incluyen derivados de celulosa tales como hidroxipropilmetilcelulosa
(HPMC) o hidroxietilcelulosa (HEC) con viscosidades apropiadamente altas (por ejemplo, "HPMC 10000 cps", "HPMC 15000 cps", "HEC tipo HH" o "HEC tipo H"). Cuando se utilizan como único polímero neutro, los polímeros de hidroxipropilmetilcelulosa como "HPMC 10000 cps" y "HPMC 15000 cps" tienen, respectivamente, viscosidades aparentes de 7500-14000 mPa.s (o 7500 - 14000 cps), y 11250-21000 mPa.s (o 11250-21000 cps), cuando se miden a 20ºC con una solución acuosa al 2% (p/p), calculadas con referencia a la sustancia seca, utilizando un viscosímetro capilar (Ubbelohde o equivalente). Un tipo de polímero de hidroxietilcelulosa, por ejemplo, "Natrosol 250 Pharma, tipo HH", de Hercules Incorporated (Aqualon), presenta típicamente una viscosidad Brookfield de aproximadamente 20.000 mPa.s utilizando un instrumento Brookfield Synchro-Lectric Model LVF, en las condiciones de concentración de solución al 1%, aguja no. 4, velocidad de la aguja 30 rpm, factor 200, 25ºC (Véase Natrosol Physical and Chemical Properties booklet, 33.007-E6 (1993), p. 21).
Las formulaciones particulares que se pueden mencionar incluyen aquellas en las que el compuesto de la invención se formula junto con iota-carragenato y HPMC (10.000 cps) en una relación 50:50 (% en peso), o junto con iota-carragenato y PEO 4 M en una relación 50:50 (% en peso).
Los excipientes adicionales preferidos en tales formulaciones incluyen lubricantes, tales como estearilfumarato de sodio.
Dependiendo del trastorno y del paciente a tratar y de la vía de administración, las composiciones se pueden administrar en dosis variables.
Los compuestos de la invención también se pueden combinar y/o coadministrar con cualquier agente o agentes antitrombóticos con un mecanismo de acción diferente, tal como uno o más de los siguientes: los agentes antiplaquetarios ácido acetilsalicílico, ticlopidina y clopidogrel; receptor de tromboxano y/o inhibidores de sintetasa; antagonistas del receptor de fibrinógeno; miméticos de prostaciclina; inhibidores de fosfodiesterasa; antagonistas del receptor de ADP (P_{2}T); e inhibidores de carboxipeptidasa U (CPU).
Los compuestos de la invención se pueden combinar además y/o coadministrar con agentes trombolíticos tales como uno o más activadores de plasminógeno tisular (naturales, recombinantes o modificados), la estreptoquinasa, la uroquinasa, la prouroquinasa, el complejo activador de plasminógeno-estreptoquinasa anisoilado (APSAC), activadores de las glándulas salivales en animales, y similares, en el tratamiento de enfermedades trombóticas, en particular el infarto de miocardio.
Según otro aspecto de la invención, se proporciona una formulación farmacéutica que incluye un compuesto de la invención, en mezcla con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
Las dosis diarias adecuadas de los compuestos de la invención en el tratamiento terapéutico de seres humanos son aproximadamente 0,001-100 mg//kg de peso corporal en la administración peroral y 0,001-50 mg/kg de peso corporal en la administración parenteral.
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Para evitar dudas, como se emplea en esta memoria, el término "tratamiento" incluye tratamiento terapéutico y/o profiláctico.
Los compuestos de la invención tienen la ventaja de que pueden ser más eficaces, menos tóxicos, tener una actuación más prolongada, tener un espectro de actividad más amplio, ser más potentes, producir menos efectos secundarios, ser más fácilmente adsorbidos y/o tener un perfil farmacocinético mejor (por ejemplo, mayor biodisponibilidad oral y/o menor aclaramiento) que los compuestos conocidos en la técnica anterior y/o tener otras propiedades farmacológicas, físicas o químicas útiles distintas a las de ellos. Los compuestos de la invención pueden tener la ventaja adicional de que se pueden administrar con menos frecuencia que los compuestos conocidos en la técnica anterior.
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Ensayos biológicos
Se pueden emplear los siguientes procedimientos de ensayo.
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Ensayo A
Determinación del tiempo de coagulación de la trombina (TT)
La solución del agente inhibidor (25 \muL) se incuba con plasma (25 \muL) durante tres minutos. Se añade entonces trombina humana (T 6769; Sigma Chem. Co o Hematologic Technologies) en una solución tampón de pH 7,4 (25 \muL, 4,0 unidades NIH/mL), y se mide el tiempo de coagulación en un dispositivo automático (KC 10; Amelung).
El tiempo de coagulación de la trombina (TT) se expresa como valores absolutos (segundos) así como la relación de TT sin agente inhibidor (TT_{0}) a TT con agente inhibidor (TT_{i}). Las últimas relaciones (amplitud 1-0) se representan frente a la concentración del agente inhibidor (transformada en log) y se ajustan a curvas sigmoidales dosis-respuesta según la ecuación
y = a/[1+(x/IC_{50})^{s}]
donde: a = amplitud máxima, es decir, 1; s = pendiente de la curva dosis-respuesta; e IC_{50} = la concentración de agente inhibidor que dobla el tiempo de coagulación. Los cálculos se procesan en un PC usando el programa informático GraFit versión 3, regulando la ecuación igual a: Inicio a 0, final definido = 1 (Erithacus Software, Robin Leatherbarrow, Imperial College de Science, London, UK).
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Ensayo B
Determinación de la inhibición de la trombina con un ensayo cromógeno robótico
La potencia del agente inhibidor de la trombina se mide con un método de sustrato cromógeno, en un procesador de microplacas robótico Plato 3300 (Rosys AG, CH-8634 Hombrechtikon, Suiza), usando placas de microtitulación de 96 pocillos a la mitad de su volumen (Costar, Cambridge, MA, USA; Nº. Cat. 3690). Las soluciones madre de la sustancia a ensayar en DMSO (72 \muL), 0,1 - 1 mmol/L, se diluyen en serie 1:3 (24 + 48 \muL) con DMSO para obtener diez concentraciones diferentes, las cuales se analizan como muestras en el ensayo. Se diluyen 2 \muL de muestra de ensayo con 124 \muL de solución tampón de ensayo, 12 \muL de solución de sustrato cromógeno (S-2366, Chromogenix, Mölndal, Suecia) en solución tampón de ensayo y finalmente se añaden 12 \muL de solución de \alpha-trombina (\alpha-trombina humana, Sigma Chemical Co. o Hematologic Technologies) en solución tampón de ensayo y se mezclan las muestras. Las concentraciones finales de ensayo son: sustancia a ensayar 0,00068 - 13,3 \mumol/L, S-2366 0,30 mmol/L, \alpha-trombina 0,020 unidades NIH/mL.
Para calcular el porcentaje de inhibición de las muestras de ensayo se usa el incremento lineal de la absorbancia durante 40 minutos de incubación a 37ºC que se compara con blancos sin agente inhibidor. El valor IC_{50}-robótico, que corresponde a la concentración de agente inhibidor que provoca un 50% de inhibición de la actividad de la trombina, se calcula a partir de la curva log concentración frente a % de inhibición.
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Ensayo C
Determinación de la constante de inhibición K_{i} para la trombina humana
Se hacen determinaciones de K_{i} usando un método de sustrato cromógeno, realizado a 37ºC con un analizador centrífugo Cobas Bio (Roche, Basel, Suiza). La actividad enzimática residual después de la incubación de \alpha-trombina humana con varias concentraciones de compuesto de ensayo se determina a tres concentraciones diferentes de sustrato, y se mide como el cambio en la absorbancia óptica a 405 nm.
Las soluciones del compuesto de ensayo (100 \muL; normalmente en solución tampón o salina que contiene BSA 10 g/L) se mezclan con 200 \muL de \alpha-trombina humana (Sigma Chemical Co) en solución tampón de ensayo (Tris-HCl a 0,05 mol/L pH 7,4, fuerza iónica 0,15 ajustada con NaCl) que contiene BSA (10 g/L), y se analizan como muestras en el equipo Cobas Bio. Se añade una muestra de 60 \muL, junto con 20 \muL de agua, a 320 \muL del sustrato S-2238 (Chromogenix AB, Mölndal, Suecia) en solución tampón de ensayo, y se monitoriza el cambio de la absorbancia (\DeltaA/min). Las concentraciones finales de S-2238 son 16, 24 y 50 \mumol/L y de la trombina 0,125 unidades
NIH/mL.
La velocidad de reacción en estado estacionario se usa para construir representaciones gráficas de Dixon, es decir, diagramas de concentración del agente inhibidor frente a 1/(\DeltaA/min). Para los agentes inhibidores competitivos reversibles, los puntos de los datos para las diferentes concentraciones de sustrato forman típicamente líneas rectas con intersección en x = -K_{i}.
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Ensayo D
Determinación del tiempo parcial activado de tromboplastina (APTT)
El APTT se determina en plasma citrado agrupado de seres humanos normales con el reactivo PTT Automated 5 fabricado por Stago. Los agentes inhibidores se añaden al plasma (10 \muL de solución del agente inhibidor a 90 \muL de plasma) y se incuban con el reactivo APTT durante 3 minutos seguido por la adición de 100 \muL de solución de cloruro de calcio (0,025 M) y el APTT se determina mediante el uso del analizador de coagulación KC10 (Amelung) según las instrucciones del productor del reactivo.
El tiempo de coagulación se expresa en valores absolutos (segundos) así como la relación de APTT sin agente inhibidor (APTT_{0}) a APTT con agente inhibidor (APTT_{i}). Las últimas relaciones (amplitud 1-0) se representan frente a la concentración del agente inhibidor (transformada en log) y se ajustan a curvas sigmoidales dosis-respuesta según la ecuación
y = a/[1+(x/IC_{50})^{s}]
donde: a = amplitud máxima, es decir, 1; s = pendiente de la curva dosis-respuesta; e IC_{50} = la concentración de agente inhibidor que dobla el tiempo de coagulación. Los cálculos se procesan en un PC usando el programa informático GraFit versión 3, regulando la ecuación igual a: Inicio a 0, final definido = 1 (Erithacus Software, Robin Leatherbarrow, Imperial College de Science, London, UK). La IC_{50} del APTT se define como la concentración de agente inhibidor en plasma de ser humano que dobla el tiempo parcial activado de tromboplastina.
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Ensayo E
Determinación del tiempo de trombina ex vivo
La inhibición de trombina después de la administración oral o parenteral de los compuestos de la invención, disueltos en etanol:Soluto IK:agua (5:5:90), se examina en ratas conscientes a las que, uno o dos días antes del experimento, se les ha incorporado un catéter para el muestreo de la sangre desde la arteria carótida. El día del experimento se extraen muestras de sangre a tiempos fijos después de la administración del compuesto en tubos de plástico que contienen 1 parte de solución de citrato de sodio (0,13 mol por L) y 9 partes de sangre. Los tubos se centrifugan para obtener plasma pobre en plaquetas.
Se precipitan 50 \muL de muestras de plasma con 100 \muL de acetonitrilo frío. Las muestras se centrifugan durante 10 minutos a 4000 rpm. Se diluyen 75 \muL del sobrenadante con 75 \muL de ácido fórmico al 0,2%. Se analizan por LC-MS/MS volúmenes de 10 \muL de las soluciones resultantes y las concentraciones del agente inhibidor de trombina se determinan usando curvas estándar.
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Ensayo F
Determinación del aclaramiento del plasma en rata
El aclaramiento del plasma se estima en ratas macho Sprague Dawley. El compuesto se disuelve en agua y se administra como una inyección subcutánea de bolo de 4 \mumol/kg. Se recogen muestras de sangre a intervalos frecuentes hasta 5 horas después de la administración del fármaco. Se centrifugan las muestras de sangre y se separa el plasma de las células sanguíneas y se transfiere a viales que contienen citrato (concentración final 10%). Se precipitan 50 \muL de muestras de plasma con 100 \muL de acetonitrilo frío. Se centrifugan las muestras durante 10 minutos a 4000 rpm. Se diluyen 75 \muL del sobrenadante con 75 \muL de ácido fórmico al 0,2%. Se analizan por LC-MS/MS volúmenes de 10 \muL de las soluciones resultantes y las concentraciones del agente inhibidor de trombina se determinan usando curvas estándar. Se estima el área bajo el perfil de la concentración plasmática-tiempo usando la regla trapezoidal log/lineal y se extrapola a tiempo infinito. El aclaramiento en el plasma (CL) del compuesto se determina entonces
como
CL = Dosis/AUC
Los valores se dan en mL/min/kg.
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Ensayo G
Determinación de la estabilidad in vitro
Se preparan microsomas de hígado de ratas Sprague-Dawley y muestras de hígado humano según procedimientos normalizados de trabajo (SOP) internos. Los compuestos se incuban a 37ºC a una concentración total de proteínas de microsomas de 3 mg/mL en una solución tampón TRIS a 0,05 mol/L a pH 7,4, en presencia de los cofactores NADH (2,5 mmol/L) y NADPH (0,8 mmol/L). La concentración inicial de compuesto es de 5 o 10 \mumol/L. Se toman muestras para análisis hasta 60 minutos después del comienzo de la incubación. La actividad enzimática en la muestra recogida se para inmediatamente añadiendo ácido mirístico al 20% a un volumen correspondiente al 3,3% del volumen total de la muestra. La concentración de compuesto que permaneció (CONC FINAL) en la muestra a los 60 min se determina por medio de LCMS usando una muestra recogida a tiempo cero como referencia (CONC INICIAL). El % de inhibidor de trombina degradado se calcula como sigue:
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Ensayo H
Modelo de trombosis arterial
El daño a los vasos se induce aplicando cloruro férrico (FeCl_{3}) tópicamente a la arteria carótida. Las ratas se anestesian con una inyección intraperitoneal de pentobarbital sódico (80 mg/kg; Apoteksbolaget; Ume\ring{a}, Suecia), seguida mediante perfusión continua (12 mg/kg/h) a lo largo de todo el experimento. La temperatura corporal de las ratas se mantiene a 38ºC a lo largo de todo el experimento mediante calentamiento externo. El experimento comienza con un período de control de 5 minutos. Cinco minutos más tarde, se administra intravenosamente ^{125}I-fibrinógeno humano (80 kBq; IM53; Amersham Internacional, Buckinghamshire, UK) y se utiliza como un marcador para la incorporación subsiguiente de fibrinógeno en el trombo. El extremo proximal del segmento de la arteria carótida se coloca en un tubo de plástico (6 mm; Silastic®; Dow Corning, MI, USA) abierto longitudinalmente, que contiene papel de filtro empapado en FeCl_{3} (2 \muL; 55% p/p; Merck, Darmstadt, Alemania) (diámetro 3 mm; 1F; Munktell, Grycksbo, Suecia). La arteria carótida izquierda se expone a FeCl_{3} durante 10 minutos y a continuación se separa del tubo de plástico y se empapa en una solución salina. Cincuenta minutos después, se separa la arteria carótida y se enjuaga en una solución salina. También se toman muestras de sangre de referencia para la determinación de la actividad de ^{125}I en sangre, 10 minutos después de la inyección de ^{125}I-fibrinógeno, y al final del experimento. La actividad de ^{125}I en las muestras de sangre de referencia y en el segmento del vaso sanguíneo se miden en un contador gamma (1282 Compugamma; LKB Wallac Oy, Turku, Finlandia) el mismo día en que se realiza el experimento. El tamaño del trombo se determina como la cantidad de actividad de ^{125}I incorporada en el segmento del vaso sanguíneo en relación ala actividad de ^{125}I en la sangre (cpm/mg).
Detalles experimentales generales
La TLC se realizó sobre gel de sílice. El análisis por HPLC quiral se realizó usando una columna de 46 mm X 250 mm Chiralcel OD con una precolumna de 5 cm. La temperatura de la columna se mantuvo a 35ºC. Se usó un caudal de 1,0 ml/min. Se usó un detector Gilson 115 UV a 228 nm. La fase móvil consistió en hexanos, etanol y ácido trifluoroacético y se listan las proporciones apropiadas para cada compuesto. Normalmente, el producto se disolvió en una cantidad mínima de etanol y ésta se diluyó con la fase móvil.
La LC-MS/MS se realizó usando un instrumento HP-1100 equipado con un inyector CTC-PAL y una columna ThermoQuest, Hypersil BDS-C18 de 4x100 mm y 5 \mum. Se usó un detector de MS API-3000 (Sciex). El caudal fue de 1,2 ml/min y la fase móvil (gradiente) consistió en acetonitrilo al 10-90% con 90-10% de solución acuosa de acetato de amonio 4 mM, conteniendo ambos ácido fórmico al 0,2%.
Los espectros ^{1}H NMR se registraron usando tetrametilsilano como patrón interno. Los espectros ^{13}C NMR se registraron usando los disolventes deuterados listados como patrón interno.
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<Otros ejemplos aparte de los ejemplos 2, 3 y 12 se proporcionan como Ejemplos de referencia>
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Ejemplo 1
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu) (i) 3-Cloro-5-metoxibenzaldehído
Se añadió gota a gota 3,5-dicloroanisol (74,0 g, 419 mmol) en THF (200 ml) a magnesio metal (14,2 g, 585 mmol, prelavado con HCl 0,5 N) en THF (100 ml) a 25ºC. Después de la adición, se añadió 1,2-dibromoetano (3,9 g, 20,8 mmol) gota a gota. La mezcla marrón oscuro resultante se calentó a reflujo durante 3 h. Se enfrió la mezcla a 0ºC, y se añadió N,N-dimetilformamida (60 ml) en una porción. Se sometió a reparto la mezcla entre éter dietílico (3 x 400 ml) y HCl 6 N (500 ml). Los extractos orgánicos reunidos se lavaron con salmuera (300 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar un aceite. Por cromatografía rápida (2x) sobre gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (4:1) se obtuvo el compuesto del sub-título (38,9 g, 54%) como un aceite amarillo.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,90 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 3,87 (s, 3H).
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(ii) 3-Cloro-5-hidroxibenzaldehído
Una solución de 3-cloro-5-metoxibenzaldehído (22,8 g, 134 mmol; véase la etapa (i) anterior) en CH_{2}Cl_{2} (250 ml) se enfrió a 0ºC. Se añadió gota a gota tribromuro de boro (15,8 ml, 167 mmol) a lo largo de 15 min. Después de agitar la mezcla de reacción durante 2 h, se añadió H_{2}O (50 ml) lentamente. Después, se extrajo la solución con Et_{2}O (2 x 100 ml). Las capas orgánicas se reunieron, se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida en gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (4:1) se obtuvo el compuesto del subtítulo (5,2 g, 25%).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,85 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 3,68 (s, 1H).
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(iii) 3-Cloro-5-difluorometoxibenzaldehído
Una solución de 3-cloro-5-hidroxibenzaldehído (7,5 g, 48 mmol; véase la etapa (ii) anterior) en 2-propanol (250 ml) y KOH al 30% (100 ml), se calentó a reflujo. Mientras se agitaba, se burbujeó CHClF_{2} por la mezcla de reacción durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió, se acidificó con HCl 1 N y se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). Los productos orgánicos se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida en gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (4:1) se obtuvo el compuesto del subtítulo (4,6 g, 46%).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,95 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 6,60 (t, J_{H-F} = 71,1 Hz, 1H).
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(iv) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R,S)CH(OTMS)CN
Una solución de 3-cloro-5-difluorometoxibenzaldehído (4,6 g, 22,3 mmol; véase la etapa (iii) anterior) en CH_{2}Cl_{2} (200 ml) se enfrió a 0ºC. Se añadieron ZnI_{2} (1,8 g, 5,6 mmol) y cianuro de trimetilsililo (2,8 g, 27,9 mmol) y la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 15 h. Se concentró la mezcla parcialmente a vacío dando el compuesto del subtítulo en forma de un líquido, que se usó directamente en la siguiente etapa (v) sin más purificación o caracterización.
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(v) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R,S)CH(OH)C(NH)OEt
El Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R,S)CH(OTMS)CN (6,82 g, implica 22,3 mmol; véase la etapa (iv) anterior) se añadió gota a gota a HCl/EtOH (500 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 15 h, después se concentró parcialmente a vacío dando el compuesto del subtítulo en forma de un líquido, que se usó en la etapa (vi) sin más purificación o caracterización.
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(vi) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R,S)CH(OH)C(O)OEt
El Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R,S)CH(OH)C(NH)OEt (6,24 g, implica 22,3 mmol; véase la etapa (v) anterior) se disolvió en THF (250 ml), se añadió H_{2}SO_{4} 0,5 M (400 ml) y la reacción se agitó a 40ºC durante 65 h, se enfrió y después se concentró parcialmente a vacío para separar la mayor parte del THF. Después, la mezcla de reacción se extrajo con Et_{2}O (3 x 100 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vació para dar el compuesto del subtítulo en forma de un sólido, que se usó en la etapa (vii) sin más purificación o caracterización.
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(vii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Una solución de Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R,S)CH(OH)C(O)OEt (6,25 g, implica 22,3 mmol; véase la etapa (vi) anterior) en 2-propanol (175 ml) y KOH al 20% (350 ml), se agitó a temperatura ambiente durante 15 h. Después se concentró la reacción parcialmente a vacío para separar la mayor parte del 2-propanol. El resto de la mezcla se acidificó con H_{2}SO_{4} 1 M, se extrajo con Et_{2}O (3 x 100 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a vacío para dar un sólido. Por cromatografía rápida en gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:MeOH:NH_{4}OH concentrado (6:3:1) se obtuvo la sal de amonio del compuesto del subtítulo. Después, la sal de amonio se disolvió en una mezcla de EtOAc (75 ml) y H_{2}O (75 ml) y se acidificó con HCl 2 N. Se separó la capa orgánica y se lavó con salmuera (50 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a vacío para obtener el compuesto del subtítulo (3,2 g, 57% a partir de las etapas (iv) a (vii)).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,38 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 6,89 (t, J_{H-F} = 71,1 Hz, 1H), 5,16 (s, 1H).
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(viii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (a) y Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(S)CH(OAc)C(O)OH (b)
Una mezcla de Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R,S)CH(OH)C(O)OH (3,2 g, 12,7 mmol; véase la etapa (vii) anterior) y Lipase PS "Amano" (\sim2,0 g) en acetato de vinilo (125 ml) y MTBE (125 ml) se calentó a reflujo durante 48 h. Se enfrió la mezcla de reacción, se filtró a través de Celite® y la torta del filtro se lavó con EtOAc. Se concentró el filtrado a vacío y se sometió a cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:MeOH:NH_{4}OH concentrado (6:3:1) dando las sales de amonio de los compuestos (a) y (b) del subtítulo. El compuesto (a) en forma de sal se disolvió en H_{2}O, se acidificó con HCl 2 N y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para obtener el compuesto (a) del subtítulo (1,2 g, 37%).
Para el compuesto (a) del subtítulo
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,38 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 6,89 (t, J_{H-F} = 71,1 Hz, 1H), 5,17 (s, 1H).
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(ix) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (1,1 g, 4,4 mmol; véase la etapa (viii) anterior) y H-Aze-Pab(Teoc) (véase la solicitud internacional de patente WO 00/42059, 2,6 g, 5,7 mmol) en DMF (50 ml) a 0ºC, se añadieron PyBOP (2,8 g, 5,3 mmol) y colidina (1,3 g, 10,6 mmol). Se agitó la reacción a 0ºC durante 2 h y después a temperatura ambiente durante 15 h adicionales. La mezcla de reacción se concentró a vacío y se trató por cromatografía rápida en gel de sílice (3 x), eluyendo primero con CHCl3:EtOH (9:1), después con EtOAc:EtOH (20:1) y finalmente eluyendo con CH_{2}Cl_{2}:CH_{3}OH (95:5) para dar el compuesto del subtítulo (1,0 g, 37%) en forma de un sólido blanco.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla de rotámeros) \delta 7,79-7,85 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,15-7,48 (m, 5H), 6,89 y 6,91 (t, J_{H-F} = 71,1 Hz, 1H), 5,12 y 5,20 (s, 1H), 4,75-4,85 (m, 1H), 3,97-4,55 (m, 6H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,15 (m, 2H), 0,09 (s, 9H).
MS (m/z) 611 (M + 1)^{+}.
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(x) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu, Teoc)
El Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,051 g, 0,08 mmol; véase la etapa (ix) anterior), se disolvió en 3 mL de acetonitrilo y se añadieron 0,062 g (0,5 mmol) de hidrocloruro de O-ciclobutilhidroxilamina. Se calentó la mezcla a 70ºC durante 4,5 h. Se evaporó el disolvente y el residuo se sometió a reparto entre agua y acetato de etilo. La fase acuosa se extrajo dos veces más con acetato de etilo y las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se evaporaron. Rendimiento: 0,054 g (95%).
^{1}H NMR (400 MHz; CD_{3}OD): \delta 8,66-8,50 (m, 1H), 7,45 (d, 2H), 7,29 (m, 3H), 7,15 (m, 2H), 6,88 (t, 1H rotámero mayor), 6,85 (t, 1H rotámero menor), 5,18 (s,1H rotámero mayor), 5,12 (s, 1H rotámero menor), 5,16 (m, 1H rotámero menor), 4,78 (m, 1H rotámero mayor), 4,70 (m, 1H), 4,50-4,30 (m, 3H), 4,19-3,93 (m, 3H), 2,71-2,44 (m, 1H), 2,34-2,11 (m, 5H), 1,78 (m, 1H), 1,62 (m, 1H), 0,96 (m, 2H), 0,01 (s, 9H).
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(xi) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu)
Se disolvió Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu, Teoc) (0,054 g, 0,08 mmol; véase la etapa (x) anterior), en 0,5 mL de CH_{2}Cl_{2} y 3 mL de TFA. Se dejó efectuar la reacción durante 60 minutos. Se evaporó el TFA y se purificó el residuo utilizando HPLC preparativa. Las fracciones de interés se reunieron y se secaron por congelación (2x), dando 23 mg (54%) del compuesto del título.
MS (m/z) 536 (M - 1)^{-}; 538 (M + 1)^{+}.
^{1}H NMR (400 MHz; CD_{3}OD): \delta 7,56 (d, 2H), 7,33 (m, 3H), 7,15 (m, 2H), 6,89 (t, 1H rotámero mayor), 6,86 (t, 1H rotámero menor), 5,18 (s, 1H rotámero mayor; y m, 1H rotámero menor), 5,11 (s, 1H rotámero menor), 4,77 (m, 1H rotámero mayor), 4,58 (m, 1H), 4,42 (m, 2H), 4,34 (m, 1H rotámero mayor), 4,15 (m, 1H rotámero mayor), 4,06 (m, 1H rotámero menor), 3,97 (m, 1H rotámero menor), 2,66 (m, 1H rotámero menor), 2,52 (m, 1H rotámero mayor), 2,33-2,25 (m, 3H), 2,01-2,20 (m, 2H), 1,75 (m, 1H), 1,59 (m, 1H) ^{13}C-NMR (100 MHz; CD_{3}OD) (carbonos de carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 172,4, 172,3, 171,9, 171,4, 152,3.
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Ejemplo 2
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH) (i) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH, Teoc)
El Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,148 g, 0,24 mmol; véase el ejemplo 1(ix) anterior), se disolvió en 9 mL de acetonitrilo y se añadieron 0,101 g (1,45 mmol) de hidrocloruro de hidroxilamina. Se calentó la mezcla a 70ºC durante 2,5 h, se filtró a través de Celite® y se evaporó. El producto crudo (0,145 g; 75% de pureza) se utilizó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional.
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(ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
El Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH, Teoc) (0,145 g, 0,23 mmol; véase la etapa (i) anterior), se disolvió en 0,5 mL de CH_{2}Cl_{2} y 9 mL de TFA. Se dejó efectuar la reacción durante 60 minutos. Se evaporó el TFA y se purificó el residuo utilizando HPLC preparativa. Las fracciones de interés se reunieron y se secaron por congelación (2x), dando 72 mg (rendimiento en las dos etapas 62%) del compuesto del título.
MS (m/z) 482 (M - 1)^{-}; 484 (M + 1)^{+}.
H-NMR (400 MHz; CD_{3}OD): \delta 7,58 (d, 2H), 7,33 (m, 3H), 7,15 (m, 2H), 6,89 (t, 1H rotámero mayor), 6,86 (t, 1H rotámero menor), 5,18 (s, 1H rotámero mayor; y m, 1H rotámero menor), 5,12 (s, 1H rotámero menor), 4,77 (m, 1H rotámero mayor),4,42 (m, 2H), 4,34 (m, 1H rotámero mayor), 4,14 (m, 1H rotámero mayor), 4,06 (m, 1H rotámero menor), 3,95 (m, 1H rotámero menor), 2,66 (m, 1H rotámero menor), 2,50 (m, 1H rotámero mayor), 2,27 (m, 1H rotámero mayor), 2,14 (m, 1H rotámero menor).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 172,4, 172,3, 172,0, 171,4 152,3, 152,1.
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Ejemplo 3
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab
El Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,045 g, 0,074 mmol; véase el ejemplo 1(ix) anterior), se disolvió en 3 mL de TFA y se dejó reaccionar durante 1 h. Se evaporó el TFA y se secó el residuo por congelación a partir de agua/acetonitrilo para dar 0,043 g (100%) del compuesto del sub-título como su sal de TFA.
^{1}H NMR (400 MHz; CD_{3}OD) rotámeros: \delta 7,8-7,75 (m, 2H), 7,55-7,5 (m, 2H), 7,35 (m, 1H, rotámero mayor), 7,31 (m, 1H, rotámero menor), 7,19 (m, 1H, rotámero mayor), 7,15 (m, 1H), 7,12 (m, 1H, rotámero menor), 6,89 (t, 1H, rotámero mayor), 6,87 (t, 1H, rotámero menor), 5,22 (m, 1H, rotámero menor), 5,20 (s, 1H, rotámero mayor), 5,13 (s, 1H, rotámero menor), 4,80 (m, 1H, rotámero mayor), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,37 (m, 1H, rotámero mayor), 4,19 (m, 1H, rotámero mayor), 4,07 (m, 1H, rotámero menor), 3,98 (m, 1H, rotámero menor), 2,70 (m, 1H, rotámero menor), 2,55 (m, 1H, rotámero mayor), 2,29 (m, 1H, rotámero mayor), 2,15 (m, 1H, rotámero menor).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 172,6, 172,5, 172,0, 171,7,
167,0.
MS (m/z) 465 (M - 1)^{-}, 467 (M + 1)^{+}.
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Ejemplo 4
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(COOcPentilo)
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (74 mg, 0,13 mmol; véase el ejemplo 3 anterior) y cloroformiato de ciclopentilo (44 mg, 0,30 mmol) en cloruro de metileno (5 mL), se añadió NaOH acuoso (0,5 mL, 2 M, 1 mmol). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente y se hizo seguimiento de la reacción con HPLC. Después de 2,5 horas, se añadió agua y se separaron las fases líquidas. La fase acuosa se extrajo dos veces con cloruro de metileno. Las fases orgánicas reunidas se secaron (MgSO_{4}) y se purificaron sobre gel de sílice (primero cloruro de metileno, después EtOAc). Después de separación de los disolventes a vacío, se disolvió el residuo sólido en agua/acetonitrilo y se secó por congelación para dar el compuesto del título como un sólido blanco. Rendimiento: 33 mg (44%).
MS (m/z) 579 (M + 1)^{+}.
^{1}H NMR (400 MHz; CD_{3}OD): \delta 7,79(d, 2H), 7,43-7,30(m, 5H), 7,20-7,11(m, 2H), 6,90(t, 1H, rotámero mayor), 6,87(t, 1H, rotámero menor), 5,19(dd, 1H, rotámero menor), 5,18(s, 1H, rotámero mayor), 5,13(m, 1H), 5,11(s, 1H, rotámero menor), 4,78(dd, 1H, rotámero mayor), 4,45(m, 2H), 4,35(m, 1H, rotámero mayor), 4,16(s, 1H, rotámero mayor), 4,06(s, 1H, rotámero menor), 3,97(s, 1H, rotámero menor), 2,68(m, 1H, rotámero menor), 2,52(s, 1H, rotámero mayor), 2,28(s, 1H, rotámero mayor), 2,16(s, 1H, rotámero menor), 1,90(m, 2H), 1,77(m, 4H), 1,61(m,
2H).
^{13}C NMR (protones de carbonilo y/o amidina; 100 MHz): \delta 173,6, 173,1, 172,6, 170,3, 165,6.
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Ejemplo 5
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)
Se preparó el compuesto del título según el procedimiento descrito en ejemplo 4 anterior partiendo de Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (73 mg, 0,13 mmol; véase el ejemplo 3 anterior) y cloroformiato de bencilo (35 mg, 0,21 mmol). Fue necesaria una purificación adicional por HPLC en fase inversa (acetato de amonio 0,1 M/MeCN 40/60). Las fracciones apropiadas se concentraron a vacío y se extrajeron con EtOAc. Rendimiento: 24 mg (32%).
MS (m/z) 602 (M + 1)^{+}.
^{1}H NMR (400 MHz; CD_{3}OD): \delta 7,80(d, 2H), 7,43-7,25(m, 8H), 7,20-7,10(m, 2H), 6,90(t, 1H, rotámero mayor), 6,88(t, 1H, rotámero menor), 5,18(dd, 1H, rotámero menor), 5,18(s, 2H), 5,17(s, 1H, rotámero), 5,11(s, 1H, rotámero), 4,78(dd, 1H, rotámero mayor), 4,45(m, 2H), 4,34(m, 1H, rotámero mayor), 4,15(s, 1H, rotámero mayor), 4,06(s, 1H, rotámero menor), 3,97(s, 1H, rotámero menor), 2,66(m, 1H, rotámero menor), 2,51(s, 1H, rotámero mayor), 2,27(s, 1H, rotámero mayor), 2,15(s, 1H, rotámero menor).
^{13}C NMR (protones de carbonilo y/o amidina; 100 MHz): \delta 173,6, 173,1, 172,6, 170,5, 164,9.
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Ejemplo 6
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) Ácido 2-nitro-5-trifluorometoxibenzoico
A una solución de ácido 3-trifluorometoxibenzoico (49,0 g, 0,24 mol) en ácido sulfúrico (500 mL) a menos de 0ºC (baño de hielo-MeOH) se añadió una solución de nitrato de potasio (31,3 g, 0,31 mol) en ácido sulfúrico (200 mL) durante 20 minutos. Se agitó la solución resultante a 0ºC durante 2 horas, después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas. Se vertió la reacción sobre hielo y la solución ácida resultante se extrajo con EtOAc (5x). Las fases orgánicas reunidas se lavaron con H_{2}O (1x), salmuera (2x), H_{2}O (1x) y salmuera (1x), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título crudo (65,7 g) como un sólido contaminado con HOAc. El compuesto del sub-título crudo se disolvió en EtOAc y tolueno y se concentró a vacío para dar un sólido libre de HOAc (58,4 g, 97%) que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 10,10 (br s, 1H), 8,02 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,69 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,54 (dd, 1H, J = 2 Hz, J = 8 Hz).
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(ii) Ácido 2-amino-5-trifluorometoxibenzoico
A una solución de ácido 2-nitro-5-trifluorometoxibenzoico (56,8 g, 0,23 mol; véase la etapa (i) anterior) en EtOH (1000 mL) se añadió Pd al 10%/C (5,7 g). Se hizo pasar H_{2} por la solución resultante durante 5 h, se filtró a través de Celite® y se concentró a vacío para dar el compuesto del sub-título crudo (49,7 g, 98%) como un sólido que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD): \delta 7,66 (m, 1H), 7,17 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,77 (d, 1H, J = 8 Hz).
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(iii) Ácido 2-amino-3-cloro-5-trifluorometoxibenzoico
A una solución de ácido 2-amino-5-trifluorometoxibenzoico (49,0 g, 0,22 mol; véase la etapa (ii) anterior) en HOAc (1200 mL), se añadió lentamente cloruro de sulfurilo (41,8 g, 0,31 mol). Se observó desprendimiento de gas. La mezcla heterogénea resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se añadió HOAc (300 mL) adicional para ayudar a la agitación, seguido por cloruro de sulfurilo en porciones de 5 mL hasta consumir el material de partida según el análisis por TLC. Se concentró la reacción a vacío para dar sólidos que fueron tratados en un evaporador rotatorio con EtOAc (2x) seguido por Et_{2}O (1x) para eliminar el HOAc. Los sólidos resultantes se secaron después para dar la sal HCl del compuesto del sub-título crudo (60,5 g, 94%), que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD): \delta 7,72 (s, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,22 (s, intercambiables).
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(iv) Ácido 3-cloro-5-trifluorometoxibenzoico
A una solución de ácido 2-amino-3-cloro-5-trifluorometoxibenzoico (60,5 g, implica 0,22 mol; véase la etapa (iii) anterior) en 1,4-dioxano (1000 mL), se añadió HCl 6 N (750 mL). Algunos compuestos orgánicos salieron de la solución como aceite. Se enfrió la solución en dioxano por debajo de 0ºC (baño de hielo-MeOH). Se añadió una solución de nitrito de sodio (18,2 g, 0,26 mol) en H_{2}O (250 mL) durante 15 minutos con un embudo de adición. La solución resultante se agitó durante 45 min. Se añadió lentamente ácido hipofosforoso (221,5 mL al 50%, en peso, en H_{2}O, 291,2 g, 2,20 mol) con un embudo de adición. Se agitó la solución a 0ºC durante 1,5 horas, después se calentó a temperatura ambiente (se observó desprendimiento de gas) y se agitó durante 18 horas. Se transfirió la solución cruda a un embudo de separación y se extrajo con Et_{2}O (4x). Los extractos orgánicos reunidos se extrajeron con NaHCO_{3} acuoso (3x). Se acidificó cuidadosamente la capa básica acuosa con HCl 6 N y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3x). Los extractos en CH_{2}Cl_{2} se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título crudo (26,5 g, 46% a partir de ácido 3-trifluorometoxibenzoico) como un sólido que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD): \delta 7,98 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,58 (s, 1H).
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(v) Alcohol 3-cloro-5-trifluorometoxibencílico
A una solución de ácido 3-cloro-5-trifluorometoxibenzoico (22,5 g, 93,5 mmol; véase la etapa (iv) anterior) en THF anhidro (1200 mL) en atmósfera de N_{2} a temperatura ambiente, se añadió una solución de complejo BH_{3}\cdotTHF (140 mL de solución 1 M en THF; 140,3 mmol). Se mantuvo a reflujo la solución durante 2 h, se enfrió a temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas, se sofocó cuidadosamente con H_{2}O y se concentró a vacío para eliminar la mayor parte del THF. Se diluyó el residuo con EtOAc y las fases orgánicas se lavaron con salmuera (3x), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título crudo (21,2 g, 100%) como un aceite que se utilizó sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,33 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,14 (s, 1H), 4,72 (s, 2H), 2,05 (br s, 1H).
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(vi) 3-Cloro-5-trifluorometoxibenzaldehído
Una solución de DMSO (16,1 g, 205,9 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (300 mL) se enfrió a -78ºC. Se añadió lentamente cloruro de oxalilo (13,1 g, 103,0 mmol) con una jeringa (se observó desprendimiento de gas). La solución resultante se agitó a -78ºC durante 15 minutos. Se añadió una solución de alcohol 3-cloro-5-trifluorometoxibencílico (21,2 g, 93,6 mmol; véase la etapa (v) anterior) en CH_{2}Cl_{2} (200 mL) con un embudo de adición a lo largo de un periodo de 15 minutos. La solución turbia se agitó a -78ºC durante 40 minutos y se añadió DIPEA (60,5 g, 468,0 mmol) con un embudo de adición durante 10 minutos. La solución homogénea resultante se agitó a -78ºC durante 1,5 horas, después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas. Se concentró la solución cruda a vacío, se diluyó el residuo con EtOAc y se lavó con H_{2}O (1x), HCl 2 N (1x), salmuera (1x), NaHCO_{3} acuoso (1x) y salmuera (1x). Se separaron las fases orgánicas, se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título crudo (19,9 g, 95%) que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 10,00 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,51 (s, 1H).
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(vii) Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R,S)CH(OTMS)CN
A una solución de 3-cloro-5-trifluorometoxibenzaldehído (19,9 g, 88,6 mmol; véase la etapa (vi) anterior) en CH_{2}Cl_{2} (600 mL) a 0ºC, se añadieron ZnI_{2} (1,4 g, 4,4 mmol) y cianuro de trimetilsililo (9,7 g, 97,5 mmol). Después de agitar a 0ºC durante 1,5 horas, y a temperatura ambiente durante 2 horas, el análisis por TLC demostró solamente el material de partida. Se añadió ZnI_{2} en porciones hasta que tuvo lugar la reacción (se añadieron en total más de 30,0 g de ZnI_{2}). Después de agitar a temperatura ambiente durante 18 h, se sofocó la reacción con agua y se separaron las capas orgánicas. Se secaron las capas orgánicas (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título crudo (27,7 g, 96%) como un líquido que se utilizó sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,43 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 5,49 (s, 1H), 0,38 (s, 9H).
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(viii) Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Una suspensión de Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R,S)CH(OTMS)CN (27,7 g, 85,6 mmol; véase la etapa (vii) anterior) en HCl concentrado (300 mL) se mantuvo a reflujo durante 3 horas. La mezcla heterogénea parda resultante se enfrió a temperatura ambiente y se extrajo con Et_{2}O (2x). Las capas orgánicas iniciales se extrajeron con NaOH 2 N (2x), después se acidificó la capa básica con HCl 2 N y se extrajo con Et_{2}O. Se secó el Et_{2}O (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar el compuesto del sub-título crudo (4,9 g, 21%). El análisis por TLC de las capas orgánicas iniciales demostró que el compuesto del sub-título estaba todavía presente por lo que se repitió la extracción básica/acidificación utilizando NaOH 6 N para dar el compuesto del sub-título crudo adicional (2,8 g, 12%). El análisis por TLC de las capas orgánicas iniciales demostró que el compuesto del sub-título estaba todavía presente por lo que las capas orgánicas se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío para dar la sal de sodio del compuesto del sub-título (18,3 g) como un aceite. Se volvió a disolver entonces la sal en Et_{2}O y las capas orgánicas se acidificaron con HCl 2 N y se lavaron con salmuera. Las capas orgánicas resultantes se secaron (Na_{2}SO_{4}), se trataron con carbón activo, se filtraron a través de Celite® y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título crudo (14,3 g, 62%) como un sólido que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD): \delta 7,53 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 5,23 (s, 1H).
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(ix) Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)OH (a) y Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(S)CH(OAc)C(O)OH (b)
Una mezcla de Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R,S)CH(OH)C(O)OH (7,7 g, 28,5 mmol; véase la etapa (viii) anterior) y Lipase PS "Amano" (3,8 g) en MTBE (100 mL) y acetato de vinilo (50 mL), se agitó a 60ºC durante 26 horas. La reacción se enfrió y se filtró a través de Celite® y la torta del filtro se lavó con EtOAc. Las fases orgánicas reunidas se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:MeOH:NH_{4}OH concentrado (6:3:1) se obtuvo una mezcla de las sales de amonio del compuesto del sub-título (a) y del compuesto del sub-título (b) (6,7 g) y una muestra pura de la sal de amonio del compuesto del sub-título (a) (1,2 g) con menos del 95% e.e. Las respectivas fracciones se disolvieron en Et_{2}O y se lavaron con HCl 2 N (1x) y salmuera (1x), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron para dar los correspondientes ácidos carboxílicos (6,7 g y 1,1 g respectivamente). Estas fracciones se sometieron entonces por separado a las condiciones de resolución y se volvieron a purificar según fue necesario por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:MeOH:NH_{4}OH concentrado (6:3:1 o 75:20:5 o 145:45:10) según necesidades. El compuesto del sub-título (a) purificado, se acidificó con HCl acuoso o con ácido cítrico acuoso antes de su uso posterior. La sal de amonio del compuesto del sub-título (b) se utilizó sin caracteriza-
ción.
Para el compuesto (a) del subtítulo
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD): \delta 7,53 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 5,23 (s, 1H).
^{13}C NMR(75 MHz, CD3OD): \delta 174,9, 150,9, 145,4, 136,3, 126,8, 122,0, 120,6, 118,9, 72,9.
MS (m/z) 269 (M – 1)^{-}.
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(x) Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
Una solución de Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)OH (0,73 g, 2,70 mmol; véase la etapa (ix) anterior) en DMF (40 mL) en atmósfera de nitrógeno se enfrió a 0ºC. Se añadieron a la solución H-Aze-Pab(Teoc) (1,46 g, 3,24 mmol), colidina (0,82 g, 6,75 mmol) y PyBOP (1,83 g, 3,51 mmol). Se agitó la solución a 0ºC durante 2 h, se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas, se sofocó con agua y se concentró a vacío. Se diluyó el residuo con EtOAc y se lavó con H_{2}O (1x), NaHCO_{3} acuoso (1x), ácido cítrico acuoso (1x) y salmuera (1x), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar el compuesto del sub-título crudo. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice (2x) eluyendo con EtOAc:MeOH (30:1) y después con CH_{2}Cl_{2}:MeOH (93:7) se obtuvo el compuesto del sub-título (0,73 g, 43%) como una espuma triturable.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros): \delta 7,78-7,82 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,25-7,54 (m, 5H), 5,25 y 5,16 (s, 1H), 5,22 y 4,79 (m, 1H), 3,92-4,58 (m, 6H), 2,20-2,76 (m, 2H), 1,04-1,13 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
MS (m/z) 629 (M + 1)^{+}.
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(xi) Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab
Se añadió ácido trifluoroacético (1,0 mL) a una solución en agitación enfriada con hielo/agua de Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (101 mg; 160 \mumol; véase la etapa (x) anterior), en cloruro de metileno (10 mL). Se separó el baño de enfriamiento después de 1 hora. Después de 1,5 horas a temperatura ambiente, se añadió acetonitrilo (30 mL) y se separaron cuidadosamente los disolventes a presión reducida. Se disolvió el residuo en agua y se secó por congelación para dar 90 mg (92%) del compuesto del título como su sal de TFA.
MS (m/z) 483 (M - 1)^{-}; 485 (M + 1)^{+}.
^{1}H NMR (300 MHz; CD_{3}OD): (complejo debido a diastereoisómeros/rotámeros): \delta 7,70-7,80 (m, 2H), 7,45-7,58 (m, 3H), 7,24-7,38 (m, 2H), 5,26 (s, 1H), 5,17 (m, 1H, rotámero menor), 4,82 (m, 1H, rotámero mayor), 4,35-4,6 (m, 3H), 4,22 (m, 1H, rotámero mayor), 3,92-4,12 (m, 2H, rotámero menor), 2,70 (m, 1H, rotámero menor), 2,55 (m, 1H, rotámero mayor), 2,30 (m, 1H, rotámero mayor), 2,16 (m, 1H, rotámero menor).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, rotámeros): \delta 173,7, 173,4, 173,0, 172,8, 168,1.
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Ejemplo 7
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
Se añadió HATU (71 mg; 0,19 mmol) a una solución en agitación enfriada con hielo/agua de Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)OH (39 mg; 0,14 mmol; véase el ejemplo 6(ix) anterior) en DMF (3 mL). Después de 30 minutos, se añadieron una solución de H-Aze-Pab(OMe) x 2HCl (69 mg; 0,21 mmol; véase la solicitud de patente internacional WO 00/42059) y 2,4,6-colidina (0,080 mL; 0,58 mmol) en DMF (1,5 mL). La mezcla de reacción se dejó en reposo durante la noche y se dejó que la temperatura subiera lentamente hasta temperatura ambiente. Se separaron los disolventes a vacío y el producto crudo se purificó utilizando HPLC en fase inversa (acetonitrilo: acetato de amonio 0,1 M acuoso) para dar, después de secar por congelación las fracciones apropiadas, el compuesto del título (61 mg, 97%) como un sólido incoloro.
MS (m/z) 513 (M - 1)^{-}, 515 (M + 1)^{+}.
^{1}H NMR (500 MHz; CD_{3}OD): \delta 7,97 (bt, 1H), 7,53 (d, 2H), 7,27 (t, 1H), 7,22 (d, 2H), 7,19 (t, 1H), 7,11 (t, 2H), 6,77 (s, 1H), 4,92 (s, 1H), 4,9 (bs, 3H), 4,81 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 4,09 (m, 1H) 3,87 (s, 3H), 2,58 (m, 1H), 2,37(m, 1H).
^{13}C NMR (125 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina): \delta 171,8, 169,9, 156,8.
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Ejemplo 8
Síntesis paralela de alcoxiamidinas
Esta síntesis se realizó en un bloque Robbins de 96 pocillos. A los pocillos que contienen una cantidad apropiada de hidroxilamina O-sustituida (especificada más adelante; todos los cuales están comercialmente disponibles o fueron preparados utilizando procedimientos de la bibliografía bien conocidos) se añadió una solución de Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (10 mg; 17 \mumol; véase el ejemplo 6(x) anterior) en acetonitrilo (1,0 mL). El bloque se selló y la mezcla de reacción se hizo rotar durante toda la noche en una estufa a 60ºC. Después de enfriar y filtrar, los sólidos se lavaron con acetonitrilo (3 x 0,3 mL). Las fracciones líquidas reunidas se concentraron en una centrífuga de vacío. El residuo se sometió a reparto entre agua (0,4 mL) y acetato de etilo (0,4 mL). Cuando se hubo acabado la extracción líquido-líquido, se filtró todo a través de una columna de Hydromatrix^{TM}. Después de lavar tres veces con acetato de etilo, los filtrados reunidos se concentraron en una centrífuga de vacío. La desprotección se realizó por adición de cloruro de metileno (0,1 mL) y ácido trifluoroacético (0,3 mL). Después de agitar a temperatura ambiente durante 3 horas se separaron los disolventes a vacío. El residuo se sometió a reparto entre hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (0,5 mL) y acetato de etilo (0,5 mL). Después de extracción, filtración a través de Hydromatrix^{TM} y concentración (vide infra) se disolvió el residuo en isopropanol/agua (7/3) (1 mL). Se separó aproximadamente el 2% de esta solución y se diluyó con isopropanol/agua (7/3) (1 mL) para análisis por LC-MS. Después de la separación de los disolventes a vacío el residuo sólido se transfirió a una placa de 96 pocillos usando acetonitrilo y acetato de etilo para disolver el compuesto. Los disolventes se evaporaron en una centrífuga de vacío para dar los siguientes compuestos de los títulos:
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH_{2}-3-(5-Me-isoxazol)) (a partir de 3-[(aminooxi)metil]-5-metilisoxazol x HCl (18 mg; 0,11 mmol)). Rendimiento: 3,64 mg (35%) (MS (m/z) 596 (M + 1)^{+});
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH_{2}-3-piridina) (a partir de 3-[(aminooxi)metil]piridina x 2 HCl (19 mg; 96 \mumol). Rendimiento: 5,14 mg (50%) (MS (m/z) 592 (M + 1)^{+});
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiBu) (a partir de O-isobutil-hidroxilamina x HCl (17 mg; 140 \mumol). Rendimiento: 4,4 mg (45%). MS (m/z) 557 (M + 1)^{+});
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt) (a partir de O-etil-hidroxilamina x HCl (14 mg; 140 \mumol). Rendimiento: 4,04 mg (42%). MS (m/z) 529 (M+1)^{+});
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn) (a partir de O-bencilhidroxilamina x HCl (17 mg; 110 \mumol). Rendimiento: 3,22 mg (29%). MS (m/z) 591 (M + 1)^{+});
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcHexil) (a partir de O-ciclohexil-hidroxilamina x HCl (15 mg; 99 \mumol). Rendimiento: 2,9 mg (26%). MS (m/z) 583 (M + 1)^{+});
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu) (a partir de O-ciclobutil-hidroxilamina x HCl (17 mg; 140 \mumol). Rendimiento: 3,3 mg (30%). MS (m/z) 555 (M + 1)^{+});
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH_{2}CH_{2}OPh(3-CF_{3})) (a partir de O-[2-[3-(trifluorometil)fenoxi]etil]hidroxilamina x HCl (24 mg; 93 \mumol). Rendimiento: 6,52 mg (46%). MS (m/z) 689 (M+1)^{+});
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Cl)) (a partir de O-(4-clorobencil)hidroxilamina x HCl (16 mg; 82 \mumol). Rendimiento: 3,47 mg (29%). MS (m/z) 625 (M + 1)^{+});
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(3-MeO)) (a partir de O-(3-metoxibencil)hidroxilamina x HCl (18 mg; 94 \mumol). Rendimiento: 4,33 mg (36%). MS (m/z) 621 (M+1)^{+});
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(2-Br)) (a partir de O-(2-bromobencil)hidroxilamina x HCl (23 mg; 96 \mumol). Rendimiento: 3,87 mg (30%). MS (m/z) 671 (M + 1)^{+});
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Me)) (a partir de O-(4-metilbencil)hidroxilamina x HCl (14 mg; 81 \mumol). Rendimiento: 2,91 mg (25%). MS (m/z) 605 (M + 1)^{+}); y
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-4-heptil) (a partir de O-(4-heptil)hidroxilamina x HCl (15 mg; 89 \mumol). Rendimiento: 17 mg (100%). MS (m/z) 599 (M + 1)^{+}).
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Ejemplo 9
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(S)CH(CH_{2}OH)C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Ácido 3-cloro-5-metoxibenzoico
Se pre-trataron virutas de magnesio (Fluka purum para reacciones de Grignard) de la siguiente manera: Se pusieron las virutas en un embudo de vidrio sinterizado y se vertió sobre ellas ácido clorhídrico 0,1 M. Se agitaron las virutas con una varilla de vidrio durante unos segundos y después se lavó el ácido con 3 porciones de agua. Finalmente, se lavaron las virutas con 2 porciones de acetona y se pusieron en frascos. Se secó tetrahidrofurano (100 mL, 99,95%) añadiendo RedAl (1 g, 70% en peso, en tolueno). Las virutas de magnesio pretratadas (5 g, 200 mmol) se pusieron en un matraz de fondo redondo, y se pasó a su través una corriente de nitrógeno 3 veces. Se disolvió dicloroanisol (26 g, 146 mmol) en THF (100 mL, RedAl-seco) y se añadió dibromoetano (1,8 g, 10 mmol). Se pasó nitrógeno a través de la mezcla de reacción y después se mantuvo a reflujo durante 2 horas. Se interrumpió la calefacción y se añadió hielo seco (10 g) en porciones durante 2 minutos. Cuando se disolvió todo el hielo seco, se vertió la mezcla de reacción sobre hielo que contenía ácido clorhídrico (400 mL, 2 M). El tratamiento de extracción (éter, 300 mL) dio 11,2 g, 60,2 mmol (rendimiento: 41%) del compuesto del sub-título.
^{1}H NMR (500 MHz; acetona-d_{6}): \delta 7,57 (m, 1H), 7,49 (m, 1H), 7,23 (m, 1H), 3,91 (s, 3H).
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(ii) Ácido 3-cloro-5-hidroxibenzoico
Se mantuvieron a reflujo en tolueno (200 mL) durante 2 horas, alúmina (1,65 g, 60 mmol) y yodo (21 g, 82 mmol). Después se añadió ácido 3-cloro-5-metoxibenzoico (11,2 g, 60,2 mmol; véase la etapa (i) anterior) disuelto en tolueno (50 mL), junto con yoduro de tetrabutilamonio (1,5 g, 4 mmol), y se mantuvo la mezcla a reflujo durante otras 2 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, el tratamiento de extracción dio 8,7 g, 50 mmol (rendimiento: 83%) del compuesto del sub-título.
^{1}H NMR (300 MHz; acetona-d_{6}): \delta 9,2,7 (s, 1H), 7,48 (m, 1H), 7,44 (m, 1H), 7,11 (m, 1H).
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(iii) Ácido 3-cloro-5-difluorometoxibenzoico
Se transfirió ácido 3-cloro-5-hidroxibenzoico (6,4 g, 37,2 mmol; véase la etapa (ii) anterior) disuelto en cloroformo (200 mL) a un matraz de 500 mL de fondo redondo, de tres bocas provisto de un condensador de hielo seco y un tubo de entrada de gas. Se añadió hidróxido de sodio (100 mL, 5 M) con agitación vigorosa. Se añadió clorodifluorometano (Freon 22; 25 g, 290 mmol) en porciones a través del tubo de entrada de gas a temperatura ambiente. Después de 2 horas, la reacción fue completa. La extracción dio 6,2 g, 28 mmol (rendimiento: 75%) del compuesto del sub-
título.
^{1}H NMR (500 MHz; acetona-d_{6}): \delta 7,87 (m, 1H), 7,74 (m, 1H), 7,54 (m, 1H), 7,19 (t, 1H, J_{H-F} 73 Hz).
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(iv) 3-Cloro-5-difluorometoxi-N-metoxi-N-metilbenzamida
Se disolvieron ácido 3-cloro-5-difluorometoxibenzoico (1,8 g, 8 mmol; véase la etapa (iii) anterior) y cloruro de oxalilo (1,5 g,11,8 mmol) en cloruro de metileno (50 mL). Se añadió DMF (2 gotas) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después, se añadieron N,O-dimetilhidroxilamina (1 g, 10,2 mmol) y trietilamina (3 g, 30 mmol) y después de otros 10 minutos de agitación a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. Se recogió el residuo en éter (100 mL) y agua (50 mL). Después de separación, la fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se cromatografió este residuo sobre sílice (hexano/acetato de etilo 2:1) lo que dio 2 g, 7,5 mmol (93%) del compuesto del sub-
título.
^{1}H NMR (400 MHz; CDCl_{3}): \delta 7,54 (m, 1H), 7,37 (m, 1H), 7,27 (m, 1H), 6,53 (t, 1H, J_{H-F} 73 Hz).
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(v) 3-Cloro-5-difluorometoxiacetofenona
Se disolvió 3-cloro-5-difluorometoxi-N-metoxi-N-metilbenzamida (2 g, 7,5 mmol; véase la etapa (iv) anterior) en éter (100 mL) y se enfrió bajo nitrógeno a -70ºC. Se añadió metillitio (7 mL, 11 mmol, 1,6 M en éter) gota a gota con una jeringa a la mezcla de reacción en agitación durante 1 minuto. Se retiró el baño de hielo seco y se dejó que la mezcla alcanzara la temperatura ambiente antes de que la reacción fuera sofocada con solución de cloruro de amonio (50 mL, NH_{4}Cl al 5% en agua). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre sílice (hexano:acetato de etilo 2:1) lo que dio 1,5 g, 6,8 mmol (rendimiento: 90%) del compuesto del sub-título.
^{1}H NMR (600 MHz; CDCl_{3}): \delta 7,77 (m, 1H), 7,59 (m, 1H), 7,35 (m, 1H), 6,56 (t, 1H, J_{H-F} 73 Hz), 2,60 (s,
3H).
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(vi) Éster metílico del ácido 3-cloro-5-difluorometoxifenilacético
Se disolvió 3-cloro-5-difluorometoxiacetofenona (1,5 g, 6,8 mmol; véase la etapa (v) anterior) en cloruro de metileno (200 mL). Se añadió nitrato de talio(III) x 3MeOH sobre montmorillonita K-10 (6 g, 10 mmol (aproximadamente 0,6 mmol/g); véase J. Am. Chem. Soc., 98, 6750 (1976)) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 20 horas. Se filtró la mezcla y se lavó el filtrado con bicarbonato de sodio (100 mL, 0,5 M), se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre sílice (hexano/acetato de etilo 2:1) lo que dio 1 g, 4 mmol (rendimiento: 56%) del compuesto del sub-título.
^{1}H NMR (500 MHz; CDCl_{3}): \delta 7,14 (m, 1H), 7,06 (m, 1H), 6,96 (m, 1H), 6,50 (t, 1H, J_{H-F} 73 Hz), 3,72 (s, 3H), 3,60 (s,1H).
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(vii) Éster metílico del ácido \alpha-formil(3-cloro-5-difluorometoxifenil)acético
Se disolvieron éster metílico del ácido 3-cloro-5-difluorometoxifenilacético (1 g, 4 mmol; véase la etapa (vi) anterior) y formiato de metilo (1 g, 16 mmol) en éter (100 mL) y se enfrió en un baño de hielo (aproximadamente 2ºC). Después, se añadieron sodio finamente cortado (180 mg, 7,8 mmol) y metanol (1 mL) y se dejó la mezcla en el baño de hielo con agitación durante la noche. Se añadió agua (100 mL) cuidadosamente y se separaron las fases. La fase que contiene el agua se acidificó con ácido clorhídrico (2 M) hasta pH 1 y se extrajo con éter (2 x 100 mL). Se secó el extracto sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. Se cromatografió el residuo sobre sílice (hexano:acetato de etilo (1:1)) lo que dio 400 mg, 1,4 mmol (rendimiento: 36%) del compuesto del sub-
título.
^{1}H-NMR (400 MHz): \delta 12,10 (d, 1H), 7,32 (d, 1H), 7,11 (m, 1H), 7,07 (m, 1H), 6,94 (m, 1H), 6,51 (t, 1H, J_{F-H} 73), 3,83 (s, 3H).
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(viii) Ácido 3-cloro-5-difluorometoxitrópico
Se disolvió éster metílico del ácido \alpha-formil(3-cloro-5-difluorometoxifenil)acético (400 mg, 1,4 mmol; véase la etapa (vii) anterior) en THF:metanol (50 mL, 9:1). Se añadió borohidruro de sodio y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadió agua y la mezcla se concentró para producir una suspensión acuosa, que se recogió en acetato de etilo y agua. Se separaron las fases y la fase orgánica se lavó con cloruro de sodio (al 15% en agua), se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. Se disolvió el residuo en metanol (30 mL) y se hidrolizó con hidróxido de sodio (1 mL, 10 M) a temperatura ambiente durante 10 minutos. La extracción dio 180 mg, 0,68 mmol (rendimiento: 48%) del compuesto del sub-título.
^{1}H NMR (500 MHz; CDCl_{3}): \delta 7,18 (m, 1H), 7,10 (m, 1H), 7,00 (m. 1H), 6,50 (t, 1H, J_{F-H} 73), 4,11 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 3,84 (m, 1H).
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(ix) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(S)(CH_{2}OH)C(O)-Aze-Pab x HOAc
Se disolvieron ácido 3-cloro-5-difluorometoxitrópico (180 mg, 0,7 mmol; véase la etapa (viii) anterior), H-Aze-Pab(Teoc) x HCl (450 mg, 1 mmol) y PyBOP (530 mg, 1 mmol) en DMF (10 mL), y después se añadió DIPEA (550 mg, 3,9 mmol). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 h antes de lo cual se diluyó con salmuera (20 mL, NaCl al 15%) y se extrajo con acetato de etilo (40 mL). Se secó el extracto sobre sulfato de sodio, se filtró y se evaporó a sequedad. Se disolvió el residuo en cloruro de metileno (5 mL) y se añadió ácido trifluoroacético (5 mL). Después de 1 h a temperatura ambiente, se evaporó a sequedad la mezcla de diastereoisómeros y el residuo se cromatografió sobre una columna de fase inversa (acetonitrilo:agua (30:70), tampón: acetato de amonio 0,1 M). Mediante secado por congelación se obtuvieron 36 mg, 0,067 mmol (rendimiento: 10,4%) del compuesto del título.
MS (ES) 481 (M + 1)^{+}.
^{1}H NMR (400 MHz; CDCl_{3}): \delta 7,77 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,30 (m, 1H), 7,13 (m, 2H), 6,87 (t, 1H, J_{F-H} 73 Hz), 4,76 (m, 1H), 4,55 (s, 2H); 4,37 (m, 1H), 4,03 (m, 2H), 3,82 (m, 1H), 3,72 (m, 1H), 2,53 (m, 1H), 2,28 (m, 1H), 1,92 (s, 1,5H) ^{13}C-NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina) \delta 172,3, 171,9, 167,2.
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Ejemplo 10
Ph(3-Cl)(S-OCF_{3})-(S)CH(CH_{2}OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) Mesilato de 3-cloro-5-trifluorometoxibencilo
A una solución de alcohol 3-cloro-5-trifluorometoxibencílico (6,1 g, 26,9 mmol; véase el ejemplo 6(v) anterior) en CH_{2}Cl_{2} (250 mL) a 0ºC en atmósfera de nitrógeno se añadieron DIPEA (4,2 g, 32,3 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (3,4 g, 29,6 mmol). La solución se agitó a 0ºC durante 1,5 horas y se sofocó con H_{2}O. Se separaron las fases orgánicas y después se lavaron con H_{2}O (1x), HCl 1 N (1x), H_{2}O (1x) y NaHCO_{3} acuoso (1x) y después se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron para dar el compuesto del sub-título (8,2 g, 99%) como un aceite.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,37 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,18 (s, 1H) 5,23 (s, 2H), 3,07 (s, 3H).
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(ii) Cianuro de 3-cloro-5-trifluorometoxibencilo
A una solución de mesilato de 3-cloro-5-trifluorometoxibencilo (8,2 g, 26,8 mmol; véase la etapa (i) anterior) en DMSO (50 mL), se añadió cianuro de sodio (2,6 g, 53,6 mmol). La solución heterogénea resultante se calentó a 50ºC y se sonicó durante 1 hora. Se enfrió la reacción y se sometió a reparto entre Et_{2}O y H_{2}O. Se lavaron las fases orgánicas con H_{2}O (2x) y salmuera (2x). Las fases acuosas reunidas se extrajeron con Et_{2}O (1x). Se secaron las fases orgánicas reunidas (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron con calor suave y vacío parcial para obtener el compuesto del sub-título (6,3 g, 100%) como un aceite volátil rojizo que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,32 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,12 (s, 1H), 3,78 (s, 2H).
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(iii) Ácido 3-cloro-5-trifluorometoxifenilacético
A una solución de cianuro de 3-cloro-5-trifluorometoxibencilo (6,3 g, 26,7 mmol; véase la etapa (ii) anterior) en 2-propanol (100 mL) se añadieron agua (200 mL) e hidróxido de potasio (7,5 g, 133,5 mmol). Se mantuvo a reflujo la solución durante 18 h, se enfrió a temperatura ambiente, y se separó el 2-propanol a vacío. Se lavó la fase acuosa con CH_{2}Cl_{2} (2x) y se desecharon los lavados. La fase acuosa básica se acidificó con HCl 2 N y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3x). Los extractos de CH_{2}Cl_{2} se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (5,2 g, 76%) como un aceite que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,25 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 3,68 (s, 2H).
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(iv) 3-Cloro-5-trifluorometoxifenilacetato de etilo
A una solución de ácido 3-cloro-5-trifluorometoxifenilacético (5,2 g, 20,4 mmol; véase la etapa (iii) anterior) en EtOH (600 mL), se añadió ácido sulfúrico (varias gotas). Se mantuvo a reflujo la solución durante 18 h, se enfrió a temperatura ambiente, se neutralizó con NaHCO_{3} sólido y el EtOH se separó a vacío. Se diluyó el residuo con EtOAc después se lavó con H_{2}O (1x), NaHCO_{3} acuoso (1x) y salmuera (1x). Se secaron las fases orgánicas (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (5,5 g, 96%) como un aceite que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,24 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 4,13-4,22 (q, J = 8 Hz, 2H), 3,63 (s, 2H), 1,24-1,32 (t, J = 8 Hz, 3H).
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(v) Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R,S)CH(CHO)C(O)OEt
A una solución de 3-cloro-5-trifluorometoxifenilacetato de etilo (4,5 g, 15,9 mmol; véase la etapa (iv) anterior) en THF anhidro (400 mL) en una atmósfera de nitrógeno a menos de 0ºC (baño de hielo-MeOH) se añadió etóxido de sodio (4,5 g, 63,6 mmol). Se agitó la solución fría durante 40 minutos y se añadió formiato de etilo (8,1 g, 111,3 mmol). Se agitó la solución a 0ºC durante 30 minutos, se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas. Después, el THF se separó a vacío. Se diluyó el residuo con Et_{2}O y se extrajo con H_{2}O (1x) y NaOH 0,5 M (3x). Los extractos acuosos se acidificaron con HCl 2 N y se extrajeron con CH_{2}Cl_{2} (3x). Las fases orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título crudo (3,9 g). Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (4: 1) se obtuvo el compuesto del sub-título (3,0 g, 61%) como un aceite.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}, mezcla de isómeros): \delta 12,30 y 12,25 (s, 1H), 7,39 y 7,34 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 4,27-4,37 (q, J = 8 Hz, 2H), 1,28-1,38 (t, J = 8 Hz, 3H).
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(vi) Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R,S)CH(CH_{2}OH)C(O)OEt
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R,S)CH(CHO)C(O)OEt (3,0 g, 9,66 mmol; véase la etapa (v) anterior) en MeOH (200 mL) a -10ºC (baño de hielo-MeOH), se añadió borohidruro de sodio (0,7 g, 19,32 mmol) en porciones a lo largo de 5 min. Se agitó la solución a -10ºC durante 45 minutos y se añadió borohidruro de sodio (0,4 g) adicional. Después de otros 15 minutos, se sofocó la reacción con cloruro de amonio acuoso, se acidificó suavemente con HCl 2 N y se separó el MeOH a vacío. Se diluyó el residuo con EtOAc y se lavó con H_{2}O (1x), NaHCO_{3} acuoso (1x) y salmuera (1x). Las fases orgánicas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para obtener el compuesto del sub-título crudo. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (5:1) se obtuvo el compuesto del sub-título (2,0 g, 66%) como un aceite.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,26 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 4,16-4,28 (m, 2H), 4,04-4,15 (m, 1H), 3,76-3,94 (m, 2H), 2,33 (t, J = 6 Hz, 1H), 1,18-1,30 (t, J = 8 Hz, 3H).
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(vii) Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R,S)CH(CH_{2}OH)C(O)OH
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R,S)CH(CH_{2}OH)C(O)OEt (2,0 g, 6,24 mmol; véase la etapa (vi) anterior) en THF (50 mL) y H_{2}O (25 mL), se añadió hidróxido de litio monohidrato (0,5 g, 12,48 mmol). Se agitó la solución a temperatura ambiente durante 1 hora y el THF se separó a vacío. Se diluyó el residuo con H_{2}O después se lavó con CHCl_{3} (2x) y se desecharon los lavados. Se acidificó la capa acuosa básica con HCl 2 N y se extrajo con CHCl_{3} (4x). Los extractos en CHCl_{3} se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título crudo (1,5 g) como un aceite. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:MeOH:NH_{4}OH concentrado (gradiente a partir de 7,0:2,5:0,5 a 6:3:1) se obtuvo la sal de amonio del compuesto del sub-título (1,1 g). La sal de amonio se sometió a reparto entre HCl 1 N y CHCl_{3}. Las fases orgánicas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (conocido también como ácido 3-cloro-5-trifluorometoxitrópico) como un aceite (1,1 g, 62%).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD):\delta 7,41 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 4,03 (m, 1H), 3,75-3,87 (m, 2H).
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(viii) Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(S)CH(CH_{2}OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (a) y Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(CH_{2}OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (b)
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R,S)CH(CH_{2}OH)C(O)OH (0,65 g, 2,28 mmol; véase la etapa (vii) anterior) en DMF a menos de 0ºC (baño de hielo-MeOH), se añadieron H-Aze-Pab(Teoc) (0,90 g, 2,39 mmol), colidina (0,71 g, 5,70 mmol) y PyBOP (1,31 g, 2,51 mmol). La solución resultante se agitó a menos de 0ºC durante 1 h, se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. La DMF se separó después a vacío. Se diluyó el residuo con EtOAc y se lavó con HCl acuoso diluido (1x), salmuera (1x), NaHCO_{3} acuoso (1x) y salmuera (1x). Las fases orgánicas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título crudo (2,1 g) como una mezcla de diastereoisómeros. Por cromatografía rápida (3x) sobre gel de sílice eluyendo en primer lugar con EtOAc:MeOH (95:5) después con CH_{2}Cl_{2}:MeOH (97:3) y finalmente con CH_{2}Cl_{2}:MeOH (95:5) se obtuvieron los compuestos del sub-título diastereoisómero (a) (0,51 g, 35%) y diastereoisómero (b) (0,45 g, 31%) como espumas triturables.
Para el diastereoisómero (a) del compuesto del sub-título
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,79-7,85 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,22-7,49 (m, 5H), 5,17-4,77 (m, 1H), 4,53-4,18 (m, 4H), 3,58-4,11 (m, 5H), 2,47-2,73 (m, 1H), 2,11-2,34 (m, 1H), 1,08-1,12 (m, 2H), 0,07 (s, 9H).
MS (m/z) 643 (M + 1)^{+}.
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(ix) Ph(3-Cl)7(5-OCF_{3})-(S)CH(CH_{2}OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Se disolvió el Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(S)CH(CH_{2}OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc), (78 mg, 0,121 mmol; véase la etapa (viii) anterior - diastereoisómero (a)), en 5 mL de ácido trifluoroacético. Después de 10 minutos, se completó la reacción y se evaporó el disolvente. Se secó el residuo por congelación a partir de agua y acetonitrilo para dar el producto deseado. Rendimiento: 70 mg (94%).
MS (m/z) 483 (M - 1)^{-}; 485 (M + 1)^{+}.
^{1}H NMR (400 MHz; D_{2}O) rotámeros 1:1: \delta 8,83 (bt, 1H), 7,79 (d, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,54 (d, 1H), 7,43 (d, 2H), 7,35 (m, 1H, rotámero), 7,28 (m, 1H, rotámero), 7,20 (m, 1H, rotámero), 7,05 (m, 1H, rotámero), 5,22 (m, 1H, rotámero), 4,83 (m, 1H, rotámero), 4,57 (m, 2H, rotámero), 4,38 (m, 2H, rotámero), 4,3-3,7 (m, 5H), 2,77 (m, 1H, rotámero), 2,55 (m, 1H, rotámero), 2,27 (m, 1H).
^{13}C NMR (100 MHz; D_{2}O): (carbonos de carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 172,9, 172,2, 172,0, 171,8, 166,9.
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Ejemplo 11
Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(S)CH(CH_{2}OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) (i) Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(S)CH(CH_{2}OH)C(O)-Aze-Pab(OMe, Teoc)
Se disolvió el Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(S)CH(CH_{2}OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (100 mg, 0,155 mmol; véase el ejemplo 10(viii) anterior), en 12 mL de tetrahidrofurano. Se añadió hidrocloruro de O-metil-hidroxilamina (44 mg, 0,53 mmol), y se calentó la reacción a 50ºC durante la noche. Se evaporó la mezcla de reacción y el residuo se purificó por HPLC preparativa (CH_{3}CN/NH_{4}OAc 0,1 M (70/30)). Se evaporaron las fracciones pertinentes y el residuo se disolvió en una pequeña cantidad de acetonitrilo y agua y se secó por congelación. El secado por congelación se repitió una vez. Rendimiento: 80 mg (76%) de material puro.
^{1}H NMR (400 MHz; CD_{3}OD) rotámeros: \delta 7,5-7,4 (m, 3H), 7,35-7,2 (m, 4H), 5,15 (m, 1H, rotámero menor), 4,74 (m, 1H, rotámero mayor), 4,5-4,25 (m, 3H), 4,2-3,95 (m, 4H), 3,91 (b, 3H), 3,9-3,6 (m, 2H), 2,63 (m, 1H, rotámero menor), 2,50 (m, 1H, rotámero mayor), 2,3-2,1 (m, 1H), 0,95 (m, 2H), 0,02 (s, 9H, rotámero mayor), 0,01 (s, 9H, rotámero menor).
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(ii) Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(S)CH(CH_{2}OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
Se disolvió Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(S)CH(CH_{2}OH)C(O)-Aze-Pab(OMe, Teoc), (80 mg, 0,12 mmol; véase la etapa (i) anterior), en 1 mL de cloruro de metileno y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió ácido trifluoroacético, 3 mL, y se mantuvo el matraz de reacción en el baño de hielo durante dos horas. Se evaporó la mezcla y se disolvió en acetato de etilo y se lavó tres veces con NaHCO_{3} (acuoso) y después con agua y salmuera. Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se evaporó. Se secó el residuo por congelación a partir de una pequeña cantidad de acetonitrilo y agua. Rendimiento: 60 mg (95%) del producto del título puro.
MS (m/z) 528 (M - 1)^{-}; 531 (M + 1)^{+}.
^{1}H NMR (500 MHz; CD_{3}OD) rotámeros: \delta 7,65-7,55 (m, 3H, rotámeros), 7,45 (m, 1H, rotámero mayor), 7,4-7,2 (m, 4H), 5,15 (m, 1H, rotámero menor), 4,74 (m, 1H, rotámero mayor), 4,5-4,3 (m, 3H), 4,05-3,95 (m, 2H), 3,85 (m, 1H, rotámero mayor), 3,82 (s, 3H, rotámero mayor), 3,81 (s, 3H, rotámero menor), 3,73 (m, 1H, rotámero mayor), 3,67 (m, 1H, rotámero menor), 3,62 (m, 1H, rotámero menor), 2,63 (m, 1H, rotámero menor), 2,50 (m, 1H, rotámero mayor), 2,24 (m, 1H, rotámero mayor), 2,16 (m, 1H, rotámero menor).
^{13}C NMR (125 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 174,0, 173,2, 172,7, 172,6, 155,1.
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Ejemplo 12
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) (i) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe, Teoc)
El Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,40 g, 0,65 mmol; véase el ejemplo 1(ix) anterior), se disolvió en 20 mL de acetonitrilo y se añadieron 0,50 g (6,0 mmol) de hidrocloruro de O-metil-hidroxilamina. La mezcla se calentó a 70ºC durante 2 h. Se evaporó el disolvente y el residuo se sometió a reparto entre agua y acetato de etilo. La fase acuosa se extrajo dos veces más con acetato de etilo y las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se evaporaron. Rendimiento: 0,41 g (91%).
^{1}H NMR (400 MHz; CDCl_{3}): \delta 7,83 (t ancho, 1H), 7,57 (s ancho, 1H), 7,47 (d, 2H), 7,30 (d, 2H), 7,20 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,01 (m, 1H), 6,53 (t, 1H), 4,89 (s, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,47 (m, 2H), 4,4-4,2 (b, 1H), 4,17-4,1 (m, 3H), 3,95 (s, 3H), 3,67 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 2,42 (m,1H) 0,97 (m, 2H), 0,01 (s, 9H).
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(ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
El Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe, Teoc) (0,40 g, 0,62 mmol; véase la etapa (i) anterior), se disolvió en 5 mL de TFA y se dejó reaccionar durante 30 min. Se evaporó el TFA y el residuo se sometió a reparto entre acetato de etilo y NaHCO_{3} (acuoso). La fase acuosa se extrajo dos veces más con acetato de etilo y las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se evaporaron. El producto se secó por congelación en agua/acetonitrilo. No fue necesaria la purificación. Rendimiento: 0,28 g (85%).
^{1}H NMR (600 MHz; CDCl_{3}): \delta 7,89 (t ancho, 1H), 7,57 (d, 2H), 7,28 (d, 2H), 7,18 (m, 1H), 7,13 (m, 1H), 6,99 (m, 1H), 6,51 (t, 1H), 4,88 (s, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,80 (s ancho, 2H), 4,48 (dd, 1H), 4,43 (dd, 1H), 4,10 (m, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,68 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 2,40 (m, 1H).
^{13}C NMR (125 MHz; CDCl_{3}): (carbonos de carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 172,9, 170,8, 152,7, 152,6.
MS (m/z) 495 (M - 1)^{-}, 497 (M + 1)^{+}.
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Ejemplo 13
Ph(3-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x HOAc
Se disolvió Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) (13 mg, 0,026 mmol; véase el ejemplo 12 anterior) en etanol absoluto (5 mL) y se añadieron 30 mg de Pd al 10%/C. Finalmente se añadió ácido acético (5 \muL) y la mezcla se hidrogenó a presión atmosférica durante 20 h. Se filtró la mezcla a través de Celite®, se evaporó, y se purificó por HPLC en fase inversa (acetato de amonio 0,1 M acuoso/MeCN). Las fracciones apropiadas se secaron por congelación para dar el compuesto del título como un sólido blanco: 8,5 mg (66%).
^{1}H NMR (400 MHz; CD_{3}OD) rotámeros: \delta 7,73-7,78 (m, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,19-7,43 (m, 3H), 7,06-7,13 (m, 1H), 6,83 (t, 1H, J_{HF} = 74Hz, rotámero mayor), 6,81 (t, 1H, rotámero mayor), 5,20 (s, 1H, rotámero mayor), 5,19 (m, 1H, rotámero menor), 5,15 (s, 1H, rotámero menor), 4,78 (m, 1H, rotámero mayor), 4,4-4,6 (varios picos, 2H), 4,35 (m, 1H, rotámero mayor), 4,08 (m, 1H), 3,99 (m, 1H, rotámero menor), 2,70 (m, 1H, rotámero menor), 2,52 (m, 1H, rotámero mayor), 2,30 (m, 1H, rotámero mayor), 2,15 (m, 1H, rotámero menor), 1,89 (s, 3H).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 173,7, 172,9, 168,3.
MS (m/z) 433 (M+1)^{+}; 431 (M-1)^{-}.
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Ejemplo 14
Ph(3-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Se disolvió Ph(3-Cl)(5-OCF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (34 mg, 0,057 mmol, a partir del ejemplo 6) en 5 mL de etanol y se añadieron 20 mg de Pd al 10%/C. Se hidrogenó la mezcla a presión atmosférica durante la noche. Se filtró la mezcla a través de Celite®, se evaporó, y se secó por congelación a partir de agua/acetonitrilo.
^{1}H NMR (400 MHz; CD_{3}OD) rotámeros: \delta 7,8-7,7 (m, 2H), 7,55 (m, 2H), 7,5-7,2 (m, 4H), 5,24 (s, 1H, rotámero mayor), 5,23 (m, 1H, rotámero menor), 5,18 (s, 1H, rotámero menor), 4,77 (m, 1H, rotámero mayor), 4,6-4,45 (m, 2H), 4,36 (m, 1H, rotámero mayor), 4,08 (m, 1H), 3,99 (m, 1H, rotámero menor), 2,70 (m, 1H, rotámero menor), 2,52 (m, 1H, rotámero mayor), 2,30 (m, 1H, rotámero mayor), 2,15 (m, 1H, rotámero menor).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 174,1, 173,9, 173,5, 172,9, 168,2.
^{19}-F NMR (282 MHz; CD_{3}OD): -59,8 y -59,9 (3F, rotámero menor y mayor respectivamente), -77,4 (3F) indica que la sal es de TFA.
MS(m/z) 451,3 (M+1)^{+}.
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Ejemplo 15
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) 3-Cloro-5-trifluoroetoxibenzaldehído
A una solución agitada magnéticamente de 3-cloro-5-hidroxibenzaldehído (2,0 g, 12,8 mmol; véase el ejemplo 1(ii) anterior) y carbonato de potasio (2,3 g, 16,6 mmol) en DMF (35 mL) bajo nitrógeno se añadió p-toluenosulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo (4,2 g, 16,6 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se calentó a 110ºC durante 7 h y después se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Se enfrió la reacción a 0ºC, se vertió sobre HCl 2 N enfriado en hielo (100 mL) y se extrajo con EtOAc (2 x 75 mL). Los extractos orgánicos reunidos se lavaron con HCl 0,5 N (2 x 50 mL), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron, y se concentraron a vacío. El aceite pardo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (6: 1) para dar el compuesto del sub-título (1,9 g, 61%) como un aceite
amarillo.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,44 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 4,42 (q, J = 8 Hz, 2H).
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(ii) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CF_{3})-(R,S)CH(OTMS)C
A una solución de 3-cloro-5-trifluoroetoxibenzaldehído (5,2 g, 21,7 mmol; véase la etapa (i) anterior) y yoduro de cinc (1,7 g, 5,4 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (200 mL) bajo nitrógeno, se añadió cianuro de trimetilsililo (4,3 g, 43,3 mmol) gota a gota con una jeringa a 0ºC. Se agitó la mezcla a 0ºC durante 3 h y después se diluyó con H_{2}O (150 mL). Se separó la capa orgánica, se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró, y se concentró a vacío para obtener el compuesto del sub-título (6,9 g, 95%) como un aceite amarillo que se utilizó sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,27 (s, 1H), 6,98 (s, 2H), 5,44 (s, 1H), 4,38 (q, J = 8 Hz, 2H), 0,30 (s, 9 H).
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(iii) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CF_{3})-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Se añadió ácido clorhídrico concentrado (170 mL) a Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CF_{3})-(R,S)CH(OTMS)CN (6,9 g, 20,4 mmol; véase la etapa (ii) anterior) y se agitó a 100ºC durante 1 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, se enfrió además la reacción a 0ºC y se alcalinizó lentamente con NaOH 3 N (300 mL). Se lavó esta mezcla con Et_{2}O (2 x 100 mL) y la capa acuosa se acidificó con HCl 2 N (50 mL). Se extrajo después la capa acuosa con EtOAc (2 x 100 mL), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró, y se concentró a vacío para dar el compuesto del sub-título (5,3 g, 92%) como un aceite amarillo pálido que se utilizó sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,18 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 5,13 (s, 1H), 4,58 (q, J = 8 Hz, 2H).
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(iv) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CF_{3})-(R)CH(OH)C(O)OH (a) y Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CF_{3})-(S)CH(OAc)C(O)OH (b)
Una solución de Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (7,06 g, 24,8 mmol; véase la etapa (iii) anterior) y Lipase PS "Amano" (4,30 g) en acetato de vinilo (250 mL) y MTBE (250 mL), se calentó a 70ºC bajo nitrógeno durante 40 h. Se enfrió la reacción a temperatura ambiente, se separó la enzima por filtración lavando con EtOAc, y el filtrado se concentró a vacío. Por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:MeOH:Et_{3}N (92:6:2) se obtuvo la sal de trietilamina del compuesto del sub-título (a) (3,02 g) como un aceite amarillo. La sal del compuesto del sub-título (a) se disolvió en H_{2}O (150 mL), se acidificó con HCl 2 N y se extrajo con EtOAc (2 x 75 mL). Los extractos orgánicos reunidos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron, y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (a) (2,18 g) como un sólido casi blanco.
En adición, la sal de trietilamina del compuesto del sub-título (b) (4,73 g) se obtuvo a partir de la cromatografía en columna mencionada antes.
Datos para el compuesto del sub-título (a):
Pf: 98-103ºC.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,18 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 5,13 (s, 1H), 4,58 (q, J = 8 Hz, 2H).
^{13}C NMR (75 MHz, CD_{3}OD) \delta 175,4, 159,6, 144,6, 136,2, 125,0 (q, J = 277 Hz), 121,8, 115,9, 113,1, 73,3, 67,0 (q, J = 35 Hz).
Análisis por HPLC: 98,6%, >99% ee, columna Chiralcel OD (fase móvil Hex:EtOH:TFA 97:3:0,5).
[\alpha]^{25}_{D} = -81,5º (c = 1,0, MeOH).
APCI-MS: (M - 1) = 283 m/z.
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(v) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CF_{3})-(R)CH(OH)C(O)OH (0,50 g, 1,8 mmol; véase la etapa (iv) anterior (compuesto (a))) en DMF (20 mL) bajo nitrógeno, se añadieron H-Aze-Pab(Teoc) x HCl (1,03 g, 2,3 mmol), PyBOP (1,01 g, 1,9 mmol), y DIPEA (0,57 g, 4,4 mmol) a 0ºC. Se agitó la reacción a 0ºC durante 2 h y después a temperatura ambiente durante 20 h. Se concentró la mezcla a vacío y el residuo se cromatografió dos veces sobre gel de sílice, eluyendo en primer lugar con CHCl_{3}:EtOH (10:1) y después con EtOAc:EtOH (10:1) para dar el compuesto del sub-título (0,55 g, 48%) como una espuma blanca triturable.
Pf: 90-95ºC.
R_{f} = 0,42 (CHCl_{3}:EtOH 10:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,78-7,81 (m, 2H), 7,38-7,41 (m, 2H), 7,12-7,16 (m, 1H), 7,00-7,06 (m, 2H), 5,09-5,22 y 4,75-4,79 (m, 2H), 3,94-4,61 (m, 8H), 2,09-2,75 (m, 2H), 1,04-1,11 (m, 2H), 0,70 (s, 9H).
APCI-MS: (M + 1) = 643 m/z.
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(vi) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Se disolvió Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,066 g, 0,103 mmol; véase la etapa (v) anterior) en 3 mL de TFA y se dejó reaccionar durante 30 min. Se evaporó el TFA y el residuo se secó por congelación a partir de agua/acetonitrilo para dar 0,060 g (94%) del compuesto del título como su sal de TFA.
^{1}H NMR (400 MHz; CD_{3}OD) rotámeros: \delta 7,8-7,7 (m, 2H), 7,6-7,5 (m, 2H), 7,2-7,0 (m, 3H), 5,21 (m, 1H, rotámero menor), 5,17 (s, 1H, rotámero mayor), 5,11 (s, 1H, rotámero menor), 4,81 (m, 1H, rotámero mayor), 4,6-4,4 (m, 4H), 4,37 (m, 1H, rotámero mayor), 4,16 (m, 1H, rotámero mayor); 4,06 (m, 1H, rotámero menor), 3,99 (m, 1H, rotámero menor), 2,70, (m, 1H, rotámero menor), 2,54 (m, 1H, rotámero mayor), 2,29 (m, 1H, rotámero mayor), 2,15 (m, 1H, rotámero menor).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 172,2, 171,8, 171,7, 167,0.
MS(m/z) 499,3 (M+1)^{+}.
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Ejemplo 16
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CF_{3})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CF_{3})-(R)CH(OH)C(O)OH (0,48 g, 1,7 mmol; véase el ejemplo 15(iv) anterior (compuesto (a)) en DMF (20 mL) bajo nitrógeno, se añadieron H-Aze-Pab(OMe) x 2HCl (0,74 g, 2,2 mmol), PyBOP (0,97 g, 1,9 mmol), y DIPEA (0,55 g, 4,2 mmol) a 0ºC. Se agitó la reacción a 0ºC durante 2 h y después a temperatura ambiente durante 20 h. Se concentró la mezcla a vacío y el residuo se cromatografió dos veces sobre gel de sílice, eluyendo en primer lugar con CHCl_{3}:EtOH (10:1) y en segundo lugar con EtOAc:EtOH (10:1) para dar el compuesto del título (0,62 g, 69%) como una espuma blanca triturable.
Pf: 75-80ºC.
R_{f} = 0,43 (CHCl_{3}:EtOH 10:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,57-7,60 (m, 2H), 7,32-7,36 (m, 2H), 7,13-7,17 (m, 1H), 7,00-7,06 (m, 2H), 5,09-5,19 y 4,74-4,80 (m, 2H), 3,93-4,62 (m, 6H), 3,81 (s, 3H), 2,10-2,73 (m, 2H).
APCI-MS: (M + 1) = 529 m/z.
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Ejemplo 17
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) Éster de 2,2-difluoroetilo y ácido metanosulfónico
A una solución agitada magnéticamente de 2,2-difluoroetanol (1,52 g, 18,5 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 mL) bajo nitrógeno se añadió trietilamina (5,61 g, 55,5 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (2,54 g, 22,2 mmol) a 0ºC. Se agitó la mezcla a 0ºC durante 1,5 h, se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (50 mL), y se lavó con HCl 2 N (50 mL). Se extrajo la capa acuosa con CH_{2}Cl_{2} (30 mL) y los extractos orgánicos reunidos se lavaron con salmuera (30 mL), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron, y se concentraron a vacío para obtener el compuesto del sub-título (2,52 g, 85%) como un aceite amarillo que se utilizó sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,02 (tt, J = 3 Hz, J = 55 Hz, 1H), 4,39 (dt, J = 3 Hz, J = 13 Hz, 2H), 3,13 (s, 3H).
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(ii) 3-Cloro-5-difluoroetoxibenzaldehído
A una solución de 3-cloro-5-hidroxibenzaldehído (1,50 g, 9,6 mmol; véase el ejemplo 1(ii) anterior) y carbonato de potasio (1,72 g, 12,5 mmol) en DMF (10 mL) bajo nitrógeno, se añadió una solución de éster de 2,2-difluoroetilo y ácido metanosulfónico (2,0 g, 12,5 mmol; véase la etapa (i) anterior) en DMF (10 ml), gota a gota a temperatura ambiente. La mezcla se calentó a 100ºC durante 6 h y después se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Se enfrió la reacción a 0ºC, se vertió sobre HCl 2 N enfriado en hielo (100 mL), y se extrajo con EtOAc (2 x 75 mL). Los extractos orgánicos reunidos se lavaron con HCl 0,5 N (2 x 50 mL), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron, y se concentraron a vacío. El aceite pardo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (5:1) para dar el compuesto del sub-título (1,35 g, 64%) como un aceite amarillo.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,92 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 6,12 (tt, J = 3 Hz, J = 55 Hz, 1H), 4,26 (dt, J = 3 Hz, J = 15 Hz, 2H).
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(iii) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R,S)CH(OTMS)CN
A una solución de 3-cloro-5-difluoroetoxibenzaldehído (1,35 g, 6,1 mmol; véase la etapa (ii) anterior) y yoduro de cinc (0,48 g, 1,5 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (50 ml), se añadió cianuro de trimetilsililo (1,21 g, 12,2 mmol) gota a gota a 0ºC en atmósfera de nitrógeno. Se agitó la mezcla a 0ºC durante 3 h, después se diluyó con H_{2}O (50 mL). Se separó la capa orgánica, se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró, y se concentró a vacío para dar el compuesto del sub-título (1,85 g, 95%) como un aceite pardo que se utilizó sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,13 (s, 1H), 6,94 (s, 2H), 6,10 (tt, J = 3 Hz, J = 55 Hz, 1H), 5,43 (s, 1H), 4,20 (dt, J = 3 Hz, J = 15 Hz, 2H), 0,28 (s, 9H).
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(iv) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Se añadió ácido clorhídrico concentrado (60 mL) a Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R,S)CH(OTMS)CN (1,85 g, 5,8 mmol; véase la etapa (iii) anterior) y se agitó a 100ºC durante 1 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la reacción se continuó enfriando hasta 0ºC, se alcalinizó lentamente con NaOH 3 N (\sim180 mL) y se lavó con Et_{2}O (2 x 75 mL). Se acidificó la capa acuosa con HCl 2 N (20 mL) y se extrajo con EtOAc (2 x 75 mL). Los extractos orgánicos reunidos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron, y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (1,50 g, 97%) como un sólido amarillo pálido que se utilizó sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,15 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 6,19 (tt, J = 4 Hz, J = 55 Hz, 1H), 5,12 (s, 1H), 4,25 (dt, J = 4 Hz, J = 17 Hz, 2H).
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(v) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(S)CH(OAc)C(O)OH (a) y Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (b)
Una solución de Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R,S)CH(OH)C(O)OH (3,90 g, 14,6 mmol; véase la etapa (iv) anterior) y Lipase PS "Amano" (2,50 g) en acetato de vinilo (140 mL) y MTBE (140 mL), se calentó a 70ºC bajo nitrógeno durante 40 h. Se enfrió la reacción a temperatura ambiente, se separó la enzima mediante lavado por filtración con EtOAc, y el filtrado se concentró a vacío. Por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:MeOH:Et_{3}N (92:6:2) se obtuvo la sal de trietilamina del compuesto del sub-título (a) como un aceite amarillo. En adición, se obtuvo la sal de trietilamina del compuesto del sub-título (b) (1,47 g) y se disolvió la sal en H_{2}O (100 mL), se acidificó con HCl 2 N y se extrajo con EtOAc (2 x 75 mL). Los extractos orgánicos reunidos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron, y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (b) (1,00 g) como un sólido casi blanco.
Datos para el compuesto del sub-título (b):
Pf: 103-106ºC.
R_{f} = 0,39 (CHCl_{3}:MeOH:Et_{3}N 90:8:2).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,13 (s, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,97 (s, 1H), 6,17 (tt, J = 4 Hz, J = 55 Hz, 1H), 5,12 (s, 1H), 4,24 (dt, J = 4 Hz, J = 8 Hz, 2H).
^{13}C NMR (75 MHz, CD_{3}OD) \delta 175,5, 160,3, 144,5, 136,1, 121,3, 115,7, 115,3, (t, J = 240 Hz), 112,9, 73,4, 68,6 (t, J = 29 Hz).
Análisis por HPLC: 96,2%, >95,0% ee, columna ChiralPak AD (fase móvil Hex:EtOH:TFA 95:5:0,5).
[\alpha]^{25}_{D} = -84,0º (c = 0,85 MeOH).
APCI-MS: (M - 1) = 265 m/z.
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(vi) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (0,35 g, 1,3 mmol; véase la etapa (v) anterior (compuesto (b))) en DMF (18 mL) bajo nitrógeno, se añadieron H-Aze-Pab(Teoc) x HCl (0,76 g, 1,7 mmol), PyBOP (0,75 g, 1,4 mmol), y DIPEA (0,43 g, 3,3 mmol) a 0ºC. Se agitó la reacción a 0ºC durante 2 h y después a temperatura ambiente durante 20 h. Se concentró la mezcla a vacío y el residuo se cromatografió dos veces sobre gel de sílice, eluyendo en primer lugar con CHCl_{3}:EtOH (10:1), y después con EtOAc:EtOH (10:1) para dar el compuesto del sub-título (0,69 g, 84%) como una espuma blanca triturable.
Pf: 108-118ºC.
R_{f} = 0,48 (CHCl_{3}:EtOH 10:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,78-7,81 (m, 2H), 7,40-7,43 (m, 2H), 7,09-7,12 (m, 1H), 6,96-7,02 (m, 2H), 6,16 (t, J = 57 Hz, 1H), 5,09-5,20 y 4,75-4,80 (m, 2H), 3,95-4,55 (m, 8H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,04-1,11 (m, 2H), 0,07 (s, 9H).
APCI-MS: (M + 1) = 625 m/z.
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(vii) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Se disolvió Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,086 g, 0,138 mmol; véase la etapa (vi) anterior), en 3 mL de TFA y se dejó reaccionar durante 1 h. Se evaporó el TFA y el residuo se secó por congelación a partir de agua/acetonitrilo para dar 0,080 g (98%) del compuesto del título como su sal de TFA.
^{1}H NMR (300 MHz; CD_{3}OD) rotámeros: \delta 7,8-7,7 (m, 2H), 7,6-7,5 (m, 2H), 7,15-6,95 (m, 3H), 6,35-5,95 (m, 1H), 5,20 (m, 1H, rotámero menor), 5,14 (s, 1H, rotámero mayor), 5,10 (s, 1H, rotámero menor), 4,80 (m, 1H, rotámero mayor), 4,6-4,0 (m, 6H), 2,70 (m, 1H, rotámero menor), 2,53 (m, 1H, rotámero mayor), 2,29 (m, 1H, rotámero mayor), 2,15 (m, 1H, rotámero menor).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 174,0, 173,8, 173,4, 172,9, 168,2.
MS(m/z) 481,2 (M+1)^{+}.
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Ejemplo 18
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (0,30 g, 1,7 mmol; véase el ejemplo 17(v) anterior (compuesto (b))) en DMF (15 mL) bajo nitrógeno, se añadieron H-Aze-Pab(OMe) x 2HCl (0,49 g, 1,5 mmol), PyBOP (0,65 g, 1,2 mmol), y DIPEA (0,36 g, 2,8 mmol) a 0ºC. Se agitó la reacción a 0ºC durante 2 h y después a temperatura ambiente durante 20 h. Se concentró la mezcla a vacío y el residuo se cromatografió tres veces sobre gel de sílice, eluyendo en primer lugar con CHCl_{3}:EtOH (10:1), después con EtOAc:EtOH (10:1), y finalmente con CHCl_{3}:MeOH (20:1) para dar el compuesto del título (0,47 g, 81%) como una espuma blanca triturable.
Pf: 65-75ºC.
R_{f}= 0,37 (CHCl_{3}:EtOH 10:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,58-7,60 (m, 2H), 7,32-7,35 (m, 2H), 7,09-7,12 (m, 1H), 6,96-7,02 (m, 2H), 6,16 (t, J = 55 Hz, 1H), 5,08-5,18 y 4,74-4,80 (m, 2H), 3,96-4,50 (m, 6H), 3,80 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H).
APCI-MS: (M + 1) = 511 m/z.
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Ejemplo 19
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) Ph(3-Cl)(5-TMSO)-(R,S)CH(OTMS)CN
A una solución de 3-cloro-5-hidroxibenzaldehído (9,8 g, 62,6 mmol; véase el ejemplo 1(ii) anterior) y ZnI_{2} (5,0 g, 15,7 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (500 mL) a 0ºC, se añadió cianuro de trimetilsililo (13,7 g, 138 mmol). Se dejó calentar la mezcla de reacción hasta la temperatura ambiente y se agitó durante una noche. Se añadió agua (250 mL), y se separaron las capas. Se extrajo la capa acuosa con CH_{2}Cl_{2} (2 x 300 mL). Los extractos orgánicos reunidos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron, y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (16,9 g, 83%) como un aceite amarillo que se utilizó sin purificación adicional.
R_{f}= 0,42 (3:1 Hex:EtOAc).
^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,06 (s, 1H), 6,86 (s, 2H), 5,40 (s, 1H), 0,30 (s, 9 H), 0,24 (s, 9 H).
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(ii) Ph(3-Cl)(5-OH)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Una solución de Ph(3-Cl)(5-OTMS)-(R,S)CH(OTMS)CN (22,6 g, 68,8 mmol; véase la etapa (i) anterior) en HCl concentrado (200 mL) se mantuvo a reflujo bajo nitrógeno durante 3 h. Se enfrió la reacción a 0ºC y se alcalinizó lentamente con NaOH 2 N. Se lavó la mezcla con Et_{2}O (3 x 100 mL) para eliminar las impurezas orgánicas. Se acidificó la capa acuosa con HCl 2 N y se extrajo con EtOAc (3 x 200 mL). Los extractos orgánicos reunidos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron, y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (9,3 g, 67%) como un aceite pardo que se utilizó sin purificación adicional.
R_{f}= 0,23 (CHCl_{3}:MeOH:NH_{4}OH concentrado 6:3:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,05 (s, 1H), 6,94 (s, 1H), 6,73 (s, 1H), 5,03 (s, 1H).
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(iii) Ph(3-Cl)(5-OH)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OH)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (9,3 g, 46,0 mmol; véase la etapa (ii) anterior) en EtOH absoluto (200 mL) se añadió ácido sulfúrico concentrado (0,25 mL) y se mantuvo a reflujo la reacción bajo nitrógeno durante 4 h. Se enfrió la reacción a 0ºC y se añadió NaHCO_{3} sólido (0,2 g). Se concentró la reacción a vacío y se sometió a reparto con NaHCO_{3} saturado (100 mL) y Et_{2}O (3 x 50 mL). Los extractos orgánicos reunidos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron, y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (6,9 g, 65%) como un aceite amarillo que se utilizó sin purificación adicional.
R_{f}= 0,.62 (CHCl_{3}:MeOH:NH_{4}OH concentrado 6:3:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,99 (s, 1H), 6,81 (s, 2H), 5,07 (s, 1H), 4,16-4,32 (m, 2H), 1,23 (t, J = 7 Hz, 3H).
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(iv) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}F)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OH)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt (6,1 g, 26,8 mmol; véase la etapa (iii) anterior) en DMF (100 mL) en un matraz sellado bajo nitrógeno a 0ºC, se añadió carbonato de cesio (13,1 g, 40,2 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a 0ºC durante 15 minutos seguido por la adición de yoduro de potasio (0,5 g, 2,7 mmol). Se enfrió la reacción a -78ºC y se hizo burbujear clorofluorometano (18,4 g, 268 mmol) por el recipiente. El matraz sellado se dejó calentar después a temperatura ambiente y se agitó durante 18 h. Se enfrió la mezcla de reacción a 0ºC, se venteó cuidadosamente para eliminar todo exceso de clorofluorometano, y se sometió a reparto con H_{2}O (20 mL) y Et_{2}O (3 x 50 mL). Las fases orgánicas reunidas se lavaron con salmuera (2 x 50 mL), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (gradiente a partir de 9:1 hasta 3:1) se obtuvo el compuesto del sub-título (2,4 g, 35%) como un aceite amarillo claro. Nota: El compuesto es débilmente visible al UV en la TLC. Se puede visualizar tiñendo la TLC con verde de bromocresol.
R_{f} = 0,46 (Hex:EtOAc 2:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,21 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 5,70 (d, J_{H-F} = 54 Hz, 2H), 5,12 (d, J = 5 Hz, 1H), 3,80-4,35 (m, 2H), 3,50 (d, J = 5 Hz, 1H), 1,26 (t, J = 7 Hz, 3H).
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(v) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}F)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}F)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt (1,8 g, 6,8 mmol; véase la etapa (iv) anterior) en H_{2}O:THF (30 mL, 1:2) a 0ºC bajo nitrógeno, se añadió hidróxido de litio monohidrato (0,40 g, 10,3 mmol). Se agitó la mezcla a 0ºC durante 2 h. Se concentró la mezcla de reacción a vacío y se sometió a reparto con H_{2}O (5 mL) y Et_{2}O (2 x 20 mL). Se acidificó la capa acuosa cuidadosamente con HCl 0,2 N a 0ºC y se extrajo con EtOAc (3 x 30 mL). Las fases orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (1,4 g, 87%) como un aceite incoloro que se solidificó por reposo hasta un sólido blanco.
R_{f}= 0,43 (CHCl_{3}:MeOH:Et_{3}N 6:2:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,24 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 5,78 (d, J_{H-F} = 54 Hz, 2H), 5,13 (s, 1H).
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(vi) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)OH (a) y Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}F)-(S)CH(OAc)C(O)OH (b)
Una mezcla de Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}F)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (3,2 g, 13,9 mmol; véase la etapa (v) anterior) y Lipase PS "Amano" (1,9 g) en acetato de vinilo (150 mL) y MTBE (150 mL), se calentó a 70ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 3 días. Se enfrió la mezcla de reacción, se filtró a través de Celite® y la torta del filtro se lavó con EtOAc. Se concentró el filtrado a vacío y se sometió a cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:MeOH:Et_{3}N (15:1:0,5) para dar la sal de trietilamina del compuesto del sub-título (a) (0,50 g, 21%) que se utilizó sin neutralización. En adición, se obtuvo la sal de trietilamina del compuesto del sub-título (b) (0,46 g, 20%).
Datos para el compuesto del sub-título (a):
R_{f}= 0,19 (CHCl_{3}:MeOH:Et_{3}N 15:1:0,5).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,26 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 6,97 (s, 1H), 5,74 (d, J_{H-F} = 54 Hz, 2H), 4,81 (s, 1H), 3,17 (q, J = 7 Hz, 6H), 1,28 (t, J = 7 Hz, 9H).
Data para el compuesto del sub-título (b)
R_{f} = 0,33 (CHCl_{3}:MeOH:Et_{3}N 15:1:0,5).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,28 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 5,76 (d, J_{H-F} = 54 Hz, 2H), 5,75 (s, 1H), 3,17 (q, J = 7 Hz, 6H), 2,16 (s, 3H), 1,28 (t, J = 7 Hz, 9H).
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(vii) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
A una solución de la sal de trietilamina de Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,50 g, 1,50 mmol; véase la etapa (vi) anterior) y HAze-Pab(Teoc)\cdotHCl (0,87 g, 1,90 mmol) en DMF seca (15 mL) bajo nitrógeno a 0ºC, se añadieron PyBOP (0,85 g, 2,60 mmol) y DIPEA (0,48 g, 3,70 mmol). Se dejó que la reacción se calentara a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se concentró la mezcla de reacción a vacío y se sometió dos veces a cromatografía rápida sobre gel de sílice, eluyendo en primer lugar con CHCl_{3}:EtOH (9:1) y en segundo lugar con EtOAc:EtOH (20:1) para dar el compuesto del sub-título (0,23 g, 26%) como una espuma blanca triturable.
Pf: 88-92ºC.
R_{f}= 0,61 (CHCl_{3}:EtOH 9:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,81 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,40-7,42 (m, 2H), 7,06-7,23 (m, 3H), 5,76 (d, J_{H-F} = 51 Hz, 2H), 5,10-5,16 y 4,77-4,83 (m, 2H), 3,80-4,49 (m, 6H), 2,30-2,53 (m, 2H), 1,08 (t, J = 7 Hz, 2H), 0,08(s, 9H).
APCI-MS (M + 1) = 593 m/z.
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(viii) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Se disolvió Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,051 1 g, 0,086 mmol; véase la etapa (vii) anterior), en 3 mL de TFA y se dejó reaccionar durante 20 min. Se evaporó el TFA y el residuo se secó por congelación a partir de agua/acetonitrilo. El producto tenía una pureza del 95% con 5% de material desfluorometilado. Los intentos para purificarlo con RPLC preparativa con CH_{3}CN:NH_{4}OAc 0,1 M fallaron, y el material, parcialmente como acetato, se disolvió en 5 mL de TFA, se evaporó y se secó por congelación para dar 26 mg (51%) del compuesto del título como su sal de TFA. Pureza: 95%.
^{1}H NMR (600 MHz; CD_{3}OD) rotámeros: \delta 7,8-7,7 (m, 2H), 7,6-7,5 (m, 2H), 7,21 (s, 1H, rotámero mayor), 7,17 (s, 1H, rotámero menor), 7,13 (s, 1H, rotámero mayor), 7,09 (s, 1H, rotámero menor), 7,07 (m, 1H, rotámero mayor), 7,04 (m, 1H, rotámero menor), 5,73 (d, 2H), 5,18 (m, 1H, rotámero menor), 5,16 (s, 1H, rotámero mayor), 5,09 (s, 1H, rotámero menor), 4,78 (m, 1H, rotámero menor), 4,56 (d, 1H, rotámero mayor), 4,50 (d, 1H, rotámero menor), 4,46 (d, 1H, rotámero menor), 4,45 (d, 1H, rotámero mayor), 4,35 (m, 1H, rotámero mayor), 4,14 (m, 1H, rotámero mayor), 4,05 (m, 1H, rotámero menor), 3,97 (m, 1H, rotámero menor), 2,68 (m, 1H, rotámero menor), 2,52 (m, 1H, rotámero mayor), 2,28 (m, 1H, rotámero mayor), 2,19 (m, 1H, rotámero menor).
^{13}C NMR (150 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 173,9, 173,3, 172,9, 168,2.
ESI-MS+: (M+1) = 449 (m/z).
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Ejemplo 20
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
A una solución de la sal de trietilamina de Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,60 g, 1,80 mmol; véase el ejemplo 19(vi)) y HAze-Pab(OMe)\cdot2HCl (0,79 g, 2,30 mmol) en DMF (15 mL) bajo nitrógeno a 0ºC, se añadieron PyBOP (1,04 g, 1,90 mmol) y DIPEA (0,58 g, 4,50 mmol). Se dejó que la reacción se calentara a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se concentró la mezcla de reacción a vacío y se sometió a cromatografía rápida tres veces sobre gel de sílice, eluyendo en primer lugar con CHCl_{3}:EtOH (9:1) y después dos veces con EtOAc:EtOH (20:1) para dar el compuesto del título (0,22 g, 26%) como una espuma blanca triturable.
Pf: 66-70ºC.
R_{f} = 0,45 (CHCl_{3}:EtOH 9:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,59. (d, J = 8 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 7 Hz, 2H), 7,06-7,23 (m, 3H), 5,75 (s, J_{H-F} = 54 Hz, 1H), 5,10-5,16 y 4,78-4,84 (m, 2H), 4,11-4,45 (m, 4H), 3,80 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H).
^{13}C NMR (150 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 173,0, 170,8, 170,7, 152,5.
APCI-MS:(M + 1) = 479 m/z.
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Ejemplo 21
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) Metanosulfonato de 2-monofluoroetilo
A una solución agitada magnéticamente, de 2-fluoroetanol (5,0 g, 78,0 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (90 mL) en atmósfera de nitrógeno a 0ºC, se añadieron trietilamina (23,7 g, 234 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (10,7 g, 93,7 mmol). La mezcla se agitó a 0ºC durante 1,5 h, se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (100 ml) y se lavó con HCl 2 N (100 ml). La capa acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (50 ml) y los extractos orgánicos reunidos se lavaron con salmuera (75 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para proporcionar el compuesto del subtítulo (9,7 g, 88%) en forma de un aceite amarillo que se usó sin más purificación.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 4,76 (t, J = 4 Hz, 1H), 4,64 (t, J= 4 Hz, 1H), 4,52 (t, J = 4 Hz, 1H), 4,43 (t, J = 4 Hz, 1H), 3,09 (s, 3H).
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(ii) 3-Cloro-5-monofluoroetoxibenzaldehído
A una solución de 3-cloro-5-hidroxibenzaldehído (8,2 g, 52,5 mmol, véase el ejemplo 1(ii) anterior) y carbonato de potasio (9,4 g, 68,2 mmol) en DMF (10 mL) bajo nitrógeno, se añadió una solución de metanosulfonato de (2-monofluoroetilo) (9,7 g, 68,2 mmol; véase la etapa (i) anterior) en DMF (120 ml) gota a gota a temperatura ambiente. La mezcla se calentó a 100ºC durante 5 h y después se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La reacción se enfrió a 0ºC, se vertió sobre HCl 2 N enfriado con hielo y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos reunidos se lavaron con salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite marrón se cromatografió en gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (4:1) para obtener el compuesto del subtítulo (7,6 g, 71%) en forma de un aceite amarillo.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,92 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 4,87 (t, J = 4 Hz, 1H), 4,71 (t, J = 3 Hz, 1H), 4,33 (t, J = 3 Hz, 1H), 4,24 (t, J = 3 Hz, 1H).
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(iii) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R,S)CH(OTMS)CN
A una solución de 3-cloro-5-monofluoroetoxibenzaldehído (7,6 g, 37,5 mmol; véase la etapa (ii) anterior) y yoduro de cinc (3,0 g, 9,38 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (310 ml) se añadió cianuro de trimetilsililo (7,4 g, 75,0 mmol) gota a gota a 0ºC en atmósfera de nitrógeno. La mezcla se agitó a 0ºC durante 3 h y a temperatura ambiente durante una noche. La reacción se diluyó con H_{2}O (300 ml), la capa orgánica se separó, se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar el compuesto del subtítulo (10,6 g, 94%) en forma de un aceite marrón que se usó sin más purificación o caracterización.
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(iv) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Se añadió ácido clorhídrico concentrado (100 ml) al Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R,S)CH(OTMS)CN (10,6 g, 5,8 mmol; véase la etapa (iii) anterior) y la solución se agitó a 100ºC durante 3 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la reacción se enfrió más a 0ºC, se hizo básica lentamente con NaOH 3 N (\sim300 ml) y se lavó con Et_{2}O (3 x 200 ml). La capa acuosa se acidificó con HCl 2 N (80 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 300 ml). Los extractos de EtOAc reunidos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del subtítulo (8,6 g, 98%) en forma de un sólido amarillo pálido que se usó sin más purificación.
R_{f} = 0,28 (CHCl_{3}:MeOH:NH_{4}OH concentrado 90:8:2).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,09 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,93 (s, 1H), 5,11 (s, 1H), 4,77-4,81 (m, 1H), 4,62-4,65 (m, 1H), 4,25-4,28 (m, 1H), 4,15-4,18 (m, 1H).
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(v) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(S)CH(OAc)C(O)OH (a) y Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)OH (b)
Una solución de Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (8,6 g, 34,5 mmol; véase la etapa (iv) anterior) y Lipase PS "Amano" (4,0 g) en acetato de vinilo (250 ml) y MTBE (250 mL), se calentó a 70ºC en atmósfera de nitrógeno durante 3 días. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y la enzima se separó por filtración a través de Celite®. La torta del filtro se lavó con EtOAc y el filtrado se concentró a vacío. Por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:MeOH:Et_{3}N (90:8:2) se obtuvo la sal de trietilamina del compuesto del sub-subtítulo (a) como un aceite amarillo. Además, se obtuvo la sal de trietilamina del compuesto (b) del subtítulo (4,0 g). La sal del compuesto (b) del subtítulo se disolvió en H_{2}O (250 ml), se acidificó con HCl 2 N y se extrajo con EtOAc (3 x 200 ml). Los extractos orgánicos reunidos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto (b) del subtítulo (2,8 g, 32%) en forma de un aceite amarillo.
Datos para el compuesto (b) del subtítulo:
R_{f} = 0,28 (CHCl_{3}:MeOH:NH_{4}OH concentrado 90:8:2).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,09 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,93 (s, 1H), 5,11 (s, 1H), 4,77-4,81 (m, 1H), 4,62-4,65 (m, 1H), 4,25-4,28 (m, 1H), 4,15-4,18 (m, 1H).
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(vi) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)OH (940 mg, 3,78 mmol; véase la etapa (v) anterior) en DMF (30 mL) bajo nitrógeno a 0ºC, se añadieron HAze-Pab(Teoc)\cdotHCl (2,21 g, 4,91 mmol), PyBOP (2,16 g, 4,15 mmol), y DIPEA (1,22 g, 9,45 mmol). Se agitó la reacción a 0ºC durante 2 h y después a temperatura ambiente durante 4 h. Se concentró la mezcla a vacío y se cromatografió el residuo dos veces sobre gel de sílice, eluyendo en primer lugar con CHCl_{3}:EtOH (15:1) y en segundo lugar con EtOAc:EtOH (20:1) para dar el compuesto del sub-título (450 mg, 20%) como una espuma blanca triturable.
Pf: 80-88ºC.
R_{f} = 0,60 (CHCl_{3}:EtOH 10:1).
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^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,79 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,05-7,08 (m, 1H), 6,93-6,99 (m, 2H), 5,08-5,13 (m, 1H), 4,75-4,80 (m, 2H), 4,60-4,68 (m, 1H), 3,95-4,55 (m, 8H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H). APCI-MS: (M + 1) = 607 m/z.
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(vii) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Se disolvió Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,357 g, 0,589 mmol; véase la etapa (vi) anterior), en 10 mL de TFA y se dejó reaccionar durante 40 min. Se evaporó el TFA y el residuo se secó por congelación a partir de agua/acetonitrilo para dar 0,33 g (93%) del compuesto del título como su sal de TFA.
^{1}H NMR (600 MHz; CD_{3}OD) rotámeros: \delta 7,8-7,7 (m, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,08 (s, 1H, rotámero mayor), 7,04 (s, 1H, rotámero menor), 6,99 (s, 1H, rotámero mayor), 6,95 (s, 1H), 6,92 (s, 1H, rotámero menor), 5,18 (m, 1H, rotámero menor), 5,14 (s, 1H, rotámero mayor), 5,08 (s, 1H, rotámero menor), 4,80 (m, 1H, rotámero mayor), 4,73 (m, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,35 (m, 1H, rotámero mayor), 4,21 (doblete de multipletes, 2H), 4,12 (m, 1H, rotámero mayor), 4,06 (m, 1H, rotámero menor), 3,99 (m, 1H, rotámero menor), 2,69 (m, 1H, rotámero menor), 2,53 (m, 1H, rotámero mayor), 2,29 (m, 1H, rotámero mayor), 2,14 (m, 1H, rotámero menor).
^{13}C NMR (150 MHz; CD_{3}OD): (átomos de carbono de carbonilo y/o amidina) \delta 172,8, 172,1, 167,4.
ESI-MS+: (M+1) = 463 (m/z).
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Ejemplo 22
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)OH (818 mg, 3,29 mmol; véase el ejemplo 21(v) anterior) en DMF (30 mL) bajo nitrógeno a 0ºC, se añadieron HAze-Pab(OMe)\cdot2HCl (1,43 g, 4,27 mmol), PyBOP (1,89 g, 3,68 mmol), y DIPEA (1,06 g, 8,23 mmol). Se agitó la reacción a 0ºC durante 2 h y después a temperatura ambiente durante una noche. Se concentró la mezcla a vacío y se cromatografió el residuo dos veces sobre gel de sílice, eluyendo en primer lugar con CHCl_{3}:EtOH (15:1) y en segundo lugar con EtOAc:EtOH (20:1) para dar el compuesto del título (880 mg, 54%) como una espuma blanca triturable.
Pf: 65-72ºC.
R_{f} = 0,60 (CHCl_{3}:EtOH 10:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,58-7,60 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 7 Hz, 2H), 7,05-7,08 (m, 2H), 6,95-6,99 (m, 1H), 5,08-5,13 (m, 1H), 4,77-4,82 (m, 1H), 4,60-4,68 (m, 1H), 3,99-4,51 (m, 7H), 3,82 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H).
^{13}C NMR (150 MHz; CD_{3}OD): (átomos de carbono de carbonilo y/o amidina) \delta 173,3, 170,8, 152,5.
APCI-MS: (M + 1) = 493 m/z.
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Ejemplo 23
Ph(3-Cl).(5-OCH(CH_{2}F)_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) Metanosulfonato de 1,3-difluoroisopropilo
A una solución agitada magnéticamente de 1,3-difluoro-2-propanol (7,0 g, 72,8 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (100 mL) bajo nitrógeno a 0ºC se añadió trietilamina (22,1 g, 219 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (10,0 g, 87,4 mmol). Se agitó la mezcla a 0ºC durante 3 h. Se lavó la mezcla con HCl 2 N (150 mL) y se separaron las capas. Se extrajo la capa acuosa con CH_{2}Cl_{2} (200 ml) y los extractos orgánicos reunidos se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para proporcionar el compuesto del subtítulo (11,5 g, 91%) en forma de un aceite amarillo que se usó sin más purificación.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 4,97-5,08 (m, 1H), 4,75-4,77 (m, 2H), 4,59-4,61 (m, 2H), 3,12 (s, 3H).
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(ii) Ph(3-Cl)(5-OCH(CH_{2}F)_{2})CHO
A una solución de 3-cloro-5-hidroxibenzaldehído (8,0 g, 50,7 mmol; véase el ejemplo 1(ii) anterior) y carbonato de potasio (9,1 g, 66,0 mmol) en DMF (75 mL) bajo nitrógeno se añadió una solución de metanosulfonato de 1,3-difluoroisopropilo (11,5 g, 66,0 mmol; véase la etapa (i) anterior) en DMF (75 ml) gota a gota a temperatura ambiente. Se calentó la mezcla a 110ºC durante 18 h. Se enfrió la reacción a 0ºC, se vertió sobre HCl 2 N (200 mL) enfriado en hielo y se extrajo con EtOAc (3 x 250 mL). Los extractos orgánicos reunidos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite pardo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (4: 1) para dar el compuesto del sub-título (4,4 g, 37%) como un aceite amarillo.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,92 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 4,70-4,89 (m, 3H), 4,63-4,68 (m, 2H).
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(iii) Ph(3-Cl)(5-OCH(CH_{2}F)_{2})-(R,S)CH(OTMS)CN
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OCH(CH_{2}F)_{2})CHO (4,4 g, 18,7 mmol; véase la etapa (ii) anterior) y yoduro de cinc (1,5 g, 4,67 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (200 mL) a 0ºC bajo nitrógeno, se añadió cianuro de trimetilsililo (3,7 g, 37,3 mmol) gota a gota. Se agitó la mezcla a 0ºC durante 3 h y durante la noche a temperatura ambiente, después se diluyó con H_{2}O (200 mL). Se separó la capa orgánica, se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar el compuesto del sub-título (5,5 g, 87%) como un aceite pardo que se utilizó sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,12 (s, 1H), 7,00 (s, 2H), 5,42 (s, 1H), 4,70-4,80 (m, 3H), 4,59-4,64 (m, 2H), 0,26 (s, 9H).
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(iv) Ph(3-Cl)(5-OCH(CH_{2}F)_{2})-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Se añadió ácido clorhídrico concentrado (50 mL) a Ph(3-Cl)(5-OCH(CH_{2}F)_{2})-(R,S)CH(OTMS)CN (5,5 g, 16,3 mmol; véase la etapa (iii) anterior) y se agitó la solución a 100ºC durante 1,5 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la reacción se continuó enfriando a 0ºC, se alcalinizó lentamente con NaOH 3 N (\sim200 ml) y se lavó con Et_{2}O (3 x 200 ml). La capa acuosa se acidificó con HCl 2 N (75 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 200 ml). Los extractos de EtOAc reunidos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (4,6 g, 100%) como un aceite pardo que se utilizó sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,14 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 5,12 (s, 1H), 4,70-4,90 (m, 3H), 4,52-4,67 (m, 2H).
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(v) Ph(3-Cl)(5-OCH(CH_{2}F)_{2})-(S)CH(OAc)C(O)OH (a) y Ph(3-Cl)(5-OCH(CH_{2}F)_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (b)
Una solución de Ph(3-Cl)(5-OCH(CH_{2}F)_{2})-(R,S)CH(OH)C(O)OH (4,6 g, 16,4 mmol; véase la etapa (iv) anterior) y Lipase PS "Amano" (3,0 g) en acetato de vinilo (150 ml) y MTBE (150 mL), se calentó a 70ºC en atmósfera de nitrógeno durante 2,5 días. Se enfrió la reacción a temperatura ambiente, se separó la enzima por filtración a través de Celite®. La torta del filtro se lavó con EtOAc y el filtrado se concentró a vacío. Por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:MeOH:Et_{3}N (90:8:2) se obtuvo la sal de trietilamina del compuesto del sub-título (a) como un aceite amarillo. En adición, se obtuvo la sal de trietilamina del compuesto del sub-título (b) (2,2 g) y se disolvió la sal en H_{2}O (100 mL), se acidificó con HCl 2 N y se extrajo con EtOAc (3 x 200 mL). Los extractos orgánicos reunidos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto (b) del subtítulo (1,4 g, 29%) en forma de un aceite amarillo.
Datos para el compuesto (b) del subtítulo:
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,14 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 5,12 (s, 1H), 4,70-4,90 (m, 3H), 4,52-4,67 (m, 2H).
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(vi) Ph(3-Cl)(5-OCH(CH_{2}F)_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OCH(CH_{2}F)_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (824 mg, 2,94 mmol; véase la etapa (v) anterior) en DMF (30 mL) bajo nitrógeno a 0ºC, se añadieron HAze-Pab(Teoc)\cdotHCl (1,71 g, 3,81 mmol), PyBOP (1,68 g, 3,23 mmol), y DIPEA (949 mg, 7,34 mmol). Se agitó la reacción a 0ºC durante 2 h y después a temperatura ambiente durante una noche. Se concentró la mezcla a vacío y el residuo se cromatografió dos veces sobre gel de sílice, eluyendo en primer lugar con CHCl_{3}:EtOH (15:1), y en segundo lugar con EtOAc:EtOH (20:1) para dar el compuesto del sub-título (720 mg, 38%) como una espuma blanca triturable.
Pf: 78-84ºC.
R_{f} = 0,62 (CHCl_{3}:EtOH 10:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,79 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,00-7,12 (m, 3H), 5,08-5,20 (m, 1H), 3,97-4,80 (m, 12H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
APCI-MS: (M + 1) = 639 m/z.
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(vii) Ph(3-Cl)(5-OCH(CH_{2}F)_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Se disolvió Ph(3-Cl)(5-OCH(CH_{2}F)_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,129 g, 0,202 mmol; véase la etapa (vi) anterior), en 3 mL de TFA y se dejó reaccionar durante 20 min. Se evaporó el TFA y se secó el residuo por congelación a partir de agua/acetonitrilo para dar 0,123 g (100%) del compuesto del título como su sal de TFA.
^{1}H NMR (400 MHz; CD_{3}OD) rotámeros: \delta 7,8-7,7 (m, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,2-7,0 (m, 3H), 5,18 (m, 1H, rotámero menor), 5,15 (s, 1H, rotámero mayor), 5,08 (s, 1H, rotámero menor), 4,80 (m, 1H, rotámero mayor parcialmente oscurecido por el pico CD_{3}OH), 4,75-4,4 (m, 7H), 4,38 (m, 1H, rotámero mayor), 4,15 (m, 1H, rotámero mayor), 4,1-3,9 (m, 2H, 2 señales a partir del rotámero menor), 2,70 (m, 1H, rotámero menor), 2,53 (m, 1H, rotámero mayor), 2,30 (m, 1H, rotámero mayor), 2,15 (m, 1H, rotámero menor).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 172,9, 172,6, 172,2, 171,7, 167,1.
ESI-MS+: (M+1) = 495 (m/z).
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Ejemplo 24
Ph(3-Cl)(5-OCH(CH_{2}F)_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OCH(CH_{2}F)_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (513 mg, 1,83 mmol; véase el ejemplo 23(v) anterior) en DMF (30 mL) bajo nitrógeno a 0ºC, se añadieron HAze-Pab(OMe)\cdot2HCl (797 mg, 2,38 mmol), PyBOP (1,04 g, 2,01 mmol), y DIPEA (591 mg, 4,57 mmol). Se agitó la reacción a 0ºC durante 2 h y después a temperatura ambiente durante una noche. Se concentró la mezcla a vacío y el residuo se cromatografió dos veces sobre gel de sílice, eluyendo en primer lugar con CHCl_{3}:EtOH (15:1) y en segundo lugar con EtOAc:EtOH (20:1) para dar el compuesto del título (370 mg, 39%) como una espuma blanca triturable.
Pf: 58-63ºC.
R_{f} = 0,66 (CHCl_{3}:EtOH 10:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,58-7,60 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,00-7,12 (m, 3H), 5,08-5,20 (m, 1H), 4,65-4,82 (m, 3H), 4,28-4,65 (m, 5H), 3,92-4,18 (m, 2H), 3,82 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H).
^{13}C NMR (150 MHz; CD_{3}OD): (átomos de carbono de carbonilo y/o amidina) \delta 173,2, 170,8, 152,5.
APCI-MS: (M + 1) = 525 m/z.
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Ejemplo 25
Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) 1-Bromo-3-fluoro-5-benciloxibenceno
Se añadió hidruro de sodio (dispersión al 60% en aceite, 24,0 g, 0,48 mol) en porciones a una solución en agitación de alcohol bencílico anhidro (64,5 g, 0,60 mol) en THF (1,0 L). Después se agitó la mezcla durante 1 h, se añadió una solución de 1-bromo-3,5-difluorobenceno (76,8 g, 0,40 mmol) en THF (100 mL) gota a gota durante un periodo de 1 h. Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 2 días. Se añadió agua (400 mL) y se separó el THF a vacío. Se extrajo la capa acuosa con hexano (3 x 150 mL). Los extractos orgánicos reunidos se lavaron con NaOH 2 N (2 x 100 mL) y después se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (110,7 g, 98%) como un aceite amarillo claro que se utilizó sin purificación adicional.
R_{f} = 0,47 (Hex).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,36-7,41 (m, 5H), 6,94 (bs, 1H), 6,87 (d, J_{H-F}= 8 Hz, 1H), 6,63 (d, J_{H-F} = 10 Hz, 1H), 5,03 (s, 2H).
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(ii) 3-Bromo-5-fluorofenol
A una solución de 1-bromo-3-fluoro-5-benciloxibenceno (110,0 g, 0,39 mol; véase la etapa (i) anterior) y N,N-dimetilanilina (474,0 g, 3,92 mol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (1,0 L) a 0ºC se añadió cloruro de aluminio (156,0 g, 1,17 mol). Después de 10 min, se separó el baño de hielo y se continuó la agitación durante 2 h. Se sofocó la reacción por la adición cuidadosa de HCl 3 N (600 mL). Se separaron las capas, y se extrajo la capa acuosa con CH_{2}Cl_{2} (2 x 150 mL). Los extractos orgánicos reunidos se lavaron con HCl 2 N (250 mL) y H_{2}O (3 x 250 mL). Se añadió a la capa orgánica KOH al 15% (500 mL), y se separaron las capas. Se extrajo la capa orgánica con KOH 2 N (2 x 70 mL). Las capas acuosas reunidas se lavaron con CH_{2}Cl_{2} (3 x 100 mL) y después se acidificaron con HCl 4 N. Se extrajo la capa acuosa con Et_{2}O (3 x 125 mL) y después los extractos de Et_{2}O reunidos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (69,0 g, 92%) como un aceite pardo que se utilizó sin purificación adicional.
Pf: 33-35ºC.
R_{f}= 0,25 (CHCl_{3}).
^{1}H NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 10,38 (s, 1H), 6,90 (dd, J_{H-F} = 11 Hz, J = 2 Hz, 1H), 6,81 (s, 1H), 6,59 (dt, J_{H-F} = 11 Hz, J = 2 Hz, 1H).
APCI-MS: (M -1) = 189 m/z.
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(iii) 1-Bromo-3-fluoro-5-difluorometoxibenceno
Una mezcla de 3-bromo-5-fluorofenol (6,1 g, 31,0 mmol; véase la etapa (ii) anterior) y clorodifluorometano (13,0 g, 150,0 mmol) en i-PrOH (100 mL) y KOH al 30% (80 mL), se calentó en un matraz sellado durante 18 h a 80-85ºC. Se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se separaron las capas. Se concentró la capa orgánica a vacío para dar un aceite incoloro. Se extrajo la capa acuosa con Et_{2}O (3 x 30 mL). El aceite crudo y los extractos orgánicos reunidos se lavaron con NaOH 2 N (3 x 30 mL) y H_{2}O (3 x 30 mL). Se secaron después las capas orgánicas (Na_{2}SO_{4}), se filtraron a través de un pequeño lecho de gel de sílice, y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (6,1 g, 79%) como un aceite incoloro que se utilizó sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,11-7,14 (m, 2H), 6,84 (dt, J = 9 Hz, J = 2 Hz, 1H), 6,50 (t, J_{H-F} = 72 Hz, 1H).
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(iv) 1-Fluoro-3-difluorometoxi-5-vinilbenceno
Se añadió tri(butil)vinilestannano (7,0 g, 22,2 mmol) a una suspensión de 1-bromo-3-fluoro-5-difluorometoxibenceno (4,9 g, 20,2 mmol; véase la etapa (iii) anterior), diclorobis(trifenilfosfina)paladio(II) (1,42 g, 2,02 mmol) y cloruro de litio anhidro (0,90 g, 20,2 mmol) en THF (40 mL) bajo nitrógeno a 65ºC y la mezcla se agitó durante 5 h. Se enfrió la mezcla de reacción a 0ºC y se añadió NaOH 1 N (90 mL). Se agitó vigorosamente la mezcla bifásica durante 1 h y después se separaron las capas. Se extrajo la capa acuosa con Et_{2}O (3 x 70 mL). Se lavaron las capas orgánicas reunidas con NaOH 2 N (2 x 40 mL) y H_{2}O (40 mL) y después se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con hexano se obtuvo el compuesto del sub-título (2,2 g, 57%) como un aceite incoloro.
R_{f} = 0,47 (Hex).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,93-6,99 (m, 2H), 6,73-6,78 (m, 1H), 6,67 (dd, J = 18 Hz, J = 11 Hz, 1H), 6,51 (t, J_{H-F} = 73 Hz, 1H), 5,77 (d, J = 18 Hz, 1H), 5,36 (d, J = 11 Hz, 1H).
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(v) Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)CH_{2}OH
Se reunieron 2-metil-2-propanol (140 mL), H_{2}O (140 mL), y AD-mix-\beta (39,2 g) y se enfriaron a 0ºC. Se añadió de una vez 1-fluoro-3-difluorometoxi-5-vinilbenceno (5,0 g, 26,4 mmol; véase la etapa (iv) anterior) disuelto en una pequeña cantidad de 2-metil-2-propanol, y la suspensión heterogénea se agitó vigorosamente a 0ºC hasta que la TLC reveló la ausencia del material de partida. Se sofocó la reacción a 0ºC por adición de sulfito de sodio (42,0 g) y después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 60 min. Se extrajo la mezcla de reacción con Et_{2}O (3 x 120 mL). Los extractos orgánicos reunidos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:EtOAc (3:2) se obtuvo el compuesto del sub-título (5,8 g, 98%) como un aceite incoloro.
R_{f} = 0,41 (CHCl_{3}:EtOAc 3:2).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,96-6,99 (m, 2H), 6,77-6,82 (m, 1H), 6,51 (t, J_{H-F} = 73 Hz, 1H), 4,79-4,85 (m, 1H), 3,76-3,84 (m, 1H), 3,58-3,66 (m, 1H), 2,66 (d, J = 3 Hz, 1H), 2,00 (t, J = 6 Hz, 1H).
Análisis por HPLC: 89,2%, >99% ee, columna ChiralPak AD (fase móvil Hex:EtOH 95:5).
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(vi) Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)CH_{2}OTBS
Una solución de Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)CH_{2}OH (5,5 g, 24,7 mmol; véase la etapa (v) anterior), 4-
(dimetilamino)piridina (121 mg, 1,0 mmol) y trietilamina (3,0 g, 29,6 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (100 mL), se enfrió a 0ºC. Se añadió gota a gota una solución 1,0 M de cloruro de terc-butildimetilsililo en CH_{2}Cl_{2} (26,0 mL, 26,0 mmol), y la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se añadió solución saturada de cloruro de amonio (60 mL), y se separaron las capas. Se lavó la capa orgánica con solución saturada de cloruro de amonio (60 mL) y H_{2}O (2 x 35 mL) después se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró, y se concentró a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:Hex (3:1) se obtuvo el compuesto del sub-título (7,9 g, 85%) como un aceite amarillo.
R_{f}= 0,47 (CHCl_{3}:Hex 3:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,95-6,98 (m, 2H), 6,76-6,79 (m, 1H), 6,51 (t, J_{H-F} = 73 Hz, 1H), 4,71-4,74 (m, 1H), 3,75-3,80 (m, 1H), 3,48-3,54 (m, 1H), 2,99 (bs, 1H), 0,91 (s, 9H), 0,05 (s, 3H), 0,00 (s, 3H).
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(vii) Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)CH_{2}OTBS
A una solución de Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)CH_{2}OTBS (7,9 g, 0,51 mmol; véase la etapa (vi) anterior) y DIPEA (4,9 g, 48,1 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (50 mL) a 0ºC bajo nitrógeno, se añadió gota a gota cloruro de 2-metoxietoximetilo (6,6 g, 48,1 mmol). Se agitó la mezcla durante 24 h. Se añadió solución saturada de cloruro de amonio (70 mL), y se separaron las capas. Se lavó la capa orgánica con solución saturada de cloruro de amonio (70 mL) y H_{2}O (3 x 60 mL) después se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar el compuesto del sub-título (8,8 g, 99%) como un aceite amarillo que se utilizó sin purificación adicional.
R_{f} = 0,41 (CHCl_{3}:EtOAc 4:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,20 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,50 (t, J_{H-F} = 73 Hz, 1H), 4,79-4,81 (m, 1H), 4,66-4,68 (m, 2H), 3,47-3,82 (m, 6H), 3,36 (s, 3H), 0,85 (s, 9H), 0,01 (s, 3H), 0,00 (s, 3H).
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(viii) Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)CH_{2}OH
A una solución de Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)CH_{2}OTBS (9,3 g, 21,9 mmol; véase la etapa (vii) anterior) en THF (60 mL) a temperatura ambiente, se añadió una solución 1,0 M de fluoruro de tetrabutilamonio en THF (70,0 mL, 70,0 mmol) y se agitó la mezcla durante la noche bajo nitrógeno. La reacción se concentró al vacío. Se disolvió el residuo amarillo en Et2O (100 mL) y hexano (100 mL) y se lavó sucesivamente con solución saturada de cloruro de amonio (2 x 150 mL) y H2O (3 x 70 mL). La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (1:1) se obtuvo el compuesto del sub-título (4,2 g, 62%) como un aceite amarillo.
R_{f} = 0,42 (Hex:EtOAc 1:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,91-6,95 (m, 2H), 6,75-6,81 (m, 1H), 6,51 (t, J_{H-F} = 73 Hz, 1H), 4,80-4,82 (m, 1H), 4,70-4,74 (m, 2H), 3,88-3,93 (m, 1H), 3,67-3,71 (m, 3H), 3,53-3,56 (m, 2H), 3,39 (s, 3H), 2,96-2,99 (m,
1H).
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(ix) Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)C(O)OH
Una solución de Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)CH_{2}OH (4,2 g, 13,4 mmol; véase la etapa (viii) anterior) en acetona (100 mL), se añadió a una solución acuosa de NaHCO_{3} al 5% (35 mL). Esta mezcla heterogénea agitada magnéticamente se enfrió a 0ºC y se añadieron bromuro de potasio (159 mg, 1,3 mmol) y 2,2,6,6-tetrametil-1-piperidiniloxi, radical libre (2,2 g, 14,1 mmol). Se añadió después gota a gota hipoclorito de sodio (5,25%, 30 mL) durante un periodo de 20 min mientras la mezcla se agitaba vigorosamente y se mantenía a 0ºC. Después de 1 h, se añadieron hipoclorito de sodio adicional (30 mL) y solución de NaHCO_{3} al 5% (35 mL) y se continuó la agitación a 0ºC durante 2 h. Se separó la acetona a vacío. Se lavó la capa acuosa con Et_{2}O (4 x 40 mL). Se acidificó la capa acuosa a pH 3,5 con ácido cítrico al 10% y se extrajo con EtOAc (4 x 50 mL). Los extractos de EtOAc reunidos se lavaron sucesivamente con H_{2}O (4 x 30 mL) y salmuera (60 mL) y después se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (4,3 g, 98%) como un aceite incoloro que se utilizó sin purificación adicional.
R_{f} = 0,74 (CHCl_{3}:MeOH:Et_{3}N 8,0:1,5:0,5).
^{1}H NMR (300 MHz, acetona-d_{6}) \delta 7,16-7,18 (m, 2H), 7,16 (t, J_{H-F} = 89 Hz, 1H), 7,00-7,03 (m, 1H), 5,30 (s, 1H), 4,88 (d, J = 7 Hz, 1H), 4,80 (d, J = 7 Hz, 1H), 3,54-3,75 (m, 2H), 3,46-3,49 (m, 2H), 3,28 (s, 3H).
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(x) Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
A una solución de Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)C(O)OH (1,1 g, 3,4 mmol; véase la etapa (ix) anterior) en DMF (20 mL) bajo nitrógeno a 0ºC, se añadieron HAze-Pab(Teoc)\cdotHCl (2,0 g, 4,4 mmol), PyBOP (1,9 g, 3,7 mmol), y DIPEA (1,1 g, 8,4 mmol). La reacción se agitó a 0ºC durante 2 h y después a temperatura ambiente durante una noche. Se concentró la mezcla a vacío y el residuo se cromatografió dos veces sobre gel de sílice, eluyendo en primer lugar con CHCl_{3}:EtOH (15:1) y en segundo lugar con EtOAc:EtOH (20:1) para dar el compuesto del sub-título (1,3 g, 56%) como una espuma blanca triturable.
R_{f} = 0,65 (CHCl_{3}:EtOH 15:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,80-7,84 (m, 2H), 7,40-7,46 (m, 2H), 6,95-7,16 (m, 3H), 6,92 y 6,88 (t, J_{H-F} = 73 Hz, 1H), 5,28 y 5,08 (s, 1H), 5,18-5,22 y 4,70-4,78 (m, 1H), 4,50-4,75 (m, 1H), 4,30-4,49 (m, 2H), 4,21-4,26 (m, 3H), 3,97-4,08 (m, 1H), 3,35-3,72 (m, 6H), 3,30 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
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(xi) Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
Una mezcla de Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (590 mg, 0,87 mmol; véase la etapa (x) anterior) y tetrabromuro de carbono (287 mg, 0,87 mmol) en 2-propanol (20 mL), se mantuvo a reflujo durante 1,5 h. Se concentró la mezcla a vacío y después se sometió a reparto con H_{2}O (50 mL) y EtOAc (3 x 50 mL). Se extrajo la capa acuosa con EtOAc adicional (2 x 10 mL). Los extractos orgánicos reunidos se lavaron con salmuera (30 mL) después se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:EtOH (15:1) se obtuvo el compuesto del sub-título (60 mg, 12%) como una espuma blanca tritu-
rable.
R_{f} = 0,46 (CHCl_{3}:EtOH 15:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,74 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,35-7,37 (m, 2H), 6,97-7,07 (m, 2H), 6,80-6,84 (m, 1H), 6,82 y 6,80 (t, J_{H-F} = 73 Hz, 1H), 5,10 y 5,06 (s, 1H), 4,68-4,70 (m, 1H), 3,97-4,60 (m, 6H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H). APCI-MS: (M + 1) = 595 m/z.
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(xii) Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Se disolvió Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,053 g, 0,089 mmol; véase la etapa (xi) anterior), en 3 mL de TFA y se dejó reaccionar durante 80 min mientras se enfriaba en un baño de hielo. Se evaporó el TFA y el residuo se secó por congelación a partir de agua/acetonitrilo para dar 0,042 g (80%) del compuesto del título como su sal de TFA.
^{1}H NMR (300 MHz; CD_{3}OD) rotámeros: \delta 7,7-7,6 (m, 2H), 7,5-7,4 (m, 2H), 7,1-6,6 (m, 4H), 5,2-5,0 (m, 1H más rotámero menor de 1H), aproximadamente 4,8 (rotámero mayor de señal previa oscurecida por la señal de CD_{3}OH), 4,6-4,3 (m, 2H), 4,26 (m, 1H, rotámero mayor), 4,10 (m, 1H, rotámero mayor), 3,96 (m, 1H, rotámero menor), 3,89 (m, 1H, rotámero menor), 2,60 (m, 1H, rotámero menor), 2,44 (m, 1H, rotámero mayor), 2,19 (m, 1H, rotámero mayor), 2,05 (m, 1H, rotámero menor).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (átomos de carbono de carbonilo y/o amidina) \delta 172,8, 172,0, 167,0.
ESI-MS+: (M+1) = 451 (m/z).
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Ejemplo 26
Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) (i) Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe)
A una solución de Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)C(O)OH (1,0 g, 3,1 mmol; véase el ejemplo 25(ix) anterior) en DMF (30 mL) bajo nitrógeno a 0ºC, se añadieron HAze-Pab(OMe)\cdot2HCl (1,4 g, 4,1 mmol), PyBOP (1,8 g, 3,4 mmol), y DIPEA (1,0 g, 7,8 mmol). La reacción se agitó a 0ºC durante 2 h y después a temperatura ambiente durante una noche. Se concentró la mezcla a vacío y el residuo se cromatografió dos veces sobre gel de sílice, eluyendo en primer lugar con CHCl_{3}:EtOH (15:1) y en segundo lugar con EtOAc para dar el compuesto del sub-título (1,5 g, 79%) como una espuma blanca triturable.
R_{f} = 0,24 (EtOAc).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,58-7,62 (m, 2H), 7,32-7,38 (m, 2H), 7,03-7,16 (m, 3H), 6,92 y 6,88 (d, J_{H-F} = 73 Hz, 1H), 5,27 y 5,08 (s, 1H), 5,22-5,15 y 4,75-4,80 (m, 1H), 4,38-4,65 (m, 5H), 3,92-4,27 (m, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,43-3,68 (m, 4H), 3,29 (s, 3H), 2,28-2,85 (m, 2H).
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(ii) Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
Una mezcla de Ph(3-F)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe) (828 mg, 2,33 mmol; véase la etapa (i) anterior) y tetrabromuro de carbono (525 mg, 2,33 mmol) en 2-propanol (20 mL) se mantuvo a reflujo durante 8 h y después se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se concentró la mezcla a vacío y el residuo se sometió a reparto con H_{2}O (70 mL) y EtOAc (50 mL). Se extrajo la capa acuosa con EtOAc (2 x 25 mL). Los extractos orgánicos reunidos se lavaron con salmuera (35 mL) y después se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:EtOH (15:1) se obtuvo el compuesto del título (520 mg, 74%) como una espuma blanca triturable.
Pf: 73-81ºC.
R_{f} = 0,43 (CHCl_{3}:EtOH 15:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,59 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,32-7,37 (m, 2H), 7,05-7,14 (m, 2H), 6,87-6,92 (m, 1H), 6,90 y 6,86 (t, J_{H-F} = 73 Hz, 1H), 5,13-5,18 y 4,75-4,85 (m, 2H), 4,15-4,45 (m, 4H), 3,81 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (átomos de carbono de carbonilo y/o amidina) \delta 172,0, 171,4, 153,9.
APCI-MS: (M + 1) = 481 m/z.
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Ejemplo 27
Ph(3-Br)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) 1,3-Dibromo-5-benciloxibenceno
Se añadió en porciones hidruro de sodio (9,9 g, 0,414 mol, 95% seco) a una solución en agitación de alcohol bencílico (41,0 g, 0,394 mol) en THF (1,0 L) a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno y se agitó durante 1 h. Se añadió a esta solución gota a gota 1,3-dibromo-5-fluorobenceno (100,0 g, 0,394 mol). Después de agitación durante la noche, la mezcla se sometió a reparto con H_{2}O (600 mL) y EtOAc (4 x 600 mL). Los extractos orgánicos reunidos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con hexanos se obtuvo el compuesto del sub-título (101,3 g, 75%) como un aceite amarillo.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,30-7,48 (m, 5H), 7,18 (s, 1H), 7,06 (s, 2H), 4,99 (s, 2H).
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(ii) 3,5-Dibromofenol
Se añadió en porciones cloruro de aluminio (11,7 g, 87,6 mmol) a una solución de 1,3-dibromo-5-benciloxibenceno (10,0 g, 29,2 mmol; véase la etapa (i) anterior) y N,N-dimetilanilina (35,4 g, 292 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (100 mL) a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno. Después de 30 min, la mezcla se sometió a reparto con HCl 1 N (300 mL) y EtOAc (5 x 150 mL). Los extractos orgánicos reunidos se lavaron con NaHCO_{3} saturado (150 mL) y salmuera (150 mL) y después se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (9:1) se obtuvo el compuesto del sub-título (6,1 g, 82%) como un sólido blanco.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,21 (s, 1H), 6,97 (s, 2H), 5,88 (bs, 1H).
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(iii) 1,3-Dibromo-5-monofluorometoxibenceno
A un matraz a presión de fondo redondo de 350 mL, tarado y sellado que contenía una suspensión de 3,5-dibromofenol (10,0 g, 39,7 mmol; véase la etapa (ii) anterior) y Cs_{2}CO_{3} (20,7 g, 63,5 mmol) en DMF (150 mL) a -78ºC se añadió clorofluorometano mediante burbujeo durante 5 min a través del séptum. Se reemplazó el séptum con un tapón de teflón y después se selló el matraz y se dejó que alcanzara la temperatura ambiente y entonces se pesó el matraz y se determinó que contenía 9,0 g (131 mmol) de clorofluorometano. Se calentó la solución en un baño de aceite ajustado a 70ºC durante la noche. Se enfrió el matraz a temperatura ambiente, se liberó la presión cuidadosamente y los contenidos se diluyeron con agua (100 mL). Se extrajo la capa acuosa con Et_{2}O (3 x 200 mL) y después, las fases orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con hexanos se obtuvo el compuesto del sub-título (7,9 g, 71%) como un sólido
blanco.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,40 (s, 1H), 7,18 (s, 2H), 5,67 (d, J_{H-F} = 53 Hz, 2H).
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(iv) 1-Bromo-3-monofluorometoxi-5-vinilbenceno
Se añadió gota a gota tri(butil)vinilestaño (10,0 g, 31,4 mmol) a una solución de 1,3-dibromo-5-monofluorometoxibenceno (8,5 g, 29,9 mmol; véase la etapa (iii) anterior), tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (690 mg, 0,599 mmol), y 2,6-di-terc-butil-4-metilfenol (una punta de espátula) en tolueno (100 mL) bajo nitrógeno. Se agitó la mezcla a 70ºC durante 8 h. Se enfrió la mezcla a 0ºC y se añadió NaOH 1 N (70 mL). Después de 1 h, se extrajo la mezcla con CH_{2}Cl_{2} (3 x 300 mL) y después, las fases orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con hexanos se obtuvo el compuesto del sub-título (4,3 g, 57%) como un aceite incoloro.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,30 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 6,60 (dd, J = 6 Hz, J = 11 Hz, 1H), 5,74 (d, J = 16 Hz, 1H), 5,67 (d, J_{H-F} = 53 Hz, 2H), 5,32 (d, J = 8 Hz, 1H).
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(v) Ph(3-Br)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)CH_{2}OH
Se reunieron 2-metil-2-propanol (100 mL), H_{2}O (100 mL), y AD-mix-\beta (27,5 g) y se enfriaron a 0ºC. Se añadió de una vez 1-bromo-3-monofluorometoxi-5-vinilbenceno (4,3 g, 17,3 mmol; véase la etapa (iv) anterior), y la suspensión heterogénea se agitó vigorosamente a 0ºC hasta que la TLC reveló la ausencia del material de partida. Se sofocó la reacción a 0ºC por adición de sulfito de sodio saturado (200 mL) y después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 60 min. La mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (3 x 150 mL). Los extractos orgánicos reunidos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (4,9 g, 100%) como un aceite incoloro que se utilizó sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,30 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 5,70 (d, J_{H-F} = 53 Hz, 2H), 4,62-4,70 (m, 1H), 3,52-3,70 (m, 2H).
Análisis por HPLC: 92,1%, 96,9% ee, columna ChiralPak AD (fase móvil Hex:EtOH 95:5).
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(vi) Ph(3-Br)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OMEM)CH_{2}OTBS
A una solución de Ph(3-Br)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)CH_{2}OH (4,9 g, 18,6 mmol; véase la etapa (v) anterior), 4-(dimetilamino)piridina (453 mg, 3,71 mmol), y DIPEA (8,9 g, 93,0 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (200 mL), se añadió gota a gota una solución 1,0 M de cloruro de terc-butildimetilsililo en CH_{2}Cl_{2} (22,3 mL, 22,3 mmol). Se agitó la mezcla de reacción 10 h a temperatura ambiente. Se añadieron a la mezcla DIPEA (8,9 g, 93,0 mmol) y cloruro de 2-metoxietoximetilo (13,9 g, 111 mmol) gota a gota. Después de 16 h, se añadió cloruro de 2-metoxietoximetilo adicional (2,2 g) y se agitó la reacción durante la noche. Se diluyó la mezcla con H_{2}O (100 mL), y se separaron las capas. Se extrajo la capa acuosa con CH_{2}Cl_{2} (3 x 200 mL) y después, las capas orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (5:1) se obtuvo el compuesto del sub-título (4,8 g, 55%) como un aceite incoloro.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,29 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 5,74 (d, J_{H-F} = 53 Hz, 2H), 4,84 (d, J = 7 Hz, 1H), 4,70-4,74 (m, 2H), 3,50-3,91 (m, 6H), 3,42 (s, 3H), 0,90 (s, 9H), 0,05 (s, 3H), 0,01 (s, 3H).
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(vii) Ph(3-Br)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OMEM)CH_{2}OH
A una solución de Ph(3-Br)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OMEM)CH_{2}OTBS (4,7 g, 10,1 mmol; véase la etapa (vi) anterior) en THF (100 mL), se añadió una solución 1,0 M de fluoruro de tetrabutilamonio en THF (13,1 mL, 13,1 mmol) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante 1 h. Se sometió la mezcla a reparto con H_{2}O (100 mL) y EtOAc (3 x 100 mL) y después, las capas orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (3,3 g, 92%) como un aceite incoloro que se utilizó sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,22 (s, 1H), 7,14 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 5,71 (d, J_{H-F} = 53 Hz, 2H), 4,80-4,82 (m, 1H), 4,58-4,66 (m, 2H), 3,71-3,77 (m, 1H), 3,39-3,65 (m, 5H), 3,27 (s, 3H).
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(viii) Ph(3-Br)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OMEM)C(O)OH
Una solución de Ph(3-Br)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OMEM)CH_{2}OH (2,1 g, 6,0 mmol; véase la etapa (vii) anterior) en acetona (40 mL), se añadió a una solución acuosa de NaHCO_{3} al 5% (15 mL). Esta mezcla heterogénea agitada magnéticamente se enfrió a 0ºC y se añadieron bromuro de potasio (70mg, 0,60 mmol) y 2,2,6,6-tetrametil-1-piperidiniloxi, radical libre (976 mg, 5,8 mmol). Se añadió después hipoclorito de sodio (5,25%, 15 mL) gota a gota durante un periodo de 10 min mientras que la mezcla se agitaba vigorosamente y se mantenía a 0ºC. Después de 1 h, se añadieron hipoclorito de sodio adicional (10 mL) y solución de NaHCO_{3} (20 mL) y se continuó la agitación a 0ºC durante 4 h adicionales. Se separó la acetona en un evaporador rotatorio. Se diluyó la capa acuosa con solución de NaHCO3 al 10% (30 mL) y se lavó con Et2O (3 x 20 mL). Se acidificó la capa acuosa a pH 3,5 con ácido cítrico al 10% y se extrajo con EtOAc (3 x 40 mL). Los extractos de EtOAc reunidos se lavaron con H_{2}O (3 x 50 mL) y salmuera (50 mL) y después, se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (1,7 g, 78%) como un aceite incoloro que se utilizó sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,38 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 5,76 (d, J_{H-F} = 53 Hz, 2H), 5,21 (s, 1H), 4,83 (d, J = 7 Hz, 1H), 4,75 (d, J = 7 Hz, 1H), 3,62-3,78 (m, 2H), 3,48-3,52 (m, 2H), 3,32 (s, 3H).
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(ix) Ph(3-Br)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
A una solución de Ph(3-Br)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OMEM)C(O)OH (1,0 g, 2,72 mmol; véase la etapa (viii) anterior) en DMF (20 mL) bajo nitrógeno a 0ºC, se añadieron HAze-Pab(Teoc)\cdotHCl (1,6 g, 3,5 mmol), PyBOP (1,6 g, 3,0 mmol), y DIPEA (880 mg, 6,81 mmol). Se agitó la reacción a 0ºC durante 2 h y después a temperatura ambiente durante una noche. Se concentró la mezcla a vacío y el residuo se cromatografió dos veces sobre gel de sílice, eluyendo en primer lugar con CHCl_{3}:EtOH (15:1) y en segundo lugar con EtOAc:EtOH (20:1) para dar el compuesto del sub-título (1,2 g, 62%) como una espuma blanca triturable.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,80-7,84 (m, 2H), 7,40-7,46 (m, 2H), 7,13-7,32 (m, 3H), 5,84-5,87 (m, 1H), 5,67-5,69 (m, 1H), 5,25 y 5,07 (s, 1H), 5,18-5,23 y 4,80-4,88 (m, 1H), 3,97-4,79 (m, 8H), 3,60-3,71 (m, 2H), 3,40-3,53 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
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(x) Ph(3-Br)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
Una mezcla de Ph(3-Br)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (347 mg, 0,478 mmol; véase la etapa (ix) anterior) y tetrabromuro de carbono (159 mg, 0,478 mmol) en 2-propanol (10 mL) se mantuvo a reflujo durante 1,5 h. Se concentró la mezcla a vacío y después se sometió a reparto con H_{2}O (20 mL) y EtOAc (3 x 30 mL). Las capas orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:EtOH (15:1) se obtuvo el compuesto del sub-título (59 mg, 19%) como una espuma blanca triturable.
Pf: 81-87ºC.
R_{f} = 0,58 (CHCl_{3}:EtOH 9:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,84 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,40-7,48 (m, 2H) 7,18-7,30 (m, 3H), 5,80 (d, J_{H-F} = 53 Hz, 2H), 5,21 y 5,15 (s, 1H), 5,18-5,24 y 4,80-4,88 (m, 1H), 3,98-4,54 (m, 6H), 2,10-2,70 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
APCI-MS: (M + 1) = 637 m/z.
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(xi) Ph(3-Br)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Se disolvió Ph(3-Br)(5-OCH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,073 g, 0,11 mmol; véase la etapa (x) anterior), en 5 mL de TFA y se dejó reaccionar durante 90 min mientras se enfriaba en un baño de hielo. Se evaporó el TFA y el residuo se purificó por RPLC preparatoria con CH_{3}CN:NH_{4}OAc 0,1 M (30:70). Las fracciones pertinentes se evaporaron y se secaron por congelación a partir de agua/acetonitrilo para dar 49 mg (77%) del compuesto del título como su sal acetato.
^{1}H NMR (300 MHz; CD_{3}OD) rotámeros: \delta 7,8-7,7 (m, 2H), 7,54 (m, 2H), 7,37 (s, 1H, rotámero mayor), 7,33 (s, 1H, rotámero menor), 7,25-7,1 (m, 2H), 5,75 (d, 2H), 5,22 (m, 1H, rotámero menor), 5,18 (s, 1H, rotámero mayor), 5,11 (s, 1H, rotámero menor), 4,80 (m, 1H, rotámero mayor), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,37 (m, 1H, rotámero mayor), 4,16 (m, 1H, rotámero mayor), 4,1-3,9 (m, 2H, dos señales a partir del rotámero menor), 2,70 (m, 1H, rotámero menor), 2,52 (m, 1H, rotámero mayor), 2,30 (m, 1H, rotámero mayor), 2,15 (m, 1H, rotámero menor), 1,89 (s, 3H).
ESI-MS+: (M+1) = 493/495 (m/z).
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Ejemplo 28
Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) 1,3-Dibromo-5-difluorometoxibenceno
A un matraz a presión de fondo redondo de 350 mL, tarado y sellado que contenía una suspensión de 3,5-dibromofenol (10,0 g, 39,7 mmol; véase el ejemplo 27(ii) anterior) en 2-propanol (100 mL) y KOH al 30% (80 mL) a -78ºC, se añadió clorodifluorometano mediante burbujeo durante 15 min a través del séptum. Se reemplazó el séptum con un tapón de teflón y después se selló el matraz y se dejó calentar a temperatura ambiente y entonces se pesó el matraz y se determinó que contenía 12,0 g (138 mmol) de clorodifluorometano. Se mantuvo la solución a reflujo durante la noche en un baño de aceite ajustado a 80ºC. Se enfrió el matraz a temperatura ambiente, se liberó la presión cuidadosamente y se diluyó el contenido con H_{2}O (200 mL). Se extrajo la capa acuosa con CHCl_{3} (2 x 150 mL), y después las capas orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Se purificó el residuo por destilación de Kugelrohr a 80ºC a 0,2 mm de Hg para obtener el compuesto del sub-título (9,6 g, 80%) como un líquido límpido.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,55 (s, 1H), 7,26 (s, 2H), 6,52 (t, J_{H-F} = 68 Hz, 1H).
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(ii) 1-Bromo-3-difluorometoxi-5-vinilbenceno
Se añadió gota a gota tri(butil)vinilestaño (10,5 g, 33,1 mmol) a una solución de 1,3-dibromo-5-monofluorometoxibenceno (9,1 g, 30,1 mmol; véase la etapa (i) anterior), tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (700 mg, 0,60 mmol), y 2,6-di-terc-butil-4-metilfenol (una punta de espátula) en tolueno (125 mL) bajo nitrógeno. La mezcla se agitó a 50ºC durante la noche. Se enfrió la mezcla a 0ºC y se añadió NaOH 1 N (70 mL). Después de 1 h, se extrajo la mezcla con CH_{2}Cl_{2} (3 x 300 mL) y después, las fases orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con hexanos se obtuvo el compuesto del sub-título (5,1 g, 68%) como un aceite incoloro.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,53 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 6,60 (dd, J = 6 Hz, J = 11 Hz, 1H), 6,57 (t, J_{H-F} = 68 Hz, 1H), 5,77 (d, J = 11 Hz, 1H), 5,36 (d, J = 8 Hz, 1H).
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(iii) Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)CH_{2}OH
Se reunieron 2-metil-2-propanol (150 mL), H_{2}O (150 mL), y AD-mix-\beta (27,8 g) y se enfriaron a 0ºC. Se añadió de una vez 1-bromo-3-difluorometoxi-5-vinilbenceno (4,6 g, 18,6 mmol; véase la etapa (ii) anterior), y la suspensión heterogénea se agitó vigorosamente a 0ºC hasta que la TLC indicó la ausencia del material de partida, después se calentó la solución a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se sofocó la reacción a 0ºC por adición de sulfito de sodio saturado (300 mL) y después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 60 min. La mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (3 x 200 mL). Los extractos orgánicos reunidos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (5,0 g, 95%) como un aceite incoloro que se utilizó sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,43 (s, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 6,86 (t, J_{H-F} = 75 Hz, 1H), 4,64-4,67 (m, 1H), 3,54-3,59 (m, 2H).
Análisis por HPLC: 88,6%, 96,3% ee, columna ChiralPak AD (fase móvil Hex:EtOH 95:5).
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(iv) Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)CH_{2}OTBS
A una solución de Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)CH_{2}OH (4,9 g, 17,3 mmol; véase la etapa (iii) anterior), 4-(dimetilamino)piridina (420 mg, 3,5 mmol), y DIPEA (11,2 g, 86,3 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (250 mL), se añadió gota a gota una solución 1,0 M de cloruro de terc-butildimetilsililo en CH_{2}Cl_{2} (20,7 mL, 20,7 mmol). La mezcla de reacción se agitó toda la noche a temperatura ambiente. Se añadieron a la mezcla DIPEA (11,2 g, 86,3 mmol) y cloruro de 2-metoxietoximetilo (12,9 g, 104 mmol) gota a gota. Después de 3 días, se añadió cloruro de 2-metoxietoximetilo adicional (3,3 g) y la reacción se agitó durante la noche. Se diluyó la mezcla con agua (250 mL), y se separaron las capas. Se extrajo la capa acuosa con CH_{2}Cl_{2} (2 x 250 mL) y después las capas orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (4:1) se obtuvo el compuesto del sub-título (4,3 g, 51%) como un aceite incoloro.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,40 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 6,58 (t, J_{H-F} = 75 Hz, 1H), 4,84 (d, J = 7 Hz, 1H), 4,70-4,74 (m, 2H), 3,50-3,91 (m, 6H), 3,42 (s, 3H), 0,90 (s, 9H), 0,12 (s, 3H), 0,05 (s, 3H).
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(v) Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)CH_{2}OH
A una solución de Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)CH_{2}OTBS (3,3 g, 6,9 mmol; véase la etapa (iv) anterior) en THF (60 mL) se añadió una solución 1,0 M de fluoruro de tetrabutilamonio en THF (9,0 mL, 9,0 mmol) a temperatura ambiente. Se agitó la reacción durante 45 min, después se sometió la mezcla a reparto con agua (150 mL) y EtOAc (2 x 120 mL). Las capas orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (2,5 g, 98%) como un aceite amarillo que se utilizó sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,35 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 6,83 (t, J_{H-F} = 73 Hz, 1H), 4,73 (d, J = 7 Hz, 1H), 4,59-4,68 (m, 2H), 3,40-380 (m, 6H), 3,26 (s, 3H).
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(vi) Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)C(O)OH
Una solución de Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)CH_{2}OH (3,0 g, 8,1 mmol; véase la etapa (v) anterior) en acetona (60 mL), se añadió a una solución acuosa de NaHCO_{3} al 5% (25 mL). Esta mezcla heterogénea agitada magnéticamente se enfrió a 0ºC y después se añadieron bromuro de potasio (100 mg, 0,81 mmol) y 2,2,6,6-tetrametil-1-piperidiniloxi, radical libre (1,3 g, 8,5 mmol). Se añadió después hipoclorito de sodio (al 5,25%, 19 mL) gota a gota durante un periodo de 10 min mientras que la mezcla se agitaba vigorosamente y se mantenía a 0ºC. Después de 1 h, se añadieron hipoclorito de sodio adicional (17 mL) y solución de NaHCO_{3} (34 mL) y se continuó la agitación a 0ºC durante 4 h adicionales. Se separó la acetona en un evaporador rotatorio. Se diluyó la capa acuosa con solución de NaHCO3 al 10% (30 mL) y se lavó con Et2O (3 x 20 mL). Se acidificó la capa acuosa a pH 3,5 con ácido cítrico al 10% y se extrajo con EtOAc (3 x 40 mL). Las capas de EtOAc reunidas se lavaron con H_{2}O (3 x 50 mL) y salmuera (50 mL), y después se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar el compuesto del sub-título (2,1 g, 66%) como un aceite incoloro que se utilizó sin purificación adicional.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,51 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 6,88 (t, J_{H-F} = 73 Hz, 1H), 5,21 (s, 1H), 4,84 (d, J = 7 Hz, 1H), 4,76 (d, J = 7 Hz, 1H), 3,62-3,80 (m, 2H), 3,48-3,52 (m, 2H), 3,32 (s, 3H).
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(vii) Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
A una solución de Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)C(O)OH (1,0 g, 2,62 mmol; véase la etapa (vi) anterior) en DMF (50 mL) bajo nitrógeno a 0ºC, se añadieron HAze-Pab(Teoc)\cdotHCl (1,5 g, 3,38 mmol), PyBOP (1,5 g, 2,9 mmol), y DIPEA (840 mg, 6,50 mmol). la reacción Se agitó la reacción a 0ºC durante 2 h y después a temperatura ambiente durante una noche. Se concentró la mezcla a vacío y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:EtOH (15:1) para dar el compuesto del sub-título (1,1 g, 59%) como una espuma blanca triturable.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,79-7,83 (m, 2H), 7,26-7,52 (m, 5H), 6,94 y 6,91 (t, J_{H-F} = 73 Hz, 1H), 5,27 y 5,07 (s, 1H), 5,20-5,23 y 4,80-4,88 (m, 1H), 4,01-4,79 (m, 8H), 3,60-3,71 (m, 2H), 3,40-3,53 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
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(viii) Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
Una mezcla de Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (369 mg, 0,496 mmol; véase la etapa (vii) anterior) y tetrabromuro de carbono (165 mg, 0,496 mmol) en 2-propanol (10 mL) se mantuvo a reflujo durante 12 h. Se concentró la mezcla a vacío, después se sometió a reparto con H_{2}O (15 mL) y EtOAc (5 x 20 mL). Las capas orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:EtOH (15:1) se obtuvo el compuesto del sub-título (134 mg, 41%) como una espuma blanca triturable.
Pf: 92-98ºC.
R_{f} = 0,37 (CHCl_{3}:EtOH 9:1).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,80-7,86 (m, 2H), 7,40-7,48 (m, 2H) 7,10-7,33 (m, 3H), 6,92 y 6,88 (t, J_{H-F} = 73 Hz, 1H), 5,18 y 5,11 (s, 1H), 5,18-5,24 y 4,76-4,80 (m, 1H), 3,98-4,54 (m, 6H), 2,10-2,70 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
APCI-MS: (M + 1) = 655 m/z.
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(ix) Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Se disolvió Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,081 g, 0,124 mmol; véase la etapa (viii) anterior), en 5 mL de TFA y se dejó reaccionar durante 80 min mientras se enfriaba en un baño de hielo. Se evaporó el TFA y el residuo se purificó por RPLC preparatoria con CH_{3}CN:NH_{4}OAc 0,1 M (30:70). Las fracciones pertinentes se evaporaron y se secaron por congelación a partir de agua/acetonitrilo para dar 59 mg (83%) del compuesto del título como su sal acetato.
^{1}H NMR (300 MHz; CD_{3}OD) rotámeros: \delta 7,8-7,7 (m, 2H), 7,6-7,4 (m, 3H), 7,3-7,2 (m, 2H), 6,89 (t, 1H, rotámero mayor), 6,87 (t, 1H, rotámero menor), 5,23 (m, 1H, rotámero menor), 5,21 (s, 1H, rotámero mayor), 5,13 (s, 1H, rotámero menor), 4,80 (m, 1H, rotámero mayor), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,38 (m, 1H, rotámero mayor), 4,20 (m, 1H, rotámero mayor), 4,1-3,9 (m, 2H, dos señales a partir del rotámero menor), 2,70 (m, 1H, rotámero menor), 2,54 (m, 1H, rotámero mayor), 2,29 (m, 1H, rotámero mayor), 2,15 (m, 1H, rotámero menor), 1,89 (s, 3H).
^{13}C NMR (75 MHz; CD_{3}OD): (átomos de carbono de carbonilo y/o amidina) \delta 172,0, 171,7, 167,0.
MS(m/z) 511/513 (M+1)^{+}.
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Ejemplo 29
Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) (i) Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe)
A una solución de Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)C(O)OH (957 mg, 2,48 mmol; véase el ejemplo 28(vi) anterior) en DMF (30 mL) bajo nitrógeno a 0ºC, se añadieron HAze-Pab(OMe)\cdot2HCl (1,1 g, 3,2 mmol), PyBOP (1,4 g, 2,7 mmol), y DIPEA (804 mg, 6,2 mmol). Se agitó la reacción a 0ºC durante 2 h y después a temperatura ambiente durante una noche. Se concentró la mezcla a vacío y el residuo se cromatografió dos veces sobre gel de sílice, eluyendo en primer lugar con CHCl_{3}:EtOH (9:1) y en segundo lugar con EtOAc:EtOH (15:1) para dar el compuesto del sub-título (1,1 g, 72%) como una espuma blanca triturable.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,59-7,65 (m, 2H), 7,20-7,55 (m, 5H), 6,95 y 6,91 (t, J_{H-F} = 73 Hz, 1H), 5,27 y 5,07 (s, 1H), 5,18-5,23 y 4,75-4,84 (m, 1H), 3,87-4,89 (m, 6H), 3,84 (s, 3H), 3,60-3,71 (m, 2H), 3,40-3,53 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H).
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(ii) Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
Una mezcla de Ph(3-Br)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe) (1,1 g, 1,8 mmol; véase la etapa (i) anterior) y tetrabromuro de carbono (583 mg, 1,8 mmol) en 2-propanol (30 mL) se mantuvo a reflujo durante 2,5 días. Durante este tiempo, se añadió tetrabromuro de carbono adicional (5 porciones de 50 mg a intervalos para 0,90 mmol adicionales) para asegurar que se ha completado la reacción. Se concentró la mezcla a vacío, después se sometió a reparto con H_{2}O (50 mL) y EtOAc (5 x 25 mL). Las capas orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:EtOH (15:1) se obtuvo el compuesto del título (460 mg, 50%) como una espuma blanca triturable.
Pf: 71-75ºC.
R_{f} = 0,63 (9:1 CHCl_{3}:EtOH).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla compleja de rotámeros) \delta 7,59 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,20-7,54 (m, 5H), 6,90 y 6,87 (t, J_{H-F} = 73 Hz, 1H), 5,18 y 5,11 (s, 1H), 4,76-4,80 (m, 1H), 3,98-4,54 (m, 4H), 3,82 (s, 3H), 2,10-2,70 (m, 2H).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 172,5, 172,1, 171,6, 154,1,
APCI-MS: (M + 1) = 542 m/z.
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Ejemplo 30
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH) (i) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)
Se disolvió Boc-Aze-Pab(Z) (véase la solicitud de patente internacional WO 97/02284, 92 mg, 0,197 mmol) en 10 mL de EtOAc saturado con HCl(g) y se dejó reaccionar durante 10 min. Se evaporó el disolvente y el residuo se mezcló con Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (50 mg, 0,188 mmol; véase el ejemplo 17(v) anterior), PyBOP (109 mg, 0,209 mmol) y finalmente diisopropiletil-amina (96 mg, 0,75 mmol) en 2 mL de DMF. Se agitó la mezcla durante 2 h y después se vertió sobre 50 mL de agua y se extrajo tres veces con EtOAc. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. El producto crudo se sometió a cromatografía rápida sobre gel de sílice con EtOAc:MeOH (9:1). Rendimiento: 100 mg (87%).
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD mezcla de rotámeros) \delta 7,85-7,75 (m, 2H), 7,45-7,25 (m, 7H), 7,11 (m, 1H, rotámero mayor), 7,08 (m, 1H, rotámero menor), 7,05-6,9 (m, 2H), 6,13 (bt, 1H), 5,25-5,05 (m, 3H), 4,77 (m, 1H, parcialmente oscurecido por la señal CD_{3}OH), 4,5-3,9 (m, 7H), 2,64 (m, 1H, rotámero menor), 2,47 (m, 1H, rotámero mayor), 2,25 (m, 1H, rotámero mayor), 2,13 (m, 1H, rotámero menor).
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(ii) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
Se mezclaron hidrocloruro de hidroxilamina (65 mg, 0,94 mmol) y trietilamina (0,319 g, 3,16 mmol) en 8 mL de THF y se sonicaron durante 1 h a 40ºC. Se añadió Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z) (96 mg, 0,156 mmol; véase la etapa (i) anterior) con 8 mL más de THF. Se agitó la mezcla a 40ºC durante 4,5 días. Se evaporó el disolvente y el producto crudo se purificó por RPLC preparativa con CH_{3}CN:NH_{4}OAc 0,1 M (40:60). Rendimiento: 30 mg (38%). Pureza: 99%.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD mezcla de rotámeros) \delta 7,6-7,55 (m, 2H), 7,35-7,3 (m, 2H), 7,12 (m, 1H, rotámero mayor), 7,09 (m, 1H, rotámero menor), 7,05-6,9 (m, 2H), 6,15 (triplete de multipletes, 1H), 5,15 (m, 1H, rotámero menor), 5,13 (s, 1H, rotámero mayor), 5,08 (s, 1H, rotámero menor), 4,77 (m, 1H, rotámero mayor), 4,5-4,2 (m, 5H), 4,08 (m, 1H, rotámero mayor), 3,97 (m, 1H, rotámero menor), 2,66 (m, 1H, rotámero menor), 2,50 (m, 1H rotámero mayor), 2,27 (m, 1H, rotámero mayor), 2,14 (m, 1H, rotámero menor).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, mezcla de rotámeros) \delta 172,8, 172,2, 171,4, 159,1, 158,9, 154,2.
APCI-MS: (M + 1) = 497/499 m/z.
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Ejemplo 31
Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH) (i) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)
Se disolvió Boc-Aze-Pab(Z) (130 mg, 0,279 mmol) en 15 mL de EtOAc saturado con HCl(g) y se dejó reaccionar durante 10 min. Se evaporó el disolvente y se mezcló el residuo con Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R)CH(OH)-C(O)OH (63 mg, 0,188 mmol; véase el ejemplo 21(v) anterior) en 3 mL de DMF, PyBOP (147 mg, 0,279 mmol) y finalmente diisopropiletil-amina (134 mg, 1,03 mmol). Se agitó la mezcla durante 130 min y después se vertió sobre 75 mL de agua y se extrajo tres veces con EtOAc. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. El producto crudo se sometió a cromatografía rápida sobre gel de sílice con EtOAc/MeOH = 95/5. Rendimiento: 119 mg (79%).
^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,06 (bt, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,45-7,25 (m, 5H), 7,18 (d, 2H), 6,89 (m, 1H), 6,84 (m, 1H), 6,76 (m, 1H), 5,16 (s, 2H), 4,84 (s, 1H), 4,79 (m, 1H), 4,66 (doblete de multipletes, 2H), 4,4-4,3 (m, 2H), 4,10 (doblete de multipletes, 2H), 4,02 (m, 1H), 3,67 (m, 1H), 2,46 (m, 1H), 2,28 (m, 1H).
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(ii) Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
Se mezclaron hidrocloruro de hidroxilamina (80 mg, 1,16 mmol) y trietilamina (0,392 g, 3,87 mmol) en 9 mL de THF y se sonicaron durante 1 h a 40ºC. Se añadió Ph(3-Cl)(5-OCH_{2}CH_{2}F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z) (96 mg, 0,156 mmol; véase la etapa (i) anterior) con 9 mL más de THF. Se agitó la mezcla a 40ºC durante 48 h y 3 días a temperatura ambiente. Se evaporó el disolvente y el producto crudo se purificó por RPLC preparativa con CH_{3}CN:NH_{4}OAc 0,1 M (30:70). Rendimiento: 72 mg (78%). Pureza: 100%.
^{1}H NMR (400 MHz, CD_{3}OD mezcla de rotámeros) \delta 7,6-7,55 (m, 2H), 7,35-7,25 (m, 4H), 7,07 (m, 1H, rotámero mayor), 7,04 (m, 1H, rotámero menor), 7,0-6,9 (M, 2h), 5,12 (m, 1H, rotámero menor), 5,08 (s, 1H, rotámero menor), 5,04 (s, 1H), 4,78 (m, 1H, rotámero mayor), 4,68 (doblete de multipletes, 2 H), 4,5-4,25 (m, 3H), 4,20 (doblete de multipletes, 2H) 4,06 (m, 1H, rotámero mayor), 3,97 (m, 1H, rotámero menor), 2,65 (m, 1H, rotámero menor), 2,48 (m, 1H rotámero mayor), 2,27 (m, 1H, rotámero mayor), 2,14 (m, 1H, rotámero menor).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, mezcla de rotámeros) \delta 172,3, 171,5, 159,8, 154,3.
APCI-MS: (M + 1) = 479/481 m/z.
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Ejemplo 32
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab (i) Boc-Pro-Pab(Teoc)
Se disolvió Boc-Pro-Pab(Z) (véase la solicitud de patente internacional WO 97/02284, 15,0 g, 0,0321 mol) en 150 mL de etanol y se añadieron 200 mg de Pd al 10%/C (50% de humedad). Se agitó la mezcla y se hidrogenó a presión atmosférica durante 2 h, se filtró a través de Hyflo y se concentró.
Se usó el producto sin purificación adicional. Se tomaron de este producto 10 g (0,029 mol), que se disolvieron en 300 mL de THF. Se añadió carbonato de teoc-p-nitrofenilo (10 g, 0,035 mol). Se añadió durante 3 min una solución de carbonato de potasio (5,2 g, 0,038 mol) en 50 mL de agua y la solución resultante se agitó durante 3 días, se concentró y el remanente se extrajo con EtOAc tres veces. Se lavaron las capas orgánicas reunidas con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. El producto crudo se sometió a cromatografía rápida sobre gel de sílice utilizando cloruro de metileno:acetona (4:1). Rendimiento: 9,8 g (69%).
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(ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Teoc)
Se disolvió Boc-Pro-Pab(Teoc) (107 mg, 0,218 mmol; véase la etapa (i) anterior) en 10 mL de EtOAc saturado con HCl(g) y se dejó reaccionar durante 10 min. Se evaporó el disolvente y el residuo se mezcló con Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (50 mg, 0,198 mmol; véase el ejemplo 1(viii) anterior) en 3 mL de DMF, PyBOP (115 mg, 0,218 mmol) y finalmente diisopropiletil-amina (104 mg, 0,80 mmol). Se agitó la mezcla durante 2 h y después se vertió sobre 75 mL de agua y se extrajo tres veces con EtOAc. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. El producto crudo se sometió a cromatografía rápida sobre gel de sílice con EtOAc:MeOH (95:5). Rendimiento: 89 mg (72%).
^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,54 (bt, 1H), 7,47 (d, 2H), 7,12 (m, 1H), 7,08 (d, 2H), 7,02 (m, 1H), 6,95 (m, 1H), 6,50 (t, 1H), 5,21 (s, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,35-4,15 (m, 3H), 3,59 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 2,1-1,7 (m, 4H), 1,06 (m, 2H), 0,04 (s, 9H).
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(iii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x TFA
Se disolvió Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab(Teoc) (85 mg, 0,136 mmol; véase la etapa (ii) anterior) en 1 mL de cloruro de metileno y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió TFA (4 mL) y se agitó la reacción durante 90 min. Se evaporó el TFA y el residuo se secó por congelación a partir de agua y acetonitrilo. Rendimiento: 79 mg (92%). Pureza: 94%.
^{1}H NMR (400 MHz, CD_{3}OD mezcla de rotámeros) \delta 7,85-7,7 (m, 2H), 7,58 (d, 2H, rotámero mayor), 7,47 (d, 2H, rotámero menor), 7,35 (m, 1H, rotámero mayor), 7,27 (m, 1H, rotámero menor), 7,2,7,1 (m, 2H), 6,88 (t, 1H), 5,38 (s, 1H, rotámero mayor), 5,22 (s, 1H, rotámero menor), 4,58 (d, 1H), 4,5-4,2 (m, 2H), 3,8-3,5 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 2,2-1,8 (m, 4H).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (átomos de carbono de carbonilo y/o amidina) \delta 173,6, 171,1, 167,0.
APCI-MS: (M + 1) = 481/483 m/z.
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Ejemplo 33
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(OMe) (i) 4-Azidometil-N-metoxi-benzamidina
Se disolvió 4-azidometilbenzonitrilo (17,3 g, 0,109 mol; Nishiyama et al; Chem. Lett. (1982) 1477) en 500 mL de tolueno y 200 mL de etanol absoluto. Se enfrió la solución a -10ºC y se hizo burbujear HCl(g) a su través hasta saturación. La mezcla se mantuvo en el refrigerador durante 2 días y en ese tiempo se evaporó la mayor parte de los disolventes. Se añadió éter dietílico y se separó por decantación. Se volvió a disolver el producto en una solución de O-metilhidroxil-amina (10,5 g, 0,125 mol) y trietil-amina (56 mL) en 200 mL de metanol. Se dejó en reposo la mezcla durante 3 días y después se evaporó el metanol con adición de EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua, HOAc diluido y bicarbonato de sodio acuoso, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se diluyó con más EtOAc hasta un volumen total de 500 mL. Una muestra de 25 mL se evaporó a sequedad. El remanente fue de 932 mg. Rendimiento total: 18,6 g (83%).
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(ii) 4-Aminometil-N-metoxi-benzamidina
A una solución de 4-azidometil-N-metoxi-benzamidina (11,3 g, 0,055 mol; véase la etapa (i) anterior) en 200 mL de etanol se añadieron 200 mg de PtO_{2}. Se hidrogenó la mezcla con burbujeo constante de hidrógeno durante 4 h y posteriormente se filtró a través de Celite® y se evaporó. Rendimiento: 7,34 g (74%).
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(iii) Boc-Pro-Pab(OMe)
A una suspensión de Boc-Pro-OH (9,7 g, 0,045 mol), 4-aminometil-N-metoxi-benzamidina (7,34 g, 0,041 mol; véase la etapa (ii) anterior) y dimetilaminopiridina (7,8 g, 0,064 mol) en 300 mL de acetonitrilo se añadió EDC base (11,7 mL, 0,068 mol). Se agitó la mezcla durante 18 h, se concentró y se sometió a reparto entre agua y EtOAc. Se lavó la capa orgánica con agua, bicarbonato de sodio acuoso, se secó (MgSO_{4}) y se evaporó. El producto crudo se sometió a cromatografía rápida sobre gel de sílice con EtOAc. Rendimiento: 9,73 g (63%).
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(iv) H-Pro-Pab(OMe) x 2 HCl
Se disolvió Boc-Pro-Pab(OMe) (9,7 g, 0,026 mol; véase la etapa (iii) anterior) en 250 mL de EtOAc. La solución enfriada con hielo se saturó con HCl(g) mediante burbujeo durante 5 min. El producto precipitó inmediatamente y se añadieron 125 mL de etanol absoluto. Se sonicó la mezcla hasta que la mayor parte del material había solidificado. Se añadió éter dietílico (200 mL) y se filtró la suspensión. Algunos grumos que no habían solidificado se trataron de nuevo con etanol absoluto y éter dietílico. Se secó el sólido. Rendimiento: 7,57 g (86%).
^{1}H NMR (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,74 (d, 2H), 7,58 (d, 2H), 4,55 (s, 2H), 4,38 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,45-3,3 (m, 2H), 2,50 (m, 1H), 2,15-2,0 (m, 3H).
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(v) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(OMe)
Se disolvieron Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (50 mg, 0,198 mmol; véase el ejemplo 1 (viii) anterior), H-Pro-Pab(OMe) (76 mg, 0,218 mmol, véase la etapa (iv) anterior) y PyBOP (115 mg, 0,218 mmol) en 2 mL de DMF. Se añadió diisopropiletil-amina (104 mg, 0,80 mmol) y se agitó la mezcla durante 2,5 h. Se vertió la mezcla sobre 50 mL de agua y se extrajo tres veces con EtOAc y las fases orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Se sometió el residuo a cromatografía rápida sobre gel de sílice con EtOAc:MeOH (95:5). Rendimiento: 37 mg (36%). Pureza: 98%.
^{1}H NMR (400 MHz, CD_{3}OD, mezcla de rotámeros) \delta 7,60 (d, 2H, rotámero mayor), 7,57 (d, 2H, rotámero menor), 7,4-7,1 (m, 5H), 6,89 (t, 1H, rotámero mayor), 6,87 (t, 1H, rotámero menor), 5,35 (s, 1H, rotámero mayor), 5,21 (s, 1H, rotámero menor), 4,72 (m, 1H, rotámero menor), 4,5-4,35 (m, 1H y 2H, rotámero mayor), 4,3-4,25 (m, 2H, rotámero menor), 3,814 (s, 3H, rotámero mayor), 3,807 (s, 3H, rotámero menor), 3,75-3,5 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 2,2-1,8 (m, 4H).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, mezcla de rotámeros) \delta 173,3, 173,2, 171,3, 171,0, 153,9, 152,4.
APCI-MS:(M+1) = 511/513 m/z.
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Ejemplo 34
Ph(3'-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-((2-amidino)-5-piridinilo)
32
(i) Ácido 6-cianonicotínico
A una solución del N-óxido del ácido nicotínico (51 g, 0,37 mol) en 1,2 L de DMF, se añadió NaCN (54 g, 1,1 mol), seguido por trietilamina (255 mL, 1,83 mol) y TMSC1 (185 mL). La mezcla de reacción se agitó a 110ºC durante 10 h, se filtró y se concentró el filtrado. Se disolvió el residuo en 100 mL de HCl 2 N y se extrajo con cloruro de metileno. Las capas orgánicas se reunieron, se concentraron y se recristalizaron a partir de agua para dar 12 g (22%) del producto.
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(ii) 5-(Hidroximetil)piridin-2-carbonitrilo
A una solución de ácido 6-cianonicotínico (12 g, 0,081 mol; véase la etapa (i) anterior) en THF a 0ºC, se añadió Et_{3}N (12,4 mL, 0,0892 mol) seguido por cloroformiato de etilo (8,53 mL, 0,0892 mol). Se agitó la mezcla de reacción durante 15 min y se añadió NaBH_{4} (6,14 g, 0,162 mol). Después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante la noche, se sofocó con agua y se extrajo con cloruro de metileno. Se concentró la capa orgánica y se purificó por cromatografía en columna para dar 4 g (20%) del alcohol.
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(iii) 5-(Azidometil)piridin-2-carbonitrilo
Se disolvió 5-(hidroximetil)piridin-2-carbonitrilo (4 g, 0,03 mol; véase la etapa (ii) anterior) en 25 mL de cloruro de metileno y se enfrió en un baño de hielo. Se añadieron gota a gota cloruro de mesilo (2,32 mL, 0,0300 mol) y después trietilamina (4,6 mL, 0,033 mol). Se agitó la mezcla de reacción y después de obtenido se trató el mesilato crudo con NaN_{3} (7,35 g, 0,113 mol) en 20 mL de DMF. La mezcla de reacción se agitó a 40ºC durante 2 h, se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se concentró para dar 3,95 g (83%) de la azida cruda.
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(iv) 5-(terc-Butoxicarbonilaminometil)piridin-2-carbonitrilo
A una solución de 5-(azidometil)piridin-2-carbonitrilo (3,95 g, 0,0248 mol; véase la etapa (iii) anterior) en 30 mL de THF y 10 mL de agua, se añadió trifenil-fosfina (7,8 g, 0,0298 mol) y la mezcla resultante se agitó durante 24 h. Después, se añadió trietilamina (3,8 mL, 0,027 mol), seguido por anhídrido Boc (5,4 g, 0,025 mol) y agitación durante 2 h. Se sometió la mezcla de reacción a reparto entre agua y acetato de etilo. Se concentró la capa orgánica y se purificó por cromatografía en columna para dar 2,1 g (36%) del compuesto del sub-título.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,6 (s, 1H), 8,0 (d, 1H), 8,9 (d, 1H), 4,1 (m, 2H), 1,4 (s, 9H).
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(v) 5-(Aminometil)piridin-2-carbonitrilo x 2 HCl
Se disolvió 5-(terc-butoxicarbonilaminometil)piridin-2-carbonitrilo (0,200 g, 0,86 mmol, véase la etapa (iv) anterior) en 10 mL de EtOAc saturado con HCl(g) y se agitó durante 30 min. Se evaporó el disolvente y se obtuvieron 0,175 g (99%) del compuesto del sub-título como su sal dihidrocloruro.
^{1}H NMR (500 MHz, D_{2}O) \delta 8,79 (s, 1H), 8,17 (d, 1H), 8,05 (d, 1H), 4,38 (s, 2H).
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(vi) Boc-Aze-NH-CH_{2}-5-Py(2-CN)
A una mezcla de 5-(aminometil)piridin-2-carbonitrilo x 2 HCl (0,175 g, 0,85 mmol; véase la etapa (v) anterior), Boc-Aze-OH (0,201 g, 1,00 mmol) y TBTU (0,321 g, 1,00 mmol) en 5 mL de DMF, se añadió dimetilaminopiridina (0,367 g, 3,00 mmol). Se agitó la mezcla durante la noche y posteriormente se vertió sobre agua y se extrajo tres veces con EtOAc. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con bicarbonato de sodio acuoso, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. El producto crudo empezó a cristalizar y se utilizó tal cual en la siguiente etapa. Rendimiento: 0,23 g (73%).
^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,66 (s, 1H), 8,2-7,8 (ancho, 1H), 7,79 (d, 1H), 7,67 (d, 1H), 4,73 (m, 1H), 4,65-4,5 (m, 2H), 3,94 (m, 1H), 3,81 (m, 1H), 2,6,2,35 (m, 2H), 1,8 (ancho, 1H), 1,45 (s, 9H).
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(vii) H-Aze-NH-CH_{2}-5-Py(2-CN) x 2 HCl
Se disolvió Boc-Aze-NH-CH_{2}-5-Py(2-CN) (0,23 g, 0,73 mmol; véase la etapa (vi) anterior) en 10 mL de EtOAc saturado con HCl(g) y se agitó durante 30 min. Se evaporó el disolvente y se obtuvieron 0,21 g (100%) del compuesto del sub-título como su sal dihidrocloruro.
^{1}H NMR (500 MHz, D_{2}O) \delta 8,64 (s, 1H), 8,0-7,9 (m, 2H), 5,19 (m, 1H), 4,65-4,55 (m, 2H), 4,20 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 2,88 (m, 1H), 2,64 (m, 1H).
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(viii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH_{2}-5-Py(2-CN)
A una mezcla de H-Aze-NH-CH_{2}-5-Py(2-CN) x 2 HCl (0,206 g, 0,713 mmol; véase la etapa (vii) anterior), Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (0,180 g, 0,713 mmol; véase el ejemplo 1(viii) anterior) y PyBOP (0,408 g, 0,784 mmol) en 5 mL de DMF, se añadió dimetilaminopiridina (0,367 g, 3,00 mmol). Se agitó la mezcla durante la noche y posteriormente se vertió sobre agua y se extrajo tres veces con EtOAc. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con bicarbonato de sodio acuoso, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Se sometió el producto crudo a cromatografía rápida sobre gel de sílice con EtOAc y dio un producto puro. Rendimiento: 0,197 g (61%).
^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,63 (m, 1H), 8,22 (bt, 1H), 7,78 (m, 1H), 7,67 (m, 1H), 7,21 (m, 1H), 7,16 (m, 1H), 7,04 (m, 1H), 6,56 (t, 1H), 4,97 (bd, 1H), 4,92 (m, 1H), 4,6-4,5 (m, 2H), 4,40 (bd, 1H), 4,18 (m, 1H), 3,80 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,46 (m, 1H), 1,92 (s, 1H).
APCI-MS: (M + 1) = 451/453 m/z.
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(ix) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH_{2}-((2-amidino)-5-piridinilo) x HOAc
Se calentaron a 50ºC durante 2 días Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH_{2}-5-Py(2-CN) (0,200 g, 0,444 mmol; véase la etapa (viii) anterior), acetato de amonio (1,00 g, 0,0130 mol) y N-acetilcisteína (2,00 g, 0,0122 mol) en 10 mL de metanol. Por RPLC preparativa con CH_{3}CN:NH_{4}OAc 0,1 M (30:79) y tratando de nuevo las fracciones apropiadas con CH_{3}CN:NH_{4}OAc 0,1 M (5:95 - 40:60) se obtuvieron 60 mg (26%) del compuesto del título puro como su sal acetato después de secado por congelación a partir de agua y acetonitrilo. Pureza:
100%.
^{1}H NMR (500 MHz, D_{2}O, mezcla de rotámeros) \delta 8,68 (s, 1H, rotámero mayor), 8,62 (s, 1H, rotámero menor), 8,05-7,9 (m, 2H), 7,33 (m, 1H, rotámero), 7,27 (m, 1H, rotámero), 7,22 (m, 1H, rotámero), 7,17 (m, 1H, rotámero), 7,01 (m, 1H, rotámero), 6,84 (t, 1H), 5,32 (s, 1H, rotámero mayor), 5,20 (m, 1H, rotámero menor), 5,13 (s, 1H, rotámero menor), 4,88 (m, 1H, rotámero mayor), 4,65-4,55 (m, 2H, rotámero mayor), 4,45-4,35 (m, 1H, rotámero más 1H, rotámero menor), 4,31 (d, 1H, rotámero menor), 4,2-4,05 (m, 1H más 1H, rotámero), 2,80 (m, 1H, rotámero menor), 2,61 (m, 1H, rotámero mayor), 2,33 (m, 1H, rotámero mayor), 2,24 (m, 1H, rotámero menor), 1,93 (s,
3H).
^{13}C NMR (100 MHz; D_{2}O): (carbonos de carbonilo y/o amidina, mezcla de rotámeros) \delta 181,6, 173,3, 172,7, 172,6, 172,3, 162,6, 162,3.
APCI-MS: (M + 1) = 468/470 m/z.
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Ejemplo 35
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-((2-metoxiamidino)-5-piridinilo) 
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33 
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(i) Boc-NH-CH_{2}-[(2-(amino(hidroxilimino)metil))-5-piridinilo]
Se disolvió 5-(terc-butoxicarbonilaminometil)piridin-2-carbonitrilo (1,00 g, 4,29 mmol; véase el ejemplo 34(iv) anterior) en 10 mL de etanol y se añadieron hidrocloruro de hidroxilamina (0,894 g, 0,0129 mol) y trietil-amina (1,30 g, 0,0129 mol). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 6 días. Se sometió la mezcla a reparto entre agua y cloruro de metileno. Se extrajo la capa acuosa con cloruro de metileno y las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Rendimiento: 0,96 g (84%).
^{1}H NMR (400 MHz, acetona-d_{6}) \delta 9,01 (bs, 1H), 8,50 (bs, 1H), 7,87 (m, 1H), 7,70 (m, 1H), 6,58 (ancho, 1H), 5,70 (ancho, 2H), 4,31 (d, 2H), 1,41 (s, 9H).
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(ii) Boc-Aze-N-H-CH_{2}-(2-(amidino)-5-piridinilo) x HOAc
Se llevó a cabo esta reacción según el método descrito en Judkins et al., Synth. Comm. (1998) 4351. Una suspensión de Boc-NH-CH_{2}-[(2-(amino(hidroxilimino)metil))-5-piridinilo] (0,910 g, 3,42 mmol; véase la etapa (i) anterior), anhídrido acético (0,35 mL, 3,7 mmol) y 0,35 g de Pd al 10%/C (50% de humedad) en 100 mL de ácido acético se hidrogenó a una presión de 5 atm durante 5 h. Se filtró la mezcla a través de Celite y se concentró. Se secó el residuo por congelación a partir de agua y acetonitrilo para dar 0,97 g (92%) del compuesto del sub-título.
^{1}H NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,74 (s, 1H), 8,12 (d, 1H), 7,98 (d, 1H), 4,38 (s, 2H), 1,92 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).
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(iii) Boc-NH-CH_{2}-(2-(amino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo)
A una suspensión de Boc-NH-CH_{2}-(2-(amidino)-5-piridinilo) x HOAc (0,96 g, 3,1 mmol; véase la etapa (ii) anterior) en 75 mL de THF, se añadió una solución de carbonato de potasio (1.07 g, 7.7 mmol) y carbonato de Teoc-p-nitrofenilo (1,14 g, 4,02 mmol) en 15 mL de agua. La mezcla se agitó durante una noche. Se añadió un exceso de glicina y carbonato de potasio, y se continuó la reacción durante 2 h. Se evaporó el THF y se extrajo el remanente tres veces con EtOAc. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. El producto se pudo usar sin más purificación.
^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,31 (ancho, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,41 (d, 1H), 8,35 (ancho, 1H), 7,74 (d, 1H), 4,97 (ancho, 1H), 4,39 (m, 2H), 4,26 (m, 2H), 1,46 (s, 9H), 1,14 (m, 2H), 0,07 (s, 9H).
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(iv) H_{2}N-CH_{2}-(2-(amino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo) x 2 HCl
Se disolvió Boc-NH-CH_{2}-(2-(amino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo) (0,23 g, 0,58 mmol; véase la etapa (iii) anterior) en 25 mL de EtOAc saturado con HCl(g) y se agitó durante 30 min. Se evaporó el disolvente y el producto se utilizó sin purificación adicional. Rendimiento: 0,21 g (98%).
^{1}H NMR (500 MHz, D_{2}O) \delta 8,89 (s, 1H), 8,25 (s, 2H), 4,55 (m, 2H), 4,42 (s, 2H), 1,20 (m, 2H), 0,09 (s, 9H).
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(v) Boc-Aze-NH-CH_{2}-(2-(amino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo)
A una solución de H_{2}N-CH_{2}-(2-(amino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo) x 2 HCl (0,21 g, 0,57 mmol; véase la etapa (iv) anterior), Boc-Aze-OH (0,127 g, 0,631 mmol), y TBTU (233 mg, 0,726 mmol) en 5 mL de DMF, se añadió dimetilaminopiridina (269 mg, 2,20 mmol). Se agitó la mezcla durante la noche, se vertió sobre 100 mL de agua y se extrajo tres veces con EtOAc. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con bicarbonato de sodio acuoso y agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. El producto crudo se sometió a cromatografía rápida sobre gel de sílice con EtOAc para dar 170 mg (56%) del producto deseado.
^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,33 (ancho, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,41 (d, 1H), 8,36 (ancho, 1H), 7,75 (m, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,56 (m, 2H), 4,26 (m, 2H), 3,93 (m, 1H), 3,80 (m, 1H), 2,6-2,4 (m, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,14 (m, 2H), 0,07 (s, 9H).
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(vi) H-Aze-NH-CH_{2}-(2-(amino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo) x 2 HCl
Se disolvió Boc-Aze-NH-CH_{2}-(2-(amino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo) (170 mg, 0,356 mmol; véase la etapa (v) anterior) en 25 mL de EtOAc saturado con HCl(g) y se agitó durante 30 min. Se evaporó el disolvente y el producto se utilizó sin purificación adicional. Rendimiento: 160 mg (100%).
^{1}H NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 9,00 (m, 1H), 8,84 (m, 1H), 8,23 (d, 2H), 8,10 (m, 1H), 5,09 (m, 1H), 4,7-4,6 (m, 2H), 4,51 (m, 2H), 4,14 (m, 1H), 3,97 (m, 1H), 2,86 (m, 1H), 2,58 (m, 1H), 1,22 (m, 2H), 0,11 (s, 9H).
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(vii) Ph(3-Cl)(S-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-(2-(amino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo)
A una solución de H-Aze-NH-CH_{2}-(2-(amino(trimetilsililetilimino)-metil)-5-piridinilo) x 2 HCl (160 mg, 0,462 mmol; véase la etapa (vi) anterior), Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (131 mg, 0,462 mmol; véase el ejemplo 1(viii) anterior) y PyBOP (263 mg, 0,505 mmol) en 5 mL de DMF se añadió diisopropiletil-amina (0,30 mL, 1,71 mmol). Se agitó la mezcla durante la noche, se vertió sobre 100 mL de agua y se extrajo tres veces con EtOAc. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con bicarbonato de sodio acuoso y agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Se sometió el producto crudo a cromatografía rápida sobre gel de sílice con EtOAc:MeOH (95:5) para dar 148 mg (52%) del producto deseado.
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(viii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-(2-(metoxiamino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo)
Una suspensión de Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH_{2}-(2-(metoxiamino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo) (148 mg, 0,242 mmol; véase la etapa (vii) anterior) y O-metilhidroxil-amina (202 mg, 2,42 mmol) en 10 mL de acetonitrilo, se calentó a 70ºC durante 3 h. Se sometió la mezcla a reparto entre agua y EtOAc. La capa acuosa se extrajo dos veces con EtOAc y las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. El material crudo se sometió a cromatografía rápida sobre gel de sílice con EtOAc:MeOH (95:5) para dar 44 mg (28%) de material puro.
^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,55 (m, 1H), 8,05 (bt, 1H), 7,70 (m, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,56 (d, 1H), 7,22 (m, 1H), 7,16 (m, 1H), 7,03 (m, 1H), 6,50 (t, 1H), 4,92 (s, 1H), 4,89 (m, 1H), 4,55-4,45 (m, 2H), 4,38 (ancho, 1H), 4,2-4,1 (m, 3H), 4,00 (s, 3H), 3,73 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,44 (m, 1H), 0,97 (m, 2H), 0,02 (s, 9H).
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(ix) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-((2-metoxiamidino)-5-piridinilo)
Se disolvió Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-(2-(metoxiamino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo) (44 mg, 0,069 mmol; véase la etapa(viii) anterior) en 2 ml de TFA y se dejó que reaccionara durante 1 h. Se evaporó el TFA y el residuo se sometió a reparto entre EtOAc y bicarbonato de sodio acuoso. Se extrajo la capa acuosa con EtOAc y las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Rendimiento: 30 mg (88%). Pureza: >95%.
^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,44 (m, 1H), 8,03 (bt, 1H), 7,91 (m, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,19 (m, 1H), 7,13 (m, 1H), 7,00 (m, 1H), 6,52 (t, 1H), 5,6-5,45 (ancho, 2H), 4,90 (s, 1H), 4,89 (m, 1H), 4,55-4,4 (m, 2H), 4,27 (ancho, 1H), 4,12 (m, 1H), 3,92 (s, 3 H), 2,68 (m, 1H), 2,41 (m, 1H).
^{13}C NMR (100 MHz; CDCl_{3}): (carbonos de carbonilo y/o amidina) \delta 173,0, 170,9, 152,6.
APCI-MS: (M + 1) = 498/500 m/z.
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Ejemplo 36
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}((5-amidino)-2-pirimidinilo) 
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34 
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(i) 2-Amino-2-iminoetilcarbamato\cdotAcOH
Se disolvieron N-Boc-aminoacetonitrilo (40,2 g, 257,4 mmol) y N-acetilcisteína (42,0 g, 257,4 mmol) en metanol (300 mL) a 60ºC y se pasó amoníaco a su través durante 18 h. Se separó el disolvente a vacío. Después de cromatografía de intercambio iónico (Amberlite IRA-400 (AcOH)) y recristalización en acetona, se obtuvieron 28,4 g (53%) del compuesto del sub-título como un sólido blanco.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 4,41 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 4,01 (s, 2H), 2,91 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 2,01 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).
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(ii) Perclorato de 1,3-bis(dimetilamino)-2-cianotrimetinio
Una solución de 3-dimetilaminoacrilonitrilo (25,0 g, 260,0 mmol) en cloroformo (75 mL) se añadió gota a gota a una solución de cloruro de (clorometilen)dimetilamonio (50,0 g, 390,1 mmol) en cloroformo (175 mL) a 0ºC. Se agitó la mezcla de reacción durante 2 h adicionales a 0ºC, después se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche, entonces se calentó seguidamente durante 8 h bajo reflujo. El disolvente se separó a vacío. Se añadió el residuo a una mezcla de perclorato de sodio (110 g, 0,898 mmol) en agua (150 mL) y etanol (300 mL). Se calentó la mezcla bajo reflujo durante 15 min después se enfrió y se dejó en reposo durante la noche en un refrigerador. Se recogió el precipitado y se recristalizó en etanol para dar 23,8 g (52%) del compuesto del sub-título como agujas
incoloras.
Pf: 140-141ºC.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,24 (s, 2H), 3,59 (s, 6H), 3,51 (s, 6H).
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(iii) Boc-NH-CH_{2}-(5-ciano)-2-pirimidina
Una mezcla de 2-amino-2-iminoetilcarbamato de t-butilo\cdotAcOH (5,0 g, 23,8 mmol; véase la etapa (i) anterior) y perclorato de 1,3-bis(dimetilamino)-2-cianotrimetinio (6,0 g, 23,8 mmol; véase la etapa (ii) anterior) en piridina (300 mL) se agitó bajo nitrógeno a 70-75ºC durante 16 h y después se calentó a reflujo durante 6 h. Se enfrió la mezcla a temperatura ambiente y se separó el disolvente a vacío. Se extrajo el residuo con una mezcla caliente (1:1) de acetato de etilo y cloroformo, se filtró a través de un pequeño lecho de sílice, y se concentró para dar el producto crudo. Por cromatografía rápida sobre sílice eluyendo con cloroformo se obtuvieron 4,0 g (71%) del compuesto del título como aceite incoloro, que se solidificó en reposo.
Pf: 86-87ºC.
R_{f}= 0,77 (sílice, acetato de etilo/cloroformo 3:2).
^{1}H NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 9,25 (s, 2H), 7,39 (bt, 1H), 4,39 (d, J = 6 Hz, 2H), 1,38 (s, 9H).
^{13}C NMR (750 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 170,4, 160,3, 155,8, 115,2, 106,9, 80,0, 46,3, 28,1.
APCI-MS: (M + 1) = 235 m/z.
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(iv) Boc-Aze-NH-CH_{2}-((5-ciano)-2-pirimidinilo)
Se disolvió Boc-NH-CH_{2}-(5-ciano)-2-pirimidina (1,14 g, 4,87 mmol; véase la etapa (iii) anterior) en 50 mL de EtOAc saturado con HCl(g) y se dejó reaccionar durante 1 h y se concentró. Se disolvió el residuo en 20 mL de DMF y se enfrió en un baño de hielo. Se añadieron diisopropiletil-amina (3,5 mL, 0,020 mol), Boc-Aze-OH (1,08 g, 5,37 mmol) y HATU (2,80 g, 5,38 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se evaporó el disolvente y el producto se purificó por RPLC preparativa utilizando CH_{3}CN:NH_{4}OAc 0,1 M (40:60). Se evaporó el acetonitrilo y la capa acuosa se extrajo tres veces con EtOAc. Las capas orgánicas reunidas se secaron (MgSO_{4}) y se evaporaron.
Rendimiento: 1,12 g (72%).
^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,95 (s, 2H), 4,82 (d, 2H), 4,74 (m, 1H), 3,95 (m, 1H), 3,84 (m, 1H), 2,6-2,4 (m, 2H), 1,47 (s, 9H).
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(v) Boc-Aze-NH-CH_{2}-((5-amidino)-2-pirimidinilo) x HOAc
Una solución de Boc-Aze-NH-CH_{2}-((5-ciano)-2-pirimidinilo) (0,83 g, 2,6 mmol; véase la etapa (iv) anterior), N-acetilcisteína (0,43 g, 2,6 mmol) y acetato de amonio (0,60 g, 7,8 mmol) en 10 mL de metanol, se calentó a 60ºC bajo nitrógeno durante 2 días. Se evaporó el disolvente y el material crudo se purificó por RPLC preparativa utilizando un gradiente de CH_{3}CN:NH_{4}OAc 0,1 M (5:95 a 100:0). Las fracciones de interés se secaron por congelación para dar 1,0 g (93%) del material deseado.
^{1}H NMR (300 MHz, D_{2}O, señales oscurecidas por la señal HDO) \delta 9, 17 (s, 2H), 4,1-3,9 (m, 2H), 2,60 (m, 1H), 2,29 (m, 1H), 1,93 (s, 3H), 1,44 (s, 9H).
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(vi) Boc-Aze-NH-CH_{2}-[(5-(amino(trimetilsililetilimino)metil))-2-pirimidinilo]
A una suspensión de Boc-Aze-NH-CH_{2}-((5-amidino)-2-pirimidinilo) x HOAc (0,95 g, 2,41 mmol; véase la etapa (v) anterior) en 50 mL de THF, se añadió una solución de carbonato de Teoc-p-nitrofenilo (0,85 g, 3,0 mmol) y carbonato de potasio (1,0 g, 7,2 mmol) en 10 mL de agua. Se agitó la mezcla durante 24 h, se concentró y se sometió a reparto entre agua y cloruro de metileno. Se lavó la capa orgánica dos veces con bicarbonato de sodio acuoso saturado, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se evaporó. Se sometió el producto crudo a cromatografía rápida sobre gel de sílice con heptano:EtOAc (1:1). Rendimiento: 1,04 g (90%).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,16 (s, 2H), 4,80 (d, 2H), 4:73 (m, 1H), 4,26 (m, 2H), 4,0-3,8 (m, 2H), 2,6-2,4 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,12 (m, 2H), 0,07 (s, 9H).
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(vii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-[(5-(amino(trimetilsililetilimino)metil))-2-pirimidinilo]
Se disolvió Boc-Aze-NH-CH_{2}-[(5-(amino(trimetilsililetilimino)metil))-2-pirimidinilo] (0,209 g, 0,437 mmol; véase la etapa (vi) anterior) en 25 mL de EtOAc saturado con HCl(g) y se dejó reaccionar durante 15 min. Se evaporó el disolvente y se disolvió el residuo en 4 mL de DMF. Se añadieron Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (0,100 g, 0,396 mmol; véase el ejemplo 1(viii) anterior), PyBOP (0,231 g, 0,444 mmol) y diisopropiletil-amina (0,208 g, 1,61 mmol), y la mezcla se agitó durante 80 min. Se vertió la mezcla de reacción sobre 100 mL de agua y se extrajo tres veces con EtOAc. Las capas orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Se purificó el producto crudo por RPLC preparativa utilizando CH_{3}CN:NH_{4}OAc 0,1 M (1:1). Rendimiento: 63 mg (26%).
^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}, mezcla de rotámeros) \delta 9,3 (ancho, 1H), 9,03 (s, 2H, rotámero menor), 9,00 (s, 2H, rotámero mayor), 8,25 (m, 1H, rotámero mayor), 7,9 (ancho, 1H), 7,80 (m, 1H, rotámero menor), 7,2-6,9 (m, 3H), 6,50 (t, 1H), 5,14 (s, 1H, rotámero menor), 5,08 (m, 1H, rotámero menor), 4,94 (s, 1H, rotámero mayor), 4,80 (m, 1H, rotámero mayor), 4,7-4,4 (m, 2H), 4,3-3,9 (m, 3H), 3,74 (m, 1H, rotámero mayor), 2,7-2,1 (m, 2H), 1,03 (m, 2H), 0,01 (s, 9H).
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(viii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-((5-amidino)-2-pirimidinilo) x TFA
Se disolvió Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-[(5-(amino(trimetilsililetilimino)metil))-2-pirimidinilo] (21 mg, 0,034 mmol; véase la etapa (vii) anterior) en 0,5 mL de cloruro de metileno y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió TFA (2 mL) y se agitó la mezcla durante 60 min y después se concentró. Se secó el producto por congelación a partir de agua y acetonitrilo. Rendimiento: 20 mg (100%). Pureza: 100%.
^{1}H NMR (400 MHz, CD_{3}OD, mezcla de rotámero, señales oscurecidas por la señal HDO) \delta 9,08 (s, 2H), 7,4-7,1 (m, 3H), 6,88 (t, 1H, rotámero mayor), 6,85 (t, 1H, rotámero menor), 5,30 (m, 1H, rotámero menor), 5,22 (s, 1H, rotámero menor), 5,20 (s, 1H, rotámero mayor), 4,73 (m, 1H, rotámero mayor), 4,34 (m, 1H, rotámero), 4,21 (m, 1H, rotámero), 4,15-3,95 (m, 2H, rotámeros), 2,73 (m, 1H, rotámero), 2,57 (m, 1H, rotámero), 2,45-2,25 (m, 2H, rotámeros) ^{13}C-NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, mezcla de rotámeros) \delta 173,0, 172,6, 172,1, 171,0, 163,4.
APCI-MS: (M + 1) = 469/471 m/z.
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Ejemplo 37
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-((5-metoxiamidino)-2-pirimidinilo) 
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35 
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(i) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-[(5-(metoxiamino-(trimetilsililetilimino)metil))-2-pirimi- dinilo]
Una suspensión de Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-[(5-(amino(trimetilsililetilimino)metil))-2-pirimidinilo] (40 mg, 0,065 mmol; véase el ejemplo 36(vii) anterior) y O-metilhidroxilamina (33 mg, 0,40 mmol) en 3 mL de acetonitrilo, se calentó a 70ºC durante 3 h. Se sometió la mezcla a reparto entre agua y EtOAc. La capa acuosa se extrajo dos veces con EtOAc y las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Rendimiento: 33 mg (79%).
^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}, mezcla de rotámeros) \delta 8,76 (s 2H, rotámero mayor), 8,70 (s, 2H, rotámero), 8,18 (m, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,4-6,9 (m, 4H), 6,50 (bt, 1H), 5,3-4,5 (m, 4H), 4,2-4,05 (m, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,68 (m, 1H), 2,8-2,2 (m, 2H), 2,1 (ancho, 1H), 0,96 (m, 2H), 0,01 (s, 9H).
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(ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-((5-metoxiamidino)-2-pirimidinilo)
Se disolvió Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH_{2}-[(5-(metoxiamino-(trimetilsililetilimino)metil))-2-pirimidinilo] (33 mg, 0,052 mmol; véase la etapa (i) anterior) en 0,5 mL de cloruro de metileno y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió TFA (2 mL) y la mezcla se agitó durante 2 h y después se concentró. Se secó el producto por congelación a partir de agua y acetonitrilo. Rendimiento: 31 mg (81%). Pureza: 100%.
^{1}H NMR (400 MHz, CD_{3}OD, mezcla de rotámero señales oscurecidas por la señal HDO) \delta 8,96 (s, 2H, rotámero), 8,94 (s, 2H, rotámero), 7,4-7,3 (m, 1H), 7,2-7,1 (m, 2H), 6,88 (t, 1H, rotámero), 6,85 (t, 1H, rotámero), 5,29 (m, 1H, rotámero), 5,24 (s, 1H, rotámero), 5,20 (s, 1H, rotámero), 4,75-4,55 (m, 2H), 4,33 (m, 1H, rotámero), 4,19 (m, 1H, rotámero), 4,15-3,95 (m, 2H, rotámeros), 3,88 (s, 3H, rotámero), 3,86 (s, 3H, rotámero), 2,72 (m, 1H, rotámero), 2,56 (m, 1H, rotámero), 2,45-2,25 (m, 2H, rotámeros).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, mezcla de rotámeros) \delta 172,8, 172,6, 172,1, 171,8, 167,8, 167,7, 155,1, 152,3, 152,1.
APCI-MS: (M + 1) = 499/501 m/z.
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Ejemplo 38
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F) 
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36 
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(i) 2-Fluoro-4-vinilbenzonitrilo
Una solución de 4-bromo-2-fluorobenzonitrilo (4,92 g, 0,0246 mol), viniltributilestaño (0,78 g, 0,246 mol), y tetrakistrifenilfosfina (0,67 g, 0,58 mmol) en 250 mL de tolueno se mantuvo a reflujo bajo nitrógeno durante la noche. Se evaporó el disolvente y el residuo se sometió a cromatografía rápida sobre gel de sílice con heptano:CH_{2}Cl_{2} (1:1) hasta CH_{2}Cl_{2} puro. Se obtuvo un aceite incoloro que cristalizó. Rendimiento: 3,0 g (82%).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,56 (m, 1H), 7,3-7,2 (m, 2H), 6,69 (m, 1H), 5,89 (d, 1H), 5,51 (d, 1H).
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(ii) 2-Fluoro-4-hidroximetilbenzonitrilo
Por una solución enfriada (-78ºC) de 2-fluoro-4-vinilbenzonitrilo (1,3 g, 8,8 mmol; véase la etapa (i) anterior) en 40 mL de CH_{2}Cl_{2} y 5 mL de metanol, se hizo burbujear ozono (50 L/h, 29 g/m^{3}) durante 30 min. Se hizo burbujear argón posteriormente a su través para eliminar el exceso de ozono. Se añadió borohidruro de sodio (0,67 g, 0,018 mol) y se separó el baño de enfriamiento. Se agitó la mezcla y se dejó reaccionar durante 1 h. Se evaporó la mezcla y se añadió HCl 2 M. Se extrajo la mezcla dos veces con éter dietílico y las fracciones etéreas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. El producto crudo cristalizó. Rendimiento: 1,1 g (81%).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,59 (m, 1H), 7,3-7,2 (m, 2H), 4,79 (d, 2H), 2,26 (t, 1H).
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(iii) Metanosulfonato de 4-ciano-3-fluorobencilo
Se disolvió 2-fluoro-4-hidroximetilbenzonitrilo (1,3 g, 8,6 mmol; véase la etapa (ii) anterior) en 50 mL de CH_{2}Cl_{2} y se enfrió en un baño de hielo. Se añadieron trietilamina (0,87 g, 8,6 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (0,99 g, 8,7 mmol). Después de agitación durante 1,5 h se lavó la mezcla de reacción con HCl 1 M. Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}) y se evaporó. El producto se pudo utilizar sin purificación. Rendimiento de un aceite incoloro: 1,8 g
(92%).
^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,66 (m, 1H), 7,35-7,3 (m, 2H), 5,26 (s, 2H), 3,07 (s, 3H).
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(iv) 4-Azidometil-2-fluorobenzonitrilo
A una solución enfriada en hielo de metanosulfonato de 4-ciano-3-fluorobencilo (1,8 g, 7,9 mmol; véase la etapa (iii) anterior) se añadió azida de sodio (0,80 g, 0,012 mol). Se agitó la mezcla durante la noche y después se vertió sobre 200 mL de agua y se extrajo tres veces con éter dietílico. Las fases etéreas reunidas se lavaron cinco veces con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. El aceite incoloro crudo se pudo utilizar sin purificación adicional. Rendimiento: 1,2 g (87%).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,64 (m, 1H), 7,25-7,18 (m, 2H), 4,47 (s, 2H).
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(v) 4-Aminometil-2-fluorobenzonitrilo
A una suspensión de cloruro estannoso dihidrato (0,45 g, 2,4 mmol) en 20 mL de acetonitrilo bajo agitación se añadieron tiofenol (1,07 g, 9,7 mmol) y trietilamina (0,726 g, 7,17 mmol). Después se añadió una solución de 4-azidometil-2-fluorobenzonitrilo (0,279 g, 1,58 mmol; véase la etapa (iv) anterior) en unos mililitros de acetonitrilo. Después de 1,5 h, se consumió la azida y se evaporó el disolvente. Se disolvió el residuo en cloruro de metileno y se lavó tres veces con NaOH 2 M. La fase orgánica se extrajo dos veces con HCl 1 M. Las fases acuosas ácidas reunidas se lavaron con cloruro de metileno y después se alcalinizaron con NaOH 2 M y se extrajeron tres veces con cloruro de metileno. La fase orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}) y se evaporó para dar 0,172 g (72%) del compuesto deseado del sub-título que pudo ser utilizado sin purificación.
^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,58 (m, 1H), 7,3-7,2 (m, 2H), 3,98 (s, 2H), 1,55-1,35 (ancho, 2H).
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(vi) Boc-Aze-NHCH_{2}-Ph(3-F, 4-CN)
A una solución enfriada con hielo de Boc-Aze-OH (0,194 g, 0,96 mmol) en 5 mL de DMF, se añadió TBTU (0,50 g, 9,6 mmol). Después de 30 min se añadió otra solución, que comprende 4-aminometil-2-fluorobenzonitrilo (0,17 g, 0,81 mmol; véase la etapa (v) anterior) y diisopropiletilamina (0,326 g, 2,53 mmol) en 7 mL de DMF. La solución resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Se evaporó el disolvente y se purificó el producto por RPLC preparativa utilizando CH_{3}CN:NH_{4}OAc 0,1 M (50:50). Mediante secado por congelación se obtuvieron 0,237 g (74%) del compuesto deseado del sub-título.
^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,70 (m, 1H), 7,35-7,25 (m, 2H), 4,65-4,35 (m, 3H), 4,0-3,85 (m, 2H), 2,51 (m, 1H), 2,19 (m, 1H), 1,40 (s, 9H).
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(vii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NHCH_{2}-Ph(3-F, 4-CN)
Se disolvió Boc-Aze-NHCH_{2}-Ph(3-F, 4-CN) (0,118 g, 0,354 mmol; a partir de la etapa (vi) anterior) en 30 mL de EtOAc saturado con HCl(g). Se agitó la reacción durante 20 min y se evaporó. Se disolvieron el dihidrocloruro resultante y HATU (0,152 g, 0,400 mmol) en 5 mL de DMF. Dicha solución se añadió a una solución enfriada con hielo de Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (0,101 g, 0,400 mmol; véase el ejemplo 1(viii) anterior) en 5 mL de DMF. Se agitó la reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se evaporó el disolvente y el producto se purificó por RPLC preparativa con CH_{3}CN:NH_{4}OAc 0,1 M (50:50). Mediante secado por congelación se obtuvieron 0,130 g (77%) del compuesto deseado del sub-título.
^{1}H NMR (500 MHz, CD_{3}OD mezcla de rotámeros) \delta 7,7-7,6 (m, 1H), 7,35-7,1 (m, 5H), 6,88 (t, 1H, rotámero), 6,86 (t, 1H, rotámero), 5,25-5,1 (m, 1H más rotámero menor a partir del siguiente protón), 4,80 (m, 1H, rotámero mayor), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,36 (m, 1H, rotámero mayor), 4,18 (m, 1H, rotámero mayor), 4,07 (m, 1H, rotámero menor), 3,98 (m, 1H, rotámero menor), 2,70 (m, 1H, rotámero menor), 2,53 (m, 1H, rotámero mayor), 2,29 (m, 1H, rotámero mayor), 2,16 (m, 1H, rotámero menor).
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(viii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F)
Se disolvió Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NHCH_{2}-Ph(3-F, 4-CN) (0,130 g, 0,278 mmol; véase la etapa (vii) anterior) en 80 mL de etanol saturado con HCl(g). Se dejó reaccionar la mezcla a temperatura ambiente durante la noche. Se evaporó el disolvente y el residuo se re-disolvió en 100 mL de etanol saturado con NH_{3}(g). Se dejó que la reacción se llevara a cabo lentamente a temperatura ambiente durante dos días. La temperatura subió a 50ºC y la reacción continuó durante otros 3 días. El material de partida se consumió y se evaporó el disol-
vente.
Se purificó el producto por RPLC preparativa y se secó por congelación para dar 17 mg (13%) del compuesto del título como su sal HOAc.
^{1}H NMR (600 MHz, CD_{3}OD mezcla de rotámeros) \delta 7,65-7,6 (m, 1H), 7,4-7,3 (m, 3H), 7,25-7,1 (m, 2H), 7,15-6,7 (m, 1H), 5,25-5,1 (m, 1H más rotámero menor del siguiente protón), 4,8 (m, 1H, rotámero mayor parcialmente tapado por CD_{3}OH), 4,6-3,95 (m, 4H), 2,69 (m, 1H, rotámero menor), 2,56 (m, 1H, rotámero mayor), 2,28 (m, 1H, rotámero mayor), 2,14 (m, 1H, rotámero menor), 1,90 (s, 3H).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, mezcla de rotámeros) \delta 180,6, 173,4, 173,1, 172,9, 164,5, 162,3, 159,8.
APCI-MS: (M + 1) = 485/487 m/z.
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Ejemplo 39
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF) 
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37 
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(i) 2,6-Difluoro-4-[(metilsulfinil)(metiltio)metil]benzonitrilo
Se disolvió (metilsulfinil)(metiltio)metano (7,26 g, 0,0584 mol) en 100 ml de THF seco bajo argón y se enfrió a -78ºC. Se añadió gota a gota butil-litio en hexano (16 ml 1,6 M, 0,0256 mol) con agitación. La mezcla se agitó durante 15 min. Mientras tanto, una solución de 3,4,5-trifluorobenzonitrilo (4,0 g, 0,025 mmol) en 100 ml de THF seco se enfrió a -78ºC bajo argón y la primera solución se añadió mediante una cánula a esta última solución a lo largo de un periodo de 35 min. Después de 30 min, se separó el baño de enfriamiento y cuando la reacción alcanzó la temperatura ambiente se vertió en 400 ml de agua. Se evaporó el THF y la capa acuosa restante se extrajo tres veces con éter dietílico. Las fases etéreas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Rendimiento: 2,0 g (30%).
^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,4-7,25 (m, 2H), 5,01 (s, 1H, diastereoisómero), 4,91 (s, 1H, diastereoisómero), 2,88 (s, 3H, diastereoisómero), 2,52 (s, 3H, diastereoisómero), 2,49 (s, 3H, diastereoisómero), 2,34 (s, 3H, diastereoisómero), 1,72 (ancho, 1H).
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(ii) 2,6-Difluoro-4-formilbenzonitrilo
El 2,6-difluoro-4[(metilsulfinil)(metiltio)metil]benzonitrilo (2,17 g, 8,32 mmol; véase la etapa (i) anterior) se disolvió en 90 ml de THF y se añadieron 3,5 ml de ácido sulfúrico concentrado. La mezcla se dejó a temperatura ambiente durante 3 días y posteriormente se vertió sobre 450 ml de agua. Después se extrajo tres veces con EtOAc y las fases etéreas reunidas se lavaron dos veces con solución acuosa de bicarbonato de sodio y con salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Rendimiento: 1,36 g (98%). La posición del grupo formilo se estableció por ^{13}C NMR. La señal de los carbonos fluorados a 162,7 ppm presentaba el patrón de acoplamiento esperado con dos constantes de acoplamiento del orden de 260 Hz y 6,3 Hz respectivamente, correspondientes a un acoplamiento ipso y a un acoplamiento meta de los átomos de flúor.
^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 10,35 (s, 1H), 7,33 (m, 2H).
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(iii) 2,6-Difluoro-4-hidroximetilbenzonitrilo
El 2,6-difluoro-4-formilbenzonitrilo (1,36 g, 8,13 mmol; véase la etapa (ii) anterior) se disolvió en 25 ml de metanol y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió borohidruro sódico (0,307 g, 8,12 mmol) en porciones con agitación y la mezcla de reacción se dejó durante 65 min. Se evaporó el disolvente y el residuo se sometió a reparto entre éter dietílico y solución acuosa de bicarbonato de sodio. La capa de éter se lavó con más solución acuosa de bicarbonato de sodio y salmuera, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se evaporó. El producto bruto cristalizó pronto y se pudo usar sin más purificación. Rendimiento: 1,24 g (90%).
^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,24 (m, 2H), 4,81 (s, 2H), 2,10 (ancho, 1H).
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(iv) Metanosulfonato de 4-ciano-2,6-difluorobencilo
A una solución enfriada con hielo de 2,6-difluoro-4-hidroximetilbenzonitrilo (1,24 g, 7,32 mmol; véase la etapa (iii) anterior) y cloruro de metanosulfonilo (0,93 g, 8,1 mmol) en 60 ml de cloruro de metileno se añadió trietilamina (0,81 g, 8,1 mmol) con agitación. Después de 3 h a 0ºC, la mezcla se lavó dos veces con HCl 1 M y una vez con agua, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se evaporó. El producto se pudo usar sin más purificación. Rendimiento: 1,61 g (89%).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,29 (m, 2H), 5,33 (s, 2H), 3,07 (s, 3H).
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(v) 4-Azidometil-2,6-difluorobenzonitrilo
Una mezcla de metanosulfonato de 4-ciano-2,6-difluorobencilo (1,61 g, 6,51 mmol; véase la etapa (iv) anterior) y azida sódica (0,72 g, 0,0111 mol) en 10 ml de agua y 20 ml de DMF se agitó a temperatura ambiente durante una noche. El producto resultante se vertió después sobre 200 ml de agua y se extrajo tres veces con éter dietílico. Las fases etéreas reunidas se lavaron cinco veces con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Se evaporó una pequeña muestra para el análisis por NMR y el producto se cristalizó. Se evaporó el resto con precaución, pero no hasta sequedad completa. El rendimiento (teóricamente 1,26 g) se asumió que era casi cuantitativo basándose en el análisis por NMR y HPLC analítica.
^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,29 (m, 2H), 4,46 (s, 2H).
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(vi) 4-Aminometil-2,6-difluorobenzonitrilo
Esta reacción se llevó a cabo según el procedimiento descrito en J. Chem. Res. (M) (1992) 3128. A una suspensión de 520 mg de Pd al 10%/C (50% de humedad) en 20 ml de agua se añadió una solución de borohidruro de sodio (0,834 g, 0,0221 mol) en 20 ml de agua. Se produjo algo de desprendimiento de gas. El 4-azidometil-2,6-difluorobenzonitrilo (1,26 g, 6,49 mmol; véase la etapa (v) anterior) se disolvió en 50 ml de THF y se añadió a la mezcla acuosa sobre un baño de hielo a lo largo de 15 min. Se agitó la mezcla durante 4 h, después de lo cual se añadieron 20 ml de HCl 2 M y la mezcla se filtró a través de Celite. Se enjuagó la Celite con más agua y las fases acuosas reunidas se lavaron con EtOAc y posteriormente se hicieron alcalinas con NaOH 2 M. Después se extrajeron tres veces con cloruro de metileno y las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Rendimiento: 0,87 g (80%).
^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,20 (m, 2H), 3,96 (s, 2H), 1,51 (ancho, 2H).
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(vii) 2,6-Difluoro-4-terc-butoxicarbonilaminometilbenzonitrilo
Una solución de 4-aminometil-2,6-difluorobenzonitrilo (0,876 g, 5,21 mmol; véase la etapa (vi) anterior) se disolvió en 50 ml de THF y se añadió dicarbonato de di-terc-butilo (1,14 g, 5,22 mmol) en 10 ml de THF. La mezcla se agitó durante 3,5 h. Se evaporó el THF y el residuo se sometió a reparto entre agua y EtOAc. La capa orgánica se lavó tres veces con HCl 0,5 M y agua, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se evaporó. El producto se pudo usar sin más purificación. Rendimiento: 1,38 g (99%).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,21 (m, 2H), 4,95 (ancho, 1H), 4,43 (ancho, 2H), 1,52 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
(viii) Boc-Pab(2,6-diF)(OH)
Una mezcla de 2,6-difluoro-4-terc-butoxicarbonilaminometilbenzonitrilo (1,38 g, 5,16 mmol; véase la etapa (vii) anterior), hidrocloruro de hidroxilamina (1,08 g, 0,0155 mol) y trietilamina (1,57 g, 0,0155 mol) en 20 ml de etanol, se agitó a temperatura ambiente durante 36 h. Se evaporó el disolvente y el residuo se sometió a reparto entre agua y cloruro de metileno. La capa orgánica se lavó con agua, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se evaporó. El producto se pudo usar sin más purificación. Rendimiento: 1,43 g (92%).
^{1}H NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,14 (m, 2H), 4,97 (ancho, 1H), 4,84 (ancho, 2H), 4,40 (ancho, 2H), 1,43 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
(ix) Boc-Pab(2,6-diF) x HOAc
Esta reacción se llevó a cabo de acuerdo con el procedimiento descrito por Judkins et al., Synth. Comm. (1998) 4351. Se hidrogenaron Boc-Pab(2,6-diF)(OH) (1,32 g, 4,37 mmol; véase la etapa (viii) anterior), anhídrido acético (0,477 g, 4,68 mmol) y 442 mg de Pd al 10%/C (50% de humedad) en 100 ml de ácido acético, a 5 atm de presión durante 3,5 h. La mezcla se filtró a través de Celite, se aclaró con etanol y se evaporó. El residuo se secó por congelación en acetonitrilo y agua y unas gotas de etanol. El producto del subtítulo se pudo usar sin más purificación. Rendimiento: 0,1,49 g (99%).
^{1}H NMR (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,45 (m, 2H), 4,34 (s, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,40 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
(x) Boc-Pab(2,6-diF)(Teoc)
A una solución de Boc-Pab(2,6-diF) x HOAc (1,56 g, 5,49 mmol; véase la etapa (ix) anterior) en 100 ml de THF y 1 ml de agua, se añadió carbonato de 2-(trimetilsilil)etilo y p-nitrofenilo (1,67 g, 5,89 mmol). Se añadió gota a gota una solución de carbonato de potasio (1,57 g, 0,0114 mol) en 20 ml de agua a lo largo de 5 min. Se agitó la mezcla durante una noche. Se evaporó el THF y el residuo se sometió a reparto entre agua y cloruro de metileno. La capa acuosa se extrajo con cloruro de metileno y las fases orgánicas reunidas se lavaron dos veces con solución acuosa de bicarbonato de sodio, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Por cromatografía rápida en gel de sílice con heptano/EtOAc = 2/1 se obtuvieron 1,71 g (73%) de compuesto puro.
^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,43 (m, 2H), 4,97 (ancho, 1H), 4,41 (ancho, 2H), 4,24 (m, 2H), 1,41 (s, 9H), 1,11 (m, 2H), 0,06 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
(xi) Boc-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc)
El Boc-Pab(2,6-diF)(Teoc) (1,009 g, 2,35 mmol; véase la etapa (x) anterior) se disolvió en 50 ml de EtOAc saturado con HCl(g). La mezcla se dejó en reposo durante 10 min, se evaporó y se disolvió en 18 ml de DMF, y después se enfrió en un baño de hielo. Se añadieron Boc-Aze-OH (0,450 g, 2,24 mmol), PyBOP (1,24 g, 2,35 mmol) y finalmente diisopropiletilamina (1,158 g, 8,96 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 2 h y después se vertió en 350 ml de agua y se extrajo tres veces con EtOAc. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Por cromatografía rápida en gel de sílice con heptano:EtOAc (1:3) se obtuvieron 1,097 g (96%) del compuesto deseado.
^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,46 (m, 2H), 4,65-4,5 (m, 3H), 4,23 (m, 2H), 3,87 (m, 1H), 3,74 (m, 1H), 2,45-2,3 (m, 2H), 1,40 (s, 9H), 1,10 (m, 2H), 0,05 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
(xii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc)
El Boc-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc) (0,256 g, 0,500 mmol; véase la etapa (xi) anterior) se disolvió en 20 ml de EtOAc saturado con HCl(g). La mezcla se dejó en reposo durante 10 min y se evaporó y se disolvió en 5 ml de DMF. Se añadieron Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (0,120 g, 0,475 mmol; véase el ejemplo 1(viii) anterior), PyBOP (0,263 g, 0,498 mmol) y finalmente diisopropiletil-amina (0,245 g, 1,89 mmol). Se agitó la mezcla de reacción durante 2 h y después se vertió en 350 ml de agua y se extrajo tres veces con EtOAc. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Por cromatografía rápida en gel de sílice con EtOAc se obtuvieron 0,184 g (60%) del compuesto del subtítulo deseado.
^{1}H NMR (400 MHz, CD_{3}OD, mezcla de rotámeros) \delta 7,55-7,45 (m, 2H), 7,32 (m, 1H, rotámero mayor), 7,27 (m, 1H, rotámero menor), 7,2-7,1 (m, 2H), 6,90 (t, 1H, rotámero mayor), 6,86 (t, 1H, rotámero menor), 5,15 (s, 1H, rotámero mayor), 5,12 (m, 1H, rotámero menor), 5,06 (s, 1H, rotámero menor), 4,72 (m, 1H, rotámero mayor), 4,6-4,45 (m, 2H), 4,30 (m, 1H, rotámero mayor), 4,24 (m, 2H), 4,13 (m, 1H, rotámero mayor), 4,04 (m, 1H, rotámero menor), 3,95 (m, 1H, rotámero menor), 2,62 (m, 1H, rotámero menor), 2,48 (m, 1H, rotámero mayor), 2,22 (m, 1H, rotámero mayor), 2,10 (m, 1H, rotámero menor), 1,07 (m, 2H), 0,07 (m, 9H).
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(xiii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF)
Se disolvió Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc) (81 mg, 0,127 mmol; véase la etapa (xii) anterior) en 0,5 mL de cloruro de metileno y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió TFA (3 mL) y se dejó proseguir la reacción durante 75 min. Se evaporó el TFA y el residuo se secó por congelación a partir de agua y acetonitrilo. El producto crudo se purificó por RPLC preparativa con CH_{3}CN:NH_{4}OAc 0,1 M (35:65) para producir 39 mg (55%) del compuesto del título como su sal de HOAc, pureza: 99%.
^{1}H NMR (400 MHz, CD_{3}OD mezcla de rotámeros) \delta 7,5-7,4 (m, 2H), 7,32 (m, 1H, rotámero mayor), 7,28 (m, 1H, rotámero menor), 7,2-7,1 (m, 3H) 6,90 (t, 1H, rotámero mayor), 6,86 (t, rotámero menor), 5,15 (s, 1H, rotámero mayor), 5,14 (m, 1H, rotámero menor), 5,07 (s, 1H, rotámero menor), 4,72 (m, 1H, rotámero mayor), 4,65-4,45 (m, 2H), 4,30 (m, 1H, rotámero mayor), 4,16 (m, 1H, rotámero mayor), 4,03 (m, 1H, rotámero menor), 3,95 (m, 1H, rotámero menor), 2,63 (m, 1H, rotámero menor), 2,48 (m, 1H, rotámero mayor), 2,21 (m, 1H, rotámero mayor), 2,07 (m, 1H, rotámero menor), 1,89 (s, 3H) ^{13}C-NMR (75 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, mezcla de rotámeros) \delta 171,9, 171,2, 165,0, 162,8, 160,4.
APCI-MS: (M + 1) = 503/505 m/z.
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\global\parskip0.870000\baselineskip
Ejemplo 40
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF)(OMe)
38
(i) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF)(OMe,Teoc)
Una mezcla de Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc) (64 mg, 0,099 mmol; véase el ejemplo 39(xii) anterior) e hidrocloruro de O-metilhidroxilamina (50 mg, 0,60 mmol) en 4 mL de acetonitrilo, se calentó a 70ºC durante 3 h. Se evaporó el disolvente y el residuo se sometió a reparto entre agua y EtOAc. La capa acuosa se extrajo dos veces con EtOAc y las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. El producto se pudo usar sin más purificación. Rendimiento: 58 mg (87%).
^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,90 (t ancho, 1H), 7,46 (m, 1H), 7,25-6,95 (m, 5H), 6,51 (t, 1H), 4,88 (s, 1H), 4,83 (m, 1H), 4,6-4,5 (m, 2H), 4,4-3,9 (m, 4H), 3,95 (s, 3H), 3,63 (m, 1H), 2,67 (m, 1H), 2,38 (m, 1H), 1,87 (ancho, 1H), 0,98 (m, 2H), 0,01, s, 9H).
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(ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF)(OMe)
El Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF)(OMe, Teoc) (58 mg, 0,086 mmol; véase la etapa (i) anterior) se disolvió en 3 mL de TFA, se enfrió en un baño de hielo y se dejó reaccionar durante 2 h. El TFA se evaporó y el residuo se disolvió en EtOAc. La capa orgánica se lavó dos veces con solución acuosa de carbonato de sodio y agua, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se evaporó. El residuo se secó por congelación en agua y acetonitrilo para dar 42 mg (92%) del compuesto del título. Pureza: 94%.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,95 (bt, 1H), 7,2-7,1 (m, 4H), 6,99 (m, 1H), 6,52 (t, 1H), 4,88 (s, 1H), 4,85-4,75 (m, 3H), 4,6-4,45 (m, 2H), 4,29 (ancho, 1H), 4,09 (m, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,69 (m, 1H), 2,64 (m, 1H), 2,38 (m, 1H), 1,85 (ancho, 1H).
^{13}C NMR (100 MHz; CDCl_{3}): (carbonos de carbonilo y/o amidina) \delta 172,1, 169,8, 151,9.
APCI-MS: (M + 1) = 533/535 m/z.
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Ejemplo 41
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF)
39
(i) 2,5-Difluoro-4-[(metilsulfinil)(metiltio)metil]benzonitrilo
Se disolvió (metilsulfinil)(metiltio)metano (3,16 g, 0,0255 mol) en 50 ml de THF seco bajo argón y después se enfrió a -78ºC. Se añadió gota a gota butil-litio en hexano (16 ml 1,6 M, 0,0256 mol) con agitación. Se agitó la mezcla durante 15 min. Mientras tanto una solución de 2,4,5-trifluorobenzonitrilo (2,0 g; 0,013 mol) en 50 mL de THF seco se enfrió a -78ºC bajo argón y se añadió la primera solución a través de una cánula a la última solución durante un periodo de 3-5 min. Después de 30 min, se separó el baño de enfriamiento y cuando la reacción hubo alcanzado la temperatura ambiente se vertió sobre 200 mL de agua. Se evaporó el THF y la capa acuosa restante se extrajo tres veces con éter dietílico. Las fases etéreas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. El producto crudo empezó a cristalizar y se pudo utilizar tal cual en la siguiente etapa. Rendimiento: 2,8 g (84%).
^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,51-7,44 (m, 2H, diastereoisómero mayor), 7,39 (dd, 1H, diastereoisómero menor), 5,00 (s, 1H, diastereoisómero menor), 4,92 (s, 1H, diastereoisómero mayor), 2,59 (s, 3H, diastereoisómero menor), 2,56 (s, 1H, diastereoisómero mayor), 2,46 (s, 1H, diastereoisómero menor), 2,40 (s, 1H, diastereoisómero mayor).
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(ii) 2,5-Difluoro-4-formilbenzonitrilo
Se disolvió 2,5-difluoro-4[(metilsulfinil)(metiltio)metil]benzonitrilo (2,8 g, 0,0107 mol; véase la etapa (i) anterior) en 100 mL de THF y se añadieron 6,5 g de ácido sulfúrico concentrado. Se dejó la mezcla a temperatura ambiente durante 6 días y posteriormente se vertió sobre 500 ml de agua. Después se extrajo tres veces con éter dietílico y las fases etéreas reunidas se lavaron varias veces con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. El producto crudo se sometió a cromatografía rápida sobre gel de sílice utilizando heptano:EtOAc (8:2). Rendimiento: 1,2 g (67%). La posición del grupo formilo se estableció por el uso de ^{13}C NMR. Las señales de carbono a partir de carbonos fluorados a 160,1 y 158,4 respectivamente eran dobletes y no cuartetes, como podrían haber sido si el grupo formilo hubiera estado en la posición 2.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 10,36 (d, 1H), 7,72 (dd, 1H), 7,54 (dd, 1H).
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(iii) 2,5-Difluoro-4-hidroximetilbenzonitrilo
Se disolvió 2,5-difluoro-4-formilbenzonitrilo (3,60 g, 0,0215 mol; véase la etapa (ii) anterior) en 50 ml de metanol y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió en porciones borohidruro de sodio (0,815 g, 0,0215 mol) con agitación y se dejó proseguir la reacción durante 45 min. Se añadió agua (300 mL) y después se añadió cuidadosamente HCl 2 M hasta que se obtuvo un pH ácido. Se extrajo tres veces la mezcla con éter dietílico, y las fases etéreas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. El producto bruto cristalizó pronto y se pudo usar sin más purificación. Rendimiento: 3,1 g (85%).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,45 (dd, 1H), 7,30 (dd, 1H), 4,85 (s, 2H), 2,10 (ancho, 1H).
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(iv) Metanosulfonato de 4-ciano-2,5-difluorobencilo
A una solución enfriada con hielo de 2,5-difluoro-4-hidroximetilbenzonitrilo (3,10 g, 0,0183 mol; véase la etapa (iii) anterior) y cloruro de metanosulfonilo (2,21 g, 0,0192 mol) en 60 mL de cloruro de metileno, se añadió trietilamina (1,95 g, 0,0192 mol) con agitación. Después de 1,5 h a 0ºC se lavó la mezcla con agua, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se evaporó. El producto se pudo usar sin más purificación. Rendimiento: 4,5 g (99%).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,45-7,35 (m, 2H), 5,32 (s, 2H), 3,13 (s, 3H).
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(v) 4-Azidometil-2,5-difluorobenzonitrilo
Se agitó una mezcla de metanosulfonato de 4-ciano-2,5-difluorobencilo (4,5 g, 0,0182 mol; véase la etapa (iv) anterior) y azida de sodio (2,0 g, 0,031 mol) en 20 mL de agua y 40 mL de DMF a temperatura ambiente durante 2 h. Se vertió posteriormente sobre 300 mL de agua y se extrajo tres veces con éter dietílico. Las fases etéreas reunidas se lavaron varias veces con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Se evaporó una pequeña muestra para el análisis por NMR y el producto cristalizó. Se evaporó el resto con precaución, pero no hasta sequedad completa. El rendimiento (teóricamente 3,5 g) se supone que es casi cuantitativo basado en la NMR y la HPLC analítica.
^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta.38 (dd, 1H), 7,32 (dd, 1H), 4,54 (s, 2H).
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(vi) 4-Aminometil-2,5-difluorobenzonitrilo
Esta reacción se llevó a cabo según el procedimiento descrito en J. Chem. Res. (M) (1992) 3128. A una suspensión de 300 mg de Pd al 10%/C (50% de humedad) en 20 ml de agua, se añadió una solución de borohidruro de sodio (0,779 g, 0,0206 mol) en 20 ml de agua. Se produjo algo de desprendimiento de gas. El 4-azidometil-2,5-difluorobenzonitrilo (1,00 g, 5,15 mmol; a partir de la etapa (v) anterior) se disolvió en 60 mL de THF y se añadió a la mezcla acuosa en un baño de hielo. Se agitó la mezcla durante 1,5 h y después se añadieron 10 mL de HCl 2 M y la mezcla se filtró a través de Celite. Se enjuagó la Celite con más agua y las fases acuosas reunidas se lavaron con EtOAc y posteriormente se hicieron alcalinas con NaOH 2 M. Después se extrajeron tres veces con cloruro de metileno y las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Rendimiento: 0,47 g (54%).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,39 (dd, 1H), 7,29 (dd, 1H), 3,99 (s, 2H), 1,45 (ancho, 2H).
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(vii) 2,5-Difluoro-4-terc-butoxicarbonilaminometilbenzonitrilo
Una solución de 4-aminometil-2,5-difluorobenzonitrilo (0,46 g, 2,7 mmol; véase la etapa (vi) anterior) y dicarbonato de di-terc-butilo (0,60 g, 2,7 mmol) en 10 mL de THF se agitó durante la noche. Se evaporó el THF y el residuo se sometió a reparto entre agua y EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se evaporó. El producto se pudo usar sin más purificación. Rendimiento: 0,71 g (97%).
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,35-7,2 (m, 2H), 5,11 (triplete ancho, 1H), 4,38 (d, 2H), 1,45 (s, 9H).
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(viii) Boc-Pab(2,5-diF)(OH)
Una mezcla de 2,5-difluoro-4-terc-butoxicarbonilaminometilbenzonitrilo (0,70 g, 2,6 mmol; véase la etapa (vii) anterior), hidrocloruro de hidroxilamina (0,54 g, 7,8 mmol) y trietilamina (0,79 g, 7,8 mmol) en 10 mL de etanol, se agitó a temperatura ambiente durante 6 días. Después se sometió a reparto entre agua y cloruro de metileno. Se extrajo la capa acuosa con cloruro de metileno y las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. El producto se pudo usar sin más purificación. Rendimiento: 0,72 g (92%).
^{1}H NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,27 (dd, 1H), 7,12 (dd, 1H), 4,29 (s, 2H), 1,47 (s, 9H).
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(ix) Boc-Pab(2,5-diF) x HOAc
Esta reacción se llevó a cabo de acuerdo con el procedimiento descrito por Judkins et al., Synth. Comm. (1998) 4351. Se hidrogenaron Boc-Pab(2,5-diF)(OH) (0,70 g, 2,3 mmol; véase la etapa (viii) anterior), anhídrido acético (0,25 g, 2,4 mmol) y 230 mg de Pd al 10%/C (50% de humedad) en 70 mL de ácido acético a 5 atm de presión durante 2,5 h. Se filtró la mezcla a través de Celite y se evaporó. Se secó el residuo por congelación a partir de acetonitrilo y agua. El producto se pudo utilizar sin purificación adicional en la siguiente etapa. Rendimiento: 0,80 g (100%).
^{1}H NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,49 (dd, 1H), 7,31 (dd, 1H), 4,33 (s, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).
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(x) Boc-Pab(2,5-diF)(Teoc)
A una suspensión de Boc-Pab(2,5-diF) x HOAc (0,80 g, 2,3 mmol; véase la etapa (ix) anterior) en 50 mL de THF se añadió carbonato de 2-(trimetilsilil)etilo y p-nitrofenilo (0,85 g, 3,0 mmol). Se añadió gota a gota una solución de carbonato de potasio (0,80 g, 5,8 mmol) en 10 mL de agua. La mezcla se agitó durante una noche. El exceso de reactivo Teoc se destruyó por adición de glicina (0,100 g) y carbonato de potasio (0,75 g) a la solución, dejando que reaccionara durante 2 h adicionales. Se evaporó el THF y el residuo se sometió a reparto entre agua y cloruro de metileno. Se extrajo la capa acuosa con cloruro de metileno y las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice con heptano:EtOAc (2:1) se obtuvieron 0,72 g (72%) de compuesto puro.
^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,00 (dd, 1H), 7,15 (dd, 1H), 4,98 (ancho, 1H), 4,36 (bd, 2H), 4,24 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,12 (m, 2H), 0,07 (s, 9H).
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(xi) H-Pab(2,5-diF)(Teoc) x 2 HCl
El Boc-Pab(2,5-diF)(Teoc) (0,38 g, 0,88 mmol; véase la etapa (x) anterior) se disolvió en 50 ml de EtOAc saturado con HCl(g). Se dejó la mezcla durante 30 min y se evaporó.
^{1}H NMR (500 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,75-7,6 (m, 2H), 4,46 (m, 2H), 4,3 (s, 2H), 1,15 (m, 2H), 0,07 (s, 9H).
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(xii) Boc-Aze-Pab(2,5-diF)(Teoc)
A una solución en agitación de Boc-Aze-OH (0,189 g, 0,94 mmol), H-Pab(2,5-diF)(Teoc) x 2 HCl (0,36 g, 0,89 mmol; véase la etapa (xi) anterior) y PyBOP (0,54 g, 1,03 mmol) en 5 mL de DMF, se añadió diisopropiletilamina (0,49 g, 3,8 mmol) y se dejó reaccionar la mezcla durante la noche. Se vertió después el producto resultante sobre bicarbonato de sodio acuoso y se extrajo tres veces con EtOAc. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice con heptano:EtOAc (3:7) se obtuvo un compuesto suficientemente puro. Rendimiento: 0,25 g (48%).
^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,98 (dd, 1H), 7,13 (dd, 1H), 4,69 (m, 1H), 4,53 (m, 2H), 4,22 (m, 2H), 3,92 (m, 1H), 3,79 (m, 1H), 2,55-2,35 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,11 (m, 2H), 0,06 (s, 9H).
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(xiii) H-Aze-Pab(2,5-diF)(Teoc) x 2 HCl
El Boc-Aze-Pab(2,5-diF)(Teoc) (0,25 g, 0,49 mmol; véase la etapa (xii) anterior) se disolvió en 50 mL de EtOAc saturado con HCl(g). Se dejó la mezcla durante 30 min. y se evaporó. Se utilizó el producto en la siguiente etapa sin purificación adicional. Rendimiento: 0,23 g (97%).
^{1}H NMR (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,59 (dd, 1H), 7,47 (dd, 1H), \Box5,14 (m, 1H), 4,54 (m, 2H), 4,48 (m,2H), 4,15 (m, 1H), 3,96 (m, 1H), 2,87 (m, 1H), 2,56 (m, 1H), 1,17 (m, 2H), 0,05 (s, 9H).
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(xiv) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF)(Teoc)
A una solución de Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH (0,12 g, 0,47 mmol; véase el ejemplo 1(viii) anterior), H-Aze-Pab(2,5-diF)(Teoc) x 2 HCl (0,23 g, 0,47 mmol; véase la etapa (xiii) anterior) y PyBOP (0,27 g, 0,52 mmol) en 10 mL de DMF, se añadió diisopropiletil-amina (0,245 g, 1,90 mmol), y se agitó la mezcla durante la noche. Se vertió el producto resultante sobre agua y se extrajo tres veces con EtOAc. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. Por cromatografía rápida sobre gel de sílice con EtOAc se obtuvieron 100 mg de una fracción pura y 30 mg de una fracción del 90% de pureza. Rendimiento total: 0,13 g (41%).
^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,80 (ancho, 1H), 8,05 (bt, 1H), 7,94 (dd, 1H),7,20 (m, 1H), 7,2-7,1 (m, 2H), 7,02 (m, 1H), 6,54 (t, 1H), 4,93 (s, 1H), 4,91 (m, 1H), 4,51 (m, 2H), 4,28 (ancho, 1H), 4,23 (m, 2H), 4,13 (m, 1H), 3,74 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,43 (m, 1H), 1,73 (ancho, 1H), 1,11 (m, 2H), 1,11 (s, 9H).
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(xv) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF)
Se disolvió Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF)(Teoc) (60 mg (0,093 mmol) de la fracción pura a partir de la etapa (xiv) anterior) en 3 mL de TFA y se dejó a temperatura ambiente durante 1 h. Se evaporó el TFA y el residuo se secó por congelación a partir de agua y acetonitrilo para producir 55 mg (96%) del compuesto del título como su sal de TFA, pureza: >99%.
^{1}H NMR (500 MHz, CD_{3}OD mezcla de rotámeros) \delta 7,55-7,3 (m, 3H), 7,2-7,1 (m, 2H), 6,88 (t, 1H, rotámero mayor), 6,86 (t, 1H, rotámero menor), 5,22 (m, 1H, rotámero menor), 5,20 (s, 1H, rotámero mayor), 5,13 (s, 1H, rotámero menor), 4,80 (m, 1H, rotámero mayor), 4,6-4,45 (m, 2H), 4,36 (m, 1H, rotámero mayor), 4,19 (m, 1H, rotámero mayor), 4,07 (m, 1H, rotámero menor), 3,98 (m, 1H, rotámero menor), 2,70 (m, 1H, rotámero menor), 2,54 (m, 1H, rotámero mayor), 2,28 (m, 1H, rotámero mayor), 2,14 (m, 1H, rotámero menor).
^{13}C NMR (75 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, mezcla de rotámeros) \delta 173,0, 172,6, 172,1, 172,0, 162,4.
APCI-MS: (M + 1) = 503/505 m/z.
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Ejemplo 42
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF)(OMe)
40
(i) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze Pab(2,5-diF)(OMe,Teoc)
Una mezcla de Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF)(Teoc) (40 mg, 0,062 mmol; véase el ejemplo 41(xiv) anterior) e hidrocloruro de O-metil-hidroxilamina (58 mg, 0,70 mmol) en 5 mL de acetonitrilo, se calentó a 70ºC durante 2 h. Se evaporó el disolvente y el residuo se sometió a reparto entre agua y EtOAc. Se extrajo la capa acuosa con EtOAc y las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron. El producto se pudo usar sin más purificación. Rendimiento: 35 mg (84%).
^{1}H NMR (600 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,99 (bt, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,20 (m, 1H) 7,15-7,1 (m, 1H), 7,07 (dd, 1H), 7,01 (m, 1H), 6,53 (t, 1H), 4,90 (s, 1H), 4,88 m, 1H), 4,48 (m, 2H), 4,2-4,1 (m, 3H), 3:95 (s, 3H), 3,67 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 2,41 (m, 1H), 0,97 (m, 2H), 0,07 (s, 9H).
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(ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF)(OMe)
El Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF)(OMe,Teoc) (35 mg, 0,052 mmol; véase la etapa (i) anterior) se disolvió en 3 mL de TFA y se dejó reaccionar durante 30 min. Se evaporó el TFA y el residuo se secó por congelación a partir de agua y acetonitrilo para dar 29 mg (99%) del compuesto del título. Pureza: 97%.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,01 (bt, 1H), 7,45 (dd, 1H), 7,20 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,09 (dd, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,54 (t, 1H), 5,2-5,0 (m, 2H), 4,95-4,85 (m, 2H), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,25 (ancho, 1H), 4,13 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,71 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,43 (m, 1H).
^{13}C NMR (75 MHz; CDCl_{3}): (carbonos de carbonilo y/o amidina) \delta 173,0, 170,9, 152,6.
APCI-MS: (M + 1) = 533/535 m/z.
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Ejemplo 43
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt) (i) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt, Teoc)
Se disolvieron Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (55 mg, 0,090 mmol; véase el ejemplo 1(ix) anterior) e hidrocloruro de O-etilhidroxilamina (53 mg, 0,54 mmol) en 4 mL de THF. Se agitó la mezcla a 60ºC durante 5 h. Se evaporó el disolvente. Se cromatografió el residuo sobre gel de sílice, eluyendo con cloruro de metileno:metanol (95:5) para obtener 55 mg (93%) del compuesto del sub-título.
^{1}H NMR (400 MHz; CDCl_{3}): \delta 7,84 (bt, 1H), 7,59 (bs, 1H), 7,47 (bd, 1H), 7,29 (bd, 1H), 7,21 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,53 (t, 1H), 4,90 (s, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,55-4,4 (m, 2H), 4,25-4,1 (m, 5H), 3,69 (m, 1H), 2,66 (m, 1H), 2,41 (m, 1H), 1,33 (t, 3H), 0,98 (m, 2H), 0,02 (s, 9H).
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(ii) Ph(3-Cl, 5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)
A una solución enfriada en hielo de Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt, Teoc) (55 mg, 0,084 mmol; véase la etapa (i) anterior) en 0,5 mL de cloruro de metileno, se añadieron 3 mL de TFA. Se agitó la mezcla (baño de hielo) durante 160 minutos. Se purificó el material utilizando HPLC preparativa. Se reunieron las fracciones de interés y se secaron por congelación (2x), dando 20 mg (47%) del compuesto del título.
^{1}H NMR (400 MHz; CD_{3}OD) rotámeros: \delta 7,59 (bd, 2H), 7,35 (m, 1H), 7,32 (bd, 2H), 7,25-7,1 (m, 2H), 6,89 (t, 1H, rotámero mayor), 6,86 (t, 1H, rotámero menor), 5,18 (s, 1H, rotámero mayor), 5,18 (m, 1H, rotámero menor), 5,11 (s, 1H, rotámero menor), 4,77 (m, 1H), 4,5-4,3 (m, 3H), 4,2-3,9 (m, 3H), 2,67 (m, 1H, rotámero menor), 2,52 (m, 1H, rotámero mayor), 2,28 (m, 1H, rotámero mayor), 2,15 (m, 1H, rotámero menor), 1,28 (t, 3H).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 172,4, 171,9, 171,4, 153,8, 152,3.
MS (m/z) 509 (M - 1)^{-}, 511 (M + 1)^{+}.
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Ejemplo 44
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr) (i) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr, Teoc)
Se disolvieron Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (53 mg, 0,087 mmol; véase el ejemplo 1(ix) anterior) e hidrocloruro de O-n-propilhidroxilamina, 58 mg (0,52 mmol), en 4 mL de THF. Se agitó la mezcla a 60ºC durante 5 h. Se evaporó el disolvente. Se cromatografió el residuo sobre gel de sílice, eluyendo con cloruro de metileno:metanol (95:5) para obtener 51 mg (88%) del compuesto del sub-título.
^{1}H NMR (400 MHz; CDCl_{3}): \delta 7,84 (m, 1H), 7,59 (bs, 1H), 7,47 (bd, 2H), 7,28 (bd, 2H), 7,21 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,53 (t, 1H), 4,90 (s, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,55-4,4 (m, 2H), 4,2-4,05 (m, 5H), 3,69 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 2,41 (m, 1H), 1,74 (m, 2H), 1,05-0,95 (m, 5H), 0,03 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
(ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr)
A una solución enfriada en hielo de Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr, Teoc) (51 mg, 0,078 mmol; véase la etapa (i) anterior) en 0,5 mL de cloruro de metileno se añadieron 3 mL de TFA. Se agitó la mezcla (baño de hielo) durante 110 minutos. Se purificó el material utilizando HPLC preparativa. La fracción de interés se evaporó y se secó por congelación, dando 20 mg (47%) del compuesto del título.
^{1}H NMR (500 MHz; CD_{3}OD) rotámeros: \delta 7,61 (bd, 2H), 7,38 (m, 1H), 7,35 (bd, 2H), 7,22 (m, 1H, rotámero mayor), 7,18 (m, 1H), 7,15 (m, 1H, rotámero menor), 6,92 (t, 1H, rotámero mayor), 6,89 (t, 1H, rotámero menor), 5,20 (s, 1H, rotámero mayor), 5,20 (m, 1H, rotámero menor), 4,80 (m, 1H, rotámero mayor), 4,5-4,4 (m, 2H, incluyendo el rotámero menor correspondiente al rotámero mayor a 4,37), 4,37 (m, 1H, rotámero mayor), 4,18 (m, 1H, rotámero mayor), 4,09 (m, 1H, rotámero menor), 3,99 (m, 2H), 2,70 (m, 1H, rotámero menor), 2,54 (m, 1H, rotámero mayor), 2,30 (m, 1H, rotámero mayor), 2,18 (m, 1H, rotámero menor), 1,73 (m, 2H), 1,01 (t, 3H).
^{13}C-NMR. (125 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 171,4, 153,8, 152,3.
MS (m/z) 523 (M - 1)^{-}, 525 (M + 1)^{+}.
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Ejemplo 45
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr) (i) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr, Teoc)
Se disolvieron Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (50 mg, 0,082 mmol; véase el ejemplo 1(ix) anterior) e hidrocloruro de O-i-propilhidroxilamina, 55 mg (0,49 mmol), en 4 mL de THF. Se agitó la mezcla a 60ºC durante 5 h. Se evaporó el disolvente. Se cromatografió el residuo sobre gel de sílice, eluyendo con cloruro de metileno:metanol (95:5) para obtener 46 mg (84%) del compuesto del sub-título.
^{1}H NMR (400 MHz; CDCl_{3}): \delta 7,84 (m, 1H), 7,57 (bs, 1H), 7,48 (bd, 2H), 7,29 (bd, 2H), 7,21 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,53 (t, 1H), 4,91 (s, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,55-4,45 (m, 2H), 4,42 (m, 1H), 4,2-4,1 (m, 3H), 3,69 (m, 1H), 2,66 (m, 1H), 2,42 (m, 1H), 1,30 (d, 6H), 0,98 (m, 2H), 0,02 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
(ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr)
A una solución enfriada en hielo de Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr, Teoc) (46 mg, 0,069 mmol; véase la etapa (i) anterior) en 0,5 mL de cloruro de metileno, se añadieron 3 mL de TFA. Se agitó la mezcla (baño de hielo) durante 150 minutos. Se purificó el material utilizando HPLC preparativa. La fracción de interés se evaporó y se secó por congelación (2x), dando 22 mg (58%) del compuesto del título.
^{1}H NMR (400 MHz; CD_{3}OD) rotámeros: \delta 7,59 (d, 2H), 7,35 (m, 1H), 7,32 (d, 2H), 7,19 (m, 1H, rotámero mayor), 7,15 (m, 1H), 7,12 (m, 1H, rotámero menor), 6,89 (t, 1H, rotámero mayor), 6,86 (t, 1H, rotámero menor), 5,18 (s, 1H, rotámero mayor), 5,18 (m, 1H, rotámero menor), 5,12 (s, 1H, rotámero menor), 4,78 (m, 1H, rotámero mayor), 4,5-3,9 (m, 5H), 2,67 (m, 1H, rotámero menor), 2,52 (m, 1H, rotámero mayor), 2,28 (m, 1H, rotámero mayor), 2,15 (m, 1H, rotámero menor), 1,26 (d, 6H).
^{13}C NMR (100 MHz; CD_{3}OD): (carbonos de carbonilo y/o amidina, rotámeros) \delta 171,9, 171,4, 153,6.
MS (m/z) 523 (M - 1)^{-}, 525 (M + 1)^{+}.
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Ejemplo 46
Los compuestos del título de los ejemplos 3, 6, 9, 10, 13 a 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 28, 32, 34, 36, 38, 39 y 41 se ensayaron en el Ensayo A anterior y se encontró que presentan valores de IC_{50}TT menores de 3,5 \muM. Los de los ejemplos 3, 6, 9, 10, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 27, 32, 34 y 39 se encontró que presentan valores menores de 0,02 \muM; los de los ejemplos 25 y 28 menores de 0,03 \muM, el del ejemplo 14 menor de 0,04 \muM; y los de los ejemplos 38 y 41 menores de 0,15 \muM.
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Ejemplo 47
Los compuestos del título de los ejemplos 3, 6, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 28, 32 y 34 se ensayaron en el Ensayo D anterior y se encontró que presentan un valor de IC_{50} APTT menor de 1 \muM.
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Ejemplo 48
Los compuestos del título de los ejemplos 1, 2, 4, 5, 7, 12, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 29, 30, 33 y 43 a 45 se ensayaron en el Ensayo E anterior y se encontró que presentan una biodisponibilidad oral y/o parenteral en la rata como el correspondiente inhibidor activo (amidina libre).
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Ejemplo 49
Los compuestos del título de los ejemplos 1, 2, 7, 8, 11, 12, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 29, 33, 37, 40, 43 y 45 se ensayaron en el Ensayo G anterior y se encontró que se convertían en el correspondiente inhibidor activo (amidina libre) en los microsomas hepáticos de los seres humanos y de las ratas.
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Abreviaturas
Ac
= acetilo
AcOH
= ácido acético
APCI
= ionización química a presión atmosférica (en relación a MS)
API
= ionización a presión atmosférica (en relación a MS)
ac.
= acuoso
AUC
= área bajo la curva
Aze
= (S)-azetidina-2-carboxilato (a menos que se especifique otra cosa)
AzeOH
= ácido azetidina-2-carboxílico
Bn
= bencilo
Boc
= terc-butoxicarbonilo
BSA
= seroalbúmina bovina
Bu
= butilo
Bzl
= bencilo
CI
= ionización química (en relación a MS)
d
= día(s)
DCC
= diciclohexilcarbodiimida
DIBAL-H
= hidruro de di-isobutilaluminio
DIPEA
= diisopropiletilamina
DMAP
= 4-(N,N-dimetilamino)piridina
DMF
= dimetilformamida
DMSO
= dimetilsulfóxido
DVT
= trombosis venosa profunda
EDC
= hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
e.e.
= exceso enantiomérico
Et
= etilo
éter
= éter dietílico
AcOEt
= acetato de etilo
EtOH
= etanol
Et_{2}O
= éter dietílico
h
= hora(s)
HATU
= hexafluorofosfato de O-(azabenzotriazol-1-ilo)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
HBTU
= [hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(benzotriazol-1-ilo)uronio]
HCl
= ácido clorhídrico, cloruro de hidrógeno gaseoso o sal de hidrocloruro (dependiendo del contexto)
Hex
= hexanos
HOAc
= ácido acético
HPLC
= cromatografía de líquidos de alta resolución
LC
= cromatografía de líquidos
Me
= metilo
MEM
= metoxietoximetilo
MeOH
= metanol
min
= minuto(s)
MS
= espectroscopía de masas
MTBE
= metil-terc-butil-éter
NADH
= nicotinamida adenina dinucleótido, forma reducida
NADPH
= nicotinamida adenina dinucleótido fosfato, forma reducida
NIH
= National Institute of Health (EE.UU.)
NIHU
= unidades del National Institute of Health
NMR
= resonancia magnética nuclear
OAc
= acetato
Pab
= para-amidinobencilamino
H-Pab
= para-amidinobencilamina
Ph
= fenilo
Pr
= propilo
Pro
= (S)-prolinilo
PyBOP
= hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tripirrolidinofosfonio
QF
= fluoruro de tetrabutilamonio
RedAl
= hidruro de bis(2-metoxietoxi)aluminio y sodio
RPLC
= cromatografía de líquidos de alta resolución en fase inversa
ta/TA
= temperatura ambiente
SOPs
= procedimientos normalizados de trabajo
TBTU
= tetrafluoroborato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(benzotriazol-1-il)uronio]
TEA
= trietilamina
Teoc
= 2-(trimetilsilil)etoxicarbonilo
TEMPO
= radical libre 2,2,6,6-tetrametil-1-piperidiniloxi
TFA
= ácido trifluoroacético
THF
= tetrahidrofurano
THP
= tetrahidropiranilo
TLC
= cromatografía de capa fina
TMSCI
= cloruro de trimetilsililo
TMSCN
= cianuro de trimetilsililo
UV
= ultravioleta
Z
= benciloxicarbonilo.
Los prefijos n, s, i y t tienen sus significados habituales: normal, secundario, iso y terciario. El prefijo c significa ciclo.

Claims (10)

1. Un compuesto seleccionado de:
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) de la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
41 
\vskip1.000000\baselineskip
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH) de la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
42 
\vskip1.000000\baselineskip
o Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab de la fórmula
43
o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Un compuesto, según la reivindicación 1, seleccionado de
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH) o
Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab.
\vskip1.000000\baselineskip
3. El compuesto Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) según la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
4. El compuesto Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) según la reivindicación 1, 2 o 3.
5. El compuesto Ph(3-Cl)(5-OCHF_{2})-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab según la reivindicación 1 o 2.
6. Una formulación farmacéutica que comprende cualquiera de los compuestos definidos en la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en mezcla con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
7. Una formulación farmacéutica según la reivindicación 6, que comprende el compuesto de la reivindicación 3, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en mezcla con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
8. Un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para utilización como un compuesto farmacéutico.
9. Un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para utilización en el tratamiento de la trombosis.
10. Un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para utilización como un anticoagulante.
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