PT1347955E - Novos derivados de ácido mandélico e sua utilização como inibidores de trombina - Google Patents

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PT1347955E PT01998535T PT01998535T PT1347955E PT 1347955 E PT1347955 E PT 1347955E PT 01998535 T PT01998535 T PT 01998535T PT 01998535 T PT01998535 T PT 01998535T PT 1347955 E PT1347955 E PT 1347955E
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Description

DESCRIÇÃO "NOVOS DERIVADOS DE ÁCIDO MANDELICO E SUA UTILIZAÇÃO COMO INIBIDORES DE TROMBINA"
Campo da Invenção
Esta invenção refere-se a novos compostos farmaceuticamente úteis, em particular compostos que são, e/ou compostos que são metabolizados em compostos que são, inibidores competitivos de serina-proteases de tipo tripsina, especialmente trombina, à sua utilização como medicamentos, a composições farmacêuticas que os contêm e a vias sintéticas para a sua produção.
Antecedentes A coagulação de sangue é o processo chave envolvido na hemostasia (i. e., a prevenção de perda de sangue de um vaso danificado) e na trombose (i. e., a formação de um coágulo sanguíneo num vaso sanguíneo, levando por vezes à obstrução do vaso). A coagulação é o resultado de uma série complexa de reacções enzimáticas. Um dos últimos passos nesta série de reacções é a conversão da proenzima protrombina na enzima activa trombina.
Sabe-se que a trombina desempenha um papel central na coagulação. Esta activa as plaquetas, levando à agregação de 1 plaquetas, converte o fibrinogénio em monómeros de fibrina, os quais polimerizam espontaneamente em polímeros de fibrina e activa o factor XIII, o qual por sua vez reticula os polímeros para formar fibrina insolúvel. Além disso, a trombina activa o factor V e o factor VIII levando a uma geração de "realimentação positiva" de trombina a partir da protrombina.
Através da inibição da agregação de plaquetas e da formação e reticulação de fibrina, esperar-se-ia que os inibidores eficazes de trombina exibissem actividade antitrombótica. Além disso, esperar-se-ia que a actividade antitrombótica fosse intensificada pela inibição eficaz do mecanismo de realimentação positiva. Técnica Anterior 0 desenvolvimento inicial de inibidores de baixo peso molecular de trombina foi descrito por Claesson em Blood Coagul. Fibrinol. (1994) 5, 411.
Blombáck et al. (em J. Clin. Lab. Invest. 24, supl. 107, 59, (1969)) descreveram inibidores de trombina com base na sequência de aminoácidos situada em torno do sítio de dissociação da cadeia Aa do fibrinogénio. Das sequências de aminoácidos discutidas, estes autores sugerem que a sequência tripeptídica Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, doravante referida como a sequência P3-P2-P1) seria o inibidor mais eficaz.
Os inibidores de trombina com base em derivados de dipeptidilo com uma a,ω-aminoalquil-guanidina na posição PI são conhecidos a partir da Patente US N° 4346078 e do Pedido de 2
Patente Internacional WO 93/11152. Foram também descritos derivados de dipeptidilo semelhantes, estruturalmente relacionados. Por exemplo, o Pedido de Patente Internacional WO 94/29336 divulga compostos com, por exemplo, aminometilbenzamidinas, aminoalquilamidinas cíclicas e aminoalquilguanidinas cíclicas na posição PI (o Pedido de Patente Internacional WO 97/23499 divulga profármacos de alguns destes compostos); o Pedido de Patente Europeia 0648780, divulga compostos com, por exemplo, aminoalquilguanidinas cíclicas na posição PI.
Os inibidores de trombina com base em derivados de peptidilo, possuindo também aminoalquilguanidinas cíclicas (e. g., 3- ou 4-aminometil-l-amidino-piperidina) na posição PI são conhecidos dos Pedidos de Patente Europeia 0468231, 0559046 e 0641779.
Os inibidores de trombina com base em derivados de tripeptidilo com aldeído de arginina na posição PI foram divulgados pela primeira vez no Pedido de Patente Europeia 0185390.
Mais recentemente foram descritos derivados de peptidilo com base em aldeído de arginina, modificado na posição P3. Por exemplo, o Pedido de Patente Internacional WO 93/18060 divulga hidroxiácidos, o Pedido de Patente Europeia 0526877, des-aminoácidos e o Pedido de Patente Europeia 0542525, ácidos O-metil-mandélicos na posição P3.
Também são conhecidos inibidores de serina-proteases (e. g., trombina) com base em cetonas electrófilas na posição PI. Por exemplo, o Pedido de Patente Europeia 0195212 divulga 3 α-ceto ésteres e amidas de peptidilo, o Pedido de Patente Europeia 0362002 fluoroalquilamida cetonas, o Pedido de Patente Europeia 0364344 compostos α,β,δ-triceto e o Pedido de Patente Europeia 0530167 derivados α-alcoxicetona de arginina na posição PI.
Outros inibidores, estruturalmente diferentes, de serina-proteases de tipo tripsina com base em derivados C-terminais de ácido borónico de arginina e os seus análogos de isotiourónio são conhecidos a partir do Pedido de Patente Europeia 0293881.
Mais recentemente foram divulgados inibidores de trombina com base em derivados de peptidilo no Pedido de Patente Europeia 0669317 e nos Pedidos Internacionais de Patente WO 95/35309, WO 95/23609, WO 96/25426, WO 97/02284, Pedidos WO 95/35309, WO 95/23609, WO 96/25426, WO 97/02284, WO 97/46577, WO 96/32110, WO 96/31504, WO 96/03374, WO 98/06740, WO 97/49404, WO 98/57932, WO 99/29664, WO 00/35869 e WO 00/42059.
Em particular, os documentos WO 97/02284 e WO 00/42059 divulgam inibidores de trombina com ácidos mandélicos substituídos na posição P3.
No entanto, continua a existir uma necessidade de inibidores eficazes de serina-proteases de tipo tripsina, tal como a trombina. Existe também uma necessidade de compostos que possuam um perfil farmacocinético favorável e sejam selectivos na inibição de trombina relativamente a outras serina-proteases, em particular as envolvidas em hemostasia. Esperar-se-ia que os compostos que exibem actividade inibidora competitiva para a trombina fossem especialmente úteis como anticoagulantes e, por 4 conseguinte, no tratamento terapêutico de trombose e distúrbios relacionados.
Divulgação da Invenção
De acordo com a invenção é proporcionado um composto seleccionado de
Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe) de fórmula
Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OH) de fórmula
5 ou Ph(3-C1) (5-OCH-F2)-(R) CH(OH)C(0)-Aze-Pab de fórmula
ou um sal farmaceuticamente aceitável de qualquer destes.
É proporcionado um composto de fórmula I
em que
Ra representa -OH ou -CH20H; R2 representa um ou dois substituintes alcoxilo C1-3, em que as partes alquilo desses substituintes estão por si só substituídas com um ou mais subst ituintes fluoro (i. e., R2 representa um ou dois grupos f luoroalcoxilo (Ci_3) ) ; Y representa -CH2- ou -(CH2)2-; e R3 representa um fragmento estrutural de fórmula I(i) ou I(ii) : 6
em que R4 representa H ou um ou mais substituintes fluoro; e um ou dois de Xi, X2, X3 e X4 representam -N- e os outros representam -CH-, ou um seu derivado farmaceuticamente aceitável. 0 termo "derivados farmaceuticamente aceitáveis", inclui sais farmaceuticamente aceitáveis (e. g., sais de adição de ácido) .
As abreviaturas estão listadas no final desta descrição. As linhas onduladas nas ligações nos fragmentos de fórmulas I(i) e I(ii) significam as posições de ligação dos fragmentos.
Os grupos halo que R1 pode representar incluem, fluoro, cloro, bromo e iodo. Para evitar dúvidas, ao representar, pelo menos, um grupo halo opcional, R1 pode não estar presente (e estar assim substituído com H, de modo a que sejam observadas as regras de valência) ou pode representar um ou mais átomos de halogéneo.
Quando R3 representa um fragmento estrutural de fórmula I(i), no qual R4 representa um ou mais subst ituintes fluoro, os compostos de fórmula I preferidos incluem aqueles nos quais R4 representa um único substituinte fluoro na posição 2 ou 3, ou dois substituintes fluoro nas posições 2 e 5 ou, de um 7 modo mais preferido, nas posições 2 e 6 (em que as posições dos substituintes são determinadas em relação ao ponto de ligação do fragmento estrutural de fórmula I(i) ao resto da molécula (i. e., ao grupo -NHCH2-) ) . fragmento estrutural de fórmula I preferidos incluem aqueles nos X4 representa -N- e os outros representam ambos -N- e os outros representam -CH-. preferidos incluem aqueles nos
Quando R3 representa um I(ii), os compostos de fórmula quais: (a) um de Xi, X2, X3 e representam -CH-; ou (b) ou Xi e X3, ou X2 e X4, dois (conforme apropriado)
Os compostos de fórmula I quais: R1 representa um único substituinte fluoro, cloro ou bromo; R2 representa alcoxilo Ci_2 substituído com um ou mais substituintes fluoro, tal como -OCHF2, -OCF3, -OCH2CF3, OCH2CHF2, -OCH2CH2F ou -OCH(CH2F)2; R3 representa um fragmento estrutural de fórmula I(i); R4 representa H.
Os compostos de fórmula I mais preferidos incluem aqueles nos quais:
Ra representa OH; R1 representa um único substituinte cloro; R2 representa -OCF3, de um modo preferido, -OCH2CHF2 ou, de um modo mais preferido, -OCHF2, ou -OCH2CH2F.
Os pontos de substituição preferidos de R1 e R2 no grupo fenilo relevante dos compostos de fórmula I incluem em duas posições meta em relação ao ponto de ligação desse grupo fenilo ao resto da molécula (i. e., na posição 3 e/ou na posição 5 (de um modo preferido, substituição 3,5) relativamente ao átomo de carbono portador do grupo I- ou θ-hidroxiácido).
Os compostos de fórmula I que podem ser mencionados incluem aqueles nos quais: R2 representa um ou dois substituintes alcoxilo Ci_2, em que as parte alquilo desses substituintes estão por si só substituídas com um ou mais substituintes fluoro; ou R2 representa um ou dois substituintes alcoxilo C3, em que as parte alquilo desses substituintes estão por si só substituídas com um ou mais substituintes fluoro.
Os compostos de fórmulâ I podem ser preparados de acordo com técnicas bem conhecidas dos especialistas na técnica, por exemplo, as descritas a seguir·
De acordo com um outro aspecto é proporcionado um processo de preparação de um composto de fórmula I, o qual compreende: (Da condensação de um composto de fórmula II,
9 em que Ra, R1 e R2 sao como anteriormente definidos com um composto de fórmula III,
"V
III o em que Y e R3 sao como anteriormente definidos, por exemplo na presença de um agente de condensação (e. g., cloreto de oxalilo em DMF, EDC, DCC, HBTU, HATU, PyBOP ou TBTU) , uma base apropriada (e. g., piridina, DMAP, TEA, 2,4,6-colidina ou DIPEA) e um solvente orgânico adequado (e. g.r diclorometano, acetonitrilo, AcOEt ou DMF); (ii) a condensação de um composto de fórmula IV,
O
R
R2
IV em que Ra, R1, R2 e Y são como anteriormente definidos com
um composto de fórmula V
V r3ch2nh2 10 em que R3 é como anteriormente definido, por exemplo, sob condições como descritas no processo (i) acima; (iii) para compostos de fórmula I, nos quais R1 não está presente, redução de um composto correspondente de fórmula Ia, como definido atrás, no qual R5 representa OR6, em que R5 e R6 são como definidos atrás, por exemplo, por hidrogenação na presença de um catalisador adequado (e. g., um catalisador de metal em suporte tal como Pd/C (e. g., 10% (p/p) Pd/C)) e um solvente apropriado (e. g., um álcool de alquilo (e. g., Ci_6) inferior, tal como etanol) e, opcionalmente na presença de um ácido adequado (e. g., ácido acético) e/ou como descrito em Synth. Comm. (1998) 4351; ou (iv) reacção de um composto correspondente de fórmula XVIA ou XVIB, como definido atrás, com uma fonte adequada de amónia (e. g., acetato de amónio ou amoniaco gasoso) em condições conhecidas do especialista na técnica, tal como por reacção de um etilimidoato intermediário (preparado por reacção de um composto de fórmula XVIA ou XVIB com HCl(g) em etanol) com amoniaco gasoso em etanol ou nas condiçoes descritas em Tetrahedron Lett. 40, 7067 (1999), em que as divulgações desse documento são aqui incorporadas por referência (por exemplo, para preparação de compostos de fórmula I, nos quais R3 representa um fragmento estrutural de fórmula I(ii) no qual X2 ou X4 representa N, reacção de um composto correspondente de fórmula XVIB com acetato de amónio (e. g., 1 a 30 equivalentes de acetato de amónio) na presença de IV-acetil-cisteína (e. g., 1 a 30 equivalentes de IV-acetil-cisteína) e um solvente apropriado (e. g., um 11 álcool de alquilo inferior (e. g., Ci_6), tal como metanol)).
Os compostos de fórmula II são disponibilizados utilizando técnicas conhecidas e/ou correntes.
Por exemplo, os compostos de fórmula II, nos quais Ra representa OH, podem ser preparados por reacção de um aldeído de fórmula VI,
em que R1 e R2 são como anteriormente definidos com: (a) um composto de fórmula VII,
R"CN VII em que R" representa H ou (CH3)3Si, por exemplo, à temperatura ambiente, ou a temperatura elevada, (e. g., abaixo de 100 °C) na presença de um solvente orgânico adequado (e. g., clorofórmio ou cloreto de metileno) e, se necessário, na presença de uma base adequada (e. g., TEA) e/ou um sistema catalisador adequado (e. g., cloreto de benzilamónio ou iodeto de zinco, ou utilizando um catalisador quiral, por exemplo, como descrito em Chem. Rev., (1999) 99, 3649), seguida de hidrólise em condições 12 que são bem conhecidas dos especialistas na técnica (e. g., como se descreve a seguir); (b) NaCN ou KCN, por exemplo, na presença de NaHSCh e água, seguida de hidrólise; (c) clorofórmio, por exemplo, a temperatura elevada (e. g., acima da temperatura ambiente mas abaixo de 100 °C) na presença de um solvente orgânico adequado (e. g., clorofórmio) e, se necessário, na presença de um sistema catalisador adequado (e. g., cloreto de benzilamónio), seguida de hidrólise; (d) um composto de fórmula VIII,
VIII em que M representa mg ou Li, seguida de dissociação oxidativa (e. g., ozonólise ou catalisada por ósmio ou ruténio) em condições que são bem conhecidas dos especialistas na técnica; ou (e) tris(metiltio)metano em condições que são bem conhecidas dos especialistas na técnica, seguida de hidrólise na presença de, e. g., HgO e HBF4.
Os compostos de fórmula II, nos quais Ra representa -CH2OH podem ser preparados por redução de um composto de fórmula IX, 13
em que R representa alquilo Ci_6 ou alquil Ci_3-fenilo e R1 e R2 são como anteriormente definidos, por exemplo, à temperatura ambiente ou abaixo na presença de um agente de redução adequado (e. g., boro-hidreto de sódio) e um solvente orgânico apropriado (e. g., metanol, etanol, THF ou misturas destes), seguida de hidrólise do intermediário éster de ácido trópico resultante de fórmula IXA,
IXA em que R, R1 e R2 são como anteriormente definidos, em condições que são bem conhecidas dos especialistas na técnica, por exemplo, como se descreve a seguir. 0 especialista na técnica compreenderá que os passos de redução e hidrólise podem ser realizados como um processo num único recipiente, por exemplo, como se descreve a seguir. 14
Os compostos de fórmula II, nos quais Ra representa -OH, podem ser alternativamente preparados por oxidação de um composto de fórmula IXB,
OH
IXB ou um derivado deste que está opcionalmente protegido no grupo hidroxilo secundário, em que R1 e R2 são como anteriormente definidos, na presença de um agente oxidante adequado (e. g., uma combinação de um oxidante de radical livre adequado (tal como TEMPO) e um sal de hipoclorito adequado (tal como hipoclorito de sódio)) em condições conhecidas do especialista na técnica, por exemplo, entre -10 °C e à temperatura ambiente, na presença de um solvente adequado (e. g., água, acetona ou uma sua mistura), um sal apropriado (e. g., um halogeneto de metal alcalino tal como brometo de potássio) e uma base adequada (e. g., um carbonato ou hidrogenocarbonato de metal alcalino, tal como hidrogenocarbonato de sódio).
As formas enantioméricas do composto de fórmula II, nos quais Ra representa -OH (i. e., aqueles compostos possuindo configurações diferentes de substituintes em torno do átomo de C em posição cx relativamente ao grupo CO2H) podem ser separadas por um passo de derivatização enantioespecífica. Isto pode ser conseguido, por exemplo, por um processo enzimático. Tais processos enzimáticos incluem, por exemplo, transesterificação 15 do grupo α-ΟΗ entre a temperatura ambiente e a de refluxo (e. g., entre 45 e 65 °C) na presença de uma enzima adequada (e. g., Lipase PS Amano) , um éster apropriado (e. g., acetato de vinilo) e um solvente adequado (e. g., éter metílico e terc-butílico). 0 isómero derivatizado pode ser depois separado do isómero por reagir por técnicas de separação convencionais (e. g., cromatografia).
Os grupos adicionados aos compostos de fórmula II num tal passo de derivatização podem ser removidos antes de quaisquer outras reacções ou numa etapa mais tardia na síntese dos compostos de fórmula I. Os grupos adicionais podem ser removidos utilizando técnicas convencionais (e. g., para ésteres do grupo oí-OH, hidrólise em condições conhecidas do especialista na técnica (e. g., entre a temperatura ambiente e a de refluxo, na presença de uma base adequada (e. g., NaOH) e um solvente apropriado (e. g., MeOH, água ou as suas misturas))).
As formas enantioméricas do composto de fórmula II, no qual Ra representa -CH2OH, podem ser separadas por técnicas cromatográficas quirais (e. g.r HPLC quiral).
Os compostos de fórmula III podem ser preparados por condensação de um composto de fórmula X,
O 16
X em que Y é como anteriormente definido com um composto de fórmula V, como definido atrás, por exemplo, em condições semelhantes às aqui descritas para preparação de compostos de fórmula I.
Os compostos de fórmula IV podem ser preparados condensando um composto de fórmula II como definido atrás com um composto de fórmula X como definido atrás, por exemplo, em condições semelhantes às aqui descritas para preparação de compostos de fórmula I.
Os compostos de fórmula VI são disponibilizados, utilizando técnicas conhecidas e/ou correntes. Por exemplo, estes podem ser preparados por: (i) metalação (em que o metal pode ser, por exemplo, um metal alcalino, tal como Li ou, de um modo preferido, um metal divalente, tal como mg) de um composto de fórmula XI,
em que Hal representa um átomo de halogéneo seleccionado de Cl, Br e I e R1 e R2 são como anteriormente definidos, seguida de reacção com uma fonte adequada do grupo formilo (tal como N, iV-dimetilformamida) , por exemplo, sob condições descritas a seguir; (ii) redução de um composto de fórmula XII, 17
XII CV^OMe
em que R1 e R2 sao como anteriormente definidos na presença de um agente de redução adequado (e. g., DIBAL-H); ou (iii) oxidação de um composto de fórmula XIII,
XIII R2 em que R1 e R2 são como anteriormente definidos na presença de um agente oxidante adequado (e. g., Mn02, clorocromato de piridinio, uma combinação de DMSO e cloreto de oxalilo, ou complexo de S03 piridina em DMSO).
Os compostos de fórmula IX podem ser preparados a partir do fenilacetato correspondente (o qual pode, por exemplo, ser obtido da acetofenona correspondente, como descrito em J. Am. Chem. Soc. 98, 6750 (1976) ou do cianeto de benzilo correspondente por processos hidrolíticos correntes) por técnicas convencionais, por exemplo, analogamente às técnicas descritas em J. Org. Chem. 54, 3831 (1989) e/ou como se descreve a seguir. 18
Os compostos de fórmula IXB podem ser preparados por di-hidroxilação de um composto correspondente de fórmula XIIIA
em que R1 e R2 são como anteriormente definidos, na presença de um agente di-hidroxilante adequado (e. g., um reagente ou mistura reagente que proporciona 0s04, tais como AD-mix-α ou, em particular, AD-mix-β), por exemplo, em condições conhecidas do especialista na técnica, tal como entre -10 °C e a temperatura ambiente na presença de um solvente apropriado (e. g., água, terc-butanol ou uma sua mistura). Quando são utilizados oxidantes simétricos tal como AD-mix-a ou AD-mix-β, este método pode ser utilizado para preparar compostos de fórmula IXB que têm configurações de grupo especificas (i. e., R ou S) em torno de ambos os átomos de C aos quais estão ligados os grupos hidroxilo primário e secundário.
Os compostos de fórmula XIIIA podem ser preparados por reacção de um composto correspondente de fórmula XI, como definido atrás, com uma fonte adequada do anião vinilo (e. g., tributil(vinil)estanho) em condições conhecidas do especialista na técnica, por exemplo, entre a temperatura ambiente e a de refluxo (e. g., 50 °C) na presença de um solvente apropriado (e. g., tolueno) , um agente de condensação adequado (e. g., um complexo de coordenação de paládio(0), tal como tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0)) e, opcionalmente, na 19 presença de um catalisador apropriado (e. g., 2,6-di-terc-butil-4-metilfenol).
Os compostos de fórmulas V, VII, VIII, X, XI, XII e XIII estão comercialmente disponíveis, são conhecidos na literatura ou podem ser obtidos por analogia com os processos aqui descritos, ou por processos sintéticos convencionais, de acordo com técnicas correntes, a partir de materiais de partida facilmente acessíveis utilizando reagentes e condições reaccionais apropriados. Os compostos de fórmulas Ia, XVIA e XVIB podem ser obtidos por processos descritos a seguir.
Os substituintes do anel fenilo nos compostos de fórmulas I, II, III, IV, V, VI, IX, IXA, IXB, XI, XII, XIII e XIIIA podem ser introduzidos e/ou interconvertidos utilizando técnicas bem conhecidas dos especialistas na técnica, através de interconversões correntes de grupos funcionais, de acordo com técnicas correntes, a partir de materiais de partida facilmente acessíveis utilizando reagentes e condições reaccionais apropriados.
Por exemplo, os compostos de fórmulas I, II, IV, VI, IXA, XI, XII e XIII podem ser preparados a partir dos compostos correspondentes de fórmulas XIVA, XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG e XIVH, respectivamente, 20
Hal
OH
em que Ra, R, R1, R3, Y e Hal (conforme apropriado) sao como anteriormente definidos, por exemplo: (a) por reacção com um haloalcano fluorado correspondente (e. g., um cloroalcano fluorado), e. g., à temperatura ambiente ou acima (e. g., a refluxo) na presença de uma base adequada (e. g., terc-butóxido de potássio, KOH ou NaOH, por exemplo, em solução aquosa) e um solvente 21 orgânico apropriado (e. g., THF, clorofórmio ou i- propanol); ou (b) por reacção com um composto de fórmula XIVJ,
RXS(0)20Ry XIVJ em que Rx representa alquilo C1-4, perfluoroalquilo C1-4 ou fenilo (opcionalmente substituído com metilo, nitro ou halo) e Ry é CH2CF3, CH2CHF2, CH2CH2F ou CH (CH2F) 2r por exemplo, na presença de uma base adequada (e. g., K2CO3) e um solvente apropriado (e. g., DMF), por exemplo, em ambos os casos, como se descreve a seguir. 0 especialista na técnica compreenderá que estas transformações de grupo funcional também podem ser realizadas numa fase mais inicial da síntese global dos compostos de fórmulas II , IV, VI, IXA, XI, XII e XIII (i. e., em precursores apropriados de compostos de fórmulas XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG e XIVH, respectivamente).
Os compostos de fórmulas XIVA, XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XI VF, XIVG, XIVH e XIVJ são comercialmente disponíveis, são conhecidos na literatura ou podem ser obtidos por analogia com os processos aqui descritos ou por processos sintéticos convencionais, de acordo com técnicas correntes, a partir de
materiais de partida facilmente acessíveis utilizando reagentes e condições reaccionais apropriadas. Por exemplo, os compostos de fórmulas XIVA, XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG e XIVH podem ser obtidos por desprotecção dos fenóis protegidos correspondentes (em que o grupo de protecção pode ser, por exemplo, metilo, alilo, benzilo ou terc-butilo) em condições correntes. Além disso, os compostos de fórmula XIVD, nos quais R1 é um único substituinte cloro podem ser obtidos a partir de um 22 3-C1, benzeno di- ou tri-halo substituído (e. g., 1-Br, 5-F-benzeno, por substituição do átomo de flúor com um grupo metoxilo (e. g., por reacção com NaOMe em l-metil-2-pirrolidinona/metanol a temperatura elevada), substituição do grupo bromo com um grupo formilo (e. g., como descrito atrás para preparação de compostos de fórmula VI) e, em seguida, desmetilação (e. g., utilizando PhSH em 1-metil-2-pirrolidinona na presença de K2CO3) ) .
De igual modo, os compostos de fórmula I, nos quais R1 está ausente podem ser preparados a partir dos compostos de fórmula I correspondentes (ou via os seus precursores apropriados), nos quais R1 representa halo (tal como cloro) , por exemplo, por hidrogenação em condições conhecidas do especialista na técnica.
Os compostos de fórmula I podem ser isolados das suas misturas reaccionais utilizando técnicas convencionais.
Os derivados farmaceuticamente aceitáveis de compostos de fórmula I também incluem derivados "protegidos", e/ou compostos que actuam como profármacos, de compostos de fórmula I.
Os compostos que podem actuar como profármacos de compostos de fórmula I que podem ser mencionados, incluem compostos de fórmula Ia,
O
R
R2 la 23 em que R3a representa um fragmento estrutural de fórmula I(iii) ou I(iv):
em que R5 representa OR6 ou C(0)0R7; R6 representa H, alquilo Ci-io, alquil Ci-3-arilo ou alquiloxi Ci-3-arilo (em que as partes de alquilo destes dois últimos grupos estão opcionalmente interrompidas por um ou mais átomos de oxigénio e em que as partes de arilo destes dois últimos grupos estão opcionalmente substituídas com um ou mais substituintes seleccionados de halo, fenilo, metilo ou metoxilo, últimos três grupos estes que também estão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes halo); R7 representa alquilo C1-10 (último grupo este que está opcionalmente interrompido por um ou mais átomos de oxigénio), ou alquil Ci-3-arilo ou alquiloxi Ci_3-arilo (em que as partes de alquilo destes dois últimos grupos estão opcionalmente interrompidas por um ou mais átomos de oxigénio e em que as partes de arilo destes dois últimos grupos estão opcionalmente substituídas com um ou mais substituintes seleccionados de halo, fenilo, metilo ou metoxilo, últimos três grupos estes que também estão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes halo); e
Ra, R1, R2, Y, R4, Xi, X2, X3 e X4 são como anteriormente definidos, e seus derivados farmaceuticamente aceitáveis. 0 termo "derivados farmaceuticamente aceitáveis" de compostos de fórmula Ia, incluem os sais farmaceuticamente aceitáveis (e. g., sais de adição de ácido).
As linhas onduladas nas ligações dos fragmentos de fórmulas I(iii) e I(iv) significam as posições de ligação dos fragmentos.
Os grupos alquiloxiarilo que R6 e R7 podem representar compreendem um grupo alquilo e um grupo arilo ligados através de um átomo de oxigénio. Os grupos alquilarilo e alquiloxiarilo estão ligados ao resto da molécula via a parte de alquilo daqueles grupos, partes de alquilo essas que podem ser (se existir um número suficiente (i. e., três) de átomos de carbono) de cadeia ramificada. As partes de arilo dos grupos alquilarilo e alquiloxiarilo que R6 e R7 podem representar ou com as quais podem estar substituídas, incluem grupos carbocíclicos e heterocíclicos aromáticos, tais como fenilo, naftilo, piridinilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiadiazolilo, indolilo e benzofuranilo e semelhantes.
Os grupos alquilo que R6 e R7 podem representar podem ser de cadeia linear ou, quando existe um número suficiente (i. e., um mínimo de três) de átomos de carbono, podem ser de cadeia ramificada e/ou cíclicos. Além disso, quando existe um número suficiente (i. e., um mínimo de quatro) de átomos de carbono, tais grupos alquilo também podem ser parte cíclicos/acíclicos. Tais grupos alquilo também podem ser saturados ou, quando existe um número suficiente (i. e., um mínimo de dois) de átomos de carbono, podem ser insaturados. 25
Os grupos halo com os quais R6 e R7 podem estar substituídos incluem fluoro, cloro, bromo e iodo.
Quando R5 representa C(0)0R7, os grupos R7 preferidos incluem: (a) alquilo C3-6 linear, ramificado ou cíclico, por exemplo, cicloalquilo C4-6; (b) grupos alquil Ci-2-arilo, tal como benzilo, opcionalmente substituídos como indicado atrás.
Os compostos de fórmula Ia preferidos incluem aqueles nos quais R5 representa OR6
Quando R5 representa OR6, os grupos R6 preferidos incluem: (a) H; (b) alquilo Ci-s (e. g., Ci-ε) linear, ramificado ou cíclico, não substituído, tais como alquilo C1-3 linear (e. g., etilo ou, em particular, metilo) , alquilo C3_8 ramificado (e. g., i-propilo, i-butilo ou 4-heptilo) ou alquilo C4^7 cíclico (i. e., cicloalquilo C4_7, e. g.r ciclobutilo ou ciclo-hexilo) ; (c) alquiloxi Ci_3-fenilo (e. g., alquiloxi C2-fenilo) , grupo fenilo esse que está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes como indicado atrás (e. g., trifluorometilo); (d) alquil Ci_2-arilo (e. g., metilarilo) , em que o grupo arilo é fenilo, piridinilo, oxazolilo ou isoxazolilo, últimos três grupos estes que estão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes como indicado atrás (e. g., metoxilo, metilo, bromo e/ou cloro). 26
Os compostos de fórmula Ia preferidos, incluem aqueles nos quais R5 representa OR6 e R6 representa alquilo Ci_6 (e. g., Ci_4) linear, ramificado (conforme apropriado) ou cíclico (conforme apropriado), tais como metilo, etilo, n-propilo, i-propilo ou ciclobutilo.
Os compostos de fórmula Ia podem ser preparados por um ou mais dos métodos seguintes: (a) reacção de um composto correspondente de fórmula II, como definido atrás, com um composto de fórmula XV,
O definidos, por descritas atrás em que Y e R3a são como anteriormente exemplo, em condições semelhantes às aqui para a síntese de compostos de fórmula I; (b) reacção de um composto correspondente de fórmula IV como definido atrás com um composto de fórmula XVI,
R3aCH2NH2 XVI em que R3a condições síntese de em a é como anteriormente definido, por exemplo, semelhantes às aqui descritas atrás para compostos de fórmula I; 27 (c) para compostos de fórmula Ia nos quais R5 representa OH, reacção de um composto correspondente de fórmula XVIA ou XVIB,
XVIA
em que Ra, R1, R2, R4, Y, Xi, X2/· X3 e X4 são como anteriormente definidos, com hidroxilamina, por exemplo, em condições conhecidas do especialista na técnica; (d) para compostos de fórmula Ia, nos quais R5 representa OR6, reacção de um derivado protegido de um composto correspondente de fórmula I o qual é, por exemplo, um composto de fórmula XVII, 28
XVII
XVII
VR3b em que R3b representa um fragmento estrutural de fórmula I(v) ou I(vi) :
R4 I(v) X=Xp N—COORb
4 /H x3-x4 nh2 l(vi) exemplo, -CH2CH2-Si (CH3) 3 ou e Ra, R1, R2, Y, R4, X2, X2, X3 definidos com um composto de
XVIII em que Rb representa, por benzilo, ou um seu tautómero, e X4 são como anteriormente fórmula XVIII, R6ONH2 em que R6 é como anteriormente definido, ou um seu sal de adição de ácido, por exemplo, entre a temperatura ambiente e a de refluxo na presença de um solvente orgânico apropriado (e. g., THF, CH3CN, DMF ou DMSO) , seguida de remoção do grupo -C(0)0Rb em condições conhecidas do 29 especialista na técnica (e. g., fazendo reagir com QF ou TFA (e. g., como se descreve a seguir)); (e) para compostos de fórmula Ia, nos quais R5 representa OH, reacção de um composto de fórmula XVII, como definido atrás, nos quais Rb representa benzilo com hidroxilamina, ou um seu sal de adição de ácido, por exemplo, sob condições que serão bem conhecidas dos especialistas na técnica; (f) para compostos de fórmula Ia, nos quais R5 representa
COOR7, reacção de um composto correspondente de fórmula I como definido atrás com um composto de fórmula XIX,
L1COOR7 XIX em que L1 representa um grupo de saida adequado, tais como halo ou nitrofenilo (e. g., 4-nitrofenilo) , e R7 é como anteriormente definido, por exemplo, à ou próximo da temperatura ambiente na presença de base adequada (e. g., NaOH, por exemplo, em solução aquosa) e num solvente orgânico apropriado (e. g., cloreto de metileno); ou (g) para compostos de fórmula Ia, nos quais R5 representa OCH3 ou OCH2CH3, reacção de um composto correspondente de fórmula Ia, no qual R5 representa OH com sulfato de dimetilo ou sulfato de dietilo, respectivamente, por exemplo, na presença de uma base adequada (e. g., um hidróxido de metal alcalino, tal como KOH (por exemplo, em solução aquosa a e. g., 50% em peso)) e um catalisador apropriado (e. g., um halogeneto de amónio quaternário, tal como cloreto de 30 benziltrimetilamónio (por exemplo, em solução de CH2CI2 ou THF a, e. g.r 10% em peso)).
As linhas onduladas nas ligações dos fragmentos de fórmulas I(v) e I(vi), significam as posições de ligação dos fragmentos.
Os compostos de fórmulas XVIA e XVIB podem ser preparados por reacção de um composto correspondente de fórmula II, como definido atrás, com um composto de fórmula XIXA ou XIXB,
XIXA XIXB em que R4, Y, Xi, X2, X3 e X4 são como anteriormente definidos, por exemplo, em condições semelhantes às aqui descritas atrás para a síntese de compostos de fórmula I.
Os compostos de fórmulas XVIA e XVIB podem ser alternativamente preparados por reacção de um composto correspondente de fórmula IV, como definido atrás, com um composto de fórmula XIXC ou XIXD, 31 H7N 2 \
CN
XIXC H,N 2 \
XIXD em que R4, Xi, X2, X3 e X4 são como anteriormente definidos, por exemplo, em condições semelhantes às aqui descritas atrás para a síntese de compostos de fórmula I.
Os compostos de fórmula XVII podem ser preparados por reacção de um composto correspondente de fórmula II, como definido atrás, com um composto de fórmula XX, tr
XX
O em que Y e R3b são como anteriormente definidos, por exemplo, em condições semelhantes às aqui descritas atrás para a síntese de compostos de fórmula I.
Alternativamente, os compostos de fórmula XVII podem ser preparados por reacção de um composto correspondente de fórmula I com um composto correspondente a um composto de fórmula XIX no qual, em vez de R7, está presente o grupo Rb, no qual Rb é como anteriormente definido, por exemplo, sob condições 32 descritas acima em relaçao à preparação de compostos de fórmula Ia.
Os compostos de fórmulas XV e XX podem ser preparados por reacção de um composto correspondente de fórmula X como definido atrás com, respectivamente, um composto de fórmula XVI como definido atrás, ou um composto de fórmula XXI,
R3bCH2NH2 XXI em que R3b é como anteriormente definido, por exemplo, em condições semelhantes às aqui descritas atrás para a síntese de compostos de fórmula I.
Os compostos de fórmula XVI, XVIII, SIX, XIXA, XIXB, XIXC, XIXD e XXI são comercialmente disponíveis, são conhecidos na literatura ou podem ser obtidos por analogia com os processos aqui descritos ou por processos sintéticos convencionais, de acordo com técnicas correntes, a partir de materiais de partida facilmente acessíveis utilizando reagentes e condições reaccionais apropriados. Por exemplo, os compostos de fórmulas XIXA e XIXB podem ser preparados por reacção de um composto correspondente de fórmula XIXC ou XIXD (conforme apropriado) com um composto de fórmula X, por exemplo, em condições semelhantes às aqui descritas atrás.
Os compostos de fórmulas I e Ia, como definidos acima e os derivados dos dois, são referidos a seguir como "os compostos". 33
Assim, os compostos preferidos incluem os compostos dos exemplos descritos a seguir. A este respeito, os compostos que podem ser mencionados incluem:
Ph(3-C1)(5=OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab;
Ph(3-C1) (5-OCHF 2) ~ (R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-C1) (5-OCHF 2) ~ (R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OEt);
Ph(3-C1) (5-OCHF 2)~(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OnPr);
Ph(3-C1)(5-0CHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OiPr);
Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OcBu);
Ph(3-C1)(5-OCHF2)- (P) CH (OH) C (0)-Aze-Pab(OH);
Ph(3-C1)(5-OCHF2) - (P)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(COOcPentilo); Ph(3-C1) (5-OCHF 2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Z);
Ph(3-C1)(5-OCF3)- (P)CH(OH)C(0)-Aze-Pab;
Ph(3-C1)(5-OCF3)- (P) CH (OH) C (0)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-C1) (5-OCF3) -(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OCH2-3-(5-Me-isoxazole));
Ph(3-C1)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OCH2-3-piridina); Ph(3-C1) (5-0CF 3) - (P)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OiBu) ;
Ph(3-C1)(5-OCF3)-(P)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OEt);
Ph(3-C1) (5-OCF 3) - (P)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OBn) ;
Ph(3-C1) (5-OCF3) -(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OcHexilo);
Ph(3-C1) (5-OCF 3) - (P)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OcBu);
Ph (3-C1) ( 5-OCF3) - (P) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (0CH2CH20Ph (3-CF3) ) ; Ph(3-C1)(5-OCF3)-(P)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OBn(4-C1));
Ph(3-C1)(5-OCF3)-(P)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OBn(3-MeO));
Ph(3-C1) (5-OCF 3)-(P)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OBn(2-Br));
Ph(3-C1) (5-OCF 3)-(P)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OBn(4-Me));
Ph(3-C1)(5-0CF3)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(0-4-heptilo);
Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(S)CH(CH20H) C (0) -Aze-Pab;
Ph(3-C1)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(0)-Aze-Pab;
Ph(3-C1) (5-OCF3) -(S)CH(CH2OH) C (0) -Aze-Pab(OMe); 34
Ph (3-OCHF2) - (.R) CH (OH) C (0) -Aze-Pab;
Ph(3-OCF3)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab;
Ph (3-Cl) (5-OCH2CF3) -(R) CH (OH) C (0) -Aze-Pab;
Ph (3-C1) (5-OCH2CF3) - (R) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (OMe) ;
Ph (3-C1) (5-OCH2CHF2) - (R) CH (OH) C (0) -Aze-Pab;
Ph (3-C1) (5-OCH2CHF2) -(R) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (OMe) ;
Ph(3-C1)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab;
Ph(3-C1)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe);
Ph (3-C1) (5-OCH2CH2F) - (R) CH (OH) C (0) -Aze-Pab;
Ph (3-C1) (5-OCH2CH2F) - (R) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (OMe) ;
Ph(3-C1) (5-OCH(CH2F) 2)-(R) CH(OH)C(0)-Aze-Pab;
Ph(3-C1) (5-OCH(CH2F) 2)-(P) CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe) ;
Ph(3-F) (S-OCHF2) -(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab;
Ph(3-F) (5-OCHF2) ~(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab;
Ph(3-Br)(5-OCHFZ)~(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab;
Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(P)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-C1, 5-OCH2CHF2)-(P)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OH);
Ph(3-C1, S-OCH2CH2F)-(R) CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OH) ;
Ph(3-C1, 5-OCHF 2)~(R)CH(OH)C(0)-Pro-Pab;
Ph(3-C1, 5-OCHF 2)-(P)CH(OH)C(0)-Pro-Pab(OMe) ;
Ph(3-C1, 5-OCHFz)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-NH-CH2-((2-amidino)-5 piridinilo);
Ph(3-C1, 5-OCHF2) ~(R)CH(OH)C(0)-Aze-NH-CH2-((2-metoxiamidino)-5-piridinilo);
Ph(3-C1, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-NH-CH2-((5-amidino)-2 pirimidinilo) ;
Ph(3-C1, 5-OCHF2) -(P)CH(OH)C(0)-Aze-NH-CH2-((5-metoxiamidino)-2-pirimidinilo);
Ph(3-Cl, 5-OCHF 2)~(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(3-F) ;
Ph(3-C1, 5-OCHF 2)~(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(2,6-diF) ;
Ph(3-C1, 5-OCHF 2)~(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(2,6-diF) (OMe); 35
Ph (3-C1, 5-OCHF2) - (-R) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (2,5-diF) ; e Ph(3-C1, 5-OCCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(2,5-diF)(OMe).
Os compostos da invenção podem exibir tautomerismo. Todas as formas tautoméricas e as suas misturas estão incluídas no âmbito da invenção. Formas tautoméricas particulares que podem ser mencionadas incluem aquelas relacionadas com a posição da ligação dupla na funcionalidade amidina num composto de fórmula Ia e a posição do substituinte R5.
Os compostos da invenção também contêm dois ou mais átomos de carbono assimétricos e podem portanto exibir isomerismo óptico e/ou diastereoisomerismo. Os diastereoisómeros podem ser separados utilizando técnicas convencionais, e. g., cromatografia. Os vários estereoisómeros podem ser isolados por separação de uma mistura racémica ou outra dos compostos utilizando técnicas convencionais, e. g., HPLC. Alternativamente, os isómeros ópticos desejados podem ser preparados por reacção de materiais de partida opticamente activos apropriados sob condições que não provocarão racemização ou epimerização, ou por derivatização, por exemplo, com um ácido homoquiral, seguida de separação dos derivados diastereoméricos por meios convencionais (e. g., HPLC, cromatografia sobre sílica). São preferidos os compostos nos quais o fragmento
36 está na configuração S.
Os compostos preferidos incluem aqueles nos quais o fragmento estrutural
está na configuração R quando Ra representa -OH ou está na configuração S quando Ra representa -CH2OH.
As linhas onduladas nas ligações nos dois fragmentos acima significam as posições de ligação dos fragmentos.
Os compostos que podem ser mencionados incluem Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-CH(OH)C(0)-Aze-Pab (em que, nesta ocasião, Aze simboliza azetidina-2-carboxilato (i. e., nas configurações (R) e/ou (S) ) , bem como os compostos equivalentes nos quais, em vez de um átomo de hidrogénio na unidade amidino em Pab, está presente o grupo -0R6 (como definido atrás) no qual R6 representa alquilo Ci_3 (i. e., Ph (3-C1) (5-OCHF2) -CH (OH) C (0) -Aze-Pab (OMe) ,
Ph(3-C1)(5-OCHF2)-CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OEt), Ph(3-Cl)(5-OCHF2)- CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OnPr) ou Ph(3-C1) (5-OCHF2) -CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OiPr)). Os compostos que podem ser ainda mencionados, incluem aqueles que não são os compostos específicos identificados na frase anterior. 37
Será compreendido pelos especialistas na técnica que nos processos descritos acima e a seguir, os grupos funcionais dos compostos intermediários podem precisar de ser protegidos com grupos de protecção.
Os grupos funcionais que é desejável proteger incluem hidroxilo, amino e ácido carboxilico. Os grupos de protecção adequados para hidroxilo, incluem grupos alquilo opcionalmente substituídos e/ou insaturados (e. g., metilo, alilo, benzilo ou terc-butilo) , grupos trialquilsililo ou diarilalquilsililo (e. g., t-butildimetilsililo, t-butildifenilsililo ou trimetilsililo) e tetra-hidropiranilo. Os grupos de protecção adequados para ácido carboxilico incluem ésteres de alquilo Ci_6 ou benzilo. Os grupos de protecção adequados para amino e amidino incluem t-butiloxicarbonilo, benziloxicarbonilo ou 2-trimetilsililetoxicarbonilo (Teoc). Os azotos do amidino também podem ser protegidos com grupos hidroxilo ou alcoxilo e podem estar mono- ou diprotegidos. A protecção e a desprotecção de grupos funcionais podem ocorrer antes ou após condensação, ou antes ou após qualquer outra reacção nos esquemas supramencionados.
Os grupos de protecção podem ser removidos de acordo com técnicas que são bem conhecidas dos especialistas na técnica e como se descreve a seguir.
Os especialistas na técnica compreenderão que, para se obter os compostos da invenção de um modo alternativo e em alguns casos, de um modo mais conveniente, os passos individuais do processo mencionados atrás podem ser realizados por uma ordem diferente e/ou as reacções individuais podem ser realizadas numa 38 podem ser adicionados fase diferente da via global (i. e., substituintes e/ou realizadas transformações químicas em intermediários diferentes dos mencionados atrás, em relação a uma reacção particular). Isto pode evitar ou tornar necessária, a utilização de grupos de protecção. 0 tipo de química envolvida ditará a necessidade e o tipo de grupos de protecção, bem como a sequência para se realizar a síntese. A utilização de grupos de protecção é totalmente descrita em "Protective Groups in Organic Chemistry", editado por J W F McOmie, Plenum Press (1973), e "Protective Groups in Organic Synthesis", 3a edição, T.W. Greene & P.G.M. Wutz, Wiley-Interscience (1999).
Os derivados protegidos dos compostos da invenção podem ser quimicamente convertidos em compostos da invenção utilizando técnicas de desprotecção convencionais (e. g., hidrogenação). 0 especialista compreenderá igualmente que determinados compostos de fórmula Ia também podem ser referidos como sendo "derivados protegidos" de compostos de fórmula I.
Utilização médica e farmacêutica
Os compostos da invenção podem por si só possuir actividade farmacológica.
No entanto, outros compostos da invenção podem não possuir uma tal actividade, mas podem ser administrados por via parentérica ou oral e podem depois disso ser metabolizados no 39 corpo para formar compostos que são farmacologicamente activos. Tais compostos (o que também inclui compostos que podem possuir alguma actividade farmacológica, mas em que a actividade é consideravelmente inferior à dos compostos "activos", nos quais eles são metabolizados) podem, por conseguinte, ser descritos como "profármacos" dos compostos activos.
Assim, os compostos da invenção são úteis porque possuem actividade farmacológica e/ou são metabolizados no corpo após administração oral ou parentérica para formar compostos que possuem actividade farmacológica. Os compostos da invenção são por isso indicados como fármacos.
De acordo com um outro aspecto da invenção são portanto proporcionados os compostos da invenção para utilização como fármacos.
Em particular, os compostos da invenção sao por si só inibidores potentes de trombina e/ou (e . g., no caso de profármacos ) são metabolizados após administração para formar inibidores potentes de trombina, por exemplo, como pode ser demonstrado nos ensaios descritos abaixo.
Por "profármaco de um inibidor de trombina," incluem-se compostos que formam um inibidor de trombina, numa quantidade experimentalmente detectável e em menos de um tempo predeterminado (e. g., cerca de 1 hora), após administração oral ou parentérica (ver, por exemplo, Ensaio E abaixo) ou, alternativamente, após incubação na presença de microssomas de fígado (ver, por exemplo, Ensaio g abaixo). 40
Espera-se assim que os compostos da invenção sejam úteis naquelas condições onde é requerida a inibição de trombina e/ou em condições onde é indicada a terapia anticoagulante, incluindo as seguintes: 0 tratamento e/ou profilaxia de trombose e hipercoagulabilidade no sangue e/ou tecidos de animais, incluindo humanos. Sabe-se que a hipercoagulabilidade pode levar a doenças tromboembólicas. Os estados associados a hipercoagulabilidade e doenças tromboembólicas que podem ser mencionados, incluem resistência hereditária ou adquirida à proteína C activada, tal como a mutação do factor V (factor V Leiden), e deficiências hereditárias ou adquiridas na antitrombina III, proteína C, proteína S, cofactor II de heparina. Outros estados que se sabe estarem associados à hipercoagulabilidade e doença tromboembólica, incluem anticorpos antifosfolípidos em circulação (Lupus anticoagulante), homocisteinemia, trombocitopenia induzida por heparina e defeitos na fibrinólise, bem como síndromes da coagulação (e. g., coagulação intravascular disseminada (DIC)) e lesão vascular em geral (e. g., devido a cirurgia). 0 tratamento de estados em que existe um excesso indesejável de trombina sem sinais de hipercoagulabilidade, por exemplo, em doenças neurodegenerativas, tal como doença de Alzheimer.
Os estados patológicos particulares que podem ser mencionados incluem o tratamento terapêutico e/ou profiláctico de trombose venosa (e. g., DVT) e embolia pulmonar, trombose arterial (e. g., no enfarte do miocárdio, angina instável, acidente vascular cerebral com base em trombose e trombose 41 arterial periférica) e embolia sistémica geralmente da aurícula durante a fibrilação auricular (e. g., fibrilação auricular não valvular) ou do ventrículo esquerdo após enfarte transmural do miocárdio, ou provocada por insuficiência cardíaca congestiva; profilaxia de reoclusão (i. e., trombose) após trombólise, angioplastia transluminal percutânea (PTA) e cirurgias de ponte coronária; a prevenção de recidiva de trombose após microcirurgia e cirurgia vascular em geral.
Outras indicações incluem o tratamento terapêutico e/ou profiláctico de coagulação intravascular disseminada provocada por bactérias, traumatismo múltiplo, intoxicação ou qualquer outro mecanismo; tratamento anticoagulante quando o sangue está em contacto com superfícies estranhas no corpo, tais como enxertos vasculares, endopróteses vasculares, cateteres vasculares, válvulas protéticas mecânicas e biológicas ou qualquer outro dispositivo médico; e tratamento anticoagulante quando o sangue está em contacto com dispositivos médicos fora do corpo, tal como durante cirurgia cardiovascular utilizando uma aparelho cardiopulmonar ou em hemodiálise; o tratamento terapêutico e/ou profiláctico de síndrome de insuficiência respiratória idiopática e do adulto, fibrose pulmonar após tratamento com radiação ou quimioterapia, choque séptico, septicemia, respostas inflamatórias, as quais incluem, mas não se limitam a edema, aterosclerose aguda ou crónica, tais como doença arterial coronária e a formação de placas ateroscleróticas, doença arterial cerebral, enfarte cerebral, trombose cerebral, embolia cerebral, doença arterial periférica, isquemia, angina (incluindo angina instável), lesão de reperfusão, restenose após angioplastia transluminal percutânea (PTA) e cirurgia de ponte coronária. 42
Os compostos da invenção que inibem a tripsina e/ou trombina também podem ser úteis no tratamento de pancreatite.
Os compostos da invenção são, deste modo, indicados no tratamento terapêutico e/ou profiláctico destes estados.
Os compostos da invenção serão normalmente administrados por via oral, intravenosa, subcutânea, bucal, rectal, dérmica, nasal, traqueal, brônquica, por qualquer outra via parentérica ou via inalação, na forma de preparações farmacêuticas compreendendo o composto da invenção como uma base livre ou um sal de adição de ácido orgânico ou inorgânico, não tóxico, farmaceuticamente aceitável, numa forma de dosagem farmaceuticamente aceitável.
As vias de administração preferidas de compostos da invenção são as orais. As preparações farmacêuticas preferidas incluem composições farmacêuticas de libertação modificada compreendendo compostos da invenção. 0 termo composição farmacêutica de "libertação modificada" será bem compreendida pelos especialistas como incluindo qualquer composição na qual o aparecimento e/ou velocidade de libertação do fármaco (i. e., composto da invenção) está alterada por manipulações galénicas e inclui assim a definição proporcionada na United States Pharmacopeia (USP XXII) nas páginas xliii e xliv da parte do prefácio/preâmbulo, em que a divulgação relevante nesse documento é aqui incorporada por referência.
Assim, as formulações de libertação modificada adequadas podem ser preparadas pelos especialistas de acordo com técnicas correntes em farmácia (ver, por exemplo, Pharmaceutisch Weekblad Edição Cientifica, 6, 57 (1984); Medicai Applications of 43
Controlled Release, Vol II, eds. Langer e Wise (1984) Bocaraton, Florida, nas páginas 1 a 34; Industrial Aspects of Pharmaceuticals, ed. Sandel, Swedish Pharmaceutical Press (1993) nas páginas 93 a 104; e páginas 191 a 211 de "Pharmaceutics: The Science of Dosage Form Design", ed. Μ. E. Aulton (1988) (Churchill Livingstone)).
Assim, as formulações de libertação modificada preferidas incluem aquelas nas quais um composto da invenção apropriado está incorporado numa matriz polimérica. A este respeito, a requerente prefere que as formulações contendo os compostos da invenção sejam proporcionadas para administração oral na forma do chamado sistema de libertação modificada por "dilatação" ou num sistema de libertação modificada por "matriz gelificante", nos quais o composto da invenção é proporcionado em conjunto com um polímero que dilata num meio aquoso (i. e., um "componente gelificante hidrófilo").
Em particular, é preferido, pela requerente que os compostos da invenção sejam formulados em conjunto numa composição de matriz gelificante compreendendo iota-carragenina e um ou mais polímeros gelificantes neutros. A iota-carragenina está, de um modo preferido, presente numa tal preparação preferida a um nível superior a 15% em peso. Os tipos preferidos de iota-carragenina incluem a iota-carragenina de qualidade farmacêutica (disponível de FMC Biopolimer) , a qual tem uma viscosidade não inferior a 5 centipoise (cps), de um modo preferido, na gama de 5-10 cps (para uma solução a 1 , 5% aquecida até 82 °C, após o que a viscosidade é medida a 75 °C com um viscosímetro de Brookfield LV munido com um fuso n° 1 a uma velocidade de 30 rpm) e a 44 iota-carragenina de qualidade técnica (disponível de Fluka Biochemica) , a qual, de um modo preferido, tem uma viscosidade não inferior a 14 mPa.s, para uma solução a 0,3% aquecida até 20 °C, após o que a viscosidade é medida utilizando um viscosímetro de esfera, de tipo Haake, utilizado em conjunto com um termostato Lauda C3 e Hakke Mess-System III e utilizando esferas de aço inoxidável revestidas a ouro de densidade 7,8 g/cm3. O polímero gelificante neutro pode ser um único ou uma mistura de mais do que um, polímero erodível neutro possuindo propriedades gelificantes e possuindo uma solubilidade consideravelmente independente do pH. O polímero gelificante neutro está, de um modo preferido, presente na formulação a um nível superior a 10% mas, de um modo preferido, superior a 20% em peso.
Os polímeros gelificantes neutros adequados incluem poli(óxido de etileno) (PEO), derivados e membros da família de PEO (por exemplo, polietilenoglicol (PEG), de um modo preferido, existindo naturalmente no estado sólido, de peso molecular ou viscosidade adequada). Se utilizado como um único polímero gelificante neutro, um PEO tem, de um modo preferido, uma PM de > 4 milhões (4M), correspondendo a uma gama de viscosidade em solução aquosa de 1650-5500 mPa.s (ou 1650-5500 cps; medida para uma solução aquosa a 1% a 25 °C, utilizando um viscosímetro de Brookfield RVF, com fuso N° 2, a 2 rpm). Outros exemplos de PEOs adequados incluem um PEO de PM de cerca de 5 milhões (5 M) , correspondendo a uma gama de viscosidade em solução aquosa de 5500 - 7500 mPa.s ou um PEO de PM de cerca de 8 milhões (8 M) , correspondendo a uma gama de viscosidade em solução aquosa de 10000-15000 mPa.s. Esta gama abrange o valor de viscosidade (em 45 cps) típico em solução medido a 25 °C, citado para este polímero, na USP 24/NF 19, 2000 edition, p. 2285-2286. Se for utilizado PEG como um único polímero gelificante neutro, este tem, de um modo preferido, um peso molecular elevado, por exemplo, um PM de cerca de 20000, correspondendo a uma gama de viscosidade de 2700-3500 mPa.s (ou 2700-3500 cps), medida utilizando uma solução aquosa a 50% (p/p) a 20 °C, utilizando um viscosímetro capilar (Ubbelohde ou equivalente). [Ref: European Pharmacopoeia 3a Ed., 2000, Suplemento, p. 908-909.]
Outros polímeros gelificantes adequados, incluem derivados de celulose, tais como hidroxipropilmetilcelulose (HPMC) ou hidroxietilcelulose (HEC) com viscosidade adequadamente elevadas (por exemplo, "HPMC 10000 cps", "HPMC 15000 cps", "HEC tipo HH" ou "HEC tipo H"). Quando utilizado como um único polímero neutro, os polímeros de hidroxipropilmetilcelulose como os "HPMC 10000 cps" e "HPMC 15000 cps" têm viscosidades aparentes, respectivamente, de 7500-14000 mPa.s (ou 7500 - 14000 cps) e 11250-21000 mPa.s (ou 11250-21000 cps), quando medidas a 20 °C com uma solução aquosa a 2% (p/p), calculadas em relação à substância seca, utilizando um viscosímetro capilar (Ubbelohde ou equivalente). Um tipo de polímero de hidroxietilcelulose, por exemplo, "Natrosol 250 Pharma, tipo HH", de Hercules Incorporated (Aqualon), mostra tipicamente uma viscosidade Brookfield de cerca de 20000 mPa.s utilizando um instrumento Brookfield Synchro-Lectric Modelo LVF, nas condições de concentração em solução de 1%, fuso n° 4, velocidade de fuso 30 rpm, factor 200, 25 °C (Ver Natrosol Physical and Chemical Properties booklet, 33.007-E6 (1993), p. 21). 46
Formulações particulares que podem ser mencionadas incluem aquelas nas quais o composto da invenção é formulado em conjunto com iota-carragenina e HPMC (10000 cps) numa proporção 50:50 (% em peso) ou em conjunto com iota-carragenina e PEO 4 M numa proporção de 50:50 (% em peso).
Os excipientes adicionais preferidos nessas formulações incluem lubrificantes, tal como estearilfumarato de sódio.
Dependendo do distúrbio e doente a ser tratado e da via de administração, as composições podem ser administradas em doses variadas.
Os compostos da invenção também podem ser associados e/ou co-administrados com quaisquer agente(s) antitrombótico(s) com um mecanismo de acção diferente, tais como um ou mais dos seguintes: os agentes antiplaquetas ácido acetilsalicilico, ticlopidina e clopidogrel; inibidores do receptor de tromboxano e/ou da sintetase; antagonistas do receptor de fibrinogénio; miméticos de prostaciclina; inibidores de fosfodiesterase; antagonistas do receptor de ADP (P2T) ; e inibidores de carboxipeptidase U (CPU).
Os compostos da invenção podem ser ainda associados e/ou co-administrados com tromboliticos tais como um ou mais de activador de plasminogénio de tipo tecidular (natural, recombinante ou modificado), estreptocinase, urocinase, prourocinase, complexo activador de plasminogénio-estreptocinase anisoilado (APSAC), activadores de plasminogénio da glândula salivar animal e semelhantes, no tratamento de doenças trombóticas, em particular enfarte do miocárdio. 47
De acordo com um outro aspecto da invenção é assim proporcionada uma formulação farmacêutica incluindo um composto da invenção, misturado com um adjuvante, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
As doses diárias adequadas dos compostos da invenção no tratamento terapêutico de humanos são de cerca de 0,001-100 mg/kg de peso corporal na administração perorai e 0,001-50 mg/kg de peso corporal na administração parentérica.
Para evitar dúvidas, como aqui utilizado, o termo "tratamento" inclui tratamento terapêutico e/ou profiláctico.
Os compostos da invenção têm a vantagem de poderem ser mais eficazes, ser menos tóxicos, ser de acção mais prolongada, ter uma gama de actividade mais alargada, ser mais potente, produzir menos efeitos secundários, ser mais facilmente absorvidos e/ou ter um melhor perfil farmacocinético (e. g., maior biodisponibilidade oral e/ou eliminação mais lenta), e/ou ter outras propriedades farmacológicas, físicas ou químicas úteis em comparação com compostos conhecidos na técnica anterior. Os compostos da invenção podem ter ainda a vantagem de poderem ser administrados menos frequentemente que os compostos conhecidos na técnica antecedente.
Ensaios Biológicos
Podem ser utilizados os seguintes processos de ensaio. 48
Ensaio A
Determinação do Tempo de Coagulaçao pela Trombina (TT) A solução de inibidor (25 pL) é incubada com plasma (25 pL) durante três minutos. É então adicionada trombina humana (T 6769; Sigma Chem. Co ou Hematologic Technologies) em solução tampão, pH 7,4 (25 pL, 4,0 unidades de NIH/mL) e o tempo de coagulação medido num dispositivo automático (KC 10; Amelung). O tempo de coagulação pela trombina (TT) é expresso em valores absolutos (segundos) e como a proporção de TT sem inibidor (TTo) relativamente ao TT com inibidor (TTi). As últimas proporções (gama 1-0) são representadas graficamente contra a concentração de inibidor (transformação log) e ajustadas a curvas dose-resposta sigmóides de acordo com a equação y = a/[l+(x/IC5o)s]
Em que: a = gama máxima, i. e., 1; s = declive da curva
dose-resposta; e IC50 = a concentração de inibidor que duplica o tempo de coagulação. Os cálculos são processados num PC utilizando 0 programa de software GraFit Versão 3, fixando a equação igual a: Começar a 0, definir final = 1 (Software Erithacus, Robin Leatherbarrow, Imperial College of Science,
London, UK). 49
Ensaio B
Determinação da Inibição de Trombina com um Ensaio Cromogénico, Robotizado A potência do inibidor de trombina é medida com um método de substrato cromogénico, num processador de microplacas robotizado Plato 3300 (Rosys AG, CH-8634 Hombrechtikon, Suíça), utilizando placas microtítulo de meio volume de 96 poços (Costar, Cambridge, MA, EUA; Cat No 3690) . Soluções-mãe de substância de ensaio em DMSO (72 pL) , 0,1 - 1 mmol/L, são diluídas em série a 1:3 (24 + 48 pL) com DMSO para se obter dez concentrações diferentes, as quais são analisadas como amostras no ensaio. 2 pL da amostra de ensaio são diluídos com 124 pL de tampão de ensaio, são adicionados 12 pL de solução de substrato cromogénico (S-2366, Chromogenix, Mõlndal, Suécia) em tampão de ensaio e finalmente 12 pL de solução de α-trombina (a-Trombina humana, Sigma Chemical Co. ou Hematologic Technologies) em tampão de ensaio e as amostras misturadas. As concentrações finais de ensaio são: substância de ensaio 0,00068 - 13,3 pmol/L, S-2366 0,30 mmol/L, a-trombina 0,020 UNIH/mL. O incremento linear na absorvância durante 40 minutos de incubação a 37 °C é utilizado para o cálculo da percentagem de inibição para as amostras de ensaio, em comparação com brancos sem inibidor. É calculado o valor robotizado de IC50, correspondente à concentração de inibidor que provoca 50% de inibição da actividade da trombina, a partir de uma curva de log da concentração vs. % de inibição. 50
Ensaio C
Determinação da Constante de Inibição Kj para a Trombina Humana
As determinações de Ki são feitas utilizando um método de substrato cromogénico, realizado a 37 °C num analisador centrífugo Cobas Bio (Roche, Basel, Suíça). A actividade residual de enzima após incubação de α-trombina humana com várias concentrações de composto de ensaio é determinada a três concentrações de substrato diferentes e é medida como a alteração na absorvância óptica a 405 nm.
As soluções de composto (100 pL; normalmente em tampão ou soro fisiológico contendo BSA 10 g/L) são misturadas com 200 pL de oí-trombina humana (Sigma Chemical Co) em tampão de ensaio (0,05 mol/L Tris-HCl pH 7,4, força iónica de 0,15 ajustada com NaCl) contendo BSA (10 g/L) e analisadas como amostras no Cobas Bio. Uma amostra de 60 pL, em conjunto com 20 pL de água, é adicionada a 320 pL do substrato S-2238 (Chromogenix AB, Mõlndal, Suécia) em tampão de ensaio e a alteração na absorvância (ΔΑ/min) é seguida. As concentrações finais de S-2238 são 16, 24 e 50 pmol/L e de trombina 0,125 U NIH/mL. A velocidade da reacção no estado estacionário é utilizada para construir gráficos de Dixon, i. e., diagramas da concentração de inibidor vs. 1/(ΔΑ/min). Para os inibidores competitivos, reversíveis, os pontos de dados para as várias concentrações de substrato formam tipicamente linhas rectas que interceptam a x = -Ki. 51
Ensaio D
Determinação do Tempo da Tromboplastina Parcial Activada (APTT) 0 APTT é determinado em plasma humano normal combinado citrado com o reagente PTT Automated 5 fabricado por Stago. Os inibidores são adicionados ao plasma (10 pL de solução de inibidor para 90 pL de plasma) e incubados com o reagente de APTT durante 3 minutos seguida da adição de 100 pL de solução de cloreto de cálcio (0,025 M) e o APTT é determinado pela utilização do analisador de coagulação KC10 (Amelung) de acordo com as instruções do produtor do reagente. O tempo de coagulação é expresso como valores absolutos (segundos) e como a proporção de APTT sem inibidor (APTT0) relativamente ao APTT com inibidor (APTTi) . As últimas proporções (gama 1-0) são representadas graficamente contra a concentração de inibidor (transformação log) e ajustadas a curvas dose-resposta sigmóides de acordo com a equação y = a/[l+(x/IC5o)s] em que: a = gama máxima, i. e., 1; s = declive da curva dose-resposta; e IC50 = a concentração de inibidor que duplica o tempo de coagulação. Os cálculos são processados num PC utilizando o programa de software GraFit Versão 3, fixando a equação igual a: Começar a 0, definir final = 1 (Software Erithacus, Robin
Leatherbarrow, Imperial College of Science, London, UK) . IC50APTT é definida como a concentração de inibidor no plasma humano que duplica o Tempo de Tromboplastina Parcial Activada. 52
Ensaio E
Determinação do Tempo de Trombina ex vivo A inibição de trombina após administração oral ou parentérica dos compostos da invenção, dissolvidos em etanol:Solutol K:água (5:5:90) é examinada em ratos conscientes os quais, um ou dois dias antes da experiência, são munidos com um cateter para recolha de sangue da artéria carótida. No dia da experiência são recolhidas amostras de sangue em alturas fixas após a administração do composto para tubos plásticos contendo 1 parte de solução de citrato de sódio (0,13 mol por L) e 9 partes de sangue. Os tubos são centrifugados para se obter plasma pobre em plaquetas. São precipitados 50 pL de amostras de plasma com 100 pL de acetonitrilo frio. As amostras são centrifugadas durante 10 minutos a 4000 rpm. 75 pL do sobrenadante são diluídos com 75 pL de ácido fórmico a 0,2%. Volumes de 10 pL das soluções resultantes são analisadas por LC-MS/MS e as concentrações de inibidor de trombina são determinadas utilizando curvas padrão.
Ensaio F
Determinação da Eliminação no Plasma em Ratos A eliminação no plasma é estimada em ratos Sprague Dawley machos. 0 composto é dissolvido em água e administrado como uma injecção bolus subcutânea a uma dose de 4 pmol/kg. Amostras de sangue são recolhidas em intervalos frequentes até 5 horas após a administração de fármaco. As amostras de sangue são 53 centrifugadas e o plasma é separado das células sanguíneas e transferido para frascos contendo citrato (concentração final de 10%). 50 pL de amostras de plasma são precipitados com 100 pL de acetonitrilo frio. As amostras são centrifugadas durante 10 minutos a 4000 rpm. 75 pL do sobrenadante são diluídos com 75 pL de ácido fórmico a 0,2%. Volumes de 10 pL das soluções resultantes são analisados por LC-MS/MS e as concentrações de inibidor de trombina são determinadas utilizando curvas padrão. A área sob o perfil concentração no plasma-tempo é estimada utilizando a regra trapezoidal log/linear e extrapolada até ao tempo infinito. A eliminação (CL) do composto no plasma é depois determinada como
CL=Dose/AUC
Os valores são dados em mL/min/kg.
Ensaio G
Determinação da Estabilidade in vitro
Os microssomas de fígado são preparados de amostras de fígado de ratos Sprague-Dawley e de fígado humano segundo SOPs internos. Os compostos são incubados a 37 °C a uma concentração total de proteína de microssomas de 3 mg/mL num tampão TRIS 0,05 mol/L a pH 7,4, na presença dos cofactores NADH (2,5 mmol/L) e NADPH (0,8 mmol/L). A concentração inicial de composto é 5 ou 10 pmol/L. São recolhidas amostras para análise até 60 minutos após o início da incubação. A actividade enzimática na amostra recolhida é imediatamente parada 54 adicionando ácido miristico a 20% num volume correspondente a 3,3% do volume de amostra total. A concentração de composto remanescente (CONC FINAL) na amostra de 60 min. é determinada por meio de LCMS utilizando uma amostra recolhida ao tempo zero como referência (CONC INICIAL). A % de inibidor de trombina degradado é calculada como: [C0NC inicial] - [conc final] 100% X -f-ή- |conc inicial]
Ensaio H
Modelo de Trombose Arterial A lesão de vasos é induzida aplicando cloreto de ferro (FeCls) por via tópica à artéria carótida. Os ratos são anestesiados com uma injecção intraperitoneal de pentobarbital de sódio (80 mg/kg; Apoteksbolaget; Umeâ, Suécia), seguida de infusão continua (12 mg/kg/h) ao longo da experiência. A temperatura do corpo do rato é mantida a 38 °C ao longo da experiência por aquecimento externo. A experiência começa com um período de controlo de 5 minutos. Cinco minutos depois é administrado 125I-fibrinogénio humano (80 kBq; IM53; Amersham International, Buckinghamshire, UK) por via intravenosa e é utilizado como marcador para a incorporação subsequente de fibrina(ogénio) no trombo. A extremidade proximal do segmento da artéria carótida é colocada num tubo plástico (6 PM; Silastic®; Dow Corning, MI, EUA) aberto longitudinalmente, contendo papel de filtro (diâmetro 3 PM; 1F; Munktell, Grycksbo, Suécia) embebido em FeCl3 (2 pL; 55% p/p; Merck, Darmstadt, Alemanha) . A artéria carótida esquerda é exposta a FeCl3 durante 10 minutos e é então 55 retirada do tubo plástico e embebida em soro fisiológico. Cinquenta minutos depois, a artéria carótida é retirada e lavada em soro fisiológico. Também são recolhidas amostras de sangue de referência para determinação da actividade de 125I no sangue, 10 minutos após a injecção de 125I-fibrinogénio e no final da experiência. A actividade de 125I nas amostras de sangue de referência e o segmento de vaso são medidos num contador gama (1282 Compugamma; LKB Wallac Oy, Turku, Finlândia) no mesmo dia à medida que a experiência é realizada. O tamanho do trombo é determinado como a quantidade de actividade de 125I incorporada no segmento de vaso em relação à actividade de 125I no sangue (cpp/pg).
Detalhes Experimentais Gerais A TLC foi realizada sobre sílica gel. A análise por HPLC quiral foi realizada utilizando uma coluna Chiralcel OD de 46 PM x 250 PM com uma pré-coluna de 5 cm. A temperatura da coluna foi mantida a 35 °C. Foi utilizado um caudal de 1,0 mL/min. Foi utilizado um detector de UV Gilson 115 a 228 nm. A fase móvel consistiu de hexanos, etanol e ácido trifluroacético e as proporções adequadas são listadas para cada composto. Tipicamente, o produto foi dissolvido numa quantidade mínima de etanol e este foi dissolvido com a fase móvel. A LC-MS/MS foi realizada utilizando um instrumento HP-1100 munido com um injector CTC-PAL e uma coluna Hypersil BDS-C18 5 pm 4 x 100 PM da ThermoQuest. Foi utilizado um detector de MS API-3000 (Sciex). O caudal foi de 1,2 mL/min e a fase móvel (gradiente) consistiu de 10-90% de acetonitrilo com 90-10% de acetato de amónio aq. 4 PM, contendo ambos ácido fórmico a 0,2%. 56
Os espectros de RMN de 1 2 3Η foram registados utilizando tetrametilsilano como o padrão interno. Os espectros de RMN de 13C foram registados utilizando os solventes deuterados listados como o padrão interno. <Exemplos que nao os Exemplos 2, 3 e 12 são proporcionados como Exemplos de Referência>
Exemplo 1
Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu) 57 1 3-Cloro-5-metoxibenzaldeído 2
3,5-Dicloroanisole (74,0 g, 419 mmol) em THF (200 mL) foi adicionado, gota a gota, a magnésio metálico (14,2 g, 585 mmol, pré-lavado com HC1 0,5 N) em THF (100 mL) a 25 °C. Depois da adição, foi adicionado 1,2-dibromoetano (3,9 g, 20,8 mmol) gota a gota. A mistura castanha escura resultante foi aquecida a refluxo durante 3 h. A mistura foi arrefecida até 0 °C e foi adicionada N, iV-dimetilf ormamida (60 mL) numa única porção. A mistura foi partilhada com éter dietílico (3 x 400 mL) e HC1 6 N 3 (500 mL) . Os extractos orgânicos reunidos foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (300 mL), secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para dar um óleo. A cromatografia flash (2x) sobre sílica gel eluindo com Hex:AcOEt (4:1) proporcionou o composto em sub-título (38,9 g, 54%) como um óleo amarelo. RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 9,90 (s, 1H) , 7,53 (s, 1H) , 7,38 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 3,87 (s, 3H). (ii) 3-Cloro-5-hidroxibenzaldeído
Uma solução de 3-cloro-5-metoxibenzaldeído (22,8 g, 134 mmol; ver passo (i) acima) em CH2CI2 (250 mL) foi arrefecida até 0 °C. Foi adicionado tribrometo de boro (15,8 mL, 167 mmol), gota a gota, ao longo de 15 min. Após agitação da mistura reaccional durante 2 h, foi adicionada lentamente H2O (50 mL) . A solução foi então extraída com Et20 (2 x 100 mL) . As camadas orgânicas foram combinadas, secas (Na2SC>4) , filtradas e concentradas in vacuo. A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com Hex:AcOEt (4:1) proporcionou o composto em subtítulo (5,2 g, 25%). RMN de (300 MHz, CDCI3) δ 9,85 (s, 1H) , 7,35 (s,lH), 7,20 (s,1H), 7,10 (s,1H), 3,68 (s,lH) (iii) 3-Cloro-5-difluorometoxibenzaldeído
Uma solução de 3-cloro-5-hidroxibenzaldeído (7,5 g, 48 mmol; ver passo (ii) acima) em 2-propanol (250 mL) e KOH a 30% (100 mL) foi aquecida até refluxo. Enquanto se agitava, foi borbulhado CHC1F2 na mistura reaccional durante 2 h. A mistura reaccional foi arrefecida, acidificada com HC1 1 N e extraída com AcOEt (2 x 100 mL) . Os orgânicos foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), secos (Na2S04), filtrados e concentrados in vacuo. A cromatografia flash sobre 58 sílica gel eluindo com Hex:AcOEt (4:1) proporcionou o composto em sub-título (4,6 g, 46%). RMN de XH (300 MHz, CDC13) δ 9,95 (s, 1H) , 7,72 (s, 1H) , 7,52 (s, 1H), 7,40 (s, 1H) , 6,60 (t, JH_ F = 71,1 Hz, 1H)
(iv) Ph(3-C1) (5-QCHF2) ~ (R, S)CH(OTMS)CN
Uma solução de 3-cloro-5-difluorometoxibenzaldeido (4,6 g, 22,3 mmol; ver passo (iii) acima) em CH2CI2 (200 mL) foi arrefecida até 0 °C. Foram adicionados Znl2 (1,8 g, 5,6 mmol) e cianeto de trimetilsililo (2,8 g, 27,9 mmol) e a mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 15 h. A mistura foi parcialmente concentrada in vacuo produzindo o composto em sub-titulo como um líquido, o qual foi utilizado directamente no passo (v) abaixo sem mais purificação ou caracterização. (v) Ph(3-C1)(5-OCHF2)~(R,S)CH(OH)C(NH)OEt
Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(R, S)CH(OTMS)CN (6,82 g, supostamente 22,3 mmol; ver passo (iv) acima) foi adicionado, gota a gota, a HCl/EtOH (500 mL) . A mistura reaccional foi agitada 15 h, em seguida, parcialmente concentrada in vacuo produzindo o composto em sub-título como um líquido, o qual foi utilizado no passo (vi) sem mais purificação ou caracterização. 59 (vi) Ph(3-C1) (5-QCHF2) -(R, S)CH(OH)C(O)OEt
Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (-R, S) CH (OH) C (NH) OEt (6,24 g, supostamente 22,3 mmol; ver passo (v) acima) foi dissolvido em THF (250 mL) , foi adicionado H2SO4 0,5 M (400 mL) e a reacção foi agitada, a 40 °C, durante 65 h, arrefecida e, em seguida, parcialmente concentrada in vacuo para remover a maior parte do THF. A mistura reaccional foi então extraída com Et20 (3 χ 100 mL) , seca (Na2SC>4) , filtrada e concentrada in vacuo para proporcionar o composto em sub-título como um sólido, o qual foi utilizado no passo (vii) sem mais purificação ou caracterização.
(vii) Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Uma solução de Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(R, S)CH(OH)C(O)OEt (6,25 g, supostamente 22,3 mmol; ver passo (vi) acima) em 2-propanol (175 mL) e KOH a 20% (350 mL) foi agitada à temperatura ambiente 15 h. A reacção foi então parcialmente concentrada in vacuo para remover a maior parte do 2-propanol. A mistura remanescente foi acidificada com H2SO4 1 M, extraída com Et20 (3 χ 100 mL) , seca (Na2S04) e concentrada in vacuo para dar um sólido. A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com CHCI3 :MeOH:NH4OH concentrado (6:3:1) proporcionou o sal de amónio do composto em sub-título. O sal de amónio foi então dissolvido numa mistura de AcOEt (75 mL) e H20 (75 mL) e acidificado com HC1 2 N. A camada orgânica foi separada e lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , seca (Na2S04) e concentrada in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (3,2 g, 57% dos passos (iv) até (vii)). 60 RMN de XH (300 MHz, CD3OD) δ 7,38 (s, 1H) , 7,22 (s, 1H) , 7.15 (s, 1H), 6,89 (t, JH-f = 71,1 Hz, 1H) , 5,16 (s, 1H) (viii) Ph(3-C1)(5-OCHF2)- (R) CH (OH) C (O) OH (a) e Ph(3-Cl)(5-QCHF2)-(S)CH(0Ac)C(0)0H (b)
Uma mistura de Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(R, S)CH(OH)C(O)OH (3,2 g, 12,7 mmol; ver passo (vii) acima) e Lipase PS "Amano" (~2,0 g) em acetato de vinilo (125 mL) e MTBE (125 mL) foi aquecida a refluxo durante 48 h. A mistura reaccional foi arrefecida, filtrada através de Celite® e o bolo de filtração lavado com AcOEt. O filtrado foi concentrado in vacuo e submetido a cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com CHC13 :MeOH:NH4OH concentrado (6:3:1) produzindo os sais de amónio dos compostos nos sub-títulos (a) e (b). Composto (a) como um sal foi dissolvido em H20, acidificado com HC1 2 N e extraído com AcOEt. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (Na2S04), filtrada e concentrada in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (a) (1,2 g, 37%).
Para o composto em sub-título (a) RMN de ΧΗ (300 MHz, CD3OD) δ 7,38 (s, 1H) , 7,22 (s, 1H) , 7.15 (s, 1H), 6,89 (t, Jh-f = 71,1 Hz, 1H) , 5,17 (s, 1H) (ix) Ph(3-C1) (5-OCHF2) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
A uma solução de Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (1,1 g, 4,4 mmol; ver passo (viii) acima) e Η-Aze-Pab(Teoc) (ver Pedido de Patente Internacional WO 00/42059, 2,6 g, 5,7 mmol) em DMF 61 (50 mL) a 0 °C foi adicionado PyBOP (2,8 g, 5,3 mmol) e colidina (1,3 g, 10,6 inmol) . A reacção foi agitada, a 0 °C, durante 2 h e, em seguida, à temperatura ambiente durante mais 15 h. A mistura reaccional foi concentrada in vacuo e submetida a cromatografia flash sobre silica gel (3 x), eluindo primeiro com CHCl3:EtOH (9:1), depois com AcOEt:EtOH (20:1) e finalmente eluindo com CH2CI2: CH3OH (95:5) para proporcionar o composto em sub-titulo (1,0 g, 37%) como um sólido branco. RMN de 1 H (30 0 MHz, CD3OD, mistura de rotâmeros) δ 7, 79- -7, 85 (d, J = 8, 7 Hz, 2H) , 7,15-7, . 48 (m, 5H) , 6, 89 e 6,91 (t, Jh-F = 71 , 1 Hz , 1H ), 5,12 e 5 , 20 (s, 1H) , 4,75-4,85 (m, 1H) , 3,97 -4,55 (m, 6 H) , 2, 10 -2, 75 (m, 2H) , 1, 05- -1,15 (m, 2H) , 0, 09 (s, 9 H) MS (m/z) 611 (M + i: ) + (x) Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH) C(0)-Aze-Pab(OcBu, Teoc) Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0) -Aze-Pab(Teoc) (0,051 g, 0,08 mmol; ver passo (ix) acima), foi dissolvido em 3 mL de acetonitrilo e foi adicionado 0,062 g (0,5 mmol) de cloridrato de O-ciclobutil- hidroxilamina. A mistura foi aquecida a 70 °c, durante 4,5 h. 0 solvente foi evaporado e 0 resíduo foi partilhado entre água e acetato de etilo. A fase aquosa foi extraída mais duas vezes com acetato de etilo e a fase orgânica reunida foi lavada com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (Na2S04), filtrada e evaporada. Rendimento: 0, 054 g (95%) . 62 RMN de TH (400 MHz; CD3OD) : δ 8,66-8,50 (m, 1H) , 7,45 (d, 2H) , 7,29 (m, 3H) , 7,15 (m, 2H), 6,88 (t, 1H rotâmero
principal), 6,85 (t, 1H rotâmero secundário), 5,18 (s, 1H rotâmero principal), 5,12 (s, 1H rotâmero secundário), 5,16 (m, 1H rotâmero secundário), 4,78 (m, 1H rotâmero principal), 4,70 (m, 1H), 4,50-4,30 (m, 3H) , 4,19-3,93 (m, 3H) , 2, 71- -2,44 1H) , 2,34-2,11 (m, 5H) , 1, 78 (m, 1H), 1,62 (m, 1H) , 0, 96 2H), 0,01 (s, 9H) (xi) Ph (3-C1) (5-QCHF2) - (R) CH (OH) C (O)-Aze-Pab(OcBu)
Ph(3-C1)(5-OCHF2) - (R) CH (OH) C (O)-Aze-Pab(OcBu, Teoc) (0,054 g, 0,08 mmol; ver passo (x) acima), foi dissolvido em 0,5 mL de CH2CI2 e 3 mL de TFA. A reacção foi deixada prosseguir durante 60 minutos. O TFA foi evaporado e o resíduo foi purificado utilizando HPLC preparativa. As fracções de interesse foram combinadas e liofilizadas (2x), produzindo 23 mg (54%) do composto em título. MS (m/z) 536 (M - 1)“; 538 (M + 1)+ RMN de ΧΗ (400 MHz; CD3OD) : δ 7,56 (d, 2H) , 7,33 (m, 3H) ,
7,15 (m, 2H) , 6,89 (t, 1H rotâmero principal), 6,86 (t, 1H
rotâmero secundário), 5,18 (s, 1H rotâmero principal; e m, 1H rotâmero secundário), 5,11 (s, 1H rotâmero secundário), 4,77 (m,
1H rotâmero principal), 4,58 (m, 1H) , 4,42 (m, 2H) , 4,34 (m, 1H rotâmero principal), 4,15 (m, 1H rotâmero principal), 4,06 (m, 1H rotâmero secundário), 3,97 (m, 1H rotâmero secundário), 2,66 (m, 1H rotâmero secundário), 2,52 (m, 1H rotâmero principal), 2,33-2,25 (m, 3H), 2,01-2,20 (m, 2H), 1,75 (m, 1H), 1,59 (m, 1H) 63 RMN de 13C (100 MHz; CD3OD) (carbonos de carbonilo amidina, rotâmeros) δ 172,4, 172,3, 171,9, 171,4, 152,3
Exemplo 2
Ph (3-C1) ( 5-OCHF2) - (-R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OH) (i) Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (-R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OH, Teoc)
Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(P)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,148 g, 0,24 mmol; ver Exemplo l(ix) acima) foi dissolvido em 9 mL de acetonitrilo e foi adicionado 0,101 g (1,45 mmol) de cloridrato de hidroxilamina. A mistura foi aquecida a 70 °C, durante 2,5 h, filtrada através de Celite® e evaporada. O produto em bruto (0,145 g; 75% puro) foi utilizado directamente no passo seguinte sem mais purificação. (ii) Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (-R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OH)
Ph(3-C1) (5-OCHF2) -(P)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH, Teoc) (0,145 g, 0,23 mmol; ver passo (i) acima) foi dissolvido em 0,5 mL de CH2C12 e 9 mL de TFA. A reacção foi deixada prosseguir durante 60 minutos. O TFA foi evaporado e o resíduo foi purificado utilizando HPLC preparativa. As fracções de interesse foram combinadas e liofilizadas (2x), produzindo 72 mg (rendimento nos dois passos 62%) do composto em título. MS (m/z) 482 (M - 1)“; 484 (M + 1)+ 64
RMN de 3H (400 MHz; CD3OD) : δ 7,58 (d, 2H) , 7,33 (m, 3H) , 7,15 (m, 2H) , 6,89 (t, 1H rotâmero principal), 6,86 (t, 1H rotâmero secundário), 5,18 (s, 1H rotâmero principal; e m, 1H rotâmero secundário), 5,12 (s, 1H rotâmero secundário), 4,77 (m, 1H rotâmero principal),4,42 (m, 2H), 4,34 (m, 1H rotâmero
principal), 4,14 (m, 1H rotâmero principal), 4,06 (m, 1H rotâmero secundário), 3,95 (m, 1H rotâmero secundário), 2,66 (m, 1H rotâmero secundário), 2,50 (m, 1H rotâmero principal), 2,27 (m, 1H rotâmero principal), 2,14 (m, 1H rotâmero secundário) RMN de 13C (100 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, rotâmeros) δ 172,4, 172,3, 172,0, 171,4 152,3, 152,1
Exemplo 3
Ph(3-C1)(5-OCHF2)- (R) CH (OH) C (O)-Aze-Pab
Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,045 g, 0,074 mmol; ver Exemplo l(ix) acima) foi dissolvido em 3 mL de TFA e deixado a reagir durante 1 h. O TFA foi evaporado e o resíduo foi liofilizado de água/acetonitrilo para produzir 0,043 g (100%) do composto em sub-título como o seu sal de TFA. RMN de 3Η (400 MHz; CD3OD) rotâmeros: δ 7,8-7,75 (m, 2H) , 7,55-7,5 (m, 2H), 7,35 (m, 1H, rotâmero principal), 7,31 (m, 1H, rotâmero secundário), 7,19 (m, 1H, rotâmero principal), 7,15 (m, 1H) , 7,12 (m, 1H, rotâmero secundário), 6,89 (t, 1H, rotâmero principal), 6,87 (t, 1H, rotâmero secundário), 5,22 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,20 (s, 1H, rotâmero principal), 5,13 (s, 1H, rotâmero secundário), 4,80 (m, 1H, rotâmero principal), 4,6-4,4 (m, 2H) , 4,37 (m, 1H, rotâmero principal), 4,19 (m, 1H, 65 rotâmero principal), 4,07 (m, 1H, rotâmero secundário), 3,98 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,70 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,55 (m, 1H, rotâmero principal), 2,29 (m, 1H, rotâmero principal), 2,15 (m, 1H, rotâmero secundário) RMN de 13C (100 MHz ; CD3OD) : (carbonos de carbonilo amidina, rotâmeros) δ 172,6, 172,5, 172,0, 171,7, 167, 0 MS (m/z) 465 (M - 1) , 467 (M + 1)+
Exemplo 4
Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (-R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (COOcPentilo) A uma solução de Ph(3—Cl) (5-OCHF2) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-
Pab x TFA (74 mg, 0,13 mmol; ver Exemplo 3 acima) e cloroformato de ciclopentilo (44 mg, 0,30 mmol) em cloreto de metileno (5 mL) foi adicionado NaOH aq. (0,5 mL, 2 Μ, 1 mmol) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente e a reacção foi seguida por HPLC. Após 2,5 horas, foi adicionada água e as fases líquidas foram separadas. A fase aquosa foi extraída duas vezes com cloreto de metileno. As fases orgânicas reunidas foram secas (MgS04) e purificadas sobre sílica gel (primeiro cloreto de metileno, depois AcOEt). Após remoção dos solventes in vacuo, o resíduo sólido foi dissolvido em água/acetonitrilo e liofilizado para proporcionar o composto em título como um sólido branco. Rendimento: 33 mg (44%) MS (m/z) 579 (M + 1)+ 6 6 RMN de ΤΗ (4 0 0MHz; CD3OD) : δ 7, 79 (d, 2H) , 7, 43-7,30 (m, 5H) , 7,20-7, 11(m, 2H) , 6,90(t, 1H, rotâmero principal), 6,87(t, 1H, rotâmero secundário), 5,19(dd, 1H, rotâmero secundário), 5,18(s, 1H, rotâmero principal), 5,13(m, 1H), 5,ll(s, 1H, rotâmero secundário), 4,78(dd, 1H, rotâmero principal), 4,45(m, 2H), 4,35(m, 1H, rotâmero principal), 4,16(s, 1H, rotâmero principal), 4,06(s, 1H, rotâmero secundário), 3,97(s, 1H, rotâmero secundário), 2,68(m, 1H, rotâmero secundário), 2,52(s, 1H, rotâmero principal), 2,28(s, 1H, rotâmero principal), 2,16(s, 1H, rotâmero secundário), l,90(m, 2H) , l,77(m, 4H), 1,61(m, 2H) RMN de 13C (protões de carbonilo e/ou amidina; 100 MHz) : δ 173,6, 173,1, 172,6, 170,3, 165,6
Exemplo 5
Ph(3-C1) (5-OCHF2) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z) O composto em titulo foi preparado de acordo com o processo descrito no Exemplo 4 acima partindo de Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab χ TFA (73 mg, 0,13 mmol; ver Exemplo 3 acima) e cloroformato de benzilo (35 mg, 0,21 mmol) . Foi necessária purificação adicional por HPLC de fase inversa (acetato de amónio 0,1 M/MeCN 40/60). As fracções apropriadas foram concentradas in vacuo e extraidas com AcOEt. Rendimento: 24 mg (32%). MS (m/z) 602 (M + 1)+ 67 RMN de ΤΗ (400MHz; CD3OD) : δ 7, 80 (d, 2H) , 7, 43-7, 25 (m, 8H) , 7,20-7,10(m, 2H) , 6,90(t, 1H, rotâmero principal), 6,88(t, 1H, rotâmero secundário), 5,18(dd, 1H, rotâmero secundário), 5,18(s, 2H), 5,17(s, 1H, rotâmero), 5,ll(s, 1H, rotâmero), 4,78(dd, 1H, rotâmero principal), 4,45(m, 2H) , 4,34(m, 1H, rotâmero principal), 4,15(s, 1H, rotâmero principal), 4,06(s, 1H, rotâmero secundário), 3,97(s, 1H, rotâmero secundário), 2,66(m, 1H, rotâmero secundário), 2,51(s, 1H, rotâmero principal), 2,27(s, 1H, rotâmero principal), 2,15(s, 1H, rotâmero secundário) RMN de 13C (protões de carbonilo e/ou amidina; 100MHz) : δ 173,6, 173,1, 172,6, 170,5, 164,9
Exemplo 6
Ph(3-C1) (5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) Ácido 2-Nitro-5-trifluorometoxibenzóico A uma solução de ácido 3-trifluorometoxibenzóico (49,0 g, 0,24 mol) em ácido sulfúrico (500 mL) a menos do que 0 °C (banho de gelo-MeOH) foi adicionada uma solução de nitrato de potássio (31,3 g, 0,31 mol) em ácido sulfúrico (200 mL) ao longo de 20 minutos. A solução resultante foi agitada, a 0 °C, durante 2 horas, em seguida, aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 18 horas. A reacção foi vertida para gelo e a solução ácida resultante foi extraída com AcOEt (5x). Os orgânicos reunidos foram lavados com H20 (lx), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2x), H20 (lx) e solução aquosa 68 saturada de cloreto de sódio (lx), secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para dar o composto em sub-título em bruto (65,7 g) como um sólido contaminado com AcOH. 0 composto em subtítulo em bruto foi dissolvido em AcOEt e tolueno e concentrado in vacuo para dar um sólido isento de AcOH (58,4 g, 97%) que foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. RMN de 2H (300 MHz, CDC13) : δ 10,10 (s 1, 1H) , 8,02 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,69 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,54 (dd, 1H, J = 2 Hz, J = 8 Hz) (ii) Ácido 2-amino-5-trifluorometoxibenzóico A uma solução de ácido 2-nitro-5-trifluorometoxibenzóico (56,8 g, 0,23 mol; ver passo (i) acima) em EtOH (1000 mL) foi adicionado Pd a 10%/C (5,7 g) . A solução resultante foi purgada com H2 durante 5 h, filtrada através de Celite® e concentrada in vacuo para dar o composto em sub-título em bruto (49,7 g, 98%) como um sólido que foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. RMN de ΧΗ (300 MHz, CD3OD) : δ 7,66 (m, 1H) , 7,17 (d, 1H, J= 8 Hz), 6,77 (d, 1H, J= 8 Hz) (iii) Ácido 2-amino-3-cloro-5-trifluorometoxibenzóico A uma solução de ácido 2-amino-5-trifluorometoxibenzóico (49,0 g, 0,22 mol; ver passo (ii) acima) em AcOH (1200 mL) foi lentamente adicionado cloreto de sulfurilo (41,8 g, 0,31 mol). Foi observada libertação gasosa. A mistura heterogénea 69 resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Foi adicionado mais AcOH (300 mL) para ajudar a agitação, seguido de cloreto de sulfurilo em porções de 5 mL até o material de partida ter sido consumido com base na análise por TLC. A reacção foi concentrada in vacuo para dar sólidos que foram lavados num evaporador rotativo com AcOEt (2x) seguido de Et20 (lx) para remover o AcOH. Os sólidos resultantes foram ainda secos para dar o sal de HC1 do composto em sub-titulo em bruto (60,5 g, 94%), o qual foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. RMN de ΤΗ (300 MHz, CD3OD) : δ 7,72 (s, 1H) , 7,44 (s, 1H) , 7,22 (s, permutáveis) (iv) Ácido 3-cloro-5-trifluorometoxibenzóico A uma solução de ácido 2-amino-3-cloro-5-trifluorometoxibenzóico (60,5 g, supostamente 0,22 mol; ver passo (iii) acima) em 1,4-dioxano (1000 mL) foi adicionado HC1 6 N (750 mL) . Alguns orgânicos separaram-se da solução como um óleo. A solução de dioxano foi arrefecida até menos do que 0 °C (banho de gelo-MeOH). Foi adicionada uma solução de nitrito de sódio (18,2 g, 0,26 mol) em H20 (250 mL) ao longo de 15 minutos via um funil de carga. A solução resultante foi agitada durante 45 min. Foi adicionado ácido hipofosforoso (221,5 mL a 50% em peso em H20, 291,2 g, 2,20 mol) lentamente via um funil de carga. A solução foi agitada, a 0 °C, durante 1,5 horas, em seguida, aquecida até à temperatura ambiente (observou-se libertação gasosa) e agitada durante 18 horas. A solução em bruto foi transferida para uma ampola de decantação e extraída com Et20 (4χ). Os orgânicos reunidos foram extraídos com NaHC03 aquoso 70 (3χ) . A camada aquosa básica foi cuidadosamente acidificada com HC1 6 N e extraída com CH2C12 (3x) . Os extractos de CH2C12 foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para dar o composto em sub-título em bruto (26,5 g, 46% de ácido 3-trifluorometoxibenzóico) como um sólido que foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. RMN de ΤΗ (300 MHz, CD3OD) : δ 7,98 (s, 1H) , 7,83 (s, 1H) , 7,58 (s, 1H) (v) Álcool 3-cloro-5-trifluorometoxibenzílico A uma solução de ácido 3-cloro-5-trifluorometoxibenzóico (22,5 g, 93,5 mmol; ver passo (iv) acima) em THF anidro (1200 mL) sob uma atmosfera de N2 à temperatura ambiente foi adicionada uma solução de complexo de BH3»THF (140 mL de 1 M em THF; 140,3 mmol). A solução foi aquecida a refluxo durante 2 h, arrefecida até à temperatura ambiente e agitada durante 18 horas, desactivada cuidadosamente com H20 e concentrada in vacuo para remover a maior parte do THF. O resíduo foi diluído com AcOEt e os orgânicos foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (3χ) , secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para dar o composto em sub-título em bruto (21,2 g, 100%) como um óleo que foi utilizado sem mais purificação. RMN de XH (300 MHz, CDC13) : δ 7,33 (s, 1H) , 7,17 (s, 1H) , 7,14 (s, 1H), 4,72 (s, 2H), 2,05 (s 1, 1H) 71 (vi) 3-Cloro-5-trifluorometoxibenzaldeído
Uma solução de DMSO (16,1 g, 205, 9 mmol) em CH2C12 anidro (300 mL) foi arrefecida até -78 °C. Foi adicionado lentamente cloreto de oxalilo (13,1 g, 103,0 mmol) via uma seringa (foi observada libertação gasosa). A solução resultante foi agitada, a -78 °C, durante 15 minutos. Foi adicionada uma solução de álcool 3-cloro-5-trifluorometoxibenzílico (21,2 g, 93,6 mmol; ver passo (v) acima) em CH2C12 (200 mL) via um funil de carga ao longo de um período de 15 minutos. A solução turva foi agitada, a -78 °C, durante 40 minutos e foi adicionada DIPEA (60,5 g, 468, 0 mmol) via um funil de carga ao longo de 10 minutos. A solução homogénea resultante foi agitada, a -78 °C, durante 1,5 horas, em seguida, aquecida até à temperatura ambiente e agitada 18 horas. A solução em bruto foi concentrada in vacuo, o resíduo diluído com AcOEt e lavado com H20 (lx), HC1 2 N (lx), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (lx), NaHCCh aquoso (lx) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (lx) . Os orgânicos foram secos (Na2SC>4) , filtrados e concentrados in vacuo para dar o composto em sub-título em bruto (19,9 g, 95%), o qual foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. RMN de XH (300 MHz, CDC13) : δ 10,00 (s, 1H) , 7,83 (s, 1H) , 7,66 (s, 1H), 7,51 (s, 1H)
(vii) Ph(3-C1) (5-OCF3)-(R, S)CH(OTMS)CN A uma solução de 3-cloro-5-trifluorometoxibenzaldeído (19,9 g, 88,6 mmol; ver passo (vi) acima) em CH2C12 (600 mL) a 0 °C foi adicionado Znl2 (1,4 g, 4,4 mmol) e cianeto de trimetilsililo (9,7 g, 97,5 mmol). Após agitação a 0 °C, durante 72 1,5 horas e à temperatura ambiente durante 2 horas, a análise por TLC mostrou apenas o material de partida. Foi adicionado Znl2 em porções até a reacção ocorrer (foi adicionado um total de mais de 30,0 g de Znl2) . Após agitação à temperatura ambiente durante 18 h, a reacção foi desactivada com água e os orgânicos foram separados. Os orgânicos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para dar o composto em sub-título em bruto (27,7 g, 96%) como um líquido que foi utilizado sem mais purificação. RMN de (300 MHz, CDC13) : δ 7,43 (s, 1H) , 7,28 (s, 1H) , 7,25 (s, 1H), 5,49 (s, 1H), 0,38 (s, 9H)
(viii) Ph(3-C1) (5-OCF3} -(R, S)CH(OH)C(O)OH
Uma suspensão de Ph(3—Cl) (5-OCF3) - (R, S)CH(OTMS)CN (27,7 g, 85,6 mmol; ver passo (vii) acima) em HC1 concentrado (300 mL) foi aquecida a refluxo durante 3 horas. A mistura heterogénea castanha resultante foi arrefecida até à temperatura ambiente e extraída com Et20 (2x). Os orgânicos iniciais foram extraídos com NaOH 2 N (2x), em seguida, a camada básica foi acidificada com HC1 2 N e extraída com Et20. O Et20 foi seco (Na2S04) , filtrado e concentrado in vacuo para dar o composto em sub-título em bruto (4,9 g, 21%) . A análise por TLC dos orgânicos iniciais mostrou que o composto em sub-título continuava presente pelo que foi repetida a extracção básica/acidificação utilizando NaOH 6N para proporcionar mais composto em sub-título em bruto (2,8 g, 12%). A análise por TLC dos orgânicos iniciais mostrou que o composto em sub-título continuava presente pelo que os orgânicos foram secos (Na2S04) e concentrados in vacuo para dar o sal de sódio do composto em sub-título (18,3 g) como um óleo. O sal foi então 73 dissolvido novamente em Et2<0 e os orgânicos acidificados com HC1 2 N e lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Os orgânicos resultantes foram secos (Na2S04) , tratados com carvão activado, filtrados através de Celite® e concentrados in vacuo para dar o composto em sub-titulo em bruto (14,3 g, 62%) como um sólido que foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. RMN de ΤΗ (300 MHz, CD3OD) : δ 7,53 (s, 1H) , 7,38 (s, 1H) , 7,29 (s, 1H), 5,23 (s, 1H) (ix) Ph (3-Cl) (5~OCF3) - (-R) CH (OH) C (O) OH (a) e Ph(3-Cl)(5-QCF3)-(S)CH(0Ac)C(0)0H (b)
Uma mistura de Ph(3-C1) (5-OCF3) -(R, S)CH(OH)C(O)OH (7,7 g, 28,5 mmol; ver passo (viii) acima) e Lipase PS "Amano" (3,8 g) em MTBE (100 mL) e acetato de vinilo (50 mL) foi agitada, a 60 °C, durante 26 horas. A reacção foi arrefecida e filtrada através de Celite® e o bolo de filtração lavado com AcOEt. Os orgânicos reunidos foram concentrados in vacuo. A cromatografia flash sobre silica gel eluindo com CHC13:MeOH:NH40H concentrado (6:3:1) proporcionou uma mistura do sal de amónio do composto em sub-titulo (a) e do composto em sub-titulo (b) (6,7 g) e uma amostra pura do sal de amónio do composto em sub-titulo (a) (1,2 g) com menos do que 95% e.e. As respectivas fracções foram dissolvidas em Et20 e lavadas com HC1 2 N (lx) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (lx), secas (Na3S04) , filtradas e concentradas para dar os ácidos carboxílicos correspondentes (6,7 g e 1,1 g respectivamente) . Estas fracções foram então de novo submetidas separadamente às condições de resolução e novamanete purificadas, conforme necessário via cromatografia 74 sobre sílica gel eluindo com CHC13:MeOH:NH4OH concentrado (6:3:1 ou 75:20:5 ou 145:45:10) conforme necessário. O composto em sub-título (a) purificado foi acidificado com HC1 aquoso ou ácido cítrico aquoso antes da utilização subsequente. O sal de amón io do composto em sub-título (b) foi utilizado sem caracterização. Para 0 composto em sub-título (a) RMN de 3H (300 MHz, CD3OD) : δ 7,53 (s , 1H) , 7,38 (s, 1H), 7,29 (s, 1H) , 5,23 (s 1H) RMN de 13C (75 MHz, CD3OD) : δ 174,9, 150,9, 145,4, 136,3, 126, 8, 122,0 , 120,6, 118, 9 , 72,9 MS (m/z ) 269 (M - 1Γ (x) Ph (3-C1) (5-OCF3) - (R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc)
Uma solução de Ph(3-C1) (5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,73 g, 2,70 mmol; ver passo (ix) acima) em DMF (40 mL) sob uma atmosfera de azoto foi arrefecida até 0 °C. À solução foi adicionado Η-Aze-Pab(Teoc) (1,46 g, 3,24 mmol), colidina (0,82 g, 6,75 mmol) e PyBOP (1,83 g, 3,51 mmol). A solução foi agitada, a 0 °C, durante 2 h, aquecida até à temperatura ambiente e agitada 18 horas, desactivada com água e concentrada in vacuo. O resíduo foi diluído com AcOEt e lavado com H20 (1x) , NaHC03 aquoso (lx), ácido cítrico aquoso (lx) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (lx), seco (Na2S04) , filtrado e concentrado in vacuo para dar o composto em sub-título em bruto. A cromatografia flash sobre sílica gel (2x) eluindo com 75
AcOEt:MeOH (30:1) depois com CH2Cl2:MeOH (93:7) proporcionou o composto em sub-título (0,73 g, 43%) como uma espuma quebradiça. RMN de (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros): δ 7, 78-7, 82 (d, 2H, J = 8 Hz), 7, 25-7, 54 (m, 5H) , 5,25 e 5,16 (s, 1H), 5,22 e 4,79 (m, 1H), 3,92-4,58 (m, 6H), 2,20-2,76 (m, 2H), 1,04-1,13 (m, 2H), 0,08 (s, 9H) MS (m/z) 629 (M + 1)+ (xi) Ph(3-C1)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab
Foi adicionado ácido trifluoroacético (l,0mL) a uma solução arrefecida com gelo/água, mantida sob agitação, de Ph(3-Cl)(5-OCF3) - (R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (101 mg; 160 pmol; ver passo (x) acima) em cloreto de metileno (10 mL) . O banho de arrefecimento foi retirado após 1 hora. Após 1,5 horas à temperatura ambiente, foi adicionado acetonitrilo (30 mL) e os solventes foram cuidadosamente removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em água e liofilizados para proporcionar 90 mg (92%) do composto em título como o seu sal de TFA. MS (m/z) 483 (Μ - 1)“; 485 (M + 1) + RMN de ΤΗ (300 MHz; CD30D) : (complexo devido a diastereómeros/rotâmeros): δ 7,70-7,80 (m, 2H), 7,45-7,58 (m, 3H) , 7,24-7,38 (m, 2H) , 5,26 (s, 1H) , 5,17 (m, 1H, rotâmero secundário), 4,82 (m, 1H, rotâmero principal), 4,35-4,6 (m, 3H), 4,22 (m, 1H, rotâmero principal), 3,92-4,12 (m, 2H, rotâmero secundário), 2,70 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,55 (m, 1H, 76 rotâmero principal), 2,30 (m, 1H, rotâmero principal), 2,16 (m, 1H, rotâmero secundário) RMN de 13C (100 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, rotâmeros): δ 173,7, 173,4, 173,0, 172,8, 168,1
Exemplo 7
Ph(3-C1) (5-OCF3)- (R) CH (OH) C (O)-Aze-Pab(OMe)
Foi adicionado HATU (71 mg; 0,19 mmol) a uma solução arrefecida com gelo/água, mantida sob agitação, de Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)OH (39 mg; 0,14 mmol; ver Exemplo 6(ix) acima) em DMF (3mL) . Após 30 minutos, foi adicionada uma solução de Η-Aze-Pab (OMe) x 2HC1 (69 mg; 0,21 mmol; ver Pedido de Patente Internacional WO 00/42059) e 2,4,6-colidina (0,080 mL; 0,58 mmol) em DMF (1,5 mL). A mistura reaccional foi deixada, de um dia para o outro, e a temperatura foi deixada subir lentamente até à ambiente. Os solventes foram removidos in vacuo e o produto em bruto foi purificado utilizando HPLC de fase inversa (acetonitrilo: acetato de amónio aq. 0,1 M) para proporcionar, após liofilização das fracções apropriadas, o composto em titulo (61 mg, 97%) como um sólido incolor. MS (m/z) 513 (Μ - 1Γ, 515 (M + 1) + RMN de ΤΗ (500 MHz; CD3OD) : δ 7,97 (t 1, 1H), 7,53 (d, 2H) , 7,27 (t, 1H), 7,22 (d, 2H), 7,19 (t, 1H), 7,11 (t, 2H), 6,77 (s, 1H) , 4,92 (s, 1H), 4,9 (s 1, 3H) , 4,81 (m, 2H) , 4,40 (m, 2H) , 4,09 (m, 1H) 3,87 (s, 3H), 2,58 (m, 1H), 2,37 (m, 1H) 77 RMN de 13C (125 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina): δ 171,8, 169,9, 156,8
Exemplo 8 Síntese Paralela de Alcoxiamidinas A síntese foi realizada num bloco Robbins de 96 poços. Aos poços contendo uma quantidade apropriada de hidroxilamina O-substituída (especificada abaixo; as quais são todas comercialmente disponíveis ou foram preparadas, utilizando processos bem conhecidos na literatura) foi adicionada uma solução de Ph(3-C1)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (10 mg; 17 ymol; ver Exemplo 6(x) acima) em acetonitrilo (1,0 mL) . 0 bloco foi selado e a mistura reaccional foi feita rodar, de um dia para o outro, numa estufa a 60 °C. Após arrefecimento e filtração, os sólidos foram lavados com acetonitrilo (3 x 0,3 mL). As fracções líquidas reunidas foram concentradas numa centrífuga de vácuo. 0 resíduo foi partilhado entre água (0,4 mL) e acetato de etilo (0,4 mL). Uma vez concluída a extracção líquido-líquido, foi tudo filtrado através de uma coluna de Hidromatrix™. Depois de lavar três vezes com acetato de etilo, os filtrados reunidos foram concentrados numa centrífuga de vácuo. A desprotecção foi realizada pela adição de cloreto de metileno (0,1 mL) e ácido trifluroacético (0,3 mL) . Após agitação à temperatura ambiente durante 3 horas, os solventes foram removidos in vacuo. 0 resíduo foi partilhado entre hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (0,5 mL) e acetato de etilo (0,5 mL) . Após extracção, filtração através de Hidromatrix™ e concentração (vide infra) o resíduo foi dissolvido em isopropanol/água (7/3) (1 mL). Foi retirado cerca de 2% desta 78 solução e diluída com isopropanol/água (7/3) (1 mL) para análise por LC-MS. Após remoção dos solventes in vacuo o resíduo sólido foi transferido para uma placa de 96 poços utilizando acetonitrilo e acetato de etilo para dissolver o composto. Os solventes foram evaporados numa centrífuga de vácuo para proporcionar os seguintes compostos nos títulos:
Ph(3-C1)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OCH2-3-(5-Me-isoxazole)) (de 3-[(aminooxi)metil]-5-metilisoxazole x HC1 (18 mg; 0,11 mmol) ) . Rendimento: 3,6 4 mg (35%) (MS (m/z) 596 (M + 1) +) ;
Ph(3-C1)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OCH2-3-piridina) (de 3-[(aminooxi) met il ] piridina χ 2 HC1 (19 mg; 96 pmol). Rendimento: 5,14 mg (50%) (MS (m/z) 592 (M + 1)+);
Ph(3-C1)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OiBu) (de O-isobutil-hidroxilamina x HC1 (17 mg; 140 ymol) . Rendimento: 4,4 mg (45%). MS (m/z) 557 (M + 1)+);
Ph(3-C1)(5-OCF3)- (R) CH (OH) C (O)-Aze-Pab(OEt) (de O-etil- hidroxilamina χ HC1 (14 mg; 140 pmol) . Rendimento: 4,04 mg (42%). MS (m/z) 529 (M+l)+);
Ph(3-C1) (5-OCF 3) - (R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn) (de O-benzil- hidroxilamina χ HC1 (17 mg; 110 ymol) . Rendimento: 3,22 mg (29%). MS (m/z) 591 (M + 1)+);
Ph(3-C1) (5-OCF3) - (R) CH (OH) C (O)-Aze-Pab(OcHexilo) (de O-ciclo-hexil-hidroxilamina χ HC1 (15 mg; 99 ymol). Rendimento: 2,9 mg (26%). MS (m/z) 583 (M + 1)+);
Ph(3-C1)(5-OCF3)- (R) CH (OH) C (O)-Aze-Pab(OcBu) (de O-ciclobutil-hidroxilamina χ HC1 (17 mg; 140 pmol). Rendimento: 3,3 mg (30%). MS (m/z) 555 (M + 1)+);
Ph (3-C1) (5-OCF3) - (R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OCH2CH2OPh (3-CF3) ) (de O-[2-[3-(trifluorometil)fenoxi]etil]hidroxilamina χ HC1 79 (24 mg; 93 μπιοί) . Rendimento: 6,52 mg (46%). MS (m/z) 689 (M+1)+);
Ph(3-C1)(5-OCF3)- (R) CH (OH) C (0)-Aze-Pab(OBn(4-C1)) (de 0-(4-clorobenzil)hidroxilamina χ HC1 (16 mg; 82 pmol).
Rendimento: 3,47 mg (29%). MS (m/z) 625 (M + 1)+);
Ph(3-C1)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OBn(3-MeO)) (de 0-(3-metoxibenzil)hidroxilamina χ HC1 (18 mg; 94 pmol). Rendimento: 4,33 mg (36%). MS (m/z) 621 (M+l)+);
Ph(3-C1)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OBn(2-Br)) (de 0-(2-bromobenzil)hidroxilamina χ HC1 (23 mg; 96 pmol).
Rendimento: 3,87 mg (30%). MS (m/z) 671 (M + 1)+);
Ph(3-C1)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OBn(4-Me)) (de 0-(4-metilbenzil)hidroxilamina χ HC1 (14 mg; 81 pmol).
Rendimento: 2,91 mg (25%). MS (m/z) 605 (M + 1)+); e Ph(3-C1)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(0-4-heptilo) (de O-(4-heptil) hidroxilamina χ HC1 (15 mg; 89 pmol).
Rendimento: 17 mg (100%). MS (m/z) 599 (M + 1)+).
Exemplo 9
Ph (3-C1) (5-OCHF?) - (S) CH (CH2OH) C (0)-Aze-Pab χ AcOH (i) Acido 3-cloro-5-metoxibenzóico
Aparas de magnésio (Fluka purum para reacções de Grignard) foram pré-tratadas do seguinte modo: As aparas foram colocadas num funil de vidro sinterizado e foi vertido sobre aquelas 0,1 M de ácido clorídrico. As aparas foram agitadas com uma vareta de vidro durante alguns segundos e, em seguida, o ácido foi eliminado com 3 porções de água. Finalmente, as aparas foram 80 lavadas com 2 porções de acetona e colocadas num frasco. Foi seco tetra-hidrofurano (100 mL, 99,95%) adicionando RedAl (1 g, 70% em peso em tolueno) . Aparas de magnésio pré-tratadas (5 g, 200 mmol) foram colocadas num balão de fundo redondo e foram purgadas com azoto 3 vezes. Foi dissolvido dicloroanisole (26 g, 146 inmol) em THF (100 mL, RedAl-dried) e foi adicionado dibromoetano (1,8 g, 10 mmol). A mistura reaccional foi purgada com azoto e, em seguida, aquecida a refluxo durante 2 horas. O aquecimento foi interrompido e foi adicionado gelo seco (10 g) em porções ao longo de 2 minutos. Quando todo o gelo seco estava dissolvido, a mistura reaccional foi vertida para gelo contendo ácido clorídrico (400 mL, 2 M). O processamento extractivo (éter, 300 mL) deu 11,2 g, 60,2 mmol (rendimento: 41 %) do composto em sub-titulo. RMN de ΤΗ (500 MHz; acetona-dõ): δ 7,57 (m, 1H) , 7,49 (m, 1H), 7,23 (m, 1H), 3,91 (s, 3H) (ii) Ácido 3-cloro-5-hidroxibenzóico
Alumina (1,65 g, 60 mmol) e iodo (21 g, 82 mmol) foram aquecidos a refluxo em tolueno (200 mL) durante 2 horas. Em seguida, foi adicionado ácido 3-cloro-5-metoxibenzóico (11,2 g, 60,2 mmol; ver passo (i) acima) dissolvido em tolueno (50 mL) , em conjunto com iodeto de tetrabutilamónio (1,5 g, 4 mmol) e a mistura foi aquecida a refluxo durante mais 2 horas. Depois de arrefecer até à temperatura ambiente, o processamento extractivo deu 8,7 g, 50 mmol (rendimento: 83%) do composto em sub-titulo. RMN de ΧΗ (300 MHz; acetona-d6) : δ 9,2,7 (s, 1H) , 7,48 (m, 1H) , 7,44 (m, 1H), 7,11 (m, 1H) 81 (iii) Ácido 3-cloro-5-difluorometoxibenzóico Ácido 3-cloro-5-hidroxibenzóico (6,4 g, 37,2 iranol; ver passo (ii) acima) dissolvido em clorofórmio (200 mL) foi transferido para um balão de fundo redondo de três tubuladuras de 500 mL munido com um condensador de gelo seco e um tubo de entrada de gás. Foi adicionado hidróxido de sódio (100 mL, 5 M) sob agitação vigorosa. Foi adicionado clorodifluorometano (Fréon 22; 25 g, 290 mmol) em porções através do tubo de entrada de gás à temperatura ambiente. Após 2 horas, a reacção estava concluída. O processamento extractivo deu 6,2 g, 28 mmol (rendimento: 75%) do composto em sub-título. RMN de ΤΗ (500 MHz; acetona-dg) : δ 7,87 (m, 1H) , 7,74 (m, 1H), 7,54 (m, 1H) , 7,19 (t, 1H, JH-F 73 Hz) (iv) 3-Cloro-5-difluorometoxi-N-metoxi-N-metilbenzamida Ácido 3-cloro-5-difluorometoxibenzóico (1,8 g, 8 mmol; ver passo (iii) acima) e cloreto de oxalilo (1,5 g,ll,8 mmol) foram dissolvidos em cloreto de metileno (50 mL) . Foi adicionada DMF (2 gotas) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Em seguida, foram adicionados N, O-dimetil-hidroxilamina (1 g, 10,2 mmol) e trietilamina (3 g, 30 mmol) e após mais 10 minutos de agitação à temperatura ambiente, a mistura reaccional foi concentrada a pressão reduzida. O resíduo foi refeito em éter (100 mL) e água (50 mL). Após separação, a fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada. Este resíduo foi cromatografado sobre 82 sílica (hexano/acetato de etilo 2:1) o que deu 2 g, 7,5 itimol (93%) do composto em sub-título. RMN de aH (400 MHz; CDC13) : δ 7,54 (m, 1H) , 7,37 (m, 1H) , 7,27 (m, 1H), 6,53 (t, 1H, JH_F 73 Hz) (v) 3-Cloro-5-difluorometoxiacetofenona 3-Cloro-5-difluorometoxi-N-metoxi-N-metilbenzamida (2 g, 7,5 mmol; ver passo (iv) acima) foi dissolvida em éter (100 mL) e arrefecida sob azoto até -70 °C. Foi adicionado metil-lítio (7 mL, 11 mmol, 1,6 M em éter), gota a gota, com uma seringa à mistura reaccional, mantida sob agitação, ao longo de 1 minuto. O banho de gelo seco foi retirado e a mistura foi deixada atingir a temperatura ambiente antes da reacção ser desactivada com solução de cloreto de amónio (50 mL, NH4C1 a 5% em água). A fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada a pressão reduzida. O resíduo foi cromatografado sobre sílica (hexano: acetato de etilo 2:1) o que deu 1,5 g, 6,8 mmol (rendimento: 90%) do composto em sub-título. RMN de ΧΗ (600 MHz; CDC13) : δ 7,77 (m , 1H) , 7,59 (m, 1H) , 7,35 (m, 1H) , 6,56 (t , 1H, JH-F 73 Hz ), 2,60 (S, 3H) (vi) Éster metílico do ácido 3-cloro-5- difluorometoxifenilacético 3-Cloro-5-difluorometoxiacetofenona (1,5 g, 6,8 mmol; ver passo (v) acima) foi dissolvida em cloreto de metileno (200 mL). 83
Foi adicionado nitrato de tálio(III) χ 3MeOH em montemorilonite K-10 (6 g, 10 mmol (ca 0,6 mmol/g); ver J. Am. Chem. Soc., 98, 6750 (1976)) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. A mistura foi filtrada e o filtrado foi lavado com bicarbonato de sódio (100 mL, 0,5 M) , seco sobre sulfato de sódio, filtrado e concentrado a pressão reduzida. O resíduo foi cromatografado sobre sílica (hexano/acetato de etilo 2:1) o que deu 1 g, 4 mmol (rendimento: 56%) do composto em sub-título. RMN de ΤΗ (500 MHz; CDC13) : δ 7, 14 (m, 1H), 7,06 (m, 1H) (m, 1H) , 6,50 (t, 1H, J H-F 7 3 Hz) , 3, 72 (s, 3H) , 3,60 (s,1H) (vii) Éster metílico do ácido ot-formil (3-cloro-5- difluorometoxifenil)acético Éster metílico do ácido 3-cloro-5- difluorometoxifenilacético (1 g, 4 mmol; ver passo (vi) acima) e formato de metilo (1 g, 16 mmol) foram dissolvidos em éter (100 mL) e arrefecidos num banho de gelo (ca. 2 °C) . Em seguida, foram adicionados sódio cortado finamente (180 mg, 7,8 mmol) e metanol (1 mL) e a mistura foi deixada no banho de gelo sob agitação de um dia para o outro. Foi adicionada água (100 mL) cuidadosamente e as fases foram separadas. A fase contendo água foi acidificada com ácido clorídrico (2 M) até pH 1 e extraída com éter (2 χ 100 mL) . 0 extracto foi seco sobre sulfato de sódio, filtrado e concentrado a pressão reduzida. O resíduo foi cromatografado sobre sílica (hexano:acetato de etilo (1:1)) o que deu 400 mg, 1,4 mmol (rendimento: 36%) do composto em sub-título. 84 RMN de ΧΗ (400 MHz): δ 12,10 (d, 1H), 7,32 (d, 1H), 7,11 (m, 1H), 7,07 (m, 1H) , 6,94 (m, 1H) , 6,51 (t, 1H, JF_H 73), 3,83 (s, 3H) (viii) Ácido 3-cloro-5-difluorometoxitrópico Éster metilico do ácido α-formil(3-cloro-5-difluorometoxifenil)acético (400 mg, 1,4 mmol; ver passo (vii) acima) foi dissolvido em THF:metanol (50 mL, 9:1). Foi adicionado boro-hidreto de sódio e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Foi adicionada água e a mistura foi concentrada para produzir uma suspensão aquosa, a qual foi refeita em acetato de etilo e água. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com cloreto de sódio (15% em água), secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (30 mL) e hidrolisado com hidróxido de sódio (1 mL, 10 M), à temperatura ambiente durante 10 minutos. O processamento extractivo deu 180 mg, 0,68 mmol (rendimento: 48%) do composto em sub-título. RMN de XH (500 MHz; CDC13) : δ 7,18 (m, 1H) , 7,10 (m, 1H) , 7,00 (m. 1H), 6,50 (t, 1H, JF_H 73), 4,11 (m, 1H) , 3,90 (m, 1H) , 3,84 (m, 1H)
(ix) Ph(3-C1)(5-OCHF2)~(S) (CH2OH)C(O)-Aze-Pab χ AcOH Ácido 3-cloro-5-difluorometoxitrópico (180 mg, 0,7 mmol; ver passo (viii) acima), Η-Aze-Pab (Teoc) χ HC1 (450 mg, 1 mmol) e PyBOP (530 mg, 1 mmol) foram dissolvidos em DMF (10 mL) , após o que foi adicionada DIPEA (550 mg, 3,9 mmol). A mistura foi 85 agitada à temperatura ambiente durante 1 h antes de ser diluída com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL, 15% NaCl) e extraída com acetato de etilo (40 mL) . O extracto foi seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado à secura. O resíduo foi dissolvido em cloreto de metileno (5 mL) e foi adicionado ácido trifluroacético (5 mL). Após 1 h à temperatura ambiente, a mistura de diastereómeros foi evaporada à secura e o resíduo foi cromatografado numa coluna de fase inversa (acetonitrilo:água (30:70), tampão: acetato de amónio 0,1 M) . A liofilização deu 36 mg, 0,067 mmol (rendimento: 10,4%) do composto em título. MS (ES) 481 (M + 1) RMN de XH (400 MHz; CDC13) : δ 7,77 (d, 2H), 7, 57 (d, 2H) , 7,30 (m, 1H) , 7,13 (m, 2H) , 6,87 (t, 1H, JF_H 73 Hz) , 4, 76 (m, 1H) , 4,55 (s , 2H); 4,37 (m, 1H) , 4,03 (m, 2H), 3, 82 (m, 1H) , 3, 72 (m, 1H) , 2,53 (m, 1H), 2,28 (m, , 1H), 1,92 (s, 1 r 5H ) RMN de 13C (100 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina) δ 172,3, 171,9, 167,2
Exemplo 10
Ph(3-C1) (S-QCF3)-(S)CH(CH?OH) C(O)-Aze-Pab x TFA (i) Mesilato de 3-cloro-5-trifluorometoxibenzilo A uma solução de álcool 3-cloro-5-trifluorometoxibenzílico (6,1 g, 26,9 mmol; ver Exemplo 6 (v) acima) em CH2C12 (250 mL) a 86 0 °C sob uma atmosfera de azoto foi adicionada DIPEA (4,2 g, 32,3 mmol) e cloreto de metanossulfonilo (3,4 g, 29,6 mmol) . A solução foi agitada, a 0 °C, durante 1,5 horas e desactivada com H20. Os orgânicos foram separados e, em seguida, lavados com H20 (lx), HC1 1 N (lx) , H20 (lx) e NaHC03 aquoso (1χ) e, depois, secos (Na2S04) , filtrados e concentrados para proporcionar o composto em sub-titulo (8,2 g, 99%) como um óleo. RMN de XH (300 MHz, CDC13) : δ 7,37 (s, 1H) , 7,28 (s, 1H) , 7,18 (s, 1H) 5,23 (s, 2H), 3,07 (s, 3H) (ii) Cianeto de 3-cloro-5-trifluorometoxibenzilo A uma solução de mesilato de 3-cloro-5-trifluorometoxibenzilo (8,2 g, 26,8 mmol; ver passo (i) acima) em DMSO (50 mL) foi adicionado cianeto de sódio (2,6 g, 53,6 mmol). A solução heterogénea resultante foi aquecida até 50 °C e submetida a ultrassons durante 1 hora. A reacção foi arrefecida e partilhada entre Et20 e H20. Os orgânicos foram lavados com H20 (2x) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2x) . As fases aquosas reunidas foram extraídas com Et20 (lx). Os orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados sob um ligeiro aquecimento e vácuo parcial para proporcionar o composto em sub-titulo (6,3 g, 100%) como um óleo volátil avermelhado o qual foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. RMN de 1H (300 MHz, CDC13) δ 7,32 (s, 1H) , 7,24 (s, 1H) , 7,12 (s, 1H), 3,78 (s, 2H) 87 (iii) Ácido 3-cloro-5-trifluorometoxifenilacético A uma solução de cianeto de 3-cloro-5-trifluorometoxibenzilo (6,3 g, 26,7 mmol; ver passo (ii) acima) em 2-propanol (100 mL) foi adicionada água (200 mL) e hidróxido de potássio (7,5 g, 133,5 mmol). A solução foi aquecida a refluxo durante 18 h, arrefecida até à temperatura ambiente e o 2-propanol foi removido in vacuo. A fase aquosa foi lavada com CH2CI2 (2x) e as lavagens rejeitadas. A fase aquosa básica foi acidificada com HC1 2 N e extraída com CH2CI2 (3x) . Os extractos de CH2CI2 foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (5,2 g, 76%) como um óleo, o qual foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. RMN de ΧΗ (300 MHz, CDCI3) : δ 7,25 (s, 1H) , 7,19 (s, 1H) , 7,08 (s, 1H), 3,68 (s, 2H) (iv) 3-Cloro-5-trifluorometoxifenilacetato de etilo A uma solução de ácido 3-cloro-5- trifluorometoxifenilacético (5,2 g, 20,4 mmol; ver passo (iii) acima) em EtOH (600 mL) foi adicionado ácido sulfúrico (várias gotas) . A solução foi aquecida a refluxo durante 18 h, arrefecida até à temperatura ambiente, neutralizada com NaHC03 sólido e o EtOH removido in vacuo. 0 resíduo foi diluído com AcOEt, em seguida, lavado com H20 (lx), NaHC03 aquoso (lx) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (lx). Os orgânicos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (5,5 g, 96%) como um óleo, o qual foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. 88 RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 7,24 (s, 1H) , 7,16 (s, 1H) , 7,07 (s, 1H), 4,13-4,22 (q, j = 8 Hz, 2H) , 3,63 (s, 2H), 1,24- 1,32 (t, J = 8 Hz, 3H) (v) Ph(3-C1) (5-OCF3) -(R, S)CH(CHO)C(O)OEt A uma solução de 3-cloro-5-trifluorometoxifenilacetato de etilo (4,5 g, 15,9 mmol; ver passo (iv) acima) em THF anidro (400 mL) sob uma atmosfera de azoto a menos do que 0 °C (banho de gelo-MeOH) foi adicionado etóxido de sódio (4,5 g, 63,6 mmol). A solução fria foi agitada durante 40 minutos e foi adicionado formato de etilo (8,1 g, 111,3 mmol). A solução foi agitada, a 0 °C, durante 30 minutos, aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 2 horas. Em seguida, o THF foi removido in vacuo. O resíduo foi diluído com Et2<0 e extraído com H2O (1x) e NaOH 0,5 M (3*). Os extractos aquosos foram acidificados com HC1 2 N e extraídos com CH2CI2 (3x). Os orgânicos reunidos foram secos (Na3S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título em bruto (3,9 g) . A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com HexrAcOEt (4:1) proporcionou o composto em sub-título (3,0 g, 61%) como um óleo. RMN de 2Η (300 MHz, CDC13, mistura de isómeros): δ 12,30 e 12,25 (s, 1H) , 7,39 e 7,34 (s, 1H), 7,21 (s, 1H) , 7,17 (s, 1H) 7,08 (s, 1H) , 4,27- 4,37 (q, J = 8 Hz, 2H), 1,28-1,38 (t J = 8 Hz, 3H) 89 (vi) Ph(3-C1) (5~OCF3) -(R,S)CH(CH2OH)C(0)OEt A uma solução de Ph(3-C1) (5-OCF3) -{R, S)CH(CHO)C(0)OEt (3,0 g, 9,66 mmol; ver passo (v) acima) em MeOH (200 mL) a -10 °C (banho de gelo-MeOH) foi adicionado boro-hidreto de sódio (0,7 g, 19,32 mmol) em porções ao longo de 5 min. A solução foi agitada, a -10 °C, durante 45 minutos e foi adicionado mais boro-hidreto de sódio (0,4 g) . Após mais 15 minutos, a reacção foi desactivada com cloreto de amónio aquoso, tornada fracamente ácida com HC1 2 N e o MeOH foi removido in vacuo. 0 resíduo foi diluído com AcOEt e lavado com H2O (lx), NaHC03 aquoso (1 x) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (lx). Os orgânicos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título em bruto. A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com Hex:AcOEt (5:1) proporcionou o composto em sub-título (2,0 g, 66%) como um óleo. RMN de (300 MHz, CDCI3) : δ 7,26 (s, 1H) , 7,19 (s, 1H) , 7,07 (s, 1H), 4,16-4,28 (m, 2H) , 4,04-4,15 (m, 1H) , 3,76-3,94 (m, 2H), 2,33 (t, J= 6 Hz, 1H), 1,18-1,30 (t, J = 8 Hz, 3H)
(vii) Ph(3-C1) (5-OCF3)-(R,S)CH(CH2OH) C(O) OH A uma solução de Ph(3-C1)(5-OCF3)-(R,S)CH(CH2OH)C(O)OEt (2,0 g, 6,24 mmol; ver passo (vi) acima) em THF (50 mL) e H20 (25 mL) foi adicionado hidróxido de lítio mono-hidratado (0,5 g, 12,48 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e o THF foi removido in vacuo. O resíduo foi diluído com H20, em seguida, lavado com CHC13 (2x) e as lavagens rejeitadas. A camada aquosa básica foi acidificada com HC1 2 N e extraída com CHCI3 (4 x) . Os extractos de CHCI3 foram secos 90 (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título em bruto (1,5 g) como um óleo. A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com CHCI3 :MeOH:NH4OH concentrado (gradiente de 7,0:2,5:0,5 a 6:3:1) proporcionou o sal de amónio do composto em sub-título (1,1 g). O sal de amónio foi partilhado entre HC1 1 N e CHCI3. Os orgânicos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (também conhecido como ácido 3-cloro-5-trifluorometoxitrópico) como um óleo (1,1 g, 62%). RMN de (300 MHz, CD3OD) : δ 7,41 (s, 1H) , 7,27 (s, 1H) , 7,24 (s, 1H), 4,03 (m, 1H), 3,75-3,87 (m, 2H) (viii) Ph (3-C1) ( 5-OCF3) - (5) CH (CH2OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (a) e Ph(3-C1) (5-OCF3)-(R)CH(CH2OH) C(O)-Aze-Pab(Teoc) (b) A uma solução de Ph(3-C1)(5-OCF3)-(R,S)CH(CH2OH)C(O)OH (0,65 g, 2,28 mmol; ver passo (vii) acima) em DMF a menos do que 0 °C (banho de gelo-MeOH) foi adicionado Η-Aze-Pab(Teoc) (0,90 g, 2,39 mmol), colidina (0,71 g, 5,70 mmol) e PyBOP (1,31 g, 2,51 mmol). A solução resultante foi agitada, a menos do que 0 °C, durante 1 h, aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 1 hora. A DMF foi então removida in vacuo. O resíduo foi diluído com AcOEt e lavado com HC1 aquoso diluído (lx), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (lx), NaHC03 aquoso (lx) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (lx). Os orgânicos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título em bruto (2,1 g) como uma mistura de diastereómeros. A cromatografia
flash (3x) sobre sílica gel eluindo primeiro com AcOEt:MeOH
(95:5) depois com CH2Cl2:MeOH (97:3) e por fim com CH2Cl2:MeOH 91 (95:5) proporcionou os compostos nas sub-títulos diastereómero (a) (0,51 g, 35%) e diastereómero (b) (0,45 g, 31%) como espumas quebradiças.
Para o composto do sub-titulo diastereómero (a) RMN de ΤΗ (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7, 79- 7,85 (d, N OO II h> 2H) , 7,22-7,49 (m, 5H) , 5,17- 4,77 (m 1H) , 4,53-4,18 (m, 4H) , 3,58- -4,11 (m, 5H) , 2, 47- -2, 73 (m, 1H) 2,11-2,34 (m, 1H), 1,08-1,12 (m, 2H), 0,07 (s, 9H) MS (m/z) 643 (M + 1)+
(ix) Ph(3-C1)7 (5-OCF3)-(5)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-C1) (5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc), (78 mg, 0,121 mmol; ver passo (viii) acima - diastereómero (a)), foi dissolvido em 5 mL de ácido trifluoroacético. Depois de 10 minutos, a reacção tinha terminado e o solvente foi evaporado. O resíduo foi liofilizado de água e acetonitrilo para dar o produto desejado. Rendimento: 70 mg (94%). MS (m/z) 483 (Μ - 1)“; 485 (M + 1) + RMN de 1H(400 MHz; D20) rotâmeros 1:1: δ 8,83 (t 1, 1H) , 7,79 (d, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,54 (d, 1H), 7,43 (d, 2H), 7,35 (m, 1H, rotâmero) , 7,28 (m, 1H, rotâmero) , 7,20 (m, 1H, rotâmero) , 7,05 (m, 1H, rotâmero), 5,22 (m, 1H, rotâmero), 4,83 (m, 1H, rotâmero), 4,57 (m, 2H, rotâmero), 4,38 (m, 2H, rotâmero), 4,3-3,7 (m, 5H), 2,77 (m, 1H, rotâmero), 2,55 (m, 1H, rotâmero), 2,27 (m, 1H) 92 RMN de 13C (100 MHz; D20) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, rotâmeros) δ 172,9, 172,2, 172,0, 171,8, 166,9
Exemplo 11
Ph(3-Cl) (5-QCF3) ~ (-S1) CH (CH2OH) C (O) -Aze-Pab (OMe) (i) Ph (3-C1) (5-OCF3) - ( 5) CH (CH2OH) C (O) -Aze-Pab (OMe, Teoc)
Ph(3-C1) (5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (100 mg, 0,155 mmol; ver Exemplo 10(viii) acima), foi dissolvido em 12 mL de tetra-hidrofurano. Foi adicionado cloridrato de O-metil-hidroxilamina (44 mg, 0,53 mmol) e a reacção foi aquecida a 50 °C de um dia para o outro. A mistura reaccional foi evaporada e o residuo purificado por HPLC preparativa (CH3CN/NH4OAc 0,1 M (70/30)). As fracções pertinentes foram evaporadas e o resíduo dissolvido numa pequena quantidade de acetonitrilo e água e liofilizadas. A liofilização foi repetida uma vez. Rendimento: 80 mg (76%) de material puro. RMN de 3H(400 MHz; CD3OD) rotâmeros: δ 7,5-7,4 (m, 3H) 7,35-7,2 (m, 4H), 5,15 (m, 1H, rotâmero secundário) , 4, 74 (m 1H, rotâmero principal), 4,5-4, 25 (m, 3H) , 4,2-3,95 (m, 4H) 3,91 (b, 3H), 3,9-3,6 (m, 2H) , 2,63 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,50 (m, 1H, rotâmero principal), 2,3-2,1 (m, 1H) , 0,95 (m, 2H) , 0,02 (s, 9H, rotâmero principal), 0,01 (s, 9H, rotâmero secundário) 93 (ii) Ph (3-C1) (5-OCF3) -(S)CH(CH?OH)C(0)-Aze-Pab (OMe)
Ph(3-C1) (5-OCF3)-(S)CH(CH2OH) C(0)-Aze-Pab(OMe, Teoc), (80 mg, 0,12 mmol; ver passo (i) acima), foi dissolvido em 1 mL de cloreto de metileno e arrefecido num banho de gelo. Foi adicionado ácido trifluoroacético, 3 mL e o balão reaccional foi mantido no banho de gelo durante duas horas. A mistura foi evaporada e dissolvida em acetato de etilo e lavada três vezes com NaHC03 (aq), depois com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi seca (Na2S04) , filtrada e evaporada. 0 resíduo foi liofilizado de uma pequena quantidade de acetonitrilo e água. Rendimento: 60 mg (95%) de produto em título puro. MS (m/z) 528 (Μ - 1)“; 531 (M + 1)+ RMN de 1H(500 MHz; CD30D) rotâmeros: δ 7,65-7,55 (m, 3H, rotâmeros), 7,45 (m, 1H, rotâmero principal), 7,4-7,2 (m, 4H) , 5,15 (m, 1H, rotâmero secundário), 4,74 (m, 1H, rotâmero principal), 4,5-4,3 (m, 3H) , 4, 05-3,95 (m, 2H) , 3,85 (m, 1H, rotâmero principal), 3,82 (s, 3H, rotâmero principal), 3,81 (s, 3H, rotâmero secundário), 3,73 (m, 1H, rotâmero principal), 3,67 (m, 1H, rotâmero secundário), 3,62 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,63 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,50 (m, 1H, rotâmero principal), 2,24 (m, 1H, rotâmero principal), 2,16 (m, 1H, rotâmero secundário) RMN de 13C (125 MHz; CD30D) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, rotâmeros) δ 174,0, 173,2, 172,7, 172,6, 155,1 94
Exemplo 12
Ph (3-C1) (5-OCHF?) - (R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OMe) (i) Ph(3-C1) (5-OCHF2) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe, Teoc)
Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (0,40 g, 0,65 mmol; ver Exemplo l(ix) acima), foi dissolvido em 20 mL de acetonitrilo e foi adicionado 0,50 g (6,0 mmol) de cloridrato de O-metil-hidroxilamina. A mistura foi aquecida a 70 °C, durante 2 h. O solvente foi evaporado e o resíduo foi partilhado entre água e acetato de etilo. A fase aquosa foi extraída mais duas vezes com acetato de etilo e a fase orgânica reunida foi lavada com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (Na2S04) , filtrada e evaporada. Rendimento: 0,41 g (91%). RMN de XH (400 MHz; CDC13) : δ 7,83 (t 1, 1H) , 7,57 (s 1, 1H) , 7,47 (d, 2H), 7, 30 (d, 2H) , 7,20 (m, 1H) , 7, 14 (m, 1H) , 7, 01 (m, 1H), 6,53 (t, 1H), 4, 89 (s , 1H), 4 ,87 (m, r 1H), 4, 47 (m, 2H) , 4,4-4,2 d, 1H), 4,17-4, 1 (m, 3H), 3, 95 (s, 3H) , 3,67 (m, 1H) , 2,68 (m, 1H), 2,42 (m,1H) 0, 97 (m, 2H) , 0, 01 (s, 9H) (ii) Ph(3-C1) (5-OCHF2) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
Ph(3-C1) (5-OCHF2) - (R) CH (OH) C (O)-Aze-Pab(OMe, Teoc) (0,40 g, 0,62 mmol; ver passo (i) acima), foi dissolvido em 5 mL de TFA e deixado a reagir durante 30 min. O TFA foi evaporado e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e NaHC03 (aq.). A fase aquosa foi extraída mais duas vezes com acetato de etilo e a 95 fase orgânica reunida foi lavada com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (Na2S04) , filtrada e evaporada. 0 produto foi liofilizado de água/acetonitrilo. Não foi necessária nenhuma purificação. Rendimento: 0,28 g (85%). RMN de 3H (600 MHz; CDC13) : δ 7,89 (t 1, 1H) , 7,57 (d, 2H) , 7,28 (d, 2H) , 7, 1 -8 (m, 1H), 7, 13 (m Oh E \—1 9 (m, 1H) , 6,51 (t, 1H) , 4, 88 (s, 1H) , 4,87 (m, 1H) , 4, 80 (s 1, 2H) , 4, 48 (dd, 1H) , 4,43 (dd, 1H) ' , 4 ,10 (m, 1H) , 3, 89 (s, 3H), 3,68 (m, 1H), 2,68 (m, 1H) , 2,40 (m, 1H) . RMN de 13C (125 MHz; CDC13 ) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, rotâmeros) δ 172,9, 170,8, 152,7, 152,6 MS (m/z) 495 (M - 1)", 497 (M + 1)+
Exemplo 13
Ph(3-OCHF2) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x AcOH
Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe) (13 mg, 0, 026 mmol; ver Exemplo 12 acima) foi dissolvido em etanol abs. (5 mL) e foi adicionado 30 mg de Pd a 10%/C. Finalmente foi adicionado ácido acético (5 pL) e a mistura foi hidrogenada à pressão atmosférica durante 20 h. A mistura foi filtrada através de Celite®, evaporada e purificada por HPLC de fase inversa (acetato de amónio aq. 0,1 P/PeCN). As fracções apropriadas foram liofilizadas para proporcionar o composto em título como um sólido branco: 8,5 mg (66%). 96 RMN de ^(400 MHz; CD3OD) rotâmeros: δ 7, 73-7, 78 (m, 2H) , 7,55 (d, 2H), 7,19-7,43 (m, 3H), 7,06-7,13 (m, 1H), 6,83 (t, 1H, JHF = 74Hz, rotâmero principal), 6,81 (t, 1H, rotâmero principal ), 5,20 (s, 1H, rotâmero principal ), 5,19 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,15 (s, 1H, rotâmero secundário), co (m, 1H, rotâmero principal) 1 , 4,4-4,6 (vários picos, 2H) , 4,35 (m, 1H, rotâmero principal), 4,08 (m, 1H) , 3,99 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,70 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,52 (m, 1H, rotâmero principal), 2,30 (m, 1H, rotâmero principal), 2,15 (m, 1H, rotâmero secundário), 1,89 (s, 3H). RMN de 13C (100 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, rotâmeros) δ 173,7, 172,9, 168,3. MS (m/z) 433 (M+l)+; 431 (M-l)~
Exemplo 14
Ph(3-OCF3) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab χ TFA
Ph(3-C1) (5-OCF3) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (34 mg, 0,057 mmol, do Exemplo 6) foi dissolvido em 5 mL de etanol e foi adicionado 20 mg de Pd a 10%/C. A mistura foi hidrogenada à pressão atmosférica de um dia para o outro. A mistura foi filtrada através de Celite®, evaporada e liofilizada de água/acetonitrilo. RMN de 1H(400 MHz; CD3OD) rotâmeros: δ 7,8-7,7 (m, 2H) , 7,55 (m, 2H), 7,5-7,2 (m, 4H), 5,24 (s, 1H, rotâmero principal), 5,23 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,18 (s, 1H, rotâmero secundário), 4,77 (m, 1H, rotâmero principal), 4,6-4,45 (m, 2H) , 4,36 (m, 1H, 97 rotâmero principal), 4,08 (m, 1H) , 3,99 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,70 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,52 (m, 1H, rotâmero principal), 2,30 (m, 1H, rotâmero principal), 2,15 (m, 1H, rotâmero secundário). RMN de 13C (100 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, rotâmeros) δ 174,1, 173,9, 173,5, 172,9, 168,2. RMN de 19F (282 MHz; CD3OD) : -59,8 e -59,9 (3F, rotâmero secundário e principal respectivamente) , -77,4 (3F) indica que o sal é TFA. MS (m/z) 451,3 (M+l)+
Exemplo 15
Ph(3-C1) (5-OCH2CF3) - (R) CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) 3-Cloro-5-trifluoroetoxibenzaldeído A uma solução, mantida sob agitação magnética, de 3-cloro-5-hidroxibenzaldeído (2,0 g, 12,8 mmol; ver Exemplo l(ii) acima) e carbonato de potássio (2,3 g, 16,6 mmol) em DMF (35 mL) sob azoto, foi adicionado p-toluenossulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo (4,2 g, 16,6 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida até 110 °C, durante 7 h e, em seguida, agitada, de um dia para o outro, à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida até 0 °C, vertida para HC1 2 N gelado (100 mL) e extraída com AcOEt (2 χ 75 mL) . Os extractos orgânicos reunidos foram lavados com HC1 0,5 N (2 χ 50 mL) , 98 secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo. 0 óleo castanho foi cromatografado sobre sílica gel eluindo com Hex:AcOEt (6: 1) para proporcionar o composto em sub-título (1,9 g, 61 %) como um óleo amarelo. RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 9,44 (s, 1H) , 7,56 (s, 1H) , 7,33 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 4,42 (q, J= 8 Hz, 2H)
(ii) Ph(3-C1) ( 5-OCH2CF 3) -(R, S)CH(OTMS)C A uma solução de 3-cloro-5-trifluoroetoxibenzaldeído (5,2 g, 21,7 mmol; ver passo (i) acima) e iodeto de zinco (1,7 g, 5,4 mmol) em CH2CI2 (200 mL) sob azoto foi adicionado cianeto de trimetilsililo (4,3 g, 43,3 mmol), gota a gota, via seringa a 0 °C. A mistura foi agitada, a 0 °C, durante 3 h, em seguida, diluída com H2O (150 mL) . A camada orgânica foi separada, seca (Na2S04) , filtrada e concentrada in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (6,9 g, 95%) como um óleo amarelo o qual foi utilizado sem mais purificação. RMN de ΧΗ (300 MHz, CDC13) δ 7,27 (s, 1H) , 6,98 (s, 2H) , 5,44 (s, 1H), 4,38 (q, J= 8 Hz, 2H), 0,30 (s, 9 H)
(iii) Ph(3-C1) (5-QCH2CF3) -(R, S)CH(OH)C(O)OH Ácido clorídrico concentrado (170 mL) foi adicionado a Ph (3-C1) (5-OCH2CF3) - (R, S) CR (OTMS) CN (6,9 g, 20,4 mmol; ver passo (ii) acima) e agitado a 100 °C, durante 1 h. Depois de arrefecer até à temperatura ambiente, a reacção foi ainda arrefecida até 0 °C e basificada lentamente com NaOH 3 N (300 mL). Esta mistura 99 foi lavada com Et20 (2 χ 100 mL) e a camada aquosa foi acidificada com HC1 2 N (50 mL) . A camada aquosa foi então extraída com AcOEt (2 χ 100 mL) , seca (Na2S04) , filtrada e concentrada in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (5,3 g, 92%) como um óleo amarelo pálido, o qual foi utilizado sem mais purificação. RMN de ΧΗ (300 MHz, CD30D) δ 7,18 (s, 1H) , 7,07 (s, 1H) , 7,02 (s, 1H), 5,13 (s, 1H), 4,58 (q, J = 8 Hz, 2H) (iv) Ph (3-C1) (5-OCH2CF3) - (B) CH (OH) C (O) OH (a) e Ph(3-Cl)(5- 0CH2CF3)-(S)CH(0Ac)C(0)0H (b)
Uma solução de Ph(3-C1)(5-OCH2CF3)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (7,06 g, 24,8 mmol; ver passo (iii) acima) e Lipase PS "Amano" (4,30 g) em acetato de vinilo (250 mL) e MTBE (250 mL) foi aquecida a 70 °C sob azoto durante 40 h. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente, a enzima foi removida por filtração lavando com AcOEt e o filtrado concentrado in vacuo. A cromatografia sobre sílica gel eluindo com CHC13:MeOH:Et3N (92:6:2) proporcionou o sal de trietilamina do composto em subtítulo (a) (3,02 g) como um óleo amarelo. O sal do composto em sub-título (a) foi dissolvido em H20 (150 mL) , acidificado com HC1 2 N e extraído com AcOEt (2 χ 75 mL). Os extractos orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para produzir o composto em sub-título (a) (2,18 g) como um sólido esbranquiçado.
Além disso, o sal de trietilamina do composto em sub-título (b) (4,73 g) foi obtido da cromatografia em coluna mencionada acima. 100
Dados para o composto na sub-título (a): p.f.: 98-103 °C RMN de 3H (300 MHz, CD3OD) δ 7,18 (s, 1H) , 7,07 (s, 1H) , 7,02 (s, 1H), 5,13 (s, 1H), 4,58 (q, J= 8 Hz, 2H). RMN de 13C (75 MHz, CD3OD) δ 175, 4, 159,6, 144,6, 136,2, 125,0 (q, J= 277 Hz), 121,8, 115,9, 113,1, 73,3, 67,0 (q, J = 35 Hz)
Análise por HPLC: 98,6%, >99% ee, coluna Chiralcel OD (fase móvel, Hex:EtOH:TFA 97:3:0,5) [oí]25d = -81,5° (c = 1,0, MeOH) APCI-MS: (M - 1) = 283 m/z (v) Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
A uma solução de Ph(3-C1)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,50 g, 1,8 mmol; ver passo (iv) acima (composto (a))) em DMF (20 mL) sob azoto foi adicionado Η-Aze-Pab (Teoc) χ HC1 (1,03 g, 2,3 mmol), PyBOP (1,01 g, 1,9 mmol) e DIPEA (0,57 g, 4,4 mmol) a 0 °C. A reacção foi agitada, a 0 °C, durante 2 h e, em seguida, à temperatura ambiente durante 20 h. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo cromatografado duas vezes sobre sílica gel, eluindo primeiro com CHCI3: EtOH (10:1) e, depois, com AcOEt:EtOH (10:1) para proporcionar o composto em sub-título (0,55 g, 48%) como uma espuma quebradiça branca
p.f.: 90-95 °C
Rf = 0,42 (CHC13:EtOH 10:1) RMN de 2H (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7,78-7,81 (m, 2H), 7,38-7,41 (m, 2H), 7,12-7,16 (m, 1H), 101 7,00-7,06 (m, 2H), 5,09-5,22 e 4,75-4,79 (m, 2H), 3,94-4,61 (m, 8H), 2, 09-2, 75 (m, 2H) , 1,04-1,11 (m, 2H) , 0,70 (s, 9H) APCI-MS: (M + 1) = 643 m/z
(vi) Ph(3-C1)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph (3—Cl) (5-OCH2CF 3) - (R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (0, 066 g, 0,103 mmol; ver passo (v) acima), foi dissolvido em 3 mL de TFA e deixado a reagir durante 30 min. O TFA foi evaporado e o resíduo foi liofilizado de água/acetonitrilo para produzir 0,060 g (94%) do composto em título como o seu sal de TFA. RMN de ΤΗ (400 MHz; CD3OD) rotâmeros: δ 7,8-7,7 (m, 2H) , 7,6-7,5 (m, 2H), 7,2-7,0 (m, 3H), 5,21 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,17 (s, 1H, rotâmero principal), 5,11 (s, 1H, rotâmero secundário), 4,81 (m, 1H, rotâmero principal), 4,6-4,4 (m, 4H), 4,37 (m, 1H, rotâmero principal), 4,16 (m, 1H, rotâmero principal); 4,06 (m, 1H, rotâmero secundário), 3,99 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,70. (m, 1H, rotâmero secundário), 2,54 (m, 1H, rotâmero principal), 2,29 (m, 1H, rotâmero principal), 2,15 (m, 1H, rotâmero secundário) RMN de 13C (100 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, rotâmeros) δ 172,2, 171,8, 171,7, 167,0. MS (m/z) 499,3 (M+l)+
Exemplo 16
Ph(3-C1)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) A uma solução de Ph(3-C1) (5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,48 g, 1,7 mmol; ver Exemplo 15 (iv) acima (composto (a)) em 102 DMF (20 mL) sob azoto foi adicionado H-Aze-Pab(OMe) χ 2HC1 (0,74 g, 2,2 mmol), PyBOP (0,97 g, 1,9 mmo1) e DIPEA (0,55 g, 4,2 mmo11 ) a 0 °C. A reacção foi agitada, O O O durante 2 h e, depois, à temperatura ambiente durante 20 h. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo cromatografado duas vezes sobre sílica gel, eluindo primeiro com CHCl3:EtOH (10:1) e, depois, com AcOEt:EtOH (10:1) para proporcionar o composto em título (0,62 g, 69%) como uma espuma quebradiça branca.
p.f.: 75-80 °C
Rf = 0,43 (CHC13:EtOH 10:1) RMN de ΧΗ (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7,57-7,60 (m, 2H), 7,32-7,36 (m, 2H) , 7,13-7,17 (m, 1H) , 7,00-7,06 (m, 2H), 5,09-5,19 e 4,74-4,80 (m, 2H), 3,93-4,62 (m, 6H), 3,81 (s, 3H), 2,10-2,73 (m, 2H) APCI-MS: (M + 1) = 529 m/z
Exemplo 17
Ph (3-C1) (5-OCH2CHF2) - (R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab χ TFA (i) Éster de 2,2-difluoroetilo do ácido metanossulfónico A uma solução, mantida sob agitação magnética, de 2,2-difluoroetanol (1,52 g, 18,5 mmol) em CH2CI2 (20 mL) sob azoto foi adicionado trietilamina (5,61 g, 55,5 mmol) e cloreto de metanossulfonilo (2,54 g, 22,2 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada , a 0 °C, durante 1,5 h, diluída com CH2CI2 (50 mL) e lavada com HC1 2 N (50 mL). A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (30 mL) e os extractos orgânicos reunidos lavados com 103 solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL), secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-titulo (2,52 g, 85%) como um óleo amarelo, o qual foi utilizado sem mais purificação. RMN de λΕ (300 MHz, CDC13) δ 6,02 (tt, J= 3 Hz, J = 55 Hz, 1H), 4,39 (dt, J = 3 Hz, J = 13 Hz, 2H), 3,13 (s, 3H) (ii) 3-Cloro-5-difluoroetoxibenzaldeído A uma solução de 3-cloro-5-hidroxibenzaldeído (1,50 g, 9,6 mmol; ver Exemplo 1(ii) acima) e carbonato de potássio (1,72 g, 12,5 mmol) em DMF (10 mL) sob azoto foi adicionada, gota a gota, uma solução de éster de 2,2-difluoroetilo do ácido metanossulfónico (2,0 g, 12,5 mmol; ver passo (i) acima) em DMF (10 mL) à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida até 100 °C, durante 6 h e, em seguida, agitada, de um dia para o outro, à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida até 0 °C, vertida para HC1 2 N gelado (100 mL) e extraída com AcOEt (2 x 75 mL) . Os extractos orgânicos reunidos foram lavados com HC1 0,5N (2 x 50 mL) , secos (Na2S04), filtrados e concentrados in vacuo. O óleo castanho foi cromatografado sobre sílica gel eluindo com Hex:AcOEt (5:1) para proporcionar o composto em sub-titulo (1,35 g, 64%) como um óleo amarelo. RMN de aH (300 MHz, CDC13) δ 9,92 (s, 1H) , 7,52 (s, 1H) , 7,31 (s, 1H), 7,22 (s, 1H) , 6,12 (tt, J= 3 Hz, J = 55 Hz, 1H) , 4,26 (dt, J = 3 Hz, J = 15 Hz, 2H) 104
(iii) Ph(3-C1) (5-QCH?CHF2) ~{R, S)CH(OTMS)CN A uma solução de 3-cloro-5-difluoroetoxibenzaldeído (1,35 g, 6,1 mmol; ver passo (ii) acima) e iodeto de zinco (0,48 g, 1,5 mmol) em CH2CI2 (50 mL) , foi adicionado cianeto de trimetilsililo (1,21 g, 12,2 mmol), gota a gota, a 0 °C sob azoto. A mistura foi agitada, a 0 °C, durante 3 h, em seguida, diluída com H20 (50 mL) . A camada orgânica foi separada, seca (Na2SC>4) , filtrada e concentrada in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (1,85 g, 95%) como um óleo castanho o qual foi utilizado sem mais purificação. RMN de ΧΗ (300 MHz, CDCI3) δ 7, 13 (s, 1H) , 6,94 (s, 2H) 6,10 (tt, J = 3 Hz, J = 55 Hz, 1H), 5, 43 (s, 1H), 4,20 (dt J = 3 Hz, J = 15 Hz, 2 H), 0,28 (s , 9H)
(iv) Ph(3-C1) (5-OCH2CHF2) — (R, S) CH(OH)C(O)OH
Foi adicionado ácido clorídrico concentrado (60 mL) a
Ph (3-C1) (5-OCH2CHF2) - (.R, S) CH (OTMS) CN (1,85 g, 5,8 mmol; ver passo (iii) acima) e agitado a 100 °C, durante 1 h. Depois de arrefecer até à temperatura ambiente, a reacção foi ainda arrefecida até 0 °C, lentamente basificada com NaOH 3 N (-180 mL) e lavada com Et20 (2 χ 75 mL). A camada aquosa foi acidificada com HC1 2 N (20 mL) e extraída com AcOEt (2 χ 75 mL). Os extractos orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (1,50 g, 97%) como um sólido amarelo pálido, o qual foi utilizado sem mais purificação. 105 RMN de TH (300 MHz, CD30D) δ 7,15 (s, 1H) , 7, 05 (s, 1H) , 6,98 (s, 1H) , 6,19 (tt, J = 4 Hz, J = 55 Hz, 1H) , 5, 12 (s, 1H) , 4,25 (dt, J - = 4 Hz, J = 17 Hz, 2H) (v) Ph(3-C1) (5-OCH2CHF2) -(S)CH(OAc)C(0)OH (a) e Ph(3-C1) ' (5- OCH2CHF2) -(R) CH (OH) C (0) OH (b) Uma solução de Ph (3-C1) (5-OCH2CHF2) - (Rr S) CH(OH)C(0)OH (3,90 g, 14,6 mmol; ver passo (iv) acima) e Lipase PS "Amano" (2,50 g) em acetato de vinilo (140 mL) e MTBE (140 mL) foi aquecida a 70 °C sob azoto durante 40 h A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente, a enzima removida por filtração lavando com AcOEt e o filtrado concentrado in vacuo. A cromatografia sobre sílica gel eluindo com CHCl3:MeOH:Et3N (92:6:2) proporcionou o sal de trietilamina do composto em subtítulo (a) como um óleo amarelo. Além disso foi obtido o sal de trietilamina do composto em sub-título (b) (1,47 g) e o sal foi dissolvido em H20 (100 mL) , acidificado com HC1 2 N e extraído com AcOEt (2 x 75 mL) . Os extractos orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para produzir o composto em sub-título (b) (1,00 g) como um sólido esbranquiçado.
Dados para o composto em sub-título (b):
p.f.: 103-106 °C
Rf = 0,39 (CHCI3:MeOH:Et3N 90:8: 2) RMN de XH (300 MHz, CD3OD) δ 7,13 (s, 1H), 7,04 (s, 1H) 6,97 (s, 1H) , 6,17 (tt, J = 4 Hz, J = 55 Hz, 1H), 5, 12 (s 1H) , 4,24 (dt, J = 4 Hz, J = 8 Hz, 2H). 106 RMN de 13C (75 MHz, CD3OD) δ 175, 5, 160,3, 144, 5, 136,1, 121,3, 115,7, 115,3, (t, J = 240 Hz), 112,9, 73,4, 68,6 (t, J = 29 Hz)
Análise por HPLC: 96,2%, >95,0% ee, Coluna ChiralPak AD (fase móvel, Hex:EtOH:TFA 95:5:0,5) [a] 25d = -84,0° (c = 0,85 MeOH) APCI-MS: (M - 1) = 265 m/z (vi) Ph (3-C1) (5-OCH2CHF2) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) A uma solução de Ph (3-C1) (5-OCH2CHF2) - (R) CH (OH) C (O) OH (0,35 g, 1,3 mmol; ver passo (v) acima (composto (b) ) ) em DMF (18 mL) sob azoto foi adicionado H-Aze-Pab (Teoc) χ HC1 (0,76 g, 1,7 mmol), PyBOP (0,75 g, 1,4 mmol) e DIPEA (0,43 g, 3,3 mmol) a 0 °C. A reacção foi agitada, a 0 °C, durante 2 h e, em seguida, à temperatura ambiente durante 20 h. A mistura foi concentrada in vacuo e o residuo cromatografado duas vezes sobre sílica gel, eluindo primeiro com CHCl3:EtOH (10:1) e, depois, com AcOEt:EtOH (10:1) para proporcionar o composto em sub-título (0,69 g, 84%) como uma espuma quebradiça branca.
p.f.: 108-118 °C
Rf = 0,48 (CHC13:EtOH 10:1) RMN de 3Η (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7,78-7,81 (m, 2H) , 7,40-7, 43 (m, 2H) , 7,09-7,12 (m, 1H) , 6,96-7,02 (m, 2H), 6,16 (t, J = 57 Hz, 1H), 5,09-5,20 e 4,75-4,80 (m, 2H), 3, 95-4, 55 (m, 8H) , 2,10-2,75 (m, 2H) , 1,04-1,11 (m, 2H) , 0,07 (s, 9H) APCI-MS: (M + 1) = 625 m/z 107
(vii) Ph(3-C1)(5-OCH2CHF7)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab x TFA
Ph (3-C1) (5-OCH2CHF2) - (R) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (Teoc) ( 0, 086 g, 0,138 mmol; ver passo (vi) acima) foi dissolvido em 3 mL de TFA e deixado a reagir durante 1 h. O TFA foi evaporado e o resíduo foi liofilizado de água/acetonitrilo para produzir 0,080 g (98%) do composto em título como o seu sal de TFA. RMN de (300 MHz; CD3OD) rotâmeros: δ 7,8-7,7 (m, 2H) , 7.6- 7,5 (m, 2H) , 7,15-6,95 (m, 3H), 6,35-5, 95 (m, 1H), 5,20 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,14 (s, 1H, rotâmero principal), 5,10 (s, 1H, rotâmero secundário), 4,80 (m, 1H, rotâmero principal), 4.6- 4,0 (m, 6H) , 2,70 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,53 (m, 1H, rotâmero principal), 2,29 (m, 1H, rotâmero principal), 2,15 (m, 1H, rotâmero secundário). RMN de 13C (100 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo amidina, rotâmeros) δ 174, 0, 173,8, 173,4, 172,9, 168,2 MS (m/z) 481,2 (M+l)+
Exemplo 18
Ph (3-C1) (5-OCH2CHF2) ~(-R)CH(OH) C(O)-Aze-Pab (OMe) A uma solução de Ph (3-C1) (5-OCH2CHF2) - (R) CH (OH) C (O) OH (0,30 g, 1,7 mmol; ver Exemplo 17(v) acima (composto (b))) em DMF (15 mL) sob azoto foi adicionado Η-Aze-Pab(OMe) χ 2HC1 (0,49 g, 1,5 mmol), PyBOP (0,65 g, 1,2 mmol) e DIPEA (0,36 g, 2,8 mmol) a 0 °C. A reacção foi agitada, a 0 °C, durante 2 h e, em seguida, à temperatura ambiente durante 20 h. A mistura foi 108 concentrada in vacuo e o resíduo cromatografado três vezes sobre sílica gel, eluindo primeiro com CHCl3:EtOH (10:1), depois com AcOEt:EtOH (10:1) e finalmente com CHCl3:MeOH (20:1) para proporcionar o composto em título (0,47 g, 81%) como uma espuma quebradiça branca.
p.f.: 65-75 °C
Rf = 0,37 (CHC13:EtOH 10:1) RMN de ΧΗ (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7,58- 7,60 (m, 2H) , 7, 32-7,35 (m, 2H) , 7,09-7,12 (m, 1H), 6,96-7,02 (m, 2H) , 6,16 (t, J = 55 Hz, 1H), 5,08-5,18 e 4,74-4,80 (m, 2H), 3,96-4,50 (m, 6H) , 3,80 (s, 3H), 2 , 10-2,75 (m, 2H) APCI-MS: (M + D = 511 m/z.
Exemplo 19
Ph (3-C1) (5-OCH2F) - (-R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab x TFA
(i) Ph(3-C1) (5-TMSO)- (R,S)CH(OTMS)CN A uma solução de 3-cloro-5-hidroxibenzaldeído (9,8 g, 62,6 mmol; ver Exemplo l(ii) acima) e Znl2 (5,0 g, 15,7 irtmol) em CH2C12 anidro (500 mL) a 0 °C foi adicionado cianeto de trimetilsililo (13,7 g, 138 mmol). A mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada, de um dia para o outro. Foi adicionada água (250 mL) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com CH2C12 (2 χ 300 mL) . Os extractos orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título 109 (16,9 g, 83%) como um óleo amarelo que foi utilizado sem mais purificação.
Rf= 0,42 (3:1 Hex:AcOEt) RMN de ΤΗ (300 MHz, CDCI3) 1 δ 7,06 (s, 1H), 6, 86 (s, 2H), 5,40 (s, 1H), 0,30 (s, 9 H) , 0 ,24 (s, 9 H) • (ii) Ph(3-C1)(5- OH) - (R, S) CH (OH) C (0) OH Uma solução de Ph(3-C1)(5 -OTMS)-(R,S) CH(OTMS)CN (22,6 g, 68,8 mmo1 ; ver passo (i) acima) em HC1 concentrado (200 mL) foi aquecida a refluxo sob azoto durante 3 h. A reacção foi arrefecida até 0 °C e lentamente basificada com NaOH 2N. A mistura foi lavada com Et20 (3 χ 100 mL ) para remover as impurezas orgânicas. A camada aquosa foi acidificada com HC1 2 N e extraída com AcOEt (3 χ 200 mL). Os extractos orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (9,3 g, 67%) como um óleo castanho que foi utilizado sem mais purificação.
Rf= 0,23 (CHCI3:MeOH:NH4OH concentrado 6:3:1) RMN de ΧΗ (300 MHz, CD3OD) δ 7,05 (s, 1H), 6,94 (s, 1H), 6,73 (s, 1H) , 5, 03 (s, 1H) . (iii) Ph(3-C1) (5-OH)- (R,S)CH(OH)C(O)OEt A uma solução de Ph(3-C1)(5-OH)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (9,3 g, 46,0 mmol; ver passo (ii) acima) em EtOH absoluto (200 mL) foi 110 adicionado ácido sulfúrico concentrado (0,25 mL) e a reacção foi aquecida a refluxo sob azoto durante 4 h. A reacção foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado NaHC03 sólido (0,2 g) . A reacção foi concentrada in vacuo e partilhada com NaHC03 saturado (100 mL) e Et20 (3 χ 50 mL) . Os extractos orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para dar o composto em sub-titulo (6,9 g, 65%) como um óleo amarelo o qual foi utilizado sem mais purificação.
Rf= 0,62 (CHC13:MeOH:NH4OH concentrado 6:3:1). RMN de 1R (300 MHz, CDC13) δ 6,99 (s, 1H) , 6,81 (s, 2H) , 5,07 (s, 1H), 4,16-4,32 (m, 2H), 1,23 (t, J = 1 Hz, 3H). (iv) Ph(3-C1) (5-OCH2F) - (R,S)CH(OH)C(O)OEt A uma solução de Ph(3-Cl)(5-OH)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt (6,1 g, 26,8 mmo1; ver passo (iii) acima) em DMF (100 mL) num balao selado sob azoto a 0 °C foi adicionado carbonato de césio (13,1 g, 40 ,2 mmo1). A mistura reaccional foi agitada , a 0 °C, durante 15 minutos seguida da adição de iodeto de potássio (0,5 g, 2,7 mmo1). A reacção foi arrefecida até -78 °C e foi borbulhado clorofluorometano (18,4 g, 268 mmol) no recipiente. O balão selado foi então deixado aquecer até à temperatura ambiente e agitado durante 18 h. A mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C, arejada cuidadosamente para remover qualquer excesso de clorofluorometano e partilhada com H20 (20 mL) e Et20 (3 χ 50 mL) . Os orgânicos reunidos foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 χ 50 mL) , secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo. A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com Hex:AcOEt 111 (gradiente de 9:1 a 3:1) proporcionou o composto em sub-titulo (2,4 g, 35%) como um óleo amarelo-claro. Nota: 0 composto é pouco visível na TLC por UV. Este pode ser visualizado revelando a TLC com verde de bromocresol.
Rf = 0,46 (2:1 Hex:AcOEt) RMN de TH (300 MHz, CDC13) δ 7,21 (s, 1H) , 7,08 (s, 1H), 7,05 (s, 1H) , 5,70 (d, Jh-f = 54 Hz, 2H) , 5,12 (d, J= 5 Hz, 1H) , 3,80-4,35 (m, 2H) , 3,50 (d, J= 5 Hz, 1H) , 1,26 (t, J= 7 Hz, 3H) .
(v) Ph (3-C1) (5-OCH2F)- (R, S) CH (OH) C (O) OH A uma solução de Ph(3-C1) (5-OCH2F)-(R, S)CH(OH)C(O)OEt (1,8 g, 6,8 mmol; ver passo (iv) acima) em H20:THF (30 mL, 1:2) a 0 °C sob azoto foi adicionado hidróxido de lítio mono-hidratado (0,40 g, 10,3 mmol). A mistura foi agitada, a 0 °C, durante 2 h. A mistura reaccional foi concentrada in vacuo e partilhada com H20 (5 mL) e Et20 (2 χ 20 mL) . A camada aquosa foi acidificada cuidadosamente com HC1 0,2 N a 0 °C e extraída com AcOEt (3 χ 30 mL) . Os orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-titulo (1,4 g, 87%) como um óleo incolor o qual solidificou num sólido branco após repouso.
Rf= 0,43 (CHCI3:MeOH:Et3N 6:2:1). RMN de ΤΗ (300 MHz, CD3OD) δ 7,24 (s, 1H) , 7,17 (s, 1H), 7,07 (s, 1H) , 5,78 (d, JH-f = 54 Hz, 2H) , 5,13 (s, 1H) . 112 (vi) Ph(3-C1)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH (a) e Ph(3-Cl)(5 OCH2F)-(S)CH(OAc)C(O)OH (b)
Uma mistura de Ph (3-C1) (5-OCH2F) - (R, S) CH (OH) C (O) OH (3,2 g, 13,9 mmol; ver passo (v) acima) e Lipase PS "Amano" (1,9 g) em acetato de vinilo (150 mL) e MTBE (150 mL) foi aquecida a 70 °C sob uma atmosfera de azoto durante 3 d. A mistura reaccional foi arrefecida, filtrada através de Celite® e o bolo de filtração lavado com AcOEt. O filtrado foi concentrado in vácuo e submetido a cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com CHCl3:MeOH:Et3N (15:1:0,5) para proporcionar o sal de trietilamina do composto em sub-título (a) (0,50 g, 21%) que foi utilizado sem neutralização. Além disso, foi obtido o sal de trietilamina do composto em sub-título (b) (0,46 g, 20%).
Dados para o Composto em Sub-título (a):
Rf= 0,19 (CHC13:MeOH:Et3N 15:1:0,5) RMN de ΤΗ (300 MHz, CD3OD) δ 7,26 (s, 1H) , 7,18 (s, 1H) , 6,97 (s, 1H), 5,74 (d, Jh-f = 54 Hz, 2H) , 4,81 (s, 1H) , 3,17 (q, J = 7 Hz, 6H), 1,28 (t, J= 1 Hz, 9H).
Dados para o Composto em Sub-título (b)
Rf = 0,33 (CHCI3:MeOH:Et3N 15:1:0,5) 113 RMN de XH (300 MHz, CD3OD) δ 7, 28 (S , 1H), 7,19 (S, 1H), 7,09 (s, 1H) , 5, 76 (d, Jh-f = 54 Hz, 2H) , 5 ,75 (s, 1H), 3,17 (q, J = 7 Hz, 6H) , 2, 16 (s, 3H), 1,28 (t , J = 7 Hz, 9H). (vii) Ph (3-C1) (5-QCH2F) - (.R) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (Teoc) A uma solução do sal de trietilamina de Ph(3-Cl) (5-0CH2F)-(R)CH(OH)C(0)OH (0,50 g, 1,50 mmol; ver passo (vi) acima) e HAze-Pab(Teoc) *HC1 (0,87 g, 1,90 mmol) em DMF seco (15 mL) sob azoto a 0 °C foi adicionado PyBOP (0,85 g, 2,60 mmol) e DIPEA (0,48 g, 3,70 mmol). A reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada, de um dia para o outro. A mistura reaccional foi concentrada in vacuo e submetida a cromatografia flash duas vezes sobre sílica gel, eluindo primeiro com CHCl3:EtOH (9:1) e, depois, com AcOEt:EtOH (20:1) para proporcionar o composto em sub-título (0,23 g, 26%) como uma espuma quebradiça branca.
P.f.: 88-92 °C
Rf= 0,61 (CHC13:EtOH 9:1) RMN de XH (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7, 81 (d, J = 8 Hz, 2H), 7, 40-7, 42 (m, 2H), 7,06-7,23 (m, 3H) , 5, 76 (d, Jh-f = 51 Hz, 2H) , 5,10-5,16 e 4, 77-4, 83 (m, 2H) , 3, 80- 4, 49 (m, 6H) , 2,30-2,53 (m, 2H), 1,08 (t, J = 7 Hz, 2H), 0, 08 (s, APCI-MS (M + 1) = 593 m/z
(viii) Ph(3-C1)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA 114
Ph (3-C1) (5-OCH2F) - (f?) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (Teoc) (0,051 1 g, 0,086 iranol; ver passo (vii) acima) foi dissolvido em 3 mL de TFA e deixado a reagir durante 20 min. 0 TFA foi evaporado e o resíduo foi liofilizado de água/acetonitrilo. 0 produto era 95% puro com 5% de material desfluorometilado. As tentativas para o purificar por RPLC preparativa com CH3CN:NH4OAc 0,1 M falharam e o material, parcialmente como um acetato, foi dissolvido em 5 mL de TFA, evaporado e liofilizado para produzir 26 mg (51%) do composto em título como o seu sal de TFA. Pureza: 95%. RMN de 1H (600 MHz; CD3OD) rotâmeros: δ 7,8-7,7 (m, 2H) , 7,6-7,5 (m, 2H) , 7,21 (s, 1H, rotâmero principal), 7,17 (s, 1H, rotâmero secundário), 7,13 (s, 1H, rotâmero principal), 7,09 (s, 1H, rotâmero secundário), 7,07 (m, 1H, rotâmero principal), 7,04 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,73 (d, 2H) , 5,18 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,16 (s, 1H, rotâmero principal), 5,09 (s, 1H, rotâmero secundário), 4, 78 (m, 1H, rotâmero secundário), 4,56 (d, 1H, rotâmero principal), 4,50 (d, 1H, rotâmero secundário), 4,46 (d, 1H, rotâmero secundário), 4,45 (d, 1H, rotâmero principal), 4,35 (m, 1H, rotâmero principal), 4,14 (m, 1H, rotâmero principal), 4,05 (m, 1H, rotâmero secundário), 3,97 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,68 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,52 (m, 1H, rotâmero principal), 2,28 (m, 1H, rotâmero principal), 2,19 (m, 1H, rotâmero secundário). RMN de 13C (150 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, rotâmeros) δ 173,9, 173,3, 172,9, 168,2. ESI-MS+: (M+l) = 449 (m/z) 115
Exemplo 20
Ph(3-C1)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) A uma solução do sal de trietilamina de Ph(3-Cl) (5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,60 g, 1,80 mmol; ver Exemplo 19(vi)) e HAze-Pab (OMe) »2HC1 (0,79 g, 2,30 mmol) em DMF (15 mL) sob azoto a 0 °C foi adicionado PyBOP (1,04 g, 1,90 mmol) e DIPEA (0,58 g, 4,50 mmol). A reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada, de um dia para o outro. A mistura reaccional foi concentrada in vacuo e submetida três vezes a cromatografia flash sobre sílica gel, eluindo primeiro com CHCl3:EtOH (9:1) e, depois, duas vezes com AcOEt:EtOH (20:1) para proporcionar o composto em título (0,22 g, 26%) como uma espuma quebradiça branca.
P.f.: 66-70 °C
Rf = 0,45 (CHCI3:EtOH 9:1) RMN de ΤΗ (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros ) δ 7,59 . (d, J = 8 Hz, 2 H) , 7,32 (d, J = 7 Hz, 2H) 1, 7,06-7,23 (m, 3 H) , 5, 75 (s, <7h-f = 54 Hz, 1H), 5,10-5,16 e 4,78-4,84 (m, 2H) , 4,11-4,45 (m, 4H) , 3,80 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H) . RMN de 13C (150 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, rotâmeros) δ 173,0, 170,8, 170,7, 152,5. APCI-MS:(M + 1) = 479 m/z 116
Exemplo 21
Ph(3-C1)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) Metanossulfonato de (2-monofluoroetilo) A uma solução, mantida sob agitação magnética, de 2-fluoroetanol (5,0 g, 78,0 mmol) em CH2CI2 (90 mL) sob azoto a 0 °C foi adicionada trietilamina (23,7 g, 234 mmol) e cloreto de metanossulfonilo (10,7 g, 93,7 mmol). A mistura foi agitada, a 0 °C, durante 1,5 h, diluída com CH2CI2 (100 mL) e lavada com HC1 2 N (100 mL) . A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (50 mL) e os extractos orgânicos reunidos lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (75 mL), secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (9,7 g, 88%) como um óleo amarelo o qual foi utilizado sem mais purificação. RMN de ΤΗ (300 MHz, CDCI3) δ 4,76 (t, J = 4 Hz, 1H) , 4, 6 (t, J = 4 Hz , 1H), 4,52 (t, J = 4 Hz, 1H) , 4,43 (t, J = 4 Hz 1H) , 3,09 (s, 3H) . (ii) 3-Cloro-5-monofluoroetoxibenzaldeído A uma solução de 3-cloro-5-hidroxibenzaldeído (8,2 g, 52,5 mmol, ver Exemplo l(ii) acima) e carbonato de potássio (9,4 g, 68,2 mmol) em DMF (10 mL) sob azoto foi adicionada uma solução de metanossulfonato de (2-monofluoroetilo) (9,7 g, 68,2 mmol; ver passo (i) acima) em DMF (120 mL) , gota a gota, à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida até 100 °C, durante 117 5 h e, em seguida, agitada, de um dia para o outro, à temperatura ambiente. A reacção foi arrefecida até 0 °C, vertida para HC1 2 N gelado e extraída com AcOEt. Os extractos orgânicos reunidos foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo. 0 óleo castanho foi cromatografado sobre sílica gel eluindo com Hex:AcOEt (4:1) para proporcionar o composto em sub-título (7,6 g, 71%) como um óleo amarelo. RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 9, 92 (s, 1H) , 7,48 (s, 1H) 7, 32 (s, 1H) , 7,21 (s, 1H), 4, 87 (t, J = 4 Hz, 1H), 4,71 (t J = 3 Hz, 1H) 4,33 (t, J = 3 Hz, 1H), 4, r 2 4 (t, J - = 3 Hz, 1H) φ
(iii) Ph (3-C1) (5-OCH2CH2F) - (R, 5JCH(OTMS)CN A uma solução de 3-cloro-5-monofluoroetoxibenzaldeído (7,6 g, 37,5 mmol; ver passo (ii) acima) e iodeto de zinco (3,0 g, 9,38 mmol) em CH2C12 (310 mL) foi adicionado cianeto de trimetilsililo (7,4 g, 75,0 mmol), gota a gota, a 0 °C sob azoto. A mistura foi agitada, a 0 °C, durante 3 h e à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A reacção foi diluída com H20 (300 mL) , a camada orgânica foi separada, seca (Na2S04) , filtrada e concentrada in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (10,6 g, 94%) como um óleo castanho que foi utilizado sem mais purificação ou caracterização.
(iv) Ph (3-C1) (5-OCH2CH2F) - (R, S) CH (OH) C (O) OH
Foi adicionado ácido clorídrico concentrado (100 mL) a Ph(3-C1) (5-OCH2CH2F)-(R, S) CH(OTMS)CN (10,6 g, 5,8 mmol; ver passo 118 (iii) acima) e a solução agitada, a 100 °C, durante 3 h. Depois de arrefecer até à temperatura ambiente, a reacção foi ainda arrefecida até 0 °C, lentamente basificada com NaOH 3 N (~300 mL) e lavada com Et20 (3 χ 200 mL) . A camada aquosa foi acidificada com HC1 2 N (80 mL) e extraída com AcOEt (3 χ 300 mL) . Os extractos de AcOEt reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (8,6 g, 98%) como um sólido amarelo pálido que foi utilizado sem mais purificação.
Rf = 0,28 (CHC13:MeOH:NH4OH concentrado 90:8:2) RMN de 1R (300 MHz, CD3OD) δ 7,09 (s, 1H) , 7,02 (s, 1H) , 6,93 (s, 1H), 5,11 (s, 1H) , 4,77-4,81 (m, 1H) , 4, 62-4, 65 (m, 1H), 4,25-4,28 (m, 1H), 4,15-4,18 (m, 1H). (v) Ph(3-C1)(5-OCH2CH2F)-(S)CH(OAc)C(O)OH (a) e Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F) - (R) CH (OH) C (0) OH (b)
Uma solução de Ph (3-C1) (5-OCH2CH2F) - (R, S) CH (OH) C (O) OH (8,6 g, 34,5 mmol; ver passo (iv) acima) e Lipase PS "Amano" (4,0 g) em acetato de vinilo (250 mL) e MTBE (250 mL) foi aquecida a 70 °C sob azoto durante 3 d. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e a enzima removida por filtração através de Celite®. 0 bolo de filtração foi lavado com AcOEt e o filtrado concentrado in vacuo. A cromatografia sobre sílica gel eluindo com CHCI3: MeOH: Et3N (90:8:2) proporcionou o sal de trietilamina do composto em sub-título (a) como um óleo amarelo. Além disso, foi obtido o sal de trietilamina do composto em subtítulo (b) (4,0 g) . O sal do composto em sub-título (b) foi dissolvido em H20 (250 mL) , acidificado com HC1 2 N e extraído 119 com AcOEt (3 χ 200 mL) . Os extractos orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para produzir o composto em sub-título (b) (2,8 g, 32%) como um óleo amarelo.
Dados para o Composto em Sub-título (b):
Rf = 0,28 (CHC13:MeOH:NH4OH concentrado 90:8:2) RMN de ΤΗ (300 MHz, CD3OD) δ 7, 09 (s, 1H) , 7, 02 (s, 1H) 6,93 (s, 1H), 5, 11 (S, 1H) , 4, 77-4, 81 (m, 1H) , 4,62- -4,65 (m 1H) , 4,25-4,28 (m, 1H ), 4 ,15-4, 18 (m, 1H) φ (vi) Ph(3-C1) (5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) A uma solução de Ph(3-Cl) (5-OCH2CH2F) - (R) CH (OH) C (O) OH (940 mg, 3,78 mmol; ver passo (v) acima) em DMF (30 mL) sob azotc ) a 0 °C, foi adicionado HAze-Pab(Teoc) »HC1 (2,21 g, 1—1 CT> mmol) , PyBOP (2,16 g, 4,15 mmol) e DIPEA (1,22 g, 9, 45 mmol) . A reacção foi agitada, a 0 °C, durante 2 h e, em seguida, à temperatura ambiente durante 4 h. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo cromatografado duas vezes sobre sílica gel, eluindo primeiro com CHCl3:EtOH (15:1) e, depois, com AcOEt:EtOH (20:1) para proporcionar o composto em sub-título (450 mg, 20%) como uma espuma quebradiça branca.
P.f.: 80-88 °C
Rf = 0,60 (CHCI3:EtOH 10:1) RMN de ΤΗ (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7,79 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 8 Hz, 2H) , 7, 05-7, 08 (m, 1H) , 120 6, 93-6, 99 (m, 2H) , 5,08-5,13 (m, 1H) , 4, 75-4, 80 (m, 2H) , 4,60-4,68 (m, 1H), 3,95-4, 55 (m, 8H) , 2,10-2,75 (m, 2H) , 1,05-1,11 (m, 2H) , 0,08 (s, 9H) . APCI-MS: (M + 1) = 607 m/z.
(vii) Ph (3-C1) (5-OCH2CH2F) - (.R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab x TFA
Ph(3-C1) (5-OCH2CH2F) - (R) CH (OH) C (O)-Aze-Pab(Teoc) (0,357 g, 0,589 mmol; ver passo (vi) acima), foi dissolvido em 10 mL de TFA e deixado a reagir durante 40 min. O TFA foi evaporado e o resíduo foi liofilizado de água/acetonitrilo para produzir 0,33 g (93%) do composto em título como o seu sal de TFA. RMN de 1H (600 MHz; CD3OD) rotâmeros: δ 7,8-7,7 (m, 2H) , 7,54 (d, 2H) , 7,08 (s, 1H, rotâmero principal), 7,04 (s, 1H, rotâmero secundário), 6,99 (s, 1H, rotâmero principal), 6,95 (s, 1H) , 6,92 (s, 1H, rotâmero secundário), 5,18 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,14 (s, 1H, rotâmero principal), 5,08 (s, 1H, rotâmero secundário), 4,80 (m, 1H, rotâmero principal), 4,73 (m, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,35 (m, 1H, rotâmero principal), 4,21 (dupleto de multipletos, 2H), 4,12 (m, 1H, rotâmero principal), 4,06 (m, 1H, rotâmero secundário), 3,99 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,69 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,53 (m, 1H, rotâmero principal), 2,29 (m, 1H, rotâmero principal), 2,14 (m, 1H, rotâmero secundário). RMN de 13C (150 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina) δ 172,8, 172,1, 167,4. ESI-MS+: (M+l) = 463 (m/z) 121
Exemplo 22
Ph (3-C1) (5-OCH2CH?F) - (R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OMe) A uma solução de Ph (3-C1) (5-OCH2CH2F) - (R) CH (OH) C (O) OH (818 mg, 3,29 mmol; ver Exemplo 21(v) acima) em DMF (30 mL) sob azoto a 0 °C foi adicionado HAze-Pab(OMe) *2HC1 (1,43 g, 4,27 mmol), PyBOP (1,89 g, 3,68 mmol) e DIPEA (1,06 g, 8,23 mmol) . A reacção foi agitada, a 0 °C, durante 2 h e, em seguida, à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A mistura foi concentrada in vacuo e o residuo cromatografado duas vezes sobre sílica gel, eluindo primeiro com CHCl3:EtOH (15:1) e, depois, com AcOEt:EtOH (20:1) para proporcionar o composto em título (880 mg, 54%) como uma espuma quebradiça branca.
P . f.: 65-72 °C
Rf = 0,60 (CHC13:EtOH 10:1) , CD30D, mistura complexa de rotâmeros) δ Hz, 2H) , 7,34 (d, J = 7 Hz , 2H), 7,05-7,08 (m, 1H) , 5,08-5,13 (m, ÍH] I, 4, 77-4, 82 (m, 1H), 3,99-4,51 (m, 7H), 3,82 (s, 3H) , RMN de 3H (300 MHz 7,58-7,60 (d, J = 8 (m, 2H), 6, 95-6,99 1H), 4,60-4,68 (m, 2,10-2,75 (m, 2H) . RMN de 13C (150 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina) δ 173,3, 170,8, 152,5. APCI-MS: (M + 1) = 493 m/z. 122
Exemplo 23
Ph (3-C1) . (5-OCH (CH2F) 2) - (-R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab χ TFA (i) Metanossulfonato de 1,3-difluoroisopropilo A uma solução, mantida sob agitação magnética, de 1,3-difluoro-2-propanol (7,0 g, 72,8 mmol) em CH2CI2 (100 mL) sob azoto a 0 °C foi adicionado trietilamina (22,1 g, 219 mmol) e cloreto de metanossulfonilo (10,0 g, 87,4 mmol). A mistura foi agitada, a 0 °C, durante 3 h. A mistura foi lavada com HC1 2 N (150 mL) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (200 mL) e os extractos orgânicos reunidos lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (11,5 g, 91%) como um óleo amarelo o qual foi utilizado sem mais purificação. RMN de 1H (300 MHz, CDC13) δ 4, 97-5, 08 (m, 1H) , 4,75-4,77 (m, 2H), 4,59-4,61 (m, 2H), 3,12 (s, 3H).
(ii) Ph (3-C1) (5-OCH (CH2F)2)CHO
A uma solução de 3-cloro-5-hidroxibenzaldeído (8,0 g, 50,7 mmol; ver Exemplo l(ii) acima) e carbonato de potássio (9,1 g, 66,0 mmol) em DMF (75 mL) sob azoto foi adicionada uma solução de metanossulfonato de 1,3-difluoroisopropilo (11,5 g, 66,0 mmol; ver passo (i) acima) em DMF (75 mL) , gota a gota, à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida até 110 °C, durante 18 h. A reacção foi arrefecida até 0 °C, vertida para HC1 2 N 123 gelado (200 mL) e extraída com AcOEt (3 χ 250 mL) . Os extractos orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo. O óleo castanho foi cromatografado sobre sílica gel eluindo com Hex:AcOEt (4:1) para proporcionar o composto em sub- título (4,4 g, 37%) como um óleo amarelo. RMN de (300 MHz , CDCI3) δ 9, 92 (s, 1H) , 7,51 (s, 1H) 7,36 (s, 1H) , 7, 26 (S, 1H), 4, 70-4,89 (m, 3 H) , 4,63-4,68 (m 2H) .
(iii) Ph(3-C1) (5-OCH(CH2F) 2)~(R, S)CH(OTMS)CN A uma solução de Ph(3-Cl) (5-OCH(CH2F) 2)CHO (4,4 g, 18,7 mmol; ver passo (ii) acima) e iodeto de zinco (1,5 g, 4,67 mmol) em CH2CI2 (200 mL) a 0 °C sob azoto foi adicionado cianeto de trimetilsililo (3,7 g, 37,3 mmol) gota a gota. A mistura foi agitada, a 0 °C, durante 3 h e, de um dia para o outro, à temperatura ambiente, em seguida, diluída com H20 (200 mL) . A camada orgânica foi separada, seca (Na2S04) , filtrada e concentrada in vacuo para proporcionar o composto em subtítulo (5,5 g, 87%) como um óleo castanho que foi utilizado sem mais purificação. RMN de (300 MHz, CDCI3) δ 7,12 (s, 1H) , 7, 00 (s, 2H) 5, 42 9H) . (s, 1H), 4,70-4,80 (m, 3H), 4,59-4,64 (m, 2H) , 0,26 (s 124
(iv) Ph(3-C1)(5-OCH(CH2F)2)-(R,S)CH(OH)C(0)OH
Foi adicionado ácido clorídrico concentrado (50 mL) a Ph(3-Cl) (5-OCH(CH2F)2)-(R,S)CH(OTMS)CN (5,5 g, 16,3 iranol; ver passo (iii) acima) e a solução agitada, a 100 °C, durante 1,5 h. Depois de arrefecer até à temperatura ambiente, a reacção foi ainda arrefecida até 0 °C, lentamente basificada com NaOH 3N (~200 mL) e lavada com Et20 (3 x 200 mL) . A camada aquosa foi acidificada com HC1 2 N (75 mL) e extraída com AcOEt (3 x 200 mL) . Os extractos de AcOEt reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (4,6 g, 100%) como um óleo castanho que foi utilizado sem mais purificação. RMN de ΤΗ (300 MHz, CD3OD) δ 7, 14 (s, 1H) , 7,08 (s, ffi 1—1 7,02 (s, 1H), 5,12 (s, 1H), 4, 70- O <D 1 (m, 3H) , 4,52-4,67 (m, 2H) . (v) Ph (3-C1) (5-0CH (CH2F) 2) - (5) CH (OAc) C (O) OH_(a)_e
Ph(3-C1)(5-0CH(CH2F)2)-(R)CH(0H)C(0)0H (b)
Uma solução de Ph(3-C1) (5-OCH(CH2F) 2)-(R,S)CH(OH)C(O) OH (4,6 g, 16,4 mmol; ver passo (iv) acima) e Lipase PS "Amano" (3,0 g) em acetato de vinilo (150 mL) e MTBE (150 mL) foi aquecida a 70 °C sob azoto durante 2,5 d. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente, a enzima removida por filtração através de Celite®. O bolo de filtração foi lavado com AcOEt e o filtrado concentrado in vacuo. A cromatografia sobre sílica gel eluindo com CHC13:MeOH:Et 3N (90:8:2) proporcionou o sal de trietilamina do composto em sub-título (a) como um óleo amarelo. Além disso foi obtido o sal de trietilamina do composto 125 em sub-título (b) (2,2 g) e o sal foi dissolvido em H20 ( 100 mL) , acidificado com HC1 2 N e extraído com AcOEt (3 χ 200 mL) . Os extractos orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para produzir o composto em sub-título (b) (1,4 g, 29%) como um óleo amarelo.
Dados para o Composto em Sub-título (b) : RMN de ΧΗ (300 MHz, CD30D) δ 7, 14 (s, \—1 7, 08 (s, 1H) 7,02 (s, 1H), 5,12 (S, 1H), 4, 70- O Oh 1 (m, 3H) , 4, 52- -4,67 (m 2H) . (vi) Ph (3-C1) (5-OCH (CH2F) 2) - (.R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) A uma solução de Ph (3-C1) (5-OCH (CH2F) 2) - (R) CH (OH) C (O) OH (824 mg, 2,94 inmol; ver passo (v) acima) em DMF (30 mL) sob azoto a 0 °C foi adicionado HAze-Pab (Teoc) »HC1 (1,71 g, 3,81 mmol), PyBOP (1,68 g, 3,23 mmol) e DIPEA (949 mg, 7,34 mmol) . A reacção foi agitada, a 0 °C, durante 2 h e, em seguida, à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo cromatografado duas vezes sobre sílica gel, eluindo primeiro com CHCl3:EtOH (15:1) e, depois, com AcOEt:EtOH (20:1) para proporcionar o composto em sub-título (720 mg, 38%) como uma espuma quebradiça branca.
P.f.: 78-84 °C
Rf = 0,62 (CHC13:EtOH 10:1) 126 RMN de ΧΗ (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7,79 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 8 Hz, 2H) , 7,00-7,12 (m, 3H) , 5,08-5,20 (m, 1H), 3,97-4,80 (m, 12H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H). APCI-MS: (M + 1) = 639 m/z.
(vii) Ph(3-C1) (5-OCH(CH2F) 2)~(R) CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph (3-C1) (5-OCH (CH2F) 2) - (-R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (0,129 g, 0, 202 iranol; ver passo (vi) acima) foi dissolvido em 3 mL de TFA e deixado a reagir durante 20 min. O TFA foi evaporado e o resíduo foi liofilizado de água/acetonitrilo para produzir 0, 123 g (100%) do composto em título como 0 seu sal de TFA. RMN de 1H (400 MHz; CD3OD) rotâmeros: δ 7,8· -7, 7 (m, 2H) , 7,55 (d, 2H) , 7,2-7,0 (m, 3H) , 5,18 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,15 (s, 1H, rotâmero principal), 5,08 (s, 1H, rotâmero secundário), 4,80 (m, 1H, rotâmero principal parcialmente escondido pelo pico do CD3OH) , 4,75-4,4 (m, 7H) , 4,38 (m, 1H, rotâmero principal), 4,15 (m, 1H, rotâmero principal), 4,1-3,9 (m, 2H, 2 sinais do rotâmero secundário), 2,70 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,53 (m, 1H, rotâmero principal), 2,30 (m, 1H, rotâmero principal), 2,15 (m, 1H, rotâmero secundário). RMN de 13C (100 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, rotâmeros) δ 172,9, 172,6, 172,2, 171,7, 167,1. ESI-MS+: (M+l) = 495 (m/z) 127
Exemplo 24
Ph (3-C1) (5-OCH (CH?F) 2) - (-R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OMe) A uma solução de Ph (3-C1) (5-OCH (CH2F) 2) - (R) CH (OH) C (0) OH (513 mg, 1,83 mmol; ver Exemplo 23(v) acima) em DMF (30 mL) sob azoto a 0 °C foi adicionado HAze-Pab (OMe) *2HC1 (797 mg, 2,38 mmol), PyBOP (1,04 g, 2,01 mmol) e DIPEA (591 mg, 4,57 mmol) . A reacção foi agitada, a 0 °C, durante 2 h e, em seguida, à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo cromatografado duas vezes sobre sílica gel, eluindo primeiro com CHCl3:EtOH (15:1) e, depois, com AcOEt:EtOH (20:1) para proporcionar o composto em título (370 mg, 39%) como uma espuma quebradiça branca.
P.f.: 58-63 °C
Rf = 0,66 (CHC13:EtOH 10:1) RMN de ΤΗ (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7,58· 7,60 (d, J = 8 Hz, 2H) , 7,34 (d, J = 8 Hz, 2H) , 7, 00- 7,12 (m 3H) , 5, 08' -5,20 (m, 1H) , 4,65-4,82 (m, 3H) , 4,28- 4,65 (m, 5H) 3, 92 -4, 18 (m, 2H) , 3,82 (s 3H), 2, 10-2,75 (m, 2H) . RMN de 13C (150 MHz; CD3OD): (carbonos de carbonilo e/ou amidina) δ 173,2, 170,8, 152,5. APCI-MS: (M + 1) = 525 m/z. 128
Exemplo 25
Ph(3-F) (5-OCHF2) ~(R) CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) l-Bromo-3-fluoro-5-benziloxibenzeno
Foi adicionado hidreto de sódio (dispersão em óleo a 60%, 24,0 g, 0,48 mol) em porções a uma solução, mantida sob agitação, de álcool benzílico anidro (64,5 g, 0,60 mol) em THF (1,0 L) . Depois da mistura ter sido agitada durante 1 h, foi adicionada, gota a gota, uma solução de l-bromo-3,5-difluorobenzeno (76,8 g, 0,40 mmol) em THF (100 mL) ao longo de um periodo de 1 h. A reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 2 d. Foi adicionado água (400 mL) e o THF foi removido in vacuo. A camada aquosa foi extraída com hexano (3 χ 150 mL) . Os extractos orgânicos reunidos foram lavados com NaOH 2 N (2 χ 100 mL), em seguida, secos (Na2SC>4) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (110,7 g, 98%) como um óleo amarelo claro que foi utilizado sem mais purificação. is l-h II 0 > (Hex) RMN de 2Η (300 MHz, CDCI3) δ 7, 36-7, 41 (m, 5H), 6, 1—1 co 1H) , 6,87 (d, 1 II co N 1—1 ,63 (d, Jh-f = 10 Hz, 1H), 5,03 (S, 2H) . 129 (ii) 3-Bromo-5-fluorofenol A uma solução de l-bromo-3-fluoro-5-benziloxibenzeno (110,0 g, 0,39 mol; ver passo (i) acima) e N, IV-dimetilanilina (474,0 g, 3,92 mol) em CH2CI2 anidro (1,0 L) a 0 °C foi adicionado cloreto de alumínio (156,0 g, 1,17 mol). Após 10 min, o banho de gelo foi removido e a agitação continuou durante 2 h.
A reacção foi desactivada pela adição cuidadosa de HC1 3 N (600 mL) . As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (2 x 150 mL). Os extractos orgânicos reunidos foram lavados com HC1 2 N (250 mL) e H2O (3 χ 250 mL). À camada orgânica foi adicionado KOH a 15% (500 mL) e as camadas foram
separadas. A camada orgânica foi ainda extraída com KOH 2 N (2 χ 70 mL). As camadas aquosas reunidas foram lavadas com CH2CI2 (3 χ 100 mL) e, em seguida, acidificada com HC1 4 N. A camada aquosa foi extraída com Et20 (3 χ 125 mL) , em seguida, os extractos de Et20 reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (69,0 g, 92%) como um óleo castanho que foi utilizado sem mais purificação.
P.f.: 33-35 °C
Rf= 0,25 (CHCI3) RMN de (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,38 (s, 1H) , 6,9 0 (dd <7h-f = 11 Hz, J = 2 Hz, 1H), 6,81 (s, 1H) , 6,59 (dt, N 1—1 \—1 II Em 1 J = 2 Hz, . 1H) • APCI -MS : (Μ—1 ) = 189 m/z 130 (iii) l-Bromo-3-fluoro-5-difluorometoxibenzeno
Uma mistura de 3-bromo-5-fluorofenol (6,1 g, 31,0 mmol; ver passo (ii) acima) e clorodifluorometano (13,0 g, 150,0 mmol) em i-PrOH (100 mL) e KOH a 30% (80 mL) foi aquecida num balão selado durante 18 h a 80-85 °C. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi concentrada in vacuo para proporcionar um óleo incolor. A camada aquosa foi extraída com Et20 (3 x 30 mL) . O óleo em bruto e os extractos orgânicos reunidos foram lavados com NaOH 2 N (3 χ 30 mL) e H2O (3 x 30 mL) . Os orgânicos foram então secos (Na2S04) , filtrados através de um pequeno tampão de sílica gel e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (6,1 g, 79%) como um óleo incolor que foi utilizado sem mais purificação. RMN de ΧΗ (300 MHz, CDC13) δ 7,11-7,14 (m, 2H) , 6,84 (dt, J= 9 Hz, J= 2 Hz, 1H) , 6,50 (t, JE-f = 72 Hz, 1H) . (iv) 1-Fluoro-3-difluorometoxi-5-vinilbenzeno
Foi adicionado tri(butil)vinilestanano (7,0 g, 22,2 mmol) a uma suspensão de l-bromo-3-fluoro-5-difluorometoxibenzeno (4,9 g, 20,2 mmol; ver passo (iii) acima), diclorobis(trifenilfosfina)paládio(II) (1,42 g, 2,02 mmol) e cloreto de lítio anidro (0,90 g, 20,2 mmol) em THF (40 mL) sob azoto a 65 °C e a mistura foi agitada durante 5 h. A mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado NaOH 1 N (90 mL) . A mistura bifásica foi vigorosamente agitada durante 1 h, em seguida, as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com Et20 (3 x 70 mL) . As camadas orgânicas reunidas 131
foram lavadas com NaOH 2 N (2 χ 40 mL) e H20 (40 mL) , em seguida, secas (Na2S04) , filtradas e concentradas in vacuo. A cromatografia flash sobre silica gel eluindo com hexano proporcionou o composto em sub-titulo (2,2 g, 57%) como um óleo incolor.
Rf = 0,47 (Hex) RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 6, 93-6, 99 (m, 2H) , 6, 73-6, 78 (m, 1H), 6,67 (dd, J = 18 Hz, J= 11 Hz, 1H) , 6,51 (t, JH-f = 73 Hz, 1H), 5,77 (d, J = 18 Hz, 1H), 5,36 (d, J = 11 Hz, 1H).
(v) Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OH 2-Metil-2-propanol (140 mL) , H20 (140 mL) e AD-mix-β (39,2 g) foram combinadas em conjunto e arrefecidos até 0 °C. Foi adicionado, de uma única vez, l-Fluoro-3-difluorometoxi-5-vinilbenzeno (5,0 g, 26,4 mmol; ver passo (iv) acima) dissolvido numa pequena quantidade de 2-metil-2-propanol e a pasta heterogénea foi vigorosamente agitada, a 0 °C até a TLC revelar a ausência do material de partida. A reacção foi desactivada a 0 °C através da adição de sulfito de sódio (42,0 g) e, em seguida, aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 60 min. A mistura reaccional foi extraída com Et20 (3 χ 120 mL) . Os extractos orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo. A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com CHCl3:AcOEt (3:2) proporcionou o composto em subtítulo (5,8 g, 98%) como um óleo incolor.
Rf = 0,41 (CHC13:AcOEt 3:2) 132 RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 6, 96-6, 99 (m, 2H) , 6, 77-6, 82 (m, 1H), 6,51 (t, Jh-f = 73 Hz, 1H) , 4, 79-4, 85 (m, 1H) , 3, 76-3, 84 (m, 1H), 3,58-3,66 (m, 1H), 2,66 (d, J = 3 Hz, 1H), 2,00 (t, J = 6 Hz, 1H).
Análise por HPLC: 89,2%, >99% ee, Coluna ChiralPak AD (fase móvel, Hex:EtOH 95:5).
(vi) Ph(3-F)(5-QCHF?)~{R)CH(OH)CH2OTBS
Uma solução de Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OH (5,5 g, 24,7 mmol; ver passo (v) acima), 4-(dimetilamino)piridina (121 mg, 1,0 mmol) e trietilamina (3,0 g, 29,6 mmol) em CH2CI2 anidro (100 mL) foi arrefecida até 0 °C. Foi adicionada, gota a gota, uma solução 1,0 M de cloreto de terc-butildimetilsililo em CH2CI2 (26,0 mL, 26,0 mmol) e a mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada, de um dia para o outro. Foi adicionada solução saturada de cloreto de amónio (60 mL) e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com solução saturada de cloreto de amónio (60 mL) e H20 (2 x 35 mL), em seguida, seca (Na2S04), filtrada e concentrada in vacuo. A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com CHCl3:Hex (3:1) proporcionou o composto em sub-título (7,9 g, 85%) como um óleo amarelo.
Rf= 0, 47 (CHCI3:Hex 3:1) RMN de 2h (300 MHz , CDCI3) δ 6,95-6,98 (m, 2H) , 1H) , 6, 51 II -p 73 Hz, 1H), 4,71-4,74 (m, 1H) 1H) , 3, 48- -3,54 (m, 1H), 2,99 (s 1, 1H), 0,91 (s 3H) , 0, 00 (s, 3H). 6, 76-6, 79 (m, 3, 75-3,80 (m, 9H) , 0,05 (s, 133
(vii) Ph(3-F)(5-OCHF2)-(^)CH(OMEM)CH2OTBS A uma solução de Ph(3-F) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OTBS (7,9 g, 0,51 mmol; ver passo (vi) acima) e DIPEA (4,9 g, 48,1 mmol) em CH2C12 anidro (50 mL) a 0 °C sob azoto foi adicionado, gota a gota, cloreto de 2-metoxietoximetilo (6,6 g, 48,1 mmol). A mistura foi agitada durante 24 h. Foi adicionada solução saturada de cloreto de amónio (70 mL) e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com solução saturada de cloreto de amónio (70 mL) e H20 (3 x 60 mL) , em seguida, seca (Na2S04), filtrada e concentrada in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (8,8 g, 99%) como um óleo amarelo que foi utilizado sem mais purificação.
Rf = o, 41 (CHC13:AcOEt 4:1 ) RMN de ΧΗ (300 MHz, CDC13) δ 7, 20 (s, 1H), 7, 06 (s, 1H) , 7, , 02 (s 1H) , 6, 50 (t, Jh-f = 73 Hz , 1H) , 4,79-4,81 (m, 1H) , 4,66- -4, . 68 (m 2H) , 3 ,47 -3,82 (m, 6H) , 3,36 (s, 3H), 0 , 85 (s, 9H) , 0, 01 (s 3H) , 0, 00 (s, 3H) .
(viii) Ph(3-F) (5-QCHF 2)-(R)CH(OMEM)CH2OH
A uma solução de Ph(3-F) (5-OCHF2) - (R) CH (OMEM) CH2OTBS (9,3 g, 21,9 mmol; ver passo (vii) acima) em THF (60 mL) , à temperatura ambiente foi adicionada uma solução 1,0 M de fluoreto de tetrabutilamónio em THF (70,0 mL, 70,0 mmol) e a mistura foi agitada, de um dia para o outro, sob azoto. A reacção foi concentrada in vacuo. O resíduo amarelo foi dissolvido em Et20 (100 mL) e hexano (100 mL) e lavado sucessivamente com solução saturada de cloreto de amónio (2 x 150 mL) e H20 (3 x 70 mL) . A 134 camada orgânica foi seca (Na2S04) , filtrada e concentrada in vacuo. A cromatografia flash sobre silica gel eluindo com Hex:AcOEt (1:1) proporcionou o composto em sub-titulo (4,2 g, 62%) como um óleo amarelo.
Rf = 0,42 (Hex:AcOEt 1:1) RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 6,91-6,95 (m, 2H) , 6,75-6,81 (m, 1H), 6,51 (t, Jk-F = 73 Hz, 1H) , 4, 80-4, 82 (m, 1H) , 4, 70-4, 74 (m, 2H), 3,88-3,93 (m, 1H) , 3,67-3,71 (m, 3H) , 3,53-3,56 (m, 2H) , 3,39 (s, 3H), 2,96-2,99 (m, 1H).
(ix) Ph(3-F)(5-QCHF2)-(R)CH(0MEM)C(0)0H
Uma solução de Ph(3-F) (5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OH (4,2 g, 13,4 mmol; ver passo (viii) acima) em acetona (100 mL) foi adicionada a uma solução aquosa de NaHCCh a 5% (35 mL) . Esta mistura heterogénea, mantida sob agitação magnética, foi arrefecida até 0 °C e foram adicionados brometo de potássio (159 mg, 1,3 mmol) e 2,2,6,6-tetrametil-l-piperidiniloxilo, radical livre (2,2 g, 14,1 mmol). Foi então adicionado hipoclorito de sódio (5,25%, 30 mL) , gota a gota, ao longo de um período de 20 min enquanto a mistura era vigorosamente agitada e mantida a 0 °C. Após 1 h, foram adicionados mais hipoclorito de sódio (30 mL) e solução de NaHC03 a 5% (35 mL) e a agitação continuou a 0 °C, durante 2 h. A acetona foi removida in vacuo. A camada aquosa foi lavada com Et20 (4 χ 40 mL) . A camada aquosa foi acidificada até pH 3,5 com ácido cítrico a 10% e extraída com AcOEt (4 χ 50 mL) . Os extractos de AcOEt reunidos foram sucessivamente lavados com H20 (4 χ 30 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (60 mL), em seguida, secos (Na2S04) , 135 filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (4,3 g, 98%) como um óleo incolor o qual foi utilizado sem mais purificação.
Rf = 0,74 (CHC13 : MeOH: Et3N 8,0:1,5:0,5) RMN de aH (300 MHz, acetona- •de) δ 7,16-7,18 (m, 2H) , 7, 16 (t Jh-f = 89 Hz, 1H), 7, 00-7,03 (m, 1H), 5,30 (s, 1H), 4, 88 (d J = 7 Hz, 1H), 4,80 (d, J = 7 Hz, 1H), 3,54-3,75 (m, 2H) 3,46-3,49 (m, 2H), 3,28 (s, 3H) . (x) Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc) A uma solução de Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH (1,1 g, 3,4 mmol; ver passo (ix) acima) em DMF (20 mL) sob azoto a 0 °C foi adicionado HAze-Pab(Teoc) *HC1 (2,0 g, 4,4 mmol), PyBOP (1,9 g, 3,7 mmol) e DIPEA (1,1 g, 8,4 mmol). A reacção foi agitada, a 0 °C, durante 2 h e, em seguida, à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo cromatografado duas vezes sobre sílica gel, eluindo primeiro com CHCl3:EtOH (15:1) e, depois, com AcOEt:EtOH (20:1) para proporcionar o composto em sub-título (1,3 g, 56%) como uma espuma quebradiça branca.
Rf = 0,65 (CHCI3:EtOH 15:1) RMN de ΤΗ (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7, 80- 7, 84 (m, 2H) , 7,40-7,46 (m, 2H) LO Oh <0 -7, 16 (m, 3H) , 6, , 92 e 6, 88 (t, Ju-F = 73 Hz, 1H), 5, 28 e 5, 08 (s, 1H), 5,18-5, 22 e 4, 70- 4, 78 (m, 1H) , 4,50-4, 75 (m, 1H) , 4, ,30-4,49 (m, 2H) , 136 4,21-4,26 (m, 3H) , 3, 97-4,08 (m, 1H) , 3,35-3,72 (m, 6H) , 3,30 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H) , 1,05-1,11 (m, 2H) , 0,08 (s, 9H) . (xi) Ph (3—F) (5-OCHF2) - (-R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc)
Uma mistura de Ph(3-F) (5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (590 mg, 0,87 mmol; ver passo (x) acima) e tetrabrometo de carbono (287 mg, 0,87 mmol) em 2-propanol (20 mL) foi aquecida a refluxo durante 1,5 h. A mistura foi concentrada in vácuo, em seguida, partilhada com H20 (50 mL) e
AcOEt (3 x 50 mL) . A camada aquosa foi extraída com mais AcOEt (2 x 10 mL) . Os extractos orgânicos reunidos foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL) , em seguida, secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo. A cromatografia flash sobre silica gel eluindo com CHCl3:EtOH (15:1) proporcionou o composto em sub-título (60 mg, 12%) como uma espuma quebradiça branca.
Rf = 0,46 (CHC13:EtOH 15:1) RMN de 1H (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7,74 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,35-7,37 (m, 2H), 6,97-7,07 (m, 2H), 6,80-6,84 (m, 1H) , 6,82 e 6,80 (t, JH-f = 73 Hz, 1H) , 5,10 e 5,06 (s, 1H), 4, 68-4, 70 (m, 1H) , 3,97-4, 60 (m, 6H) , 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H). APCI-MS: (M + 1) = 595 m/z
(xii) Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,053 g,
0, 089 mmol; ver passo (xi) acima) foi dissolvido em 3 mL de TFA 137 e deixado a reagir durante 80 min enquanto se arrefecia num banho de gelo. O TFA foi evaporado e o resíduo foi liofilizado de água/acetonitrilo para produzir 0,042 g (80%) do composto em título como o seu sal de TFA. RMN de 3Η (300 MHz; CD3OD) rotâmeros: δ 7,7-7,6 (m, 2H) , 7,5-7,4 (m, 2H), 7,1-6,6 (m, 4H), 5,2-5,0 (m, 1H mais o rotâmero secundário de 1H) , ca 4,8 (rotâmero principal do sinal anterior tapado pelo sinal do CD3OH) , 4,6-4,3 (m, 2H) , 4,26 (m, 1H, rotâmero principal), 4,10 (m, 1H, rotâmero principal), 3,96 (m, 1H, rotâmero secundário), 3,89 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,60 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,44 (m, 1H, rotâmero principal), 2,19 (m, 1H, rotâmero principal), 2,05 (m, 1H, rotâmero secundário). RMN de 13C (100 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina) δ 172,8, 172,0, 167,0. ESI-MS+: (M+l) = 451 (m/z)
Exemplo 26
Ph(3-F)(5-OCHF?)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) (i) Ph (3-F) (5-OCHF2) - (-R) CH (OMEM) C (O) -Aze-Pab (OMe) A uma solução de Ph(3-F) (5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH (1,0 g, 3,1 mmol; ver Exemplo 25 (ix) acima) em DMF (30 mL) sob azoto a 0 °C foi adicionado HAze-Pab (OMe) *2HC1 (1,4 g, 4,1 mmol), PyBOP (1,8 g, 3,4 mmol) e DIPEA (1,0 g, 7,8 mmol). A reacção foi 138 agitada, a 0 °C, durante 2 h e, em seguida, à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo cromatografado duas vezes sobre sílica gel, eluindo primeiro com CHCl3:EtOH (15:1) e, depois, com AcOEt para proporcionar o composto em sub-título (1,5 g, 79%) como uma espuma guebradiça branca.
Rf = 0,24 (AcOEt) RMN de XH (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7,58-7,62 (m, 2H) , 7,32-7,38 (m, 2H), 7,03-7,16 (m, 3H), 6,92 e 6,88 (d, Jb-e = 73 Hz, 1H), 5,27 e 5,08 (s, 1H), 5,22-5,15 e 4,75-4,80 (m, 1H), 4,38-4,65 (m, 5H) , 3, 92-4, 27 (m, 1H) , 3, 82 (s, 3H), 3,43-3,68 (m, 4H), 3,29 (s, 3H), 2,28-2,85 (m, 2H). (ii) Ph (3-F) (5-OCHF2) - (-R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OMe)
Uma mistura de Ph (3-F) (5-OCHF2) - (R) CH (OMEM) C (O) -Aze-Pab (OMe) (828 mg, 2,33 mmol; ver passo (i) acima) e tetrabrometo de carbono (525 mg, 2,33 mmol) em 2-propanol (20 mL) foi aguecida a refluxo durante 8 h e, em seguida, agitada à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo partilhado com H20 (70 mL) e AcOEt (50 mL). A camada aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 25 mL). Os extractos orgânicos reunidos foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (35 mL) , em seguida, secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo. A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com CHCl3:EtOH (15:1) proporcionou o composto em título (520 mg, 74%) como uma espuma quebradiça branca.
P.f.: 73-81 °C 139
Rf = 0,43 (CHC13:EtOH 15:1) RMN de ΧΗ (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7,59 (d, J= 8 Hz, 2H), 7,32-7,37 (m, 2H), 7,05-7,14 (m, 2H) , 6,87-6, 92 (m, 1H) , 6,90 e 6,86 (t, Jh-f = 73 Hz, 1H) , 5,13-5,18 e 4, 75-4, 85 (m, 2H) , 4,15-4,45 (m, 4H) , 3,81 (s, 3H) , 2,10-2,75 (m, 2H) . RMN de 13C (100 MHz; CD3OD): (carbonos de carbonilo e/ou amidina) δ 172,0, 171,4, 153,9. APCI-MS: (M + 1) = 481 m/z
Exemplo 27
Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) 1,3-Dibromo-5-benziloxibenzeno
Foi adicionado hidreto de sódio (9,9 g, 0,414 mol, 95% seco) em porções a uma solução, mantida sob agitação, de álcool benzilico (41,0 g, 0,394 mol) em THF (1,0 L) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de azoto e agitado durante 1 h. A esta solução foi adicionado, gota a gota, 1,3-dibromo-5-fluorobenzeno (100,0 g, 0,394 mol). Após agitação de um dia para o outro, a mistura foi partilhada com H20 (600 mL) e AcOEt (4 x 600 mL) . Os extractos orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo. A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com hexanos proporcionou o composto em sub-título (101,3 g, 75%) como um óleo amarelo. 140 RMN de XH (300 MHz, CDC13) δ 7, 30-7, 48 (m, 5H) , 7,18 (s, 1H) , 7,06 (s, 2H), 4,99 (s, 2H) . (ii) 3,5-Dibromofenol
Foi adicionado cloreto de alumínio (11,7 g, 87,6 mmol) em porções a uma solução de 1,3-dibromo-5-benziloxibenzeno (10,0 g, 29,2 mmol; ver passo (i) acima) e N,N-dimetilanilina (35,4 g, 2 92 mmol) em CH2CI2 (100 mL) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de azoto. Após 30 min, a mistura foi partilhada com HC1 1 N (300 mL) e AcOEt (5 χ 150 mL) . Os extractos orgânicos reunidos foram lavados com NaHC03 saturado (150 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (150 mL) , em seguida, secos (Na2S0<i) , filtrados e concentrados in vacuo. A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com Hex:AcOEt (9:1) proporcionou o composto em sub-título (6,1 g, 82%) como um sólido branco. RMN de ΧΗ (300 MHz, CDCI3) δ 7,21 (s, 1H) , 6,97 (s, 2H) , 5,88 (s 1, 1H). (iii) 1,3-Dibromo-5-monofluorometoxibenzeno A um balão de pressão de fundo redondo de 350 mL, selado, tarado contendo uma suspensão de 3,5-dibromofenol (10,0 g, 39,7 mmol; ver passo (ii) acima) e Cs2C03 (20, 7 g, 63,5 mmol) em DMF (150 mL) a -78 °C foi adicionado clorofluorometano via borbulhação durante 5 min através de um septo. O septo foi substituído por uma rolha de Teflon e o balão foi então selado e deixado aquecer até à temperatura ambiente, altura em que o balão foi pesado e determinado conter 9,0 g (131 mmol) de 141 clorofluorometano. A solução foi aquecida num banho de óleo ajustado a 70 °C de um dia para o outro. O balão foi arrefecido até à temperatura ambiente, a pressão cuidadosamente libertada e o conteúdo diluído com água (100 mL). A camada aquosa foi extraída com Et20 (3 x 200 mL) , em seguida, os orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo. A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com hexanos proporcionou o composto em sub-título (7,9 g, 71%) como um sólido branco. RMN de (300 MHz, CDC13) δ 7,40 (s, 1H) , 7,18 (s, 2H) , 5,6 7 (d, Jh-f = 53 Hz, 2H) . (iv) l-Bromo-3-monofluorometoxi-5-vinilbenzeno
Foi adicionado tri(butil)vinilestanho (10,0 g, 31,4 mmol), gota a gota, a uma solução de 1,3-dibromo-5-monofluorometoxibenzeno (8,5 g, 29,9 mmol; ver passo (iii) acima), tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (690 mg, 0,599 mmol) e 2,6-di-terc-butil-4-metilfenol (ponta de espátula) em tolueno (100 mL) sob azoto. A mistura foi agitada, a 70 °C, durante 8 h. A mistura foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado NaOH IN (70 mL) . Após 1 h, a mistura foi extraída com CH2C12 (3 x 300 mL), em seguida, os orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo. A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com hexanos proporcionou o composto em sub-titulo (4,3 g, 57%) como um óleo incolor. RMN de (300 MHz, CDC13) δ 7,30 (s, 1H), 1, . 16 (s, 1H) , 7, 01 (s, 1H) , 6 , 60 (dd, J -- = 6 Hz, J = 11 Hz, r 1H) , 5, 74 (d, J = 16 Hz, 1H) , 5, 67 II b 53 Hz, 2H), 5, 32 (d, J = 8 Hz, 1H) . 142
(v) Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)CH2OH 2-Metil-2-propanol (100 mL) , H20 (100 mL) e AD-mix-β (27,5 g) foram combinadas em conjunto e arrefecidos até 0 °C. Foi adicionado l-bromo-3-monofluorometoxi-5-vinilbenzeno (4,3 g, 17,3 mmol; ver passo (iv) acima) de uma única vez e a pasta heterogénea foi vigorosamente agitada, a 0 °C até a TLC revelar ausência do material de partida. A reacção foi desactivada a 0 °C através da adição de sulfito de sódio saturado (200 mL) e, em seguida, aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 60 min. A mistura reaccional foi extraída com AcOEt (3 x 150 mL) . Os extractos orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (4,9 g, 100%) como um óleo incolor que foi utilizado sem mais purificação. RMN de ΧΗ (300 MHz, CD3OD) δ 7,30 (s, 1H) , 7, 15 (s, 1H) 7,11 (s, 1H) , 5, 70 (d, <7h-f = 53 Hz, 2H), 4, 62- 4, 70 (m, 1H) 3, 52-3, 70 (m, 2H) .
Análise por HPLC: 92,1%, 96,9% ee, Coluna ChiralPak AD (fase móvel, HextEtOH 95:5).
(vi) Ph(3-Br)(5-QCH2F)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS A uma solução de Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)CH2OH (4,9 g, 18,6 mmol; ver passo (v) acima), 4-(dimetilamino)piridina (453 mg, 3,71 mmol) e DIPEA (8,9 g, 93,0 mmol) em CH2C12 anidro (200 mL) foi adicionada, gota a gota, uma solução 1,0 M de cloreto de terc-butildimetilsililo em CH2C12 (22,3 mL, 22,3 mmol). A mistura reaccional foi agitada 10 h, à temperatura 143 ambiente. À mistura foi adicionado DIPEA (8,9 g, 93,0 mmol) e cloreto de 2-metoxietoximetilo (13,9 g, 111 mmol) gota a gota. Após 16 h, foi adicionado mais cloreto de 2-metoxietoximetilo (2,2 g) e a reacção agitada, de um dia para o outro. A mistura foi diluida com H20 (100 mL) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraida com CH2CI2 (3 x 200 mL) , em seguida, as camadas orgânicas reunidas foram secas (Na2S04) , filtradas e concentradas in vacuo. A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com Hex:AcOEt (5:1) proporcionou o composto em subtítulo (4,8 g, 55%) como um óleo incolor. RMN de 1 H (30 0 MHz, CDCI3) δ 7,29 (s, 1H) , 7,22 (s, 1H) 7, 05 (S, 1H) , 5, 74 (d, Jh-f = 53 Hz, 2H) , 4, 84 (d, J = 1 Hz, 1H) > O 1 -4, 74 (m, 2H) , 3,50-3,91 (m, 6H) , 3,42 (s, 3H) , 0,90 (s 9H) , 0,05 (s, 3H) , 0,01 (s, 3H).
(vii) Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(A)CH(OMEM)CH2OH A uma solução de Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS (4,7 g, 10,1 mmol; ver passo (vi) acima) em THF (100 mL) foi adicionada uma solução 1,0 M de fluoreto de tetrabutilamónio em THF (13,1 mL, 13,1 mmol) à temperatura ambiente e a mistura foi agitada 1 h. A mistura foi partilhada com H20 (100 mL) e AcOEt (3 x 100 mL), em seguida, os orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (3,3 g, 92%) como um óleo incolor gue foi utilizado sem mais purificação. 7,03 (s, 1H),
(300 MHz, CD3OD) δ 7,22 (s, \—1 7, 14 (s, 1H 5, 71 (d, Jh-f = 53 Hz, 2H), O OO CM OO 1 (m, 1H 144 4, 58-4, 66 (m, 2H) , 3,71-3,77 (m, 1H) , 3,39-3,65 (m, 5H) , 3,27 (s, 3H).
(viii) Ph(3-Br) (5-OCH2F) -(R)CH(OMEM)C(O)OH
Uma solução de Ph (3-Br) ( 5-OCH2F) - (R) CH (OMEM) CH2OH (2,1 g, 6,0 mmol; ver passo (vii) acima) em acetona (40 mL) foi adicionada a uma solução aquosa de NaHC03 a 5% (15 mL) . Esta mistura heterogénea, mantida sob agitação magnética, foi arrefecida até 0 °C e foram adicionados brometo de potássio (70 mg, 0,60 mmol) e 2,2,6,6-tetrametil-l-piperidiniloxilo, radical livre (976 mg, 5,8 mmol). Foi então adicionado hipoclorito de sódio (5,25%, 15 mL), gota a gota, ao longo de um período de 10 min, enquanto a mistura era vigorosamente agitada e mantida a 0 °C. Após 1 h, foram adicionados mais hipoclorito de sódio (10 mL) e solução de NaHCCg (20 mL) e a agitação continuou a 0 °C, durante mais 4 h. A acetona foi removida num evaporador rotativo. A camada aquosa foi diluída com solução de NaHC03 a 10% (30 mL) e foi lavada com Et20 (3 χ 20 mL) . A camada aquosa foi acidificada até pH 3,5 com ácido cítrico a 10% e extraída com AcOEt (3 χ 40 mL) . Os extractos de AcOEt reunidos foram lavados com H20 (3 χ 50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL), em seguida, secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (1,7 g, 78%) como um óleo incolor o qual foi utilizado sem mais purificação. RMN de 1H (300 MHz, CD3OD) δ 7,38 (s, 1H) , 7, 25 (s, 1H) 7,18 (s, 1H), 5 ,76 (d, Jh- -F = 53 Hz, 2H) , 5, 21 (s, 1H) , 4, 83 (d J = 1 Hz, 1H) , 4,75 (d, J = 7 Hz , 1H) t 3,62-3 ,78 (m, 2H) 3,48-3,52 (m, 2H), 3,32 (s, 3H). 145 (ix) Ph (3-Br) (5-OCH2F) - (.R) CH (OMEM) C (O) -Aze-Pab (Teoc)
A uma solução de Ph(3-Br) (5-0CH2F)-(R)CH(OMEM)C(O)OH (1,0 g, 2, 72 mmol; ver passo (viii) acima) em DMF (20 mL) sob azoto a 0 °C foi adicionado HAze-Pab (Teoc) »HC1 (1,6 g, 3,5 mmol), PyBOP (1,6 g, 3,0 mmol) e DIPEA (880 mg, 6, 81 mmo1). A reacção foi agitada, a 0 °C, durante 2 h e, em seguida, à temperatura ambiente, de um dia para 0 outro. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo cromatografado duas vezes sobre sílica gel, eluindo primeiro com CHCl3:EtOH (15:1) e, depois, com AcOEt:EtOH (20:1) para proporcionar o composto em sub-título (1,2 g, 62%) como uma espuma quebradiça branca. RMN de ΤΗ (300 MHz, CD30D, mistura complexa de rot âmero s) < 7, 80- -7, 84 (m, 2 H) , 7,4 0-7,46 (m, 2H), 7,13- 7, 32 (m, 3H) 5, 84- -5, 87 (m, 1H) , 5,67 -5, 69 (m, 1H), 5,25 e 5 ,07 (s, 1H) 5, 18- -5, 23 e 4,8 ! 0 — 4, 88 (m, 1H) , 3,97 -4,79 (m, 8H) t 3,60 -3, 71 (m 2H :), 3 ,40-3,53 (m, r 2H) , 3,32 (s , 3H), 2,10- -2, 75 (m, 2H) 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H). (x) Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(P)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
Uma mistura de Ph(3-Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (347 mg, 0,478 mmol; ver passo (ix) acima) e tetrabrometo de carbono (159 mg, 0,478 mmol) em 2-propanol (10 mL) foi aquecida a refluxo durante 1,5 h. A mistura foi concentrada in vacuo, em seguida, partilhada com H2O (20 mL) e AcOEt (3 x 30 mL) . Os orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo. A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com CHCl3:EtOH (15:1) proporcionou o composto em sub-título (59 mg, 19%) como uma espuma quebradiça branca. 146
P.f.: 81-87 °C
Rf = 0,58 (CHC13:EtOH 9:1) RMN de ΤΗ (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7,84 (d, J= 8 Hz, 2H), 7,40-7,48 (m, 2H) 7,18-7,30 (m, 3H), 5,80 (d,
Jh-f = 53 Hz, 2H), 5,21 e 5,15 (s, 1H) , 5,18-5,24 e 4, 80-4, 88 (m, 1H), 3,98-4,54 (m, 6H) , 2,10-2,70 (m, 2H) , 1,05-1,11 (m, 2H) , 0,08 (s, 9H). APCI-MS: (M + 1) = 637 m/z
(xi) Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,073 g, 0,11 mmol; ver passo (x) acima) foi dissolvido em 5 mL de TFA e deixado a reagir durante 90 min enquanto era arrefecido num banho de gelo. O TFA foi evaporado e o resíduo purificado por RPLC prep com CH3CN:NH4OAc 0,1 M (30:70). As fracções pertinentes foram evaporadas e liofilizadas de água/acetonitrilo para produzir 49 mg (77%) do composto em título como o seu sal de acetato. RMN de XH (300 MHz ; CD3OD) rotâmeros: δ 7,8-7,7 (m, 2H) 7,54 (m, 2H), 7,37 (s, 1H, rotâmero principal), 7,33 (s, 1H rotâmero secundário) , 7, 25-7,1 (m, 2H), 5,75 (d, 2H) , 5,22 (m 1H, rotâmero secundário), 5,18 (s, 1H, rotâmero principal), 5,11 (s, 1H, rotâmero secundário), 4,80 (m, 1H, rotâmero principal), 4,6-4,4 (m, 2H) , 4,37 (m, 1H, rotâmero principal), 4,16 (m, 1H, rotâmero principal), 4,1-3,9 (m, 2H, dois sinais do rotâmero secundário), 2,70 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,52 (m, 1H, 147 rotâmero principal), 2,30 (m, 1H, rotâmero principal), 2,15 (m, 1H, rotâmero secundário), 1,89 (s, 3H). ESI-MS+: (M+l) = 493/495 (m/z)
Exemplo 28
Ph(3-Br)(5-QCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) 1,3-Dibromo-5-difluorometoxibenzeno A um balão de pressão de 350 mL de fundo redondo, selado, tarado contendo uma solução de 3,5-dibromofenol (10,0 g, 39,7 mmol; ver Exemplo 27 (ii) acima) em 2-propanol (100 mL) e KOH a 30% (80 mL) a -78 °C foi adicionado clorodifluorometano via borbulhação durante 15 min através de um septo. O septo foi substituído por uma rolha de Teflon e o balão foi, em seguida, selado e deixado aquecer até à temperatura ambiente, altura em que o balão foi pesado e determinado conter 12,0 g (138 mmol) de clorodifluorometano. A solução foi aquecida a refluxo, de um dia para o outro, num banho de óleo ajustado a 80 °C. O balão foi arrefecido até à temperatura ambiente, a pressão cuidadosamente libertada e o conteúdo diluído com H20 (200 mL) . A camada aquosa foi extraída com CHCI3 (2 χ 150 mL) , em seguida, os orgânicos reunidos foram secos (Na2S04), filtrados e concentrados in vacuo. O resíduo foi purificado por destilação em Kugelrohr a 80 °C a 0,2 PM Hg para proporcionar o composto em sub-título (9,6 g, 80%) como um líquido transparente. RMN de ΧΗ (300 MHz, CDC13) δ 7,55 (s, 1H) , 7,26 (s, 2H) , 6,52 (t, Jh-f = 6 8 Hz, 1H) . 148 (ii) l-Bromo-3-difluorometoxi-5-vinilbenzeno
Foi adicionado tri(butil)vinilestanho (10,5 g, 33,1 mmol), gota a gota, a uma solução de 1,3-dibromo-5-difluorometoxibenzeno (9,1 g, 30,1 mmol; ver passo (i) acima), tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (700 mg, 0,60 mmol) e 2,6-di-terc-butil-4-metilfenol (ponta de espátula) em tolueno (125 mL) sob azoto. A mistura foi agitada, a 50 °C de um dia para o outro. A mistura foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado NaOH IN (70 mL) . Após 1 h, a mistura foi extraída com CH2CI2 (3 x 300 mL), em seguida, os orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo. A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com hexanos proporcionou o composto em sub-titulo (5,1 g, 68%) como um óleo incolor. RMN de XH (300 MHz, CDCI3) δ 7,53 (s, K 1—1 7, 18 (s, 1H) OO 0 r- (S, 1H ) , 6,60 (dd, J = 6 Hz , J = 11 Hz, 1H) , 6,57 (t I II = 68 Hz, 1H) , 5, 77 (d, J = 11 Hz, 1H), 5, 36 (d, J = 8 Hz 1H) .
(iii) Ph(3-Br) (5-OCHF2) -(R)CH(OH)CH2OH 2-Metil-2-propanol (150 mL) , H20 (150 mL) e AD-mix-β (27,8 g) foram combinados em conjunto e arrefecidos até 0 °C. Foi adicionado l-bromo-3-difluorometoxi-5-vinilbenzeno (4,6 g, 18,6 mmol; ver passo (ii) acima) de uma única vez e a pasta heterogénea foi vigorosamente agitada, a 0 °C até a TLC indicar a ausência de material de partida, em seguida, a solução foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada, de um dia para o outro. A reacção foi desactivada a 0 °C pela adição de sulfito de sódio saturado (300 mL) e, em seguida, aquecida até à 149 temperatura ambiente e agitada durante 60 min. A mistura reaccional foi extraída com AcOEt (3 χ 200 mL) . Os extractos orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (5,0 g, 95%) como um óleo incolor que foi utilizado sem mais purificação. RMN de XH (300 MHz, CD3OD) δ 7,43 (s, 1H) , 7, 23 (s, 1H) 7,16 (S, 1H) , 6, 86 (t, Jh-p =75 Hz, 1H), 4,64- 4,67 (m, 1H) 3,54-3,59 (m, 2H).
Análise por HPLC: 88,6%, 96,3% ee, Coluna ChiralPak AD (fase móvel, Hex:EtOH foi adicionado).
(iv) Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS A uma solução de Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OH (4,9 g, 17,3 mmol; ver passo (iii) acima), 4-(dimetilamino)piridina (420 mg, 3,5 mmol) e DIPEA (11,2 g, 86,3 mmol) em CH2C12 anidro (250 mL) foi adicionada, gota a gota, uma solução 1,0 M de cloreto de terc-butildimetilsililo em CH2C12 (20,7 mL, 20,7 mmol). A mistura reaccional foi agitada, de um dia para o outro, à temperatura ambiente. À mistura foi adicionado DIPEA (11,2 g, 86,3 mmol) e cloreto de 2-metoxietoximetilo (12,9 g, 104 mmol) gota a gota. Após 3 d, foi adicionado mais cloreto de 2-metoxietoximetilo (3,3 g) e a reacção agitada, de um dia para o outro. A mistura foi diluída com água (250 mL) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com CH2C12 (2 χ 250 mL), em seguida, os orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo. A cromatografia flash sobre sílica gel eluindo com Hex: AcOEt (4:1) proporcionou o composto em sub-título (4,3 g, 51%) como um óleo incolor. 150
RMN de 1 H (300 MHz, CDC13) δ 7, 40 (s, 1H) , 7,25 (s, 1H) , 7, 08 (s, 1H) , 6,58 (t, Jh-f = 75 Hz , 1H) , 4, 84 (d, J = 7 Hz, 1H) , 4, 70- -4, 74 (m, 2H) , 3,50-3 ,91 (m, 6H) , 3,42 (s, 3H) , 0,90 (s, 9H) , 0,12 (s, 3 H) , 0 ,05 (s, 3 H) . (v) Ph (3- -Br)(5- OCHF2) - (R)CH(OMEM)CH2 OH A uma solução de Ph (3- Br) (5- -ochf2; i - (R) CH (OMEM) CH; >OTBS (3,3 g, 6,9 mmol; ver passo (iv) acima) em THF (60 mL) foi adicionada uma solução 1,0 M de fluoreto de tetrabutilamónio em THF (9,0 mL, 9,0 mmol) à temperatura ambiente. A reacção foi agitada durante 45 min, em seguida, a mistura foi partilhada com água (150 mL) e AcOEt (2 χ 120 mL) . Os orgânicos reunidos foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em sub-titulo (2,5 g, 98%) como um óleo amarelo que foi utilizado sem mais purificação. 7,21 (s, 1H), J = 1 Hz, 1H), RMN de 1R (300 MHz, CD3OD) δ 7,35 (s, 1H) , 7,08 (s, 1H), 6,83 (t, Jh-f = 73 Hz, 1H) , 4,73 (d, 4, 59-4, 68 (m, 2H) , 3,40-380 (m, 6H), 3,26 (s, 3H) .
(vi) Ph(3-Br) (5-OCHF ?)-(R)CH(OMEM)C(O)OH
Uma solução de Ph (3-Br) (5-OCHF2) - (R) CH (OMEM) CH2OH (3,0 g, 8,1 mmol; ver passo (v) acima) em acetona (60 mL) foi adicionada a uma solução aquosa de NaHC03 a 5% (25 mL) . Esta mistura heterogénea, mantida sob agitação magnética, foi arrefecida até 0 °C, em seguida, foram adicionados brometo de potássio (100 mg, 0,81 mmol) e 2,2,6,6-tetrametil-l-piperidiniloxilo, radical livre (1,3 g, 8,5 mmol). Foi então adicionado hipoclorito de 151 sódio (5,25%, 19 mL) , gota a gota, ao longo de um período de 10 min, enquanto a mistura era vigorosamente agitada e mantida a 0 °C. Após 1 h foram adicionados mais hipoclorito de sódio (17 mL) e solução de NaHCC>3 (34 mL) e a agitação continuou a 0 °C, durante mais 4 h. A acetona foi removida num evaporador rotativo. A camada aquosa foi diluída com solução de NaHC03 a 10% (30 mL) e foi lavada com Et2<3 (3 x 20 mL) . A camada aquosa foi acidificada até pH 3,5 com ácido cítrico a 10% e extraída com AcOEt (3 x 40 mL) . As camadas de AcOEt reunidas foram lavadas com H2O (3 x 50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) e, em seguida, secas (Na2S04) , filtradas e concentradas in vacuo para proporcionar o composto em sub-título (2,1 g, 66%) como um óleo incolor o qual foi utilizado sem mais purificação. RMN de ΤΗ (300 MHz, CD3OD) δ 7,51 (s, 1H) , 7,32 (s, 1H) , 7,24 (s, 1H), 6,88 (t, JH-F = 73 Hz, 1H) , 5,21 (s, 1H) , 4,84 (d, J = 7 Hz, 1H), 4,76 (d, J= 7 Hz, 1H), 3,62-3,80 (m, 2H), 3,48-3,52 (m, 2H), 3,32 (s, 3H). (vii) Ph(3-Br)(5-OCHF2)~(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc) A uma solução de Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH (1,0 g, 2,62 mmol; ver passo (vi) acima) em DMF (50 mL) sob azoto a 0 °C foi adicionado HAze-Pab(Teoc) *HC1 (1,5 g, 3,38 mmol), PyBOP (1,5 g, 2,9 mmol) e DIPEA (840 mg, 6,50 mmol). A reacção foi agitada, a 0 °C, durante 2 h e, em seguida, à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo cromatografado sobre sílica gel eluindo com CHCl3:EtOH (15:1) para proporcionar o composto em sub-título (1,1 g, 59%) como uma espuma quebradiça branca. 152 RMN de 1H (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7, 79-7, 83 (m, 2H) , 7, 26-7, 52 (m, 5H) , 6,94 e 6,91 (t,
Jh-f = 73 Hz, 1H), 5,27 e 5,07 (s, 1H) , 5, 20-5, 23 e 4, 80-4, 88 (m, 1H), 4,01-4,79 (m, 8H) , 3,60-3,71 (m, 2H) , 3, 40-3,53 (m, 2H) , 3,32 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H) , 1,05-1,11 (m, 2H) , 0,08 (s, 9H) . (viii) Ph(3-Br)(5-OCHF2)- (R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
Uma mistura de Ph(3-Br) (5-OCHF2) -(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-
Pab (Teoc) (369 mg, 0,496 mmol; ver passo (vii) acima) e tetrabrometo de carbono (165 mg, 0,496 mmol) em 2-propanol (10 mL) foi aguecida a refluxo durante 12 h. A mistura foi concentrada in vacuo, em seguida, partilhada com H20 (15 mL) e
AcOEt (5 x 20 mL) . Os orgânicos reunidos foram secos (Na2SC>4) , filtrados e concentrados in vacuo. A cromatografia flash sobre silica gel eluindo com CHCl3:EtOH (15:1) proporcionou o composto em sub-titulo (134 mg, 41%) como uma espuma quebradiça branca.
P . f.: 92-98 °C
Rf = 0,37 (CHC13:EtOH 9:1) RMN de XH (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7,80-7,86 (m, 2H) , 7, 40-7, 48 (m, 2H) 7, 10- -7,33 (m, 3H), 6,92 e 6,88 (t, <7h-f = 73 Hz, 1H) , 5,18 e 5, 11 (s, 1H), 5,18-5,24 e 4,76-4,80 (m, 1H) , 3,98-4,54 (m, 6H) , 2,10-2, 70 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H) , 0,08 (s, 9H). APCI-MS: (M + D = 655 m/z 153
(ix) Ph (3-Br) (5-OCHF2) -(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-Br) (5-OCHF 2)-(1¾)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0,081 g, 0,124 mmol; ver passo (viii) acima) foi dissolvido em 5 mL de TFA e deixado a reagir durante 80 min, enquanto era arrefecido num banho de gelo. O TFA foi evaporado e o resíduo purificado por RPLC prep com CH3CN:NH4OAc 0,1M (30 : 70). As fracções pertinentes foram evaporadas e liofilizadas de água/acetonitrilo para produzir 59 mg (83%) do composto em título como o seu sal de acetato. RMN de ΤΗ (300 MHz; CD3OD) rotâmeros: δ 7,8-7,7 (m, 2H) , 7,6-7,4 (m, 3H), 7,3-7,2 (m, 2H), 6,89 (t, 1H, rotâmero principal ) , 6,87 (t, 1H, rotâmero secundário), 5,23 (m, 1—1 rotâmero secundário), 5,21 (s, 1H, rotâmero principal), 5,13 (s, 1H, rotâmero secundário), 4,80 (m, 1H, rotâmero principal), 4,6-4,4 (m, 2H) , 4,38 (m, 1H, rotâmero principal), 4,20 (m, 1H, rotâmero principal), 4,1-3,9 (m, 2H, dois sinais do rotâmero secundário), 2,70 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,54 (m, 1H, rotâmero principal), 2,29 (m, 1H, rotâmero principal), 2,15 (m, 1H, rotâmero secundário), 1,89 (s, 3H) . RMN de 13C (75 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina) δ 172,0, 171,7, 167,0. MS (m/z) 511/513 (M+l) 154
Exemplo 29
Ph(3-Br) (5-OCHF 2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) (i) Ph(3-Br)(5-OCHF?)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe)
A uma solução de Ph (3-Br) (5-OCHF2) - (-R) CH (OMEM) C (O) OH (957 mg, 2,48 mmol; ver Exemplo 28(vi) acima) em DMF (30 mL) sob azoto a 0 °C foi adicionado HAze-Pab(OMe) »2HC1 (1,1 g, 3,2 mmol), PyBOP (1,4 g, 2,7 mmol) e DlPEA (804 mg, 6,2 mmol). A reacção foi agitada, a 0 °C, durante 2 h e, em seguida, à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo cromatografado duas vezes sobre sílica gel, eluindo primeiro com CHCl3:EtOH (9:1) e, depois, com AcOEt:EtOH (15:1) para proporcionar o composto em sub-título (1,1 g, 72%) como uma espuma quebradiça branca. RMN de 1H (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7, 59-7,65 (m, 2H) , 7,20-7,55 (m, 5H) , 6,95 e 6,91 (t,
Jh-f = 73 Hz, 1H), 5,27 e 5,07 (s, 1H) , 5,18-5,23 e 4, 75-4, 84 (m, 1H), 3,87-4,89 (m, 6H), 3,84 (s, 3H), 3,60-3,71 (m, 2H), 3,40-3,53 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H). (ii) Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
Uma mistura of Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe) (1,1 g, 1,8 mmol; ver passo (i) acima) e tetrabrometo de carbono (583 mg, 1,8 mmol) em 2-propanol (30 mL) foi aquecida a refluxo durante 2,5 d. Durante este período foi adicionado mais tetrabrometo de carbono (5 porções de 50 mg em intervalos 155 de mais 0,90 mmol) para assegurar a conclusão da reacção. A mistura foi concentrada in vacuo, em seguida, partilhada com H20 (50 mL) e AcOEt (5 x 25 mL) . Os orgânicos reunidos foram secos (Na2S04), filtrados e concentrados in vacuo. A cromatografia flash sobre silica gel eluindo com CHCl3:EtOH (15:1) proporcionou o composto em titulo (460 mg, 50%) como uma espuma quebradiça branca.
P.f.:71-75 °C
Rf = 0,63 (CHC13:EtOH 9:1) RMN de 3H (300 MHz, CD3OD, mistura complexa de rotâmeros) δ 7,59 (d, J = 8 Hz , 2H ), 7,20- -7,54 (m, 5H) , 6,90 e 6,87 (t 1 II LO Ή N 1H) , 5, 18 e 5, 11 (s, 1H) , 4,76-4,80 (m, 1H) 3,98-4,54 (m, 4H) , 3,82 (s, 3H) , 2,10-2,70 (m, 2H) . RMN de 13C (100 MHz; CD3OD): (carbonos de carbonilo e/ou amidina, rotâmeros) δ 172,5, 172,1, 171,6, 154,1. APCI-MS: (M + 1) = 542 m/z Exemplo 30
Ph (3-C1) ( 5-QCH2CHF2) - (-R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OH) (i) Ph(3-C1)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)
Boc-Aze-Pab(Z) (ver Pedido de Patente Internacional WO 97/02284, 92 mg, 0,197 mmol) foi dissolvido em 10 mL de AcOEt 156 saturado com HCl(g) e deixado a reagir durante 10 min. O solvente foi evaporado e o resíduo foi misturado com Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2) - (R) CH (OH) C (O) OH (50 mg, 0,188 mmol; ver Exemplo 17 (v) acima), PyBOP (109 mg, 0,209 mmol) e finalmente
diisopropiletilamina (96 mg, 0,75 mmol) em 2 mL de DMF. A mistura foi agitada durante 2 h e, em seguida, vertida para 50 mL de água e extraída três vezes com AcOEt. A fase orgânica reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. O produto em bruto foi submetido a cromatografia flash sobre sílica gel com AcOEt:MeOH (9:1). Rendimento: 100 mg (87%). RMN de 1H (300 MHz, CD3OD mistura de rotâmeros) δ 7,85-7,75 (m, 2H) , 7, 45-7, 25 (m, 7H) , 7,11 (m, 1H, rotâmero principal), 7,08 (m, 1H, rotâmero secundário), 7,05-6,9 (m, 2H) , 6,13 (t 1, 1H) , 5, 25-5, 05 (m, 3H) , 4,77 (m, 1H, parcialmente tapado pelo sinal do CD3OH) , 4,5-3,9 (m, 7H) , 2,64 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,47 (m, 1H, rotâmero principal), 2,25 (m, 1H, rotâmero principal), 2,13 (m, 1H, rotâmero secundário) (ii) Ph(3-C1) (5-OCH2CHF 2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
Cloridrato de hidroxilamina (65 mg, 0,94 mmol) e trietilamina (0,319 g, 3,16 mmol) foram misturados em 8 mL de THF e submetidos a ultrassons durante 1 h a 40 °C. Foi adicionado Ph (3-C1) (5-OCH2CHF2) - (R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Z) (96 mg, 0,156 mmol; ver passo (i) acima) com mais 8 mL de THF. A mistura foi agitada, a 40 °C, durante 4,5 dias. O solvente foi evaporado e o produto em bruto foi purificado por RPLC preparativa com CH3CN:NH4OAc 0,1 M (40:60). Rendimento: 30 mg (38%). Pureza: 99%. 157 RMN de 3Η (300 MHz, CD3OD mistura de rotâmeros) δ 7,6-7,55 (m, 2H) , 7,35-7,3 (m, 2H) , 7,12 (m, 1H, rotâmero principal), 7,09 (m, 1H, rotâmero secundário), 7,05-6,9 (m, 2H), 6,15 (tripleto de multipletos, 1H), 5,15 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,13 (s, 1H, rotâmero principal), 5,08 (s, 1H, rotâmero secundário), 4,77 (m, 1H, rotâmero principal), 4,5-4,2 (m, 5H), 4,08 (m, 1H, rotâmero principal), 3,97 (m, 1H, rotâmero
secundário), 2,66 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,50 (m, 1H rotâmero principal), 2,27 (m, 1H, rotâmero principal), 2,14 (m, 1H, rotâmero secundário) . RMN de 13C (100 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, mistura de rotâmeros) δ 172,8, 172,2, 171,4, 159,1, 158,9, 154,2. APCI-MS: (M + 1) = 497/499 m/z
Exemplo 31
Ph(3-C1)(5-OCH2CH2F)—(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH) (i) Ph(3-C1)(5-OCH2CH2F)-(P)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)
Boc-Aze-Pab(Z) (130 mg, 0,279 mmol) foi dissolvido em 15 mL de AcOEt saturado com HCl(g) e deixado a reagir durante 10 min. O solvente foi evaporado e o resíduo foi misturado com Ph(3-Cl) (5-0CH2CH2F)-(R)CH(0H)-C(0)0H (63 mg, 0,188 mmol; ver Exemplo 21 (v) acima) em 3 mL de DMF, PyBOP (147 mg, 0,279 mmol) e finalmente diisopropiletilamina (134 mg, 1,03 mmol). A mistura foi agitada durante 130 min e, em seguida, vertida para 75 mL de 158 água e extraída três vezes com AcOEt. A fase orgânica reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. 0 produto em bruto foi submetido a cromatografia flash sobre sílica gel com AcOEt/MeOH = 95/5. Rendimento: 119 mg (79%). RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 8,06 (t 1, 1H) , 7,67 (d, 2H) , 7, 45- -7,25 (m, 5H) , 7, 18 (d, 2H ), 6,89 (m, 1H) , 6, 84 (m, 1H) , 6, 76 (m, 1H) , 5, 16 (s, 2H), 4, 84 (s, 1H) , 4, 79 (m, 1H) , 4,66 (dupleto de multipletos, 2H) , 4,4-4,3 (m, 2H) , 4,10 (dupleto de multipletos, 2H) , 4,02 (m, 1H) , 3,67 (m, 1H), 2,46 (m, 1H), 2,28 (m, 1H) . (ii) Ph(3-C1)(5-OCH2CH2F)- (R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
Cloridrato de hidroxilamina (80 mg, 1,16 mmol) e trietilamina (0,392 g, 3,87 mmol) foram misturados em 9 mL de THF e submetidos a ultrassons durante 1 h a 40 °C. Foi adicionado Ph(3-C1) (5-OCH2CH2F)-(R) CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z) (96 mg, 0,156 mmol; ver passo (i) acima) com mais 9 mL de THF. A mistura foi agitada, a 40 °C, durante 48 h e 3 dias à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado e o produto em bruto foi purificado por RPLC preparativa com CH3CN:NH4OAc 0,1 M (30:70). Rendimento: 72 mg (78%). Pureza: 100%. RMN de ΤΗ (400 MHz, CD30D mistura de rotâmeros) δ 7,6-7,55 (m, 2H) , 7,35-7, 25 (m, 4H) , 7,07 (m, 1H, rotâmero principal), 7,04 (m, 1H, rotâmero secundário), 7,0-6,9 (M, 2h) , 5,12 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,08 (s, 1H, rotâmero secundário), 5,04 (s, 1H) , 4,78 (m, 1H, rotâmero principal), 4,68 (dupleto de multipletos, 2 H) , 4,5-4,25 (m, 3H) , 4,20 (dupleto de multipletos, 2H) , 4,06 (m, 1H, rotâmero principal), 3,97 (m, 1H, 159 rotâmero secundário), 2,65 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,48 (m, 1H rotâmero principal), 2,27 (m, 1H, rotâmero principal), 2,14 (m, 1H, rotâmero secundário) RMN de 13C (100 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, mistura de rotâmeros) δ 172,3, 171,5, 159,8,154,3 APCI-MS: (M + 1) = 479/481 m/z Exemplo 32
Ph(3-C1) (5-OCHF2) ~(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab (i) Boc-Pro-Pab(Teoc)
Boc-Pro-Pab(Z) (ver Pedido de Patente Internacional WO 97/02284, 15, 0 g, 0,0321 mol) foi dissolvido em 150 mL de etanol e foi adicionado 200 mg de Pd a 10%/C (50% de humidade) . A mistura foi agitada e hidrogenada à pressão atmosférica durante 2 h, filtrada através de Hyflo e concentrada. O produto foi utilizado sem mais purificação. Deste produto foi retirado 10 g (0, 029 mol), o qual foi dissolvido em 300 mL de THF. Foi adicionado carbonato de Teoc-p-nitrofenilo (10 g, 0,035 mol). Foi adicionada uma solução de carbonato de potássio (5,2 g, 0, 038 mol) em 50 mL de água ao longo 3 min e a solução resultante foi agitada durante 3 dias, concentrada e o remanescente foi extraido três vezes com AcOEt. A camada orgânica reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. O produto em bruto foi submetido a cromatografia flash sobre 160 sílica gel utilizando cloreto de metileno:acetona (4:1). Rendimento: 9,8 g (69%). (ii) Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (-R) CH (OH) -C (O) -Pro-Pab (Teoc)
Boc-Pro-Pab(Teoc) (107 mg, 0,218 mmol; ver passo (i) acima) foi dissolvido em 10 mL de AcOEt saturado com HCl(g) e deixado a reagir durante 10 min. O solvente foi evaporado e o resíduo foi misturado com Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (.R) CH (OH) C (O) OH (50 mg, 0,198 mmol; ver Exemplo l(viii) acima) em 3 mL de DMF, PyBOP (115 mg, 0,218 mmol) e finalmente diisopropiletilamina (104 mg, 0,80 mmol) . A mistura foi agitada durante 2 h e, em seguida, vertida para 75 mL de água e extraída três vezes com AcOEt. A fase orgânica reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. O produto em bruto foi submetido a cromatografia flash sobre sílica gel com AcOEt:MeOH (95:5). Rendimento: 89 mg (72%) . RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 7,54 (t 1, 1H) , 7,47 (d, 2H) , 7,12 (m, 1H), 7,08 (d, 2H), 7,02 (m, 1H), 6,95 (m, 1H) , 6,50 (t, 1H), 5,21 (s, 1H), 4,42 (m, 1H) , 4,35-4,15 (m, 3H) , 3,59 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 2,1-1,7 (m, 4H), 1,06 (m, 2H), 0,04 (s, 9H).
(iii) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x TFA
Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab(Teoc) (85 mg,
0,136 mmol; ver passo (ii) acima) foi dissolvido em 1 mL de cloreto de metileno e arrefecido num banho de gelo. Foi adicionado TFA (4 mL) e a reacção foi agitada durante 90 min. O 161 TFA foi evaporado e o resíduo foi liofilizado de água e acetonitrilo. Rendimento: 79 mg (92%). Pureza: 94%. RMN de XH (400 MHz, CD3OD mistura de rotâmeros) δ 7,85-7,7 (m, 2H) , 7,58 (d, 2H, rotâmero principal), 7,47 (d, 2H, rotâmero secundário), 7,35 (m, 1H, rotâmero principal), 7,27 (m, 1H, rotâmero secundário), 7,2,7,1 (m, 2H) , 6,88 (t, 1H) , 5,38 (s, 1H, rotâmero principal), 5,22 (s, 1H, rotâmero secundário), 4,58 (d, 1H), 4,5-4,2 (m, 2H), 3,8-3,5 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 2,2-1,8 (m, 4H) . RMN de 13C (100 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina) δ 173,6, 171,1, 167,0. APCI-MS: (M + 1) = 481/483 m/z Exemplo 33
Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(OMe) (i) 4-Azidometil-N-metoxi-benzamidina 4-Azidometilbenzonitrilo (17,3 g, 0,109 mol; Nishiyama et al.; Chem. Lett. (1982) 1477) foi dissolvido em 500 mL de tolueno e 200 mL de etanol absoluto. A solução foi arrefecida até -10 °C e foi borbulhado HCl(g) até à saturação. A mistura foi mantida no frigorífico durante 2 dias, altura em que a maioria dos solventes foi evaporada. Foi adicionado éter dietílico e foi decantado. O produto foi redissolvido numa solução de O-metil-hidroxilamina (10,5 g, 0,125 mol) e 162 trietilamina (56 mL) em 200 mL de metanol. A mistura foi deixada em repouso durante 3 dias, de onde o metanol foi evaporado pela adição de AcOEt. A fase orgânica foi lavada com água, AcOH diluído e bicarbonato de sódio aquoso, seca (Na2S04) e diluída com mais AcOEt até um volume total de 500 mL. Uma amostra de 25 mL foi evaporada à secura. O remanescente foi 932 mg. Rendimento total: 18,6 g (83%). (ii) 4-Aminometil-N-metoxi-benzamidina A uma solução de 4-azidometil-N-metoxi-benzamidina (11,3 g, 0,055 mol; ver passo (i) acima) em 200 mL de etanol foi adicionado 200 mg de Pt02. A mistura foi hidrogenada com borbulhação constante de hidrogénio durante 4 h e subsequentemente filtrada através de Celite® e evaporada. Rendimento: 7,34 g (74%). (iii) Boc-Pro-Pab(OMe) A uma suspensão de Boc-Pro-OH (9,7 g, 0,045 mol), 4-aminometil-N-metoxi-benzamidina (7,34 g, 0,041 mol; ver passo (ii) acima) e dimetilaminopiridina (7,8 g, 0,064 mol) em 300 mL de acetonitrilo foi adicionado EDC base (11,7 mL, 0,068 mol). A mistura foi agitada durante 18 h, concentrada e partilhada entre água e AcOEt. A camada orgânica foi lavada com água, bicarbonato de sódio aquoso, seca (MgS04) e evaporada. O produto em bruto foi submetido a cromatografia flash sobre sílica gel com AcOEt. Rendimento: 9,73 g (63%). 163 (iv) H-Pro-Pab(OMe) x 2 HC1
Boc-Pro-Pab(OMe) (9,7 g, 0,026 mol; ver passo (iii) acima) foi dissolvido em 250 mL de AcOEt. A solução arrefecida em gelo foi saturada com HCl(g) por borbulhação durante 5 min. O produto precipitou imediatamente e foram adicionados 125 mL de etanol absoluto. A mistura foi submetida a ultrassons até a maior parte do material ter solidificado. Foi adicionado éter dietilico (200 mL) e a suspensão foi filtrada. Alguns pedaços que não solidificaram foram novamente tratados com etanol absoluto e éter dietilico. O sólido foi seco. Rendimento: 7,57 g (86%). RMN de XH (400 MHz, CD3OD) δ 7,74 (d, 2H) , 7,58 (d, 2H) , 4,55 (s, 2H), 4,38 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,45-3,3 (m, 2H) , 2,50 (m, 1H), 2,15-2,0 (m, 3H) (v) Ph(3-C1) (5-OCHF 2) -(R) CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(OMe)
Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (50 mg, 0,198 mmol; ver Exemplo 1 (viii) acima), Η-Pro-Pab(OMe) (76 mg, 0,218 mmol, ver passo (iv) acima) e PyBOP (115 mg, 0,218 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF. Foi adicionada diisopropiletilamina (104 mg, 0,80 mmol) e a mistura foi agitada durante 2,5 h. A mistura foi vertida para 50 mL de água e extraída três vezes com AcOEt e a fase orgânica reunida foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (Na2S04) e evaporada. O resíduo foi submetido a cromatografia flash sobre sílica gel com AcOEt:MeOH (95:5). Rendimento: 37 mg (36%). Pureza: 98%. 164 RMN de 3Η (400 MHz, CD3OD, mistura de rotâmeros) δ 7,60 (d, 2H, rotâmero principal), 7,57 (d, 2H, rotâmero secundário), 7,4-7,1 (m, 5H) , 6,89 (t, 1H, rotâmero principal), 6,87 (t, 1H, rotâmero secundário), 5,35 (s, 1H, rotâmero principal), 5,21 (s, 1H, rotâmero secundário), 4, 72 (m, 1H, rotâmero secundário), 4,5-4,35 (m, 1H e 2H, rotâmero principal), 4,3-4,25 (m, 2H, rotâmero secundário), 3,814 (s, 3H, rotâmero principal), 3,807 (s, 3H, rotâmero secundário), 3,75-3,5 (m, 1H) , 3,35 (m, 1H) , 2,2-1,8 (m, 4H) RMN de 13C (100 MHz; CD3OD): (carbonos de carbonilo e/ou amidina, mistura de rotâmeros) δ 173,3, 173,2, 171,3, 171,0, 153,9, 152,4 APCI-MS:(M+l) = 511/513 m/z 165
Exemplo 34
Ph(3'-Cl) (5-OCHF 2) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((2-amidino)-5-piridinilo)
ochf2
Cl (i) Ácido 6-cianonicotínico A uma solução de N-óxido de ácido nicotinico (51 g, 0,37 mol) em 1,2 L de DMF, foi adicionado NaCN (54 g, 1,1 mol), seguido de trietilamina (255 mL, 1,83 mol) e TMSC1 (185 mL) . A mistura reaccional foi agitada, a 110 °C, durante 10 h, filtrada e o filtrado foi concentrado. O residuo foi dissolvido em 100 mL de HC1 2 N e extraído com cloreto de metileno. As camadas orgânicas foram combinadas, concentradas e recristalizadas de água para produzir 12 g (22%) do produto. (ii) 5-(Hidroximetil)piridina-2-carbonitrilo A uma solução de ácido 6-cianonicotínico (12g, 0,081 mol; ver passo (i) acima) em THF a 0 °C, foi adicionada Et3N (12,4 mL, 0,0892 mol) seguida de cloroformato de etilo (8,53 mL, 0,0892 mol). A mistura reaccional foi agitada durante 15 min e foi adicionado NaBH4 (6,14 g, 0,162 mol)., em seguida, a mistura 166 foi agitada à t.a., de um dia para o outro, desactivada com água e extraida com cloreto de metileno. A camada orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna para produzir 4 g (20%) de álcool. (iii) 5-(Azidometil)piridina-2-carbonitrilo 5-(Hidroximetil)piridina-2-carbonitrilo (4 g, 0,03 mol; ver passo (ii) acima) foi dissolvido em 25 mL de cloreto de metileno e arrefecido num banho de gelo. Foram adicionados, gota a gota, cloreto de mesilo (2,32 mL, 0,0300 mol) e, em seguida, trietilamina (4,6 mL, 0,033 mol). A mistura reaccional foi agitada e após processamento o mesilato em bruto foi tratado com NaN3 (7,35 g, 0,113 mol) em 20 mL de DMF. A mistura reaccional foi agitada, a 40 °C, durante 2 h, diluída com água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi concentrada para produzir 3,95 g (83%) da azida em bruto. (iv) carbonitrilo 5-(terc-Butoxicarbonilaminometil)piridina-2- A uma solução de 5-(azidometil)piridina-2-carbonitrilo (3,95 g, 0, 0248 mol; ver passo (iii) acima) em 30 mL de THF e 10 mL de água, foi adicionada trifenilfosfina (7,8 g, 0,0298 mol) e a mistura resultante agitada durante 24 h., em seguida, foi adicionada trietilamina (3,8 mL, 0,027 mol), seguida de anidrido Boc (5,4 g, 0,025 mol) e agitação durante 2 h. A mistura reaccional foi partilhada entre água e acetato de etilo. A camada orgânica foi concentrada e purificada por 167 cromatografia em coluna para produzir 2,1 g (36%) do composto em sub-titulo. RMN de (300 MHz, CDC13) δ 8,6 (s, 1H) , 8,0 (d, 1H) , 8,9 (d, 1H), 4,1 (m, 2H), 1,4 (s, 9H) (v) 5-(Aminometil)piridina-2-carbonitrilo x 2 HC1 5-(terc-Butoxicarbonilaminometil)piridina-2-carbonitrilo (0,200 g, 0,86 mmol, ver passo (iv) acima) foi dissolvido em 10 mL de AcOEt saturado com HCl(g) e foi agitado durante 30 min. O solvente foi evaporado e foi obtido 0,175 g (99%) do composto em sub-título como o seu sal de dicloridrato. RMN de ΧΗ (500 MHz, D20) δ 8,79 (s, 1H), 8,17 (d, 1H) , 8,05 (d, 1H), 4,38 (s, 2H) (vi) Boc-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN) A uma mistura de 5-(aminometil)piridina-2- carbonitrilo χ 2 HC1 (0,175 g, 0,85 mmol; ver passo (v) acima), Boc-Aze-OH (0,201 g, 1,00 mmol) e TBTU (0,321 g, 1,00 mmol) em 5 mL de DMF foi adicionada dimetilaminopiridina (0,367 g, 3,00 mmol). A mistura foi agitada, de um dia para o outro, e subsequentemente vertida para água e extraída três vezes com AcOEt. A fase orgânica reunida foi lavada com bicarbonato de sódio aquoso, seca (Na2S04) e evaporada. 0 produto em bruto começou a cristalizar e foi utilizado tal qual no passo seguinte. Rendimento: 0,23 g (73%). 168 RMN de ΤΗ (500 MHz, CDC13) δ 8,66 (s, 1H) , 8,2-7,8 (largo, 7,79 (d, 1H) , 7,67 (d, 1H) , 4, 73 (m, 1H) , 4,65-4,5 (m, 2H) , (m, 1H) , 3,81 (m, 1H) , 2,6, 2,35 (m, 2H) , 1, 8 (largo, 1H) , 1,45 (s, 9H) (vii) H-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN) x 2 HC1
Boc-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN) (0,23 g, 0,73 mmol; ver passo (vi) acima) foi dissolvido em 10 mL de AcOEt saturado com HCl(g) e foi agitado durante 30 min. O solvente foi evaporado e foi obtido 0,21 g (100%) do composto em sub-titulo como o seu sal de dicloridrato. RMN de ΤΗ (500 MHz, D20) δ 8,64 (s, 1H), 8,0-7,9 (m, 2H) 5,19 (m, 1H), 4,65-4,55 (m, 2H) , 4,20 (m, 1H), 4,03 (m, 1H) 2,88 (m, 1H), 2,64 (m, 1H) (viii) Ph(3-C1) (5-QCHF2) -(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH2-5-Py(2- CN) A uma mistura de H-Aze-NH-CH2-5-Py (2-CN) χ 2 HC1 (0,206 g, 0,713 mmol; ver passo (vii) acima), Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,180 g, 0,713 mmol; ver Exemplo l(viii) acima) e PyBOP (0,408 g, 0, 784 mmol) em 5 mL de DMF foi adicionada dimetilaminopiridina (0,367 g, 3,00 mmol). A mistura foi agitada, de um dia para o outro e, subsequentemente, vertida para água e extraída três vezes com AcOEt. A fase orgânica reunida foi lavada com bicarbonato de sódio aquoso, seca (Na2S04) e evaporada. O produto em bruto foi submetido a cromatografia 169 flash sobre sílica gel com AcOEt deu um produto puro. Rendimento: 0,197 g (61%). RMN de 1 H (500 MHz, CDC13) δ 8, 63 (m, 1H) , 8, 22 (t 1, 1H) , 7, 78 (m, 1H) , 7,67 (m, 1H), 7,2 1 (m, 1H), 7,16 (m, 1H) , 7, 04 (m, 1H ) , 6, 56 (t, 1H), 4, 97 (d 1, 1H) , 4,92 (m, 1H) , 4,6- -4,5 (m, 2H ) , 4, 40 (d 1, 1H), 4,18 (m, 1H) , 3,80 (m, 1H), 2,69 (m, 1H) , 2, 46 (m, 1H) , 1,92 (s, 1H) APCI -MS : (M + 1) = 451/453 m/ z (ix) Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH—CH2~((2-
amidino)-5-piridinil) χ AcOH
Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN) (0,200 g, 0,444 mmol; ver passo (viii) acima), acetato de amónio (1,00 g, 0,0130 mol) e N-acetilcisteína (2,00 g, 0,0122 mol) em 10 mL de metanol foi aquecido a 50 °C, durante 2 dias. A RPLC preparativa com CH3CN:NH4OAc 0,1 M (30:79) e correndo as fracções apropriadas novamente com CH3CN:NH4OAc 0,1M (5:95 - 40:60) deu 60 mg (26%) de composto em título puro como o seu sal de acetato após liofilização de água e acetonitrilo. Pureza: 100%. RMN de 1H (500 MHz, D20, mistura de rotâmeros) δ 8,68 (s, 1H, rotâmero principal), 8,62 (s, 1H, rotâmero secundário), 8,05-7,9 (m, 2H), 7,33 (m, 1H, rotâmero), 7,27 (m, 1H, rotâmero), 7,22 (m, 1H, rotâmero), 7,17 (m, 1H, rotâmero), 7,01 (m, 1H, rotâmero), 6,84 (t, 1H) , 5,32 (s, 1H, rotâmero principal), 5,20 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,13 (s, 1H, rotâmero secundário), 4,88 (m, 1H, rotâmero principal), 4,65-4,55 (m, 2H, rotâmero principal), 4,45-4,35 (m, 1H, 170 rotâmero mais 1H, rotâmero secundário), 4,31 (d, 1H, rotâmero secundário), 4,2-4,05 (m, 1H mais 1H, rotâmero), 2,80 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,61 (m, 1H, rotâmero principal), 2,33 (m, 1H, rotâmero principal), 2,24 (m, 1H, rotâmero secundário), 1,93 (s, 3H) RMN de 13C (100 MHz; D2O) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, mistura de rotâmeros) δ 181,6, 173,3, 172,7, 172,6, 172,3, 162,6, 162,3 APCI-MS: (M + 1) = 468/470 m/z Exemplo 35
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)~(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((2-metoxiamidino)-5-piridinilo)
(i) Boc-NH-CH2-[(2-(amino(hidroxilimino)metil))-5- piridinilo] 5-(terc-Butoxicarbonilaminometil)piridina-2-carbonitrilo (1,00 g, 4,29 mmol; ver Exemplo 34(iv) acima) foi dissolvido em 10 mL de etanol e foram adicionados cloridrato de hidroxilamina 171 (0, 894 g, 0,0129 mol) e trietilamina (1,30 g, 0,0129 mol) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 6 dias. A mistura foi partilhada entre água e cloreto de metileno. A camada aquosa foi extraída com cloreto de metileno e a fase orgânica reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. Rendimento: 0,96 g (84%). RMN de (400 MHz, acetona-de) δ 9,01 (s 1, 1H), 8,50 (s 1, 1H) , 7,87 (m, 1H) , 7,70 (m, 1H) , 6,58 (largo, 1H) , 5,70 (largo, 2H), 4,31 (d, 2H), 1,41 (s, 9H)
(ii) Boc-Aze-N-H-CH2-(2-(amidino)-5-piridinilo) x AcOH
Esta reacção foi realizada segundo o método descrito em Judkins et al., Synth. Comm. (1998) 4351. Uma suspensão de Boc-NH-CH2-[(2-(amino(hidroxilimino)metil))-5-piridinilo] (0,910 g, 3,42 mmol; ver passo (i) acima), anidrido acético (0,35 mL, 3,7 mmol) e 0,35 g de Pd a 10%/C (50% de humidade) em 100 mL de ácido acético foi hidrogenada a uma pressão de 5 atm. durante 5 h. A mistura foi filtrada através de Celite e concentrada. O resíduo foi liofilizado de água e acetonitrilo para dar 0,97 g (92%) do composto em sub-título. RMN de (500 MHz, CD3OD) δ 8, 74 (s, , 1H), 8,12 7,98 (d, 1H) , 4,38 (S, 2H) , 1,92 (s, 3H), 1, 46 (s, 9H) 172 (iii) B0C-NH-CH2-(2-(amino(trimetilsililetilimino)metil)-5- piridinilo) A uma suspensão de Boc-NH-CH2-(2-(amidino)-5- piridinilo) x AcOH (0,96 g, 3,1 mmol; ver passo (ii) acima) em 75 mL de THF foi adicionada uma solução de carbonato de potássio (1,07 g, 7,7 mmol) e carbonato de Teoc-p-nitrofenilo (l,14g, 4,02 mmol) em 15 mL de água. A mistura foi agitada, de um dia para o outro. Foi adicionado um excesso de glicina e carbonato de potássio e a reacção continuou durante 2 h. O THF foi evaporado e o remanescente foi extraído três vezes com AcOEt. A fase orgânica reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. O produto podia ser utilizado sem mais purificação. RMN de (500 MHz, CDCI3) δ 9,31 (largo, 1H), 8,52 (s, 1H) , 8,41 (d, 1H) , 8,35 (largo, 1H) , 7,74 (d, 1H), 4,97 (largo, 1H) , 4,39 (m, 2H), 4,26 (m, 2H), 1,46 (s, 9H) , 1,14 (m, 2H) , 0,07 (s, 9 H) (iv) H2N-CH2-(2-(amino(trimetilsililetilimino)metil)-5- piridinilo) x 2 HC1
Boc-NH-CH2-(2-(amino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo) (0,23 g, 0,58 mmol; ver passo (iii) acima) foi dissolvido em 25 mL de AcOEt saturado com HCl(g) e agitado durante 30 min. O solvente foi evaporado e o produto utilizado sem mais purificação. Rendimento: 0,21 g (98%). RMN de ΧΗ (500 MHz, D20) δ 8,89 (s, 1H), 8,25 (s, 2H) , 4,55 (m, 2H), 4,42 (s, 2H), 1,20 (m, 2H) , 0,09 (s, 9H) 173 (v) Boc-Aze-NH-CH2-(2-(amino(trimetilsililetilimino) metil)-5-piridinilo) A uma solução de H2N-CH2-(2- (amino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo) x 2 HC1 (0,21 g, 0,57 mmol; ver passo (iv) acima), Boc-Aze-OH (0,127 g, 0,631 mmol) e TBTU (233 mg, 0, 726 mmol) em 5 mL de DMF foi adicionada dimetilaminopiridina (269 mg, 2,20 mmol). A mistura foi agitada, de um dia para o outro, vertida para 100 mL de água e extraída três vezes com AcOEt. A fase orgânica reunida foi lavada com bicarbonato de sódio aquoso e água, seca (Na2S04) e evaporada. O produto em bruto foi submetido a cromatografia flash sobre sílica gel com AcOEt para dar 170 mg (56%) do produto desejado. RMN de 2H (500 MHz, CDC13) δ 9,33 (largo, 1H), 8,54 (s, 1H) , 8,41 (d, 1H), 8,36 (largo, 1H), 7,75 (m, 1H) , 4,72 (m, 1H) , 4,56 (m, 2H), 4,26 (m, 2H) , 3,93 (m, 1H) , 3,80 (m, 1H) , 2,6-2,4 (m, 2H) , 1,42 (s, 9H), 1,14 (m, 2H), 0,07 (s, 9H) (vi) H-Aze-NH-CH2-(2-(amino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo) x 2 HC1
Boc—Aze-NH—CH2—(2-(amino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo) (170 mg, 0,356 mmol; ver passo (v) acima) foi dissolvido em 25 mL de AcOEt saturado com HCl(g) e agitado durante 30 min. O solvente foi evaporado e o produto utilizado sem mais purificação. Rendimento: 160 mg (100%). RMN de ΤΗ (500 MHz, CD3OD) δ 9,00 (m, 1H) , 8,84 (m, 1H) , 8,23 (d, 2H), 8,10 (m, 1H), 5,09 (m, 1H), 4,7-4,6 (m, 2H), 4,51 174 (m, 2H), 4,14 (m, 1H), 3,97 (m, 1H), 2,86 (m, 1H) , 2,58 (m, 1H) 1,22 (m, 2H), 0,11 (s, 9H) (vii) Ph(3-C1) (S-OCHF2) ~ (R)Cti(OH)C(O)-Aze~NH-CH2- (2- (amino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo) A uma solução de H-Aze-NH-CH2-(2- (amino(trimetilsililetilimino)-metil)-5-piridinilo) χ 2 HC1 (160 mg, 0,462 mmol; ver passo (vi) acima), Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)OH (131 mg, 0,462 mmol; ver Exemplo l(viii) acima) e PyBOP (263 mg, 0,505 mmol) em 5 mL de DMF foi adicionada diisopropiletilamina (0,30 mL, 1,71 mmol). A mistura foi agitada, de um dia para o outro, vertida para 100 mL de água e extraída três vezes com AcOEt. A fase orgânica reunida foi lavada com bicarbonato de sódio aquoso e água, seca (Na2S04) e evaporada. O produto em bruto foi submetido a cromatografia flash sobre sílica gel com AcOEt:MeOH (95:5) para dar 148 mg (52%) do produto desejado. (viii) Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (PjCH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-(2- (metoxiamino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo)
Uma suspensão de Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(R) CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH2-(2-(metoxiamino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo) (148 mg, 0,242 mmol; ver passo (vii) acima) e O-metil-hidroxilamina (202 mg, 2,42 mmol) em 10 mL de acetonitrilo foi aquecida a 70 °C, durante 3 h. A mistura foi partilhada entre água e AcOEt. A camada aquosa foi extraída duas vezes com AcOEt e a fase orgânica reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. O material em bruto foi submetido a cromatografia 175 flash sobre sílica gel com AcOEt:MeOH (95:5) para dar 44 mg (28%) de material puro. RMN de 3Η (500 MHz, CDC13 ) δ 8,55 (m, OO Ή \—1 , 05 (t 1, 1H) , 7, 70 (m, 1H) , 7, 58 (S, 1H), 7, 56 (d, 1H), 7, .22 (m, 1H) , 7, 16 (m, 1H) , 7, 03 (m, 1H) , 6,50 (t, 1H) , 4,92 (s, 1H) , 4, 89 (m, 1H) , 4, 55- -4, 45 (m, 2H) , 4,38 (largo, 1H), 4,2-4, r 1 (m, 3H) , 4, 00 (s, 3H) , 3, 73 (m, 1H) , 2,69 (m, 1H) , 2,44 (m, 1H) , 0, 97 (m, 2H) , 0,02 (s, 9H) (ix) Ph(3-C1) (5-OCHF2) -(R)CR(OH)C(O)-Aze-NH—CH2-((2- metoxiamidino)-5-piridinilo)
Ph(3-C1) (5-OCHF2) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2- (2-(metoxiamino(trimetilsililetilimino)metil)-5-piridinilo) (44 mg, 0, 069 mmol; ver passo (viii) acima) foi dissolvido em 2 mL de TF A e deixado a reagir durante 1 h. O TFA foi evaporado e o resíduo foi partilhado entre AcOEt e bicarbonato de sódio aquoso. A camada aquosa foi extraída com AcOEt e a fase orgânica reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. Rendimento: 30 mg (88%). Pureza: >95%. RMN de 3H (500 MHz, CDCI3) δ 8, 44 (m r 1H) , 8, 03 (t 1 r 1H) 1—1 Oh r- (m, 1H) , 7, 60 (m, 1H ) , 7,19 (m, 1H) , 7, r 13 (m, 1H) , 7, 00 (m 1H) , 6,52 (t, 1H) , 5,6-5, 45 (largo, 2H) , 4, 90 (s, 1H) , 4, 89 (m 1H) , 4,55-4,4 (m, 2H), 4, 27 (largo, 1H) , 4, 12 (m, 1H) , 3, 92 (s 3 H) , . 2,68 (m, 1H) , 2, 41 (m, 1H) RMN de 13C (100 MHz; CDC13) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina) δ 173,0, 170,9, 152,6 176 APCI-MS: (Μ + 1) = 498/500 m/z
Exemplo 36
Ph(3-C1) (5-QCHF2) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2((5-amidino)-2-pirimidinilo)
(i) 2-Amino-2-iminoetilcarbamato »AcOH N-Boc-aminoacetonitrilo (40,2 g, 257,4 mmol) e IV-acetilcisteína (42,0 g, 257, 4 mmol) foram dissolvidos em metanol (300 mL) a 60 °C e foi feito passar amónia durante 18 h. O solvente foi removido in vacuo. Após cromatografia de troca iónica (Amberlite IRA-400 (AcOH)) e recristalização de acetona, foi obtido 28,4 g (53%) do composto em sub-título como um sólido branco. RMN de (300 MHz, CD3OD) δ 4,41 (t, J= 4,9 Hz, 1H) , 4,01 (s, 2H), 2,91 (d, J= 5,0 Hz, 2H), 2,01 (s, 3H), 1,46 (s, 9H) 177 (ii) Perclorato de 1,3-bis(dimetilamino)-2-cianotrimetínio
Uma solução de 3-dimetilaminoacrilonitrilo (25,0 g, 260,0 mmol) em clorofórmio (75 mL) foi adicionada, gota a gota, a uma solução de cloreto de (clorometileno)dimetilamónio (50,0 g, 390, 1 mmol) em clorofórmio (175 mL) a 0 °C. A mistura reaccional foi agitada mais 2 h a 0 °C, em seguida, deixada aquecer até à temperatura ambiente, de um dia para o outro, em seguida, subsequentemente aquecida durante 8 h sob refluxo. O solvente foi removido in vacuo. O resíduo foi adicionado a uma mistura de perclorato de sódio (110 g, 0,898 mmol) em água (150 mL) e etanol (300 mL) . A mistura foi aquecida sob refluxo durante 15 min, em seguida, arrefecida e deixada em repouso, de um dia para o outro, num frigorífico. O precipitado foi recolhido e recristalizado de etanol para produzir 23,8 g (52%) do composto em sub-título como agulhas incolores.
p . f.: 140-141 °C RMN de ΧΗ (300 MHz, CDC13) δ 8,24 (s, 2H) , 3,59 (s, 6H), 3,51 (s, 6H) (iii) Boc-NH-CH2-(5-ciano)-2-pirimidina
Uma mistura de 2-amino-2-iminoetilcarbamato de t-butilo»AcOH (5,0 g, 23,8 mmol; ver passo (i) acima) e perclorato de 1,3-bis(dimetilamino)-2-cianotrimetínio (6,0 g, 23,8 mmol; ver passo (ii) acima) em piridina (300 mL) foi agitada sob azoto a 70-75 °C, durante 16 h e, em seguida, aquecida sob refluxo durante 6 h. A mistura foi arrefecida até à 178 temperatura ambiente e o solvente foi removido in vacuo. 0 resíduo foi extraído com uma mistura quente (1:1) de acetato de etilo e clorofórmio, filtrado através de um pequeno tampão de sílica e concentrado para dar o produto em bruto. A cromatoqrafia flash sobre sílica eluindo com clorofórmio deu 4,0 g (71%) do composto em título como óleo incolor, o qual solidificou em repouso.
p.f.: 86-87 °C
Rf= 0,77 (sílica, acetato de etilo/Clorofórmio 3:2) RMN de 3Η (300 MHz, DMSO-d6) δ 9,25 (s, 2H) , 7,39 (t 1, 1H) , 4,39 (d, J= 6 Hz, 2H), 1,38 (s, 9H). RMN de 13C (750 MHz, DMSO-d6) δ 170, 4, 160,3, 155, 8, 115, 2, 106,9, 80,0, 46,3, 28,1 APCI-MS: (M + 1) = 235 m/z (iv) Boc-Aze-NH-CH2-((5-ciano)-2-pirimidinilo)
Boc-NH-CH2-(5-ciano)-2-pirimidina (1,14 g, 4,87 mmol; ver passo (iii) acima) foi dissolvido em 50 mL de AcOEt saturado com HCl(g) e deixado a reagir durante lhe concentrado. O resíduo foi dissolvido em 20 mL de DMF e arrefecido num banho de gelo. Foram adicionados diisopropiletilamina (3,5 mL, 0,020 mol), Boc-Aze-OH (1,08 g, 5,37 mmol) e HATU (2,80 g, 5,38 mmol) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente, de um dia para o outro. O solvente foi evaporado e o produto foi purificado por RPLC preparativa utilizando CH3CN:NH4OAc 0,1 M 179 (40:60). O acetonitrilo foi evaporado e a camada aquosa foi extraída três vezes com AcOEt. A camada orgânica reunida foi seca (MgS04) e evaporada.
Rendimento: 1,12 g (72%). RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 8,95 (s, 2H) , 4,82 (d, 2H) , 4,74 (m, 1H), 3,95 (m, 1H), 3,84 (m, 1H), 2,6-2,4 (m, 2H), 1,47 (s, 9H)
(v) Boc-Aze-NH-CH2-((5-amidino)-2-pirimidinilo) χ AcOH
Uma solução de Boc-Aze-NH-CH2-((5-ciano)-2-pirimidinilo) (0,83 g, 2,6 mmol; ver passo (iv) acima), N-acetilcisteína (0,43 g, 2,6 mmol) e acetato de amónio (0,60 g, 7,8 mmol) em 10 mL de metanol foi aquecida a 60 °C sob azoto durante 2 dias. O solvente foi evaporado e o material em bruto foi purificado por RPLC preparativa utilizando um gradiente de CH3CN:NH4OAc 0,1 M (5:95 até 100:0). As fracções de interesse foram liofilizadas para dar 1,0 g (93%) do material desejado. RMN de (300 MHz, D20, sinais tapados pelo sinal do HDO) δ 9,17 (s, 2H), 4,1-3,9 (m, 2H) , 2,60 (m, 1H), 2,29 (m, 1H), 1,93 (s, 3H), 1,44 (s, 9H) (vi) Boc-Aze-NH-CH2- [ (5- (amino(trimetilsililetilimino)metil))-2-pirimidinilo] A uma suspensão de Boc-Aze-NH-CH2-((5-amidino)-2-pirimidinilo) x AcOH (0,95 g, 2,41 mmol; ver passo (v) acima) em 180 50 mL de THF foi adicionada uma solução de carbonato de
Teoc-p-nitrofenilo (0,85 g, 3,0 iranol) e carbonato de potássio (1,0 g, 7,2 inmol) em 10 mL de água. A mistura foi agitada durante 24 h, concentrada e partilhada entre água e cloreto de metileno. A camada orgânica foi lavada duas vezes com bicarbonato de sódio aquoso saturado, seca (Na2S04) e evaporada. O produto em bruto foi submetido a cromatografia flash sobre sílica gel com heptano:AcOEt (1:1). Rendimento: 1,04 g (90%). RMN de ΤΗ (300 MHz , CDCI3) δ 9, 16 (s, 2H), 4,80 (d, 2H) 4:73 (m, 1H), 4,26 (m, 2H), 4,0-3,8 (m, 2H), 2,6-2,4 (m, 2H) 1,47 (s, 9H), 1,12 (m, 2H), 0,07 (s, 9H) (vii) Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-[(5- (amino(trimetilsililetilimino)metil))-2-pirimidinilo]
Boc-Aze-NH-CH2-[(5-(amino(trimetilsililetilimino)metil)) -2-pirimidinilo] (0,209 g, 0,437 mmol; ver passo (vi) acima) foi dissolvido em 25 mL de AcOEt saturado com HCl(g) e deixado a reagir durante 15 min. O solvente foi evaporado e o remanescente foi dissolvido em 4 mL de DMF. Foram adicionados Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,100 g, 0,396 mmol; ver Exemplo l(viii) acima), PyBOP (0,231 g, 0,444 mmol) e diisopropiletilamina (0,208 g, 1,61 mmol) e a mistura foi agitada durante 80 min. A mistura reaccional foi vertida para 100 mL de água e extraída três vezes com AcOEt. A camada orgânica reunida foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (Na2S04) e evaporada. O produto em bruto foi purificado por RPLC preparativa utilizando CH3CN:NH4OAc 0,1 M (1:1). Rendimento: 63 mg (26%). 181 RMN de ΤΗ (400 MHz, CDCI3, mistura de rotâmeros ) δ 9,3 (largo, 1H), 9,03 (s, 2H, rotâmero secundário), 9,00 (s, 2H, rotâmero principal), 8,25 (m, 1H, rotâmero principal), 7,9 (largo, 1H) , 7,80 (m, 1H, rotâmero secundário), 7,2-6,9 (m, 3 H) , 6,50 (t, 1H), 5,14 (s, 1H, rotâmero secundário), 5, 08 (m, \—1 rotâmero secundário), 4,94 (s, 1H, rotâmero principal), 4,80 (m, 1H, rotâmero principal), 4,7-4,4 (m, 2H) , 4,3-3,9 (m, 3H) , 3,74 (m, 1H, rotâmero principal), 2,7-2,1 (m, 2H), 1,03 (m, 2H), 0,01 (s, 9H) (viii) Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH—CH2~((5-
amidino)-2-pirimidinilo) χ TFA
Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-[ (5-(amino(trimetilsililetilimino)metil))-2-pirimidinilo] (21 mg, 0, 034 mmol; ver passo (vii) acima) foi dissolvido em 0,5 mL de cloreto de metileno e arrefecido num banho de gelo. Foi adicionado TFA (2 mL) e a mistura foi agitada durante 60 min e, em seguida, concentrada. O produto foi liofilizado de água e acetonitrilo. Rendimento: 20 mg (100%). Pureza: 100%. RMN de 1H ( 400 MHz, CD3OD, mistura de rotâmeros, sinais tapados pelo sinal de HDO) δ 9,08 (s, 2H), 7,4-7,1 (m, 3H), 6,88 (t, 1H, rotâmero principal), 6,85 (t, 1H, rotâmero secundário), 5,30 (m, 1H, rotâmero secundário) , 5,22 (s, 1H, rotâmero secundário ), 5,20 (s, 1H, rotâmero principal), 4, 73 (m, 1H, rotâmero principal), 4,34 (m, 1H, rotâmero), 4,21 (m, 1H, rotâmero), 4,15-3,95 (m, 2H, rotâmeros), 2,73 (m, 1H, rotâmero), 2,57 (m, 1H, rotâmero), 2,45-2,25 (m, 2H, rotâmeros) 182 RMN de 13C (100 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, mistura de rotâmeros) δ 173,0, 172,6, 172,1, 171,0, 163,4. APCI-MS: (M + 1) = 469/471 m/z
Exemplo 37
Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(R) CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2- ( (5-metoxiamidino)-2-pirimidinilo)
(i) Ph(3-C1) (5-OCHF2) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-[(5- (metoxiamino-(trimetilsililetilimino)metil))-2-pirimidinilo]
Uma suspensão de Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-[(5-(amino(trimetilsililetilimino)metil))-2-pirimidinilo] (40 mg, 0,065 mmol; ver Exemplo 36(vii) acima) e O-metil-hidroxilamina (33 mg, 0,40 mmol) em 3 mL de acetonitrilo foi aquecida a 70 °C, durante 3 h. A mistura foi partilhada entre água e AcOEt. A camada aquosa foi extraída duas vezes com AcOEt e a fase orgânica reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. Rendimento: 33 mg (79%). 183 RMN de 3Η (40 0 MHz, CDC13, 2H, rotâmero principal), 8,70 7,62 (s, 1H), 7,4-6,9 (m, 4H) , 4,2-4,05 (m, 3H) , 3,96 (s, 3H) 2,1 (largo, 1H), 0,96 (m, 2H), mistura de rotâmeros) δ 8,76 (s (s, 2H, rotâmero), 8,18 (m, 1H) , 6,50 (t 1, 1H), 5,3-4,5 (m, 4H) , , 3,68 (m, 1H), 2,8-2,2 (m, 2H) , 0,01 (s, 9H) (ii) Ph(3-C1) (5-OCHF2) -(R)CH(OH)C(0)-Aze~NH-CH2-((5- metoxiamidino)-2-pirimidinilo)
Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-[(5-(metoxiamino-(trimetilsililetilimino)metil))-2-pirimidinilo] (33 mg, 0, 052 mmol; ver passo (i) acima) foi dissolvido em 0,5 mL de cloreto de metileno e arrefecido num banho de gelo. Foi adicionado TFA (2 mL) e a mistura foi agitada durante 2 h e, em seguida, concentrada. O produto foi liofilizado de água e acetonitrilo. Rendimento: 31 mg (81%). Pureza: 100%. RMN de XH (400 MHz, CD3OD, sinais da mistura de rotâmeros tapados pelo sinal de HDO) δ 8,96 (s, 2H, rotâmero), 8,94 (s, 2H, rotâmero), 7,4-7,3 (m, 1H) , 7,2-7,1 (m, 2H) , 6,88 (t, 1H, rotâmero), 6,85 (t, 1H, rotâmero), 5,29 (m, 1H, rotâmero), 5,24 (s, 1H, rotâmero), 5,20 (s, 1H, rotâmero), 4, 75 -4,55 (m, 2H) 4,33 (m, 1H, rotâmero) , 4, 19 (m, 1H, rotâmero), 4,15-3,95 (m 2H, rotâmeros) 1 , 3,88 (s, 3H, rotâmero) , 3,86 (s, 3H, rotâmero) 2,72 (m, 1H, rotâmero) , 2,56 (m, 1H, rotâmero), 2,45-2,25 (m 2H, rotâmeros) RMN de 13C (100 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, mistura de rotâmeros) δ 172,8, 172,6, 172,1, 171,8, 167,8, 167, 7, 155, 1, 152,3, 152,1 184 APCI-MS: (Μ + 1) = 499/501 m/z
Exemplo 38
Ph (3-C1) (5-QCHF2) - (-R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (3-F)
(i) 2-Fluoro-4-vinilbenzonitrilo
Uma solução de 4-bromo-2-fluorobenzonitrilo (4,92 g, 0,0246 mol), viniltributilestanho (0,78 g, 0,246 mol) e tetraquistrifenilfosfina (0,67 g, 0,58 mmol) em 250 mL de tolueno foi aquecida a refluxo sob azoto de um dia para o outro. O solvente foi evaporado e o resíduo foi submetido a cromatografia flash sobre sílica gel com heptano:CH2CI2 (1:1) até CH2CI2 puro. Foi obtido um óleo incolor que cristalizou. Rendimento: 3,0 g (82%). RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 7,56 (m, 1H), 7,3-7,2 (m, 2H) , 6,69 (m, 1H), 5,89 (d, 1H), 5,51 (d, 1H) 185 (ii) 2-Fluoro-4-hidroximetilbenzonitrilo
Numa solução arrefecida (-78 °C) de 2-fluoro-4- vinilbenzonitrilo (1,3 g, 8,8 mmol; ver passo (i) acima) em 40 mL de CH2C12 e 5 mL de metanol foi borbulhado ozono (50 L/h, 29 g/m3) durante 30 min. Foi subsequentemente borbulhado árgon para remover o excesso de ozono. Foi adicionado boro-hidreto de sódio (0,67 g, 0,018 mol) e o banho de arrefecimento foi removido. A mistura foi agitada e deixada a reagir durante 1 h. A mistura foi evaporada e foi adicionado HC1 2 Μ. A mistura foi extraída duas vezes com éter dietílico e a fracção reunida de éter foi seca (Na2S04) e evaporada. O produto em bruto cristalizou. Rendimento: 1,1 g (81%). RMN de 3Η (300 MHz, CDC13) δ 7,59 (m, 1H) , 7,3-7,2 (m, 2H) , 4,79 (d, 2H), 2,26 (t, 1H) (iii) Metanossulfonato de 4-ciano-3-fluorobenzilo 2-Fluoro-4-hidroximetilbenzonitrilo (1,3 g, 8,6 mmol; ver passo (ii) acima) foi dissolvido em 50 mL de CH2C12 e arrefecido num banho de gelo. Foram adicionados trietilamina (0,87 g, 8,6 mmol) e cloreto de metanossulfonilo (0,99 g, 8,7 mmol). Após agitação durante 1,5 h a mistura reaccional foi lavada com HC1 1M. A fase orgânica foi seca (Na2S04) e evaporada. O produto podia ser utilizado sem purificação. Rendimento de um óleo incolor: 1,8 g (92%). RMN de 3H (400 MHz, CDC13) δ 7,66 (m, 1H) , 7,35-7,3 (m, 2H) , 5,26 (s, 2H), 3,07 (s, 3H) 186 (iv) 4-Azidometil-2-fluorobenzonitrilo A uma solução gelada de metanossulfonato de 4-ciano-3-fluorobenzilo (1,8 g, 7,9 mmol; ver passo (iii) acima) foi adicionada azida de sódio (0,80 g, 0,012 mol). A mistura foi agitada, de um dia para o outro, e, em seguida, vertida para 200 mL de água e extraída três vezes com éter dietilico. A fase etérea reunida foi lavada cinco vezes com água, seca (Na2S04) e evaporada. O óleo incolor em bruto podia ser utilizado sem mais purificação. Rendimento: 1,2 g (87%). RMN de (300 MHz, CDC13) δ 7,64 (m, 1H) , 7,25-7,18 (m, 2H), 4,47 (s, 2H) (v) 4-Aminometil-2-fluorobenzonitrilo A uma suspensão de cloreto de estanho di-hidratado (0,45 g, 2,4 mmol) em 20 mL de acetonitrilo sob agitação foi adicionado tiofenol (1,07 g, 9,7 mmol) e trietilamina (0,726 g, 7,17 mmol). Depois disso foi adicionada uma solução de 4-azidometil-2-fluorobenzonitrilo (0,279 g, 1,58 mmol; ver passo (iv) acima) em alguns mL de acetonitrilo. Após 1,5 h, a azida foi consumida e o solvente foi evaporado. O resíduo foi dissolvido em cloreto de metileno e lavado três vezes com NaOH 2 Μ. A fase orgânica foi extraída duas vezes com HC1 1 Μ. A fase aquosa ácida reunida foi lavada com cloreto de metileno e, em seguida, tornada alcalina com NaOH 2 M e extraída três vezes com cloreto de metileno. A fase orgânica foi seca (Na2S04) e evaporada para dar 0,172 g (72%) do composto em sub-título desejado o qual podia ser utilizado sem purificação. 187 RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 7,58 (m, 1H) , 7,3-7,2 (m, 2H) , 3,98 (s, 2H), 1,55-1,35 (largo, 2H) (vi) Boc-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN) A uma solução gelada de Boc-Aze-OH (0,194 g, 0,96 mmol) em 5 mL de DMF foi adicionado TBTU (0,50 g, 9,6 mmol). Após 30 min foi adicionada outra solução compreendendo 4-aminometil-2-fluorobenzonitrilo (0,17 g, 0,81 mmol; ver passo (v) acima) e diisopropiletilamina (0,326 g, 2,53 mmol) em 7 mL de DMF. A solução resultante foi agitada, de um dia para o outro, à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado e o produto foi purificado por RPLC preparativa utilizando CH3CN:NH4OAc 0,1 M (50:50). A liofilização deu 0,237 g (74%) do composto em subtítulo desejado. RMN de (300 MHz, CD30D) δ 7,70 (m, 1H) , 7, 35-7, 25 (m, 2H), 4,65-4,35 (m, 3H), 4,0-3,85 (m, 2H) , 2,51 (m, 1H), 2,19 (m, 1H), 1,40 (s, 9H) (vii) Ph(3-C1) (5-OCHF2) -(R) CH(OH)C(O)-Aze-NHCH2~Ph(3-F, 4-CN)
Boc-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN) (0,118 g, 0,354 mmol; do passo (vi) acima) foi dissolvido em 30 mL de AcOEt saturado com HCl(g). A reacção foi agitada durante 20 min e evaporada. O dicloridrato resultante e HATU (0,152 g, 0,400 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de DMF. Essa solução foi adicionada a uma solução gelada de Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(R)CE(OH)C(O)OH (0,101 g, 0,400 mmol; ver Exemplo l(viii) acima) em 5 mL de DMF. A reacção foi agitada, de um dia para o outro, à temperatura ambiente. 0 solvente foi evaporado e o produto foi purificado por RPLC preparativa com CH3CN:NH4OAc 0,1 M (50:50). A liofilização deu 0,130 g (77%) do composto em sub-título desejado. RMN de ΧΗ (500 MHz, CD3OD mistura de rotâmeros) δ 7,7-7,6 (m, 1H), 7,35-7,1 (m, 5H) , 6,88 (t, 1H, rotâmero) , 6,86 (t, 1H, rotâmero), 5,25-5,1 (m, 1H mais rotâmero secundário do protão seguinte), 4,80 (m, 1H, rotâmero principal), 4,6-4,4 (m, 2H) , 4,36 (m, 1H, rotâmero principal), 4,18 (m, 1H, rotâmero principal), 4,07 (m, 1H, rotâmero secundário), 3,98 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,70 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,53 (m, 1H, rotâmero principal), 2,29 (m, 1H, rotâmero principal), 2,16 (m, 1H, rotâmero secundário) (viii) Ph(3-C1) (5-OCHF2) -(R) CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F)
Ph(3-C1) (5-OCHF2) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN) (0,130 g, 0,278 mmol; ver passo (vii) acima) foi dissolvido em 80 mL de etanol saturado com HCl(g) . A mistura foi deixada a reagir à temperatura ambiente, de um dia para o outro. O solvente foi evaporado e o resíduo foi re-dissolvido em 100 mL de etanol saturado com NH3(g). A reacção foi deixada prosseguir lentamente à temperatura ambiente durante dois dias. A temperatura foi aumentada até 50 °C e a reacção continuou durante mais 3 dias. O material de partida foi consumido e o solvente foi evaporado. O produto foi purificado por RPLC preparativa e liofilizado para dar 17 mg (13%) do composto em título como o seu sal de AcOH. 189 RMN de 3Η (600 MHz, CD3OD mistura de rotâmeros) δ 7,65-7,6 (m, 1H) , 7,4-7,3 (m, 3H) , 7,25-7,1 (m, 2H) , 7,15-6,7 (m, 1H) , 5,25-5,1 (m, 1H mais rotâmero secundário do protão seguinte), 4,8 (m, 1H, rotâmero principal parcialmente tapado pelo CD3OH) , 4,6-3,95 (m, 4H) , 2,69 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,56 (m, 1H, rotâmero principal), 2,28 (m, 1H, rotâmero principal), 2,14 (m, 1H, rotâmero secundário), 1,90 (s, 3H) RMN de 13C (100 MHz; CD3OD): (carbonos de carbonilo e/ou amidina, mistura de rotâmeros) δ 180,6, 173,4, 173,1, 172,9, 164,5, 162,3, 159,8 APCI-MS: (M + 1) = 485/487 m/z Exemplo 39
Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (-R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (2,6-diF)
(i) 2,6-Difluoro-4[(metilsulfinil)(metiltio)metil]benzoni- trilo (Metilsulfinil)(metiltio)metano (7,26 g, 0,0584 mol) foi dissolvido em 100 mL de THF seco sob árgon e foi arrefecido até 190 -78 °C. Foi adicionado butil-litio em hexano (16 mL 1,6 M, 0,0256 mol), gota a gota, sob agitação. A mistura foi agitada durante 15 min. Entretanto, uma solução de 3,4,5-trifluorobenzonitrilo (4,0 g, 0,025 mmol) em 100 mL de THF seco foi arrefecida até -78 °C sob árgon e a solução anterior foi adicionada através de uma cânula à última solução ao longo de um período de 35 min. Após 30 min, o banho de arrefecimento foi removido e quando a reacção tinha atingido a temperatura ambiente, esta foi vertida para 400 mL de água. 0 THF foi evaporado e a camada aquosa remanescente foi extraída três vezes com éter dietílico. A fase etérea reunida foi lavada com água, seca (Na2SC>4) e evaporada. Rendimento: 2,0 g (30%).
RMN de ΤΗ (500 MHz, CDC13) δ 7,4-7,25 (m, 2H) \—1 O LO (s, 1H diastereómero), 4, 91 (S, 1H, diastereómero), 2,88 (s, 3H diastereómero), 2, 52 (s, 3H, diastereómero), 2, 49 (s, 3H diastereómero), 2,34 (s, 3H, diastereómero), 1,72 (largo, 1H) (ii) 2,6-Difluoro-4-formilbenzonitrilo 2,6-Difluoro-4[(metilsulfinil)(metiltio)metil]benzonitrilo (2,17 g, 8,32 mmol; ver passo (i) acima) foi dissolvido em 90 mL de THF e foram adicionados 3,5 mL de ácido sulfúrico concentrado. A mistura foi deixada à temperatura ambiente durante 3 dias e, subsequentemente, vertida para 450 mL de água. Seguiu-se a extracção três vezes com AcOEt e a fase etérea reunida foi lavada duas vezes com bicarbonato de sódio aquoso e com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (Na2S04) e evaporada. Rendimento: 1,36 g (98%). A posição do grupo formilo foi estabelecida por RMN de 13C. O sinal dos carbonos fluorados a 162,7 ppm exibiu o padrão de acoplamento esperado com duas 191 constantes de acoplamento da ordem dos 260 Hz e 6,3 Hz respectivamente correspondendo a um acoplamento ipso e um meta dos átomos de flúor. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 10,35 (s, 1H), 7,33 (m, 2H) (iii) 2,6-Difluoro-4-hidroximetilbenzonitrilo 2,6-Difluoro-4-formilbenzonitrilo (1,36 g, 8,13 mmol; ver passo (ii) acima) foi dissolvido em 25 mL de metanol e arrefecido num banho de gelo. Foi adicionado boro-hidreto de sódio (0,307 g, 8,12 mmol) em porções sob agitação e a reacção foi deixada durante 65 min. O solvente foi evaporado e o resíduo foi partilhado entre éter dietílico e bicarbonato de sódio aquoso. A camada etérea foi lavada com mais bicarbonato de sódio aquoso e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (Na2SC>4) e evaporada. O produto em bruto cristalizou rapidamente e podia ser utilizado sem mais purificação. Rendimento: 1,24 g (90%) . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 7,24 (m, 2H) , 4,81 (s, 2H) , 2,10 (largo, 1H) (iv) Metanossulfonato de 4-ciano-2,6-difluorobenzilo A uma solução gelada de 2,6-difluoro-4-hidroximetilbenzonitrilo (1,24 g, 7,32 mmol; ver passo (iii) acima) e cloreto de metanossulfonilo (0,93 g, 8,1 mmol) em 60 mL de cloreto de metileno foi adicionada trietilamina (0,81 g, 8,1 mmol) sob agitação. Após 3 h a 0 °C, a mistura foi lavada 192 duas vezes com HC1 1 M e uma vez com água, seca (Na2S04) e evaporada. O produto podia ser utilizado sem mais purificação. Rendimento: 1,61 g (89%). RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 7,29 (m, 2H) , 5,33 (s, 2H) , 3,07 (s, 3H) (v) 4-Azidometil-2,6-difluorobenzonitrilo
Uma mistura de metanossulfonato de 4-ciano-2,6-difluorobenzilo (1,61 g, 6,51 mmol; ver passo (iv) acima) e azida de sódio (0,72 g, 0,0111 mol) em 10 mL de água e 20 mL de DMF foi agitada à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A mistura resultante foi subsequentemente vertida para 200 mL de água e extraída três vezes com éter dietílico. A fase etérea reunida foi lavada cinco vezes com água, seca (Na2S04) e evaporada. Uma pequena amostra foi evaporada para efeitos de RMN e o produto cristalizado. O resto foi evaporado cuidadosamente mas não até à secura total. O rendimento (teoricamente 1,26 g) foi assumido como sendo quase quantitativo com base em RMN e HPLC analítico. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 7,29 (m, 2H), 4,46 (s, 2H) (vi) 4-Aminometil-2,6-difluorobenzonitrilo
Esta reacção foi realizada de acordo com o processo descrito em J. Chem. Res. (M) (1992) 3128. A uma suspensão de 520 mg de Pd a 10%/C (50% de humidade) em 20 mL de água foi adicionada uma solução de boro-hidreto de sódio (0,834 g, 193 0,0221 mol) em 20 mL de água. Ocorreu alguma libertação gasosa. 4-Azidometil-2,6-difluorobenzonitrilo (1,26 g, 6,49 mmol; ver passo (v) acima) foi dissolvido em 50 mL de THF e adicionado à mistura aquosa num banho de gelo ao longo de 15 min. A mistura foi agitada durante 4 h, após o que foram adicionados 20 mL de HC1 2 M e a mistura foi filtrada através de Celite. A Celite foi lavada com mais água e a fase aquosa reunida foi lavada com AcOEt e subsequentemente tornada alcalina com NaOH 2 M. Seguiu-se a extracção três vezes com cloreto de metileno e a fase orgânica reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. Rendimento: 0,87 g (80%). RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 7,20 (m, 2H) , 3,96 (s, 2H) , 1,51 (largo, 2H) (vii) 2,6-Dif luoro-4-te-rc-butoxicarbonilaminometilbenzoni- trilo
Uma solução de 4-aminometil-2,6-difluorobenzonitrilo (0,876 g, 5,21 mmol; ver passo (vi) acima) foi dissolvida em 50 mL de THF e foi adicionado dicarbonato de di-terc-butilo (1,14 g, 5,22 mmol) em 10 mL de THF. A mistura foi agitada durante 3,5 h. O THF foi evaporado e o resíduo foi partilhado entre água e AcOEt. A camada orgânica foi lavada três vezes com HC1 0,5 Me água, seca (Na2S04) e evaporada. O produto podia ser utilizado sem mais purificação. Rendimento: 1,38 g (99%). RMN de 2Η (300 MHz, CDC13) δ 7,21 (m,2H), 4,95 (largo, 1H), 4,43 (largo, 2H), 1,52 (s, 9H) 194 (viii) Boc-Pab(2,6-diF)(OH)
Uma mistura de 2,6-difluoro-4-terc-butoxicarbonilamino-metilbenzonitrilo (1,38 g, 5,16 mmol; ver passo (vii) acima), cloridrato de hidroxilamina (1,08 g, 0,0155 mol) e trietilamina (1,57 g, 0,0155 mol) em 20 mL de etanol foi agitada à temperatura ambiente durante 36 h. O solvente foi evaporado e o residuo foi partilhado entre água e cloreto de metileno. A camada orgânica foi lavada com água, seca (Na2SC>4) e evaporada. O produto podia ser utilizado sem mais purificação. Rendimento: 1,43 g (92%). RMN de ΧΗ (500 MHz, CD3OD) δ 7,14 (m, 2H), 4,97 (largo, 1H), 4,84 (largo, 2H), 4,40 (largo, 2H), 1,43 (s, 9H)
(ix) Boc-Pab(2,6-diF) x AcOH
Esta reacção foi realizada de acordo com o processo descrito por Judkins et al., Synth. Comm. (1998) 4351.
Boc-Pab(2,6-diF)(OH) (1,32 g, 4,37 mmol; ver passo (viii) acima), anidrido acético (0, 477 g, 4,68 mmol) e 442 mg de Pd a 10%/C (50% de humidade) em 100 mL de ácido acético foi hidrogenado a 5 atm de pressão durante 3,5 h. A mistura foi filtrada através de Celite, lavada com etanol e evaporada. O residuo foi liofilizado de acetonitrilo e água e algumas gotas de etanol. O produto em sub-titulo podia ser utilizado sem mais purificação. Rendimento: 0,1,49 g (99%). RMN de ΤΗ (400 MHz, CD3OD) δ 7,45 (m, 2H) , 4,34 (s, 2H) , 1,90 (s, 3H), 1,40 (s, 9H) 195 (x) Boc-Pab(2,6-diF)(Teoc) A uma solução de Boc-Pab(2,6-diF) χ AcOH (1,56 g, 5,49 mmol; ver passo (ix) acima) em 100 mL de THF e 1 mL de água foi adicionado carbonato de 2-(trimetilsilil)etilo e p-nitrofenilo (1,67 g, 5,89 mmol). Foi adicionada, gota a gota, ao longo de 5 min, uma solução de carbonato de potássio (1,57 g, 0,0114 mol) em 20 mL de água. A mistura foi agitada, de um dia para o outro. O THF foi evaporado e o resíduo foi partilhado entre água e cloreto de metileno. A camada aquosa foi extraída com cloreto de metileno e a fase orgânica reunida foi lavada duas vezes com bicarbonato de sódio aquoso, seca (Na2S04) e evaporada. A cromatografia flash sobre sílica gel com heptano/AcOEt = 2/1 deu 1,71 g (73%) de composto puro. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 7,43 (m, 2H) , 4,97 (largo, 1H), 4,41 (largo, 2H) , 4,24 (m, 2H), 1,41 (s, 9H), 1,11 (m, 2H) , 0,06 (s, 9 H) (xi) Boc-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc)
Boc-Pab(2,6-diF)(Teoc) (1,009 g, 2,35 mmol; ver passo (x) acima) foi dissolvido em 50 mL de AcOEt saturado com HCl(g). A mistura foi deixada durante 10 min., evaporada e dissolvida em 18 mL de DMF e, em seguida, arrefecida num banho de gelo. Foram adicionados Boc-Aze-OH (0,450 g, 2,24 mmol), PyBOP (1,24 g, 2,35 mmol) e por último diisopropiletilamina (1,158 g,
8,96 mmol) . A mistura reaccional foi agitada durante 2 h e, em seguida, vertida para 350 mL de água e extraída três vezes com AcOEt. A fase orgânica reunida foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (Na2S04) e evaporada. A 196 cromatografia flash sobre sílica gel com heptano:AcOEt (1:3) deu 1,097 g (96%) do composto desejado. RMN de (500 MHz, CDC13) δ 7,46 (m, 2H) , 4,65-4,5 (m, 3H) , 4,23 (m, 2H), 3,87 (m, 1H), 3,74 (m, 1H), 2,45-2,3 (m, 2H), 1,40 (s, 9H), 1,10 (m, 2H), 0,05 (s, 9H) (xii) Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc)
Boc-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc) (0,256 g, 0,500 mmol; ver passo (xi) acima) foi dissolvido em 20 mL de AcOEt saturado com HCl(g). A mistura foi deixada durante 10 min. e evaporada e dissolvida em 5 mL de DMF. Foram adicionados Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,120 g, 0,475 mmol; ver Exemplo l(viii) acima), PyBOP (0,263 g, 0,498 mmol) e por último diisopropiletilamina (0,245 g, 1,89 mmol. A mistura reaccional foi agitada durante 2 h e, em seguida, vertida para 350 mL de água e extraída três vezes com AcOEt. A fase orgânica reunida foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (Na2S04) e evaporada. A cromatografia flash sobre sílica gel com AcOEt deu 0,184 g (60%) do composto em sub-título desejado. RMN de XH (400 MHz, CD3OD, mistura de rotâmeros) δ 7,55-7,45 (m, 2H) , 7,32 (m, 1H, rotâmero principal), 7,27 (m, 1H, rotâmero secundário), 7,2-7,1 (m, 2H) , 6,90 (t, 1H, rotâmero principal), 6,86 (t, 1H, rotâmero secundário), 5,15 (s, 1H, rotâmero principal), 5,12 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,06 (s, 1H, rotâmero secundário), 4,72 (m, 1H, rotâmero principal), 4,6-4,45 (m, 2H) , 4,30 (m, 1H, rotâmero principal), 4,24 (m, 2H) , 4,13 (m, 1H, rotâmero principal), 4,04 (m, 1H, rotâmero secundário), 3,95 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,62 (m, 1H, rotâmero 197 secundário), 2,48 (m, 1H, rotâmero principal), 2,22 (m, 1H, rotâmero principal), 2,10 (m, 1H, rotâmero secundário), 1,07 (m, 2H), 0,07 (m, 9H) (xiii) Ph (3-C1) (5-OCHF?) - (R) CH(OH) C (O) -Aze-Pab(2,6-diF)
Ph (3-C1) (5-OCHF2)- /R) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (2,6-diF) (Teoc) (81 mg, 0,127 mmol; ver passo (xii) acima) foi dissolvido em 0,5 mL de cloreto de metileno e arrefecido num banho de gelo. Foi adicionado TFA (3 mL) e a reacção foi deixada durante 75 min. O TFA foi evaporado e o resíduo foi liofilizado de água e acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por RPLC preparativa com CH3CN:NH4OAc 0,1 M (35:65) para produzir 39 mg (55%) do composto em título como o seu sal de AcOH, pureza: 99%. RMN de XH (400 MHz, CD3OD mistura de rotâmeros) δ 7,5-7,4 (m, 2H), 7,32 (m, 1H, rotâmero principal), 7,28 (m, 1H, rotâmero secundário), 7,2-7,1 (m, 3H) 6,90 (t, 1H, rotâmero principal), 6,86 (t, rotâmero secundário), 5,15 (s, 1H, rotâmero principal), 5,14 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,07 (s, 1H, rotâmero secundário), 4,72 (m, 1H, rotâmero principal), 4,65-4,45 (m, 2H) , 4,30 (m, 1H, rotâmero principal), 4,16 (m, 1H, rotâmero principal), 4,03 (m, 1H, rotâmero secundário), 3,95 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,63 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,48 (m, 1H, rotâmero principal), 2,21 (m, 1H, rotâmero principal), 2,07 (m, 1H, rotâmero secundário), 1,89 (s, 3H) RMN de 13C (75 MHz; CD30D) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, mistura de rotâmeros) δ 171,9, 171,2, 165,0, 162,8, 160,4 APCI-MS: (M + 1) = 503/505 m/z. 198
Exemplo 40
Ph (3-C1) (5-OCHF2) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF) (OMe)
(i) Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CE(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6- diF)(OMe,Teoc)
Uma mistura de Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc) (64 mg, 0,099 mmol; ver Exemplo 39(xii) acima) e cloridrato de O-metil-hidroxilamina (50 mg, 0,60 mmol) em 4 mL de acetonitrilo foi aguecida a 70 °C, durante 3 h. O solvente foi evaporado e o resíduo foi partilhado entre água e AcOEt. A camada aquosa foi extraída duas vezes com AcOEt e a fase orgânica reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. O produto podia ser utilizado sem mais purificação. Rendimento: 58 mg (87%). RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC1 3) δ 7,90 (t 1, 1H) , 7, 46 (m, 1H) 7,25-6,95 (m, 5H) , 6,51, t, 1H), 4,88 (s, 1H) , 4, 83 (m, 1H) 4,6-4,5 (m, 2H) , 4, 4-3,9 (m, 4H) , 3,95 (s, 3H) , 3,63 (m, 1H) 2,67 (m, 1H), 2,38 (m, 1H) , 1,87 (largo, 1H) , 0,98 (m, 2H) 0,01, s, 9H) 199 (ii) Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R;CH(0H)C(0)-Aze-Pab(2,6-diF)(OMe)
Ph(3-C1) (S-OCHF2) ~ (R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF) (OMe,Teoc) (58 mg, 0, 086 mmol; ver passo (i) acima) foi dissolvido em 3 mL de TFA, arrefecido num banho de gelo e deixado a reagir durante 2 h. O TFA foi evaporado e o resíduo dissolvido em AcOEt. A camada orgânica foi lavada duas vezes com carbonato de sódio aquoso e água, seca (Na2S04) e evaporada. O resíduo foi liofilizado de água e acetonitrilo para dar 42 mg (92%) do composto em título. Pureza: 94%. RMN de 3Η (300 MHz, CDCI3) δ 7,95 (t 1, 1H) , 7,2-7,1 (m 4H) , 6,99 (m, 1H), 6,52 (t, 1H), 4,88 (s, 1H) , 4,85-4,75 (m 3H) , 4,6-4,45 (m, 2H) , 4,29 (largo, 1H), 4, 0 9 (m, 1H), 3,89 (s 3H) , 3,69 (m, 1H), 2,64 (m, 1H), 2,38 (m, 1H ), 1,85 (largo, 1H) RMN de 13C (100 MHz; CDCI3) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina δ 172,1, 169,8, 151,9 APCI -MS: (Μ + 1 ) = 533/535 m/z 200
Exemplo 41
Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (.R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (2,5-diF)
(i) 2, 5-Difluoro- 4[(metilsulfinil)(metiltio)metil]benzonitrilo (Metilsulfinil)(metiltio)metano (3,16 g, 0,0255 mol) foi dissolvido em 50 mL de THF seco sob árgon e, em seguida, arrefecido até -78 °C. Foi adicionado butil-litio em hexano (16 mL 1,6 M, 0,0256 mol), gota a gota, sob agitação. A mistura foi agitada durante 15 min. Entretanto, uma solução de 2,4,5-trifluorobenzonitrilo (2,0 g; 0,013 mol) em 50 mL de THF seco foi arrefecida até -78 °C sob árgon e a solução anterior foi adicionada através de uma cânula à última solução ao longo de um periodo de 3-5 min. Após 30 min, o banho de arrefecimento foi retirado e quando a reacção tinha atingido a temperatura ambiente, ela foi vertida para 200 mL de água. O THF foi evaporado e a camada aquosa remanescente foi extraida três vezes com éter dietilico. A fase etérea reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. O produto em bruto começou a cristalizar e podia ser utilizado tal e qual no passo seguinte. Rendimento: 2,8 g (84%). 201 RMN de XH (500 MHz, CDCI3) δ 7,51-7,44 (m, 2H, diastereómero principal), 7,39 (dd, 1H, diastereómero secundário), 5,00 (s, 1H, diastereómero secundário), 4,92 (s, 1H, diastereómero principal), 2,59 (s, 3H, diastereómero secundário), 2,56 (s, 1H, diastereómero principal), 2,46 (s, 1H, diastereómero secundário), 2,40 (s, 1H, diastereómero principal) (ii) 2,5-Difluoro-4-formilbenzonitrilo 2,5-Difluoro-4[(metilsulfinil)(metiltio)metil]benzonitrilo (2,8 g, 0,0107 mol; ver passo (i) acima) foi dissolvido em 100 mL de THF e foi adicionado 6,5 g de ácido sulfúrico concentrado. A mistura foi deixada à temperatura ambiente durante 6 dias e subsequentemente vertida para 500 mL de água. Seguiu-se a extracção três vezes com éter dietilico e a fase etérea reunida foi lavada várias vezes com água, seca (Na2S04) e evaporada. O produto em bruto foi submetido a cromatografia flash sobre sílica gel utilizando heptano:AcOEt (8:2). Rendimento: 1,2 g (67%). A posição do grupo formilo foi estabelecida utilizando RMN de 13C. Os sinais de carbono dos carbonos fluorados a 160,1 e 158,4 respectivamente eram dupletos e não quartetos, como seria esperado se o grupo formilo estivesse na posição 2. RMN de 3Η (300 MHz, CDC13) δ 10,36 (d, 1H) , 7,72 (dd, 1H) , 7,54 (dd, 1H) 202 (iii) 2,5-Difluoro-4-hidroximetilbenzonitrilo 2,5-Difluoro-4-formilbenzonitrilo (3,60 g, 0,0215 mol; ver passo (ii) acima) foi dissolvido em 50 mL de metanol e arrefecido num banho de gelo. Foi adicionado boro-hidreto de sódio (0,815 g, 0,0215 mol) em porções sob agitação e a reacção foi deixada durante 45 min. Foi adicionada água (300 mL) e, depois, disso foi cuidadosamente adicionado HC1 2M até ter sido obtido um pH ácido. A mistura foi extraída três vezes com éter dietílico e a fase etérea reunida foi lavada com água, seca (Na2SC>4) e evaporada. O produto em bruto cristalizou rapidamente e podia ser utilizado sem mais purificação. Rendimento: 3,1 g (85%) . RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 7,45 (dd, 1H) , 7,30 (dd, 1H) , 4,85 (s, 2 H), 2,10 (largo, 1H) (iv) Metanossulfonato de 4-ciano-2,5-difluorobenzilo A uma solução gelada de 2,5-difluoro-4- hidroximetilbenzonitrilo (3,10 g, 0,0183 mol; ver passo (iii) acima) e cloreto de metanossulfonilo (2,21 g, 0,0192 mol) em 60 mL de cloreto de metileno foi adicionada trietilamina (1,95 g, 0,0192 mol) sob agitação. Após 1,5 h a 0 °C, a mistura foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. 0 produto podia ser utilizado sem mais purificação. Rendimento: 4,5 g (99%). RMN de (300 MHz, CDC13) δ 7, 45-7,35 (m, 2H) , 5,32 (s, 2H), 3,13 (s, 3H) 203 (v) 4-Azidometil-2, 5-difluorobenzonitrilo
Uma mistura de metanossulfonato de 4-ciano-2,5- difluorobenzilo (4,5 g, 0,0182 mol; ver passo (iv) acima) e azida de sódio (2,0 g, 0,031 mol) em 20 mL de água e 40 mL de DMF foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. Esta foi subsequentemente vertida para 300 mL de água e extraída três vezes com éter dietílico. A fase etérea reunida foi lavada várias vezes com água, seca (Na2S04) e evaporada. Uma pequena amostra foi evaporada para efeitos de RMN e o produto cristalizou. O resto foi evaporado cuidadosamente, mas não até à secura total. Rendimento (teoricamente 3,5 g) é assumido ser quase quantitativa com base em RMN e HPLC analítico. RMN de ΧΗ (500 MHz, CDC13) δ, 38 (dd, 1H) , 7,32 (dd, 1H) , 4,54 (s, 2H) (vi) 4-Aminometil-2,5-difluorobenzonitrilo
Esta reacção foi realizada de acordo com o processo descrito em J. Chem. Res. (M) (1992) 3128. A uma suspensão de 300 mg de Pd a 10%/C (50% de humidade) em 20 mL de água foi adicionada uma solução de boro-hidreto de sódio (0,779 g, 0,0206 mol) em 20 mL de água. Ocorreu alguma libertação gasosa. 4-Azidometil-2,5-difluorobenzonitrilo (1,00 g, 5,15 mmol; do passo (v) acima) foi dissolvido em 60 mL de THF e adicionado à mistura aquosa num banho de gelo. A mistura foi agitada durante 1,5 h, após o que foram adicionados 10 mL de HC1 2 M e a mistura foi filtrada através de Celite. A Celite foi lavada com mais água e a fase aquosa reunida foi lavada com AcOEt e, subsequentemente, tornada alcalina com NaOH 2 M. Seguiu-se a 204 extracção três vezes com cloreto de metileno e a fase orgânica reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. Rendimento: 0,47 g (54%). RMN de 1ti (300 MHz, CDC13) δ 7,39 (dd, 1H) , 7,29 (dd, 1H) , 3,99 (s, 2H), 1,45 (largo, 2H) (vii) 2,5-Difluoro-4-terc-butoxicarbonilaminometilbenzoni- trilo
Uma solução de 4-aminometil-2,5-difluorobenzonitrilo (0,46 g, 2,7 mmol; ver passo (vi) acima) e dicarbonato de di-terc-butilo (0,60 g, 2,7 mmol) em 10 mL de THF foi agitada, de um dia para o outro. O THF foi evaporado e o resíduo foi partilhado entre água e AcOEt. A camada orgânica foi lavada com água, seca (Na2SC>4) e evaporada. O produto podia ser utilizado sem mais purificação. Rendimento: 0,71 g (97%). RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 7,35-7,2 (m, 2H), 5,11 (largo tripleto, 1H), 4,38 (d, 2H), 1,45 (s, 9H) (viii) Boc-Pab(2,5-diF)(OH)
Uma mistura de 2,5-difluoro-4-terc-butoxicarbonilaminometilbenzonitrilo (0,70 g, 2,6 mmol; ver passo (vii) acima), cloridrato de hidroxilamina (0,54 g, 7,8 mmol) e trietilamina (0,79 g, 7,8 mmol) em 10 mL de etanol foi agitada à temperatura ambiente durante 6 dias. Esta foi, em seguida, partilhada entre água e cloreto de metileno. A camada aquosa foi extraída com cloreto de metileno e a fase orgânica 205 reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. 0 produto podia ser utilizado sem mais purificação. Rendimento: 0,72 g (92%) . RMN de ΤΗ (500 MHz, CD30D) δ 7,27 (dd, 1H) , 7,12 (dd, 1H) , 4,29 (s, 2H), 1,47 (s, 9H)
(ix) Boc-Pab(2,5-diF) x AcOH
Esta reacção foi realizada de acordo com o processo descrito por Judkins et ai., Synth. Comm. (1998) 4351.
Boc-Pab(2,5-diF)(OH) (0,70 g, 2,3 mmol; ver passo (viii) acima), anidrido acético (0,25 g, 2,4 mmol) e 230 mg de Pd a 10%/C (50% de humidade) em 70 mL de ácido acético foi hidrogenado a 5 atm de pressão durante 2,5 h. A mistura foi filtrada através de
Celite e evaporada. O resíduo foi liofilizado de acetonitrilo e água. O produto podia ser utilizado sem mais purificação no passo seguinte. Rendimento: 0,80 g (100%). RMN de ΧΗ (500 MHz, CD3OD) δ 7,49 (dd, 1H) , 7,31 (dd, 1H) , 4,33 (s, 2H) , 1,91 (s, 3H), 1,46 (s, 9H) (x) Boc-Pab(2,5-diF)(Teoc) A uma suspensão de Boc-Pab(2,5-diF) χ AcOH (0,80 g, 2,3 mmol; ver passo (ix) acima) em 50 mL de THF foi adicionado carbonato de 2-(trimetilsilil)etilo e p-nitrofenilo (0,85 g, 3,0 mmol). Foi adicionada, gota a gota, uma solução de carbonato de potássio (0,80 g, 5,8 mmol) em 10 mL de água. A mistura foi agitada, de um dia para o outro. O excesso de reagente Teoc foi 206 destruído pela adição de glicina (0,100 g) e carbonato de potássio (0,75 g) à solução, deixado reagir durante mais 2 h. O THF foi evaporado e o resíduo foi partilhado entre água e cloreto de metileno. A camada aquosa foi extraída com cloreto de metileno e a fase orgânica reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. A cromatografia flash sobre sílica gel com heptano:AcOEt (2:1) deu 0,72 g (72%) de composto puro. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13 ) δ 8,00 (dd, 1H) , 7, 15 (dd, 1H) 4,98 (largo, 1H), 4,36 (d 1, 2H), 4,24 (m, 2H) , in 1—1 (s, 9 H) 1,12 (m, 2H), 0,07 (s, 9H) (xi) H-Pab(2,5-diF)(Teoc) x 2 HC1
Boc-Pab(2,5-diF)(Teoc) (0,38 g, 0,88 mmol; ver passo (x) acima) foi dissolvido em 50 mL de AcOEt saturado com HCl(g). A mistura foi deixada durante 30 min e evaporada. RMN de ΧΗ (500 MHz, CD3OD) δ 7,75-7,6 (m, 2H), 4,46 (m, 2H) , 4,3 (s, 2H), 1,15 (m, 2H), 0,07 (s, 9H) (xii) Boc-Aze-Pab(2,5-diF)(Teoc)
A uma solução, mantida sob agitação, de Boc-Aze-OH
(0,189 g, 0,94 mmol), H-Pab (2,5-diF) (Teoc) χ 2 HC1 (0,36 g, 0,89 mmol; ver passo (xi) acima) e PyBOP (0,54 g, 1,03 mmol) em 5 mL de DMF foi adicionada diisopropiletilamina (0,49 g, 3,8 mmol) e a mistura foi deixada a reagir de um dia para o outro. A mistura resultante foi, em seguida, vertida para bicarbonato de sódio aquoso e extraída três vezes com AcOEt. A 207 fase orgânica reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. A cromatografia flash sobre sílica gel com heptano:AcOEt (3:7) deu um composto suficientemente puro.
Rendimento: 0,25 g (48%). RMN de ΤΗ (500 MHz, CDC13) δ 7,98 (dd, 1H) , 7,13 (dd, 1H) , 4,69 (m, 1H), 4,53 (m, 2H), 4,22 (m, 2H), 3,92 (m, 1H) , 3,79 (m, 1H), 2,55-2,35 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,11 (m, 2H) , 0,06 (s, 9H) (xiii) H-Aze-Pab(2,5-diF)(Teoc) χ 2 HC1
Boc-Aze-Pab(2,5-diF)(Teoc) (0,25 g, 0,49 mmol; ver passo (xii) acima) foi dissolvido em 50 mL de AcOEt saturado com HCl(g). A mistura foi deixada durante 30 min. e evaporada. O produto foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. Rendimento: 0,23 g (97%). RMN de ΧΗ (400 MHz, CD3OD) δ 7,59 (dd, 1H) , 7,47 (dd, 1H) , 5,14 (m, 1H), 4,54 (m, 2H), 4,48 (m,2H), 4,15 (m, 1H), 3,96 (m, 1H), 2,87 (m, 1H), 2,56 (m, 1H), 1,17 (m, 2H), 0,05 (s, 9H) (xiv) Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(R) CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF) (Teoc) A uma solução de Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)OH (0,12 g, 0,47 mmol; ver Exemplo l(viii) acima), H-Aze-Pab(2,5- diF) (Teoc) x 2 HC1 (0,23 g, 0,47 mmol; ver passo (xiii) acima) e PyBOP (0,27 g, 0,52 mmol) em 10 mL de DMF foi adicionada diisopropiletilamina (0,245 g, 1,90 mmol) e a mistura foi agitada, de um dia para o outro. A mistura resultante foi vertida para água e extraída três vezes com AcOEt. A fase 208 orgânica reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. A cromatografia flash sobre sílica gel com AcOEt deu 100 mg de uma fraeção pura e 30 mg de uma fraeçao 90% pura. Rendimento total: 0,13 g (41%). RMN de ΧΗ (400 MHz , CDC13) δ 9,80 (largo, 1H ) , 8 ,05 (t 1, \—1 7,94 (dd, 1H),7,2 0 (m, 1H) , 7,2-7,1 (m, 2H) , 7,02 (m, 1H) , 6,54 (t, 1H), 4,93 (s, 1H), 4, ,91 (m, 1H), 4,51 (m, 2H) , 4,28 (largo, 1H) , 4,23 (m, 2H) , 4,13 (m, 1H), 3,74 (m, 1H) , 2,69 (m, 1H) , 2,43 (m, 1H), 1,73 (largo, 1H), 1,11 (m, 2H), 1,11 (s,9H) (XV) Ph(3-C1) (5-OCHF2) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF)
Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R;CH(0H)C(0)-Aze-Pab(2,5-diF)(Teoc) (60 mg (0,093 mmol) da fraeção pura do passo (xiv) acima) foi dissolvido em 3 mL de TFA e deixado à temperatura ambiente durante 1 h. O TFA foi evaporado e o resíduo foi liofilizado de água e acetonitrilo para produzir 55 mg (96%) do composto em título como o seu sal de TFA, pureza: >99%. RMN de ΤΗ (500 MHz, CD3OD mistura de rotâmeros) δ 7,55-7,3 (m, 3H), 7,2-7,1 (m, 2H), 6,88 (t, 1H, rotâmero principal), 6,86 (t, 1H, rotâmero secundário), 5,22 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,20 (s, 1H, rotâmero principal), 5,13 (s, 1H, rotâmero secundário), 4,80 (m, 1H, rotâmero principal), 4,6-4,45 (m, 2H), 4,36 (m, 1H, rotâmero principal), 4,19 (m, 1H, rotâmero principal), 4,07 (m, 1H, rotâmero secundário), 3,98 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,70 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,54 (m, 1H, rotâmero principal), 2,28 (m, 1H, rotâmero principal), 2,14 (m, 1H, rotâmero secundário) 209 RMN de 13C (75 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, mistura de rotâmeros) δ 173,0, 172,6, 172,1, 172,0, 162,4 APCI-MS: (M + 1) = 503/505 m/z.
Exemplo 42
Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (-R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (2,5-diF) (OMe)
(i) Ph (3-C1) ( 5-OCHF 2) - (R) CH (OH) C (O) -Aze_Pab(2,5- diF)(OMe,Teoc)
Uma mistura de Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(R) CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF)(Teoc) (40 mg, 0,062 mmol; ver Exemplo 41(xiv) acima) e cloridrato de O-metil-hidroxilamina (58 mg, 0,70 mmol) em 5 mL de acetonitrilo foi aquecida a 70 °C, durante 2 h. O solvente foi evaporado e o residuo foi partilhado entre água e AcOEt. A camada aquosa foi extraida com AcOEt e a fase orgânica reunida foi lavada com água, seca (Na2S04) e evaporada. O produto podia ser utilizado sem mais purificação. Rendimento: 35 mg (84%). RMN de 3H (600 MHz, CDCI3) δ 7,99 (t 1, 1H) , 7,72 (s, 1H) , 7,20 (m, 1H) 7,15-7,1 (m, 1H), 7,07 (dd, 1H) , 7,01 (m, 1H) , 6,53 210 (t, 1H), 4,90 (s, 1H) , 4, , 88 m, 1H), 4,48 (m, 2H) , \—1 1 CM (m, 3H) , 3:95 (s, 3H) , 3, 67 (m, 1H) , 2,68 (m, 1H), 2, • 41 (m, 1H) , 0,97 (m, 2H), 0,07 (s, 9H) (ii) Ph (3-C1) (5-OCHF2)-(R)CH(0H)C(0)-Aze-Pab(2,5-diF) (OMe)
Ph (3-C1) (5-OCHF2)- (R)CH(0H)C(0)-Aze-Pab(2,5-diF) (OMe,Teoc) (35 mg, 0,052 mmol; ver passo (i) acima) foi dissolvido em 3 mL de TFA e deixado a reagir durante 30 min. O TFA foi evaporado e o resíduo liofilizado de água e acetonitrilo para dar 29 mg (99%) do composto em título. Pureza: 97%. RMN de 1 H (300 MHz , CDCI3) δ 8,01 (t 1, 1H), 7,45 (dd, 1H) , 7, 20 (m, 1H) , , 7,15 (m, 1H), 7, 09 (dd, 1H), 7,02 (m, 1H) , 6,54 (t, 1H) , 5,2 -5, 0 (m, 2H) , 4,95 -4 , 85 (m, 2H) , 4,6-4,4 (m, 2H) , 4, 25 (largo, 1H), 4,13 (m, 1H) , 3, 90 (s, 3H), 3,71 (m, 1H) , 2,69 (m, 1H) , 2,43 (m, 1H) RMN de 13C (75 MHz; CDCI3) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina) δ 173,0, 170,9, 152,6 APCI-MS: (M + 1) = 533/535 m/z. 211
Exemplo 43
Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (-R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OEt) (i) Ph(3-C1)(5-QCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt, Teoc)
Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (f?) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (55 mg, 0,090 mmol; ver Exemplo l(ix) acima) e cloridrato de O-etil-hidroxilamina (53 mg, 0,54 mmol) foram dissolvidos em 4 mL de THF. A mistura foi agitada, a 60 °C, durante 5 h. O solvente foi evaporado. O resíduo foi cromatografado sobre sílica gel, eluindo com cloreto de metileno:metanol (95:5) para proporcionar 55 mg (93%) do composto em sub-título. RMN de 2H (400 MHz; CDC13) : δ 7,84 (t 1, 1H) , 7,59 (s 1, 1H), 7,47 (d 1, 1H), 7,29 (d 1, 1H), 7,21 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,53 (t, 1H), 4,90 (s, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,55-4,4 (m, 2H), 4,25-4,1 (m, 5H) , 3,69 (m, 1H), 2,66 (m, 1H), 2,41 (m, 1H), 1,33 (t, 3H), 0,98 (m, 2H), 0,02 (s, 9H) (ii) Ph(3-C1, 5-OCHF2)~(P)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt) A uma solução gelada de Ph(3-Cl) (5-OCHF2) -(R) CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt, Teoc) (55 mg, 0,084 mmol; ver passo (i) acima) em 0,5 mL de cloreto de metileno foram adicionados 3 mL de TFA. A mistura foi agitada (banho de gelo) durante 160 minutos. O material foi purificado utilizando HPLC preparativa. As fracções de interesse foram combinadas e liofilizadas (2x), produzindo 20 mg (47%) do composto em título. 212 RMN de TH (400 MHz; CD3OD) rotâmeros: δ 7,59 (d 1, 2H) , 7,35 (m, 1H), 7,32 (d 1, 2H), 7,25-7,1 (m, 2H) , 6,89 (t, 1H, rotâmero principal), 6,86 (t, 1H, rotâmero secundário), 5,18 (s, 1H, rotâmero principal), 5,18 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,11 (s, 1H, rotâmero secundário), 4,77 (m, 1H) , 4,5-4,3 (m, 3H), 4,2-3,9 (m, 3H), 2,67 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,52 (m, 1H, rotâmero principal), 2,28 (m, 1H, rotâmero principal), 2,15 (m, 1H, rotâmero secundário), 1,28 (t, 3H) RMN de 13C (100 MHz; CD3OD): (carbonos de carbonilo e/ou amidina, rotâmeros) δ 172,4, 171,9, 171,4, 153,8, 152,3 MS (m/z) 509 (Μ - 1Γ, 511 (M + 1) +
Exemplo 44
Ph(3-C1) (5-OCHF2) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr) (i) Ph(3-C1) (5-OCHF2) -(R)CH(OH)C (O)-Aze-Pab(OnPr, Teoc)
Ph(3-C1) (5-OCHF2) - (R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (53 mg, 0,087 mmol; ver Exemplo l(ix) acima) e cloridrato de O-n-propil-hidroxilamina, 58 mg (0,52 mmol) foram dissolvidos em 4 mL de THF. A mistura foi agitada, a 60 °C, durante 5 h. O solvente foi evaporado. O resíduo foi cromatografado sobre sílica gel, eluindo com cloreto de metileno:metanol (95:5) para proporcionar 51 mg (88%) do composto em sub-título. 213 RMN de 2H (400 MHz; CDC13): δ 7,84 (m, 1H), 7,59 (s 1, 1H) , 7,47 (d 1, 2H), 7,28 (d 1, 2H), 7,21 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,53 (t, 1H), 4,90 (s, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,55-4,4 (m, 2H), 4,2-4,05 (m, 5H), 3,69 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 2,41 (m, 1H), 1,74 (m, 2H), 1,05-0,95 (m, 5H), 0,03 (s, 9H) (ii) Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab(OnPr) A uma solução gelada de Ph(3-Cl) (5-OCHF2) - (R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab (OnPr, Teoc) (51 mg, 0, 078 irtmol; ver passo (i) acima) em 0,5 mL de cloreto de metileno foram adicionados 3 mL de TFA. A mistura foi agitada (banho de gelo) durante 110 minutos. O material foi purificado utilizando HPLC preparativa. A fracção de interesse foi evaporada e liofilizada, produzindo 20 mg (47%) do composto em titulo. RMN de 3Η (500 MHz; CD3OD) rotâmeros: δ 7,61 (d 1, 2H) , 7,38 (m, 1H) , 7,35 (d 1, 2H), 7,22 (m, 1H, rotâmero principal), 7,18 (m, 1H), 7,15 (m, 1H, rotâmero secundário), 6,92 (t, 1H, rotâmero principal), 6,89 (t, 1H, rotâmero secundário), 5,20 (s, 1H, rotâmero principal), 5,20 (m, 1H, rotâmero secundário), 4,80 (m, 1H, rotâmero principal), 4,5-4,4 (m, 2H, incluindo rotâmero secundário correspondente ao principal a 4,37), 4,37 (m, 1H, rotâmero principal), 4,18 (m, 1H, rotâmero principal), 4,09 (m, 1H, rotâmero secundário), 3,99 (m, 2H) , 2,70 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,54 (m, 1H, rotâmero principal), 2,30 (m, 1H, rotâmero principal), 2,18 (m, 1H, rotâmero secundário), 1,73 (m, 2H), 1,01 (t, 3H) RMN de 13C. (125 MHz; CD3OD) : (carbonos de carbonilo e/ou amidina, rotâmeros) δ 171,4, 153,8, 152,3 214 MS (m/z) 523 (Μ - 1)“, 525 (M + 1)
Exemplo 45
Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (-R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OiPr) (i) Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(P)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr, Teoc)
Ph(3-C1) (5-OCHF2) - (P) CH (OH) C (O)-Aze-Pab(Teoc) (50 mg, 0,082 mmol; ver Exemplo l(ix) acima) e cloridrato de O-i-propil-hidroxilamina, 55 mg (0,49 mmol) foram dissolvidos em 4 mL de THF. A mistura foi agitada, a 60 °C, durante 5 h. O solvente foi evaporado. O resíduo foi cromatografado sobre sílica gel, eluindo com cloreto de metileno:metanol (95:5) para proporcionar 46 mg (84%) do composto em sub-título. RMN de XH (40 0 MHz; CDCI3) : δ 7, 84 (m, 1H ), 7, r 5 7 (s 1, 1H), 7,48 (d 1 f 2H) , 7, 29 (d 1, 2H) , 7,21 (m, 1H), 7, 14 (m , 1H), 7,02 (m, 1H) , 6, 53 (t, 1H) , 4,91 (s, 1H) , 4,87 (m, 1H) , 4, 55-4,45 (m, 2H) , 4, 42 ( m, 1H) , 4, 2-4, 1 (m, 3H) , 3,69 (m, 1H) , 2, 66 (m, 1H), 2,42 (m, 1H ) , 1,30 (d, r 6H) , 0,98 (m, 2H), 0,02 (s, 9H) (ii) Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(P)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OiPr) A uma solução gelada de Ph(3-Cl) (5-OCHF2) - (P) CH (OH) C (O) -Aze-Pab(OiPr, Teoc) (46 mg, 0,069 mmol; ver passo (i) acima) em 0,5 mL de cloreto de metileno foram adicionados 3 mL de TFA. A mistura foi agitada (banho de gelo) durante 150 minutos. O material foi purificado utilizando HPLC preparativa. A fracção 215 de interesse foi evaporada e liofilizada (2χ), produzindo 22 mg (58%) do composto em título. RMN de 3H (400 MHz; CD3OD) rotâmeros: δ 7,59 (d, 2H) , 7,35 (m, 1H) , 7,32 (d, 2H) , 7,19 (m, 1H, rotâmero principal), 7, 15 (m, 1H) , 7, 12 (m, 1H, rotâmero secundário), 6,89 (t, 1H, rotâmero principal), 6,86 (t, 1H, rotâmero secundário), 5,18 (s, 1H, rotâmero principal), 5,18 (m, 1H, rotâmero secundário), 5,12 (s, 1H, rotâmero secundário), 4,78 (m, 1H, rotâmero principal), 4,5-3,9 (m, 5H) , 2,67 (m, 1H, rotâmero secundário), 2,52 (m, 1H, rotâmero principal), 2,28 (m, 1H, rotâmero principal), 2,15 (m, 1H, rotâmero secundário), 1,26 (d, 6H) RMN de 13C (100 MHz; CD3OD): (carbonos de carbonilo e/ou amidina, rotâmeros) δ 171,9, 171,4, 153,6. MS (m/z) 523 (Μ - 1Γ, 525 (M + 1) +
Exemplo 46
Os compostos nos títulos dos Exemplos 3, 6, 9, 10, 13 até 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 28, 32, 34, 36, 38, 39 e 41 foram testados no Ensaio A acima e constatou-se que exibem valores de IC50TT inferiores a 3,5 μΜ. Constatou-se que os dos Exemplos 3, 6, 9, 10, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 27, 32, 34 e 39 exibem valores inferiores a 0,02 μΜ; os Exemplos 25 e 28 inferiores a 0,03 μΜ, que o do Exemplo 14 inferior a 0,04 μΜ; e aqueles dos Exemplos 38 e 41 inferiores a 0,15 μΜ. 216
Exemplo 47
Os compostos nos títulos dos Exemplos 3, 6, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 28, 32 e 34 foram testados no Ensaio D acima e constatou-se que exibem valores de IC5o APTT inferiores a 1 μΜ.
Exemplo 48
Os compostos nos títulos dos Exemplos 1, 2, 4, 5, 7, 12, 16, 18, 20, 22, 24 , 26, 29, 30, 33 e 43 até 45 foram testados no Ensaio E acima e constatou-se que exibem valores de biodisponibilidade oral e/ou parentérica no rato como o correspondente inibidor activo (amidina livre).
Exemplo 49
Os compostos nos títulos dos Exemplos 1, 2, 7, 8, 11, 12, \—1 18, 20, 22 , 24, 26, 29, 33, 37, 40, 43 e 45 foram testados no Ensaio g acima e constatou-se que eram convertidos no correspondente inibidor activo (amidina livre) nos microssomas de fígado de humanos e de ratos.
Abreviaturas
Ac = acetilo AcOH = ácido acético APCI = ionização química à pressão atmosférica relação à MS) (em API = ionização à pressão atmosférica (em relação MS) ao 217 aq. AUC Aze
AzeOH Bn Boc BSA Bu Bzl Cl d DCC DIBAL-H DIPEA DMAP DMF DMSO DVT EDC e. e. Et éter AcOEt EtOH Et 20 h HATU HBTU = aquosa = área sob a curva = (S)-azetidina-2-carboxilato (a menos que especificado de outro modo) = ácido azetidina-2-carboxílico = benzilo = terc-butiloxicarbonilo = albumina de soro bovino = butilo = benzilo = ionização quimica (em relação à MS) = dia(s) = diciclo-hexilcarbodiimida = hidreto de diisobutilaluminio = diisopropiletilamina = 4-(N, IV-dimetilamino) piridina = dimetilformamida = dimetilsulfóxido = trombose de veia profunda = cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3- etilcarbodiimida = excesso enantiomérico = etilo = éter dietilico = acetato de etilo = etanol = éter dietilico = hora(s) = hexafluorofosfato de O-(azabenzotriazol-l-il)-N,N, Ν' , Ν'-tetrametilurónio = [hexaf luorof osf ato de IV, IV, IV', IV'-tetrametil-O- (benzotriazol-l-il)urónio] 218 HC1
Hex AcOH HPLC LC Me MEM MeOH min MS MTBE NADH NADPH NIH UNIH RMN AcO Pab H-Pab Ph Pr Pro PyBOP QF RedAl RPLC = ácido clorídrico, cloreto de hidrogénio gasoso ou sal de cloridrato (dependendo do contexto) = hexanos = ácido acético = cromatografia líquida de alta eficiência = cromatografia líquida = metilo = metoxietoximetilo = metanol = minuto(s) = espectroscopia de massa = éter metílico e terc-butílico = dinucleótido de nicotinamida e adenina, forma reduzida = fosfato de dinucleótido de nicotinamida e adenina, forma reduzida = National Institute of Health (US) = Unidades do National Institute of Health = ressonância magnética nuclear = acetato = para-amidinobenzilamino = para-amidinobenzilamina = fenilo = propilo = (S)-prolinilo = hexafluorofosfato de (benzotriazol-1- iloxi)tripirrolidinofosfónio = fluoreto de tetrabutilamónio = hidreto de bis(2-metoxietoxi)alumínio sódio = cromatografia líquida de alta eficiência de fase inversa t.a./T.A. = temperatura ambiente 219
SOPs TBTU TEA Teoc TEMPO TF A THF THP TLC TMSC1 TMSCN UV Z = processos padrão de funcionamento = [ tetraf luoroborato de IV, IV, IV', IV'-tetrametil-O- (benzotriazol-l-il)urónio] = trietilamina = 2-(trimetilsilil)etoxicarbonilo = 2,2,6,6-tetrametil-l-piperidiniloxilo, radical livre = ácido trifluoroacético = tetra-hidrofurano = tetra-hidropiranilo = cromatografia em camada fina = cloreto de trimetilsililo = cianeto de trimetilsililo = ultravioleta = benziloxicarbonilo
Os prefixos n, s, i e t têm os seus significados habituais: normal, secundário, iso e terciário. 0 prefixo c significa ciclo.
Lisboa, 12 de Maio de 2010 220

Claims (10)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto seleccionado de
    Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OH) de fórmula
    ou Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab de fórmula
    1 ou um sal farmaceuticamente aceitável de qualquer destes.
  2. 2. Composto, como reivindicado na reivindicação 1, seleccionado de Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(P)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe); Ph(3-C1) (5-OCHF 2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OH) ou Ph(3-C1) (5-OCHF 2)-(P)CH(OH)C(0)-Aze-Pab.
  3. 3. Composto Ph(3-C1)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe), como reivindicado na reivindicação 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  4. 4. Composto Ph (3-C1)(5-OCHF2) - (-R) CH (OH) C (0)-Aze-Pab (OMe) , como reivindicado na reivindicação 1, 2 ou 3.
  5. 5. Composto Ph(3-C1) (5-OCHF2)-(P)CH(OH)C(0)-Aze-Pab como reivindicado na reivindicação 1 ou 2.
  6. 6. Formulação farmacêutica compreendendo qualquer dos compostos como definidos na reivindicação 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em combinação com um adjuvante, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável.
  7. 7. Formulação farmacêutica como reivindicada na reivindicação 6, compreendendo o composto da reivindicação 3, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em combinação com um adjuvante, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável.
  8. 8. Composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para utilização como um fármaco. 2
  9. 9. Composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização no tratamento de trombose.
  10. 10. Composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização como um anticoagulante. Lisboa, 12 de Maio de 2010 3
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