CZ303708B6 - Nové deriváty kyseliny mandlové a jejich pouzití jako inhibitory trombinu - Google Patents

Nové deriváty kyseliny mandlové a jejich pouzití jako inhibitory trombinu Download PDF

Info

Publication number
CZ303708B6
CZ303708B6 CZ20031514A CZ20031514A CZ303708B6 CZ 303708 B6 CZ303708 B6 CZ 303708B6 CZ 20031514 A CZ20031514 A CZ 20031514A CZ 20031514 A CZ20031514 A CZ 20031514A CZ 303708 B6 CZ303708 B6 CZ 303708B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
mmol
aze
pab
rotamer
nmr
Prior art date
Application number
CZ20031514A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ20031514A3 (cs
Inventor
Inghardt@Tord
Johansson@Anders
Svensson@Arne
Original Assignee
Astrazeneca Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from SE0004458A external-priority patent/SE0004458D0/xx
Priority claimed from SE0100965A external-priority patent/SE0100965D0/xx
Priority claimed from SE0101239A external-priority patent/SE0101239D0/xx
Priority claimed from SE0102921A external-priority patent/SE0102921D0/xx
Application filed by Astrazeneca Ab filed Critical Astrazeneca Ab
Publication of CZ20031514A3 publication Critical patent/CZ20031514A3/cs
Publication of CZ303708B6 publication Critical patent/CZ303708B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/397—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having four-membered rings, e.g. azetidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C205/00—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton
    • C07C205/49—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups
    • C07C205/57—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups having nitro groups and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton
    • C07C205/59—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups having nitro groups and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C37/00—Preparation of compounds having hydroxy or O-metal groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C07C37/01—Preparation of compounds having hydroxy or O-metal groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring by replacing functional groups bound to a six-membered aromatic ring by hydroxy groups, e.g. by hydrolysis
    • C07C37/055—Preparation of compounds having hydroxy or O-metal groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring by replacing functional groups bound to a six-membered aromatic ring by hydroxy groups, e.g. by hydrolysis the substituted group being bound to oxygen, e.g. ether group
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C41/00—Preparation of ethers; Preparation of compounds having groups, groups or groups
    • C07C41/01—Preparation of ethers
    • C07C41/16—Preparation of ethers by reaction of esters of mineral or organic acids with hydroxy or O-metal groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C41/00—Preparation of ethers; Preparation of compounds having groups, groups or groups
    • C07C41/01—Preparation of ethers
    • C07C41/18—Preparation of ethers by reactions not forming ether-oxygen bonds
    • C07C41/26—Preparation of ethers by reactions not forming ether-oxygen bonds by introduction of hydroxy or O-metal groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C41/00—Preparation of ethers; Preparation of compounds having groups, groups or groups
    • C07C41/01—Preparation of ethers
    • C07C41/18—Preparation of ethers by reactions not forming ether-oxygen bonds
    • C07C41/30—Preparation of ethers by reactions not forming ether-oxygen bonds by increasing the number of carbon atoms, e.g. by oligomerisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/004—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reaction with organometalhalides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/27—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by oxidation
    • C07C45/29—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by oxidation of hydroxy groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/45—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by condensation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/61—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups
    • C07C45/67—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton
    • C07C45/673—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton by change of size of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/61—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups
    • C07C45/67—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton
    • C07C45/68—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton by increase in the number of carbon atoms
    • C07C45/70—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton by increase in the number of carbon atoms by reaction with functional groups containing oxygen only in singly bound form
    • C07C45/71—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton by increase in the number of carbon atoms by reaction with functional groups containing oxygen only in singly bound form being hydroxy groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C47/00—Compounds having —CHO groups
    • C07C47/52—Compounds having —CHO groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings
    • C07C47/56—Compounds having —CHO groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings containing hydroxy groups
    • C07C47/565—Compounds having —CHO groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings containing hydroxy groups all hydroxy groups bound to the ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C47/00—Compounds having —CHO groups
    • C07C47/52—Compounds having —CHO groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings
    • C07C47/575—Compounds having —CHO groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings containing ether groups, groups, groups, or groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C49/00—Ketones; Ketenes; Dimeric ketenes; Ketonic chelates
    • C07C49/76—Ketones containing a keto group bound to a six-membered aromatic ring
    • C07C49/84—Ketones containing a keto group bound to a six-membered aromatic ring containing ether groups, groups, groups, or groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/42—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups
    • C07C59/48—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups containing six-membered aromatic rings
    • C07C59/50—Mandelic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/42—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups
    • C07C59/56—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups containing halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/58—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups
    • C07C59/64—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups containing six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/73—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids
    • C07C69/732—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids of unsaturated hydroxy carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/73—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids
    • C07C69/734—Ethers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/73—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids
    • C07C69/738—Esters of keto-carboxylic acids or aldehydo-carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D205/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D205/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D205/04—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D263/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings
    • C07D263/52—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D263/54—Benzoxazoles; Hydrogenated benzoxazoles
    • C07D263/58—Benzoxazoles; Hydrogenated benzoxazoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached in position 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Resení se týká derivátu kyseliny mandlové Ph(3-Cl)(5-OCHF.sub.2.n.)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe), Ph(3-Cl)(5-OCHF.sub.2.n.)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH), Ph(3-Cl)(5-OCHF.sub.2.n.)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab znázornených uvedenými vzorci, které jsou uzitecné jako kompetitivní inhibitory trypsinu podobných serinproteáz, jako je trombin a zejména pri lécbe stavu, pri kterých je zádoucí inhibice trombinu (napríklad trombóze) nebo jako antikoagulanty.

Description

Oblast techniky
S
Tento vynález se týká nových farmaceuticky užitečných sloučenin, obzvláště sloučenin, jako takových a/nebo sloučenin, které jsou metabolisovány na tyto sloučeniny, které jsou kompetitivními inhibitory trypsinu podobných serinproteáz, obzvláště trombinu, jejich použití jako léčiv, farmaceutických přípravků je obsahujících a syntetických postupů jejich výroby.
K)
Dosavadní stav techniky
Srážení krve je klíčovým procesem zahrnutým jak v herno stází (tj. prevence ztrát krve z poško15 zené cévy), tak v trombóze (tj. tvorba krevní sraženiny v cévě, někdy vedoucí k jejímu uzavření).
Koagulace je výsledkem komplexních sérií enzymatických reakcí. Jedním z konečných kroků v této řadě reakcí je konverze proenzymu protrombinu na aktivní enzym trombin.
O trombinu je známo, že v koagulaci hraje ústřední roli. Aktivuje destičky, což vede k jejich agregaci, přeměňuje tlbrinogen na monomery tíbrinu, které spontánně polymerují na fibrinové polymery, a aktivuje faktor XIII, který naopak spojuje polymery do sítí, aby se vytvořil nerozpustný fibrin. Trombin navíc aktivuje faktor V a faktor VIII, což vede k „pozitivní zpětné vazbě“ při tvorbě trombinu z protrombinu.
Díky inhibici agregace destiček a tvorby a zesíťování fibrinu lze u účinných inhibitorů trombinu očekávat, že budou vykazovat antitrombotickou aktivitu. Navíc by se dalo očekávat, že antitrombotická aktivita by mohla být posílena účinnou inhibici mechanismu positivní zpětné vazby.
»0
Dosavadní stav techniky
Počáteční vývoj inhibitorů trombinu o nízké molekulární hmotnosti je popsán Cleassonem v Blood Coagul. Fibrinol. (1994), 5, 411.
Blombáck a kol., (v J. Clin. Lab. Invest., 24, suppl. 107, 59, (1969)) popsal inhibitory trombinu založené na sekvenci aminokyselin umístěné okolo místa štěpení A-alfa řetězce fibrinogenu. 7, diskutovaných sekvencí aminokyselin tito autoři navrhli jako nejúčinnější inhibitor tripeptidovou sekvencí Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, dále označovaná jako sekvence P3-P2-P1).
Inhibitory trombinu založené na dipeptidylových derivátech s alfa,omega-aminoalkylguanidinem v pozici Pl jsou známy z US patentu 4 346 078 a mezinárodní patentové přihlášky WO 93/11152. Byly také popsány podobné, strukturně příbuzné dipeptidylové deriváty. Například mezinárodní patentová přihláška WO 94/29336 popisuje sloučeniny, které například mají v pozici Pl aminomethylbenzamidiny, cyklické aminoalkylamidiny a cyklické aminoalkylguanidiny (mezinárodní patentová přihláška WO 97/23499 popisuje prekurzory léčiv určitých těchto sloučenin); evropská patentová přihláška 0 648 780 popisuje sloučeniny, které mají v pozici Pl například cyklické aminoalkylguanidiny.
Inhibitory trombinu založené na peptidylových derivátech, které mají v pozici Pl také cyklické aminoalkylguanidiny (např. buď 3- nebo 4-aminomethyl-l-amidinopiperidin) jsou známy z evropských patentových přihlášek 0 468 231,0 559 046 a 0 641 779.
Inhibitory' trombinu založené na tripeptidylových derivátech s argíninaldehydem v pozici Pl byly poprvé popsány v evropské patentové přihlášce 0 185 390.
- 1 CZ 303708 B6
V nedávné době byly popsány peptidylové deriváty založené na argininaldehydu modifikované v pozici P3. Například mezinárodní patentová přihláška WO 93/18060 popisuje hydroxykyseliny, evropská patentová přihláška 0 526 877 des-aminokyseliny a evropská patentová přihláška
0 542 525 o-methylmandlové kyseliny v pozici P3.
Jsou také známy inhibitory serinproteáz (např. trombinu) založené na elektrofilních ketonech v pozici Pl. Například evropská patentová přihláška 0 195 212 popisuje peptidyl alfa-ketoestery a amidy, evropská patentová přihláška 0 362 002 fluoraikylamidketony, evropská patentová io přihláška 0 364 344 al fa, beta, delta-tr i ketos loučen iny a evropská patentová přihláška 0 530 167 a I fa-alkoxy ketonové deriváty argininu v pozici Pl.
Jiné strukturně odlišné inhibitory trypsinu podobných serinproteáz založené na derivátech kyseliny borité na C-konci argininu a jejich izothiouroniových analozích jsou známy z evropské patentové přihlášky 0 293 881.
V nedávné době byly zveřejněny inhibitory trombinu založené na peptidylových derivátech v evropské patentové přihlášce 0 669 317 a mezinárodních patentových přihláškách WO 95/35309, WO 95/23609, WO 96/25426, WO 97/02284, WO 97/46577, WO 96/32110, ?o WO 96/31504, WO 96/03374, WO 98/06740, WO97/49404, WO 98/57932, WO 99/29664,
WO 00/35869 a WO 00/42059.
Zejména WO 97/02284 a WO 00/42059 popisují inhibitory trombinu se substituovanou mandlovou kyselinou v poloze P3.
Přetrvává však potřeba účinných inhibitorů trypsinu podobných serinproteáz jako je trombin.
Dále také existuje potřeba sloučenin, které mají příznivý farmakokinetický profil a jsou selektivní při inhibici trombinu ve srovnání sjinými serinproteázami, zejména ty, které jsou zahrnuty v hemostázi. U sloučenin, které vykazují kompetitivní inhibiční aktivitu vůči trombinu lze očekávati, že budou obzvláště užitečné jako antikoagulanty a tedy užitečné při terapeutickém léčení trombózy a souvisejících poruch.
Podstata vynálezu
V rámci tohoto vynálezu se poskytují sloučeniny vybrané z Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) vzorce
- 7 .
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)Cl I(OH)C(O)-Aze-Pab(OH) vzorce
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0}-Aze-Pab vzorce
nebo farmaceuticky přijatelná sůl kterékoliv z těchto sloučenin. Dále se popisují sloučeniny obecného vzorce I
kde
R;1 znamená skupinu -OH nebo skupinu -CH?OH;
R1 znamená alespoň jeden případný halogenový substituent;
R2 znamená jeden nebo dva alkoxysubstituenty obsahující l až 3 atomy uhlíku, kde alkylové části substituentů jsou samotné substituovány jedním nebo více fluorovými substituenty (tj. R znamená jednu nebo dvě tluoralkoxyskupiny obsahující 1 až 3 atomy uhlíku);
Y znamená skupinu -CH2- nebo -(CH2)2-; a
- j CZ 303708 Β6
R? znamená strukturní skupinu obecného vzorce I(i) neb I(ii):
l(ii) kde
R4 znamená atom vodíku nebo jeden nebo více fluorových substituentů; a jedno nebo dvě z X], X2, X3 a X4 představuje skupinu -N- a zbývající představují skupinu -CH— nebo její farmaceuticky přijatelné deriváty.
Výraz „farmaceuticky přijatelné deriváty“ zahrnuje farmaceuticky přijatelné soli (například adiční soli s kyselinou).
Zkratky jsou uvedeny na konci popisu. Vlnité čáry na fragmentech vzorců I(i) a I(ii) označují vazebné polohy fragmentů.
Halogenové skupiny, které může představovat skupina R1 zahrnují atom fluoru, atom chloru, atom bromu a atom jodu. Abychom se vyhnuli pochybnostem v představě alespoň jedné případné halogenové skupiny, Rl může nebo nemusí být přítomné (a tak může být nahrazené atomem vodíku, proto jsou pravidla pro valenci připojena) nebo může představovat jeden nebo více atomů halogenu.
Jestliže R3 znamená strukturní zlomek obecného vzorce I(i), kde R4 znamená jeden nebo více fluorových substituentů, výhodné sloučeniny obecného vzorce I zahrnují ty sloučeniny, kde R4 znamená jeden fluorový substituent ve 2- nebo 3- poloze nebo 2 fluorové substituenty, buď ve 2- a 5- poloze nebo výhodněji 2- a 6- poloze (kde substituční polohy jsou vztaženy k bodu připojení strukturního fragmentu obecného vzorce I(i) ke zbytku molekuly (tj. k -NHCH2- skupině)).
Jestliže skupiny R3 představují strukturní fragment obecného vzorce I(ii), výhodné sloučeniny obecného vzorce 1 zahrnují ty, ve kterých buď:
(a) jedno zXh X2, X} a X4 znamená skupinu -N- a zbývající představují skupinu -CH-; nebo (b) buď Xi a X3 nebo X2 a X4 obě znamenají skupinu -N- a ostatní dvě (jak je to vhodné) znamenají skupinu -CH-.
Výhodné sloučeniny obecného vzorce I zahrnují ty, kde:
R1 znamená jeden fluorový substituent, jeden chlorový substituent nebo jeden bromový substituent;
R2 znamená alkoxyskupinu s l až 2 atomy uhlíku, substituovanou jedním nebo více fluorovými substituenty, jako jsou -OCHF2, -OCR -OCH-.CF), -OCHCHK -OCILCH.F nebo -OCH(CH2F)2;
R3 znamená strukturní vzorek obecného vzorce I( i);
-4 CZ 303708 B6
R4 znamená atom vodíku.
Výhodnější jsou sloučeniny obecného vzorce 1, ve kterých:
S
Ra znamená skupinu OH;
Rl znamená jeden chlorový substituent;
R2 znamená skupinu -OCF3, výhodně -OCH2CHF? nebo výhodněji -OCHF? nebo
-OCH2CH2F.
Výhodné polohy substituce R1 a R2 na příslušné relevantní fenylové skupiny sloučenin obecného vzorce I zahrnují dvě metapolohy vzhledem k bodu připojení této fenylové skupiny ke zbytku is molekuly (tj. ve 3- a/nebo 5- poloze (výhodně substituce 3,5) vzhledem k atomu uhlíku nesoucímu tx- nebo β-hydroxy lovou skupinu kyseliny.
Sloučeniny obecného vzorce, které mohou být zmíněny, zahrnují ty sloučeniny, kde:
R2 znamená jeden nebo dva alkoxylové substituenty s 1 až 2 atomy uhlíku, kde alkylové části těchto substituentů jsou samotné substituovány jedním nebo více fluorovými substituenty; nebo
R2 znamená jeden nebo dva alkoxylové substituenty se 3 atomy uhlíku, kde alkylové části těchto substituentů jsou samotné substituovány jedním nebo více fluorovými substituenty.
Sloučeniny obecného vzorce I se mohou připravit způsoby, kteréjsou odborníkovi známé, například jak jsou popsány dále.
Podle toho se dále poskytuje způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce 1, který zahrnuje:
(i) kondenzaci sloučeniny obecného vzorce II,
kde R\ Rl a R2 mají význam definovaný shora, se sloučeninou obecného vzorce HI,
Π
O kde Y a R1 mají význam definovaný shora, například v přítomnosti kondenzačního činidla (například oxalylchloridu v DMF, EDC, DCC, HBTU, HATU, PyBOP nebo TBTU) vhodné báze (například pyridinu, DMAP, TEA, 2,4-kolidinu nebo DÍPEA) a vhodného organického rozpouštědla (například dichlormethanu, acetonitrilu, EtOAc nebo DMF);
IV (ii) kondenzací sloučeniny obecného vzorce IV,
OH kde Ra, R.1, R2 a Y mají význam definovaný shora se sloučeninou obecného vzorce V
R3CH,NH7 v, kde R3 má význam uvedený shora, například při podmínkách jak je popsáno v postupu (i) shora;
(iii) pro sloučeniny obecného vzorce I, kde R1 není přítomné, redukci odpovídající sloučeniny io obecného vzorce la, jak je definováno shora, kde R5 znamená skupinu OR6, kde R5 a R6 mají význam definovaný shora, například hydrogenaci v přítomnosti vhodného katalyzátoru (například kovového katalyzátoru, jako je Pd/C (například 10% (objem/objem Pd/c)) a vhodného rozpouštědla (například nižšího (například s 1 až 6 atomy uhlíku) alkylalkoholu, jako je ethanol) a případně v přítomnosti vhodné kyseliny (například kyseliny octové) a/nebo jak je popsáno v Synth. Comm (1998)4351; nebo (iv) reakci odpovídající sloučeniny obecného vzorce XVIA nebo XVIB, jak je popsáno dále, s vhodným zdrojem amoniaku (například octanem amonným nebo plynným amoniakem) za podmínek, které jsou odborníkovi známé, jakoje reakce ethylimidátového meziproduktu (tvoře20 ného reakci sloučeniny obecného vzorce XVIA nebo XVB s plynným HCI v ethanolu) s plynným amoniakem v ethanolu nebo za podmínek, popsaných v Tetrahedron Lett, 40, 7067 (1999), uváděný zde jako odkaz (například při přípravě sloučenin obecného vzorce I, kde R3 znamená strukturní vzorec l( i i), kde X2 nebo X] znamená atom dusíku, reakci odpovídající sloučeniny obecného vzorce XVIB s octanem amonným (například 1 až 30 ekvivalenty octanu amonného) v přítom25 nosti N-acetylcysteinu (například 1 až 30 ekvivalenty N-aeetylcvsteinu) a vhodného rozpouštědla (například nižšího alkyl (například s 1 až 6 atomy uhlíku) alkoholu, jako je methanol)). Sloučeniny obecného vzorce II jsou dostupné za použití známých a/nebo standardních technik.
Například sloučeniny obecného vzorce II, kde Ra znamená OH skupinu, se mohou připravit teakcí aldehydu obecného vzorce VI
kde R1 a R2 mají význam definovaný shora, s:
-6 CZ 303708 B6 (a) sloučeninou obecného vzorce VII
RCN VII, kde R znamená atom vodíku nebo skupinu (CH3)3Si, například při teplotě místnosti nebo zvýšené teplotě (například pod 100 °C) v přítomnosti vhodného organického rozpouštědla (například chloroformu nebo methylenchloridu) a je-li to nezbytné, v přítomnosti vhodné báze (například TEA) a vhodného katalytického systému (například benzylamoniumchloridu nebo jodidu zinečnatého), za použití chirálního katalyzátoru, jak je například popsáno v Chem. Re v. io (1999), 99, 3649), a následnou hydrolýzou za podmínek, které jsou odborníkovi velmi dobře známé (například jak je popsáno dále);
(b) NaCN nebo KCN, například v přítomnosti NaHSO3 a vody a následnou hydrolýzou;
is (c) chloroform, například za zvýšené teploty (například nad teplotou místnosti ale pod 100 °C) v přítomnosti vhodného organického rozpouštědla (například chloroformu) a, je-li to nezbytné, v přítomnosti vhodného katalytického systému (například benzylamoniumchloridu) a následnou hydrolýzou;
(d) sloučeninou obecného vzorce VIII,
vm kde M znamená atom hořčíku nebo lithia a následným oxidačním štěpením (například ozonolýzou nebo katalyzovaným osmiem nebo rutheniem), za podmínek, které jsou odborníkovi velmi dobře známé; nebo (e) tris(methylthio)methanem za podmínek, které jsou odborníkovi velmi dobře známé a následnou hydrolýzou v přítomnosti například HgO a HBF4.
Sloučeniny obecného vzorce II, kde Ra znamená skupinu -CH2OH se mohou připravit redukcí sloučeniny obecného vzorce IX,
kde R znamená alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 atomu uhlíku, alky lfeny lovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části a R1 a R2 mají význam definovaný shora, například při teplotě místnosti nebo nižší, v přítomnosti vhodného redukčního činidla (například borohydridu sodného) a vhodného organického rozpouštědla (například methanolu, ethanolu, THF nebo jejich směsi) a následnou hydrolýzou vzniklého meziproduktu esteru kyseliny tropové obecného vzorce IXA,
- 7 CZ 303708 B6
O
OR
ÍXA
R2 kde R, Rl a R2 mají význam uvedený shora, za podmínek, které jsou odborníkovi známé, jak je například popsáno dále. Odborník v oboru zná, že stupně redukce a hydrolýzy se mohou provést v jedné nádobě, například jak je popsáno dále.
Sloučeniny obecného vzorce II, kde Ra znamená skupinu -OH se mohou alternativně připravit oxidací sloučeniny obecného vzorce ÍXB,
OH
mají význam definovaný shora, v přítomnosti vhodného oxidačního činidla (například kombinace vhodného radikálového oxidačního činidla (jako je TEMPO) a vhodné chlomanové soli (jako je chlornan sodný) za podmínek, které jsou odborníkovi známé, například při teplotě mezi -10 °C a teplotou místnosti, v přítomnosti vhodného rozpouštědla (například vody, acetonu nebo jejich směsi), vhodné soli (například halogenidu alkalického kovu, jako je bromid draselný) a vhodné báze (například uhličitanu alkalického kovu nebo hydrogenuhličitanu alkalického kovu, jako je hydrogenuhličitan sodný).
Enantiomemí formy sloučeniny obecného vzorce II, kde Ra znamená skupinu -OH (tj. sloučeniny mající různé konfigurace substituentů okolo C-atomu a- skupiny -CO2H) se mohou oddělit enantíospecifickým derivatizačním stupněm. Toho se může dosáhnout například enzymovým postupem. Takový enzymový postup zahrnuje například transesterifikaci α-OH skupiny při teplotě mezi teplotou místnosti a teplotou zpětného toku (například při teplotě mezi 45 a 65 °C) v přítomnosti vhodného enzymu (například Lipase PS Amano), vhodného esteru (například vinylacetátu) a vhodného rozpouštědla (například methyl-terc-butyletheru). Derivatizovaný izomer se může poté oddělit od nezreagovaného izomerů konvenčními separačními technikami (například chromatografií).
Skupiny, které jsou zavedené do sloučenin obecného vzorce II vlakovém derivatizačním stupni se mohou odstranit před kteroukoli další reakcí nebo v kterémkoli dalším stupni v syntéze sloučenin obecného vzorce I. Tyto přidané skupiny se mohou odstranit obvyklými technikami (například pro estery skupiny α-OH hydrolýzou za podmínek, které jsou odborníkovi známé (například při teplotě mezi teplotou místnosti a teplotou zpětného toku, v přítomnosti vhodné báze (například NaOH) a vhodného rozpouštědla (například MeOH, vody nebo jejich směsí)).
Enantiomemí formy sloučeniny obecného vzorce II, kde Rd znamená skupinu -CH2OH se mohou oddělit chromatografickými technikami (například chirální HPLC).
- 8 CZ 303708 B6
Sloučeniny obecného vzorce III se mohou připravit kondenzací sloučeniny obecného vzorce X.
i—Y
O kde Y má význam definovaný shora, se sloučeninou obecného vzorce V, jak je definováno shora, 5 například za podmínek, které jsou podobné podmínkám popsaným v tomto dokumentu pro přípravu sloučenin obecného vzorce I.
Sloučeniny obecného vzorce IV se mohou připravit kondenzací sloučeniny obecného vzorce II jak je popsáno shora, se sloučeninou obecného vzorce X, jak je popsáno shora, například za io podmínek podobných podmínkám pro přípravu sloučenin obecného vzorce I.
Sloučeniny obecného vzorce VI jsou dostupné za použití známých a/nebo standardních technik. Například se mohou připravit:
(i) metalací (kde kov může být například alkalický kov, jako je Li, nebo výhodně, dvojmocný kov. jako je Mg) sloučeniny obecného vzorce XI,
kde Hal znamená atom halogenu vybraný z Cl, Br a I a R1 a R2 mají význam definovaný shora, reakcí s vhodným zdrojem formy lové skupiny, jako je (N,N—dimethylformamid), například za zo podmínek, kteréjsou popsány shora;
kde R1 a R2 mají význam definovaný shora, v přítomnosti vhodného redukčního činidla (napří25 klad DIBAL-H); nebo
- 9 CZ 303708 B6 (iii) oxidací sloučeniny obecného vzorce XIII,
kde Rl a R2 mají význam definovaný shora, v přítomnosti vhodného oxidačního činidla (například MnCb, pyridiniumchlorchromátu, kombinace DMSO a oxalylchloridu nebo komplexu pyridinu a SO3 v DMSO).
Sloučeniny obecného vzorce IX se mohou připravit zodpovídajícího fenylacetátu (který se může například získat zodpovídajícího acetofenonu, jak je popsáno vj. Am. Chem. Soc. 98, 6750 (1976) nebo zodpovídajícího benzylkyanidu standardními hydrolytickými postupy) obvyklými io technikami, například analogicky k technikám popsaným v J. Org. Chem. 54, 3831 (1989) a/nebo jak je popsáno dále.
Sloučeniny obecného vzorce IXB se mohou připravit dihydroxylací odpovídající sloučeniny
XI1IA kde R1 a R2 mají význam definovaný shora, v přítomnosti vhodného dihydroxylačního činidla (například činidla nebo reakční směsi, která poskytuje OsO4, jako je AD-mix-ot nebo zejména AD-mix-β), například za podmínek, které jsou odborníkovi známé, například při teplotě mezi -10 °C a teplotou místnosti v přítomnosti vhodného rozpouštědla (například vody, terc-butanolu nebo jejich směsí). Pokud se použijí asymetrická oxidační činidla, jako je AD-mix-α a ADmix-β, tato metoda se může použít k přípravě sloučenin obecného vzorce IXB, které mají specifickou konfiguraci skupin (tj. R nebo S) okolo obou C-atomů, ke kterým jsou primární a sekundární hydroxylové skupiny vázané.
Sloučeniny obecného vzorce XIIIA se mohou připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce XI. jak je definována shora, s vhodným zdrojem vinylového anionu (například tributy l(vinyl)cínu) za podmínek, kteréjsou odborníkovi známé, například při teplotě mezi teplotou místnosti a teplotou zpětného toku rozpouštědla (například 50 °C), v přítomnosti vhodného rozpouštědla (například toluenu), vhodného kondenzačního činidla (například koordinačního komplexu palladium(O), to jako je tetrakis(trifenylfosfin)palladium(())) a případně v přítomnosti vhodného katalyzátoru (například 2,6-di-terc-butyl-4-methylfenolu).
Sloučeniny obecných vzorců V. Vil, Vlil, X, XI, XII a XIII jsou buď komerčně dostupné, jsou známé v literatuře nebo se mohou získat buď postupy, kteréjsou analogické s postupy popsanými v tomto dokumentu nebo obvyklými syntetickými postupy, v souladu se standardními technikami. ze snadno dostupných výchozích materiálů, za použití vhodných reakčních složek a reakčních podmínek. Sloučeniny obecných vzorců la, XVIA a XVIB se mohou získat postupy, kteréjsou popsané dále.
- 10CZ 303708 B6
Substituenty na ťenylovém kruhu sloučenin obecných vzorců I, II, III, IV, V, VI, IX, 1XA, IXB, XI, XII, XIII a XI11A se mohou zavést nebo navzájem přeměnit za použití technik, které jsou odborníkovi známé, standardními vzájemnými přeměnami funkčních skupin, v souladu se standardními technikami, ze snadno dostupných výchozích materiálů, za použití vhodných reakčních
Činidel a reakčních podmínek.
Například, sloučeniny obecných vzorců I, II, IV, VI, IXA, XI, XII a XIII se mohou připravit zodpovídajících sloučenin obecných vzorců XIVA, XIVB, X1VC, XIVD, XIVE, X1VF. XIVG aXIVH
X1VF XIVG XIVH kde R\ R, Rl, R3, Y a Hal (jak je vhodné) mají význam definovaný shora, například:
(a) reakcí s odpovídajícím fluorovaným halogenalkanem (například fluorovaným chloralkanem) například při teplotě místnosti nebo vyšší (například při zpětném toku) v přítomnosti vhodné báze (například terc-butoxidu draselného, KOH nebo NaOH, například ve vodném roztoku) a vhodného organického rozpouštědla (například THF, chloroformu nebo izopropanolu); nebo (b) reakcí se sloučeninou obecného vzorce XIVJ
RxS(O)2ORy X1VJ, kde Rx znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, perfluoralkýlovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo fenylovou skupinu (případně substituovanou methylovou skupinu, nitroCZ 303708 B6 skupinou nebo atomem halogenu) a R? znamená skupinu CH2CF3, CH2CHF2, CH2CH2F nebo CH(CH2F)2, například v přítomnosti vhodné báze (například K2CO3) a vhodného rozpouštědla (například DMF), například v obou případech, jak je popsáno dále.
Odborník v oboru zná, že tyto transformace funkčních skupin mohou být provedeny v dřívějším stadiu v průběhu syntézy sloučenin obecných vzorců II, IV, VI, IXA, XI, XII a XIII (tj. na vhodných prekurzoreeh sloučenin obecných vzorců XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG a XIVH).
to Sloučeniny obecných vzorců XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG, XIVH a XIVJ jsou buď komerčně dostupné, jsou známé v literatuře, nebo se mohou získat analogicky s postupy popsanými v tomto dokumentu nebo konvenčními syntetickými postupy, v souladu se standardními technikami, ze snadno dostupných výchozích materiálů, za použití vhodných reakčních činidel nebo reakčních podmínek. Například, sloučeniny obecných vzorců XIVA, XIVB, XIVC, XIVD, is XIVE, XIVF, XIVG a XIVH se mohou získat odstraněním chránící skupiny odpovídajících chráněných fenolů (kde chránící skupina může být například methylová skupina, allylová skupina, benzylová skupina nebo terc-butylová skupina), za standardních podmínek. Dále, sloučeniny obecného vzorce XIVD, kde R1 je jednotlivý chlorový substituent se mohou získat z di- nebo trihalosubstituovaného benzenu (například 1-Br, 3-C1, 5-F-benzenu, substitucí atomu fluoru s methoxyskupinou (například reakcí s NaOMe ve směsi l-methyl-2-pyrrolidinon/methanol (při zvýšené teplotě), vytěsněním bromové skupiny s formylovou skupinou (například jak je popsáno shora pro přípravu sloučenin obecného vzorce VI) a poté demethylaci (například za použití PhSH v l-methyl-2-pyrrolidinonu v přítomnosti K2CO3)).
Rovněž, sloučeniny obecného vzorce I, kde R1 je nepřítomné, se mohou připravit z odpovídajících sloučenin obecného vzorce I (nebo přes jejich vhodné prekurzory), kde R1 představuje atom halogenu (jako je atom chloru), například hydrogenaci za podmínek, které jsou odborníkovi známé.
Sloučeniny obecného vzorce I se mohou izolovat ze svých reakčních směsí za použití obvyklých technik.
Farmaceuticky přijatelné deriváty sloučenin obecného vzorce I také zahrnují „chráněné“ deriváty a/nebo sloučeniny, které působí jako proléčiva sloučenin obecného vzorce I.
Sloučeniny, které působí jako proléčiva sloučenin obecného vzorce I, které mohou být zmíněny, zahrnují sloučeniny obecného vzorce la,
kde R1a znamená strukturní fragment obecného vzorce I(íii) nebo I(iv):
- 12 CZ 303708 B6
xrx4 nh2
KM kde R? znamená skupinu ORÓ nebo skupinu C(O)OR';
Ró znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, alkylarylovou skupinu s 1 5 až 3 atomy uhlíku v alkylové části nebo alkyloxyarylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části (přičemž alkylové části později uváděných dvou skupin jsou případně přerušeny jedním nebo více atomy kyslíku a arylové části, později uváděných dvou skupin jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými z atomů halogenu, fenylové skupiny, methylové skupiny nebo methoxyskupiny, přičemž později uváděné tři skupiny jsou případně io substituovány jedním nebo více atomy halogenu);
R7 znamená alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku (přičemž později uváděná skupina je případně přerušena jedním nebo více atomy kyslíku) nebo alkylarylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, v alkylové části nebo alkyloxyarylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části is (přičemž alkylové části později uváděných dvou skupin jsou případně přerušeny jedním nebo více atomy kyslíku a arylové části, později uváděných dvou skupin jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými z atomů halogenu, fenylové skupiny, methylové skupiny nebo methoxyskupiny, přičemž později uváděné tri skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více atomy halogenu); a R“, R1, R. Y, R4, X|, X2, X3 a X4 mají význam definovaný shora, a jejich farmaceuticky přijatelné deriváty.
Výraz „farmaceuticky přijatelné deriváty“ sloučenin obecného vzorce I zahrnuje farmaceuticky přijatelné soli (například adiční soli s kyselinou).
Vlnité čáry na fragmentech vzorců I(iii) a I(iv) označují vazebné polohy fragmentů.
Alkoxyarylové skupiny, které mohou představovat 1< a R7 obsahují alkylovou a arylovou skupinu, vázanou k atomu kyslíku. Alkylarylové a alkyloxyarylové skupiny jsou vázány ke zbytku molekuly přes alkylovou část těchto skupin, jejichž alkylová část může (pokud je dostatečný so počet (například tři) atomů uhlíku) být s přímým nebo rozvětveným řetězcem. Arylové části alky lary lových a alky loxyary lových skupin, které mohou R6 a R7 představovat, nebo kterými mohou být substituovány, zahrnují karbocyklické a heterocyklické aromatické skupiny, jako je fenylová skupina, naťtylová skupina, pyridinylová skupina, oxazolylová skupina, izoxazolylová skupina, thiadiazolylová skupina, indolylová skupina a benzofuranylová skupina a podobně.
Alkylové části, které mohou R6 a R představovat, mohou být s přímým řetězcem, nebo pokud je dostatečný počet (tj. minimálně tři) atomů uhlíku s rozvětveným řetězcem a/nebo mohou být cyklické. Dále. pokud je přítomen dostatečný počet (tj. minimálně čtyři) atomů uhlíku, takové alkylové skupiny mohou také být částečně cyklické/acyklické. Takové alkylové skupiny mohou být nasycené, nebo když je dostatečný počet (tj. minimálně dva) atomů uhlíku, mohou být nenasycené.
Halogenové skupiny, kterými mohou být Ró a R7 substituovány, zahrnují atom fluoru, atom chloru, atom bromu a atom jodu.
Jestliže 1< znamená skupinu C(O)OR'. výhodně R7 znamená;
- 13 CZ 303708 B6 (a) lineární, rozvětvenou nebo cyklickou alkylovou skupinu obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, například cykloalkylovou skupinu obsahující 4 až 6 atomů uhlíku;
(b) alkylarylovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku v alkylové části, jako je například benzylová skupina, případně substituována jak je indikováno shora.
Výhodné sloučeniny obecného vzorce Ia jsou ty, kde Rs znamená skupinu OR6.
io Když R5 znamená skupinu OR6, výhodně R6 zahrnuje:
(a) atom vodíku;
(b) nesubstituovanou, lineární, rozvětvenou nebo cyklickou alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku (například s 1 až 6 atomy uhlíku), jako je lineární alkylová skupina s 1 až 3 atomy uhlíku (například ethylová skupina nebo zejména methylová skupina), rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující 3 až 8 atomů uhlíku (například izopropylovou skupinu, izobutylovou skupinu nebo 4heptylovou skupinu) nebo cyklickou alkylovou skupinu se 4 až 7 atomy uhlíku (tj. cyklickou alkylovou skupinu se 4 až 7 atomy uhlíku, například cyklobutylovou skupinu nebo cyklohexylozo vou skupinu);
(c) alkyloxyfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části (například alkyloxyfenylovou skupinu se dvěma atomy uhlíku v alkylové části), kde fenylová skupina je případně substituována jedním nebo více substituenty jak je indikováno shora (například trifluormethylo25 vou skupinu);
(d) alkylarylovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku v alkylové části (například methy! ary lovou skupinu), kde arylová skupina je fenylová skupina, pyridinylová skupina, oxazolylová skupina nebo izoxazolyiová skupina, přičemž tři později uvedené skupiny jsou případně substituovány
5o jedním nebo více substituenty, jak je indikováno shora (například methoxyskupinou, methylovou skupinou, bromem a/nebo chlorem).
Výhodné sloučeniny obecného vzorce Ia zahrnují ty sloučeniny, kde R5 znamená skupinu OR6 a R6 znamená lineární, rozvětvenou (jak je vhodné) nebo cyklickou (jak je vhodné) alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku (například alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku), jako je methylová skupina, ethylová skupina, n-propylová skupina, izopropylová skupina nebo cyklobutylová skupina.
Sloučeniny obecného vzorce Ia se mohou připravit následujícími způsoby:
(a) reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce II jakje definováno shora, se sloučeninou obecného vzorce XV,
O kde Y a R'a mají význam definovaný shora, například za podmínek podobných podmínkám 45 popsaným shora pro přípravu sloučenin obecného vzorce I;
(b) reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce IV jakje definováno shora, se sloučeninou obecného vzorce XVI,
- 14 CZ 303708 B6
R3aCH2NH2
XVI, kde RJa má význam definovaný shora, například za podmínek podobných podmínkám popsaným shora pro přípravu sloučenin obecného vzorce 1;
(c) pro sloučeniny obecného vzorce la, kde R znamená OH skupinu, reakci odpovídající slou ceniny obecného vzorce XVIA nebo XVIB,
XVIA
XVIB kde Ra, R1, R2, R4, Y, X], X2, X3 a X4 mají význam definovaný shora, s hydroxylaminem, napři 10 klad za podmínek, které jsou odborníkovi známé;
(d) pro sloučeniny obecného vzorce la. kde R5 znamená skupinu OR6, reakci chráněného deri vátu odpovídající sloučeniny obecného vzorce I, která je například sloučeninou obecného vzor ce XVII,
XVií kde RJD znamená strukturní fragment obecného vzorce I(v) nebo l(vi):
N—COORb //
NH2 ΧΓΧ2
N—COORb s\ // X3~X4 nh2
R4 i(v) l(vi)
- 15 CZ 303708 B6 kde Rb znamená například skupinu -CH2CH2-SÍ(CH3)3 nebo benzylovou skupinu nebo její tautomer a R\ R1, R2, Y, R4, X), X2, X3 a X4 mají význam definovaný shora, se sloučeninou obecného vzorce XV1I1,
R6ONH2 XVIII, kde R6 má význam definovaný shora, nebo jejich adíčních solí s kyselinou, například pří teplotě mezi teplotou místnosti a teplotou zpětného toku, v přítomnosti vhodného organického rozpouštědla (například THF, CH3CN, DMF nebo DMSO) a následným odstraněním skupiny
-C(O)ORb za podmínek, kteréjsou odborníkovi známé (například reakcí s QF nebo TFA (například jakje popsáno dále));
(e) pro sloučeniny obecného la, kde R5 znamená OH, reakcí sloučeniny obecného vzorce XVII, jak je definována shora, kde Rb znamená benzylovou skupinu, s hydroxylaminem nebo jeho adiční solí s kyselinou, například za podmínek, kteréjsou odborníkovi známé;
(f) pro sloučeniny obecného vzorce la, kde R3 znamená skupinu COOR7, reakci odpovídající sloučeniny obecného vzorce I, jakje definovaná shora, se sloučeninou obecného vzorce XIX l‘coor7 XIX, kde L1 je vhodná odštěpující se skupina, jako je například atom halogenu nebo nitrofenylová skupina (například 4-nirtofenylová skupina) a R7 má význam uvedený shora, například při teplotě okolo teploty místnosti, v přítomnosti vhodné báze (například NaOH, například ve vodném roz25 toku) a vhodného organického rozpouštědla (například methylenchloridu); nebo (g) pro sloučeniny obecného vzorce la, kde R5 znamená skupinu OCH3 nebo OCH2CH3, reakci odpovídající sloučeniny obecného vzorce la, kde R5 znamená skupinu OH, s dimethy 1 sulfátem nebo d iethy l sulfátem, například v přítomnosti vhodné báze (například hydroxidu alkalického kovu, jako je KOH (například ve formě 50% hmotn. vodného roztoku) a vhodného katalyzátoru (například kvartémího amonium halogenidu, jako je benzyltrimethylammoniumchlorid (například 10% hmotn. roztok v CH2C12 nebo THF)).
Vlnité čáry na fragmentech vzorců I(v) a I(vi) označují vazebné polohy fragmentů.
Sloučeniny obecného vzorce XVIA a XVIB se mohou připravit reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce II, jakje popsána shora, se sloučeninou obecného vzorce XIXA nebo XIXB,
X1XA
XIXB kde R4. Xi, X2, X3 a X3 mají význam definovaný shora, například za podmínek, které jsou 41) podobné podmínkám popsaným shora pro syntézu sloučenin obecného vzorce I.
- 16 CZ 303708 B6
Sloučeniny obecného vzorce XVIA a XVIB se mohou alternativně připravit reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce IV, jak je popsána shora, se sloučeninou obecného vzorce XIXC nebo XIXD,
XIXC
XIXD kde R4, Xi, X2, X3 a X4 mají význam definovaný shora, například za podmínek, které jsou podobné podmínkám popsaným shora pro syntézu sloučenin obecného vzorce I.
Sloučeniny obecného vzorce XVII se mohou připravit reakcí odpovídající sloučeniny obecného io vzorce II, jak je definována shora, se sloučeninou obecného vzorce XX,
O kde Y a R3b mají význam definovaný shora, například za podmínek podobných těm, které jsou popsány shora pro přípravu sloučenin obecného vzorce I.
Alternativně se sloučeniny obecného vzorce XVII mohou připravit reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce 1 se sloučeninou odpovídající sloučenině obecného vzorce XIX, kde namísto skupiny R7 je přítomná skupina Rb, kde Rb má význam uvedený shora, například za podmínek popsaných shora s ohledem na přípravu sloučeniny obecného vzorce ía.
Sloučeniny obecného vzorce XV a XX se mohou připravit reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce X jak je definována shora, se sloučeninou obecného vzorce XVI, jak je definována shora, nebo sloučeninou XXI
R3bCH3NH2 XXI.
kde R'b má význam definovaný shora, například za podmínek, které jsou podobné těm, které jsou popsány shora pro přípravu sloučenin obecného vzorce I.
Sloučeniny obecného vzorce XVI, XVIII, XIX, XIXA, XIXB, XIXC, XIXD a XXI jsou buď 30 komerčně dostupné, jsou známé v literatuře nebo se mohou získat buď analogickými postupy, jak jsou popsány v předkládaném dokumentu nebo obvyklými syntetickými postupy, v souladu se standardními technikami, ze snadno dostupných výchozích materiálů, za použití vhodných reakčních činidel a reakčních podmínek. Například sloučeniny obecného vzorce XIXA a XIXB se mohou připravit reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce XIXC nebo XIXD (jak je vhodné) se sloučeninou obecného vzorce X, například za podmínek popsaných podobných těm, které jsou popsány shora.
- 17 CZ 303708 B6
Sloučeniny obecného vzorce I a Ia jak jsou definovány shora ajejich deriváty jsou dále uváděny jako „sloučeniny“.
Výhodné sloučeniny zahrnují sloučeniny příkladů popsaných dále. Sloučeniny, které mohou být zmíněny zahrnují:
Ph(3Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl) (5^OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt);
io Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr);
Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr);
Ph(3—Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu);
Ph(3—Cl) (5-OCHF?)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH);
Ph(3—Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(COOcPentyl);
Ph(3^CD(5-OCHF2>-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z);
Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3Cl) (5^OCF<HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3—Cl) (5—OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2-3—(5-Me-izoxazol));
Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2-3~pyridin);
Ph(3-CI) (5—OCF3)-{R)CH(OH)C(O)-Aze~Pab(OíBu);
Ph(3—Cl) (5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt);
Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn);
Ph(3—Cl) (5-OCF3HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcHexyl);
Ph(3-CI) (5—OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu);
Ph(3-CI) (5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2CH2OPh(3-CF3));
Ph(3-Cl) (5-OCF3HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Cl));
Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OBn(3-MeO));
Ph(3-Cl) (5~OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(2-Br));
Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-~Me));
Ph(3-CI) (5-OCF3)-(R)CH(0H)C(0)-Aze-Pab(0-4-heptyl);
Ph(3-Cl) (5-OCHF2HS)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3—Cl) (5-OCF3HS)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3“Cl) (5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(OMe); Ph(5^OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(50CF3HR)CH(OH)C(0)-Aze-Pab;
Ph(3—Cl) (5-OCH2CF3HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl) (5-OCH2CF3HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-C 1) (5-OCH2CHF2HR)CH(OH)C(0)-Aze -Pab;
Ph(3-G) (5—OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-CI)(5-OCH2F2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3—Cl) (5-OCH2F2b(R)CH(OH)C(ObAze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl) (5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-CI) (5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe); Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2FHR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe); Ph(3-F)(5-OCHF2HR)CH(OH)C(0)-Aze-Pab; Ph(3-F)(5-OCHF2HR)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe); Ph(3-Br)(5-OCH2FHR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
- 18 CZ 303708 B6
Ph(3—Br) (5-OCI lF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl. 5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH);
Ph(3—Cl, 5-OCH2CH2FHR)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OH);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl, 5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((2-amidino)-5-pyridinyl);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2HR)CH(OH)C(0)-Aze-NH-CH24(2-methoxyamidino)-5-pyridinyl); Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-NH-CH2-((5-amidíno)-2-pyrimidÍnyl);
Ph(3-Cl, 5-CCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-<(5-methoxyamidino)-2-pyrimidinyl);
io Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O}-Aze-Pab(2,6-diF);
Ph(3-Cl, 5-()CHP>) (R.)CH(OH)C(O)—Aze- Pab(2,6- diF) (OMe);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(0H)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF); a Ph(3-CI, 5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF) (OMe).
Sloučeniny podle vynálezu mohou vykazovat tautomerismus. Všechny tautomemí formy ajejich směsi jsou zahrnuty do rozsahu předkládaného vynálezu. Konkrétní tautomemí formy, které mohou být zmíněny, zahrnují ty, které jsou spojeny s polohou dvojné vazby v amidinové funkční skupině ve sloučeninách obecného vzorce Ia a polohách substituentu R\
Sloučeniny podle vynálezu také obsahují dva nebo více asymetrických atomů uhlíku a mohou tedy vykazovat optickou diastereomerií. Diastereomery se mohou oddělit za použití obvyklých technik, například chromatografií. Různé stereoizomery se mohou izolovat rozdělením racemických nebo jiných směsí sloučenin za použití obvyklých technik, například HPLC. Alternativně se žádané optické izomery mohou připravit reakcí příslušné opticky aktivních výchozích materiálů za podmínek, které nezpůsobí racemizaci nebo epimerizaci nebo derivatízací, například s homochirální kyselinou a následnou separací diastereomemích derivátů obvyklými prostředky (například HPLC, chromatografií na silikagelu). Všechny stereoizomery jsou zahrnuty do rozsahu předkládaného vynálezu.
Sloučeniny, kde
fragment je v S-konfiguraci jsou výhodné.
Výhodné sloučeniny podle vynálezu zahrnují ty sloučeniny, kde zlomek
je v R-konfiguraci, když Ra znamená -OH neboje v S-konfiguraci, když Ra znamená -C1LOH.
- 19 CZ 303708 Β6
Vlnité čáry na vazbách shora uvedených fragmentů označují vazebné polohy fragmentů.
Sloučeniny podle vynálezu, které mohou být uvedeny, zahrnují Ph(3—Cl) (5-OCHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab (kde Aze znamená azetidin-2-karboxylát) tj. v (R)- a/nebo (S)-konformaci) a rovněž ekvivalentní sloučeniny, ve kterých, místo atomu vodíku v amidinové jednotce v Pab, je přítomná skupina OR6 (jak je definována shora), kde Ró znamená alkylovou skupinu s l až 3 atomy uhlíku (tj. Ph(3-Cl) (5-OCHF2)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe), Ph(3-CI) (5-0CHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt), PhO-Cl) (5^0CHF2)-CH(0H)C(O)-Aze-Pab(0nPr) nebo Ph(3—CI) (5-OCHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr). Sloučeniny podle vynálezu, které mohou být zmíněny, zahrnují ty, které nejsou specifické sloučeniny identifikované v předchozí větě.
Odborník v oboru zjistí, že v postupech popsaných shora a dále, bude nutné chránit funkční skupiny meziproduktů chránícími skupinami.
Funkční skupiny, které bude nutné chránit, zahrnují hydroxyskupiny, aminoskupiny a skupiny karboxylové kyseliny. Vhodné chránící skupiny pro hydroxylovou skupinu zahrnují případně substituované a/nebo nenasycené alkylové skupiny (například methylovou skupinu, allylovou skupinu, benzylovou skupinu nebo terc-buty lovou skupinu), trialkylsily lové nebo diarylalkylsilylové skupiny (například terc-butyldimethylsilylovou skupinu, terc-butyldifenylsilylovou skupinu nebo trimethylsilylovou skupinu) a tetrahydropyranylovou skupinu. Vhodné chránící skupiny pro karboxylovou skupinu zahrnují alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo benzylestery. Vhodné chránící skupiny pro aminovou a amidinovou skupinu zahrnují terc-butyloxykarbony lovou skupinu, benzyloxakarbonylovou skupinu nebo 2-trimethylsilylethoxykarbonylovou skupinu (Teoc). Amidinové atomy dusíku také může být chráněn hydroxyskupinou nebo alkoxyskupinou a může být chráněn jeden nebo dva atomy dusíku.
Chránění funkčních skupin a odstranění chránících skupin může být provedeno před nebo po kondenzaci nebo před kteroukoli reakcí ve shora uvedených schématech.
Chránící skupiny mohou být odstraněny v souladu s postupy, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy a jak je zde dále popsáno. Odborník v oboru zjistí, že k získání sloučenin podle vynálezu alternativním a, při určitých příležitostech, vhodnějším způsobem, mohou být jednotlivé kroky postupu uvedené shora prováděny v odlišném poradí a/nebo mohou být jednotlivé reakce prováděny v jiných stupních celkového postupu (tj. substituenty mohou být ve spojitosti s určitou reakcí adovány najiné meziprodukty a/nebo vytvořeny chemickou přeměnou prováděnou na jiných meziproduktech než jsou zde výše zmíněny). To může negovat nebo nutně vyžadovat potřebu chránících skupin.
Tudíž řád a typ zahrnuté chemické reakce bude diktovat potřebu a typ chránících skupin stejně jako pořadí kroků k uskutečnění syntézy.
Použití chránících skupin je plně popsáno v „Protective Groups in Organic Chemistry“ kterou vydal J. W. F. McOmie, Plenům Press (1973) a „Protective Groups in organic Synthesis“, 3. vydání, T. W. Greene a P. G. M. Wutz. Wiley-Intescience (1999).
Chráněné deriváty sloučenin podle vynálezu mohou být chemicky převedeny na sloučeniny podle vynálezu použitím standardních postupů odstranění chránících skupin (např. hydrogenace). Odborník v oboru zjistí, že určité sloučeniny obecného vzorce Ia mohou být považovány za ..chráněné deriváty“ jiných sloučenin obecného vzorce I.
-20CZ 303708 B6
Lékařské a farmaceutické použití
Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou mít farmako logickou aktivitu jako takové. Sloučeniny podle tohoto vynálezu, které mohou mít takovou aktivitu, zahrnují, nikoliv však s omezením, sloučeniny obecného vzorce I.
Nicméně, další sloučeniny (včetně sloučenin obecného vzorce fa) nemusejí mít farmako logickou aktivitu, ale mohou být podány parenterálně nebo orálně a poté mohou být v těle metabolízovány ío k vytvoření sloučenin, které jsou farmakologicky aktivní (včetně, nikoliv však s omezením, odpovídajících sloučenin obecného vzorce I). Takové sloučeniny (které rovněž zahrnují sloučeniny, které mohou mít určitou ťarmakologickou aktivitu, ale tato aktivita je zřetelně nižší než aktivita „aktivních“ sloučenin na něž se metabolizují) mohou být tedy popsány jako „prekurzory léčiva“ aktivních sloučenin.
Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou tedy užitečné, protože mají farmakologickou aktivitu a/nebo jsou metabolízovány v těle po orálním nebo parenterálním podání za vytvoření sloučenin, které mají farmakologickou aktivitu. Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou tedy indikovány jako farmaceutika.
Podle dalšího aspektu tohoto vynálezu jsou tedy poskytnuty sloučeniny podle tohoto vynálezu pro použití jako farmaceutika.
Zejména jsou sloučeniny podle tohoto vynálezu silnými inhibitory trombinu bud1 jako takové nebo (v případě prekurzorů léčiv) jsou metabolízovány po podání za vzniku silných inhibitorů trombinu, například jak může být demonstrováno v testech popsaných dále.
Pod pojem „prekurzor léčiva inhibitoru trombinu“ se zahrnují sloučeniny, které tvoří inhibitor trombinu, v experimentálně detekovatelném množství a v předem určený čas (např. okolo 1 hodi30 ny) po orálním nebo parenterálním podání (viz například test E dále) nebo alternativně, po inkubaci v přítomnosti jatemích mikrosomů (viz například test G dále).
U sloučenin podle předloženého vynálezu se tedy předpokládá, že budou užitečné při těch stavech, kde je vyžadována inhibice trombinu a/nebo stavech, kde je indikována antikoagulační terapie, zahrnující následující:
Léčbu a/nebo profylaxi trombózy a hyperkoagulability v krvi a/nebo tkáních živočichů včetně člověka. Je známo, že hyperkoagulabilita může vést k tromboembolickým onemocněním. Stavy spojené s hyperkoagulabilitou a tromboembolickými nemocemi, které mohou být zmíněny, zahrnují dědičnou nebo získanou aktivovanou rezistenci na protein C, jako je mutace faktoru V (faktor V Leiden), a dědičné nebo získané deficience antitrombinu III, protein C, proteinu S a heparinového kofaktoru II. Jiné stavy, a nichž je známo, že jsou spojeny s hyperkoagulabilitou a tromboembolickým onemocněním zahrnují cirkulační antifosfolipidové protilátky (Lupus antikoagulant), homocysteinemii, heparinem navozenou trombocytopenii a poruchy fibrinolýzy a rovněž koagulační syndromy (například roztroušenou intravaskulámí koagulaci (DIC)) a vaskulámí poškození obecně (v důsledku chirurgie).
Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou dále indikovány pri léčení stavů, kde se vyskytují nežádoucí nadměrné hladiny trombinu bez známek hyperkoagulability, například při neuroso degenerativních onemocněních jako je Alzheimerova nemoc.
Zvláštní chorobné stavy, které mohou být zmíněny, zahrnují terapeutické a/nebo profylaktické podávání při venózní trombóze (například DVT) a plicní embolíi, arteriální trombóze (např. infarktu myokardu, nestabilní angíně, mrtvicí založené na trombóze a periferní arteriální trombóS5 ze) a systemickou embolii, obyčejně z atria během arteriální ťíbrilace (například nevalvulámí
-21 CZ 303708 B6 atriální fíbrilace) nebo z levé komory po transmurálním infarktu myokardu nebo způsobená kongestivním srdečním selháním; při profylaxi reokluze (tj. trombózy) po trombolýze, perkutánní transluminální angioplastice (ΡΤΛ) a zavedení koronárního bypassu; prevenci retrombózy po mikrochirurgických zákrocích a zákrocích na cévách obecně.
Další indikace zahrnují terapeutické a/nebo profylaktické použití při diseminované intravaskulární koagulaci způsobené bakteriemi, mnohočetným traumatem, intoxikací nebo jakýmkoli jiným mechanismem; anti koagulační léčbě, kdy je krev v kontaktu s cizími povrchy v těle, jako jsou cévní štěpy, cévní sten ty, cévní katetry, mechanické a biologické prostetické chlopně nebo io jakýkoli jiný prostředek zdravotnické techniky; a při antikoagulační léčbě, kdy je krev v kontaktu s prostředky zdravotnické techniky mimo tělo, jako při kardiovaskulárním chirurgickém zákroku při použití mimotělního oběhu nebo při hemodialýze; pro terapeutické a/nebo profylaktické použití při idiopatickém syndromu dechové tísně a při syndromu dechové tísně dospělých, plicní fibróze po léčení ozářením nebo chemoterapií, septickém šoku, septikémii, zánětlivých odpově15 dích, které zahrnují, nikoliv však s omezením, edém, akutní nebo chronickou aterosklerózu, jako je choroba srdečních arterií a tvorba aterosklerotických plátů, choroba mozkových arterií, mozkový infarkt, mozková trombóza, mozková embolie, choroba periferních arterií, ischémie, angína (včetně nestabilní angíny), poškození po reperfuzi a restenóza po perkutánní transluminální angioplastice (PTA) a bypassu koronární artérie.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu, které inhibují trypsin a/nebo trombin mohou také být užitečné při léčbě pankreatitidy.
Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou indikovány jak pro terapeutickou, tak pro profy25 laktickou léčbu těchto stavů.
Podle dalšího aspektu předloženého vynálezu je poskytnut způsob léčení stavu, kde je vyžadována inhibice trombinu, přičemž tento způsob zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle předloženého vynálezu osobě trpící takovým stavem nebo osobě na tento stav citlivé.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu budou normálně podávány orálně, intravenózně, subkutánně, bukálně, rektálně, dermálně, nasálně, tracheálně, bronchiálně, jakoukoli jinou parenterální cestou nebo cestou inhalace, ve formě farmaceutických přípravků zahrnujících aktivní sloučeninu buď jako volnou bázi nebo farmaceuticky přijatelnou netoxickou adiční sůl s organickou nebo anorganickou kyselinou ve farmaceuticky přijatelné dávkovači formě.
Výhodná cesta podání sloučenin podle vynálezu je orální cesta. Výhodné farmaceutické preparáty zahrnují farmaceutické prostředky s modifikovaným uvolňováním, obsahující sloučeniny pod40 le vynálezu. Výraz farmaceutický prostředek „s modifikovaným uvolňováním“ odborník chápe tak, že zahrnuje jakýkoli prostředek, ve kterém je nástup a/nebo rychlost uvolňování léčiva (tj. sloučenina podle vynálezu) míněna galeníckými manipulacemi a tak zahrnuje definici uváděnou v United States Pharmacopeia (USP XXII) na stranách Xliii a Xliv předmluvy.
Vhodné formulace s modifikovaným uvolňováním odborník může připravit standardními postupy ve farmacii (viz například Pharmaceutisch Weekbland Scientific Edition, 6, 57 (1984); Medical Application of Controlled Release, vol II, vyd. Langer a Wíse (1984) Bocaraton, Florida, str. 1 až 34; Industrial Aspects of Pharmaceuticals, vyd. Swedish Pharmaceutical Press (1993), str. 93 až 104; a str. 191 až 211 „Pharmaceutics: The Science of Dosage Form Design“, vyd. Μ. E. Aulton ( 1988) Churcill Livingstone)).
Výhodné formulace s modifikovaným uvolňováním jsou ty, kde je vhodná sloučenina podle vynálezu uložena v polymemí matrici. Z tohoto hlediska pokládáme za výhodné, když formulace obsahující sloučeniny podle vynálezu jsou poskytovány pro orální podání ve formě systému s modifikovaným uvolňováním, kdy dochází k bobtnání nebo systému s modifikovaným uvolňo. 17 .
váním využívající gelové matrice, ve kterém je sloučenina podle vynálezu poskytována současně s polymerem, který bobtná ve vodném prostředí („hydrofilní gelující složka“).
Zejména je výhodné, když jsou sloučeniny podle vynálezu formulovány společně v prostředku využívajícím gelové matrice, obsahující jota-karagen a jeden nebo více gelujících polymerů.
Jota-karagén je přítomen v takovém výhodném preparátu v množství větším než 15 % hmotnostních. Výhodný stupeň pro jota-karagén je jota-karagén farmaceutického stupně (dostupný od EMC Biopolymer), který nemá viskositu menší než 5 centipoise (cpc), 5mPa-s, výhodně v rozsaio hu 5 až 10 eps, 5-10mPa-s, (pro 1,5% roztok zahřátý na teplotu 82 °C, načež se měří viskosita při °C s viskosimetrem Brookfíeld LV opatřeném s vřetenem č. 1, otáčejícím se rychlostí otáček/minutu) a jota-karagén technického stupně (dostupný od Fluka Biochemica), který má výhodně viskositu ne menší než 14 mPa-s pro 0,3% vodný roztok, zahřátý na 20 °C načež se měří viskosita za použití viskosimetru s padající kuličkou typu Haake, používaného společně s Laudovým termostatem C3 a Hakke Mess-Systémem III a používající zlatém povlečené nerezové kuličky o hustotě 7,8 g/cm3.
Neutrální gelující polymer může být jednotlivý nebo směs jednoho nebo více erodovatelnýeh polymerů, mající gelující vlastnosti a mající v podstatě na pH nezávislou rozpustnost. Neutrální gelující polymer je výhodně přítomný ve formulaci v množství větším než 10 %, ale výhodněji v množství větším než 20 % hmotnostních.
Vhodné neutrální gelující polymery zahrnují polyethylenoxid (PEO), deriváty a členy PEO rodiny (například polyethylenglykol (PEG), výhodně nacházející se přirozeně v pevném stavu, o vhodné molekulární hmotnosti nebo viskozity). Pokud se použije jednotlivý neutrální gelující polymer, PEO má výhodně molekulovou hmotnost > 4 miliony, odpovídající viskositě ve vodném roztoku v rozsahu 1650 až 5500 mPa-s (nebo 1650 až 5500 eps; měřeno pro 1% roztok při 25 °C, za použití viskosimetru Brookfíeld RVF, s vřetenem č. 2, při 2 otáčkách za minutu). Další příklady vhodných PEO zahrnují PEO o molekulové hmotnosti okolo 5 milionů, odpovídající viskositě vodného roztoku v rozsahu 5500 až 7500 mPa-s nebo PEO o molekulové hmotnosti okolo 8 milionů, odpovídající viskositě vodného roztoku v rozsahu 1000 až 15000 mPa-s. Tento rozsah zahrnuje hodnoty pro typickou viskositu roztoku (v eps) měřenou při 25 °C vypočtenou pro tento polymer podle USP 24/NF 19, vyd. 2000, str. 2285 - 2286. Pokud se použije jednotlivý neutrální gelující polymer, má výhodně vysokou molekulární hmotnost, například okolo 2000, odpovídající viskositě v rozsahu 2700 až 3500 mPa-s (nebo 2700 až 3500 eps), měřeno za použití 50% vodného roztoku (hmotnost/hmotnost) pří teplotě 20 °C, za použití kapilárního viskosimetru (Ubbelohde nebo ekvivalentního) [Odkaz: Europan Pharmacopoeia, 3. vyd., 2000, Dodatek, str. 908-909].
Další vhodné gelující polymery zahrnují deriváty celulózy, jako je hydroxypropylcelulóza (HPMC) nebo hydroxyethylcelulóza (HEC) s vhodně vysokou viskositou (například „HPMC 10000 eps“, „HPMC 15000 eps“, „HEC typu HH“ nebo „HEC typu H“). Pokud se použije jednotlivý neutrální polymer, hydroxypropylmethylcelulózový polymer, jako „HPMC 10000 eps a „HPMC 15000 eps“, mají zřejmé viskosity 7500 až 14000 mPa-s (nebo 7500 až 14000 eps) a 11250 až 21000 mPa-s (nebo 11250 až 21000 eps), když se měří při 20 °C v 2% (hmotnost/hmotnost) vodného roztoku, počítáno vzhledem k sušené substanci, za použití kapilárního viskosimetru (Ubbelohde nebo ekvivalentu). Jeden typ hydroxyethylcelulózového polymeru, například „Natrosal 250 Pharma, typ HH“ od Hercules lncorporated (Aqualon) vykazuje typickou Brookfieldovu viskositu okolo 20000 mPa-s. za použití zařízení Brookfíeld Synchro-d .ctric
Model LVF, při 1% koncentraci, vřetena Č. 4, rychlosti otáčení 30 otáček/minutu, faktoru 200, 25 °C (vizNatrosol Physical and Chemical Properties booklet, 33:007-E6 (1993). str. 21).
-23 CZ 303708 B6
Zvláštní formulace, které mohou být uvedeny zahrnují ty, ve kterých je sloučenina podle vynálezu formulována společně s jota-karagenem a HPMC (10000 cps) v poměru 50:50 (hmotnostní %) nebo společně s jota-karagenem a PEO 4 miliony v poměru 50:50 (hmotnostně).
Výhodné další pomocné látky v takových formulacích zahrnují mazadla, jako je steary lfumarát sodný.
Prostředky podle vynálezu mohou být podávány v různých dávkách v závislosti na chorobě léčeného pacienta a cestě podání.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být také kombinovány a/nebo podávány společně s jakoukoli antitrombotickou látkou s odlišným mechanismem účinku, jako jsou protidestičkové látky kyselina acetylsalicylová, tiklopidin, klopidrogel; inhibitory receptoru tromboxanu a/nebo inhibitory syntetázy; antagonisté receptoru fibrinogenu; mimetika prostacyklinu a inhibitory fosfodiesterázy a antagonisté ADP-receptoru (P2T) a inhibitory karboxypeptidázy.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být dále kombinovány a/nebo podávány společně s trombolytiky, jako jsou aktivátor tkáňového plasminogenu (přirozený, rekombinantní nebo modifikovaný), streptokináza, urokináza, prourokináza, anisoylovaný aktivační komplex plasminogen-streptokináza (APSAC), aktivátory plasminogenu ze zvířecích slinných žláz apod., při léčení trombotických nemocí, obzvláště infarktu myokardu.
Podle dalšího aspektu předloženého vynálezu je tedy poskytnut farmaceutický přípravek zahrnující sloučeninu podle tohoto vynálezu ve směsi s farmaceuticky přijatelným adjuvantem, ředidlem nebo nosičem.
Vhodné denní dávky sloučenin podle tohoto vynálezu při terapeutickém použití u lidí jsou okolo 0,001 až 100 mg/kg tělesné hmotností pří perorálním podání a 0,001 až 50 mg/kg tělesné hmotnosti při parenterálním podání.
Aby nedošlo k pochybnostem, výraz „léčba“ zahrnuje terapeutickou a/nebo proiylaktickou léčbu.
Sloučeniny podle tohoto vynálezu mají tu výhodu, že mohou být účinnější, méně toxické, déle působící, mohou mít širší pole účinnosti, mohou být silněji působící, mohou vést k méně nežádoucím vedlejším účinkům, mohou být snadněji absorbovány a/nebo mají lepší farmakokinetický profil (například vyšší biologickou dostupnost a/nebo nižší klearanci) než sloučeniny dosud známé ve stavu techniky. Sloučeniny podle vynálezu mají další výhodu v tom, že mohou být podávány s menší frekvencí než dosud známé sloučeniny ve stavu techniky.
Biologické testy
Mohou se použít následující testovací postupy
Test A
Stanovení trombinového srážecího Času (TT)
Roztok inhibitoru (25 μΙ) se 3 minuty inkubuje s plazmou (25 μΐ). Potom se přidá lidský trombin (T 6769; Sigma Chem Co nebo Hematologie Technologies) v puťrovaném roztoku, pH 7,4 (25 μΐ, 4,0 NIH jednotek/ml) a měří se čas srážení na automatickém přístroji (KC 10; Amelung).
Cas srážení (TT) se vyjádří jako absolutní hodnoty' (sekundy) stejnéjako poměr TT bez inhibitoru (TT0) k TT s inhibitorem (TTi). Posledně uvedené poměry (rozmezí 1 až 0) se vynesou proti koncentraci inhibitoru (převeden logaritmicky) a proloží se se sigmoidálními křivkami dávkaodpovčď podle rovnice
- 24CZ 303708 B6 y - a/[l+(x/ICs0)s]' kde a = maximální rozmezí, tj. 1; s = sklon křivky dávka-odpověď; a IC50 = koncentrace inhibi5 toru, která zdvojnásobuje čas srážení. Výpočty se provedou na PC za použití softwarového programu GraFit Version 3, přičemž rovnice se nastaví na: start v 0, úplný konec - 1 (Erithacus Software, Robin Leatherbarrow, Imperiál College of Science, Londýn, UK).
Test B
Stanovení inhibice trombinu pomocí chromogenní robotizované zkoušky
Síla inhibice trombinu se měří pomocí metody chromogenního substrátu v robotizovaném mikroplotnovém přístroji Plato 3300 (Rosys AG, CH-8634 Hombrechtikon Švýcarsko), za použití mikrotitračních poloobjemových ploten s 96 jamkami (Costar, Cambridge, MA USA, Cat. No 3690). Zásobní roztoky testované látky v DMSO (72 μΐ), 0,1 až 1 mmol/litr se sériově naředí 1 : 3 (24 + 48 μΐ) v DMSO, aby se získaly různé koncentrace, které se analyzují jako vzorky při zkoušce. 2 μΐ testovacího vzorku se naředí 124 μΐ pufru pro zkoušku a přidá se 12 μΐ roztoku chromogenního substrátu (S-2366, Chromogenix, Mólndal, Švédsko) v pufru ve zkušebním pufru a konečné 12 μΐ roztoku alfa-trombinu (lidský alfa-trombin, Sigma Chemical Co nebo Hematologie Technologies) ve zkušebním pufru a vzorky se smísí. Konečné koncentrace stanovení byly: testovaná látka 0,00068 až 13,3 μιηοΙ/ΙίίΓ, S-2366 0,30 mmol/litr, alfa-trombin 0.020 NIHU/ml. Pro výpočet procenta inhibice pro testované vzorky se použije zvýšení lineární absorbance během 40 minut inkubace při 37 °C, ve srovnání se slepým pokusem bez inhibitoru.
Robotická hodnota IC50, odpovídající koncentraci inhibitoru, která způsobí 50% inhibici aktivity trombinu, se vypočítá z křivky log koncentrace proti % inhibice.
Test C
Stanovení inhibiční konstanty Ki pro lidský trombin
Stanovení K, se provedou za použití metody chromogenního substrátu provedené při 37 °C na centrifugálním analyzátoru Cobas Bio (Roche, Basilej, Švýcarsko). Zbytková; enzymová aktivita po inkubaci lidského alfa-trombinu s různými koncentracemi testované sloučeniny se stanoví při
3 různých koncentracích substrátu a měří se jako změna optické absorbance při 405 nm.
Roztok testovaných sloučenin (100 μΙ; normálně v pufru nebo fyziologickém roztoku obsahujícím BSA 10 g/lítr) se smíchají s 200 μΐ lidského alfa-trombinu (Sigma Chemical Co.) ve zkušebním pufru (0,05 mol/litr Tris-HCI pH 7,4, iontová síla 0,15 upravená pomocí NaCl) obsahujícím
BSA (10 g/lítr) a analyzuje se jako vzorky v přístrojí Cobas Bio. K 320 μΐ substrátu S-2238 (Chromogenix AB, Mólndal, Švédsko) ve zkušebním pufru se přidá 60 μΙ vzorku spolu s 20 μΙ vody a monitoruje se změna absorbance (ΔΑ/min). Konečné koncentrace S-2238 byly 16, 24 a 50 μΓηοΙ/Íitr a trombinu 0.125 NIHU/ml.
K sestrojení Dixonových křivek, tj. diagramů koncentrace inhibitoru proti l/(AA/min), se použije míra reakce v rovnovážném stavu. Pro reversi bilní, kompetitivní inhibitory, datové body pro různé koncentrace substrátů typicky tvoří přímé čáry, které se kříží při x - -Ki.
Test D
Stanovení času aktivovaného částečného tromboplastinu (APTT)
APTT se stanoví ve shromážděné lidské plazmě ošetřené citrátem pomocí činidla PTT Automated 5 vyrobených firmou Stago. K plazmě se přidají inhibitory (10 μΐ roztoku inhibitoru na 90 μΐ
- 25 CZ 303708 B6 plazmy) a inkubuje se 3 minuty s činidlem APTT, potom se přidá 100 μΐ roztoku chloridu vápenatého (0,025M) a APTT se stanoví ve směsi použitím analyzátoru koagulace KC10 (Amelung) podle pokynů výrobce činidla.
Čas srážení se vyjádří jako absolutní hodnoty (sekundy) stejně jako poměr APTT bez inhibitoru (APTT0) k APTT s inhibitorem (APTT;). Posledně uvedené poměry (rozmezí l až 0) se vynesou proti koncentraci inhibitoru (převedeno logaritmicky) a proloží se se sigmoidálními křivkami dávka-odpověď podle rovnice in y = a/[l+(x/IC50)s], kde a = maximální rozmezí, tj. 1; s - sklon křivky dávka-odpověď; a IC50 = koncentrace inhibitoru, která zdvojnásobuje čas srážení. Výpočty se provedou na PC za použití softwarového programu GraFit Version 3, přičemž rovnice se nastaví na; start v 0, úplný konec = 1 (Erithacus
Software, Robin Leatherbarrow, Imperiál College of Science, Londýn, UK).
1C5O APTT je definována jako koncentrace inhibitoru v lidské plazmě, která zdvojnásobí čas aktivovaného částečného tromboplastinu.
Test E
Stanovení trombinového času ex vivo
Inhibice trombinu po orálním podání sloučenin podle vynálezu rozpuštěných ve směsi etha25 nol;SolutolTM;voda (5 ; 5 ; 90) se zkoumá na krysách při vědomí, které se 1 nebo 2 dny před experimentem vybaví katetrem pro odebírání vzorků krve z krkavice. V den experimentu se ve stanovených časech po podání sloučeniny odeberou vzorky krve do plastických zkumavek obsahujících 1 díl roztoku citrátu sodného (0,13 mol na litr) a 9 dílů krve. Zkumavky se odstředí, aby se získala plazma chudá na destičky.
μΐ vzorky plazmy se sráží 100 μΐ studeného acetonitrilu. Vzorky se odstřeďují 10 minut při 4000 otáčkách/minutu. 75 μΐ supematantu se zředí 75 μΐ 0,2% kyseliny mravenčí. Analyzují se 10 μΐ objemy výsledných roztoků za použití LC-MS/MS a koncentrace inhibitoru trombinu se stanoví standardními křivkami.
Test F
Stanovení klearance plazmy u krysy
Klearance plazmy se zkoumá u samců krys Sprague Dawley. Sloučeniny se rozpustí ve vodě a podají se jako subkutánní bolusová injekce v dávce 4 μηιυΙ/kg. Vzorky krve se seberou v častých intervalech do 5 hodin po podání. Vzorky krve se odstředí a plazma se oddělí od krevních buněk a přenese se do lékovky obsahující citrát (10% finální koncentrace). 50μ1 vzorky plazmy se sráží 100 μΐ studeného acetonitrilu. Vzorky se odstřeďují 10 minut při 400 otáčkách za minutu. 75 μΐ supematantu se zředí 75 μΐ 0,2% kyseliny mravenčí. 10μ1 objemy vzniklých roztoků se analyzují LC-MS/MS a koncentrace inhibitoru trombinu se stanoví za použití standardních křivek. Plocha pod křivkou koncentrace v plazmě vůči času se ureí za použití log/lineárního trapezoidálního pravidla a extrapoluje se na nekonečný čas. Klearance plazmy (CL) sloučeniny se stanoví jako
CL = Dávka/AUC.
Hodnoty se uvádějí v ml/min/kg.
-26CZ 303708 B6
TestG
Stanovení stability in vitro
Jatemí mikrosomy se připraví z krys Sprague-Dawley a lidské jatemí vzorky podle SOP (Standard Operating Procedures). Sloučeniny se inkubují při 37 °C při celkové mikrosomové proteinové koncentraci 3 mg/ml v 0,05 mol/1 pufru TRIS při pH 7,4, v přítomnosti kofaktorů NADH (2,5 mmol/1) a NADPH (0,8 mmol/1). Počáteční koncentrace sloučeniny je 5 nebo 10 pmol/l. Vzorky se analyzují 60 minut po začátku inkubace. Enzymová aktivita v sebraném io vzorku se bezprostředně zastaví přidáním 20% kyseliny myristové v objemu, odpovídajícímu
3.3 % celkového objemu vzorku. Koncentrace sloučeniny (FINÁL CONC) ve vzorku po 60 minutách se stanoví LCMS za použití vzorku sebraném v čase nula jako reference (START CONC).
Procenta degradovaného inhibitoru trombínu se vypočtou jako:
100 % x [START CONC]-fFINÁL CONCl [START CONC] fest H
Arteriální trombotický model
Poškození cévy se indukuje aplikací chloridu železitého (FeCL) na karotickou artéríi. Krysy se anestetizují intraperitoneální injekcí pentobarbitalu sodného (80 mg/kg; Apoteksbolaget; Umeá, Švédsko), a následnou kontinuální infuzí (12 mg/kg) v průběhu experimentu. Teplota těla krysy se udržuje během experimentu na 38 °C vnějším zahříváním. Experiment začíná s 5 min. kontrolní periodou. Pět minut později se intravenózně podá lidský 125I-fibrinogen (80 kBq; IM53; Amer25 sham International, Buckingham-shire, UK) a použije se jako značkovač pro následné začlenění fibrin(ogenu) do trombu. Proximální konec segmentu karotické artérie se vloží do plastické zkumavky (6 mm; SilasticDow Corning, MI, USA) podélně rozříznuté, obsahující FeCl3 nasáklý (2 μΐ; 55% hmotnost/hmotnost; Merck. Darmstadt, Německo) filtrační papír (průměr 3 mm; 1F; Munktell, Grycksbo, Švédsko). Levá karotidní artérie se vystaví účinkům FeCl3 na dobu
10 minut a poté se odstraní z plastické zkumavky a nasákne se fyziologickým roztokem. Po minutách se artérie odstraní a promyje se fyziologickým roztokem. Referenční vzorky krve se také odeberou na stanovení 125I-aktivity krve 10 minut po injekci 125I-fibrinogenu a na konci experimentu. l25l-aktivita v referenčních vzorcích krve a cévních segmentech se měří v gama čítači (1282 Compugamma; LKB Wallac Oy. Turku, Finsko) ve stejný den, kdy je proveden experiment. Velikost trombu se určí jako množství '251-aktivity začleněné do cévního segmentu vzhledem k l25I—aktivitě v krvi (cpm/mg).
Obecné experimentální podrobnosti
TLC sc provádí na silikagelu. Chirální HPLC analýza se provádí za použití kolony 46 mm x 250 mm Chiracel OD s 5 cm předkolonou. Teplota v koloně se udržuje na 35 °C. Průtoková ry chlost je 1,0 ml/minutu. Používá se detektor Gilson 115 UV při 228 nm. Mobilní fáze sc skládá z hexanů, ethanolu a kyseliny trifluoroctové a pro každou sloučeninu jsou zaznamenány příslušné poměry. Typicky se produkt rozpustí v minimálním množství ethanolu a ten se zředí s mobilní ts fází.
LC-MS/MS se provádí za použití zařízení HP-1100. opatřené injektorem C 1C-PAL a 5 μΙ, 4 x 100 mm TheroQuest. Hypersil BDS-C18 kolonou. Použije se detektor API-3000 (Sciex) MS. Průtoková rychlost je 1,2 ml/min a mobilní fáze obsahuje 10 až 90 % acetonitrilu s 90 až
10 % 4 mM vodného octanu amonného, oba obsahují 0.2 % kyseliny mravenčí.
- 27 CZ 303708 B6 ‘H NMR spektra se zaznamenávají za použití tetramethylsilanu jako vnitřního standardu. I3C NMR spektra se zaznamenávají za použití uvedených deuterovaných rozpouštědel jako vnitřní standard.
Příklady provedení vynálezu io Příklad 1
Ph(3Cl)(5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu) (i) 3-Chlor-5-methoxybenzaldehyd
3,5-Dichloranisol (74,0 g, 419 mmol) v THF (200 ml) se přidá po kapkách při teplotě 25 °C ke kovovému hořčíku (14,2 g, 585 mmol, předem promytému s 0,5 N HCl) v THF (100 ml). Po přidání se po kapkách přidá 1,2-dibromethan (3,9 g, 20,8 mmol). Vzniklá tmavohnědá směs se zahřívá při zpětném toku po dobu 3 hodin. Směs se ochladí na 0 °C a v jedné dávce se přidá dimethylformamid (60 ml). Směs se rozdělí s diethy letherem (3 x 400 ml) a 6N HCl (500 ml). Spojené organické extrakty se promyjí solankou (300 ml), suší se (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu a získá se olej. Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním směsí Hex:EtOAc (4:1) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (38,9 g, 54 %) jako žlutý olej.
' H NMR (300 MHz, CDCI,) δ 9,90 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 3,87 (s, 3H).
(íi) 3-Chlor-5-hydroxybenzaldehyd
Roztok 3-chlor-5-methoxybenzaldehydu (22,8 g, 134 mmol; viz stupeň (i) shora) v CH2C12 (250 ml) se ochladí na 0 °C. Poté se přidá po kapkách během 15 minut bromid boritý (15,8 ml,
167 mmol). Reakční směs se míchá 2 hodiny a pomalu se přidá voda (50 ml). Roztok se poté extrahuje s Et2O (2 x 100 ml). Organické vrstvy se spojí, suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním směsí Hex:EtOAc (4:1) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (5,2 g, 25 %).
'HNMR (300 MHz, CDCf) δ 9,85 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 3,68 (s, 1H) (iii) 3^C4ilor-5 difluormethoxybenzaldehyd
Roztok 3-chIor-5-hydroxybenzaldehydu (7,5g, 48 mmol; viz stupeň (ii) shora) v 2-propanolu (250 ml) a 30% KOH (100 ml) se zahřívá při zpětném toku. Za míchání se reakční směsí probublává CHC1F2 po dobu 2 hodin. Reakční směs se ochladí, okyselí se IN HCl a extrahuje se s EtOAc (2 x 100 ml). Organické podíly se promyjí solankou (100 ml) suší se (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním směsí Hex:EtOAc (4:1) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (4,6 g, 46 %).
'H NMR (300 MHz, CDCh) δ 9,95 (s, 1H), 7.72 (s, IH), 7,52 (s, IH), 7,40 (s, 1H), 6,60 (t. JH-f = 71.1 Hz, lil) (iv) Ph(3-CI) (5-OCHF2)-(R,S)CH(OTMS)CN
Roztok 3-chlor-5-difluormethoxybenzaldehydu (4,6 g, 22,3 mmol; viz stupeň (iii) shora) vCH2CI2 (200 ml) se ochladí na 0 °C. Přidá se Znl2 (1,8 g, 5,6 mmol) a trimethylsilylkyanid (2,8 g, 27,9 mmol) a reakční směs se nechá zahřát na teplotu místnosti a míchá se 15 hodin. Směs
-28CZ 303708 B6 se částečně koncentruje ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu jako kapalina, která se použije přímo ve stupni (v) dále bez dalšího Čištění nebo charakterizace.
(v) Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R,S)CH(OH)C(NH)OEt
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)~(R,S)CH(OTMS)CN (6,82 g, 22,3 mmol; viz stupeň (iv) shora) se přidá po kapkách ke směsi HCl/EtOH (500 ml). Reakční směs se míchá 15 hodin, poté se částečně koncentruje ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu, jako kapalina, která se použije ve stupni (vi) bez dalšího čištění nebo charakterizace.
io (vi) Ph(3-CI) (5-OCHF2)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt
Ph(3-Cl) (5-OCFH2)-<R,S)CH(OH)C(NH)OEt (6,24 g, 22,3 mmol; viz stupeň (v) shora) se rozpustí v THF (250 ml), přidá se 0,5 M H2SO4 (400 ml) a reakční směs se míchá pri teplotě 40 °C is po dobu 65 hodin, ochladí se a částečně se koncentruje ve vakuu k odstranění většiny THF.
Reakční směs se poté extrahuje s Et2O (3 x 100 ml), suší se (Na2SO4), filtruje se a koncentruje se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu jako pevná látka, která se použije ve stupni (vii) bez dalšího čištění nebo charakterizace.
(vii) Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR,S)CH(OH)C(O)OH
Roztok Ph(3-Cl) (5-OCHF2H^S)CH(0H)C(O)OEt (6,25 g, 22,3 mmol; viz stupeň (vi) shora) v 2-propanolu (175 ml) a 20% K.OH (350 ml) se míchá při teplotě místnosti 15 hodin. Reakční směs se poté částečně koncentruje ve vakuu k odstranění většiny 2-propanolu. Zbývající směs se okyselí 1M H2SO4, extrahuje se s Et2O (3 x 100 ml), suší se (Na2SO4) a koncentruje se ve vakuu a získá se pevná látka. Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním směsí CH3Cl:MeOH:koncentrovaný NH4OH (6:3:1) se získá amonná sůl sloučeniny uvedené v podnázvu. Tato amonná sůl se poté rozpustí ve směsí EtOAc (75 ml) a H2O (75 ml) a okyselí se 2N HCI. Organická vrstva se oddělí a promyje se solankou (50 ml), suší se (Na2SO4) a koncentruje se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (3,2 g, 57 % ze stupně (iv) na (vii).
'H NMR (300 MHz. CD3OD) δ 7,35 (s, IH), 7,22 (s, IH), 7,15 (s, IH), 6,89 (t, JH_F - 71,1 Hz, IH), 5,16 (s, IH) (viii) Ph(3-CI) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (a) a Ph(3-CI) (5-OCHF,)(S)CH(OAc)C(O)OH (b)
Směs Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (3,2 g, 12,7 mmol; viz stupeň (vii) shora) a Lipase PS „Amano“ (cca 2,0 g) ve vinylacetátu (125 ml) a MTBE (125 ml) se zahřívá při zpět40 ném toku 48 hodin. Reakční směs se ochladí, filtruje se přes Celit' a filtrační koláč se promyje s EtOAc. Filtrát se koncentruje ve vakuu a podrobí se mžikové chromatografii na silikagelu eluováním směsí CHCl3:MeOH:koncentrovaný NH4OH (6:3:1) a získá se amonná sůl sloučeniny uvedené v názvu (a) a (b). Sloučenina (a) jako sůl se rozpustí v H?O, okyselí se s 2N HCI a extrahuje se s EtOAc. Organická vrstva se promyje solankou, suší se (Na2SO4). filtruje se a končentru45 je se ve vakuu a získá se sloučenina (a) uvedená v podnázvu (1,2 g, 37 %).
Pro sloučeninu (a) podnázvu
Ίΐ NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,38 (s, IH). 7.22 (s, IH), 7,15 (s, IH), 6,89 (t, JH-f = 71,1 Hz.
IH), 5,17 (s, IH) (ix) Ph(3-Cl) (5-0CHF2HR)CH(0H)C(0)-Aze-Pab(Teoc)
K roztoku Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)OH (1,1 g, 4,4 mmol; viz stupeň (viii) shora a H-Aze-Pab(Teoc) (viz mezinárodní patentovou přihlášku WO 00/42059, 2.6 g. 5.7 mmol)
- 29CZ 303708 B6 v DMF (50 ml) se při teplotě 0 °C přidá PyBOP (2,8 g, 5,3 mmol) a kolidin (1,3 g, 10,6 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 0°C 2 hodiny a poté pri teplotě místnosti dalších 1 5 hodin. Reakční směs se koncentruje ve vakuu a mžikovou chromatografií na silikagelu (3 x), eluováním nejprve CHCUiEtOH (9:1) a poté EtOAc: EtOH (20:1) a nakonec eluováním CH2C12:CH3OH (95:5) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (1,0 g, 37 %) jako bílá pevná látka.
lH NMR (300 MHz, CD3OD) δ, směr rotamerů) δ 7,79 - 7,85 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,15 - 7,48 (tn, 5H), 6,89 a 6,91 (t, JH_F = 71,1 Hz, IH), 5,12 a 5,20 (s, IH), 4,75 - 4,85 (m, IH), 3,97-4,55 (m, 6H), 2,10 - 2,75 (m, 2H), 1,05 - 1,15 (m, 2H), 0,09 (s, 9H)
MS (m/z) 611 (M + 1)+ (x) Ph(3-CI) (5-OCHF2HK)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu, Teoc)
Ph(3—Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,051 g, 0,08 mmol; viz stupeň (ix) shora), se rozpustí ve 3 ml acetonitrilu a přidá se 0,062 g (0,5 mmol) O-cyklobutylhydroxylaminhydrochloridu. Směs se zahřívá na 70 °C po dobu 4,5 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozdělí mezi vodu a ethylacetát. Vodná fáze se extrahuje ještě dvakrát ethylacetátem a spojená organická fáze se promyje s vodou, solankou, suší se (Na2SO4), filtruje se a odpaří. Výtěžek: 0,054 g (95 %).
'H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8,66 - 8,50 (m, 1 H), 7,45 (d, 2H), 7,29 (m, 3H), 7,15 (m, 2H),
6,88 (t, IH většinový rotamer), 6,85 (t, IH menšinový rotamer), 5,18 (s, IH, většinový rotamer),
5,12 (s, IH, menšinový rotamer), 5,16 (m, IH, menšinový rotamer), 4,78 (m, IH většinový rotamer), 4,70 (m, IH), 4,50 - 4,30 (m, 3H), 4,19 - 3,93 (m, 3H), 2,71 - 2,44 (m, IH), 2,34-2,11 (m, 5H), 1,78 (m, IH), 1,62 (m, lH),0,96(m, 2H), 0,01 (s, 9H) (xi) Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OcBu)
Ph(3-CI) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBU, Teoc) (0,054 g, 0,08 mmol; viz stupeň (x) shora), se rozpustí v 0,5 ml CH2C12 a 3 ml TFA. Reakční směs se nechá 60 minut. TFA se odpaří a zbytek se čistí preparativní HPLC. Frakce, kteréjsou předmětem zájmu, se spojí a suší vymrazováním (2 x) a získá se 23 mg sloučeniny uvedené v názvu.
MS (m/z) 536 (M-l)’; 538 (M + 1)+ 'H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,56 (d, 2H), 7,33 (m, 3H), 7,15 (m, 2H), 6,89 (t, IH většinový rotamer), 6,86 (t, IH menšinový rotamer), 5,18 (s, IH, většinový rotamer; a m, IH menšinový rotamer), 5,11 (s, IH, menšinový rotamer), 4,77 (m, IH většinový rotamer), 4,58 (m, IH), 4,42 (m, 2H), 4.34 (m, IH většinový rotamer), 4,15 (m, IH většinový rotamer), 4,06 (m, IH menšinový rotamer), 3,97 (m, IH menšinový rotamer), 2,66 (m, IH menšinový rotamer), 2,52 (m, lil většinový rotamer), 2,33 - 2,25 (m, 3H), 2,01 - 2,20 (m, 2H), 1,75 (m, 1 H), l,59(m, IH) HC-NMR (100 MHz; CD3OD) (karbonvlové a/nebo amidinové uhlíkv, rotamerv δ 172,4, 172,3, 171,9, 171,4, 152,3
Příklad 2
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OH) (i) Ph(3-C1) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH, Teoc)
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,148 g, 0,24 mmol; viz příklad l(ix) shora), se rozpustí v 9 ml acetonitrilu a přidá se 0,101 g (1,45 mmol) hydroxylaminhydro- 30 CZ 303708 B6 chloridu. Směs se zahřívá na 70 °C po dobu 2,5 hodin, filtruje se přes Celit*' a odpaří se. Surový produkt (0,145 g; 75% čistota) se použije přímo v dalším stupni bez čištění.
(ii) Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Azc-Pab(OH)
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH, Teoc) (0,145 g, 0,23 mmol; viz stupeň (i) shora), se rozpustí v 0,5 ml CH2CI2 a 9 ml TFA. Směs se nechá reagovat 60 minut, TFA se odpaří a zbytek se čistí preparativní HPLC. Frakce, které jsou předmětem zájmu, se spojí a suší se vymrazováním (2x) a získá se 72 mg (výtěžek 62 % během 2 stupňů) sloučeniny uvedené v názvu.
MS (m/z) 482 (Μ - 1)’; 484 (Μ + 1)‘ lH NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,58 (d, 2H), 7,33 (m, 3H), 7,15 (m, 2H), 6,89 (t, IH většinový rotamer), 6,86 (t, IH menšinový rotamer), 5,18 (s, IH, většinový rotamer; am. IH menšinový rotamer), 5,12 (s, IH, menšinový rotamer), 4,77 (m, IH většinový rotamer), 4,42 (m, 2H), 4,34 (m, IH většinový rotamer), 4,14 (m, IH většinový rotamer), 4,06 (m, IH menšinový rotamer), 3.95 (m, IH menšinový rotamer), 2,66 (m, IH menšinový rotamer), 2,50 (m, IH většinový rotamer), 2,27 (m, IH většinový rotamer), 2,14 (m, 1H menšinový rotamer) bC-NMR (100 MHz; CD3OD) (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery) δ 172,4, 172,3, 172,0, 171,4, 152,3, 152,1
Příklad 3
Ph(3 Cl) (5--OCHF2)—(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)—(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,045 g, 0,074 mmol; viz příklad 1 (ix) shora), se rozpustí ve 3 ml TFA a nechá se reagovat 1 hodinu. TFA se odpaří a zbytek se suší vymrazováním ze směsi voda/acetonitril a získá se 0,043 g (100 %) sloučeniny uvedené v podnázvu jako TFA sůl.
’H NMR (400 MHz, CD3OD) rotamery: δ 7,8 - 7,75 (m, 2H), 7,55 - 7,5 (m, 2H), 7,35 (m, IH většinový rotamer), 7.31 (m, IH, menšinový rotamer), 7,19 (m, IH většinový rotamer), 7,15 (m. IH), 7,12 (m, IH, menšinový rotamer), 6,89 (t, IH, většinový rotamer), 6.87 (t, IH, menšinový rotamer), 5,22 (s, IH, většinový rotamer), 5,20 (s, IH, většinový rotamer), 5,13 (s, IH, menšinový rotamer), 4,80 (m, IH většinový rotamer), 4,6 - 4,4 (m, 2H), 4,37 (m, IH většinový rotamer), 4,19 (m, IH většinový rotamer), 4,07 (m, IH menšinový rotamer), 3,98 (m, IH menšinový rotamer), 2,70 (m, IH menšinový rotamer), 2,55 (m, IH většinový rotamer), 2,29 (m, IH většinový rotamer), 2,15 (m, IH menšinový rotamer) ,3C-NMR (100 MHz; CD3OD) (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery) δ 172,6, 172,5, 172,0, 171,7, 167,0
MS (m/z) 465 (Μ - 1)’, 467 (Μ + 1)'
Příklad 4
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)—(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(COOc Pentyl)
K roztoku Ph<3—Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (74 mg, 0,13 mmol; viz příklad 3 shora) a cyklopentylchlorformiátu (44 mg, 0,30 mmol) v methylenchloridu (5 ml) se přidá vodný NaOH (0,5 ml, 2M, 1 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti a reakce se sleduje
-31 CZ 303708 Β6 s HPLC. Po 2,5 hodinách se přidá voda a kapalná fáze se oddělí. Vodná fáze se extrahuje dvakrát s methylenchloridem. Spojené organické fáze se suší (MgSO4) a čistí se na silikagelu (nejprve methylenchloridem a poté EtOAc). Po odstranění rozpouštědla ve vakuu se pevný zbytek rozpustí ve směsí acetonitril/voda a sušením vymrazováním se získá sloučenina uvedená v názvu jako bílá pevná látka. Výtěžek: 33 mg (44 %)
MS (m/z) 579 (M + 1/ 'H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,79 (d, 2H), 7,43 - 7,30 (m, 5H), 7,20 - 7,11 (m, 2H), 6,90 (t, IH většinový rotamer), 6,87 (t, IH menšinový rotamer), 5,19 (dd, IH, menšinový rotamer),
5,18 (s, IH, většinový rotamer), 5,13 (m, IH), 5,11 (s, IH, menšinový rotamer), 4,78 (dd, IH většinový rotamer), 4,45 (m, 2H), 4,35 (m, IH většinový rotamer), 4,16 (s, IH většinový rotamer), 4,06 (s, IH menšinový rotamer), 3,97 (s, IH menšinový rotamer), 2,68 (m, IH menšinový rotamer), 2,52 (s, IH většinový rotamer), 2,28 (s, IH většinový rotamer), 2,16 (s, IH menšinový rotamer), 1,90 (m, 2H), 1,77 (m, 4H), 1,61 (m, 2H) l3C-NMR (karbonylové a/nebo amidinové protony; 100 MHz): δ 173,6, 173,1, 172,6, 170,3, 165,6
Příklad 5
Ph(3-Cl) (5—OCIIF2)—(R)CH(OH)C(O)—Aze-Pab(Z)
Sloučenina uvedená v názvu se připraví podle postupu popsaném v příkladu 4, vycházeje zPh(3-Cl) (S- OCHF))—(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (73 mg, 0,13 mmol; viz příklad 3 shora) a benzylchlorformiátu (35 mg, 0,21 mmol). Další čištění HPLC (0,lM octan amonný/MeCN 40/60) s reverzními fázemi je nezbytné. Příslušné frakce se koncentrují ve vakuu a extrahují se s EtOAc. Výtěžek: 24 mg (32 %).
MS (m/z) 602 (M+ 1)+ 'H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.80 (d, 2H), 7,43 - 7,25 (m, 8H), 7,20 - 7,10 (m, 2H), 6,90 (t, IH většinový rotamer), 6,88 (t, IH menšinový rotamer), 5,18 (dd, IH, menšinový rotamer),
5,18 (s, 2H), 5,17 (s, IH, rotamer), 5,11 (s, IH, rotamer), 4,78 (dd, IH většinový rotamer), 4,45 (m, 2H), 4,34 (m, IH většinový rotamer), 4,15 (s, IH většinový rotamer), 4,06 (s, IH menšinový rotamer), 3,97 (s, IH menšinový rotamer), 2,66 (m, IH menšinový rotamer), 2,51 (s, IH většinový rotamer), 2,27 (s, 1H většinový rotamer), 2,15 (s, IH menšinový rotamer) |3C NMR (karbonylové a/nebo amidinové protony; 100ΜΗζ)δ 173,6, 173,1, 172,6, 170,5, 164,9
Příklad 6
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) 2-Nitro—5-trifluormethoxybenzoová kyselina
K roztoku 3—trifluormethoxybenzoové kyseliny (49,0 g, 0,24 mol) v kyselině sírové (500 ml) se při méně než 0 °C (lázeň led-MeOH) pridá během 20 minut roztok dusičnanu draselného (31.3 g 0,31 mol) v kyselině sírové (200 ml). Vzniklý roztok se míchá při teplotě 0 °C po dobu 2 hodin a poté se zahřeje na teplotu místnosti a míchá se 18 hodin. Reakční směs se vlije do ledu a vzniklý kyselý roztok se extrahuje s EtOAc (5x). Spojené organické podíly se promyjí H2O (lx), solankou (2x), H2O (lx) a solankou (lx), suší se (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu a získá se surová sloučenina uvedená v podnázvu (65.7 g) jako pevná látka, znečištěná s HOAc.
- 32 CZ 303708 B6
Tato surová sloučenina se rozpustí v EtOAc a toluenu a koncentruje se ve vakuu a získá se pevná látka prostá HOAc (58,4 g, 97 %), která se použije v dalším stupni bez čištění.
'HNMR (300 MHz, CDCb): δ 10,10 (brs, l H), 8.02 (d, IH, J - 8 Hz), 7,69 (d, IH, J - 2 Hz),
7,54 (dd, IH, J = 2 Hz, J = 8 Hz) (ii) 2-ArninO' 5-'triíluorrnethoxvbenzoova kyselina
K roztoku 2-nitro-5-triíluormethoxybenzoové kyseliny (56,8 g, 0,23 mol; viz stupeň (i) shora) v EtOH (1000 ml) se přidá 10% Pd/C (5,7 g). Vzniklý roztok se proplachuje vodíkem po dobu 5 hodin, filtruje se přes Celit® a koncentruje se ve vakuu a získá se surová sloučenina uvedená v podnázvu (49,7 g, 98 %) jako pevná látka, která se použije v příštím stupni bez čištění.
'HNMR (300 MHz, CDCb): δ 7,66 (m, IH), 7,17 (d, IH, J - 8 Hz), 6,77 (d, IH, J = 8 Hz) (iii) 2-Amino-3--chlor-5-trifluormethoxybenzoová kyselina
K roztoku 2-am i no-5-tri fluormethoxy benzoové kyseliny (49,0 g, 0,22 mol; viz stupeň (ii) shora) v HOAc (1200 ml) se pomalu přidá sulfurylchlorid (41,8 g, 0,31 mol). Dojde k vývoji plynu. Vzniklá heterogenní směs se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu. Za míchání se přidá další HOAc (300 ml) a poté se přidává v 5 ml dávkách další výchozí materiál, dokud se veškerý výchozí materiál nespotřebuje (sledováno TLC). Reakční směs se koncentruje ve vakuu za získání pevné látky, která se propláchne na rotační odpařovačce s EtOAc (2x) a poté s Et?O (lx), k odstranění HOAc. Vzniklá pevná látka se suší a získá se HCI sůl surové sloučeniny uvedené v podnázvu (60,5 g, 94 %), která se použije v příštím stupni bez dalšího čištění.
'11 NMR (300 MHz, CD,OD): δ 7,72 (s, IH), 7.44 (s, IH), 7,22 (s, zaměnitelné) (iv) 3-Chlor-5-trifluormethoxybenzoová kyselina
K roztoku 2-amino-3-chlor-5-trifluormethoxybenzoové kyseliny (60,5 g, 0,22 mol; viz stupeň (iii) shora) v 1,4—dioxanu (1000 ml) se přidá 6N HCI (750 ml). Některé organické podíly vytvoří olejovou vrstvu. Dioxanový roztok se ochladí na teplotu méně než 0 °C (lázeň led-MeOH). Během 15 minut se přidá z dělicí nálevky roztok dusitanu sodného (18,2 g, 0,26 mol) v H2O (250 ml). Vzniklý roztok se míchá 45 minut. Pomalu se přidá z dělicí nálevky kyselina fosfomá (221,5 ml 50% hmotn. ve vodě, 291,2 g, 2,20 mol). Roztok se míchá při teplotě 0 °C po dobu
1,5 hodiny a poté se zahřeje na teplotu místnosti (pozoruje se vývoj plynu) a míchá se 18 hodin. Surový roztok se přenese do dělicí nálevky a extrahuje s Et2O (4x). Spojené organické podíly se extrahují s vodným NaHCCL (3x). Bazická vodná vrstva se opatrně okyselí 6N HCI a extrahuje se s CH2CI2 (3x). CH2C12 extrakty se suší (Na2SO4), filtrují se a koncentrují se ve vakuu a získá se surová sloučenina uvedená v podnázvu (26,5 g, 46 % z 3-trifluormethoxybenzoové kyseliny) jako pevná látka, která se použije v dalším stupni bez čištění.
'H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 7,98 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,58 (s, 1H) (v) 3--Chlor--5—trifiuormethoxybenzylalkohol
K roztoku 3—chlor-5-trifluormethoxybenzoové kyseliny (22,5 g, 93,5 mmol; viz stupeň (iv) shora) v bezvodém THF (1200 ml) se pod atmosférou dusíku a při teplotě místnosti přidá roztok komplexu BH3.THF (140 ml 1M v THF; 140.3 mmol). Roztok se zahřívá při zpětném toku 2 hodiny, ochladí se na teplotu místnosti a míchá se 18 hodin. Poté se opatrně zalije vodou a koncentruje se ve vakuu k odstranění většiny THF. Zbytek se zředí s EtOAc a organické podíly se promyjí solankou (3x), suší se (Na2SO4), filtrují se a koncentrují ve vakuu a získá se surová sloučenina uvedená v podnázvu (21,2 g, 100 %) jako olej, který se použije bez dalšího čištění.
- jj CZ 303708 B6 'Η NMR (300 MHz, CDCb): δ 7,33 (s, IH), 7,17 (s, IH), 7,14 (s, IH), 4,72 (s, 2H), 2,05 (brs, IH) (vi) 3-Chlor-5-trífluormethoxybenzaldehyd
Roztok DMSO (16,1 g, 205,9 mmol) v bezvodém CH2C12 (300 ml) se ochladí na teplotu -78 °C. Pomalu se injekční stříkačkou přidá oxaly(chlorid (13,1 g, 103,0 mmol), přičemž dochází k vývoji plynu. Vzniklý roztok se míchá při -75 °C po dobu 15 minut. Poté se přidá z dělicí nálevky roztok 3-chlor-5-trifluormethoxybenzylalkoholu (21,2 g, 93,6 mmol; viz stupeň (v) shora v CH2C12 (200 ml). Zakalený roztok se míchá při -78 °C po dobu 48 minut a z dělicí nálevky se přidá během 10 minut DIPEA (60,5 g, 468,0 mmol). Vzniklý homogenní roztok se míchá při teplotě -78 °C po dobu 1,5 hodiny, poté se zahřeje na teplotu místnosti a míchá se 18 hodin. Surový roztok se koncentruje ve vakuu, zbytek se zředí s EtOAc a promyje se vodou (Ix), 2N HCI (lx), solankou (lx), vodným NaHCO3 (lx) a solankou (lx). Organické podíly se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (19,9 g, 95 %), která se použije v příštím stupni bez dalšího čištění.
1H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 10,00 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,51 (s, 1H) (vii) Ph(3-Cl) (5-OCF3) (R,S)CH(OTMS)CN
K roztoku 3-chlor-5-trifluormethoxybenzaldehydu (19,9 g, 88,6 mmol; viz stupeň (vi) shora) v CH2C12 (600 ml) se při teplotě 0 °C přidá Znl2 (1,4 g, 4,4 mmol) a trimethylsilylkyanid (9,7 g,
97,5 mmol) Směs se míchá při teplotě 0 °C 1,5 hodiny a při teplotě místnosti 2 hodiny. TLC vykazuje pouze výchozí materiál. Přidává se po částech Znl2, dokud reakce probíhá (celkově se přidá více než 30,0 g Znl2). Směs se míchá při teplotě místnosti 16 hodin, poté se reakční směs uhasí vodou a organické podíly se oddělí. Organické podíly se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují ve vakuu a získá se surová sloučenina uvedená v podnázvu (27,7 g, 96 %) jako kapalina, která se použije bez dalšího čištění.
'HNMR (300 MHz, CDCb): δ 7,43 (s, IH), 7,28 (s, IH), 7,25 (s, IH), 5,49 (s, IH), 0,38 (s, 9H) (viii) Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Suspenze Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(R,S)CH(OTMS)CN (27,7 g, 85,6 mmol; viz stupeň (vii) shora) v koncentrované HCI (300 ml) se zahřívá při zpětném toku 3 hodiny. Vzniklá hnědá heterogenní směs se ochladí na teplotu místnosti a extrahuje se s EtO2O (2x). Původní organické podíly se extrahují s 2N NaOH (2x), bazická vrstva se okyselí 2N HCI a extrahuje se s Et2O. Et2O se suší (Na2SO4), filtruje se a koncentruje se ve vakuu a získá se surová sloučenina uvedená v podnázvu (4,9 g, 21 %). TLC analýza původních organických podílů ukazuje, že sloučenina uvedená v podnázvu je dosud přítomná, takže sc extrakce a okyselení opakuje za použití 6N NaOH a získá se další surová sloučenina uvedená v podnázvu (2,8 g, 12 %). TLC analýza původních organických podílů ukazuje, že sloučenina uvedená v podnázvu je ještě přítomná, proto se organické podíly suší (Na2SO4) a koncentrují se ve vakuu a získá se sodná sůl sloučeniny uvedené v podnázvu (18,3 g) jako olej. Tato sůl se poté znovu rozpustí v Et2O a organické podíly se okyselí 2N HCI a promyjí se solankou. Vzniklé organické podíly se suší (Na2SO4), zpracují se aktivním uhlím, filtrují se přes Celit, ošetří se aktivním uhlím, filtrují se přes Celita koncentrují se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (14,3 g, 62 %) jako pevná látka, která se použije v příštím stupni bez dalšího Čištění.
H NMR (300 MHz, CDiOD): δ 7.53 (s. 1 H), 7.38 (s, IH), 7,29 (s, IH). 5,23 (s, IH)
- 34 CZ 303708 B6 (ix) Ph(3-Cl) (5-OCF3HR)CH(OH)C(O)OH (a) a Ph(3-Cl) (5-OCF3) (S)CH(OAc)C(O)OH (b)
Směs Ph(3-CI) (5-0CF?)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (7.7 g, 28,5 mmol; viz stupeň (viii) shora) a Lipase PS „Amano“ (3,8 g) v MTBE (100 ml) a vinylacetátu (50 ml) se míchá při 60 °C po dobu 26 hodin. Reakční směs se ochladí a filtruje přes Celit“ a filtrační koláč se promyje s EtOAc. Spojené organické podíly se koncentrují ve vakuu. Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním směsí CHChiMeOEEkoncentrovaný NH4OH (6:3:1) se získá směs amonné soli sloučeniny (a) uvedené v podnázvu a sloučeniny (b) (6,7 g) a čistý vzorek amonné soli sloučeniny (a) uvedené v podnázvu (1,2 g) s méně než 95 % e.e. Příslušné frakce se rozpustí v Et2O a promyjí se 2N HC1 (Ix) a solankou (lx), suší se (Na2SO4), filtrují a koncentrují a získají se odpovídající karboxylové kyseliny (6,7 g a 1,1 g). Tyto frakce se poté znovu rozpustí a čistí pokud to je nezbytné chromatografií na silikagelu eluováním s CHCE;MeOH:koncentrovaný NH4OH (6:3:1 nebo 75:20:5 nebo 145:45:10) podle potřeby. Čištěná sloučenina (a) uvedená v podnázvu se okyselí vodnou HC1 nebo kyselinou citrónovou před dalším použitím. Amonná sůl sloučeniny (b) uvedené v podnázvu se použije bez charakterizace.
Pro sloučeninu (a) uvedenou v podnázvu !HNMR(300 MHz, CD3OD): δ 7,53 (s, 1H), 7,38 (s, IH), 7,29 (s, 1H), 5,23 (s, IH) 3C NMR (75 MHz, CD3OD): δ 174,9, 150,9, 145,4, 136,3, 126,8, 122,0, 120,6, 118,9, 72,9 MS (m/z) 269 (M-l)’1 (x) Ph(3-Cl) (5-OCF3HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
Roztok Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (0,73 g, 2,70 mmol; viz stupeň (ix) shora) v DMF (40 ml) se ochladí pod atmosférou dusíku na 0 °C. K roztoku se přidá H-Aze-Pab(Teoc) (1,46 g, 3,24 mmol), kolidin (0,82 g, 6,75 mmol) a PyBOP (1,83 g, 3,51 mmol). Roztok se míchá při teplotě 0 °C 2 hodiny, zahřeje se na teplotu místnosti a míchá se 18 hodin, poté se směs zalije vodou a koncentruje se ve vakuu. Zbytek se zředí s EtOAc a promyje se vodou (lx), vodným NaHCO3 (lx), vodnou kyselinou eitronovou (lx) a solankou (lx), suší se (Na2SO4) a koncentruje se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu. Mžikovou chromatografií na silikagelu (2x) eluováním směsí EtOAc;MeOH (30:1) a poté ClLCUMeOH (93:7) se získá sloučenina uvedená v podnázvu ve formě rozmělnitelné pěny.
'H NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů): δ 7,78 - 7,82 (d, 2H, J= 8 Hz), 7,25 - 7,54 (m, 5H), 5,25 a 5,16 (s, IH), 5,22 a 4,79 (m, IH), 3.92 -4.58 (m, 6H), 2,20 - 2,76 (m, 2H), 1,04 - U 3 (m, 2H), 0.08 (s, 9H)
MS (m/z) 629 (M + lf (xi) Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O>-Aze-Pab
Kyselina trifluoroctová (1,0 ml) se přidá k míchanému ledem a vodou chlazenému roztoku Ph(3—Cl) (5-OCF3HR)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (101 mg; 160 pmol; viz stupeň (x) shora), v methylenchloridu (10 ml). Chladicí lázeň se po 1 hodině odstaví. Po 1,5 hodině se při teplotě místnosti přidá acetonitril (30 ml) a rozpouštědlo se pomalu odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí ve vodě a po sušení vymrazováním se získá 90 g (92 %) sloučeniny uvedené v názvu jako sůl TFA.
MS (m/z) 483 (Μ -l)’1; 485 (M+l)' 'HNMR (300 MHz; CD3OD): (komplex způsobený směsí diastereomery/rotamery): (3
7,70 - 7,80 (m, 2H). 7,45 - 7,58 (m, 3H), 7,24 - 7.38 (m, 2H). 5.26 (s. III), 5,17 (m. IH, menši- 35 CZ 303708 B6 nový rotamer), 4,82 (m, 1 H, většinový rotamer), 4,35 - 4,6 (m, 3H), 4,22 (m, 1H, většinový rotamer), 3,92 - 4,12 (m, 2H, menšinový rotamer), 2,70 (m, IH, menšinový rotamer), 2,55 (m, IH, většinový rotamer), 2,30 (m, IH, většinový rotamer), 2,16 (m, 1 H, menšinový rotamer) l3C NMR. (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery): δ 173,7, 173,4, 173,0, 172,8, 168,1
Příklad 7
Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
HATU (71 mg; 0,19 mmol) se přidá k míchanému, ledem chlazenému roztoku Ph(3-Cl) (5-OCF3HR)CH(OH)C(O)OH (39 mg; 0,14 mmol; viz příklad 6(ix) shora) v DMF (3 ml). Po 30 minutách se přidá roztok H-Aze-Pab(OMe) x 2HC1 (69 mg; 0,21 mmol; viz mezinárodní patentovou přihlášku WO 00/42059) a 2,4,6-kolidin (0,080 ml; 0,58 mmol) v DMF (1,5 ml). Reakční směs se nechá přes noc a teplota se nechá pomalu stoupnout na teplotu okolí. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a surový produkt se čistí HPLC s reverzními fázemi (acetonitril; 0,lM vodný octan amonný) a po sušení vymrazováním se získají vhodné frakce sloučeniny uvedené v názvu (61 mg, 97 %) jako bezbarvá pevná látka.
MS (m/z) 513 (M-l)’, 515 (Μ + 1) 'H NMR (500 MHz; CD3OD): δ 7,97 (bt, IH), 7,53 (d, 2H), 7,27 (t, IH), 7,22 (d, 2H), 7,19 (t, IH), 7,11 (t, 2H), 6,77 (s, IH), 4,92 (s, IH), 4,9 (bs, 3H), 4,81 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 4,09 (m, IH), 3,87 (s, 3H), 2,58 (m, IH), 2,37 (m, IH) nCNMR(125 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky); δ 171,8, 169,9, 156,8
Příklad 8
Paralelní syntézy alkoxyamidinů
Syntézy se provádí v 96-jamkovém Robbinsově bloku. Do jamek obsahujících příslušné množství O-substituovaného hydroxylaminu (specifikováno dále; všechny jsou komerčně dostupné nebo se připraví známými způsoby) se přidá roztok Ph(3-Cl) (5-OCF3)—(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (10 mg; 17 pmol; viz příklad 6(x) shora) v acetonitrilu (1,0 ml). Blok se uzavře a reakční směs se míchá přes noc v sušárně při teplotě 60 °C. Po ochlazení a filtraci se pevné podíly promyjí acetonitrilem (3 x 0,3 ml). Spojené kapalné frakce se koncentrují ve vakuové odstředivce. Zbytek se rozdělí mezi vodu (0,4 ml) a ethylacetát (0,4 ml). Jakmile extrakce kapalina-kapalina skončí, vše se filtruje přes kolonu Hydromatrix . Po promytí třikrát s ethylacetátem se spojené filtráty koncentrují ve vakuové odstředivce. Odstranění chránící skupiny se provede přidáním methylenchloridu (0,1 ml) a kyseliny trifluoroctové (0,3 ml). Směs se míchá při teplotě místnosti 3 hodiny a rozpouštědla se odstraní ve vakuu. Zbytek se rozdělí mezi vodný nasycený hydrogenuhličitan sodný (0,5 ml) a ethylacetát (0,5 ml). Po extrakci, filtraci přes Hydromatrix a koncentraci (viz dále) se zbytek rozpustí ve směsi izopropanol/voda (7/3) (1 ml). Okolo 2 % tohoto roztoku se odebere a zředí se směsí izopropanol/voda (7/3) (1 ml) pro analýzu LC—MS. Po odstranění rozpouštědel ve vakuu se pevný zbytek přenese do 96—jamkové plotny za použití acetonitrilu a ethylacetátu, aby došlo k rozpouštění sloučeniny. Rozpouštědla se odpaří na vakuové odpařovačce a získají se následující sloučeniny:
Ph(3-CI)(5-OCF,HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2-3-(5-Me-izoxazol)) (z 3-{(aminooxy)methyl]-5-methylizoxazolu x HCI (18 mg; 0,11 mmol)). Výtěžek: 3,64 mg (35 %) (MS (m/z) 596 (M + 1)‘);
- 36 CZ 303708 B6
Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab-(OCH2-3-pyridin) (z 3-[(aminooxy)methyl]pyridinu x 2 HCl (19 mg; 96 pmol). Výtěžek: 5,14 mg (50 %) (MS (m/z) 592 (M + 3) );
Ph(3-Cl)(5-OCF3HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiBu) (z O-izobutylhydroxylaminu x HCl (17 mg; 140 μπιοί). Výtěžek: 4,4 mg (45 %). MS (tn/z) 557 (M+1)';
Ph(3-Cl)(5-GCF1)-(R)CH(OH)C(O>-Aze-Pab(OEt) io (z O-ethylhydroxylaminu x HCl (14 mg; 140 μπιοί). Výtěžek: 4,04 mg (42 %). MS (m/z) 529 (M + lf;
Ph(3-CI) (5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn) (z O-benzylhydroxylaminu x HCl (17 mg; 110 μπιοί). Výtěžek: 3,22 mg (29 %). MS (m/z) 591 (M + lf)/
Ph(3-C])(5-OCF/HR)CH(OH)C(())-Aze-Pab(OcHexyi) (z O-cyklohexylhydroxylaminu x HCl (15 mg; 99 μπιοί). Výtěžek: 2,9 mg (26 %). MS (m/z) 583 (M+if);
Ph(3-Cl)(5-OCF3HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu) (z O-cyklobutylhydroxylaminu x HCl (17 mg; 140 μπιοί). Výtěžek: 3,3 mg (30 %). MS (m/z) 555 (M + lf);
Ph(3^Cl) (5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2CH2OPh (3-CF3)) (z O-[2-[3-(tritluormethyl)fenoxy]ethyl]hydroxylaminu x HCl (24 mg; 93 μπιοί). Výtěžek:
6,52 mg (46 %). MS (m/z) 689 (M + 1)‘);
Ph(3-Cl) (5-OCF3ý-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Cl)) (z O—(4—chlorbenzyl)hydroxylaminu x HCl (16 mg; 82 μπιοί). Výtěžek: 3,47 mg (29 %). MS (m/z) 625 (M + 1)1);
Ph(3-Cl) (5-OCF3HR)CH(OH)C(C))-Aze-Pab(OBn(3-MeO)) (z O-(3-methoxybenzyl)hydroxylaminu x HCl (18 mg; 94 μιηοΐ). Výtěžek: 4,33 mg (36 %).
MS (m/z) 621 (M + I) ):
Ph(3—Cl) (5-OCF3>_(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OB(2-Br)) (z O—(2-bromobenzyl)hydroxylaminu x HCl (23 mg; 96 μπιοί). Výtěžek: 3,87 mg (30 %). MS (m/z) 671 (M + 1f);
Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(R)CH(OH)C(())-Aze-Pab(OBn(4-Me)) (z O—(4-methylbenzyl)hydroxylaminu x HCl (14 mg; 81 μπιοί). Výtěžek: 2,91 mg (25 %). MS (m/z) 605 (M + lf);a is Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-4-hcptyl) (z O—(4-heptyl)hydroxylaminu x HCl (15 mg; 89 μπιοί). Výtěžek: 17 mg (100 %). MS (m/z) 599 (M+1)).
- 37 CZ 303708 B6
Příklad 9
Ph(3-CI) (5 -OC'HF2HS)CH(CH2OH)C(O)-Aze Pab x HOAc (i) 3-Chlor-5-methoxybenzoová kyselina
Hořčíkové hoblinky (Fluka purum pro Grignardovy reakce) se předem upraví následujícím způsobem: Hoblinky se umístí do nálevky ze slinutého skla a přidá se knim 0,1 M kyselina chlorovodíková. Hoblinky se míchají několik vteřin skleněnou tyčinkou a poté se kyselina promyje 3 díly vody. Nakonec se hoblinky promyjí 2 díly acetonu a uloží se do lahvičky. Tetrahydrofuran (100 ml, 99,5%) se vysuší přidáním RedAl (1 g, 70% hmotn. v toluenu). Ošetřené hořčíkové hoblinky (5 g, 200 mmol) se vloží do baňky s kulatým dnem a propláchnou se 3x dusíkem. Dichloranisol (26 g, 146 mmol) se rozpustí v THF (100 ml, sušený RedAl) a přidá se dibromethan (10 ml). Reakční směs se propláchne dusíkem a poté se zahřívá při zpětném toku 2 hodiny. Zahřívání se přeruší a během 2 minut se přidá po částech suchý led (10 g). Jakmile se suchý led rozpustí, reakční směs se vlije do ledu obsahujícího kyselinu chlorovodíkovou (400 ml, 2M). Extrakcí (ether, 300 ml) se získá 11,2 g, 60,2 mmol (výtěžek: 41 %) sloučeniny uvedené v podnázvu.
‘H-NMR (500 MHz; aceton-d6): δ 7,57 (m, IH), 7,49 (m, IH), 7,23 (m, IH), 3,91 (s, 3H) (ii) 3-Chlor-5-hydroxybenzoová kyselina
Alumina (1,65 g, 60 mmol) a jod (21 g, 82 mmol) se zahřívají při zpětném toku v toluenu (200 ml) po dobu 2 hodin. Přidá se 3-chlor-5-methoxybenzoová kyselina (11,2 g, 60,2 mmol; viz stupeň (i) shora) rozpuštěná v toluenu (50 ml) společně s tetrabutylamoniumjodidem (1,5 g, 4 mmol) a směs se zahřívá při zpětném toku 2 hodiny. Po ochlazení na teplotu okolí se provede extrakce a získá se 8,7 g, 50 mmol (výtěžek: 83 %) sloučeniny uvedené v podnázvu.
'H-NMR (300 MHz; aceton-d6): δ 9,27 (s, IH), 7,48 (m, IH), 7,44 (m, IH), 7,11 (m, IH) (iii) 3-Chlor-5-difluormethoxybenzoová kyselina
3-Chlor-5-hydroxybenzoová kyselina (6,4 g, 37,2 mmol; viz stupeň (ii) shora), rozpuštěná v chloroformu (200 ml) se přenese do 500 ml tříhrdlé baňky s kulatým dnem opatřené chladičem se suchým ledem a trubkou pro přívod plynu. Za intenzivního míchání se přidá hydroxid sodný (100 ml, 5M). Poté se přidá vstupní trubkou při teplotě okolí po částech chlordifluormethan (Freon 22; 25 g, 290 mmol). Po 2 hodinách je reakce kompletní. Provede se extrakce a získá se
6,2 g, 28 mmol (výtěžek: 75 %) sloučeniny uvedené v podnázvu.
'II-NMR (500 MHz; aceton^): δ 7,87 (m, IH), 7,74 (m, 1H), 7,54 (m, IH), 7,19 (t, 1H,Jh f 73 Hz) (iv) 3-Chlor-5-difluormethoxy-N-methoxy-N-methylbenzamid
3-Chlor-5-difluormethoxybenzoová kyselina (1,8 g, 8 mmol; viz stupeň (iii) shora) a oxalylchlorid (1,5 g, 11,8 mmol) se rozpustí v methylenchloridu (50 ml). Přidá se DMF (2 kapky) a reakční směs se míchá při teplotě okolí 30 minut. Poté se přidá N,O-dimethylhydroxylamin (1 g, 10,2 mmol) a triethylamin (3 g, 30 mmol) a po dalších 10 minutách míchání při teplotě okolí se reakční směs koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se přenese do etheru (100 ml) a vody (50 ml). Po oddělení se organická fáze promyje solankou, suší se nad síranem sodným, filtruje se a koncentruje. Zbytek se chromatografuje na silikagelu (hexan/ethylacetát 2:1) a získají se 2 g, 7,5 mmol (93 %) sloučeniny uvedené v podnázvu.
- 38 CZ 303708 B6 'H-NMR (400 MHz; CDCb): 6 7,54 (m, IH), 7,37 (m, IH), 7,27 (m, IH), 6,53 (t, IH. Jh-f 73 Hz) (v) 3-Chlor-5-difluormethoxyacetoťenon
3-Chlor-5-difluormethoxy-N-methoxy-N-methylbenzamid (2 g, 7,5 mmol; viz stupeň (iv) shora) se rozpustí v etheru (100 ml) a ochladí se pod dusíkem na teplotu -70 °C. Po kapkách se přidá k reakční směsi během 1 minuty injekční stříkačkou methyllithium (7 ml, 11 mmol, 1,6 M v etheru). Lázeň se suchým ledem se odstaví a směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a poté se reakce uhasí roztokem chloridu amonného (50 ml, 5% NH4Cl ve vodě). Organická fáze se promyje solankou, suší se nad síranem sodným, filtruje se a koncentruje se za sníženého tlaku. Zbytek se chromatografuje na silikagelu (hexan:ethylacetátu 2 : 1) a získá se 1,5 g, 6,8 mmol (výtěžek 90 %) sloučeniny uvedené v podnázvu.
'H-NMR (600 MHz; CDCb): δ 7,77 (m, IH), 7,59 (m, IH), 7,35 (m, IH), 6,56 (t. IH, JH-h 73 Hz), 2,60 (s,3H) (ví) Methylester 3-Chlor-5-dÍfluormethoxyfenyloctové kyseliny
3-Chlor-5—difluormethoxyacetofenon (1,5 g, 6,8 mmol; viz stupeň (v) shora) se rozpustí v methylenchloridu (200 ml). Přidá se dusičnan thalitý x 3MeOH na K-10 montmorillonitu (6 g, 10 mmol (cca 0,6 mmol/g); viz J. Am. Chem. Soc., 98, 6750 (1976)) a směs se míchá při teplotě okolí 20 hodin. Směs se filtruje a filtrát se promyje hydrogenuhličitanem sodným (100 ml, 0,5 M), suší se nad síranem sodným, filtruje se a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se chromatografuje na silikagelu (hexan/ethylacetát 2 : 1) a získá se 1 g, 4 mmol (výtěžek; 56 %) sloučeniny uvedené v podnázvu.
1 H-NMR (500 MHz; CDCb): δ 7,14 (m, IH), 7,06 (m, IH), 6,96 (m, IH), 6.50 (t, IH, JH F 73 Hz), 3,72 (s, 3H), 3,60 (s, IH) (vii) Methylester a-formyl-3-(chlor-5-difluonnethoxyfenyI)octové kyseliny
Methylester 3—chlor-5—difluormethoxyfenyloctové kyseliny (1 g, 4 mmol; viz stupeň (vi) shora) a methylformiát (1 g, 16 mmol) se rozpustí v etheru (100 ml) a ochladí se v ledové lázni (cca °C). Poté se přidá jemně nakrájený sodík (180 mg, 7,8 mmol) a methanol (1 ml) a směs se nechá v ledové lázni za míchání přes noc. Opatrně se přidá voda (100 ml) a fáze se rozdělí. Vodná fáze se okyselí kyselinou chlorovodíkovou (2M) na pH 1 a extrahuje se s etherem (2 x 100 ml). Extrakt se suší nad síranem sodným, filtruje se a koncentruje se za sníženého tlaku. Zbytek se chromatografuje na silikagelu (hexan:ethylacetátu (1 : 1)) a získá se 400 mg, 1,4 mmol (výtěžek: 36 %) sloučeniny uvedené v podnázvu.
'H-NMR (400 MHz): δ 12,10 (d, IH), 7,32 (d, IH), 7,11 (m, IH), 7,07 (m, IH), 6,94 (m, IH), 6,51 (t, 1H,Jf_h 73),3,83 (s, 3H) (viii) 3-Chlor-5-difiuormethoxytropová kyselina
Methylester ot-formyl-3-(chIor-5—difluormethoxyfenyl)octové kyseliny (400 mg, 1,4 mmol; viz stupeň (vii) shora) se rozpustí ve směsi THF:methanol (50 ml, 9:1). Přidá se borohydrid sodný a směs se míchá při teplotě okolí 30 minut. Přidá se voda a směs se koncentruje za získání vodné suspenze, která se přenese do ethylacetátu a vody. Fáze se rozdělí a organická fáze se promyje chloridem sodným (15% ve vodě), suší se nad síranem sodným, filtruje se a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v methanolu (30 ml) a hydrolyzuje se hydroxidem sodným (1 ml, 10 M) při teplotě okolí po dobu 10 minut. Extrakcí se získá 180 mg, 0,68 mmol (výtěžek: 48 %) sloučeniny uvedené v podnázvu.
- 39 CZ 303708 B6 1 H-NMR (500 MHz; CDCR): δ 7,18 (m, 1 H), 7,10 (m, 1H), 7,00 (m, 1H), 6,50 (t, 1H, JF_H 73),
4,11 (m, lH),3,90(m, lH),3,84(m, IH) (ix) Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab x HOAc
Chlor-5-difluormethoxytropová kyselina (180 mg, 0,7 mmol; viz stupeň (viii) shora), H-Aze-Pab(Teoc) x HCl (450 mg, 1 mmol) a PyBOP (530 mg, 1 mmol) se rozpustí v DMF (10 ml) a přidá se DIPEA (550 mg, 3,9 mmol). Směs se míchá při teplotě okolí 1 hodinu předtím, než byla zředěna solankou (20 ml, 15% NaCl) a extrahuje se s ethylacetátem (40 ml). Extrakt se suší nad síranem sodným, filtruje se a odpaří se do sucha. Zbytek se rozpustí v methylenchloridu (5 ml) a přidá se kyselina trifluoroctová (5 ml). Po 1 hodině při teplotě okolí se směs diastereomerů odpaří do sucha a zbytek se chromatografuje na koloně s reverzními fázemi (acetonitrikvoda (30: 70), pufr: octan amonný 0,1 M). Sušením vymrazováním se získá 36 mg, 0,067 mmol (výtěžek: 10,4 %) sloučeniny uvedené v názvu.
MS (ES) 481 (M+ 1)T 'H-NMR (400 MHz; CDCb): δ 7,77 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,30 (m, IH), 7,13 (m, 2H), 6,87 (t, IH, JF „ 73 Hz), 4,76 (m, IH), 4,55 (s, 2H), 4,37 (m, IH), 4,03 (m, 2H), 3,82 (m, IH), 3,72 (m, 1 H), 2,53 (m, 1H), 2,28 (m, 1 Η), 1,92 (s, 1,5H) l3C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky) δ 172,3, 171,9, 167,2
Příklad 10
Ph(3—Cl) (5-OCF3)-<H(CH2OH)C(0)-Aze-Pab x TFA (i) 3-Chlor--5--trifluormethoxybenzylmesylát
K roztoku 3-chlor-5-trifluormethoxybenzylalkohoIu (6,1 g, 26,9 mmol; viz příklad 6(v) shora) v CH2C12 (250 ml) se při 0 °C a pod atmosférou dusíku přidá DIPEA (4,2 g, 32,3 mmol) a methansulfonylchlorid (3,4 g, 26,9 mmol). Roztok se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1,5 hodiny a zalije se vodou. Organické podíly se oddělí a poté se promyjí s vodou (lx), IN HCl (lx), vodou (lx) a vodným NaHCO3 (lx) a poté se suší (Na2SO4), filtrují se a koncentrují a získá se sloučenina uvedená v názvu (8,2 g, 99 %) jako olej.
'H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,37(s, IH), 7,28 (s, IH), 7,18 (s, 1H), 5,23 (s, 2H), 3,07 (s, 3H) (ii) 3-Chlor-5-trifluormethoxybenzylkyanid
K. roztoku 3-chlor-5-trifluormethoxybenzylmesylátu (8,2 g, 26,8 mmol; viz stupeň (i) shora) v DMSO (50 ml) se přidá kyanid sodný (2,6 g, 53,6 mmol). Vzniklý heterogenní roztok se zahřívá na 50 °C a sonifikuje se 1 hodinu. Reakční směs se ochladí a rozdělí se mezi Et2O a vodu. Organické podíly se promyjí s vodou (2x) a solankou (2x). Spojené vodné fáze se extrahují s Et2O (lx). Spojené organické podíly se suší (Na2SO4), filtrují se a koncentrují se za mírného zahřívání a částečného vakua a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (6,3 g, 100 %), jako načervenalý těkavý olej, který se použije v příštím stupni bez dalšího Čištění.
H-NMR (300 MHz, CDCb): Ó 7,32 (s, 1 H), 7,24 (s, IH), 7,12 (s, IH), 3,78 (s, 2H)
-40CZ 303708 B6 (iii) 3-Chlor-5-trifluormethoxyfenyloetová kyselina
K roztoku 3-chlor-5-trifluormethoxybenzylkyanidu (6,3 g, 26.7 mmol; viz stupeň (ii) shora) v 2-propanolu (100 ml) se přidá voda (200 ml) a hydroxid draselný (7,5 g, 133,5 mmol), Roztok se zahřívá při zpětném toku 18 hodin, ochladí se na teplotu místnosti a 2-propanol se odstraní ve vakuu. Vodná fáze se promyje CH2Cb (2x) a promývací kapaliny se odstraní. Bazická vodná fáze se okyselí 2N HCI a extrahuje se sCH2Cb (3x). CH2Cb extrakty se suší (\a2SO.1), filtrují se a koncentrují se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (5,2 g, 76 %), jako olej, který se použije v příštím stupni bez dalšího čištění.
lt) 'H-NMR (300 MHz, CDCb): δ 7,25 (s, IH), 7,19 (s, IH), 7.08 (s, IH), 3,68 (s, 2H) (iv) Ethyl—3--chlor-5-trifluormethoxyfenylacetát is K roztoku 3-chlor-5-trifluormethoxyfenyloctové kyseliny (5,2 g, 20,4 mmol; viz stupeň (iii) shora) v EtOH (600 ml) se přidá kyselina sírová (několik kapek). Roztok se zahřívá při zpětném toku 18 hodin, ochladí se na teplotu místnosti, neutralizuje se pevným NaHCO3 a EtOH se odstraní ve vakuu. Zbytek se zředí s EtOAc, promyje se s vodou (lx), vodným NaHCO3 (Ix) a solankou (lx). Organické podíly se suší (Na2SO4), filtrují se a koncentrují ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (5,5 g, 96 %) jako olej, který se použije v příštím stupni bez dalšího čištění.
1 H-NMR (300 MHz, CDCb): δ 7,24 (s, IH), 7,16 (s, IH), 7,07 (s, IH), 4,13 - 4,22 (q, J - 8 Hz, 2H), 3.63 (s, 2H), 1,24 - 1,32 (t, J “ 8 Hz, 3H) (v) Ph(3-Cl) (5-OCF0-(R.S)CH(CHO)C(O)OEt
K roztoku ethy l-3-chlor-5-tri fíuormeth oxy fenyl acetátu (4,5 g, 15,9 mmol; viz stupeň (iv) shora) v bezvodém THF (400 ml) se pod atmosférou dusíku a při teplotě menší než 0 °C (lázeň ledu a MeOH) přidá ethoxid sodný (4,5 g, 63,6 mmol). Studený roztok se míchá 40 minut a přidá se ethylformiát (8,1 g, 111,3 mmol). Roztok se míchá při 0 °C po dobu 30 minut, zahřeje se na teplotu místnosti a míchá se 2 hodiny. Poté se odstraní THF ve vakuu. Zbytek se zředí s ELO a extrahuje se s vodou (lx) a 0,5M NaOH (3x). Vodné extrakty se okyselí 2N HCI a extrahují se s CH?Cb (3x). Spojené organické podíly se suší (Na2SO4), filtrují se a koncentrují se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (3,9 g). Mžikovou chromatografíi na silikagelu eluováním směsí Hex:EtOAc (4 : 1) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (3,0 g, 61 %) jako olej.
'H-NMR (300 MHz, CDCb, směs izomerů): δ 12,30 a 12,25 (s, IH), 7,39 a 7,34 (s, IH), 7,21 (s, IH), 7,17 (s, IH), 7,08 (s, 1H), 4,27 - 4,37 (q, J = 8 Hz. 2H), 1,28 - 1,38 (t, J = 8 Hz, 3H) (vi) Ph(3-Cl) (5-OCF1HR,S)CH(CH2OH)C(O)OEt
K. roztoku Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(R,S)CH(CHO)C(0)OEt (3,0 g, 9,66 mmol; viz stupeň (v) shora) v MeOH (200 ml) se při teplotě -10 °C (lázeň ledu a MeOH) přidá po částech během 5 minut borohydrid sodný (0,7 g, 19.32 mmol). Roztok se míchá při teplotě -10 °C po dobu 45 minut a přidá se další borohydrid sodný (0,4 g). Po dalších 15 minutách se reakce uhasí vodným chloridem amonným, slabě se okyselí 2N HCI a MOH se odstraní ve vakuu. Zbytek se zředí s EtOAc a promyje se vodou (lx), vodným NaHCOi (lx) a solankou (lx). Organické podíly se suší (Na2SO4), filtrují se a koncentrují se ve vakuu a získá se surová sloučenina uvedená v podnázvu.
Mžikovou chromatografíi na silikagelu eluováním směsí Hex:EtOAc (5 : 1) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (2.0 g, 66 %) jako olej.
' H-NMR (300 MHz, CDCb): δ 7,26 (s, IH), 7,19 (s, 1 H), 7.07 (s, IH), 4.16 - 4,28 (m, 2H), 4,04-4,15 (m. ί H), 3,76 - 3,94 (m, 2H), 2.33 (t, J = 6 Hz, 1H), 1.18 - 1,30 (t, J - 8 Hz, 3H)
- 41 CZ 303708 B6 (vii) Ph(3—Cl) (5-OCF3HR,S)CH(CH2OH)C(O)OH
K roztoku Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(R,S)CH(CH2OH)C(O)OEt (2,0 g, 6,24 mmol; viz stupeň (vi) shora) v THF (50 ml) a vodě (25 ml) se přidá monohydrát hydroxidu lithného (0,5 g, 12,48 mmol). Roztok se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu a THF se odstraní ve vakuu. Zbytek se zředí s vodou a poté se promyje CHC13 (2x) a promývací kapaliny se odstraní. Bazická vodná vrstva se okyselí 2N HCI a extrahuje se s CHC13 (4x). CHCl3 extrakty se suší (Na2SO4), filtrují se a koncentrují se ve vakuu a získá se surová sloučenina uvedená v názvu (1,5 g) jako olej. Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním směsí CHC13: MeOH koncentrovaný NH4OH (gradient od 7,0:2,5:0,5 až 6:3:1) se získá amonná sůl sloučeniny uvedené v podnázvu (1,1 g). Amonná sůl se rozdělí mezi IN HCI a CHC13. Organické podíly se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (také známá jako 3-chlor-5trifiuormethoxytropová kyselina) jako olej (1,1 g, 62 %).
'H-NMR (300 MHz, CD3OD): δ 7,41 (s, IH), 7,27 (s, 1H), 7,24 (s, IH), 4,03 (m, IH), 3,75 3,87 (m,2H) (viii) Ph(3-Cl) (5-OCF;)—(S)CH(Cl TOH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (a) a Ph(3-Cl) (5^OCF3>-(R)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (bj
K roztoku Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(R,S)CH(CH2OH)C(O)OH (0,65 g, 2,28 mmol; viz stupeň (vii) shora) v DMF se při teplotě menší než 0 °C (lázeň ledu a MeOH) přidá H-Aze-Pab(Teoc) (0,90 g, 2,39 mmol), kolidin (0,71 g, 5,70 mmol) a PyBOP (1,31 g, 2,51 mmol). Vzniklý roztok se míchá při teplotě menší než 0 °C po dobu 1 hodiny, zahřeje se na teplotu místnosti a míchá se 1 hodinu. DMF se odstraní ve vakuu. Zbytek se zředí s EtOAc a promyje se zředěnou vodnou HCI (lx), solankou (lx), vodným NaHCO3 (lx) a solankou (lx). Organické podíly se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují ve vakuu a získá se surová sloučenina uvedená v podnázvu (2,1 g) jako směs diastereomerů. Mžikovou chromatografií (3x) na silikagelu eluováním nejprve EtOAc:MeOH (95:5) a poté CH2Cl2:MeOH (97 : 3) a nakonec CH2Cl2:MeOH (95 : 5) se získá sloučenina uvedená v podnázvu jako diastereomer (a) (0,51 g, 35 %) a diastereomer (b) (0,45 g, 31 %)jako pěna, kterou lze rozmělnit.
Pro diastereomer sloučeniny (a) podnázvu 'H-NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů): δ 7,79 - 7,85 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,22 - 7,49 (m, 5), 5,17 - 4,77 (m, IH), 4,53 -4,18 (m, 4H), 3,58 - 4,11 (m, 5H), 2,47 - 2,73 (m, 1H), 2,11 - 2,34 (m, IH), 1,08-1,12 (m, 2H), 0,07 (s, 9H)
MS (m/z) 643 (M + lf (ix) Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)“Aze-Pab x TFA
Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(Teox), (78 mg, 0,121 mmol; viz stupeň (viii) shora — diastereomer (a)), se rozpustí v 5 ml kyseliny trifluoroctové. Po 10 minutách reakce proběhne a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se suší vymrazováním z vody a acetonitrilu a získá se žádaný produkt. Výtěžek: 70 mg (94 %).
MS (m/z) 483 (M-l) ; 485 (Μ + I / 'H-NMR (400 MHz. D2O) rotamery 1: δ 8,83 (bt, 1 H), 7,79 (d, IH), 7,72 (d, I H), 7,54 (d, IH),
7,43 (d, 2H), 7,35 (m, 1 H, rotamer), 7.28 (m, IH, rotamer), 7,20 (m, IH, rotamer), 7,05 (m. IH, rotamer), 5,22 (m, IH, rotamer), 4,83 (rn, 1 H, rotamer), 4,57 (m, 2H, rotamer), 4,38 (m, 2H. rotamer). 4.3 - 3,7 (m, 5H), 2,77 (m, 1H, rotamer), 2,55 (m, 1H, rotamer), 2,27 (m, 1 H)
- 42 CZ 303708 B6 1 C-NMR (100 MHz; D2O): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery) ó 172,9, 172.2, 172,0, 171,8, 166,9
Příklad 11
Ph(3-Cl)(5-OCF3HS)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) (i) Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(0Me, Teoc)
Ph(3—Cl) (5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (100 mg, 0,155 mmol; viz příklad lO(viii) shora), se rozpustí v 12 ml tetrahydrofuranu. Přidá se hydrochlorid O-methylhydroxylaminu (44 mg, 0,53 mmol) a reakční směs se zahřívá na 50 °C přes noc, Reakční směs se odpaří a zbytek se čistí preparativní HPLC (CH3CN/0,lM NH4OAc (70/30). Příslušné frakce se odpaří a zbytek se rozpustí v malém množství acetonitrilu a vody a suší se vymrazováním. Sušení vymrazováním se ještě jednou opakuje. Výtěžek: 80 mg (76 %) čistého materiálu.
’Η-NMR (400 MHz, CD3OD) rotamery: δ 7,5 - 7,4 (m, 3H), 7,35 - 7,2 (m, 4H), 5,15 (m, IH, menšinový rotamer), 4,74 (m, IH, většinový rotamer), 4,5 - 4,25 (m, 3H), 4,2 - 3,95 (m, 4H),
3,91 (b, 3H), 3,9 - 3,6 (m, 2H), 2,63 (m, IH, menšinový rotamer), 2,50 (m, IH, většinový rotamer), 2,3 - 2,1 (m, IH), 0,95 (m, 2H), 0,02 (s, 9H, většinový rotamer), 0,01 (s, 9H, menšinový rotamer) (ii) Ph(3-Cl) (5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
Ph(3-Cl) (5-CCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(OMe, Teoc) (80 mg, 0,12 mmol; viz stupeň (i) shora), se rozpustí v ! ml methylenchloridu a ochladí se v ledové lázni. Přidá se kyselina trifluoroctová (3 ml) a reakční nádoba se udržuje v ledové lázni dvě hodiny. Směs se odpaří a rozpustí se v ethylacetátu a promyje se třikrát s NaHCO3 (vodný) a poté vodou a solankou. Organic30 ká fáze se suší (Na2SO4), filtruje se a odpaří. Zbytek se suší vymražením, z malého množství vody a acetonitrilu. Výtěžek: 60 mg (95 %) čistého produktu.
MS (m/z) 528 (M-l)“; 531 (M + 1/ 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) rotamery: δ 7,65 - 7,55 (m, 3H. rotamery), 7,45 (m, IH. většinový rotamer), 7,4 - 7,2 (m, 4H), 5,15 (m, IH, menšinový rotamer), 4,74 (m, IH, většinový rotamer),
4.5 - 4,3 (m, 3H), 4.05 - 3,95 (m, 2H), 3,85 (m. IH, většinový rotamer), 3,82 (s, 3H, většinový rotamer), 3,81 (s, 3H, menšinový rotamer), 3,73 (m. IH, většinový rotamer), 3,67 (m, 1 H, menšinový rotamer), 3,62 (m, IH, menšinový rotamer), 2,63 (m, IH, menšinový rotamer), 2,50 (m. IH, to většinový rotamer), 2,24 (m, IH, většinový rotamer), 2,16 (m, IH, menšinový rotamer) nC-NMR (125 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery) δ 174,0, 173,2, 172,7, 172,6, 155,1
Příklad 12
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)—(R)CH(OH)C(O>-Aze-Pab(OMe) (i) Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe. Teoc)
Ph(3-Cl) (5-OCHF3HR)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Tcoc) (0,40 g, 0.65 mmol; viz příklad l(ix) shora), se rozpustí v 20 ml acetonitrilu a přidá se 0,50 g (6,0 mmol) O-methy1 hydroxy lam inhvdrochloridu. Směs se zahřívá na 70 °C po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se
-43 CZ 303708 B6 rozdělí mezi vodu a ethylacetát. Vodná fáze se extrahuje dvakrát ještě ethylacetátem a spojená organická fáze se promyje vodou, solankou, suší se (Na?SO4), filtruje a odpaří.
Výtěžek: 0,41 g (91 %).
'H-NMR (400 MHz, CDC10: δ 7,83 (bt, 1 H), 7,57 (bs, 1 H), 7,47 (d, 2H), 7,30 (d, 2H), 7,20 (m, IH), 7,14 (m, IH), 7,01 (m, IH), 6,53 (t, IH), 4,89 (s, IH), 4,87 (m, IH), 4,47 (m, 2H), 4,4-4,2 (b, IH), 4,17-4,1 (m, 3H),3,95 (s, 3H), 3,67 (m, IH), 2,68 (m, IH), 2,42 (m, IH), 0,97 (m, 2H), 0,01 (s,9H).
(ii) Ph(3-Ci) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
Ph(3~Cl) (5~OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe, Teoc) (0,40 g, 0,62 mmol; viz stupeň (i) shora), se rozpustí v 5 ml TFA a nechá se reagovat 30 minut. TFA se odpaří a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a NaHCO3 (vodný). Vodná fáze se extrahuje ještě dvakrát s ethylacetátem a spojená organická fáze se promyje vodou, solankou, suší se (Na2SO4), filtruje a odpaří. Produkt se suší vymrazováním z vody a acetonitriíu. Další čištění není nutné. Výtěžek: 0,28 g (85 %).
'H-NMR (600 MHz, CDC13): δ 7,89 (bt, IH), 7,57 (d, 2H), 7,28 (d, 2H), 7,18 (m, IH), 7,13 (m, IH), 6,99(m, IH), 6,51 (t, lH),4,88(s, IH), 4,87 (m, IH), 4,80 (bs, 2H), 4,48 (dd, IH), 4,43 (dd, IH), 4,10(m, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,68 (m, IH), 2,68 (m, IH), 2,40 (m, IH).
I?C-NMR (125 MHz; CDC10: (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery) δ 172,9, 170,8,
152,7, 152,6
MS (m/z) 495 (M-l)’, 497 (M + 1)+
Příklad 13
Ph(3-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x HOAc
Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) (13 mg, 0,026 mmol; viz příklad 12 shora) se rozpustí v absolutním ethanolu (5 ml) a přidá se 30 mg 10% Pd/C. Nakonec se pridá kyselina octová (5 μΐ) a směs se hydrogenuje pri atmosférickém tlaku 20 hodin. Směs se filtruje přes Celiť®, odpaří se a čistí se HPLC s reverzními fázemi (0,lM vodný octan amonný MeCN). Příslušné frakce se suší vymrazováním a získá se sloučenina uvedená v názvu ve formě bílé pevné látky: 8,5 mg (66 %).
'H-NMR (400 MHz, CD3OD) rotamery: δ 7,73 - 7,78 (m, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,19 - 7,43 (m, 3H), 7,06 7,13 (m, 111), 6,83 (t, III, JHf = 74IJz, většinový rotamer), 6,81 (t, IH, většinový rotamer), 5,20 (s, 1 H, většinový rotamer), 5,19 (m, IH, menšinový rotamer), 5,15 (s, IH. menšinový rotamer), 4,78 (m, 1H, většinový rotamer), 4,4 - 4,6 (několik píků, 2H), 4,35 (m, 1H, většinový rotamer), 4,08 (m, 1 H), 3,99 (m, 1 H, menšinový rotamer), 2,70 (m, IH, menšinový rotamer), 2,52 (m, IH, většinový rotamer), 2,30 (m, IH, většinový rotamer), 2,15 (ni, IH, menšinový rotamer), 1,89 (s, 3H).
'•’C-NMR (100 MHz; CD4)D): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery) ó 173,7, 172,9, 168,3,
MS (m/z) 433 (M+l) ; 431 (M-l f
- 44 CZ 303708 B6
Příklad 14
Ph(3 -GCT,HR)CH(OH)C(O) /\ze-Pab x TFA
Ph(3—Cl) (5-OCF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (34 mg, 0,057 mmol, z přikladu 6) se rozpustí v 5 ml ethanolu a přidá se 20 mg 10% Pd/C. Směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku přes noc. Směs se poté filtruje přes Celit*1, odpaří se a suší se vymrazováním z vody a acetonitrilu.
io 'H-NMR (400 MHz, CD3OD) rotamery: δ 7,8 - 7,7 (m, 2H), 7,55 (m, 2H), 7,5 - 7,2 (m, 4H), 5,24 (s, IH, většinový rotamer), 5,23 (m, IH, menšinový rotamer). 5,18 (s, IH, menšinový rotamer), 4,77 (m, IH, většinový rotamer), 4,6 - 4,45 (m, 2H), 4,36 (m, IH, většinový rotamer), 4,08 (m, IH), 3,99 (m, IH, menšinový rotamer), 2,70 (m, IH, menšinový rotamer), 2,52 (m, 1H, většinový rotamer), 2,30 (m, IH, většinový rotamer), 2,15 (m, IH, menšinový rotamer).
nC-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery) δ 174,1, 173,9, 173,5, 172,9, 168,2.
'9—F NMR (282 MHz; CD3OD): -59,8 a -59,9 (3F, menšinový, resp. většinový rotamer),
-77,4 (3F) indikují, že sůl je TFA.
MS (m/z) 451,3 (M+l)’
Příklad 15
Ph(3-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) 3-Chíor-5-trifIuorethoxybenzaldehyd
K magneticky míchanému roztoku 3-chlor-5~hydroxybenzaldehydu (2,0 g, 12,8 mmol; viz příklad 1 (ii) shora) a uhličitanu draselného (2,3 g, 16,6 mmol) v DMF (35 ml) se pod dusíkem přidá při teplotě místnosti 2,2,2-trifluorethyl p-toluensulfonát (4,2 g, 16,6 mmol). Směs se zahřívá na 110 °C po dobu 7 hodin a poté se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se ochladí na 0 °C. vlije se do ledem chlazené 2N HCI (100 ml) a extrahuje se s EtOAc (2 x 75 ml). Spojené organické extrakty se promyjí s 0,5N HCI (2 x 50 ml), suší se (Na2SO4), filtrují se a koncentrují ve vakuu. Hnědý olej se chromatografuje na silikagelu eluováním směsí Hex:EtOAc (6 : 1) a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (1,9 g, 61 %) jako žlutý olej.
'H-NMR (300 MHz, CDCb) δ 9,44 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,33 (s, IH), 7,28 (s, 1H). 4,42 (q, J = 8 Hz, 2H) (ii) Ph(3-Cl) (5-OCH2CF3HR,S)CH(OTMS)CN
K roztoku 3-chlor-5-trifluorethoxybenzaldehydu (5,2 g, 21,7 mmol; viz stupeň (i) shora) a jodidů zinečnatého (1,7 g, 5,4 mmol) vCH2Cl2 se přidá po kapkách injekční stříkačkou a při teplotě 0 °C trimethylsilylkyanid (4,3 g, 43,3 mmol). Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 3 hodin a poté se zředí s vodou (150 ml). Organická vrstva se oddělí, suší (Na^SOj), filtruje se a koncentruje se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (6,9 g, 95 %) jako žlutý olej, který se použije bez dalšího Čištění.
'H-NMR (300 MHz, CDCh) δ 7,27 (s, IH), 6,98 (s, 2H), 5.44 (s, IH), 4,38 (q, J = 8 Hz. 2H). 0,30 (s,9H)
-45 CZ 303708 B6 (iii) Ph(3—Cl) (5-OCH2CF3)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Koncentrovaná kyselina chlorovodíková (170 ml) se přidá k Ph(3—Cl) (5-OCH2CF3)-(R,S)CH(OTMS)CN (6,9 g, 20,4 mmol; viz stupeň (ii) shora) a směs se míchá při teplotě 100 °C po dobu 1 hodiny. Po ochlazení na teplotu místnosti se reakční směs dále ochladí na 0 °C a pomalu se alkalizuje s 3N NaOH (300 ml). Tato směs se promyje s Et2O (2 x 100 ml) a vodná vrstva se okyselí 2N HCI (50 ml). Vodná vrstva se poté extrahuje s EtOAc (2x 100 ml), suší se (Na2SO4), filtruje se a koncentruje ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (5,3 g, 92 %) jako světle žlutý olej, který se použije bez dalšího Čištění.
'H-NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,18 (s, IH), 7,07 (s, IH), 7,02 (s, IH), 5,13 (s, IH), 4,58 (q, J = 8 Hz, 2H) (iv) Ph(3-Cl) (50CH2CF3HR)CH(OH)C(0)OH (a) a Ph (3-Cl) (5-OCH2CF3)(S)CH(OAc)C(O)OH (b)
Roztok Ph(3-Cl) (5-OCH2CF3HKS)CH(OH)C(O)OH (7,06 g, 24,8 mmol; viz stupeň (iii) shora) a Lipase PS „Amano“ (4,30 g) ve vinylacetátu (250 ml) a MTBE (250 ml) se zahřívá na 70 °C pod dusíkem po dobu 40 hodin. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti, enzym se odstraní filtrací promytím s EtOAc a filtrát se koncentruje ve vakuu. Chromatografií eluováním směsí CHCl3:MeOH:Et3N (92 : 6 : 2) se získá triethy lam inová sůl sloučeniny (a) uvedené v názvu (3,02 g) jako žlutý olej. Tato sůl se rozpustí ve vodě (150 ml), okyselí se 2N HCI a extrahuje se s EtOAc (2 x 75 ml). Spojené organické extrakty se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrací ve vakuu se sloučenina (a) podnázvu (2,18 g) jako ne zcela bílá pevná látka. Dále, triethylaminová sůl sloučeniny (b) podnázvu (4,73 g) se získá sloupcovou chromatografií uvedenu shora.
Data pro sloučeninu (a) podnázvu:
t.t.: 98 až 103 °C 'H-NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,18 (s, IH), 7,07 (s, IH), 7,02 (s, IH), 5,13 (s, 1 H), 4,58 (q, J = 8 Hz, 2H).
BC NMR (75 MHz, CD3OD) δ 175,4, 159,6, 144,6, 136,2, 125,0, (q, J = 277 Hz), 121,8, 115,9,
113,1,73,3. 67,0 (q, J = 35 Hz)
HPLC analýza: 98,6 %, > 99% ee, Chiralcel OD Column (mobilní fáze 97:3:0,5 Hex:EtOH:TFA) [a]2j> - -81,5° (c - 1,0, MeOH)
APCl-MS: (M-l)- 283 m/z (v) Ph(3-Cl) (5A)CH2CF3f-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
K roztoku Ph(3-Cl) (5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,50 g, 1,8 mmol; viz stupeň (iv) shora (sloučenina (a)) v DMF (20 ml) se pod dusíkem a při teplotě 0 °C přidá H-Aze-Pab(Teoc) x HCI (1,03 g, 2,3 mmol), PyBOP (1,01 g, 1,9 mmol), a DIPEA (0,57 g, 4,4 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 2 hodin a poté při teplotě místnosti 20 hodin. Směs se koncentruje ve vakuu a zbytek se chromatografuje dvakrát na silikagelu, eluováním prvně směsí CHCbEtOH (10 : 1) a poté směsí EtOAc:EtOH (10 : 1) a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (0,55 g, 48 %) jako bílá, rozmělnitelná pěna.
t.t.: 90 až 95 °C
Rť = 0,42(10:1 CHClťEtOH)
-46 CZ 303708 B6 'H-NMR (300 MHz, CD^OD, komplexní směs rotamerů) δ 7,78 - 7,81 (m, 2H), 7,38 - 7,41 (m, 2H), 7,12 - 7,16 (m, 1 H), 7,00 - 7.06 (m, 2H), 5,09 - 5,22 a 4,75 - 4,79 (m, 2H), 3,94 - 4.61 (m. 8H), 2,09 - 2,75 (m. 2H), 1,04-1,11 (m, 2H), 0,70 (s, 9H).
APCI-MS: (M + 1) = 643 m/z (vi) Ph(3Cl) (5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA io Ph(3-Cl) (5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(ObAze-Pab(Teoc) (0,066 g, 0,103 mmol; viz stupen (v) shora), se rozpustí ve 3 ml TFA a nechá se reagovat po dobu 30 minut. TFA se odpaří a zbytek se suší vymrazováním ze směsi vody a acetonitrilu a získá se 0,060 g (94 %) sloučeniny uvedené v názvu jako její TFA sůl.
II NMR (400 MHz, CD3OD) rotamery: δ 7,8 - 7,7 (m, 2H), 7.6 - 7.5 (m, 2H), 7,2 - 7.0 (m, 3 H), 5.21 (m, IH, menšinový rotamer), 5,17 (s, IH, většinový rotamer), 5,11 (s, IH, menšinový rotamer), 4,81 (m, IH, většinový rotamer), 4,6 - 4,4 (m, 4H), 4,37 (m, IH, většinový rotamer), 4,16 (m, IH, většinový rotamer), 4,06 (m, IH, menšinový rotamer), 3,99 (m, IH, menšinový rotamer),
2,70 (m, IH, menšinový rotamer), 2,54 (m, IH, většinový rotamer), 2,29 (m, IH, většinový rota20 mer), 2,15 (m, IH, menšinový rotamer) l3C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karboxylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery) ό 172,2,
171,8, 171,7, 167,0.
MS (m/z) 499,3 (M+lf
Příklad 16
Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe)
K roztoku Ph(3-Cl) (5-OCH2CF3HR)CH(OH)C(O)OH (0,48 g, 1,7 mmol; viz příklad IS(iv) shora sloučenina (a)) v DMF (20 ml) se pod argonem při 0 °C přidá H-Aze-Pab(PMe) x 2HC1 (0,74 g, 2,2 mmol), PyBOP (0,97 g, 1,9 mmol), a DIPEA (0,55 g, 4,2 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 2 hodin a poté při teplotě místnosti 20 hodin. Směs se koncentruje ve vakuu a zbytek se chromatografuje dvakrát na silikagelu eluováním nejprve směsí CHClyEEtOH (10 : 1) a poté směsí EtOAc:EtOH (10 : 1) a získá se sloučenina uvedená v názvu (0,62 g, 69 %) jako bílá rozmělnitelná pěna.
t.t.: 75 až 80 °C
Rf-0,43 (10:1 CHCl3:EtOH) 'H NMR (300 MHz, CD^OD, komplexní směs rotamerů) Ó 7,57 - 7.60 (m, 2H), 7,32 - 7.36 (m,
2H), 7,13 - 7,17 (m, 1H), 7.00 - 7,06 (m. 2H), 5,09 - 5,19 a 4,74 - 4.80 (m, 2H). 3,93 - 4.62 (m,
6H), 3,81 (s,3H), 2.10-2,73 (m, 2H)
APCI-MS: (M + 1)- 529 m/z
-47 CZ 303708 B6
Příklad 17
Ph(3-C1) (5—OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) 2,2-DÍfluorethylester methansulfonové kyseliny
K magneticky míchanému roztoku 2,2-difluorethanolu (1,52 g, 18,5 mmol) v CH2C12 (20 ml) se pod dusíkem přidá při teplotě 0 °C triethylamin (5,61 g, 55,5 mmol) a methansulfonylchlorid (2,54 g, 22,2 mmol). Směs se míchá při 0 °C po dobu 1,5 hodiny, zředí se CH2CI2 (50 ml) a promyje se 2N HCI (50 ml). Vodná vrstva se extrahuje s CH2C12 (30 ml) a spojené extrakty se promyjí solankou (30 ml), suší se (Na2SO4), filtrují se a koncentrují se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (2,52 g, 85 %) jako žlutý olej, který se použije bez dalšího čištění.
Ή NMR (300 MHz, CDC13) δ 6,02 (tt, J = 3 Hz, J = 55 Hz, IH), 4,39 (dt, J = 3 Hz, J = 13 Hz, 2H), 3,13 (s, 3H) (ii) 3-Chlor-5-difluorethoxybenzaldehyd
K roztoku 3-chlor-5-hydroxybenzaldehydu (1,50 g, 9,6 mmol; viz příklad l(ti) shora) a uhličitanu draselného (1,72 g, 12,5 mmol) v DMF (10 ml) se pod argonem při teplotě místnosti a po kapkách přidá roztok 2,2-difluorethylesteru methansulfonové kyseliny (2,0 g, 12,5 mmol; viz stupeň (i) shora) v DMF (10 ml). Směs se zahřívá na 100 °C po dobu 6 hodin a poté se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se ochladí na 0 °C, vlije se do směsi ledem chlazené 2N HCI (100 ml) a extrahuje se s EtOAc (2 x 75 ml). Spojené organické extrakty se promyjí s 0,5N HCI (2 x 50 ml), suší se (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Hnědý olej se chromatografuje na silikagelu eluováním směsí Hex:EtOAc (5 : 1) a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (1,35 g, 64 %) jako žlutý olej.
Ή NMR (300 MHz, CDC13) δ 9,92 (s, IH), 7,52 (s, IH), 7,31 (s, IH), 7,22 (s, IH), 6,12 (tt, J - 3 Hz, J = 55 Hz, IH), 4,26 (dt, J = 3 Hz, J - 15 Hz, 2H) (iii) Ph(3-CI) (5-OCH2CHF2HR,S)CH(OTMS)CN
K roztoku 3-chlor-5-difluorethoxybenzaldehydu (1,35 g, 6,1 mmol; viz stupeň (ii) shora) a jodidu zinečnatého (0,48 g, 1,5 mmol) v CH2C12 (50 ml) se přidá po kapkách při teplotě °C a pod dusíkem trimethylsilyl kyanid (1,21 g, 12,2 mmol). Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 3 hodin a poté se zředí s vodou (50 ml). Organická vrstva se oddělí, suší se (Na2SO4), filtruje se a koncentruje ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (1,85 g, 95 %) jako hnědý olej, který se použije bez dalšího čištění.
'HNMR (300 MHz, CDCb) δ 7,13 (s, III), 6,94 (s, 211), 6,10 (tt, J = 3 Hz, J = 55 liz, III), 5,43 (s, 1H), 4,20 (dt, J - 3 Hz, J = 15 Hz, 2H), 0,28 (s, 9H) (iv) Ph(3-Cl) (5-OCH2CHF2)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Koncentrovaná kyselina chlorovodíková (60 ml) se přidá k Ph(3-Cl) (5-OCH2CHF2)-(R,S)CH(OTMS)CN (1,85 g, 5,8 mmol; viz stupeň (iii) shora) a směs se míchá při teplotě 100 °C po dobu 1 hodiny. Po ochlazení na teplotu místnosti se reakční směs dále ochladí na 0°C a pomalu se alkalizuje s 3N NaOH (cca 180 ml) a promyje se s Et2O (2 x 75 ml). Vodná vrstva se okyselí s 2N HCI (20 ml) a extrahuje se s EtOAc (2 x 75 ml). Spojené extrakty se suší (Na2SO4), filtrují se a koncentrují se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (1,50 g, 97 %) jako světle žlutá pevná látka, která se použije bez dalšího čištění.
'H NMR (300 MHz. CDCb) δ 7,15 (s, 1 H), 7,05 (s. 1 H), 6,98 (s, 1H), 6,19 (tt, J = 4 Hz, J = 55 Hz, 1 H), 5.12 (s, 1H), 4,25 (dt, J = 4 Hz. J = 17 Hz, 2H)
-48 CZ 303708 B6 (v) Ph(3-Cl) (5-OCH2CHF2)-(S)CH(OAc)C(O)OH (a) a Ph(3-CI) (5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (b)
Roztok Ph(3-Cl) (5^)CH2CHF2)-(R.S)CH(OH)C(O)OH (3,90 g, 14,6 mmol; viz stupeň (iv) shora) a Lipase PS „Amano“ (2,50 g) ve vinylacetátu (140 ml) a MTBE (140 ml) se zahřívá na 70 °C pod dusíkem po dobu 40 hodin. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti, enzym se odstraní Filtračním promytím s EtOAc a filtrát se koncentruje ve vakuu. Chromatografií na silikagelu eluováním směsí CHCl3:MeOH:Et3N (92:6:2), se získá triethylaminová sůl sloučeniny (a) uvedené v podnázvu jako žlutý olej. Dále se získá triethylaminová sůl sloučeniny (b) uvedené v názvu (1,47 g) a sůl se rozpustí ve vodě (100 ml), okyselí se 2N HCI a extrahuje se s EtOAc (2 x 75 ml). Spojené organické extrakty se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu a získá se sloučenina (b) uvedená v podnázvu (1,00 g) jako ne zcela bílá pevná látka.
Data pro sloučeninu (b) uvedenou v podnázvu:
t.t. 103 až 106°C
Rf= 0,39 (90:8:2 CHCl3:MeOH:Et3N) 'H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,13 (s, IH), 7,04 (s, IH), 6,97 (s, IH), 6,17 (tt, J -4 Hz, J = 55 Hz, 1H), 5,12 (s, 1H), 4,24 (dt, J = 4 Hz, J = 8 Hz, 2H).
nC NMR (75 MHz, CD3OD) δ 175,5, 160,3, 144,5, 136,1, 121,3, 115,7, 115,3, (t, J - 240 Hz),
112,9, 73,4,68,6 (t, J = 29 Hz)
HPLC analýza: 96,2%, > 95,0% ee, ChiraíPak AD Column (95:5:0,5 mobilní fáze Hex:EtOH:TFA) [0tl2So = -84,0° (c=0, 85 MeOH)
APCI-MS: (Μ - 1) - 265 m/z (vi) Ph(3-Cl) (5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
K roztoku Ph(3-Cl) (5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,35 g, 1,3 mmol; viz stupeň (v) shora (sloučenina (b)) v DMF (18 ml) se pod dusíkem a při teplotě 0 °C přidá H-Aze-Pab(Teoc) x HCI (0,76 g, 1,7 mmol), PyBOP (0,75 g, 1,4 mmol), a DIPEA (0,43 g, 3,3 mmol). Reakční směs se míchá při 0 °C po dobu 2 hodiny a poté při teplotě místnosti po dobu 20 hodin. Směs se koncentruje ve vakuu a zbytek se chromatografuje na silikagelu eluováním nejprve směsí CHCl3:EtOH (10:1) a poté směsí EtOAc:EtOH (10:1) a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (0,69 g, 84 %) jako rozmělnitelná pěna.
t.t.: 108 až 118 °C
Rf = 0,48 (10:1 CHCl3;EtOH) 'H NMR (300 MHz. CD3OD. komplexní směs rotamerů) δ 7,78 - 7,81 (m, 2H), 7,40 - 7,43 (m, 2H). 7,09 - 7,12 (m, 1H), 6,96 - 7,02 (m, 2H), 6,16 (t, J - 57 Hz, 1H), 5.09 - 5,20 a 4,75 - 4,80 (m, 2H), 3,95 - 4,55 (m. 8H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,04- 1,1 1 (m, 2H), 0.07 (s, 9H)
APCI-MS: (M + 1) = 625 m/z
- 49CZ 303708 B6 (vii) Ph(3-Cl) (5-OCH2CHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3—Cl) (5-OCH2CHF<> <R)CH(OH)C(O)-Aze- Pab(Teoc) (0,086g, 0,138 mmol; viz stupeň (vi) shora), se rozpustí ve 3 ml TFA a nechá se reagovat 1 hodinu. TFA se odpaří a zbytek se suší vymrazováním z vody a acetonitrilu a získá se 0,080 g (98 %) sloučeniny uvedené v názvu jako TFA sůl.
'H NMR (300 MHz, CD3OD) rotamery: δ 7,8 - 7,7 (m, 2H), 7,6 - 7,5 (m, 2H), 7,15 - 6,95 (m, 3H), 6,35 - 5,95 (m, 1H), 5,20 (m, IH, menšinový rotamer), 5,14 (s, IH, většinový rotamer), 5,10 (s, IH, menšinový rotamer), 4,80 (m, IH, většinový rotamer), 4,6 - 4,0 (m, 6H), 2,70 (m, IH, menšinový rotamer), 2,53 (m, IH, většinový rotamer), 2,29 (m, IH, většinový rotamer), 2,15 (m, IH, menšinový rotamer).
i3C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery) S 174,0,
173,8, 173,4, 172,9, 168,2
MS (m/z) 481,2 (M+l)
Příklad 18
Ph(3-Cl) (5-OCH2CHF?HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
K roztoku (3—Cl) (5-OCH2CHF2HRK'H(OH)C(O)OH (0,30 g, 1,7 mmol; viz příklad 17(v) shora (sloučenina (b)) v DMF (15 ml) se přidá pod argonem při teplotě 0 °C H-Aze-Pab(OMe) x 2HC1 (0,49 g, 1,5 mmol), PyBOP (0,65 g, 1,2 mmol), a DIPEA (0,36 g, 2,8 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 2 hodin a poté při teplotě místnosti 20 hodin. Směs se koncentruje ve vakuu a zbytek se chromatografuje třikrát na silikagelu, eluováním nejprve směsí CHCl3:EtOH (10 : 1), poté EtOAc:EtOH (10 : 1) a konečně CHCl3:MeOH (20 : 1) a získá se sloučenina uvedená v názvu (0,47 g, 81 %) jako rozmělnitelná bílá pěna.
t.t.: 65 až 75 °C
Rf = 0,37 (10:1 CHClyEtOH) lH NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů) δ 7,58 - 7,60 (m, 2H), 7,32 - 7,35 (m, 2H), 7,09 - 7,12 (m, IH), 6,96 - 7,02 (m, 2H), 6,16 (t, J = 55 Hz, IH), 5,08 - 5,18 a 4,74 - 4,80 (m, 2H), 3,96 - 4,50 (m, 6H), 3,80 (s, 3H), 2,10 - 2,75 (m, 2H)
APCI-MS: (M + 1)-511 m/z.
Příklad 19
Ph(3-Cl) (5-OCH2FHR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) Ph(3-Cl)(5-TMSOHR,S)CH(OTMS)CN
K roztoku 3~chlor-5-hydroxybenzaldehydu (9,8 g, 62,6 mmol; viz příklad l(ii) shora) a Znl2 (5,0 g, 15,7 mmol) v bezvodém CH2C12 (500 ml) se při teplotě 0 °C přidá trimethylsilylkyanid (13,7 g, 138 mmol). Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Přidá se voda (250 ml) a vrstvy se oddělí. Vodná vrstva se extrahuje s CH2C12 (2 x 300 ml). Spojené organické extrakty se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (16,9g, 83 %)jako žlutý olej, který se použije bez dalšího čištění.
- 50CZ 303708 B6
Rf = 0,42 (3; 1 Hex: EtOAc) 'HNMR (300 MHz, CDCb) δ 7,06 (s, 1H), 6,86 (s, 2H), 5,40 (s, IH), 0,30 (s, 9H), 0.24 (s. 91Ϊ).
(ii) Ph(3-Cl) (5-OHHR,S)CH(OH)C(0)OH
Roztok Ph(3 CI) (5-OTMS)-(R,S)CH(OTMS)CN (22,6 g, 68,8 mmol; viz stupeň (i) shora) v koncentrované kyselině chlorovodíkové (200 ml) se zahřívá při zpětném toku pod dusíkem 3 hodiny. Reakční směs se ochladí na 0 °C a alkalizuje se pomalu 2N NaOH. Směs se promyje io s Et2O (3 x 100 ml), aby se odstranily organické nečistoty. Vodná vrstva se okyselí 2N HC1 a extrahuje se s EtOAc (3 x 200 ml). Spojené organické extrakty se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (9,3g, 67 %) jako hnědý olej, který se použije bez dalšího čištění, i? R;-0.23 (6:3:1 CHCb:MeOH:koncentrovaný NH4OH) ‘HNMR (300 MHz, CD3OD) Ó 7,05 (s, lH),6,94(s, 1H),6,73 (s, 1H),5,O3 (s, IH).
(iii) Ph(3-C!) (5-OHHR,S)CH(OH)C(O)OEt
K roztoku Ph(3-Cl) (5-OH)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (9,3 g, 46,0 mmol; viz stupeň (ii) shora) v absolutním EtOH (200 ml) se přidá koncentrovaná kyselina sírová (0,25 ml) a reakční směs se zahřívá při zpětném toku pod dusíkem 4 hodiny. Reakční směs se ochladí na 0 °C a přidá se pevný NaHCCb (0,2 g). Reakční směs se koncentruje ve vakuu a rozdělí se mezi nasycený NaHCO3 (100 ml) a Et2O (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (6,9g, 65 %) jako žlutý olej, který se použije bez dalšího čištění.
Rf = 0,62 (6:3:1 CHCl3:MeOH:koncentrovaný NH4OH).
'H NMR (300 MHz, CDCb) δ 6,99 (s, IH), 6,81 (s, 2H), 5,07 (s, IH), 4,16 - 4,32 (m, 2H), 1,23 (t, J = 7 Hz, 3H).
(iv) Ph(3-Cl) (5-OCH2FHR,S)CH(OH)C(O)OEt
K roztoku Ph(3-Cl) (5-OH)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt (6,1 g, 26,8 mmol; viz stupeň (iii) shora) v DMF (100 ml) v utěsněné nádobě se pod dusíkem a při teplotě °C přidá uhličitan česný (13.1 g,
40.2 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 15 minut a poté se přidá jodid draselný (0,5 g, 2,7 mmol). Reakění směs se ochladí na teplotu -78 °C a nádobou se probublává ehlorťluormethan (18,4 g, 268 mmol). Utěsněná nádoba se poté nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 18 hodin. Směs se ochladí na 0 °C, opatrně se odvětrá k odstranění přebytku chlorfluormethanu a rozdělí se vodou (20 ml) a Et2O (3 x 50 ml). Spojené organické podíly se promyjí solankou (2 x 50 1), suší se (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Mžikovou chromatografíí 11a silikagelu eluováním směsí Hex:EtOAc (gradient 9 : 1 až 3 : 1) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (2,4 g, 35 %) jako světle žlutý olej. Poznámka: Sloučenina je slabě UV-viditelná na TLC. Může být detekovatelná napuštěním TLC bromkresolovou zelení.
Rf= 0,46 (2:1 Hex:EtOAc) ‘HNMR (300 MHz, CDCb) Ó 7.21 (s, IH), 7,08 (s, IH), 7,05 (s, IH), 5,70 (d, JH-f = 54 Hz. 2H),
5,12 (d, J - 5 Hz, IH), 3.80-4,35 (m, 2H), 3.50 (d, J = 5 Hz, IH), 1,26 (t, J = 7 Hz. 3H).
- 51 CZ 303708 B6 (v) Ph(3-Cl) (5-OCH2F)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
K roztoku Ph(3-Cl) (5-OCH2F)-(R,S)CH(OH)C(0)OEt (1,8 g, 6,8 mmol; viz stupeň (iv) shora) ve směsi vody a THF (30 ml, 1:2) se při 0 °C pod dusíkem přidá monohydrát hydroxidu lithného (0,40 g, 10,3 mmol). Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 2 hodin. Reakční směs se koncentruje ve vakuu a rozdělí se vodou (5 ml) a Et2O (2 x 20 ml). Vodná vrstva se opatrně okyselí 0,2N HCl při teplotě 0°C a extrahuje se s EtOAc (3 x 30 ml). Spojené organické podíly se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (1,4 g, 87 %) jako bezbarvý olej, který stáním tuhne na bílou pevnou látku.
Rf=0,43 (6:2:1 CHCI·»:MeOH:Et3N) 'H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,24 (s, IH), 7,17 (s, 1H), 7,07 (s, IH), 5,78 (d, JH-F = 54 Hz, 2H), 5,13(s, IH).
(vi) Ph(3-CI) (5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH (a) a Ph(3CI) (5-OCH2FHS)CH(OAC)C(O)OH(b)
Směs Ph(3-Cl) (5-OCH2F)-(R,S)CH(OH)C(0)OH (3,2 g, 13,9 mmol; viz stupeň (v) shora) a Lipase PS „Amano“ (1,9 g) ve vinylacetátu (150 ml) a MTBE (150 ml) se zahřívá na 70 °C pod atmosférou dusíku po dobu 3 dnů. Reakční směs se ochladí, filtruje se přes Celit® a filtrační koláč se promyje s EtOAc. Filtrát se koncentruje ve vakuu a podrobí se mžikové chromatografií na silikagelu eluováním směsí CHCl3:MeOH:Et3N (15:1:0,5) a získá se triethylaminová sůl sloučeniny (a) uvedené v podnázvu (0,50 g, 21 %), která se použije bez neutralizace. Dále se získá sloučenina (b) uvedená v podnázvu (0,46 g, 20 %).
Data pro sloučeninu (a) podnázvu:
Rf = 0,19 (15:1:0,5 CHCbíMeOHrEtsN) ’H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,26 (s, IH), 7,18 (s, IH), 6,97 (s, IH), 5,74 (d, J„ F — 54 Hz, 2H), 4,81 (s, IH), 3,17 (q, J = 7 Hz, 6H), 1,28 (t, J - 7 Hz, 9H).
Data pro sloučeninu (b) podnázvu:
Rt -O,33 (15:1:0,5 CHCl3:MeOH:Et3N) 'H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,28 (s, IH), 7,19 (s, IH), 7,09 (s, IH), 5,76 (d, JH-f = 54 Hz, 2H), 5,75 (s, 1H), 3,17 (q, J = 7 Hz, 6H), 2,16 (s, 3H), 1,28 (t, J = 7 Hz, 9H).
(vii) Ph(3-Cl) (5-OCH(R)CH(OH)C(0)“Azc-Pab(Teoc)
K roztoku triethylaminové soli Ph(3—Cl) (5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,50 g, 1,50 mmol; viz stupeň (vi) shora) a HAze-Pab(Teoc).HCl (0,87 g, 1,90 mmol) v suchém DMF (15 ml) se pod argonem a při teplotě 0 °C přidá PyBOP (0,85 g, 2,60 mmol) a DIPEA (0,48 g, 3,70 mmol). Reakční směs se zahřeje na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Reakční směs se koncentruje ve vakuu a mžikovou chromatografií na silikagelu, eluováním nejprve směsí CHC^EtOH (9:1) a poté směsí EtOAc:EtOH (20 : 1) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (0,23 g, 26 %) jako rozmělnitelná bílá pěna.
t.t.: 88 až 92 °C
Rf=0,6l (9:1 CHC^EtOH)
-52CZ 303708 Β6 'Η NMR (300 MHz. CD3OD, komplexní směs rotamerů) Ó 7,81 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,40-7,42 (m, 2H), 7,06 - 7,23 (m, 3H), 5,76 (d, JH_F = 51 Hz. 2H), 5,10 - 5,16 a 4.77 - 4,83 (m, 2H), 3,80 - 4,49 (m, 6H), 2,30 - 2,53 (m, 2H), 1,08 (t, J “ 7 Hz, 2H), 0,08 (s, 9H).
APCI-MS (M + 1) = 593 m/z (viii) Ph(3—Cl) (5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-Cl) (5-OCH2FHR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,051 g, 0,086 mmol; viz stupeň (vii) shora), se rozpustí ve 3 ml TFA a nechá se reagovat 20 minut. TFA se odpaří a zbytek se suší vymrazováním ze směsi vody a acetonitrilu. Produkt vykazuje 95% čistotu s 5% obsahem defluormethylovaného materiálu. Pokusy o čištění preparativní RPLC směsí CH3CN:0,lM NH4OAc selžou a materiál, částečně jako acetát se rozpustí v 5 ml TFA, odpaří se a sušením vymrazováním se získá 26 mg (51 %) sloučeniny uvedené v názvu jako její TFA sůl. Čistota: 95 %.
‘H-NMR (600 MHz; CD3OD) rotamery: δ 7,8 - 7,7 (m, 2H), 7,6 - 7,5 (m, 2H), 7,21 (s, IH. většinový rotamer), 7,17 (s, 1H, menšinový rotamer), 7.13 (s, IH, většinový rotamer), 7,17 (s, IH, menšinový rotamer), 7,13 (s, IH, většinový rotamer), 7,09 (s, IH, menšinový rotamer), 7,07 (m, IH, většinový rotamer), 7,04 (m, IH, menšinový rotamer), 5,73 (d, 2H), 5,18 (m, IH, menšinový rotamer), 5,16 (s, IH, většinový rotamer), 5,09 (s, IH, menšinový rotamer), 4,78 (m, IH, menšinový rotamer), 4,56 (d, IH, většinový rotamer), 4,50 (d, IH, menšinový rotamer),
4,46 (d, IH, menšinový rotamer), 4,45 (d, IH, většinový rotamer), 4,35 (m, IH, většinový rotamer), 4,14 (m, IH, většinový rotamer), 4,05 (m, IH, menšinový rotamer), 3,97 (m, IH, většinový rotamer), 2,68 (m, IH, menšinový rotamer), 2,52 (m, IH, většinový rotamer), 2,28 (m, IH, většinový rotamer), 2,19 (m, IH, menšinový rotamer).
nC-NMR (150 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery) ó 173,9,
173,3, 172,9, 168,2.
ESI-MS+: (M+l) = 449 (m/z)
Příklad 20
Ph(3-Cl)(5-OCH2FHR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
K roztoku triethylaminové soli Ph(3-Cl) (5-OCH2FHR)CH(OH)C(O)OH (0,60 g, 1,80 mmol; viz příklad I9(vi)) a HAze-Pab(OMe).2HCl (0,79 g, 2,30 mmol) v DMF (15 ml) se pod atmosférou dusíku při teplotě 0 °C přidá PyBOP (1,04 g, 1.90 mmol) a DIPEA (0,58 g, 4,50 mmol). Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Reakční směs se koncentruje ve vakuu a mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním nejprve směsí CHCl3;EtOH (9 : 1) a poté dvakrát směsí EtOAc: EtOH (20 : 1) a získá se sloučenina uvedená v názvu (0,22 g, 26 %) jako rozmčlnitelná bílá pěna.
t.t.: 66 až 70 °C
Rf= 0,45 (9:1 CHCl3:EtOH) 'li NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů) δ 7,59 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 7 Hz. 2H), 7,06 - 7,23 (m, 3H), 5,75 (s, JH-F = 54 Hz, 1H), 5,10 - 5,16 a 4,78 - 4,84 (m, 2H),
4,11 - 4,45 (m, 4H). 3,80 (s, 3H), 2,10 - 2,75 (m, 2H).
C-NMR (150 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery) Ó 173.0,
170,8, 170,7, 152,5.
- 53 CZ 303708 B6
APCI-MS (M + 1) = 479 m/z
Příklad 21
Ph(3-CI) (5—OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) (2-Monofluorethyl)methansulfonát
K magneticky míchanému roztoku 2-fluorethanolu (5,0 g, 78 mmol) v CH2C12 (90 ml) se pod dusíkem přidá při teplotě 0 °C triethylamin (23,7 g, 234 mmol) a methansulfonylchlorid (10,7 g,
93,7 mmol). Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1,5 hodiny, zředí se CH2C12 (100 ml) a promyje se 2N HCl (100 ml). Vodná vrstva se extrahuje s CH2CI? (50 ml) a spojené organické extrakty se promyjí solankou (5 ml), suší se (Na2SO4), filtrují a koncentrují ve vakuu a získá se sloučenina uvedený v podnázvu (9,7 g, 88 %) jako žlutý olej, který se použije bez dalšího čištění.
'H NMR (300 MHz, CDCb) δ 4,76 (t, J = 4 Hz, IH), 4,64 (t, J = 4 Hz, IH), 4,52 (t, J = 4 Hz, 1H), 4,43 (t, J = 4 Hz, 1H), 3,09 (s, 3H).
(ii) 3-Chlor-5-monofluorethoxybenzaldehyd
K roztoku 3-ch i or-5-hydroxyben/aldehydu (8,2 g, 52,5 mmol, viz příklad l(ii) shora) a uhličitanu draselného (9,4 g, 68,2 mmol) v DMF (10 ml) se pod argonem přidá po kapkách a při teplotě místnosti roztok (2-monofluorethyl)methansulfonátu (9,7 g, 68,2 mmol; stupeň (i) shora) v DMF (120 ml). Směs se zahřívá na teplotu 100 °C po dobu 5 hodin a poté se míchá při teplotě místnosti pres noc. Reakční směs se ochladí na 0 °C, vlije se do ledem chlazené 2N HCl a extrahuje se s EtOAc. Spojené organické extrakty se promyjí solankou, suší se (Na2SO4), filtrují a koncentrují ve vakuu. Hnědý olej se chromatografuje na silikagelu eluováním směsí Hex:EtOAc (4 : 1) a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (7,6 g, 71 %) jako žlutý olej.
lH NMR (300 MHz, CDCb) δ 9,92 (s, IH), 7,48 (s, IH), 7,32 (s, IH), 7,21 (s, IH), 4,87 (t, J - 4 Hz, 1H), 4,71 (t, J = 3 Hz, 1H), 4,33 (t, J = 3 Hz, 1H), 4,24 (t, J = 3 Hz, 1H).
(iii) Ph(3-CH) (S-OCH2CH2F)-(R,S)CH(OTMS)CN
K. roztoku 3-chlor-5-monofluorethoxybenzaldehydu (7,6 g, 37,5 mmol, viz stupeň (ii) shora) a jodidů zinečnatého (3,0 g, 9,38 mmol) v CH2C12 (310 ml) se přidá po kapkách a při teplotě 0 °C pod dusíkem trimethylsilylkyanid (7,4 g, 75,0 mmol) Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 3 hodin a při teplotě místnosti přes noc. Reakční směs se zředí s vodou (300 ml), organická vrstva se oddělí, suší (Na2SO4), filtruje se a koncentruje ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (10,6 g, 94 %) jako hnědý olej, který se použije bez dalšího čištění nebo charakterizace.
(iv) Ph(3-Cl) (5-OCH2CH2F)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
100 ml koncentrované kyseliny sírové se přidá k Ph(3-Cl) (5-OCH2CH2F)-(R,S)CH(OTMS)CN (10.6 g, 5,8 mmol; viz stupeň (iii) shora) a roztok se míchá při teplotě 100 °C po dobu 3 hodin. Po ochlazení na teplotu místnosti se reakční směs dále ochladí na 0 °C, alkalizuje se pomalu 3N NaOH (cca 300 ml) a promyje se Et2O (3 x 200 ml). Vodná vrstva se okyselí 2N HCl (80 ml) a extrahuje se s EtOAc (3 x 300 ml). Spojené EtOAc extrakty se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (8,6 g, 98 %) jako světle žlutá pevná látka, která se použije bez dalšího čištění.
R,·= 0,28 (90:8:2 CHCE:MeOH:koncentrovaný NH4OH)
- 54 CZ 303708 B6 'H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,09 (s, IH), 7,02 (s, IH). 6,93 (s, IH), 5,11 (s, IH), 4,77-4,81 (m, 1H), 4,62 - 4,65 (m, 1H), 4,25 - 4,28 (m, 1H), 4,15 - 4,18 (m, 1 H).
(v) Ph(3-Cl) (5-OCH2CH2F)-(R,S)CH(OAc)C(O)OH (a) Ph(3-C1) (5-OCH2CH2FHR)CH(OH)C(O)OH (b)
Roztok Ph(3-Cl) (5-OCH2CH2F)-(R,S)CH(OH)C(0)OH (8,6 g, 34,5 mmol; viz stupen (iv) shora) a Lipase PS „Amano“ (4,0 g) ve vinylacetátu (250 ml) a MTBE (250 ml) se zahřívá na io 70 °C pod dusíkem po dobu 3 dnů. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a enzym se odstraní filtrací přes CelitFiltrační koláč se promyje s EtOAc a filtrát se koncentruje ve vakuu.
Chromatografií na silikagelu eluováním směsí CHCL:MeOH:Et3N (90:8:2) se získá triethy 1aminová sůl sloučeniny (a) uvedené v podnázvu jako žlutý olej. Dále se může získat sůl triethylaminové sloučeniny (b) (4,0 g) uvedené v podnázvu. Sloučenina (b) podnázvu se rozpustí ve vodě (250 ml), okyselí se 2N HCI a extrahuje se s EtOAc (3 x 200 ml). Spojené organické extrakty se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují ve vakuu a získá se sloučenina (b) (2,8 g, 32 %) uvedená v podnázvu jako žlutý olej.
Data pro sloučeninu (b) podnázvu:
Rf- 0,28 (90:8:2 CHCl3:MeOH: koncentrovaný NH4OH) 'HNMR (300 MHz, CD4OD) δ 7,09 (s, IH), 7,02 (s, IH), 6,93 (s, IH), 5,11 (s, IH), 4,77-4,81 (m, IH), 4,62 - 4,65 (m, 1H), 4,25 - 4,28 (m, 1H), 4,15 - 4,18 (m, 1H).
(vi) Ph(3-Cl) (5-OCH2CH2FHR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
K roztoku Ph(3-CI) (5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH (940 mg, 3,78 mmol; viz stupeň (v) shora) v DMF (30 ml) se pod dusíkem při teplotě 0 °C přidá HAze-Pab(Teoc).HCl (2,21 g,
4,91 mmol), PyBOP (2,16 g, 4,15 mmol), a DIPEA (1,22 g, 9,45 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C 2 hodiny a poté při teplotě místnosti 4 hodiny. Směs se koncentruje ve vakuu a zbytek se chromatografuje dvakrát na silikagelu, eluováním nejprve směsí CHCiyEtOH (15 : 1) a poté směsí EtOAc:EtOH) (20 : 1) a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (450 mg, 20 %) jako rozmělnitelná bílá pěna.
t.t.: 80 až 88 °C
Rf—0.60(10:1 CHCl3:EtOH) 'H NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů) 5 7,79 (d, J = 8 Hz. 2H), 7,42 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,05 - 7,08 (m, IH), 6.93 - 6,99 (m, 2H), 5,08 - 5,13 (m, IH), 4,75 4,80 (m,2H), 4,60-4,68 (m, 1H), 3,95 - 4,55 (m, 8H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,11 (m. 2H), 0,08 (s, 9H).
APCI-MS: (Μ + 1) = 607 m/z.
(vii) Ph(3-Cl) (5-OCH2CH2FHR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-Cl) (5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0.357 g, 0,589 mmol; viz stupeň (vi) shora), se rozpustí v 10 ml TFA a nechá se reagovat 40 minut. TFA se odpaří a zbytek se suší vymrazováním ze směsi vody a acetonitriíu a získá se 0,33 g (93 %) sloučeniny uvedené v názvu jako její TFA sůl.
'HNMR (600 MHz, CD3OD) rotamery: 6 7,8 - 7,7 (m. 2H). 7.54 (d, 2H). 7.08 (s, IH, většinový rotamer). 7,04 (s. IH, menšinový rotamer), 6,99 (s, IH, většinový rotamer), 6,95 (s. IH). 6.92
- 55 CZ 303708 R6 (s, IH, menšinový rotamer), 5,18 (m, IH, menšinový rotamer), 5,14 (s, 1 H, většinový rotamer), 5,08 (s, IH, menšinový rotamer), 4,80 (m, IH, většinový rotamer), 4,73 (m, IH), 4,65 (m, IH),
4,6 - 4,4 (m, 2H), 4,35 (m, IH, většinový rotamer), 4,21 (dublet multipletů; 2H), 4,12 (m, IH, většinový rotamer), 4,06 (m, IH, menšinový rotamer), 3,99 (m, IH, menšinový rotamer), 2,69 (m, IH, menšinový rotamer), 2,53 (m, IH, většinový rotamer), 2,29 (m, IH, většinový rotamer), 2,14 (m, 1H, menšinový rotamer).
nC-NMR (150 MHz; CD3OD): (karbonylová a/nebo amidinové uhlíky) δ 172,8, 172,1, 167,4, ESI-MST: (M+l) = 463 (m/z)
Příklad 22
Ph(3—Cl) (5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
K roztoku Ph(3-CI) (5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH (818 mg, 3,29 mmol; víz příklad 21 (v) shora) v DMF (30 ml) se pod dusíkem pri teplotě 0°C přidá HAze-Pab(Teoc).2HCl (1,43 g, 4,27 mmol), PyBOP (1,89 g, 3,68 mmol), a DIPEA (1,06 g, 8,23 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 2 hodin a poté při teplotě místnosti přes noc. Směs se koncentruje ve vakuu a zbytek se chromatografuje dvakrát na silikagelu, eluováním nejprve směsí CHCI2:EtOH (15 : 5) a poté směsí EtOAc:EtOH) (20 : 1) a získá se sloučenina uvedená v názvu (880 mg, 54 %) jako rozmělnitelná bílá pěna.
t.t.: 65 až 72 °C
Rf= 0,60 (10:1 CHCf:EtOH) !H NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů) δ 7,58 - 7,60 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 7 Hz, 2H), 7,05 - 7,08 (m, 2H), 6,95 - 6,99 (m, 1H), 5,08 - 5,13 (m, l H), 4,77 - 4,82 (m, IH), 4,60 - 4,68 (m, 1H), 3,99 - 4,51 (m, 7H), 3,82 (s, 3H), 2,10 - 2,75 (m, 2H).
BC-NMR (150 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidové uhlíky) δ 173,3, 170,8, 152,5. APCI-MS: (Μ + 1) = 493 m/z.
Příklad 23
Ph(3-Cl) (5—OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) 1,3-Difluorizopropylmethansulfonát
K magneticky míchanému roztoku l,3-dÍfluor-2-propanolu (7,0 g, 72.8 mmol) v CH2C12 (100 ml) se pod dusíkem při teplotě 0 °C přidá triethylamin (22,1 g, 219 mmol) a methansulfonylchlorid (10,0g, 87.4 mmol). Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 3 hodiny. Směs se promyje 2N HCI (150 ml) a vrstvy se oddělí. Vodná vrstva se extrahuje s CH2C12 (200 ml) a spojené organické extrakty se promyjí solankou (10 ml), suší se (Na2SO4), filtrují se a koncentrují se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (11,5 g, 91 %) jako žlutý olej, který se použije bez dalšího čištění.
'H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4,97 - 5,08 (m, IH), 4,75 - 4,77 (m, 2H), 4,59 - 4,61 (m, 2H),
3,12 (s,3H).
- 56 CZ 303708 Β6 (ii) Ph(3-Cl) (5-OCH(CH2F)2)CHO
K roztoku 3-ehlor-5-hydroxybenzaldehydu (8,0 g, 50.7 mmol; viz příklad l(ii) shora) a uhličitanu draselného (9,1 g, 66,0 mmol) v DMF (75 ml) se přidá po kapkách při teplotě místnosti pod dusíkem roztok 1,3-difluorizopropylmethansulfonátu (11,5 g, 66,0 mmol; viz stupeň (i) shora) v DMF (75 ml). Směs se zahřívá na 110 °C po dobu 18 hodin. Reakční směs se ochladí na 0 °C. vlije se do ledem chlazené 2N HCI (200 ml) a extrahuje se s EtOAc (3 x 250 ml). Spojené extrakty se extrahují a suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují ve vakuu. Hnědý olej se chromatografuje na silikagelu eluováním směsí Hex:EtOAc (4 : 1) a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (4,4 g, 37 %)jako žlutý olej.
'H NMR (300 MHz. CDCh) δ 9,92 (s, IH), 7,51 (s, IH), 7,36 (s, IH), 7,26 (s, IH), 4,70-4,89 (m,3H), 4,63 -4,68 (m, 2H).
(iii) Ph(3-Cl) (5-OCH(CH2F)2HR,S)CH(OTMS)CN
K roztoku Ph(3-Cl) (5-OCH(CH2F)2)CHO (4,4 g, 18,7 mmol; viz stupeň (ii) shora) a jodidů zinečnatého (1,5 g, 4.67 mmol) i v CH2CÍ2 (200 ml) se při teplotě 0 °C pod dusíkem přidá po kapkách trimethylsilylkyanid (3.7 g, 37,3 mmol). Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 3 hodin a přes noc při teplotě místnosti a poté se zředí s vodou (200 ml). Organická vrstva se oddělí, suší (NH2SO4), filtruje se a koncentruje ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (5,5 g, 87 %) jako hnědý olej, který se použije bez dalšího čištění.
lH NMR (300 MHz, CDCh) δ 7,12 (s, IH), 7,00 (s, 2H), 5,42 (s, 1H), 4,70 - 4,80 (m, 3H), 4,59 -4,64 (m, 2H), 0,26 (s, 9H).
(iv) Ph(3-Cl) (5-OCH(CH2F)2)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
Koncentrovaná kyselina chlorovodíková (50 ml) se přidá k Ph(3-Cl) (5-OCH(CH2F)2) (R,S)CH(OTMS)CN (5,5 g, 16,3 mmol; viz stupeň (iii) shora) a roztok se míchá při teplotě 100 °C po dobu 1,5 hodiny. Po ochlazení na teplotu místnosti se reakční směs dále ochladí na teplotu 0 °C, alkalizuje se pomalu 3N NaOH (cca 200 ml) a promyje se Et2O (3 x 200 ml). Vodná vrstva se okyselí 2N HCI (75 ml) a extrahuje se s EtOAc (3 x 200 ml). Spojené EtOAc extrakty se suší (Na2SO4), filtrují se a koncentrují ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (4,6 g, 100 %) jako hnědý olej, který se použije bez dalšího čištění.
‘HNMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,14 (s, IH), 7,08 (s, IH), 7,02 (s, IH), 5,12 (s, IH), 4,70-4,90 (m, 3H), 4,52-4,67 (m,2H).
(v) Ph(3-Cl) (5-OCH(CH2F)2)-(S)CH(0Ac)C(O)OH (a) a Ph(3-Cl) (5-OCH(CH3F)2HR)CH(OH)C(O)OH (b)
Roztok Ph(3-Cl) (5-OCH(CH2F)2)-(R,S)CH(OH)C(O)OH (4.6 g, 16,4 mmol; viz stupeň (iv) shora) a Lipase PS „Amano“ (3,0 g) ve vinylacetátu (150 ml) a MTBE (150 ml) se zahřívá na 70 °C pod dusíkem 2,5 dnů. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a enzym se odstraní filtrací přes Celit*5. Filtrační koláč se promyje s EtOAc a filtrát se koncentruje ve vakuu. Chromatografií na silikagelu eluováním směsí CHCl3:MeOH:Et3N (90:8:2) se získá triethylaminová sůl sloučeniny (a) uvedené v podnázvu jako žlutý olej. Dále se může získat sůl triethylaminové sloučeniny (b) (2,2 g) uvedené v podnázvu a sůl se rozpustí ve vodě (100 ml), okyselí se 2N HCI a extrahuje se s EtOAc (3 x 200 ml). Spojené organické extrakty se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují ve vakuu a získá se sloučenina (b) (1.4 g, 29 %) uvedená v podnázvu jako žlutý olej.
- 57CZ 303708 B6
Data pro sloučeninu (b) podnázvu:
H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,14 (s, IH), 7,08 (s, IH), 7,02 (s, IH), 5,12 (s, IH), 4,70-4,90 (m, 3H), 4,52-4,67 (m, 2H).
(vi) Ph(3—Cl) (5-OCH(CH2F)2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
K roztoku Ph(3-Cl) (5-OCH(CH2F)2HR)CH(OH)C(O)OH (824 mg, 2,94 mmol; viz stupeň (v) shora) v DMF (30 ml) se pod dusíkem při teplotě 0 °C přidá HAze-Pab(Teoc).HCl (1,71 g, 3,81 mmol), PyBOP (1,68 g, 3,23 mmol), a D1PEA (949 mg, 7,34 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 2 hodin a poté při teplotě místnosti přes noc. Směs se koncentruje ve vakuu a zbytek se chromatografuje na silikagelu, eluováním nejprve směsí CHCl3:EtOH (15 : 1) a poté směsí EtOAc:EtOH (20 : 1) a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (720 mg, 38 %) jako rozmělnitelná bílá pěna.
t.t.: 78 až 84 °C
Rf= 0,62 (10:1 CHClgEtOH) 'H NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů) δ 7,79 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,00 - 7,12 (m, 3H), 5,08 - 5,20 (m, IH), 3,97 - 4,80 (m, 12H), 2,10 - 2,75 (m, 2H), 1,05 - 1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
APCI-MS: (M + 1) = 639 m/z.
(vii) Ph(3-Cl) (5-OCH(CH2F)2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3—Cl) (5-OCH(CH2F)2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,129 g, 0,202 mmol; viz stupeň (vi) shora), se rozpustí ve 3 ml TFA a nechá se reagovat 20minut.TFAse odpaří a zbytek se suší vymrazováním ze směsi vody a acetonitrilu a získá se 0,123 g (100%) sloučeniny uvedené v názvu jako její TFA sůl.
'H NMR (400 MHz, CD3OD) rotamery: δ 7,8 - 7,7 (m, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,2 - 7,0 (m, 3H), 5,18 (m, IH, menšinový rotamer), 5,15 (s, IH, většinový rotamer), 5,08 (s, IH, menšinový rotamer), 4,80 (m, IH, většinový rotamer částečně zahalen pikem CD3OH), 4,75 - 4,4 (m, 7H), 4,38 (m, IH, většinový rotamer), 4,15 (m, IH, většinový rotamer), 4,1 - 3,9 (m, 2H, 2 signály z menšinového rotamerů), 2.70 (m, IH, menšinový rotamer), 2,53 (m, IH, většinový rotamer), 2,30 (m, 1H, většinový rotamer), 2,15 (m, 1H, menšinový rotamer).
nC-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amídínové uhlíky, rotamery) Ó 172,9,
172,6, 172,2, 171,7, 167,1.
ESI-MS+: (M+l) 495 (m/z)
Příklad 24
Ph(3-C!) (5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(0H)C(O)-Aze-Pab(OMe)
K roztoku Ph(3-Cl) (5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)OH (513 mg, 1,83 mmol; viz příklad 23(v) shora) v DMF (30 ml) se pod dusíkem a při teplotě 0 °C přidá HAze-Pab(OMe).2HCl (797 mg, 2,38 mmol), PyBOP (1,04 g, 2,01 mmol) a DÍPFA (591 mg, 4,57 mmol). Reakční směs se koncentruje ve vakuu a zbytek se chromatografuje dvakrát na silikagelu, eluováním nejprve směsí CHCl+.EtOH (15 : 1) a poté směsí EtOAc:EtOH (20 ; 1) a získá se sloučenina uvedená v názvu (370 mg, 39 %) jako rozmělnitelná bílá pěna.
- 58 CZ 303708 B6
t.t.: 58 až 63 °C
Rf= 0,66 (10:1 CHCUEtOH) 'H NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů) δ 7,58 - 7,60 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,34 (d, J - 8 Hz, 2H), 7,00 - 7,12 (m, 3H), 5,08 - 5,20 (m, IH), 4,65 - 4,82 (m, 3H), 4,28 - 4,65 (m, 5H), 3,92 - 4,18 (m, 2H), 3,82 (s, 3H), 2,10 - 2,75 (m, 2H.
io nC-NMR(150 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky) δ 173,2, 170,8, 152,5. APCI-MS: (Μ + 1) = 525 m/z.
Příklad 25
Ph(3—F) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) 1 -Brom-3-fiuor-5-benzyloxybenzen
Hydrid sodný (60% disperze v oleji, 24,0 g, 0,48 mol) se přidá po částech k míchanému roztoku bezvodého alkoholu (64,5 g, 0,60 mol) v THF (1,0 1). Směs se míchá 1 hodinu a po kapkách se přidá během 1 hodiny roztok l-brom-3,5-difluorbenzenu (76,8 g, 0,40 mmol) v THF (100 ml). Reakční směs se míchá pri teplotě místnosti 2 dny. Přidá se voda (400 ml) a THF se odstraní ve vakuu. Vodná vrstva se extrahuje hexanem (3 x 150 ml). Spojené organické se promyjí 2N NaOH (2 x 100 ml), suší se (Na2SO4), filtrují se a koncentrují se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (110,7 g, 98 %) jako světle žlutý' olej, který' se použije bez dalšího čištění.
Rf-0.47(He\) 'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,37 - 7,41 (m, 5H), 6,94 (bs, IH), 6,87 (d, JH_F = 8 Hz, 1H), 6,63 (d, JH-f -= 10 Hz, 1H), 5,03 (s, 2H).
(ii) 3-Brom-5-fluorfenol
K roztoku l-brom-3-fluor-5-benzyloxybenzenu (110,0 g, 0,39 mol; viz stupeň (i) shora) a Ν,Ν-dimethy lani linu (474 g, 3,92 mol) v bezvodém CH2C12 (1,0 1) se při teplotě 0 °C přidá chlorid hlinitý (156,0 g, 1,17 mol). Po 10 minutách se ledová lázeň odstaví a míchání pokračuje 2 hodiny. Reakce se zastaví opatrným přidáváním 3N HCI (600 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje sCH2C12 (2 x 150 ml). Spojené organické extrakty se promyjí 2N HCI (250 ml) a vodou (3 x 250 ml). K organické vrstvě se přidá 15% KOH (500 ml) a vrstvy se oddělí. Organická vrstva se dále extrahuje s 2N KOH (2 x 70 ml). Spojené vodné vrstvy se promyjí s CH2C12 (3 x 100 ml) a poté se okyselí 4N HCI. Vodná vrstva se extrahuje s Et2O (3 x 125 ml), spojené extrakty se suší (Na2SO4), filtrují se a koncentrují ve vakuu a získá se sloučenina uvede45 ná v podnázvu (69,0 g, 92 %) jako hnědý olej, který se použije bez dalšího čištění.
t.t.: 33 až 35 °C
Rť = 0,25 (CHCb) 'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,38 (s, 1 H), 6,90 (dd, JH-f = 1 1 Hz, J - 2 Hz, 1 H), 6,81 (s, 1H), 6,59 (dt, Jh_f = 11 Hz, J = 2 Hz, 1H).
APCI-MS: (M-l) ’ 189 m/z
- 59 CZ 303708 B6 (i i i) 1 -Brom-3-fiuor-5-difluormethoxybenzen
Směs 3-brom-5-fluorfenolu (6,1 g, 31,0 mmol; viz stupeň (ii) shora) a chlordifluormethanu (13,0 g, 150,0 mmol) v i-PrOH (100 ml) a 30% KOH (80 ml) se zahřívají v utěsněné nádobě po dobu 18 hodin při teplotě 80 až 85 °C. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a vrstvy se oddělí. Organická fáze se koncentruje ve vakuu a získá se bezbarvý olej. Vodná vrstva se extrahuje s EbO (3 x 30 ml). Surový olej a spojené organické extrakty se promyjí s 2N NaOH (3 x 30 ml) a vodou (3 x 30 ml). Organické podíly se suší (Na2SO4), filtrují se přes malou zátku silikagelu, koncentrují se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (6,1 g, 79 %) jako io bezbarvý olej, který se použije bez dalšího čištění.
'H NMR (300 MHz, CDCl,) δ 7,11 - 7,14 (m, 2H), 6,84 (dt, J = 9 Hz, J = 2 Hz, IH), 6,50 (t,J„ f = 72Hz, IH).
t5 (iv) l-Fluor-3-difluormethoxy-5-vinylbenzen
Tri(butyl)vinylstannan (7,0 g, 22,2 mmol) se přidá pod atmosférou dusíku při teplotě 65 °C k suspenzi l-brom-3-fluor-5-difluormethoxybenzenu (4,9 g, 20,2 mmol; viz stupeň (iii) shora), dichlorbis(trifenylfosfin)palladiu (II) (1,42 g, 20,2 mmol) v THF (40 ml) a směs se míchá
5 hodin. Reakční směs se ochladí na 0 °C a přidá se IN NaOH (90 ml). Dvoufázová směs se intenzivně míchá 1 hodinu a vrstvy se oddělí. Vodná vrstva se extrahuje s Et2O (3 x 70 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí s 2N NaOH (2 x 40 ml) a vodou (40 ml) a suší se (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Mžikovou chromatografii na silikagelu s hexanem se získá sloučenina uvedená v podnázvu (2,2 g, 57 %) jako bezbarvý olej.
R, -0,47 (Hex) 'H NMR (300 MHz, CDCb) δ 6,93 - 6,99 (m, 2H), 6,73 - 6,78 (m, IH), 6,67 (dd, J = 18 Hz, J= 11 Hz, 1H), 6,51 (t, Jh_f = 73 Hz, 1H), 5,77 (d, J = 18 Hz, IH), 5,36 (d,J = 11 Hz, IH).
(v) Ph(3-F) (5-OCHF2HR)CH(OH)CH2OH
2-Methyl-2-propanol (140 ml), voda (140 ml) a AD-mix-β (39,2 g) se spojí a ochladí se na 0 °C. Najednou se přidá l lluor-3-difluormethoxy -5-vinylbenzen (5,0 g, 26,4 mmol; viz stupeň (iv) shora) rozpuštěný v malém množství 2-methy 1-2-propanolu a heterogenní kaše se intenzivně míchá při teplotě 0 °C dokud TLC nevykazuje nepřítomnost výchozího materiálu. Reakce se zastaví při teplotě 0 °C přidáním siřičitanu sodného (42,0 g) a poté se směs zahřeje na teplotu místnosti a míchá se 60 minut. Reakční směs se extrahuje s Et2O (3 x 120 ml). Spojené organické extrakty se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Mžikovou chromatografii na silika40 gelu eluováním směsí CHClfEtOAc (3:2) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (5.8 g, 98 %) jako bezbarvý olej,
Rf = 0,41 (3:2 CHCl3:EtOAc) ’H NMR (300 MHz, CDCb) δ 6,96 - 6,99 (m, 2H), 6.77 - 6,82 (m, 1 H), 6,51 (t, JH-f = 73 Hz, IH), 4,79-4,85 (m, 1H), 3,76 - 3,84 (m, IH), 3,58 - 3,66 (m, lli), 2,66 (d, J = 3 Hz, IH), 2.00 (t,J = 6Hz, IH).
Analýza HPLC: 89,2 %. > 99 % ee, ChiralPak AD Column (mobilní fáze 95:5 Hex:EtOH).
(vi) Ph(3-F) (50CHF2HR)CH(OH)CH2OTBS
Roztok Ph(3-F) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OH (5,5 g, 24.7 mmol; viz stupeň (v) shora). 4—<díinethy!amino)pyridinu (121 mg, 1,0 mmol) a triethylaminu (3,0 g, 29,6 mmol) v bezvodém
CILCL (100 ml) se ochladí na 0 °C. Po kapkách se přidá LOM roztok terc-butyldimethylsilyl-60CZ 303708 B6 chloridu v CH2Ch (26,0 ml, 26,0 mmol) a reakční směs se nechá zahřát na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Přidá se nasycený roztok chloridu amonného (60 ml) a vrstvy se rozdělí. Organická vrstva se promyje s nasyceným roztokem chloridu amonného (60 ml) a vodou (2 x 35 ml), suší se (Na2SO4), filtruje a koncentruje ve vakuu. Mžikovou chromatografií na silika5 gelu eluováním směsí CHChHex (3 : 1) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (7,9 g, 85 %) jako žlutý olej.
Rf= 0,47 (3:1 CHCI3:Hex) io lH NMR (300 MHz, CDCh) δ 6,95 - 6,98 (m, 2H), 6,76 - 6,79 (m, IH), 6,51 (t, JK-f = B Hz, IH), 4,71 -4,74 (m, IH), 3,75 - 3,80 (m, IH), 3,48- 3,54 (m, IH), 2,99 (bs, IH), 0,91 (s, 9H), 0,05 (s,3H), 0,00 (s,3H).
(vii) Ph(3-F) (5-OCHF2HR)CH(OMEM)CH2OTBS
K roztoku Ph(3-F) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OTBS (7,9 g, 0,51 mmol; viz stupeň (vi) shora) a DIPEA (4,9 g, 48,1 mmol) v bezvodém CH2C12 (50 ml) se při teplotě 0 °C pod dusíkem přidá po kapkách 2-methoxyethoxymethylchlorid (6,6 g, 48,1 mmol). Směs se míchá 24 hodin. Přidá se nasycený roztok chloridu amonného (70 ml) a vrstvy se oddělí. Organická vrstva se promyje nasyceným roztokem chloridu amonného (70 ml) a vodou (3 x 60 ml) a poté se suší (Na2SO4), filtruje a koncentruje ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (8,0 g, 99 %) jako žlutý olej, který se použije bez dalšího čištění.
Rf=0,41 (4:1 CHCf.EtOAc) ’H NMR (300 MHz, CDCh) δ 7,20 (s, IH), 7,06 (s, IH), 7,02 (s, IH), 6,50 (t, JH-f = 73 Hz, 1 H), 4J9 - 4,81 (ni, IH), 4,66 - 4,68 (m, 2H), 3,47 - 3,82 (m, 6H), 3,36 (s, 3H), 0,85 (s, 9H). 0.01 (s, 3H), 0,00 (s, 3H).
(viii) Ph(3-F) (5-OCHF2HR)CH(OMEM)CH2OH
K roztoku Ph(3-F) (5-OCHF2>-(R)CH(OMEM)CH2OTBS (9,3 g, 21,9 mmol; viz stupeň (vii) shora) v THF (60 ml) se při teplotě místnosti přidá 1,0 M roztok tetrabutylamoniumťluoridu v THF (70,0 ml, 70,0 mmol) a směs se míchá přes noc pod dusíkem. Reakční směs se koncent35 ruje ve vakuu. Žlutý zbytek se rozpustí v Et2O (100 ml) a hexanu (100 ml) a postupně se promyje s nasyceným roztokem chloridu amonného (2 x 150 ml) a vodou (3 x 70 ml). Organická vrstva se suší (Na2SO.4), filtruje se a koncentruje se ve vakuu. Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním směsí Hex:EtOAc (1:1) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (4,2 g, 62 %) jako žlutý olej.
Rf= 0,42 (1:1 Hex:EtOAc) 'H NMR (300 MHz, CDCh) δ 6,91 - 6,95 (m, 2H), 6,75 - 6,81 (m, 1H), 6,51 (t, JH f = 73 Hz,
H), 4,80 - 4.82 (m, 111), 3,53 - 3,56 (m, 2H), 3,39 (s, 3H), 2.96 - 2,99 (m, 1H).
(ix) Ph(3-F) (5-OCHF2MR)CH(OMEM)C(O)OH
Roztok Ph(3-F) (5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OH (4.2 g, 13.4 mmol; viz stupeň (viii) shora) v acetonu (100 ml) se přidá k vodnému 5% roztoku NaHCO3 (35 ml). Tato magneticky míchaná heterogenní fáze se ochladí na0°C a přidá se bromid draselný (159 mg. 1,3 mmol) a volný radikál 2,2,6,6-tetramethyl-l-piperidinyIoxy (2,2 g, 14,1 mmol). Poté se po kapkách přidá během 20 minut chlornan sodný (5,25%. 30 ml), přičemž se směs intenzivně míchá a teplota se udržuje na 0 °C. Po 1 hodině se přidá další chlornan sodný (30 ml) a 5% roztok Nal ICO (35 ml) a míchání pokračuje při teplotě 0 °C po dobu 2 hodin. Aceton se odstraní ve vakuu. Vodná vrstva se promyje s EtO (4 x 40 ml). Vodná vrstva se okyselí na pH 3.5 10% kyselinou citrónovou
- 61 CZ 303708 Β6 a extrahuje se s EtOAc (4 x 50 ml). Spojené EtOAc extrakty se postupně promyjí s vodou (4 x 30 ml) a solankou (60 ml) a suší se (Na2SO4), filtrují se a koncentrují ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (4,3 g, 98 %) jako bezbarvý olej, který se použije bez dalšího čištění.
Rf= 0,74 (8,0:1,5:0,5 CHCl3:MeOH:Et3N)
Ή NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 7,16 - 7,18 (m, 2H), 7,16 (t, JH_F = 89 Hz, IH), 7,00 - 7,03 (m, IH), 5,30 (s, IH), 4,88 (d, J - 7 Hz, IH), 4,80 (d, J = 7 Hz, IH), 3,543 - 3,75 (m, 2H),
3,46 - 3,49 (m, 2H), 3,28 (s, 3H).
(x) Ph(3-F) (5-OCHF2HR)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
K roztoku Ph(3-F) (5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH (1,1 g, 3,4 mmol; viz stupeň (ix) shora) v DMF (20 ml) se pod dusíkem při teplotě 0 °C přidá HAze-Pab(Teoc).HCl (2,0 g, 4,4 mmol), PyBOP (1,9 g, 3,7 mmol), a DIPEA (1,1 g, 8,4 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 2 hodin a poté při teplotě místnosti přes noc. Směs se koncentruje ve vakuu a zbytek se chromatografuje na silikagelu eluováním nejprve směsí CHCl3:EtOH (15:1) a poté s RtOAc:EtOH (20:1) a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (1,3 g, 56 %) jako rozmělnitelná bílá pěna.
Rf = 0,65 (15:1 CHCl3:EtOH) 'H NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů) δ 7,80 - 7,84 (m, 2H), 7,40 - 7,46 (m, 2H), 6,96 - 7,16 (m, 3H), 6,92 a 6,88 (t, JH-f = 73 Hz, IH), 5,28 a 5,08 (s, IH), 5,18 - 5,22 a 4,70 - 4,78 (m, IH), 4,50 - 4,75 (m, IH), 4,30 - 4,49 (m, 2H), 4,21 - 4,26 (m, 3H), 3,97 - 4,08 (m, IH), 3,35 - 3,72 (m, 6H), 3,30 (s, 3H), 2,10 - 2,75 (m, 2H), 1,05 - 1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
(xi) Ph(3-F) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
Směs Ph(3-F) (5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (590 mg, 0,87 mmol; viz stupeň (x) shora) a bromidu uhličitého (287 mg, 0,87 mmol) v 2-propanolu (20 ml) se zahřívá při zpětném toku 1,5 hodiny. Směs se koncentruje ve vakuu, poté se rozdělí s vodou (50 ml a EtOAc (3 x 50 ml). Vodná vrstva se extrahuje s dalším EtOAc (2x10 ml). Spojené organické extrakty se promyjí solankou (30 ml) a poté se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují ve vakuu. Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním směsí CHCl3:EtOH (15:1) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (60 mg, 12 %) jako rozmělnitelná bílá pěna.
Rf = 0,46 (15:1 CHClyEtOH) 'H NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů) δ 7,74 (d, J - 8 Hz, 2H). 7,35 - 7,37 (m, 2H), 6,97 - 7,07 (m. 2H), 6,80 - 6,84 (m, 1H), 6,82 a 6,80 (t, JH_F = 73 IIz, 1H), 5,10 a 5,06 (s, 1H), 4,68-4,70 (m, 1 H), 3,97 - 4,60 (m, 6H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
APCI-MS: (M + 1)-595 m/z (xii) Pb(3-F) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-F) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,053 g, 0,089 mmol; viz stupeň (xi) shora) se rozpustí v 3 ml TFA a směs se nechá reagovat 80 minut, přičemž se chladí v ledové lázni. TFA se odpaří a zbytek se suší vymrazováním ze směsi vody a acetonitrilu a získá se 0,42 g (80 %) sloučeniny uvedené v názvu jako její TFA sůl.
- 62 CZ 303708 B6 ‘H NMR (300 MHz, CD3OD) rotamery: δ 7,7 - 7,6 (m, 2H), 7,5 - 7,4 (m, 2H), 7,1 - 7,6 (m, 4H),
5,2 - 5,0 (m, 1H plus menšinový rotamer 1H), cca 4,8 (většinový rotamer předchozího signálu je překryt signálem CD3OH), 4,6 - 4,3 (m, 2H), 4,26 (m, IH, většinový rotamer), 4,10 (tn, 1 H, většinový rotamer), 3.96 (m, IH, menšinový rotamer), 3,89 (m, IH, menšinový rotamer), 2,60 (m, IH, menšinový rotamer), 2,44 (m, IH, většinový rotamer), 2,19 (m, IH, většinový rotamer),
2,05 (m, IH, menšinový rotamer).
I3C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky) δ 172,8, 172,0, 167,0, io ESI-MS+: (M+l) -451 (m/z)
Příklad 26
Ph(3-F) (5—OCHF2) (R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) (i) Ph(3-F) (5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe)
K roztoku Ph(3-F) (5-OCHF2)-(K)CH(OMEM)C(O)OH (1,0 g, 3,1 mmol; viz příklad 25(ix) shora) v DMF (30 ml) se přidá pod dusíkem při teplotě 0 °C HAze-Pab(OMe).2HCI (1,4 g, 4,1 mmol), PyBOP (1,8 g, 3,4 mmol), a DIPEA (1,0 g, 7,8 mmol). Reakční směs se míchá pri teplotě 0 °C po dobu 2 hodin a poté pri teplotě místnosti přes noc. Směs se koncentruje ve vakuu a zbytek se chromatografuje dvakrát na silikagelu, eluováním nejprve CHClyEtOH (15 : 1) a poté s EtOAc a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (1,5 g, 79 %) jako rozmělnitelná bílá pěna.
Rf= 0,24 (EtOAc) 'H NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů) δ 7,58 - 7,62 (m, 2H), 7,32 - 7,38 (m,2H), 7,03 -7,16 (m, 3H), 6,92 a 6,88 (d, JH-f = 73 Hz, IH), 5,27 a 5,08 (s, IH), 5,22-5,15 a4,75 - 4,80 (m, IH), 4,38 - 4,65 (m, 5H), 3,92 - 4.27 (m, IH), 3,82 (s, 3H), 3,43 - 3,68 (m, 4H), 3,29 (s, 3H), 2,28 - 2,85 (m, 2H).
(ii) Ph(3-F) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
Směs Ph(3-F) (5-OCHF2HR)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe) (828 mg, 2,33 mmol; viz stupeň (i) shora) a bromidu uhličitého (525 mg, 2,33 mmol) ve 2-propanolu (20 ml) se zahřívá při zpětném toku 8 hodin a poté se míchá pří teplotě místnosti přes noc. Smčs se koncentruje ve vakuu a zbytek se rozdělí s vodou (70 ml a EtOAc (50 ml). Vodná vrstva se extrahuje s EtOAc (2 x 25 ml). Spojené organické extrakty se promyjí solankou (35 ml) a poté se suší, filtrují a koncentrují se ve vakuu. Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním směsí ClICl3:EtOH (15 : 1) se získá sloučenina uvedená v názvu (520 mg, 74 %) jak rozmělnitelná bílá pěna.
t.t.: 73 až 81 °C
Rf= 0,43 (15:1 CHClf EtOH) ’H NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů) δ 7,59 (d, J = 8 Hz. 2H). 7,32 - 7.37 (m,2H). 7,05 -7.14 (m, 2H). 6.87-6,92 (m, 111), 6,90 a 6.86 (t, JH-f = 73 Hz, IH), 5,13 - 5.18 a 4.75 - 4,85 (m, 2H), 4,15 - 4,45 (m, 4H). 3.81 (s, 3H), 2,10 - 2,75 (m, 2H).
13C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky) δ 172,0, 171,4, 153,9
APCI-MS: (M+ 1)-481 m/z
-63 CZ 303708 B6
Příklad 27
Ph(3-Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) 1,3-Dibrom-5-benzyloxybenzen
Hydrid sodný (9,9 g, 0,414 mol, suchý, 95%) se přidá pri teplotě místnosti a v atmosféře dusíku po částech k míchanému roztoku benzylalkoholu (41,0 g, 0,394 mol) v THF (1,01) a směs se ío míchá 1 hodinu. K tomuto roztoku se přidá po kapkách 1,3-dibrom-5-fluorbenzen (100,0 g,
0,394 mmol). Směs se míchá přes noc a poté se rozdělí s vodou (600 ml) a EtOAc (4 x 600 ml).
Spojené organické extrakty se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním hexany se získá sloučenina uvedená v podnázvu (101,3 g, 75 %) jako žlutý olej.
lH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,30 - 7,48 (m, 5H), 7,18 (s, IH), 7,06 (s, 2H), 4,99 (s, 2H).
(ii) 3,5-Dtbromofenol
Chlorid amonný (11,7 g, 87,6 mmol) se přidá po částech k roztoku 1,3-dibrom-5-benzyloxybenzenu (10,0g, 29,2 mmol; viz stupeň (i) shora) a N,N-dimethylaniIinu (35,4 g, 292 mmol) v CH2C12 při teplotě místnosti a pod atmosférou dusíku. Po 30 minutách se směs rozdělí s IN HCl (300 ml) a EtOAc (5 x 150 ml). Spojené organické extrakty se promyjí nasyceným roztokem NaHCO-i (150 ml) a solankou, suší se (Na2SO4), filtrují se a koncentrují se ve vakuu. Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním směsí Hex:EtOAc (9 : 1) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (6,1 g, 82 %) jako bílá pevná látka. lH NMR (300 MHz, CDCfi) δ 7,21 (s, IH), 6,97(s,2H), 5,88 (bs, IH).
(iii) 1,3-D ibrom-5-monofiuormethoxy benzen
K tárované, utěsněné 350 ml tlakové baňce obsahující suspenzi 3,5-dibrom fenolu (10,0 g,
39,7 mmol; viz stupeň (ii) shora) a Cs2CO3 (20,7 g, 63,5 mmol) v DMF (150 ml) se pri teplotě -78 °C přidá chlorfluormethan probubláváním po dobu 5 minut přes septum. Septum se nahradí teflonovým uzávěrem a nádoba se poté utěsní a nechá se ohřát na teplotu místnosti, kdy se zváží a stanoví se obsah 9,0 g (131 mmol) chlorfluormethanu. Roztok se zahřívá v olejové lázni přes noc na teplotu 70 °C. Nádoba se ochladí na teplotu místnosti, tlak se opatrně uvolní a obsah se zředí vodou (100 ml). Vodná vrstva se extrahuje s Et2O (3 x 200 ml) a poté se organické podíly spojí a suší se (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Mžikovou chromatografií na silíka40 gelu eluováním s hexany se získá sloučenina uvedená v podnázvu (7,9 g, 71 %) jako bílá pevná látka.
lH NMR (300 MHz, CDCfi) δ 7,40 (s, 1H), 7,18 (s, 2H), 5,67 (d, Jh_f = 53 Hz, 2H).
(iv) l-Brom-3-monofluormethoxy-5-vinylbenzen
Tri(butyl)vinyItin (10.0 g, 31,4 mmol) se přidá pod dusíkem po kapkách k roztoku U dibrom5-monofiuormethoxybenzenu (8,5 g, 29,9 mmol; viz stupeň (iii) shora), tetrakis(trifenylfosfin)palladiu(O) (690, 0,599 mmol) a 2,6—dí- terc-butyl-4-methylfenolu (špička špachtle) v toluenu (100 ml). Směs se míchá při teplotě 70 °C po dobu 8 hodin. Směs se ochladí na 0 °C a přidá se
IN NaOH (70 ml). Po 1 hodině se směs extrahuje s ClFCb (3 x 300 ml), spojené organické podíly se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním s hexany se získá sloučenina uvedená v podnázvu (4,3 g, 57 %) jako bezbarvý olej.
- 64CZ 303708 B6 'H NMR (300 MHz, CDCb) δ 7,30 (s, IH), 7,16 (s, IH), 7,01 (s, IH), 6,60 (dd, J -6 Hz,
J = 11 Hz, IH), 5,74 (d, J = 16 Hz, 1H), 5,67 (d, J„ F = 53 Hz, 2H), 5,32 (d,J = 8 Hz, 1H).
(v) Ph(3-Br) (5-OCH,FHR)CH(OH)CH2OH
2-Methyl-2-propanol (100 ml), H2O (100 ml), a AD-mix-β (27,5 g) se spojí a ochladí se na 0 °C. Najednou se přidá t-b rom-3-mono fluormethoxy-5-vinyl benzen (4,3 g, 17,3 mmol; viz stupeň (iv) shora) a heterogenní kaše se intenzivně míchá při teplotě 0 °C dokud TLC nevykazuje absenci výchozího materiálu, Reakční směs se uhasí při teplotě 0 °C přidáním nasyceného siřičiio tanu sodného (200 ml) a zahřeje se na teplotu místnosti a míchá se 60 minut. Reakění směs se extrahuje s EtOAc (3 x 150 ml). Spojené organické extrakty se suší (Na2SO4), filtruji a koncentrují se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v názvu (4,9 g, 100 %), jako bezbarvý olej, který se použije bez dalšího Čištění.
‘H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,30 (s, IH), 7,15 (s, IH), 7,11 (s, IH), 5,70 (d, J„_F = 53 Hz, 2H), 4,62 - 4,70 (m, 1H), 3,52 - 3,70 (m, 2H).
Analýza HPLC: 92,1 %, 96,9% ee, ChiralPak AD Column (mobilní fáze 95:5 Hex:EtOH).
(vi) Ph(3-Br) (5-OCH2FHR)CH(OMEM)CH2OTBS
K roztoku Ph(3-Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OH)CH2OH (4,9 g, 18,6 mmol; viz stupeň (v) shora),
4-(dimethylamino)pyridÍnu (453 mg, 3,71 mmol), a DIPEA (8,9 g, 93,0 mmol) v bezvodém CH2C12 (200 ml) se přidá po kapkách l,0M roztok terc-butyldimethylsilylchloridu v CH?CL (22,3 ml, 22,3 mmol). Reakění směs se míchá 10 hodin při teplotě místnosti. Ke směsi se přidá po kapkách DIPEA (8,9 g, 93,0 mmol) a 2-methoxyethoxymethyIchlorid (13,9 g, 111 mmol). Po 16 hodinách se přidá další 2-methoxyethoxynicthylchlorid (2.2 g) a reakění směs se míchá přes noc. Směs se zředí s vodou (100 ml) a vrstvy se oddělí. Vodná vrstva se extrahuje s CH2CL (3 x 200 ml), spojené organické vrstvy se suší (Na2SO4), filtrují se a koncentrují se ve vakuu.
Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním směsí Hex;EtOAc (5 : 1) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (4,8 g, 55 %) jako bezbarvý olej.
’H NMR (300 MHz, CDCb) δ 7,29 (s, IH), 7,22 (s, IH), 7,05 (s, IH), 5,74 (d, JH f = 53 Hz, 2H), 4,84 (d, J = 7 Hz, IH), 4,70 - 4,74 (m, 2H), 3,50 - 3,91 (m, 6H), 3,42 (s, 3H), 0,90 (s, 9H), 0,05 (s, 3H), 0,01 (s, 3H).
(vii) Ph(3—Br) (5-OCH2F)-<R)CH(OMEM)CH20H
K roztoku Ph(3-Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS (4,7 g, 10,1 mmol; viz stupeň (vi) shora) v THF (100 ml) se přidá při teplotě místnosti l,0M roztok tetrabutylammoniumfluoridu v THF (13,1 ml, 13,1 mmol) a směs sc míchá 1 hodinu. Směs se rozdělí mezi vodu (100 ml) a EtOAc (3 x 100 ml) a poté se spojené organické podíly suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují se vc vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (3,3 g, 92 %) jako bezbarvý olej, který se použije bez dalšího čištěni.
‘H NMR (300 MHz, CD.OD) δ 7,22 (s, IH), 7,14 (s. IH), 7,03 (s, IH), 5,71 (d, J„_F = 53 Hz. 2H). 4,80 - 4,82 (m, IH), 4,58 - 4,66 (m. 2H). 3,71 - 3,77 (m. 1 H), 3,39 - 3.65 (m, 5H), 3,27 (s, 3H).
(viii) Ph(3-Br) (5-OCH2FHR)CH(OMEM)OH
Roztok Ph(3-Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)CH2OH (2,1 g, 6,0 mmol; viz stupeň (vii) shora) v acetonu (40 ml) sc přidá k vodnému 5% roztoku NaHCCf (15 ml). Tato magneticky míchaná heterogenní směs se ochladí na 0 °C a přidá se bromid draselný (70 mg, 0,60 mmol) a volný radikál 2,2.6.6-tetramethyl-l-píperidinyloxy (976 mg, 5.8 mmol). Poté se po kapkách přidá
- 65 CZ 303708 B6 během 10 minut chlornan sodný (5,25%, 15 ml), přičemž se směs intenzivně míchá a teplota se udržuje na 0 °C. Po 1 hodině se přidá další chlornan sodný (10 ml) a roztok NaHCCb (20 ml) a míchání pokračuje při teplotě 0 °C po dobu 4 hodiny. Aceton se odstraní na rotační odpařovaěee. Vodná vrstva se zředí 10% NaHCCb (30 ml) a promyje se s Et2O (3 x 20 ml). Vodná vrst5 va se okyselí na pH 3,5 10% kyselinou citrónovou a extrahuje se s EtOAc (3 x 40 ml). Spojené EtOAc extrakty se postupně promyjí s vodou (3 x 50 ml) a solankou (50 ml) a suší se (Na2SO4), filtrují se a koncentrují ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (1,7 g, 78 %) jako bezbarvý olej, který se použije bez dalšího čištění.
io 1 HNMR (300 MHz, CDCb) δ 7,38 (s, IH), 7,25 (s, IH), 7,18(s, IH), 5,76 (d, JH-F = 53 Hz, 2H), 5,21 (s, IH), 4,83 (d, J = 7 Hz, IH), 4,75 (d, J = 7 Hz, IH), 3,62 - 3,78 (m, 2H), 3,48 - 3,52 (m, 2H), 3,32 (s, 3H).
(ix) Ph(3-Br) (5-OCH2FHR)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
K roztoku Ph(3 Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)C(O)OH (1,0 g, 2,72 mmol; viz stupeň (viii) shora) v DMF (20 ml) se pod dusíkem a při teplotě 0 °C přidá HAze-Pab(Teoc).HCl (1,6 g,
3,5 mmol), PyBOP (1,6 g, 3,0 mmol), a DIPEA (880 mg, 6,81 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 2 hodin a poté při teplotě místnosti přes noc. Směs se koncentruje ve vakuu a zbytek se chromatografuje dvakrát na silikagelu, eluováním prvně směsí CHCb.EtOH (15 : 1) a poté směsí EtOAc:EtOH (20 : 1) a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (1,2 g, 62 %) jako rozmělnitelná bílá pěna.
'H NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů) δ 7,80 - 7,84 (m, 2H), 7,40 - 7,46 (m,2H), 7,13 -7,32 (m, 3H), 5,84 - 5,87 (m, IH), 5,67 - 5,69 (m, IH), 5,25 a 5,07 (s, IH),
5,18- 5,23 a 4,80 - 4,88 (m, 1H), 3,97 - 4,79 (m, 8H), 3,60 - 3,71 (m, 2H), 3,40 - 3,53 (m, 2H),
3,32 (s, 3H), 2,10 - 2,75 (m, 2H), 1,05 - 1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
(x) Ph(3-Br) (5-OCH2FHR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
Směs Ph(3-Br) (5-OCH2FHR)CH(OMEM)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (347 mg, 0,478 mmol; viz stupeň (ix) shora) a bromidu uhličitého (159 mg, 0,478 mmol) ve 2-propanolu (10 ml) se zahřívá při zpětném toku po dobu 1,5 hodiny. Směs se koncentruje ve vakuu a rozdělí se s vodou (20 ml) a EtOAc (3 x 30 ml). Spojené organické extrakty se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním směsí CHCI3:EtOH (15:1) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (59 mg, 19 %) jako rozmělnitelná bílá pěna.
t.t.: 81 až 87 °C
Rf-0,58 (9:1 CHCl3:EtOH) 'H NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů) δ 7,84 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,40 - 7,48 (m, 2H), 7,18 - 7,30 (m, 3H), 5,80 (d, J„ F = 53 Hz, 2H), 5,21 a 5,15 (s, IH), 5,18 - 5,24 a 4,80- 4,88 (m, IH), 3,98 - 4,54 (m, 6H), 2,10 - 2,70 (m, 2H), 1,05 - 1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
APCl-MS:(M+ 1) = 637 m/z (xi) Ph(3-Br) (5-OCH2F}-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0,073 g, 0,11 mmol; viz stupeň (x) shora), se rozpustí v 5 ml TFA a nechá se reagovat po dobu 90 minut, přičemž se směs chladí v ledové lázni. TFA se odpaří a zbytek se čistí preparativní RPLC sCHiCNiOJM NH4()Ac (30:70). Příslušné frakce se odpaří a suší se vymrazováním ze směsi vody a acetonitrilu a získá se
49 mg (77 %) sloučeniny uvedené v názvu jako acetátová sůl.
- 66CZ 303708 B6 'HNMR (300 MHz; CD3OD) rotamery; δ 7,8 -- 7,8 (m, 2H), 7,54 (m, 2H), 7,37 (s. 1H, většinový rotamer), 7,33 (s, IH, menšinový rotamer), 7,25 - 7,1 (m, 2H), 5,75 (d, 2H), 5,22 (m, 1 H. menšinový rotamer), 5,18 (s, IH, většinový rotamer), 5,11 (s, IH, menšinový rotamer), 4.80 (m, IH, většinový rotamer), 4,6 - 4.4 (m, 2H), 4,37 (m, III, většinový rotamer). 4,16 (m, IH, většinový rotamer), 4,1 - 3.9 (m, 2H, dva signály z menšinového rotamerů), 2,70 (m. IH, menšinový rotamer), 2,52 (m, IH, většinový rotamer), 2,30 (m, IH, většinový rotamer), 2,15 (m, IH, menšinový rotamer), 1,89 (s, 3H).
ESI-MS+: (M+l) = 493/495 (m/z)
Příklad 28
Ph(3-Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA (i) 1,3-Dibronio--5—d i fluormethoxy benzen
Ktárované, utěsněné 350 ml tlakové baňce obsahující suspenzi 3,5-dibromfenolu (10,0 g,
39,7 mmol; viz stupeň 27(it) v 2-propanolu (100 ml) a 30% KOH (80 ml) se při teplotě -78 °C přidá chlordifluormethan probubláváním po dobu 15 minut přes septum. Septum se nahradí teflonovým uzávěrem a nádoba se poté utěsní a nechá se ohřát na teplotu místnosti, kdy se zváží a stanoví se obsah 12,0 g (138 mmol) chlordifluormethanu. Roztok se zahřívá v olejové lázni přes noc na teplotu 80 °C. Nádoba se ochladí na teplotu místnosti, tlak se opatrně uvolní a obsah se zředí vodou (200 ml). Vodná vrstva se extrahuje s Et2O (2 x 150 ml) a poté se organické podíly spojí a suší se (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Zbytek se čistí Kugelrohrovou destilací při 80 °C a 0,2 mm lig a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (9,6 g, 80 %) jako čirá kapalina.
so 'HNMR (300 MHz, CDCl·,) 7,55 (s, 1H), 7,26 (s, 2H), 6,52 (t, JH-f = 68 Hz, IH).
(ii) IBrom-3-difluormethoxy-5-vinylbenzen
Tri(butyl)vinyltin (10,5 g, 33,1 mmol) se přidá pod dusíkem po kapkách k roztoku 1,3-dibrom35 5--difluormethoxybenzenu (9,1 g, 30,1 mmol; viz stupeň (i) shora), tetrakis(trifenylfosfin)palladiu(O) (700 mg, 0,60 mmol) a 2,6-di-terc-butyM-methylfenolu (špička špachtle) v toluenu (125 ml). Směs se míchá při teplotě 50 °C přes noc. Směs se ochladí na 0 °C a přidá se IN NaOH (70 ml). Po 1 hodině se směs extrahuje s CH2CE (3 x 300 ml), Spojené organické podíly se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním s hexany se získá sloučenina uvedená v podnázvu (5.1 g, 68 %) jako bezbarvý olej.
‘H NMR (300 MHz, CDC13) 7,53 (s, IH), 7,18 (s, IH), 7,08 (s, IH), 6,60 (dd, J = 6 Hz, J = 11 Hz, IH), 6,57 (t, JH-f = 68 Hz, IH), 5,77 (d, J = 11 Hz, IH), 5,36 (d, J = 8 Hz, IH).
is (iii) Ph(3 Br) <5 OCHT) <R)CH(OH)CHT)H
2-Methyl-2-propanol (150 ml), H2O (150 ml), a AD-mix-β (27,8 g) se spojí a ochladí se na 0 °C. Najednou se přidá l-brom-3-difluormethoxy-5-vinylbenzen (4,6 g, 18,6 mmol; viz stupeň (ii) shora) a heterogenní kaše se intenzivně míchá při teplotě 0 °C dokud TLC nevykazuje absenci výchozího materiálu. Potom se roztok zahřeje na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Reakční směs se uhasí při teplotě 0 °C přidáním nasyceného siřičitanu sodného (300 ml) a zahřeje se na teplotu místnosti a míchá se 60 minut. Reakční směs se extrahuje s EtOAc (3 x 200 ml). Spojené organické extrakty se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v názvu (5.0 g, 95 %), jako bezbarvý olej, který' se použije bez
5? dalšího čištění.
- 67 CZ 303708 B6 'H NMR (300 MHz, CD3OD) 7,43 (s, IH), 7,23 (s, IH), 7,16 (s, IH), 6,86 (t, JH-f = 75 Hz, IH), 4,64 - 4.67 (m, 1H), 3,54 - 3,59 (m, 2H).
Analýza HPLC: 88,6%, 96,3% ee, ChiralPak AD Column (mobilní fáze 95:5 Hex: EtOH).
(iv) Ph(3-Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS
K roztoku Ph(3-Br) (5-OCH2F>-(R)CH(OH)CH2OH (4,9 g, 17,3 mmol; viz stupeň (iii) shora), io 4-(dimethy[amino)pyndinu (420 mg, 3,5 mmol), a DIPEA (11,2 g, 86,3 mmol) v bezvodém
CH2C12 (250 ml) se přidá po kapkách l,0M roztok terc-butyldimethylsilylchloridu vCH2Cl2 (20,7 ml, 20,7 mmol). Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Ke směsi se přidá po kapkách DIPEA (11,2 g, 86,3 mmol a 2-methoxyethoxymethylchlorid (12,9 g, 104 mmol). Po 3 dnech se přidá další 2-methoxyethoxymethylchlorid (3,3 g) a reakční směs se míchá přes noc. ís Směs se zředí s vodou (250 ml) a vrstvy se oddělí. Vodná vrstva se extrahuje s CH2CL (2x250 ml), spojené organické vrstvy se suší (Na2SO4), filtrují se a koncentrují se ve vakuu.
Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním směsí Hex:EtOAc (4 : 1) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (4,3 g, 51 %)jako bezbarvý olej.
lH NMR (300 MHz, CDCh) δ 7,40 (s, IH), 7,25 (s, IH), 7,08 (s, IH), 6,58 (t, JH F = 75 Hz, IH),
4,84 (d, J = 7 Hz, IH), 4,70 - 4,74 (m, 2H), 3,50 - 3,91 (m, 6H), 3,42 (s, 3H), 0,90 (s, 9H), 0,12 (s,3H), 0,05 (s,3H).
(v) Ph(3—Br) (5-OCH2FHR)CH(OMEM)CH2OH
K roztoku Ph(3-Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS (3,3 g, 6,9 mmol; viz stupeň (iv) shora) v THF (60 ml) se přidá pri teplotě místnosti l,0M roztok tetrabutylammon i um fluoridu v THF (9,0 ml, 9,0 mmol) a směs se míchá 45 minut. Směs se rozdělí mezi vodu (150 ml) a EtOAc (2 x 120 ml). Spojené organické podíly se suší (Na3SO4), filtrují a koncentrují se ve .io vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (2,5 g, 98 %) jako bezbarvý olej, který se použije bez dalšího čištění.
H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,35 (s, IH), 7,21 (s, IH), 7,08 (s, IH), 6,83 (t, JH-f = 73 Hz,
1H), 4,73 (d, J = 7 Hz, 1H), 4,59 - 4,68 (m, 2H), 3,40 - 3,80 (m, 6H), 3,26 (s, 3H).
(vi) Ph(3-Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)C(O)OH
Roztok Ph(3-Br) (5-OCH2FHR)CH(OMEM)CTLOH (3,0 g, 8,1 mmol; viz stupeň (v) shora) v acetonu (60 ml) se přidá k vodnému 5% roztoku NaHCCh (25 ml). Tato magneticky míchaná heterogenní směs se ochladí na 0 °C a přidá se bromid draselný (100 mg, 0,81 mmol) a volný radikál 2.2_6,6-tetramethy!-!-piperidinyíoxy (1,3 g, 8,5 mmol). Poté sc po kapkách přidá během 10 minut chlornan sodný (5,25%, 19 ml), přičemž se směs intenzivně míchá a teplota se udržuje na 0 °C. Po 1 hodině se přidá další chlornan sodný (17 ml) a roztok NaHCOi (34 ml) a míchání pokračuje při teplotě 0 °C po dobu 4 hodiny. Aceton se odstraní na rotační odpařovačce. Vodná vrstva se zředí 10% NaHCOi (30 ml) a promyje se s ELO (3 x 20 ml). Vodná vrstva se okyselí na pH 3,5 10% kyselinou citrónovou a extrahuje se s EtOAc (3 x 40 ml). Spojené EtOAc extrakty se postupně promyjí s vodou (3 x 50 ml) a solankou (50 ml) a suší se (Na2SO4), filtrují se a koncentrují ve vakuu a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (2,1 g, 66 %) jako bezbarvý olej, který se použije bez dalšího čištění.
'11 NMR (300 MHz, CD?,OD) δ 7.51 (s, IH), 7,32 (s, IH), 7,24 (s, 1H), 6,88 (t, h - 73 Hz, I H). 5,21 (s, 1 H), 4,84 (d, J - 7 Hz, IH), 4,76 (d. J - 7 Hz, 1H), 3,62 - 3,80 (m, 2H), 3,48 - 3,52 (m. 2H). 3,32 (s, 3H).
- 68 CZ 303708 B6 (vii) Ph(3-Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)C(0)-Aze-Pab(Teoc)
K roztoku Ph(3-Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)C(O)OH (1,0 g, 2,62 mmol; viz stupeň (vi) shora) v DMF (50 ml) se přidá pod dusíkem a při teplotě 0 °C HAze-Pab(Teoc).HCl (1,5 g,
3,38 mmol), PyBOP (1,5 g, 2,9 mmol), a DIPEA (840 mg, 6,50 mmol), Reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 2 hodin a poté při teplotě místnosti přes noc. Směs se koncentruje ve vakuu a zbytek se chromatografuje na silikagelu eluováním směsí CHCl3:EtOH (15:1) a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (1,1 g, 59 %) jako rozmělnitelná bílá pěna.
io lII NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů) δ 7,79 - 7,83 (m, 2H), 7,26 - 7,52 (m, 5H), 6,94 a 6,91 (t, JH-f = 73 Hz, IH), 5,27 a 5,07 (s, IH), 5.20 - 5,23 a 4,80 - 4,88 (m, IH). 4,01 - 4,79 (m, 8H), 3,60 - 3,71 (m, 2H), 3,40 - 3,53 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 2,10 - 2,75 (m, 2H), 1.05 - 1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
is (viii) Ph(3-Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
Směs Ph(3-Br) (5-OCH2FHR)CH(OMEM)C(O)~Aze-Pab(Teoc) (369 mg, 0,496 mmol; viz stupeň (vii) shora) a bromidu uhličitého (165 mg, 0,496 mmol) v 2-propanolu (10 ml) se zahřívá při zpětném toku 12 hodin. Směs se koncentruje ve vakuu, rozdělí se s vodou (15 ml) a EtOAc (5 x 20 ml). Spojené organické podíly se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Mžikovou chromatografií na silikagelu směsí CHCl3:EtOH (15:1) se získá sloučenina uvedená v podnázvu (134 mg, 41 %) jako rozmělnitelná bílá pěna.
t.t.: 92 až 98 °C
Rf= 0,37 (9:1 CHCl3:EtOH) 'H NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů) δ 7,80 - 7,86 (m, 2H), 7,40 - 7,48 (m,2H), 7,10 - 7,33 (m, 3H), 6,92 a 6,88 (t, JH-f = 73 Hz, IH), 5,18 a 5,11 (s, IH), 5,18 - 5.24 a4,76 - 4,80 (m, IH), 3,98 - 4,54 (m, 6H), 2,10 - 2,70 (m, 2H), 1,05 - 1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
APCI-MS: (M + 1) = 655 m/z (ix) Ph(3—Br) (5-OCH?F)-{R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-Br) (5-OCH2FHR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (0,081 g, 0,124 mmol; viz stupeň (viii) shora), se rozpustí v 5 ml TFA a nechá se reagovat 80 minut, přičemž se chladí v ledové lázni. TFA se odpaří a zbytek se čistí preparativní RPLC směsí CH3CN:0,lM NH4OAc (30:70). Přísluš40 né frakce se odpaří a suší se vymrazováním ze směsi vody a acetonitrilu a získá se 59 mg (83 %) sloučeniny uvedené v názvu jako její acetátová sůl.
'HNMR (300 MHz, CD3OD) rotamery: 6 7,8 - 7,7 (m, 2H), 7.6 - 7,4 (m, 3H), 7,3 - 7,2 (m, 2H),
6,89 (t, IH, většinový rotamer), 6,87 (t, ÍH, menšinový rotamer), 5,23 (m, IH, menšinový rotamer), 5,21 (s, IH, většinový rotamer), 5,13 (s, IH. menšinový rotamer), 4,80 (m. IH, většinový rotamer), 4,6 - 4.4 (m, 2H), 4,38 (m, IH, většinový rotamer), 4,20 (m, IH, většinový rotamer), 4,1 - 3,9 (m, 2H, dva signály z menšinového rotamerů), 2,70 (m, 1 H, menšinový rotamer),
2.54 (m, IH, většinový rotamer). 2,29 (m, 1 H, většinový rotamer), 2,15 (m, IH. menšinový rotamer), 1,89 (s, 311).
1?3C-NMR(75 MHz; CD3OD); (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky) δ 172,0, 171,7, 167.0.
MS (m/z) 511/513 (M+l)’
- 69 CZ 303708 B6
Příklad 29
Ph(3-Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe) (i) Ph(3-Br) (5-OCH2E)—(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe)
K roztoku Ph(3-Br) (5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH (957 mg, 2,48 mmol; viz příklad 28(vi) shora) v DMF (30 ml) se při teplotě 0 °C pod dusíkem přidá HAze-Pab(OMe).2HCl (1,1 g, 3,2 mmol), PyBOP (1,4 g, 2,7 mmol), a DIPEA (804 mg, 6,2 mmol). Reakční směs se io míchá při teplotě 0 °C 2 hodiny a poté při teplotě místnosti přes noc. Směs se koncentruje ve vakuu a zbytek se chromatografuje dvakrát na silikagelu, eluováním nejprve směsí CHCl3:EtOH (9 : 1) a poté směsí EtOAc:EtOH (15 : 1) a získá se sloučenina uvedená v podnázvu (1,1 g, 72 %) jako rozmělnitelná bílá pěna.
'H NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů) δ 7,59 - 7,65 (m, 2H), 7,20 - 7,55 (m, 5H), 6,95 a 6,91 (t, JH f = 73 Hz, IH), 5,27 a 5,07 (s, IH), 5,18 - 5,23 a 4,75 - 4,84 (m, IH), 3,87 - 4,89 (m, 6H), 3,84 (s, 3H), 3,60 - 3,71 (m, 2H), 3,40 - 3,53 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 2,10-2,75 (m,2H).
(ii) Ph(3-Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe)
Směs Ph(3-Br) (5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe) (1,1 g, 1,8 mmol; viz stupeň (i) shora) a bromidu uhličitého (583 mg, 1,8 mmol) v 2-propanolu (30 ml) se zahřívá při zpětném toku 2,5 dnů. Během této doby se přidá další bromid uhličitý (5 dávek po 50 mg v intervalech,
2? dalších 0,90 mmol), aby se dokončila reakce. Směs se koncentruje ve vakuu, poté se rozdělí s vodou (50 ml) a EtOAc (5 x 25 ml). Spojené organické podíly se suší (Na2SO4), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním směsí CHCl3:EtOH (15 : 1) se získá sloučenina uvedená v názvu (460 mg, 50 %) jako rozmělnitelná bílá pěna.
t.t.: 71 až 75 °C
Rf = 0,63 (9:1 CHCl3:EtOH) 'H NMR (300 MHz, CD3OD, komplexní směs rotamerů) δ 7,59 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,20 - 7,54 (m, 5H), 6,90 a 6,87 (t, JH-f = 73 Hz, IH), 5,18 a 5,11 (s, IH), 4,76-4,80 (m, IH), 3,98-4,54 (m, 4H), 3,82 (s, 3H), 2,10-2,70 (m, 2H), ,3C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery) δ 172,5,
172,1, 171,6, 154,1.
to
APCI-MS: (Μ + I) = 542 m/z
Příklad 30
Ph(3—Cl) (5-OCH2CHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH) (i) Ph(3-Cl) (5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab (Z)
Boc-Aze-Pab(Z) (viz mezinárodní patentovou přihlášku WO 97/02284, 92 mg, 0,197 mmol) se rozpustí v 10 ml EtOAc nasyceném plynným HCl a nechá se reagovat 10 minut. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se smísí s Ph(3-Br) (5-OCH2CHE2)-(R)CH(OH)C(0)OH (50 mg, 0,188 mmol; víz příklad 17(v) shora), PyBOP (109 mg, 0,209 mmol) a konečně diízopropylethylaminem (96 mg, 0,76 mmol) v 2 ml DMF. Směs se míchá 2 hodiny a poté se vlije do 50 ml vody a extra55 buje se třikrát s EtOAc. Spojené organické fáze se promyjí s vodou, suší se (Na2SO) a odpaří se.
- 70CZ 303708 B6
Surový produkt se zpracuje mžikovou chromatografíi na silikagelu eluováním směsí EtOAc:MeOH (9:1). Výtěžek: 100 mg (87 %).
!H NMR (300 MHz, CDiOD, směs rotamerů) δ 7,85 - 7,75 (m, 2H), 7,45 - 7,25 (m. 7H), 7,11 (m, 1H, většinový rotamer), 7,08 (m, 1H, menšinový rotamer), 7,05 - 6,9 (m. 2H), 6,13 (bt, 1 H),
5,25 - 5,05 (m, 3H), 4,77 (m, IH, částečně zakryt signálem CD?OH), 4,5 - 3,9 (m, 7H), 2,64 (m, IH, menšinový rotamer), 2,47 (m, IH, většinový rotamer), 2,25 (m, IH, většinový rotamer),
2,13 (m, 1 H, menšinový rotamer) (ii) Ph(3—Cl) (5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
Hydroxylaminhydrochlorid (65 mg, 0,94 mmol) a triethylamin (0,319 g, 3,16 mmol) se smísí v 8 ml THF a sonifikuje se 1 hodinu pri teplotě 40 °C. Přidá se Ph(3-Cl) (5-OCFTCHF/HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z) (96 mg, 0,156 mmol; viz stupeň (i) shora) s dalšími 8 ml THF. Směs se míchá pri teplotě 40 °C po dobu 4,5 dnů.
Rozpouštědlo se odpaří a surový produkt se čistí preparativní RPLC směsí CH3CN:0,ÍM NH4OAc (40 : 60). Výtěžek: 30 mg (38 %). Čistota: 99 %.
'H NMR (300 MHz, CD3OD, směs rotamerů) δ 7,6 - 7,55 (m, 2H), 7,35 - 7,3 (m, 2H), 7,12 (m, 1H, většinový rotamer), 7,09 (m, 1H, menšinový rotamer), 7,05 - 6,9 (m, 2H), 6,15 (triplet multipletů, 1H), 5,15 (m, IH, menšinový rotamer), 5,13 (s, IH, většinový rotamer), 5,08 (s, IH, menšinový rotamer), 4,77 (m, IH, většinový rotamer), 4,5 - 4,2 (m, 5H), 4,08 (m, IH, většinový rotamer), 3,97 (m, 1 H, menšinový rotamer), 2,66 (m, IH, menšinový rotamer), 2,50 (m, IH, většinový rotamer), 2,27 (m, 1H, většinový rotamer), 2,14 (m, IH, menšinový rotamer), l3C NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, směs rotamerů) δ 172,8,
172,2, 171,4, 159,1, 158,9, 154,2
APCIMS: (M + 1) = 497/499 m/z
Příklad 31
Ph(3-Cl) (5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(0H) (i) Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2FHR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)
Boc-Aze-Pab(Z) (130 mg, 0,279 mmol) se rozpustí v 15 ml EtOAc nasyceném s plynným HCl a nechá se reagovat 10 minut.
Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se smísí s Ph(3-CI) (5-OCH2CH2F)-<R)CH(OH}-C(O)OH (63 mg, 0,188 mmol; viz příklad 21(v) shora) ve 3 ml DMF, PyBOP (147 mg, 0,279 mmol) a konečně s diizopropylethylaminem (134 mg, 1,03 mmol). Směs se míchá 130 minut a poté se vlije do 75 vody a extrahuje se třikrát s EtOAc. Spojené organické fáze se promyjí s vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Surový produkt se zpracuje mžikovou chromatografíi na silikagelu směsí ĚtOAc/MeOH = 95/5. Výtěžek: 1 19 mg (79 %).
!H NMR (400 MHz, CDCh) ó 8.06 (bt. 1H), 7.67 (d, 2H), 7.45 - 7,25 (m, 5H), 7,18 (d, 2H), 6,89 (m. IH), 6,84 (m, IH), 6,76 (m, IH), 5,16 (s, 2H), 4,84 (s, IH), 4,79 (m, IH). 4,66 (dublet multipletů, 2H), 4,4 - 4,3 (m, 2H), 4,10 (dublet multipletů, 2H), 4,02 (m, 1H), 3,67 (m. 1 H), 2,46 (m, IH), 2,28 (m, IH).
- 71 CZ 303708 B6 (ii) Ph(3—Cl) (5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
Hydroxyiaminhydrochlorid (80 mg, 1,16 mmol) a triethylamin (0,392 g, 3,87 mmol) se smísí s 9 ml THF a sonifikuje se 1 hodinu při teplotě 40 °C. Přidá se Ph(3-Cl) (5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z) (96 mg, 0,156 mmol; viz stupeň (i) shora) s dalšími 9 ml THF. Směs se míchá při teplotě 40 °C po dobu 48 hodin a 3 dny při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a surový produkt se Čistí preparativní RPLC směsí CH3CN:0,lM NH4OAc (30 : 70). Výtěžek: 72 mg (78 %). Čistota: 100 %.
!H NMR (400 MHz, CD3OD, směs rotamerů) δ 7,6 - 7,55 (m, 2H), 7,35 - 7,25 (m, 4H), 7,07 (m, IH, většinový rotamer), 7,04 (m, IH, menšinový rotamer), 7,0 - 6,9 (Μ, 2H), 5,12 (m, IH, menšinový rotamer), 5,08 (s, IH, menšinový rotamer), 5,04 (s, IH), 4,78 (m, IH, většinový rotamer), 4,68 (dublet multipletů, 2H), 4,5 - 4,25 (m, 3H), 4,20 (dublet multipletů, 2H), 4,06 (m, IH, většinový rotamer), 3,97 (m, 1H, menšinový rotamer), 2,65 (m, 1H, menšinový rotamer), 2,48 (m, IH, většinový rotamer), 2,27 (m, IH, většinový rotamer), 2,14 (m, IH, menšinový rotamer) l3C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery) δ 172,5, 172,1, 171,6, 154,1.
APCI-MS: (M + 1) = 479/481 m/z
Příklad 32
Ph(3—Cl) (5—OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab (i) Boc-Pro-Pab(Teoc)
Boc-Pro-Pab (Z) (viz mezinárodní patentovou přihlášku WO 97/02284, 15,0 g, 0,0321 mmol) se rozpustí ve 150 ml ethanolu a přidá se 200 mg 10% Pd/C (50% vlhkost). Směs se míchá a hydrogenuje při atmosférickém tlaku po dobu 2 hodin, filtruje se přes Hyflo a koncentruje se. Produkt se použije bez dalšího čištění. Z tohoto produktu se odebere 10 g (0,029 mol), který se rozpustí v 300 ml THF. Přidá se Teoc-p-nitro fenyl karbonát (10 g, 0,035 mol). Během 3 minut se přidá roztok uhličitanu draselného (5,2 g, 0,038 mol). V 50 ml vody a vzniklý roztok se míchá 3 dny, koncentruje se a zbytek se extrahuje třikrát s EtOAc. Spojená organická vrstva se promyje s vodou, suší se (Na2SO) a odpaří se. Surový produkt se chromatografuje mžikovou chromatografií na silikagelu za použití směsi methylenchloridu a acetonu (4:1). Výtěžek: 9,8 g (69 %).
(ii) Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Teoc)
Boc-Pro-Pab(Teoc) (107 mg, 0,218 mmol; viz stupeň (i) shora) se rozpustí v 10 ml EtO.Ac nasyceným plynným HCI a nechá se reagovat 10 minut. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se smísí s Ph(3—Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (50 mg, 0,198 mmol; viz příklad l(viii) shora) v 3 ml DMF, PyBOP (115 mg, 0,218 mmol) a konečně diizopropy lethy laminem (104 mg, 0,80 mmol). Směs se míchá 2 hodiny a poté se vlije do 75 ml vody a extrahuje se třikrát s EtOAc. Spojené organické fáze se promyjí s vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří. Surový produkt se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním směsí EtOAc:MeOH (95 : 5). Výtěžek: 89 mg (72 %).
Ή NMR (400 MHz, CDCf) δ 7,54 (bt, IH), 7,4 (d, 2H), 7,12 (m, IH), 7,08 (d, 211), 7,02 (m, IH), 6,95 (m, IH), 6,50 (t, IH), 5,21 (s, I H), 4,42 (m, IH), 4,35-4,15 (m, 3H), 3,59 (m, IH),
2,94 (m, IH), 2,1 - 1,7 (m, 4H), 1,06 (m, 211), 0,04 (s, 9H).
- 72 CZ 303708 B6 (iii) Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH>-C(0)-Pro-Pab x TFA
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab(Teoc) (85 mg, 0,136 mmol; víz stupeň (ii) shora) se rozpustí v 1 ml methylenchloridu a ochladí se v ledové lázni. Přidá se TFA (4 ml) a reakční směs se míchá 90 minut. TFA se odpaří a zbytek se suší vymrazováním ze směsi vody a acetonitrilu. Výtěžek: 79 mg (92 %). Čistota: 94 %.
'H NMR (400 MHz, CD3OD, směs rotamerů) δ 7,85 - 7,7 (m, 2H), 7,58 (d, 2H, většinový rotamer), 7,47 (d, 2H, menšinový rotamer), 7,35 (m, IH, většinový rotamer), 7,27 (m, IH, io menšinový rotamer), 7,2, 7,1 (m, 2H), 6,88 (t, IH), 5,38 (s, IH, většinový rotamer), 5,22 (s, IH, menšinový rotamer), 4,58 (d, IH), 4,5 - 4,2 (m, 2H), 3,8- 3,5 (m, IH), 3,35 (m, IH), 2,2 - 1,8 (m, 4H).
l3C-NMR(100 MHz;CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky) ó 173,6, 171,1, 167,0.
APCI-MS: (M + 1) = 481/483 m/z
Příklad 33
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(0)-Pro-Pab(OMe) (i) 4—Azidomethyl-N—methoxybenzamidin
4-Azidomethylbenzonitril (17,3 g, 0,109 mmol; Nishiyama a kok; Chem. Lett. (1982) 1477) se rozpustí v 500 ml toluenu a 200 ml absolutního ethanolu. Roztok se ochladí na -10 °C a směsí se probublává plynný HCI do nasycení. Směs se uloží do mrazáku na dobu 2 dnů, kdy se většina rozpouštědel odpaří. Přidá se diethylether a provede se dekantace. Produkt se znovu rozpustí v roztoku O-methyl hydroxy laminu (10,5 g, 0,125 mol) a triethylaminu (56 ml) ve 200 ml methanolu. Směs se nechá stát 3 dny a přidáním EtOAc se odpaří methanol. Organická fáze se promyje s vodou, ředí se HOAc a vodným hydrogenuhličitanem sodným, suší se (Na2SO) a zředí se ještě EtOAc na celkový objem 500 ml. Vzorek 25 ml se odpaří do sucha. Zbývá 932 mg. Celkový výtěžek: 18,6 g (83 %).
(ii) 4-Aminomethyl-N-methoxybenzamidin
K roztoku 4-azidomethyl-N-methoxybenzamidinu (11,3 g, 0,055 mol; viz stupeň (i) shora) v 200 ml ethanolu se přidá 200 mg PtO2. Směs se hydrogenuje konstantním probubláváním vodíku po dobu 4 hodin a následně se filtruje přes Celit10 a odpaří se. Výtěžek: 7,34 g (74 %).
(iii) Boc-Pro-Pab(OMe)
K suspenzi Boc-Pro-OH (9,7 g, 0,045 mol), 4-aminomethyl-N-methoxybenzamidinu (7,34 g, 0,041 mol; viz stupeň (U) shora) a dimethylaminopyridinu (7,8 g, 0,064 mol) v 300 ml aceto45 nitrilu se přidá EDC báze (1 1,7 ml, 0,068 mol). Směs se míchá 1 8 hodin, koncentruje se a rozdělí se mezi vodu a EtOAc, Organická vrstva se promyje s vodou, vodným hydrogenuhličitanem sodným, suší se (MgSO4) a odpaří se. Surový produkt se zpracuje mžikovou chromatografíi na silikagelu s EtOAc. Výtěžek: 9,73 g (63 %).
(iv) H-Pro-Pab(OMe) x 2 HCI
Boc-Pro-Pab(OMe) (9,7 g, 0,026 mol; viz stupeň (iii) shora) se rozpustí v 250 ml EtOAc, Ledem chlazený roztok se nasytí s plynným HCI probubláváním po dobu 5 minut. Produkt se bezprostředně sráží a přidá se 125 ml ethanolu. Směs se soniflkuje dokud většina materiálu neztuhne.
- 73 CZ 303708 B6
Přidá se diethylether a suspenze se filtruje. Několik kousků, které neztuhly se zpracuje absolutním ethanolem a diethyletherem. Pevná látka se suší. Výtěžek 7,57 g (86 %).
'H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,74 (d, 2H), 7,58 (d, 2H), 4,55 (s, 2H), 4,38 (m, IH), 3,98 5 (s, 3H), 3,45 - 3,3 (m, 2H), 2,50 (m, 1H), 2,15 - 2,0 (m, 3H) (v) Ph(3-CI) (50CHF2HR)CH(OH)-C(0)-Pro-Pab(OMe)
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (50 mg, 0,198 mmol; viz příklad í(viii) shora), i o H-Pro-Pab(OMe) (76 mg, 0,218 mmol, viz stupeň (iv) shora) a PyBOP (115 mg, 0,218 mmol) se rozpustí ve 2 tni DMF. Přidá se diizopropylethylamin (104 mg, 0,80 mmol) a směs se míchá
2,5 hodiny. Směs se vlije do 50 ml vody a extrahuje se třikrát s EtOAc a spojené organické fáze se promyjí solankou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Zbytek se zpracuje mžikovou chromatografií na silikagelu směsí EtOAc:MeOH (95 : 5). Výtěžek; 37 mg (36%). Čistota: 98 %.
'H NMR (400 MHz, CD3OD, směs rotamerů) δ 7,60 (d, 2H, většinový rotamer), 7,57 (d, 2H, menšinový rotamer), 7,4 - 7,1 (m, 5H), 6,89 (t, IH, většinový rotamer), 6,87 (t, IH, menšinový rotamer), 5,35 (s, IH, většinový rotamer), 5,21 (s, IH, menšinový rotamer), 4,72 (m, IH, menšinový rotamer), 4,5 - 4,35 (m, IH a 2H, většinový rotamer), 4,3 - 4,25 (m, 2H, menšinový rota20 mer), 3,814 (s, 3H, většinový rotamer), 3,807 (s, 3H, menšinový rotamer), 3,75 - 3,5 (m, IH),
3,35 (m, IH), 2,21,8 (m, 4H) nC-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, směs rotamerů) δ 173,3,
173,2, 171,3, 171,0, 153,9, 152,4
APCI-MS: (Μ + 1) = 511/513 m/z
Příklad 34
Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((2-amidino)-S-pyridinyl)
(i) 6-K.yanonikotinová kyselina
K roztoku N-oxidu kyseliny nikotinové (51 g, 0,37 mol) v 1,2 l DMF, se přidá NaCN (54 g, 1,1 mol) a poté triethylamin (255 ml, 1,83 mol) a TMSC1 (185 ml). Reakční směs se míchá při teplotě 110 °C po dobu 10 hodin, filtruje se a filtrát se koncentruje. Zbytek se rozpustí ve 100 ml 2N HCI a extrahuje se s methylenchloridem. Organické vrstvy se spojí, koncentrují a rekrystalizují se z vody a získá se 12 g (22 %) produktu.
(ii) 5-(Hydroxymethyl)pyridin-2-karbonitril
K roztoku kyseliny 6-kyanonikotinové (12 g, 0,081 mol; viz stupeň (i) shora) v THF se pří teplotě 0 °C přidá Et,N (12,4 ml, 0,0892 mol) a poté ethylchlorformiát (8,53 ml, 0.0892 mol).
Reakční směs se míchá 15 minut a přidá se NaBH4 (6,14 g, 0,162 mol). Směs se míchá pří teplotě
- 74 CZ 303708 B6 místnosti přes noc. reakce se uhasí vodou a extrahuje se methylenchloridem. Organická vrstva se čistí sloupcovou chromatografií a získají se 4 g (20 %) alkoholu.
(iii) 5-(Azidomethyl)pyridin-2-karbomtril
5-(Hydroxymethyl)pyridin-2-karbonitril (4 g, 0,03 mol; viz stupeň (ii) shora) se rozpustí v 25 ml methylenchloridu a ochladí se v ledové lázni. Po kapkách se přidá mesylehlorid (2,32 ml, 0,0300 mol) a poté triethylamin (4,6 ml, 0,033 mol). Reakční směs se míchá a po zpracování se surový mesylát zpracuje sNaN3 (7,35 g, 0,113 mol) v 20 ml DMF. Reakční směs se míchá při io teplotě 40 °C 2 hodiny, zředí se vodou a extrahuje se s ethylacetátem. Organická vrstva se koncentruje a získá se 3,95 g (83 %) surového azidu.
(iv) 5{terc-Biitoxykarbonylaminomethyl)pyridin2·karbon itril
K roztoku 5-(azidomethyl)pyridin-2-karbonitrilu (3,95 g, 0.0248 mol; viz stupeň (ííí) shora) v 30 ml THF a 10 ml vody se přidá trifenylfosfin (7,8 g, 0,0298 mol) a vzniklá směs se míchá 24 hodin. Poté se přidá triethylamin (3,8 ml, 0,027 mol) a následně Boc anhydrid (5,4 g, 0,025 mol) a míchání pokračuje 2 hodiny. Reakční směs se rozdělí mezi vodu a ethylacetát. Organická vrstva se koncentruje a čistí se sloupcovou chromatografií a získá se 2,1 g (36 %) sloučeniny uvedené v podnázvu.
'HNMR (300 MHz, CDCb) δ 8,6 (s, 1H), 8,0 (d, IH), 8,9 (d, IH), 4,1 (m, 2H), l,4(s,9H) (v) 5-(Aminomethyl)pyridin 2 -karbonitril x 2 HCl
5-(terc-Butoxykarbonylaminomethyl)pyridin-2-karbonitril (0,200 g, 0,86 mmol. viz stupeň (iv) shora) se rozpustí v 10 ml EtOAc nasyceném plynným HC! a směs se míchá 30 minut. Rozpouštědlo se odpaří a získá se 0,175 g (99 %) sloučeniny uvedené v názvu jako jeho dihydrochloridová sůl.
'HNMR (500 MHz, D,O) δ 8,79 (s, lH),8,17(d, IH),8,05 (d, IH), 4,38 (s, 2H) (vi) Boc-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN)
Ke směsi 5-(aminomethyl)pyridin-2-karbonitrilu x 2 HCl (0,175 g, 0,85 mmol; viz stupeň (v) shora), Boc-Aze-OH (0,201 g, 1,00 mmol) a TBTU (0,321 g, 1,00 mmol) v 5 ml DMF se přidá dimethylaminopyridin (0,367 g, 3,00 mmol). Směs se míchá přes noc a následně se vlije do vody a extrahuje se třikrát s EtOAc. Spojené organické fáze se promyjí vodným hydrogenuhličitanem sodným, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Surový produkt začne krystalovat a použije se jako takový v příštím stupni. Výtěžek 0,23 g (73 %).
'HNMR (500 MHz, CDC13) δ 8,66 (s, IH), 8.2 - 7,8 (br, IH), 7,79 (d, IH), 767 (d, IH), 4,73 (m, 111),4,65-4.5 (m, 2H), 3,94 (m, IH), 3,81 (m, 1H), 2,6,2, 35 (m, 2H), 1,8 (br, IH), 1,45 (s, 9H) (vii) H-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN) x 2 HCl
Boc-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN) (0,23 g, 0,73 mmol; viz stupeň (vi) shora) se rozpustí v 10 ml EtOAc nasyceném plynným HCl a míchá se 30 minut. Rozpouštědlo se odpaří a získá se 0,21 g (100 %) sloučeniny uvedené v podnázvu jako dihydrochloridová sůl.
'11 NMR (500 MHz, D2O) δ 8,64 (s, IH), 8,0- 7.9 (m, 2H), 5,19 (m, 1H), 4,65 -4.55 (m. 2H), 4,20 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 2,88 (m, 1H), 2,64 (m, 1H)
- 75 CZ 303708 B6 (viii) Ph(3-Cl) (5-OCHF2}-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN)
Ke směsi H-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN) x 2 HCl (0,206 g, 0,713 mmol; viz stupeň (vii) shora), Ph(3-Cl) (5-OCHF2>-(R)CH(OH)C(O)OH (0,180 g, 0,713 mmol; víz příklad l(viii) shora) a PyBOP (0,408 g, 0,784 mmol) v 5 ml DMF se přidá dimethylaminopyridin (0,367 g, 3,00 mmol. Směs se míchá přes noc a poté se vlije do vody a extrahuje se třikrát s EtOAc. Spojená organická fáze se promyje vodným hydrogenuhličitanem sodným, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Surový produkt se zpracuje mžikovou chromatografií na silikagelu s EtOAc a získá se čistý produkt. Výtěžek: 0,197 g (61 %).
'H NMR (500 MHz, CDCh) δ 8,63 (m, IH), 8,22 (bt, IH), 7,78 (m, IH), 7,67 (m, IH), 7,21 (m, IH), 7,16 (m, IH), 7,04 (m, IH), 6,56 (t, IH), 4,97 (bd, IH), 4,92 (m, IH), 4,6 - 4,5 (m, 2H), 4,40 (bd, IH), 4,18(m, lH),3,80(m, lH),2,69(m, lH),2,46(m, IH), 1,92 (s, IH)
APCI-MS: (M + 1) = 451/453 m/z ix) Ph(3-Cl) (5-OCHF?)—(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NHCH2—((2--amidino)—5-pyridinyl) xHOAc
Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN) (0,200 g, 0,444 mmol; viz stupeň (viii) shora), octan amonný (1,00 g, 0,0130 mol) a N-acetylcystein (2,00 g, 0,0122 mol) v 10 ml methanolu se zahřívá na 50 °C po dobu 2 dnů. Preparativní RPLC směsí CH3CN:0, IM NH4OAc (30:79) a zpracováním vhodných frakcí opět směsí CH3CN:0,lM NH4OAc (5:95 -40:60) se získá 60 mg (26 %) čisté sloučeniny uvedené v názvu jako její acetátová sůl po sušení vymrazováním ze směsi vody a acetonitrilu. Čistota: 100 %.
'H NMR (500 MHz, D2O, směs rotamerů) δ 8,68 (s, IH, většinový rotamer), 8,62 (s, IH, menšinový rotamer), 8,05 - 7,9 (m, 2H), 7,33 (m, IH, rotamer), 7,27 (m, IH, rotamer), 7,22 (m, 1H, rotamer), 7,17 (m, 1H, rotamer), 7,01 (m, 1H, rotamer), 6,84 (t, 1H), 5,32 (s, IH, většino30 vý rotamer), 5,20 (m, IH, menšinový rotamer), 5,13 (s, IH, menšinový rotamer), 4,88 (m, IH, většinový rotamer), 4,65 -4,55 (m, 2H, většinový rotamer), 4,45 - 4,35 (m, IH, rotamer plus IH, menšinový rotamer), 4,31 (d, IH, menšinový rotamer), 4,2 -4,05 (m, IH plus IH, rotamer), 2,80 (m, IH. menšinový rotamer), 2,61 (m, IH, většinový rotamer), 2,33 (m, IH, většinový rotamer),
2,24 (m, 1H, menšinový rotamer), 1,93 (s, 3H) BC-NMR (100 MHz; D2O): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, směs rotamerů) δ 181,6,
173,3, 172,7, 172,6, 172,3, 162,6, 162,3
APCI-MS: (Μ + 1) = 468/470 m/z
- 76CZ 303708 B6
Příklad 35
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze--NH-<HH(2-methoxyamidino)-5-pyridinyl)
(i) Boc \H CH2 [(2 {amino(hydroxylimino)methyI))-5-pyridinyl]
5-(terc-Butoxykarbonylaminomethyl)pyridin-2—karbonitril (1,00 g, 4,29 mmol; viz příklad 34 (iv) shora) se rozpustí v 10 ml ethanolu a přidá se hydroxylaminhydrochlorid (0.894 g, io 0,0129 mol) a triethylamin (1,30 g, 0,0129 mol). Směs se míchá při teplotě místnosti 6 dnů. Směs se rozdělí mezi vodu a methylenchlorid. Vodná vrstva se extrahuje s methylenchloridem a spojené organické fáze se promyjí s vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se.
Výtěžek: 0,96 g (84 %).
'H NMR (400 MHz, aceton-d6) δ 9,01 (bs, 1H). 8,50 (bs, IH), 7,87 (m, IH), 7,70 (m, IH), 6,58 (br, IH), 5,70 (br, 2H), 4,31 (d, 2H), 1,41 (s, 9H) (íí) Boc-Aze-NH-CH2-(2-(amidino)-5-pyridinyl) x HOAc
Tato reakce se provede podle metody, kterou popsal Judkins et al., Synth. Comm. (1998) 4351. Suspenze Boc-NH-CH2-[(2-(amino(hydroxylimino)methyl))-5-pyridinylu] (0,910 g, 3,42 mmol; viz stupeň (i) shora), anhydridu kyseliny octové (0,35 ml, 3,7 mmol) a 0,35 g 10% Pd/C (50% vlhkost) ve 100 ml kyseliny octové se hydrogenuje při tlaku 0,505 MPa po dobu
5 hodin. Směs se filtruje přes Celit a koncentruje. Zbytek se suší vymrazováním z vody a acetonitrilu a získá se 0,97 g (92 %) sloučeniny uvedené v podnázvu.
Ίΐ NMR (500 MHz, CDjOD) δ 8,74 (s, IH), 8,12 (d, IH), 7,98 (d, IH), 4.38 (s, 2H), 1,92 (s, 3H), 1,46 (s, 9H) (iii) Boc-NH-CH2-(2-(amino(trimethylsilylethylimino)methyl)-5-pyridinyl)
K suspenzi Boc-NH-CH2-(2-(amidino)-5-pyridinyIu) x HOAc (0,96 g, 3,1 mmol; viz stupeň (ii) shora) v 75 ml THF se přidá roztok uhličitanu draselného (1,07 g, 7,7 mmol) a Teoc-p-nitro35 feny (karbonátu (1,14 g, 4,02 mmol) v 15 ml vody. Směs se míchá přes noc. Přidá se přebytek glycinu a uhličitanu draselného a reakce pokračuje 2 hodiny. THF se odpaří a zbytek se extrahuje třikrát s EtOAc. Spojená organická fáze se promyje s vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Produkt se může použít bez dalšího Čištění.
'H NMR (500 MHz, CDCb) δ 9,31 (br, IH). 8,52 (s, IH), 8,41 (d. IH), 8.35 (br, IH). 7,74 (d, 111), ,97 (br, IH), 4,39 (m. 2H), 4,26 (m, 2H), 1,46 (s, 9H), 1,14 (m, 2H), 0,07 (s, 9H)
- 77 CZ 303708 B6 (iv) H2N-CH2-(24amino(trimethylsilylethylimino)methyl)-5-pyridínyl) x 2 HCI
Boc-NH-CH2-(2-(amino(trimethylsilylethylimino)methyl)-5-pyridinyl) (0,23 g, 0,58 mmol; viz stupeň (iii) shora) se rozpustí v 25 ml EtOAc nasyceném plynným HCI a směs se míchá
30 minut.
Rozpouštědlo se odpaří a produkt se použije bez dalšího čištění.
Výtěžek: 0,21 g(98%).
io 'H NMR (500 MHz, D2O) δ 8,89 (s, IH), 8,25 (s, 2H), 4,55 (m, 2H), 4,42 (s, 2H), 1,20 (m, 2H), 0,09 (s, 9H) (v) Boc-Aze-NH-CH2-(2-(amino(trimethylsilylethy]imino)methyl)-5_pyridtnyl)
K roztoku H2N-CH2-(2Hamino(trimethylsilylethylamino)methyl)-5-pyridÍnylu) x 2 HCI (0,21 g, 0,57 mmol; viz stupeň (iv) shora), Boc-Aze-OH (0,127 g, 0,631 mmol), a TBTU (233 mg, 0,726 mmol) v 5 ml DMF se přidá dimethylaminopyridin (269 mg, 2,20 mmol). Směs se míchá přes noc, vlije se do 100 ml vody a extrahuje se třikrát s EtOAc. Spojená organická fáze se promyje vodným hydrogenuhličitanem sodným, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Surový produkt se zpracuje mžikovou chromatografií na silikagelu s EtOAc a získá se 170 mg (56 %) žádaného produktu.
'H NMR (500 MHz, CDCh) δ 9,3 (br, IH), 8,54 (s, IH), 8,41 (d, IH), 8,36 (br, IH), 7,75 (m, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,56 (m, 2H), 4,26 (m, 2H), 3,93 (m, 1H), 3,80 (m, 1H), 2,6 - 2,4 (ni, 2H),
1,42 (s, 9H), 1,14 (m, 2H), 0,07 (s, 9H) (vi) H-Aze-NH-CH2-(2-(amino(trimethylsilylethylimino)methyl)-5-pyridinyl) x 2 HCI
Boc-Aze-NH-CH2-(2-(amino(trimethylsilylethylÍmino)methyl)-5-pyridinyl) (170 mg,
0,356 mmol; viz stupeň (v) shora) se rozpustí v 25 ml EtOAc nasyceném plynným HCI a směs se míchá 30 minut. Rozpouštědlo se odpaří a produkt se použije bez dalšího Čištění.
Výtěžek: 160 mg (100%).
'H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 9,0 (m, IH), 8,84 (m, IH), 8,23 (d, 2H), 8,10 (m, IH), 5,09 (m, 1H), 4,7-4,6 (m,2H), 4,51 (m, 2H), 4,14 (m, lH),3,97(m, IH), 2,86 (m, lH),2,58(m, IH), 1,22 (m,2H), 0,11 (s, 9H)
-io (vii) Ph(3—Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH3—(2-(amino(trimethylsÍlylethylimino)inelhyl)-5-pyi iuinyl)
K roztoku H-Aze-NH-CH?-(2-(amÍno(trimethylsilylethylimmo)methyl}-5-pyridinylu) x 2 HCI (160 mg, 0,462 mmol; viz stupeň (vi) shora), Ph(3~Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)OH (131 mg, 0,462 mmol; viz příklad l(viii) shora) a PyBOP (263 mg, 0,505 mmol) v 5 ml DMF se přidá diizopropylethylamin (0,30 ml, 1,71 mmol). Směs se míchá přes noc, vlije se do 100 ml vody a extrahuje se třikrát s EtOAc. Spojená organická fáze se promyje s vodným hydrogenuhličitanem sodným a vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Surový produkt se zpracuje mžikovou chromatografií na silikagelu směsí EtOAc:MeOH (95 : 5) a získá se 148 mg (52 %) žádaného produktu.
- 78 CZ 303708 B6 (viii) Ph( 3C1) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-NH-CH2-(2-(methoxyamino(tnmethylsilylethylimino)methyl)-5-pyridinyl)
Suspenze Ph(3-Cl) (5-OCI IF2)-(R)CH(OH>-C(0)OH-Aze-NH-CH2-(24methoxyamino(tri5 methylsilylethylimino)methyl)-5-pyridinylu) (148 mg, 0,242 mmol; viz stupeň (vii) shora) a O-methylhydroxylaminu (202 mg, 2,42 mmol) v 10 acetonitriíu se zahřívá na teplotu 70 °C po dobu 3 hodin. Směs se rozdělí mezi vodu a EtOAc. Vodná vrstva se extrahuje dvakrát s EtOAc a spojená organická fáze se promyje s vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Surový materiál se čistí chromatografií na silikagelu směsí EtOAc:MeOH (95 : 5) a získá se 44 mg (28 %) Čistého ío materiálu.
'H NMR (500 MHz, CDC10 δ 8,55 (m, IH), 8,05 (bt, IH), 7,70 (m, IH), 7,58 (s, IH), 7,56 (d, IH), 7,22 (m, IH), 7,16 (m, IH), 7,03 (m, IH), 6,50 (t, IH), 4,92 (s, IH), 4,89 (τη, IH),
4,55 -4,45 (m, 2H), 4,38 (br, IH), 4,24,1 (m, 3H), 4,00 (s, 3H), 3,73 (m, IH), 2,69 (m, IH), 2,44 (m, IH), 0,97 (m, 2H), 0,02 (s, 9H) (ix) Ph(3-Cl) (5^0CHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-NH-CH2-((2-methoxyamidÍnol)-5-pyridinyl)
Ph(3-Cl) (5-OCHF2>-<R)CH(OH)C(0)-Aze-NHM2H2-(24methoxyamino(trimethylsilylethyl20 imino)methyl)-5-pyridinyl) (44 mg, 0,069 mmol; viz stupeň (viii) shora) se rozpustí ve 2 ml TFA a nechá se reagovat po dobu 1 hodiny. TFA se odpaří a zbytek se rozdělí mezi EtOAc a vodný hydrogenuhličitan sodný. Vodná vrstva se extrahuje s EtOAc a spojená organická fáze se promyje s vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Výtěžek: 30 mg (88 %). Čistota: > 95 %.
lH NMR (500 MHz, CDCb) δ 8,44 (m, IH), 8,03 (bt, IH), 7,91 (m, IH), 7,60 (s, IH), 7,19 (m, IH), 7,13 (m, IH), 7,00 (m, I H), 6,52 (t, IH), 5,6 - 5,45 (br, 2H), 4,90 (s, IH), 4,89 (m, IH), 4,55-4,4 (m, 2H), 4,27 (br, !H),4,12(m, 1H), 3,92 (s, 3 H), 2,68 (m, 1H),2,41 (m, IH) l3C-NMR(100 MHz; CDCb): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky) δ 173,0, 170,9, 152,6
APCI-MS: (Μ + l) = 498/500 m/z
Příklad 36
Ph(3-Cl) (5—OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((5-amidino)-2-pyrimÍdinyl)
(i) 2-Amino-2-iminoethylkarbamát.AcOH
N-Boc-aminoacetonitril (40,2 g, 257.4 mmol) a N-acetylcystein (42,0 g, 257,4 mmol) se rozpustí v methanolu (300 ml) pri teplotě 60 °C a po dobu 18 hodin se směsí prohání amoniak. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Po iontoměničové chromatografií (Amber!it IRA-400 (AcOH)) a rekrystalizaci z acetonu se získá 28,4 g (53 %) sloučeniny uvedené v podnázvu jako bílá pevná látka.
- 79CZ 303708 B6 'H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 4,41 (t, J = 4,9 Hz, IH), 4,01 (s, 2H), 2,91 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 2,01 (s, 3H), 1,46 (s, 911) (ii) 13-Bis(dimethylamino)-2-kyanotrimethiniumperchlorát
Roztok 3-dimethylaminoakrylonitrilu (25,0 g, 260,0 mmol) v chloroformu (75 ml) se přidá po kapkách při teplotě 0 °C k roztoku (chlormethylen)dimethylammoniumchloridu (50,0 g, 390,1 mmol) v chloroformu (175 ml). Reakční směs se míchá další 2 hodiny při teplotě 0 °C a poté se zahřívá na teplotu místnosti přes noc a následně se zahřívá 8 hodin při zpětném toku. io Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Zbytek se přidá ke směsi chloristanu sodného (110 g,
0,898 mmol) ve vodě (150 mi) a ethanolu (300 ml). Směs se zahřívá při zpětném toku po dobu minut, ochladí se a nechá se stát přes noc v mrazáku. Sraženina se sebere a rekrystalizuje se z ethanolu a získá se 23,8 g (52 %) sloučeniny uvedené v podnázvu jako bezbarvé jehličky.
t.t.: 140až 141 °C !H NMR (300 MHz, CDCb) δ 8,24 (s, 2H), 3,9 (s, 6H), 3,51 (s, 6H) (iii) Boc-NH-CH2-(5—kyano)-2—pyrimidin
Směs terc-butyl-2-amino-2-iminoethylkarbamátu.AcOH (5,0 g, 23,8 mmol; viz stupeň (i) shora) a 1,3- bis(dimethylamino)-2-kyanotrimethiniumperchlorátu (6,0 g, 23,8 mmol; viz stupeň (ii) shora) v pyridinu se míchá pod dusíkem při teplotě 70 až 75 °C po dobu 16 hodin a poté se zahřívá při zpětném toku 6 hodin. Směs se ochladí na teplotu místnosti a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Zbytek se extrahuje horkou směsí (1:1) ethylacetátu a chloroformu, filtruje se přes malý polštářek silikagelu a koncentruje a získá se surový produkt. Mžikovou chromatografií na silikagelu, eluováním s chloroformem se získá 4,0 g (71 %) sloučeniny uvedené v názvu jako bezbarvý olej, který stáním tuhne.
t.t.: 86 až 87 °C
Rf = 0,77 (oxid křemičitý, 3:2 ethylacetát/chloroform) 'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9,25 (s, 2H), 7,39 (bt, IH), 4,39 (d, J = 6 Hz, 2H), 1,38 (s, 9H).
BC NMR (750 MHz, DMSCAd6) δ 170,4, 160,3, 155,8, 115,2, 106,9, 80,0, 46,3, 28,1
APCI-MS:(M + 1) = 235 m/z (iv) Boc-Aze-NH-CH2-((5-kyano)-2-pynmÍdínyÍ)
Boc--NH- CH2 -(5 kyano} 2-pynmidin (1,14 g, 4,87 mmol; viz stupeň (iii) shora) se rozpustí v 50 ml EtOAc nasyceného plynným HC1 a nechá se reagovat 1 hodinu a koncentruje se. Zbytek se rozpustí v 20 ml DME a ochladí se na ledové lázni. Přidá se diizopropylethy lamin (3,5 ml, 0.020 mol), Boc-Aze-OH (1,08 g, 5,37 mmol) a HATU (2.80 g, 5,38 mol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Rozpouštědlo se odpaří a produkt se čistí preparativní RPLC za použití směsi ClbCN:0.1M NH4OAc (40 : 60). Acetonitril se odpaří a vodná vrstva se extrahuje třikrát EtOAc. Spojená organická vrstva se suší (MgSO4) a odpaří. Výtěžek: 1,12 g (72 %).
Ή NMR (400 MHz. CDCb) δ 8,95 (s, 2H), 4,82 (d, 2H), 4,74 (m, IH), 3,95 (m, 1 H), 3,84 (m, IH), 2,6 - 2,4 (m, 2H), 1,47 (s. 9H)
- 80CZ 303708 Β6 (v) Boc-Aze-NH-CH2-((5 amidino)-2 pyrimidinyl) χ HOAc
Roztok Boc-Aze-NH-CFh—((5-kvano)-2-pyrimídinylu) (0,83 g, 2,6 mmol; viz stupeň (vi) shora), N-acetylcysteinu (0,43 g, 2,6 mmol) a octanu amonného (0.60 g, 7,8 mmol) v 10 tni methanolu se zahřívá na teplotu 60 °C po dobu 2 dnů. Rozpouštědlo se odpaří a surový materiál se Čistí preparativní HPLC za použití gradientu CH3CN:0,lM NH4OAc (5 : 95 až 100: 0). Příslušné frakce se suší vymrazováním a získá se 1,0 g (93 %) žádaného materiálu.
'H NMR (300 MHz, D2O, signály překryté signálem HDO) δ 9,17 (s, 2H), 4,1 - 3,9 (m, 2H), 2,60 (m, IH), 2,29 (m, IH), 1,93 (s,3H), 1,44 (s, 9H) (vi) Boc-Aze—NH-CH2-[( 5—(amíno(trimethy Isily lethyl Ímino)methyl))-2-pyrimidinyl]
K suspenzi Boc-Aze-NH-CH2-((5-amidino)-2—pyrim idinyl u) x HOAc (0,95 g, 2,41 mmol; viz stupeň (v) shora) v 50 ml THF se přidá roztok Teoc-p-n i tro fenyl karbonátu (0,85 g, 3.0 mmol) a uhličitanu draselného (1,0 g, 7,2 mmol) v 10 ml vody. Směs se míchá 24 hodin, koncentruje se a rozdělí se mezi vodu a methylenchlorid. Organická vrstva se promyje dvakrát nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, suší se (Na2SO4) a odpaří. Surový produkt se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu směsí heptanu a ethylacetátu (1 : 1). Výtěžek: 1,04 g (90 %).
'HNMR (300 MHz, CDC13) δ 9,16 (s, 2H), 4,80 (d, 2H), 4,73 (m, IH), 4,26 (m, 2H), 4,0-3,8 (m, 2H), 2,6 - 2,4 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,12 (m, 2H), 0,07 (s, 9H) (vii) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-NH-CH2-[(5-(amino(trimethylsilylethylimino)methyl))-2-pyrimidinyl]
Boc-Aze-NH-CH2-[(5-amino( trimethy Isily lethyl imino)methyl))-2-pyrimidinylJ (0,209 g,
0,437 mmol; víz stupeň (vi) shora) se rozpustí v 25 ml EtOAc nasyceném plynným HCI a směs se nechá reagovat 15 minut. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí ve 4 ml DMF. Přidá se Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,100 g, 0,396 mmol; viz příklad l(viii) shora), PyBOP (0,231 g, 0,444 mmol) a diizopropylethylamin (0,208 g, 1,61 mmol) a směs se míchá 80 minut. Reakční směs se vlije do 100 ml vody a extrahuje se třikrát s EtOAc. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Surový produkt se čistí preparativní RPLC za použití směsi CH3CN:0,lM NH4OAc (1 : 1). Výtěžek: 63 mg (26 %).
'H NMR (400 MHz, CDCh, směs rotamerů) δ 9,3 (br, IH), 9,03 (s, 2H, menšinový rotamer), 9,00 (s, 2H, většinový rotamer), 8,25 (m, IH, většinový rotamer), 7,9 (br, IH), 7.80 (m, IH, menšinový rotamer), 7,2 - 6,9 (m, 3H), 6,50 (t, IH), 5,14 (s, IH, menšinový rotamer), 5,08 (m, IH, menšinový rotamer), 4,94 (s, IH, většinový rotamer), 4,80 (m, IH, většinový rotamer),
4,7 - 4,4 (m, 2H), 4,3 - 3,9 (m, 3H), 3,74 (m, 1H, většinový rotamer), 2,7 - 2.1 (m, 2H), 1,03 (m, 2H), 0,01 (s, 9H) (viii) Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-N H-C H2-((5-(amidino)-2-pyrim idinyl xTFA
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)—(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-[(5-(amino(trimethylsilylethylÍmino)methvl))-2-pyrimidinyl] (21 mg, 0,034 mmol; viz stupeň (vii) shora) se rozpustí v 0.5 ml methylenchloridu a ochladí se v ledové lázni. Přidá se TFA (2 ml) a směs se míchá 60 minut a poté se koncentruje. Produkt se suší vymrazováním z vody a acetonitrilu. Výtěžek: 20 mg (100%). Čistota: 100%.
]H NMR (400 MHz, CD3OD, směs signálů rotamerů překryta signálem HDO) δ 9,08 (s, 2H).
7,4 - 7.1 (m, 3H), 6,88 (t, 1 H, většinový rotamer), 6,85 (t, IH, menšinový rotamer), 5.30 (m. IH, menšinový rotamer), 5.22 (s, IH, menšinový rotamer), 5.20 (s. IH. většinový rotamer). 4.73
-81 CZ 303708 B6 (m, IH, většinový rotamer), 4,34 (m, IH, rotamer), 4,21 (m, IH, rotamer), 4,15 - 3,95 (m, 2H rotamery), 2,73 (m, 1H, rotamer), 2,57 (m, IH, rotamer), 2,45 - 2,25 (m, 2H, rotamery) l?C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, směs rotamerů) δ 173,0, 5 172,6, 172,1, 171,0, 163,4.
APCI-MS: (M + 1) = 469/471 m/z io Příklad 37
Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-NH~CH24(5-methoxyamidÍno)-2-pyrimidinyl)
(i) Ph(3-Cl) (5-OCHF2ý-(R)CH(OH)C(O)-Aze—NH-CH2-[(5-(methoxyamino(trimethylsÍlyl15 ethyl imino)methyl))-2-pyrimidinyl]
Suspenze Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-[(54amino(trimethylsilylethylimino)methyl))-2-pyrimidinylu] (40 mg, 0,065 mmol; viz příklad 36(vii) shora) a O— methylhydroxylaminu (33 mg, 0,40 mmol) ve 3 ml acetonitrilu se zahřívá na 70 °C po dobu io 3 hodin. Směs se rozdělí mezi vodu a EtOAc. Vodná fáze se extrahuje dvakrát EtOAc a spojená organická fáze se promyje vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Výtěžek: 33 mg (79 %).
'H NMR (400 MHz, CDC13, směs rotamerů) δ 8,76 (s, 2H, většinový rotamer), 8,70 (s, 2H, rotamer), 8,18 (m, IH), 7,62 (s, IH), 7,4 - 6,9 (m, 4H), 6,50 (bt, IH), 5,3 - 4,5 (m, 4H), 4,2 25 4,05 (m, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,68 (m, IH), 2,8 - 2,2 (m, 2H), 2,1 (br, IH), 0,96 (m, 2H), 0,01 (s,
9H) (ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-<(5-methoxyamidino)-2pyrimidinyl)
Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-[(5-<methoxyamino(trimethylsilylethylimino)meíhyi))-2-pyriinidÍnyt] (33 mg, 0,052 mmol; viz stupeň (i) shora) se rozpustí v 0.5 m! methylenchloridu a ochladí se v ledové lázni. Přidá se TFA a směs se míchá 2 hodiny a poté se koncentruje. Produkt se suší vymrazováním z vody a acetonitrilu. Výtěžek: 31 mg (81 %).
Čistota: 100 %.
'H NMR (400 MHz, CD3OD, směs rotamerů. signály překryly signálem HDO) Ó 8,96 (s, 2H, rotamer), 8,94 (s, 2H, rotamer), 7,4 - 7,3 (m, IH), 7,2 - 7,1 (m, 211), 6,88 (t, IH, rotamer), 6,85 (t, IH, rotamer), 5,29 (m, IH, rotamer), 5,24 (s, IH, rotamer), 4,19 (m, 1 H, rotamer), 4,15 - 3,95 (m. 2H, rotamery), 3.88 (s, 3H, rotamer), 3,86 (s, 3H, rotamer), 2,72 (m, IH, rotamer), 2,56 (m, 1H, rotamer), 2,45 - 2,25 (m, 2H, rotamery) nC-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, směs rotamerů) Ó 172,8,
172.6, 172.1, 171.8, 167.8, 167,7, 155,1,*152.3, 152,1 45
APCI-MS: (M+ 1) = 499/501 m/z
- 82 CZ 303708 B6
Příklad 38
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F)
(i) 2-Fluor-4-viny lbenzonitril
Roztok 4-brom-2-fluorbenzonitrilu (4.92 g, 0,0246 mol), vinyltributylcínu (0,78 g, 0,246 moi) a tetrakistrifenylfosfínu (0,67 g, 0,58 mmol) v 250 ml toluenu se zahřívá při zpětném toku pod io dusíkem přes noc. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se zpracuje mžikovou chromatografií na silikagelu směsí heptanu a CH2Cb (1:1) až čistým CH2Cl2. Získá se bezbarvý olej, který krystalizuje. Výtěžek: 3,0 g (82 %).
lH NMR (300 MHz, CDCl.,) δ 7,56 (m, 1H), 7,3 - 7,2 (m, 2H), 6,69 (m, 1H), 5,89 (d, 1H), 5,51 (d, IH) (ii) 2-Fluor-4-hydroxy methy lbenzonitril
Ochlazeným roztokem (-78 °C) 2—fluor—4 -vinylbenzonitrilu (1,3 g, 8,8 mmol; viz stupeň (i) shora) v 40 ml CH2C12 a 5 ml methanolu se probublává ozon (50 l/hodinu, 29 g/m3) po dobu 30 minut. Poté se probublává argon, aby se odstranil přebytek ozonu. Přidá se borohydrid sodný (0,67 g, 0,018 mmol) a chladicí lázeň se odstaví. Směs se míchá a nechá se reagovat 1 hodinu. Směs se odpaří a přidá se 2M HCI. Směs se extrahuje dvakrát s diethyletherem a spojené etherové frakce se suší (Na2SO4) a odpaří. Surový produkt krystalizuje. Výtěžek: 1,1 g (81 %).
'H NMR (300 MHz, CDCb) δ 7,59 (m, IH), 7,3 - 7.2 (m, 2H), 4,79 (d, 2H), 2,26 (t, IH) (iii) 4-Kyano-3-fluorbenzylmethansulfonát
2-Fluor-4-hydroxymethylbenzonitril (1,3 g, 8,6 mmol; viz stupeň (ii) shora) se rozpustí v 50 ml CH2C12 a ochladí se v ledové lázni. Přidá se triethylamin (0,87 g, 8,6 mmol) a methansulfonylchlorid (0,99 g, 8,7 mmol). Reakční směs se míchá 1,5 hodiny a promyje se IM HCI. Organická fáze se suší (Na?SO4) a odpaří se. Produkt se může použít bez Čištění. Získá se bezbarvý olej:
1,8 g (92%).
'HNMR (400 MHz. CDCb) δ 7,66 (m. 1 H), 7,35 - 7.3 (m, 2H), 5,26 (s, 2H), 3.07 (s, 3H) (iv) 4-Azidomethvl-2-fluorbenzonitril
K ledem chlazenému roztoku 4-kyano-3-fluorbenzylmethansulfonátu (1,8 g, 7,9 mmol; viz stupeň (iii) shora) se přidá azid sodný (0,80 g, 0,012 mol). Směs se míchá přes noc a poté se vlije do 200 ml vody a extrahuje se třikrát s diethyletherem. Spojené etherové fáze se promyjí pětkrát s vodou, suší se a odpaří. Surový bezbarvý olej se může použít bez dalšího čištění. Výtěžek: 1,2 g (87%).
-83 CZ 303708 B6 !H NMR (300 MHz, CDCb): δ 7,64 (m, 1H), 7,25 7,18 (m, 2H), 4,47 (s, 2H) (v) 4-Aminomethyl-2-fluorbenzonitril
K suspenzi dihydrátu chloridu cínatého (0,45 g, 2,4 mmol) v 20 ml acetonitrilu se za míchání přidá thiofenol (1,07 g, 9,7 mmol) a triethylamin (0,726 g, 7,17 mmol). Poté se přidá roztok
4-azidornethyl-2-fIuorbenzonitrilu (0,279 g, 1,58 mmol; viz stupeň (iv) shora) v několika ml acetonitrilu. Po 1,5 hodině se azid spotřebuje a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se rozpustí v methylenchloridu a promyje se třikrát s 2M NaOH. Organická fáze se extrahuje dvakrát s 1M HCI. Spojené organické fáze se promyjí methylenchloridem a potom se alkalizují s 2M NaOH a extrahují se třikrát methylenchloridem. Organická fáze se suší (Na2SO4) a po odpaření se získá 0,172 g (72 %) žádané sloučeniny uvedené v podnázvu, která se může použít bez čištění.
1H NMR (400 MHz, CDCb): δ 7,58 (m, IH), 7,3 - 7,2 (m, 2H), 3,98 (s, 2H), 1,55 - 1,35 (br, 2H) (vi) Boc-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN)
K ledem chlazenému roztoku Boc-Aze-OH (0,194 g, 0,96 mmol) v 5 ml DMF se přidá TBTU (0,50 g, 9,6 mmol). Po 30 minutách se přidá další roztok, obsahující 4-aminomethyl—2-fluorbenzonitril (0,17 g, 0,81 mmol; viz stupeň (v) shora) a diizopropylethylamin (0,326 g,
2,53 mmol) v 7 ml DMF. Vzniklý roztok se míchá přes noc při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a produkt se čistí preparativní RPLC za použití směsi CH3CN:0,lM NH4OAc (50:50). Sušením vymrazováním se získá 0,237 g (74 %) žádaného produktu uvedeném v názvu.
'H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 7,70 (m, 1H), 7,35 - 7,25 (m, 2H), 4,65 - 4,35 (m, 3H), 4,0-3,85 (m, 2H), 2,51 (m, lH),2,19(m, IH), 1,40 (s, 9H) (vii) Ph(3-Cl) (5-OCHF?)-(R)CH(OH)C(O)-Aze—NHCH2-Ph(3-F, 4-CN)
Boc-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN) (0,118 g, 0,354 mmol; ze stupně (vi) shora) se rozpustí v 30 ml EtOAc nasyceném plynným HCI. Reakční směs se míchá 20 minut a poté se odpaří. Vzniklá dihydrochloridová sůl a HATU (0,152 g, 0,400 ml) se rozpustí v 5 ml DMF. Tento roztok se přidá k ledem chlazenému roztoku Ph(3-Cl) (5-O-CHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (0,101 g, 0,400 mmol; viz příklad 1 (viii) shora) v 5 ml DMF. Reakční směs se míchá pres noc při teplotě okolí. Rozpouštědlo se odpaří a produkt se čistí preparativní RPLC směsí CH3CN:0,1M NH4OAc (50 : 50). Sušením vymrazením se získá 0,130 (77 %) žádané sloučeniny uvedené v podnázvu.
'Η NMR (500 MHz, CD3OD směr rotamerů): δ 7,7 - 7,6 (m, IH), 7,35 - 7,1 (m, 5H), 6,88 (t, IH, rotamer), 6,86 (t, IH, rotamer), 5,25 - 5,1 (m, IH plus menšinový rotamer z následujícího protonu), 4,80 (m, 1H, většinový rotamer), 4,6 - 4,4 (m, 2H), 4,36 (m, 1H, většinový rotamer),
4,18 (m, IH, většinový rotamer), 4,07 (m, IH, menšinový rotamer), 3,98 (m, IH, menšinový rotamer), 2.70 (m, IH. menšinový rotamer), 2,53 (m, IH, většinový rotamer), 2,29 (m, IH, většinový rotamer), 2,16 (m, 1H, menšinový rotamer) (viii) Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F)
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN), (0,130 g, 0,278 mmol; viz stupeň (vii) shora) se rozpustí v 80 ml ethanolu nasyceném plynným HCI. Směs se nechá reagovat při teplotě místnosti přes noc. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se znovu rozpustí ve 100 ml ethanolu nasyceném plynným amoniakem. Reakce probíhá pomalu při teplotě místnosti po dobu dvou dnů. Teplota se zvýší na 50 °C a reakce pokračuje další 3 dny. Výchozí materiál se spotřebuje a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se čistí preparativní RPLC a sušením vymrazováním se získá 17 mg (13 %) sloučeniny uvedené v názvu jako HOAc sůl.
- 84CZ 303708 B6 'H NMR (600 MHz, CD3OD směr rotamerů): Ó 7,65 - 7,6 (m, IH), 7,4 - 7.3 (m, 3H), 7,25 - 7,1 (m, 2H), 7,15 - 6,7 (m, IH), 5,25 - 5,1 (m, IH plus menšinový rotamer následujícího protonu),
4,8 (rn, IH, většinový rotamer částečně překryt CD?OH), 4,6 - 3,95 (m, 4H), 2.69 (m, I H. menšinový rotamer), 2,56 (m, IH, většinový rotamer), 2,28 (m, IH, většinový rotamer), 2.144 (m.
IH, menšinový rotamer), 1,90 (s, 3H) 13C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, směs rotamerů) δ 180,6,
173,4, 173,1, 172,9, 164,5, 162,3, 159,8 io APCI-MS: (M+l) “ 485/487 m/z
Příklad 39
Ph(3- Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF)
(i) 2,6-Difluor-4[(methylsulfÍnyl)(methylthio)methyl]benzonitril (Methylsulfínyl)(methylthio)methan (7,26 g, 0,0584 mol) se rozpustí ve 100 ml suchého THF pod argonem a ochladí se na -78 °C. Po kapkách a za míchání se přidá butyllithium v hexanu (16 ml 1,6M, 0,0256 mol). Směs se míchá 15 minut. Mezitím se ochladí roztok 3.4,5-trifluorbenzonítrílu (4,0 g, 0,025 mmol) ve 100 ml suchého THF na -78 °C pod argonem a dříve připravený roztok se přidá pomocí kanyly během 35 minut k později připravenému roztoku. Po 30 minutách se chladicí lázeň odstaví a když reakční směs dosáhne teploty místnosti, vlije se do 400 ml vody. THF se odpaří a zbývající vodná vrstva se extrahuje třikrát diethyletherem. Spojené etherové fáze se promyjí s vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří. Výtěžek: 2,0 g (30 %).
'H NMR (500 MHz, CDCh) δ 7,4 - 7,25 (m, 2H), 5,01 (s, IH, diastereomer), 4,91 (s, IH, diastereomer), 2,88 (s, 3H, diastereomer), 2,52 (s, 3H, diastereomer), 2,49 (s, 3H. diastereomer),
2,34 (s, 3H, diastereomer), 1,72 (br, IH) (ii) 2,6-DifluorA—formylbenzonitril
2.6-Difluor-4[(methylsulfinyl)(methylthio)methyl]benzonitril (2,17 g, 8.32 mmol; viz stupeň (i) shora) se rozpustí v 90 ml THF a přidá se 3,5 ml koncentrované kyseliny sírové. Směs se nechá stát při teplotě místnosti 3 dny a následně se vlije do 450 ml vody. Následuje 3x extrakce s EtOAc a spojená etherová fáze se promyje dvakrát vodným hydrogenuhličitanem sodným a poté solankou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Výtěžek: 1,36 g (98 %). Poloha formylové skupiny se stanovila l3C NMR. Signál z fluorovaných uhlíků při 162,7 ppm vykazoval očekávaný kopulační charakteristický rys se dvěma kopulačními konstantami v pořadí 260 Hz a 6,3 Hz, odpovídající ipso a meta kopulaci atomů fluoru.
'HNMR (400 MHz, CDCh): δ 10,35 (s, IH), 7,33 (m. 2H)
- 85 CZ 303708 B6 (iii) 2,6-Difiuor-4-hydroxymethylbenzonitril
2,6-Difluor-4-formylbenzonitril (1,36 g, 8,13 mmol; viz stupeň (ii) shora) se rozpustí v 25 ml methanolu a ochladí se v ledové lázni. Za míchání se přidá po částech borohydrid sodný (0,307 g,
8,12 mmol) a reakční směs se nechá 65 minut. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozdělí mezi diethylether a vodný hydrogenuhličitanu sodný. Etherová vrstva se promyje ještě vodným hydrogenuhličitanem sodným a solankou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Surový produkt krystalizuje brzo a může se použít bez dalšího čištění. Výtěžek 1,24 g (90 %).
‘HNMR (400 MHz, CDCh): δ 7,24 (m, 2H), 4,81 (s, 2H), 2,10 (br, IH) (iv) 4-Kyano-2,6-difluorbenzylmethansulfonát
K ledem chlazenému roztoku 2,6-difluor-4--hydroxymethylbenzonitrilu (1,24 g, 7,32 mmol; viz stupeň (iii) shora) a methansulfonylchloridu (0,93 g, 8,1 mmol) v 60 ml methylenchloridu se přidá za míchání triethylamin (0,81 g, 8,1 mmol). Po 3 hodinách se při 0 °C směs promyje dvakrát 1M HCI a jednou vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Produkt se může použít bez dalšího čištění. Výtěžek: 1,61 g (89 %).
'H NMR (300 MHz, CDCh): δ 7,29 (m, 2H), 5,33 (s, 2H), 3,07 (s, 3H) (v) 4-Azidomethyl-2,6-difluorbenzonitril
Směs 4-kyano-2,6-difluorbenzylmethansulfonátu (1,61 g, 6,51 mmol; viz stupeň (iv) shora) a azidu sodného (0,72 g, 0,0111 mol) v 10 ml vody a 20 ml DMF se míchá při teplotě místnosti přes noc. Vzniklá směs se vlije do 200 ml vody a extrahuje se třikrát diethyletherem. Spojená etherová fáze se promyje pětkrát vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Malý vzorek se odpaří pro analýzu NMR a produkt se krystalizuje. Zbytek se opatrně odpaří, ale nikoliv do sucha. Výtěžek (teoreticky 1,26 g) je téměř kvantitativní (NMR a analytická HPLC).
‘HNMR (400 MHz, CDCh): δ 7,29 (m, 2H), 4,46 (s, 2H) (vi) 4-Aminomethyl-2,6-difluorbenzonitril
Tato reakce se provádí podle postupu popsaném v J. Chem. Res. (M) (1992) 3128. K suspenzi 520 mg 10% Pd/C (50% vlhkost) v 20 ml vody se přidá roztok borohydridu sodného (0,834 g, 0,0221 mol) v 20 ml vody, přičemž se dochází k uvolňování plynu. 4-Azidomethyl-2,6-difluorbenzonitril (1,26 g, 6,49 mmol; viz stupeň (v) shora) se rozpustí v 50 ml THF a přidá se k vodné směsi v ledové lázni během 15 minut. Směs se míchá 4 hodiny, přidá se 20 ml 2M HCI a směs se filtruje přes Celit. Celit se propláchne ještě větším množstvím vody a spojená vodná fáze se promyje s EtOAc a následně se alkalizuje s 2M NaOH. Následuje extrakce třikrát s methylenchloridem a spojená organická fáze se promyje s vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Výsledek: 0,97 g (80%).
lH NMR (400 MHz, CDCh): δ 7.20 (m, 2H), 3,96 (s, 2H), 1,51 (br, 2H) (vii) 2,6--Difluor--4--terč--butoxykarbonylaminomethylbenzonitril
Roztok 4-aminomethyl-2.6-difiuorbenzonitrilu (0,876 g, 5.21 mmol; viz stupeň (vi) shora) se rozpustí v 50 ml THF a přidá se díterc-butyldikarbonát (1,14 g, 5,22 mol) v 10 ml THF. Směs se míchá 3,5 hodiny. THF se odpaří a zbytek se rozdělí mezi vodu a EtOAc. Organická vrstva se promyje třikrát s 0,5 M HCI a vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Produkt se může použít bez dalšího čištění. Výtěžek: 1,38 g (99 %).
- 86 CZ 303708 B6 'H NMR (300 MHz, CDCb): Ó 7,21 (m,2H), 4,95 (br, IH), 4,43 (br, 2H), 1,52 (s,9H) (viii) Boe-Pab(2,6-diF) (OH)
Směs 2,6-difluor-4-terc-butoxykarbonylaminomethylbenzonitrilu (1,38 g, 5,16 mmol; viz stupeň (vii) shora), hydroxylaminhydroch loridu (1,08 g, 0,0155 mol) a triethylaminu (1,57 g, 0,0155 mol) v 20 ml ethanolu se míchá při teplotě místnosti po dobu 36 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozdělí mezi vodu a methylenchlorid. Organická vrstva se promyje s vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Produkt se může použít bez čištění. Výtěžek: 1,43 g (92 %).
to 'H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 7,14 (m, 2H), 4,97 (br, 1H), 4,84 (br, 2H), 4,40 (br, 2H), 1,43 (s, 9H) (ix) Boc-Pab(2,6-diF) x HOAc
Tato reakce se provede podle postupu, který popsal Judkins a kol., Synth. Comm. (1998) 4351. Boc-Pab(2,6—diF) (OH) (1,32 g, 4,37 mmol; viz stupeň (viii) shora), anhydrid kyseliny octové (0,477 g, 4,68 mmol) a 442 mg 10% Pd/C (50% vlhkost) ve 100 ml kyseliny octové se hydrogenuje pri tlaku 0,505 MPa po dobu 3,5 hodiny. Směs se filtruje přes Celit, propláchne se ethano2o lem a odpaří se. Zbytek se suší vymrazováním z acetonitrilu a vody a několika kapek ethanolu. Sloučenina uvedená v podnázvu se může použít bez dalšího čištění. Výtěžek: 0,149 g (99 %).
*H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7,45 (m, 2H), 4,34 (s, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,40 (s, 9H) (x) Boc-Pab(2,6-dtF) (Teoc)
K roztoku Boc-Pab(2,6-diF) x HOAc (1,56 g, 5,49 mmol; viz stupeň (ix) shora) ve 100 ml THF a 1 ml vody se přidá 2-(trimethylsilyl)ethyl-p-nitrofenylkarbonát (1,67 g, 5,89 mmol). Po kapkách se během 5 minut přidá roztok uhličitanu draselného (1,57 g, 0,0114 mol) v 20 ml vody. io Směs se míchá přes noc. THF se odpaří a zbytek se rozdělí mezi vodu a methylenchlorid. Vodná vrstva se extrahuje s methylenchloridem a spojená organická fáze se promyje dvakrát vodným hydrogenuhličitanem sodným, suší se (Na2SO4) a odpaří. Mžikovou chromatografií na silikagelu směsí heptan/EtOAc = 2/1 se získá 1,71 g (73 %) čisté sloučeniny.
'H NMR (400 MHz, CDCb): δ 7,43 (m, 2H), 4,97 (br, 1H), 4,41 (br, 211), 4,24 (m, 2H), 1,41 (s, 9H), 1,11 (m,2H), 0,06 (s, 9H) (xi) Boc-Aze-Pab(2,6-diF) (Teoc)
Boc-Pab(2,6-diF) (Teoc) (1,009 g, 2,35 mmol; viz stupeň (x) shora) se rozpustí v 50 ml EtOAc nasyceném plynným HCI. Směs se nechá 10 minut, odpaří se a rozpustí v 18 ml DMF a poté se ochladí na ledové lázni. Přidá se Boc-Aze-OH (0,450 g, 2,24 mmol), PyBOP (1,24 g,
2,35 mmol) a konečně diizopropylethylamin (1,158 g, 8,96 mmol). Reakční směs se míchá 2 hodiny a poté se vlije do 350 ml vody a extrahuje se třikrát s EtOAc. Spojené organické fáze se promyjí solankou, suší se (Na2SO4) a odpaří. Mžikovou chromatografií na silikagelu směsí heptan: EtOAc (1 : 3) se získá 1,097 g (06 %) žádané sloučeniny.
'H NMR (500 MHz, CDCb): δ 7,46 (m, 2H), 4,65 - 4,5 (m, 3H), 4,23 (m, 2H), 3,87 (m, 1H). 3,74 (m, 1H), 2,45 - 2,3 (m, 2H), 1,40 (s, 9H), 1,10 (m, 2H), 0,05 (s, 9H) (xii) Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-díF) (Teoc)
Boc-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc) (0,256 g, 0,500 mmol; viz stupeň (xi) shora) se rozpustí v 20 ml EtOAc nasyceného plynným HCI. Směs se nechá 10 minut a odpaří se a rozpustí se v 5 ml DMF.
Přidá se Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)OH (0,120 g, 0.475 mmol; viz příklad l(viii)
-87CZ 303708 B6 shora), PyBOP (0,263 g, 0,498 mmol) a nakonec diizopropylethylamin (0,245 g, 1,89 mmol). Reakční směs se míchá 2 hodiny a poté se vlije do 350 ml vody a extrahuje se třikrát s EtOAc. Spojená organická fáze se promyje solankou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Mžikovou chromatografií na silikagelu s EtOAc se získá 0,184 g (60 %) žádané sloučeniny uvedené v podnázvu.
'H NMR (400 MHz, CD3OD, směs rotamerů): δ 7,55 - 7,45 (m, 2H), 7,32 (m, IH, většinový rotamer), 7,27 (m, IH, menšinový rotamer), 7,2 - 7,1 (m, 2H), 6,90 (t, IH, většinový rotamer), 6,86 (t, IH, menšinový rotamer), 5,15 (s, IH, většinový rotamer), 5,12 (m, IH, menšinový rotamer), 5,06 (s, 1H, menšinový rotamer), 4,72 (m, 1H, většinový rotamer), 4,6 - 4,45 (m, 2H), 4,30 io (m, IH, většinový rotamer), 4,24 (m, 2H), 4,13 (m, IH, většinový rotamer), 4,04 (m, IH, menšinový rotamer), 3,95 (m, 1H, menšinový rotamer), 2,62 (m, 1H, menšinový rotamer), 2,48 (m, IH, většinový rotamer), 2,22 (m, IH, většinový rotamer), 2,10 (m, IH, menšinový rotamer), 1,07 (m,
2H), 0,07 (m, 9H) (xiii) (Ph(3-Cl) (5 GCHF2)- (R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2.6^íiF)
Ph(3-CI) (5-OCHF2)—(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2.6—diF) (Teoc) (81 mg, 0,127 mmol; viz stupeň (xii) shora) se rozpustí v 0,5 ml methylenchloridu a ochladí se v ledové lázni. Přidá se TFA (3 ml) a reakční směs se nechá 75 minut, TFA se odpaří a zbytek se suěí vymrazováním z vody a acetonitrilu. Surový produkt se čistí preparativní RPLC směsí CH3CN:0,lM NH4OAc (35 : 65) a získá se 39 mg (55 %) sloučeniny uvedené v názvu jako její HOAc sůl, čistoty 99 %.
'H NMR (400 MHz, CD3OD směs rotamerů): δ 7,5 - 7,4 (m, 2H), 7,32 (m, IH, většinový rotamer), 7,28 (m, IH, menšinový rotamer), 7,2 - 7,1 (m, 3H), 6,90 (t, IH, většinový rotamer),
6,86 (t, menšinový rotamer), 5,15 (s, IH, většinový rotamer), 5,14 (m, IH, menšinový rotamer),
5,07 (s, IH, menšinový rotamer), 4,72 (m, IH, většinový rotamer), 4,65 - 4,45 (m, 2H), 4,30 (m, IH, většinový rotamer), 4,16 (m, IH, většinový rotamer), 4,03 (m, IH, menšinový rotamer),
3,95 (m, IH, menšinový rotamer), 2,63 (m, IH, menšinový rotamer), 2,48 (m, IH, většinový rotamer), 2,21 (m, IH, většinový rotamer), 2,07 (m, IH, menšinový rotamer), 1,89 (s, 3H) 'CNMR (75 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, směs rotamerů), δ 171,9,
171,2, 165,0, 162,8, 160,4
APCI-MS: (M + 1) = 503/505 m/z.
Příklad 40 (Ph(3-CI) (5-OCHF?)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,ó-diF) (OMe)
Směs Ph(3-Cl) (5-CCHF2)-(R)CH(OH)C(O)--Aze-Pab(2,6-diF) (Teoc) (64 mg, 0,099 mmol; viz příklad 39(xíi) shora) a O-methylhydroxylaminhydrochloridu (50 mg, 0,60 mmol) v 4 ml acetonitrilu se zahřívá na 70 °C po dobu 3 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozdělí mezí
- 88CZ 303708 B6 vodu a EtOAc. Vodná vrstva se extrahuje dvakrát s EtOAc a spojená organická fáze se promyje vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Produkt se může použít bez dalšího Čištění,
Výtěžek: 58 mg (87 %).
S 'HNMR (400 MHz, CDCh): δ 7,90 (bt, IH), 7,46 (m, IH), 7,25 -6,95 (m, 5H), 6,51 (t, 1),4,88 (s, IH), 4,893 (m, IH), 4,6 - 4,5 (m, 2H), 4,4 - 3,9 (m, 4H), 3,95 (s, 3H), 3,63 (m, IH), 2,67 (m, IH), 2,38 (m, IH), 1,87 (br, lH),0,98 (m, 2H), 0,01 (s, 9H) io (ii) Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2.<wiiF) (OMe)
Ph(3—Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF) (OMe, Teoc) (58 mg, 0,086 mmol; víz stupeň (i) shora) se rozpustí ve 3 ml TFA, ochladí se v ledové lázni a nechá se reagovat po dobu 2 hodin. ΓΕΑ se odpaří a zbytek se rozpustí v EtOAc. Organická vrstva se promyje dvakrát s vodným uhličitanem sodným a vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Zbytek se suší vymrazováním z vody a acetonitrilu a získá se 42 mg (92 %) sloučeniny uvedené v názvu. Čistota: 94 %.
'H NMR (300 MHz, CDCh): δ 7,95 (bt, IH), 7,2 - 7,1 (m, 4H), 6,99 (m, IH), 6,52 (t, IH), 4,88 (s, IH), 4,85 - 4,75 (m, 3H), 4,6 - 4,45 (m, 2H), 4,29 (br, 1H), 4,09 (m, IH), 3,89 (s, 3H), 3,69 (m, IH), 2,64(m, lH),2,38(m, IH), 1,85 (br, IH) BC-NMR (100 MHz; CDCh): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky) δ 172,1, 169,8, 151,9 APCI MS: (M + 1) = 533/535 m/z
Příklad 41
Ph(3-Cl) (5—OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6~diF)
(i) 2,5-Difluor-4-[(methylsulťinyl)(methylthÍo)methyllbenzonÍtril (Methylsulfinyl)(methylthio)methan (3,16 g, 0,0255 mmol) se rozpustí v 50 ml suchého THF pod argonem a poté se ochladí na teplotu -78 °C. Po kapkách a za míchání se přidá butyl lithium v hexanu (16 ml, 1,6M. 0,0256). Smě se míchá 15 minut. Mezitím se ochladí roztok 2,4.5—trifluorbenzonitrilu (2,0 g, 0,013 mmol) v 50 ml suchého THF na -78 °C pod argonem a dříve připravený roztok se přidá pomocí kanyly během 3 až 5 minut k později připravenému roztoku. Po 30 minutách se chladicí lázeň odstaví, a když reakční směs dosáhne teploty místnosti, vlije se do 200 ml vody. THF se odpaří a zbývající vodná vrstva se extrahuje třikrát diethyietherem. ío Spojené etherové fáze se promyjí s vodou, suší se (Na2S()4) a odpaří. Surový produkt začne krystalovat a může se použít jako takový v příštím stupni.
Výtěžek: 28g(84%).
- 89 CZ 303708 B6 'li NMR (500 MHz, CDCb): δ 7,51 - 7,44 (m, 2H, většinový diastereomer), 7,39 (dd, IH, menšinový diastereomer), 5,00 (s, 1 H, menšinový diastereomer), 4,92 (s, 1 H, většinový diastereomer), 2,59 (s, 3H. menšinový diastereomer), 2,56 (s, 1H, většinový diastereomer), 2,46 (s, 1 H, menšinový diastereomer), 2,40 (s, 1 H, většinový diastereomer) (ii) 2,5-Difluor-4-formylbenzonitril
2.5- Di fluor—4—[(methyl sulfinyl)( methy lthio)methyl]benzon i trii (2,8 g, 0,0107 mol; viz stupeň (i) shora) se rozpustí ve 100 ml THF a přidá se 6,5 g koncentrované kyseliny sírové. Smě se míchá io stát při teplotě místnosti 6 dnů a následně se vlije do 500 ml vody. Následuje 3x extrakce s diethyletherem a spojená etherová fáze se promyje několikrát vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Surový produkt se čistí mžikovou chromatografii na silikagelu za použití směsi heptan:EtOAc (8 : 2). Výtěžek: 1,2 g (67 %). Poloha formylové skupiny se stanovila nC NMR. Uhlíkové signály z fluorovaných uhlíků při 160,1 a 158,4 byly dublety a nikoli kvartéry, kterými by měly být, pokud by formy lová skupina byla ve 2 poloze.
'HNMR (300 MHz, CDCb): δ 10,36 (d, 1H), 7,72 (dd, IH), 7,54 (dd, IH) (iii) 2,5-Difluor-4-hydroxymethylbenzonitril
2.5- Difluor~4-formylbenzonitril (3,60 g, 0,0215 mmol; viz stupeň (ii) shora) se rozpustí v 50 ml methanolu a ochladí se v ledové lázni. Po částech a za míchání se přidá borohydrid sodný (0,815 g, 0,0215 mol) a reakční směs se nechá 45 minut. Přidá se voda (300 ml) a poté opatrně 2M HCl dokud se nedosáhne kyselého pH. Směs se extrahuje třikrát diethyletherem a spojená etherová fáze se promyje s vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří. Surový produkt krystalizuje brzo a může se použít bez dalšího čištění. Výtěžek: 3,1 g (85 %).
'HNMR (300 MHz, CDCb): δ 7,45 (dd, 1H), 7,30 (dd, 1H), 4,85 (s, 2H), 2,10 (br, 1H) (iv) 4-Kyano-2,5-d i fluorbenzyl methansulfonát
K ledem chlazenému roztoku 2.5-ditluor-4-hydroxymethylbenzonitrilu (3,10 g, 0,0183 mmol; viz stupeň (iii) shora) a methansulfony[chloridu (2,21 g, 0,0192 mol) v 60 ml methylenchloridu se přidá za míchání triethylamin (1,95 g, 0,0192 mol). Po 1,5 hodině při 0 °C se směs promyje vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Produkt se může použít bez dalšího čištění. Výtěžek: 4,5 g (99 %).
'HNMR (300 MHz, CDCb): δ 7,45 - 7,35 (m, 2H), 5,32 (s, 2H), 3,13 (s, 3H) (v) 4-Azidomethyl-2,5-difluorbenzonitril
Směs 4-kyano-2,5-difluorbenzylmethansulfonátu (4,5 g, 0,0182 mol; viz stupeň (iv) shora) a azidu sodného (2,0 g, 0,031 mol) v 20 ml vody a 40 ml DMF se míchá při teplotě místnosti 2 hodiny. Směs se poté vlije do 300 ml vody a extrahuje se třikrát diethyletherem. Spojená ethe45 rová fáze se promyje několikrát vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Malý vzorek se odpaří pro účely NMR a produkt krystalizuje. Zbytek se opatrně odpaří ale nikoliv úplně do sucha. Výtěžek (teoreticky 3,5 g) je téměř kvantitativní (založeno na NMR a analytické HPLC).
'HNMR (500 MHz. CDCl·,): δ ,38 (dd, 1H), 7,32 (dd, 1H), 4,54 (s, 2H) (vi) 4-Aminomethyl-2,5-difluorbenzonitril
Tato reakce se provádí podle postupu popsaném v J. Chem. Res. (M) (1992) 3128. K suspenzi 300 mg 10% Pd/C (50% vlhkost) v 20 ml vody se přidá roztok borohydridu sodného (0,779 g, ^5 0,0206 mol) v 20 ml vody, přičemž se dochází k uvolňování plynu. 4-Azidomethyl-2,5-di-90CZ 303708 B6 fiuorbenzonitril (1,00 g, 5,15 mmol; ze stupně (v) shora) se rozpustí v 60 ml THF a přidá se k vodné směsi v ledové lázni. Směs se míchá 1,5 hodiny, přidá se 10 ml 2M HCl a směs se filtruje přes Celit. Celit se propláchne ještě větším množstvím vody a spojená vodná fáze se promyje s EtOAc a následně se alkalizuje s 2M NaOH. Následuje extrakce třikrát s methylenchloridem a spojená organická fáze se promyje s vodu, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Výtěžek: 0,47 g (54 %).
'HNMR (300 MHz, CDCI.·,): δ 7,39 (dd, IH), 7,29 (dd, 1H), 3,99 (s, 2H), 1,45 (br, 2H) (vii) 2,5-Difluor-4-terc-butoxykarbonylaminomethylbenzonitril
Roztok 4-aminomethyl-2,5-difluorbenzonitrilu (0,46 g, 2,7 mmol; viz stupeň (vi) shora) a di-terc-butyldikarbonátu (0,60 g, 2,7 mmol) v 10 ml THF se míchá přes noc. THF se odpaří a zbytek se rozdělí mezi vodu a EtOAc. Organická vrstva se promyje s vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří. Produkt se může použít bez dalšího čištění. Výtěžek: 0.71 g (97 %).
'HNMR (300 MHz, CDCb): δ 7,35 - 7,2 (m, 2H), 5,11 (br triplet, IH), 4,38 (d, 2H), 1,45 (s, 9H) (viii) Boc--Pab(2.5-diF) (OH)
Směs 2,5-difluor—4-tere-butoxykarbonylaminomethylbenzonitrilu (0,70 g, 2.6 mmol; viz stupeň (vii) shora), hydroxy lam inhydrochloridu (0,54 g, 7,8 mmol) a triethylaminu (0,79 g, 7,8 mmol) v 10 ml ethanolu se míchá při teplotě místnosti 6 dnů. Směs se rozdělí mezi vodu a methylenchlorid. Vodná fáze se extrahuje s methylenchloridem a spojená organická fáze se promyje s vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Produkt se může použít bez dalšího čištění. Výtěžek: 0,72 g (92 %).
'HNMR (500 MHz, CD,OD): δ 7,27 (dd, IH), 7,12 (dd, IH), 4,29 (s,2H), 1,47 (s,9H) (ix) Boc-Pab(2,5-diF) x HOAc
Tato reakce se může provádět postupem, který popsal Judkins a kok, Synth. Comm. (1998) 435 1. Boc-Pab(2,5-diF) (OH) (0,70 g, 2,3 mmol; viz stupeň (viii) shora), anhydrid kyseliny octové (0,25 g, 2,4 mmol) a 230 mg (10% Pd/C (50% vlhkost) v 70 ml kyseliny octové se hydrogenuje při tlaku 0,505 MPa po dobu 2,5 hodin. Směs se filtruje přes Celit a odpaří se. Zbytek se suší vymrazováním z acetonitrilu a vody. Produkt se může použít bez dalšího čištění v příštím stupni. Výtěžek; 0,80 g (100%).
lH NMR (500 MHz, CD3OD): δ 7,49 (dd, IH), 7,31 (dd, IH), 4.33 (s, 2H), 1,91 (s. 3H), 1,46 (s, 9H) (x) Boc-Pab(2,5-diF) (Teoc)
K suspenzi Boc-Pab(2,5-diF) x HOAc (0,80 g, 2,3 mmol; viz stupeň (ix) shora) v 50 ml THF se přidá 2-(trimethylsilyl)ethyl-p-nÍtrofenylkarbonát (0,85 g, 3.0 mmol). Potom se přidá po kapkách roztok uhličitanu draselného (0,80 g, 5,8 mmol) v 10 ml vody. Směs se míchá přes noc. Přebytek Teoc činidla se rozloží přidáním glycinu (0,100 g) a uhličitanu draselného (0,75 g) k roztoku a směs se nechá reagovat další 2 hodiny. THF se odpaří a zbytek se rozdělí mezi vodu a methylenchlorid. Vodná vrstva se extrahuje s methylenchloridem a spojená organická fáze se promyje vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Mžikovou chromatografií na silikagelu směsí heptan:EtOAc (2:1) se získá 0.72 g (72 %) čisté sloučeniny.
'H NMR (400 MHz, CDCb): δ 8,00 (dd. IH), 7,15 (dd. IH). 4,98 (br, IH), 4,36 (bd, 2H), 4,24 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1.12 (m, 2H), 0,07 (s, 9H)
- 91 CZ 303708 B6 (xi) H-Pab(2,5-diF) (Teoc) x 2 HCl
Boc-Pab(2,5-diF) (Teoc) (0,38 g, 0,88 mmol; viz stupeň (x) shora) se rozpustí v 50 ml EtOAc nasyceném plynným HCl. Směs se nechá 30 minut stát a odpaří se.
'H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 7,75 - 7,6 (m, 2H), 4,46 (m, 2H), 4,3 (s, 2H), 1,15 (m, 2H), 0,07 (s, 9H) (xii) Boc-Aze-Pab(2,5-diF) (Teoc)
K. míchanému roztoku Boc-Aze-OH (0,189g, 0,94 mmol), H-Pab(2-díF) (Teoc) x 2 HCl (0,36 g, 0,89 mmol; viz stupeň (xi) shora) a PyBOP (0,54 g, 1,03 mmol) v 5 ml DMF se přidá diizopropylethylamin (0,49 g, 3,8 mmol) a směs se nechá reagovat přes noc. Vzniklá směs se poté vlije do vodného hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje se třikrát s EtOAc. Spojená organická fáze se promyje s vodou, suší se (Na?SO4) a odpaří se. Mžikovou chromatografií na silikagelu směsí heptan:EtOAc (3:7) se získá dostatečně čistá sloučenina. Výtěžek 0,25 g (48 %).
'H NMR (500 MHz, CDCf): δ 7,98 (dd, IH), 7,13 (dd, IH), 4,69 (m, IH), 4,53 (m, 2H), 4,22 (m, 2H), 3,92 (m, lH),3,79(m, IH), 2,55 - 2,35 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,11 (m, 2H), 0,06 (s, 9H) (xiii) H-Aze-Pab(2,5-diF) (Teoc) x 2 HCl
Boc-Aze-Pab(2,5-diF) (Teoc) (0,25 g, 0,49 mmol; viz stupeň (xii) shora) se rozpustí v 50 ml EtOAc nasyceném s plynným HCl. Směs se nechá 30 minut stát a odpaří se. Produkt se použije v příštím stupni bez dalšího čištění. Výtěžek: 0,23 g (97 %).
lH NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7,59 (dd, IH), 7,47 (dd, IH), 5,14 (m, IH), 4,54 (m, 2H), 4,48 (m, 2H), 4,15 (m, 1H),3,96 (m, IH), 2,87 (m, IH), 2,56 (m, IH), 1,17 (m, 2H), 0,05 (s, 9H) (xiv) Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF) (Teoc)
K roztoku Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH (12 g, 0,47 mmol; viz příklad l(viii) shora), H-Aze-Pab(2.-diF) (Teoc) x 2 HCl (0,23 g, 0,47 mmol; viz stupeň (xiií) shora) a PyBOP (0,27 g, 0,52 mmol) v 10 ml DMF se přidá diizopropylethylamin (0,245 g, 1,90 mmol), a směs se míchá přes noc. Výsledná směs se vlije do vody a extrahuje se třikrát s EtOAc. Spojená organická fáze se promyje vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Mžikovou chromatografií na silikagelu s EtOAc se získá 100 mg čisté frakce a 30 mg frakce čistoty 90 %. Celkový výtěžek: 0,13 g (41 %).
'HNMR (400 MHz, CDCh): δ 9,80 (br, IH), 8,05 (bt, 1H), 7,94 (dd, IH), 7,20 (m, IH), 7,2-7,1 (m, 2H), 7,02 (m, IH), 6,54 (t, IH), 4,93 (s, IH), 4,91 (m, IH), 4,51 (m, 2H), 4,28 (br, IH), 4,23 (m, 2H), 4,13 (m, IH), 3,74 (m, IH), 2,69 (m, IH), 2,43 (m, IH), 1,73 (br, IH), 1,11 (m, 2H), 1.11 (s, 9H) (xv) Ph(3-Cl) (5--OCHF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5--díF)
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF) (Teoc) (60 mg 0,093 mmol) čisté frakce ze stupně (xiv) shora) se rozpustí ve 3 ml TFA a nechá se stát při teplotě místnosti 1 hodinu. TFA se odpaří a zbytek se suší vymrazováním z vody a acetonitrilu a získá se 55 mg (96 %) sloučeniny uvedené v názvu, jako její TFA sůl, čistoty > 99 %.
‘H NMR (500 MHz, CD3OD směs rotamerů): δ 7,55 - 7,3 (m, 3H), 7,2 - 7,1 (m, 2H), 6,88 (t, IH, většinový rotamer), 6,86 (t, IH. menšinový rotamer), 5,22 (m, IH, menšinový rotamer), 5,20 (s, IH, většinový rotamer), 5.13 (s, IH, menšinový rotamer), 4.80 (m, 1 H, většinový rotamer), 4.6 -4.45 (m, 2H), 4,36 (m, IH. většinový rotamer), 4,19 (m, IH, většinový rotamer), 4,07
-92 CZ 303708 B6 (m, IH, menšinový rotamer), 3,98 (m, IH, menšinový rotamer), 2,70 (m, IH, menšinový rotamer), 2,54 (m, l H, většinový rotamer), 2,28 (m, 1 H, většinový rotamer), 2,14 (m, 1H, menšinový rotamer) k’C-NMR (75 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, směs rotamerů) Ó 173,0,
172,6, 172,1, 172,0, 162,4
APCI-MS: (M + 1) = 503/505 m/z.
Příklad 42
Ph(3—Cl) (5A>CHF2HR)CH(OH)C(O>-Aze-Pab(2,5-diF) (OMe)
(i) Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5^diF) (OMe, Teoc)
Směs Ph(3—Cl) (5-OCHF2><R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF) (Teoc) (40 mg 0,062 mmol; viz příklad 41(xiv) shora) a CAn ethyl hydroxy lamin hydrochloridu (58 mg, 0,70 mmol) v 5 ml acetonitrilu se zahřívá při teplotě 70 °C po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozdělí mezi vodu a EtOAc. Vodná vrstva se extrahuje s EtOAc a spojená organická fáze se promyje s vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se. Produkt se může použít bez dalšího čištění.
Výtěžek: 35 mg (84%).
'HNMR (600 MHz, CDCb): δ 7,99 (bt, IH), 7,72 (s, IH), 7,20 (m, IH), 7,15-7,1 (m, IH), 7,07 (dd, IH), 7,01 (m, IH), 6,53 (t, IH), 4,90 (s, lH),4,88(m, IH), 4,48 (m, 2H), 4,2-4,1 (m, 3H),
3,95 (s,3H), 3,67 (m, 1H),2,68 (m, 1II), 2,41 (m, IH), 0,97 (m, 2H), 0,07 (s, 9H) (ii) Ph(3-CI) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF) (OMe)
Ph(3-CI) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-diF) (OMe, Teoc) (35 mg, 0,052 mmol; viz stupeň (i) shora) se rozpustí ve 3 ml TFA a nechá se reagovat 30 minut. TFA se odpaří a zbytek se suší vymrazováním z vody a acetonitrilu a získá se 29 mg (99 %) sloučeniny uvedené v názvu. Čistota: 97 %.
'H NMR (300 MHz. CDCb): δ 8,01 (bt, 1 H), 7,45 (dd, IH), 7.20 (m, 1 H), 7.15 (m, IH). 7,09 (dd, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,54 (t, 1 ί I), 5,2 - 5,0 (m, 2H), 4,95 - 4.85 (m, 2H), 4,6 - 4,4 (m, 2H),
4.25 (br. IH), 4,13(m, IH), 3.90 (s, 3H), 3,71 (m, tH),2,69(m, 1H), 2,43 (m, IH) 13C-NMR (75 1MHz; CDCb): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky) δ 173,0. 170.9, 152.6 APCI-MS: (Μ + 1) = 533/535 m/z.
- 93 CZ 303708 B6
Příklad 43
Ph(3—C l) (5—OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab (OEt) (i) Ph(3-CI) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt, Teoc)
Ph(3-CI) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (55 mg, 0,090 mmol; viz příklad l(ix) shora) a O-ethylhydroxylaminhydrochlorid (53 mg, 0,54 mmol) se rozpustí ve 4 ml THF. Směs se míchá při teplotě 60 °C po dobu 5 hodin. Rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se chromatografuje na silikagelu eluováním směsí methylenchlorid:methanol (95:5) a získá se 55 mg (93 %) sloučeniny uvedené v podnázvu.
‘H NMR (400 MHz, CDCI3): δ 7,84 (bt, IH), 7,59 (bs, IH), 7,47 (bd, IH), 7,29 (bd, IH), 7,21 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,53 (t, 1H), 4,90 (s, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,55 - 4,4 (m, 2H),
4,25 - 4,1 (m, 5H), 3,69 (m, IH), 2,66 (m, IH), 2,41 (m, IH), 1,33 (t, 3H), 0,98 (m, 2H), 0,02 (s, 9H) (ii) Ph(3-Cl) (5=OCHF2)-(R)CH(OH)C(O>-Aze—Pab (OEt)
K ledem chlazenému roztoku Ph(3-CI) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt, Teoc). (55 mg, 0,084 mmol; viz stupen (i) shora) v 0,5 ml methylenchloridu se přidají 3 ml TFA. Směs se míchá (ledová lázeň) po dobu 60 minut. Materiál se čistí za použití preparativní HPLC. Příslušné frakce se spojí a suší se vymrazováním (2x) a získá se 20 mg (47 %) sloučeniny uvedené v názvu.
H NMR (400 MHz, CD3OD) rotamery: δ 7,59 (bd, 2H), 7,35 (m, IH), 7,32 (bd, 2H), 7,25 - 7,1 (m, 2H), 6,89 (t, IH, většinový rotamer), 6,86 (t, IH, menšinový rotamer), 5,18 (s, IH, většinový rotamer), 5,18 (m, IH, menšinový rotamer), 5,11 (s, IH, menšinový rotamer), 4,77 (m, IH),
4,5 - 4,3 (m, 3H), 4,2 - 3,9 (m, 3H), 2,67 (m, IH, menšinový rotamer), 2,52 (m, IH, většinový rotamer), 2,28 (m, 1H, většinový rotamer), 2,15 (m, IH, menšinový rotamer), 1,28 (t,3H) l3C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery) δ 172,4,
171,9, 171,4, 153,8, 152,3
MS (m/z) 509 (M-l)’, 511 (M + lf
Příklad 44
Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr) (i) Ph(3—Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr, Teoc)
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) (53 mg 0,087 mmol; víz příklad l(íx) shora) a O-n-propylhydroxylaminhydrochlorid, 58 mg (0,52 mmol) sc rozpustí ve 4 ml THF. Směs se míchá při teplotě 60 °C po dobu 5 hodin. Rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se chromatografuje na silikagelu směsí methylenchloridrmethanolu (95:5) a získá se 51 mg (88 %) sloučeniny uvedené v podnázvu.
Ή NMR (400 MHz, CDCh); δ 7,84 (m, IH), 7,59 (bs, IH), 7,47 (bd, 2H), 7,28 (bd, 2H), 7,21 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 7.02 (m, 1H). 6,53 (t, 1H), 4,90 (s, 1 H), 4,85 (m. 1H), 4,55 - 4.4 (m, 2H),
4,2-4,05 (m, 5H), 3,69 (m, 1 H). 2,65 (m, 1 H), 2,41 (m, IH), I,74(m,2H), 1,05 -0,95 (m. 5H), 0,03 (s, 9H)
-94CZ 303708 B6 (ii) Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab (OnPr)
K ledem chlazenému roztoku Ph(3-Cl) (5-OCHF2HR)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OnPr,Teoc) (51 mg, 0,078 mmol; viz stupeň (i) shora) v 0,5 ml methylenchloridu se přidají 3 ml TFA. Směs se míchá (ledová lázeň) po dobu 110 minut. Materiál se čistí za použití preparativní HPLC. Příslušné frakce se odpaří, suší se vymrazováním a získá se 20 mg (47 %) sloučeniny uvedené v názvu.
'H NMR (500 MHz, CDjOD) rotamery: δ 7,61 (bd, 2H), 7,38 (m, IH), 7,35 (bd, 2H), 7,22 (m, IH, většinový rotamer), 7,18 (m, IH), 7,15 (m, IH, menšinový rotamer), 6,92 (t, IH, většinový rotamer), 6,89 (t, IH, většinový rotamer), 5,20 (s, IH, většinový rotamer), 5,20 (m, IH, menšinový rotamer), 4,80 (m, IH, většinový rotamer), 4,5 - 4,4 (m, 2H, zahrnující menšinový rotamer odpovídající většinovému při 4,37), 4,37 (m, IH, většinový rotamer), 4,18 (τη, IH, většinový rotamer), 4,09 (m, IH, menšinový rotamer), 3,99 (m, 2H), 2,70 (m, IH, menšinový rotamer),
2,54 (m, IH, většinový rotamer), 2,30 (m, IH, většinový rotamer). 2,18 (m, IH, menšinový rotamer), 1,73 (m,2H), 1,01 (t, 3H) nC-NMR (125 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery) Ó 171,4,
153,8, 152,3
MS (m/z) 523 (M-lf, 525 (M + lf
Příklad 45
Ph(3 Cl) (5-OCHF2)-ýR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr) (i) Ph(3-Cl) (5--OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OiPr, Teoc)
Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (50 mg 0,082 mmol; viz příklad l(ix) shora) a O-i-propylhydroxylaminhydrochlorid, 55 mg (0,49 mmol) se rozpustí ve 4 ml THF. Směs se míchá při teplotě 60 °C po dobu 5 hodin. Rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se chromatografuje na silikagelu, eluováním směsí methylenchlorid .methanol (95:5) a získá se 46 mg (84 %) sloučeniny uvedené v podnázvu.
'H NMR (400 MHz. CDCb): δ 7,84 (m, IH), 7,57 (bs, IH), 7,48 (bd, 2H), 7,29 (bd, 2H), 7,21 (m, IH), 7,14 (m, 1H), 7,02 (m, IH), 6,53 (t, IH), 4,91 (s, IH), 4,87 (m, IH), 4,55 - 4,45 (m, 2H), 4,42 (m, 1H), 4,2 - 4,1 (m, 3H), 3,69 (m, IH), 2,66 (m, IH), 2,42 (m, IH), 1,30 (d, 6H), 0,98 (m, 2H), 0,02 (s, 9H) (ii) Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab (OiPr)
K ledem chlazenému roztoku Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr,Teoc) (46 mg, 0,069 mmol; viz stupeň (i) shora) v 5 ml methylenchloridu se přidají 3 ml TFA. Směs se míchá (ledová lázeň) po dobu 150 minut. Materiál se čistí za použití preparativní HPLC. Příslušné frakce se odpaří a suší se vymrazováním (2x) a získá se 22 mg (55 %) sloučeniny uvedené v názvu.
'H NMR (400 MHz, CD3OD) rotamery: δ 7,59 (d, 2H), 7,35 (m, 1 H), 7,32 (d, 2H), 7,19 (m. 1 H, většinový rotamer), 7,15 (m, IH), 7,12 (m, IH, menšinový rotamer), 6,89 (t, IH, většinový rotamer), 6,86 (t, IH, menšinový rotamer), 5,18 (s, IH, většinový rotamer), 5,18 (m, IH, menšinový rotamer), 5,12 (s, 1 H, menšinový rotamer). 4,78 (m, IH, většinový rotamer), 4.5 - 3,9 (m, 5H). 2.67 (m, IH, menšinový rotamer), 2.52 (m, IH, většinový rotamer), 2,28 (m, IH, většinový rotamer), 2,15 (m, IH, menšinový rotamer), 1.26 (d. 6H)
-95 CZ 303708 B6 l3C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíky, rotamery) δ 171,9,
171,4, 153,6,
MS (m/z) 523 (M-l) , 525 (Μ + 1)'
Příklad 46 io Sloučeniny uvedené v názvu v příkladech 3, 6, 9, 10, 13 až 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 28, 32, 34, 36, 38,39a41 byly testovány v testu A shora a bylo zjištěno, že vykazují hodnoty IC50TT menší než 3,5 μΜ. Sloučeniny z příkladů 3, 6, 9, 10, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 27, 32, 34 a 39 vykazují hodnoty menší než 0,02 μΜ; sloučeniny z příkladů 25 a 28 menší než 0,03 μΜ, sloučeniny z příkladu 14 menší než 0,04 μΜ; sloučeniny z příkladů 38 a 41 menší než 0,15 μΜ.
Příklad 47
Sloučeniny uvedené v názvu příkladů 3, 6, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 28, 32 a 34 byly testo20 vány v testu D shora a bylo zjištěno, že vykazují hodnoty IC50 APTT menší než 1 μΜ.
Příklad 48
Sloučeniny uvedené v názvu v příkladech 1, 2, 4, 5, 7, 12, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 29, 30, 33 a 43 až 45 byly testovány v testu E shora a bylo zjištěno, že vykazují orální a/nebo parenterální biologickou dostupnost u krys jako odpovídající aktivní inhibitor (volný amidin).
Příklad 49
Sloučeniny uvedené v názvu v příkladech 1, 2, 7, 8, 11, 12, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 29, 30, 33, 37, 40, 43 až 45 byly testovány v testu G shora a bylo zjištěno, že konvertují na odpovídající aktivní inhibitor (volný amidin) v jaterních mikrosomech z lidí a krys.
Zkratky
Ac = acetyl
AcOH - kyselina octová io APCI = chemická ionizace při atmosférickém tlaku (vhledem k MS)
API = ionizace při atmosférickém tlaku (vhledem k MS) aq. - vodný
AUC - oblast pod křivkou
Aze “ (S)-azetidin-2-karboxylát (pokud není specifikováno jinak)
AzeOH - azetidin-2-karboxylová kyselina Bn - benzyl
Boc tec-butyloxykarbonyl BSA = hovězí sérumalbumin Bu - butyl
Bzl = benzyl
CI = chemická ionizace (ve vztahu k MS)
DCC - dicyklohexylkarbodiimid
-96 CZ 303708 B6
DIBAL-H = diizobutylaluminiumhydrid DIPEA = diizopropylethylamin DMAP = 4--(NN-d imethy lam inojpyridin DMF = dimethylformamid
DMSO = dimethylsulfoxid
DVT = hluboká žilní trombóza
EDC = hydrochlorid l-Q-dimethyl-aminopropylf-3-ethylkarbodiirnidu e.e. = enantiomemí přebytek Et = ethyl io ether = diethylether EtOAc = ethylacetát EtOH = ethanol EbO = diethylether
HATU = 0-(azabenzotríazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluroniumhexafluorfosťát
HBTU = [Ν,Ν,',Ν -tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uronÍumhexaťluorfosfát]
HCI = kyselina chlorovodíková, plynný chlorovodík nebo hydrochloridová sůl (v závislosti na kontextu)
Hex = hexany
HPLC = vysokoúčinná kapalinová chromatografíe
LC = kapalinová chromatografíe Me - methyl
MEM = methoxyethoxymethyl
MeOH = methanol
MS = hmotností spektrometrie
MTBE = methy Iterc-buty lether
NADH = nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma NADPH = fosfát nikotinamidadenindinukleotidu, redukovaná forma NIH = National Institute of Health (US)
N1HU = National Institute of Health units
NMR = nukleární magnetická rezonance OAc = acetát
Pab = p-amidinobenzylamino H-Pab = p-amidinobenzylamin Ph = fenyl
Pr = propyl
Pro = (S)-prolinyl
PyBOP = (benzotriazol-l-yloxy)tripyrrolidinofosfoniumhexafluorfosfát QF = tetrabutylamoniumfluorid
RedAl = sodium bis(2-methoxyethoxy)aluminiumhydrid
RPLC = vysokoúčinná kapalinová chromatografíe s reverzními fázemi rt/RT = teplota místnosti SOP - standardní operační postup
TBTU - [N,N,N',Nř-tetramethyÍ-0-benzotriazol-l-yl)uroniumtetraťluorboráf]
TEA triethylamin
Teoc = 2-(trimethylsilyl)ethoxykarbonyl
TEMPO = volný radikál 2,2.6,6-tetramethyl-l--piperidinyloxy TFA = kyselina trifluoroctová
-97CZ 303708 B6
THF = tetrahydrofuran
THP = tetrahydropyranyl
TLC = chromatografie na tenké vrstvě
TMSC1 - trimethylsilylchlorid
TMSCN = trimethylsilylkyanid
UV ~ ultrafialový
Z = benzyloxykarbonyl
Předpony n, s, i a terč- mají své obvyklé významy: normální, sekundární, izo a terciární. Předpo na c znamená cyklo.

Claims (10)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Derivát kyseliny mandlové
    Ph(3-Cl) (5-OCHF3H/?)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) vzorce
    Ph(3-Cl)(5-OCHF2HÁ)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH) vzorce a
    Ph(3-CI) (5-OCHF2)-(/č)CH(OH)C(O)-Aze-Pab vzorce
    -98CZ 303708 B6 nebo farmaceuticky přijatelná sůl kteréhokoliv z nich.
  2. 2. Sloučenina podle nároku 1, zvolená z
    Ph(3—Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O}-Aze-Pab(OMe);
    Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH) nebo i o Ph(3-Cl) (5-OCI {F? HR)ČH(OH)C(O> . Aze-Pab.
  3. 3. Sloučenina Ph(3-Cl) (5- OCHI?2)-(R)CH(OH)C(())-Aze-Pab(OMe) podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
    15
  4. 4. Sloučenina Ph(3-C1) (5^OCHF2HR)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) podle nároku 1, 2 nebo 3.
  5. 5. Sloučenina Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab podle nároku 1 nebo 2.
    20
  6. 6. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu, jakje definována v nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl ve směsi s farmaceuticky přijatelnou pomocnou látkou, ředidlem nebo nosičem,
  7. 7. Farmaceutický prostředek podle nároku 6, vyznačující se tím, že obsahuje slou25 ceninu podle nároku 3 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl ve směsi s farmaceuticky přijatelnou pomocnou látkou, ředidlem nebo nosičem.
  8. 8. Sloučenina jak je definována v kterémkoliv z nároků 1 až 5 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl pro použití jako léčivo.
  9. 9. Sloučenina jak je definována v kterémkoliv z nároků 1 až 5 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl pro použití k léčbě trombózy.
  10. 10. Sloučenina jak je definována v kterémkoliv z nároků 1 až 5 nebo její farmaceuticky přijatel35 ná sůl pro použití jako antikoagulant.
CZ20031514A 2000-12-01 2001-11-30 Nové deriváty kyseliny mandlové a jejich pouzití jako inhibitory trombinu CZ303708B6 (cs)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE0004458A SE0004458D0 (sv) 2000-12-01 2000-12-01 Pharmaceutically useful compounds
SE0100965A SE0100965D0 (sv) 2001-03-19 2001-03-19 Pharmaceutically-useful compounds
SE0101239A SE0101239D0 (sv) 2001-04-06 2001-04-06 Pharmaceutically useful compounds
SE0102921A SE0102921D0 (sv) 2001-08-30 2001-08-30 Pharmaceutically useful compounds

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ20031514A3 CZ20031514A3 (cs) 2003-08-13
CZ303708B6 true CZ303708B6 (cs) 2013-03-27

Family

ID=27484527

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20031514A CZ303708B6 (cs) 2000-12-01 2001-11-30 Nové deriváty kyseliny mandlové a jejich pouzití jako inhibitory trombinu

Country Status (30)

Country Link
US (4) US20070218136A1 (cs)
EP (2) EP1347955B1 (cs)
JP (3) JP4177101B2 (cs)
KR (4) KR100914537B1 (cs)
CN (1) CN1291975C (cs)
AR (2) AR035216A1 (cs)
AT (1) ATE461171T1 (cs)
AU (2) AU2007203520B2 (cs)
BG (1) BG66261B1 (cs)
BR (1) BR0115861A (cs)
CA (1) CA2436220C (cs)
CY (1) CY1113487T1 (cs)
CZ (1) CZ303708B6 (cs)
DE (1) DE60141603D1 (cs)
DK (1) DK1347955T3 (cs)
EE (1) EE05382B1 (cs)
ES (1) ES2341318T3 (cs)
HK (1) HK1057214A1 (cs)
HU (1) HU228814B1 (cs)
IL (1) IL156096A0 (cs)
IS (1) IS2755B (cs)
MX (1) MXPA03004794A (cs)
MY (1) MY136133A (cs)
NO (3) NO325228B1 (cs)
NZ (1) NZ526205A (cs)
PL (1) PL207045B1 (cs)
PT (1) PT1347955E (cs)
SI (1) SI1347955T1 (cs)
SK (1) SK287692B6 (cs)
WO (1) WO2002044145A1 (cs)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR035216A1 (es) * 2000-12-01 2004-05-05 Astrazeneca Ab Derivados de acido mandelico ,derivados farmaceuticamente aceptables, uso de estos derivados para la fabricacion de medicamentos, metodos de tratamiento ,procesos para la preparacion de estos derivados, y compuestos intermediarios
AR034517A1 (es) 2001-06-21 2004-02-25 Astrazeneca Ab Formulacion farmaceutica
SE0201658D0 (sv) * 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab Immediate release pharmaceutical formulation
SE0201662D0 (sv) * 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab Pharmaceutical combination
SE0201661D0 (sv) * 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab New salts
SE0201659D0 (sv) * 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
BRPI0407506A (pt) 2003-02-13 2006-02-14 Wellstat Therapeutics Corp compostos para o tratamento de distúrbios metabólicos, seu uso e composição farmacêutica compreendendo os mesmos
GB0306615D0 (en) * 2003-03-22 2003-04-30 Astrazeneca Ab New use
US7781424B2 (en) * 2003-05-27 2010-08-24 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
SE0303220D0 (sv) 2003-11-28 2003-11-28 Astrazeneca Ab New process
US7550499B2 (en) 2004-05-12 2009-06-23 Bristol-Myers Squibb Company Urea antagonists of P2Y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions
MX2007008434A (es) 2005-01-19 2007-07-25 Squibb Bristol Myers Co Derivados de 2-fenoxi-n-(1,3,4-tiadizol-2il)piridin-3-amina y compuestos relacionados como inhibidores del receptor p2y1 para el tratamiento de trastornos tromboembolicos.
GB0503672D0 (en) * 2005-02-23 2005-03-30 Astrazeneca Ab New process
GB0510546D0 (en) * 2005-05-24 2005-06-29 Astrazeneca Ab New process
AU2006261828A1 (en) 2005-06-27 2007-01-04 Bristol-Myers Squibb Company N-linked heterocyclic antagonists of P2Y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions
DE602006017694D1 (de) 2005-06-27 2010-12-02 Bristol Myers Squibb Co C-verknüpfte zyklische antagonisten des p2y1-rezeptors mit eignung bei der behandlung thrombotischer leiden
WO2007002634A1 (en) 2005-06-27 2007-01-04 Bristol-Myers Squibb Company Carbocycle and heterocycle antagonists of p2y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions
EP1896417B1 (en) 2005-06-27 2011-03-23 Bristol-Myers Squibb Company Linear urea mimics antagonists of p2y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions
JP2009524686A (ja) 2006-01-25 2009-07-02 ウェルスタット セラピューティクス コーポレイション 代謝障害を処置するための化合物
JP2009531280A (ja) 2006-01-25 2009-09-03 ウェルスタット セラピューティクス コーポレイション 代謝障害を処置するための化合物
NZ570334A (en) 2006-02-02 2011-07-29 Wellstat Therapeutics Corp Compounds for the treatment of metabolic disorders
US8044242B2 (en) 2006-03-09 2011-10-25 Bristol-Myers Squibb Company 2-(aryloxy) acetamide factor VIIa inhibitors useful as anticoagulants
US8222453B2 (en) 2006-06-08 2012-07-17 Bristol-Myers Squibb Company Benzamide factor VIIa inhibitors useful as anticoagulants
DE102006033572A1 (de) 2006-07-20 2008-01-24 Bayer Cropscience Ag N'-Cyano-N-halogenalkyl-imidamid Derivate
US7960569B2 (en) 2006-10-17 2011-06-14 Bristol-Myers Squibb Company Indole antagonists of P2Y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions
TW200827336A (en) 2006-12-06 2008-07-01 Astrazeneca Ab New crystalline forms
EP2102189B1 (en) 2006-12-15 2015-07-29 Bristol-Myers Squibb Company Arylpropionamide, arylacrylamide, arylpropynamide, or arylmethylurea analogs as factor xia inhibitors
PE20081775A1 (es) 2006-12-20 2008-12-18 Bristol Myers Squibb Co Compuestos macrociclicos como inhibidores del factor viia
KR20100015886A (ko) 2007-04-23 2010-02-12 사노피-아벤티스 Ｐ2ｙ12 길항제로서의 퀴놀린-카복스아미드 유도체
TW200900033A (en) * 2007-06-21 2009-01-01 Wen-Qing Li Automatic brewing machine
US20090061000A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-05 Astrazeneca Ab Pharmaceutical formulation use 030
WO2009080226A2 (en) 2007-12-26 2009-07-02 Sanofis-Aventis Heterocyclic pyrazole-carboxamides as p2y12 antagonists
TWI577665B (zh) 2010-02-11 2017-04-11 必治妥美雅史谷比公司 作為因子ｘｉａ抑制劑之巨環類
TW201319068A (zh) 2011-08-05 2013-05-16 必治妥美雅史谷比公司 作為ｘｉａ因子抑制劑之環狀ｐ１接合劑
TW201311689A (zh) 2011-08-05 2013-03-16 必治妥美雅史谷比公司 作為因子ｘｉａ抑制劑之新穎巨環化合物
CN103987696B (zh) 2011-10-14 2016-12-21 百时美施贵宝公司 作为因子xia抑制剂的取代的四氢异喹啉化合物
ES2699226T3 (es) 2011-10-14 2019-02-08 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de tetrahidroisoquinolina sustituidos como inhibidores del factor XIa
PL2766346T3 (pl) 2011-10-14 2017-09-29 Bristol-Myers Squibb Company Podstawione związki tetrahydroizochinoliny jako inhibitory czynnika XIA
CN108250199B (zh) 2012-08-03 2021-07-16 百时美施贵宝公司 二氢吡啶酮p1作为凝血因子xia抑制剂
UY34959A (es) 2012-08-03 2014-01-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporación Del Estado De Delaware Dihidropiridona p1 como inhibidores del factor xia
GB2510407A (en) 2013-02-04 2014-08-06 Kalvista Pharmaceuticals Ltd Aqueous suspensions of kallikrein inhibitors for parenteral administration
EP2978751B1 (en) 2013-03-25 2018-12-05 Bristol-Myers Squibb Company Tetrahydroisoquinolines containing substituted azoles as factor xia inhibitors
HUE040226T2 (hu) 2014-01-31 2019-02-28 Bristol Myers Squibb Co Makrociklusok heterociklusos P2' csoportokkal XIA faktor inhibitorokként
NO2760821T3 (cs) 2014-01-31 2018-03-10
NO2721243T3 (cs) 2014-10-01 2018-10-20
EP3310777B1 (en) 2015-06-19 2019-10-09 Bristol-Myers Squibb Company Diamide macrocycles as factor xia inhibitors
ES2937156T3 (es) 2015-07-29 2023-03-24 Bristol Myers Squibb Co Inhibidores macrocíclicos del factor XIa que llevan un grupo P2' no aromático
JP6785838B2 (ja) 2015-08-05 2020-11-18 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 新規な置換グリシン誘導のｆｘｉａ阻害剤
CN105294520A (zh) * 2015-11-23 2016-02-03 大连九信生物化工科技有限公司 一种2-（2’,2’-二氟乙氧基）-6-三氟甲基苯基丙基硫醚的合成工艺
EP3423458A1 (en) 2016-03-02 2019-01-09 Bristol-Myers Squibb Company Diamide macrocycles having factor xia inhibiting activity
CN106674085B (zh) * 2016-12-20 2020-06-23 苏州汉德创宏生化科技有限公司 N-1,3-二氟异丙基-4-氨基哌啶类化合物的合成方法
EP3877380A1 (en) 2018-11-05 2021-09-15 Syngenta Participations Ag Pesticidally active azole-amide compounds
WO2021028645A1 (en) 2019-08-09 2021-02-18 Kalvista Pharmaceuticals Limited Plasma kallikrein inhibitors

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996025429A1 (en) * 1995-02-17 1996-08-22 Nps Pharmaceuticals, Inc. Insecticidal toxins from bracon hebetor
WO1997002284A1 (en) * 1995-07-06 1997-01-23 Astra Aktiebolag New thrombin inhibitors, their preparation and use
WO1997046577A1 (en) * 1996-06-07 1997-12-11 Astra Aktiebolag New amino acid derivatives and their use as thrombin inhibitors
WO1999029664A1 (en) * 1997-12-05 1999-06-17 Astrazeneca Ab New compounds
WO2000042059A1 (en) * 1999-01-13 2000-07-20 Astrazeneca Ab New amidinobenzylamine derivatives and their use as thrombin inhibitors

Family Cites Families (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU178398B (en) 1979-06-12 1982-04-28 Gyogyszerkutato Intezet Process for producing new agmatine derivatives of activity against haemagglutination
JPS57149217A (en) 1981-03-11 1982-09-14 Kaken Pharmaceut Co Ltd Slow-releasing pharmaceutical preparation
HU192646B (en) 1984-12-21 1987-06-29 Gyogyszerkutato Intezet Process for preparing new n-alkyl-peptide aldehydes
CA1341029C (en) 1985-02-04 2000-06-20 Michael Kolb Peptidase inhibitors
US5187157A (en) 1987-06-05 1993-02-16 Du Pont Merck Pharmaceutical Company Peptide boronic acid inhibitors of trypsin-like proteases
US4792452A (en) * 1987-07-28 1988-12-20 E. R. Squibb & Sons, Inc. Controlled release formulation
US5538847A (en) * 1989-07-17 1996-07-23 Tropix, Inc. Chemiluminescent 1,2-dioxetanes
EP0362002B1 (en) 1988-09-01 1995-07-26 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. HIV protease inhibitors
ZA897515B (en) 1988-10-07 1990-06-27 Merrell Dow Pharma Novel peptidase inhibitors
IT1229491B (it) 1988-12-28 1991-09-03 Roussel Maestretti S P A Ora R Derivati della 1,2,5,6-tetraidropiridina, loro procedimento di preparazione e loro impiego come sostanze medicinali
TW201303B (cs) 1990-07-05 1993-03-01 Hoffmann La Roche
CA2075154A1 (en) 1991-08-06 1993-02-07 Neelakantan Balasubramanian Peptide aldehydes as antithrombotic agents
SE9102462D0 (sv) 1991-08-28 1991-08-28 Astra Ab New isosteric peptides
US5169638A (en) 1991-10-23 1992-12-08 E. R. Squibb & Sons, Inc. Buoyant controlled release powder formulation
ZA928581B (en) 1991-11-12 1994-05-06 Lilly Co Eli Antithrombotic agents
SE9103612D0 (sv) 1991-12-04 1991-12-04 Astra Ab New peptide derivatives
WO1993018060A1 (en) 1992-03-04 1993-09-16 Gyógyszerkutató Intézet Kft. New anticoagulant peptide derivatives and pharmaceutical compositions containing the same as well as a process for the preparation thereof
TW223629B (cs) 1992-03-06 1994-05-11 Hoffmann La Roche
US5783563A (en) * 1993-06-03 1998-07-21 Astra Aktiebolag Method for treatment or prophylaxis of venous thrombosis
SE9301912D0 (sv) 1993-06-03 1993-06-03 Ab Astra Process for the production of aminoalkylguandines
US6984627B1 (en) * 1993-06-03 2006-01-10 Astrazeneca Ab Peptide derivatives
SE9301916D0 (sv) * 1993-06-03 1993-06-03 Ab Astra New peptides derivatives
EP0648780A1 (en) 1993-08-26 1995-04-19 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclic thrombin inhibitors
TW394760B (en) * 1993-09-07 2000-06-21 Hoffmann La Roche Novel Carboxamides, process for their preparation and pharmaceutical composition containing the same
CA2140598C (en) 1994-01-27 2010-03-09 Masahiro Ohshima Prolineamide derivatives
ZA951617B (en) 1994-03-04 1997-02-27 Lilly Co Eli Antithrombotic agents.
US5707966A (en) * 1994-03-04 1998-01-13 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5705487A (en) * 1994-03-04 1998-01-06 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5561146A (en) 1994-06-10 1996-10-01 Bristol-Myers Squibb Company Modified guanidino and amidino thrombin inhibitors
DE4421052A1 (de) 1994-06-17 1995-12-21 Basf Ag Neue Thrombininhibitoren, ihre Herstellung und Verwendung
US5498724A (en) * 1994-06-28 1996-03-12 Aktiebolaget Astra Pyrazoleamidine compounds
US5510369A (en) 1994-07-22 1996-04-23 Merck & Co., Inc. Pyrrolidine thrombin inhibitors
WO1996025426A1 (de) 1995-02-17 1996-08-22 Basf Aktiengesellschaft Neue dipeptidische amidine als thrombin-inhibitoren
US5710130A (en) 1995-02-27 1998-01-20 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US6083532A (en) 1995-03-01 2000-07-04 Duramed Pharmaceuticals, Inc. Sustained release formulation containing three different types of polymers and tablet formed therefrom
US5695781A (en) 1995-03-01 1997-12-09 Hallmark Pharmaceuticals, Inc. Sustained release formulation containing three different types of polymers
WO1996031504A1 (en) 1995-04-04 1996-10-10 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
US5629324A (en) 1995-04-10 1997-05-13 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
AR005245A1 (es) * 1995-12-21 1999-04-28 Astrazeneca Ab Prodrogas de inhibidores de trombina, una formulación farmaceutica que las comprende, el uso de dichas prodrogas para la manufactura de un medicamento y un procedimiento para su preparacion
SE9601556D0 (sv) 1996-04-24 1996-04-24 Astra Ab New pharmaceutical formulation of a thrombin inhibitor for parenteral use
WO1997049404A1 (en) 1996-06-25 1997-12-31 Eli Lilly And Company Anticoagulant agents
SE9602646D0 (sv) 1996-07-04 1996-07-04 Astra Ab Pharmaceutically-useful compounds
DE19632772A1 (de) * 1996-08-14 1998-02-19 Basf Ag Neue Benzamidine
SE9603724D0 (sv) 1996-10-11 1996-10-11 Astra Ab New pharmaceutical parenteral formulation of a thrombin inhibitor
AR013084A1 (es) 1997-06-19 2000-12-13 Astrazeneca Ab Derivados de amidino utiles como inhibidores de la trombina, composicion farmaceutica, utilizacion de dichos compuestos para la preparacion demedicamentos y proceso para la preparacion de los compuestos mencionados
IT1297461B1 (it) 1997-10-29 1999-12-17 Ciocca Maurizio Preparazione di compresse a rilascio controllato a base di complessi tra carragenano e farmaci basici solubili
SE9704401D0 (sv) 1997-11-28 1997-11-28 Astra Ab Matrix pellets for greasy, oily or sticky drug substances
US6174913B1 (en) * 1998-06-05 2001-01-16 The University Of North Carolina At Chapel Hill Naphtho- and dihydrobenzo-thiophene derivatives as cytotoxic antitumor agents
SE9802938D0 (sv) * 1998-09-01 1998-09-01 Astra Ab Improved stability for injection solutions
SE9802973D0 (sv) * 1998-09-03 1998-09-03 Astra Ab Immediate release tablet
SE9802974D0 (sv) * 1998-09-03 1998-09-03 Astra Ab New crystalline forms
SE9804313D0 (sv) 1998-12-14 1998-12-14 Astra Ab New compounds
US6758430B1 (en) * 1999-02-16 2004-07-06 Aesop, Inc. Method of winding motors and other electric machines to reduce AC losses
SE9902550D0 (sv) * 1999-07-02 1999-07-02 Astra Ab New crystalline forms
SE0001803D0 (sv) 2000-05-16 2000-05-16 Astrazeneca Ab New compounds i
US6433186B1 (en) * 2000-08-16 2002-08-13 Astrazeneca Ab Amidino derivatives and their use as thormbin inhibitors
US7129233B2 (en) 2000-12-01 2006-10-31 Astrazeneca Ab Mandelic acid derivatives and their use as thrombin inhibitors
AR035216A1 (es) * 2000-12-01 2004-05-05 Astrazeneca Ab Derivados de acido mandelico ,derivados farmaceuticamente aceptables, uso de estos derivados para la fabricacion de medicamentos, metodos de tratamiento ,procesos para la preparacion de estos derivados, y compuestos intermediarios
SE0102921D0 (sv) * 2001-08-30 2001-08-30 Astrazeneca Ab Pharmaceutically useful compounds
US6287599B1 (en) 2000-12-20 2001-09-11 Shire Laboratories, Inc. Sustained release pharmaceutical dosage forms with minimized pH dependent dissolution profiles
AR034517A1 (es) * 2001-06-21 2004-02-25 Astrazeneca Ab Formulacion farmaceutica
US6811794B2 (en) 2001-12-20 2004-11-02 Shire Laboratories, Inc. Sustained release pharmaceutical dosage forms with minimized pH dependent dissolution profiles
SE0201658D0 (sv) 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab Immediate release pharmaceutical formulation
SE0201659D0 (sv) 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
SE0201661D0 (sv) 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab New salts
US7781424B2 (en) 2003-05-27 2010-08-24 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
SE0303220D0 (sv) 2003-11-28 2003-11-28 Astrazeneca Ab New process
GB0503672D0 (en) 2005-02-23 2005-03-30 Astrazeneca Ab New process
GB0510546D0 (en) 2005-05-24 2005-06-29 Astrazeneca Ab New process
TW200827336A (en) 2006-12-06 2008-07-01 Astrazeneca Ab New crystalline forms

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996025429A1 (en) * 1995-02-17 1996-08-22 Nps Pharmaceuticals, Inc. Insecticidal toxins from bracon hebetor
WO1997002284A1 (en) * 1995-07-06 1997-01-23 Astra Aktiebolag New thrombin inhibitors, their preparation and use
WO1997046577A1 (en) * 1996-06-07 1997-12-11 Astra Aktiebolag New amino acid derivatives and their use as thrombin inhibitors
WO1999029664A1 (en) * 1997-12-05 1999-06-17 Astrazeneca Ab New compounds
WO2000042059A1 (en) * 1999-01-13 2000-07-20 Astrazeneca Ab New amidinobenzylamine derivatives and their use as thrombin inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
KR20080059681A (ko) 2008-06-30
BG107825A (bg) 2004-02-27
PL207045B1 (pl) 2010-10-29
NO20032465D0 (no) 2003-05-30
AR035216A1 (es) 2004-05-05
PT1347955E (pt) 2010-05-21
BR0115861A (pt) 2003-09-23
CN1291975C (zh) 2006-12-27
WO2002044145A1 (en) 2002-06-06
EP1347955B1 (en) 2010-03-17
AU2007203520A1 (en) 2007-08-16
US20070218136A1 (en) 2007-09-20
KR100914537B1 (ko) 2009-09-02
JP2008156362A (ja) 2008-07-10
DE60141603D1 (de) 2010-04-29
KR100914016B1 (ko) 2009-08-28
DK1347955T3 (da) 2010-06-07
CA2436220C (en) 2010-04-13
IL156096A0 (en) 2003-12-23
NO325228B1 (no) 2008-03-03
EE05382B1 (et) 2011-02-15
KR20090023745A (ko) 2009-03-05
SK6512003A3 (en) 2003-11-04
HUP0302487A3 (en) 2009-08-28
ES2341318T3 (es) 2010-06-18
IS2755B (is) 2011-09-15
SI1347955T1 (sl) 2010-07-30
EP2186800A1 (en) 2010-05-19
JP4177101B2 (ja) 2008-11-05
US20100087651A1 (en) 2010-04-08
US7645751B2 (en) 2010-01-12
NO20080031L (no) 2003-07-25
AU2007203509A1 (en) 2007-08-16
NO20080030L (no) 2003-07-25
CA2436220A1 (en) 2002-06-06
CZ20031514A3 (cs) 2003-08-13
KR20030051894A (ko) 2003-06-25
AR072331A2 (es) 2010-08-25
KR20080064204A (ko) 2008-07-08
BG66261B1 (bg) 2012-10-31
AU2002218618A1 (en) 2002-06-11
PL362917A1 (en) 2004-11-02
EE200300259A (et) 2003-08-15
HK1057214A1 (en) 2004-03-19
CN1487919A (zh) 2004-04-07
MY136133A (en) 2008-08-29
JP2008138009A (ja) 2008-06-19
AU2007203520B2 (en) 2010-12-09
HUP0302487A2 (hu) 2003-11-28
HU228814B1 (hu) 2013-05-28
MXPA03004794A (es) 2003-09-10
US20080090800A1 (en) 2008-04-17
EP1347955A1 (en) 2003-10-01
US7803954B2 (en) 2010-09-28
IS6828A (is) 2003-05-27
NZ526205A (en) 2005-04-29
JP2004520290A (ja) 2004-07-08
ATE461171T1 (de) 2010-04-15
KR100947296B1 (ko) 2010-03-16
US20070202174A1 (en) 2007-08-30
CY1113487T1 (el) 2016-06-22
NO20032465L (no) 2003-07-25
SK287692B6 (sk) 2011-06-06
KR100914535B1 (ko) 2009-09-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ303708B6 (cs) Nové deriváty kyseliny mandlové a jejich pouzití jako inhibitory trombinu
CZ398698A3 (cs) Nový derivát aminokyseliny a jeho použití jako inhibitoru thrombinu
JP2001525394A (ja) 新規な化合物
US7129233B2 (en) Mandelic acid derivatives and their use as thrombin inhibitors
KR100928285B1 (ko) 신규한 만델산 유도체 및 이것의 트롬빈 억제제로서의 용도
RU2300521C2 (ru) Новые производные миндальной кислоты и их применение в качестве ингибиторов тромбина
MXPA04011910A (es) Combinacion farmaceutica.
AU2002218618B2 (en) New mandelic acid derivatives and their use as throbin inhibitors
KR100483869B1 (ko) 신규한 아미노산 유도체 및 트롬빈 억제제로서의 그의 용도
TW200306975A (en) New mandelic acid derivatives and their use as thrombin inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20151130