NO325228B1 - Nye mandelsyre-derivater og anvendelse derav samt farmasoytisk formulering - Google Patents

Nye mandelsyre-derivater og anvendelse derav samt farmasoytisk formulering Download PDF

Info

Publication number
NO325228B1
NO325228B1 NO20032465A NO20032465A NO325228B1 NO 325228 B1 NO325228 B1 NO 325228B1 NO 20032465 A NO20032465 A NO 20032465A NO 20032465 A NO20032465 A NO 20032465A NO 325228 B1 NO325228 B1 NO 325228B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
mmol
rotamer
nmr
mhz
aze
Prior art date
Application number
NO20032465A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20032465D0 (no
NO20032465L (no
Inventor
Tord Inghardt
Arne Svensson
Anders Johansson
Original Assignee
Astrazeneca Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from SE0004458A external-priority patent/SE0004458D0/xx
Priority claimed from SE0100965A external-priority patent/SE0100965D0/xx
Priority claimed from SE0101239A external-priority patent/SE0101239D0/xx
Priority claimed from SE0102921A external-priority patent/SE0102921D0/xx
Application filed by Astrazeneca Ab filed Critical Astrazeneca Ab
Publication of NO20032465D0 publication Critical patent/NO20032465D0/no
Publication of NO20032465L publication Critical patent/NO20032465L/no
Publication of NO325228B1 publication Critical patent/NO325228B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/397—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having four-membered rings, e.g. azetidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C205/00—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton
    • C07C205/49—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups
    • C07C205/57—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups having nitro groups and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton
    • C07C205/59—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups having nitro groups and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C37/00—Preparation of compounds having hydroxy or O-metal groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C07C37/01—Preparation of compounds having hydroxy or O-metal groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring by replacing functional groups bound to a six-membered aromatic ring by hydroxy groups, e.g. by hydrolysis
    • C07C37/055—Preparation of compounds having hydroxy or O-metal groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring by replacing functional groups bound to a six-membered aromatic ring by hydroxy groups, e.g. by hydrolysis the substituted group being bound to oxygen, e.g. ether group
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C41/00—Preparation of ethers; Preparation of compounds having groups, groups or groups
    • C07C41/01—Preparation of ethers
    • C07C41/16—Preparation of ethers by reaction of esters of mineral or organic acids with hydroxy or O-metal groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C41/00—Preparation of ethers; Preparation of compounds having groups, groups or groups
    • C07C41/01—Preparation of ethers
    • C07C41/18—Preparation of ethers by reactions not forming ether-oxygen bonds
    • C07C41/26—Preparation of ethers by reactions not forming ether-oxygen bonds by introduction of hydroxy or O-metal groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C41/00—Preparation of ethers; Preparation of compounds having groups, groups or groups
    • C07C41/01—Preparation of ethers
    • C07C41/18—Preparation of ethers by reactions not forming ether-oxygen bonds
    • C07C41/30—Preparation of ethers by reactions not forming ether-oxygen bonds by increasing the number of carbon atoms, e.g. by oligomerisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/004—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reaction with organometalhalides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/27—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by oxidation
    • C07C45/29—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by oxidation of hydroxy groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/45—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by condensation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/61—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups
    • C07C45/67—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton
    • C07C45/673—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton by change of size of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/61—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups
    • C07C45/67—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton
    • C07C45/68—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton by increase in the number of carbon atoms
    • C07C45/70—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton by increase in the number of carbon atoms by reaction with functional groups containing oxygen only in singly bound form
    • C07C45/71—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton by increase in the number of carbon atoms by reaction with functional groups containing oxygen only in singly bound form being hydroxy groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C47/00—Compounds having —CHO groups
    • C07C47/52—Compounds having —CHO groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings
    • C07C47/56—Compounds having —CHO groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings containing hydroxy groups
    • C07C47/565—Compounds having —CHO groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings containing hydroxy groups all hydroxy groups bound to the ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C47/00—Compounds having —CHO groups
    • C07C47/52—Compounds having —CHO groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings
    • C07C47/575—Compounds having —CHO groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings containing ether groups, groups, groups, or groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C49/00—Ketones; Ketenes; Dimeric ketenes; Ketonic chelates
    • C07C49/76—Ketones containing a keto group bound to a six-membered aromatic ring
    • C07C49/84—Ketones containing a keto group bound to a six-membered aromatic ring containing ether groups, groups, groups, or groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/42—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups
    • C07C59/48—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups containing six-membered aromatic rings
    • C07C59/50—Mandelic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/42—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups
    • C07C59/56—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups containing halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/58—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups
    • C07C59/64—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups containing six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/73—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids
    • C07C69/732—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids of unsaturated hydroxy carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/73—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids
    • C07C69/734—Ethers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/73—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids
    • C07C69/738—Esters of keto-carboxylic acids or aldehydo-carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D205/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D205/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D205/04—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D263/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings
    • C07D263/52—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D263/54—Benzoxazoles; Hydrogenated benzoxazoles
    • C07D263/58—Benzoxazoles; Hydrogenated benzoxazoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached in position 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse angår mandelsyre-derivater og anvendelse derav samt farmasøytisk formulering.
Oppfinnelsens område
Foreliggende oppfinnelse angår følgelig nye farmasøytisk anvendelige forbindelser, spesielt forbindelser som er og/eller forbindelser som blir metabolisert til forbindelser som er, kompetitive inhibitorer av trypsin-lignende serinproteaser, spesielt trombin, anvendelse av dem som medikamenter, farmasøytiske preparater inneholdende dem og synteseveier for deres produksjon.
Bakgrunn
Blodkoagulering er nøkkelprosessen involvert i både hemostase (dvs. forhindring av blodtap fra å skade kar) og trombose (dvs. dannelsen av en blodkoagel i et blodkar, som noen ganger fører til karobstruksjon).
Koagulering er resultatet av en kompleks serie av enzymatiske reaksjoner. En av de ultimate trinnene i denne serien av reaksjoner er omdannelsen av proenzymet protrombin til det aktive enzymet trombin.
Trombin er kjent for å spille en sentral rolle i koagulering. Det aktiverer blodplater, hvilket fører til blodplateaggregering, omdanner fibrinogen til fibrin monomerer, som polymeriserer spontant til fibrin polymerer og aktiverer faktor XIII, som igjen kryssbinder polymerene for å danne uoppløselig fibrin. Videre, aktiverer trombin faktor V og faktor VIII hvilket fører til en "positive feedback" dannelse av trombin fra protrombin.
Ved å hemme aggregering av blodplater og dannelsen og kryssbinding av fibrin, vil effektive inhibitorer av trombin være forventet å vise antitrombotisk aktivitet. I tillegg, vil antitrombotisk aktivitet være forventet å være forbedret ved effektiv hemning av positiv feedback mekanisme.
Tidligere Teknikk
Tidlig utvikling av lav molekylvekt inhibitorer av trombin er beskrevet av Claesson i Blood Coagul. Fibrinol. (1994) 5,411.
Blombåck et al (i J. Clin. Lab. Invest. 24, suppl. 107, 59, (1969)) har beskrevet trombininhibitorer basert på aminosyresekvensen plassert rundt spaltningssetet for fibrinogen A kjeden. Av aminosyresekvensene beskrevet, har disse forfatterene foreslått at tripeptidetsekvensen Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, nedenfor referert til som P3-P2-P1 sekvens) ville være den mest effektive inhibitor.
Trombininhibitorer basert på dipeptidyl-derivater med en I,a-aminoalkyl guanidin i Pl-stillingen er kjent fra US-patent nr 4,346,078 og internasjonal patentsøknad WO 93/11152. Lignende, strukturelt relaterte, dipeptidyl-derivater har også vært beskrevet. For eksempel beskriver internasjonal patentsøknad WO 94/29336 forbindelser med, for eksempel aminometylbenzamidiner, cykliske aminoalkylamidiner og cykliske aminoalkylguanidiner i Pl-stillingen (internasjonal patentsøknad WO 97/23499 beskriver prodroge av visse av disse forbindelser); europeisk patentsøknad 0 648 780, beskriver forbindelser med, for eksempel cykliske aminoalkylguanidiner i Pl-stilling.
Trombininhibitorer basert på peptidyl-derivater som også har cykliske aminoalkylguanidiner (f.eks. enten 3- eller 4- aminometyl-l-amidino-piperidin) i Pl-stilling er kjent fra Europeisk Patentsøknader 0 468 231,0 559 046 og 0 641 779.
Trombininhibitorer basert på tripeptidyl-derivater med argininaldehyd i Pl-stillingen ble først beskrevet i europeisk patentsøknad 0 185 390.
Mer nylig, er arginin aldehyd-baserte peptidyl-derivater, modifisert i P3-stilling, rapportert. For eksempel beskriver internasjonal patentsøknad WO 93/18060 hydroksysyrer, europeisk patentsøknad 0 526 877 des-aminosyrer og europeisk patentsøknad 0 542 525 O-metyl mandelsyrer i P3-stilling.
Inhibitorer av serinproteaser (f.eks. trombin) basert på elektrofile ketoner i Pl-stilling er også kjent. For eksempel beskriver europeisk patentsøknad 0 195 212 peptidyl I-ketoestere og amider, europeisk patentsøknad 0 362 002 fluoralkylamidketoner, europeisk patentsøknad 0 364 344I,#,A-triketoforbindelser og europeisk patentsøknad 0 530 167 I-alkoksyketonderivater av arginin i Pl-stilling.
Andre, strukturelt forskjellige, inhibitorer av trypsin-lignende serinproteaser basert på C-terminale boronsyrederivater av arginin og isotiouronium analoger derav er kjent fra europeisk patentsøknad 0 293 881.
Mer nylig, er trombininhibitorer basert på peptidyl-derivater beskrevet i europeisk patentsøknad 0 669 317 og internasjonal patentsøknader WO 95/35309, WO 95/23609, WO 96/25426, WO 97/02284, WO 97/46577, WO 96/32110, WO 96/31504, WO 96/03374, WO 98/06740, WO 97/49404, WO 98/57932, WO 99/29664, WO 00/35869 og WO 00/42059.
Spesielt beskriver, WO 97/02284 og WO 00/42059 trombininhibitorer med substituerte mandelsyrer i P3 stilling.
Imidlertid, er det fortsatt et behov for effektive inhibitorer av trypsin-lignende serinproteaser, så som trombin. Det er også et behov for forbindelser som har en fordelaktig farmakokinetisk profil og er selektive for å hemme trombin over andre serinproteaser, spesielt de involvert i hemostase. Forbindelser som viser kompetitiv hemmende aktivitet mot trombin ville være forventet å være spesielt anvendelige som antikoaguleirngsmidler og derfor i terapeutisk behandling av trombose og relaterte lidelser.
Beskrivelse ifølge foreliggende oppfinnelse
Ifølge oppfinnelsen tilveiebringes en forbindelse, kjennetegnet ved at den er valgt fra Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(Æ)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OH) eller
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(Æ)CH(OH)C(0)-Aze-Pab, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.
Det er foretrukket at forbindelsen er kjennetegnet ved at den er Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(Æ)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe) eller et farmasøytisk akseptebelt salt derav.
Forbindelser med formlene XV og XX kan fremstilles ved omsetning av en tilsvarende forbindelse med formel X som ovenfor definert med, henholdsvis, en forbindelse med formel XVI som ovenfor definert eller en forbindelse med formel XXI,
hvor R IL er som ovenfor definert, for eksempel under lignende betingelser som de beskrevet ovenfor for syntese av forbindelser med formel I.
Forbindelser med formel XVI, XVIII, XIX, XDCA, XIXB, XIXC, XIXD og XXI er enten kommersielt tilgjengelig, er kjent i litteraturen eller kan oppnås enten analogt med prosessene beskrevet her eller ved konvensjonelle syntetiske prosedyrer, i henhold til standard teknikker, fra lett tilgjengelige utgangsmaterialer ved anvendelse av passende reagenser og reaksjonsbetingelser. For eksempel kan forbindelser med formlene XDCA og XDCB fremstilles ved omsetning av en tilsvarende forbindelse med formel XIXC eller XIXD (som passende) med en forbindelse med formel X, for eksempel under lignende betingelser som de beskrevet ovenfor.
Forbindelser med formlene I og Ia, som definert ovenfor og derivater av disse, er referert til nedenfor som "forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse".
Foretrukne forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse er for anvendelse som et farmasøytisk preparat.
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan vise tautomerisme. Alle tautomere former og blandinger derav omfattes av omfanget av foreliggende oppfinnelse.
Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse inneholder også to eller flere asymmetriske karbonatomer og kan derfor vise optisk og/eller diastereoisomerisme. Diastereoisomerer kan separeres ved anvendelse av konvensjonelle teknikker, f.eks. kromatografi. De forskjellige stereoisomerer kan isoleres ved separering av en racemisk eller annen blanding av forbindelsene ved anvendelse av konvensjonelle, f.eks. HPLC teknikker. Alternativt kan de ønskede optiske isomerer fremstilles ved omsetning av de passende optisk aktive utgangsmaterialer under betingelser som ikke vil forårsake racemisering eller epimerisering eller ved derivatisering, for eksempel med en homochiral syre fulgt av separering av diastereomerderivater ved konvensjonelle metoder (f.eks. HPLC, kromatografi over silika). Alle stereoisomerer omfattes av omfanget av foreliggende oppfinnelse.
Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse som kan nevnes omfatter Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-CH(OH)C(0)-Aze-Pab (hvor Aze symboliserer azetidin-2-karboksylat (dvs. i ( R)-og/eller (5)-konformasjoner).
Medisinsk og farmasøytisk anvendelse
Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse kan i seg selv ha farmakologisk aktivitet.
I henhold til et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse er det således gitt forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse for anvendelse som farmasøytiske midler.
Spesielt, er forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse anvendelige ved at de er for anvendelse ved behandling av en tilstand hvor inhibisjon av trombin er nødvendig.
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse er således forventet å være anvendelige i de tilstandene hvor hemning av trombin er nødvendig og/eller tilstander hvor antikoagulant terapi er angitt, omfattende de følgende: Behandling og/eller forebygging av trombose og hyperkoagulabilitet i blod og/eller vev til dyr inkludert mennesker. Det er kjent at hyperkoagulabilitet kan føre til thrombo-emboliske sykdommer. Lidelser forbundet med hyperkoagulabilitet og thrombo-emboliske sykdommer som kan nevnes omfatter arvet eller ervervet aktivert protein C resistens, så som faktor V-mutasjon (faktor V Leiden) og arvet eller ervervet mangler i antithrombin III, protein C, protein S, heparin kofaktor II. Andre tilstander kjent å være forbundet med hyperkoagulabilitet og thrombo-embolisk sykdom omfatter sirkulerende antifosfolipid antistoffer (Lupus antikoagulant), homocysteinemi, heparin fremkalt trombocytopeni og defekter i fibrinolyse, så vel som koaguleringssyndromer (f.eks. disseminert intravaskulær koagulering (DIC)) og vaskulær skade generelt (f.eks. på grunn av kirurgi).
Behandling av tilstander hvor det er et uønskede overskudd av trombin uten tegn på hyperkoagulabilitet, for eksempel i neurodegenerative sykdommer så som Alzheimer' s sykdom.
Spesielle sykdomstilstander som kan nevnes omfatter terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av venøs trombose (f.eks. DVT) og pulmonal emboli, arteriell trombose (f.eks. i myokardialt infarkt, ustabil angina, trombose-basert slag og perifer arteriell trombose) og systemisk emboli vanligvis fra atrium under atrial fibrillering (f.eks. ikke-valvulær atrial fibrillering) eller fra venstre hjertekammer etter transmural myokardialt infarkt eller forårsaket av kongestivt hjertesvikt; forebygging av re-okklusjon (dvs. trombose) etter thrombolyse, perkutan trans-luminal angioplasti (PTA) og koronar-bypass operasjoner; forhindring av re-trombose etter mikrokirurgi og vaskulær kirurgi generelt.
Ytterligere indikasjoner omfatter terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av disseminert intravaskulær koagulering forårsaket av bakterier, multippel traume, forgiftning eller hvilken som helst annen mekanisme; antikoagulant behandling når blodet er i kontakt med fremmede overflater i kroppen så som vaskulære podninger, vaskulære stenter, vaskulære katetere, mekaniske og biologiske protese ventiler eller hvilken som helst annen medisinsk anordning; og antikoagulant behandling når blodet er i kontakt med medisinske anordninger utenfor kroppen så som under kardiovaskulær kirurgi ved anvendelse av en hjerte-lunge maskin eller i haemodialyse; terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av idiopatisk og voksen åndenødssyndrom, pulmonal fibrose etter behandling med stråling eller kjemoterapi, septisk sjokk, septikemi, inflammatoriske responser, som omfatter, men er ikke begrenset til, ødem, akutt eller kronisk aterosklerose så som koronar arteriell sykdom og dannelsen av aterosklerotiske plaque, cerebral arteriell sykdom, cerebralt infarkt, cerebral trombose, cerebral emboli, perifer arteriell sykdom, ischemi, angina (omfattende ustabil angina), reperfusjonsskade, restenose etter perkutan trans-luminal angioplasti (PTA) og koronar arterie bypass kirurgi.
Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse som hemmer trypsin og/eller trombin kan også være anvendelige ved behandling av pankreatitt.
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse er således angitt både ved terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av disse tilstander.
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse vil normalt administreres oralt, intravenøst, subkutant, buckalt, rektalt, dermalt, nasalt, trakealt, bronkialt, ved hvilken som helst annen parenteral vei eller via inhalering, i form av farmasøytiske preparater omfattende forbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse enten som en fri base eller et farmasøytisk akseptabelt ikke-toksisk organisk eller uorganisk syreaddisjonssalt, i en farmasøytisk akseptable doseform.
Foretrukne administreringsmetoder av forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse er oral. Foretrukne farmasøytiske preparater omfatter farmasøytiske preparater med modifisert frigjøring omfattende forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse. Betegnelsen farmasøytisk preparat med "modifisert frigjøring" vil være kjent for fagfolk å omfatte hvilket som helst preparat hvor begynnelsen og/eller rate av frigjøring av medikament (dvs. forbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse) er endret ved galeniske manipulasjoner og omfatter således definisjonen gitt i United States Pharmacopeia (USP XXII) på sidene xliii og xliv av innledende del, den relevante beskrivelsen i dokumentet inntas herved som referanse.
Egnete modifiserte frigjøringspreparater kan således fremstilles av fagfolk i henhold til standardteknikker i farmasi (se for eksempel Pharmaceutisch Weekblad Vitenskapelig Edition, 6, 57 (1984); Medical Applications of Controlled Release, Vol II, eds. Langer og Wise (1984) Bocaraton, Florida, på sidene 1 til 34; Industriell Aspects ofpharmaceuticals, ed. Sandel, Swedish Pharmaceutical Press (1993) på sidene 93 til 104; og sidene 191 til 211 av " Pharmaceutics: The Science ofDosage Form Design", ed. M. E. Aulton (1988)
(Churchill Livingston)).
Foretrukete preparater med modifisert frigjøring omfatter således de hvor en hensiktsmessig forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse er innleiret i en polymer matriks. I dette henseende foretrekker vi at preparatene omfattende forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse blir tilveiebrakt for oral adrnimstrering i form av et såkalt "svelle" modifisert-firgjøringsystem eller en "geldannende matriks" modifisert-frigjøringssystem, hvor forbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse er gitt sammen med en polymer som sveller i et vandig medium (dvs. en "hydrofil gelldannende komponent").
Vi foretrekker spesielt at forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse blir formulert sammen i et geleringsmatriks preparat omfattende iota-carrageenan og én eller flere nøytrale geleringspolymerer.
Iota-carrageenan er fortrinnsvis til stede i slikt et foretrukket preparat i et nivå på mer enn 15 vekt%. Foretrukne kvaliteter av iota-carrageenan omfatter farmasøytisk kvalitet iota-carrageenan (tilgjengelig fra FMC Biopolymer), som har en viskositet på ikke mindre enn
5 centipois (eps), fortrinnsvis i området 5-10 eps (for en 1,5% løsning oppvarmet til 82°C, etter som viskositeten blir målt ved 75°C med et Brookfield LV viscometer utstyrt med en #1 spindel drevet ved en hastighet på 30rpm) og teknisk kvalitet iota-carrageenan
(tilgjengelig fra Fluka Biochemica), som fortrinnsvis har en viskositet på ikke mindre enn 14 mPa.s, for en 0,3 % vandig løsning oppvarmet til 20°C, etter hvor viskositeten blir målt ved anvendelse av et "fallingball" viscometer, av type Haake, anvendt sammen med en Lauda thermostat C3 og Hakke Mess-System III og ved anvendelse av gull-belagte rustfri stål baller med tetthet 7,8 g/cm<3>.
Nøytral geldannende polymer kan være en enkel eller en blanding av mer enn en, nøytral eroderbar polymer(er) som har geldannende egenskaper og som har hovedsakelig pH-uavhengig oppløselighet. Nøytral geleringspolymer er, fortrinnsvis, til stede i preparatet i et nivå på mer enn 10% men fortrinnsvis mer enn 20 vekt%.
Egnete nøytrale geleringspolymerer omfatter polyetylenoksyd (PEO), derivater og medlemmer av PEO familien (for eksempel polyetylenglykol (PEG), fortrinnsvis eksisterende naturlig i fast stoff tilstand, med egnet molekylvekt eller viskositet). Hvis anvendt som en enkel nøytral geldannende polymer, har en PEO fortrinnsvis en MW på > 4 million (4M), svarende til en vandig løsning viskositetsområde på 1650-5500 mPa.s (eller 1650-5500 eps; målt for en 1% vandig løsning ved 25°C, ved anvendelse av et Brookfield RVF viscometer, med Nr. 2 spindel, ved 2 rpm). Andre eksempler på egnede PEOs omfatter en PEO med MW på rundt 5 million (5M), svarende til et vandig løsningsviskositetsområde på 5500 - 7500 mPa.s eller en PEO MW på rundt 8 millioner (8M), svarende til et vandig løsnings viskositetsområde på 10000-15000 mPa.s. Dette område dekker verdien for typisk løsningsviskositet (i eps) målt ved 25°C, angitt for denne polymeren, i USP 24/NF 19,2000 utgave, s.2285-2286. Hvis PEG blir anvendt som en enkel nøytral geldannende polymer har den fortrinnsvis en høy molekylvekt, for eksempel en MW på rundt 20000, svarende til et viskositetsområde på 2700-3500 mPa.s (eller 2700-3500 eps), målt ved anvendelse av en 50% vandig løsning (vekt/vekt) ved 20°C, ved anvendelse av et kapilærviscometer (Ubbelohde eller tilsvarende). [Ref: European pharmacopoeia 3rf Ed., 2000, Supplement, s. 908-909.]
Andre egnete geldannende polymerer omfatter cellulosederivater så som hydroksypropylmetylcellulose (HPMC) eller hydroksyetylcellulose (HEC) med hensiktsmessige høye viskositeter (for eksempel "HPMC 10000 eps", "HPMC 15000 eps", "HEC type HH" eller "HEC type H"). Når anvendt som en enkel nøytral polymer, hydroksypropylmetylcellulose polymerer som "HPMC 10000 eps" og "HPMC 15000 eps" har, henholdsvis, tilsynelatende viskositeter på 7500-14000 mPa.s (eller 7500 - 14000 eps) og 11250-21000 mPa.s (eller 11250-21000 eps), når målt ved 20°C med en 2% (vekt/vekt) vandig løsning, beregnet med referanse til tørket substans, ved anvendelse av et kapilær viscometer (Ubbelohde eller ekvivalent). En type av hydroksyetylcellulosepolymer, for eksempel "Natrosol 250 Pharma, type HH", fra Hercules Incorporated (Aqualon), viser typisk en Brookfield viskositet på ca. 20,000 mPa.s ved anvendelse av en Brookfield Synchro-Lectric Modell LVF instrument, ved tilstander med 1% løsningskonsentrasjon, spindel nr. 4, spindel hastighet 30 rpm, faktor 200,25°C (Se Natrosol Physical and Chemical Properties booklet, 33.007-E6 (1993), p. 21).
Spesielle preparater som kan nevnes omfatter de hvor forbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse blir formulert sammen med iota-carageenan og HPMC (10,000 eps) i et 50:50 (vekt %) forhold eller sammen med iota-carageenan og PEO 4M i et 50:50 (vekt %) forhold.
Foretrukne ytterligere tilsetningsmidler i slike preparater omfatter smøremidler, så som natriumstearylfumarat.
Avhengig av lidelse og pasient som skal behandles og administreringsveien, kan preparatene administreres i varierende doser.
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan også bli kombinert og/eller ko-administrert med hvilket som helst antitrombotisk middel(er) med en forskjellig virkningsmekanisme, så som én eller flere av de følgende: antiblodplate midler acetylsalicylsyre, ticlopidin og clopidogrel; thromboksan reseptor og/eller syntetase inhibitorer; fibrinogen reseptorantagonister; prostacyclin etterligninger; fosfodiesterase inhibitorer; ADP-reseptor (P2T) antagonister; og inhibitorer av karboksypeptidase U
(CPU).
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan videre bli kombinert og/eller ko-administrert med trombolytiske midler så som én eller flere av vevsplasminogen activator (naturlig, rekombinant eller modifisert), streptokinase, urokinase, prourokinase, anisoylert plasminogen-streptokinase activator kompleks (APSAC), spyttkjertel plasminogen aktivatorer fra dyr og lignende, ved behandling av trombotiske sykdommer, spesielt myokardialt infarkt.
I henhold til et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse er det således gitt et farmasøytisk preparat omfattende hvilke som helst av forbindelsene ifølge krav 1 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, blandet sammen med en farmasytisk akseptabel adjuvant, fortynningsmiddel eller bærer.
Egnet daglig doser av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse i terapeutisk behandling av mennesker er ca. 0,001-100 mg/kg kroppsvekt ved peroral administrering og 0,001-50 mg/kg kroppsvekt ved parenteral administrering.
For å unngå tvil, som anvendt her, omfatter betegnelsen "behandling" terapeutisk og/eller profylaktisk behandling.
Foreliggende oppfinnelse vedrører videre anvendelse av en forbindelse ifølge krav 1 eller 2, som et aktivt ingrediens for fremstilling av et medikament for behandling av en tilstand hvor inhibisjon av trombin er nødvendig. Oppfinnelsen vedrører videre anvendelse av en forbindelse ifølge krav 1 eller 2, som et aktivt ingrediens for fremstilling av et medikament for behandling av en tilstand hvor antikoaguleringsterapi er indikert. Foreliggende oppfinnelse vedrører også anvendelse av en forbindelse ifølge krav 1 eller 2 som et aktivt ingrediens for fremstilling av et antikoaguleringsmiddel.
Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse har den fordelen at de kan være mer effektive, være mindre toksiske, være lenger virkende, har et bredere område med aktivitet, er kraftigere, produserer færre bivirkninger, blir lettere absorbert og/eller har en bedre farmakokinetisk profil (f.eks. høyere oral biotilgjengelighet og/eller lavere fjerning), og/eller har andre anvendelige farmakologiske, fysiske eller kjemiske, egenskaper i forhold til, forbindelser kjent i tidligere teknikk. Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse kan ha ytterligere den fordel at de kan administreres sjeldnere enn forbindelser kjent i tidligere teknikk.
Biologiske Tester
De følgende testprosedyrer kan anvendes.
Test A
Bestemmelse av Trombin Koaguleringstid ( TT)
Inhibitorløsningen (25 TL) blir inkubert med plasma (25 TL) i tre minutter. Human trombin (T 6769; Sigma Chem. Co eller Hematologic Teknologies) i bufferløsning, pH 7,4 (25 TL, 4,0 NIH enheter/ml), blir deretter tilsatt og størkningstiden målt i en automatisk anordning (KC 10; Amelunge).
Trombin-koaguleringstid (TT) blir uttrykt som absolutte verdier (sekunder) så vel som forholdet av TT uten inhibitor (TT0) til TT med inhibitor (TT;). Det sistnevnte forhold (område 1-0) blir plottet mot konsentrasjonen av inhibitor (log transformert) og tilpasset til sigmoidal dose-respons kurver i henhold til ligningen
y = a/[l+(x/IC50)<s>]
hvor: a = maksimum området, dvs. 1; s = stigning av dosen-respons kurven; og IC50 = konsentrasjonen av inhibitor som dobbler størkningstiden. Beregningene er prosessert på en PC ved anvendelse av programvare program GraFit Versjon 3, ved innstilling av
ligningen til: Start ved 0, definerer ende = 1 (Erithacus Programvare, Robin Leatherbarrow, Imperial College av Science, London, UK).
TestB
Bestemmelse av Trombin Hemning med en Kromogen. Robot Forsøk
Trombininhibitor potens blir målt med en kromogen substratmetode, i en Plato 3300 robot mikroplate processor (Rosys AG, CH-8634 Hombrechtikon, Switzerland), ved anvendelse av 96-brønn, halv volum mikrotiter-plater (Costar, Cambridge, MA, USA; Katt No 3690). Lagerløsninger av testsubstans i DMSO (72 |iL), 0,1-1 mmol/L, blir fortynnet i serie 1:3 (24 + 48 uL) med DMSO for å oppnå ti forskjellige konsentrasjoner, som blir analysert som prøver i forsøket. 2 |iL av testprøve blir fortynnet med 124 [iL forsøksbuffer, 12 jiL av kromogen substrat løsning (S-2366, Chromogenix, Molndal, Sweden) i forsøksbuffer og til slutt 12 (iL av I-trombinløsning (Human a-trombin, Sigma Kjemisk Co. eller Hematologic Teknologies) i forsøksbuffer, blir tilsatt og prøvene blandet. De endelige forsøkskonsentrasjoner er: testsubstans
0,00068 - 13,3 umol/L, S-2366 0,30 mmol/L, I-trombin 0,020 NIHU/ml. lineær absorbans del under 40 minutter inkubering ved 37°C blir anvendt for beregning av prosentdel hemning for testprøver, sammenlignet med blanke kontrollprøver uten inhibitor. ICso-robot verdi, svarende til inhibitorkonsentrasjonen som forårsaker 50% hemning av trombin aktivitet, blir beregnet fra en log konsentrasjon vs. % hemningskurve.
TestC
Bestemmelse av hemningskonstant K for Human Trombin
Ki-bestemmelser blir gjort ved anvendelse av en kromogen substrat metode, utført ved 37°C på en Cobas Bio centrifugal analysator (Roche, Basel, Switzerland). Gjenværende enzymaktivitet etter inkubering av human I-trombin med forskjellige konsentrasjoner av testforbindelse blir bestemt ved tre forskjellige substrat konsentrasjoner og blir målt som forandringen i optisk absorbans ved 405 nm.
Testforbindelseløsninger (100 TL; normalt i buffer eller saltvann inneholdende BSA 10 g/L) blir blandet med 200 TL av human I-trombin (Sigma Kjemisk Co) i forsøksbuffer
(0,05 mol/L Tris-HCl pH 7,4, ionestyrke 0,15 regulert med NaCl) inneholdende BSA (10 g/L) og analysert som prøver i Cobas Bio. En 60 TL prøve, sammen med 20 TL vann, blir satt til 320 TL av substratet S-2238 (Chromogenix AB, Molndal, Sverige) i forsøksbuffer og absorbanseforandringen (AA/min) blir overvåket. De endelige konsentrasjoner av S-2238 er 16,24 og 50 pmol/L og av trombin 0,125 NIH U/ml.
Lineær-rate reaksjonsrate blir anvendt for å konstruere Dixon plott, dvs. diagrammer av inhibitorkonsentrasjon vs. l(AA/min). For reversible, kompetitive inhibitorer, datapunktene for de forskjellige substratkonsentrasjoner danner typisk lineære linjer som krysses ved x = -K,.
TestD
Bestemmelse av Aktivert Partiell Thromboplastin Tid ( APTT)
APTT blir bestemt i samlet normalt humant citrert plasma med reagenset PTT Automatisert 5 fremstilt av Stago. Inhibitorene blir satt til plasmaet (10 TL inhibitorløsning til 90 TL plasma) og inkubert med APTT reagens i 3 minutter fulgt av tilsetning av 100 TL av kalsiumklorid-løsning (0,025 M) og APTT blir bestemt ved anvendelse av koaguleringsanalyser KC10 (Amelunge) i henhold til instruksjoner av produsent produsenten.
Størkningstiden blir uttrykt som absolutte verdier (sekunder) så vel som forholdet av APTT uten inhibitor (APTT0) til APTT med inhibitor (APTTi). Det sistnevnte forhold (område 1-0) blir plottet mot konsentrasjonen av inhibitor (log transformert) og tilpasset til sigmoidale dose-respons kurver i henhold til ligningen
y = a/[l+(x/IC50)<s>]
hvor: a = maksimumområde, dvs. 1; s = stigning av dosen-respons kurven; og IC50 = konsentrasjonen av inhibitor som dobbler størkningstiden. Beregningene er prosessert på en PC ved anvendelse av programvare program GraFit Versjon 3, ved innstilling av ligning til: Start ved 0, definerer ende = 1 (Erithacus Programvare, Robin Leatherbarrow, Imperial College av Science, London, UK).
IC50APTT er definert som konsentrasjonen av inhibitor i humant plasma som dobblet den aktiverte Partielle Thromboplastin Tiden.
TestE
Bestemmelse av Trombintid ex vivo
Hemning av trombin etter oral eller parenteral administrering av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse, oppløst i etanol:SolutolK:vann (5:5:90), blir undersøkt i bevisste rotter som, én eller to dager før forsøket, blir utstyrt med et kateter for blodprøvetakning fra carotid arterien. På eksperimentdagen blir blodprøver tatt ved bestemte ganger etter administreringen av forbindelsen til plastrør inneholdende 1 del natriumcitratløsning (0,13 mol pr. L) og 9 deler blod. Rørene blir sentrifugert for å oppnå blodplate manglende plasma. 50 uL av plasmaprøver blir utfelt med 100 uL kald acetonitril. Prøvene blir sentrifugert i 10 minutter ved 4000 rpm. 75 uL av supernatanten blir fortynnet med 75 uL 0,2% maursyre. 10 uL volum av de resulterende løsninger blir analysert ved LC-MS/MS og konsentrasjonene av trombininhibitor blir bestemt ved anvendelse av standardkurver.
Test F
Bestemmelse av Plasma Fjerning i Rotte
Plasma fjerning blir beregnet i sprague dawley hannrotter. Forbindelsen blir oppløst i vann og administrert som en subkutan bolus injeksjon i en dose på 4 fimol/kg. Blodprøver blir oppsamlet ved hyppige intervaller opptil 5 timer etter medikamentadministrering. Blodprøver blir sentrifugert og plasma blir separert fra blodceller og overført til medisinglass inneholdende citrat (10% endelig konsentrasjon). 50 uL av plasmaprøver blir utfelt med 100 uL kald acetonitril. Prøvene blir sentrifugert i 10 minutter ved 4000 rpm.
75 uL av supernatanten blir fortynnet med 75 uL av 0,2% maursyre. 10 uL volum av de resulterende løsninger blir analysert ved LC-MS/MS og konsentrasjonene av trombininhibitor blir bestemt ved anvendelse av standardkurver. Området under plasmakonsentrasjon-tid profilen blir beregnet ved anvendelse av log/lineær trapezoidal regel og ekstrapolert til uendelig tid. Plasma fjerning(CL) av forbindelsen blir deretter bestemt som
CL=Dose/AUC
Verdiene er angitt i ml/min/kg.
TestG
Bestemmelse av in vitro Stabilitet
Levermikrosomer blir fremstilt fra Sprague-Dawley rotter og humane leverprøver i henhold til indre SOP. Forbindelsene blir inkubert ved 37°C ved en total mikrosom-protein konsentrasjon på 3 mg/ml i en 0,05 mol/L TRIS buffer ved pH 7,4, i nærvær av kofaktorer NADH (2,5 mmol/L) og NADPH (0,8 mmol/L). De innledende konsentrasjonene av forbindelse er 5 eller 10 u mol/L. Prøver blir tatt for analyse opptil 60 minutter etter starten av inkuberingen. Den enzymatiske aktiviteten i oppsamlet prøve blir umiddelbart stanset ved tilsetning av 20% myristinsyre ved et volum svarende til 3,3% av totalt prøvevolum. Konsentrasjonen av forbindelse gjenværende (ENDELIG KONS.) i 60 min. prøve blir bestemt ved hjelp av LCMS ved anvendelse av en prøve oppsamlet ved null tid som referanse (START KONS.). % av nedbrutt trombininhibitor blir beregnet som:
TestH
Arteriell Trombose Modell
Karskade blir fremkalt ved påføring av jern(III) klorid (FeCla) topisk til carotid arterien. Rotter blir bedøvet med en intraperitoneal injeksjon av natriumpentobarbital (80 mg/kg; Apoteksbolaget; Umeå, Sweden), fulgt av kontinuerlig infusjon (12 mg/kg/t) gjennom hele forsøket. Rottekroppstemperaturen blir holdt ved 38°C gjennom hele forsøket ved ytre oppvarmning. Forsøket begynner med en 5 minutter lang kontrollperiode. Fem minutter senere, blir human I-fibrinogen (80 kBq; IM53; Amersham Internasjonal, Buckinghamshire, UK) gitt intravenøst og blir anvendt som en markør for den påfølgende innføringen av fibrin(ogen) til trombe. Proximal ende av karotidarteriesegmentet blir plassert i et plastrør (6 mm; Silastic®; Dow Corning, MI, USA) åpnet i lengderetningen, inneholdende FeCl3-fuktet (2 uL; 55% vekt/vekt; Merck, Darmstadt, Tyskland) filterpapir (diameter 3 mm; 1F; Munktell, Grycksbo, Sweden). Venstre karotidarterie blir eksponert for FeCl3 i 10 minutter og blir deretter fjernet fra plastrørene og fuktet i saltvann. Femti minutter senere, blir karotidarterien fjernet og skyllet i saltvann. Referanseblodprøver blir også tatt for bestemmelse av blod <125>I-aktivitet, 10 minutter etter injeksjon av <1>25I-fibrinogen og ved slutten av forsøket. <19>SI-aktiviteten i referanseblodprøver og karsegmentet blir målt i en gammateller (1282 Compugamma; LKB Wallac Oy, Turku, Finland) på samme dag som forsøket blir utført. Trombestørrelsen blir bestemt som mengden av I-aktivitet inkorporert i karsegment i relasjon til I-aktiviteten i blodet (cpm/mg).
Generelle Eksperimentelle Detaljer
TLC ble utført på silikagel. Chiral HPLC analyse ble utført ved anvendelse av en 46 mm X 250 mm Chiralcel OD kolonne med en 5 cm guard kolonne. Kolonnetemperaturen ble holdt ved 35°C. En strømningshastighet på 1,0 ml/min ble anvendt. En Gilson 115 UV detektor ved 228 nm ble anvendt. Den mobile fasen besto av heksaner, etanol og trifluroeddiksyre og det passende forhold er listet opp for hver forbindelse. Typisk, ble produktet oppløst i en minimal mengde av etanol og dette ble fortynnet med den mobile fasen.
LC-MS/MS ble utført ved anvendelse av et HP-1100 instrument utstyrt med en CTC-PAL injector og en 5 um, 4x100 mm ThermoQuest, Hypersil BDS-C18 kolonne. En API-3000 (Sciex) MS detektor ble anvendt. Strømningshastigheten var 1,2 ml/min og den mobile fasen (gradient) besto av 10-90% acetonitril med 90-10% av 4 mM vandig ammoniumacetat, begge inneholdende 0,2% maursyre.
<*>H NMR spektra ble registrert ved anvendelse av tetrametylsilan som den indre standard. <13>c NMR spektra ble registrert ved anvendelse av oppførte deutererte løsningsmidler som den indre standard.
Eksempel 1
Ph( 3- Cl¥5- OCHF9)-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( OcBu)
(i) 3- klor- 5- metoksvbenzaldehvd
3,5-dikloranisol (74,0 g, 419 mmol) i THF (200 ml) ble satt dråpevis til magnesiummetall (14,2 g, 585 mmol, pre-vasket med 0,5 N HC1) i THF (100 ml) ved 25°C. Etter tilsetningen, ble 1,2-dibrometan
(3,9 g, 20,8 mmol) tilsatt dråpevis. Den resulterende mørke brune blanding ble oppvarmet ved tilbakeløp i 3 timer. Blandingen ble avkjølt til 0°C og MN-dimetylformamid (60 ml) ble tilsatt i én porsjon. Blandingen ble fordelt med dietyleter (3 x 400 ml) og 6N HC1 (500 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med saltvann (300 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir en olje. Flash kromatografi (2x) på silikagel
under eluering med Heks:EtOAc (4:1) ga sub-tittelforbindelsen (38,9 g, 54%) som en gul olje.
'H NMR (300 MHz, CDC13) A 9,90 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 3,87 (s, 3H).
(ii) 3 - klor- 5- hvdroksybenzaldehvd
En løsning av 3-klor-5-metoksybenzaldehyd (22,8 g, 134 mmol; se trinn (i) ovenfor) i CH2C12 (250 ml) ble avkjølt til 0°C. Bortribromid (15,8 ml, 167 mmol) ble tilsatt dråpevis over 15 min. Etter omrøring, av reaksjonsblandingen i 2 timer, ble H2O (50 ml) tilsatt langsomt. Løsningen ble deretter ekstrahert med Et20 (2 x 100 ml). De organiske lag ble samlet, tørket (Na2SC«4), filtrert og konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med Heks:EtOAc (4:1) ga sub-tittelforbindelse (5,2 g, 25%).
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8 9,85 (s, 1H), 7,35 (s,lH), 7,20 (s,lH), 7,10 (s.lH), 3,68
(s.lH)
(iii) 3- klor- 5- difluormetoksvbenzaldehvd
En løsning av 3-klor-5-hydroksybenzaldehyd (7,5 g, 48 mmol; se trinn (ii) ovenfor) i 2-propanol (250 ml) og 30% KOH (100 ml) ble oppvarmet til tilbakeløp. Under omrøring, ble CHCIF2 boblet inn i reaksjonsblandingen i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt, surgjort med IN HC1 og ekstrahert med EtOAc (2 x 100 ml). De organiske faser ble vasket med saltvann (100 ml), tørket (Na2SC«4), filtrert og konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med Heks:EtOAc (4:1) ga sub-tittelforbindelse (4,6 g, 46%).
<*>H NMR (300 MHz, CDC13) 8 9,95 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 6,60 (t, 7H-f = 71,1Hz, 1H)
(iv) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF?)-(/ ?. y) CH( OTMS) CN
En løsning av 3-klor-5-difluormetoksybenzaldehyd (4,6 g, 22,3 mmol; se trinn (iii) ovenfor) i CH2C12 (200 ml) ble avkjølt til 0°C. Znl2 (1,8 g, 5,6 mmol) og trimetylsilylcyanid (2,8 g, 27,9 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen fikk oppvarmes til romtemperatur og omrørt i 15 timer. Blandingen ble delvis konsentrert / vakuum hvilket gir sub-tittelforbindelsen som dets salt, som ble anvendt direkte i trinn (v) nedenfor uten ytterligere rensning eller karakterisering.
(v) Ph( 3- Cl¥5- OCHF7)-(/ ?.^ CH( OH) C( NH) OEt
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?,S)CH(OTMS)CN (6,82 g, annta 22,3 mmol; se trinn (iv) ovenfor) ble satt dråpevis til HCl/EtOH (500 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 15 timer, deretter delvis konsentrert / vakuum hvilket gir sub-tittelforbindelse som dens salt, som ble anvendt i trinn (vi) uten ytterligere rensning eller karakterisering.
(vi) Ph( 3- Cn( 5- OCHFz)-(/ ?. 5) CH( OH) C( Q) OEt
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?,5)CH(OH)C(NH)OEt (6,24 g, anta 22,3 mmol; se trinn (v) ovenfor) ble oppløst i THF (250 ml), 0,5M H2S04
(400 ml) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved 40°C i 65 timer, avkjølt og deretter delvis konsentrert i vakuum for å fjerne mesteparten av THF. Reaksjonsblandingen ble deretter ekstrahert med Et20 (3 x 100 ml), tørket (Na2SC«4), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir sub-tittelforbindelse som et fast stoff, som ble anvendt i trinn (vii) uten ytterligere rensning eller karakterisering.
(vii) Ph( 3- ClX5- OCHF9H/ g. S) CH( OH) C( 0) OH
En løsning av Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?,5)CH(OH)C(0)OEt (6,25 g, anta 22,3 mmol; se trinn (vi) ovenfor) i 2-propanol (175 ml) og 20% KOH (350 ml) ble omrørt ved romtemperatur 15 timer. Reaksjonen ble deretter delvis konsentrert i vakuum for å fjerne mesteparten av 2-propanol. Den gjenværende blanding ble surgjort med IM H2SC«4, ekstrahert med Et20 (3 x 100 ml), tørket (Na2S04) og konsentrert i vakuum, hvilket gir et fast stoff. Flash kromatografi på silikagel under eluering med CHCl3:MeOH:konsentrert NH4OH (6:3:1) ga ammoniumsaltet av sub-tittelforbindelse. Ammoniumsaltet ble deretter oppløst i en blanding av EtOAc (75 ml) og H20 (75 ml) og surgjort med 2N HC1. Det organiske laget ble separert og vasket med saltvann (50 ml), tørket (Na2SC«4) og konsentrert i vakuum, hvilket gir sub-tittelforbindelsen (3,2 g, 57% fra trinn (iv) til (vii)).
'H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,38 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 6,89 (t, 7H-f = 71,1 Hz, 1H), 5,16 (s, 1H)
(viii) Ph( 3- Cn( 5- OCHF?H/ flCH( OH) C( 0) OH ( a) og Ph( 3- Cn( 5- OCHF7)-( S) CH( OAc) C( Q) OH ( b)
En blanding av Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(Æ,S)CH(OH)C(0)OH (3,2 g, 12,7 mmol; se trinn (vii) ovenfor) og Lipase PS "Amano" (-2,0 g) i vinylacetat (125 ml) og MTBE (125 ml) ble oppvarmet ved tilbakeløp i 48 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt, filtrert gjennom Celite® og filterkaken vasket med EtOAc. Filtratet ble konsentrert i vakuum og underkastet flash kromatografi på silikagel under eluering med CHCl3:MeOH:konsentrert NH4OH (6:3:1) hvilket gir ammoniumsalter av sub-tittelforbindelsene (a) og (b). Forbindelse (a) som et salt ble oppløst i H20, surgjort med 2N HC1 og ekstrahert med EtOAc. Det organiske laget ble vasket med saltvann, tørket (Na2SC«4), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir sub-tittelforbindelse (a) (1,2 g, 37%).
For sub-tittelforbindelse (a)
'H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,38 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 6,89 (t, 7H-f = 71,1 Hz, 1H), 5,17 (s, 1H)
(ix) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF,)-(/ ?) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( Teoc)
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)OH (1,1 g, 4,4 mmol; se trinn (viii) ovenfor) og H-Aze-Pab(Teoc) (se internasjonal patentsøknad WO 00/42059, 2,6 g, 5,7 mmol) i DMF (50 ml) ved 0°C ble tilsatt PyBOP (2,8 g, 5,3 mmol) og collidin (1,3 g, 10,6 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ved romtemperatur i ytterligere 15 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum og flash kromatografert på silikagel (3 x), under eluering først med CHCtøEtOH (9:1), deretter med EtOAc:EtOH (20:1) og til slutt under eluering med CH2C12:CH30H (95:5), hvilket gir sub-tittelforbindelsen (1,0 g, 37%) som et hvitt, fast stoff.
'H NMR (300 MHz, CD3OD, blanding av rotamerer) 8 7,79-7,85 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,15-7,48 (m, 5H), 6,89 og 6,91 (t, 7H-f = 71,1 Hz, 1H), 5,12 og 5,20 (s, 1H), 4,75-4,85 (m, 1H), 3,97-4,55 (m, 6H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,15 (m, 2H), 0,09 (s, 9H)
MS (m/z)611(M + l)<+>
(x) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF2)-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( OcBu. Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0,051 g, 0,08 mmol; se trinn (ix) ovenfor), ble oppløst i 3 ml acetonitril og 0,062 g
(0,5 mmol) O-cyklobutylhydroksylamin-hydroklorid ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet ved 70°C i 4,5 timer. Løsningsmidlet ble avdampet og residuet ble fordelt mellom vann og etylacetat. Den vandige fasen ble ekstrahert to ytterligere ganger med etylacetat og den samlede organiske fase ble vasket med vann, saltvann, tørket (Na2SC<4), filtrert og inndampet. Utbytte: 0,054 g (95%).
'H-NMR (400 MHz; CD3OD): 5 8,66-8,50 (m, 1H), 7,45 (d, 2H), 7,29 (m, 3H), 7,15 (m, 2H), 6,88 (t, 1H hoved rotamer), 6,85 (t, 1H mindre rotamer), 5,18 (s,lH hoved rotamer), 5,12 (s, 1H mindre rotamer), 5,16 (m, 1H mindre rotamer), 4,78 (m, 1H hoved rotamer), 4,70 (m, 1H), 4,50-4,30 (m, 3H), 4,19-3,93 (m, 3H), 2,71-2,44 (m, 1H), 2,34-2,11 (m, 5H), 1,78 (m, 1H), 1,62 (m, 1H), 0,96 (m, 2H), 0,01 (s, 9H)
(xi) Ph( 3- Cl¥5- OCHF?)-(/ tfCH( OH) C( 0)- Aze- Pab( OcBu)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OcBu, Teoc) (0,054 g,
0,08 mmol; se trinn (x) ovenfor), ble oppløst i 0,5 ml CH2C12 og
3 ml TFA. Reaksjonen fikk forløpe i 60 minutter. TFA ble inndampet og residuet ble renset ved anvendelse av preparativ HPLC. Fraksjonene av interesse ble samlet og frysetørket (2x), hvilket gir 23 mg (54%) av tittelforbindelsen.
MS (m/z) 536 (M -1)_; 538 (M + 1)<+>
'H-NMR (400 MHz; CD3OD): 8 7,56 (d, 2H), 7,33 (m, 3H), 7,15 (m, 2H), 6,89 (t, 1H hoved rotamer), 6,86 (t, 1H mindre rotamer), 5,18 (s, 1H hoved rotamer; og m, 1H mindre rotamer), 5,11 (s, 1H mindre rotamer), 4,77 (m, 1H hoved rotamer), 4,58 (m, 1H), 4,42 (m, 2H), 4,34 (m, 1H hoved rotamer), 4,15 (m, 1H hoved rotamer), 4,06 (m, 1H mindre rotamer), 3,97 (m, 1H mindre rotamer), 2,66 (m, 1H mindre rotamer), 2,52 (m, 1H hoved rotamer), 2,33-2,25 (m, 3H), 2,01-2,20 (m, 2H), 1,75 (m, 1H), 1,59 (m, 1H)
<13>C-NMR (100 MHz; CD3OD) (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 8 172,4, 172,3,171,9,171,4,152,3
Eksempel 2
Ph( 3- Cl¥5- OCHF?)-(/ ftCH( OH) C( CO- Aze- Pab( OH)
(i) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF7)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( OH. Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0,148 g, 0,24 mmol; se Eksempel l(ix) ovenfor), ble oppløst i 9 ml acetonitril og 0,101 g (1,45 mmol) hydroksylamin-hydroklorid ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet ved 70°C i 2,5 timer, filtrert gjennom Celite® og inndampet. Råproduktet (0,145 g; 75% ren) ble anvendt direkte i neste trinn uten ytterligere rensning.
(ii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF?)-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( OH)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OH, Teoc) (0,145 g, 0,23 mmol; se trinn (i) ovenfor), ble oppløst i 0,5 ml CH2C12 og 9 ml TFA. Reaksjonen fikk forløpe i 60 minutter. TFA ble inndampet og residuet ble renset ved anvendelse av preparativ HPLC. Fraksjonene av interesse ble samlet og frysetørket (2x), hvilket gir 72 mg (utbytte over to trinn 62%) av tittelforbindelsen.
MS (m/z) 482 (M - 1)_; 484 (M + 1)<+>
'H-NMR (400 MHz; CD3OD): 8 7,58 (d, 2H), 7,33 (m, 3H), 7,15 (m, 2H), 6,89 (t, 1H hoved rotamer), 6,86 (t, 1H mindre rotamer), 5,18 (s, 1H hoved rotamer; og m, 1H mindre rotamer), 5,12 (s, 1H mindre rotamer), 4,77 (m, 1H hoved rotamer),4,42 (m, 2H), 4,34 (m, 1H hoved rotamer), 4,14 (m, 1H hoved rotamer), 4,06 (m, 1H mindre rotamer), 3,95 (m, 1H mindre rotamer), 2,66 (m, 1H mindre rotamer), 2,50 (m, 1H hoved rotamer), 2,27 (m, 1H hoved rotamer), 2,14 (m, 1H mindre rotamer)
<13>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 8 172,4,172,3,172,0,171,4 152,3,152,1
Eksempel 3
Ph( 3- Cl)( 5- OCHF?)-(/ ?) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0,045 g, 0,074 mmol; se Eksempel l(ix) ovenfor), ble oppløst i 3 ml TFA og fikk reagere i 1 time. TFA ble inndampet og residuet ble fryse tørket fra vann/acetonitril, hvilket gir 0,043 g (100%) av sub-tittelforbindelsen som dens TFA salt.
'H-NMR (400 MHz; CD3OD) rotamerer: 8 7,8-7,75 (m, 2H), 7,55-7,5 (m, 2H), 7,35 (m, 1H, hoved rotamer), 7,31 (m, 1H, mindre rotamer), 7,19 (m, 1H, hoved rotamer), 7,15 (m, 1H), 7,12 (m, 1H, mindre rotamer), 6,89 (t, 1H, hoved rotamer), 6,87 (t, 1H, mindre rotamer), 5,22 (m, 1H, mindre rotamer), 5,20 (s, 1H, hoved rotamer), 5,13 (s, 1H, mindre
rotamer), 4,80 (m, 1H, hoved rotamer), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,37 (m, 1H, hoved rotamer), 4,19 (m, 1H, hoved rotamer), 4,07 (m, 1H, mindre rotamer), 3,98 (m, 1H, mindre rotamer), 2,70 (m, 1H, mindre rotamer), 2,55 (m, 1H, hoved rotamer), 2,29 (m, 1H, hoved rotamer), 2,15
(m, 1H, mindre rotamer)
<13>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 8 172,6,172,5,172,0,171,7,167,0
MS (m/z) 465 (M - 1)_, 467 (M + 1)<+>
Eksempel 4
Ph( 3- Cl)( 5- OCHF?)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( COOcPentvl)
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab x TFA
(74 mg, 0,13 mmol; se Eksempel 3 ovenfor) og cyklopentylklorformiat
(44 mg, 0,30 mmol) i metylenklorid (5 ml) ble tilsatt vandig NaOH (0,5 ml, 2M, 1 mmol). Blandingen ble omrørt ved romtemperatur og reaksjonen ble overvåket med HPLC. Etter 2,5 timer, ble vann tilsatt og væskefasene ble separert. Den vandige fasen ble ekstrahert to ganger med metylenklorid. De samlede organiske faser ble tørket (MgS04) og renset på silikagel (først metylenklorid, deretter EtOAc). Etter fjerning av løsningsmidlene / vakuum, det faste residuet ble oppløst i vann/acetonitril og frysetørket, hvilket gir tittelforbindelsen som et hvitt, fast stoff. Utbytte: 33 mg (44%)
MS (m/z) 579 (M + 1)<+>
<*>H NMR (400MHz; CD3OD): A 7,79(d, 2H), 7,43-7,30(m, 5H), 7,20-7,ll(m, 2H), 6,90(t, 1H, hoved rotamer), 6,87(t, 1H, mindre rotamer), 5,19(dd, 1H, mindre rotamer), 5,18(s, 1H, hoved rotamer), 5,13(m, 1H), 5,1 l(s, 1H, mindre rotamer), 4,78(dd, 1H, hoved rotamer), 4,45(m, 2H), 4,35(m, 1H, hoved rotamer), 4,16(s, 1H, hoved rotamer), 4,06(s, 1H, mindre rotamer), 3,97(s, 1H, mindre rotamer), 2,68(m, 1H, mindre rotamer), 2,52(s, 1H, hoved rotamer), 2,28(s, 1H, hoved rotamer), 2,16(s, 1H, mindre rotamer), l,90(m, 2H), l,77(m, 4H), l,61(m, 2H) <13>C NMR (karbonyl og/eller amidin protoner; 100 MHz): A 173,6,173,1,172,6,170,3, 165,6
Eksempel 5
Ph( 3- Cl)( 5- OCHFz)-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( Z)
Tittelforbindelsen ble fremstilt i henhold til metoden beskrevet i Eksempel 4 ovenfor ved å starte fraPh(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab x TFA (73 mg, 0,13 mmol; se Eksempel 3 ovenfor) og benzylklorformiat (35 mg, 0,21 mmol). Ytterligere rensning ved revers-fase HPLC (0,1M ammoniumacetat/MeCN 40/60) ble nødvendig. De passende fraksjoner ble konsentrert i vakuum og ekstrahert med EtOAc. Utbytte: 24 mg (32%).
MS (m/z) 602 (M + 1)<+>
<!>H NMR (400MHz; CD3OD): A 7,80(d, 2H), 7,43-7,25(m, 8H), 7,20-7,10(m, 2H), 6,90(t, 1H, hoved rotamer), 6,88(t, 1H, mindre rotamer), 5,18(dd, 1H, mindre rotamer), 5,18(s, 2H), 5,17(s, 1H, rotamer), 5,1 l(s, 1H, rotamer), 4,78(dd, 1H, hoved rotamer), 4,45(m, 2H), 4,34(m, 1H, hoved rotamer), 4,15(s, 1H, hoved rotamer), 4,06(s, 1H, mindre rotamer), 3,97(s, 1H, mindre rotamer), 2,66(m, 1H, mindre rotamer), 2,5l(s, 1H, hoved rotamer), 2,27(s, 1H, hoved rotamer), 2,15(s, 1H, mindre rotamer)
<13>C NMR (karbonyl og/eller amidin protoner; 100MHz): A 173,6,173,1,172,6,170,5, 164,9
Eksempel 6
Ph( 3- Cl¥5- OCFO-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab x TFA
(i) 2- nitro- 5- trifluormetoksvbenzosvre
Til en løsning av 3-trifluormetoksybenzosyre (49,0 g, 0,24 mol) i svovelsyre (500 ml) at mindre enn 0°C (is-MeOH bad) ble tilsatt en løsning av kaliumnitrat (31,3 g, 0,31 mol) i svovelsyre (200 ml) over 20 minutter. Den resulterende løsning ble omrørt ved 0°C i 2 timer, deretter oppvarmet til romtemperatur og omrørt i 18 timer. Reaksjonsblandingen ble hellet i is og den resulterende sure løsning ble ekstrahert med EtOAc (5x). De samlede organiske lag ble vasket med H20 (lx), saltvann (2x), H20 (lx) og saltvann (lx), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir rå sub-tittelforbindelse (65,7 g) som et fast stoff forurenset med HO Ac. Rå sub-tittelforbindelse ble oppløst i EtOAc og toluen og konsentrert i vakuum, hvilket gir et HOAc fritt fast stoff (58,4 g, 97%) som ble anvendt i neste trinn uten ytterligere rensning.
<*>H NMR (300 MHz, CDC13): A 10,10 (br s, 1H), 8,02 (d, 1H, / = 8 Hz), 7,69 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,54 (dd, 1H, J = 2 Hz, J = 8 Hz)
(ii) 2- amino- 5- trifluormetoksvbenzosvre
Til en løsning av 2-nitro-5-trifluormetoksybenzosyre (56,8 g, 0,23 mol; se trinn (i) ovenfor) i EtOH (1000 ml) ble tilsatt 10% Pd/C (5,7 g). Den resulterende løsning ble spylt med H2 i 5 timer, filtrert gjennom Celite® og konsentrert i vakuum, hvilket gir rå sub-tittelforbindelse (49,7 g, 98%) som et fast stoff som ble anvendt i neste trinn uten ytterligere rensning.
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD): A 7,66 (m, 1H), 7,17 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,77 (d, 1H, J = 8 Hz)
(iii) 2- amino- 3- klor- 5- trifluormetoksvbenzosvre
Til en løsning av 2-amino-5-trifluormetoksybenzosyre (49,0 g, 0,22 mol; se trinn (ii) ovenfor) i HOAc (1200 ml) ble langsomt tilsatt sulfurylklorid (41,8 g, 0,31 mol). Gassutvikling ble observert. Den resulterende heterogene blanding ble omrørt ved romtemperatur i 1 time. Ytterligere HOAc (300 ml) ble satt til for å lette omrøringen, fulgt av sulfurylklorid i 5 ml porsjoner inntil utgangsmaterialet ble oppbrukt basert på TLC analyse. Reaksjonen ble konsentrert i vakuum, hvilket gir faste stoffer som ble spylt på en rotasjonsinndamper med EtOAc (2x) fulgt av Et20 (lx) for å fjerne HOAc. De resulterende faste stoffer ble videre tørket, hvilket gir HC1 salt av rå sub-tittelforbindelse (60,5 g, 94%), som ble anvendt i neste trinn uten ytterligere rensning.
'H NMR (300 MHz, CD3OD): A 7,72 (s, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,22 (s, exchangeables)
(iv) 3- klor- 5- trifluormetoksvbenzosvre
Til en løsning av 2-amino-3-klor-5-trifluormetoksybenzosyre (60,5 g, anta 0,22 mol; se trinn (iii) ovenfor) i 1,4-dioksan (1000 ml) ble tilsatt 6N HC1 (750 ml). Noen organiske stoffer gikk ut av løsningen som olje. Dioksanløsningen ble avkjølt til mindre enn 0°C (is-MeOH bad). En løsning av natriumnitritt (18,2 g, 0,26 mol) i H20 (250 ml) ble tilsatt over 15 minutter via en tilsetningstrakt. Den resulterende løsning ble omrørt i 45 min. Hypofosforsyrling (221,5 ml 50 vekt% i H20, 291,2 g,
2,20 mol) ble tilsatt langsomt via en tilsetningstrakt. Løsningen ble omrørt ved 0°C i 1,5 timer, deretter oppvarmet til romtemperatur (gassutvikling ble observert) og omrørt i 18 timer. Rå løsning ble overført til en separasjonstrakt og ekstrahert med Et20 (4x). De samlede organiske lag ble ekstrahert med vandig NaHCC<3 (3x). Det basiske vandige lag ble forsiktig surgjort med 6N HC1 og ekstrahert med CH2C12 (3x). CH2C12 ekstrakter ble tørket (Na2SC«4), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir rå sub-tittelforbindelse (26,5 g, 46% fra 3-trifluormetoksybenzosyre) som et fast stoff som ble anvendt i neste trinn uten ytterligere rensning.
'H NMR (300 MHz, CD3OD): A 7,98 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,58 (s, 1H)
(v) 3- klor- 5- trifluormetoksvbenzvlalkohol
Til en løsning av 3-klor-5-trifluormetoksybenzosyre (22,5 g,
93,5 mmol; se trinn (iv) ovenfor) i vannfri THF (1200 ml) under en N2 atmosfære ved romtemperatur ble tilsatt en løsning av BH3»THF kompleks (140 ml IM i THF; 140,3 mmol). Løsningen ble tilbakeløpskokt i 2 timer, avkjølt til romtemperatur og omrørt i 18 timer, quenched forsiktig med H20 og konsentrert 1 vakuum for å fjerne mesteparten av THF. Residuet ble fortynnet med EtOAc og de organiske faser ble vasket med saltvann (3x), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir rå sub-tittelforbindelse (21,2 g, 100%) som en olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
<!>H NMR (300 MHz, CDCI3): A 7,33 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,14 (s, 1H), 4,72 (s, 2H), 2,05
(br s, 1H)
(vi) 3- klor- 5- trifluormetoksvbenzaldehvd
En løsning av DMSO (16,1 g, 205,9 mmol) i vannfri CH2C12 (300 ml) ble avkjølt til -78°C. Oksalylklorid (13,1 g, 103,0 mmol) ble tilsatt langsomt via en sprøyte (gassutvikling ble observert). Den resulterende løsning ble omrørt ved -78°C i 15 minutter. En løsning av 3-klor-5-tirfluormetoksybenzylalkohol (21,2 g, 93,6 mmol; se trinn (v) ovenfor) i CH2C12 (200 ml) ble tilsatt via en tilsetningstrakt over en periode på 15 minutter. Den uklare løsningen ble omrørt ved -78°C i 40 minutter og DIPEA (60,5 g, 468,0 mmol) ble tilsatt via en tilsetningstrakt over 10 minutter. Den resulterende homogene løsning ble omrørt ved -78°C i 1,5 timer, deretter oppvarmet til romtemperatur og omrørt 18 timer. Rå løsning ble konsentrert i vakuum, residuet fortynnet med EtOAc og vasket med H2O (lx), 2N HC1 (lx), saltvann (lx), vandig NaHC03 (lx) og saltvann (lx). De organiske faser ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir rå sub-tittelforbindelse (19,9 g, 95%) som ble anvendt i neste trinn uten ytterligere rensning.
<*>H NMR (300 MHz, CDCI3): A 10,00 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,51 (s, 1H)
(vii) Ph( 3- Cl)( 5- OCFj)-(/ ?. 5) CH( OTMS) CN
Til en løsning av 3-klor-5-trifluormetoksybenzaldehyd (19,9 g,
88,6 mmol; se trinn (vi) ovenfor) i CH2C12 (600 ml) ved 0°C ble tilsatt Znl2 (1,4 g, 4,4 mmol) og trimetylsilylcyanid (9,7 g, 97,5 mmol). Etter omrøring ved 0°C i 1,5 timer og ved romtemperatur i 2 timer, viste TLC analyse bare utgangsmaterialet. Znl2 ble tilsatt porsjonsvis inntil reaksjonen forløp (over 30,0 g Znl2 ble tilsatt totalt). Etter omrøring ved romtemperatur i 18 timer, ble reaksjonen stanset med vann og de organiske faser ble separert. De organiske faser ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir rå sub-tittelforbindelse (27,7 g, 96%) som en væske som ble anvendt uten ytterligere rensning.
<J>H NMR (300 MHz, CDC13): A 7,43 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 5,49 (s, 1H), 0,38
(s, 9H)
(viii) Ph( 3- Cl)( 5- OCF^-(/ g. 5) CH( OH) C( Q) OH
En suspensjon av Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(Æ,S)CH(OTMS)CN (27,7 g,
85,6 mmol; se trinn (vii) ovenfor) i konsentrert HC1 (300 ml) ble tilbakeløpskokt i 3 timer. Den resulterende brune heterogene blanding ble avkjølt til romtemperatur og ekstrahert med Et20 (2x). De innledende organiske lag ble ekstrahert med 2N NaOH (2x), deretter ble basiske lag surgjort med 2N HC1 og ekstrahert med EtiO. Et20 ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir rå sub-tittelforbindelse (4,9 g, 21%). TLC analyse av de innledende organiske lag viste at sub-tittelforbindelsen fortsatt var til stede slik at basisk ekstraksjon/surgjøring ble gjentatt ved anvendelse av 6N NaOH, hvilket gir
ytterligere rå sub-tittelforbindelse (2,8 g, 12%). TLC analyse av de innledende organiske lag viste at sub-tittelforbindelsen fortsatt var til stede slik at de organiske faser ble tørket (Na2S04) og konsentrert i vakuum, hvilket gir natriumsaltet av sub-tittelforbindelse (18,3 g) som en olje. Saltet ble deretter gjenoppløst i Et20 og de organiske faser surgjort med 2N HC1 og vasket med saltvann. Det resulterende organiske lag ble tørket (Na2S04),
behandlet med aktivert trekull, filtrert gjennom Celite® og konsentrert i vakuum, hvilket gir rå sub-tittelforbindelse (14,3 g, 62%) som et fast stoff som ble anvendt i neste trinn uten ytterligere rensning.
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD): A 7,53 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 5,23 (s, 1H)
(ix) Ph( 3- Cl)( 5- OCFO-(/ g) CH( OH) C( C0OH ( a) oe Ph( 3- Cl)( 5- OCFO-( S) CH( OAc) C( Q) OH ( b)
En blanding av Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(Æ,S)CH(OH)C(0)OH (7,7 g, 28,5 mmol; se trinn (viii) ovenfor) og Lipase PS "Amano" (3,8 g) i MTBE (100 ml) og vinylacetat (50 ml) ble omrørt ved 60°C i 26 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt og filtrert gjennom Celite® og filterkaken vasket med EtOAc. De samlede organiske lag ble konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med CHCl3:MeOH:konsentrert NH4OH (6:3:1) ga en blanding av ammoniumsalter av sub-tittelforbindelse (a) og sub-tittelforbindelse (b) (6,7 g) og en ren prøve av ammoniumsaltet av sub-tittelforbindelse (a)
(1,2 g) med mindre enn 95% e.e. De respektive fraksjoner ble oppløst i Et20 og vasket med 2N HC1 (lx) og saltvann (lx), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert, hvilket gir de tilsvarende karboksylsyrer (6,7 g og 1,1 g henholdsvis). Disse fraksjoner ble deretter separat igjen underkastet spaltning og igjen renset som nødvendig via kromatografi på silikagel under eluering med CHCl3:MeOH:konsentrert NH4OH (6:3:1 eller 75:20:5 eller 145:45:10) etter behov. Renset sub-tittelforbindelse (a) ble surgjort med vandig HC1 eller vandig sitronsyre før ytterligere anvendelse. Ammoniumsaltet av sub-tittelforbindelse (b) ble anvendt uten karakterisering.
For sub-tittelforbindelse (a)
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD): A 7,53 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 5,23 (s, 1H)
,<3>C NMR (75 MHz, CD3OD): A 174,9,150,9,145,4,136,3,126,8,122,0,120,6,118,9, 72,9
MS (m/z) 269 (M -1)"
(x) Ph( 3- CI)( 5- OCFO-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( Teoc)
En løsning av Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(Æ)CH(OH)C(0)OH (0,73 g, 2,70 mmol; se trinn (ix) ovenfor) i DMF (40 ml) under en nitrogen-atmosfære ble avkjølt til 0°C. Til løsningen ble satt H-Aze-Pab(Teoc) (1,46 g,
3,24 mmol), collidin (0,82 g, 6,75 mmol) og PyBOP (1,83 g, 3,51 mmol). Løsningen ble omrørt ved 0°C i 2 timer, oppvarmet til romtemperatur og omrørt i 18 timer, behandlet med vann og konsentrert / vakuum. Residuet ble fortynnet med EtOAc og vasket med H2O (lx), vandig NaHC03 (lx), vandig sitronsyre (lx) og saltvann (lx), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir rå sub-tittelforbindelse. Flash kromatografi på silikagel (2x) under eluering med EtOAcrMeOH (30:1) deretter CH2Cl2:MeOH (93:7) ga sub-tittelforbindelsen (0,73 g, 43%) som et knusbart skum.
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer): A 7,78-7,82 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,25-7,54 (m, 5H), 5,25 og 5,16 (s, 1H), 5,22 og 4,79 (m, 1H), 3,92-4,58 (m, 6H), 2,20-2,76 (m, 2H), 1,04-1,13 (m, 2H), 0,08 (s, 9H)
MS (m/z) 629 (M + 1)<+>
(xi) Ph( 3- Cl)( 5- OCFO-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab
Trifluoreddiksyre (1,0 ml) ble satt til en omrørt is/vann-avkjølt løsning av Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (101 mg; 160 umol; se trinn (x) ovenfor), i metylenklorid (10 ml). Kjølebadet ble fjernet etter 1 time. Etter 1,5 timer ved romtemperatur, ble acetonitril (30 ml) tilsatt og løsningsmidlene ble forsiktig fjernet under redusert trykk. Residuet ble oppløst i vann og fryse tørket, hvilket gir 90 mg (92%) av tittelforbindelsen som dens TFA salt.
MS (m/z) 483 (M -1)"; 485 (M + 1)<+>
'H NMR (300 MHz; CD3OD): (kompleks på grunn av diastereomerene/rotamerer): A 7,70-7,80 (m, 2H), 7,45-7,58 (m, 3H), 7,24-7,38 (m, 2H), 5,26 (s, 1H), 5,17 (m, 1H, mindre rotamer), 4,82 (m, 1H, hoved rotamer), 4,35-4,6 (m, 3H), 4,22 (m, 1H, hoved rotamer),
3,92-4,12 (m, 2H, mindre rotamer), 2,70 (m, 1H, mindre rotamer), 2,55 (m, 1H, hoved rotamer), 2,30 (m, 1H, hoved rotamer), 2,16 (m, 1H, mindre rotamer)
<13>C NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer): A 173,7,173,4,173,0,172,8, 168,1
Eksempel 7
Ph( 3- Cl)( 5- OCFO-(/ ?) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( OMe)
HATU (71 mg; 0,19 mmol) ble satt til en omrørt is/vann-avkjølt løsning av Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(/?)CH(OH)C(0)OH (39 mg; 0,14 mmol; se Eksempel 6(ix) ovenfor) i DMF (3 ml). Etter 30 minutter, ble en løsning av H-Aze-Pab(OMe) x 2HC1 (69 mg; 0,21 mmol; se internasjonal patentsøknad WO 00/42059) og 2,4,6-collidin (0,080 ml; 0,58 mmol) i DMF (1,5 ml) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble latt stå natten over og temperaturen fikk øke langsomt til omgivelsestemperatur. Løsningsmidlene ble fjernet i vakuum og råproduktet ble renset ved anvendelse av revers-fase HPLC (acetonitril: 0,1M vandig ammoniumacetat) hvilket gir, etter frysetørking de passende fraksjoner, tittelforbindelsen (61 mg, 97%) som et fargeløst, fast stoff.
MS (m/z) 513 (M -1)_, 515 (M + 1)<+>
'H NMR (500 MHz; CD3OD): A 7,97 (bt, 1H), 7,53 (d, 2H), 7,27 (t, 1H), 7,22 (d, 2H), 7,19 (t, 1H), 7,11 (t, 2H), 6,77 (s, 1H), 4,92 (s, 1H), 4,9 (bs, 3H), 4,81 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 4,09 (m, 1H) 3,87 (s, 3H), 2,58 (m, 1H), 2,37(m, 1H)
<13>C NMR (125 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer): A 171,8,169,9, 156,8
Eksempel 8
Parallel Syntese av Alkoksvamidiner
Denne syntesen ble utført i en 96-brønn Robbins blokkerer. Til brønner inneholdende en passende mengde av O-substituert hydroksylamin (spesifisert nedenfor; idet alle er kommersielt tilgjengelig eller ble fremstilt ved anvendelse av velkjente litteratur prosedyrer) ble tilsatt en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(Æ)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc)
(10 mg; 17 umol; se Eksempel 6(x) ovenfor) i acetonitril (1,0 ml). Blokkeringsmidlet ble forseglet og reaksjonsblandingen ble rotert natten over i en ovn ved 60°C. Etter avkjøling og filtrering, ble de faste stoffene vasket med acetonitril (3 x 0,3 ml). De samlede
væskefraksjoner ble konsentrert i en vakuumsentrifuge. Residuet ble fordelt mellom vann (0,4 ml) og etylacetat (0,4 ml). Etter at væske-væske ekstraksjonen var avsluttet, ble alt filtrert gjennom en kolonne av Hydromatriks™. Etter vasking tre ganger med etylacetat, ble de samlede filtrater konsentrert i en vakuumsentrifuge. Avbeskyttelse ble utført ved tilsetning av metylenklorid (0,1 ml) og trifluroeddiksyre (0,3 ml). Etter omrøring ved romtemperatur i 3 timer, ble løsningsmidlene fjernet i vakuum. Residuet ble fordelt mellom vandig mettet natriumhydrogenkarbonat (0,5 ml) og etylacetat (0,5 ml). Etter ekstraksjon, filtrering gjennom Hydromatriks og konsentrasjon ( vid infra) ble residuet oppløst i isopropanol/vann (7/3) (1 ml). Omtrent 2% av denne løsningen ble fjernet og fortynnet med isopropanol/vann (7/3) (1 ml) for LC-MS analyse. Etter fjerning av løsningsmidlene i vakuum ble det faste residuet overført til en 96-brønn plate ved anvendelse av acetonitril og etylacetat for å oppløse forbindelsen. Løsningsmidlene ble avdampet i en vakuum sentrifuge, hvilket gir de følgende tittelforbindelser:
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OCH2-3-(5-Me-isoksazol))
(fra 3-[(aminooksy)metyl]-5-metylisoksazol x HC1 (18 mg; 0,11 mmol)). Utbytte: 3,64 mg (35%) (MS (m/z) 596 (M + 1)<+>);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OCH2-3-pyridin)
(fra 3-[(aminooksy)metyl]pyridin x 2 HC1 (19 mg; 96 umol). Utbytte: 5,14 mg (50%) (MS (m/z) 592 (M + 1)<+>);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(0/Bu)
(fra Ø-isobutyl hydroksylamin x HC1 (17 mg; 140 umol). Utbytte: 4,4 mg (45%). MS (m/z) 557 (M + 1)<+>);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OEt)
(fra O-etyl hydroksylamin x HC1 (14 mg; 140 umol). Utbytte: 4,04 mg (42%). MS (m/z) 529 (M+l)<+>);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(Æ)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OBn)
(fra Ø-benzylhydroksylamin x HC1 (17 mg; 110 umol). Utbytte: 3,22 mg (29%). MS (m/z) 591 (M + 1)<+>);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OcHeksyl)
(fra Ø-cykloheksyl hydroksylamin x HC1 (15 mg; 99 umol). Utbytte: 2,9 mg (26%). MS (m/z) 583 (M + 1)<+>);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(Æ)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OcBu)
(fra Ø-cyklobutyl hydroksylamin x HC1 (17 mg; 140 umol). Utbytte: 3,3 mg (30%). MS (m/z) 555 (M + 1)<+>);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OCH2CH20Ph(3-CF3))
(fra 0-[2-[3-(trifluormetyl)fenoksy]etyl]hydroksylamin x HC1 (24 mg; 93 umol). Utbytte: 6,52 mg (46%). MS (m/z) 689 (M+l)<+>);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OBn(4-Cl))
(fra 0-(4-klorbenzyl)hydroksylamin x HC1 (16 mg; 82 umol). Utbytte: 3,47 mg (29%). MS (m/z) 625 (M + 1)<+>);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(/2)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OBn(3-MeO))
(fra 0-(3-metoksybenzyl)hydroksylamin x HC1 (18 mg; 94 umol). Utbytte: 4,33 mg (36%). MS (m/z) 621 (M+l)<+>);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OBn(2-Br))
(fra 0-(2-brombenzyl)hydroksylamin x HC1 (23 mg; 96 umol). Utbytte: 3,87 mg (30%). MS (m/z) 671 (M + 1)<+>);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OBn(4-Me))
(fra 0-(4-metylbenzyl)hydroksylamin x HC1 (14 mg; 81umol). Utbytte: 2,91 mg (25%).
MS (m/z) 605 (M + 1)<+>); og
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(0-4-heptyl)
(fra 0-(4-heptyl)hydxoksylamin x HC1 (15 mg; 89 umol). Utbytte: 17 mg (100%). MS (m/z) 599 (M + 1)<+>).
Eksempel 9
Ph( 3- Cn( 5- OCHF2)-(^ CH( CH7QH) C( 0)- Aze- Pab x HOAc
(i) 3- klor- 5- metoksvbenzosvre
Magnesiumspon (Fluka purum for Grignard reaksjoner) ble forbehandlet på følgende måte: sponet ble plassert i en glass sinteret trakt og 0,1 M av saltsyre ble hellet i dem. Sponene ble omrørt med en glass stav i noen få sekunder og deretter ble syren vasket bort med 3 porsjoner vann. Til slutt, ble sponet vasket med 2 porsjoner av aceton og satt på flasker. Tetrahydrofuran (100 ml, 99,95%) ble tørket ved tilsetning av RedAl (1 g, 70% vekt. i toluen). Forbehandlet magnesiumspon (5 g, 200 mmol) ble plassert i en rundbunnet kolbe og ble spylt med nitrogen 3 ganger. Dikloranisol (26 g, 146 mmol) ble oppløst i THF (100 ml, RedAl-tørket) og dibrometan (1,8 g,
10 mmol) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble spylt med nitrogen og deretter tilbakeløpskokt i 2 timer. Oppvarmning ble avbrudt og tørris (10 g) ble tilsatt porsjons vis over 2 minutter. Når all tørris var oppløst, ble reaksjonsblandingen hellet i is inneholdende saltsyre
(400 ml, 2 M). Ekstra aktiv opparbeiding (eter, 300 ml) ga 11,2 g,
60,2 mmol (utbytte: 41%) av sub-tittelforbindelsen.
■H-NMR (500 MHz; aceton-d6): A 7,57 (m, 1H), 7,49 (m, 1H), 7,23 (m, 1H), 3,91 (s, 3H)
(ii) 3- klor- 5- hvdroksvbenzosvre
Alumina (1,65 g, 60 mmol) og jod (21 g, 82 mmol) ble tilbakeløpskokt i toluen (200 ml) i 2 timer. Deretter, ble 3-klor-5-metoksybenzosyre
(11,2 g, 60,2 mmol; se trinn (i) ovenfor) oppløst i toluen (50 ml) tilsatt, sammen med tetrabutylammoniumjodid (1,5 g, 4 mmol) og blandingen ble tilbakeløpskokt i ytterligere 2 timer. Etter avkjøling til omgivelsestemperatur, ga ekstra aktiv opparbeiding 8,7 g, 50 mmol (utbytte: 83%) av sub-tittelforbindelse.
'H-NMR (300 MHz; aceton-de): A 9,27 (s, 1H), 7,48 (m, 1H), 7,44 (m, 1H), 7,11 (m, 1H)
(iii) 3- klor- 5- difluormetoksvbenzosvre
3-klor-5-hydroksybenzosyre (6,4 g, 37,2 mmol; se trinn (ii) ovenfor) oppløst i kloroform (200 ml) ble overført til en 500 ml trehalset rundbunnet kolbe utstyrt med en tørris kondenser og et gass innførselsrør. Natriumhydroksyd (100 ml, 5 M) ble tilsatt med kraftig omrøring. Klordifluormetan (Freon 22; 25 g, 290 mmol) ble tilsatt porsjonsvis gjennom gass innførselsrøret ved omgivelsestemperatur. Etter 2 timer, var reaksjonen fullstendig. Ekstra aktiv opparbeiding ga 6,2 g, 28 mmol (utbytte: 75%) av sub-tittelforbindelse.
'H-NMR (500 MHz; aceton-de): A 7,87 (m, 1H), 7,74 (m, 1H), 7,54 (m, 1H), 7,19 (t, 1H, Jh-f73Hz)
(iv) 3- klor- 5- difluormetoksv- N- metoksv- N- metvlbenzamid 3-klor-5-difluormetoksybenzosyre (1,8 g, 8 mmol; se trinn (iii) ovenfor) og oksalylklorid (1,5 g,ll,8 mmol) ble oppløst i metylenklorid (50 ml). DMF (2 dråper) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved omgivelsestemperatur i 30 minutter. Deretter, ble A^,0-dimetylhydroksylamin (1 g, 10,2 mmol) og trietylamin (3 g, 30 mmol) tilsatt og etter ytterligere 10 minutter omrøring ved omgivelsestemperatur, ble reaksjonsblandingen konsentrert ved redusert trykk. Residuet ble tatt opp i eter (100 ml) og vann (50 ml). Etter separering, ble den organiske fasen vasket med saltvann, tørket over natriumsulfat, filtrert og konsentrert. Dette residuet ble kromatografert på silika (heksan/etylacetat 2:1) som ga 2 g, 7,5 mmol (93%) av sub-tittelforbindelse.
'H-NMR (400 MHz; CDC13): A 7,54 (m, 1H), 7,37 (m, 1H), 7,27 (m, 1H), 6,53 (t, 1H, JH-f 73 Hz)
(v) 3- klor- 5- difluormetoksvacetofenon
3-klor-5-difluormetoksy-N-metoksy-N-metylbenzamid (2 g,
7,5 mmol; se trinn (iv) ovenfor) ble oppløst i eter (100 ml) og avkjølt under nitrogen til - 70°C. Metyllitium (7 ml, 11 mmol, 1,6 M i eter) ble tilsatt dråpevis med en sprøyte til den omrørte reaksjonsblanding over 1 minutt. Tørris-badet ble fjernet og blandingen fikk nå omgivelsestemperatur før reaksjonen ble stanset med ammoniumklorid-løsning (50 ml, 5% NH4CI i vann). Den organiske fasen ble vasket med saltvann, tørket over natriumsulfat, filtrert og konsentrert ved redusert trykk. Residuet ble kromatografert på silika (heksametylacetat 2:1) som ga 1,5 g, 6,8 mmol (utbytte: 90%) av sub-tittelforbindelse.
•H-NMR (600 MHz; CDC13): A 7,77 (m, 1H), 7,59 (m, 1H), 7,35 (m, 1H), 6,56 (t, 1H, JH-f 73 Hz), 2,60 (s, 3H)
(vi) 3- klor- 5- difluormetoksvfenvleddiksyre- metvlester
3-klor-5-difluormetoksyacetofenon (1,5 g, 6,8 mmol; se trinn (v) ovenfor) ble oppløst i metylenklorid (200 ml). Thallium(III) nitrat x 3MeOH på K-10 montmorillonite (6 g, 10 mmol (ca 0,6 mmol/g); se J. Am. Chem. Soc, 98,6750 (1976)) ble tilsatt og blandingen ble omrørt ved omgivelsestemperatur i 20 timer. Blandingen ble filtrert og filtratet ble vasket med natriumbikarbonat (100 ml, 0,5 M), tørket over natriumsulfat, filtrert og konsentrert ved redusert trykk. Residuet ble kromatografert på silika (heksan/etylacetat 2:1) som ga 1
g.
4 mmol (utbytte: 56%) av sub-tittelforbindelse.
^-NMR (500 MHz; CDC13): A 7,14 (m, 1H), 7,06 (m, 1H), 6,96 (m, 1H), 6,50 (t, 1H, JH-f
73 Hz), 3,72 (s, 3H), 3,60 (s,lH) (vii) a- Formyl( 3- klor- 5- difluormetoksyfenvl) eddiksvre- metylester 3-klor-5-difluormetoksyfenyleddiksyre-metylester (1 g, 4 mmol; se trinn (vi) ovenfor) og metylformiat (1 g, 16 mmol) ble oppløst i eter (100 ml) og avkjølt i et isbad (ca. 2°C). Deretter, ble finfordelt kuttet natrium (180 mg, 7,8 mmol) og metanol (1 ml) tilsatt og blandingen ble latt stå i is-bad med omrøring natten over. Vann (100 ml) ble forsiktig tilsatt og fasene ble separert. Den vannet inneholdende fasen ble surgjort med saltsyre (2 M) til pH 1 og ekstrahert med eter (2 x 100 ml). Ekstrakten ble tørket over natriumsulfat, filtrert og konsentrert ved redusert trykk. Residuet ble kromatografert på silika (heksametylacetat (1:1)) som ga 400 mg, 1,4 mmol (utbytte: 36%) av sub-tittelforbindelse.
'H-NMR (400 MHz): A 12,10 (d, 1H), 7,32 (d, 1H), 7,11 (m, 1H), 7,07 (m, 1H), 6,94 (m, 1H), 6,51 (t, 1H, JF.H 73), 3,83 (s, 3H)
(viii) 3- klor- 5- difluormetoksvtropic syre
a-Formyl(3-klor-5-difluormetoksyfenyl)eddiksyre-metylester
(400 mg, 1,4 mmol; se trinn (vii) ovenfor) ble oppløst i THF:metanol (50 ml, 9:1). Natrium-borhydrid ble tilsatt og blandingen ble omrørt ved omgivelsestemperatur i 30 minutter. Vann ble tilsatt og blandingen ble konsentrert for å produsere en vandig suspensjon, som ble tatt opp i etylacetat og vann. Fasene ble separert og den organiske fasen ble vasket med natriumklorid (15% i vann), tørket over natriumsulfat, filtrert og konsentrert ved redusert trykk. Residuet ble oppløst i metanol (30 ml) og hydrolysen med natriumhydroksyd
(1 ml, 10 M) ved omgivelsestemperatur i 10 minutter. Ekstraktiv opparbeiding ga 180 mg, 0,68 mmol (utbytte: 48%) av sub-tittelforbindelse.
'H-NMR (500 MHz; CDC13): A 7,18 (m, 1H), 7,10 (m, 1H), 7,00 (m. 1H), 6,50 (t, 1H, JF.H 73), 4,11 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 3,84 (m, 1H)
(ix) Ph( 3- Cl)( 5- OCHFz)-( 5) CH( CH20H) C( 0)- Azé- Pab x HOAc
3-klor-5-difluormetoksytropinsyre (180 mg, 0,7 mmol; se trinn (viii) ovenfor), H-Aze-Pab(Teoc) x HC1 (450 mg, 1 mmol) og PyBOP (530 mg, 1 mmol) ble oppløst i DMF (10 ml), hvoretter DIPEA (550 mg, 3,9 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble omrørt ved omgivelsestemperatur i 1 time før den ble fortynnet med saltvann (20 ml, 15% NaCl) og ekstrahert med etylacetat (40 ml). Ekstrakten ble tørket over natriumsulfat, filtrert og inndampet til tørrhet. Residuet ble oppløst i metylenklorid (5 ml) og trifluroeddiksyre (5 ml) ble tilsatt. Etter 1 time ved omgivelsestemperatur, ble blandingen av diastereomerene inndampet til tørrhet og residuet ble kromatografert på en revers fase kolonne (acetonitril:vann (30:70), buffer: ammoniumacetat 0,1 M). Frysetørking ga 36 mg, 0,067 mmol (utbytte: 10,4%) av tittelforbindelsen.
MS (ES) 481(M + 1)<+>
•H-NMR (400 MHz; CDCI3): A 7,77 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,30 (m, 1H), 7,13 (m, 2H), 6,87 (t, 1H, JF.H 73 Hz), 4,76 (m, 1H), 4,55 (s, 2H), 4,37 (m, 1H), 4,03 (m, 2H), 3,82 (m, 1H), 3,72 (m, 1H), 2,53 (m, 1H), 2,28 (m, 1H), 1,92 (s, 1,5H)
<l3>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer) A 172,3,171,9,167,2
Eksempel 10
Ph( 3- Cl)( 5- OCFO-( S) CH( CH7OH) C( Q)- Aze- Pab x TFA
(i) 3- klor- 5- trifluormetoksvbenzvlmesylat
Til en løsning av 3-klor-5-trifluormetoksybenzylalkohol (6,1 g,
26,9 mmol; se Eksempel 6(v) ovenfor) i CH2CI2 (250 ml) ved 0°C under en nitrogen-
atmosfære ble tilsatt DIPEA (4,2 g, 32,3 mmol) og metansulfonylklorid (3,4 g, 29,6
mmol). Løsningen ble omrørt ved 0°C i 1,5 timer og behandlet med H2O. De organiske faser ble separert og deretter vasket med H2O (lx), IN HC1 (lx), H2O (lx) og vandig NaHC03 (lx) og deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert, hvilket gir sub-tittelforbindelsen (8,2 g, 99%) som en olje.
<*>H NMR (300 MHz, CDC13): A 7,37 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,18 (s, 1H) 5,23 (s, 2H), 3,07
(s, 3H)
(ii) 3- klor- 5- trifluormetoksvbenzylcvanid
Til en løsning av 3-klor-5-trifluormetoksybenzylmesylat (8,2 g,
26,8 mmol; se trinn (i) ovenfor) i DMSO (50 ml) ble tilsatt natriumcyanid (2,6 g, 53,6 mmol). Den resulterende heterogene løsning ble oppvarmet til 50°C og ultralydbehandlet i 1 time. Reaksjonsblandingen ble avkjølt og fordelt mellom Et20 og H20. De organiske faser ble vasket med H20 (2x) og saltvann (2x). Den samlede vandige faser ble ekstrahert med Et20 (lx). De samlede organiske lag ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert under en lav varme og partielt vakuum, hvilket gir sub-tittelforbindelsen (6,3 g, 100%) som en rødaktig flyktig olje som ble anvendt i neste trinn uten ytterligere rensning.
<*>H NMR (300 MHz, CDCI3) A 7,32 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,12 (s, 1H), 3,78 (s, 2H)
(iii) 3- klor- 5- trifluormetoksvfenvleddiksvre
Til en løsning av 3-klor-5-trifluormetoksybenzylcyanid (6,3 g,
26,7 mmol; se trinn (ii) ovenfor) i 2-propanol (100 ml) ble det tilsatt vann (200 ml) og kaliumhydroksyd (7,5 g, 133,5 mmol). Løsningen ble tilbakeløpskokt i 18 timer, avkjølt til romtemperatur og 2-propanol ble fjernet i vakuum. Den vandige fasen ble vasket med CH2C12 (2x) og vaskevæskene kastet. Den basiske vandige fasen ble surgjort med 2N HC1 og ekstrahert med CH2C12 (3x). CH2C12 ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir sub-tittelforbindelsen (5,2 g, 76%) som en olje som ble anvendt i neste trinn uten ytterligere rensning.
'H NMR (300 MHz, CDCI3): A 7,25 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 3,68 (s, 2H)
(iv) Etyl 3- klor- 5- trifluormetoksvfenvlacetat
Til en løsning av 3-klor-5-trifluormetoksyfenyleddiksyre (5,2 g,
20,4 mmol; se trinn (iii) ovenfor) i EtOH (600 ml) ble det tilsatt svovelsyre (mange dråper). Løsningen ble tilbakeløpskokt i 18 timer, avkjølt til romtemperatur, nøytralisert med fast stoff NaHC03 og EtOH fjernet i vakuum. Residuet ble fortynnet med EtOAc deretter vasket med H20 (lx), vandig NaHC03 (lx) og saltvann (lx). De organiske faser
ble tørket (Na2SC«4), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir sub-tittelforbindelsen (5,5 g, 96%) som en olje som ble anvendt i neste trinn uten ytterligere rensning.
'H NMR (300 MHz, CDC13) A 7,24 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 4,13-4,22 (q, 7 = 8 Hz, 2H), 3,63 (s, 2H), 1,24-1,32 (t, 7 = 8 Hz, 3H)
(v) Ph( 3- Cl)( 5- OCFi)-(/ ?. S) CH( CHO) C( Q) OEt
Til en løsning av etyl 3-klor-5-trifluormetoksyfenylacetat (4,5 g,
15,9 mmol; se trinn (iv) ovenfor) i vannfri THF (400 ml) under en nitrogen-atmosfære ved mindre enn 0°C (is-MeOH bad) ble det tilsatt natriumetoksyd (4,5 g, 63,6 mmol). Den kalde løsningen ble omrørt i 40 minutter og etylformiat (8,1 g, 111,3 mmol) ble tilsatt. Løsningen ble omrørt ved 0°C i 30 minutter, oppvarmet til romtemperatur og omrørt i 2 timer. Deretter, THF ble fjernet i vakuum. Residuet ble fortynnet med EtjO og ekstrahert med H2O (lx) og 0,5M NaOH (3x). De vandige ekstraktene ble surgjort med 2N HC1 og ekstrahert med CH2CI2 (3x). De samlede organiske lag ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir rå sub-tittelforbindelse (3,9 g). Flash kromatografi på silikagel under eluering med Heks:EtOAc (4:1) ga sub-tittelforbindelse (3,0 g, 61%) som en olje.
<*>H NMR (300 MHz, CDCI3, blanding av isomerer): A 12,30 og 12,25 (s, 1H), 7,39 og 7,34 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 4,27-4,37 (q, 7 = 8 Hz, 2H), 1,28-1,38
(t,7=8Hz, 3H)
(vi) Ph( 3- Cl)( 5- OCFO-(/ ?. S) CH( CH, OH) C( Q) OEt
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(Æ,S)CH(CHO)C(0)OEt (3,0 g,
9,66 mmol; se trinn (v) ovenfor) i MeOH (200 ml) ved -10°C (is-MeOH bad) ble det tilsatt natrium-borhydrid (0,7 g, 19,32 mmol) porsjonsvis over 5 min. Løsningen ble omrørt ved -10°C i 45 minutter og ytterligere natrium-borhydrid (0,4 g) ble tilsatt. Etter ytterligere 15 minutter, ble reaksjonen stanset med vandig ammoniumklorid, gjort svakt sur med 2N HC1 og MeOH ble fjernet i vakuum. Residuet ble fortynnet med EtOAc og vasket med H2O (lx), vandig NaHC03 (lx) og saltvann (lx). De organiske faser ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir rå sub-tittelforbindelse. Flash kromatografi på silikagel under eluering med Heks:EtOAc (5:1) ga sub-tittelforbindelse (2,0 g, 66%) som en olje.
'H NMR (300 MHz, CDCI3): A 7,26 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 4,16-4,28 (m, 2H), 4,04-4,15 (m, 1H), 3,76-3,94 (m, 2H), 2,33 (t, 7 = 6 Hz, 1H), 1,18-1,30 (t, 7 = 8 Hz, 3H)
(vii) Ph( 3- Cl)( 5- OCF0-(/ g. 5) CH( CH2OH) C( O) OH
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(Æ,S)CH(CH2OH)C(0)OEt (2,0 g,
6,24 mmol; se trinn (vi) ovenfor) i THF (50 ml) og H20 (25 ml) ble tilsatt litiumhydroksydmonohydrat (0,5 g, 12,48 mmol). Løsningen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time og THF ble fjernet 1 vakuum. Residuet ble fortynnet med H20, deretter vasket med CHCI3 (2x) og vaskevæskene kastet. Det basiske vandige lag ble surgjort med 2N HC1 og ekstrahert med CHC13 (4x). CHCI3 ekstrakter ble tørket (Na2SC«4), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir rå sub-tittelforbindelse (1,5 g) som en olje. Flash kromatografi på silikagel under eluering med CHCl3:MeOH:konsentrert NH4OH (gradient fra 7,0:2,5:0,5 til 6:3:1) ga ammoniumsalt av sub-tittelforbindelse (1,1
g). Ammoniumsaltet ble fordelt mellom IN HC1 og CHCI3. De organiske faser ble tørket (Na2SC<4), filtrert og konsentrert 1 vakuum, hvilket gir sub-tittelforbindelsen (også kjent
som 3-klor-5-trifluormetoksytropin syre) som en olje (1,1 g, 62%).
'H NMR (300 MHz, CD3OD):A 7,41 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 4,03 (m, 1H), 3,75-3,87 (m, 2H)
(viii) Ph( 3- Cl)( 5- OCF0-( 5) CH( CH7QH) C( O)- Aze- Pab( Teoc) ( a) og Ph( 3- Cn( 5- OCFO-(/ g) CH( CH7QH) C( Q)- Aze- Pab( Teoc)( b)
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(/?,S)CH(CH2OH)C(0)OH (0,65 g,
2,28 mmol; se trinn (vii) ovenfor) i DMF ved mindre enn 0°C (is-MeOH bad) ble det tilsatt H-Aze-Pab(Teoc) (0,90 g, 2,39 mmol), collidin (0,71 g, 5,70 mmol) og PyBOP (1,31 g, 2,51 mmol). Den resulterende løsning ble omrørt ved mindre enn 0°C i 1 time, oppvarmet til romtemperatur og omrørt i 1 time. DMF ble deretter fjernet i vakuum. Residuet ble fortynnet med EtOAc og vasket med fortynnet vandig HC1 (lx), saltvann (lx), vandig NaHC03 (lx) og saltvann (lx). De organiske faser ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir rå sub-tittelforbindelse (2,1 g) som en blanding av diastereomerene. Flash kromatografi (3x) på silikagel under eluering først med EtOAc:MeOH (95:5) deretter med CH2Cl2:MeOH (97:3) og deretter med CH2Cl2:MeOH
(95:5) ga sub-tittelforbindelse diastereomer (a) (0,51 g, 35%) og diastereomer (b) (0,45 g, 31%) som knusbart skum.
For sub-tittelforbindelse diastereomer (a)
<!>H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) A 7,79-7,85 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,22-7,49 (m, 5H), 5,17-4,77 (m, 1H), 4,53-4,18 (m, 4H), 3,58-4,11 (m, 5H), 2,47-2,73 (m, 1H), 2,11-2,34 (m, 1H), 1,08-1,12 (m, 2H), 0,07 (s, 9H)
MS (m/z) 643 (M + 1)<+>
(ix) Ph( 3- Cl)( 5- OCFj)-( 5) CH( CH2OH) C( 0)- Aze- Pab x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc), (78 mg, 0,121 mmol; se trinn (viii) ovenfor - diastereomer (a)), ble oppløst i 5 ml trifluoreddiksyre. Etter 10 minutter, var reaksjonen over og løsningsmidlet ble avdampet. Residuet ble fryse tørket fra vann og acetonitril, hvilket gir det ønskede produkt. Utbytte: 70 mg (94%).
MS (m/z) 483 (M -1)"; 485 (M + 1)<+>
<1>H-NMR(400 MHz; D20) rotamerer 1:1:8 8,83 (bt, 1H), 7,79 (d, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,54 (d, 1H), 7,43 (d, 2H), 7,35 (m, 1H, rotamer), 7,28 (m, 1H, rotamer), 7,20 (m, 1H, rotamer), 7,05 (m, 1H, rotamer), 5,22 (m, 1H, rotamer), 4,83 (m, 1H, rotamer), 4,57 (m, 2H, rotamer), 4,38 (m, 2H, rotamer), 4,3-3,7 (m, 5H), 2,77 (m, 1H, rotamer), 2,55 (m, 1H, rotamer), 2,27 (m, 1H)
<13>C-NMR (100 MHz; D20): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 8 172,9, 172,2,172,0,171,8,166,9
Eksempel 11
Ph( 3- Cl)( 5- OCF0-( 5) CH( CH2OH) C( O)- Aze- Pab( OMe)
(i) Ph( 3- Cl)( 5- OCFO-( S) CH( CH, OH) C( 0)- Aze- Pab( OMe. Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (100 mg, 0,155 mmol; se Eksempel 10(viii) ovenfor), ble oppløst i 12 ml tetrahydrofuran. O-metylhydroksylamin-hydroklorid (44 mg,
0,53 mmol), ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble oppvarmet ved 50°C natten over.
Reaksjonsblandingen ble inndampet og residuet renset ved preparativ HPLC (CH3CN/0,1 M NH4OAC (70/30)). Fraksjoner ble inndampet og residuet oppløst i en liten mengde av acetonitril og vann og fryse tørket. Fryse tørkingen ble gjentatt én gang. Utbytte: 80 mg (76%) av rent materiale.
'H-NMR(400 MHz; CD3OD) rotamerer: 8 7,5-7,4 (m, 3H), 7,35-7,2 (m, 4H), 5,15 (m, 1H, mindre rotamer), 4,74 (m, 1H, hoved rotamer), 4,5-4,25 (m, 3H), 4,2-3,95 (m, 4H), 3,91 (b, 3H), 3,9-3,6 (m, 2H), 2,63 (m, 1H, mindre rotamer), 2,50 (m, 1H, hoved rotamer), 2,3-2,1 (m, 1H), 0,95 (m, 2H), 0,02 (s, 9H, hoved rotamer), 0,01 (s, 9H, mindre rotamer)
(ii) Ph( 3- Cn( 5- OCFj)-( 5) CH( CH9QH) C( 0)- Aze- Pab( OMe)
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(0)-Aze-Pab(OMe, Teoc), (80 mg, 0,12 mmol; se trinn (i) ovenfor), ble oppløst i 1 ml metylenklorid og avkjølt i et isbad. Trifluoreddiksyre, 3 ml, ble tilsatt og reaksjonskolben ble holdt i isbadet i to timer. Blandingen ble inndampet og oppløst i etylacetat og vasket tre ganger med NaHC03 (vandig) deretter med vann og saltvann. Den organiske fasen ble tørket (Na2SC«4), filtrert og inndampet. Residuet ble fryse tørket fra en liten mengde av acetonitril og vann. Utbytte: 60 mg (95%) av rent tittel produkt.
MS (m/z) 528 (M -1)_; 531 (M + 1)<+>
<1>H-NMR(500 MHz; CD3OD) rotamerer: 8 7,65-7,55 (m, 3H, rotamerer), 7,45 (m, 1H, hoved rotamer), 7,4-7,2 (m, 4H), 5,15 (m, 1H, mindre rotamer), 4,74 (m, 1H, hoved rotamer), 4,5-4,3 (m, 3H), 4,05-3,95 (m, 2H), 3,85 (m, 1H, hoved rotamer), 3,82 (s, 3H, hoved rotamer), 3,81 (s, 3H, mindre rotamer), 3,73 (m, 1H, hoved rotamer), 3,67 (m, 1H, mindre rotamer), 3,62 (m, 1H, mindre rotamer), 2,63 (m, 1H, mindre rotamer), 2,50 (m, 1H, hoved rotamer), 2,24 (m, 1H, hoved rotamer), 2,16 (m, 1H, mindre rotamer) <13>C-NMR (125 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 174,0,173,2,172,7,172,6,155,1
Eksempel 12
Ph( 3- Cl)( 5- OCHF7)-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( OMe)
(i) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF2)-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( OMe. Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0,40 g, 0,65 mmol; se Eksempel l(ix) ovenfor), ble oppløst i 20 ml acetonitril og 0,50 g (6,0 mmol) O-metyl hydroksylamin-hydroklorid ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet ved 70°C i 2 timer. Løsningsmidlet ble avdampet og residuet ble fordelt mellom vann og etylacetat. Den vandige fasen ble ekstrahert to ganger mer med etylacetat og den samlede organiske fase ble vasket med vann, saltvann, tørket (Na2S04), filtrert og inndampet. Utbytte: 0,41 g (91%).
'H-NMR (400 MHz; CDC13): 5 7,83 (bt, 1H), 7,57 (bs, 1H), 7,47 (d, 2H), 7,30 (d, 2H), 7,20 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,01 (m, 1H), 6,53 (t, 1H), 4,89 (s, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,47 (m, 2H), 4,4-4,2 (b, 1H), 4,17-4,1 (m, 3H), 3,95 (s, 3H), 3,67 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 2,42 (m,lH) 0,97 (m, 2H), 0,01 (s, 9H).
(ii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF?)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( QMe)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe, Teoc) (0,40 g, 0,62 mmol; se trinn (i) ovenfor), ble oppløst i 5 ml TFA og fikk reagere i 30 min. TFA ble inndampet og residuet ble fordelt mellom etylacetat og NaHCC«3 (vandig). Den vandige fasen ble ekstrahert to ganger mer med etylacetat og den samlede organiske fase ble vasket med vann, saltvann, tørket (Na2S04), filtrert og inndampet. Produktet ble fryse tørket fra vann/acetonitril. No rensning ble nødvendig.Utbytte: 0,28 g (85%).
'H-NMR (600 MHz; CDCI3): 6 7,89 (bt, 1H), 7,57 (d, 2H), 7,28 (d, 2H), 7,18 (m, 1H), 7,13 (m,lH), 6,99 (m, 1H), 6,51 (t, 1H), 4,88 (s, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,80 (bs, 2H), 4,48 (dd, 1H), 4,43 (dd, 1H), 4,10 (m, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,68 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 2,40 (m, 1H). <13>C-NMR (125 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 8 172,9, 170,8,152,7,152,6
MS (m/z) 495 (M -1)\ 497 (M + 1)<+>
Eksempel 13
Ph( 3- OCHF9)-(/ ?) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab x HOAc
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe) (13 mg, 0,026 mmol; se Eksempel 12 ovenfor) ble oppløst i abs. etanol (5 ml) og 30 mg 10% Pd/C ble tilsatt. Til slutt ble eddiksyre (5 (iL) tilsatt og blandingen ble hydrogenert ved atmosfærisk trykk i 20 timer. Blandingen ble filtrert gjennom Celite®, inndampet og renset ved reversert fase HPLC (0,1 M vandig ammoniumacetat/MeCN). De passende fraksjoner ble frysetørket, hvilket gir tittelforbindelsen som et hvitt, fast stoff: 8,5 mg (66%).
<1>H-NMR(400 MHz; CD3OD) rotamerer: 8 7,73-7,78 (m, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,19-7,43 (m, 3H), 7,06-7,13 (m, 1H), 6,83 (t, 1H, JHF = 74Hz, hoved rotamer), 6,81 (t, 1H, hoved rotamer), 5,20 (s, 1H, hoved rotamer), 5,19 (m, 1H, mindre rotamer), 5,15 (s, 1H, mindre rotamer), 4,78 (m, 1H, hoved rotamer), 4,4-4,6 (mange topper, 2H), 4,35 (m, 1H, hoved rotamer), 4,08 (m, 1H), 3,99 (m, 1H, mindre rotamer), 2,70 (m, 1H, mindre rotamer), 2,52 (m, 1H, hoved rotamer), 2,30 (m, 1H, hoved rotamer), 2,15 (m, 1H, mindre rotamer), 1,89 (s, 3H). 1 ^C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 8 173,7, 172,9,168,3.
MS (m/z) 433 (M+l)+ ; 431 (M-l)-
Eksempel 14
Ph( 3- OCFO-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab x TFA (34 mg, 0,057 mmol, fra Eksempel 6) ble oppløst i 5 ml etanol og 20 mg 10% Pd/C ble tilsatt. Blandingen ble hydrogenen ved atmosfærisk trykk natten over. Blandingen ble filtrert gjennom Celite®, inndampet og fryse tørket fra vann/acetonitril.
'H-NMR(400 MHz; CD3OD) rotamerer: 8 7,8-7,7 (m, 2H), 7,55 (m, 2H), 7,5-7,2 (m, 4H), 5,24 (s, 1H, hoved rotamer), 5,23 (m, 1H, mindre rotamer), 5,18 (s, 1H, mindre rotamer), 4,77 (m, 1H, hoved rotamer), 4,6-4,45 (m, 2H), 4,36 (m, 1H, hoved rotamer), 4,08 (m, 1H), 3,99 (m, 1H, mindre rotamer), 2,70 (m, 1H, mindre rotamer), 2,52 (m, 1H, hoved rotamer), 2,30 (m, 1H, hoved rotamer), 2,15 (m, 1H, mindre rotamer).
<11>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 8 174,1,173,9,173,5,172,9,168,2.
<19->F NMR (282 MHz; CD3OD): -59,8 og -59,9 (3F, henholdsvis mindre og hoved rotamer),
-77,4 (3F) indikerer at saltet er TFA.
MS (m/z) 451,3 (M+l)<+>
Eksempel 15
Ph( 3- Cl¥5- OCH?CF0-(/ g) CH( OH) C( O)- Aze- Pab x TFA
(i) 3- klor- 5- trifluoretoksvbenzaldehyd
Til en magnetisk omrørt løsning av 3-klor-5-hydroksybenzaldehyd (2,0 g, 12,8 mmol; se Eksempel l(ii) ovenfor) og kaliumkarbonat (2,3 g, 16,6 mmol) i DMF (35 ml) under nitrogen ble tilsatt 2,2,2-trifluoretyl p-toluensulfonat (4,2 g, 16,6 mmol) ved romtemperatur. Blandingen ble oppvarmet til 110°C i 7 timer og deretter omrørt natten over ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 0°C, hellet i is-kald 2 N HC1 (100 ml) og ekstrahert med EtOAc (2 x 75 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med 0,5 N HC1 (2 x 50 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Den brune oljen ble kromatografert på silikagel under eluering med Heks:EtOAc (6:1), hvilket gir sub-tittelforbindelse (1,9 g, 61%) som en gul olje.
'H NMR (300 MHz, CDC13) A 9,44 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 4,42
(q,7=8Hz, 2H)
(ii) Ph( 3- Cn( 5- OCH?CFO-( j?. 5) CH( OTMS) CN
Til en løsning av 3-klor-5-trifluoretoksybenzaldehyd (5,2 g, 21,7 mmol; se trinn (i) ovenfor) og sinkjodid (1,7 g, 5,4 mmol) i CH2CI2 (200 ml) under nitrogen ble tilsatt trimetylsilylcyanid (4,3 g, 43,3 mmol) dråpevis via sprøyte ved 0°C. Blandingen ble omrørt ved 0°C i 3 timer og deretter fortynnet med H2O (150 ml). Det organiske laget ble separert, tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert 1 vakuum, hvilket gir sub-tittelforbindelsen (6,9 g, 95%) som en gul olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
'H NMR (300 MHz, CDCI3) A 7,27 (s, 1H), 6,98 (s, 2H), 5,44 (s, 1H), 4,38 (q, / = 8 Hz, 2H), 0,30 (s, 9 H)
(iii) Ph( 3- Cl¥5- OCH7CFj)-(/ ?. S) CH( OH) C( Q) OH
Konsentrert saltsyre (170 ml) ble satt til Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(/?,5)CH(OTMS)CN (6,9 g, 20,4 mmol; se trinn (ii) ovenfor) og omrørt ved 100°C i 1 time. Etter avkjøling til romtemperatur, ble reaksjonen ytterligere avkjølt til 0°C og gjort basisk langsomt med 3 N NaOH (300 ml). Denne blandingen ble vasket med Et20 (2 x 100 ml) og det vandige laget ble surgjort med 2 N HC1 (50 ml). Det vandige laget ble deretter ekstrahert med EtOAc (2 x 100 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir sub-tittelforbindelsen (5,3 g, 92%) som en blekgul olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
'H NMR (300 MHz, CD3OD) A 7,18 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 5,13 (s, 1H), 4,58
(q,7=8Hz, 2H)
(iv) Ph( 3- Cl¥5- OCH7CF0-(/ g) CH( OH) C( O) OH ( a) oe Ph( 3- Cl¥5- OCH?CFO-( 5) CH( OAc) C( Q) OH ( b)
En løsning av Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(Æ,S)CH(OH)C(0)OH (7,06 g, 24,8 mmol; se trinn (iii) ovenfor) og Lipase PS "Amano" (4,30 g) i vinylacetat (250 ml) og MTBE (250 ml) ble oppvarmet ved 70°C under nitrogen i 40 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, enzymet ble fjernet ved filtrering vasking med EtOAc og filtratet konsentrert i vakuum. Kromatografi på silikagel under eluering med CHCl3:MeOH:Et3N (92:6:2) ga trietylaminsaltet av sub-tittelforbindelse (a) (3,02 g) som en gul olje. Saltet av sub-tittelforbindelse (a) ble oppløst i H20 (150 ml), surgjort med 2 N HC1 og ekstrahert med EtOAc (2 x 75 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir sub-tittelforbindelse (a) (2,18 g) som et gråhvitt, fast stoff. I tillegg, trietylaminsaltet av sub-tittelforbindelse (b) (4,73 g) ble oppnådd fra kolonnenkromatografi nevnt ovenfor.
Data for sub-tittelforbindelse (a):
Sm.p.: 98-103°C
<!>H NMR (300 MHz, CD3OD) A 7,18 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 5,13 (s, 1H), 4,58 (q,<y>=8Hz,2H).
<13>C NMR (75 MHz, CD3OD) A 175,4,159,6,144,6, 136,2,125,0 (q, J = 277 Hz), 121,8, 115,9,113,1,73,3, 67,0 (q, J =35 Hz)
HPLC Analyse: 98,6%, >99% ee, Chiralcel OD Kolonne (97:3:0,5 Heks:EtOH:TFA mobil fase)
[I]<25>D = -81,5° (c = 1,0, MeOH)
APCI-MS: (M - 1) = 283 m/z
(v) Ph( 3- Cl)( 5- OCH7CFO-(/ tfCH( OH) C( 0)- Aze- Pab( Teoc)
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(Æ)CH(OH)C(0)OH (0,50 g, 1,8 mmol; se trinn (iv) ovenfor (forbindelse (a))) i DMF (20 ml) under nitrogen ble tilsatt H-Aze-Pab(Teoc) x HC1 (1,03 g, 2,3 mmol), PyBOP (1,01 g, 1,9 mmol) og DIPEA (0,57 g, 4,4 mmol) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ved romtemperatur i 20 timer. Blandingen ble konsentrert i vakuum og residuet kromatografert to ganger på silikagel, under eluering først med CHCl3:EtOH (10:1) og deretter med EtOAc:EtOH (10:1), hvilket gir sub-tittelforbindelsen (0,55 g, 48%) som et knusbart hvitt skum.
Sm.p.: 90-95°C
Rf = 0,42 (10:1 CHCl3:EtOH)
'H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) A 7,78-7,81 (m, 2H), 7,38-7,41 (m, 2H), 7,12-7,16 (m, 1H), 7,00-7,06 (m, 2H), 5,09-5,22 og 4,75-4,79 (m, 2H), 3,94-4,61 (m, 8H), 2,09-2,75 (m, 2H), 1,04-1,11 (m, 2H), 0,70 (s, 9H)
APCI-MS: (M + l) = 643m/z
(vi) Ph( 3- ClX5- OCH9CF0-(/ g) CH( OH) C( O)- Aze- Pab x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0,066 g, 0,103 mmol; se trinn (v) ovenfor), ble oppløst i 3 ml TFA og fikk reagere i 30 min. TFA ble inndampet og residuet ble fryse tørket fra vann/acetonitril, hvilket gir 0,060 g (94%) av tittelforbindelsen som dens TFA salt.
'H-NMR (400 MHz; CD3OD) rotamerer: 5 7,8-7,7 (m, 2H), 7,6-7,5 (m, 2H), 7,2-7,0 (m, 3H), 5,21 (m, 1H, mindre rotamer), 5,17 (s, 1H, hoved rotamer), 5,11 (s, 1H, mindre
rotamer), 4,81 (m, 1H, hoved rotamer), 4,6-4,4 (m, 4H), 4,37 (m, 1H, hoved rotamer), 4,16 (m, 1H, hoved rotamer), 4,06 (m, 1H, mindre rotamer), 3,99 (m, 1H, mindre rotamer), 2,70 (m, 1H, mindre rotamer), 2,54 (m, 1H, hoved rotamer), 2,29 (m, 1H, hoved rotamer), 2,15
(m, 1H, mindre rotamer)
<13>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 5 172,2,171,8,171,7,167,0.
MS (m/z) 499,3 (M+l)<+>
Eksempel 16
Ph( 3- Cl)( 5- OCH7CF0-(/ ?) CH( OH) C( O)- Aze- Pab( OMe)
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(/?)CH(OH)C(0)OH (0,48 g, 1,7 mmol; se Eksempel 15(iv) ovenfor (forbindelse (a)) i DMF (20 ml) under nitrogen ble tilsatt H-AzePab(OMe) x 2HC1 (0,74 g, 2,2 mmol), PyBOP (0,97 g, 1,9 mmol) og DIPEA (0,55 g, 4,2 mmol) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ved romtemperatur i 20 timer. Blandingen ble konsentrert i vakuum og residuet kromatografert to ganger på silikagel, under eluering først med CHCl3:EtOH (10:1) og deretter med EtOAc:EtOH (10:1), hvilket gir tittelforbindelsen (0,62 g, 69%) som et knusbart hvitt skum.
Sm.p.: 75-80°C
Rf = 0,43 (10:1 CHCl3:EtOH)
'H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) A 7,57-7,60 (m, 2H), 7,32-7,36 (m, 2H), 7,13-7,17 (m, 1H), 7,00-7,06 (m, 2H), 5,09-5,19 og 4,74-4,80 (m, 2H), 3,93-4,62 (m, 6H), 3,81 (s, 3H), 2,10-2,73 (m, 2H)
APCI-MS: (M+l) = 529m/z
Eksempel 17
Ph( 3- Cl)( 5- OCH7CHF7)-(/ ?) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab x TFA
(i) 2. 2- difluoretvlester metansulfonsvre
Til en magnetisk omrørt løsning av 2,2-difluoretanol (1,52 g, 18,5 mmol) i CH2CI2 (20 ml) under nitrogen ble det tilsatt trietylamin (5,61 g, 55,5 mmol) og metansulfonylklorid (2,54 g, 22,2 mmol) ved 0°C. Blandingen ble omrørt ved 0°C i 1,5 timer, fortynnet med CH2CI2 (50 ml) og vasket med 2 N HC1 (50 ml). Det vandige laget ble ekstrahert med CH2C12 (30 ml) og de samlede organiske ekstrakter vasket med saltvann (30 ml), tørket (Na2SC<4), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir sub-tittelforbindelsen (2,52 g, 85%) som en gul olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
'H NMR (300 MHz, CDC13) A 6,02 (tt, J = 3 Hz, J = 55 Hz, 1H), 4,39 (dt, J = 3 Hz, / = 13 Hz, 2H), 3,13 (s, 3H)
(ii) 3 - klor- 5- difluoretoks vbenzaldehvd
Til en løsning av 3-klor-5-hydroksybenzaldehyd (1,50 g, 9,6 mmol; se Eksempel l(ii) ovenfor) og kaliumkarbonat (1,72 g, 12,5 mmol) i DMF (10 ml) under nitrogen ble tilsatt en løsning av 2,2-difluoretylester metansulfonsyre (2,0 g, 12,5 mmol; se trinn (i) ovenfor) i DMF (10 ml) dråpevis ved romtemperatur. Blandingen ble oppvarmet til 100°C i 6 timer og deretter omrørt natten over ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 0°C, hellet i is-kald 2 N HC1 (100 ml) og ekstrahert med EtOAc (2 x 75 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med 0,5 N HC1 (2 x 50 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Den brune oljen ble kromatografert på silikagel under eluering med Heks:EtOAc (5:1), hvilket gir sub-tittelforbindelsen (1,35 g, 64%) som en gul olje.
'H NMR (300 MHz, CDC13) A 9,92 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 6,12 (tt, J = 3 Hz, J = 55 Hz, 1H), 4,26 (dt, J = 3 Hz, J = 15 Hz, 2H)
(iii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHzCHFz)-(/ g. 5) CH( OTMS) CN
Til en løsning av 3-klor-5-difluoretoksybenzaldehyd (1,35 g, 6,1 mmol; se trinn (ii) ovenfor) og sinkjodid (0,48 g, 1,5 mmol) i CH2CI2 (50 ml) ble det tilsatt trimetylsilylcyanid (1,21 g, 12,2 mmol) dråpevis ved 0°C under nitrogen. Blandingen ble omrørt ved 0°C i 3 timer, deretter fortynnet med H20 (50 ml). Det organiske laget ble separert, tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert 1 vakuum, hvilket gir sub-tittelforbindelse (1,85 g, 95%) som en brun olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
'H NMR (300 MHz, CDC13) A 7,13 (s, 1H), 6,94 (s, 2H), 6,10 (tt, / = 3 Hz, J = 55 Hz, 1H), 5,43 (s, 1H), 4,20 (dt, J = 3 Hz, J = 15 Hz, 2H), 0,28 (s, 9H)
(iv) Ph( 3- Cl)( 5- OCH, CHF,)-(/ g. S) CH( OH) aO) OH
Konsentrert saltsyre (60 ml) ble satt til Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(Æ,S)CH(OTMS)CN (1,85 g, 5,8 mmol; se trinn (iii) ovenfor) og omrørt ved 100°C i 1 time. Etter avkjøling til romtemperatur, ble reaksjonen ytterligere avkjølt til 0°C, gjort basisk langsomt med 3 N NaOH (-180 ml) og vasket med Et20 (2 x 75 ml). Det vandige laget ble surgjort med 2 N HC1 (20 ml) og ekstrahert med EtOAc (2 x 75 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert / vakuum, hvilket gir sub-tittelforbindelsen (1,50 g, 97%) som et blekgult, fast stoff som ble anvendt uten ytterligere rensning.
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD) A 7,15 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 6,19 (tt, 7 = 4 Hz, J = 55 Hz, 1H), 5,12 (s, 1H), 4,25 (dt, J = 4 Hz, J = 17 Hz, 2H)
(v) Ph( 3- Cl)( 5- OCHzCHF?>( S) CH( OAc) C( 0) OH ( a) og Ph( 3- Cn( 5- OCH7CHF9)-(/ g) CH( OH) C( Q) OH ( b)
En løsning av Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(/?,S)CH(OH)C(0)OH (3,90 g, 14,6 mmol; se trinn (iv) ovenfor) og Lipase PS "Amano" (2,50 g) i vinylacetat (140 ml) og MTBE (140 ml) ble oppvarmet ved 70°C under nitrogen i 40 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, enzymet fjernet ved filtrering vasking med EtOAc og filtratet konsentrert i vakuum. Kromatografi på silikagel under eluering med CHCl3:MeOH:Et3N (92:6:2) ga trietylaminsaltet av sub-tittelforbindelse (a) som en gul olje. I tillegg, ble trietylaminsaltet av sub-tittelforbindelse (b) (1,47 g) oppnådd og saltet ble oppløst i H20 (100 ml), surgjort med 2 N HC1 og ekstrahert med EtOAc (2 x 75 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir sub-tittelforbindelse (b) (1,00
g) som et gråhvitt, fast stoff.
Data for sub-tittelforbindelse (b):
Sm.p.: 103-106°C
Rf = 0,39 (90:8:2 CHCl3:MeOH:Et3N)
'H NMR (300 MHz, CD3OD) A 7,13 (s, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,97 (s, 1H), 6,17 (tt, J = 4 Hz, J = 55 Hz, 1H), 5,12 (s, 1H), 4,24 (dt, J = 4 Hz, J = 8 Hz, 2H).
<13>C NMR (75 MHz, CD3OD) A 175,5,160,3,144,5, 136,1,121,3,115,7,115,3, (t, J = 240 Hz), 112,9, 73,4, 68,6 (t, J = 29 Hz)
HPLC Analyse: 96,2%, >95,0% ee, ChiralPak AD Kolonne (95:5:0,5 Heks:EtOH:TFA mobil fase)
[I]<25>d = -84,0° (c = 0,85 MeOH)
APCI-MS: (M - 1) = 265 m/z
(vi) Ph( 3- Cl)( 5- OCH?CHF9)-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( Teoc)
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(Æ)CH(OH)C(0)OH (0,35 g, 1,3 mmol; se trinn (v) ovenfor (forbindelse (b))) i DMF (18 ml) under nitrogen ble tilsatt H-Aze-Pab(Teoc) x HC1 (0,76 g, 1,7 mmol), PyBOP (0,75 g, 1,4 mmol) og DIPEA (0,43 g, 3,3 mmol) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ved romtemperatur i 20 timer. Blandingen ble konsentrert i vakuum og residuet kromatografert to ganger på silikagel, under eluering først med CHCtøEtOH (10:1) og deretter med EtOAc:EtOH (10:1), hvilker gir sub-tittelforbindelsen (0,69 g, 84%) som et knusbart hvitt skum.
Sm.p.: 108-118°C
Rf = 0,48 (10:1 CHCl3:EtOH)
'H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) A 7,78-7,81 (m, 2H), 7,40-7,43 (m, 2H), 7,09-7,12 (m, 1H), 6,96-7,02 (m, 2H), 6,16 (t, J= 57 Hz, 1H), 5,09-5,20 og 4,75-4,80 (m, 2H), 3,95-4,55 (m, 8H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,04-1,11 (m, 2H), 0,07 (s, 9H) APCI-MS: (M+l) = 625m/z
(vii) Ph( 3- Cn( 5- OCHzCHF?)-( j?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0,086 g, 0,138 mmol; se trinn (vi) ovenfor), ble oppløst i 3 ml TFA og-fikk reagere i 1 time. TFA ble inndampet og residuet ble fryse tørket fra vann/acetonitril, hvilket gir 0,080 g (98%) av tittelforbindelsen som dens TFA salt.
'H-NMR (300 MHz; CD3OD) rotamerer: 8 7,8-7,7 (m, 2H), 7,6-7,5 (m, 2H), 7,15-6,95 (m, 3H), 6,35-5,95 (m, 1H), 5,20 (m, 1H, mindre rotamer), 5,14 (s, 1H, hoved rotamer), 5,10 (s, 1H, mindre rotamer), 4,80 (m, 1H, hoved rotamer), 4,6-4,0 (m, 6H), 2,70 (m, 1H, mindre rotamer), 2,53 (m, 1H, hoved rotamer), 2,29 (m, 1H, hoved rotamer), 2,15 (m, 1H, mindre rotamer).
<13>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 8 174,0,173,8,173,4,172,9,168,2
MS (m/z) 481,2 (M+l)<+>
Eksempel 18
Ph( 3- Cl)( 5- OCH7CHF2)-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( OMe)
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(Æ)CH(OH)C(0)OH (0,30 g, 1,7 mmol; se Eksempel 17(v) ovenfor (forbindelse (b))) i DMF (15 ml) under nitrogen ble tilsatt H-AzePab(OMe) x 2HC1 (0,49 g, 1,5 mmol), PyBOP (0,65 g, 1,2 mmol) og DIPEA (0,36 g, 2,8 mmol) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ved romtemperatur i 20 timer. Blandingen ble konsentrert 1 vakuum og residuet kromatografert tre ganger på silikagel, under eluering først med CHCl3:EtOH (10:1), deretter med EtOAc:EtOH (10:1) og til slutt med CHCl3:MeOH (20:1), hvilket gir tittelforbindelsen (0,47 g, 81%) som et knusbart hvitt skum.
Sm.p.: 65-75°C
Rf = 0,37 (10:1 CHCl3:EtOH)
'H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) A 7,58-7,60 (m, 2H), 7,32-7,35 (m, 2H), 7,09-7,12 (m, 1H), 6,96-7,02 (m, 2H), 6,16 (t, /= 55 Hz, 1H), 5,08-5,18 og 4,74-4,80 (m, 2H), 3,96-4,50 (m, 6H), 3,80 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H)
APCI-MS: (M+l) = 511m/z.
Eksempel 19
Ph( 3- Cl)( 5- OCHzF)-( Æ) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab x TFA
(i) Ph( 3- Cl)( 5- TMSOW/ ?. S) CH( OTMS) CN
Til en løsning av 3-klor-5-hydroksybenzaldehyd (9,8 g, 62,6 mmol; se Eksempel l(ii) ovenfor) og Znl2 (5,0 g, 15,7 mmol) i vannfri CH2C12 (500 ml) ved 0°C ble tilsatt trimetylsilylcyanid (13,7 g, 138 mmol). Reaksjonsblandingen fikk oppvarmes til romtemperatur og omrørt natten over. Vann (250 ml) ble tilsatt og lagene ble separert. Det vandige laget ble ekstrahert med CH2C12 (2 x 300 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket (Na2SC«4), filtrert og konsentrert / vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (16,9 g, 83%) som en gul olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
Rf = 0,42 (3:1 Heks:EtOAc)
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8 7,06 (s, 1H), 6,86 (s, 2H), 5,40 (s, 1H), 0,30 (s, 9 H), 0,24 (s,9H).
(ii) Ph( 3- Cl)( 5- OH)- r/ g. 5JCH( OH) C( Q) OH
En løsning av Ph(3-Cl)(5-OTMS)-(R,S)CH(OTMS)CN (22,6 g, 68,8 mmol; se trinn (i) ovenfor) i konsentrert HC1 (200 ml) ble tilbakeløpskokt under nitrogen i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 0°C og gjort basisk langsomt med 2N NaOH. Blandingen ble vasket med Et20 (3 x 100 ml) for å fjerne organisk urenheter. Det vandige laget ble surgjort med 2N HC1 og ekstrahert med EtOAc (3 x 200 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket (Na2SC«4), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (9,3 g, 67%) som en brun olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
Rf = 0,23 (6:3:1 CHCl3:MeOH:konsentrert NH4OH)
'H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,05 (s, 1H), 6,94 (s, 1H), 6,73 (s, 1H), 5,03 (s, 1H).
(iii) Ph( 3- Cl)( 5- OHW/ ?. S) CH( OH) C( 0) OEt
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OH)-(Æ,S)CH(OH)C(0)OH (9,3 g, 46,0 mmol; se trinn (ii) ovenfor) i absolutt EtOH (200 ml) ble det tilsatt konsentrert svovelsyre (0,25 ml) og reaksjonen ble tilbakeløpskokt under nitrogen i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 0°C og fast stoff NaHC03 (0,2 g) ble tilsatt. Reaksjonen ble konsentrert 1 vakuum og fordelt med mettet NaHC03 (100 ml) og Et20 (3 x 50 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (6,9 g, 65%) som en gul olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
Rf = 0,62 (6:3:1 CHCl3:MeOH:konsentrert NH4OH).
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8 6,99 (s, 1H), 6,81 (s, 2H), 5,07 (s, 1H), 4,16-4,32 (m, 2H), 1,23 (t,7=7Hz, 3H).
(iv) Ph( 3- Cl)( 5- OCH9F)- r/ ?. 5) CH( OH) C( Q) OEt
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OH)-(/?,S)CH(OH)C(0)OEt (6,1 g, 26,8 mmol; se trinn (iii) ovenfor) i DMF (100 ml) i en forseglet kolbe under nitrogen ved 0°C ble det tilsatt cesiumkarbonat (13,1 g, 40,2 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 15 minutter fulgt av tilsetning av kaliumjodid (0,5 g, 2,7 mmol). Reaksjonsblandingen ble avkjølt til -78°C og klorfluormetan (18,4 g, 268 mmol) ble boblet inn i karet. Den forseglete kolben fikk deretter oppvarmes til romtemperatur og omrørt i 18 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 0°C, luftet forsiktig for å fjerne eventuelt overskudd av klorfluormetan og fordelt med H2O (20 ml) og EtiO (3 x 50 ml). De samlede organiske lag ble vasket med saltvann (2 x 50 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med Heks:EtOAc (gradient fra 9:1 til 3:1) ga sub-tittelforbindelsen (2,4 g, 35%) som en lysegul olje. Anmerkning: Forbindelsen er så vidt uv-synlig på TLC. Den kan visualiseres ved å merke TLC med bromcresol grønn.
Rf = 0,46 (2:1 Heks:EtOAc)
<*>H NMR (300 MHz, CDC13) 8 7,21 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 5,70 (d, 7H.F = 54 Hz, 2H), 5,12 (d, 7 = 5 Hz, 1H), 3,80-4,35 (m, 2H), 3,50 (d, 7 = 5 Hz, 1H), 1,26 (t, 7 = 7 Hz, 3H).
(v) Ph( 3- Cl)( 5- OCH2FW/ g. S) CH( OH) C( 0) OH
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(/?,5)CH(OH)C(0)OEt (1,8 g, 6,8 mmol; se trinn (iv) ovenfor) i H20:THF (30 ml, 1:2) ved 0°C under nitrogen ble det tilsatt litiumhydroksydmonohydrat (0,40 g, 10,3 mmol). Blandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum og fordelt med H2O (5 ml) og Et20 (2 x 20 ml). Det vandige laget ble surgjort forsiktig med 0,2N HC1 ved 0°C og ekstrahert med EtOAc (3 x 30 ml). De samlede organiske lag ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (1,4 g, 87%) som en fargeløs olje som stivnet til et hvitt, fast stoff ved henstand.
Rf = 0,43 (6:2:1 CHCl3:MeOH:Et3N)
<l>H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,24 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 5,78 (d, 7H-f = 54 Hz, 2H), 5,13 (s, 1H).
(vi) Ph( 3- Cl)( 5- OCH2F)-(/ ?) CH( OH) C( 0) OH ( a) oe Ph( 3- Cl)( 5- OCH2F)-( S) CH( OAc) C( Q) OH ( b)
En blanding av Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(/?,S)CH(OH)C(0)OH (3,2 g, 13,9 mmol; se trinn (v) ovenfor) og Lipase PS "Amano" (1,9 g) i vinylacetat (150 ml) og MTBE (150 ml) ble oppvarmet ved 70°C under en nitrogen-atmosfære i 3 d. Reaksjonsblandingen ble avkjølt, filtrert gjennom Celite® og filterkaken vasket med EtOAc. Filtratet ble konsentrert i vakuum og underkastet flash kromatografi på en silikagel under eluering med CHCl3:MeOH:Et3N (15:1:0,5), hvilket gir trietylaminsaltet av sub-tittelforbindelse (a)
(0,50 g, 21%) som ble anvendt uten nøytralisering. I tillegg, ble trietylaminsaltet av sub-tittelforbindelse (b) (0,46 g, 20%) oppnådd.
Data for Sub- Tittelforbindelse ( a) :
Rf = 0,19 (15:1:0,5 CHCl3:MeOH:Et3N)
'H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,26 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 6,97 (s, 1H), 5,74 (d, 7H-f = 54 Hz, 2H), 4,81 (s, 1H), 3,17 (q, / = 7 Hz, 6H), 1,28 (t, / = 7 Hz, 9H).
Data for Sub- Tittelforbindelse ( b)
Rf = 0,33 (15:1:0,5 CHCl3:MeOH:Et3N)
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,28 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 5,76 (d, 7H-f = 54 Hz, 2H), 5,75 (s, 1H), 3,17 (q, J = 7 Hz, 6H), 2,16 (s, 3H), 1,28 (t, J = 7 Hz, 9H).
(vii) Ph( 3- Cl)( 5- OCH7F)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( Teoc)
Til en løsning av trietylaminsaltet av Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(/?)CH(OH)C(0)OH (0,50 g, 1,50 mmol; se trinn (vi) ovenfor) og HAze-Pab(Teoc)»HCl (0,87 g, 1,90 mmol) i tørr DMF (15 ml) under nitrogen ved 0°C ble tilsatt PyBOP (0,85 g, 2,60 mmol) og DIPEA (0,48 g, 3,70 mmol). Reaksjonen fikk oppvarmes til romtemperatur og omrørt natten over. Reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum og flash kromatografert to ganger på silikagel, under eluering først med CHCl3:EtOH (9:1) og deretter med EtOAc:EtOH (20:1), hvilker gir sub-tittelforbindelsen (0,23 g, 26%) som et knusbart hvitt skum.
Sm.p.: 88-92°C
Rf = 0,61 (9:1 CHCl3:EtOH)
'H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) 8 7,81 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,40-7,42 (m, 2H), 7,06-7,23 (m, 3H), 5,76 (d, 7H-f = 51 Hz, 2H), 5,10-5,16 og 4,77-4,83 (m, 2H), 3,80-4,49 (m, 6H), 2,30-2,53 (m, 2H), 1,08 (t, / = 7 Hz, 2H), 0,08(s, 9H). APCI-MS (M + 1) = 593 m/z
(viii) Ph( 3- Cl¥5- OCH?F)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0,051 g, 0,086 mmol; se trinn (vii) ovenfor), ble oppløst i 3 ml TFA og fikk reagere i 20 min. TFA ble inndampet og residuet ble fryse tørket fra vann/acetonitril. Produktet var 95% rent med 5% av defluormetylert materiale. Forsøk på å rense det ved preparativ RPLC med CH3CN:0,1M NH4OAC sviktet og materialet, delvis som et acetat, ble oppløst i 5 ml TFA, inndampet og fryse tørket, hvilket gir 26 mg (51%) av tittelforbindelsen som dens TFA salt. Renhet: 95%.
'H-NMR (600 MHz; CD3OD) rotamerer: 8 7,8-7,7 (m, 2H), 7,6-7,5 (m, 2H), 7,21 (s, 1H, hoved rotamer), 7,17 (s, 1H, mindre rotamer), 7,13 (s, 1H, hoved rotamer), 7,09 (s, 1H, mindre rotamer), 7,07 (m, 1H, hoved rotamer), 7,04 (m, 1H, mindre rotamer), 5,73 (d, 2H), 5.18 (m, 1H, mindre rotamer), 5,16 (s, 1H, hoved rotamer), 5,09 (s, 1H, mindre rotamer), 4,78 (m, 1H, mindre rotamer), 4,56 (d, 1H, hoved rotamer), 4,50 (d, 1H, mindre rotamer), 4,46 (d, 1H, mindre rotamer), 4,45 (d, 1H, hoved rotamer), 4,35 (m, 1H, hoved rotamer), 4,14 (m, 1H, hoved rotamer), 4,05 (m, 1H, mindre rotamer), 3,97 (m, 1H, mindre rotamer), 2,68 (m, 1H, mindre rotamer), 2,52 (m, 1H, hoved rotamer), 2,28 (m, 1H, hoved rotamer), 2.19 (m, 1H, mindre rotamer).
<13>C-NMR (150 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 8 173,9,173,3,172,9,168,2.
ESI-MS+: (M+l) = 449 (m/z)
Eksempel 20
Ph( 3- Cl)( 5- OCH9F)-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( OMe)
Til en løsning av trietylaminsaltet av Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(Æ)CH(OH)C(0)OH (0,60 g, 1,80 mmol; se Eksempel 19(vi)) og HAze-Pab(OMe)»2HCl (0,79 g, 2,30 mmol) i DMF (15 ml) under nitrogen ved 0°C ble tilsatt PyBOP (1,04 g, 1,90 mmol) og DIPEA (0,58 g, 4,50 mmol). Reaksjonen fikk oppvarmes til romtemperatur og omrørt natten over. Reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum og flash kromatografert tre ganger på silikagel, under eluering først med CHCtøEtOH (9:1) og deretter to ganger med EtOAc:EtOH (20:1), hvilket gir tittelforbindelsen (0,22 g, 26%) som et knusbart hvitt skum.
Sm.p.: 66-70°C
Rf = 0,45 (9:1 CHCl3:EtOH)
'H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) 8 7,59 (d, / = 8 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 7 Hz, 2H), 7,06-7,23 (m, 3H), 5,75 (s, 7H-f = 54 Hz, 1H), 5,10-5,16 og 4,78-4,84 (m, 2H), 4,11-4,45 (m, 4H), 3,80 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H).
<13>C-NMR (150 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 8 173,0,170,8,170,7,152,5.
APCI-MS:(M + 1) = 479 m/z
Eksempel 21
Ph( 3- Cn( 5- OCH2CH2F)-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab x TFA
(i) ( 2- Monolfuoretvl) metansulfonat
Til en magnetisk omrørt løsning av 2-fluoretanol (5,0 g, 78,0 mmol) i CH2CI2 (90 ml) under nitrogen ved 0°C ble tilsatt trietylamin (23,7 g, 234 mmol) og metansulfonylklorid (10,7 g, 93,7 mmol). Blandingen ble omrørt ved 0°C i 1,5 timer, fortynnet med CH2CI2 (100 ml) og vasket med 2N HC1 (100 ml). Det vandige laget ble ekstrahert med CH2C12 (50 ml) og de samlede organiske ekstrakter vasket med saltvann (75 ml), tørket (Na2SC«4), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (9,7 g, 88%) som en gul olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
'H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 4,76 (t, J = 4 Hz, 1H), 4,64 (t, J = 4 Hz, 1H), 4,52 (t, J = 4 Hz, 1H), 4,43 (t, / = 4 Hz, 1H), 3,09 (s, 3H).
(ii) 3- klor- 5- monofluoretoksvbenzaldehvd
Til en løsning av 3-klor-5-hydroksybenzaldehyd (8,2 g, 52,5 mmol; se Eksempel l(ii) ovenfor) og kaliumkarbonat (9,4 g, 68,2 mmol) i DMF (10 ml) under nitrogen ble det tilsatt en løsning av (2-monofluoretyl) metansulfonat (9,7 g, 68,2 mmol; se trinn (i) ovenfor) i DMF (120 ml) dråpevis ved romtemperatur. Blandingen ble oppvarmet til 100°C i 5 timer og deretter omrørt natten over ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 0°C, hellet i is-kald 2N HC1 og ekstrahert med EtOAc. De samlede organiske ekstrakter ble vasket med saltvann, tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Den brune oljen ble kromatografert på silikagel under eluering med Heks:EtOAc (4:1), hvilker gir sub-tittelforbindelsen (7,6 g, 71%) som en gul olje.
'H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 9,92 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 4,87 (t, J = 4 Hz, 1H), 4,71 (t, J = 3 Hz, 1H), 4,33 (t, / = 3 Hz, 1H), 4,24 (t, J = 3 Hz, 1H).
(iii) Ph( 3- Cl)( 5- OCH9CH?F)-(/ g. 5) CH( OTMS) CN
Til en løsning av 3-klor-5-monofluoretoksybenzaldehyd (7,6 g, 37,5 mmol; se trinn (ii) ovenfor) og sinkjodid (3,0 g, 9,38 mmol) i CH2CI2 (310 ml) ble tilsatt trimetylsilylcyanid (7,4 g, 75,0 mmol) dråpevis ved 0°C under nitrogen. Blandingen ble omrørt ved 0°C i 3 timer og ved romtemperatur natten over. Reaksjonen ble fortynnet med H2O (300 ml), det organiske laget ble separert, tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert / vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (10,6 g, 94%) som en brun olje som ble anvendt uten ytterligere rensning eller karakterisering.
(iv) Ph( 3- Cl)( 5- OCH2CH?FW/ g., Sr) CH( OH) C( 0) OH
Konsentrert saltsyre (100 ml) ble satt til Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(/?,S)CH(OTMS)CN (10,6 g, 5,8 mmol; se trinn (iii) ovenfor) og løsningen omrørt ved 100°C i 3 timer. Etter avkjøling til romtemperatur, ble reaksjonen ytterligere avkjølt til 0°C, gjort basisk langsomt med 3N NaOH (-300 ml) og vasket med Et20 (3 x 200 ml). Det vandige laget ble surgjort med 2N HC1 (80 ml) og ekstrahert med EtOAc (3 x
300 ml). De samlede EtOAc ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (8,6 g, 98%) som et blekgult, fast stoff som ble anvendt uten ytterligere rensning.
Rf = 0,28 (90:8:2 CHCl3:MeOH:konsentrert NH4OH)
'H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 7,09 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,93 (s, 1H), 5,11 (s, 1H), 4,77-4,81 (m, 1H), 4,62-4,65 (m, 1H), 4,25-4,28 (m, 1H), 4,15-4,18 (m, 1H).
(v) Ph( 3- Cl)( 5- OCH?CH?F)-( S) CH( OAc) C( 0) OH ( a) og Ph( 3- Cl)( 5- OCH?CH7F)-(/ ?) CH( OH) C( Q) OH ( b)
En løsning av Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(/?,5)CH(OH)C(0)OH (8,6 g, 34,5 mmol; se trinn (iv) ovenfor) og Lipase PS "Amano" (4,0 g) i vinylacetat (250 ml) og MTBE (250 ml) ble oppvarmet ved 70°C under nitrogen i 3 d. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og enzymet fjernet ved filtrering gjennom Celite®. Filterkaken ble vasket med EtOAc og filtratet konsentrert i vakuum. Kromatografi på silikagel under eluering med CHCl3:MeOH:Et3N (90:8:2) ga trietylaminsaltet av sub-tittelforbindelse (a) som en gul olje. I tillegg, ble trietylaminsaltet av sub-tittelforbindelse (b) (4,0 g) oppnådd. Saltet av sub-tittelforbindelse (b) ble oppløst i H20 (250 ml), surgjort med 2N HC1 og ekstrahert med EtOAc (3 x 200 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (b) (2,8 g, 32%) som en gul olje.
Data for Sub- Tittelforbindelse ( b) :
Rf = 0,28 (90:8:2 CHCl3:MeOH:konsentrert NH4OH)
'H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,09 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,93 (s, 1H), 5,11 (s, 1H), 4,77-4,81 (m, 1H), 4,62-4,65 (m, 1H), 4,25-4,28 (m, 1H), 4,15-4,18 (m, 1H).
(vi) Ph( 3- Cl)( 5- OCH7CH7F)-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( Teoc)
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(/?)CH(OH)C(0)OH (940 mg, 3,78 mmol; se trinn (v) ovenfor) i DMF (30 ml) under nitrogen ved 0°C ble tilsatt HAze-Pab(Teoc)»HCl (2,21 g, 4,91 mmol), PyBOP (2,16 g, 4,15 mmol) og DIPEA (1,22 g, 9,45 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ved romtemperatur i 4 timer. Blandingen ble konsentrert i vakuum og residuet kromatografert to ganger på silikagel, under eluering først med CHCl3:EtOH (15:1) og deretter med EtOAc:EtOH (20:1), hvilker gir sub-tittelforbindelsen (450 mg, 20%) som et knusbart hvitt skum.
Sm.p.: 80-88°C
Rf = 0,60 (10:1 CHCl3:EtOH)
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) 8 7,79 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,05-7,08 (m, 1H), 6,93-6,99 (m, 2H), 5,08-5,13 (m, 1H), 4,75-4,80 (m, 2H), 4,60-4,68 (m, 1H), 3,95-4,55 (m, 8H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s,9H).
APCI-MS: (M + 1) = 607 m/z.
(vii) Ph( 3- Cl)( 5- OCH7CH?F)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0,357 g, 0,589 mmol; se trinn (vi) ovenfor), ble oppløst i 10 ml TFA og fikk reagere i 40 min. TFA ble inndampet og residuet ble fryse tørket fra vann/acetonitril, hvilket gir 0,33 g (93%) av tittelforbindelsen som dens TFA salt.
'H-NMR (600 MHz; CD3OD) rotamerer: 8 7,8-7,7 (m, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,08 (s, 1H, hoved rotamer), 7,04 (s, 1H, mindre rotamer), 6,99 (s, 1H, hoved rotamer), 6,95 (s, 1H), 6,92 (s, 1H, mindre rotamer), 5,18 (m, 1H, mindre rotamer), 5,14 (s, 1H, hoved rotamer), 5,08 (s, 1H, mindre rotamer), 4,80 (m, 1H, hoved rotamer), 4,73 (m, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,35 (m, 1H, hoved rotamer), 4,21 (dublett av multippelts, 2H), 4,12 (m, 1H, hoved rotamer), 4,06 (m, 1H, mindre rotamer), 3,99 (m, 1H, mindre rotamer), 2,69 (m,
1H, mindre rotamer), 2,53 (m, 1H, hoved rotamer), 2,29 (m, 1H, hoved rotamer), 2,14 (m, 1H, mindre rotamer).
<13>C-NMR (150 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer) 8 172,8,172,1, 167,4.
ESI-MS+: (M+l) = 463 (m/z)
Eksempel 22
Ph( 3- Cl)( 5- OCH7CH7F)-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( OMe)
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(/?)CH(OH)C(0)OH (818 mg, 3,29 mmol; se Eksempel 21 (v) ovenfor) i DMF (30 ml) under nitrogen ved 0°C ble tilsatt HAze-Pab(OMe)-2HCl (1,43 g, 4,27 mmol), PyBOP (1,89 g, 3,68 mmol) og DIPEA (1,06 g, 8,23 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ved romtemperatur natten over. Blandingen ble konsentrert i vakuum og residuet kromatografert to ganger på silikagel, under eluering først med CHCl3:EtOH (15:1) og deretter med EtOAc:EtOH (20:1), hvilket gir tittelforbindelsen (880 mg, 54%) som et knusbart hvitt skum.
Sm.p.: 65-72°C
Rf = 0,60 (10:1 CHCl3:EtOH)
<]>H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) 8 7,58-7,60 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 7 Hz, 2H), 7,05-7,08 (m, 2H), 6,95-6,99 (m, 1H), 5,08-5,13 (m, 1H), 4,77-4,82 (m, 1H), 4,60-4,68 (m, 1H), 3,99-4,51 (m, 7H), 3,82 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H). <13>C-NMR (150 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer) 8 173,3,170,8, 152,5.
APCI-MS: (M + 1) = 493 m/z.
Eksempel 23
Ph( 3- Cn( 5- OCH( CH7F) 9)-(/ g) CH( OH) C( 0).- Aze- Pab x TFA
(i) 1. 3- difluorisopropvlmetansulfonat
Til en magnetisk omrørt løsning av l,3-difluor-2-propanol (7,0 g, 72,8 mmol) i CH2CI2 (100 ml) under nitrogen ved 0°C ble tilsatt trietylamin (22,1 g, 219 mmol) og metansulfonylklorid (10,0 g, 87,4 mmol). Blandingen ble omrørt ved 0°C i 3 timer. Blandingen ble vasket med 2N HC1 (150 ml) og lagene ble separert. Det vandige laget ble ekstrahert med CH2CI2 (200 ml) og de samlede organiske ekstrakter vasket med saltvann (100 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert 1 vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (11,5 g, 91%) som en gul olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
<*>H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 4,97-5,08 (m, 1H), 4,75-4,77 (m, 2H), 4,59-4,61 (m, 2H), 3,12 (s, 3H).
(ii) Ph( 3- Cl)( 5- OCH( CH9F) 7) CHO
Til en løsning av 3-klor-5-hydroksybenzaldehyd (8,0 g, 50,7 mmol; se Eksempel l(ii) ovenfor) og kaliumkarbonat (9,1 g, 66,0 mmol) i DMF (75 ml) under nitrogen ble det tilsatt en løsning av 1,3-difluorisopropyl metansulfonat (11,5 g, 66,0 mmol; se trinn (i) ovenfor) i DMF (75 ml) dråpevis ved romtemperatur. Blandingen ble oppvarmet til 110°C i 18 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 0°C, hellet i is-kald 2N HC1 (200 ml) og ekstrahert med EtOAc (3 x 250 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Den brune oljen ble kromatografert på silikagel under eluering med Heks:EtOAc (4:1), hvilker gir sub-tittelforbindelsen (4,4 g, 37%) som en gul olje.
'H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 9,92 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 4,70-4,89 (m, 3H), 4,63-4,68 (m, 2H).
(iii) Ph( 3- Cl)( 5- OCH( CH7F) 7)-( R. S) CH( OTMS) CN
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)CHO (4,4 g, 18,7 mmol; se trinn (ii) ovenfor) og sinkjodid (1,5 g, 4,67 mmol) i CH2CI2 (200 ml) ved 0°C under nitrogen ble det tilsatt trimetylsilylcyanid (3,7 g, 37,3 mmol) dråpevis. Blandingen ble omrørt ved 0°C i 3 timer og natten over ved romtemperatur, deretter fortynnet med H2O (200 ml). Det organiske laget ble separert, tørket (Na2SC>4), filtrert og konsentrert 1 vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (5,5 g, 87%) som en brun olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
<!>H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 7,12 (s, 1H), 7,00 (s, 2H), 5,42 (s, 1H), 4,70-4,80 (m, 3H), 4,59-4,64 (m, 2H), 0,26 (s, 9H).
(iv) Ph( 3- Cl)( 5- OCH( CH2F) 9)-( R. S) CH( OH) C( 0) OH
Konsentrert saltsyre (50 ml) ble satt til Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R,S)CH(OTMS)CN (5,5 g, 16,3 mmol; se trinn (iii) ovenfor) og løsningen omrørt ved 100°C i 1,5 timer. Etter avkjøling til romtemperatur, ble reaksjonen ytterligere avkjølt til 0°C, gjort basisk langsomt med 3N NaOH (-200 ml) og vasket med Et20 (3 x 200 ml). Det vandige laget ble surgjort med 2N HC1 (75 ml) og ekstrahert med EtOAc (3 x 200 ml). De samlede EtOAc ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (4,6 g, 100%) som en brun olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,14 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 5,12 (s, 1H), 4,70-4,90 (m, 3H), 4,52-4,67 (m, 2H).
(v) Ph( 3- Cn( 5- OCH( CHzF) 7)-( 5) CH( OAc) C( 0) OH ( a) oe Ph( 3- Cl)( 5- OCH( CH9F) ?)-(/ ?) CH( OH) C( Q) OH ( b)
En løsning av Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R,S)CH(OH)C(0)OH (4,6 g, 16,4 mmol; se trinn (iv) ovenfor) og Lipase PS "Amano" (3,0 g) i vinylacetat (150 ml) og MTBE (150 ml) ble oppvarmet ved 70°C under nitrogen i 2,5 d. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, enzymet fjernet ved filtrering gjennom Celite®. Filterkaken ble vasket med EtOAc og filtratet konsentrert i vakuum. Kromatografi på silikagel under eluering med CHCl3:MeOH:Et3N (90:8:2) ga trietylaminsaltet av sub-tittelforbindelse (a) som en gul olje. I tillegg, ble trietylaminsaltet av sub-tittelforbindelse (b) (2,2 g) oppnådd og saltet ble oppløst i H20 (100 ml), surgjort med 2N HC1 og ekstrahert med EtOAc (3 x 200 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (b) (1,4 g, 29%) som en gul olje.
Data for Sub- Tittelforbindelse ( b) :
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,14 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 5,12 (s, 1H), 4,70-4,90 (m, 3H), 4,52-4,67 (m, 2H).
(vi) Ph( 3- Cl)( 5- OCH( CHzF) ?)- r/ e) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( Teoc)
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(/?)CH(OH)C(0)OH (824 mg, 2,94 mmol; se trinn (v) ovenfor) i DMF (30 ml) under nitrogen ved 0°C ble det tilsatt HAze-Pab(Teoc)«HCl (1,71 g, 3,81 mmol), PyBOP (1,68 g, 3,23 mmol) og DIPEA (949 mg, 7,34 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ved romtemperatur natten over. Blandingen ble konsentrert i vakuum og residuet kromatografert to ganger på silikagel, under eluering først med CHCl3:EtOH (15:1) og deretter med EtOAc:EtOH (20:1), hvilker gir sub-tittelforbindelsen (720 mg, 38%) som et knusbart hvitt skum.
Sm.p.: 78-84°C
Rf = 0,62 (10:1 CHCl3:EtOH)
'H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) 8 7,79 (d, / = 8 Hz, 2H), 7,42 (d, 7 = 8 Hz, 2H), 7,00-7,12 (m, 3H), 5,08-5,20 (m, 1H), 3,97-4,80 (m, 12H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
APCI-MS: (M + 1) = 639 m/z.
(vii) Ph( 3- Cl)( 5- OCH( CH9F) 2)-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0,129 g, 0,202 mmol; se trinn (vi) ovenfor), ble oppløst i 3 ml TFA og fikk reagere i 20 min. TFA ble inndampet og residuet ble fryse tørket fra vann/acetonitril, hvilket gir 0,123 g (100%) av tittelforbindelsen som dens TFA salt.
'H-NMR (400 MHz; CD3OD) rotamerer: 8 7,8-7,7 (m, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,2-7,0 (m, 3H), 5,18 (m, 1H, mindre rotamer), 5,15 (s, 1H, hoved rotamer), 5,08 (s, 1H, mindre rotamer), 4,80 (m, 1H, hoved rotamer delvis obscured by CD3OH topp), 4,75-4,4 (m, 7H), 4,38 (m, 1H, hoved rotamer), 4,15 (m, 1H, hoved rotamer), 4,1-3,9 (m, 2H, 2 signaler fra mindre rotamer), 2,70 (m, 1H, mindre rotamer), 2,53 (m, 1H, hoved rotamer), 2,30 (m, 1H, hoved rotamer), 2,15 (m, 1H, mindre rotamer). C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 8 172,9,172,6,172,2,171,7,167,1.
ESI-MS+: (M+l) = 495 (m/z)
Eksempel 24
Ph( 3- Cl)( 5- OCH( CHzF) z)-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( OMe)
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(/?)CH(OH)C(0)OH (513 mg, 1,83 mmol; se Eksempel 23 (v) ovenfor) i DMF (30 ml) under nitrogen ved 0°C ble det tilsatt HAze-Pab(OMe)-2HCl (797 mg, 2,38 mmol), PyBOP (1,04 g, 2,01 mmol) og DIPEA (591 mg, 4,57 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ved romtemperatur natten over. Blandingen ble konsentrert 1 vakuum og residuet kromatografert to ganger på silikagel, under eluering først med CHCtøEtOH (15:1) og deretter med EtOAc:EtOH (20:1), hvilket gir tittelforbindelsen (370 mg, 39%) som et knusbart hvitt skum.
Sm.p.: 58-63°C
Rf = 0,66 (10:1 CHCl3:EtOH)
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) 8 7,58-7,60 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,00-7,12 (m, 3H), 5,08-5,20 (m, 1H), 4,65-4,82 (m, 3H), 4,28-4,65 (m, 5H), 3,92-4,18 (m, 2H), 3,82 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H).
<13>C-NMR (150 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer) 8 173,2,170,8, 152,5.
APCI-MS: (M + 1) = 525 m/z.
Eksempel 25
Ph( 3- F)( 5- OCHF?)-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab x TFA
(i) 1 - brom- 3 - fluor- 5- benzyloks vbenzen
Natriumhydrid (60% dispersjon i olje, 24,0 g, 0,48 mol) ble tilsatt porsjonsvis til en omrørt løsning av vannfri benzylalkohol (64,5 g, 0,60 mol) i THF (1,0 L). Etter at blandingen ble omrørt i 1 time, ble en løsning av 1 -brom-3,5-difluorbenzen (76,8 g, 0,40 mmol) i THF (100 ml) tilsatt dråpevis over en periode på 1 time. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 2 d. Vann (400 ml) ble tilsatt og THF ble fjernet i vakuum. Det vandige laget ble ekstrahert med heksan (3 x 150 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med 2N NaOH (2 x 100 ml) deretter, tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (110,7 g, 98%) som en lysegul olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
Rf = 0,47 (Heks)
<*>H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 7,36-7,41 (m, 5H), 6,94 (bs, 1H), 6,87 (d,
7H-f = 8 Hz, 1H), 6,63 (d, /H-f = 10 Hz, 1H), 5,03 (s, 2H).
(ii) 3- brom- 5- fluorfenol
Til en løsning av l-brom-3-fluor-5-benzyloksybenzen (110,0 g, 0,39 mol; se trinn (i) ovenfor) og A^iV-dimetylanilin (474,0 g, 3,92 mol) i vannfri CH2C12 (1,0 L) ved 0°C ble tilsatt aluminiumklorid (156,0 g, 1,17 mol). Etter 10 min, ble isbadet fjernet og omrøringen ble fortsatt i 2 timer. Reaksjonen ble stanset ved forsiktig tilsetning av 3N HC1 (600 ml). Lagene ble separert og det vandige laget ble ekstrahert med CH2CI2 (2 x 150 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med 2N HC1 (250 ml) og H2O (3 x 250 ml). Til det organiske laget ble tilsatt 15% KOH (500 ml) og lagene ble separert. Det organiske laget ble videre ekstrahert med 2 N KOH (2 x 70 ml). De samlede vandig lag ble vasket med CH2CI2 (3 x 100 ml) og deretter surgjort med 4N HC1. Det vandige laget ble ekstrahert med Et20 (3 x 125 ml) deretter, ble de samlede Et20 ekstrakter tørket
(Na2SC«4), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (69,0 g, 92%) som en brun olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
Sm.p.: 33-35°C
Rf = 0,25 (CHC13)
<*>H NMR (300 MHz, DMSO-^j) 8 10,38 (s, 1H), 6,90 (dd, 7H.F = 11 Hz, 7 = 2 Hz, lH), 6,81 (s, 1H), 6,59 (dt, 7H-f = 11 Hz, 7 = 2 Hz, lH).
APCI-MS: (M-l) = 189 m/z
(iii) 1 - brom- 3 - lfuor- 5- difluormetoks vbenzen
En blanding av 3-brom-5-fluorfenol (6,1 g, 31,0 mmol; se trinn (ii) ovenfor) og klordifluormetan (13,0 g, 150,0 mmol) i i-PrOH (100 ml) og 30% KOH (80 ml) ble oppvarmet i en forseglet kolbe i 18 timer ved 80-85°C. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og lagene ble separert. Det organiske laget ble konsentrert i vakuum, hvilket gir en fargeløs olje. Det vandige laget ble ekstrahert med Et20 (3 x 30 ml). Den rå oljen og de samlede organiske ekstrakter ble vasket med 2N NaOH (3 x 30 ml) og H2O (3 x 30 ml). De organiske faser ble deretter tørket (Na2S04), filtrert gjennom en liten silikagel plugg og konsentrert 1" vakuum, hvilker gir sub- tittelforbindelsen (6,1 g, 79%) som en fargeløs olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
'H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 7,11-7,14 (m, 2H), 6,84 (dt, 7 = 9 Hz, 7 = 2 Hz, 1H), 6,50 (t, 7H-f=72Hz, lH).
(iv) l- fluor- 3- difluormetoksv- 5- vinvlbenzen
Tri(butyl)vinylstannan (7,0 g, 22,2 mmol) ble satt til en suspensjon av 1 -brom-3-fluor-5-difluormetoksybenzen (4,9 g, 20,2 mmol; se trinn (iii) ovenfor),
diklorbis(trifenylfosfin)palladium(II) (1,42 g, 2,02 mmol) og vannfri litiumklorid (0,90 g, 20,2 mmol) i THF (40 ml) under nitrogen ved 65°C og blandingen ble omrørt i 5 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 0°C og IN NaOH (90 ml) ble tilsatt. Den bifasiske blandingen ble kraftig omrørt i 1 time og deretter ble lagene separert. Det vandige laget ble ekstrahert med Et20 (3 x 70 ml). De samlede organiske lag ble vasket med 2N NaOH (2 x 40 ml) og H2O (40 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum.
Flash kromatografi på silikagel under eluering med heksan ga sub-tittelforbindelsen (2,2 g, 57%) som en fargeløs olje.
Rf = 0,47 (Heks)
'H NMR (300 MHz, CDC13) 5 6,93-6,99 (m, 2H), 6,73-6,78 (m, 1H), 6,67 (dd, J = 18 Hz, / = 11 Hz, 1H), 6,51 (t, 7H-f = 73 Hz, 1H), 5,77 (d, J = 18 Hz, 1H), 5,36 (d, J = 11 Hz, 1H).
(v) Ph( 3- F)( 5- OCHF7)-(/ g) CH( OH) CH2OH
2-metyl-2-propanol (140 ml), H2O (140 ml) og AD-mix-P (39,2 g) ble samlet sammen og avkjølt til 0°C. l-fluor-3-difluormetoksy-5-vinylbenzen (5,0 g, 26,4 mmol; se trinn (iv) ovenfor) oppløst i en liten mengde av 2-metyl-2-propanol ble tilsatt på én gang og heterogenoppslemningen ble kraftig omrørt ved 0°C inntil TLC avslørte fravær av utgangsmaterialet. Reaksjonen ble stanset ved 0°C ved tilsetning av natriumsulfitt (42,0 g) og deretter oppvarmet til romtemperatur og omrørt i 60 min. Reaksjonsblandingen ble ekstrahert med Et20 (3 x 120 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket (Na2SC*4), filtrert og konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med CHCl3:EtOAc (3:2) ga sub-tittelforbindelse (5,8 g, 98%) som en fargeløs olje.
Rf = 0,41 (3:2 CHCl3:EtOAc)
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8 6,96-6,99 (m, 2H), 6,77-6,82 (m, 1H), 6,51 (t, /H-f = 73 Hz, 1H), 4,79-4,85 (m, 1H), 3,76-3,84 (m, 1H), 3,58-3,66 (m, 1H), 2,66 (d, J = 3 Hz, 1H), 2,00 (t,7=6Hz, 1H).
HPLC Analyse: 89,2%, >99% ee, ChiralPak AD Kolonne (95:5 Heks:EtOH mobil fase).
(vi) Ph( 3- F)( 5- OCHF?>(/ ?) CH( OH) CH2OTBS
En løsning av Ph(3-F)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)CH2OH (5,5 g, 24,7 mmol; se trinn (v) ovenfor), 4-(dimetylamino)pyridin (121 mg, 1,0 mmol) og trietylamin (3,0 g, 29,6 mmol) i vannfri CH2C12 (100 ml) ble avkjølt til 0°C. En 1,0 M løsning av tert-butyldimetylsilylklorid i CH2C12 (26,0 ml, 26,0 mmol) ble tilsatt dråpevis og reaksjonsblandingen fikk oppvarmes til romtemperatur og omrørt natten over. Mettet ammoniumklorid-løsning (60 ml) ble tilsatt og lagene ble separert. Det organiske laget ble vasket med mettet ammoniumklorid-løsning (60 ml) og H20 (2 x 35 ml) deretter tørket (Na2SC<4), filtrert og konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med CHCl3:Heks (3:1) ga sub-tittelforbindelsen (7,9 g, 85%) som en gul olje.
Rf = 0,47 (3:1 CHCl3:Heks)
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8 6,95-6,98 (m, 2H), 6,76-6,79 (m, 1H), 6,51 (t, 7H-f = 73 Hz, 1H), 4,71-4,74 (m, 1H), 3,75-3,80 (m, 1H), 3,48-3,54 (m, 1H), 2,99 (bs, 1H), 0,91 (s, 9H), 0,05 (s, 3H), 0,00 (s, 3H).
(vii) Ph( 3- F)( 5- OCHF?)-(/ ?) CH( OMEM) CH, OTBS
Til en løsning av Ph(3-F)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)CH2OTBS (7,9 g, 0,51 mmol; se trinn (vi) ovenfor) og DIPEA (4,9 g, 48,1 mmol) i vannfri CH2C12 (50 ml) ved 0°C under nitrogen ble det tilsatt dråpevis 2-metoksyetoksymetylklorid (6,6 g, 48,1 mmol). Blandingen ble omrørt i 24 timer. Mettet ammoniumklorid-løsning (70 ml) ble tilsatt og lagene ble separert. Det organiske laget ble vasket med mettet ammoniumklorid-løsning (70 ml) og H20 (3 x 60 ml) deretter tørket (Na2SC»4), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (8,8 g, 99%) som en gul olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
Rf = 0,41 (4:1 CHCl3:EtOAc)
<J>H NMR (300 MHz, CDC13) 8 7,20 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,50 (t, 7H-f = 73 Hz, 1H), 4,79-4,81 (m, 1H), 4,66-4,68 (m, 2H), 3,47-3,82 (m, 6H), 3,36 (s, 3H), 0,85 (s, 9H), 0,01 (s, 3H), 0,00 (s, 3H).
(viii) Ph( 3- F)( 5- OCHF?)-(/ g) CH( OMEM) CH7QH
Til en løsning av Ph(3-F)(5-OCHF2)-(/?)CH(OMEM)CH2OTBS (9,3 g, 21,9 mmol; se trinn (vii) ovenfor) i THF (60 ml) ved romtemperatur ble det tilsatt en 1,0 M løsning av tetrabutylammonium fluorid i THF (70,0 ml, 70,0 mmol) og blandingen ble omrørt natten over under nitrogen. Reaksjonen ble konsentrert i vakuum. Det gule residuet ble oppløst i Et20 (100 ml) og heksan (100 ml) og vasket suksessivt med mettet ammoniumklorid-løsning (2 x 150 ml) og H20 (3 x 70 ml). Det organiske laget ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med Heks:EtOAc (1:1) ga sub-tittelforbindelse (4,2 g, 62%) som en gul olje.
Rf = 0,42 (1:1 Heks:EtOAc)
'H NMR (300 MHz, CDC13) 5 6,91-6,95 (m, 2H), 6,75-6,81 (m, 1H), 6,51 (t, 7H-f = 73 Hz, 1H), 4,80-4,82 (m, 1H), 4,70-4,74 (m, 2H), 3,88-3,93 (m, 1H), 3,67-3,71 (m, 3H), 3,53-3,56 (m, 2H), 3,39 (s, 3H), 2,96-2,99 (m, 1H).
(ix) Ph( 3- F)( 5- OCHF?)-(/ ?) CH( OMEM) C( Q) OH
En løsning av Ph(3-F)(5-OCHF2)-(/?)CH(OMEM)CH2OH (4,2 g, 13,4 mmol; se trinn (viii) ovenfor) i aceton (100 ml) ble satt til en vandig 5% NaHC03 løsning (35 ml). Denne magnetisk omrørte heterogenblandingen ble avkjølt til 0°C og kaliumbromid (159 mg, 1,3 mmol) og 2,2,6,6-tetrametyl-l-piperidinyloksy, fri rest (2,2 g, 14,1 mmol) ble tilsatt. Natriumhypokloritt (5,25%, 30 ml) ble deretter tilsatt dråpevis over en periode på 20 min mens blandingen ble kraftig omrørt og holdt ved 0°C. Etter 1 time, ble rligere natriumhypokloritt (30 ml) og 5% NaHCC>3 løsning (35 ml) tilsatt og omrøringen ble fortsatt ved 0°C i 2 timer. Aceton ble fjernet 1 vakuum. Det vandige laget ble vasket med Et20 (4 x 40 ml). Det vandige laget ble surgjort til pH 3,5 med 10% sitronsyre og ekstrahert med EtOAc (4 x 50 ml). De samlede EtOAc ekstrakter ble suksessivt vasket med H20 (4 x 30 ml) og saltvann (60 ml) deretter, tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert 1 vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (4,3 g, 98%) som en fargeløs olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
Rf = 0,74 (8,0:1,5:0,5 CHCl3:MeOH:Et3N)
'H NMR (300 MHz, aceton-^j) 8 7,16-7,18 (m, 2H), 7,16 (t, 7H-f = 89 Hz, 1H), 7,00-7,03 (m, 1H), 5,30 (s, 1H), 4,88 (d, J = 7 Hz, 1H), 4,80 (d, / = 7 Hz, 1H), 3,54-3,75 (m, 2H), 3,46-3,49 (m, 2H), 3,28 (s, 3H).
(x) Ph( 3- F)( 5- OCHF?U/ ftCH( OMEM) C( Q)- Aze- Pab( Teoc)
Til en løsning av Ph(3-F)(5-OCHF2)-(/?)CH(OMEM)C(0)OH (1,1 g, 3,4 mmol; se trinn (ix) ovenfor) i DMF (20 ml) under nitrogen ved 0°C ble det tilsatt HAze-Pab(Teoc)«HCl (2,0 g, 4,4 mmol), PyBOP (1,9 g, 3,7 mmol) og DIPEA (1,1 g, 8,4 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ved romtemperatur natten over. Blandingen ble konsentrert i vakuum og residuet kromatografert to ganger på silikagel, under eluering først med CHCl3:EtOH (15:1) og deretter med EtOAc:EtOH (20:1), hvilker gir sub-tittelforbindelsen (1,3 g, 56%) som et knusbart hvitt skum.
Rf = 0,65 (15:1 CHCl3:EtOH)
<:>H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) 8 7,80-7,84 (m, 2H), 7,40-7,46 (m, 2H), 6,95-7,16 (m, 3H), 6,92 og 6,88 (t, 7H-f = 73 Hz, 1H), 5,28 og 5,08 (s, 1H), 5,18-5,22 og 4,70-4,78 (m, 1H), 4,50-4,75 (m, 1H), 4,30-4,49 (m, 2H), 4,21-4,26 (m, 3H), 3,97-4,08 (m, 1H), 3,35-3,72 (m, 6H), 3,30 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
(xi) Ph( 3- F)( 5- OCHF9)-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( Teoc)
En blanding av Ph(3-F)(5-OCHF2)-(/?)CH(OMEM)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (590 mg, 0,87 mmol; se trinn (x) ovenfor) og karbontetrabromid (287 mg, 0,87 mmol) i 2-propanol (20 ml) ble tilbakeløpskokt i 1,5 timer. Blandingen ble konsentrert i vakuum deretter, fordelt med H20 (50 ml) og EtOAc (3 x 50 ml). Det vandige laget ble ekstrahert med ytterligere EtOAc (2 x 10 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med saltvann (30 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med CHCl3:EtOH (15:1) ga sub-tittelforbindelsen (60 mg, 12%) som et knusbart hvitt skum.
Rf = 0,46 (15:1 CHCl3:EtOH)
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) 8 7,74 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,35-7,37 (m, 2H), 6,97-7,07 (m, 2H), 6,80-6,84 (m, 1H), 6,82 og 6,80 (t, 7H-f = 73 Hz, 1H), 5,10 og 5,06 (s, 1H), 4,68-4,70 (m, 1H), 3,97-4,60 (m, 6H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
APCI-MS: (M + 1) = 595 m/z
(xii) Ph( 3- F)( 5- OCHF?)-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab x TFA
Ph(3-F)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0,053 g, 0,089 mmol; se trinn (xi) ovenfor), ble oppløst i 3 ml TFA og fikk reagere i 80 min mens den ble avkjølt på et isbad. TFA ble inndampet og residuet ble fryse tørket fra vann/acetonitril, hvilket gir 0,042 g (80%) av tittelforbindelsen som dens TFA salt.
'H-NMR (300 MHz; CD3OD) rotamerer: 8 7,7-7,6 (m, 2H), 7,5-7,4 (m, 2H), 7,1-6,6 (m, 4H), 5,2-5,0 (m, 1H pluss mindre rotamer av 1H), ca 4,8 (hoved rotamer av tidligere signal uklart p.g.a.CD3OH signal), 4,6-4,3 (m, 2H), 4,26 (m, 1H, hoved rotamer), 4,10 (m, 1H, hoved rotamer), 3,96 (m, 1H, mindre rotamer), 3,89 (m, 1H, mindre rotamer), 2,60 (m, 1H, mindre rotamer), 2,44 (m, 1H, hoved rotamer), 2,19 (m, 1H, hoved rotamer), 2,05 (m, 1H, mindre rotamer).
<13>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer) 8 172,8,172,0, 167,0.
ESI-MS+: (M+l) = 451 (m/z)
Eksempel 26
Ph( 3- F)( 5- OCHF7)-(/ ?) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( OMe)
(i) Ph( 3- F)( 5- OCHFz)-(/ ?) CH( OMEM) C( Q)- Aze- Pab( OMe)
Til en løsning av Ph(3-F)(5-OCHF2)-(/?)CH(OMEM)C(0)OH (1,0 g, 3,1 mmol; se Eksempel 25(ix) ovenfor) i DMF (30 ml) under nitrogen ved 0°C ble det tilsatt HAze-Pab(OMe)-2HCl (1,4 g, 4,1 mmol), PyBOP (1,8 g, 3,4 mmol) og DIPEA (1,0 g, 7,8 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ved romtemperatur natten over. Blandingen ble konsentrert i vakuum og residuet kromatografert to ganger på silikagel, under eluering først med CHCl3:EtOH (15:1) og deretter med EtOAc, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (1,5 g, 79%) som et knusbart hvitt skum.
Rf = 0,24 (EtOAc)
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) 8 7,58-7,62 (m, 2H), 7,32-7,38 (m, 2H), 7,03-7,16 (m, 3H), 6,92 og 6,88 (d, 7H-f = 73 Hz, 1H), 5,27 og 5,08 (s, 1H), 5,22-5,15 og 4,75-4,80 (m, 1H), 4,38-4,65 (m, 5H), 3,92-4,27 (m, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,43-3,68 (m, 4H), 3,29 (s, 3H), 2,28-2,85 (m, 2H).
(ii) Ph( 3- F)( 5- OCHF?)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( OMe)
En blanding av Ph(3-F)(5-OCHF2)-(/?)CH(OMEM)C(0)-Aze-Pab(OMe) (828 mg, 2,33 mmol; se trinn (i) ovenfor) og karbontetrabromid (525 mg, 2,33 mmol) i 2-propanol (20 ml) ble tilbakeløpskokt i 8 timer og deretter omrørt ved romtemperatur natten over. Blandingen ble konsentrert i vakuum og residuet fordelt med H20 (70 ml) og EtOAc (50 ml). Det vandige laget ble ekstrahert med EtOAc (2 x 25 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med saltvann (35 ml) deretter, tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med CHCl3:EtOH (15:1) ga tittelforbindelsen (520 mg, 74%) som et knusbart hvitt skum.
Sm.p.: 73-81°C
Rf = 0,43 (15:1 CHCl3:EtOH)
<!>H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) 8 7,59 (d, / = 8 Hz, 2H), 7,32-7,37 (m, 2H), 7,05-7,14 (m, 2H), 6,87-6,92 (m, 1H), 6,90 og 6,86 (t, 7H-f = 73 Hz, 1H), 5,13-5,18 og 4,75-4,85 (m, 2H), 4,15-4,45 (m, 4H), 3,81 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H). <13>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer) 8 172,0,171,4, 153,9.
APCI-MS: (M + 1) = 481 m/z
Eksempel 27
Ph( 3- Br)( 5- OCH9F)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab x TFA
(i) 1. 3- dibrom- 5- benzvloksvbenzen
Natriumhydrid (9,9 g, 0,414 mol, 95% tørr) ble tilsatt i porsjoner til en omrørt løsning av benzylalkohol (41,0 g, 0,394 mol) i THF (1,0 L) ved romtemperatur under en nitrogen-atmosfære og omrørt i 1 time. Til denne løsningen ble det tilsatt dråpevis l,3-dibrom-5-fluorbenzen (100,0 g, 0,394 mol). Etter omrøring natten over, ble blandingen fordelt med H2O (600 ml) og EtOAc (4 x 600 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert 1 vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med heksaner ga sub-tittelforbindelsen (101,3 g, 75%) som en gul olje.
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8 7,30-7,48 (m, 5H), 7,18 (s, 1H), 7,06 (s, 2H), 4,99 (s, 2H).
(ii) 3. 5- dibromfenol
Aluminiumklorid (11,7 g, 87,6 mmol) ble tilsatt i porsjoner til en løsning av l,3-dibrom-5-benzyloksybenzen (10,0 g, 29,2 mmol; se trinn (i) ovenfor) og iV^V-dimetylanilin (35,4 g, 292 mmol) i CH2CI2 (100 ml) ved romtemperatur under en nitrogen-atmosfære. Etter 30 min, ble blandingen fordelt med IN HC1 (300 ml) og EtOAc (5 x 150 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med mettet NaHC03 (150 ml) og saltvann (150 ml) deretter, tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med Heks:EtOAc (9:1) ga sub-tittelforbindelsen (6,1 g, 82%) som et hvitt, fast stoff.
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8 7,21 (s, 1H), 6,97 (s, 2H), 5,88 (bs, 1H).
(iii) 1. 3- dibrom- 5- monolfuormetoksvbenzen
Til en tarert, forseglet 350 ml rundbunnet trykk kolbe inneholdende en suspensjon av 3,5-dibromfenol (10,0 g, 39,7 mmol; se trinn (ii) ovenfor) og CS2CO3 (20,7 g, 63,5 mmol) i DMF (150 ml)ved -78°C ble det tilsatt klorfluormetan via bobling i 5 min gjennom septum. Septumet ble erstattet med en Teflon stopper og kolben ble deretter forseglet og fikk oppvarmes til romtemperatur hvor kolben ble veiet og bestemt å inneholde 9,0 g (131 mmol) klorfluormetan. Løsningen ble oppvarmet i et oljebad satt til 70°C natten over. Kolben ble avkjølt til romtemperatur, trykket forsiktig frigjort og innholdet fortynnet med vann (100 ml). Det vandige laget ble ekstrahert med Et20 (3 x 200 ml) deretter, de samlede organiske lag ble tørket (Na2SC>4), filtrert og konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med heksaner ga sub-tittelforbindelse (7,9 g, 71%) som et hvitt, fast stoff.
'H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 7,40 (s, 1H), 7,18 (s, 2H), 5,67 (d, 7H-f = 53 Hz, 2H).
(iv) 1 - brom- 3 - monofluormetoks v- 5- vinvlbenzen
Tri(butyl)vinyltin (10,0 g, 31,4 mmol) ble satt dråpevis til en løsning av l,3-dibrom-5-monofluormetoksybenzen (8,5 g, 29,9 mmol; se trinn (iii) ovenfor), tetrakis(trifenylfosfin)palladium(0) (690 mg, 0,599 mmol) og 2,6-di-ferf-butyl-4-metylfenol (spatel tip) i toluen (100 ml) under nitrogen. Blandingen ble omrørt ved 70°C i 8 timer. Blandingen ble avkjølt til 0°C og IN NaOH (70 ml) ble tilsatt. Etter 1 time, ble blandingen ekstrahert med CH2CI2 (3 x 300 ml) deretter, ble de samlede organiske lag tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med heksaner ga sub-tittelforbindelsen (4,3 g, 57%) som en fargeløs olje.
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8 7,30 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 6,60 (dd, 7 = 6 Hz, 7 = 11 Hz, 1H), 5,74 (d, 7 = 16 Hz, 1H), 5,67 (d, 7H-f = 53 Hz, 2H), 5,32 (d, 7 = 8 Hz, 1H).
(v) Ph( 3- Br)( 5- OCH9F)-(/ g) CH( OH) CH7QH
2-metyl-2-propanol (100 ml), H20 (100 ml) og AD-mix-Ø (27,5 g) ble samlet sammen og avkjølt til 0°C. l-brom-3-monofluormetoksy-5-vinylbenzen (4,3 g, 17,3 mmol; se trinn (iv) ovenfor) ble tilsatt på én gang og heterogenoppslemningen ble kraftig omrørt ved 0°C inntil TLC avslørte fravær av utgangsmaterialet. Reaksjonen ble stanset ved 0°C ved tilsetning av mettet natriumsulfitt (200 ml) og deretter oppvarmet til romtemperatur og
omrørt i 60 min. Reaksjonsblandingen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 150 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (4,9 g, 100%) som en fargeløs olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
'H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,30 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 5,70 (d, JH. F = 53 Hz, 2H), 4,62-4,70 (m, 1H), 3,52-3,70 (m, 2H).
HPLC Analyse: 92,1%, 96,9% ee, ChiralPak AD Kolonne (95:5 Heks:EtOH mobil fase).
(vi) Ph( 3- Br)( 5- OCHzF)-(/ e) CH( OMEM) CHzOTBS
Til en løsning av Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(Æ)CH(OH)CH2OH (4,9 g, 18,6 mmol; se trinn (v) ovenfor), 4-(dimetylamino)pyridin (453 mg, 3,71 mmol) og DIPEA (8,9 g, 93,0 mmol) i vannfri CH2C12 (200 ml) ble det tilsatt dråpevis en 1,0 M løsning av tert-butyldimetylsilylklorid i CH2C12 (22,3 ml, 22,3 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt 10 timer ved romtemperatur. Til blandingen ble det tilsatt DIPEA (8,9 g, 93,0 mmol) og 2-metoksyetoksymetylklorid (13,9 g, 111 mmol) dråpevis. Etter 16 timer, ble ytterligere 2-metoksyetoksymetylklorid (2,2 g) tilsatt og reaksjonsblandingen omrørt natten over. Blandingen ble fortynnet med H20 (100 ml) og lagene ble separert. Det vandige laget ble ekstrahert med CH2C12 (3 x 200 ml) deretter, ble de samlede organiske lag tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med Heks:EtOAc (5:1) ga sub-tittelforbindelsen (4,8 g, 55%) som en fargeløs olje.
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8 7,29 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 5,74 (d, 7H-f = 53 Hz, 2H), 4,84 (d, J = 7 Hz, 1H), 4,70-4,74 (m, 2H), 3,50-3,91 (m, 6H), 3,42 (s, 3H), 0,90 (s, 9H), 0,05 (s, 3H), 0,01 (s, 3H).
(vii) Ph( 3- Br)( 5- OCH7F)-(/ ?) CH( OMEM) CH2OH
Til en løsning av Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(Æ)CH(OMEM)CH2OTBS (4,7 g, 10,1 mmol; se trinn (vi) ovenfor) i THF (100 ml) ble det tilsatt en 1,0 M løsning av tetrabutylammoniumfluorid i THF (13,1 ml, 13,1 mmol) ved romtemperatur og blandingen ble omrørt i 1 time. Blandingen ble fordelt med H20 (100 ml) og EtOAc (3 x 100 ml) deretter, de samlede organiske lag ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (3,3 g, 92%) som en fargeløs olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
'H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,22 (s, 1H), 7,14 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 5,71 (d, 7H-f = 53 Hz, 2H), 4,80-4,82 (m, 1H), 4,58-4,66 (m, 2H), 3,71-3,77 (m, 1H), 3,39-3,65 (m, 5H), 3,27 (s, 3H).
(viii) Ph( 3- Br)( 5- OCH2F)-(/ g) CH( OMEM) C( 0) OH
En løsning av Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(/?)CH(OMEM)CH2OH (2,1 g, 6,0 mmol; se trinn (vii) ovenfor) i aceton (40 ml) ble satt til en vandig 5% NaHCC>3 løsning (15 ml). Denne magnetisk omrørte heterogene blandingen ble avkjølt til 0°C og kaliumbromid (70 mg, 0,60 mmol) og 2,2,6,6-tetrametyl-l-piperidinyloksy, fri rest (976 mg, 5,8 mmol) ble tilsatt. Natriumhypokloritt (5,25%, 15 ml) ble deretter tilsatt dråpevis over en periode på 10 min mens blandingen ble kraftig omrørt og holdt ved 0°C. Etter 1 time, ble ytterligere natriumhypokloritt (10 ml) og NaHCC«3 løsning (20 ml) tilsatt og omrøringen ble fortsatt ved 0°C i ytterligere 4 timer. Aceton ble fjernet på en rotasjonsinndamper. Det vandige laget ble fortynnet med 10% NaHC03 løsning (30 ml) og ble vasket med Et20 (3 x 20 ml). Det vandige laget ble surgjort til pH 3,5 med 10% sitronsyre og ekstrahert med EtOAc (3 x 40 ml). De samlede EtOAc ekstrakter ble vasket med H20 (3 x 50 ml) og saltvann (50 ml) deretter, tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (1,7 g, 78%) som en fargeløs olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
'H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,38 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 5,76 (d, 7H-f = 53 Hz, 2H), 5,21 (s, 1H), 4,83 (d, J = 7 Hz, 1H), 4,75 (d, J = 7 Hz, 1H), 3,62-3,78 (m, 2H), 3,48-3,52 (m, 2H), 3,32 (s, 3H).
(ix) Ph( 3- Br)( 5- OCHzF)-(/ g) CH( OMEM) C( 0)- Aze- Pab( Teoc)
Til en løsning av Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(Æ)CH(OMEM)C(0)OH (1,0 g, 2,72 mmol; se trinn (viii) ovenfor) i DMF (20 ml) under nitrogen ved 0°C ble det tilsatt HAze-Pab(Teoc)»HCl (1,6 g, 3,5 mmol), PyBOP (1,6 g, 3,0 mmol) og DIPEA (880 mg, 6,81 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ved romtemperatur natten over. Blandingen ble konsentrert i vakuum og residuet kromatografert to ganger på silikagel, under eluering først med CHCtøEtOH (15:1) og deretter med EtOAc:EtOH (20:1), hvilker gir sub-tittelforbindelsen (1,2 g, 62%) som et knusbart hvitt skum.
'H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) 8 7,80-7,84 (m, 2H), 7,40-7,46 (m, 2H), 7,13-7,32 (m, 3H), 5,84-5,87 (m, 1H), 5,67-5,69 (m, 1H), 5,25 og 5,07 (s, 1H), 5,18-5,23 og 4,80-4,88 (m, 1H), 3,97-4,79 (m, 8H), 3,60-3,71 (m, 2H), 3,40-3,53 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
(x) Ph( 3- Br)( 5- OCHzn-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( Teoc)
En blanding av Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(/?)CH(OMEM)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (347 mg, 0,478 mmol; se trinn (ix) ovenfor) og karbontetrabromid (159 mg, 0,478 mmol) i 2-propanol (10 ml) ble tilbakeløpskokt i 1,5 timer. Blandingen ble konsentrert i vakuum deretter fordelt med H20 (20 ml) og EtOAc (3 x 30 ml). De samlede organiske lag ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med CHCl3:EtOH (15:1) ga sub-tittelforbindelse (59 mg, 19%) som et knusbart hvitt skum.
Sm.p.: 81-87°C
Rf = 0,58 (9:1 CHCl3:EtOH)
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) 5 7,84 (d, / = 8 Hz, 2H), 7,40-7,48 (m, 2H) 7,18-7,30 (m, 3H), 5,80 (d, 7H-f = 53 Hz, 2H), 5,21 og 5,15 (s, 1H), 5,18-5,24 og 4,80-4,88 (m, 1H), 3,98-4,54 (m, 6H), 2,10-2,70 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
APCI-MS: (M + 1) = 637 m/z
(xi) Ph( 3- Br)( 5- OCH9F)-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab x TFA
Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(Æ)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0,073 g, 0,11 mmol; se trinn (x) ovenfor), ble oppløst i 5 ml TFA og fikk reagere i 90 min mens den ble avkjølt på et isbad. TFA ble inndampet og residuet renset ved prep RPLC med CH3CN:0,1M NH4OAC (30:70). Gjeldende fraksjoner ble inndampet og fryse tørket fra vann/acetonitril, hvilket gir 49 mg (77%) av tittelforbindelsen som dens acetatsalt.
'H-NMR (300 MHz; CD3OD) rotamerer: 8 7,8-7,7 (m, 2H), 7,54 (m, 2H), 7,37 (s, 1H, hoved rotamer), 7,33 (s, 1H, mindre rotamer), 7,25-7,1 (m, 2H), 5,75 (d, 2H), 5,22 (m, 1H, mindre rotamer), 5,18 (s, 1H, hoved rotamer), 5,11 (s, 1H, mindre rotamer), 4,80 (m, 1H, hoved rotamer), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,37 (m, 1H, hoved rotamer), 4,16 (m, 1H, hoved rotamer), 4,1-3,9 (m, 2H, to signaler fra mindre rotamer), 2,70 (m, 1H, mindre rotamer), 2,52 (m, 1H, hoved rotamer), 2,30 (m, 1H, hoved rotamer), 2,15 (m, 1H, mindre rotamer), 1,89 (s, 3H).
ESI-MS+: (M+l) = 493/495 (m/z)
Eksempel 28
Ph( 3- Br)( 5- OCHF7)-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab x TFA
(i) 1. 3- dibrom- 5- dilfuormetoksvbenzen
Til en tarert, forseglet 350 ml rundbunnet trykk kolbe inneholdende en løsning av 3,5-dibromfenol (10,0 g, 39,7 mmol; se Eksempel 27(ii) ovenfor) i 2-propanol (100 ml) og 30% KOH (80 ml) ved -78°C ble det tilsatt klordifluormetan via bobling i 15 min gjennom septum. Septumet ble erstattet med en Teflon stopper og kolben ble deretter forseglet og fikk oppvarmes til romtemperatur hvor kolben ble veiet og bestemt å inneholde 12,0 g (138 mmol) klordifluormetan. Løsningen ble tilbakeløpskokt natten over i et oljebad satt til 80°C. Kolben ble avkjølt til romtemperatur, trykket forsiktig frigjort og innholdet fortynnet med H20 (200 ml). Det vandige laget ble ekstrahert med CHC13 (2 x 150 ml), deretter ble de samlede organiske lag tørket (NajSO^, filtrert og konsentrert i vakuum. Residuet ble renset ved Kugelrohr destillering ved 80°C ved 0,2 mm Hg, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (9,6 g, 80%) som en klar væske.
'H NMR (300 MHz, CDC13) 5 7,55 (s, 1H), 7,26 (s, 2H), 6,52 (t, 7H-f = 68 Hz, 1H).
(ii) l- brom- 3- difluormetoksy- 5- vinylbenzen
Tri(butyl)vinyltin (10,5 g, 33,1 mmol) ble satt dråpevis til en løsning av l,3-dibrom-5-difluormetoksybenzen (9,1 g, 30,1 mmol; se trinn (i) ovenfor),
tetrakis(trifenylfosfin)palladium(0) (700 mg, 0,60 mmol) og 2,6-di-terf-butyl-4-metylfenol (spatel tip) i toluen (125 ml) under nitrogen. Blandingen ble omrørt ved 50°C natten over. Blandingen ble avkjølt til 0°C og IN NaOH (70 ml) ble tilsatt. Etter 1 time, ble blandingen ekstrahert med CH2CI2 (3 x 300 ml) deretter, ble de samlede organiske lag tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med heksaner ga sub-tittelforbindelse (5,1 g, 68%) som en fargeløs olje.
<*>H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 7,53 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 6,60 (dd, 7 = 6 Hz, 7 = 11 Hz, 1H), 6,57 (t, 7H-f = 68 Hz, 1H), 5,77 (d, 7 = 11 Hz, 1H), 5,36 (d, 7 = 8 Hz, 1H).
(iii) Ph( 3- Br)( 5- OCHF2)-(/ g) CH( OH) CH?OH
2-metyl-2-propanol (150 ml), H20 (150 ml) og AD-mix-P (27,8 g) ble samlet sammen og avkjølt til 0°C. l-brom-3-difluormetoksy-5-vinylbenzen (4,6 g, 18,6 mmol; se trinn (ii) ovenfor) ble tilsatt på en gang og den heterogene oppslemningen ble kraftig omrørt ved 0°C inntil TLC viste fravær av utgangsmaterialet, deretter ble løsningen oppvarmet til romtemperatur og omrørt natten over. Reaksjonen ble stanset ved 0°C ved tilsetning av mettet natriumsulfitt (300 ml) og deretter oppvarmet til romtemperatur og omrørt i 60 min. Reaksjonsblandingen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 200 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (5,0 g, 95%) som en fargeløs olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 7,43 (s, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 6,86 (t, 7H-f = 75 Hz, 1H), 4,64-4,67 (m, 1H), 3,54-3,59 (m, 2H).
HPLC Analyse: 88,6%, 96,3% ee, ChiralPak AD Kolonne (95:5 Heks:EtOH mobil fase).
(iv) Ph( 3- Br)( 5- OCHF9)-(/ g) CH( OMEM) CH, OTBS
Til en løsning av Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)CH2OH (4,9 g, 17,3 mmol; se trinn (iii) ovenfor), 4-(dimetylamino)pyridin (420 mg, 3,5 mmol) og DIPEA (11,2 g, 86,3 mmol) i vannfri CH2CI2 (250 ml) ble tilsatt dråpevis en 1,0 M løsning av tert-butyldimetylsilylklorid i CH2CI2 (20,7 ml, 20,7 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt natten over ved romtemperatur. Til blandingen ble det tilsatt DIPEA (11,2 g, 86,3 mmol) og 2-metoksyetoksymetylklorid (12,9 g, 104 mmol) dråpevis. Etter 3 d, ble ytterligere 2-metoksyetoksymetylklorid (3,3 g) tilsatt og reaksjonsblandingen omrørt natten over. Blandingen ble fortynnet med vann (250 ml) og lagene ble separert. Det vandige laget ble ekstrahert med CH2CI2 (2 x 250 ml), deretter de samlede organiske lag ble tørket (Na2SC«4), filtrert og konsentrert 1 vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med Heks:EtOAc (4:1) ga sub-tittelforbindelsen (4,3 g, 51%) som en fargeløs olje.
'H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 7,40 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 6,58 (t, 7H-f = 75 Hz, 1H), 4,84 (d, 7 = 7 Hz, 1H), 4,70-4,74 (m, 2H), 3,50-3,91 (m, 6H), 3,42 (s, 3H), 0,90 (s, 9H), 0,12 (s, 3H), 0,05 (s, 3H).
(v) Ph( 3- Br¥5- OCHF9)-(/ ?) CH( OMEM) CH90H
Til en løsning av Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(/?)CH(OMEM)CH2OTBS (3,3 g, 6,9 mmol; se trinn (iv) ovenfor) i THF (60 ml) ble tilsatt en 1,0 M løsning av tetrabutylammoniumfluorid i THF (9,0 ml, 9,0 mmol) ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 45 min, blandingen ble deretter fordelt med vann (150 ml) og EtOAc (2 x 120 ml). De samlede organiske lag ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (2,5 g, 98%) som en gul olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
<!>H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,35 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 6,83 (t, 7H-f = 73 Hz, 1H), 4,73 (d, 7 = 7 Hz, 1H), 4,59-4,68 (m, 2H), 3,40-380 (m, 6H), 3,26 (s, 3H).
(vi) Ph( 3- Br)( 5- OCHF7)-(/ g) CH( OMEM) C( Q) OH
En løsning av Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(Æ)CH(OMEM)CH2OH (3,0 g, 8,1 mmol; se trinn (v) ovenfor) i aceton (60 ml) ble satt til en vandig 5% NaHC03 løsning (25 ml). Denne magnetisk omrørte heterogene blanding ble avkjølt til 0°C og deretter ble kaliumbromid (100 mg, 0,81 mmol) og 2,2,6,6-tetrametyl-l-piperidinyloksy, fri rest (1,3 g, 8,5 mmol) tilsatt. Natriumhypokloritt (5,25%, 19 ml) ble deretter tilsatt dråpevis over en periode på 10 min mens blandingen ble kraftig omrørt og holdt ved 0°C. Etter 1 time, ble ytterligere natriumhypokloritt (17 ml) og NaHCOs løsning (34 ml) tilsatt og omrøring ble fortsatt ved 0°C i ytterligere 4 timer. Aceton ble fjernet på en rotasjonsinndamper. Det vandige laget ble fortynnet med 10% NaHC03 løsning (30 ml) og ble vasket med Et20 (3 x 20 ml). Det vandige laget ble surgjort til pH 3,5 med 10% sitronsyre og ekstrahert med EtOAc (3 x 40 ml). De samlede EtOAc lag ble vasket med H2O (3 x 50 ml) og saltvann (50 ml) og deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert 1 vakuum, hvilker gir sub-tittelforbindelsen (2,1 g, 66%) som en fargeløs olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.
'H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,51 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 6,88 (t, 7H-f = 73 Hz, 1H), 5,21 (s, 1H), 4,84 (d, 7 = 7 Hz, 1H), 4,76 (d, 7 = 7 Hz, 1H), 3,62-3,80 (m, 2H), 3,48-3,52 (m, 2H), 3,32 (s, 3H).
(vii) Ph( 3- Br)( 5- OCHF2)-(/ g) CH( OMEM) C( 0)- Aze- Pab( Teoc)
Til en løsning av Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(/?)CH(OMEM)C(0)OH (1,0 g, 2,62 mmol; se trinn (vi) ovenfor) i DMF (50 ml) under nitrogen ved 0°C ble det tilsatt HAze-Pab(Teoc)»HCl (1,5 g, 3,38 mmol), PyBOP (1,5 g, 2,9 mmol) og DIPEA (840 mg, 6,50 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ved romtemperatur natten over. Blandingen ble konsentrert i vakuum og residuet kromatografert på silikagel under eluering med CHCl3:EtOH (15:1), hvilker gir sub-tittelforbindelsen (1,1 g, 59%) som et knusbart hvitt skum.
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) 8 7,79-7,83 (m, 2H), 7,26-7,52 (m, 5H), 6,94 og 6,91 (t, 7H-f = 73 Hz, 1H), 5,27 og 5,07 (s, 1H), 5,20-5,23 og 4,80-4,88 (m, 1H), 4,01-4,79 (m, 8H), 3,60-3,71 (m, 2H), 3,40-3,53 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
(viii) Ph( 3- Br)( 5- OCHF2)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( Teoc)
En blanding av Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(/?)CH(OMEM)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (369 mg, 0,496 mmol; se trinn (vii) ovenfor) og karbontetrabromid (165 mg, 0,496 mmol) i 2-propanol (10 ml) ble tilbakeløpskokt i 12 timer. Blandingen ble konsentrert 1 vakuum, deretter fordelt med H20 (15 ml) og EtOAc (5 x 20 ml). De samlede organiske lag ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med CHCl3:EtOH (15:1) ga sub-tittelforbindelsen (134 mg, 41%) som et knusbart hvitt skum.
Sm.p.: 92-98°C
Rf = 0,37 (9:1 CHCl3:EtOH)
lU NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) 8 7,80-7,86 (m, 2H), 7,40-7,48 (m, 2H) 7,10-7,33 (m, 3H), 6,92 og 6,88 (t, 7H-f = 73 Hz, 1H), 5,18 og 5,11 (s, 1H), 5,18-5,24 og 4,76-4,80 (m, 1H), 3,98-4,54 (m, 6H), 2,10-2,70 (m, 2H), 1,05-1,11 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
APCI-MS: (M + 1) = 655 m/z
(ix) Ph( 3- Br)( 5- OCHF2)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab x TFA
Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(Æ)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0,081 g, 0,124 mmol; se trinn (viii) ovenfor), ble oppløst i 5 ml TFA og fikk reagere i 80 min mens den ble avkjølt på et isbad. TFA ble inndampet og residuet renset ved prep RPLC med CH3CN:0,1M NH4OAC (30:70). Gjeldende fraksjoner ble inndampet og fryse tørket fra vann/acetonitril, hvilket gir 59 mg (83%) av tittelforbindelsen som dens acetatsalt.
'H-NMR (300 MHz; CD3OD) rotamerer: 8 7,8-7,7 (m, 2H), 7,6-7,4 (m, 3H), 7,3-7,2 (m, 2H), 6,89 (t, 1H, hoved rotamer), 6,87 (t, 1H, mindre rotamer), 5,23 (m, 1H, mindre rotamer), 5,21 (s, 1H, hoved rotamer), 5,13 (s, 1H, mindre rotamer), 4,80 (m, 1H, hoved rotamer), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,38 (m, 1H, hoved rotamer), 4,20 (m, 1H, hoved rotamer), 4,1-3,9 (m, 2H, to signaler fra mindre rotamer), 2,70 (m, 1H, mindre rotamer), 2,54 (m, 1H, hoved rotamer), 2,29 (m, 1H, hoved rotamer), 2,15 (m, 1H, mindre rotamer), 1,89 (s, 3H). <13>C-NMR (75 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer) 8 172,0,171,7, 167,0.
MS (m/z) 511/513 (M+l)<+>
Eksempel 29
Ph( 3- Br)( 5- OCHF2)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( OMe)
(i) Ph( 3- Br)( 5- OCHF2)-(/ g) CH( OMEM) C( 0)- Aze- Pab( OMe)
Til en løsning av Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(/?)CH(OMEM)C(0)OH (957 mg, 2,48 mmol; se Eksempel 28(vi) ovenfor) i DMF (30 ml) under nitrogen ved 0°C ble det tilsatt HAze-Pab(OMe)-2HCl (1,1 g, 3,2 mmol), PyBOP (1,4 g, 2,7 mmol) og DIPEA (804 mg, 6,2 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ved romtemperatur natten over. Blandingen ble konsentrert i vakuum og residuet kromatografert to ganger på silikagel, under eluering først med CHCl3:EtOH (9:1) og deretter med EtOAc:EtOH (15:1), hvilker gir sub-tittelforbindelsen (1,1 g, 72%) som et knusbart hvitt skum.
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) 8 7,59-7,65 (m, 2H), 7,20-7,55 (m, 5H), 6,95 og 6,91 (t, 7H-f = 73 Hz, 1H), 5,27 og 5,07 (s, 1H), 5,18-5,23 og 4,75-4,84 (m, 1H), 3,87-4,89 (m, 6H), 3,84 (s, 3H), 3,60-3,71 (m, 2H), 3,40-3,53 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 2,10-2,75 (m, 2H).
(ii) Ph( 3- Br)( 5- OCHF7)-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( OMe)
En blanding av Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(/?)CH(OMEM)C(0)-Aze-Pab(OMe) (1,1 g, 1,8 mmol; se trinn (i) ovenfor) og karbontetrabromid (583 mg, 1,8 mmol) i 2-propanol (30 ml) ble tilbakeløpskokt i 2,5 d. I løpet av denne tiden ble ytterligere karbontetrabromid (5 porsjoner av 50 mg i intervaller for ytterligere 0,90 mmol) satt til for å sikre fullføring av reaksjonen. Blandingen ble konsentrert i vakuum, deretter fordelt med H20 (50 ml) og EtOAc (5 x 25 ml). De samlede organiske lag ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Flash kromatografi på silikagel under eluering med CHCl3:EtOH (15:1) ga tittelforbindelsen (460 mg, 50%) som et knusbart hvitt skum.
Sm.p.: 71-75°C
Rf = 0,63 (9:1 CHCl3:EtOH)
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD, kompleks blanding av rotamerer) 8 7,59 (d, 7 = 8 Hz, 2H), 7,20-7,54 (m, 5H), 6,90 og 6,87 (t, 7H-f = 73 Hz, 1H), 5,18 og 5,11 (s, 1H), 4,76-4,80 (m, 1H), 3,98-4,54 (m, 4H), 3,82 (s, 3H), 2,10-2,70 (m, 2H).
<13>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 8 172,5,172,1,171,6,154,1.
APCI-MS: (M + 1) = 542 m/z
Eksempel 30
Ph( 3- Cl)( 5- OCH7CHF7)- r/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( OH)
(i) Ph( 3- Cl)( 5- OCH9CHF9)-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( Z)
Boc-Aze-Pab(Z) (se internasjonal patentsøknad WO 97/02284, 92 mg, 0,197 mmol) ble oppløst i 10 ml EtOAc mettet med HCl(g) og fikk reagere i 10 min. Løsningsmidlet ble avdampet og residuet ble blandet med Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-r/?;CH(OH)C(0)OH (50 mg, 0,188 mmol; se Eksempel 17(v) ovenfor), PyBOP (109 mg, 0,209 mmol) og til slutt diisopropyletylamin (96 mg, 0,75 mmol) i 2 ml DMF. Blandingen ble omrørt i 2 timer og deretter hellet i 50 ml vann og ekstrahert tre ganger med EtOAc. Den samlede organiske fasen ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet ble flash kromatografert på silikagel med EtOAc:MeOH (9:1). Utbytte: 100 mg (87%).
<!>H NMR (300 MHz, CD3OD blanding av rotamerer) 8 7,85-7,75 (m, 2H), 7,45-7,25 (m, 7H), 7,11 (m, 1H, hoved rotamer), 7,08 (m, 1H, mindre rotamer), 7,05-6,9 (m, 2H), 6,13 (bt, 1H), 5,25-5,05 (m, 3H), 4,77 (m, 1H, delvis hidden by CD3OH signal), 4,5-3,9 (m, 7H), 2,64 (m, 1H, mindre rotamer), 2,47 (m, 1H, hoved rotamer), 2,25 (m, 1H, hoved rotamer), 2,13 (m, 1H, mindre rotamer)
(ii) Ph( 3- Cl)( 5- OCH9CHF7)- r/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( OH)
Hydroksylamin-hydroklorid (65 mg, 0,94 mmol) og trietylamin (0,319 g, 3,16 mmol) ble blandet i 8 ml THF og ultralydbehandlet i 1 time ved 40°C. Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(Æ;CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Z) (96 mg, 0,156 mmol; se trinn (i) ovenfor) ble tilsatt med 8 ml mer av THF. Blandingen ble omrørt ved 40°C i 4,5 dager. Løsningsmidlet ble avdampet og råproduktet ble renset ved preparativ RPLC med CH3CN:0,1M NH4OAC (40:60). Utbytte: 30 mg (38%). Renhet: 99%.
<]>H NMR (300 MHz, CD3OD blanding av rotamerer) 8 7,6-7,55 (m, 2H), 7,35-7,3 (m, 2H), 7,12 (m, 1H, hoved rotamer), 7,09 (m, 1H, mindre rotamer), 7,05-6,9 (m, 2H), 6,15 (triplett av multippeller, 1H), 5,15 (m, 1H, mindre rotamer), 5,13 (s, 1H, hoved rotamer), 5,08 (s, 1H, mindre rotamer), 4,77 (m, 1H, hoved rotamer), 4,5-4,2 (m, 5H), 4,08 (m, 1H, hoved rotamer), 3,97 (m, 1H, mindre rotamer), 2,66 (m, 1H, mindre rotamer), 2,50 (m, 1H hoved rotamer), 2,27 (m, 1H, hoved rotamer), 2,14 (m, 1H, mindre rotamer).
<13>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, blanding av rotamerer) 8 172,8,172,2,171,4,159,1,158,9,154,2.
APCI-MS: (M + 1) = 497/499 m/z
Eksempel 31
Ph( 3- Cl)( 5- OCH7CH7F)-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( OH)
(i) Ph( 3- Cl)( 5- OCH9CH7FW/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( Z)
Boc-Aze-Pab(Z) (130 mg, 0,279 mmol) ble oppløst i 15 ml EtOAc mettet med HCl(g) og fikk reagere i 10 min. Løsningsmidlet ble avdampet og residuet ble blandet med Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-r/?>)CH(OH)-C(0)OH (63 mg, 0,188 mmol; se Eksempel 21(v) ovenfor) i 3 ml DMF, PyBOP (147 mg, 0,279 mmol) og til slutt diisopropyletylamin (134 mg, 1,03 mmol). Blandingen ble omrørt i 130 min og deretter hellet i 75 ml vann og ekstrahert tre ganger med EtOAc. Den samlede organiske fase ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet ble flash kromatografert på silikagel med EtOAc/MeOH = 95/5. Utbytte: 119 mg (79%).
<*>H NMR (400 MHz, CDC13) 88,06 (bt, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,45-7,25 (m, 5H), 7,18 (d, 2H), 6,89 (m, 1H), 6,84 (m, 1H), 6,76 (m, 1H), 5,16 (s, 2H), 4,84 (s, 1H), 4,79 (m, 1H), 4,66 (dublett av multippeller, 2H), 4,4-4,3 (m, 2H), 4,10 (dublett av multippeller, 2H), 4,02 (m, 1H), 3,67 (m, 1H), 2,46 (m, 1H), 2,28 (m, 1H).
fii) Ph( 3- Cl)( 5- OCH, CH7FW/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( OH)
Hydroksylamin-hydroklorid (80 mg, 1,16 mmol) og trietylamin (0,392 g, 3,87 mmol) ble blandet i 9 ml THF og ultralydbehandlet i 1 time ved 40°C. Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(7?jCH(OH)C(0)-Aze-Pab(Z) (96 mg, 0,156 mmol; se trinn (i) ovenfor) ble tilsatt med 9 ml mer av THF. Blandingen ble omrørt ved 40°C i 48 timer og 3 dager ved romtemperatur. Løsningsmidlet ble avdampet og råproduktet ble renset ved preparativ RPLC med CH3CN:0,1M NH4OAC (30:70). Utbytte: 72 mg (78%). Renhet: 100%.
'H NMR (400 MHz, CD3OD, blanding av rotamerer) 87,6-7,55 (m, 2H), 7,35-7,25 (m, 4H), 7,07 (m, 1H, hoved rotamer), 7,04 (m, 1H, mindre rotamer), 7,0-6,9 (M, 2 timer), 5,12 (m, 1H, mindre rotamer), 5,08 (s, 1H, mindre rotamer), 5,04 (s, 1H), 4,78 (m, 1H, hoved rotamer), 4,68 (dublett av multippelts, 2 H), 4,5-4,25 (m, 3H), 4,20 (dublett av multippeller, 2H) 4,06 (m, 1H, hoved rotamer), 3,97 (m, 1H, mindre rotamer), 2,65 (m, 1H, mindre rotamer), 2,48 (m, 1H hoved rotamer), 2,27 (m, 1H, hoved rotamer), 2,14 (m, 1H, mindre rotamer)
<13>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, blanding av rotamerer) 5 172,3,171,5,159,8,154,3
APCI-MS: (M + 1) = 479/481 m/z
Eksempel 32
Ph( 3- Cl)( 5- OCHF, W/ g) CH( OHVC( 0)- Pro- Pab
(i) Boc- Pro- Pab( Teoc)
Boc-Pro-Pab(Z) (se internasjonal patentsøknad WO 97/02284,15,0 g, 0,0321 mol) ble oppløst i 150 ml etanol og 200 mg 10% Pd/C (50% fuktighet) ble tilsatt. Blandingen ble omrørt og hydrogenen ved atmosfærisk trykk i 2 timer, filtrert gjennom Hyflo og konsentrert. Produktet ble anvendt uten ytterligere rensning. Av dette produktet ble det tatt 10 g (0,029 mol), som ble oppløst i 300 ml THF. Teoc-p-nitrofenylkarbonat (10 g, 0,035 mol) ble tilsatt. En løsning av kaliumkarbonat (5,2 g, 0,038 mol) i 50 ml vann ble tilsatt over 3 min og den resulterende løsning ble omrørt i 3 dager, konsentrert og resten ble ekstrahert med EtOAc tre ganger. De samlede organiske lag ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet ble flash kromatografert på silikagel ved anvendelse av metylenklorid:aceton (4:1). Utbytte: 9,8 g (69%).
(ii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF9)- r/ gJCH( OH)- C( Q)- Pro- Pab( Teoc)
Boc-Pro-Pab(Teoe) (107 mg, 0,218 mmol; se trinn (i) ovenfor) ble oppløst i 10 ml EtOAc mettet med HCl(g) og fikk reagere i 10 min. Løsningsmidlet ble avdampet og residuet ble blandet med Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?>)CH(OH)C(0)OH (50 mg, 0,198 mmol; se Eksempel l(viii) ovenfor) i 3 ml DMF, PyBOP (115 mg, 0,218 mmol) og til slutt diisopropyletylamin (104 mg, 0,80 mmol). Blandingen ble omrørt i 2 timer og deretter hellet i 75 ml vann og ekstrahert tre ganger med EtOAc. Den samlede organiske fase ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet ble flash kromatografert på silikagel med EtOAc:MeOH (95:5). Utbytte: 89 mg (72%).
<*>H NMR (400 MHz, CDC13) 87,54 (bt, 1H), 7,47 (d, 2H), 7,12 (m, 1H), 7,08 (d, 2H), 7,02 (m, 1H), 6,95 (m, 1H), 6,50 (t, 1H), 5,21 (s, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,35-4,15 (m, 3H), 3,59 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 2,1-1,7 (m, 4H), 1,06 (m, 2H), 0,04 (s, 9H).
(iii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF2)- r/ g) CH( OH)- C( 0)- Pro- Pab x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-WCH(OH)C(0)-Pro-Pab(Teoc) (85 mg, 0,136 mmol; se trinn (ii) ovenfor) ble oppløst i 1 ml metylenklorid og avkjølt på et isbad. TFA (4 ml) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt i 90 min. TFA ble inndampet og residuet ble frysetørket fra vann og acetonitril. Utbytte: 79 mg (92%). Renhet: 94%.
<!>H NMR (400 MHz, CD3OD blanding av rotamerer) 87,85-7,7 (m, 2H), 7,58 (d, 2H, hoved rotamer), 7,47 (d, 2H, mindre rotamer), 7,35 (m, 1H, hoved rotamer), 7,27 (m, 1H, mindre rotamer), 7,2,7,1 (m, 2H), 6,88 (t, 1H), 5,38 (s, 1H, hoved rotamer), 5,22 (s, 1H, mindre rotamer), 4,58 (d, 1H), 4,5-4,2 (m, 2H), 3,8-3,5 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 2,2-1,8 (m, 4H). <13>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer) 8 173,6,171,1, 167,0.
APCI-MS: (M + 1) = 481/483 m/z
Eksempel 33
Ph( 3- Cl)( 5- OCHF2)-( 7g) CH( OH)- C( Q)- Pro- Pab( OMe)
(i) 4- Azidometvl- N- metoksv- benzamidin
4-Azidometylbenzonitril (17,3 g, 0,109 mol; Nishiyama et al; Chem. Lett. (1982) 1477) ble oppløst i 500 ml toluen og 200 ml absolutt etanol. Løsningen ble avkjølt til -10°C og HCl(g) ble boblet gjennom inntil metning. Blandingen ble holdt i kjøleskap i 2 dager når mesteparten av løsningsmidlene ble avdampet. Dietyleter ble tilsatt og ble dekantert fra. Produktet ble gjenoppløst i en løsning av O-metylhydroksylamin (10,5 g, 0,125 mol) og trietylamin (56 ml) i 200 ml metanol. Blandingen fikk stå i 3 dager mens metanolen ble inndampet med tilsetning av EtOAc. Den organiske fasen ble vasket med vann, fortynnet HOAc og vandig natriumbikarbonat, tørket (Na2S04) og fortynnet med mer EtOAc til et totalt volum på 500 ml. En prøve av 25 ml ble inndampet til tørrhet. Resten ble 932 mg. Total utbytte: 18,6 g (83%).
(ii) 4- aminometvl- N- metoksv- benzamidin
Til en løsning av 4-azidometyl-N-metoksy-benzamidin (11,3 g, 0,055 mol; se trinn (i) ovenfor) i 200 ml etanol ble tilsatt 200 mg PÆ>2. Blandingen ble hydrogenen med konstant bobling av hydrogen i 4 timer og deretter filtrert gjennom Celite® og inndampet. Utbytte: 7,34 g (74%).
(iii) Boc- Pro- Pab( OMe)
Til en suspensjon av Boc-Pro-OH (9,7 g, 0,045 mol), 4-aminometyl-N-metoksy-benzamidin (7,34 g, 0,041 mol; se trinn (ii) ovenfor) og dimetylaminopyridin (7,8 g, 0,064 mol) i 300 ml acetonitril ble tilsatt EDC base (11,7 ml, 0,068 mol). Blandingen ble omrørt i 18 timer, konsentrert og fordelt mellom vann og EtOAc. Det organiske laget ble vasket med vann, vandig natriumbikarbonat, tørket (MgS04) og inndampet. Råproduktet ble flash kromatografert på silikagel med EtOAc. Utbytte: 9,73 g (63%).
(iv) H- Pro- Pab( OMe) x 2 HC1
Boc-Pro-Pab(OMe) (9,7 g, 0,026 mol; se trinn (iii) ovenfor) ble oppløst i 250 ml EtOAc. Isavkjølt løsning ble mettet med HCl(g) ved bobling i 5 min. Produktet utfelte umiddelbart og 125 ml absolutt etanol ble tilsatt. Blandingen ble ultralydbehandlet inntil mesteparten av materialet hadde stivnet. Dietyleter (200 ml) ble tilsatt og suspensjonen ble filtrert. Noen få klumper som ikke hadde stivnet ble igjen behandlet med absolutt etanol og dietyleter. Det faste stoffet ble tørket. Utbytte: 7,57 g (86%).
'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 7,74 (d, 2H), 7,58 (d, 2H), 4,55 (s, 2H), 4,38 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,45-3,3 (m, 2H), 2,50 (m, 1H), 2,15-2,0 (m, 3H)
(v) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF2)-(/ ?) CH( OH)- C( 0)- Pro- Pab( OMe)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-WCH(OH)C(0)OH (50 mg, 0,198 mmol; se Eksempel l(viii) ovenfor), H-Pro-Pab(OMe) (76 mg, 0,218 mmol, se trinn (iv) ovenfor) og PyBOP (115 mg, 0,218 mmol) ble oppløst i 2 ml DMF. Diisopropyletylamin (104 mg, 0,80 mmol) ble tilsatt og blandingen ble omrørt i 2,5 timer. Blandingen ble hellet i 50 ml vann og ekstrahert tre ganger med EtOAc og den samlede organiske fase ble vasket med saltvann, tørket (Na2S04) og inndampet. Residuet ble flash kromatografert på silikagel med EtOAc:MeOH (95:5). Utbytte: 37 mg (36%). Renhet: 98%.
'H NMR (400 MHz, CD3OD blanding av rotamerer) 8 7,60 (d, 2H, hoved rotamer), 7,57 (d, 2H, mindre rotamer), 7,4-7,1 (m, 5H), 6,89 (t, 1H, hoved rotamer), 6,87 (t, 1H, mindre rotamer), 5,35 (s, 1H, hoved rotamer), 5,21 (s, 1H, mindre rotamer), 4,72 (m, 1H, mindre
rotamer), 4,5-4,35 (m, 1H og 2H, hoved rotamer), 4,3-4,25 (m, 2H, mindre rotamer), 3,814 (s, 3H, hoved rotamer), 3,807 (s, 3H, mindre rotamer), 3,75-3,5 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 2,2-1,8 (m, 4H)
<l3>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, blanding av rotamerer) 8 173,3,173,2,171,3,171,0,153,9,152,4
APCI-MS: (M + 1) = 511/513 m/z
Eksempel 34
Ph( 3- Cl)( 5- OCHF7)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- NH- CH?-(( 2- amidino)- 5- pvridinvl)
(i) 6- cvanonikotinsvre
Til en løsning av nikotinsyre N-oksyd (51 g, 0,37 mol) i 1,2 L av DMF, ble NaCN (54 g, 1,1 mol) tilsatt, fulgt av trietylamin (255 ml, 1,83 mol) og TMSC1 (185 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 110°C i 10 timer, filtrert og filtratet ble konsentrert. Residuet ble oppløst i 100 ml 2N HC1 og ekstrahert med metylenklorid. De organiske lag ble samlet, konsentrert og omkrystallisert fra vann, hvilket gir 12 g (22%) av produktet.
(ii) 5- Qivdroksvmetvl) pvridin- 2- karbonitril
Til en løsning av 6-cyanonikotinsyre (12 g, 0,081 mol; se trinn (i) ovenfor) i THF ved 0°C, Et3N (12,4 ml, 0,0892 mol) ble tilsatt fulgt av etylklorformiat (8,53 ml, 0,0892 mol). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 15 min og NaBH} (6,14 g, 0,162 mol) ble tilsatt. Deretter ble blandingen omrørt ved RT natten over, behandlet med vann og ekstrahert med metylenklorid. Det organiske laget ble konsentrert og renset ved kolonnekromatografi, hvilket gir 4 g (20%) av alkoholen.
(iii) 5-( Azidometyl) pyridin- 2- karbonitril
5-(hydroksymetyl)pyridin-2-karbonitril (4 g, 0,03 mol; se trinn (ii) ovenfor) ble oppløst i 25 ml metylenklorid og avkjølt i et isbad. Mesylklorid (2,32 ml, 0,0300 mol) og deretter trietylamin (4,6 ml, 0,033 mol) ble tilsatt dråpevis. Reaksjonsblandingen ble omrørt og etter opparbeiding ble rå mesylat behandlet med NaN3 (7,35 g, 0,113 mol) i 20 ml DMF. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 40°C i 2 timer, fortynnet med vann og ekstrahert med etylacetat. Det organiske laget ble konsentrert, hvilket gir 3,95 g (83%) av rå azid.
(iv) 5-( ferr- butoksvkarbonylaminometvl) pvridin- 2- karbonitril
Til en løsning av 5-(azidometyl)pyridin-2-karbonitril (3,95 g, 0,0248 mol; se trinn (iii) ovenfor) i 30 ml THF og 10 ml vann, trifenylfosfin (7,8 g, 0,0298 mol) ble tilsatt og det resulterende omrørt i 24 timer. Deretter, ble trietylamin (3,8 ml, 0,027 mol) tilsatt, fulgt av Boc-anhydrid (5,4 g, 0,025 mol) og omrøring i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble fordelt mellom vann og etylacetat. Det organiske laget ble konsentrert og renset ved
. kolonnekromatografi, hvilket gir 2,1 g (36%) av sub-tittelforbindelsen.
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8 8,6 (s, 1H), 8,0 (d, 1H), 8,9 (d, 1H), 4,1 (m, 2H), 1,4 (s, 9H)
(v) 5-( aminometvl) pvridin- 2- karbonitril x 2 HC1
5-(teAt-butoksykarbonylaminometyl)pyridin-2-karbonitril (0,200 g, 0,86 mmol, se trinn (iv) ovenfor) ble oppløst i 10 ml EtOAc mettet med HCl(g) og ble omrørt i 30 min. Løsningsmidlet ble avdampet og 0,175 g (99%) av sub-tittelforbindelse ble oppnådd som dens dihydrokloridsalt.
'H NMR (500 MHz, D20) 8 8,79 (s, 1H), 8,17 (d, 1H), 8,05 (d, 1H), 4,38 (s, 2H)
(vi) Boc- Aze- NH- CH9- 5- Pv( 2- CN)
Til en blanding av 5-(aminometyl)pyridin-2-karbonitril x 2 HC1 (0,175 g, 0j85 mmol; se trinn (v) ovenfor), Boc-Aze-OH (0,201 g, 1,00 mmol) og TBTU (0,321 g, 1,00 mmol) i 5 ml DMF ble det tilsatt dimetylaminopyridin (0,367 g, 3,00 mmol). Blandingen ble omrørt natten over og deretter hellet i vann og ekstrahert tre ganger med EtOAc. Den samlede organiske fase ble vasket med vandig natriumbikarbonat, tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet begynte å krystallisere og ble anvendt som sådanne i neste trinn. Utbytte: 0,23 g (73%).
'H NMR (500 MHz, CDC13) 8 8,66 (s, 1H), 8,2-7,8 (bred, 1H), 7,79 (d, 1H), 7,67 (d, 1H), 4,73 (m, 1H), 4,65-4,5 (m, 2H), 3,94 (m, 1H), 3,81 (m, 1H), 2,6,2,35 (m, 2H), 1,8 (bred, 1H), 1,45 (s, 9H)
(vii) H- Aze- NH- CHr5- Pv( 2- CN) x 2 HC1
Boc-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN) (0,23 g, 0,73 mmol; se trinn (vi) ovenfor) ble oppløst i 10 ml EtOAc mettet med HCl(g) og ble omrørt i 30 min. Løsningsmidlet ble avdampet og 0,21 g (100%) av sub-tittelforbindelsen ble oppnådd som dens dihydrokloridsalt.
<*>H NMR (500 MHz, D20) 8 8,64 (s, 1H), 8,0-7,9 (m, 2H), 5,19 (m, 1H), 4,65-4,55 (m, 2H), 4,20 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 2,88 (m, 1H), 2,64 (m, 1H)
(viii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHFz)-(/ ?JCH( OH)- C( Q)- Aze- NH- CH2- 5- Pv( 2- CN)
Til en blanding av H-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN) x 2 HC1 (0,206 g, 0,713 mmol; se trinn (vii) ovenfor), Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?>)CH(OH)C(0)OH (0,180 g, 0,713 mmol; se Eksempel l(viii) ovenfor) og PyBOP (0,408 g, 0,784 mmol) i 5 ml DMF ble tilsatt dimetylaminopyridin (0,367 g, 3,00 mmol). Blandingen ble omrørt natten over og deretter hellet i vann og ekstrahert tre ganger med EtOAc. Den samlede organiske fase ble vasket med vandig natriumbikarbonat, tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet ble flash kromatografert på silikagel med EtOAc og ga et rent produkt. Utbytte: 0,197 g (61%).
'H NMR (500 MHz, CDC13) 8 8,63 (m, 1H), 8,22 (bt, 1H), 7,78 (m, 1H), 7,67 (m, 1H), 7,21 (m, 1H), 7,16 (m, 1H), 7,04 (m, 1H), 6,56 (t, 1H), 4,97 (bd, 1H), 4,92 (m, 1H), 4,6-4,5 (m, 2H), 4,40 (bd, 1H), 4,18 (m, 1H), 3,80 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,46 (m, 1H), 1,92 (s, 1H)
APCI-MS: (M + 1) = 451/453 m/z
(ix) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF9)-(/ g) CH( OH)- C( Q)- Aze- NH- CH7-(( 2- amidino)- 5-
p<y>ridin<y>l) x HOAc
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?>)CH(OH)-C(0)-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN) (0,200 g, 0,444 mmol; se trinn (viii) ovenfor), ammoniumacetat (1,00 g, 0,0130 mol) og N-acetylcystein (2,00 g, 0,0122 mol) i 10 ml metanol ble oppvarmet ved 50°C i 2 dager. Preparativ RPLC med CH3CN:0,1M NH4OAC (30:79) og kjøring av de passende fraksjoner igjen med CH3CN:0,1M NHjOAc (5:95 - 40:60) ga 60 mg (26%) av ren tittelforbindelse som dens acetatsalt etter fryse tørking fra vann og acetonitril. Renhet: 100%.
'H NMR (500 MHz, D20, blanding av rotamerer) 8 8,68 (s, 1H, hoved rotamer), 8,62 (s, 1H, mindre rotamer), 8,05-7,9 (m, 2H), 7,33 (m, 1H, rotamer), 7,27 (m, 1H, rotamer), 7,22 (m, 1H, rotamer), 7,17 (m, 1H, rotamer), 7,01 (m, 1H, rotamer), 6,84 (t, 1H), 5,32 (s, 1H, hoved rotamer), 5,20 (m, 1H, mindre rotamer), 5,13 (s, 1H, mindre rotamer), 4,88 (m, 1H, hoved rotamer), 4,65-4,55 (m, 2H, hoved rotamer), 4,45-4,35 (m, 1H, rotamer pluss 1H, mindre rotamer), 4,31 (d, 1H, mindre rotamer), 4,2-4,05 (m, 1H pluss 1H, rotamer), 2,80 (m, 1H, mindre rotamer), 2,61 (m, 1H, hoved rotamer), 2,33 (m, 1H, hoved rotamer), 2,24 (m, 1H, mindre rotamer), 1,93 (s, 3H)
C-NMR (100 MHz; D20): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, blanding av rotamerer) 8 181,6,173,3,172,7,172,6,172,3,162,6,162,3
APCI-MS: (M + 1) = 468/470 m/z
Eksempel 35
Ph( 3- Cl)( 5- OCHF9)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- NH- CHr(( 2- metoksvamidino)- 5- pvridinvl)
(i) Boc- NH- CH7- r( 2-( aminoQivdroksvlimino) metvl))- 5- pvridinvll 5-(te/t-butoksykarbonylaminometyl)pyridin-2-karbonitril (1,00 g, 4,29 mmol; se Eksempel 34(iv) ovenfor) ble oppløst i 10 ml etanol og hydroksylamin-hydroklorid (0,894 g, 0,0129 mol) og trietylamin (1,30 g, 0,0129 mol) ble tilsatt. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 6 dager. Blandingen ble fordelt mellom vann og metylenklorid. Det vandige laget ble ekstrahert med metylenklorid og den samlede organiske fase ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Utbytte: 0,96 g (84%).
<*>H NMR (400 MHz, aceton-de) 8 9,01 (bs, 1H), 8,50 (bs, 1H), 7,87 (m, 1H), 7,70 (m, 1H), 6,58 (bred, 1H), 5,70 (bred, 2H), 4,31 (d, 2H), 1,41 (s, 9H)
(ii) Boc- Aze- NH- CH2-( 2-( amidino)- 5- pvridinvn x HOAc
Denne reaksjonen ble utført i henhold til metoden beskrevet i Judkins et al, Synth. Comm.
(1998) 4351. En suspensjon av Boc-NH-CH2-[(2-(amino(hydroksylimino)metyl))-5-pyridinyl] (0,910 g, 3,42 mmol; se trinn (i) ovenfor), eddiksyreanhydrid (0,35 ml, 3,7 mmol) og 0,35 g 10% Pd/C (50% fuktighet) i 100 ml eddiksyre ble hydrogenen ved et trykk på 5 atm. i 5 timer. Blandingen ble filtrert gjennom Celite og konsentrert. Residuet ble frysetørket fra vann og acetonitril, hvilket gir 0,97 g (92%) av sub-tittelforbindelse.
•h NMR (500 MHz, CD3OD) 8 8,74 (s, 1H), 8,12 (d, 1H), 7,98 (d, 1H), 4,38 (s, 2H), 1,92 (s, 3H),1,46 (s,9H)
(iii) Boc- NH- CH2-( 2-( amino( trimetvlsilyletvlimino) metvl)- 5- pvridinvl)
Til en suspensjon av Boc-NH-CH2-(2-(amidino)-5-pyridinyl) x HOAc (0,96 g, 3,1 mmol; se trinn (ii) ovenfor) i 75 ml THF ble det tilsatt en løsning av kaliumkarbonat (1,07 g, 7,7 mmol) og Teoc-/7-nitrofenylkarbonat (1,14 g, 4,02 mmol) i 15 ml vann. Blandingen ble omrørt natten over. Et overskudd av glycin og kaliumkarbonat ble tilsatt og reaksjonen ble fortsatt i 2 timer. THF ble inndampet og resten ble ekstrahert tre ganger med EtOAc. Den samlede organiske fase ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Produktet kunne anvendes uten ytterligere rensning.
'H NMR (500 MHz, CDC13) 8 9,31 (bred, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,41 (d, 1H), 8,35 (bred, 1H), 7,74 (d, 1H), 4,97 (bred, 1H), 4,39 (m, 2H), 4,26 (m, 2H), 1,46 (s, 9H), 1,14 (m, 2H), 0,07
(s, 9H)
(iv) H7N- CH2-( 2-( amino( trimetylsilvletvlimino) metvl)- 5- pvridinyl) x 2 HC1 Boc-NH-CH2-(2-(amino(trimetylsilyletylimino)metyl)-5-pyridinyl) (0,23 g, 0,58 mmol; se trinn (iii) ovenfor) ble oppløst i 25 ml EtOAc mettet med HCl(g) og omrørt i 30 min. Løsningsmidlet ble avdampet og produktet anvendt uten ytterligere rensning. Utbytte: 0,21 g (98%).
'H NMR (500 MHz, D20) 5 8,89 (s, 1H), 8,25 (s, 2H), 4,55 (m, 2H), 4,42 (s, 2H), 1,20 (m, 2H), 0,09 (s, 9H)
(v) Boc- Aze- NH- CH9-( 2-( amino( trimetvlsilvletvlimino) metvl)- 5-
pvridinvl)
Til en løsning av H2N-CH2-(2-(amino(trimetylsilyletylimino)metyl)-5-pyridinyl) x 2 HC1 (0,21 g, 0,57 mmol; se trinn (iv) ovenfor), Boc-Aze-OH (0,127 g, 0,631 mmol) og TBTU (233 mg, 0,726 mmol) i 5 ml DMF ble tilsatt dimetylaminopyridin (269 mg, 2,20 mmol). Blandingen ble omrørt natten over, hellet i 100 ml vann og ekstrahert med EtOAc tre ganger. Den samlede organiske fase ble vasket med vandig natriumbikarbonat og vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet ble flash kromatografert på silikagel med EtOAc, hvilket gir 170 mg (56%) av det ønskede produkt.
'H NMR (500 MHz, CDC13) 6 9,33 (bred, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,41 (d, 1H), 8,36 (bred, 1H), 7,75 (m, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,56 (m, 2H), 4,26 (m, 2H), 3,93 (m, 1H), 3,80 (m, 1H), 2,6-2,4 (m, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,14 (m, 2H), 0,07 (s, 9H)
(vi) H- Aze- NH- CH2-( 2-( amino( trimetvlsilvletvlimino) metvl)- 5-
pvridinvl) x 2 HC1
Boc-Aze-NH-CH2-(2-(amino(trimetylsilyletylimino)metyl)-5-pyridinyl) (170 mg, 0,356 mmol; se trinn (v) ovenfor) ble oppløst i 25 ml EtOAc mettet med HCl(g) og omrørt i 30 min. Løsningsmidlet ble avdampet og produktet anvendt uten ytterligere rensning. Utbytte: 160 mg (100%).
<J>H NMR (500 MHz, CD3OD) 8 9,00 (m, 1H), 8,84 (m, 1H), 8,23 (d, 2H), 8,10 (m, 1H), 5,09 (m, 1H), 4,7-4,6 (m, 2H), 4,51 (m, 2H), 4,14 (m, 1H), 3,97 (m, 1H), 2,86 (m, 1H), 2,58 (m, 1H), 1,22 (m, 2H), 0,11 (s, 9H)
(vii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF7)- r/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- NH- CHz-( 2-( amino( tri-metvlsilvletylimino) metvl)- 5- pvridinvl)
Til en løsning av H-Aze-NH-CH2-(2-(amino(trimetylsilyletylimino)-metyl)-5-pyridinyl) x 2 HC1 (160 mg, 0,462 mmol; se trinn (vi) ovenfor), Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-r/?;CH(OH)C(0)OH (131 mg, 0,462 mmol; se Eksempel l(viii) ovenfor) og PyBOP (263 mg, 0,505 mmol) i 5 ml DMF ble det tilsatt diisopropyletylamin (0,30 ml, 1,71 mmol). Blandingen ble omrørt natten over, hellet i 100 ml vann og ekstrahert tre ganger med EtOAc. Den samlede organiske fase ble vasket med vandig natriumbikarbonat og vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet ble flash kromatografert på silikagel med EtOAc:MeOH (95:5), hvilket gir 148 mg (52%) av det ønskede produkt.
(viii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF2)- ri?) CH( OH) C( 0)- Aze- NH- CH?-( 2-( metoksv-amino( trimetvlsilvletvlimino) metvl)- 5- pvridinyl)
En suspensjon av Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)-C(0)-Aze-NH-CH2-(2-(metoksyamino(trimetylsilyletylimino)metyl)-5-pyridinyl) (148 mg, 0,242 mmol; se trinn (vii) ovenfor) og O-metylhydroksyl amin (202 mg, 2,42 mmol) i 10 ml acetonitril ble oppvarmet ved 70°C i 3 timer. Blandingen ble fordelt mellom vann og EtOAc. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med EtOAc og den samlede organiske fase ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Rå materialet ble flash kromatografert på silikagel med EtOAc:MeOH (95:5), hvilket gir 44 mg (28%) av rent materiale.
'H NMR (500 MHz, CDC13) 8 8,55 (m, 1H), 8,05 (bt, 1H), 7,70 (m, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,56 (d, 1H), 7,22 (m, 1H), 7,16 (m, 1H), 7,03 (m, 1H), 6,50 (t, 1H), 4,92 (s, 1H), 4,89 (m, 1H), 4,55-4,45 (m, 2H), 4,38 (bred, 1H), 4,2-4,1 (m, 3H), 4,00 (s, 3H), 3,73 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,44 (m, 1H), 0,97 (m, 2H), 0,02 (s, 9H)
(ix) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF?)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- NH- CH2-(( 2- metoksv-amidino)- 5- pvridinvl)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?>)CH(OH)C(0)-Aze-NH-CH2-(2-(metoksyamino(tri-metylsilyletylimino)metyl)-5-pyridinyl) (44 mg, 0,069 mmol; se trinn (viii) ovenfor) ble oppløst i 2 ml TFA og fikk reagere i 1 time. TFA ble inndampet og residuet ble fordelt mellom EtOAc og vandig natriumbikarbonat. Det vandige laget ble ekstrahert med EtOAc og den samlede organiske fase ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Utbytte: 30 mg (88%). Renhet: >95%.
'H NMR (500 MHz, CDC13) 8 8,44 (m, 1H), 8,03 (bt, 1H), 7,91 (m, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,19 (m, 1H), 7,13 (m, 1H), 7,00 (m, 1H), 6,52 (t, 1H), 5,6-5,45 (bred, 2H), 4,90 (s, 1H), 4,89 (m, 1H), 4,55-4,4 (m, 2H), 4,27 (bred, 1H), 4,12 (m, 1H), 3,92 (s, 3 H), 2,68 (m, 1H), 2,41 (m, 1H)
<13>C-NMR (100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer) 8 173,0,170,9, 152,6
APCI-MS: (M + 1) = 498/500 m/z
Eksempel 36
Ph( 3- Cl)( 5- OCHF7)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- NH- CH7-(( 5- amidino)- 2- pvrimidinvl)
(i) 2- amino- 2- iminoetvlkarbamafAcOH
N-Boc-aminoacetonitril (40,2 g, 257,4 mmol) og N-acetylcystein (42,0 g, 257,4 mmol) ble oppløst i metanol (300 ml) ved 60°C og ammoniakk ble ført gjennom i 18 timer. Løsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Etter ionebytter kromatografi (Amberlite IRA-400 (AcOH)) og omkrystallisering fra aceton, ble 28,4 g (53%) av sub-tittelforbindelsen oppnådd som et hvitt, fast stoff.
'H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 4,41 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 4,01 (s, 2H), 2,91 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 2,01 (s, 3H), 1,46 (s, 9H)
(ii) 1. 3- bis( dimetvlamino)- 2- cvanotrimethiniumperklorat
En løsning av 3-dimetylaminoakrylonitril (25,0 g, 260,0 mmol) i kloroform (75 ml) ble satt dråpevis til en løsning av (klormetylen)dimetylammoniumklorid (50,0 g, 390,1 mmol) i kloroform (175 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble omrørt i ytterligere 2 timer ved 0°C, og fikk deretter oppvarmes til romtemperatur natten over, deretter oppvarmet i 8 timer under tilbakeløp. Løsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Residuet ble satt til en blanding av natriumperklorat (110 g, 0,898 mmol) i vann (150 ml) og etanol (300 ml). Blandingen ble oppvarmet under tilbakeløp i 15 min deretter avkjølt og fikk stå natten over i et kjøleskap. Fellingen ble oppsamlet og omkrystallisert fra etanol, hvilket gir 23,8 g (52%) av sub-tittelforbindelse som fargeløse nåler.
Sm.p.: 140-141°C
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8 8,24 (s, 2H), 3,59 (s, 6H), 3,51 (s, 6H)
(iii) Boc- NH- CH2-( 5- cvano)- 2- pvrimidin
En blanding av f-butyl 2-amino-2-iminoetylkarbamat»AcOH (5,0 g, 23,8 mmol; se trinn (i) ovenfor) og l,3-bis(dimetylamino)-2-cyanotrimethinium perklorat (6,0 g, 23,8 mmol; se trinn (ii) ovenfor) i pyridin (300 ml) ble omrørt under nitrogen ved 70-75 °C i 16 timer og deretter oppvarmet under tilbakeløp i 6 timer. Blandingen ble avkjølt til romtemperatur og løsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Residuet ble ekstrahert med en varm blanding (1:1) av etylacetat og kloroform, filtrert gjennom en liten pute av silika og konsentrert, hvilket gir råproduktet. Flash kromatografi på silika under eluering med kloroform ga 4,0 g (71%) av tittelforbindelsen som fargeløs olje, som stivnet ved henstand.
Sm.p.: 86-87 °C
Rf = 0,77 (silika, 3:2 Etylacetat/Kloroform)
'H NMR (300 MHz, DMSO-</tf) 8 9,25 (s, 2H), 7,39 (bt, 1H), 4,39 (d, / = 6 Hz, 2H), 1,38 (s, 9H).
<13>C NMR (750 MHz, DMSO-4$) 8 170,4,160,3,155,8, 115,2,106,9, 80,0,46,3, 28,1 APCI-MS: (M + 1) = 235 m/z
(iv) Boc- Aze- NH- CH2-(( 5- cvano)- 2- pvrimidinyl)
Boc-NH-CH2-(5-cyano)-2-pyrimidin (1,14 g, 4,87 mmol; se trinn (iii) ovenfor) ble oppløst i 50 ml EtOAc mettet med HCl(g) og fikk reagere i 1 time og konsentrert. Residuet ble oppløst i 20 ml DMF og avkjølt i et isbad. Diisopropyletylamin (3,5 ml, 0,020 mol), Boc-Aze-OH (1,08 g, 5,37 mmol) og HATU (2,80 g, 5,38 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Løsningsmidlet ble avdampet og produktet ble renset ved preparativ RPLC ved anvendelse av CH3CN:0,1M NHiOAc (40:60). Acetonitrilet ble inndampet og det vandige laget ble ekstrahert tre ganger med EtOAc. De samlede organiske lag ble tørket (MgSO,*) og inndampet. Utbytte: 1,12 g (72%).
<*>H NMR (400 MHz, CDCI3) 8 8,95 (s, 2H), 4,82 (d, 2H), 4,74 (m, 1H), 3,95 (m, 1H), 3,84 (m, 1H), 2,6-2,4 (m, 2H), 1,47 (s, 9H)
(v) Boc- Aze- NH- CH2-(( 5- amidino)- 2- pvrimidinvl) x HOAc
En løsning av Boc-Aze-NH-CH2-((5-cyano)-2-pyrimidinyl) (0,83 g, 2,6 mmol; se trinn (iv) ovenfor), N-acetylcystein (0,43 g, 2,6 mmol) og ammoniumacetat (0,60 g, 7,8 mmol) i 10 ml metanol ble oppvarmet ved 60°C under nitrogen i 2 dager. Løsningsmidlet ble avdampet og rå materiale ble renset ved preparativ RPLC ved anvendelse av en gradient av CH3CN:0,1M NH4OAC (5:95 til 100:0). Fraksjonene av interesse ble fryse tørket, hvilket gir 1,0 g (93%) av det ønskede materiale.
<!>H NMR (300 MHz, D20, signaler utydelige grunnet HDO signal) 8 9.17 (s, 2H), 4,1-3,9 (m, 2H), 2,60 (m, 1H), 2,29 (m, 1H), 1,93 (s, 3H), 1,44 (s, 9H) (vi) Boc- Aze- NH- CH7- r( 5-( amino( trimetvlsilvletvlimino) metvl))- 2- pvrimidinvll Til en suspensjon av Boc-Aze-NH-CH2-((5-amidino)-2-pyrimidinyl) x HOAc (0,95 g, 2,41 mmol; se trinn (v) ovenfor) i 50 ml THF ble det tilsatt en løsning av Teoc-p-nitrofenylkarbonat (0,85 g, 3,0 mmol) og kaliumkarbonat (1,0 g, 7,2 mmol) i 10 ml vann. Blandingen ble omrørt i 24 timer, konsentrert og fordelt mellom vann og metylenklorid. Det organiske laget ble vasket to ganger med mettet vandig natriumbikarbonat, tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet ble flash kromatografert på silikagel med heptan:EtOAc(l:l). Utbytte: 1,04 g (90%).
<*>H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 9,16 (s, 2H), 4,80 (d, 2H), 4,73 (m, 1H), 4,26 (m, 2H), 4,0-3,8 (m, 2H), 2,6-2,4 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,12 (m, 2H), 0,07 (s, 9H)
(vii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHFz)-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- NH- CH7- r( 5-( amino( trimetvlsilvletvlimino) metvl))- 2- pvrimidinvll
Boc-Aze->M-CH2-[(5-(ammo(trimetylsilyletylimino)metyl))-2-pyrimidin^ (0,209 g, 0,437 mmol; se trinn (vi) ovenfor) ble oppløst i 25 ml EtOAc mettet med HCl(g) og fikk reagere i 15 min. Løsningsmidlet ble avdampet og resten ble oppløst i 4 ml DMF. Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?>)CH(OH)C(0)OH (0,100 g, 0,396 mmol; se Eksempel l(viii) ovenfor), PyBOP (0,231 g, 0,444 mmol) og diisopropyletylamin (0,208 g, 1,61 mmol) ble tilsatt og blandingen ble omrørt i 80 min. Reaksjonsblandingen ble hellet i 100 ml vann og ekstrahert tre ganger med EtOAc. De samlede organiske lag ble vasket med saltvann, tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet ble renset ved preparativ RPLC ved anvendelse av CH3CN:0,1M NH4OAC (1:1). Utbytte: 63 mg (26%).
'H NMR (400 MHz, CDCI3, blanding av rotamerer) 6 9,3 (bred, 1H), 9,03 (s, 2H, mindre rotamer), 9,00 (s, 2H, hoved rotamer), 8,25 (m, 1H, hoved rotamer), 7,9 (bred, 1H), 7,80 (m, 1H, mindre rotamer), 7,2-6,9 (m, 3H), 6,50 (t, 1H), 5,14 (s, 1H, mindre rotamer), 5,08 (m, 1H, mindre rotamer), 4,94 (s, 1H, hoved rotamer), 4,80 (m, 1H, hoved rotamer), 4,7-4,4 (m, 2H), 4,3-3,9 (m, 3H), 3,74 (m, 1H, hoved rotamer), 2,7-2,1 (m, 2H), 1,03 (m, 2H), 0,01 (s, 9H)
(viii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF7)- r/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- NH- CH2-(( 5- amidino)- 2- pvrimidinvl) x
TFA
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?;CH(OH)C(0)-Aze-NH-CH2-[(5-(amino(trimetyl-silyletylimino)metyl))-2-pyrimidinyl] (21 mg, 0,034 mmol; se trinn (vii) ovenfor) ble oppløst i 0,5 ml metylenklorid og avkjølt i et isbad. TFA (2 ml) ble tilsatt og blandingen ble omrørt i 60 min og deretter konsentrert. Produktet ble frysetørket fra vann og acetonitril. Utbytte: 20 mg (100%). Renhet: 100%.
'H NMR (400 MHz, CD3OD, blanding av rotamer signaler obscured by HDO signal) 8 9,08 (s, 2H), 7,4-7,1 (m, 3H), 6,88 (t, 1H, hoved rotamer), 6,85 (t, 1H, mindre rotamer), 5,30 (m, 1H, mindre rotamer), 5,22 (s, 1H, mindre rotamer), 5,20 (s, 1H, hoved rotamer), 4,73 (m, 1H, hoved rotamer), 4,34 (m, 1H, rotamer), 4,21 (m, 1H, rotamer), 4,15-3,95 (m, 2H, rotamerer), 2,73 (m, 1H, rotamer), 2,57 (m, 1H, rotamer), 2,45-2,25 (m, 2H, rotamerer)
<13>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, blanding av rotamerer) 8 173,0,172,6,172,1,171,0,163,4.
APCI-MS: (M + 1) = 469/471 m/z
Eksempel 37
Ph( 3- Cl¥5- OCHF?)-(/ g) CH( OmC( 0)- Aze- NH- CH7-(( 5- metoksvamidino)- 2- pvrimidinvn
(i) Ph( 3- Cn( 5- OCHF7)- r/ ?JCH( OH) C( 0)- Aze- NH- CH?- r( 5-( metoksvamino-( trimetvlsilvletylimino) metyl))- 2- pvrimidinvl1
En suspensjon av Ph(3-Cl)(5-OCHF2H/?)CH(OH)C(0)-Aze-NH-CH2-[(5-(amino(trimetylsilyletylimino)metyl))-2-pyrimidinyl] (40 mg, 0,065 mmol; se Eksempel 36(vii) ovenfor) og O-metylhydroksylamin (33 mg, 0,40 mmol) i 3 ml acetonitril ble oppvarmet ved 70°C i 3 timer. Blandingen ble fordelt mellom vann og EtOAc. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med EtOAc og den samlede organiske fase ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Utbytte: 33 mg (79%).
<*>H NMR (400 MHz, CDC13, blanding av rotamerer) 88,76 (s 2H, hoved rotamer), 8,70 (s, 2H, rotamer), 8,18 (m, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,4-6,9 (m, 4H), 6,50 (bt, 1H), 5,3-4,5 (m, 4H), 4,2-4,05 (m, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,68 (m, 1H), 2,8-2,2 (m, 2H), 2,1 (bred, 1H), 0,96 (m, 2H), 0,01 (s, 9H)
(ii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF?)- r/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- NH- CHz-(( 5- metoksv-amidino)- 2- pvrimidinyl)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?>)CH(OH)C(0)-Aze-NH-CH2-[(5-(metoksyamino-(trimetylsilyletylimino)metyl))-2-pyrimidinyl] (33 mg, 0,052 mmol; se trinn (i) ovenfor) ble oppløst i 0,5 ml metylenklorid og avkjølt i et isbad. TFA (2 ml) ble tilsatt og blandingen ble omrørt i 2 timer og deretter konsentrert. Produktet ble fryse tørket fra vann og acetonitril. Utbytte: 31 mg (81%). Renhet: 100%.
<*>H NMR (400 MHz, CD3OD, blanding av rotamer signaler obscured by HDO signal) 88,96 (s, 2H, rotamer), 8,94 (s, 2H, rotamer), 7,4-7,3 (m, 1H), 7,2-7,1 (m, 2H), 6,88 (t, 1H, rotamer), 6,85 (t, 1H, rotamer), 5,29 (m, 1H, rotamer), 5,24 (s, 1H, rotamer), 5,20 (s, 1H, rotamer), 4,75-4,55 (m, 2H), 4,33 (m, 1H, rotamer), 4,19 (m, 1H, rotamer), 4,15-3,95 (m, 2H, rotamerer), 3,88 (s, 3H, rotamer), 3,86 (s, 3H, rotamer), 2,72 (m, 1H, rotamer), 2,56 (m, 1H, rotamer), 2,45-2,25 (m, 2H, rotamerer)
<13>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, blanding av rotamerer) 8 172,8,172,6,172,1,171,8,167,8,167,7,155,1,152,3,152,1
APCI-MS: (M + 1) = 499/501 m/z
Eksempel 38
Ph( 3- Cl)( 5- OCHFz)-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( 3- F)
(i) 2- fluor- 4- vinylbenzonitril
En løsning av 4-brom-2-fluorbenzonitril (4,92 g, 0,0246 mol), vinyltributyltin (0,78 g, 0,246 mol) og tetrakistrifenylfosfin (0,67 g, 0,58 mmol) i 250 ml toluen ble tilbakeløpskokt under nitrogen natten over. Løsningsmidlet ble avdampet og residuet ble flash kromatografert på silikagel med heptamC^Ch (1:1) til ren CH2CI2. En fargeløs olje ble oppnådd som krystalliserte. Utbytte: 3,0 g (82%).
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8 7,56 (m, 1H), 7,3-7,2 (m, 2H), 6,69 (m, 1H), 5,89 (d, 1H), 5,51 (d, 1H)
(ii) 2- fluor- 4- hvdroksvmetylbenzonitril
Til en avkjølt løsning (-78°C) av 2-fluor-4-vinylbenzonitril (1,3 g, 8,8 mmol; se trinn (i) ovenfor) i 40 ml CH2CI2 og 5 ml metanol ble det boblet ozon (50 L/h, 29 g/m<3>) i 30 min. Argon ble deretter boblet gjennom for å fjerne overskudd av ozon. Natrium-borhydrid (0,67 g, 0,018 mol) ble tilsatt og kjølebadet ble fjernet. Blandingen ble omrørt og fikk reagere i 1 time. Blandingen ble inndampet og 2M HC1 ble tilsatt. Blandingen ble ekstrahert to ganger med dietyleter og den samlede eterfraksjon ble tørket (Na2SC«4) og inndampet. Råproduktet krystallisert. Utbytte: 1,1 g (81%).
<*>H NMR (300 MHz, CDC13) 8 7,59 (m, 1H), 7,3-7,2 (m, 2H), 4,79 (d, 2H), 2,26 (t, 1H)
(iii) 4- cvano- 3- fluorbenzyl metansulfonat
2-fluor-4-hydroksymetylbenzonitril (1,3 g, 8,6 mmol; se trinn (ii) ovenfor) ble oppløst i 50 ml CH2CI2 og avkjølt på et isbad. Trietylamin (0,87 g, 8,6 mmol) og metansulfonylklorid (0,99 g, 8,7 mmol) ble tilsatt. Etter omrøring i 1,5 timer ble reaksjonsblandingen vasket med IM HC1. Den organiske fasen ble tørket (Na2SC<4) og inndampet. Produktet kunne anvendes uten rensning. Utbytte av en fargeløs olje: 1,8 g (92%).
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 8 7,66 (m, 1H), 7,35-7,3 (m, 2H), 5,26 (s, 2H), 3,07 (s, 3H)
(iv) 4- Azidometvl- 2- lfuorbenzonitril
Til en is avkjølt løsning av 4-cyano-3-fluorbenzylmetansulfonat (1,8 g, 7,9 mmol; se trinn (iii) ovenfor) ble det tilsatt natriumazid (0,80 g, 0,012 mol). Blandingen ble omrørt natten over og deretter hellet i 200 ml vann og ekstrahert tre ganger med dietyleter. Den samlede eteriske fasen ble vasket fem ganger med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Rå fargeløs olje kunne anvendes uten ytterligere rensning. Utbytte: 1,2 g (87%).
<!>H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 7,64 (m, 1H), 7,25-7,18 (m, 2H), 4,47 (s, 2H)
(v) 4- aminometvl- 2- lfuorbenzonitril
Til en suspensjon av tinnkloriddihydrat (0,45 g, 2,4 mmol) i 20 ml acetonitril under omrøring ble det tilsatt tiofenol (1,07 g, 9,7 mmol) og trietylamin (0,726 g, 7,17 mmol). Deretter ble det tilsatt en løsning av 4-azidometyl-2-fluorbenzonitril (0,279 g, 1,58 mmol; se trinn (iv) ovenfor) i noen få mL av acetonitril. Etter 1,5 timer, ble azidet oppbrukt og løsningsmidlet ble avdampet. Residuet ble oppløst i metylenklorid og vasket tre ganger med 2M NaOH. Den organiske fasen ble ekstrahert to ganger med IM HC1. Den samlede sure vandige fasen ble vasket med metylenklorid og deretter gjort alkalisk med 2M NaOH og ekstrahert tre ganger med metylenklorid. Den organiske fasen ble tørket (Na2S04) og inndampet, hvilket gir 0,172 g (72%) av den ønskede sub-tittelforbindelsen som kunne anvendes uten rensning.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8 7,58 (m, 1H), 7,3-7,2 (m, 2H), 3,98 (s, 2H), 1,55-1,35 (bred, 2H)
(vi) Boc- Aze- NHCH7- Ph( 3- F. 4- CN)
Til en is avkjølt løsning av Boc-Aze-OH (0,194 g, 0,96 mmol) i 5 ml DMF ble det tilsatt TBTU (0,50 g, 9,6 mmol). Etter 30 min ble en ytterligere løsning, omfattende 4-aminometyl-2-fluorbenzonitril (0,17 g, 0,81 mmol; se trinn (v) ovenfor) og diiisopropyletylamin (0,326 g, 2,53 mmol) i 7 ml DMF tilsatt. Den resulterende løsning ble omrørt natten over ved romtemperatur. Løsningsmidlet ble avdampet og produktet ble renset ved preparativ RPLC ved anvendelse av CH3CN:0,1M NH4OAC (50:50). Frysetørking ga 0,237 g (74%) av den ønskede sub-tittelforbindelsen.
'H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,70 (m, 1H), 7,35-7,25 (m, 2H), 4,65-4,35 (m, 3H), 4,0-3,85 (m, 2H), 2,51 (m, 1H), 2,19 (m, 1H), 1,40 (s, 9H) (vii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF7)- r/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- NHCHz- Ph( 3- F. 4- CN) Boc-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN) (0,118 g, 0,354 mmol; fra trinn (vi) ovenfor) ble oppløst i 30 ml EtOAc mettet med HCl(g). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 20 min og inndampet. Det resulterende dihydroklorid og HATU (0,152 g, 0,400 mmol) ble oppløst i 5 ml DMF. Løsningen ble satt til en is avkjølt løsning av Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?;CH(OH)C(0)OH (0,101 g, 0,400 mmol; se Eksempel l(viii) ovenfor) i 5 ml DMF. Reaksjonsblandingen ble omrørt natten over ved omgivelsestemperatur. Løsningsmidlet ble avdampet og produktet ble renset ved preparativ RPLC med CH3CN:0,1M NH4OAC (50:50). Frysetørking ga 0,130 g (77%) av den ønskede sub-tittelforbindelsen.
'H NMR (500 MHz, CD3OD blanding av rotamerer) 8 7,7-7,6 (m, 1H), 7,35-7,1 (m, 5H), 6,88 (t, 1H, rotamer), 6,86 (t, 1H, rotamer), 5,25-5,1 (m, 1H pluss mindre rotamer fra det
følgende proton), 4,80 (m, 1H, hoved rotamer), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,36 (m, 1H, hoved rotamer), 4,18 (m, 1H, hoved rotamer), 4,07 (m, 1H, mindre rotamer), 3,98 (m, 1H, mindre rotamer), 2,70 (m, 1H, mindre rotamer), 2,53 (m, 1H, hoved rotamer), 2,29 (m, 1H, hoved rotamer), 2,16 (m, 1H, mindre rotamer)
(viii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF7)- r/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( 3- F)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-r/?>)CH(OH)C(0)-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN) (0,130 g, 0,278 mmol; se trinn (vii) ovenfor) ble oppløst i 80 ml etanol mettet med HCl(g). Blandingen fikk reagere ved romtemperatur natten over. Løsningsmidlet ble avdampet og residuet ble gjenoppløst i 100 ml etanol mettet med NH3(g). Reaksjonen fikk forløpe langsomt ved romtemperatur i to dager. Temperaturen ble hevet til 50°C og reaksjonen fortsatt i ytterligere 3 dager. Utgangsmaterialet ble oppbrukt og løsningsmidlet ble avdampet. Produktet ble renset ved preparativ RPLC og frysetørket, hvilket gir 17 mg (13%) av tittelforbindelsen som dens HOAc salt.
<*>H NMR (600 MHz, CD3OD blanding av rotamerer) 8 7,65-7,6 (m, 1H), 7,4-7,3 (m, 3H), 7,25-7,1 (m, 2H), 7,15-6,7 (m, 1H), 5,25-5,1 (m, 1H pluss mindre rotamer av de følgende proton), 4,8 (m, 1H, hoved rotamer delvis hidden by CD3OH), 4,6-3,95 (m, 4H), 2,69 (m, 1H, mindre rotamer), 2,56 (m, 1H, hoved rotamer), 2,28 (m, 1H, hoved rotamer), 2,14 (m, 1H, mindre rotamer), 1,90 (s, 3H)
<l3>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, blanding av rotamerer) 8 180,6,173,4,173,1,172,9,164,5,162,3,159,8
APCI-MS: (M + 1) = 485/487 m/z
Eksempel 39
Ph( 3- Cl)( 5- OCHF7)-(/ ?) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( 2. 6- diF)
(i) 2. 6- difluor- 4r( metvlsulfinvl)( metvltio) metyllbenzonitril
(Metylsulfinyl)(metyltio)metan (7,26 g, 0,0584 mol) ble oppløst i 100 ml tørr THF under argon og ble avkjølt til -78°C. Butyllitium i heksan (16 ml 1,6M, 0,0256 mol) ble tilsatt dråpevis med omrøring. Blandingen ble omrørt i 15 min. I mens ble, en løsning av 3,4,5-trifluorbenzonitril (4,0 g, 0,025 mmol) i 100 ml tørr THF avkjølt til -78°C under argon og førstnevnte løsning ble tilsatt gjennom en kanyle til den sistnevnte løsning over en periode på 35 min. Etter 30 min, ble kjølebadet fjernet og når reaksjonen hadde nådd romtemperatur ble den hellet i 400 ml vann. THF ble inndampet og det gjenværende vandige lag ble ekstrahert tre ganger med dietyleter. Den samlede eter fasen ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Utbytte: 2,0 g (30%).
<!>H NMR (500 MHz, CDC13) 8 7,4-7,25 (m, 2H), 5,01 (s, 1H, diasteromer), 4,91 (s, 1H, diasteromer), 2,88 (s, 3H, diasteromer), 2,52 (s, 3H, diasteromer), 2,49 (s, 3H, diasteromer), 2,34 (s, 3H, diasteromer), 1,72 (bred, 1H)
(ii) 2. 6- difluor- 4- formvlbenzonitril
2,6-difluor-4[(metylsulfinyl)(metyltio)metyl]benzonitril (2,17 g, 8,32 mmol; se trinn (i) ovenfor) ble oppløst i 90 ml THF og 3,5 ml konsentrert svovelsyre ble tilsatt. Blandingen fikk stå ved romtemperatur i 3 dager og deretter hellet i 450 ml vann. Ekstraksjon tre ganger med EtOAc og den samlede eteriske fase ble vasket to ganger med vandig natriumbikarbonat og med saltvann, tørket (Na2SC<4) og inndampet. Utbytte: 1,36 g (98%). Stillingen til formylgruppen ble etablert ved CNMR. Signalet fra fluorerte karbonatomer ved 162,7 ppm viste forventet koblingsmønster med to koblingskonstanter i
størrelse 260 Hz og 6,3 Hz henholdsvis svarende til en ipso og en meta kobling fra fluoratomer.
<!>H NMR (400 MHz, CDC13) 8 10,35 (s, 1H), 7,33 (m, 2H)
(iii) 2, 6- difluor- 4- hydroksymetylbenzonitril
2,6-difluor-4-formylbenzonitril (1,36 g, 8,13 mmol; se trinn (ii) ovenfor) ble oppløst i 25 ml metanol og avkjølt på et isbad. Natrium-borhydrid (0,307 g, 8,12 mmol) ble tilsatt i porsjoner med omrøring og reaksjonen ble latt stå i 65 min. Løsningsmidlet ble avdampet og residuet ble fordelt mellom dietyleter og vandig natriumbikarbonat. Det eteriske lag ble vasket med mer vandig natriumbikarbonat og saltvann, tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet krystallisert fort og kunne anvendes uten ytterligere rensning. Utbytte: 1,24 g (90%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8 7,24 (m, 2H), 4,81 (s, 2H), 2,10 (bred, 1H)
(iv) 4- cvano- 2. 6- difluorbenzyl metansulfonat
Til en is avkjølt løsning av 2,6-difluor-4-hydroksymetylbenzonitril (1,24 g, 7,32 mmol; se trinn (iii) ovenfor) og metansulfonylklorid (0,93 g, 8,1 mmol) i 60 ml metylenklorid ble det tilsatt trietylamin (0,81 g, 8,1 mmol) med omrøring. Etter 3 timer ved 0°C, ble blandingen vasket to ganger med IM HC1 og én gang med vann, tørket (Na2SC«4) og inndampet. Produktet kunne anvendes uten ytterligere rensning. Utbytte: 1,61 g (89%).
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8 7,29 (m, 2H), 5,33 (s, 2H), 3,07 (s, 3H)
(v) 4- Azidometyl- 2. 6- difluorbenzonitril
En blanding av 4-cyano-2,6-difluorbenzyl metansulfonat (1,61 g, 6,51 mmol; se trinn (iv) ovenfor) og natriumazid (0,72 g, 0,0111 mol) i 10 ml vann og 20 ml DMF ble omrørt ved romtemperatur natten over. Det resulterende ble deretter hellet i 200 ml vann og ekstrahert tre ganger med dietyleter. Den samlede eteriske fase ble vasket fem ganger med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. En liten prøve ble inndampet for NMR formål og produktet krystallisert. Resten ble inndampet forsiktig men ikke inntil full tørrhet. Utbytte (teoretisk 1,26 g) ble antatt å være nesten kvantitativt basert på NMR og analytisk HPLC.
i
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8 7,29 (m, 2H), 4,46 (s, 2H)
(vi) 4- aminometvl- 2. 6- difluorbenzonitril
Denne reaksjonen ble utført i henhold til metoden beskrevet i J. Chem. Res. ( M) (1992) 3128. Til en suspensjon av 520 mg 10% Pd/C (50% fuktighet) i 20 ml vann ble tilsatt en løsning av natrium-borhydrid (0,834 g, 0,0221 mol) i 20 ml vann. Noe gassutvikling resulterte. 4-Azidometyl-2,6-difluorbenzonitril (1,26 g, 6,49 mmol; se trinn (v) ovenfor) ble oppløst i 50 ml THF og satt til den vandige blandingen på et isbad over 15 min. Blandingen ble omrørt i 4 timer, hvoretter 20 ml 2M HC1 ble tilsatt og blandingen ble filtrert gjennom Celite. Celite ble skyllet med mer vann og den samlede vandige fase ble vasket med EtOAc og deretter gjort alkalisk med 2M NaOH. Eks tr aksjon tre ganger med metylenklorid fulgte og den samlede organiske fase ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Utbytte: 0,87 g (80%).
'H NMR (400 MHz, CDCI3) 8 7,20 (m, 2H), 3,96 (s, 2H), 1,51 (bred, 2H)
(vii) 2. 6- difluor- 4- terf- butoksvkarbonvlaminometvlbenzonitril
En løsning av 4-aminometyl-2,6-difluorbenzonitril (0,876 g, 5,21 mmol; se trinn (vi) ovenfor) ble oppløst i 50 ml THF og di-te/t-butyl dikarbonat (1,14 g, 5,22 mmol) i 10 ml THF ble tilsatt. Blandingen ble omrørt i 3,5 timer. THF ble inndampet og residuet ble fordelt mellom vann og EtOAc. Det organiske laget ble vasket tre ganger med 0,5 M HC1 og vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Produktet kunne anvendes uten ytterligere rensning. Utbytte: 1,38 g (99%).
'H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 7,21 (m,2H), 4,95 (bred, 1H), 4,43 (bred, 2H), 1,52 (s, 9H)
(viii) Boe- Pab( 2. 6- diF)( OH)
En blanding av 2,6-difluor-4-ferf-butoksykarbonylaminometylbenzonitril (1,38 g, 5,16 mmol; se trinn (vii) ovenfor), hydroksylamin-hydroklorid (1,08 g, 0,0155 mol) og trietylamin (1,57 g, 0,0155 mol) i 20 ml etanol ble omrørt ved romtemperatur i 36 timer. Løsningsmidlet ble avdampet og residuet ble fordelt mellom vann og metylenklorid. Det organiske laget ble vasket med vann, tørket (Na2SC«4) og inndampet. Produktet kunne anvendes uten ytterligere rensning. Utbytte: 1,43 g (92%).
'H NMR (500 MHz, CD3OD) 8 7,14 (m, 2H), 4,97 (bred, 1H), 4,84 (bred, 2H), 4,40 (bred, 2H), 1,43 (s, 9H)
(ix) Boc- Pab( 2. 6- diF) x HOAc
Denne reaksjonen ble utført i henhold til metoden beskrevet av Judkins et al, Synth. Comm.
(i998) 4351. Boc-Pab(2,6-diF)(OH) (1,32 g, 4,37 mmol; se trinn (viii) ovenfor), eddiksyreanhydrid (0,477 g, 4,68 mmol) og 442 mg 10% Pd/C (50% fuktighet) i 100 ml eddiksyre ble hydrogenen ved 5 atm trykk i 3,5 timer. Blandingen ble filtrert gjennom Celite, skyllet med etanol og inndampet. Residuet ble frysetørket fra acetonitril og vann og noen få dråper etanol. Sub-tittel produktet kunne anvendes uten ytterligere rensning. Utbytte: 0,1,49 g (99%).
'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 7,45 (m, 2H), 4,34 (s, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,40 (s, 9H)
(x) Boc- Pab( 2. 6- diF)( Teoc)
Til en løsning av Boc-Pab(2,6-diF) x HOAc (1,56 g, 5,49 mmol; se trinn (ix) ovenfor) i 100 ml THF og 1 ml vann ble det tilsatt 2-(trimetylsilyl)etyl p-nitrofenylkarbonat (1,67 g, 5,89 mmol). En løsning av kaliumkarbonat (1,57 g, 0,0114 mol) i 20 ml vann ble tilsatt dråpevis over 5 min. Blandingen ble omrørt natten over. THF ble inndampet og residuet ble fordelt mellom vann og metylenklorid. Det vandige laget ble ekstrahert med metylenklorid og den samlede organiske fase ble vasket to ganger med vandig natriumbikarbonat, tørket (Na2S04) og inndampet. Flash kromatografi på silikagel med heptan/EtOAc = 2/1 ga 1,71 g (73%) av ren forbindelse.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8 7,43 (m, 2H), 4,97 (bred, 1H), 4,41 (bred, 2H), 4,24 (m, 2H), 1,41 (s, 9H), 1,11 (m, 2H), 0,06 (s, 9H)
(xi) Boc- Aze- Pab( 2. 6- diF)( Teoc)
Boc-Pab(2,6-diF)(Teoc) (1,009 g, 2,35 mmol; se trinn (x) ovenfor) ble oppløst i 50 ml EtOAc mettet med HCl(g). Blandingen ble latt stå i 10 min., inndampet og oppløst i 18 ml DMF og deretter avkjølt på et isbad. Boc-Aze-OH (0,450 g, 2,24 mmol), PyBOP (1,24 g, 2,35 mmol) og til slutt ble diisopropyletylamin (1,158 g, 8,96 mmol) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 2 timer og deretter hellet i 350 ml vann og ekstrahert tre ganger med EtOAc. Den samlede organiske fase ble vasket med saltvann, tørket (Na2S04) og inndampet. Flash kromatografi på silikagel med heptan:EtOAc (1:3) ga 1,097 g (96%) av den ønskede forbindelse.
<*>H NMR (500 MHz, CDC13) 8 7,46 (m, 2H), 4,65-4,5 (m, 3H), 4,23 (m, 2H), 3,87 (m, 1H), 3,74 (m, 1H), 2,45-2,3 (m, 2H), 1,40 (s, 9H), 1,10 (m, 2H), 0,05 (s, 9H)
(xii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF2)- r/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( 2. 6- diF)( Teoc)
Boc-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc) (0,256 g, 0,500 mmol; se trinn (xi) ovenfor) ble oppløst i 20 ml EtOAc mettet med HCl(g). Blandingen ble latt stå i 10 min. og inndampet og oppløst i 5 ml DMF. Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?;CH(OH)C(0)OH (0,120 g, 0,475 mmol; se Eksempel l(viii) ovenfor), PyBOP (0,263 g, 0,498 mmol) og til slutt diisopropyletylamin (0,245 g, 1,89 mmol ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 2 timer og deretter hellet i 350 ml vann og ekstrahert tre ganger med EtOAc. Den samlede organiske fase ble vasket med saltvann, tørket (Na2S04) og inndampet. Flash kromatografi på silikagel med EtOAc ga 0,184 g (60%) av den ønskede sub-tittelforbindelse.
<*>H NMR (400 MHz, CD3OD, blanding av rotamerer) 8 7,55-7,45 (m, 2H), 7,32 (m, 1H, hoved rotamer), 7,27 (m, 1H, mindre rotamer), 7,2-7,1 (m, 2H), 6,90 (t, 1H, hoved rotamer), 6,86 (t, 1H, mindre rotamer), 5,15 (s, lH,hoved rotamer), 5,12 (m, 1H, mindre rotamer), 5,06 (s, 1H, mindre rotamer), 4,72 (m, 1H, hoved rotamer), 4,6-4,45 (m, 2H), 4,30 (m, 1H, hoved rotamer), 4,24 (m, 2H), 4,13 (m, 1H, hoved rotamer), 4,04 (m, 1H, mindre rotamer), 3,95 (m, 1H, mindre rotamer), 2,62 (m, 1H, mindre rotamer), 2,48 (m, 1H, hoved rotamer), 2,22 (m, 1H, hoved rotamer), 2,10 (m, 1H, mindre rotamer), 1,07 (m, 2H), 0,07 (m, 9H)
(xiii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF2)-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( 2. 6- diF)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?>)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc) (81 mg, 0,127 mmol; se trinn (xii) ovenfor) ble oppløst i 0,5 ml metylenklorid og avkjølt på et isbad. TFA (3 ml) ble tilsatt og reaksjonen ble latt stå i 75 min. TFA ble inndampet og residuet ble fryse tørket fra vann og acetonitril. Råproduktet ble renset ved preparativ RPLC med CH3CN:0,1M NH4OAC (35:65) for å produsere 39 mg (55%) av tittelforbindelsen som dens HOAc salt, renhet: 99%.
'H NMR (400 MHz, CD3OD blanding av rotamerer) 8 7,5-7,4 (m, 2H), 7,32 (m, 1H, hoved rotamer), 7,28 (m, 1H, mindre rotamer), 7,2-7,1 (m, 3H) 6,90 (t, 1H, hoved rotamer), 6,86 (t, mindre rotamer), 5,15 (s, 1H, hoved rotamer), 5,14 (m, 1H, mindre rotamer), 5,07 (s,
1H, mindre rotamer), 4,72 (m, 1H, hoved rotamer), 4,65-4,45 (m, 2H), 4,30 (m, 1H, hoved rotamer), 4,16 (m, 1H, hoved rotamer), 4,03 (m, 1H, mindre rotamer), 3,95 (m, 1H, mindre rotamer), 2,63 (m, 1H, mindre rotamer), 2,48 (m, 1H, hoved rotamer), 2,21 (m, 1H, hoved rotamer), 2,07 (m, 1H, mindre rotamer), 1,89 (s, 3H)
<13>C-NMR (75 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, blanding av rotamerer) 8 171,9,171,2,165,0,162,8,160,4
APCI-MS: (M + 1) = 503/505 m/z.
Eksempel 40
Ph( 3- Cl)( 5- OCHF9)-(/ ?) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( 2. 6- diF)( OMe)
(i) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF2)-(/ ?JCH( OH) C( 0)- Aze- Pab( 2. 6- diF)( OMe. Teoc)
En blanding av Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?>)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc) (64 mg, 0,099 mmol; se Eksempel 39(xii) ovenfor) og O-metyl hydroksylamin-hydroklorid (50 mg, 0,60 mmol) i 4 ml acetonitril ble oppvarmet ved 70°C i 3 timer. Løsningsmidlet ble avdampet og residuet ble fordelt mellom vann og EtOAc. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med EtOAc og den samlede organiske fase ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Produktet kunne anvendes uten ytterligere rensning. Utbytte: 58 mg (87%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8 7,90 (bt, 1H), 7,46 (m, 1H), 7,25-6,95 (m, 5H), 6,51, t, 1H), 4,88 (s, 1H), 4,83 (m, 1H), 4,6-4,5 (m, 2H), 4,4-3,9 (m, 4H), 3,95 (s, 3H), 3,63 (m, 1H), 2,67 (m, 1H), 2,38 (m, 1H), 1,87 (bred, 1H), 0,98 (m, 2H), 0,01, s, 9H) (ii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF7)-( Æ) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( 2. 6- diF)( OMe) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?;CH(OH)C(0)-Aze-Pab(2,6-diF)(OMe,Teoc) (58 mg, 0,086 mmol; , se trinn (i) ovenfor) ble oppløst i 3 ml TFA, avkjølt på et isbad og fikk reagere i 2 timer. TFA ble inndampet og residuet oppløst i EtOAc. Det organiske laget ble vasket to ganger med vandig natriumkarbonat og vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Residuet ble frysetørket fra vann og acetonitril, hvilket gir 42 mg (92%) av tittelforbindelsen. Renhet: 94%.
'H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 7,95 (bt, 1H), 7,2-7,1 (m, 4H), 6,99 (m, 1H), 6,52 (t, 1H), 4,88 (s, 1H), 4,85-4,75 (m, 3H), 4,6-4,45 (m, 2H), 4,29 (bred, 1H), 4,09 (m, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,69 (m, 1H), 2,64 (m, 1H), 2,38 (m, 1H), 1,85 (bred, 1H)
<13>C-NMR (100 MHz; CDCI3): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer) 8 172,1, 169,8, 151,9
APCI-MS: (M + 1) = 533/535 m/z
Eksempel 41
Ph( 3- Cl)( 5- OCHF2)-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( 2. 5- diF)
(i) 2. 5- difluor- 4r( metvlsulfinvl)( metyltio) metvllbenzonitril
(Metylsulfinyl)(metyltio)metan (3,16 g, 0,0255 mol) ble oppløst i 50 ml tørr THF under argon og deretter avkjølt til -78°C. Butyllitium i heksan (16 ml 1,6M, 0,0256 mol) ble tilsatt dråpevis med omrøring. Blandingen ble omrørt i 15 min. I mens ble en løsning av 2,4,5-trifluorbenzonitril (2,0 g; 0,013 mol) i 50 ml tørr THF avkjølt til -78°C under argon
og førstnevnte løsning ble tilsatt gjennom en kanyle til den sistnevnte løsning over en periode på 3-5 min. Etter 30 min, ble kjølebadet fjernet og når reaksjonen hadde nådd romtemperatur ble den hellet i 200 ml vann. THF ble inndampet og det gjenværende vandige lag ble ekstrahert tre ganger med dietyleter. Den samlede eter fase ble vasket med vann, tørket (Na2SC«4) og inndampet. Råproduktet begynte å krystallisere og kunne anvendes som sådanne i neste trinn. Utbytte: 2,8 g (84%).
'H NMR (500 MHz, CDC13) 5 7,51-7,44 (m, 2H, hoved diastereomer), 7,39 (dd, 1H, mindre diastereomer), 5,00 (s, 1H, mindre diastereomer), 4,92 (s, 1H, hoved diastereomer), 2,59 (s, 3H, mindre diastereomer), 2,56 (s, 1H, hoved diastereomer), 2,46 (s, 1H, mindre diastereomer), 2,40 (s, 1H, hoved diastereomer)
(ii) 2. 5- difluor- 4- ofrmvlbenzonitril
2,5-difluor-4[(metylsulfinyl)(metyltio)metyl]benzonitril (2,8 g, 0,0107 mol; se trinn (i) ovenfor) ble oppløst i 100 ml THF og 6,5 g konsentrert svovelsyre ble tilsatt. Blandingen fikk stå ved romtemperatur i 6 dager og deretter hellet i 500 ml vann. Ekstraksjon tre ganger med dietyleter fulgte og den samlede eteriske fase ble vasket mange ganger med vann, tørket (Na2SC«4) og inndampet. Råproduktet ble flash kromatografert på silikagel ved anvendelse av heptan:EtOAc (8:2). Utbytte: 1,2 g (67%). Stillingen til formylgruppen ble etablert ved anvendelse av C NMR. Karbonsignaler fra fluorerte karbonatomer ved henholdsvis 160,1 og 158,4 var dubletter og ikke kvartetter, som de ville vært hvis formylgruppe hadde vært i 2-stillingen.
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8 10,36 (d, 1H), 7,72 (dd, 1H), 7,54 (dd, 1H)
(iii) 2. 5- difluor- 4- hvdroksvmetvlbenzonitril
2,5-difluor-4-formylbenzonitril (3,60 g, 0,0215 mol; se trinn (ii) ovenfor) ble oppløst i 50 ml metanol og avkjølt på et isbad. Natrium-borhydrid (0,815 g, 0,0215 mol) ble tilsatt i porsjoner med omrøring og reaksjonen ble latt stå i 45 min. Vann (300 ml) ble tilsatt og deretter ble forsiktig 2M HC1 tilsatt inntil en sur pH ble oppnådd. Blandingen ble ekstrahert tre ganger med dietyleter og den samlede eteriske fase ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Råproduktet krystallisert fort og kunne anvendes uten ytterligere rensning. Utbytte: 3,1 g (85%).
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8 7,45 (dd, 1H), 7,30 (dd, 1H), 4,85 (s, 2H), 2,10 (bred, 1H)
(iv) 4- cvano- 2. 5- difluorbenzyl metansulfonat
Til en is avkjølt løsning av 2,5-difluor-4-hydroksymetylbenzonitril (3,10 g, 0,0183 mol; se trinn (iii) ovenfor) og metansulfonylklorid (2,21 g, 0,0192 mol) i 60 ml metylenklorid ble det tilsatt trietylamin (1,95 g, 0,0192 mol) med omrøring. Etter 1,5 timer ved 0°C ble blandingen vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Produktet kunne anvendes uten ytterligere rensning. Utbytte: 4,5 g (99%).
<!>H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 7,45-7,35 (m, 2H), 5,32 (s, 2H), 3,13 (s, 3H)
(v) 4- Azidometvl- 2. 5- difluorbenzonitril
En blanding av 4-cyano-2,5-difluorbenzylmetansulfonat (4,5 g, 0,0182 mol; se trinn (iv) ovenfor) og natriumazid (2,0 g, 0,031 mol) i 20 ml vann og 40 ml DMF ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer. Den ble deretter hellet i 300 ml vann og ekstrahert tre ganger med dietyleter. Den samlede eteriske fase ble vasket mange ganger med vann, tørket (Na2SC«4) og inndampet. En liten prøve ble inndampet for NMR formål og produktet krystallisert. Resten ble inndampet forsiktig men ikke til fullstendig tørrhet. Utbytte (teoretisk 3,5 g) er antatt å være nesten kvantitativt basert på NMR og analytisk HPLC.
'H NMR (500 MHz, CDCI3) 8 ,38 (dd, 1H), 7,32 (dd, 1H), 4,54 (s, 2H)
(vi) 4- aminometvl- 2. 5- difluorbenzonitril
Denne reaksjonen ble utført i henhold til metoden beskrevet i J. Chem. Res. ( M) (1992) 3128. Til en suspensjon av 300 mg 10% Pd/C (50% fuktighet) i 20 ml vann ble det tilsatt en løsning av natrium-borhydrid (0,779 g, 0,0206 mol) i 20 ml vann. Noe gassutvikling resulterte. 4-Azidometyl-2,5-difluorbenzonitril (1,00 g, 5,15 mmol; fra trinn (v) ovenfor) ble oppløst i 60 ml THF og satt til den vandige blandingen på et isbad. Blandingen ble omrørt i 1,5 timer hvoretter 10 ml 2M HC1 ble tilsatt og blandingen ble filtrert gjennom Celite. Celite ble skyllet med mer vann og den samlede vandige fase ble vasket med EtOAc og deretter gjort alkalisk med 2M NaOH. Ekstraksjon tre ganger med metylenklorid fulgte og den samlede organiske fase ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Utbytte: 0,47 g (54%).
'H NMR (300 MHz, CDC13) 6 7,39 (dd, 1H), 7,29 (dd, 1H), 3,99 (s, 2H), 1,45 (bred, 2H)
(vii) 2. 5- difluor- 4- fe^ butoksvkarbonvlaminometvlbenzonitril
En løsning av 4-aminometyl-2,5-difluorbenzonitril (0,46 g, 2,7 mmol; se trinn (vi) ovenfor) og di-tørf-butyl dikarbonat (0,60 g , 2,7 mmol) i 10 ml THF ble omrørt natten over. THF ble inndampet og residuet ble fordelt mellom vann og EtOAc. Det organiske laget ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Produktet kunne anvendes uten ytterligere rensning. Utbytte: 0,71 g (97%).
'H NMR (300 MHz, CDC13) 8 7,35-7,2 (m, 2H), 5,11 (bred triplett, 1H), 4,38 (d, 2H), 1,45
(s, 9H)
(viii) Boc- Pab( 2. 5- diF)( OH)
En blanding av 2,5-difluor-4-terr-butoksykarbonylaminometylbenzonitril (0,70 g, 2,6 mmol; se trinn (vii) ovenfor), hydroksylamin-hydroklorid (0,54 g, 7,8 mmol) og trietylamin (0,79 g, 7,8 mmol) i 10 ml etanol ble omrørt ved romtemperatur i 6 dager. Den ble deretter fordelt mellom vann og metylenklorid. Det vandige laget ble ekstrahert med metylenklorid og den samlede organiske fase ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Produktet kunne anvendes uten ytterligere rensning. Utbytte: 0,72 g (92%).
<*>H NMR (500 MHz, CD3OD) 8 7,27 (dd, 1H), 7,12 (dd, 1H), 4,29 (s, 2H), 1,47 (s, 9H)
(ix) Boc- Pab( 2. 5- diF) x HOAc
Denne reaksjonen ble utført i henhold til metoden beskrevet av Judkins et al, Synth. Comm.
(1998) 4351. Boc-Pab(2,5-diF)(OH) (0,70 g, 2,3 mmol; se trinn (viii) ovenfor), eddiksyreanhydrid (0,25 g, 2,4 mmol) og 230 mg 10% Pd/C (50% fuktighet) i 70 ml eddiksyre ble hydrogenen ved 5 atm trykk i 2,5 timer. Blandingen ble filtrert gjennom Celite og inndampet. Residuet ble fryse tørket fra acetonitril og vann. Produktet kunne anvendes uten ytterligere rensning i neste trinn. Utbytte: 0,80 g (100%).
'H NMR (500 MHz, CD3OD) 8 7,49 (dd, 1H), 7,31 (dd, 1H), 4,33 (s, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (s, 9H)
(x) Boc- Pab( 2. 5- diF)( Teoc)
Til en suspensjon av Boc-Pab(2,5-diF) x HOAc (0,80 g, 2,3 mmol; se trinn (ix) ovenfor) i 50 ml THF ble det tilsatt 2-(trimetylsilyl)etyl p-nitrofenylkarbonat (0,85 g, 3,0 mmol). En løsning av kaliumkarbonat (0,80 g, 5,8 mmol) i 10 ml vann ble tilsatt dråpevis. Blandingen ble omrørt natten over. Overskudd av Teoc reagens ble ødelagt ved tilsetning av glycin (0,100 g) og kaliumkarbonat (0,75 g) til løsningen, det ble latt reagere i ytterligere 2 timer. THF ble inndampet og residuet ble fordelt mellom vann og metylenklorid. Det vandige laget ble ekstrahert med metylenklorid og den samlede organiske fase ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Flash kromatografi på silikagel med heptan:EtOAc (2:1) ga 0,72 g (72%) av ren forbindelse.
<*>H NMR (400 MHz, CDC13) 8 8,00 (dd, 1H), 7,15 (dd, 1H), 4,98 (bred, 1H), 4,36 (bd, 2H), 4,24 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,12 (m, 2H), 0,07 (s, 9H)
(xi) H- Pab( 2. 5- diF)( Teoc) x 2 HC1
Boc-Pab(2,5-diF)(Teoc) (0,38 g, 0,88 mmol; se trinn (x) ovenfor) ble oppløst i 50 ml EtOAc mettet med HCl(g). Blandingen ble latt stå i 30 min og inndampet.
•h NMR (500 MHz, CD3OD) 8 7,75-7,6 (m, 2H), 4,46 (m, 2H), 4,3 (s, 2H), 1,15 (m, 2H), 0,07 (s, 9H)
(xii) Boc- Aze- Pab( 2. 5- diF)( Teoc)
Til en omrørt løsning av Boc-Aze-OH (0,189 g, 0,94 mmol), H-Pab(2,5-diF)(Teoc) x 2 HC1 (0,36 g, 0,89 mmol; se trinn (xi) ovenfor) og PyBOP (0,54 g, 1,03 mmol) i 5 ml DMF ble tilsatt diisopropyletylamin (0,49 g, 3,8 mmol) og blandingen fikk reagere natten over. Det resulterende ble deretter hellet i vandig natriumbikarbonat og ekstrahert tre ganger med EtOAc. Den samlede organiske fase ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Flash kromatografi på silikagel med heptan:EtOAc (3:7) ga en tilstrekkelig ren forbindelse. Utbytte: 0,25 g (48%).
'H NMR (500 MHz, CDC13) 8 7,98 (dd, 1H), 7,13 (dd, 1H), 4,69 (m, 1H), 4,53 (m, 2H), 4,22 (m, 2H), 3,92 (m, 1H), 3,79 (m, 1H), 2,55-2,35 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,11 (m, 2H), 0,06 (s, 9H)
(xiii) H- Aze- Pab( 2. 5- diF)( Teoc) x 2 HC1
Boc-Aze-Pab(2,5-diF)(Teoc) (0,25 g, 0,49 mmol; se trinn (xii) ovenfor) ble oppløst i 50 ml EtOAc mettet med HCl(g). Blandingen ble latt stå i 30 min. og inndampet. Produktet ble anvendt i neste trinn uten ytterligere rensning. Utbytte: 0,23 g (97%).
'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 7,59 (dd, 1H), 7,47 (dd, 1H), 5,14 (m, 1H), 4,54 (m, 2H), 4,48 (m,2H), 4,15 (m, 1H), 3,96 (m, 1H), 2,87 (m, 1H), 2,56 (m, 1H), 1,17 (m, 2H), 0,05
(s, 9H)
(xiv) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF7)-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( 2. 5- diF)( Teoc)
Til en løsning av Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?;CH(OH)C(0)OH (0,12 g, 0,47 mmol; se Eksempel l(viii) ovenfor), H-Aze-Pab(2,5-diF)(Teoc) x 2 HC1 (0,23 g, 0,47 mmol; se trinn (xiii) ovenfor) og PyBOP (0,27 g, 0,52 mmol) i 10 ml DMF ble det tilsatt diisopropyletylamin (0,245 g, 1,90 mmol) og blandingen ble omrørt natten over. Det resulterende ble hellet i vann og ekstrahert tre ganger med EtOAc. Den samlede organiske fase ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Flash kromatografi på silikagel med EtOAc ga 100 mg av en ren fraksjon og 30 mg av en 90% ren fraksjon. Total utbytte: 0,13 g (41%).
'H NMR (400 MHz, CDC13) 8 9,80 (bred, 1H), 8,05 (bt, 1H), 7,94 (dd, 1H),7,20 (m, 1H), 7,2-7,1 (m, 2H), 7,02 (m, 1H), 6,54 (t, 1H), 4,93 (s, 1H), 4,91 (m, 1H), 4,51 (m, 2H), 4,28 (bred, 1H), 4,23 (m, 2H), 4,13 (m, 1H), 3,74 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,43 (m, 1H), 1,73 (bred, 1H), 1,11 (m, 2H), 1,11 (s, 9H)
(xv) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF?)-( fl) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( 2. 5- diF)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?>)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(2,5-diF)(Teoc) (60 mg (0,093 mmol) ren fraksjon fra trinn (xiv) ovenfor) ble oppløst i 3 ml TFA og latt stå ved romtemperatur i 1 time. TFA ble inndampet og residuet ble frysetørket fra vann og acetonitril for å produsere 55 mg (96%) av tittelforbindelsen som dens TFA salt, renhet: >99%.
'H NMR (500 MHz, CD3OD blanding av rotamerer) 8 7,55-7,3 (m, 3H), 7,2-7,1 (m, 2H), 6,88 (t, 1H, hoved rotamer), 6,86 (t, 1H, mindre rotamer), 5,22 (m, 1H, mindre rotamer),
5,20 (s, 1H, hoved rotamer), 5,13 (s, 1H, mindre rotamer), 4,80 (m, 1H, hoved rotamer), 4,6-4,45 (m, 2H), 4,36 (m, 1H, hoved rotamer), 4,19 (m, 1H, hoved rotamer), 4,07 (m, 1H, mindre rotamer), 3,98 (m, 1H, mindre rotamer), 2,70 (m, 1H, mindre rotamer), 2,54 (m, 1H, hoved rotamer), 2,28 (m, 1H, hoved rotamer), 2,14 (m, 1H, mindre rotamer) <13>C-NMR (75 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, blanding av rotamerer) 8 173,0,172,6,172,1,172,0,162,4
APCI-MS: (M + 1) = 503/505 m/z.
Eksempel 42
Ph( 3- Cl)( 5- OCHF7)-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( 2. 5- diF)( OMe)
(i) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF7)- r/ g) CH( OH) C( Q)- AzePab( 2. 5- diF)( OMe. Teoc)
En blanding av Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-WCH(OH)C(0)-Aze-Pab(2,5-diF)(Teoc) (40 mg, 0,062 mmol; se Eksempel 41(xiv) ovenfor) og O-metyl hydroksylamin-hydroklorid (58 mg, 0,70 mmol) i 5 ml acetonitril ble oppvarmet ved 70°C i 2 timer. Løsningsmidlet ble avdampet og residuet ble fordelt mellom vann og EtOAc. Det vandige laget ble ekstrahert med EtOAc og den samlede organiske fase ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og inndampet. Produktet kunne anvendes uten ytterligere rensning. Utbytte: 35 mg (84%).
<*>H NMR (600 MHz, CDC13) 8 7,99 (bt, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,20 (m, 1H) 7,15-7,1 (m, 1H), 7,07 (dd, 1H), 7,01 (m, 1H), 6,53 (t, 1H), 4,90 (s, 1H), 4,88 m, 1H), 4,48 (m, 2H), 4,2-4,1 (m, 3H), 3,95 (s, 3H), 3,67 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 2,41 (m, 1H), 0,97 (m, 2H), 0,07 (s, 9H) (ii) Ph( 3- Cn( 5- OCHF2Vr^ JCH( OH') C( 0)- Aze- Pabr2. 5- diF) rOMe) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?>)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(2,5-diF)(OMe,Teoc) (35 mg, 0,052 mmol; se trinn (i) ovenfor) ble oppløst i 3 ml TFA og fikk reagere i 30 min. TFA ble inndampet og residuet frysetørket fra vann og acetonitril, hvilket gir 29 mg (99%) av tittelforbindelsen. Renhet: 97%.
<!>H NMR (300 MHz, CDC13) 8 8,01 (bt, 1H), 7,45 (dd, 1H), 7,20 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,09 (dd, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,54 (t, 1H), 5,2-5,0 (m, 2H), 4,95-4,85 (m, 2H), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,25 (bred, 1H), 4,13 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,71 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,43 (m, 1H) <13>C-NMR (75 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer) 8 173,0,170,9, 152,6
APCI-MS: (M + 1) = 533/535 m/z.
Eksempel 43
Ph( 3- Cl)( 5- OCHFz)-(/ g) CH( OmC( Q)- Aze- Pab( OEt)
(i) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF9)-(/ ?) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( OEt. Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (55 mg, 0,090 mmol; se Eksempel l(ix) ovenfor) og O-etylhydroksyl amin-hydroklorid (53 mg, 0,54 mmol) ble oppløst i 4 ml THF. Blandingen ble omrørt ved 60°C i 5 timer. Løsningsmidlet ble avdampet. Residuet ble kromatografert på silikagel, under eluering med metylenklorid:metanol (95:5), hvilket gir 55 mg (93%) av sub-tittelforbindelse.
'H-NMR (400 MHz; CDCI3): 8 7,84 (bt, 1H), 7,59 (bs, 1H), 7,47 (bd, 1H), 7,29 (bd, 1H), 7,21 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,53 (t, 1H), 4,90 (s, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,55-4,4 (m, 2H), 4,25-4,1 (m, 5H), 3,69 (m, 1H), 2,66 (m, 1H), 2,41 (m, 1H), 1,33 (t, 3H), 0,98 (m, 2H), 0,02 (s, 9H)
(ii) Ph( 3- Cl. 5- OCHFz)-(/ ?) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( OEt)
Til en is-kald løsning av Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OEt, Teoc) (55 mg, 0,084 mmol; se trinn (i) ovenfor) i 0,5 ml metylenklorid ble det tilsatt 3 ml TFA. Blandingen ble omrørt (is-bad) i 160 minutter. Materialet ble renset ved anvendelse av preparativ HPLC. Fraksjonene av interesse ble samlet og frysetørket (2x), hvilket gir 20 mg (47%) av tittelforbindelsen.
'H-NMR (400 MHz; CD3OD) rotamerer: 8 7,59 (bd, 2H), 7,35 (m, 1H), 7,32 (bd, 2H), 7,25-7,1 (m, 2H), 6,89 (t, 1H, hoved rotamer), 6,86 (t, 1H, mindre rotamer), 5,18 (s, 1H, hoved rotamer), 5,18 (m, 1H, mindre rotamer), 5,11 (s, 1H, mindre rotamer), 4,77 (m, 1H), 4,5-4,3 (m, 3H), 4,2-3,9 (m, 3H), 2,67 (m, 1H, mindre rotamer), 2,52 (m, 1H, hoved rotamer), 2,28 (m, 1H, hoved rotamer), 2,15 (m, 1H, mindre rotamer), 1,28 (t, 3H) <13>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 8 172,4,171,9,171,4,153,8,152,3
MS (m/z) 509 (M - 1)\ 511 (M + 1)<+>
Eksempel 44
Ph( 3- Cl)( 5- OCHF2)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( OnPr)
(i) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF2)-(/ ?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( OnPr. Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (53 mg, 0,087 mmol; se Eksempel l(ix) ovenfor) og O-n-propylhydroksyl amin-hydroklorid, 58 mg (0,52 mmol) ble oppløst i 4 ml THF. Blandingen ble omrørt ved 60°C i 5 timer. Løsningsmidlet ble avdampet. Residuet ble kromatografert på silikagel, under eluering med metylenklorid:metanol (95:5), hvilket gir 51 mg (88%) av sub-tittelforbindelse.
'H-NMR (400 MHz; CDC13): 8 7,84 (m, 1H), 7,59 (bs, 1H), 7,47 (bd, 2H), 7,28 (bd, 2H), 7.21 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,53 (t, 1H), 4,90 (s, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,55-4,4 (m, 2H), 4,2-4,05 (m, 5H), 3,69 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 2,41 (m, 1H), 1,74 (m, 2H), 1,05-0,95 (m, 5H), 0,03 (s, 9H)
(ii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF2)-(/ g) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( OnPr)
Til en is-kald løsning av Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OnPr, Teoc) (51 mg, 0,078 mmol; se trinn (i) ovenfor) i 0,5 ml metylenklorid ble det tilsatt 3 ml TFA. Blandingen ble omrørt (is-bad) i 110 minutter. Materialet ble renset ved anvendelse av preparativ HPLC. Fraksjonen av interesse ble inndampet og frysetørket, hvilket gir 20 mg (47%) av tittelforbindelsen.
'H-NMR (500 MHz; CD3OD) rotamerer: 8 7,61 (bd, 2H), 7,38 (m, 1H), 7,35 (bd, 2H), 7.22 (m, 1H, hoved rotamer), 7,18 (m, 1H), 7,15 (m, 1H, mindre rotamer), 6,92 (t, 1H,
hoved rotamer), 6,89 (t, 1H, mindre rotamer), 5,20 (s, 1H, hoved rotamer), 5,20 (m, 1H, mindre rotamer), 4,80 (m, 1H, hoved rotamer), 4,5-4,4 (m, 2H, omfattende mindre rotamer svarende til hoved ved 4,37), 4,37 (m, 1H, hoved rotamer), 4,18 (m, 1H, hoved rotamer), 4,09 (m, 1H, mindre rotamer), 3,99 (m, 2H), 2,70 (m, 1H, mindre rotamer), 2,54 (m, 1H, hoved rotamer), 2,30 (m, 1H, hoved rotamer), 2,18 (m, 1H, mindre rotamer), 1,73 (m, 2H), 1,01 (t, 3H)
<13>C-NMR (125 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 8 171,4,153,8,152,3
MS (m/z) 523 (M - 1)\ 525 (M + 1)<+>
Eksempel 45
Ph( 3- Cl)( 5- OCHF7)-( i?) CH( OH) C( 0)- Aze- Pab( 0/ Pr)
(i) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF9)-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( OiPr. Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (50 mg, 0,082 mmol; se Eksempel l(ix) ovenfor) og O-i-propylhydroksyl amin-hydroklorid, 55 mg (0,49 mmol) ble oppløst i 4 ml THF. Blandingen ble omrørt ved 60°C i 5 timer. Løsningsmidlet ble avdampet. Residuet ble kromatografert på silikagel, under eluering med metylenkloird:metanol (95:5), hvilket gir 46 mg (84%) av sub-tittelforbindelse.
'H-NMR (400 MHz; CDC13): 8 7,84 (m, 1H), 7,57 (bs, 1H), 7,48 (bd, 2H), 7,29 (bd, 2H), 7,21 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,02 (m,lH), 6,53 (t, 1H), 4,91 (s, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,55-4,45 (m, 2H), 4,42 (m, 1H), 4,2-4,1 (m, 3H), 3,69 (m, 1H), 2,66 (m, 1H), 2,42 (m, 1H), 1,30 (d, 6H), 0,98 (m, 2H), 0,02 (s, 9H)
(ii) Ph( 3- Cl)( 5- OCHF7)-(/ g) CH( OH) C( Q)- Aze- Pab( OtPr)
Til en is-kald løsning av Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OiPr, Teoc) (46 mg, 0,069 mmol; se trinn (i) ovenfor) i 0,5 ml metylenklorid ble det tilsatt 3 ml TFA. Blandingen ble omrørt (is-bad) i 150 minutter. Materialet ble renset ved anvendelse av preparativ HPLC. Fraksjonen av interesse ble inndampet og frysetørket (2x), hvilket gir 22 mg (58%) av tittelforbindelsen.
'H-NMR (400 MHz; CD3OD) rotamerer: 8 7,59 (d, 2H), 7,35 (m, 1H), 7,32 (d, 2H), 7,19 (m, 1H, hoved rotamer), 7,15 (m, 1H), 7,12 (m, 1H, mindre rotamer), 6,89 (t, 1H, hoved rotamer), 6,86 (t, 1H, mindre rotamer), 5,18 (s, 1H, hoved rotamer), 5,18 (m, 1H, mindre rotamer), 5,12 (s, 1H, mindre rotamer), 4,78 (m, 1H, hoved rotamer), 4,5-3,9 (m, 5H), 2,67 (m, 1H, mindre rotamer), 2,52 (m, 1H, hoved rotamer), 2,28 (m, 1H, hoved rotamer), 2,15 (m, 1H, mindre rotamer), 1,26 (d, 6H)
<13>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarbonatomer, rotamerer) 8 171,9,171,4,153,6.
MS (m/z) 523 (M - 1)", 525 (M + 1)<+>
Eksempel 46
Tittelforbindelsen i Eksemplene 3,6, 9,10,13 til 15,17,19,21, 23,25,27, 28, 32,34, 36, 38, 39 og 41 ble testet i Test A ovenfor og ble funnet å vise IC50TT verdier på mindre enn 3,5 uM. De i Eksemplene 3,6,9,10,13,15,17,19,21,23, 27, 32, 34 og 39 ble funnet å vise verdier som var mindre enn 0,02 uM; de i Eksemplene 25 og 28 mindre enn 0,03 \ iM, de i Eksempel 14 mindre enn 0,04 |iM; og de i Eksemplene 38 og 41 mindre enn 0,15 uM.
Eksempel 47
. Tittelforbindelsen i Eksemplene 3,6,13,15,17,19,21,23, 25,27, 28, 32 og 34 ble testet i Test D ovenfor og ble funnet å vise en IC50 APTT verdi på mindre enn 1 TM.
Eksempel 48
Tittelforbindelsene i Eksemplene 1, 2,4, 5,7,12,16,18,20,22, 24,26,29, 30, 33 og 43 til 45 ble testet i Test E ovenfor og ble funnet å vise oral og/eller parenteral biotilgjengelighet i rotte som den tilsvarende aktive inhibitor (fri amidin).
Eksempel 49
Tittelforbindelsene i Eksemplene 1,2,7, 8,11,12,16,18,20,22, 24,26,29, 33, 37,40,43 og 45 ble testet i Test G ovenfor og ble funnet å bli omdannet til den tilsvarende aktive inhibitor (fri amidin) i levermikrosomer fra mennesker og fra rotter.
Forkortelser
Ac = acetyl
AcOH = eddiksyre
APCI = atmosfærisk trykk kjemisk ionisering (i relasjon til MS)
API = atmosfærisk trykk ionisering (i relasjon til MS)
vandig = vandig
AUC = areal under kurven
Aze = (S)-azetidin-2-karboksylat (hvis ikke på annen måte spesifisert) AzeOH = azetidin-2-karboksylsyre
Bn = benzyl
Boe = tørf-butyloksykarbonyl
BSA = bovint serumalbumin
Bu = butyl
Bzl = benzyl
CI = kjemisk ionisering (i relasjon til MS)
d = dag(er)
DCC = dicykloheksylkarbodiimid
DIBAL-H = di-isobutylaluminiumhydrid
DIPEA = diisopropyletylamin
DMAP = 4-(AT,N-dimetylamino) pyridin
DMF = dimetylformamid
DMSO = dimetylsulfoksyd
DVT = dyp vene trombose
EDC = l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydroklorid
e.e. = enantiomert overskudd av
Et = etyl
ether = dietyleter
EtOAc = etylacetat
EtOH = etanol
Et20 = dietyleter
t = time(r)
HATU = 0-(azabenzotriazol-l-yl)-iV,^V^V^V-tetrametyluronium heksafluorfosfat
HBTU = [^,A^^^-tetrametyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumheksafluorfosfat^ HC1 = saltsyre, hydrogenklorid gass eller hydrokloridsalt (avhengig av
sammenheng)
Heks = heksaner
HOAc = eddiksyre
HPLC = høy ytelse væskekromatografi
LC = væskekromatografi
Me = metyl
MEM = metoksyetoksymetyl
MeOH = metanol
min = minutt(er)
MS = massespektroskopi
MTBE = metyl terf-butyleter
NADH = nikotinamidadenindinukleotid, redusert form
NADPH = nikotinamidademndinukleotid fosfat, redusert form
NIH = "National Institute of Health "(US)
NIHU = "National Institute of Health" enheter
NMR = kjernemagnetisk resonans
OAc = acetat
Pab = para-amidinobenzylamino
H-Pab = parø-amidinobenzylamin
Ph = fenyl
Pr = propyl
Pro = (5)-prolinyl
PyBOP = (benzotriazol-l-yloksy)tripyrrolidinofosfoniumheksafluorfosfat
QF = tetrabutylammonium fluorid
RedAl = natrium bis(2-metoksyetoksy)aluminiumhydrid
RPLC = revers fase høy ytelse væskekromatografi
rt/RT = romtemperatur
SOPs = standard drifts prosedyrer
TBTU = [^V^V^^-tetrametyl-O-^enzotriazol-l-yOuroniumtetrafluorborat] TE = trietylamin
Teoc = 2-(trimetylsilyl)etoksykarbonyl
TEMPO = 2,2,6,6-tetrametyl-l-piperidinyloksy fri rest
TFA = trifluoreddiksyre THF = tetrahydrofuran
THP = tetrahydropyranyl TLC = tynnskiktskromatografi TMSC1 = trimetylsilylklorid TMSCN = trimetylsilylcyanid UV = ultrafiolett
Z = benzyloksykarbonyl
Forstavelsene, s, i og t har deres vanlige betydninger: normal, sekundær, iso og tertiær. Forstavelsen c betyr cyklo.

Claims (17)

1. Forbindelse, karakterisert ved at den er valgt fra Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe); Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OH) eller Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.
2. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert ved at den er Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(Æ)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(OMe) eller et farmasøytisk akseptebelt salt derav.
3. Farmasøytisk formulering, karakterisert ved at den omfatter hvilke som helst av forbindelsene ifølge krav 1 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, blandet sammen med en farmasytisk akseptabel adjuvant, fortynningsmiddel eller bærer.
4. Farmasøytiskformuleringifølgekrav3,karakterisert ved at den omfatter forbindelsen ifølge krav 2, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, blandet sammen med en farmasøytisk akseptabel adjuvant, fortynningsmiddel eller bærer.
5. Farmasøytisk formulering ifølge krav 3 eller 4, karakterisert ved at adjuvanten, fortynningsmidlet og/eller bæreren gir opphav til en forbindelse med modifisert frigjøring.
6. Farmasøytisk formulering ifølge krav 3 eller 4, karakterisert ved at den er tilpasset for oral administrering.
7. Farmasøytisk formulering ifølge krav 5 eller 6, karakterisert ved at den er i form av et geldannende matriksmodifisert-frigjøringssystem omfattende en hydrofil geldannende komponent og aktiv ingrediens.
8. Forbindelse ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at den er for anvendelse som et farmasøytisk preparat.
9. Forbindelse ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at den er for anvendelse ved behandling av en tilstand hvor inhibisjon av trombin er nødvendig.
10. Forbindelse ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at den er for anvendelse ved behandling av en tilstand hvor antikoagulantterapi er indikert.
11. Forbindelse ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at den er for anvendelse ved behandling av trombose.
12. Forbindelse ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at den er for anvendelse satt som et antikoaguleringsmiddel.
13. Anvendelse av en forbindelse ifølge krav 1 eller 2, som et aktivt ingrediens for fremstilling av et medikament for behandling av en tilstand hvor inhibisjon av trombin er nødvendig.
14. Anvendelse av en forbindelse ifølge krav 1 eller 2, som et aktivt ingrediens for fremstilling av et medikament for behandling av en tilstand hvor antikoaguleringsterapi er indikert.
15. Anvendelse ifølge krav 13 eller 14, hvor tilstanden er trombose.
16. Anvendelse ifølge krav 13 eller 14, hvor tilstanden er hyperkoagulabilitet i blod og/eller vev.
17. Anvendelse av en forbindelse ifølge krav 1 eller 2 som et aktivt ingrediens for fremstilling av et antikoaguleringsmiddel.
NO20032465A 2000-12-01 2003-05-30 Nye mandelsyre-derivater og anvendelse derav samt farmasoytisk formulering NO325228B1 (no)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE0004458A SE0004458D0 (sv) 2000-12-01 2000-12-01 Pharmaceutically useful compounds
SE0100965A SE0100965D0 (sv) 2001-03-19 2001-03-19 Pharmaceutically-useful compounds
SE0101239A SE0101239D0 (sv) 2001-04-06 2001-04-06 Pharmaceutically useful compounds
SE0102921A SE0102921D0 (sv) 2001-08-30 2001-08-30 Pharmaceutically useful compounds
PCT/SE2001/002657 WO2002044145A1 (en) 2000-12-01 2001-11-30 New mandelic acid derivatives and their use as throbin inhibitors

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO20032465D0 NO20032465D0 (no) 2003-05-30
NO20032465L NO20032465L (no) 2003-07-25
NO325228B1 true NO325228B1 (no) 2008-03-03

Family

ID=27484527

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20032465A NO325228B1 (no) 2000-12-01 2003-05-30 Nye mandelsyre-derivater og anvendelse derav samt farmasoytisk formulering
NO20080031A NO20080031L (no) 2000-12-01 2008-01-03 Nye mandelsyre-derivater og anvendelse derav som trombininhibitorer
NO20080030A NO20080030L (no) 2000-12-01 2008-01-03 Nye mandelsyre-derivater og anvendelse derav som trombininhibitorer

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20080031A NO20080031L (no) 2000-12-01 2008-01-03 Nye mandelsyre-derivater og anvendelse derav som trombininhibitorer
NO20080030A NO20080030L (no) 2000-12-01 2008-01-03 Nye mandelsyre-derivater og anvendelse derav som trombininhibitorer

Country Status (30)

Country Link
US (4) US7803954B2 (no)
EP (2) EP1347955B1 (no)
JP (3) JP4177101B2 (no)
KR (4) KR100914535B1 (no)
CN (1) CN1291975C (no)
AR (2) AR035216A1 (no)
AT (1) ATE461171T1 (no)
AU (2) AU2007203509A1 (no)
BG (1) BG66261B1 (no)
BR (1) BR0115861A (no)
CA (1) CA2436220C (no)
CY (1) CY1113487T1 (no)
CZ (1) CZ303708B6 (no)
DE (1) DE60141603D1 (no)
DK (1) DK1347955T3 (no)
EE (1) EE05382B1 (no)
ES (1) ES2341318T3 (no)
HK (1) HK1057214A1 (no)
HU (1) HU228814B1 (no)
IL (1) IL156096A0 (no)
IS (1) IS2755B (no)
MX (1) MXPA03004794A (no)
MY (1) MY136133A (no)
NO (3) NO325228B1 (no)
NZ (1) NZ526205A (no)
PL (1) PL207045B1 (no)
PT (1) PT1347955E (no)
SI (1) SI1347955T1 (no)
SK (1) SK287692B6 (no)
WO (1) WO2002044145A1 (no)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR035216A1 (es) * 2000-12-01 2004-05-05 Astrazeneca Ab Derivados de acido mandelico ,derivados farmaceuticamente aceptables, uso de estos derivados para la fabricacion de medicamentos, metodos de tratamiento ,procesos para la preparacion de estos derivados, y compuestos intermediarios
AR034517A1 (es) 2001-06-21 2004-02-25 Astrazeneca Ab Formulacion farmaceutica
SE0201662D0 (sv) * 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab Pharmaceutical combination
SE0201661D0 (sv) * 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab New salts
SE0201658D0 (sv) * 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab Immediate release pharmaceutical formulation
SE0201659D0 (sv) 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
US7615575B2 (en) 2003-02-13 2009-11-10 Wellstat Therapeutics Corporation Compounds for the treatment of metabolic disorders
GB0306615D0 (en) * 2003-03-22 2003-04-30 Astrazeneca Ab New use
US7781424B2 (en) * 2003-05-27 2010-08-24 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
SE0303220D0 (sv) * 2003-11-28 2003-11-28 Astrazeneca Ab New process
US7550499B2 (en) 2004-05-12 2009-06-23 Bristol-Myers Squibb Company Urea antagonists of P2Y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions
MX2007008434A (es) 2005-01-19 2007-07-25 Squibb Bristol Myers Co Derivados de 2-fenoxi-n-(1,3,4-tiadizol-2il)piridin-3-amina y compuestos relacionados como inhibidores del receptor p2y1 para el tratamiento de trastornos tromboembolicos.
GB0503672D0 (en) * 2005-02-23 2005-03-30 Astrazeneca Ab New process
GB0510546D0 (en) * 2005-05-24 2005-06-29 Astrazeneca Ab New process
WO2007002584A1 (en) 2005-06-27 2007-01-04 Bristol-Myers Squibb Company Linear urea mimics antagonists of p2y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions
WO2007002634A1 (en) 2005-06-27 2007-01-04 Bristol-Myers Squibb Company Carbocycle and heterocycle antagonists of p2y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions
EP1899299B1 (en) 2005-06-27 2010-10-20 Bristol-Myers Squibb Company C-linked cyclic antagonists of p2y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions
EP1896466B1 (en) 2005-06-27 2011-04-13 Bristol-Myers Squibb Company N-linked heterocyclic antagonists of p2y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions
CA2637373A1 (en) 2006-01-25 2007-08-02 Wellstat Therapeutics Corporation Compounds for the treatment of metabolic disorders
US7820721B2 (en) 2006-01-25 2010-10-26 Wellstat Therapeutics Corporation Compounds for the treatment of metabolic disorders
AU2007212104A1 (en) 2006-02-02 2007-08-16 Wellstat Therapeutics Corporation Compounds for the treatment of metabolic disorders
US8044242B2 (en) 2006-03-09 2011-10-25 Bristol-Myers Squibb Company 2-(aryloxy) acetamide factor VIIa inhibitors useful as anticoagulants
JP2009539873A (ja) 2006-06-08 2009-11-19 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗凝固剤として有用な第ＶＩＩａ因子インヒビターとしての２−アミノカルボニルフェニルアミノ−２−フェニルアセトアミド類
DE102006033572A1 (de) 2006-07-20 2008-01-24 Bayer Cropscience Ag N'-Cyano-N-halogenalkyl-imidamid Derivate
US7960569B2 (en) 2006-10-17 2011-06-14 Bristol-Myers Squibb Company Indole antagonists of P2Y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions
TW200827336A (en) * 2006-12-06 2008-07-01 Astrazeneca Ab New crystalline forms
US8410155B2 (en) 2006-12-15 2013-04-02 Bristol-Myers Squibb Company Arylpropionamide, arylacrylamide, arylpropynamide, or arylmethylurea analogs as factor XIA inhibitors
PE20081775A1 (es) 2006-12-20 2008-12-18 Bristol Myers Squibb Co Compuestos macrociclicos como inhibidores del factor viia
MY153427A (en) 2007-04-23 2015-02-13 Sanofi Aventis Quinoline-carboxamide derivatives as p2y12 antagonists
TW200900033A (en) * 2007-06-21 2009-01-01 Wen-Qing Li Automatic brewing machine
US20090061000A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-05 Astrazeneca Ab Pharmaceutical formulation use 030
EP2238128B1 (en) 2007-12-26 2012-08-22 Sanofi Heterocyclic pyrazole-carboxamides as p2y12 antagonists
CA2789622C (en) 2010-02-11 2018-04-03 Bristol-Myers Squibb Company Macrocycles as factor xia inhibitors
TW201311689A (zh) 2011-08-05 2013-03-16 必治妥美雅史谷比公司 作為因子ｘｉａ抑制劑之新穎巨環化合物
TW201319068A (zh) 2011-08-05 2013-05-16 必治妥美雅史谷比公司 作為ｘｉａ因子抑制劑之環狀ｐ１接合劑
US9079929B2 (en) 2011-10-14 2015-07-14 Bristol-Myers Squibb Company Substituted tetrahydroisoquinoline compounds as factor XIa inhibitors
SG11201401384UA (en) 2011-10-14 2014-09-26 Bristol Myers Squibb Co Substituted tetrahydroisoquinoline compounds as factor xia inhibitors
US9108951B2 (en) 2011-10-14 2015-08-18 Bristol-Myers Squibb Company Substituted 5,6,7,8-tetrahydro-1,6-naphthyridines as factor XIa inhibitors
KR20150038369A (ko) 2012-08-03 2015-04-08 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 인자 XIa 억제제로서의 디히드로피리돈 P1
WO2014022767A1 (en) 2012-08-03 2014-02-06 Bristol-Myers Squibb Company Dihydropyridone p1 as factor xia inhibitors
GB2510407A (en) 2013-02-04 2014-08-06 Kalvista Pharmaceuticals Ltd Aqueous suspensions of kallikrein inhibitors for parenteral administration
US9738655B2 (en) 2013-03-25 2017-08-22 Bristol-Myers Squibb Company Tetrahydroisoquinolines containing substituted azoles as factor XIa inhibitors
IL307212A (en) 2014-01-31 2023-11-01 Bristol Myers Squibb Co Macrocyclines with P2' heterocyclic groups as factor XIA inhibitors
NO2760821T3 (no) 2014-01-31 2018-03-10
NO2721243T3 (no) 2014-10-01 2018-10-20
US10160750B2 (en) 2015-06-19 2018-12-25 Bristol-Myers Squibb Company Diamide macrocycles as factor XIa inhibitors
CN114805365B (zh) 2015-07-29 2024-07-23 百时美施贵宝公司 携带非芳族p2′基团的因子xia新大环
JP6785838B2 (ja) 2015-08-05 2020-11-18 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 新規な置換グリシン誘導のｆｘｉａ阻害剤
CN105294520A (zh) * 2015-11-23 2016-02-03 大连九信生物化工科技有限公司 一种2-（2’,2’-二氟乙氧基）-6-三氟甲基苯基丙基硫醚的合成工艺
JP2019507167A (ja) 2016-03-02 2019-03-14 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 第ｘｉａ因子阻害活性を有するジアミド大員環
CN106674085B (zh) * 2016-12-20 2020-06-23 苏州汉德创宏生化科技有限公司 N-1,3-二氟异丙基-4-氨基哌啶类化合物的合成方法
CN112955442A (zh) 2018-11-05 2021-06-11 先正达参股股份有限公司 杀有害生物活性的唑-酰胺化合物
EP4010333A1 (en) 2019-08-09 2022-06-15 Kalvista Pharmaceuticals Limited Plasma kallikrein inhibitors

Family Cites Families (75)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU178398B (en) 1979-06-12 1982-04-28 Gyogyszerkutato Intezet Process for producing new agmatine derivatives of activity against haemagglutination
JPS57149217A (en) 1981-03-11 1982-09-14 Kaken Pharmaceut Co Ltd Slow-releasing pharmaceutical preparation
HU192646B (en) 1984-12-21 1987-06-29 Gyogyszerkutato Intezet Process for preparing new n-alkyl-peptide aldehydes
AU600226B2 (en) 1985-02-04 1990-08-09 Merrell Pharmaceuticals Inc. Novel peptidase inhibitors
US5187157A (en) 1987-06-05 1993-02-16 Du Pont Merck Pharmaceutical Company Peptide boronic acid inhibitors of trypsin-like proteases
US4792452A (en) * 1987-07-28 1988-12-20 E. R. Squibb & Sons, Inc. Controlled release formulation
US5538847A (en) * 1989-07-17 1996-07-23 Tropix, Inc. Chemiluminescent 1,2-dioxetanes
EP0362002B1 (en) 1988-09-01 1995-07-26 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. HIV protease inhibitors
ZA897515B (en) 1988-10-07 1990-06-27 Merrell Dow Pharma Novel peptidase inhibitors
IT1229491B (it) 1988-12-28 1991-09-03 Roussel Maestretti S P A Ora R Derivati della 1,2,5,6-tetraidropiridina, loro procedimento di preparazione e loro impiego come sostanze medicinali
TW201303B (no) 1990-07-05 1993-03-01 Hoffmann La Roche
CA2075154A1 (en) 1991-08-06 1993-02-07 Neelakantan Balasubramanian Peptide aldehydes as antithrombotic agents
SE9102462D0 (sv) 1991-08-28 1991-08-28 Astra Ab New isosteric peptides
US5169638A (en) 1991-10-23 1992-12-08 E. R. Squibb & Sons, Inc. Buoyant controlled release powder formulation
CZ333492A3 (en) 1991-11-12 1993-09-15 Lilly Co Eli Dipeptide of l-azetidine-2-carboxylic acids and l-argininaldehyde, process of its preparation and pharmaceutical preparation in which said dipeptide is comprised
SE9103612D0 (sv) 1991-12-04 1991-12-04 Astra Ab New peptide derivatives
EP0629212B1 (en) 1992-03-04 1997-10-08 Gyogyszerkutato Intezet Kft. New anticoagulant peptide derivatives and pharmaceutical compositions containing the same as well as a process for the preparation thereof
TW223629B (no) 1992-03-06 1994-05-11 Hoffmann La Roche
SE9301912D0 (sv) 1993-06-03 1993-06-03 Ab Astra Process for the production of aminoalkylguandines
SE9301916D0 (sv) 1993-06-03 1993-06-03 Ab Astra New peptides derivatives
US6984627B1 (en) 1993-06-03 2006-01-10 Astrazeneca Ab Peptide derivatives
US5783563A (en) 1993-06-03 1998-07-21 Astra Aktiebolag Method for treatment or prophylaxis of venous thrombosis
EP0648780A1 (en) 1993-08-26 1995-04-19 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclic thrombin inhibitors
TW394760B (en) 1993-09-07 2000-06-21 Hoffmann La Roche Novel Carboxamides, process for their preparation and pharmaceutical composition containing the same
AU1025795A (en) 1994-01-27 1995-08-03 Mitsubishi Chemical Corporation Prolineamide derivatives
IL112795A (en) 1994-03-04 2001-01-28 Astrazeneca Ab Derivatives of peptides as antithrombotic drugs, their preparation, and pharmaceutical preparations containing them
US5705487A (en) 1994-03-04 1998-01-06 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5707966A (en) * 1994-03-04 1998-01-13 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5561146A (en) 1994-06-10 1996-10-01 Bristol-Myers Squibb Company Modified guanidino and amidino thrombin inhibitors
DE4421052A1 (de) 1994-06-17 1995-12-21 Basf Ag Neue Thrombininhibitoren, ihre Herstellung und Verwendung
US5498724A (en) 1994-06-28 1996-03-12 Aktiebolaget Astra Pyrazoleamidine compounds
US5510369A (en) 1994-07-22 1996-04-23 Merck & Co., Inc. Pyrrolidine thrombin inhibitors
JPH11500120A (ja) * 1995-02-17 1999-01-06 ビーエーエスエフ アクチェンゲゼルシャフト 新規なトロンビンインヒビター
US5874298A (en) * 1995-02-17 1999-02-23 Nps Pharmaceuticals, Inc. Insecticidal toxins from Bracon hebetor nucleic acid encoding said toxin and methods of use
US5710130A (en) 1995-02-27 1998-01-20 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US6083532A (en) 1995-03-01 2000-07-04 Duramed Pharmaceuticals, Inc. Sustained release formulation containing three different types of polymers and tablet formed therefrom
US5695781A (en) 1995-03-01 1997-12-09 Hallmark Pharmaceuticals, Inc. Sustained release formulation containing three different types of polymers
AU698911B2 (en) 1995-04-04 1998-11-12 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
US5629324A (en) 1995-04-10 1997-05-13 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
SA96170106A (ar) * 1995-07-06 2005-12-03 أسترا أكتيبولاج مشتقات حامض أميني جديدة
TWI238827B (en) * 1995-12-21 2005-09-01 Astrazeneca Ab Prodrugs of thrombin inhibitors
SE9601556D0 (sv) 1996-04-24 1996-04-24 Astra Ab New pharmaceutical formulation of a thrombin inhibitor for parenteral use
SE9602263D0 (sv) 1996-06-07 1996-06-07 Astra Ab New amino acid derivatives
US5863929A (en) 1996-06-25 1999-01-26 Eli Lilly And Company Anticoagulant agents
SE9602646D0 (sv) 1996-07-04 1996-07-04 Astra Ab Pharmaceutically-useful compounds
DE19632772A1 (de) 1996-08-14 1998-02-19 Basf Ag Neue Benzamidine
SE9603724D0 (sv) 1996-10-11 1996-10-11 Astra Ab New pharmaceutical parenteral formulation of a thrombin inhibitor
AR013084A1 (es) * 1997-06-19 2000-12-13 Astrazeneca Ab Derivados de amidino utiles como inhibidores de la trombina, composicion farmaceutica, utilizacion de dichos compuestos para la preparacion demedicamentos y proceso para la preparacion de los compuestos mencionados
IT1297461B1 (it) 1997-10-29 1999-12-17 Ciocca Maurizio Preparazione di compresse a rilascio controllato a base di complessi tra carragenano e farmaci basici solubili
SE9704401D0 (sv) 1997-11-28 1997-11-28 Astra Ab Matrix pellets for greasy, oily or sticky drug substances
SE9704543D0 (sv) 1997-12-05 1997-12-05 Astra Ab New compounds
US6174913B1 (en) * 1998-06-05 2001-01-16 The University Of North Carolina At Chapel Hill Naphtho- and dihydrobenzo-thiophene derivatives as cytotoxic antitumor agents
SE9802938D0 (sv) 1998-09-01 1998-09-01 Astra Ab Improved stability for injection solutions
SE9802974D0 (sv) * 1998-09-03 1998-09-03 Astra Ab New crystalline forms
SE9802973D0 (sv) 1998-09-03 1998-09-03 Astra Ab Immediate release tablet
SE9804313D0 (sv) 1998-12-14 1998-12-14 Astra Ab New compounds
DE60037183T2 (de) * 1999-01-13 2008-10-09 Astrazeneca Ab Neue amidinbenzylamin-derivate und ihre verwendung als thrombin-inhibitoren
US6758430B1 (en) * 1999-02-16 2004-07-06 Aesop, Inc. Method of winding motors and other electric machines to reduce AC losses
SE9902550D0 (sv) * 1999-07-02 1999-07-02 Astra Ab New crystalline forms
SE0001803D0 (sv) * 2000-05-16 2000-05-16 Astrazeneca Ab New compounds i
US6433186B1 (en) * 2000-08-16 2002-08-13 Astrazeneca Ab Amidino derivatives and their use as thormbin inhibitors
SE0102921D0 (sv) 2001-08-30 2001-08-30 Astrazeneca Ab Pharmaceutically useful compounds
US7129233B2 (en) * 2000-12-01 2006-10-31 Astrazeneca Ab Mandelic acid derivatives and their use as thrombin inhibitors
AR035216A1 (es) 2000-12-01 2004-05-05 Astrazeneca Ab Derivados de acido mandelico ,derivados farmaceuticamente aceptables, uso de estos derivados para la fabricacion de medicamentos, metodos de tratamiento ,procesos para la preparacion de estos derivados, y compuestos intermediarios
US6287599B1 (en) 2000-12-20 2001-09-11 Shire Laboratories, Inc. Sustained release pharmaceutical dosage forms with minimized pH dependent dissolution profiles
AR034517A1 (es) * 2001-06-21 2004-02-25 Astrazeneca Ab Formulacion farmaceutica
US6811794B2 (en) 2001-12-20 2004-11-02 Shire Laboratories, Inc. Sustained release pharmaceutical dosage forms with minimized pH dependent dissolution profiles
SE0201661D0 (sv) * 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab New salts
SE0201658D0 (sv) 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab Immediate release pharmaceutical formulation
SE0201659D0 (sv) 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
US7781424B2 (en) 2003-05-27 2010-08-24 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
SE0303220D0 (sv) 2003-11-28 2003-11-28 Astrazeneca Ab New process
GB0503672D0 (en) 2005-02-23 2005-03-30 Astrazeneca Ab New process
GB0510546D0 (en) 2005-05-24 2005-06-29 Astrazeneca Ab New process
TW200827336A (en) 2006-12-06 2008-07-01 Astrazeneca Ab New crystalline forms

Also Published As

Publication number Publication date
PL362917A1 (en) 2004-11-02
BG66261B1 (bg) 2012-10-31
MXPA03004794A (es) 2003-09-10
KR100914535B1 (ko) 2009-09-02
SI1347955T1 (sl) 2010-07-30
KR20030051894A (ko) 2003-06-25
CN1291975C (zh) 2006-12-27
SK287692B6 (sk) 2011-06-06
NO20080031L (no) 2003-07-25
CZ303708B6 (cs) 2013-03-27
JP2008138009A (ja) 2008-06-19
CY1113487T1 (el) 2016-06-22
IL156096A0 (en) 2003-12-23
CZ20031514A3 (cs) 2003-08-13
US7803954B2 (en) 2010-09-28
JP2008156362A (ja) 2008-07-10
AU2002218618A1 (en) 2002-06-11
NO20032465D0 (no) 2003-05-30
JP4177101B2 (ja) 2008-11-05
ATE461171T1 (de) 2010-04-15
DE60141603D1 (de) 2010-04-29
BR0115861A (pt) 2003-09-23
US20070218136A1 (en) 2007-09-20
HUP0302487A3 (en) 2009-08-28
IS6828A (is) 2003-05-27
KR20080064204A (ko) 2008-07-08
WO2002044145A1 (en) 2002-06-06
NZ526205A (en) 2005-04-29
EP1347955B1 (en) 2010-03-17
KR100914016B1 (ko) 2009-08-28
BG107825A (bg) 2004-02-27
JP2004520290A (ja) 2004-07-08
PT1347955E (pt) 2010-05-21
HK1057214A1 (en) 2004-03-19
US20080090800A1 (en) 2008-04-17
AU2007203520A1 (en) 2007-08-16
EE05382B1 (et) 2011-02-15
AR035216A1 (es) 2004-05-05
EP2186800A1 (en) 2010-05-19
KR20080059681A (ko) 2008-06-30
KR100914537B1 (ko) 2009-09-02
KR20090023745A (ko) 2009-03-05
SK6512003A3 (en) 2003-11-04
ES2341318T3 (es) 2010-06-18
EP1347955A1 (en) 2003-10-01
AU2007203509A1 (en) 2007-08-16
NO20080030L (no) 2003-07-25
US20070202174A1 (en) 2007-08-30
CA2436220C (en) 2010-04-13
NO20032465L (no) 2003-07-25
CN1487919A (zh) 2004-04-07
AR072331A2 (es) 2010-08-25
US20100087651A1 (en) 2010-04-08
US7645751B2 (en) 2010-01-12
MY136133A (en) 2008-08-29
KR100947296B1 (ko) 2010-03-16
HUP0302487A2 (hu) 2003-11-28
PL207045B1 (pl) 2010-10-29
DK1347955T3 (da) 2010-06-07
AU2007203520B2 (en) 2010-12-09
CA2436220A1 (en) 2002-06-06
HU228814B1 (hu) 2013-05-28
IS2755B (is) 2011-09-15
EE200300259A (et) 2003-08-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO325228B1 (no) Nye mandelsyre-derivater og anvendelse derav samt farmasoytisk formulering
EP1036061B1 (en) New compounds
US20040019033A1 (en) Mandelic acid derivatives and their use as throbin inhibitors
KR20040029091A (ko) 신규한 만델산 유도체 및 이것의 트롬빈 억제제로서의 용도
AU2002324410B2 (en) New mandelic acid derivatives and their use as thrombin inhibitors
RU2300521C2 (ru) Новые производные миндальной кислоты и их применение в качестве ингибиторов тромбина
AU2002218618B2 (en) New mandelic acid derivatives and their use as throbin inhibitors
CZ20002070A3 (cs) Nové sloučeniny

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees