MXPA04001825A - Derivados de acido mandelico nuevos y su uso como inhibidores de trombina. - Google Patents

Derivados de acido mandelico nuevos y su uso como inhibidores de trombina.

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Abstract

Se proporciona un compuesto de formula (I) y derivados farmaceuticamente aceptables (que incluyen precursores) del mismo; compuesto y derivados los cuales son utiles como, o son utiles como precursores competitivos de inhibidores de proteasa similares a tripsina tales como trombina y por lo tanto, en particular, en el tratamiento de enfermedades en donde se requiere inhibicion de trombina (por ejemplo en trombosis) o como anticoagulantes.

Description

DERIVADOS DE ÁCIDO MANDELICO NUEVOS Y SU USO COMO INHIBIDORES DE TROMBINA CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se relaciona con compuestos novedosos farmacéuticamente útiles, en particular compuestos que son, o compuestos que se metabolizan a compuestos los cuales son inhibidores competitivos de serinas proteasas similares a tripsina, especialmente trombina, y su uso como medicamentos, composiciones farmacéuticas que los contienen y vías de síntesis para su producción.
ANTECEDENTES La coagulación sanguínea es un procedimiento clave involucrado tanto en la hemostasis (es decir, para evitar la pérdida de sangre desde un vaso dañado) y la trombosis (es decir, la formación de un coágulo sanguíneo en un vaso sanguíneo, que algunas veces lleva a la obstrucción del vaso. La coagulación es el resultado de una serie compleja de reacciones enzimáticas. Una de las etapas finales en esta serie de reacciones es la conversión de la proenzima protrombina a la enzima activa trombina. Se sabe que la trombina juega un papel central en la coagulación. Activa las plaquetas, lo que induce agregación plaquetaria, convierte fibrinógeno en monómeros de fibrina que polimerizan espontáneamente en polímeros de fibrina y activa al factor XIII el cual a su vez retícula los polímeros para formar fibrina insoluble. Además, la trombina activa al factor V y factor VIII lo que induce una generación de "retroalimentacion positiva" de la trombina a partir de protrombina. Al inhibir la agregación de las plaquetas y la formación y reticulación de fibrina, se esperaría que los inhibidores eficaces de trombina muestren actividad antitrombótica. Además, se puede esperar que la actividad antitrombótica se incremente por inhibición efectiva del mecanismo de retroalimentacion positiva.
TÉCNICA ANTERIOR El desarrollo inicial de inhibidores de peso molecular bajo de trombina se ha descrito por Claesson en Blood Coagul. Fibrinol. (1994) 5, 411. Blomb ck et a.l (en J. Clin. Lab. Invest . 24, suppl . 107, 59, (1969)) han informado de inhibidores de trombina en base en la secuencia de aminoácidos que se encuentra alrededor del sitio de separación para la cadena Aa de fibrinógeno. De las secuencias de aminoácidos discutidas, estos autores sugieren que la secuencia tripeptídica Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, a continuación denominada como la secuencia P3-P2-P1) puede ser el inhibidor más eficaz. Los inhibidores de trombina basados en derivados de dipeptidilo con una a, ?-aminoalquilguanidina en la posición Pl se conocen a partir de la patente de E.U.A. número 4,346,078 y la solicitud de patente internacional WO 93/11152. También se han reportado derivados de dipeptidilo similares relacionados estructuralmente . Por ejemplo, la solicitud de patente internacional WO 94/29336 describe compuestos con, por ejemplo, aminometilbenzamidinas , aminoalquilamidinas cíclicas y aminoalquilguanidinas cíclicas en la posición Pl (solicitud de patente internacional WO 97/23499 que describe precursores de algunos de estos compuestos) ; la solicitud de patente europea 0 648 780 describe compuestos, por ejemplo, con aminoalquilguanidinas cíclicas en la posición Pl . Los inhibidores de trombina basados en derivados de peptidilo, que también tienen aminoalquilguanidinas cíclicas (por ejemplo 3- ó 4-aminometil-l-amidino-piperidina) en la posición Pl se conocen a partir de las solicitudes de patente europeas 0 468 231, 0 559 046 y O 641 779. Los inhibidores de trombina basados en derivados de tripeptidilo con arginina aldehido en la posición Pl fueron descritos por primera vez en la solicitud de patente europea 0 185 390. Más recientemente se ha informado de derivados de peptidilo basados en arginina aldehido modificados en la posición P3. Por ejemplo, la solicitud de patente internacional WO 93/18060 describe hidroxiácidos , la solicitud de patente europea 0 526 877 describe desaminoácidos y la solicitud de patente europea 0 542 525 describe ácidos O-metilmandélicos en la posición P3. Los inhibidores de serinas proteasas (por ejemplo trombina) basados en cetonas electrofílicas en la posición Pl también son conocidos. Por ejemplo, la solicitud de patente europea 0 195 212 describe a-cetoésteres de peptidilo y amidas, la solicitud de patente europea 0 362 002 fluoroalquilamidacetonas, la solicitud de patente europea 0 364 344 compuestos a, ß, d-triceto y la solicitud de patente europea 0 530 167 derivados de arginina de a-alcoxicetona en la posición Pl. Se conocen otros inhibidores, estructuralmente diferentes de serinas proteasas similares a tripsina basadas en derivados de ácido borónico en la parte C terminal y análogos de isotiouronio de los mismos a partir de la solicitud de patente europea 0 293 881. Más recientemente, se han descrito inhibidores de trombina basados en derivados de peptidilo en la solicitud de patente europea 0 669 317 y en las solicitudes de patentes internacionales WO 95/35309, WO 95/23609, WO 96/25426, WO 97/02284, WO 97/46577, WO 96/32110, WO 96/31504, WO 96/03374, WO 98/06740, WO 97/49404, WO 98/57932, WO 99/29664, WO 99/35869 y WO 00/42059. En particular, los documentos WO 97/02284 y WO 00/42059 describen inhibidores de trombina con ácidos mandélicos sustituidos en la posición P3. No obstante, permanece la necesidad por inhibidores eficaces de serinas proteasas similares a tripsina, tales como trombina. También existe la necesidad de compuestos que tengan un perfil farmacocinético favorable y que sean selectivos para inhibir la trombina con respecto a otras serinas proteasas, en particular aquellas relacionadas en la hemostasis . Los compuestos que muestran actividad inhibidora competitiva hacia trombina se esperaría que fueran especialmente útiles como anticoagulantes y por lo tanto en el tratamiento terapéutico de trombosis y trastornos relacionados.
DESCRIPCION DE LA INVENCION De acuerdo con la invención, se proporciona un compuesto de fórmula I (es decir Ph(3-Cl) (5-OCHF2) -CH (OH) C (0) -Aze-Pab(2, 6-diF) ) , o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo . El término "derivado farmacéuticamente aceptable" incluye sales farmacéuticamente aceptables (por ejemplo sales de adición de ácido) . Las abreviaturas se incluyen en el extremo de esta especificación. El compuesto de fórmula I se puede elaborar de acuerdo con técnicas bien conocidas por los expertos en la técnica, por ejemplo como se describe en lo siguiente. De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un procedimiento para la preparación del compuesto de fórmula I, que comprende: (i) el acoplamiento de un compuesto de fórmula II; con un compuesto de fórmula III, por ejemplo, en presencia de un agente de acoplamiento (por ejemplo cloruro de oxalilo en DMF, EDC, DCC, HBTU, HATU, PyBOP o TBTU) , una base apropiada (por ejemplo piridina, DMAP, TEA, 2 , , 6-colidina o DIPEA) y un solvente orgánico adecuado (por ejemplo diclorometano, acetonitrilo, EtOAc o DMF) ; (ii) el acoplamiento de un compuesto de fórmula IV, con el compuesto de fórmula V, por ejemplo bajo condiciones como se describe en el procedimiento (i) anterior; o (iii) reacción de un compuesto correspondiente de fórmula XVI como se define en lo siguiente, con una fuente adecuada de amoníaco (por ejemplo acetato de amonio o amoniaco gaseoso) bajo condiciones conocidas por los expertos en la técnica por ejemplo por reacción de un intermediario de imidoato de etilo (formado por la reacción de un compuesto de fórmula XVI con HCl (g) en etanol) con amoníaco gaseoso en etanol, o bajo estas condiciones descritas en Tetrahedron Lett. 40, 7067 (1999) , las descripciones del documento las cuales se incorporan en la presente como referencia.
Los compuestos de fórmula II están disponibles utilizando técnicas conocidas o estándar. Por ejemplo, los compuestos de fórmula II se pueden preparar por reacción del aldehido de fórmula VI, con: (a) un compuesto de fórmula VII, R"CN VII en donde R" representa H o (CH3)3Si, por ejemplo a temperatura ambiente o elevada (por ejemplo inferior a 100°C) en presencia de un solvente orgánico adecuado (por ejemplo cloroformo o cloruro de metileno) y, si es necesario, en presencia de una base adecuada (por ejemplo TEA) o un sistema de catalizador adecuado (por ejemplo cloruro de bencilamonio o yoduro de zinc, o utilizando un catalizador cristalino, por ejemplo como se describe en Chem. Rev., (1999) 99, 3649), seguido por hidrólisis bajo condiciones que son bien conocidas por los expertos en la técnica (por ejemplo, como se describe en lo siguiente) ; (b) NaCN o KCN, por ejemplo, en presencia de NaHS03 y agua, seguido por hidrólisis; (c) cloroformo, por ejemplo, a temperatura elevada (por ejemplo por encima de la temperatura ambiente pero inferior a 100oC) en presencia de un solvente orgánico adecuado (por ejemplo cloroformo) y, si es necesario, en presencia de un sistema de catalizador adecuado (por ejemplo cloruro de bencilamonio) seguido por hidrólisis; (d) un compuesto de fórmula VIII, en donde M representa Mg o Li, seguido por separación oxidativa (por ejemplo ozonólisis o catalizada por osmio o rutenio) bajo condiciones las cuales son bien conocidas por los expertos en la técnica; o (e) tris (metiltio) metano bajo condiciones las cuales son bien conocidas por los expertos en la técnica, seguido por hidrólisis en presencia, por ejemplo, de HgO y HBF4. Alternativamente, los compuestos de fórmula II se pueden preparar por oxidación de un compuesto de fórmula IX, o un derivado del mismo que está opcionalmente protegido en el grupo hidroxxlo secundario, en presencia de un agente oxidante adecuado (por ejemplo una combinación de un oxidante adecuado por radicales libres (tal como TEMPO) y una sal apropiada de hipoclorito (tal como hipoclorito de sodio) ) bajo condiciones conocidas por los expertos en la técnica, por ejemplo entre -10°C y la temperatura ambiente, en presencia de un solvente adecuado (por ejemplo agua, acetona o una mezcla de los mismos) , una sal apropiada (por ejemplo un haluro de metal alcalino tal como bromuro de potasio) y una base adecuada (por ejemplo un carbonato o carbonato ácido de metal alcalino tal como carbonato ácido de sodio) . Las formas enantiomérreamente puras de compuestos de fórmula II (es decir, aquellos compuestos que tienen configuraciones diferentes de sustituyentes alrededor del átomo de carbono a al grupo C02H) se pueden separar por una etapa de formación de derivados enantioespeclficos . Esto se puede llevar a cabo, por ejemplo, por un procedimiento enzimático. Tal procedimiento enzimático incluye, por ejemplo transesterificación del grupo a-OH entre la temperatura ambiente y la de reflujo (por ejemplo entre 45 y 65°C) en presencia de una enzima adecuada (por ejemplo Lipase PS Amano) , un éster apropiado (por ejemplo acetato de vinilo) y un solvente adecuado (por ejemplo metilterbutiléter) . El isómero derivatizado después se puede separar del isómero que no ha reaccionado por técnicas de separación convencionales (por ejemplo cromatografía) . Los grupos agregados a los compuestos de fórmula II en tal etapa de formación de derivados se pueden separar antes de cualquier reacción adicional o bien en una etapa posterior en la síntesis de los compuestos de fórmula I . Los grupos adicionales se pueden separar utilizando técnicas convencionales (por ejemplo, para ésteres del grupo a-OH, hidrólisis bajo condiciones conocidas por los expertos en la técnica (por ejemplo entre la temperatura ambiente y la de reflujo en presencia de una base adecuada (por ejemplo NaOH) y un solvente apropiado (por ejemplo MeOH, agua o mezclas de los mismos) ) . Los compuestos de fórmula III se pueden preparar al acoplar ácido acetidin-2-carboxílico a un compuesto de fórmula V, como se define en lo anterior, por ejemplo bajo condiciones similares a las descritas en la presente para preparación de compuestos de fórmula I.
Los compuestos de fórmula IV se pueden preparar por acoplamiento de un compuesto de fórmula II como se define en lo anterior a ácido acetidin-2-carboxílico, por ejemplo utilizando condiciones similares a las descritas en la presente para la preparación de compuestos de fórmula I . El compuesto de fórmula VI está disponible utilizando técnicas conocidas o estándar. Por ejemplo, se puede preparar por: (i) metalación (en donde el metal puede ser, por ejemplo, un metal alcalino tal como Li, o, preferiblemente un metal divalente tal como Mg) de un compuesto de fórmula X, en donde Hal representa un átomo de halógeno que se selecciona de Cl, Br e I, seguido por reacción con una fuente adecuada del grupo formilo (tal como N,N-dimetilformamida) , por ejemplo bajo condiciones descritas en lo siguiente; (ii) reducción de un compuesto de fórmula XI, en presencia de un agente reductor adecuado (por ejemplo DIBAL-H) ; o (iii) oxidación de un compuesto de fórmula XII, en presencia de un agente oxidante adecuado (por ejemplo Mn02, clorocromato de piridinio o una combinación de DMSO y cloruro de oxalilo, o complejo de S03 y piridina en DMSO) . Los compuestos de fórmula IX se pueden preparar por dihidroxilación de un compuesto correspondiente de fórmula XIII en presencia de un agente dihidroxilante adecuado (por ejemplo un reactivo o mezcla de reactivos que proporcione 0s04 tal como D-mix-a o particularmente AD-mix-ß) , por ejemplo bajo condiciones conocidas por los expertos en la técnica, tales como entre -10 °C y la temperatura ambiente en presencia de un solvente adecuado (por ejemplo agua, terbutanol o una mezcla de los mismos) . Cuando se utilizan oxidantes asimétricos tales como AD~mix-a o AD-mix-ß, este método se puede utilizar para preparar compuestos de fórmula IX que tienen configuraciones específicas de grupos (es decir, R o S) alrededor de ambos átomos de carbono a los cuales están unidos los grupos hidroxilo primario y secundario . Los compuestos de fórmula XIII se pueden preparar por reacción de un compuesto correspondiente de fórmula X, como se define en lo anterior, con una fuente adecuada de anión vinilo (por ejemplo tributil (vinil) estaño) bajo condiciones conocidas por los expertos en la técnica, por ejemplo entre la temperatura ambiente y la de reflujo (por ejemplo 50°C) en presencia de un solvente apropiado (por ejemplo tolueno), un agente de acoplamiento adecuado )por ejemplo un complejo de coordinación de paladio(O) tal como tetrakis (trifenilfosfina) aladio (0 ) ) y opcionalmente en presencia de un catalizador apropiado (por ejemplo 2,6-diterbutil-4-metilfenol) . Los compuestos de fórmulas V, VII, VIII, X, XI, XII y el ácido acetidin-2-carboxílico están disponibles comercialmente, se conocen en la literatura o se pueden obtener por analogía con procedimientos descritos en la presente o por procedimientos de síntesis convencionales de acuerdo con técnicas estándar, a partir de materiales iniciales disponibles fácilmente utilizando reactivos y condiciones de reacción apropiados . Los compuestos de fórmula XVI se pueden obtener por procedimientos descritos en lo siguiente. Los sustituyentes en el anillo fenilo en los compuestos de fórmulas I, II, III, IV, V, VI, . IX, X, XI, XII y XIII utilizando técnicas bien conocidas por los expertos en la técnica por medio de interconversiones estándar de grupos funcionales, de acuerdo con técnicas estándar a partir de materiales iniciales disponibles fácilmente utilizando reactivos y condiciones de reacción apropiados . Por ejemplo, los compuestos de fórmulas I, II, IV, VI, X, XI y XII se pueden preparar a partir de compuestos que corresponden a los compuestos en los cuales, en lugar del grupo -OCHF2, están presentes grupos -OH (a continuación denominados como "los compuestos precursores de fenol relevantes") , por e emplo por reacción con tal compuesto precursor de fenol relevante con un haloalcano fluorado apropiado (tal como C1CHF2) , por ejemplo a temperatura ambiente o por encima de la misma (por ejemplo a reflujo) en presencia de una base adecuada (por ejemplo terbutóxido de potasio, KOH o NaOH, por ejemplo en solución acuosa) y un solvente orgánico apropiado (por ejemplo THF, cloroformo o i-propanol) por ejemplo como se describe en lo siguiente . Las personas expertas apreciarán que tales transformaciones de grupos funcionales también se pueden llevar a cabo en una etapa anterior en la síntesis total de compuestos de fórmulas II, IV, VI, X, XI y XII (es decir, sobre precursores apropiados de los compuestos precursores de fenol relevantes) . Los compuestos precursores de fenol relevantes están disponibles comercialmente, se conocen en la literatura o se pueden obtener por analogía con el procedimiento descrito en la presente o por procedimientos de síntesis convencionales, de acuerdo con técnicas estándar a partir de materiales iniciales disponibles fácilmente utilizando reactivos y condiciones de reacción apropiados. Por ejemplo, los compuestos precursores de fenol relevantes se pueden obtener por desprotección de los fenoles protegidos correspondientes (en donde el grupo protector puede ser, por ejemplo, metilo, alilo, bencilo o terbutilo) bajo condiciones estándar. Los compuestos de fórmula I se pueden aislar a partir de sus mezclas de reacción utilizando técnicas convencionales .
De acuerdo con la presente invención, los derivados farmacéuticamente aceptables de compuestos de fórmula I también incluyen derivados "protegidos" o compuestos que actúan como precursores (profármacos o promedicamentos) de compuestos de fórmula I. Los compuestos que pueden actuar como precursores de compuestos de fórmula I que se pueden mencionar incluyen compuestos de fórmula la, en donde R1 representa OR2 o C(0)OR3; R2 representa H, alquilo de 1 a 10 átomos de carbono, alquilarilo de 1 a 3 átomos de carbono o alquiloxiarilo de 1 a 3 átomos de carbono (las partes alquilo de las cuales los dos últimos grupos están opcionalmente interrumpidos por uno o más átomos de oxígeno, y las partes arilo de los dos últimos grupos los cuales están opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes que se seleccionan de halo, fenilo, metilo o metoxi, los últimos tres grupos los cuales también están opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes halo) ; y R3 representa alquilo de 1 a 10 átomos de carbono (último grupo el cual está opcionalmente interrumpido por uno o más átomos de oxígeno) , o alquilarilo de 1 a 3 átomos de carbono o alcoxiarilo de 1 a 3 átomos de carbono (las partes alquilo de los dos últimos grupos los cuales están opcionalmente interrumpidas por uno o más átomos de oxígeno y las partes arilo de los dos últimos grupos las cuales están opcionalmente sustituidas por uno o más sustituyentes que se seleccionan de halo, fenilo, metilo o metoxi, últimos tres grupos los cuales también están opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes halo) , y derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos . El término "derivados farmacéuticamente aceptables" de los compuestos de fórmula la incluyen sales farmacéuticamente aceptables (por ejemplo sales de adición de ácido) . Los grupos alcoxiarilo que pueden representar R2 y R3 comprenden un alquilo y un grupo arilo unido por medio de un átomo de oxígeno. Los grupos alquilarilo y alquiloxiarilo están unidos al resto de la molécula por medio de la parte alquilo de aquellos grupos, partes alquilo las cuales pueden (si existe un número suficiente (es decir tres) de átomos de carbono) ser de cadena ramificada (las partes arilo de los grupos alquilarilo y alcoxiarilo que puede representar R2 y R3 o por las cuales puede estar sustituida, incluyen grupos aromáticos carbocíclacos y heterocíclicos, tales como fenilo, naftilo, piridilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiadiazolilo, indolilo y benzofuranilo, y similares. Los grupos alquilo en los cuales R2 y R3 pueden representar una cadena lineal o, cuando existe un número suficiente (es decir, un mínimo de tres) átomos de carbono, pueden ser de cadena ramificada o cíclica. Además, cuando existe un número suficiente (es decir, un mínimo de cuatro) átomos de carbono tales como grupos alquilo también puede ser parte cíclica/acíclica. Tales grupos alquilo también pueden estar saturados o, cuando existe un número suficiente (es decir un mínimo de dos) átomos de carbono, pueden estar insaturados. Los grupos halo con los cuales se pueden sustituir a R2 y R3 incluyen fluoro, cloro, bromo y yodo. Cuando R1 representa C(0)OR3, los grupos R3 preferidos incluyen: (a) alquilo de 3 a 6 átomos de carbono lineal, ramificado o cíclico, por ejemplo cicloalquilo de 4 a 6 átomos de carbono; (b) grupos alquilarilo de 1 a 2 átomos de carbono, tales como bencilo, opcionalmente sustituido como se indica en lo anterior. Los compuestos preferidos de fórmula la incluyen aquellos en los cuales R1 representa OR2. Cuando R1 representa OR2, los grupos R2 preferidos incluyen: (a) H; (b) alquilo de 1 a 8 átomos de carbono (por ejemplo de 1 a 6 átomos de carbono lineal, ramificado o cíclico no sustituido tal como alquilo de 1 a 3 átomos de carbono (por ejemplo etilo o particularmente metilo) , alquilo de 3 a 8 átomos de carbono ramificado (por ejemplo i-propilo, i-butilo o 4-heptilo) o alquilo cíclico de 4 a 7 átomos de carbono (es decir, cicloalquilo de 4 a 7 átomos de carbono, por ejemplo ciclobutilo o ciclo exilo) (c) alcoxifenilo de 1 a 3 átomos de carbono (por ejemplo alcoxifenilo de 2 átomos de carbono) , grupo fenilo el cual está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes como se indica en lo anterior (por ejemplo trifluorometilo) ; (d) alquilarilo de 1 a 2 átomos de carbono (por ejemplo metilarilo) , en donde el grupo arilo es fenilo, piridinilo, oxazolilo o isoxazolilo, últimos tres grupos los cuales están opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes, como se indica en lo anterior (por ejemplo metoxi, metilo, bromo o cloro) . Los compuestos preferidos de fórmula la incluyen aquellos en los cuales R1 representa OR2 y R2 representa la forma lineal, ramificada (según sea apropiado) o cíclica (según sea apropiado) , de alquilo de 1 a 6 átomos de carbono (por ejemplo de 1 a 4 átomos de carbono) tal como metilo, etilo, n-propilo, i-propilo o ciclobutilo. Los compuestos de fórmula la se pueden preparar por uno o más de los siguientes métodos : (a) reacción de un compuesto correspondiente de fórmula II como se define en lo anterior con un compuesto de fórmula XIV, en donde R1 es como se define en lo anterior, por ejemplo bajo condiciones similares a las descritas en lo anterior para la síntesis de compuestos de fórmula I; (b) reacción de un compuesto correspondiente de fórmula IV como se define en lo anterior con un compuesto de fórmula XV, en donde R1 es como se define en lo anterior, por ejemplo bajo condiciones similares a las descritas en lo anterior para la síntesis de compuestos de fórmula I; (c) para compuestos de fórmula la en los cuales R1 representa OH, reacción de un compuesto correspondiente de fórmula XVI, con hidroxilamina, por ejemplo bajo condiciones conocidas por los expertos en la técnica; (d) para compuestos de fórmula a en los cuales R1 representa O 2, la reacción de un derivado protegido de un compuesto correspondiente de fórmula I el cual es, por ejemplo, un compuesto de fórmula XVII, en donde Ra representa, por ejemplo, -CH2CH2-Si (CH3) 3 o bencilo, o un tautómero del mismo, con un compuesto de fórmula XVIII, R2ONH2 XVIII en donde R2 es como se define en lo anterior, o una sal de adición de ácido del mismo, por ejemplo entre la temperatura ambiente y la de reflujo en presencia de un solvente orgánico apropiado (por ejemplo THF, CH3CN, DMF o DMSO) , seguido por separación del grupo -C(0)ORa ^bajo condiciones conocidas por los expertos en la técnica (por ejemplo al reaccionar con QF o TFA (por ejemplo como se describe en lo siguiente) ) ; (e) para compuestos de fórmula la en los cuales R1 representa OH, la reacción de un compuesto de fórmula XVII como se define en lo anterior, en el cual Ra representa bencilo con hidroxilamina, o una sal de adición de ácido del mismo, por ejemplo bajo condiciones que serán conocidas por los expertos en la técnica; (f) para compuestos de fórmula la en la cual R1 representa COOR3, la reacción de un compuesto correspondiente de fórmula I como se define en lo anterior con un compuesto de fórmula XIX, l COOR3 XIX en donde L1 representa un grupo saliente adecuado, tal como halo o nitrofenilo (por ejemplo 4-nitrofenilo) y R3 es como se define en lo anterior, por ejemplo aproximadamente a temperatura ambiente en presencia de una base adecuada (por ejemplo NaOH, por ejemplo en solución acuosa) y un solvente orgánico apropiado (por ejemplo cloruro de metileno) ; o (g) para compuestos de fórmula la en los cuales R1 representa 0CH3 u OCH2CH3, la reacción de un compuesto correspondiente de fórmula la en el cual R1 representa OH con sulfato de dimetilo o sulfato de dietilo, respectivamente, por ejemplo en presencia de una base adecuada (por ejemplo un hidróxido de metal alcalino tal como KOH (por ejemplo en solución acuosa, por ejemplo a 50% en peso)) y un catalizador apropiado (por ejemplo haluro de amonio cuaternario, tal como cloruro de benciltrimetilamonio (por ejemplo en CH2C12 o solución de THF, por ejemplo a 10% en peso) ) . Los compuestos de fórmula XVI se pueden preparar por reacción de un compuesto correspondiente de fórmula II, como se define en lo anterior, con un compuesto de fórmula XX, por ejemplo bajo condiciones similares a las descritas en lo anterior para la síntesis de compuestos de fórmula I . Los compuestos de fórmulas XVI alternativamente se pueden preparar por reacción de un compuesto correspondiente de fórmula IV, como se define en lo anterior, con un compuesto de fórmula XXI, por ejemplo bajo condiciones similares a las descritas en lo anterior para la síntesis de compuestos de fórmula I . Los compuestos de fórmula XVII se pueden preparar por reacción de un compuesto correspondiente de fórmula II, como se define en lo anterior, con un compuesto de formula XXII, en donde Ra es como se define en lo anterior, por ejemplo bajo condiciones similares a las descritas en lo anterior para la síntesis de compuestos de fórmula I. De manera alternativa, los compuestos de fórmula XVII se pueden preparar por reacción de un compuesto correspondiente de fórmula I con un compuesto correspondiente a un compuesto de fórmula XIX en el cual, en lugar de R3, está presente el grupo Ra en el cual Ra es como se define en lo anterior, por ejemplo bajo condiciones descritas en lo anterior con respecto a la preparación de compuestos de fórmula la. Los compuestos de fórmulas XIV y XXII se pueden preparar por reacción de ácido acetidin-2-carboxílico, respectivamente, para un compuesto de fórmula XV como se define en lo anterior, o un compuesto de fórmula XXIII, XXIII en donde Ra es como se define en lo anterior, por ejemplo bajo condiciones similares a las descritas en lo anterior para la síntesis de compuestos de fórmula I. Los compuestos de fórmulas XV, XVIII, XIX, XX, XXI y XXIII están disponibles comercialmente, se conocen en la literatura o se pueden obtener ya sea por analogía con procedimientos descritos en la presente o por procedimientos de síntesis convencionales, de acuerdo con técnicas estándar, a partir de materiales iniciales disponibles fácilmente utilizando reactivos y condiciones de reacción apropiados, por ejemplo, los compuestos de fórmula XX se pueden preparar por reacción de un compuesto correspondiente de fórmula XXI con ácido acetidin-2-carboxílico, por ejemplo bajo condiciones similares a las descritas en lo anterior. Los compuestos de fórmulas I y la, como se definen en lo anterior, y los derivados de cualquiera de ellas, se denominan en lo siguiente como "los compuestos de la invención" . Los compuestos de la invención pueden mostrar tautomerismo. Todas las formas tautoméricas y mezclas de las mismas están incluidas dentro del alcance de la invención. Las formas tautoméricas particulares que se pueden mencionar incluyen las relacionadas con la posición de un enlace doble en la funcionalidad amidina en un compuesto de fórmula la, y la posición del sustituyente R1. Los compuestos de la invención también contienen dos o más átomos de carbono asimétricos y por lo tanto pueden mostrar isomerismo óptico o diastereoisomerismo . Los diastereoisómeros se pueden preparar utilizando técnicas convencionales, por ejemplo cromatografía. Los diversos estereoisómeros se pueden aislar por separación de una mezcla racémica u otra mezcla de los compuestos utilizando técnicas convencionales, por ejemplo CLAR.
Alternativamente, los isómeros ópticos deseados se pueden elaborar por reacción de los materiales iniciales ópticamente activos apropiados bajo condiciones que no provocarán racemización o epimerización, o por formación de derivados, por ejemplo, con un ácido omoquiral seguido por separación de los derivados diastereoméricos por medios convencionales (por ejemplo CLAR, cromatografía sobre sílice) . Dentro del alcance de la invención se incluyen todos los estereoisómeros. Se prefieren los compuestos de la invención en los cuales el fragmento está en la configuración S . Los compuestos preferidos de la invención también incluye aquellos en los cuales el fragmento estructural está en la configuración R. Las lineas onduladas en los enlaces en los dos fragmentos anteriores significan las posiciones de unión de los fragmentos . De este modo, los compuestos preferidos de la invención incluyen: Ph(3-Cl) (5-OCHF2) - (R) CH(0H)C(O) -Aze-Pab (2 , 6-diF) ; Ph(3-Cl) (5-OCHF2) - (R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (2 , 6-diF) (OMe) ; y Ph(3-Cl) (5-OCHF2) - (R) CH(0H)C(0) -Aze-Pab (2 , 6-diF) (OH) . Se apreciará por aquellos expertos en la técnica en el procedimiento descrito antes y en lo que sigue, que los grupos funcionales de los compuestos intermediarios pueden necesitar estar protegidos por grupos protectores . Los grupos funcionales que son deseables proteger incluyen hidroxi, amino y ácido carboxílico. Los grupos protectores adecuados para hidroxi incluyen grupos alquilo opcionalraente sustituidos o insaturados (por ejemplo metilo, alilo, bencilo o terbutilo) , grupos trialquilsililo o diarilalquilsililo (por ejemplo terbutildimetilsililo, terbutildifenilsililo o trimetilsililo) y tetrahidropiranilo . Los grupos protectores adecuados para ácido carboxílico incluyen esteres de alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o de bencilo. Los grupos protectores adecuados para amino y amidino incluyen terbutiloxicarbonilo, benciloxicarbonilo o 2-trimetilsilil-etoxicarbonilo (Teoc, por sus siglas en inglés) . Los nitrógenos amidino también pueden estar protegidos por grupos hidroxi o alcoxi, y pueden estar monoprotegidos o diprotegidos . La protección y desprotección de grupos funcionales puede llevarse a cabo antes o después del acoplamiento, o antes o después de cualquier otra reacción en los esquemas de reacción mencionados antes. Los grupos protectores se pueden separar de acuerdo con técnicas que son bien conocidos por los expertos en la técnica y que se describen en lo siguiente . Las personas expertas en la técnica apreciarán que, con el fin de obtener los compuestos de la invención, de una manera alternativa y en algunas ocasiones más conveniente, las etapas de procedimiento inhibidores mencionadas en lo anterior se pueden llevar a cabo en un orden diferente o se pueden realizar reacciones individuales en una etapa diferente en la via total (es decir, se pueden agregar los sustituyentes o las transformaciones químicas realizadas sobre el mismo, los intermediarios diferentes a los mencionados en lo anterior junto con una reacción particular) . Esto puede eliminar, o volver necesaria, la necesidad de grupos protectores. El tipo de química involucrada determinará la necesidad y tipo de grupos protectores así como la secuencia para llevar a cabo la síntesis. El uso de grupos protectores se describe completamente en "Protective Groups in Organic Chemistry" , editada por J W F McOmie, Plenum Press (1973), y "Protective Groups in Organic Synthesis", tercera edición, T. W. Greene & P.G.M. Wutz, Wiley-Interscience (1999) . Los derivados protegidos de los compuestos de la invención se pueden convertir químicamente a compuestos de la invención utilizando técnicas de desprotección estándar (por ejemplo hidrogenación) . Una persona experta también apreciará que ciertos compuestos de fórmula la también se les puede denominar como "derivados protegidos" de compuestos de fórmula I .
USO MÉDICO Y FARMACÉUTICO Los compuestos de la invención poseen actividad farmacológica como tales. Los compuestos de la invención pueden poseer actividad farmacológica como tales . Los compuestos de la invención que pueden poseer dicha actividad incluyen, pero no se limitan a compuestos de fórmula I . No obstante, otros compuestos de la invención (que incluye a los compuestos de fórmula la pueden no poseer dicha actividad, pero se pueden administrar por vía parenteral u oral y posteriormente se metabolizan en el cuerpo para formar compuestos que son farmacológicamente activos (que incluyen pero que no se limitan a los compuestos correspondientes de fórmula I) . Tales compuestos (los cuales también incluyen compuestos que pueden poseer cierta actividad farmacológica pero que dicha actividad es apreciablemente menor que la de los compuestos "activos" a los cuales son metabolizados) por lo tanto se pueden describir como "precursores" de los compuestos activos. De esta manera, los compuestos de la invención son útiles debido a que poseen actividad farmacológica o son metabolizados en el cuerpo después de su administración oral o parenteral para formar compuestos que poseen actividad farmacológica. Los compuestos de la invención por lo tanto están indicados como sustancias farmacéuticas.
De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona de esta manera los compuestos de la invención para uso como sustancias farmacéuticas. En particular, los compuestos de la invención son inhibidores potentes de trombina ya sea como tal o (por ejemplo en el caso de precursores) son metabolizados después de su administración para formar inhibidores potentes de trombina, por ejemplo como se puede demostrar por las pruebas que se describen en lo siguiente. Mediante el término "precursor de un inhibidor de trombina", se incluyen compuestos que forman un inhibidor de trombina, en una cantidad detectable experimentalmente y dentro de un tiempo determinado previamente (por ejemplo, aproximadamente 1 hora) posterior a su administración oral o parenteral (véase, por ejemplo, la prueba E en lo siguiente) , o alternativamente, después de incubación en presencia de microsomas hepáticos (véase, por ejemplo, la prueba G en lo que sigue) . De esta manera, se espera que los compuestos de la invención sean útiles en aquellas condiciones en donde se requiere inhibición de trombina o condiciones en donde está indicado un tratamiento anticoagulante, que incluye a los siguientes : El tratamiento o profilaxis de trombosis e hipercoagulabilidad en sangre o tejidos de animales, incluyendo al ser humano . Se sabe que la hipercoagulabilidad puede inducir enfermedades tromboembólicas . Las condiciones asociadas con hipercoagulabilidad y enfermedades tromboembólicas las cuales se pueden mencionar incluyen resistencia heredada o adquirida a proteina C activada, tal como mutación del factor V (factor V Leiden) y deficiencias heredadas o adquiridas en antitrombina III, proteína C, proteínas S, cofactor II de heparina. Otras condiciones que se sabe están asociadas con hipercoagulabilidad y enfermedades tromboembólicas incluyen anticuerpos circulantes contra fosfolípidos (Lupus anticoagulante) , homocisteinemia, trombocitopenia inducida por heparina y defectos en fibrinólisis, así como síndromes de coagulación (por ejemplo coagulación intravascular diseminada (DIC) ) y daño vascular en general (por ejemplo debido a cirugía) . El tratamiento de condiciones en donde existe un exceso indeseable de trombina sin signos de hipercoagulabilidad, por ejemplo en enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Alzheimer. Los estados de enfermedad particulares los cuales se pueden mencionar incluyen el tratamiento terapéutico o profiláctico de trombosis venosa (por ejemplo DVT) y embolia pulmonar, trombosis arterial (por ejemplo en infarto al miocardio, angina inestable, apoplejía basada en trombosis y trombosis arterial periférica) así como embolia sistémica habitualmente de la aurícula durante la fibrilación auricular (por ejemplo, fibrilación auricular no valvular) o del ventrículo izquierdo después de infarto miocárdico transmural , o causado por fallo cardíaco congestivo, profilaxis de reoclusión (es decir, trombosis) , después de trombólisis, angioplastía transluminal percutánea (PTA) y cirugías de derivación coronaria; la prevención de retrombosis después de microcirugía y cirugía vascular en general . Las indicaciones adicionales incluyen el tratamiento terapéutico o profiláctico de la coagulación intravascular diseminada causada por bacterias, traumatismos múltiples, intoxicación o cualquier otro mecanismo, el tratamiento con anticoagulantes cuando la sangre está en contacto con superficies extrañas en el cuerpo tales como injertos vasculares, endoprótesis vasculares, catéteres vasculares, válvulas prostéticas mecánicas o biológicas o cualquier otro dispositivo médico; y tratamiento anticoagulante cuando la sangre está en contacto con dispositivos médicos fuera del cuerpo por ejemplo durante cirugía cardiovascular utilizando una máquina cardiopulmonar o en hemodiálisis; el tratamiento terapéutico o profiláctico de el síndrome idiopático o de malestar respiratorio adulto, fibrosis pulmonar posterior al tratamiento con radiación o quimioterapia, choque septicémico, septicemia, respuestas inflamatorias las cuales incluyen, pero no se limitan a edema, ateroesclerosis aguda o crónica tales como arteriopatía coronaria y la deformación de placas ateroescleróticas, enfermedad arterial cerebral, infarto cerebral, trombosis cerebral, embolia cerebral, arteriopatía periférica, isquemia, angina (que incluye angina inestable) , daño por reperfusión, restenosis después de angioplastía transluminal percutánea (PTA) y cirugía de derivación de la arteria coronaria. Los compuestos de la invención que inhiben a la tripsina o trombina también pueden ser útiles en tratamiento de pancreatitis. Los compuestos de la invención de esta manera están indicados en el tratamiento como terapéutico como profiláctico de estas condiciones. De acuerdo con un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un método de tratamiento de una condición en donde se requiere la inhibición de trombina, método el cual comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención a una persona que padece de, o que es susceptible de tal condición. Los compuestos de la invención normalmente se administrarán por vía oral, intravenosa, subcutánea, bucal, rectal, dérmica, nasal, traqueal, bronquial o por cualquier otra vía parenteral o por medio de inhalación, en forma de preparaciones farmacéuticas que comprenden compuestos de la invención en una forma de dosificación farmacéuticamente aceptable . En base en el trastorno y el paciente que se va a tratar así como la vía de administración, las composiciones se pueden administrar a dosis variables . Los compuestos de la invención también se pueden combinar o administrar de manera conjunta con uno o varios agentes antitrombóticos con un mecanismo de acción diferente, tal como uno o más de los siguientes: agentes antiplaquetarios como ácido acetilsalicílico, ticlopidina y clopidogrel; inhibidores de receptor de tromboxano o de sintetasa, antagonistas del receptor de fibrinógeno; miméticos de prostaciclina; inhibidores de fosfodies erasa; antagonistas del receptor de ADP (P2T) e inhibidores de carboxipeptidasa U (CPU) . Los compuestos de la invención se pueden combinar adicionalmente o se pueden coadministrar con trombolíticos tales como uno o más de activador de plasminógeno tisular (natural, recombinante o modificado) , estreptocinasa, urocinasa prourocinasa, complejo de plasminógeno-activador de estreptocinasa anisoilado (APSAC) , activadores de plasminógeno de glándulas salivales animales y similares, en el tratamiento de enfermedades trombóticas, en particular infarto al miocardio. De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona una formulación farmacéutica que incluye un compuesto de la invención, en mezcla con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable . Las dosis diarias adecuadas de los compuestos de la invención en tratamiento terapéutico de humanos son de aproximadamente 0.001-100 mg/kg de peso corporal a administración peroral, y de 0.001-50 mg/kg de peso corporal de administración parenteral, excluyendo el peso de cualquier contraión acido . Para evitar dudas, como se utiliza en la presente, el término "tratamiento" incluye tratamiento terapéutico o profiláctico. Los compuestos de la invención tienen la ventaja de que pueden ser más eficaces, menos tóxicos, de acción más prolongada, tener un alcance de actividad más amplio, ser más potentes, producir menos efectos colaterales, ser absorbidos con mayor facilidad o presentar un mejor perfil farmacocinético (es decir, una biodisponibilidad oral superior o una menor depuración) en comparación, o bien pueden presentar otras propiedades farmacológicas, físicas o químicas útiles, en relación con compuestos conocidos en la técnica anterior. Los compuestos de la invención pueden tener la ventaja adicional de que se pueden administrar con menor frecuencia que los compuestos conocidos en la técnica anterior .
PRUEBAS BIOLÓGICAS Se pueden utilizar los siguientes procedimientos de prueba.
Prueba A Determinación del tiempo de coagulación de trombina (TT) Se incuban 25 µ? de solución inhibidora con 25 µ? de plasma durante tres minutos . Después se agrega trombina humana (T 6769; Sigma Chem. Co o Hematologic Technologies) en solución amortiguadora, pH 7.4 (25 µ?, 4.0 unidades NIH/ml) y se mide el tiempo de coagulación en un dispositivo automático (KC 10; Amelung) . El tiempo de coagulación de trombina (TT) se expresa como valores absolutos (segundos) así como la proporción de TT sin inhibidor (TT0) respecto a TT con inhibidor (???) . Estas últimas relaciones (intervalo de 1-0) se grafican contra la concentración de inhibidor (logaritmo decimal transformado) y se ajustan a curvas dosis-respuesta sigmoideas, de acuerdo con la ecuación: y = a/ [l+(x/CIS0)s] en donde: a = alcance máximo, es decir 1; s = pendiente de la curva dosis-respuesta, y CIS0 = concentración del inhibidor que duplica el tiempo de coagulación. Los cálculos se procesan en una PC utilizando el programa de software GraFit Versión 3, ajustando la ecuación igual a: inicio en 0, definir fin = 1 (Erithacus Software, Robin Leatherbarrow, Imperial College of Science, Londres, Reino Unido) .
Prueba B Determinación de Inhibición de Trombina con un Ensayo Robótico Cromogénico Se mide la potencia de inhibidora de trombina con un método de sustrato cromogénico en un procesador de microplaca robótico Plato 3300 (Rosys AG, CH-8634 Hombrechtikon, Suiza) utilizando placas de microtitulación de medio volumen de 96 pozos (Costar, Cambridge, ??, USA; Cat No 3690) . Las soluciones concentradas de la sustancia de prueba en 72 µ? de DMSO, 0.1 - 1 mmol/1, se diluyen de manera seriada 1:3 (24 + 48 µ?) con DMSO para obtener 10 concentraciones diferentes las cuales se analizan como muestras en el ensayo. Se diluyen 2 µ1· de la muestra de prueba con 124 µ? de amortiguador de ensayo, 12 µ? de solución cromogénica de sustrato (S-2366, Chromogenix, Mólndal, Suecia) en amortiguador de ensayo y finalmente 12 µ? de solución de trombina OÍ (trombina a humana, Sigma Chemical Co. o Hematologic Technologies) en amortiguador de ensayo, el cual se agrega y se mezcla en las muestras. Las concentraciones finales de ensayo son: sustancia de prueba 0.00068 - 13.3 µ???/?, S-2366 0.30 mmol/1, a-trombina 0.020 NIHU/ml. El incremento de absorbancia lineal durante 40 minutos de incubación a 37 °C se utiliza para el cálculo de porcentaje de inhibición para las muestras de prueba, en comparación con los blancos o testigos sin inhibidor. El valor robótico CI50 que corresponde a la concentración inhibidora que provoca 50% de inhibición de la actividad de trombina se calcula a partir de una curva de logaritmo decimal de la concentración versus % de inhibición.
Prueba C Determinación de la Constante de Inhibición Kj para Trombina Humana Se realizan determinaciones de ?? utilizando el método de sustrato cromogénico realizado a 37 °C en un analizador centrifugo Cobas Bio (Roche, Basilea, Suiza) . Se determina la actividad enzimática residual después de incubación de trombina a humana con diversas concentraciones del compuesto de prueba a 3 concentraciones diferentes de sustrato, y se mide como el cambio en la absorbancia óptica a 405 nm. Se mezclan las soluciones del compuesto de prueba (100 µ?; habitualmente en amortiguador o solución salina que contiene 10 g/1 de BSA) con 200 µ? de trombina a humana (Sigma Chemical Co) en amortiguador de ensayo (0.05 mol/1 de clorhidrato Tris, pH 7.4, fuerza iónica de 0.15 ajustada con NaCl) que contiene 10 g/1 de BSA y se analizan como muestras en el equipo Cobas Bio. Se agrega una muestra de 60 µ?, junto con 20 µ? de agua a 320 µ? de sustrato S-2238 (Chromogenix AB, Mólndal, Suecia) en amortiguador de ensayo y se monitorea el cambio de absorbancia (??/min) . Las concentraciones finales de S-2238 son de 16, 24 y 50 ymol/l y de trombina 0.125 NIH U/ml. Se utiliza la velocidad de reacción en estado estable para construir las gráficas Dixon, es decir, diagramas de concentración de inhibidor versus inverso de ??/min. Para inhibidores competitivos reversibles, los puntos de datos para las diferentes concentraciones de sustrato típicamente son líneas rectas que se interceptan en x = Prueba D Determinación del Tiempo Parcial de Tromboplastina Activada (APTT) Se determina ???? en plasma humano normal acumulado, tratado con citrato, con el reactivo PTT automático 5 fabricado por Stago. Se agregan los inhibidores al plasma (10 µ? de solución de inhibidor a 90 µ? de plasma) que se incuba con el reactivo APTT durante 3 minutos seguido por la adición de 100 µ? de una solución 0.025 M de cloruro de calcio y se determina APTT mediante el uso del analizador de coagulación KC10 (Amelung) de acuerdo con las instrucciones de productor del reactivo. El tiempo de coagulación se expresa como valores absolutos (segundos) asi como la proporción de APTT sin inhibidor (APTT0) sin respecto a APTT con inhibidor (APTTj.) . Estas últimas relaciones (intervalo 1-0) se grafican contra la concentración de inhibidor (logaritmo decimal transformado) y se ajustan a curvas de dosis-respuesta sigmoideas de acuerdo con la ecuación. y = a/ [l+(x/CIS0)5] en donde: a = alcance máximo, es decir 1; s = pendiente de la curva dosis-respuesta, y CIS0 (concentración de inhibidor que duplica el tiempo de coagulación. Los cálculos se procesan en una PC utilizando el programa de software GraFit Versión 3, ajustando la ecuación igual a: inicio en 0, definir fin = 1 (Erithacus Software, Robin Leatherbarrow, Imperial College of Science, Londres, Reino Unido) . La CIS0 de APTT se define como la concentración de inhibidor en plasma humano que duplica el tiempo parcial de tromboplastina activada.
Prueba E Determinación del Tiempo de Trombina ex vivo Se examina la inhibición de trombina después de administración oral o parenteral de los compuestos de la invención, disueltos en etanol : solutol K:agua (5:5:90), experimento que se realiza en ratas concientes, las cuales, uno a dos días antes del experimento, se les coloca un catéter para muestra de sangre en la arteria carótida. En el dia del experimento se extraen muestras de sangre en momentos establecidos después de la administración del compuesto en tubos de plástico que contienen 1 parte de solución de citrato de sodio (0.13 moles por 1) y 9 partes de sangre. Los tubos se centrifugan para obtener la plasma con una baja concentración de plaquetas. Se precipitan 50 µ? de muestras de plasma con 100 µ,? de acetonitrilo frío. Las muestras se centrifugan durante 10 minutos a 4000 rpm. Se diluyen 75 ? del sobrenadante con 75 µ? de ácido fórmico 0.2%. Se analizan volúmenes de 10 µ? de las soluciones resultantes por CL-EM/EM (cromatografía liquida-espectro de masas/espectro de masas) y se determina las concentraciones de inhibidor de trombina utilizando curvas estándar.
Prueba F Determinación de la Depuración Plasmática en Rata Se calcula la depuración plasmática en ratas macho Sprague Dawley. El compuesto se disuelve en agua y se administra como una inyección rápida subcutánea a una dosis de 4 µp???/kg. Las muestras de sangre se recolectan a intervalos frecuentes de hasta 5 horas después de la administración del medicamento. Las muestras de sangre se centrifugan y se separa el plasma de las células sanguíneas y se transfiere a frascos que contienen citrato (concentración final 10%) . Se precipitan 50 µ? de muestras de plasma con 100 µ? de acetonitrilo frío. Las muestras se centrifugan durante 10 minutos a 4000 rpm. Se diluyen 75 µ? del sobrenadante con 75 µ? de ácido fórmico 0.2%. Se analizan volúmenes de 10 µ? de las soluciones resultantes por CL-EM/EM y se determinan las concentraciones de inhibidor de trombina utilizando curvas estándar. Se calcula el área debajo del perfil de concentración en plasma-tiempo mediante la utilización de una regla trapezoidal logarítmica/lineal y se extrapola a un tiempo infinito. Se determina la depuración plasmática (CL) del compuesto como CL = Dosis/ABC Los valores se reportan en ml/min/kg.
Prueba G Determinación de la Estabilidad in vitro Se preparan microsomas hepáticos a partir de ratas Sprague-Dawley en muestras de hígado humano, de acuerdo con los SOP internos . Los compuestos se incuban a 37°C a una concentración de proteína microsómica total de 3 mg/ml en amortiguador Tris 0.05 mol/1 a pH 7.4 en presencia de cofactores NADH (2.5 mmol/1) y NADPH (0.8 mmol/1) . Las concentraciones iniciales del compuesto son 5 o 10 µt???/?. Se toman muestras para análisis hasta 60 minutos después del inicio de la incubación. La actividad enzimática en la muestra recolectada se detiene de inmediato al agregar ácido mirístico 20% a un volumen que corresponde 3.3% del volumen de muestra total . La concentración de compuesto que permanece (concentración final) en la muestra de 60 minutos se determina por medio CLEM utilizando una muestra recolectada en el tiempo cero como referencia: (STA T CONC) . Se calcula el % de inhibidor de trombina degradada como : 100% , ? ¡CONCENTRACIÓN INICIAL]J_-_L ¡CONCENTRA CIÓN FINALJ ] [CONCENTRACION INICIAL] Prueba H Modelo de Trombosis Arterial Se induce daño a los vasos al aplicar cloruro férrico (FeCl3) tópicamente a la arteria carótida. Se anestesia a ratas con una inyección intraperitoneal de pentobarbital sódico (80 mg/kg; Apoteksbolaget; Umea, Suecia) seguido por infusión continua 12 mg/kg/h) durante el experimento. Se mantiene la temperatura corporal de la rata a 38°C durante el experimento, por calentamiento externo . El experimento comienza con un período de control de 5 minutos . 5 minutos después se administra por via intravenosa a la 125I-fibrinógeno humano (80 kBq; IM53 ; Amersham International, Buckinghamshire, Reino Unido) y se utiliza como un marcador para la incorporación subsecuente de fibrina/fibrinógeno) en el trombo. El extremo proximal del segmento de arteria carótida se coloca en un tubo de plástico (6 mm; SilasticMR; Dow Corning, MI; Estados Unidos) abierto longitudinalmente que contiene papel filtro remojado en FeCl3 (2 µ?; 55% p/p; Merck, Darmstadt, Alemania) (3 mm de diámetro; 1F; Munktell, Grycksbo, Suecia) . Se expone la arteria carótida izquierda se expone a FeCl3 durante 10 minutos y después se extrae del tubo de plástico y se enjuaga con solución salina. 15 minutos después se separa la arteria carótida y se enjuaga en solución salina. Las muestras de sangre de referencia también se toman para determinación de sangre, actividad de 125I, 10 minutos después de la inyección de 125I-fibrinógeno y al final del experimento . La actividad de 12SI en las muestras de sangre de referencia y el segmento de vasos se mide en un contador ? (1282 Compugamma; L B Wallac Oy, Turku, Finlandia) en el mismo día en que se realiza el experimento. El tamaño del trombo se determina como la cantidad de actividad de 1SI incorporada en el segmento del vaso en relación a la actividad de 12SI en la sangre (cpm/mg) .
Detalles Experimentales Generales Se realiza CCD sobre gel de sílice. Se realiza el análisis de CLA quiral utilizando 46 mm X 250 mm de una columna Chiralcel OD con una columna de protección de 5 cm. Se mantiene la temperatura de la columna a 35°C. Se utiliza una velocidad de flujo de 1.0 ml/min. Se utiliza un detector Gilson 115 UV a 228 nm. La fase móvil consiste de hexanos, etanol y ácido trifluoroacético, y las proporciones adecuadas se incluyen para cada compuesto.
Habitualmente, el producto se disuelve en una cantidad mínima de etanol y después se diluye con la fase móvil. Se realiza CL-EM/EM utilizando un instrumento HP-1100 equipado con un inyector CTC-PAL y una columna de 5 µta, 4 x 100 mm ThermoQuest , Hypersil BDS-C18. Se utiliza un detector API-3000 (Sciex) EM, la velocidad de flujo es de 12 ml/min y la fase móvil (gradiente) consiste de 10-90% de acetonitrilo con 90-10% de acetato de amonio acuoso 4 mM, ambos con ácido fórmico 0.2%. Los espectros de RMN 1H se registran utilizando tetrametilsilano como el estándar interno. Los espectros de RMN 13C se graban utilizando los solventes deuterados incluidos en la lista, como el estándar interno.
EJEMPLO 1 pH(3-Cl) (5-OCHFj-(R)CH(OH)C(0) - (S)Aze-Pab (2 , 6-diF) (i) 3-cloro-5-metoxibenzaldehído Se agrega a gotas 3 , 5-dicloroanisol (74.0 g, 419 mmoles) en 200 mi de THF a magnesio metálico (14.2 g, 585 mmoles, lavado previamente con HCl 0.5 N en 100 mi de THF a 25 °C. Después de la adición, se agrega a gotas 1,2-dibromometano (3.9 g, 20.8 mmoles). La mezcla de color café oscuro resultante se calienta a reflujo durante 3 h. La mezcla se enfría a 0°C y se agrega en una porción 60 mi de N, jV-dimetilformamida. La mezcla se divide con dietiléter (3 x 400 mi) y 500 mi de HCl 6 N. Los extractos orgánicos combinados se lavan con 300 mi de salmuera, se secan con Na2S04, se filtran y concentran al vacio para proporcionar un aceite. La cromatografía instantánea (2x) sobre gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (4:1) proporciona el compuesto del título (38.9 g, 54%) como un aceite amarillo. RMN XH (300 Hz, CDCl3) d 9.90 (s, 1H) , 7.53 (s, 1H) , 7.38 (s, 1H) , 7.15 (s, 1H) , 3.87 (s, 3H) . (ii) 3-cloro-5-hidroxibenzaldehído Una solución de 3-cloro-5-metoxibenzaldehído (22.8 g, 134 mmoles; véase etapa (i) anterior en 250 mi de CH2C12 se enfría a 0°C. Se agrega a gotas durante 15 minutos tribromuro de boro (15.8 mi, 167 mmoles) después de agitar la mezcla de reacción durante 2 h, se agregan lentamente 50 mi de H20. La solución después se extrae con Et20 (2 x 100 mi) . Las capas orgánicas se combinan, se secan con Na2S04, se filtran y se concentran al vacío. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con HexrEtOAc (4:1) proporciona el compuesto del subtítulo (5.2 g, 25%) RMN ¾ (300 MHz, CDC13) d 9.85 (s, 1H) , 7.35 (s, 1H) , 7.20 (s, 1H) , 7.10 (s, 1H) , 3.68 (s, 1H) . (iii) 3-cloro-5-difluorometoxibenzaldehído Una solución de 3-cloro-5-hidroxibenzaldehído (7.5 g, 48 mmoles; véase etapa (ii) anterior) en 250 mi de 2-propanol y 100 mi de OH 30% se calienta a reflujo. Mientras se agita, se burbujea, CHC1F2 dentro de la mezcla de reacción durante 2 h. La mezcla de reacción se enfría, se acidifica con HC1 1N y se extrae con EtOAc (2 x 100 mi) . Las fracciones orgánicas se lavan con 100 mi de salmuera, se secan con Na2SO¾, se filtran y se concentran al vacío. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (4:1) proporciona el compuesto del subtítulo (4.6 g, 46%) . RMN ¾ (300 MHz, CDCl3) d 9.95 (s, 1H) , 7.72 (s, 1H) , 7.52 (s, 1H) , 7.40 (s, 1H) , 6.60 (t, JH.F = 71.1 Hz, 1H) . (iv) Ph(3-Cl) (5-0CHFJ - (R.S) CHÍOTMS) CN Una solución de 3-cloro-5-difluorometoxibenzaldehído (4.6 g, 22.3 mmoles; véase etapa (iii) anterior) en 200 mi de CH2C12 se enfría a 0°C, se agregan Znl2 (1.8 g, 5.6 mmoles) y cianuro de trimetilsililo (2.8 g, 27.9 mmoles) y se permite que la mezcla de reacción se caliente hasta la temperatura ambiente y se agite durante 15 h. La mezcla se concentra parcialmente al vacío lo que proporciona el compuesto del subtitulo como un liquido, el cual se utiliza directamente en la etapa (v) siguiente sin purificación o caracterización adicionales . (v) Ph(3-Cl) (5-0CHF,- (R, S) CH (OH) C ( H) OEt Se agrega a gotas P (3-C1) (5-OCHF2) - (R, S) CH (OTMS) CN (6.82 g, suponiendo 22.3 mmoles; véase etapa (iv) anterior) a 500 mi de HCl/EtOH. La mezcla de reacción se agita durante 15 h y después se concentra parcialmente al vacío lo que proporciona el compuesto del subtítulo como un líquido, el cual se utiliza en la etapa (vi) sin purificación o caracterización adicionales. (vi) Ph(3-Cl) (5-0CHF- (R,S) CH(OH) C (O) OEt Se disuelve Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (R, S) CH (OH) C (NH) OEt (6.24 g, suponiendo 22.3 mmoles; véase etapa (v) anterior) en 250 mi de THF, se agregan 400 mi de H2S04 0.5 M y la reacción se agita a 40 °C durante 65 h, se enfría y después se concentra parcialmente al vacío para eliminar la mayor parte del THF. La mezcla de reacción después se extrae con Et20 (3 x 100 mi) , se seca con Na2S04, se filtra y se concentra al vacío para proporcionar el compuesto del título como un sólido el cual se utiliza en la etapa (vii) sin purificación o caracterización adicionales. (vii) Ph(3-Cl) (5-0CHFJ- (R, S) CH (OH) C (0) OH Una solución de Ph (3-Cl) (5-OCHF2) - (R, S) CH (OH) C (O) OEt (6.25 g, suponiendo 22.3 mmoles; véase etapa (vi) anterior) en 175 mi de 2-propanol y 350 mi de KOH 20% se agita a temperatura ambiente durante 15 h. La reacción después se concentra parcialmente al vacío para eliminar la mayor parte del 2-propanol. La mezcla restante se acidifica con H2S04 1M, se extrae con Et20 (3 x 100 mi) , se seca con Na;,S04 y se concentra al vacío para proporcionar un sólido. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con CHC13.-MeOH: concentrado NH40H (6:3:1) proporciona la sal de amonio del compuesto del subtítulo. La sal de amonio después se disuelve en una mezcla de 75 mi de EtOAc y 75 mi de H20 y se acidifica con HC1 2N. La capa orgánica se separa y se lava con 50 mi de samluera, se seca con Na2S04 y se concentra al vacío para proporcionar el compuesto del subtítulo (3.2 g, 57% de las etapas (iv) a (vii) . RMN ¾ (300 MHz, CD3OD) d 7.38 (s, 1H) , 7.22 (s, 1H) , 7.15 (s, 1H) , 6.89 (t, JH_F = 71.1 Hz, 1H) , 5.16 (s, 1H) . (viii) Ph(3-Cl) (5-0CHFJ - (R) CH (OH) C (O) OH (a) y Ph(3-Cl) (5-OCHF,) - (5) -CH(OAc) C(0)OH (b) Una mezcla de Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (R, S) CH (OH) C (O) OH (3.2 g, 12.7 mmoles; véase etapa (vii) anterior) y Lipase PS "Amano" (-2.0 g) en 125 mi de acetato de vinilo y 175 mi de MTBE se calienta a reflujo durante 48 h. La mezcla de reacción se enfría, se filtra a través de Celite™11 y la torta de filtro se lava con EtOAc. El filtrado se concentra al vacío y se somete a cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con CHC13 : MeOH : NH4OH concentrado (6:3:1) lo que proporciona las sales de amonio de los compuestos del subtítulo (a) y (b) . El compuesto (a) como una sal se disuelve en H20, se acidifica con HCl 2N y se extrae con EtOAc. La capa orgánica se lava con salmuera, se seca con Na2S04, se filtra y se concentra al vacío para proporcionar el compuesto del subtítulo (a) (1.2 g, 37%). Para el compuesto del subtítulo (a) RMN ¾ (300 MHz, CD30D) d 7.38 (s, 1H) , 7.22 (s, 1H) , 7.15 (s, 1H) , 6.89 (t, JH.F = 71.1 Hz, 1H) , 5.17 (s, 1H) . (ix) 2 , 6-difluoro-4 G (metilsulfinil) (metiltio) -metill benzonitrilo Se disuelve (metilsulfinil) (metiltio) metano (7.26 g, 0.0584 moles) en 100 mi de THF seco bajo argón y se enfría a -78 °C. Se agrega a gotas con agitación butillitio en hexano (16 mi, 1.6M, 0.0256 moles). La mezcla se agita durante 15 minutos. Mientras tanto, se agrega una solución de 3 , 4 , 5-trifluorobenzonitrilo (4.0 g, 0.025 mmoles) en 100 mi de THF seco y se enfría a -78 °C bajo argón, y se agrega la solución anterior a través de una cánula a la segunda solución, durante un período de 35 minutos. Después de 30 minutos se retira el baño de enfriamiento y, cuando la reacción ha alcanzado la temperatura ambiente, se vierte en 400 mi de agua. Se evapora el THF y la capa acuosa restante se extrae tres veces con etiléter. La fase etérea combinada se lava con agua, se seca con Na2S04 y se evapora. Rendimiento: 2.0 g (30%) . RN ¾ (500 MHz, CDCl3) d 7.4-7.25 (m, 2H) , 5.01 (s, 1H, diasteroisómero) , 4.91 (s, 1H, diasteroisómero) , 2.88 (s, 3H, diasteroisómero), 2.52 (s, 3H, diasteroisómero), 2.49 (s, 3H, diastereoisómero) , 2.34 (s, 3H, diastereoisómero), 1.72 (amplio, 1H) (x) 2 , 6-difluoro-formilbenzonitrilo Se disuelve 2 , 6-difluoro-4- [ (metilsulfinil) (metiltio) metil] benzonitrilo (2.17 g, 8.32 mmoles; véase etapa (ix) anterior) en 90 mi de THF y se agregan 3.5 mi de ácido sulfúrico concentrado. La mezcla se deja a temperatura ambiente durante 3 días y posteriormente se vierte en 450 mi de agua. Se extrae tres veces con EtOAc seguido y la fase etérea combinada se lava dos veces con bicarbonato de sodio acuoso y con salmuera, se seca con Na2S04 y se evapora. Rendimiento: 1.36 g (98%) . Se establece la posición del grupo formilo por RMN 13C. La señal de los carbonos fluorados a 162.7 ppm muestra el patrón de acoplamiento esperado con dos constantes de acoplamiento en el orden de 260 Hz y 6.3 Hz, respectivamente, que corresponden al acoplamiento ipso y meta de los átomos de flúor. RMN ¾ (400 MHz, CDCl3) d 10.35 (s, 1H) , 7.33 (m, 2H) (xi) 2 , 6-difluoro-4-h.idroximetilbenzonitrilo Se disuelve 2 , 6-difluoro-4-formilbenzonitrilo (1.36 g, 8.13 mmoles; véase etapa (x) anterior) en 25 mi de metanol y se enfría en un baño con hielo . Se agrega en porciones borohidruro de sodio (0.307 g, 8.12 mmoles) con agitación y la reacción se deja en reposo durante 65 minutos. Se evapora el solvente y el residuo se divide entre dietiléter y bicarbonato de sodio acuoso. La capa etérea se lava con más bicarbonato de sodio acuoso y salmuera, se seca con Na2S04 y se evapora. El producto crudo cristaliza rápidamente y se puede utilizar sin purificación adicional. Rendimiento: 1.24 g (90%). RMN ¾ (400 MHz, CDC13) d 7.24 (m, 2H) , 4.81 (s, 2H) , 2.10 (amplio, 1H) . (xii) Metansulfonato de 4-ciano-2 , 6-difluorobencilo A una solución enfriada con hielo de 2,6-difluoro-4-hidroximetilbenzonitrilo (1.24 g, 7.32 mmoles; véase etapa (xi) anterior) y cloruro de metansulfonilo (0.93 g, 8.1 mmoles) en 60 mi de cloruro de metileno se agrega trietilamina (0.81 g, 8.1 mmoles) con agitación. Después de 3 h a 0°C, la mezcla se lava dos veces con HCl 1M y una vez con agua, se seca con NazS04 y se evapora. El producto se puede utilizar sin purificación adicional . Rendimiento: 1.61 g (89%). RMN ¾ (300 MHz, CDC13) d 7.29 (m, 2H) , 5.33 (s, 2H) , 3.07 (s, 3H) . (xiii) 4-azidometil-2 , 6-difluorobenzonitrilo Una mezcla de metansul onato de 4-ciano-2,6-difluorobencilo (1.61 g, 6.51 mmoles; véase la etapa (xii) anterior y azida de sodio (0.72 g, 0.0111 moles) en 10 mi de agua y 20 mi de DMF se agita a temperatura ambiente durante la noche. El material resultante posteriormente se vierte en 200 mi de agua y se extrae tres veces con dietiléter. La fase etérea combinada se lava cinco veces con agua, se seca con Na2S04 y se evapora. Se evapora una muestra pequeña para propósitos de RMN y el producto cristaliza. El resto se evapora con precaución pero no hasta sequedad completa. Rendimiento: (teórico, 1.26 g) se supone que es casi cuantitativo en base en la RMN y la CLAR analítica.
MN ¾ (400 Hz, CDCl3) d 7.29 (m, 2H) , 4.46 (s, 2H) . (xiv) 4-aminometil-2 , 6-difluorobenzonitrilo Esta reacción se lleva a cabo de acuerdo con el procedimiento descrito en J". Chem. Res. (M) (1992) 3128. A una suspensión de 520 mg de 10% de Pd/C (50% de humedad) en 20 mi de agua se agrega una solución de borohidruro de sodio (0.834 g, 0.0221 moles) en 20 mi de agua. Se genera cierta cantidad de gas. Se disuelve 4-azidometil-2 , 6-difluorobenzonitrilo (1.26 g, 6.49 minóles; véase etapa (xiii) anterior) en 50 mi de THF y se agrega a la mezcla acuosa en un baño de hielo durante 15 min. La mezcla se agita durante 4 h y posteriormente se agregan 20 mi de HC1 2M y la mezcla se filtra a través de Celite. El material de Celite se enjuaga con más agua y después la fase acuosa combinada se lava con EtOAc y posteriormente se vuelve alcalina con NaOH 2M. La extracción tres veces con cloruro de metileno seguido, y la fase orgánica combinada se lavan con agua, se secan con Na2S04 y se evaporan. Rendimiento: 0.87 g (80%) . RMN ¾ (400 MHz, CDC13) d 7.20 (m, 2H) , 3.96 (s, 2H) , 1.51 (amplio, 2H) . (xv) 2 , 6-difluoro-4-terbutoxicarbonilaminometil-benzonitrilo Una solución de 4-aminometil-2 , 6-difluorobenzonitrilo (0.876 g, 5.21 mmoles; véase la etapa (xiv) anterior) se disuelve en 50 mi de THP y se agrega dicarbonato de diterbutilo (1.14 g, 5.22 mmoles) en 10 mi de THF. La mezcla se agita durante 3.5 h. El THF se evapora y el residuo se divide entre agua y EtOAc . La capa orgánica se lava tres veces con HC1 0.5M y agua, se seca con Na2S04 y se evapora. El producto puede ser utilizado sin purificación adicional. Rendimiento: 1.38 g (99%). RMN ¾ (300 MHz, CDCl3) d 7.21 (m, 2H) , 4.95 (amplio, 1H) , 4.43 (amplio, 2H) , 1.52 (s, 9H) . (xvi) Boc-Pab(2, 6-diF(0H) Una mezcla de 2 , 6-difluoro-4-terbutoxicarbonilaminometilbenzonitrilo (1.38 g, 5.16 mmoles; véase etapa (xv) anterior), clorhidrato de hidroxilamina (1.08 g, 0.0155 moles) y trietilamina (1.57 g, 0.0155 moles) en 20 mi de etanol se agita a temperatura ambiente durante 36 h. El solvente se evapora y el residuo se divide entre agua y cloruro de metileno. La capa orgánica se lava con agua, se seca con Na2S04 y se evapora. El producto puede ser utilizado sin purificación adicional. Rendimiento 1.43 g (92%) . RMN ¾ (500 MHz, CD30D) d 7.14 (m, 2H) , 4.97 (amplio, 1H) , 4.84 (amplio, 2H) , 4.40 (amplio, 2H) , 1.43 (s, 9H) (xvii) Boc-Pab (2 , 6-diF)x HOAc Esta reacción se lleva a cabo de acuerdo con el procedimiento descrito por Judkins et al, Synth. Comm. (1988) 4351. Se hidrogenan a una presión de 5 atmósferas durante 3.5 h Boc-Pab (2 , 6-diF) (OH) (1.32 g, 4.37 mmoles; véase etapa (xvi) anterior), anhídrido acético (0.477 g, 4.68 mmoles) y 442 mg de 10% de Pd/C (50% de humedad) en 100 mi de ácido acético. La mezcla se filtra a través de Celite, se enjuaga con etanol y se evapora. El residuo se liofiliza a partir de acetonitrilo y agua, y algunas gotas de etanol . Se puede utilizar el producto del subtítulo sin purificación adicional. Rendimiento: 0.1.49 g, (99%). RMN ¾ (400 MHz, CD3OD) d 7.45 (m, 2H) , 4.34 (s, 2H) , 1.90 (s, 3H) , 1.40 (s, 9H) . (xviii) Boc-Pab (2 , 6-diF (Teoc) A una solución de Boc-Pab (2 , 6-diF) x HOAc (1.56 g, 5.49 mmoles; véase etapa (xvii) anterior) en 100 mi de THF y 1 mi de agua se agrega carbonato de 2- (trimetilsilil) etilo p-nitrofenilo (1.67 g, 5.89 mmoles). Se agrega a gotas durante 5 minutos una solución de carbonato de potasio (1.57 g, 0.0114 moles) en 20 mi de agua. La mezcla se agita durante la noche. El THF se evapora y el residuo se divide entre agua y cloruro de metileno. La capa acuosa se extrae con cloruro de metileno y la fase orgánica combinada se lava dos veces con bicarbonato de sodio acuoso, se seca con Na2S04 y se evapora. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice con heptano/EtOAc = 2/1 proporciona 1.71 g (73%) del compuesto puro. RM ¾ (400 MHz, CDCl3) d 7.43 (m, 2H) , 4.97 (amplio, 1H) , 4.41 (amplio, 2H) , 4.24 (m, 2H) , 1.41 (s, 9H) , 1.11 (m, 2H) , 0.06 (s, 9H) . (xix) Boc- (S)Aze-Pab(2,6-diF) (Teoc) Se disuelve Boc-Pab (2 , 6-diF) (Teoc) (1.009 g, 2.35 mmoles; véase etapa (xviii) anterior) en 50 mi de EtOAc saturado con HCl gaseoso. La mezcla se deja en reposo durante 10 minutos, se evapora y se disuelve en 18 mi de DMF y después se enfría en un baño con hielo. Se agregan Boc- (S) -Aze-OH (0.450 g, 2.24 mmoles), PyBOP (1.24 g, 2.35 mmoles) y finalmente diisopropiletilamina (1.158 g, 8.96 mmoles) . La mezcla de reacción se agita durante 2 h y después se vierte en 350 mi de agua y se extrae tres veces con EtOAc. La fase orgánica combinada se lava con salmuera, se seca con Na2S04 y se evapora. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice con heptaño :EtOAc (1:3) proporciona 1.097 g (96%) del compuesto deseado. RMN 2H (500 MHz, CDC13) d 7.46 (m, 2H) , 4.65-4.5 (m, 3H) , 4.23 (m, 2H) , 3.87 (m, 1H) , 3.74 (m, 1H) , 2.45-2.3 (m, 2H) , 1.40 (s, 9H) , 1.10 (m, 2H) , 0.05 (s, 9H) . (xx) Ph(3-Cl) (5-OCHFJ - (R) CH (OH) C (0) - (S)Aze-Pab(2,6-diF) (Teoc) Se disuelven Boc- (S) -Aze-Pab (2 , 6-diF) (Teoc (0.256 g, 0.500 mmoles; véase etapa (xix) anterior) en 20 mi de EtOAc saturado con HC1 gaseoso. La mezcla se deja durante 10 minutos y se evapora y se disuelve en 5 mi de DMF. Se agregan Ph(3-Cl) (5-OCHF2) - ( ) -CH(OH)C(0)OH (0.120 g, 0.475 mmoles ; véase etapa (viii) anterior), PyBOP (0.263 g, 0.498 mmoles) y finalmente diisopropiletilamina (0.245 g, 1.89 mmoles). La mezcla de reacción se agita durante 2 h y después se vierte en 350 mi de agua y se extrae tres veces con EtOAc. La fase orgánica combinada se lava con salmuera, se seca con Na2S04 y se evapora. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice con EtOAc proporciona 0.184 g (60%) del compuesto deseado del subtítulo. RMN ¾ (400 MHz, CD3OD, mezcla de rotámeros) d 7.55-7.45 (m, 2H) , 7.32 (m, 1H, rotámero principal), 7.27 (m, 1H, rotámero menor), 7.2-7.1 (m, 2H) , 6.90 (t, 1H, rotámero principal), 6.86 (t, 1H, rotámero menor), 5.15 (s, 1H, rotámero principal), 5.12 (m, 1H, rotámero menor), 5.06 (s, 1H, rotámero menor), 4.72 (m, 1H, rotámero principal), 4.6-4.45 (m, 2H) , 4.30 (m, 1H, rotámero principal), 4.24 (m, 2H) , 4.13 (m, 1H, rotámero principal), 4.04 (m,l H, rotámero menor) 3.95 (m, 1H, rotámero menor), 2.62 (m, 1H, rotámero menor), 2.48 (m, 1H, rotámero principal), 2.22 (m, 1H, rotámero principal), 2.10 (m, 1H, rotámero menor), 1.07 (m, 2H) , 0.07 (m, 9H) . (xxi) Phí3-Cl) (5-OCHFJ - (R) CH (OH) C (O) - (S)Aze- Pab(2, 6-diF) Se disuelve Ph (3 -Cl) (5-OCHF2) - (R) CH (OH) C (0) - (S)Aze-Pab(2, 6-diF) (Teoc) (81 mg, 0.127 mmoles; véase etapa ( x) anterior en 0.5 mi de cloruro de metileno y se enfría en un baño con hielo. Se agregan 3 mi de TFA y la reacción se deja reposar durante 75 minutos. Se evapora el TFA y el residuo se liofiliza a partir de agua y acetonitrilo . El producto crudo se purifica por RPLC preparativa con CH3CN:0.1M NH4OAc (35:65) para producir 39 mg (55%) del compuesto del título y su sal de HOAc, -pureza: 99%. RMN XH (400 MHz, CD3OD mezcla de rotámeros) d 7.5-7.4 (m, 2H) , 7.32 (m, 1H, rotámero principal), 7.28 (m, 1H, rotámero menor), 7.2-7.1 (m, 3H) 6.90 (t, 1H, rotámero principal), 6.86 (t, rotámero menor), 5.15 (s, 1H, rotámero principal), 5.14 (m, 1H, rotámero menor), 5.07 (s, 1H, rotámero menor), 4.72 (m, 1H, rotámero principal), 4.65-4.45 (m, 2H) , 4.30 (m, 1H, rotámero principal), 4.16 (m, 1H, rotámero principal), 4.03 (m, 1H, rotámero menor), 3.95 (m, 1H, rotámero menor), 2.63 (m, 1H, rotámero menor), 2.48 (m, 1H, rotámero principal), 2.21 (m, 1H, rotámero principal), 2.07 (m, 1H, rotámero menor), 1.89 (s, 3H) RMN 13C (75 MHz; CD30D) : (carbonos de carbonilo o amidina, mezcla de rotámeros) d 171.9, 171.2, 165.0, 162.8, 160. . APCI-EM: (M + 1) = 503/505 m/z.
Ej emplo 2 Ph(3-Cl) (5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(0)-(S)-Aze-Pab(2,6-diF) (OMe) (i) Ph(3-Cl) (5-OCHFj - (R) CH (OH) C (0) - (S)Aze-Pab(2,6-diF) (OMe.Teoc) Una mezcla de Ph (3 -Cl) (5-OCHF2) - (R) CH (OH) C (O) -(S) Aze-Pab (2, 6-diF) (Teoc) (64 mg, 0.099 ramoles; véase ejemplo 1 (xx) anterior) y clorhidrato de O-metilhidroxilamina (50 mg, 0.60 mmoles) en 4 mi de acetonitrilo se calienta a 70 °C durante 3 h. El solvente se evapora y el residuo se divide entre agua y EtOAc. La capa acuosa se extrae dos veces con EtOAc y la fase orgánica combinada se lava con agua, se seca con Na2S04 y se evapora. El producto puede ser utilizado sin purificación adicional . Rendimiento: 58 mg (87%) .
RMN ¾ (400 MHz , CDC13) d 7.90 (t amplio, 1H) , 7.46 (m, 1H) , 7.25-6.95 (m, 5H) , 6.51 (t, 1H) , 4.88 (s, 1H) , 4.83 (m, 1H) , 4.6-4.5 (m, 2H) , 4.4-3.9 (m, 4H) , 3.95 (s, 3H) , 3.63 (m, 1H) , 2.67 (m, 1H) , 2.38 (m, 1 H) , 1.87 (amplio, 1H) , 0.98 (m, 2H) , 0.01, s, 9H) . (ii) Ph(3-Cl) (5-OCHFJ - (R) CH(OH) C(O) - (S)Aze- Pab(2 , 6-diF) (OMe) Se disuelve Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (R) CH (OH) C (O) - (S)Aze-Pab(2, 6-diF) (O e,Teoc) (58 mg, 0.086 mmoles; véase etapa (i) anterior en 3 mi de TFA, se enfría en un baño con hielo y se permite que reaccione durante 2 h. El TFA se evapora y el residuo se disuelve en EtOAc . La capa orgánica se lava dos veces con carbonato de sodio acuoso y agua, se seca con Na2S04 y se evapora. El residuo se liofiliza a partir de agua y acetonitrilo para proporcionar 42 mg (92%) del compuesto del título. Pureza: 94%. RMN ¾ (300 MHz, CDCl3) d 7.95 (t amplio, 1H) , 7.2-7.1 (m, 4H) , 6.99 (m, 1H) , 6.52 (t, 1H) , 4.88 (s, 1H) , 4.85-4.75 (m, 3H) , 4.6-4.45 (m, 2H) , 4.29 (amplio, 1H) , 4.09 (m, 1H) , 3.89 (s, 3H) , 3.69 (m, 1H) , 2.64 (m, 1 H) , 2.38 (m, 1H) , 1.85 (amplio, 1H) RMN 13C (100 MHz, CDC13) : (carbonos de carbonilo o amidina) d 172.1, 169.8, 151.9 APCI-EM: (M+l) = 533/535 m/z E emplo 3 PM3-C1) (5-0CHFJ - (R) CH(OH) C(O) - (S) Aze-Pab (2 , 6-diF) (OH) (i) Boc- (S)Aze-KfHCH2-Ph(2,6-diF, 4-CN) Se disuelve Boc- (S) Aze-OH (1.14 g, 5.6 mmoles) en 45 mi de DMF. Se agregan 4-aminometil-2 , 6-difluorobenzonitrilo (1.00 g, 5.95 moles, véase Ejemplo l(xiv) anterior), PyBOP (3.10 g, 5.95 mmoles) y DIPEA (3.95 mi, 22.7 mmoles) y la solución se agita a temperatura ambiente durante 2 h. El solvente se evapora y el residuo se divide entre H20 y EtOAc (75 mi de cada uno) . La fase acuosa se extrae con 2 x 50 mi de EtOAc y la fase orgánica combinada se lava con salmuera y se seca sobre Na2S04. La cromatografía instantánea (Si02í EtOAc/heptano (3/1) ) proporciona el compuesto del subtitulo (1.52 g, 77%) como un aceite el cual cristaliza en el refrigerador. RMN ¾ (400 MHz, CD30D) : d 7.19 (m, 2H) , 4.65-4.5 (m, 3H) , 3.86 (ra, 1H) , 3.73 (m, 1H) , 2.45-2.3 (m, 2H) , 1.39 (s, 9H) . (ii) H- (S) Aze-NHCH^-Ph (2 , 6-diF, 4-CN) x HCl Se disuelve Boc- (S) Aze-NHCH2-Ph (2 , 6-diF, 4-CN) (0.707 g, 2.01 mmoles, véase etapa (i) anterior) en 60 mi de EtOAc saturado con HCl gaseoso. Después de agitar a temperatura ambiente durante 15 minutos, se evapora el solvente. El residuo se disuelve en CH3CN/H20 (l/l) y se liofiliza para proporcionar el compuesto del subtítulo (0.567 g, 98%) como un polvo amorfo blancuzco. RMN ¾ (400 MHz, CD3OD) d 7.49 (m, 2H) , 4.99 (m, 1H) , 4.58 (m, 2H) , 4.12 (m, 1H) , 3.94 (m, 1H) , 2.80 (m, 1H) , 2.47 (m, 1H) EM (m/z) 252.0 (M + 1) + (iii) Ph(3-Cl) (5-OCHF,) - (R) CH (OH) C (O) - (S)Aze-NHCH,-Ph(2, 6-diF, 4-CN) Se disuelve Ph. (3 -Cl) (5-OCHF2) - (R) CH (OH) C (0) OH (0.40 g, 1.42 mmoles, véase Ejemplo 1 (viii) anterior) en 10 mi de DMF y se agrega H- (S) Aze-NHCH2-Ph (2 , 6-diF, 4-CN) x HCl 1 (0.43 g, 1.50 mmoles, véase etapa (ii) anterior) y PyBOP (0.779 g, 1.50 mmoles), seguido por DIPEA (1.0 mi, 5.7 mmoles). Después de agitar a temperatura ambiente durante 2 h, el solvente se evapora. El residuo se divide entre 200 mi de H20 y 75 mi de EtOAc. La fase acuosa se extrae con 2 x 75 mi de EtOAc y la fase orgánica combinada se lava con salmuera y se seca sobre Na2S04. La cromatografía instantánea (Si02, EtOAc/heptano (4/1) ) proporciona el compuesto del subtítulo (0.56 g, 81%) como un aceite. R N ¾ (400 MHz, CD3OD) rotámeros : d 7.43 (m, 2H) , 7.31 (m, 1H, rotámero principal), 7.26 (m, 1H, rotámero menor), 7.2-7.1 (m, 2H) , 6.90 (t, 1H, rotámero principal), 6.86 (t, 1H, rotámero menor), 5.14 (s, 1H, rotámero principal), 5.11 (m, 1H, rotámero menor), 5.04 (s, 1H, rotámero menor), 4.71 (m, 1H, rotámero principal), 4.6-4.45 (m, 2H) , 4.30 (m, 1H, rotámero principal), 4.2-3.9 (m, 1H; y 1H, rotámero menor), 2.162 (m, 1H, rotámero menor), 2.48 (m, 1H, rotámero principal), 2.21 (m, 1H, rotámero principal), 2.09 (m, 1H, rotámero menor) RMN 13C (100 MHz; CD30D) : (carbonos carbonilo) d 171.9, 171.8 EM (m/z) 484.0, 485.9 (M - 1)~, 486.0, 487.9 (M + D + (iv) Ph(3-Cl) (5-OCHF,- (R) CH (OH) C (O) - (S)Aze- Pab(2, 6-diF) (OH) Se disuelven Ph(3-Cl) (5-OCHF2- (R) -CH(OH) C(O) - (S)Aze-NHCH2-Ph(2, 6-diF, 4-CN) (0.555 g, 1.14 mmoles, a partir de la etapa (iii) anterior) en 10 mi de EtOH (95%) . A esta solución se le agrega clorhidrato de hidroxilamina (0.238 g, 3.42 mmoles) y Et3N (0.48 mi, 3.44 mmoles). Después de agitar a temperatura ambiente durante 14 h se separa el solvente y el residuo se disuelve en EtOAc. La fase orgánica se lava con salmuera y H20 y se seca sobre Na2S04. El producto crudo se purifica por RPLC preparativa con CH3CN: H4OAc 0.1 M como eluyente, lo que proporciona el compuesto del título como un polvo amorfo (0.429 g, 72%) después de liofilizar. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) rotámeros d 7.35-7.1 (m, 5H) , 6.90 (t, 1H, rotámero principal), 6.85 (t, 1H, rot mero menor), 5.15 (s, 1H, rotámero principal), 5.12 (m, 1H, rotámero menor), 5.08 (s, 1H, rotámero menor), 4.72 (m, 1H, rotámero principal), 4.6-4.4 (m, 2H) , 4.30 (m, 1H, rotámero principal), 4.12 (m, 1H, rotámero principal), 4.04 (m 1H, rotámero menor), 3.94 (m, 1H, rotámero menor), 2.62 (m, 1H, rotámero menor), 2.48 (m, 1H, rotámero principal), 2.22 (m, 1H, rotámero principal), 2.10 (m, 1H, rotámero menor) RMN 13C (100 MHz, CD3OD) : (carbonos del carbonilo y amidina, rotámeros) d 172.4, 171.9, 171.0, 152.3, 151.5 EM (m/z) 517.1, 519.0, (M - 1)", 519.1, 521.0 (M + 1) + .
E emplo 4 Se prueba el compuesto del título del Ejemplo 1 en la prueba A anterior y se encuentra que presenta un valor CI50 TT menor de 0.02 µ?.
Ejemplo 5 Se prueba el compuesto del título del Ejemplo en la Prueba D anterior y se encuentra que muestra un val Cl50 APTT menor de 1 µ?.
Ej emplo 6 Se prueba el compuesto del título del Ejemplo 2 en la prueba E anterior y se encuentra que presenta una biodisponibilidad oral o parenteral en rata como el inhibidor activo correspondiente (amidina libre) .
Ej emplo 7 Se prueba el compuesto del título del Ejemplo 2 en la prueba G anterior y se encuentra que se convierte al inhibidor activo correspondiente (amidina libre) en microsomas hepáticos a partir de humanos y de ratas.
Abreviaturas Ac = acetilo AP = ionización química por presión atmosférica (en relación al EM) API = ionización por presión atmosférica (en relación al EM) ac = acuoso ABC = área bajo la curva Aze acetidina-2-carboxilato AzeOH = ácido acetidin-2-carboxílico Boc = terbutiloxicarbonilo BSA = albúmina sérica bovina CI ionización química (en relación al EM) d dias DCC = diciclohexilcarbodiimida DIBAL-H hidruro de diisobutilaluminio DIPEA = diisopropiletilamina D AP = 4- (N, jV-dimetilamino) piridina dimetilformamida sulfóxido de dimetilo DVT trombosis venosa profunda EDC clorhidrato de 1- (3-dimetilaminopropil) etilcarbodiimida Et etilo éter dietiléter EtOAc acetato de etilo EtOH etanol Et20 = dietiléter h horas HATU = hexafluorofosfato de 0- (azabenzotriazol ?,?,?' ,N'-tetrametiluronio [hexafluorofosfato de N, N, Nl ,JV'-tetrametil-0- (benzotriazol-l-il) uronio ácido clorhídrico, cloruro de hidrógeno gaseoso o sal clorhidrato (en base en el contexto) hexanos ácido acético o sal de ácido acético cromatografía líquida de alta resolución cromatografía líquida metilo metanol minutos espectrometría de masas metilterbutiléter nicotinamida adenina dinucleótido, forma reducida fosfato de nicotinamida adenina dinucleótido, forma reducida Instituto Nacional de Salud (Estados Unidos) Unidades del Instituto Nacional de Salud Resonancia magnética nuclear acetato para-aminodibencilamino para-amidinobencilamina fenilo hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi) tripirrolidinofosfonio QF = fluoruro de tetrabutilamonio RPLC = Cromatografía líquida de alta resolución en fase inversa rt/RT = temperatura ambiente SOPs = procedimientos de operación estándar TBTU = [tetrafluoroborato de ?,?,?' ,JV'-tetrametil-O- benzotriazol-l-il) uronio] TEA = trietilamina Teoc = 2- (trimetilsilil) etoxicarbonilo TEMPO = radical libre 2 , 2 , 6 , 6-tetrametil-l-piperidiniloxi TFA = ácido trifluroacético THF = tetrahidrofurano CCD = cromatografía en capa delgada ÜV = ultravioleta Los prefijos n, s, i y t tienen sus significados habituales: normal, secundario, iso y terciario. El prefijo c significa ciclo.

Claims (13)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de fórmula I, o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo .
2. Un derivado farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula I, como se define en la reivindicación 1, compuesto derivado el cual es un compuesto de fórmula la, en donde R1 representa OR2 o C(0)0R3; R2 representa H, alquilo de 1 a 10 átomos carbono, alquilarilo de 1 a 3 átomos de carbono alcoxiarilo de 1 a 3 átomos de carbono (las partes alquilo de las cuales los dos últimos grupos están opcionalmente interrumpidos por uno o más átomos de oxígeno, y las partes arilo de los dos últimos grupos los cuales están opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes que se seleccionan de halo, fenilo, metilo o metoxi, los últimos tres grupos los cuales también están opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes halo) ; y R3 es alquilo de 1 a 10 átomos de carbono (último grupo el cuaX está opcionalmente interrumpido por uno o más átomos de oxigeno) , o alquilarilo de 1 a 3 átomos de carbono o al uiloxiarilo de 1 a 3 átomos de carbono (las partes alquilo de los dos últimos grupos los cuales están opcionalmente interrumpidas por uno o más átomos de oxígeno y las partes arilo de los dos últimos grupos las cuales están opcionalmente sustituidas por uno o más sustituyentes que se seleccionan de halo, fenilo, metilo o metoxi, los últimos tres grupos los cuales también están opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes halo) , o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos .
3. El compuesto como se describe en la reivindicación 2, en donde R1 representa OR2.
4. El compuesto como se describe en la reivindicación 3, en donde R2 representa H o alquilo no sustituido, lineal, ramificado o cíclico de 1 a 8 átomos de carbono.
5. El compuesto como se describe en la reivindicación 4, en donde R2 representa H o alquilo de 1 a 6 átomos de carbono.
6. El compuesto como se describe en la reivindicación 4, en donde R2 representa alquilo lineal de 1 a 3 átomos de carbono, alquilo ramificado de 3 a 8 átomos de carbono o alquilo cíclico de 4 a 7 átomos de carbono.
7. El compuesto como se describe en la reivindicación 5 o la reivindicación 6, en donde R2 representa metilo, etilo, n-propilo, i-propilo o ciclobutilo .
8. El compuesto como se describe en la reivindicación 7 , en donde R2 representa metilo .
9. El compuesto como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde el fragmento está en la configuración S .
10. El compuesto como se describe en cualqui de las reivindicaciones 1 a 9, en donde el fragmento está en la configuración R.
11. El compuesto como se describe en la reivindicación 1, el cual es Ph (3-Cl) (5-0CHF2) -(R) CH (OH) C (O) - (S) Aze-Pab (2 , 6-diF) .
12. El compuesto como se describe en la reivindicación 2, el cual es: Ph(3-Cl) (5-OCHF2) - (R) CH (OH) C (O) - (S) Aze-Pab (2, 6-diF) (OMe); o Ph(3-Cl) (5-OCHF2) - (R) CH (OH) C (O) - (S)Aze-Pab (2, 6-diF) (OH).
13. Una formulación farmacéutica que incluye un compuesto como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, en mezcla con un adyuvante, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable . 1 . Un compuesto como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso como una sustancia farmacéutica. 15. Un compuesto como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de una condición en donde se requiere inhibición de trombina. 16. Un compuesto como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de una condición en donde está indicado un tratamiento anticoagulante . 17. Un compuesto como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de trombosis . 18. Un compuesto como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso como un anticoagulante . 19. El uso de un compuesto como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, como un ingrediente activo para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de una condición en donde se requiere inhibición de trombina. 20. El uso de un compuesto como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, como un ingrediente activo para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de una condición en donde está indicado un tratamiento anticoagulante . 21. El uso como se describe en la reivindicación 19 o la reivindicación 20, en donde la condición es trombosis. 22. El uso como se describe en la reivindicación 19 o la reivindicación 20, en donde la condición es hipercoagulabilidad en sangre o tej idos . 23. El uso de un compuesto como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, como un ingrediente activo para la elaboración de un anticoagulante. 24. Un método de tratamiento de una condición en donde se requiere inhibición de trombina, método el cual comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, a una persona que padece de, o es susceptible a tal condición. 25. Un método de tratamiento de una condición en donde está indicado el tratamiento anticoagulante, método el cual comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, a una persona que padece de, o que es susceptible de tal condición. 26. El método como se describe en la reivindicación 24 o la reivindicación 25, en donde la condición es trombosis . 27. El método como se describe en la reivindicación 24 o la reivindicación 25 , en donde la condición es hipercoagulabilidad en sangre o tejidos. 28. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula I, como se describe en la reivindicación 1, que comprende: (i) el acoplamiento de un compuesto de fórmula II; con un compuesto de fórmula III, (ii) el acoplamiento de un compuesto de fórmula (iii) reacción de un compuesto correspondiente de fórmula XVI como se describe en la reivindicación 29, con una fuente adecuada de amoníaco; o (iv) la desprotección de un derivado protegido de un compuesto como se define en la reivindicación 1. 29. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula a como se describe en la reivindicación 2, el cual comprende (a) la reacción de un compuesto correspondiente de fórmula II como se define en la reivindicación 28, con un compuesto de fórmula XIV, en donde R1 es como se describe en la reivindicación 2; (b) reacción de un compuesto correspondiente de fórmula IV como se describe en la reivindicación 28, con un compuesto de fórmula XV, en donde R1 es como se describe en la reivindicación 2; (c) para compuestos de fórmula la en los cuales R1 representa OH, la reacción de un compuesto correspondiente de fórmula XVI, con hidroxilamina, (d) para compuestos de fórmula la en los cuales R1 representa OR2, la reacción del compuesto de fórmula XVII, en donde Ra representa, -CH2CH2-Si (CH3) 3 o bencilo, o un tautómero del mismo, con un compuesto de fórmula XVIII , R20NH2 XVIII en donde R2 es como se describe en la reivindicación 2, o una sal de adición de ácido del mismo, seguido por separación del grupo -C(0)ORa; (e) para compuestos de fórmula la en los cuales R1 representa OH, la reacción de un compuesto de fórmula XVII como se define en lo anterior, en el cual Ra representa bencilo con hidroxilamina, o una sal de adición de ácido del mismo; (f) para compuestos de fórmula la en la cual R1 representa COOR3, la reacción de ¦ un compuesto correspondiente de fórmula I como se describe en la reivindicación 1, con un compuesto de fórmula XIX, i COOR3 XIX en donde L1 representa un grupo saliente adecuado y R3 es como se describe en la reivindicación 2 ; o (g) para compuestos de fórmula I en los cuales R1 representa OCH3 u OCH2CH3, la reacción de un compuesto correspondiente de fórmula la en el cual R1 representa OH con sulfato de dimetilo o sulfato de dietilo, respectivamente.
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