MXPA01007004A - Nuevos derivados de amidinobencilamina y su uso como inhibidores de la trombina - Google Patents

Nuevos derivados de amidinobencilamina y su uso como inhibidores de la trombina

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MXPA01007004A
MXPA01007004A MXPA/A/2001/007004A MXPA01007004A MXPA01007004A MX PA01007004 A MXPA01007004 A MX PA01007004A MX PA01007004 A MXPA01007004 A MX PA01007004A MX PA01007004 A MXPA01007004 A MX PA01007004A
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MXPA/A/2001/007004A
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Janerik Nystrom
Tord Inghardt
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Astrazeneca Ab
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Abstract

La presente invención se refiere a compuestos de la fórmula (I) en donde R1, R2, Y, R3 y R4 tienen los significados dados en la descripción los cuales sonútiles como, o como los profármacos de, los inhibidores competitivos de las proteasas semejantes a la tripsina, tales como la trombina, y en particular en el tratamiento de las condiciones en donde la inhibición de la trombina es requerida (por ejemplo la trombosis) o como anticoagulantes.

Description

NUEVOS DERIVADOS DE AMIDINOBENCILAMINA Y SO USO CCMO INHIBIDORES DE LA TROMBINA Campo de la Invención Esta invención se refiere a nuevos compuestos útiles farmacéuticamente, en particular a los compuestos que son, o son profármacos de, los inhibidores competitivos de las serina proteasas semejantes a la tripsina, especialmente la trombina, a su uso como medicamentos, a las composiciones farmacéuticas que los contienen y a las rutas sintéticas para su producción.
Antecedentes de la Invención La coagulación de la sangre es el proceso clave involucrado tanto en la hemostasis (es decir la prevención de la pérdida de la sangre de un vaso dañado) y la trombosis (es decir la formación de un coágulo de sangre en un vaso sanguíneo, que conduce algunas veces a la obstrucción del vaso) . La coagulación es el resultado de una serie compleja de reacciones enzimáticas. Uno de los últimos pasos Ref.131054 en esta serie de reacciones es la conversión de la protrombina de la proenzima en la trombina de la enzima activa. La trombina se sabe que desempeña un papel central en la coagulación. Ella activa las plaquetas, conduciendo a la agregación de las mismas, convierte el fibrinógeno en los monómeros de la fibrina, los cuales se polimerizan espontáneamente en los polímeros de la fibrina, y activa el factor XIII, lo cual a su vez reticula los polímeros para formar la fibrina insoluble. Además, la trombina activa el factor V y el factor VIII conduciendo a una generación de una "realimentación positiva" de la trombina a partir de la protrombina. Inhibiendo la agregación de las plaquetas y la formación y reticulación de la fibrina, los inhibidores efectivos de la trombina se podría esperar que exhibieran una actividad antitrombótica. Además, la actividad antitrombótica se podría esperar que sea mejorada por la inhibición efectiva del mecanismo de realimentación positiva. Además, se sabe que la administración de los profármacos de los inhibidores de la trombina puede ocasionar mejoras en: (a) ciertas propiedades farmacocinéticas después de la administración de; y (b) la frecuencia de ciertos efectos lateralea asociados con, estos inhibidores.
Arte Previo El desarrollo inicial de los inhibidores de peso molecular bajo de la trombina ya ha sido descrito por Claesson en Coagul. Fibrinol. (1994) 5, 411. Blombáck y colaboradores (en J. Clin. Lab. Invest. 24, suppl. 107, 59, (1969)) reportó los inhibidores de la trombina basados en la secuencia de aminoácidos situada alrededor del sitio de segmentación para la cadena Aa del fibrinógeno. De las secuencias de aminoácidos descritas, estos autores sugirieron que la secuencia de tripéptidos Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, referida aquí posteriormente como la secuencia P3-P2-P1) podría ser el inhibidor más efectivo. Los inhibidores de la trombina basados en los derivados del dipeptidilo con una a,?-aminoalquil guanidina en la posición Pl ya son conocidos de la Patente US No. 4,346,078 y la Solicitud de Patente Internacional WO 93/11152. De manera similar, los derivados de dipeptidilo, relacionados estructuralmente, también han sido reportados. Por ejemplo la Solicitud de Patente Internacional WO 94/29336 describe los compuestos con, por ejemplo, las aminometil bencimidinas, las aminoalquil amidinas cíclicas y las aminoalquil guanidinas cíclicas en la posición Pl (la Solicitud de Patente Internacional WO 97/23499 describe profármacos de ciertos de estos compuestos); la Solicitud de Patente Europea 0 648 780, describe los compuestos con, por ejemplo, las aminoalquil guanidinas cíclicas en la posición Pl. Los inhibidores de la trombina basados en los derivados del peptidilo, que también tienen aminoalquil guanidinas cíclicas (por ejemplo ya sea la 3- o 4-aminometil-1-amidino-piperidina) en la posición Pl ya son conocidos de las Solicitudes de Patente Europea 0 468 231, 0 559 046 y 0 641 779. Los inhibidores de la trombina basados en los derivados del tripeptidilo con el aldehido de arginina en la posición Pl fueron descritos primero en la Solicitud de Patente Europea 0 185 390. Más recientemente, los derivados de peptidilo a base del aldehido de arginina, modificados en la posición P3, han sido reportados. Por ejemplo, la Solicitud de Patente Internacional WO 93/18060 describe hidroxi ácidos, la Solicitud de Patente Europea 0 526 877 los des-aminoácidos, y la Solicitud de Patente Europea 0 542 525 los ácidos O-metil mandélicos en la posición P3.
Los inhibidores de las serina proteasas (por ejemplo la trombina) basados en las cetonas electrofílicas en la posición Pl también son conocidos. Por ejemplo, la Solicitud de Patente Europea 0 195 212 describe los esteres y amidas a-ceto peptidílicas, la Solicitud de Patente Europea 0 362 002 las fluoroalquilamida cetonas, la Solicitud de Patente Europea 0 364 344 los compuestos a, ß,d-triceto, y la Solicitud de Patente Europea 0 530 167 los derivados de la a-alcoxi cetona de la arginina en la posición Pl. Otros inhibidores estructuralmente diferentes de las serina proteasas semejantes a la tripsina basados en los derivados del ácido borónico C-terminal de la arginina, los análogos del isotiouronio, ya son conocidos de la Solicitud de Patente Europea 0 293 881. Más recientemente, los inhibidores de la trombina basados en los derivados de peptidilo han sido descritos en la Solicitud de Patente Europea 0 669 317 y las Solicitudes de Patente Internacional WO 95/35309, WO 95/23609, WO 96/25426, WO 97/02284, WO 97/46577, WO 96/32110, WO 96/31504, WO 96/03374, WO 98/06740 y WO 97/49404. Sin embargo, subsiste una necesidad de inhibidores efectivos de las serina proteasas semejantes a la tripsina, tales como la trombina. También existe una necesidad de compuestos los cuales estén tanto biodisponibles oralmente como que sean selectivos en la inhibición de la trombina sobre otras serina proteasas, en particular aquellas involucradas en la hemostasis. Los compuestos que exhiben una actividad inhibidora competitiva hacia la trombina se podría esperar que sean especialmente útiles como anticoagulantes y por lo tanto en el tratamiento terapéutico de la trombosis y los desórdenes relacionados.
Descripción de la Invención De acuerdo con la invención se proporciona un compuesto de la fórmula I, en donde R1 representa un substituyente N(R5)R6 o S(0)raR7; R2 y R3 representan independientemente un substituyente opcional seleccionado de halo, alquilo con C?_ o alcoxi con C1-4 (estos dos últimos grupos están substituidos opcionalmente por halo) ; Y representa alquileno con C?_3, substituido opcionalmente por alquilo con C?-4, metileno, =0 o hidroxi); R4 representa H, OH, 0R8a, C(0)0R8b o R8c; R5 representa alquilo con C?-6 (substituido opcionalmente por halo) o, junto con R6 y el átomo de nitrógeno al cual R5 y R6 están unidos o fijados, representa un anillo que contiene nitrógeno de 3 a 7 elementos, tal anillo incluye opcionalmente un átomo de oxígeno y/o está substituido opcionalmente con un grupo =0; R6 representa alquilo con C?_6 (substituido opcionalmente por halo), C(0)R9 o, junto con R5 y el átomo de nitrógeno al cual R5 y R6 están unidos o fijados, representa un anillo que contiene nitrógeno de 3 a 7 elementos, tal anillo incluye opcionalmente un átomo de oxígeno y/o está substituido opcionalmente con un grupo =0; o el grupo N(R5)R6 representa el fragmento estructural la, la R6a representa uno o más substituyentes opcionales seleccionados de halo, alquilo con C?-4 y alcoxi con C?-4 (estos dos últimos grupos están substituidos opcionalmente R8a y R8b representan independientemente alquilo con C?-?o, alquilfenilo o arilo con C6-?o> o R8a representa C(R10a) (RC10b)OC(0)R11, C(R10a) (R10b) N (H) C (0) OR12 o C(R10a) (R10b)OC(0)N(H)R12; R8c representa C(R10a) (R10b)OC(0)Rxl, C (R10a) (R10b)N(H) C (0)OR12 o C(R10a) (R10b)OC(0)N(H)R12; R10a y R10b representan independientemente, en cada caso, H o alquilo con C?_4; R11 representa, en cada caso, arilo con C6-?o, OR12 o alquilo con C?-7 (este último grupo está substituido opcionalmente por un substituyente seleccionado de OH, C02H y arilo con C6-?o) ; R12 representa, en cada caso, arilo con C6-?o o alquilo con C?-6 (este último grupo está substituido opcionalmente por un substituyente seleccionado de OH, C02H y arilo con C6-?o) ; R9 representa alquilo con Ci-s, Het1, arilo con C6-?o o alquilo con C?-4 substituido por arilo con C6-?o; y Het1 representa un anillo heterocíclico de 4 a 12 elementos, tal anillo contiene uno o más heteroátomos seleccionados del oxígeno, nitrógeno y/o azufre, y tal anillo puede estar totalmente saturado, parcialmente saturado o puede ser aromático y/u opcionalmente monocíclico, bicíclico y/o benzo-fusionado; en donde cada grupo de arilo/fenilo y cada grupo Het1 identificado anteriormente está substituido opcionalmente por uno o más grupos de halo, alquilo con C?_4 y/o alcoxi con C?-4 (estos dos últimos grupos están substituidos opcionalmente ellos mismos por uno o más grupos halo) ; o una sal del mismo aceptable farmacéuticamente, siempre que: (a) cuando m representa 1 o 2, entonces R7 no representa H; y (b) cuando m representa 0, entonces R7 no representa NH2; tales compuestos son referidos aquí posteriormente como "los compuestos de la invención". Las sales aceptables farmacéuticamente incluyen el ácido orgánico (por ejemplo el haluro de hidrógeno) , y el ácido orgánico (por ejemplo, el ácido acético, metansulfónico o trifluoroacético), las sales de adición. Los compuestos de la invención pueden exhibir un tautomerismo. Todas las formas tautoméricas y mezclas de los mismas están incluidas dentro del alcance de la invención. Las formas tautoméricas particulares que pueden ser mencionadas incluyen aquellas relacionadas con la posición del doble enlace en la funcionalidad de la amidina en el compuesto de la fórmula I, y la posición del substituyente R4, cuando este no representa H. Los compuestos de la fórmula I también contienen al menos dos átomos de carbono asimétricos y pueden exhibir por lo tanto un diastereoisomerismo y/o isomerismo óptico. Todos los diastereoisómeros pueden ser separados utilizando las técnicas convencionales, por ejemplo la cromatografía o la cristalización fraccionada. Los diversos estereoisómeros pueden ser aislados por la separación de una mezcla racémica o de otra mezcla de los compuestos utilizando técnicas convencionales, por ejemplo cristalización fraccionada o CLAR. Alternativamente los isómeros ópticos deseados se pueden hacer por la reacción de las materias primas activas ópticamente, apropiadas, bajo condiciones las cuales no provocarán la racemización o la epimerización, o por derivación, por ejemplo con un ácido homoquiral seguido por la separación de los derivados diastereoméricos por medios convencionales (po ejemplo CLAR, cromatografía sobre sílice) . Todos los estereoisómeros están incluidos dentro del alcance de la invención. Cuando se utilice aquí, el término "arilo" incluye fenilo, naftilo y semejantes. Los grupos de alquilo los cuales R2, R3, R5, R6, R6a, R7, R8a, R8b, R9, R10a, R10b, R11 y R12 pueden representar, y con los cuales Y y los grupos de arilo/fenilo y Het1 pueden ser substituidos; los grupos de alcoxi los cuales R2, R3 y R6a pueden representar, y con los cuales los grupos de arilo/fenilo y Het1 pueden ser substituidos; la parte de alquilo de los grupos de alquilfenilo o de alquilarilo la cual R8a, R9, R11 y R12 pueden representar; y los grupos de alquileno los cuales Y pueden representar, cuando existe un número suficiente de átomos de carbono, pueden ser lineales o ramificados, ser saturados o insaturados, ser cíclicos, acíclicos o parte cíclicos/acíclicos, y/o estar interrumpidos opcionalmente por un átomo de 0. La persona experta apreciará que cuando los grupos de alquilo que R2, R3, R5, R6, R6a, R7, R8a, R8b, R9, R10a, R10b, R11 y R12 pueden representar, y con los cuales Y y los grupos de arilo/fenilo y Het1 pueden estar substituidos, son cíclicos y están interrumpidos por oxígeno, los mismos pueden representar entonces los heterociclos que contienen oxígeno, tales como el tetrahidrofuranilo o (cuando sea apropiado) el tetrahidropiranilo. Los grupos halo los cuales R2, R3 y R6a pueden representar, y con los cuales R2, R3, R5, R6, R6a y los grupos de arilo/fenilo y Het1 pueden ser substituidos, incluyen fluoro, cloro, bromo e yodo. Las abreviaturas son listadas al final de esta especificación. Cuando R5 y R6, junto con el átomo de nitrógeno al cual los mismos están unidos o fijados, representa un anillo que contiene nitrógeno (por ejemplo pirrolidina) de 3 a 7 elementos, tal anillo incluye opcionalmente un átomo de oxígeno y/o está substituido por un grupo =0, el anillo está substituido preferentemente en un átomo de carbono que está en la posición a con respecto al átomo de nitrógeno. Para evitar dudas, el átomo de nitrógeno al cual R5 y R6 están unidos o fijados, es el átomo de nitrógeno que debe estar presente en el anillo. Los compuestos de la invención los cuales pueden ser mencionados incluyen aquellos en los cuales: R2 y R3 representan independientemente un substituyente opcional seleccionado de halo o alquilo con Cx_4 (substituido opcionalmente por halo) ; R5 representa alquilo con C?-6 o, junto con R6 y el átomo de nitrógeno al cual R5 y R6 están unidos o fijados, representa un anillo que contiene nitrógeno de 3 a 7 elementos, substituido opcionalmente con un grupo =0; R6 representa alquilo con C?_6/ C(0)R9 o, junto con R5 y el átomo de nitrógeno al cual R5 y R6 están unidos o fijados, representa un anillo que contiene nitrógeno de 3 a 7 elementos, substituido opcionalmente con un grupo =0; cuando R4 representa 0R8a o C(0)0R8b, R8a y R8 representan independientemente, en cada caso, alquilo con C?_?o, alquilfenilo con C?_3 o arilo con C6-?o, estos dos últimos grupos están substituidos opcionalmente por uno o más grupos de halo, alquilo con C?-4 y/o alcoxi con C?-4; R9 representa alquilo con Ci-ß; y todos los otros substituyentes son de otra manera como se definieron aquí anteriormente. _____—-— Los compuestos adicionales <de—-_cT_invención que pueden ser mencionados "incluyen aquellos en los cuales R4 no representa R8c. Los compuestos preferidos de la invención incluyen aquellos en los cuales: R2, si está presente, representa alquilo con C?-4 o alcoxi con C?_4 lineal o ramificado (ambos de los cuales están substituidos opcionalmente por halo), o halo (por ejemplo cloro) ; R3 está ya sea ausente o, si está presente, representa alquilo con C?_4 lineal o ramificado, o halo; R5 representa alquilo con C?_6 lineal, ramificado o cíclico o, junto con R6 y el átomo de nitrógeno al cual R5 y R6 están unidos o fijados, representa un anillo que contiene nitrógeno de 4 a 6 elementos, substituido opcionalmente con un grupo =0; R6 representa alquilo con C?-6 lineal, ramificado o cíclico, C(0) -alquilo con C?_6 o, junto con R5 y el átomo de nitrógeno al cual R5 y R6 están unidos o fijados, representa un anillo que contiene nitrógeno de 4 a 6 elementos, substituido opcionalmente con un grupo =0; R7 representa alquilo con C?_6 lineal, ramificado o cíclico; Y representa CH2 o (CH2)2. Cuando R4 representa 0R8a, los compuestos preferidos de la invención incluyen aquellos en los cuales R8a representa alquilo con C?-6 lineal o ramificado, alquilo cíclico con C4-5 (estos dos últimos dos grupos están interrumpidos opcionalmente por oxígeno) , o fenilo o alquilfenilo con C?_2 (por ejemplo bencilo) (estos dos últimos grupos están substituidos opcionalmente como se especificó aquí anteriormente), o R8a representa CH20C(0)R11, en el cual R11 representa fenilo, alquilo con C?-6 lineal, ramificado o cíclico (este último grupo está substituido opcionalmente por un substituyente seleccionado de OH, CH2H y fenilo) , u OR12 (en donde R12 representa fenilo o alquilo con d-6 lineal, ramificado o cíclico (este último grupo está substituido opcionalmente por un substituyente seleccionado de OH, C02H y fenilo) ) . Cuando R4 representa C(0)0R8b, los compuestos preferidos de la invención incluyen aquellos en los cuales R8b representa alquilfenilo con C?_2 lineal o ramificado o fenilo (estos últimos dos grupos están substituidos opcionalmente como se especificó aquí anteriormente) .
Los compuestos preferidos de la invención incluyen aquellos en los cuales R1 está unido o fijado al anillo de fenilo en la posición 3, con relación al grupo -CH(OH)- al cual el anillo de fenilo también está unido o fijado. El substituyente opcional R2 está fijado preferentemente al anillo de fenilo en la posición 5, con relación al grupo -CH(OH)- al cual el anillo de fenilo también está unido o fijado. Cuando el grupo N(R5)R6 representa un fragmento estructural la, el fragmento está preferentemente sin substituir. Los compuestos más preferidos de la invención incluyen aquellos en los cuales: R1 representa N(R5)R6; R3 está ya sea ausente o, si está presente, representa metilo o cloro, preferentemente en la posición 2 con relación al grupo -CH2- al cual el anillo de fenilo también está unido o fijado; R8a representa alquilo con C?-4 lineal o ramificado (interrumpido opcionalmente por oxígeno) o alquilo cíclico con C4-5 interrumpido por oxígeno; R5 representa alquilo con C?_4 o, junto con R6 y el átomo de nitrógeno al cual R5 y R6 están unidos, representa un anillo que contiene nitrógeno con 5 o 6 elementos, substituido opcionalmente con un grupo =0; R representa alquilo con C1-4. C(0) -alquilo con C1-6 (por ejemplo C(0) -alquilo con C?-4) o, junto con R5 y el átomo de nitrógeno al cual R5 y R6 están unidos, representa un anillo que contiene nitrógeno de 5 o 6 elementos, substituido opcionalmente con un grupo =0. Los compuestos de la fórmula I en los cuales el fragmento está en la configuración S, son preferidos. Los compuestos de la fórmula I en la cual el fragmento está en la configuración R son preferidos, Las líneas onduladas sobre los enlaces en los dos fragmentos anteriores significan las posiciones de unión de los fragmentos. Los compuestos preferidos de la fórmula I incluyen los compuestos de los Ejemplos descritos aquí posteriormente.
Preparación De acuerdo con la invención también se proporciona un proceso para la preparación de los compuestos de la fórmula I el cual comprende: (i) la unión de un compuesto de la fórmula II, en donde R1 y R2 son como se definieron aquí anteriormente con un compuesto de la fórmula III, en donde Y, R3 y R4 son como se definieron aquí anteriormente, por ejemplo en la presencia de un agente de unión (por ejemplo EDC, DCC, HBTU, HATU, TBTU, PyBOP o cloruro de oxalilo en DMF), una base apropiada (por ejemplo piridina, 2, 4, 6, -trimetilpiridina, 2, 4, 6-colidina, DMAP, TEA o DIPEA) y un solvente orgánico adecuado (por ejemplo diclorometano, acetonitrilo o DMF) ; (ii) la unión de un compuesto de la fórmula IV, IV en donde R1, R2 e Y son como se definieron aquí anteriormente con un compuesto de la fórmula V, en donde R3 y R4 son como se definieron aquí anteriormente, por ejemplo en la presencia de un agente de unión (por ejemplo cloruro de oxalilo en DMF, EDC, DCC, HBTU, HATU, PyBOP o TBTU) , una base apropiada (por ejemplo piridina, 2,4, 6,-trimetilpiridina, DMAP, TEA, 2, 4, 6-colidina o DIPEA) y un solvente orgánico adecuado (por ejemplo diclorometano, acetonitrilo o DMF) ; (iii) para los compuestos de la fórmula I en los cuales R4 representa OH u 0R8a, la reacción de un compuesto de la fórmula VI, en donde R1, R2, Y y R3 son como se definieron aquí anteriormente con un compuesto de la fórmula VII H2N0Ra VII en donde Ra representa H o R8a y R8a son como se definieron aquí anteriormente, por ejemplo a entre 40 y 60 °C, en la presencia de una base adecuada (por ejemplo TEA) y en un solvente orgánico apropiado (por ejemplo THF, CH3CN, DMF o DMSO) , opcionalmente por el pretratamiento del compuesto de la fórmula VI con HCl gaseoso, en la presencia de un alcohol (por ejemplo etanol) de alquilo inferior (por ejemplo alquilo con C?-6) a, por ejemplo, 0 °C, para formar un compuesto de la fórmula VIII, en donde Rc representa alquilo inferior (por ejemplo con C?_6) , tal como etilo, y R1, R2, Y y R3 son como se definieron anteriormente, tal compuesto puede ser aislado si se desea; (iv) para los compuestos de la fórmula I en la cual R representa OH u 0R8a, la reacción de un compuesto que corresponde a un compuesto de la fórmula I, en la cual, en lugar de R4, un grupo protector C(0)ORbl está presente, en la cual Rbl representa un grupo tal como el 2-trimetilsililetilo, alquilo con C?_6 o alquilfenilo (por ejemplo bencilo), con un compuesto de la fórmula VII como se definió aquí anteriormente, por ejemplo bajo condiciones de la reacción similares a aquellas descritas aquí anteriormente para la preparación de los compuestos de la fórmula I (paso (iii) (las personas expertas apreciarán que en tal reacción el derivado de la amidina diprotegida (es decir C(0)0Rbl y 0Ra protegida), en algunos casos, puede ser aislado si se desea, y el grupo C(0)ORbl removido entonces utilizando técnicas convencionales) ; (v) para los compuestos de la fórmula I en la cual R4 representa C(0)OR8b, la reacción de un compuesto de la fórmula I en la cual R4 representa H con un compuesto de la fórmula IX, L^CtOJOR815 IX en donde L1 representa un grupo de separación adecuado, tal como halo o p-nitrofenoxi, y R8b es como se definió aquí anteriormente, por ejemplo a 0 °C en la presencia de una base adecuada (por ejemplo NaOH) y un solvente orgánico apropiado (por ejemplo THF) y/o agua; (vi) para los compuestos de la formula I en los cuales R4 representa OR8a, la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula I en la cual R4 representa OH con un compuesto de la fórmula IXA, 8a L1-!.1 IXA en donde R8a y L1 son como se definieron aquí anteriormente, por ejemplo a entre 0 °C y la temperatura de reflujo, opcionalmente en la presencia de un solvente apropiado (por ejemplo DCM, THF, MeCN o DMF) y una base adecuada (por ejemplo ET3N o piridina); [vii) para los compuestos de la fórmula I en los cuales representa R8c, en donde R8c representa C(R 10a, (R10b)OC(O)Ru C(R10a) (R10b)OC(O)N(H)R12, la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula IXB, en donde R1, R2, Y, R3, R10a y R10b, son. como se definieron aquí anteriormente con un compuesto de la fórmula IXC, ?fOlR13 IXC en donde R13 representa R11 o N(H)R12, y L1, R11 y R12 son como se definieron aquí anteriormente, por ejemplo bajo las condiciones descritas aquí anteriormente (paso de proceso (vi)); (viii) para los compuestos de la fórmula I en la cual R4 representa R8c, la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula I en la cual R4 representa H con un compuesto de la fórmula IXD, L^ÍR103) (R10b)R14 IXD en donde R14 representa 0C(0)Ru, NHC(0)OR12 u OC (O)N(H) R12, y L1, R10a, R10b, R11 y R12 son como se definieron aquí anteriormente, por ejemplo bajo las condiciones descritas aquí anteriormente (paso (vi) del proceso); (ix) para los compuestos de la fórmula I en la cual R1 incluye un grupo S(0) o un grupo S(0)2, la oxidación de un compuesto correspondiente de la fórmula I en donde R1 incluye un grupo S, en la presencia de una cantidad apropiada de un agente de oxidación adecuado (por ejemplo mCPBA o peroximonosulfato de potasio) y un solvente orgánico apropiado (por ejemplo CH2C12, metanol, agua o mezclas de los mismos (por ejemplo metanol/agua) ) . Los compuestos de la fórmula II están disponibles utilizando técnicas estándares y/o conocidas. Por ejemplo, los compuestos de la fórmula II pueden ser preparados por la reacción de un aldehido de la fórmula X, en donde R1 y R2 son como se definieron anteriormente aquí, con: [a) un compuesto de la fórmula XI,.
R"CN XI en donde R" representa H o (CH3)3Si, por ejemplo a temperatura ambiental, o elevada (por ejemplo abajo de 100 °C) en la presencia de un solvente orgánico adecuado (por ejemplo cloroformo o cloruro de metileno) y, si es necesario, en la presencia de una base adecuada (por ejemplo TEA) y/o un sistema catalizador adecuado (por ejemplo cloruro de bencilamonio o yoduro de zinc), seguido por la hidrólisis bajo condiciones que son bien conocidas por aquellos expertos en el arte (por ejemplo como se describe aquí posteriormente); b) NaCN o KCN, por ejemplo en la presencia de NaHS03 y agua, seguido por hidrólisis; (c) cloroformo, por ejemplo a una temperatura elevada (por ejemplo arriba de la temperatura ambiental pero abajo de 100 °C) en la presencia de un solvente orgánico adecuado (por ejemplo cloroformo) y, si es necesario, en la presencia de un sistema catalizador adecuado (por ejemplo cloruro de bencilamonio), seguido por hidrólisis; (d) un compuesto de la fórmula XII, <^ r M XII en donde M representa Mg o Li, seguido por segmentación oxidante (por ejemplo ozonólisis o catalizada con osmio o rutenio) bajo condiciones las cuales son bien conocidas por aquellos expertos en el arte; o (e) tris (metiltio) metano bajo condiciones las cuales son bien conocidas por aquellos expertos en el arte, seguido por la hidrólisis en la presencia por ejemplo de HgO y HBF4.
Las formas enantioméricas de los compuestos de la fórmula II (es decir aquellos compuestos que tienen diferentes configuraciones de los substituyentes alrededor del a- del átomo de C con respecto al grupo de C02H) pueden ser separados por un paso de derivación enantioespecífico. Esto puede ser logrado, por ejemplo por un proceso enzimático. Tales procesos enzimáticos incluyen, por ejemplo, la transesterificación del grupo a-OH a la temperatura entre la ambiental y la de reflujo (por ejemplo a entre 45 y 55 °C) en la presencia de una enzima adecuada (por ejemplo la Lipase PS Amano) , un éster apropiado (por ejemplo acetato de vinilo) y un solvente adecuado (por ejemplo éter metil terc-butílico) . El isómero derivado puede ser separado entonces del isómero que no reaccionó por las técnicas de separación convencionales (por ejemplo cromatografía) . Los grupos agregados a los compuestos de la fórmula II en tal paso de derivación pueden ser removidos ya sea antes de cualesquiera reacciones adicionales o en cualquier etapa posterior en la síntesis de los compuestos de la fórmula I. Los grupos adicionales pueden ser removidos utilizando las técnicas convencionales (por ejemplo para los esteres del grupo a-OH, la hidrólisis bajo las condiciones conocidas por aquellos expertos en el arte (por ejemplo entre la temperatura ambiental y la temperatura de reflujo en la presencia de una base adecuada (por ejemplo NaOH) y un solvente apropiado (por ejemplo MeOH, agua o mezclas de los mismos) ) ) . Los compuestos de la fórmula III pueden ser preparados por la reacción de un compuesto de la fórmula XIII H-N Y XIII O OH en donde Y es como se definió aquí anteriormente con un compuesto de la fórmula V como se definió aquí anteriormente, por ejemplo bajo condiciones tales como aquellas descritas aquí anteriormente para la síntesis de los compuestos de la fórmula I (véanse, por ejemplo, los pasos de proceso (i) y (ii)). Los compuestos de la fórmula IV están disponibles fácilmente utilizando las técnicas conocidas. Por ejemplo, los compuestos de la fórmula IV pueden ser preparados por la reacción de un compuesto de la fórmula II como se definió aquí anteriormente con un compuesto de la fórmula XIII como se definió aquí anteriormente, por ejemplo bajo condiciones tales como aquellas descritas aquí anteriormente para la síntesis de los compuestos de la fórmula I (véanse, por ejemplo, los pasos de proceso (i) y (ii)). Los compuestos de la fórmula V ya son conocidos en la literatura, y/o pueden ser preparados utilizando técnicas conocidas. Por ejemplo los compuestos de la fórmula V pueden ser preparados por la reducción de un compuesto de la formula XIV, en donde R3 y R4 son como se definieron aquí anteriormente, bajo condiciones que son bien conocidas por aquellos expertos en el arte. Los compuestos de la fórmula VI pueden ser preparados de acuerdo con las técnicas de acoplamiento de los péptidos, por ejemplo de un modo análogo a los métodos descritos aquí anteriormente para los compuestos de la fórmula I (véanse, por ejemplo, los pasos de proceso (i) y (ii)). Si se desea, los compuestos de la fórmula VIII también pueden ser preparados de esta manera.
Los compuestos de la fórmula IXB pueden ser preparados por la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula I en la cual R4 representa H con un exceso de un compuesto de la fórmula IVA, R10aC (0) R10b XI VA en donde R10a y R10b son como se definieron aquí anteriormente, por ejemplo bajo las condiciones conocidas por aquellos expertos en el arte. Los compuestos de la fórmula X están disponibles comercialmente, son bien conocidos en la literatura, o están disponibles utilizando técnicas estándares y/o conocidas. Por ejemplo, los compuestos de la fórmula X pueden ser preparados por la reducción de un compuesto de la fórmula XV, en donde R1 y R2 son como se definieron aquí anteriormente, en la presencia de un agente de reducción adecuado (por ejemplo DIBAL-H) .
Alternativamente, los compuestos de la fórmula X pueden ser preparados por la oxidación de un compuesto de la fórmula XVI, en donde R1 y R2 son como se definieron aquí anteriormente, en la presencia de un agente de oxidación adecuado (por ejemplo clorocromato de piridinio o una combinación de DMSO y cloruro de oxalilo) . Los compuestos de las fórmulas II, IV, VI, VIII, X, XV y XVI en las cuales R1 incluye un grupo S(0) o un grupo S(0)2, pueden ser preparados por la oxidación de un compuesto correspondiente de la fórmula II, IV, VI, VIII, X, XV o XVI (cuando sea apropiado) en donde R1 incluye un grupo S, por ejemplo como se describió aquí anteriormente. Los compuestos de las fórmulas VII, IX, IXA, IXC, IXD, XI, XII, XIII, XIV, XIVA, XV y XVI, y los derivados de los mismos, están ya sea disponibles comercialmente, son conocidos en la literatura, o pueden ser obtenidos ya sea por analogía con el proceso descrito aquí, o por . procedimientos sintéticos convencionales, de acuerdo con las técnicas estándares, a partir de las materias primas disponibles fácilmente utilizando los reactivos apropiados y las condiciones de la reacción (por ejemplo como se describió aquí anteriormente) . Los substituyentes sobre el (los) anillo (s) aromáticos y/o no aromáticos, carbocíclicos y heterocíclicos en los compuestos de las fórmulas I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, IXA, IXB, IXC, IXD, X, XIII, XIV, XV y XVI pueden ser introducidos y/o interconvertidos utilizando las técnicas-bien conocidas por aquellos expertos en el arte. Por ejemplo, nitro puede ser reducido a amino, el amino puede ser alquilado o acilado para dar el alquil- y/o acilamino, el amino puede ser convertido a pirrólo (por la condensación con un 2, 5-dimetoxitetrahidrofurano en la presencia de un catalizador, tal como el pentóxido fosforoso) , el amino puede ser convertido (por medio de diazotización) a halo o (por ejemplo por medio de la reacción con un compuesto de 1,4- o 1, 5-dihaloalquilo o un ß- o ?-haloéster) a un anillo que contiene nitrógeno (substituido opcionalmente con un grupo =0) , yodo puede ser convertido a los heterociclos que contienen nitrógeno (por ejemplo el imidazolilo y el piperidinilo, por el tratamiento con imidazol o piperidina bajo las condiciones de Buchwald) , el hidroxi del nitrógeno puede ser alquilado para dar alcoxi, el alcoxi puede ser hidrolizado a hidroxi, los alquenos pueden ser hidrogenados a alcanos, el halo puede ser hidrogenado a H, etc. A este respecto, los compuestos de la fórmula XV en los cuales R1 representa -N(CH3)2 y R2 representa cloro o metilo, pueden ser obtenidos de los esteres de metilo del ácido benzoico disubstituido con yodo-cloro o yodo-metilo disponibles comercialmente utilizando la aminación catalizada con Pd, por ejemplo como se describió por Wolfe y colaboradores en Tetra?edron Lett. 38, 6367 (1997), seguido por ya sea la aminación reductora (por ejemplo utilizando el HCHO y un agente reductor tal como Na(CN)BH3 o una combinación de óxido de Pt(IV) e hidrógeno), o la alquilación (por ejemplo utilizando Mel y una base apropiada) , de la anilina resultante. Los compuestos de la fórmula XV en la cual R1 representa -S(0)mCH3 (en la cual m es como se definió aquí anteriormente) y R2 representa cloro o metilo, pueden ser obtenidos de la anilina resultante descrita anteriormente (o del ácido benzoico correspondiente) por medio de diazotización, seguido por el tratamiento de la sal de diazonio con etil xantato de potasio, y luego la hidrólisis del compuesto intermedio para dar el tiofenol correspondiente, por ejemplo como se describió por Tarbell y colaboradores en "Organi c Synthesis", Coll. Vol. III, p. 809-11 (1955). El tiofenol resultante puede ser alquilado entonces (por ejemplo utilizando un yoduro de alquilo apropiado en la presencia de una base adecuada en EtOH) , y luego (si es necesario) oxidado para formar la sulfona o el sulfóxido (por ejemplo utilizando mCPBA en CH2C12 o peroximonosulfato de potasio en metanol/agua) . Los compuestos de la fórmula I pueden ser aislados de sus mezclas de la reacción utilizando las técnicas convencionales. Será apreciado por aquellos expertos en el arte que en los procesos descritos anteriormente los grupos funcionales de los compuestos intermedios pueden necesitar ser protegidos por los grupos protectores. Los grupos funcionales los cuales es deseable que se protejan incluyen hidroxi, amino, aldehido, ácido 2-hidroxicarboxílico y ácido carboxílico. Los grupos protectores adecuados para el hidroxi incluyen los grupos de trialquilsililo o diarilalquilsililo (por ejemplo t-butildimetilsililo, t-butildifenilsililo o trimetilsililo) y tetrahidropiranilo. Los grupos protectores adecuados para el ácido carboxílico incluyen el alquilo con C?-6 o los esteres de bencilo. Los grupos protectores adecuados para amino y amidino incluyen t-butiloxicarbonilo, benciloxicarbonilo o 2-trimetilsililetoxicarbonilo (Teoc) .
Los nitrógenos de amidino también pueden ser protegidos por los grupos de hidroxi o alcoxi, y pueden ser ya sea mono- o diprotegidos. Los aldehidos pueden ser protegidos como acétales haciéndolos reaccionar por ejemplo con etilenglicol. Los ácidos 2-hidroxi carboxílicos pueden ser protegidos por condensación por ejemplo con la acetona. La protección y desprotección de los grupos funcionales se puede llevar a cabo antes o después de la unión, o antes o después de cualquiera otra reacción en los esquemas mencionados anteriormente. Los grupos protectores pueden ser removidos de acuerdo con las técnicas las cuales son bien conocidas por aquellos expertos en el arte y como se describen aquí posteriormente . Las personas expertas en el arte apreciarán que, para obtener los compuestos de la fórmula I en una alternativa, y, en algunas ocasiones, de una manera más conveniente, los pasos de proceso individuales mencionados aquí anteriormente pueden ser efectuados en un orden diferentes, y/o las reacciones individuales pueden ser efectuadas en una etapa diferente en la ruta completa (es decir los substituyentes pueden ser agregados a y/o las transformaciones químicas efectuadas sobre, los diferentes compuestos intermedios para aquellos mencionados aquí anteriormente en conjunción con una reacción particular) .
Esto puede anular, o hacer que exista, la necesidad de los grupos protectores. Por ejemplo, esto es particularmente verdadero con respecto a la síntesis de los compuestos de la fórmula I en la cual R4 no representa H. En este caso, los grupos OH, 0R8a, C(0)0R8b y/o R8c pueden ser introducidos en una etapa previa en la síntesis completa utilizando los pasos de proceso descritos aquí anteriormente (véanse, por ejemplo, los pasos de proceso (iii) a (viii) ) . Además, el grupo OH del ácido mandélico de los compuestos de las fórmulas II y IV puede necesitar ser protegido previo a los pasos de unión o acoplamiento descritos anteriormente. En consecuencia, el orden y tipo de química involucrado dictará la necesidad, y el tipo, de los grupos protectores, así como la secuencia para llevar a cabo la síntesis . El uso de los grupos protectores es descrito de manera más completa en "Protective Groups in Organic Chemistry", editado por J W F McOmie, Plenum Press (1973), y "Protective Groups in Organic Synthesis", 2/a. edición, T W Greene & P G M Wutz, Wiley-Interscience (1991). Los derivados protegidos de los compuestos de la fórmula I pueden ser convertidos químicamente a los compuestos de la fórmula I utilizando técnicas de desprotección estándares (por ejemplo hidrogenación) . La persona experta también apreciará que ciertos compuestos de la fórmula I también pueden ser referidos como que son "derivados protegidos" de otros compuestos de la fórmula I .
Uso médico y farmacéutico Los compuestos de la invención pueden poseer actividad farmacológica como tales. Los compuestos de la invención que pueden poseer tal actividad incluyen, pero no están limitados a, aquellos en los cuales R4 es H. Sin embargo, otros compuestos de la fórmula I (incluyendo aquellos en los cuales R4 no es H) pueden no poseer tal actividad, pero pueden ser administrados parenteral u oralmente, y después de esto metabolizados en el cuerpo para formar los compuestos que son activos farmacológicamente (incluyendo, pero sin estar limitado a, los compuestos correspondientes en los cuales R4 es H) . Tales compuestos (los cuales también incluyen los compuestos que pueden poseer alguna actividad farmacológica, pero esta actividad es apreciablemente inferior que aquella de los compuestos "activos" a los cuales los mismos son metabolizados), pueden ser descritos por lo tanto como los "profármacos" de los compuestos activos. Así, los compuestos de la invención son útiles a causa de que los mismos poseen una actividad farmacológica, y/o son metabolizados en el cuerpo a continuación de la administración oral o parenteral para formar los compuestos los cuales poseen la actividad farmacológica. .Los compuestos de la invención están indicados por lo tanto como substancias farmacéuticas. De acuerdo con un aspecto adicional de la invención se proporcionan así los compuestos de la invención para su uso como substancias farmacéuticas. En particular, los compuestos de la invención son inhibidores potentes de la trombina ya sea como tales y/o (por ejemplo en el caso de los profármacos), son metabolizados a continuación de la administración para formar inhibidores potentes de la trombina, por ejemplo como se demostró en las pruebas descritas posteriormente. Por "profármaco de un inhibidor de la trombina", se incluyen los compuesto que forman un inhibidor de la trombina, en una cantidad detectable experimentalmente, y dentro de un tiempo predeterminado (por ejemplo aproximadamente 1 hora), a continuación de la administración oral o parenteral. Los compuestos de la invención se espera así que sean útiles en aquellas condiciones en donde la inhibición de la trombina es requerida. Los compuestos de la invención están indicados así en el tratamiento y/o la profilaxis de la trombosis y la hipercoagulabilidad en la sangre y los tejidos de los animales incluyendo el ser humano. Se sabe que la hipercoagulabilidad puede conducir a enfermedades tromboembólicas. Las condiciones asociadas con la hipercoagulabilidad y las enfermedades tromboembólicas las cuales pueden ser mencionadas incluyen la resistencia a la proteína C activada, heredada o adquirida, tal como la mutación del factor V (factor V de Leiden), y las deficiencias adquiridas o heredadas en la antitrombina III, la proteína C, la proteína S o el cofactor II de la heparina. Otras condiciones que se sabe que van a estar asociadas con la hipercoagulabilidad y la enfermedad tromboembólica incluyen los anticuerpos antifosfolípidos circulantes (anticoagulante de Lupus), la homocisteinemia, la trombocitopenia inducida por la heparina y los defectos en la fibrinólisis. Los compuestos de la invención están indicados así tanto en el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de estas condiciones. Los compuestos de la invención están indicados adicionalmente en el tratamiento de las condiciones en donde existe un exceso indeseable de la trombina sin señales de hipercoagulabilidad, por ejemplo en las enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer. Los estados de enfermedad particulares que puede ser mencionados incluyen el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de la trombosis venosa y el embolismo pulmonar, la trombosis arterial (por ejemplo en el infarto al miocardio, la angina inestable, los ataques debido a la trombosis y la trombosis arterial periférica) y el embolismo sistémico usualmente desde el atrio durante la fibrilación arterial o desde el ventrículo izquierdo después del infarto al miocardio transmural. Además, los compuestos de la invención se espera que tengan utilidad en la profilaxis de la reoclusión (es decir la trombosis) después de la trombólisis, la angioplastía transluminal percutánea (PTA) y las operaciones de derivación coronaria; la prevención de la re-trombosis después de la microcirugía y la cirugía vascular en general. Las indicaciones adicionales incluyen el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de la coagulación intravascular diseminada provocada por las bacterias, los traumas múltiples, la intoxicación o cualquier otro mecanismo; el tratamiento anticoagulante cuando la sangre está en contacto con las superficies extrañas en el cuerpo tales como los injertos vasculares, los dispositivos de Stent vasculares, los catéteres vasculares, las válvulas prostéticas mecánicas y biológicas o cualquier otro dispositivo médico; y el tratamiento anticoagulante cuando la sangre está en contacto con los dispositivos mecánicos fuera del cuerpo tales como durante la circugía cardiovascular utilizando una máquina de corazón-pulmón o en la hemodiálisis. Además de sus efectos sobre el proceso de coagulación, la trombina se sabe que activa un gran número de células (tales como los neutrófilos, los fibroblastos, las células endoteliales y las células de los músculos lisos) .
Por lo tanto, los compuestos de la invención también pueden ser útiles para el tratamiento terapéutico y/o profiláctico del síndrome de tensión respiratoria del adulto e idiopática, la fibrosis pulmonar a continuación del tratamiento con radiación o quimioterapia, el choque séptico, la septicemia, las respuestas inflamatorias, las cuales incluyen, pero no están limitadas a, edema, las aterosclerosis aguda o crónica tal como la enfermedad arterial coronaria, la enfermedad arterial cerebral, la enfermedad arterial periférica, el daño a la reperfusión, y la restenosis después de la angioplastía transluminal percutánea (PTA) . Los compuestos de la invención que inhiben la tripsina y/o la trombina también pueden ser útiles en el tratamiento de la pancreatitis. De acuerdo con un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un método de tratamiento de una condición en donde la inhibición de la trombina es requerida, tal método comprende la administración de una cantidad efectiva terapéuticamente de un compuesto de la invención, o una sal del mismo aceptable farmacéuticamente, a una persona que sufra de, o sea susceptible a tal condición. Los compuestos de la invención serán administrados normalmente de manera oral, intravenosa, subcutánea, bucal, rectal, dérmica, nasal, traqueal, bronquial, o por cualquier otra ruta parenteral o por medio de inhalación, en la forma de las preparaciones farmacéuticas que comprenden el compuesto activo ya sea como una base libre, o una sal de adición acida orgánica o inorgánica aceptable farmacéuticamente, en una forma de dosificación aceptable farmacéuticamente. Dependiendo del desorden y del paciente que va a ser tratado y de la ruta de administración, las composiciones pueden ser administradas en dosis variables. Los compuestos de la invención también pueden ser combinados y/o coadministrados con cualquier agente antitrombótico con un mecanismo diferente de acción, tal como los agentes antiplaquetas del ácido acetilsalicílico, la ticlopidina, el clopidogrel, el receptor del tromboxano y/o los inhibidores de la sintetasa, los antagonistas del receptor del fibrinógeno, las substancias que imitan la prostaciclina y los inhibidores de fosfodiesterasa y los antagonistas del receptor de ADP (P2T) . Los compuestos de la invención además pueden ser combinados y/o coadministrados con trombolíticos tales como el activador del plasminógeno del tejido (natural, recombinante o modificado) , la estreptocinasa, la urocinasa, la prourocinasa, el complejo del activador de estreptocinasa-plasminógeno anisoilado (APSAC) , los activadores del plasminógeno de la glándula salival de los animales, y semejantes, en el tratamiento de las enfermedades trombóticas, en particular el infarto al miocardio. De acuerdo con un aspecto adicional de la invención se proporciona así una formulación farmacéutica que incluye un compuesto de la invención, mezclada con un adyuvante, diluyente o portador aceptable farmacéuticamente. Las dosis diarias adecuadas de los compuestos de la invención en el tratamiento terapéutico de los seres humanos son de aproximadamente 0.001-100 mg/kg de peso corporal en la administración peroral y 0.001-50 mg/kg de peso corporal en la administración parenteral. Los compuestos de la invención tienen la ventaja de que los mismos pueden, o pueden ser metabolizados a los compuestos que pueden ser más eficaces, menos tóxicos, de acción más prolongada, que tengan un intervalo más amplio de actividad, que sean más potentes, que produzcan menos efectos laterales, que sean absorbidos más fácilmente que, o que tengan otras propiedades farmacológicas, físicas, o químicas, útiles, sobre los compuestos conocidos en el arte previo.
Pruebas Biológicas Prueba A Determinación del Tiempo de Coagulación de la Trombina (TT) La solución inhibidora (25 µl) se incuba con el plasma (25 µl) durante tres minutos. La trombina humana (T 6769; Sigma Chem. Co., o Hematologic Technologies) en la solución amortiguadora, pH 7.4 (25 µl, 4.0 NIH unidades/ml), fue agregada entonces y el tiempo de la coagulación se midió en un dispositivo automático (KC 10; Amelung) . El tiempo de coagulación de la trombina (TT) es expresado como los valores absolutos (segundos) así como la relación de TT sin el inhibidor (TT0) con respecto a TT sin el inhibidor (TTj.) . Las relaciones finales (intervalo de 1-0) fueron graficadas contra la concentración del inhibidor (transformada en el log) y se ajustaron a las curvas de respuesta de la dosis sigmoidal de acuerdo con la ecuación Y = a/[l + (x/ICso)5] en donde: a = intervalo máximo, es decir 1; s = pendiente de la curva de respuesta a la dosis; e IC50 = la concentración del inhibidor que duplica el tiempo de coagulación. Los cálculos fueron procesados sobre una PC utilizando el programa GraFit Versión 3, ajustando la ecuación igual a: Inicio en 0, final definido = 1 (Erithacus Software, Robín Leatherbarrow, Imperial College of Science, Londres, UK) .
Prueba B Determinación de la Inhibición de la Trombina con un Ensayo Robótico, Cromogénico La potencia del inhibidor de la trombina se midió con un método de substrato cromogénico, en un procesador de microplaca robótico Plato 3300 (Rosy AG, CH-8634 Hombrechtikon, Suiza) , utilizando placas de microtitulación de la mitad del volumen, de 96 cavidades (Costar, Cambridge, MA, EUA; Cat. No. 3690) . Las soluciones de la materia prima de la substancia de prueba en DMSI (72 µl), 0.1 - 1 mmol/1, fueron diluidas en serie 1:3 (24 + 48 µl) con DMSO para obtener diez diferentes concentraciones, las cuales fueron analizadas como las muestras en el ensayo. 2 µl de la muestra de prueba se diluyeron con 124 µl de la solución amortiguadora de ensayo, 12 µl de la solución del substrato cromogénico (S-2366, Chromogenix, Mólndal, Suecia) en la solución amortiguadora para el ensayo y finalmente 12 µl de una solución de a-'trombina (a-trombina humana, Signa Chemical Co., o Hematologic Technologies) en la solución amortiguadora de ensayo, fueron agregados, y las muestras se mezclaron. Las concentraciones del ensayo final fueron: substancia de prueba 0.00068 - 13.3 µmoles/1, S-2366 0.30 mmoles/1, a-trombina 0.020 NIHU/ml. El incremento de la absorbencia lineal durante 40 minutos de incubación a 37 °C se utilizó para el cálculo de la inhibición del porcentaje para las muestras de prueba, cuando se comparó con los blancos sin el inhibidor. El valor de IC50-robótico, que corresponde a la concentración del inhibidor la cual provocó el 50% de la inhibición de la actividad de la trombina, se calculó a partir la curva de la concentración logarítmica contra el % de inhibición.
Prueba C Determinación de la Constante de Inhibición Kj para la Trombina Humana Las determinaciones de Ki se hicieron utilizando un método del substrato cromogénico, efectuado a 37 °C sobre un analizador centrífugo Cobas Bio (Roche, Basel, Suiza) . La actividad enzimática residual después de la incubación de la a-trombina humana con varias concentraciones del compuesto de prueba se determinó en tres concentraciones del substrato diferentes, y se midió como el cambio en la absorbencia óptica a 405 nm. Las soluciones del compuesto de prueba (100 µl; normalmente en la solución salada o la solución amortiguadora que contiene BSA 10 g/1) se mezclan con 200 µl de la a-trombina humana (Sigma Chemical Co) en la solución amortiguadora de ensayo (0.05 moles/1 de Tris-HCl pH 7.4, una intensidad iónica de 0.15 ajustada con NaCl) que contiene BSA (10 g/1), y se analizó como las muestras en el Cobas Bio. Una muestra de 60 µl, junto con 20 µl del agua, se agrega a 320 µl del substrato S-2238 (Chromogenix AB, Mólndal, Suecia) en la solución amortiguadora de ensayo, y el cambio de la absorbencia (?A/min) fue verificada. Las concentraciones finales de S-2238 fueron de 16, 24 y 50 µmoles/1 y de la trombina 0.125 NIH U/ml. La velocidad de la reacción en estado permanente se utilizó para construir las gráficas de Dixon, es decir los diagramas de la concentración del inhibidor contra 1 (?A/min). Para los inhibidores competitivos, reversibles, los puntos de los datos para las diferentes concentraciones del substrato típicamente forman líneas rectas que se interceptan en x = -K_.
Prueba D Determinación del Tiempo de la Tromboplastina Parcial Activada El APTT fue determinado en el plasma tratado con citrato humano normal con el reactivo PTT Automated 5 fabricado por Stago. Los inhibidores fueron agregados al plasma (10 µl de la solución inhibidora a 90 µl del plasma) y se incubaron con el reactivo de APTT durante 3 minutos seguido por la adición de 100 µl de la solución del cloruro de calcio (0.025 M) y el APTT fue determinado por el uso del analizador de la coagulación KC10 (Amelung) de acuerdo con las instrucciones del productor del reactivo. El tiempo de coagulación es expresado en valores absolutos (segundos) así como la relación del APTT sin inhibidor (APTT0) con respecto al APTT con el inhibidor (APTTn.) . Las relaciones posteriores (intervalo 1-0) fueron graficadas contra la concentración del inhibidor (log transformado) y se ajustaron a las curvas de respuesta-dosis sigmoidales de acuerdo con la ecuación y = a/[l + (x/ICso)2] en donde: a = intervalo máximo, es decir 1; s = pendiente de la curva de dosis-respuesta; e IC50 = la concentración del inhibidor que duplica el tiempo de coagulación. Los cálculos fueron procesados sobre una PC utilizando el programa GraFit Versión 3, ajustando la ecuación igual a: Inicio en 0, final definido = 1 (Erithacus Software, Robin Leatherbarrow, Imperial College of Science, Londres, UK) . El IC50APTT está definido como la concentración del inhibidor en el plasma humano que duplicó el Tiempo de la Tromboplastina Parcial Activada.
Prueba E Determinación del Tiempo de la Trombina ex vivo La inhibición de la trombina después de la administración oral o parenteral de los compuestos de la fórmula I, disueltos en etanol :Solutol™: agua (5:5:90), fue examinadas en ratas conscientes las cuales, uno o dos días previo al experimento, fueron equipadas con un catéter para el muestreo de la sangre desde la arteria carótida. Las muestras de sangre del día experimental fueron extraídas en tiempo fijos después de la administración del compuesto en tubos de plástico que contienen 1 parte de la solución de citrato de sodio (0.13 moles por 1) y 9 partes de la sangre.
Los tubos fueron centrifugados para obtener plasma pobre en plaquetas. El plasma fue utilizado para la determinación del tiempo de la trombina o el tiempo de coagulación de la ecarina (ECT) como se describe posteriormente. El plasma de la rata tratado con citrato, 100 µl, se diluyó con una solución salada, 0.9 %, 100 µl, y la coagulación del plasma se inició por la adición de la trombina humana (T 6769, Sigma Chem Co, EUA o Hematologic Techonologies) en una solución amortiguadora, pH 7.4, 100 µl, o ecarina (Pentapharm) . El tiempo de coagulación fue medido en un dispositivo automático (KC 10, Amelung, Alemania) . En donde un compuesto de "profármaco" de la fórmula I fue administrado, las concentraciones del inhibidor de la trombina activa apropiado de la fórmula I (por ejemplo el compuesto de amidina libre) en el plasma de la rata fueron estimadas por el uso de las curvas estándares que relacionan el tiempo de la trombina o el tiempo de coagulación de la ecarina en el plasma de la rata tratado con el citrato, agrupado, con las concentraciones conocidas del inhibidor de la trombina "activo" correspondiente disuelto en la solución salada. Basado en las concentraciones del plasma estimadas del inhibidor de la trombina activo (lo cual supone que el tiempo de la trombina o la prolongación de ECT es provocada por el compuesto mencionado anteriormente) en la rata, el área bajo la curva después de la administración oral y/o parenteral del compuesto del profármaco correspondiente de la fórmula I fue calculada (AUCpd) utilizando la regla trapezoidal y la extrapolación de los datos hasta el infinito. La biodisponibilidad del inhibidor de la trombina activa después de la administración oral o parenteral del profármaco se calculó como sigue: [ (AUCpd/dosis) / (AUCactivo, parenteral/dosis] x 100 en donde AUCactivo, parenteral representa el AUC obtenido después de la administración parenteral del inhibidor de trombina activo correspondiente a las ratas conscientes como se describió anteriormente.
Prueba F Determinación del Tiempo de la Trombina en la Orina ex vi vo La cantidad del inhibidor de la trombina "activo" que fue excretada en la orina después de la administración oral o parenteral de los compuestos del "profármaco" de la invención, disuelta en etanol :Solutol™: agua (5:5:90), se estimó por la determinación del tiempo de la trombina en la orina ex vivo (suponiendo que la prolongación del tiempo de la trombina es provocado por el compuesto mencionado anteriormente) . Las ratas conscientes fueron colocadas en jaulas para el metabolismo, permitiendo la colección separada de la orina y las heces, durante 24 horas a continuación de la administración oral de los compuestos de la invención. El tiempo de la trombina fue determinado sobre la orina colectada como se describe posteriormente. El plasma humano tratado con el citrato, normal, agrupado (100 µl) se incubó con la orina de la rata concentrada, o las diluciones de la solución salada de la misma, durante un minuto. La coagulación del plasma fue iniciada entonces por la administración de la trombina humana (T 6769, Sigma Chem Company) en la solución amortiguadora (pH 7.4; 100 µl) . El tiempo de coagulación fue medido en un dispositivo automático (KC 10; Amelung) . Las concentraciones del inhibidor de la trombina activa en la orina de la rata fueron estimadas por el uso de las curvas estándares que relacionan el tiempo de la trombina en el plasma humano tratado con el citrato, agrupado, con las concentraciones conocidas del inhibidor de la trombina activo mencionado anteriormente, disuelto en la orina de la rata concentrada (o las diluciones de la solución salada de la misma) . Multiplicando el total de la producción de la orina de la rata durante el período de 24 horas por la concentración promedio estimada del inhibidor activo mencionado anteriormente en la orina, la cantidad del inhibidor activo excretado en la orina (AMOUNTpd) podría ser calculada. La biodisponibilidad del inhibidor de la trombina activa después de la administración oral o parenteral del profármaco se calculó como se indica en seguida: [ (AMOUNTpd/dosis)/ (AMOUNTactive, parenteral/dosis] x 100 en donde AMOUNTactive, parenteral representa la cantidad excretada en la orina después de la administración parenteral del inhibidor de la trombina activa correspondiente a las ratas conscientes como se describió anteriormente.
Prueba G Activación Metabólica de los Compuestos del Profármaco in vitro Los compuestos del proférmaco de la fórmula I fueron incubados a 37 °C con los microsomas del hígado o con las fracciones del sobrenadante de 10 000 gravedades (refiriéndose a la velocidad de la máquina centrífuga) (es decir la fracción s9) preparada apartir del homogenato del hígado de la rata o del ser humano. Las concentraciones de la proteína total en las incubaciones fueron de 1 o 3 mg/ml disueltas en 0.05 moles/1 de la solución amortiguadora TRIS (pH 7.4), y con los cofactores de NADH (2.5 mmoles/1) y NADPH (0.8 mmoles/1) presentes. El volumen total de la substancia incubada fue de 1.2 ml . Las concentraciones del profármaco inicial fueron de 5 o 10 µmoles/1. Las muestras fueron colectadas de las substancias incubadas a intervalos regulares de más de 60 minutos después del inicio de las incubaciones. Las muestras (25 µl) de la substancia incubada fueron mezcladas con un volumen igual del plasma del ser humano de la rata y una cantidad apropiada de la trombina, y el tiempo de coagulación (es decir el tiempo de la trombina) fue medido sobre un coagulómetro (KC 10; Amelung) . La cantidad del inhibidor de la trombina "activo" formado fue estimada por el uso de las curvas estándares que relacionan el tiempo de la trombina en el plasma de la rata o del ser humano, tratado con citrato, agrupado, con las concentraciones conocidas del "inhibidor de la trombina activo" correspondientes. La cantidad del inhibidor de la trombina "activo" fue alternativamente, o además del método mencionado anteriormente, estimada por el uso de CL-EM.
Ejemplos La invención es ilustrada por medio de los siguiente ejemplos. Los aminoácidos Pro y Aze son definidos como los isómeros S si no se especificaron de otra manera.
Los ejemplos fueron obtenidos como los diastereoisómeros si no se especifican de otra manera.
Ejemplo 1 • Ph(3-N(Me)2-(R)- o - (S) CH (OH) -C (O) -Aze-Pab x HOAc (i) Ph(3-N(Me)2)-CHO Una mezcla de Ph (3-N(Me)2) -CH2OH (1.9 g; 12.6 mmoles) y Mn02 (8.8 g; 100 mmoles) en CH2C12 se agita a temperatura ambiente durante 2.5 días. La mezcla se filtró a través de Celite® y el filtrado se evaporó. El producto crudo fue sometido a cromatografía instantánea sobre gel de sílice utilizando éter iso-propílico: trimetilpentano (7:3) como eluyente. Producción 0.93 g (50%).
RMN^H (400 MHz; CDC13) : d 9.89 (s, 1H) , 7.37 (m, 1H) , 7.17-7.25 (m, 2H), 7.05 (m, 1H) , 2.98 (s, 6H) . (ii) Ph ( 3-N (Me) 2) - (R S ) CH (0SiMe3) CN El TMS-CN (0.75 ml; 6.0 mmoles) se agregó por goteo a una mezcla del Ph (3-N (Me) 2) -CHO (0.9 g; 6.0 mmoles; del paso (i) anterior) y Et3N (0.08 ml; 6.0 mmoles) en CH2C12 (15 ml) . La mezcla de la reacción se agita a temperatura ambiente durante 24 horas. Se agregan Et3N (0.08 ml; 6.1 mmoles) y TMS-CN (0.75 ml; 6.0 mmoles) adicionales y la agitación se continua durante otras 24 horas. La mezcla de la reacción se evapora produciendo 1.35 g (90%) del compuesto del subtítulo.
RMN-1H (400 MHz; CDC13) : d 7.27 (t, 1H) , 6.78-6.84 (m, 2H) , 6.74 (dd, 1H), 5.47 (s, 1H) , 3.00 (s, 6H) . (iii) Ph(3-N(Me)2)-(R,S)CH(OH)-C(0)OH Una mezcla de Ph (3-N (Me) 2) - (R, S) CH (OSiMe3) CN (1.35 g; 5.43 mmoles; del paso (ii) anterior) y HCl (20 ml; conc.) se agita a temperatura ambiente durante 10 minutos, y luego a entre 90 °C y 100 °C (en un baño de aceite) durante 3 horas. La mezcla de la reacción se evapora y se agrega H20. La capa acuosa acida se lava con Et20 y se coloca sobre una resina de intercambio de cationes (IR-120, 10-15 g; el intercambiador de cationes fue pre-preparado suspendiéndolo en NaOH (2 M) ) , y luego la suspensión se vierte en una columna. El intercambiador catiónico se lavó subsiguientemente con HCl (2 M; 2 x 50 ml), H20 (2 x 50 ml), y luego con H20 hasta que el pH fue neutral y el producto fue eluido con NH4OH/ac (1 M) . La capa acuosa resultante se evaporó y se secó por congelamiento dando 0.78 g (74%) del compuesto del subtítulo.
CL-EM: (M - l) 194 m/z RMN-1H (500 MHz; CD3OD) : d 7.15 (t, 1H) , 6.94 (s, 1H) , 6.84 (d, 1H), 6.69 (dd, 1H) , 4.85 (s, 1H) , 2.92 (s, 6H) . (iv) Ph(3-N(Me)2)-(R)- O - (S)CH (OH) -C(0)OH x HCl Los enantiómeros de Ph (3-N (Me) 2) - (R, S) CH (OH) -C (O) OH (paso (iii) anterior) se separaron por CLAR preparativa utilizando Chiralcel™ OD como una fase estacionaria y n-heptano: 2-propanol: ácido fórmico (80:20:1) como la fase móvil. El enantiómero que eluyó al último fue evaporado y secado por congelamiento, luego se redisolvió en agua, y se agregaron 3 eq. de HCl 1 M. La solución se secó por congelamiento para dar la sal del clorhidrato la cual dió una [a]D20 de -63.7° (c = 1.0, MeOH). El exceso enantiomérico fue del 97% como se determinó por CLAR quiral analítica. (v) Ph(3-N(Me)2)-(R)- o -(S)CH(OH)-C(0)-Aze-Pab(Z) El DIPEA (1.03 ml; 6.15 inmoles) se agregó a 0 °C a una mezcla del Ph (3-N(Me) 2) -R) - o - (S) CH (OH) -C (O)OH x HCl (0.36 g; 1.54 mmoles; el producto aislado/separado del paso (iv) anterior), H-Aze-Pab(Z) x 2 HCl (0.743 g; 1.69 mmoles; véase la solicitud de patente internacional WO 97/02284) y TBTU (0.543 g; 1.69 mmoles) en DMF (10 ml) . La mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 días, se vierte sobre H20 (400 ml) y el pH se ajusta a 10 agregando NaHC?3/ac. La capa acuosa se extrae con EtOAc y luego la capa orgánica se lava con NaHC03/ac, H20 y NaCl/ac, se seca (Na2S04) , y se evapora. El producto crudo se purifica por cromatografía instantánea sobre gel de sílice utilizando CH2Cl2:Me0H (95:5) como el eluyente. El producto fue purificado adicionalmente por CLAR preparativa para dar 203 mg (24%) del compuesto del subtítulo.
CL-EM: (M + 1) 544; (M -1) 542 m/z RM ^H (400 MHz; CDC13) : d 8.20 (t, 1H) , 7.75 (d, 2H) , 7.43 (d, 2H), 7.18-7.38 (m, 6H) , 6.61-6.72 (m, 3H) , 5.20 (s, 2H) , 4.88 (s, 1H), 4.84 (dd, 1H) , 4.36-4.52 (m, 2H) , 4.03 (m, 1H) , 3.63 (m, 1H), 2.93 (s, 6H), 2.54 (m, 1H) , 2.30 (m, 1H) . (vi) Ph(3-N(Me)2)-(R)- o - (S) CH (OH) -C (O) -Aze-Pab x HOAc Una mezcla de Ph (3-N(Me)2) - (R) - o - (S)CH(OH) -C(O) -Aze-Pab(Z) (112 mg; 0.206 mmoles; del paso (v) anterior), HOAc (0.41 ml) y Pd/C al 10% en EtOH (7 ml) se hidrogenó a presión atmosférica y temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de la reacción se filtra a través de Celite® y el filtrado se evapora y se seca por congelamiento (x 2) produciendo 90 mg (93 %) de los cristales blancos.
CL-EM: (M + 1) 410; (M -1) 408 m/z RMN^H (500 MHz; CD30D) : d 7.74 (d, 2H) , 7.54 (d, 2H) , 7.21 (t, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.73-6.77 (m, 2H) , 5.11 (s, 1H) , 4.77 (dd, 1H), 4.52 (dd, 2H) , 4.30 (m, 1H) , 3.92 (m, 1H) , 2.92 (s, 6H), 2.46 (m, 1H) , 2.27 (m, 1H) . RMN-13C (125 MHz; CDC13) : (carbonos del carbonilo y/o la amidina) d 173.3, 171.9, 167.0.
Ejemplo 2 Ph(3-N(Me)2)-(R)- o - (S)CH (OH) -C (O) -Aze-Pab (OMe) (i) Azida de 4- (amino, metoxiiminometil) bencilo Una mezcla del clorhidrato de la O-metilhidroxilamina (10.5 g; 125 mmoles), trietilamina (56 ml) y metanol (200 ml) se agrega al clorhidrato de la azida de 4-etilimidatobencilo (22.5 g; 110 mmoles; preparada de acuerdo con el método descrito en WO 94/29336) en éter dietílico. La mezcla de la reacción se agita a temperatura ambiente durante 3 o 4 días. La mayoría del metanol se removió in vacuo y se reemplazó con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con H20, HOAc/ac (1.5%; pH 4), NaHC03/ac y se seca (Na2S04) . La solución resultante se diluye con acetato de etilo hasta 500 ml, y 25 ml de la solución diluida se concentran para estimar la producción. La producción total fue de aproximadamente 20 g.
RM ^H (400 MHz; CD30D) : d 7.66 (d, 2H) , 7.36 (d, 2H) , 4.37 (s, 2H) , 3.83 (s, 3H) . (ii) H-Pab(OMe) El óxido de platino (200 mg) se agrega a una solución de la azida de 4- (amino, metoxiiminometil) bencilo (10 g; 0.049 moles; del paso (i) anterior) en 200 ml de etanol. La mezcla se hidrogenó a presión atmosférica durante 8 horas, se filtra a través de Celite™ y se concentra. El producto crudo se utilizó directamente en el siguiente paso.
RMN-1H (400 MHz; CD3OD) : d 7.60 (d, 2H) , 7.37 (d, 2H) , 3.81 (s, 3H) , 3.80 (s, 2H) . (iii) Boc-Aze-Pab(OMe) El DIPEA (17.5 ml, 105 mmoles) se agrega a una solución enfriada con hielo de Boc-Aze-OH (9.7 g; 48 mmoles; véase la solicitud de patente internacional WO 97/02284) y H-Pab(OMe) (9.4 g, 52 mmoles; del paso (ii) anterior) y TBTU (18.5 g; 58 mmoles) en DMF (100 ml), y la mezcla se agita toda la noche a TA. La mezcla resultante se vierte sobre agua (50 ml) el pH se ajusta a casi 9, y la mezcla se extrae tres veces con EtOAc. La capa orgánica combinada se lava con NaHC03 (ac), agua y salmuera, se seca (Na2S04), y se concentra. El producto crudo se purifica con la cromatografía instantánea (Si-gel; EtOAc). La producción fue de 11.9 g (69 %) • RMN-1!! (400 MHz; CDC13) : d 7.60 (d, 2H) ; 7.31 (d, 2H) ; 4.78 (a, 2H); 4.69 (t, 1H) ; 4.50 (a, 2H) ; 3.92 (s+m, 4H) ; 3.79 (m, 1H); 2.46 (a, 2H) ; 2.04 (s,' 3H) . (iv) Aze-Pab (OMe) x 2HC1 Una solución de Boc-Pab(OMe) (9.4 g; 26 mmoles; desde el paso (iii) anterior) en el EtOAc (250 ml) se saturó con HCl (g) . El EtOH (abs.; 125 ml) se agregó a la emulsión resultante y la mezcla se sometió a la acción del sonido durante 10 minutos. El EtOAc fue agregado hasta que la solución se volvió turbia, después de esto el producto del subtítulo se cristalizó rápidamente. Producción 6.7 g (77 %).
CL-EM: (M + 1) 263 (m/z) RMN^H (400 MHz; CD3OD) : d 7.74 (d, 2H) ; 7.58 (d, 2H) ; 5.13 (t, 1H); 4.57 ( , 2H) ; 4.15 (m, 2H) ; 3.97 (s+m, 4H) ; 2.87 (m, 1H) ; 2.57 , 1H) . RMN-13C (75 MHz; CDC13) : (carbonos del carbonilo y/o la amidina) d 168.9; 168.8; 161.9. (v) Ph(3-N(Me)2)-(R)- o - (S)CH (OH) -C (O) -Aze-Pa (OMe) Una mezcla de Ph (3-N (Me) 2) - (R) - o - (S) CH (OH) -C (O)OH x HCl (118 mg; 0.51 mmoles; véase el Ejemplo l(iv) anterior) y HATU (214 mg; 0.56 mmoles) en DMF (3 ml) se agita a 0 °C durante 1.5 horas. El H-Aze-Pab (OMe) x 2 HCl (189 mg, 0.56 mmoles; del paso (iv) anterior), la 2, 4, 6-trimetilpiridina (0.3 ml, 2.25 mmoles) y DMF (3 ml) se mezclan por separado antes de ser agregados por goteo a la primera mezcla a 0 °C. La mezcla de la reacción se agita a 0 °C durante 3 horas, se coloca en el refrigerador durante 3 días y se evapora. El producto crudo se purifica por CLAR preparativa para dar 140 mg (62 %) del compuesto del título.
CL-EM: (M + 1) 440; (M - 1) 438 m/z RMN-XH (500 MHz; CD3OD) : d 8.60 (t, 1H) , 7.61 (d, 2H) , 7.37 (d, 2H), 7.22 (t, 1H), 6.87 (s, 1H) , 6.77 (d, 2H) , 5.08 (s, 1H), 4.75 (dd, 1H), 4.46 (dd, 2H), 4.26 (m, 1H) , 3.90 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 2.94 (s, 6H) , 2.44 ( , 1H) , 2.26 (m, 1H) . RMN-13C (125 MHz; CD30D: (carbonos del carbonilo y/o la amidina) d 173.3, 171.8, 154.9.
Ejemplo 3 Ph(3-SMe)-(R)- o - (S)CH (OH) -C(0) -Aze-Pab x TFA (i) Ph ( 3-SMe ) - (R, S ) CH (QTMS ) CN A una solución del Ph (3-SMe) -CHO (19.8 g, 130 mmoles) y Znl2 (2.1 g, 6.50 mmoles) en CH2C12 (450 ml) a 0 °C bajo nitrógeno se agrega por goteo cianuro de trimetilsililo (14.2 g, 143 mmoles). Después de agitación toda la noche a 25 °C, la mezcla anaranjada se enfría con H20 (450 ml) . La capa orgánica se separa y se lava con salmuera saturada (300 ml), se seca (Na2S?4), se filtra y se concentra in vacuo para dar 32.0 g (98 % crudo) del compuesto del subtítulo como un aceite anaranjado el cual se utilizó sin purificación.
RMN XH (300 MHz; CDC13) : d 7.20-7.41 (m, 4H) , 5.50 (s, 1H) , 2.51 (s, 3H), 0.23 (s, 9H) . (ii) Ph(3-SMe)-(R,S)CH(OH)C(0)OH Una solución de Ph(3-SMe) - (R, S)CH (OTMS) CN (32.0 g, 130 mmoles; véase el paso (i) anterior) en HCl concentrado (250 ml) se somete a reflujo durante 2.5 horas. La mezcla se hace básica con NaOH 6 N (450 ml) y se lava con Et20 (3 x 300 ml) para remover las impurezas orgánicas. La capa acuosa se acidifica con HCl 6 N (150 ml) y se extrae con EtOAc (4 x 500 ml) . Los extractos combinados se secan (Na2S?), se filtran y se concentran in vacuo para dar 22.6 g (90 % de rendimiento en crudo) del compuesto del subtítulo como un aceite anaranjado el cual se cristalizó hasta un sólido de color amarillo canela durante el reposo.
RMN-2H (300 MHz; CD3OD) : d 7.20-7.40 (m, 4H) , 5.12 (s, 1H) , 2.50 (s, 3H) . (iii) Ph(3-SMe)-(R) o -(S)CH(OH)C(0)OH (a) y Ph (3-SMe) - (S) o -(R)CH(OAc)C(0)OH (b) Una mezcla del Ph (3-SMe) - (R, S)CH (OH)C(0)OH (2.0 g, 10.1 mmoles; véase el paso (ii) anterior), la Lipase PS Amano (1.0 g), el acetato de vinilo (5.0 ml) y el MTBE (5.0 ml) se calientan a 45 °C durante 24 horas. La reacción se filtró y la torta del filtro se lava con EtOAc (100 ml) . El filtrado de concentra in vacuo y se somete a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con una mezcla de CHCl3:Me0H:NH3 (ac, sat.) (6:3:1), para dar 630 mg, (32%) del compuesto (a) del subtítulo como un aceite amarillo y 850 mg (35%) del compuesto (b) del subtítulo como un sólido de color canela.
Para el compuesto (a) del subtítulo: RMN 1H (300 MHz; CD3OD) : d 7.38 (s, 1H) , 7.10-7.25 (m, 3H) , .08 (s, 1H), 2.40 (s, 3H) . RMN 13C (75 MHz; CD3OD) : d 178.4, 142.6, 140.2, 130.0, 127.3, 126.4, 125.2, 75.5, 15.8. Análisis de CLAR: 98 . 9 % , 96. 0 % ee [a] D25 = -119. 8 ° ( c = 1 . 0 , MeOH ) CI-EM : (M + l ) 199 m/ z Para el compuesto (b) del subtítulo: RMN-1!! (300 MHz; CD3OD) : d 7.62 (s, 1H) , 7.32-7.44 (m, 3H) , .82 (s, 1H), 2.62 (s, 3H) , 2.30 (s, 3H) . (iv) Boc-Aze-Pab x HCOOH El formiato de amonio (3.0 g; 50 mmoles) y Pd/C (5%, 1.0 g) fueron agregados a una solución de Boc-Aze-Pab (Z) (4.7 g; 10 mmoles; véase la solicitud de patente internacional WO 94/29336) en 50 ml de MeOH. El ácido fórmico 1.0 g; 22 mmoles) fue agregado y la mezcla se agita durante minutos. La mezcla de la reacción se filtra a través de Hyflo y la solución se concentra. El producto crudo se suspende en CH2C12 (50 ml), se filtra y se lava con más CH2C12. El material sólido se seca y se utiliza en el siguiente paso sin purificación adicional. (v) Boc-Aze-Pab (Teoc) El carbonato de Teoc-p-nitrofenilo (3.5 g; 12.3 mmoles) se agrega a una solución de Boc-Aze-Pab x HCOOH (3.7 g; 10 mmoles; véase el paso (iv) anterior) en THF (100 ml) después de lo cual una solución de K2C03 (1.8 g; 13 mmoles) en agua (20 ml) se agrega durante 2 minutos. La solución resultante se agita durante 3 días, se concentra, y el resto se recibe en EtOAc (150 ml ) y NaOH (ac; 0.5M; 50 ml). La capa orgánica se lava con salmuera (2 x 50 ml), se seca (Na2S04) y se concentra. El producto crudo se purifica utilizando la cromatografía instantánea (Si-gel; cloruro de metileno: acetona; 4:1). Producción 4.6 g (95%).
RMN-XH (500 MHz; CDC13) : d 7.86 (d, 2H) , 7.39 (d, 2H) , 4.72 (ta, 1H), 4.7-4.5 (amp., 2H) , 3.93 (m, 1H), 3.81 (m, 1H) , 2.48 (amp., 2H) , 1.43 (s, 9H) , 0.09 (s, 9H) . (vi) H-Aze-Pab(Teoc) x HCl Una solución de Boc-Aze (Teoc) (4.6 g; 9.6 mmoles; véase el paso (v) anterior) en cloruro de metileno (150 ml) se saturó con HCl seco. La solución se mantiene a TA en un recipiente con tapón durante 10 minutos, después de lo cual la misma fue concentrada. Producción 4.2 g (97%).
RMN^H (400 MHz; CD30D) : d 7.80 (d, 2H) , 7.60 (d, 2H) , 5.10 (m, 1H), 4.60 (sa, 2H) , 4.15 (m, 1H), 3.97 (c, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.57 (m, 1H) , 0.11 (s, 9H) . (vii) Ph(3-SMe)-(R) o - (S) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (Teoc) Una mezcla del Ph (3-SMe) - (R) o - (S) CH (OH) C (O)OH (300 mg, 1.51 inmoles; véase el paso (iii) (a) anterior), H-Aze-Pab(Teoc) (627 mg, 1.66 mmoles; véase (vi) anterior, TBTU (632 mg, 1.66 mmoles), y DIPEA (391 mg, 3.03 mmoles) en DMF (8.0 ml) se agita a 0 °C y luego a 25 °C toda la noche. La reacción se apaga con H20 (50 ml) y se extrae con EtOAc (3 x 50 ml) . Los extractos combinados fueron secados (Na2S04) y se concentran in vacuo. El residuo se somete a cromatografía sobre el gel de sílice, eluyendo con CH2Cl2:MeOH (9:1), para dar 150 mg (18%) del compuesto del subtítulo como un sólido blanco.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.74-7.86 (m, 2H) , 7.10-7.45 (m, 6H), 5.10-5.15 (m, 2H) , 4.70-4.81 (m, 1H) , 3.90-4.44 (m, 6H) , 2.50 (s, 3H), 2.10-2.32 (m, 2H) , 1.02-1.18 (m, 2H) , 0.10 (s, 9H) . API-EM: (M + l) 557 m/z (viii) Ph(3-SMe)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab x TFA Una mezcla de Ph (3-SMe) - (R) o - (S)CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (80 mg, 0.19 mmoles; véase el paso (vii) anterior) y TFA (2.0 ml) en CH2C12 (2 ml) se agita a 0 °C durante 3 horas. La solución se concentra in vacuo y el residuo se disuelve en agua y se seca por congelamiento para dar 90 mg (87 %) del compuesto del título.
CL-EM: (M + 1) 413; (M-l) 411 m/z RMN XH (400 MHz; CD30D; mezcla de los rotámeros) : d 7.74 (m, 2H), 7.52 ( , 2H) , 7.38-7.13 (m, 4H) , 5.2-5.0 (m, 1H) , 4.79 (m, 1H), 4.62-3.94 (m, 4H) , 2.68, 2.49 (2m, 1H), 2.28, 2.14 (2m, 1H), 2.45 (s, 3H) . RMN 13C (100 MHz): d 185.0, 172.8, 171.8, 167.0 Ejemplo 4 Ph(3-S02Me)-(R) o - (S)CH (OH) C (O) -Aze-Pab x TFA (i) Ph(3-S02Me)-(R) o - (S) CH (OH) C (O)OH Una mezcla de Ph (3-SMe) - (R) o - (S)CH (OH) C(0)OH (890 mg, 4.49 mmoles; véase el Ejemplo 3(iii)(a) anterior) y Oxone® (8.3 g, 13.5 mmoles) en MeOH (40 ml) y H20 (25 ml) se agita a 0 °C y luego a 25 °C toda la noche. Los sólidos fueron filtrados y lavados con EtOAc (200 ml) . El filtrado se concentra in vacuo, se diluye con H20 (50 ml), y luego se extrae con EtOAc (4 x 60 ml) . Los extractos orgánicos combinados fueron secados (Na2S0), filtrados y luego concentrados in vacuo. El residuo se somete a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:MeOH:NH3 (ac, sat.) (6:3:1), para dar 150 mg (15 %) del compuesto del subtítulo como un sólido blanco.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 8.10 (s, 1H) , 7.80-7.88 (m, 2H) , 7.55 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 5.02 (s, 1H) , 3.10 (s, 3H) . RMN 13C (75 MHz; CD3OD) : d 178.4, 145.6, 142.2, 133.2, 130.3, 127.4, 126.2, 75.5, 42.4. Análisis de CLAR: 94.8 %, > 99% ee [a]D25 = -86.2° (c = 1.0, MeOH) API-EM: (M - 1) 229 m/z (ii) Ph(3-SQ2Me)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) Una mezcla de Ph(3-S02Me) - (R) o - (S) CH (OH) C (O)OH (400 mg, 1.74 mmoles; véase el paso (i) anterior, H-Aze-Pab(Teoc) (720 mg, 1.91 mmoles; véase el Ejemplo 3 (vi) anterior), PyBOP (995 mg, 1.91 mmoles), y 2, 4, 6-colidina (463 mg, 3.83 mmoles) en DMF (10 ml) se agita a 0 °C y luego a 25 °C toda la noche. La mezcla se enfría con H20 (50 ml) y se extrae con EtOAc (3 x 50 ml) . Los extractos combinados fueron secados (Na2S04), filtrados y luego concentrados in vacuo. El residuo se somete a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:MeOH (15:1), para dar 570 mg (57%) del compuesto del subtítulo como un sólido blanco.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.58-8.10 (m, 6H) , 7.40-7.50 (m, 2H), 5.32 (s, 1H), 5.25 (s, 1H) , 4.70-4.81 (m, 1H) , 3.97-4.54 (m, 6H), 3.20 (s, 3H) , 2.10-2.82 (m, 2H), 1.02-1.18 (m, 2H) , 0.10 (s, 9H) . API-EM: (M + 1) 589 m/z (iii) Ph(3-S02Me)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab x TFA A una solución fría del Ph (3-S02Me) - (R) o - (S)CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (65 mg, 0.11 mmoles; véase el paso (ii) anterior) en cloruro de metileno (0.5 ml) se agrega TFA (3 ml), y la solución se agita durante 100 minutos. La solución resultante se concentra, se agrega agua, y la solución acuosa se seca por congelamiento, dando 60 mg (96%) del compuesto del título.
CL-EM: (M + 1) 445; (M-l) 443 m/z RMN XH (400 MHz; CD3OD) : d 8.10-7.45 (m, 8H) , 5.34, 5.25 (2m, 1H), 4.81 (m, 1H), 4.62-3.93 (m, 4H) , 3.10 (s, 3H) , 2.70, 2.54 (m, 1H), 2.28, 2.17 (m, 1H) . RMN 13C (125 MHz; CDC13) : (átomos de carbono del carbonilo y/o de la amidina; 100 MHz) d 172.2, 171.7, 167.0, 161.0.
Ejemplo 5 Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab x TFA (i) Ph(3-Cl, 5-N02)-(R,S)CH(OTMS)CN A una solución del 3-cloro-5-nitrobenzaldehído (24.1 g, 0.13 moles) en CH2C12 (1.0 1) se agrega Znl2 (2.1 g, 6.5 mmoles). La suspensión resultante se enfría a 0 °C y se agrega cianuro de trimetilsililo (13.9 g, 0.14 moles) durante minutos. La solución se agita a 0 °C durante 3 horas, se calienta a 25 °C y se agita durante 18 horas. La reacción se diluye con H20 y las substancias orgánicas se separan, se secan (Na2S04), se filtran y luego se concentran in vacuo para dar 36.8 g 899%) del compuesto del subtítulo como un aceite.
RMN XH (300 MHz; CDC13) : d 8.21-8.29 (m, 2H) , 7.83 (s, 1H) , 5.59 (s, 1H), 0.36 (s, 9H) . (ii) Ph (3-C1, 5-N02) - (R, S) CH (OH) C (O) OH Una solución de Ph(3-Cl, 5-N02) - (R, S) CH (OTMS) CN (59.0 g, 0.209 moles; véase el paso (i) anterior) en HCl concentrado (600 ml) se calienta a reflujo durante 3 horas.
La solución se enfría y se concentra in vacuo hasta 500 ml.
La solución acida se extrae con Et20 (4 x) , las substancias orgánicas se lavaron con salmuera (2 x), se secan (Na2S04), se filtran y luego se concentran in vacuo para dar 48.4 g (93 %) del compuesto del subtítulo como un sólido que fue utilizado sin purificación adicional.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 8.33 (m, 1H) , 8.23 (m, 1H) , 7.94 ( , 1H), 5.34 (s, 1H) . (iii) Ph(3-Cl, 5-N02)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) OH (a) y Ph(3-Cl, 5-N02)-(S) o -(R)CH(QAC)C(0)0H (b) Una mezcla del Ph(3-Cl, 5-N02) - (R, S) CH (OH) C (O) OH (17.1 g, 73.84 mmoles; véase el paso (ii) anterior) y la Lipase PS Amano (8.5 g) en acetato de vinilo (300 ml) y MTBE (300 ml) se agita a 55 °C durante 24 horas. La reacción se filtra a través de Celite® y la torta del filtro se lava con Et20. El filtrado se concentra in vacuo y luego se somete a cromatografía instantánea sobre gel de sílice, sluyendo con CHC13:CH3CN:TFA (180:20:1), para dar 7.1 g (42 %) del compuesto del subtítulo (a) como un sólido y 10.7 g (52 %) del compuesto del subtítulo (b) como un sólido. / Para el compuesto (a) del subtítulo: RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 8.33 (s, 1H) , 8.22 (s, 1H) , 7.95 (S, 1H), 5.34 (s, 1H) . RMN 13C (75 MHz; CD3OD) : d 174.6, 150.2, 145.2, 136.3, 133.8, 124.1, 121.1, 72.7.
API-EM: (M - 1) 230 m/z [a]D25 = -101.2° (c = 1.0, MeOH) Análisis de CLAR: 99.6%, 99% ee Para el compuesto (b) del subtítulo: RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 8.32 (m, 1H) , 8.28 (m, 1H), 7.96 (m, 1H), 6.10 (s, 1H), 2.21 (s, 3H) . (iv) Ph(3-Cl, 5-NH2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) Oh Una mezcla de Ph(3-Cl, 5-N02)-(R) o -(S)CH(OH)C(0)OH (3.9 g, 16.8 mmoles; véase el paso (iii) (a) y el óxido de platino (IV) (0.4 g) en EtOH (200 ml) a 40 °C se agita bajo una atmósfera de hidrógeno durante 4 horas. La mezcla se filtra a través de una almohadilla de Celite® y la torta del filtro se lava con EtOH, el filtrado se concentra in vacuo para dar 3.5 g (casi 100%) del compuesto del subtítulo como una espuma desmenuzable que fue utilizada sin purificación adicional.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 6.77 (m, 1H) , 6.71 (m, 1H) , 6.57 (m, 1H), 4.78 (s, 1H) . (v) Ph(3-Cl, 5-NHMe)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) OH Método A: Una mezcla de Ph(3-Cl, 5-NH2)-(R) o -(S)CH(OH)C(0)OH (3.5 g, 16.8 mmoles, véase el paso (iv) anterior) y el formaldehído (1.8 ml de 37 % en peso de H20, 23.9 mmoles) en EtOH (400 ml) se agita a 25 °C durante 18 horas. La solución se concentra in vacuo para dar una espuma que se puede triturar que fue combinada con óxido de platino (IV) (0.35 g) en EtOH (400 ml) y se agita bajo una atmósfera de hidrógeno durante 48 horas. La mezcla se filtra a través de una almohadilla de Celite® y la torta del filtro se lava con EtOH. Las substancias orgánicas fueron concentradas in vacuo y se someten a cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:MeOH:NH3 (ac, sat.) (14:5:1), para dar 1.0 g (28 %) de la sal de amonio del compuesto del subtítulo como una espuma que se puede desmenuzar. El compuesto del subtítulo fue obtenido lavando abundantemente la sal de amonio correspondiente a través de una almohadilla de Amberlite® CG-50 con CH3CN:MeOH (3:1).
Método B; Una mezcla de Ph(3-Cl, 5-NH2)-(R) o -(S)CH(OH)C(0)OH (8.67 g, 43.0 mmoles; véase el paso (iv) anterior) e yoduro de metilo (6.10 g, 43.0 mmoles) en CH3CH (500 ml) y MeOH (100 ml) se calienta a 50 °C durante 24 horas. La solución se concentra in vacuo y se somete a cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:MeOH:NH3 (ac, sat.) (14:5:1), para dar 2.9 g (31%) de la sal de amonio del compuesto del subtítulo como un sólido. El compuesto del subtítulo se obtuvo lavando abundantemente la sal de amonio correspondiente a través de una almohadilla de Amberlite® CG-50 con CHCl3:MeOH (3:1).
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 6.68 (m, 1H) , 6.61 (m, 1H) , 6.50 (m, 1H), 4.98 (s, 1H) , 2.75 (s, 3H) . RMN 13C (75 MHz; CD3OD) : d 176.8, 153.4, 144.1, 136.7, 116.3, 113.2, 111.0, 74.7, 31.3. API-EM: (M + 1) 216 m/z Análisis de CLAR: 97.2 %, 97.9 % ee [a]D25 = -81.6° (c = 1.0, MeOH) (vi) Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) OH Una solución de Ph(3-Cl, 5-NHMe)-(R) o -(S)CH(OH)C(0)OH (1.0 g, 4.64 mmoles; véase el paso (v) anterior) en MeOH (100 ml) se trata con cuatro porciones del anhídrido acético (40.47 g, 4.64 mmoles cada porción) durante un período de 72 h. La solución se hace básica con NaOH 2 N, se agita durante 3 h, se neutraliza con HCl 2 N y luego se concentra in vacuo. La cromatografía instantánea (2 x) sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:MeOH:NH3 (ac, sat.) (6:3:1), produjo 0.83 g (69 %) de la sal de amonio del compuesto del subtítulo como una espuma que se puede desmenuzar. El compuesto del subtítulo fue obtenido lavando abundantemente la sal de amonio correspondiente a través de una almohadilla de Amberlite® CG-50 con CHCl3:MeOH (3:1).
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.54 (s, 1H) , 7.35 (s, 2H) , 5.19 (s, 1H), 3.26 (s, 3H), 1.88 (s, 3H) . RMN 13C (75 MHz; CD3OD) : d 175.3, 172.8, 146.8, 145.2, 136.2, 128.0, 127.5, 125.4, 73.2, 37.6, 22.5. API-EM: (M + 1) 258 m/z Análisis de CLAR: 98.5 %, 97.4 % ee [a]D25 = -97.5° (c = 1.0, MeOH) (vii) Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) A una mezcla del Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) o -(S)CH(OH)C(0)OH (0.34 g, 1.32 mmoles; véase el paso (vi) anterior) y H-Aze-Pab (Teoc) (0.52 g, 1.39 mmoles; véase el Ejemplo 3 (vi) anterior) en DMF (15 ml) a 0 °C se agrega colidina (0.35 g, 2.90 mmoles) y PyBOP (0.75 g, 1.45 mmoles). La solución se agita a 0 °C durante 2 h, se calienta a 25 °C y se agita durante 2 h luego se concentra in vacuo. La cromatografía instantánea (2 x) sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:EtOH (95:5), produjo 0.36 g (44%) del compuesto del subtítulo como una espuma que se puede desmenuzar.
RMN XH (300 MHz; CD3OD, mezcla de rotámeros) : d 7.78 (d, 2H, J = 9 Hz), 7.25-7.55 (m, 5H) , 5.25 y 4.78 (2m, 1H) , 5.22 y 5.15 (2s, 1H), 3.93-4.56 (m, 6H) , 3.23 (s, 3H) , 2.12-2.78 (m, 2H), 1.87 (s, 3H), 1.04-1.11 (m, 1H) , 0.06 (s, 9H) . API-EM: (M + 1) 616 m/z (viii) Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) o - (S)CH(OH)C(0) -Aze-Pab x TFA Una solución de Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) o -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (73 mg, 0.12 mmoles; véase el paso (vii) anterior) en TFA (5.0 ml) se agita a temperatura ambiente durante 80 minutos, después de tal tiempo la solución resultante se evapora a sequedad. El sólido restante se disuelve en agua, y la solución se seca por congelamiento, produciendo 70 mg (98%) del compuesto del título como una espuma.
CL-EM: (M + l) 472 m/z RMN XH (400 MHz; CD30D) : d 7.74 (dd, 2H) , 7.55-7.10 (m, 5H) , .36, 5.20 (2s, 1H) , 5.23, 4.88 (2m, 1H) , 4.60-4.05 (m, 4H) , 3.38, 3.20 (2s, 3H) , 2.80, 2.60 (2m, 1H) , 2.38-2.20 (m, 1.5H), 1.87 (2.5H). RMN-13C (carbonos del carbonilo y/o la amidina; 100 MHz) d 173.9, 173.3, 172.6, 166.5, 163.3.
Ejemplo 6 Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (0) -Aze-Pab x 2TFA (i) Alcohol 3-cloro-5-N, N-dimetilaminobencílico A una solución del alcohol 3-cloro-5-nitrobencílico (12.5 g, 66.6 mmoles) en EtOH (750 ml) se agrega óxido de platino (IV) (1.25 g) . La suspensión resultante se purga con hidrógeno durante 3 horas. Se agrega una solución de formaldehído (37 % en peso en H20, 97 ml, 1.3 moles) y la mezcla se agita bajo una atmósfera de hidrógeno durante 18 horas. La solución se filtra a través de una almohadilla de Celite® y se concentra in vacuo para dar el producto crudo. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con Hex: EtOAc (7:3), dio 8.2 g (66%) del compuesto del subtítulo como un aceite.
RMN XH (300 MHz; CDC13) : d 6.67 (s, 1H) , 6.55-6.63 (m, 2H) , 4.58 (d, 2H, J = 7 Hz), 2.96 (s, 6H) , 1.74 (t, 1H, J = 7 Hz).
CI-EM: (M + 1) 185 m/z (ii) 3-Cloro-5-N,N-dimetilaminobenzaldehido A una solución de DMSO (7.58 g, 97.0 mmoles) en CH2C12 (100 ml) a -78 °C se agrega cloruro de oxalilo (6.16 g, 48.5 mmoles) durante el transcurso de 10 minutos. Después de unos 15 minutos adicionales a -78 °C, se agrega una solución del alcohol 3-cloro-5-N,N-dimetilaminobencílico (8.18 g, 44.1 mmoles; véase el paso (i) anterior) en CH2C12 (100 ml) durante el transcurso de 15 minutos. La solución resultante se agita a -78 °C durante 1 hora previo a la adición del DIPEA (28.5 g, 220.5 mmoles). La solución se calienta a 25 °C y se agita durante 18 h, antes de ser concentrada in vacuo para dar el producto crudo. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con Hex: EtOAc (5:1), dió 7.50 g (93%) del compuesto del subtítulo como un sólido amarillo.
RMN XH (300 MHz; CDC13) : d 9.88 (s, 1H) , 7.15 (m, 1H) , 7.05 (m, 1H), 6.87 (m, 1H) , 3.04 (s, 6H) . (iii) Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R,S)CH(OTMS)CN A una solución del 3-cloro-5-N,N-dimetilaminobenzaldehído (7.5 g, 40.8 mmoles; véase el paso (ii) anterior) en CH2C12 (300 ml) se agrega Znl2 (0.65 g,__2-.04 mmoles) . La suspensión resultante se enfría a 0 °C y se agrega cianuro de trimetilsililo (4.5 g, 44.9 mmoles) durante 5 minutos. La solución se agita a 0 °C durante 1 hora antes de ser calentada a 25 °C, y se agita durante 2 horas. La mezcla resultante se diluye con H20 y las substancias orgánicas fueron separadas, secadas (Na2S04), filtradas y luego concentradas in vacuo para dar 11.7 g (100%) del compuesto del subtítulo como un aceite.
RMN aH (300 MHz; CD3OD) : d 6.75 (m, 1H) , 6.60-6.68 (m, 2H) , 5.39 (s, 1H), 2.97 (s, 6H) , 0.28 (s, 9H) . (iv) Ph ( 3-C1 , 5-NMe2 ) - ( R, S ) CH (OH ) C (O) OH El Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R,S)CH(OTMS)CN (11.7 g, 41.4 mmoles; véase el paso (iii) anterior) se disolvió en HCl concentrado (300 ml) y se calentó a reflujo durante 1.5 h. La solución se enfría y se concentra in vacuo. El residuo se disuelve en H20, se neutraliza con NaHC03 y se concentra in vacuo. La mezcla de las substancias orgánicas y las sales fue convertida en una suspensión en MeOH, se filtra y luego se concentra para dar el producto crudo. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:MeOH:NH4OH concentrado ( ac . ) (6:3:1), produjo 9.0 g (95%) de la sal de amonio del compuesto del subtítulo como un sólido.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 6.77-6.82 (m, 2H) , 6.58 (m, 1H) , 4.80 (s, 1H), 2.94 (s, 6H) . (v) Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O)OH (a) y Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(S) O -(S)CH(OAc)C(0)OH (b) Una mezcla de Ph(3-Cl, 5-NMe2) - (R, S) CH (OH) C (0) OH (1.0 g; véase el paso (iv) anterior) y la Lipase PS Amano (0.5 g) en acetato de vinilo (10 ml) y MTBE (10 ml) se agita a 45 °C durante 48 horas. La reacción se filtra a través de Celite® y la torta del filtro se lava con MeOH. El filtrado se concentra in vacuo y se somete a cromatografía instantánea sobre gel de sílice , eluyendo con CHCl3 :MeOH : NH3 ( ac , sat . ) (6:3:1), para dar 0.40 g (40%) del compuesto (a) del subtítulo como una espuma que se puede desmenuzar y 0.45 g (38%) del compuesto (b) del subtítulo como una espuma que se puede desmenuzar. El compuesto (a) del subtítulo podría ser purificado adicionalmente por recristalización a partir de CH2C12 y MeOH.
Para el compuesto (a) del subtítulo: RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 6.81 (m, 1H) , 6.74 (m, 1H) , 6.57 (m, 1H), 4.98 (s, 1H) , 2.87 (s, 6H) . RMN 13C (75 MHz; CD3OD) : d 180.0, 152.9, 144.8, 135.6, 116.1, 112.2, 110.9, 76.9, 40.5. API-EM: (M + 1) 230 m/z Análisis de CLAR: 98.5%, 97.9% ee [a]D25 = -73.5° (c = 0.5, DMSO) Para el compuesto (b) de subtítulo: RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 6.77-6.83 (m, 2H) , 6.64 (m, 1H) , 5.67 (s, 1H), 2.94 (s, 6H) , 2.14 (s, 3H) . (vi) Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) A una mezcla del Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o -(S)CH(OH)C(0)OH (0.11 g, 0.48 mmoles; veas el paso (v) (a) anterior) y el H-Aze-Pab (Teoc) (0.20 g, 0.53 mmoles, véase el Ejemplo 3 (vi)) en DMF (15 ml) a 0 °C se agrega DIPEA (0.12 g, 0.96 mmoles) y TBTU (0.17 g, 0.53 mmoles). La solución se agita a 0 °C durante 2 horas, se calienta a 25 °C y se agita durante 18 horas luego se concentra in vacuo. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con un gradiente de CH2Cl2:MeOH (desde 100:0 hasta 95:5), produjo 0.25 g del compuesto del subtítulo el cual se sometió a una segunda cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con EtOAc:MeOH (30:1), para dar 0.22 g (78%) del compuesto del subtítulo como una espuma que se puede desmenuzar.
RMN XH (300 MHz; CD3OD, mezcla de rotámeros): d 7.78 (d, 2H, J = 9 Hz), 7.42 (d, 2H, J = 9 Hz) , 6.62-6.75 (m, 3H) , 5.14 y 4.78 (2m, 1H), 5.07 ( , 1H) , 4.15-4.57 (m, 4H) , 3.94-4.12 (m, 2H), 2.96 (s, 6H), 2.05-2.75 (m, 2H) , 1.04-1.13 (m, 2H) , 0.08 (s, 9H). API-EM: (M + l) 588 m/z (vii) Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab x 2TFA A una solución enfriada con hielo del Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S)CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (84 mg, 0.14 mmoles; véase el paso (vi) anterior) se agrega TFA (4 ml), y la solución resultante se agita a 0 °C durante 2 horas. La solución se concentra para dar un residuo que se disolvió en agua y luego se seca por congelamiento. Esto dio 78 mg (81 %) del compuesto del título como un polvo blanco.
CL-EM: (M - 1) 442 m/z RMN XH (400 MHz; CD3OD, mezcla de rotámeros) : d 7.78-7.49 (m, 4H), 6.94-6.79 (m, 4H) , 5.15, 5.08 (m, 1H) , 5.20, 4.79 (2m, 1H), 4.51 (parte AB de un espectro ABX; 2H), 4.41-3.95 (m, 2H), 2.98 (s, 6H), 2.69, 2.52 (2m, 1H) , 2.28, 2.14 (2m, 1H) . RMN 13C (carbonos del carbonilo y/o la amidina; 100 MHz) d 172.5, 171.7, 166.9, 161.0, 160.7.
Ejemplo 7 Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab x HOAc (i) Ph(3-N02)-(R) o -(S)CH(OH)C(Q)OH y Ph (3-N02) - (S) o -(S)CH(OAc)C(0)OH (b) Una mezcla del Ph (3-N02) - (R, S) CH (OH) C (O) OH (25 g, 126 inmoles), Lipase PS Amano (12.5 g), acetato de vinilo (150 ml) y MTBE (375 ml) se calienta a 45 °C durante 24 h. La reacción se filtra y la torta del filtro se lava con EtOAc (500 ml) . El filtrado se concentra in vacuo y se somete a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con una mezcla de CHCl3:MeOH:NH3 (ac, sat.), para dar 9.0 g, (36 %) del compuesto (a) del subtítulo como un aceite amarillo y 6.5 g (21 %) del compuesto (b) del subtítulo como un sólido de color canela.
Para el compuesto (a) del subtítulo: RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 8.34 (s, 1H) , 8.25 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.62 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 5.30 (s, 1H) . Para el compuesto (b) del subtítulo: RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 8.34 (s, 1H) , 8.25 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.62 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 5.82 (s, 1H), 2.20 (s, 3H) . (ii) Ph(3-NH2)-(R) o -(S)CH(OH)C(0)OH Una mezcla de Ph(3-N02) - (R) o - (S)CH(OH)C(0)OH (8.0 g, 40.6 mmoles; véase el paso (i) (a) anterior) y 10% de paladio sobre carbón (800 mg) en MeOH (200 ml) se agita a 25 °C bajo una atmósfera de hidrógeno toda la noche. La mezcla se filtra a través de una almohadilla de Celite®, lavando con EtOAc (250 ml) . El filtrado se concentra in vacuo para dar 7.0 g (100%) del compuesto del subtítulo como una espuma blanca.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.0-7.12 (m, 1H) , 6.75-6.90 (m, 2H), 6.60-6.70 (m, 1H) , 4.80 (s, 1H) . (iii) PhQ-NHMe)-(R) o - (S) CH (OH) C (0) OH Una mezcla de Ph(3-NH2) - (R) o - (S) CH (OH) C (0) OH (2.9 g, 17.3 mmoles; véase el paso (ii) anterior) e yoduro de metilo (2.95 g, 20.8 mmoles) en MeOH (50 ml) se calienta 55 °C toda la noche. La mezcla de la reacción se concentra in vacuo y se somete a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:Me0H:NH3 (ac, sat.) (6:3:1), para dar 616 mg (20 %) del compuesto del subtítulo como un aceite café.
RMN XH (300 MHz; CD30D) : d 7.00-7.12 (m, 1H) , 6.70-6.80 (m, 2H), 6.50-6.55 (m, 1H) , 4.80 (s, 1H) , 2.80 (s, 3H) . (iv) Ph(3-NMeAc)-(R) o -(S)CH(0H)C(0)0H Una mezcla de Ph(3-NHMe) - (R) o - (S)CH (OH) C(0)0H (540 mg, 2.99 mmoles; véase el paso (iii) anterior) y el anhídrido acético (612 mg, 5.98 mmoles) en MeOH (15 ml) se agita a 25 °C bajo nitrógeno toda la noche. La mezcla se concentra in vacuo y se somete a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:MeOH:NH4OH conc. (ac.) (6:3:1), para dar 380 mg (57 %) del compuesto del subtítulo como una espuma blanca.
RMN E (300 MHz; CD3OD) : d 7.51-7.60 (m, 1H) , 7.38-7.49 (m, 2H), 7.15-7.25 (m, 1H) , 5.04 (s, 1H) , 3.22 (s, 3H) , 1.85 (s, 3H), RMN 13C (75 MHz; CD3OD) : d 178.2, 173.6, 145.8, 142.8, 131.5, 127.8, 126.5, 126.2, 75.5, 37.8, 22.5. Análisis de CLAR: 95.7 %, 95.3 % ee [a]D25 = -4.32° (c = 0.5, MeOH) CI-EM: (M + 1) 224 m/z (v) PhQ-NMeAc)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) Una mezcla de Ph (3-NMeAc) - (R) o - (S) CH (OH) C (O) OH (301 mg, 1.35 mmoles; véase el paso (iv) anterior), H-Aze-Pab(Teoc) (560 mg, 1.48 mmoles, véase el Ejemplo 3 (vi) anterior), pyBOP (774 mg, 1.48 mmoles), y 2, 4, 6-colidina (360 mg, 2.97 inmoles) en DMF (10 ml) se agita a 0 °C y luego a 25 °C toda la noche. La mezcla se enfría con H20 (50 ml) y se extrae con EtOAc (3 x 50 ml) . Los extractos orgánicos combinados fueron secados (Na2S04), se filtraron y se concentraron in vacuo. El residuo se somete a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:MeOH (9:1), para dar 175 mg (23 %) del compuesto del subtítulo como un sólido blanco.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.82-7.90 (m, 2H) , 7.20-7.50 (m, 6H), 5.32 (s, 1H), 5.25 (s, 1H) , 4.70-4.81 (m, 1H) , 3.97-4.54 (m, 6H), 3.20 (s, 3H) , 2.10-2.82 (m, 2H) , 1.85 (s, 3H) , 1.02-1.18 (m, 2H), 0.10 (s, 9H) . API-EM: (M + 1) 582 m/z (vi) Ph(3-NMeAc)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab x HOAc Una mezcla de Ph (3-NMeAc) - (R,S)CH (OH) C(O) -Aze-Pab(Teoc) (65 mg, 0.11 mmoles; véase el paso (v) anterior) y TFA (2.0 ml) en CH2C12 (2 ml) se agita a 0 °C durante 3 horas. La solución se concentra in vacuo a temperatura ambiente y el residuo se purifica utilizando CLAR preparativa (CH3CN:0.1 M NH4OAC, gradiente: 0-50% CH3CN) y las fracciones de interés fueron concentradas. El producto se disolvió en agua/HOAc y se secó por congelamiento para dar 55 mg (100%) del compuesto del título.
CL-EM: (M + 1) 438; (M - 1) 436 m/z RMN XH (400 MHz; D20; mezcla de rotámeros) : d 7.74 (m, 3H) , 7.61-7.20 (m, 5H) , 5.36, 5.24 (2m, 1H) , 4.84 (m, 1H) , 4.58- 3.94 (m, 4H), 3.42-3.08 (m, 3H) , 2.80, 2.57 (2m, 1H), 2.36- 1.98 (m, 4H), 1.84 (s, 3H) . RMN 13C (100 MHz): d 174.2, 173.1, 172.7, 166.7.
Ejemplo 8 Ph(3-N02, 5-CF3)-(R) o - (S) CH (OH) C (0) -Aze-Pab x TFA (i) Ph(3-N02, 5-CF3)CH2OH El complejo de borano-tetrahidrofurano (170 ml de 1 M en THF, 170 mmol) fue agregado, por goteo durante 1 hora, a una solución de Ph(3-N02, 5-CF3)C02H (10.0 g, 42.6 mmoles) en THF (50 ml) enfriado a 0 °C bajo nitrógeno. La solución se deja calentar a temperatura ambiente y se agita durante 4 horas. La solución se enfría por la adición lenta de H20, se vierte en EtOAc (200 ml) , y luego se lava secuencialmente con H20 (150 ml) y salmuera (150 ml) . La fase orgánica se seca (Na2S04), se filtra, y se concentra in vacuo para dar 6.9 g (73 %) del compuesto del subtítulo como un aceite anaranjado.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 8.44 (s, 1H) , 8.46 (s, 1H) , 8.01 (s, 1H), 4.92 (d, J = 5.5 Hz, 2H) , 2.10 (s amp., 1H) . (ii) Ph(3-N02, 5-CF3)-CHO El cloruro de oxalilo (3.0 ml, 34 mmoles) se agrega por goteo a una solución de DMSO (4.86 ml, 68.6 mmoles) en 70 ml de CH2C12 seco enfriado a -78 °C bajo nitrógeno. Después de 15 minutos a -78 °C, se agrega por goteo el Ph(3-N02, 5-CF3)CH2OH (6.9 g, 31 mmoles; véase el paso (i) anterior) en 75 ml del CH2C12 durante 30 minutos. Después de 45 minutos a -78 °C, se agrega DIPEA (27.2 ml, 156 mmoles) durante 20 minutos. La solución se agita a -78 °C durante 1 hora adicional, en tal tiempo la solución se deja calentar a temperatura ambiente y se agita 15 horas. La solución se lava secuencialmente con HCl 1 M (2 x 150 ml), salmuera (150 ml), se seca (Na2S04) , se filtra, y se concentra in vacuo para dar 6.9 g (99 %) del compuesto del subtítulo como un aceite anaranjado.
RMN *H (300 MHz; CDC13) : d 10.19 (s, 1H) , 8.94 (s, 1H) , 8.76 (s, 1H), 8.51 (s, 1H) . (iii) Ph(3-N02, 5-CF3)-(R,S)CH(OTMS)CN A una solución de Ph(3-N02, 5-CF3)-CH0 (6.52 g, 29.7 mmoles; del paso (ii) anterior) en 220 ml de CH2C12 se agrega Znl2 (474 mg, 1.49 mmoles). La solución se purga con nitrógeno y se enfría a 0 °C. Se agrega cianuro de trimetilsililo (3.25 g, 32.7 mmoles) durante 10 minutos, después de lo cual la solución se agita durante 2 horas. La solución se calienta entonces a temperatura ambiente y se agita durante unas 5.5 horas adicionales, después de tal período de tiempo la reacción se enfría con H20 (250 ml) . La fase orgánica se separa y la fase acuosa se extrae con CH2C12 (125 ml) . Las capas orgánicas combinadas se secan (Na2S04), se filtran, y se concentran in vacuo para dar 9.1 g (96%) del compuesto del subtítulo como un aceite anaranjado.
RMN XH (300 MHz; CDC13) : d 8.64 (s, 1H) , 8.58 (s, 1H) , 8.23 (s, 1H), 6.14 (s, 1H), 0.80 (s, 9H) . (iv) Ph (3-N02, 5-CF3) - (R, S) CH (OH) C (O) OH El Ph(3-N02, 5-CF3.-.R. S)CH(OTMS)CN (9.1 g, 29 mmoles; véase el paso (iii) anterior) se disuelve en HCl-concentrado (83 ml, 1000 mmoles) y se calienta a reflujo durante 3 horas. La solución se diluye con H20 (200 ml) y se extrae con Et20 (3 x 150 ml) . Las substancias orgánicas combinadas se lavan con salmuera (200 ml), se secan (Na2S04), se filtran, y se concentran in vacuo para dar un aceite café. El producto crudo se somete a cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:MeOH:NH3 (ac, sat.) (14:5:1). El sólido blanco resultante se suspendió en Et2o y se agrega HCl 2 M (100 ml). Las capas se separan y la fase acuosa se extrae con Et20 (3 x 200 ml) . Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (Na2S04), filtradas, y concentradas para dar 5.9 g (78 %) del compuesto del subtítulo como un sólido café.
RMN 1H (300 MHz; CD3OD) : 6 8.65 (s, 1H) , 8.47 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 5.43 (s, 1H) . (v) Ph ( 3-NH2, 5-CF3) - (R, S) CH (OH) C (O) OH A una solución de Ph(3-N02, 5-CF3)- (R,S)CH(OH)C(0)OH (5.9 g, 22 moles; véase el paso (iv) anterior) en EtOH absoluto (350 ml) se agrega óxido de platino (IV) (590 mg) . La solución se purga con hidrógeno durante 5 h, tiempo después del cual la mezcla se filtra a través de Celite® y luego se concentra in vacuo para dar 5.8 g (100 %) del compuesto del subtítulo como un aceite anaranjado.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.00 (s, 2H) , 6.86 (s, 1H) , 5.06 (s, 1H). (vi) Ph(3-NMe2, 5-CF3) - (R, S) CH (OH) C (O) OH A una solución del Ph(3-NH2, 5-CF3)- (R,S)CH(OH)C(0)OH (5.27 g, 22.4 mmoles; véase (v) anterior) disuelta en EtOH absoluto (250 ml) se agrega una solución acuosa al 37% de formaldehído (54 ml, 720 mmoles) . Se agrega óxido de platino (520 mg), y la solución se purga con hidrógeno. Después de agitación bajo hidrógeno durante 22 horas, la solución se filtra a través de Celite® y se concentra in vacuo. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:MeOH:NH3 (ac, sat.) (6:3:1), produjo 2.7 g (46 %) del compuesto del subtítulo como un sólido blanco.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.10 (S, 1H) , 7.07 (s, 1H) , 6.80 (s, 1H), 4.88 (s, 1H), 2.98 (s, 6H) . (vii) Ph(3-NMe2, 5-CF3)-(R,S)CH(OH)C(0)OH (a) y Ph (3-NMe2) (5-CF3)-(R,S)CH(0Ac)C(Q)0H (b) Una mezcla de Ph(3-NMe2, 5-CF3) - (R, S)CH (OH) C (O) OH (2.7 g, 10 mmoles; véase el paso (vi) anterior), Lipase PS Amano (1.4 g), acetato de vinilo (56 ml) y MTBE (120 ml) se somete a reflujo durante 1 día. La reacción se filtra a través de Celite® y la torta del filtro se lava con Et20. El filtrado se concentra in vacuo y se somete a cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:MeOH:NH3 (ac, sat.) (14:5:1), para dar 727 mg (27 %) de la sal de amonio del compuesto (a) del subtítulo como un sólido blanco y 1.53 g (49%) de la sal de amonio del compuesto (b) del subtítulo como un sólido blanco. La sal de amonio del compuesto (a) del subtítulo se lavó abundantemente a través de una almohadilla de Amberlite® CG-50 con CHCl3:MeOH (3:1) como eluyente para dar el compuesto (a) del subtítulo como un sólido blanco.
Para el compuesto (a) del subtítulo: RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.03-7.09 (m, 2H) , 6.79 (s, 1H) , 4.95 (s, 1H), 2.88 (s, 6H) . RMN 13C (75 MHz; CD3OD) : d 180.2, 152.9, 146.0, 133.0 (c, J = 32.2 Hz), 125.2 (t, J = 284.0 Hz), 116.3, 113.4, 109.3, 77.4, 41.4. Análisis de CLAR: 98.8 %, > 99% ee [a]D25 = -59.5° (c = 1.0, MeOH) API-EM: (M + l) 264 m/z Para el compuesto (b) del subtítulo: RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.12 (s, 1H) , 7.09 (s, 1H) , 6.83 (s, 1H), 5.73 (s, 1H), 3.00 (s, 6H) , 2.14 (s, 3H) . (viii) Ph(3-NMe2, 5-CF3) - (R, S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc¡ A una mezcla de Ph(3-NMe2, 5-CF3)-(R) o -(S)CH(OH)C(0)OH (290 mg, 1.10 mmoles; véase el paso (vii) (a) anterior) y el H-Aze-Pab (Teoc) (436 mg, 1.16 mmoles, véase el Ejemplo 3 (vi)) se agregan 10 ml de DMF seco. La solución se enfría a 0 °C, después de lo cual se agregan PyBOP (630 mg, 1.21 mmoles) y colidina (295 mg, 2.42 mmoles). La solución se agita bajo nitrógeno a 0 °C durante 2 horas y a temperatura ambiente durante 15 horas. La mezcla se concentra y se somete a cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con EtOAc: EtOH (20:1), para dar 383 mg (56 %) del compuesto del subtítulo como un sólido blanco.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.76-7.83 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.38-7.44 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.12 (m, 2H) , 6.86-6.87 (m, 1H), 5.15-5.17 (m, 1H) , 4.75-4.81 (m, 1H) , 3.98-4.56 (m, 6H) , 3.00 (s, 6H), 2.48-2.58 (m, 1H) , 2.24-2.33 (m, 1H) , 1.03-1.13 (m, 2H), 0.08 (s, 9H) . API-EM: (M + 1) 622 m/z. (ix) Ph(3-NMe2, 5-CF3)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab x TFA A una solución enfriada con hielo de Ph(3-NMe2, 5-CF3)-(R) o -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (87 mg, 0.14 mmoles; véase el paso (viii) anterior) en cloruro de metileno se agrega TFA (4 ml), y la mezcla se agita a 0 °C durante 100 minutos. La solución restante se concentra a sequedad, dando un residuo que se disolvió en agua/CH3CN y luego se seca por congelamiento, dando 81 mg (80 %) del compuesto del título como un polvo blanco.
CL-EM: (M + 1) 478; (M -1) 476 m/z RMN XH (400 MHz; CD30D, mezcla de rotámeros) : d 7.78-7.50 ( , 4H), 7.09-7.04 (m, 2H) , 6.92 (s amp., 1H) , 5.21, 5.17 (2s, 1H) , 4.80 (m, 1H), 4.52 (parte AB de un espectro ABX, 2H) , 4.41-3.95 (m, 2H) , 3.00 (s, 3H) , 2.70, 2.52 (2m, 1H) , 2.30, 2.15 (2m, 1H) . RMN 13C (átomos de carbono del carbonilo y/o amidina; 100 MHz): d 172.6, 171.7, 167.0, 161.5, 161.2.
Ejemplo 9 Ph(3-Cl, 5-(l-Pirrolidin-2-ona) )-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab x HOAc (i) (R, S) -5-P (3-C1, 5-N02) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano A una solución del Ph (3-C1, 5-N02) - (R, S) CH (OH) C (O)OH (18.8 g, 81.2 mmoles; véase el Ejemplo 5(ii) anterior) en acetona (300 ml) se agrega el monohidrato del ácido p-toluensulfónico (750 mg, 3.94 mmoles) y 2, 2-dimetoxipropano (75 ml, 514 mmoles) . La solución se somete a reflujo durante 6 h y se concentra in vacuo. El residuo se disuelve en EtOAc (200 ml), y luego se lava con H20 (100 ml), NaHC03 saturado (150 ml) y salmuera (150 ml) . La fase orgánica se seca (Na2S04), se filtra, y se concentra para dar .un sólido café el cual fue sometido a cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con Hex:EtOAc (7:3). El sólido resultante fue purificado adicionalmente por recristalización a partir de EtOAc/Hex (1:10) para dar 14.7 g (67 %) del compuesto del subtítulo como un sólido blanco.
RMN XH (300 MHz; CDC13) : d 8.29 (m, 1H) , 8.24 (m, 1H) , 7.86 (m, 1H), 5.45 (s, 1H), 1.78 (s, 3H) , 1.72 (s, 3H) . (ii) (R, S ) -5-Ph ( 3-C1, 5-NH2) -2 , 2-dimetil-4-oxo-l , 3-dioxolano A una solución del (R, S) -5-Ph (3-C1, 5-N02) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano (14.7 g, 54.1 mmoles; véase el paso (i) anterior) en EtOH (400 ml) se agregó óxido de platino (IV) (1.5 g) . La suspensión se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno durante 27 horas a temperatura ambiente. La suspensión se filtra a través de Celite® y la torta del filtro se lava con EtOH. El filtrado se concentra in vacuo para dar un aceite amarillo el cual se somete a cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con Hex: EtOAc (4:1) para dar 6.5 g (50 %) del compuesto del subtítulo como un aceite amarillo.
RMN XH (300 MHz; CDC13) : d 6.76 (m, 1H) , 6.56 (m, 2H) , 5.18 (s, 1H), 3.74 (s amp., 2H), 1.64 (s, 3H), 1.68 (s, 3H) . (iii) (R, S) -5-Ph (3-C1, 5- (l-pirrolidinil-2-ona) ) -2, 2-dimetil- 4-oxo-l, 3-dioxolano A una solución del (R,S) -5-P (3-C1, 5-NH2) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano (6.5 g, 26.9 mmoles; véase el paso (ii) anterior) en DMF (100 ml) se agrega 4-bromobutirato de etilo (10.5 g, 53.8 mmoles) y Et3N (5.4 g, 53.8 mmoles). La solución se calienta a 95 °C bajo argón durante 21 horas. La mezcla de la reacción se concentra y luego se disuelve en EtOAc (200 ml), dando una solución que fue lavada con H20 (150 ml) y salmuera (150 ml) . La fase orgánica se seca (Na2S04), se filtra, y se concentra para dar 9.6 g de un aceite anaranjado. El material crudo se disuelve en p-xileno (250 ml) y se calienta a reflujo. Después de 3 días, la mezcla se concentra hasta un aceite anaranjado y se somete a cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con EtOAc:Hexano (1:1), para dar 4.5 g (54 %) del compuesto del subtítulo como un sólido amarillo.
RMN 2H (300 MHz; CDC13) : d 7.74 (m, 1H) , 7.69 (m, 1H) , 7.26 (m, 1H), 5.38 (s, 1H) , 3.80-3.93 (m, 2H) , 2.60-2.68 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.15-2.25 ' (m, 2H) , 1.77 (s, 3H) , 1.70 (s, 3H) . (iv) Ph (3-C1, 5- (l-pirrolidinil-2-ona) ) - (R, S) CH (OH) C (O) OH A una solución del (R, S) -5-Ph (3-C1, 5- (1-pirrolidinil-2-ona) ) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano (4.5 g, 14.5 mmoles; véase el paso (iii) anterior) en THF (300 ml) se agrega NaOH 1 N (145 ml) . La solución se agita durante 30 minutos, después de lo cual la solución resultante se redujo parcialmente in vacuo. La solución se acidifica con HCl 2 N y se extrae con EtOAc (2 x 150 ml) . La fase orgánica se lava con salmuera (200 ml), se seca (Na2S04), se filtra, y se concentra para dar 3.2 g (82 %) del compuesto del subtítulo como un sólido blanco.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.81 (m, 1H) , 7.59 (m, 1H) , 7.30 (m, 1H), 5.15 (s, 1H), 3.89-3.96 (t, J = 7.5 Hz, 2H) , 2.57-2.65 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.12-2.22 (m, 2H) . (v) Ph(3-Cl, 5-(l-pirrolidinil-2-ona) )-(S) o -(R)CH(QAc)-C(Q)OH (b) y Ph(3-Cl, 5- ( l-pirrolidinil-2-ona) ) - (R) o -(S)CH(OH)C(0)OH (a) Una mezcla de Ph(3-Cl, 5- (l-pirrolidinil-2-ona) ) - (R,S)CH(OH)C(0)OH (3.2 g, 11.9 mmoles; véase el paso (iv) anterior) y Lipase PS Amano (1.6 g) en acetato de vinilo (65 ml) y MTBE (130 ml) se agita a 55 °C durante 24 h. La reacción se filtra a través de Celite® y la torta del filtro se lava secuencialmente con THF y luego con MeOH. El filtrado se concentra in vacuo y se somete a cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:MeOH:NH3 (ac, sat.) (14:5:1), para dar 1.3 g (33%) de la sal de amonio del compuesto del subtítulo (b) como un sólido blanco. Además, 800 mg (20%) de la sal de amonio del compuesto del subtítulo (a) fueron obtenidos. Este material se disuelve en H20 (40 ml), se acidifica con HCl 1 N y se extrae con EtOAc (2 x 50 ml) . La fase orgánica se seca (Na2S04), se filtra, y se concentra para dar el compuesto del subtítulo (a) como un sólido blanco. Debido a la pureza óptica baja, el compuesto del subtítulo (b) fue resometido a las condiciones de resolución enzimática anteriores (0.5 g Lipase PS Amano; 35 ml acetato de vinilo; 60 ml MTBE; 55 °C; 24 h) . El aislamiento y la purificación como se reportaron anteriormente produjeron 470 mg del compuesto del subtítulo (a) como un sólido blanco.
Para el compuesto (a) del subtítulo: RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.80 (m, 1H) , 7.59 (m, 1H) , 7.29 ( , 1H), 5.15 (s, 1H), 3.88-3.92 (t, J = 7.1 Hz, 2H) , 2.57- 2.62 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 2.11-2.21 (m, 2H) . RMN 13C (75 MHz; CD3OD) : d 179.7, 177.8, 146.1, 144.4, 137.9, 126.3, 123.5, 120.2, 75.9, 52.7, 36.0, 21.2.
API-EM: (M + 1) 270 m/z Análisis CLAR: 95.3 %, 96.5 % ee [a]D25 = -64.5° (c = 1.0, MeOH) (vi) Ph(3-Cl, 5-(l-pirrolidinil-2-ona) )-(R)- o (S) CH (OH) C (O) - Aze-Pab (Teoc) A una mezcla de Ph(3-Cl, 5- (l-pirrolidinil-2-ona) ) -(R)- o -(S)CH(OH)C(0)OH (250 mg, 0.927 mmoles; del paso (v) (a) anterior) y H-Aze-Pab (Teoc) (367 mg, 0.973 mmoles, véase el Ejemplo 3 (vi) en DMF (9 ml) a 0 °C se agrega PyBop (531 mg, 1.02 mmoles) y colidina (250 mg, 2.04 mmoles). La solución se agita bajo nitrógeno a 0 °C durante 2 h y luego se calienta a temperatura ambiente durante 15 h. La mezcla se concentra y se somete a cromatografía instantánea sobre gel de sílice, aluyendo con EtOAc: EtOH (20:1), seguido por una lavado de la columna con EtOH para dar un sólido blanco. La cromatografía instantánea adicional sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:EtOH (9:1), produjo 420 mg (72%) del compuesto del subtítulo como un sólido blanco.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.73-7.85 (m, 3H) , 7.51-7.65 (m, 1H), 7.36-7.47 (m, 2H) , 7.22-7.31 (m, 1H) , 5.11-5.23 (m, 1H) , 4.76-4.86 (m, 1H) , 3.95-4.55 (m, 6H) , 3.84-3.94 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.46-2.74 (m, 3H) , 2.08-2.47 (m, 3H) , 1.02-1.14 (m, 2H), 0.09 (s, 9H) . API-EM: (M + 1) 629 m/z (vii) Ph(3-Cl, 5-(l-pirrolidinil-2-ona) )-(R) o - (S)CH (OH) C (O) -Aze-Pab x HOAc A una solución del Ph(3-Cl, 5- (l-pirrolidinil-2-ona))-(R o S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (90 mg, 0.14 mmoles; véase el paso (vi) anterior) en cloruro de metileno (0.5 ml) se agrega TFA (4 ml) . La mezcla se agita a TA durante 100 minutos. La solución resultante se concentra in vacuo, y el material crudo sólido se purifica utilizando PHPLC (CH3CN:0.1 M acetato de amonio 20:80). Las fracciones de interés fueron agrupadas y secadas por congelamiento dos veces toda la noche. Producción 51 mg (67 %) . Pureza 99.8 %.
CL-EM (M + l) = 484, 486 m/z RMN XH (400 MHz; CD3OD) : d 7.73 (m, 3H) , 7.62 (m, 1H) , 7.52 (m, 2H), 7.28, 7.23 (2s, 1H) , 5.19 (s, 1H) , 4.80 (dd, 1H) , 4.51 (parte AB de un espectro ABX, 2H) , 4.38 (m, 1H), 4.19 (m, 1H), 4.02 (m, 1H) , 3.88 (t, 2H) , 2.61-2.48 (m, 3H) , 2.29 (m, 1H), 2.14 (m, 2H), 1.90 (s, 3H) . RMN 13C (100 MHz) (átomos de carbono del carbonilo y/o de la amidina): d 176.0, 172.3, 171.7, 167.0.
Ejemplo 10 Ph(3-(l-pirrolidinil-2-ona) )-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab x HOAc (i) (R, S) -5-Ph (3-NQ2) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano Una mezcla del ácido m-nitromandélico (6.0 g, 30.4 mmoles), 2,2-dimetoxi propano (15.1 ml), monohidrato del ácido p-toluensulfónico (0.29 g, 1.52 mmoles) y acetona (60 ml) se agita durante 12 horas a temperatura ambiente. La mezcla se concentra in vacuo y el producto crudo se disuelve en EtOAc. La fase orgánica se lava secuencialmente con NaHC03 acuoso saturado y salmuera, se seca (MgS04) y luego se concentra in vacuo. El residuo se somete a cromatografía sobre gel de sílice, se eluye con heptano/EtOAc (80/20 a 70/30), para dar 5.7 g (79 %) del compuesto del subtítulo.
(El producto crudo fue difícil de disolver en una cantidad pequeña de EtOAc, y la carga sobre la columna de cromatografía se logró utilizando gel de sílice sobre el cual el producto ha sido absorbido) .
FAB-EM: (M + l) 238 m/z RMN *H (400 MHz; CDC13) : d 8.36 (a amp., 1H) , 8.22 (dd, 1H) , 7.84 (dd, 1H), 7.60 (dd, 1H) , 5.44 (s, 1H) , 1.76 (s, 3H) , 1.71 (s,3H). (ii) (R, S) -5-Ph (3-NH2) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano Una mezcla de (R, S) -5-Ph (3-N02) -2, 2-dimetil-4-oxo-1, 3-dioxolano (3.1 g, 13.1 mmoles; véase el paso (i) anterior), Pd/C, 5 % (1.7 g) y HOAc (0.75 ml, 13.1 mmoles) en EtOH (250 ml) se agita bajo una atmósfera de nitrógeno durante 4 h. La mezcla se filtra a través de una almohadilla de Celite®, y la torta del filtro se lava con EtOH. El filtrado se concentra in vacuo y el sólido incoloro formado se reparte entre EtOAc y NaHC03 acuoso saturado. La fase acuosa se extrae con EtOAc y las fases orgánicas combinadas se lavan con salmuera, se secan (Na2S04) y se concentran in vacuo para dar 2.3 g (85 %) del compuesto del subtítulo.
CL-EM: (M + l) 208 m/z RMN XH (400 MHz; CDC13) : d 7.16 (dd, 1H) , 6.84 (dd, 1H) , 6.76 (s amp., 1H), 6.67 (dd, 1H) , 5.30 (s, 1H) , 1.70 (s, 3H) , 1.65 (s, 3H) . (iii) (R, S) -5-Ph (3-NH (CH2) 3C (O) OEt ) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano Una mezcla de (R, S) -5-Ph(3-NH2) -2, 2-dimetil-4-oxo-1, 3-dioxolano (1.63, 7.87 mmoles; véase el paso (ii) anterior), 4-bromobutirato de etilo (3.4 ml, 23.6 mmoles) y Et3N (3.3 ml, 23.6 mmoles) en CH2C12 se somete a reflujo toda la noche. Se agregan cantidades adicionales de 4-bromobutirato de etilo (2.3 ml, 15.7 mmoles) y Et3N (2.2 ml, 15.7 mmoles) y la mezcla se somete a reflujo durante una noche más. El solvente se remueve y el producto crudo se reparte entre EtOAc y agua. La fase acuosa se extrae con EtOAc y las fases orgánicas combinadas se lavan con salmuera, se secan (Na2S04) y luego se concentran in vacuo. El residuo se somete a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con heptano:EtOAc (90:10 hasta 80:20), para dar 2.1 g (84 %) del compuesto del subtítulo.
FAB-EM: (M + 1) 322 m/z RMN XH (400 MHz; CDC13) : d 7.17 (dd, 1H) , 6.77 (d amp., 1H) , 6.66 (s amp., 1H), 6.59 (dd, 1H) , 5.30 (s, 1H) , 4.12 (c, 2H) , 3.16 (t, 2H), 2.40 (t, 2H) , 1.93 (m, 2H) , 1.70 (s, 3H) , 1.64 (s, 3H), 1.24 (t, 2H). (iv) (R, S) -5-Ph (3- (l-pirrolidin-2-ona) ) -2, 2-dimetil-4-oxo- 1, 3-dioxolano Una solución del (R,S) -5-Ph (3-NH (CH2) 3C (O)OEt) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano (2.2 g, 6.85 mmoles; véase el paso (iii) anterior) en tolueno (15 ml) se somete a reflujo durante dos noches. El solvente se remueve y el producto crudo se somete a cromatografía instantánea, eluyendo con heptano:EtOAc (80:20 a 60:40), para dar 1.4 g (74 %) del compuesto del subtítulo.
RMN XH (400 MHz; CDC13) : d 7.78 (s amp., 1H), 7.60 (d amp., 1H), 7.38 (dd, 1H), 7.23 (d amp., 1H) , 5.40 (s, 1H) , 3.85 (m, 2H), 2.59 (t, 2H) , 2.14 (m, 2H) , 1.70 (s, 3H) , 1.65 (s, 3H) . (v) Ph ( 3- (l-pirrolidin-2-ona) ) - (R, S ) CH (OH) C (O) OH Una mezcla del (R, S) -5-Ph (3-l-pirrolidin-2-ona) ) ) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano (1.4 g, 5.1 mmoles; véase el paso (iv) anterior) y 1 M NaOH (10 ml) en THF (15 ml) se agita vigorosamente toda la noche a temperatura ambiente. El THF fue removido y la fase acuosa se lava una vez con CH2C12 y después de esto se concentra in vacuo. El residuo se purifica utilizando RPCL preparativa (CH3CN:0.1 M HOAc (16:84)) y las fracciones de interés fueron concentradas y secadas por congelamiento para dar 0.94 g (79 %) del compuesto del subtítulo.
CL-EM: (M + 1) 236; (M - 1) 234 m/z RMN XH (400 MHz; CD3OD) : d 7.64 (s amp., 1H) , 7.59 (d amp., 1H), 7.35 (dd, 1H), 7.28 (d amp., 1H) , 5.10 (ds, 1H) , 3.92 (t, 2H), 2.58 (t, 2H), 2.16 ( , 2H) . (vi) Ph(3-(l-pirrolidin-2-ona) )-(R) o - (S) CH (OH) C (0) OH Los enantiómeros del Ph(3- (l-pirrolidin-2-ona) ) -(R,S)CH(OH)C(0)OH (0.94 g, 4.0 mmoles; véase el paso (v) anterior) fueron separados por CLAR preparativa utilizando Chiralpak™ AD como la fase estacionaria y el heptano: 2-propanol:acetonitrilo:ácido fórmico (160:30:10:1) como la fase móvil. El enantiómero que eluyó primero se evaporó in vacuo para dar o.37 g (39 %) del compuesto del subtítulo el cual dio 98.6 % ee y [a]D20 = -90.9° (c = 1.0, MeOH). (vii) Ph(3-(l-pirrolidin-2-ona) )-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze- Pab (Teoc) El PyBop (365 mg, 0.70 mmoles), seguido por DIPEA (0.5 ml, 2.8 mmoles) se agrega a una solución enfriada (-20 °C) de Ph(3-(l-pirrolidin-2-ona) )-(R) o - (S) CH (OH) C (O) OH (150 mg, 0.64 mmoles; véase el paso (vi) anterior) y H-Aze-Pab(Teoc) (264 mg, 0.70 mmoles, véase el Ejemplo 3 (vi) anterior) en DMF (8 ml) . La mezcla se deja que alcance lentamente la temperatura ambiente y se agita toda la noche. El DMF fue removido in vacuo y el residuo se somete a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con CH2Cl2:MeOH (95:5), para dar 310 mg (82 %) del compuesto del subtítulo.
CL-EM: (M + l) 594; (M - l) 592 m/z RMN *H (400 MHz; CDC13; mezcla de rotámeros): d 8.09 (dd amp., 1H), 7.66 (d amp., 2H) , 7.47 (d amp., 1H) , 7.34 (dd, 1H), 7.25 (d amp., 2H), 7.12 (d, 1H) , 5.02 (s, 1H) , 4.83 (dd, 1H), 4.43 (d, 2H), 4.25 (t, 2H), 4.17 (m, 1H), 3.82 (m, 3H) , 3.65 (m, 1H), 3.10 (m, 1H), 2.55 (dd, 2H) , 2.50 (m, 1H) , 2.38 (m, 1H), 2.13 (m, 2H) , 1.10 (t, 2H) , 0.05 (s, 9H) . (viii) Ph(3-(l-pirrolidin-2-ona) )-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze- Pab x HOAc Una mezcla de la Ph (3- (l-pirrolidin-2-ona) ) - (R) o - (S)CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (70 mg, 0.12 mmoles; véase el paso (vii) anterior) y TFA (2.0 ml) en CH2C12 (2 ml) se agita a 0 °C durante 2 horas. La solución se concentra in vacuo y el residuo se purifica utilizando CLAR preparativa (CH3CN:0.1 M NH4OAc (gradiente: 0-50% CH3CN) ) ) . Las fracciones de interés fueron concentradas y el producto resultante se disolvió en agua/HOAc y se secan por congelamiento para dar 52 mg (87 %) del compuesto del título.
CL-EM: (M + l) 450 m/z RMN XH (400 MHz; CD3OD; mezcla de rotámeros) : d 7.72 (m, 3H), 7.52 (m, 3H), 7.42-7.20 ( , 2H) , 5.22-5.12 (m, 1H) , 4.80 (m, 1H), 4.50 (parte AB de un espectro ABX, 2H), 4.14 (m, 1H), 4.07 (m, 1H), 3.90 (m, 2H) , 2.74-2.44 (m, 3H) , 2.34-2.08 (m, 3H), 1.90 (s, 3H) . RMN 13C (átomos de carbono del carbonilo y/o de la amidina; 100 MHz); d 176.0, 172.4, 171.8, 167.0.
Ejemplo 11 Ph(3-(l-pirrolidin-2-ona) )-(R)- o - (S) CH (OH) C (0) -Aze-Pab x 2TFA (i) (R, S) -5-Ph (3- (1-pirrolidin) ) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3- dioxolano Una mezcla del (R, S) -5-Ph (3-NH2) -2, 2-dimetil-4-oxo- 1, 3-dioxolano (450 mg, 2.17 mmoles; véase el Ejemplo 10 (ii) anterior), 1, 4-dibromo-butano (0.30 ml, 3.26 mmoles) y CS2CO3 (2.1 g, 6.5 mmoles) en acetona se somete a reflujo durante 3 días. El solvente se remueve y el producto crudo se reparte entre CH2C12 y agua. La fase acuosa se extrae con CH2C12 y las fases orgánicas combinadas se lavan con salmuera, se secan (Na2S04) y luego se concentran in vacuo. El residuo se somete a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con heptano: EtOAc (100:0 hasta 90:10), para dar 140 mg (25%) del compuesto del subtítulo.
CL-EM: (M + 1) 413; (M - 1) 411 m/z RMN XH (400 MHz; CDC13) : d 7.23 (dd, 1H) , 6.74 (d, 1H) , 6.61 (s amp., 1H), 6.55 (d amp., 1H), 5.35 (s, 1H) , 3.29 (m, 4H) , 2.00 (m, 4H), 1.72 (s, 3H), 1.66 (s, 3H) . (ii) Ph(3-(l-pirrolidin) ) - (R, S) CH (OH) C (O)OH x HCl Una mezcla del (R, S) -5-P (3- (1-pirrolidin) ) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano 640 mg, 2.45 mmoles; véase el paso (i) anterior y NaOH 1 M (10 ml) en THF (10 ml) se agita vigorosamente toda la noche a temperatura ambiente. El THF fue removido y la fase acuosa se lavó una vez con CH2C1 y después de esto se concentró in vacuo. El residuo se somete a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:MeOH:NH2OH (6:3:1). El producto se seca por congelamiento dos veces para cambiar las sales, en primer lugar utilizando agua/HOAc y en segundo lugar utilizando agua/HCl 2 M. Esto produjo 0.62 g (98 %) del compuesto del subtítulo.
CL-EM: (M + 1) 222; (M - 1) 220 m/z RMN XH (400 MHz; CD3OD) : d 7.40 (m, 1H) , 7.20-7.55 (m, 3H) , 5.28 (s, 1H), 3.80 (m, 4H) , 2.30 (m, 4H) . (iii) Ph (3- (1-pirrolidin) ) - (R, S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) El PyBop (355 mg, 0.68 mmoles) y luego la colidina (0.4 ml, 3.35 mmoles), fueron agregados a una solución enfriada (-20 °C) de Ph (3- (1-pirrolidin) ) - (R, S) CH (OH) C (O) OH) (160 mg, 0.62 mmoles; véase el paso (ii) anterior) y H-Aze-Pab(Teoc) x 2 HCl (307 mg, 0.68 mmoles, véase el Ejemplo 3 (vi) anterior) en DMF (8 ml) . La reacción se deja que alcance lentamente la temperatura ambiente y se agita toda la noche. El DMF fue removido y el producto crudo se reparte entre EtOAc y agua. La fase acuosa se extrae con EtOAc y la fase orgánica se seca (Na2S04) y se concentra in vacuo. El residuo se somete a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con CH2Cl2:MeOH (95:5) para dar 50 mg (15%) del compuesto del subtítulo.
CL-EM: (M + 1) 580; (M - 1) 578 m/z RMN XH (400 MHz; CDC13; mezcla de rotámeros) : d 7.82 (m, 2H), 7.46-7.30 (m, 2H) , 7.18-7.08 (m, 1H) , 6.70-6.45 (m, 3H) , 5.12-5.00 (m, 1H), 4.75 (m, 1H) , 4.45 (m, 2H) , 4.23 (m, 2H) , 4.1-3.85 (m, 2H) , 3.22 (m, 4H) , 2.69-2.34 (m, 1H) , 2.25, 2.11 (2m, 1H), 1.07 (m, 2H), 0.08 (s, 9H) . (iv) Ph(3-(l-pirrolidin) )- (R, S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab x 2TFA Una mezcla del Ph(3- (1-pirrolidin) ) -(R, S)CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (100 mg, 0.17 mmoles; véase el paso (iii) anterior) y TFA (2.0 ml) en CH2C12 (2 ml) se agita a 0 °C durante 2 horas. La solución se concentra in vacuo para dar un residuo que se disuelve en agua y se seca por congelamiento para dar 70 mg (58 %) del compuesto del título.
CL-EM: (M + 1) 580 m/z RMN XH (400 MHz; CD3OD; mezcla de rotámeros): d 7.75 (m, 2H), 7.50 (m, 2H), 7.15 (m, 1H) , 6.75-6.50 (m, 3H) , 5.14, 5.08 (2s, 1H), 4.76 (m, 1H), 4.60-4.42 (m, 2H), 4.28 (m, 1H) , 4.11-3.87 (m, 2H) , 3.26 (m, 4H), 2.75-2.40 (m, 1H) , 2.26, 2.13 (2m, 1H), 1.89 (m, 4H) . RMN 13C (átomos de carbono del carbonilo y/o de la amidina; 100 MHz): d 173.8, 173.3, 171.8, 167.0.
Ejemplo 12 Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (OMe) (i) Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (Teoc) (OMe) A una solución del Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S)CH (OH) C(0) -Aze-Pab (Teoc) (92 mg, 0.16 mmoles; véase el Ejemplo 6 (vi) anterior) en THF (6 ml) se agrega O-metilhidroxilamina (78 mg, 0.92 mmoles), para dar una mezcla que se agitó toda la noche a 60 °C. El solvente se remueve in vacuo, y el sólido resultante se somete a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con EtOAc. Las fracciones de interés fueron concentradas, produciendo el compuesto del subtítulo (82 mg, 85%) como un sólido blanco.
RMN XH (400 MHz; CDC13) : d 8.0 (t amp., 1H) , 7.57 (amp., 1H) , 7.50 (d, 2H), 7.33 (d, 2H) , 6.64 (m, 2H) , 6.51 (s, 1H) , 4.90 (dd, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.51 (parte AB del espectro ABX, 2H) , 4.16 (m, 2H), 4.07 (m, 1H) , 3.97 (s, 3H), 3.65 (m, 1H) , 2.97 (s, 6H), 2.70 (m, 1H) , 2.40 (m, 1H) , 0.99 (m, 2H) , 0.03 (s, 12H) . CL-EM: (M + l) 618 m/z (ii) Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OMe) Una solución del Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S)CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (OMe) (78 mg, 0.13 mmoles, véase el paso (i) anterior) en TFA (3 ml) se agita a 0 °C durante 2 horas. La solución se concentra in vacuo en frío y el sólido resultante se somete a cromatografía sobre CLAR preparativa (CH3CN: cetato de amonio 0.1 M (40:60)). Las fracciones de interés fueron concentradas parcialmente. El residuo se seca por congelamiento (CH3CN:agua) 3 veces, produciendo 40 mg (30 %) del compuesto del título. Pureza 99.4 %.
RMN XH (400 MHz; CDC13) : d 7.59 (d, 2H) , 7.32 (d, 2H) , 6.72 (s, 2H), 6.66 (m, 1H) , 5.05 (s, 1H) , 4.84 (s, 4H) , 4.76 (dd, 1H), 4.44 (parte AB de un espectro ABX, 2H) , 4.30 (m, 1H), 4.00 (m, 1H), 3.82 (s, 3H) , 2.93 (s, 6H), 2.49 (m, 1H) , 2.39 (m, 1H) . RMN 13C (átomos de carbono de carbonilo y/o amidina; 100 MHz): d 172.7, 171.8, 171.7, 158.7. CL-EM: (M + l) 474 m/z Ejemplo 13 Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C(O) -Aze-Pab (O-Et ) (i) Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (OMe) A una solución del Ph(3-Cl, .5-NMe2)-(R) o - (S)CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (40 mg, 0.07 mmoles, véase el Ejemplo 6 (vi) anterior) en THF (3 ml) se agrega 0-etilhidroxilamina x HCl (40 mg, 0.41 mmoles), y la solución se agita a 60 °C toda la noche. La solución se concentra y el material resultante se purifica con CLAR preparativa (CH3CN: acetato de amonio 0.01 M (60:40)). Las fracciones de interés fueron concentradas parcialmente, y el residuo se extrae con EtOAc (3 x) . La capa orgánica se lava con agua y se concentra in vacuo produciendo 16 mg (37 %) del compuesto del subtítulo.
RMN XH (400 MHz; CDC13) : d 8.00 (amp., 1H) , 7.58 (amp., 1H) , 7.49 (d, 2H), 7.32 (d, 2H) , 6.65 (s, 1H) , 6.63 (s, 1H) , 6.51 (s, 1H), 4.90 (dd, 1H), 4.82 (s, 1H) , 4.50 (parte AB de un espectro de ABX, 2H), 4.25-4.15 (m, 5H) , 4.06 (m, 1H) , 3.65 (c, 1H), 2.97 (s, 6H), 2.69 (m, 1H) , 2.39 (m, 1H) , 1.34 (t, 3H), 0.99 (t, 2H), 0.05 (s, 9H) . (ii) Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (O-Et) A una solución del Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (O-Et) (16 mg, 0.03 mmoles, véase el paso (i) anterior) en cloruro de metileno (0.5 ml) se agrega TFA (1 ml), y la mezcla se agita a 0 °C durante 2 horas. La mezcla resultante se concentra in vacuo para dar un residuo sólido que se disuelve en agua/CH3CN y se seca por congelamiento dos veces produciendo 14 mg (92 %) del compuesto del título. Pureza 94.4%.
RMN ? (400 MHz; CD30D) : d 8.73 (t amp., 1H) , 7.66 (d, 2H) , 7.53 (d, 2H), 6.73 (s, 2H) , 6.67 (s, 2H) , 5.07 (s, 2H) , 4.78 (dd, 1H), 4.51 (parte AB de un espectro de ABX, 2H) , 4.32 (m, 1H), 4.16 (m, 1H), 4.04 (m, 1H) , 2.94 (s, 6H) , 2.50 (m, 1H) , 2.29 (m, 1H), 1.39 (t, 3H) . RMN 13C (átomos de carbono de carbonilo y/o amidina; 100 MHz): d 172.7, 171.7, 160.6, 152.0. CL-EM: (M + 1) 489 m/z Ejemplo 14 Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (O-n-Pr) (i) Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (Teoc) (O-n- Pr) A una solución del Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (40 mg, 0.07 mmoles; véase el Ejemplo 6 (vi) anterior) en THF (5 ml) se agrega O-n-propilhidroxilamina x HCl (46 mg, 0.41 mmoles), y la solución se agita a 60 °C toda la noche. La solución se concentra a sequedad, y el resto se purifica utilizando CLAR preparativa (CH3CN: acetato de amonio 0.1 M (60:40)). La fracción de interés fue concentrada parcialmente, y la solución acuosa se extrajo con EtOAc (3 x) . La capa orqánica se lava con agua, se seca (Na2S04) y se concentra para dar 16 mg (36 %) del compuesto del subtítulo.
RMN XH (400 MHz; CDC13) : d 8.00 (t amp., 1H) , 7.58 (s amp., 1H), 7.48 (d, 2H), 7.32 (d, 2H) , 6.65 (s, 1H) , 6.63 (s, 1H) , 6.51 (s, 1H), 4.89 (dd, 1H) , 4.82 (s, 1H) , 4.50 (parte AB de un espectro ABX, 2H) , 4.16 (dd, 1H), 4.11 (t, 1H) , 4.06 (m, 1H), 3.65 (c, 1H), 2.96 (s, 6H) , 2.68 (m, 1H) , 2.39 (m, 1H) , 1.75 (m, 2H), 0.98 (t, 5H) , 0.05 (s, 9H) . CL-EM: (M + 1) 647 m/z ;ii) Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (O-n-Pr) El TFA (2 ml) fue agregado a una solución enfriada con hielo de Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S)CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (O-n-Pr) (16 mg, 0.02 mmoles; véase el paso (i) anterior) en cloruro de metileno (0.5 ml), y la mezcla resultante se enfría con agitación durante 2 horas. La solución resultante se concentra in vacuo para dar un residuo sólido que se disolvió en agua/CH3CN y se secó por congelamiento. El producto se purificó utilizando cromatografía instantánea (EtOAc:MeOH (9:1)). Las fracciones de interés se concentraron para dar 14 mg (92 %) del compuesto del título. Pureza 98 %.
RMN ?H (400 MHz; CDC13) : d 8.71 (t amp., 1H) , 7.65 (d, 2H) , 7.50 (d, 2H), 6.73 (m, 2H) , 6.67 (s, 1H) , 5.07 (s, 1H) , 4.78 (dd, 1H), 4.50 (parte AB de un espectro ABX, 2H), 4.32 (m, 1H), 4.06 (m, 3H), 2.94 (s, 6H) , 2.49 (m, 1H) ; 2.29 (m, 1H) , 1.80 (m, 2H), 1.03 (m, 3H) . CL-EM: (M + l) 503 m/z Ejemplo 15 Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (O-i-Pr) (i) Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (O-i- Pr) La O-isopropilhidroxilamina x HCl (46 mg, 0.41 mmoles) fue agregada a una solución de Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S)CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) ( 40 mg, 0.07 mmoles; véase el Ejemplo 6 (vi) anterior) en THF (3 ml), y la mezcla resultante se agita a 60 °C toda la noche. La solución resultante se concentra, y el producto crudo se purifica utilizando la CLAR preparativa (CH3CN: acetato de amonio 0.1 M (60:40)). Las fracciones de interés fueron concentradas parcialmente y luego extraídas con EtOAc (3 x) . Las substancias orgánicas combinadas se lavan con agua, se secan (Na2S04), y se concentran para dar 16 mg (36 %) del compuesto del subtítulo.
RMN XH (400 MHz; CDC13) : d 8.00 (amp., 1H) , 7.57 (s, 1H) , 7.50 (d, 2H), 7.32 (d, 2H) , 6.65 (s, 1H) , 6.63 (s, 1H) , 6.51 (s, 1H), 4.90 (dd, 1H), 4.82 (s, 1H) , 4.58-4.40 (m, 3H) , 4.17 (m, 3H), 4.07 (m, 1H) , 3.65 (m, 1H) , 2.97 (s, 2H) , 2.69 (m, 1H), 2.39 ( , 1H) , 1.31 (d, 6H) , 1.00 ( , 2H) , 0.05 (s, 9H) . CL-EM: (M + l) 647 m/z (ii) Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (O-i-Pr) Una solución enfriada con hielo de Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (O-i-Pr) (16 mg, 0.02 mmoles; véase el paso (i) anterior) en TFA (1.5 ml) se enfría con agitación durante 2 horas. La solución resultante se evapora in vacuo antes de que se agregue agua/CH3CN, y la solución se seca por congelamiento. El producto crudo se purifica utilizando cromagrafía instantánea (EtOAc :MeOH (9:1)). Las fracciones de interés fueron concentradas entonces para dar 14 mg (92 %) del compuesto del título. Pureza (CLAR) 96 %.
RMN XH (400 MHz; CDC13) : d 8.73 (t amp., 1H) , 7.66 (d, 2H), 7.50 (d, 2H), 6.73 (d, 2H) , 6.67 (t, 1H) , 5.08 (s, 1H) , 4.78 (dd, 1H), 4.51 (parte AB de un espectro ABX, 2H), 4.4-4.3 (m, 2H), 4.02 (m, 1H) , 2.95 (s, 6H) , 2.51 (m, 1H) , 2.30 (m, 1H) , 1.39 (d, 6H) . CL-EM: (M + l) 503 m/z Ejemplo 16 Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Q-CH2-CH2-0-CH3) (i) Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (0- CH2-CH2-Q-CH3) Una solución de la O- (2-metoxi) etilhidroxilamina y HOAc (23.3 µl) en THF (2 ml) se agrega a una solución de Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (40 mg, 0.07 mmoles; véase el Ejemplo 6 (vi) anterior) en THF (1 ml), y la mezcla se agita a 60 °C durante 3.5 días. La solución resultante se concentra a sequedad, y el producto crudo se purifica utilizando CLAR preparativa (CH3CN: acetato de amonio 0.1 M (60:40)). Las fracciones de interés fueron concentradas y extraídas parcialmente con EtAOc (3 x) . Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con agua, secadas (Na2S04) y luego concentradas a sequedad para dar 20 mg (44 %) del compuesto del subtítulo.
RMN XH (400 MHz; CDC13) : d 8.00 (t amp., 1H) , 7.71 (amp., 1H), 7.48 (d, 2H), 7.32 (d, 2H) , 6.65 (s, 1H) , 6.63 (s, 1H) , 6.51 (s, 1H), 4.89 (dd, 1H) , 4.81 (s, 1H) , 4.49 (parte AB de un espectro ABX, 2H), 4.29 (m, 2H), 4.14 (m, 2H) , 4.07 (m, 2H), 3.74-3.60 (m, 3H) , 3.42 (s, 3H) , 2.96 (s, 6H) , 2.68 (m, 1H), 2.39 ( , 1H), 1.79 (amp., 2H) , 0.97 (m, 1H), 0.02 (s, 9H) . CL-EM: (M + l) 663 m/z (ii) Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Q-CH2-CH2- O-CH3) El TFA (2 ml, 26 mmoles) se agrega a una solución enfriada con hielo de Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (0-CH2-CH2-0-CH3) (20 mg, 0.03 mmoles; del paso (i) anterior) en cloruro de metileno (0.5 ml), y la mezcla resultante se enfría con agitación durante 2 horas. La solución resultante se evapora a sequedad, y el producto crudo se purifica por cromatografía instantánea (EtOAc :MeOH (9:1)). Las fracciones de interés fueron concentradas para dar un residuo al cual se agregó agua/CH3CN. La solución resultante se seca por congelamiento toda la noche para dar 13 mg (65 %) del compuesto del título. Pureza (CLAR) 96 %.
RMN XH (400 MHz; CD3OD) : d 8.69 (t amp., 1H) , 7.65 (d, 2H) , 7.49 (d, 2H), 6.73 (d, 2H) , 6.67 (t, 1H) , 5.07 (s, 2H) , 4.78 (dd, 1H), 4.51 (parte AB de un espectro ABX, 2H) , 4.32 (m, 1H), 4.22 (m, 2H) , 4.03 (m, 1H) , 3.72 (m, 2H) , 3.41 (s, 3H) , 2.94 (s, 6H), 2.48 (m, 1H) , 2.29 (m, 1H) . RMN 13C (átomos de carbono de carbonilo y/o amidina; 100 MHz; CD30D) : d 172.7, 171.8, 171,7, 159.3, 152.0. CL-EM: (M + 1) 519 m/z Ejemplo 17 Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (0-THP) (i) Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (Teoc) (0- THP) Una solución de la O- (tetrahidropiran-2-il) -hidroxilamina (51 mg, 0.44 mmoles) y HOAc (25 µL) en THF (1 ml) se agrega a una solución de Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S)CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (43 mg, 0.07 mmoles; véase el Ejemplo 6 (vi) anterior) en THF (2 ml) , y la mezcla resultante se agita a 60 °C durante 22 h y luego a TA toda la noche. La solución resultante se concentra, y el producto crudo se purifica por medio de CLAR preparativa (CH3CN: acetato de amonio 0.1 M (60:40)). Las fracciones de interés fueron concentradas parcialmente y el residuo acuoso se extrajo con EtOAc (3 x) . Las substancias orgánicas combinadas fueron lavadas con agua, secadas (Na2S04) y luego concentradas para dar 26 mg (52 %) del compuesto del subtítulo.
RMN XH (400 MHz; CDC13) : d 8.00 (t amp., 1H), 7.61 (amp., 1H), 7.52 (d, 2H), 7.32 (d, 2H) , 6.66 (s, 1H) , 6.63 (s, 1H) , 6.51 (s, 1H), 5.30 (m, 1H) , 4.90 (dd, 1H), 4.82 (s, 1H) , 4.50 (parte AB de un espectro ABX, 2H) , 4.17 (m, 2H) , 4.07 (m, 1H), 3.95 (m, 1H) , 3.66 (m, 2H), 2.97 (s, 6H) , 2.69 (m, 1H) , 2.39 (m, 1H), 2.00-1.55 (m, 7H) , 0.98 (m, 2H) , 0.04 (s, 9H) . CL-EM: (M + l) 689 m/z (ii) Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (0-THP) El fluoruro sobre Amberlyst® A-26 (140 mg) se agrega a una solución de Ph(3-Cl, 5-NMe2)-(R) o - (S)CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (0-THP) (34 mg, 0.05 mmoles; véase el paso (i) anterior) en CH3CN (3 ml), y la mezcla se deja a 60 °C toda la noche. Después del enfriamiento, la resina se removió por filtración y luego se lava con muchas porciones de CH3CN y EtOH (95 %). Las substancias orgánicas combinadas se concentraron para dar un producto crudo que fue purificado por CLAR preparativa (CH3CN:acetato de amonio 0.1 M (50:50)). Las fracciones de interés fueron concentradas, disueltas en agua/CH3CN y luego se secan por congelamiento para dar 18 mg (60 %) del compuesto del título.
RMN XH (400 MHz; CD3OD) : d 7.62 (d, 2H) , 7.32 (d, 2H) , 6.72 (s, 2H), 6.66 (s, 1H), 5.15 (m, 1H) , 5.05 (s, 1H) , 4.77 (dd, 1H), 4.44 (parte AB de un espectro ABX, 2H) , 4.29 (m, 1H), 3.95 (m, 2H), 3.57 (m, 1H) , 2.93 (s, 6H) , 2.48 (m, 1H) , 2.27 (m, 1H), 1.94 (m, 2H) , 1.82 (m, 1H) , 1.75 (m, 1H) , 1.61 (m, 3H) . RMN 13C (átomos de carbono de carbonilo y/o amidina; 100 MHz; CD3OD) : d 172.7, 171.5, 154.7, 152.0. CL-EM: (M + 1) 545 m/z Ejemplo 18 Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OMe) x TFA (i) Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (OMe) Una mezcla de Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) o - (S)CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (38 mg, 0.06 mmoles, véase el Ejemplo 5 (vii) anterior) y O-metil-hidroxilamina (62 mg, 0.74 mmoles) en THF (3 ml) se calienta a 60 °C durante 30 horas, después de lo cual el solvente se remueve y la mezcla de la reacción se purifica por CLAR preparativa (CH3CN: acetato de amonio 0.1M 50:50). La fracción de interés se concentró parcialmente y el residuo acuoso se extrajo con EtOAc (3x) . Las substancias orgánicas combinadas se secan (Na2S04) y se concentran in vacuo, produciendo 22 mg (50 %) del compuesto del subtítulo.
RMN XH (600 MHz; CDC13) : d 7.81 (amp., 1H) , 7.55 (amp., 1H) , 7.45 (d, 2H), 7.28 (d, 2H) , 7.18 (amp., 1H) , 7.09 (amp., 1H) , 4.89 (s, 1H), 4.86 (dd, 1H) , 4.46 (parte AB de un espectro ABX, 2H), 4.11 (m, 2H) , 3.92 (s, 3H) , 3.67 (amp., 1H), 3.22 (amp., 3H), 2.68 (amp., 1H) , 2.41 (m, 1H) , 1.87 (amp., 2H) , 1.71 (m, 4H), 0.95 (m 2H) , -0.02 (s, 9H) . (ii) Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pa (OMe) x TFA Una solución del Ph(3-Cl, 5-NMeAc)-(R) o - (S)CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (OMe) (22 mg, 0.03 mmoles, véase el paso (i) anterior) en TFA (3 ml) se mantiene a TA durante 1 hora, después de lo cual el solvente fue removido in vacuo. El residuo sólido se disuelve en agua y la solución se seca por congelamiento toda la noche, produciendo 20 mg (76 %) del compuesto del título.
RMN XH (400 MHz; D20) (complejo debido al rotamerismo) : d 8.79 (t amp., 1H), 7.67 (t, 2H) , 7.51 (d, 2H) , 7.46 (d, 2H) , 7.17 (s, 1H), 5.35 (s, 1H) , 5.20 (s+m, 1H) , 4.88 (dd, 1H) , 4.55 (m, 1H), 4.40 (m, 1H) , 4.11 (m, 2H) , 3.98 (2xs, 3H) , 3.38 (s, 1H), 3.19 (2s, 2H) , 2.80 (m, 0.5H), 2.60 (m, 0.5H), 2.28 (m, 2H), 1.88 (s, 2H) RMN 13C (100 MHz, CD30H) (átomos de carbono de carbonilo y/o amidina): d 174.0; 173.3; 172.6; 172.5; 163.4; 163.0. CL-EM: (M + l) 502 m/z Ejemplo 19 Ph(3-(l-pirrolidin-2-ona) )-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OMe) x TFA (i) Ph(3-(l-pirrolidin-2-ona) )-(R) o - (S ) CH (OH) C (O) -Aze-Pab(Teoc) (OMe) La O-metilhidroxilamina x HCl (42 mg, 0.50 mmoles) se agrega a una solución de la Ph (3- (l-pirrolidin-2-ona) ) - (R) o - (S)CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (50 mg, 0.08 mmoles; véase el Ejemplo 10 (vii) anterior) en THF (3 ml), y la mezcla se agita toda la noche a 60 °C. El solvente fue removido y el residuo se reparte entre agua y EtOAc. La fase acuosa se extrae con EtOAc y las fases orgánicas combinadas fueron secadas (Na2S04) y luego concentradas in vacuo para dar casi 52 mg (casi 100%) del compuesto del subtítulo como un sólido, el cual fue utilizado sin purificación adicional.
CL-EM: (M + l) 624; (M - l) 622 m/z (ii) Ph(3-(l-pirrolidin-2-ona) )-(R) o - (S)CH (OH) C (0) -Aze-Pab (OMe) x TFA Una mezcla de Ph (3- ( l-pirrolidin-2-ona) ) - (R) o. -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (OMe) (53 mg, 0.08 mmoles; véase el paso (i) anterior) y TFA (2.0 ml) en CH2C12 (1 ml) se agita a TA durante 4 horas. El solvente se remueve y el residuo se reparte entre agua y EtOAc. La fase acuosa se extrae con EtOAc y las fases orgánicas combinadas se secan (Na2S04) y luego se concentran in vacuo. El residuo se somete a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con CH2Cl2:MeOH (98:2 a 95:5) para dar 22 mg (44 %) del compuesto del título.
CL-EM: (M + 1) 480; (M - 1) 478 m/z RMN XH (400 MHz; CD3OD) : d 7.76-7.63 (m, 3H) , 7.59-7.50 (m, 3H), 7.44-7.20 (m, 2H) , 5.20-5.14 (m, 1H) , 4.61-4.02 (m, 4H) , 3.97-3.87 (m, 5H) , 2.74-2.44 (m, 3H) , 2.34-2.09 (m, 3H) .
Ejemplo 20 Ph(3-Cl, 5-pirrolo)-(R) o - (S) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (i) (R,S)-5-Ph(3-Cl, 5-pirrolo) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3- dioxolano A una solución del (R, S) -5-Ph (3-C1, 5-NH2)-2,2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano (6.0 g, 24.8 mmoles; véase el Ejemplo 9(ii) anterior) y el pentóxido de fósforo (3.5 g, 24.8 mmoles) en tolueno seco (50 ml) se agrega 2,5-dimetoxitetrahidrofurano (4.9 g, 37.3 mmoles) por goteo. La reacción se calienta a reflujo durante 30 minutos y luego se permite enfriar a temperatura ambiente. La reacción se enfría con NaOH 2 N (10 ml), se transfiere a un embudo de separación y la fase acuosa se separa y se extrae con tolueno (100 ml) . Las fases orgánicas combinadas fueron lavadas subsiguientemente con salmuera (20 ml), se secan (MgS04), se filtran y se concentran in vacuo para dar un aceite anaranjado tenue (5.0 g) . La cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con CH2C12 produjo 2.8 g (39 %) del compuesto del subtítulo como un sólido amarillo.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.28-7.42 (m, 3H) , 7.18 (t, J = 2.1 Hz, 2H), 6.38 (t, J = 2.1 Hz, 2H) , 5.40 (s, 1H) , 1.72 (d, J = 8.2 Hz, 6H) . (ii) Ph(3-Cl, 5-pirrolo)-(R,S)CH(0H)C(0)0H A una solución del (R, S) -5-Ph (3-C1, 5-pirrolo) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano (3.1 g, 10.7 mmoles; véase el paso (i) anterior en THF (40 ml) a temperatura ambiente se agrega NaOH 3 N (36 ml, 107.3 mmoles) junto con el bromuro de tributilamonio (0.35 g, 1.07 mmoles). La mezcla de la reacción se agita entonces a temperatura ambiente durante unas 2 h adicionales. La mezcla de la reacción se concentra in vacuo para remover el THF. La fase acuosa restante se enfría a 0 °C y se acidifica a pH 2 con HCl concentrado y se extrae con EtOAc (2 x 150 ml ) . Las substancias orgánicas combinadas se lavan con salmuera, se secan (MgS04), se filtran y se concentran in vacuo para dar una espuma anaranjada. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con CHCl3:MeOH: hidróxido de amonio concentrado (85:15:5), produjo la sal de amonio del compuesto del subtítulo como un sólido blanco (2.0 g) . La acidificación subsiguiente con HCl 2 N hasta pH 1, seguido por la extracción con EtOAc, la concentración in vacuo y el secado, produjo 1.8 g (68 %) del compuesto del subtítulo como un sólido blanco.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.52 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.22 (t, J = 3 Hz, 2H) , 6.32 (t, J = 3 Hz, 2H) , 5.4 (s, 1H). (iii) Ph(3-Cl, 5-?irrolo)-(R) o - (S) CH (OH)C(0)OH (a) y Ph(3- Cl, 5-pirrolo)-(S) o - (R) CH (OAc) C (O) OH (b) Una mezcla de Ph(3-Cl, 5-pirrolo) - (R, S) CH (OH) C (O) OH (1.8 g, 7.3 mmoles; véase el paso (ii) anterior), Lipase PS "Amano" (1.0 g), acetato de vinilo (5.0 ml) y MTBE (5.0 ml) se calienta a 45 °C durante 24 horas. La reacción se filtra y la torta del filtro se lava con EtOAc (100 ml) . El filtrado se concentra in vacuo y se somete a cromatografía sobre sílice, eluyendo con CHCl3:HOAc (95:5), para dar 710 mg, (38 %) del compuesto (a) del subtítulo como un sólido blanco y 910 mg (42 %) del compuesto (b) del subtítulo como un sólido de color cremoso.
Para el compuesto (a) del subtítulo: RMN XH (300 MHz; CD30D) : d 7.54 (s, 1H) , 7.47 (s, 1H) , 7.36 (s, 1H), 7.19 (d, J = 3 Hz, 2H), 6.30 (d, J = 3 Hz, 2H) , 5.21 (s, 1H). RMN 13C (75 MHz; CD3OD) : d 175.2, 142.9, 136.1, 124.4, 120.3, 119.9, 117.3, 112.0, 73.2. Análisis por CLAR: 98.3 %, 98.0 % ee . [a]D25 = -99° (c = 1.0, metanol) CL-EM: (M + 1) 252 m/z Para el compuesto (b) del subtítulo: RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.52 (s, 1H) , 7.46 (s, 1H) , 7.38 (s, 1H), 7.20 (s amp., 2H) , 6.30 (s amp., 2H), 5.22 (s, 1H) , 1.98 (s, 3H) . (iv) Ph(3-Cl, 5-pirrolo)-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) Una mezcla de Ph(3-Cl, 5-pirrolo) - (R) o -(S)CH(OH)C(0)OH (285 mg, 1.14 mmoles; véase el paso (iii) anterior), HAze-Pab (Teoc) (470 mg, 1.25 mmoles), PyBOP (650 mg, 1.25 mmoles), y 2, 4, 6-colidina (0.33 ml, 2.49 mmoles) en DMF (14 ml) se agita a 0 °C durante 2 h y luego a 25 °C durante 30 minutos. La reacción se enfría con H20 (50 ml) y se extrae con EtOAc (3 x 50 ml) . Los extractos combinados se secan (Na2S04), se filtran y se concentran in vacuo. La cromatografía instantánea (2x) sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc produjo 180 mg (26 %) del compuesto del subtítulo como un sólido blanco.
RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7-74-7.86 (m, 2H) , 7.14-7.58 (m, 7H), 6.28 (s amp., 2H) , 5-14-5.28 (m, 2H) , 4.76-4.82 (m, 1H) , 3.92-4.58 (m, 7H) , 2.40-2.68 (m, 2H) , 2.10-2.38 (m, 2H) , 1.02-1.16 (m, 2H), 0.09 (s, 9H) . API-EM: (M + l) 610 m/z (v) Ph(3-Cl, 5-pirrolo)-(R) o - (S) CH (OH) C (0) -Aze-Pab A una solución del Ph(3-Cl, 5-pirrolo) - (R) o -(S)CH(OH)C(0)OH-Aze-Pab(Teoc) (38 mg, 0.06 mmoles; véase el paso (iv) anterior) en acetonitrilo se agregó el anión de fluoruro unido a un polímero (Amberlyst® A-26) (170 mg) y la mezcla se calienta a 60 °C toda la noche seguido por 70 °C durante 4 h. La mezcla restante se filtra, el polímero se lava con, y la solución se hizo de, acetonitrilo, etanol y THF, y la solución se concentró in vacuo. El producto crudo se purificó dos veces utilizando CLAR preparativa (CH3CN : acetato de amonio 0.1 M, 40:60 y CH3CN : acetato de amonio 0.1 M, 30:70, respectivamente). Las fracciones de interés fueron secadas por congelamiento (3x), produciendo 8 mg (28 %) del compuesto del título.
RMN XH (400 MHz; CD3OD) : d 7.77 (m, 2H) , 7.61-7.48 (m, 3H) , 7.40 (d, 1H), 7.26 (m, 2H), 6.33 (m, 2H) , 5.30 (d, 1H), 4.68-4.25 (m, 2H), 4.09 (m, 1H), 2.60 (m, 1H) , 2.35 (m, 1H) , 1.94 (s, 3H) . CL-EM: (M + l) 466 m/z Ejemplo 21 Ph(3-Cl, 5-(l-pirrolidin-2-ona) )-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab(Q-n-Pr) (i) Ph(3-Cl, 5-(l-pirrolidin-2-ona) )-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (O-n-Pr) A una solución de la Ph(3-Cl, 5- (l-pirrolidin-2-ona))-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (40 mg, 0.064 moles; véase el Ejemplo 9 (vi) anterior) en THF (3 ml) se agrega O-n-propilhidroxilamina xHCl (43 mg, 0.38 mmoles), y la solución se calienta a 60 °C durante 4.5 horas. La solución se concentra in vacuo, y el material crudo resultante se purifica por cromatografía instantánea (gel de Si, EtOAc :MeOH 9:1). Las fracciones de interés fueron concentradas, produciendo 43 mg (98 %) del compuesto del subtítulo.
RMN Hí (400 MHz; CD3OD) : d 7.75 (2s, 1H) , 7.59 (amp., 1H) , 7.43 (d, 2H), 7.23 (m, 3H) , 5.18 (amp., 1H) , 4.50-4.30 (m, 3H), 4.20-4.05 (m, 5H) , 3.99 (t, 3H) , 3.84 (m, 2H) , 2.55 (t, 2H), 2.28 (m, 1H) , 2.12 (m, 2H) , 1.71 (m, 2H) , 0.99 (m, 4H) , 0.02 (s, 9H) . (ii) Ph(3-Cl, 5-(l-pirrolidin-2-ona) )-(R) o - (S) CH (OH) C (0) -Aze-Pab (O-n-Pr) A una solución enfriada con hielo de Ph(3-Cl, 5-(l-pirrolidin-2-ona) )-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (O-n-Pr) (Teoc) (43 mg, 0.063 mmoles; del Paso (i) anterior) en cloruro de metileno (0.5 ml) se agrega TFA (2.5 ml), y la solución se agita a 0 °C durante 100 minutos, después de lo cual la solución se concentra in vacuo y el material crudo resultante se purifica utilizando CLAR preparativa (CH3CN:acetato de amonio 0.1 M 30:70). Las fracciones de interés fueron agrupadas y secadas por congelamiento, dando 23 mg (68 %) . Pureza 99.9 % CL-EM: (M + 1) 542 m/z RMN XH (400 MHz; CD3OD) (complejo debido al rotamerismo) : d 7.75 (amp., 1H), 7.57 (m, 2.5H), 7.49 (s, 0.5H), 7.36-7.22 (m, 3H), 5.16 (s, 1H) , 4.78 (dd, 1H) , 4.48-4.32 (m, 3H) , 4.17 (m, 1H), 3.97 (m, 2H) , 3.86 (m, 2H) , 2.55 (t, 3H) , 2.52 (m, 0.5H), 2.28 (m, 0.5H), 2.13 (m, 3H) , 1.71 (m, 2H) , 0.98 (m, 2H) .
Ejemplo 22 Ph(3-Cl,5-(l-pirrolidin-2-ona) )-(R) o - (S) CH (OH) C (0) -Aze-Pab(OMe) (i) Ph(3-Cl,5-(l-pirrolidin-2-ona) )-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (OMe) A una mezcla del Ph (3-C1, 5- (l-pirrolidin-2-ona) ) -(R) o -(S)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (80 mg, 0.13 mmoles; véase el Ejemplo 9 (vi) anterior) en THF (6 ml) se agrega O-metilhidroxilamina x HCl (64 mg, 0.77 mmoles). La mezcla se agita a 60 °C durante 5 horas y luego se evapora. El residuo se somete a cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo:metanol (9:1), para dar 75 mg del producto crudo. El producto crudo fue purificado adicionalmente utilizando CLAR preparativa (preparativa (CH3CN: acetato de amonio 0.1 M 60:40). Las fracciones de interés fueron concentradas. El CH3CN fue removido in vacuo. La fase acuosa se extrae con EtOAc (3x) . Las fases de acetato de etilo combinadas fueron lavadas con salmuera, luego se secan (Na2S04) y se concentran, dando 65.8 mg (78 %) del compuesto del subtítulo.
RMN XH (400 MHz; CDC13) : d 7.97-7.90 (m, 1H) , 7.60-7.55 (m, 2H), 7.46 (d, 2H), 7.29 (d, 2H) , 7.13 (s, 1H) , 4.95-4.81 (m, 2H), 4.55-4.30 (m, 3H) , 4.18-4.09 (m, 3H) , 3.95 (s, 3H) , 3.87-3.75 (m, 3H) , 2.69-2.55 (m, 3H) , 2.45-2.34 (m, 1H) , 2.20-2.10 (m, 2H) , 2.00 (amp., 1H) , 1.01-0.92 (m, 2H), 0.00 (s, 9H) (ii) Ph(3-Cl, 5-(l-pirrolidin-2-ona) )-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OMe) A una solución enfriada con hielo de Ph (3-C1, 5- (1-pirrolidin-2-ona) )-(R) o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (Teoc) (OMe) (55.9 mg, 0.08 mmoles; del paso (i) anterior) en cloruro de metileno (0.5 ml) se agrega TFA (3.0 ml). La solución se agita a 0 °C durante 130 minutos, después de lo cual la solución se concentra in vacuo y el material crudo resultante se purifica utilizando CLAR preparativa (CH3CN:acetato de amonio 0.1 M 30:70). Las fracciones de interés fueron agrupadas y secadas por congelamiento (2x), produciendo 38 mg (87 %) del compuesto del título.
CL-EM: (M + l) 514 m/z RMN XH (400 MHz; CDC13) : d 7.75 (s, 1H) , 7.62-7.47 (m, 3H) , 7.36-7.21 (m, 3H) , 5.19-5.10 (m, 1H) , 4.48-3.93 (m, 4H) , 3.89-3.79 (m, 5H) , 2.72-2.45 (m, 3H) , 2.33-2.06 (m, 3H) .
Ejemplo 23 Ph(3-Cl,5-NMe(3-metilbutanoil) )-(R)- o - (S) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OMe) (i) (R, S) -5-Ph (3-C1, 5-NHMe) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano Una mezcla de (R, S) -5-Ph (3-C1, 5-NH2) -2, 2-dimetil-4-oxo-1, 3-dioxolano (3.0 g, 12.4 mmoles; véase el Ejemplo 9(ii) anterior), formaldehído (0.81 ml de 37 % en peso en H20, 9.9 mmoles) y óxido de plantino(IV) (330 mg) en EtOAc (100 ml) se agita bajo una atmósfera de hidrógeno durante 5 horas a 25 °C. La mezcla se filtra a través de una almohadilla de Celite y la torta del filtro se lava con EtOAc (200 ml) . Las substancias orgánicas se concentran in vacuo y se someten a cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc: Hex (1:4) para dar 1.63 g (52 %) del compuesto del subtítulo como un aceite amarillo.
RMN XH (300 MHz; CDC13) : d 6.75 (s, 1H) , 6.54 (s, 2H) , 5.25 (s, 1H), 3.90 (s amp., 1H), 2.80 (s, 3H) , 1.68 (s, 3H) , 1.64 (s, 3H) (ii) (R,S)-5-Ph(3-Cl, 5-NMe(3-metilbutanoil) ) -2, 2-dimetil-4-oxo-1, 3-dioxolano A una solución de (R,S) -5-Ph (3-C1, 5-NHMe)-2,2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano (945 mg, 3.70 mmoles; véase el paso (i) anterior) y trietilamina (560 mg, 5.54 mmoles) en acetona (20 ml) a 0 °C se agrega por goteo el cloruro de isovalerilo (623 mg, 5.17 mmoles). La mezcla se agita durante 0.5 h, y se reparte entre EtOAc (3 x 30 ml) y H20 (30 ml) . Los extractos orgánicos combinados se lavan con NaHCÜ3 acuoso (30 ml), se secan (Na2S04), se filtran y se concentran in vacuo para dar 1.35 g (> 100%) del compuesto del subtítulo como un aceite amarillo, el cual se utilizó directamente sin purificación.
RMN XH (300 MHz; CDC13) : d 7.50 (s, 1H) , 7.20 (s, 2H) , 5.38 (s, 1H), 3.28 (s, 3H), 1.90-2.22 (m, 3H) , 1.70 (s, 3H) , 1.68 (s, 3H), 0.70-0.92 (m, 6H) (iii) Ph ( 3-C1, 5-NMe (3-metilbutanoil ) ) - (R, S ) CH (OH) C (O) OH Una mezcla del (R,S) -5-Ph (3-C1, 5-NMe(3-metilbutanoil) ) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano (1.35 g, 3.97 mmoles; véase el paso (ii) anterior) y NaOH (1.60 g, 39.7 mmoles) en MeOH (20 ml) se agita durante 1 hora a 25 °C. La mezcla se concentra in vacuo, y el residuo se diluye con H20 (30 ml), se acidifica con HCl 2N (20 ml) y se extrae con EtOAc (3 x 50 ml) . Los extractos orgánicos combinados se secaron (Na2S04), se filtraron y se concentraron in vacuo para dar 1.0 g (100 %) del compuesto del subtítulo como un aceite amarillo, el cual fue utilizado directamente sin purificación.
RMN XH (300 MHz; CD30D) : d 7.55 (s, 1H) , 7.34 (s, 2H) , 5.21 (s, 1H), 3.23 (s, 3H), 1.90-2.10 (m, 3H) , 0.70-0.92 (m, 6H) (iv) Ph (3-C1, 5-NMe (3-metilbutanoil) ) - (R) - o -(S)CH(OH)C(0)QH (a) y Ph (3-C1, 5-NMe (3-metilbutanoil ) )-(S)- o -(R)CH(OAc)C(0)OH (b) Una mezcla del Ph(3-Cl, 5-NMe (3-metilbutanoil) ) - (R,S)CH(OH)C(0)OH (1.0 g, 3.34 mmoles; véase el paso (iii) anterior y Lipase PS Amano (510 mg) en acetato de vinilo (25 ml) y MTBE (25 ml) se calienta a 55 °C durante 14 h. La reacción se filtra a través de Celite y la torta del filtro se lava con MeOH (200 ml) . El filtrado se concentra in vacuo y se somete a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con CHCl3:MeOH:NH4OH concentrado (6.5:3.0:0.5) para dar 285 mg de la sal de amonio del compuesto (a) del subtítulo como una espuma que se puede desmenuzar y 370 mg (32 %) de la sal de amonio del compuesto (b) del subtítulo como una espuma blanca. La sal de amonio del compuesto (a) del subtítulo se recibe en EtOAc (25 ml) y se neutraliza con HCl 2M en Et20 (0.60 ml) . Se agrega agua (25 ml), y las capas fueron separadas. La capa acuosa se extrae con EtOAc (2 x 25 ml), y los extractos orgánicos fueron secados (Na2S0 ), filtrados, y concentrados in vacuo para dar 230 mg (23 %) del compuesto (a) del subtítulo como una espuma blanca que se puede desmenuzar.
Para el compuesto (a) del subtítulo: RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.55 (s, 1H) , 7.34 (s, 1H) , 7.30 (s, 1H), 5.21 (s, 1H), 3.23 (s, 3H) , 1.90-2.10 (m, 3H) , 0.70-0.92 (m, 6H) RMN 13C (75 MHz; CD3OD) : d 175.4, 175.0, 146.6, 145.2, 136.2, 128.1, 127.4, 125.6, 73.6, 44.0, 37.7, 27.4, 22.8 Análisis de CLAR: 96.0 %, > 99 % ee [a]D25 = -85.1° (c = 0.5, MeOH) API-EM (M + l) = 300 m/z Para el compuesto (b) del subtítulo: RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.55 (S, 1H) , 7.34 (s, 1H) , 7.30 (s, 1H), 5.75 (s, 1H), 3.23 (s, 3H) , 2.11 (s, 3H) , 1.90-2.10 (m, 3H), 0.70-0.92 (m, 6H) (v) Ph(3-Cl,5-NMe(3-metilbutanoil) )-(R)- o - (S) CH (OH) C (O) - Aze-Pab (OMe) A una mezcla de P (3-C1, 5-NMe (3-metilbutanoil) ) -(R)- o -(S)CH(OH)C(0)OH (119 mg, 0.40 mmoles; véase el paso (iv) anterior) y H-Aze-Pab (OMe) x 2HC1 (146 mg, 0.44 mmoles; véase Ejemplo 2(iv) anterior) en DMF (5 ml) se agrega PyBOP (227 mg, 0.44 mmoles) y colidina (168 mg, 1.39 mmoles). La solución se agita durante 3 horas a 0 °C bajo nitrógeno. La mezcla se reparte con EtOAc (3 x 30 ml) y H20 (30 ml), se seca (Na2S04), se filtra, y se concentra in vacuo. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con CHCl3:MeOH (15:1) dio 125 mg (58 %) del compuesto del título como una espuma blanca que se puede desmenuzar.
RMN XH (300 MHz; CD3OD, mezcla de los rotámeros): d 7.60 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.42-7.54 (m, 1H) , 7.20-7.50 (m, 4H) , 5.20 y 5.14 (s, 1H), 4.72-4.81 (m, 1H) , 4.30-4.48 (m, 3H) , 3.90-4.20 (m, 2H), 3.80 (s, 3H) , 3.22 (s, 3H) , 2.46-2.72 (m, 2H) , 2.10-2.36 (m, 1H), 1.94-2.10 (m, 2H) , 0.80-0.94 (m, 6H) CL-EM: (M + l) = 545 m/z Ejemplo 24 Ph(3-Cl,5-NMe(ciclopentilcarbonil) )-(R)- o - (S) CH (OH) C (0) - Aze-Pab (OMe) (i) (R, S) -5-P (3-C1, 5-NMe (ciclopentilcarbonil ) ) -2, 2-dimet i 1- 4-oxo-l, 3-dioxolano A una solución del (R, S) -5-Ph (3-C1, 5-NHMe) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano (945 mg, 3.70 mmoles, véase el Ejemplo 23 (i) anterior) y trietilamina (635 mg, 5.86 mmoles) en acetona (20 ml) a 0 °C se agrega por goteo cloruro de ciclopentancarbonilo (776 mg, 5.86 mmoles). La mezcla se agita durante 1 hora, y se reparte entre EtOAc (3 x 30 ml) y H20 (30 ml) . Los extractos orgánicos combinados se lavan con NaHC03 acuoso (30 ml), se secan (Na2S04), se filtran y se concentran in vacuo para dar 1.58 g (> 100%) del compuesto del subtítulo como un aceite amarillo, el cual se utilizó directamente sin purificación.
RMN XH (300 MHz; CDC13) : d 7.50 (s, 1H) , 7.20 (s, 2H) , 5.38 (s, 1H), 3.28 (s, 3H), 2.50-2.60 (m, 1H) , 1.70 (s, 3H) , 1.68 (s, 3H), 1.40-1.90 (m, 8H) (ii) Ph (3-C1, 5-NMe (ciclopentilcarbon.il ) ) - (R, S ) CH (OH) C (0) OH Una mezcla del (R, S) -5-Ph (3-C1, 5- NMe (ciclopentilcarbonil) ) -2, 2-dimetil-4-oxo-l, 3-dioxolano (1.58 g, 5.07 mmoles; véase el paso (i) anterior) y NaOH (2.03 g, 50.7 mmoles) en MeOH (25 ml) se agita 1 h a 25 °C.
La mezcla se concentra in vacuo, se diluye con H20 (30 ml), y se acidifica con HCl 2N (20 ml) . La capa acuosa se extrae con EtOAc (3 x 50 ml), los extractos orgánicos combinados se secan (Na2S04), se filtran y se concentran in vacuo para dar 1.17 g (100%) del compuesto del subtítulo como una espuma blanca, la cual se utilizó directamente sin purificación.
RMN XH (300 MHz; CD30D) : d 7.55 (s, 1H) , 7.32 (s, 2H) , 5.20 (s, 1H), 3.20 (s, 3H), 2.50-2.62 (m 1H) , 1.40-1.80 (m, 8H) . (iii) Ph (3-C1, 5-NMe (ciclopentilcarbonil) ) - (R) - o -(S)CH(OH)C(0)OH (a) y Ph (3-C1, 5-NMe (ciclopentilcarbonil) ) -(S)- o -(R)CH(OAc)C(0)OH (b) Una mezcla del Ph (3-C1, 5-NMe (ciclopentilcarbonil) ) - (R,S)CH(OH)C(0)OH (1.17 g, 3.75 mmoles; véase el paso (ii) anterior) y Lipase PS Amano (600 mg) en acetato de vinilo (25 ml), y MTBE (25 ml) se calienta a 55 °C durante 14 horas. La reacción se filtra a través de Celite y la torta del filtro se lava con MeOH (100 ml) . El filtrado se concentra in vacuo y se somete a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con CHCl3:MeOH:NH4OH concentrado (6.5:3.0:0.5) para dar 336 mg de la sal de amonio del compuesto (b) del subtítulo (a) como una espuma que se puede desmenuzar y 557 mg (50 %) de la sal de amonio del compuesto (b) del subtítulo como una espuma blanca. La sal de amonio del compuesto (a) del subtítulo fue recibida en EtOAc (25 ml), y se neutraliza con HCl 2M en Et20 (0.70 ml) . Se agrega agua (25 ml), y las capas se separan. La capa acuosa se extrae con EtOAc (2 x 25 ml), y los extractos orgánicos se secaron (Na2S04), se filtran, y se concentran para dar 290 mg (29 %) del compuesto del subtítulo (a) como una espuma blanca que se puede desmenuzar.
Para el compuesto (a) del subtítulo: RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.55 (s, 1H) , 7.32 (s, 2H) , 5.20 (s, 1H), 3.20 (s, 3H), 2.50-2.62 (m, 1H) , 1.40-1.80 (m, 8H) RMN 13C (75 MHz; CD3OD) : d 178.8, 175.1, 146.5, 144.9, 136.2, 128.2, 127.5, 125.7, 73.0, 43.4, 38.0, 32.3, 27.3 Análisis de CLAR: 91.9 %, >99 % ee [a]D25 = -77.9° (c = 1.0, MeOH) CL-EM: (M + l) = 312 m/z Para el compuesto (b) del subtítulo: RMN XH (300 MHz; CD3OD) : d 7.55 (s, 1H) , 7.40 (s, 1H) , 7.34 (s, 1H), 5.75 (s, 1H), 3.20 (s, 3H) , 2.50-2.62 (m, 1H) , 2.18 (s, 3H), 1.40-1.80 (m, 8H) (iv) Ph (3-C1, 5-NMe (ciclopentilcarbonil) ) - (R) - o - (S)CH (OH) C (O)Aze-Pab (Ome) A una mezcla del Ph(3-Cl,5-NMe (ciclopentilcarbonil) )-(R,S) CH (OH) C (O) OH (120 mg, 0.39 mmoles; véase el paso (iii) anterior) y H-Aze-Pab (Ome) x 2HC1 (142 mg, 0.42 inmoles; véase el Ejemplo 2(iv) anterior) en DMF (5 ml) se agrega PyBOP (220 mg, 0.42 mmoles) y colidina (161 mg, 1.35 mmoles). La solución se agita durante 6 h a 0 °C bajo nitrógeno. La mezcla se reparte entre EtOAa (3 x 30 ml) y H20 (30 ml), se seca (Na2S04), se filtra, y se concentra in vacuo. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con CHCl3:MeOH (15:1), seguido por cromatografía con EtOAc:EtOH (20:1) dio 85 mg (40 %) del compuesto del título como una espuma blanca que se puede desmenuzar.
RMN XH (300 MHz; CD3OD, mezcla de rotámeros): d 7.60 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.42-7.54 (m, 1H) , 7.20-7.50 (m, 4H) , 5.20 y 5.14 (s, 1H), 4.72-4.81 (m, 1H) , 4.30-4.48 (m, 3H) , 3.90-4.20 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.22 (s, 3H) , 2.46-2.72 (m, 2H) , 2.10-2.36 (m, 1H), 1.40-1.80 (m, 8H) .
API-EM (M + l) = 556 m/z Ejemplo 25 Los compuestos del título de los Ejemplos 1, 3 a 11 y 20 fueron probados en la Prueba A anterior y se encontró que exhiben un valor de IC50IT de menos de 0.5 µM.
Ejemplo 26 Los compuestos del título de los Ejemplos 2, 12, 13, 15, 18, 19 y 21 fueron probados en la Prueba E anterior y se encontró que exhiben una biodisponibilidad oral y/o parenteral en la rata como el inhibidor activo correspondiente (amidina libre) .
Ejemplo 27 Los compuestos del título de los Ejemplos 2, 12 a 19 y 21 fueron probados en la Prueba G anterior y exhibieron la formación del inhibidor activo correspondiente (amidina libre) .
Abreviaturas Ac = acetilo AcOH = ácido acético API = ionización a presión atmosférica (con relación al EM) Aze = azetidin-2-carboxilato AzeOH = ácido azetidin-2-carboxílico Bzl = bencilo Cl = Ionización química (con relación al EM) DIPEA = diisopropiletilamina DMAP = 4- (N,N-dimetilamino) piridina DMF = dimetilformamida DMSO = sulfóxido de dimetilo EDC = clorhidrato de la 1- (3-dimetilaminopropil) -3- etilcarbodiimida Et = etilo éter = éter dietílico EtOAc = acetato de etilo EtOH = etanol h = horas HATU = hexafluorofosfato de O- (azabenzotriazol-1-il) - N, N, N' , N' -tetrametiluronio HBTU = [hexafluorofostato de N,N,N' ,N' -tetrametil-O- (benzotriazol-1-il) uronio] HCl = ácido clorhídrico HCl (g) = cloruro de hidrógeno gaseoso Hex = hexanos HOAc = ácido acético CLAR = cromatografía líquida de alta resolución CL = cromatografía líquida Me = metilo MeOH = metanol EM = espectroscopia de masa MTBE = éter metil terc-butílico Pab = para-amidinobencilamino H-Pab = para-amidinobencilamina PyBOP = hexafluorofosfato de (benzotriazol-1- iloxi) tripirrolidinofosfonio RPLC = cromatografía líquida de alta resolución en fase inversa TA = temperatura ambiente TBTU = [tetrafluoroborato de N,N,N' ,N' -tetrametil-O- (benzotriazol-1-il) uronio TEA = trietilamina Teoc = 2- (trimetilsilil) etoxicarbonilo TFA = ácido trifluoroacético THF = tetrahidrofurano THP = tetrahidropiranilo CCD = cromatografía de capa delgada TMSCN = cianuro de trimetilsililo Z = benciloxicarbonilo Los prefijos n, s, i y t tienen sus significados usuales; normal, secundario, iso y terciario.
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (27)

  1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1 . Un compuesto de la fórmula I , caracterizado porque: R1 representa un substituyente N(R5)R6 o S(0)mR7; R2 y R3 representan independientemente un substituyente opcional seleccionado de halo, alquilo con C?_4 o alcoxi con
  2. C?-4 (estos dos últimos grupos están substituidos opcionalmente por halo) ; Y representa alquileno con C?_3, substituido opcionalmente por alquilo con C?_4, metileno, =0 o hidroxi); R* representa H, OH, OR 8a, C(0)0R >8ßbD o? R 58BcC;.
  3. R5 representa alquilo con C?_6 (substituido opcionalmente por halo) o, junto con R6 y el átomo de nitrógeno al cual R5 y R6 están unidos o fijados, representa un anillo que contiene nitrógeno de 3 a 7 elementos, tal anillo incluye opcionalmente un átomo de oxígeno y/o está substituido opcionalmente con un grupo =0; R6 representa alquilo con C?-6 (substituido opcionalmente por halo), C(0)R9 o, junto con R5 y el átomo de nitrógeno al cual R5 y R6 están unidos o fijados, representa un anillo que contiene nitrógeno de 3 a 7 elementos, tal anillo incluye opcionalmente un átomo de oxígeno y/o está substituido opcionalmente con un grupo =0; o el grupo N(R5)R6 representa el fragmento estructural la,
  4. R6a representa uno o más substituyentes opcionales seleccionados de halo, alquilo con C?_4 y alcoxi con C?-4 (estos dos últimos grupos están substituidos opcionalmente por halo) ; X representa CH o N; m representa 0, 1 o 2; R7 representa H, NH2 o alquilo con C?_6;
  5. R8a y Rßb representan independientemente alquilo con Ci-io, alquilfenilo o arilo con Cß-io, o R8a representa C(R10a) (R10b)OC(0)ORu O C(R10a) (R10b) N (H) C (0) OR12 o C(R10a) (R10b)OC(0)N(H)R12; R8c representa C(R10a) (R10b)OC(0) R11, C (R10a) (R10b)N (H) C (0)0R12 o C(R10a) (R10b)OC(0)N(H)R12; R10a y R10b representan independientemente, en cada caso, H o alquilo con C?_4; R11 representa, en cada caso, arilo con Cß-io, OR12 o alquilo con C?_ (este último grupo está substituido opcionalmente por un substituyente seleccionado de OH, C02H y arilo con C6-?o) ; R12 representa, en cada caso, arilo con Cß-io o alquilo con Ci-ß (este último grupo está substituido opcionalmente por un substituyente seleccionado de OH, C02H y arilo con Ce-io); R9 representa alquilo con C?_8, Het1, arilo con Cß-io o alquilo con C?_4 substituido por arilo con C6-?o; y Het1 representa un anillo heterocíclico de 4 a 12 elementos, tal anillo contiene uno o más heteroátomos seleccionados del oxígeno, nitrógeno y/o azufre, y tal anillo puede estar totalmente saturado, parcialmente saturado o puede ser aromático y/u opcionalmente monocíclico, bicíclico y/o benzo-fusionado; en donde cada grupo de arilo/fenilo y cada grupo Het1 identificado anteriormente está substituido opcionalmente por uno o más grupos de halo, alquilo con C?_4 y/o alcoxi con C?-4 (estos dos últimos grupos están substituidos opcionalmente ellos mismos por uno o más grupos halo) ; o una sal del mismo aceptable farmacéuticamente, siempre que: (a) cuando m representa 1 o 2, entonces R7 no representa H; y (b) cuando m representa 0, entonces R7 no representa NH2. 2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque cuando R5 y R6, junto con el átomo de nitrógeno al cual los mismos están unidos, representa un anillo de 3 a 7 elementos substituido por un grupo =0, el anillo está substituido en un átomo de carbono que está en a con respecto al átomo de nitrógeno. 3. Un compuesto de conformidad con las reivindicación 1 y la reivindicación 2, caracterizado porque R2, si está presente, representa alquilo con C?_4 o alcoxi con C?_4 (estos dos últimos grupos están substituidos opcionalmente por halo) o halo. 4. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque R3 está ya sea ausente o, si está presente, representa alquilo con C?_ lineal o ramificado o halo. 5. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque R3, si está presente, representa un metilo o un grupo cloro.
  6. 6. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 4 o la reivindicación 5, caracterizado porque el substituyente (si está presente) está en la posición 2 con relación al grupo -CH2- al cual el anillo de fenilo también está fijado.
  7. 7. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque R1 representa N(R5) (R6) .
  8. 8. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3 a 7, caracterizado porque R5 representa alquilo con C?-6 lineal, ramificado o cíclico o, junto con R6 y el átomo de nitrógeno al cual R5 y R6 están unidos o fijados, representa un anillo que contiene nitrógeno de 4 a 6 elementos, substituido opcionalmente con un grupo =0.
  9. 9. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque R5 representa alquilo con C?_4 o, junto con R6 y el átomo de nitrógeno al cual R5 y R6 están unidos o fijados, representa un anillo que contiene nitrógeno de 5 o 6 elementos, substituido opcionalmente con un grupo =0.
  10. 10. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3 a 9, caracterizado porque R6 representa alquilo con C?-6 lineal, ramificado o cíclico, C(0) -alquilo con C?_6 o, junto con R5 y el átomo de nitrógeno al cual R y R están unidos o fijados, representa un anillo que contiene nitrógeno de 4 a 6 elementos, substituido opcionalmente con un grupo =0.
  11. 11. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque R6 representa metilo, C(0) -alquilo con C?_6 o, junto con R5 y el átomo de nitrógeno al cual R5 y R6 están unidos o fijados, representa un anillo que contiene nitrógeno de 5 o 6 elementos, substituido opcionalmente con un grupo =0.
  12. 12. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3 a 6, caracterizado porque R7 representa alquilo con C?-6 lineal, ramificado o cíclico.
  13. 13. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque R1 está unido o fijado al anillo de fenilo en la posición 3, con relación al grupo -CH(OH)- el cual el anillo de fenilo también está fijado.
  14. 14. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque, cuando R2 está presente, el mismo está fijado al anillo de fenilo en la posición 5, con relación al grupo -CH(OH)- al cual el anillo de fenilo también está fijado.
  15. 15. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque, cuando R4 representa OR8a, entonces R8a representa alquilo con C?_6 lineal o ramificado, alquilo cíclico con C4_5 (estos dos últimos grupos están interrumpidos opcionalmente por oxígeno) , o fenilo o alquilfenilo con C?_2 (estos dos últimos grupos están substituidos opcionalmente como se definió en la reivindicación 1), o R8a representa CH2OC(0)Ru, en la cual Ru representa fenilo, alquilo con C?-6 lineal, ramificado o cíclico (este último grupo está substituido opcionalmente por un substituyente seleccionado de OH, C02H y fenilo, u OR12 (en donde R12 representa fenilo o alquilo con C?_6 lineal, ramificado o cíclico (este último grupo está substituido opcionalmente por un substituyente seleccionado de OH, C02H y fenilo) ) .
  16. 16. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado porque, cuando R4 representa C(0)0R8 , entonces R8b representa fenilo o alquilfenilo con C?_2 lineal o ramificado (estos dos últimos grupos están substituidos opcionalmente como se definió en la reivindicación 1).
  17. 17. Un compuesto de la fórmula I, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el fragmento está en la configuración S.
  18. 18. Un compuesto de la fórmula I, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el fragmento está en la configuración R.
  19. 19. Una formulación farmacéutica, caracterizada porque incluye un compuesto como se definió en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o una sal del mismo aceptable farmacéuticamente, mezclado con un auxiliar, diluyente o portador aceptable farmacéuticamente.
  20. 20. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o una sal del mismo aceptable farmacéuticamente, para su uso como una substancia farmacéutica.
  21. 21. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o una sal del mismo aceptable farmacéuticamente, para su uso en el tratamiento de una condición en donde la inhibición de la trombina es requerida.
  22. 22. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o una sal del mismo aceptable farmacéuticamente, para su uso en el tratamiento de la trombosis.
  23. 23. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o una sal del mismo aceptable farmacéuticamente, para su uso como un anticoagulante.
  24. 24. El uso de un compuesto como se definió en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o una sal del mismo aceptable farmacéuticamente, como un ingrediente activo en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una condición en donde se requiere la inhibición de la trombina.
  25. 25. El uso de conformidad con la reivindicación 24, en donde la condición es la trombosis.
  26. 26. El uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o una sal del mismo aceptable farmacéuticamente, como el ingrediente activo en la fabricación de un anticoagulante.
  27. 27. Un proceso para la preparación de un compuesto de la fórmula I, caracterizado porque comprende: (i) la unión de un compuesto de la fórmula II, en donde R1 y R2 son como se definieron en la reivindicación 1 con un compuesto de la fórmula III, en donde Y, R3 y R4 son como se definieron en la Reivindicación 1; (ii) la unión de un compuesto de la fórmula IV, en donde R1, R2 e Y son como se definieron en la Reivindicación 1 con un compuesto de la fórmula V, en donde R3 y R4 son como se definieron en la reivindicación i; (iii) para los compuestos de la fórmula I en la cual R4 representa OH u OR8a, la reacción de un compuesto de la fórmula VI, en donde R1, R2, Y y R3 son como se definieron en la Reivindicación 1, con un compuesto de la fórmula VII, H2NORa (VII) en donde Ra representa H o R8a y R8a son como se definieron aquí anteriormente, opcionalmente por el pretratamiento del compuesto de la fórmula VI con HCl gaseoso, en la presencia de un alcohol de alquilo inferior, para formar un compuesto de la fórmula VIII, VIII en donde Rc representa alquilo inferior y R~, R2, Y y R son como se definieron en la reivindicación 1; (iv) para los compuestos de la fórmula I en la cual R4 representa OH u 0R8a, la reacción de un compuesto que corresponde a un compuesto de la fórmula I, en la cual, en lugar de R4, un grupo protector C(0)ORbl está presente, en la cual Rbl representa un grupo tal como el 2-trimetilsililetilo, alquilo con Ci-e o alquilfenilo, con un compuesto de la fórmula VII como se definió aquí anteriormente, (v) para los compuestos de la fórmula I en la cual R4 representa C(0)0R8b, la reacción de un compuesto de la fórmula I en la cual R4 representa H con un compuesto de la fórmula IX, en donde L1 representa un grupo de separación adecuado, y R8b es como se definió en la reivindicación 1; (vi) para los compuestos de la formula I en los cuales R4 representa OR8a, la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula I en la cual R4 representa OH con un compuesto de la fórmula IXA, L:-R8 IXA en donde R8a es como se definió en la reivindicación 1 y L* es como se definió aquí anteriormente; (vii) para los compuestos de la fórmula I en los cuales R4 representa R8c, en donde R8c representa C (R10a) (R10b) OC (0) R o C(R10a) (R10b)OC(0)N(H)R12, la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula IXB, en donde R1 , R2, Y, R3, R10a y R10t, son como se definieron en la reivindicación 1, con un compuesto de la fórmula IXC, LC(0)R 13 IXC en donde R13 representa R11 o N(H)R12, y R11 y R12 son como se definieron en la reivindicación 1 y L1 es como se definió anteriormente ; (viii) para los compuestos de la fórmula I en la cual R4 representa R8c, la reacción de un compuesto correspondiente de la fórmula I en la cual R4 representa H con un compuesto de la fórmula IXD, en donde R14 representa OC(0)R , NHC(0)OR12 u OC (O) N (H) R12, y R10a, R10b, R11 y R:2 son como se definieron en la reivindicación 1 y L1 es como se definió anteriormente; (ix) para los compuestos de la fórmula I en la cual R1 incluye un grupo S (O) o un grupo S(0)2, la oxidación de un compuesto correspondiente de la fórmula I en donde R1 incluye un grupo S ; (x) la desprotección de un derivado protegido de un compuesto de la fórmula I como se definió en la reivindicación 1; o (xi) la introducción o la interconversión de un substituyente sobre un anillo aromático, no aromático, carbocíclico o heterocíclico en un compuesto de la fórmula I _ como se definió en la reivindicación 1. INHIBIDORES DE LA TROMBINO¬ RESUMEN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona compuestos de la fórmula (I) en donde R1, R2, Y, R3 y R4 tienen los significados dados en la descripción, los cuales son útiles como, o como los profármacos de, los inhibidores competitivos de las proteasas semejantes a la tripsina, tales como la trombina, y en particular en el tratamiento de las condiciones en donde la inhibición de la trombina es requerida (por ejemplo la trombosis) o como anticoagulantes.
MXPA/A/2001/007004A 1999-01-13 2001-07-10 Nuevos derivados de amidinobencilamina y su uso como inhibidores de la trombina MXPA01007004A (es)

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