ES2311538T3 - Nuevos derivados amidino y su uso como inhibidores de trombina. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de fórmula I, (Ver fórmula) en la que: R 1 representa un grupo C(O)CH3 o un grupo alquilo de C1 - 3; e Y representa un grupo -CH2- o un grupo CH2)2-, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
Description
Nuevos derivados amidino y su uso como
inhibidores de trombina.
Esta invención se refiere a nuevos compuestos
farmacéuticamente útiles, en particular a compuestos que son, y/o
compuestos que son metabolizados a compuestos que son, agentes
inhibidores competitivos de serina proteasas semejantes a la
tripsina, especialmente la trombina, a su uso como medicamentos, a
composiciones farmacéuticas que los contienen y a rutas sintéticas
para su producción.
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La coagulación de la sangre es el procedimiento
clave implicado tanto en la hemostasis (es decir, la prevención de
la pérdida de sangre por un vaso dañado) como en la trombosis (es
decir, la formación de un coágulo de sangre en un vaso sanguíneo,
que algunas veces conduce a la obstrucción).
La coagulación es el resultado de una serie
compleja de reacciones enzimáticas. Una de las últimas etapas en
esta serie de reacciones es la conversión del proenzima protrombina
al enzima activo trombina.
Se sabe que la trombina juega un papel central
en la coagulación. Activa las plaquetas, lo que conduce a la
agregación de las plaquetas, convierte el fibrinógeno en monómeros
de fibrina, los cuales polimerizan espontáneamente para dar
polímeros de fibrina, y activa el factor XIII, el cual a su vez
reticula los polímeros para formar fibrina insoluble. Además, la
trombina activa el factor V y el factor VIII lo que conduce a una
generación de trombina a partir de protrombina por
"retroalimentación positiva".
Inhibiendo la agregación de las plaquetas y la
formación y reticulación de la fibrina, sería de esperar que los
agentes inhibidores efectivos de la trombina exhibieran actividad
antitrombótica. Además, sería de esperar que la actividad
antitrombótica aumentara mediante la inhibición efectiva del
mecanismo de retroalimentación positiva.
\vskip1.000000\baselineskip
El desarrollo temprano de agentes inhibidores de
la trombina de bajo peso molecular ha sido descrito por Claesson en
Blood Coagul. Fibrinol. (1994) 5, 411.
Blombäck et al (en J. Clin. Lab. Invest.
24, suppl. 107, 59, (1969)) informaron sobre agentes inhibidores de
la trombina basados en la secuencia de aminoácidos situada alrededor
del sitio de escisión de la cadena A\alpha del fibrinógeno. De la
secuencia de aminoácidos discutida, estos autores sugirieron que la
secuencia tripéptida Phe-Val-Arg
(P9-P2-P1, de aquí en adelante
denominada la secuencia P3-P2-P)
sería el agente inhibidor más efectivo.
Los agentes inhibidores de la trombina basados
en derivados dipeptidílicos con una
\alpha,\omega-aminoalquil guanidina en la
posición P1son conocidos por la patente de EE.UU. Nº 4.346.078 y la
solicitud de patente internacional WO 93/11152. También se ha
informado de derivados dipeptidílicos similares, estructuralmente
relacionados. Por ejemplo, la solicitud de patente internacional WO
94/29336 describe compuestos con, por ejemplo, aminometil
benzamidinas, aminoalquil amidinas cíclicas y aminoalquil guanidinas
cíclicas en la posición P1 (la solicitud de patente internacional
WO 97/23499 describe profármacos de ciertos de estos compuestos); La
solicitud de patente europea 0 648 780, describe compuestos con,
por ejemplo, aminoalquil guanidinas cíclicas en la posición P1.
Los agentes inhibidores de la trombina basados
en derivados peptidílicos, que también tienen aminoalquil guanidinas
cíclicas (por ejemplo, 3 ó
4-aminometil-1-amidino-piperidina)
en la posición P1 son conocidos por las solicitudes de patente
europea 0 468 231, 0 559 046 y 0 641 779.
Los agentes inhibidores de la trombina basados
en derivados tripeptidílicos con arginina aldehído en la posición P1
fueron descritos en primer lugar en la solicitud de patente europea
0 185 390.
Más recientemente, se ha informado de derivados
peptidílicos basados en arginina aldehído, modificados en la
posición P3. Por ejemplo, la solicitud de patente internacional WO
93/18060 describe hidroxi ácidos, la solicitud de patente europea 0
526 877 des-amino ácidos, y la solicitud de patente
europea 0 542 525 ácidos O-metil mandélicos en la
posición P3.
También son conocidos los agentes inhibidores de
las serina proteasas (por ejemplo, la trombina) basados en cetonas
electrófílas en la posición P1. Por ejemplo, la solicitud de patente
europea 0 195 212 describe peptidil \alpha-ceto
ésteres y amidas, la solicitud de patente europea 0 362 002
fluoroalquilamida cetonas, la solicitud de patente europea 0 364
344 \alpha,\beta,\delta-tricetocompuestos y la
solicitud de patente europea 0 530 167 derivados
\alpha-alcoxi cetona de arginina en la posición
P1.
\newpage
Otros agentes inhibidores de serina proteasas
estructuralmente diferentes, semejantes a la tripsina basados en
derivados de arginina con ácido borónico en el extremo
C-terminal y sus análogos de isotiouronio son
conocidos por la solicitud de patente europea 0 293 881.
Más recientemente, los agentes inhibidores de la
trombina basados en derivados peptidílicos han sido descritos en la
solicitud de patente europea 0 669 317 y en la solicitudes de
patente internacionales WO 95/35309, WO 95/23609, WO 96/25426, WO
97/02284, WO 97/46577, WO 96/32110, WO 96/31504, WO 96/03374, WO
98/06740, WO 97/49404, WO 98/57932, WO 99/29664 y WO 00/35869.
En particular, los documentos WO 97/02284 y WO
00/42059 describen los agentes inhibidores de la trombina con ácidos
mandélicos sustituidos en la posición P3.
Sin embargo, permanece una necesidad de agentes
inhibidores efectivos de serina proteasas semejantes a la tripsina,
tales como la trombina. También hay una necesidad de compuestos que
tienen un perfil farmacocinético favorable (por ejemplo, bajo
aclaramiento) y son selectivos para inhibir la trombina con respecto
a otras serina proteasas, en particular las implicadas en la
hemostatis. Sería de esperar que los compuestos que exhiben
actividad inhibidora competitiva hacia la trombina fueran
especialmente útiles como anticoagulantes y por lo tanto en el
tratamiento terapéutico de la trombosis y trastornos
relacionados.
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Según la invención se proporcionan compuestos de
fórmula I,
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
R^{1} representa un grupo
C(O)CH_{3} o un grupo alquilo de
C_{1-3}; y,
Y representa un grupo -CH_{2}- o un grupo
CH_{2})_{2}-,
y sales farmacéuticamente aceptables de los
mismos.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos preferidos de fórmula I incluyen
aquellos en los que:
R^{1} representa un grupo
C(O)CH_{3}, un grupo metilo o un grupo etilo;
Y representa un grupo -CH_{2}-.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos particularmente preferidos de
fórmula I incluyen
Ph(3-Cl)(S-NHMe)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-NHAc)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab.
\vskip1.000000\baselineskip
Las abreviaturas se listan al final de esta
memoria descriptiva.
Los compuestos de fórmula I pueden fabricarse
según técnicas bien conocidas por los expertos en la técnica, por
ejemplo, como se describe de aquí en adelante.
\newpage
Según otro aspecto de la invención se
proporciona un procedimiento para la preparación de un compuesto de
fórmula I, que comprende:
(i) la condensación de un compuesto de fórmula
II
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{1} es como se
definió antes en la presente memoria, con un compuesto de fórmula
III,
en la que Y es como se definió
antes en la presente memoria, por ejemplo, en presencia de un agente
de condensación (por ejemplo, cloruro de oxalilo en DMF, EDC, DCC,
HBTU, HATU, PyBOP o TBTU), una base apropiada (por ejemplo,
piridina, DMAP, TEA, 2,4,6-colidina o DIPEA) y un
disolvente orgánico adecuado (por ejemplo, diclorometano,
acetonitrilo, EtOAc o
DMF);
\vskip1.000000\baselineskip
(ii) la condensación de un compuesto de fórmula
IV,
en la que R^{1} e Y son como se
definieron anteriormente en la presente memoria, con
para-amidinobencilamina, por ejemplo, en condiciones que se
describen en la etapa (i) anterior;
o
Los compuestos de fórmula I pueden prepararse
por medio de la desprotección de un compuesto correspondiente de
fórmula XV, como se define de aquí en adelante, cuya desprotección
comprende la separación del grupo C(O)OR^{x}, en el
que R^{x} es como se define de aquí en adelante, a partir del
compuesto de fórmula XV, por ejemplo, en condiciones conocidas por
los expertos en la técnica (por ejemplo, por reacción con QF o TFA
(por ejemplo, como se describe de aquí en adelante)).
Además, los compuestos de fórmula I pueden
prepararse por medio de la desprotección de un compuesto
correspondiente de fórmula Ia, como se define de aquí en adelante,
en el que R^{2} representa un grupo OR^{3}, en el que R^{2} y
R^{3} son como se define de aquí en adelante, por ejemplo, por
hidrogenación en presencia de un catalizador apropiado (por
ejemplo, un catalizador metálico soportado tal como Pd/C (por
ejemplo, Pd al 10% (p/p)/C)) y un disolvente apropiado (por
ejemplo, un alquilo inferior (por ejemplo, de
C_{1-6}) alcohol tal como etanol), y
opcionalmente en presencia de un ácido adecuado (por ejemplo, ácido
acético).
Los compuestos de fórmula II están disponibles
usando técnicas conocidas y/o estándares.
\newpage
Por ejemplo, los compuestos de fórmula II pueden
prepararse por reacción de un aldehído de fórmula V,
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{1} es como se
definió antes en la presente memoria,
con:
(a) un compuesto de fórmula VI,
VIR''CN
en la que R'' representa un átomo
de H o un grupo (CH_{3})_{3}Si, por ejemplo, a
temperatura ambiente o elevada (por ejemplo, por debajo de 100ºC)
en presencia de un disolvente orgánico adecuado (por ejemplo,
cloroformo o cloruro de metileno) y, si es necesario, en presencia
de una base adecuada (por ejemplo, TEA) y/o un sistema catalizador
apropiado (por ejemplo, cloruro de bencilamonio o yoduro de cinc),
seguido por hidrólisis en condiciones que son bien conocidas por los
expertos en la técnica (por ejemplo, como se describe de aquí en
adelante);
(b) NaCN o KCN, por ejemplo, en presencia de
NaHSO_{3} y agua, seguida por hidrólisis;
(c) cloroformo, por ejemplo, a temperatura
elevada (por ejemplo, por encima de la temperatura ambiente pero
por debajo de 100ºC) en presencia de un disolvente orgánico adecuado
(por ejemplo, cloroformo) y, si es necesario, en presencia de un
sistema catalizador apropiado (por ejemplo, cloruro de
bencilamonio), seguido por hidrólisis;
(d) un compuesto de fórmula VII,
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que M representa Mg o Li,
seguido por escisión oxidante (por ejemplo, ozonolisis o catalizada
por osmio o rutenio) en condiciones que son bien conocidas por los
expertos en la técnica;
o
(e) tris(metiltio)metano en
condiciones que son bien conocidas por los expertos en la técnica,
seguido por hidrólisis en presencia de, por ejemplo, HgO y
HBF_{4}.
Los compuestos de fórmula II pueden prepararse
alternativamente a partir de
Ph(3-Cl)(5-NH_{2})-CH(OH)C(O)OH,
por ejemplo, como se describe de aquí en adelante para los
compuestos de fórmula II en la que R^{1} representa un grupo
C(O)CH_{3} o un grupo metilo.
Las formas enantiómeras del compuesto de fórmula
II (es decir, de los compuestos que tienen diferentes
configuraciones de sustituyentes alrededor del átomo de carbono
\alpha al grupo CO_{2}H) pueden separarse mediante una etapa de
derivatización enantioespecífica. Esto puede lograrse, por ejemplo,
mediante un procedimiento enzimático. Tales procedimientos
enzimáticos incluyen, por ejemplo, transesterificación del grupo
\alpha-OH entre la temperatura ambiente y la de
reflujo (por ejemplo, entre 45 y 65ºC) en presencia de una enzima
adecuada (por ejemplo, Lipasa PS Amano), un éster apropiado (por
ejemplo, acetato de vinilo) y un disolvente adecuado (por ejemplo,
un grupo metilo terc-butil éter). El isómero
derivatizado puede entonces separarse del isómero sin reaccionar por
técnicas de separación convencionales (por ejemplo,
cromatografía).
Los grupos añadidos a los compuestos de fórmula
II en tal etapa de derivatización pueden separarse antes de
cualquier reacción posterior o en cualquier etapa posterior en la
síntesis de compuestos de fórmula I. Los grupos adicionales pueden
separarse usando técnicas convencionales (por ejemplo, para ésteres
del grupo \alpha-OH, hidrólisis en condiciones
conocidas por los expertos en la técnica (por ejemplo, entre
temperatura ambiente y de reflujo en presencia de una base adecuada
(por ejemplo, NaOH) y un disolvente apropiado (por ejemplo, MeOH,
agua o sus mezclas).
\newpage
Los compuestos de fórmula IV pueden prepararse
por condensación con un compuesto de fórmula II, como se definió
antes en la presente memoria, con un compuesto de fórmula VIII,
en la que Y es como se definió
antes en la presente memoria, por ejemplo, en condiciones similares
a las descritas en la presente memoria para la preparación de
compuestos de fórmula
I.
Los compuestos de fórmula V están disponibles
usando técnicas conocidas y/o estándares. Por ejemplo, pueden
prepararse por:
(i) reducción de un compuesto de fórmula X,
en la que R^{1} es como se
definió antes en la presente memoria, o uno de sus derivados
protegidos, en presencia de un agente reductor adecuado (por
ejemplo, DIBAL-H);
u
(ii) oxidación de un compuesto de fórmula
XI,
en la que R^{1} es como se
definió antes en la presente memoria, o uno de sus derivados
protegidos, en presencia de un agente oxidante adecuado (por
ejemplo, MnO_{2}, clorocromato de piridinio o una combinación de
DMSO y cloruro de
oxalilo).
Los compuestos de las fórmulas III, VI, VII,
VIII, X y XI están comercialmente disponibles, son conocidos en la
bibliografía, o pueden obtenerse por analogía con los procedimientos
descritos en la presente memoria, o por procedimientos sintéticos
convencionales, según técnicas estándares, a partir de materiales de
partida fácilmente disponibles usando reactivos y condiciones de
reacción apropiadas (por ejemplo, como se describe de aquí en
adelante).
Los compuestos de fórmula I pueden aislarse de
sus mezclas de reacción usando técnicas convencionales.
Los compuestos que pueden actuar como
profármacos de los compuestos de fórmula I que pueden mencionarse
incluyen compuestos de fórmula Ia,
en la
que
R^{2} representa un grupo OR^{3} o un grupo
C(O)OR^{4};
R^{3} representa un átomo de H, un grupo
alquilo de C_{1-10}, un grupo alquilo de
C_{1-3}-arilo o un grupo
alquiloxi de C_{1-3}-arilo (las
partes alquilo de los dos últimos grupos están opcionalmente
interrumpidas por uno o más átomos de oxígeno, y las partes arilo
de los dos últimos grupos están opcionalmente sustituidas por uno o
más sustituyentes seleccionados de un resto halo, un grupo fenilo,
un grupo metilo o un grupo metoxi, los cuales tres últimos grupos
también están opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes
halo);
R^{4} representa un grupo alquilo de
C_{1-10} (grupo el último que está opcionalmente
interrumpido por uno o más átomos de oxígeno), o un grupo alquilo
de C_{1-3}-arilo o un grupo
alquiloxi de C_{1-3}-arilo (las
partes alquilo de los dos últimos grupos están opcionalmente
interrumpidas por uno o más átomos de oxígeno, y las partes arilo
de los dos últimos grupos están opcionalmente sustituidas por uno o
más sustituyentes seleccionados de un resto halo, un grupo fenilo,
un grupo metilo o un grupo metoxi, los cuales tres últimos grupos
también están opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes
halo); y
R^{1} e Y son como se definieron anteriormente
en la presente memoria,
y sales farmacéuticamente
aceptables de los
mismos.
Los grupos alquiloxiarilo que pueden representar
R^{3} y R^{4} comprenden un grupo alquilo y un grupo arilo
unidos por medio de un átomo de oxígeno. Los grupos alquilarilo y
alquiloxiarilo están unidos al resto de la molécula vía la parte
alquilo de esos grupos, parte alquilo que puede (si hay un número
suficiente (es decir, tres) de átomos de carbono) ser de cadena
ramificada. Las partes arilo de los grupos alquilarilo y
alquiloxiarilo que pueden representar R^{3} y R^{4} incluyen
grupos carbocíclicos y heterocíclicos aromáticos (heteroarilo),
tales como los grupos fenilo, naftilo, piridinilo, oxazolilo,
isoxazolilo, tiadiazolilo (por ejemplo,
1,2,3-tiadiazolilo), indolilo y benzofuranilo y los
grupos semejantes.
Los grupos alquilo que pueden representar
R^{3} y R^{4} pueden ser de cadena lineal o, cuando hay un
número suficiente (es decir, un mínimo de tres) de átomos de
carbono, de cadena ramificada y/o cíclica. Además, cuando hay un
número suficiente (es decir, un mínimo de cuatro) de átomos de
carbono, tales alquilo de grupos también pueden ser parte
cíclicos/acíclicos. Tales alquilo de grupos también pueden ser
saturados o, cuando hay un número suficiente (es decir, un mínimo de
dos) de átomos de carbono, insaturados.
Los grupos halo con los cuales pueden estar
sustituidos R^{3} y R^{4} incluyen fluoro, cloro, bromo y
yodo.
Cuando R^{2} representa un grupo
C(O)OR^{4}, los grupos R^{4} preferidos
incluyen:
(a) grupos alquilo de C_{3-6}
lineales, ramificados o cíclico, por ejemplo, un grupo cicloalquilo
de C_{4-6};
(b) grupos alquilo de
C_{1-2}-arilo, tales como el grupo
bencilo, opcionalmente sustituidos como se indicó antes en la
presente memoria.
Los compuestos de fórmula Ia preferidos incluyen
aquellos en los que R^{2} representa un grupo OR^{3}.
Cuando R^{2} representa un grupo OR^{3}, los
grupos R^{3} preferidos incluyen:
(a) un átomo de H;
(b) un grupo alquilo de
C_{1-8} (por ejemplo, de
C_{1-6}) no sustituido, lineal, ramificado o
cíclico, tal como un grupo alquilo lineal de
C_{1-3} (por ejemplo, un grupo metilo, un grupo
etilo o un grupo i-propilo), un grupo alquilo ramificado de
C_{3-8} (por ejemplo, un grupo i-butilo) o
un grupo alquilo cíclico de C_{4-7} (por ejemplo,
un grupo ciclobutilo o un grupo ciclohexilo);
(c) un grupo alquiloxi de
C_{1-3}-fenilo (por ejemplo, un
grupo alquiloxi de C_{2}-fenilo), el grupo fenilo
del cual está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes
como se indicó antes en la presente memoria (por ejemplo, un grupo
trifluorometilo);
(d) un grupo alquilo de
C_{1-2}-arilo (por ejemplo, un
grupo metilarilo), en el que el grupo arilo es un grupo fenilo,
piridinilo, isoxazolilo o tiadiazolilo, cuatro últimos grupos que
están opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes como se
indicó antes en la presente memoria (por ejemplo, un grupo metoxi,
un grupo metilo, un átomo de bromo y/o un átomo de cloro).
Los compuestos de fórmula Ia preferidos incluyen
aquellos en los que R^{2} representa un grupo OR^{3} y R^{3}
representa:
(i) un grupo alquilo de
C_{1-6} (por ejemplo, de
C_{1-4}) lineal o cíclico (como sea apropiado),
tal como un grupo metilo, un grupo un grupo etilo, un grupo un
grupo i-propilo, o un grupo ciclohexilo; o
(ii) un grupo metilarilo, en el que el grupo
arilo es un grupo fenilo o un grupo isoxazolilo, dos últimos grupos
que están opcionalmente sustituidos en la parte arilo por un
sustituyente seleccionado de un grupo metoxi, un grupo metilo y un
átomo de bromo (por ejemplo, un grupo
4-metilbencilo, un grupo
3-metoxibencilo, un grupo
2-bromobencilo o un grupo
5-metil-3-isoxazolilo).
Los compuestos de fórmula Ia pueden prepararse
por uno o más de los siguientes métodos:
(a) la condensación de un compuesto de fórmula
II como se definió antes en la presente memoria con un compuesto de
fórmula XII,
en la que Y e R^{2} son como se
definieron anteriormente en la presente memoria, por ejemplo, en
condiciones similares a las descritas antes en la presente memoria
para la síntesis de compuestos de fórmula
I;
\vskip1.000000\baselineskip
(b) la condensación de un compuesto de fórmula
IV, como se definió antes en la presente memoria, con un compuesto
de fórmula XIII,
en la que R^{2} es como se
definió antes en la presente memoria, por ejemplo, en condiciones
similares a las descritas antes en la presente memoria para la
síntesis de compuestos de fórmula
I;
\vskip1.000000\baselineskip
(c) para los compuestos de fórmula Ia en la que
R^{2} representa un grupo OH, reacción de un compuesto
correspondiente de fórmula IV,
en la que R^{1} e Y son como se
definieron anteriormente en la presente memoria, con hidroxilamina,
por ejemplo, en condiciones conocidas por los expertos en la
técnica;
\vskip1.000000\baselineskip
(d) para los compuestos de fórmula Ia en la que
R^{2} representa un grupo OR^{3}, reacción de un derivado
protegido de un compuesto correspondiente de fórmula I que, por
ejemplo, es un compuesto de fórmula XV,
en la que R^{x} representa, por
ejemplo, un grupo
-CH_{2}CH_{2}-Si(CH_{3})_{3} o
un grupo bencilo, y R^{1} e Y son como se definieron anteriormente
en la presente memoria, o uno de sus tautómeros, con un compuesto de
fórmula
XVI,
XVIR^{3}ONH_{2}
en la que R^{3} es como se
definió antes en la presente memoria, o una de sus sales de adición
de ácidos, por ejemplo, entre temperatura ambiente y de reflujo en
presencia de un disolvente orgánico apropiado (por ejemplo, THF,
CH_{3}CN, DMF o DMSO), seguido por la separación del grupo
-C(O)OR^{x} en condiciones conocidas por los
expertos en la técnica (por ejemplo, por reacción con QF o TFA (por
ejemplo, como se describe de aquí en
adelante));
(e) para los compuestos de fórmula Ia en la que
R^{2} representa un grupo COOR^{4}, reacción de un compuesto
correspondiente de fórmula I, como se definió antes en la presente
memoria, con un compuesto de fórmula XVII,
XVIIL^{1}COOR^{4}
en la que L^{1} representa un
grupo saliente adecuado, tal como un resto halo, y R^{4} es como
se definió antes en la presente memoria, por ejemplo, a o alrededor
de temperatura ambiente en presencia de una base adecuada (por
ejemplo, NaOH, por ejemplo, en disolución acuosa) y un disolvente
orgánico apropiado (por ejemplo, cloruro de metileno);
o
(f) para los compuestos de fórmula Ia en la que
R^{2} representa un grupo OCH_{3} o un grupo OCH_{2}CH_{3},
reacción de un compuesto correspondiente de fórmula Ia en la que
R^{2} representa OH con sulfato de dimetilo o sulfato de dietilo,
respectivamente, por ejemplo, en presencia de una base adecuada (por
ejemplo, un hidróxido de un metal alcalino tal como KOH (por
ejemplo, en disolución acuosa a, por ejemplo, 50% en peso)) y un
catalizador apropiado (por ejemplo, un haluro de amonio cuaternario
como cloruro de benciltrimetilamonio (por ejemplo, en disolución de
CH_{2}Cl_{2} o THF a, por ejemplo, 10% en peso)).
Los compuestos de fórmula XIV y XV pueden
prepararse mediante la condensación de un compuesto correspondiente
de fórmula II con, respectivamente, un compuesto de fórmula
XVIII,
en la que Y es como se definió
antes en la presente memoria, o un compuesto de fórmula
XIX,
en la que Y e R^{x} son como se
definieron anteriormente en la presente memoria, por ejemplo, en
cada caso en condiciones similares a las descritas antes en la
presente memoria para la síntesis de compuestos de fórmula
I.
Los compuestos de fórmula XIV y XV pueden
prepararse alternativamente por condensación de un compuesto
correspondiente de fórmula IV con, respectivamente,
para-cianobencilamina, o un compuesto de fórmula
XX,
en la que R^{x} es como se
definió anteriormente en la presente memoria, por ejemplo, en cada
caso en condiciones similares a las descritas antes en la presente
memoria para la síntesis de compuestos de fórmula
I.
\newpage
Los compuestos de fórmula XV pueden prepararse
alternativamente por reacción de un compuesto correspondiente de
fórmula XIV con hidroxilamina en condiciones conocidas por los
expertos en la técnica, seguido por:
(i) reducción de la hidroxiamidina resultante en
condiciones conocidas por los expertos en la técnica (por ejemplo,
por hidrogenación catalítica); y a continuación
(ii) reacción del compuesto resultante de
fórmula I con un compuesto correspondiente a un compuesto de fórmula
XVII en la cual, en lugar de R^{4}, está presente el grupo
R^{x}, en el que R^{x} es como se definió antes en la presente
memoria, por ejemplo, en condiciones descritas antes con respecto a
la preparación de compuestos de fórmula Ia.
Los compuestos de las fórmulas XII, XVIII y XIX
pueden prepararse mediante la condensación de un compuesto
correspondiente de fórmula VIII, como se definió antes en la
presente memoria, con, respectivamente, un compuesto de fórmula
XIII como se definió antes en la presente memoria,
para-cianobencilamina, o un compuesto de fórmula XX
como se definió antes en la presente memoria, por ejemplo en cada
caso en condiciones similares a las descritas antes en la presente
memoria para la síntesis de compuestos de fórmula I.
Los compuestos de las fórmulas XIII, XVI, XVII y
XX están comercialmente disponibles, son conocidos en la
bibliografía, o pueden obtenerse por analogía con los procedimientos
descritos en la presente memoria, o por procedimientos sintéticos
convencionales, según técnicas estándares, a partir de materiales de
partida fácilmente disponibles usando reactivos y condiciones de
reacción apropiadas (por ejemplo, como se describe de aquí en
adelante).
Los compuestos de fórmula Ia pueden aislarse de
sus mezclas de reacción usando técnicas convencionales.
De aquí en adelante, los compuestos de fórmula I
y Ia, como se definieron antes, y sus sales, se denominan "los
compuestos de la invención".
Los compuestos de la invención pueden exhibir
tautomerismo. Todas las formas tautómeras y sus mezclas están
incluidas dentro del alcance de la invención. Las formas tautómeras
particulares que pueden mencionarse incluyen las conectadas con la
posición del doble enlace en la funcionalidad amidina en un
compuesto de fórmula Ia, y la posición del sustituyente R^{2}.
Los compuestos de la invención también contienen
dos o más átomos de carbono asimétricos y por lo tanto pueden
exhibir isomería óptica y/o diastereoisomerismo. Los
diastereoisómeros pueden separarse usando técnicas convencionales,
por ejemplo, cromatografía o cristalización fraccionada. Los
diversos estereoisómeros pueden aislarse por separación de una
mezcla racémica u otra mezcla de los compuestos usando técnicas
convencionales, por ejemplo, cristalización fraccionada o HPLC.
Alternativamente, los isómeros ópticos deseados pueden fabricarse
por reacción de los materiales de partida apropiados ópticamente
activos en condiciones que no provoquen racemización o
epimerización, o por derivatización, por ejemplo, con un ácido
homoquiral seguido por separación de los derivados diastereómeros
por medios convencionales (por ejemplo, HPLC, cromatografía sobre
sílice). Todos los estereoisómeros están incluidos dentro del
alcance de la invención.
Los compuestos de la invención en los que el
fragmento
está en la configuración S son los
preferidos.
Los compuestos de la invención en los que el
fragmento
está en la configuración R
son los
preferidos.
Las líneas onduladas de los enlaces en los
fragmentos anteriores significan las posiciones de los enlaces de
los fragmentos.
Así, los compuestos de la invención
particularmente preferidos incluyen
Ph(3-Cl)(5-NHMe)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab;
y
Ph(3-Cl)(5-NHAc)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab.
\vskip1.000000\baselineskip
Los expertos en la técnica apreciarán que en los
procedimientos anteriormente descritos y de aquí en adelante los
grupos funcionales de los compuestos intermedios pueden necesitar
ser protegidos mediante grupos protectores.
Los grupos funcionales que son deseables
proteger incluyen los grupos hidroxi, amino y ácido carboxílico.
Los grupos protectores adecuados para el grupo hidroxi incluyen
grupos trialquilsililo o diarilalquilsililo (por ejemplo,
t-butildimetilsililo,
t-butildifenilsililo o trimetilsililo) y
tetrahidropiranilo. Los grupos protectores adecuados del grupo
ácido carboxílico incluyen ésteres de alquilo de
C_{1-6} o de bencilo. Los grupos protectores
adecuados de los grupos amino y amidino incluyen los grupos
t-butiloxicarbonilo, benciloxicarbonilo ó
2-trimetilsililetoxicarbonilo (Teoc). Los átomos de
nitrógeno del grupo amidino también pueden estar protegidos con
grupos hidroxi o alcoxi, y pueden estar mono o diprotegidos.
La protección y desprotección de grupos
funcionales puede ocurrir antes o después de la condensación, o
antes o después de cualquier otra reacción en los esquemas
anteriormente mencionados.
Los grupos protectores pueden separarse según
técnicas que son bien conocidas por los expertos en la técnica y
como se describe de aquí en adelante.
Los expertos en la técnica apreciarán que, con
el fin de obtener compuestos de la invención de una manera
alternativa, y, en algunas ocasiones, más conveniente, las etapas
individuales del procedimiento mencionadas antes en la presente
memoria pueden realizarse en un orden diferente, y/o las reacciones
individuales pueden realizarse en una etapa diferente en la ruta
global (es decir, pueden añadirse sustituyentes a y/o
transformaciones químicas realizadas sobre, diferentes compuestos
intermedios a los mencionados antes en la presente memoria junto con
una reacción particular). Esto puede negar, o hacer necesaria, la
necesidad de grupos protectores.
El tipo de química implicada dictará la
necesidad, y el tipo, de grupos protectores así como la secuencia
para conseguir la síntesis.
El uso de grupos protectores se describe
completamente en "Protective Groups in Organic Chemistry",
editado por J W F McOmie, Plenum Press (1973), y "Protective
Groups in Organic Synthesis", 3ª edición, T W Greene & P G M
Wutz, Wiley-Interscience (1999).
Los derivados protegidos de los compuestos de la
invención pueden convertirse químicamente en compuestos de la
invención usando técnicas de desprotección estándares (por ejemplo,
hidrogenación). El experto en la técnica también apreciará que
ciertos compuestos de fórmula Ia también pueden denominarse
"derivados protegidos" de compuestos de fórmula I.
Algunos de los compuestos intermedios referidos
antes en la presente memoria son nuevos.
Según otro aspecto de la invención se
proporciona así: (a) un compuesto de fórmula II como se definió
antes en la presente memoria o uno de sus derivados protegidos; (b)
un compuesto de fórmula IV, como se definió antes en la presente
memoria, o uno de sus derivados protegidos; (c) un compuesto de
fórmula XIV, como se definió antes en la presente memoria, o uno de
sus derivados protegidos; y (d) un compuesto de fórmula XV, como se
definió antes en la presente memoria, o uno de sus derivados
protegidos.
Los compuestos preferidos de fórmula II incluyen
Ph(3-Cl)(5-NHMe)-CH(OH)C(O)OH
y
Ph(3-Cl)(5-NHAc)-CH(OH)C(O)OH.
Los compuestos preferidos de fórmula III incluyen
Ph(3-Cl)(5-NHMe)-CH(OH)C(O)-Aze-OH
y
Ph(3-Cl)(5-NHAc)-CH(OH)C(O)-Aze-OH.
Los compuestos preferidos de fórmula XV incluyen
Ph(3-Cl)(5-NHMe)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
y
Ph(3-Cl)(5-NHAc)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc).
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos de la invención pueden poseer
actividad farmacológica como tales. Los compuestos de la invención
que pueden poseer tal actividad incluyen, pero no se limitan a,
compuestos de fórmula I.
Sin embargo, otros compuestos de la invención
(incluyendo los compuestos de fórmula Ia) puede que no posean tal
actividad, pero pueden administrarse parenteral u oralmente, y
seguidamente pueden metabolizarse en el cuerpo para formar
compuestos que sean farmacológicamente activos (incluyendo, pero no
limitándose a, los correspondientes compuestos de fórmula I). Tales
compuestos (que también incluyen compuestos que pueden poseer
alguna actividad farmacológica, pero que esa actividad es
apreciablemente menor que la de los compuestos "activos" a los
que se metabolizan), pueden por lo tanto ser descritos como
"profármacos" de los compuestos activos.
Así, los compuestos de la invención son útiles
porque poseen actividad farmacológica y/o son metabolizados en el
cuerpo tras la administración oral o parenteral para formar
compuestos que poseen actividad farmacológica. Los compuestos de la
invención están por lo tanto indicados como compuestos
farmacéuticos.
Según otro aspecto de la invención, se
proporcionan así los compuestos de la invención para usar como
compuestos farmacéuticos.
En particular, los compuestos de la invención
son potentes agentes inhibidores de la trombina como tales y/o (por
ejemplo, en el caso de profármacos), son metabolizados tras la
administración para formar potentes agentes inhibidores de la
trombina, por ejemplo, como puede demostrarse en los ensayos
descritos más adelante.
Mediante "profármaco de un agente inhibidor de
la trombina", se incluyen compuestos que forman (es decir, se
metabolizan a) un agente inhibidor de la trombina, en una cantidad
experimentalmente detectable, y dentro de un tiempo predeterminado
(por ejemplo, aproximadamente 1 hora), tras la administración oral o
parenteral (véase, por ejemplo, el ensayo E más adelante) o,
alternativamente, tras la incubación en presencia de microsomas de
hígado (véase, por ejemplo, el ensayo G más adelante).
Así, se espera que los compuestos de la
invención sean útiles en las enfermedades en las que se requiera la
inhibición de la trombina y/o en las enfermedades en las que se
indique una terapia anticoagulante, incluyendo las siguientes:
El tratamiento y/o profilaxis de la trombosis y
la hipercoagulabilidad en la sangre y/o los tejidos de animales
incluyendo el hombre. Se sabe que la hipercoagulabilidad puede
conducir a enfermedades tromboembólicas. Las enfermedades asociadas
con la hipercoagulabilidad y las enfermedades tromboembólicas que
pueden mencionarse incluyen la resistencia heredada o adquirida
activada a la proteína C, tal como la mutación del factor V (factor
V de Leiden), y deficiencias heredadas o adquiridas en antitrombina
III, proteína C, proteína S, cofactor II de la heparina. Otras
enfermedades que se sabe están asociadas con la hipercoagulabilidad
y la enfermedad tromboembólica incluyen anticuerpos
antifosfolípidos circulantes (Lupus anticoagulante),
homocisteinemia, trombocitopenia inducida por la heparina y
defectos en la fibrinolisis, así como los síndromes de coagulación
(por ejemplo, coagulación intravascular diseminada (DIC)) y lesión
vascular en general (por ejemplo, debido a la cirugía).
El tratamiento de enfermedades en las que hay un
exceso indeseable de trombina sin signos de hipercoagulabilidad,
por ejemplo, en enfermedades neurodegenerativas tales como la
enfermedad de Alzheimer.
Las enfermedades particulares que pueden
mencionarse incluyen el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de
la trombosis venosa (por ejemplo, DVT) y la embolia pulmonar, la
trombosis arterial (por ejemplo, en el infarto de miocardio, angina
inestable, la apoplejía basada en la trombosis y la trombosis
arterial periférica), y la embolia sistémica usualmente desde la
aurícula durante la fibrilación auricular o desde el ventrículo
izquierdo después del infarto de miocardio transmural, o provocada
por fallo congestivo del corazón; la profilaxis de reoclusión (es
decir, la trombosis) después de la trombolisis, la angioplastia
percutánea trans-luminal (PTA) y las operaciones de
by-pass coronarios; la prevención de la
re-trombosis después de microcirugía y cirugía
vascular en general.
Indicaciones adicionales incluyen el tratamiento
terapéutico y/o profiláctico de la coagulación intravascular
diseminada provocada por bacterias, el trauma múltiple, la
intoxicación o cualquier otro mecanismo; el tratamiento
anticoagulante cuando la sangre está en contacto con superficies
extrañas en el cuerpo tales como los injertos vasculares, stents
vasculares, catéteres vasculares, válvulas prostéticas mecánicas y
biológicas, o cualquier otro dispositivo médico; y el tratamiento
anticoagulante cuando la sangre está en contacto con dispositivos
médicos fuera del cuerpo tal como durante la cirugía cardiovascular
usando una máquina corazón-pulmón o en
hemodiálisis; el tratamiento terapéutico y/o profiláctico del
síndrome de idiopático y de angustia respiratoria en adultos, la
fibrosis pulmonar tras el tratamiento con radiación o quimioterapia,
el choque séptico, la septicemia, las respuestas inflamatorias, las
cuales incluyen, pero no se limitan a, el edema, la aterosclerosis
aguda o crónica tal como la enfermedad arterial coronaria y la
formación de placas ateroscleróticas, la enfermedad cerebral
arterial, el infarto cerebral, la trombosis cerebral, la embolia
cerebral, la enfermedad arterial periférica, la isquemia, la angina
(incluyendo la angina inestable), el daño por reperfusión, la
restenosis después de la angioplastia percutánea
trans-luminal (PTA) y la cirugía coronaria de
by-pass de las arterias.
Los compuestos de la invención que inhiben a la
tripsina y/o a la trombina también pueden ser útiles en el
tratamiento de la pancreatitis.
Los compuestos de la invención están así
indicados tanto en ambos tratamientos de estas enfermedades, el
terapéutico y/o el profiláctico.
Según otro aspecto de la presente invención, los
compuestos de la invención podrían usarse en un método de
tratamiento de una enfermedad en la que se requiere la inhibición de
la trombina, método que comprende la administración de una cantidad
terapéuticamente efectiva de un compuesto de la invención a una
persona que padece de, o es susceptible a, tal enfermedad.
Los compuestos de la invención se administrarán
normalmente oral, intravenosa, subcutánea, bucal, rectal, dérmica,
nasal, traqueal y bronquialmente, por cualquier otra ruta o vía de
inhalación parenteral, en la forma de preparaciones farmacéuticas
que comprenden el compuesto activo como una base libre, o una sal de
adición de ácidos orgánicos o inorgánicos no tóxica
farmacéuticamente aceptable, u otro derivado, en una forma de
dosificación farmacéuticamente aceptable.
Dependiendo del trastorno y el paciente que se
tenga que tratar y la vía de administración, las composiciones se
pueden administrar en dosis variables.
El compuesto de la invención también puede
combinarse y/o co-administrarse con cualquier agente
antitrombótico con un mecanismo de acción diferente, tales como los
agentes antiplaquetas ácido acetilsalicílico, ticlopidina,
clopidogrel, agentes inhibidores de los receptores del tromboxano
y/o de sintetasa, agentes antagonistas de los receptores del
fibrinógeno, agentes miméticos de la prostaciclina y agentes
inhibidores de la fosfodiesterasa y agentes antagonistas de los
receptores de ADP (P_{2}T) y agentes inhibidores de la
carboxipeptidasa U (CPU).
Los compuestos de la invención pueden además
combinarse y/o coadministrarse con agentes trombolíticos tales como
el activante del plasminógeno en los tejidos (natural, recombinante
o modificado), la estreptoquinasa, la uroquinasa, la prouroquinasa,
el complejo activante de
plasminógeno-estreptoquinasa anisoilado (APSAC),
agentes activantes de las glándulas salivales en animales, y
semejantes, en el tratamiento de enfermedades trombóticas, en
particular el infarto de miocardio.
Según otro aspecto de la invención, se
proporciona una formulación farmacéutica que incluye un compuesto de
la invención, en mezcla con un compuesto auxiliar, diluyente o
vehículo farmacéuticamente aceptable.
Las dosis diarias adecuadas de los compuestos de
la invención en el tratamiento terapéutico de seres humanos son
aproximadamente 0,001-100 mg//kg de peso corporal en
la administración peroral y 0,001-50 mg/kg de peso
corporal en la administración parenteral.
Los compuestos de la invención tienen la ventaja
de que pueden ser más eficaces, menos tóxicos, de mayor período de
actuación, tener un intervalo más amplio de actividad, ser más
potentes, producir menos efectos secundarios, ser más fácilmente
adsorbidos y/o tener un perfil farmacocinético (por ejemplo, menor
aclaramiento), que, o tener otras propiedades farmacológicas,
físicas o químicas útiles respecto a, los compuestos conocidos en la
técnica anterior.
\vskip1.000000\baselineskip
Pueden emplearse los siguientes procedimientos
de ensayo.
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayo
A
La disolución del agente inhibidor (25 \muL)
se incuba con plasma (25 \muL) durante minutos. A continuación, se
añade trombina de ser humano (T 6769; Sigma Chem. Co o Hematologic
Technologies) en una disolución amortiguadora del pH, pH 7,4 (25
\muL, 4,0 unidades NIH/mL), y se mide el tiempo de coagulación en
un dispositivo automático (KC 10; Amelung).
El tiempo de coagulación de la trombina (TT) se
expresa como valores absolutos (segundos) así como la relación de TT
sin agente inhibidor (TT_{0}) a TT con agente inhibidor
(TT_{i}). Las últimas relaciones (amplitud 1-0) se
representan frente a la concentración de agente inhibidor
(transformada en log) y se ajustan a curvas sigmoidales
dosis-respuesta según la ecuación
y =
a/[1+(x+IC_{50})^{S}]
en la que: a = amplitud máxima, es
decir, 1; s = pendiente de la curva dosis-respuesta;
e IC_{50} = la concentración de agente inhibidor que dobla el
tiempo de coagulación. Los cálculos se procesan en un PC usando el
programa informático GraFit versión 3, regulando la ecuación igual
a: Inicio a 0, final definido = 1 (Erithacus Software, Robin
Leatherbarrow, Imperial College of Science, London,
UK).
\newpage
Ensayo
B
La potencia del agente inhibidor de la trombina
se mide con un método de sustrato cromógeno, en un procesador de
microplacas robótico Plato 3300 (Rosys AG, CH-8634
Hombrechtikon, Suiza), usando placas de microtitulación de 96
pocillos a la mitad de su volumen (Costar, Cambridge, MA, USA; Cat
No 3690). Disoluciones madre de la sustancia a ensayar en DMSO (72
\muL), 0,1 - 1 mmol/L, se diluyen serialmente 1:3 (24 + 48 \muL)
con DMSO para obtener diez concentraciones diferentes, las cuales
se analizan como muestras en el ensayo. Se diluyen 2 \muL de
muestra de ensayo con 124 \muL de disolución amortiguadora del pH
de ensayo, 12 \muL de disolución de sustrato cromógeno
(S-2366, Chromogenix, Mölndal, Suecia) en disolución
amortiguadora del pH de ensayo y finalmente se añaden 12 \muL de
disolución de \alpha-trombina
(\alpha-trombina de ser humano, Sigma Chemical
Co. o Hematologic Technologies) en disolución amortiguadora del pH
de ensayo y las muestras se mezclan. Las concentraciones finales de
ensayo son: sustancia a ensayar 0,00068 - 13,3 \mumol/L,
S-2366 0,30 mmol/L,
\alpha-trombina 0,020 unidades NIH/mL. Para
calcular el porcentaje de inhibición de las muestras de ensayo se
usa el incremento lineal de la absorbancia durante 40 minutos de
incubación a 37ºC que se compara con blancos sin agente inhibidor.
El valor IC_{50}-robótico, que corresponde a la
concentración de agente inhibidor que provoca un 50% inhibición de
la actividad de la trombina, se calcula a partir de la curva log
concentración vs. % de inhibición.
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayo
C
Se hacen determinaciones de K_{i} usando un
método de sustrato cromógeno, realizado a 37ºC con un analizador
centrífugo Cobas Bio (Roche, Basel, Suiza). La actividad enzimática
residual después de la incubación de
\alpha-trombina de ser humano con varias
concentraciones de compuesto a ensayar se determina a tres
concentraciones diferentes de sustrato, y se mide como el cambio en
la absorbancia óptica a 405 nm.
Disoluciones de compuesto a ensayar (100 \muL;
normalmente en disolución amortiguadora del pH o salina que
contiene BSA 10 g/L) se mezclan con 200 \muL de
\alpha-trombina de ser humano (Sigma Chemical Co)
en disolución amortiguadora del pH de ensayo (0,05 mol/L
Tris-HCl pH 7,4, fuerza iónica 0,15 ajustada con
NaCl) que contiene BSA (10 g/L), y se analizan como muestras en el
equipo Cobas Bio. Se añade una muestra de 60 \muL, junto con 20
\muL de agua, a 320 \muL del sustrato S-2238
(Chromogenix AB, Mölndal, Suecia) en disolución amortiguadora del
pH de ensayo, y se monitoriza el cambio de la absorbancia
(\DeltaA/min). Las concentraciones finales de
S-2238 son 16, 24 y 50 \mumol/L y de la trombina
0,125 unidades NIH/mL.
La velocidad de reacción en el estado
estacionario se usa para construir representaciones gráficas de
Dixon, es decir, diagramas de concentración de agente inhibidor vs.
1/(\DeltaA/min). Para agentes inhibidores competitivos
reversibles, los puntos de los datos para las diferentes
concentraciones de sustrato forman típicamente líneas rectas que
interceptan a x = -K_{i}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayo
D
El APTT se determina en plasma citrado agrupado
de seres humanos normales con el reactivo PTT Automated 5 fabricado
por Stago. Los agentes inhibidores se añaden al plasma (10 \muL de
disolución del agente inhibidor a 90 \muL plasma) y se incuban
con el reactivo APTT durante 3 minutos seguido por la adición de 100
\muL de disolución de cloruro de calcio (0,025 M) y el APTT se
determina mediante el uso del analizador de coagulación KC10
(Amelung) según las instrucciones del productor del reactivo.
El tiempo de coagulación se expresa en valores
absolutos (segundos) así como la relación de APTT sin agente
inhibidor (APTT_{0}) a APTT con agente inhibidor (APTT_{i}). Las
últimas relaciones (amplitud 1-0) se representan
frente a la concentración de agente inhibidor (transformada en log)
y se ajustan a curvas sigmoidales dosis-respuesta
según la ecuación
y =
a/[1+(x+IC_{50})^{S}]
en la que: a = amplitud máxima, es
decir, 1; s = pendiente de la curva dosis-respuesta;
e IC_{50} = la concentración de agente inhibidor que dobla el
tiempo de coagulación. Los cálculos se procesan en un PC usando el
programa informático GraFit versión 3, regulando la ecuación igual
a: Inicio a 0, final definido = 1 (Erithacus Software, Robin
Leatherbarrow, Imperial College of Science, London,
UK).
La IC_{50} del APTT se define como la
concentración de agente inhibidor en plasma de ser humano que dobla
el tiempo parcial activado de tromboplastina.
Ensayo
E
La inhibición de la trombina después de la
administración oral o parenteral de los compuestos de la invención,
disueltos en etanol: Solutol^{TM}:agua (5:5:90), se examina en
ratas conscientes que, uno o dos días antes del experimento, se
equipan con un catéter para muestrear sangre de la arteria carótida.
El día del experimento se extraen muestras de sangre a tiempos
fijos después de la administración del compuesto en tubos de
plástico que contiene 1 parte de disolución de citrato de sodio
(0,13 mol por L) y 9 partes de sangre. Los tubos se centrifugan para
obtener plasma pobre en plaquetas.
Se precipitan 50 \muL de muestras de plasma
con 100 \muL de acetonitrilo frío. Las muestras se centrifugan
durante 10 minutos a 4000 rpm. Se diluyen 75 \muL del sobrenadante
con 75 \muL de ácido fórmico al 0,2%. Se analizan por
LC-MS/MS volúmenes de 10 \muL de las disoluciones
resultantes y las concentraciones de agente inhibidor de la trombina
se determinan usando curvas estándares.
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayo
F
El aclaramiento del plasma se estimó en ratas
macho Sprague Dawley. El compuesto se disolvió en agua y se
administró como una inyección subcutánea de bolo de 4 \mumol/kg.
Se recogieron muestras de sangre a intervalos frecuentes hasta 5
horas después de la administración del fármaco. Las muestras de
sangre se centrifugaron y el plasma se separó de las células de la
sangre y se transfirió a viales que contenían citrato (concentración
final 10%). Se precipitan 50 \muL de muestras de plasma con 100
\muL de acetonitrilo frío. Las muestras se centrifugan durante 10
minutos a 4000 rpm. Se diluyen 75 \muL del sobrenadante con 75
\muL de ácido fórmico al 0,2%. Se analizan por
LC-MS/MS volúmenes de 10 \muL de las disoluciones
resultantes y las concentraciones de agente inhibidor de la
trombina se determinan usando curvas estándares. Se estimó el área
bajo en perfil concentración en el plasma-tiempo
usando la regla trapezoidal log/lineal y se extrapoló a tiempo
infinito. El aclaramiento en el plasma (CL) del compuesto se
determinó entonces como
CL=Dose/AUC
Los valores se dan en mL/min/kg.
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayo
G
Se prepararon microsomas de hígado de ratas
Sprague-Dawley y muestras de hígado de ser humano
según SOPs internos. Los compuestos se incubaron a 37ºC a una
concentración total de proteínas de microsomas de 3 mg/mL en una
disolución amortiguadora del pH TRIS 0,05 mol/L a pH 7,4, en
presencia de los cofactores NADH (2,5 mmol/L) y NADPH (0,8 mmol/L).
La concentración inicial de compuesto fue 5 ó 10 \mumol/L. Se
tomaron muestras para análisis hasta 60 minutos después del
comienzo de la incubación. La actividad enzimática en la muestra
recogida se paró inmediatamente añadiendo ácido mirístico al 20% a
un volumen correspondiente al 3,3% del volumen total de la muestra.
La concentración de compuesto que permaneció (FINAL CONC) en la
muestra a 60 min se determinó por medio de LCMS usando una muestra
recogida a tiempo cero como referencia (START CONC). El % de agente
inhibidor de la trombina degradado se calculó como:
Ensayo
H
El daño de los vasos se indujo aplicando cloruro
férrico (FeCl_{3}) tópicamente a la arteria carótida. Las ratas se
anestesiaron con una inyección intraperitoneal de pentobarbital
sódico (80 mg/kg; Apoteksbolaget; Ume\ring{a}, Suecia), seguido
por infusión continua (12 mg/kg/h) a lo largo de todo el
experimento.
La temperatura corporal de las ratas se mantuvo
a 38ºC a lo largo de todo el experimento por calentamiento externo.
El experimento comenzó con un período de control de 5 minutos. Cinco
minutos después, se dio intravenosamente
^{125}I-fibrinógeno de ser humano (80 kBq; IM53;
Amersham International, Buckinghamshire, UK) y se usó como un
marcador para la incorporación subsiguiente de fibrinógeno en el
trombo. El extremo proximal del segmento de la arteria carótida se
colocó en un tubo de plástico (6 mm; Silastic®; Dow Corning, MI,
USA) abierto longitudinalmente, que contenía papel de filtro
empapado en FeCl_{3} (2 \muL; 55% p/p; Merck, Darmstadt,
Germany) (diámetro 3 mm; 1F; Munktell, Grycksbo, Suecia). La
arteria carótida izquierda se expuso a FeCl_{3} durante 10 minutos
y a continuación se separó del tubo de plástico y se empapó en una
disolución salina. Cincuenta minutos después, la arteria carótida
se separó y se enjuagó en una disolución salina. También se tomaron
muestras de sangre de referencia para la determinación de la
actividad ^{125}I en sangre 10 minutos después de la inyección de
^{125}I-fibrinógeno, y al final del experimento.
La actividad ^{125}I en las muestras de sangre de referencia y en
el segmento del vaso sanguíneo se midieron en un contador gamma
(1282 Compugamma; LKB Wallac Oy, Turku, Finlandia) el mismo día en
el que se realizó el experimento. El tamaño del trombo se determinó
como la cantidad de actividad ^{125}I incorporada en el segmento
del vaso sanguíneo en relación a actividad ^{125}I en la sangre
(cpm/mg).
La invención se ilustra por medio de los
siguientes ejemplos.
\vskip1.000000\baselineskip
La TLC se realizó sobre gel de sílice.
El análisis por HPLC quiral se realizó usando
una columna de 46 mm X 250 mm Chiralcel OD con una columna de
protección de 5 cm. La temperatura de la columna se mantuvo a 35ºC.
Se usó un caudal de 1,0 mL/min. Se usó un detector Gilson 115 UV a
228 nm. La fase móvil consistió en hexanos, etanol y ácido
trifluroacético y se listan las relaciones apropiadas para cada
compuesto. Típicamente, el producto se disolvió en una cantidad
mínima de etanol y ésta se diluyó con la fase móvil.
La LC-MS/MS se realizó usando un
instrumento HP-1100 equipado con un inyector
CTC-PAL y una columna ThermoQuest, hipersil
BDS-C18 de 4x100 mm y 5 \mum. Se usó un detector
de MS API-3000 (Sciex). El caudal fue 1,2 mL/min y
la fase móvil (gradiente) consistió en acetonitrilo
10-90% con 90-10% de disolución
acuosa de acetato de amonio 4 mM, conteniendo ambas ácido fórmico al
0,2%.
Los espectros ^{1}H-RMN se
registraron usando tetrametilsilano como patrón interno. Los
espectros ^{13}C-RMN se registraron usando los
disolventes deuterados listados como el patrón interno.
Los puntos de fusión son sin corregir.
\vskip1.000000\baselineskip
Método
A
Una mezcla de
Ph(3-Cl)(5-NH_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH
(3,5 g, 16,8 mmol; véase la solicitud de patente internacional WO
00/42059) y formaldehído (1,8 mL de 37% en peso en H_{2}O, 23,9
mmol) en EtOH (400 mL) se agitó a 25ºC durante 18 h. La disolución
se concentró a vacío para dar una espuma aplastable que se combinó
con óxido de platino (IV) (0,35 g) en EtOH (400 mL) y se agitó en
una atmósfera de hidrógeno durante 48 h. La mezcla se filtró a
través de un lecho de Celite® y la torta del filtro se lavó con
EtOH. Los compuestos orgánicos se concentraron a vacío y se
sometieron a cromatografía súbita sobre gel de sílice eluyendo con
CHCl_{3}:MeOH: NH_{4}OH concentrado (7:2,5:0,5) para dar 1,0 g
(28%) de la sal de amonio del compuesto del subtítulo como una
espuma aplastable. El compuesto del subtítulo se obtuvo haciendo
fluir la correspondiente sal de amonio a través de un lecho de
Amberlite® CG-50 con CH_{3}CN:MeOH (3:1).
\vskip1.000000\baselineskip
Método
B
Una mezcla de
Ph(3-Cl)(5-NH_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH
(8,67 g, 43,0 mmol; véase la solicitud de patente internacional WO
00/42059) y yoduro de metilo (6,10 g, 43,0 mmol) en CH_{3}CN (500
mL) y MeOH (100 mL) se calentó a 50ºC durante 24 h. La disolución
se concentró a vacío y se sometió a cromatografía súbita sobre gel
de sílice eluyendo con CHCl_{3}:MeOH:NH_{4}OH concentrado
(7:2,5:0,5) para dar 2,9 g (31%) de la sal de amonio del compuesto
del subtítulo como un sólido. El compuesto del subtítulo se obtuvo
haciendo fluir la correspondiente sal de amonio a través de un lecho
de Amberlite® CG-50 con CH_{3}CN:MeOH (3:1).
Pf: 58-65ºC.
R_{f}= 0,25 (CHCl_{3}:MeOH:NH_{4}OH
concentrado 6:3:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 6,68
(m, 1H), 6,61 (m, 1H), 6,50 (m, 1H), 4,98 (s, 1H), 2,75 (s, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CD_{3}OD) \delta
176,8, 153,4, 144,1, 136,7, 116,3, 113,2, 111,0, 74,7, 31,3.
API-MS: (M + 1) = 216 m/z.
Análisis HPLC: 97,2%, 97,9% ee, Chiralcel OD
Column (fase móvil Hex:EtOH:TFA 90:10:0,5).
[\alpha]_{D} ^{25} = -81.6º (c =
1,0, MeOH)
\vskip1.000000\baselineskip
A una mezcla de
Ph(3-Cl)(5-NHMe)-(R)CH(OH)C(O)OH
(0,21 g, 0,97 mmol; véase la etapa (i) anterior) y
H-(S)Aze-Pab(Teoc) (0,38 g, 1,02
mmol, véase la solicitud de patente internacional WO 00/42059) en
DMF (10 mL) a 0ºC se añadió colidina (0,26 g, 2,13 mmol) y PyBOP
(0,56 g, 1,07 mmol). La disolución se agitó a 0ºC durante 2 h, se
calentó a 25ºC, se agitó durante 18 h y a continuación se concentró
a vacío. La cromatografía súbita extensiva (3x) sobre gel de
sílice eluyendo primero con CHCl_{3}:EtOH (9:1), a continuación
con CHCl_{3}:EtOH (95:5), y finalmente con EtOAc:EtOH (20:1) dio
0,31 g (61%) del compuesto del subtítulo como una espuma
aplastable.
Pf: 93-98ºC.
R_{f}= 0,40 (CHCl_{3}:EtOH 9:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla de
rotámeros) \delta 7,82 (d, 2H, J= 9 Hz), 7,42 (d, 2H,
J= 9 Hz), 6,66 (m, 1H), 6,48-6,59 (m, 2H),
5,13 y 4,78 (m, 1H), 5,02 (s, 1H) 3,96-4,58 (m, 6H),
2,76 (s, 3H), 2,05-2,75 (m, 2H),
1,05-1,13 (m, 2H), 0,07 (s, 9H).
API-MS: (M + 1) = 574 m/z.
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución enfriada en hielo de
Ph(3-Cl)(5-NHMe)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(Teoc)
(71 mg, 0,12 mmol, de la etapa (ii) anterior) en cloruro de
metileno (10 mL) se añadió TFA (1 mL), y la mezcla se agitó a 0ºC
durante 2 h y 1 h a temperatura ambiente, después de lo cual la
mezcla resultante se concentró a vacío. Lo restante se disolvió en
agua y se liofilizó, dando 79 mg (97%) del compuesto del título.
^{1}H RMN (500 MHz, CD_{3}OD): (complejo
debido a diastereómeros/rotámeros) \delta 7,74 (d, 2H), 7,52 (d,
2H); 7,03 (t, 0,25H, rotámero secundario); 6,98 (t, 0,25H, rotámero
secundario); 6,96 (t, 0,75H, rotámero principal); 6,93 (t, 0,25H,
rotámero secundario); 6,89 (t, 0,25H, rotámero principal); 6,84 (t,
0,25H, rotámero principal); 5,22 (dd, 0,25H, rotámero secundario);
5,12 (s, 0,75H, rotámero principal); 5,10 (s, 0.25H, rotámero
secundario); 4,80 (dd, 0,75H, rotámero principal);
4,58-4,44 (varios picos, 2H); 4,34 (m, 0,75H,
rotámero principal); 4,12-3,95 (varios picos,
1,25H); 2,87 (s, 0,75H, rotámero secundario); 2,83 (s, 2,25H,
rotámero principal); 2,70 (m, 0,25H, rotámero secundario); 2,53 (s,
0,75H, rotámero principal); 2,27 (m, 0,75H, rotámero principal);
2,15 (s, 0,25H, rotámero secundario);
^{13}C RMN (100 MHz, CDCl_{3}): (átomos de
carbono de carbonilo y/o amidina) \delta 174,2; 173,6; 172,9;
168,1.
MS: (M+1) 430 m/z.
\vskip1.000000\baselineskip
Esta síntesis se realizó en un bloque Robbins de
96 pocillos.
A un pocillo que contenía una cantidad apropiada
de hidroxilamina O-sustituida (especificada más adelante) se
añadió una disolución de
Ph(3-Cl)(5-NHMe)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(Teoc)
(10 mg; 17 \mumol; véase el ejemplo 1(ii) anterior) en
acetonitrilo (1,0 mL). El bloque se selló y la mezcla de reacción se
hizo rotar durante toda la noche en un horno a 60ºC. Después de
enfriar y filtrar, los sólidos se lavaron con acetonitrilo (3 x 0,3
mL). Las fracciones líquidas combinadas se concentraron en una
centrífuga de vacío. El residuo se repartió entre agua (0,4 mL) y
acetato de etilo (0,4 mL). Tras la extracción
líquido-líquido cada cosa se filtró a través de una
columna de hidromatrix^{TM}. Después de lavar tres veces con
acetato de etilo, los filtrados combinados se concentraron en una
centrífuga de vacío. La desprotección se realizó por adición de
cloruro de metileno (0,1 mL) y ácido trifluoroacético (0,3 mL).
Después de agitar a temperatura ambiente durante 3 h los
disolventes se separaron a vacío. El residuo se repartió
entre hidrógenocarbonato de sodio (0,5 mL de una disolución acuosa
saturada) y acetato de etilo (0,5 mL). Después de extraer, filtrar a
través de hidromatrix^{TM} y concentrar (vide infra), el
residuo se disolvió en isopropanol/agua (7/3) (1 mL).
Aproximadamente 2% de esta disolución se separó y diluyó con
isopropanol/agua (7/3) (1 mL) durante el análisis por
LC-MS. Después de la separación de los disolventes
a vacío el residuo sólido se transfirió a una placa de 96
pocillos usando acetonitrilo y acetato de etilo para disolver el
compuesto. Los disolventes se evaporaron en una centrífuga de vacío
para dar los siguientes compuestos del título (todos los materiales
de partida estaban comercialmente disponibles):
\vskip1.000000\baselineskip
Preparado usando
3-[(aminoxi)metil]-5-metilisoxazol
x HCl (21 mg; 0,13 mmol). Rendimiento: 4,66 mg (50%).
LC (254 mn) 100%.
MS(m/z) 541 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparado usando
3-[(aminoxi)metil]piridina x 2HCl (17 mg; 86
\mumol). Rendimiento: 7,56 mg (81%).
LC: 100%.
MS(m/z) 537 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparado usando
O-isobutilhidroxilamina x HCl (13 mg; 104 \mumol).
Rendimiento: 4,9 mg (56%).
LC: 100%.
MS(m/z) 502 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparado usando
O-etilhidroxilamina x HCl (13 mg; 133 \mumol).
Rendimiento: 7,13 mg (86%).
LC: 100%.
MS(m/z) 474 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparado usando
O-bencilhidroxilamina x HCl (18 mg; 113 \mumol).
Rendimiento: 5,76 mg (62%).
LC: 100%.
MS(m/z) 536 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparado usando
O-ciclohexilhidroxilamina x HCl (12 mg; 79
\mumol). Rendimiento: 7,09 mg (77%).
LC: 100%.
MS(m/z) 528 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparado usando
O-ciclobutilhidroxilamina x HCl (16 mg; 130 \mumol).
Rendimiento: 6,24 mg (72%).
LC: 100%.
MS(m/z) 500 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparado usando
4-(aminoxi)metil-5-cloro-1,2,3-tiadiazol
x HCl (16 mg; 79 \mumol). Rendimiento: 10,4 mg
(100%).
(100%).
LC: 100%.
MS(m/z) 578 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparado usando
O-[2-[3-(trifluorometil)fenoxi]etil]hidroxilamina
x HCl (21 mg; 82 \mumol). Rendimiento: 7,44 mg (65%).
LC: 96%.
MS(m/z) 634 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparado usando
O-(3-metoxibencil)hidroxilamina x HCl (20 mg;
105 \mumol). Rendimiento: 5,07 mg (51%).
LC: 100%.
MS(m/z) 566 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparado usando
O-(2-bromobencil)hidroxilamina x HCl (24 mg;
101 \mumol). Rendimiento: 5,01 mg (47%).
LC: 100%.
MS(m/z) 616 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparado usando
O-(4-metilbencil)hidroxilamina x HCl (17 mg;
98 \mumol). Rendimiento: 6,00 mg (63%).
LC: 100%.
MS(m/z) 550 (M+1)^{+}.
^{1}H RMN (400 MHz; CDCl_{3}): \delta 7,99
(bt, 1H), 7,56 (d, 2H), 7,32 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 7,16 (d, 2H),
6,59 (t, 1H), 6,51 (t, 1H), 6,37 (t, 1H), 5,07 (s, 2H), 4,86 (bs,
1H), 4,84 (m, 2H), 4,76 (s, 1H), 4,44 (m, 2H), 4,03 (m, 1H), 3,70
(m, 1H), 2,75 (s, 3H), 2,60 (m, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,34 (m, 1H).
^{13}C RMN (100 MHz; CDCl_{3}): (átomos de
carbono de carbonilo y/o amidina) \delta 172,3, 171,1, 170,0,
151,8 ó 150,9.
\vskip1.000000\baselineskip
Ph(3-Cl)(5-NHMe)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(Teoc)
(0,043 g; 0,075 mmol, véase el ejemplo 1 (ii) anterior) y
O-metilhidroxilamina x HCl (0,045 g; 0,54 mmol) en THF (5 mL)
se mantuvieron a reflujo durante toda la noche. Después de
concentrar a presión reducida, el residuo se disolvió en acetato de
etilo y se lavó con agua y salmuera. El secado (Na_{2}SO_{4}) y
la separación del disolvente a vacío dieron el compuesto del
subtítulo como un sólido incoloro. Rendimiento: 0,045 g (100%).
MS(m/z) 604 (M+1)^{+}, 602
(M-1)^{-}.
Se añadió ácido trifluoroacético (1,0 mL) a una
disolución agitada enfriada en agua de
Ph(3-Cl)(5-NHMe)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe,
Teoc) (45 mg; 74 \mumol; véase la etapa (i) anterior) en cloruro
de metileno (10 mL). El baño de refrigeración se separó después de
1,5 h. Después de 1 h a temperatura ambiente, se añadió acetonitrilo
y los disolventes se separaron cuidadosamente a presión reducida.
El producto bruto se purificó usando HPLC en fase inversa
(acetonitrilo: acetato de amonio acuoso 0,1 M) para dar, después de
liofilizar las fracciones apropiadas, el compuesto del título como
un sólido incoloro. Rendimiento: 19 mg (56%).
MS(m/z) 460 (M+1)^{+}, 458
M-1)^{-}.
^{1}H RMN (300 MHz; CDCl_{3}): \delta 8,02
(bt, 1H), 7,60 (d, 2H), 7,32 (d, 2H), 6,64 (s, 1H), 6,56 (s, 1H),
6,40 (s, 1H), 4,87 (m, 2H), 4,8 (s, 1H), 4,47 (m, 2H), 4,06 (m, 1H),
3,91 (s, 3H), 3,70 (m, 1H), 3,0 (bs, 1H), 2,80 (s, 3H), 2,65 (m,
1H), 2,40 (m, 1H).
^{13}C RMN (100 MHz; CD_{3}OD): (átomos de
carbono de carbonilo y/o amidina) \delta 173,9, 172,7, 155,1.
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
ácido3,5-dinitrobenzoico (213,0 g, 1,00 mol) en THF
anhidro (1500 mL) a 0ºC se añadió el complejo
borano-tetrahidrofurano (1,5 L de 1M en THF, 1,50
mol) en 1 h. La mezcla heterogénea resultante se agitó a 0ºC
durante 3 h y a 25ºC durante 18 h. La disolución homogénea
resultante se trató con H_{2}O y se concentró a vacío hasta que
se formaron sólidos. Los sólidos se filtraron, se lavaron con
H_{2}O y se disolvieron en EtOAc. El filtrado acuoso se extrajo
con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una
disolución acuosa de NaHCO_{3} y salmuera, se secaron
(Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar
176,0 g (89%) del compuesto del subtítulo como un sólido que se usó
sin más purificación.
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,88
(m, 1H), 8,55-8,68 (m, 2H), 4,83 (s, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
3,5-dinitrobencilalcohol (129,1 g, 0,65 mol; de la
etapa (i) anterior) en MeOH (1500 mL) a reflujo se añadió sulfuro
de amonio (450 mL, 442,9 g de 20% en peso en H_{2}O, 1,30 mol) en
45 min. La mezcla heterogénea resultante se mantuvo a reflujo
durante 2 h y se agitó a 25ºC durante 18 h. La disolución se filtró
a través de un lecho de Celite, el filtrado se acidificó con HCl 2N
y el MeOH se separó por destilación a vacío. La disolución acuosa
ácida restante se lavó con Et_{2}O (3x) y se basificó con NaOH 6N.
La disolución acuosa básica se extrajo con Et_{2}O (4x). Los
extractos orgánicos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y
se concentraron a vacío para dar 95,8 g (88%) del compuesto del
subtítulo como un sólido naranja que se usó sin más
purificación.
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,46
(m, 1H), 7,38 (m, 1H), 6,98 (m, 1H), 4,57 (s, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
A una suspensión de
3-amino-5-nitrobencilalcohol
(103,8 g, 0,62 mol; de la etapa (ii) anterior) en 1,0 L de HCl 6N a
-5ºC se añadió nitrito de sodio (47,1 g, 0,68 mol) en H_{2}O (400
mL) en 45 min. La disolución resultante se agitó a -5ºC durante 1 h
antes de la adición de una mezcla de cloruro de cobre (II) (125,0 g,
0,93 mol) y cloruro de cobre (I) (0,74 g, 0,007 mol) en HCl 6N (1,0
L) en 1 h mientras se mantenía la temperatura a menos que 0ºC. La
disolución resultante se calentó a 60-70ºC durante
2,5 h, a continuación se enfrió a temperatura ambiente y se extrajo
con Et_{2}O (6x). Las fases orgánicas se lavaron con salmuera
(2x), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron
a vacío para dar el producto bruto. La cromatografía súbita sobre
gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (4:1) dio 81,7 g (70%) del
compuesto del subtítulo como un sólido blanco apagado. El compuesto
del subtítulo pudo purificarse más por cristalización en
CH_{2}Cl_{2}.
Pf: 74-75ºC.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,14
(s, 2H), 7,72 (s, 1H), 4,83 (d, 2H, J= 7 Hz), 2,18 (t, 1H,
J = 7 Hz).
CI-MS: (M +1) = 188 m/z.
\vskip1.000000\baselineskip
\global\parskip0.900000\baselineskip
Método
A
A una disolución de
3-cloro-5-nitrobencilalcohol
(31,0 g, 165 mmol; véase la etapa (iii) anterior) en EtOH (800 mL)
se añadió óxido de platino (IV) (5 g). La suspensión se agitó bajo
una atmósfera de hidrógeno durante 24 h a temperatura ambiente. La
mezcla de reacción se filtró a través de Celite® y la torta del
filtro se lavó con EtOH. El filtrado se concentró a vacío
para dar un aceite marrón el cual se sometió a cromatografía súbita
sobre gel de sílice eluyendo con Hex:EtOAc (1:1) para dar 12,1 g
(46%) del compuesto del subtítulo como un aceite naranja.
\vskip1.000000\baselineskip
Método
B
A una disolución de
3-cloro-5-nitrobencilalcohol
(9,5 g, 50,6 mmol; véase la etapa (iii) anterior) en EtOAc (150 mL)
se añadió Pt al 5% sulfurado/C (4,7 g). La suspensión se agitó bajo
una atmósfera de hidrógeno durante 5 h a temperatura ambiente. La
mezcla de reacción se filtró a través de Celite® y la torta del
filtro se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró a vacío
para dar 7,6 g (95%) del compuesto del subtítulo como un sólido, el
cual se usó sin más purificación.
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 6,68
(s, 1H), 6,62 (m, 2H), 4,47 (s, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
5-amino-3-clorobencilalcohol
(14,1 g, 89,5 mmol; véase la etapa (iv) anterior) en piridina (500
mL) a 0ºC se añadió gota a gota anhídrido acético (36,5 g, 358
mmol). La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó
durante 5 h. La mezcla se concentró a vacío y se diluyó con
EtOAc (300 mL). Las fases orgánicas se lavaron sucesivamente con 2N
HCl (3 x 300 mL), disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} (200
mL) y salmuera (200 mL), a continuación se secaron
(Na_{2}SO_{4}), se filtraron, y se concentraron a vacío para
dar 20,5 g (95%) del compuesto del subtítulo como un aceite marrón
el cual se usó sin más purificación.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,62
(bs, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 5,02 (s, 2H),
2,17 (s, 3H), 2,10 (s, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió hidruro de litio y aluminio (12,9 g,
339 mmol) en porciones a una disolución agitada mecánicamente de
acetato de
3-cloro-5-(NHAc)bencilo (20,5
g, 84,8 mmol; de la etapa (v) anterior) en THF (600 mL) a 0ºC. La
suspensión se mantuvo a reflujo durante 3 h, se enfrió a 0ºC, y se
trató sucesivamente con H_{2}O (13 mL), NaOH 3N (13 mL) y
H_{2}O (40 mL). Los sólidos se separaron por filtración sobre
Celite® y se lavaron con EtOAc (500 mL). El filtrado se concentró
a vacío para dar 15,7 g (100%) del compuesto del subtítulo
como un aceite naranja el cual se usó sin más purificación.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,62
(s, 1H), 6,47 (s, 1H), 6,44 (s, 1H), 6,42 (s, 1H), 4,52 (s, 2H),
3,12 (q, J= 7,5 Hz, 2H), 1,25 (t, J= 7,5 Hz, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió cloruro de oxalilo (12,0 g, 94,8 mmol)
gota a gota a una disolución de dimetilsulfóxido (14,8 g, 190 mmol)
en CH_{2}Cl_{2} (400 mL) a -78ºC. Después de 30 min a -78ºC, una
disolución de
3-cloro-5-(NHEt)bencilalcohol
(15,7 g, 86,2 mmol; de la etapa (vi) anterior) en CH_{2}Cl_{2}
(250 mL) se añadió gota a gota en 30 min. Después de 30 min a
-78ºC, se añadió gota a gota diisopropiletilamina (55,7 g, 431
mmol), y la mezcla se calentó a temperatura ambiente durante toda
la noche. La mezcla se lavó sucesivamente con HCl 1N (1,0 L),
H_{2}O (500 mL) y salmuera (2 x 500 mL), se secó
(Na_{2}SO_{4}), y se concentró a vacío para dar un aceite
marrón. La cromatografía súbita sobre gel de sílice eluyendo con
Hex:EtOAc (7:1) dio 6,40 g (40%) del compuesto del subtítulo como un
sólido amarillo.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,87
(s, 1H), 7,10 (s, 1H), 6,90 (s, 1H), 6,77 (s, 1H), 3,90 (bs, 1H),
3,20 (m, 2H), 1,25 (t, J= 7,5 Hz, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió gota a gota anhídrido trifluoroacético
(9,26 g, 44,1 mmol) a una disolución de
3-cloro-5-(NHEt)benzaldehído
(5,40 g, 29,4 mmol; de la etapa (vii) anterior) y piridina (3,49 g,
44,1 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (150 mL) a 0ºC. La mezcla se calentó
a temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche. La mezcla
se lavó sucesivamente con una disolución saturada de
Na_{2}CO_{3} (150 mL) y HCl 1N (150 mL), se secó
(Na_{2}SO_{4}), se filtró, y se concentró a vacío para dar 7,46
g (91%) del compuesto del subtítulo como un sólido amarillo el cual
se usó sin más purificación.
\global\parskip1.000000\baselineskip
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 10,0
(s, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 3,80 (m, 2H),
1,20 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
3-cloro-5-(NEt)-5-(N-trifluoroacetil)benzaldehído
(7,46 g, 26,7 mmol; de la etapa (viii) anterior) en
CH_{2}Cl_{2}(150 mL) a 0ºC se añadieron ZnI_{2} (425
mg, 1,34 mmol) y cianuro de trimetilsililo (2,90 g, 29,3 mmol). La
disolución se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. La
mezcla se lavó con H_{2}O (100 mL), se secó (Na_{2}SO_{4}),
se filtró, y se concentró a vacío para dar 9,30 g (92%) del
compuesto del subtítulo como un aceite naranja el cual se usó sin
más purificación.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,58
(s, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 5,52 (s, 1H), 3,80 (q,
J= 7,5 Hz, 2H), 1,20 (t, J= 7,5 Hz, 3H), 0,30 (s,
9H).
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto
Ph(3-Cl)(5-NEt)(5-N-trifluoroacetil)CH(OTMS)CN
(1,40 g, 3,69 mmol; de la etapa (ix) anterior) se mantuvo a reflujo
en HCl concentrado (10 mL) durante 6 h, momento en el cual la mezcla
se concentró a vacío para dar un sólido marrón. La
cromatografía súbita sobre gel de sílice eluyendo con
CHCl_{3}:MeOH: NH_{4}OH concentrado (6:3:1) dio la sal de
amonio del compuesto del subtítulo que se disolvió en H_{2}O, se
acidificó (pH\sim5) con HCl 1M y se extrajo con EtOAc (3 x 15 mL).
Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se
filtraron, y se concentraron a vacío para dar 540 mg (64%) del
compuesto del subtítulo como un sólido marrón.
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 6,69
(s, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,03 (s, 1H), 3,10 (q,
J= 7,1 Hz, 2H), 1,21 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de
Ph(3-Cl)(5-NHEt)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
(540 mg, 2,36 mmol; de la etapa (x) anterior) y Lipasa PS
"Amano" (280 mg) en acetato de vinilo (15 mL) y MTBE (15 mL) se
calentó a reflujo durante 22 h. La mezcla de reacción se filtró a
través de Celite® y la torta del filtro se lavó con EtOAc (100 mL).
El filtrado se concentró a vacío y se sometió a
cromatografía súbita sobre gel de sílice eluyendo con
CHCl_{3}:MeOH:NH_{4}OH concentrado (6:3:1) dando las sales de
amonio de los compuestos (a) y (b) del subtítulo. La sal de amonio
del compuesto del subtítulo (a) se tomó en EtOAc (10 mL) y se
neutralizó con HCl 2M en Et_{2}O (0,65 mL). Se añadió agua (10
mL) , y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc
(2 x 20 mL), y los extractos orgánicos combinados se secaron
(Na_{2}SO_{4}), se filtraron, y se concentraron a vacío para
dar 260 mg (48%) del compuesto del subtítulo (a) como un sólido
blanco. La sal de amonio del compuesto del subtítulo (b) (260 mg,
46%) se usó sin más manipulación o caracterización.
Para el compuesto del subtítulo (a):
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD \delta 6,69
(s, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,03 (s, 1H), 3,10 (q, J
= 7,1 Hz, 2H), 1,21 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
Para el compuesto del subtítulo (b):
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD \delta 6,69
(s, 1H), 6,65 (s, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,70 (s, 1H), 3,08 (q,
J= 7,1 Hz, 2H), 2,14 (s, 3H), 1,20 (t, J= 7,2 Hz,
3H).
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
Ph(3-Cl)(5-NHEt)-(R)CH(OH)C(O)OH
(260 mg, 1,22 mmol; compuesto del subtítulo (a) de la etapa (xi)
anterior) y H-(S)Aze-Pab(Teoc) (602
mg, 1,34 mmol) en DMF (10 mL) a 0ºC se añadieron PyBOP (698 mg,
1,34 mmol) y colidina (517 mg, 4,27 mmol). La disolución se agitó a
0ºC durante 2 h y a continuación se calentó a temperatura ambiente
y se agitó durante toda la noche. La mezcla se repartió entre EtOAc
(3 x 50 mL) y H_{2}O (50 mL). Las fases orgánicas combinadas se
secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron, y se concentraron a
vacío. La cromatografía súbita sobre gel de sílice eluyendo con
CHCl_{3}:MeOH (20:1) seguido por más cromatografías (2x) eluyendo
con EtOAc:EtOH (20:1) dio 157 mg (22%) del compuesto del subtítulo
como un sólido blanco.
Pf: 95-100ºC.
R_{f} = 0,40 (CHCl_{3}:MeOH 15:1).
\newpage
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla de
rotámeros) \delta 7,80 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,41 (d,
J= 8,2 Hz, 2H), 6,63 (s, 1H), 6,57 (s, 1H), 6,53 (s, 1H),
5,10-5,15 (m, 1H), 5,00 (s, 1H),
4,74-4,81 (m, 1H), 4,20-4,52 (m,
5H), 3,90-4,10 (m, 2H), 3,07 (q, J = 7,2 Hz,
2H), 2,44-2,68 (m, 1H), 2,14-2,33
(m, 1H), 1,21 (t, J= 7,1 Hz, 3H), 1,08 (t, J= 8,6 Hz,
2H), 0,08 (s, 9H).
API-MS (M + 1) = 588 m/z.
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió TFA (4.0 mL) a una disolución de
Ph(3,Cl)(5-NHEt)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(Teoc)
(0,090 g, 0,15 mmol; de la etapa (xii) anterior) en DCM (2 mL) a
temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 15
minutos. El disolvente se evaporó sin calentar. El producto se
disolvió en acetonitrilo y agua (1:5) y se liofilizó para dar 70 mg
(68%) del compuesto del título.
^{1}H RMN (500 MHz; D_{2}O): \delta
7,70-7,12 (m, 7H), 5,23-4,72 (m,
2H), 4,40-3,92 (m, 5H), 3,24 (m, 2H), 2,55 (m, 1H),
2,10 (m, 1H), 1,14 (m, 3H) LC-MS (m/z) 444
(M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de
Ph(3-Cl)(5-NH_{2})-(R)CH(OH)C(O)OH
(1,5 g, 7,44 mmol; véase la solicitud de patente internacional WO
00/42059) en piridina (100 mL) a 0ºC se trató con anhídrido acético
(0,77 mL, 0,84 g, 8,18 mmol). Después de 30 min, se añadió
anhídrido acético (0,35 mL) adicional y la reacción se calentó a
25ºC. Después de 1 h, se añadió una tercera parte alícuota de
anhídrido acético (0,17 mL) y la reacción se agitó a 25ºC durante
18 h. La disolución se concentró a vacío, el residuo se secó, se
disolvió en MeOH, se basificó con NaOH 2 N y se agitó durante 3 h.
La disolución se neutralizó con un exceso de Amberlite
CG-50 y se filtró a través de un lecho de Celite.
Las fases orgánicas se concentraron a vacío y se sometieron a
cromatografía súbita sobre gel de sílice eluyendo con
CHCl_{3}:MeOH:NH_{4}OH concentrado (7:2.5:0.5) para dar 1,5 g
(83%) de la sal de amonio del compuesto del subtítulo como un sólido
con una pureza quiral de 89% ee por análisis de HPLC quiral.
Debido a la baja pureza quiral del compuesto del
subtítulo, la sal correspondiente se neutralizó con Amberlite
CG-50 y se sometió a una redisolución enzimática
(0,3 g de Lipasa PS Amano; 20 mL MTBE; 20 mL acetato de vinilo;
55ºC; 18 h). La filtración a través de Celite seguido por
concentración y cromatografía súbita sobre gel de sílice eluyendo
con CHCl_{3}:MeOH:NH_{4}OH concentrado (6:3:1) dio 1,0 g de la
sal de amonio del compuesto del subtítulo como una espuma
aplastable. El compuesto del subtítulo se obtuvo como un sólido
repartiendo la correspondiente sal de amonio entre HCl 1 M y EtOAc
y concentrando las fases orgánicas a vacío.
Pf: 155-157ºC.
R_{f}= 0,25 (CHCl_{3}:MeOH:NH_{4}OH
concentrado 6:3:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD \delta 7,76
(m, 1H), 7,49 (m, 1H), 7,22 (s, 1H), 5,12 (s, 1H), 2,13 (s, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CD_{3}OD \delta 175,5,
172,0, 143,6, 141,4, 135,5, 123,2, 120,5, 117,6, 73,5, 24,0.
API-MS: (M + 1) = 244 m/z.
Análisis HPLC: 96,3%, 95,7% ee, Columna
Chiralcel OD (fase móvil Hex:EtOH:TFA 92:8:0,5).
[\alpha]_{D}^{25} = -99,4º (c =
1,0, MeOH).
\vskip1.000000\baselineskip
A una mezcla de
Ph(3-Cl)(5-NHAc)-(R)CH(OH)C(O)OH
(0,25 g, 1,01 mmol; véase la etapa (i) anterior) y
H-(S)Aze-Pab(Teoc) (0,40 g, 1,06
mmol, véase la solicitud de patente internacional WO 00/42059) en
DMF (15 mL) a 0ºC se añadió colidina (0,27 g, 2,22 mmol) y PyBOP
(0,58 g, 1,11 mmol). La disolución se agitó a 0ºC durante 2 h, se
calentó a 25ºC y se agitó durante 18 h y a continuación se
concentró a vacío. El residuo se disolvió en EtOAc y se lavó con
H_{2}O y salmuera. Las fases orgánicas se secaron
(Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. La
cromatografía súbita extensiva (3x) sobre gel de sílice eluyendo
primero con CHC_{13}:EtOH (95:5), a continuación con
CH_{2}Cl_{2}:MeOH:NH_{4}OH concentrado (94:5:1) y por último
con CH_{2}Cl_{2}:MeOH: NH_{4}OH concentrado (88.5:10:1.5) dio
0.40 g (66%) del compuesto del subtítulo como una espuma
aplastable.
\global\parskip0.900000\baselineskip
Pf: 65-72ºC.
R_{f} = 0,45 (CH_{2}Cl_{2}:MeOH 9:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD, mezcla de
rotámeros) \delta 7,79 (d, 2H, J = 9 Hz), 7,68 (m, 1H),
7,35-7,53 (m, 3H), 7,18 y 7,15 (m, 1H), 5,18 y 4,79.
(m, 1H), 5,14 y 5,09 (s, 1H), 3,93-4,55 (m, 6H),
2,05-2,78 (m, 2H), 2,12 (s, 3H),
1,03-1,13 (m, 2H), 0,08 (s, 9H).
API-MS: (1M + 1) = 602 m/z.
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
Ph(3-Cl)(5-NHAc)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(Teoc)
(0,11 g, 0,18 mmol; véase la etapa (ii) anterior) en 2 mL de
CH_{2}Cl_{2} se añadió 2 mL de TFA. Se permitió que la mezcla
reaccionara durante 4 h y subsiguientemente se evaporó. El producto
bruto se purificó usando PHPLC (columna de C8, 50 x 250 mm,
gradiente: 0 a 50% de CH_{3}CN, 60 mL/min). Después de evaporar,
el residuo se liofilizó en agua-ácido acético. Rendimiento: 95 mg
del compuesto del título como la sal de acetato (99%).
^{1}H RMN (500 MHz, D_{2}O, mezcla de
rotámeros): \delta 7,66 (m, 2H), 7,50 (m, 1H rotámero secundario),
7,45-7,35 (m, 3H), 7,22 (m, 1H), 7,07 (m, 1H
rotámero secundario), 5,25 (m, 1H rotámero),
5,15-5,10 (m, 2H rotámero) 4,84 (m, 1H rotámero),
4,55-4,45 (m, 2H rotámero), 4,41 (m, 1H rotámero),
4,28 (d, 1H rotámero), 4,18-3,95 (m, 2H rotámero),
2,78 (m, 1H rotámero), 2,58 (m, 1H rotámero),
2,35-2,16 (m, 1H), 2,13 (s, 3H rotámero), 2,11 (s,
3H rotámero), 1,92 (s, 3H).
^{13}C RMN (125 MHz, D_{2}O): \delta
173,9, 173,1, 173,0, 172,80, 172,76, 172,6, 166,6, 166,5.
MS: (M+1) 458 m/z.
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de
Ph(3-Cl)(5-NHAc)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(Teoc)
(60 mg, 0,10 mmol; véase el ejemplo 5(ii) anterior) y
H_{2}NOiPr x HCl (70 mg, 0,63 mmol) en THF (5 mL) se calentó a
60ºC durante toda la noche. El disolvente se evaporó y el producto
bruto se repartió entre agua y EtOAc. La fase acuosa se extrajo con
EtOAc y las capas orgánicas se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se
concentraron para dar 65 mg (100%) del compuesto del título. El
material bruto se disolvió en DCM (2 mL) a temperatura ambiente, se
añadió TFA (2,0 mL) y la mezcla de reacción se agitó durante 1
hora. El disolvente se evaporó sin calentar y el producto bruto se
repartió entre agua y EtOAc. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y
la fase orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. El
producto bruto se sometió a cromatografía súbita usando DCM:MeOH
(95:5) como eluyente. El producto se purificó más por RPLC
preparativa (CH_{3}CN:0,1M NH_{4}OAc-tamponado,
0-50%), las fracciones de interés se concentraron y
el producto se liofilizó para dar 50 mg (94%) del compuesto del
título.
^{1}H RMN (400 MHz; CD3OD): \delta
7,70-7,12 (m, 7H), 5,20-4,72 (m,
2H), 4,48-3,92 (m, 5H), 2,73-2,11
(m, 2H), 2,10 (s, 3H), 1,26 (s, 3H), 1,24 (s, 3H).
^{13}C RMN (100 MHz, CD3OD): (átomos de
carbono de carbonilo y/o amidina) \delta 172,3; 171,5; 170,6.
LC-MS (m/z) 517
(M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos del título de los ejemplos 1, 4 y
5 se ensayaron en el ensayo A anterior y se encontró que exhibían un
valor de IC_{50}TT de menos que 0,02 \muM.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos del título de los ejemplos 1, 4 y
5 se ensayaron en el ensayo D anterior y se encontró que exhibían un
valor de IC_{50}TT de menos que 1 \muM.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos del título de los ejemplos 2 y 3
se ensayaron en el ensayo G anterior y se encontró que se
convirtieron en el correspondiente agente inhibidor activo (amidina
libre) en microsomas de hígado de seres humanos y ratas.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Los compuestos del título de los ejemplos 3 y 6
se ensayaron en el ensayo E anterior y se encontró que exhibían una
biodisponibilidad oral y/o parenteral en la rata como el
correspondiente agente inhibidor activo (amidina libre).
\vskip1.000000\baselineskip
- Ac
- = acetilo
- AcOH
- = ácido acético
- API
- = ionización a presión atmosférica (en relación a MS)
- AUC
- = área bajo la curva
- Aze
- = azetidina-2-carboxilato
- AzeOH
- = ácido azetidina-2-carboxílico
- BSA
- = albúmina de suero bovino
- Bn
- = bencilo
- Bu
- = butilo
- Bzl
- = bencilo
- CI
- = ionización química (en relación a MS)
- d
- = día(s)
- DCC
- = diciclohexil carbodiimida
- DCM
- = diclorometano
- DIPEA
- = diisopropiletilamina
- MAP
- = 4-(N,N-dimetil amino) piridina
- DMF
- = dimetilformamida
- DMSO
- = dimetilsulfóxido
- EDC
- = hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
- Et
- = etilo
- Et_{2}O
- = dietil éter
- éter
- = dietil éter
- EtOAc
- = acetato de etilo
- EtOH
- = etanol
- h
- = hora(s)
- HATU
- = hexafluorofosfato de O-(azabenzotriazol-1-ilo)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
- HBTU
- = hexafluorofosfato de [N,N,N',N'-tetrametil-O-(benzotriazol-1-ilo)uronio]
- HCl
- = ácido clorhídrico
- HCl(g)
- = cloruro de hidrógeno gas
- Hex
- = hexanos
- HOAc
- = ácido acético
- HPLC
- = cromatografía de líquidos de alta resolución
- LC
- = cromatografía de líquidos
- Me
- = metilo
- MeOH
- = metanol
- Pf
- = punto de fusión
- MS
- = espectroscopía de masas
- MTBE
- = metil terc-butil éter
- NADH
- = nicotinamida adenina dinucleótido, forma reducida
- NADPH
- = nicotinamida adenina dinucleótido fosfato, forma reducida
- NIH
- = National Institute of Health (EE.UU.)
- NIHU
- = unidades del National Institute of Health
- Pab
- = para-amidinobencilamino
- H-Pab
- = para-amidinobencilamina
- Ph
- = fenilo
- PHPLC
- = cromatografía de líquidos de alta resolución preparativa
- Pr
- = propilo
- PyBOP
- = hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tripirrolidinofosfonio
- QF
- = fluoruro de tetrabutilamonio
- RPLC
- = cromatografía de líquidos de alta resolución en fase inversa
- rt
- = temperatura ambiente
- SOPs
- = procedimientos operativos estándares
- TBTU
- =[tetrafluoroborato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(benzotriazol-1-ilo)uronio]
- TEA
- = trietilamina
- Teoc
- = 2-(trimetilsililo)etoxicarbonilo
- TFA
- = ácido trifluoroacético
- THF
- = tetrahidrofurano
- THP
- = tetrahidropiranilo
- TLC
- = cromatografía de capa fina
- TMSCN
- = cianuro de trimetilsililo
- Z
- = benciloxicarbonilo
\vskip1.000000\baselineskip
Los prefijos n, s, i y t tienen
sus significados usuales: normal, secundario, iso y terciario. El
prefijo c significa ciclo.
Claims (34)
1. Un compuesto de fórmula I,
en la
que:
R^{1} representa un grupo
C(O)CH_{3} o un grupo alquilo de
C_{1-3}; e
Y representa un grupo -CH_{2}- o un grupo
CH_{2})_{2}-,
o una de sus sales farmacéuticamente
aceptables.
2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el
que Y representa un grupo -CH_{2}-.
3. Un compuesto según la reivindicación 1 ó 2,
en el que R^{1} representa un grupo C(O)CH_{3}, un
grupo metilo o un grupo etilo.
4. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, el cual es
Ph(3-Cl)(5-NHMe)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en el que Aze es un
grupo azetidina-2-carboxilato y Pab
es un grupo para-amidinobencilamino.
5. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, el cual es
Ph(3-Cl)(5-NHAc)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
6. Un compuesto de fórmula Ia,
en la
que
R^{2} representa un grupo OR^{3} o un grupo
C(O)OR^{4};
R^{3} representa un átomo de H, un grupo
alquilo de C_{1-10}, un grupo alquilo de
C_{1-3}-arilo o un grupo alquiloxi
de C_{1-3}-arilo (las partes
alquilo de los dos últimos grupos están opcionalmente interrumpidas
por uno o más átomos de oxígeno, y las partes arilo de los dos
últimos grupos están opcionalmente sustituidas por uno o más
sustituyentes seleccionados de un resto halo, un grupo fenilo, un
grupo metilo o un grupo metoxi, los cuales tres últimos grupos
también están opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes
halo);
R^{4} representa un grupo alquilo de
C_{1-10} (grupo el último que está opcionalmente
interrumpido por uno o más átomos de oxígeno), o un grupo alquilo de
C_{1-3}-arilo o un grupo alquiloxi
de C_{1-3}-arilo (las partes
alquilo de los dos últimos grupos están opcionalmente interrumpidas
por uno o más átomos de oxígeno, y las partes arilo de los dos
últimos grupos están opcionalmente sustituidas por uno o más
sustituyentes seleccionados de un resto halo, un grupo fenilo, un
grupo metilo o un grupo metoxi, los cuales tres últimos grupos
también están opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes
halo); y
R^{1} e Y son como se definieron en la
reivindicación 1,
o una de sus sales farmacéuticamente
aceptables.
7. Un compuesto según la reivindicación 6, en la
que R^{2} representa un grupo OR^{3}.
8. Un compuesto según la reivindicación 7, en la
que R^{3} representa: un átomo de H; un grupo alquilo de
C_{1-8} no sustituido, lineal, ramificado o
cíclico; un grupo alquiloxi de
C_{1-3}-fenilo, el grupo fenilo
del cual está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes
según la reivindicación 6; o un grupo alquilo de
C_{1-2}-arilo, en el que el grupo
arilo es un grupo fenilo, piridinilo, isoxazolilo o tiadiazolilo,
los cuales cuatro últimos grupos están opcionalmente sustituidos por
uno o más sustituyentes según la reivindicación 6.
9. Un compuesto según la reivindicación 8, en el
que R^{3} representa: un grupo alquilo lineal de
C_{1-6}, o un grupo alquilo cíclico de
C_{3-6}; o un grupo metilarilo, en el que el grupo
arilo es un grupo fenilo o isoxazolilo, los cuales dos últimos
grupos están opcionalmente sustituidos en la parte arilo por un
sustituyente seleccionado de un grupo metoxi, un grupo metilo y un
átomo de bromo.
10. Un compuesto según la reivindicación 9, en
el que R^{3} representa un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo
i-propilo, un grupo ciclohexilo, un grupo
4-metilbencilo, un grupo
3-metoxibencilo, un grupo
2-bromobencilo o un grupo
5-metil-3-isoxazolilo.
11. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que el fragmento
está en la configuración
R.
12. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que el fragmento
está en la configuración
S.
13. Un compuesto según la reivindicación 1, el
cual es
Ph(3-Cl)(5-NHMe)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
14. Un compuesto según la reivindicación 1, el
cual es
Ph(3-Cl)(5-NHAc)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
15. Una formulación farmacéutica que incluye un
compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, o una
de sus sales farmacéuticamente aceptables, en mezcla con un
compuesto auxiliar, diluyente o vehículo farmacéuticamente
aceptable.
16. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 14, o una de sus sales farmacéuticamente
aceptables, para usar como un compuesto farmacéutico.
17. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 14, o una de sus sales farmacéuticamente
aceptables, para usar en el tratamiento de una enfermedad en la que
se requiere la inhibición de la trombina.
18. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 14, o una de sus sales derivadas
farmacéuticamente aceptables, para usar en el tratamiento de una
enfermedad en la que está indicada una terapia anticoagulante.
19. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 14, o una de sus sales farmacéuticamente
aceptables, para usar en el tratamiento de la trombosis.
20. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 14, o una de sus sales farmacéuticamente
aceptables, para usar como un anticoagulante.
21. El uso de un compuesto según una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 14, o de una de sus sales
farmacéuticamente aceptables, como ingrediente activo para la
fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad
en la que se requiere la inhibición de la trombina.
22. El uso de un compuesto según una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 14, o de una de sus sales
farmacéuticamente aceptables, como ingrediente activo para la
fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad
en la que está indicada una terapia anticoagulante.
23. El uso según la reivindicación 21 ó 22, en
el que la enfermedad es la trombosis.
24. El uso según la reivindicación 21 ó 22, en
el que la enfermedad es la hipercoagulabilidad en la sangre y/o en
los tejidos.
25. El uso de un compuesto según una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 14, o de una de sus sales
farmacéuticamente aceptables, como ingrediente activo para la
fabricación de un anticoagulante.
26. Un procedimiento para la preparación de un
compuesto de fórmula I según la reivindicación 1, que comprende:
(i) la condensación de un compuesto de fórmula
II
en la que R^{1} es según la
reivindicación 1, con un compuesto de fórmula
III,
en la que Y es según la
reivindicación
1;
(ii) la condensación de un compuesto de fórmula
IV,
en la que R^{1} e Y son como se
definieron en la reivindicación 1, con
para-amidinobencilamina.
27. Un compuesto de fórmula II según la
reivindicación 26, en el que R^{1} representa un grupo
C(O)CH_{3} o un grupo etilo.
28. Un compuesto según la reivindicación 27, el
cual es
Ph(3-Cl)(5-NHAc)-CH(OH)C(O)OH.
29. Un compuesto de fórmula IV, según la
reivindicación 26.
30. Un compuesto según la reivindicación 29, el
cual es
Ph(3-Cl)(5-NHMe)-CH(OH)C(O)-Aze-OH,
o
Ph(3-Cl)(5-NHAc)-CH(OH)C(O)-Aze-OH.
31. Un procedimiento para la preparación de un
compuesto de fórmula Ia según la reivindicación 6, que
comprende:
(a) la condensación de un compuesto de fórmula
II según la reivindicación 26 con un compuesto de fórmula XII,
en la que Y es según la
reivindicación 1 y R^{2} es según la reivindicación
6;
\vskip1.000000\baselineskip
(b) la condensación de un compuesto de fórmula
IV, según la reivindicación 26, con un compuesto de fórmula
XIII,
en la que R^{2} es según la
reivindicación
6;
\vskip1.000000\baselineskip
(c) para los compuestos de fórmula Ia en la que
R^{2} representa un grupo OH, reacción de un compuesto
correspondiente de fórmula XIV,
en la que R^{1} e Y son como se
definieron en la reivindicación 1, con
hidroxilamina;
\vskip1.000000\baselineskip
(d) para los compuestos de fórmula Ia en la que
R^{2} representa un grupo OR^{3}, reacción de un compuesto de
fórmula XV,
en la que R^{1} representa un
grupo
-CH_{2}CH_{2}-Si(CH_{3})_{3} o
un grupo bencilo, y R^{1} e Y son como se definieron en la
reivindicación 1, o una de sus formas tautómeras, con un compuesto
de fórmula
XVI,
XVIR^{3}ONH_{2}
en la que R^{3} es según la
reivindicación 6, o una de sus sales de adición de ácidos, seguida
por la separación del grupo
-C(O)OR^{x};
\vskip1.000000\baselineskip
(e) para los compuestos de fórmula Ia en la que
R^{2} representa un grupo COOR^{4}, reacción de un compuesto
correspondiente de fórmula I, como se definió en la reivindicación
1, con un compuesto de fórmula XVII,
XVIIL^{1}COOR^{4}
en la que L^{1} representa un
grupo saliente, y R^{4} es según la reivindicación 6;
o
\vskip1.000000\baselineskip
(f) para los compuestos de fórmula Ia en la que
R^{2} representa un grupo OCH_{3} o un grupo OCH_{2}CH_{3},
reacción de un compuesto correspondiente de fórmula Ia, en la que
R^{2} representa un grupo OH, con sulfato de dimetilo o sulfato de
dietilo, respectivamente.
32. Un compuesto de fórmula XIV, según la
reivindicación 31.
33. Un compuesto de fórmula XV, según la
reivindicación 31.
34. Un compuesto según la reivindicación 33, el
cual es
Ph(3-Cl)(5-NHMe)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc),
o
Ph(3-Cl)(5-NHAc)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc).
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