NO325242B1 - Nye amidinoderivater, anvendelse og fremstilling derav, samt farmasoytisk preparat - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører nye amidinoderivater, anvendelse og fremstilling derav, samt farmasøytisk preparat.

Oppfinnelsens område

Foreliggende oppfinnelse angår følgelig nye farmasøytisk anvendelige forbindelser, spesielt forbindelser som er og/eller forbindelser som blir metabolisert til, forbindelser som er kompetitive inhibitorer av trypsin-lignende serinproteaser, spesielt trombin, anvendelse derav, farmasøytiske preparater inneholdende dem og synteseveier for deres produksjon.

Bakgrunn

Blodkoagulering er nøkkelprosessen involvert i både hemostase (dvs. forhindring av blodtap fra et skadet kar) og trombose (dvs. dannelse av et blodkoagel i et blodkar, som noen ganger fører til karobstruksjon).

Koagulering er resultatet av en kompleks serie av enzymatiske reaksjoner. Ett av de ultimate trinn i denne serien av reaksjoner er omdannelse av proenzym protrombin til det aktive enzym trombin.

Trombin er kjent å spille en sentral rolle i koagulering. Det aktiverer blodplater, hvilket fører til blodplateaggregering, omdanner fibrinogen til fibrinmonomerer, som polymeriserer spontant til fibrinpolymerer og aktiverer faktor XIII, som så kryssbinder polymerene for å danne uoppløselig fibrin. Videre aktiverer trombin faktor V og faktor VIII hvilket fører til en "positiv feedback" dannelse av trombin fra protrombin.

Ved å hemme aggregering av blodplater og dannelse og kryssbinding av fibrin, ville effektive inhibitorer av trombin være forventet å vise antitrombotisk aktivitet. I tillegg ville antitrombotisk aktivitet forventes å forbedres ved effektiv hemning av den positive feedback-mekanisme.

Kjent teknikk

Den tidlige utvikling av lavmolekylære inhibitorer av trombin er beskrevet av Claesson i Blood Coagul. Fibrinol. (1994) 5, 411.

Blombåck et al (i J. Clin. Lab. Invest. 24, suppl. 107, 59, (1969)) angir trombin-inhibitorer basert på aminosyresekvensen plassert rundt spaltningssetet for fibrinogen Aot-kjede. Av de beskrevne aminosyresekvensene, indikerte disse forfatterne at tripeptidetsekvensen Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, nedenfor referert til som the P3-P2-P1-sekvens) ville være den mest effektive inhibitor.

Trombin-inhibitorer basert på dipeptidyl-derivater med et a,o> aminoalkylguanidin i P1-posisjonen er kjent fra US-patent nr. 4,346,078 og internasjonal patentsøknad WO 93/11152. Lignende, strukturelt relaterte dipeptidyl-derivater har også vært angitt. For eksempel beskriver internasjonal patentsøknad WO 94/29336 forbindelser med for eksempel aminometyl-benzamidiner, cykliske aminoalkyl-amidiner og cykliske aminoalkyl-guanidiner i P1-posisjon (internasjonal patentsøknad WO 97/23499 beskriver prodrug av visse av disse forbindelser); europeisk patentsøknad 0 648 780 beskriver forbindelser med for eksempel cykliske aminoalkyl-guanidiner i P1-posisjonen.

Trombin-inhibitorer basert på peptidyl-derivater som også har cykliske aminoalkylguanidiner (f.eks. enten 3- eller 4-aminometyl-1-amidino-piperidin) i P1 -posisjonen er kjent fra europeiske patentsøknader 0 468 231, 0 559 046 og 0 641 779.

Trombin inhibitorer basert på tripeptidyl-derivater med argininaldehyd i P1-posisjon ble først beskrevet i europeisk patentsøknad 0 185 390.

Senere er arginin-aldehyd-baserte peptidyl-derivater, modifisert i P3-posisjon, rapportert. For eksempel beskriver internasjonal patentsøknad WO 93/18060 hydroksysyrer, europeisk patentsøknad 0 526 877 des-aminosyrer og europeisk patentsøknad 0 542 525 O-metyl-mandelsyrer i P3-posisjonen.

Inhibitorer av serinproteaser (f.eks. trombin) basert på elektrofile ketoner 1 P1 -posisjonen er også kjent. For eksempel beskriver europeisk patentsøknad 0 195 212 peptidyl-a-keto-estere og -amider, europeisk patentsøknad 0 362 002 fluoralkylamid-ketoner, europeisk patentsøknad 0 364 344 a,p\8-triketoforbindelser og europeisk patentsøknad 0 530 167 a-alkoksyketon-derivater av arginin i P1 -posisjonen.

Andre strukturelt forskjellige inhibitorer av trypsin-lignende serinproteaser basert på C-terminale boronsyrederivater av arginin og isotiouronium-analoger derav er kjent fra europeisk patentsøknad 0 293 881.

Enda senere er trombin-inhibitorer basert på peptidyl-derivater beskrevet 1 europeisk patentsøknad 0 669 317 og internasjonale patentsøknader WO 95/35309, WO 95/23609, WO 96/25426, WO 97/02284, WO 97/46577, WO 96/32110, WO 96/31504, WO 96/03374, WO 98/06740, WO 97/49404, WO 98/57932, WO 99/29664 og WO 00/35869.

Spesielt beskriver WO 97/02284 og WO 00/42059 trombin-inhibitorer med substituerte mandelsyrer i P3-posisjonen.

Imidlertid er det fortsatt et behov for effektive inhibitorer av trypsin-lignende serinproteaser, så som trombin. Det er også et behov for forbindelser som har en fordelaktig farmakokinetisk profil (f.eks. lav utskilling) og er selektive i å hemme trombin fremfor andre serinproteaser, spesielt de involvert i hemostase. Forbindelser som viser kompetitiv hemmende aktivitet mot trombin ville være forventet å være spesielt anvendelige som antikoaguleringsmidler og derfor ved terapeutisk behandling av trombose og relaterte lidelser.

Beskrivelse av foreliggende oppfinnelse

Ifølge oppfinnelsen tilveiebringes forbindelser med formel I

hvor

R<1> representerer C(0)CH3 eller Ci-3 alkyl; og

Y representerer -CH2- eller -(CH2)2-,

og farmasøytisk akseptable derivater derav.

Betegnelsen "farmasøytisk akseptable derivater" omfatter bl.a. farmasøytisk akseptable salter (f.eks. syreaddisjonssalter).

Foretrukne forbindelser med formel I omfatter de hvor: R<1> representerer C(0)CH3, metyl eller etyl;

Y representerer -CH2-.

Spesielt foretrukne forbindelser med formel I omfatter

Ph(3-CI)(5-NHMe)-CH(OH)C(0)-Aze-Pab;

Ph(3-CI)(5-NHAc)-CH(OH)C(0)-Aze-Pab.

Forkortelser er listet opp på slutten av denne beskrivelsen.

Forbindelser med formel I kan fremstilles i henhold til teknikker velkjent for fagfolk på området, for eksempel som beskrevet nedenfor.

I henhold til et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes en fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse med formel I, som omfatter:

(i) kobling av en forbindelse med formel II

hvor R<1> er som ovenfor definert, med en forbindelse med formel III,

hvor Y er som definert i krav 1,

(ii) kobling av en forbindelse med formel IV,

hvor R<1> og Y er som definert i krav 1, med para-amidinobenzylamin.

Punkt (i) ovenfor kan for eksempel utføres i nærvær av et koblingsmiddel (f.eks. oksalylklorid i DMF, EDC, DCC, HBTU, HATU, PyBOP eller TBTU), en passende base (f.eks. pyridin, DMAP, TEA, 2,4,6-kollidin eller DIPEA) og et egnet organisk løsningsmiddel (f.eks. diklormetan, acetonitril, EtOAc eller DMF).

Punkt (ii) ovenfor kan for eksempel utføres under betingelser som beskrevet i trinn (i) ovenfor

Forbindelser med formel I kan fremstilles ved avbeskyttelse av en tilsvarende forbindelse med formel XV, som definert nedenfor, hvilken avbeskyttelse omfatter fjerning av gruppen C(0)OR<x>, hvor R<*> er som definert nedenfor, fra forbindelsen med formel XV, for eksempel under betingelser kjent for fagfolk på området (f.eks. ved omsetning med QF eller TFA (f.eks. som beskrevet nedenfor)).

Videre kan forbindelser med formel I fremstilles ved avbeskyttelse av en tilsvarende forbindelse med formel la, som definert nedenfor, hvor R<2 >representerer OR<3>, hvor R2 og R3 er som definert nedenfor, for eksempel ved hydrogenering i nærvær av en egnet katalysator (f.eks. en supportert metallkatalysator så som Pd/C (f.eks. 10% (vekt/vekt) Pd/C)) og et passende løsningsmiddel (f.eks. en lavere (f.eks. Ci-6) alkylalkohol så som etanol) og eventuelt i nærvær av en egnet syre (f.eks. eddiksyre).

Forbindelser med formel II er tilgjengelige ved anvendelse av kjente og/eller standard teknikker.

For eksempel kan forbindelser med formel II fremstilles ved omsetning av et aldehyd med formel V,

hvor R<1> er som ovenfor definert med: (a) en forbindelse med formel VI, hvor R" representerer H eller (CH3)3Si, for eksempel ved romtemperatur eller forhøyet temperatur (f.eks. under 100°C) i nærvær av et egnet organisk løsningsmiddel (f.eks. kloroform eller metylenklorid) og, hvis nødvendig, i nærvær av en egnet base (f.eks. TEA) og/eller et egnet katalysatorsystem (f.eks. benzylammoniumklorid eller sinkjodid), fulgt av hydrolyse under betingelser som er velkjent for fagfolk på området (f.eks. som beskrevet nedenfor); (b) NaCN eller KCN, for eksempel i nærvær av NaHS03 og vann, fulgt av hydrolyse; (c) kloroform, for eksempel ved forhøyet temperatur (f.eks. over romtemperatur, men under 100°C) i nærvær av et egnet organisk løsningsmiddel (f.eks. kloroform) og, hvis nødvendig, i nærvær av et egnet katalysatorsystem (f.eks. benzylammoniumklorid), fulgt av hydrolyse;

(d) en forbindelse med formel VII,

hvor M representerer Mg eller Li, fulgt av oksydativ spaltning (f.eks. ozonolyse eller osmium- eller ruthenium-katalysert) under betingelser som er velkjent for fagfolk på området; eller (e) tris(metyltio)metan under betingelser som er velkjent for fagfolk på området, fulgt av hydrolyse i nærvær av f.eks. HgO og HBF4.

Forbindelser med formel II kan alternativt fremstilles fra Ph(3-CI)(5-NH2)-CH(OH)C(0)OH, for eksempel som beskrevet nedenfor for forbindelser med formel II hvor R<1> representerer C(0)CH3 eller metyl.

Enantiomere former av forbindelsen med formel II (dvs. de forbindelser som har forskjellige konfigurasjoner av substituenter rundt C-atomet a- til C02H-gruppen) kan separeres ved et enantiospesifikt derivatiseringstrinn. Dette kan for eksempel oppnås ved en enzymatisk prosess. Slike enzymatiske prosesser omfatter for eksempel omestring av a-OH-gruppen ved mellom romtemperatur og tilbakeløpstemperatur (f.eks. ved mellom 45 og 65°C) i nærvær av et egnet enzym (f.eks. Lipase PS Amano), en passende ester (f.eks. vinylacetat) og et egnet løsningsmiddel (f.eks. metyl-terf-b uty lete r). Den derivatiserte isomer kan deretter separeres fra den uomsatte isomer ved konvensjonelle separerings-teknikker (f.eks. kromatografi).

Grupper satt til forbindelser med formel II i et slikt derivatiserings-trinn kan fjernes enten før eventuelle ytterligere reaksjoner eller på hvilket som helst senere trinn i syntesen av forbindelser med formel I. De ytterligere grupper kan fjernes ved anvendelse av konvensjonelle teknikker (f.eks. for estere av a-OH-gruppen, hydrolyse under betingelser kjent for fagfolk på området (f.eks. ved mellom romtemperatur og tilbakeløpstemperatur i nærvær av en egnet base (f.eks. NaOH) og et passende løsningsmiddel (f.eks. MeOH, vann eller blandinger derav))).

Forbindelser med formel IV kan fremstilles ved kobling av en forbindelse med formel II som ovenfor definert til en forbindelse med formel VIII hvor Y er som ovenfor definert, for eksempel under lignende betingelser som de beskrevet her for fremstilling av forbindelser med formel I.

Forbindelser med formel V er tilgjengelige ved anvendelse av kjente og/eller standard teknikker. For eksempel kan de fremstilles ved:

(i) reduksjon av en forbindelse med formel X,

hvor R<1> er som ovenfor definert eller et beskyttet derivat derav, i nærvær av et egnet reduksjonsmiddel (f.eks. DIBAL-H); eller

(ii) oksydasjon av en forbindelse med formel XI,

hvor R<1> er som ovenfor definert eller et beskyttet derivat derav, i nærvær av et egnet oksydasjonsmiddel (f.eks. Mn02, pyridinium-klorkromat eller en kombinasjon av DMSO og oksalylklorid).

Forbindelser med formlene III, VI, VII, VIII, X og XI er enten kommersielt tilgjengelige, er kjent i litteraturen eller kan oppnås enten analogt med prosessene beskrevet her eller ved konvensjonelle syntese-prosedyrer, i henhold til standard teknikker, fra lett tilgjengelige utgangsmaterialer ved anvendelse av passende reagenser og reaksjonsbetingelser (f.eks. som beskrevet nedenfor).

Forbindelser med formel I kan isoleres fra deres reaksjonsblandinger ved anvendelse av konvensjonelle teknikker.

I henhold til foreliggende oppfinnelse omfatter farmasøytisk akseptable derivater av forbindelser med formel I også "beskyttede" derivater og/eller forbindelser som virker som prodrug, av forbindelser med formel I.

Forbindelser som kan virke som prodrug for forbindelser med formel I som kan nevnes, omfatter forbindelser med formel la

hvor R<2> representerer OR<3>;

R3 representerer H, C3-C7-sykloalkyl, Cm0 alkyl, C1-3 alkylaryl eller C1-3 alkyloksyaryl (idet alkyldelene av de tre sistnevnte grupper eventuelt er avbrutt av ett eller flere oksygenatomer og aryldelene av de to sistnevnte grupper eventuelt er substituert med én eller flere substituenter valgt fra halogen, eller metyl, idet sistnevnte tre grupper også er eventuelt substituert med én eller flere halogensubstituenter og hvor aryl er en karbosyklisk eller heterosyklisk aromatisk gruppe valgt fra fenyl, naftyl, pyridinyl, oxazolyl, tiadiazolyl, indolyl, isoksazolyl og benzofuranyl);

og

R<1> og Y er som definert i krav 1,

eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

Betegnelsen "farmasøytisk akseptable derivater" av forbindelser med formel la omfatter farmasøytisk akseptable salter (f.eks. syreaddisjonssalter).

Alkyloksyarylgrupper som R3 og R<4> kan representere omfatter en alkyl-og en arylgruppe bundet ved et oksygenatom. Alkylaryl- og alkyloksyarylgrupper er bundet til resten av molekylet via alkyldelen av de grupper, hvilke alkyldeler kan (hvis det er et tilstrekkelig antall (dvs. tre) karbonatomer) være forgrenede. Aryldeler av alkylaryl- og alkyloksyarylgrupper som R<3> og R4 kan representere omfatter karbocykliske og heterocykliske aromatiske (heteroaryl) grupper, så som fenyl, naftyl, pyridinyl, oksazolyl, isoksazolyl, tiadiazolyl (f.eks. 1,2,3-tiadiazolyl), indolyl og benzofuranyl og lignende.

Alkylgrupper som R3 og R<4> kan representere kan være rettkjedede eller, når det er et tilstrekkelig antall (dvs. et minimum på tre) karbonatomer, være forgrenede og/eller cykliske. Videre, når det er et tilstrekkelig antall (dvs. et minimum på fire) karbonatomer, kan slike alkylgrupper også være delvis cykliske/acykliske. Slike alkylgrupper kan også være mettede eller, når det er et tilstrekkelig antall (dvs. et minimum på to) karbonatomer, være umettede.

Halogen-grupper med hvilke R<3> og R<4> kan være substituert omfatter fluor, klor, brom og jod.

Foretrukne forbindelser med formel la omfatter de hvor R<2> representerer OR<3>.

Når R<2> representerer OR<3> omfatter foretrukne R<3->grupper:

H; usubstituert, lineær, eller forgrenet Ci-8-alkyl, eller syklisk C3-C7-alkyl; C1-3 alkyloksyfenyl, hvor fenylgruppen i denne eventuelt er substituert med én eller flere substituenter som definert i krav 6; eller Ci-2 alkylaryl, hvor arylgruppen er fenyl, pyridinyl, isoksazolyl eller tiadiazolyl, hvilke fire sistnevnte grupper eventuelt er substituert med én eller flere substituenter som definert i krav 6.

Foretrukne forbindelser med formel la omfatter de hvor R<2> representerer OR<3> og R<3> representerer: (i) lineær Ci-6 alkyl eller cyklisk C3-e alkyl; eller metylaryl, hvor arylgruppen er fenyl eller isoksazolyl, hvilke to sistnevnte grupper eventuelt er substituert i aryldelen med én substituent valgt fra metoksy, metyl og brom.

Foreliggende oppfinnelse vedrører videre fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse med formel la som definert i krav 6, som omfatter:

(a) kobling av en forbindelse med formel II som definert i krav 26 med en forbindelse med formel XII hvor Y er som definert i krav 1 og R<2> er som definert i krav 6; (b) kobling av en forbindelse med formel IV, som definert i krav 26, med en forbindelse med formel XIII hvor R<2> er som definert i krav 6; (c) for forbindelser med formel la hvor R2 representerer OH, omsetning av en tilsvarende forbindelse med formel XIV hvor R<1> og Y er som definert i krav 1, med hydroksylamin; (d) for forbindelser med formel la hvor R2 representerer OR<3>, omsetning av en forbindelse med formel XV hvor Rx representerer -CH2CH2-Si(CH3)3 eller benzyl og R<1> og Y er som definert i krav 1 eller en tautomer derav, med en forbindelse med formel XVI, hvor R<3> er som definert i krav 6 eller et syreaddisjonssalt derav, fulgt av fjerning av -C(0)OR<x>-gruppen; (e) for forbindelser med formel la hvor R<2> representerer COOR<4>, omsetning av en tilsvarende forbindelse med formel I, som definert i krav 1, med en forbindelse med formel XVII hvor L<1> representerer en utgående gruppe og R<4> er som definert i krav 6; eller (f) for forbindelser med formel la hvor R2 representerer OCH3 eller OCH2CH3, omsetning av en tilsvarende forbindelse med formel la hvor R2 representerer OH med henholdsvis dimetylsulfat eller dietylsulfat.

Punkt (a) og (b) kan for eksempel utføres under lignende betingelser som de beskrevet ovenfor for syntese av forbindelser med formel I.

Punkt (d) kan for eksempel utføres ved mellom romtemperatur og tilbakeløpstemperatur i nærvær av et passende organisk løsningsmiddel (f.eks. THF, CH3CN, DMF eller DMSO), fulgt av fjerning av -C(0)OR<x>-gruppen under betingelser kjent for fagfolk på området (f.eks. ved omsetning med QF eller

TFA).

Punkt (e) kan for eksempel utføres ved eller rundt romtemperatur i nærvær av en egnet base (f.eks. NaOH, for eksempel i vandig løsning) og et passende organisk løsningsmiddel (f.eks. metylenklorid).

Punkt (f) kan for eksempel utføres i nærvær av en egnet base (f.eks. et alkalimetallhydroksyd så som KOH (for eksempel i vandig løsning ved f.eks. 50 vekt%)) og en passende katalysator (f.eks. et kvaternært ammoniumhalogenid så som benzyltrimetylammoniumklorid (for eksempel i CH2CI2 eller TH F løsning ved f.eks. 10vekt.%)).

Forbindelser med formel XIV og XV kan fremstilles ved kobling av en tilsvarende forbindelse med formel II til henholdsvis en forbindelse med formel

XVIII

hvor Y er som ovenfor definert, eller en forbindelse med formel XIX

hvor Y og Rx er som ovenfor definert, for eksempel i hvert tilfelle under lignende betingelser som de beskrevet ovenfor for syntese av forbindelser med formel I.

Forbindelser med formel XIV og XV kan alternativt fremstilles ved kobling av en tilsvarende forbindelse med formel IV til henholdsvis para-cyanobenzylamin eller en forbindelse med formel XX hvor Rx er som ovenfor definert, for eksempel i hvert tilfelle under lignende betingelser som de beskrevet ovenfor for syntese av forbindelser med formel I.

Forbindelser med formel XV kan alternativt fremstilles ved omsetning av en tilsvarende forbindelse med formel XIV med hydroksylamin under betingelser kjent for fagfolk på området, fulgt av: (i) reduksjon av det resulterende hydroksyamidin under betingelser kjent for fagfolk på området (f.eks. ved katalytisk hydrogenering); og deretter (ii) omsetning av den resulterende forbindelsen med formel I med en forbindelse svarende til en forbindelse med formel XVII hvor, istedenfor R<4>, gruppen Rx er til stede, hvor Rx er som ovenfor definert, for eksempel under betingelser beskrevet ovenfor med hensyn til fremstilling av forbindelser med formel la.

Forbindelser med formlene XII, XVIII og XIX kan fremstilles ved kobling av en tilsvarende forbindelse med formel VIII, som ovenfor definert, til henholdsvis en forbindelse med formel XIII som ovenfor definert, para-cyanobenzylamin eller en forbindelse med formel XX som ovenfor definert, for eksempel i hvert tilfelle under lignende betingelser som de beskrevet ovenfor for syntese av forbindelser med formel I.

Forbindelser med formlene XIII, XVI, XVII og XX er enten kommersielt tilgjengelige, er kjent i litteraturen eller kan oppnås enten analogt med prosessene beskrevet her eller ved konvensjonelle syntese-prosedyrer, i henhold til standard teknikker, fra lett tilgjengelige utgangsmaterialer ved anvendelse av passende reagenser og reaksjonsbetingelser (f.eks. som beskrevet nedenfor).

Forbindelser med formel la kan isoleres fra deres reaksjonsblandinger ved anvendelse av konvensjonelle teknikker.

Forbindelser med formel I og la, som definert ovenfor og derivater derav, er referert til nedenfor som "forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse".

Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan oppvise tautomerisme. Alle tautomere former og blandinger derav omfattes av omfanget av foreliggende oppfinnelse. Spesielle tautomere former som kan nevnes omfatter de forbundet med stillingen av dobbeltbindingen i amidin-funksjonaliteten i en forbindelse med formel la og stillingen av substituenten R<2>.

Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse inneholder også to eller flere asymmetriske karbonatomer og kan derfor oppvise optisk og/eller diastereoisomerisme. Diastereoisomerer kan separeres ved anvendelse av konvensjonelle teknikker, f.eks. kromatografi eller fraksjonert krystallisasjon. De forskjellige stereoisomerer kan isoleres ved separering av en racemisk eller annen blanding av forbindelsene ved anvendelse av konvensjonelle, f.eks. fraksjonert krystallisasjon eller HPLC, teknikker. Alternativt kan de ønskede optiske isomerer fremstilles ved omsetning av de passende optisk aktive utgangsmaterialer under betingelser som ikke vil forårsake racemisering eller epimerisering eller ved derivatisering, for eksempel med en homochiral syre fulgt av separering av diastereomere derivater ved konvensjonelle metoder (f.eks. HPLC, kromatografi over silika). Alle stereoisomerer omfattes av omfanget av foreliggende oppfinnelse.

Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse hvor fragmentet

er i S-konfigurasjon er foretrukket.

Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse hvor fragmentet

er i /^-konfigurasjon er foretrukket.

De bølgede linjer i bindingene i fragmentene ovenfor betyr bindings-stillinger av fragmentene.

Således omfatter spesielt foretrukne forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse

Ph(3-CI)(5-NHMe)-(fl)CH(OH)C(0)-(S)Aze-Pab; og

Ph(3-CI)(5-NHAc)-(fl)CH(OH)C(0)-(S)Aze-Pab.

Det vil forstås av fagfolk på området at i prosessene beskrevet ovenfor og nedenfor kan de funksjonelle gruppene i mellomprodukt-forbindelsene trenge å være beskyttet med beskyttelsesgrupper.

Funksjonelle grupper som det er ønskelig å beskytte omfatter hydroksy, amino og karboksylsyre. Egnede beskyttelsesgrupper for hydroksy omfatter trialkylsilyl- eller diarylalkylsilylgrupper (f.eks. f-butyldimetylsilyl, f-butyldifenylsilyl eller trimetylsilyl) og tetrahydropyranyl. Egnede beskyttelsesgrupper for karboksylsyre omfatter Ci-6 alkyl eller benzylestere. Egnede beskyttelsesgrupper for amino og amidino omfatter f-butyloksykarbonyl, benzyloksykarbonyl eller 2-trimetylsilyletoksykarbonyl (Teoc). Amidino-nitrogener kan også være beskyttet med hydroksy- eller alkoksygrupper og kan være enten mono- eller dibeskyttet.

Beskyttelse og avbeskyttelse av funksjonelle grupper kan skje før eller etter kobling eller før eller etter hvilken som helst annen reaksjon i de ovennevnte skjemaer.

Beskyttelsesgrupper kan fjernes i henhold til teknikker som er velkjent for fagfolk på området og som beskrevet nedenfor.

Fagfolk på området vil forstå at for å oppnå forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse kan, ved en alternativ og, i noen tilfeller, mer hensiktsmessig, metode, de individuelle prosesstrinn nevnt ovenfor, utføres i en forskjellig rekkefølge og/eller de individuelle reaksjoner kan utføres i et forskjellig trinn i den totale syntese (dvs. substituenter kan tilsettes og/eller kjemiske omdannelser utføres for forskjellige mellomprodukter fra de nevnt ovenfor sammen med en spesiell reaksjon). Dette kan oppheve eller nødvendiggjøre, behovet for beskyttelsesgrupper.

Typen kjemi involvert vil diktere behovet for og typen av beskyttelsesgrupper så vel som sekvensen for utførelse av syntesen.

Anvendelse av beskyttelsesgrupper er fullstendig beskrevet i "Protective Groups in Organic Chemistry", ed. J W F McOmie, Plenum Press (1973) og "Protective Groups in Organic Synthesis", 3. ed., T. W. Greene & P G M Wutz, Wiley-lnterscience (1999).

Beskyttede derivater av forbindelser ifølge oppfinnelsen kan omdannes kjemisk til forbindelser ifølge oppfinnelsen ved anvendelse av standard avbeskyttelsesteknikker (f.eks. hydrogenering). Fagfolk vil også forstå at visse forbindelser med formel la også kan refereres til som "beskyttede derivater" av forbindelser med formel I.

Noen av mellomproduktene referert til ovenfor er nye.

I henhold til et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes således: (a) en forbindelse med formel II som ovenfor definert eller et beskyttet derivat derav; (b) en forbindelse med formel IV, som ovenfor definert eller et beskyttet derivat derav; (c) en forbindelse med formel XIV, som ovenfor definert eller et beskyttet derivat derav; og (d) en forbindelse med formel XV, som ovenfor definert eller et beskyttet derivat derav.

Foretrukne forbindelser med formel II omfatter Ph(3-CI)(5-NHMe)-CH(OH)C(0)OH og Ph(3-CI)(5-NHAc)-CH(OH)C(0)OH. Foretrukne forbindelser med formel III omfatter Ph(3-CI)(5-NHMe)-CH(OH)C(0)-Aze-OH og Ph(3-CI)(5-NHAc)-CH(OH)C(0)-Aze-OH. Foretrukne forbindelser med formel XV omfatter Ph(3-CI)(5-NHMe)-CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) og Ph(3-CI)(5-NHAc)-CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc).

Medisinsk og farmasøytisk anvendelse

Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse kan ha farmakologisk aktivitet som sådanne. Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse som kan ha slik aktivitet omfatter, men er ikke begrenset til, forbindelser med formel I.

Imidlertid kan andre forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse (omfattende forbindelser med formel la) ikke ha slik aktivitet, men kan administreres parenteralt eller oralt og kan deretter metaboliseres i kroppen for å danne forbindelser som er farmakologisk aktive (omfattende, men ikke begrenset til, tilsvarende forbindelser med formel I). Slike forbindelser (som også omfatter forbindelser som kan ha noe farmakologisk aktivitet, men den aktiviteten er vesentlig lavere enn den til de "aktive" forbindelser til hvilke de blir metabolisert), kan derfor betegnes som "prodrug" for de aktive forbindelser.

Således er forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse anvendelige fordi de har farmakologisk aktivitet og/eller blir metabolisert i kroppen etter oral eller parenteral administrering for å danne forbindelser som har farmakologisk aktivitet. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er derfor indikert som farmasøytiske midler.

I henhold til et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse omfattes således et farmasøytisk preparat omfattende en forbindelse som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 13 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, i blanding med et farmasøytisk akseptabelt adjuvans, fortynningsmiddel eller bærer. Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan således anvendes som et farmasøytisk middel.

Spesielt er forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse kraftige inhibitorer av trombin enten som sådanne og/eller (f.eks. i tilfellet av prodrug) blir metabolisert etter administrering for å danne kraftige inhibitorer av trombin, for eksempel som det kan demonstreres i testene beskrevet nedenfor.

Med "prodrug for en trombin-inhibitor" menes forbindelser som danner (dvs. blir metabolisert til) en trombin-inhibitor, i en eksperimentelt detekterbar mengde og innen en forutbestemt tid (f.eks. ca. 1 time), etter oral eller parenteral administrering (se for eksempel Test E nedenfor) eller, alternativt, etter inkubering i nærvær av levermikrosomer (se for eksempel Test G nedenfor).

Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse er således forventet å være nyttige ved de lidelser hvor hemning av trombin er nødvendig og/eller lidelser hvor antikoagulerende terapi er indikert, omfattende de følgende: Behandling og/eller forebygging av trombose og hyperkoagulering i blod og/eller vev av dyr omfattende mennesker. Det er kjent at hyperkoagulering kan føre til tromboemboliske sykdommer. Lidelser forbundet med hyperkoagulering og tromboemboliske sykdommer som kan nevnes, omfatter arvelig eller ervervet aktivert protein C-resistens, så som faktor V-mutasjon (faktor V Leiden) og arvelige eller ervervede mangler i antitrombin III, protein C, protein S, heparin kofaktor II. Andre lidelser kjent å være forbundet med hyperkoagulering og tromboembolisk sykdom omfatter sirkulerende antifosfolipid antistoffer (Lupus antikoagulant), homocysteinemi, heparin-fremkalt trombocytopeni og defekter ved fibrinolyse, så vel som koagulerings-syndromer (f.eks. disseminert intravaskulær koagulering (DIC)) og vaskulær skade generelt (f.eks. på grunn av kirurgi).

Behandling av lidelser hvor det er et uønsket overskudd av trombin uten tegn på hyperkoagulering, for eksempel ved nevrodegenerative sykdommer så som Alzheimers sykdom.

Spesielle sykdomstilstander som kan nevnes omfatter terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av venøs trombose (f.eks. DVT) og pulmonal emboli, arteriell trombose (f.eks. ved myokardialt infarkt, ustabil angina, trombose-basert slag og perifer arteriell trombose) og systemisk emboli vanligvis fra atrium under atrial fibrillering eller fra det venstre hjertekammer etter transmuralt myokardialt infarkt eller forårsaket av kongestiv hjertesvikt; forebygging av reokklusjon (dvs. trombose) etter trombolyse, perkutan transluminal angioplasti (PTA) og koronar bypass-operasjoner; forhindring av re-trombose etter mikrokirurgi og vaskulær kirurgi generelt.

Ytterligere indikasjoner omfatter terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av disseminert intravaskulær koagulering forårsaket av bakterier, multippelt traume, forgiftning eller hvilken som helst annen mekanisme; antikoagulasjonsbehandling når blod kommer i kontakt med fremmede overflater i kroppen så som vaskulære transplantater, vaskulære stenter, vaskulær katetere, mekaniske og biologiske protese-ventiler eller hvilken som helst annen medisinsk anordning; og antikoagulasjonsbehandling når blod kommer i kontakt med medisinske anordninger utenfor kroppen så som under kardiovaskulær kirurgi ved anvendelse av en hjerte-lunge-maskin eller ved hemodialyse; terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av idiopatisk og voksen åndenødssyndrom, pulmonal fibrose etter behandling med stråling eller kjemoterapi, septisk sjokk, septikemi, inflammatoriske responser som omfatter, men er ikke begrenset til, ødem, akutt eller kronisk aterosklerose så som koronar arteriell sykdom og dannelse av aterosklerotisk plaque, cerebral arteriell sykdom, cerebralt infarkt, cerebral trombose, cerebral emboli, perifer arteriell sykdom, ischemi, angina (omfattende ustabil angina), reperfusjonsskade, restenose etter perkutan transluminal angioplasti (PTA) og koronararterie bypass-kirurgi.

Forbindelser ifølge oppfinnelsen som hemmer trypsin og/eller trombin kan også være anvendelige ved behandling av pankreatitt.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er således indikert både for terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av disse lidelser.

I henhold til et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes således anvendelse av en forbindelse som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 13 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som aktiv bestanddel for fremstilling av et medikament for behandling av en lidelse hvor hemning av trombin er nødvendig eller hvor antikoagulerende terapi er indikert, slik som hvor lidelser er trombose, hyperkoagulering i blod og/eller vev. Foreliggende oppfinnelse vedrører videre anvendelse av en forbindelse som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 13 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som aktiv bestanddel for fremstilling av et antikoagulasjonsmiddel.

Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse vil normalt administreres oralt, intravenøst, subkutant, buckalt, rektalt, dermalt, nasalt, trakealt, bronkialt, ved hvilken som helst annen parenteral rute eller ved inhalering, i form av farmasøytiske preparater omfattende aktiv forbindelse enten som en fri base eller et farmasøytisk akseptabelt ikke-toksisk organisk eller uorganisk syreaddisjonssalt eller annet derivat, i en farmasøytisk akseptabel doseform.

Avhengig av lidelsen og pasienten som skal behandles og administreringsveien kan preparatene administreres i varierende doser.

Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan også kombineres og/eller samadministreres med hvilket som helst antitrombotisk middel med en forskjellig virkningsmekanisme, så som antiblodplate-midlene acetylsalicylsyre, ticlopidine, clopidogrel, tromboksan-reseptor og/eller syntetase-inhibitorer, fibrinogen-reseptorantagonister, prostacyclin-mimetika og fosfodiesterase-inhibitorer og ADP-reseptor- (P2T) antagonister og inhibitorer av karboksypeptidase U (CPU).

Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan videre kombineres og/eller samadministreres med trombolytika så som vev-plasminogen-aktivator (naturlig, rekombinant eller modifisert), streptokinase, urokinase, prourokinase, anisoylert plasminogen-streptokinase-aktivator-kompleks (APSAC), dyre-spyttkjertel-plasminogen-aktivatorer og lignende, ved behandling av trombotiske sykdommer, spesielt myokardialt infarkt.

Egnede daglige doser av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse

for terapeutisk behandling av mennesker er ca. 0,001 -100 mg/kg kroppsvekt ved peroral administrering og 0,001-50 mg/kg kroppsvekt ved parenteral administrering.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen har fordelen at de kan være mer effektive, være mindre toksiske, ha lenger virkning, ha et bredere aktivitetsområde, være kraftigere, produsere færre bivirkninger, bli lettere absorbert og/eller ha en bedre farmakokinetisk profil (f.eks. lavere utskilling),

eller ha andre nyttige farmakologiske, fysiske eller kjemiske, egenskaper fremfor forbindelser kjent i tidligere teknikk.

Biologiske tester

De følgende test prosedyrer kan anvendes.

Test A

Bestemmelse av trombin- koaaulerinastid ( TT )

Inhibitor-løsn i ngen (25 blir inkubert med plasma (25 (il) i tre minutter. Human trombin (T 6769; Sigma Chem. Co eller Hematologic Technologies) i bufferløsning, pH 7,4 (25 |il, 4,0 NIH enheter/ml), blir deretter tilsatt og størkningstiden målt i en automatidk anordning (KC 10; Amelung).

Trombin-koaguleringstiden (TT) er uttrykt som absolutte verdier (sekunder) så vel som forholdet av TT uten inhibitor (TT0) til TT med inhibitor (TTi). De sistnevnte forhold (område 1-0) er plottet mot konsentrasjonen av inhibitor (log transformert) og tilpasset til sigmoidale doserespons-kurver i henhold til ligningen

hvor: a = maksimum område, dvs. 1; s = hellingen av doserespons-kurven; og IC5o = konsentrasjonen av inhibitor som dobler størkningstiden. Beregningene blir prosessert på PC ved anvendelse av programvaren GraFit Versjon 3, og sette ligningen lik med: Start ved 0, definer slutt = 1 (Erithacus Software, Robin Leatherbarrow, Imperial College of Science, London, UK).

TestB

Bestemmelse av trombin- hemning med et kromoaen. robotforsøk

Trombininhibitor-styrke blir målt med en kromogen substratmetode, i en Plato 3300 robot mikroplate-prosessor (Rosys AG, CH-8634 Hombrechtikon, Sveits), ved anvendelse av 96-brønn, halvt volum mikrotiter-plater (Costar, Cambridge, MA, USA; Kat. nr. 3690). Lagerløsninger av testsubstans i DMSO (72 fil), 0,1-1 mmol/L, blir fortynnet serielt 1:3 (24 + 48 med DMSO for å oppnå ti forskjellig konsentrasjoner, som blir analysert som prøver i forsøket. 2 (il av testprøve blir fortynnet med 124 |il forsøksbuffer, 12 (il kromogen substratløsning (S-2366, Chromogenix, Molndal, Sverige) i forsøksbuffer og til slutt 12 (il av a-trombinløsning (Human a-trombin, Sigma Chemical Co. eller Hematologic Technologies) i forsøksbuffer, blir tilsatt og prøvene blandet. De endelige forsøkskonsentrasjoner er: testsubstans 0,00068 -13,3 (imol/l, S-2366 0,30 mmol/l, a-trombin 0,020 NIHU/ml. Den lineære absorbans-økning i løpet av 40 minutter inkubering ved 37°C blir anvendt for beregning av prosentdel hemning for testprøver, sammenlignet med blanke uten inhibitor. ICso-robot-verdi, svarende til inhibitorkonsentrasjonen som forårsaker 50% hemning av trombinaktivitet, blir beregnet fra log konsentrasjon vs. % hemningskurve.

TestC

Bestemmelse av hemninoskonstanten Ki for human trombin

Ki-bestemmelser blir utført ved anvendelse av en kromogen substratmetode, utført ved 37°C på en Cobas Bio sentrifugalanalysator (Roche, Basel, Sveits). Gjenværende enzymaktivitet etter inkubering av humant

a-trombin med forskjellige konsentrasjoner av testforbindelse blir bestemt ved tre forskjellige substrat-konsentrasjoner og blir målt som forandring i optisk absorbans ved 405 nm.

Testforbindelse-løsninger (100 pi; normalt i buffer eller saltvann inneholdende BSA 10 g/l) blir blandet med 200 |il av humant a-trombin (Sigma Chemical Co) i forsøksbuffer (0,05 mol/l Tris-HCI pH 7,4, ionestyrke 0,15 regulert med NaCI) inneholdende BSA (10 g/l) og analysert som prøver i Cobas Bio. En 60 |il prøve, sammen med 20 |il vann, blir satt til 320 (il av substratet S-2238 (Chromogenix AB, Molndal, Sverige) i forsøksbuffer og absorbans-forandringen (AA/min) blir overvåket. De endelige konsentrasjoner av S-2238 er 16, 24 og 50 \ imo\/\ og av trombin 0,125 NIH U/ml. Likevekt reaksjonshastigheten blir anvendt for å konstruere Dixon plot, dvs. diagrammer av inhibitor-konsentrasjon vs. 1/(AA/min). For reversible, kompetitive inhibitorer, danner datapunktene for de forskjellige substratkonsentrasjoner typisk rette linjer som avskjæres ved x = -Kj.

TestD

Bestemmelse av aktivert partiell tromboplastin- tid ( APTT)

APTT blir bestemt i samlet normalt humant citrert plasma med reagenset PTT Automated 5 fremstilt av Stago. Inhibitorene blir satt til plasmaet (10 uJ inhibitorløsning til 90 |il plasma) og inkubert med APTT-reagenset i 3 minutter fulgt av tilsetning av 100 (il kalsiumklorid-løsning (0,025 M) og APTT blir bestemt ved anvendelse av koagulerings-analysator KC10 (Amelung) i henhold til instruksjonene fra reagensprodusenten.

Størkningstiden er uttrykt som absoluttverdier (sekunder) så vel som forholdet av APTT uten inhibitor (APTT0) til APTT med inhibitor (APTTj). De sistnevnte forhold (område 1-0) er plottet mot konsentrasjonen av inhibitor (log transformert) og tilpasset til sigmoidale doserespons-kurver i henhold til ligningen

hvor: a = maksimum område, dvs. 1; s = helling av doserespons-kurven; og IC5o = konsentrasjonen av inhibitor som dobler størkningstiden. Beregningene blir prosessert på en PC ved anvendelse av programvaren Gra Fit Versjon 3, ved å sette ligning lik: Start ved 0, definer slutt = 1 (Erithacus Software, Robin Leatherbarrow, Imperial College of Science, London, UK).

IC50APTT er definert som konsentrasjonen av inhibitor i humant plasma som dobler den aktiverte partielle tromboplastin-tid.

TestE

Bestemmelse av trombin- tid ex vivo

Hemning av trombin etter oral eller parenteral administrering av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse, oppløst i etanol:Solutol™:vann (5:5:90), blir undersøkt i bevisste rotter som, én eller to dager før forsøket, blir utstyrt med et kateter for blodprøvetagning fra karotid-arterien. På forsøksdagen blir blodprøver tatt på fastsatte tider etter administrering av forbindelsen, i plastrør inneholdende 1 del natriumcitrat-løsning (0,13 mol pr. L) og 9 deler blod. Rørene blir sentrifugert for å oppnå blodplate-fattig plasma. 50 pl av plasmaprøver blir utfelt med 100 ul kald acetonitril. Prøvene blir sentrifugert i 10 minutter ved 4000 rpm. 75 ul av supernatanten blir fortynnet med 75 pl av 0,2% maursyre. 10 ul volumer av de resulterende løsninger blir analysert ved LC-MS/MS og konsentrasjonene av trombin-inhibitor blir bestemt ved anvendelse av standard kurver.

Test F

Bestemmelse av plasmautskillina i rotte

Plasma-utskilling ble beregnet for Sprague Dawley hannrotter. Forbindelsen ble oppløst i vann og administrert som en subkutan bolus-injeksjon i en dose på 4 u,mol/kg. Blodprøver ble oppsamlet med hyppige intervaller opptil 5 timer etter medikament-administrering. Blodprøvene ble sentrifugert og plasma ble separert fra blodceller og overført til medisinglass inneholdende citrat (10% endelig konsentrasjon). 50 ul av plasmaprøver blir utfelt med 100 ul kald acetonitril. Prøvene blir sentrifugert i 10 minutter ved 4000 rpm. 75 pl av supernatanten blir fortynnet med 75 pl av 0,2% maursyre. 10 pl volumer av de resulterende løsninger blir analysert ved LC-MS/MS og konsentrasjonene av trombin-inhibitor blir bestemt ved anvendelse av standard kurver. Området under plasmakonsentrasjon-tidsprofilen ble beregnet ved anvendelse av log/lineær trapesoid regel og ekstrapolert til uendelig tid.

Plasma-utskilling (CL) av forbindelsen ble deretter bestemt som

Verdiene er angitt i ml/min/kg.

TestG

Bestemmelse av in vitro stabilitet

Lever-mikrosomer ble produsert fra Sprague-Dawley-rotter og humane leverprøver i henhold til indre SOP. Forbindelsene ble inkubert ved 37°C i en total mikrosom-proteinkonsentrasjon på 3 mg/ml i en 0,05 mol/l TRIS-buffer ved pH 7,4, i nærvær av kofaktorene NADH (2,5 mmol/l) og NADPH (0,8 mmol/l). Den innledende konsentrasjon av forbindelse var 5 eller 10 umol/l. Prøver ble tatt for analyse opptil 60 minutter etter starten av inkuberingen. Den enzymatiske aktivitet i den oppsamlede prøven ble umiddelbart stanset ved tilsetning av 20% myristinsyre i et volum svarende til 3,3% av det totale prøvevolum. Konsentrasjonen av forbindelse som var igjen (ENDELIG KONS.) i 60 min. prøve ble bestemt ved hjelp av LCMS ved anvendelse av en prøve oppsamlet på null-tid som referanse (START KONS.). % av nedbrutt trombin-inhibitor ble beregnet som:

TestH

Arteriell trombose- modell

Karskade ble fremkalt ved å påføre jern(lll)klorid (FeCI3) topisk på karotid-arterien. Rotter blir bedøvet med en intraperitoneal injeksjon av natrium-pentobarbital (80 mg/kg; Apoteksbolaget; Umeå, Sverige), fulgt av kontinuerlig infusjon (12 mg/kg/time) gjennom hele forsøket. Rottens kroppstemperatur ble holdt ved 38°C gjennom hele forsøket ved ytre oppvarmning. Forsøket startet med en 5 minutter kontrollperiode. Fem minutter senere ble human 125l-fibrinogen (80 kBq; IM53; Amersham International, Buckinghamshire, UK) gitt intravenøst og ble anvendt som en markør for den påfølgende innføring av fibrin(ogen) i tromben. Den proksimale enden av karotidarterie-segmentet ble plassert i et plastrør (6 mm; Silastic®; Dow Corning, Ml, USA) åpnet langsetter, inneholdende FeCI3-bløtet (2 pl; 55% vekt/vekt; Merck, Darmstadt, Tyskland) filterpapir (diameter 3 mm; 1 F; Munktell, Grycksbo, Sverige). Den venstre karotidarterie ble eksponert for FeCI3 i 10 minutter og ble deretter fjernet fra plastrøret og bløtet i saltvann. 50 minutter senere ble karotidarterien fjernet og skyllet i saltvann. Referanse-blodprøver ble også tatt for bestemmelse av blod <125>l-aktivitet, 10 minutter etter injeksjon av <125>l-fibrinogen og ved slutten av forsøket. <125>l-aktiviteten i referanse-blodprøver og karsegmentet ble målt i en gammateller (1282 Cbmpugamma; LKB Wallac Oy, Turku, Finland) på samme dag som forsøket ble utført. Trombestørrelsen ble bestemt som mengden av <125>l-aktivitet inkorporert i karsegmentet i forhold til 125l-aktiviteten i blodet (cpm/mg).

Oppfinnelsen blir illustrert ved de følgende eksempler.

Generelle eksperimentelle detaljer

TLC ble utført på silikagel.

Chiral HPLC-analyse ble utført ved anvendelse av en 46 mm X 250 mm Chiralcel OD-kolonne med en 5 cm beskyttelseskolonne. Kolonnetemperaturen ble holdt ved 35°C. En strømningshastighet på 1,0 ml/min ble anvendt. En Gilson 115 UV-detektor ved 228 nm ble anvendt. Den mobile fasen besto av heksaner, etanol og trifluroeddiksyre og de passende forhold er angitt for hver forbindelse. Typisk ble produktet oppløst i en minimal mengde av etanol og dette ble fortynnet med den mobile fasen.

LC-MS/MS ble utført ved anvendelse av et HP-1100 instrument utstyrt med en CTC-PAL injektor og en 5 u.m, 4x100 mm ThermoQuest, Hypersil BDS-C18 kolonne. En API-3000 (Sciex) MS-detektor ble anvendt. Strømningshastigheten var 1,2 ml/min og den mobile fasen (gradient) besto av 10-90% acetonitril med 90-10% av 4 mM vandig ammoniumacetat, begge inneholdende 0,2% maursyre.

<1>H NMR-spektra ble registrert ved anvendelse av tetrarrietylsilan som indre standard. <13>C NMR-spektra ble registrert ved anvendelse av de angitte deutererte løsningsmidler som indre standard.

Smeltepunkter er ukorrigerte.

Eksempel 1

Ph( 3- Cn( 5- NHMeHfl) CH( OH) C( OHS) Aze- Pab

(i) Ph( 3- Cn( 5- NHMeH/ 7ICH( OH) C( 0) OH

Metode A:

En blanding av Ph(3-CI)(5-NH2)-(fl)CH(OH)C(0)OH (3,5 g, 16,8 mmol; se internasjonal patentsøknad WO 00/42059) og formaldehyd (1,8 ml 37 vekt% i H20, 23,9 mmol) i EtOH (400 ml) ble omrørt ved 25°C i 18 timer. Løsningen ble konsentrert i vakuum, hvilket ga et knusbart skum som ble kombinert med platina(IV)oksyd (0,35 g) i EtOH (400 ml) og omrørt under en hydrogenatmosfære i 48 timer. Blandingen ble filtrert gjennom en pute av Celite® og filterkaken vasket med EtOH. De organiske faser ble konsentrert i vakuum og "flash" kromatografert på silikagel under eluering med CHCI3:MeOH:konsentrert NH4OH (7:2,5:0,5), hvilket ga 1,0 g (28%) av ammoniumsaltet av undertittelforbindelsen som et knusbart skum. Undertittelforbindelsen ble oppnådd ved spyling av det tilsvarende ammoniumsalt gjennom en pute av Amberlite® CG-50 med CH3CN:MeOH (3:1).

Metode B:

En blanding av Ph(3-CI)(5-NH2)-(fl)CH(OH)C(0)OH (8,67 g, 43,0 mmol; se internasjonal patentsøknad WO 00/42059) og metyljodid (6,10 g, 43,0 mmol) i CH3CN (500 ml) og MeOH (100 ml) ble oppvarmet til 50°C i 24 timer. Løsningen ble konsentrert i vakuum og "flash" kromatografert på silikagel under eluering med CHCI3:MeOH:konsentrert NH4OH (7:2,5:0,5), hvilket ga 2,9 g

(31 %) av ammoniumsaltet av undertittelforbindelsen som et fast stoff. Undertittelforbindelsen ble oppnådd ved spyling av det tilsvarende ammoniumsalt gjennom en pute av Amberlite® CG-50 med CH3CN:MeOH (3:1).

Sm.p.: 58-65°C

Rf = 0,25 (6:3:1 CHCI3:MeOH:konsentrert NH4OH)

<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 6,68 (m, 1H), 6,61 (m, 1H), 6,50 (m, 1H), 4,98 (s, 1H), 2,75 (s, 3H).

<13>CNMR(75 MHz, CD3OD) 8 176,8, 153,4, 144,1, 136,7, 116,3, 113,2, 111,0, 74,7, 31,3

API-MS: (M + 1) = 216m/z

HPLC-analyse: 97,2%, 97,9% ee, Chiralcel OD-kolonne (90:10:0,5 Hex:EtOH:TFA mobil fase).

[a]D2<5>= -81,6° (c = 1,0, MeOH)

(ii) Ph( 3- CM5- NHMeHffiCH( OmC( OHS) Aze- Pabneoc)

Til en blanding av Ph(3-CI)(5-NHMe)-(fl)CH(OH)C(0)OH (0,21 g, 0,97 mmol; se trinn (i) ovenfor) og H-(S)Aze-Pab(Teoc) (0,38 g, 1,02 mmol, se internasjonal patentsøknad WO 00/42059) i DMF (10 ml) ved 0°C ble satt kollidin (0,26 g, 2,13 mmol) og PyBOP (0,56 g, 1,07 mmol). Løsningen ble omrørt ved 0°C i 2 timer, oppvarmet til 25°C, omrørt i 18 timer og deretter konsentrert i vakuum. Omfattende "flash" kromatografi (3x) på silikagel under eluering først med CHCI3:EtOH (9:1), deretter med CHCI3:EtOH (95:5) og til slutt med EtOAc:EtOH (20:1) ga 0,31 g (61%) av undertittelforbindelsen som et knusbart skum.

Sm.p.: 93-98°C

Rf = 0,40 (9:1 CHCI3:EtOH)

<1>H NMR (300 MHz, CD3OD, blanding av rotamerer) 8 7,82 (d, 2H, J= 9 Hz), 7,42 (d, 2H, J = 9 Hz), 6,66 (m, 1H), 6,48-6,59 (m, 2H), 5,13 og 4,78 (m, 1H), 5,02 (s, 1H) 3,96-4,58 (m, 6H), 2,76 (s, 3H), 2,05-2,75 (m, 2H), 1,05-1,13 (m, 2H), 0,07 (s, 9H)

API-MS: (M + 1) = 574m/z

(iii) Ph( 3- CIK5- NHMeHfl) CH( OH) C( OHS) Aze- Pab

Til en iskald løsning av Ph(3-CI)(5-NHMe)-(lf)CH(OH)C(0)-(S)Aze-Pab(Teoc) (71 mg, 0,12 mmol fra trinn (ii) ovenfor) i metylenklorid (10 ml) ble tilsatt TFA (1 ml) og blandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og 1 time ved romtemperatur, hvoretter den resulterende blanding ble konsentrert /' vakuum. Resten ble oppløst i vann og frysetørket, hvilket ga 79 mg (97%) av tittelforbindelsen.

<1>H NMR (500 MHz, CD3OD): (kompleks på grunn av diastereomerer/rotamerer) 8 7,74 (d, 2H), 7,52 (d, 2H); 7,03 (t, 0.25H, mindre rotamer); 6,98 (t, 0.25H, mindre rotamer); 6,96 (t, 0.75H, større rotamer); 6,93 (t, 0.25H, mindre rotamer); 6,89 (t, 0.25H, større rotamer); 6,84 (t, 0.25H, større rotamer); 5,22 (dd, 0.25H, mindre rotamer); 5,12 (s, 0,75H, større rotamer); 5,10 (s, 0.25H, mindre rotamer); 4,80 (dd, 0.75H, større rotamer); 4,58-4,44 (mange topper,

2H); 4,34 (m, 0.75H, større rotamer); 4,12-3,95 (mange topper, 1.25H); 2,87 (s, 0.75H, mindre rotamer); 2,83 (s, 2.25H, større rotamer); 2,70 (m, 0.25H, mindre rotamer); 2,53 (s, 0.75H, større rotamer); 2,27 (m, 0.75H, større rotamer); 2,15 (s, 0.25H, mindre rotamer).

<13>C NMR (100 MHz, CDCI3): (karbonyl- og/eller amidin-karbonatomer) 8174,2; 173,6; 172,9; 168,1.

MS: (M+1)430 m/z

Eksempel 2

Parallell syntese av alkoksvamidiner

Denne syntese ble utført i en 96-brønn Robbins blokk.

Til en brønn inneholdende en passende mengde av O-substituert hydroksylamin (spesifisert nedenfor) ble satt en løsning av Ph(3-CI)(5-NHMe)-(fl)CH(OH)C(0)-(S)Aze-Pab(Teoc) (10 mg; 17 pmol; se Eksempel 1(ii) ovenfor) i acetonitril (1,0 ml). Blokken ble lukket og reaksjonsblandingen ble rotert natten over i en ovn ved 60°C. Etter avkjøling og filtrering ble de faste stoffene vasket med acetonitril (3 x 0,3 ml). De samlede væske-fraksjoner ble konsentrert i en vakuumsentrifuge. Residuet ble fordelt mellom vann (0,4 ml) og etylacetat (0,4 ml). Etter væske-væske-ekstraksjon ble alt filtrert gjennom en kolonne av Hydromatrix™. Etter vasking tre ganger med etylacetat ble de samlede filtrater konsentrert i en vakuumsentrifuge. Avbeskyttelse ble utført ved tilsetning av metylenklorid (0,1 ml) og trifluoreddiksyre (0,3 ml). Etter omrøring ved romtemperatur i 3 timer ble løsningsmidlene fjernet i vakuum. Residuet ble fordelt mellom natriumhydrogenkarbonat (0,5 ml av en mettet vandig løsning) og etylacetat (0,5 ml). Etter ekstraksjon, filtrering gjennom Hydromatrix™ og konsentrasjon (se nedenfor), ble residuet oppløst i isopropanol/vann (7/3) (1 ml). Ca. 2% av denne løsningen ble fjernet og fortynnet med isopropanol/vann (7/3) (1 ml) for LC-MS-analyse. Etter fjerning av løsningsmidlene i vakuum ble det faste residuet overført til en 96-brønn plate ved anvendelse av acetonitril og etylacetat for å oppløse forbindelsen. Løsningsmidlene ble avdampet i en vakuumsentrifuge, hvilket ga de følgende tittelforbindelser (alle utgangsmaterialer var kommersielt tilgjengelige): 2.1 Ph( 3- CI) f5- NHMe)-( fflCHfOH) CrO)-( S) Aze- Pab( OCHg- 3- isoksazol( 5- Me)) Fremstilt ved anvendelse av 3-[(aminooksy)metyl]-5-metylisoksazol x HCI (21 mg; 0,13 mmol). Utbytte: 4,66 mg (50%)

LC (254 mn) 100%

MS(m/z)541 (M+1)<+>

2.2 Phf3- Cn( 5- NHMe)-(/ 7>CHfOH) CfO)- rS) Aze- PabfOCH?- 3- pvridin)

Fremstilt ved anvendelse av 3-[(aminooksy)metyl]pyridin x 2HCI (17 mg; 86 umol). Utbytte: 7,56 mg (81%).

LC: 100%

MS(m/z)537 (M+1)+

2.3 Ph( 3- CI)( 5- NHMe)- fff) CH( OH) CfO)- rS) Aze- PabfOBu)

Fremstilt ved anvendelse av Oisob uty I hydroksy I am in x HCI (13 mg; 104 pmol). Utbytte: 4,9 mg (56%).

LC: 100%

MS(m/z) 502 (M+1)+

2.4 Ph( 3- CM5- NHMeHfl>CH( OH) C( OWS) Aze- PabfOEt)

Fremstilt ved anvendelse av Oetylhydroksylamin x HCI (13 mg; 133 umol). Utbytte: 7,13 mg (86%).

LC: 100%

MS(m/z) 474 (M+1)+

2.5 Ph( 3- Cn( 5- NHMe)-( ff) CH( OH) C( Q)-( S) Aze- Pab( OBn)

Fremstilt ved anvendelse av O-benzylhydroksylamin x HCI (18 mg; 113 umol). Utbytte: 5,76 mg (62%).

LC: 100%

MS(m/z)536 (M+1)+

2.6 Ph( 3- CI)( 5- NHMe)- f/ ?) CH( OH) C( 0)- r^ Aze- Pab( OcHeksvl)

Fremstilt ved anvendelse av O-cykloheksylhydroksylamin x HCI (12 mg; 79 umol). Utbytte: 7,09 mg (77%).

LC: 100%

MS(m/z)528(M+1)<+>

2.7 Ph( 3- Cn( 5- NHMe)-( ff) CH( OH) C( 0)-( S) Aze- Pab( OcButvn Fremstilt ved anvendelse av O-cyklobutylhydroksylamin x HCI (16 mg; 130 pmol). Utbytte: 6,24 mg (72%).

LC: 100%

MS(m/z)500 (M+1)+

2.8 Ph( 3- CIV5- NHMe)- rff) CH( OH) C( 0)-^ Aze- Pab( OCHp- 4- tiadiazol-( 5- Cn) Fremstilt ved anvendelse av 4-(aminooksy)metyl-5-klor-1,2,3-tiadiazol x HCI (16 mg; 79 Mmol). Utbytte: 10,4 mg (100%).

LC: 100%

MS(m/z)578 (M+1)+

2.9 Phf3- CI)( 5- NHMe)- fff>CH( OH) CfOMS) Aze- Pab( OCHpCH?OPhr3-

CF3))

Fremstilt ved anvendelse av 0-[2-[3-(trifluormetyl)fenoksy]etyl]hydroksylamin x HCI (21 mg; 82 umol). Utbytte: 7,44 mg (65%).

LC: 96%

MS(m/z) 634 (M+1)+

2.10 Ph( 3- CM5- NHMeH/ 7>CH( OmaOHS) Aze- Pab( OBn( 3- MeO))

Fremstilt ved anvendelse av 0-(3-metoksybenzyl)hydroksylamin x HCI (20 mg; 105 umol). Utbytte: 5,07 mg (51%).

LC: 100%

MS(m/z)566(M+1)<+>

2.11 Ph( 3- Cnr5- NHMe)- r/ ?) CH( OH) CfO)- fS) Aze- Pab( OBnf2- Bm Fremstilt ved anvendelse av 0(2-brombenzyl)hydroksylamin x HCI (24 mg; 101 Mmol). Utbytte: 5,01 mg (47%).

LC: 100%

MS(m/z) 616(M+1)+

2.12 Ph( 3- Cnf5- NHMeHfl) CH( OH) C( OHS) Aze- Pab( 0Bn( 4- Me))

Fremstilt ved anvendelse av 0-(4-metylbenzyl)hydroksylamin x HCI (17 mg; 98 Mmol). Utbytte: 6,00 mg (63%).

LC: 100%

MS(m/z) 550 (M+1)+

<1>H NMR (400 MHz; CDCI3): 8 7,99 (bt, 1H), 7,56 (d, 2H), 7,32 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 7,16 (d, 2H), 6,59 (t, 1H), 6,51 (t, 1H), 6,37 (t, 1H), 5,07 (s, 2H), 4,86 (bs, 1H), 4,84 (m, 2H), 4,76 (s, 1H), 4,44 (m, 2H), 4,03 (m, 1H), 3,70 (m, 1H), 2,75 (s, 3H), 2,60 (m, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,34 (m, 1H).

<13>C NMR (100 MHz; CDCI3): (karbonyl- og/eller amidin-karbonatomer) 8172,3, 171,1,170,0,151,8 eller 150,9.

Eksempel 3

Ph( 3- Cn( 5- NHMe)-( ff) CHfOH) C( OMS) Aze- Pab( OMe)

(i) Ph( 3- CM5- NHMeHfflCH( OmaOHS) Aze- Pab( OMe. Teoc)

Ph(3-CI)(5-NHMe)-(/<=>?)CH(OH)C(0)-(S)Aze-Pab(Teoc) (0,043 g; 0,075 mmol, se Eksempel 1 (ii) ovenfor) og O-metylhydroksylamin x HCI (0,045 g; 0,54 mmol) i THF (5 ml) ble tilbakeløpskokt natten over. Etter konsentrasjon under redusert trykk ble residuet oppløst i etylacetat og vasket med vann og saltvann. Tørking (Na2S04) og fjerning av løsningsmidlet i vakuum ga undertittelforbindelsen som et fargeløst, fast stoff. Utbytte: 0,045 g (100%). MS(m/z) 604 (M+1)<+>, 602 (M-1)"

(ii) Ph( 3- CI)( 5- NHMeHflK) H( OH) aO)-( S) Aze- Pab( OMe)

Trifluoreddiksyre (1,0 ml) ble satt til en omrørt, is/vann-avkjølt løsning av Ph(3-CI)(5-NHMe)-(fl)CH(OH)C(0)-(S)Aze-Pab(OMe, Teoc) (45 mg; 74 pmol; se trinn (i) ovenfor) i metylenklorid (10 ml). Kjølebadet ble fjernet etter 1,5 timer. Etter 1 time ved romtemperatur ble acetonitril tilsatt og løsningsmidlene ble forsiktig fjernet under redusert trykk. Råproduktet ble renset ved anvendelse av reversert-fase HPLC (acetonitril: 0,1 M vandig ammoniumacetat) hvilket ga, etter frysetørking av de passende fraksjoner, tittelforbindelsen som et fargeløst, fast stoff. Utbytte: 19 mg (56%).

MS(m/z) 460 (M+1)<+>, 458 (M-1V

<1>H NMR (300 MHz; CDCI3): 6 8,02 (bt, 1H), 7,60 (d, 2H), 7,32 (d, 2H), 6,64 (s, 1H), 6,56 (s, 1H), 6,40 (s, 1H), 4,87 (m, 2H), 4,8 (s, 1H), 4,47 (m, 2H), 4,06 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,70 (m, 1H), 3,0 (bs, 1H), 2,80 (s, 3H), 2,65 (m, 1H), 2,40 (m, 1H).

<13>C NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl- og/eller amidin-karbonatomer) 8173,9, 172,7,155,1.

Eksempel 4

Ph( 3- CI)( 5- NHEtHfflCH( OH) C( 0)-( S) Aze- Pab

(i) 3. 5- dinitrobenzvlalkohol

Til en løsning av 3,5-dinitrobenzosyre (213,0 g, 1,00 mol) i vannfri THF (1500 ml) ved 0°C ble satt boran-tetrahydrofuran-kompleks (1,51 av 1M i THF, 1,50 mol) over 1 time. Den resulterende heterogene blanding ble omrørt ved 0°C i 3 timer og ved 25°C i 18 timer. Den resulterende homogene løsning ble behandlet med H20 og konsentrert i vakuum inntil faste stoffer var til stede. De faste stoffene ble filtrert, vasket med H20 og oppløst i EtOAc. Det vandige filtratet ble ekstrahert med EtOAc. De samlede organiske lag ble vasket med vandig NaHC03 og saltvann, tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket ga 176,0 g (89%) av undertittelforbindelsen som et fast stoff som ble anvendt uten ytterligere rensning.

<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 8,88 (m, 1H), 8,55-8,68 (m, 2H), 4,83 (s, 2H).

(ii) 3- am ino- 5- n itrobenzvlalkohol

Til en løsning av 3,5-dinitrobenzylalkohol (129,1 g, 0,65 mol; fra trinn (i) ovenfor) i MeOH (1500 ml) ved tilbakeløp ble satt ammoniumsulfid (450 ml, 442,9 g 20 vekt% i H20,1,30 mol) over 45 min. Den resulterende heterogene blanding ble tilbakeløpskokt i 2 timer og omrørt ved 25°C i 18 timer. Løsningen ble filtrert gjennom en pute av Celite, filtratet ble surgjort med 2N HCI og MeOH avdestillert i vakuum. Den gjenværende sure vandige løsningen ble vasket med Et20 (3x) og gjort basisk med 6N NaOH. Den basiske, vandige løsningen ble ekstrahert med Et20 (4x). De organiske ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket ga 95,8 g (88%) av undertittelforbindelsen som et oransje, fast stoff som ble anvendt uten ytterligere rensning.

<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,46 (m, 1H), 7,38 (m, 1H), 6,98 (m, 1H), 4,57 (s, 2H).

(iii) 3- klor- 5- nitrobenzvlalkohol

Til en suspensjon av 3-amino-5-nitrobenzylalkohol (103,8 g, 0,62 mol; fra trinn (ii) ovenfor) i 1,01 6N HCI ved -5°C ble satt natriumnitritt (47,1 g, 0,68 mol) i H20 (400 ml) over 45 min. Den resulterende løsning ble omrørt ved -5°C i 1 time før tilsetning av en blanding av kobbe r( 11) klorid (125,0 g, 0,93 mol) og kobber(l)klorid (0,74 g, 0,007 mol) i 6N HCI (1,0 L) over 1 time mens temperaturen ble holdt under 0°C. Den resulterende løsningen ble oppvarmet til 60-70°C i 2,5 timer og deretter avkjølt til romtemperatur og ekstrahert med Et20 (6x). De organiske faser ble vasket med saltvann (2x), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket ga råproduktet. "Flash" kromatografi på silikagel under eluering med Hex:EtOAc (4:1) ga 81,7 g (70%) av undertittelforbindelsen som et gråhvitt, fast stoff. Undertittelforbindelsen kunne renses ytterligere ved krystallisering fra CH2CI2.

Sm.p.: 74-75 °C

<1>H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 8,14 (s, 2H), 7,72 (s, 1H), 4,83 (d, 2H, J= 7 Hz), 2,18 (t, 1H, J=7Hz)

CI-MS: (M + 1) = 188m/z

(iv) 5- amino- 3- klorbenzvlalkohol

Metode A:

Til en løsning av 3-klor-5-nitrobenzylalkohol (31,0 g, 165 mmol; se trinn (iii) ovenfor) i EtOH (800 ml) ble satt platina(IV)oksyd (5 g). Suspensjonen ble omrørt under én atmosfære av hydrogen i 24 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom Celite<®> og filterkaken ble vasket med EtOH. Filtratet ble konsentrert i vakuum, hvilket ga en brun olje som ble "flash" kromatografert på silikagel under eluering med Hex:EtOAc (1:1), hvilket ga 12,1 g (46%) av undertittelforbindelsen som en oransje olje.

Metode B:

Til en løsning av 3-klor-5-nitrobenzylalkohol (9,5 g, 50,6 mmol; se trinn (iii) ovenfor) i EtOAc (150 ml) ble satt 5% sulfidert Pt/C (4,7 g). Suspensjonen ble omrørt under én atmosfære av hydrogen i 5 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom Celite<®> og filterkaken ble vasket med EtOAc. Filtratet ble konsentrert i vakuum, hvilket ga 7,6 g (95%) av undertittelforbindelsen som et fast stoff, som ble anvendt uten ytterligere rensning.

<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 6,68 (s, 1H), 6,62 (m, 2H), 4,47 (s, 2H).

(v) 3- klor- 5-( NHAc) benzvlacetat

Til en løsning av 5-amino-3-klorbenzylalkohol (14,1 g, 89,5 mmol; se trinn (iv) ovenfor) i pyridin (500 ml) ved 0°C ble satt dråpevis eddiksyreanhydrid

(36,5 g, 358 mmol). Blandingen ble oppvarmet til romtemperatur og omrørt i 5 timer. Blandingen ble konsentrert i vakuum og fortynnet med EtOAc (300 ml). De organiske faser ble suksessivt vasket med 2N HCI (3 x 300 ml), mettet NaHC03 (200 ml) og saltvann (200 ml), og deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket ga 20,5 g (95%) av undertittelforbindelsen som et brunt, fast stoff som ble anvendt uten ytterligere rensning.

<1>H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 7,62 (bs, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 5,02 (s, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,10 (s, 3H)

(vi) 3- klor- 5- tNHEt) benzvlalkohol

Litiumaluminiumhydrid (12,9 g, 339 mmol) ble tilsatt i porsjoner til en mekanisk omrørt løsning av 3-klor-5-(NHAc)benzylacetat (20,5 g, 84,8 mmol; fra trinn (v) ovenfor) i THF (600 ml) ved 0°C. Suspensjonen ble tilbakeløpskokt i 3 timer, avkjølt til 0°C og suksessivt behandlet med H20 (13 ml), 3N NaOH (13 ml) og H20 (40 ml). De faste stoffene ble fjernet ved filtrering over Celite<®> og vasket med EtOAc (500 ml). Filtratet ble konsentrert i vakuum, hvilket ga 15,7 g (100%) av undertittelforbindelsen som en oransje olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.

<1>H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 6,62 (s, 1H), 6,47 (s, 1H), 6,44 (s, 1H), 6,42 (s, 1H), 4,52 (s, 2H), 3,12 (q, J= 7,5 Hz, 2H), 1,25 (t, J= 7,5 Hz, 3H)

(vii) 3- klor- 5-( NHEt) benzaldehvd

Oksalylklorid (12,0 g, 94,8 mmol) ble satt dråpevis til en løsning av dimetylsulfoksyd (14,8 g, 190 mmol) i CH2CI2 (400 ml) ved -78°C. Etter 30 min. ved -78°C ble en løsning av 3-klor-5-(NHEt)benzylalkohol (15,7 g, 86,2 mmol; fra trinn (vi) ovenfor) i CH2CI2 (250 ml) tilsatt dråpevis over 30 min. Etter 30 min. ved -78°C, ble diisopropyletylamin (55,7 g, 431 mmol) tilsatt dråpevis og blandingen ble oppvarmet til romtemperatur natten over. Blandingen ble suksessivt vasket med 1N HCI (1,01), H20 (500 ml) og saltvann (2 x 500 ml), tørket (Na2S04) og konsentrert i vakuum, hvilket ga en brun olje. "Flash" kromatografi på silikagel under eluering med Hex:EtOAc (7:1) ga 6,40 g (40%) av undertittelforbindelsen som et gult, fast stoff.

<1>H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 9,87 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 6,90 (s, 1H), 6,77 (s, 1H), 3,90 (bs, 1H), 3,20 (m, 2H), 1,25 (t, J= 7,5 Hz, 3H)

(viii) 3- klor- 5-( NEt)- 5-( N- trifluoracetvnbenzaldehvd

Trifluoreddiksyreanhydrid (9,26 g, 44,1 mmol) ble satt dråpevis til en løsning av 3-klor-5-(NHEt)benzaldehyd (5,40 g, 29,4 mmol; fra trinn (vii) ovenfor) og pyridin (3,49 g, 44,1 mmol) i CH2CI2 (150 ml) ved 0°C. Blandingen ble oppvarmet til romtemperatur og omrørt natten over. Blandingen ble suksessivt vasket med mettet Na2C03 (150 ml) og 1N HCI (150 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket ga 7,46 g (91%) av undertittelforbindelsen som et gult, fast stoff som ble anvendt uten ytterligere rensning.

<1>H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 10,0 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 3,80 (m, 2H), 1,20 (t, J= 7,5 Hz, 3H)

(ix) Ph( 3- Cn( 5- NEM5- N- trifluoracetvl)- CH( OTMS) CN

Til en løsning av 3-klor-5-(NEt)-5-(N-trifluoracetyl)benzaldehyd (7,46 g, 26,7 mmol; fra trinn (viii) ovenfor) i CH2CI2 (150 ml) ved 0°C ble satt Znl2 (425 mg, 1,34 mmol) og trimetylsilylcyanid (2,90 g, 29,3 mmol). Løsningen ble omrørt natten over ved romtemperatur. Blandingen ble vasket med H20 (100 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket ga 9,30 g (92%) av undertittelforbindelsen som en oransje olje som ble anvendt uten ytterligere rensning.

<1>H NMR (300 MHz, CDCI3) 8 7,58 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 5,52 (s, 1H), 3,80 (q, J= 7,5 Hz, 2H), 1,20 (t, J= 7,5 Hz, 3H), 0,30 (s, 9H)

(x) Ph( 3- CM5- NHEtHtfS) CH( OH) C( 0) OH

Ph(3-CI)(5-NEt)(5-N-trifluoracetyl)CH(OTMS)CN (1,40 g, 3,69 mmol; fra trinn (ix) ovenfor) ble tilbakeløpskokt i konsentrert HCI (10 ml) i 6 timer på hvilket tidspunkt, blandingen ble konsentrert i vakuum, hvilket ga et brunt, fast stoff. "Flash" kromatografi på silikagel under eluering med CHCI3:MeOH:konsentrert NH4OH (6:3:1) ga ammoniumsaltet av undertittelforbindelsen som ble oppløst i H20, surgjort (pH~5) med 1M HCI og ekstrahert med EtOAc (3x15 ml). De samlede organiske lag ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket ga 540 mg (64%) av undertittelforbindelsen som et brunt, fast stoff.

<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 6,69 (s, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,03 (s, 1H), 3,10 (q, J=7,1 Hz, 2H), 1,21 (t, J=7,2 Hz, 3H)

(xi) Ph( 3- CI)( 5- NHEtH/ 7) CH( OH) C( Q) OH fa) oa Ph( 3- CI) t5- NHEt)-( S) CH( OAc) aO) OH tb)

En blanding av Ph(3-CI)(5-NHEt)-(fl,S)CH(OH)C(0)OH (540 mg, 2,36 mmol; fra trinn (x) ovenfor) og Lipase PS "Amano" (280 mg) i vinylacetat (15 ml) og MTBE (15 ml) ble oppvarmet ved tilbakeløp i 22 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom Celite<®> og filterkaken vasket med EtOAc (100 ml). Filtratet ble konsentrert i vakuum og underkastet "flash" kromatografi på silikagel under eluering med CHCI3:MeOH:konsentrert NH4OH (6:3:1) hvilket ga ammoniumsaltene av undertittelforbindelsene (a) og (b). Ammoniumsaltet av undertittelforbindelsen (a) ble tatt opp i EtOAc (10 ml) og nøytralisert med 2M HCI i Et20 (0,65 ml). Vann (10 ml) ble tilsatt og lagene ble separert. Det vandige laget ble ekstrahert med EtOAc (2 x 20 ml) og de samlede organiske ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket ga 260 mg (48%) av undertittelforbindelsen (a) som et hvitt, fast stoff. Ammoniumsaltet av undertittelforbindelsen (b) (260 mg, 46%) ble anvendt uten ytterligere manipulering eller karakterisering.

For undertittelforbindelse (a):

<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 6,69 (s, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,03 (s, 1H), 3,10 (q, J= 7,1 Hz, 2H), 1,21 (t, J=7,2 Hz, 3H)

For undertittelforbindelse (b):

<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 6,69 (s, 1H), 6,65 (s, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,70 (s, 1H), 3,08 (q, J= 7,1 Hz, 2H), 2,14 (s, 3H), 1,20 (t, J= 7,2 Hz, 3H)

(xii) Ph( 3- Cn( 5- NEt)- ffl) CHrOH) CrO)- raAze- PabrTeoc)

Til en løsning av Ph(3-CI)(5-NHEt)-(fl)CH(OH)C(0)OH (260 mg, 1,22 mmol; undertittelforbindelse (a) fra trinn (xi) ovenfor) og H-(S)Aze-Pab(Teoc) (602 mg, 1,34 mmol) i DMF (10 ml) ved 0°C ble satt PyBOP (698 mg, 1,34 mmol) og kollidin (517 mg, 4,27 mmol). Løsningen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter oppvarmet til romtemperatur og omrørt natten over. Blandingen ble fordelt med EtOAc (3 x 50 ml) og H20 (50 ml). De samlede organiske lag ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. "Flash" kromatografi på silikagel under eluering med CHCI3:MeOH (20:1) fulgt av rekromatografi (2x) under eluering med EtOAc:EtOH (20:1) ga 157 mg (22%) av undertittelforbindelsen som et hvitt, fast stoff.

Sm.p.: 95-100°C

Rf = 0,40 (15:1 CHCI3:MeOH)

<1>H NMR (300 MHz, CD3OD, blanding av rotamerer) 8 7,80 (d, J= 8,2 Hz, 2H), 7,41 (d, J= 8,2 Hz, 2H), 6,63 (s, 1H), 6,57 (s, 1H), 6,53 (s, 1H), 5,10-5,15 (m, 1H), 5,00 (s, 1H), 4,74-4,81 (m, 1H), 4,20-4,52 (m, 5H), 3,90-4,10 (m, 2H), 3,07 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 2,44-2,68 (m, 1H), 2,14-2,33 (m, 1H), 1,21 (t, J= 7,1 Hz, 3H), 1,08 (t, J= 8,6 Hz, 2H), 0,08 (s, 9H)

API-MS (M + 1) = 588m/z

(xiii) Ph( 3- Cnt5- NHEtHfl) CH( OH) C( OWS) Aze- Pab

TFA (4,0 ml) ble satt til en løsning av Ph(3-CI)(5-NHEt)-(fl)CH(OH)C(0)-(S)Aze-Pab(Teoc) (0,090 g, 0,15 mmol; fra trinn (xii) ovenfor) i DCM (2 ml) ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 15 minutter. Løsningsmidlet ble avdampet uten oppvarmning. Produktet ble oppløst i acteonitril og vann (1:5) og frysetørket, hvilket ga 70 mg (68%) av tittelforbindelsen.

<1>H NMR (500 MHz; D20): 8 7,70-7,12 (m, 7H), 5,23-4,72 (m, 2H), 4,40-3,92 (m, 5H), 3,24 (m, 2H), 2,55 (m, 1H), 2,10 (m, 1H), 1,14 (m, 3H) LC-MS (m/z)444(M+1)+

Eksempel 5

Ph( 3- CI)( 5- NHAcHfl) CH( OH) C( OHS) Aze- Pab

fn Ph( 3- CI)( 5- NHAcHfl>CH( OmC( 0) OH

En løsning av Ph(3-CI)(5-NH2)-(fl)CH(OH)C(0)OH (1,5 g, 7,44 mmol; se internasjonal patentsøknad WO 00/42059) i pyridin (100 ml) ved 0°C ble behandlet med eddiksyreanhydrid (0,77 ml, 0,84 g, 8,18 mmol). Etter 30 min. ble ytterligere eddiksyreanhydrid (0,35 ml) tilsatt og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 25°C. Etter 1 time ble en tredje aliquot av eddiksyreanhydrid (0,17 ml) tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved 25°C i 18 timer. Løsningen ble konsentrert i vakuum, residuet tørket, oppløst i MeOH, gjort basisk med 2N NaOH og omrørt i 3 timer. Løsningen ble nøytralisert med overskudd av Amberlite CG-50 og filtrert gjennom en pute av Celite. De organiske faser ble konsentrert i vakuum og "flash" kromatografert på silikagel under eluering med CHCI3:MeOH:konsentrert NH4OH (7:2,5:0,5), hvilket ga 1,5 g (83%) av ammoniumsaltet av undertittelforbindelsen som et fast stoff med en chiral renhet på 89% ee ved chiral HPLC-analyse.

På grunn av den lave chirale renhet av undertittelforbindelsen ble det tilsvarende salt nøytralisert med Amberlite CG-50 og underkastet enzymatisk spaltning (0,3 g Lipase PS Amano; 20 ml MTBE; 20 ml vinylacetat; 55°C; 18 timer). Filtrering gjennom Celite fulgt av konsentrering og "flash" kromatografi på silikagel under eluering med CHCI3:MeOH:konsentrert NH4OH (6:3:1) ga 1.0 g av ammoniumsaltet av undertittelforbindelsen som et knusbart skum. Undertittelforbindelsen ble oppnådd som et fast stoff ved fordeling av det tilsvarende ammoniumsalt mellom 1 M HCI og EtOAc og konsentrering av de organiske faser i vakuum.

Sm.p.: 155-157°C

Rf = 0,25 (6:3:1 CHCI3:MeOH:konsentrert NH4OH)

<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7,76 (m, 1H), 7,49 (m, 1H), 7,22 (s, 1H), 5,12 (s, 1H), 2,13 (s, 3H).

<13>C NMR (75 MHz, CD3OD) 8 175,5, 172,0, 143,6, 141,4, 135,5, 123,2, 120,5, 117,6, 73,5, 24,0.

API-MS: (M + 1) = 244m/z

HPLC-analyse: 96,3%, 95,7% ee, Chiralcel OD-kolonne (92:8:0,5 Hex:EtOH:TFA mobil fase).

[a]D<25> = -99,4° (c = 1,0, MeOH)

(ii) Ph( 3- CI)( 5- NHAcHfl) CHtOH) aOHS) Aze- Pabfreoc)

Til en blanding av Ph(3-CI)(5-NHAc)-(fl)CH(OH)C(0)OH (0,25 g,

1.01 mmol; se trinn (i) ovenfor) og H-(S)Aze-Pab(Teoc) (0,40 g, 1,06 mmol, se

internasjonal patentsøknad WO 00/42059) i DMF (15 ml) ved 0°C ble satt kollidin (0,27 g, 2,22 mmol) og PyBOP (0,58 g, 1,11 mmol). Løsningen ble omrørt ved 0°C i 2 timer, oppvarmet til 25°C, omrørt i 18 timer og deretter konsentrert i vakuum. Residuet ble oppløst i EtOAc og vasket med H20 og saltvann. De organiske faser ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Omfattende "flash" kromatografi (3x) på silikagel under eluering først med CHCI3:EtOH (95:5) deretter med CH2CI2:MeOH:konsentrert NH4OH

(94:5:1) og til slutt med CH2CI2:MeOH:konsentrert NH4OH (88,5:10:1,5) ga 0,40 g (66%) av undertittelforbindelsen som et knusbart skum.

Sm.p.: 65-72°C

Rf = 0,45 (9:1 CH2CI2:MeOH)

<1>H NMR (300 MHz, CD3OD, blanding av rotamerer) 8 7,79 (d, 2H, J= 9 Hz), 7,68 (m, 1H), 7,35-7,53 (m, 3H), 7,18 og 7,15 (m, 1H), 5,18 og 4,79 (m, 1H), 5,14 og 5,09 (s, 1H), 3,93-4,55 (m, 6H), 2,05-2,78 (m, 2H), 2,12 (s, 3H), 1,03-1,13 (m,2H), 0,08 (s, 9H).

API-MS: (M + 1) = 602m/z

(iii) Ph( 3- Cn( 5- NHAcHfflCH( OH) C( OHS) Aze- Pab

Til en løsning av Ph(3-CI)(5-NHAc)-(fl)CH(OH)C(0)-(S)Aze-Pab(Teoc)

(0,11 g, 0,18 mmol; se trinn (ii) ovenfor) i 2 ml CH2CI2 ble satt 2 ml TFA. Blandingen fikk reagere i 4 timer og ble deretter inndampet. Råproduktet ble renset ved anvendelse av PHPLC (C8 kolonne, 50 x 250 mm, gradient: 0 til 50% CH3CN, 60 ml/min). Etter inndampning ble residuet frysetørket fra vann-eddiksyre. Utbytte: 95 mg av tittelforbindelsen som et acetatsalt (99%).

<1>H NMR (500 MHz, D20, blanding av rotamerer): 8 7,66 (m, 2H), 7,50 (m, 1H mindre rotamer), 7,45-7,35 (m, 3H), 7,22 (m, 1H), 7,07 (m, 1H mindre rotamer), 5,25 (m, 1H rotamer), 5,15-5,10 (m, 2H rotamer) 4,84 (m, 1H rotamer), 4,55-4,45 (m, 2H rotamer), 4,41 (m, 1H rotamer), 4,28 (d, 1H rotamer), 4,18-3,95 (m, 2H rotamer), 2,78 (m, 1H rotamer), 2,58 (m, 1H rotamer), 2,35-2,16 (m, 1H), 2,13 (s, 3H rotamer), 2,11 (s, 3H rotamer), 1,92 (s, 3H).

<13>C NMR (125 MHz, D20): 8 173,9, 173,1, 173,0, 172,80, 172,76, 172,6, 166,6, 166,5.

MS: (M+1)458 m/z

Eksempel 6

Ph( 3- CI)( 5- NHAcHfl) CH( OmC( OHS) Aze- Pab( OiPr)

En blanding av Ph(3-CI)(5-NHAc)-(fl)CH(OH)C(0)-(S)Aze-Pab(Teoc) (60 mg, 0,10 mmol; se Eksempel 5(ii) ovenfor) og H2NOiPr x HCI (70 mg, 0,63 mmol) i THF (5 ml) ble oppvarmet til 60°C natten over. Løsningsmidlet ble avdampet og det rå residuet ble fordelt mellom vann og EtOAc. Vannfasen ble ekstrahert med EtOAc og de organiske lag ble tørket (Na2S04) og konsentrert, hvilket ga 65 mg (100%) av tittelforbindelsen. Råmaterialet ble oppløst i DCM (2 ml) ved romtemperatur, TFA (2,0 ml) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt i 1 time. Løsningsmidlet ble avdampet uten oppvarmning og det rå residuet ble fordelt mellom vann og EtOAc. Vannfasen ble ekstrahert med EtOAc og den organiske fasen ble tørket (Na2S04) og konsentrert. Råmaterialet ble underkastet "flash" kromatografi ved anvendelse av DCM:MeOH (95:5) som elueringsmiddel. Produktet ble ytterligere renset ved preparativ RPLC (CH3CN:0,1M NH4OAc-bufret, 0-50%), fraksjonene av interesse ble konsentrert og produktet ble f ry se tørket, hvilket ga 50 mg (94%) av tittelforbindelsen.

<1>H NMR (400 MHz; CD30D): 8 7,70-7,12 (m, 7H), 5,20-4,72 (m, 2H), 4,48-3,92 (m, 5H), 2,73-2,11 (m, 2H), 2,10 (s, 3H), 1,26 (s, 3H), 1,24 (s, 3H).

<13>C NMR (100 MHz, CD30D): (karbonyl- og/eller amidin-karbonatomer) 8 172,3; 171,5; 170,6

LC-MS (m/z)517(M+1)+

Eksempel 7

Tittelforbindelsene i Eksempler 1,4 og 5 ble testet i Test A ovenfor og ble funnet å vise en IC5oTT-verdi på mindre enn 0,02 \ M.

Eksempel 8

Tittelforbindelsene i Eksempler 1, 4 og 5 ble testet i Test D ovenfor og ble funnet å vise en IC5o APTT-verdi på mindre enn 1 |llM.

Eksempel 9

Tittelforbindelsene i Eksempler 2 og 3 ble testet i Test G ovenfor og ble funnet å være omdannet til den tilsvarende aktive inhibitor (fri amidin) i lever-mikrosomer fra mennesker og rotter.

Eksempel 10

Tittelforbindelsene i Eksempler 3 og 6 ble testet i Test E ovenfor og ble funnet å vise oral og/eller parenteral biotilgjengelighet i rotte som den tilsvarende aktive inhibitor (fri amidin).

Forkortelser

Ac = acetyl

AcOH = eddiksyre

API = atmosfærisk trykk ionisering (i forbindelse med MS) AUC = område under kurven

Aze = azetidin-2-karboksylat

AzeOH = azetidin-2-karboksylsyre

BSA = bovint serumalbumin

Bn = benzyl

Bu = butyl

Bzl = benzyl

Cl = kjemisk ionisering (i forbindelse med MS)

d = dag(er)

DCC = dicykloheksylkarbodiimid

DCM = diklormetan

DIPEA = diisopropyletylamin

DMAP = 4-(/V,Aklimetylamino) pyridin

DMF = dimetylformamid

DMSO = dimetylsulfoksyd

EDC = 1 -(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydroklorid

Et = etyl

EX2O = dietyleter

eter = dietyleter

EtOAc = etylacetat

EtOH = etanol

h = time(r)

HATU = 0-(azabenzotriazol-1-yl)-A/,A/,Ar,Ar-tetrametyluronium-heksafluorfosfat

HBTU = [A/,A/,Ar,A^-tetrametyl-0-(benzotriazol-1-yl)uronium-heksafluorfosfat]

HCI = saltsyre

HCI(g) = hydrogenkloridgass

Hex = heksaner

HOAc = eddiksyre

HPLC = høyytelse væskekromatografi

LC = væskekromatografi

Me = metyl

MeOH = metanol

Sm.p. = smeltepunkt

MS = massespektroskopi

MTBE = metyl-ferf-butyleter

NADH = nikotinamid-adenin-dinukleotid, redusert form NADPH = nikotinamid-adenin-dinukleotid-fosfat, redusert form NIH = National Institute of Health (US)

NIHU = National Institute of Health enheter

Pab = para-amidinobenzylamino

H-Pab = para-amidinobenzylamin

Ph = fenyl

PHPLC = preparativ høyytelse væskekromatografi

Pr = propyl

PyBOP = (benzotriazol-1 -yloksy)tripyrrolidinofosfonium-heksafluorfosfat

QF = tetrabutylammoniumfluorid

RPLC = revers fase høyytelse væskekromatografi

rt = romtemperatur

SOP standard operasjonsprosedyrer

TBTU = [/V,/V,/V,Ar-tetrametyl-0-(benzotriazol-1-yl)uronium-tetrafluorborat]

TEA = trietylamin

Teoc = 2-(trimetylsilyl)etoksykarbonyl

TFA = trifluoreddiksyre

THF = tetrahydrofuran

THP = tetrahydropyranyl

TLC = tynnskiktskromatografi

TMSCN = trimetylsilylcyanid

Z = benzyloksykarbonyl

Forstavelsene n, s, i og f har deres vanlig betydninger: normal, sekundær, iso og tertiær. Forstavelsen c betyr cyklo.

Claims (33)

1. Forbindelse med formel I hvor R<1> representerer C(0)CH3 eller C1-3 alkyl; og Y representerer -CH2- eller -(CH2)2-, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

2. Forbindelse ifølge krav 1, hvor Y representerer -CH2-.

3. Forbindelse ifølge krav 1 eller krav 2, hvor R<1> representerer C(0)CH3, metyl eller etyl.

4. Forbindelse ifølge hvilket som helst av de foregående krav, som er Ph(3-CI)(5-NHMe)-CH(OH)C(0)-Aze-Pab eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

5. Forbindelse ifølge i hvilket som helst av kravene 1 til 3, som er Ph(3-CI)(5-NHAc)-CH(OH)C(0)-Aze-Pab eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

6. Forbindelse med formel la hvor R<2> representerer OR<3>; R<3> representerer H, C3-C7-sykloalkyl, Cm0 alkyl, C1-3 alkylaryl eller Ci-3 alkyloksyaryl (idet alkyldelene av de tre sistnevnte grupper eventuelt er avbrutt av ett eller flere oksygenatomer og aryldelene av de to sistnevnte grupper eventuelt er substituert med én eller flere substituenter valgt fra halogen, eller metyl, idet sistnevnte tre grupper også er eventuelt substituert med én eller flere halogensubstituenter og hvor aryl er en karbosyklisk eller heterosyklisk aromatisk gruppe valgt fra fenyl, naftyl, pyridinyl, oxazolyl, tiadiazolyl, indolyl, isoksazolyl og benzofuranyl); og R<1> og Y er som definert i krav 1, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

7. Forbindelse ifølge krav 6, hvor R<3> representerer: H; usubstituert, lineær, eller forgrenet d-s-alkyl, eller syklisk C3-C7-alkyl; C1-3 alkyloksyfenyl, hvor fenylgruppen i denne eventuelt er substituert med én eller flere substituenter som definert i krav 6; eller C1-2 alkylaryl, hvor arylgruppen er fenyl, pyridinyl, isoksazolyl eller tiadiazolyl, hvilke fire sistnevnte grupper eventuelt er substituert med én eller flere substituenter som definert i krav 6.

8. Forbindelse ifølge krav 7, hvor R3 representerer: lineær Ci-6 alkyl eller cyklisk C3.6 alkyl; eller metylaryl, hvor arylgruppen er fenyl eller isoksazolyl, hvilke to sistnevnte grupper eventuelt er substituert i aryldelen med én substituent valgt fra metoksy, metyl og brom.

9. Forbindelse ifølge krav 8, hvor R<3> representerer metyl, etyl, Apropyl, cykloheksyl, 4-metylbenzyl, 3-metoksybenzyl, 2-brombenzyl eller 5-metyl-3-isoksazolyl.

10. Forbindelse ifølge i hvilket som helst av de foregående krav, hvor fragmentet er i fl-konfigurasjon.

11. Forbindelse ifølge i hvilket som helst av de foregående krav, hvor fragmentet er i S-konfigurasjon.

12. Forbindelse ifølge krav 1 som er Ph(3-CI)(5-NHMe)-(fl)CH(OH)C(0)-(S)Aze-Pab eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

13. Forbindelse ifølge krav 1 som er Ph(3-CI)(5-NHAc)-(fl)CH(OH)C(0)-(S)Aze-Pab eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

14. Farmasøytisk preparat omfattende en forbindelse som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 13 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, i blanding med et farmasøytisk akseptabelt adjuvans, fortynningsmiddel eller bærer.

15. Forbindelse som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 13 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for anvendelse som et farmasøytisk middel.

16. Forbindelse som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 13 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for anvendelse ved behandling av en lidelse hvor hemning av trombin er nødvendig.

17. Forbindelse som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 13 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for anvendelse ved behandling av en lidelse hvor antikoagulerende terapi er indikert.

18. Forbindelse som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 13 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for anvendelse ved behandling av trombose.

19. Forbindelse som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 13 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for anvendelse som et antikoagulasjonsmiddel.

20. Anvendelse av en forbindelse som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 13 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som aktiv bestanddel for fremstilling av et medikament for behandling av en lidelse hvor hemning av trombin er nødvendig.

21. Anvendelse av en forbindelse som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 13 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som aktiv bestanddel for fremstilling av et medikament for behandling av en lidelse hvor antikoagulerende terapi er indikert.

22. Anvendelse ifølge krav 20 eller krav 21, hvor lidelsen er trombose.

23. Anvendelse ifølge krav 20 eller krav 21, hvor lidelsen er hyperkoagulering i blod og/eller vev.

24. Anvendelse av en forbindelse som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 13 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som aktiv bestanddel for fremstilling av et antikoagulasjonsmiddel.

25. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse med formel I, som definert i krav 1 som omfatter: (i) kobling av en forbindelse med formel II hvor R<1> er som definert i krav 1, med en forbindelse med formel III hvor Y er som definert i krav 1; (ii) kobling av en forbindelse med formel IV hvor R<1> og Y er som definert i krav 1, med para-amidinobenzylamin.

26. Forbindelse med formel II som definert i krav 25, hvor R<1> er C(0)CH3 eller etyl.

27. Forbindelse ifølge krav 26 som er Ph(3-CI)(5-NHAc)-CH(OH)C(0)OH.

28. Forbindelse med formel IV, som definert i krav 25.

29. Forbindelse ifølge krav 28 som er Ph(3-CI)(5-NHMe)-CH(OH)C(0)-AzeOH eller Ph(3-CI)(5-NHAc)-CH(OH)C(0)-Aze-OH.

30. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse med formel la som definert i krav 6, som omfatter: (a) kobling av en forbindelse med formel II som definert i krav 26 med en forbindelse med formel XII hvor Y er som definert i krav 1 og R<2> er som definert i krav 6; (b) kobling av en forbindelse med formel IV, som definert i krav 26, med en forbindelse med formel XIII hvor R<2> er som definert i krav 6; (c) for forbindelser med formel la hvor R2 representerer OH, omsetning av en tilsvarende forbindelse med formel XIV hvor R<1> og Y er som definert i krav 1, med hydroksylamin; (d) for forbindelser med formel la hvor R2 representerer OR<3>, omsetning av en forbindelse med formel XV hvor Rx representerer -CH2CH2-Si(CH3)3 eller benzyl og R<1> og Y er som definert i krav 1 eller en tautomer derav, med en forbindelse med formel XVI, hvor R<3> er som definert i krav 6 eller et syreaddisjonssalt derav, fulgt av fjerning av -C(0)OR<x>-gruppen; (e) for forbindelser med formel la hvor R<2> representerer COOR<4>, omsetning av en tilsvarende forbindelse med formel I, som definert i krav 1, med en forbindelse med formel XVII hvor L<1> representerer en utgående gruppe og R4 er som definert i krav 6; eller (f) for forbindelser med formel la hvor R2 representerer OCH3 eller OCH2CH3, omsetning av en tilsvarende forbindelse med formel la hvor R2 representerer OH med henholdsvis dimetylsulfat eller dietylsulfat.

31. Forbindelse med formel XIV, som definert i krav 30.

32. Forbindelse med formel XV, som definert i krav 30.

33. Forbindelse ifølge krav 32 som er Ph(3-CI)(5-NHMe)-CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc) eller Ph(3-CI)(5-NHAc)-CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc)