ES2320181T3 - Composiciones farmaceuticas que tienen un efecto reductor del colesterol. - Google Patents
Composiciones farmaceuticas que tienen un efecto reductor del colesterol. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2320181T3 ES2320181T3 ES98933883T ES98933883T ES2320181T3 ES 2320181 T3 ES2320181 T3 ES 2320181T3 ES 98933883 T ES98933883 T ES 98933883T ES 98933883 T ES98933883 T ES 98933883T ES 2320181 T3 ES2320181 T3 ES 2320181T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- ppar
- effect
- cholesterol
- baselineskip
- compound
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
Abstract
Uso de una composición farmacéutica que comprende como ingrediente activo el ácido p-[3-(4-acetil-3-hidroxi-2-propilfenoxi)propoxi]fenilacético o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para reducir el nivel del colesterol.
Description
Composiciones farmacéuticas que tienen un efecto
reductor del colesterol.
Esta invención se refiere al uso de
composiciones farmacéuticas que tienen un efecto reductor del
colesterol que comprenden como ingrediente activo el ácido
p-[3-(4-acetil-3-hidroxi-2propilfenoxi)propoxi]fenilacético
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y a un método para
identificar un compuesto que tiene un efecto reductor del
colesterol caracterizado por la medición del efecto de activación
del receptor activado por la proliferación de peroxisomas (PPAR)
\delta o el efecto de activación del PPAR\delta y PPAR\gamma
del mismo.
Se considera que el aumento del nivel de lípidos
en sangre, en particular, el nivel de colesterol LDL (lipoproteína
de baja densidad) es uno de los factores importantes que causa la
arteriosclerosis. Los agentes reductores del
colesterol-LDL conocidos hasta ahora incluyen
inhibidores para la HMG-CoA
(3-hidroxi-3-metilglutaril
coenzima A) reductasa, que es la enzima que limita la velocidad de
la biosíntesis del colesterol, e inhibidores para la reabsorción
intestinal del colesterol. Por ejemplo, se considera que el
mecanismo de reducción del nivel de colesterol-LDL
en suero por la administración de un inhibidor de la
HMG-CoA reductasa está basado en la disminución del
colesterol intracelular y su metabolito debido a la inhibición de la
biosíntesis del colesterol principalmente en el hígado y a la
aceleración de la expresión del receptor de LDL que la acompaña (J.
Lipid Res., 33, p. 1569-1582, 1992).
En el ensayo clínico de fase I sobre la
simvastatina, que es uno de los inhibidores de la
HMG-CoA reductasa, el nivel de colesterol en suero
de sujetos normales mostró una disminución de aproximadamente el 20%
aproximadamente una semana después del inicio de la administración,
pero no podía esperarse una reducción continua aunque se continuara
la administración. También se indicó que la disminución fue de
aproximadamente el 20% en un paciente con hiperlipemia que mostró
un nivel de colesterol en suero total de 220 mg/dl o superior (A.
Yamamoto et al., Rinsho Iyaku (Clinical Medicine),
4(3), p. 409, 1988).
Por otro lado, se sabe que el compuesto
YM-16638 descrito en la publicación de patente
japonesa examinada 63-35626, que tiene
intrínsecamente un potente antagonismo para la SRS-A
(sustancia de reacción lenta de anafilaxis), es útil como medio
preventivo y como remedio para diversas enfermedades alérgicas (por
ejemplo, asma bronquial, urticaria), enfermedades isquémicas del
corazón y cerebrales, inflamación, etc. y como agente antiulceroso
(Arzneim. Forsch. Drug Res., 38(1), p.
682-685, 1988; Prostaglandins Leukotrienes and
Essential Fatty Acids, 36, p. 43-47, 1989).
En un ensayo clínico sobre este compuesto como
agente antiulceroso/antiasmático, se descubrió inesperadamente que
este compuesto también mostraba un potente efecto reductor del
colesterol en el suero en seres humanos. También se confirmó que se
observaba un efecto similar en experimentos en animales (Drug Dev.
Res., 38, p. 86-92, 1996; solicitud de patente
japonesa publicada no examinada 2-215717).
La disminución del nivel de colesterol en suero
descrita anteriormente en sujetos normales variaba de
aproximadamente el 26% (dosis de administración: 60 mg) al 41%
(dosis de administración: 120 mg) (Drug Dev. Res., 38, p.
86-92, 1996). En un ensayo clínico inicial de fase
II, aproximadamente el 80% de los sujetos mostraba una disminución
de aproximadamente un 20 a un 50%. Este potente efecto reductor del
colesterol en suero en seres humanos no se produce por una
disminución del colesterol-HDL (lipoproteína de alta
densidad), sino por una disminución significativa de la apoproteína
B y del colesterol-LDL. Se sabe que, por otro lado,
el compuesto tiene únicamente un efecto débil de reducción del
nivel de triglicéridos en el suero. (Drugs, 53 (2), p.
299-336, 1997).
Como resultado de los estudios sobre el
mecanismo de función del efecto reductor del colesterol en suero de
YM-16638, se ha aclarado hasta ahora que este
compuesto tiene efectos de inhibición de la biosíntesis del
colesterol en el hígado (Br. J. Pharmacol., 118, p.
174-178, 1996), activación del receptor de LDL y
elevación del nivel de expresión génica del receptor de LDL en el
hígado (Drug Dev. Res., 38, p. 86-92, 1996). Sin
embargo, aún se desconoce el mecanismo de función detallado
adicional del compuesto YM-16638 que consigue
estos
efectos.
efectos.
En el transcurso de estudios recientes sobre el
mecanismo de diferenciación y proliferación de adipocitos, se ha
demostrado la presencia del PPAR (receptor activado por el
proliferador de peroxisomas), que es un receptor nuclear (Nature,
347, p. 645-650, 1990). Hasta el momento se ha
aclarado que el PPAR puede clasificarse en líneas generales en 3
subtipos denominados respectivamente PPAR\alpha, PPAR\delta y
PPAR\gamma (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91, p.
7355-7359, 1994; Tanpakushitsu Kakusan Koso
(Protein, Nucleic acid and Enzyme), 40 (13), p.
50-55, 1995). Además, se ha descrito la activación
de estos subtipos de PPAR y los efectos reductores de lípidos de
diversos compuestos. Por ejemplo, se sabe que los compuestos de
tiazolidinadiona empleados como remedio para la diabetes, sirven
como ligandos del PPAR\gamma y disminuyen de manera significativa
el nivel de triglicéridos en suero, pero no disminuyen el nivel de
colesterol en suero en seres humanos (Diabetes, 46, p.
433-439, 1997; Diabetes Care, 19 (2), p.
151-156, 1996, 15 (2), p. 193-203;
Diabetologia, 39, p.701-709, 1996 (Referencia 1)).
Por otro lado, se sabe que los fármacos de tipo fibrato, que se han
empleado como agentes reductores de lípidos durante mucho tiempo,
sirven como ligandos de los PPAR\gamma y generalmente muestran un
potente efecto de reducción del nivel de triacilglicerol en suero en
situaciones clínicas (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, p.
4312-4317, 1997; Drugs, 40 (2), p.
260-290, 1990 (Referencia 2)).
Similar a estos fármacos de tipo fibrato, el Wy
14.643 (ácido priníxico) se conoce como un ligando específico para
el PPAR\alpha (EMBO J. 11, p. 433-439, 1992; Arch.
Biochem. Biophys., 228 (1), p. 185-196, 1984
(Referencia 3)). Sin embargo, nunca se ha informado sobre el efecto
reductor de lípidos de este compuesto en animales superiores.
Aunque se ha demostrado que la prostaciclina (PGI_{2}) empleada
como agente antitrombótico, etc. no activa el PPAR\alpha ni el
PPAR\delta (Proc. Natl. Acad. Sci USA, 94, p.
4312-4317, 1997), se ha notificado que la
carbaprostaciclina (cPGI_{2}), un derivado de la PGI_{2}, tiene
actividades tanto de ligando de PPAR\alpha como de ligando de
PPAR\delta. Sin embargo, hasta ahora no se ha hecho ningún
informe detallado sobre el efecto reductor de lípidos de este
compuesto (J. Bio. Chem., 272 (9), p. 5367-5370,
1997; Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, p. 4312-4317,
1997 (Referencia 4)).
Por otro lado, la solicitud de patente británica
publicada GB 2292885 reivindica un fármaco para la hiperlipemia
donde se administra una sustancia que activa el receptor NUC1
(PPAR\delta humano). Sin embargo, la descripción de la regulación
del nivel enzimático relacionado con la oxidación de los ácidos
grasos descrita en la memoria descriptiva de esta referencia se
relaciona con el metabolismo de los triglicéridos. Esta referencia,
concretamente, ni revela ni sugiere ningún efecto reductor del
colesterol.
Es decir, nunca se ha confirmado hasta ahora qué
subtipo de PPAR participa en el efecto reductor del colesterol en
suero, aunque como se ha descrito anteriormente se han realizado
varios descubrimientos.
Se espera que los agentes reductores del
colesterol basados en el nuevo mecanismo de función en el que
participa un subtipo de PPAR sean superiores en eficacia a los
fármacos existentes. Sin embargo, el mecanismo de función descrito
anteriormente no se ha aclarado hasta ahora y, por lo tanto, hasta
el momento no se ha encontrado ningún fármaco satisfactorio. Por lo
tanto, se ha exigido intensamente desarrollar un fármaco
farmacéuticamente satisfactorio que tenga un mecanismo de función
claro en el que participe un subtipo de PPAR y ejerza un excelente
efecto de reducción del colesterol.
Los presentes inventores realizaron amplios
estudios sobre el mecanismo de función de reducción del colesterol
del compuesto YM-166638 descrito anteriormente. Como
resultado, descubrieron por primera vez que este compuesto tiene un
efecto de activación del PPAR\delta y PPAR\gamma. Basándose en
este descubrimiento y en el informe convencional de que los
compuestos de tiazolidinadiona, que son ligandos del PPAR\gamma,
no reducen el nivel de colesterol en suero, los presentes
inventores consideraron que el PPAR\delta podría participar
principalmente en el efecto reductor de colesterol como se ha
descrito anteriormente. De esta manera, realizaron estudios
adicionales sobre compuestos que tienen un efecto de activación del
PPAR\delta. Concretamente, buscaron compuestos con el efecto de
activación del PPAR\delta usando un método caracterizado por la
medición del efecto de activación del PPAR\delta o del efecto de
activación del PPAR\delta y PPAR\gamma. Como resultado,
descubrieron que el ácido
p-[3-(4-acetil-3-hidroxi-2-propilfenoxi)propoxi]fenilacético
descrito en la patente checa CZ 281130 como un compuesto que tiene
efectos antiinflamatorios y antiasmáticos mostró un efecto de
activación del PPAR\delta y PPAR\gamma e, inesperadamente,
mostró excelentes efectos de la reducción del colesterol y del
colesterol-LDL en suero, similares al
YM-16638, en experimentación con animales
superiores.
Por consiguiente, la presente invención se
refiere al uso de composiciones farmacéuticas que tienen un efecto
reductor del colesterol que comprenden como ingrediente activo el
ácido
p-[3-(4-acetil-3-hidroxi-2-propilfenoxi)propoxi
fenilacético o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para
fabricar un medicamento para reducir el nivel de colesterol.
La presente invención se refiere además a un
método para identificar un compuesto que tiene un efecto reductor
del colesterol caracterizado por la medición del efecto de
activación del PPAR\delta o el efecto de activación del
PPAR\delta y PPAR\gamma del mismo y por la medición del efecto
reductor del colesterol.
A continuación, se describirá la presente
invención con mayor detalle.
El "efecto de activación del receptor activado
por el proliferador de peroxisomas (PPAR)", como se usa en este
documento, significa el efecto global de la etapa inicial,
concretamente, un compuesto se une directamente al sitio de unión
al ligando del receptor y actúa sobre el mismo o actúa
indirectamente sobre el mismo de manera que la función se expresa
por el receptor de unión al ligando. Cuando se ha considerado
estadísticamente que los datos determinados por la medición del
efecto de activación del receptor de un determinado compuesto son
significativamente diferentes de los datos de control determinados
en ausencia del compuesto (con adición de dimetil sulfóxido
empleado como disolvente en esta invención), se dice que el
compuesto "tiene efecto de activación".
La expresión "efecto de reducción del
colesterol", como se usa en este documento, significa un efecto
que reduce significativamente el nivel de colesterol en suero en un
estado patológico con necesidad de algún tratamiento terapéutico
(generalmente 220 mg o más). Las composiciones farmacéuticas que
tienen un efecto reductor de colesterol son útiles para la
prevención y el tratamiento de diversas enfermedades causadas por un
aumento del nivel de colesterol en suero.
El "compuesto que tiene un efecto de
activación del PPAR\delta o un efecto de activación del
PPAR\delta y PPAR\gamma" que es el ingrediente activo de las
composiciones farmacéuticas y que es el ácido
p-[3-(4-acetil-3-hidroxi-2-propilfenoxi)propoxi]fenilacético
que tiene un efecto reductor del colesterol de acuerdo con la
presente invención, incluye dicho compuesto que tiene un efecto de
activación del PPAR\delta o un efecto de activación del
PPAR\delta y PPAR\gamma.
La expresión "sales farmacéuticamente
aceptables", como se utiliza en este documento, significa sales
biológicamente no tóxicas formadas por el correspondiente compuesto
con un ácido o una base.
Los ejemplos ilustrativos de éstas incluyen
sales de adición de ácidos con ácidos orgánicos o inorgánicos y
sales con bases orgánicas o inorgánicas. Los ejemplos de estas sales
farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adición de ácidos
con ácidos minerales (por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido
bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico,
ácido fosfórico, etc.), ácidos orgánicos (por ejemplo, ácido
fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido oxálico, ácido
malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido
láctico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido
metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido bencenosulfónico,
ácido toluenosulfónico, etc.) y aminoácidos ácidos (por ejemplo,
ácido aspártico, ácido glutámico, etc.), bases inorgánicas (por
ejemplo, sodio, potasio, magnesio, calcio, aluminio, litio, etc.),
bases orgánicas (por ejemplo, metilamina, etilamina, etanolamina,
etc.), aminoácidos básicos (por ejemplo, lisina, ornitina, etc.) y
sales de amonio.
Además, el compuesto de la presente invención a
veces forma hidratos, solvatos con etanol, etc. o formas cristalinas
polimórficas. La presente invención incluye dentro de su alcance
todos estos hidratos, solvatos y formas cristalinas polimórficas,
en estado separado o como una mezcla de los mismos.
El método para identificar un compuesto con
efecto reductor del colesterol de acuerdo con la presente invención
se caracteriza por la medición del efecto de activación del
PPAR\delta o el efecto de activación del PPAR\delta y
PPAR\gamma del mismo y por la medición del efecto reductor del
colesterol. Es decir, la presente invención proporciona un método
para confirmar el efecto de activación del PPAR\delta o el efecto
de activación del PPAR\delta y PPAR\gamma de un compuesto o
para seleccionar un compuesto con efecto reductor del colesterol.
Este método incluye las siguientes etapas: (a) construcción de un
cassette de expresión que codifica un fragmento funcional del
receptor PPAR\delta o PPAR\gamma; (b) formación de una
construcción en la que uno o más elementos que responden a la unión
de un fragmento de proteína funcional al fragmento del receptor
descrito anteriormente están ligados a un gen indicador; (c)
cotransfección en un hospedador usando esta construcción; (d)
adición de los compuestos de ensayo; (e) medición de la expresión
del gen indicador; y (f) selección de un compuesto con efecto de
activación del PPAR\delta o efecto de activación del PPAR\delta
y PPAR\gamma por comparación de los compuestos de ensayo con un
control. Usando este método, pueden ensayarse rápida y eficazmente
varios compuestos, efectuándose de esta manera una selección
aleatoria.
Las etapas (a) y (b) descritas anteriormente se
han establecido recientemente como un sistema para evaluar ligandos
de receptores nucleares. Hablando con mayor detalle, es un sistema
indicador que aprovecha la unión de un factor de regulación de las
proteínas de regulación enzimática del metabolismo de la galactosa
GAL4 (Gal1 (galactoquinasa), GAL7
(\alpha-D-galactosa-1-fosfato
uridiltransferasa), GAL10 (uridina
difosfoglucosa-4-epimerasa))
expresado en una levadura (Saccharomyces cerevisiae) a su
secuencia sensible UAS_{G} (región de activación aguas arriba de
la galactosa) (Cell, 40, p. 767-774, 1985, 52, p.
161-167, 1988; 52, p. 169-178, 1988,
54, p. 199-207, 1988). Además del sistema indicador
descrito en el Ejemplo 1 en lo sucesivo en este documento que usa
la capacidad de la proteína GAL4 de la levadura para unirse al ADN
(J. Biol. Chem., 270 (2), p. 12953-12956, 1995),
también es posible usar un sistema indicador usando una secuencia
sensible (elemento sensible al proliferador de peroxisomas, PPRE) a
la que se une el dominio de unión al ADN del PPAR (Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, 94, p. 4312-4317, 1997; 91, p.
7355-7359, 1994, J. Biol. Chem., 268 (8), p.
5530-5534, 1993), un sistema indicador con el uso
de un operón de tetraciclina bacteriano (J. Biol. Chem., 270 (41),
p. 23975-23983, 1995), etc.
Las técnicas básicas relativas a la manipulación
genética que se requieren en la construcción de un vector, tal como
se describe en el ejemplo 1, pueden realizarse con referencia a
Basic Methods in Molecular Biology, 2^{nd} Edition (Leonard G.
Davis, W. Michael Kuehl, James F. Battey,
Prentice-Hall International Inc., 1994) y a
"Bio-Jikken Illustrated (Illustrated Biological
Experiments) \ding{173} Idenshi Kaiseki no Kiso (Basic Gene
Analysis)" (Hiroki Nakayama y Keito Nishikata, extra number of
Saibo Kogaku (Cell Engineering), Shujun - Sha, 1995).
El vector de expresión génico a usar en la etapa
(a) del método de acuerdo con la presente invención es un vector
comercializado que ya contiene un gen que codifica el dominio de
unión al ADN de la proteína GAL4 (GAL4-DBD), es
decir, el vector de dominio de unión al ADN pGBT9 (tamaño del
vector: 5,5 kb, con la región GAL4-DBD y una
secuencia del gen de resistencia a la ampicilina Amp^{R} en el
mismo, fabricado por Clontech). Este vector es suficientemente
ventajoso ya que se puede utilizar una proteína quimérica, que se
expresa en las células mediante la transferencia del dominio de
unión al ligando del receptor nuclear diana en el sitio de
clonación múltiple (MCS) en las proximidades de la región
GAL4-DBD del vector, como un sensor en el método de
identificación de acuerdo con la presente invención. Como sustituto
de pGBT9, puede utilizarse otro producto, el Vector de Dominio de
Unión al ADN pAS2 (fabricado por Clontech). Además, para la
construcción del vector se puede usar un método descrito en una
referencia (Cell, 52, p. 169-178 (1988)) o
modificaciones del mismo para la construcción del vector.
Un vector fusionado compuesto de un elemento
sensible a la proteína quimérica activada con un gen indicador para
usarse en la etapa (b) se obtiene mediante la construcción de un
elemento sensible conocido y su transferencia dentro de un vector
de expresión que contiene el gen de luciferasa (PICA GENE VECTOR 2
(PGV-B2), fabricado por Toyo Ink Mfg.).
Generalmente se inserta a través de un fragmento corto que lleva un
sitio de enzima de restricción apropiado. Concretamente, el vector
fusionado se sintetiza de manera convencional, por ejemplo,
mediante la escisión del gen indicador con una enzima de restricción
apropiada y la inserción posterior del elemento sensible en la
proximidad del gen indicador. El elemento sensible que tiene un
extremo adecuado para usarse en esta invención se construye en un
sintetizador de ADN.
Aunque puede construirse un elemento sensible
conocido en un sintetizador de ADN como se ha descrito
anteriormente, también es posible usar uno que ya se haya integrado
en un vector comercializado adecuado, por ejemplo, un plásmido
indicador pG5CAT (fabricado por Clontech). Es deseable seleccionar y
usar un elemento sensible que muestre una buena respuesta en el
hospedador para usarse en la identificación del compuesto diana como
se describirá a continuación en este documento.
Es preferible seleccionar secuencias de promotor
y de terminación apropiadas, bien conocidas en la técnica, que sean
preferentemente activas en el hospedador como se describirá en lo
sucesivo en este documento. Estas secuencias pueden unirse a genes
estructurales, grupos de marcadores arbitrarios y otros elementos
convenientes para las técnicas de ingeniería genética estándar.
Los ejemplos de células hospedadoras preferibles
que pueden usarse en la expresión de la construcción formada en la
etapa (c) del método para la identificación de un compuesto con un
efecto reductor de colesterol de acuerdo con la presente invención
incluyen células de bacterias, hongos tales como levaduras, insectos
y mamíferos. Son ejemplos típicos de las mismas HepG2,
NIH-3T3, COS-1,
COS-7, U-937, CV-1,
KI-293, etc. Entre todos, son preferibles HepG2,
CV-1 y NIH-3T3. Pueden realizarse
experimentos de transferencia génica usando estas células en
condiciones tales que se induzca poca citotoxicidad y el gen diana
se transfiera en una gran cantidad y apenas se degrade. En
concreto, el método de transferencia génica no se restringe al que
se usa para la lipofectamina como se emplea en el Ejemplo 1.
En la etapa (d), un compuesto conocido
registrado en el Archivo Químico o uno recientemente sintetizado se
diluye en una proporción adecuada y después se añade al medio
celular al que se han trasferido los genes, seguido por la medición
de la etapa (e). Este tratamiento puede realizarse, por ejemplo,
como un sistema de selección de alto rendimiento usando una placa
de 96 pocillos.
En la etapa (d), el compuesto se disuelve en un
disolvente apropiado y después se añade al medio celular. La
incubación se realiza en condiciones necesarias y suficientes para
la medición de los dos genes, que se han transferido a las células,
y de las sustancias que actúan sobre ellos basándose en la actividad
del indicador. Cuando el compuesto no puede penetrar a través de la
membrana celular, es posible añadir un vehículo apropiado o usar un
sistema sin células.
En la presente invención, la expresión del gen
indicador puede determinarse basándose en el nivel de transcripción
o el nivel de traducción, por ejemplo, midiendo el producto de
proteína, la actividad enzimática o la proliferación celular.
En cuanto a la indicación que debe medirse en la
etapa (e), se han conocido en la técnica genes indicadores
apropiados, por ejemplo, luciferasa de luciérnaga (luc, PGV,
fabricada por Pica Gene), luciferasa de invertebrados del género
Renilla (sea pansy) (luc, pRL, fabricada por Pica Gene), luciferasa
híbrida bacteriana (luXAB), cloranfenicol acetiltransferasa (CAT) y
\beta-D-galactosidasa (lacZ).
En la etapa (f), el disolvente del compuesto de
ensayo se usa como control y la expresión del gen indicador se mide
en la etapa (e). Después, se calcula la actividad relativa del
ligando del compuesto de ensayo tomando como referencia un valor de
actividad del control de 1,0. De esta manera puede seleccionarse un
compuesto que muestre un efecto significativo para la activación
del PPAR\delta o PPAR\delta y PPAR\gamma.
El uso de composiciones farmacéuticas
proporcionadas por la presente invención se caracteriza por tener un
nuevo mecanismo de función, concretamente, un efecto de activación
del PPAR\delta, que es un subtipo de receptor activado por el
proliferador de peroxisomas, o un efecto de activación del
PPAR\delta y del PPAR\gamma. Se espera que estas composiciones
farmacéuticas sean muy superiores a las de los fármacos
convencionales particularmente en los efectos farmacéuticos sobre
organismos superiores incluidos los seres humanos y monos.
De acuerdo con la presente invención, el ácido
p-[3-(4-acetil-3-hidroxi-2propilfenoxi)propoxi]fenilacético
se encuentra en forma de diversos isómeros, tales como tautómeros
de cetoenol basados en el grupo hidroxilo, etc. en su estructura
química. La presente invención incluye dentro de su alcance a todos
estos isómeros que están aislados individualmente o existen como
mezclas de los mismos.
El compuesto de la presente invención forma
adicionalmente sales con bases. Los ejemplos de dichas sales
incluyen las formadas con bases inorgánicas (por ejemplo, sodio,
potasio, magnesio, calcio, aluminio, etc), con bases orgánicas (por
ejemplo, metilamina, etilamina, etanolamina, lisina, arginina,
ornitina, etc.) y sales de amonio. Además, el compuesto de la
presente invención se obtiene a veces como hidratos, solvatos con
etanol, etc. o como formas cristalinas polimórficas que muestran
diversas formas cristalinas en función de las propiedades
fisicoquímicas del mismo o de las condiciones de producción. La
presente invención también incluye dentro de su alcance todos estos
hidratos, solvatos con etanol, etc. y diversas formas
cristalinas.
El compuesto de acuerdo con la presente
invención puede producirse mediante el proceso que se describirá en
el Ejemplo de producción 1 o modificaciones del mismo conocidas por
los especialistas en la técnica. Se aísla como un compuesto libre o
como una sal del mismo. Puede producirse una sal del compuesto de la
presente invención sometiendo el compuesto de la presente invención
en estado de ácido libre o base libre a una reacción de formación
de sal convencional. El producto obtenido se aísla y se purifica
aplicando procedimientos químicos comunes tales como extracción,
concentración, destilación, cristalización, filtración,
recristalización o diversas técnicas cromatográficas. Los diversos
isómeros del compuesto de la presente invención pueden aislarse unos
de otros mediante un método convencional usando diferencias en las
propiedades fisicoquímicas entre los isómeros.
Las composiciones farmacéuticas que tienen un
efecto reductor del colesterol de acuerdo con la presente invención
muestran un excelente efecto de reducción del colesterol en suero,
en particular el colesterol-LDL, particularmente en
animales superiores tales como los seres humanos y monos, basándose
en el nuevo mecanismo de función de activación del PPAR\delta o
activación del PPAR\delta y PPAR\gamma.
Se ha confirmado que el método para identificar
un compuesto con efecto reductor de colesterol de acuerdo con la
presente invención es útil en la selección de un compuesto con un
excelente efecto reductor del colesterol en la práctica.
Concretamente este método es muy útil para detectar y seleccionar de
manera rápida y eficaz, de entre varios compuestos, un compuesto
diana con efecto reductor del colesterol.
Por consiguiente, las composiciones
farmacéuticas de la presente invención son de gran utilidad en la
prevención y el tratamiento, basándose en los efectos descritos
anteriormente, de diversas enfermedades provocadas por un aumento
del colesterol en suero, en particular, un aumento del colesterol
LDL, concretamente, hipercolesterolemia, hiperlipemia, xantoma,
arteriosclerosis o diversas enfermedades causadas por la
arteriosclerosis (enfermedades isquémicas del corazón tales como
angina de pecho e infarto de miocardio basado en arteriosclerosis
circulatoria, fallos cerebrovasculares tales como infarto cerebral
y hemorragia cerebral debido al endurecimiento cerebrovascular,
atrofia del nervio óptico e hidrocefalia provocada por la opresión
mecánica de una arteria cerebral endurecida, esclerosis renal
basada en el endurecimiento de la arteria renal, aneurisma y
arteriosclerosis obstructiva debida al estrechamiento de la aorta o
de una arteria periférica, etc.).
La preparación de acuerdo con la presente
invención que contiene uno o más ingredientes activos seleccionados
del compuesto anteriormente indicado que tiene un efecto de
activación del PPAR\delta o un efecto de activación del
PPAR\delta y PPAR\gamma o sus sales, se consigue mediante el uso
de vehículos farmacéuticos comúnmente empleados, cargas y otros
aditivos. Puede procesarse de cualquier forma adecuada para la
administración oral (comprimidos, píldoras, cápsulas, gránulos,
polvos, soluciones, etc) o para la administración parenteral (por
ejemplo, inyección intravenosa o intramuscular, supositorios,
preparaciones percutáneas, etc.). La dosis de administración se
determina apropiadamente caso por caso dependiendo de los síntomas,
edad, sexo, etc. del paciente. En el caso de administración oral,
la dosis diaria para un adulto por lo general varía de 1 a 500 mg.
En caso de administración parenteral, la dosis diaria para un adulto
por lo general varía de 0,1 a 50 mg. La administración se realiza
una vez ó de 2 a 4 veces al día.
Los ejemplos de preparaciones sólidas para la
administración oral de acuerdo con la presente invención incluyen
comprimidos, polvos y gránulos. En esta preparación sólida, al menos
una sustancia activa se mezcla con al menos un diluyente inactivo,
por ejemplo, lactosa, manitol, glucosa, hidroxipropil celulosa,
celulosa microcristalina, almidón, polivinilpirrolidona, ácido
metasilícico o aluminato de magnesio. La composición puede contener
adicionalmente, de manera convencional, aditivos distintos del
diluyente inactivo, por ejemplo, agentes lubricantes (estearato de
magnesio, etc.), agentes disgregantes (celulosa, glicolato cálcico,
etc.), estabilizantes (lactosa, etc), coadyuvantes de la disolución
(ácido glutámico, ácido aspártico, etc.). Los comprimidos y
pastillas pueden estar recubiertos de azúcar con sacarosa,
gelatina, hidroxipropil celulosa, ftalato de hidroxipropilmetil
celulosa, etc. o recubiertos con una película entérica, si es
preciso.
Los ejemplos de composiciones líquidas para la
administración oral incluyen emulsiones, soluciones, suspensiones,
jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Dicha composición
líquida contiene diluyentes inactivos comúnmente empleados en la
técnica, por ejemplo, agua purificada o etanol. Además de los
diluyentes inactivos, puede contener adicionalmente humectantes,
agentes auxiliares (agentes de suspensión, etc.), edulcorantes,
saporíferos, aromas y conservantes.
Los ejemplos de inyecciones para administración
parenteral incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones estériles
acuosas o no acuosas. Las soluciones y las suspensiones acuosas
contienen, por ejemplo, agua destilada para inyección o solución
salina fisiológica. Las soluciones y las suspensiones no acuosas
contienen, por ejemplo, propilenglicol, polietilenglicol, aceites
vegetales (por ejemplo, aceite de oliva, etc.), alcoholes (por
ejemplo, etanol, etc.) o polysorbate^{TM} 80. Dicha composición
puede contener adicionalmente agentes auxiliares tales como
conservantes, humectantes, emulsionantes, agentes de dispersión,
estabilizantes (por ejemplo, lactosa, etc.) y coadyuvantes de la
disolución (por ejemplo, ácido glutámico, ácido aspártico, etc.).
Estas composiciones se esterilizan, por ejemplo, mediante filtrado a
través de un filtro de retención bacteriana, añadiendo bactericidas
o mediante irradiación. También es posible producir una composición
sólida estéril que se disuelve en agua estéril o un disolvente de
inyección estéril antes de su uso.
El método para identificar un compuesto que
tiene un efecto reductor del colesterol, preparaciones reductoras
del colesterol y compuestos de acuerdo con la presente invención se
describirá más detalladamente en relación con los siguientes
ejemplos.
Para identificar un compuesto que tiene un
efecto de ligando de PPAR\delta y PPAR\gamma, se construyeron
vectores de expresión génica fusionados del dominio de unión al ADN
(dominio de unión al ADN-GAL4,
GAL4-DBD) de una proteína de levadura activada por
la transcripción y los dominios de unión al ligando (LBD) del PPAR.
Los tres vectores de activación construidos de esta manera se
denominaron GAL-PPAR\alpha,
GAL-PPAR\delta y GAL-PPAR\gamma
respectivamente. El proceso de construcción incluía las siguientes
etapas: i) clonación de los PPAR-LBD; ii)
construcción de vectores fusionados por transferencia de un vector
que contiene el gen de GAL4-DBD y iii) subclonación
en un vector de expresión (J. Biol. Chem., 270 (22), p.
12953-12956, 1995; Cell, 83,
p.803-812, 1995).
i) Se amplificó cada dominio de unión al ligando
(PPAR-LBD) de los receptores activados por el
proliferador de peroxisomas (mPPAR\alpha, mPPAR\delta y
mPPAR\gamma) de ratón mediante la PCR (reacción en cadena de la
polimerasa). Como plantilla empleada en la amplificación, se preparó
ARN total a partir de tejido graso que rodea el epidídimo de ratón
usando un reactivo de extracción de ARN total Isogen (fabricado por
Nippon Gene) de acuerdo con las instrucciones del fabricante
adjuntas. Las secuencias de bases de los cebadores sintetizados
para la clonación de genes que codifican respectivamente los
dominios de unión al ligando de los subtipos del PPAR fueron las
siguientes: mPPAR\alpha (Gly^{165}-Tyr^{467});
5'-TTC CCG GGG ATG TCA CAC AAT GCA ATT
CGC-3' (SEC ID Nº:1) y 5'-TTG GAT
CCT CAG TAC AAA ATG TCT CTG TAG ATC TC-3' (SEC ID
Nº:2), mPPAR\delta (Met^{137}-Tyr^{439});
5'-TTC CCG GGC ATG TCG CAC AAC GCT
AT-3' (SEC ID Nº:3) y 5'-TTG GAT CCT
TAG TAC ATG TCC TTG TAG ATT-3' (SEC ID Nº:4),
mPPAR\gamma (Gly^{172}-Tyr^{474});
5'-TTC CCG GGG ATG TCT CAC AAT GCC
ATC-3' (SEC ID Nº:5) y 5'-TTG GAT
CCC TAA TAC AAG TCC TTG TAG AT-3' (SEC ID Nº:6). La
PCR se realizó usando GeneAmp PCR System Model 9600.
ii) En un lado de cada cebador sintetizado de
esta manera, se había insertado previamente una secuencia de
reconocimiento de una enzima de restricción SmaI o BamHI para que el
cebador pudiera escindirse con la enzima de restricción. Después de
la amplificación, el fragmento de PCR se unió con el Vector de
Dominio de Unión al ADN pGBT9 (5,5 kb, con el dominio
GAL4-DBD y una secuencia del gen resistente a la
ampicilina Amp^{R}, fabricado por Clontech) y el vector formado
de esta manera se denominó
pGBT9-PPAR-LBD.
iii) Un dominio génico fusionado
(GAL4-DBD+PPAR-LBD) en el que
GAL4-DBD contenido en
pGBT9-PPAR-LBD estaba ligado al
PPAR-LBD se escindió usando HindIII/SalI y se
transfirió a un sitio de clonación múltiple (MCS) de un vector de
expresión pZeoSV (3,5 kg, con una secuencia génica resistente a la
zeocina Zeo^{R}, fabricado por Clontech) usando HindIII/XhoI. Los
vectores de expresión quiméricos obtenidos de esta manera de
GAL4-DBD y PPAR-LBD se denominaron
respectivamente GAL-PPAR\alpha,
GAL-PPAR\delta y
GAL-PPAR\gamma.
\vskip1.000000\baselineskip
Se construyó un gen indicador con la expresión
de luciferasa como indicativo (denominado más abajo
RE-LUC) mediante las dos siguientes etapas: i)
formación de una secuencia sensible a GAL4; y ii) subclonación en un
vector de expresión de luciferasa (J. Biol Chem., 270 (22),
p.12953-12956, 1995; y Cell, 83,
p.803-812, 1995).
i) Las secuencias de ADN se sintetizaron usando
un sintetizador de ADN (Beckman DNA Synthesizer Oligo1000M,
fabricado por Beckman) repitiendo la secuencia de unión
GAL4-BDB (elemento sensible a GAL4, RE o UAS_{G})
una vez (REx1) o tres veces (REx3). A continuación se introdujeron
los sitios de enzimas de restricción apropiados en ambos extremos y
estas secuencias se unieron entre sí para dar un fragmento de
secuencia de 4 repeticiones (REx4). Adicionalmente, se formó un
fragmento de secuencia de 8 repeticiones (REx8) usando lo mismo.
ii) Se formó una secuencia de ADN en la que la
caja TATA se unió a la secuencia sensible a GAL4 anterior (REx8)
mediante la PCR y después se insertó en el lado 5' aguas arriba de
la secuencia del gen de la luciferasa (RE-LUC) en
un vector para el sistema de ensayo de luciferasa (Pica Gene
Vector-2, (Pgv-B2), Toyo Ink Mfg.).
Después de preparar muestras usando un kit de secuenciación
(PRISM^{TM} Ready Reaction DyeDeoxy^{TM} Terminator Cycle
Sequencing Kit, fabricado por Applied Biosystems), se confirmó la
secuencia de bases de la región insertada que contenía REx8 y la
caja TATA de RE-LUC usando un secuenciador
(secuenciador de ADN ABI 373, fabricado por Applied Biosystems). Se
transfirió RE-LUC que contenía REx8 a las células
junto con el GAL-PPAR\gamma Después se añadió
CS-045 (troglitazona), es decir, el ligando del
PPAR\gamma. Como resultado, REx8 mostró una respuesta al ligando
(actividad luciferasa) mayor que cualquiera de las otras secuencias
(REx2, x3, x4, x5, x6 o x10). De este modo, REx8 se empleó en la
evaluación realizada en este documento.
\vskip1.000000\baselineskip
Usando los vectores de activación y los vectores
indicadores construidos en los puntos (1) y (2) anteriores, se
midió el efecto de activación del PPAR de un compuesto por un método
que implicaba las tres etapas siguientes: i) cotransfección de la
construcción en un hospedador; ii) tratamiento de células añadiendo
el compuesto y iii) ensayo del nivel de expresión del gen
indicador.
\vskip1.000000\baselineskip
Se inocularon células HepG2 (American Type
Culture Collection, Maryland, USA) en una placa de 96 pocillos
tratada con colágeno de tipo IV (fabricado por Iwaki) a una densidad
celular de 1 x10^{4}/pocillo y se incubaron durante 2 días en
presencia de medio de Eagle modificado por Dulbecco que contenía un
10% de suero bovino fetal (FCS) (200 \mul/pocillo,
FCS-DMEM (GIBCO BRL)). Después, se lavaron las
células con 100 \mul/pocillo de un medio de incubación celular
(Medio Sérico Reducido OPTI-MEM I, fabricado por
GIBCO BRL) mantenido a 37ºC. Posteriormente, se añadió una solución
con ADN (que contenía las siguientes sustancias por pocillo
(correspondiente a 50 \mul): 0,01 \mul de
GAL-PPAR\alpha, PPAR\delta o PPAR\gamma, 0,1
\mug de un vector de luciferasa RE-LUC, 0,02
\mug de un vector de expresión de células eucariotas pCH110
(vector para la expresión de \beta-galactosidasa
(para una correcta eficacia de la transferencia génica) fabricado
por Pharmacia Biotech) y 1 \mul de LipofectAMINE (GIBCO BRL);
disueltos en OPTI-MEM mediante agitación a
temperatura ambiente durante 15 minutos) y la incubación se llevó a
cabo a 37ºC durante 3 horas.
\vskip1.000000\baselineskip
Las células se lavaron dos veces con partes de
100 \mul de FCS-DMEM al 10% y el medio de
incubación se sustituyó por 200 \mul de FCS-DMEM
al 10% que contenía el compuesto de ensayo (10^{-4} M, disuelto en
dimetil sulfóxido (DMSO) al 5%). Después se continuó la incubación
a 37ºC durante 48 horas.
\vskip1.000000\baselineskip
Después de retirar el medio, se añadieron 100
\mul de un tampón de solubilización para ensayar la actividad de
la luciferasa (diluido 1 vez, fabricado por Pica Gene). Después de
dejar en reposo a temperatura ambiente durante 15 a 30 minutos, se
pipeteó una parte de 20 \mul del mismo en otra placa de ensayo y
se añadieron a la misma 100 \mul de una solución de sustrato de
luciferasa (fabricada por Pica Gene). Después se midió la
intensidad luminosa (actividad luciferasa) durante 10 segundos
usando un medidor lumínico químico (Model AB-2100,
fabricado por Atto). Simultáneamente con la adición del gen de la
luciferasa, se midió la dosis de expresión de la actividad del gen
de expresión de \beta-galactosidasa que se había
transferido a las células. Después se corrigió la variación en la
actividad luciferasa debido a la adición del compuesto usando la
eficacia de la transfección del gen transferido. La actividad de la
\beta-galactosidasa se midió de acuerdo con el
manual disponible en Promega (Methods Enzymol., 152, p.
704-720, 1987; Biotechniques, 7, p. 576, 1989).
Se pipetearon 20 \mul de una muestra
solubilizada en otra placa de 96 pocillos. Después de añadir a ésta
100 \mul de una solución ONPG
(o-nitrofenil-\beta-D-galactopiranósido,
fabricado por Promega), se realizó la incubación a 37ºC durante 90
minutos. Después se añadieron 50 \mul de una solución de
terminación de la reacción (solución de carbonato sódico 1 M,
fabricado por Promega) y se midió la absorbancia a 415 nm a
temperatura ambiente). Considerando una actividad luciferasa de las
células tratadas exclusivamente con óxido de dimetilsulfonilo
(DMSO, 0,5%) empleado como disolvente de 1,0 (actividad de control),
se calculó la actividad relativa del ligando (Tabla 1).
Como resultado, se ha confirmado que
YM-16638 y el compuesto del Ejemplo de producción 1
tienen, cada uno, un efecto de activación del PPAR\delta y
PPAR\delta.
\vskip1.000000\baselineskip
Se realizó un ensayo para evaluar el efecto
reductor del colesterol usando monos rhesus de acuerdo con un
método descrito en Br. J. Pharmacol., 118, p.
174-178, 1996.
i) Se alimentaron machos de monos rhesus con un
peso aproximado de 4,5 a 5 kg (adquiridos en Hamri) dándoles dos
veces al día 50 g/día de alimentación sólida, que se había preparado
añadiendo 50 ml de agua y vitamina C (5 mg/kg/día, fabricada por
Sigma) a 50 g de alimento en polvo Purina (Código nº 5408, fabricado
por Oriental Yeast) y solidificando la mezcla, y aproximadamente
100 g de plátano. Después se confirmó que los animales alimentados
en las condiciones anteriores no mostraron variaciones
significativas de peso corporal.
ii) Los monos que se habían acostumbrado a la
alimentación de control se dividieron en un grupo de control con 4
animales y grupos de ensayo con 3 animales cada uno. Los animales
del grupo de ensayo se alimentaron con la alimentación de control.
Por otro lado, los animales de un grupo de ensayo se alimentaron con
una composición de alimento que contenía 30 mg/kg/día de
YM-16683, mientras que los del otro grupo de ensayo
se alimentaron con una composición de alimento que contenía 30
mg/kg/día del compuesto del Ejemplo de Producción 1, cada uno dos
veces al día. Para evitar que los monos dejaran comida, se dio
plátano a los animales después de tomar 50 g de cada alimento.
iii) Los grupos se alimentaron con las
composiciones de alimento respectivas durante dos semanas.
Aproximadamente 16 horas antes del penúltimo día de administración,
los animales ayunaron y se recogieron muestras de sangre del muslo.
Después de medir el peso corporal, se recogieron dos veces muestras
de sangre, es decir, antes y después de la administración del
compuesto de ensayo. Cada muestra de sangre recogida de esta manera
se heparinizó y se separó el suero de la misma. Después, se
midieron el nivel de colesterol total (TC) y el nivel de colesterol
LDL (LDL-C) por el método enzimático usando un
analizador automático (Modelo 736-10, Hitachi)
(Tabla 2).
La disminución se calculó comparando los datos
antes de la administración.
\vskip1.000000\baselineskip
Como resultado, se ha confirmado que el
YM-16638 y el compuesto del Ejemplo de Producción 1
muestran, cada uno, un excelente efecto de reducción del nivel de
colesterol total, en particular, el nivel de colesterol LDL.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de producción
1
Se agitaron 5,00 g de
4-hidroxifenilacetato de metilo, 12,15 g de
1,3-dibromopropano y 8,32 g de carbonato potásico
en 30 ml de N,N-dimetilformamida a temperatura
ambiente durante 3 noches. Después de añadir 200 ml de agua
enfriada con hielo, se extrajo la mezcla con acetato de etilo (200
ml x 1). La capa orgánica se lavó con agua (150 ml x 1) y se secó
sobre sulfato de magnesio anhidro. Después de filtrar, el filtrado
se concentró para dar 8,12 g de un residuo. Después, se agitaron
2,87 g de este residuo, 1,94 g de
2-propil-3-hidroxi-4-acetilfenol
y 2,76 g de carbonato potásico en 30 ml de
N,N-dimetilformamida a temperatura ambiente toda la
noche. Después de añadir 200 ml de agua enfriada con hielo, la
mezcla se extrajo con acetato de etilo (200 ml x 1). Se lavó la
capa orgánica con agua (200 ml x 1) y se secó sobre sulfato de
magnesio anhidro. Después de filtrar, el filtrado se concentró para
dar 4,30 g de un residuo. Después, este residuo se sometió a una
cromatografía en gel de sílice (Merck, Kieselgel 60) y se
obtuvieron 1,63 g de un precursor (RF=0,75, placa de TLC: Merck
DC-Fertigplatten Kieselgel 60 F254, disolvente de
revelado: cloroformo) a partir de un eluido de cloroformo. Después,
se calentaron 1,63 g de este precursor a reflujo en 40 ml de metanol
y 20,4 ml de solución acuosa de hidróxido de sodio 1 N. Después de
enfriar dejando en reposo, se añadieron adicionalmente 40 ml de
solución acuosa de ácido clorhídrico 1 N. Los cristales
precipitados de esta manera se recogieron por filtración, se
lavaron con metanol/agua y se secaron después a presión reducida
para dar 1,13 g de ácido
p-[3-(4-acetil-3-hidroxi-2-propilfenoxi)propoxi]fenilacético.
Punto de fusión: 106-108ºC
Análisis elemental (como
C_{22}H_{26}O_{6}):
| C (%) | H (%) | ||
| calculado | 68,38 | 6,78 | |
| encontrado | 68,35 | 6,84 | |
Espectro de absorción IR \nu máx. (KBr)
cm^{-1}:
- \quad
- 2968, 1700, 1638, 1586, 1520, 1504, 1472, 1420, 1378, 1274, 1250, 1126, 1066, 814 y 790.
<110> Yamanouchi Pharmaceutical Co.,
Ltd.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Composiciones farmacéuticas para un
efecto reductor del colesterol
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> Y9811-PCT
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<140> PCT/JP98/03266
\vskip0.400000\baselineskip
<141>
22-07-1998
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> JP H09-198232
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
24-7-1997
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn. Ver. 2.0
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: Cebador del extremo 5' para la clonación del dominio de
unión al ligando del receptor activado por el proliferador de
peroxisomas alfa de ratón.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipttcccgggga tgtcacacaa tgcaattcgc
\hfill
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: Cebador del extremo 3' para la clonación del dominio de
unión al ligando del receptor activado por el proliferador de
peroxisomas alfa de ratón.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipttggatcctc agtacaaaat gtctctgtag atctc
\hfill
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: Cebador del extremo 5' para la clonación del dominio de
unión al ligando del receptor activado por el proliferador de
peroxisomas delta de ratón.
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipttcccgggca tgtcgcacaa cgctat
\hfill
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: Cebador del extremo 3' para la clonación del dominio de
unión al ligando del receptor activado por el proliferador de
peroxisomas delta de ratón.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipttggatcctt agtacatgtc cttgtagatt
\hfill
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: Cebador del extremo 5' para la clonación del dominio de
unión al ligando del receptor activado por el proliferador de
peroxisomas gamma de ratón.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipttcccgggga tgtctcacaa tgccatc
\hfill
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 29
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: Cebador del extremo 3' para la clonación del dominio de
unión al ligando del receptor activado por el proliferador de
peroxisomas gamma de ratón.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipttggatccct aatacaagtc cttgtagat
\hfill
Claims (3)
1. Uso de una composición farmacéutica que
comprende como ingrediente activo el ácido
p-[3-(4-acetil-3-hidroxi-2-propilfenoxi)propoxi]fenilacético
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación
de un medicamento para reducir el nivel del colesterol.
2. Un método para identificar un compuesto que
tiene un efecto reductor del colesterol caracterizado por la
medición de un efecto de activación del receptor activado por el
proliferador de peroxisomas (PPAR)\delta o un efecto de
activación del PPAR\delta y PPAR\gamma y la medición del efecto
reductor del colesterol.
3. El método de identificación de acuerdo con la
reivindicación 2, en el que el efecto de activación del PPAR\delta
o el efecto de activación del PPAR\delta y PPAR\gamma se miden
por los métodos mostrados en los siguientes puntos (a) a (d);
(a) se prepara un vector de expresión de una
proteína quimérica usando un gen que codifica la región de unión al
ligando del PPAR\delta o PPAR\gamma y un gen que codifica el
dominio de unión al ADN-GAL4,
(b) se prepara un vector indicador de luciferasa
ligando la secuencia de la caja TATA a la secuencia de unión al
ADN-GAL4 e insertando ésta en el extremo 5' aguas
arriba de la secuencia del gen de la luciferasa,
(c) se obtiene una proteína expresada en una
célula por cotransfección en una célula con los vectores obtenidos
en (a) y (b), y
(d) se mide el cambio en la actividad de la
proteína luciferasa acompañado por el cambio de expresión del gen
indicador añadiendo un compuesto de selección a dicha célula,
midiendo por tanto el efecto reductor del colesterol.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19823297 | 1997-07-24 | ||
| JP9-198232 | 1997-07-24 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2320181T3 true ES2320181T3 (es) | 2009-05-19 |
Family
ID=16387713
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES98933883T Expired - Lifetime ES2320181T3 (es) | 1997-07-24 | 1998-07-22 | Composiciones farmaceuticas que tienen un efecto reductor del colesterol. |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6300364B1 (es) |
| EP (1) | EP1023907B1 (es) |
| JP (1) | JP4427825B2 (es) |
| AT (1) | ATE421336T1 (es) |
| AU (1) | AU8355998A (es) |
| CA (1) | CA2295930C (es) |
| DE (1) | DE69840510D1 (es) |
| ES (1) | ES2320181T3 (es) |
| WO (1) | WO1999004815A1 (es) |
Families Citing this family (51)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1148361C (zh) | 1998-05-11 | 2004-05-05 | 武田药品工业株式会社 | 羟基亚氨基链烷酸衍生物 |
| GB9914977D0 (en) | 1999-06-25 | 1999-08-25 | Glaxo Group Ltd | Chemical compounds |
| GB9917405D0 (en) * | 1999-07-23 | 1999-09-22 | Univ Dundee | Methods of treatment and drug screening methods |
| TWI262185B (en) | 1999-10-01 | 2006-09-21 | Eisai Co Ltd | Carboxylic acid derivatives having anti-hyperglycemia and anti-hyperlipemia action, and pharmaceutical composition containing the derivatives |
| CN1423566A (zh) * | 1999-11-10 | 2003-06-11 | 武田药品工业株式会社 | 体重增加抑制剂 |
| EP1310494B1 (en) | 2000-08-11 | 2012-01-25 | Nippon Chemiphar Co., Ltd. | PPAR (delta) ACTIVATORS |
| GB0024362D0 (en) * | 2000-10-05 | 2000-11-22 | Glaxo Group Ltd | Medicaments |
| GB0024361D0 (en) * | 2000-10-05 | 2000-11-22 | Glaxo Group Ltd | Medicaments |
| EP1911462A3 (en) | 2001-01-26 | 2011-11-30 | Schering Corporation | Compositions comprising a sterol absorption inhibitor |
| WO2002070011A2 (en) * | 2001-02-02 | 2002-09-12 | Smithkline Beecham Corporation | Treatment of ppar mediated diseases |
| EP1375484A4 (en) | 2001-03-28 | 2009-08-05 | Eisai R&D Man Co Ltd | CARBOXYLIC ACIDS |
| EP1375472A4 (en) | 2001-03-30 | 2008-12-10 | Eisai R&D Man Co Ltd | BENZENE COMPOUND AND SALT THEREOF |
| TWI311133B (en) | 2001-04-20 | 2009-06-21 | Eisai R&D Man Co Ltd | Carboxylic acid derivativeand the salt thereof |
| EP1382336B1 (en) * | 2001-04-25 | 2010-09-08 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Use of the abc expression promotor pioglitazone for the treatment of arteriosclerosis obliterans |
| JPWO2002098840A1 (ja) | 2001-06-04 | 2004-09-16 | エーザイ株式会社 | カルボン酸誘導体及びその塩もしくはそのエステルからなる医薬 |
| US20040242459A1 (en) * | 2001-06-11 | 2004-12-02 | Forrest Michael J | Method for treating inflammatory diseases by administering a ppar-delta agonist |
| CN101259276A (zh) * | 2001-07-17 | 2008-09-10 | 帝人株式会社 | 通过测定PPARδ激活作用筛选物质的方法和药剂 |
| JP4870464B2 (ja) * | 2001-07-17 | 2012-02-08 | 帝人株式会社 | ＰＰＡＲδ活性化作用を測定することを特徴とする物質の選択方法及び薬剤 |
| CN1330641C (zh) * | 2001-08-10 | 2007-08-08 | 日本化学医药株式会社 | 过氧化物酶体增殖剂响应受体δ活化剂 |
| WO2003016265A1 (fr) | 2001-08-17 | 2003-02-27 | Eisai Co., Ltd. | Compose cyclique et agoniste du recepteur ppar |
| ES2443642T3 (es) | 2001-09-14 | 2014-02-20 | Amgen Inc. | Compuestos de biarilo conectados |
| DE60232739D1 (de) * | 2001-10-12 | 2009-08-06 | Nippon Chemiphar Co | Aktivator des peroxisomproliferator-aktivierten rezeptors delta |
| KR20050057178A (ko) | 2002-09-05 | 2005-06-16 | 노보 노르디스크 에이/에스 | 신규 비닐 카르복실산 유도체 및 그들의 치료에의 사용 |
| US20050080115A1 (en) | 2002-10-28 | 2005-04-14 | Lone Jeppesen | Novel compounds, their preparation and use |
| ES2344106T3 (es) | 2002-10-28 | 2010-08-18 | High Point Pharmaceuticals, Llc | Nuevos compuestos utiles en el tratamiento de enfermedades mediadas por ppar. |
| ATE472526T1 (de) | 2002-10-28 | 2010-07-15 | High Point Pharmaceuticals Llc | Neue verbindungen und deren verwendung als ppar- modulatoren |
| US7129268B2 (en) | 2002-10-28 | 2006-10-31 | Novo Nordisk A/S | Peroxisome proliferator activated receptor-active arylene acetic acid derivatives |
| JPWO2004093910A1 (ja) * | 2003-04-22 | 2006-07-13 | アステラス製薬株式会社 | ＰＰＡＲδアゴニストによる脳神経変性疾患治療剤 |
| UA87467C2 (en) | 2003-09-19 | 2009-07-27 | Янссен Фармацевтика Н.В | 4-((phenoxyalkyl)thio)-phenoxyacetic acids and analogs |
| JP2007536343A (ja) | 2004-05-05 | 2007-12-13 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | Ｐｐａｒアゴニストとしてのフェノキシ酢酸誘導体 |
| JP4981662B2 (ja) | 2004-05-05 | 2012-07-25 | ハイ・ポイント・ファーマスーティカルズ、エルエルシー | 新規の化合物、その製法と使用 |
| EP1751120A4 (en) | 2004-05-25 | 2010-05-05 | Metabolex Inc | SUBSTITUTED TRIAZOLE AS PPAR MODULATORS AND MANUFACTURING METHOD THEREFOR |
| US8111617B2 (en) * | 2004-08-13 | 2012-02-07 | Broadcom Corporation | Multiple independent pathway communications |
| MY145712A (en) * | 2004-09-15 | 2012-03-30 | Janssen Pharmaceutica Nv | 4-((phenoxyalkyl)thio)-phenoxyacetic acids and analogs |
| MY147518A (en) | 2004-09-15 | 2012-12-31 | Janssen Pharmaceutica Nv | 4-((phenoxyalkyl)thio)-phenoxyacetic acids and analogs |
| US20080194646A1 (en) | 2005-03-21 | 2008-08-14 | Sanders Martin E | Methods For Avoiding Edema in the Treatment of Metabolic, Inflammatory, and Cardiovascular Disorders |
| EP1899302B1 (en) | 2005-06-30 | 2011-10-19 | High Point Pharmaceuticals, LLC | Phenoxy acetic acids as ppar delta activators |
| US8097610B2 (en) * | 2005-08-26 | 2012-01-17 | Shionogi & Co., Ltd. | Derivative having PPAR agonistic activity |
| JO3006B1 (ar) | 2005-09-14 | 2016-09-05 | Janssen Pharmaceutica Nv | املاح ليسين مبتكرة من مشتقات حامض 4-((فينوكسي الكيل)ثيو) فينوكسي الخليك |
| JP5054028B2 (ja) | 2005-12-22 | 2012-10-24 | ハイ ポイント ファーマシューティカルズ，リミティド ライアビリティ カンパニー | 新規化合物、それらの製造および使用 |
| EP1999098A2 (en) | 2006-03-09 | 2008-12-10 | High Point Pharmaceuticals, LLC | Compounds that modulate ppar activity, their preparation and use |
| AU2007239283B2 (en) * | 2006-04-18 | 2013-02-07 | Nippon Chemiphar Co., Ltd. | Activating agent for peroxisome proliferator activated receptor delta |
| PE20080188A1 (es) | 2006-04-18 | 2008-03-10 | Janssen Pharmaceutica Nv | Derivados del acido benzoazepin-oxi-acetico como agonistas de ppar-delta usados para aumentar hdl-c, reducir ldl-c y reducir colesterol |
| WO2008030604A2 (en) | 2006-09-08 | 2008-03-13 | Rhode Island Hospital | Treatment, prevention, and reversal of alcohol-induced brain disease |
| AU2007292874B2 (en) | 2006-09-08 | 2013-11-21 | Rhode Island Hospital | Treatment, prevention, and reversal of alcohol-induced liver disease |
| EP2155769B1 (en) | 2007-05-04 | 2012-06-27 | Katholieke Universiteit Leuven KU Leuven Research & Development | Tissue degeneration protection |
| LT2277874T (lt) * | 2008-04-15 | 2018-10-10 | Nippon Chemiphar Co., Ltd. | Peroksisomų proliferatoriaus aktyvuotų receptorių aktyvatorius |
| CA2770494A1 (en) * | 2009-08-14 | 2011-02-17 | Ronald Barbaras | Use of ppar delta ligands for the treatment or prevention of inflammation or energy metabolism/production related diseases |
| WO2012027331A1 (en) | 2010-08-27 | 2012-03-01 | Ironwood Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating or preventing metabolic syndrome and related diseases and disorders |
| ES2811087T3 (es) | 2013-09-09 | 2021-03-10 | Vtv Therapeutics Llc | Uso de agonistas de PPAR-delta para tratar la atrofia muscular |
| WO2023147309A1 (en) | 2022-01-25 | 2023-08-03 | Reneo Pharmaceuticals, Inc. | Use of ppar-delta agonists in the treatment of disease |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ZA858493B (en) | 1984-11-12 | 1986-07-30 | Yamanouchi Pharma Co Ltd | Heterocyclic compounds and process of producing them |
| JPS61268657A (ja) | 1985-05-23 | 1986-11-28 | Takeda Chem Ind Ltd | フエニル酢酸誘導体およびその製造法 |
| JPH0788426B2 (ja) | 1986-07-30 | 1995-09-27 | 住友ベークライト株式会社 | 耐熱性樹脂の製造方法 |
| JPH02215717A (ja) | 1989-02-14 | 1990-08-28 | Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd | 血清脂質低下剤 |
| CZ281130B6 (cs) | 1993-06-18 | 1996-06-12 | Galena, A.S. | Deriváty 4-alkyloxy-3-propyl-2-hydroxyacetofenonu |
| WO1996001317A2 (en) | 1994-07-01 | 1996-01-18 | The Salk Institute For Biological Studies | Mammalian peroxisome proliferator-activated receptors and uses thereof |
| GB2292885A (en) | 1994-09-08 | 1996-03-13 | Merck & Co Inc | Method of treating hyperlipidemia |
| WO1997010813A1 (en) | 1995-09-18 | 1997-03-27 | Ligand Pharmaceuticals Incorporated | Ppar gamma antagonists for treating obesity |
| BR9610624A (pt) | 1995-09-18 | 1999-03-16 | Ligand Pharm Inc | Tratamento de dmndi com agonistas de de rxr |
| JP2000504021A (ja) | 1996-02-02 | 2000-04-04 | メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド | 糖尿病及び関連疾患状態を治療する方法 |
| US6090839A (en) * | 1996-12-23 | 2000-07-18 | Merck & Co., Inc. | Antidiabetic agents |
-
1998
- 1998-07-22 DE DE69840510T patent/DE69840510D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-07-22 US US09/463,334 patent/US6300364B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-07-22 AT AT98933883T patent/ATE421336T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-07-22 CA CA2295930A patent/CA2295930C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-07-22 EP EP98933883A patent/EP1023907B1/en not_active Revoked
- 1998-07-22 AU AU83559/98A patent/AU8355998A/en not_active Abandoned
- 1998-07-22 JP JP50965799A patent/JP4427825B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-07-22 WO PCT/JP1998/003266 patent/WO1999004815A1/ja active Application Filing
- 1998-07-22 ES ES98933883T patent/ES2320181T3/es not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU8355998A (en) | 1999-02-16 |
| WO1999004815A1 (fr) | 1999-02-04 |
| CA2295930A1 (en) | 1999-02-04 |
| ATE421336T1 (de) | 2009-02-15 |
| US6300364B1 (en) | 2001-10-09 |
| EP1023907A1 (en) | 2000-08-02 |
| JP4427825B2 (ja) | 2010-03-10 |
| EP1023907A4 (en) | 2001-02-21 |
| EP1023907B1 (en) | 2009-01-21 |
| CA2295930C (en) | 2010-12-14 |
| DE69840510D1 (de) | 2009-03-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2320181T3 (es) | Composiciones farmaceuticas que tienen un efecto reductor del colesterol. | |
| ES2653717T3 (es) | Pirazolil- y pirimidinil-enonas tricíclicas como moduladores antioxidantes de la inflamación | |
| JP2020527133A (ja) | 心臓代謝の効率を高めるための組成物および方法 | |
| US5242915A (en) | Formulation useful for the inhibition of massive release of cerebral glutamate | |
| AU2014230569A1 (en) | Pyrazole-amide compound and medicinal uses therefor | |
| WO1982001873A1 (en) | 1-sulfo-2-oxoazetidine derivatives and process for their preparation | |
| AU2005209843A1 (en) | Nitroxyl progenitor compounds and methods of use | |
| JP2016522831A (ja) | 炎症を予防および治療するためのクリオピリン阻害剤 | |
| US20020119958A1 (en) | Therapeutic agent for hyperlipidemia | |
| CN115667244B (zh) | 3-氮杂二环烷基衍生物及包含其的药物组合物 | |
| AU2064701A (en) | Method for the prevention and/or treatment of atherosclerosis | |
| JPH0541626B2 (es) | ||
| RU2282627C2 (ru) | Кумариновые производные с подавляющей комт активностью | |
| JPH02290841A (ja) | 新規化合物、その製法及びそれを含む医薬組成物 | |
| US20030086923A1 (en) | Method for the prevention and/or treatment of atherosclerosis | |
| WO2007046456A1 (ja) | 新規水溶性プロドラッグを含有する、膵臓癌、卵巣癌または肝臓癌の予防または治療剤 | |
| WO2019096113A1 (zh) | 一种氘代的含硼的化合物及药物组合物和用途 | |
| JP2003503347A (ja) | Ｎａｄシンテターゼ酵素のインヒビターを用いた真菌感染の治療法 | |
| JP2009051731A (ja) | 新規アスコクロリン誘導体化合物及びそれを含有する医薬組成物 | |
| JP2511709B2 (ja) | キサントシリンｘモノメチルエ―テル誘導体及びそれを含有する抗腫瘍剤 | |
| EP3191099B1 (en) | Derivatives of pyridopyrimidines | |
| CN109824574B (zh) | 吲哚-3-甲酰胺类化合物及其应用 | |
| JP2657614B2 (ja) | アロマターゼ阻害剤 | |
| EA008174B1 (ru) | ЧИСТЫЕ ИЗОМЕРЫ D-(17α)-13-ЭТИЛ-17-ГИДРОКСИ-18,19-ДИНОРПРЕГН-4-ЕН-20-ИН-3-ОН-3Е И 3Z-ОКСИМОВ, СПОСОБ СИНТЕЗА СМЕСИ ИЗОМЕРОВ И ЧИСТЫХ ИЗОМЕРОВ | |
| US11708381B2 (en) | Inhibitors of androgen receptor signaling |