ES2239694T3

ES2239694T3 - Agentes desactivantes de alergenos de acaros de polvo.

Info

Publication number: ES2239694T3
Application number: ES02003297T
Authority: ES
Inventors: Janette Suh; Malcolm Tom Mckechnie; Gay Cornelius; Ian Andrew Thompson
Original assignee: Reckitt Benckiser UK Ltd
Current assignee: Reckitt Benckiser UK Ltd
Priority date: 1997-09-25
Filing date: 1998-09-22
Publication date: 2005-10-01
Anticipated expiration: 2018-09-22
Also published as: DE69814427T2; EP1484089A3; GB2329588A; EP1224955B1; US7537729B2; CA2695678A1; US6800247B1; EP1219323A2; EP1017428A2; WO1999015208A3; EP1224955A3; EP1484089A2; DE69840760D1; DE69830256D1; EP1017428B1; DE69830256T2; WO1999015208A2; AU2006252279B2; EP1219323A3; ES2197503T3

Abstract

Un método para desactivar un alérgeno Der-f y/o un alérgeno Der-p que comprende poner en contacto el alérgeno con una cantidad desactivadora eficaz de un desactivador, en donde el método usa una composición que contiene el desactivador en una cantidad desde 0, 01% hasta 3%, siendo el desactivador 6-isopropil-m-cresol.

Description

Agentes desactivantes de alérgenos de ácaros de polvo.

Se ha sabido desde hace mucho tiempo que el polvo doméstico puede desencadenar reacciones alérgicas en humanos, tales como asma y rinitis. Se describió, tan antiguamente como en 1928, que eran los ácaros del polvo la fuente principal de la respuesta alérgica, pero fue solamente en la década de los 1960 cuando los investigadores apreciaron su significado.

Se cree que las heces de dos especies particulares de ácaros de polvo doméstico, Dermatophagoides farinae (conocido como Der-f) y Dermatophagoides pteronyssinus (conocido como Der-p) desencadenan las respuestas inmunes del cuerpo, dando lugar con ello a los bien conocidos síntomas alérgicos.

Una revisión de esto se da en Experimental and Applied Acarology, 10 (1991) p. 167-186 en un artículo titulado "House dust-mite allergen": A review de L. G. Arlian.

Tanto la especie Der-f como la especie Der-p se encuentran por todo el mundo. En algunas áreas, la Der-f será la única especie Dermatophagoides. En otras áreas, la Der-p será la única especie. Aún en otras áreas, las dos especies estarán al mismo tiempo presentes aunque, generalmente, una o la otra predominará.

Una manera de vencer estas respuestas alérgicas ha sido aspirar a vacío las superficies, tales como alfombras, que contienen los ácaros del polvo y sus heces, minuciosa y frecuentemente, pero eso consume tiempo (es decir, se ha de hacer regularmente si se quiere conseguir un ambiente libre de alérgenos) y depende mucho de la eficacia del aspirador de polvo y bolsa de filtro usada, por ejemplo, bolsa de filtro de micras o bolsas de aspirador de 2 capas.

El documento WO 93/15774 describe la desinfección y desintoxicación como un medio de sanear el hogar usando un producto difundido en forma de aerosol en el ambiente. El producto puede ser una formulación de diez constituyentes, que puede incluir timol en una mínima cantidad de 4%.

El Chemical Abstracts, vol. 69, no. 19, 4 de Noviembre 1968, resumen no. 75913, Honma, Shoichi, "Effect of Various Chemicals on Mites", describe el uso de productos químicos para matar ácaros. El timol era de interés para el tratamiento de acariasis.

Se han descubierto varios desactivadores de alérgenos que son eficaces tanto frente a la especie Der-f como frente a la especie Der-p. Muy sorprendentemente, se ha descubierto que algunos de estos desactivadores son específicos para el tipo de alérgeno de ácaro del polvo que se está tratando. Por ejemplo, un desactivador eficaz de alérgenos de Der-f no funcionará automáticamente de modo eficaz como un desactivador de alérgenos de Der-p.

De acuerdo con la invención, se proporciona un método para desactivar un alérgeno de Der-f y/o Der-p que comprende poner en contacto el alérgeno con una cantidad eficaz, desactivadora, de un desactivador, usando el método una composición que contiene el desactivador en una cantidad desde 0,01% a 3%, siendo el desactivador 6-isopropil-m-cresol.

6-isopropil-m-cresol es normalmente conocido como timol.

En los métodos para tratar tapetes y alfombras para desactivar alérgenos, la cantidad de desactivador presente es desde alrededor de 16 g hasta alrededor de 170 g por 10 metros cuadrados, preferentemente alrededor de 32 g por 10 metros cuadrados.

Además, de acuerdo con la invención se ha proporcionado una composición de aerosol que contiene 0,01 a 3% de 6-isopropil-m-cresol como desactivador, un propulsor y, opcionalmente, un disolvente.

Preferentemente, la cantidad de propulsor presente en tal composición es desde 4% hasta 50%, más preferentemente desde 4% hasta 30%.

Preferentemente, la cantidad de disolvente presente en tal composición es 0% a 90%, y lo más preferentemente desde 20% hasta 90%.

El propulsor se selecciona, preferentemente, de los disponibles comercialmente, por ejemplo alcanos C_{1}-C_{4}, clorofluorocarbonos y gases comprimidos tales como nitrógeno, aire y dióxido de carbono.

El disolvente se selecciona, preferentemente, de alcoholes C_{1}-C_{6} (por ejemplo, etanol) o agua.

Además, las composiciones de esta invención pueden contener también uno o más de lo siguiente:

una fragancia, preferentemente en una cantidad de 0% a 5%, más preferentemente 0% a 2%;

\newpage

un compuesto antimicrobiano, por ejemplo sacarinato de alquildimetilbencilamonio, preferentemente en una cantidad de 0,01% a 1%;

un tensioactivo, por ejemplo Dow Corning 193 Surfactant, preferentemente en una cantidad de 0,01% a 1%;

un inhibidor de corrosión, por ejemplo nitrito sódico, benzoato sódico, trietanolamina e hidróxido amónico, preferentemente en una cantidad de 0,01% a 10%;

y

un acaricida, tal como benzoato de bencilo, pemetrina piretroide, d-alletrina y opcionalmente un sinérgico tal como butóxido de piperonilo, preferentemente en una cantidad de 0,1% a 10%.

La invención se ilustrará ahora por los Ejemplos siguientes.

Ejemplos

El procedimiento de las pruebas de los Ejemplos 1 y 2 es como sigue y se conoce como el protocolo ELISA.

El protocolo ELISA para Der-f y Der-p se ha desarrollado como sigue como una medida de propiedad desnaturalizante para los desnaturalizantes.

Protocolo ELISA 1

1. El polvo se recoge de bolsas de vacuoaspirador Hoover^{TM} y se pasa a través de una serie de tamices decrecientes hasta 63 micrómetros.

2. Las placas petri limpias se marcan con el producto químico a probar (en la base). Se usan tres réplicas para cada tratamiento.

3. Se usa papel de filtro para forrar cada placa y se añaden 0,2 g de polvo a cada placa sobre el papel de filtro. Se vuelve a colocar la tapa (o base, porque las placas están invertidas) y la placa se sacude para dispersar uniformemente el polvo sobre el papel de filtro.

4. Se usaron disoluciones acuosas de desactivador al 2%. El desactivador se emulsificó con un tensioactivo de oleato de sorbitan (es decir, Tween).

5. Se rocía el polvo con el tratamiento correspondiente, se requieren 2 rociadas para una cobertura suficiente (1 rociada = 1,5 ml).

6. Dejarlo descubierto a temperatura ambiente, en habitación bien aireada, hasta que el papel de filtro esté seco. Esto puede tardar hasta 4 horas.

7. Vaciar el polvo en ependorfs marcados de acuerdo con el tratamiento.

8. Añadir 1 ml de seroalbúmina de bovino al 5% en tampón fosfato salino -Tween, BSA-PBS-T, a cada ependorf (5 veces el peso de polvo) (20 ml de BSA-PBS-T = 1 g de BSA en 20 ml de PBS-T).

9. Dejar durante una noche en una nevera.

10. Centrifugar durante 5 minutos a 13.000 rpm.

11. Decantar el sobrenadante en un nuevo ependorf marcado de acuerdo con el tratamiento.

12. Centrifugar nuevamente durante 5 minutos a 13.000 rpm.

13. Hacer diluciones de 1:10 y 1:100 añadiendo 100 \mul de disolución neta a 900 \mul de BSA-PBS-T al 1% (1:10). Esto se repite usando 100 \mul de dilución 1:10 y añadiéndolos a 900 \mul de BSA-PBS-T al 1% para la dilución 1:100.

Protocolo ELISA 2 para Der-f y Der-p: Biotecnologías de casa

1. Preparar muestras y diluciones como en el protocolo

2. Preparar 500 ml de tampón carbonato/bicarbonato 50 mM disolviendo 0,795 g de Na_{2}CO_{3} y 1.465 g de NaHCO_{3} en 500 ml de agua destilada. Comprobar que el pH está en 9,6. (Esta disolución se guarda en la nevera en un matraz cónico).

\newpage

3. El anticuerpo monoclonal (guardado en el congelador) se ha de añadir al tampón usando el método siguiente, (1 \mug por pocillo; se necesitan 11 ml) aplicado a la placa ELISA

- se añaden 11 ml de tampón carbonato/bicarbonato a la bandeja distribuidora.

- se añaden 11 \mul de anticuerpo monoclonal Der-f1 o Der-p1 (almacenado en congelador, el ependorf en uso está en la nevera) al tampón. Para asegurarse de que todo el anticuerpo se ha separado de la punta, lavar la punta de la pipeta aspirando hacia arriba y hacia abajo en la disolución tampón, agitando suavemente para mezclar a fondo.

4. Pipetear 100 \mul de la disolución de anticuerpo en cada pocillo de la placa de microvaloración, cubrir con un sellador de placa y dejar durante una noche a 4ºC.

5. Vaciar la placa invirtiéndola rápidamente sobre el fregadero, secar entonces golpeando sobre una pila de toallas de papel.

6. Añadir 200 \mul de tampón de lavado a cada pocillo: PBS/0/05% Tween (PBS-T).

7. Repetir las etapas 5 y 6 una vez más (haciendo un total de 2 lavados).

8. Asegurarse de que todos los pocillos están secos, añadir entonces 100 \mul de BSA-PBS-T al 1%. Volver a colocar el sellador de la placa e incubar durante 1 hora a temperatura ambiente*.

9. Repetir las etapas 5 a 7 (2 lavados).

10. *Durante el periodo de la hora de incubación, preparar los patrones alérgenos a diluciones entre 125 y 1 \mug/ml de Der f 1 o Der p1:

-: Añadir 25 \mul de patrón alérgeno (guardado en la nevera en caja de poliestireno) a 475 \mul de PBS-BSA-T al 1% y mezclar completamente - marcar "125".

-: Se añaden 250 \mul de PBS-BSA-T al 1% a otros 7 ependorfs que se marcan con 62,5, 31,25, 15,63, 7,61, 3,9, 1,95 y 0,98.

-: Se toman 250 \mul del primer ependorf (marcado con 125) y se pasan al siguiente (marcado con 62,5). Esto se mezcla completamente.

-: Usando una nueva punta de pipeta, se separan 250 \mul del ependorf marcado con 62,5 y se transfieren a 31,25, este procedimiento se continúa hasta bajar a la concentración 0,98 (125, 62,5, 31,25, 15,63, 7,61, 3,9, 1,95, 0,98).

-: En total se añaden 475 + (250 x 7) = 2,3 ml : 0,023 g de BSA a 2,3 ml de PBS-T.

11. Añadir alícuotas de 100 \mul de la muestra de alérgeno a la placa junto con las muestras de alérgeno patrón para la curva de referencia en duplicado. Los patrones van normalmente en las dos primeras columnas sobre el lado izquierdo, con el menos concentrado arriba. Incubar durante 1 hora.

12. Seguir las etapas 5 a 6, completando un total de 5 lavados.

13. Verter 11 ml de BSA-PBS-T al 1% (0,11 g de BSA a 11 ml de PBS-T) a la bandeja de distribución. Añadir 11 \mul del anticuerpo monoclonal biotinilado (nevera) y mezclar completamente.

14. Pipetear 100 \mul en cada pocillo e incubar durante 1 hora a temperatura ambiente.

15. Vaciar la placa y lavar como se ha descrito en la etapa 12. (5 lavados).

16. Añadir 11 \mul de Streptavidin (congelador) a 11 ml de BSA-PBS-T al 1%. Pipetear 100 \mul en cada pocillo e incubar durante 30 minutos. Reservar cualquier disolución restante en un frasco.

17. Vaciar la placa y lavar como se ha descrito en la etapa 12 (5 lavados).

18. Preparar una disolución de OPD, poniendo los dos comprimidos (en hoja de plata y oro) en 20 ml de agua destilada (en un frasco de vidrio). Agitar muy vigorosamente en la oscuridad hasta que los comprimidos se han disuelto (Envolver el frasco con hoja de estaño o toalla de papel).

19. Añadir una pequeña cantidad de la disolución restante de la etapa 16. Esperar a un cambio de color (reacción positiva). Añadir 200 \mul a cada pocillo e incubar durante un mínimo de 30 minutos en la oscuridad.

20. Leer la placa a 450 nm/405 nm si no hay filtro disponible.

Ejemplo 1

El desactivador mostrado en la tabla siguiente se usó frente a alérgenos de Der-f de acuerdo con el procedimiento anterior, y los resultados son como se dan más adelante. El ácido tánico se usó como un comparador. Lo que se midió tras el tratamiento con desactivador y ácido tánico fue la cantidad de alérgeno que permanecía activo después del tratamiento. Se da también la relación de la cantidad de alérgeno que permanecía activo tras el tratamiento con 6-isopropil-m-cresol comparado con ácido tánico.

\vskip1.000000\baselineskip

Desactivador	\begin{minipage}[t]{45mm} Cantidad de alérgeno que permanecía activo tras el tratamiento con 6-isopropil-m-cresol\end{minipage}	\begin{minipage}[t]{45mm} Cantidad de alérgeno que permanecía activo tras el tratamiento con ácido tánico \end{minipage}
6-isopropil-m-cresol	725	1387,5

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 2

El desactivador mencionado más adelante se usó frente a alérgenos Der-p de acuerdo con el procedimiento anterior y los resultados se dan más adelante. Lo que se midió fue la cantidad de alérgenos que permanecían tras el tratamiento con desactivador y la cantidad de alérgenos que permanecían tras hacer el vacío con tratamiento sin desactivador.

\vskip1.000000\baselineskip

Desactivador	\begin{minipage}[t]{45mm}Cantidad de alérgeno que permanecía activo tras el tratamiento con 6-isopropil-m-cresol \end{minipage}	\begin{minipage}[t]{45mm}Cantidad de alérgeno que permanecía tras el tratamiento sin desactivador pero haciendo el vacío solamente\end{minipage}
6-isopropil-m-cresol	1500	3400

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplos 3-6

Las formulaciones siguientes se pueden preparar como composiciones soporte para usar en un aerosol para desactivar alérgenos de Der-f y Der-p.

Ejemplo 3

\vskip1.000000\baselineskip

Descripción de Ingredientes Brutos en Peso	Clasificación Puntual	%
Etanol anhidro (Alcohol 40 SD)	Disolvente	79,646
Sacarinato de alquildimetilbencilamonio	Tensioactivo catiónico	0,106
Inhibidor de corrosión (I)		0,192
Inhibidor de corrosión (II)		0,192
Inhibidor de corrosión (III)		0,096
Agua desionizada	Agua/Disolvente	15,768
Dióxido de carbono	Propulsor	4,000
Total		100,000

Ejemplo 4

\vskip1.000000\baselineskip

Descripción de Ingredientes Brutos en Peso	Clasificación Puntual	%
Etanol anhidro (Alcohol 40 SD)	Disolvente	*57,000
Fragancia #17	Fragancia	0,050
Tensioactivo Dow Corning 193	Tensioactivo	0,025
Inhibidor de corrosión (I)		0,100
Inhibidor de corrosión (II)		0,100
Agua desionizada	Agua/disolvente	*14,725
NP-40/Butano 40	Propulsor de hidrocarburo	28,000
Total		100,000
* = Se puede reemplazar por 61,755% en peso de etanol al 95% (alcohol 40 SD) y 9,970%
\hskip0,5cm en peso de agua desionizada.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 5

\vskip1.000000\baselineskip

Descripción de Ingredientes Brutos en Peso	Clasificación puntual	%
Etanol anhidro (Alcohol 40 SD)	Disolvente	79,646
Benzoato de bencilo - un acaricida	Ester/activo	4,600
Sacarinato de alquildimetilbencilamonio	Tensioactivo catiónico	0,106
Inhibidor de corrosión (I)		0,192
Inhibidor de corrosión (II)		0,192
Inhibidor de corrosión (III)		0,096
Agua desionizada	Agua/disolvente	11,168
Dióxido de carbono	Propulsor	4,000
Total		100,000

Ejemplo 6

\vskip1.000000\baselineskip

Descripción de Ingredientes Brutos en Peso	Clasificación puntual	%
Etanol anhidro (Alcohol 40 SD)	Disolvente	*57,000
Benzoato de bencilo	Ester/activo	4,600
Fragancia # 17	Fragancia	0,050
Tensioactivo Dow Corning 193	Tensioactivo	0,025
Inhibidor de corrosión (I)		0,100
Inhibidor de corrosión (II)		0,100
Agua desionizada	Agua/disolvente	*10,125
NP-40/Butano 40	Propulsor de hidrocarburo	28,000
Total		100,000
* = Se puede reemplazar por 61,755% en peso de etanol al 95% (alcohol 40 SD) y 5,370%
\hskip0,5cm en peso de agua desionizada.

Claims

1. Un método para desactivar un alérgeno Der-f y/o un alérgeno Der-p que comprende poner en contacto el alérgeno con una cantidad desactivadora eficaz de un desactivador, en donde el método usa una composición que contiene el desactivador en una cantidad desde 0,01% hasta 3%, siendo el desactivador 6-isopropil-m-cresol.

2. Un método según la reivindicación 1, en donde el alérgeno es un alérgeno Der-f.

3. Un método según la reivindicación 1, en donde el alérgeno es un alérgeno Der-p.

4. Un método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el desactivador 6-isopropil-m-cresol se aplica a materiales de tejidos seleccionados de tapetes, alfombras y muebles tapizados, en una proporción de aplicación desde 16 gramos a 170 gramos de desactivador por 10 metros cuadrados, para combatir con ello alérgenos asociados con partículas fecales excretadas por ácaros de polvo sobre las superficies de los materiales de tejidos.

5. Un método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el desactivador está comprendido dentro de una composición de aerosol, que contiene también un propulsor y, opcionalmente, un disolvente.

6. Un método de acuerdo con la reivindicación 5, en el que la cantidad de propulsor presente es desde 4% hasta 50%, y la cantidad de disolvente presente es desde 0% hasta 90%, siendo todos los porcentajes en peso.

7. Un método de acuerdo con las reivindicaciones 5 ó 6, en el que el propulsor se selecciona de un alcano C_{1-4} y dióxido de carbono.

8. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, siendo seleccionado el disolvente de alcoholes C_{1-6} y agua.

9. Un método de acuerdo con la reivindicación 8, en el que el disolvente es etanol.

10. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9, en el que la composición contiene uno o más de los siguientes:

una fragancia,

un tensioactivo,

un agente antimicrobiano,

un inhibidor de corrosión,

un acaricida.