ES2323460T3

ES2323460T3 - Desactivantes de alergenos de acaros del polvo.

Info

Publication number: ES2323460T3
Application number: ES04020020T
Authority: ES
Inventors: Gay Joyce Cornelius; Malcom Tom Mckechnie; Janette Suh Edelstein; Ian Andrew Thompson
Original assignee: Reckitt Benckiser UK Ltd
Current assignee: Reckitt Benckiser UK Ltd
Priority date: 1997-09-25
Filing date: 1998-09-22
Publication date: 2009-07-16
Anticipated expiration: 2018-09-22
Also published as: GB9820220D0; DE69814427D1; AU9175298A; EP1017428B1; EP1498156A3; US20050008709A1; EP1017428A2; CA2304639C; EP1219323A2; AR017145A1; GB2329588A; WO1999015208A3; AU2006252279B2; EP1224955A2; US6800247B1; DE69840760D1; AU2003200400B2; EP1498156A2; CA2695678A1; DE69814427T2

Abstract

Un método para desactivar un alérgeno Der-f y/o Der-p que comprende poner en contacto el alérgeno con una cantidad desactivadora eficaz de un desactivador, siendo el desactivador ácido L-ascórbico.

Description

Desactivantes de alérgenos de ácaros del polvo.

Se ha sabido desde hace mucho tiempo que el polvo doméstico puede desencadenar reacciones alérgicas en humanos, tales como asma y rinitis. Se describió, ya en 1928, que eran los ácaros del polvo la fuente principal de la respuesta alérgica, pero no fue hasta la década de los 1960 cuando los investigadores apreciaron su significado.

Se cree que las heces de dos especies particulares de ácaros de polvo doméstico, Dermatophagoides farinae (conocido como Der-f) y Dermatophagoides pteronyssinus (conocido como Der-p) desencadenan las respuestas inmunes del cuerpo, dando lugar con ello a los bien conocidos síntomas alérgicos.

Una revisión de esto se da en Experimental and Applied Acarology, 10 (1991) págs. 167-186 en un artículo titulado "House dust-mite allergen": Un estudio de L. G. Arlian.

Tanto la especie Der-f como la especie Der-p se encuentran por todo el mundo. En algunas zonas, la Der-f será la única especie Dermatophagoides. En otras zonas, la Der-p será la única especie. Aún en otras zonas, estarán presentes las dos especies aunque, generalmente, una o la otra predominará.

Una manera de vencer estas respuestas alérgicas ha sido aspirar las superficies, tales como alfombras, que contienen los ácaros del polvo y sus heces, minuciosa y frecuentemente, pero eso consume tiempo (es decir, se ha de hacer regularmente si se quiere conseguir un ambiente libre de alérgenos) y depende mucho de la eficacia del aspirador y bolsa de filtro usada, por ejemplo, bolsa de filtro de micras o bolsas de aspirador de 2 capas.

El documento WO 93/15774 describe un método de descontaminación y desintoxicación para la desinfección doméstica usando un producto basado en aceite esencial y un atomizador para ello.

El documento EP-A-716143 describe el uso de isoprenoides, por ejemplo terpenos de naranja como desactivadores.

El documento WO 96/09762 describe el uso de glutaraldehído como agente para controlar la alergenicidad de los ácaros del polvo domésticos.

Un método alternativo eficaz descrito en la patente de EE.UU. nº 4.806.526 es aplicar ácido tánico a los alérgenos. Sin embargo, el ácido tánico puede manchar, y este es un problema particularmente grave para las alfombras de colores claros (por ejemplo, alfombras blancas y beige claras) y otras superficies textiles porque el ácido tánico deja una mancha marrón oscura.

Por tanto, los autores han estado buscando desnaturalizantes de alérgenos que no manchen superficies susceptibles tales como alfombras y no obstante desactiven el alérgeno.

El documento WO 96/22081 describe composiciones de vitamina C estables, líquidas. Las composiciones son para usar en la producción de productos medicinales.

Los autores han descubierto varios desactivadores de alérgenos que son eficaces tanto frente a la especie Der-f como frente a la especie Der-p. Muy sorprendentemente, han descubierto que algunos de estos desactivadores son específicos para el tipo de alérgeno de ácaro del polvo que se está tratando. Por ejemplo, un desactivador eficaz de alérgenos de Der-f no funcionará automáticamente de modo eficaz como un desactivador de alérgenos de Der-p.

De acuerdo con la invención se ha poporcionado un método para desactivar alérgenos derivados de la especie de ácaros del polvo Der-f y/o la especie Der-p, que comprende poner en contacto el alérgeno con una cantidad desactivadora eficaz de un desactivador, siendo el desactivador ácido L-ascórbico.

El ácido L-ascórbico es eficaz tanto contra alérgenos Der-f como Der-p.

En las composiciones que contienen el desactivador, el desactivador está presente en una cantidad desde 0,01% hasta 7%, preferentemente desde 0,01% hasta 3%.

En los métodos para tratar tapetes y alfombras para desactivar alérgenos, la cantidad de desactivador presente es desde alrededor de 16 g hasta alrededor de 170 g por 10 metros cuadrados, preferentemente alrededor de 32 g por 10 metros cuadrados.

El método puede emplear una composición de aerosol que contiene ácido L-ascórbico, un propulsor y, opcionalmente, un disolvente.

Preferentemente, la cantidad de desactivador presente en tal composición es desde 0,01% hasta 7%, más preferentemente desde 0,01% hasta 3%.

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Preferentemente, la cantidad de propulsor presente en tal composición es desde 4% hasta 50%, más preferentemente desde 4% hasta 30%.

Preferentemente, la cantidad de disolvente presente en tal composición es 0 a 99,95%, más preferiblemente 0% a 90%, y lo más preferentemente desde 20% hasta 90%.

El propulsor se selecciona, preferentemente, de los disponibles comercialmente, por ejemplo alcanos C_{1}-C_{4}, clorofluorocarbonos y gases comprimidos tales como nitrógeno, aire y dióxido de carbono.

El disolvente se selecciona, preferentemente, de alcoholes C_{1}-C_{6} (por ejemplo, etanol) o agua.

Además, las composiciones usadas en esta invención pueden contener también uno o más de los siguientes:

una fragancia, preferentemente en una cantidad de 0% a 5%, más preferentemente 0% a 2%;

un compuesto antimicrobiano, por ejemplo sacarinato de alquildimetilbencilamonio, preferentemente en una cantidad de 0,01% a 1%;

un tensioactivo, por ejemplo tensioactivo 193 de Dow Corning, preferentemente en una cantidad de 0,01% a 1%;

un inhibidor de corrosión, por ejemplo nitrito sódico, benzoato sódico, trietanolamina e hidróxido amónico, preferentemente en una cantidad de 0,01% a 10%; y

un acaricida, tal como benzoato de bencilo, pemetrina piretroide, d-alletrina y opcionalmente un sinérgico tal como butóxido de piperonilo, preferentemente en una cantidad de 0,1% a 10%.

Se ha encontrado que los desactivadores usados en esta invención tienen propiedades desactivadoras de alérgenos tan eficaces como el ácido tánico, pero sin el inconveniente de manchar.

La invención se ilustrará ahora mediante los Ejemplos siguientes.

Ejemplos

El procedimiento de las pruebas de los Ejemplos 1 a 6 es como sigue y se conoce como el protocolo ELISA.

El protocolo ELISA para Der-f y Der-p se ha desarrollado como sigue como una medida de propiedad desnaturalizante para los desnaturalizantes.

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Protocolo ELISA 1

1. El polvo se recoge de bolsas de aspirador Hoover^{TM} y se pasa a través de una serie de tamices decrecientes hasta 63 micrómetros.

2. Se etiquetan las placas petri limpias se marcan con el producto químico que se va a probar (en la base). Se usan tres réplicas para cada tratamiento.

3. Se usa papel de filtro para forrar cada placa y se añaden 0,2 g de polvo a cada placa sobre el papel de filtro. Se vuelve a colocar la tapa (o base, porque las placas están invertidas) y la placa se sacude para dispersar uniformemente el polvo sobre el papel de filtro.

4. Se usaron disoluciones acuosas de desactivador al 2% excepto para el material compuesto de cloruro de plata en el que, en cambio, se usó 0,05%. El ácido tánico inmovilizado se usó como una dispersión al 1%. El resto de lúpulo hidrogenado se usó a nivel de 2% (en la forma de una disolución al 10%). Los desactivadores insolubles en agua se emulsionaron con un tensioactivo de oleato de sorbitan (es decir, Tween). Se usó hinoquitol al 0,5%, no 2%.

5. Se rocía el polvo con el tratamiento correspondiente, se requieren 2 rociadas para una cobertura suficiente
(1 rociada = 1,5 ml).

6. Se deja descubierto a temperatura ambiente, en habitación bien aireada, hasta que el papel de filtro esté seco. Esto puede tardar hasta 4 horas.

7. Se vacía el polvo en ependorfs etiquetados de acuerdo con el tratamiento.

8. Se añade 1 ml de seroalbúmina de bovino al 5% en tampón fosfato salino -Tween, BSA-PBS-T, a cada ependorf (5 veces el peso de polvo) (20 ml de BSA-PBS-T = 1 g de BSA en 20 ml de PBS-T).

9. Se deja durante una noche en una nevera.

10. Se centrifuga durante 5 minutos a 13.000 rpm.

11. Se decanta el sobrenadante en un nuevo ependorf etiquetado de acuerdo con el tratamiento.

12. Se centrifuga nuevamente durante 5 minutos a 13.000 rpm.

13. Se preparan diluciones de 1:10 y 1:100 añadiendo 100 \mul de disolución neta a 900 \mul de BSA-PBS-T al 1% (1:10). Esto se repite usando 100 \mul de dilución 1:10 y añadiéndolos a 900 \mul de BSA-PBS-T al 1% para la dilución 1:100.

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Protocolo ELISA 2 para Der-f y Der-p: Biotecnologías de casa

1. Se preparan muestras y diluciones como en el protocolo

2. Se preparan 500 ml de tampón carbonato/bicarbonato 50 mM disolviendo 0,795 g de Na_{2}CO_{3} y 1.465 g de NaHCO_{3} en 500 ml de agua destilada. Comprobar que el pH está en 9,6. (Esta disolución se guarda en la nevera en un matraz cónico).

3. El anticuerpo monoclonal (guardado en el congelador) se ha de añadir al tampón usando el método siguiente,
(1 \mug por pocillo; se necesitan 11 ml) aplicado a la placa ELISA

-: se añaden 11 ml de tampón carbonato/bicarbonato a la bandeja distribuidora.

-: se añaden 11 \mul de anticuerpo monoclonal Der-f1 o Der-p1 (almacenado en congelador, el ependorf en uso está en la nevera) al tampón. Para asegurarse de que todo el anticuerpo se ha separado de la punta, lavar la punta de la pipeta aspirando hacia arriba y hacia abajo en la disolución tampón, agitando suavemente para mezclar a fondo.

4. Se pipetean 100 \mul de la disolución de anticuerpo en cada pocillo de la placa de microvaloración, se cubre con un sellador de placa y se deja durante una noche a 4ºC.

5. Se vacía la placa invirtiéndola rápidamente sobre el fregadero, secar entonces golpeando sobre una pila de toallas de papel.

6. Se añaden 200 \mul de tampón de lavado a cada pocillo: PBS/0/05% Tween (PBS-T).

7. Se repiten las etapas 5 y 6 una vez más (haciendo un total de 2 lavados).

8. Asegurarse de que todos los pocillos están secos, añadir entonces 100 \mul de BSA-PBS-T al 1%. Se vuelve a colocar el sellador de la placa y se incuba durante 1 hora a temperatura ambiente*.

9. Se repiten las etapas 5 a 7 (2 lavados).

10. Durante la hora de incubación, se preparan los patrones alérgenos a diluciones entre 125 y 1 \mug/ml de Der f 1 o Der p1:

-: Se añaden 25 \mul de patrón alérgeno (guardado en la nevera en caja de poliestireno) a 475 \mul de PBS-BSA-T al 1% y se mezclan completamente - etiquetado "125".

-: Se añaden 250 \mul de PBS-BSA-T al 1% a otros 7 ependorfs que se etiquetan con 62,5, 31,25, 15,63, 7,61, 3,9, 1,95 y 0,98.

-: Se toman 250 \mul del primer ependorf (etiquetado con 125) y se pasan al siguiente (etiquetado con 62,5). Esto se mezcla completamente.

-: Usando una nueva punta de pipeta, se separan 250 \mul del ependorf etiquetado con 62,5 y se transfieren a 31,25, este procedimiento se continúa hasta bajar a la concentración 0,98 (125, 62,5, 31,25, 15,63, 7,61, 3,9, 1,95, 0,98).

-: En total se añaden 475 + (250 x 7) = 2,3 ml : 0,023 g de BSA a 2,3 ml de PBS-T.

11. Se añaden alícuotas de 100 \mul de la muestra de alérgeno a la placa junto con las muestras de alérgeno patrón para la curva de referencia por duplicado. Los patrones van normalmente en las dos primeras columnas en el lado izquierdo, con el menos concentrado arriba. Se incuban durante 1 hora.

12. Se siguen las etapas 5 a 6, completando un total de 5 lavados.

13. Se vierten 11 ml de BSA-PBS-T al 1% (0,11 g de BSA a 11 ml de PBS-T) a la bandeja de distribución. Se añaden 11 \mul del anticuerpo monoclonal biotinilado (nevera) y se mezcla completamente.

14. Se pipetean 100 \mul en cada pocillo y se incuban durante 1 hora a temperatura ambiente.

15. Se vacía la placa y se lava como se ha descrito en la etapa 12. (5 lavados).

16. Se añaden 11 \mul de Streptavidin (congelador) a 11 ml de BSA-PBS-T al 1%. Se pipetean 100 \mul en cada pocillo y se incuban durante 30 minutos. Se reserva cualquier disolución restante en un frasco.

17. Se vacía la placa y se lava como se ha descrito en la etapa 12 (5 lavados).

18. Se prepara una disolución de OPD, poniendo los dos comprimidos (en hoja de plata y oro) en 20 ml de agua destilada (en un frasco de vidrio). Se agita muy vigorosamente en la oscuridad hasta que los comprimidos se han disuelto (Envolver el frasco con hoja de estaño o toalla de papel).

19. Se añade una pequeña cantidad de la disolución restante de la etapa 16. Se espera a un cambio de color (reacción positiva). Se añaden 200 \mul a cada pocillo y se incuba durante un mínimo de 30 minutos en la oscuridad.

20. Se lee la placa a 450 nm/405 nm si no hay filtro disponible.

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Ejemplo 1

El desactivador mostrado en la tabla siguiente se usó frente a alérgenos de Der-f de acuerdo con el procedimiento anterior, y los resultados son como se dan más adelante. El ácido tánico se usó como un comparador. Lo que se midió tras el tratamiento con desactivador y ácido tánico fue la cantidad de alérgeno que permanecía activo después del tratamiento. Se da también la relación de la cantidad de alérgeno que permanecía activo tras el tratamiento con desactivador y ácido tánico.

1

Ejemplo 2

El mismo desactivador se usó frente a alérgenos Der-p de acuerdo con el procedimiento anterior y los resultados se dan más adelante. Lo que se midió fue la cantidad de alérgenos que permanecían tras el tratamiento con desactivador y la cantidad de alérgenos que permancecían tras hacer el vacío sin tratamiento desactivador.

2

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Ejemplos 3-6

Las formulaciones siguientes se pueden preparar como composiciones vehículo para usar en un aerosol para desactivar alérgenos de Der-f y Der-p, en un método de la invención.

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Ejemplo 3

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Ejemplo 4

4

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Ejemplo 5

6

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Ejemplo 6

7

Claims

1. Un método para desactivar un alérgeno Der-f y/o Der-p que comprende poner en contacto el alérgeno con una cantidad desactivadora eficaz de un desactivador, siendo el desactivador ácido L-ascórbico.

2. Un método para desactivar un alérgeno Der-f que comprende poner en contacto el alérgeno con una cantidad desactivadora eficaz de un desactivador, siendo el desactivador ácido L-ascórbico.

3. Un método para desactivar un alérgeno Der-p que comprende poner en contacto el alérgeno con una cantidad desactivadora eficaz de un desactivador, siendo el desactivador ácido L-ascórbico.

4. Un método para desactivar alérgenos que derivan de ácaros del polvo Der-f y/o Der-p, estando dichos alérgenos asociados con partículas fecales excretadas por dichos ácaros sobre las superficies de materiales de tejidos seleccionados de tapetes, alfombras y muebles tapizados, tal método comprende aplicar a dichos materiales tejidos un desactivador que es ácido L-ascórbico, en una proporción de 16 gramos a 170 gramos de desactivador por 10 metros cuadrados.

5. Un método según la reivindicación 4, en el que los alérgenos derivan de ácaros del polvo Der-f.

6. Un método según la reivindicación 4, en el que los alérgenos derivan de ácaros del polvo Der-p.

7. Un método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el desactivador está en una composición que contiene de 0,01 a 7% de desactivador.

8. Un método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que emplea una composición aerosol que contiene

a) ácido L-ascórbico;

b) un propulsor; y

c) opcionalmente, un disolvente.

9. Un método de acuerdo con la reivindicación 8, en el que la cantidad de desactivador presente es desde 0,01% hasta 7%, la cantidad de propulsor presente es desde 0,05% hasta 3%, y la cantidad de disolvente presente es desde 0% hasta 99,95%, siendo todos los porcentajes en peso.

10. Un método de acuerdo con la reivindicación 8 ó 9, en el que el propulsor se selecciona de alcano C_{1-4} y dióxido de carbono.

11. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8, 9 ó 10 en el que el disolvente se selecciona de alcoholes C_{1-6} o agua.

12. Un método de acuerdo con la reivindicación 11, en el que el disolvente es etanol.

13. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12, en el que la composición contiene uno o más de los siguientes:

una fragancia,

un tensioactivo,

un agente antimicrobiano,

un inhibidor de corrosión, y/o

un acaricida.