ES2239181T3 - Desactivadores de alergenos de acaros del polvo. - Google Patents
Desactivadores de alergenos de acaros del polvo.Info
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Abstract
Un método para desactivar un alérgeno Der-f y/o un alérgeno Der-p que comprende poner en contacto el alérgeno con una cantidad desactivadora eficaz de un desactivador, usando el método una composición que contiene el desactivador en una cantidad desde 0, 01% hasta 7%, siendo el desactivador ácido tánico inmovilizado.
Description
Desactivadores de alérgenos de ácaros del
polvo.
Se ha sabido desde hace mucho tiempo que el polvo
doméstico puede desencadenar reacciones alérgicas en humanos, tales
como asma y rinitis. Se describió, tan antiguamente como en 1928,
que eran los ácaros pulverulentos del polvo la fuente principal de
la respuesta alérgica, pero fue solamente en la década de los 1960
cuando los investigadores apreciaron su significado.
Se cree que las heces de dos especies
particulares de ácaros de polvo doméstico, Dermatophagoides
farinae (conocido como Der-f) y
Dermatophagoides pteronyssinus (conocido como
Der-p) desencadenan las respuestas inmunes del
cuerpo, dando lugar con ello a los bien conocidos síntomas
alérgicos.
Una revisión de esto se da en Experimental and
Applied Acarology, 10 (1991) p. 167-186 en un
artículo titulado "Alérgeno de ácaro de polvo doméstico": Una
revisión por L. G. Arlian.
Tanto la especie Der-f como la
especie Der-p se encuentran por todo el mundo. En
algunas áreas, la Der-f será la única especie
Dermatophagoides. En otras áreas, la Der-p será la
única especie. Aún en otras áreas, las dos especies estarán al mismo
tiempo presentes aunque, generalmente, una o la otra
predominará.
Una manera de vencer estas respuestas alérgicas
ha sido aspirar a vacío las superficies, tales como alfombras, que
contienen los ácaros pulverulentos y sus heces, minuciosa y
frecuentemente, pero eso consume tiempo (es decir, se ha de hacer
regularmente si se quiere hacer un ambiente libre de alérgenos) y es
muy dependiente de la eficacia del aspirador de polvo y bolsa de
filtro usada, por ejemplo, bolsa de filtro de micras o bolsas de
aspirador de 2 capas.
Un método alternativo de crear un ambiente libre
de alérgenos ha sido desnaturalizar el alérgeno, por ejemplo como se
describe en la patente de U.S. No. 4.806.526. Sin embargo, el único
método eficaz del que estamos informados es aplicar ácido tánico al
alérgeno. Sin embargo, el ácido tánico puede causar manchas, y este
es un problema particularmente agudo para las alfombras de colores
claros (por ejemplo, alfombras blancas y beige claras) y otras
superficies textiles porque el ácido tánico deja mancha marrón
oscura.
Por tanto, hemos estado buscando
desnaturalizantes alérgicos que no manchen superficies susceptibles
tales como alfombras y no obstante desactiven el alérgeno.
Hemos descubierto un número de desactivadores de
alérgenos que son eficaces tanto frente a la especie
Der-f como frente a la especie
Der-p. Muy sorprendentemente, hemos descubierto que
algunos de estos desactivadores son específicos para el tipo de
alérgeno de ácaro de polvo que se está tratando. Por ejemplo, un
desactivador eficaz de alérgenos de Der-f no
funcionará automáticamente de modo eficaz como un desactivador de
alérgenos de Der-p.
De acuerdo con la invención, se proporciona un
método para desactivar un alérgeno de Der-f y/o
Der-p que comprende poner en contacto el alérgeno
con una cantidad eficaz, desactivadora, de un desactivador, usando
el método una composición que contiene el desactivador en una
cantidad desde 0,01% hasta 7%, siendo el desactivador ácido tánico
inmovilizado.
"Ácido tánico inmovilizado" es ácido tánico
sobre perlas de poli(vinilpirrolidona). Se preparó como sigue
ácido tánico inmovilizado: se disolvieron 100 mg de ácido tánico en
agua; se añadieron 50 mg de perlas de poli(vinilpirrolidona)
Polyclar 10 (ISP, Guildford Surrey) y se agitó durante una hora; se
separaron las perlas de la disolución por filtración y se lavaron
con varios mls de agua helada hasta que no se vio color alguno en
los lavados; se secaron en un horno a 50ºC.
El desactivador está preferentemente presente en
una cantidad de desde 0,01% hasta 3%.
En los métodos para tratar tapetes y alfombras
para desactivar alérgenos, la cantidad de desactivador presente es
desde alrededor de 16 g hasta alrededor de 170 g por 10 metros
cuadrados, preferentemente alrededor de 32 g por 10 metros
cuadrados.
Además, de acuerdo con la invención se ha
proporcionado una composición de aerosol que contiene 0,01 a 7% de
ácido tánico inmovilizado como desactivador, un propulsor y,
opcionalmente, un disolvente.
Preferentemente, la cantidad de desactivador
presente en tal composición de la invención es desde 0,01% hasta
3%.
Preferentemente, la cantidad de propulsor
presente en tal composición es desde 4% hasta 50%, más
preferentemente desde 4% hasta 30%.
Preferentemente, la cantidad de disolvente
presente en tal composición es 0% a 90%, y lo más preferentemente
desde 20% hasta 90%.
El propulsor se selecciona, preferentemente, de
los disponibles comercialmente, por ejemplo alcanos
C_{1}-C_{4}, clorofluorocarbonos y gases
comprimidos tales como nitrógeno, aire y dióxido de carbono.
El disolvente se selecciona, preferentemente, de
alcoholes C_{1}-C_{6} (por ejemplo, etanol) o
agua.
Además, las composiciones de esta invención
pueden contener también uno o más de lo siguiente:
una fragancia, preferentemente en una cantidad de
0% a 5%, más preferentemente 0% a 2%;
un compuesto antimicrobiano, por ejemplo
sacarinato de alquildimetilbencilamonio, preferentemente en una
cantidad de 0,01% a 1%;
un tensioactivo, por ejemplo Dow Corning 193
Surfactant, preferentemente en una cantidad de 0,01% a
1%;
1%;
un inhibidor de corrosión, por ejemplo nitrito
sódico, benzoato sódico, trietanolamina e hidróxido amónico,
preferentemente en una cantidad de 0,01% a 10%;
y
un acaricida, tal como benzoato de bencilo,
pemetrina piretroide, d-alletrina y opcionalmente un
sinérgico tal como butóxido de piperonilo, preferentemente en una
cantidad de 0,1% a 10%.
Se ha encontrado que el desactivador de la
invención tiene propiedades desactivadoras de alérgenos tan eficaces
como el ácido tánico, pero sin el inconveniente de manchar.
La invención se ilustrará ahora por los Ejemplos
siguientes.
El procedimiento de las pruebas de los Ejemplos 1
a 6 es como sigue y se conoce como el protocolo ELISA.
El protocolo ELISA para Der-f y
Der-p se ha desarrollado como sigue como una medida
de la propiedad desnaturalizante para los desnaturalizantes.
1. El polvo se recoge de bolsas de
vacuoaspirador Hoover^{TM} y se pasa a través de una serie de
tamices decrecientes hasta 63 micrómetros.
2. Las placas petri limpias se marcan con el
producto químico a probar (en la base). Se usan tres réplicas para
cada tratamiento.
3. Se usa papel de filtro para forrar cada
placa y se añaden 0,2 g de polvo a cada placa sobre el papel de
filtro. Se vuelve a colocar la tapa (o base, porque las placas están
invertidas) y la placa se sacude para dispersar uniformemente el
polvo sobre el papel de filtro.
4. Se usó ácido tánico inmovilizado como una
dispersión al 1%.
5. Se rocía el polvo con el tratamiento
correspondiente, se requieren 2 rociadas para una cobertura
suficiente
(1 rociada = 1,5 ml).
(1 rociada = 1,5 ml).
6. Dejarlo descubierto a temperatura ambiente,
en habitación bien aireada, hasta que el papel de filtro esté seco.
Esto puede tardar hasta 4 horas.
7. Vaciar el polvo en tubos epindorf marcados de
acuerdo con el tratamiento.
8. Añadir 1 ml de seroalbúmina de bovino al 5%
en tampón fosfato salino -Tween,
BSA-PBS-T, a cada tubo epindorf (5
veces el peso de polvo) (20 ml de
BSA-PBS-T = 1 g de BSA en 20 ml de
PBS-T).
9. Dejar durante una noche en una nevera.
10. Centrifugar durante 5 minutos a 13.000
rpm.
11. Decantar el sobrenadante en un nuevo tubo
epindorf marcado de acuerdo con el tratamiento.
12. Centrifugar nuevamente durante 5 minutos a
13.000 rpm.
13. Hacer diluciones de 1:10 y 1:100 añadiendo
100 \mul de disolución neta a 900 \mul de
BSA-PBS-T al 1% (1:10). Esto se
repite usando 100 \mul de dilución 1:10 y añadiéndolos a 900
\mul de BSA-PBS-T al 1% para la
dilución 1:100.
1. Preparar muestras y diluciones como en el
protocolo.
2. Preparar 500 ml de tampón
carbonato/bicarbonato 50 mM disolviendo 0.795 g de Na_{2}CO_{3}
y 1.465 g de NaHCO_{3} en 500 ml de agua destilada. Comprobar que
el pH está en 9,6. (Esta disolución se guarda en la nevera en un
matraz cónico).
3. El anticuerpo monoclonal (guardado en el
congelador) se ha de añadir al tampón usando el método
siguiente,
(1 \mug por pocillo; se necesitan 11 ml) aplicado a la placa ELISA
(1 \mug por pocillo; se necesitan 11 ml) aplicado a la placa ELISA
- -
- se añaden 11 ml de tampón carbonato/bicarbonato a la bandeja distribuidora.
- -
- se añaden 11 \mul de anticuerpo monoclonal Der-f1 o Der-p1 (almacenado en congelador, el tubo epindorf en uso está en la nevera) al tampón. Para asegurarse de que todo el anticuerpo se ha separado de la punta, lavar la punta de la pipeta aspirando hacia arriba y hacia abajo en la disolución tampón, agitando suavemente para mezclar a fondo.
4. Pipetear 100 \mul de la disolución de
anticuerpo en cada pocillo de la placa de microvaloración, cubrir
con un sellador de placa y dejar durante una noche a 4ºC.
5. Vaciar la placa invirtiéndola rápidamente
sobre el fregadero, secar entonces golpeando sobre una pila de
toallas de papel.
6. Añadir 200 \mul de tampón de lavado a cada
pocillo: PBS/0/05% Tween (PBS-T).
7. Repetir las etapas 5 y 6 una vez más (haciendo
un total de 2 lavados).
8. Asegurarse de que todos los pocillos están
secos, añadir entonces 100 \mul de
BSA-PBS-T al 1%. Volver a colocar el
sellador de la placa e incubar durante 1 hora a temperatura
ambiente*.
9. Repetir las etapas 5 a 7 (2 lavados)
10. Durante el periodo de la hora de incubación,
preparar los patrones alérgenos a diluciones entre 125 y 1 \mug/ml
de Der f 1 o Der p1:
- -
- Añadir 25 \mul de patrón alérgeno (guardado en la nevera en caja de poliestireno) a 475 \mul de BSA-PBS-T al 1% y mezclar completamente - marcar "125".
- -
- Se añaden 250 \mul de BSA-PBS-T al 1% a otros 7 tubos epindorf que se marcan con 62,5, 31,25, 15,63, 7,61, 3,9, 1,95 y 0,98.
- -
- Se toman 250 \mul del primer tubo epindorf (marcado con 125) y se pasan al siguiente (marcado con 62,5). Esto se mezcla completamente.
- -
- Usando una nueva punta de pipeta, se separan 250 \mul del tubo epindorf marcado con 62,5 y se transfieren a 31,25, este procedimiento se continúa hasta bajar a la concentración 0,98 (125, 62,5, 31,25, 15,63, 7,61, 3,9, 1,95, 0,98).
- -
- En total se añaden 475 + (250 x 7) = 2,3 ml : 0,023 g de BSA a 2,3 ml de PBS-T.
11. Añadir alícuotas de 100 \mul de la muestra
de alérgeno a la placa junto con las muestras de alérgeno patrón
para la curva de referencia en duplicado. Los patrones van
normalmente en las dos primeras columnas sobre el lado izquierdo,
con el menos concentrado arriba. Incubar durante 1 hora.
12. Seguir las etapas 5 a 6, completando un total
de 5 lavados.
13. Verter 11 ml de
BSA-PBS-T al 1% (0,11 g de BSA a 11
ml de PBS-T) a la bandeja de distribución.
Añadir
11 \mul del anticuerpo monoclonal biotinilado (nevera) y mezclar completamente.
11 \mul del anticuerpo monoclonal biotinilado (nevera) y mezclar completamente.
14. Pipetear 100 \mul en cada pocillo e incubar
durante 1 hora a temperatura ambiente.
15. Vaciar la placa y lavar como se ha descrito
en la etapa 12. (5 lavados).
\newpage
16. Añadir 11 \mul de Streptavidin (congelador)
a 11 ml de BSA-PBS-T al 1%. Pipetear
100 \mul en cada pocillo e incubar durante 30 minutos. Reservar
cualquier disolución restante en un frasco.
17. Vaciar la placa y lavar como se ha descrito
en la etapa 12 (5 lavados).
18. Preparar una disolución de OPD, poniendo los
dos comprimidos (en hoja de plata y oro) en 20 ml de agua destilada
(en un frasco de vidrio). Agitar muy vigorosamente en la oscuridad
hasta que los comprimidos se han disuelto (Envolver el frasco con
hoja de estaño o toalla de papel).
19. Añadir una pequeña cantidad de la disolución
restante de la etapa 16. Esperar a un cambio de color (reacción
positiva). Añadir 200 \mul a cada pocillo e incubar durante un
mínimo de 30 minutos en la oscuridad.
20. Leer la placa a 450 nm/405 nm si no hay
filtro disponible.
El desactivador mostrado en la tabla siguiente se
usó frente a alérgenos de Der-f de acuerdo con el
procedimiento anterior, y los resultados son como se dan más
adelante. El ácido tánico se usó como un comparador. Lo que se midió
tras el tratamiento con desactivador y ácido tánico fue la cantidad
de alérgeno que permanecía activo después del tratamiento. Se da
también la relación de la cantidad de alérgeno que permanecía activo
tras el tratamiento con ácido tánico inmovilizado comparado con
ácido tánico.
\vskip1.000000\baselineskip
Desactivador | \begin{minipage}[t]{50mm} Cantidad de alérgeno que permanecía activo tras el tratamiento con ácido tánico inmovilizado \end{minipage} | \begin{minipage}[t]{50mm} Cantidad de alérgeno que permanecía activo tras el tratamiento con ácido tánico \end{minipage} |
Ácido tánico inmovilizado | 1550 | 1175 |
\vskip1.000000\baselineskip
El desactivador mencionado más adelante se usó
frente a alérgenos Der-p de acuerdo con el
procedimiento anterior y los resultados se dan más adelante. Lo que
se midió fue la cantidad de alérgenos que permanecían tras el
tratamiento con desactivador y la cantidad de alérgenos que
permancecían tras hacer el vacío con tratamiento sin desacti-
vador.
vador.
\vskip1.000000\baselineskip
Desactivador | \begin{minipage}[t]{50mm} Cantidad de alérgeno que permanecía activo tras el tratamiento con ácido tánico inmovilizado \end{minipage} | \begin{minipage}[t]{50mm} Cantidad de alérgeno que permanecía tras el tratamiento sin desactivador \end{minipage} |
Ácido tánico inmovilizado | 1125 | 5642 |
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplos 3 -
6
Las formulaciones siguientes se pueden preparar
como composiciones soporte para usar en un aerosol para desactivar
alérgenos de Der-f y Der-p.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Descripción de Ingredientes Brutos en Peso | Clasificación Puntual | % |
Etanol anhidro (Alcohol 40 SD) | Disolvente | 79,646 |
Sacarinato de alquildimetilbencilamonio | Tensioactivo catiónico | 0,106 |
Inhibidor de corrosión (I) | 0,192 | |
Inhibidor de corrosión (II) | 0,192 | |
Inhibidor de corrosión (III) | 0,096 | |
Agua desionizada | Agua/Disolvente | 15,768 |
Dióxido de carbono | Propulsor | 4,000 |
Total | 100,000 |
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Descripción de Ingredientes Brutos en Peso | Clasificación Puntual | % |
Etanol anhidro (Alcohol 40 SD) | Disolvente | * 57,000 |
Fragancia #17 | Fragancia | 0,0500 |
Tensioactivo Dow Corning 193 | Tensioactivo | 0,025 |
Inhibidor de corrosión (I) | 0,100 | |
Inhibidor de corrosión (II) | 0,100 | |
Agua desionizada | Agua/disolvente | * 14,725 |
NP-40/Butano 40 | Propulsor de hidrocarburo | 28,000 |
Total | 100,000 | |
* = \begin{minipage}[t]{140mm} Se puede reemplazar por 61,755% en peso de etanol al 95% (alcohol 40 SD) y 9,970% en peso de agua desionizada. \end{minipage} |
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Descripción de Ingredientes Brutos en Peso | Clasificación puntual | % |
Etanol anhidro (Alcohol 40 SD) | Disolvente | 79,646 |
Benzoato de bencilo - un acaricida | Ester/activo | 4,600 |
Sacarinato de alquildimetilbencilamonio | Tensioactivo catiónico | 0,106 |
Inhibidor de corrosión (I) | 0,192 | |
Inhibidor de corrosión (II) | 0,192 | |
Inhibidor de corrosión (III) | 0,096 | |
Agua desionizada | Agua/disolvente | 11,168 |
Dióxido de carbono | Propulsor | 4,000 |
Total | 100,000 |
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Descripción de Ingredientes Brutos en Peso | Clasificación Puntual | % |
Etanol anhidro (Alcohol 40 SD) | Disolvente | * 57,000 |
Benzoato de bencilo | Ester/activo | 4,600 |
Fragancia #17 | Fragancia | 0,0500 |
Tensioactivo Dow Corning 193 | Tensioactivo | 0,025 |
Inhibidor de corrosión (I) | 0,100 | |
Inhibidor de corrosión (II) | 0,100 | |
Agua desionizada | Agua/disolvente | * 10,125 |
NP-40/Butano 40 | Propulsor de hidrocarburo | 28,000 |
Total | 100,000 | |
* = \begin{minipage}[t]{140mm} Se puede reemplazar por 61,755% en peso de etanol al 95% (alcohol 40 SD) y 5,370% en peso de agua desionizada. \end{minipage} |
Claims (10)
1. Un método para desactivar un alérgeno
Der-f y/o un alérgeno Der-p que
comprende poner en contacto el alérgeno con una cantidad
desactivadora eficaz de un desactivador, usando el método una
composición que contiene el desactivador en una cantidad desde 0,01%
hasta 7%, siendo el desactivador ácido tánico inmovilizado.
2. Un método como se reivindica en la
reivindicación 1, en donde el alérgeno es un alérgeno
Der-f.
3. Un método como se reivindica en la
reivindicación 1, en donde el alérgeno es un alérgeno
Der-p.
4. Un método como se reivindica en una cualquiera
de las reivindicaciones precedentes, en donde el desactivador ácido
tánico inmovilizado se aplica a materiales de tejidos seleccionados
de tapetes, alfombras y muebles tapizados, en una proporción de
aplicación de desde 16 gramos hasta 170 gramos de desactivador por
10 metros cuadrados, para combatir con ello alérgenos asociados con
partículas fecales excretadas por ácaros de polvo sobre las
superficies de los materiales de tejidos.
5. Un método como se reivindica en una cualquiera
de las reivindicaciones precedentes, en donde el desactivador está
comprendido dentro de una composición de aerosol, conteniendo
también un propulsor y, opcionalmente, un disolvente.
6. Un método de acuerdo con la reivindicación 5,
en el que la cantidad de desactivador presente es desde 0,01% hasta
3%, la cantidad de propulsor presente es desde 4% hasta 50%, y la
cantidad de disolvente presente es desde 0% hasta 90%, siendo todo
los porcentajes en peso.
7. Un método de acuerdo con las reivindicaciones
5 ó 6 en el que el propulsor se selecciona de un alcano
C_{1-4} y dióxido de carbono.
8. Un método de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones 5 a 7, siendo seleccionado el disolvente de
alcoholes C_{1-6} y agua.
9. Un método de acuerdo con la reivindicación 8,
en el que el disolvente es etanol.
10. Un método de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 5 a 9, en el que la composición contiene uno o
más de lo siguiente:
- una fragancia,
- un tensioactivo,
- un agente antimicrobiano,
- un inhibidor de corrosión,
- un acaricida.
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