EA037799B1 - Пептиды с активностью, препятствующей ожирению или диабету, и их применение - Google Patents
Пептиды с активностью, препятствующей ожирению или диабету, и их применение Download PDFInfo
- Publication number
- EA037799B1 EA037799B1 EA201792365A EA201792365A EA037799B1 EA 037799 B1 EA037799 B1 EA 037799B1 EA 201792365 A EA201792365 A EA 201792365A EA 201792365 A EA201792365 A EA 201792365A EA 037799 B1 EA037799 B1 EA 037799B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- peptide
- expression
- obesity
- seq
- diabetes
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 182
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 52
- 230000003579 anti-obesity Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 230000003178 anti-diabetic effect Effects 0.000 title description 5
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims abstract description 56
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims abstract description 42
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims abstract description 42
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 31
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 24
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 19
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 43
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 43
- 230000004132 lipogenesis Effects 0.000 claims description 25
- 230000004130 lipolysis Effects 0.000 claims description 24
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 22
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 claims description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 20
- 101001062864 Homo sapiens Fatty acid-binding protein, adipocyte Proteins 0.000 claims description 19
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 19
- 102100030431 Fatty acid-binding protein, adipocyte Human genes 0.000 claims description 18
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 claims description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 15
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 10
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 8
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 2
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims description 2
- 102000000452 Acetyl-CoA carboxylase Human genes 0.000 claims 9
- 108010016219 Acetyl-CoA carboxylase Proteins 0.000 claims 9
- 108010018763 Biotin carboxylase Proteins 0.000 claims 9
- 102000014156 AMP-Activated Protein Kinases Human genes 0.000 claims 1
- 108010011376 AMP-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 claims 1
- 102000000019 Sterol Esterase Human genes 0.000 claims 1
- 108010055297 Sterol Esterase Proteins 0.000 claims 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003614 peroxisome proliferator Substances 0.000 claims 1
- 102100035905 1-acylglycerol-3-phosphate O-acyltransferase ABHD5 Human genes 0.000 abstract description 6
- 101000929840 Homo sapiens 1-acylglycerol-3-phosphate O-acyltransferase ABHD5 Proteins 0.000 abstract description 6
- 101001129187 Homo sapiens Patatin-like phospholipase domain-containing protein 2 Proteins 0.000 abstract description 6
- 102100031248 Patatin-like phospholipase domain-containing protein 2 Human genes 0.000 abstract description 6
- 102000003728 Peroxisome Proliferator-Activated Receptors Human genes 0.000 abstract 1
- 108090000029 Peroxisome Proliferator-Activated Receptors Proteins 0.000 abstract 1
- 230000002293 adipogenic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 46
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 33
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 32
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 30
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 22
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 19
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 17
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 16
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 13
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 12
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 12
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 12
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 12
- 210000000229 preadipocyte Anatomy 0.000 description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 11
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 11
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 11
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 10
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 10
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 10
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N Oil red O Chemical compound Cc1ccc(C)c(c1)N=Nc1cc(C)c(cc1C)N=Nc1c(O)ccc2ccccc12 NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 5
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 5
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 5
- 238000007446 glucose tolerance test Methods 0.000 description 5
- 238000013116 obese mouse model Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 230000006372 lipid accumulation Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- MFFMDFFZMYYVKS-SECBINFHSA-N sitagliptin Chemical group C([C@H](CC(=O)N1CC=2N(C(=NN=2)C(F)(F)F)CC1)N)C1=CC(F)=C(F)C=C1F MFFMDFFZMYYVKS-SECBINFHSA-N 0.000 description 4
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100214824 Caenorhabditis elegans abhd-5.2 gene Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 210000000593 adipose tissue white Anatomy 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 3
- 239000008004 cell lysis buffer Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 3
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 3
- 238000010603 microCT Methods 0.000 description 3
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 3
- HYAFETHFCAUJAY-UHFFFAOYSA-N pioglitazone Chemical compound N1=CC(CC)=CC=C1CCOC(C=C1)=CC=C1CC1C(=O)NC(=O)S1 HYAFETHFCAUJAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 229960004034 sitagliptin Drugs 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 3
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- DBGIVFWFUFKIQN-UHFFFAOYSA-N (+-)-Fenfluramine Chemical compound CCNC(C)CC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 DBGIVFWFUFKIQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KWGRBVOPPLSCSI-WPRPVWTQSA-N (-)-ephedrine Chemical compound CN[C@@H](C)[C@H](O)C1=CC=CC=C1 KWGRBVOPPLSCSI-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 description 2
- 102000016622 Dipeptidyl Peptidase 4 Human genes 0.000 description 2
- 108010067722 Dipeptidyl Peptidase 4 Proteins 0.000 description 2
- 101710198884 GATA-type zinc finger protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 102400000322 Glucagon-like peptide 1 Human genes 0.000 description 2
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 description 2
- FAEKWTJYAYMJKF-QHCPKHFHSA-N GlucoNorm Chemical compound C1=C(C(O)=O)C(OCC)=CC(CC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C=2C(=CC=CC=2)N2CCCCC2)=C1 FAEKWTJYAYMJKF-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 2
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 2
- YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N Liraglutide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)CC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N 0.000 description 2
- 108010019598 Liraglutide Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- YASAKCUCGLMORW-UHFFFAOYSA-N Rosiglitazone Chemical compound C=1C=CC=NC=1N(C)CCOC(C=C1)=CC=C1CC1SC(=O)NC1=O YASAKCUCGLMORW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 210000000579 abdominal fat Anatomy 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 210000003486 adipose tissue brown Anatomy 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 description 2
- 229960001582 fenfluramine Drugs 0.000 description 2
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 2
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 210000001596 intra-abdominal fat Anatomy 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 238000007443 liposuction Methods 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 2
- 230000002474 noradrenergic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 229940076279 serotonin Drugs 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 210000004003 subcutaneous fat Anatomy 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- DBGIVFWFUFKIQN-VIFPVBQESA-N (+)-Fenfluramine Chemical compound CCN[C@@H](C)CC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 DBGIVFWFUFKIQN-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OELFLUMRDSZNSF-OFLPRAFFSA-N (2R)-2-[[oxo-(4-propan-2-ylcyclohexyl)methyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C1CC(C(C)C)CCC1C(=O)N[C@@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OELFLUMRDSZNSF-OFLPRAFFSA-N 0.000 description 1
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-oxo-4-(tritylamino)butanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N 0.000 description 1
- HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N (2s)-5-[[amino-[(2,2,4,6,7-pentamethyl-3h-1-benzofuran-5-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C1=C(C)C(C)=C2OC(C)(C)CC2=C1C HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N 0.000 description 1
- LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N (2s,3r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]butanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H]([C@H](OC(C)(C)C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N 0.000 description 1
- JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-2-[chloro(diphenyl)methyl]benzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SWLAMJPTOQZTAE-UHFFFAOYSA-N 4-[2-[(5-chloro-2-methoxybenzoyl)amino]ethyl]benzoic acid Chemical class COC1=CC=C(Cl)C=C1C(=O)NCCC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 SWLAMJPTOQZTAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004611 Abdominal Obesity Diseases 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 235000006491 Acacia senegal Nutrition 0.000 description 1
- 102000014777 Adipokines Human genes 0.000 description 1
- 108010078606 Adipokines Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 229940123208 Biguanide Drugs 0.000 description 1
- XNCOSPRUTUOJCJ-UHFFFAOYSA-N Biguanide Chemical compound NC(N)=NC(N)=N XNCOSPRUTUOJCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010007269 Carcinogenicity Diseases 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010065941 Central obesity Diseases 0.000 description 1
- 201000006306 Cor pulmonale Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010011459 Exenatide Proteins 0.000 description 1
- HTQBXNHDCUEHJF-XWLPCZSASA-N Exenatide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 HTQBXNHDCUEHJF-XWLPCZSASA-N 0.000 description 1
- 208000004248 Familial Primary Pulmonary Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010018429 Glucose tolerance impaired Diseases 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 1
- 206010019851 Hepatotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- GKXJWSZPLIKUPS-IUNAMMOKSA-N N-[(2Z,6Z)-2,6-bis(hydroxyimino)cyclohexylidene]hydroxylamine Chemical compound O\N=C1\CCC\C(=N\O)C1=NO GKXJWSZPLIKUPS-IUNAMMOKSA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 208000001280 Prediabetic State Diseases 0.000 description 1
- 208000004186 Pulmonary Heart Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010064911 Pulmonary arterial hypertension Diseases 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229940123464 Thiazolidinedione Drugs 0.000 description 1
- 206010000059 abdominal discomfort Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 229940062328 actos Drugs 0.000 description 1
- 239000000478 adipokine Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 239000000883 anti-obesity agent Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N azide group Chemical group [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 1
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003563 calcium carbonate Drugs 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003340 calcium silicate Drugs 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- QEVLNUAVAONTEW-UZYHXJQGSA-L calcium;(2s)-4-[(3as,7ar)-1,3,3a,4,5,6,7,7a-octahydroisoindol-2-yl]-2-benzyl-4-oxobutanoate;dihydrate Chemical compound O.O.[Ca+2].C([C@@H](CC(=O)N1C[C@@H]2CCCC[C@@H]2C1)C(=O)[O-])C1=CC=CC=C1.C([C@@H](CC(=O)N1C[C@@H]2CCCC[C@@H]2C1)C(=O)[O-])C1=CC=CC=C1 QEVLNUAVAONTEW-UZYHXJQGSA-L 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 231100000260 carcinogenicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007670 carcinogenicity Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- KWGRBVOPPLSCSI-UHFFFAOYSA-N d-ephedrine Natural products CNC(C)C(O)C1=CC=CC=C1 KWGRBVOPPLSCSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 229960004597 dexfenfluramine Drugs 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 235000013367 dietary fats Nutrition 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940090124 dipeptidyl peptidase 4 (dpp-4) inhibitors for blood glucose lowering Drugs 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 235000005686 eating Nutrition 0.000 description 1
- 235000006694 eating habits Nutrition 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960002179 ephedrine Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 229960001519 exenatide Drugs 0.000 description 1
- 238000009207 exercise therapy Methods 0.000 description 1
- 238000004880 explosion Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000012757 fluorescence staining Methods 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 229940014259 gelatin Drugs 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007686 hepatotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940126904 hypoglycaemic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229940090473 januvia Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 230000000512 lipotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 229960002701 liraglutide Drugs 0.000 description 1
- 208000012866 low blood pressure Diseases 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 229950004994 meglitinide Drugs 0.000 description 1
- XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N metformin Chemical compound CN(C)C(=N)NC(N)=N XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003105 metformin Drugs 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 229960003365 mitiglinide Drugs 0.000 description 1
- WPGGHFDDFPHPOB-BBWFWOEESA-N mitiglinide Chemical compound C([C@@H](CC(=O)N1C[C@@H]2CCCC[C@@H]2C1)C(=O)O)C1=CC=CC=C1 WPGGHFDDFPHPOB-BBWFWOEESA-N 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 125000001421 myristyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;piperidine Chemical compound CN(C)C=O.C1CCNCC1 CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000698 nateglinide Drugs 0.000 description 1
- OELFLUMRDSZNSF-BRWVUGGUSA-N nateglinide Chemical compound C1C[C@@H](C(C)C)CC[C@@H]1C(=O)N[C@@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OELFLUMRDSZNSF-BRWVUGGUSA-N 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- AHLBNYSZXLDEJQ-FWEHEUNISA-N orlistat Chemical group CCCCCCCCCCC[C@H](OC(=O)[C@H](CC(C)C)NC=O)C[C@@H]1OC(=O)[C@H]1CCCCCC AHLBNYSZXLDEJQ-FWEHEUNISA-N 0.000 description 1
- 229960001243 orlistat Drugs 0.000 description 1
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000554 physical therapy Methods 0.000 description 1
- 229960005095 pioglitazone Drugs 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 201000009104 prediabetes syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 201000008312 primary pulmonary hypertension Diseases 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008085 renal dysfunction Effects 0.000 description 1
- 229960002354 repaglinide Drugs 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 229960004586 rosiglitazone Drugs 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229960004425 sibutramine Drugs 0.000 description 1
- UNAANXDKBXWMLN-UHFFFAOYSA-N sibutramine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1C1(C(N(C)C)CC(C)C)CCC1 UNAANXDKBXWMLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 150000001467 thiazolidinediones Chemical class 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 229940007428 victoza Drugs 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/2264—Obesity-gene products, e.g. leptin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/30—Insulin-like growth factors, i.e. somatomedins, e.g. IGF-1, IGF-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/5759—Products of obesity genes, e.g. leptin, obese (OB), tub, fat
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Obesity (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к пептидам и их пептидному комплексу с активностью, препятствующей ожирению или диабету за счет уменьшения экспрессии маркеров липогенеза PPAR, ACC, aP2 или увеличения экспрессии липолитических факторов pHSL, AMPK-1, CGI-58, ATGL. Также изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим указанные пептиды или пептидный комплекс, для профилактики и лечения ожирения или диабета, а также их использованию в соответствующих способах.
Description
Область техники
Эта заявка притязает на приоритет заявки на патент республики Корея с № 10-2015-0059648, поданной 28 апреля 2015 года в Ведомство по интеллектуальной собственности республики Корея. Содержание вышеуказанной заявки включено посредством ссылки во всей их полноте.
Настоящее изобретение относится к пептиду с активностью, препятствующей ожирению и диабету, и его применению.
Предпосылки создания изобретения
В Корее потребление жира с пищей увеличивалось в последнее время с ростом экономики и вестернизацией диетических привычек, и возникновение метаболических заболеваний, таких как ожирение, диабет, гиперлипидемия, гипертония, артериосклероз и жировая инфильтрация печени, увеличилось изза недостаточной физической нагрузки. Кроме того, ожирение является эстетической проблемой для людей, которые обычно склонны в предпочтении к изящным типам тела, а также сопровождается различными нарушениями.
На сегодняшний день терапевтические средства против ожирения можно в основном разделить на лекарственные средства, которые действуют на центральную нервную систему с нарушением аппетита, и лекарственные средства, которые действуют на желудочно-кишечный тракт с ингибированием всасывания.
Лекарственные средства, действующие на центральную нервную систему, поступили в продажу как лекарственные средства против ожирения, которые действуют на серотонин (5-НТ) в нервной системе, такие как фенфлурамин, дексфенфлурамин и т.п., на норадренергическую нервную систему, такие как эфедрин и кофеин, и как на серотонин, так и на норадренергическую нервную систему, такие как недавно разработанный сибутрамин, в соответствии с классификацией по механизмам действия. Представителем лекарственных средств против ожирения, действующих на желудочно-кишечный тракт, является орлистат, разрешенный в качестве терапевтического средства для лечения ожирения, который ингибирует кишечную липазу с уменьшением поглощения жира.
Существуют проблемы с некоторыми из уже существующих лекарственных средств. Например, продажа фенфлурамина и т.п. была запрещена из-за побочного эффекта перехода к первичной легочной гипертензии или пороку сердца, а другие лекарственные средства нельзя применять для пациентов с сердечной недостаточностью или почечной недостаточностью вследствие возникновения снижения артериального давления или лактоцитоза.
Диабет является группой метаболических нарушений, вызываемых недостаточной секрецией инсулина или недостаточным нормальным функционированием (DeFronzo, 1988), и характеризуется гипергликемией, то есть высокими уровнями сахара в крови на протяжении длительного периода, которая является причиной различных симптомов и синдромов, вместе с глюкозой в моче. В последние годы заболеваемость ожирением, особенно абдоминальным ожирением, увеличилась, что привело к взрыву заболеваемости диабетом.
По состоянию на 2000 год число пациентов с диабетом по оценкам составило 170 млн во всем мире и, как ожидается, увеличится до 370 млн человек в 2030 году. Однако в аналитическом отчете за 2008 было указано, что число пациентов с диабетом, возможно, уже достигло 350 млн во всем мире (Danaei et al., 2011), что намного хуже, чем ожидалось. Сообщается, что более приблизительно 80% пациентов с диабетом типа 1 страдают ожирением, тогда как лишь менее 10% пациентов, не страдающих ожирением, имеют диабет (Harris et al., 1987). Корреляция между диабетом и ожирением объясняется тем, что адипокины и свободные жирные кислоты секретируются нерегулярно с вызовом накопления жирных кислот в чувствительных к инсулину тканях, таких как бета-клетки, почки, печень, сердце и т.д., что приводит к липотоксичности. При оставлении без подходящего лечения хроническая гипергликемия может иметь тенденцию к переходу в различные патологические симптомы, включающие ретинопатию, почечную дисфункцию, нейропатию и сосудистое нарушение. Эффективное контролирование сахара в крови необходимо для предупреждения таких осложнений.
В наше время контролирование уровней сахара в крови достигается коррекцией образа жизни (с помощью диетотерапии, лечебной физкультуры) и с помощью лекарственных средств. Однако строгое контролирование и выполнение диетотерапии и лечебной физкультуры затруднены, и в их результатах имеются ограничения. Поэтому большинство пациентов с диабетом полагаются на контролирование уровней сахара в крови с помощью лекарственных средств, таких как инсулин, стимуляторы секреции инсулина, усилители чувствительности рецепторов к инсулину и гипогликемические средства, а также коррекцию образа жизни.
Инсулин, продуцированный рекомбинантным способом, используется в качестве лекарственного средства, незаменимого для пациентов с диабетом типа 1 и пациентов с диабетом типа 2, которые не в состоянии контролировать уровни сахара в крови, и является полезным для контролирования сахара в крови. Однако они страдают от недостатка отталкивания игл для шприцов, трудности введения, риска гипогликемии и набора веса.
Меглитиниды, тип стимуляторов секреции инсулина, представляют собой средства короткого действия и принимаются перед едой. Среди них находятся NovoNorm (репаглинид), Fastic (натеглинид) и Glufast (митиглинид). Усилители чувствительности рецепторов к инсулину характеризуются почти от- 1 037799 сутствием перехода к гипергликемии при приеме в виде монотерапии, и их примерами являются лекарственные средства бигуаниды, такие как метформин, и лекарственные средства тиазолидиндионы, такие как Avanida (розиглитазон) и Actos (пиоглитазон).
Агонисты GLP-1 были недавно разработаны с использованием действия глюкагонопододного петида-1, который является стимулирующим секрецию инсулина гормоном, и включают эксенатид и Victoza (лираглутид). Кроме того, ингибиторы DPP-4, которые ингибируют действие DPP-4 (дипептидилпептидазы-4), фермента, ответственного за быструю инактивацию GLP-1, являются недавно разработанными лекарственными средствами, и их типичным представителем является Januvia (название ингредиента: ситаглиптин). Однако, как сообщается, эти лекарственные средства имеют побочные эффекты, такие как гепатотоксичность, желудочно-кишечные расстройства, сердечно-сосудистые заболевания и канцерогенность. Другой проблемой с этими лекарственными средствами является высокая ежегодная стоимость лечения, что является препятствием на пути лечения диабета. В самом деле, затраты здравоохранения на преддиабет и диабет достигли приблизительно 200 трлн вон в США по состоянию на 2007 год (Dall et al., 2010) и затраты здравоохранения на ожирение также близки к 150 трлн вон в США по состоянию на 2008 году (Finkelstein et al., 2009). Следовательно, существует острая необходимость в разработке лекарственного средства, которое может эффективно снижать уровни глюкозы в крови и которое может использоваться для лечения и диабета, и вызванного ожирением диабета с меньшим количеством побочных эффектов.
Поэтому авторы настоящего изобретения недавно обратили внимание на механизм регулирования энергетического обмена, чтобы найти улучшенный способ лечения ожирения, и провели исследование сигналов, ответственных за накопление липидов, и белков, оказывающих влияние на накопление липидов при приеме пиши с высоким содержанием жира у людей, с замыслом, что соединение, которое должно быть разработано, будет обладать большей безопасностью (меньшей токсичностью). В результате исследования сигналов для подавления экспрессии белков, ответственных за накопление жира и за расщепление накопленного жира, и белков, участвующих в передаче сигналов, авторам настоящего изобретения удалось разработать пептиды, активирующие липолиз. Кроме того, пептиды настоящего изобретения демонстрируют исключительную терапевтическую эффективность при диабете и вызванном ожирением диабете. Накопление жира, вызванное диетами с высоким содержанием жира, подавление передачи сигнала от инсулина, объясняемое накоплением жира в печени или мышце, и результирующая инсулинорезистентность являются причинами диабета. Каждый из пептидов в соответствии с настоящим изобретением и их комплексы являются терапевтически эффективными в случае такого диабета и вызванного ожирением диабета.
На всем протяжении этого описания ссылаются на множество документов и патентных документов, с указанными ссылками в них. Раскрытия приведенных документов и патентных документов полностью включены сюда посредством ссылок, и, таким образом, точнее объясняется уровень техники, к которому относится настоящее изобретение, и содержание настоящего изобретения.
Подробное описание настоящего изобретения
Техническая проблема
Завершающееся настоящим изобретением интенсивное и тщательное исследование по разработке большого количества исключительных пептидов, обладающих биологически эффективной активностью, которое было проведено авторами настоящего изобретения, привело к обнаружению того, что пептиды, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 1-7, действуют не только против ожирения, ингибируя накопление жира, вызванное диетами с высоким содержанием жира, и расщепляя уже накопленный жир, но также проявляют терапевтические эффекты на высоком уровне при диабете и вызванном ожирением диабете и осложнениях диабета.
Соответственно целью настоящего изобретения является предоставление пептидов, имеющих аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 1-7.
Другой целью настоящего изобретения является создание пептида, обладающего препятствующей ожирению или противодиабетической активностью.
Следующей целью настоящего изобретения является предоставление пептидного комплекса, обладающего препятствующей ожирению или противодиабетической активностью.
Более того, целью настоящего изобретения является предоставление фармацевтической композиции для профилактики или лечения ожирения.
Еще одной целью настоящего изобретения является предоставление фармацевтической композиции для профилактики или лечения диабета.
Другие цели и преимущества настоящего изобретения поясняются последующим подробным описанием настоящего изобретения, формулой изобретения и чертежами.
Техническое решение
В соответствии с другим вариантом осуществления настоящего изобретения предоставляется пептид с активностью, препятствующей ожирению и диабету, имеющий аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 1-7.
В соответствии с другим вариантом осуществления настоящего изобретения предлагается пептидный комплекс с активностью, препятствующей ожирению и диабету, состоящий из следующей комбина- 2 037799 ции пептидов:
(a) пептида, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1;
(b) пептида, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3; и (c) пептида, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 7.
В результате предпринятых авторами настоящего изобретения усилий по разработке большого количества исключительных пептидов, обладающих биологически эффективной активностью, было обнаружено, что пептиды, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 1-7, подавляют накопление жира, вызванное диетами с высоким содержанием жира, и расщепляют уже накопленный жир, таким образом, демонстрируя препятствующее ожирению действие и терапевтический эффект при диабете и вызванном ожирением диабете и осложнениях диабета.
Используемый здесь термин пептид относится к линейной молекуле из аминокислотных остатков, связанных пептидными связями. Пептиды настоящего изобретения могут быть получены с помощью способов химического синтеза, известных в данной области, в особенности методов твердофазного синтеза (Merrifield, J. Amer. Chem. Soc. 85:2149-54(1963); Stewart, et al., Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd. ed., Pierce Chem. Co.: Rockford, 111(1984)) или метода жидкофазного синтеза (патент США с № 5516891).
Пептиды настоящего изобретения могут быть модифицированы на N-конце или C-конце для выбора частей их аминокислотной последовательности и увеличения их активности. Благодаря такой модификации пептиды настоящего изобретения могут быть наделены пролонгированным периодом существования после in vivo введения.
Кроме того, C-концы пептидов настоящего изобретения могут быть модифицированы с использованием гидроксильной группы (-OH), аминогруппы (-NH2), азидной группы (-NHNH2) и т.д., тогда как Nконцы могут быть связаны с защитным радикалом, состоящим из группы, состоящей из ацетила, флуоренилметоксикарбонила, формила, пальмитоила, миристила, стеарила и полиэтиленгликоля (ПЭГ).
Благодаря вышеупомянутой аминокислотной модификации стабильность пептидов настоящего изобретения может быть значительно увеличена. Используемый здесь термин стабильность, как предполагается, относится как к in vivo стабильности, так и к стабильности при хранении (например, стабильности во время хранения при комнатной температуре). Защитная группа действует для защиты пептидов настоящего изобретения от воздействия протеиназ in vivo.
В соответствии с одним вариантом осуществления настоящего изобретения пептиды настоящего изобретения проявляют эффект подавления накопления жира, вызванного диетами с высоким содержанием жира, и расщепления уже накопленного жира, уменьшают экспрессию маркеров липогенеза PPARy, ACC и aP2, увеличивает экспрессию липолитических факторов pHSL, AMPK-a1, CGI-58 и ATGL, уменьшают размер адипоцитов (липоцитов) и понижают уровни холестерина в крови. Эти результаты свидетельствуют о том, что пептиды настоящего изобретения оказывают превосходные терапевтические эффекты при ожирении, диабете и вызванном ожирением диабете.
Не только отдельные пептиды с SEQ ID NO: 1-7, но также их комплекс проявляет превосходную препятствующую ожирению и противодиабетическую активность.
В соответствии с настоящим изобретением предложены пептиды с активностью, препятствующей ожирению или диабету, имеющие аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 7, для уменьшения экспрессии маркеров липогенеза PPARy, ACC и aP2 или увеличения экспрессии липолитических факторов pHSL, AMPK-a1, CGI-58 и ATGL.
В соответствии с одним вариантом осуществления настоящего изобретения пептидный комплекс, проявляющий активность, препятствующую ожирению или диабету, включает следующую комбинацию пептидов: (a) пептид с SEQ ID NO: 1; (b) пептид с SEQ ID NO: 3; (c) пептид с SEQ ID NO: 6 или 7.
В соответствии с другим вариантом осуществления настоящего изобретения пептидный комплекс настоящего изобретения состоит из пептидов, имеющих соответственно аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 1, 3 и 7.
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения предлагается фармацевтическая композиция, содержащая пептид или пептидный комплекс настоящего изобретения в качестве эффективного ингредиента, для профилактики или лечения ожирения.
Превосходный с точки зрения функции ингибирования липогенеза и липолитической функции, пептид или пептидный комплекс настоящего изобретения может быть полезен для профилактики или лечения ожирения.
В соответствии с еще одним аспектом настоящего изобретения предоставляется фармацевтическая композиция, содержащая пептид или пептидный комплекс настоящего изобретения в качестве эффективного ингредиента, для профилактики или лечения диабета.
Действуя с вызовом эффективного снижения повышенного уровня сахара в крови на модели диабета на животном, пептид или пептидный комплекс настоящего изобретения может найти применение в профилактике или лечении диабета.
В соответствии с некоторыми конкретными вариантами осуществления настоящего изобретения
- 3 037799 композиция настоящего изобретения представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую (а) фармацевтически эффективное количество пептида или пептидного комплекса настоящего изобретения; (b) фармацевтически приемлемый носитель.
Используемый здесь термин фармацевтически эффективное количество означает количество, достаточное для достижения вышеуказанной эффективности или активности пептида.
Фармацевтически приемлемый носитель, содержащийся в фармацевтической композиции настоящего изобретения, может представлять собой носитель, который обычно используется при приготовлении лекарственных средств и включает, но без ограничения, лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмал, аравийскую камедь, карбонат кальция, альгинат, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, воду, сироп, метилцеллюлозу, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния и минеральное масло. Помимо этих ингредиентов, фармацевтическая композиция настоящего изобретения может, кроме того, содержать смазочное вещество, гигроскопическое вещество, подсластитель, корригент, эмульгатор, суспендирующий агент и консервант. Что касается фармацевтически приемлемых носителей и агентов, подходящих для использования, можно сослаться на Remington's Pharmaceutical Sciences (19-е изд., 1995).
Фармацевтическую композицию настоящего изобретения можно вводить перорально или парентерально. В случае парентерального введения могут использоваться внутримышечный, внутривенный, подкожный, внутрибрюшинный, местный или чрескожный пути введения.
Доза фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением может меняться в зависимости от различных факторов, включающих лекарственную форму, способ введения, возраст, вес тела, пол, состояние здоровья пациента, диету, время введения, путь введения, скорость выведения, чувствительность и т.д. Например, фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может вводиться в суточной дозе в диапазоне 0,0001-1000 мкг.
Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть приготовлена в формах на один прием или в упаковках на множество приемов, используя фармацевтически приемлемый носитель и/или наполнитель в соответствии со способом, который может быть легко осуществлен специалистами в данной области техники. Здесь препаратом фармацевтической композиции может быть раствор, суспензия или эмульсия фармацевтической композиции в масле или водной среде или экстракт, порошок, гранула, таблетка или капсула, содержащая фармацевтическую композицию, и может дополнительно содержать диспергатор или стабилизатор.
Полезные эффекты
Признаки и преимущества настоящего изобретения суммированы следующим образом.
(i) Пептиды и пептидный комплекс настоящего изобретения проявляют не только эффект препятствования ожирению в результате подавления накопления жира и расщепления уже накопленного жира, но также исключительный терапевтический эффект при диабете в результате эффективного снижения уровней сахара в крови.
(ii) Пептиды и пептидный комплекс настоящего изобретения уменьшают экспрессию маркеров липогенеза PPARy, ACC и aP2, увеличивают экспрессию липолитических факторов pHSL, AMPK-a1, CGI58 и ATGL, уменьшая, таким образом, размеры липоцитов и понижая уровни холестерина в крови.
(iii) Пептиды и пептидный комплекс настоящего изобретения обладают превосходной активностью и стабильностью и, таким образом, могут быть выгодно использованы в лекарственных средствах и препаратах общего воздействия.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 представлены проанализированные с помощью окрашивания масляным красным O липиды, накопленные после обработки пептидом настоящего изобретения: (a) пептидом с SEQ ID NO: 1, (b) пептидом с SEQ ID NO: 3 и (c) пептидом с SEQ ID NO: 5.
На фиг. 2 представлены результаты накопления липидов после обработки пептидным комплексом настоящего изобретения, в соответствии с анализом с помощью окрашивания масляным красным О.
На фиг. 3 представлены результаты измерения уровней экспрессии гена aP2, который участвует в липогенезе, после обработки пептидами настоящего изобретения: (A) пептидом с SEQ ID NO: 1, (B) пептидом с SEQ ID NO: 3 и (c) пептидом с SEQ ID NO: 5.
На фиг. 4 представлены результаты измерения уровней экспрессии генов PPARy, ACC и aP2, которые играют важную роль в липогенезе, после обработки пептидным комплексом настоящего изобретения в различных концентрациях.
На фиг. 5 представлены результаты измерения уровней экспрессии PPARy и фосфо-HSL, которые играют важную роль в липогенезе, после обработки пептидным комплексом настоящего изобретения в различных концентрациях.
На фиг. 6 представлены результаты измерения уровней экспрессии генов AMPK-a1 и CGI-58, участвующих в расщеплении накопленных жиров, после обработки пептидами и пептидным комплексом настоящего изобретения: (A) пептидом с SEQ ID NO: 1, (B) пептидом с SEQ ID NO: 3, (C) пептидом с SEQ ID NO: 5 и (D) комплексом пептидов с SEQ ID NO: 1, 3 и 7.
- 4 037799
На фиг. 7 представлены результаты измерения ATGL, белка, участвующего в расщеплении накопленных жиров, после обработки пептидным комплексом настоящего изобретения в различных концентрациях.
На фиг. 8 представлены результаты измерения уровней экспрессии белка фосфо-HSL, участвующего в расщеплении накопленных жиров, после обработки пептидами настоящего изобретения: (a) пептидом с SEQ ID NO: 1, (b) пептидом с SEQ ID NO: 3, (c) пептидом с SEQ ID NO: 5 и (d) комплексом пептидов с SEQ ID NO: 1, 3 и 7, в соответствии с определением с использованием иммуноокрашивания.
На фиг. 9 представлены результаты измерения глицерина, продуцированного после обработки пептидным комплексом настоящего изобретения в различных концентрациях.
На фиг. 10A представлены жировые ткани, подвергшиеся расщеплению, от экспериментальных моделей ожирения на мышах после обработки пептидным комплексом настоящего изобретения.
На фиг. 10B представлены размеры и количество жировых тканей, подвергшихся расщеплению, от экспериментальных моделей ожирения на мышах после обработки пептидным комплексом настоящего изобретения.
На фиг. 11 представлены результаты измерения уровней экспрессии белка фосфо-HSL, участвующего в расщеплении накопленных жиров, после обработки пептидным комплексом настоящего изобретения, в соответствии с определением с использованием иммуноокрашивания.
На фиг. 12 представлены изменения веса тела (г) и потребление пищи у страдающих ожирением мышей после лечения пептидным комплексом настоящего изобретения.
На фиг. 13 представлены фотографии страдающих ожирением мышей после лечения пептидным комплексом настоящего изобретения.
На фиг. 14 представлены результаты распределения жира в моделях ожирения на мышах, вызванного кормлением пищей с высоким содержанием жира, относительно экспериментальной модели на животном C57BL/6, в соответствии с определением с использованием иммуноокрашивания.
На фиг. 15 представлены фотографии жировых тканей, выделенных из моделей ожирения на мышах, вызванного кормлением пищей с высоким содержанием жира, относительно экспериментальной модели на животном C57BL/6, после лечения пептидным комплексом настоящего изобретения.
На фиг. 16A представлены морфологические визуализации адипоцитов в жировых тканях, взятых у моделей ожирения на мышах, вызванного кормлением пищей с высоким содержанием жира, относительно экспериментальной модели на животном C57BL/6, после лечения пептидным комплексом настоящего изобретения.
На фиг. 16B представлены результаты измерения размеров адипоцитов в жировых тканях, взятых у моделей ожирения на мышах, вызванного кормлением пищей пищи с высоким содержанием жира, относительно экспериментальной модели на животном C57BL/6, после лечения пептидным комплексом настоящего изобретения.
На фиг. 17 представлены результаты измерения уровней экспрессии белка фосфо-HSL, участвующего в липолизе, в адипоцитах жировых тканей, взятых у моделей ожирения на мышах, вызванного кормлением пищей с высоким содержанием жира, относительно экспериментальной модели на животном C57BL/6, после лечения пептидным комплексом настоящего изобретения.
На фиг. 18 представлены результаты измерения уровней холестерина в образцах крови, взятых у моделей ожирения на мышах, вызванного кормлением пищей с высоким содержанием жира, относительно экспериментальной модели на животном C57BL/6, после лечения пептидным комплексом настоящего изобретения.
На фиг. 19 представлены результаты измерения уровней глюкозы в образцах крови, взятых у моделей ожирения на мышах, вызванного кормлением пищей с высоким содержанием жира, относительно экспериментальной модели на животном C57BL/6, после лечения пептидным комплексом настоящего изобретения.
На фиг. 20 представлены изменения уровня сахара в крови в модели на мыши, вызванного ожирением DB/DB, после лечения пептидным комплексом настоящего изобретения.
На фиг. 21 представлены изменения уровня холестерина в крови в модели на мыши, вызванного ожирением DB/DB, после лечения пептидным комплексом настоящего изобретения.
На фиг. 22 представлены изменения уровня сахара в крови в модели на мыши, вызванные ожирением DB/DB, после лечения пептидами настоящего изобретения: (A) пептидом с SEQ ID NO: 1, (B) пептидом с SEQ ID NO: 3 и (C) пептидом с SEQ ID NO: 5.
На фиг. 23 представлены результаты измерения уровней экспрессии IGF-1 и инсулина после обработки пептидом с SEQ ID NO: 7.
На фиг. 24 представлены изменения уровня сахара в крови в модели на мыши, вызванные ожирением DB/Db, после лечения пептидом с SEQ ID NO: 7.
На фиг. 25A-25D представлены изменения уровней сахара в крови у пациентов с диабетом, имеющих высокие уровни глюкозы в крови, после лечения пептидным комплексом настоящего изобретения.
- 5 037799
Вариант осуществления настоящего изобретения
Далее настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на примеры. Для специалистов со средним уровнем компетентности в данной области техники будет очевидно, что эти примеры предназначены лишь для иллюстрации настоящего изобретения и не должны истолковываться как ограничение объема настоящего изобретения, Таким образом, существенный объем настоящего изобретения будет определяться прилагаемой формулой изобретения и ее эквивалентами.
Примеры
Пример синтеза 1. Синтез пептида.
В реактор с 700 мг хлортритилхлоридных смол (смол CTL, каталожный № Nova Biochem - 01-640021) добавляли 10 мл метиленхлорида (МС) и осуществляли перемешивание в течение 3 мин. После удаления растворителя добавляли 10 мл диметилформамида (DMF). Раствор снова перемешивали в течение 3 мин и затем растворитель удаляли. В реактор добавляли 10 мл раствора дихлорметана, а затем 200 ммоль Fmoc-Asn(Trt)-ОН (Bachem, Швейцария) и 400 ммоль диизопропилэтиламина (DIEA). Реагенты полностью растворяли и реакцию осуществляли в реакцию при перемешивании в течение 1 ч. Впоследствии раствор промывали и осуществляли реакцию с раствором метанола и DIEA (2:1) в DCM (дихлорметане) в течение 10 мин. После промывки избыточным количеством DCM/DMF (1:1) растворитель удаляли. Затем добавляли 10 мл диметилформамида (DMF) с последующим перемешиванием в течение 3 мин. После удаления растворителя 10 мл раствора для удаления защиты (20% пиперидина/DMF) добавляли в реактор. Удалению растворителя предшествовало перемешивание в течение 10 мин при комнатной температуре. Раствор для удаления защиты добавляли в том же количестве, а затем через 10 мин удаляли из реакции. Дважды выполняли промывку с использованием DMF, один раз с использованием МС и один раз с использованием DMF, каждую промывку в течение 3 мин, с предоставлением Asn-CTL-смол. В другом реакторе 200 ммоль Fmoc-Arg(Pbf)-ОН (Bachem, Швейцария), 200 ммоль HOBt и 200 ммоль BOP добавляли к 10 мл раствора DMF и полностью растворяли при перемешивании. В реактор добавляли 400 ммоль DIEA двумя аликвотами с последующим перемешиванием в течение по крайней мере 5 мин до полного растворения твердых веществ. В реактор, в который были помещены незащищенные смолы, вносили раствор смеси растворенных аминокислот, с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 1 ч для осуществления реакции. После удаления реакционного раствора перемешивание осуществляли трижды в течение 3 мин каждый раз, вместе с раствором DMF, который затем удаляли. Небольшое количество смол в ходе реакции отбирали и использовали в реакции Кайзера (нингидриновой реакции) для проверки степени завершенности реакции. Одну и ту же реакцию удаления защиты выполняли дважды с использованием раствора для удаления защиты с получением Arg-Asn-CTL смол. Смолы в достаточной степени промывали с использованием DMF и МС перед выполнением еще одной реакции Кайзера. Последующие эксперименты по присоединению аминокислот проводились так же, как описано выше. В соответствии с выбранной аминокислотной последовательностью реакции индуцировали последовательно с использованием Fmoc-Thr(tBU)-ОН, Fmoc-Lys(Вое)-ОН и Fmoc-Leu-OH в этом порядке. Fmoc-защитную группу удаляли с помощью проводимой дважды реакции с раствором для удаления защиты, каждую реакцию в течение 10 мин, а затем хорошей промывки. Уксусный ангидрид, DIEA и HoBt добавляли и подвергали ацетилированию в течение 1 ч. Полученные таким образом пептидильные смолы промывали трижды каждым из DMF, MC и метанола. Смолы сушили медленно пропускаемым газообразным азотом, а затем подвергали полной сублимации в атмосфере P205. Смолы подвергали реакции в течение 2 ч при комнатной температуре с 30 мл остаточного раствора (81,5% трифторуксусной кислоты, 5% дистиллированной воды, 5% тиоанизола, 5% фенола, 2,5% EDT и 1% TIS) при встряхивании время от времени. Смолы подвергали фильтрации и промывке небольшим объемом раствора TFA, после чего фильтрат объединяли с маточным раствором. После перегонки при пониженном давлении для уменьшения общего объема вдвое использовали 50 мл холодного эфира, чтобы индуцировать осаждения, и образованные таким образом осадки собирали с помощью центрифугирования и промывали дважды холодным эфиром. После удаления маточного раствора остаток сушили в достаточной степени в атмосфере азота с предоставлением 0,85 г неочищенного пептида с SEQ ID NO: 1 NH2-Leu-Lys-Thr-Arg-Asn-COOH (с выходом: 92%). Был осуществлен синтез NH2-Lys-Gly-Ala-Cys(Ser)-Thr-Gly-Trp-Met-Ala-COOH в количестве 0,78 г в качестве пептидов с SEQ ID NOS: 2 и 3 (с выходом 82%), NH2-Ala-Cys(Ser)Thr-Leu-ProHis-Pro-Trp-Phe-Cys(Ser)-COOH в количестве 0,92 г в качестве пептидов SEQ ID NOS: 4 и 5 (с выходом 85%) и NH2-Cys (Ser)-Asp-Leu-Arg-Arg-Leu-Glu-Met-Tyr-Cys(Ser)-COOH в количестве 0,76 г в качестве пептидов с SEQ ID NOS: 6 и 7 (с выходом 88%). Было установлено, что пептиды с SEQ ID NO: 1, 2, 4 и 6 имеют молекулярные массы, равные 630,7 (теоретическое значение 630,7), 924,5 (теоретическое значение 924,1), 1236 (теоретическое значение 1236,5) и 1301.5 (теоретическое значение 1301.5) соответственно, как определено помощью масс-спектрометрии.
- 6 037799
Таблица 1
| Пептид | Аминокислотная последовательность | Анализ (масс-спектрометрия) | |
| Определенное значение | Теоретическое значение | ||
| SEQ ID NO: 1 | 630,7 | 630,7 | |
| SEQ ID NO: 2 | KGACTGWMA | 924,5 | 924,1(908,0) |
| SEQ ID NO: 3 | KGASTGWMA | ||
| SEQ ID NO: 4 | ACYLPHPWFC | 1236 | 1236,5 (1269,4) |
| SEQ ID NO: 5 | ASYLPHPWFS | ||
| SEQ ID NO: 6 | CDLRRLEMYC | 1301,5 | 1301,5 |
| SEQ ID NO: 7 | SDLRRLEMYS |
Между тем, пептиды с SEQ ID NO: 1, 3 и 7 в равных количествах смешивали с получением пептидного комплекса, эффективность которого оценивали.
Пример 1. Анализ активности ингибирования липогенеза.
1-1. Анализ подавления накопления липидов при использовании преадипоцита (окрашивание масляным красным О).
Клетки 3T3-L1, преадипоциты, выращивали до конфлюэнтного состояния, а затем инкубировали в течение двух дней с различными концентрациями пептидов в среде для дифференцировки, содержащей 10 мкг/мл инсулина, 0,1 мкМ дексаметазона и 0,5 мкМ IBMX. Среду заменяли средой, содержащей 10 мкг/мл инсулина, каждые 2 дня. После индукции дифференцировки в течение 10 дней формирование жировых включений (капель) в клетках проверяли с помощью окрашивания масляным красным О. Полученные адипоциты 3T3-L1 промывали PBS, фиксировали 3,7% формалином в течение 1 ч и промывали 60% изопропанолом. Получающиеся клетки окрашивали реагентом масляным красным О при комнатной температуре в течение 20 мин. После удаления реагента масляного красного О клетки трижды промывали дистиллированной водой и наблюдали под фазово-контрастным микроскопом. Для количественного анализа жиры экстрагировали из клеток, используя 100% изопропанол, клетки переносили в 96луночные планшеты в количестве 200 мкл/лунку и оптическую плотность при 500 нм измеряли с помощью считывающего устройства для ELISA.
Экспериментальные данные свидетельствовали о том, что обработка пептидами с SEQ ID NO: 1, 3 и 5 уменьшала степени накопления жира в клетках, как определено с помощью окрашивание масляным красным О (фиг. 1A-C).
Степень накопления липидов в клетках также уменьшалась, когда комплекс пептидов с SEQ ID NO: 1, 3 и 7 применялся в разных концентрациях (фиг. 2).
1-2. Подавление экспрессии генов, участвующих в липогенезе.
Клетки 3T3-L1 (преадипоциты) засевали в 6-луночные планшеты с плотностью 3x105 клеток/лунку. После культивирования в течение 24 ч клетки инкубировали с пептидами в заданных концентрациях (0,1, 1 и 10 мкг/мл) в течение 14 дней в термостате с температурой 37°C. Впоследствии клетки собирали и обрабатывали раствором для экстракции РНК (Easy Blue, Intron) для приготовления РНК, исходя из которой затем синтезировали кДНК с использованием RT премикса (Intron). ПЦР проводили, используя праймеры для антигенных маркеров (PPARy, ACC и aP2) и премикс для ПЦР.
Последовательности мишень-специфических праймеров для ПЦР маркеров липогенеза были следующими: последовательность прямого праймера для PPARy, 5'-TTTTCAAGGGTGCCAGTTTC-3' и обратного праймера для PPARy, 5'-AATCCTTGGCCCTCTGAGAT-3' (температура отжига, 60°C);
последовательность прямого праймера для ACC, 5'-ACCTTACTGCCATCCCATGTGCTA-3' и обратного праймера для ACC, 5'-GTGCCTGATGATCGCACGAACAAA-3' (температура отжига, 60°C);
последовательность прямого праймера для аР2, 5'-CATCAGCGTAAATGGGGATT-3' и обратного праймера для aP2, 5'-ACACATTCCACCACCAGCTT-3' (температура отжига, 60°C).
Каждый из ПЦР-продуктов загружали в объеме 5 мкл в 1% агарозный гель и подвергали электро- 7 037799 форезу, с последующей идентификацией полос в Gel-Doc.
В линии клеток остеобластов мыши 3T3-L1, которую инкубировали с пептидом с SEQ ID NO: 1, 3 или в течение трех дней, отмечали уменьшение уровней экспрессии маркера липогенеза aP2 (фиг. 3A-C).
Также при инкубации в течение трех дней с составляющими 0,1 мкг/мл, 1 мкг/мл и 10 мкг/мл концентрациями комплекса пептидов с SEQ IS NO: 1, 3 и 7, в линии клеток остеобластов мыши отмечали уменьшение экспрессии маркеров липогенеза PPARy, ACC и aP2, подобно клеткам, обработанным 100 нг/мл TNFa, в качестве положительно контроля (фиг. 4).
1-3. Исследование экспрессии индуцирующих липогенез и липолиз белков при использовании преадипоцита.
Клетки 3T3-L1 (преадипоциты) засевали в 6-луночные планшеты с плотностью 3х105 клеток/лунку. После культивирования в течение 24 ч клетки инкубировали с пептидным комплексом в заданных концентрациях (0,1, 1 и 10 мкг/мл) в течение 14 дней в термостате с температурой 37°C. Клеточные лизаты, полученные путем обработки буфером для лизиса клеток, использовали для количественного определения белка, а затем Вестерн-блоттинга с использованием антитела против PPARy (Santa Cruz Biotechnology, США), которое является антителом против маркера липогенеза, и антитела против pHSL (Santa Cruz Biotechnology, США), которое является антителом против маркера липолиза.
При обработке пептидным комплексом в разных концентрациях в клетках наблюдали уменьшение экспрессии маркера липогенеза PPARy дозозависимым образом при все увеличивающейся экспрессии маркера липолиза pHSL (фиг. 5).
Пример 2. Оценка липолитической активности.
2. Увеличенная экспрессия генов, участвующих в липолизе.
Клетки 3T3-L1 (преадипоциты) засевали в 6-луночные планшеты с плотностью 3х105 клеток/лунку. После культивирования в течение 24 ч клетки инкубировали с пептидами в заданных концентрациях (0,1, 1 и 10 мкг/мл) в течение 14 дней в термостате с температурой 37°C (положительный контроль: 100 нг/мл TNFa (SIGMA)). Клетки собирали и обрабатывали раствором для экстракции РНК (Easy Blue, Intron) для приготовления РНК, исходя из которой затем синтезировали кДНК с использованием RT премикса (Intron). ПЦР проводили, используя праймеры для маркеров (AMPK-a1 и CGI58) и премикс для ПЦР.
Последовательности мишень-специфических праймеров для ПЦР маркеров липолиза были следующими: последовательность прямого праймера для AMPK-a1, TGACCGGACATAAAGTGGCTGTGA-3' и обратного праймера для AMPK-a1, 5'-TGATGATGTGAGGGTGCCTGAACA-3' (температура отжига, 60°C);
последовательность прямого праймера для GI58, 5'-TGTGCAGGACTCTTACTTGGCAGT-3' и обратного праймера для CGI58, 5'-GTTTCTTTGGGCAGACCGGTTTCT-3' (температура отжига, 60°C).
Каждый из ПЦР-продуктов загружали в объеме 5 мкл в 1% агарозный гель и подвергали электрофорезу, с последующей идентификацией полос в Gel-Doc.
Во всех преадипоцитах (3T3-L1), которые инкубировали с пептидами, отмечали увеличенные уровни экспрессии маркеров липолиза AMPK-a1 и CGI-58 (фиг. 6A-C). Кроме того, обработка пептидным комплексом, как отмечали, приводила к увеличению экспрессии AMPK-a1 и CGI-58 дозозависимым образом и до более высоких уровней по сравнению с обработкой 100 нг/мл TNFa в качестве положительного контроля (фиг. 6D).
2-2. Исследование экспрессии индуцирующих липолиз белков при использовании преадипоцита.
Клетки 3T3-L1 (преадипоциты) засевали в 6-луночные планшеты с плотностью 3х105 клеток/лунку. После культивирования в течение 24 ч клетки инкубировали с пептидным комплексом в заданных концентрациях (0,1, 1 и 10 мкг/мл) в течение 14 дней в термостате с температурой 37°C (положительный контроль: 100 нг/мл TNFa (SIGMA)). Клеточные лизаты, полученные путем обработки буфером для лизиса клеток, использовали для количественного определения белка, а затем Вестерн-блоттинга с использованием антитела против ATGL (Santa Cruz Biotechnology, США), которое является антителом против маркера липолиза.
При обработке пептидным комплексом экспрессия маркера липолиза ATGL уменьшалась (фиг. 7).
2-3. Исследование с помощью флуоресцентной микроскопии экспрессии индуцирующего липолиз белка при использовании преадипоцита.
Клетки 3T3-L1 (преадипоциты) засевали в 6-луночные планшеты с плотностью 3х105 клеток/лунку. После культивирования в течение 24 ч клетки инкубировали с отдельными пептидами или пептидным комплексом (1 мкг/мл) в течение 14 дней в термостате с температурой 37°C (положительный контроль: 100 нг/мл TNFa (SIGMA)). Впоследствии клетки фиксировали с использованием 70% этанола, а затем подвергали иммунооокрашиванию антителом против фосфо-HSL (Santa Cruz Biotechnology, США) для исследования экспрессии в клетках фосфо-HSL, маркера липолиза.
Исходя из экспериментальных данных, и пептиды в отдельности (фиг. 8A-C), и пептидный комплекс (фиг. 8D), как отмечалось, приводили к увеличению экспрессии маркера липолиза фосфо-HSL.
2-4. Количественный анализ глицерина, продукта липолиза.
После взятия жировых тканей из живота мышей с вызванным ожирением, их помещали в 24- 8 037799 луночные планшеты для культивирования с плотностью 100 мг/лунку и культивировали в среде для культивирования (1 мл буфера Кребса-Рингера, содержащего 25 мМ HEPES, 5,5 мМ глюкозы и 2% (в отношении веса к объему) бычьего сывороточного альбумина). При этом ткани инкубировали в течение 48 ч с 0.1 мкг/мл, 1 мкг/мл и 10 мкг/мл пептидного комплекса, тогда как 100 нг/мл TNFa использовали в качестве положительного контроля. Глицерин, образуемый во время липолиза, подвергали количественному анализу.
Как это понятно из экспериментальных данных, количество глицерина, являющегося результатом липолиза при обработке пептидным комплексом, увеличивалось дозозависимым образом и превысило количества глицерина, образованного при обработке положительным контролем TNFa (фиг. 9).
2-5. Эффект лизиса жировой ткани, выделенной из страдающей ожирением мыши.
Жировые ткани подразделяются на белый жир и бурый жир в зависимости от цвета и на подкожный жир, брюшной жир, брыжеечный жир (висцеральный жир) и эпидидимальный жир классифицируются в зависимости от ткани. После анатомирования тела выполняли липэктомию на тканях. Белый жир выделяли, помещали в 24-луночные планшеты в количестве 100 мг/лунку, а затем инкубировали в течение 72 ч с различными концентрациями пептидного комплекса в среде для культивирования (1 мл буфера КребсаРингера, содержащего 25 мМ HEPES, 5,5 мМ глюкозы и 2% (в отношении веса к объему) бычьего сывороточного альбумина). Делали срезы жировых тканей, которые затем окрашивали гематоксилином и эозином. Размеры адипоцитов сравнивали под микроскопом (TS100, Nicon) с 100-кратным увеличением.
По сравнению с контролем в жировых тканях, обработанных различными концентрациями пептидов, адипоциты были меньшего размера (фиг. 10A). Кроме того, при определении размера клеток с помощью программы жировые ткани, имеющие отличные клеточно-мембранные компартменты, наблюдались после обработки пептидным комплексом (фиг. 10B).
2-6. Исследование липолитического маркера в жировой ткани.
Жировую ткань, взятую из живота мыши с вызванным ожирением, помещали в количестве 100 мг/лунку в 24-луночные планшеты и инкубировали в течение 48 ч с пептидным комплексом, в то время как 100 нг/мл TNFa использовали в качестве положительного контроля. Детектировали меченый маркер липолиза фосфо-HSL (зеленый флуоресцентный материал).
Отмечали, что обработка пептидным комплексом приводит к увеличению уровня экспрессии маркера липолиза фосфо-HSL в жировых тканях (фиг. 11).
Пример 3. Эффект подавления липогенеза и активирования липолиза у экспериментального животного.
Потеря веса и подавление липогенеза у животного, которого кормили пищей с высоким содержанием жира.
Модели DIO (вызванного диетами ожирения), которые стали страдать ожирением в результате их кормления пищей с высоким содержанием жира, использовались для экспериментов по препятствованию ожирению, в которых 5 мкг/мл TNFa использовали в качестве положительного контроля. В качестве контроля кормили обычной пищей, а не пищей с высоким содержанием жира. В этом эксперименте пищей с высоким содержанием жира кормили в течение 12 недель, пока применялся пептидный комплекс или положительный контроль. Во время эксперимента контролировали вес тела.
TNFa и соединения против ожирения вводили внутрибрюшинно в 3-4 ч после полудня каждую неделю в течение 12 недель. Вес тела и количество пищи измеряли непосредственно перед первым введением, а затем регулярно с интервалами в одну неделю. Образцы крови отбирали из хвостовой вены после экспериментов по введению лекарственного средства, и уровни сахара в крови измеряли, используя Accu-Check Active (Roche), а уровни холестерина анализировали, используя набор Cholesterol calculation Kit (BioVision). Жировые ткани подразделяются на белый жир и бурый жир в зависимости от цвета и на подкожный жир, брюшной жир, брыжеечный жир (висцеральный жир) и эпидидимальный жир классифицируются в зависимости от ткани. После липэктомии исследовали жиры, полученные таким образом из тканей. Для гистологического исследования, жиры фиксировали с использованием 10% нейтрального забуференного формалина, заделывали в парафиновые блоки, делали срезы толщиной 5 мкм и окрашивали гематоксилином и эозином. Для анализа фосфорилирования маркера липолиза HSL выполняли флуоресцентное окрашивание с использованием антитела против pHSL. Образец ткани готовили, заключали в среду для заключения ткани глицериновый гель и покрывали покровным стеклом. Ткани исследовали под микроскопом (Nikon, TS100), со встроенной цифровой камерой, делающей их снимки.
В течение 12 недель от первоначальной стадии до конечной стадии эксперимента вес мышей, как определено, увеличивался с 20,9 до 28,74 г, когда кормили обычной пищей, и с 20,99 до 49,5 г, когда кормили пищей с высоким содержанием жира. У мышей, которые получали пищу с высоким содержанием жира плюс введения пептидного комплекса, привес достигал лишь 36,76 г через 12 недель от первоначального веса, составляющего 21,1 г, что указывает на значительное уменьшение привеса (174,2%), по сравнению с контрольной группой, которую кормили пищей с высоким содержанием жира (235,8%) (табл. 2 и фиг. 12).
- 9 037799
Вес (г)
Таблица 2. Вес модели ожирения на мыши после лечения пептидным комплексом
| Обычная пища (контроль) | Пища с высоким содержанием жира | Пища с высоким содержанием жира+пептид/конт роль | Пища с высоким содержанием жира+пептидны й комплекс | |
| 0 недель | 20,09 | 20,99 | 22,41 | 21,1 |
| 1 неделя | 20,75 | 22,32 | 23 | 21,26 |
| 2 недели | 21,99 | 25,25 | 26,12 | 23,72 |
| 3 недели | 18,23 | 27,35 | 27,45 | 24,36 |
| 4 недели | 23,26 | 30,2 | 30,51 | 25,29 |
| 5 недель | 23,16 | 32,76 | 32,76 | 28,65 |
| 6 недель | 23,28 | 36,78 | 33,49 | 28,79 |
| 7 недель | 24,71 | 38,31 | 35,14 | 30,37 |
| 8 недель | 25,84 | 40,12 | 37,15 | 31,53 |
| 9 недель | 25,59 | 42,14 | 38,97 | 32,59 |
| 10 недель | 28,13 | 43,02 | 40,39 | 33,78 |
| 11 недель | 27,9 | 45,7 | 41,35 | 35,33 |
| 12 недель | 28,74 | 49,5 | 43,91 | 36,76 |
Вес (%)
| Обычная пища (контроль) | Пища с высоким содержанием | Пища с высоким содержанием жира+пептид/конт | Пища с высоким содержанием | |
| жира | роль | жира+пептидны й комплекс | ||
| 0 недель | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 1 неделя | 100,3 | 106, 3 | 102,6 | 100,8 |
| 2 недели | 109,5 | 120,3 | 116, 6 | 112,4 |
| 3 недели | 90,7 | 130,3 | 122,5 | 115,5 |
| 4 недели | 115,8 | 143,9 | 136, 1 | 119,9 |
| 5 недель | 115,3 | 156, 1 | 146,2 | 135,8 |
| 6 недель | 115,9 | 175,2 | 149,4 | 136, 4 |
| 7 недель | 123,0 | 182,5 | 156, 8 | 143,9 |
| 8 недель | 128,6 | 191,1 | 165,8 | 149,4 |
| 9 недель | 127,4 | 200,8 | 173,9 | 154,5 |
| 10 недель | 140,0 | 205,0 | 180,2 | 160,1 |
| 11 недель | 138,9 | 217,7 | 184,5 | 167,4 |
| 12 недель | 143,1 | 235,8 | 195,9 | 174,2 |
Кроме того, по завершении 12-недельного эксперимента отмечалось, что у подвергнутых лечению пептидным комплексом мышей сохранялись размеры их тел, аналогичные тем, которые были характерны для нормальных мышей (обычная пища), но не для мышей, которых кормили пищей с высоким содержанием жира, в соответствии с анализом фотографий (фиг. 13).
Спустя 12 недель эксперимента мышей подвергали микро-КТ для определения распределения жира по всему телу. В результате полученных с помощью микро-КТ данных о жирах (желтых) в теле, уровень жиров, распределенных по всему телу, заметно увеличивался у мышей, которых кормили пищей с высоким содержанием жира, по сравнению с контрольной группой, которую кормили обычной пищей, в то время значительно уменьшенный уровень жиров, распределенных по всему телу, отмечался в группе,
- 10 037799 получавшей лечение пептидным комплексом плюс пищу с высоким содержанием жира (фиг. 14).
Мышей, которые завершили микро-КТ-визуализацию, анатомировали для выделения жировых тканей, распределенных по всему телу. Сравнивали объемы жировых тканей. В результате объем жира, выделенного у мышей, которых кормили пищей с высоким содержанием жира, превышал таковой у мышей, которых кормили обычной пищей, со значительным снижением объема жира у мышей, получавших лечение пептидным комплексом плюс пищу с высоким содержанием жира (фиг. 15).
Жиры выделяли и окрашивали H&E для визуализации размеров жировых клеток. Меньшие размеры жировых клеток наблюдались у мышей, получавших как пищу с высоким содержанием жира, так и пептидный комплекс, чем в контрольной группе, которую кормили пищей с высоким содержанием жира (фиг. 16A). Анализ размера адипоцита по программе показал, что в случае допущения, что размер адипоцита в контрольной группе, которую кормили обычной пищей, составляет 100%, размер адипоцита увеличивается до 127% в группе, которую кормили пищей с высоким содержанием жира, но снижается до 97% в группе, получавшей пищу с высоким содержанием жира и пептидный комплекс (фиг. 16B).
Жиры выделяли и исследовали на уровень экспрессии маркера липолиза фосфо-HSL в жировых тканях. Было обнаружено, что мыши, получавшие как пищу с высоким содержанием жиров, так и пептидный комплекс, имели повышенный уровень экспрессии фосфо-HSL (фиг. 17).
Уровни холестерина в крови у мышей после эксперимента были измерены. В результате уровень холестерина в крови составлял 2,52 мкг/мл у мышей, которых кормили обычной пищей, 3,5 мкг/мл у мышей, которых кормили пищей с высоким содержанием жира, и 2,86 мкг/мл у мышей, получавших как пищу с высоким содержанием жиров, так и пептидный комплекс, что указывает на то, что пептидный комплекс снижает уровень холестерина, который повышался вместе с ожирением (фиг. 18).
Уровни сахара в крови после завершения эксперимента составляли 174 мг/дл у мышей, которых кормили обычной пищей, и увеличивались до 235 мг/дл у мышей, которых кормили пищей с высоким содержанием жира. Тем не менее, было определено, что уровень сахара в крови у мышей, получавших как пищу с высоким содержанием жиров, так и пептидный комплекс, составляет 183 мг/дл, его значительное снижение (фиг. 19).
Пример 4. Контролирование уровня сахара в крови.
Эффект на контролирование сахара в крови.
В этом эксперименте с животными использовали C57BL/6 (нормальную мышь, приобретенную у Samtako Inc.) и самку C57BLKS/JLepr (модель диабета на мыши, мышь db/db, приобретенную в Центральной лаборатории Animal Inc.) вместе с пептидным комплексом в качестве эффективного против диабета и/или ожирения материала и ситаглиптином в качестве положительного контрольного лекарственного средства. В этом примере комплекс, эффективный против диабета и/или ожирения, оценивали на предмет сильной противодиабетической эффективности (однократное введение) на модели нормальной мыши и на модели генетически предрасположенного диабета, используя тест GTT (тест на толерантность к глюкозе), который является типичным способом диагностики диабета. Мышей выращивали в клетке при температуре 22-24°C и относительной влажности 50-30%, с четырьмя мышами в каждой клетке. Мыши находились при свете 150-300 люкс с 8 ч утра до 8 ч вечера с использованием цикла 12 ч свет/12 ч темнота. Им был предоставлен свободный доступ к обычной пище (18% белка, произведенной в 2018 году, Harlan Laboratories Inc, США). Сначала мыши голодали в течение 4 ч или дольше перед ITTэкспериментом (анализом в зависимости от назначенного лечения) и в течение 12 ч до GTT-эксперимента. Комплекс вводили перорально принудительно с помощью одноразового шприца для перорального введения за один час до GTT-эксперимента. Для GTT-эксперимента мышам разрешался свободный доступ к пище с высоким содержанием жира в 0 (нуль) ч после начала эксперимента. Через 40 мин свободного доступа к пище с высоким содержанием жира образцы крови для использования в исследовании уровня глюкозы в крови брали из хвостовой вены с интервалами 0, 30, 60, 90, 120 и 180 мин. Уровни глюкозы в крови измеряли, используя Accu-Chek Active (Roche). Ситаглиптин, используемый в качестве терапевтического средства для лечения диабета, был выбран в качестве положительного контрольного лекарственного средства и вводился в дозе 100 мг/кг. Комплекс, выбранный как эффективный кандидат против диабета и/или против ожирения, вводился в дозе 100 мг/кг экспериментальным группам из четырех мышей.
В результате пептидный комплекс проявлял редуктивный эффект на уровни сахара в крови, при этом уровень сахара в крови, повышенный с помощью пищи с высоким содержанием жира, снижался в результате лечения пептидным комплексом. В моделях вызванного диабета на мышах уровень сахара в крови снижался с помощью комплекса (фиг. 20A и B). Кроме того, были обнаружены более низкие уровни холестерина в крови в группе, получавшей как пищу с высоким содержанием жиров, так и пептидный комплекс, чем в контрольной группе, которую кормили пищей с высоким содержанием жира (фиг. 21).
Кроме того, после голодания в течение 16 ч мышей с вызванным диабетом DB/DB кормили в течение 30 мин, а затем им вводили пептиды. Уровни сахара в крови измеряли в динамике по времени.
Было обнаружено, что уровни сахара в крови в группах, соответственно подвергнутых лечению пептидами с SEQ ID NO: 1, 3 и 5, уменьшаются зависящим от времени образом (фиг. 22A-C).
Пример 5. Активация экспрессии инсулина и инсулиноподобного фактора роста.
Активация экспрессии инсулина и инсулиноподобного фактора роста.
- 11 037799
Клетки 3T3-L1 (преадипоциты) засевали в 6-луночные планшеты с плотностью 3х105 клеток/лунку и выращивали в течение 24 ч. Впоследствии клетки инкубировали с пептидами в различных концентрациях (10 нг - 1 мкг/мл) в течение 14 дней в термостате с температурой 37°C. Белки выделяли из клеточных лизатов, которые были получены путем обработки буфером для лизиса клеток, подвергали количественному анализу и Вестерн-блоттингу, используя антитело против IGF-1, которое является антителом против маркера липолиза, и антитело против инсулина (Santa Cruz Biotechnology, США).
Исходя из этих данных было установлено, что пептид с SEQ ID NO: 7 увеличивал экспрессию IGF-1 и инсулина дозозависимым образом (фиг. 23).
Пример 6. Наблюдение эффекта снижения уровня сахара в крови в клиническом эксперименте.
Снижение уровня сахара в крови за счет приема комплекса.
Был проведен краткий клинический тест для лиц в возрасте 45-65 лет, у которых уровень глюкозы в крови натощак составлял 170 мг/дл или выше. Через 30 мин после приемов пищи они принимали препарат комплекса. У людей брали образцы крови с интервалами 30, 60, 90, 120, 150 и 180 мин и измеряли уровень глюкозы, используя Accu-Chek Active (Roche).
Снижение уровня сахара в крови с помощью препарата комплекса наблюдалось у всех испытуемых (фиг. 25A-D).
Хотя настоящее изобретение было подробно описано со ссылкой на конкретные признаки, специалистам в данной области техники будет очевидно, что это описание предназначается лишь для предпочтительного варианта осуществления и не ограничивает объем настоящего изобретения. Таким образом, существенный объем настоящего изобретения будет определяться прилагаемой формулой изобретения и ее эквивалентами.
Claims (21)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Пептид с активностью, препятствующей ожирению или диабету, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, для уменьшения экспрессии маркеров липогенеза PPARy, ACC и aP2 или увеличения экспрессии липолитических факторов pHSL, AMPK-a1, CGI-58 и ATGL.
- 2. Пептид с активностью, препятствующей ожирению или диабету, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, для уменьшения экспрессии маркеров липогенеза PPARy, ACC и aP2 или увеличения экспрессии липолитических факторов pHSL, AMPK-a1, CGI-58 и ATGL.
- 3. Пептид с активностью, препятствующей ожирению или диабету, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, для уменьшения экспрессии маркеров липогенеза PPARy, ACC и aP2 или увеличения экспрессии липолитических факторов pHSL, AMPK-a1, CGI-58 и ATGL.
- 4. Пептид с активностью, препятствующей ожирению или диабету, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, для уменьшения экспрессии маркеров липогенеза PPARy, ACC и aP2 или увеличения экспрессии липолитических факторов pHSL, AMPK-a1, CGI-58 и ATGL.
- 5. Пептид с активностью, препятствующей ожирению или диабету, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, для уменьшения экспрессии маркеров липогенеза PPARy, ACC и aP2 или увеличения экспрессии липолитических факторов pHSL, AMPK-a1, CGI-58 и ATGL.
- 6. Пептид с активностью, препятствующей ожирению или диабету, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, для уменьшения экспрессии маркеров липогенеза PPARy, ACC и aP2 или увеличения экспрессии липолитических факторов pHSL, AMPK-a1, CGI-58 и ATGL.
- 7. Пептид с активностью, препятствующей ожирению или диабету, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, для уменьшения экспрессии маркеров липогенеза PPARy, ACC и aP2 или увеличения экспрессии липолитических факторов pHSL, AMPK-a1, CGI-58 и ATGL.
- 8. Пептид по любому из пп.1-7, подавляющий липогенез.
- 9. Пептид по любому из пп.1-7, уменьшающий экспрессию PPARy (гамма-рецептора, активируемого пероксисомным пролифератором), АСС (ацетил-КоА-карбоксилазы) или aP2 (адипоцитарного белка, связывающего жирные кислоты).
- 10. Пептид по любому из пп.1-7, активирующий липолиз.
- 11. Пептид по любому из пп.1-7, увеличивающий экспрессию pHSL (фосфорилированной гормончувствительной липазы), AMPK-a1 (АМФ-активируемой протеинкиназы al), CGI-58 (белка сравнительной генной идентификации-58) или ATGL (триглицеридлипазы жировой ткани).
- 12. Пептид по любому из пп.1-7, снижающий уровень сахара в крови.
- 13. Пептидный комплекс, проявляющий активность, препятствующую ожирению или диабету, и включающий следующую комбинацию пептидов:(a) пептид с SEQ ID NO: 1;(b) пептид с SEQ ID NO: 3;(c) пептид с SEQ ID NO: 6 или 7.
- 14. Пептидный комплекс по п.13, уменьшающий размеры адипоцитов.
- 15. Пептидный комплекс по п.13, снижающий уровень холестерина в крови.- 12 037799
- 16. Фармацевтическая композиция, содержащая пептид по любому из пп.1-12 в качестве эффективного ингредиента, для профилактики или лечения ожирения.
- 17. Фармацевтическая композиция, содержащая пептидный комплекс по любому из пп.13-15 в качестве эффективного ингредиента, для профилактики или лечения ожирения.
- 18. Фармацевтическая композиция, содержащая пептид по любому из пп.1-12 в качестве эффективного ингредиента, для профилактики или лечения диабета.
- 19. Фармацевтическая композиция, содержащая пептидный комплекс по любому из пп.13-15 в качестве эффективного ингредиента, для профилактики или лечения диабета.
- 20. Способ профилактики или лечения ожирения или диабета, включающий введение субъекту фармацевтически эффективного количества пептида по любому из пп.1-12.
- 21. Способ профилактики или лечения ожирения или диабета, включающий введение субъекту фармацевтически эффективного количества пептидного комплекса по любому из пп.13-15.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020150059648A KR101669140B1 (ko) | 2015-04-28 | 2015-04-28 | 항비만 및 항당뇨 효능을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 |
| PCT/KR2015/004749 WO2016175362A1 (ko) | 2015-04-28 | 2015-05-12 | 항비만 및 항당뇨 효능을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201792365A1 EA201792365A1 (ru) | 2018-04-30 |
| EA037799B1 true EA037799B1 (ru) | 2021-05-21 |
Family
ID=57198486
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201792365A EA037799B1 (ru) | 2015-04-28 | 2015-05-12 | Пептиды с активностью, препятствующей ожирению или диабету, и их применение |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US10351597B2 (ru) |
| EP (4) | EP3290434B1 (ru) |
| JP (4) | JP6606192B2 (ru) |
| KR (1) | KR101669140B1 (ru) |
| CN (3) | CN110172083B (ru) |
| AU (4) | AU2015393357B2 (ru) |
| BR (4) | BR122020019171B1 (ru) |
| CA (4) | CA3074800C (ru) |
| CL (4) | CL2017002718A1 (ru) |
| CO (1) | CO2017011998A2 (ru) |
| EA (1) | EA037799B1 (ru) |
| ES (4) | ES2831329T3 (ru) |
| HK (1) | HK1252251A1 (ru) |
| IL (4) | IL255263B (ru) |
| MX (4) | MX2020012992A (ru) |
| MY (4) | MY197888A (ru) |
| NZ (4) | NZ747396A (ru) |
| PH (1) | PH12017501983B1 (ru) |
| SA (4) | SA520420882B1 (ru) |
| SG (4) | SG10201913487RA (ru) |
| WO (1) | WO2016175362A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201708044B (ru) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101669140B1 (ko) | 2015-04-28 | 2016-10-26 | (주)케어젠 | 항비만 및 항당뇨 효능을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 |
| KR101887576B1 (ko) | 2016-04-15 | 2018-08-13 | (주)케어젠 | 항비만 및 항당뇨 효능을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 |
| KR101831888B1 (ko) * | 2016-04-15 | 2018-04-16 | (주)케어젠 | 항염증 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 |
| KR101955511B1 (ko) * | 2016-08-17 | 2019-03-11 | (주)진셀팜 | 지방분해 촉진 효과를 가지는 펩타이드, 및 이의 용도 |
| KR101887577B1 (ko) | 2016-10-19 | 2018-09-10 | (주)케어젠 | 항비만 및 항당뇨 효능을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 |
| KR102386705B1 (ko) * | 2016-11-07 | 2022-04-21 | 주식회사 삼양사 | 알룰로스의 항비만 활성 관련 마커 유전자 및 이의 용도 |
| CN106749533B (zh) * | 2016-12-05 | 2020-08-18 | 华南理工大学 | 一种抗肥胖十七肽lnnpsvcdcdcmmkaar |
| CN106749524B (zh) * | 2016-12-05 | 2020-08-18 | 华南理工大学 | 一种抗肥胖七肽npvwkrk |
| CN106699846B (zh) * | 2016-12-05 | 2020-08-18 | 华南理工大学 | 一种抗肥胖十一肽nalkcchscpa |
| CN106518971B (zh) * | 2016-12-05 | 2019-12-10 | 华南理工大学 | 一种抗肥胖十肽canphelpnk |
| JP2019034926A (ja) * | 2017-08-10 | 2019-03-07 | 小林製薬株式会社 | 加齢性肥満改善剤及び脂肪分解力改善剤 |
| KR101920047B1 (ko) | 2018-01-03 | 2018-11-19 | (주)케어젠 | 항비만 및 항당뇨 효능을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 |
| KR102065150B1 (ko) | 2018-04-27 | 2020-01-10 | (주)케어젠 | 이소트레티노인-펩타이드 결합체를 유효성분으로 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 조성물 |
| KR102171141B1 (ko) * | 2018-05-28 | 2020-10-28 | 중앙대학교 산학협력단 | Lgi3 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 비만의 예방, 치료, 또는 개선용 조성물 |
| CN109081862A (zh) * | 2018-06-07 | 2018-12-25 | 华南理工大学 | 一种抗肥胖四肽pqtr及其应用 |
| CN108676073B (zh) * | 2018-06-07 | 2021-10-26 | 华南理工大学 | 一种抗肥胖十肽llvvypwtqr及其应用 |
| CN112010941B (zh) * | 2019-05-31 | 2022-08-16 | 华南理工大学 | 一种降血糖七肽 |
| CN113248628B (zh) * | 2021-07-13 | 2021-10-22 | 南京市妇幼保健院 | 一种乳源多肽衍生物及其在制备肥胖症防治药物、保健品和食品添加物中的应用 |
| KR20230046870A (ko) * | 2021-09-30 | 2023-04-06 | (주)케어젠 | 항비만 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 |
| KR20230138832A (ko) * | 2022-03-24 | 2023-10-05 | (주)케어젠 | 항당뇨 활성을 갖는 펩타이드 복합체 및 이의 용도 |
| KR20230148629A (ko) | 2022-04-18 | 2023-10-25 | (주)케어젠 | 항비만 및 항당뇨 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 |
| WO2024181693A1 (ko) * | 2023-02-28 | 2024-09-06 | (주)케어젠 | 펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하는 항노화용 조성물 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6087334A (en) * | 1998-08-21 | 2000-07-11 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Anti-diabetic peptides |
| US20140018291A1 (en) * | 2010-12-22 | 2014-01-16 | Marcadia Biotech, Inc. | Methods for treating metabolic disorders and obesity with gip and glp-1 receptor-active glucagon-based peptides |
| KR20140027594A (ko) * | 2012-07-23 | 2014-03-07 | 씨지케이바이오 주식회사 | 항당뇨 및 항비만 활성을 갖는 약학 조성물 |
| KR20140134083A (ko) * | 2013-05-13 | 2014-11-21 | (주)케어젠 | 비만세포―특이적 아팝토시스-유도용 펩타이드 및 이의 용도 |
Family Cites Families (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6693076B1 (en) * | 1989-06-05 | 2004-02-17 | Cephalon, Inc. | Treating disorders by application of insulin-like growth factors and analogs |
| US6723699B1 (en) * | 1989-06-05 | 2004-04-20 | Cephalon, Inc. | Treating disorders by application of insulin-like growth factors and analogs |
| US6310040B1 (en) | 1991-11-08 | 2001-10-30 | Cephalon, Inc. | Treating retinal neuronal disorders by the application of insulin-like growth factors and analogs |
| US5516891A (en) | 1992-06-16 | 1996-05-14 | Kinerton, Ltd. | Liquid phase synthesis of peptides and peptide derivatives |
| NZ255461A (en) * | 1992-08-20 | 1996-12-20 | Biotechnology & Biolog Science | Specific binding molecules for insulin-like-growth-factor-1 (igf-1), antigens capable of generating them and their use in enhancing igf-1 activity |
| EP1231218B1 (en) * | 1996-03-01 | 2008-05-14 | Novo Nordisk A/S | An appetite-suppressing peptide, its compositions and use |
| US20020132767A1 (en) | 2000-01-31 | 2002-09-19 | Rosen Craig A. | Nucleic acids, proteins, and antibodies |
| WO2001060853A1 (en) * | 2000-02-18 | 2001-08-23 | Biovitrum Ab | Transgenic animal model for obesity expressing foxc2 |
| WO2001092523A2 (en) | 2000-05-30 | 2001-12-06 | Curagen Corporation | Human polynucleotides and polypeptides encoded thereby |
| WO2002069232A2 (en) | 2001-02-19 | 2002-09-06 | Merck Patent Gmbh | Method for identification of t-cell epitopes and use for preparing molecules with reeduced immunogenicity |
| CA2388287A1 (en) * | 2001-05-30 | 2002-11-30 | Terry E. Graham | Therapies for the prevention and treatment of diabetes and obesity |
| US7041646B2 (en) * | 2001-10-05 | 2006-05-09 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | Methods of treating type 2 diabetes with peptides acting as both GLP-1 receptor agonists and glucagon receptor antagonists |
| EP1474445A4 (en) | 2002-01-18 | 2007-02-21 | Protemix Corp Ltd | ADIPONECTIN GLYCO-ISOFORMS, AND USES THEREOF |
| US20050143297A1 (en) | 2003-05-26 | 2005-06-30 | Jean-Pierre Rosat | Method for the administration of ligands, agonists of ligands of the TNF family with reduced toxicity |
| CN1980686A (zh) * | 2004-04-05 | 2007-06-13 | 安斯泰来制药有限公司 | 抗肥胖药 |
| US20070185025A1 (en) * | 2005-09-11 | 2007-08-09 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Filoviral immunosuppressive peptides and uses thereof |
| JP2009523173A (ja) * | 2006-01-09 | 2009-06-18 | チルドレンズ ホスピタル メディカル センター | 様々な病気の治療用のアディポネクチン |
| WO2007102686A1 (en) | 2006-03-06 | 2007-09-13 | Caregen Co., Ltd | Peptides having activities of insulin like growth factor-1 and their uses |
| SI2032155T1 (sl) * | 2006-06-09 | 2015-04-30 | Novartis Ag | Stabilizirani polipeptidi inzulinu podobnega rastnega faktorja |
| CN101091765A (zh) * | 2007-06-08 | 2007-12-26 | 余仁生国际有限公司 | 药物组合物及其预防和治疗糖尿病的用途 |
| KR101050429B1 (ko) * | 2009-03-18 | 2011-07-19 | 연세대학교 산학협력단 | 캠펜을 유효성분으로 포함하는 비만, 이상지방혈증, 지방간또는 인슐린 저항성 증후군의 예방 또는 치료용 조성물 |
| ES2538694T3 (es) * | 2011-04-01 | 2015-06-23 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Variantes de la T7 ARN polimerasa con sustituciones de Cisteína-Serina |
| KR101363455B1 (ko) * | 2011-09-09 | 2014-02-21 | (주)케어젠 | 매트릭스 메탈로프로테아제 활성 억제 펩타이드 및 이의 용도 |
| US9493398B2 (en) | 2012-09-21 | 2016-11-15 | Dow Global Technologies Llc | Ether dye fixative agents and methods |
| EP3395358B1 (en) * | 2012-09-26 | 2019-11-06 | Indiana University Research and Technology Corporation | Insulin analog dimers |
| WO2015136108A1 (en) | 2014-03-13 | 2015-09-17 | Universite Joseph Fourier | New pharmaceutical compositions and their use for the treatment of autoimmune disorders |
| KR101669140B1 (ko) | 2015-04-28 | 2016-10-26 | (주)케어젠 | 항비만 및 항당뇨 효능을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 |
-
2015
- 2015-04-28 KR KR1020150059648A patent/KR101669140B1/ko active IP Right Grant
- 2015-05-12 EA EA201792365A patent/EA037799B1/ru unknown
- 2015-05-12 BR BR122020019171-6A patent/BR122020019171B1/pt active IP Right Grant
- 2015-05-12 MX MX2020012992A patent/MX2020012992A/es unknown
- 2015-05-12 MX MX2017013847A patent/MX2017013847A/es unknown
- 2015-05-12 CN CN201910508329.1A patent/CN110172083B/zh active Active
- 2015-05-12 MX MX2020012993A patent/MX2020012993A/es unknown
- 2015-05-12 BR BR122020019077-9A patent/BR122020019077B1/pt active IP Right Grant
- 2015-05-12 NZ NZ747396A patent/NZ747396A/en unknown
- 2015-05-12 MY MYPI2021006165A patent/MY197888A/en unknown
- 2015-05-12 MY MYPI2017704076A patent/MY192154A/en unknown
- 2015-05-12 MY MYPI2021006159A patent/MY197886A/en unknown
- 2015-05-12 BR BR122020019095-7A patent/BR122020019095B1/pt active IP Right Grant
- 2015-05-12 CA CA3074800A patent/CA3074800C/en active Active
- 2015-05-12 ES ES15890803T patent/ES2831329T3/es active Active
- 2015-05-12 EP EP15890803.8A patent/EP3290434B1/en active Active
- 2015-05-12 SG SG10201913487RA patent/SG10201913487RA/en unknown
- 2015-05-12 WO PCT/KR2015/004749 patent/WO2016175362A1/ko active Application Filing
- 2015-05-12 CA CA2984287A patent/CA2984287C/en active Active
- 2015-05-12 ES ES19199390T patent/ES2895167T3/es active Active
- 2015-05-12 CN CN201910508327.2A patent/CN110105432B/zh active Active
- 2015-05-12 CA CA3074836A patent/CA3074836C/en active Active
- 2015-05-12 JP JP2017556574A patent/JP6606192B2/ja active Active
- 2015-05-12 EP EP19199388.0A patent/EP3613759B1/en active Active
- 2015-05-12 NZ NZ747390A patent/NZ747390A/en unknown
- 2015-05-12 MY MYPI2021006154A patent/MY197887A/en unknown
- 2015-05-12 CA CA3074790A patent/CA3074790C/en active Active
- 2015-05-12 NZ NZ747392A patent/NZ747392A/en unknown
- 2015-05-12 NZ NZ737077A patent/NZ737077A/en unknown
- 2015-05-12 EP EP19199355.9A patent/EP3613758B1/en active Active
- 2015-05-12 SG SG10201913490WA patent/SG10201913490WA/en unknown
- 2015-05-12 ES ES19199388T patent/ES2894638T3/es active Active
- 2015-05-12 SG SG11201708847VA patent/SG11201708847VA/en unknown
- 2015-05-12 BR BR112017023199-9A patent/BR112017023199B1/pt active IP Right Grant
- 2015-05-12 CN CN201580004918.6A patent/CN106459152B/zh active Active
- 2015-05-12 AU AU2015393357A patent/AU2015393357B2/en active Active
- 2015-05-12 US US15/569,322 patent/US10351597B2/en active Active
- 2015-05-12 MX MX2020012994A patent/MX2020012994A/es unknown
- 2015-05-12 ES ES19199355T patent/ES2893468T3/es active Active
- 2015-05-12 SG SG10201913489UA patent/SG10201913489UA/en unknown
- 2015-05-12 EP EP19199390.6A patent/EP3613760B1/en active Active
-
2017
- 2017-10-25 IL IL255263A patent/IL255263B/en unknown
- 2017-10-26 SA SA520420882A patent/SA520420882B1/ar unknown
- 2017-10-26 SA SA520420880A patent/SA520420880B1/ar unknown
- 2017-10-26 CL CL2017002718A patent/CL2017002718A1/es unknown
- 2017-10-26 SA SA520420881A patent/SA520420881B1/ar unknown
- 2017-10-26 SA SA517390237A patent/SA517390237B1/ar unknown
- 2017-10-27 PH PH12017501983A patent/PH12017501983B1/en unknown
- 2017-11-27 CO CONC2017/0011998A patent/CO2017011998A2/es unknown
- 2017-11-27 ZA ZA2017/08044A patent/ZA201708044B/en unknown
-
2018
- 2018-09-06 HK HK18111490.2A patent/HK1252251A1/zh unknown
-
2019
- 2019-03-20 US US16/359,645 patent/US10626145B2/en active Active
- 2019-03-20 US US16/359,675 patent/US10738081B2/en active Active
- 2019-03-20 US US16/359,613 patent/US11186611B2/en active Active
- 2019-05-24 AU AU2019203657A patent/AU2019203657B2/en active Active
- 2019-05-24 AU AU2019203659A patent/AU2019203659B2/en active Active
- 2019-05-24 AU AU2019203655A patent/AU2019203655B2/en active Active
- 2019-10-17 CL CL2019002960A patent/CL2019002960A1/es unknown
- 2019-10-17 CL CL2019002958A patent/CL2019002958A1/es unknown
- 2019-10-17 JP JP2019189873A patent/JP6813156B2/ja active Active
- 2019-10-17 CL CL2019002959A patent/CL2019002959A1/es unknown
- 2019-10-17 JP JP2019189876A patent/JP6908085B2/ja active Active
- 2019-10-17 JP JP2019189870A patent/JP6813155B2/ja active Active
-
2021
- 2021-04-21 IL IL282510A patent/IL282510B/en unknown
- 2021-04-21 IL IL282514A patent/IL282514B/en unknown
- 2021-04-21 IL IL282513A patent/IL282513B/en unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6087334A (en) * | 1998-08-21 | 2000-07-11 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Anti-diabetic peptides |
| US20140018291A1 (en) * | 2010-12-22 | 2014-01-16 | Marcadia Biotech, Inc. | Methods for treating metabolic disorders and obesity with gip and glp-1 receptor-active glucagon-based peptides |
| KR20140027594A (ko) * | 2012-07-23 | 2014-03-07 | 씨지케이바이오 주식회사 | 항당뇨 및 항비만 활성을 갖는 약학 조성물 |
| KR20140134083A (ko) * | 2013-05-13 | 2014-11-21 | (주)케어젠 | 비만세포―특이적 아팝토시스-유도용 펩타이드 및 이의 용도 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| NCBI, GenBank accession no. ABG01984.1 (05 March 2009) See the entire document. * |
| NCBI, GenBank accession no. EDL89718.1 (20 June 2007) See the entire document. * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2019203659B2 (en) | Peptide with anti-obesity and anti-diabetes activity and use thereof | |
| CN110088122B (zh) | 具有抗肥胖和抗糖尿病功效的肽及其用途 | |
| OA18548A (en) | Peptide having anti-diabetic and anti-obesity effects and use thereof. |