CN106699846B - 一种抗肥胖十一肽nalkcchscpa - Google Patents
一种抗肥胖十一肽nalkcchscpa Download PDFInfo
- Publication number
- CN106699846B CN106699846B CN201611101037.9A CN201611101037A CN106699846B CN 106699846 B CN106699846 B CN 106699846B CN 201611101037 A CN201611101037 A CN 201611101037A CN 106699846 B CN106699846 B CN 106699846B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cys
- polypeptide
- nalkcchscpa
- ala
- undecapeptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 230000003579 anti-obesity Effects 0.000 title abstract description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims abstract description 19
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 8
- 210000000229 preadipocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 40
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 33
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 19
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 19
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 19
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 18
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 18
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 6
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 2
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- -1 Asn amino acid Chemical class 0.000 description 1
- XYOVHPDDWCEUDY-CIUDSAMLSA-N Asn-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XYOVHPDDWCEUDY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 description 1
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 1
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 1
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 1
- WKEABZIITNXXQZ-CIUDSAMLSA-N His-Ser-Cys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N WKEABZIITNXXQZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N Liraglutide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)CC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N 0.000 description 1
- 108010019598 Liraglutide Proteins 0.000 description 1
- CFVQPNSCQMKDPB-CIUDSAMLSA-N Lys-Cys-Cys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N CFVQPNSCQMKDPB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 241000382353 Pupa Species 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000009422 growth inhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 229960002701 liraglutide Drugs 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种抗肥胖十一肽NALKCCHSCPA,该合成多肽的氨基酸序列如下所示:Asn‑Ala‑Leu‑Lys‑Cys‑Cys‑His‑Ser‑Cys‑Pro‑Ala,缩写为NALKCCHSCPA,分子量1146.38,纯度97.61%。本发明的多肽使用多肽合成仪,采用固相合成法合成。通过体外小鼠前脂肪细胞3T3‑L1增殖抑制活性检测,在0.125‑2 mg/mL范围内,本发明的多肽对3T3‑L1呈现出了一定的抑制效果。在2 mg/mL时,对3T3‑L1的体外增殖抑制率为36.84%。本发明提供一种具有潜在体外抗肥胖活性的合成多肽,可应用于生物制药领域。
Description
技术领域
本发明属于生物制药领域,具体涉及一种抗肥胖十一肽及其应用。
背景技术
生物活性肽是对机体的功能或状态具有积极作用并最终影响机体健康的特殊蛋白质片段。相较于蛋白质而言,小分子肽片段的优越性主要体现在:更易被人体吸收利用;活性高,在较小浓度下即可发挥其特有的生理作用;分子量小,易于修饰和改造,能够通过人工化学合成等。而相较于单一的氨基酸而言,小分子肽除了具有特殊的生理活性外,在吸收通道和吸收速度上也具有氨基酸无可比拟的优越性。已有研究证实,人体小肠存在专门的低聚肽吸收通道,人体摄入的蛋白质经过多种消化酶的水解,主要以低肽的形式被吸收。许多研究表明,各种来源的生物活性肽具有抗氧化、抗肿瘤、抑菌、降压、降血糖等多种作用,成为生物医药和保健品开发的热点。肥胖增加动脉粥样硬化,冠心病,高血压,糖尿病,痛风,脂肪肝等疾病的发病危险。因此,对具有减肥降脂作用而安全无害的生物活性肽的开发研究,变得尤为重要。目前,具有减肥降脂作用的多肽包括利拉鲁肽,鲈鱼活性肽,蚕蛹肽等。
发明内容
本发明选取小鼠前脂肪细胞3T3-L1为研究对象,使用MTT法测定合成肽的体外抑制活性。本发明的目的是提供一种具有体外抗肥胖活性的合成多肽,可应用于生物制药领域。
本发明合成的抗肥胖十一肽缩写为NALKCCHSCPA,分子量1146.38,序列为:Asn-Ala-Leu-Lys-Cys-Cys-His-Ser-Cys-Pro-Ala。其中,
Asn表示英文名称为Asparagine,中文名称为天冬酰胺酸的氨基酸的相应残基;
Ala表示英文名称为Alanine,中文名称为丙氨酸的氨基酸的相应残基;
Leu表示英文名称为Leucine,中文名称为亮氨酸的氨基酸的相应残基;
Lys表示英文名称为Lysine,中文名称为赖氨酸的氨基酸的相应残基;
Cys表示英文名称为Cysteine,中文名称为半胱氨酸的氨基酸的相应残基;
Cys表示英文名称为Cysteine,中文名称为半胱氨酸的氨基酸的相应残基;
His表示英文名称为Histidine,中文名称为组氨酸的氨基酸的相应残基;
Ser表示英文名称为Serine,中文名称为丝氨酸的氨基酸的相应残基;
Cys表示英文名称为Cysteine,中文名称为半胱氨酸的氨基酸的相应残基;
Pro表示英文名称为Proline,中文名称为脯氨酸的氨基酸的相应残基;
Ala表示英文名称为Alanine,中文名称为丙氨酸的氨基酸的相应残基。
本发明所述的氨基酸序列采用标准 Fmoc 方案,通过树脂的筛选,合理的多肽合成方法。将目标多肽的 C-端羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连,然后以这个氨基酸的氨基作为起点,与另一分子氨基酸的羧基作用形成肽键。不断重复这一过程,即可以得到目标多肽产物。合成反应完成后,去除保护基,将肽链与树脂分离,即得到目标产物。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程,固相合成顺序从C端向N 端合成。
本发明将终浓度为0.125-2 mg/mL 的合成多肽与3T3-L1混匀,孵育48 h后,经MTT法检测,对脂肪细胞抑制率达到29.9%-36.84%,可在生物医药领域中应用。
所述十一肽NALKCCHSCPA在浓度为2 mg/mL 时,对3T3-L1的体外增殖抑制率为36.84%。
与现有技术相比,本发明具有如下优点和技术效果:
本发明首次合成了该肽,并且采用MTT方法检测了合成多肽的体外脂肪细胞增殖抑制活性,所述合成多肽具有一定的脂肪细胞抑制能力。
附图说明
图1a为合成多肽Asn-Ala-Leu-Lys-Cys-Cys-His-Ser-Cys-Pro-Ala 的HPLC图。
图1b为合成多肽Asn-Ala-Leu-Lys-Cys-Cys-His-Ser-Cys-Pro-Ala 的MS图。
图2为合成多肽Asn-Ala-Leu-Lys-Cys-Cys-His-Ser-Cys-Pro-Ala对脂肪细胞3T3-L1的抑制活性柱状图。
具体实施方式
以下结合具体实例对本发明作进一步说明,但本发明的实施和保护范围不限于此。
多肽固相合成
选用高分子树脂(中肽生化有限公司),按照氨基酸序列Asn-Ala-Leu-Lys-Cys-Cys-His-Ser-Cys-Pro-Ala的特征,先将Ala的羧基以共价键的形式与一个树脂相连,然后Pro的氨基和Ala 的羧基缩水反应,处理后,再添加Cys,Cys的氨基和Pro的羧基反应,依次从右到左添加氨基酸,加好最后一个Asn氨基酸后,再切除树脂即得到目标多肽。采用高效液相色谱进行纯化,色谱柱型号为Phenomenex C18,尺寸 4.6*150mm,流动相A:含有0.1%三氟乙酸(TFA)的水;流动相B:含有0.09%TFA 的溶液 (80%乙腈+20%水);20 min内B相由14.0%上升到24.0%,流速1.0 mL/min,检测波长220nm。液氮速冻,冷冻干燥,得到最后的产品,要求纯度达到98.06%以上,并经MS 鉴定结构(如图1 所示)。
合成多肽的体外抑制活性
通过 MTT 比色法分析肽组分对3T3-L1的生长抑制作用。具体操作步骤如下:
1)取对数生长期的细胞,经0.25%(体积)的胰蛋白酶-EDTA消化液消化后,加入相应的完全培养基终止消化并重悬细胞,血球平板计数后,调整细胞悬液的浓度至5×104个/mL,加至96孔板中,每孔100 µL, 于37 ℃恒温CO2培养箱中培养;
2)培养24 h后细胞贴壁,吸出废旧培养液,加入终体积为200 µL的含有不同浓度待测样品的新鲜完全培养基,并以完全培养基为阴性对照,于37 ℃恒温CO2培养箱中培养;
3)48 h后吸出药液,用PBS洗板2次,加入5 mg /mL的MTT溶液20 µl和新鲜完全培养基180 µL;于37 ℃恒温CO2培养箱中继续培养;
4)4 h后,弃去含有MTT的培养液,加入150 µl DMSO后于微型振荡器上振荡15min, 490nm 波长处测定光密度值并计算抑制率:
脂肪细胞生长抑制率(%)=((对照组OD-空白组OD)-(给药组OD-空白组OD ))/((对照组OD-空白组OD ) )×100 。
应用实施例1
脂肪细胞3T3-L1 100 µL 细胞悬液(5×104个/mL),加至96孔板中,于37 ℃恒温CO2培养箱中培养, 24 h后细胞贴壁,吸出废旧培养液,加入终体积为100 µL的125 µg/mL的多肽样品的新鲜完全培养基,并以完全培养基为阴性对照,于37 ℃恒温CO2培养箱中培养, 48 h后吸出药液,用PBS洗板2次,加入5 mg /mL的MTT溶液20 µl和新鲜完全培养基180µL;于37 ℃恒温CO2培养箱中继续培养;4 h后,弃去含有MTT的培养液,加入150 µl DMSO后于微型振荡器上振荡15 min, 490nm 波长处测定光密度值并计算抑制率。由图2可知,125µg/mL的多肽对脂肪细胞3T3-L1的抑制率是29.9%。
应用实施例2
脂肪细胞3T3-L1 100 µL 细胞悬液(5×104个/mL),加至96孔板中,于37 ℃恒温CO2培养箱中培养,24 h后细胞贴壁,吸出废旧培养液,加入终体积为100 µL的250 µg/mL的多肽样品的新鲜完全培养基,并以完全培养基为阴性对照,于37 ℃恒温CO2培养箱中培养,48 h后吸出药液,用PBS洗板2次,加入5 mg /mL的MTT溶液20 µl和新鲜完全培养基180 µL;于37 ℃恒温CO2培养箱中继续培养;4 h后,弃去含有MTT的培养液,加入150 µl DMSO后于微型振荡器上振荡15 min, 490nm 波长处测定光密度值并计算抑制率。由图2可知,250 µg/mL的多肽对脂肪细胞3T3-L1的抑制率是30.39%。
应用实施例3
脂肪细胞3T3-L1 100 µL 细胞悬液(5×104个/mL),加至96孔板中,于37 ℃恒温CO2培养箱中培养, 24 h后细胞贴壁,吸出废旧培养液,加入终体积为100 µL的500 µg/mL的多肽样品的新鲜完全培养基,并以完全培养基为阴性对照,于37 ℃恒温CO2培养箱中培养,48 h后吸出药液,用PBS洗板2次,加入5 mg /mL的MTT溶液20 µl和新鲜基完全培养基180 µL;于37 ℃恒温CO2培养箱中继续培养;4 h后,弃去含有MTT的培养液,加入150 µlDMSO后于微型振荡器上振荡15 min, 490nm 波长处测定光密度值并计算抑制率。由图2可知,500 µg/mL的多肽对脂肪细胞3T3-L1的抑制率是35.19%。
应用实施例4
脂肪细胞3T3-L1 100 µL 细胞悬液(5×104个/mL),加至96孔板中,于37 ℃恒温CO2培养箱中培养, 24 h后细胞贴壁,吸出废旧培养液,加入终体积为100 µL的1000 µg/mL的多肽样品的新鲜完全培养基,并以完全培养基为阴性对照,于37 ℃恒温CO2培养箱中培养,48 h后吸出药液,用PBS洗板2次,加入5 mg /mL的MTT溶液20 µl和新鲜完全培养基180µL;于37 ℃恒温CO2培养箱中继续培养;4 h后,弃去含有MTT的培养液,加入150 µl DMSO后于微型振荡器上振荡15 min, 490nm 波长处测定光密度值并计算抑制率。由图2可知,1000µg/mL的多肽对脂肪细胞3T3-L1的抑制率是37.11%。
应用实施例5
脂肪细胞3T3-L1 100 µL 细胞悬液(5×104个/mL),加至96孔板中,于37 ℃恒温CO2培养箱中培养, 24 h后细胞贴壁,吸出废旧培养液,加入终体积为100 µL的2000 µg/mL的多肽样品的新鲜完全培养基,并以完全培养基为阴性对照,于37 ℃恒温CO2培养箱中培养,48 h后吸出药液,用PBS洗板2次,加入5 mg /mL的MTT溶液20 µl和新鲜完全培养基180µL;于37 ℃恒温CO2培养箱中继续培养;4 h后,弃去含有MTT的培养液,加入150 µl DMSO后于微型振荡器上振荡15 min, 490nm 波长处测定光密度值并计算抑制率。由图2可知,2000µg/mL的多肽对脂肪细胞3T3-L1的抑制率是36.84%。
SEQUENCE LISTING
<110> 华南理工大学
<120> 一种抗肥胖十一肽NALKCCHSCPA
<130>
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Asn Ala Leu Lys Cys Cys His Ser Cys Pro Ala
1 5 10
Claims (2)
1.一种抑制前脂肪细胞3T3-L1增殖的十一肽NALKCCHSCPA,其特征是该十一肽NALKCCHSCPA的氨基酸序列为Asn-Ala-Leu-Lys-Cys-Cys-His-Ser-Cys-Pro-Ala;所述十一肽NALKCCHSCPA在浓度为0.125-2 mg/mL 时,对前脂肪细胞3T3-L1的体外增殖抑制率为29.9%-36.84%。
2.根据权利要求1所述的一种抑制前脂肪细胞3T3-L1增殖的十一肽NALKCCHSCPA,其特征在于所述十一肽NALKCCHSCPA在浓度为2 mg/mL 时,对前脂肪细胞3T3-L1的体外增殖抑制率为36.84%。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201611101037.9A CN106699846B (zh) | 2016-12-05 | 2016-12-05 | 一种抗肥胖十一肽nalkcchscpa |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201611101037.9A CN106699846B (zh) | 2016-12-05 | 2016-12-05 | 一种抗肥胖十一肽nalkcchscpa |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106699846A CN106699846A (zh) | 2017-05-24 |
CN106699846B true CN106699846B (zh) | 2020-08-18 |
Family
ID=58935438
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201611101037.9A Expired - Fee Related CN106699846B (zh) | 2016-12-05 | 2016-12-05 | 一种抗肥胖十一肽nalkcchscpa |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106699846B (zh) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109081862A (zh) * | 2018-06-07 | 2018-12-25 | 华南理工大学 | 一种抗肥胖四肽pqtr及其应用 |
CN110183517B (zh) * | 2019-05-31 | 2021-12-21 | 华南理工大学 | 一种降血糖十一肽 |
CN114315965B (zh) * | 2021-12-22 | 2023-05-12 | 华南理工大学 | 抗肥胖肽及其应用 |
CN114292311B (zh) * | 2021-12-22 | 2023-05-12 | 华南理工大学 | 胰脂肪酶抑制肽及其应用 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101669140B1 (ko) * | 2015-04-28 | 2016-10-26 | (주)케어젠 | 항비만 및 항당뇨 효능을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 |
CN104840943A (zh) * | 2015-05-05 | 2015-08-19 | 中国农业科学院作物科学研究所 | Lunasin多肽在制备具有减肥活性物质方面的应用 |
-
2016
- 2016-12-05 CN CN201611101037.9A patent/CN106699846B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106699846A (zh) | 2017-05-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106699846B (zh) | 一种抗肥胖十一肽nalkcchscpa | |
CN108676073B (zh) | 一种抗肥胖十肽llvvypwtqr及其应用 | |
CN104710511A (zh) | 一种源于带鱼鱼肉蛋白的铁螯合肽及其制备方法和用途 | |
CN111647043B (zh) | 含有Hyp-Gly序列的一类抗血小板和抗血栓功能的寡肽 | |
CN106749524B (zh) | 一种抗肥胖七肽npvwkrk | |
CN111269290B (zh) | 一种鲟鱼抗炎肽的制备方法 | |
CN106518971B (zh) | 一种抗肥胖十肽canphelpnk | |
CN105237624B (zh) | 一种七肽emlqppl及其应用 | |
CN105131089B (zh) | 一种十三肽及其应用 | |
CN112745380B (zh) | 具有氨基酸结构raglqfpvgrvh的生物活性肽及其制备方法和应用 | |
CN106749533B (zh) | 一种抗肥胖十七肽lnnpsvcdcdcmmkaar | |
CN109206483A (zh) | 一种贻贝来源的ace抑制及抗肿瘤活性肽 | |
CN109081862A (zh) | 一种抗肥胖四肽pqtr及其应用 | |
CN102558298A (zh) | 一种利用固相多肽合成法合成四肽异构体的方法及其应用 | |
CN103897029A (zh) | 一种罗米地辛的制备方法 | |
CN105175496B (zh) | 一种七肽pgkplfl及其应用 | |
CN113072621B (zh) | 一种牦牛骨降血压肽及其制备方法与应用 | |
CN106496329B (zh) | 一种含有胶原蛋白结合结构域的融合蛋白 | |
CN106084011B (zh) | 一种十二肽vpgtpknldspr及其应用 | |
CN110724179B (zh) | 一种抗肿瘤多肽及其制备方法和用途 | |
CN105153283B (zh) | 一种八肽sccscded及其应用 | |
CN108101960B (zh) | 一种具有ace抑制活性和抗肿瘤的多肽分子及其制备方法 | |
CN112661830A (zh) | 具有氨基酸结构airndeelnkllgr的生物活性肽及其制备方法和应用 | |
RU2078769C1 (ru) | Пептидный фрагмент, обладающий биологической активностью инсулина | |
CN112794881B (zh) | 一种抗肝癌十三肽nksgtysnddlsh及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20200818 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |