EA029470B1 - Способ стимулирования формирования защитного иммунитета против норовируса - Google Patents

Способ стимулирования формирования защитного иммунитета против норовируса Download PDF

Info

Publication number
EA029470B1
EA029470B1 EA201490258A EA201490258A EA029470B1 EA 029470 B1 EA029470 B1 EA 029470B1 EA 201490258 A EA201490258 A EA 201490258A EA 201490258 A EA201490258 A EA 201490258A EA 029470 B1 EA029470 B1 EA 029470B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
norovirus
genogroup
vaccine
dose
ubr
Prior art date
Application number
EA201490258A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201490258A1 (ru
Inventor
Чарльз Ричардсон
Роберт Ф. Баргаце
Пол М. Мендельман
Original Assignee
Такеда Вэксинс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47506489&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA029470(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Такеда Вэксинс, Инк. filed Critical Такеда Вэксинс, Инк.
Publication of EA201490258A1 publication Critical patent/EA201490258A1/ru
Publication of EA029470B1 publication Critical patent/EA029470B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/125—Picornaviridae, e.g. calicivirus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5258—Virus-like particles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/16011—Caliciviridae
    • C12N2770/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Изобретение относится к способу стимулирования формирования защитного иммунитета против норовируса у человека, включающему внутримышечное введение человеку не более однократной дозы вакцины, при этом указанная однократная доза содержит вирусоподобные частицы (VLP) норовируса геногруппы I и/или геногруппы II, где указанные VLP норовируса геногруппы I и/или геногруппы II содержат капсидный белок, полученный из вирусного штамма соответствующей геногруппы, при этом указанная доза вакцины содержит не более 150 мкг VLP норовируса геногруппы I или геногруппы II.

Description

Изобретение относится к способу стимулирования формирования защитного иммунитета против норовируса у человека, включающему внутримышечное введение человеку не более однократной дозы вакцины, при этом указанная однократная доза содержит вирусоподобные частицы (УЬР) норовируса геногруппы I и/или геногруппы II, где указанные УЬР норовируса геногруппы I и/ или геногруппы II содержат капсидный белок, полученный из вирусного штамма соответствующей геногруппы, при этом указанная доза вакцины содержит не более 150 мкг УЬР норовируса геногруппы I или геногруппы II.
029470 Β1
029470
Перекрестная ссылка на родственные заявки
Настоящая заявка заявляет приоритет по предварительной заявке на патент США 61/506447, поданной 11 июля 2011 г., полное содержание которой включено в данный документ посредством ссылки.
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к области, связанной с вакцинами, в частности вакцинами от норовирусов. Кроме того, настоящее изобретение относится к способам получения вакцин и способам индуцирования и оценивания защитных иммунных ответов против норовируса у людей.
Предпосылки изобретения
Норовирусы являются некультивируемыми калицивирусами человека, которые, как выяснилось, являются единственной наиболее важной причиной эпидемических вспышек разновидностей небактериального гастроэнтерита (С1а88 е! а1., 2000; Натбу е! а1., 1999). Клиническое значение норовирусов недооценивали до того, как были разработаны чувствительные анализы молекулярной диагностики. Клонирование генома прототипного вируса Νογ\\η11< (Νν) геногруппы I и получение вирусоподобных частиц (УЬР) с помощью системы экспрессии рекомбинантного бакуловируса привели к разработке анализов, которые выявляют распространенную норовирусную инфекцию (Лайд е! а1. 1990; 1992).
Норовирусы являются вирусами, содержащими одноцепочечную молекулу РНК положительной полярности, которые содержат несегментированный РНК-геном. Вирусный геном кодирует три открытые рамки считывания, из которых последние две определяют продуцирование главного капсидного белка и малого структурного белка соответственно (С1а88 е! а1. 2000). При экспрессии капсидного белка Νν и некоторых других норовирусов на высоком уровне в эукариотических системах экспрессии он самоорганизуется в νΕΡ, которые структурно имитируют нативные вирионы норовирусов. При исследовании с помощью трансмиссионной электронной микроскопии νΕΡ морфологически неотличимы от инфекционных вирионов, выделенных из образцов фекалий человека.
Иммунные ответы на норовирусы являются комплексными, и корреляты защиты в настоящее время только выясняют. Исследования на людях-добровольцах, осуществлявшиеся с нативным вирусом, показали, что иммунологическая память слизистых оболочек обеспечивала краткосрочную защиту от инфекции, и позволили предположить, что защита, опосредованная вакциной, является возможной (ЬшбезтИй е! а1. 2003; Ратпо е! а1. 1977; Ауа!! е! а1., 1974).
Хотя норовирус невозможно культивировать ίη νίίτο благодаря доступности νΕΡ и их способности вырабатываться в больших количествах, был достигнут значительный прогресс в определении антигенной и структурной топографии норовирусного капсида. νΕΡ сохраняют исходную конформацию вирусного капсидного белка, при этом у них отсутствует инфекционный генетический материал. Следовательно, νΕΡ имитируют функциональные взаимодействия вируса с клеточными рецепторами, вызывая, таким образом, соответствующий иммунный ответ хозяина, но при этом у них отсутствует способность к репродукции или способность вызывать инфекцию. Медицинский колледж Бэйлора (Вау1ог Со11еде о£ Мебюше) совместно с ΝΙΗ изучали гуморальный, мукозный и клеточный иммунные ответы на νΕΡ Νν на людях-добровольцах в I фазе академических клинических испытаний, спонсируемых исследователем. Перорально применяемые νΕΡ характеризовались безопасностью и иммуногенностью у здоровых взрослых (Ва11 е! а1. 1999; Таске! е! а1. 2003). Но для появления иммунного ответа требовались многократные дозы с относительно высоким количеством νΕΡ. В других научных центрах доклинические эксперименты на животных моделях продемонстрировали усиление иммунных ответов на νΤΡ при их применении интраназально с адъювантами-бактериальными экзотоксинами (Сиеттето е! а1. 2001; №соШет-1ато! е! а1. 2004; Ρе^^\γа1 е! а1. 2003; 8ои/а е! а1. (2007) ν3απκ. νο1. 25(50):8448-59). Однако защитный иммунитет против норовируса у людей остается неясным в связи с тем, что показатели защитного иммунного ответа у людей все еще четко не определены (НегЬ51-Кга1о\'е1/ е! а1. (2010) Ехрег! Ре\'. ν3αίικ5 9(3), 299-307).
Краткое описание настоящего изобретения
Настоящее изобретение частично основано на открытии, что однократная доза норовирусной вакцины вызывает быстрый сильный защитный иммунный ответ против норовируса у людей при внутримышечном введении. Соответственно в настоящем изобретении представлен способ стимулирования формирования защитного иммунитета против норовируса у человека, включающий внутримышечное введение человеку не более однократной дозы вакцины, при этом указанная однократная доза содержит вирусоподобные частицы (νΈΡ) норовируса геногруппы I и/или геногруппы II, где указанные νΕΡ норовируса геногруппы I и/или геногруппы II содержат капсидный белок, полученный из вирусного штамма соответствующей геногруппы, при этом указанная доза вакцины содержит не более 150 мкг νΈΡ норовируса геногруппы I или геногруппы II. Указанная вакцина индуцирует по меньшей мере трехкратное увеличение титра норовирусспецифичных сывороточных антител по сравнению с титром у человека до введения вакцины. В определенных вариантах осуществления индукция увеличения титра норовирус специфичных антител происходит в течение семи дней после введения однократной дозы вакцины.
Однократная доза вакцины может содержать νΈΡ норовируса геногруппы I, νΈΡ норовируса геногруппы II или и те, и те в дозе, составляющей от 15 до 150 мкг. В вариантах осуществления, в которых однократная доза вакцины содержит νΈΡ норовируса и геногруппы I, и геногруппы II, доза νΈΡ каждой геногруппы может быть одинаковой или различной. В одном варианте осуществления доза вакцины со- 1 029470
держит не более 50 мкг УЪР норовируса геногруппы I. В другом варианте осуществления доза вакцины содержит не более 25 мкг УЬР норовируса геногруппы I. В еще одном варианте осуществления доза вакцины содержит не более 15 мкг УЬР норовируса геногруппы I. В еще одном варианте осуществления доза вакцины содержит не более 15 мкг УЬР норовируса геногруппы II. В еще другом варианте осуществления доза вакцины содержит не более 50 мкг УЬР норовируса геногруппы II. В еще другом варианте осуществления доза вакцины содержит не более 25 мкг УЬР норовируса геногруппы II.
В некоторых аспектах настоящего изобретения УЬР норовируса геногруппы I содержат капсидный белок из вируса Νογ\υ;·ι11<. В других аспектах настоящего изобретения УЬР норовируса геногруппы II содержат капсидный белок из норовируса 4 генотипа геногруппы II. В определенных вариантах осуществления УЬР норовируса геногруппы II представляют собой УЬР, образованные в результате экспрессии консенсусной последовательности норовируса геногруппы II.
В определенных вариантах осуществления вакцина дополнительно содержит по меньшей мере один адъювант. В одном варианте осуществления адъювант представляет собой агонист 1о11-подобных рецепторов. В определенных вариантах осуществления вакцина содержит два адъюванта, таких как МРЬ и гидроксид алюминия. В некоторых вариантах осуществления вакцина может дополнительно содержать буфер, такой как Ь-гистидин, имидазол, янтарная кислота, трис и лимонная кислота.
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1. Результаты анализов по методу ЕЬРЗА для общего по измерению объединенных сывороточных уровней ^О, !дА и I§М у людей-добровольцев, иммунизированных внутримышечно плацебо (солевым раствором) или составом вакцины, содержащим 5, 15, 50 или 150 мкг каждого из УЪР норовируса геногруппы Σ.1 и УЪР норовируса геногруппы П.4. Средний геометрический титр антител к ОГ1 (А) и к ОП.4 (В) показан для каждого из уровней дозировки на 7 и 21 день после первой иммунизации и на 7 и 28 день после второй иммунизации. Добровольцев иммунизировали в 0 и на 28 день исследования.
Фиг. 2. Результаты анализов по методу ЕЬРЗА для общего по измерению объединенных сывороточных уровней ^О, !дА и I§М у людей-добровольцев, иммунизированных внутримышечно плацебо (солевым раствором) или составом вакцины, содержащим 5, 15, 50 или 150 мкг каждого из УЪР норовируса геногруппы Σ.1 и УЪР норовируса геногруппы П.4. Фактор сероконверсии для антител к ОГ1 (А) и к ОП.4 (В) показан для каждого из уровней дозировки на 7 и 21 день после первой иммунизации и на 7 и 28 день после второй иммунизации. Добровольцев иммунизировали в 0 и на 28 день исследования.
Фиг. 3. Результаты анализов по методу ЕЬРЗА для общего по измерению объединенных сывороточных уровней ^О, !дА и I§М у людей-добровольцев, иммунизированных внутримышечно плацебо (солевым раствором) или составом вакцины, содержащим 5, 15, 50 или 150 мкг каждого из УЪР норовируса геногруппы Σ.1 и УЬР норовирус геногруппы П.4. Процентные показатели серологической реакции (т.е. четырехкратное увеличение титра антител по сравнению с титрами до иммунизации) для антител к ОН (А) и к ОП.4 (В) показаны для каждого из уровней дозировки на 7 и 21 день после первой иммунизации и на 7 и 28 день после второй иммунизации. Добровольцев иммунизировали в 0 и на 28 день исследования.
Фиг. 4. Результаты анализов по методу ЕЬРЗА по измерению сывороточного !дА у людейдобровольцев, иммунизированных внутримышечно плацебо (солевым раствором) или составом вакцины, содержащим 5, 15 или 50 мкг каждого из УЬР норовируса геногруппы Σ.1 и УЬР норовируса геногруппы П.4. Средний геометрический титр антител к ОГ1 (А) и к ОП.4 (В) показан для каждого из уровней дозировки на 7 и 21 день после первой иммунизации и на 7 и 28 день после второй иммунизации. Добровольцев иммунизировали в 0 и на 28 день исследования.
Фиг. 5. Результаты анализов по методу ЕЬРЗА по измерению сывороточного !дА у людейдобровольцев, иммунизированных внутримышечно плацебо (солевым раствором) или составом вакцины, содержащим 5, 15 или 50 мкг каждого из УЪР норовируса геногруппы Σ.1 и УЪР норовирус геногруппы П.4. Фактор сероконверсии для антител к СТ.1 (А) и к ОП.4 (В) показан для каждого из уровней дозировки на 7 и 21 день после первой иммунизации и на 7 и 28 день после второй иммунизации. Добровольцев иммунизировали в 0 и на 28 день исследования.
Фиг. 6. Результаты анализов по методу ЕЬРЗА по измерению сывороточного !дА у людейдобровольцев, иммунизированных внутримышечно плацебо (солевым раствором) или составом вакцины, содержащим 5, 15 или 50 мкг каждого из УЬР норовируса геногруппы Σ.1 и УЬР норовируса геногруппы П.4. Процентные показатели серологической реакции (т.е. четырехкратное увеличение титра антител по сравнению с титрами до иммунизации) для антител к ОГ1 (А) и к ОП.4 (В) показаны для каждого из уровней дозировки на 7 и 21 день после первой иммунизации и на 7 и 28 день после второй иммунизации. Добровольцев иммунизировали в 0 и на 28 день исследования.
Фиг. 7. Результаты анализов по методу ЕЬРЗА по измерению сывороточного у людейдобровольцев, иммунизированных внутримышечно плацебо (солевым раствором) или составом вакцины, содержащим 5, 15 или 50 мкг каждого из УЬР норовируса геногруппы Σ.1 и УЬР норовируса геногруппы П.4. Средний геометрический титр антител к ОГ1 (А) и к ОП.4 (В) показан для каждого из уровней дозировки на 7 и 21 день после первой иммунизации и на 7 и 28 день после второй иммунизации. Добровольцев иммунизировали в 0 и на 28 день исследования.
- 2 029470
Фиг. 8. Результаты анализов по методу ЕЫ8А по измерению сывороточного Ι§Ο у людейдобровольцев, иммунизированных внутримышечно плацебо (солевым раствором) или составом вакцины, содержащим 5, 15 или 50 мкг каждого из МБР норовируса геногруппы 1.1 и МБР норовируса геногруппы ΙΙ.4. Фактор сероконверсии для антител к ΟΙ.1 (А) и к ΟΙΙ.4 (В) показан для каждого из уровней дозировки на 7 и 21 день после первой иммунизации и на 7 и 28 день после второй иммунизации. Добровольцев иммунизировали в 0 и на 28 день исследования.
Фиг. 9. Результаты анализов по методу ЕЫ8А по измерению сывороточного ΙβΟ у людейдобровольцев, иммунизированных внутримышечно плацебо (солевым раствором) или составом вакцины, содержащим 5, 15 или 50 мкг каждого из МБР норовируса геногруппы Ι.1 и МБР норовируса геногруппы ΙΙ.4. Процентные показатели серологической реакции (т.е. четырехкратное увеличение титра антител по сравнению с титрами до иммунизации) для антител к ΟΙ.1 (А) и к ΟΙΙ.4 (В) показаны для каждого из уровней дозировки на 7 и 21 день после первой иммунизации и на 7 и 28 день после второй иммунизации. Добровольцев иммунизировали в 0 и на 28 день исследования.
Фиг. 10. Результаты анализов по методу ЕЫ8А для общего Ιβ по измерению объединенных сывороточных уровней Ι§Ο, ΙβΛ и Ι§Μ у людей-добровольцев, иммунизированных либо норовирусной моновалентной вакциной для интраназального введения, как описано в Е1 Катагу е! а1. (2010) 1. ΙηΓοοΙ Όίδ, νοί. 202(11): 1649-1658, (группы ЬУ01-103), либо норовирусной бивалентной вакциной для внутримышечного введения, как описано в примере 1 (группы ЬУ03-104), в указанные моменты времени. Людидобровольцы получали либо плацебо, либо две дозы состава вакцины либо для внутримышечного введения, либо для интраназального введения. Бивалентная норовирусная вакцина для внутримышечного введения содержала 5 мкг каждого из УБР норовируса геногруппы Ι.1 и УЪР норовируса геногруппы ΙΙ.4. Моновалентная вакцина для интраназального введения содержала 100 мкг норовируса геногруппы Ι.1. Добровольцам, получавшим вакцину для интраназального введения или плацебо, вводили провокационную пробу с живым норовирусом после второй иммунизации.
Фиг. 11. РАС8-анализ мононуклеарных клеток периферической крови, полученной от людейдобровольцев в 0 день перед иммунизацией либо 5 мкг дозой бивалентной норовирусной вакцины для внутримышечного введения (А), либо плацебо (В) и на 7 день после иммунизации. СЭ19+ РВМС являются нацеленными на слизистые, о чем свидетельствует экспрессия хоминг-рецептора альфа4/бета7 и хемокинового рецептора ССК.10.
Детальное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к способам стимулирования формирования защитного иммунитета к норовирусным инфекциям у субъекта. В частности, в настоящем изобретении представлены способы стимулирования формирования защитного иммунитета против норовируса у человека посредством парентерального введения человеку не более однократной дозы вакцины, содержащей УЪР норовируса и необязательно по меньшей мере один адъювант, где вакцина обеспечивает защиту от или облегчение по меньшей мере одного симптома норовирусной инфекции. Изобретатели обнаружили, что внутримышечное введение людям не более однократной дозы вакцины, содержащей УЪР норовируса, индуцирует быструю (т.е. в течение 7 дней после иммунизации) сероконверсию в сыворотке крови (т.е. по меньшей мере трехкратное увеличение титров антигенспецифичных сывороточных антител по сравнению с уровнями до вакцинации), что указывает на защитный иммунный ответ против норовирусной инфекции и заболевания. Иммунные ответы, индуцируемые данной вакциной однократной дозы, достигают такого же высокого уровня титров антител, что и уровень, наблюдаемый при природной инфекции в результате введения живого вируса в исследованиях с введением провокационной пробы людям. Примечательно, что ревакцинирующая доза вакцины не требуется, поскольку иммунный ответ не повышается при дополнительном введении еще одной дозы вакцины.
В настоящем изобретении представлена вакцина, содержащая один или несколько норовирусных антигенов. Под "норовирусом", "норовирусом (ΝΘΚ)" и грамматическими эквивалентами в данном документе понимают члены рода Νοτονύπδ семейства СаПсйзпбае. В некоторых вариантах осуществления норовирус может включать группу родственных вирусов, содержащих одноцепочечную молекулу РНК положительной полярности, не имеющих оболочки, которые могут быть инфекционными для человека или видов млекопитающих, не являющихся человеком. В некоторых вариантах осуществления норовирус может вызывать острый гастроэнтерит у людей. Норовирусы также могут упоминаться как небольшие сферические структурированные вирусы (8К.8У), имеющие определенную поверхностную структуру или неровный контур, как видно при рассмотрении с помощью электронной микроскопии.
Норовирусы включают по меньшей мере пять геногрупп (ΟΙ, ΟΙΙ, ΟΙΙΙ, ΟΙν и Ον). Норовирусы ΟΙ, ΟΙΙ и ΟΙν являются инфекционными для людей, тогда как норовирусы ΟΙΙΙ в основном инфицируют крупный рогатый скот. Ον в недавнем времени был выделен из мышей (Ζ1κη§ е! а1. (2006) Упо1оду. νοί 346: 312-323). Типичными представителями ΟΙΙΙ являются штаммы 1епа и №№Ъшу, тогда как типичными представителями ΟΙν являются штаммы А1рйа!гоп, Ροτΐ Баибегба1е и 8аш! ΟοιιΦ Группы ΟΙ и ΟΙΙ можно дополнительно разделить на генетические кластеры или генотипы на основе генетической классификации (Ληάο е! а1. (2000) 1. ΙηΚοΙίοιίδ И18еа8е8, νοί. 181(8ирр2):8336-8348; ЬшбеИ е! а1. (2005) 1. С1ш. ΜίοτοΠΐοί., νο1. 43(3):1086-1092). Используемое в данном документе выражение "генетические кластеры" при- 3 029470
меняется взаимозаменяемо с выражением "генотипы". В геногруппу I входит 8 кластеров С1, известных на сегодняшний день (с названием прототипного вирусного штамма): 01.1 (ΝοηναΙΚ (ЫУ-и8Л93)); 01.2 (8οιι11ι1κ·ιιηρ1οη (80У-0ВК93)); 01.3 (Эе8ег1 81йе1а (08у-И8А93)); 01.4 (Сгш8е 8Ыр уник/СЫЪа (СЫЪа1ΡΝ00)); 01.5 (318/Ми8§тоуе (Ми8§тоу-0ВК00)); 01.6 (Не88е (Не88е-ПЕИ98)); 01.7 (\Упс11е800ВН00) и 01.8 (Вохег-и8А02). В геногруппу II входит 19 кластеров 0ΙΙ, известных на сегодняшний день (с названием прототипного вирусного штамма): 0ΙΙ.1 (На\\а0 (На\уа0-и8А94)); 0ΙΙ.2 (8ηον Моийаш/Ме1к8Ьат (М5кат-0ВК95)); 0ΙΙ.3 (Τοτοηΐο (ТогоШо-САОО)); 0ΙΙ.4 (ВпйоЕЕоМвдак (Вт181о1-0ВК93)); 0ΙΙ.5 (290/Ηί11ίη§άοη (НШп§а-0ВК00)); 0ΙΙ.6 (269/8еасгой (8еастоЕ-0ВК00)); 0ΙΙ.7 (273/Ьееа§ (Ьееа8-0ВК00)); 0ΙΙ.8 (539/Ат§1етаат (АпиВат-ЖЮ))); 0ΙΙ.9 (378 (УАВеасЬ-И8А01)), 0ΙΙ.10 (Ег1иг1-ЕЕЕ01); 0ΙΙ.11 (8\\'9180,1Ю01); 0ΙΙ.12 (Е ог11е\-0ВН00); 0ΙΙ.13 (РауМ1-и8А02); 0ΙΙ.14 (М7-И8А03); 0ΙΙ.15 (123И8А02); 0ΙΙ.16 (Т1йш-и8А03); 0ΙΙ.17 (С8Е1-И8А03); 0ΙΙ.18 (0^101/2003/08) и 0ΙΙ.19 (0^170/2003/08).
Под "норовирусом" также в данном документе понимают вирусоподобные частицы рекомбинантного норовируса (УЪР τΝ0Κ). В некоторых вариантах осуществления рекомбинантная экспрессия, по меньшей мере, норовирусного капсидного белка, кодируемого 0КР2, в клетках, например, из бакуловирусного вектора в клетках 8Е9, может привести к самопроизвольной самоорганизации капсидного белка в УЪР. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантная экспрессия, по меньшей мере, норовирусных белков, кодируемых 0РР1 и 0РР2, в клетках, например, из бакуловирусного вектора в клетках 8ί9, может привести к самопроизвольной самоорганизации капсидного белка в УЪР. УЬР структурно схожи с норовирусами, но у них отсутствует вирусный РНК-геном и, следовательно, они не являются инфекционными. Соответственно "норовирус" включает вирионы, которые могут представлять собой инфекционные или неинфекционные частицы, которые включают неполные частицы.
Неограничивающие примеры норовирусов включают норовирус геногруппы 1 штамм Нц/ШУЛЕеЦ Сйе81ет/2001/и8А, номер доступа в 0еηВаηк АУ502016; СЫЪа у1ти8 (СНУ, 0еηВаηк АВ042808); норовирус геногруппы 2 штамм Ни/ЖУ/Вгаааоск Не1дй18/1999/и8А, номер доступа в 0еηВаηк АУ502015; норовирус геногруппы 2 штамм Ни/№У/Еауе11е/1999/и8А. номер доступа в 0еηВаηк АУ502014; норовирус геногруппы 2 штамм Ни/№У/Раийе1а/1999/и8А, номер доступа в 0еηВаηк АУ502013; норовирус геногруппы 2 штамм Ηи/NοУ/8аηаиδку/1999/υ8Α, номер доступа в 0еηВаηк АУ502012; норовирус геногруппы 2 штамм Ηи/NοУ/Саηΐοη/1999/υ8Α, номер доступа в 0еηВаηк АУ502011; норовирус геногруппы 2 штамм Ηи/NοV/Τ^ΓΓ^η/1999/υ8Α. номер доступа в 0еηВаηк АУ502010; норовирус геногруппы 2 штамм Ни/ЖУ/С8-Е1/2002/и8А, номер доступа в 0еηВаηк АУ502009; норовирус геногруппы 1 штамм Ηи/NοV/\V^5Сοη5^η/2001/υ8Α. номер доступа в 0еηВаηк АУ502008; норовирус геногруппы 1 штамм Ни/ЖУ/С8-841/2001/И8А, номер доступа в 0еηВаηк АУ502007; норовирус геногруппы 2 штамм Ηи/NοV/Η^^ат/2000/υ8Α. номер доступа в 0еηВаηк АУ502006; норовирус геногруппы 2 штамм Ηи/NοУ/Τοηΐοдаηу/1999/υ8Α, номер доступа в 0еηВаηк АУ502005; вирус Νοην-ΟΕ полный геном, номер доступа в 0еηВаηк Ж/8иЪ.-001959; норовирус Ηи/ΟI/Οίοίике/1979/^Ρ, геномная РНК, полный геном, номер доступа в 0еηВаηк АВ187514; норовирус Ни/Нокка1ао/133/2003/1Р, номер доступа в 0еηВаηк АВ212306; норовирус 8уацеу 2212, номер доступа в 0еηВаηк АУ588132; вирус №г\\а1к штамм 8Ж000.!А, номер доступа в 0еηВаηк АВ190457; вирус Ьо^аак, полный геном, номер доступа в 0енВаηк Х86557; Жг\уа1к-подобный вирус, геномная РНК, 0йи'96, номер доступа в 0еηВаηк АВ045603; вирус №г\\и1к штамм У|е1нат 026, полный геном, номер доступа в 0еηВаηк АР504671; норовирус Ни/0П.4/2004/ЖР, номер доступа в 0еηВаηк АУ883096; норовирус Ηи/0II/Ηοки8Ыη/03/^Ρ, номер доступа в 0еηВаηк АВ195227; норовирус Ни/0П/Като/03/1Р, номер доступа в 0еηВаηк АВ195228; норовирус Ηи/ΟII/8^η8^^ο/97/^Ρ. номер доступа в 0еηВаηк АВ195226; норовирус Ηи/0II/Iηа/02/^Ρ. номер доступа в 0еηВаηк АВ195225; норовирус Ни/ЖУ/0П/№и8йе1Й7260/2000/ПЕ, номер доступа в 0еηВаηк АУ772730; норовирус Ηи/N^V/^^е8аеη174/рυ8-Nο^II/1997/ΟЕ. номер доступа в 0еηВаηк АУ741811; норовирус Ни/ЖУ/0х£ота/В2816/2002/иК, номер доступа в 0еηВаηк АУ587989; норовирус
Ни/ЖУ/0х£ота/В487/2002/иК, номер доступа в 0еηВаηк АУ587987; норовирус
101/0.7/0111^0082/200000 номер доступа в 0еηВаηк АУ588030; норовирус
^1^00^11-10.1^9823/200.3^10 номер доступа в 0еηВаηк АУ588029; норовирус
Ηи/N^У/СЬ^рр^η§Nο^ιοη/2003/υК, номер доступа в 0еηВаηк АУ588028; норовирус
Ни/ЖУ/П1асоЙВ982/2003/иК, номер доступа в 0еηВаηк АУ588027; норовирус
Ни/ЖУ/0х£ота/В885/2002/иК, номер доступа в 0еηВаηк АУ588026; норовирус
Ни/ЖУ/0х£ота/В684/2003/иК, номер доступа в 0еηВаηк АУ588025; норовирус
Ни/ЖУ/0х£ота/В685/2003/иК, номер доступа в 0еηВаηк АУ588024; норовирус
Ни/ЖУ/0х£ота/В5823/2003/иК, номер доступа в 0еηВаηк АУ588023; норовирус
Ни/ЖУ/0х£ота/В682/2003/иК, номер доступа в 0еηВаηк АУ588022; норовирус
Ни/ЖУ/0х£ота/В686/2003/иК, номер доступа в 0еηВаηк АУ588021; изолят Жг\уа1к-подобного вируса Во/ТЫт8к10/00/иК, номер доступа в 0еηВаηк АУ126468; изолят Жг\уа1к-подобного вируса
Во/Ретт(Ъ55/00/иК, номер доступа в 0еηВаηк АУ126476; изолят Жг\уа1к-подобного вируса
Во/АЪету8ЩуШ24/00/иК, номер доступа в 0еηВаηк АУ126475; изолят Жг\уа1к-подобного вируса Во/Пиш1пе8/94/иК, номер доступа в 0еηВаηк АУ126474; норовирус N^V/IΕ2036/2003/I^а^. номер досту- 4 029470
па в СепБапк ΑΥ675555; норовирус ΝΕν/ΙΕ1998/2003/ΐΓας. номер доступа в СепВапк ΑΥ675554; норовирус ΝΕν/ΒυΌδ/2002/υδΑ, номер доступа в СепВапк ΑΥ660568; норовирус ΝΕν/Ρηπ8 Ыапй/2003/и8А, номер доступа в СепВапк ΑΥ652979; вирус 8поте Моийаш, полный геном, номер доступа в СепВапк ΑΥ134748; Ыогта1к-подобный вирус ХЪУ/Роп Ьаийегйа1е/560/1998/и8, номер доступа в СепВапк ΑΡ414426; Ни/№гоу1ги8/Ыго8Ыта/1999/.ГР(9912-02Р), номер доступа в СепВапк ΑΒ044366; Ыогта1кподобный вирус штамм 11М§и-М^, номер доступа в СепВапк ΑΥ274820; №гта1к-подобный вирус штамм В-ЫУЭ, номер доступа в СепВапк ΑΥ274819; норовирус геногруппы 2 штамм Ηи/NоУ/Ρа^т^и§ΐои ΗίΙΙδ/2002/υδΑ, номер доступа в СепВапк ΑΥ502023; норовирус геногруппы 2 штамм Ηιι/Νον/ί.’δ^4/2002/υδΑ. номер доступа в СепВапк ΑΥ502022; норовирус геногруппы 2 штамм Ηιι/Νον/ί.’δ^2/2002/υδΑ. номер доступа в СепВапк ΑΥ502021; норовирус геногруппы 2 штамм Ηιι/Νον/ί.’δ^1/2002/υδΑ. номер доступа в СепВапк ΑΥ502020; норовирус геногруппы 2 штамм Ηи/NоУ/Αисйо^аде/2002/υδΑ, номер доступа в СепВапк ΑΥ502019; норовирус геногруппы 2 штамм Ηιι/Νον/ί.’δ-Ο1/2002/ί.ΆΝ. номер доступа в СепВапк ΑΥ502018; норовирус геногруппы 2 штамм Ηи/NоV/Се^таηΐоη/2002/υδΑ, номер доступа в СепВапк ΑΥ502017; калицивирус человека ИЕУ/С11/Еап§еп1061/2002/ПЕ, полный геном, номер доступа в СепВапк ΑΥ485642; норовирус мышей 1, полипротеин, номер доступа в СепВапк ΑΥ228235; вирус №гта1к номер доступа в СепВапк ΑΒ067536; калицивирус человека ЫЕУ/Мех7076/1999, номер доступа в СепВапк ΑΡ542090; калицивирус человека ЖУ/ОЬегйанхеп 455/01/ΌΕ, номер доступа в СепВапк ΑΡ539440; калицивирус человека ЫЬУ/Нег/Ьегд 385/01/ΌΕ, номер доступа в СепВапк ΑΡ539439; калицивирус человека N^У/Βоxе^/2001/υδ, номер доступа в СепВапк ΑΡ538679; Ыогта1к-подобный вирус, геномная РНК, полный геном, номер доступа в СепВапк АВ081723; Ыогта1к-подобный вирус, геномная РНК, полный геном, изолят:§айата υ201, номер доступа в СепВапк ΑΒ039782; Ыогта1к-подобный вирус, геномная РНК, полный геном, изолят:§айата Ш8, номер доступа в СепВапк ΑΒ039781; Ыогта1к-подобный вирус, геномная РНК, полный геном, изолят:8айата υ25, номер доступа в СепВапк ΑΒ039780; вирус Ыогга1к штамм:Ш5СП, номер доступа в СепВапк ΑΒ067543; вирус Ыогта1к штамм:Ш01 С11, номер доступа в СепВапк АВ067542; Ыогта1к-подобные вирусы штамм 416/97003156/1996/ΕΑ, номер доступа в СепВапк ΑΡ080559; Ыогта1кподобные вирусы штамм 408/97003012/1996/РЬ, номер доступа в СепВапк ΑΡ080558; Ыогта1к-подобный вирус ХЕУ/Вигга8й ^аий^ид/331/1995/υδ. номер доступа в СепВапк ΑΡ414425; №гта1к-подобный вирус ХЪУ/М1ат1 Веасй/326/1995/υδ, номер доступа в СепВапк ΑΡ414424; Ыогта1к-подобный вирус Ж-У^ййе Κ^Γ/290/1994/ϋδ, номер доступа в СепВапк ΑΡ414423; Ыогта1к-подобный вирус ЖУ/ке»· О^ίеаи8/306/1994/υδ, номер доступа в СепВапк ΑΡ414422; Жогта1к-подобный вирус Ж-У/РоП Сапауега1/301/1994/Ы^„ номер доступа в СепВапк ΑΡ414421; Жогта1к-подобный вирус ΝΕν/Ηοπο1υ1υ/314/1994/υδ, номер доступа в СепВапк ΑΡ414420; Жогта1к-подобный вирус ΝΕν/Κίε^οπά/283/1994/υδ, номер доступа в СепВапк ΑΡ414419; Жогта1к-подобный вирус N^У/Vе8ΐоνе^/302/1994/υδ, номер доступа в СепВапк ΑΡ414418; Жогта1к-подобный вирус ΝΕν/υΚ317/12700/1992/СВ, номер доступа в СепВапк ΑΡ414417; Жогта1к-подобный вирус N^У/М^ат^/81/1986/υδ, номер доступа в СепВапк ΑΡ414416; штамм §поте Моийаш, номер доступа в СепВапк υ70059; вирус Иезеп §Ые1й Όδν395, номер доступа в СепВапк υ04469; вирус Νογ\υ;·ι11υ полный геном, номер доступа в СепВапк ΑΡ093797; калицивирус Натан, номер доступа в СепВапк υ07611; вирус 8оййатр1оп, номер доступа в СепВапк Ь07418; вирус Ыогга1к (δΚδν-ΚΥ-89/89/Ι), номер доступа в СепВапк Ь23828; вирус Ыогта1к (δΚδУ-δМΑ/76/υδ), номер доступа в СепВапк Ь23831; вирус СатЬегта11, номер доступа в СепВапк υ46500; калицивирус человека штамм Ме1к8йат, номер доступа в СепВапк Х81879; калицивирус человека штамм МХ, номер доступа в СепВапк Ш2498; миниреовирус ТУ24, номер доступа в СепВапк υ02030; и Жогта1к-подобный вирус ΝΕν^^^άά/273/1994/ϋδ, номер доступа в СепВапк ΑΡ414409; последовательности всех из которых (как внесено на дату подачи настоящей заявки) включены в данный документ посредством ссылки. Дополнительные последовательности норовируса раскрыты в следующих патентных публикациях: νθ 2005/030806, νθ 2000/79280, ДР 2002020399, υδ 2003129588, патент США № 6572862, νθ 1994/05700 и νθ 05/032457, все из которых включены в данный документ в полном объеме посредством ссылки. Для сравнения последовательностей и для рассмотрения генетического разнообразия и филогенетического анализа норовирусов см. также Сгееп е! а1. (2000) 1. 1п£ес1, ϋΐ8., νοί. 181(8ирр1. 2):δ322-330; Vаид е! а1. (1994) 1. Уио1., νοί. 68:59825990; Сйеп е! а1. (2004) 1. Уио1., νοί. 78: 6469-6479; СЬакгэтайу е! а1. (2005) 1. У1го1., νοί. 79: 554-568; Напзтап е! а1. (2006) 1. Сеп. Уио1., νοί. 87:909-919; Ви11 е! а1. (2006) 1. Сйп. Мюго., νοί. 44(2):327-333; δίν'Ьепда, е! а1. (2007) 1. Уио1., νοί. 81(18):9932-9941 и Рапкйаизег е! а1. (1998) 1. 1и£сск Όΐ8., νοί. 178:15711578. Все нуклеиновые кислоты и соответствующие аминокислотные последовательности каждого из них включены в полном объеме посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления для целей идентификации может использоваться шифр, и он имеет следующий порядок: вид хозяина, из которого вирус был выделен/сокращенное обозначение рода/сокращенное обозначение вида/название штамма/год обнаружения/страна происхождения (Сгееп е! а1., Нитап Сайсгу1ги8е8, ш Ые1Й8 У1го1оду, νοί. 1 841-874 (Кшре апй НоШеу, еййог8-ш-сЫе£, 4!й ей., Ырршсой \νί11ί;·ιιτΐ8 & νί1Κίπ8 2001)). Вирусные штаммы 4 генотипа геногруппы II (С11.4) (например, штаммы Нои81ои, Мшегуа (также известный как Ией Наад) и Ьаигеи8 (также известный как Уег8еке)) являются предпочтительными в некоторых вариантах осуществ- 5 029470
ления. По мере того как идентифицируют новые штаммы и их генетические последовательности становятся доступными, специалист в данной области сможет применять УЬР с использованием этих современных штаммов в вакцинах и способах по настоящему изобретению с помощью обычных методик. Таким образом, в настоящем изобретении предусмотрены УЬР, полученные из таких штаммов, в качестве подходящих антигенов для применения в вакцинах и способах, описанных в данном документе.
Норовирусные антигены могут быть в форме пептидов, белков или вирусоподобных частиц (УЕР). В предпочтительном варианте осуществления норовирусные антигены включают УЬР. Используемое в данном документе выражение "вирусоподобная частица (вирусоподобные частицы) или УЬР" относится к вирусоподобной частице (вирусоподобным частицам), ее фрагменту (фрагментам), комплексам или части (частям), полученным из последовательности, кодирующей капсидный белок норовируса, и включающим антигенную характеристику (характеристики), аналогичные таковым инфекционных частиц норовируса. Норовирусные антигены могут также быть в форме капсидных мономеров, капсидных мультимеров, белковых или пептидных фрагментов УЬР или их комплексов или смесей. Норовирусные антигенные белки или пептиды могут также находиться в денатурированной форме, их можно получить посредством способов, известных в уровне техники.
УЬР по настоящему изобретению могут быть образованы либо из норовирусного капсидного белка полной длины, такого как белки УР1 и/или УР2, либо определенных производных УР1 или УР2 посредством стандартных способов из уровня техники. Альтернативно, капсидный белок, применяемый для образования УЬР, является усеченным капсидным белком. В некоторых вариантах осуществления, например, по меньшей мере один из УЬР содержит усеченный белок УР1. В других вариантах осуществления все УЬР содержат усеченные белки УР1. Усечение может быть Ν- или С-концевым усечением. Усеченные капсидные белки являются подходящими функциональными производными капсидного белка. Функциональные производные капсидного белка способны вызывать иммунный ответ (при необходимости при наличии подходящего адъюванта) таким же образом, как вызывают иммунный ответ УЬР, состоящие из капсидного белка полной длины.
УЬР могут содержать главные белки УР1 и/или малые белки УР2. В некоторых вариантах осуществления каждая УЬР содержит белок УР1 и/или УР2 из норовируса только одной геногруппы, образуя моновалентную УЬР. Используемое в данном документе выражение "моновалентный" означает, что антигенные белки получены из норовируса одной геногруппы. Например, УЬР содержат УР1 и/или УР2 из штамма вируса геногруппы I (например, УР1 и УР2 из вируса Νοτ^αΙΕ). Предпочтительно УЬР преимущественно состоят из белков УР1. В одном варианте осуществления настоящего изобретения антиген представляет собой смесь моновалентных УЬР, где вакцина включает УЬР, состоящие из УР1 и УР2 из норовируса одной геногруппы, смешанные с УЬР, состоящими из УР1 и УР2 норовируса другой геногруппы (например, вируса Νοηναΐΐχ и вируса Ноиз1оп), полученными из нескольких вирусных штаммов. Исключительно в качестве примера вакцина может содержать моновалентные УЬР из одного или нескольких штаммов норовируса геногруппы I совместно с моновалентными УЬР из одного или нескольких штаммов норовируса геногруппы II. Штаммы могут быть выбраны на основе их преобладания в кровотоке в данное время. В определенных вариантах осуществления смесь УЬР норовируса включает вирусные штаммы ОЕ1 и ОП.4. Более предпочтительно смесь УЬР норовируса содержит последовательность штаммов Νοηναΐΐχ и консенсусную последовательность капсидного белка, полученную из норовирусов геногруппы II. Консенсусные последовательности капсидного белка, полученные из последовательностей циркулирующих норовирусов, и УЬР, созданные из таких последовательностей, описаны в Ж) 2010/017542, который включен в данный документ в полном объеме посредством ссылки. Например, в одном варианте осуществления консенсусная последовательность капсидного белка, полученная из вирусных штаммов 4 генотипа геногруппы II (ОП.4), содержит последовательность 8Ер ГО ΝΟ: 1. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления вакцина содержит смесь моновалентных УЕР, где одни моновалентные УЕР содержат капсидный белок из норовируса геногруппы I (например, Νοτ^αΙΕ), а другие моновалентные УЕР содержат капсидный белок с консенсусной последовательностью, содержащий
последовательность 8Ер ГО ΝΟ: 1.
ΜΚΜΑδδϋΑΝΡδϋθδΤΑΝΓνΡΕνΝΝΕνΜΑΓΕΡννθΑΑΙΑΑ ΡνΑΘΟΟΝνίΟΡλνίΚΝΝΡνΟΑΡΘΘΕΡΤνδΡΚΝΑΡΘΕΙΕλνδΑ ΡΕΟΡϋΕΝΡΥΕδΗΕΑΚΜΥΝΟΥΑΟΟΡΕνΟνίΕΑΟΝΑΡΤΑθΚ ΙΙΡΑΑνΡΡΝΡΡΤΕΘΕδΡδΟνΤΜΡΡΗΙΐνονΚΟΕΕΡνΕΙΡΕΡΟ νΚΝΝΡΥΗΥΝΟδΝϋΡΤΙΚΕΙΑΜΕΥΤΡΕΚΑΝΝΑΟϋϋνΡΤνδ СКУЕТКРЗРОРОР1РЕУРРТУЕЗКТКРРТУР1ЕТУЕЕМТХЗ ΚΡΡΙΡΕΕΚΕΡΤΘΡδΘΑΡννΟΡΟΝΘΚΟΤΤΟΘνΕΕΘΤΤΟΕδΡ νΝΙΟΤΡΚΘϋνΤΗΙΑΘΤΟΕΥΤΜΝΕΑδΟΝλνΝΝΥΟΡΤΕΕΙΡΑΡ ΕΘΤΡΟΡνΟΚΙΟΘνΕΤΟΤΤΚΘΟΘδΤΚΘΗΚΑΤνδΤΘδνΗΡΤΡ ΚΕΘδνΟΡδΤΟΤδΝΟΡΕΤΘΟΝΤΚΡΤΡνΘννΟϋΘδΤΤΗΟΝΕΡ ΟΟλννΕΡΟΥδΘΚϋδΗΝνΗΕΑΡΑνΑΡΤΡΡΘΕΟΕΕΡΡΚδΤΜΡ ΘΟδΘΥΡΝΜΝΕΟΟΕΕΡΟΕλΥνΟΗΡΥΟΕΑΑΡΑΟδΟνΑΕΕΚΡν ΝΡΟΤΟΚνΕΡΕΟΚΕΗΚδΘΥντνΑΗΤΘΟΗΟΕνίΡΡΝΘΥΡΚΡΟ δλΥνΝΟΡΥΤΕΑΡΜΘΝΘΤΘΚΚΚΑΕ (ЗЕЦ Ю ΝΟ: 1).
- 6 029470
Однако в альтернативном варианте осуществления настоящего изобретения УЪР могут быть мультивалентными УЪР, которые содержат, например, белки УР1 и/или УР2 из норовируса одной геногруппы, смешанные с белками УР1 и/или УР2 из норовируса второй геногруппы, где различные белки УР1 и УР2 не являются химерными белками УР1 и УР2, но связаны вместе в одной капсидной структуре с образованием иммуногенных УЬР. Используемое в данном документе выражение "мультивалентный" означает, что антигенные белки получены из двух или более геногрупп или штаммов норовируса. Мультивалентные УЬР могут содержать антигены УЬР, взятые из двух или более вирусных штаммов. Исключительно в качестве примера вакцина может содержать мультивалентные УЬР, состоящие из капсидных мономеров или мультимеров из одного или нескольких штаммов норовируса геногруппы I (например, вируса Νογ\υ;·ι11<) совместно с капсидными мономерами или мультимерами из одного или нескольких штаммов норовируса геногруппы II (например, вируса НоиЧоп). Предпочтительно мультивалентные УЬР содержат капсидные белки из штаммов норовируса ΝοΓγναΙΚ и НоиЧоп или других преобладающих в данное время циркулирующих штаммов.
Комбинирование моновалентных или мультивалентных УЬР в вакцине предпочтительно не будет снижать иммуногенность УЬР каждого типа. В частности, предпочтительно, чтобы между УЬР норовируса в комбинации по настоящему изобретению не было взаимного воздействия так, чтобы комбинированная вакцина УЬР по настоящему изобретению была способна стимулировать формирование иммунитета к инфекции с помощью норовируса каждого генотипа, представленного в вакцине. Соответственно иммунный ответ против данного типа УЬР в комбинации составляет по меньшей мере 50% иммунного ответа против того же типа УЬР при измерении отдельно, предпочтительно 100% или практически 100%. Иммунный ответ можно подходящим образом определять, например, посредством гуморальных иммунных ответов, как иллюстрируется в примерах данного документа.
Используемое в данном документе выражение "УЬР норовируса геногруппы I" относится либо к моновалентным, либо к мультивалентным УЬР, которые содержат капсидный белок, полученный из одного или нескольких штаммов норовируса геногруппы I. В некоторых вариантах осуществления УЬР норовируса геногруппы I содержат капсидный белок полной длины из норовируса геногруппы I (например, вируса ΝθΓ\ν;·ι11<). В других вариантах осуществления УЬР норовируса геногруппы I содержат капсидный белок с консенсусной последовательностью, полученный из различных штаммов геногруппы I. Штаммы геногруппы I, из которых получена консенсусная последовательность капсидного белка, могут входить в один и тот же генотип или генетический кластер или в разные генотипы или генетические кластеры. Аналогично, используемое в данном документе выражение "УЬР норовируса геногруппы II" относится либо к моновалентным, либо к мультивалентным УЬР, которые содержат капсидный белок, полученный из одного или нескольких штаммов норовируса геногруппы II. В некоторых вариантах осуществления УЬР норовируса геногруппы II содержат капсидный белок полной длины из норовируса геногруппы II (например, вируса Ьаигепк или Мшегуа). В других вариантах осуществления УЬР норовируса геногруппы II содержат капсидный белок с консенсусной последовательностью, полученный из различных штаммов геногруппы II. Штаммы геногруппы II, из которых получена консенсусная последовательность капсидного белка, могут входить в один и тот же генотип или генетический кластер или в разные генотипы или генетические кластеры. В одном варианте осуществления УЬР норовируса геногруппы II содержат консенсусную последовательность капсидного белка из норовируса 4 генотипа геногруппы II (ОП.4). Таким образом, в некоторых вариантах осуществления УЪР норовируса геногруппы II содержат последовательность капсидного белка 8ΕΟ ГО ΝΟ: 1.
Мультивалентные УЪР можно получать посредством раздельной экспрессии отдельных капсидных белков с последующим комбинированием для получения УЪР. Альтернативно, множество капсидных белков может экспрессироваться в одной и той же клетке из одного или нескольких ДНК-конструктов. Например, клетки-хозяева можно трансформировать или трансфицировать с помощью множества ДНКконструктов, причем каждый вектор кодирует отличный капсидный белок. Альтернативно, можно применять один вектор со множеством генов капсидных белков, регулируемых общим промотором или несколькими отдельными промоторами. ΓΚΕδ-элементы также можно при необходимости внедрять в вектор. С помощью таких стратегий экспрессии совместно экспрессируемые капсидные белки можно совместно очищать для дальнейшего образования УЬР, или они могут самопроизвольно образовывать мультивалентные УЪР, которые можно затем очищать.
Предпочтительный способ получения мультивалентных УЬР включает получение капсидных белков или производных УЪР, таких как белки УР1, из норовирусов различных генотипов, смешивание белков и сборку белков с получением мультивалентных УЪР. Белки УР1 могут быть в форме неочищенного экстракта, могут быть частично очищенными или очищенными перед смешиванием. Собранные моновалентные УЪР различных геногрупп можно разбирать, смешивать вместе и собирать заново в мультивалентные УЬР. Предпочтительно белки или УЪР, по меньшей мере частично очищены перед комбинированием. Необязательно дополнительное очищение мультивалентных УЪР можно проводить после сборки.
В подходящем случае УЪР по настоящему изобретению получают, разбирая и заново собирая УЪР для обеспечения гомогенных и чистых УЪР. В одном варианте осуществления мультивалентные УЪР
- 7 029470
можно получать, разбирая две или более УЬР, с последующим комбинированием разобранных компонентов УЪР в любой подходящий момент до новой сборки. Этот подход можно применять, когда УЬР образуются самопроизвольно из экспрессированного белка УР1, что происходит, например, у некоторых штаммов дрожжей. В случае, когда экспрессия белка УР1 не приводит к самопроизвольному образованию УЬР, получения белков УР1 или капсомеров можно комбинировать до сборки в УЬР.
В случае, когда используют мультивалентные УЬР, компоненты УЬР предпочтительно смешивают в процентном соотношении, в котором они должны быть в конечных смешанных УЬР. Например, смесь одинакового количества частично очищенного белка УР1 из вирусов ΝοηναΙΚ и НоиЧоп (или других штаммов норовируса) обеспечивает мультивалентные УЬР с приблизительно равными количествами каждого белка.
Вакцины, содержащие мультивалентные УЬР, можно стабилизировать с помощью растворов, известных в уровне техники, таких как растворы из νθ 98/44944, \νϋ 00/45841, включенных в данный документ посредством ссылки.
Вакцины по настоящему изобретению могут содержать другие белки или фрагменты белков в дополнение к белкам или производным УР1 и УР2 норовируса. Другие белки или пептиды можно также вводить вместе с вакциной по настоящему изобретению. Необязательно вакцину можно также составлять или вводить вместе с антигенами, не являющимися норовирусными антигенами. Соответственно эти антигены могут обеспечивать защиту от других заболеваний.
Белок УР1 или функциональное производное белка в подходящем случае способны образовывать УЬР, и образование УЪР можно оценивать с помощью стандартных техник, таких как, например, эксклюзионная хроматография, электронная микроскопия и динамическое рассеяние лазерного излучения.
Молекулы антигена по настоящему изобретению можно получать с помощью выделения и очищения из организмов, в которых они встречаются в природе, или их можно получать с помощью техник рекомбинации. Предпочтительно антигены УЪР норовируса получают из клеток насекомых, таких как клетки 8Г9 или Н5, хотя можно применять любые подходящие клетки, такие как клетки Е. сой или дрожжей, например 8. сегеу181ае, 8. рошЬе, РюЫа раЧоп или другие системы экспрессии на основе РюЫа, системы экспрессии на основе клеток млекопитающих, такие как системы экспрессии на основе СНО или НЕК. При получении с помощью рекомбинантного способа или с помощью синтеза можно производить одну или несколько вставок, делеций, инверсий или замещений аминокислот, составляющих пептид. Каждый из вышеуказанных антигенов предпочтительно применяют в по сути чистом состоянии.
Процедуры получения УЪР норовируса в культуре клеток насекомых были ранее раскрыты в патенте США № 6942865, который включен в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки. Вкратце, клонируют кДНК от З'-конца генома, содержащего ген вирусного капсида (ОКЕ2) и малый структурный ген (ОРЕЗ). Рекомбинантные бакуловирусы, несущие гены вирусного капсида, конструируют на основе клонированных кДНК. УЪР норовируса получают в культурах клеток насекомых 8Г9 или Н5.
В некоторых вариантах осуществления вакцина содержит один или несколько адъювантов в комбинации с норовирусным антигеном. Большинство адъювантов содержат вещество, предназначенное защищать антиген от быстрого катаболизма, такое как гидроксид алюминия или минеральное масло, и стимулятор иммунных ответов, такой как белки, полученные из Вогба!е11а рег1и8818 или МусоЬас!епит 1иЬегси1о818. Подходящие адъюванты коммерчески доступны, как, например, неполный адъювант Фрейнда и полный адъювант (РГсо БаЬогаЮпеь Детройт, Мичиган); адъювант Мегск Абщуап! 65 (Мегск апб Сотрапу, 1пс., Рахвей, Нью-Джерси); соли алюминия, такие как гель гидроксида алюминия (квасцы) или фосфат алюминия; соли кальция, железа или цинка; нерастворимая суспензия ацилированного тирозина, ацилированных сахаров; катионно- или анионно-полученные полисахариды; полифосфазены; биоразлагаемые микросферы и Ош1 А.
Подходящие адъюванты также включают без ограничений агонисты !о11-подобных рецепторов (ТЬР), в частности агонисты !о11-подобных рецепторов 4 типа (ТЬР-4) (например, монофосфорил-липид А (МРЬ), синтетический липид А, миметики или аналоги липида А), соли алюминия, цитокины, сапонины, производные мурамилдипептида (МЭР), СрО-олигонуклеотиды, липополисахарид (ЬР8) грамотрицательных бактерий, полифосфазены, эмульсии, виросомы, кохлеаты, микрочастицы сополимеров(лактида и гликолида) (РБО). полоксамерные частицы, микрочастицы, липосомы, эмульсии "масло в воде", МЕ59 и сквален. В некоторых вариантах осуществления адъюванты не являются экзотоксинами бактериального происхождения. Предпочтительные адъюванты включают адъюванты, которые стимулируют ответ по ТЫ-типу, такие как ЗЭМРЬ или 0821.
Монофосфорил-липид А (МРЬ), нетоксичное производное липида А, полученного из 8а1топе11а, является сильным агонистом ТЬР-4, который был разработан в качестве адъюванта вакцины (Еуапк е! а1. 2003). В доклинических исследованиях на мышах было показано, что интраназальное введение МРЬ усиливает секреторные, а также системные гуморальные ответы (Ва1бпбде е! а1. 2000; Уанд е! а1. 2002). Также была доказана его безопасность и эффективность в качестве адъюванта вакцины в клинических исследованиях на более 120000 пациентов (Ва1бпск е! а1., 2002; Ва1бпбде е! а1. 2004). МРЬ стимулирует индукцию врожденного иммунитета посредством рецептора ТЬР-4 и, таким образом, способен стимули- 8 029470
ровать формирование неспецифических иммунных ответов против широкого спектра инфекционных патогенов, в том числе грамотрицательных и грамположительных бактерий, вирусов и паразитов (ВаШпйде с1 а1. 2004; Реткшд с1 а1. 2002). Включение МРЬ в составы вакцин должно обеспечивать быструю индукцию врожденных ответов, стимулируя формирование неспецифических иммунных ответов, после введения вирусной провокационной пробы и при этом усиливать специфические ответы, вызываемые антигенными компонентами вакцины.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет вакцину, содержащую монофосфорил-липид А (МРЬ) или 3-де-О-ацилированный монофосфорил-липид А (ЗО-МРЬ) в качестве стимулятора адаптивного и врожденного иммунитета. В химическом отношении 30-МРБ представляет собой смесь З-де-О-апилированного монофосфорил-липида Ас 4, 5 или 6 ацилированными цепями. Предпочтительная форма З-де-О-ацилированного монофосфорил-липида А раскрыта в Европейском патенте 0 689 454 В1 (ЗтйНКБие ВеееНат ВюКщсаК 8А), который включен в данный документ посредством ссылки. В другом варианте осуществления настоящее изобретение представляет вакцину, содержащую синтетический липид А, миметики или аналоги липида А, такие как РЕТ липид А от ВюМйа, или синтетические производные, разработанные таким образом, что функционируют как агонисты ТЬК-4.
В определенных вариантах осуществления вакцина содержит два адъюванта. Комбинацию адъювантов можно выбрать из комбинаций, описанных выше. В одном конкретном варианте осуществления два адъюванта представляют собой МРЬ и гидроксид алюминия (например, квасцы). В другом конкретном варианте осуществления два адъюванта представляют собой МРЬ и масло.
Выражение "эффективное количество адъюванта" будет хорошо понятно специалисту в данной области и включает количество одного или нескольких адъювантов, которое способно стимулировать иммунный ответ на введенный антиген, т.е. количество, которое увеличивает иммунный ответ на введенную композицию антигена, который измеряют на основе уровней 1§А в смывах из носовой полости, уровней сывороточного 1дО или 1дМ или В- и Т-клеточной пролиферации. Подходящее эффективное увеличение уровней иммуноглобулинов включает более чем на 5%, предпочтительно более чем на 25% и, в частности, более чем на 50% по сравнению с такой же композицией антигена без какого-либо адъюванта.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет вакцину, составленную для парентерального введения, где вакцина включает по меньшей мере два типа УЪР норовируса в комбинации с гидроксидом алюминия и буфером. Буфер может быть выбран из группы, включающей Ьгистидин, имидазол, янтарную кислоту, трис, лимонную кислоту, бис-трис, Р1РЕ8, МЕ8, НЕРЕ8, глицинамид и трицин. В одном варианте осуществления буфер представляет собой Ь-гистидин или имидазол. Предпочтительно буфер присутствует в концентрации от приблизительно 15 до приблизительно 50 мМ, более предпочтительно от приблизительно 18 до приблизительно 40 мМ или наиболее предпочтительно от приблизительно 20 до приблизительно 25 мМ. В некоторых вариантах осуществления рН композиции антигена или вакцины составляет от приблизительно 6,0 до приблизительно 7,0, или от приблизительно 6,2 до приблизительно 6,8, или приблизительно 6,5. Вакцина может представлять собой водный состав. В некоторых вариантах осуществления вакцина представляет собой лиофилизированный порошок и ее ресуспендируют с получением водного состава.
В определенных вариантах осуществления вакцина дополнительно содержит по меньшей мере один адъювант в дополнение к УЪР норовируса двух или более типов, гидроксиду алюминия и буферу. Например, адъювант может представлять собой агонист ΐοίί-подобных рецепторов, такой как МРЬ, флагеллин, СрО-олигонуклеотиды, синтетический липид А, или миметики, или аналоги липида А. В одном конкретном варианте осуществления адъювант представляет собой МРЬ.
УЪР норовируса, которые включают в вакцины по настоящему изобретению, могут представлять собой любые УЪР, описанные в данном документе. В одном варианте осуществления каждый из двух типов УЪР норовируса содержит капсидный белок различных геногрупп (например, геногруппы I и геногруппы II). Например, УЪР норовируса одного типа содержат капсидный белок, полученный из норовируса геногруппы I, а УЪР норовируса другого типа содержат капсидный белок, полученный из норовируса геногруппы II. В одном варианте осуществления УЪР норовируса одного типа содержат капсидный белок из вируса ΝοπγπΙΕ а УЪР норовируса другого типа содержат капсидный белок с консенсусной последовательностью, полученный из норовирусов 4 генотипа геногруппы II (например, капсидный белок, содержащий последовательность 8ЕО ГО ΝΟ: 1). Вакцина может содержать от приблизительно 5 до приблизительно 200 мкг УЪР норовируса каждого типа, более предпочтительно от приблизительно 15 до приблизительно 50 мкг УЪР норовируса каждого типа. В некоторых вариантах осуществления доза УЪР норовируса одного типа отличается от дозы УЪР норовируса другого типа. Например, в определенных вариантах осуществления вакцина содержит от приблизительно 5 до приблизительно 15 мкг УЪР геногруппы I и от приблизительно 15 до приблизительно 50 мкг УЪР геногруппы II. В других вариантах осуществления вакцина содержит от приблизительно 15 до приблизительно 50 мкг УЪР геногруппы I и от приблизительно 50 до приблизительно 150 мкг УЪР геногруппы II.
В некоторых вариантах осуществления вакцины дополнительно содержат фармацевтически приемлемую соль, включая без ограничений хлорид натрия, хлорид калия, сульфат натрия, сульфат аммония и
- 9 029470
цитрат натрия. В одном варианте осуществления фармацевтически приемлемая соль представляет собой хлорид натрия. Концентрация фармацевтически приемлемой соли может составлять от приблизительно 10 до приблизительно 200 мМ с предпочтительными концентрациями в диапазоне от приблизительно 100 до приблизительно 150 мМ. Предпочтительно вакцины по настоящему изобретению содержат менее 2 мМ свободного фосфата. В некоторых вариантах осуществления вакцины содержат менее 1 мМ свободного фосфата. Вакцины могут также дополнительно содержать другие фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как сахара (например, сахароза, трегалоза, маннит) и поверхностноактивные вещества.
Как рассматривалось в данном документе, вакцины по настоящему изобретению можно составлять для введения в виде составов вакцины. Используемое в данном документе выражение "вакцина" относится к составу, который содержит УЪР норовируса или другие норовирусные антигены по настоящему изобретению, описанные выше, который представлен в форме, которую можно вводить позвоночным, в частности человеку, и который индуцирует защитный иммунный ответ, достаточный для индукции иммунитета для предупреждения и/или облегчения течения норовирусной инфекции или индуцируемой норовирусом болезни и/или для уменьшения по меньшей мере одного симптома норовирусной инфекции или болезни.
Используемое в данном документе выражение "иммунный ответ" относится как к гуморальному иммунному ответу, так и к клеточно-опосредованному иммунному ответу. Гуморальный иммунный ответ включает стимуляцию продукции антител В-лимфоцитами, которые, например, нейтрализуют возбудителей инфекции, препятствуют проникновению возбудителей инфекции в клетки, препятствуют репликации указанных возбудителей инфекции и/или защищают клетки-хозяева от инфекции и разрушения. Клеточно-опосредованный иммунный ответ относится к иммунному ответу, опосредованному Тлимфоцитами и/или другими клетками, такими как макрофаги, направленному против возбудителя инфекции, проявляющемуся у позвоночных (например, человека), который предупреждает или облегчает течение инфекции или уменьшает по меньшей мере один ее симптом. В частности, "защитный иммунитет" или "защитный иммунный ответ" относится к иммунитету или стимулированию формирования иммунного ответа против возбудителя инфекции, проявляющемуся у позвоночных (например, человека), который предупреждает или облегчает течение инфекции или уменьшает по меньшей мере один ее симптом. В частности, об индукции защитного иммунного ответа при введении вакцины свидетельствует устранение или уменьшение проявления одного или нескольких симптомов острого гастроэнтерита или уменьшение длительности или тяжести таких симптомов. Клинические симптомы гастроэнтерита, вызванного норовирусом, включают тошноту, диарею, жидкий стул, рвоту, лихорадку и общее недомогание. Защитный иммунный ответ, который уменьшает или устраняет симптомы заболевания, будет уменьшать или останавливать распространение эпидемии норовируса в популяции. Получение вакцины в целом описано в Уассше Эсмдп ("Тйе кийипИ апб абщуаШ арргоаск" (ебк Ро\\е11 М.Р. & Ие^тап М.1.) (1995) Р1епит Ргекк Ией Уогк). Вакцины по настоящему изобретению можно составлять, например, для доставки в одну или несколько из слизистых ротовой полости, желудочно-кишечного тракта и дыхательных путей (например, носовой полости). Вакцины по настоящему изобретению можно составлять, например, для доставки посредством инъекции, такой как парентеральная инъекция (например, внутривенная, подкожная, внутрикожная или внутримышечная инъекция).
В случае, когда вакцина предназначена для доставки в слизистую дыхательных путей (например, носовой полости), ее обычно составляют в виде водного раствора для введения в форме аэрозоля, или назальных капель, или, альтернативно, в форме сухого порошка, например, для быстрого накопления в носовом ходе. Вакцины для введения в форме назальных капель могут содержать одно или несколько вспомогательных веществ таких, какие обычно включают в подобные вакцины, например консерванты, средства, регулирующие вязкость, средства, регулирующие тоничность, буферные средства и т.п. Средствами для изменения вязкости могут быть микрокристаллическая целлюлоза, хитозан, крахмалы, полисахариды и т.п. Вакцины для введения в форме сухого порошка могут также содержать одно или несколько вспомогательных веществ, какие обычно включают в подобные вакцины, например средства, регулирующие мукоадгезивные свойства, наполнители и средства для придания порошку соответствующих характеристик текучести и объема. Наполнители и средства, регулирующие текучесть и объем порошка, могут включать маннит, сахарозу, трегалозу и ксилит.
В случае, когда вакцина предназначена для парентеральной инъекции, такой как внутривенная (ί.ν.), подкожная (к.с), внутрикожная или внутримышечная (кт.) инъекция, ее обычно составляют в форме жидкой суспензии (т.е. водного состава), содержащей по меньшей мере один тип УЪР норовируса и необязательно по меньшей мере один адъювант. В одном варианте осуществления адъювант может представлять собой МРЬ. В другом варианте осуществления в жидкой вакцине, составленной для парентерального введения, может содержаться более одного адъюванта. В предпочтительном варианте осуществления жидкая вакцина, составленная для парентерального введения (например, составленная для 1.т., ί.ν. или к.с. введения), содержит УЪР норовируса геногруппы I и/или геногруппы II с гидроксидом алюминия (например, квасцами) и монофосфорил-липидом А (МРЬ) в качестве адъювантов. В одном варианте осуществления жидкий состав для парентерального введения содержит антиген (антигены) геног- 10 029470
рупп норовируса, такой как один или несколько типов УЪР норовируса, описанных в данном документе, МРЬ, гидроксид алюминия и буфер. В другом варианте осуществления жидкий состав для парентерального введения содержит антиген (антигены) геногрупп норовируса, МРЬ, масло и буфер. В определенных вариантах осуществления буфер в составах вакцины для парентерального введения представляет собой Ь-гистидин или имидазол. Парентеральное введение жидких вакцин можно осуществлять посредством иглы и шприца, как хорошо известно в уровне техники.
В определенных вариантах осуществления вакцина по настоящему изобретению для стимулирования формирования защитного иммунного ответа против норовируса у людей содержит УЬР норовируса геногруппы I и/или геногруппы II в дозе не более 150 мкг. Например, в некоторых вариантах осуществления вакцина содержит не более 150, не более 100, не более 50, не более 25, не более 15 или не более 10 мкг УЬР норовируса геногруппы I. В других вариантах осуществления вакцина содержит не более 150, не более 100, не более 50, не более 25, не более 15 или не более 10 мкг УЬР норовируса геногруппы II. В определенных вариантах осуществления вакцина содержит не более 150 мкг каждого из УЬР норовируса геногруппы I и геногруппы II. В таких вариантах осуществления доза УЬР норовируса геногруппы I и УЬР геногруппы II может быть одинаковой или различной. Например, в одном варианте осуществления вакцина может содержать не более 50 мкг УЬР норовируса геногруппы I и не более 150 мкг УЬР норовируса геногруппы II. В другом варианте осуществления вакцина может содержать не более 25 мкг УЬР норовируса геногруппы I и не более 50 мкг УЬР норовируса геногруппы II. В других вариантах осуществления вакцина может содержать не более 15 мкг УЬР норовируса геногруппы I и не более 50 мкг УЬР норовируса геногруппы II. В еще других вариантах осуществления вакцина может содержать не более 25 мкг УЬР норовируса геногруппы I и не более 150 мкг УЬР норовируса геногруппы II.
УЬР норовируса геногруппы I и геногруппы II могут быть получены из любого штамма норовируса, описанного в данном документе. В одном варианте осуществления УЬР норовируса геногруппы I представляют собой УЬР 1 генотипа геногруппы I (ΟΣ.1) (т.е. содержат капсидный белок из норовируса ΟΣ.1). В другом варианте осуществления УЬР норовируса геногруппы I представляют собой УЬР вируса Νοτ\уа1к. В другом варианте осуществления УЬР норовируса геногруппы II представляют собой УЬР 4 генотипа геногруппы II (ОП.4). В другом варианте осуществления УЬР норовируса геногруппы II представляют собой УЬР, полученные в результате экспрессии консенсусной последовательности норовируса геногруппы II. В конкретном варианте осуществления УЬР норовируса геногруппы II содержат капсидный белок с последовательностью §Е0 ГО ΝΟ: 1.
Вакцины, описанные ранее в данном документе, можно лиофилизировать и хранить в безводном состоянии до того, как они будут готовы к использованию, и тогда их ресуспендируют с помощью разбавителя. Альтернативно, различные компоненты вакцины можно хранить отдельно в наборе (любой или все компоненты можно лиофилизировать). Компоненты можно оставлять в лиофилизированной форме для сухого состава или можно ресуспендировать для жидких составов и либо смешивать перед применением, либо вводить пациенту отдельно. В некоторых вариантах осуществления вакцины хранятся в наборах в форме жидких составов, и к ним могут прилагаться устройства доставки, такие как шприцы с иглами. В других вариантах осуществления жидкие вакцины можно хранить в устройствах доставки в наборе. Например, набор может содержать предварительно заполненные шприцы, автоинжекторы или устройства шприц-ручки, содержащие жидкий состав вакцины, описанный в данном документе.
Лиофилизация вакцин хорошо известна в уровне техники. Обычно жидкий антиген лиофилизируют в присутствии средств для защиты антигена во время процесса лиофилизации и для получения осадка с необходимыми характеристиками порошка. Сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или лактоза (присутствующие в начальной концентрации 10-200 мг/мл) обычно применяют для криозащиты белковых антигенов и для получения лиофилизированного осадка с необходимыми характеристиками порошка. Лиофилизация вакцин теоретически дает в результате более устойчивую вакцину.
Количество антигена в каждой вакцине выбирают как количество, которое индуцирует сильный иммунный ответ без значительных неблагоприятных побочных эффектов. Такое количество будет варьировать в зависимости от того, какой специфический антиген (антигены) используют, от пути введения и используемых адъювантов. В общем, доза, которую вводят пациенту, согласно настоящему изобретению должна быть достаточной для того, чтобы вызвать защитный иммунный ответ у пациента через какое-то время или чтобы индуцировать выработку антигенспецифичных антител. Таким образом, вакцину вводят пациенту в количестве, достаточном для стимулирования формирования иммунного ответа на специфические антигены и/или для предупреждения, облегчения, уменьшения или излечения симптомов и/или осложнений заболевания или инфекции и, таким образом, уменьшения или остановки распространения эпидемии норовируса в популяции. Количество, достаточное для выполнения вышеуказанного, определяют как "терапевтически эффективную дозу".
Вакцины по настоящему изобретению можно вводить посредством пути введения через слизистые или не через слизистые. Эти пути введения могут включать ίη νίνο введение посредством парентеральной инъекции (например, внутривенной, подкожной, внутрикожной и внутримышечной), или другие традиционные прямые пути, такие как буккальный/сублингвальный, ректальный, пероральный, назальный, местный (такой как трансдермальный и глазной), вагинальный, легочный, интраартериальный, вну- 11 029470
трибрюшинный, интраокулярный или интраназальный пути, или введение непосредственно в конкретную ткань. Другие подходящие пути введения включают чрескожный, субдермальный и посредством суппозитория. В одном варианте осуществления вакцину вводят посредством парентерального пути введения, такого как внутривенный, подкожный, внутрикожный или внутримышечный. В определенных вариантах осуществления вакцину вводят посредством внутримышечного пути введения. Введение можно осуществлять просто путем непосредственного введения с помощью иглы, катетера или сходного устройства (например, предварительно заполненных шприцев или автоинжекторов) одномоментно или в разные моменты времени. Другие составы для парентерального введения могут быть доставлены подкожно или внутрикожно посредством микроинъекции или способов доставки с использованием трансдермального пластыря.
В настоящем изобретении представлены способы стимулирования формирования защитного иммунитета против норовируса у субъекта, включающие парентеральное введение субъекту не более однократной дозы вакцины по настоящему изобретению, где указанная вакцина содержит УЪР норовируса геногруппы I и/или геногруппы II, описанные в данном документе, и необязательно по меньшей мере один адъювант. В таких вариантах осуществления вакцина однократной дозы индуцирует по меньшей мере трехкратное увеличение титра норовирусспецифичных сывороточных антител по сравнению с титром у человека до введения вакцины. В некоторых вариантах осуществления вакцина однократной дозы индуцирует по меньшей мере шестикратное увеличение титра норовирусспецифичных сывороточных антител по сравнению с титром у человека до введения вакцины. В других вариантах осуществления вакцина однократной дозы индуцирует титр норовирусспецифичных сывороточных антител, сопоставимый с титром антител, индуцируемым контактом с живым норовирусом при природной инфекции, т.е. более чем десятикратное увеличение титра норовирусспецифичных сывороточных антител по сравнению с титром у человека до введения вакцины. В определенных вариантах осуществления вакцина однократной дозы индуцирует увеличение титра норовирусспецифичных сывороточных антител в течение семи дней после введения вакцины. Предпочтительно вакцину однократной дозы вводят посредством внутривенного, подкожного или внутримышечного пути введения. В определенном варианте осуществления вакцину однократной дозы вводят человеку внутримышечно.
Как описано в данном документе, в некоторых вариантах осуществления вакцины однократной дозы, подходящие для применения в способе, содержат не более 150 мкг каждого из УЪР норовируса геногруппы I и/или геногруппы II. Например, в некоторых вариантах осуществления вакцина содержит не более 150, не более 100, не более 50, не более 25, не более 15 или не более 10 мкг УЪР норовируса геногруппы I. В других вариантах осуществления вакцина содержит не более 150, не более 100, не более 50, не более 25, не более 15 или не более 10 мкг УЪР норовируса геногруппы II. В определенных вариантах осуществления вакцина содержит не более 50 мкг каждого из УЪР норовируса геногруппы I и геногруппы II. В вариантах осуществления, в которых вакцина однократной дозы содержит УЪР норовируса и геногруппы I, и геногруппы II, доза УЪР норовируса геногруппы I и УЪР геногруппы II может быть одинаковой или различной. Например, в одном варианте осуществления вакцина может содержать не более 50 мкг УЪР норовируса геногруппы I и не более 150 мкг УЪР норовируса геногруппы II. В другом варианте осуществления вакцина может содержать не более 25 мкг УЪР норовируса геногруппы I и не более 50 мкг УЪР норовируса геногруппы II. В других вариантах осуществления вакцина может содержать не более 15 мкг УЪР норовируса геногруппы I и не более 50 мкг УЪР норовируса геногруппы II. В еще других вариантах осуществления вакцина может содержать не более 25 мкг УЪР норовируса геногруппы I и не более 150 мкг УЪР норовируса геногруппы II.
В одном варианте осуществления способа субъект является человеком, и вакцина обеспечивает защиту от одного или нескольких симптомов норовирусной инфекции. Хотя в других источниках и сообщалось о способах индукции иммунного ответа с помощью норовирусных антигенов (см. публикацию заявки на патент США № И8 2007/0207526), показатели защитного иммунного ответа против норовируса у людей все еще четко не определены (НсгЬ51-Кга1оус1/ е! а1. (2010) Ехрей Рсу. Уассшек 9(3), 299-307). В отличие от некоторых вакцин, лицензированных в настоящее время в США, где эффективность вакцины коррелирует с сывороточными антителами, исследования показали, что маркеры иммунного ответа, такие как увеличение титров сывороточных антител фС к вирусу ΝοπναΙΕ не связаны с защитным иммунитетом у людей (1оЬи8ои е! а1. (1990) 1. ШСсйоик Эйсахсх 161: 18-21). Более того, другое исследование, в котором изучали реакцию людей на введение провокационной пробы с вирусом Νογ\υ;·ι1Ε показало, что восприимчивость к инфекции Νογ\υ;·ι11< является мультифакториальной и включает такие факторы, как секреторный статус и иммунологическая память слизистых (ЬшбектИй е! а1. (2003) №йиге Мебюше 9: 548-553).
Поскольку норовирус невозможно культивировать ίη νί!το, то анализы нейтрализации вирусов в настоящее время не доступны. Функциональным анализом, который служит заменой анализу нейтрализации, является анализ ингибирования гемагглютинации (НА!) (см. пример 1). ΗΑI позволяет измерять способность антител, индуцированных норовирусной вакциной, ингибировать агглютинацию эритроцитов, покрытых антигенами, УЪР норовируса, так как УЪР норовируса связываются с антигенами эритроцитов (например, антигенами группы крови). Данный анализ также известен как анализ блокирования
- 12 029470
углеводов, поскольку он показывает функциональную способность антитела блокировать связывание вируса или УЪР с углеводами антигенов группы крови на поверхности эритроцитов. В данном анализе определенное количество УЪР норовируса смешивают с определенным количеством эритроцитов и сыворотки от иммунизированных субъектов. Если образец сыворотки содержит функциональные антитела, антитела будут связываться с УЪР и, таким образом, ингибировать агглютинацию эритроцитов. Используемое в данном документе выражение "функциональные антитела" относится к антителам, способным ингибировать взаимодействие между частицами норовируса и антигенами эритроцитов. Другими словами, титр функциональных антител равен титру антител, блокирующих антигены группы крови (НВСЛ) или углеводы. Сывороточный титр норовирусспецифичных функциональных антител можно измерять с помощью анализа НА1, описанного выше. Сывороточный титр норовирусспецифичных функциональных антител можно также измерять с помощью анализа на основе ЕЬ18А, в котором углеводный Н-антиген связан с лунками микротитровального планшета и связывание УЪР норовируса с Н-антигеном выявляют в присутствии сыворотки (см. пример 1 и Кееск е1 а1. (2010) 1. 1пГес1 Όίδ, νοί. 202(8): 1212-1218). Увеличение уровня норовирусспецифичных функциональных антител может служить показателем защитного иммунного ответа. Таким образом, в одном варианте осуществления введение вакцины стимулирует формирование защитного иммунитета, что включает увеличение сывороточного титра норовирусспецифичных функциональных антител по сравнению с сывороточным титром у человека, не получавшего вакцину. Сывороточный титр норовирусспецифичных функциональных антител, служащий показателем защитного иммунного ответа, предпочтительно представляет собой средний геометрический титр, составляющий более 40, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200 по результатам измерения с помощью анализа НА1, или средний геометрический титр блокирующих антител (ВТ)50 (50% ингибирование связывания Нантигена с УЪР норовирусом) составляет более 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 или 500 по результатам измерения с помощью анализа связывания Н-антигена. В одном варианте осуществления сывороточный титр норовирусспецифичных функциональных антител представляет собой средний геометрический титр, составляющий более 40 по результатам измерения с помощью анализа НАЬ В другом варианте осуществления сывороточный титр норовирусспецифичных функциональных антител представляет собой средний геометрический титр, составляющий более 100 по результатам измерения с помощью анализа НАЬ В другом варианте осуществления сывороточный титр норовирусспецифичных функциональных антител представляет собой средний геометрический титр ВТ50, составляющий более 100 по результатам измерения с помощью анализа связывания Н-антигена. В еще другом варианте осуществления сывороточный титр норовирусспецифичных функциональных антител представляет собой средний геометрический титр ВТ50, составляющий более 200 по результатам измерения с помощью анализа связывания Н-антигена.
В дополнительном аспекте введением вакцины стимулируют формирование защитного иммунитета, включая 1дА-опосредованный мукозный иммунный ответ и 1дО-опосредованный системный иммунный ответ, посредством парентерального введения (предпочтительно внутримышечного) субъекту не более однократной дозы антигенной вакцины, содержащей один или несколько типов норовирусных антигенов и необязательно по меньшей мере один эффективный адъювант. Изобретатели обнаружили, что парентеральное введение норовирусных вакцин, описанных в данном документе, индуцирует сильный 1дА-опосредованный ответ в дополнение к сильному 1§О-опосредованному ответу. Как правило, сильные 1дА-опосредованные ответы наблюдаются только когда вакцины вводят посредством пути введения через слизистые.
В определенных вариантах осуществления введение вакцины стимулирует формирование защитного иммунитета, что включает увеличение уровня клеток, секретирующих норовирусспецифичные антитела класса 1дА, в крови по сравнению с уровнем у человека, не получавшего вакцину. В некоторых вариантах осуществления введение вакцины стимулирует формирование защитного иммунитета, что включает увеличение уровня клеток, секретирующих норовирусспецифичные антитела класса 1дА, в крови по сравнению с уровнем у человека до получения вакцины. В одном варианте осуществления клетками, секретирующими норовирусспецифичные антитела класса 1дА, являются ССК10+, СИ19+, СИ27+, СИ62Ь+ и α4β7+. Клетки, секретирующие антитела, с данным маркерным профилем способны к хоумингу как в периферическую лимфоидную ткань, такую как пейеровы бляшки в кишечнике, так и в лимфоидную ткань слизистой, такой как слизистая кишечника. В одном варианте осуществления количество ССК10+, СИ19+, СИ27+, СИ62Ь+ и α4β7+ клеток, секретирующих антитела класса 1дА, составляет более приблизительно 500, приблизительно 700, приблизительно 1000, приблизительно 1500 или более приблизительно 2000 клеток на 1х106 моноцитов периферической крови. В другом варианте осуществления клетками, секретирующими норовирусспецифичные антитела класса 1дА, являются ССК10+, СИ19+, СИ27+, СИ62Ь- и α4β7+. Σ секретирующих антитела клеток с данным маркерным профилем обычно наблюдается хоуминг только в участки слизистой, и они могут служить показателями вторичного В-клеточного ответа. В некоторых вариантах осуществления, в которых вакцину вводят внутримышечно, количество ССК10+, СИ19+, СИ27+, СИ62Ь- и α4β7+ клеток, секретирующих антитела класса 1дА, составляет более приблизительно 5000, приблизительно 6500, приблизительно 7000, приблизитель- 13 029470
но 10000, приблизительно 13000, приблизительно 15000 или более приблизительно 20000 клеток на 1х 106 моноцитов периферической крови.
Аналогичные результаты получали с вакцинами против других вирусов, таких как ротавирус. В отношении ротавирусной вакцины существуют разногласия по поводу того, вовлечены ли сывороточные антитела непосредственно в защиту или только отражают недавнюю инфекцию (Лайд, 2002; Ргаисо, 2006). Определение таких взаимосвязей с защитой особенно затруднительно в отношении острых кишечных инфекций, таких как ротавирусные или норовирусные, поскольку доклинические исследования, по результатам которых можно сделать вывод о защитном эффекте, могут быть многофакторными и учитывать защитные свойства слизистых (такие как опосредованные 1дА кишечника), выработку цитокинов и клеточный иммунитет. Сложность измерения таких иммунных ответов во время клинических исследований и слабая взаимосвязь с данными измерений сывороточных антител подразумевают, что эффективность вакцины против этих типов вирусов можно обнаружить только с помощью клинических экспериментов по введению провокационной пробы людям.
Как указано выше, введение вакцины по настоящему изобретению предупреждает и/или уменьшает по меньшей мере один симптом норовирусной инфекции. Симптомы норовирусной инфекции хорошо известны в уровне техники и включают тошноту, рвоту, диарею и спастические боли в желудке. Кроме того, у пациента с норовирусной инфекцией может наблюдаться субфебрильная лихорадка, головная боль, озноб, мышечные боли и слабость. Настоящее изобретение также охватывает способ индукции защитного иммунного ответа у субъекта с наличием норовирусной инфекции посредством введения субъекту состава вакцины по настоящему изобретению таким образом, что облегчают и/или уменьшают по меньшей мере один симптом, связанный с норовирусной инфекцией. Уменьшение симптома может быть определено субъективно или объективно, например посредством самостоятельной оценки своего состояния субъектом, оценки клиницистом или посредством проведения соответствующего анализа или измерения (например, температуры тела), включая, например, оценку качества жизни, замедление прогрессирования норовирусной инфекции или дополнительных симптомов, уменьшение тяжести симптомов норовирусной инфекции, или подходящих анализов (например, титр антител, выявление антигенов методом ОТ-ПЦР и/или анализ активации В-клеток или Т-клеток). Эффективный ответ также можно определять посредством прямого измерения (например, ОТ-ПЦР) вирусной нагрузки в образцах испражнений, которая отражает количество вирусов, выделяемых из кишечника). Объективное оценивание включает методы оценки, применяемые как для животных, так и для человека.
В настоящем изобретении также представлен способ стимулирования образования антител к одному или нескольким норовирусным антигенам, причем указанный способ включает введение вакцины по настоящему изобретению, описанной выше, субъекту. Эти антитела можно выделять и очищать с помощью обычных способов из уровня техники. Выделенные антитела, специфичные в отношении норовирусных антигенов, можно использовать при разработке диагностических иммунологических анализов. Эти анализы можно использовать для выявления норовируса в клинических образцах и идентификации конкретного вируса, вызывающего инфекцию (например, Νογυυ;·ι11<. НоиМоп. δηον Моийши и т.д.). Альтернативно, выделенные антитела можно вводить субъектам, восприимчивым к норовирусной инфекции, для обеспечения пассивного или краткосрочного иммунитета.
Настоящее изобретение будет далее более подробно иллюстрировано основываясь на конкретных вариантах осуществления, описанных в следующих примерах. Примеры, как предполагается, служат исключительно иллюстративным целям настоящего изобретения и, как предполагается, не ограничивают каким-либо образом его объем.
Примеры
Пример 1. Исследование с эскалацией дозы по изучению безопасности и иммуногенности норовирусной бивалентной вакцины для внутримышечного введения на основе вирусоподобных частиц (УЬР) у людей (исследование ЬУ03-104), когорта А.
В данном примере описана когорта А рандомизированного многоцентрового исследования с эскалацией дозы по изучению безопасности и иммуногенности четырех уровней дозировки норовирусной бивалентной вакцины для внутримышечного введения (ΙΜ) на основе УЬР с адъювантом монофосфориллипидом А (МРЬ) и гидроксидом алюминия (А1ОН) по сравнению с плацебо у взрослых субъектов. Приблизительно 48 субъектов в возрасте от 18 до 49 лет включили в когорту. Субъекты получали две дозы вакцины или плацебо посредством внутримышечной (ΙΜ) инъекции с использованием 1,5-дюймовой (38 мм) иглы с разницей в 28 дней.
Норовирусная бивалентная вакцина на основе УЬР содержала УЬР 1 генотипа геногруппы I (ΟΙ.1) и IV генотипа геногруппы II (ΟΙΙ.4) в качестве антигенов и монофосфорил-липид А (МРЬ) и гидроксид алюминия (А1ОН) в качестве адъювантов, хлорид натрия (ΝαΟΊ) и Ь-гистидин (Ь-Ηίδ) в качестве буфера (рН 6,3-6,7), этанол и воду для инъекций. Композиция норовирусной бивалентной вакцины для внутримышечного введения на основе УЬР изложена в табл. 1. УЬР ΟΙΙ.4 содержали последовательность капсидного белка 8ЕЦ ГО N0: 1, полученную из трех штаммов ΟΙΙ.4.
- 14 029470
Таблица 1
Конечная композиция готовой лекарственной формы для четырех составов норовирусных бивалентных ΙΜ вакцин на основе УЬР в расчете на 0,5 мл
Состав УЬР ΟΙ.1 (мкг) УЬР ΟΙΙ.4 (мкг) МРЬ (мкг) А1* (мг) №С1 (мг) Ь-Ηίδ (мг) Этанол (мг)
Дозировка 10 мкг 5 5 50 0,5 4,38 1,55 19,7
Дозировка 30 мкг 15 15 50 0,5 4,38 1,55 19,7
Дозировка 100 мкг 50 50 50 0,5 4,38 1,55 19,7
Дозировка 300 мкг 150 150 50 0,5 4,38 1,55 19,7
* - в виде гидроксида алюминия.
Плацебо представляло собой стерильный нормальный солевой раствор для инъекций (0,9% ИаС1, без консервантов). Эскалацию дозы вакцины проводили следующим образом: после соответствующего скрининга на предмет удовлетворительного состояния здоровья субъектов когорты А последовательно включали в каждую из четырех групп по дозировке, по ~12 субъектов каждая (группы по дозировке А1, А2, А3 и А4). Группы по дозировке А1, А2, А3 и А4 представляли дозировки бивалентных антигенов, составляющие 5/5, 15/15, 50/50 и 150/150 мкг УЬР норовируса ΟΙ.1 и ΟΙΙ.4 соответственно. Субъекты в каждой группе по дозировке были рандомизированы в соотношении 5:1 для получения вакцины или плацебо. Субъекты в группе по дозировке А1 получали свое соответствующее рандомизированное лечение (10 субъектов получали 5/5 мкг вакцины и 2 субъекта получали плацебо). Субъектов наблюдали с целью оценки безопасности посредством рассмотрения симптомов, зарегистрированных во дневнике самонаблюдения (дни 0-7) и индивидуальных картах, начиная с дня посещения 7, 21, 28, 35 и 56. Данные по безопасности рассматривались главным наблюдателем, ответственным за безопасность (С8М). После того как от субъектов группы по дозировке А1 были получены для рассмотрения данные по безопасности по истечении 7 дней после приема дозы 2 (день исследования 35) и их сочли приемлемыми, субъекты группы по дозировке А2 допускались к приему своей начальной дозы. То же правило применяли для дозирования в последующих группах по дозировке; то есть после того как от группы по дозировке были получены для рассмотрения данные по безопасности по истечении 7 дней после приема дозы 2 (день исследования 35), следующая группа по дозировке допускалась к приему своей начальной дозы.
По окончании включения в когорту А приблизительно 10 субъектов в каждой группе по дозировке получали вакцину (в сумме 40 вакцинированных) и 2 субъекта в каждой группе получали солевой раствор (в сумме приблизительно 8 реципиентов, получавших солевой раствор-контроль).
Субъекты ежедневно вели записи в дневнике самонаблюдения об ожидаемых симптомах, включая четыре местные реакции в местах инъекций, такие как боль, болезненная чувствительность, покраснение и припухлость, и 10 системных проявлений или симптомов, включая ежедневную температуру тела, измеряемую в ротовой полости, головную боль, слабость, мышечные боли, озноб, боли в суставах и гастроинтестинальные симптомы, а именно тошноту, рвоту, диарею, абдоминальные спастические боли/абдоминальную боль, от дня 0 до 7 после каждой дозы норовирусной бивалентной ΙΜ вакцины на основе УЬР или контроля. Покраснение и припухлость в месте инъекции измеряли и регистрировали ежедневно в течение 7 дней после каждой инъекции.
Индивидуальные карты заполняли при каждом последующем посещении в дни 7+3, 21+3, 28+3, 35+3, 56+7, 180+14 и 393+14 и во время последующего телефонного звонка в день 265+14; субъектов расспрашивали о перенесенных за данный период заболеваниях, посещениях врача, любых серьезных неблагоприятных явлениях (8АЕ) и возникновении любых новых значимых медицинских состояний. У субъектов определяли количество форменных элементов крови с определением лейкоцитарной формулы и определением количества тромбоцитов и осуществляли оценку сывороточной мочевины, креатинина, глюкозы, АСТ и АЛТ при скрининге и в дни 21 и 35 (~7 дней после каждой дозы) для оценки того, продолжают ли они соответствовать требованиям, и для оценки безопасности соответственно.
У субъектов забирали образцы крови перед вакцинацией в день 0 и в дни 7+3, 21+3, 28+3, 35+3, 56+7, 180+14 и 393+14 для измерения сывороточных антител (Ι§Ο, 1дА и 1дМ по отдельности и в совокупности), выработанных в ответ на норовирусную бивалентную ΙΜ вакцину на основе УЬР, посредством иммуноферментных анализов (ЕЫ8А). Также измеряли уровни антител, обуславливающих активность блокирования углеводов в сыворотке крови и ΗАI в сыворотке крови. У субъектов когорты А анализировали клетки, секретирующие антитела (А8С), маркеры хоуминга, В-клетки памяти и клеточные иммунные ответы.
Следующие способы применяли для анализа образцов крови, собранных от иммунизированных лиц или лиц, получавших плацебо.
Измерения уровней сывороточных антител посредством ЕЫ8А.
Измерение уровней антител к норовирусу посредством ЕЫ8А осуществляли у всех субъектов с использованием очищенных рекомбинантных УЬР норовируса (ΟΙ.1 и ΟΙΙ.4 по отдельности) в качестве
- 15 029470
целевых антигенов для того, чтобы осуществлять скрининг проб с присвоенным шифром. Вкратце, УЬР норовируса в карбонатном покрывающем буфере с рН 9,6 использовали для нанесения на титрационные микропланшеты. Планшеты промывали, блокировали и инкубировали с двукратными серийными разведениями исследуемой сыворотки с последующим промыванием и инкубированием со связанными с ферментом вторичными антителами-реагентами, специфичными в отношении всех 1дО, 1дО1, 1дО2, 1дО3, 1дО4, 1дА и 1§М человека. Добавляли соответствующие субстратные растворы, осуществляли проявление окрашивания, считывание планшетов и определяли конечные титры 1дС. 1дА и 1§М в сравнении с контрольной стандартной кривой для каждого класса антител. Определяли средние геометрические титры (ОМТ), фактор сероконверсии (ОМРК) и показатели серологической реакции для каждой группы. Серологическую реакцию характеризовали как 4-кратное увеличение титра антител по сравнению с титрами до иммунизации.
Активность норовирусов по блокированию углеводных антигенов группы крови (НВОА).
Анализы блокирования для определения способности сывороточных антител ингибировать связывание УЬР Νν с синтетическими углеводными Н-антигенами 1 типа или Н-антигенами 3 типа осуществляли, как описано ранее (Кееск еГ а1. (2010) I. 1и£се1 Όίδ, νοί. 202(8): 1212-1218). Вкратце, νΈΡ Νν для анализов блокирования инкубировали с равным объемом сыворотки и осуществляли двукратное серийное разведение, начиная от исходного разведения 1:25. Покрытые нейтравидином 96-луночные титрационные микропланшеты промывали и на них наносили 2,5 мкг/мл либо синтетического поливалентного комплекса Н-антиген 1 типа-РАА-биотин, либо поливалентного комплекса Н-антиген 3 типа-РААбиотин. Добавляли растворы νΡ-Р в сыворотке. Планшеты промывали и добавляли поликлональную сыворотку кролика, специфичную в отношении νΡ-Р Νν, промывали и затем инкубировали с антителами козы к 1§О кролика, связанными с пероксидазой хрена. Окрашивание проявляли с помощью жидкого субстрата для пероксидазы тетраметилбензидина и останавливали с помощью 1М фосфорной кислоты. Оптическую плотность измеряли при 450. Выполняли положительный и отрицательный контроли. Определяли 50%-ные титры блокирующих антител (ВТ50), их характеризовали как титры, при которых результаты считывания ΘΌ (после удаления данных контроля) составляли 50% положительного контроля. Значение 12,5 было присвоено образцам с ВТ50 менее 25. Определяли средние геометрические титры (ОМТ), фактор сероконверсии (ОМРК) и показатели серологической реакции для каждой группы. Серологическую реакцию характеризовали как 4-кратное увеличение титра антител по сравнению с титрами до иммунизации. Контрольные образцы блокирующей сыворотки использовали в качестве внутреннего контроля. Анализ для подтверждения специфичности блокирования осуществляли с использованием того же самого протокола для анализа блокирования со следующими особенностями: после нанесения углеводов сыворотки инкубировали непосредственно на планшете без первого предварительного инкубирования с νΓ-Р. После промывки νΡ-Р инкубировали на планшете и выявляли так же, как в анализе блокирования.
Анализ антителоопосредованного ингибирования гемагглютинации (НА1) норовирусом.
Индуцированные вакциной антитела исследовали на способность ингибировать гемагглютинацию эритроцитов человека О-типа ^Р норовируса, как описано ранее (Е1 Катагу е1 а1. (2010) ί. 1пГес1 Όίδ, νοί. 202(11): 1649-58). Титры НА1 вычисляли как величину, обратную наибольшему разведению, при котором происходило ингибирование гемагглютинации с образованием компактного "отрицательного" паттерна эритроцитов, и представляли в виде ОМТ, ОМРК и >4-кратного увеличения.
Проводили серийное разведение νΡ-Р норовируса О1.1 и ΟΙΙ.4 по отдельности и инкубировали их с равным объемом 0,5% суспензии эритроцитов человека в 96-луночном планшете с ν-образным дном. Определяли количество антигенов, νΡ-Р норовируса, соответствующее 4 ГА единицам, и подтверждали посредством обратного титрования. Исследуемые сыворотки инактивировали теплом при 56°С в течение 30 мин и обрабатывали свежеполученной 25% суспензией каолина. Для того чтобы исключить сывороточные ингибиторы, исследуемые образцы были предварительно адсорбированы на эритроцитах. Анализ НА1 осуществляли следующим образом: предварительно обработанные сыворотки (в двукратном разведении в РВ§, рН 5,5) добавляли в 96-луночные планшеты с ν-образным дном и инкубировали с равным объемом антигена, νΡ-Р норовируса ΟΙ.1 и ΟΙΙ.4 соответственно, содержащим 4 ГА единицы. Добавляли 0,5% суспензию эритроцитов в каждую лунку и планшеты инкубировали в течение дополнительных 90 мин при 4°С. Лунки, содержавшие только РВ§ или антиген без сыворотки, служили в качестве отрицательных и положительных контролей соответственно. Определяли средние геометрические титры (ОМТ), фактор сероконверсии (ОМРК) и показатели серологической реакции для каждой группы. Серологическую реакцию характеризовали как 4-кратное увеличение титра антител по сравнению с титрами до иммунизации.
Анализы клеток, секретирующих антитела.
РВМС выделяли из приблизительно 60 мл крови с добавленным антикоагулянтом в дни 0, 7+3, 28+3 и 35+3 после введения норовирусной бивалентной ГМ вакцины на основе νΡ-Р или плацебо. Получали приблизительно 25 мл крови для анализов РВМС непосредственно после получения и 35 мл крови для криоконсервации РВМС. Анализы А8С позволяют выявить клетки, секретирующие антитела к νΡ-Р норовируса (ТаскеГ еГ а1. (2000) к ЫесГ. Όίδ., νοί. 182:302-305; ТаскеГ еГ а1. (2003) С1ш. Iттиηοί., νοί.
- 16 029470
108:241-247; Е1 Катагу е! а1. (2010) 1. Шес! Όίδ, ^1. 202(11): 1649-58). Свежезабранные РВМС от группы субъектов оценивали на частоту встречаемости АЗС и определяли маркеры хоуминга. Замороженные РВМС от субъектов, входивших в когорту А, оценивали на частоту встречаемости АЗС. Показатели ответа и среднее количество АЗС на 10 РВМС описаны в каждый момент времени для каждой группы. Положительный ответ определяли как число АЗС после вакцинации на 106 РВМС, которое по меньшей мере на 3 стандартных отклонения (ЗБ) превышает среднее число до вакцинации для всех субъектов (в логарифмическом виде), и наличие по меньшей мере 8 пятен АЗС, что соответствовало среднему значению стимулированных средой лунок отрицательного контроля (2 пятна) плюс 3 ЗБ, как определено в аналогичных анализах.
Измерение количества вирусспецифичных В-клеток памяти, специфичных в отношении норовируса.
Образцы крови с добавленным антикоагулянтом собирали только от субъектов когорты А (приблизительно 25 мл в дни 0, 28, 56 и 180) для измерения количества В-клеток памяти в дни 0, 28, 56 и 180 после вакцинации с помощью анализа ЕЫЗро! с предшествующей антигенной стимуляцией ίη \йго (СгоНу е! а1. (2004) 1. Iттиηο1. МеШоЙ5, Ш. 286:111-122.; Ы е! а1. (2006) 1. Iттиηο1. МеШоЙ5, то1. 313:110-118). Мононуклеарные клетки периферической крови (5х 106 клетки/мл, 1 мл/лунка в 24-луночных планшетах) инкубировали в течение 4 дней с антигенами, νΈΡ норовируса СТ1 и СП.4, по отдельности для того, чтобы обеспечить возможность клональной экспансии антигенспецифичных В-клеток памяти и дифференциации в клетки, секретирующие антитела. Контроли включали клетки, инкубированные в тех же условиях в отсутствие антигена, и/или клетки, инкубированные с неродственным антигеном. После стимуляции клетки промывали, подсчитывали и переносили в планшеты для ЕЫЗро! с нанесенными νΣΡ №г\уа1к. Для того чтобы определить частоту встречаемости вирусспецифичных В-клеток памяти по отношению к общему количеству ^-секретирующих В-лимфоцитов, размноженные В-клетки также добавляли в лунки с нанесенными антителами к !дС человека и к !дА человека. Связавшиеся антитела выявляли с помощью ΗΚΡ-меченых антител к !дС человека или к !дА человека, после которых применяли соответствующий субстрат. Конъюгаты к подклассам !дА и !дС ДдА1, !дА2 и ^С1-4) также применяют для определения антигенспецифичных ответов, опосредованных антителами этих подклассов, которые могут быть связаны с определенными эффекторными механизмами и локализацией иммунного примирования. Пятна подсчитывали с помощью ЕЫЗро!-ридера. Популяции размноженных клеток для каждого субъекта изучали с помощью проточной цитометрии для того, чтобы, среди прочего, подтвердить фенотип Вклеток памяти, т.е. СБ19+, СБ27+, !дС+. !дМ+. СБ38+, !дЫ (Стойу е! а1. (2004) ί. ^типок Ме!йоЙ5, νο1. 286:111-122; Ы е! а1. (2006) 1. Iттиηο1. Ме!йоЙ5, то1. 313:110-118).
Клеточные иммунные ответы.
Образцы крови с добавленным антикоагулянтом (приблизительно 25 мл в дни 0, 28, 56 и 180) от субъектов когорты А собирали в виде проб с присвоенным шифром, и РВМС выделяли и замораживали в жидком азоте для возможного оценивания в будущем СМЕответов на антигены, νΕΡ норовируса ОТ1 и СП.4. Анализы, которые проводят, включают, среди прочего, анализы пролиферации РВМС и цитокиновых ответов на антигены, νΕΡ норовируса СП и СП.4, посредством измерения уровней интерферона (Ш^-у и интерлейкина (Ε)-4 согласно принятым техникам (Затапйай е! а1. (2000) ί. Iттиηο1., νο1. 164:2221-2232; Таске! е! а1. (2003) Сйп. Iттиηο1., νο1. 108:241-247). Также оценивают Т-клеточные ответы.
Результаты.
Оценка безопасности включала местные и системные ожидаемые симптомы в течение 7 дней и неожидаемые симптомы в течение 28 дней после каждой дозы. Осуществляли наблюдение на предмет серьезных нежелательных явлений в течение 12 месяцев. Иммуногенность оценивали на основе сыворотки, полученной до и после каждой вакцинации, по антителам из ЕЫЗА для общего !д ^дС, !дА и !дМ в совокупности) и мононуклеарным клеткам периферической крови (РВМС) в отношении клеток, секретирующих антитела класса !дС и !дА (АЗС), посредством ЕЙ5ро!.
Все четыре группы по дозировке были включены в когорту А с наличием данных по безопасности после дозы два для всех четырех групп по дозировке (40 вакцинированных в сумме). Среди 40 вакцинированных боль или болезненная чувствительность были самыми распространенными местными симптомами, зарегистрированными после каждой дозы, тогда как припухлость или покраснение были редкими. Не было зарегистрировано тяжелых местных симптомов. Системные симптомы, а именно головная боль, миалгия или недомогание, после каждой дозы были зарегистрированы у менее чем половины вакцинированных. Ни у одного вакцинированного не была зарегистрирована лихорадка. Никаких родственных ЗАЕ зарегистрировано не было.
Как показано на фиг. 1-3, по результатам ЕЫЗА для общего !д сильные анамнестические антителоопосредованные ответы ^дС, !дА и !дМ в совокупности) наблюдали в отношении обоих типов антигенов νΕΡ спустя 7 дней после первой дозы с наименьшей дозировкой (5 мкг νΕΡ СТ1+5 мкг νΕΡ СП.4). Вторая доза не усилила ответы после дозы один. Аналогичные результаты наблюдали для ответов, опосредованных антигенспецифичными сывороточными !дС и сывороточными !дА, измеряемых по отдельно- 17 029470
сти (фиг. 4-9). Дозозависимые ответы наблюдали для антителоопосредованных ответов на оба антигена (фиг. 1-9). Однако максимальный ответ на УБР ΟΣ.1, как оказалось, получали с меньшей дозой, чем для получения максимального ответа на УБР ΘΙΙ.4 (15 мкг по сравнению с 50 мкг). Что примечательно, однократная доза вводимой внутримышечно норовирусной бивалентной вакцины индуцировала неожиданно значительно больший титр антигенспецифичных антител, чем титр, индуцированный двумя дозами вводимых интраназально моновалентных вакцин на основе УБР, содержащих в 20 раз большую дозу УБР (фиг. 10; сравнивается группа 5 мкг БУ03-104 с группой 100 мкг БУ01-103). Более того, низкая доза (5 мкг) бивалентной норовирусной ΙΜ вакцины обеспечивала такой же титр норовирусспецифичных антител, что и титр, индуцированный у людей, контактировавших с нативным норовирусом (фиг. 10).
Сильные Ι§Θ- и 1дА-опосредованные ответы по результатам Εΐΐδροΐ также наблюдали спустя 7 дней после первой дозы с наименьшей дозировкой (5 мкг) в отношении обоих типов антигенов УБР (табл. 2). Примечательно, ответы, опосредованные клетками, секретирующими антитела (А8С), были смещены в сторону 1дА по сравнению с Ι§Θ, и у А8С наблюдался фенотип рецепторов хоуминга в слизистые (альфа4/бета7) и фенотип хемокиновых (ССК10) рецепторов, как оценивалось с помощью проточной цитометрии (фиг. 11; табл. 3). Как показано в табл. 3, у большего количества А8С наблюдались маркеры хоуминга в слизистые (бета7+, СО62Б-) по сравнению с двойственными маркерами хоуминга в слизистые/периферические ткани (бета7+, СО62Б+). В табл. 4 показано процентное соотношение В-клеток памяти на 106 моноцитов периферической крови, осуществляющих ответ на антигены, УБР. Больший процент антигенспецифичных В-клеток памяти также экспрессируют маркеры хоуминга в слизистые по сравнению с двойственными маркерами в слизистые/периферические ткани или хоуминга в периферические ткани. Аналогичные ответы также наблюдали у реципиентов, получавших дозы 15 и 50 мкг (табл. 24).
Таблица2
День 7, характеристика ответа, опосредованного РВМС. Приблизительное количество клеток, секретирующих антитела (А8С)/миллион СО19+ клеток
А8С/миллион СБ19+ клеток - день 7 Процент ответа на вакцину Вакцинаспецифичные
Норовирусспецифичные В-клетки 1§А С1.1 1§С С1.1 1§А СП.4 1§С СП.4 Специфичные в отношении С1.1 Специфичные в отношении СП.4 Процент общей совокупности циркулирующих РВМС
Среднее геометрическое А1 доза 5 мкг (п=5) 30947 13807 10947 3945 4,48% 1,49% 5,96%
Стандартное отклонение А1 доза 5 мкг 6674 9780 3651 2261
Среднее геометрическое А2 доза 15 мкг (п=4) 25296 17004 7108 4336 4,23% 1,14% 5,37%
Стандартное отклонение А2 доза 15 мкг 10846 18770 6055 5697
Среднее геометрическое АЗ доза 50 мкг (п=4) 36158 20572 14103 2549 5,67% 1,67% 7,34%
Стандартное отклонение АЗ доза 50 мкг 11470 418 7627 2230
Среднее геометрическое А4 доза 150 мкг (п=4) 34183 9566 26213 11310 4,37% 3,75% 8,13%
Стандартное отклонение А4 доза 150 мкг 32938 4466 89769 15226
Норовирусспецифичные В-клетки 1§А С1.1 1§С С1.1 1§А СП.4 1§С СП.4 Специфичные в отношении С1.1 Специфичные в отношении СП.4 Процент общей совокупности циркулирующих РВМС
Плацебо ОбЧ 0 152 0 108 0,02% 0,01% 0,03%
- 18 029470
Таблица 3
Маркеры А8С у реципиентов, получавших вакцину и плацебо, определенные с помощью проточной цитометрии - день 7
% общего количества СБ19+ Вклеток, которые являются СБ27+ и СБ38+ % от % общего количества СБ27+, Οϋ38+, ССК10+_бет а 7+, СП62Б- % от % общего количества СБ27+, СБ38+, ССК10+ бета 7+, СП62Б+ Процент общего количества А8С СБ27+, СБ38+, ССК10+, бета 7+ СП62Ц+) и(-) Общее количество вакцинаспецифичных на миллион клеток* СБ27+, Οϋ38+, ССК10+, бета 7+ СП62Ц+) и (-) Процент вакцинаспецифичных от общего количества* циркулирующих РВМС с хоумингом в слизистые
Среднее геометрическое А1 доза 5 мкг (п=5) 25,10% 6,86% 1,06% 2,78% 1656 0,17%
Стандартное отклонение А1 доза 5 мкг 10,45 3,13 1,01
Среднее геометрическое А2 доза 15 мкг (п=4) 12,99% 16,98% 2,43% 4,63% 1355 0,14%
Стандартное отклонение А2 15 мкг доза 9,13 1,56 0,23
Среднее геометрическое АЗ 50 мкг доза (п=4) 31,71% 26,43% 3,63% 12,01% 23915 2,39%
Стандартное отклонение АЗ доза 50 мкг 6,32 1,82 1,38
Среднее геометрическое А4 доза 150 мкг (п=4) 33,46% 30,06% 5,68% 15,74% 31350 3,14%
Стандартное отклонение А4 доза 150 мкг 9,86 2,97 1,70
Плацебо (п=2) 1,26% 22,00% 0,87% 1,20% 5 0,001%
* - в случае, когда большинство А8С являются норовирусспецифичными.
Таблица 4
Ответы В-клеток памяти у реципиентов, получавших вакцину и плацебо - день 7
% общего количества 0)19+ Вклеток, которые являются СБ27+, СБ38+, СШ38+ % от % общего количеств а СБ27+, СБ38+, СБ138+, ССК10+ Бета 7+, СП62Б- % от % общего количества СБ27+, СБ38+, СШ38+, ССК10+_Бет а 7+, СО62Б+ Процент общего количества СБ27+, СБ38+, СП138+, ССК10+, Бета 7+ СП62Ц+) и (-) клеток памяти Общее количество вакцинаспецифичных на миллион клеток* СО27+, СО38+, СБ138+, ССК10+, бета 7+ СП62Ь(+) и (-)' Процент вакцинаспецифичных от общего количества* циркулирующих РВМС с хоумингом в слизистые
Среднее геометрическое А1 доза 5 мкг н/о н/о н/о н/о н/о н/о
Среднее геометрическое А2 доза 15 мкг (п=4) 1,54% 11,58% 1,92% 0,21% 61 0,01%
Стандартное отклонение А2 доза 15 мкг 1,54 3,94 0,94
Среднее геометрическое АЗ доза 50 мкг (п=4) 3,31% 16,10% 4,60% 0,68% 1364 0,14%
Стандартное отклонение АЗ доза 50 мкг 1,П 2,16 0,97
Среднее геометрическое А4 150 мкг доза (п=4) 1,56% 16,90% 8,10% 0,39% 778 0,08%
Стандартное отклонение А4 доза 150 мкг 0,22 3,26 4,57
Плацебо (п=1) 0,10% 12,50% 0,00% 0,01% 0 0%
* - в случае, когда большинство А8С являются норовирусспецифичными.
В отсутствие доступного прямого анализа нейтрализации вируса в связи с отсутствием возможности культивировать норовирус ίη νίΐτο проводили функциональные анализы, которые служат заменой анализам нейтрализации вируса, для измерения количества функциональных антител у вакцинированных.
С помощью анализа активности блокирования углеводного Н-антигена, описанного выше, измеряли
- 19 029470
ингибирование связывания УЕР ΟΙ.1 с Н-антигеном, опосредованное сывороточными антителами, индуцированными вакциной. Данные представлены в виде фактора сероконверсии (ОМЕК) и серологической реакции (4-кратное увеличение) в табл. 5 и в виде среднего геометрического титра (ОМТ) в табл. 6. К удивлению, после всего одной внутримышечной инъекции состава вакцины наблюдали значительную активность блокирования углеводов для всех групп доз; фактически, введение второй дозы вакцины не повышало значительно активность блокирования по сравнению с уровнями после дозы 1. Активность ингибирования связывания сохранялась в течение всего периода испытаний вплоть до 56-го дня после дозы 1.
Таблица 5
Активность блокирования углеводов (НВОА ВТ50). Фактор сероконверсии (ОМЕК) и серологическая реакция (4-кратное увеличение) для антител к норовирусу ΟΙ.1
День исследования
7 дней после дозы 1 21 день после дозы 1 28 дней после дозы 1 (перед дозой 2) 7 дней после дозы 2 (35 дней после дозы 1) 28 дней после дозы 2 (56 дней после дозы 1)
Группа обрабо тки N (ί\1Ι к (95% ДИ) 4крат ное увел ичен не (95% ДИ) N смг к (95% ДИ) 4кратн ое увели чение (95% ДИ) N СМГ к (95% ДИ) 4кратн ое увели чение (95% ДИ) N СМГ к (95% ДИ) 4кратн ое увели чение (95% ДИ) N СМГ к (95% ДИ) 4крат ное увел ичен не (95% ДИ)
Вакцин а на основе УБР 5/5 мкг 9 26,6 (8,3, 85,1) 88,9 (51,8, 99,7) 9 25,1 (8,9, 70,3) 88,9 (51,8, 99,7) 9 19,7 (8,2, 47,1) 100,0 (66,4, 100,0) 9 20 (7,7, 51,7) 88,9 (51,8, 99,7) 9 16,6 (5,7, 48,1) 77,8 (40,0, 97,2)
Вакцин а на основе УБР 15/15 мкг 8 33,2 (13,6, 80,8) 100,0 (63,1, 100,0 ) 8 25,5 (Ю,5, 61,8) 100,0 (63,1, 100,0) 8 18,5 (8,4, 40,6) 100,0 (63,1, 100,0) 7 22,2 (8,8, 56) 100,0 (59,0, 100,0) 7 8,4 (2,4, 29,6) 57,1 (18,4, 90,1)
Вакцин а на основе УЕР 50/50 мкг 1 0 38,6 (18,3, 81,6) 100,0 (69,2, 100,0 ) 1 0 27,9 (13,4, 58) 100,0 (69,2, 100,0) 1 0 20,9 (Ю, 43,5) 100,0 (69,2, 100,0) 1 0 19 (9,9, 36,4) 100,0 (69,2, 100,0) 9 10,2 (4,6, 22,8) 77,8 (40,0, 97,2)
Вакцин а на основе УБР 150/150 мкг 7 30,6 (16,3, 57,6) 100,0 (59,0, 100,0 ) 8 19,4 (13,1, 28,5) 100,0 (63,1, 100,0) 8 16,3 (11,7, 22,6) 100,0 (63,1, 100,0) 8 18,8 (12,8, 27,5) 100,0 (63,1, 100,0) 8 23,8 (17, 33,3) 100,0 (63,1, 100,0 )
Плацсб о 8 0,9 (0,8, 1) 0,0 (0,0, 36,9) 8 0,8 (0,7, 1,1) 0,0 (0,0, 36,9) 8 0,8 (0,6, 1,1) 0,0 (0,0, 36,9) 8 0,8 (0,7, 1,1) 0,0 (0,0, 36,9) 8 0,6 (0,3, 1,2) 0,0 (0,0, 36,9)
Результаты на основе данных по всем субъектам, получавшим обе дозы исследуемого продукта.
Исключены два частных значения от двух субъектов в связи с тем, что пробы возможно были перепутаны; одно из этих частных значений представляло собой данные базовой пробы, что привело в результате к тому, что для субъекта не были получены данные по кратности увеличения для какого-либо момента времени.
Таблица 6
Активность блокирования углеводов (НВОА ВТ50). Средний геометрический титр (ОМТ) антител к норовирусу ΟΙ.1
День исследования
Перед дозой 1 7 дней после дозы 21 день после дозы 1 28 дней после дозы 1 (перед дозой 2) 7 дней после дозы 2 (35 дней после дозы 1) 28 дней после дозы 2 (56 дней после дозы 1)
Группа обработки N СМТ (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ)
Вакцина на основе УБР 5/5 мкг 9 28,9 (12,7, 65,9) 9 768,5 (344,1, 1716) 9 723,7 (398,1, 1316) 9 568 (321,8, 1003) 9 577,1 (351,2, 948,3) 9 478,3 (293,3, 780,1)
Вакцина на основе УБР 15/15 мкг 8 24,9 (12,7, 48,7) 8 826,1 (524,9, 1300) 8 634,3 (285,9, 1407) 8 459,8 (225,3, 938,6) 7 610,3 (354,6, 1050) 7 230,9 (105,2, 506,7)
Вакцина на основе УБР 50/50 мкг 1 0 17,3 (9,9, 30,3) 1 0 669,2 (329,1, 1361) 1 0 483,7 (258,7, 904,2) 10 362,4 (192,9, 680,7) 1 0 328,9 (191,9, 563,8) 9 184 (97,2, 348,3)
Вакцина на основе УБР 150/150 мкг 8 15,5 (ИД, 21,8) 7 435 (262,5, 720,8) 8 300,7 (173,9, 520) 8 252,7 (146,7, 435,2) 8 291,5 (171,5, 495,4) 8 369,7 (233,8, 584,6)
Плацебо 8 29 (9,1, 92,8) 9 24,6 (9,8, 62,1) 9 22,5 (8,8, 57,3) 9 22,2 (8,9, 55,5) 8 24,6 (8,4, 72,6) 8 18,3 (10,1, 33,3)
Результаты на основе данных по всем субъектам, получавшим обе дозы исследуемого продукта.
- 20 029470
Исключены два частных значения от двух субъектов в связи с тем, что пробы возможно были перепутаны.
Аналогично, измеряли активность блокирования углеводов сывороточных антител против УЬР ОП.4. Значительный ответ наблюдали во всех группах дозирования, как было измерено с помощью ОМТК и серологической реакции (табл. 7), а также ОМТ (табл. 8). Аналогично антителоопосредованному блокированию связывания ОЫ, описанному выше, выявляли сильную активность блокирования связывания углеводов УЬР ОП.4 после всего одной дозы, причем вторая доза, как оказалось, не усиливала активность блокирования.
Таблица 7
Активность блокирования углеводов (НВОА ВТ50). Фактор сероконверсии (ОМТК) и серологическая реакция (4-кратное увеличение) для антител к норовирусу ОП.4
День исследования
7 дней после дозы 1 21 день после дозы 1 28 дней после дозы 1 (перед дозой 2) 7 дней после дозы 2 (35 дней после дозы 1) 28 дней после дозы 2 (56 дней после дозы 1)
Группа обработ ки N смг к (95% ДЩ 4крат ное увел ичен ие (95% ДЩ N СМГ к (95% ДЩ 4кратн ое увели чение (95% ДЩ N СМГ к (95% ДЩ 4кратн ое увели чение (95% ДЩ N СМГ к (95% ДЩ 4кратн ое увели чение (95% ДЩ N СМГ к (95% ДИ) 4крат ное увели чение (95% ДЩ
Вакцина на основе УЬР 5/5 мкг 9 5 (1,6, 16,1) 33,3 (7,5, 70,1) 9 5,9 (1,7, 20,3) 55,6 (21,2, 86,3) 9 4,7 (1,4, 15,7) 44,4 (13,7, 78,8) 9 4,7 (1,6, 13,8) 44,4 (13,7, 78,8) 9 5 (1,6, 15,9) 55,6 (21,2, 86,3)
Вакцина на основе УЬР 15/15 мкг 8 11 (2,7, 45,3) 62,5 (24,5, 91,5) 8 9,2 (3, 27,9) 62,5 (24,5, 91,5) 8 7,4 (2,5, 21,8) 62,5 (24,5, 91,5) 7 7(2,1, 23) 57,1 (18,4, 90,1) 7 5,6 (2,3, 14) 57,1 (18,4, 90,1)
Вакцина на основе УЬР 50/50 мкг 1 0 18,6 (4,9, 70,8) 70,0 (34,8, 93,3) 1 0 12,2 (3,8, 39,4) 70,0 (34,8, 93,3) 1 0 8,4 (2,9, 24,1) 70,0 (34,8, 93,3) 1 0 8,7 (2,9, 26,1) 70,0 (34,8, 93,3) 9 5,2 (2,2, 12) 66,7 (29,9, 92,5)
Вакцина на основе УЬР 150/150 мкг 7 10,1 (2, 51,8) 57,1 (18,4, 90,1) 8 5,5 (1,9, 16,5) 50,0 (15,7, 84,3) 8 4,4 (1,6, 12,2) 50,0 (15,7, 84,3) 8 4,3 (1,7, Ю,7) 37,5 (8,5, 75,5) 8 3,1 (1,3, 7,2) 25,0 (3,2, 65,1)
Плацебо 8 1 (0,9, 1,1) 0,0 (0,0, 36,9) 8 1,1(1, 1,3) 0,0 (0,0, 36,9) 8 1,3 (0,9, 2,1) 12,5 (0,3, 52,7) 8 1,8 (0,5, 6,7) 12,5 (0,3, 52,7) 8 2 (0,7, 6,1) 12,5 (0,3, 52,7)
Результаты на основе данных по всем субъектам, получавшим обе дозы исследуемого продукта.
Исключены два частных значения от двух субъектов в связи с тем, что пробы возможно были перепутаны; одно из этих частных значений представляло собой данные базовой пробы, что привело в результате к тому, что для субъекта не были получены данные по кратности увеличения для какого-либо момента времени.
Таблица 8
Активность блокирования углеводов (НВОА ВТ50). Средний геометрический титр (ОМТ) антител к норовирусу ОП.4
День исследования
Перед дозой 1 7 дней после дозы 21 день после дозы 1 28 дней после дозы (перед дозой 2) 7 дней после дозы 2 (35 дней после дозы 1) 28 дней после дозы 2 (56 дней после дозы 1)
Группа обработки N смт (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ)
Вакцина на основе УЬР 5/5 мкг 9 40,3 (18, 90) 9 202,1 (106,3, 384,3) 9 236,9 (133,4, 420,6) 9 189,7 (108,6, 331,3) 9 188,7 (П8,7, 300,1) 9 201,6 (П6,4, 349,5)
Вакцина на основе УЬР 15/15 мкг 8 23,7 (12,8, 43,8) 8 260,1 (95,1, 711,1) 8 218,1 (Ю4,2, 456,3) 8 175,4 (82,7, 372) 7 182,3 (89,1, 372,8) 7 146,3 (92,4, 231,5)
Вакцина на основе УЬР 50/50 мкг 1 0 28,4 (13,1, 61,5) 1 0 527,2 (271,1, 1025) 1 0 345,2 (195,5, 609,6) 1 0 238,3 (139,4, 407,3) 1 0 246,5 (138,7, 438,2) 9 160,2 (Ю7,4, 238,8)
Вакцина на основе УЬР 150/150 мкг 8 63 (24,8, 160,4) 7 721,8 (344,6, 1512) 8 347,7 (186,1, 649,5) 8 277 (145,6, 527) 8 267,9 (158,7, 452,2) 8 193,5 (121,6, 308,2)
Плацебо 8 24,1 (12,9, 45) 9 22,8 (12,6, 41,6) 9 24,9 (12,7, 48,7) 9 29,1 (15,1, 56,1) 8 44(12,6, 154,2) 8 48,2 (16,7, 139,5)
Результаты на основе данных по всем субъектам, получавшим обе дозы исследуемого продукта.
- 21 029470
Исключены два частных значения от двух субъектов в связи с тем, что пробы возможно были перепутаны.
Анализы ингибирования гемагглютинации (ΗΑΙ) также использовали для исследования ответа сывороточных антител от вакцинированных субъектов против целевых антигенов, УБР норовируса. Аналогично исследованиям связывания углеводных Η-антигенов всего одна доза вакцины на основе УБР индуцировала антитела, которые ингибировали гемагглютинацию во всех группах дозирования, что измеряли с помощью ΘΜΡΚ (табл. 9), 4-кратного увеличения (табл. 9) и ΘΜΤ (табл. 10). Хотя уровень ингибирования гемагглютинации сохранялся до последнего дня испытаний (28 дней после дозы 2, 56 дней после дозы 1), вторая доза вакцины на основе УБР, как оказалось, не усиливала ингибирование гемагглютинации, опосредованное антителами, индуцированными вакциной.
Таблица 9
Анализ ингибирования гемагглютинации. Фактор сероконверсии (ΘΜΡΚ) и серологическая реакция (4-кратное увеличение) для антител к норовирусу ΟΣ.1
День исследования
7 дней после дозы 1 21 день после дозы 1 28 дней после дозы 1 (перед дозой 2) 7 дней после дозы 2 (35 дней после дозы 1) 28 дней после дозы 2 (56 дней после дозы 1)
Группа обработ ки N смг к (95% ДИ) 4кратн ое увели чение (95% ДИ) N СМГ к (95% ДИ) 4кратн ое увели чение (95% ДИ) N СМГ к (95% ДИ) 4крат ное увел ичен не (95 % ДИ) N СМГ к (95% ДИ) 4кратн ое увели чение (95% ДИ) N СМГ к (95% ДЩ 4крат ное увел ичен не (95% ДИ)
Вакцина на основе \ЪР 5/5 мкг 9 5,4 (3, 9,8) 77,8 (40,0, 97,2) 9 7 (4,6, Ю,7) 88,9 (51,8, 99,7) 9 6,1 (4,1, 9,3) 88,9 (51,8 99,7) 9 6 (3,7, 9,5) 77,8 (40,0, 97,2) 9 6,3 (3,9, Ю,3) 88,9 (51,8, 99,7)
Вакцина на основе \ЪР 15/15 мкг 8 8,9 (4,4, 18) 100,0 (63,1, 100,0) 8 9,5 (4, 22,5) 87,5 (47,3, 99,7) 8 7,1 (3,1, 16,1) 75,0 (34,9 96,8) 7 8,5 (4,1, 17,7) 85,7 (42,1, 99,6) 7 8,1 (4,4, 15,2) 100,0 (59,0, 100,0 )
Вакцина на основе \ЪР 50/50 мкг 1 0 22,4 (П,6, 43) 100,0 (69,2, 100,0) 1 0 16,7 (9,3, 29,8) 100,0 (69,2, 100,0) 1 0 13,9 (8,1, 24) 100,0 (69,2 100,0 ) 1 0 14,5 (9,3, 22,7) 100,0 (69,2, 100,0) 9 11,8 (6,3, 21,9) 100,0 (66,4, 100,0 )
Вакцина на основе УЬР 150/150 мкг 7 12,6 (5,7, 28) 85,7 (42,1, 99,6) 8 ИД (6,4, 19,3) 100,0 (63,1, 100,0) 8 8,4 (5, 14) 100,0 (63,1 100,0 ) 8 8,4 (5, 14) 100,0 (63,1, 100,0) 8 7,3 (4,5, П,9) 100,0 (63,1, 100,0 )
Плацебо 8 1 (0,8, 1,2) 0,0 (0,0, 36,9) 8 1 (0,9, 1,2) 0,0 (0,0, 36,9) 8 1 (0,9, 1,1) 0,0 (0,0, 36,9) 8 0,9 (0,7, 1,1) 0,0 (0,0, 36,9) 8 1 (0,8, 1,2) 0,0 (0,0, 36,9)
Результаты на основе данных по всем субъектам, получавшим обе дозы исследуемого продукта.
Исключены два частных значения от двух субъектов в связи с тем, что пробы возможно были перепутаны; одно из этих частных значений представляло собой данные базовой пробы, что привело в результате к тому, что для субъекта не были получены данные по кратности увеличения для какого-либо момента времени.
Таблица 10
Анализ ингибирования гемагглютинации. Средний геометрический титр (ΘΜΤ) антител к норовирусу ΟΣ.1
День исследования
Перед дозой 1 7 дней после дозы 21 день после дозы 28 дней после дозы 1 (перед дозой 2) 7 дней после дозы 2 (35 дней после дозы 1) 28 дней после дозы 2 (56 дней после дозы 1)
Группа обработки N смт (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ)
Вакцина на основе УЬР 5/5 мкг 9 26,4 (14,1, 49,4) 9 143,5 (53,6, 383,8) 9 185,3 (88,6, 387,6) 9 162,1 (83,3, 315,6) 9 157(80,3, 307,1) 9 167,4 (88,4, 316,8)
- 22 029470
Вакцина на основе УЬР 15/15 мкг 8 П,9 (6,1, 23,4) 8 105,3 (56,1, 197,6) 8 113,1 (42,5, 301,3) 8 84,2 (31,1, 227,6) 7 103,3 (43,3, 246,6) 7 99,2 (46,9, 209,7)
Вакцина на основе УЬР 50/50 мкг 1 0 7,2 (5Д 9,6) 1 0 160 (79,4, 322,6) 1 0 119,2 (60,4, 235,1) 1 0 99,7 (51,8, 191,8) 1 0 103,8 (58,4, 184,5) 9 81,1 (38,8, 169,5)
Вакцина на основе УЬР 150/150 мкг 8 9,2 (7,5, 11,3) 7 114,1 (50,9, 255,7) 8 101,6 (62, 166,4) 8 77,2 (51,8, 115) 8 77,2 (51,8, 115) 8 67,3 (44,7, Ю1,3)
Плацебо 8 16,8 (Ю,1, 28,1) 9 16,6 (П,7, 23,7) 9 16,1 (Ю,7, 24,1) 9 16,6(11, 25) 8 15,4(10, 23,7) 8 16,2(10,8, 24,4)
Результаты на основе данных по всем субъектам, получавшим обе дозы исследуемого продукта.
Исключены два частных значения от двух субъектов в связи с тем, что пробы возможно были перепутаны.
Ингибирование гемагглютинации также достигали, когда целевые УЬР относились к несоответствующему вирусу. Сывороточные антитела, индуцированные вакциной, ингибировали гемагглютинацию УЬР штамма вируса ИоизФп, что измеряли с помощью ОМРК и серологической реакции (табл. 11), а также ОМТ (табл. 12). В данном случае более высокие дозы вакцины на основе УЬР обеспечивали более сильные ответы, что, в частности, измеряли с помощью 4-кратного увеличения или ОМТ. Также наблюдалось значительное повышение ОМРК и 4-кратного увеличения, когда целевые УЬР относились к штамму вируса 2003 СтстпаИ, что измеряли всего 7 дней после дозы 1 (табл. 13).
Таблица 11
Анализ ингибирования гемагглютинации (УЬР штамма вируса ИоизФп).
Фактор сероконверсии (ОМРК) и серологическая реакция (4-кратное увеличение)
для антител к норовирусу ОП.4
День исследования
7 дней после дозы 1 21 день после дозы 1 28 дней после дозы 1 (перед дозой 2) 7 дней после дозы 2 (35 дней после дозы 1) 28 дней после дозы 2 (56 дней после дозы 1)
Групп а обраб отки N смг к (95% ДИ) 4крат ное увел ичен ие (95% ДИ) N СМГ к (95% ДИ) 4крат ное увел ичен ие (95 % ДИ) N СМГ к (95% ДИ) 4крат ное увел ичен ие (95 % ДИ) N СМГ к (95% ДИ) 4кратн ое увели чение (95% ДИ) N СМГ к (95% ДИ) 4крат ное увел ичен ие (95% ДИ)
Вакци на на основе УЬР 5/5 мкг 9 1,2 (1, 1,5) 0,0 (0,0, 33,6) 9 1,3 (0,9, 1,7) 0,0 (0,0, 33,6) 9 1,3 (0,9, 1,7) 0,0 (0,0, 33,6) 9 1,3 (1, 1,7) 0,0 (0,0, 33,6) 9 1,3 (1, 1,6) 0,0 (0,0, 33,6)
Вакци на на основе УЬР 15/15 мкг 8 1,7 (0,9, 3) 12,5 (0,3, 52,7) 8 1,6 (1,1, 2,4) 12,5 (0,3, 52,7) 8 1,5 (1,1, 2,2) 0,0 (0,0, 36,9) 7 1,5 (1, 2,2) 0,0 (0,0, 41,0) 7 1,6 (1,1, 2,4) 0,0 (0,0, 41,0)
Вакци на на основе УЬР 50/50 мкг 1 0 2 (0,9, 4,3) 10,0 (0,3, 44,5) 1 0 1,6 (0,8, ЗД) 10,0 (0,3, 44,5) 1 0 1,7 (0,9, 3,1) 10,0 (0,3, 44,5) 1 0 1,5 (0,9, 2,4) 10,0 (0,3, 44,5) 9 1,3 (0,8, 2) 11,1 (0,3, 48,2)
Вакци на на основе УЬР 150/15 0 мкг 7 4,3 (1,5, 12,4) 57,1 (18,4, 90,1) 8 2,6 (1,2, 5,8) 50,0 (15,7 84,3) 8 1,9 (1,1, 3,3) 12,5 (0,3, 52,7) 8 1,9 (1,1, 3,5) 12,5 (0,3, 52,7) 8 1,7 (1,1, 2,6) 12,5 (0,3, 52,7)
Плаце бо 8 1 (0,9, 1,1) 0,0 (0,0, 36,9) 8 1,1 (0,9, 1,3) 0,0 (0,0, 36,9) 8 1,1 (1, 1,2) 0,0 (0,0, 36,9) 8 1,2 (0,8, 1,9) 12,5 (0,3, 52,7) 8 1Д (0,7, 1,8) 12,5 (0,3, 52,7)
Результаты на основе данных по всем субъектам, получавшим обе дозы исследуемого продукта.
Исключены два частных значения от двух субъектов в связи с тем, что пробы возможно были перепутаны; одно из этих частных значений представляло собой данные базовой пробы, что привело в результате к тому, что для субъекта не были получены данные по кратности увеличения для какого-либо момента времени.
- 23 029470
Таблица 12
Анализ ингибирования гемагглютинации (УЬР штамма вируса Ноиз!оп). Средний геометрический титр (ОМТ) антител к норовирусу ΟΙΙ.4
День исследования
Перед дозой 1 7 дней после дозы 21 день после дозы 1 28 дней после дозы (перед дозой 2) 7 дней после дозы 2 (35 дней после дозы 1) 28 дней после дозы 2 (56 дней после дозы 1)
Группа обработк и N смт (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ) N СМТ (95% ДИ) N СМТ (95% ДЩ N СМТ (95% ДИ)
Вакцина на основе УЬР 5/5 мкг 9 143,5 (97,9, 210,3) 9 177,4 (122,7, 256,5) 9 180,8 (П4,4, 285,6) 9 180,8 (П4,4, 285,6) 9 189,1 (П9,2, 299,9) 9 180,8 (122,7, 266,3)
Вакцина на основе УЬР 15/15 мкг 8 129,8 (86,4, 194,9) 8 218,3 (129,2, 368,8) 8 207,5 (134,8, 319,3) 8 200,2 (132,8, 301,7) 7 169,5 (114Д, 252) 7 187,2 (119Д, 294,2)
Вакцина на основе УЬР 50/50 мкг 1 0 161,9 (П9,7, 219) 1 0 323,8 (156,5, 669,8) 1 0 252,5 (130,4, 489,2) 1 0 273,9 (150,9, 497,2) 1 0 242,5 (150,2, 391,5) 9 195,2 (125, 304,9)
Вакцина на основе УЬР 150/150 мкг 8 210,6 (108,8, 407,5) 7 853,5 (297,4, 2449) 8 546,2 (237,6, 1255) 8 406,3 (201,5, 819,1) 8 406,3 (180,3, 915,4) 8 354,1 (184,6, 679,5)
Плацебо 8 148,9 (73,8, 300,3) 9 150,1 (80,1, 281,1) 9 157 (77,9, 316,5) 9 167,4 (91,4, 306,4) 8 183,6 (95, 354,5) 8 162,4 (88,5, 297,9)
Результаты на основе данных по всем субъектам, получавшим обе дозы исследуемого продукта. Исключены два частных значения от двух субъектов в связи с тем, что пробы возможно были перепутаны.
Таблица 13
Ингибирование гемагглютинации у группы плацебо по сравнению с группой 50/50 мкг вакцин на основе УЬР
Анализ ингибирования гемагглютинации (УЬР штамма вируса 2003 СтстпаД). Фактор сероконверсии (ОМРК) и геометрическая серологическая реакция (4-кратное увеличение) для антител к норовирусу Ο1Ι.4.
Результаты по группе обработки, 7 дней после дозы 1
Группа обработки N СМГК (95% ДИ) 4-кратное увеличение (95% ДИ)
Плацебо 2 1,0 (0,6, 1,8) 0,0 (0,0, 84,2)
Вакцина на основе УЬР 50/50 мкг 10 4,4(1,6, 11,9) 50,0(18,7, 81,3)
Результаты данного исследования продемонстрировали, что бивалентная норовирусная ΙΜ вакцина на основе УЬР в целом хорошо переносилась. Данные по иммуногенности позволяют считать, что однократной дозы вакцины может быть достаточно для защиты серопозитивных взрослых людей. Результаты анализов активности блокирования углеводов и ингибирования гемагглютинации представили дополнительные доказательства того, что однократная доза вакцины индуцировала сильную противоноровирусную активность сывороточных антител. Сила и быстрота наблюдаемых иммунных ответов после введения однократной парентеральной дозы у людей были значительно большими по сравнению с иммунными ответами после введений множества вакцин на основе УЬР для назального введения с более высокими дозировками УЬР, о которых сообщалось ранее (Е1 Катагу е! а1. (2010) 1. 1п£ес! Όΐδ, νοί. 202(11): 16491658). Эти ответы также превосходили ответы, индуцированные перорально вводимыми УЬР норовируса (Таске! е! а1. (2003) СНп 1ттипо1 108:241-247; Ва11 е! а1. (1999, Оаз!гоеп!его1о§у 117:40-48), а также ответы, индуцированные УЬР норовируса, продуцируемыми трансгенными растениями (Таске! е! а1. (2000) 1. 1п1ес! Όΐδ 182:302-305). В частности, данный состав вакцины для внутримышечного введения вызывал анамнестические ответы в течение семи дней после иммунизации, и наблюдались максимальные ответы, опосредованные сывороточными антителами, после однократной дозы, включая значительный 1дАопосредованный ответ, и функциональную активность блокирования углеводов, и активность ингибирования гемагглютинации. Таким образом, данная норовирусная бивалентная вакцина индуцировала сильный защитный иммунный ответ у людей, который превосходил иммунные ответы, индуцированные любой в настоящее время доступной норовирусной вакциной.
Пример 2. Эскалация дозы. Исследование безопасности и иммуногенности норовирусной бивалентной вакцины для внутримышечного введения на основе вирусоподобных частиц (УЬР) у людей (исследование ЬУ03-104).
В следующем примере представлена оставшаяся запланированная часть клинического исследова- 24 029470
ния, описанного в примере 1, где проводили рандомизированное многоцентровое исследование с эскалацией дозы среди взрослых в возрасте >18 лет по изучению безопасности и иммуногенности четырех уровней дозировки норовирусной бивалентной вакцины для внутримышечного введения ДМ) на основе УЬР с адъювантом монофосфорил-липидом А (МРЬ) и гидроксидом алюминия (А1ОН) по сравнению с плацебо. Субъекты получали две дозы вакцины или плацебо посредством внутримышечной ДМ) инъекции с использованием 1,5-дюймовой (38 мм) иглы с разницей в 28 дней. Данный пример предназначен для дополнительного иллюстрирования основных идей настоящего изобретения.
Отбор в когорту А исследования завершен и был описан выше в примере 1. Когорта В включает ~20 субъектов в возрасте 50-64 года. Когорта С включает ~30 субъектов в возрасте 65-85 лет. Всего в исследование включено приблизительно 98 субъектов.
В когорте В ~20 субъектов в возрасте 50-64 года отобраны и рандомизированы в соотношении 1: 1 для получения вакцины (N=10) или плацебо (N=10). После того как получены для рассмотрения данные по безопасности по истечении 7 дней после дозы 2 (день исследования 35) от субъектов когорты В, субъекты когорты С допускаются к получению своей начальной дозы. В когорте С ~30 субъектов в возрасте от 65 до 85 лет отобраны и рандомизированы в соотношении 1:1:1 для получения вакцины с адъювантом МРЬ и А1ОН (N=10), или вакцины только с адъювантом А1ОН, т.е. без МРЬ (N=10), или плацебо (N=10). Концентрации антигена, УЬР норовируса, и А1ОН в двух составах вакцины, которые оценивают, в когорте С одинаковы; отличие только в наличии или отсутствии МРЬ.
Норовирусная бивалентная вакцина на основе УЬР содержит УЬР 1 генотипа геногруппы I (ОТ1) и IV генотипа геногруппы II (ОП.4) в качестве антигенов и монофосфорил-липид А (МРЬ) и гидроксид алюминия (А1ОН) в качестве адъювантов, хлорид натрия ЩаС1) и Ь-гистидин (Ь-Нтк) в качестве буфера (рН 6,3-6,7), этанол и воду для инъекций. νΕ-Р ОП.4 содержат последовательность капсидного белка 8ЕО ГО NΟ: 1, которая была получена из трех штаммов ОП.4.
Однократная дозировка вакцины, выбранная для дальнейшего оценивания в когортах В и С, представляет собой наименьшую дозировку из когорты А, которая дает в результате наиболее сильный и воспроизводимый иммунный ответ, которая также в целом хорошо переносится. Данные по безопасности и иммуногенности на день 56 от субъектов когорты А рассматривают с помощью С8М/8МС, и выбирают дозировку бивалентной вакцины для оценивания в когортах В и С.
Субъекты ведут записи в дневнике самонаблюдения об ожидаемых симптомах, включая четыре местные реакции в месте инъекции, такие как боль, болезненная чувствительность, покраснение и припухлость, и 10 системных проявлений или симптомов, включая ежедневную температуру тела, измеряемую в ротовой полости, головную боль, слабость, мышечные боли, озноб, боли в суставах и гастроинтестинальные симптомы, а именно тошноту, рвоту, диарею, абдоминальные спастические боли/абдоминальную боль, от дня 0 до 7 после каждой дозы норовирусной бивалентной ЕМ вакцины на основе "9ЬР или контроля. Покраснение и припухлость в месте инъекции измеряют и фиксируют ежедневно в течение 7 дней после каждой инъекции.
Индивидуальные карты заполняют при каждом последующем посещении в дни 7+3, 21+3, 28+3, 35+3, 56+7, 180+14 и 393+14 и во время последующего телефонного звонка в день 265+14; субъектов расспрашивают о перенесенных за данный период заболеваниях, посещениях врача, любых серьезных неблагоприятных явлениях (8АЕ) и возникновении любых новых значимых медицинских состояний. У субъектов определяют количество форменных элементов крови с определением лейкоцитарной формулы и определением количества тромбоцитов и осуществляют оценку сывороточной мочевины, креатинина, глюкозы, АСТ и АЛТ при скрининге и в дни 21 и 35 (~7 дней после каждой дозы) для оценки того, продолжают ли они соответствовать требованиям, и для оценки безопасности соответственно.
Образцы крови от субъектов собирают до вакцинации в день 0 и в дни 7+3, 21+3, 28+3, 35+3, 56+7, 180+14 и 393 +14 для измерения количества сывороточных антител ДдО, !дА и !дМ вместе и по отдельности), выработанных в ответ на норовирусную бивалентную Ш: вакцину на основе ν+Р, посредством иммуноферментных анализов (ЕЫ8А). Также измеряют уровни антител, обуславливающих активность блокирования углеводов в сыворотке крови и НАГ в сыворотке крови.
Способы, описанные выше для когорты А, применяют для анализа образцов крови, собранных от иммунизированных лиц или лиц, получающих плацебо.
Результаты исследования будут использоваться в разработке клинического протокола введения составов вакцины по настоящему изобретению.
Настоящее изобретение не следует ограничивать в объеме конкретными описанными вариантами осуществления, которые, как предполагается, являются только иллюстрациями отдельных аспектов настоящего изобретения, и функциональные эквиваленты способов и компонентов охвачены объемом настоящего изобретения. Безусловно, различные модификации настоящего изобретения в дополнение к таковым, приведенным и описанным в данном документе, станут очевидными специалистам в данной области из вышеизложенного описания и сопутствующих графических материалов при использовании не более чем обычного экспериментирования. Такие модификации и эквиваленты, как предполагается, охвачены объемом прилагаемой формулы изобретения.
Все публикации, патенты и заявки на патент, упоминаемые в настоящем описании, в данном доку- 25 029470
менте включены в настоящее описание посредством ссылки в том же объеме, как если бы было указано, что каждая отдельная публикация, патент или заявка на патент конкретно и индивидуально включены в данный документ посредством ссылки.
Цитирование или рассмотрение литературных источников в данном документе не следует истолковывать как признание, что таковые являются уровнем техники для настоящего изобретения.
Список литературы
1. О1аз8, ΚΙ, Νοεί, Т Ап4о, КБ Рапккаизег, Θ Βείΐοΐί, Α Моип1з, £ГО Рагазкег, 18 Вгезее ап4 88 Мопгое. Тке Ερίάεηιίο1ο§γ о£ Еткепс СаксАкизез £гот Нитап: А Кеаззеззтеп! ΕΓδΐη§ Νενν О1а§позйсз. Лп/ес1В18 2000; 181 (8ир 2): 8254-8261.
2. Наг4у, МЕ. Νοΐ'ννη11< ап 4 Шогу/аПс-кке У^гизез” ΐη ЕрМепис Оаз1гоеп1егШз. СПп 1.аЪ Μβά 1999; 19(3): 675-90.
3. Лап§, X, ΏΥ Огакат, ΚΝ Аап§, ап 4 МК Ез1ез. Νοπνη11< νΐηΐδ Оепоте С1опт§ ап 4 Скагас1епгакоп. Рсгепсе 1990; 250: 1580-1583.
4. Лап§, X, М \\'ап1, ΏΥ Огакат, ап 4 МК Ез1ез. Ехргеззюп, 8е1£-АззетЫу, ап 4 Αηίφεηίείίν о£ 1ке Νοπνη11< νΐηΐδ СарзЫ Ριοίείη. 7 Уто1 1992; 66: 6527-6532.
5. О1азз, Р, Б1 Акке, 1М Ва11, I Берагс-Оо££аП, МЕ Наг4у, ап с! МК Ез1ез. Νοπνη11< νΐηΐδ Ореп Кеа4т§ Егате 3 Епсоскз а Мтог 81гис1ига1 Ριοίείη. 7 Угго12000; 74: 65816591.
6. ЕтскзтйЬ, Ъ, С Мое, 8 Магюппеаи, N Киуоеп, X Лап§, Б БтйЫай, Р δίεννηιί, 1 БеРепйи, ап 4 К Вайс. Нитап 8изсеркЫк1у ап 4 Вез1з1апсе ίο Νοΐ'ννη11< νΐηΐδ 1п£ескоп.
ΝαίΜβά2003; 9: 548-553.
7. Ратпо, ТА, ϋδ 8скге1Ъег, 18 Тпег, ΑΖ Карккап, ап с! ΝΚ В1аск1о\у. СНтса1 1ттипку ΐη Аси1е Оазкоегкепкз Саизес! Ьу Νοπνη11< Αβεηί. N Еп§1./ Μβά 1977; 297:
86-89.
8. Ауак, КО, К ϋοΐΐη, ΝΚ В1аск1о\у, НБ ОиРогк, КГ Визско, Τδ ТкогпкШ, ΑΖ Кар1к1ап, ап 4 КМ Скапоск. Сотрапзоп о£ Ткгее Αβεηίδ о£ Аси1е 1п£ескоиз Копкас1епа1 Оазкоеткепкз Ьу Сгозз-скаПеп^е ΐη Уо1итПеегз. ./ Ιηβββΐ !)ί8 1974; 129:
709.
9. Ва11, 1М, ΏΥ Огакат, АК Орекит, МА О4§ег, КА Оиеггего, ап с! МК Εδίεδ.
КесотЪтап! Иогу/аПс Укиз-Нке Рагкскз Οΐνεη Ога11у ίο Уо1иткеегз: Рказе I 81и4у.
Са81гоеп1его1о£у 1999; 117: 40-48.
10. Таске!, СО, МВ δζίεΐη, ОА Бозопку, δδ Ааззеппап, ап4 МК Εδίεδ. Нитога1,
Мисоза1, ап4 Се11и1аг 1ттипе Кезропзез ίο Ога1 Νοπνη11< Уйпз-Нке Рагкскз ΐη Уо1шкеегз. СИп1ттипо12003; 108: 241.
11. Оиеггего, КА, 1М Ва11, 88 Кга1ег, 8Е Раскесо, ГО С1етеп1з, ап4 МК Ез1ез.
КесотЪтап! ΝοπνηΙΗ Укиз-Нке Рагкскз А4тпиз1еге4 ЕкгапазаПу ίο Мке 1п4исе 8узкт1с ап4 Мисоза1 (Ееса1 ап4 Уа§та1) 1ттипе Кезропзез. У νίτοί 2001; 75: 9713.
12. №соШег-!ато1, В, А 0§кг, Б Ρποίΐι, Р РоЙпег, ап4 Е Кокк. КесотЪтап! Укиз-Нке Рагкскз о£ а ΝοΓονΐηΐδ (Оепо§гоир II 81гат) А4т1тпз1еге4 1пкапаза11у ап4 Ога11у χνίίΗ Мисоза1 АфиуаШз БТ ап4 БТ(К192О) ΐη ВАБВ/с Мке 1п4исе 8рес1Йс Нитога1 ап4 Се11и1аг ТЫ/ТЬ2-Нке Ептипе Кезропзез. Уассте 2004; 22:1079-1086.
13. Ретуа1, 8В, КК Коипе, N КатасЬап4агап, 81 В1акепеу, δ ϋεΒηιΐη, ϋ Ζΐηι, ΤΙ ΖητηΗ, Б δτηίίΗ, δ Шет, ΙΗ Е14п4§е, ΚΕ 8кго££, ап4 РА КеШу. Α Μο4ΐΕιε4 С1ю1ега Ηοίοίοχΐη СТ-Е29Н Епкапсез δνδίειηίε ап4 Мисоза1 Ьптипе Кезропзез ίο КесотЪтап! Νοπνη11< Уггиз- Нке РагНск Уассте. Уассте 2003; 21: 376-385.
14. Бака, Μ, Υ Уази4а, δ Когика, Т ТапфисЫ, К Ма1апо, I Маеуата, Т Коплуа, К Оккита, Ν Οοίο, ап4 К Тосккико. 1п4исОоп о£ зузкппс ап4 тисоза1 апкЪо4у гезропзез ΐη тке кптитгеН тКапазаПу χνίίΗ а1иттит-поп-а4зогЬе4 41рЬ1Ьейа ίοχοΐ4 ίοβείΐιετ χνίίΗ гесотЪтап! сЬокга ίοχΐη В зиЬипк аз ап а4]иуапк Уассте 1999; 18: 743751.
15. Κοζίοννδίά, РА, 8 Си-ЕАт, МК Кейка, ап4 ТР Е1ат§ап. Сотрапзоп о£ 1ке ога1, гес1а1, ап4 уа§та1 йптитгайоп гоикз £ог т4исйоп о£ апкЪо4кз ΐη гес1а1 ап4 §епка1 кас1 зесгекопз о£ у/отеп. 1п/ес11ттип 1997; 65: 1387-1394.
16. Мез1еску, I, 8М М1скакк, Ζ Мо14оуеапи, ап4 МА КиззеП. Кои1ез о£ йптитгайоп ап4 апк§еп 4еНуегу зуз1етз £ог оркта1 тисоза1 титте гезропзез ΐη китапз. ВеИгт§
Ιη8ίΜϋί 1997; 33-43.
- 26 029470
17. АУи, ΗΥ, апс! М\У Киззе11. Ыаза1 Ιντηρίιοΐά йззие, тПапаза1 шшшшгайоп, апс! сотрагОпетПаНгабоп о£ 1Не соттоп тисоза1 ттипе зуз!ет. 1ттгто1 Вез 1997; 16: 187-201.
18. Еуапз, ТГ, С\У С1и££, ΏΑ Ιοίιηδοη, ΜΙ Ьасу, ΏΗ Регзт§, апс1 Ж ВаШпс1§е. ЕпИапсетеп! о£ апй^еп-зресШс πητηιιηΐίν У1а 1Не Т1Ж4 1фапс1з МРЬ афиуап! апс! ΚίΒΐ 529. ΕχρβτίΚβν Уасстез 2003; 2: 219-229.
19. ВаМп0§е, Ж, Υ Уощепзеп, Ж АУагф апс! Л ЕПпсИ. МопорИозрИогу1 Ιΐρΐά А епИапсез тисоза1 апс! зуз1еппс тштпДу ίο уассте апП^епз ίοΐίοννΐηβ тПапаза1 асЬттзйайоп [Ιη Ргосезз Скайоп]. Уассте 2000; 18: 2416-2425.
20. Уап§, ζ)Β, М МагПп, 8М МкЬакк, апс! I Ка1г. Мескатзтз о£ топорЬозр1югу1 Ιΐρΐά А аи§теп!айоп о£ коз! гезропзез ίο гесотЪтап! На§В йот Рогркуготопаз ξΐηξΐναΐΰ. 1п/ес11ттип 2002; 70: 3557-3565.
21. ВаМпск, Р, ϋ ЮскаМзоп, О ΕΙΙΐοίί, ап0 А\У \УИее1ег. 5а£е1у еуаШаИоп о£ топорЬозр1югу1 Ιΐρΐά А (МРЬ): ап тшшпозйтиШогу аффуапЕ Реуи! ΤοχίοοΙ Ркагтасо12002; 35: 398-413.
22. Βа1ά^^άβе, Ж, Р МсОоу/ап, ΙΤ Еуапз, С С1и££, δ Моззтап, ϋ 1оЬпзоп, агИ ϋ Регзт§. Такт§ а ίοΐΐ оп Ишпап ά^зеазе: То11-Ике гесер1ог 4 а§отз!з аз уассте афщуагПз агИ топоШегареийс а§еп!з. ЕхреП Ορίη ΒίοΙ Ткег 2004; 4: 1129-1138.
23. Регзт§, ϋΗ, ΚΝ Со1ег, ΜΙ Ьасу, ΏΑ 1оЬпзоп, Ж Βа1ά^^άβе, КМ НегзЬЪег^, агИ 80 Κεεά. Такт§ ίοΐΐ: Ιΐρΐά А ттейсз аз аά^иνаηί8 агИ πηίηιιηοτηοάιιΟίοΐΈ. ТгепсЕ МлсгоЫо12002; 10: 832-37.

Claims (15)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ стимулирования формирования защитного иммунитета против норовируса у человека, включающий внутримышечное введение человеку не более однократной дозы вакцины, причем указанная однократная доза содержит вирусоподобные частицы (УБР) норовируса геногруппы I и/или геногруппы II, где указанные УБР норовируса геногруппы I и/или геногруппы II содержат капсидный белок, полученный из вирусного штамма соответствующей геногруппы, при этом указанная доза вакцины содержит не более 150 мкг УБР норовируса геногруппы I или геногруппы II.
  2. 2. Способ по п.1, где доза вакцины содержит не более 50 мкг указанных УБР норовируса геногруппы I.
  3. 3. Способ по п.1, где доза вакцины содержит не более 25 мкг указанных УБР норовируса геногруппы I.
  4. 4. Способ по п.1, где доза вакцины содержит не более 15 мкг указанных УБР норовируса геногруппы I.
  5. 5. Способ по п.1, где доза вакцины содержит не более 50 мкг УБР норовируса геногруппы II.
  6. 6. Способ по п.1, где доза вакцины содержит не более 25 мкг УБР норовируса геногруппы II.
  7. 7. Способ по п.1, где доза вакцины содержит не более 15 мкг УБР норовируса геногруппы II.
  8. 8. Способ по п.1, где указанные УБР норовируса геногруппы I представляют собой УБР вируса Νοΐ’\\α11<, а указанные УБР норовируса геногруппы II представляют собой УБР, образованные в результате экспрессии консенсусной последовательности норовируса геногруппы II.
  9. 9. Способ по п.1, где указанные УБР норовируса геногруппы II содержат капсидный белок, полученный из вирусного штамма 4 генотипа геногруппы II.
  10. 10. Способ по любому из пп.1-9, где вакцина дополнительно содержит по меньшей мере один адъювант.
  11. 11. Способ по п. 10, где по меньшей мере один адъювант представляет собой агонист ίοίί-подобных рецепторов.
  12. 12. Способ по любому из пп.1-9, где вакцина дополнительно содержит два адъюванта.
  13. 13. Способ по п.12, где указанные адъюванты представляют собой монофосфорил-липид А и гидроксид алюминия.
  14. 14. Способ по любому из пп.1-13, где вакцина дополнительно содержит буфер.
  15. 15. Способ по п.14, где указанный буфер выбран из группы, включающей Б-гистидин, имидазол, янтарную кислоту, трис и лимонную кислоту.
    - 27 029470
EA201490258A 2011-07-11 2012-07-11 Способ стимулирования формирования защитного иммунитета против норовируса EA029470B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161506447P 2011-07-11 2011-07-11
PCT/US2012/046222 WO2013009849A1 (en) 2011-07-11 2012-07-11 Parenteral norovirus vaccine formulations

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201490258A1 EA201490258A1 (ru) 2014-05-30
EA029470B1 true EA029470B1 (ru) 2018-03-30

Family

ID=47506489

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201792407A EA035442B1 (ru) 2011-07-11 2012-07-11 Композиции, содержащие буфер, вакцины, которые содержат композиции, содержащие буфер, и пути их применения
EA201490258A EA029470B1 (ru) 2011-07-11 2012-07-11 Способ стимулирования формирования защитного иммунитета против норовируса
EA202090699A EA202090699A3 (ru) 2011-07-11 2012-07-11 Композиции, содержащие буфер, вакцины, которые содержат композиции, содержащие буфер, и пути их применения

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201792407A EA035442B1 (ru) 2011-07-11 2012-07-11 Композиции, содержащие буфер, вакцины, которые содержат композиции, содержащие буфер, и пути их применения

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA202090699A EA202090699A3 (ru) 2011-07-11 2012-07-11 Композиции, содержащие буфер, вакцины, которые содержат композиции, содержащие буфер, и пути их применения

Country Status (29)

Country Link
US (5) US9801934B2 (ru)
EP (3) EP3299030B1 (ru)
JP (2) JP6208659B2 (ru)
KR (1) KR102096937B1 (ru)
CN (3) CN108567975A (ru)
AU (2) AU2012282658B2 (ru)
BR (1) BR112014000656A2 (ru)
CA (1) CA2841356C (ru)
CL (1) CL2014000082A1 (ru)
CR (2) CR20190540A (ru)
DK (1) DK3299030T3 (ru)
DO (2) DOP2014000004A (ru)
EA (3) EA035442B1 (ru)
EC (1) ECSP14013201A (ru)
ES (2) ES2926487T3 (ru)
GE (1) GEP201706668B (ru)
HK (3) HK1198136A1 (ru)
IL (1) IL230356B (ru)
MA (1) MA35414B1 (ru)
MX (1) MX356586B (ru)
MY (1) MY170746A (ru)
PE (1) PE20140845A1 (ru)
PH (1) PH12018501515B1 (ru)
PL (2) PL2731621T3 (ru)
SG (1) SG10201605644WA (ru)
TN (1) TN2014000008A1 (ru)
UA (1) UA117732C2 (ru)
WO (1) WO2013009849A1 (ru)
ZA (2) ZA201401012B (ru)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2007303608B2 (en) 2006-09-29 2013-05-02 Takeda Vaccines, Inc. Norovirus vaccine formulations
KR20100083150A (ko) 2007-09-18 2010-07-21 리고사이트 파머슈티컬즈 인코퍼레이티드 노로바이러스에 대한 보호면역반응을 제공하는 방법
US20100266636A1 (en) 2007-09-18 2010-10-21 Ligocyte Pharmaceuticals, Inc. Method of conferring a protective immune response to norovirus
EA035442B1 (ru) 2011-07-11 2020-06-17 Такеда Вэксинс, Инк. Композиции, содержащие буфер, вакцины, которые содержат композиции, содержащие буфер, и пути их применения
EP3052631B1 (en) 2013-10-03 2019-08-07 Takeda Vaccines, Inc. Methods of detection and removal of rhabdoviruses from cell lines
WO2015093452A1 (ja) 2013-12-16 2015-06-25 武田薬品工業株式会社 マイクロニードル
CN107184970A (zh) * 2017-02-16 2017-09-22 北京生物制品研究所有限责任公司 口服诺如病毒亚单位疫苗及lt作为该疫苗佐剂的用途
GB201703644D0 (en) 2017-03-07 2017-04-19 Elopak As Improvements in or relating to toller mounting arrangements
EP3624851A1 (en) * 2017-05-15 2020-03-25 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Stable virus-containing composition
US11633467B2 (en) 2018-02-15 2023-04-25 Icon Genetics Gmbh Immunogenic composition and vaccine for generating an immune response to norovirus
US20210121511A1 (en) * 2018-05-29 2021-04-29 Unm Rainforest Innovations Virus-like particle compositions and methods of using same
CN109265542B (zh) * 2018-09-27 2021-06-15 国药中生生物技术研究院有限公司 特异性结合诺如病毒gii.4基因型vp1蛋白或vlp的抗体及其制备方法和应用
AR117462A1 (es) * 2018-12-20 2021-08-04 Takeda Vaccines Inc Vacuna contra norovirus, formulaciones y métodos
WO2021140524A1 (en) 2020-01-08 2021-07-15 Bharat Biotech International Limited Viral vaccine compositions and methods of preparations thereof
CA3213547A1 (en) 2021-03-29 2022-10-06 Naoshi Fukushima Peptide of norovirus origin, polynucleotide, antibody, composition, method for identifying neutralizing epitope for norovirus
JP2024519800A (ja) 2021-05-21 2024-05-21 タケダ ワクチン，インコーポレイテッド 固体組成物、フリーズドライ方法およびガラスバイアル

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010017542A1 (en) * 2008-08-08 2010-02-11 Ligocyte Pharmaceuticals, Inc. Virus-like particles comprising composite capsid amino acid sequences for enhanced cross reactivity
US20100266636A1 (en) * 2007-09-18 2010-10-21 Ligocyte Pharmaceuticals, Inc. Method of conferring a protective immune response to norovirus

Family Cites Families (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6572862B1 (en) 1989-11-08 2003-06-03 Baylor College Of Medicine Methods and reagents to detect and characterize Norwalk and related viruses
WO1992016543A1 (en) 1991-03-25 1992-10-01 Genelabs Incorporated NORWALK VIRUS HUMAN GASTROENTERITIS AGENT AND MOLECULAR CLONING OF CORRESPONDING cDNAs
WO1993021325A1 (en) 1992-04-08 1993-10-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Wild-type measles virus glycoproteins: vaccine and detection method therefor
JPH08500250A (ja) 1992-09-07 1996-01-16 ベイラー・カレッジ・オブ・メディシン ノーウォークおよび関連ウイルスを検出し、かつ特徴付けるための方法並びに試薬
HU219056B (hu) 1993-03-23 2001-02-28 Smithkline Beecham Biologicals Sa 3-O-Dezacilezett monofoszforil-lipid A-t tartalmazó vakcinakészítmény
US5788970A (en) 1994-03-29 1998-08-04 The University Of Maryland College Park Chimeric infectious bursal disease virus CDNA clones, expression products and vaccines based thereon
MXPA96005662A (es) 1994-05-16 2004-08-19 Merck & Co Inc Vacunas de papilomavirus.
US5645051A (en) 1995-04-21 1997-07-08 Dura Pharmaceuticals, Inc. Unit dose dry powder inhaler
US5861241A (en) 1995-08-16 1999-01-19 University Of Massachusetts Monoclonal antibodies for detecting Norwalk virus
GB9525083D0 (en) 1995-12-07 1996-02-07 Danbiosyst Uk Vaccine compositions
US5834015A (en) * 1996-09-11 1998-11-10 Albany Medical College Protein-lipid vesicles and autogenous vaccine comprising the same
US5953727A (en) 1996-10-10 1999-09-14 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Project-based full-length biomolecular sequence database
US6491919B2 (en) 1997-04-01 2002-12-10 Corixa Corporation Aqueous immunologic adjuvant compostions of monophosphoryl lipid A
PT973546E (pt) 1997-04-08 2004-06-30 Merck & Co Inc Formulacoes estabilizadas de virus de papiloma humano
EP0980257A1 (en) 1997-05-01 2000-02-23 Chiron Corporation Use of virus-like particles as adjuvants
US20040265377A1 (en) 1997-10-27 2004-12-30 Harry Seager Solid dispersing vaccine composition for oral delivery
PL347472A1 (en) 1998-08-14 2002-04-08 Merck & Co Inc Process for purifying human papillomavirus virus-like particles
EP1140161B1 (en) 1998-12-17 2006-04-19 Merck & Co., Inc. Synthetic virus-like particles with heterologous epitopes
DK1150712T3 (da) * 1999-02-05 2009-02-02 Merck & Co Inc Vaccineformuleringer mod human papillomavirus
KR100762092B1 (ko) 1999-06-22 2007-10-04 국립감염증연구소장이 대표하는 일본국 Ｓｒｓｖ 검출 킷트
JP2002020399A (ja) 2000-07-10 2002-01-23 Osaka Prefecture ノルウォークウイルス（ｎｖ）を認識するモノクローナル抗体
GB0118249D0 (en) 2001-07-26 2001-09-19 Chiron Spa Histidine vaccines
WO2003068933A2 (en) 2002-02-14 2003-08-21 Novavax, Inc. Optimization of gene sequences of virus-like particles for expression in insect cells
GB0206360D0 (en) 2002-03-18 2002-05-01 Glaxosmithkline Biolog Sa Viral antigens
GB0206359D0 (en) 2002-03-18 2002-05-01 Glaxosmithkline Biolog Sa Viral antigens
WO2003087327A2 (en) 2002-04-11 2003-10-23 Medimmune Vaccines, Inc. Preservation of bioactive materials by freeze dried foam
GB0302218D0 (en) 2003-01-30 2003-03-05 Chiron Sri Vaccine formulation & Mucosal delivery
AU2003237528A1 (en) 2002-06-07 2003-12-22 Kentucky Bioprocessing, Llc Flexible vaccine assembly and vaccine delivery platform
AU2003242742B2 (en) 2002-06-20 2009-04-30 Cytos Biotechnology Ag Packaged virus-like particles for use as adjuvants: method of preparation and use
DE602004020189D1 (de) 2003-01-30 2009-05-07 Novartis Vaccines & Diagnostic Adjuvante influenza-vakzine
WO2004073652A2 (en) 2003-02-20 2004-09-02 Becton Dickinson And Company Powder formulations of recombinant staphylococcal enterotoxin b (rseb) made by atmospheric spray-freeze drying for improved vaccination
US8592197B2 (en) 2003-07-11 2013-11-26 Novavax, Inc. Functional influenza virus-like particles (VLPs)
US7879338B2 (en) 2003-07-21 2011-02-01 Boyce Thompson Institute For Plant Research Vectors and methods for immunization against norovirus using transgenic plants
US20050152911A1 (en) 2003-09-24 2005-07-14 Montana State University Norovirus monoclonal antibodies and peptides
US7795242B2 (en) 2003-10-15 2010-09-14 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods and compositions for immunomodulation
US20050215501A1 (en) 2003-10-24 2005-09-29 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Methods and products for enhancing epitope spreading
FR2863890B1 (fr) 2003-12-19 2006-03-24 Aventis Pasteur Composition immunostimulante
US7481997B1 (en) 2004-02-12 2009-01-27 Montana State University Snow mountain virus genome sequence, virus-like particles and methods of use
US20050260225A1 (en) 2004-05-18 2005-11-24 Goldberg Joanna B Intranasal recombinant Salmonella vaccine encoding heterologous polysaccharide antigens
CU23496A1 (es) 2004-09-03 2010-02-23 Ct Ingenieria Genetica Biotech Composición vacunal contra el virus de la hepatitis c
KR101501162B1 (ko) 2004-10-20 2015-03-16 사노피 파스테르 바이오로직스, 엘엘씨 일본 뇌염 바이러스 및 웨스트 나일 바이러스에 대한 백신
GB0428394D0 (en) 2004-12-24 2005-02-02 Chiron Srl Saccharide conjugate vaccines
CN101128216A (zh) 2005-01-05 2008-02-20 费城健康和教育公司 输送载体、生物活性物质和病毒疫苗
US8168771B2 (en) 2005-01-31 2012-05-01 The Johns Hopkins University Use of consensus sequence as vaccine antigen to enhance recognition of virulent viral variants
CN101203529A (zh) 2005-02-18 2008-06-18 诺华疫苗和诊断公司 来自脑膜炎/脓毒症相关性大肠杆菌的蛋白质和核酸
ZA200707413B (en) 2005-03-18 2009-01-28 Cytos Biotechnology Ag Cat allergen fusion proteins and uses thereof
EP1885394A4 (en) 2005-06-01 2009-10-21 Dow Global Technologies Inc PRODUCTION OF MULTIVALENT PARTICLES LIKE VIRUSES
EP1736538A1 (en) 2005-06-21 2006-12-27 Cytos Biotechnology AG Process for the preparative purification of virus-like-particles (VLPs)
WO2007081447A2 (en) 2005-11-22 2007-07-19 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Norovirus and sapovirus antigens
JP2007145775A (ja) 2005-11-29 2007-06-14 Falco Life Science:Kk ノロウイルスｇｉの高感度検出方法
US20080029915A1 (en) * 2006-08-02 2008-02-07 Courtoy Nv Rotary tablet press
AU2007303608B2 (en) 2006-09-29 2013-05-02 Takeda Vaccines, Inc. Norovirus vaccine formulations
NZ577405A (en) 2006-12-06 2012-08-31 Novartis Ag Vaccines including antigen from four strains of influenza virus
US8481693B2 (en) * 2007-03-14 2013-07-09 Takeda Vaccines (Montana), Inc. Virus like particle purification
WO2009033229A1 (en) 2007-09-12 2009-03-19 Australian Centre For Plant Functional Genomics Pty Ltd Plant seed active transcriptional control sequences
KR20100083150A (ko) * 2007-09-18 2010-07-21 리고사이트 파머슈티컬즈 인코퍼레이티드 노로바이러스에 대한 보호면역반응을 제공하는 방법
CA2750321A1 (en) * 2009-01-22 2010-07-29 Pharmathene, Inc. Stable vaccine compositions and methods of use
US20120093859A1 (en) * 2009-02-10 2012-04-19 Novartis Ag Influenza vaccine regimens for pandemic-associated strains
US20110070260A1 (en) 2009-09-09 2011-03-24 Baric Ralph S Multivalent Immunogenic Compositions Against Noroviruses and Methods of Use
SG182636A1 (en) 2010-01-21 2012-08-30 Ligocyte Pharmaceuticals Inc Targeted heterologous antigen presentation on calicivirus virus-like particles
EP2575876B1 (en) * 2010-05-26 2017-12-06 Selecta Biosciences, Inc. Multivalent synthetic nanocarrier vaccines
EA035442B1 (ru) 2011-07-11 2020-06-17 Такеда Вэксинс, Инк. Композиции, содержащие буфер, вакцины, которые содержат композиции, содержащие буфер, и пути их применения
JOP20130186B1 (ar) 2012-06-22 2021-08-17 Takeda Vaccines Montana Inc تنقية الجزيئات الشبيهة بالفيروسات
EP4253412A3 (en) 2015-12-16 2023-11-22 The Walter and Eliza Hall Institute of Medical Research Inhibition of cytokine-induced sh2 protein in nk cells
AU2017346885B2 (en) 2016-10-18 2021-10-21 Intima Bioscience, Inc. Tumor infiltrating lymphocytes and methods of therapy
MX2020011697A (es) 2018-05-03 2020-12-10 Univ Texas Células exterminadoras naturales diseñadas para expresar receptores de antígeno quimérico con bloqueo de punto de control inmunitario.
EP3840778A1 (en) 2018-08-20 2021-06-30 Takeda Vaccines, Inc. Vlp formulations
AR117462A1 (es) 2018-12-20 2021-08-04 Takeda Vaccines Inc Vacuna contra norovirus, formulaciones y métodos
WO2020168300A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Editas Medicine, Inc. Modified natural killer (nk) cells for immunotherapy

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100266636A1 (en) * 2007-09-18 2010-10-21 Ligocyte Pharmaceuticals, Inc. Method of conferring a protective immune response to norovirus
WO2010017542A1 (en) * 2008-08-08 2010-02-11 Ligocyte Pharmaceuticals, Inc. Virus-like particles comprising composite capsid amino acid sequences for enhanced cross reactivity

Also Published As

Publication number Publication date
ZA201500915B (en) 2016-06-29
CR20190540A (es) 2022-04-04
EP3299030A1 (en) 2018-03-28
NZ710919A (en) 2017-12-22
PH12018501515A1 (en) 2019-02-04
US20180185468A1 (en) 2018-07-05
SG10201605644WA (en) 2016-09-29
CN105031637A (zh) 2015-11-11
HK1199202A1 (en) 2015-06-26
EP2731621A4 (en) 2015-03-25
CN103874507A (zh) 2014-06-18
ECSP14013201A (es) 2014-05-31
CN108567975A (zh) 2018-09-25
GEP201706668B (en) 2017-05-25
WO2013009849A1 (en) 2013-01-17
AU2015200836A1 (en) 2015-03-12
ES2656527T3 (es) 2018-02-27
JP6613259B2 (ja) 2019-11-27
JP6208659B2 (ja) 2017-10-04
EA035442B1 (ru) 2020-06-17
JP2017214357A (ja) 2017-12-07
CA2841356C (en) 2022-03-01
PL3299030T3 (pl) 2022-12-05
US9867876B2 (en) 2018-01-16
AU2015200836B2 (en) 2016-08-25
EA201792407A2 (ru) 2018-03-30
BR112014000656A2 (pt) 2017-02-14
CA2841356A1 (en) 2013-01-17
AU2012282658B2 (en) 2014-11-27
EA201792407A3 (ru) 2018-07-31
EP3299030B1 (en) 2022-06-08
ZA201401012B (en) 2015-05-27
MA35414B1 (fr) 2014-09-01
US20130273102A1 (en) 2013-10-17
US9801934B2 (en) 2017-10-31
US20230338503A1 (en) 2023-10-26
CR20140069A (es) 2014-06-27
IL230356B (en) 2019-05-30
ES2926487T3 (es) 2022-10-26
MX356586B (es) 2018-06-05
EP2731621A1 (en) 2014-05-21
EA202090699A2 (ru) 2020-07-31
JP2014520852A (ja) 2014-08-25
US20210085778A1 (en) 2021-03-25
US11701420B2 (en) 2023-07-18
HK1198136A1 (en) 2015-03-13
UA117732C2 (uk) 2018-09-25
PH12018501515B1 (en) 2019-02-04
KR20140066160A (ko) 2014-05-30
EP4112074A1 (en) 2023-01-04
TN2014000008A1 (en) 2015-07-01
US20160000899A1 (en) 2016-01-07
EA202090699A3 (ru) 2020-11-30
CL2014000082A1 (es) 2014-07-04
DK3299030T3 (da) 2022-09-05
AU2012282658A1 (en) 2013-03-14
DOP2014000004A (es) 2014-10-31
KR102096937B1 (ko) 2020-04-03
US10675341B2 (en) 2020-06-09
MY170746A (en) 2019-08-27
NZ620865A (en) 2015-08-28
HK1215154A1 (zh) 2016-08-19
PE20140845A1 (es) 2014-08-03
EA201490258A1 (ru) 2014-05-30
PL2731621T3 (pl) 2018-10-31
MX2014000411A (es) 2014-08-26
DOP2022000030A (es) 2022-06-30
EP2731621B1 (en) 2017-11-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA029470B1 (ru) Способ стимулирования формирования защитного иммунитета против норовируса
US11628214B2 (en) Immunogenic compositions and vaccines comprising African swine fever virus peptides and proteins and uses thereof
CA2526128C (en) Severe acute respiratory syndrome dna vaccine compositions and methods of use
JP7083362B2 (ja) セネカウイルスａ免疫原性組成物およびその方法
TWI656213B (zh) 豬小病毒５ａ、用法及疫苗
CN113666990A (zh) 一种诱导广谱抗冠状病毒的t细胞疫苗免疫原及其应用
KR102075393B1 (ko) 중증 열성 혈소판 감소 증후군(sfts) 바이러스 감염 질환 예방 또는 치료용 백신 조성물
WO2021188818A1 (en) Vaccine constructs and compositions and methods of use thereof
EP3116540B1 (en) Compositions and methods for treating, including preventing, parvovirus infections and related diseases
US20230210981A1 (en) Coronavirus disease 2019 (covid-19) combination vaccine
KR20230084078A (ko) 제3 유전자형 e형 간염 바이러스 캡시드 단백질의 면역원성 단편 또는 이의 바이러스-유사 입자를 포함하는 e 형 간염의 예방 또는 치료용 백신 조성물
KR20230084422A (ko) 제4 유전자형 e형 간염 바이러스 캡시드 단백질의 면역원성 단편 또는 이의 바이러스-유사 입자를 포함하는 e 형 간염의 예방 또는 치료용 백신 조성물
KR20220133633A (ko) SARS-CoV-2 스파이크 단백질 S1 유래 단백질 및 페리틴 유래 단백질을 포함하는 재조합 단백질 및 이의 용도
EA041112B1 (ru) Иммуногенные композиции senecavirus a и способы с ними
BE1009826A3 (fr) Vaccin plasmidique contre le virus pseudorabique.

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM