EA028206B1 - Производные 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9н-пуринов, их использование в качестве лекарственных средств и фармацевтических составов - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к новым производным 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9H-пуринов с общей формулой Iпоказывающим действие в качестве специфических ингибиторов роста и ангиогенеза гепатоклеточной карциномы. Изобретение также относится к применению производных 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пуринов с общей формулой I для получения лекарственных средств и фармацевтических композиций, сочетающих антипролиферативное, антиангиогенное, противовоспалительное и проапоптозное действия.

Description

Настоящее изобретение относится к новым производным 2-замещенных-6-биарилметиламино-9циклопентил-9Н-пурина, их действию в качестве специфических ингибиторов роста и ангиогенеза гепатоклеточных карцином, и их использованию в качестве лекарственных средств.

Уровень техники

Гепатоклеточная карцинома (ГКК) относится к числу самых распространенных в мире злокачественных новообразований (Е1-8егад & Кибо1рЬ, 2007, Оа81гоеп1его1оду, 132(7):2557-76). Среди наиболее распространенных факторов ГКК - инфекции вирусов гепатита, хроническое злоупотребление алкоголем, экологические токсины, гемохроматоз, недостаток αΐ-антитрипсина или неалкогольные жировые болезни печени Тага/ί & ОеРтЬо, 2006, Ναι. Кеу. Сапсег, 6(9):674-87). Исключая радикальное лечение ГКК посредством хирургической резекции или трансплантации печени, в последнее время в качестве перспективного терапевтического варианта была установлена молекулярно-направленная терапия. В настоящее время проводятся исследования нескольких хемотерапевтических агентов в рамках монотерапии или при направленной терапии в связке или в сочетании с другими традиционно используемыми агентами (СЬиа & СЬоо, 2011, Ιηί. I. Нера1о1. 348297. ЕриЬ 2011 Τι1. 12; Тапака & Лги, 2011, I. Са81гоеп1его1, 46(3):289-96). К сожалению, большинство агентов показали ограниченную эффективности при ГКК, вероятно - по причине относительно высокой хеморезистентности этого типа опухоли. Ингибирование ангиогенеза считается рациональной стратегией лечение в связи с типичной гиперваскуляризации узелков ГКК в опухолях (Ае1кег & Тгсдап, 2011, АогИ I. Са81гоеп1его1., 14; 17(26):3075-81), хотя в последнее время в качестве новых потенциальных стратегий лечения ГКК появились также другие молекулярные цели, включая раковые стволовые клетки (Тапака & Лги, 2011, 1. Са81гоеп1его1. 46(3):289-96). Сорафениб (Нексавар) стал первым разрешенным лекарственным препаратом для лечения ГКК на поздней стадии, нацеленным на широкий спектр киназ, включая УЕОРК, ΡΌΟΡΚ и КаТ, которые часто гиперактивируются при ГКК. К сожалению, точное показание сорафениба до сих пор остается широким и неясным (Ктш е1 а1., 2011, Опсо1оду, 25(3):283-91, 295), поэтому ощущается критическая необходимость в принципиально новых терапевтических стратегиях эффективного лечения ГКК.

Недавно для лечения нерезектабельной ГКК было предложено лечение трансартериальной хемоэмболизацией (ТАХЭ) (Ь1оуе1 & Вгшх, 2008, 1. Нера1о1, 48 8ирр1 1:820-37), которое эффективно приводит к избирательному распределению и более продолжительному времени удержания часто используемых химиотерапевтических препаратов, таких как доксорубицин, цисплатин и эпирубицин, в опухоли (Ь1оуе1 & Вгшх, 2003 Нера1о1оду, 37(2):429-42; МагеШ е1 а1., 2006, Сапсег Тгеа1. Кеу., 32(8):594-606).

Кроме того, получены новые выводы, касающиеся патологии злокачественных гепатоцитов, отражающие специфичность прогрессирования ГКК (Ζί)1 е1 а1., 2009, Ри1иге Опсо1., 5(8): 1169-79). В установленной недавно человеческой модели эпителиально-мезенхимального перехода (ЕМТ) подчеркивается значимость указанного процесса, особенно в распространении рака, метастатической колонизации, а также полезная оценка эффективности лекарственных препаратов во время прогрессирующей ГКК (Ζΐ]1 е1 а1., 2011, Мо1 Сапсег ТЬег, 10(5):850-60). Была выполнена замена пуринового кольца в позициях 2, 6 и 9 широким кругом заместителей с анализом полученных соединений, например замена заместителями на основе бензила и фенила в позиции Ν⁶ (АО 03/040144, АО 2010^Ζ00067, АО 2010^Ζ00004), замена рибозой в позиции 9 (АО 2004/058791), замена менее стерически требовательными заместителями в позиции 2 (АО 2009/003428), замена заместителями 2-замещенного бензила в позиции Ν⁶ (АО 2009/043320). И8 696970В2 относится к производным 2,6,9-тризамещенного биарилпурина, несущим, в основном, короткий алкил в позиции 9 (метил, этил, изопропил), а также к их использованию в качестве ингибиторов ЦЗК1/2 и антипролиферативных соединений. АО 03/022216А2 и АО 00/55161А1 также относятся к производным 2,6,9-двузамещенного биариладенина, несущим изопропильную группу в позиции 9, и к их использованию при нескольких гиперпролиферативных заболеваниях. Однако эти заместители не привели к созданию полезных лекарств от гепатоклеточной карциномы. Таким образом, настоящее изобретение создает ряд новых производных 2-замещенных-6-биарилметиламино-9циклопентил-9Н-пуринов, которые полезны для ингибирования роста и ангиогенеза гепатоклеточной карциномы. Эта группа новых производных пуринов характеризуется необычным сочетанием цитотоксического, антиангиогенного, противовоспалительного и проапоптозного действия, что придает названным соединениям сильные противораковые свойства, но и обеспечивает неизвестный доселе тип действия (антиангиогенного, проапоптозного, противовоспалительного), полезного для лечения гепатокарциномы, в частности нацеленный на метастатическую гепатоклеточную карциному. Целью настоящего изобретения является создание нового поколения уникальных и эффективных противораковых соединений, обладающих улучшенной избирательностью и более высоким индексом эффективности.

- 1 028206

Описание изобретения

Предметом настоящего изобретения являются 2-замещенные-6-биарилметиламино-9-циклопентил9Н-пурины с общей формулой I

в которых К¹ выбирается из (4-аминоциклогексил)амино, (2-аминоциклогексил)амино, (З-аминоциклогексил)амино, (4-гидроксициклогексил)амино, [(2К)-1-гидроксибутан-2-ил]амино, (2-гидрокси-2-метилпропил)амино, (З-гидрокси-З-метилбутил)амино, [(3В)-2-гидрокси-2,4-диметилпент3-ил]амино, [(1В)-1-(диметиламино)-2-гидроксиэтил]амино, [(3К)-2-гидроксипент-3-ил]амино, (З-гидроксипропил)амино, (2-аминоэтил)амино, (3-аминопропил)амино, (2-аминопропил)амино;

К² выбирается из замещенного фенила, где заместители находятся в любых позициях и независимо выбираются из группы, в состав которой входят ОН, ОСН₃, ΝΗ₂, С1, Вг, Ρ, I, СООН, ΝΟ₂, 2-пиридил,

3- пиридил, 4-пиридил, 2-фуранил 3-фуранил, тиен-2-ил, тиен-3-ил, пиразол-1-ил, пиразол-3-ил, пиразол4- ил, пиррол-1-ил, и их фармацевтически приемлемые соли.

Когда в молекуле присутствуют хиральные центры, настоящее изобретение охватывает оптически активные изомеры, их смеси и рацематы.

Еще одним предметом настоящего изобретения являются 2-замещенные-6-биарилметиламино-9циклопентил-9Н-пурины с общей формулой I для использования в качестве лекарственных средств.

Еще одним предметом настоящего изобретения являются 2-замещенные-6-биарилметиламино-9циклопентил-9Н-пурины с общей формулой I для использования в ингибировании пролиферации клеток и/или индуцировании апоптоза.

Еще одним предметом настоящего изобретения являются 2-замещенные-6-биарилметиламино-9циклопентил-9Н-пурины с общей формулой I для использования в ингибировании ангиогенеза.

Еще одним предметом настоящего изобретения являются 2-замещенные-6-биарилметиламино-9циклопентил-9Н-пурины с общей формулой I для использования в качестве противовоспалительных соединений.

Еще одним предметом настоящего изобретения являются 2-замещенные-6-биарилметиламино-9циклопентил-9Н-пурины с общей формулой I для использования в лечении раковых заболеваний в предпочтительном случае выбираемых из группы, в состав которой входят гепатоклеточная карцинома и метастатическая гепатоклеточная карцинома. В частности, эти соединения сочетают антипролиферативное, антиангиогенное, противовоспалительное и проапоптозное действие.

Еще одним предметом настоящего изобретения являются 2-замещенные-6-биарилметиламино-9циклопентил-9Н-пурины с общей формулой I для использования в производстве лекарственных средств для лечения раковых заболеваний, таких как опухоли.

Соединения по настоящему изобретению представляют собой ингибиторы циклин-зависимых киназ (ЦЗК), выбираемых из группы, в состав которой входят ЦЗК 5, 7 и 9, и егк1 или их сочетания. Они также активируют онкосупрессор р53.

Изобретение также включает фармацевтический состав, содержащий по меньшей мере одни

2-замещенные-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пурины с общей формулой I и фармацевтически приемлемый носитель, а также еще один противораковый агент, выбираемый из группы, в состав которой входят цис-платин, доксорубицин или сорафениб.

- 2 028206

В предпочтительном варианте осуществления производные формулы I выбираются из группы, в состав которой входят:

Я²-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-А⁶-(4-пиридин-2-ил-бензил)-9Я-пурин2,6-диамин, Я²-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-У⁶-(4-тиофен-2-ил-бензил)9Я-пурин-2,6-диамин, А²-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-А⁶-(4-тиофен-З ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Л^/6(4-фуран-2-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(4-амино-циклогексил)-9циклопентил-Х⁶-(4-фуран-3-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-?/⁶-(3'-фтор-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6диамин, Я²-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-А⁶-(2'-метокси-бифенил-4илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-А⁶-(2'гидрокси-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(4-амино-циклогексил)9-циклопентил-У⁶-(2'-амино-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Ν²-(4амино-циклогексил)-9-циклопентил-У⁶-(4-пиразол-1-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6диамин, 4'- {[2-(4-амино-циклогексиламино)-9-циклопентил-9Н-пурин-6иламино]-метил} -бифенил-4-карбоновая кислота, Я²-(4-амино-циклогексил)-Л^/б[2,2']бипиридинил-5-илметил-9-циклопентил-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-У⁶-(6-тиофен-2-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин- 3 028206

2,6-диамин, Я²-('4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-(6-тиофен-З-илпиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Л^?2-(4-амино-циклогексил)-9циклопентил-Я⁶-(6-фуран-2-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(4амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-(6-фуран-3-ил-пиридин-3-илметил)-9Япурин-2,6-диамин, Я²-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-М-[6-(3-фторфенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(4-амино-циклогексил)-9циклопентил-Я⁶-[6-(2-метокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-[6-(2-гидрокси-фенил)-пиридин-3илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-[6(2-амино-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-(6-пиразол-1-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин2,6-диамин, 4-(5-{[2-(4-амино-циклогексиламино)-9-циклопентил-9Н-пурин-6иламино]-метил}-пиридин-2-ил)-бензойная кислота, Я²-(2-амино-циклогексил)-9циклопентил-Я⁶-(4-пиридин-2-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-аминоциклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-(4-тиофен-2-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-(4-тиофен-3-ил-бензил)-9Я-пурин2,6-диамин, Я²-(2-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-(4-фуран-2-ил-бензил)9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-(4-фуран-3ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶(3'-фтор-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-циклогексил)-9циклопентил-?/-(2'-метокси-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-(2' -гидрокси-бифенил-4-илметил)-9Япурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-(2'-аминобифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-циклогексил)-9циклопентил-ЯЦб-пиразол-1 -ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 4'- {[2-(2-аминоциклогексиламино)-9-циклопентил-9Н-пурин-6-иламино]-метил}-бифенил-4карбоновая кислота, Я²-(2-амино-циклогексил)-Я⁶-[2,2']бипиридинил-5-илметил9-циклопентил-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-циклогексил)-9-циклопентилЯ⁶-(6-тиофен-2-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-аминоциклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-(6-тиофен-3-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин2,6-диамин, Я²-(2-амино-циклогексил)-9-циклопентил-?/⁶-(6-фуран-2-ил-пиридин·

3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶(6-фуран-3-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино- 4 028206 циклогексил)-9-циклопентил-Л^/6-[6-(3-фтор-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Япурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-[6-(2-метоксифенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-циклогексил)-9циклопентил-Л^-[6-(2-гидрокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин-2,6диамин, Я²-(2-амино-циклогексил)-9-циклопентил-У’-[6-(2-амино-фенил)пиридин-3-илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-циклогексил)-9циклопентил-Я⁶-(6-пиразол-1 -ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 4-(5{[2-(2-амино-циклогексиламино)-9-циклопентил-9Н-пурин-6-иламино]-метил}пиридин-2-ил)-бензойная кислота, Я²-(3-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶(4-пиридин-2-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-циклогексил)-9циклопентил-Я⁶-(4-тиофен-2-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-аминоциклогексил)-9-циклопентил-Л^-(4-тиофен-3-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-(4-фуран-2-ил-бензил)-9Я-пурин2,6-диамин, Ν²-(3-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-(4-фуран-3-ил-бензил)9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-(3'-фторбифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-циклогексил)-9циклопентил-7У⁶-(2'-метокси-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-(2' -гидрокси-бифенил-4-илметил)-9Япурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-(2'-аминобифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-циклогексил)-9циклопентил-Я⁶-(4-пиразол-1 -ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 4'- {[2-(3 -аминоциклогексиламино)-9-циклопентил-9Н-пурин-6-иламино]-метил}-бифенил-4карбоновая кислота, Я²-(3-амино-циклогексил)-Я⁶-[2,2']бипиридинил-5-илметил9-циклопентил-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-циклогексил)-9-циклопентилЯ⁶-(6-тиофен-2-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-аминоциклогексил^-циклопентил-Я⁶-(6-тиофен-З -ил-пиридин-3 -илметил)-9Я-пурин2,6-диамин, Я²-(3-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-(б-фуран-2-ил-пиридин3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶(6-фуран-3-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-аминоииклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-[6-(3 -фтор-фенил)-пиридин-3 -илметил] -9Япурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-[6-(2-метоксифенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-циклогексил)-9цикл опентил-Я⁶- [6-(2-гидрокси-фенил)-пиридин-3 -илметил] -9Я-пурин-2,6- 5 028206 диамин, Я²-(3-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я⁶-[6-(2-амино-фенил)пиридин-3-илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-циклогексил)-9циклопентил-Я⁶-(6-пиразол-1-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 4-(5{[2-(3-амино-циклогексиламино)-9-циклопентил-9Н-пурин-6-иламино]-метил}пиридин-2-ил)-бензойная кислота, 4-[9-циклопентил-6-(4-тиофен-2-илбензиламино)-9Я-пурин-2-иламино] -циклогексанол, 4- [9-циклопентил-6-(4тиофен-3 -ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-иламино] -циклогексанол, 4- [9циклопентил-6-(4-фуран-2-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-иламино]циклогексанол, 4-[9-циклопентил~6-(3-фуран-2-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2иламино] -циклогексанол, 4- {9-циклопентил-6- [(3 '-фтор-бифенил-4-илметил)амино]-9Я-пурин-2-иламино]-циклогексанол, 4-{9-циклопентил-6-[(2'-метоксибифенил-4-илметил)-амино]-977-пурин-2-иламино}-циклогексанол, 4-{9циклопентил-6-[(2'-гидрокси-бифенил-4-илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино}циклогексанол, 4-{9-цикл опентил-6-[(2'-амино-бифенил-4-илметил)-амино]-9Нпурин-2-иламино} -циклогексанол, 4- [9-циклопентил-6-(4-пиразол-1 -илбензил амино)-9Я-пурин-2-иламино] -циклогексанол, 4'- {[9-циклопентил-2-(4гидрокси-цикл огексиламино)-9Н-пурин-6-иламино] -метил} -бифенилокарбоновая кислота, 4- {9-циклопентил-6- [(6-тиофен-2-ил-пиридин-3 -илметил)амино] -9Я-пурин-2-иламино} -циклогексанол, 4- {9-циклопентил-6-[(6-тиофен-3ил-пиридин-3 -илметил)-амино] -9Я-пурин-2-иламино} -циклогексанол, 4- {9циклопентил-6- [(6-фуран-2-ил-пиридин-3 -илметил)-амино] -9Я-пурин-2иламино} -циклогексанол, 4- {9-циклопентил-6-[(6-фуран-3-ил-пиридин-3илметил)-амино] -9Я-пурин-2-иламино} -циклогексанол, 4-(9-циклопентил-6- {[6(3 -фтор-фенил)-пиридин-3 -илметил] -амино} -9Я-пурин-2-иламино)циклогексанол, 4-(9-циклопентил-6- {[6-(2-метокси-фенил)-пиридин-3 -илметил] амино} -9Я-пурин-2-иламино)-циклогексанол, 4-(9-циклопентил-6- {[6-(2гидрокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-амино }-9Я-пурин-2-иламино)циклогексанол, 4-(9-циклопентил-6- {[6-(2-амино-фенил)-пиридин-3 -илметил] амино} -9Я-пурин-2-иламино)-циклогексанол, 4- {9-циклопентил-6- [(6-пиразол-1 ил-пиридин-3 -илметил)-амино] -9Я-пурин-2-иламино} -циклогексанол, 4-(5 - {[9циклопентил-2-(4-гидрокси-циклогексиламино)-9Н-пурин-6-иламино]-метил}пиридин-2-ил)-бензойная кислота, (9-циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6ил)-(4-тиофен-2-ил-бензил)-амин, (9-циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6- 6 028206 ил)-(4-тиофен-3-ил-бензил)-амин, (9-циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6ил)-(4-1игапу-2-ил-бензил)-амин, (9-циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6ил)-(4-фуран-3-ил-бензил)-амин, (9-циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6ил)-(3'-фтор-бифенил-4-илметил)-амин, (9-циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Япурин-6-ил)-(2'-метокси-бифенил-4-илметил)-амин, (9-циклопентил-2-морфолин4-ил-9Я-пурин-6-ил)-(2'-гидрокси-бифенил-4-илметил)-амин, (9-циклопентил-2морфолин-4-ил-9Я-пурин-6-ил)-(2'-амино-бифенил-4-илметил)-амин, (9циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6-ил)-(4-пиразол-1 -ил-бензил)-амин, 4'[(9-циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6-иламино)-метил]-бифенил-4карбоновая кислота, (9-циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6-ил)-(6-тиофен2-ил-пиридин-3-илметил)-амин, (9-циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6ил)-(6-тиофен-3-ил-пиридин-3-илметил)-амин, (9-циклопентил-2-морфолин-4-ил9Я-пурин-6-ил)-(6-фуран-2-ил-пиридин-3-илметил)-амин, (9-циклопентил-2морфолин-4-ил-9Я-пурин-6-ил)-(6-фуран-3 -ил-пиридин-3 -илметил)-амин, (9циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6-ил)- [6-(3 -фтор-фенил)-пиридин-3 илметилфамин, (9-циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6-ил)-[6-(2-метоксифенил)-пиридин-3-илметил]-амин, (9-циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6ил)-[6-(2-гидрокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-амин, (9-циклопентил-2морфолин-4-ил-9Я-пурин-6-ил)-[6-(2-амино-фенил)-пиридин-3-илметил]-амин, (9-циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6-ил)-(6-пиразол-1-ил-пиридин-3илметил)-амин, 4-{5-[(9-циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6-иламино)метил]-пиридин-2-ил}-бензойная кислота, 1 -[9-циклопентил-6-(4-тиофен-2-илбензиламино)-9Я-пурин-2-1амино]-2-метил-пропан-2-ол, 1-[9-циклопентил-6-(4тиофен-3-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-1амино]-2-метил-пропан-2-ол, 1-[9циклопентил-6-(4-фуран-2-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-1амино]-2-метил-пропан2-ол, 1 - [9-циклопентил-6-(4-фуран-3 -ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-1амино] -2метил-пропан-2-ол, 1-{9-циклопентил-6-[(3'-фтор-бифенил-4-илметил)-амино]9Я-пурин-2-иламино}-2-метил-пропан-2-ол, 1-{9-циклопентил-6-[(2'-метоксибифенил-4-илметил)-амино] -9Я-пурин-2-иламино} -2-метил-пропан-2-ол, 1 - {9циклопентил-6-[(2'-гидрокси-бифенил-4-илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино}2-метил-пропан-2-ол, 1-{9-циклопентил-6-[(2'-амино-бифенил-4-илметил)-амино]9Я-пурин-2-иламино}-2-метил-пропан-2-ол, 1-[9-циклопентил-6-(4-пиразол-1-илбензиламино)-9Я-пурин-2-иламино] -2-метил-пропан-2-ол, 4'- {[9-циклопентил-2- 7 028206 (2-гидрокси-2-метил-пропиламино)-9Я-пурин-6-иламино]-метил}-бифенил-4карбоновая кислота, 1 - {9-циклопентил-6- [(6-тиофен-2-ил-пири дин-3 -илметил)амино] -9Я-пурин-2-иламино} -2-метил-пропан-2-ол, 1 - {9-циклопентил-6- [(6тиофен-3 -ил-пиридин-3 -илмети л)-амино] -9Я-пурин-2-иламино} -2-метил-пропан2-ол, 1-{9-циклопентил-6-[(6-фуран-2-ил-пиридин-3-илметил)-амино]-9Я-пурин2-иламино}-2-метил-пропан-2-ол, 1-{9-циклопентил-6-[(6-фуран-3-ил-пиридин-3илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино}-2-метил-пропан-2-ол, 1-(9-циклопентил6- {[6-(3 -фтор-фенил)-пиридин-3 -илметил] -амино} -9Я-пурин-2-иламино)-2-метилпропан-2-ол, 1-(9-циклопентил-6-{[6-(2-метокси-фенил)-пиридин-3 -илметил] амино }-9Я-пурин-2-иламино)-2-метил-пропан-2-ол, 1-(9-циклопентил-6-{[6-(2гидрокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-амино}-9Я-пурин-2-иламино)-2-метилпропан-2-ол, 1 -(9-цикл опентил-6- {[6-(2-амино-фенил)-пиридин-3 -илметил] амино }-9Я-пурин-2-иламино)-2-метил-пропан-2-ол, 1-{9-циклопентил-6-[(6пиразол-1 -ил-пиридин-3-илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино }-2-метил-пропан2-ол, 4-(5- {[9-циклопентил-2-(2-гидрокси-2-метил-пропиламино)-9Я-пурин-6иламино] -метил } -пиридин-2-ил)-бензойная кислота

4-[9-циклопентил-6-(4-тиофен-2-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-иламино]-2-метилбутан-2-ол, 4-[9-циклопентил-6-(4-тиофен-3-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2иламино]-2-метил-бутан-2-ол, 4-[9-циклопентил-6-(4-фуран-2-ил-бензиламино)9Я-пурин-2-иламино]-2-метил-бутан-2-ол, 4-[9-циклопентил-6-(4-фуран-3-илбензиламино)-9Я-пурин-2-иламино]-2-метил-бутан-2-ол, 4-{9-циклопентил-6-[(3'фтор-бифенил-4-илметил)-амино] -9Я-пурин-2-иламино} -2-метил-бутан-2-ол, 4{9-циклопентил-6-[(2'-метокси-бифенил-4-илметил)-амино]-9Я-пурин-2иламино} -2-метил-бутан-2-ол, 4- {9-циклопентил-6-[(2'-гидрокси-бифенил-4илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино}-2-метил-бутан-2-ол, 4-{9-циклопентил-6[(2'-амино-бифенил-4-илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино}-2-метил-бутан-2ол, 4- [9-циклопентил-6-(4-пиразол-1 -ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-иламино] -2метил-бутан-2-ол, 4'-{[9-циклопентил-2-(3-гидрокси-3-метил-бутиламино)-9Япурин-6-иламино] -метил} -бифенил-4-карбоновая кислота, 4- {9-циклопентил-6[(6-тиофен-2-ил-пиридин-3 -илметил)-амино] -9Я-пурин-2-иламино} -2-метилбутан-2-ол, 4-{9-циклопентил-6-[(6-тиофен-3-ил-пиридин-3-илметил)-амино]-9Япурин-2-иламино} -2-метил-бутан-2-ол, 4- {9-циклопентил-6-[(6-фуран-2-илпиридин-3 -илметил)-амино] -9Я-пурин-2-иламино} -2-метил-бутан-2-ол, 4- {9- 8 028206 циклопентил-6- [(6-фуран-З -ил-пиридин-3 -илметил)-амино] -9Я-пурин-2иламино}-2-метил-бутан-2-ол, 4-(9-циклопентил-6-{[6-(3-фтор-фенил)-пиридин-3илметил]-амино}-9Я-пурин-2-иламино)-2-метил-бутан-2-ол, 4-(9-циклопентил-6{[6-(2-метокси-фенил)-пиридин-3 -илметил] -амино} -9Я-пурин-2-иламино)-2метил-бутан-2-ол, 4-(9-циклопентил-6- {[6-(2-гидрокси-фенил)-пиридин-3илметил]-амино}-9Я-пурин-2-иламино)-2-метил-бутан-2-ол, 4-(9-циклопентил-6{[6-(2-амино-фенил)-пиридин-3-илметил]-амино}-9Я-пурин-2-иламино)-2-метилбутан-2-ол, 4-{9-циклопентил-6-[(6-пиразол-1 -ил-пиридин-3-илметил)-амино]-9Япурин-2-иламино}-2-метил-бутан-2-ол, 4-(5-{[9-циклопентил-2-(3-гидрокси-3метил-бутиламино)-9Я-пурин-6-иламино] -метил} -пиридин-2-ил)-бензойная кислота, Я²-(2-амино-пропил)-9-циклопентил-Л^/6-(4-пиридин-2-ил-бензил)-9Япурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-пропил)-9-циклопентил-Л^/6-(4-тиофен-2-илбензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-пропил)-9-циклопентил-Я⁶-(4-тиофен3-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-пропил)-9-циклопентил-Л^/6-(4фуран-2-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-пропил)-9-циклопентилЯ⁶-(4-фуран-3-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-пропил)-9циклопентил-Я⁶-(3'-фтор-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Ν²-(2амино-пропил)-9-циклопентил-Я⁶-(2'-метокси-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6диамин, Я²-(2-амино-пропил)-9-циклопентил-Я⁶-(2'-гидрокси-бифенил-4илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-пропил)-9-циклопентил-Я⁶-(2'амино-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-пропил)-9циклопентил-Я⁶-(4-пиразол-1 -ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 4'- {[2-(2-аминопропил)-9-циклопентил-9Н-пурин-6-иламино] -метил} -бифенил-4-карбоновая кислота, Я²-(2-амино-пропил)-М-[2,2']бипиридинил-5-илметил-9-циклопентил9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-пропил)-9-циклопентил-Я⁶-(6-тиофен-2-илпиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-пропил)-9-циклопентилЯ⁶-(6-тиофен-3-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-аминопропил)-9-циклопентил-Я⁶-(6-фуран-2-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6диамин, Ν²-(2-амино-пропил)-9-циклопентил-Л^/6-(6-фуран-З -ил-пиридин-3 илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-пропил)-9-циклопентил-?/-[6-(3фтор-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-пропил)-9циклопентил-Л^/6-[6-(2-метокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-пропил)-9-циклопентил-Я⁶-[6-(2-гидрокси-фенил)-пиридин-3- 9 028206 илметил]-9Я-пурии-2,6-диами11, У²-(2-амино-пропил)-9-циклопентил-Л'’⁶-[6-(2амино-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-пропил)-9циклопентил-УЦб-пиразол-1 -ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 4-(5{[2-(2-амино-пропил)-9-циклопентил-9Н-пурин-6-иламино]-метил}-пиридин-2ил)-бензойная кислота, Я²-(3-амино-пропил)-9-циклопентил-/\^/6-(4-пиридин-2-илбензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-пропил)-9-циклопентил-Л^-(4-тиофен2-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-пропил)-9-циклопентил-Я⁶-(4тиофен-3-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-пропил)-9-циклопентилЯ⁶-(4-фуран-2-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-пропил)-9циклопентил-Я⁶-(4-фуран-3-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-аминопропил)-9-циклопентил-Я⁶-(3'-фтор-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-пропил)-9-циклопентил-Я⁶-(2'-метокси-бифенил-4-илметил)-9Япурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-пропил)-9-циклопентил-Я⁶-(2'-гидрокси-бифенил4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-пропил)-9-циклопентил-Я⁶-(2'амино-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-пропил)-9циклопентил-Я⁶-(4-пиразол-1-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 4'-{[2-(3-аминопропил)-9-циклопентил-9Н-пурин-6-иламино] -метил} -бифенил-4-карбоновая кислота, Я²-(3-амино-пропил)-Л^/6-[2,2']бипиридинил-5-илметил-9-циклопентил9 Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-пропил)-9-циклопентил-Я⁶-(6-тиофен-2-илпиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-пропил)-9-циклопентилМ-(б-тиофен-3-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Ν²-(3-аминопропил)-9-циклопентил-Я⁶-(6-фуран-2-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6диамин, Я²-(3 -амино-пропил)-9-циклопентил-Я⁶-(6-фуран-З -ил-пиридин-3 илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-пропил)-9-циклопентил-У⁶-[6-(3фтор-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-пропил)-9циклопентил-Я⁶ - [6-(2-метокси-фенил)-пиридин-3 -илметил] -9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-пропил)-9-циклопентил-Я⁶-[6-(2-гидрокси-фенил)-пиридин-3илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-пропил)-9-циклопентил-Я⁶-[6-(2амино-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(3-амино-пропил)-9циклопентил-Я⁶-(6-пиразол-1-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 4-(5{[2-(3-амино-пропил)-9-циклопентил-9Н-пурин-6-иламино]-метил}-пиридин-2ил)-бензойная кислота, Я²-(2-амино-этил)-9-циклопентил-Я⁶-(4-пиридин-2-илбензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-этил)-9-циклопентил-Я⁶-(4-тиофен-2- 10 028206 ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-этил)-9-циклопентил-А⁶-(4-тиофен3-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-этил)-9-циклопентил-Я⁶-(4фуран-2-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-этил)-9-циклопентил-тУ⁶(4-фуран-3-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, А²-(2-амино-этил)-9-циклопентилЯ⁶-(3'-фтор-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Х²-(2-амино-этил)-9циклопентил-Я⁶-(2'-метокси-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2амино-этил)-9-циклопентил-А⁶-(2'-гидрокси-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6диамин, Я²-(2-амино-этил)-9-циклопентил-Я⁶-(2'-амино-бифенил-4-илметил)-9Япурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-этил)-9-циклопентил-Л^/6-(4-пиразол-1 -ил-бензил)9Я-пурин-2,6-диамин,

4'-{[2-(2-амино-этил)-9-циклопентил-9Н-пурин-6-иламино]-метил}-бифенил-4карбоновая кислота, Я²-(2-амино-этил)-Л^-[2,2']бипиридинил-5-илметил-9циклопентил-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-этил)-9-циклопентил-Я⁶-(6тиофен-2-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-этил)-9циклопентил-?/⁶-(6-тиофен-3-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2амино-этил)-9-циклопентил-Я⁶-(6-фуран-2-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6диамин, Я²-(2-амино-этил)-9-циклопентил-Я⁶-(6-фуран-3-ил-пиридин-3-илметил)9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-этил)-9-циклопентил-Я⁶-[б-(З-фтор-фенил)пиридин-3-илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-этил)-9-циклопентил-Я⁶[6-(2-метокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-аминоэтил)-9-циклопентил-Я⁶-[6-(2-гидрокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин2,6-диамин, Я²-(2-амино-этил)-9-циклопентил-Л^/6-[6-(2-амино-фенил)-пиридин-3илметил]-9Я-пурин-2,6-диамин, Я²-(2-амино-этил)-9-циклопентил-?/⁶-(6-пиразол1-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 4-(5-{[2-(2-амино-этил)-9циклопентил-9Н-пурин-6-иламино]-метил}-пиридин-2-ил)-бензойная кислота, 3[9-циклопентил-6-(4-тиофен-2-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-иламино]-пропан-1ол, 3 - [9-циклопентил-6-(4-тиофен-3 -ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-иламино] пропан-1-ол, 3-[9-циклопентил-6-(4-фуран-2-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2иламино] -пропан-1 -ол, 3 - [9-цикл опентил-6-(4-фуран-3 -ил-бензиламино)-9Япурин-2-иламино] -пропан-1 -ол, 3 - {9-циклопентил-6- [(3 '-фтор-бифенил-4илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино}-пропан-1-ол, 3-{9-циклопентил-6-[(2'метокси-бифенил-4-илметил)-амино] -9Я-пурин-2-иламино} -пропан- 1-ол, 3 - {9циклопентил-6-[(2'-гидрокси-бифенил-4-илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино}- 11 028206 пропан-1 -ол, 3 - {9-цикл опентил-6- [(2'-амино-бифенил-4-илметил)-амино]-9Нпурин-2-иламино} -пропан-1 -ол, 3 - [9-циклопентил-6-(4-пиразол-1 -илбензиламино)-9Я-пурин-2-иламино]-пропан-1-ол, 4'-{[9-циклопентил-2-(3гидрокси-пропиламино)-9Я-пурин-6-иламино]-метил}-бифенил-4-карбоновая кислота, 3-{9-циклопентил-6-[(6-тиофен-2-ил-пиридин-3-илметил)-амино]-9Япурин-2-иламино}-пропан-1-ол, 3-{9-циклопентил-6-[(6-тиофен-3-ил-пиридин-3илметил)-амино] -9Я-пурин-2-иламино} -пропан-1 -ол, 3 - {9-цикл опентил-6-[(6фуран-2-ил-пиридин-3-илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино} -пропан- 1-ол, 3- {9циклопентил-6-[(6-фуран-3-ил-пиридин-3-илметил)-амино]-9Я-пурин-2иламино} -пропан- 1-ол, 3 -(9-циклопентил-6- {[6-(3 -фтор-фенил)-пиридин-3 илметил]-амино}-9Я-пурин-2-иламино)-пропан-1-ол, 3-(9-циклопентил-6-{[6-(2метокси-фенил)-пиридин-3 -илметил] -амино} -9Я-пурин-2-иламино)-пропан-1 -ол,

-(9-циклопентил-6- {[6-(2-гидрокси-фенил)-пиридин-3 -илметил] -амино} -9Япурин-2-иламино)-пропан-1 -ол, 3 -(9-циклопентил-6- {[6-(2-амино-фенил)пиридин-3 -илметил] -амино} -9Я-пурин-2-иламино)-пропан-1 -ол, 3 - {9циклопентил-6- [(6-пиразол-1 -ил-пиридин-3 -илметил)-амино] -9Я-пурин-2иламино] -пропан-1 -ол, 4-(5- {[9-циклопентил-2-(3 -гидрокси-пропиламино)-9Япурин-6-иламино] -метил} -пиридин-2-ил)-бензойная кислота, (7?)-3 - [9циклопентил-6-(4-тиофен-2-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-иламино]-пентан-2-ол, (7?)-3 - [9-циклопентил-6-(4-тиофен-3 -ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-иламино] пентан-2-ол, (7?)-3-[9-циклопентил-6-(4-фуран-2-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2иламино]-пентан-2-ол, (7?)-3-[9-циклопентил-6-(4-фуран-3-ил-бензиламино)-9Япурин-2-иламино]-пентан-2-ол, (7?)-3-{9-циклопентил-6-[(3'-фтор-бифенил-4илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино}-пентан-2-ол, (7?)-3-{9-циклопентил-6-[(2'метокси-бифенил-4-илметил)-амино] -9Я-пурин-2-иламино} -пентан-2-ол, (7?)-3 - {9цикл опентил-6- [(2'-гидрокси-бифенил-4-илметил)-амино] -9Я-пурин-2-иламино} пентан-2-ол, (7?)-3-{9-циклопентил-6-[(2'-амино-бифенил-4-илметил)-амино]-9Япурин-2-иламино} -пентан-2-ол, (7?)-3 - [9-циклопентил-6-(4-пиразол-1 -илбензиламино)-9Я-пурин-2-иламино] -пентан-2-ол, 4’- {[9-циклопентил-2-((7?)-1 этил-2-гидрокси-пропиламино)-9Я-пурин-6-иламино] -метил} -бифенил-4карбоновая кислота, (7?)-3 - {9-циклопентил-6-[(6-тиофен-2-ил-пиридин-3илметил)-амино] -9Я-пурин-2-иламино} -пентан-2-ол, (7?)-3 - {9-циклопентил-6- [(6тиофен-3-ил-пиридин-3-илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино}-пентан-2-ол, (7?)- 12 028206

3-{9-циклопентил-6-[(6-фуран-2-ил-пиридин-3-илметил)-амино]-9Я-пурин-2иламино}-пентан-2-ол, (7?)-3-{9-циклопентил-6-[(6-фуран-3-ил-пиридин-3илметил)-амино] -9Я-пурин-2-иламино} -пентан-2-ол, (7?)-3 -(9-циклопентил-6- {[6(3 -фтор-фенил )-пиридин-3 -илметил ]-амино} -9Н-пурин-2-иламино)-пентан-2-ол, (7?)-3-(9-циклопентил-6-{[6-(2-метокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-амино}-9Нпурин-2-иламино)-пентан-2-ол, (7?)-3-(9-циклопентил-6- {[6-(2-гидрокси-фенил)пиридин-3 -илметил] -амино} -9Н-пурин-2-ил амино)-пентан-2-ол, (7?)-3 -(9циклопентил-6- {[6-(2-амино-фенил)-пиридин-3 -илметил] -амино} -9Н-пурин-2иламино)-пентан-2-ол, (7?)-3-{9-Циклопентил-6-[(6-пиразол-1-ил-пиридин-3илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино}-пентан-2-ол, 4-(5-{[9-циклопентил-2-((/?)1 -этил-2-гидрокси-пропиламино)-9 Л-пурин-6-иламино] -метил} -пиридин-2-ил)бензойная кислота, [9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил](4-пиридин-2-ил-бензил)-амин, [9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Нпурин-6-ил]-(4-тиофен-2-ил-бензил)-амин, [9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин1 -ил)-9Н-пурин-6-ил] -(4-тиофен-З -ил-бензил)-амин, [9-циклопентил-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил] -(4-фуран-2-ил-бензил)-амин, [9-циклопентил-2(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил] -(4-фуран-З -ил-бензил)-амин, [9циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1-ил)-9Н-пурин-6-ил]-(3'-фтор-бифенил-4илметил)-амин, [9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил]-(2'метокси-бифенил-4-илметил)-амин, [9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)9Н-пурин-6-ил]-(2'-гидрокси-бифенил-4-илметил)-амин, [9-циклопентил-2-(4метил-пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил]-(2'-амино-бифенил-4-илметил)-амин, [9циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил]-(4-пиразол-1 -илбензил)-амин, 4'- {[9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6иламино]-метил} -бифенил-4-карбоновая кислота, [2,2'] бипиридинил-5 -илметил [9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил]-амин, [9циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1-ил)-9Н-пурин-6-ил]-(6-тиофен-2-илпиридин-3 -илметил)-амин, [9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Нпурин-6-ил] -(6-тиофен-З -ил-пиридин-3 -илметил)-амин, [9-циклопентил-2-(4метил-пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил]-(6-фуран-2-ил-пиридин-3 -илметил)-амин, [9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1-ил)-9Н-пурин-6-ил]-(6-фуран-3-илпиридин-3-илметил)-амин, [9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Нпурин-6-ил] - [6-(3 -фтор-фенил)-пиридин-3 -илметил] -амин, [9-цикл опентил-2-(4·

- 13 028206 метил-пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил] - [6-(2-метокси-фенил)-пиридин-3 илметил]-амин, [9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1-ил)-9Н-пурин-6-ил]-[6(2-гидрокси-фенил)-пиридин-3 -илметил] -амин, [9-циклопентил-2-(4-метилпиперазин-1-ил)-9Н-пурин-6-ил]-[6-(2-амино-фенил)-пиридин-3-илметил]-амин, [9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил]-(6-пиразол-1 -илпир идин-3 -илметил)-амин, 4-(5- {[9-Циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Нпурин-6-иламино] -метил} -пиридин-2-ил)-бензойная кислота, [9-циклопентил-2(пиперазин-1-ил)-9Н-пурин-6-ил]-(4-пиридин-2-ил-бензил)-амин, [9-циклопентил2-(пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил]-(4-тиофен-2-ил-бензил)-амин, [9циклопентил-2-(пиперазин-1-ил)-9Н-пурин-6-ил]-(4-тиофен-3-ил-бензил)-амин, [9-циклопентил-2-(пиперазин-1-ил)-9Н-пурин-6-ил]-(4-фуран-2-ил-бензил)-амин, [9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил] -(4-фуран-З -ил-бензил)-амин, [9-циклопентил-2-(пиперазин-1-ил)-9Н-пурин-6-ил]-(3'-фтор-бифенил-4илметил)-амин, [9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил]-(2'-метоксибифенил-4-илметил)-амин, [9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил](2'-гидрокси-бифенил-4-илметил)-амин, [9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Нпурин-6-ил] -(2'-амино-бифенил-4-илметил)-амин, [9-циклопентил-2-(пиперазин-1 ил)-9Н-пурин-6-ил]-(4-пиразол-1-ил-бензил)-амин, 4'-{[9-циклопентил-2(пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-иламино]-метил} -бифенил-4-карбоновая кислота, [2,2']бипиридинил-5-илметил-[9-циклопентил-2-(пиперазин-1-ил)-9Н-пурин-6ил]-амин, [9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил]-(6-тиофен-2-илпиридин-3 -илметил)-амин, [9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил] (6-тиофен-З -ил-пиридин-3 -илметил)-амин, [9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)9Н-пурин-6-ил]-(6-фуран-2-ил-пиридин-3-илметил)-амин, [9-циклопентил-2(пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил] -(6-фуран-З -ил-пиридин-3 -илметил)-амин, [9циклопентил-2-(пиперазин-1-ил)-9Н-пурин-6-ил]-[6-(3-фтор-фенил)-пиридин-3илметил]-амин, [9-циклопентил-2-(пиперазин-1-ил)-9Н-пурин-6-ил]-[6-(2метокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-амин, [9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)9Н-пурин-6-ил] - [6-(2-гидрокси-фенил)-пиридин-3 -илметил] -амин, [9циклопентил-2-(пиперазин-1-ил)-9Н-пурин-6-ил]-[6-(2-амино-фенил)-пиридин-3илметил] -амин, [9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил] -(6-пиразол-1 ил-пиридин-3-илметил)-амин, 4-(5- {[9-Циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Нпурин-6-иламино]-метил }-пиридин-2-ил)-бензойная кислота, 9-циклопентил-А²- 14 028206 пиперидин-4-илметил-Я⁶-(4-пиридин-2-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 9циклопентил-Я²-пиперидин-4-илметил-Я⁶-(4-тиофен-2-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6диамин, 9-циклопентил-Я²-пиперидин-4-илметил-Я⁶-(4-тиофен-3-ил-бензил)-9Япурин-2,6-диамин, 9-циклопентил-Я²-пиперидин-4-илметил-Я⁶-(4-фуран-2-илбензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 9-циклопентил-Я²-пиперидин-4-илметил-Я⁶-(4фуран-3-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 9-циклопентил-Я²-пиперидин-4илметил-Я⁶-(3'-фтор-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 9-циклопентилЯ²-пиперидин-4-илметил-Я⁶-(2'-метокси-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6диамин, 9-циклопентил-А²-пиперидин-4-илметил-Я⁶-(2'-гидрокси-бифенил-4илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 9-циклопентил-Я²-пиперидин-4-илметил-Я⁶-(2'амино-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 9-циклопентил-Я²-пиперидин4-илметил-Я⁶-(4-пиразол-1 -ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 4'-({9-циклопентил2- [(пиперидин-4-илметил)-амино] -9Я-пурин-6-иламино } -метил)-бифенил-4карбоновая кислота, 9-циклопентил-Я²-пиперидин-4-илметил-Я⁶-(6-тиофен-2-илпиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 9-циклопентил-Я²-пиперидин-4илметил-Л^/6-(6-тиофен-3-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 9циклопентил-Я²-пиперидин-4-илметил-Я⁶-(6-фуран-2-ил-пиридин-3-илметил)-9Япурин-2,6-диамин, 9-циклопентил-Я²-пиперидин-4-илметил-Я⁶-(6-фуран-3-илпиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 9-циклопентил-Я⁶-[6-(3-фтор-фенил)пиридин-3-илметил]-Я²-пиперидин-4-илметил-9Я-пурин-2,6-диамин, 9циклопентил-Я⁶ - [6-(2-метокси-фенил)-пиридин-3 -илметил] -Я²-пиперидин-4илметил-9Я-пурин-2,6-диамин, 9-циклопентил-Я⁶-[6-(2-гидрокси-фенил)пиридин-3-илметил]-Я²-пиперидин-4-илметил-9Я-пурин-2,6-диамин, 9циклопентил-Я⁶ - [6-(2-амино-фенил)-пиридин-3 -илметил]-Я²-пиперидин-4илметил-9Я-пурин-2,6-диамин, 9-циклопентил-Я²-пиперидин-4-илметил-Я⁶-(6пиразол-1-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин, 4-[5-({9-циклопентил-2[(пиперидин-4-и лметил)-амино] -9Я-пурин-6-иламино} -метил)-пиридин-2-ил] бензойная кислота, (Л)-2-[9-циклопентил-6-(4-пиридин-2-ил-бензиламино)-9Япурин-2-иламино]-бутан-1-ол, (7?)-2-[9-циклопентил-6-(4-тиофен-2-илбензиламино)-9Я-пурин-2-иламино]-бутан-1-ол, (7?)-2-[9-циклопентил-6-(4тиофен-3-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-иламино]-бутан-1-ол, (7?)-2-[9циклопентил-6-(4-фуран-2-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-иламино] -бутан-1 -ол, (7?)-2-[9-циклопентил-6-(4-фуран-3-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-иламино]-бутан- 15 028206

Гол, (7?)-2-{9-циклопентил-6-[(3'-фтор-бифенил-4-илметил)-амино]-9Я-пурин-2иламино} -бутан-1 -ол, (К)-2-{ 9-циклопентил-6- [(2'-метокси-бифенил-4-илметил)амино] -9Я-пурин-2-иламино} -бутан-1 -ол, (К)-2-{ 9-циклопентил-6-[(2'-гидроксибифенил-4-илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино}-бутан-1-ол, (7?)-2-{9циклопентил-6- [(2'-амино-бифенил-4-илметил)-амино] -9Я-пурин-2-иламино} бутан-1-ол, (7?)-2-[9-циклопентил-6-(4-пиразол-1-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2иламино] -бутан-1 -ол, 4'- {[9-циклопентил-2-((7?)-1 -гидроксиметил-пропиламино)9Я-пурин-6-иламино] -метил} -бифенил-4-карбоновая кислота, (7?)-2- {9циклопентил-6- [(6-тиофен-2-ил-пиридин-3 -илметил )-амино]-9Я-пурин-2иламино} -бутан-1 -ол, (7?)-2- {9-циклопентил-6- [(6-тиофен-З -ил-пиридин-3 илметил)-амино] -9#-пурин-2-иламино} -бутан-1 -ол, (К)-2-{ 9-циклопентил-6- [(6фуран-2-ил-пиридин-3-илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино}-бутан-1-ол, (7?)-2{9-циклопентил-6- [(6-фуран-З -ил-пиридин-3 -илметил)-амино] -9Я-пурин-2ил амино} -бутан-1 -ол, (Я)-2-(9-циклопентил-6- {[6-(3 -фтор-фенил)-пиридин-3 илметил] -амино} -9Я-пурин-2-иламино)-бутан-1 -ол, (7?)-2-(9-циклопентил-6- {[6(2-метокси-фенил)-пиридин-3 -илметил] -амино} -9Я-пурин-2-иламино)-бутан-1 -ол, (/?)-2-(9-циклопентил-6-{[6-(2-гидрокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-амино}-9Япурин-2-иламино)-бутан-1 -ол, (7?)-2-(9-циклопентил-6- {[6-(2-амино-фенил)пиридин-3 -илметил ] -амино} -9Я-пурин-2-иламино)-бутан- Гол, (7?)-2- { 9циклопентил-6- [(6-пиразол-1 -ил-пиридин-3-илметил)-амино]-9Я-пурин-2иламино] -бутан-1 -ол, 4-(5- {[9-цикл опентил-2-((7?)-1 -гидроксиметилпропиламино)-9Я-пурин-6-иламино]-метил} -пиридин-2-ил)-бензойная кислота, 2{4- [9-Циклопентил-6-(4-пиридин-2-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-ил] -пиперазинГил} -этанол, 2- {4- [9-Циклопентил-6-(4-тиофен-2-ил-бензиламино)-9#-пурин-2ил] -пиперазин-1 -ил} -этанол, 2- {4- [9-Циклопентил-6-(4-тиофен-3 -илбензиламино)-9#-пурин-2-ил]-пиперазин-Гил} -этанол, 2-{4-[9-Циклопентил-6(4-фуран-2-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-ил]-пиперазин-Гил [-этанол, 2-{4-[9Циклопентил-6-(4-фуран-3 -ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-ил] -пиперазин- Гил} этанол, 2-(4- {9-Циклопентил-6- [(3 ’-фтор-бифенил-4-илметил)-амино] -9Я-пурин-2ил} -пиперазин-1 -ил)-этанол, 2-(4- {9-Циклопентил-6-[(2'-метокси-бифенил-4илметил)-амино] -9Я-пурин-2-ил} -пиперазин-1 -ил)-этанол, 2-(4- {9-Циклопентил6-[(2'-гидрокси-бифенил-4-илметил)-амино]-9Я-пурин-2-ил[-пиперазин-1-ил)этанол, 2-(4-{9-Циклопентил-6-[(2'-амино-бифенил-4-илметил)-амино]-9Я-пурин- 16 028206

2-ил} -пиперазин-1 -ил)-этанол, 2- {4- [9-Циклопентил-6-(4-пиразол-1 -илбензиламино)-9Я-пурин-2-ил]-пиперазин-1-ил}-этанол, 4'-({9-Циклопентил-2-[4(2-гидрокси-этил)-пиперазин-1 -ил] -9Я-пурин-6-иламино} -метил)-бифенил-4карбоновая кислота, 2-(4- {6- [([2,2'] Бипиридинил-5 -илметил)-амино] -9циклопентил-9Я-пурин-2-ил} -пиперазин-1 -ил)-этанол, 2- [4-(9-Циклопентил-6- {[6(3 -фтор-фенил)-пиридин-3 -илметил] -амино} -9Я-пурин-2-ил)-пиперазин-1 -ил] этанол, 2- [4-(9-Циклопентил-6- {[6-(2-метокси-фенил)-пиридин-3 -илметил ] амино} -9Я-пурин-2-ил)-пиперазин-1 -ил]-этанол, 2-[4-(9-Циклопентил-6- {[6-(2гидрокси-фенил)-пиридин-3 -илметил] -амино } -9Я-пурин-2-ил)-пиперазин-1 -ил] этанол, 2- [4-(9-Циклопентил-6- {[6-(2-амино-фенил)-пиридин-3 -илметил] -амино} 9Я-пурин-2-ил)-пиперазин-1-ил]-этанол, 4-[5-({9-Циклопентил-2-[4-(2-гидроксиэтил)-пиперазин-1 -ил] -9Я-пурин-6-иламино} -метил)-пиридин-2-ил] -бензойная кислота, 2-(4- {9-Циклопентил-6- [(6-тиофен-2-ил-пиридин-3 -илметил)-амино] -9Япурин-2-ил} -пиперазин-1 -ил)-этанол, 2-(4- (9-Циклопентил-6-[(6-тиофен-3-илпиридин-3 -илметил)-амино] -9Я-пурин-2-ил} -пиперазин-1 -ил)-этанол, 2-(4-(9Циклопентил-6- [(6-фуран-2-ил-пиридин-3 -илметил)-амино] -9Я-пурин-2-ил} пиперазин-1 -ил)-этанол, 2-(4-( 9-Циклопентил-6- [(6-фуран-З -ил-пиридин-3 илметил)-амино] -9Я-пурин-2-ил} -пиперазин-1 -ил)-этанол, 2-(4-( 9-Циклопентил6- [(6-пиразол-1 -ил-пиридин-3 -илметил)-амино] -9Я-пурин-2-ил} -пиперазин-1 -ил)этанол, 2-(2-{4-[9-Циклопентил-6-(4-пиридин-2-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-ил]пиперазин-1 -ил} -этокси)-этанол, 2- [2-(4- { 9-Циклопентил-6- [(3 '-фтор-бифенил-4илметил)-амино] -9Я-пурин-2-ил} -пиперазин-1 -ил )-этокси] -этанол, 2-(2-(4-(9Циклопентил-6- [(2'-метокси-бифенил-4-илметил)-амино] -9Я-пурин-2-ил} пиперазин-1-ил)-этокси]-этанол, 2-[2-(4-(9-Циклопентил-6-[(2'-гидроксибифенил-4-илметил)-амино]-9Я-пурин-2-ил}-пиперазин-1 -ил)-этокси]-этанол, 2[2-(4-(9-Циклопентил-6-[(2'-амино-бифенил-4-илметил)-амино]-9Я-пурин-2-ил}пиперазин-1-ил)-этокси]-этанол, 4'-[(9-Циклопентил-2-(4-[2-(2-гидрокси-этокси)этил] -пиперазин-1 -ил} -9Я-пурин-6-иламино)-метил] -бифенил-4-карбоновая кислота, 2-(2- (4- [9-Циклопентил-6-(4-тиофен-2-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-ил] пиперазин-1 -ил} -этокси)-этанол, 2-(2-( 4- [9-Циклопентил-6-(4-тиофен-3 -илбензиламино)-9Я-пурин-2-ил]-пиперазин-1 -ил} -этокси)-этанол, 2-(2-( 4-[9Циклопентил-6-(4-фуран-2-ил-бензиламино)-9Я-пурин-2-ил] -пиперазин-1 -ил} этокси)-этанол, 2-(2-{4-[9-Циклопентил-6-(4-фуран-3-ил-бензиламино)-9Я-пурин- 17 028206

2-ил]-пиперазин-1 -ил} -этокси)-этанол, 2-(2- {4-[9-Циклопентил-6-(4-пиразол-1 -илбензиламино)-9Я-пурин-2-ил]-пиперазин-1-ил}-этокси)-этанол, 2-[2-(4-{6[([2,2']Бипиридинил-5-илметил)-амино]-9-циклопентил-9Я-пурин-2-ил}пиперазин-1 -ил)-этокси] -этанол, 2- {2- [4-(9-Циклопентил-6- {[6-(3 -фтор-фенил)пиридин-3 -илметил] -амино} -9Я-пурин-2-ил)-пиперазин-1 -ил] -этокси} -этанол, 2{2-[4-(9-Циклопентил-6-{[6-(2-метокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-амино}-9Япурин-2-ил)-пиперазин-1 -ил]-этокси] -этанол, 2- {2-[4-(9-Циклопентил-6- {[6-(2гидрокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-амино}-9Я-пурин-2-ил)-пиперазин-1-ил]этокси]-этанол, 2-{2-[4-(9-Циклопентил-6-{[6-(2-амино-фенил)-пиридин-3илметил] -амино} -9Я-пурин-2-ил)-пиперазин-1 -ил] -этокси} -этанол, 4- {5 -[(9Циклопентил-2-{4-[2-(2-гидрокси-этокси)-этил]-пиперазин-1-ил}-9Я-пурин-6иламино)-метил]-пиридин-2-ил]-бензойная кислота, 2-[2-(4-{9-Циклопентил-6[(6-тиофен-2-ил-пиридин-3-илметил)-амино]-9Я-пурин-2-ил}-пиперазин-1-ил)этокси]-этанол, 2-[2-(4-{9-Циклопентил-6-[(6-тиофен-3-ил-пиридин-3-илметил)амино]-9Я-пурин-2-ил} -пиперазин-1 -ил)-этокси]-этанол, 2-[2-(4- {9-Циклопентил6-[(6-фуран-2-ил-пиридин-3-илметил)-амино]-9Я-пурин-2-ил]-пиперазин-1-ил)этокси] -этанол, 2- [2-(4- {9-Циклопентил-6- [(6-фуран- 3 -ил-пиридин-3 -илметил)амино]-9Я-пурин-2-ил]-пиперазин- 1-ил)-этокси]-этанол, 2-[2-(4-{9-Циклопентил6-[(6-пиразол-1 -ил-пиридин-3-илметил)-амино]-9Я-пурин-2-ил} -пиперазин-1 -ил)этоксифэтанол.

Общие методы синтеза

Соединения по настоящему изобретению были приготовлены с помощью обычных химических процедур, которые допускали высокую вариабельность заместителей в позициях 2 и 6 пуриновой группы. Подходящие синтетические подходы показаны на схеме 1.

Реагенты и условия:

а: соответствующий амин, ΌΙΡΕΑ, н-пропанол, 120°С (запаянная пробирка), 4-8 ч;

Ь: транс-1,4-диаминоциклогексан, 160°С (запаянная пробирка), 4 ч;

с: соответствующая арилборная кислота, Ρά(ϋΛο)₂, К₃РО₄, ТВАВ, ΌΜΕ, 80-120°С, 4-48 ч; ά: соответствующая арилборная кислота, Р4(4Ьа)₂, РРй₃, Яа₂СО₃, ΌΜΕ, вода, 80°С, 8-16 ч; е: соответствующий амин, ΌΙΡΕΑ, ΝΜΡ, 160°С, 4-72 ч;

ί: 1. ВВг₃, ЭСМ, 2. Метанол.

- 18 028206

Синтез начинается с серийно выпускаемого 2,6-дихлорпурина, который на первом шаге алкилировали циклопентанолом посредством алкилирования Мицунобу для получения 9-циклопентил-2,6-дихлор9Н-пурина (1), который затем реагирует с соответствующим 4-бромбензиламином или С-(6-бромпиридин-3-ил)метиламином с получением структуры (2). В некоторых случаях проводят реакцию с соответствующим 1-(зам.бифенил)метанамином или 1-[4-(гетероарил)фенил]метанамином или

1-[6-(зам.фенил)пиридин-3-ил]метанамином или 1-[6-(гетероарил)пиридин-3-ил]метанамином для получения соединения (3). Замещение атома хлора в позиции 2 пуриновой группы протекает для соединений (2) или (3) с большим избытком соответствующего амина в присутствии сильного основания при температуре 160°С, результатом чего является получение соединения (4) или (5). Сочетание Сузуки соединений (2) или (4) с соответствующей арилборной или гетероарилборной кислоты протекает гладко даже в присутствии атома хлора в случае соединений (2), (3) или (5). Деметилирование соединения (6), в котором К² представляет собой 2-метоксифенильную группу, осуществляется с использованием трибромида бора в дихлорметане в мягких условиях.

Фармацевтические составы

Терапевтические составы содержат от примерно 1 до около 95% действующего вещества, лекарственные формы однократного применения в предпочтительном случае содержат от примерно 20 до около 90% действующего вещества, а лекарственные формы, которые не рассчитаны на однократное применение, в предпочтительном случае содержат от примерно 5 до около 20% действующего вещества. Порционные формы могут, в частности, представлять собой таблетки, покрытые оболочкой, таблетки без оболочки, ампулы, флаконы, суппозитории или капсулы. Другие лекарственные формы, в частности, включают мази, кремы, пасты, пены, настойки, губные помады, капли, спреи, дисперсии и т.п. Примерами являются капсулы, содержащие от примерно 0,05 до около 1,0 г действующего вещества.

Фармацевтические составы по настоящему изобретению приготавливают известным способом, например, с помощью процессов обычного смешивания, грануляции, покрытия оболочкой, растворения или лиофилизации. В предпочтительном случае растворы действующего вещества, а также суспензии или дисперсии, особенно изотонические водные растворы, дисперсии или суспензии, используют, если имеется возможность приготовить их перед применением, например, в случае лиофилизированных составов, которые содержат действующее вещество, само по себе или совместно с носителем, например маннитолом. Фармацевтические составы могут представлять собой стерилизованными и/или содержать вспомогательные вещества, например, консерванты, стабилизаторы, смачивающие агенты и/или эмульгаторы, солюбилизирующие агенты, соли для регулирования осмотического давления и/или буферы, и приготавливаются известным способом рег зе, например с помощью обычных процессов растворения или лиофилизации. Названные растворы или суспензии могут содержать вещества, повышающие вязкость, такие как натрия карбоксиметилцеллюлоза, декстран, поливинилпирролидон или желатин.

Суспензии в масле содержат, в качестве масляного компонента, растительные, синтетические или полусинтетические масла, обычно применяемые для инъекций. В частности, можно упомянуть такие масла, как жидкие сложные эфиры жирных кислот, которые содержат, в качестве кислотного компонента, длинноцепочечную жирную кислоту, имеющую 8-22, в частности 12-22, атомов углерода, например лауриновую кислоту, тридекановую кислоту, миристиновую кислоту, пентадекановую кислоту, пальмитиновую кислоту, маргариновую кислоту, стеариновую кислоту, арахидоновую кислоту, бегеновую кислоту или соответствующие ненасыщенные кислоты, например олеиновую кислоту, элаидиновую кислоту, эруковую кислоту, брассидиновую кислоту или линолевую кислоту, в подходящих случаях - с добавлением антиоксидантов, например витамина Е, β-каротина или 3,5-ди-трет-бутил-4-гидрокситолуола. Спиртовой компонент этих сложных эфиров жирных кислот имеет не более 6 атомов углерода и представлен одно- или многоатомным спиртом, например одно-, двух- или трехатомным спиртом, например метанолом, этанолом, пропанолом, бутанолом или пентанолом либо их изомерами, в частности гликолем и глицерином. Сложные эфиры жирных кислот - это, в частности, этилолеат, изопропилмиристат, изопропилпальмитат, ЬаЪтаГП М 2375 (полиоксиэтиленглицеролтриолеат производства СайеГозес, Париж), ЬаЪтаИ М 1944 С8 (ненасыщенные полигликолированные глицериды, приготовленные акоголизом масла из косточек абрикоса и состоящие из глицеридов и сложных эфиров полиэтиленгликоля; производства СайеГозес, Париж), ЬаЪгазо1 (насыщенные полигликолированные глицериды, приготовленные алкоголизом среднецепочечных триглицеридов и состоящие из глицеридов и сложных эфиров полиэтиленгликоля; производства СайеГозес, Париж) и/или Мщ1уо1 812 (триглицерид насыщенных жирных кислот с длиной цепочки от С₈ до С₁₂ производства Ни1з АС, Германия), в частности растительные масла, такие как хлопковое масло, миндальное масло, оливковое масло, кунжутное масло, соевое масло и в особенности арахисовое масло.

Приготовление составов для инъекций осуществляют обычным образом в стерильных условиях, таким как розлив в ампулы или флаконы, с закрытием контейнеров.

Например, фармацевтические составы для перорального приема могут быть получены сочетанием действующего вещества с одним или несколькими твердыми носителями, в подходящих случаях - гранулированием полученной смеси и, если требуется, переработкой смеси или гранул в таблетки без оболочки или в сердцевины таблеток в оболочке, в подходящих случаев - добавлением дополнительных вспо- 19 028206 могательных веществ.

Подходящими носителями, в частности, являются наполнители, такие как сахара, например лактоза, сахароза, маннитол или сорбитол, препараты целлюлозы и/или фосфаты кальция, например, трикальцийдифосфат или дикальций фосфат, а также связующие вещества, такие как крахмалы, например кукурузный, пшеничный, рисовый или картофельный крахмал, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, натрий-карбоксиметилцеллюлоза и/или поливинилпирролидин, и/или, при необходимости, разрыхлители, такие как вышеупомянутые крахмалы, а также карбоксиметил-крахмал, сшитый поливинилпирролидон, альгиновая кислота или ее соль, такая как натрия альгинат. Дополнительными вспомогательными веществами являются, в частности, регуляторы текучести и смазывающие вещества, например салициловая кислота, тальк, стеариновая кислота или ее соли, такие как магния стеарат или кальция стеарат, и/или полиэтиленгликоль, или их производные. Сердцевины таблеток в оболочке могут быть снабжены подходящими оболочками, которые в соответствующих случаях устойчивы к действию желудочного сока, где к используемым оболочкам относятся, среди прочих, концентрированные растворы сахара, которые в подходящих случаях содержат гуммиарабик, тальк, поливинилпирролидин, полиэтиленгликоль и/или титана диоксид, растворы оболочек в подходящих органических растворителях или смесях растворителей, или для приготовления оболочек, которые устойчивы к действию желудочного сока, растворы подходящих препаратов целлюлозы, таких как ацетилцеллюлозы фталат или гидроксипропилметилцеллюлозы фталат. Красители или пигменты могут примешиваться к таблеткам без покрытия или покрытиям таблеток с покрытием, например, для идентификации или определения характеристик различных доз активного вещества. К фармацевтическим составам, которые могут использоваться перорально, также относятся твердые капсулы из желатина и мягкие закрытые капсулы из желатина и пластификатора, такого как глицерин или сорбитол. Твердые капсулы могут содержать действующее вещество в форме гранул, смешанное, например, с наполнителями, такими как кукурузный крахмал, связующими веществами и/или смазывающими веществами, такими как тальк или магния стеарат, а также в соответствующих случаях стабилизаторами. В мягких капсулах действующее вещество в предпочтительном случае растворяется или диспергируется в подходящих жидких вспомогательных веществах, таких как жирные масла, парафиновое масло или жидкий полиэтиленгликоль либо сложные эфиры жирных кислот этиленгликоля или пропиленгликоля; при этом также возможно добавление стабилизаторов и детергентов, например типа сложного эфира сорбита и жирной кислоты.

К другим лекарственным формам для перорального приема относятся, в частности, сиропы, приготовленные обычным образом, в состав которых входит действующее вещество, например в форме суспензии и в концентрации от примерно 5 до 20%, предпочтительно около 10% или в другой аналогичной концентрации, которая обеспечивает приемлемую разовую дозу, например, объемом 5 или 10 мл. Другими формами также являются, например, порошкообразные или жидкие концентраты для приготовления коктейлей, например, в молоке. Такие концентраты могут также быть упакованы в количествах, соответствующих разовой дозе.

К фармацевтическим составам, которые могут использоваться ректально, относятся, в частности, суппозитории, которые содержат сочетание действующего вещества с суппозиторной основой. Подходящими суппозиторными основами являются, например, природные или синтетические триглицериды, парафиновые углеводороды, полиэтиленгликоли или высшие алканолы.

К составам, подходящим для приема парентерально, относятся водные растворы действующего вещества в водорастворимой форме, например водорастворимой соли, или водные суспензии для инъекций, которые содержат вещества, повышающие вязкость, например натрий-карбоксиметилцеллюлозу, сорбитол и/или декстран, а также в соответствующих случаях стабилизаторы. Действующее вещество может также присутствовать здесь в форме лиофилизата, в соответствующих случаях вместе со вспомогательными веществами и могут растворяться перед приемом парентерально посредством добавления подходящих растворителей. Растворы, которые используются, например, для приема парентерально, могут также использоваться в качестве инфузионных растворов. Предпочтительными консервантами являются, например, антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, или микробициды, такие как сорбиновая или бензойная кислота.

Мазями являются масляные эмульсии в воде, содержание воды или водной фазы в которых составляет не более 70%, предпочтительно 20-50%. Жирная фаза содержит, в частности, углеводороды, например вазелин, парафиновое масло или твердые парафины, которые в предпочтительном случае содержат подходящие гидрокси-соединения, такие как жирные спирты или их сложные эфиры, например цетиловый спирт, или ланолиновые спирты, например ланолин, для улучшения водосвязывающей способности. Эмульгаторами являются соответствующие липофильные вещества, например сложные эфиры сорбита и жирной кислоты (§рап8), например сорбитан олеат и/или сорбитан изостеарат. Дополнителями к водной фазе являются, например, увлажнители, такие как полиспирты, например глицерин, пропиленгликоль, сорбитол и/или полиэтиленгликоль, или консерванты и ароматические вещества. Настойки и растворы обычно содержат водно-этаноловое основание, к которому примешивают увлажнители для уменьшения испарения, такие как полиспирты, например глицерин, гликоли и/или полиэтиленгликоли, и вещества для восстанавливающего смазывания, такие как сложные эфиры жирных кислот с низшими полиэти- 20 028206 ленгликолями, т.е. липофильные вещества, растворимые в водной смеси, для замещения жирных веществ, удаляемых с кожи этанолом, а также, при необходимости, прочие вспомогательные вещества и добавки. Изобретение также относится к процессу или способу для лечения болезненных состояний, упоминавшихся выше. Соединения могут назначаться профилактически или терапевтически как в чистом виде, так и в виде фармацевтических составов, предпочтительно в количестве, которое является эффективным при названных заболеваниях. Применительно к теплокровным животным, например человеку, требующим такого лечения, соединения используются, в частности, в форме фармацевтической композиции. Суточная доза от примерно 0,1 до около 5 г, предпочтительно от 0,5 до примерно 2 г, соединения по настоящему изобретению назначается здесь для тела массой около 70 кг.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 показана индукция апоптоза в различных линиях клеток гепатоклеточной карциномы, обработанных соединением ВР14. Асинхронные клетки подвергали в течение 24 ч показанным концентрациям ВР14, после чего анализировали методом иммуноблоттинга уровни белка расщепленного РАКР-1 и антиапоптозного белка Мс1-1. Для контроля равномерности белковой нагрузки, фиксировали уровень актина.

На фиг. 2 показана индукция апоптоза в различных линиях клеток гепатоклеточной карциномы, обработанных соединением ВР14. Активность каспаз-3/7 измеряли с помощью флуорогенного субстрата Ае-ИЕУИ-АМС в лизатах клеток, обработанных увеличивающимися дозами соединения ВР14.

На фиг. 3 показан иммуноблот-анализ ингибирования транскрипции в различных линиях клеток гепатоклеточной карциномы, обрабатывавшихся соединением ВР14 в течение 24 ч. Для контроля равномерности белковой нагрузки, фиксировали уровень актина.

На фиг. 4 показано воздействие 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пуринов на миграцию эндотелиальных клеток пупочной вены человека (ЭКПВЧ). Определение миграции с использованием программного обеспечения собственной разработки проводилось расчетом доли пикселей на изображении, которые не были покрыты клетками, от общего количества пикселей:

А - контрольные клетки;

В - положительная контрольная группа (клетки выдерживались в бессывороточной среде);

С - клетки, обработанные ВР30 (100 нМ);

И - клетки, обработанные ВР36 (100 нМ).

На фиг. 5 показано антиангиогенное действие ВР14 и ВР20. Для анализов колониеобразования в пробирке ЭКПВЧ высевались в чашки с покрытием из матригеля в присутствии показанных доз ВР14 и ВР20 и инкубировались в течение 24 ч для обеспечения образования капиллярной сети.

На фиг. 6 показана экспрессия ЕЬАМ-1 посредством ЭКПВЧ, которые были сокультивированы с различными дозами (в наномолярной концентрации) анализируемых ингибиторов в течение 4 ч. Данные представлены в виде среднего и стандартного отклонения трех различных экспериментов.

На фиг. 7 показано, что ВР-14 снижает жизнеспособность клеток гепатомы и блокирует множество

ЦКЗ:

А - дозозависимое влияние ВА-12 на жизнеспособность клеток гепатомы человека НерО2, РЬС, НерЗВ и 3§р;

В - ингибирование активности ЦК31 и ЦК32 за счет применения ВР-14 в бесклеточных экстрактах;

С - супрессия активности ЦЗК7 и ЦЗК9 после воздействия различными концентрациями ВР-14 в течение 24 ч в клетках НерО2 и РЬС.

Как показал иммуноблоттинг, уровни активности ЦЗК7 и ЦЗК9 соответствуют фосфорилированию РНК-полимеразы II по серину 5 и серину 2 соответственно. Экспрессия актина указывает на равномерную нагрузку проб белка, с: контрольная группа (необработанные клетки). Показатели погрешности отражают стандартное отклонение по результатам по меньшей мере трех отдельных экспериментов.

На фиг. 8 показано, что ВР-14 влияет на клоногенность и прогрессирование клеточного цикла клеток ГКК:

А - количественная оценка колоний, положительных к кристаллическому фиолетовому, образованных клетками НерО2 (левый ряд) и РЬС (правый ряд). Клетки, предварительно обработанные различными концентрациями ВР-14;

В - клетки НерО2 (слева) и РЬС (справа) подвергались воздействию ВР-14 в течение 24 ч, с анализом синтеза ДНК посредством инкорпорации БДУ;

С - проточная цитометрия, показывающая распределение клеточного цикла клеток НерО2 (слева) и РЬС (справа) после обработки различными концентрациями ВР-14 в течение 24 ч.

Содержание клеточной ДНК показано на гистограммах (верхний ряд), а процентные отношения клеток в фазе 01, δ или 02 изображены в виде столбцов гистограмм после квантификации (нижний ряд), с. контрольная группа (необработанные клетки). Столбцы гистограмм погрешностей отражают стандартное отклонение по результатам по меньшей мере трех отдельных экспериментов. Статистическая значимость отмечена звездочками (*** р<0,005).

На фиг. 9 показана пролиферация клеток ГКК после воздействия ВР-14. Кинетика пролиферации клеток Нер02, РЬС и Нер3В после обработки различными концентрациями ВР-14. Столбцы гистограмм

- 21 028206 погрешностей отражают стандартное отклонение по результатам по меньшей мере трех отдельных экспериментов.

На фиг. 10 отражен апоптоз, индуцированный ВР-14 в клетках ГКК, но не в первичных человеческих гепатоцитах (ПЧГ). А. расщепление РАКР после обработки клеток НерС2 и РЬС различными концентрациями ВР-14 в течение 24 ч. В. расщепление РАКР (верхний ряд) и определение дозозависимых воздействий ВР-14 на жизнеспособность (нижний ряд) ПЧГ. Клетки НерС2 с расщеплением РАКР включены в качестве положительной контрольной группы. Актин показан в качестве средства контроля нагрузки, с: контрольная группа (необработанные клетки). Столбцы гистограмм погрешностей отражают стандартное отклонение по результатам по меньшей мере трех отдельных экспериментов.

На фиг. 11 показано воздействие ВР-14 на модели ксенографтной ГКК. Опухоли генерировались подкожными инъекциями клеток НерС2 и РЬС у мышей с иммунодефицитом (ТКИН). Фармакологическое воздействие осуществляли на опухоленесущих мышах посредством ежедневных внутрибрюшинных инъекций ВР-14 в течение 17 дней:

А - объемы опухолей, производных от НерС2 и РЬС в отсутствие соединений (контрольная группа) и после воздействия ВР-14;

В - иммуногистохимический анализ, показывающий срезы опухоли, помеченные антителом антиБДУ. На вставках показано маркирование БДУ при более высоком увеличении;

С - количественный анализ инкорпорации БДУ. с. контрольная группа (необработанные клетки).

Столбцы гистограмм погрешностей отражают стандартное отклонение по результатам трех отдельных экспериментов, которые проводились в четырех параллельных испытаниях. Статистическая значимость отмечена звездочками (*р<0,05, ***р<0,005).

На фиг. 12 показано, что ВР-14 уменьшает образование гепатомы, индуцированной ДЭНА. Эндогенный рак печени индуцировали введением ДЭНА у мышей С57ВЬ/61 в возрасте 14 дней:

А - схема, изображающая график лечения ВР-14. После 8 месяцев (заштрихованный участок), Мыши, индуцированные ДЭНА, подвергались 3 циклам лекарственной терапии в течение 10 дней (зеленые участки) с перерывами в подаче Вр-14 на 7 дней между циклами:

В - репрезентативная морфология гепатомы, индуцированной ДЭНА (контрольная группа), в сравнении с результатами после лечения ВР-14. Белыми окружностями отмечены узелки злокачественных образований в печени;

С - диаметры злокачественных узелков измерялись на поверхности печени и отражались в столбцах гистограмм. Статистическая значимость отмечена звездочками (*р<0,05).

Примеры осуществления изобретения

Приведенные ниже примеры служат для иллюстрации изобретения, без ограничения объема последнего.

Исходные материалы для соединений с формулой I выпускаются в промышленных масштабах (5>щта-А1йпсК Р1ика, е!с.).

Температуры плавления определялись на нагревательном столике Воейиз и даны с учетом поправок. 'Н ЯМР-спектры измерялись в СЭС1₃ или в ДМСО-й₆ при 300 К на ЯМР-спектрометре Вгикег Ауаисе 300 (300 МГц) с ТМ8 в качестве внутреннего стандарта; регистрировались химические сдвиги в ррт, и константы взаимодействия в герцах. Массовые спектры регистрировались с использованием массспектрометрической ионной ловушкой ЬСО (Ейиидап МАТ, 8аи 1озе, СА, И8А). Для колоночной хроматографии использовался силикагель Мегск К1езе1де1 60 (с сеткой 230-400).

Элементный анализ проводили с использованием элементного анализатора ЕА 1108 (Ρίδοη 1и8йитеи18); их значения (С, Н, Ν) согласовывались с расчетными в приемлемых пределах. Квадрупольные масс-спектры измерялись на детекторе Мюготазз ΖΜΌ с ионизацией электрораспылением.

Исходный 2,6-дихлор-9-циклопентилпурин приготавливался методом алкилирования по Мицунобу из 2,6-дихлорпурина и циклопентанола.

1) Зйит е! а1. №с1еоз. №.1с1ео1. 20, 2001: 1067-1078.

2) Эгеуег е! а1. 1. Мей. Сйет. 44, 2001: 524-530.

Приготовление 9-циклопентил-2,6-дихлор-9Н-пурина.

2,6-Дихлор-9Н-пурин (30,0 ммоль), циклопентанол (60,0 ммоль) и трифенилфосфин (36,0 ммоль) растворяли в сухом тетрагидрофуране (120 мл) и охлаждали до 0°С. К перемешиваемому раствору диизопропил-азодикарбоксилата (36,0 ммоль) добавляли каплями в атмосфере аргона таким образом, чтобы температура поддерживалась на уровне между 0 и 20°С. Реагирующую смесь перемешивали в атмосфере аргона при 20°С в течение еще 2 ч. Затем реагирующую смесь испаряли при пониженном давлении, а осадок растворяли в кипящем толуоле (100 мл). После охлаждения до комнатной температуры раствор инокулировали небольшим количеством оксида трифенилфосфина и выдерживали при 5°С в течение 24 ч. Оксид трифенилфосфина отфильтровывали, а фильтра испаряли при пониженном давлении. Осадок кристаллизовали из этанола до получения чистого 9-циклопентил-2,6-дихлор-9Н-пурина.

Выход: 56%, т.пл.: 118-120°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₁₀Н₁₀С1₂Щ (257,12): С, 46,71; Н, 3,92; Ν, 21,79. Обнаружено: С, 46,95; Н, 3,81; Ν, 21,70.

- 22 028206

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 288,10 (99,6%).

Ή ЯМР (ДМСО-б₆): 1,64-1,69 (т, 2Н), 1,81-1,96 (т, 4Н), 2,09-2,15 (т, 2Н), 4,92 (дш, 1=7,53 Гц, 1Н, СН), 8,82 (5, 1Н, СН).

Приготовление С-(6-бромпиридин-3 -ил)метиламина.

2-Бром-5-метилпиридин (70,0 ммоль) и Ν-бромсукцинимид (80,0 ммоль) растворяли в

1.2- дихлорэтане (150 мл) и к этой смеси добавляли 2,2'-азо-бис-(2-этилпропионитрил) (1,50 ммоль). Реагирующую смесь нагревали с обратным холодильником при 85°С в течение 15 мин, после чего добавляли следующую порцию 2,2'-азо-бис-(2-метилпропионитрила) (1,50 ммоль) и реагирующую смесь нагревали при 85°С еще 15 мин. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь выдерживали при 5°С в течение 2 ч, а осадок отфильтровывали и промывали небольшим количеством

1.2- дихлорэтана. Фильтра испаряли при пониженном давлении, а сырой продукт использовали для дальнейшего шага реакции без очистки. Сырой 2-бром-5-бромометилпиридин растворяли в хлороформе (100 мл) и добавляли уротропин (70,0 ммоль). Реагирующую смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Осадок отфильтровывали, промывали небольшим количеством хлороформа и высушивали на воздухе. Сырую соль уротропина нагревали с обратным холодильником в смеси конц. гидроксида аммония (12 мл) и воды (80 мл) в течение 90 мин и после охлаждения до комнатной температуры добавляли при помешивании 40% формальдегид (5,0 мл). Осадок отфильтровывали, промывали ледяной водой и высушивали в вакуумном дессикаторе. Сырой продукт кристаллизовали из этанола.

Выход: 40%, т.пл.:105-106°С.

Элементный анализ: Рассчитано для Ο,Η-ΒγΝ (187,04): С, 38,53; Н, 3,77; Ν, 14,98. Обнаружено: С, 38,22; Н, 3,72; Ν, 14,71.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 188,02 (97,2%).

Ή ЯМР (ДМСО-б₆): 4,04 (1, 1=5,67 Гц, 2Н, СН₂), 7,71 (б, 1=8,19 Гц, 1Н, АгН), 7,95 (бб, 1=8,19 Гц, 1-1,95 Гц, 1Н, АгН), 8,51 (б, 1=1,95 Гц, 1Н, АгН), 8,74 (₈(Ьг), 2Н, ΝΉ₂).

Пример 1. Приготовление (4-бромбензил)-(2-хлор-9-циклопентил-9Н-пурин-6-ил)амина

К суспензии 9-циклопентил-2,6-дихлор-9Н-пурина (7,78 ммоль) в смеси н-пропанола (40 мл) и НН-диизопропил-Н-этиламина (23,34 ммоль) добавляли 4-бромбензиламина гидрохлорид (8,56 ммоль). Суспензию нагревали при помешивании в запаянной пробирке в атмосфере аргона при температуре 120°С в течение 4 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь выпаривали при пониженном давлении, а остаток разделяли между водой (50 мл) и дихлорметаном (50 мл). Водную фазу дважды дополнительно экстрагировали с дихлорметаном. Объединенные органические фазы промывали водой и рассолом и выпаривали при пониженном давлении.

Выход: 98%, т.пл.: 152-154°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₁₇Н₁₇С1Вг^ (406,71): С, 50,20; Н, 4,21; Ν, 17,22. Обнаружено: С, 50,00; Н, 3,99; Ν, 16,95.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 408 (99,9%).

Ή ЯМР (ДМСО-б₆): 1,64-1,69 (т, 2Н), 1,81-1,96 (т, 4Н), 2,09-2,15 (т, 2Н), 4,59 (б, 1=6,72 Гц, 2Н, СН₂), 4,77 (дш, 1=7,05 Гц, 1Н, СН), 7,28 (б, 1=8,22 Гц, 2Н, АгН), 7,49 (б, 1=8,22 Гц, 2Н, АгН), 8,26 (5, 1Н, СН), 8,83 (1, 1=6,72 Гц, 1Н, ΝΉ).

Пример 2. (6-Бромпиридин-3-илметил)-(2-хлор-9-циклопентил-9Н-пурин-6-ил)амин

- 23 028206

К суспензии 9-циклопентил-2,6-дихлор-9Н-пурина (13,6 ммоль) в смеси н-пропанола (60 мл) и Н^диизопропилХ-этиламина (60,0 ммоль) добавляли С-(6-бромпиридин-3-ил)метиламин (15,0 ммоль). Суспензию нагревали при помешивании в запаянной пробирке в атмосфере аргона при температуре 120°С в течение 4 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь оставляли при 5°С на ночь, а белую твердую фазу отфильтровывали и промывали небольшим количеством охлажденного льдом изопропанола. Сырой продукт высушивали при 80°С в течение 2 ч и, наконец, кристаллизовали из этанола.

Выход: 71%, т.пл.: 178-179°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С^^СШт^ (407,70): С, 47,14; Н, 3,96; Ν, 20,61. Обнаружено: С, 47,35; Н, 3,88; Ν, 20,48.

НРЬС-Μδ (Ε8Σ+): 409 (98,5%).

’Н ЯМР (ДМСО-б₆): 1,64-1,69 (т, 2Н), 1,81-1,96 (т, 4Н), 2,09-2,15 (т, 2Н), 4,61 (5(Ьг), 2Н, СН₂), 4,77 (ЯШ, 1=7,20 Гц, 1Н, СН), 7,59 (б, 1=8,19 Гц, 1Н, АгН), 7,70 (б, 1=8,19 Гц, 1Н, АгН), 8,26 (5, 1Н, СН), 8,38 (5, 1Н, АгН), 8,82 (5(Ьг), 1Н, ЫН).

Пример 3. (2-Хлор-9-циклопентил-9Н-пурин-6-ил)-(6-фуран-2-илпиридин-3 -илметил)амин

К суспензии 9-циклопентил-2,6-дихлор-9Н-пурина (4,70 ммоль) в смеси н-пропанола (15 мл) и ХН-диизопропил-Н-этиламина (9,40 ммоль) добавляли [6-(2-фурил)пирид-3-ил]метамин (5,17 ммоль). Суспензию нагревали при помешивании в запаянной пробирке в атмосфере аргона при температуре 120°С в течение 3 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь выпаривали при пониженном давлении, а остаток разделяли между водой (50 мл) и дихлорэтаном (50 мл). Водную фазу дополнительно дважды экстрагировали с дихлорметаном. Объединенные органические фазы промывали водой и рассолом и концентрировали.

Выход: 96%, т.пл.: 119-122°С.

Элементный анализ: Рассчитано для СЬНнгОН-О (394,86): С, 60,84; Н, 4,85; Ν, 21,28. Обнаружено: С, 60,56; Н, 4,92; Ν, 21,48.

НРЬС-Μδ (Ε8Σ+): 396 (97,6%).

’Н ЯМР (СЭС1₃): 1,76-1,91 (т, 6Н), 2,22-2,28 (т, 2Н), 4,85-4,92 (т, 3Н, СН, СН₂), 6,54 (б, 1=3,42 Гц, 1Н, АгН), 6,59 (5(Ьг), 1Н, ЯН), 7,05 (б, 1=3,42 Гц, 1Н, АгН), 7,53 (б, 1=3,42 Гц, 1Н, АгН), 7,64-7,69 (т, 2Н, АгН), 7,75 (б, 1=6,27 Гц, 1Н, АгН) 8,61 (5, 1Н, СН).

Пример 4. (2-Хлор-9-циклопентил-9Н-пурин-6-ил)-(4-фуран-2-илбензил)амин

К суспензии 2-хлор-6-(4-бромобензиламино)-9-циклопентил-9Н-пурина (2,46 ммоль), добавляли в атмосфере аргона 2-фуранилборную кислоту (2,70 ммоль), калий фосфат тригидрат (7,38 ммоль) и тетрабутиламмония бромид (0,05 ммоль) в диметилформамиде (10 мл), палладия диацетате (0,05 ммоль). Реагирующую смесь нагревали при помешивании в атмосфере аргона в запаянной пробирке при температуре 120°С в течение 12 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь наливали в воду (100 мл), а полученную суспензию экстрагировали трижды с этилацетатом (100 мл). Объединенные органические фазы промывали водой и рассолом, высушивали над сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанол (19:1, об./об.).

- 24 028206

Выход: 55%, т.пл.: 135-137°С.

Элементный анализ: Рассчитано для СУЩСЩО (393,87): С, 64,04; Н, 5,12; Ν, 17,78. Обнаружено: С, 64,25; Н, 4,98; Ν, 17,67.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 394 (97,4%).

' Н ЯМР (СОС1₃): 1,72-1,93 (т, 6Н), 2,22-2,28 (т, 2Н), 4,85-4,92 (т, 3Н, СН, СН₂), 6,65 (ά, 1=3,33 Гц, 1Н, АгН), 7,40 (т, 2Н, АгН), 7,48 (ΐ, 1=3,33 Гц, 1Н, АгН), 7,64-7,69 (т, 3Н, АгН, СН).

Пример 5. (2-Хлор-9-циклопентил-9Н-пурин-6-ил)-(4-пиразол-1-илбензил)амин

9-Циклопентил-2,6-дихлор-9Н-пурин (4,70 ммоль) растворяли в смеси н-пропанола (15,0 мл) и ХЮдиизопропил-Ы-этиламина (9,40 ммоль), и к раствору добавляли 1-[4-(1Н-пиразол-1ил)]фенилметанамин (1,44 ммоль). Реагирующую смесь нагревали в запаянной пробирке в атмосфере аргона при 100°С в течение 1,5 ч. После охлаждения до комнатной температуры полученный твердый осадок суспендировали в этаноле (20 мл), а осадок отфильтровывали и промывали охлажденным льдом этанолом (20 мл). Сырой продукт высушивали при 80°С в течение 2 ч и наконец, кристаллизовали из этанола.

Выход: 72%, т.пл.: 165-167°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₀Н1₉СШ₆О (394,86): С, 60,84; Н, 4,85; Ν, 21,28. Обнаружено: С, 60,56; Н, 4,92; Ν, 21,48.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 394,3 (97,6%).

Ίί ЯМР (ДМСО-б₆):1,61-1,71 (т, 2Н), 1,80-1,98 (т, 4Н), 2,09-2,18 (т, 2Н), 4,66 (ά, 1=5,25 Гц, 2Н, СН₂), 4,77 (ςυΐ, 1=7,05 Гц, 1Н, СН), 6,51 (ΐ, 1=2,16 Гц, 1Н, АгН), 7,45 (ά, 1=8,37 Гц, 2Н, АгН), 7,71 (ά, 1=2,16 Гц, 1Н, АгН), 7,77 (ά, 1=8,37 Гц, 2Н, АгН), 8,27 (5, 1Н, СН), 8,43 (ά, 1=2,16 Гц, 1Н, АгН), 8,86 (ΐ, 1=5,25 Гц, 1Н, ΝΉ).

Пример 6. (2-Хлор-9-циклопентил-9Н-пурин-6-ил)-(6-тиофен-2-илпиридин-3 -илметил)амин

9-Циклопентил-2,6-дихлор-9Н-пурин (1,48 ммоль) растворяли в смеси н-пропанола (15,0 мл) и ХЮдиизопропил-Ы-этиламина (6,0 ммоль) и к раствору добавляли (6-тиофен-2-ил)пирид-3илметиламина дигидрохлорид (1,63 ммоль). Реагирующую смесь нагревали в запаянной пробирке в атмосфере аргона при 80°С в течение 16 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (30 мл) и суспензию дважды экстрагировали с дихлорметаном (25 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, рассолом, высушивали над сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Остаток использовали для дальнейших реакций без очистки.

Выход: 92%, т.пл.: 111-114°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₀Н1₉С18Н5 (410,92): С, 58,46; Н, 4,66; Ν, 20,45; δ, 7,80. Обнаружено: С, 58,56; Н, 4,72; Ν, 20,37, δ, 7,55.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 411,3 (97,3%).

Ίί ЯМР (ДМСО^₆):1,61-1,70 (т, 2Н), 1,78-1,96 (т, 4Н), 2,09-2,16 (т, 2Н), 4,64 (ά, 1=5,37 Гц, 2Н, СН₂), 4,77 (ςυΐ, 1=7,20 Гц, 1Н, СН), 7,14 (ΐ, 1=4,52 Гц, 1Н, АгН), 7,59 (ά, 1=5,01 Гц, 1Н, АгН), 7,74 (ά, 1=5,01 Гц, 1Н, АгН), 7,80 (ά, 1=4,52 Гц, 1Н, АгН), 7,85 (ά, 1=4,52 Гц, 1Н, АгН), 8,27 (5, 1Н, СН), 8,51 (5, 1Н, АгН), 8,87 (ΐ, 1=5,37 Гц, 1Н, ΝΉ).

- 25 028206

Пример 7. М²-(4-Лминоциклогексил)-М⁶-(4-бромбензил)-9-циклопентил-9Н-пурин-2,б-диамин

Вг

ΝΗ(4-Бромбензил)-(2-хлор-9-циклопентил-9Н-пурин-6-ил)амин (7,36 ммоль) смешивали с транс-1,4-диаминоциклогексаном (110 ммоль) и нагревали при 160°С в запаянной пробирке в атмосфере аргона при помешивании в течение 12 ч.

После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разделяли между водой (50 мл) и этилацетатом (50 мл), и водную фазу экстрагировали трижды с этилацетатом (50 мл). Объединенные органические фазы промывали водой и рассолом и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт кристаллизовали из этанола.

Выход: 91%, т.пл.: 123-124°С.

¹Н ЯМР (ДМСО-б₆): 0,85-1,22 (т, 4Н), 1,64-2,04 (т, 12Н) 3,29-3,37 (т, 3Н, СН, ΝΗ₂), 3,52 (вех, 1=7,11 Гц, 1Н, СН), 4,57 (в(Ьг), 2Н, СН₂), 4,62 (цш, 1Н, 1=7,38, СН), 6,02 (б, 1=7,89 Гц, 1Н, ΝΗ), 7,28 (б, 6=8,31 Гц, 2Н, АгН), 7,46 (б, 1=8,31 Гц, 2Н, АгН), 7,73 (в, 1Н, СН), 7,84 (в(Ьг), 1Н, Ν^.

Пример 8. ^-(4-Лминоциклогексил)-У⁶-(6-бромпиридин-3-илметил)-9-циклопентил-9Н-пурин-2,6диамин

Тщательно измельченный (6-бромпиридин-3-илметил)-(2-хлор-9-циклопентил-9Н-пурин-6-ил)амин (7,36 ммоль) и транс-1,4-диаминоциклогексан (110,0 ммоль) смешивали и нагревали в запаянной пробирке в атмосфере аргона при 160°С в течение 4 ч. После охлаждения до 100°С в реагирующую смесь добавляли воду (50 мл) и полученную суспензию экстрагировали трижды с этилацетатом (50 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, рассолом, высушивали над сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Остаток растворяли в этилацетате (10 мл) и измельчали в порошок с диэтилэфиром до получения белой кристаллической массы, которую отфильтровывали и высушивали при 80°С в течение 4 ч.

Выход: 33%, т.пл.: 114-116°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₂Н₂₉Вт№ (485,42): С, 54,43; Н, 6,02; Ν, 23,08. Обнаружено: С, 54,29; Н, 6,15; Ν, 23,00.

НРБС-М8 (Ε8Ι+): 487,3 (98,1%).

Ή ЯМР (СБС1₃): 1,13-1,29 (т, 4Н), 1,50 (в(Ьг), 2Н, ПН₂), 1,71-2,22 (т, 12Н), 2,75 (вер, 1=7,43 Гц, 1Н, СН), 3,67 (вех, 1=7,52 Гц, 1Н, СН), 4,59 (б, 1=7,52 Гц, 1Н, ПН), 4,70 (цш, 1=7,20 Гц, 1Н, СН), 4,82 (б, 1=7,20 Гц, 2Н, СН₂), 6,21 (ΐ, 1=5,25Гц, 1Н, ПН), 7,40 (б, 1=8,16 Гц, 1Н, АгН), 7,55 (бб, 1=8,16 Гц, Т=2,4 Гц, 1Н, АгН), 8,34 (в, 1Н, ИН), 8,39 (в, 1Н, СН).

Пример 9. 1-[6-(4-Бромбензиламино)-9-циклопентил-9Н-пурин-2-иламино]-2-метилпропан-2-ол

- 26 028206

Смесь (4-бромбензил)-(2-хлор-9-циклопентил-9Н-пурин-6-ил)амина (4,92 ммоль), 1-амино-2-метилпропан-2-ола (25,00 ммоль), ЫХ-диизопропил-М-этиламина (10,83 ммоль) и Ν-метилпирролидона (5,0 мл) нагревали при помешивании в запаянной пробирке при 160°С в атмосфере аргона в течение 36 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь разделяли между водой (25 мл) и этилацетатом (25 мл) и водную фазу дважды экстрагировали с этилацетатом. Объединенные органические фазы промывали водой, рассолом и концентрировали в вакууме. Остаток обрабатывали 1% соляной кислоты (25 мл) и дважды экстрагировали с дихлорметаном. Объединенные органические фазы высушивали с сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Сырой продукт использовали для дальнейших реакций без очистки. После колоночной хроматографии на диоксиде кремния получали аналитическую пробу (хлороформ-метанол 9:1, об./об.).

Выход: 82 %, т.пл.: 108-110°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂1Н₂₉ВгЫ₆О (461,40): С, 54,67; Н, 6,34; Ν, 18,21. Обнаружено: С, 54,59; Н, 6,12; Ν, 18,07.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 482,3 (98,6%).

Ή ЯМР (СЭС1₃): 1,28 (5, 6Н, СН₃), 1,74-1,90 (т, 6Н), 2,05-2,38 (т, 2Н), 2,84 (ά, 1=2,32 Гц, 2Н, СН₂), 4,75-4,83 (т, 3Н, СН₂, СН), 5,20 (5(Ьг), 1Н, ОН), 7,28 (ά, 1=7,75 Гц, 2Н, АгН), 7,45 (ά, 1=7,75 Гц, 2Н, АгН), 7,62 (5, 1Н, СН).

Пример 10. 4-{9-Циклопентил-6-[(6-фуран-2-илпиридин-3-илметил)амино]-9Н-пурин-2иламино}циклогексанол

Транс-4-аминоциклогексан-1-ола гидрохлорид (9,43 ммоль) суспендировали в метаноле (10 мл) и к суспензии добавляли натрия метоксид (9,43 ммоль). Реагирующую смесь перемешивали в течение 10 мин при комнатной температуре и хлорид натрия отфильтровывали. Фильтрат выпаривали при пониженном давлении и к остатку добавляли (2-хлор-9-циклопентил-9Н-пурин-6-ил)-(6-фуран-2-илпиридин3-илметил)амин (0,25 ммоль) и Ν-метилпирролидон (1 мл). Реагирующую смесь нагревали при 160°С в течение 16 ч в атмосфере аргона. После охлаждения до комнатной температуры добавляли воду (10 мл) и полученную суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (25 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, рассолом, высушивал над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографии на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанол (9:1).

Выход: 33%, т.пл.: 164-166°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₆Н₃₁Ы₇О₂ (473,57): С, 65,94; Н, 6,60; Ν, 20,70. Обнаружено: С, 66,08; Н, 6,48; Ν, 20,34.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 474,4 (99,6%).

Ή ЯМР (СБС1₃): 1,22 (φ 1= 10,2, 2Н), 1,43 (φ 1=10,2 Гц, 2Н), 1,72-1,81 (т, 2Н), 1,90-2,02 (т, 6Н), 2,11-2,25 (т, 4Н), 2,86 (5(Ьг), 1Н, ОН), 3,61-3,76 (т, 2Н), 4,64 (ά, 1=7,68 Гц, 1Н, ΝΉ), 4,69 (дш, 1=7,14 Гц, 1Н, СН), 4,79 (ά, 1=5,43 Гц, 2Н, СН₂), 6,12 (1, 1=5,43 Гц, 1Н, ΝΉ), 6,52 (άά, 1=3,39 Гц, Г=1,77 Гц, 1Н, АгН), 7,02 (ά, 1=3,39 Гц, 1Н, АгН), 7,48 (5, 1Н, АгН), 7,52 (ά, 1=3,39 Гц, 1Н, АгН), 7,63 (ά, 1=8,13 Гц, 1Н, АгН), 7,73 (άά, 1=8,13 Гц, Г=2,07 Гц, 1Н, АгН), 8,61 (5, 1Н, СН).

- 27 028206

Пример 11. Приготовление 1-{9-циклопентил-6-[(6-фуран-2-илпиридин-3-илметил)амино]-9Нпурин-2-иламино } -2-метилпропан-2-ола

Смесь (2-хлор-9-циклопентил-9Н-пурин-6-ил)-(6-фуран-2-илпиридин-3-илметил)амина (2,53 ммоль), 1-амино-2-метилпропан-2-ола (12,66 ммоль) и ПШ-диизопропил-Н-этиламина (15,0 ммоль) нагревали при 160°С в запаянной пробирке в атмосфере аргона в течение 16 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь растворяли в смеси этилацетата (50 мл) и метанола (10 мл), а полученный раствор промывали водой (50 мл). Затем водную фазу дважды экстрагировали с этилацетатом (40 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с использованием подвижной фазы хлороформ - метанол (19:1, об./об.).

Выход: 37%, т.пл.: 128-129°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₄Н₂₉Ы₇О₂ (447,53): С, 64,41; Н, 6,53; Ν, 21,91. Обнаружено: С, 64,65; Н, 6,44; Ν, 21,58.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 448,4 (99,5%).

¹Н ЯМР (СЭС1₃): 1,27 (5, 6Н, СН₃), 1,70-1,91 (т, 6Н), 2,20-2,35 (т, 2Н), 3,40 (к, 1=6,21 Гц, 2Н, СН₂), 4,69 (цш, 1=6,42 Гц, 1Н, СН), 4,79 (5(Ьг), 2Н, СН₂), 5,24 (ΐ, 1=6,21 Гц, 1Н, N4), 5,61 (5(Ьг), 1Н, ОН), 6,04 (5(Ьг), 1Н, ΝΉ), 6,54 (ΐ, 1=3,42 Гц, 1Н, АгН), 7,03 (к, 1=3,42 Гц, 1Н, АгН), 7,50-7,54 (т, 2Н, АгН), 7,64 (к, 1=8,25 Гц, 1Н, АгН), 7,74 (кк, 1=8,25 Гц, Э’=3,42 Гц, 1Н, АгН), 8,63 (5, 1Н, СН).

Пример 12. Приготовление 1-[9-циклопентил-6-(4-фуран-2-илбензиламино)-9Н-пурин-2-иламино]2-метилпропан-2-ола

К суспензии 1-[6-(4-бромбензиламино)-9-циклопентил-9Н-пурин-2-иламино]-2-метилпропан-2-ола (3,34 ммоль), 2-фуранилборной кислоты (5,01 ммоль), калия фосфата тригидрата (13,3 ммоль) и тетрабутиламмония бромиде (0,067 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (15 мл) добавляли палладия диацетат (0,085 ммоль) в атмосфере аргона. Реагирующую смесь нагревали в запаянной пробирке в атмосфере аргона при 85°С в течение 4 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (200 мл), а полученный раствор дважды экстрагировали с этилацетатом (200 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанол (19:1, об./об.).

Выход: 80%, т.пл.: 121-123°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₅Н₃₀П₆О₂ (446,54): С, 67,24; Н, 6,77; Ν, 18,82. Обнаружено: С, 67,59; Н, 6,37; Ν, 18,62.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 447,4 (99,8%).

Ή ЯМР (СЭС1₃): 1,27 (5, 6Н, СН₃), 1,70-1,91 (т, 6Н), 2,20-2,35 (т, 2Н), 3,40 (к, 1=6,18 Гц, 2Н, СН₂), 4,70 (цш, 1=5,01 Гц, 1Н, СН), 4,79 (5(Ьг), 2Н, СН₂), 5,29 (5(Ьг), 1Н, ОН), 5,62 (ΐ, 1=6,21 Гц, 1Н, ΝΉ), 7,217,63 (т, 7Н, АгН), 7,68 (5(Ьг), 1Н, ΝΉ), 8,63 (5, 1Н, СН).

- 28 028206

Пример 13. Приготовление У-(4-а\1иноциклогексил)-9-циклопентил-У-(4-пираэол-1-илбензил)9Н-пурин-2,6-диамина

Смесь тщательно измельченного (2-хлор-9-циклопентил-9Н-пурин-6-ил)-(4-пиразол-1илбензил)амина (0,63 ммоль) и транс-1,4-диаминоциклогексана (12,69 ммоль) нагревали при помешивании в атмосфере аргона при 160°С в течение 4 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (50 мл), а суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (50 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией с подвижной фазой хлороформ - метанол (19:1, об./об.).

Выход: 78%, т.пл.: 186-187°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₃₃Н₃₃Н₉ (471,60): С, 66,22.; Н, 7,05; Ν, 26,73. Обнаружено: С, 66,48; Н, 7,24; Ν, 16,51.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 472,4 (99,8%), ^!Н ЯМР (ДМСО-б₆): 1,02-1,21 (т, 4Н), 1,64-1,2,05 (т, 12Н), 2,90-3,15 (т, 3Н, СН, ΝΗ₂), 3,59 (вех, 1=5,05 Гц, 1Н, СН), 4,58-4,67 (т, 3Н, СН₂, СН), 6,05 (б, 1=7,29 Гц, 1Н, N4), 6,51 (ί, 1=2,28 Гц, 1Н, АгН), 7,45 (б, 1=8,34 Гц, 2Н, АгН), 7,70-7,86 (т, 4Н, АгН), 7,95 (в(Ьг), 1Н, ΝΉ), 8,42 (б, 1=7,29 Гц, 1Н, СН), 8,63 (в, 1Н, СН).

Пример 14. Приготовление У-(2'-а\1инобифенил-4-ил\1етил)-У-(4-а\1иноциклогексил)-9циклопентил-9Н -пурин-2,6 -диамина

^-(4-Аминоциклогексил)-У³-(4-бромбензил)-9-циклопентил-9Н-пурин-2,6-диамин (0,25 ммоль), 2-аминофенилборной кислоты гидрохлорид (0,75 ммоль), трифенилфосфин (0,50 ммоль) и натрия карбонат (1,75 ммоль) суспендировали в смеси диметилксиэтана (3,0 мл) и воды (2,0 мл) и к этой суспензии добавляли бис-(дибензилиденацетон)палладия (7,50 мкмоль) в атмосфере аргона. Реагирующую смесь нагревали в запаянной пробирке в атмосфере аргона при 80°С в течение 65 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (25 мл), а полученную суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (25 мл). Объединенные органические фазы промывали рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанолконц.аммония гидроксид (9:1:0,05).

Выход: 85%, т.пл.: 168-170°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₉Н₃₆^ (496,65): С, 70,13.; Н, 7,31; Ν, 22,56. Обнаружено: С, 70,32; Н, 7,28; Ν, 22,46.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 497,4 (99,9%).

^!Н ЯМР (ДМСО-б₆): 1,14-1,26 (т, 4Н), 1,72-1,82 (т, 2Н), 1,83-1,96 (т, 10Н), 1,98-2,22 (т, 4Н), 2,71 (вех, 1=6,72 Гц, 1Н, СН), 3,69-3,80 (т, 3Н, ΝΉ₂, СН), 4,66 (б, 1=7,71 Гц, 1Н, ΝΉ), 4,74 (ςυΐ, 1=7,08 Гц, 1Н, СН), 4,81 (б, 1=5,43 Гц, 2Н, СН₂), 6,15 (в(Ьг), 1Н, ΝΉ), 6,76 (б, 1=7,41 Гц, 1Н, АгН), 6,82 (ί, 1=7,41 Гц, 1Н, АгН), 7,11 (б, 1=7.41 Гц, 1Н, АгН), 7,15 (ί, 1=7,41 Гц, 1Н, АгН), 7,38-7,46 (т, 5Н, АгН, СН).

- 29 028206

Пример 15. Приготовление Ы²-(4-аминоциклогексил)-М⁶-[6-(2-аминофенил)пиридин-3-илметил]-9циклопентил-9Н -пурин-2,6 -диамина

Ы²-(4-Аминоциклогексил)-М⁶-(6-бромпиридин-3-илметил)-9-циклопентил-9Н-пурин-2,6-диамин (0,25 ммоль), 2-аминофенилборной кислоты гидрохлорид (0,75 ммоль), трифенилфосфин (0,50 ммоль) и натрия карбонат (1,75 ммоль) суспендировали в смеси 1,2-диметоксиэтана (3,0 мл) и воды (2,0 мл) и к этой суспензии добавляли бис-(дибензилденацетон)палладий (7,50 мкмоль) в атмосфере аргона. Реагирующую смесь нагревали в запаянной пробирке в атмосфере аргона при 120°С в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (25 мл) и полученную суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (25 мл). Объединенные органические фазы промывали рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформметанол-конц.аммония гидроксид (8:2:0,05).

Выход: 56%, т.пл.: 173-175°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₈Н₃₅М₉ (497,64): С, 67,58.; Н, 7,09; Ν, 25,33. Обнаружено: С, 67,69; Н, 7,19; Ν, 25,02.

НРБС-М8 (Ε8Ι+): 498,4 (99,9%).

¹Н ЯМР (СБС1₃): 1,14-1,34 (т, 4Н), 1,71-2,05 (т, 12Н), 2,10-2,23 (т, 4Н, 2χΝΉ₂), 2,75 (вер, 1=7,32 Гц, 1Н, СН), 3,73 (вех, 1=7,52 Гц, 1Н, СН), 4,59 (ά, 1=7,52 Гц, 1Н, ΝΉ), 4,70 (дт, 1=7,20 Гц, 1Н, СН), 4,82 (ά, 1=7,20 Гц, 2Н, СН₂), 5,92 (1, 1=7,20 Гц, 1Н, ΝΉ), 6,75-6,81 (т, 2Н, АгН), 7,20 (1, 1=7,89 Гц, 1Н, АгН), 7,47,751 (т, 2Н, АгН), 7,61 (ά, 1=8,34 Гц, 1Н, АгН), 7,79 (ά, 1=8,34 Гц, 1Н, АгН), 8,63 (в, 1Н, СН).

Пример 16. Приготовление Ы²-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-М⁶-(6-тиофен-2-илпиридин-3илметил)-9Н-пурин-2,6-диамина

Смесь тщательно измельченного (2-хлор-9-циклопентил-9Н-пурин-6-ил)-(6-тиофен-2-илпиридин-3илметил)амина (0,75 ммоль) и транс-1,4-диаминоциклогексана (10,95 ммоль) нагревали в запаянной пробирке в атмосфере аргона при 160°С в течение 3 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (50 мл), а полученную суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (50 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанол-конц.аммония гидроксид (9:1:0,05).

Выход: 88%, т.пл.: 151-153°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₆Н₃₄Ы₈8 (497,64): С, 63,64.; Н, 6,98; Ν, 22,84; 8, 6,53. Обнаружено: С, 63,72; Н, 7,08; Ν, 23,02; 8, 6,28.

НРБС-М8 (Ε8Ι+): 489,4 (99,9%).

¹Н ЯМР (ДМСОД₆): 1,04-1,17 (т, 4Н), 1,64-2,05 (т, 12Н), 3,25-3,38 (т, 3Н, СН, ΝΉ₂), 3,54 (вех, 1=7,83 Гц, 1Н, СН), 4,59-4,65 (т, 3Н, СН₂, СН), 6,09 (ά, 1=7,83 Гц, 1Н, ΝΉ), 7,13 (1, 1=4,05 Гц, 1Н, АгН), 7,58 (ά, 1=4,05 Гц, 1Н, АгН), 7,71-,7,84 (т, 4Н, АгН), 7,90 (в(Ьг), 1Н, ΝΉ), 8,51 (в, 1Н, СН).

- 30 028206

Пример 17. Приготовление М²-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-Н⁶-(б-фуран-2-илпиридин-3илметил)-9Н-пурин-2,6 -диамина

Способ А.

Смесь тщательно измельченного (2-хлор-9-циклопентил-9Н-пурин-6-ил)-(6-фуран-2-илпиридин-3илметил)амин (1,27 ммоль) и транс-1,4-диаминоциклогексан (19,05 ммоль) нагревали в запаянной пробирке в атмосфере аргона при 160°С в течение 4 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (50 мл), а полученную суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (50 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанол-конц.аммония гидроксид (9:1:0,05).

Выход: 89%, т.пл.: 184-186°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₆Н₃₂Ы₈О (472,59): С, 66,08.; Н, 6,83; Ν, 23,71. Обнаружено: С, 66,32; Н, 6,59; Ν, 23,99.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 473,5 (98,6%).

Способ В.

^-(4-Аминоциклогексил)-Х⁶-(6-бромпиридин-3-илметил)-9-циклопентил-9Н-пурин-2,6-диамин (0,41 ммоль), 2-фуранилборную кислоту (1,24 ммоль), трифенилфосфин (0,25 ммоль) и натрия карбонат (1,70 ммоль) суспендировали в смеси 1,2-диметоксиэтана (3,0 мл) и воды (2,0 мл) и к этой смеси добавляли бис-(дибензилденацетон)палладий (12,0 мкмоль) в атмосфере аргона. Реагирующую смесь нагревали в запаянной пробирке в атмосфере аргона при 120°С в течение 6 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (40 мл), а полученную суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (50 мл). Объединенные органические фазы промывали рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанол-конц.аммония гидроксид (9:1:0,05).

Выход: 78%, т.пл.: 184-186°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₆Н₃₂Ы₈О (472,59): С, 66,08.; Н, 6,83; Ν, 23,71. Обнаружено: С, 66,25; Н, 7,03; Ν, 23,54.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 473,5 (99,3%).

Способ С.

К суспензии ^-(4-аминоциклогексил)-^-(6-бромпиридин-3 -илметил)-9-циклопентил-9Н-пурин2,6-диамин (0,21 ммоль), 2-фуранилборной кислоты (0,31 ммоль), калия фосфата тригидрата (0,80 ммоль) и тетрабутиламмония бромида (0,003 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (5,0 мл) добавляли палладия диацетат (2,5 мкмоль) в атмосфере аргона. Суспензию нагревали при помешивании в запаянной пробирке при 120°С в течение 4 ч в атмосфере аргона. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (20 мл), а полученную суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (25 мл). Объединенные органические фазы промывали рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанол-конц.аммония гидроксид (9:1:0,05).

Выход: 81%, т.пл.: 180-183°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₆Н₃₂Ы₈О (472,59): С, 66,08.; Н, 6,83; Ν, 23,71. Обнаружено: С, 66,18; Н, 6,59; Ν, 23,88.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 473,5 (99,8%).

Ή ЯМР (СЭС1₃): 1,12-1,28 (т, 4Н), 1,71-2,15 (т, 12Н), 2,60-2,68 (т, 3Н, СН, ΝΉ₂), 3,68 (вех, 1=10,02 Гц, 1Н, СН), 4,65-4,73 (т, 4Н, СН, СН₂, Ν^, 6,50 (ΐ, 1=3,42 Гц, 1Н, АгН), 6,62 (в(Ьг), 1Н, ΝΉ), 7,00 (8, 1Н, АгН), 7,41-7,69 (т, 4Н, АгН), 8,57 (в, 1Н, СН).

- 31 028206

Пример 18. Приготовление ^-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-Ы⁶-[6-(2метоксифенил)пиридин-3 -илметил] -9Н-пурин-2,6-диамина

^-(4-Аминоциклогексил)-Ы⁶-(6-бромпиридин-3-илметил)-9-циклопентил-9Н-пурин-2,6-диамин (0,41 ммоль), 2-метоксифенилборная кислота (1,24 ммоль), трифенилфосфин (0,25 ммоль) и натрия карбонат (1,70 ммоль) суспендировали в смеси 1,2-диметоксиэтана (3,0 мл) и воды (2,0 мл) и к этой суспензии добавляли бис-(дибензилиденацетон)палладий (12,0 мкмоль) в атмосфере аргона. Реагирующую смесь нагревали в запаянной пробирке в атмосфере аргона при 120°С в течение 3 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (25 мл), а полученную суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (25 мл). Объединенные органические фазы промывали рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанолконц.аммония гидроксид (9:1:0,05).

Выход: 85%, т.пл.: 184-186°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₉Н_3&Ы₈О (512,65): С, 67,94.; Н, 7,08; Ν, 21,86. Обнаружено: С, 67,78; Н, 7,01; Ν, 21,59.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 513,5 (99,6%).

Ίΐ ЯМР (СБС1₃): 1,14-1,34 (т, 4Н), 1,71-2,22 (т, 14Н), 2,72 (вер, 1=5,87 Гц, 1Н, СН), 3,75 (вех, 1=6,25 Гц, 1Н, СН), 3,85 (в, 3Н, СН₃), 4,61 (б, 1=5,87 Гц, 1Н, ΝΉ), 4,69 (ςυΐ, 1=6,87 Гц, 1Н, СН), 4,82 (б, 1=7,20 Гц, 2Н, СН₂), 6,00 (в(Ьг), 1=7,20 Гц, 1Н, ΝΉ), 7,00 (б, 1=8,22 Гц, 1Н, АгН), 7,09 (ΐ, 1=7,32 Гц, 1Н, АгН), 7,35 (ΐ, 1=7,32 Гц, 1Н, АгН), 7,49 (в, 1Н, АгН), 7,70-7,74 (т, 3Н, АгН), 8,72 (в, 1Н, СН).

Пример 19. Приготовление ^-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-Ы⁶-(2'-метоксибифенил-4илметил)-9Н-пурин-2,6-диамина

К суспензии ^-(4-аминоциклогексил)-Ы⁶-(4-бромбензил)-9-циклопентил-9Н-пурин-2,6-диамин (0,25 ммоль), 2-метоксифенилборной кислоты (0,38 ммоль), калия фосфата тригидрата (1,00 ммоль) и тетрабутиламмония бромида (0,005 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (7,0 мл) добавляли диацетат палладия (2,5 мкмоль) в атмосфере аргона. Суспензию нагревали при помешивании в запаянной пробирке при 100°С в течение 20 ч в атмосфере аргона. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (25 мл), а полученную суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (25 мл). Объединенные органические фазы промывали рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанол-конц.аммония гидроксид (9:1:0,05).

Выход: 88%, т.пл.: 178-180°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₃₀Н₃₇^О (511,66): С, 70,42.; Н, 7,29; Ν, 19,16. Обнаружено: С, 70,58; Н, 7,10; Ν, 19,45.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 512,4 (99,8%).

Ίΐ ЯМР (СОС1₃): ЯМР (СПС1₃): 1,14-1,34 (т, 4Н), 1,71-2,22 (т, 14Н), 2,74 (вер, 1=6,33 Гц, 1Н, СН), 3,78 (вех, 1=7,05 Гц, 1Н, СН), 4,00 (в, 3Н, СН₃), 4,59 (б, 1=5,87 Гц, 1Н, ΝΉ), 4,71 (ςυΐ, 1=6,87 Гц, 1Н, СН), 4,79 (б, 1=7,20 Гц, 2Н, СН₂), 6,12 (в(Ьг), 1=7,42 Гц, 1Н, ΝΉ), 7,05 (б, 1=8,05 Гц, 1Н, АгН), 7,09 (ΐ, 1=8,05 Гц, 1Н, АгН), 7,32 (1, 1=8,05 Гц, 1Н, АгН), 7,49 (б, 1=8,05 Гц, 1Н, АгН), 7,38-7,46 (т, 4Н, АгН), 8,65 (в, 1Н, СН).

- 32 028206

Пример 20. Приготовление N²-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-N⁶-(6-фуран-3-илпиридин-3илметил)-9Н-пурин-2,6-диамина

К суспензии N²-(4-аминоциклогексил)-N⁶-(4-бромбензил)-9-циклопентил-9Η-пурин-2,6-диамин (0,25 ммоль), 3-фуранилборной кислоты (0,38 ммоль), калия фосфата тригидрата (1,00 ммоль) и тетрабутиламмония бромида (0,005 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (7,0 мл) добавляли палладия диацетат (2,5 мкмоль) в атмосфере аргона. Суспензию нагревали при помешивании в запаянной пробирке при 100°С в течение 20 ч в атмосфере аргона. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (25 мл) и полученную суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (25 мл). Объединенные органические фазы промывали рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанол-конц.аммония гидроксид (9:1:0,05).

Выход: 94%, т.пл.: 154-156°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₇Н₃Ш₇О (471,60): С, 68,76.; Н, 7,05; Ν, 20,79. Обнаружено: С, 68,52; Н, 7,16 Ν, 20,49.

НРЬС-Μδ (Ε8Σ+): 472,4 (97,8%).

’Н ЯМР (ДМСО-б₆): 1,04-1,17 (т, 4Н), 1,64-2,05 (т, 12Н), 3,15-3,19 (т, 3Н, СН, ЫН₂), 3,58 (вех, 1=7,32 Гц, 1Н, СН), 4,58-4,63 (т, 3Н, СН, СН₂), 6,05 (б, 1=7,32 Гц, 1Н, ЦН), 6,91 (в, 1Н, АгН), 7,34 (б, 1=7,92 Гц, 2Н, АгН), 7,51 (б, 1=7,92 Гц, 2Н, АгН), 7,70-7,73 (т, 2Н, АгН), 7,78 (в(Ьг), 1Н, ЫН), 8,12 (в, 1Н, СН).

Пример 21. Приготовление N²-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-N⁶-[6-(2-гидроксифенил)пиридин-3 -илметил] -9Н-пурин-2,6-диамина

К раствору N²-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-N⁶-[6-(2-метокси-фенил)пиридин-3-илметил]9Н-пурин-2,6-диамина (0,48 ммоль) в дихлорметане (10 мл) при помешивании при комнатной температуре добавляли раствор бора трибромида (2,40 ммоль) в дихлорметане (10 мл). Смесь перемешивали еще 18 ч, после чего каплями добавляли метанол (20 мл). Смесь выпаривали при пониженном давлении, а остаток очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформметанол-аммония гидроксид (4:1:0,025).

Выход: 86%, т.пл.: 202-203°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₈Н₃Ш₈О (498,62): С, 67,45.; Н, 6,87; Ν, 22,47. Обнаружено: С, 67,28; Н, 7,11 Ν, 22,41.

НРЬС-Μδ (Ε8Σ+): 499,5 (97,8%).

’Н ЯМР (СБС1₃): 1,16-1,40 (т, 4Н), 1,71-2,22 (т, 12Н), 2,49 (в(Ьг), 2Н, Ν^, 2,80 (вер, 1=5,31 Гц, 1Н, СН), 3,62 (вех, 1=7,25 Гц, 1Н, СН), 4,61 (б, 1=7,77 Гц, 1Н, ЫН), 4,69 (цш, 1=7,17 Гц, 1Н, СН), 4,82 (б, 1=5,43 Гц, 2Н, СН₂), 6,13 (в(Ьг), 1Н, ЫН), 6,91 (1, 1=7,38 Гц, 1Н, АгН), 7,02 (б, 1=8,19 Гц, 1Н, АгН), 7,29 (1, 1=7,38 Гц, 1Н, АгН), 7,50 (в, 1Н, АгН), 7,78 (б, 1=8,19 Гц, 1Н, АгН), 7,82-7,86 (т, 2Н, АгН), 8,54 (в, 1Н, СН).

- 33 028206

Пример 22. Приготовление П²-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-П⁶-(2'-гидроксибифенил-4илметил)-9Н-пурин-2,6-диамина

К раствору Ы²-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-Н⁶-(2'-метоксибифенил-4-илметил)-9Н-пурин2,6-диамина (0,48 ммоль) в дихлорметане (10 мл), при помешивании при комнатной температуре, медленно добавляли раствор бора трибромида (2,40 ммоль) в дихлорметане (10 мл). Смесь перемешивали еще 18 ч, после чего каплями добавляли метанол (20 мл). Смесь выпаривали при пониженном давлении, а остаток очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформметанол-аммония гидроксид (4:1:0,025).

Выход: 95%, т.пл.: 168-170°С.

Элементный анализ: Рассчитано для ΟΗΧΌ (497,63): С, 69,99.; Н, 7,09; Ν, 19,70. Обнаружено: С, 69,68; Н, 7,23 Ν, 19,57.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 498,5 (99,9%).

ΊI ЯМР (СЭС1₃): 1,16-1,40 (т, 4Н), 1,71-2,22 (т, 12Н), 2,52 (в(Ьг), 2Н, ΝΗ₂), 2,76 (вер, 1=5,43 Гц, 1Н, СН), 3,67 (вех, 1=7,41 Гц, 1Н, СН), 4,59 (б, 1=7,25 Гц, 1Н, ΝΗ), 4,72 (цш, 1=7,00 Гц, 1Н, СН), 4,79 (б, 1=5,63 Гц, 2Н, СН₂), 6,10 (в(Ьг), 1Н, ЫН), 7,10 (ί, 1=7,43 Гц, 1Н, АгН), 7,16 (б, 1=8,04 Гц, 1Н, АгН), 7,24 (ί, 1=7,43 Гц, 1Н, АгН), 7,48-7,66 (т, 4Н, АгН), 8,63 (в, 1Н, СН).

Пример 23. Приготовление ^-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-Х⁵-[6-(3-фтор-фенил)пиридин3 -илметил] -9Н-пурин-2,6-диамина

^-(4-Аминоциклогексил)-Х⁵-(6-бромпиридин-3-илметил)-9-циклопентил-9Н-пурин-2,6-диамин (0,41 ммоль), 3-фторфенилборная кислота (1,24 ммоль), трифенилфосфин (0,25 ммоль) и натрия карбонат (1,70 ммоль) суспендировали в смеси 1,2-диметоксиэтана (3,0 мл) и воды (2,0 мл) и к суспензии добавляли в атмосфере аргона бис-(дибензилиденацетон)палладий (12,0 мкмоль). Реагирующую смесь нагревали в запаянной пробирке в атмосфере аргона при 120°С в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (25 мл), а полученную суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (25 мл). Объединенные органические фазы промывали рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанол-конц. аммония гидроксид (9:1:0,05).Выход: 92%, т.пл.: 121-122°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₈Н₃₃РЫ₈О (500,61): С, 67,18.; Н, 6,64; Ν, 22,38. Обнаружено: С, 67,41; Н, 6,69; Ν, 22,09.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 501,4 (99,5%).

ΊI ЯМР (СЭС1₃): 1,12-1,42 (т, 4Н), 1,71-2,21 (т, 12Н), 2,81 (вех, 1=5,87 Гц, 1Н, СН), 3,12 (в(Ьг), 2Н, ЫН₂), 3,73 (вех, 1=7,44 Гц, 1Н, СН), 4,62-4,72 (т, 2Н, СН, ЫН), 4,81(б, 1=5,77 Гц, 1Н, СН₂), 6,33 (ί, 1=5,77 Гц, 1Н, ЫН), 7,12 (ί, 1=8,25 Гц, 1Н, АгН), 7,38-7,44 (т, 2Н, АгН), 7,61-7,77 (т, 4Н, АгН), 8,72 (в, 1Н, СН).

- 34 028206

Пример 24. Приготовление Ы²-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-М⁶-(4-тиофен-2-илбензил)-9Нпурин-2,6-диамина

Ы²-(4-Аминоциклогексил)-М⁶-(4-бромбензил)-9-циклопентил-9Н-пурин-2,6-диамин (0,50 ммоль), тиофен-2-борная кислота (1,50 ммоль), трифенилфосфин (0,25 ммоль) и натрия карбонат (1,70 ммоль) суспендировали в смеси 1,2-диметоксиэтана (3,0 мл) и воды (2,0 мл) и к этой суспензии добавляли в атмосфере аргона бис-(дибензилиденацетон)палладий (15,0 мкмоль). Реагирующую смесь нагревали в запаянной пробирке в атмосфере аргона при 120°С в течение 48 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (25 мл), а полученную суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (25 мл). Объединенные органические фазы промывали рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанол-конц.аммония гидроксид (9:1:0,05).

Выход: 71%, т.пл.: 225-226°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₇Н₃₃М₇§ (487,66): С, 66,50; Н, 6,82; Ν, 20,11; δ, 6,58. Обнаружено: С, 66,58; Н, 6,51; Ν, 20,35; δ, 6,41.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 488,5 (99,8%).

Ή ЯМР (СИС1₃): 1,20-1,28 (т, 4Н), 1,61-2,22 (т, 14Н), 2,71 (вер, 1=5,52 Гц, 1Н, СН), 3,72 (вех, 1=7,44 Гц, 1Н, СН), 4,61 (б, 1=7,44 Гц, 1Н, ΝΉ), 4,71 (цш, 1=6,36 Гц, 1Н, СН), 4,78 (б, 1=5,25 Гц, 2Н, СН₂), 5,93 (в(Ьг), 1Н, ΝΉ), 7,08 (ΐ, 1=4,50 Гц, 1Н, АгН), 7,30 (б, 1=4,50 Гц, 1Н, АгН), 7,38 (б, 1=7,95 Гц, 2Н, АгН), 7,47 (б, 1=4,50 Гц, 1Н, АгН), 7,57 (б, 1=7,95 Гц, 2Н, АгН), 8,63 (в, 1Н, СН).

Пример 25. Приготовление ^-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-Ы⁶-(4-фуран-2-илбензил)-9Нпурин-2,6-диамина

К суспензии ^-(4-аминоциклогексил)-Ы⁶-(4-бромбензил)-9-циклопентил-9Н-пурин-2,6-диамина (0,50 ммоль), 2-фуранилборной кислоты (0,75 ммоль), калия фосфата тригидрата (2,00 ммоль) и тетрабутиламмония бромида (0,01 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (10,0 мл) добавляли в атмосфере аргона палладия диацетат (2,5 мкмоль). Суспензию нагревали при помешивании в запаянной пробирке при 80°С в течение 6 ч в атмосфере аргона. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (50 мл), а белый осадок отфильтровывали и промывали водой (20мл). Сырой продукт высушивали в вакуумном дессикаторе в течение 24 ч и, наконец, очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанол-конц.аммония гидроксид (9:1:0,05).

Выход: 87%, т.пл.: 157-159°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₇Н₃₃Ы₇О (471,60): С, 68,76.; Н, 7,05; Ν, 20,79. Обнаружено: С, 68,81; Н, 7,22 Ν, 20,51.

НРЬС-Μδ (ΕδΙ+): 472,4 (99,8%).

Ή ЯМР (ДМСО-б₆): 1,04-1,17 (т, 4Н), 1,64-2,05 (т, 12Н), 2,65-2,72 (т, 3Н, СН, ΝΉ₂), 3,58 (вех, 1=7,55 Гц, 1Н, СН), 4,58-4,63 (т, 3Н, СН, СН₂), 6,04 (б, 1=7,55 Гц, 1Н, ΝΉ), 7,28 (б, 1=7,89 Гц, 2Н, АгН), 7,38 (б, 6=5,95 Гц, 1Н, АгН), 7,46 (б, 1=7,89 Гц, 2Н, АгН), 7,61 (б, 1=5,95 Гц, 1Н, АгН), 7,70-7,73 (т, 2Н, АгН, ΝΉ), 7,95 (в, 1Н, СН).

- 35 028206

Пример 26. Приготовление Ы²-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-М⁶-(6-тиофен-3-илпиридин-3илметил)-9Н-пурин-2,6-диамина

К суспензии Ы²-(4-аминоциклогексил)-М⁶-(4-бромбензил)-9-циклопентил-9Н-пурин-2,6-диамина (0,50 ммоль), тиофен-3-борной кислоты (1,50 ммоль), трифенилфосфина (0,25 ммоль), натрия карбоната (2,0 ммоль) в смеси 1,2-диметоксиэтана (3,0 мл) и воды (2,0 мл) добавляли в атмосфере аргона бис(дибензилиденацетон)палладий (15,0 мкмоль). Суспензию нагревали при помешивании в запаянной пробирке при 120°С в течение 48 ч в атмосфере аргона. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (50 мл), а суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (25 мл). Объединенные органические фазы промывали рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанол-конц.аммония гидроксид (9:1:0,05).

Выход: 71%, т.пл.: 114-118°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₇НззЫ₇§ (487,66): С, 66,50.; Н, 6,82; Ν, 20,11; 8, 6,58. Обнаружено: С, 66,49; Н, 7,06 Ν, 20,39; 8, 6,32.

НРБС-М8 (Ε8Ι+): 488,4 (99,9%).

’Н ЯМР (ДМСО-й₆): 1,07-1,22 (т, 4Н), 1,64-2,04 (т, 12Н), 2,62-2,75 (т), 3Н, СН, ΝΉ₂), 3,58 (зех, .1=7,25 Гц, 1Н, СН), 4,60-4,65 (т, 3Н, СН, СН₂), 6,02 (ά, Э=7,20 Гц, 1Н, N4), 7,37 (ά, >7,71 Гц, 2Н, АгН), 7,50 (ά, 1=4,83 Гц, 1Н, АгН), 7,61 (ά, 1=7,71 Гц, 2Н, АгН), 7,72-7,78 (т, 3Н, АгН, ΝΉ), 8,32 (з, 1Н, СН).

Пример 27. Приготовление ^-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-Ц⁵-(3'-фтор-бифенил-4илметил)-9Н-пурин-2,6-диамина

К суспензии ^-(4-аминоциклогексил)-Ц³-(4-бромбензил)-9-циклопентил-9Н-пурин-2,6-диамина (0,50 ммоль), 3-фторфенилборной кислоты (1,50 ммоль), трифенилфосфина (0,25 ммоль), натрия карбоната (2,0 ммоль) в смеси 1,2-диметоксиэтана (3,0 мл) и воды (2,0 мл) добавляли в атмосфере аргона бис(дибензилиденацетон)палладий (15,0 мкмоль). Суспензию нагревали при помешивании в запаянной пробирке при 120°С в течение 65 ч в атмосфере аргона. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (25 мл), а суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (25 мл). Объединенные органические фазы промывали рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанол-конц.аммония гидроксид (9:1:0,05).

Выход: 75%, т.пл.: 146-148°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂₉Н₃₄Р^ (499,63): С, 69,71.; Н, 6,86; Ν, 19,62. Обнаружено: С, 69,95; Н, 7,12; Ν, 19,45.

НРБС-М8 (Ε8Ι+): 500,4 (99,9%).

’Н ЯМР (ДМСОЦ₆): 1,02-1,21 (т, 4Н), 1,61-2,06 (т, 12Н), 2,65-2,72 (т, 3Н, СН, ΝΉ₂), 3,59 (зех, 1=7,19 Гц, 1Н, СН), 4,60-,466 (т, 3Н, СН₂, СН), 6,01 (ά, Э=6,60 Гц, 1Н, ΝΉ), 7,12-7,18 (т, 1Н, АгН), 7,427,48 (т, 5Н, АгН), 7,61 (ά, 1=8,01 Гц, 2Н, АгН), 7,73 (з, 1Н, СН), 7,86 (з(Ъг), 1Н, ΝΉ).

- 36 028206

Пример 28. Приготовление ^-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-Ы⁶-(6-тиофен-3-илпиридин-3илметил)-9Н-пурин-2,6 -диамина

^-(4-Аминоциклогексил)-^-(6-бромпиридин-3-илметил)-9-циклопентил-9Н-пурин-2,6-диамин (0,41 ммоль), 3-тиенилборную кислоту (1,24 ммоль), трифенилфосфин (0,25 ммоль) и карбонат натрия (1,70 ммоль) суспендировали в смеси 1,2-диметоксиэтана (3,0 мл) и воды (2,0 мл) и к этой смеси добавляли в атмосфере аргона бис-(дибензилиденацетон)палладий (12,0 мкмоль). Реагирующую смесь нагревали в запаянной пробирке в атмосфере аргона при 120°С в течение 6 ч. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (40 мл), а полученную суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (50 мл). Объединенные органические фазы промывали рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанол-конц.аммония гидроксид (9:1:0,05).

Выход: 68%, т.пл.: 139-140°С.

Элементный анализ: Рассчитано для С₂бН₃₄Ы₈8 (497,64): С, 63,64.; Н, 6,98; Ν, 22,84; 8, 6,53. Обнаружено: С, 63,62; Н, 6,78; Ν, 22,59; 8, 6,76.

НРБС-М8 (Ε8Ι+): 498,4 (98,9%).

'II ЯМР (ДМСО-й₆): 1,04-1,17 (т, 4Н), 1,64-2,05 (т, 12Н), 3,25-3,38 (т, 3Н, СН, ЫН₂), 3,54 (зех, 1=7,56 Гц, 1Н, СН), 4,59-4,65 (т, 3Н, СН₂, СН), 6,09 (й, 1=7,56 Гц, 1Н, ЫН), 7,11 (з, 1=4,12 Гц, 1Н, АгН), 7,62 (й, 1=4,05 Гц, 1Н, АгН), 7,72-,7,82 (т, 4Н, АгН), 7,90 (з(Ьг), 1Н, ЫН), 8,53 (з, 1Н, СН).

Пример 29. Приготовление ^-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-Ы⁶-(6-фуран-3-илпиридин-3илметил)-9Н-пурин-2,6 -диамина

К суспензии ^-(4-аминоциклогексил)-Ы⁶-(6-бромпиридин-3 -илметил)-9-циклопентил-9Н-пурин2,6-диамина (0,21 ммоль), 3-фуранилборной кислоты (0,31 ммоль), калия фосфата тригидрата (0,80 ммоль) и тетрабутиламмония бромида (0,003 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамида (5,0 мл) добавляли в атмосфере аргона палладия диацетат (2,5 мкмоль). Суспензию нагревали при помешивании в запаянной пробирке при 120°С в течение 4 ч в атмосфере аргона. После охлаждения до комнатной температуры реагирующую смесь разбавляли водой (20 мл), а полученную суспензию дважды экстрагировали с этилацетатом (25 мл). Объединенные органические фазы промывали рассолом, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на диоксиде кремния с подвижной фазой хлороформ-метанол-конц.аммония гидроксид (9:1:0,05).

Выход: 56%, т.пл.: 165-167°С. Рассчитано для СН_;;\₈О (472,59): С, 66,08.; Н, 6,83; Ν, 23,71. Обнаружено: С, 66,01; Н, 6,93; Ν, 23,51.

НРБС-М8 (Ε8Ι+): 473,26 (98,6%).

'Н ЯМР (СЭС1₃): 1,12-1,28 (т, 4Н), 1,71-2,15 (т, 12Н), 2,60-2,68 (т, 3Н, СН, ЫН₂), 3,68 (зех, 1=10,00 Гц, 1Н, СН), 4,65-4,73 (т, 4Н, СН, СН₂, ЫН), 6,50 (!, 1=3,42 Гц, 1Н, АгН), 6,62 (з(Ьг), 1Н, ЫН), 6,91 (з, 1Н, АгН), 7,00 (з, 1Н, АгН), 7,61-7,73 (т, 4Н, АгН), 8,57 (з, 1Н, СН).

- 37 028206

Соединения, приготовленные методами, описанными в примерах 2, 17 и 21

Таблица 1

№	НАЗВАНИЕ СОЕДИНЕНИЯ	ЭЛЕМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ	Μδ (ΖΜΗ)
		Рассчитано/Обнаружено [%]	[М-Н]· а)	[М+Н]+ Ь)
ВР1	4-[9-циклопентил-6-(4-фуран-2-ил-бензиламино)- 9Н-пурин-2-иламино]-циклогексанол	С, 68,62/68,50; Н, 6,83/6,60; Ν, 17,78/17,25	471,60	473,55
ВР2	А2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-А6-(4- тиофен-2-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин	С, 66,50/66,82; Н, 6,82/6,64; Ν, 20,11/20,32; 8 6,58/6,42	486,66	488,58
ВРЗ	4'- {[2-(4-амино-циклогексиламино)-9- циклопентил-9//-пурин-6-иламино]-метил}- бифенил-4-карбоновая кислота	С, 68,55/68,47; Н, 6,71/6,42; Ν, 18,65/18,49	524,53	526,70
ВР4	А2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-А6-(4фуран-2-ил-бензил)-9//-пурин-2,6-диамин	С, 68,76/68,52; Н, 7,05/6,91; Ν, 20,79/20,49	470,58	472,60
ВР5	А2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-М-(4тиофен-3-ил-бензил)-9//-пурин-2,6-диамин	С, 66,50/66,41; Н, 6,82/6,95; Ν, 20,11/19,88; δ 6,58/6,62	486,66	488,58
ВР7	А2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Л,6-(4- тиофен-3-ил-бензил)-9//-пурин-2,6-диамин	С, 66,50/66,41; Н, 6,82/6,95; Ν, 20,11/19,88; δ 6,58/6,62	486,66	488,58
ВР8	У2-(4-амино-циклогексил)-Аъ-[2,2']бипиридинил- 5-илметил-9-циклопентил-9//-пурин-2,6-диамин	С, 67,06/67,39; Н, 6,88/6,95; Ν, 26,07/26,29	482,65	484,56
ВР9	А2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-А6-(6- пиразол-1-ил-пиридин-3-илметил)-9//-пурин-2,6- диамин	С, 63,54/63,21 ;Н, 6,82/6,55; Ν, 29,64/29,50	471,59	473,42
ВР10	4-(5-{[2-(4-амино-циклогексиламино)-9- циклопентил-9/У-пурин-6-иламино]-метил}- пиридин-2-ил)-бензойная кислота	С, 66,14/66,15; Н, 6,51/6,32; N,21,28/21,03	525,58	527,78
ВР11	А’г-(2-амино-циклогексил)-9-циклопентил-А6-(4тиофен-2-ил-бензил)-9//-пурин-2,6-диамин	С, 66,50/66,35; Н, 6,82/6,59; Ν, 20,11/19,75; δ 6,58/6,41	486,66	488,58
ВР12	М-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-А6-(3'- фтор-бифенил-4-илметил)-9//-пурин-2,6-диамин	С, 69,71/69,52; Н 6,86/6,48; Ν, 19,62/19,32	498,58	500,64
ВР13	А2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-А6-(4фуран-3-ил-бензил)-9//-пурин-2,6-диамин	С, 68,76/68,68; Н, 7,05/7,32; Ν, 20,79/20,68	470,58	472,60
ВР14	А2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-А6-(6- фуран-2-ил-пиридин-3-илметил)-9//-пурин-2,6- диамин	С, 66,08/66,29; Н, 6,83/6,74; Ν, 23,71/23,55	471,63	473,68
ВР15	Лг2-(2-амино-циклогексил)-9-циклопентил-А6-[6- (2-метокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-9//- пурин-2,6-диамин	С, 67,94/67,62; Н, 7,08/6,86; N,21,86/21,41	511,65	513,78

- 38 028206

ВР16	Л'2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-/У6-(2'- метокси-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6- диамин	С, 70,42/70,56; Н, 7,29/7,01; Ν, 19,16/19,56	510,69	512,72
ВР17	А?2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопен™л-Л,6-(2'- гидрокси-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6- диамин	С, 69,99/69,72; Н, 7,09/7,12; Ν, 19,70/19,54	496,65	498,92
ВР18	/У2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Л/6-[6- (2-метокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я- пурин-2,6-диамин	С, 67,94/67,82; Н, 7,08/7,36; N,21,86/21,55	511,68	513,74
ВР19	Я2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я6-[6- (3-фтор-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин- 2,6-диамин	С, 67,18/66,94; Н, 6,64/6,35; Ν, 22,38/22,65	499,69	501,65
ВР20	Я2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Л,б-[6- (2-гидрокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я- пурин-2,6-диамин	С, 67,45/67,21; Н, 6,87/6,53; Ν, 22,47/22,41	497,62	499,58
ВР21	4-{9-циклопентил-6-[(6-фуран-2-ил-пиридин-3- илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино}- циклогексанол	С, 65,94/65,95; Н, 6,60/6,47; Ν, 20,70/20,50	472,55	474,60
ВР22	А2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-А6-[6- (2-амино-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин- 2,6-диамин	С, 67,58/67,96; Н, 7,09/7,00; Ν, 25,33/25,12	496,50	498,55
ВР23	(2-хлор-9-циклопентил-9Я-пурин-6-ил)-(4- пиразол-1 -ил-бензил)-амин	С, 60,84/60,66; Н, 4,92/4,68; N,21,48/21,19	392,28	394,30
ВР24	У-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Л/6-(4- пиразол-1-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин	С, 66,22/66,49; Н, 7,05/7,28; Ν, 26,73/26,46	470,55	472,63
ВР25	А2-(2-амино-циклогексил)-9-циклопентил-М-[6- (2-гидрокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я- пурин-2,6-диамин	С, 67,45/67,33; Н, 6,87/6,83; Ν, 22,47/22,39	497,60	499,54
ВР26	Я2-(3-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я6-(4- тиофен-2-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин	С, 66,50/66,67; Н, 6,82/6,99; Ν, 20,11/20,38; 8 6,58/6,69	486,60	488,60
ВР27	Я2-(3-амино-циклогексил)-9-циклопентил-У’-[6- (2-метокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я- пурин-2,6-диамин	С, 67,94/67,81; Н, 7,08/7,09; N,21,86/21,55	511,70	513,80
ВР28	Я2-(3-амино-циклогексил)-9-циклопентил-М-[6- (2-гидрокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я- пурин-2,6-диамин	С, 67,45/67,33; Н, 6,87/6,83; Ν, 22,47/22,39	497,60	499,54
ВР29	(2-хлор-9-циклопентил-9Я-пурин-6-ил)-(6- тиофен-2-ил-пиридин-3-илметил)-амин	С, 58,46/58,49; Н, 4,66/4,39; Ν, 20,45/20,26	409,85	411,96
ВРЗО	Я2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я6-(6-	С, 63,91/63,72; Н, 6,60/6,51;	487,62	489,72

- 39 028206

	тиофен-2-ил-пиридин-3-илметил)-9//-пурин-2,6- диамин	Ν, 22,93/22,71; δ, 6,56/6,24
ВР31	Л'2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-?/’-(4пиридин-2-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин	С, 69,68/69,25; Н, 7,10/6,82; Ν, 23,22/23,02	481,58	483,75
ВР32	А2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-М’-(2'амино-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин	С, 70,13/69,95; Н, 7,31/7,15; Ν, 22,56/22,46	495,58	497,82
ВРЗЗ	4-(9-циклопентил-6- {[6-(2-метокси-фенил)- пиридин-3-илметил]-амино}-9Я-пурин-2- иламино)-циклогексанол	С, 67,81/67,49; Н, 6,87/6,55; Ν, 19,09/19,27	512,57	514,80
ВР34	4-(9-циклопентил-6- {[6-(2-гидрокси-фенил)- пиридин-3-илметил]-амино}-9Я-пурин-2- иламино)-циклогексанол	С, 67,31/67,15; Н, 6,66/6,47; Ν, 19,62/19,53	498,52	500,57
ВР35	Я2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я6-(6- тиофен-3-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6- диамин	С, 63,91/64,12; Н, 6,60/6,91; Ν, 22,93/22,68; δ, 6,56/6,35	487,62	489,72
ВР36	Я2-(4-амино-циклогексил)-9-циклопентил-Я6-(6- фуран-3-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6- диамин	С, 66,08/65,92; Н, 6,83/6,59; Ν, 23,71/23,41	471,55	473,65
ВР37	2-{4-[9-Циклопентил-6-(4-фуран-2-ил- бензиламино)-9Я-пурин-2-ил]-пиперазин-1-ил}- этанол	С, 66,51/66,55; Н, 6,82/6,69; Ν, 20,11/20,01	486,60	488,57
ВР38	2-(2-{4-[9-Циклопентил-6-(4-фуран-2-ил- бензиламино)-9Я-пурин-2-ил]-пиперазин-1-ил}- этокси)-этанол	С, 65,52/65,38; Н, 7,01/6,93; Ν, 18,44/18,03	530,66	532,63
ВР39	(9-циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6-ил)- (2'-амино-бифенил-4-илметил)-амин	С, 69,06/69,21; Н, 6,65/6,28; Ν, 20,88/20,62	468,55	470,60
ВР40	(9-циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6-ил)- (б-фуран-З-ил-пиридин-З-илметил)-амин	С, 64,70/64,25; Н, 6,11/5,85; Ν, 22,01/22,25	444,50	446,65
ВР41	(9-циклопентил-2-морфолин-4-ил-9Я-пурин-6-ил)- [6-(3-фтор-фенил)-пиридин-3-илметил]-амин	С, 65,94/65,74; Н, 5,96/5,82; Ν, 20,70/20,55	472,55	474,62
ВР42	1 -{9-циклопентил-6-[(3'-фтор-бифенил-4- илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино} -2-метил- пропан-2-ол	С, 68,33/68,59; Н, 6,58/6,52; Ν, 17,71/17,52	473,51	475,62
ВР43	1 -(9-циклопентил-6- {[6-(3 -фтор-фенил)-пиридин- 3-илметил]-амино}-9Я-пурин-2-иламино)-2- метил-пропан-2-ол	С, 65,67/65,42; Н, 6,36/6,16; Ν, 20,62/20,48	474,52	476,68
ВР44	1 -(9-циклопентил-6- {[6-(2-метокси-фенил)- пиридин-3-илметил]-амино}-9Я-пурин-2- иламино)-2-метил-пропан-2-ол	С, 66,51/66,37; Н, 6,82/6,41; Ν, 20,11/19,94	486,59	488,62

- 40 028206

ВР45	1 -(9-циклопентил-6- {[6-(2-гидрокси-фенил)- пиридин-3-илметил]-амино}-9Я-пурин-2- иламино)-2-метил-пропан-2-ол	С, 65,94/65,68; Н, 6,60/6,65; Ν, 20,70/20,54	472,55	474,60
ВР46	4-[9-циклопентил-6-(4-фуран-2-ил-бензиламино)- 9Я-пурин-2-иламино]-2-метил-бутан-2-ол	С, 67,80/67,53; Н, 7,00/6,56; Ν, 18,25/18,00	459,55	461,62
ВР47	4-{9-циклопентил-6-[(6-фуран-2-ил-пиридин-3- илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино}-2-метил- бутан-2-ол	С, 65,06/65,21; Н, 6,77/6,51; N,21,24/21,11	460,51	462,62
ВР48	4-(9-циклопентил-6- {[6-(2-амино-фенил)- пиридин-3-илметил]-амино}-9Я-пурин-2- иламино)-2-метил-бутан-2-ол	С, 66,64/66,58; Н, 7,04/7,25; Ν, 23,03/22,86	485,59	487,63
ВР49	А2-(2-амино-пропил)-9-циклопентил-А6-(6- тиофен-2-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6- диамин	С, 61,58/61,28; Н, 6,29/6,05; Ν, 24,98/24,78	447,62	449,63
ВР50	А2-(2-амино-пропил)-9-циклопентил-?/’-[6-(2- метокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин- 2,6-диамин	С, 66,08/66,29; Н, 6,83/6,59; N,23,71/23,56	471,55	473,63
ВР51	А2-(2-амино-пропил)-9-циклопентил-А6-[6-(2- гидрокси-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин- 2,6-диамин	С, 65,48/65,49; Н, 6,59/6,47; Ν, 24,44/24,11	457,42	459,45
ВР52	А2-(3-амино-пропил)-9-циклопентил-А6-(4тиофен-3-ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин	С, 64,40/64,10; Н, 6,53/6,32; Ν, 21,91/22,07; δ, 7,16/6,95	446,59	448,64
ВР53	А2-(3-амино-пропил)-9-циклопентил-//’-(4-фуран2-ил-бензил)-9 Я-пурин-2,6-диамин	С, 66,80/66,59; Н, 6,77/6,51; Ν, 22,72/22,48	430,56	432,58
ВР54	Я2-(3-амино-пропил)-9-циклопентил-//'-(3'-фторбифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин	С, 67,95/67,88; Н, 6,58/6,56; N,21,33/21,01	458,50	460,40
ВР55	Я2-(3 -амино-пропил)-9-циклопентил-Я6-(2 'метокси-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6- диамин	С, 68,76/68,98%; Н, 7,05/7,00; Ν, 20,79/20,96	470,60	472,63
ВР56	Я2-(3 -амино-пропил)-9-циклопентил-Л,6-(2 'гидрокси-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,б- диамин	С, 68,25/68,00; Н, 6,83/6,57; N,21,43/21,15	456,57	458,60
ВР57	Я2-(3-амино-пропил)-9-циклопентил-Я6-(6-фуран2-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин	С, 63,87/63,65; Н, 6,53/6,54; Ν, 25,91/25,76	431,50	433,58
ВР58	Я2-(3-амино-пропил)-9-циклопентил-Я6-[6-(3- фтор-фенил)-пиридин-3-илметил]-9Я-пурин-2,6- диамин	С, 65,20/65,03; Н, 6,35/6,08; Ν, 24,33/24,59
ВР60	А2-(2-амино-этил)-9-циклопентил-А6-(4-тиофен-3- ил-бензил)-9Я-пурин-2,6-диамин	С, 63,71/63,52; Н,6,28/6,54; Ν, 22,61/22,35; δ, 7,40/7,20	432,57	434,57

- 41 028206

ВР61	У2-(2-амино-эгил)-9-циклопентил-А'6-(2'-аминобифенил-4-илметил)-9Н-пурин-2,6-диамин	С, 67,85/67,58; Н,6,83/6,59; Ν, 25,32/25,00	441,60	443,58
ВР62	/У2-(2-амино-этил)-9-циклопентил-1У6-(6-тиофен-2- ил-пиридин-3-илметил)-9//-пурин-2,6-диамин	С, 60,81/60,62; Н, 6,03/5,89; N,25,79/25,51; 5, 7,38/7,02	433,55	435,57
ВР63	4-(5- {[2-(2-амино-этил)-9-циклопентил-9Н-пурин- 6-иламино]-метил}-пиридин-2-ил)-бензойная кислота	С, 63,54/63,82; Н, 5,97/6,12; Ν, 23,71/23,46	471,56	473,60
ВР65	3-[9-циклопентил-6-(4-тиофен-3-ил-бензиламино)- 9//-пурин-2-иламино]-пропан-1-ол	С, 64,26/64,58; Н, 6,29/6,15; Ν, 18,73/18,54; δ, 7,15/7,00	447,64	449,58
ВР66	3-[9-циклопентил-6-(4-фуран-2-ил-бензиламино)- 9#-пурин-2-иламино]-пропан-1-ол	С, 66,65/66,81;Н, 6,53/6,74; Ν, 19,43/19,01	431,50	433,54
ВР67	3 - {9-циклопентил-6-[(2'-метокси-бифенил-4- илметил)-амино]-9//-пурин-2-иламино} -пропан-1 - ол	С, 68,62/68,98; Н, 6,83/6,56; Ν, 17,78/17,54	471,58	473,60
ВР68	3 - {9-циклопентил-6-[(2'-гидрокси-бифенил-4- илметил)-амино]-9/У-пурин-2-иламино}-пропан-1- ол	С, 68,10/67,82; Н,6,59/6,47; Ν, 18,33/18,01	457,56	459,55
ВР69	4'- {[9-циклопентил-2-(3 -гидрокси-пропиламино)- 9Я-пурин-6-иламино]-метил}-бифенил-4- карбоновая кислота	С, 66,65/66,41 ;Н, 6,21/6,20; Ν, 17,27/17,05	485,58	487,58
ВР70	3-{9-циклопентил-6-[(6-тиофен-3-ил-пиридин-3- илметил)-амино]-9//-пурин-2-иламино}-пропан-1- ол	С, 61,45/61,59; Н, 6,05/5,89; N,21,81/21,54; δ, 7,13/7,00	448,60	450,55
ВР71	3 - {9-циклопентил-6-[(6-фуран-2-ил-пиридин-3- илметил)-амино]-9//-пурин-2-иламино} -пропан-1 - ол	С, 63,72/63,98; Н, 6,28/5,96; Ν, 22,62/22,45	432,51	434,55
ВР72	3 - {9-циклопентил-6-[(6-фуран-3 -ил-пиридин-3- илметил)-амино]-9Н-пурин-2-иламино}-пропан-1- ол	С, 63,72/63,58; Н, 6,28/6,53; Ν, 22,62/22,81	432,51	434,55
ВР73	3-(9-циклопентил-6-{[6-(2-метокси-фенил)- пиридин-3-илметил]-амино}-9//-пурин-2- иламино)-пропан-1 -ол	С, 65,94/65,74; Н, 6,60/6,41; Ν, 20,70/20,46	472,57	474,58
ВР74	3-(9-циклопентил-6-{[6-(2-гидрокси-фенил)- пиридин-3-илметил]-амино}-9//-пурин-2- иламино)-пропан-1 -ол	С, 65,34/65,02; Н, 6,36/6,54; N,21,34/21,08	458,56	460,58
ВР76	(7?)-3-[9-циклопентил-6-(4-фуран-2-ил- бензиламино)-9//-пурин-2-иламино]-пентан-2-ол	С, 67,80/68,11; Н, 7,00/7,05; Ν, 18,25/17,94	459,65	461,67
ВР77	(7?)-3 -[9-циклопентил-6-(4-фуран-3 -ил- бензиламино)-9//-пурин-2-иламино]-пентан-2-ол	С, 67,80/67,59; Н, 7,00/6,81; Ν, 18,25/18,26	459,67	461,69

- 42 028206

ВР78	(Л)-3-{9-циклопентил-6-[(2'-метокси-бифенил-4- илметил)-амино]-97/-пурин-2-иламино}-пентан-2- ол	С, 69,57/69,42; Н, 7,25/7,00; Ν, 16,79/17,03	499,62	501,62
ВР79	(Я)-3-{9-циклопентил-6-[(2'-гидрокси-бифенил-4- илметил)-амино]-9#-пурин-2-иламино}-пентан-2- ол	С, 69,11/69,42; Н, 7,04/6,84; Ν, 17,27/17,00	485,61	487,65
ВР80	(Я)-3-[9-циклопентил-6-(4-пиразол-1-ил- бензиламино)-9Н-пурин-2-иламино]-пентан-2-ол	С, 65,19/65,00; Н, 7,00/6,75; Ν, 24,33/24,00	459,55	461,57
ВР81	(Л)-3-{9-циклопентил-6-[(6-тиофен-2-ил-пиридин- 3-илметил)-амино]-9//-пурин-2-иламино}-пентан- 2-ол	С, 62,87/62,58; Н, 6,54/6,55; Ν, 20,53/20,48; 5, 6,71/6,57	476,60	478,64
ВР82	(/?)-3-{9-циклопентил-6-[(6-тиофен-3-ил-пиридин- 3-илметил)-амино]-9/7-пурин-2-иламино}-пентан- 2-ол	С, 62,87/62,88; Н, 6,54/6,32; Ν, 20,53/20,57; δ, 6,71/6,74	476,60	478,64
ВР83	(/?)-3-(9-циклопентил-6-{[6-(3-фтор-фенил)- пиридин-3-илметил]-амино}-9//-пурин-2- иламино)-пентан-2-ол	С, 66,24/66,58; Н, 6,59/6,64; Ν, 20,03/19,86	488,63	490,65
ВР84	(Я)-3-(9-циклопентил-6-{[6-(2-метокси-фенил)- пиридин-3-илметил]-амино}-9//-пурин-2- иламино)-пентан-2-ол	С, 67,04/67,10; Н, 7,03/7,25; Ν, 19,55/19,19	500,65	502,66
ВР85	(Л)-3-(9-циклопентил-6-{[6-(2-гидрокси-фенил)- пиридин-3-илметил]-амино}-9//-пурин-2- иламино)-пентан-2-ол	С, 66,51/66,83; Н, 6,82/6,94; Ν, 20,11/20,03	486,60	488,62
ВР87	[9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Я- пурин-6-ил]-(4-пиридин-2-ил-бензил)-амин	С, 69,20/69,51;Н, 6,88/6,52; Ν, 23,91/23,87	467,52	469,62
ВР88	[9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9//- пурин-6-ил]-(4-тиофен-2-ил-бензил)-амин	С, 65,93/65,78; Н, 6,60/6,52; Ν, 20,70/20,41; 8,6,77/6,52	472,65	474,66
ВР89	[9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1-ил)-9Н- пурин-6-ил]-(4-тиофен-3-ил-бензил)-амин	С, 65,93/66,06; Н, 6,60/6,74; Ν, 20,70/20,35; 8, 6,77/6,92	472,65	474,66
ВР90	[9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9/7- пурин-6-ил]-(4-фуран-2-ил-бензил)-амин	С, 68,25/68,00; Н, 6,83/6,56; N,21,43/21,11	456,55	458,62
ВР91	[9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Н- пурин-6-ил]-(4-фуран-3-ил-бензил)-амин	С, 68,25/68,52 Н, 6,83/6,99; N,21,43/21,34	456,55	458,62
ВР92	[2,2']бипиридинил-5-илметил-[9-циклопентил-2- (4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6-ил]-амин	С, 66,50/66,38; Н, 6,65/6,47; Ν, 26,85/26,96	468,58	470,62
ВР93	[9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Я- пурин-6-ил]-(6-тиофен-2-ил-пиридин-3-илметил)- амин	С, 63,26/63,59; Н, 6,37/6,02; Ν, 23,61/23,96; 8, 6,76/6,52	473,63	475,65
ВР94	[9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1-ил)-9//-	С, 63,26/62,95; Н, 6,37/6,56;	473,63	475,65

- 43 028206

	пурин-6-ил]-(6-тиофен-3-ил-пиридин-3-илметил)- амин	Ν, 23,61/23,33; 8, 6,76/6,48
ВР95	[9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Я- пурин-6-ил]-(6-фуран-2-ил-пиридин-3-илметил)- амин	С, 65,48/65,19; Н, 6,59/6,28; Ν, 24,44/24,16	457,63	459,57
ВР96	[9-циклопентил-2-(4-метил-пиперазин-1 -ил)-9Я- пурин-6-ил]-(6-фуран-3-ил-пиридин-3-илметил)- амин	С, 65,48/65,59; Н, 6,59/6,74; Ν, 24,44/24,21	457,63	459,57
ВР97	[9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Я-пурин-6- ил]-(4-тиофен-2-ил-бензил)-амин	С, 65,33/65,22; Н, 6,36/,608; N,21,33/20,96; 8, 6,98/6,69	458,59	460,63
ВР98	[9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Я-пурин-6- ил]-(4-тиофен-3-ил-бензил)-амин	С, 65,33/65,54; Н, 6,36/,659; N,21,33/21,59; 8,6,98/7,05	458,59	460,63
ВР99	[9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Я-пурин-6- ил]-(4-фуран-2-ил-бензил)-амин	С, 67,70/67,55; Н, 6,59/6,47; Ν, 22,11/22,02	442,56	444,56
ВР100	[9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Я-пурин-6- ил]-(4-фуран-3-ил-бензил)-амин	С, 67,70/67,82; Н, 6,59/6,68; Ν, 22,11/21,84	442,56	444,56
ВР101	(4-бром-бензил)-(2-хлор-9-циклопентил-9Я- пурин-6-ил)-амин	С, 50,20/49,96; Н, 4,21/4,63; Ν, 17,22/17,02	405,58	407,73
ВР102	Л,2-(4-амино-циклогексил)-/У6-(4-бром-бензил)-9- циклопентил-9Я-пурин-2,6-диамин	С, 57,02/56,85; Н, 6,24/6,43; Ν, 20,24/20,00	483,42	485,50
ВР103	[9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6- ил]-(3'-фтор-бифенил-4-илметил)-амин	С, 68,77/68,52; Н, 6,41/6,78; Ν, 20,79/20,48	470,55	472,55
ВР104	[2,2']бипиридинил-5-илметил-[9-циклопентил-2- (пиперазин-1-ил)-9Я-пурин-6-ил]-амин	С, 65,91/65,77; Н, 6,42/6,56; Ν, 27,67/27,54	454,56	456,54
ВР105	[9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Я-пурин-6- ил]-(6-тиофен-2-ил-пиридин-3-илметил)-амин	С, 61,72/61,55; Н, 6,08/5,87; Ν, 25,04/25,55; 8, 7,16/6,96	459,58	461,58
ВР106	[9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Я-пурин-6- ил]-(6-тиофен-3-ил-пиридин-3-илметил)-амин	С, 61,72/61,84; Н, 6,08/6,12; Ν, 25,04/25,05; 8, 7,16/7,28	459,58	461,58
ВР107	[9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Н-пурин-6- ил]-(6-фуран-2-ил-пиридин-3-илметил)-амин	С, 64,84/64,51; Н, 6,35/6,12; Ν, 25,21/25,56	443,55	445,62
ВР108	[9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Я-пурин-6- ил]-(6-фуран-3-ил-пиридин-3-илметил)-амин	С, 64,84/64,55; Н, 6,35/6,52; N,25,21/24,94	443,55	445,58
ВР109	(6-бром-пиридин-3-илметил)-(2-хлор-9- циклопентил-9Я-пурин-6-ил)-амин	С, 47,14/47,28; Н, 3,96/3,67; Ν, 20,61/20,19	406,70	408,82
ВРИО	Я2-(4-амино-циклогексил)-Я<’-(6-бром-пиридин-3- илметил)-9-циклопентил-9Я-пурин-2,6-диамин	С, 54,43/54,62; Н, 6,02/5,87; N,23,08/23,19	484,42	486,39
ВР111	[9-циклопентил-2-(пиперазин-1 -ил)-9Я-пурин-6- ил]-[6-(2-амино-фенил)-пиридин-3-илметил]-амин	С, 66,50/66,24; Н, 6,65/6,68; Ν, 26,85/26,57	468,56	470,54
ВР112	9-циклопентил-Я2-пиперидин-4-илметил-Л/6-(4-	С, 69,68/69,54; Н, 7,10/6,89;	481,60	483,58

- 44 028206

	пиридин-2-ил-бензил)-9/7-пурин-2,6-диамин	Ν, 23,22/22,95
ВР113	9-циклопентил-Х-пиперилин-4-илметил-Л/6-(3 'фтор-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6-диамин	С, 69,71/69,52; Н, 6,86/6,41; Ν, 19,62/19,47	498,61	500,65
ВР114	1-[6-(4-бром-бензиламино)-9-циклопентил-9Я- пурин-2-иламино]-2-метил-пропан-2-ол	С, 54,67/54,59; Н, 6,34/6,12; Ν, 18,21/18,07	460,40	462,38
ВР115	1-[9-Циклопентил-6-(4-фуран-2-ил-бензиламино)- 9#-пурин-2-иламино]-2-метил-пропан-2-ол	С, 67,24/67,59; Н, 6,77/6,37; Ν, 18,82/18,62	445,40	447,38
ВР116	(2-хлор-9-циклопентил-9Я-пурин-6-ил)-(6-фуран- 2-ил-пиридин-З -илметил)-амин	С, 60,84/60,61; Н, 4,85/4,87; N,21,28/21,11	393,85	395,92
ВР117	1-{9-циклопентил-6-[(6-фуран-2-ил-пиридин-3- илметил)-амино]-9Я-пурин-2-иламино}-2-метил- пропан-2-ол	С, 64,41/64,65; Н, 6,53/6,44; N,21,91/21,58	446,58	448,60
ВР118	(2-хлор-9-циклопентил-9Я-пурин-6-ил)-(4-фуран- 2-ил-бензил)-амин	С, 64,04/64,12; Н, 5,12/5,36; Ν, 17,78/17,49	392,91	393,88
ВР119	9-ииклопентил-/Ф-пиперидин-4-илметил-Л*’-(2’- метокси-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6- диамин	С, 70,42/70,12; Н, 7,29/6,96; Ν, 19,16/19,28	510,64	512,66
ВР120	9-циклопентил-Я2-пиперидин-4-илметил-Я6-(2'- гидрокси-бифенил-4-илметил)-9Я-пурин-2,6- диамин	С, 69,99/69,74; Н, 7,09/6,88; Ν, 19,70/19,55	496,66	498,61
ВР122	9-циклопентил-Лг2-пиперидин-4-илметил-Л'<'-(6- тиофен-2-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6- диамин	С, 63,91/63,78; Н, 6,60/6,65; Ν, 22,93/22,84; δ, 6,56/6,41	487,63	489,67
ВР123	9-циклопентил-Лг2-пиперидин-4-илметил-Я6-(6- тиофен-3-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6- диамин	С, 63,91/63,51; Н, 6,60/6,39; Ν, 22,93/22,67; 5, 6,56/6,62	487,64	489,66
ВР124	9-циклопентил-А2-пиперидин-4-илметил-Л,6-(6- фуран-2-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6- диамин	С, 66,08/66,12; Н, 6,83/6,92; Ν, 23,71/23,54	471,59	473,61
ВР125	9-циклопентил-А2-пиперидин-4-илметил-Л,6-(6- фуран-3-ил-пиридин-3-илметил)-9Я-пурин-2,6- диамин	С, 66,08/66,02; Н, 6,83/6,59; Ν, 23,71/23,47	471,59	473,61
ВР127	(Я)-2-[9-циклопентил-6-(4-тиофен-2-ил- бензиламино)-9Я-пурин-2-иламино]-бутан-1 -ол	С, 64,91/64,68; Н, 6,54/6,32; Ν, 18,17/17,89; 8, 6,93/6,84	461,61	463,62
ВР128	(7?)-2-[9-циклопентил-6-(4-тиофен-3-ил- бензиламино)-9Н-пурин-2-иламино]-бутан-1-ол	С, 64,91/65,02; Н, 6,54/6,63; Ν, 18,17/18,19; 8, 6,93/6,54	461,61	463,62
ВР129	(Я)-2-[9-циклопентил-6-(4-фуран-2-ил- бензиламино)-9Я-пурин-2-иламино]-бутан-1 -ол	С, 67,24/67,12; Н, 6,77/6,72; Ν, 18,82/18,63	445,56	447,58
ВР130	(Д)-2-[9-циклопентил-6-(4-фуран-3-ил-	С, 67,24/67,52; Н, 6,77/6,61;	445,55	447,57

- 45 028206

	бензиламино)-9Н-пурин-2-иламино]-бутан-1 -ол	Ν, 18,82/18,46
ВР131	(/?)-2-(9-циклопентил-6-{[6-(3-фтор-фенил)- пиридин-3-илметилфамино}-9//-пурин-2- иламино)-бутан-1 -ол	С, 65,67/65,52; Н, 6,36/6,12; Ν, 20,62/20,14	474,56	476,60
ВР132	(/?)-2-(9-циклопентил-6- {[6-(2-метокси-фенил)- пиридин-3-илметил]-амино}-9/7-пурин-2- иламино)-бутан-1 -ол	С, 66,51/66,28; Н, 6,82/6,49; N,20,11/20,01	486,60	488,58
ВР133	(/?)-2-(9-циклопентил-6- {[6-(2-гидрокси-фенилф пиридин-3-илметилфамино}-9//-пурин-2- иламино)-бутан-1 -ол	С, 65,94/65,81; Н, 6,60/6,49; N,20,70/20,51	472,57	474,59
ВР135	2-{4-[9-Циклопентил-6-(4-фуран-2-ил- бензиламино)-9Н-пурин-2-ил]-пиперазин-1-ил}- этанол	С, 66,51/66,85; Н, 6,82/6,56; Ν, 20,11/19,86	486,60	488,58
ВР136	2-(4-{9-Циклопентил-6-[(3'-фтор-бифенил-4- илметил)-амино]-9//-пурин-2-ил}-пиперазин-1- ил)-этанол	С, 67,55/67,23; Н, 6,65/6,42; Ν, 19,02/19,25	514,63	516,62
ВР137	2-(4-{9-Циклопентил-6-[(2'-метокси-бифенил-4- илметил)-амино]-9//-пурин-2-ил}-пиперазин-1- ил)-этанол	С, 68,29/68,52; Н, 7,07/6,86; Ν, 18,58/18,31	526,68	528,70
ВР138	2-(4-{9-Циклопентил-6-[(2'-гидрокси-бифенил-4- илметил)-амино]-9Я-пурин-2-ил}-пиперазин-1- ил)-этанол	С, 67,81/67,98; Н, 6,87/6,45; Ν, 19,09/19,25	512,65	514,60
ВР139	4'-( {9-Циклопентил-2-[4-(2-гидрокси-этил)- пиперазин-1-ил]-9//-пурин-6-иламино}-метил)- бифенил-4-карбоновая кислота	С, 66,52/66,41 ;Н, 6,51/6,32; Ν, 18,10/17,85	540,66	542,60
ВР140	2-(4-{6-[([2,2']Бипиридинил-5-илметил)-амино]-9- циклопентил-9Я-пурин-2-ил}-пиперазин-1-ил)- этанол	С, 64,91/64,62; Н, 6,66/6,62; Ν, 25,23/24,96	498,61	500,58
ВР141	2-[4-(9-Циклопентил-6- {[б-(З-фтор-фенил)- пиридин-3-илметил]-амино}-9//-пурин-2-ил)- пиперазин-1 -илфэтанол	С, 65,10/64,87; Н, 6,44/6,11; N,21,69/21,48	515,63	517,59
ВР142	2-[4-(9-Циклопентил-6-{[6-(2-метокси-фенил)- пиридин-3-илметил]-амино}-9Н-пурин-2-ил)- пиперазин-1 -илфэтанол	С, 65,89/65,51; Н, 6,86/6,47; N,21,20/21,00	527,63	529,65
ВР143	2-[4-(9-Циклопентил-6- {[6-(2-гидрокси-фенилф пиридин-3-илметилфамино}-9//-пурин-2-илф пиперазин-1 -штфэтанол	С, 65,35/65,02; Н, 6,66/6,64; N,21,77/21,54	513,62	515,60
ВР145	2-(2-{4-[9-Циклопентил-6-(4-тиофен-2-ил- бензиламиноф9//-пурин-2-илфпиперазин-1-ил}-	С, 63,59/63,19; Н, 6,81/6,69; Ν, 17,90/17,85; δ, 5,85/5,63	546,71	548,68

- 46 028206

	этокси)-этанол
ВР146	2-(2-{4-[9-Циклопентил-6-(4-тиофен-3-ил- бензиламино)-9//-пурин-2-ил]-пиперазин-1-ил}- этокси)-этанол	С, 63,59/63,75; Н, 6,81/6,52; Ν, 17,90/17,68; 5, 5,85/5,92	546,71	548,67
ВР147	2-(2-{4-[9-Циклопентил-6-(4-фуран-2-ил- бензиламино)-9//-пурин-2-ил]-пиперазин-1-ил}- этокси)-этанол	С, 65,52/65,71; Н, 7,01/6,83; Ν, 18,44/18,16	530,65	532,66
ВР148	2-(2-{4-[9-Циклопентил-6-(4-фуран-3-ил- бензиламино)-9//-пурин-2-ил]-пиперазин-1-ил}- этокси)-этанол	С, 65,52/65,38; Н, 7,01/7,11; Ν, 18,44/18,08	530,66	532,66
ВР149	2-{2-[4-(9-Циклопентил-6-{[6-(2-амино-фенил)- пиридин-3-илметил]-амино}-9//-пурин-2-ил)- пиперазин-1 -ил]-этокси} -этанол	С, 64,61/64,53; Н, 7,05/7,02; Ν, 22,60/22,83	556,67	558,69
ВР150	2-(2-(4-{9-Циклопентил-6-[(6-тиофен-2-ил- пиридин-3-илметил)-амино]-9//-пурин-2-ил}- пиперазин-1 -и л)-этокси]-этанол	С, 61,29/61,05; Н, 6,61/6,98; Ν, 20,42/20,09; 8, 5,84/5,62	547,70	549,72
ВР151	2-(2-(4- {9-Циклопентил-6-[(6-пиразол-1 -ил- пиридин-3-илметил)-амино]-9//-пурин-2-ил}- пиперазин-1-ил)-этокси]-этанол	С, 60,88/61,06; Н, 6,81/6,49; Ν, 26,30/26,05	531,65	533,64
ВР152	(8)-3-[9-Циклопентил-6-(4-фуран-2-ил- бензиламино)-9//-пурин-2-иламино]-2,4-диметил- пентан-2-ол	С, 68,83/68,85; Н, 7,43/7,39; Ν, 17,20/16,89	487,65	489,62
ВР153	(5)-3-{9-Циклопентил-6-[(6-фуран-2-ил-пиридин- 3-илметил)-амино]-9//-пурин-2-иламино}-2,4- диметил-пентан-2-ол	С, 66,23/66,01; Н, 7,21/7,38; Ν, 20,02/19,83	488,61	490,53
ВР154	(8)-2-{9-Циклопентил-6-[(6-тиофен-2-ил-пиридин- 3-илметил)-амино]-9//-пурин-2-иламино}-3- метил-бутан-1 -ол	С, 62,87/62,80; Н, 6,54/6,39; Ν, 20,53/20,72	476,64	478,63
ВР155	(5)-2-[9-Циклопентил-6-(4-тиофен-2-ил- бензиламино)-9//-пурин-2-иламино]-3-метил- бутан-1-ол	С, 65,52/65,29; Н, 6,77/6,69; Ν, 17,63/17,45	475,74	477,72

a) Решение: МеОН р.а. + НСООН;

b) Решение: МеОН р.а. + Н₂О + ЯН₃.

Пример 30. Ιη νίΐίο цитотоксическое действие новых соединений.

Цитотоксичность соединений является важным свойством, определяющим их ожидаемое действие ίη νίνο. Одним из используемых параметров, служащим основой для анализов на цитотоксичность, является метаболическая активность жизнеспособных клеток. Например, анализ микротитрованием, в котором используется (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолий бромид (МТТ-тест), широко применяется для количественного определения пролиферации клеток и цитотоксичности. В частности, этот анализ используется в программах лекарственного скрининга и при испытаниях на чувствительность к химиотерапевтическим препаратам. Так как только метаболически активные живые клетки редуцируют МТТ к соответствию пурпурному формазановому красителю, эти анализы позволяют обнаружить исключительно жизнеспособные клетки. Количество редуцированного МТТ соответствует числу живых клеток в культуре.

Авторы изобретения использовали следующие клеточные линии. Линии клеток НиН-7 и РЬС/РКР/5 выдерживались в среде ΌΜΕΜ, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой, пенициллином (100 ед./мл) и стрептомицином (100 мкг/мл). Уникальные клеточные линии НСС-1,2 (3р) и НСС-1,1 (3вр) (Ζίί) е! а1., 2009, РиШге Опсо1., 5(8): 1169-79), а также клетки Нер3В культивировались в ΚΡΜΙ-среде, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой, пенициллином (100 ед./мл) и стрептомицином (100 мкг/мл). Клеточная линия НерО2 выдерживалась в среде ЕМЕМ, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой, натрия пируватом (0,11 г/л), пенициллином (100 ед./мл) и стрептомицином (100 мкг/мл). Все клеточные линии культивировались при 37°С в 5% СО₂. Для анализов на цитотоксичность 3000 клеток (10000 клеток - в случае клеточной линии НерО2) высевали в каждую лунку 96-луночного планшета, а на следующий день анализируемые соединения добавляли в различных кон- 47 028206 центрациях группами по три параллельных испытания. Через три дня после добавления лекарственного препарата в каждую лунку добавляли маточный раствор МТТ (5 мг/мл), который инкубировали в течение 4 ч. После указанного инкубационного периода произведенный формазан растворяли с помощью ДМСО, а конечную абсорбцию измеряли при 570 нм гибридным многорежимным планшет-ридером δγηχ'ΐ'ηγ Н4. Значение ΕС5₀ - уровень концентрации лекарственного препарата, летальный для 50% опухолевых клеток, рассчитывали из полученных кривых дозовой зависимости.

Цитотоксичность новых соединения проверяли на панели клеточных линий различного гистогенного происхождения. Во всех анализируемых клеточных линиях опухоли гепатокарциномы была обнаружена значительная активность (например, см. табл. 2). Примечательно, что более высокая эффективность новых производных была также обнаружена в клеточных линиях, несущих различные мутации или делеции в ассоциированных белках клеточного цикла, например, Нер3В, РЬС-РКР-5, НерО2, НиН-7, АКН3р, АКН3вр (Ршв1еих е1 а1., 1993, ΡАδΕВ I. Νον.; 7(14):1407-13). Это показывает, что названные вещества также должны быть в равной степени эффективными в опухолях с различным статусом онкосупрессора и генов клеточного цикла, а именно - р53, КЬ и т.п.

Таблица 2

Ιη νΐίΓο антипролиферативная активность отдельных новых замещенных 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пуринов в различных линиях клеток гепатоклеточной карциномы. (СК8 - это [[9-(1-метилэтил)-6-[[[4-(2пиридинил)фенил] метил] амино] -9Н-пурин-2-ил] амино] -1 -бутанол)

Ингибиторная концентрация 1С50 (нМ)

Соединение _

	НерЗВ	РЬС/РКР/5	НерС2	нин-7	Зр	Зяр
росковитин	>10000	>10000	п.а.	>10000	>10000	>10000
СК8	>2000
ВР2	460	105	444	319	317	466
ВР4	708	106	389	355	802	813
ВР5	405	60	247	231	420	454
ВР6	566	82	789	389	804	877
ВР12	418	77	248	199	288	492
ВР13	518	76	256	339	602	613
ВР14	58	7	211	373	410	513
ВР16	532	129	937	363	580	767
ВР18	233	22	417	618	791	791
ВР19	85	9	111	281	191	410
ВР20	32	7	68	182	132	197
ВР21	487	46	38	155	167	408
ВР22	487	280	>1000	642	436	516
ВР23	432	п.а.	п.а.	п.а.	п.а.	468
ВР24	115	12	142	177	169	339
ВР29	792	п.а.	п.а.	п.а.	п.а.	843
ВРЗО	77	15	206	184	205	476
ВР32	400	122	>1000	647	543	687
ВР35	207	37	278	257	218	328
ВР36	130	18	131	332	258	424
ВР102	268	644	>1000	386	492	441
ВРИО	488	400	>1000	513	334	515
ВР116	298	п.а.	п.а.	п.а.	п.а.	371

п.а.: анализ не проводился.

- 48 028206

Таблица 3

Ιη νίΐΓΘ антипролиферативная активность контрольных молекул в различных линиях клеток гепатоклеточной карциномы

Контрольная молекула	Ингибиторная концентрация 1С50 (нМ)
НерЗВ	РЬС/РКР/5	НерО2	нин-7	АКНЗр	АКНЗзр
доксорубицин	0,46	0,67	1,38	1,25	0,54	0,27
цисплатин	1,28	10,15	1,38	3,62	2,71	0,72
сорафениб	3,74	4,06	5,85	2,86	4,42	6,39

Пример 31. Киназная ингибиторная активность новых соединений.

ЦЗК2/циклин Е-киназа производилась в клетках насекомых 819 посредством бакуловирусного инфицирования и очищалась на колонке ΝΐΝΤΑ (Скацеп). ЦЗК5/р35, ЦЗК7/циклин Н/МАТ1 и ЦЗК9/циклин Т1 приобретались у СгоС/тазе ОтЬН. Проводили анализ киназных реакций с 1 мг/мл гистона Н1 (для ЦЗК2 и ЦЗК5) либо (Υ8ΡΤ8Ρ8)₂ΚΚ пептида (для ЦЗК7 и ЦЗК9) в присутствии 15/0,15/1,5/1,5 мкМ АТФ (для ЦЗК2/ЦЗК5/ЦЗК7ЦЗК9), 0,05 мк-ϋί [у-³³Р]АТФ и пробного соединения в конечном объеме 10 мл, где все вышеперечисленное помещали в рабочий буферный раствор (60 мМ ΗΕΡΕ8-ΝαΟΗ, рН 7,5, 3 мМ МдС1₂, 3 мМ МпС1₂, 3 мкМ Να-ортованадата, 1,2 мМ ΏΤΤ, 2,5 мкг / 50 мкл ΡΕΟ₂₀,₀₀₀). Реакции останавливали добавлением 5 мкл 3% водн. Н₃РО₄. Аликвоты наносили на Р-81 фосфоцеллюлозу (АИаПпап), промывали 3х 0,5% водн. Н₃РО₄ и, наконец, высушивали воздухом. Киназное ингибирование количественно определяли с использованием цифрового анализатора изображений ΕΕΆ-7000 (Еирй1ш) и выражали в виде остаточной активности киназы или 1С₅₀-концентрации пробных соединений, необходимой для уменьшения ЦЗК на 50%.

Как показано на табл. 4 и 5, все соединения мощно ингибировали не только ЦЗК1 и ЦЗК2 в наномолярных диапазонах, но и показали высокую активность в отношении других ЦЗК, участвующих в других важных биологических процессах. Ингибирование транскрипционной ЦЗК7/9 приводит к отрицательной регуляции белков с коротким временем полужизни, связанных с апоптозом (Мс1-1, ΧΙΑΡ), которая оказалась критической для выживания раковых клеток, особенно - тех из них, которые вызывают множественную миелому и хроническую лимфоцитарную лейкемию (СЬеп е! а1., Β1οοά. 2005 Ос!. 1; 106(7):2513-9; МасСа11ит е! а1., Сапсег Кез. 2005 1ип 15; 65(12):5399-407; Мапойаг е! а1., Ееик Кез. 2011 .1ип; 35(6):821-30). ЦЗК5, до сих пор известная в качестве регулятора нейронных процессов, также играет ключевую роль в регуляции миграции эндотелиальных клеток и образовании трубок, которые представляют собой два важнейших этапа клеточного ангиогенеза (И1еЬ1 е! а1., I. Βΐο1. СЬет. 2010 Νον 12; 285(46):35932-43). Таким образом, была исследована ингибиторная активность наиболее мощных соединений в отношении всех ЦЗК и изучено их воздействие на транскрипцию и ангиогенез.

Таблица 4

Киназная ингибиторная активность отдельных 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пуринов, выраженная как 1С₅₀

Ингибирование киназы

Соединение 1С50 (нМ)

	ЦЗК1	ЦЗК2
Росковитин	>1000	160
СК8	787	51
ВР2	119	20,0
ВР4	148	11,4
ВР5	183	14,0
ВР6	184	31,0
ВР12	422	33,5
ВР13	202	13,0
ВР14	50,0	10,0

- 49 028206

ВР16	301	33,0
ВР18	118	34,0
ВР19	77,0	14,0
ВР20	47,0	7,1
ВР21	215	23,0
ВР22	100	10,0
ВР24	58,0	12,0
ВРЗО	49,0	4,0
ВР32	152	20,5
ВР35	169	18,0
ВР36	66,0	8,0

Таблица 5

Киназная ингибиторная активность отдельных 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пуринов, выраженная как остаточная активность киназ ЦЗК5/7/9 Остаточная активность киназ (%)

Соединение ЦЗК5 ЦЗК7 ЦЗК9

	1000 нМ	100 нМ	1000 нМ	100 нМ	1000 нМ	100 нМ
ВР6	14,32	62,09	46,00	71,85	2,53	33,95
ВР14	24,82	37,79	23,95	54,83	0,73	22,31
ВР18	23,58	49,19	24,13	54,07	1,03	32,65
ВР19	25,62	37,73	24,98	55,05	0,83	26,55
ВР20	19,36	47,64	17,27	48,04	0,59	21,06
ВР21	23,37	88,22	48,47	72,03	7,74	48,99
ВР22	89,00	87,75	93,86	70,04	82,80	93,40
ВРЗО	4,31	26,02	16,50	47,68	1,78	19,59
ВР35	8,70	65,04	33,47	64,07	2,39	32,80
ВР36	2,95	31,88	17,34	49,06	1,68	15,39
ВР117	39,63	76,73	68,34	76,35	23,18	52,68

Пример 32.

Одноступенчатый анализ активности клеточных каспаз-3/7 для новых 2-замещенных-6биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пуринов.

Измерения проапоптозных свойств новых соединений основывались на количественном определении ферментной активности каспаз, а именно - каспаз-3/7. Активность клеточных каспаз-3/7 измеряли по Саггазео е! а1., 2003, ВюТееЬшдиез, 34(5): 1064-67. Коротко говоря, клетки Нер3В и Ρ^/ΡΚΡ/5 инкубировали в плотностях 10000 клеток/лунку в 96-луночном планшете в течение ночи. На следующий день добавляли соединения в соответствующих концентрациях, после чего клетки инкубировались в течение 24 ч. После инкубации 3х каспаз-3/7 аналитический буфер (150 мМ ΗΕΡΕ8 рН 7,4, 450 мМ ЖС1, 150 мМ КС1, 30 мМ МдС1₂, 1,2 мМ ЕОТА, 1,5% Шшйе! Ρ40, 0,3% ΟΗΑΡ8, 30% сахаразы, 30 мМ ИТТ, 3 мМ ΡΜ8Ρ) с 150 мкМ Ае-ВЕУИ-АМС в качестве субстрата (81§ша-А1йпеЬ) добавляли в лунки и планшеты инкубировали при 37°С при комнатной температуре. Активность каспаз-3/7 измеряли через 6 ч с помощью микропланшетного ридера Ииогозкап Азееп! (каЬ§у81еш8) при 346 нм/442 нм (возбуждение/эмиссия).

Флуорометрический анализ активности каспаз-3/7 в клетках Нер3В (табл. 6) и ΡΕΟ/ΡΚΡ/5 (табл. 7), обработанных производными 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пурина показал мощную дозозависимую активацию каспаз в средних областях наномолярного диапазона.

- 50 028206

Таблица 6

Относительная активность каспаз-3/7 в клетках Нер3В после обработки новыми соединениями

Относительная активность каспаз-3/7 в клеточной линии НерЗВ

Концентрация (нМ)

Соединение _

	0	100	200	400	800	1600
ВР2	1,00	-	1,09	1,40	3,73	7,77
ВР4	1,00	-	1,12	1,44	5,58	9,25
ВР5	1,00	-	1,09	1,48	6,65	8,96
ВР6	1,00	-	0,77	0,62	0,78	4,69
ВР12	1,00	-	1,12	4,20	7,04	9,85
ВР13	1,00	-	0,95	1,71	5,65	7,81
ВРИ	1,00	0,99	3,60	6,55	9,00	9,50
ВР16	1,00	-	0,93	1,26	2,82	7,07
ВР17	1,00	-	0,89	0,87	0,96	0,63
ВР18	1,00	-	0,89	3,19	6,05	8,59
ВРИ	1,00	0,90	4,82	6,60	9,80	9,45
ВР20	1,00	4,42	5,37	8,25	9,63	9,95
ВР21	1,00	-	1,15	1,18	4,36	7,19
ВР22	1,00	-	0,81	0,80	0,81	1,18
ВР24	1,00	1,98	6,18	6,81	9,80	9,65
ВРЗО	1,00	2,99	5,32	8,08	9,00	9,43
ВР32	1,00	-	0,70	1,15	2,48	7,53
ВР35	1,00	-	1,01	5,59	6,07	9,10
ВР36	1,00	2,67	6,19	6,55	9,80	9,75
ВР115	1,00	-	0,94	1,05	1,19	0,81
ВР117	1,00	-	0,77	0,89	1,06	2,00

Таблица 7

Относительная активность каспаз-3/7 в клетках РЬС/РКР/5 после обработки новыми соединениями Относительная активность каспаз-3/7 в клеточной линии

РЬС/РКР/5 Концентрация (нМ)

С оединение_

	0	40	80	160	320	640	1280
ВР2	1,00	1,09	1,14	1,30	2,24	>5,00	>5,00
ВР4	1,00	-	-	0,67	0,61	0,33	0,55
ВР5	1,00	0,65	1,07	2,22	3,37	>5,00	>5,00
ВР6	1,00	0,66	0,86	1,28	2,80	>5,00	>5,00
ВР12	1,00	0,93	1,27	3,10	2,95	>5,00	>5,00
ВР13	1,00	0,99	1,37	1,72	2,28	>5,00	>5,00
ВРИ	1,00	1,99	2,86	>5,00	>5,00	>5,00	>5,00
ВР16	1,00	1,01	0,73	1,15	2,42	>5,00	>5,00
ВР17	1,00	-	-	1,08	1,09	0,99	1,20
ВР18	1,00	0,97	2,40	>5,00	>5,00	>5,00	>5,00

ВР19	1,00	1,78	2,39	>5,00	>5,00	>5,00	>5,00
ВР20	1,00	3,15	2,66	>5,00	>5,00	>5,00	>5,00
ВР21	1,00	0,69	1,20	2,19	3,39	>5,00	>5,00
ВР22	1,00	-	-	0,72	1,08	1,92	3,50
ВР24	1,00	2,01	2,59	>5,00	>5,00	>5,00	>5,00
ВРЗО	1,00	2,46	3,93	>5,00	>5,00	>5,00	>5,00
ВР32	1,00	0,62	1,00	0,69	2,01	>5,00	>5,00
ВР35	1,00	1,10	2,37	2,97	>5,00	>5,00	>5,00
ВР36	1,00	2,34	>5,00	>5,00	>5,00	>5,00	>5,00
ВР115	1,00	-	-	1,17	1,05	0,88	0,98
ВР117	1,00	-	-	0,79	1,17	2,60	2,99

Пример 33. Воздействие 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пурина ВР14 на клеточный апоптоз.

Измерения проапоптозных свойств ВР14 основывались на количественном определении ферментной активности каспаз-3/7. Для анализов каспазы обработанные клетки собирали центрифугированием и гомогенизировали в экстракционном буфере (10 мМ КС1, 5 мМ Нерез, 1 мМ ЕОТА, 1 мМ ЕОТА, 0,2% СНАР8, ингибиторов протеаз, рН 7,4) на льду в течение 20 мин. Гомогенаты осветляли центрифугированием при 10,000 д в течение 20 мин при 4°С, после чего белки измеряли по методу Брэдфорда и разбавляли до одинаковой концентрации. Затем лизаты инкубировали в течение 5 ч с 100 мкМ Лс-1)ЕУ1)-ЛМС в качестве субстрата ($1дта-А1йпсЬ) в аналитическом буфере (25 мМ Р1РЕ8, 2 мМ ЕОТА, 2 мМ МдС1₂, 5 мМ ОТТ, рН 7,3). Флуоресценцию продукта измеряли с использованием микропланшетного ридера Р1иогозкап Азсеп! (ЬаЬзуз1етз, НеЫпкц Рш1апй) при 346 нм/442 нм (ех/ет).

Соединение ВР14 сильно индуцирует активность каспаз-3/7 в клетках карциномы Нер3В; после обработки в течение 24 ч наблюдалось 20-кратное повышение концентрации 3х1С₅₀ в анализируемой пробе, по сравнению с необработанной контрольной группой. Влияние ВР14 на активацию каспаз было также определено в других линиях клеток гепатоклеточной карциномы (см. фиг. 2).

Влияние ВР14 на апоптоз клеток дополнялось иммуноблот-анализом отдельных апоптических протеинов. Для иммуноблоттинга клетки отделяли резиновым скребком и промывали трижды в ледяном фосфатно-солевом буферном растворе (ФСБ), лизировали в буфере (50 мМ Тпз, рН 7,4, 250 мМ №С1, 5 мМ ЕОТА, 50 мМ ХаР, 1 мМ ХаЛХ-Р, 1% Хошйе! Р40), содержащем смесь ингибиторов протеазы и фосфатазы (81дта-А1йпсЬ, и8А). 20 мкг выделяли из общих белков ДСН-электрофорезом в полиакриламидном геле (ДСН-ПААГ) и переносили на нитроцеллюлозные мембраны. Мембраны блокировали в 5% молока и 0,1% Т\уееп 20 в ФСБ и оставляли для анализа на ночь со специфическими антителами для РАКР-1 (клон Р-2; 8ап!а Ст/ Вю!есЬпо1оду, и8А), Мс1-1 (8-19; 8ап!а Ст/ Вю!есЬпо1оду, и8А) и β-актина (С-4, 8ап!а Ст/ Вю!есЬпо1оду, и8А). Все первичные антитела разбавляли в ФСБ, содержащем 5% сухого молока; 0,1% Т\уееп 20. В качестве вторичных антител использовали конъюгированный с пероксидазой антимышиный иммуноглобулин кроликов или антикроличьи иммуноглобулиновые антисеры свиней (ОАКО, Нептагк), которые визуализировали с помощью ЭХЛ-реагентов (АшегзЬатРЬагтаОа, 1аи1е СНаИ’опЕ иК).

Мониторинг расщепления РАКР-1 - ядерной мишени каспазы-3 подтвердил указанные выше результаты. Появление расщепленного каспазой-3 фрагмента РАКР-1 при 89 кДа после обработки клеток соединением ВР14 связывалось с уменьшением его полноразмерной формы (фиг. 1) и заметно наблюдалось в обработанных клетках Нер3В и АНК3р. В то же время не наблюдалось изменения уровня белка РАКР-1 после обработки клеток НиН-7 соединением ВР14 при концентрации до 3х1С₅₀ (мкМ). Активация апоптоза была также очевидной из определения уровня антиапоптического белка Мс1-1, которое показано значительное дозозависимое уменьшение в линиях клеток Нер3В, РЬС/РКР/5 и АКН3р.

Пример 34. Индукция онкосупрессора р53 в раковых клетках гепатокарциномы.

Более мощное противораковое действие соединений усиливается их положительным влиянием на стабильность и активность онкосупрессора р53. Для измерения р53-зависимой транскрипционной активности активность β-галактозидазы количественно определяли в линии Агп8 клеток меланомы, которая была установлена посредством устойчивой трансфекции клеток с р53-реактивной репортерной конструкцией рКОСА£οз1асΖ (РгеЬипд е! а1., Сапсег Кез., 52, 1992-6976). Коротко говоря, после 24 ч инкубации с ингибиторами клетки Агп8 пермеабилизировали 0,3% Тп!оп Х-100 в течение 15 мин, после чего добавляли 4-метилумбеллиферон-в-В-галактопиранозид в качестве субстрата до конечной концентрации 80 мкМ. Через 1 ч флуоресценцию полученного 4-метилбеллиферона измеряли при 355/460 нм (ех/ет) с помощью микропланшетного ридера Р1иогозкап Азсеп! (ЬаЬзуз!етз). Данные в табл. 8 представляют, что ряд производных 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пуринов оказывают дозозави- 52 028206 симое активирующее влияние на р53-регулируемую транскрипцию, причем максимальное воздействие наблюдается для большинства приготовленных соединений в диапазоне концентраций от 100 до 500 нМ (табл. 8).

Таблица 8

Влияние отдельных новых производных 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пуринов на индукцию белка р53 в клетках Агп8, подвергшихся стабильной трансфекции с репортерным геном β-галактозидазы Концентрация

Соединение максимальной активации (нМ)

росковитин	>10000
СК8	1600
ВР2	930
ВР4	700
ВР5	961
ВР6	500
ВР12	986
ВР13	970
ВР14	137
ВР16	943
ВР17	950
ВР18	510
ВР19	167
ВР20	150
ВР21	918
ВР22	373
ВР24	260
ВРЗО	120
ВР32	895
ВР35	230
ВР36	125
ВР115	870
ВР117	950

Пример 35. Новые производные 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пуринов ингибируют клеточную транскрипцию за счет уменьшения фосфорилирования РНК-полимеразы II.

Авторами изобретения отслеживались уровни фосфорилирования РНК-полимеразы II, которая является субстратом ЦЗК7 и ЦЗК9, в клетках, обработанных соединением ВР14 (фиг. 3). Иммуноблотанализ выполняли способом, описанным в примере 33, с использованием соответствующих антител для антифосфо-РНК-полимеразы II (85) (Ве1йу1 ЬаЪогаЮпез, и8А), антифосфо-РНК-полимеразы II (82) (Ве1йу1 ЬаЪога1ог1ез, и8А), анти-РНК-полимеразы II (клон АКNА-3, Мййроге) и β-актина (клон С4, 8аи1а Сги-ζ Вю1есйио1оду, и8А).

Иммуноблот-анализ показал быстрое снижение фосфорилирования в серинах 2 и 5 РНК-полимеразы II - в основном в линиях клеток АКН3зр и Нер3В (фиг. 3), что подтверждает клеточное ингибирование этих двух киназ. Значительное снижение фосфорилирования обеих форм РНК-полимеразы II наблюдалось в клетках, обработанных ВР14 в концентрации, соответствующей 1(\₀ (24 ч). Наблюдавшееся ингибирование клеточной транскрипции было подтверждено обнаружением понижающей регуляции Мс1-1, которые принадлежат к группе антиапоптотических белков с малым периодом полужизни (фиг. 1).

- 53 028206

Пример 36. Антиангиогенное действие новых производных.

Новые производные 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пуринов проверяли на наличие у них потенциальных антиангиогенных свойств; было проанализировано их влияние на пролиферацию (табл. 9), миграцию и образование трубок эндотелиальных клеток пупочной вены человека (ЭКПВЧ). Сливающиеся ЭКПВЧ высевали в 96-луночные микротитровальные планшеты для регистрации их пролиферации в течение 24 или 72 ч, с использованием раствора Са1еет АΜ СпуПгодеп) и микропланшетного ридера Пиоговкап Авсеп1 (ЬаЬвув1етв) описанным выше способом (Кгуз1о£ е1 а1., 2011, Риг I. Μеб. Сйет. 2011 δер; 46(9):4289-94).

Таблица 9

Ιη νίίτο антипролиферативное действие отдельных новых 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пуринов в эндотелиальных клетках пупочной вены человека (ЭКПВЧ)

Ингибиторная концентрация для Соединение клеток ЭКПВЧ - 1С50 (мкМ)“

	24 Ь	72 Ь
доксорубицин	>6,6	>6,6
сорафениб	>50	>10
СК.8	>50	0,61
ВР4	15,7	0,45
ВР14	>50	0,05
ВР18	>50	0,52
ВР19	21,8	0,37
ВР20	29,2	0,57
ВР24	>50	0,17
ВРЗО	20,4	0,08
ВР35	>50	0,18
ВР36	20,8	0,19

^а Средние значения по результатам трех анализов.

Пример 37. Антиангиогенное действие новых производных - анализ миграции методом зарастания царапины.

Анализ миграции проводили описанным выше способом (Кгуз1о£ е1 а1., 2011, Ευτ. I. Μеб. Сйет.; 46(9):4289-94). Коротко говоря, сливающиеся ЭКПВЧ царапали и немедленно после этого обрабатывали в течение 24 ч различными дозами соединений. После инкубации каждую лунку фотографировали с использованием системы ОР Соп1го11ег (О1утрив), подключаемым к микроскопу О1утрив ВХ50. Миграция выражалась как доля пикселей площади раны на изображении, которые не были покрыты клетками, определяемая с использованием программного обеспечения собственного производства.

Миграцию νΕΟΡ-стимулированных ЭКПВЧ через процарапанную область ингибировали новыми замещенными 2-замещенными-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пуринами в концентрации 100 и 1000 нМ (табл. 10). Значительное ингибирование миграции в основном наблюдалось в клетках, обработанных ВР20 и ВР30 в концентрации 100 нМ после обработки в течение 24 ч, которая не повлияла на жизнеспособность клеток (вее таб. 9).

- 54 028206

Таблица 10

Влияние отдельных новых замещенных 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пуринов на миграцию эндотелиальных клеток пупочной вены человека (ЭКПВЧ)

Площадь раны

Соединение концентрация (нМ)

100 1000

оломоуцин	0	0
росковитин	0	0
СК8	0	+
ВР4	0	++
ВР14	+	++
ВР18	+	++
ВР19	+	++
ВР20	++	++
ВР24	+	++
ВРЗО	++	++
ВР35	0	++
ВР36	+	++

^а++ открытая; + частично открытая, 0 закрытая.

Пример 38. Антиангиогенное действие новых производных - анализ образования трубок.

Для оценки образования трубок клетки ЭКПВЧ в среде роста эндотелиальных клеток (ЕСОМ), содержащей анализируемое соединение, высевали на покрытые Ма1пде1® (ВО) ангиогенетические планшеты ώίά (15-луночные, ΐΜάΐ ОтЬН, Мюнхен, Германия). После 24 ч делали снимки с использованием микроскопа О1утри5 ВХ50 с системой ΌΡ Соп1го11ег. Оценку образования трубок выражали в количестве узлов обработанных клеток, по сравнению с необработанной контрольной группой с использованием программного обеспечения собственного производства.

Многие 2-замещенные-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пурины значительно уменьшали миграцию ЭКПВЧ в концентрации 10 или 100 нМ (фиг. 5). В качестве примера приводятся несколько точек ветвления, где количество трубок, общая длина трубок и средняя длина трубки значительно уменьшились после обработки в течение 24 ч соединениями ВР14 и ВР20 (фиг. 5).

Пример 39. Противовоспалительное действие производных - снижение экспрессии Е-селектина.

Для оценки противовоспалительного действия 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил9Н-пуринов анализировали экспрессию Е-селектина (ЕЬАМ-1 - эндотелиальной молекулы адгезии лейкоцитов 1). ЕЬАМ-1 принадлежат к группе гликопротеинов поверхности клеток, которая быстро индуцируется воспалительными цитокинами, например фактором некроза опухолей (ФНО) при хронических или острых воспалительных процессах (Ьеу, Тгепйз Мо1. Мей. 2003 1ип; 9(6):263-8). В связи с этим авторы изобретения оценили влияние новых соединений на экспрессию мембраносвязанного Е-селектина на ЭКПВЧ после моделирования ФНО высокочувствительным иммуноферментным анализом (ЕП8А).

Коротко говоря, 96-луночный планшет покрывали желатином, нанося 200 мкл 1,0% желатина в течение 10 мин при комнатной температуре. 1х10⁴ ЭКПВЧ высевали в каждую из других лунок в среде 200 мкл и выращивали в течение 48 ч до оптимального слияния. Затем в ЭКПВЧ-содержащие лунки добавляли, тройками параллельных опытов, возрастающие концентрации анализируемых ингибиторов, после чего клетки инкубировали в течение 30 мин, а затем добавляли по 10 нг/мл ФНОа на лунку для моделирования ΝΓ-кВ, и как следствие, ЕЬАМ-1. После еще 4 ч инкубации уровни ЕЬАМ-1 в каждой из ЭКПВЧ-содержащих лунок определяли иммуноферментным анализом (ЕП8А). Клетки промывали один раз ФСБ и фиксировали 0,1% глутаральдегидом (81дта-А1йпсЬ, Мюнхен, Германия) в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем клетки промывали 3х200 мкл на лунку ФСБ /0,05% Т\уееп 20, блокировали 200 мкл/лунку 5% В8А/ФСБ в течение 1 ч, после чего вновь промывали 3х200 мкл/лунку ФСБ/0,05% Т\уееп 20. Затем добавляли в течение 1 ч при комнатной температуре анти-ЕЬАМ-1-антитело (клон ВВА-1, Κ&Ό 8у51ет5, МтпеароНз, М^ и8А), разбавленное в пропорции 1:5000 в 0,1% В8А/ФСБ (100 мкл на лунку), после чего промывали 5х200 мкл/лунку ФСБ/0,05% Т\уее'п 20. Впоследствии наносили козьи антитела к иммуноглобулину мыши, конъюгированные с пероксидазой хрена (НКР) (8щтаА1йпсЬ, МитсЬ, Оегтапу), разбавленные в пропорции 1:10000 в 0,1% В8А/ФСБ (100 мкл/лунку), и клетки инкубировали в течение 1 ч в темноте при комнатной температуре и после декантирования промывали пять раз 200 мкл/лунку ФСБ/0,05 % Т\уееп 20. НКФ-активность клеток в каждой из лунок оценивали с

- 55 028206 использованием анализа ΡηδΙ-ΟΡΩ (о-фенилэнедиамина дигидрохлорида) (Зщта-АИпск МишсЬ, Сегтапу) описанным способом (СпдПпд е! а1., 1п!. 1. Опсо1. 2009, Арг; 34(4):1117-28), а абсорбцию измеряли при ОЭ_492пт в вертикальном спектрофотометре. Все данные нормализовали относительно положительной контрольной группы (клеток, обработанных ФНО без ингибитора), что соответствует 100% воспаления. Выбранные 2-замещенные-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пурины быстро уменьшают экспрессию ЕЬАМ-1 в наномолярных диапазонах концентрации, которые не влияли на жизнеспособность клеток (данные не показаны). Результаты ясно показывают, что большинство новых соединений значительно более действенны, чем контрольное соединение доксорубицин (ΌΟΧ) или сорафениб (ЗОК), и что, например, пурины ВР36 и ВР30 относятся к наиболее активным в ряду исследованных соединений, с показателями ингибирования менее 25% (для обработки 1 мкМ соединения).

Пример 40. ВР-14 в клетках гепатомы ш νίίτο и ш νίνο.

Клеточная культура.

Линии клеток гепатомы человека и НерС2, ΡΡί.’/ΡΡΡ/5 (ΡΡ-С). Нер3В и 3зр (ранее описываемые как ГКК-1,1) культивировали в КГМ1 1640 и 10% фетальной телячьей сыворотке (РСЗ) описанным выше способом (31, 32). Все клетки выдерживали при 37°С и 5% СО₂ и регулярно проверяли скринингом на отсутствие микоплазмы.

Первичные человеческие гепатоциты (ПЧГ).

Не связанные с новообразованиями образцы тканей от резекций печени получали у больных, проходивших частичную гепатэктомию в связи с метастатическими опухолями печени, рака толстой и прямой кишки. Экспериментальные процедуры проводились в соответствии с рекомендациями благотворительного государственного фонда НТСК (Нитап Лззие апд Се11 КезеагсЬ, КедепзЬигд, Сегтапу), с информированного согласия больного, утвержденного местным комитетом по этике Университета Регенсбурга. ПЧГ выделяли с использованием модифицированной двухступенчатой процедуры ЭГТК/коллагеназной перфузии, описанной выше (33). Жизнеспособность выделенных ПЧГ определяли вытеснением трипанового синего, а клетки с жизнеспособностью выше 85% использовали для дальнейшей работы. Клетки наносили на планшеты, покрытые коллагеном (ΒΌ Вюзшепсез, Зап ^зе, ИЗА) с плотностью 1,2х10⁵ клеток/см². Среда состояла из ЭМЕМ с 10% фетальной телячьей сывороткой, 2 мМ Ь-глутамина, 100 мг/мл стрептомицина, 100 ед./мл пенициллина и следующих добавок: 125 милли-ед./мл инсулина, 7,3 нг/мл глюкагона и 0,8 мкг/мл гидрокортизона. Клетки инкубировали при 37°С в увлажненном инкубаторе с 5% СО2, а среды ежедневно меняли.

Лечебные агенты.

ВР-14 (^-(4-аминоциклогексил)-9-циклопентил-Н6-[[6-(2-фурил)-3-пиридил]метил]пурин-2,6диамин) синтезировали с помощью описываемых здесь процедур. Соединения растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО). Маточный раствор 100 мМ разбавляли в аналитическом буфере или в среде до концентраций, указанных в тексте. Максимальная концентрация ДМСО во время анализов никогда не превышала 0,1%.

Определение жизнеспособности клеток и ингибиторной концентрации (1С)₅₀.

Жизнеспособность клеток определяли с использованием анализа с 3-(4,5 диметилтиазол-2-ил)-2,5дифенилтетразолий бромидом (МТТ). Коротко говоря, клетки высевали в трех параллельных опытах с плотностью 6х10³ клеток/лунку. Через 24 ч клетки инкубировали с содержащей лекарственный препарат средой в течение 72 ч. Клетки инкубировали с раствором МТТ (5 мг/мл; З1дта, δΐ. ^шз, ИЗА), а среду заменяли на ДМСО через 5 ч. Абсорбцию измеряли при 620 нм с использованием микропланшетного ридера (Азуз НГГесЬ, ЗакЬитд, Аизйта). МГГ-анализы повторяли по 3 раза для каждого применения лекарственного препарата, а необработанные клетки использовали в качестве контрольных. Значения 1С₅₀ получали линейно-логарифмической интерполяцией точек данных и представили на дозозависимых графиках с использованием программного обеспечения Стар№ад Ρπ3ΐη® 5,01.

Анализы на ингибирование киназы с использованием бесклеточных экстрактов.

Экстракты из целых клеток приготавливали лизированием клеток Нер3В с буфером, содержащим 20 мМ Ττΐ3 рН 8,0, 100 мМ №С1, 1 мМ Ε^ΤΑ и 0,5% ΝΡ-40. 100 мкг экстракта использовали для иммунопреципитации при 4°С в течение 4 ч - либо с 1 мкг анти-ЦЗК2-антитела М2 (Зап!а Сги/ ВПесН^^^у, Зап!а Сги/, ИЗА), либо с 1 мкг антициклин В1-антитела СЖ1 (Зап!а Сги/ В^есЬтоГду, Зап!а Сги/, ИЗА). Осажденные белки промывали трижды лизирующим буфером, после чего однократно промывали киназным буфером (50 мМ №ΡΕ8 рН 7,5, 10 мМ МдС1₂ и 1 мМ ΌΤΤ), а затем повторно суспендировали в 20 мкл киназного буфера, содержащего 5 мк-С1 [γ-^Ρ^ΤΡ ^Γίαι-ιΕΡι^ι: 8ап!а С1ага, ИЗА), 1 мкг гистона Н1 (Νρ» Εη§1аηд БюР-Фз, 1рзМсЬ, ИЗА) и соответствующую концентрацию ингибитора. После инкубации в течение 60 мин при 30°С супернатант кипятили в буфере для образца, содержащем 60 мМ Мз/НО рН6,8, 10% глицерина, 2% натрия додецилсульфата (8Ό8), 5% β-меркаптоэтанола, 0,02% бромфенолового синего. Белки выделяли ДСН-ПААГ-электрофорезом и наносили на нитроцеллюлозную мембрану. После этого мембрану помечали Понсо З для контроля равномерности нагрузки и анализировали радиоавтографией.

- 56 028206

Анализы на ингибирование киназы с использованием рекомбинантных субстратов.

ЦЗК1/циклин В- и ЦЗК2/циклин Е-киназы производили в клетках насекомых δΊ9 посредством бакуловирусного инфицирования, а ЦЗК5/р35, ЦЗК7/циклин Н/МАТ1 и ЦЗК9/циклин Т1 приобретали у РгоОтаве (РгеШигд, Сегтапу) и анализировали описанным выше способом (35). Киназные реакции анализировали с 1 мг/мл гистона Н1 (для ЦЗК2 и ЦЗК5) или (ΥδРΤδРδ)₂КК пептида (для ЦЗК7 и ЦЗК9) в присутствии 15/0,15/1,5/1,5 мМ АТФ (для ЦЗК2/ЦЗК5/ЦЗК7ЦЗК9), 0,05 мк-С1 [у-³³Р]АТФ и пробного соединения в конечном объеме 10 мл. Реакционный буфер содержал 60 мМ НΕРΕδ-NаОН, рН 7,5, 3 мМ Μ§Ο₂, 3 мМ ΜηΟ₂. 3 мМ Ш-ортованадата, 1,2 мМ ΌΤΤ, 2,5 мг/50 мл РΕС20,000. Реакции останавливали добавлением 5 мл 3% Н₃РО₄. Аликвоты наносили на Р-81 фосфоцеллюлозу (ЛУйаПпап, СΕ НеаНйсаге Вюваепсев, РШвЬигдй, υδΛ), промывали 3х 0,5% Н₃РО₄ и, наконец, высушивали воздухом. Киназное ингибирование количественно определяли с использованием цифрового анализатора изображений РЬА-7000 (Рирй1т, Токуо, 1арап). Концентрацию пробных соединений, необходимую для снижения активности ЦЗК на 50%, определяли по дозозависимым кривым и обозначали как Ιθ5₀.

Анализ пролиферации.

6х10⁴ клеток высевали на 12-луночных планшетах и инкубировали с ингибиторами при различных концентрациях в течение 3 дней. Количество клеток определяли в различные моменты времени после трипсинизации с использованием счетчика клеток (САδΥ, Зсйабе δуβΐетβ, КеиШпдеп, Сегтапу). Проводилось три независимых эксперимента группами по три параллельных опыта.

Анализ на клоногенную выживаемость.

Чтобы проанализировать поведение популяций клеток с точки зрения клоногенного роста на пластике для выращивания тканей, 500 клеток высевали в 6-луночный планшет и после обработки ВА-12 или ВР-14 в течение 24 ч или без таковой инкубировали в стандартной среде в течение 10 дней при 37°С и 5% СО₂. Колонии фиксировали метанолом/уксусной кислотой (3:1) и помечали 0,25% кристаллическим фиолетовым. Кристаллический фиолетовый зафиксированных клеток солюбилизировали 1% δϋδ, а абсорбцию фотометрически определяли при 560 нм.

Анализ пролиферации клеток инкорпорацией 5-бром-2'-деоксиуридина.

Инкорпорация БДУ в ядра клеток непосредственно указывает на пролиферацию клеток. Культуру клеток выращивали в среде, содержащей 10 мкМ 5-бром-2'-деоксиуридина (БДУ) в течение 1 ч. После удаления маркировочной среды клетки фиксировали, а ДНК денатурировали фиксирующим/денатурирующим раствором, содержащим 2 М НС1 в течение 30 мин при 37°С. Для анализа инкорпорации БДУ ίη νί\Ό 200 мкл раствора Рингера, содержащего 1 мг БДУ, внутрибрюшинно вводили в ксенотрансплантатных мышей за 2 ч до анализа. Мышей умерщвляли, а опухолевую ткань фиксировали в 4% формальдегиде и обрабатывали для иммуногистохимического исследования. Инкорпорация БДУ в клеточную ДНК регистрировали с использованием моноклональных анти-БДУ антител (Зщта, З1.Ьои1в, ИЗА), с последующей инкубацией вторичных антител, конъюгированных с пероксидазой (СаЬюсйет, ЬаГо11а, ИЗА) в разведении 1:10,000.

Проточная цитометрия.

Анализ содержимого клеточной ДНК проводили с использованием цветного клеточного анализатора ΒΌ ЬЗКРойевва (ВесЮг! Оюктвои РщпЫш Ьакев, ИЗА). До цитофлуорометрического измерения, около 5х10⁵ клеток промывали фосфатно-солевым раствором (ФСБ), фиксировали в 70% этаноле, снова промывали с помощью ФСБ и обрабатывали 100 мкг РНКазы А/50 мкг пропидиума йодида на 1 мл в течение 10 мин для маркирования клеточной ДНК. Процентное отношение клеток в различных позициях клеток рассчитывали с использованием пакета программного обеспечения от того же производителя.

Определение долговременной чувствительности к химиотерапевтическим препаратам.

Клетки гепатомы непрерывно культивировали в присутствии ВА-12 или ВР-14 при концентрациях ниже Κ₅₀ (1/2 ГС₅₀, 1/4 ΙΟ₅₀, 1/8 ГС₅₀ и 1/16 ΙΟ₅₀). Отбор хемостойких клеток контролировали через каждые 6 недель определением значений Ιί\₀ с использованием анализа МТТ. Клетки ГКК, показывающие более высокие значения Ιί\₀ после обработки ингибиторами, по сравнению с необработанными клетками, считаются хемостойкими.

Иммуноблоттинг.

Иммуноблоттинг проводили описанным выше способом (36). Первичные антитела использовали в разведениях: анти-фосфо-Зег5 РНК Пол. ΙΙ (ЦЗК7; Ве1йу1 ЬаЬога1опев, Μοηΐ§οте^у, ИЗА), 1:1,000; антифосфо-рйоврйо-Зег2 РНК Пол. ΙΙ (ЦЗК9; Ве1йу1 ЬаЬога1опев, Μοηΐ§οте^у, ИЗА), 1:1,000; анти-РНК Пол. ΙΙ (ЗаШа Сгн/ Вю^сй-щ^ду, Зайа Сгн/, ИЗА), 1:1,000; анти-РАКР (Се11 δί£ΐη·ι1ίη£ ТесИмо^у, Веуег1у, ИЗА), 1:1,000; анти-в-актин (Зщта, З1.Ьошв, ИЗА), 1:2,500. Вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (СаЬюсйет, Ьа1о11а, ИЗА) использовали в разведениях 1:10,000.

Образование ксенографтной опухоли и воздействие лекарственным препаратом.

5х10⁶ клеток гепатомы человека повторно суспендировали в 100 мкл раствора Рингера и внутрибрюшинно вводили в мышей с тяжелой комбинированной иммунной недостаточностью (ТКИД) (На^1аη ЬаЬога1опев, δаη Р1е1го, Йа1у). Объем опухоли определяли описанным способом (36). Фармакологическое воздействие осуществляли на опухоленесущих мышах в течение 17 дней ежедневной внутрибрюшинной

- 57 028206 инъекцией 5 мг/кг ВА-12 либо 1 мг/кг ВР-14 в 100 мкл 0,01% ДМСО. Опухоленесущим мышам из контрольной группы каждый день внутрибрюшинно вводили только 100 мкл 0,01% ДМСО. Все опыты на животных проводились в соответствии с Австрийскими рекомендациями по уходу за животными и защите животных.

Диэтилнитрозамин-индуцированный рак печени и воздействие лекарственным препаратом.

Чтобы инициировать развитие опухоли в печени, мышам С57ВБ/61 в возрасте 14 дней внутрибрюшинно вводили разовую дозу диэтилнитрозамина (ДЭНА, 25 мг/кг). Через 8 месяцев, назначали фармакологическое воздействие у ДЭНА-индуцированных мышей в виде 3 циклов лечения соединениями продолжительностью по 10 дней, с перерывами в приеме соединений между циклами на 7 дней. Либо 5 мг/кг ВА-12, либо 1 мг/кг ВР-14 внутрибрюшинно вводили в 100 мкл 0,01% ДМСО. Мыши из контрольной группы получали только 100 мкл растворителя. Впоследствии, мышей умерщвляли, а их печень фиксировали в 4% формальдегиде. Двое исследователей независимо измеряли диаметры новообразований, которые можно было контролировать на поверхности печени. В анализ включались раковые узелки диаметром до 1 см, покрывающие более 97% всех видимых гепатом. Менее 3% новообразований большего диаметра исключались на основании допущения, что крупные опухоли не дают надлежащей реакции на лекарственную терапию. Все опыты на животных проводились в соответствии с Австрийскими рекомендациями по уходу за животными и защите животных.

Иммуногистохимическое исследование.

Мышей умерщвляли, а опухоли фиксировали описанным способом (37). Залитые парафином срезы толщиной 4 мкм маркировали гематоксилином и эозином (Н&Е). Для иммуногистохимического анализа, срезы маркировали анти-БДУ (81дта, 8ί. Бошз, и8А), 1:200. Биотинилированные вторичные антитела использовали в 1:200. Иммунопероксидазный анализ проводили с использованием аналитического комплекта Уес1аз1ат Н1пе АВС (Уес1ог БаЪогаЮпез, СА, и8А) способом, описанным производителем.

Статистический анализ.

Данные выражались в виде среднего ± стандартного отклонения (80). Статистическую значимость различий оценивали с использованием непарного непараметрического теста Стьюдента по критерию ί. Значительными различиями между опытными группами являлись значения * р<0,05, ** р<0,01 или *** р<0,005.

Результаты.

Цитотоксичностъ и киназная специфичность ВР-14.

Анализы на жизнеспособность клеток показали сильное цитотоксическое воздействие ВР-14 на клетки гепатомы человека НерС2 и РБС, а также на линии клеток установленной ГКК Нер3В и 3зр (фиг. 7А). Оценка дозозависимых кривых показала значения 1С\₀ ниже 0,5 мкМ в различных линиях клеток ГКК (табл. 11). Анализы киназы с использованием бесклеточных экстрактов показали, что ВР-14 значительно снижает активность ЦЗК1/ЦЗК2 в концентрациях 0,03 мкМ (фиг. 7В). Кроме того, обработка клеток НерС2 и РБС ВР-14 в концентрациях ниже 1 мкМ приводила к сильному снижению фосфорилирования РНК-полимеразы II на серине 5 (ЦЗК7) и серине 2 (ЦЗК9), что указывает на ингибирование активности ЦЗК7/ЦЗК9 (фиг. 7С). Количественное определение ингибирования ЦЗК с использованием рекомбинантных субстратов ЦЗК показало значения ГС₅₀ для ВР-14 на уровне от 0,01 до 0,05 мкМ, включая противодействующее влияние на ЦЗК5 (табл. 12), что подтвердило данные, полученные бесклеточными экстрактами. Все эти результаты, вместе взятые, указывают на то, что ВР-14 является мощным цитотоксическим соединением на линиях клеток ГКК за счет специфического ингибирования ЦЗК1/ЦЗК2/ЦЗК5/ЦЗК7 и ЦЗК9.

Таблица 11

Оценка дозозависимых кривых ^С^) в различных линиях клеток ГКК _ 1Счо (мкМ)

Линия клеток -ьтУтд— —

НерО2	0,12
РБС	0,02
НерЗВ	0,08
Ззр	0,48

- 58 028206

Таблица 12

Количественное определение ингибирования ЦЗК с использованием рекомбинантных субстратов ЦЗК - значения 1С₅₀ (мкМ)

	1С50 (мкМ)
Протеинкиназа	ВРИ
ЦЗК1/циклин В	0,050
ЦЗК2/циклин Е	0,010
ЦЗК5/р25Т4СК	0,015
ЦЗК9/циклин Т	0,007

ВР-14 прекращает клоногенностъ и подавляет прогрессирование клеточного цикла.

Авторами изобретения наблюдалось более чем 15-кратное снижение клоногенного роста после обработки клеток НерО2 и РБС 0,2 мкМ ВР-14 (фиг. 8А). Анализ синтеза ДНК показал, что обработка клеток НерО2 или РБС 1 мкМ ВР-14 уменьшала инкорпорацию БДУ более чем в 2 раза по сравнению с контрольной группой (фиг. 8В). Кинетика пролиферации показала цитостатическое действие ВР-14 в количестве 0,2 мкМ в клетках НерО2 и РЬС, а также в клетках гепатомы Нер3В (фиг. 9). Соответственно, прием ВР-14 смог индуцировать накопление клеток НерО2 и РБС в фазе 02 клеточного цикла (фиг. 8С). Эти данные указывают на то, что ВР-14 оказывает антипролиферативное действие, блокируя репликацию ДНК и купируя клетки ГКК на фазе 02 клеточного цикла.

ВР-14 индуцирует апоптоз не в первичных человеческих гепатоцитах (ПЧГ), а в клетках гепатомы.

Авторами изобретения был исследован апоптоз, индуцированный ВР-14 в клетках Нер02, которые несут ген дикого типа р53, и в клетках РЬС, с экспрессией полноразмерного, но мутировавшего р53 (Рег1ау еΐ а1. Ιηΐ. I. Сапсег. 2010; 127(12):2893-917). Назначение 0,2 мкМ ВР-14 индуцировало расщепление РАКР и экспрессию р53 в клетках НерО2 и в клетках РБС с мутировавшим р53 (фиг. 10А). В то же время прием ВР-14 не индуцировал переработку РАКР в ПЧГ, которые представляют собой клеточный источник гепатомы (фиг. 10В). Соответственно, ВР-14 показало значение 1С₅₀ на уровне 20,08 мкМ в ПЧГ, что более чем в 90 раз выше соответствующего значения в клетках НерО2 (табл. 11). Эти данные показывают, что ВР-14 индуцирует апоптоз клеток ГКК при низкой концентрации р53-независимым образом и не оказывает цитотоксического действия в ПЧГ.

Долговременная цитотоксичностъ ВР-14 в клетках ГКК.

Авторами изобретения было проанализировано проявление ВР-14 изменений в цитотоксическом действии при обработке клеток гепатомы в концентрациях, соответствующих половине их значений 1С₅₀, а также при последовательных разбавлениях 1С₅₀ в течение периода продолжительностью до 9 месяцев. Если снижение чувствительности к химиотерапевтическим препаратам происходит за счет усиления механизмов устойчивости, клетки ГКК должны увеличивать значения. Наиболее примечательным среди наших наблюдений было то, что значения 1С₅₀ поддерживались в клетках гепатомы с весьма незначительными изменениями во время продолжительного воздействия лекарственным препаратом (табл. 13). Эти данные показывают, что цитотоксическое действие ВР-14 на клетки ГКК сохраняется и после продолжительной лекарственной терапии: это указывает на то, что клетки гепатомы не развивают хемостойкости в результате воздействия ВР-14.

Таблица 13

Устойчивая цитотоксичность в линиях клеток ГКК после долговременного воздействия ВР-14.

1С50 для ВРИ (мкМ)

НерС2 НерЗВ

контроль (мкМ)	0,32	0,53
1/2 1С50 (мкМ)	0,59	0,80
1/4 1С5о (мкМ)	0,45	0,45
1/8 1С5о (мкМ)	0,39	0,38
1/16 1С50 (мкМ)	0,27	0,42

Ингибирование ксенографтных моделей и ДЭНА-индуцированной гепатомы с помощью ВР-14.

Авторами изобретения оценивались ксенографтные модели, производные от клеток НерО2 и РИС. Опухоленесущим мышам вводили ВР-14 в максимально переносимой дозе (МПД; 1 мг/кг). Назначение ВР-14 привело к значительно уменьшенным объемам опухоли ксенотрансплантатов, образованных клетками НерО2 и РБС (фиг. 11А). Прием ВР-14 даже приводил к регрессии опухолей РБС. Оценка δ-фазоположительных клеток в опухолях, производных от НерО2 и РБС инкорпорацией БДУ в ДНК показала 2-кратное снижение после воздействия ВР-14 (фиг. 11В и 11С).

Авторами изобретения также была проанализирована способность ВР-14 ингибирование образования эндогенного рака печени, которое было химически индуцировано гепатотоксином ДЭНА. Методы лечения ДЭНА-индуцированных мышей включали 3 цикла лечения МПД ВР-14 в течение 10 дней с интервалами продолжительностью 7 дней (фиг. 12А). Оценка узелков опухоли, которые наблюдаются на

- 59 028206 поверхности раковой печени, показала, что ВА-12 вызывает 1,4-кратное уменьшение узелков опухоли, по сравнению с не проходившими лечения мышами из контрольной группы. Воздействие ВР-14 показало сопоставимое противораковое действие, выраженное в 1,3-кратном сокращении ДЭНА-индуцированной гепатомы (фиг. 12В и 12С). Резюмируя вышесказанное: эти данные указывают на то, что как ВА-12, так и ВР-14 проявляют сильное антигепатомное действие ш У1уо, что наблюдается как в ксенографтной модели, так и при эндогенном раке печени.

Пример 41. Сухие капсулы.

5000 капсул, каждая из которых содержит по 0,25 г соединения с формулой I в качестве действующего вещества, приготавливают следующим образом аз Го11о\з.:

Состав.

Действующее вещество	1250 г
Тальк	180 г
Пшеничный крахмал	120 г
Магния стеарат	80 г
Лактоза	20 г

Процесс приготовления: Названные измельченные вещества продавливают через сито с шириной ячейки 0,6 мм. Порции по 0,33 г смеси переносят в желатиновые капсулы с помощью машины для заполнения капсул.

Пример 42. Мягкие капсулы.

5000 мягких желатиновых капсул, каждая из которых содержит 0,05 г соединения с формулой I в качестве действующего вещества, приготавливаются следующим образом.

Состав.

Действующее вещество 250 г Лаурогликоль 2 л

Процесс приготовления: Измельченное действующее вещество суспендируют в Ьаигод1уко1® (пропиленгликоля лаурат, ОаПеГоззе 8.А., 8аш1 Рпез1, Ргапсе) и измельчают в мокрой мельнице до частиц размером от около 1 до 3 мм. Затем отдельные порции, составляющие в каждом случае 0,419 г смеси, переносят в мягкие желатиновые капсулы с помощью машины для заполнения капсул

Пример 43 Мягкие капсулы.

5000 мягких желатиновых капсул, каждая из которых содержит 0,05 г соединения с формулой I в качестве действующего вещества, приготавливаются следующим образом.

Состав.

Действующее вещество 250 г

ПЭГ 400 1 л

Τν/ееп 80 ΐ ^л

Процесс приготовления: Измельченное действующее вещество суспендируют в ПЭГ 400 (полиэтиленгликоле с Мг от 380 до примерно 420, 81дта, Р1ика, А1йпсЬ, И8А) и Т\ееп® 80 (полиоксиэтилена сорбитана монолаурата, А!1аз СЬет. Шс., Щс., И8А, производства 81дта, Р1ика, А1йпсЬ, И8А) и измельчают в мокрой мельнице до частиц размером от около 1 до 3 мм. Затем отдельные порции, составляющие в каждом случае 0,43 г смеси, переносят в мягкие желатиновые капсулы с помощью машины для заполнения капсул.

Claims (8)

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. 2-Замещенные-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пурины общей формулы I где К¹ выбирают из (4-аминоциклогексил)амино, (2-аминоциклогексил)амино, (3-аминоциклогексил)амино, (4-гидроксициклогексил)амино, [(2К)-1-гидроксибутан-2-ил]амино, (2-гидрокси-2-метилпропил)амино, (3-гидрокси-3-метилбутил)амино, [(38)-2-гидрокси-2,4-диметилпент3-ил]амино, [(13)-1-(диметиламино)-2-гидроксиэтил]амино, [(3К)-2-гидроксипент-3-ил]амино, (3-гидроксипропил)амино, (2-аминоэтил)амино, (3-аминопропил)амино, (2-аминопропил)амино;

К² выбирают из замещенного фенила, где заместители находятся в любых позициях и независимо выбираются из группы, в состав которой входят ОН, ОСН₃, \Н₂, С1, Вг, Е, I, СООН, ΝΟ₂, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, 2-фуранил, 3-фуранил, тиен-2-ил, тиен-3-ил, пиразол-1-ил, пиразол-3-ил, пиразол-4-ил, пиррол-1-ил, и их фармацевтически приемлемые соли.

2. Применение производных 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пуринов по п.1 общей формулы I для получения лекарственных средств, сочетающих антипролиферативное, антиангиогенное, противовоспалительное и проапоптозное действие.

3. Применение производных 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пуринов по п.1 общей формулы I для получения фармацевтических композиций, сочетающих антипролиферативное, антиангиогенное, противовоспалительное и проапоптозное действие.

4. Применение соединения формулы I по п.1 для использования в ингибировании ангиогенеза в клетках млекопитающих.

5. Применение соединения формулы I по п.1 для использования в подавлении воспаления.

6. Применение соединения формулы I по п.1 для использования в лечении раковых заболеваний.

7. Применение производных 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил-9Н-пуринов по п.1 для использования в лечении раковых заболеваний, выбираемых из группы, в состав которой входят гепатоклеточная карцинома и метастатическая гепатоклеточная карцинома.

8. Фармацевтическая композиция для лечения раковых заболеваний, характеризующаяся тем, что она содержит по меньшей мере одно производное 2-замещенных-6-биарилметиламино-9-циклопентил9Н-пуринов формулы 1 по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.