CN105026396A - 2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9h-嘌呤衍生物、其作为药物的用途及药物组合物 - Google Patents

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伊娃·雷兹尼科瓦
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Abstract

本发明涉及显示出作为肝细胞癌生长和血管生成的特异性抑制剂的活性的新型2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤衍生物。本发明还包括含有2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基嘌呤的药物组合物。

Description

2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤衍生物、其作为药物的用途及药物组合物
技术领域
本发明涉及新型2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤衍生物，其作为肝细胞癌生长和血管生成的特异性抑制剂的活性，及其作为药物的用途。
背景技术
肝细胞癌(HCC)属于全球最常见的恶性肿瘤(El-Serag&Rudolph,2007,Gastroenterology,132(7):2557-76)。在最常见的HCC病因中，包括肝炎病毒感染、长期过量饮酒、环境毒素、血色沉着病、α1-抗胰蛋白酶缺乏症或非酒精性脂肪肝病(Farazi&DePinho,2006,Nat Rev Cancer,6(9):674-87)。除了通过手术切除或肝移植治愈性治疗HCC之外，最近将基于靶向分子的疗法建立为有前景的治疗选择。目前在与其它常规药剂依序联合(in tandem)或组合的单药疗法或靶向疗法中研究了数种化疗剂(Chua&Choo,2011,Int J Hepatol 348297.Epub 2011年7月12日；Tanaka&Arii,2011,J Gastroenterol,46(3):289-96)。遗憾的是大部分试剂在HCC中显示出有限的活性，这可能是由于该类型肿瘤相对高的化学抗性。
由于肿瘤中HCC结节通常血管过度形成，抑制血管生成已被认为是合理的治疗策略(Welker&Trojan,2011,World J Gastroenterol,14；17(26):3075-81)，但最近已经将其它的分子靶标，包括癌症干细胞，建立为下一个HCC治疗的潜在策略(Tanaka&Arii,2011,J Gastroenterol 46(3):289-96)。索拉非尼(Nexavar)是第一种经批准作为治疗晚期HCC的药物，其靶向广谱激酶，包括通常在HCC中超激活的VEGFR、PDGFR和Raf。遗憾的是，索拉非尼的精确指征仍然是广泛且不清晰的(Kim等,2011,Oncology,25(3):283-91,295)，因此迫切需要有效治疗HCC的新型治疗策略。
最近，经动脉化疗栓塞术治疗(TACE)已被引入用于治疗不可切除的HCC(Llovet&Bruix,2008,J Hepatol,48增刊1:S20-37)，其可有效地导致频繁使用的化疗剂诸如多柔比星、顺铂和表柔比星在肿瘤中选择性分布和更久的停留时间(Llovet&Bruix,2003Hepatology,37(2):429-42；Marelli等,2006,Cancer TreatRev,32(8):594-606)。
此外，已经建立了反映HCC进展的特异性的恶性肝细胞的病理学中的新发现(Zijl等,2009,Future Oncol,5(8):1169-79)。最近建立的上皮至间充质转分化(EMT)的人模型强调了该过程特别在HCC进展期间的癌症扩展、转移移生和药物功效的有用评估中的重要性(Zijl等,2011,Mol Cancer Ther,10(5):850-60)。
嘌呤环在位置2、6和9处进行被多种取代基的取代，并测试这些化合物，如在位置N6处被基于苄基和苯基的取代基取代(WO 03/040144、WO2010CZ00067、WO2010CZ00004)、在位置9处被核糖取代(WO2004/058791)、在位置2处被空间上不太需要的取代基取代(WO 2009/003428)、在位置N6处被2-取代苄基取代基取代(WO 2009/043320)。US696970B2涉及主要在位置9处携带短烷基(甲基、乙基、异丙基)的2,6,9-三取代联芳基嘌呤衍生物，和其作为CDK1/2抑制剂和抗增殖化合物的用途。WO 03/022216A2和WO 00/55161A1还涉及在位置9处携带异丙基部分的2,6,9-二取代联芳基腺嘌呤衍生物和其在若干过度增生疾病中的用途。然而，这些取代不产生针对肝细胞癌有用的药物。
本发明因此提供一系列新型2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤衍生物，其可用于抑制肝细胞癌的生长以及血管生成。该组新型嘌呤衍生物的特征在于细胞毒性活性、抗血管生成活性、抗炎活性和促凋亡活性的不常见组合，因此不仅给所述化合物带来强抗癌性，并且带来迄今为止未知类型用于治疗肝癌的的活性(抗血管生成、促凋亡、抗炎性)，特别是靶向转移性肝细胞癌。本发明的目的是提供新产生独特且有效的具有改善的选择性和效率指数的抗癌化合物。
发明内容
本发明的目标是具有通式I的经取代的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤
其中，
X＝CH、N
R1选自由以下组成的组
(4-氨基环己基)氨基，
(2-氨基环己基)氨基，
(3-氨基环己基)氨基，
(4-羟基环己基)氨基，
[(2R)-1-羟基丁烷-2-基]氨基，
(2-羟基-2-甲基丙基)氨基，
(3-羟基-3-甲基丁基)氨基，
[(3S)-2-羟基-2,4-二甲基戊烷-3-基]氨基，
哌嗪-1-基，
4-甲基哌嗪-1-基，
吗啉-4-基，
[(1S)-1-(二甲基氨基)-2-羟基乙基]氨基，
[(3R)-2-羟基戊烷-3-基]氨基，
(3-羟基丙基)氨基，
(2-氨基乙基)氨基，
(3-氨基丙基)氨基，
(2-氨基丙基)氨基，
4-(氨基甲基)哌啶-1-基，
(哌啶-4-基甲基)氨基，
4-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]哌嗪-1-基，
4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基，
和
R2选自由以下组成的组
取代苯基，其中取代基在任何位置处并且独立选自由以下组成的组：OH、OCH3、NH2、Cl、Br、F、I、COOH、NO2，
2-吡啶基，
3-吡啶基，
4-吡啶基，
2-呋喃基，
3-呋喃基，
噻吩-2-基，
噻吩-3-基，
吡唑-1-基，
吡唑-3-基，
吡唑-4-基，
吡咯-1-基，
以及，其药学上可接受的盐，特别是碱金属盐、铵盐或胺盐或酸加成盐。
当手性中心存在于所述分子时，本发明涵盖光学活性异构体、其混合物和外消旋物。
本发明的另一个目标是用作药物的具有通式I的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤。
本发明的另一个目标是用于抑制细胞增殖和/或诱导凋亡的具有通式I的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤。
本发明的又一个目标是用于抑制血管生成的具有通式I的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤。
本发明的另一个目标是用作抗炎化合物的具有通式I的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤。
本发明的又一个目标是用于治疗癌症病症的具有通式I的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤，所述癌症病症优选选自肝细胞癌和转移性肝细胞癌。特别地，这些化合物组合了抗增殖活性、抗血管生成活性、抗炎活性和促凋亡活性。
本发明的另一个目标是用于制造癌症病症诸如肿瘤所用的药物的具有通式I的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤。
本发明的化合物是选自包括CDK5、CDK7和CDK9的细胞周期素依赖性激酶(CDK)及erk1或其组合的抑制剂。它们还激活肿瘤抑制子p53。
本发明还包括包含至少一种具有通式I的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤和药学上可接受的载体及可选的另一种选自顺铂、多柔比星或索拉非尼的抗癌剂的药物组合物。
在一个优选的实施方案中，式I衍生物选自以下组成的组：
N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-吡啶-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-噻吩-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-噻吩-3-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-呋喃-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-呋喃-3-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(3′-氟-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(2′-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(2′-羟基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(2′-氨基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-吡唑-1-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、4′-{[2-(4-氨基-环己基氨基)-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-联苯基-4-羧酸、N2-(4-氨基-环己基)-N6-[2,2′]联吡啶基-5-基甲基-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、4-(5-{[2-(4-氨基-环己基氨基)-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-苯甲酸、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-吡啶-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-噻吩-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-噻吩-3-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-呋喃-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-呋喃-3-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(3′-氟-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(2′-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(2′-羟基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(2′-氨基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-吡唑-1-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、4′-{[2-(2-氨基-环己基氨基)-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-联苯基-4-羧酸、N2-(2-氨基-环己基)-N6-[2,2′]联吡啶基-5-基甲基-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、4-(5-{[2-(2-氨基-环己基氨基)-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-苯甲酸、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-吡啶-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-噻吩-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-噻吩-3-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-呋喃-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-呋喃-3-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(3′-氟-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(2′-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(2′-羟基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(2′-氨基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-吡唑-1-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、4′-{[2-(3-氨基-环己基氨基)-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-联苯基-4-羧酸、N2-(3-氨基-环己基)-N6-[2,2′]联吡啶基-5-基甲基-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、4-(5-{[2-(3-氨基-环己基氨基)-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-苯甲酸、4-[9-环戊基-6-(4-噻吩-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-环己醇,4-[9-环戊基-6-(4-噻吩-3-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-环己醇、4-[9-环戊基-6-(4-呋喃-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-环己醇、4-[9-环戊基-6-(3-呋喃-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-环己醇、4-{9-环戊基-6-[(3'-氟-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-环己醇、4-{9-环戊基-6-[(2'-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-环己醇、4-{9-环戊基-6-[(2'-羟基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-环己醇、4-{9-环戊基-6-[(2'-氨基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-环己醇、4-[9-环戊基-6-(4-吡唑-1-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-环己醇、4'-{[9-环戊基-2-(4-羟基-环己基氨基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-联苯基-4-羧酸、4-{9-环戊基-6-[(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-环己醇、4-{9-环戊基-6-[(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-环己醇、4-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-环己醇、4-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-环己醇、4-(9-环戊基-6-{[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-环己醇、4-(9-环戊基-6-{[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-环己醇、4-(9-环戊基-6-{[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-环己醇、4-(9-环戊基-6-{[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-环己醇、4-{9-环戊基-6-[(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-环己醇、4-(5-{[9-环戊基-2-(4-羟基-环己基氨基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-苯甲酸、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-(4-噻吩-2-基-苄基)-胺,(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-(4-噻吩-3-基-苄基)-胺、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-(4-呋喃-2-基-苄基)-胺、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-(4-呋喃-3-基-苄基)-胺、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-(3'-氟-联苯基-4-基甲基)-胺、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-(2'-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-胺、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-(2'-羟基-联苯基-4-基甲基)-胺、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-(2'-氨基-联苯基-4-基甲基)-胺、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-(4-吡唑-1-基-苄基)-胺、4'-[(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基氨基)-甲基]-联苯基-4-羧酸、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-胺、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-胺、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-胺、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-胺、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-胺、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-胺、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-胺、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-胺、(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-胺、4-{5-[(9-环戊基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-苯甲酸、1-[9-环戊基-6-(4-噻吩-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-l氨基]-2-甲基-丙烷-2-醇、1-[9-环戊基-6-(4-噻吩-3-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-l氨基]-2-甲基-丙烷-2-醇、1-[9-环戊基-6-(4-呋喃-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-l氨基]-2-甲基-丙烷-2-醇、1-[9-环戊基-6-(4-呋喃-3-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-l氨基]-2-甲基-丙烷-2-醇、1-{9-环戊基-6-[(3'-氟-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丙烷-2-醇、1-{9-环戊基-6-[(2'-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丙烷-2-醇、1-{9-环戊基-6-[(2'-羟基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丙烷-2-醇、1-{9-环戊基-6-[(2'-氨基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丙烷-2-醇、1-[9-环戊基-6-(4-吡唑-1-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-2-甲基-丙烷-2-醇、4'-{[9-环戊基-2-(2-羟基-2-甲基-丙基氨基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-联苯基-4-羧酸、1-{9-环戊基-6-[(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丙烷-2-醇、1-{9-环戊基-6-[(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丙烷-2-醇、1-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丙烷-2-醇、1-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丙烷-2-醇、1-(9-环戊基-6-{[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-2-甲基-丙烷-2-醇、1-(9-环戊基-6-{[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-2-甲基-丙烷-2-醇、1-(9-环戊基-6-{[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-2-甲基-丙烷-2-醇、1-(9-环戊基-6-{[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-2-甲基-丙烷-2-醇、1-{9-环戊基-6-[(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丙烷-2-醇、4-(5-{[9-环戊基-2-(2-羟基-2-甲基-丙基氨基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-苯甲酸、
4-[9-环戊基-6-(4-噻吩-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-2-甲基-丁烷-2-醇、4-[9-环戊基-6-(4-噻吩-3-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-2-甲基-丁烷-2-醇、4-[9-环戊基-6-(4-呋喃-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-2-甲基-丁烷-2-醇、4-[9-环戊基-6-(4-呋喃-3-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-2-甲基-丁烷-2-醇、4-{9-环戊基-6-[(3'-氟-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丁烷-2-醇、4-{9-环戊基-6-[(2'-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丁烷-2-醇、4-{9-环戊基-6-[(2'-羟基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丁烷-2-醇、4-{9-环戊基-6-[(2'-氨基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丁烷-2-醇、4-[9-环戊基-6-(4-吡唑-1-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-2-甲基-丁烷-2-醇、4'-{[9-环戊基-2-(3-羟基-3-甲基-丁基氨基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-联苯基-4-羧酸、4-{9-环戊基-6-[(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丁烷-2-醇、4-{9-环戊基-6-[(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丁烷-2-醇、4-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丁烷-2-醇、4-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丁烷-2-醇、4-(9-环戊基-6-{[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-2-甲基-丁烷-2-醇、4-(9-环戊基-6-{[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-2-甲基-丁烷-2-醇、4-(9-环戊基-6-{[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-2-甲基-丁烷-2-醇、4-(9-环戊基-6-{[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-2-甲基-丁烷-2-醇、4-{9-环戊基-6-[(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丁烷-2-醇、4-(5-{[9-环戊基-2-(3-羟基-3-甲基-丁基氨基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-苯甲酸、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(4-吡啶-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(4-噻吩-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(4-噻吩-3-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺,N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(4-呋喃-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(4-呋喃-3-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺,N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(3′-氟-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(2′-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(2′-羟基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(2′-氨基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(4-吡唑-1-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、4′-{[2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-联苯基-4-羧酸、N2-(2-氨基-丙基)-N6-[2,2′]联吡啶基-5-基甲基-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、4-(5-{[2-(2-氨基-丙基)-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-苯甲酸、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(4-吡啶-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(4-噻吩-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(4-噻吩-3-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(4-呋喃-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(4-呋喃-3-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(3′-氟-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(2′-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(2′-羟基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(2′-氨基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(4-吡唑-1-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、4′-{[2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-联苯基-4-羧酸、N2-(3-氨基-丙基)-N6-[2,2′]联吡啶基-5-基甲基-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-N6-(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、4-(5-{[2-(3-氨基-丙基)-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-苯甲酸、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-(4-吡啶-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-(4-噻吩-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-(4-噻吩-3-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-(4-呋喃-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-(4-呋喃-3-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-(3′-氟-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-(2′-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-(2′-羟基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-(2′-氨基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-(4-吡唑-1-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、4′-{[2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-联苯基-4-羧酸、N2-(2-氨基-乙基)-N6-[2,2′]联吡啶基-5-基甲基-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺、N2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-N6-(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、4-(5-{[2-(2-氨基-乙基)-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-苯甲酸、3-[9-环戊基-6-(4-噻吩-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-丙烷-1-醇、3-[9-环戊基-6-(4-噻吩-3-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-丙烷-1-醇、3-[9-环戊基-6-(4-呋喃-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-丙烷-1-醇、3-[9-环戊基-6-(4-呋喃-3-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-丙烷-1-醇、3-{9-环戊基-6-[(3'-氟-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丙烷-1-醇、3-{9-环戊基-6-[(2'-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丙烷-1-醇、3-{9-环戊基-6-[(2'-羟基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丙烷-1-醇、3-{9-环戊基-6-[(2'-氨基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丙烷-1-醇、3-[9-环戊基-6-(4-吡唑-1-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-丙烷-1-醇、4'-{[9-环戊基-2-(3-羟基-丙基氨基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-联苯基-4-羧酸、3-{9-环戊基-6-[(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丙烷-1-醇、3-{9-环戊基-6-[(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丙烷-1-醇、3-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丙烷-1-醇、3-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丙烷-1-醇、3-(9-环戊基-6-{[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-丙烷-1-醇、3-(9-环戊基-6-{[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-丙烷-1-醇、3-(9-环戊基-6-{[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-丙烷-1-醇、3-(9-环戊基-6-{[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-丙烷-1-醇、3-{9-环戊基-6-[(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丙烷-1-醇、4-(5-{[9-环戊基-2-(3-羟基-丙基氨基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-苯甲酸、(R)-3-[9-环戊基-6-(4-噻吩-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-戊烷-2-醇、(R)-3-[9-环戊基-6-(4-噻吩-3-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-戊烷-2-醇、(R)-3-[9-环戊基-6-(4-呋喃-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-戊烷-2-醇、(R)-3-[9-环戊基-6-(4-呋喃-3-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-戊烷-2-醇、(R)-3-{9-环戊基-6-[(3'-氟-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊烷-2-醇、(R)-3-{9-环戊基-6-[(2'-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊烷-2-醇、(R)-3-{9-环戊基-6-[(2'-羟基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊烷-2-醇、(R)-3-{9-环戊基-6-[(2'-氨基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊烷-2-醇、(R)-3-[9-环戊基-6-(4-吡唑-1-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-戊烷-2-醇、4'-{[9-环戊基-2-((R)-1-乙基-2-羟基-丙基氨基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-联苯基-4-羧酸、(R)-3-{9-环戊基-6-[(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊烷-2-醇、(R)-3-{9-环戊基-6-[(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊烷-2-醇、(R)-3-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊烷-2-醇、(R)-3-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊烷-2-醇、(R)-3-(9-环戊基-6-{[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-戊烷-2-醇、(R)-3-(9-环戊基-6-{[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-戊烷-2-醇、(R)-3-(9-环戊基-6-{[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-戊烷-2-醇、(R)-3-(9-环戊基-6-{[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-戊烷-2-醇、(R)-3-{9-环戊基-6-[(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊烷-2-醇、4-(5-{[9-环戊基-2-((R)-1-乙基-2-羟基-丙基氨基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-苯甲酸、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(4-吡啶-2-基-苄基)-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(4-噻吩-2-基-苄基)-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(4-噻吩-3-基-苄基)-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(4-呋喃-2-基-苄基)-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(4-呋喃-3-基-苄基)-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(3'-氟-联苯基-4-基甲基)-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(2'-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(2'-羟基-联苯基-4-基甲基)-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(2'-氨基-联苯基-4-基甲基)-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(4-吡唑-1-基-苄基)-胺、4'-{[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-联苯基-4-羧酸、[2,2']联吡啶基-5-基甲基-[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-胺、[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-胺、4-(5-{[9-环戊基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-苯甲酸、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(4-吡啶-2-基-苄基)-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(4-噻吩-2-基-苄基)-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(4-噻吩-3-基-苄基)-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(4-呋喃-2-基-苄基)-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(4-呋喃-3-基-苄基)-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(3'-氟-联苯基-4-基甲基)-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(2'-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(2'-羟基-联苯基-4-基甲基)-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(2'-氨基-联苯基-4-基甲基)-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(4-吡唑-1-基-苄基)-胺、4'-{[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-联苯基-4-羧酸、[2,2']联吡啶基-5-基甲基-[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-胺、[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基]-(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-胺、4-(5-{[9-环戊基-2-(哌嗪-1-基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-苯甲酸、9-环戊基-N2-哌啶-4-基甲基-N6-(4-吡啶-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N2-哌啶-4-基甲基-N6-(4-噻吩-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N2-哌啶-4-基甲基-N6-(4-噻吩-3-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N2-哌啶-4-基甲基-N6-(4-呋喃-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N2-哌啶-4-基甲基-N6-(4-呋喃-3-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N2-哌啶-4-基甲基-N6-(3′-氟-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N2-哌啶-4-基甲基-N6-(2′-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N2-哌啶-4-基甲基-N6-(2′-羟基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N2-哌啶-4-基甲基-N6-(2′-氨基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N2-哌啶-4-基甲基-N6-(4-吡唑-1-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、4'-({9-环戊基-2-[(哌啶-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-6-基氨基}-甲基)-联苯基-4-羧酸、9-环戊基-N2-哌啶-4-基甲基-N6-(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N2-哌啶-4-基甲基-N6-(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N2-哌啶-4-基甲基-N6-(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N2-哌啶-4-基甲基-N6-(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N6-[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-N2-哌啶-4-基甲基-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N6-[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-N2-哌啶-4-基甲基-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N6-[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-N2-哌啶-4-基甲基-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N6-[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-N2-哌啶-4-基甲基-9H-嘌呤-2,6-二胺、9-环戊基-N2-哌啶-4-基甲基-N6-(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺、4-[5-({9-环戊基-2-[(哌啶-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-6-基氨基}-甲基)-吡啶-2-基]-苯甲酸、(R)-2-[9-环戊基-6-(4-吡啶-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-丁烷-1-醇、(R)-2-[9-环戊基-6-(4-噻吩-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-丁烷-1-醇、(R)-2-[9-环戊基-6-(4-噻吩-3-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-丁烷-1-醇、(R)-2-[9-环戊基-6-(4-呋喃-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-丁烷-1-醇、(R)-2-[9-环戊基-6-(4-呋喃-3-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-丁烷-1-醇、(R)-2-{9-环戊基-6-[(3'-氟-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丁烷-1-醇、(R)-2-{9-环戊基-6-[(2'-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丁烷-1-醇、(R)-2-{9-环戊基-6-[(2'-羟基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丁烷-1-醇、(R)-2-{9-环戊基-6-[(2'-氨基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丁烷-1-醇、(R)-2-[9-环戊基-6-(4-吡唑-1-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-丁烷-1-醇、4'-{[9-环戊基-2-((R)-1-羟基甲基-丙基氨基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-联苯基-4-羧酸、(R)-2-{9-环戊基-6-[(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丁烷-1-醇、(R)-2-{9-环戊基-6-[(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丁烷-1-醇、(R)-2-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丁烷-1-醇、(R)-2-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丁烷-1-醇、(R)-2-(9-环戊基-6-{[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-丁烷-1-醇、(R)-2-(9-环戊基-6-{[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-丁烷-1-醇、(R)-2-(9-环戊基-6-{[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-丁烷-1-醇、(R)-2-(9-环戊基-6-{[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基氨基)-丁烷-1-醇、(R)-2-{9-环戊基-6-[(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-丁烷-1-醇、4-(5-{[9-环戊基-2-((R)-1-羟基甲基-丙基氨基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-苯甲酸、2-{4-[9-环戊基-6-(4-吡啶-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基]-哌嗪-1-基}-乙醇、2-{4-[9-环戊基-6-(4-噻吩-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基]-哌嗪-1-基}-乙醇、2-{4-[9-环戊基-6-(4-噻吩-3-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基]-哌嗪-1-基}-乙醇、2-{4-[9-环戊基-6-(4-呋喃-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基]-哌嗪-1-基}-乙醇、2-{4-[9-环戊基-6-(4-呋喃-3-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基]-哌嗪-1-基}-乙醇、2-(4-{9-环戊基-6-[(3'-氟-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙醇、2-(4-{9-环戊基-6-[(2'-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙醇、2-(4-{9-环戊基-6-[(2'-羟基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙醇、2-(4-{9-环戊基-6-[(2'-氨基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙醇、2-{4-[9-环戊基-6-(4-吡唑-1-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基]-哌嗪-1-基}-乙醇、4'-({9-环戊基-2-[4-(2-羟基-乙基)-哌嗪-1-基]-9H-嘌呤-6-基氨基}-甲基)-联苯基-4-羧酸、2-(4-{6-[([2,2']联吡啶基-5-基甲基)-氨基]-9-环戊基-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙醇、2-[4-(9-环戊基-6-{[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基)-哌嗪-1-基]-乙醇、2-[4-(9-环戊基-6-{[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基)-哌嗪-1-基]-乙醇、2-[4-(9-环戊基-6-{[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基)-哌嗪-1-基]-乙醇、2-[4-(9-环戊基-6-{[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基)-哌嗪-1-基]-乙醇、4-[5-({9-环戊基-2-[4-(2-羟基-乙基)-哌嗪-1-基]-9H-嘌呤-6-基氨基}-甲基)-吡啶-2-基]-苯甲酸、2-(4-{9-环戊基-6-[(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙醇、2-(4-{9-环戊基-6-[(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙醇、2-(4-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙醇、2-(4-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙醇、2-(4-{9-环戊基-6-[(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙醇、2-(2-{4-[9-环戊基-6-(4-吡啶-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基]-哌嗪-1-基}-乙氧基)-乙醇、2-[2-(4-{9-环戊基-6-[(3'-氟-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙氧基]-乙醇、2-[2-(4-{9-环戊基-6-[(2'-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙氧基]-乙醇、2-[2-(4-{9-环戊基-6-[(2'-羟基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙氧基]-乙醇、2-[2-(4-{9-环戊基-6-[(2'-氨基-联苯基-4-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙氧基]-乙醇、4'-[(9-环戊基-2-{4-[2-(2-羟基-乙氧基)-乙基]-哌嗪-1-基}-9H-嘌呤-6-基氨基)-甲基]-联苯基-4-羧酸、2-(2-{4-[9-环戊基-6-(4-噻吩-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基]-哌嗪-1-基}-乙氧基)-乙醇、2-(2-{4-[9-环戊基-6-(4-噻吩-3-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基]-哌嗪-1-基}-乙氧基)-乙醇、2-(2-{4-[9-环戊基-6-(4-呋喃-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基]-哌嗪-1-基}-乙氧基)-乙醇、2-(2-{4-[9-环戊基-6-(4-呋喃-3-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基]-哌嗪-1-基}-乙氧基)-乙醇、2-(2-{4-[9-环戊基-6-(4-吡唑-1-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基]-哌嗪-1-基}-乙氧基)-乙醇、2-[2-(4-{6-[([2,2']联吡啶基-5-基甲基)-氨基]-9-环戊基-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙氧基]-乙醇、2-{2-[4-(9-环戊基-6-{[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基)-哌嗪-1-基]-乙氧基}-乙醇、2-{2-[4-(9-环戊基-6-{[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基)-哌嗪-1-基]-乙氧基}-乙醇、2-{2-[4-(9-环戊基-6-{[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基)-哌嗪-1-基]-乙氧基}-乙醇、2-{2-[4-(9-环戊基-6-{[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-9H-嘌呤-2-基)-哌嗪-1-基]-乙氧基}-乙醇、4-{5-[(9-环戊基-2-{4-[2-(2-羟基-乙氧基)-乙基]-哌嗪-1-基}-9H-嘌呤-6-基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-苯甲酸、2-[2-(4-{9-环戊基-6-[(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙氧基]-乙醇、2-[2-(4-{9-环戊基-6-[(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙氧基]-乙醇、2-[2-(4-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙氧基]-乙醇、2-[2-(4-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙氧基]-乙醇、2-[2-(4-{9-环戊基-6-[(6-吡唑-1-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基}-哌嗪-1-基)-乙氧基]-乙醇。
一般合成程序
本发明的化合物通过常规化学程序制备，所述程序允许嘌呤部分的位置2和6处取代基的高度可变性。适合的合成方法示于方案1中。
A＝C或N
试剂和条件：
a:适当的胺，DIPEA，正丙醇，120℃(密封管)，4小时至8小时
b:反式1,4-二氨基环己烷，160℃(密封管)，4小时
c:适当的芳基硼酸，Pd(OAc)2，K3PO4，TBAB，DMF，80-120℃，4小时至48小时
d:适当的芳基硼酸，Pd(dba)2，PPh3，Na2CO3，DME，水，80℃，8小时至16小时
e:适当的胺，DIPEA，NMP，160℃，4小时至72小时
f:1.BBr3，DCM，2.甲醇
合成从可商购获得的2,6-二氯嘌呤开始，2,6-二氯嘌呤在第一步中经由Mitsunobu烷基化通过环戊醇烷基化以获得9-环戊基-2,6-二氯-9H-嘌呤(1)，然后使9-环戊基-2,6-二氯-9H-嘌呤(1)与适当的4-溴苄基胺或C-(6-溴-吡啶-3-基)甲基胺反应以得到结构(2)的化合物。在一些情况下，进行与适当的1-(取代联苯基)-甲胺或1-[4-(杂芳基)苯基]甲胺或1-[6-(取代苯基)吡啶-3-基]甲胺或1-[6-(杂芳基)吡啶-3-基]甲胺的反应，得到化合物(3)。针对化合物(2)或(3)，在强碱的存在下，在160℃的温度下，用过量的适当的胺进行嘌呤部分的位置2处氯原子的取代，获得化合物(4)或(5)。化合物(2)或(4)与适当的芳基或杂芳基硼酸的Suzuki偶联甚至在氯原子的存在下在化合物(2)、(3)或(5)的情况下顺利进行。使用三溴化硼于二氯甲烷中在温和条件下进行化合物(6)的去甲基化，其中R2是2-甲氧基苯基。
药物组合物
治疗组合物包含约1％至约95％的活性成分，单剂量形式的施用优选包含约约20％至约90％的活性成分和非单剂量形式的施用包含约5％至约20％的活性成分。单位剂型可例如为包衣片剂、片剂、安瓿、小瓶、栓剂或胶囊。其它施用形式是例如软膏剂、霜剂、糊剂、泡沫剂、酊剂、唇膏、滴剂、喷雾剂、分散剂等。实例是含有约0.05g至约1.0g的活性成分的胶囊。
本发明的药物组合物以已知的方式制备，例如通过常规混合、制粒、包衣、溶解或冻干工艺的方式。
优选地，如果可以在使用前制备这些物质，例如在冻干组合物的情况下其包含活性物质本身或包含与载体(例如甘露醇)一起的活性物质，使用活性成分的溶液和此外还有混悬剂或分散剂，特别是等渗水溶液、分散剂或混悬剂。药物组合物可被灭菌和/或包含赋形剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂和/或乳化剂、增溶剂、调控渗透压力和/或缓冲液的盐，并且它们以本领域已知的方式制备，例如通过常规溶解或冻干工艺的方式。提及的溶液或混悬剂可包含增粘物质，诸如羧甲基纤维素钠、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮或白明胶。
于油中的混悬剂包含作为油性组分的植物油、合成油或半合成油(常用于注射目的)。特别地，可提及的油为含有作为酸性组分的具有8个至22个、特别是12个至22个碳原子的长链脂肪酸的液体脂肪酸酯，所述长链脂肪酸例如月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、花生四烯酸、山萮酸，或相应的不饱和酸例如油酸、反油酸、芥酸、巴西烯酸或亚油酸(如果适当，添加抗氧化剂例如维生素E、β-胡萝卜素或3,5-二-叔丁基-4-羟基甲苯)。这些脂肪酸酯的醇组分具有不超过6个碳原子，并且是单羟基醇或多羟基醇，例如单羟基醇、二羟基醇或三羟基醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇或其异构体，但特别是二醇和甘油。脂肪酸酯是例如：油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、“Labrafil M 2375”(聚氧乙烯甘油三油酸酯，来自Gattefoseé，巴黎)、“Labrafil M 1944CS”(通过杏仁油醇解制备并且由甘油酯和聚乙二醇酯组成的不饱和聚乙二醇化甘油酯；来自Gattefoseé，巴黎)、“Labrasol”(通过TCM醇解制备并且由甘油酯和聚乙二醇酯组成的饱和聚乙二醇化甘油酯；来自Gattefoseé，巴黎)和/或“Miglyol 812”(长链C8至C12的饱和脂肪酸的甘油三酯，来自Hüls AG，德国)，并且特别是植物油，诸如棉籽油、杏仁油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、大豆油并且特别是花生油。
注射组合物的制备是以常规方式在无菌条件下进行的，装瓶例如至安瓿或小瓶中和封闭容器也是如此。
例如，用于口服使用的药物组合物可通过将活性成分与一种或多种固体载体组合，如果适当将所得混合物制粒，及如果需要将所述混合物或颗粒加工成片剂或包衣片剂芯(如果适当通过添加额外的赋形剂)获得。
特别地，适合的载体是填充剂，诸如糖(例如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇)、纤维素制剂和/或磷酸钙(例如二磷酸三钙或磷酸氢钙)，并且此外是粘合剂，诸如淀粉(例如玉米、小麦、大米或马铃薯淀粉、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷)，和/或如果需要是崩解剂，诸如以上提及的淀粉和此外的羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸或其盐(诸如藻酸钠)。特别地，额外的赋形剂是流动调节剂和润滑剂，例如水杨酸、滑石、硬脂酸或其盐，诸如硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇，或其衍生物。
可对包衣片剂芯提供包衣，如果适当，该包衣可耐受胃液，所使用的包衣尤其为浓缩糖溶液，如果适当，该包衣包含阿拉伯树胶、滑石、聚维酮、聚乙二醇和/或二氧化钛，提供在适当的有机溶剂或溶剂混合物中的包衣溶液，或为了制备对胃液耐受的包衣，提供适合的纤维素制剂(诸如乙酰基纤维素邻苯二甲酸酯或羟基丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯)的溶液。可将染料或颜料混合至片剂或包衣片剂包衣，例如用于鉴别或表征活性成分的不同剂量。
可口服使用的药物组合物也是白明胶的硬胶囊和白明胶与增塑剂诸如甘油或山梨糖醇的软封闭胶囊。硬胶囊可含有例如与填充剂(诸如玉米淀粉)、粘合剂和/或润滑剂(诸如滑石或硬脂酸镁)及稳定剂(适当)混合的颗粒剂形式的活性成分。在软胶囊中，活性成分优选溶解或混悬于适当的液体赋形剂(诸如多脂油、石蜡油或液态聚乙二醇或乙二醇或丙二醇的脂肪酸酯)中，类似地可能添加稳定剂和例如聚乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯类型的去污剂。
其它口服施用形式是例如以常规方式制备的糖浆剂，其例如量出5毫升或10毫升时包含例如呈悬浮形式的和约5％至20％、优选约10％浓度或产生适合单独剂量的类似浓度的活性成分。其它形式还是例如粉状或液体浓缩物以用于制备例如在奶中的奶昔。此类浓缩物还可以单位剂量数量被包装。
可经直肠使用的药物组合物是例如包含活性成分与栓剂基质组合的的栓剂。适当的栓剂基质是例如天然存在的或合成的甘油三酯、石蜡烃、聚乙二醇或高级烷醇。
适用于亲本施用的组合物是呈水溶性形式的活性成分(例如水溶性盐)的水溶液或水性注射混悬剂，其包含增粘物质例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇和/或葡聚糖和适当的稳定剂。活性成分在此还以适当时连同赋形剂的冻干剂的形式存在，并且可在肠胃外施用之前通过添加适当的溶剂溶解。例如，诸如可用于亲本施用的溶液还可用作输注溶液。优选的防腐剂是例如抗氧化剂，诸如抗坏血酸或杀微生物剂，诸如山梨酸或苯甲酸。
软膏剂是包含不超过70％、优选20％-50％水或水相的水包油乳液。脂肪相特别地由烃例如凡士林、石蜡油或硬石蜡组成，其优选包含适当的羟基化合物，诸如脂肪醇或其酯，例如鲸蜡醇或羊毛蜡醇(诸如羊毛脂)以改善水结合力。乳化剂是相应的亲脂性物质，诸如失水山梨糖醇脂肪酸酯(Spans)，例如油酸山梨醇酯和/或失水山梨糖醇异硬脂酸酯。水相的添加剂是例如增湿剂，诸如多元醇，例如甘油、丙二醇、山梨糖醇和/或聚乙二醇，或防腐剂及香味物质。
酊剂和溶液通常包含水性-乙醇性基质，向其混合用于减少蒸发的增湿剂诸如多元醇(例如甘油、二醇和/或聚乙二醇)和再上油物质诸如与低级聚乙二醇一起的脂肪酸酯(即可溶于水性混合物中的亲脂性物质以用乙醇取代从皮肤移除的脂肪物质)，并且如果必要则混合其它赋形剂和添加剂。
本发明还涉及用于治疗上文提及的疾病状态的工艺或方法。所述化合物可就这样或以药物组合物的形式优选以有效针对提及的疾病的量预防性或治疗性施用。在需要此类治疗的温血动物例如人的情况下，所述化合物可特别地以药物组合物的形式使用。在此针对约70kg的体重施用每日剂量约0.1g至约5g、优选0.5g至约2g的本发明的化合物。
附图说明
图1显示用化合物BP14处理的不同肝细胞癌细胞系中的凋亡的诱导。将不同时细胞暴露于指定浓度的BP14持续24小时，然后通过免疫印迹分析裂解的PARP-1和抑凋亡蛋白Mcl-1的水平。检测肌动蛋白的水平以验证等量的蛋白上样。
图2显示用化合物BP14处理的不同肝细胞癌细胞系中的凋亡的诱导。使用荧光物质Ac-DEVD-AMC，测量在用增加剂量的化合物BP14处理的细胞的裂解物中的胱天蛋白酶-3/7的活性。
图3显示用化合物BP14处理24小时的不同肝细胞癌细胞系中的转录的抑制的免疫印迹分析。检测肌动蛋白水平以验证等量蛋白上样。
图4显示2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤对人脐静脉内皮细胞细胞(HUVEC)迁移的影响。使用“内部”软件将迁移的测定计算为图像中不被细胞覆盖的像素的比例。(A)对照细胞；(B)阳性对照(将细胞保持在不含血清的培养基中)，(C)用BP30(100nM)处理的细胞；(D)用BP36(100nM)处理的细胞。
图5显示BP14和BP20的抗血管生成活性。对于管形成测定，将HUVEC在指定剂量的BP14和BP20的存在下接种在基质胶-涂覆的皿上，并且孵育24小时以使得毛细管网形成。
图6显示与不同剂量(纳摩尔浓度浓度)的测试抑制剂共培养4小时的HUVEC表达ELAM-1。数据表达为三个不同实验的平均值和标准偏差。
图7显示BP-14降低肝细胞瘤细胞的细胞存活力并且阻断多种CDK。A，BA-12对人HepG2、PLC、Hep3B和3sp肝细胞瘤细胞的存活力的剂量-依赖效应。B，无细胞提取物中BP-14对CDK1和CDK2活性的抑制。C，在暴露于不同浓度的BP-14持续24小时之后于HepG2和PLC细胞中CDK7活性和CDK9活性的抑制。如通过免疫印迹检测，CDK7活性和CDK9活性分别对应于RNA聚合酶II的丝氨酸5和丝氨酸2磷酸化。肌动蛋白的表达表明蛋白样品的等量上样。c，对照(未处理的细胞)。误差条描绘了至少三个单独实验的SD。
图8显示BP-14干扰HCC细胞的克隆形成和细胞周期进展。A，通过HepG2(左图)和PLC细胞(右图)产生的结晶紫阳性集落的定量评价。用不同浓度的BP-14预处理细胞。B，将HepG2(左)和PLC细胞(右)暴露于BP-14持续24小时和通过BrdU掺入分析DNA合成。C，流式细胞术显示在用不同浓度的BP-14处理24小时后HepG2(左)和PLC细胞(右)的细胞周期分布。细胞DNA含量示于直方图(上图)中，并且细胞定量后在G1、S或G2期中的百分比以棒条描绘(下图)。c，对照(未处理的细胞)。误差条描绘了至少三个单独实验的SD。统计显著性用星号表明(***p<0.005)。
图9显示HCC细胞在暴露于BP-14之后的增殖。HepG2、PLC和Hep3B细胞在用不同浓度的BP-14处理之后的增殖动力学。误差条描绘了至少三个单独实验的SD。
图10显示在HCC细胞中而非原代人肝细胞(PHH)中由BP-14所诱导的凋亡。A，在用不同浓度的BP-14处理HepG2和PLC细胞24小时之后PARP的裂解。B，PARP裂解(上图)和BP-14对PHH存活力的剂量依赖性效应的测定(下图)。包括HepG2细胞的PARP裂解作为阳性对照。肌动蛋白显示为上样对照。c，对照(未处理的细胞)。误差条描绘了至少三个单独实验的SD。
图11显示用BP-14干预异种移植HCC模型。通过皮下注射HepG2和PLC细胞至免疫缺陷SCID小鼠中产生肿瘤。药物干预在荷瘤小鼠中通过每日腹膜内注射BP-14持续17天进行。A，在缺乏化合物(对照)的情况下和在用BP-14干预之后，HepG2-来源和PLC-来源的肿瘤的体积。B，免疫组织化学显示肿瘤切片染色抗-BrdU抗体。插图以较高放大倍数显示BrdU标记。C，BrdU掺入的定量分析。c，对照(未处理的细胞)。误差条描绘了三个单独实验的SD，所述实验以一式四份进行。统计显著性用星号表明(*p<0.05,***p<0.005)。
图12显示BP-14减少DEN-诱导的肝细胞瘤形成。内源性肝癌通过单次DEN注射到14日龄C57BL/6J小鼠中诱导。A，描绘了使用BP-14的治疗时间表的方案。在8个月后(阴影框)，使DEN-诱导的小鼠经受3个循环的药物治疗持续10天(绿框)和在循环期间解除Bp-14持续7天。B，DEN-诱导的肝细胞瘤(对照)和那些用BP-14处理的肝细胞瘤的代表性形态。白环表示癌性肝结节。C，对肝表面的癌性结节的直径打分并以棒条描绘。统计显著性用星号表明(*,p<0.05)。
具体实施方式
执行本发明的实施例
以下实施例用于说明本发明而不限制其范围。
式I化合物的原料是可商购获得的(Sigma-Aldrich，Fluka等)。
将熔点在Boetius阶段测定并修正。1H NMR光谱在CDCl3或DMSO-d6中在300K下在Bruker Avance 300NMR光谱仪(300MHz)上测量，其中TMS作为内标；化学位移以ppm报道，并且偶联常数以Hz报道。质谱通过使用LCQ离子阱质谱仪(Finnigan MAT,San Jose,CA,美国)记录。Merck硅胶Kieselgel 60(230-400目)用于柱色谱。元素分析通过使用EA1108元素分析仪(FisonInstruments)进行；它们的值(C、H、N)在可接受的限值内与计算值一致。四极杆质谱在具有电喷雾电离的Micromass ZMD检测器上测量。
起始2,6-二氯-9-环戊基嘌呤通过Mitsunobu烷基化方法从2,6-二氯嘌呤和环戊醇制备。
1)Shum等Nucleos.Nucleot.20,2001:1067-1078
2)Dreyer等J.Med.Chem.44,2001:524–530
9-环戊基-2,6-二氯-9H-嘌呤的制备。
将2,6-二氯-9H-嘌呤(30.0mmol)、环戊醇(60.0mmol)和三苯基膦(36.0mmol)溶解于无水四氢呋喃(120ml)中并冷却至0℃。在氩气氛下向搅拌的溶液滴加偶氮二甲酸二异丙酯(36.0mmol)，使得温度保持在0℃至20℃之间。将反应混合物在氩气氛下在20℃下再搅拌2小时。然后减压蒸发反应混合物，并将残余物溶解于沸腾甲苯(100ml)中。在冷却至室温之后，使溶液注入少量三苯基氧化膦，并将溶液保持在5℃下24小时。滤掉三苯基氧化膦，并将滤液减压蒸发。将残余物从乙醇结晶，以获得纯9-环戊基-2,6-二氯-9H-嘌呤。产率：56％，mp:118℃至120℃。元素分析：C10H10Cl2N4(257.12)的计算值：C,46.71；H,3.92；N,21.79。实测值：C,46.95；H,3.81；N,21.70。HPLC-MS(ESI+):288.10(99.6％)。1H NMR(DMSO-d6):1.64-1.69(m,2H),1.81-1.96(m,4H),2.09-2.15(m,2H),4.92(qui,J＝7.53,1H,CH),8.82(s,1H,CH)。
C-(6-溴-吡啶-3-基)甲胺的制备
将2-溴-5-甲基-吡啶(70.0mmol)和N-溴琥珀酰亚胺(80.0mmol)溶解于1,2-二氯乙烷(150ml)中，并向该混合物添加2,2′-偶氮二(2-乙基丙腈)(1.50mmol)。将反应混合物在回流下在85℃下加热15分钟，并添加下一部分2,2′-偶氮二(2-甲基丙腈)(1.50mmol)，并将反应混合物在85℃下再加热15分钟。在冷却至室温后，将反应混合物在5℃下保持2小时，并将沉淀物滤掉并用少量1,2-二氯乙烷洗涤。将滤液减压蒸发，并将粗产物用于另一反应步骤而不纯化。将粗2-溴-5-溴甲基-吡啶溶解于氯仿(100ml)中，并添加乌洛托品(70.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。将沉淀物滤掉、用少量氯仿洗涤并空气干燥。将粗乌洛托品盐在浓氢氧化铵(12ml)和水(80ml)的混合物中回流90分钟，并在冷却至室温后，在搅拌下添加40％甲醛(5.0ml)。将沉淀物滤掉、用冰冷水洗涤并在真空干燥器中干燥。将粗产物从乙醇结晶。产率：40％，m.p.105℃至106℃。元素分析：C6H7BrN2(187.04)的计算值：C,38.53；H,3.77；N,14.98。实测值：C,38.22；H,3.72；N,14.71。HPLC-MS(ESI+):188.02(97.2％)。1H NMR(DMSO-d6):4.04(t,J＝5.67,2H,CH2),7.71(d,J＝8.19,1H,ArH),7.95(dd,J＝8.19,J′＝1.95,1H,ArH),8.51(d,J＝1.95,1H,ArH),8.74(s(br),2H,NH2)。
实施例1(4-溴-苄基)-(2-氯-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基)-胺的制备
向9-环戊基-2,6-二氯-9H-嘌呤(7.78mmol)在正丙醇(40ml)和N,N-二异丙基-N-乙胺(23.34mmol)的混合物中的混悬液添加4-溴苄基胺盐酸盐(8.56mmol)。将混悬液在搅拌下在密封管中在氩气氛下在120℃的温度下加热4小时。在冷却至室温后，将反应混合物减压蒸发，并将残余物在水(50ml)与二氯甲烷(50ml)之间分配。将水相用二氯甲烷另外提取两次。将合并的有机相用水和盐水洗涤，并减压蒸发。产率：98％，m.p.:152℃至154℃。元素分析：C17H17ClBrN5(406.71)的计算值：C,50.20；H,4.21；N,17.22。实测值：C,50.00；H,3.99；N,16.95。HPLC-MS(ESI+):408(99.9％)。1H NMR(DMSO-d6):1.64-1.69(m,2H),1.81-1.96(m,4H),2.09-2.15(m,2H),4.59(d,J＝6.72,2H,CH2),4.77(qui,J＝7.05,1H,CH),7.28(d,J＝8.22,2H,ArH),7.49(d,J＝8.22,2H,ArH),8.26(s,1H,CH),8.83(t,J＝6.72,1H,NH)。
实施例2(6-溴-吡啶-3-基甲基)-(2-氯-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基)-胺
向9-环戊基-2,6-二氯-9H-嘌呤(13.6mmol)于正丙醇(60ml)和N,N-二异丙基-N-乙胺(60.0mmol)的混合物中的混悬液添加C-(6-溴-吡啶-3-基)甲胺(15.0mmol)。将混悬液在搅拌下在密封管中在氩气氛下在120℃的温度下加热4小时。在冷却至室温后，将反应混合物在5℃下静置过夜，并将白色固体滤掉并用少量冰冷的异丙醇洗涤。将粗产物在80℃下干燥2小时并最终从乙醇结晶。产率：71％，m.p.：178℃至179℃。元素分析：C16H16ClBrN6(407.70)的计算值：C,47.14；H,3.96；N,20.61。实测值：C,47.35；H,3.88；N,20.48。HPLC-MS(ESI+):409(98.5％)。1H NMR(DMSO-d6):1.64-1.69(m,2H),1.81-1.96(m,4H),2.09-2.15(m,2H),4.61(s(br),2H,CH2),4.77(qui,J＝7.20,1H,CH),7.59(d,J＝8.19,1H,ArH),7.70(d,J＝8.19,1H,ArH),8.26(s,1H,CH),8.38(s,1H,ArH),8.82(s(br),1H,NH)。
实施例3(2-氯-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基)-(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-胺
向9-环戊基-2,6-二氯-9H-嘌呤(4.70mmol)于正丙醇(15ml)和N,N-二异丙基-N-乙胺(9.40mmol)的混合物中的混悬液添加[6-(2-呋喃基)吡啶-3-基]甲胺(5.17mmol)。将混悬物在搅拌下在密封管中在氩气氛下在120℃的温度下加热3小时。在冷却至室温后，将反应混合物减压蒸发并将残余物在水(50ml)与二氯甲烷(50ml)之间分配。将水相用二氯甲烷另外提取两次。将合并的有机相用水和盐水洗涤并浓缩。产率：96％,m.p.：119℃至122℃。元素分析：C20H19ClN6O(394.86)的计算值：C,60.84；H,4.85；N,21.28。实测值：C,60.56；H,4.92；N,21.48。HPLC-MS(ESI+):396(97.6％)。1H NMR(CDCl3):1.76-1.91(m,6H),2.22-2.28(m,2H),4.85-4.92(m,3H,CH,CH2),6.54(d,J＝3.42,1H,ArH),6.59(s(br),1H,NH),7.05(d,J＝3.42,1H,ArH),7.53(d,J＝3.42,1H,ArH),7.64-7.69(m,2H,ArH),7.75(d,J＝6.27,1H,ArH)8.61(s,1H,CH)。
实施例4(2-氯-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基)-(4-呋喃-2-基-苄基)-胺
在氩气氛下，向2-氯-6-(4-溴苄基氨基)-9-环戊基-9H-嘌呤(2.46mmol)、2-呋喃基硼酸(2.70mmol)、磷酸钾三水合物(7.38mmol)和四丁基溴化铵(0.05mmol)于二甲基甲酰胺(10ml)中的混悬液添加二乙酸钯(0.05mmol)。将反应混合物在搅拌下在密封管中在氩气氛下在120℃的温度下加热12小时。在冷却至室温后，将反应混合物倾倒至水(100ml)中，并将所得的混悬液用乙酸乙酯(100ml)提取三次。将合并的有机相用水和盐水洗涤、经硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇(19:1,v/v)。产率：55％，m.p.：135℃至137℃。元素分析：C21H20ClN5O(393.87)的计算值：C,64.04；H,5.12；N,17.78。实测值：C,64.25；H,4.98；N,17.67。HPLC-MS(ESI+)：394(97.4％)。1H NMR(CDCl3)：1.72-1.93(m,6H)，2.22-2.28(m,2H)，4.85-4.92(m,3H,CH,CH2)，6.65(d,J＝3.33,1H,ArH)，7.40(m,2H,ArH)，7.48(t,J＝3.33,1H,ArH)，7.64-7.69(m,3H,ArH,CH)。
实施例5(2-氯-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基)-(4-吡唑-1-基-苄基)-胺
将9-环戊基-2,6-二氯-9H-嘌呤(4.70mmol)溶解于正丙醇(15.0ml)和N,N-二异丙基-N-乙胺(9.40mmol)的混合物中，并向溶液添加1-[4-(1H-吡唑-1-基)]苯基甲胺(1.44mmol)。将反应混合物在密封管中在氩气氛下在100℃下加热1.5小时。在冷却至室温后，将所得的固体沉淀物悬浮在乙醇(20ml)中，并将沉淀物滤掉并用冰冷的乙醇(20ml)洗涤。将粗产物在80℃下干燥2小时并最终从乙醇结晶。产率：72％，m.p.：165℃至167℃。元素分析：C20H19ClN6O(394.86)的计算值：C,60.84；H,4.85；N,21.28。实测值：C,60.56；H,4.92；N,21.48。HPLC-MS(ESI+):394.3(97.6％)。1H NMR(DMSO-d6):1.61-1.71(m,2H),1.80-1.98(m,4H),2.09-2.18(m,2H),4.66(d,J＝5.25,2H,CH2),4.77(qui,J＝7.05,1H,CH),6.51(t,J＝2.16,1H,ArH),7.45(d,J＝8.37,2H,ArH),7.71(d,J＝2.16,1H,ArH),7.77(d,J＝8.37,2H,ArH),8.27(s,1H,CH),8.43(d,J＝2.16,1H,ArH),8.86(t,J＝5.25,1H,NH)。
实施例6(2-氯-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基)-(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-胺
将9-环戊基-2,6-二氯-9H-嘌呤(1.48mmol)溶解于正丙醇(15.0ml)和N,N-二异丙基-N-乙胺(6.0mmol)的混合物中，并向溶液添加(6-噻吩-2-基)吡啶-3-基甲胺二盐酸盐(1.63mmol)。将反应混合物在密封管中在氩气氛下在80℃下加热16小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(30ml)稀释，并将混悬液用二氯甲烷(25ml)提取两次。将合并的有机相用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并减压蒸发。将残余物用于进一步反应而不经纯化。产率：92％,m.p.：111℃至114℃。元素分析：C20H19ClSN6(410.92)的计算值：C,58.46；H,4.66；N,20.45；S,7.80。实测值：C,58.56；H,4.72；N,20.37,S,7.55。HPLC-MS(ESI+):411.3(97.3％)。1H NMR(DMSO-d6):1.61-1.70(m,2H),1.78-1.96(m,4H),2.09-2.16(m,2H),4.64(d,J＝5.37,2H,CH2),4.77(qui,J＝7.20,1H,CH),7.14(t,J＝4.52,1H,ArH),7.59(d,J＝5.01,1H,ArH),7.74(d,J＝5.01,1H,ArH),7.80(d,J＝4.52,1H,ArH),7.85(d,J＝4.52,1H,ArH),8.27(s,1H,CH),8.51(s,1H,ArH),8.87(t,J＝5.37,1H,NH)。
实施例7 N2-(4-氨基-环己基)-N6-(4-溴-苄基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺
将(4-溴-苄基)-(2-氯-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基)-胺(7.36mmol)于反式-1,4-二氨基环己烷(110mmol)混合，并在160℃下在密封管中在氩气氛下加热同时搅拌12小时。在冷却至室温后，将反应混合物在水(50ml)与乙酸乙酯(50ml)之间分配，并将水相用乙酸乙酯(50ml)提取三次。将合并的有机相用水和盐水洗涤，并减压蒸发。将粗产物从乙醇结晶。产率：91％,m.p.:123℃至124℃。1H NMR(DMSO-d6):0.85-1.22(m,4H),1.64-2.04(m,12H)3.29-3.37(m,3H,CH,NH2),3.52(sex,J＝7.11,1H,CH),4.57(s(br),2H,CH2),4.62(qui,1H,J＝7.38,CH),6.02(d,J＝7.89,1H,NH),7.28(d,J＝8.31,2H,ArH),7.46(d,J＝8.31,2H,ArH),7.73(s,1H,CH),7.84(s(br),1H,NH)。
实施例8 N2-(4-氨基-环己基)-N6-(6-溴-吡啶-3-基甲基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺
将良好粉末化的(6-溴-吡啶-3-基甲基)-(2-氯-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基)-胺(7.36mmol)和反式-1,4-二氨基环己烷(110.0mmol)混合并在密封管中在氩气氛下在160℃下加热4小时。在冷却至100℃后，添加水(50ml)至反应混合物，并将所得的混悬液用乙酸乙酯(50ml)提取三次。将合并的有机相用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并减压蒸发。将残余物溶解于乙酸乙酯(10ml)中，并用二乙醚研磨以获得白色晶体块，将所述晶体块滤掉并在80℃下干燥4小时。产率：33％,m.p.：114℃至116℃。元素分析：C22H29BrN8(485.42)的计算值：C,54.43；H,6.02；N,23.08。实测值：C,54.29；H,6.15；N,23.00。HPLC-MS(ESI+):487.3(98.1％)。1H NMR(CDCl3):1.13-1.29(m,4H),1.50(s(br),2H,NH2),1.71-2.22(m,12H),2.75(sep,J＝7.43,1H,CH),3.67(sex,J＝7.52,1H,CH),4.59(d,J＝7.52,1H,NH),4.70(qui,J＝7.20,1H,CH),4.82(d,J＝7.20,2H,CH2),6.21(t,J＝5.25,1H,NH),7.40(d,J＝8.16,1H,ArH),7.55(dd,J＝8.16,J′＝2.4,1H,ArH),8.34(s,1H,NH),8.39(s,1H,CH)。
实施例9 1-[6-(4-溴-苄基氨基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2-基氨基]-2-甲基-丙烷-2-醇
将(4-溴-苄基)-(2-氯-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基)-胺(4.92mmol)、1-氨基-2-甲基丙烷-2-醇(25.00mmol)、N,N-二异丙基-N-乙胺(10.83mmol)和N-甲基吡咯烷酮(5.0ml)的混合物在搅拌下在密封管中在160℃下在氩气氛下加热36小时。在冷却至室温后，将混合物在水(25ml)与乙酸乙酯(25ml)之间分配，并将水相用乙酸乙酯提取两次。将合并的有机相用水、盐水洗涤，并真空浓缩。将残余物用1％盐酸(25ml)处理并用二氯甲烷提取两次。将合并的有机相用硫酸钠干燥并真空浓缩。将粗产物用于进一步反应而不经纯化。在在二氧化硅上柱色谱(氯仿-甲醇9:1,v/v)后获得分析样品。产率：82％,m.p.:108℃至110℃。元素分析：C21H29BrN6O(461.40)的计算值：C,54.67；H,6.34；N,18.21。实测值：C,54.59；H,6.12；N,18.07。HPLC-MS(ESI+):482.3(98.6％)。1H NMR(CDCl3):1.28(s,6H,CH3),1.74-1.90(m,6H),2.05-2.38(m,2H),2.84(d,J＝2.32,2H,CH2),4.75-4.83(m,3H,CH2,CH),5.20(s(br),1H,OH),7.28(d,J＝7.75,2H,ArH),7.45(d,J＝7.75,2H,ArH),7.62(s,1H,CH)。
实施例10 4-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-环己醇
将反式-4-氨基环己烷-1-醇盐酸盐(9.43mmol)悬浮在甲醇(10ml)中，并向混悬液添加甲醇钠(9.43mmol)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟并将氯化钠滤掉。将滤液减压蒸发，并向残余物添加(2-氯-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基)-(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-胺(0.25mmol)和N-甲基吡咯烷酮(1ml)。将反应混合物在160℃下在氩气氛下加热16小时。在冷却至室温后，添加水(10ml)并将所得混悬液用乙酸乙酯(25ml)提取两次。将合并的有机相用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇(9:1)。产率：33％,m.p.:164℃至166℃。元素分析：C26H31N7O2(473.57)的计算值：C,65.94；H,6.60；N,20.70。实测值：C,66.08；H,6.48；N,20.34。HPLC-MS(ESI+):474.4(99.6％)。1H NMR(CDCl3):1.22(q,J＝10.2,2H),1.43(q,J＝10.2,2H),1.72-1.81(m,2H),1.90-2.02(m,6H),2.11-2.25(m,4H),2.86(s(br),1H,OH),3.61-3.76(m,2H),4.64(d,J＝7.68,1H,NH),4.69(qui,J＝7.14,1H,CH),4.79(d,J＝5.43,2H,CH2),6.12(t,J＝5.43,1H,NH),6.52(dd,J＝3.39,J′＝1.77,1H,ArH),7.02(d,J＝3.39,1H,ArH),7.48(s,1H,ArH),7.52(d,J＝3.39,1H,ArH),7.63(d,J＝8.13,1H,ArH),7.73(dd,J＝8.13,J′＝2.07,1H,ArH),8.61(s,1H,CH)。
实施例11 1-{9-环戊基-6-[(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-丙烷-2-醇的制备
将(2-氯-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基)-(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-胺(2.53mmol)、1-氨基-2-甲基丙烷-2-醇(12.66mmol)和N,N-二异丙基-N-乙胺(15.0mmol)的混合物在密封管中在氩气氛下在160℃下加热16小时。在冷却至室温后，将反应混合物溶解于乙酸乙酯(50ml)和甲醇(10ml)的混合物中，并将所得的溶液用水(50ml)洗涤。然后将水相用乙酸乙酯(40ml)提取三次。将合并的有机相用水、盐水洗涤，经无水硫酸铵干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上使用流动相氯仿-甲醇(19:1,v/v)纯化。产率：37％,m.p.：128℃至129℃。元素分析：C24H29N7O2(447.53)的计算值：C,64.41；H,6.53；N,21.91。实测值：C,64.65；H,6.44；N,21.58。HPLC-MS(ESI+):448.4(99.5％)。1HNMR(CDCl3):1.27(s,6H,CH3),1.70-1.91(m,6H),2.20-2.35(m,2H),3.40(d,J＝6.21,2H,CH2),4.69(qui,J＝6.42,1H,CH),4.79(s(br),2H,CH2),5.24(t,J＝6.21,1H,NH),5.61(s(br),1H,OH),6.04(s(br),1H,NH),6.54(t,J＝3.42,1H,ArH),7.03(d,J＝3.42,1H,ArH),7.50-7.54(m,2H,ArH),7.64(d,J＝8.25,1H,ArH),7.74(dd,J＝8.25,J′＝3.42,1H,ArH),8.63(s,1H,CH)。
实施例12 1-[9-环戊基-6-(4-呋喃-2-基-苄基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基]-2-甲基-丙烷-2-醇的制备
在氩气氛下，向1-[6-(4-溴-苄基氨基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2-基氨基]-2-甲基-丙烷-2-醇(3.34mmol)、2-呋喃基硼酸(5.01mmol)、磷酸钾三水合物(13.3mmol)和四丁基溴化铵(0.067mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(15ml)中的混悬液，添加二乙酸钯(0.085mmol)。将反应混合物在密封管中在氩气氛下在85℃下加热4小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(200ml)稀释，并将所得的混悬液用乙酸乙酯(200ml)提取两次。将合并的有机相用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇(19:1,v/v)。产率：80％,m.p.:121℃至123℃。元素分析：C25H30N6O2(446.54)计算值：C,67.24；H,6.77；N,18.82。实测值：C,67.59；H,6.37；N,18.62。HPLC-MS(ESI+):447.4(99.8％)。1H NMR(CDCl3):1.27(s,6H,CH3),1.70-1.91(m,6H),2.20-2.35(m,2H),3.40(d,J＝6.18,2H,CH2),4.70(qui,J＝5.01,1H,CH),4.79(s(br),2H,CH2),5.29(s(br),1H,OH),5.62(t,J＝6.21,1H,NH),7.21-7.63(m,7H,ArH),7.68(s(br),1H,NH),8.63(s,1H,CH)。
实施例13 N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-吡唑-1-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
将良好粉末化的(2-氯-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基)-(4-吡唑-1-基-苄基)-胺(0.63mmol)和反式-1,4-二氨基环己烷(12.69mmol)的混合物在搅拌下在氩气氛下在160℃下加热4小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(50ml)稀释，并将混悬液用乙酸乙酯(50ml)提取两次。将合并的有机相用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱纯化，流动相氯仿-甲醇(19:1,v/v)。
产率：78％,m.p.:186℃至187℃。元素分析：C26H33N9(471.60)的计算值：C,66.22.；H,7.05；N,26.73。实测值：C,66.48；H,7.24；N,16.51。HPLC-MS(ESI+):472.4(99.8％)。1H NMR(DMSO-d6):1.02-1.21(m,4H),1.64-1.2.05(m,12H),2.90-3.15(m,3H,CH,NH2),3.59(sex,J＝5.05,1H,CH),4.58-4.67(m,3H,CH2,CH),6.05(d,J＝7.29,1H,NH),6.51(t,J＝2.28,1H,ArH),7.45(d,J＝8.34,2H,ArH),7.70-7.86(m,4H,ArH),7.95(s(br),1H,NH),8.42(d,J＝7.29,1H,CH),8.63(s,1H,CH)。
实施例14 N6-(2'-氨基-联苯基-4-基甲基)-N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
将N2-(4-氨基-环己基)-N6-(4-溴-苄基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺(0.25mmol)、2-氨基苯基硼酸盐酸盐(0.75mmol)、三苯基膦(0.50mmol)和碳酸钠(1.75mmol)悬浮在二甲氧基乙烷(3.0ml)和水(2.0ml)的混合物中，并在氩气氛下向该混悬液添加双(二亚芐基丙酮)钯(7.50μmol)。将反应混合物在密封管中在氩气氛下在80℃下加热65小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(25ml)稀释，并将所得的混悬液用乙酸乙酯(25ml)提取两次。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-浓氢氧化铵(9:1:0.05)。产率：85％,m.p.:168℃至170℃。元素分析：C29H36N8(496.65)计算值：C,70.13.；H,7.31；N,22.56。实测值：C,70.32；H,7.28；N,22.46。HPLC-MS(ESI+):497.4(99.9％)。1H NMR(DMSO-d6):1.14-1.26(m,4H),1.72-1.82(m,2H),1.83-1.96(m,10H),1.98-2.22(m,4H),2.71(sex,J＝6.72,1H,CH),3.69-3.80(m,3H,NH2,CH),4.66(d,J＝7.71,1H,NH),4.74(qui,J＝7.08,1H,CH),4.81(d,J＝5.43,2H,CH2),6.15(s(br),1H,NH),6.76(d,J＝7.41,1H,ArH),6.82(t,J＝7.41,1H,ArH),7.11(d,J＝7.41,1H,ArH),7.15(t,J＝7.41,1H,ArH),7.38-7.46(m,5H,ArH,CH)。
实施例15 N2-(4-氨基-环己基)-N6-[6-(2-氨基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
将N2-(4-氨基-环己基)-N6-(6-溴-吡啶-3-基甲基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺(0.25mmol)、2-氨基苯基硼酸盐酸盐(0.75mmol)、三苯基膦(0.50mmol)和碳酸钠(1.75mmol)悬浮在1,2-二甲氧基乙烷(3.0ml)和水(2.0ml)的混合物中，并在氩气氛下向该混悬液添加双(二亚芐基丙酮)钯(7.50μmol)。将反应混合物在密封管中在氩气氛下在120℃下加热18小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(25ml)稀释，并将所得混悬液用乙酸乙酯(25ml)提取两次。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-浓氢氧化铵(8:2:0.05)。产率：56％,m.p.:173℃至175℃。元素分析：C28H35N9(497.64)的计算值：C,67.58.；H,7.09；N,25.33。实测值：C,67.69；H,7.19；N,25.02。HPLC-MS(ESI+):498.4(99.9％)。1HNMR(CDCl3):1.14-1.34(m,4H),1.71-2.05(m,12H),2.10-2.23(m,4H,2xNH2),2.75(sep,J＝7.32,1H,CH),3.73(sex,J＝7.52,1H,CH),4.59(d,J＝7.52,1H,NH),4.70(qui,J＝7.20,1H,CH),4.82(d,J＝7.20,2H,CH2),5.92(t,J＝7.20,1H,NH),6.75-6.81(m,2H,ArH),7.20(t,J＝7.89,1H,ArH),7.47-.751(m,2H,ArH),7.61(d,J＝8.34,1H,ArH),7.79(d,J＝8.34,1H,ArH),8.63(s,1H,CH)。
实施例16 N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
将良好粉末化的(2-氯-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基)-(6-噻吩-2-基-吡啶-3-基甲基)-胺(0.75mmol)和反式-1,4-二氨基环己烷(10.95mmol)的混合物在密封管中在氩气氛下在160℃下加热3小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(50ml)稀释，并将所得混悬液用乙酸乙酯(50ml)提取两次。将合并的有机相用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-浓氢氧化铵(9:1:0.05)。产率：88％,m.p.:151℃至153℃。元素分析：C26H34N8S(497.64)计算值：C,63.64.；H,6.98；N,22.84；S,6.53。实测值：C,63.72；H,7.08；N,23.02；S,6.28。HPLC-MS(ESI+):489.4(99.9％)。1H NMR(DMSO-d6):1.04-1.17(m,4H),1.64-2.05(m,12H),3.25-3.38(m,3H,CH,NH2),3.54(sex,J＝7.83,1H,CH),4.59-4.65(m,3H,CH2,CH),6.09(d,J＝7.83,1H,NH),7.13(t,J＝4.05,1H,ArH),7.58(d,J＝4.05,1H,ArH),7.71-.7.84(m,4H,ArH),7.90(s(br),1H,NH),8.51(s,1H,CH)。
实施例17 N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
方法A
将良好粉末化的(2-氯-9-环戊基-9H-嘌呤-6-基)-(6-呋喃-2-基-吡啶-3-基甲基)-胺(1.27mmol)和反式-1,4-二氨基环己烷(19.05mmol)的混合物在密封管中在氩气氛下在160℃下加热4小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(50ml)稀释，并将所得的混悬液用乙酸乙酯(50ml)提取两次。将合并的有机相用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-浓氢氧化铵(9:1:0.05)。产率：89％,m.p.:184℃至186℃。元素分析：C26H32N8O(472.59)的计算值：C,66.08.；H,6.83；N,23.71。实测值：C,66.32；H,6.59；N,23.99。HPLC-MS(ESI+):473.5(98.6％)。
方法B
将N2-(4-氨基-环己基)-N6-(6-溴-吡啶-3-基甲基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺(0.41mmol)、2-呋喃基硼酸(1.24mmol)、三苯基膦(0.25mmol)和碳酸钠(1.70mmol)悬浮在1,2-二甲氧基乙烷(3.0ml)和水(2.0ml)的混合物中，并在氩气氛下向该混悬液添加双(二亚芐基丙酮)钯(12.0μmol)。将反应混合物在密封管中在氩气氛下在120℃下加热6小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(40ml)稀释，并将所得混悬液用乙酸乙酯(50ml)提取两次。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-浓氢氧化铵(9:1:0.05)。产率：78％,m.p.:184℃至186℃。元素分析：C26H32N8O(472.59)的计算值：C,66.08.；H,6.83；N,23.71。实测值：C,66.25；H,7.03；N,23.54。HPLC-MS(ESI+):473.5(99.3％)。
方法C
在氩气氛下，向N2-(4-氨基-环己基)-N6-(6-溴-吡啶-3-基甲基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺(0.21mmol)、2-呋喃基硼酸(0.31mmol)、磷酸钾三水合物(0.80mmol)和四丁基溴化铵(0.003mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(5.0ml)中的混悬液，添加二乙酸钯(2.5μmol)。将混悬液在搅拌下在密封管中在120℃下在氩气氛下加热4小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(20ml)稀释，并将所得的混悬液用乙酸乙酯(25ml)提取两次。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-浓氢氧化铵(9:1:0.05)。产率：81％,m.p.:180℃至183℃。元素分析：C26H32N8O(472.59)的计算值：C,66.08.；H,6.83；N,23.71。实测值：C,66.18；H,6.59；N,23.88。HPLC-MS(ESI+):473.5(99.8％)。1H NMR(CDCl3):1.12-1.28(m,4H),1.71-2.15(m,12H),2.60-2.68(m,3H,CH,NH2),3.68(sex,J＝10.02,1H,CH),4.65-4.73(m,4H,CH,CH2,NH),6.50(t,J＝3.42,1H,ArH),6.62(s(br),1H,NH),7.00(s,1H,ArH),7.41-7.69(m,4H,ArH),8.57(s,1H,CH)。
实施例18 N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
将N2-(4-氨基-环己基)-N6-(6-溴-吡啶-3-基甲基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺(0.41mmol)、2-甲氧基苯基硼酸(1.24mmol)、三苯基膦(0.25mmol)和碳酸钠(1.70mmol)悬浮在1,2-二甲氧基乙烷(3.0ml)和水(2.0ml)的混合物中，并在氩气氛下向该混悬液添加双(二亚芐基丙酮)钯(12.0μmol)。将反应混合物在密封管中在氩气氛下在120℃下加热3小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(25ml)稀释，并将所得的混悬液用乙酸乙酯(25ml)提取两次。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-浓氢氧化铵(9:1:0.05)。产率：85％,m.p.:184℃至186℃。
元素分析：C29H36N8O(512.65)的计算值：C,67.94.；H,7.08；N,21.86。实测值：C,67.78；H,7.01；N,21.59。HPLC-MS(ESI+):513.5(99.6％)。1H NMR(CDCl3):1.14-1.34(m,4H),1.71-2.22(m,14H),2.72(sep,J＝5.87,1H,CH),3.75(sex,J＝6.25,1H,CH),3.85(s,3H,CH3),4.61(d,J＝5.87,1H,NH),4.69(qui,J＝6.87,1H,CH),4.82(d,J＝7.20,2H,CH2),6.00(s(br),J＝7.20,1H,NH),7.00(d,J＝8.22,1H,ArH),7.09(t,J＝7.32,1H,ArH),7.35(t,J＝7.32,1H,ArH),7.49(s,1H,ArH),7.70-7.74(m,3H,ArH),8.72(s,1H,CH)。
实施例19 N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(2′-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
在氩气氛下，向N2-(4-氨基-环己基)-N6-(4-溴-苄基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺(0.25mmol)、2-甲氧基苯基硼酸(0.38mmol)、磷酸钾三水合物(1.00mmol)和四丁基溴化铵(0.005mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(7.0ml)中的混悬液添加二乙酸钯(2.5μmol)。将混悬液在搅拌下在密封管中在氩气氛下在100℃下加热20小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(25ml)稀释并将所得混悬液用乙酸乙酯(25ml)提取两次。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-浓氢氧化铵(9:1:0.05)。产率：88％,m.p.:178℃至180℃。元素分析：C30H37N7O(511.66)的计算值：C,70.42.；H,7.29；N,19.16。实测值：C,70.58；H,7.10；N,19.45。HPLC-MS(ESI+):512.4(99.8％)。1H NMR(CDCl3):1H NMR(CDCl3):1.14-1.34(m,4H),1.71-2.22(m,14H),2.74(sep,J＝6.33,1H,CH),3.78(sex,J＝7.05,1H,CH),4.00(s,3H,CH3),4.59(d,J＝5.87,1H,NH),4.71(qui,J＝6.87,1H,CH),4.79(d,J＝7.20,2H,CH2),6.12(s(br),J＝7.42,1H,NH),7.05(d,J＝8.05,1H,ArH),7.09(t,J＝8.05,1H,ArH),7.32(t,J＝8.05,1H,ArH),7.49(d,J＝8.05,1H,ArH),7.38-7.46(m,4H,ArH),8.65(s,1H,CH)。
实施例20 N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
在氩气氛下，向N2-(4-氨基-环己基)-N6-(4-溴-苄基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺(0.25mmol)、3-呋喃基硼酸(0.38mmol)、磷酸钾三水合物(1.00mmol)和四丁基溴化铵(0.005mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(7.0ml)中的混悬液添加二乙酸钯(2.5μmol)。将混悬液在搅拌下在密封管中在氩气氛下在100℃下加热20小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(25ml)稀释，并将所得混悬液用乙酸乙酯(25ml)提取两次。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-浓氢氧化铵(9:1:0.05)。产率：94％,m.p.:154℃至156℃。元素分析：C27H33N7O(471.60)的计算值：C,68.76.；H,7.05；N,20.79。实测值：C,68.52；H,7.16N,20.49。HPLC-MS(ESI+):472.4(97.8％)。1H NMR(DMSO-d6):1.04-1.17(m,4H),1.64-2.05(m,12H),3.15-3.19(m,3H,CH,NH2),3.58(sex,J＝7.32,1H,CH),4.58-4.63(m,3H,CH,CH2),6.05(d,J＝7.32,1H,NH),6.91(s,1H,ArH),7.34(d,J＝7.92,2H,ArH),7.51(d,J＝7.92,2H,ArH),7.70-7.73(m,2H,ArH),7.78(s(br),1H,NH),8.12(s,1H,CH)。
实施例21 N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-[6-(2-羟基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
向N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-[6-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺(0.48mmol)于二氯甲烷(10ml)中的溶液，在搅拌下在室温下缓慢添加于二氯甲烷(10ml)中的三溴化硼(2.40mmol)溶液。将混合物再搅拌18小时，然后滴加甲醇(20ml)。将混合物减压蒸发，并将残余物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-氢氧化铵(4:1:0.025)。产率：86％,m.p.:202℃至203℃。元素分析：C28H34N8O(498.62)的计算值：C,67.45.；H,6.87；N,22.47。实测值：C,67.28；H,7.11N,22.41。HPLC-MS(ESI+):499.5(97.8％)。1HNMR(CDCl3):1.16-1.40(m,4H),1.71-2.22(m,12H),2.49(s(br),2H,NH2),2.80(sep,J＝5.31,1H,CH),3.62(sex,J＝7.25,1H,CH),4.61(d,J＝7.77,1H,NH),4.69(qui,J＝7.17,1H,CH),4.82(d,J＝5.43,2H,CH2),6.13(s(br),1H,NH),6.91(t,J＝7.38,1H,ArH),7.02(d,J＝8.19,1H,ArH),7.29(t,J＝7.38,1H,ArH),7.50(s,1H,ArH),7.78(d,J＝8.19,1H,ArH),7.82-7.86(m,2H,ArH),8.54(s,1H,CH)。
实施例22 N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(2′-羟基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
向N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(2′-甲氧基-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺(0.48mmol)于二氯甲烷(10ml)中的溶液，在搅拌下在室温下缓慢添加于二氯甲烷(10ml)中的三溴化硼(2.40mmol)溶液。将混合物再搅拌18小时，然后滴加甲醇(20ml)。减压蒸发混合物并将残余物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-氢氧化铵(4:1:0.025)。产率：95％,m.p.:168℃至170℃。元素分析：C29H35N7O(497.63)的计算值：C,69.99.；H,7.09；N,19.70。实测值：C,69.68；H,7.23N,19.57。HPLC-MS(ESI+):498.5(99.9％)。1H NMR(CDCl3):1.16-1.40(m,4H),1.71-2.22(m,12H),2.52(s(br),2H,NH2),2.76(sep,J＝5.43,1H,CH),3.67(sex,J＝7.41,1H,CH),4.59(d,J＝7.25,1H,NH),4.72(qui,J＝7.00,1H,CH),4.79(d,J＝5.63,2H,CH2),6.10(s(br),1H,NH),7.10(t,J＝7.43,1H,ArH),7.16(d,J＝8.04,1H,ArH),7.24(t,J＝7.43,1H,ArH),7.48-7.66(m,4H,ArH),8.63(s,1H,CH)。
实施例23 N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-[6-(3-氟-苯基)-吡啶-3-基甲基]-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
将N2-(4-氨基-环己基)-N6-(6-溴-吡啶-3-基甲基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺(0.41mmol)、3-氟苯基硼酸(1.24mmol)、三苯基膦(0.25mmol)和碳酸钠(1.70mmol)悬浮在1,2-二甲氧基乙烷(3.0ml)和水(2.0ml)的混合物中，并在氩气氛下向该混悬液添加双(二亚芐基丙酮)钯(12.0μmol)。将反应混合物在密封管中在氩气氛下在120℃下加热18小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(25ml)稀释，并将所得混悬液用乙酸乙酯(25ml)提取两次。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-浓氢氧化铵(9:1:0.05)。产率：92％,m.p.:121℃至122℃。
元素分析：C28H33FN8O(500.61)的计算值：C,67.18.；H,6.64；N,22.38。实测值：C,67.41；H,6.69；N,22.09。HPLC-MS(ESI+):501.4(99.5％)。1H NMR(CDCl3):1.12-1.42(m,4H),1.71-2.21(m,12H),2.81(sex,J＝5.87,1H,CH),3.12(s(br),2H,NH2),3.73(sex,J＝7.44,1H,CH),4.62-4.72(m,2H,CH,NH),4.81(d,J＝5.77,1H,CH2),6.33(t,J＝5.77,1H,NH),7.12(t,J＝8.25,1H,ArH),7.38-7.44(m,2H,ArH),7.61-7.77(m,4H,ArH),8.72(s,1H,CH)。
实施例24 N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-噻吩-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
将N2-(4-氨基-环己基)-N6-(4-溴-苄基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺(0.50mmol)、噻吩-2-硼酸(1.50mmol)、三苯基膦(0.25mmol)和碳酸钠(1.70mmol)悬浮在1,2-二甲氧基乙烷(3.0ml)和水(2.0ml)的混合物中，并在氩气氛下向该混悬液添加双(二亚芐基丙酮)钯(15.0μmol)。将反应混合物在密封管中在氩气氛下在120℃下加热48小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(25ml)稀释，并将所得的混悬液用乙酸乙酯(25ml)提取两次。将合并的有机相用水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-浓氢氧化铵(9:1:0.05)。产率：71％,m.p.:225℃至226℃。元素分析：C27H33N7S(487.66)计算值：C,66.50；H,6.82；N,20.11；S,6.58。实测值：C,66.58；H,6.51；N,20.35；S,6.41。HPLC-MS(ESI+):488.5(99.8％)。1H NMR(CDCl3):1.20-1.28(m,4H),1.61-2.22(m,14H),2.71(sep,J＝5.52,1H,CH),3.72(sex,J＝7.44,1H,CH),4.61(d,J＝7.44,1H,NH),4.71(qui,J＝6.36,1H,CH),4.78(d,J＝5.25,2H,CH2),5.93(s(br),1H,NH),7.08(t,J＝4.50,1H,ArH),7.30(d,J＝4.50,1H,ArH),7.38(d,J＝7.95,2H,ArH),7.47(d,J＝4.50,1H,ArH),7.57(d,J＝7.95,2H,ArH),8.63(s,1H,CH)。
实施例25 N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(4-呋喃-2-基-苄基)-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
在氩气氛下，向N2-(4-氨基-环己基)-N6-(4-溴-苄基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺(0.50mmol)、2-呋喃基硼酸(0.0.75mmol)、磷酸钾三水合物(2.00mmol)和四丁基溴化铵(0.01mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(10.0ml)中的混悬液，添加二乙酸钯(2.5μmol)。将混悬液在搅拌下在密封管中在氩气氛下在80℃下加热6小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(50ml)稀释，并将白色沉淀滤掉并用水(20ml)洗涤。将粗产物在真空干燥器中干燥24小时，并最终通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-浓氢氧化铵(9:1:0.05)。产率:87％,m.p.:157℃至159℃。元素分析：C27H33N7O(471.60)的计算值：C,68.76.；H,7.05；N,20.79。实测值：C,68.81；H,7.22N,20.51。HPLC-MS(ESI+):472.4(99.8％)。1H NMR(DMSO-d6):1.04-1.17(m,4H),1.64-2.05(m,12H),2.65-2.72(m,3H,CH,NH2),3.58(sex,J＝7.55,1H,CH),4.58-4.63(m,3H,CH,CH2),6.04(d,J＝7.55,1H,NH),7.28(d,J＝7.89,2H,ArH),7.38(d,J＝5.95,1H,ArH),7.46(d,J＝7.89,2H,ArH),7.61(d,J＝5.95,1H,ArH),7.70-7.73(m,2H,ArH,NH),7.95(s,1H,CH)。
实施例26 N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
在氩气氛下，向N2-(4-氨基-环己基)-N6-(4-溴-苄基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺(0.50mmol)、噻吩-3-硼酸(1.50mmol)、三苯基膦(0.25mmol)、碳酸钠(2.0mmol)于1,2-二甲氧基乙烷(3.0ml)和水(2.0ml)的混合物中的混悬液添加双(二亚芐基丙酮)钯(15μmol)。将混悬液在搅拌下在密封管中在氩气氛下在120℃下加热48小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(50ml)稀释，并将混悬液用乙酸乙酯(25ml)提取两次。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将残余物通过该柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-浓氢氧化铵(9:1:0.05)。产率：71％,m.p.:114℃至118℃。元素分析：C27H33N7S(487.66)的计算值：C,66.50.；H,6.82；N,20.11；S,6.58。实测值：C,66.49；H,7.06N,20.39；S,6.32。HPLC-MS(ESI+):488.4(99.9％)。1H NMR(DMSO-d6):1.07-1.22(m,4H),1.64-2.04(m,12H),2.62-2.75(m),3H,CH,NH2),3.58(sex,J＝7.25,1H,CH),4.60-4.65(m,3H,CH,CH2),6.02(d,J＝7.20,1H,NH),7.37(d,J＝7.71,2H,ArH),7.50(d,J＝4.83,1H,ArH),7.61(d,J＝7.71,2H,ArH),7.72-7.78(m,3H,ArH,NH),8.32(s,1H,CH)。
实施例27 N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(3′-氟-联苯基-4-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
在氩气氛下，向N2-(4-氨基-环己基)-N6-(4-溴-苄基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺(0.50mmol)、3-氟苯基硼酸(1.50mmol)、三苯基膦(0.25mmol)、碳酸钠(2.0mmol)于1,2-二甲氧基乙烷(3.0ml)和水(2.0ml)的混合物中的混悬液添加双(二亚芐基丙酮)钯(15.0μmol)。将混悬液在搅拌下在密封管中在氩气氛下在120℃下加热65小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(25ml)稀释并将混悬液用乙酸乙酯(25ml)提取两次。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将残余物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-浓氢氧化铵(9:1:0.05)。产率：75％,m.p.:146℃至148℃。元素分析：C29H34FN7(499.63)的计算值：C,69.71.；H,6.86；N,19.62。实测值：C,69.95；H,7.12；N,19.45。HPLC-MS(ESI+):500.4(99.9％)。1H NMR(DMSO-d6):1.02-1.21(m,4H),1.61-2.06(m,12H),2.65-2.72(m,3H,CH,NH2),3.59(sex,J＝7.19,1H,CH),4.60-.466(m,3H,CH2,CH),6.01(d,J＝6.60,1H,NH),7.12-7.18(m,1H,ArH),7.42-7.48(m,5H,ArH),7.61(d,J＝8.01,2H,ArH),7.73(s,1H,CH),7.86(s(br),1H,NH)。
实施例28 N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-噻吩-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
将N2-(4-氨基-环己基)-N6-(6-溴-吡啶-3-基甲基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺(0.41mmol)、3-噻吩基硼酸(1.24mmol)、三苯基膦(0.25mmol)和碳酸钠(1.70mmol)悬浮于1,2-二甲氧基乙烷(3.0ml)和水(2.0ml)的混合物中，并在氩气氛下向该混悬液添加双(二亚芐基丙酮)钯(12.0μmol)。将反应混合物在密封管中在氩气氛下在120℃下加热6小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(40ml)稀释并将所得混悬液用乙酸乙酯(50ml)提取两次。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-浓氢氧化铵(9:1:0.05)。产率：68％,m.p.:139℃至140℃。元素分析：C26H34N8S(497.64)的计算值：C,63.64.；H,6.98；N,22.84；S,6.53。实测值：C,63.62；H,6.78；N,22.59；S,6.76。HPLC-MS(ESI+):498.4(98.9％)。1H NMR(DMSO-d6):1.04-1.17(m,4H),1.64-2.05(m,12H),3.25-3.38(m,3H,CH,NH2),3.54(sex,J＝7.56,1H,CH),4.59-4.65(m,3H,CH2,CH),6.09(d,J＝7.56,1H,NH),7.11(s,J＝4.12,1H,ArH),7.62(d,J＝4.05,1H,ArH),7.72-.7.82(m,4H,ArH),7.90(s(br),1H,NH),8.53(s,1H,CH)。
实施例29 N2-(4-氨基-环己基)-9-环戊基-N6-(6-呋喃-3-基-吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-2,6-二胺的制备
在氩气氛下，向N2-(4-氨基-环己基)-N6-(6-溴-吡啶-3-基甲基)-9-环戊基-9H-嘌呤-2,6-二胺(0.21mmol)、3-呋喃基硼酸(0.31mmol)、磷酸钾三水合物(0.80mmol)和四丁基溴化铵(0.003mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(5.0ml)中的混悬液添加二乙酸钯(2.5μmol)。将混悬液在搅拌下在密封管中在氩气氛下在120℃下加热4小时。在冷却至室温后，将反应混合物用水(20ml)稀释，并将所得混悬液用乙酸乙酯(25ml)提取两次。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压蒸发。将粗产物通过柱色谱在二氧化硅上纯化，流动相氯仿-甲醇-浓氢氧化铵(9:1:0.05)。产率：56％,m.p.:165℃至167℃。C26H32N8O(472.59)的计算值：C,66.08.；H,6.83；N,23.71。实测值：C,66.01；H,6.93；N,23.51。HPLC-MS(ESI+)：473.26(98.6％)。1H NMR(CDCl3):1.12-1.28(m,4H),1.71-2.15(m,12H),2.60-2.68(m,3H,CH,NH2),3.68(sex,J＝10.00,1H,CH),4.65-4.73(m,4H,CH,CH2,NH),6.50(t,J＝3.42,1H,ArH),6.62(s(br),1H,NH),6.91(s,1H,ArH),7.00(s,1H,ArH),7.61-7.73(m,4H,ArH),8.57(s,1H,CH)。
表1：通过实施例2、实施例17和实施例21的方法制备的化合物。
a)溶液：MeOH p.a.+HCOOH；b)溶液：MeOH p.a.+H2O+NH3
实施例30新型化合物的体外细胞毒性活性
所述化合物的细胞毒性是决定它们的体内抗癌作用的主要性质。用作细胞毒性测定基础的参数之一是活细胞的代谢活性。例如，使用(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四氮唑(MTT)的微量滴定测定广泛用于定量细胞增殖和细胞毒性。例如，该测定用于药物筛选程序和药敏试验中。因为仅代谢活性活细胞减少了MTT以对应紫色甲瓒染料，所以这些测定仅检测活细胞。减少的MTT的量对应于培养物中的活细胞的数目。
我们一直使用以下细胞系：将HUH-7和PLC/PRF/5细胞系保持在补充有10％胎牛血清、青霉素(100U/ml)和链霉素(100μg/ml)的DMEM中。将独特的HCC-1.2(3p)和HCC-1.1(3sp)细胞系(Zilj等,2009,Future Oncol,5(8):1169-79)及Hep3B细胞在补充有10％胎牛血清、青霉素(100U/ml)和链霉素(100μg/ml)的RPMI中培养。将HepG2细胞系保持在补充有10％胎牛血清、丙酮酸钠(0.11g/l)、青霉素(100U/ml)和链霉素(100μg/ml)的EMEM中。将所有细胞系在37℃下在5％CO2中培养。对于细胞毒性测定，将3000个细胞(10000个细胞，在HepG2细胞系的情况下)接种到96孔板的每个孔中，并在第二天以各种浓度一式三份添加测试的化合物。药物添加之后三天，将MTT原液(5mg/ml)添加至每个孔中并孵育4小时。在该孵育时期后，将产生的甲臜用DMSO溶解，并在570nm下用协同H4混合多模微板读取仪测量最终吸光度。EC50值，对50％的肿瘤细胞致死的药物浓度，从获得的剂量响应曲线计算。
对一组不同组织发生来源的细胞系，测试新型化合物的细胞毒性。在测试的所有肝癌肿瘤细胞系中发现了显著的活性(例如参见表2)。值得注意的是，还在携带细胞周期相关蛋白(如Hep3B、PLC-PRF-5、HepG2、HUH-7、AKH3p、AKH3sp)各种突变或缺失的细胞系中发现了新型衍生物的较高效力(Puisieux等,1993,FASEB J.Nov；7(14):1407-13)。其表明这些物质在具有各种状况的肿瘤抑制子和细胞周期基因，即p53、Rb等的肿瘤中应同等有效。
表2：不同肝细胞癌细胞系中所选的新型取代的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤的体外抗增殖活性。(CR8是[[9-(1-甲基乙基)-6-[[[4-(2-吡啶基)苯基]甲基]氨基]-9H-嘌呤-2-基]氨基]-1-丁醇)
n.a.：未分析
表3：不同肝细胞癌细胞系中参考分子的体外抗增殖活性
实施例31新型化合物的激酶抑制活性
CDK2/细胞周期蛋白E激酶在Sf9昆虫细胞中经由昆虫病毒感染产生并在NiNTA柱(Qiagen)上纯化。CDK5/p35、CDK7细胞周期蛋白H/MAT1和CDK9/细胞周期蛋白T1购自ProQinase GmbH。激酶反应用1mg/mL组蛋白H1(对于CDK2和CDK5)或(YSPTSPS)2KK肽(对于CDK7和CDK9)在15/0.15/1.5/1.5μM ATP(对于CDK2/CDK5/CDK7CDK9)、0.05μCi[γ-33P]ATP和测试化合物的存在下在10μL的最终体积中测定，所有物质均在反应缓冲液(60mMHEPES-NaOH，pH 7.5，3mM MgCl2，3mM MnCl2，3μM原钒酸钠，1.2mM DTT，2.5μg/50μl PEG20.000)中。通过添加5μL的3％H3PO4水溶液终止反应。将等分试样滴到P-81磷酸纤维素(Whatman)上、用0.5％H3PO4水溶液洗涤3次，并最后风干。使用数字图像分析仪FLA-7000(Fujifilm)定量激酶抑制，并将其表达为激酶的残余活性或IC50(将CDK降低50％所需的测试化合物浓度)。
如表4和表5中所示，所有化合物不仅有效抑制纳摩尔浓度范围内的CDK1和CDK2，而且还对其它重要生物学过程中涉及的其它CDK展现出强的活性。转录CDK7/9的抑制导致与凋亡相关的短半衰期蛋白(Mcl-1,XIAP)的下调，其已经显示对于癌症细胞、特别是引起多发性骨髓瘤和慢性淋巴细胞性白血病的癌症细胞的存活很重要(Chen等,Blood.2005Oct 1；106(7):2513-9；MacCallum等,Cancer Res.2005Jun 15；65(12):5399-407；Manohar等,Leuk Res.2011Jun；35(6):821-30)。CDK5，目前已知是一种神经元过程的调控子，也在内皮细胞迁移和管形成(细胞血管生成的两个基础步骤)的调控起到重要作用(Liebl等,J Biol Chem.2010年11月，12；85(46):35932-43)。因此我们研究了最有效化合物对所有CDK的抑制活性及它们对转录和血管生成的作用。
表4：所选的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤以IC50表示的激酶抑制活性。
表5：所选的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤以激酶CDK5/7/9的残余活性表示的激酶抑制活性。
实施例32新型2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤的一步细胞胱天蛋白酶-3/7活性测定
新型化合物的促凋亡性质的测量基于胱天蛋白酶具体是胱天蛋白酶-3/7的酶促活性的定量。根据Carrasco等(2003，BioTechniques，34(5)：1064-67)测量细胞胱天蛋白酶-3/7的活性。简而言之，将Hep3B和PLC/PRF/5细胞以10000个细胞/孔密度在96孔板中孵育过夜。第二天，添加适当的浓度的所述化合物，并将细胞孵育24小时。在孵育后，将3x胱天蛋白酶-3/7测定缓冲液(150mMHEPES pH 7.4，450mM NaCl，150mM KCl，30mM MgCl2，1.2mM EGTA，1.5％Nonidet P40，0.3％CHAPS，30％蔗糖，30mM DTT，3mM PMSF)以及作为底物的150μM Ac-DEVD-AMC(Sigma-Aldrich)，添加至各孔中，并将所述板在37℃下在室温下孵育。在6小时后使用Fluoroskan Ascent微板读取仪(Labsystems)在346nm/442nm(激发/发射)下测量胱天蛋白酶-3/7活性。
用2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤衍生物处理的Hep3B(表6)和PLC/PRF/5细胞(表7)中的基于荧光测定的胱天蛋白酶-3/7活性测定反映了在中等纳摩尔浓度范围内胱天蛋白酶的有效剂量依赖性激活。
表6：新型化合物处理后的Hep3B细胞中的相对胱天蛋白酶-3/7活性。
表7：新型化合物处理后的PLC/PRF/5细胞中的相对胱天蛋白酶-3/7活性。
实施例33 2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤BP14对细胞凋亡的影响
BP14的促凋亡性质的测量基于胱天蛋白酶-3/7的酶促活性的定量。对于胱天蛋白酶测定，通过离心收集经处理的细胞，并将其在提取缓冲液(10mM KCl，5mM Hepes，1mM EDTA，1mM EGTA，0.2％CHAPS，蛋白酶抑制剂，pH 7.4)中在冰上匀质化20分钟。将匀浆通过在4℃下10,000g离心20分钟澄清，然后将蛋白质通过Bradford法定量，并稀释至相同浓度。然后将裂解物与作为底物的100μM Ac-DEVD-AMC(Sigma-Aldrich)一起在测定缓冲液(25mM PIPES，2mM EGTA，2mM MgCl2，5mM DTT，pH 7.3)中孵育5小时。使用FluoroskanAscent微板读取仪(Labsystems，Helsinki，芬兰)在346nm/442nm(激发/发射)处测量产物的荧光。
化合物BP14强烈诱导胱天蛋白酶-3/7在Hep3B癌细胞中的活性；在24小时处理后，与未处理的对照相比在测定中观察到在3xIC50浓度处的二十倍的增加。BP14对胱天蛋白酶激活的影响还在其它肝细胞癌细胞系中测定(参见图2)。
BP14对细胞凋亡的影响通过所选凋亡蛋白的免疫印迹分析补充。对于免疫印迹，将细胞用橡胶淀帚脱离并用冰冷PBS洗涤三次，并在含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂(Sigma-Aldrich，美国)的混合物的缓冲液(50mM Tris，pH 7,4，250mMNaCl，5mM EDTA，50mM NaF，1mM Na3VO4，1％Nonidet P40)中裂解。将20μg总蛋白通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离并转移至硝基纤维素膜上。将膜在PBS中的5％奶和0.1％Tween 20阻断并利用针对PARP-1(克隆F-2；Santa Cruz Biotechnology，美国)、Mcl-1(S-19；Santa Cruz Biotechnology，美国)和β-肌动蛋白(C-4，Santa Cruz Biotechnology，美国)的特异性抗体探测过夜。将所有一级抗体于含有5％奶粉、0.1％Tween 20的PBS中稀释。过氧化物酶缀合的兔抗小鼠免疫球蛋白或猪抗兔免疫球蛋白抗血清(DAKO，丹麦)用作二级抗体并用ECL试剂(Amersham-Pharmacia，Little Chalfont，UK)显现。
监测PARP-1(即胱天蛋白酶-3的核靶)的裂解确认了以上结果。在细胞暴露至BP14之后，在89kDa处出现胱天蛋白酶-3-裂解的PARP-1片段与其全长形式的减少相关(图1)，并且在经处理的Hep3B细胞和AHK3p细胞中显著观察到。另一方面，在用高达3xIC50(μM)浓度的BP14处理HUH-7细胞之后，没有观察到PARP-1的蛋白水平的作用。还从测定抗凋亡蛋白Mcl-1的水平可明显看出凋亡的激活，其显示Hep3B、PLC/PRF/5和AKH3p细胞系中大剂量依赖性降低。
实施例34肝癌癌症细胞中肿瘤抑制子p53的诱导
所述化合物的较强抗癌活性通过其对肿瘤抑制子p53的稳定性和活性的正面影响而增强。为了测量p53-依赖性转录活性，β-半乳糖苷酶活性在黑素瘤细胞系Arn8中定量，这已经使用利用p53-响应性报道子构建体pRGC foslacZ对细胞的稳定转染建立(Frebung等，Cancer Res.,52,1992-6976)。简而言之，在使用抑制剂孵育24小时后，将Arn8细胞用0.3％Triton X-100透化15分钟，然后添加作为底物的4-甲基伞形酮(methylumbelliferon)-β-D-吡喃半乳糖苷至80μM的最终浓度。在1小时后，产物4-甲基伞形酮的荧光在355nm/460nm(ex/em)下用Fluoroskan Ascent微板读取仪(Labsystems)测定。表8中的数据呈现2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤衍生物的系列显示对p53-调控的转录的剂量依赖性激活影响，其中观察到对于大部分制备的化合物(表8)的最大影响在100nM与500nM浓度之间。
表8：所选的新型2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤衍生物对用β-半乳糖苷酶报道基因稳定转染的Arn8细胞中的p53蛋白诱导的影响。
实施例35新型2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤衍生物通过减少RNA聚合酶II的磷酸化抑制细胞转录
我们监测了用化合物BP14处理的细胞中的作为CDK7和CDK9的底物的RNA聚合酶II的磷酸化的水平(图3)。如在实施例33中所述，进行免疫印迹分析，其中使用适当的抗体用于抗磷酸RNA聚合酶II(S5)(Bethyl Laboratories，美国)、抗磷酸RNA聚合酶II(S2)(Bethyl Laboratories，SA)、抗RNA聚合酶II(克隆ARNA-3，Millipore)和β-肌动蛋白(克隆C4，Santa Cruz Biotechnology，美国)。
免疫印迹分析揭示在AKH3sp和Hep3B细胞系中RNA聚合酶II在丝氨酸2和5处磷酸化的快速降低(图3)，从而确认了这两种激酶的细胞抑制。在用对应于IC50的浓度的BP14处理(24小时)的细胞中观察到两种形式的RNA聚合酶II的显著降低。观察到的细胞转录抑制通过检测Mcl-1的下调而得以确认，Mcl-1属于一组具有短半寿期的抗凋亡蛋白(图1)。
实施例36新型衍生物的抗血管生成作用
测试新型2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤衍生物的潜在抗血管生成性质；我们分析了其对人脐静脉内皮细胞细胞(HUVEC)的增殖(表9)、迁移和管形成的影响。将汇合的HUVEC接种在96-孔微量滴定板中以使用如前所述的Calcein AM溶液(Invitrogen)和Fluoroskan Ascent微板读取仪(Labsystems)检测它们的24小时或72小时增殖(等，2011，Eur J MedChem.2011Sep；46(9):4289-94)。
表9：人脐静脉内皮细胞细胞(HUVEC)中所选的新型2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤的体外抗增殖活性。
a三次测定结果的平均值
实施例37新型衍生物的抗血管生成作用-迁移刮伤测定
迁移测定如前所述进行(等，2011，Eur J Med Chem.；46(9):4289-94)。简而言之，将汇合的HUVEC刮擦并立即用各种剂量的化合物处理24小时。在孵育后，将各孔使用连接至Olympus BX50显微镜的DP Controller系统(Olympus)拍照。使用“内部”软件，以图像中伤口区域的不由细胞覆盖的像素的比例表示迁移。
VEGF刺激的HUVEC在整个刮擦区域的迁移被100nM和1000nM的浓度的新型取代的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤所抑制(表10)。对迁移的显著抑制主要在用浓度为100nM的BP20和BP30处理的细胞中在24小时不影响细胞存活力的处理后观察到(参见表9)。
表10.所选的新型取代的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤对人脐静脉内皮细胞细胞(HUVEC)迁移的影响。
a++开放；+部分开放，0闭合
实施例38新型衍生物的抗血管生成作用-管形成测定
为了评估管形成，将在含有测试化合物的内皮细胞生长培养基(ECGM)中的HUVEC细胞接种至(BD)涂覆的ibidi血管生成载片(15-孔，ibidiGmbH，Munich，德国)上。在24小时后，使用具有DP Controller系统的OlympusBX50显微镜拍摄图片。使用特定“内部”软件，将评估管形成表达为与未处理的对照相比经处理的细胞的管的数目和结节的数目。
许多2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤以10nM或100nM的浓度显著较少了HUVEC迁移(图5)。作为一个实例-若干个分支点、管数、总结节长度和平均管长度通过化合物BP14和BP20的24小时处理而显著减少(图5)。
实施例39新型衍生物的抗炎性活性-E-选择蛋白表达的下降
为了评估2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤的抗炎性活性，分析E-选择蛋白(ELAM-1-内皮-白细胞黏附分子1)的表达。ELAM-1属于一组细胞表面糖蛋白，其由炎性细胞因子如肿瘤坏死因子(TNF)在慢性或急性炎症过程中快速诱导(Ley,Trends Mol Med.2003Jun；9(6):263-8)。因此我们通过基于高度敏感的ELISA的测定评估了在TNF刺激之后，新型化合物对HUVEC上的膜结合的E-选择蛋白表达的影响。
简而言之，将96-孔板通过在室温下施加10分钟的200μl的1.0％白明胶而用白明胶涂覆。将1×104HUVEC接种在200μl培养基中其它的每个孔中，并生长48小时至最佳汇合。然后将增加浓度的经测试的抑制剂一式三份添加至含有HUVEC的孔中，并将细胞孵育30分钟，之后每孔添加10ng/ml TNFα以刺激NF-κB，并因此刺激ELAM-1。在再孵育4小时后，含有HUVEC的每一个孔中的ELAM-1的水平通过酶联活性测定(ELISA)测定。将细胞用PBS洗涤一次，并在室温下用0.1％戊二醛(Sigma-Aldrich,Munich,德国)固定15分钟。然后，将细胞用200μl/孔PBS/0.05％Tween 20洗涤3次，用200μl/孔5％BSA/PBS阻断1小时，并用200μl/孔PBS/0.05％Tween 20再洗涤3次。然后，在室温下添加于0.1％BSA/PBS(100μl/孔)中的以1：5000稀释的抗-ELAM-1抗体(克隆BBA-1,R&D Systems，Minneapolis，MN，美国)持续1小时，其后用200μl/孔PBS/0.05％Tween 20洗涤5次。随后，施加于0.1％BSA/PBS(100μl/孔)中的以1：10000稀释的山羊抗小鼠-HRP抗体(Sigma-Aldrich，Munich，德国)，并将细胞在黑暗中在室温下孵育1小时，并且在倾析之后，用200μl/孔PBS/0.05％Tween 20洗涤5次。如所述，使用Fast-OPD(邻苯二胺二盐酸盐)(Sigma-Aldrich，Munich，德国)测定评估每个孔中的细胞的HRP-活性(Gridling等,Int J Oncol.2009年4月；34(4):1117-28)，并在垂直的分光光度计中在OD492nm下测量吸光度。将所有数据归一化成代表100％炎症的阳性对照(用TNF而非抑制剂处理的细胞)。
所选的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤快速减少不影响细胞存活力的纳摩尔浓度范围内的ELAM-1的表达(数据未显示)。结果清晰地显示了大部分新型化合物比参考化合物多柔比星(DOX)或索拉非尼(SOR)显著更有效，并且如嘌呤BP36和BP30在检查的一系列化合物中最有效，其抑制值低于25％(对于1μM化合物的处理来说)。
实施例40体外和体内肝细胞瘤细胞中的BP-14
细胞培养物
如所述(31，32)，将人肝细胞瘤细胞系和HepG2、PLC/PRF/5(PLC)、Hep3B及3sp(先前描述为HCC-1.1)在RPMI 1640和10％胎牛血清(FCS)中培养。将所有细胞保持在37℃和5％CO2下，并常规筛选是否存在支原体属。
原代人肝细胞(PHH)
来自肝切除的非肿瘤性组织样品获自经历结直肠癌的转移性肝肿瘤的部分肝切除术的患者。实验程序根据政府控制的慈善基金会HTCR(Human Tissue andCell Research,Regensburg,德国)的准则进行，患者的知情同意书由雷根斯堡大学(University of Regensburg)的当地伦理委员会批准。如前所述(33)，使用修改的两步EGTA/胶原酶灌注程序分离PHH。经分离的PHH的存活力通过台盼蓝拒染测定，并且存活力超过85％的的细胞用于进一步的工作中。将细胞以1.2x105细胞/cm2的密度涂铺在胶原-涂覆的板(BD Biosciences，San Jose，美国)上。培养基由DMEM组成，所述DMEM具有10％FCS、2mM L-谷氨酰胺、100mg/ml链霉素、100U/ml青霉素和如下的补充物：125mU/ml胰岛素、7.3ng/ml胰高血糖素和0.8μg/ml氢化可的松。将细胞在37℃下在具有5％CO2的湿润培养箱中孵育，每天更换培养基。
治疗剂
通过如本文所述的程序合成BP-14(N2-(4-氨基环己基)-9-环戊基-N6-[[6-(2-呋喃基)-3-吡啶基]甲基]嘌呤-2,6-二胺)。将化合物溶解于二甲亚砜(DMSO)中。将100mM的原液在测定缓冲液或培养基中稀释至本文指定的浓度。测定中DMSO的最大浓度从来不超过0.1％。
细胞存活力和抑制浓度(IC) 50 的测定
使用3-(4,5二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四氮唑(MTT)分析测定细胞存活力。简而言之，将细胞一式三份以6x 103细胞/孔的密度接种。在24小时后，将细胞与含药物的培养基一起孵育72小时。将细胞与MTT溶液(5mg/ml；Sigma，St.Louis，美国)一起孵育，并且在5小时后将培养基用DMSO替换。通过采用微板读取仪(Asys HiTech，Salzburg，奥地利)，在620nm下测定吸光度。对于每个药物施加将MTT测定重复3次，并将未处理的细胞用作参考。通过数据点的log-线性插值获得IC50值，并且使用软件GraphPad5.01通过剂量响应曲线描绘。
使用无细胞提取物的激酶抑制测定
全细胞提取物通过用含有20mM Tris pH 8.0、100mM NaCl、1mM EDTA和0.5％NP-40的缓冲液裂解Hep3B细胞来制备。在4℃下，将100μg提取物与1μg抗-CDK2抗体M2(Santa Cruz Biotechnology,Santa Cruz,美国)或与1μg抗-细胞周期蛋白B1抗体GNS1(Santa Cruz Biotechnology,Santa Cruz,美国)一起用于免疫沉淀持续4小时。将沉淀的蛋白用裂解缓冲液洗涤三次，然后用激酶缓冲液(50mM HEPES pH 7.5、10mM MgCl2和1mM DTT)洗涤一次，随后重新悬浮于含有5μCi[γ-32P]ATP(PerkinElmer,Santa Clara,美国)、1μg组蛋白H1(New England Biolabs,Ipswich,美国)和各浓度的抑制剂的20μl激酶缓冲液中。在30℃下孵育60分钟之后，将上清液在含有60mM Tris/HCl pH6.8、10％甘油、2％SDS、5％β-巯基乙醇、0.02％溴酚蓝的样品缓冲液中煮沸。将蛋白通过SDS-PAGE分离并印迹在硝基纤维素膜上。此后，将膜用丽春红S染色以检测等量上样并通过放射自显影分析。
使用重组底物的激酶抑制测定
CDK1/细胞周期蛋白B和CDK2/细胞周期蛋白E激酶在Sf9昆虫细胞中经由昆虫病毒感染产生，而CDK5/p35、CDK7/细胞周期蛋白H/MAT1和CDK9/细胞周期蛋白T1购自ProQinase(Freiburg,德国)并且如前所述进行测定(35)。激酶反应用1mg/ml组蛋白H1(对于CDK2和CDK5)或(YSPTSPS)2KK肽(对于CDK7和CDK9)在15mM/0.15mM/1.5mM/1.5mM ATP(对于CDK2/CDK5/CDK7CDK9)、0.05mCi[γ-33P]ATP和测试化合物的存在下，在10ml的最终体积中测定。反应缓冲液含有60mM HEPES-NaOH,pH 7.5、3mM MgCl2、3mM MnCl2、3mM原钒酸钠、1.2mM DTT、2.5mg/50ml PEG20.000。通过添加5ml的3％H3PO4终止反应。将等分试样涂在P-81磷酸纤维素(Whatman,GEHealthcare Biosciences,Pittsburgh,USA)上、用0.5％H3PO4洗涤3次并最终风干。激酶抑制使用FLA-7000数字图像分析仪(Fujifilm,Tokyo，日本)定量。将CDK活性降低50％所需的测试化合物的浓度从剂量响应曲线确定，并命名为IC50。
增殖的分析
将6x 104细胞接种在12-孔板上，并与不同浓度的抑制剂一起孵育3天。在胰蛋白酶化之后，在各个时间点使用细胞计数器(CASY,Systems,Reutlingen,德国)测定细胞数目。一式三份进行三个独立实验。
克隆源性存活测定
为了分析组织培养塑料上细胞群体的克隆源性生长行为，将500个细胞接种在6-孔板中，并且未处理或用BA-12或BP-14预处理24小时，在37℃和5％CO2下与标准培养基一起孵育10天。将菌落用甲醇/乙酸(3:1)固定并用0.25％结晶紫染色。将经固定的细胞的结晶紫用1％SDS溶解，并在560nm下光度测定吸光度。
通过5-溴-2’-脱氧-尿苷掺入分析的细胞增殖
BrdU掺入至细胞核中直接指示细胞增殖。将培养的细胞生长在含有10μM5-溴-2’-脱氧-尿苷(BrdU)的培养基中1小时。在移除标记培养基之后，将细胞在37℃下用含有2M HCl的固定/变性溶液固定并DNA变性30分钟。为了分析体内BrdU掺入，在分析前两小时，将200μl含有1mg BrdU的林格溶液腹膜内注射到异种移植小鼠中。将小鼠处死，并且将肿瘤组织固定在4％甲醛中并进行处理以用于免疫组织化学。BrdU掺入到细胞DNA中使用单克隆抗-BrdU抗体(Sigma,St.Louis,美国)，然后与以1：10,000稀释的过氧化物酶-缀合的二级抗体(Calbiochem,LaJolla,美国)一起孵育来检测。
流式细胞术
细胞DNA含量的分析用多色BD LSRFortessa细胞分析仪(Becton Dickinson,Franklin Lakes,美国)进行。在细胞荧光测量之前，将约5x 105个细胞用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤、固定在70％乙醇中、用PBS再次洗涤并用100μg RNAseA/50μg碘化丙啶/ml处理10分钟以染色细胞DNA。各种细胞周期位置中细胞的百分比使用来自相同制造商的软件包计算。
长期化学敏感性的测定
将肝细胞瘤细胞在BA-12或BP-14的存在下在低于IC50的浓度(1/2IC50、1/4IC50、1/8IC50和1/16IC50)下持续培养。使用MTT测定，通过测定IC50值，每6周监测化疗耐药性细胞的选择。与未处理的细胞相比，在用抑制剂处理之后显示较高的IC50值的HCC细胞被认为具有化疗耐药性。
免疫印迹
免疫印迹如前所述进行(36)。一级抗体以以下稀释度使用：抗-磷酸-Ser5RNA Pol II(CDK7；Bethyl Laboratories,Montgomery,美国)，1:1,000；抗-磷酸-Ser2RNA Pol II(CDK9；Bethyl Laboratories,Montgomery,美国)，1:1,000；抗-RNA Pol II(Santa Cruz Biotechnology,Santa Cruz,美国)，1:1,000；抗-PARP(CellSignaling Technology,Beverly,美国)，1:1,000；抗-β-肌动蛋白(Sigma,St.Louis,美国)，1:2.500。辣根过氧化物酶-缀合的二级抗体(Calbiochem,LaJolla,美国)以1：10,000的稀释度使用。
异种移植肿瘤形成和药物干预
将5x106个人肝细胞瘤细胞重新悬浮于100μl林格溶液中，并皮下注射到严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠(Harlan Laboratories,San Pietro,意大利)中。肿瘤体积如所述(36)测定。药理学干预在荷瘤小鼠中通过每日腹膜内注射于100μl的0.01％DMSO中的5mg/kg BA-12或1mg/kg BP-14进行17天。向对照荷瘤小鼠每日仅腹膜内注射100μl的0.01％DMSO。所有动物实验根据奥地利动物保健和保护指导进行。
二乙基亚硝胺-诱导的肝癌和药物干预
为了在肝中引发肿瘤形成，向14日龄的C57BL/6J小鼠腹膜内注射单剂量的二乙基亚硝胺(DEN,25mg/kg)。在8个月后，在DEN-诱导的小鼠中通过进行3个循环的化合物处理持续10天和在循环期间解除化合物持续7天，施用药理学干预。将在100μl 0.01％DMSO中的5mg/kg BA-12或1mg/kg BP-14腹膜内注射。对照小鼠仅获得100μl溶剂。此后，将小鼠处死并将肝固定在4％甲醛中。两名研究者单独对可在肝表面监测的瘤形成直径进行评分。将直径长达1cm、覆盖大于97％的所有可见肝细胞瘤的癌性结节包括在分析中。由于假定大的肿瘤不能适当地响应药物治疗，所以少于3％的具有更大直径的瘤形成被排除。根据奥地利动物保健和保护指导进行所有动物实验。
免疫组织化学
将小鼠处死并将肿瘤如(37)所述固定。将4μm厚的石蜡包埋的切片用苏木精和伊红(H&E)染色。对于免疫组织化学，将切片用抗-BrdU(Sigma，St.Louis，美国)染色，1：200。以1：200使用生物素化二级抗体。如制造商所述，使用Vectastain Elite ABC试剂盒(Vector Laboratories，CA，美国)进行免疫过氧化物酶程序。
统计分析
数据表达为平均值±标准偏差(SD)。使用未配对、非参数学生t检验，评估差异的统计显著性。实验组之间的差异显著性是*p<0.05、**p<0.01或***p<0.005。
结果
BP-14的细胞毒性和激酶特异性
细胞存活力测定显示出BP-14对人HepG2和PLC肝细胞瘤细胞以及对建立的HCC细胞系Hep3B和3sp的较强细胞毒性影响(图7A)。剂量响应曲线的评估揭示在各种HCC细胞系中低于0.5μM的IC50值(表11)。使用无细胞提取物的激酶测定显示BP-14在0.03μM的浓度下显著降低CDK1/CDK2活性(图7B)。此外，用低于1μM的BP-14处理HepG2细胞和PLC细胞导致RNA聚合酶II磷酸化对丝氨酸5(CDK7)和丝氨酸2(CDK9)的强烈下降，表明了抑制CDK7/CDK9活性(图7C)。使用重组CDK底物的定量CDK抑制显示出0.01μM至0.05μM的BP-14的IC50值，包括对CDK5的拮抗作用(表12)，因此确证了通过无细胞提取物获得的数据。总之，这些结果表明BP-14通过CDK1/CDK2/CDK5/CDK7和CDK9的特定抑制是对HCC细胞系高度有效的细胞毒性化合物。
表11.在各种HCC细胞系中剂量响应曲线(IC50)的评估
表12.使用重组CDK底物定量CDK抑制-IC50值(μM)
BP-14消除克隆形成和抑制细胞周期进展
我们观察了在用0.2μM BP-14处理HepG2和PLC细胞之后克隆源性生长行为的超过15倍的减少(图8A)。分析DNA合成揭示，与对照相比用1μM BP-14处理HepG2细胞或PLC细胞减少BrdU掺入超过2倍(图8B)。增殖动力学显示在HepG2细胞和PLC细胞中以及在Hep3B肝细胞瘤细胞中0.2μM的BP-14的细胞抑制作用(图9)。因此，BP-14能够诱导在细胞周期G2期中HepG2细胞和PLC细胞的累积(图8C)。这些数据表明BP-14通过在细胞周期的G2期中阻断DNA复制和阻滞HCC细胞来用作抗增殖剂。
BP-14诱导肝细胞瘤细胞而非原代人肝细胞(PHH)中的凋亡
我们检查了在装载野生型p53的HepG2细胞中和在表达全长但突变的p53的PLC细胞中由BP-14诱导的凋亡(Ferlay等，Int J Cancer.2010；127(12):2893-917)。施用0.2μM BP-14诱导在HepG2细胞和p53-突变PLC细胞中的PARP裂解和p53表达(图10A)。然而，BP-14不能诱导在为肝细胞瘤的细胞来源的PHH中的PARP处理(图10B)。因此，BP-14展现出PHH中20.08μM的IC50值，其与HepG2细胞相比超过90倍更高(表11)。这些数据显示BP-14在低浓度下以p53-独立形式诱导HCC细胞凋亡并且不能在PHH中实现细胞毒性作用。
HCC细胞中BP-14的长期细胞毒性
我们分析了BP-14是否通过以其IC50浓度的一半以及IC50的连续稀释度处理肝细胞瘤细胞长达9个月展现细胞毒性作用改变。如果由于获得抗性机制而发生化学敏感性的下降，那么HCC细胞必须增强IC50值。最值得注意的是，我们观察到在持续药物暴露期间在肝细胞瘤细胞中IC50值保持极小的变化(表13)。这些数据显示在持续药物治疗时保持了BP-14对HCC细胞的细胞毒性影响，从而表明肝细胞瘤细胞不能通过BP-14获取化学抗性。
表13.在长期暴露于BP-14后HCC细胞系中的持续细胞毒性。
BP-14抑制异种移植物模型和DEN-诱导的肝细胞瘤
我们评估了源自HepG2细胞和PLC细胞的肝细胞瘤异种移植物模型。向荷瘤小鼠注射最大耐受剂量的BP-14(MTD；1mg/kg)。施用BP-14导致通过HepG2和PLC细胞产生的异种移植物显著减少(图11A)。BP-14甚至导致PLC肿瘤消退。通过BrdU掺入至DNA中在HepG2-来源和PLC-来源的肿瘤中的S-期-阳性细胞的评估揭示了在暴露至BP-14之后减少2倍(图11B和图11C)。
我们进一步分析了BP-14抑制由肝毒素DEN化学诱导的内源性肝癌形成的能力。DEN-诱导的小鼠的处理方式包括3个循环的MTD的BP-14处理(10天，其中临时间断7天)(图12A)。评估在癌性肝表面上观察到的肿瘤结节揭示与未处理的对照小鼠相比BA-12引起肿瘤结节减少1.4倍。用BP-14干预显示可比较的抗癌作用，DEN-诱导的肝细胞瘤下降1.3倍(图12B和图12C)。总之，这些数据表明如在异种移植物模型以及内源性肝癌中所观察到的那样，BA-12和BP-14均展现出较强的体内抗-肝细胞瘤活性。
实施例41干胶囊
如下制备5000粒胶囊，每一粒含有0.25g的式I的化合物作为活性成分：
组成
制备工艺：将提及的粉状物质压制通过网格宽度0.6mm的筛。借助胶囊填充机，将0.33g混合物的部分转移至白明胶胶囊。
实施例42软胶囊
如下制备5000粒软白明胶胶囊，每一粒含有0.05g的式I的化合物作为活性成分：
组成
活性成分       250g
Lauroglycol    2升
制备工艺：将粉状活性成分混悬在(丙二醇月桂酸酯，GattefosséS.A.,Saint Priest,法国)并在湿式粉碎机中研磨成约1μm至3μm的粒径。然后，在每种情况下，将0.419g的混合物的部分通过胶囊填充机的方式转移至软白明胶胶囊。
实施例43软胶囊
如下制备5000粒软白明胶胶囊，每一粒含有0.05g的式I的化合物作为活性成分：
组成
活性成分       250g
PEG 400       1升
Tween 80      1升
制备工艺：将粉状活性成分混悬在PEG 400(Mr在380至约420之间的聚乙二醇，Sigma,Fluka,Aldrich,美国)和80(聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯，Atlas Chem.Inc.,Inc.,美国，由Sigma提供,Fluka,Aldrich,美国)中，并在湿式粉碎机中研磨成约1μm至3μm的粒径。然后，在每种情况下，将0.43g的混合物的部分通过胶囊填充机的方式转移至软白明胶胶囊。

Claims (9)

1.一种具有通式I的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤：
其中，
X是CH或N
R1选自由以下组成的组：
(4-氨基环己基)氨基、
(2-氨基环己基)氨基、
(3-氨基环己基)氨基、
(4-羟基环己基)氨基、
[(2R)-1-羟基丁烷-2-基]氨基、
(2-羟基-2-甲基丙基)氨基、
(3-羟基-3-甲基丁基)氨基、
[(3S)-2-羟基-2,4-二甲基戊烷-3-基]氨基、
哌嗪-1-基、
4-甲基哌嗪-1-基、
吗啉-4-基、
[(1S)-1-(二甲基氨基)-2-羟基乙基]氨基、
[(3R)-2-羟基戊烷-3-基]氨基、
(3-羟基丙基)氨基、
(2-氨基乙基)氨基、
(3-氨基丙基)氨基、
(2-氨基丙基)氨基、
4-(氨基甲基)哌啶-1-基、
(哌啶-4-基甲基)氨基、
4-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]哌嗪-1-基、
4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基，
并且
R2选自由以下组成的组：
经取代的苯基，其中，所述取代基在任何位置处并且独立选自OH、OCH3、NH2、Cl、Br、F、I、COOH、NO2、
2-吡啶基、
3-吡啶基、
4-吡啶基、
2-呋喃基
3-呋喃基、
噻吩-2-基、
噻吩-3-基、
吡唑-1-基、
吡唑-3-基、
吡唑-4-基、
吡咯-1-基，
及其药学上可接受的盐，特别是碱金属盐、铵盐或胺盐、或酸加成盐。
2.根据权利要求1所述的具有通式I的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤，在位置R2处具有手性的情况下呈(R)或(S)异构体的形式。
3.根据权利要求1或2所述的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤衍生物，其用作药物。
4.根据权利要求1或2所述的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤衍生物，其用于抑制哺乳动物细胞中的血管生成。
5.根据权利要求1或2所述的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤衍生物，其用于抑制炎症。
6.根据权利要求1或2所述的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤衍生物，其用于治疗癌症病症。
7.根据权利要求1或2所述的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤衍生物，其用于治疗选自肝细胞癌和转移性肝细胞癌的癌症病症。
8.一种药物组合物，其特征在于，其含有至少一种根据权利要求1或2所述的2-取代-6-联芳基甲基氨基-9-环戊基-9H-嘌呤衍生物和药学上可接受的载体。
9.根据权利要求11所述的药物组合物，其特征在于，其还含有至少一种另外的抗肿瘤剂，优选顺铂、多柔比星或索拉非尼。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105348298A (zh) * 2014-07-04 2016-02-24 沈阳中化农药化工研发有限公司 取代芳基吡啶类化合物及其用途
CN111217814A (zh) * 2018-11-26 2020-06-02 天津科技大学 一类联哌啶衍生物及其作为抗肿瘤药物的应用
CN113307765A (zh) * 2021-05-24 2021-08-27 上海泰坦科技股份有限公司 吡啶甲胺类化合物及其制备方法
CN116217576A (zh) * 2023-03-08 2023-06-06 四川大学 一种基于嘌呤骨架的近红外发射荧光分子及其制备方法和应用
WO2024041661A1 (zh) * 2022-08-26 2024-02-29 嘉兴优博生物技术有限公司 细胞周期蛋白调节剂

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK3244891T3 (da) 2015-01-16 2022-10-24 Massachusetts Gen Hospital Forbindelser til forbedring af mrna-splejsning
CZ307147B6 (cs) * 2015-05-14 2018-02-07 Ústav experimentální botaniky AV ČR, v. v. i. 5-Substituované 7-[4-(2-pyridyl)fenylmethylamino]-3-isopropylpyrazolo[4,3-d]pyrimidiny, jejich použití jako léčiva, a farmaceutické přípravky
CZ308029B6 (cs) * 2017-03-20 2019-11-06 Univerzita PalackĂ©ho v Olomouci 2,6-Disubstituované-9-cyklopentyl-9H-puriny, jejich použití jako léčiva a farmaceutické přípravky
WO2023140640A1 (ko) * 2022-01-21 2023-07-27 한양대학교 산학협력단 헤테로아릴 유도체 및 이의 용도

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US696970A (en) 1902-01-27 1902-04-08 Michigan Specialty Company Ltd Harness-hook.
RU2001124352A (ru) * 1999-02-01 2004-02-20 Си Ви Терапьютикс, Инк. (Us) Пуриновые ингибиторы циклин-зависимой киназы 2 и Ikb-альфа
US6969720B2 (en) * 1999-03-17 2005-11-29 Amr Technology, Inc. Biaryl substituted purine derivatives as potent antiproliferative agents
US6627633B2 (en) * 1999-03-17 2003-09-30 Albany Molecular Research, Inc. 6-substituted biaryl purine derivatives as potent cyclin/CDK inhibitors and antiproliferative agents
CZ294535B6 (cs) 2001-08-02 2005-01-12 Ústav Experimentální Botaniky Avčr Heterocyklické sloučeniny na bázi N6-substituovaného adeninu, způsoby jejich přípravy, jejich použití pro přípravu léčiv, kosmetických přípravků a růstových regulátorů, farmaceutické přípravky, kosmetické přípravky a růstové regulátory tyto sloučeniny obsahující
US6667311B2 (en) * 2001-09-11 2003-12-23 Albany Molecular Research, Inc. Nitrogen substituted biaryl purine derivatives as potent antiproliferative agents
US6812232B2 (en) * 2001-09-11 2004-11-02 Amr Technology, Inc. Heterocycle substituted purine derivatives as potent antiproliferative agents
CZ294538B6 (cs) 2002-12-30 2005-01-12 Ústav Experimentální Botaniky Akademie Vědčeské Re Substituční deriváty N6-benzyladenosinu, způsob jejich přípravy, jejich použití pro přípravu léčiv, kosmetických přípravků a růstových regulátorů, farmaceutické přípravky, kosmetické přípravky a růstové regulátory tyto sloučeniny obsahující
CZ302225B6 (cs) 2007-07-04 2010-12-29 Univerzita Palackého v Olomouci Substituované 6-anilinopurinové deriváty jako inhibitory cytokinin oxidasy a prípravky obsahující tyto slouceniny
CZ300774B6 (cs) 2007-10-05 2009-08-05 Univerzita Palackého Substituované 6-(alkylbenzylamino)purinové deriváty pro použití jako antagonisté cytokininových receptoru a prípravky obsahující tyto slouceniny
CZ302122B6 (cs) * 2009-01-28 2010-10-20 Univerzita Palackého v Olomouci Substituované deriváty 6-(2-aminobenzylamino)purinu, jejich použití jako léciva a prípravky tyto slouceniny obsahující
US20130005747A1 (en) * 2010-12-21 2013-01-03 Cyclacel Limited Method for selecting a cancer therapy

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105348298A (zh) * 2014-07-04 2016-02-24 沈阳中化农药化工研发有限公司 取代芳基吡啶类化合物及其用途
CN105348298B (zh) * 2014-07-04 2019-03-19 沈阳中化农药化工研发有限公司 取代芳基吡啶类化合物及其用途
CN111217814A (zh) * 2018-11-26 2020-06-02 天津科技大学 一类联哌啶衍生物及其作为抗肿瘤药物的应用
WO2020108407A1 (zh) * 2018-11-26 2020-06-04 天津科技大学 一类联哌啶衍生物作为抗肿瘤药物
CN111217814B (zh) * 2018-11-26 2022-08-26 天津科技大学 一类联哌啶衍生物及其作为抗肿瘤药物的应用
CN113307765A (zh) * 2021-05-24 2021-08-27 上海泰坦科技股份有限公司 吡啶甲胺类化合物及其制备方法
WO2024041661A1 (zh) * 2022-08-26 2024-02-29 嘉兴优博生物技术有限公司 细胞周期蛋白调节剂
CN116217576A (zh) * 2023-03-08 2023-06-06 四川大学 一种基于嘌呤骨架的近红外发射荧光分子及其制备方法和应用
CN116217576B (zh) * 2023-03-08 2024-06-14 四川大学 一种基于嘌呤骨架的近红外发射荧光分子及其制备方法和应用

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