EA023470B1 - Новые составы, стабилизирующие иммуногенные композиции и ингибирующие их осаждение - Google Patents

Новые составы, стабилизирующие иммуногенные композиции и ингибирующие их осаждение Download PDF

Info

Publication number
EA023470B1
EA023470B1 EA201200929A EA201200929A EA023470B1 EA 023470 B1 EA023470 B1 EA 023470B1 EA 201200929 A EA201200929 A EA 201200929A EA 201200929 A EA201200929 A EA 201200929A EA 023470 B1 EA023470 B1 EA 023470B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
polysaccharide
composition
serotype
conjugated
polypeptide
Prior art date
Application number
EA201200929A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201200929A1 (ru
Inventor
Лакшми Кхандке
Ин Чен
Ханиоунг Хан
Роберт Чэнси мл. Сид
Чжаовэй Цзинь
Дзее Лоон Лоок
Рональд Мэлон
Сюйдун Ян
Original Assignee
УАЙТ ЭлЭлСи
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=38441477&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA023470(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by УАЙТ ЭлЭлСи filed Critical УАЙТ ЭлЭлСи
Publication of EA201200929A1 publication Critical patent/EA201200929A1/ru
Publication of EA023470B1 publication Critical patent/EA023470B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/085—Staphylococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
    • A61K39/092—Streptococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/095—Neisseria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55583—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6018—Lipids, e.g. in lipopeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6081—Albumin; Keyhole limpet haemocyanin [KLH]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Infusion, Injection, And Reservoir Apparatuses (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение направлено на постоянную необходимость в данной области в составах, улучшающих стабильность иммуногенных композиций, таких как конъюгаты полисахарид-белок и белковые иммуногены. Изобретение в широком смысле относится к новым составам, стабилизирующим иммуногенные композиции и ингибирующим их осаждение. Более конкретно, изобретение, описанное в настоящем описании, направлено на необходимость в данной области в составах, стабилизирующих иммуногенные композиции и ингибирующих формирование твердых частиц (например, агрегацию, осаждение) в иммуногенных композициях, перерабатываемых, разрабатываемых, составленных, изготовленных и/или сохраняемых в контейнерных устройствах, таких как ферментеры, биореакторы, флаконы, бутылки, пакеты, шприцы, резиновые пробки, пробирки и т.п.

Description

Настоящее изобретение, в целом, относится к области иммунологии, бактериологии, составам вакцин, стабильности белка и усовершенствования процесса. Более конкретно, изобретение относится к новым составам, ингибирующим осаждение иммуногенных композиций.
Предпосылки изобретения
В биофармацевтической области общепризнанным является тот факт, что улучшение стабильности иммуногенной композиции (например, белкового иммуногена, конъюгата полисахарид-белок) является необходимой и очень желательной целью. Например, иммуногенная композиция при введении пациенту должна оставаться свежей, ясной и соответствующей профессиональным требованиям. Любые изменения стабильности и/или физических свойств иммуногенной композиции, такие как изменение цвета, образование осадка или помутнение, может вызывать у пациента или потребителя потерю доверия к продукту. Более того, поскольку многие иммуногенные составы отпускают в контейнерах для множественной дозировки, необходимо обеспечить однородность содержания дозы активного ингредиента (например, конъюгата полисахарид-белок) в течение времени (например, замутненный раствор может приводить к неравномерному характеру дозирования). Кроме того, иммуногенная композиция должна быть активной в течение ее ожидаемого срока хранения, когда любой распад иммуногенной композиции до неактивной или иным образом нежелательной формы (например, агрегата) снижает общую концентрацию продукта.
В нескольких публикациях в литературе было сделано предположение, что стабильность конкретной иммуногенной композиции (например, белкового иммуногена, конъюгата полисахарид-белок), по меньшей мере, частично зависит от конкретного белка или белка-носителя (Но е! а1., 2001; Но е! а1., 2002; Βοϊβίαηο е! а1., 2001). Например, анализ стабильности полисахаридов менингококка С (МепС) и полисахаридов НаеторН1и8 тЛиеп/ае типа Ь (ΗίΗ). конъюгированных либо с токсоидом столбняка (ТТ), либо с белком-носителем СКМ197, выявил различные профили стабильности в зависимости от белка-носителя (Но е1 а1., 2002). В другом исследовании (Но е! а1., 2001) анализировали конъюгаты МепС-СКМ197 от двух различных производителей (Но е! а1., 2001), в которых конъюгаты МепС-СКМ197 отличаются по химии их конъюгации и длине конъюгированного полисахарида (оба обладают одним и тем же белкомносителем, СКМ197). Кроме того, данные этого исследования показывают, что такие факторы, как химия конъюгации (например, восстановительное аминирование либо напрямую, либо через химическую спейсерную группу), число участков конъюгации, длина полисахаридной цепи, рН, буфер для хранения, температура(ы) хранения и циклы замораживания/оттаивания также влияют на стабильность иммуногенной композиции.
Таким образом, при разработке состава для иммуногенной композиции необходимо учитывать множество факторов для обеспечения получения безопасного, стабильного, активного и экономически эффективного продукта. Такие факторы включают в качестве неограничивающих примеров химическую стабильность иммуногенной композиции (например, гидролиз сахаридов, деполимеризацию полисахаридов, протеолиз или фрагментацию белков), физическую/термическую стабильность иммуногенной композиции (например, агрегацию, осаждение, адсорбцию), совместимость иммуногенной композиции с системой контейнера/крышки, взаимодействия между иммуногенной композицией и неактивными ингредиентами (например, буферами, солями, наполнителями, криопротекторами), способ получения, лекарственную форму (например, лиофилизированную, жидкую), условия внешней среды, встречающиеся во время перевозки, хранения и манипуляций (например, температура, влажность, усилия сдвига), и промежуток времени между изготовлением и использованием.
В данной области было сделано предположение, что силиконовое масло, которое индуцирует вторичные и третичные конформационные изменения белка, может быть ответственным за агрегацию/осаждение, наблюдаемые в конкретных белковых фармацевтических препаратах Нопех е! а1., 2005). Например, в нескольких публикациях в 1980 гг. было показано высвобождение силиконового масла из одноразовых пластиковых шприцев в качестве причинного фактора агрегации инсулина человека (Скап!е1аи апб Вегдег, 1985; Скап!е1аи е! а1., 1986; Скап!е1аи, 1989; Вегп8!еш, 1987; Ва1бМп, 1988; СоШег и Оатеоп, 1985). Скап!е1аи е! а1. (1986) наблюдали, что после трех или более отборов из десятидозового препарата инсулина (с использованием силиконизированного одноразового шприца), во флаконе начинается помутнение из-за загрязнения силиконовым маслом, таким образом, приводя в результате к агрегации и дезактивации инсулина (Скап!е1аи е! а1., 1986). Парадоксально, но силиконовое масло является необходимым компонентом пластиковых шприцев, так как оно служит для смазки резинового поршня и облегчения движения поршня вниз цилиндра шприца (т.е. силиконовое масло улучшает проходимость состава через шприц).
Более того, использование силиконового масла не ограничено шприцами, так как его используют для покрытия стеклянных флаконов, чтобы минимизировать адсорбцию белка, в качестве смазывающего вещества для предупреждения прилипания резиновых пробок во время процедур наполнения, в качестве смазывающего вещества, критического для технологичности/механической обрабатываемости стеклянных и эластомерных крышек, и в качестве смазывающего вещества для облегчения протыкания иглой резиновых пробок флаконов. Кроме того, силиконизация шприцев, стеклянных флаконов, резиновых
- 1 023470 пробок и т.п. не является ни хорошо контролируемым, ни стандартизованным процессом, и по этой причине существует высокая вариабельность содержания силиконового масла от одной партии к другой.
Таким образом, в данной области существует постоянная необходимость в составах, которые увеличивают стабильность и ингибируют осаждение иммуногенных композиций.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение в широком смысле относится к новым составам, стабилизирующим иммуногенные композиции и ингибирующим их осаждение. Более конкретно, в конкретных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к новым составам, ингибирующим осаждение иммуногенных композиций, содержащихся в контейнерных устройствах. В одном из конкретных вариантов осуществления изобретение относится к новым составам, стабилизирующим иммуногенные композиции против взаимодействий с силиконовым маслом, усилий сдвига, встряхивания при перевозке и т.п.
Таким образом, в конкретных вариантах осуществления изобретение относится к составам, стабилизирующим конъюгат полисахарид-белок, содержащим (ί) рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 приблизительно до 7,5, (ίί) поверхностно-активное вещество и (ίίί) один или несколько конъюгатов полисахарид-белок. В одном из конкретных вариантов осуществления состава конъюгата полисахарид-белок содержится в контейнерных устройствах. В конкретных вариантах осуществления контейнерные устройства выбраны из одного или нескольких из группы, состоящей из флакона, пробки флакона, крышки флакона, стеклянной крышки, резиновой крышки, пластиковой крышки, шприца, стопора шприца, поршня шприца, бутылки, мензурки, мерного цилиндра, ферментера, биореактора, пробирки, трубки, пакета, банки, ампулы, картриджа и одноразовой ручки. В конкретных вариантах осуществления контейнерные устройства закрывают силиконом.
В конкретных вариантах осуществления рН-забуференный солевой раствор составов обладает рН 5,5-7,5. В других вариантах осуществления буфер представляет собой фосфат, сукцинат, гистидин или цитрат. В конкретных вариантах осуществления буфер представляет собой сукцинат с конечной концентрацией 1-10 мМ и рН 5,8-6,0. В одном конкретном варианте осуществления конечная концентрация сукцинатного буфера составляет 5 мМ. В других вариантах осуществления соль в рН-забуференном солевом растворе содержит хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание. В одном из конкретных вариантов осуществления соль в рН-забуференном солевом растворе представляет собой хлорид натрия.
В другом варианте осуществления поверхностно-активное вещество из составов выбрано из группы, состоящей из полисорбата 20 (Туееп™20), полисорбата 40 (Туееп™40), полисорбата 60 (Туееп™60), полисорбата 65 (Т\уссп™65). полисорбата 80 (Т\уссп™80). полисорбата 85 (Т\уссп™85). Тгйои™ N-101, Ττίΐοη™ Х-100, октоксинола 40, ноноксинола-9, триэтаноламина, олеата триэтаноламина полипептида, гидроксистеарата полиоксиэтилена-660 (РЕС-15, δοϊυΐοΐ Н15), рицинолеата полиоксиэтилена-35 (СгеторЬог ЕЬ™), соевого лецитина и полоксамера. В одном конкретном варианте осуществления поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В другом варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет по меньшей мере 0,01-10% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,05% полисорбата 80 по мас./об. состава. В другом варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,1% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других конкретных вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 1,0% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 10,0% полисорбата 80 по мас./об. состава.
В другом варианте осуществления конъюгат полисахарид-белок содержит один или несколько полисахаридов пневмококка. В конкретных вариантах осуществления один или несколько полисахаридов пневмококка представляют собой полисахарид 8. рпеитошае серотипа 4, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 6В, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 9У, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 14, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 18С, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 19Р, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 23Р, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 1, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 3, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 5, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 6А, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 7Р и полисахарид 8. рпеитошае серотипа 19А. В конкретных вариантах осуществления белок из состава конъюгата полисахарид-белок выбран из группы, состоящей из СРМ197, токсоида столбняка, токсоида холеры, токсоида коклюша, термолабильного токсоида Е. сой (ЬТ), токсоида пневмолизина, поверхностного белка А пневмококка (РкрА), белка адгезина А пневмококка (РкаА), пептидазы С5а из 81гер1ососсн5. белка Ό НаеторЬйик шЛисп/ае. овальбумина, гемоцианина морского блюдечка (КЬН), бычьего сывороточного альбумина (В8А) и очищенного белкового производного туберкулина (ΡΡΌ).
В одном конкретном варианте осуществления состав конъюгата полисахарид-белок представляет собой состав 7-валентного конъюгата пневмококка (7уРпС), содержащий полисахарид 8. рпеитошае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 9У, конъюгированный с поли- 2 023470 пептидом СКМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СКМ497, полисахарид δ. риеитотае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 19Р, конъюгированный с полипептидом СРМ197, и полисахарид δ. риеитотае серотипа 23Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197.
В другом конкретном варианте осуществления состав конъюгата полисахарид-белок представляет собой состав 13-валентного конъюгата пневмококка (13уРиС), содержащий полисахарид δ. риеитотае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 9У, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 19Р, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 23Р, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 1, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 3, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 5, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 5. риеитотае серотипа 6А, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 7Р, конъюгированный с полипептидом СРМ197, и полисахарид δ. риеитотае серотипа 19А, конъюгированный с полипептидом СКМ197.
В других вариантах осуществления состав дополнительно содержит один или несколько полисахаридов менингококка, один или несколько антигенных белков менингококка или их сочетание. В других вариантах осуществления состав дополнительно содержит один или несколько полисахаридов стрептококка, один или несколько антигенных белков стрептококка или их сочетание.
В других конкретных вариантах осуществления состав дополнительно содержит один или несколько адъювантов. Примеры подходящих адъювантов описаны далее.
В других вариантах осуществления изобретение относится к составам, стабилизирующим композицию пептидазы С5а стрептококка ^СР), содержащим (ι) рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 6,5, (ΐΐ) поверхностно-активное вещество и (ίίί) пептидазу С5а стрептококка. В одном конкретном варианте осуществления состав δСΡ содержится в контейнерных устройствах. В конкретных вариантах осуществления контейнерные устройства выбраны из одного или нескольких из группы, состоящей из флакона, пробки флакона, крышки флакона, стеклянной крышки, резиновой крышки, пластиковой крышки, шприца, стопора шприца, поршня шприца, бутылки, мензурки, мерного цилиндра, ферментера, биореактора, пробирки, трубки, пакета, банки, ампулы, картриджа и одноразовой ручки.
В других вариантах осуществления рН-забуференный солевой раствор состава обладает рН 5,5-7,5. В других вариантах осуществления буфер представляет собой сукцинат, гистидин, фосфат или цитрат. В одном конкретном варианте осуществления буфер представляет собой сукцинат при конечной концентрации 1-10 мМ и рН 5,8-6,0. В другом конкретном варианте осуществления конечная концентрация сукцинатного буфера составляет 5 мМ. В других вариантах осуществления соль в рН-забуференном солевом растворе содержит хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание.
В конкретных вариантах осуществления поверхностно-активное вещество в составах выбрано из группы, состоящей из полисорбата 20 (Т^ееи™20), полисорбата 40 (Т^ееи™40), полисорбата 60 (Т\уееп™60). полисорбата 65 (Т\уееп™65). полисорбата 80 (Т\уееп™80). полисорбата 85 (Т\уееп™85) , Ттйои™ N-101, ТгПоп™ Х-100, октоксинола 40, ноноксинола-9, триэтаноламина, олеата триэтаноламина полипептида, гидроксистеарата полиоксиэтилена-660 (РЕО-15, δо1иΐо1 Н15), рицинолеата полиоксиэтилена-35 (СгеторЬог ЕЬ™}, соевого лецитина и полоксамера. В одном конкретном варианте осуществления поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В конкретных вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01-10% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,05% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,1% полисорбата 80 по мас./об. состава. В другом варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 1,0% полисорбата 80 по мас./об. состава. В другом варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 10,0% полисорбата 80 по мас./об. состава.
В других конкретных вариантах осуществления композиция δСΡ дополнительно содержит один или несколько полипептидов, выбранных из группы, состоящей из полипептида стрептококка, полипептида пневмококка, полипептида менингококка и полипептида стафилококка. В других вариантах осуществления композиция δСΡ дополнительно содержит один или несколько полисахаридов, выбранных из группы, состоящей из полисахарида стрептококка, полисахарида пневмококка, полисахарида менингококка и полисахарида стафилококка.
В другом варианте осуществления состав дополнительно содержит один или несколько адъювантов. Примеры подходящих адъювантов описаны далее.
- 3 023470
В другом варианте осуществления изобретение относится к составам, ингибирующим индуцированное силиконом осаждение конъюгата полисахарид-белок, содержащегося в силиконизированных контейнерных устройствах, содержащим (ί) рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, (ίί) соль алюминия и (ίίί) один или несколько конъюгатов полисахарид-белок. В конкретных вариантах осуществления силиконизированные контейнерные устройства выбраны из одного или нескольких из группы, состоящей из флакона, пробки флакона, крышки флакона, стеклянной крышки, резиновой крышки, пластиковой крышки, шприца, стопора шприца, поршня шприца, бутылки, мензурки, мерного цилиндра, ферментера, биореактора, пробирки, трубки, пакета, банки, ампулы, картриджа и одноразовой ручки.
В конкретных вариантах осуществления рН-забуференный солевой раствор в составах обладает рН 5,5-7,5. В других вариантах осуществления буфер в составах представляет собой фосфат, сукцинат, гистидин или цитрат. В других вариантах осуществления буфер представляет собой сукцинат при конечной концентрации 1-10 мМ и рН 5,8-6,0. В одном из конкретных вариантов осуществления конечная концентрация сукцинатного буфера составляет 5 мМ. В других вариантах осуществления соль в рНзабуференном солевом растворе содержит хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание. В одном конкретном варианте осуществления соль в рН-забуференном солевом растворе представляет собой хлорид натрия.
В других вариантах осуществления соль алюминия представляет собой гидроксид алюминия, фосфат алюминия или сульфат алюминия. В одном из конкретных вариантов осуществления соль алюминия представляет собой фосфат алюминия.
В других конкретных вариантах осуществления состав дополнительно содержит полисорбат 80 (Тетееп™80). В одном конкретном варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет по меньшей мере 0,01-10% полисорбата 80 по мас./об. состава.
В другом варианте осуществления конъюгат полисахарид-белок содержит один или несколько полисахаридов пневмококка. В конкретных вариантах осуществления один или несколько полисахаридов пневмококка представляют собой полисахарид 8. рпеитошае серотипа 4, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 6В, полисахарид δ. риеитошае серотипа 9У, полисахарид δ. риеитошае серотипа 14, полисахарид δ. риеитошае серотипа 18С, полисахарид δ. риеитошае серотипа 19Р, полисахарид δ. риеитошае серотипа 23Р, полисахарид δ. риеитошае серотипа 1, полисахарид δ. риеитошае серотипа 3, полисахарид δ. риеитошае серотипа 5, полисахарид δ. риеитошае серотипа 6А, полисахарид δ. риеитошае серотипа 7Р и полисахарид δ. риеитошае серотипа 19А.
В других конкретных вариантах осуществления белок из состава конъюгата полисахарид-белок выбран из группы, состоящей из СРМ197, токсоида столбняка, токсоида холеры, токсоида коклюша, термолабильного токсоида Е. сой (ЬТ), токсоида пневмолизина, поверхностного белка А пневмококка (РкрА), белка адгезина А пневмококка (РкаА), пептидазы С5а из δΟ^^^^Ηδ, белка Ό Наеторййик шЛиеп/ае. овальбумина, гемоцианина морского блюдечка (КЬН), бычьего сывороточного альбумина (ΒδΑ) и очищенного белкового производного туберкулина (ΡΡΌ).
В одном из конкретных вариантов осуществления состав конъюгата полисахарид-белок представляет собой состав 7-валентного конъюгата пневмококка (7уРпС), содержащий полисахарид δ. рпеитотае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 9У, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 19Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197, и полисахарид δ. рпеитотае серотипа 23Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197.
В другом конкретном варианте осуществления состав конъюгата полисахарид-белок представляет собой состав 13-валентного конъюгата пневмококка (13уРпС), содержащий полисахарид δ. рпеитошае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 9У, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 19Р, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 23Р, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 1, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 3, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 5, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 6А, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 7Р, конъюгированный с полипептидом СРМ197, и полисахарид δ. рпеитошае серотипа 19А, конъюгированный с полипептидом СКМ197.
В других вариантах осуществления состав дополнительно содержит один или несколько полисахаридов менингококка, один или несколько антигенных белков менингококка или их сочетание.
В другом варианте осуществления состав дополнительно содержит один или несколько полисахаридов стрептококка, один или несколько антигенных белков стрептококка или их сочетание.
- 4 023470
В других конкретных вариантах осуществления состав дополнительно содержит один или несколько адъювантов. Примеры подходящих адъювантов описаны далее.
В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к составам, ингибирующим индуцированное силиконом осаждение композиции пептидазы С5а стрептококка (8СР), содержащейся в силиконизированных контейнерных устройствах, содержащим (ί) рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 6,5, (тт) соль алюминия и (ίίί) пептидазу С5а стрептококка. В конкретных вариантах осуществления контейнерные устройства выбраны из одного или нескольких из группы, состоящей из флакона, пробки флакона, крышки флакона, стеклянной крышки, резиновой крышки, пластиковой крышки, шприца, стопора шприца, поршня шприца, бутылки, мензурки, мерного цилиндра, ферментера, биореактора, пробирки, трубки, пакета, банки, ампулы, картриджа и одноразовой ручки.
В другом варианте осуществления рН-забуференный солевой раствор из состава обладает рН 5,57,5. В других вариантах осуществления буфер представляет собой сукцинат, гистидин, фосфат или цитрат. В конкретных вариантах осуществления буфер представляет собой сукцинат при конечной концентрации 1-10 мМ и рН 5,8-6,0. В другом варианте осуществления соль в рН-забуференном солевом растворе содержит хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание.
В других конкретных вариантах осуществления состав дополнительно содержит полисорбат 80 (Т\уссп™80). В одном конкретном варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01-10% полисорбата 80 по мас./об. состава.
В других вариантах осуществления композиция §СР дополнительно содержит один или несколько полипептидов, выбранных из группы, состоящей из полипептида стрептококка, полипептида пневмококка, полипептида менингококка и полипептида стафилококка.
В других конкретных вариантах осуществления композиция §СР дополнительно содержит один или несколько полисахаридов, выбранных из группы, состоящей из полисахарида стрептококка, полисахарида пневмококка, полисахарида менингококка и полисахарида стафилококка.
В другом варианте осуществления состав дополнительно содержит один или несколько адъювантов. Примеры подходящих адъювантов описаны далее.
В других вариантах осуществления изобретение относится к составам, стабилизирующим композицию белка 2086 N. тешидШФз, содержащим (ί) рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 6,5, (тт) поверхностно-активное вещество и (ίίί) белок 2086 N. тешидШФз. Примерные белки 2086 N. тетидШФз описаны далее. В одном из конкретных вариантов осуществления состав белка 2086 N. тешпщОбк содержится в контейнерных устройствах. В конкретных вариантах осуществления контейнерные устройства выбраны из одного или нескольких из группы, состоящей из флакона, пробки флакона, крышки флакона, стеклянной крышки, резиновой крышки, пластиковой крышки, шприца, стопора шприца, поршня шприца, бутылки, мензурки, мерного цилиндра, ферментера, биореактора, пробирки, трубки, пакета, банки, ампулы, картриджа и одноразовой ручки.
В других вариантах осуществления рН-забуференный солевой раствор в составе обладает рН 5,57,5. В других вариантах осуществления буфер представляет собой сукцинат, гистидин, фосфат или цитрат. В одном конкретном варианте осуществления буфер представляет собой сукцинат при конечной концентрации 1-10 мМ и рН 5,8-6,0. В другом конкретном варианте осуществления конечная концентрация сукцинатного буфера составляет 5 мМ. В других вариантах осуществления соль в рН-забуференном солевом растворе содержит хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание.
В конкретных вариантах осуществления поверхностно-активное вещество в составах выбрано из группы, состоящей из полисорбата 20 (Ттееп™20), полисорбата 40 (Т\уееп™40). полисорбата 60 (Т\уееп™60). полисорбата 65 (Ттееп™65), полисорбата 80 (Ттееп™80), полисорбата 85 (Ттееп™85), Тгйои™ N-101, Тгйои™ Х-100, октоксинола 40, ноноксинола-9, триэтаноламина, олеата триэтаноламина полипептида, гидроксистеарата полиоксиэтилена-660 (РЕО-15, §о1и1о1 Н15), рицинолеата полиоксиэтилена-35 (Сгеторйог ЕЬ™), соевого лецитина и полоксамера. В одном конкретном варианте осуществления поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В конкретных вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01-10% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,05% полисорбата 80 по мас./об. состава. В других вариантах осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,1% полисорбата 80 по мас./об. состава. В другом варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 1,0% полисорбата 80 по мас./об. состава. В другом варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 10,0% полисорбата 80 по мас./об. состава.
В других конкретных вариантах осуществления композиция белка 2086 N. тешидШФз дополнительно содержит один или несколько полипептидов, выбранных из группы, состоящей из полипептида стрептококка, полипептида пневмококка, полипептида менингококка и полипептида стафилококка. В других вариантах осуществления композиция белка 2086 N. тепшщОбк дополнительно содержит один
- 5 023470 или несколько полисахаридов, выбранных из группы, состоящей из полисахарида стрептококка, полисахарида пневмококка, полисахарида менингококка и полисахарида стафилококка.
В другом варианте осуществления состав дополнительно содержит один или несколько адъювантов. Примеры подходящих адъювантов описаны далее.
В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к составам, ингибирующим индуцированное силиконом осаждение композиции белка 2086 N. тешпдШФз, содержащейся в силиконизированных контейнерных устройствах, содержащим (ί) рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 6,5, (ίί) соль алюминия и (ίίί) белок N. тешпдШάίδ 2086. В конкретных вариантах осуществления контейнерные устройства выбраны из одного или нескольких из группы, состоящей из флакона, пробки флакона, крышки флакона, стеклянной крышки, резиновой крышки, пластиковой крышки, шприца, стопора шприца, поршня шприца, бутылки, мензурки, мерного цилиндра, ферментера, биореактора, пробирки, трубки, пакета, банки, ампулы, картриджа и одноразовой ручки.
В другом варианте осуществления рН-забуференный солевой раствор в составах обладает рН 5,57,5. В других вариантах осуществления буфер представляет собой сукцинат, гистидин, фосфат или цитрат. В конкретных вариантах осуществления буфер представляет собой сукцинат при конечной концентрации 1-10 мМ и рН 5,8-6,0. В другом варианте осуществления соль в рН-забуференном солевом растворе содержит хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание.
В других конкретных вариантах осуществления состав дополнительно содержит полисорбат 80 (Тетееп™80). В одном конкретном варианте осуществления конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01-10% полисорбата 80 по мас./об. состава.
В других вариантах осуществления композиция белка 2086 N. тешпдШФз дополнительно содержит один или несколько полипептидов, выбранных из группы, состоящей из полипептида стрептококка, полипептида пневмококка, полипептида менингококка и полипептида стафилококка.
В других конкретных вариантах осуществления композиция белка 2086 N. тешпдШФз дополнительно содержит один или несколько полисахаридов, выбранных из группы, состоящей из полисахарида стрептококка, полисахарида пневмококка, полисахарида менингококка и полисахарида стафилококка.
В другом варианте осуществления состав дополнительно содержит один или несколько адъювантов. Примеры подходящих адъювантов описаны далее.
Другие признаки и преимущества изобретения будут очевидны из следующего подробного описания, из вариантов его осуществления и из формулы изобретения.
Краткое описание рисунков
На фиг. 1 показана стабильность составов пептидазы С5а стрептококка (ЗСР) (заполняющих шприцы) до и после двух суток осторожного встряхивания (60 срт) на горизонтальном орбитальном встряхивателе. Данные, представленные на фиг. 1А, представляют собой стабильность в течение двух суток 8СР, составленной без Тетееп™80 (т.е. 0%), в то время как данные на фиг. 1В представляют собой стабильность в течение двух суток 8СР, составленной с 0,025% Тетееп™80. Буферы, применяемые в составах, показанных на фиг. 1А и 1В, представляют собой забуференный сукцинатом солевой раствор (ЗВЗ), фосфатно-солевой буфер (РВЗ) и трис(гидроксиметил)аминометан (ТК1З).
На фиг. 2 показана общая потеря антигенности 13уРпС, составленного с А1РО4 (0,25 мг/мл) и заполняющего шприц ΒΌ Нурак, после 2, 8 и 24 ч встряхивания при 500 об/мин и 2-8°С.
На фиг. 3 показана общая потеря антигенности 13уРпС, составленного с А1РО4 (0,25 мг/мл) и заполняющего несиликонизированный шприц, после 2, 8 и 24 ч встряхивания при 500 об/мин и 2-8°С.
На фиг. 4 показана общая потеря антигенности 13уРпС, составленного с А1РО4 (0,25 мг/мл) и заполняющего шприц Уейег, после 2, 8 и 24 ч встряхивания при 500 об/мин и 2-8°С.
На фиг. 5 показана общая потеря антигенности 13уРпС, составленного с А1РО4 (0,25 мг/мл) и заполняющего шприц ЗеЕой ТорРас, после 2, 8 и 24 ч встряхивания при 500 об/мин и 2-8°С.
На фиг. 6 показана общая потеря антигенности 13уРпС, составленного с (фиг. 6А) и без (фиг. 6В) А1РО4 (0,25 мг/мл) и заполняющего шприц ΒΌ после термической обработки, после 2, 8 и 24 ч встряхивания при 500 об/мин и 2-8°С.
На фиг. 7 показана общая потеря антигенности 13уРпС составленного с (фиг. 7А) и без (фиг. 7В) А1РО4 (0,25 мг/мл) и заполняющего шприц ВипйегО1а8 РЗ2, после 2, 8 и 24 ч встряхивания при 500 об/мин и 2-8°С.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение направлено на существующую в данной области необходимость улучшения стабильности иммуногенных композиций, таких как конъюгаты полисахарид-белок и белковые иммуногены. Таким образом, настоящее изобретение в широком смысле относится к новым составам поверхностно-активных веществ и/или новым составам солей алюминия, стабилизирующим иммуногенные композиции и ингибирующим их осаждение. Более конкретно, изобретение, описанное далее, направлено на существующую в данной области необходимость составов, стабилизирующих иммуногенные композиции и ингибирующих формирование твердых частиц (например, агрегацию, осаждение) в иммуногенных
- 6 023470 композициях, перерабатываемых, разрабатываемых, составленных, изготовленных и/или сохраняемых в контейнерных устройствах, таких как ферментеры, биореакторы, флаконы, бутылки, пакеты, шприцы, резиновые пробки, пробирки и т.п.
Как указано выше в разделе Предпосылки изобретения, различные факторы влияют на стабильность иммуногенных композиций, включая в качестве неограничивающих примеров химическую стабильность иммуногенной композиции, физическую/термическую стабильность иммуногенной композиции, совместимость иммуногенной композиции с системой контейнера/крышки, взаимодействия между иммуногенной композицией и неактивными ингредиентами (например, буферами, солями, наполнителями, криопротекторами), способ изготовления, лекарственную форму, условия внешней среды, встречающиеся во время перевозки, хранения и манипуляций (например, температура, влажность, усилия сдвига), и промежуток времени между изготовлением и использованием.
Стабильность иммуногенной композиции по изобретению легко определить с использованием стандартных способов, которые являются хорошо известными и общепринятыми для специалистов в данной области. Например, для иммуногенной композиции исследуют стабильность, агрегацию, иммуногенность, формирование твердых частиц, потерю белка (концентрации) и т.п. способами, включающими в себя в качестве неограничивающих примеров рассеяние света, оптическую плотность, скорость седиментации при центрифугировании, равновесие седиментации при центрифугировании, круговой дихроизм (СЛ), анализ по Лоури, анализ с бицинхониновой кислотой (ВСА), связывание антитела и т.п.
Как подробно описано здесь, настоящее изобретение относится к неожиданным и удивительным результатам, что составление иммуногенной композиции с поверхностно-активным веществом, таким как Т\уссп™8(). значительно усиливает стабильность и ингибирует осаждение иммуногенной композиции. Например, наблюдали, что по настоящему изобретению (например, см. пример 2) 13-валентный конъюгат пневмококка (13уРиС), составленный в забуференном солевом растворе и заполняющий шприц для однократной дозы, будет начинать осаждаться из раствора в течение 10 мин при 2-8°С при осторожном встряхивании на горизонтальном орбитальном встряхивателе (горизонтальный орбитальный встряхиватель использовали для имитации типичных условий получения, перевозки и хранения иммуногенной композиции 13уРиС). Однако, неожиданно обнаружили, что 13уРиС, составленный в забуференном солевом растворе и 0,001% Т\уссп™80. заполняющий шприц для однократной дозы и осторожно встряхиваемый при 2-8°С, являлся стабильным в течение 25 суток без видимых признаков осаждения (данные не представлены). Таким образом, эти данные показывают, что добавление поверхностноактивного вещества (например, Т\уссп™80) к составу иммуногенной композиции увеличивает стабильность иммуногенной композиции.
Второе исследование стабильности 13уРиС дополнительно подтвердило, что добавление поверхностно-активного вещества к составу значительно увеличивает стабильность 13уРиС. Например, стабильность (т.е. анализируемую измерением изменения антигенности 13уРиС) состава 13уРиС с 0,05% Т\уссп™80 (табл. 1) и без Т\уссп™80 (0,0%, табл. 1) оценивали в течение 2 ч. Как показано в табл. 1, присутствовало значительное снижение антигенности полисахаридов 13 серотипов (составленных без Т\уссп™80) во время анализа в течение 2 ч. Однако, достаточно ясно для состава 13уРиС, содержащего 0,05% Т\уссп™80 (табл. 1), была показана сильная стабильность во время анализа антигенности в течение 2 ч. Наблюдали также, что 13уРиС, составленный в 250 мл стеклянных бутылках либо с 0,01% Т\уссп™80. либо с 0,05% Т\уссп™8 0, может выдерживать значительные усилия сдвига, индуцированные встряхиванием составов в течение 30 мин при 2-8°С, с малой потерей антигенности или без потери антигенности (например, см. пример 2, табл. 2).
В других экспериментах (пример 3) было показано, что стабильность иммуногенной композиции пептидазы С5а стрептококка (8СР) сильно увеличивается при составлении с поверхностно-активным веществом, таким как Т\уссп™80. Например, как показано на фиг. 1А, после 2 суток встряхивания 8СР (55 мкг/мл), составленной либо в 5 мМ сукцинатном буфере (рН 6,0), либо в 10 мМ фосфатном буфере (рН 7,0 и 7,4), либо в 10 мМ Тпз буфере (рН 7,5), присутствовало значительное снижение (например, более чем на 90%) концентрации 8СР. Однако, как показано на фиг. 1В, добавление 0,025% Т\уссп™80 к составам 8СР с сукцинатом, 8СР с фосфатом и 8СР с Тпз перед встряхиванием в течением 2 суток полностью ингибирует потерю 8СР, которую наблюдали на фиг. 1А.
Иммуногенную композицию 13уРиС по изобретению можно также составлять с адъювантом или без адъюванта, такого как фосфат алюминия (А1РО4). Таким образом, в отдельной серии экспериментов (пример 4) иммуногенные композиции 13уРиС составляли в 5 мМ сукцинатном буфере (рН 5,8), 0,85% №С1 и А1РО4 (0,25 мг алюминия/мл) без добавления поверхностно-активного вещества (например, в состав не включали Ттеееи™80).
В этих экспериментах иммуногенной композицией 13уРиС (составленной в присутствии А1РО4) наполняли различные силиконизированные и несиликонизированные контейнерные устройства (например, см. табл. 3) и подвергали имитации условий перевозки и манипуляций посредством встряхивания при 28°С. В этих экспериментах наблюдали (пример 4), что для контейнерных устройств с более высоким содержанием силикона характерна более высокая степень формирования твердых частиц 13уРиС и более
- 7 023470 высокий процент потери антигенности 13уРпС. Анализ ΡΤΙΚ твердых частиц показал, что твердые частицы состоят из белка и силикона (данные не представлены), и что приблизительно 85% 13уРиС связано с А1РО4, где оставшиеся 15% представляли собой свободный (не связанный с А1РО4) 13уРиС в растворе.
В другом эксперименте, сравнивающем иммуногенные композиции 13уРиС, составленные с и без А1РО4, которыми затем наполняли одинаковые шприцы, наблюдали, что 13уРиС, составленный без А1РО4, теряет значительно больше антигенности, чем 13уРиС с А1РО4, в тестированных шприцах (например, см. фиг. 6 и 7).
Таким образом, изобретение, как описано здесь, относится к новым составам, стабилизирующим иммуногенные композиции и ингибирующим агрегацию или осаждение иммуногенных композиций, таких как конъюгаты полисахарид-белок (например, 13уРиС) и белковые иммуногены (например, пептидаза С5а стрептококка, белок ОКР 2086 N. тешпдШйй), в зависимости от различных факторов, влияющих на стабильность иммуногенных композиций (например, усилия сдвига, встряхивание при перевозке, взаимодействия с силиконовым маслом, адсорбция, способ изготовления, температура, влажность, промежуток времени между изготовлением и использованием и т.д.).
В конкретных вариантах осуществления изобретение относится к составу, стабилизирующему конъюгат полисахарид-белок, где состав содержит рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, поверхностно-активное вещество и один или несколько конъюгатов полисахарид-белок. В других вариантах осуществления состав конъюгата полисахарид-белок содержится в контейнерных устройствах. В другом варианте осуществления изобретение относится к составу, стабилизирующему композицию пептидазы С5а стрептококка (8СР), где состав содержит рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 6,5, поверхностно-активное вещество и пептидазу С5а стрептококка. В конкретных вариантах осуществления состав 8СР содержится в контейнерных устройствах. В другом варианте осуществления изобретение относится к составу, стабилизирующему композицию белка 2086 N. тепшщОйй. где состав содержит рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, поверхностно-активное вещество и белок N. тешидШФк 2086. В конкретных вариантах осуществления состав 2086 менингококка содержится в контейнерных устройствах.
В других конкретных вариантах осуществления изобретение относится к составу, ингибирующему индуцируемое силиконом осаждение конъюгата полисахарид-белок, содержащегося в силиконизированных контейнерных устройствах, где состав содержит рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, соль алюминия и один или несколько конъюгатов полисахарид-белок. В другом варианте осуществления изобретение относится к составу, ингибирующему индуцированное силиконом осаждение композиции пептидазы С5а стрептококка (8СР), содержащейся в силиконизированных контейнерных устройствах, где состав содержит рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 6,5, соль алюминия и пептидазу С5а стрептококка. В других конкретных вариантах осуществления изобретение относится к составу, ингибирующему индуцируемое силиконом осаждение композиции белка 2086 N. тешпдШйй, содержащейся в силиконизированных контейнерных устройствах, где состав содержит рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, соль алюминия и белок 2086 N. тешпдШйй.
В других вариантах осуществления изобретение относится к составам, оптимизирующим антигенную стабильность и процент связывания с адъювантом - солью алюминия (например, А1РО4) белка 2086 N. тешидШФк, где состав содержит рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, поверхностно-активное вещество, соль алюминия и белок 2086 N. тешпдШФк. В конкретных вариантах осуществления состав содержится в контейнерных устройствах.
Как определено далее, термины осаждение, осадок, формирование твердых частиц, помутнение и агрегация можно использовать взаимозаменяемо, и они предназначены для обозначения любого физического взаимодействия или химической реакции, которые приводят к агрегации конъюгата полисахарид-белок или белкового (или полипептидного) иммуногена. Процесс агрегации (например, агрегации белка) является хорошо известным (но не хорошо понятным) и описанным в данной области, и на него часто влияют многочисленные физико-химические воздействия, включая тепло, давление, рН, встряхивание, усилия сдвига, замораживание-оттаивание, дегидратация, тяжелые металлы, фенольные соединения, силиконовое масло, денатурирующие средства и т.п.
Как определено далее, конъюгат полисахарид-белок, конъюгат пневмококка, 7-валентный конъюгат пневмококка (7уРпС), 13-валентный конъюгат пневмококка (13уРпС), иммуногенная композиция пептидазы С5а стрептококка (8СР) и иммуногенная композиция белка 2086 N. МешпдШйй по изобретению включают в себя жидкие составы, замороженные жидкие составы и твердые (например, высушенные сублимацией или лиофилизированные) составы.
А. Поверхностно-активные вещества.
Как указано выше, изобретение относится к составам, стабилизирующим иммуногенные композиции и ингибирующим агрегацию иммуногенных композиций в зависимости от различных факторов, влияющих на стабильность иммуногенных композиций (например, усилий сдвига, встряхивания при пере- 8 023470 возке, взаимодействий с силиконовым маслом, адсорбции, способов изготовления, температуры, влажности, промежутка времени между изготовлением и использованием и т.д.). В конкретных вариантах осуществления изобретение относится к составам, содержащим поверхностно-активное вещество.
Поверхностно-активное вещество (или поверхностно-активное средство) в общем определяют как (а) молекулу или соединение, содержащие гидрофильную группу или часть и липофильную (гидрофобную) группу или часть, и/или (Ь) молекулу, вещество или соединение, которое понижает или уменьшает поверхностное натяжение раствора. Как определяют здесь, поверхностно-активное вещество по настоящему изобретению представляет собой любую молекулу или соединение, снижающие поверхностное натяжение состава иммуногенной композиции.
Поверхностно-активное вещество, применяемое в составе по настоящему изобретению, содержит любое поверхностно-активное вещество или любое сочетание поверхностно-активных веществ, стабилизирующих иммуногенную композицию и ингибирующих агрегацию иммуногенной композиции, описанной здесь. Таким образом, поверхностно-активное вещество по изобретению включает в себя в качестве неограничивающих примеров полисорбат 20 (Т\уссп|Л120). полисорбат 40 (Т\уееп™40). полисорбат 60 (Т\уееп™60). полисорбат 65 (Т^ееп™65), полисорбат 80 (Т\\ееп™80). полисорбат 85 (Т\\ееп™85). Тпΐοη™ N-101, Ττίΐοη™ Х-100, октоксинол 40, ноноксинол-9, триэтаноламин, олеат триэтаноламина полипептида, гидроксистеарат полиоксиэтилена-660 (РЕС-15, δοϊυΐοΐ Н15) , рицинолеат полиоксиэтилена-35 (Сгешорйог ЕЬ™), соевый лецитин, полоксамер, гексадециламин, октадециламин, сложные эфиры октадецила и аминокислоты, лизолецитин, бромид диметилдиоктадециламмония, метоксигексадецилглицерин, плюроновые полиолы, полиамины (например, пиран, декстрансульфат, поли 1С, карбопол), пептиды (например, мурамилпептид и дипептид, диметилглицин, тафцин), масляные эмульсии, минеральные гели (например, фосфат алюминия) и иммуностимулирующие комплексы (18СОМ8).
Специалист в данной области может легко определить подходящее поверхностно-активное вещество или сочетание поверхностно-активных веществ посредством измерения поверхностного натяжения конкретного состава иммуногенной композиции в присутствии и в отсутствие поверхностно-активного вещества (веществ). Альтернативно, поверхностно-активное вещество оценивают качественно (например, визуальный контроль формирования частиц) или количественно (например, рассеяние света, скорость седиментации при центрифугировании, оптическая плотность, антигенность) по их способности уменьшать, ингибировать или предупреждать агрегацию иммуногенной композиции.
В. Контейнерные устройства.
В конкретных вариантах осуществления изобретение относится к составам иммуногенных композиций, содержащимся в контейнерных устройствах. Как определяют здесь, контейнерные устройства по настоящему изобретению включают в себя любое изделие, которое используют, чтобы вмещать, содержать, смешивать, перемешивать, размельчать, инъецировать, переносить, распылять и т.д. иммуногенную композицию во время исследования, переработки, разработки, составления, изготовления, хранения и/или введения. Например, контейнерные устройства по настоящему изобретению включают в себя в качестве неограничивающих примеров обычную лабораторную стеклянную посуду, бутылки, мензурки, мерные цилиндры, ферментеры, биореакторы, пробирки, трубки, пакеты, банки, флаконы, крышки флаконов (например, резиновая пробка, навинчивающийся колпачок), ампулы, шприцы, стопоры шприцев, поршни шприцев, резиновые крышки, пластиковые крышки, стеклянные крышки и т.п. Контейнерные устройства по настоящему изобретению не являются ограниченными по материалу для изготовления, и материалы включают в себя такие материалы, как стекло, металлы (например, сталь, нержавеющая сталь, алюминий и т.д.) и полимеры (например, термопластики, эластомеры, термопластики-эластомеры).
Опытному специалисту в данной области будет понятно, что контейнерные устройства, описанные выше, совсем не представляют собой исчерпывающий список, но просто служат руководством для специалиста в данной области по отношению к множеству контейнерных устройств, которые используют, чтобы вмещать, содержать, смешивать, перемешивать, размельчать, инъецировать, переносить, распылять и т.д. иммуноген или иммуногенную композицию во время исследования, переработки, разработки, составления, изготовления, хранения и/или введения композиции. Дополнительные контейнерные устройства, предусмотренные для использования по настоящему изобретению, можно найти в опубликованных каталогах от поставщиков и производителей лабораторного оборудования, таких как Ипкей §1а1е8 Р1а8Йс С.огр. (Ыша, ОН), УАК™ (Аек! СНеЧег. РА), ΒΌ Вюкаепсек (РгапкПп Ьакек, ΝΣ), ИкНег 8степййс 1п1егпа1юпа1 1пс. (НатрЮп. ΝΗ) и §1дта-А1бйсН (δΐ. ΕοιιΑ МО).
Таким образом, новые составы по настоящему изобретению являются особенно преимущественными в том, что они стабилизируют иммуногенные составы и ингибируют осаждение иммуногенных составов, содержащихся в контейнерных устройствах, во время различных стадий исследования, переработки, разработки, составления, изготовления, хранения и/или введения композиции. Новые составы по изобретению не только стабилизируют иммуногенные композиции против физических/термических воздействий (например, температура, влажность, усилия сдвига и т.д.), они также увеличивают стабильность иммуногенных композиций и ингибируют осаждение иммуногенных композиций в зависимости от отрица- 9 023470 тельных факторов или влияний, таких как несовместимость иммуногенной композиции с системой контейнера/крышки (например, с силиконизированными контейнерными устройствами).
Таким образом, новые составы по настоящему изобретению являются, в частности, применимыми для стабилизации иммуногена (т.е. конъюгата полисахарид-белок, белкового или полипептидного антигена) против осаждения, индуцированного силиконовым маслом, и осаждения, описанного выше. Например, в одновременно рассматриваемой патентной заявке США № 60/795098, поданной 26 апреля 2006 г., конкретно приведенной в данном описании в качестве ссылки, описана агрегация иммуногенных композиций в присутствии силиконового масла, обнаруженная в контейнерных устройствах, таких как шприцы, стеклянные флаконы, резиновые пробки и т.п., где добавление поверхностно-активного вещества в контейнерные устройства предупреждает индуцированную силиконовым маслом агрегацию этих иммуногенных композиций.
С. Адъюванты и фармацевтические носители/наполнители.
В конкретных вариантах осуществления иммуногенные композиции по изобретению дополнительно составляют с адъювантом. Адъювант представляет собой вещество, которое усиливает иммунный ответ при введении вместе с иммуногеном или антигеном. Показано, что ряд цитокинов или лимфокинов обладают иммуномодулирующей активностью, и, таким образом, их можно использовать в качестве адъювантов, включая в качестве неограничивающих примеров интерлейкины 1-α, 1-β, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12 (см., например, патент США № 5723127), 13, 14, 15, 16, 17 и 18 (и их мутантные формы), интерфероны-α, β и γ, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (СМС8Р, см., например, патент США № 5078996 и инвентарный номер в АТСС 39900), макрофагальный колониестимулирующий фактор (МС8Р), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (СС8Р) и факторы некроза опухоли α и β (ΤΝΡ). Другие адъюванты, применимые по этому изобретению, включают в себя хемокины, включая, без ограничения, МСР-1, ΜΙΡ-1α, ΜΙΡ-1β и Κ.ΑΝΤΕ8.
В конкретных вариантах осуществления адъюванты, применимые для усиления иммунного ответа в составах иммуногенных композиций, включают в себя, без ограничения, МРЬ™ (3-О-деацилированный монофосфориллипид Α; Сопха, НатйЮп, ΜΤ), описанный в патенте США № 4912094, содержание которого таким образом приведено в качестве ссылки. Также пригодными для применения в качестве адъювантов являются синтетические аналоги липида А или соединения аминоалкилглюкозаминфосфата (ΑΟΡ) или их производные или аналоги, доступные из Сопха (НатйЮп, ΜΤ) и описанные в патенте США № 6113918, содержание которого, таким образом, приведено в качестве ссылки. Один такой АСР представляет собой 2-[(К)-3-тетрадеканоилокситетрадеканоиламино]этил-2-дезокси-4-О-фосфоно-3-О[(К)-3 -тетрадеканоилокситетрадеканоил] -2-[(К)-3 -тетрадеканоилокситетрадеканоиламино] -Ь-Э-глюкопиранозид, известный также как 529 (ранее известный как К.С529). Этот адъювант 529 составляют в виде водной формы или в виде стабильной эмульсии (КС529-8Е).
Другие адъюванты включают в себя эмульсии минерального масла и воды, соли алюминия (квасцы), такие как гидроксид алюминия, фосфат алюминия, сульфат алюминия и т.д., амфиген, авридин, Ь121/сквален, Ό-лактид-полилактид/гликозид, плюроновые полиолы, мурамилдипептид, убитую Вотйе1е11а, сапонины, такие как 8йти1оп™ 08-21 (Апйдешск, Ртаттдйат, МА), описанные в патенте США № 5057540, содержание которого, таким образом, приведено в данном описании в качестве ссылки, и полученные из них частицы, такие как 18СОМ8 (иммуностимулирующие комплексы), I8СОΜΑΤΚΊX (С8Ь Ытйей, РаткуШе, ЛиЧгаНа), описанный в патенте США № 5254339, МусоЬасЮтшт 1иЬегси1о515, бактериальные липополисахариды, синтетические полинуклеотиды, такие как олигонуклеотиды, содержащие СрС-мотив (патент США № 6207646, содержание которого, таким образом, приведено в качестве ссылки), 1С-31 (1п1етсе11 АС, Айепиа, АиБйта), описанный в европейских патентах № 1296713 и № 1326634, токсин коклюша (РТ) или термолабильный токсин Е. сой (ΠΤ), в частности ΕΤ-Κ63, ΕΤ-Κ.72, ΡΤК9/С129; см., например, международные патентные публикации № АО 93/13302 и АО 92/19265, содержание которых приведено в данном описании в качестве ссылки.
Также применимыми в качестве адъювантов (и белков-носителей) являются токсины холеры и их мутанты, включая токсины, описанные в опубликованной международной патентной заявке номер АО 00/18434 (где глутаминовую кислоту в положении аминокислоты 29 заменяют другой аминокислотой (отличной от аспарагиновой кислоты), предпочтительно гистидином). Подобные СТ токсины или мутанты описаны в опубликованной международной патентной заявке номер АО 02/098368 (где изолейцин в положении аминокислоты 16 заменяют другой аминокислотой, либо отдельно, либо в сочетании с заменой серина в положении аминокислоты 68 другой аминокислотой; и/или где валин в положении аминокислоты 72 заменяют другой аминокислотой). Другие СТ токсины описаны в опубликованной международной патентной заявке номер АО 02/098369 (где аргинин в положении аминокислоты 25 заменяют другой аминокислотой; и/или вставляют аминокислоту в положении аминокислоты 49; и/или вставляют две аминокислоты в положениях аминокислот 35 и 36).
В конкретных вариантах осуществления составы иммуногенных композиций содержат фармацевтически приемлемый разбавитель, наполнитель или фармацевтически приемлемый носитель. В одном варианте осуществления фармацевтически приемлемый разбавитель представляет собой стерильную
- 10 023470 воду, воду для инъекций, стерильный изотонический солевой раствор или биологический буфер. Конъюгаты полисахарид-белок и/или белковые иммуногены смешивают с такими разбавителями или носителями общепринятым образом. Как применяют в настоящем описании, выражение фармацевтически приемлемый носитель предназначено, чтобы включать в себя все и любые растворители, диспергенты, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические и замедляющие всасывание средства и т.п., подходящие для введения хозяевам - людям или другим позвоночным. Подходящий носитель является очевидным для специалистов в данной области и будет зависеть в значительной степени от способа введения.
Например, наполнители, которые могут присутствовать в составе иммуногенной композиции, представляют собой консерванты, химические стабилизаторы и суспендирующие или диспергирующие средства. Как правило, стабилизаторы, консерванты и т.п. оптимизируют для определения лучшего состава для эффективности для намеченного реципиента (например, человека). Примеры консервантов включают в себя хлорбутанол, сорбат калия, сорбиновую кислоту, диоксид серы, пропилгаллат, парабены, этилванилин, глицерин, фенол, и парахлорфенол. Примеры стабилизирующих ингредиентов включают в себя казаминокислоты, сахарозу, желатин, феноловый красный, Ν-Ζ амин, дифосфат монокалия, лактозу, гидролизат лактальбумина и сухое молоко.
В конкретных вариантах осуществления состав иммуногенной композиции получают для введения людям, например, в форме жидкостей, порошков, аэрозолей, таблеток, капсул, таблеток или капсул с энтеросолюбильным покрытием или суппозиториев. Таким образом, составы иммуногенной композиции могут также включать в себя в качестве неограничивающих примеров суспензии, растворы, эмульсии в масляных или водных носителях, пасты и имплантируемые составы с замедленным высвобождением или биологически разлагаемые составы.
Иммуногенные композиции по настоящему изобретению не являются ограниченными посредством выбора общепринятых физиологически приемлемых носителей, разбавителей и наполнителей, таких как растворители, буферы, адъюванты или другие ингредиенты, применимых в фармацевтических препаратах описанных выше типов. Получение этих фармацевтически приемлемых композиций из вышеописанных компонентов, обладающих подходящими рН, изотоничностью, стабильностью и другими общепринятыми характеристиками, находится в компетенции специалистов в данной области.
Ό. Иммуногены.
В конкретных вариантах осуществления состав конъюгата полисахарид-белок по изобретению содержит один или несколько полисахаридов пневмококка. В других вариантах осуществления состав конъюгата полисахарид-белок по изобретению содержит один или несколько полисахаридов стрептококка. В других вариантах осуществления состав конъюгата полисахарид-белок по изобретению содержит один или несколько полисахаридов менингококка. В других вариантах осуществления состав конъюгата полисахарид-белок по изобретению содержит сочетание одного или нескольких полисахаридов пневмококка, одного или нескольких полипептидов пневмококка, одного или нескольких полисахаридов стрептококка, одного или нескольких полипептидов стрептококка, одного или нескольких полисахаридов менингококка и/или одного или нескольких полипептидов менингококка.
Как определено далее, термин полисахарид предназначен, чтобы включать в себя любой антигенный сахаридный элемент (или антигенную единицу), общепринятый в области иммунологических и бактериальных вакцин, включая в качестве неограничивающих примеров сахарид, олигосахарид, полисахарид, липосахарид, липоолигосахарид (ЬО3), липополисахарид (ЬР3), гликозилат, гликоконъюгат и т.п.
В одном конкретном варианте осуществления изобретения один или несколько полисахаридов пневмококка представляют собой полисахарид 3. рпеитошае серотипа 4, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 6В, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 9У, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 14, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 18С, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 19Р, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 23Р, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 1, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 3, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 5, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 6А, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 7Р и полисахарид 3. рпеитошае серотипа 19А.
В конкретных вариантах осуществления состав конъюгата полисахарид-белок представляет собой состав 7-валентного конъюгата пневмококка (7уРпС), содержащий полисахарид 3. рпеитошае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 9У, конъюгированный с полипептидом ΟΚΜι97, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом ΟΚΜι97, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид 3. рпеитотае серотипа 19Р, конъюгированный с полипептидом ΟΚΜι97, и полисахарид 3. рпеитошае серотипа 23Р, конъюгированный с полипептидом СРМ197.
В других конкретных вариантах осуществления состав конъюгата полисахарид-белок представляет собой состав 13-валентного конъюгата пневмококка (13уРпС), содержащий полисахарид 3. рпеитошае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 9У, конъюгированный с по- 11 023470 липептидом СКМ497, полисахарид δ. рпеитошае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СКМ497, полисахарид δ. риеитотае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 19Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. Риеитотае серотипа 23Р, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 1, конъюгированный с полипептидом СРМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 3, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 5, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 6А, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид δ. риеитотае серотипа 7Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197, и полисахарид δ. риеитотае серотипа 19А, конъюгированный с полипептидом СКМ197.
Полисахариды получают посредством общепринятых способов, известных специалистам в данной области. Например, капсульные полисахариды, описанные в настоящем изобретении, получают из серотипов 1, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7Р, 9У, 14, 18С, 19А, 19Р и 23Р δΐ^ерΐососси8 риеитотае, где каждый серотип выращивают на среде на основе сои, и затем отдельные полисахариды очищают центрифугированием, осаждением, ультрафильтрацией и колоночной хроматографией. Подобным образом, полисахариды стрептококка (например, один или несколько полисахаридов (или олигосахаридов) из β-гемолитического δι^ерЮсосси8. такого как δί^ерΐососси8 группы А, группы В, δί^ерΐососси8 группы С и δίπ^ο1ососси8 группы С) и сахариды менингококка (например, липоолигосахарид N. тетидШФз (ΡΘδ) или липополисахарид (ΡΡδ)) получают из имеющих клиническое значение серотипов или серогрупп с использованием обычных способов и методов, известных специалисту в данной области. Затем очищенные полисахариды химически активируют (например, посредством восстановительного аминирования) для получения сахаридов, способных реагировать с белком-носителем. После активации каждый капсульный полисахарид отдельно конъюгируют с белком-носителем (например, ΟΚΜι97) для получения гликоконъюгата (или, альтернативно, каждый капсульный полисахарид конъюгируют с одним и тем же белкомносителем) и составляют в состав для однократного дозирования.
Химическую активацию полисахаридов и последующую конъюгацию с белком-носителем (т.е. конъюгат полисахарид-белок) получают общепринятыми способами (см., например, патенты США №№ 4673574 и 4902506).
Белки-носители предпочтительно представляют собой белки, которые являются нетоксичными и нереакционноспособными и которые можно получить с достаточным количеством и чистотой. Белкиносители должны являться поддающимися общепринятым способам конъюгации. В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения СРМ197 используют в качестве белка-носителя.
СКМ197 (^уе!й, δаηίо^ά, N0) представляет собой нетоксичный вариант (т.е. токсоид) дифтерийного токсина, выделенного из культур СотупеЪас1етшт ЕрЫНепа штамма С7 (βι97), выращиваемых в среде на основе казаминокислот и дрожжевого экстракта. СРМ197 очищают посредством ультрафильтрации, осаждения сульфатом аммония и ионообменной хроматографии. Альтернативно, СКМ197 получают рекомбинантным способом согласно патенту США № 5614382, который, таким образом, приведен в качестве ссылки. Другие дифтерийные токсоиды также являются подходящими для использования в качестве белков-носителей.
В других вариантах осуществления белок-носитель по изобретению представляет собой ферментативно неактивную пептидазу С5а стрептококка ^СР) (например, один или несколько вариантов δСΡ, описанных в патентах США №№ 6951653, 6355255 и 6270775).
Другие подходящие белки-носители включают в себя инактивированные бактериальные токсины, такие как токсоид столбняка, токсоид коклюша, токсоид холеры (например, СТ Е29Н, описанный в международной патентной заявке νθ 2004/083251), ЬТ Е. сой, δΤ Е. сой, и экзотоксин А из Р8еийотопа8 аетидто8а. Можно использовать также белки внешней мембраны бактерий, такие как комплекс внешней мембраны с (ОМРС), порины, связывающие трансферрин белки, пневмолизин, поверхностный белок А пневмококка (Р8рА), белок адгезии пневмококка (Р8аА), или белок Ό НаеторЫ1и8 тЛиеп/ае. Другие белки, такие как овальбумин, гемоцианин морского блюдечка (КЕН), бычий сывороточный альбумин (ΒδΑ) или очищенное белковое производное туберкулина (РРЭ). также можно использовать в качестве белковносителей.
После конъюгации капсульного полисахарида с белком-носителем конъюгаты полисахарид-белок очищают (обогащают по отношению к количеству конъюгата полисахарид-белок) множеством способов. Эти способы включают в себя способы концентрирования/диафильтрации, осаждения/элюции, колоночной хроматографии и глубокой фильтрации.
После очистки отдельных гликоконъюгатов их смешивают для получения иммуногенной композиции по настоящему изобретению. Состав конъюгатов полисахарид-белок по настоящему изобретению можно получать с использованием известных в данной области способов. Например, 13 отдельных конъюгатов пневмококка можно составлять с физиологически пригодным носителем для получения композиции. Такие носители включают в себя в качестве неограничивающих примеров воду, забуференный солевой раствор, полиолы (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль) и растворы декстрозы.
- 12 023470
В других вариантах осуществления изобретение относится к составам, стабилизирующим иммуногенную композицию пептидазы стрептококка С5а (8СР), где составы содержат рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 6,5, поверхностноактивное вещество и пептидазу С5а стрептококка. Пептидаза С5а представляет собой высоко консервативную сериновую протеазу и экспрессируется у всех β-гемолитических стрептококков (например, стрептококков групп А, В, С и С). Например, нуклеотидная последовательность, кодирующая пептидазу С5а стрептококков группы В (СВ8), на 98% идентична нуклеотидной последовательности, кодирующей пептидазу С5а стрептококков группы А (СА8). Таким образом, в конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенная композиция против инфекции, вызванной β-гемолитическими стрептококками, содержит иммуноген (или антиген) пептидазу С5а.
В одном конкретном варианте осуществления пептидаза С5а по изобретению представляет собой ферментативно неактивную пептидазу С5а стрептококка (например, один или более из вариантов 8СР, описанных в патентах США №№ 6951653, 6355255 и 6270775, содержание каждого из которых конкретно приведено в данном описании в качестве ссылки). В другом конкретном варианте осуществления 8СР, используемые в новых составах иммуногенной композиции по изобретению, клонируют из стрептококков группы В. В другом варианте осуществления в последовательность 8СР стрептококков группы В вводят генетические мутации, чтобы привести ее в протеолитически неактивное состояние (например, см. патенты США №№ 6951653; 6355255 и 6270775), и экспрессируют в качестве рекомбинантного белка в Е. сок.
В другом из вариантов осуществления изобретение относится к составам, стабилизирующим иммуногенную композицию белка 208 6 N. тетпдШФк, где составы содержат рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, поверхностно-активное вещество и белок 2086 N. тетпдШШк. Белки 2086 N. тетпдШШк кодированы последовательностью нуклеиновой кислоты открытой рамки считывания (ОКЕ), идентифицированной как ОКЕ 2086 (например, см. международную публикацию № АО 03/063766 А2 (международная заявка № РСТ/И802/32369), Международную публикацию № АО 04/094596 А2 (международная заявка № РСТ/И804/011901) и Международную публикацию № АО 04/065603 А2 (международная заявка № РСТ/И804/000800), содержание каждой из которых конкретно приведено в данном описании в качестве ссылки). В следующем варианте осуществления изобретение относится к составам, оптимизирующим антигенную стабильность и процент связывания с адъювантом - солью алюминия (например, А1РО4) белка 2086 N. тетпдШШк, где составы содержат рН-забуференный солевой раствор, где буфер обладает рКа приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, поверхностно-активное вещество, соль алюминия и белок 2086 N. тешпдПкк.
Содержание всех патентов и публикаций, процитированных в данном описании, таким образом, приведено в качестве ссылки.
Е. Примеры.
Следующие примеры осуществляли с использованием общепринятых способов, которые являются хорошо известными и общепринятыми для специалистов в данной области, за исключением тех, которые подробно описаны иным образом. Следующие примеры представлены для иллюстративной цели, и их никаким образом не следует рассматривать как ограничивающие объем настоящего изобретения.
Пример 1. Иммуногенные составы, содержащие 0,001-0,05% Т\уееп™80, стабилизируют иммуноген и предупреждают его агрегацию.
Конъюгат полисахарид-белок, применяемый в этом примере, представлял собой 13-валентный конъюгат полисахарида пневмококка (13уРпС), содержащий капсульные полисахариды из 8. рпеитотае серотипов 4, 6В, 9У, 18С, 19Е, 14, 23Е, 1, 3, 5, 6А, 7Е и 19А, каждый из которых конъюгировали с СКМ197. Капсульные полисахариды получены посредством общепринятых способов, известных специалистам в данной области. Кратко, каждый серотип полисахарида выращивали в среде на основе сои, затем отдельные полисахариды очищали посредством центрифугирования, осаждения, ультрафильтрации и колоночной хроматографии. Очищенные полисахариды химически активировали для конъюгации, и каждый полисахарид отдельно конъюгировали с белком-носителем СКМ197 для получения гликоконъюгата и составляли в состав для однократной дозы.
Химическую активацию полисахаридов и последующую конъюгацию с белком-носителем осуществляли посредством общепринятых способов (например, см. патент США №№ 4673574 и 4902506). СКМ197 (Ауе!к, 8аиГогб, N0) представляет собой нетоксичный вариант (т.е. токсоид) дифтерийного токсина, выделенного из СогупеЬас!егшт Шрккепа штамма С7 (βι97), выращенного в среде на основе казаминокислот и дрожжевого экстракта. СКМ197 очищали посредством ультрафильтрации, осаждения сульфатом аммония и ионообменной хроматографии.
Эксперименты по антигенности, описанные ниже, выполняли посредством смешивания образцов 13уРпС с одной из 13 антисывороток (АЬ), специфических к каждому из серотипов полисахарида, и детекции иммунных комплексов посредством измерений рассеяния света на системе Аггау® 360 (Весктап Соикег, 1пс.; Еикейоп, СА). Детектированные измерения рассеяния света для каждого из 13 серотипов затем сравнивали со стандартной кривой и записывали как антигенность (мкг/мл).
- 13 023470
Шприцы (ΒΌ Нурак §СР™) и стопоры шприцев (ΒΌ Нурак §СР™) закупали в ΒΌ Вюксзспсск (РгаикНи Ьакек, N1). Прозрачные боросиликатные флаконы (У\УК ТгасеС1еап™, 40 мл) с покрытыми ТеГ1оп® крышками закупали в У\УКТ™ (^ек! СНеДег. РА). Полисорбат 80 (Т\уееп|Л180) закупали в ТТ. Вакег (МаШпскгой! Вакег, 1пс.; РЫШркЬигд, N1). Забуференный солевой раствор представлял собой сукцинат (5 мМ) и №С1 (0,85%) при рН 5,8.
13уРпС составляли (500 мл общего объема) при различных концентрациях поверхностно-активного вещества (Т\уееп™80; 0,001, 0,005, 0,01 и 0,05% мас./об.) следующим образом: в стеклянную литровую мензурку Ругех® добавляли 0,85% солевой раствор (150 мМ №С1), затем 50 мМ сукцинатный буфер (конечная концентрация 5 мМ) и 13уРпС. Конечная концентрация конъюгата каждого серотипа составляла 4,4 мкг/мл (за исключением серотипа 6В, для которого она составляла 8,8 мкг/мл). Затем состав 13уРпС разделяли на пять отдельных стеклянных флаконов (50 мл на флакон), где 0,0, 0,001, 0,005, 0,01 или 0,05% мас./об. Тетееп™80 добавляли в один из пяти флаконов, и каждый раствор фильтровали через 0,22 мкм фильтр Энгароге® (Мййроге; ВШепса, МА). Затем 0,65 мл каждого раствора заполняли в отдельный стеклянный шприц 3 мл ΒΌ НУРАК™ §СР™ с неокрашенными стопорами \\4432 (ΒΌ Мейюа1 РНагтасеийса1 ЗуДенв; Ргапкйп Ьакек, N1), и помещали шприцы в горизонтальный орбитальный встряхиватель (60 срт) на 100 ч при 2 -8°С.
Посредством визуального контроля наблюдали (данные не представлены), что 13уРпС, составленный в отсутствие Тетееп™80 (т.е. 0,0%), начинает осаждаться из раствора в течение 10 мин при 2-8°С при осторожном встряхивании посредством горизонтального орбитального встряхивателя. В отличие от этого 13уРпС, составленный в 0,001, 0,005, 0,01 или 0,05% Т\уееп™80 и осторожно встряхиваемый при 28°С, являлся стабильным в течение вплоть до 25 суток без видимых признаков осаждения (данные не представлены). Таким образом, эти данные показывают, что добавление поверхностно-активного вещества (например, Тетееп™80) к составу иммуногенной композиции увеличивает стабильность иммуногенной композиции.
Второй эксперимент по стабильности 13уРпС дополнительно подтвердил, что добавление поверхностно-активного вещества к составу значительно увеличивает стабильность 13уРпС. В этом эксперименте 13уРпС составляли с и без 0,05% Т\уееп|Л180. 13уРпС, составленный без Т\уееп™80 (т.е. 0,0%), получали следующим образом: в литровую стеклянную мензурку Ругех® добавляли 0,85% солевой раствор (150 мМ №С1), затем 50 мМ сукцинатный буфер (конечная концентрация 5 мМ) и 13уРпС в общем объеме 500 мл. 13уРпС, составленный с 0,05% Тетееп™80, получали следующим образом: в литровую стеклянную мензурку Ругех® добавляли 0,85% солевой раствор (150 мМ №С1), затем 50 мМ сукцинатный буфер (конечная концентрация 5 мМ), 0,05% Т\уееп|Л180 и 13уРпС в общем объеме 500 мл. Конечная концентрация конъюгата каждого серотипа в 500 мл составов составляла 4,4 мкг/мл (за исключением серотипа 6В, для которого она составляла 8,8 мкг/мл). 500 мл составов гомогенизировали посредством роторного/статорного гомогенизатора при 6000 об/мин (2-8°С) в течение 120 мин. Процесс гомогенизации создавал поверхность раздела воздух-жидкость (с пузырьками воздуха).
Стабильность состава 13уРпС с (табл. 1) и без (табл. 1) 0,05% Т\уееп|Л180 оценивали в течение 2 ч следующим образом: образцы (20-30 мл) отбирали через 0, 30 и 120 мин из составов с 0,0% и 0,05% Ттееп™80, образцы разводили 1:2 в разбавителе для белка (Аггау® 360 разбавитель для белка (Са!. № 663630); Βесктап Сои1!ег 1пс.; Ри11ег!оп, СА), и оценивали антигенность всех тринадцати серотипов 13уРпС (см. табл. 1) в системе Аггау® 360.
Как показано в табл. 1, присутствовало значительное уменьшение антигенности полисахаридов 13 серотипов (составленных без Тетееп™80) в течение двухчасового анализа. Однако, достаточно значительно для состава 13уРпС, содержащего 0,05% Т\уееп™80 (табл. 1), была показана сильная стабильность без уменьшения антигенности в течение двухчасового анализа антигенности.
- 14 023470
Таблица 1
Анализ стабильности 13уРпС, составленного с и без Туееп™80
13уРпС без ТмеепЭО 13уРпС с 0, 05% ТмеепЭО
Серотип Антиген ность 0 мин Антиген ность 30 мин Антиген ность 120 мин Серотип Антиген ность 0 мин Антиген ность 30 мин Антиген ность 120 мин
4,8 мкг/мл 4,2 мкг/мл 2,4 мкг/мл 5,1 мкг/мл 5,0 мкг/мл 5,2 мкг/мл
3 4,8 мкг/мл 4,1 мкг/мл 1,7 мкг/мл 3 5,0 мкг/мл 5,0 мкг/мл 5,2 мкг/мл
5,8 мкг/мл 5,0 мкг/мл 3,1 мкг/мл 6,1 мкг/мл 6,1 мкг/мл 6,2 мкг/мл
3,4 мкг/мл 3,0 мкг/мл 2,0 мкг/мл 5 3,6 мкг/мл 3, 6 мкг/мл 3,7 мкг/мл
6А 4,9 мкг/мл 3,8 мкг/мл 1, з мкг/мл 6А 5,4 мкг/мл 5,4 мкг/мл 5, 6 мкг/мл
6В 10,0 мкг/мл 5,6 мкг/мл 1,4 мкг/мл 6В 10, 6 мкг/мл 10,6 мкг/мл 10,5 мкг/мл
7Г 4,7 мкг/мл 3,4 мкг/мл 1,0 мкг/мл 7? 5, 3 мкг/мл 5,2 мкг/мл 5,3 мкг/мл
9У 5,6 мкг/мл 4,7 мкг/мл 2,5 мкг/мл 9ν 6,1 мкг/мл 6,1 мкг/мл 6,2 мкг/мл
14 7,6 мкг/мл 6,4 мкг/мл 3,0 мкг/мл 14 8,2 мкг/мл 8,3 мкг/мл 8,3 мкг/мл
18С 5, 6 мкг/мл 4,4 мкг/мл 1,7 мкг/мл 18С 6,2 мкг/мл 6,1 мкг/мл 6,2 мкг/мл
19А 6,4 мкг/мл 4,5 мкг/мл 1,9 мкг/мл 19А 6,8 мкг/мл 6,8 мкг/мл 6,8 мкг/мл
19Г 5, 4 мкг/мл 2,6 мкг/мл 0,0 мкг/мл 19Г 6, 1 мкг/мл 6,2 мкг/мл 6,0 мкг/мл
23Г 4,5 мкг/мл 2,8 мкг/мл 0,9 мкг/мл 23Г 5, 2 мкг/мл 5,2 мкг/мл 5,2 мкг/мл
Состав 13уРиС/Туееи™80 далее тестировали по стабильности против усилий сдвига. В этом эксперименте 100 мл композиции 13уРиС (4,4 мкг/мл серотипов 1, 3, 4, 5, 6А, 7Р, 9У, 14, 18С, 19А, 19Р, 23Р и 8,8 мкг/мл серотипа 6В, 5 мМ сукцинатный буфер, 150 мМ ЫаС1 и 0,25 мг/мл А1РО4) добавляли в три 250 мл стеклянные бутылки, содержащие 0,0, 0,01 или 0,05% Туееи™80. Затем три бутылки встряхивали в течение 30 мин (2-8°С) на встряхивателе (Уойех-Оеше® 2; 8шепййс 1пби51пе5. 1пс.; ВоНепиа. ΝΥ) и создавали поверхность раздела воздух-жидкость при установке максимальной скорости. Спустя 30 мин образцы по 10-30 мл отбирали из каждой бутылки, разводили 1:2 в разбавителе для белка Аггау® 360 и анализировали антигенность 30 серотипов в системе Аггау® 360.
Как видно в табл. 2 ниже, 13уРпС, составленный без Туееп™80 (0,0%), обладал в среднем 20% уменьшением антигенности после встряхивания. 13уРпС, составленный с 0,01% Туееп™80, обладал уменьшением антигенности в диапазоне 2-10% (в среднем 8%), а 13уРпС, составленный с 0,05% Туееп™80, обладал уменьшением антигенности в диапазоне 0-8% (в среднем 3%). Таким образом, данные, представленные в табл. 2, показывают, что 13уРпС, составленные либо с 0,01%, либо с 0,05% Туееп™80, являлись значительно стабилизированными против усилий сдвига по сравнению с 13уРпС, составленным в отсутствие Туееп™80.
Таблица 2
Стабилизирующий эффект Туееп™80 против усилий сдвига
Серотип Антиген- ность 0,0% Тмееп80 Антиген- ность 0, 0% Тмееп80 + встряхивание Антиген- ность 0, 01% ТмеепЭО Антиген- ность 0,01% Тмееп80 + встряхивание Антиген- ность 0,05% ТмеепЭО Антиген- ность 0,05% ТмеепЭО + встряхи- вание
1 4,7 мкг/мл 3,6 мкг/мл 4,8 мкг/мл 4,3 мкг/мл 4,7 мкг/мл 4,6 мкг/мл
3 4,6 мкг/мл 3,4 мкг/мл 4,7 мкг/мл 4,2 мкг/мл 4,7 мкг/мл 4,4 мкг/мл
4 5, 5 мкг/мл 4,4 мкг/мл 5,9 мкг/мл 5,4 мкг/мл 5,9 мкг/мл 5, 6 мкг/мл
5 3,2 мкг/мл 2,5 мкг/мл 3,5 мкг/мл 3,2 мкг/мл 3,3 мкг/мл 3,3 мкг/мл
6А 4,3 мкг/мл 3,6 мкг/мл 4,6 мкг/мл 4,5 мкг/мл 4,7 мкг/мл 4,8 мкг/мл
6В 9, 7 мкг/мл 7, 7 мкг/мл 10,2 мкг/мл 9, 6 мкг/мл 10,2 мкг/мл 10,1 мкг/мл
7Р 4,6 мкг/мл 3,5 мкг/мл 5,4 мкг/мл 5,0 мкг/мл 5,4 мкг/мл 5,3 мкг/мл
9У 5, 3 мкг/мл 4,1 мкг/мл 5, 7 мкг/мл 5,1 мкг/мл 5, 6 мкг/мл 5,3 мкг/мл
14 6, 8 мкг/мл 5,4 мкг/мл 7,3 мкг/мл 6,7 мкг/мл 7,4 мкг/мл 6,8 мкг/мл
18С 4,1 мкг/мл 3,4 мкг/мл 4,5 мкг/мл 4,3 мкг/мл 4,5 мкг/мл 4,5 мкг/мл
19А 5,1 мкг/мл 4,2 мкг/мл 5,5 мкг/мл 5,3 мкг/мл 5, 6 мкг/мл 5,4 мкг/мл
19Г 4,8 мкг/мл 3,6 мкг/мл 5,2 мкг/мл 4,9 мкг/мл 5,2 мкг/мл 5,1 мкг/мл
23Р 3,0 мкг/мл 2,4 мкг/мл 3,4 мкг/мл 3,3 мкг/мл 3,5 мкг/мл 3,4 мкг/мл
Пример 2. Составы, содержащие поверхностно-активное вещество, стабилизируют пептидазу С5а стрептококка и предупреждают ее агрегацию.
Пептидазу С5а стрептококка (8СР), применяемую в этом примере, экспрессировали и очищали следующим образом. 8СР экспрессировали рекомбинантным способом в Е. сой с использованием индуцируемой системы арабинозы. Следовали общепринятым протоколам ферментации в Е. сой с использованием среды определенного состава, свободной от веществ животного происхождения, и последующего лизиса клеток. Рекомбинантный 8СР очищали из растворимой фракции лизата клеток посредством на- 15 023470 сыщения до 60% (приблизительно 3М) сульфата аммония при перемешивании в течение 12-24 ч. Насыщенный лизат центрифугировали, супернатант сохраняли и наносили на колонку для гидрофобного взаимодействия с фенилсефарозой. Затем связавшийся материал элюировали с помощью 1М сульфата аммония, 20 мМ Тгк-Ск рН 7,5, концентрировали и подвергали диафильтрации против ΡΒδ, рН 7,4. Очищенный рекомбинантный δСΡ (ΓδΟΡ) разводили до ~10 мг/мл ΡΒδ, рН 7,4, пропускали через фильтр Ромйупе для удаления эндотоксина с последующей окончательной фильтрацией (0,2 мМ) для стерильности и хранили замороженным (-25°С).
Затем очищенный δСΡ (55 мкг/мл) составляли с 0,025% Туееп™80 или без Т\уееп™80 (0,0%) в следующих буферах: 5 мМ сукцинатный буфер при рН 6,0, 10 мМ фосфатный буфер при рН 7,0, 10 мМ фосфатный буфер при рН 7,4 или 10 мМ Тгк-буфер при рН 7,5, и наполняли им отдельные шприцы ΒΌ Нурак δСΡ™. Затем шприцы помещали в горизонтальный орбитальный встряхиватель при 2-8°С, встряхивали при 180 срт в течение 2 суток и определяли концентрацию белка δСΡ посредством модифицированного анализа по Лоури.
Как показано на фиг. 1, стабильность δСΡ сильно увеличивается при составлении с Туееп™80. Например, после 2 суток на орбитальном шейкере, для δСΡ, составленного без Туееп™80 (фиг. 1А) было показано значительное уменьшение (например, более 90%) концентрации δСΡ в каждом из тестированных буферов. Однако, как показано на фиг. 1В, добавление 0,025% Туееп™80 в составы буферов для δСΡ перед помещением в орбитальный шейкер на двое суток, полностью ингибирует потерю δСΡ, наблюдаемую на фиг. 1А.
Стабильность при хранении состава δСΡ/Туееη™80 (0,025%) оценивали также при 25 и 37°С в течение 8 и 6 недель соответственно (данные не представлены). Кратко, δСΡ (200 мкг) составляли либо в сукцинатном буфере, либо в фосфатном буфере следующим образом: сукцинатный буфер (5 мМ, рН 6,0) или фосфатный буфер (15 мМ, рН 7,4), 0,9% №-1С1 и 0,025% Туееп™80. Стабильность составов δСΡ/Туееη™80 анализировали эксклюзионной НРЬС, модифицированным анализом общего белка по Лоури и визуальным контролем осаждения. В этом исследовании наблюдали, что составы δСΡ/Туееη™80 (в любом буфере) являлись полностью стабильными при 25 и 37°С в течение всего исследования стабильности (т.е. вплоть до 8 и 6 недель соответственно).
Пример 3. Влияние силиконизированных контейнерных устройств на стабильность 13уРпС.
Предварительные эксперименты показали (данные не представлены), что иммуногенные композиции 13уРпС осаждались и/или агрегировали при наполнении готовых для использования (для однократной дозы) шприцев Вескоп Оюкиъоп® (ΒΌ) Нурак типа 1 из боросиликатного стекла, обработанных чистым для медицины силиконом Эоу Соттпд® ОС 360 и закрытых свободными от латекса стопорами ^Уез1 4432/50 (хлорбутил) и крышкой для наконечника ΕΖ ^Уез1 7025/65 (смесь синтетических изопрена и бромбутила; \Уе® РЬаттасеик1са1®, ЬюпуШе, ΡΑ). В этих экспериментах 13уРпС составляли в 5 мМ сукцинатном буфере, содержащем 0,85% №-1С1 и 4,4 мкг/мл δ. рпеитотае серотипов 1, 3, 4, 5, 6А, 7Р, 9У, 14, 18С, 19А, 19Р и 23Р и 8,8 мкг/мл δ. рпеитотае серотипа 6В, в присутствии и в отсутствие 0,25 мг/мл фосфата алюминия в качестве адъюванта. Обнаружили, что в отсутствие Α1ΡΟ4 можно было легко наблюдать твердые частицы 13уРпС, тогда как в присутствии Α1ΡΟ4 твердых частиц 13уРпС было значительно меньше и их было труднее детектировать.
В настоящем примере исследовали серии компонентов контейнеров и крышек (т.е. контейнерные устройства), чтобы идентифицировать, какие компоненты индуцируют формирование твердых частиц 13уРпС или вносят в него вклад. Тестируемые контейнерные устройства включают в себя шприцы, стопоры и флаконы и перечислены ниже в табл. 3. Стопоры ΒΌ и ^Уекк, перечисленные в табл. 3, силиконизировали с использованием способа либо НиЬет, либо 1ат. Способ силиконизации НиЬет является более контролируемым и дает выход 30-60 мкг/см2 силикона на поверхности стопора, тогда как способом силиконизации 1ат получают 150-300 мкг/см2 силикона на поверхности стопора. На основании теоретических вычислений приблизительно 15% площади поверхности стопора подвергаются воздействию продукта в шприце, позволяя предполагать, что для способов НиЬет и 1ат между 4,5-9 и 22,5-45 мкг силикона может быть экстрагировано из стопоров соответственно.
Материалы.
Силикон представлял собой Эо\у Соттпд® 360 МеШса1 Р1шй 1000 сантистоксов (партия № 0001846266). 7уРпС составляли в 5 мМ сукцинатном буфере, содержащем 0,85% №С1 и 4,4 мкг/мл δ. рпеитотае серотипов 4, 9, 14, 18С, 19Р и 23Р, и 8,8 мкг/мл δ. рпеитотае серотипа 6В, в присутствии и в отсутствие 0,25 мг/мл фосфата алюминия. 13уРпС составляли в 5 мМ сукцинатном буфере, содержащем 0,85% №-1С1 и 4,4 мкг/мл δ. рпеитотае серотипов 1, 3, 4, 5, 6А, 7Р, 9У, 14, 18С, 19А, 19Р и 23Р, и 8,8 мкг/мл δ. рпеитотае серотипа 6В, в присутствии и в отсутствие 0,25 мг/мл фосфата алюминия. Моновалентный δ. рпеитотае серотипа 6В составляли (в 5 мМ сукцинатном буфере, содержащем 0,85% №С1, без фосфата алюминия) в концентрации 61 мкг/мл для имитации общей концентрации сахарида составов 13уРпС.
Методы.
7уРпС и 13уРпС составляли, как описано выше, и 35 мл данного состава добавляли в прозрачную
- 16 023470 бутылку 250 мл №1депе®. В каждую бутылку №)1дспс® добавляли компоненты контейнерных устройств, перечисленных в табл. 3. Затем бутылки №)1дспс® помещали в орбитальный шейкер ЬаЫте® и вращали в течение ночи при 50 об/мин. Результаты суммированы в табл. 3.
Визуальный контроль.
Бутылки Ка1деие®, содержащие каждый из компонентов контейнерных устройств, удерживали под флуоресцентным освещением в лаборатории. Путь пучка света (эффект Тиндаля), проходящего через образцы, позволяет детекцию твердых частиц.
Анализ белка.
Общий белок и белок, связавшийся с алюминием, определяли измерением концентрации общего белка в составленной иммуногенной композиции и белка, связанного с осадком алюминия, соответственно (аликвоту иммуногенной композиции центрифугировали, и осадок ресуспендировали в солевом растворе). Анализы проводили с использованием модифицированного анализа белка по Лоури Иетее (каталожный # 23240) с бычьим сывороточным альбумином в качестве стандарта.
Результаты.
В первой серии экспериментов иммуногенные композиции 13νΡηΟ составляли без А1РО4 и подвергали воздействию серий контейнерных устройств, перечисленных ниже в табл. 3. Из данных ясно было очевидно (табл. 3), что компоненты контейнерных устройств, которые обрабатывали силиконовым маслом, индуцировали формирование белых частиц. В отличие от этого не детектировали твердых частиц в присутствии несиликонизированных стопоров ΩαίΚνο® (Иа&уо 8еП<о. Ый., 1арап) и флаконов 8е1юП (8еЬой ΝοΠίι Атепса 1пс.; ЬеЬапоп, РА).
Таблица 3
Эффект различных компонентов контейнерных устройств на 13νΡηΟ, составленный без А1РО4
Компоненты контейнерных устройств Число добавленных компонентов контейнерных устройств Внешний вид (визуальный контроль)
Контроль - 13νΡηΟ без ΑΙΡΟ4 Нет Нет твердых частиц
ВЭ Нурак ВЗСГ 1-3 мл 4432/50, неокрашенные стопоры 3ί ΝΝΟ 10 Твердые частицы
ВО Нурак ВЗСГ 1-3 мл 4432/50, неокрашенные 3ί стопоры, обработанные по НиЬег 10 Твердые частицы
Готовые для стерилизации стопоры Иезб 890 10 Твердые частицы
Βϋ Нурак ВЗСГ 1-3 мл, стопоры N4416/50, неокрашенные 3ί 1000 ΝΝϋ 10 Твердые частицы
Стопоры Не1уоеб 6213 10 Твердые частицы
Пробки для флаконов Оаткуо (притертые пробки 0777-1 В240 Г451) 10 Нет твердых частиц
Цилиндры шприцев ВО Нурак ВЗСГ 1-3 мл ЬЬА Егстс N7025/65 4 Твердые частицы
Стопоры Нурак ИЗСГ 1-3 мл 4023/50 В2-40 ЭаФкуо 10 Нет твердых частиц
Шприц Е-Ζ, зажимная крышка наконечника N7025/65 ΕΖ 11ТС 10 Нет твердых частиц
2 мл, 13 мм стеклянные флаконы ЗсЬобб типа 1 4 Нет твердых частиц
Силиконовое масло (Оои СЬет1са1 чистое для медицины 360) 500 мкл (1,43%) Твердые частицы
Шприцы ЗсЬоТЛ ТорРас 4 Нет твердых частиц
Моновалентный δ. рпеитошае серотипа 6В выбрали в качестве модели для 13νΡηΟ и составляли при 61,6 мкг/мл (без А1РО4) для имитации общей концентрации сахарида в составе 13νΡηС. Силикон ('Эо\у Сотптд 360 Мей1са1 Ишй) добавляли к аликвотам составленного моновалентного 6В в диапазоне от 2 до 100 ч/млн. Смеси помещали в орбитальный шейкер ЬаЬ1те® на 2 ч при 50 об/мин. Как указано ниже в табл. 4, подобные волокнам белые твердые частицы наблюдали при всех концентрациях силикона (δί).
- 17 023470
Таблица 4
Эффект концентрации силикона на формирование твердых частиц
Концентрация силикона Внешний вид (визуальный контроль)
2 ч/млн (1 мкл 5Ϊ на 500 мл состава) Подобные волокнам белые твердые частицы
5 ч/млн (2,5 мкл 3ΐ на 500 мл состава) Подобные волокнам белые твердые частицы
10 ч/млн (5 мкл 3ΐ на 500 мл состава) Подобные волокнам белые твердые частицы
15 ч/млн (7,5 мкл 3ί на 500 мл состава) Подобные волокнам белые твердые частицы
20 ч/млн (10 мкл 5Ϊ на 500 мл состава) Подобные волокнам белые твердые частицы
100 ч/млн (2 мкл 3ΐ на 20 мл состава) Подобные волокнам белые твердые частицы
Исследовали также количество силикона в составах 13уРпС (без А1РО4). Концентрацию силикона определяли эмиссионной спектроскопией с плазмой ИС (данные не представлены). По этому способу содержимое 25 шприцов объединяли и экстрагировали двумя 50 мл порциями смеси циклогексан/изопропиловый спирт. Экстракты объединяли и упаривали. Осадок солюбилизировали и тестировали согласно существующим способам для определения силикона на резиновых пробках. Результаты показали, что из каждого шприца можно экстрагировать между 15,8 и 19,0 мкг силикона. Это количество соответствует 2,7-3,3% силикона.
В отдельных сериях экспериментов, в которых 13уРпС составляли в присутствии А1РО4 и подвергали воздействию тех же самых контейнерных устройств, описанных в табл. 3, выявили, что силикон и свободный белок (13уРпС) в растворе являлись ответственными за формирование твердых частиц (данные не представлены). Анализ РТ1К твердых частиц также показал, что твердые частицы состояли из белка и силикона (данные не представлены). В этих экспериментах определили, что приблизительно 85% из 13уРпС являлись связанными с А1РО4, где оставшиеся 15% являлись свободным (не связанным с А1РО4) 13уРпС в растворе. В отличие от этого наблюдали, что 7уРпС, составленный с А1РО4, являлся на 100% связанным с А1РО4 (данные не представлены).
Для выявления эффекта свободного белка-полисахарида на формирование твердых частиц по 25 мл как 7уРпС, так и 13уРпС разделяли на аликвоты и переносили в 50 мл пробирку для центрифугирования. Образцы центрифугировали в течение 10 мин при 3000 об/мин, супернатант осторожно экстрагировали и переносили в бутылку №1депе®. 10 силиконизированных стопоров (стопоры 4432) добавляли в каждую бутылку и помещали на орбитальный встряхиватель при 50 об/мин. После тщательного визуального контроля обнаружили, что для супернатанта 7уРпС не наблюдали формирования твердых частиц, таким образом, он оставался прозрачным и бесцветным. Однако, для супернатанта 13уРпС начинали наблюдать низкие уровни твердых частиц, начиная с четвертого часа наблюдения (данные не представлены). Этот результат позволяет предполагать, что свободный белок-полисахарид в растворе в сочетании с силиконом является ответственным за формирование твердых частиц.
Для дальнейшего выявления вклада свободного белка-полисахарида в растворе в формирование твердых частиц выбрали моновалентные З. рпеитотае серотипов 4 и 6В за их высокое и низкое связывание с алюминием соответственно. Эти два моновалентных серотипа составляли при концентрации белка в диапазоне от 25 до 200 мкг/мл в отсутствие и в присутствии А1РО4. Десять силиконизированных стопоров (стопоры 4432) помещали в каждый из составов, которые затем помещали в орбитальный встряхиватель при 50 об/мин. Как показано ниже в табл. 5, подобные волокнам белые твердые частицы наблюдали для обоих моновалентных серотипов при всех концентрациях белка в отсутствие А1РО4. Однако в присутствии А1РО4 твердые частицы детектировали при более низких концентрациях для серотипа 4 (100 мкг/мл) по сравнению с серотипом 6В (200 мкг/мл), данные не представлены.
Таблица 5
Эффект концентрации белка на формирование твердых частиц
Внешний вид (визуальный контроль)
Без ΑΙΡΟ4 С А1РО4
25 мкг/мл 6В Подобные волокнам белые твердые частицы Нет твердых частиц
50 мкг/мл 6В Подобные волокнам белые твердые частицы Нет твердых частиц
75 мкг/мл 6В Подобные волокнам белые твердые частицы Нет твердых частиц
100 мкг/мл 6В Подобные волокнам белые твердые частицы Нет твердых частиц
200 мкг/мл 6В Подобные волокнам белые твердые частицы Подобные волокнам белые твердые частицы
25 мкг/мл типа 4 Подобные волокнам белые твердые частицы Нет твердых частиц
50 мкг/мл типа 4 Подобные волокнам белые твердые частицы Нет твердых частиц
75 мкг/мл типа 4 Подобные волокнам белые твердые частицы Нет твердых частиц
100 мкг/мл типа 4 Подобные волокнам белые твердые частицы Подобные волокнам белые твердые частицы
200 мкг/мл типа 4 Подобные волокнам белые твердые частицы Подобные волокнам белые твердые частицы
- 18 023470
Пример 4. Алюминиевые адъюванты ингибируют формирование твердых частиц 13уРпС в присутствии силиконизированных контейнерных устройств.
Как указано выше в примере 3, иммуногенная композиция 13уРпС представляет собой жидкий состав, содержащий 4,4 мкг/мл 8. рпеитошае серотипов 1, 3, 4, 5, 6А, 7Р, 9У, 14, 18С, 19А, 19Р, 23Р и 8,8 мкг/мл типа 6В в 5 мМ сукцинатном буфере (рН 5,8) и 0,85% №С1, который можно также составлять в присутствии или в отсутствие адъюванта (например, алюминиевого адъюванта). 13уРпС можно также составлять в присутствии или в отсутствие адъюванта, такого как 0,25 мг алюминия/мл фосфата алюминия (А1РО4). В примере 3 наблюдали, что 13уРпС, составленный без А1РО4 и заполняющий шприцы ΒΌ Нурак 8СР™ (закрытые поршнями Нурак), не удовлетворял визуальному контролю из-за обнаружения твердых частиц, где дополнительные исследования выявили, что твердые частицы частично являлись результатом взаимодействий белка-полисахарида с силиконом. В следующем примере шприцы (и поршни) от различных поставщиков оценивали с составами 13уРпС, где условия перевозки и манипуляций имитировали встряхиванием (описано ниже).
Материалы.
13уРпС составляли в 5 мМ сукцинатном буфере, содержащем 0,85% №С’1 и 4,4 мкг/мл 8. рпеитошае серотипов 1, 3, 4, 5, 6А, 7Р, 9У, 14, 18С, 19А, 19Р и 23Р и 8,8 мкг/мл 8. рпеитошае серотипа 6В, в присутствии и в отсутствие 0,25 мг/мл фосфата алюминия. Тестированные контейнерные устройства перечислены ниже в табл. 6.
Таблица 6
Контейнерные устройства
Контейнерные устройства Описание
Шприцы УеРРег, необработанное стекло типа 1 1 мл, в формате больших упаковок
2 Шприцы ЗсНоРР ТорРас® Пластиковые шприцы
3 Шприцы ΒΩ после термической обработки, необработанное стекло типа 1 0,1 мг силикона/баррель
Шприцы Βϋ после термической обработки, необработанное стекло типа 1 0,04 мг силикона/баррель
5 Шприцы Βϋ для высокой вязкости, необработанное стекло типа 1 2,25 мл шприцы 12500 сзР силикона
6 Шприцы ΒΏ для высокой вязкости, необработанное стекло типа 1 1,0 мл шприцы 12500 сзР силикона
7 Шприцы Вйп<йегС1аз, необработанное стекло Р32 типа 1 0,056 мг силикона/баррель
8 Шприцы ВПпс!егС1аз, необработанное стекло Р54 типа 1 0,14 мг силикона/баррель
1 Поршни МезР 4023/50 ПигоРес® В2-40 Поршни ПигоРес®
2 Поршни ИезР 4023/50 ПигоРес® В2-40 Поршни ПигоРес®
1 13νΡηΟ с ΑΙΡΟ4 в шприцах ВО Нурак с готовыми к применению поршнями ИезР 4432 и крышками для наконечника 7025/65 ΕΖ Положительный контроль, высокий уровень силикона
2 13чРпС с ΑΙΡΟ4 в несиликонизированных шприцах с поршнями ИезР 4023/50 ПигоРес® В2-40 Отрицатель ный контроль, не обработанный силиконом
Методы.
Способ составления и заполнения.
Ниже в табл. 7 перечислена рецептура для 2 л состава 13уРпС. Кратко, в стеклянную мензурку сначала добавляли 0,85% солевой раствор, затем 5 мМ сукцинатный буфер (рН 5,8) и затем последовательно конъюгаты каждого из серотипов 8. рпеитошае. Затем состав осторожно перемешивали на смесителе и фильтровали через фильтрующий элемент МПНроге® 0,22 мкм. Для состава, содержащего А1РО4, затем добавляли А1РО4 (конечная концентрация 0,25 мг/мл) и состав осторожно перемешивали. Затем заполняли тестируемые шприцы (0,58 мл/шприц) и закрывали поршнями.
Имитация перевозки посредством встряхивания.
Встряхиватель У^К® 81§па!ите Οί^ίΐη1 МиЙйиЬе (каталожный № 14005-826) использовали для встряхивания образцов. Шприцы, заполненные 13уРпС, размещали горизонтально и фиксировали двумя поддерживающими пластинами встряхивателя. Образцы удерживали в горизонтальном положении и встряхивали при 500 об/мин в режиме выдержки при 2-8°С в течение 24 ч.
Нефелометрия.
Специфические для серотипов антигенности определяли анализом кинетической нефелометрии с использованием типоспецифических антител. В случае 13уРпС с А1РО4 фосфат алюминия солюбилизировали добавлением 1н №ОН. Раствор немедленно нейтрализовали добавлением 1М лимонной кислоты. В случае 13уРпС без А1РО4 не проводили процедур солюбилизации и нейтрализации. Анализ измеряет скорость изменения интенсивности рассеяния света, происходящего из-за комплекса антитело-антиген, сформированного в образце, с использованием нефелометра Весктап Аггау 360.
- 19 023470
Таблица 7
Таблица состава 1уРпС
Компонент Объем партии (л) Объемная конц. (мг/мл) Требуемая конц. (мкг/мл) 13νΡηΟ с А1РО4 Объем (мл) 13νΡηΟ без А1РО4 Объем (мл)
Серотип 1 2,000 0,506 4,4 17,39 17,39
Серотип 3 2, 000 0,256 4,4 34,38 34,38
Серотип 4 2,000 0,530 4,4 16, 60 16, 60
Серотип 5 2,000 0,515 4,4 17,09 17,09
Серотип 6А 2,000 0,519 4,4 16, 96 16, 96
Серотип 6В 2,000 0,489 8,8 35, 99 35,99
Серотип 7 Г 2,000 0,500 4,4 17,60 17,60
Серотип 9ν 2,000 0,521 4,4 16,89 16, 89
Серотип 14 2,000 0,518 4,4 16, 99 16, 99
Серотип 18С 2,000 0,509 4,4 17,29 17,29
Серотип 19А 2,000 0,511 4,4 17,22 17,22
Серотип 19Г 2,000 0,520 4,4 16, 92 16,92
Серотип 23Г 2,000 0,511 4,4 17,22 17,22
Сукцинатный буфер в 0,85% солевом растворе, рН 5,8 2,000 50,0 5000 200,0 200,0
А1РО4 2,000 3,250 250 153,85 ΝΑ
Солевой раствор 2,000 ΝΑ ΝΑ 1387,62 1541,46
Рузультаты.
В этом исследовании шприцы от различных поставщиков, обладающие различными уровнями силикона (табл. 6), подвергали условиям контролируемого встряхивания. Общую антигенность каждого серотипа измеряли анализом нефелометрии для образцов как до встряхивания, так и после встряхивания. Рассчитывали потерю антигенности после встряхивания (процент), и она показана на фиг. 2-7.
Перед исследованием условия встряхивания оптимизировали на основании потери антигенности двух контролей: (1) контроля для наихудшего случая (положительный контроль, высокий уровень силикона; фиг. 2) и (2) контроля для наилучшего случая (отрицательный контроль, без силикона; фиг. 3). Затем условия оптимизировали, так что потеря антигенности являлась низкой в положительном контроле, однако поддающейся детекции в отрицательном контроле. Это выполняли, чтобы убедиться, что встряхивание не являлось ни слишком слабым, чтобы вызывать осаждение в шприцах; ни слишком сильным, так что осаждение могут вызывать факторы, отличные от взаимодействия с силиконом (например, усилия сдвига). Таким образом, встряхивание при 500 об/мин (в режиме выдержки) в течение 24 ч выбрали в качестве наиболее подходящего условия встряхивания, в то время как температуру 2-8°С и горизонтальное положение использовали для имитации условий перевозки продукта и манипуляций с ним в реальном масштабе времени.
Результаты исследования обобщены следующим образом: наибольшие потери антигенности 13уРпС, составленного с А1РО4, присутствовали в шприцах с более высокими уровнями силикона (данные не представлены). Например, из шприцев, перечисленных в табл. 6, каждый из шприца ΒΌ Нурак (контроль 1), шприца ΒΌ после термической обработки (шприц 3; 0,1 мг силикона), шприца ΒΌ для высокой вязкости (шприц 5) и шприца ВипбегО1аз Р84 (шприц 8, 0,14 мг силикона) обладал одним или несколькими из серотипов 13уРпС с потерей антигенности более 10%. Наименьшие потери антигенности 13уРпС, составленного с А1РО4, присутствовали в шприцах с более низкими уровнями силикона. Например, шприцы Уейег (фиг. 4) и пластиковые шприцы 5>с1ю11 ТорРас (фиг. 5) наиболее сходны с несиликонизированными шприцами (фиг. 2), для тех и других была показана незначительная потеря антигенности для 13уРпС, составленного с А1РО4.
Влияние фосфата алюминия на стабилизацию 13уРпС и ингибирование формирования твердых частиц в присутствии силиконизированных шприцев анализировали в экспериментах с использованием 13уРпС, составленного с и без 0,25 мг/мл А1РО4, где использованные шприцы представляли собой шприцы ΒΌ после термической обработки с низким уровнем силикона (шприц 4 в табл. 6) и шприцы ВипбегО1аз с низким уровнем силикона Р82 (шприц 7 в табл. 6). Шприцы ΒΌ после термической обработки с низким уровнем силикона (0,04 мг силикона/баррель), как правило, обладали потерей антигенности менее 10% для серотипов 13уРпС составленных с А1РО4 (фиг. 6А), где потеря антигенности для серотипов 13уРпС, составленных без А1РО4 (фиг. 6В), составляла потери антигенности в диапазоне от 5% (серотип 1) вплоть до приблизительно 50% (серотип 23Р). Шприцы Βиηбе^О1а5 с низким уровнем силикона Р82 (0,056 мг силикона/баррель) обладали потерей антигенности менее 5-8% (в зависимости от серотипа) для 13уРпС, составленного с А1РО4 (фиг. 7А), где потеря антигенности для серотипов 13уРпС, составленных без А1РО4 (фиг. 7В), составляла потери антигенности в диапазоне приблизительно от 5% до приблизительно 30% (в зависимости от серотипа).
Таким образом, взятые вместе, эти данные показывают, что (1) потеря антигенности 13уРпС явля- 20 023470 лась более высокой в шприцах с более высокими уровнями силикона, и (2) 13уРпС, составленный без А1РО4, сохранял более высокие потери антигенности, чем 13уРпС с А1РО4, во всех тестированных шприцах.
Пример 5. Составы, содержащие поверхностно-активное вещество, оптимизируют связывание антигенных белков менингококка с адъювантами - солями алюминия.
Рекомбинантный липидированный белок 2086 N. тешп§1ЙЙ18 (гЬР2086), используемый в этом примере, экспрессировали и очищали следующим образом. ГЙР2086 экспрессировали рекомбинантным способом в Е. сой, используя природную лидерную последовательность. Следовали общепринятым способам для Е. сой с использованием среды с определенным составом, свободной от продуктов животного происхождения, а затем клетки лизировали. Рекомбинантный липидированный белок 2086 N. тешпдШЙ18 очищали от осадка мембраны с помощью 50 мМ Тп8-НС1/5 мМ ЭДТА/1% саркозила рН 8. Этот саркозиловый экстракт доводили до 1% цвиттергента 3-14 (Ζ3-14) и дважды подвергали диализу против 30кратного избытка 50 мМ ТЙ8-НС1/5 мМ ЭДТА/1% Ζ3-14. Диализованный экстракт ГЙР2086 осаждали с помощью 90% этанола для удаления оставшегося саркозила и солюбилизировали с помощью 50 мМ Тп8НС1/5 мМ ЭДТА/1% Ζ3-14 рН 8. Нерастворимый материал удаляли центрифугированием, супернатант пропускали через колонку для анионообменной хроматографии, и ГЙР2086 собирали в несвязавшейся фракции. Затем несвязавшийся материал подвергали диализу дважды против 30-кратного избытка 25 мМ №Ас/1% Ζ3-14 рН 4,5 и пропускали через колонку для катионообменной хроматографии. ГЙР2086 элюировали с помощью градиента 0-0,ЗМ №С1 и хранили замороженным (-25°С).
Затем очищенный ГЙР2086 составляли с 150 мМ №С1, 0,020% Ттеееп™80, 0,25 мг А1/мл А1РО4 и в следующих буферах: 10 мМ фосфатный буфер при рН 7,0 и 5 мМ сукцинатный буфер при рН 6,0. В таблице 8 сравнивают процент связывания белка с адъювантом А1РО4.
Таблица 8
Связывание ГЙР2086 с адъювантом
Буфер Общая конц. белка (мкг/мл) Белок, связанный с А1РО„ (%)
10 мМ фосфатный буфер рН 400 68
7,0, содержащий 150 мМ ЫаС1, 0,02% полисорбат 80 и 0,25 мг А1/мл А1РОд 120 82
5 мМ сукцинатный буфер рН 6,0, содержащий 150 мМ ЫаС1, 0,02% полисорбат 80 и 0,25 мг А1/мл ΑΙΡΟ4 400 81
120 100
Список литературы
Ва1бм1п, СопРатШаРхоп οί хпзиНп Ьу зхИсопе οϋ: А роРепРха1 Ьагагб οί р1азРхс хпзиНп зугхпдез, РхабеС. Мед., 5:789-790, 1988.
ВагРсока, Вгоок апб МсОогтоРР, РгоРе1п-Зх1хсопе 1пРегасРхопз аР Ыдигб-Ыдихб 1пРегРасез. 1п К.Ь. МхРРа1 апб Р. Китаг (ебз.), ЕтиФз^опз, Еоатпз апб ТЫл П1тз, Эеккег, Мем Уогк, рр. 371-380, 2000.
ВагРгока, Вгоок апб МсБогтоРР, РгоРехп-ЗхНсопе П1тз: ЕзРаЫхзЬхпд РЬе ЗРгепдРЬ οί РЬе РгоРехп-ЗхНсопе 1пРегасР1оп, Ьапдтиъг 14:1892-1898, 1998ь.
ВагРгока, Вгоок апб МсОогтоРР, РгоРехп-ЗхНсопе 1пРегасРхопз: Ном СотраРхЫе Аге РЬе Тмо Зресхез?, Ьапдтпихг 14:1887-1891, 1998а.
ВагРгока, СЬап апб Вгоок, РгоРехп-ЗхНсопе Зупегдхзт аР Ьхдихб/Ыдихб 1пРег^асе5, ЪапдтиФг 16:458 9-4 593, 2000.
ВегпзРехп, С1оибхпд апб БеасРхуаРхоп οί С1еаг (Веди1аг) Нитап 1пзиИп: АззосхаРхоп мхРЬ ЗШсопе Οίΐ ίτοιη ОхзрозаЫе Зугхпдез, СхабеРез Саге 10:786-787, 1987.
ВегпзРехп, С1оибхпд апб беасРхуаРхоп οί с1еаг (геди1аг) Ьитап хпзиНп: АззосхаРхоп мхРЬ ЗШсопе οίΐ Ргот бхзрозаЫе зугхпдез?, ГхабеРез Саге, 10:786-787, 1987.
Во1дхапо еР а!., ΕίίθοΡ οί РЬузхсо-СЬетхса1 ΜοόίίίσθΡίοη оп РЬе 1ттиподепхсхРу οί НаеторЬИиз ФпЕЗаепгае Туре Ь ОИдозассЬаг1бе-СКМ197 Соп^идаРе Уассхпез, УассФпе, 19:31893200, 2001.
СЬапРе1аи апб Вегдег, Ро11иР1оп οί 1пзи11п м!РЬ зШсопе ох1, а Ьагагб οί бхзрозаЫе р1азРхс зугхпдез, ЬалсеС, 1:1459, 1985.
СЬапРе1аи еР а!., ЗШсопе οϋ ге1еазеб Ргот бхзрозаЫе хпзиНп зугхпдез, ОхаЬеСез саге, 9:672-673, 1986. .
СЬапРе1аи, ЗШсопе οίΐ сопРатхпаРхоп οί хпзиНп, РхаЬеС. Меб. , 6:278, 1989.
СЬапРе1аи, Вигдег апб ВоЫкеп, ЗШсопе ОН Ке1еазеб ίΓοιτι ЭхзрозаЫе 1пзи1хп Зугхпдез, СхаЬеСез Саге 9: 672-673, 1986.
- 21 023470
СоШег апс! Оамзоп, Ιηβυΐίη зуг1пдез апс! βϊΐίοοηβ οίΐ, ЁапсеЬ, 5:789-790, 1985.
Но ее а!., РЬу51со-СЬет1са1 апс! 1ттипо1од1са1 Ехат/кпаПоп οί ЬЬе ТЬегта! ЗЬаЬШЬу οί Тееагшз Τοχοίά Соп^идаЬе Уасс1пез, Уассгпе, 20:3509-3522, 2002.
Но ее а1., δοϊϋίίοη ЗЬаЬШЬу οί ЬЬе ЗиЬипаЛ СотропепЬз οί Мепгпдососса! С ОЫдозассЬаггде-СРМхэ? СопзидаЬе Уассхпез, В20СесЬ. Арр1. ВтосЬет., 33:91-98,2001.
Лопез еС а!., ЗШсопе Οΐΐ 1пЬисес! АддгедаЫоп οί Ргоееьпз, 7. РЬагпасеиЫса! 5σί., 94(4):918-927, 2005.
Кадл-Нага ее а!., ЭеуеХортепЬ οί пеы с!гид ЬеНуегу зузЬет ίοτ ргоеехп Ьгидз изхпд зШсопе, Л. СолСго!. Ре1. 66:49-61, 2000.
Ροϊίη, ТЬе 1пз апс! ОиЬз οί Ρτβίίΐίβά Зугхпдез, РЬагтасеиСзса! алс/ Ме<Иса1 Раскадтпд Меыз АгИс1е 1пс1ехг Мау 2003.
Зип ее а1., РгоЬехп ЭепаЬигаЫоп 1пс!исес! Ьу СусИс ЗШсопе, В2отаСег2а15 18:1593-1597, 1998.

Claims (32)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Состав, ингибирующий индуцированное силиконом осаждение конъюгата полисахарида-белка, содержащийся в силиконизированном контейнерном устройстве, где состав содержит (ί) рНзабуференный солевой раствор, где буфер имеет значение рКа, равное приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, (ίί) алюминиевую соль и (ίίί) один или несколько конъюгатов полисахарид-белок.
  2. 2. Состав по п.1, где рН-забуференный солевой раствор имеет значение рН, равное 5,5-7,5.
  3. 3. Состав по п.1, где буфер является фосфатным, сукцинатным, гистидиновым или цитратным.
  4. 4. Состав по п.1, где соль в рН-забуференном солевом растворе содержит хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание.
  5. 5. Состав по п.1, где соль алюминия представляет собой гидроксид алюминия, фосфат алюминия или сульфат алюминия.
  6. 6. Состав по п.1, где соль алюминия представляет собой фосфат алюминия.
  7. 7. Состав по п.1, где буфер является гистидиновым, соль в рН-забуференном солевом растворе представляет собой хлорид натрия и соль алюминия представляет собой фосфат алюминия.
  8. 8. Состав по п.1, где буфер представляет собой гистидин при рН 5,8, соль в рН-забуференном солевом растворе представляет собой хлорид натрия и соль алюминия представляет собой фосфат алюминия.
  9. 9. Состав по п.1, дополнительно содержащий полисорбат 80.
  10. 10. Состав по п.9, где конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01-10% полисорбата 80 мас./об. состава.
  11. 11. Состав по п.1, где буфер является сукцинатным при конечной концентрации, равной 1-10 мМ и рН 5,8-6,0.
  12. 12. Состав по п.11, где сукцинатный буфер имеет конечную концентрацию, равную 5 мМ.
  13. 13. Состав по п.1, где конъюгат полисахарид-белок содержит один или несколько полисахаридов пневмококка.
  14. 14. Состав по п.1, дополнительно содержащий один или несколько полисахаридов менингококка, один или несколько антигенных белков менингококка или их сочетание.
  15. 15. Состав по п.1, дополнительно содержащий один или несколько полисахаридов стрептококка, один или несколько антигенных белков стрептококка или их сочетание.
  16. 16. Состав по п.1, где состав конъюгата полисахарид-белок представляет собой состав 7-валентного конъюгата пневмококка (7уРпС), содержащий полисахарид 8. рпеитошае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 9У, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 19Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197, и полисахарид 8. рпеитошае серотипа 23Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197.
  17. 17. Состав по п.1, где состав конъюгата полисахарида-белка представляет собой состав 13валентного конъюгата пневмококка (13уРпС), содержащий полисахарид 8. рпеитошае серотипа 4, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 6В, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 9У, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 14, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 18С, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 19Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 23Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 1, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 8. рпеитошае серотипа 3, конъюгированный с полипептидом
    - 22 023470
    СКМ197, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 5, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 6А, конъюгированный с полипептидом СКМ197, полисахарид 3. рпеитошае серотипа 7Р, конъюгированный с полипептидом СКМ197, и полисахарид 3. рпеитошае серотипа 19А, конъюгированный с полипептидом СКМ197.
  18. 18. Состав по п.1, где конъюгат полисахарид-белок содержит один или несколько полисахаридов пневмококка, буфер является гистидиновым, соль в рН-забуференном солевом растворе является хлоридом натрия и соль алюминия является фосфатом алюминия.
  19. 19. Состав по п.1, где конъюгат полисахарид-белок содержит один или несколько полисахаридов пневмококка, буфер является гистидиновым при рН 5,8, соль в рН-забуференном солевом растворе является хлоридом натрия и соль алюминия является фосфатом алюминия.
  20. 20. Состав, который стабилизирует композицию белка 2086 Ν. тешпдШЛз, где состав содержит (ΐ) рН-забуференный солевой раствор, где значение рКа буфера составляет от около 3,5 до около 7,5, (и) поверхностно-активное вещество и (ίίί) белок 2086 Ν. шешпдШЛз.
  21. 21. Состав по п.20, где поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80.
  22. 22. Состав по п.20, где состав дополнительно содержит адъювант - соль алюминия.
  23. 23. Состав по п.20, где рН-забуференный солевой раствор имеет рН от 5,5 до 7,5.
  24. 24. Состав по п.20, где буфер является фосфатным, сукцинатным, гистидиновым или цитратным.
  25. 25. Состав по п.20, где соль в рН-забуференном солевом растворе содержит хлорид магния, хлорид калия, хлорид натрия или их сочетание.
  26. 26. Состав, ингибирующий индуцированное силиконом осаждение композиции белка 2086 Ν. тептдШФз, содержащийся в силиконизированном контейнерном устройстве, где состав содержит (ΐ) рНзабуференный солевой раствор, где буфер имеет значение рКа, равное приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5, (и) алюминиевую соль и (ίίί) белок 2086 Ν. тептдФЛз.
  27. 27. Контейнерное устройство, наполненное составом по любому из пп.1-26.
  28. 28. Контейнерное устройство по п.27, выбранное из группы, состоящей из флакона, шприца, бутылки, ферментера, биореактора, пробирки, трубки, пакета, банки, ампулы, картриджа и одноразовой ручки.
  29. 29. Контейнерное устройство по п.28, где указанный контейнер сделан из стекла, металла или полимеров.
  30. 30. Контейнерное устройство по п.29, где указанный контейнер представляет собой шприц.
  31. 31. Контейнерное устройство по п.30, где указанный контейнер является стеклянным шприцем.
  32. 32. Контейнерное устройство по пп.28-31, которое является силиконизированным.
EA201200929A 2006-04-26 2007-04-19 Новые составы, стабилизирующие иммуногенные композиции и ингибирующие их осаждение EA023470B1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US79526106P 2006-04-26 2006-04-26

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201200929A1 EA201200929A1 (ru) 2013-05-30
EA023470B1 true EA023470B1 (ru) 2016-06-30

Family

ID=38441477

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201200929A EA023470B1 (ru) 2006-04-26 2007-04-19 Новые составы, стабилизирующие иммуногенные композиции и ингибирующие их осаждение
EA200870480A EA017436B1 (ru) 2006-04-26 2007-04-19 Новые составы, стабилизирующие иммуногенные композиции и ингибирующие их осаждение

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200870480A EA017436B1 (ru) 2006-04-26 2007-04-19 Новые составы, стабилизирующие иммуногенные композиции и ингибирующие их осаждение

Country Status (30)

Country Link
US (3) US7935787B2 (ru)
EP (5) EP2679245B1 (ru)
JP (7) JP5612305B2 (ru)
KR (9) KR20140132779A (ru)
CN (4) CN103768615B (ru)
AR (2) AR060665A1 (ru)
AU (1) AU2007243019B2 (ru)
BR (2) BR122020000285B1 (ru)
CA (3) CA2803111C (ru)
CL (1) CL2007001185A1 (ru)
CR (1) CR10405A (ru)
CY (2) CY1116966T1 (ru)
DK (4) DK2010219T3 (ru)
EA (2) EA023470B1 (ru)
ES (4) ES2712956T3 (ru)
FR (1) FR22C1027I1 (ru)
HK (3) HK1196546A1 (ru)
HR (3) HRP20151203T1 (ru)
HU (5) HUE042923T2 (ru)
IL (3) IL194753A (ru)
LT (2) LT2676679T (ru)
MX (3) MX2008013572A (ru)
PL (4) PL2679244T3 (ru)
PT (4) PT2679245T (ru)
RU (1) RU2482878C2 (ru)
SI (4) SI2679244T1 (ru)
TR (1) TR201902402T4 (ru)
TW (1) TW200806315A (ru)
WO (1) WO2007127665A2 (ru)
ZA (1) ZA200809167B (ru)

Families Citing this family (63)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1093517B1 (en) 1998-05-01 2008-03-05 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Neisseria meningitidis antigens and compositions
NZ528254A (en) 1999-05-19 2005-07-29 Chiron S Combined neisserial compositions
PT2275553E (pt) 1999-10-29 2015-09-18 Glaxosmithkline Biolog Sa Péptidos antigénicos de neisseria
WO2001064922A2 (en) 2000-02-28 2001-09-07 Chiron Spa Heterologous expression of neisserial proteins
GB0118249D0 (en) 2001-07-26 2001-09-19 Chiron Spa Histidine vaccines
GB0121591D0 (en) 2001-09-06 2001-10-24 Chiron Spa Hybrid and tandem expression of neisserial proteins
MX339524B (es) 2001-10-11 2016-05-30 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica.
GB0227346D0 (en) 2002-11-22 2002-12-31 Chiron Spa 741
GB0408977D0 (en) 2004-04-22 2004-05-26 Chiron Srl Immunising against meningococcal serogroup Y using proteins
GB0419408D0 (en) * 2004-09-01 2004-10-06 Chiron Srl 741 chimeric polypeptides
US7955605B2 (en) * 2005-04-08 2011-06-07 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
GB0524066D0 (en) 2005-11-25 2006-01-04 Chiron Srl 741 ii
TW200806315A (en) 2006-04-26 2008-02-01 Wyeth Corp Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions
US8808707B1 (en) 2006-05-08 2014-08-19 Wyeth Llc Pneumococcal dosing regimen
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
US20100272745A1 (en) * 2007-12-21 2010-10-28 Dominique Ingrid Lemoine Vaccines for malaria
EP2886551A3 (en) 2008-02-21 2015-09-23 Novartis AG Meningococcal fhbp polypeptides
DK2411048T3 (da) 2009-03-24 2020-06-15 Glaxosmithkline Biologicals Sa Adjuvanterende meningokok-faktor h-bindingsprotein
EP3017826A1 (en) * 2009-03-24 2016-05-11 Novartis AG Combinations of meningococcal factor h binding protein and pneumococcal saccharide conjugates
EP2424562B1 (en) 2009-04-30 2015-10-07 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Pneumococcal vaccine and uses thereof
AU2011262346B2 (en) * 2010-06-04 2014-12-11 Wyeth Llc Streptococcus pneumoniae vaccine formulations
US8802603B2 (en) 2010-06-17 2014-08-12 Becton, Dickinson And Company Medical components having coated surfaces exhibiting low friction and low reactivity
CA2803239A1 (en) 2010-06-25 2011-12-29 Novartis Ag Combinations of meningococcal factor h binding proteins
PL2608805T3 (pl) 2010-08-23 2017-12-29 Wyeth Llc Trwałe preparaty antygenów rLP2086 Neisseria meningitidis
CN103096920B (zh) 2010-09-10 2016-03-23 惠氏有限责任公司 脑膜炎奈瑟球菌orf2086抗原的非脂质化变体
FR2966044B1 (fr) * 2010-10-18 2012-11-02 Sanofi Pasteur Procede de conditionnement d'un vaccin contenant un adjuvant d'aluminium
PT2637690T (pt) 2010-11-11 2016-12-27 Abbvie Biotechnology Ltd Formulações líquidas de anticorpo anti-tnf-alfa de concentração elevada
CN103391714A (zh) * 2010-12-10 2013-11-13 默沙东公司 减轻搅动引起的免疫原性组合物聚集的新制剂
EP2797624A1 (en) 2011-12-29 2014-11-05 Novartis AG Adjuvanted combinations of meningococcal factor h binding proteins
SA115360586B1 (ar) 2012-03-09 2017-04-12 فايزر انك تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها
MY198910A (en) 2012-03-09 2023-10-02 Pfizer Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
MX357538B (es) 2012-06-14 2018-07-13 Novartis Ag Vacunas para meningococo de serogrupo x.
SI4002842T1 (sl) 2012-06-26 2023-12-29 Lg Electronics, Inc. Postopek za dekodiranje videa, postopek za kodiranje videa in pomnilniški medij, ki ima shranjene zakodirane informacije o videu
JOP20200175A1 (ar) * 2012-07-03 2017-06-16 Novartis Ag حقنة
WO2014136064A2 (en) 2013-03-08 2014-09-12 Pfizer Inc. Immunogenic fusion polypeptides
KR102199096B1 (ko) 2013-09-08 2021-01-06 화이자 인코포레이티드 나이세리아 메닌지티디스 조성물 및 그의 방법
HUE045020T2 (hu) * 2013-10-25 2019-12-30 Bayer Pharma AG Új stabil formuláció
US11160855B2 (en) 2014-01-21 2021-11-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
ES2820824T3 (es) * 2014-01-21 2021-04-22 Pfizer Composiciones inmunogénicas que comprenden antígenos sacáridos capsulares conjugados y usos de las mismas
EP3270959A1 (en) 2015-02-19 2018-01-24 Pfizer Inc Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
CA2988366C (en) * 2015-06-08 2021-12-07 Serum Institute Of India Private Ltd. Methods for improving the adsorption of polysaccharide-protein conjugates and multivalent vaccine formulation obtained thereof.
TWI720448B (zh) * 2015-07-21 2021-03-01 美商輝瑞股份有限公司 包含經共軛之莢膜糖抗原的致免疫性組成物、包含該致免疫性組成物之套組及彼等之用途
US10702606B2 (en) * 2015-12-10 2020-07-07 Menicon Co., Ltd. Peptide composition
WO2018045286A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Sanofi Pasteur, Inc. Neisseria meningitidis vaccine
CN110366428B (zh) 2016-12-30 2024-05-17 Vaxcyte公司 具有非天然氨基酸的多肽-抗原缀合物
US11951165B2 (en) 2016-12-30 2024-04-09 Vaxcyte, Inc. Conjugated vaccine carrier proteins
CN106620681A (zh) * 2017-01-12 2017-05-10 南京佰泰克生物技术有限公司 一种细胞裂解液、试剂盒及在制备肿瘤全细胞抗原负载dc肿瘤疫苗中的应用
WO2018144439A1 (en) 2017-01-31 2018-08-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods for making polysaccharide-protein conjugates
EP3577130A2 (en) 2017-01-31 2019-12-11 Pfizer Inc Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
KR102650073B1 (ko) 2017-01-31 2024-03-20 머크 샤프 앤드 돔 엘엘씨 스트렙토코커스 뉴모니아 혈청형 19f 유래의 협막 다당류 단백질 접합체의 제조 방법
WO2018156467A1 (en) * 2017-02-24 2018-08-30 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods for improving filterability of polysaccharide-protein conjugate reactions
US11090374B2 (en) 2017-02-24 2021-08-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Enhancing immunogenicity of Streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates
WO2018156468A1 (en) * 2017-02-24 2018-08-30 Merck Sharp & Dohme Corp. Pneumococcal conjugate vaccine formulations
JP7218358B2 (ja) 2017-09-07 2023-02-06 メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー 肺炎球菌多糖体および免疫原性多糖体－キャリアタンパク質コンジュゲートでのその使用
BR112020004471A8 (pt) 2017-09-07 2022-11-01 Merck Sharp & Dohme Polissacarídeos pneumocócicos e uso dos mesmos em conjugados imunogênicos polissacarídeo-proteína carreadora
JP2021501144A (ja) * 2017-10-25 2021-01-14 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． アジュバントワクチン
CA3084436A1 (en) 2017-12-06 2019-07-18 Merck Sharp & Dohme Corp. Compositions comprising streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof
EP3787673A4 (en) 2018-04-30 2022-04-27 Merck Sharp & Dohme Corp. METHODS FOR PRODUCING CAPSULAR CARRIER PROTEIN-POLYSACCHARIDE CONJUGATES OF STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE
WO2019212844A1 (en) 2018-04-30 2019-11-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods for providing a homogenous solution of lyophilized mutant diptheria toxin in dimethylsulfoxide
US11260119B2 (en) 2018-08-24 2022-03-01 Pfizer Inc. Escherichia coli compositions and methods thereof
EP3856895A4 (en) * 2018-09-24 2022-08-31 BioVaxys Inc. BIHAPTENIZED AUTOLOGOUS VACCINES AND THEIR USES
EP3897705A2 (en) 2018-12-19 2021-10-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Compositions comprising streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof
WO2022180648A1 (en) 2021-02-26 2022-09-01 Biological E Limited Activated-quenched polysaccharide and improved methods for quantification of polysaccharide in a vaccine composition

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0941738A1 (en) * 1998-03-10 1999-09-15 American Cyanamid Company Antigenic conjugates of conserved lipopolysaccharides of gram negative bacteria
RU2162710C2 (ru) * 1994-03-07 2001-02-10 Байер Аг Вакцина против свиного и репродуктивного и респираторного синдрома
WO2002074325A1 (en) * 2001-03-19 2002-09-26 Iomai Corporation Patch for transcutaneous immunization

Family Cites Families (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1189340A (en) * 1967-09-13 1970-04-22 American Cyanamid Co Antigen-Adjuvant Composition
US4673574A (en) 1981-08-31 1987-06-16 Anderson Porter W Immunogenic conjugates
US4902506A (en) 1983-07-05 1990-02-20 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
SE8405493D0 (sv) 1984-11-01 1984-11-01 Bror Morein Immunogent komplex samt sett for framstellning derav och anvendning derav som immunstimulerande medel
US5078996A (en) 1985-08-16 1992-01-07 Immunex Corporation Activation of macrophage tumoricidal activity by granulocyte-macrophage colony stimulating factor
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
FR2630115B1 (fr) * 1988-04-14 1994-10-28 Merieux Inst Procede de stabilisation des solutions d'albumine humaine et solution obtenue
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
CA2017507C (en) 1989-05-25 1996-11-12 Gary Van Nest Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion
ATE129906T1 (de) * 1990-07-19 1995-11-15 Nardino Righi Sicherheitsspritze zum einmaligen gebrauch.
CA2059692C (en) * 1991-01-28 2004-11-16 Peter J. Kniskern Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine
IL101715A (en) 1991-05-02 2005-06-19 Amgen Inc Recombinant dna-derived cholera toxin subunit analogs
JPH07507854A (ja) 1991-12-23 1995-08-31 ツォッヒェ，ミヒャエル 油除去装置を備えたエンジン
IT1253009B (it) 1991-12-31 1995-07-10 Sclavo Ricerca S R L Mutanti immunogenici detossificati della tossina colerica e della tossina lt, loro preparazione ed uso per la preparazione di vaccini
JP3755890B2 (ja) 1992-06-25 2006-03-15 スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノニム） アジュバント含有ワクチン組成物
ATE280235T1 (de) 1993-03-05 2004-11-15 Wyeth Corp Plasmid zur herstellung von crm-protein und diphtherie-toxin
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
JP3696267B2 (ja) 1994-02-28 2005-09-14 天野エンザイム株式会社 生理活性蛋白質の安定化方法
US5571515A (en) 1994-04-18 1996-11-05 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Compositions and methods for use of IL-12 as an adjuvant
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
UA56132C2 (ru) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиция вакцины (варианты), способ стабилизации qs21 по отношению к гидролизу (варианты), способ приготовления вакцины
US6355255B1 (en) 1998-12-07 2002-03-12 Regents Of The University Of Minnesota Streptococcal C5a peptidase vaccine
US5846547A (en) * 1996-01-22 1998-12-08 Regents Of The University Of Minnesota Streptococcal C5a peptidase vaccine
US6403098B1 (en) 1996-09-26 2002-06-11 Merck & Co., Inc. Rotavirus vaccine formulations
US5932223A (en) 1996-09-26 1999-08-03 Merck & Co., Inc. Rotavirus vaccine formulations
RU2098109C1 (ru) 1996-09-26 1997-12-10 Александр Григорьевич Чучалин Противоаллергическое, противовоспалительное средство, способ его получения, лечебное и косметическое средства с его использованием
JP4078406B2 (ja) * 1997-01-22 2008-04-23 有限会社コーキ・エンジニアリング 注射器のシリンダの製造方法
NZ500028A (en) * 1997-04-08 2001-08-31 Merck & Co Inc Stabilized human papillomavirus formulations also containing a salt and a nonionic surfactant
US6113918A (en) 1997-05-08 2000-09-05 Ribi Immunochem Research, Inc. Aminoalkyl glucosamine phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
FR2763244B1 (fr) * 1997-05-14 2003-08-01 Pasteur Merieux Serums Vacc Composition vaccinale multivalente a porteur mixte
US6224880B1 (en) * 1997-09-24 2001-05-01 Merck & Co., Inc. Immunization against Streptococcus pneumoniae using conjugated and unconjugated pneumoccocal polysaccharide vaccines
PT1117435E (pt) 1998-09-30 2008-02-21 Us Gov Univ Health Sciences Holotoxina da cólera mutante como adjuvante
GB9909077D0 (en) 1999-04-20 1999-06-16 Smithkline Beecham Biolog Novel compositions
EP1162999B1 (en) 1999-03-19 2006-11-29 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine against Streptococcus pneumoniae
GB9928196D0 (en) * 1999-11-29 2000-01-26 Chiron Spa Combinations of B, C and other antigens
ES2307553T3 (es) 1999-12-02 2008-12-01 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Composiciones y procedimientos para estabilizar moleculas biologicas tras liofilizacion.
DE10012370A1 (de) * 2000-03-14 2001-09-27 Chiron Behring Gmbh & Co Adjuvans für Vakzinen
TR200302015T4 (tr) 2000-06-08 2004-01-21 Intercell Biomedizinische Forschungs-Und Entwicklungs Ag İmüno-uyarıcı oligodeoksinükleotitler
GB0108364D0 (en) * 2001-04-03 2001-05-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine composition
EP1296715B2 (en) * 2000-06-29 2015-12-23 SmithKline Beecham Biologicals S.A. Multivalent vaccine composition
KR100385711B1 (ko) * 2000-07-05 2003-05-27 녹십자백신 주식회사 디프테리아, 파상풍 톡소이드와 백일해균 및ｂ형간염표면항원을 포함한 4가 혼합백신 및 그 제조방법
AU2001271935B2 (en) * 2000-07-10 2006-09-14 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Multiple antigenic peptides immunogenic against streptococcus pneumoniae
GB0025414D0 (en) * 2000-10-16 2000-11-29 Consejo Superior Investigacion Nanoparticles
AT410635B (de) 2000-10-18 2003-06-25 Cistem Biotechnologies Gmbh Vakzin-zusammensetzung
WO2002098369A2 (en) 2001-06-07 2002-12-12 Wyeth Holdings Corporation Mutant forms of cholera holotoxin as an adjuvant
ATE451386T1 (de) 2001-06-07 2009-12-15 Wyeth Corp Mutantenformen von cholera holotoxin als adjuvans
GB0115176D0 (en) * 2001-06-20 2001-08-15 Chiron Spa Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
WO2003009869A1 (en) * 2001-07-26 2003-02-06 Chiron Srl. Vaccines comprising aluminium adjuvants and histidine
MX339524B (es) * 2001-10-11 2016-05-30 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica.
IL161677A0 (en) * 2001-11-08 2004-09-27 Protein Design Labs Stable liquid pharmaceutical formulation of igg antibodies
US20070148729A1 (en) 2003-01-15 2007-06-28 Farley John E Methods for increasing neisseria protein expression and compositions thereof
CA2514328C (en) * 2003-01-30 2020-01-14 Chiron Srl Injectable vaccines against multiple meningococcal serogroups
DK2236154T3 (en) 2003-02-10 2018-06-25 Biogen Ma Inc IMMUNOGLOBULIN INFORMATION AND METHOD OF PREPARING IT
EP1603950A2 (en) 2003-03-17 2005-12-14 Wyeth Holdings Corporation Mutant cholera holotoxin as an adjuvant and an antigen carrier protein
JP2006525330A (ja) 2003-04-16 2006-11-09 ワイエス・ホールディングス・コーポレーション 髄膜炎菌性疾患の予防および処置のための新規免疫原性組成物
NZ544367A (en) * 2003-06-25 2009-12-24 Elan Pharm Inc Combination therapy involving methotrexate for treating rheumatoid arthritis
UA67144A (en) 2003-07-29 2004-06-15 Inst Exprm & Clinical Veterina Method for production of inactivated vaccine against salmonellosis and escherichiosis of animals
AU2004263135B2 (en) 2003-08-06 2010-11-25 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Polysaccharide-protein conjugate vaccines
DE10348550A1 (de) 2003-10-20 2005-06-16 Hexal Biotech Forschungsgmbh Stabile wässrige G-CSF-haltige Zusammensetzungen
RU37462U1 (ru) 2004-01-16 2004-04-27 Бычкова Ольга Владимировна Пробирка
WO2006050341A2 (en) * 2004-11-01 2006-05-11 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Modified streptococcal polysaccharides and uses thereof
EP1841456A2 (en) * 2005-01-28 2007-10-10 Wyeth Stabilized liquid polypeptide formulations
US20070184072A1 (en) 2005-04-08 2007-08-09 Wyeth Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
EP2425853A1 (en) * 2005-04-08 2012-03-07 Wyeth LLC Multivalent Pneumococcal Polysaccharide-Protein Conjugate Composition
US7709001B2 (en) 2005-04-08 2010-05-04 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US7955605B2 (en) 2005-04-08 2011-06-07 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
GB0524066D0 (en) * 2005-11-25 2006-01-04 Chiron Srl 741 ii
TW200806315A (en) 2006-04-26 2008-02-01 Wyeth Corp Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions
US20070253985A1 (en) 2006-04-26 2007-11-01 Wyeth Novel processes for coating container means which inhibit precipitation of polysaccharide-protein conjugate formulations
BRPI0909820A2 (pt) 2008-03-05 2015-08-11 Sanofi Pasteur Processo para estabilização de composição de vacina contra gripe, para estabilização de composição de vacina contendo adjuvante e para preparação de vacina, composições de vacina, kit de vacina e método de estocagem de uma matéria prima

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2162710C2 (ru) * 1994-03-07 2001-02-10 Байер Аг Вакцина против свиного и репродуктивного и респираторного синдрома
EP0941738A1 (en) * 1998-03-10 1999-09-15 American Cyanamid Company Antigenic conjugates of conserved lipopolysaccharides of gram negative bacteria
WO2002074325A1 (en) * 2001-03-19 2002-09-26 Iomai Corporation Patch for transcutaneous immunization

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Boehm G el al. On technological and immunological benefits of multivalent single-injection microsphere vaccines Pharm Res, 2002 Sep, 19(9): 1330-6 *
Murdan S et al. Immobilisation of vaccines onto micro-crystals for enhanced thermal stability Int J Pharm, 2005 May 30; 296(1-2): 117-21 *

Also Published As

Publication number Publication date
CA2650056A1 (en) 2007-11-08
EP2676679B1 (en) 2019-01-02
JP2021176910A (ja) 2021-11-11
CN101500612A (zh) 2009-08-05
HK1223569A1 (zh) 2017-08-04
TW200806315A (en) 2008-02-01
CY1121251T1 (el) 2020-05-29
JP6192115B2 (ja) 2017-09-06
KR20140132779A (ko) 2014-11-18
CN104857524B (zh) 2018-08-28
KR101514913B9 (ko) 2022-07-20
IL194753A (en) 2015-08-31
EP2676679A3 (en) 2014-01-01
SI2679245T1 (sl) 2021-11-30
BRPI0710918A2 (pt) 2012-03-06
AR110731A2 (es) 2019-04-24
ES2712956T3 (es) 2019-05-16
EP2010219A2 (en) 2009-01-07
EP2010219B1 (en) 2015-10-28
SI2676679T1 (sl) 2019-03-29
ES2557504T3 (es) 2016-01-26
EA201200929A1 (ru) 2013-05-30
HUE055682T2 (hu) 2021-12-28
KR101514913B1 (ko) 2015-04-23
TR201902402T4 (tr) 2019-03-21
MX359741B (es) 2018-10-09
JP2019194240A (ja) 2019-11-07
CN104857524A (zh) 2015-08-26
PT2679244T (pt) 2022-04-19
JP2016222701A (ja) 2016-12-28
WO2007127665A2 (en) 2007-11-08
KR20220061256A (ko) 2022-05-12
PL2679245T3 (pl) 2021-11-08
EP3517129A1 (en) 2019-07-31
CY1116966T1 (el) 2017-04-05
KR20140004258A (ko) 2014-01-10
PL2679244T3 (pl) 2022-06-20
CL2007001185A1 (es) 2008-01-18
DK2676679T3 (en) 2019-03-04
KR20210111326A (ko) 2021-09-10
CN103768615A (zh) 2014-05-07
US20130034580A1 (en) 2013-02-07
HK1209358A1 (en) 2016-04-01
AR060665A1 (es) 2008-07-02
PL2010219T3 (pl) 2016-03-31
HUE042923T2 (hu) 2019-07-29
CR10405A (es) 2009-02-26
JP6321094B2 (ja) 2018-05-09
CA2873346C (en) 2017-09-05
LTPA2022509I1 (ru) 2022-06-27
RU2482878C2 (ru) 2013-05-27
BRPI0710918B1 (pt) 2021-02-02
CA2803111A1 (en) 2007-11-08
AU2007243019B2 (en) 2012-06-21
DK2010219T3 (en) 2016-01-11
EP2679245B1 (en) 2021-07-28
HUS2200028I1 (hu) 2022-07-28
PT2676679T (pt) 2019-03-01
KR20200032268A (ko) 2020-03-25
KR102093269B1 (ko) 2020-04-23
IL239978B (en) 2019-06-30
FR22C1027I1 (fr) 2022-09-09
EP2676679A2 (en) 2013-12-25
SI2010219T1 (sl) 2015-12-31
JP2018123145A (ja) 2018-08-09
HK1196546A1 (zh) 2014-12-19
EA200870480A1 (ru) 2009-04-28
PT2679245T (pt) 2021-09-02
EP2679244B1 (en) 2022-03-23
IL194753A0 (en) 2009-08-03
CA2873346A1 (en) 2007-11-08
KR101514847B1 (ko) 2015-04-24
HUE058394T2 (hu) 2022-08-28
US20070253984A1 (en) 2007-11-01
EP2679245A3 (en) 2014-01-15
KR20180130004A (ko) 2018-12-05
HRP20151203T1 (hr) 2015-12-04
JP2014055169A (ja) 2014-03-27
HUE028137T2 (hu) 2016-11-28
KR20160049063A (ko) 2016-05-04
CN103768615B (zh) 2016-06-01
EP2679244A2 (en) 2014-01-01
AU2007243019A1 (en) 2007-11-08
HRP20211417T1 (hr) 2021-12-10
US7935787B2 (en) 2011-05-03
EP2679245A2 (en) 2014-01-01
EA017436B1 (ru) 2012-12-28
MX2008013572A (es) 2009-03-06
CN105879021B (zh) 2020-11-24
WO2007127665A3 (en) 2008-11-13
US8562999B2 (en) 2013-10-22
PL2676679T3 (pl) 2019-06-28
HRP20190198T1 (hr) 2019-04-05
KR20090017537A (ko) 2009-02-18
CN101500612B (zh) 2013-12-25
EP2679244A3 (en) 2014-01-15
MX2018012171A (es) 2021-12-08
PT2010219E (pt) 2016-01-29
SI2679244T1 (sl) 2022-05-31
IL239788A0 (en) 2015-08-31
CA2650056C (en) 2013-07-16
RU2008141680A (ru) 2010-06-10
ZA200809167B (en) 2009-06-24
JP5612305B2 (ja) 2014-10-22
IL239978A0 (en) 2015-08-31
KR20170122857A (ko) 2017-11-06
BR122020000285B1 (pt) 2023-05-09
CA2803111C (en) 2015-06-16
DK2679244T3 (da) 2022-04-11
BRPI0710918B8 (pt) 2021-05-25
LT2676679T (lt) 2019-03-12
CN105879021A (zh) 2016-08-24
DK2679245T3 (da) 2021-09-06
ES2910432T3 (es) 2022-05-12
JP2014221806A (ja) 2014-11-27
JP2009535353A (ja) 2009-10-01
ES2885762T3 (es) 2021-12-15
US20110172393A1 (en) 2011-07-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA023470B1 (ru) Новые составы, стабилизирующие иммуногенные композиции и ингибирующие их осаждение
JP2009535353A5 (ru)
AU2018204779B2 (en) Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions
AU2014268186B2 (en) Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions
AU2012216628A1 (en) Novel Formulations which Stabilize and Inhibit Precipitation of Immunogenic Compositions

Legal Events

Date Code Title Description
ND4A Extension of term of a eurasian patent