EA015817B1 - Иммуногенная композиция, содержащая адъювант в виде эмульсии "масло в воде" - Google Patents
Иммуногенная композиция, содержащая адъювант в виде эмульсии "масло в воде" Download PDFInfo
- Publication number
- EA015817B1 EA015817B1 EA200900350A EA200900350A EA015817B1 EA 015817 B1 EA015817 B1 EA 015817B1 EA 200900350 A EA200900350 A EA 200900350A EA 200900350 A EA200900350 A EA 200900350A EA 015817 B1 EA015817 B1 EA 015817B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- dose
- vaccine
- adjuvant
- antigen
- composition
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 182
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 title claims abstract description 125
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims abstract description 46
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 title claims abstract description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 116
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 115
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 113
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 27
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims abstract description 16
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 14
- DFUSDJMZWQVQSF-XLGIIRLISA-N (2r)-2-methyl-2-[(4r,8r)-4,8,12-trimethyltridecyl]-3,4-dihydrochromen-6-ol Chemical compound OC1=CC=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1 DFUSDJMZWQVQSF-XLGIIRLISA-N 0.000 claims abstract description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000009117 preventive therapy Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims abstract description 5
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 40
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 39
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 39
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 claims description 27
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 19
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 claims description 17
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 claims description 14
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 14
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 claims description 14
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 claims description 14
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 claims description 13
- YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N squalene Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C\CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N 0.000 abstract 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 200
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 66
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 49
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 46
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 46
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 46
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 46
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 42
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 39
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 35
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 32
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 32
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 30
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 30
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 29
- 241000894007 species Species 0.000 description 28
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 25
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 24
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 23
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 23
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 23
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 23
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 23
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 23
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 22
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 22
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 22
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 21
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 21
- 239000000047 product Substances 0.000 description 20
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 19
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 18
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 17
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 17
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 17
- 230000004044 response Effects 0.000 description 17
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 16
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 16
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 16
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 15
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 14
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 14
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 13
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 13
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 12
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 12
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 12
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 11
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 10
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 10
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 9
- IELOKBJPULMYRW-NJQVLOCASA-N D-alpha-Tocopheryl Acid Succinate Chemical compound OC(=O)CCC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C IELOKBJPULMYRW-NJQVLOCASA-N 0.000 description 8
- 229940124896 Fluarix Drugs 0.000 description 8
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 8
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 8
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 8
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 7
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 7
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 7
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 7
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 7
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 7
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 229940099418 d- alpha-tocopherol succinate Drugs 0.000 description 6
- 238000013461 design Methods 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 6
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 6
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 6
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 6
- TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 6-oxabicyclo[3.2.1]oct-3-en-7-one Chemical compound C1C2C(=O)OC1C=CC2 TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 5
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 5
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 5
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- 240000004507 Abelmoschus esculentus Species 0.000 description 4
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 4
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 4
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 235000009421 Myristica fragrans Nutrition 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 238000011869 Shapiro-Wilk test Methods 0.000 description 3
- 238000010162 Tukey test Methods 0.000 description 3
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 3
- 101150078331 ama-1 gene Proteins 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 3
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 3
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 3
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 239000001115 mace Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 3
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 238000009021 pre-vaccination Methods 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 3
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 3
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 3
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 3
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 3
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 3
- CERZMXAJYMMUDR-QBTAGHCHSA-N 5-amino-3,5-dideoxy-D-glycero-D-galacto-non-2-ulopyranosonic acid Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)CC(O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO CERZMXAJYMMUDR-QBTAGHCHSA-N 0.000 description 2
- 206010059313 Anogenital warts Diseases 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100021257 Beta-secretase 1 Human genes 0.000 description 2
- 108030001720 Bontoxilysin Proteins 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 101100309570 Caenorhabditis elegans let-765 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000000907 Condylomata Acuminata Diseases 0.000 description 2
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 102100023847 Histone H3.X Human genes 0.000 description 2
- 101000894895 Homo sapiens Beta-secretase 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000905312 Homo sapiens Histone H3.X Proteins 0.000 description 2
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 241000371980 Influenza B virus (B/Shanghai/361/2002) Species 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 101710105759 Major outer membrane porin Proteins 0.000 description 2
- 101710164702 Major outer membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 241000255969 Pieris brassicae Species 0.000 description 2
- 102100035181 Plastin-1 Human genes 0.000 description 2
- 101710120463 Prostate stem cell antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100036735 Prostate stem cell antigen Human genes 0.000 description 2
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 208000025009 anogenital human papillomavirus infection Diseases 0.000 description 2
- 201000004201 anogenital venereal wart Diseases 0.000 description 2
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229960001212 bacterial vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 229940053031 botulinum toxin Drugs 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 102000013361 fetuin Human genes 0.000 description 2
- 108060002885 fetuin Proteins 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000010211 hemagglutination inhibition (HI) assay Methods 0.000 description 2
- 102000022382 heparin binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091012216 heparin binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N neuraminic acid Natural products NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010049148 plastin Proteins 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- OWZPCEFYPSAJFR-UHFFFAOYSA-N 2-(butan-2-yl)-4,6-dinitrophenol Chemical compound CCC(C)C1=CC([N+]([O-])=O)=CC([N+]([O-])=O)=C1O OWZPCEFYPSAJFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNLXNOZHXNSSPN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(OCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO)C=C1 HNLXNOZHXNSSPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 101100058598 Arabidopsis thaliana BPM1 gene Proteins 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 102100021663 Baculoviral IAP repeat-containing protein 5 Human genes 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 101100457838 Caenorhabditis elegans mod-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100025338 Calcium-binding tyrosine phosphorylation-regulated protein Human genes 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100024633 Carbonic anhydrase 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000006082 Chickenpox Diseases 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- 241000511343 Chondrostoma nasus Species 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 101710117490 Circumsporozoite protein Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241001076388 Fimbria Species 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 244000287680 Garcinia dulcis Species 0.000 description 1
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 101100406392 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) omp26 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 101000935132 Homo sapiens Calcium-binding tyrosine phosphorylation-regulated protein Proteins 0.000 description 1
- 101000760643 Homo sapiens Carbonic anhydrase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000616172 Homo sapiens Splicing factor 3B subunit 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000794213 Homo sapiens Thymus-specific serine protease Proteins 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 229940124873 Influenza virus vaccine Drugs 0.000 description 1
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102100032241 Lactotransferrin Human genes 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- -1 M8P3 Proteins 0.000 description 1
- 101150110972 ME1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 description 1
- 241000282339 Mustela Species 0.000 description 1
- 241000282341 Mustela putorius furo Species 0.000 description 1
- 102100032965 Myomesin-2 Human genes 0.000 description 1
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 108010046016 Peanut Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 1
- 101710183389 Pneumolysin Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101710132701 Protein L1 Proteins 0.000 description 1
- 101710201576 Putative membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 235000019774 Rice Bran oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 108091006629 SLC13A2 Proteins 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010079723 Shiga Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102100021816 Splicing factor 3B subunit 3 Human genes 0.000 description 1
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 108010011834 Streptolysins Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 108010002687 Survivin Proteins 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 102100030138 Thymus-specific serine protease Human genes 0.000 description 1
- 241000710771 Tick-borne encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 102000010912 Transferrin-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010062476 Transferrin-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010064390 Tumour invasion Diseases 0.000 description 1
- 102100039094 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010046980 Varicella Diseases 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 235000018936 Vitellaria paradoxa Nutrition 0.000 description 1
- 241000710772 Yellow fever virus Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 1
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 244000037640 animal pathogen Species 0.000 description 1
- 230000000078 anti-malarial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000003430 antimalarial agent Substances 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 201000001531 bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 108091016312 choline binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 231100001102 clostridial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000000292 ehrlichiosis Diseases 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000369 enteropathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000249 enterotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002242 enterotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 description 1
- 229940035638 gonadotropin-releasing hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 244000052637 human pathogen Species 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002130 immunocastration Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 230000002480 immunoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000003866 lung sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 229940124735 malaria vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002941 microtiter virus yield reduction assay Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 229920004905 octoxynol-10 Polymers 0.000 description 1
- 239000008041 oiling agent Substances 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 108010021711 pertactin Proteins 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 239000008165 rice bran oil Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012284 sample analysis method Methods 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000004513 sizing Methods 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 235000013547 stew Nutrition 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012956 testing procedure Methods 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000037317 transdermal delivery Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 208000010570 urinary bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- 230000002477 vacuolizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 230000007485 viral shedding Effects 0.000 description 1
- 239000000277 virosome Substances 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 239000010497 wheat germ oil Substances 0.000 description 1
- 229940051021 yellow-fever virus Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/295—Polyvalent viral antigens; Mixtures of viral and bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
В настоящем изобретении предлагается иммуногенная композиция, содержащая антиген или антигенную композицию и адъювантную композицию, состоящую из эмульсии ″масло в воде″, где указанная эмульсия ″масло в воде″ содержит 0,25-1,25% (об./об.) сквалена, 0,25-1,25% (об./об.) токола и 0,1-0,7% (об./об.) эмульгатора от общего объема композиции, а также ее применение при изготовлении лекарственного средства для использования в профилактической терапии или терапии состояния или заболевания человека. Также предложен способ лечения или предупреждения заболевания, включающий введение пациенту, страдающему от заболевания или подверженному ему, иммуногенной композиции по изобретению.
Description
Настоящее изобретение относится к улучшенной вакцине и иммуногенным композициям и к их применению в медицине. В частности, изобретение относится к иммуногенным композициям, содержащим адъювант в виде эмульсии масло в воде, и их применению в медицине, в частности их применению для усиления иммунных ответов на различные антигены, и к способам получения, где эмульсия масло в воде содержит токол, сквален и эмульгатор.
Предшествующий уровень техники
Существует неизменная потребность в новых композициях или вакцинах с улучшенной иммуногенностью. В качестве одной стратегии адъюванты использовали для достижения и улучшения иммунного ответа, генерируемого на какой-либо заданный антиген и/или для снижения реактогенности/токсичности в организме хозяина.
Эмульсии масло в воде сами по себе хорошо известны в данной области техники и предложены как полезные в качестве адъювантных композиций (ЕР 399843; νθ 95/17210).
В νθ 95/17210 раскрыты эмульсии масло в воде, содержащие 2-10% сквалена, 2-10% αтокоферола и 0,3-3% Твин 80 и их применение самих по себе или в комбинации с ^821 и/или 3Ό-ΜΡΤ (3-де-О-ацилированный монофосфориллипид А).
В νθ 99/12565 раскрыты эмульсионные композиции масло в воде, содержащие метаболизируемое масло, сапонин и стерол. Эмульсии масло в воде дополнительно содержат 3Ό-ΜΡΤ.
В νθ 99/11241 раскрыты эмульсии масло в воде, содержащие метаболизируемое масло и сапонин, где масло и сапонин присутствуют в соотношении от 1:1 до 200:1.
Все еще существует потребность в улучшенных вакцинных и иммуногенных композициях, которые обеспечивают подходящий иммунный ответ и являются менее реактогенными в организме хозяина.
Краткое изложение сущности изобретения
Авторы изобретения обнаружили, что можно использовать вакцинные или иммуногенные композиции, содержащие более низкие количества каждого компонента эмульсии масло в воде, поддерживая сравнимый иммунный ответ против антигена или антигенной композиции в указанной композиции. Преимуществом этого является поддержание уровня иммуногенности к антигену, в то время как реактогенность в организме хозяина-реципиента понижена.
Соответственно в первом аспекте настоящего изобретения предлагается иммуногенная композиция, содержащая антиген или антигенную композицию и адъювантную композицию, состоящую из эмульсии масло в воде, где указанная эмульсия масло в воде содержит 0,25-1,25% (об./об.) сквалена, 0,251,25% (об /об.) токола и 0,1-0,7% (об./об.) эмульгатора от общего объема композиции.
Предпочтительно токол представляет собой α-токоферол.
Предпочтительно эмульгатор представляет собой полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат, наиболее предпочтительно полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат выбран из группы, включающей Ро1у8ОтЬа1е® 80 или Т\гееп® 80.
Предпочтительно антиген или антигенную композицию получают из вируса гриппа.
Предпочтительно доза иммуногенной композиции согласно настоящему изобретению, предназначенная для введения человеку, составляет 0,4-1,5 мл, более предпочтительно объем дозы составляет 0,5, 0,7 или 1,0 мл.
В еще одном аспекте настоящего изобретения предлагается применение иммуногенной композиции по изобретению в качестве лекарственного средствоа для использования в профилактической терапии или терапии состояния или заболевания человека.
В дополнительном аспекте изобретения предлагается применение иммуногенной композиции по настоящему изобретению при изготовлении лекарственного средства для использования в профилактической терапии или терапии состояния или заболевания человека.
В еще одном аспекте настоящего изобретения предлагается способ лечения или предупреждения заболевания, включающий введение пациенту, страдающему от заболевания или подверженному ему, иммуногенной композиции по изобретению.
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1: Клиническое испытание: средние геометрические значения титров (СМТ§) анти-НА антител в разные моменты времени (АТР (Ассотбшд 1о рго!оео1 (согласно протоколу))-группа исследования иммуногенности).
Фиг. 2: Клиническое испытание: уровень серопротекции (8РК.) для титра Н1-антител с 95% доверительным интервалом на 0 и 21 сутки (АТР-группа исследования иммуногенности).
Фиг. 3: Клиническое испытание: уровень сероконверсии (8СК.) для титра Н1-антител с доверительным интервалом 95% на 21 сутки (АТР-группа исследования иммуногенности).
Фиг. 4: Клиническое испытание: фактор сероконверсии (8СЕ) для титра Н1-антител с 95% доверительным интервалом на 21 сутки (АТР-группа исследования иммуногенности).
Фиг. 5: Исследование на мышах: Тест ингибирования гемагглютинина (СМТ+/-1С95) у мыши ВАТВ/с, праймированной гетеросубтипическими штаммами (интервал доз А803).
- 1 015817
Фиг. 5А: Титры анти-А/Ыете Са1ейоша/20/99 ΗΙ; Фиг. 5Б: Титры анти-А/Рапата/2007/99 ΗΙ. Фиг. 5В: Титры анти-В/§йапйопд/7/97 ΗΙ.
Фиг. 6: Исследование на мышах: Тест ингибирования гемагглютинина (СМТ +/- 1С95) у С57В1/6 мыши, праймированной гетеросубтипическими штаммами (интервал доз АБ03).
Фиг. 7: Исследование на мышах: Клеточный иммунный ответ (СИ4+ Т се11) в РВМС (мононуклеары периферической крови) из мыши С57В1/6, праймированной гетеросубтипическими штаммами (интервал доз АБ03).
Фиг. 8: Исследование на мышах: Клеточный иммунный ответ (СИ4+Т-клетки) в РВМС от мыши С57В1/6, праймированной гетеросубтипическими штаммами и иммунизированной низкой дозой антигена (0,5 мкг), адъювантированного интервалом доз АБ03.
Фиг. 9: Исследование на мышах: ЕЬ1§А Титры (А и Б) Н5Ы1-специфического сывороточного 1д и анти-Н5Ы1 1дС1 (В и Г) и 1дС2Ь (Д и Е) изотипических ответов на 14 сутки после иммунизации (СМТ+/1С95) для двух разных доз антигена: 1,5 мкг (А, В и Д) или 0,38 мкг (Б, Г и Е).
Фиг. 10: Исследование на мышах: Тест ингибирования гемагглютинации (СМТ +/- 1С95) на 21 сутки после иммунизации (СМТ+/-1С95) для двух разных доз антигена: 1,5 мкг (А) или 0,38 мкг (Б).
Фиг. 11: Исследование на мышах: Клеточный иммунный ответ (СИ4+ Т-клетки) у ранее не подвергавшейся воздействию мыши С57В1/6, иммунизированной разными дозами Н5И1-вакцины (1,5 или 0,38 мкг), адъювантированной интервалом доз АБ03: (А) 1,5 мкг НА Ад (антиген) или (Б) 0,38 мкг НА Ад (антиген).
Фиг. 12: Исследования на свиньях. Тест ингибирования гемагглютинина (СМТ+/-1С95) у свиней, праймированных гомологичными штаммами (интервал доз АБ03).
Подробное описание изобретения
Термины содержащий, содержат и содержит в данном описании изобретения, как предполагается авторами, в каждом случае являются возможно заменяемыми терминами состоящий из, состоят из и состоит из соответственно.
Воплощения в данном описании изобретения, относящиеся к вакцинным композициям по изобретению, также применимы к воплощениям, относящимся к иммунногенным композициям по изобретению, и наоборот.
Компонент в виде эмульсии масло в воде
Сквален (2,6,10,15,19,23-гексаметил-2,6,10,14,18,22-тетракозагексаен) представляет собой ненасыщенное масло, которое обнаруживается в больших количествах в жире из печени акулы, и в более низких количествах в оливковом масле, масле зародышей пшеницы, масле рисовых отрубей и в дрожжах, и является особенно предпочтительным маслом для применения в данном изобретении. Сквален является метаболизируемым маслом, поскольку представляет собой промежуточный продукт в биосинтезе холестерина (Мегск шйех, 10(11 ΕάίΙίοη. еп1гу по.8619).
Количество сквалена в иммунногенной композиции может быть выражено в виде процента от общей композиции. Подходящим образом сквален присутствует в иммуногенной композиции в количестве 0,25-1,25% (об./об.) от общего объема композиции.
В еще одном конкретном воплощении метаболизируемое масло присутствует в конечном количестве 1,25% от общего объема иммунногенной композиции. В еще одном конкретном воплощении метаболизируемое масло присутствует в конечном количестве 0,25% (об./об.) от общего объема композиции.
С целью пояснения, концентрации, приведенные в об./об., могут быть переведены в концентрацию в мас./об. путем применения следующего переводного коэффициента: концентрация сквалена 5% (об./об.) эквивалентна концентрации сквалена 4,28% (мас./об.).
Эмульсия масло в воде содержит токол. Токолы хорошо известны в данной области техники и описаны в ЕР0382271. Подходящим образом токол представляет собой α-токоферол или его производное, такое как α-токоферола сукцинат (также известный как сукцинат витамина Е).
Количество токола может быть представлено в виде процента от общего объема иммунногенной композиции. Подходящим образом токол присутствует в имууногенной композиции в количестве от 0,25 до 1,25% (об./об.) от общего объема иммуногенной композиции.
В конкретном воплощении токол присутствует в конечном количестве примерно 1,25% от общего объема вакцинной или иммунногенной композиции. В еще одном конкретном воплощении токол присутствует в конечном количестве 0,25% (об./об.) общего объема или 1,25% (об./об.) в объеме дозы 0,5 мл, или 0,9% (об./об.) в объеме дозы 0,7 мл, или 0,5% (об./об.) в 0,5 мл дозе или 0,35-0,37%, предпочтительно 0,36%, в 0,7 мл вакцинной или иммунногенной дозе.
С целью пояснения, концентрации, приведенные в об./об., могут быть переведены в концентрацию в мас./об. путем применения следующего переводного коэффициента: концентрация α-токоферола 5% (об./об.) эквивалентна концентрации α-токоферола 4,8% (мас./об.).
Эмульсия масло в воде дополнительно содержит эмульгатор. Эмульгатор подходящим образом может представлять собой полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат. В конкретном воплощении эмульгатор может быть выбран из группы, содержащей Ро1узогЬа1е® 80 или Т\гееп® 80.
- 2 015817
Количество эмульгатора может быть выражено в виде процента от общего объема иммуногенной композиции. Подходящим образом эмульгатор присутствует в иммунногенной композиции в количестве 0,125-0,7% (об./об.) от общего объема композиции, предпочтительно 0,08-0,05, или 0,1-0,7, или 0,2-0,6, или 0,25-0,55, или 0,3-0,52, или 0,4-0,5% (об./об.) от общего объема. В конкретном воплощении эмульгатор присутствует в количестве 0,7, 0,5 или 0,2% (об./об.) от общего объема вакцинной или иммунногенной композиции.
С целью пояснения, концентрации, указанные в об./об., могут быть переведены в концентрацию в мас./об. путем применения следующего переводного коэффициента: концентрация полисорбата 80 1,8% (об./об.) эквивалентна концентрации полисорбата 80 1,91% (мас./об.).
В конкретном воплощении 0,5 мл объем вакцинной или иммуногенной содержит 0,45% (об./об.) Т\тссп 80, и 0,7 мл объем дозы содержит 0,315% (об./об.) Т\уссп 80. В еще одном конкретном воплощении 0,5 мл доза содержит 0,18% (об./об.) эмульгатора и 0,7 мл доза вакцинной или иммунногенной композиции содержит 0,126% (об./об.) эмульгатора.
Под термином доза, предназначенная для человека подразумевается доза, которая представлена в объеме, пригодном для применения у человека. Как правило, она составляет от 0,25 до 1,5 мл. В одном воплощении доза, предназначенная для человека, составляет 0,5 мл. В дополнительном воплощении доза, предназначенная для человека, выше 0,5 мл, например 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 или 1 мл. В дополнительном воплощении доза, предназначенная для человека, составляет от 1 до 1,5 мл. В еще одном воплощении, в частности, если иммуногенная композиция предназначена для педиатрической популяции, доза, предназначенная для человека, может быть меньше 0,5 мл, такой как 0,25-0,5 мл. Изобретение отличается тем, что каждый или все отдельные компоненты адъюванта в составе иммуногенной композиции присутствует/присутствуют на более низком уровне, чем считалось пригодным ранее, и обычно представляет/представляют собой перечисленные выше. Особенно подходящие композиции содержат следующие адъювантные компоненты в следующих количествах в конечном объеме дозы, предназначенной для человека, 0,5 мл:
Таблица 1
Н· X со т § << | Адъювант В | Адъювант | Адъювант | Адъювант С | Адъювант С | Адъювант Э | |
Эмульсия м/в | 125 мкл | 100 мкл | 83,33 мкл | 62,5 мкл | 50 мкл | 31,25 мкл | 25 мкл |
Компоненты: | |||||||
Токоферол | 5,94 мг | 4,28 мг | 3,57 мг | 2,68 мг | 2,38 мг | 1,34 мг | 1,19 мг |
Сквален | 5,35 мг | 4,75 мг | 3,96 мг | 2,97 мг | 2,14 мг | 1,49 мг | 1,07 мг |
Полисорбат 80 | 2,43 мг | 1,94 мг | 1,62 мг | 1,21 мг | 0,97 мг | 0,61 мг | 0,48 мг |
В изобретении дополнительно предлагается адъювантная композиция, содержащая отдельные компоненты, как определено выше в данном описании изобретения, и в количестве, определенном выше, например, но исключительно так, как поясняется в табл. 1. Обычно такая адъювантная композиция будет представлена в объеме, подходящем для дозы, предназначенной для человека. Если адъювант находится в жидкой форме для объединения с жидкой формой антигенной композиции, то адъювантная композиция будет представлена в объеме, подходящем для дозы, предназначенной для человека, который представляет собой часть предполагаемого конечного объема дозы, предназначенной для человека, например, приблизительно половину предполагаемого конечного объема дозы, предназначенной для человека, например объем 350 мкл для предполагаемой дозы, предназначенной для человека, 0,7 мл, или объем 250 мкл для предполагаемой дозы, предназначенной для человека, 0,5 мл. Адъювантную композицию разбавляют при объединении с антигенной композицией с получением конечной дозы вакцины, предназначенной для человека. Конечный объем такой дозы будет, конечно, варьироваться в зависимости от начального объема адъювантной композиции и объема антигенной композиции, добавленной к адъювантной композиции. В альтернативном воплощении жидкий адъювант используют для разведения лиофилизированной антигенной композиции. В данном воплощении подходящий объем дозы, предназначенной для человека, адъювантной композиции приблизительно равен конечному объему дозы, предназначенной для человека. Жидкую адъювантную композицию добавляют во флакон, содержащий лиофилизированную антигенную композицию. Конечная доза, предназначенная для человека, может варьироваться между 0,5 и 1,5 мл.
Способ изготовления эмульсий масло в воде хорошо известен специалисту в данной области техники. Обычно такой способ включает смешивание токолсодержащей масляной фазы с поверхностноактивным веществом, таким как раствор ΡΒ8/ΤΨΕΕΝ80™, с последующей гомогенизацией с применением гомогенизатора, специалисту в данной области техники понятно, что способ, включающий пропуска
- 3 015817 ние смеси дважды через иглу шприца будет пригодным для гомогенизации небольших объемов жидкости. В равной степени процесс эмульгирования в микрофлюидизаторе (аппарат М1 108 МюгоПшбюк. максимум 50 проходов в течение 2 мин при максимальном давлении на входе 6 бар (6х 105 Па) (выходное давление примерно 850 бар (8.5х107 Па))) может быть адаптирован специалистом в данной области техники для получения меньших или больших объемов эмульсии. Адаптирование может быть выполнено посредством обычного экспериментирования. включающего проведение замеров в образующейся эмульсии до тех пор. пока не получают препарат с масляными каплями требуемого диаметра.
В эмульсии масло в воде масло и эмульгирующее вещество должны быть в водном носителе. Водный носитель может представлять собой. например. фосфатно-солевой буферный раствор.
Предпочтительно эмульсионные системы масло в воде по настоящему изобретению имеют небольшой размер масляной капли в субмикронном диапазоне. Подходящие размеры капель находятся в диапазоне 120-750 нм. более предпочтительны размеры от 120 до 600 нм в диаметре. Более предпочтительно эмульсия масло в воде содержит масляные капли при интенсивности. из которых по меньшей мере 70% по количеству имеют менее диаметр 500 нм. более предпочтительно по меньшей мере 80% по интенсивности имеют диаметр менее 300 нм. более предпочтительно по меньшей мере 90% по интенсивности находятся в диапазоне от 120 до 200 нм диаметром.
Размер масляной капли. то есть диаметр. согласно настоящему изобретению приведен по интенсивности. Существует несколько способов определения диаметра размера масляной капли посредством интенсивности. Интенсивность измеряют. используя устройство для определения размера. удобно посредством динамического рассеяния света. такого как Макет ΖοΙηκίζοΓ 4000 или предпочтительно Макет ΖοΙηκίζοΓ 3000Н8. Подробная методика приведена в примере П.2. Первая возможность состоит в определении ΖΆΌ - среднего диаметра по ζ. посредством динамического рассеяния света (РС8-фотонкорреляционная спектроскопия); такой способ дополнительно дает индекс полидисперсности (РБ1). и ΖΆΌ и РБ1 рассчитывают при помощи кумулянтного алгоритма. Данные значения не требуют знания показателя преломления частицы. Второй способ состоит в расчете диаметра масляной капли путем определения полного распределения частиц по размерам посредством другого алгоритма. либо СопБп. либо ΝΝΕ8. либо автоматического алгоритма Макет (алгоритма по умолчанию. предусмотренного для устройства для измерения размера). Большей частью. так как показатель преломления частиц сложной композиции неизвестен. принимают во внимание только распределение интенсивности. и в случае необходимости среднее значение интенсивности. возникающее из этого распределения.
Антигены и антигенная композиция
Иммуногенные композиции содержат антиген или антигенную композицию. способную вызывать иммунный ответ против человеческого или животного патогена.
Соответственно. указанный антиген или антигенная композиция происходит из одного или более из нижеперечисленного: Н1У-1 (такого как дад или его фрагменты. такие как р24. 1а(. пеГ. др120 или др160 или фрагменты любого из них). вирусы герпеса человека. такие как дБ или его производные. или предранний белок. такой как 1СР27 из Н8У1 или Н8У2. цитомегаловирус ((особенно человеческий) (такой как дВ или его производные). ротавирус (включая живые аттенуированные вирусы). вирус ЭпштейнаБарр (такой как др350 или его производные). вирус ветряной оспы (такой как др1. II и ΙΕ63). или вируса гепатита. такого как вирус гепатита В (например поверхностный антиген гепатита В или его производное). вирус гепатита А. вирус гепатита С и вирус гепатита Ε. или из других вирусных патогенов. таких как парамиксовирусы: респираторно-синцитиальный вирус (такой как белки Е. N. М и С или их производные). вирус 8АП8 (тяжелый острый респираторный синдром). вирус парагриппа. вирус кори. вирус эпидемического паротита. вирусы папилломы человека (например НРУ6. 11. 16. 18). флавивирусы (например. вирус желтой лихорадки. вирус Денге. вирус клещевого энцефалита. вирус японского энцефалита) или вирус гриппа (цельный живой или инактивированный вирус. расщепленный вирус гриппа. выращенный в яйцах или в МБСК-клетках (клетки почек собак Мабш-БагЬу). или цельные виросомы гриппа (как описано у П. С1иск. Уаееше. 1992. 10. 915-920) или их очищенные или рекомбинантные белки. такие как белки НА. №. ΝΑ. или М. или их комбинации). или происходящие из бактериальных патогенов. таких как виды №бкепа. включая Ν. доиоггйеа и Ν. тепшдШбб (например. капсулярные сахариды и их конъюгаты. трансферрин-связывающие белки. лактоферрин-связывающие белки. Р11С. адгезины); 8. руодепек (например. М-белки или их фрагменты. протеаза С5А. липотейхоевые кислоты). 8. ада1асБае. 8. ти1аи8; Н. бисгеуц виды Могахе11а. включая М. са1агг11аНк. также известную как ВгапбатеПа са1агг11ак (например. высокомолекулярные и низкомолекулярные адгезины и инвазины); виды Вогбе1е11а. включая В. регШккб (например. пертактин. токсин коклюша или их производные. нитевидный гемагглютинин. аденилатциклаза. фимбрии). В. рагарегШккб и В. ЬгопсЫкерйса; виды МусоЬас1егшт. включая М. 1иЬегси1ок1к (например Е8АТ6. антиген 85А. -В или -С). М. Ьог1к. М. 1ергае. М. аущт. М. рагаШЬегси1окб. М. ктедтак; виды Бедюпе11а. включая Ь. рпеиторНПа; виды ЕксНепсЫа. включая энтеротоксичную Е. сой (например. факторы колонизации. термолабильный токсин или его производные. термостабильный токсин или его производные). энтерогеморрагическую Е. сой. энтеропатогенную Е. сой (например шигаподобный токсин или его производные); виды У1Ьгю. включая V. с1ю1ега (например. токсин холеры или его
- 4 015817 производные); виды 8Ыдс11а, включая 8. коппст 8. буксШспас, 8, Псхпсги; виды Усташа, включая Υ. сп!егосо1й1еа (например, Υορ-белок), Υ. рскбк, Υ. рксибо!иЬсгси1ок1к; виды Сатру1оЬае!сг, включая С. )с)ши (например токсины, адгезины и инвазины) и С. сой; виды 8а1топс11а, включая 8. (урНт 8. рата!урЫ, 8. сйо1сгаскшк, 8. сп1спЦб1к; виды ЫкВпа, включая Ь. топосуЮдспсх; виды НсисоЬас!сг, включая Н. ру1оп (например уреаза, каталаза, вакуолизирующий токсин); виды Рксиботопак, включая Р. астидшока; виды 8!арйу1ососсик, включая 8. аитсик, 8. ср|бспшб1к; виды Еп1стососсик, включая Е. ГассаНз, Е. Гассшт; виды С1ок!п6шш, включая С. 1с1ап1 (например, столбнячный токсин и его производные), С. Ьо!и1шит (например, ботулотоксин и его производные,), С. бйГтсбс (например, клостридиальные токсины А или В и их производные); виды ВасШик, включая В. апЮтаак (например, ботулотоксин и его производные); виды СогупсЬас!стшт, включая С. б|р11111спас (например, дифтерийный токсин и его производные); виды Вогтсйа, включая В. ЬигдбогГсп (например, ОкрА, ОкрС, ОЬрА, ЭЬрВ), В. датши (например, ОкрА, ОкрС, ОЬрА, ЭЬрВ), В. аГхсЫ (например, ОкрА, ОкрС, ОЬрА, ОЬрВ,), В. апбсткопй (например, ОкрА, ОкрС, ОЬрА, ОЬрВ), В. йсттки; виды ЕйтйсЫа крр., включая Е. сс.|ш и агент гранулоцитарного эрлихиоза человека; виды Ктсксйыа, включая В. псксИкп; виды СЫатуФа, включая С. йасйотайк (например, МОМР, гепарин-связывающие белки), С. рпситошас (например, МОМР, гепарин-связывающие белки), С. ркШаск виды Еср!окр1га, включая Ь. ш1стгодапк; виды Тгсропста, включая Т. раШбит (например, минорные белки наружной мембраны), Т. бспбсо1а, Т. 11уобуксп1спас; или происходящие из паразитов, таких как виды Р1актоб1ит, включая Р. ГаШрагит; виды Тохор1акта, включая Т. допби (например, 8А62, 8А63, Тд34); виды Еп!атосЬа, включая Е. 1ик1о1уйса; виды ВаЬсыа, включая В. тюгоб; виды Тгурапокота, включая Т. сги/ί; виды 61агб1а, включая 6. 1атЬ11а; виды Ескйтап1а, включая Ь. та)ог, виды Рпситосукбк, включая Р. саппи; виды Тг1сйотопак, включая Т. уадшайк; виды 8сЫкок!ота, включая 8. тапкош, или происходящие из дрожжей, таких как виды Сапб1ба, включая С. а1Ысапк; виды Сгур!ососсик, включая С. псоГогтапк.
Композиции по настоящему изобретению можно использовать для профилактики или лечения аллергии. Такие вакцины должны содержать аллергенспецифические и аллергеннеспецифические антигены.
Другие предпочтительные конкретные антигены для М. 1иЬсгси1ок1к представляют собой, например, ТЬ Ва12, ТЬ Н9, ТЬ Ва35, ТЬ38-1, Егб 14, ПРУ, МТ1, М8Ь, тТТС2 и 11ТСС1 (№О 99/51748). Белки для М. !иЬсгси1ок1к также включают слитые белки и их варианты, где по меньшей мере два, предпочтительно три полипептида М. 1иЬсгси1ок1к слиты в более крупный белок. Предпочтительные слитые белки содержат Ва12-ТЬН9-Ва35, Етб14-ОРУ-МТ1, ПРУ-МТ1-М8Ь, Егб14-ПРУ-МТ1-М8Ь-тТСС2, Етб14-ПРУ-МТ1-М8Ь, ПРУ-МТ1-М8Ь-шТСС2, ТЬН9-ПРУ-МТ1 (№О 99/51748).
Наиболее предпочтительные антигены для С111атуб1а включают, например, высокомолекулярный белок (НМ^) (\УО 99/17741), ОВР3 (ЕР 366 412), и предполагаемые мембранные белки (Ртрк). Другие антигены С111атуб1а в вакцинной композиции могут быть выбраны из группы, описанной в \УО 99/28475.
Предпочтительные бактериальные вакцины содержат антигены, происходящие из 8!гср!ососсик крр., включая 8. рпситошас (например, РкаА, РкрА, стрептолизин, холин-связывающие белки) и белковый антиген пневмолизин (ВюсЬст ВюрЬук Ас!а, 1989, 67, 1007; ВиЬшк с! а1., МютоЬ1а1 Ра!йодспск1к, 25, 337-342) и их мутантные детоксифицированные производные (\УО 90/06951; XVО 99/03884). Другие предпочтительные бактериальные вакцины содержат антигены, происходящие из НасторЫ1ик крр., включая Н. тПисп/ас типа В, нетипичную Н. шПиспгас, например ОМР26, высокомолекулярные адгезины, Р5, Р6, белок Ό и липопротеин Ό, и фимбрин и происходящие от фимбрина пептиды (И8 5843464) или их многократно копированные варианты или слитые белки.
Производные поверхностного антигена гепатита В хорошо известны в данной области техники и включают, в частности, антигены Рге81, Ргс82 8, описанные в заявках на европейский патент ЕР-А414374; ЕР-А-0304578 и ЕР 198-474. В одном предпочтительном аспекте вакцинная композиция по изобретению содержит антиген Н1У-1, др120, особенно при экспрессии в клетках СНО (яичника китайского хомяка). В дополнительном воплощении вакцинная композиция по изобретению содержит дО21, как определено выше в данном описании изобретения.
В предпочтительном воплощении настоящего изобретения вакцины, содержащие заявленный адъювант, содержат антиген, происходящий из вируса папилломы человека (НРУ), считающийся ответственным за остроконечные кондиломы (НРУ 6 или НРУ 11 и другие) и вирусов НРУ, ответственных за рак шейки матки (НРУ16, НРУ18 и другие).
Особенно предпочтительные формы профилактической или терапевтической вакцины для остроконечной кондиломы содержат белок Ь1 и слитые белки, содержащие один или более антигенов, выбранных из НРУ белков Е1 , Е2, Е5, Е6, Е7, Ь1 и Ь2.
Наиболее предпочтительные формы слитого белка представляют собой Ь2Е7, раскрытый в VО 96/26277, и белок О(1/3)-Е7, раскрытый в №О99/10375.
Предпочтительная НРУ инфекция шейки матки или рак, профилактическая или терапевтическая вакцина, композиция может содержать антигены НРУ 16 или 18.
Особенно предпочтительные НРУ 16 антигены содержат ранние белки Е6 или Е7 в слиянии с носителем белка Ό с образованием слияний белок О-Е6 или Е7 из НРУ 16 или их комбинаций; или комбина
- 5 015817 ций Е6 или Е7 с Ь2 (УО 96/26277).
Альтернативно ранние белки Е6 и Е7 НРУ 16 или 18 могут быть представлены единственной молекулой, предпочтительно слиянием белок Э-Е6/Е7. Такая вакцина возможно может содержать любой из двух или оба из белков Е6 и Е7 из НРУ 18, предпочтительно в форме слитых белков белок Ό -Е6 или белок Ό - Е7 или слитого белка белок Э-Е6/Е7.
Вакцина по настоящему изобретению может дополнительно содержать антигены из других штаммов НРУ, предпочтительно из штаммов НРУ 31 или 33.
Вакцины или иммуногенные композиции по настоящему изобретению дополнительно содержат антигены, происходящие из паразитов, которые вызывают малярию, например антигены из Р1актоб1а ίαίοίрагит, включая белок циркумспорозоита (С8-белок), КТ8,8, М8Р1, М8Р3, Ь8А1, Ь8А3, АМА1 и ТКАР. КТ8 представляет собой гибридный белок, содержащий, по существу, весь С-концевой участок белка циркумспорозоита (С8) из Р. £а1с1ратит, присоединенный с помощью четырех аминокислот области рге82 поверхностного антигена гепатита В к поверхностному (8) антигену вируса гепатита В. Его полная структура раскрыта в международной патентной заявке №РСТ/ЕР92/02591, опубликованной под номером УО 93/10152, с заявленным приоритетом патентной заявки ИК 9124390.7. При экспрессии в дрожжах КТ8 продуцируется в виде липопротеиновой частицы, и когда его коэкспрессируют с антигеном 8 из НВУ, то получают смешанную частицу, известную как КТ8,8. Антигены ТКАР описаны в международной патентной заявке №РСТ/СВ89/00895, опубликованной в рамках УО 90/01496. Антигены Р1актоб1а, которые являются подходящими кандидатами в компоненты мультистадийной противомалярийной вакцины, представляют собой Р. £а1с1ратит М8Р1, АМА1, М8Р3, ЕВА, СЬиКР, КАРЕ КАР2, 8ес.|иек1пп. РЕЕМР1, Р1332, Ь8А1, Ь8А3, 8ТАКР, 8АЬ8А, РЕЕХР1, Р£к25, Р£к28, РЕ827/25, Р£к16, РЖ48/45, РЖ230 и их аналоги в Р1актобшт крр. Одно воплощение настоящего изобретения представляет собой малярийную вакцину, где антигенный препарат содержит белок КТ88 или С8 или его фрагмент, такой как С8-участок из КТ8,8, в комбинации с одним или более дополнительными малярийными антигенами, причем любой из них или оба вместе могут быть прикреплены к субъединице шигатоксина В согласно изобретению. Один или более чем один дополнительный малярийный антиген может быть выбран, например, из группы, состоящей из МР81, М8Р3, АМА1, Ь8А1 или Ь8А3.
Композиции могут также содержать противоопухолевый антиген и быть полезными для иммунотерапевтического лечения раковых заболеваний. Например, адъювантная композиция находит применение с антигенами отторжения опухоли, такими как антигены для раков простаты, молочной железы, прямой и ободочной кишки, легкого, поджелудочной железы, почки или меланомы. Типичные антигены включают МАСЕ 1 и МАСЕ 3 или другие антигены МАСЕ (для лечения меланомы), РКАМЕ, ВАСЕ или САСЕ (КоЬЬшк и Каиакат!, 1996, Сштеи! Оршюик ίη 1ттиио1оду 8, стр. 628-636; Уап беи Еуибе е( а1., 1п1егпа(1опа1 1оитиа1 о£ Сйшса1 & БаЬогаЮгу Кекеагсй (киЬтЖеб 1997); Соггеа1е е( а1. (1997), 1оита1 о£ 1Пе №1юиа1 Сапсег 1пк111и1е 89, р. 293. В действительности такие антигены экспрессируют в широком спектре типов опухолей, таких как меланома, карцинома легкого, саркома и карцинома мочевого пузыря. Другие опухолеспецифические антигены подходят для использования с адъювантами по настоящему изобретению и включают, но без ограничения ими, опухолеспецифические ганглиозиды, простатоспецифический антиген (Р8А) или Нег-2/иеи, К8А (СА733), РАР, маммаглобин, МИС-1, раковоэмбриональный антиген (СЕА), р5018 (простеин). Согласно одному аспекту настоящего изобретения предложена вакцина, содержащая адъювантную композицию по изобретению и антиген отторжения опухоли. В одном аспекте опухолевый антиген представляет собой Нег-2/иеи.
В одном аспекте настоящего изобретения предложены вакцины, содержащие опухолевый антиген таких видов рака, как рак простаты, молочной железы, прямой и ободочной кишки, легкого, поджелудочной железы, почки, яичника или меланому. Соответственно, композиции могут содержать опухолеассоциированный антиген, а также антигены, ассоциированные с опухолеподдерживающими механизмами (например, ангиогенез, инвазия опухоли). Кроме того, антигены, особенно подходящие для вакцин в терапии рака, также содержат простатоспецифический мембранный антиген (Р8МА), антиген стволовых клеток простаты (Р8СА), р5018 (постеин), тирозиназу, сурвивин, ПУ-Е8О1, простазу, Р8108 (УО 98/50567), КАСЕ, ЬАСЕ, НАСЕ. Кроме того, указанный антиген может представлять собой аутологичный пептидный гормон, такой как полноразмерный гонадотропинвысвобождающий гормон (СиКН, УО 95/20600), короткий пептид, длиной 10 аминокислот, полезный в лечении многих видов рака, или в иммунокастрации.
Вакцинация
Вакцинные препараты, содержащие иммуногенные композиции по настоящему изобретению, можно использовать для защиты или лечения млекопитающего, подверженного инфекции, посредством введения указанной вакцины системным или мукозальным путем. Такие введения могут включать инъекцию посредством внутримышечного, внутрибрюшинного, интрадермального или подкожного способов; или посредством мукозального введения в пероральный/пищевой, дыхательный, мочеполовой тракты. Хотя вакцина по изобретению может быть введена в виде однократной дозы, ее компоненты также могут быть введены вместе одновременно или в разные моменты времени (например, конъюгаты пневмококкового сахарида можно вводить раздельно, одновременно или через 1-2 недели после введения любого бак
- 6 015817 термального белкового компонента вакцины для оптимальной координации иммунных ответов по отношению друг к другу). Кроме того, вакцины по изобретению можно вводить ΙΜ в праймирующих дозах и ΙΝ в бустерных дозах.
Содержание белковых антигенов в вакцине типично находится в диапазоне 1-100 мкг, предпочтительно 5-50 мкг, более типично в диапазоне 5-25 мкг. После первичной вакцинации субъекты могут получить одну или несколько повторных иммунизации, надлежащим образом разделенных во времени.
Вакцинный препарат в целом описан в Уассше Ωοδίβη (ТНе киЬиш! аиб абщгагИ арргоасН (еб§ Ρο\νе11 Μ. Р. & №\\шап Μ.Ρ) (1995) Р1еиит Рге§8 №\ν Уогк). Инкапсуляция в липосомы описана РиНейои, патент И8 4235877.
Вакцины по настоящему изобретению можно хранить в растворе или лиофилизировать. Предпочтительно раствор лиофилизируют в присутствии сахара, такого как сахароза или лактоза. Кроме того, предпочтительно их лиофилизировать и восстанавливать непосредственно перед применением.
В одном аспекте изобретения предлагается вакцинный набор, включающий флакон, содержащий иммуногенную композицию по изобретению, возможно в лиофилизированной форме, и дополнительно включающий флакон, содержащий адъювант, как описано в данном описании изобретения. В этом аспекте изобретения предусматривается, что адьювант будет использоваться для восстановления лиофилизированной иммуногенной композиции.
Хотя вакцины по настоящему изобретению можно вводить любым путем, введение описанных вакцин в кожу (ΙΌ) образует одно воплощение настоящего изобретения. Кожа человека содержит наружную загрубевшую кутикулу, называемую роговым слоем, которая покрывает эпидермис. Под поверхностью этого эпидермиса находится слой, называемый дермой, который, в свою очередь, покрывает подкожную ткань. Исследователи показали, что инъекция вакцины в кожу, и в частности в дерму, стимулирует иммунный ответ, который также может быть связан с рядом дополнительных преимуществ. Внутридермальная вакцинация вакцинами, описанными в данном описании изобретения, образует предпочтительный аспект настоящего изобретения.
Обычная техника внутридермальной инъекции, методика Манту, включает стадии очистки кожи и затем натягивание одной рукой, затем с фаской малоразмерной иглы (26-31 размер), направленной вверх, иглу вводят под углом в 10-15°. Как только фаска иглы введена, корпус иглы опускают и продвигают дальше, обеспечивая небольшое давление для повышения его под кожей. Затем жидкость очень медленно инъецируют, образуя таким образом пузырек или выпуклость на поверхности кожи, затем иглу медленно извлекают.
Совсем недавно были описаны устройства, которые спроектированы специально для введения жидких агентов в или через кожу, например устройства, описанные в №О 99/34850 и ЕР 1092444, также устройства безыгольного впрыскивания, описанные, например, в №О 01/13977; И8 5480381, И8 5599302, И8 5334144, И8 5993412, И8 5649912, И8 5569189, И8 5704911, И8 5383851, И8 5893397, И8 5466220, И8 5339163, И8 5312,335, И8 5503627, И8 5064413 И8 5520639, И8 4596556, И8 4790824, И8 4941880, И8 4940460, №О 97/37705 и №О 97/13537. Альтернативные способы интрадермального введения вакцинных препаратов могут включать обычные шприцы и иглы, или устройства, предназначенные для баллистической доставки твердых вакцин (№О 99/27961), или трансдермальные пластыри (№О 97/48440; XVО 98/28037); или нанесение на поверхность кожи (трансдермальная или чрескожная доставка №О 98/20734; \ν() 98/28037).
Если вакцины по настоящему изобретению предназначены для введения в кожу, или более конкретно внутрь дермы, такая вакцина находится в малом объеме жидкости, конкретно в объеме между примерно 0,05 мл и 0,2 мл.
Содержание антигенов в кожных или интрадермальных вакцинах по настоящему изобретению может быть аналогично обычным дозам, найденным для внутримышечных вакцин (см. выше). Однако особенностью кожных или интрадермальных вакцин является то, что композиции могут быть низкодозовыми. Соответственно, белковые антигены в низкодозовых вакцинах предпочтительно присутствуют в концентрации, достигающей от 0,1 до 10 мкг, предпочтительно от 0,1 до 5 мкг на дозу; и сахаридные (предпочтительно конъюгированные) антигены могут присутствовать в диапазоне 0,01-1 мкг, и предпочтительно от 0,01 до 0,5 мкг сахарида на дозу.
При использовании в данном описании изобретения термин интрадермальная доставка означает доставку вакцины к области дермы в коже. Однако вакцина необязательно должна быть локализована исключительно в дерме. Дерма представляет собой слой в коже, расположенный между примерно 1,0 и примерно 2,0 мм от поверхности кожи человека, но существует некоторая величина изменчивости между индивидуумами и в разных частях тела. Как правило, можно ожидать, что она достигнет дермы, проходя 1,5 мм ниже поверхности кожи. Дерма расположена между роговым слоем и эпидермисом на поверхности и подкожным слоем ниже. В зависимости от способа доставки вакцина в конечном итоге может быть локализована исключительно или в основном в пределах дермы, или в конечном итоге она может быть распределена внутри эпидермиса и дермы.
Количество каждого антигена в каждой дозе вакцины выбирают как количество, которое индуцирует иммунопротективный ответ без значительных вредных побочных эффектов типичных вакцин. Такое
- 7 015817 количество будет варьироваться в зависимости от того, какой конкретный иммуноген используется и как он представлен.
В дополнительном воплощении предложен способ лечения индивидуума, подверженного заболеванию или страдающего от него, путем введения композиции, как, по существу, описано в данном описании изобретения.
Также предложен способ профилактики человека от заболевания, выбранного из группы, включающей инфекционные бактериальные и вирусные заболевания, паразитарные заболевания, в частности внутриклеточное патогенное заболевание, пролиферативные заболевания, такие как рак простаты, молочной железы, прямой и ободочной кишки, легкого, поджелудочной железы, почки, яичника или меланома; нераковые хронические расстройства, аллергию, включающий введение указанному человеку композиции, как, по существу, описано в данном описании изобретения.
Данное изобретение дополнительно описано посредством ссылки на следующие неограничивающие примеры:
пример I описывает способы иммунологического считывания, использованные в исследованиях на мышах, хорьках, свиньях и человеке;
пример II описывает приготовление эмульсии масло в воде и адъювантных композиций, использованных в приведенных в качестве примера исследованиях;
пример III демонстрирует клиническое испытание во взрослой популяции с возрастом 18-59 лет вакциной, содержащей препарат антигена расщепленного вируса гриппа и различные дозы адъюванта Л803;
пример IV показывает доклиническую оценку адъювантных и неадъювантных вакцин расщепленного вируса гриппа (содержащих различные дозы адъюванта Л803) в праймированных мышах ВЛЬВ/с;
пример V показывает доклиническую оценку адъювантных и неадъювантных вакцин расщепленного вируса (содержащих различные дозы адъюванта Л803) в праймированных мышах С57ВI/6;
пример VI показывает доклиническую оценку адъювантных и неадъювантных вакцин расщепленного вируса (содержащих различные дозы адъюванта Л803 и низкую дозу антигена) в праймированных мышах С57ВI/6;
пример VII показывает доклиническую оценку адъювантных и неадъювантных вакцин расщепленного вируса Η5Ν1 (содержащих различные дозы адъюванта Л803 и антигена) у неподвергавшихся воздействию С57В1/6 мышей;
пример VIII показывает доклиническую оценку адъювантных и неадъювантных гриппозных вакцин в праймированных свиньях Ьатде А1Шс (Крупная белая).
Пример I. Иммунологические способы считывания.
1.1. Способы исследования на мышах
11.1. Тест ингибирования гемагглютинации
Принцип проведения испытаний (классический способ).
Титры антител к гемагглютинину для трех (сезонных) штаммов вируса гриппа определяют, используя тест ингибирования гемагглютинации (Ш). Принцип теста Ш основан на способности специфических антигриппозных антител ингибировать гемагглютинацию эритроцитов (ВВС) с помощью гемагглютинина вируса гриппа (ΗΑ). Инактивированную нагреванием сыворотку обрабатывают каолином и ВВС для удаления неспецифических ингибиторов. После предварительной обработки двукратные разведения сыворотки инкубируют с 4 гемагглютинирующими единицами каждого штамма вируса гриппа. Затем добавляют эритроциты и оценивают ингибирование агглютинации. Титры выражают как эквивалент самого высокого разведения сыворотки, который полностью подавлял гемагглютинацию. Так как первое разведение сыворотки составляет 1:20, неопределяемый уровень оценивают как титр, равный 10.
Адаптация для Η5Ν1 (частное описание Ш с использованием эритроцитов лошадей).
Так как установлено, что классический анализ Ш для определения анти-ΗΑ антител функционирует должным образом для штамма Η5Ν1, использовали адаптированный протокол с использованием лошадиных ВВС. Для пандемических штаммов Η5Ν1 используют эритроциты лошадей. 0,5% (конечная концентрация) суспензии эритроцитов лошади в фосфатном буфере, содержащем 0,5% В8А (бычий сывороточный альбумин, конечная концентрация). Эту суспензию готовят ежедневно, промывая эритроциты тем же фосфатным буфером и с последующей стадией центрифугования (10 мин, 2000 об./мин). Данную стадию промывания следует повторить еще раз. После добавления лошадиных эритроцитов к реакционной смеси сыворотки и вирусной суспензии планшеты следует инкубировать при комнатной температуре (комнатная температура, 20°С +/- 2°С) в течение 2 ч из-за низкой скорости осаждения лошадиных эритроцитов.
Статистический анализ
Статистический анализ выполняли на поствакционных титрах Ш, используя ϋΝΊδΤΑΤ. Протокол, применяемый для дисперсионного анализа, может быть кратко описан следующим образом:
логарифмическое преобразование данных;
тест Шапиро-Уилка для каждой популяции (группы) для того, чтобы удостовериться в нормально
- 8 015817 сти распределения групп;
тест Кохрана, чтобы подтвердить равномерность отклонений в разных популяциях (группах); дисперсионный анализ выбранных данных;
тест взаимодействия двухфакторного ΑΝΟνΑ (дисперсионного анализа);
тест Тьюки (Η8Ό) для множественных сравнений.
1.1.2. Окрашивание внутриклеточных цитокинов
Данный способ позволяет количественно оценить антигенспецифические Т-лимфоциты на основе продукции цитокинов: эффекторные Т-клетки и/или эффекторные Т-клетки памяти продуцируют ΙΡΝ-γ и/или центральные Т-клетки памяти продуцируют 1Ь-2. РВМС/ собирают на 7 сутки после иммунизации.
Лимфоидные клетки еще раз стимулируют ίη νίΐτο в присутствии ингибитора секреции (брефелдин). Затем эти клетки обрабатывают с помощью традиционного иммунофлуоресцентного способа, используя флуоресцентные антитела (СЭ4. СЭ8. ΙΡΝ-γ и 1Ь-2). Результаты представляют как частоту встречаемости цитокинположительных клеток среди СЭ4/СЭ8 Т-клеток. Внутриклеточное окрашивание цитокинов Тклеток выполняли на РВМС через 7 суток после второй иммунизации. Кровь собирали от мышей и объединяли в гепаринированной среде ВРМЕ Абб. Для крови ВРМ1 + Абб-разбавляющие РВЬ суспензии наслаивали на градиент Ьутр11о1у1с-Матта1 согласно рекомендуемому протоколу (центрифугирование 20 мин при 2500 об./мин и комнатной температуре). Мононуклеарные клетки на поверхности удаляли. промывали 2 раза в КРМ1 + Абб и РВМСк суспензии доводили до 2х106 клеток/мл в КРМ1 5% фетальной телячьей сыворотке.
Антигенную стимуляцию РВМС/ ίη νίΐτο осуществляли при конечной концентрации 1х107 клеток/мл (пробирка РАС8) с цельным ΡΙ (1 мкг ΗΑ/штамм) и затем инкубировали 2 ч при 37°С с добавлением анти-СО28 и анти-СЭ49б (1 мкг/мл для каждого).
После стадии антигенной повторной стимуляции РВМС инкубировали в течение ночи при 37°С в присутствии брефелдина (1 мкг/мл) при 37°С для ингибирования секреции цитокина.
Окрашивание ΙΡΝ-γ /ΙΤ-2/ΟΟ4/ΟΟ8 выполняли следующим образом: клеточные суспензии промывали. ресуспендировали в 50 мкл РВ8 1% РС8. содержащего 2% Рс-блокирующего реагента (1/50; 2.402). Через 10 мин инкубирования при 4°С. добавляли 50 мкл смеси анти-СЭ4-РЕ (2/50) и анти-СЭ8 регСр (3/50) и инкубировали 30 мин при 4°С. После промывания в РВ8 1% РС8. клетки пермеабилизировали путем ресуспенидования в 200 мкл СуЮПх-СуЮрегт (набор ВО) и инкубировали 20 мин при 4°С. Затем клетки промывали Регт ^акй (набор ВО) и ресуспендировали с 50 мкл смеси анти-ШЫ^АРС (1/50) + анти-1Ь-2Р1ТС (1/50). разведенной в Регт \Са511. После инкубирования в течение минимум 2 ч. максимум в течение ночи при 4°С. клетки промывали Регт \Са511 и ресуспендировали в РВ8 1% РС8 + 1% параформальдегида. Анализ образцов выполняли посредством РАС8. Живые клетки пропускали (Р8С/88С). и обнаружение осуществляли на -20000 событий (лимфоциты) или 35000 событий на СЭ4+ Т-клетках. Процентное содержание ГРЫ-γ + или 1Ь2+ рассчитывали на СЭ4+ и СЭ8+ на популяциях клеток. дающих сигнал выше порогового значения.
1.1.3. Анти-Н5Ы1 ЕЫ8А.
Количественную оценку титров анти-Н5Ы1 1д. 1дО 1 и 1дО2Ь антител выполняли при помощи ЕЫ8А. используя расщепленный вирус Η5Ν1 в качестве покрытия. Растворы вируса и антител использовали в количестве 100 мкл на лунку. Расщепленный вирус Η5Ν1 разводили с конечной концентрации 1 мкг/мл в РВ8 и адсорбировали в течение ночи при 4°С на лунки 96-луночного микротитровального планшета (МахЬогЬ 1тшипор1а1е Мшс 439454). Затем планшеты инкубировали в течение 1 ч при 37°С с 200 мкл на лунку РВ8. содержащего 1% В8А и 0.1% Твин 20 (насыщенный буфер). Двенадцать двукратных разведений сыворотки в насыщенном буфере добавляли к планшетам. покрытым Η5Ν1. и инкубировали в течение 1 ч 30 мин при 37°С. Планшеты промывали четыре раза РВ8 0.1% Твин 20. Биотинилированный-конъюгированный антимышиный 1д (Прозан-Е0413). разведенный 1/500. или биотинилированный-конъюгированный антимышиный 1дО 1 (1т1ес11 1070-08). или биотинилированный антимышиный 1дО2Ь (1т1есй 1090-08). разведенный 1/4000 в РВ8 с 1% В8А. 0.1% Т\гееп 20. добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение 1.30 ч при 37°С; после стадии промывания. планшеты инкубировали 30 мин со конъюгированной стрептавидин-биотин-пероксидазой (Прозан Р0397). разведенной 1/10000 в РВ8 с 1% В8А Твин 20.
Для колориметрического обнаружения планшеты инкубировали 20 мин при 22°С с раствором ортофенилдиамина (8щта Р4664) 0.04% Η2Ο2 0.03% в 0.1 М цитратном буфере рН 4.2. Реакцию останавливали 2 н. Η2δΟ4 и считывали микропланшеты при 490-630 нм.
1.2. Методы с использованием хорьков.
1.2.1. Тест ингибирования гемагглютинации (ΗΙ)
Способ проведения испытаний.
Титры антигемагглютининовых антител к трем штаммам вируса гриппа определяли. используя тест ингибирования гемагглютинации (ΗΙ). Принцип теста ΗΙ основывают на способности специфических противогриппозных антител ингибировать гемагглютинацию куриных эритроцитов (ВВС) гемагглюти
- 9 015817 нином вируса гриппа (НА). Сыворотку сначала обрабатывали 25% раствором нейраминидазы (ВОЕ) и инактивировали нагреванием для удаления неспецифических ингибиторов. После предварительной обработки двукратные разведения сыворотки инкубировали с 4 гемагглютинирующими единицами каждого штамма гриппа. Затем добавляли куриные эритроциты и рассчитывали ингибирование агглютинации. Титры выражали как эквивалент самого высокого разведения сыворотки, которое полностью ингибировало гемагглютинацию. Так как первое разведение сыворотки составляло 1:10, неопределяемый уровень рассчитывали как титр, равный 5.
Статистический анализ
Статистический анализ выполняли на титрах Н1 (41 сутки, до контрольного заражения), используя ΚΝΊ8Ί АТ. Протокол, используемый для дисперсионного анализа, может быть кратко описан следующим образом:
логарифмическое преобразование данных;
тест Шапиро-Уилка для каждой популяции (группы) для того, чтобы удостовериться в нормальности распределения групп;
тест Кохрана, чтобы подтвердить равномерность отклонений в разных популяциях (группах); дисперсионный анализ выбранных данных;
тест взаимодействия двухфакторного ΑΝΟνΑ (дисперсионного анализа);
тест Тьюки (Ηδϋ) для множественных сравнений.
1.2.2. Мониторинг температуры тела
Индивидуальные температуры контролировали в течение периода контрольного заражения с датчиками и при помощи телеметрической регистрации. Все импланты проверяли и обновляли, и новую калибровку выполняли с помощью Ό8Ι (Эа1а 8е1спес5 1п1етаИопа1, СеШаиги^ед 123, 5015 ТС ТбЬигд, Тйе №1йег1апб8) перед помещением во внутрибрюшинную полость. Все животные были размещены по отдельности в индивидуальных клетках во время данных исследований.
Температуры регистрировали каждые 15 мин, начиная с 4 суток до контрольного заражения вплоть до 7 суток после контрольного заражения.
1.2.3. Назальные промывания.
Назальные промывания выполняли путем введения 5 мл РВ8 в обе ноздри проснувшимся животным. Инокулят собирали в чашки Петри и помещали в контейнеры для образцов на сухой лед.
Титрование вирусов в назальных промываниях
Все назальные образцы сначала стерильно фильтровали через δρίη X фильтры (Сойаг) для удаления любого бактериального загрязнения. 50 мкл последовательных десятикратных разведений назальных промываний переносили в микротитровальные планшеты, содержащие 50 мкл среды (10 лунок/разведение). Затем добавляли в каждую лунку 100 мкл клеток МОСК (2,4х105 клеток/мл) и инкубировали при 35°С в течение 5-7 суток.
Через 5-7 суток инкубирования культуральную среду осторожно удаляли и добавляли 100 мкл среды, содержащей 1/20 νδΤ-1, и инкубировали в течение еще 18 ч.
Интенсивность желтого формазанового окрашивания, получаемого при восстановлении \У8Т-1 жизнеспособными клетками, пропорциональна количеству жизнеспособных клеток, присутствующих в лунке в конце анализа по титрованию вирусов, и количественно определяется путем измерения поглощения каждой лунки при подходящей длине волны (450 нм). Пороговое значение определяют как среднее значение ΟΏ неинфицированных контрольных клеток - 0,3 ΟΏ (0,3 ΟΏ соответствует +/-3 81Оеу (стандарное отклонение) ΟΏ неинфицированных контрольных клеток). Положительную оценку определяют, когда ΟΏ ниже порогового значения и, наоборот, негативную оценку определяют, когда ΟΏ выше порогового значения. Титры вирусного шеддинга определяли с помощью Вееб апб Миеисй и представляли в виде Ьод ТСГО50/мл.
1.3. Методики с использованием свиней.
1.3.1. Тест ингибирования гемагглютинации (ΗΙ).
Методика проведения испытаний.
Титры антигемагглютининовых антител к трем штаммам вируса гриппа определяли, используя тест ингибирования гемагглютинации (ΗΙ). Принцип теста ΗΙ основан на способности специфических противогриппозных антител ингибировать гемагглютинацию куриных эритроцитов (ВВС) гемагглютинином вируса гриппа (НА). Сыворотку сначала нагревали с 25% раствором нейраминидазы (ВОЕ) и инактивировали нагреванием для удаления неспецифических ингибиторов. После предварительной обработки двукратные разведения сыворотки инкубировали с 4 гемагглютинирующими единицами каждого штамма гриппа. Затем добавляли куриные эритроциты и оценивали ингибирование агглютинации. Титры представляли в виде обратной величины наибольшего разведения иммунной сыворотки, которое полностью ингибировало гемагглютинацию. Так как первое разведение сыворотки составляло 1:10, неопределяемый уровень рассчитывали как титр, равный 5.
Статистический анализ.
Статистический анализ выполняли на титрах ΗΙ (41 сутки, до контрольного заражения), используя
- 10 015817 υΝΙδΤΑΤ. Протокол, применяемый для дисперсионного анализа, может быть кратко описан следующим образом:
логарифмическое преобразование данных;
тест Шапиро-Уилка для каждой популяции (группы) для того, чтобы удостовериться в нормальности распределения групп;
тест Кохрана, чтобы подтвердить равномерность отклонений в разных популяциях (группах);
тест взаимодействия однофакторного ΑΝΟνΑ;
тест Тьюки (Н8И) для множественных сравнений.
1.4. Анализы для оценки иммунного ответа у людей.
1.4.1. Анализ ингибирования гемагглютинации.
Иммунный ответ определяли путем измерения ΗΙ антител, используя способ, описанный в νΗΟ Со11аЬога1шд СсШгс £ог ίηΠιιοηζη. СегИгек £ог Ищеаке Сои!го1, ΑΐΙαηΙα, υδΑ (1991).
Измерения титра антител производили на оттаявших образцах замороженной иммунной сыворотки стандартизованным и полностью утвержденным микрометодом, используя 4 ингибирующие гемагглютинацию единицы (4 Ηΐυ) соответствующих антигенов и 0,5% суспензию эритроцитов домашней птицы. Неспецифические сывороточные ингибиторы удаляли при помощи тепловой обработки и фермента, разрушающего рецептор.
Полученную сыворотку оценивали на уровни антител ΗΙ. Начиная с первого разведения 1:10, серии разведений (с коэффициентом 2) готовили вплоть до конечного разведения 1:20480.
За конечную точку титрования принимается стадия наибольшего разведения, которая показала полное ингибирование (100%) гемагглютинации. Все анализы выполняли в двух экземплярах.
1.4.2. Анализ ингибирования нейраминидазы.
Анализ выполняли в микротитровальных планшетах, покрытых фетуином. Получали серии 2кратных разведений антисыворотки и смешивали со стандартизованным количеством вируса гриппа Α Η3Ν2, Η1Ν1 или вируса гриппа В. Тест был основан на биологической активности нейраминидазы, которая ферментативно высвобождает нейраминовую кислоту из фетуина. После отщепления терминальной нейраминовой кислоты в-О-галактоза-Н-ацетилгалактозамин был демаскирован. В лунки добавляли меченный пероксидазой хрена (НКР) арахисовый агглютинин из ЛгасЫк йуродаеа, который специфически связывается с галактозными структурами. Количество связанного агглютинина может быть детектировано и количественно определено в субстратной реакции с тетраметилбензидином (ТМВ). Было показано, что самое высокое разведение антител, которое все еще ингибирует активность вирусной нейраминидазы по меньшей мере на 50%, представляет собой титр ΝΙ.
1.4.3. Анализ нейтрализующих антител.
Определение нейтрализующих антител проводили на оттаявших образцах замороженной сыворотки. Нейтрализацию вирусов антителами, содержащимися в иммунной сыворотке, определяли в анализе микронейтрализации. Сыворотку использовали в анализе без дополнительной обработки. Каждую сыворотку тестировали в трех параллелях. Стандартное количество вируса смешивали с последовательными разведениями сыворотки и инкубировали, чтобы обеспечить связывание антител с вирусом. Затем клеточную суспензию, содержащую определенное количество клеток МОСК, добавляли к смеси вируса и антисыворотки и инкубировали при 33 °С. После инкубационного периода вирусную репликацию визуализировали с помощью гемагглютинации куриных эритроцитов. Титр сыворотки с 50% нейтрализации рассчитывали способом Рида и Мюнха (Кееб апб Миеисй).
1.4.4. Клеточно-опосредованный иммунитет оценивали посредством проточной цитометрии цитокинов (СРС).
Антигенспецифические Т-клетки СИ4 и СИ8 из периферической крови можно повторно стимулировать ίη уйго для продуцирования Ш-2, СО40Б, ΤΝΡ-альфа и ΙΡΝ при инкубировании с соответствующим антигеном. Затем антигенспецифические Т-клетки СИ4 и СИ8 можно пересчитать посредством проточной цитометрии после обычного иммунофлуоресцентного маркирования клеточного фенотипа, а также внутриклеточного продуцирования цитокинов. В настоящем исследовании антиген гриппозной вакцины, а также пептиды, происходящие из специфического белка вируса гриппа, использовали в качестве антигена для повторного стимулирования Т-клеток, специфичных к вирусу гриппа. Результаты выражают в виде количества цитокин(цитокины)-положительных Т-клеток СИ4 или СИ8 в субпопуляции Т-клеток СИ4 или СИ8.
1.4.5. Статистические способы.
1.4.5.1. Первичные конечные точки.
Процентное содержание, интенсивность и отношение к вакцинации ожидаемых местных и генерализованных признаков и симптомов в течение 7-дневного последующего периода (то есть день вакцинации и 6 последующих суток) после вакцинации и в целом.
Процентное содержание, интенсивность и отношение к вакцинации неожидаемых местных и генерализованных признаков и симптомов в течение 21-дневного последующего периода (то есть день вакцинации и 20 последующих суток) после вакцинации и в целом.
- 11 015817
Частота серьезных нежелательных явлений в течение всего исследования.
1.4.5.2. Вторичные конечные точки.
Для гуморального иммунного ответа:
Наблюдаемые показатели:
в сутки 0 и 21: титры ингибирования сывороточной гемагглютинации (Н1) и титры ИТ-антител, исследованные отдельно против каждого из трех штаммов вируса гриппа, представленных в вакцине (антиН1И1, анти-Н3И2 и анти-В-антитела);
в сутки 0 и 21: титры нейтрализующих антител, исследованные отдельно против каждого из трех штаммов вируса гриппа, представленных в вакцине.
Производные показатели (с 95%-ными доверительными интервалами):
среднее геометрическое титров (СМТ§) сывороточных Н1-антител (с 95%-ными доверительными интервалами): (95% ДИ) перед и после вакцинации;
уровни сероконверсии* с 95% ДИ на 21 сутки;
факторы конверсии** с ДИ 95% на 21 сутки;
уровни серопротекции *** с ДИ 95% на 21 сутки;
СМТк' сывороточных антител к N1 (с 95%-ными доверительными интервалами) во всех точках времени.
*Уровень сероконверсии, определенный как процент вакцинированных, у которых имеется по меньшей мере 4-кратное увеличение сывороточных титров Н1 на 21 сутки по сравнению с 0 сутками для каждого вакцинного штамма.
**Фактор конверсии, определенный как кратное увеличение сывороточных Н1 СМТ§ на 21 сутки по сравнению с сутками 0 для каждого вакцинного штамма.
***Уровень серопротекции определяли как процент вакцинированных с титром сыворотки Н1 равным 40 после вакцинации (для каждого вакцинного штамма), который обычно принимается как указывающий на протекцию.
Следует понимать, что для некоторых клинических испытаний реактогенность/безопасность могут являться вторичными конечными точками, и иммуногенность может являться первичной конечной точкой.
Для клеточно-опосредованного иммунного ответа (СМ1).
Наблюдаемый показатель.
В сутки 0 и 21: количество цитокин-положительных клеток СЭ4/СЭ8 на 106 в разных тестах.
Каждый тест определяет в количественном выражении ответ Т-клеток СЭ4/СЭ8 на:
пептидный антиген вируса гриппа (ρί) (точная природа и происхождение этих антигенов нуждаются в установлении/объяснении);
антиген расщепленного вируса гриппа (δί);
антиген целого вируса гриппа (\\ί).
Производные показатели:
клетки, продуцирующие по меньшей мере два разных цитокина (СО40Ь, 1Ь-2, ΙΕΝγ, ΪΝΕα);
клетки, продуцирующие, по меньшей мере, СО40Ь и другой цитокин (1Ь-2, ТИЕа, ΙΕΝγ);
клетки, продуцирующие по меньшей мере 1Ь-2 и другой цитокин (СО40Ь, ΊΝΕα, ΙΕΝγ);
клетки, продуцирующие по меньшей мере ΙΕΝγ и другой цитокин (1Ь-2, ΙΝΕα, СО40Ь);
клетки, продуцирующие по меньшей мере Т№а и другой цитокин (1Ь-2, СО40Ь, ΙΕΝγ).
1.3.5.3. Анализ иммуногенности.
Анализ иммуногенности был основан на всей вакцинированной группе. Для каждой обработанной группы рассчитывали следующие параметры (с 95%-ными доверительными интервалами):
среднее геометрическое титров (СМТ§) Ш и ΝΙ антител в 0 и 21 сутки;
среднее геометрическое титров (СМТ§) нейтрализующих антител в 0 и 21 сутки;
факторы конверсии на 21 сутки;
уровни сероконверсии (8С) на 21 сутки, определенные как процент вакцинированных, у которых имеется по меньшей мере 4-кратное увеличение сывороточных титров Ш на 21 сутки по сравнению с 0 сутками;
уровни протекции на 21 сутки, определенные в виде процента вакцинированных с сывороточным Ш титром =1:40;
количество Т-лимфоцитов ί.Ό4/ί.Ό8. секретируемых в ответ, обобщали (описательная статистика) для каждой вакцинированной группы в каждый контрольный момент времени (сутки 0, сутки 21) и для каждого антигена (пептида вируса гриппа (ρί), расщепленного вируса гриппа (δί) и цельного вируса гриппа (νί));
описательная статистика индивидуальной разности между ответами в контрольные моменты времени (Ро81-Рге) для каждой вакцинированной группы и каждого антигена (ρί, δί, и \\Т) в каждом из 5 разных тестов;
непараметрический тест (тест Крускал-Уоллиса) использовали для сравнения значений локальной
- 12 015817 разницы между 3 группами, и статистическое значение р рассчитывали для каждого антигена в каждом из 5 разных тестов. Все критерии значимости были двусторонними. Значения р меньше или равные 0,05 рассматривали как статистически значимые.
Пример II. Получение эмульсии масло в воде и адъювантных композиций.
Если не оговаривается иное, эмульсию масло/вода, используемую в следующих примерах, составляют органическая фаза, приготовленная из 2 масел (α-токоферола и сквалена), и водная фаза РВ8 (фосфатно-солевой буферный раствор), содержащая Твин 80 в качестве эмульгатора. Если не оговаривается иное, эмульсионные масло в воде адъювантные композиции, используемые в следующих примерах, готовили содержащими следующий эмульсионный масло в воде компонент (приведены конечные концентрации): 2,5% сквалена (об./об.), 2,5% α-токоферола (об./об.), 0,9% полиоксиэтиленсорбитанмоноолеата (об./об.) (Твин 80), см. \УО 95/17210. Такую эмульсию, называемую А803 в следующих примерах, получали, как указано ниже в виде концентрата двукратного сгущения.
2.1. Получение эмульсии 8В62.
Данный способ использовали в исследованиях, описанных в разделах клинических и доклинических примеров. Препарат эмульсии 8В62 изготавливают посредством смешивания при энергичном перемешивании масляной фазы, состоящей из гидрофобных компонентов (ΌΕ-α-токоферол и сквален), и водной фазы, содержащей водорастворимые компоненты (анионный детергент Твин 80 и РВ8 тоб (модифицированный), рН 6,8). Во время перемешивания масляную фазу (1/10 общего объема) переносят в водную фазу (9/10 общего объема) и смесь перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем полученную смесь подвергали воздействию усилия сдвига, ударной силы и кавитации в камере для взаимодействия микрофлуидайзер (15000 Р81 - 8 циклов, или 3 цикла в адъюванте, используемом в клиническом испытании, описанном в примере III) для получения субмикронных капель (распределение между 100-200 нм). Полученный рН составляет 6,8±0,1. Затем эмульсию 8В62 стерилизовали фильтрацией через мембрану 0,22 мкм, и стерильную нерасфасованную эмульсию хранили замороженной в контейнерах Сирас при 2-8°С. Стерильным инертным газом (азотом или аргоном) продували мертвый объем конечного наливного контейнера для эмульсии 8В62 в течение по меньшей мере 15 с.
Конечная композиция эмульсии 8В62 является следующей;
Твин 80: 1,8% (об./об.) 19,4 мг/мл; сквален: 5% (об./об.) 42,8 мг/мл; α -токоферол: 5% (об./об.) 47,5 мг/мл; РВ8: ЫаС1 121 мМ, КС1 2,38 мМ, Ыа2НРО4 7,14 мМ, КН2РО4 1,3 мМ; рН 6,8 ± 0,1.
Пример III. Клиническое испытание вакцины, содержащей антигенный препарат расщепленного вируса гриппа и различные дозы адъюванта А803 (Е1и-ЬП-004) на взрослой популяции в возрасте 18-59 лет.
3.1. Введение.
II фазу контролируемого рандомизированного простого слепого исследования проводили в 2006 г. на взрослой популяции в возрасте 18-59 лет, чтобы оценить иммуногенность, безопасность и реактогенность низкодозовой (то есть содержащей 5 мкг НА на штамм) кандидатной вакцины против гриппа с двумя дозами адъюванта А803 от С1ахо8тййК1ше Вю1од1сак.
Гуморальный иммунный ответ (то есть анти-гемагглютинин) определяли на 21 сутки после внутримышечного введения одной дозы адъювантной вакцины А803. Ниапх™ использовали в качестве эталона.
3.2. Дизайн исследования.
Три группы субъектов параллельно внутримышечно получали следующую вакцину:
одна группа из 100 субъектов, получающая одну инъекцию низкодозовой вакцины на основе расщепленного вируса гриппа, содержащей 5 мкг НА, адъювантированной А803 (Е1иЬП1/1);
одна группа из 100 субъектов, получающая одну инъекцию низкодозовой вакцины на основе расщепленного вируса гриппа, содержащей 5 мкг НА, адъювантированной половиной дозы А803 (АЭ03 1/2) (Е1иЬП1/2);
одна группа из 100 субъектов, получающая одну дозу Ниапх™ (Флюарикс).
Режим: одна ΣΜ инъекция гриппозной вакцины в сутки 0, посещения центра клинических исследований в сутки 0 и сутки 21 с отбором образца крови (определение Ш-антител) и дополнительный телефонный контакт в сутки 30 (завершение исследования).
Стандартная расщепленная трехвалентная гриппозная вакцина Е1иапх™, используемая в данном исследовании, представляет собой имеющуюся в продаже вакцину, разработанную и производимую С1ахо8тЦ11К1те Вю1офса15 с 2006 г.
3.3. Цели исследования.
3.3.1. Первичная цель.
Оценить гуморальный иммунный ответ, индуцируемый исследуемыми вакцинами, в единицах титров антител к гемагглютинину:
Наблюдаемые показатели в сутки 0 и 21: титры сывороточных антител, ингибирующих гемагглютинацию.
Производные показатели (с 95%-ными доверительными интервалами):
- 13 015817 среднее геометрическое титров (СМТ§) сывороточных антител в сутки 0 и 21;
уровни сероконверсии* на 21 сутки; факторы конверсии* на 21 сутки;
уровни протекции*** на сутки 0 и 21.
*Уровень сероконверсии иммунного ответа на гемагглютинин определяют как процент вакцинированных, которые имеют либо довакционный титр менее 1:10 и поствакционный титр больше или равный 1:40, либо довакционный титр больше или равный 1:10 и по меньшей мере четырехкратное увеличение поствакционного титра.
**Фактор конверсии определяют как кратность увеличения сывороточных ΗΙ СМТ§ после вакцинации по сравнению с сутками 0.
***Уровень протекции определяют как процент вакцинированных с титром сывороточного ΗΙ более 40 после вакцинации, что обычно принимают как индикатор защиты.
3.3.2. Вторичная цель.
Оценить безопасность и реактогенность исследуемых вакцин с точки зрения ожидаемых местных и генерализованных нежелательных явлений, неожидаемых нежелательных явлений и серьезных нежелательных явлений:
1. Появление, интенсивность и отношение к вакцинации ожидаемых местных и генерализованных признаков и симптомов в продолжение 7-дневного последующего периода (то есть день вакцинации и 6 последующих суток) после каждой вакцинации в каждой группе.
2. Появление, интенсивность и отношение к вакцинации неожидаемых местных и генерализованных признаков и симптомов в течение 30-дневного последующего периода (то есть день вакцинации и 29 последующих суток) после вакцинации в каждой группе.
3. Появление и взаимосвязь серьезных нежелательных явлений в течение всего периода исследования в каждой группе.
3.4. Вакцинная композиция и введение.
3.4.1. Вакцинный препарат.
Неадъювантная вакцина против гриппа представляет собой трехвалентный расщепленный вирион, инактивированную вакцину против гриппа, состоящую из смесей трех моновалентных вирусных антигенных продуктов (полученных соответственно из штаммов гриппа Α/Η1Ν1, Α/Η3Ν2 и В). Антигены, присутствующие в такой вакцине, являются такими же, что и в лицензированной вакцине Р1иапх™, которая продается под торговой маркой Р1иапх™ (α-Ктх®) с 1992 г и содержит 15 мкг ΗΑ/штамм на дозу. Штаммы гриппа, включенные в клинические партии Р1иБ0. представляют собой штаммы, которые были выбраны для 2006/2007 Северного полушария:
- Α/Νο\ν Са1ейоша/20/99 (ШМ^подобный штамм: Α/Νο\ν Са1ейоша/20/99 (Η1Ν1 ) ГУК-116;
- А/^18соп81п/67/2005 (Η3N2)-подобный штамм: АЖ18СОП8ш/67/2005 (Η3Ν2) РГУМСХ-161;
- В/Ма1ауыа/2506/2004.
Антигены производят из вирусов, выращенных в яйцах. Расщепление выполняют дезоксихолатом натрия перед стадией инактивации, которую выполняют посредством последовательного воздействия дезоксихолата натрия и формальдегида.
Низкодозовая вакцина против гриппа (ПиБЭ) (клинические серии), адъювантированная Α803, основана на имеющейся в продаже вакцине Р1иапх™ (полученной соответственно из штаммов гриппа Α/Η1Ν1, Α/Η3Ν2 и В), но с более низким содержанием антигена и адъювантированной С8К адъювантной системе Α803. Α803 состоит из эмульсии масло в воде (8В62), которая содержит два биоразлагаемых масла, сквален и α-токоферол (витамин Е), и поверхностно-активное вещество полисорбат 80 (Твин 80). Антигены вируса гриппа включены в водную фазу адъювантной системы посредством простого смешивания с эмульсией. Были испытаны две композиции, отличающиеся количеством адъюванта, введенного с антигенами Р1и в партию вакцины. Адъювантные вакцины содержат 5 мкг гемагглютинина (ΗΑ) каждого штамма вируса гриппа на дозу, объединенных с полной дозой (Α803) или половиной дозы (Α803 1/2) адъювантной системы Α803. Эксципиенты следующие: полисорбат 80 (Твин 80), октоксинол 10 (Тритон Х-100), α-токоферилгидросукцинат, хлорид натрия, натрия гидрофосфат, дигидрофосфат калия, хлорид калия, вода для инъекций. Низкодозовые вакцины против гриппа, адъювантированные Α803 (Р1иЕЭ, полная или половинная доза Α803), представляют собой вакцины, не содержащие консерванта. Однако они содержат следовые количества тиомерсала (<1,25 мкг Η§ на дозу) с ранних стадий производственного процесса. Они обе присутствуют в виде однодозовых вакцин в стеклянных (тип 1) предварительно наполненных шприцах с объемом 0,5 мл/доза.
3.4.1.1. Композиция гриппозной вакцины, адъювантированной Α803
Одна доза РРВЭ (полная или половинная доза Α803) соответствует 0,5 мл. Композиция представлена в табл. 3. Содержание ΗΑ на дозу составляет 5 мкг для обеих композиций, единственным огличием является количество Α803, присутствующего в конечных контейнерах.
- 14 015817
Таблица 3. Композиция низкодозовой гриппозной вакцины, адъювантированной Л803 (полная доза и половина дозы Л803)
Компонент | Количество на дозу (0,5 мл) |
Инактивированные расщепленные вирионы - А/Νθνν Са1ебота/20/90 (Η1Ν1) ΐνί4-116 - АЛМзсопз1п/67/2005 (Η3Ν2) ΝΥΜΟΧ-161 - В/Ма1ауз1а/2506/2004 | 5 мкг НА 5 мкг НА 5 мкг НА |
Адъювант (полная доза/половина дозы) | 0,250 мл 10,70 мг/5,35 мг 11,88 мг/5,94 мг 4,85 мг/2,425 мг |
- эмульсия 8В62 (общий объем) • сквален • ОЬа-токоферол • полисорбат 80 (Твин 80) | |
Полисорбат 80 (Твин 80) | 0,122 мг |
Октоксинол 10 (Тритон Х-100) | 0,0283 мг |
α-Токоферил гидросукцинат | 0,01665 мг |
Хлорид натрия | 4 мг |
Натрия фосфат двузамещенный | 0,575 мг |
Калий дигидрофосфат | 0,100 мг |
Хлорид калия | 0,101 мг |
Вода для инъекций | до 0,50 мл |
Сокращения: НА = гемагглютинин.
Общее содержание в Полисорбате 80 соответствует 4,972 мг на дозу, когда используют полную дозу А803, и 2,547 мг на дозу, когда используют половину дозы А803.
3.4.1.2. Получение антигенного препарата расщепленного инактивированного вируса гриппа.
Вирусы гриппа идентичны вирусам, включенным в Е1иапх™ (вакцина против вируса гриппа). Моновалентные продукты состоят из очищенных инактивированных расщепленных вирусов, которые получают из рабочих посевов трех штаммов вируса гриппа, типа А (Η1Ν1 и Η3Ν2) и типа Β, которые выращивают по отдельности в куриных яйцах с развивающимся эмбрионом. Такие рабочие посевы происходят из штаммов, которые получают из Центра сотрудничества ВОЗ, следуя ежегодным рекомендациям ВОЗ. Информация по способу получения антигенов, в качестве иллюстрации, дается в XVО 02/097072. Объемы трех моновалентных продуктов основаны на содержании НА, измеренном в каждом моновалентном продукте перед приготовлением препарата, и на нужном объеме производства.
10-Кратно концентрированный фосфатно-солевой буферный раствор (рН 7,4 при однократной концентрировании) и премикс Твин 80 и α-токоферилгидросукцината разводят в воде для инъекций, затем перемешивают в течение 5-30 мин при комнатной температуре.
Затем три концентрированных моновалентных продукта последовательно разводят в полученном растворе из фосфатно-солевого буферного раствора/Твин 80-а-токоферилгидросукцината до концентрации 20 мкг НА каждого моновалентного продукта А (Η1Ν1, Η3Ν2) 23,32 мкг НА моновалентного продукта Β на миллилитр промежуточного трехвалентного продукта (5 мкг НА каждого моновалентного продукта А и 5,83 мкг НА В/500 мкл трехвалентного конечного продукта).
Между добавлениями каждого моновалентного продукта смесь перемешивают в течение 10-30 мин при комнатной температуре и в течение 15-30 мин после добавления последнего моновалентного продукта. Данный трехвалентный промежуточный продукт, упоминаемый также как предварительный пул, может храниться при +2 - +8°С или далее перерабатываться на конечной стадии получения препарата в тот же день. Конечный объем предварительного пула составляет 250 мкл на дозу.
3.4.1.3. Получение вакцинных композиций с адъювантом А803.
Адъювантная вакцина: ЬИ А803 1/1 (табл. 4).
10-кратно концентрированный ΡΒ8 тоб (рН 7,4 при однократном концентрировании; 137 мМ №С1, 2,7 мМ КС1, 8,1 мМ №ьНРО4. 1,47 мМ КН2РО4, рН 7,4), а также смесь, содержащую Твин 80, Тритон X100 и УЕЗ (количества с учетом поверхностно-активного вещества, присутствующего в штаммах) добавляют к воде для инъекций. Через 5-30 мин перемешивания добавляют 20 мкг НА на мл каждого штамма НШ1 и 43Ν2 и 23,32 мкг НА на мл штамма В с 10-30 минутным перемешиванием между каждым добавлением. Через 15-30 мин перемешивания небольшой объем так называемого промежуточного продукта отбирали для анализа и хранили между +2 и +8°С. Промежуточную смесь помещают в РВ8 тоб 1-кратно концентрированный. Целевые концентрации поверхностно-активных веществ составляют 488 мкг Твин
- 15 015817 на мл, 73,6 мкг Тритон Х-100 на мл и 66,6 мкг УЕЗ на мл.
Затем получают конечную композицию: эквивалентный объем 8В62 (получение смотри в примере 2) добавляют к каждым 250 мкл предварительно объединенной промежуточной смеси и смешивают в течение 30-60 мин при комнатной температуре. рН сверяют с диапазоном 6,8-7,5. Композицию продувают азотом и затем хранят при +2 - +8°С перед заполнением.
Таблица 4. Низкодозовая вакцина, адъювантированная А803
Компонент | Концентрация | Объем(мл) |
Стадия 1: Предварительное объединение | ||
моновалентная продукт Α/Νβνν Са!ейоп1а | 104 мкг/мл | 302,88 |
моновалентная продукт ΑΛΛ/ίδοοπείη | 85 мкг/мл | 370,59 |
моновалентная продукт В/Ма1ауз1а | 110 мкг/мл | 333,90 |
РВЗ той(1) | Смотри пояснение | 56,76 |
Твин 80 | 48000 мкг/мл | 5,24 |
Тритон Х-100 | Остаток от штамма Η3Ν2 | |
α-токоферола гидросукцинат | 26480 мкг/мл | 1,2 |
Фильтрованная вода | 504,43 |
Общий объем=1575 (мл) 65 мл предварительно объединенного образца отбирают для исследования Остающийся объем предварительно объединенного =1500 (мл)
Стадия 2: добавление к предварительно объединенному | ||
Эмульсия ЗВ62 | 1500 | |
Общий объем конечной смеси=3000 (мл) |
(1): Буферная композиция конечной смеси представляет собой: 137 мМ ЫаС1, 2,7 мМ КС1,
8,1 мМ Ыа2НРО4, 1,47 мМ КН2РО4, рН 7,4.
Адъювантная вакцина. БЭ А803 1/2 (табл. 5).
10-кратно концентрированный РВ8 той (рН 7,4 при однократном концентрировании (см. вышеуказанную композицию), а также смесь, содержащую Твин 80, Тритон Х-100 и УЕ8 (количества, взятые с учетом поверхностно-активного вещества, присутствующего в штаммах), добавляют к воде для инъекций. Через 5-30 мин перемешивания добавляют 20 мкг НА на мл каждого штамма Н1Ы1 и Н3Ы2 и 23,32 мкг НА на мл штамма В с 10-30-минутным перемешиванием после каждого добавления. Через 15-30 мин перемешивания небольшой объем так называемой промежуточной смеси исключают для анализа и хранят при +2 и +8°С. РВ8 той 1-кратно концентрируют в промежуточной смеси. Целевые концентрации поверхностно-активных веществ составляют 488 мкг Твин 80 на мл, 73,6 мг Тритон Х-100 на мл и
66,6 мкг УЕ8 на мл.
Затем получают конечную композицию: 8В62 сначала разводят буфером РВ8 той и перемешивают в течение 15-30 мин при комнатной температуре. Эквивалентный объем такой разведенной 8В62 добавляют затем к каждым 250 мкл предварительно объединенной промежуточной смеси. Через 30-60 мин перемешивания при комнатной температуре рН сверяют с диапазоном 6,8-7,5. Композицию продувают азотом и затем хранят при +2 -+ 8°С перед заполнением.
Конечный объем обеих композиций составляет 500 мкл на дозу и конечная концентрация НА составляет 10 мкг каждой моновалентной продукта А и 11,66 мкг моновалентной продукта В на мл трехвалентной конечной продукта. Конечные целевые концентрации Твин 80, Тритон Х-100 (остаток от производства монопродукта Н3Ы2) и α-токоферила гидросукцината (α-токоферола гидросукцинат представляет собой эфирную форму ΒΒΒ (Ό изомера^-токоферола) составляют 244, 58,6 и 33,3 мкг/мл соответственно.
- 16 015817
Таблица 5. Низкодозовая вакцина, адъювантированная А803 (половина дозы адъюванта)
Компонент | Концентрация | Объем (мл) |
Стадия 1: Предварительное объединение | ||
Стадия 1: Предварительное объединение | ||
моновалентная продукт Α/Νβνν Са1ебоп1а | 105 мкг/мл | 300,96 |
моновалентная продукт ΑΛΛ/ίεοοηείη | 85 мкг/мл | 368,24 |
моновалентная продукт В/Ма1аув1а | 110 мкг/мл | 331,78 |
РВ8 тоб(1) | Смотри пояснение | 56,4 |
Твин 80 | 48000 мкг/мл | 5,2 |
Тритон Х-100 | Остаток от штамма Η3Ν2 | |
α-токоферола гидросукцинат | 26480 мкг/мл | 1,2 |
Фильтрованная вода | 501,22 |
Общий объем=1565 (мл) 65 мл предварительно объединенного образца отбирают для исследования Остающийся объем предварительно объединенного =1500 (мл)
Стадия 2: добавление к предварительно объединенному | ||
Эмульсия 8В62 | 750 | |
РВ8 тоб(1) | Смотри пояснение | 75 |
Фильтрованная вода | 675 | |
Общий объем конечной смеси=3000 (мл) |
(1): Буферная композиция конечной смеси представляет сооои: 137 мМ Να&, 2,7 мМ КС1,
8,1 мМ \а;11РСГ. 1,47 мМ ΚΗ2ΡΟ4, ρΗ 7,4.
3.4.2. Введение вакцины.
Вакцину заполняют в 1,25-мл стерильные стеклянные шприцы типа 1 (Евр. Фарм). Каждый шприц заполняют до целевого объема 0,57 мл (интервал: 0,54-0,60 мл). Вакцины вводили внутримышечно в дельтовидную область недоминирующей руки. Все вакцины были представлены в виде предварительно заполненных шприцев (0,5 мл). Чтобы обеспечить правильную ГМ инъекцию вакцины использовали иглу по меньшей мере 256 и длиной по меньшей мере 2,5 см.
3.5 Результаты исследования популяции.
В данное исследование зачислили всего 300 субъектов: по 100 субъектов в каждой из 3 групп. Среднее значение возраста общей вакцинированной когорты на момент вакцинации составляло 36,7 лет со стандартным отклонением 13,67 лет. Средний возраст и тендерное распределение субъектов по 3 группам вакцин было аналогичным.
3.6 Результаты по иммуногенности.
Анализ иммуногенности выполняли на АТР-группе исследования иммуногенности (297 субъектов).
Гуморальный иммунный ответ
Чтобы оценить гуморальный иммунный ответ, индуцируемый низкодозовой кандидатной вакцины против гриппа, адъювантированной А803, рассчитывали следующие параметры (с 95%-ными доверительными интервалами) для каждой группы обработки:
среднее геометрическое титров (6МТ5) титров антител Ш в сутки 0 и 21;
уровни сероконверсии (8С) в сутки 21;
факторы конверсии в сутки 21;
уровни протекции в сутки 0 и 21.
3.6.1 Среднее геометрическое титров Ш (6МТ).
6МТ для Ш-антител с 95% ДИ показаны в табл. I и на фиг. 1. Скорректированные соотношения 6МТ между группами показаны в табл. II.
Довакционные 6МТ5 Ш-антител для всех 3 вакцинных штаммов находились в одном диапазоне в 3 группах обработки. Наблюдаемые 6МТ на 21 сутки для адъювантированных групп обычно были более высокими, чем в группе Ниапх, для всех 3 штаммов со статистическим расхождением (без перекрывания 95% ДИ, и скорректированное соотношение 6МТ не включает значение 1) между ИиЬЭШ и Ниапх для
- 17 015817 вакцинного штамма А/№18СОИ8Ш. Статистическое расхождение (скорректированное отношение СМТ не включает значение 1) наблюдали также между Р1иЬП1/2 и Р1иапх для вакцинного штамма В/Ма1ау81а.
Таблица I. Коэффициенты серопозитивности и среднее геометрическое титров (СМТ) для анти-НА антител в сутки 0 и 21 (АТР-группа исследования иммуногенности)
Антитело | Группа | Срок | N | £10 1/Ц11_ | ΘΜΤ | Μίη | Мах | |||||
п | % | 95%ДИ | 1ЛЛ. | 95%ДИ | ||||||||
и. | иь | и. | иь | |||||||||
А/Цеад | Р1иЬ01/1 | РПЕ | 99 | 80 | 80,8 | 71,7 | 88,0 | 31,9 | 23,5 | 43.4 | <10,0 | 2560,0 |
Са1ейогна | ΡΙ(ϋ21) | 99 | 99 | 100 | 96,3 | 100 | 475,4 | 352,2 | 641,6 | 20,0 | 7240,0 | |
ΡΙυΙΟΊ/2 | РПЕ Ρί(ϋ21) | 99 99 | 80 98 | 80,8 99,0 | 71,7 94,5 | 88.0 100 | 36,1 399,0 | 26,9 294,7 | 48,5 540,2 | <10,0 <10,0 | 3620,0 7240,0 | |
Яиапх | РПЕ ΡΙ(ϋ21) | 98 98 | 85 98 | 86,7 100 | 78,4 96,3 | 92.7 100 | 26,1 380,6 | 20,5 274,2 | 33,2 528,4 | <10,0 10,0 | 1280,0 7240,0 | |
Α/ννίεεοηεϊη | НиШ1/1 | РНЕ Р|(021) | 99 99 | Θ1 99 | 61,6 100 | 51.3 96.3 | 71,2 100 | 16,8 276,2 | 13,1 223,5 | 21,5 341,3 | <10,0 28,0 | 453,0 5120,0 |
ΕΙιιΙ-01/2 | Ь>НЁ Р1(О21) | 99 99 | 68 99 | 66,7 100 | 56,5 96,3 | 75,8 100 | 19.9 241.9 | 15,2 192 9 | 25,9 303,4 | <10,0 20,0 | 640,0 520,0 | |
Яиапх | РНЕ Р1(О21) | 98 98 | 58 97 | 59,2 99,0 | 48,8 94,4 | 69,0 100 | 14,7 172,3 | 11,6 136,4 | 18,6 217,6 | <10,0 <10,0 | 320,0 5220.0 | |
В/Ма1аув1а | ЯиЮ1/1 | РНЕ Р1(О21) | 99 99 | 72 99 | 72,7 100 | 62,9 96,3 | 81,2 100 | 20,4 268,6 | 15,9 221,3 | 26,1 326,0 | <10,0 28,0 | 453,0 2560,0 |
Е1иЮ1/2 | РНЕ Р1(О21) | 99 99 | 76 99 | 76,8 100 | 67.2 96.3 | 84,7 100 | 22,2 301,5 | 17.6 246.1 | 27,9 369,4 | <10,0 28.0 | 320,0 3620,0 | |
Яиапх | РНЕ Р1(О21) | 98 98 | 76 97 | 77,6 99,0 | 68,0 94,4 | 85,4 100 | 26,5 219,2 | 20,9 171,4 | 33,6 280,2 | <10,0 <10,0 | 320,0 5120.0 |
Р1иЬП1/1 = низкодозовая вакцина против гриппа (5 мкг НА/штамм) с полной дозой адъюванта А803; Р1иЬП1/2 = низкодозовая вакцина против гриппа (5 мкг НА/ штамм) с половиной дозы адъюванта А803; Р1иапх = вакцина Флюарикс;
СМТ = среднее геометрическое титра антител;
N = число субъектов с действительными результатами;
и/% = число/процент серопозитивных субъектов (титр ΗΙ >1:10);
95% ДИ = 95%-ный доверительный интервал, ЬЬ = нижний предел, ИЬ = верхний предел; ΜΙΝ/МАХ = минимум/максимум;
РВЕ = до вакцинации в сутки 0;
РI (021) = после вакцинации в сутки 21.
Таблица ΙΙ. Скорректированные соотношения СΜТ между группами для каждого вакцинного штамма на 21 сутки (АТР-группа исследования иммуногенности)
Антитело | Описание группы | N | Скорректированное СМТ | Описание группы | N | Скорректированное дат | Скорректированное соотношение СМТ | |||
пород* соотношения | значе- ние | 95%Д | И ΊΖ “ | |||||||
и | ||||||||||
1 | 2 | 3 | 4 | |||||||
РШ31/1 | 99 | 472,4 | РШЛЕ | 99 | 385,0 | РШ31Л | 123 | 0,80 | 138 | |
Са1ес1опв | /РШИЙ | |||||||||
(1ЮЬ) | РШИЛ | 99 | 4723 | Ниви | 98 | 3969 | ЕШ31/1/Ниагй | 1.19 | 0,78 | 132 |
НШМ2 | 99 | 3855 | Низгос | 98 | 3970 | ЕШИйНиак | 0,97 | 053 | 1,49 | |
АМЛзсопап | РШИЛ | 99 | 2773 | РШЭ1Й | 99 | 230,0 | РШЭ1/1/ | 121 | 0,90 | 132 |
(1®р | РШЭ12 | |||||||||
РШЭ1/1 | 99 | 2775 | Яиапк | 98 | 1803 | НиЮ1Л/Ниак | 154 | 1,14 | 206 | |
Ницца | 99 | 230,0 | АиаНк | 38 | 1803 | РШЖУНиапх | 127 | 0,95 | 1.71 | |
ВШауза | РЫВ1Л | 39 | 275,1 | РШ31Д | 39 | 303,4 | РШЭ1Л | 051 | 0,68 | 122 |
(1ОЦ | /РШЭ1Й | |||||||||
РШЭ1Л | Ниагк | 129 | 096 | 1,74 | ||||||
НиЦИЙ | 39 | 2752 | Аиагк | Зв | 212,7 | НиШ1/1/Ниаги | 1,43 | 1,06 | 132 | |
39 | 303.4 | 93 | 212,6 | РШЛЭНиапх |
Р1иЬО1/1 = низкодозовая вакцина против гриппа (5 мкг НА/штамм) с полной дозой адъюванта А803; Р1иЬО1/2 = низкодозовая вакцина против гриппа (5 мкг НА/ штамм) с половиной дозы адъюванта А803; Р1иапх = вакцина Флюарикс;
Скорректированное СΜТ = среднее геометрическое титра антител, скорректированное с учетом исходного титра;
- 18 015817
N = нисло субъектов с действительными как довакционными, так и поствакционными результатами;
95% ДИ = 95%-ный доверительный интервал для скорректированного соотношения СМТ (модель ΆΝΟΟνΆ: корректировка с учетом исходного титра - объединенная дисперсия для более чем 2 групп);
ЬЬ = нижний предел, ИЬ = верхний предел.
3.6.2 Факторы конверсии титров антител ΗΙ, коэффициенты серопротекции и уровни сероконверсии (коррелирует с защитой, как установлено для гриппозной вакцины у людей).
Результаты представлены в табл. 6 - на фиг. 2 для уровней серопротекции, в табл. 7 - на фиг. 3 для уровней сероконверсии и в табл. 8 - на фиг. 4 для факторов конверсии.
Пороговое значение, указанное европейскими организациями для уровней серопротекции (70%), достигалось во всех группах (по меньшей мере 94,9%). Для каждого вакцинного штамма уровни серопротекции на 21 сутки для 3 групп находились в таком же диапазоне.
Пороговое значение, указанное европейскими организациями для уровней сероконверсии (40%), достигалось во всех группах (по меньшей мере 65%).
Для вакцинного штамма Λ/Νο\ν Са1ебоша 8СК. на 21 сутки для 3 групп находились в таком же диапазоне.
Для вакцинного штамма ААУйсопйп 8СР на 21 сутки для группы Р1иБИ1/1 обычно были более высокими по сравнению с группой Ииапх. 8СК. на 21 сутки для группы ИиЬП1/2 находились в таком же диапазоне по сравнению с группой Ииапх.
Для вакцинного штамма В/Ма1ау51а 8СР на 21 сутки для группы ИиЬП1/2 обычно были более высоким по сравнению с группой Ииапх. 8СР в 21 сутки для группы Ии1ЬП1/1 находились в таком же диапазоне по сравнению с группой Ииапх.
Пороговое значение, указанное европейскими организациями для факторов сероконверсии (2,5), достигалось во всех группах (по меньшей мере 6,2).
Для вакцинного штамма А/№\т Са1ебоша 8СР на 21 сутки для 3 групп находились в таком же диапазоне. Значение, наблюдаемое для группы ИиЬП1/2, было ниже значения, наблюдаемого для группы Ииапх, но может быть объяснено более высоким уровнем серопротекции до вакцинации в группе ИиЬП1/2.
Для вакцинного штамма АЛУйсопмп 8СР на 21 сутки для группы ИиЬП1/1 обычно были более высоким по сравнению с группой Ииапх. 8СР в 21 сутки для группы ИиЬП1/2 находился в таком же диапазоне по сравнению с группой Ииапх.
Для вакцинного штамма В/Ма1ау51а 8СР на 21 сутки для двух адъювантированных групп обычно были более высоким по сравнению с группой Ииапх.
Таблица 6. Уровни серопротекции (8РК.) для титра ΗΙ-антител в сутки 0 и сутки 21 (АТР-группа исследования иммуногенности).
Вакцинный штамм | Группа | Время | N | 5РК | |||
η | % | 95%ДИ | |||||
и. | иь | ||||||
Α/Νβνν Са1ес1ота | Е1и1_О1/1 | РКЕ | 99 | 41 | 41,4 | 31,6 | 51,8 |
ΡΙ(ϋ21) | 99 | 95 | 96,0 | 90,0 | 98,9 | ||
Ни1ДЭ1/2 | РКЕ | 99 | 55 | 55,6 | 45,2 | 65,5 | |
ΡΙ(ϋ21) | 99 | 97 | 98,0 | 92,9 | 99,8 | ||
Пиапх | РКЕ | 98 | 35 | 35,7 | 26,3 | 46,0 | |
Р1(О21) | 98 | 93 | 94,9 | 88,5 | 98,3 | ||
АЛМзсопзт | Р1иЮ1/1 | РКЕ | 99 | 32 | 32,3 | 23,3 | 42,5 |
Р1(О21) | 99 | 97 | 98.0 | 92,9 | 99,8 | ||
НиШ1/2 | РКЕ | 99 | 37 | 37,4 | 27,9 | 47,7 | |
Р1(О21) | 99 | 97 | 98,0 | 92,9 | 99,8 | ||
Пиапх | РКЕ | 98 | 25 | 25,5 | 17,2 | 35,3 | |
ΡΙ(ϋ21) | 98 | 93 | 94,9 | * | |||
8,5 | |||||||
В/Ма1ауз1а | Р1иБ01/1 | РКЕ | 99 | 31 | 31,3 | 22,4 | 41,4 |
Ρ1(ϋ21) | 99 | 97 | 98,0 | 92,9 | 99,8 | ||
Р1иБ01/2 | РКЕ | 99 | 39 | 39,4 | 29,7 | 49,7 | |
Р1(О21) | 99 | 98 | 99,0 | 94,5 | 100 | ||
Ииапх | РКЕ | 98 | 44 | 44,9 | 34,8 | 55,3 | |
ΡΙ(ϋ21) | 98 | 94 | 95,9 | 89,9 | 98,9 |
ИиЬП1/1 = низкодозовая вакцина против гриппа (5 мкг НА/штамм) с полной дозой адъюванта А803; ИиЬП1/2 = низкодозовая вакцина против гриппа (5 мкг НА/штамм) с половиной дозы адъюванта А803; Ииапх = вакцина Ииапх;
N = число субъектов с действительными результатами;
п/% = число/процент субъектов с серопротекцией (титр ΗΙ >40 1/И1Б);
95% ДИ = 95%-ный доверительный интервал, ЬЬ = нижний предел, ИЬ = верхний предел;
РКЕ = до вакцинации в сутки 0;
ΡΙ (Ό1) = после вакцинации в сутки 21.
Источник данных = табл. 3А приложения.
- 19 015817
Таблица 7. Уровень сероконверсии (8СВ) для титра ΗΙ-антител на 21 сутки (АТР-группа исследования иммуногенности)
Вакцинный штамм | Г руппа | N | зек | |||
η | % | 95%ДИ ίί | υι. | |||
Α/Νβνν Са1е6ота | Яи1_О1/1 | 99 | 69 | 69,7 | 59,6 | 78,5 |
Яи1_О1/2 | 99 | 64 | 64,6 | 54,4 | 74,0 | |
Яиапх | 98 | 66 | 67,3 | 57,1 | 76,5 | |
А/1Л/|2СОП51П | Е1иШ1/1 | 99 | 88 | 88,9 | 81,0 | 94,3 |
Р1иЮ1/2 | 99 | 79 | 79,8 | 70,5 | 87,2 | |
Яиапх | 98 | 73 | 74,5 | 64,7 | 82,8 | |
В/Ма1ау8!а | Аи1_О1/1 | 99 | 76 | 76,8 | 67,2 | 84,7 |
Р1иШ1/2 | 99 | 82 | 82,8 | 73,9 | 89,7 | |
Яиапх | 98 | 65 | 66,3 | 56,1 | 75,6 |
Е1иЬО1/1 = низкодозовая вакцина против гриппа (5 мкг ΗΑ/штамм) с полной дозой адъюванта А803. Е1иЬО1/2 = низкодозовая вакцина против гриппа (5 мкг НА/ штамм) с половиной дозы адъюванта А803. Ииапх = вакцина Флюарикс.
Сероконверсию определяли как:
для изначально серонегативных субъектов титр антител > 40 1/ΌΙΕ после вакцинации;
для изначально серопозитивных субъектов, титр антител после вакцинации в > 4 раза выше титра антител до вакцинации;
Ν= число субъектов с действительными результатами до и после вакцинации;
п/% = число/процент субъектов с сероконверсией;
95% ДИ = 95%-ный доверительный интервал, ЬЬ = нижний предел, иь = верхний предел.
Таблица 8. Фактор сероконверсии (8СИ) для титра ΗΙ-антител на 21 сутки (АТР-группа исследования иммуногенности)
Вакцинный штамм | Группа | N | ЗСР | ||
значение | 95°/ и. | »ДИ иь | |||
Α/Νθνν Са1ес1оп1а | ЯиЮ1/1 Яи1_О1/2 Яиапх | 99 99 98 | 14,9 11,0 14,6 | 10,4 θ'θ | 21,3 15,9 21,6 |
ДЛЛ/13СОП81П | Яи1_О1/1 ЯиГО1/2 Яиапх | 99 99 98 | 16,5 12,2 11,7 | 13,0 9,2 8,8 | 20,9 16,1 А |
В/Ма1ауз1а | ЯиЮ1/1 ПиЮ1/2 Яиапх | 99 99 98 | 13,2 13,6 8,3 | 10,0 10,2 6,2 | 17,4 18,0 11,0 |
И1иБО1/1 = низкодозовая вакцина против гриппа (о мкг ΗΑ/штамм) с полной дозой адъюванта А803; И1иБО1/2 = низкодозовая вакцина против гриппа (5 мкг ΗΑ/штамм) с половиной дозы адъюванта А803; Ииапх = вакцина Флюарикс;
N = число субъектов с действительными результатами до и после вакцинации;
8СИ = фактор сероконверсии или среднее геометрическое отношения (значение [1ο§10(ΡΙ(Ό21)/ΡΒΕ)]);
95% ДИ = 95%-ный доверительный интервал, ЬЬ = нижний предел, иь = верхний предел.
3.7 Выводы по безопасности.
Более высокая реактогенность в показателях ожидаемых (местных/генерализованных) и неожидаемых симптомов в группах адъювантных вакцин по сравнению с группой Ииапх являлась общей тенденцией, наблюдаемой в данном исследовании.
Понижение содержания А803 в адъювантной вакцине оказывает значительное влияние на степень всех генерализованных и на 3 локальных симптома.
Появление неожидаемых симптомов обычно было более высоким в группах адъювантных вакцин (55 и 47% субъектов) по сравнению с группой Ииапх (35%).
Из этих результатов можно заключить, что реактогенность и профиль безопасности кандидатных вакцин является удовлетворительным и клинически приемлемым.
3.8. Общие выводы.
3.8.1. Результаты по иммуногенности.
Главной целью данного исследования было оценить гуморальный иммунный ответ (титры анти-ΗΙ антител), вызываемый низкодозовой вакциной против гриппа с двумя разными концентрациями адъюванта А803 и вакциной Ииапх.
На 21 сутки три вакцины превысили требования европейских организаций для ежегодной регистрации вакцин против гриппа на основе расщепленного вириона (№1е Гог Ошбапсе оп ИагтопШиоп οί Ве
- 20 015817
с.|шгетеп^ Гог тПиеп/а Уассп^ для иммунологической оценки ежегодных изменений штаммов СΡΜΡ/ВVΡ/214/96). СМТ обычно были более высокими в адъювантных группах по сравнению с группой Είπατίχ, со статистически значимым различием, наблюдаемым для вирусных штаммов ΛΛνίδ^ηδίη (Ε1πΤΌ1/1 по сравнению с Εΐιιαπ.χ) и В/Ма1ауъ1а (Ε1πΤΌ1/2 по сравнению с ΕΙυαΓίχ), Аналогичные уровни серопротекции наблюдались во всех трех группах вакцин, в интервале от 94,9 до 99%. Наблюдаемые уровни сероконверсии и факторы сероконверсии были выше в адъювантных группах, чем в группе Ε1παΓίχ. Данные, полученные в этом испытании, также выявили, что иммуногенность, индуцированная вакциной с половиной дозы адъюванта А803, была сравнима с иммуногенностью, индуцированной полной дозой адъюванта
3.8.2. Результаты по реактогенности и безопасности.
Введение низкодозовой противогриппозной кандидатной вакцины, адъювантированной А803, было безопасным и клинически хорошо переносилось в вошедшей в исследование популяции, то есть у взрослых людей в возрасте 18-59 лет. Вакцина с половиной дозы адъюванта показала значительное уменьшение частоты возникновения ожидаемых местных и генерализованных симптомов по сравнению с вакциной с полной дозой адъюванта.
Пример ГУ. Доклиническая оценка адъювантированных и неадъювантированных расщепленных противогриппозных вакцин (содержащих различные дозы адъюванта А803) на праймированных мышах ВАЬВ/с.
4.1. Дизайн и цель эксперимента.
Эксперименты на праймированных гриппом мышах выполняли для того, чтобы оценить усиление посредством А803 гуморальных ответов, индуцированных противогриппозными вакцинами, приготовленными с данным адъювантом масло-в-воде. Для моделирования ситуации у человека эксперимент выполняли, используя мышей, праймированных гетеросубтипируемыми штаммами.
4.1.1. Обработка/группа (табл. 9).
Группы из 27 взрослых мышей ВАЬВ/с женского пола праймировали интраназально (объем 20 мкл) в 0 сутки трехвалентным целым вирусом гриппа, инактивированным формалином (5 мкг НА на каждый штамм). Праймирующие штаммы состояли из более ранних дрейфующих вариантов (5 мкг НА целого инактивированного Н1М А/^ойаηηеδЬи^д/82/96, №Ν2 А/8убпеу/5/97, В/НагЫп/7/94) штаммов, включенных в вакцину. Через двадцать восемь суток мышей вакцинировали однократной дозой кандидатной вакцины внутримышечно с общим объемом 50 мкл. Мышей иммунизировали композициями, содержащими только расщепленные антигены (трехвалентные расщепленные простые), или композициями, содержащими расщепленные антигены, адъювантированные двумя дозами А803 (полной или 1/5). Штаммы, использованные для иммунизации, включали вирусные антигены НШ1 А/№\\· Са1ебоша/20/99, №Ν2 А/Рапата/2007/99, В/8йапдбопд/7/97 (1,5 мкг/штамм, 1/10 дозы, предназначенной для человека).
Таблица 9
Г руппа Ί | Антиген/Композиция Трехеалентный расщепленный/Простая (неадъювантная) | Другая обработка Г етерологическое праймирование СО |
2 | Трехвалентный расщепленный/АЗОЗ | Г етерологическое праймирование СО |
3 | Трехвалентный расщепленный/АЗОЗ 1/5 | Гетерологическое праймирование ϋθ |
4.1.2. Получение вакцинных композиций.
Готовят премикс Твин 80, Тритон Х100 и Витамина Е сукцината (УЕ8) для того, чтобы достичь конечной концентрации в вакцине 750 мкг/мл Твин 80, 110 мкг/мл Тритон Х100 и 100 мкг/мл УЕ8. Количества, использованные в премиксе, рассчитывают, принимая во внимание количества поверхностноактивного вещества и УЕ8, уже присутствующее в штаммах.
Получение 1 л 10-кратно концентрированного солевого буфера (РВ8 рН 7,4): к 0,800 л воды для инъекций добавляют 80 г №С1, 2 г КС1, 11,44 г №2НРО4, 2 г КН2РО4. После растворения доводят до 1,0 л водой для инъекций. При 10-кратном разведении рН будет составлять 7,4.
- 21 015817
Трехвалентный расщепленный/простой
Композицию одной 50 мкл дозы готовят для немедленного применения согласно следующей последовательности: вода для инъекций + солевой буфер (10-кратно концентрированный РВ8 рН 7,4) + премикс, 5 мин перемешивания магнитной мешалкой при комнатной температуре, + 1,5 мкг ΗΑ штамма Η1Ν1, 10 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре, + 1,5 мкг ΗΑ штамма Η3Ν2, 10 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре, + 1,5 мкг ΗΑ штамма В, 15 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре. Композиции вводят в течение часа после окончания их приготовления.
Трехвалентный расщепленный /А803
Готовили премикс Твин 80, Тритон Х100 и Витамин Е сукцината (νΕδ) с достижением конечной концентрации в вакцине 750 мкг/мл Твин 80, 110 мкг/мл Тритона Х100 и 100 мкг/мл νΕδ. Количества, используемые в премиксе, рассчитывают, учитывая количества поверхностно-активного вещества и νΕδ, уже присутствующих в штаммах.
Композицию однократной 50 мкл дозы готовят для немедленного применения согласно следующей последовательности: вода для инъекций + солевой буфер (10-кратно концентрированный ΡΒδ рН 7,4) + премикс, 5 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре, + 1,5 мкг ΗΑ штамма Η1Ν1, 10 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре, + 1,5 мкг ΗΑ штамма Η3Ν2, 10 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре, + 1,5 мкг ΗΑ штамма В, 15 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре, + 25 мкл эмульсии δΒ62 для полной дозы Αδ03 или 5 мкл эмульсии δΒ62 для 1/5 дозы Αδ03, 15 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре. Композиции вводят в течение часа после окончания их приготовления.
4.1.3. Считывания (табл. 10).
Гуморальный иммунный ответ на вакцинацию оценивали перед иммунизацией (28 сутки) и через 14 суток после иммунизации (27 мышей/группа). Образцы сыворотки испытывали с помощью теста ингибирования гемагглютинации (ΗΙ).
Таблица 10
4.2. Результаты.
4.2.1. Гуморальный иммунитет.
Результаты представлены на фиг. 5. В данной модели гетеросубтипируемого заражения мышей с последующей однократной вакцинацией, было показано, что Αδ03 и его разведения индуцировали более высокие титры ΗΙ по сравнению с простой вакциной. Для всех штаммов вируса гриппа Α наблюдалось статистически значимое увеличение ΗΙ-титров (р<0,05). Для штамма Η1Ν1 также наблюдалось значимое различие ΗΙ-титров между Αδ03 и Αδ03 1/5 (р<0,05). Пониженная доза Αδ03 не увеличивала титры ΗΙ для всех трех штаммов по сравнению с простой вакциной. Очень низкие ответы наблюдались против штамма В (Β/δйаηдбоид); это, вероятно, может быть обусловлено значительным антигенным дрейфом штаммов В, использованных для праймирования, и вакцины.
4.3. Краткое изложение результатов и выводы.
В заключение, увеличение ΗΙ-титров наблюдалось у животных, праймированных гетеросубтипируемыми штаммами, при использовании вакцин, адъювантированных Αδ03, по сравнению с простой вакциной. Полная доза Αδ03 была оптимальной для получения устойчивых ΗΙ-титров против трех штаммов гриппозной вакцины.
Пример ν. Доклиническая оценка адъювантных и неадъювантных расщепленных гриппозных вакцин (содержащих различные дозы адъюванта Αδ03) у праймированных мышей С57ВЕ8
5.1. Дизайн и цель эксперимента.
Эксперименты на мышах, праймированных вирусом гриппа, выполняли, чтобы оценить усиление посредством Αδ03 гуморального и клеточного ответов, индуцированных гриппозными вакцинами, приготовленными с данным адъювантом масло-в-воде.
Для моделирования ситуации у человека эксперимент проводили, используя мышей, праймированных гетеросубтипируемыми штаммами.
5.1.1. Обработка/группа (табл. 11).
Группы из 25 взрослых самок мышей С57ВЕ6 праймировали интраназально (объем 20 мкл) в сутки 0 трехвалентным цельным вирусом гриппа, инактивированным формалином (5 мкг ΗΑ на каждый штамм). Праймирующие штаммы состояли из более ранних дрейфующих вариантов (5 мкг ΗΑ цельного инактивированного Η1Ν1 Λ/Βе^^^ид/262/95, Η3Ν2 Л/Раиата/2007/99, Β/δйаидбоид/7/97) штаммов, включенных в вакцину. Через двадцать восемь суток мышей вакцинировали однократной дозой вакциныкандидата внутримышечно с общим объемом 100 мкл. Мышей иммунизировали композициями, содержащими только расщепленные антигены (трехвалентный расщепленный простой), или композициями,
- 22 015817 содержащими расщепленные антигены. адъювантированные тремя дозами А803 (полная. 1/2 или 1/5). Штаммы. использованные для иммунизации. включали вирусные антигены Н1М Λ/№\ν Са1ебоша/20/99. №N2 Λ/№\ν Уогк/55/2004. В/Лапд8и/10/2003 (1.5 мкг/штамм. 1/10 дозы. предназначенной для человека).
Таблица 11
Группа | Антиген/Композиция | Другая обработка |
1 | Трехвалентный расщепленный/простая (неадъювантная) | Г етерологическое праймирование ОО |
2 | Трехвалентный расщепленный/ 803 | Гетерологическое праймирование ОО |
3 | Трехвалентный расщепленный/А803 1/2 | Гетерологическое праймирование Э0 |
4 | Трехвалентный расщепленный/А803 1/5 | Гетерологическое праймирование ϋθ |
5 | РВ8 | Гетерологическое праймирование ОО |
5.1.2. Получение вакцинных композиций.
Трехвалентная расщепленная/простая.
Композицию 100 мкл дозы готовят для немедленного применения согласно следующей последовательности: вода для инъекций + солевой буфер (10-кратно концентрированный РВ8 рН 7.4. полученный. как указано в примере IV) + Флюарикс клиническая серия ПЕЬиА014 (1.5 мкг на штамм в конечной дозе).
Трехвалентная расщепленная/А803.
Композиции 100 мкл дозы готовят для немедленного применения согласно следующей последовательности: вода для инъекций + солевой буфер (10-кратно концентрированный РВ8 рН 7.4. полученный. как указано в примере IV) + Флюарикс клиническая серия ПЕЬиА014 (1.5 мкг на штамм в конечной дозе) + 25 мкл эмульсии 8В62 для полной дозы или 12.5 мкл эмульсии 8В 62 для 1/2 дозы или 5 мкл эмульсии 8В62 для 1/5 дозы. Композиции вводят в течение 1 ч после окончания приготовления.
5.1.3. Считывания (табл. 12).
Гуморальный иммунный ответ на вакцинацию оценивали через 21 сутки после иммунизации (10 мышей/группа). и образцы сыворотки испытывали с помощью теста ингибирования гемагглютинации (Ш). Клеточный иммунный ответ проверяли через 7 суток после иммунизации с помощью внутриклеточного окрашивания цитокинов ЦС8).
Таблица 12
Считывание | Момент времени | Тип образца | I Метод анализа |
Гуморальный ответ | 049 | Сыворотка | I ΙΗΑ |
Клеточный ответ | 035 | РВМСа | | !С5 |
5.2. Результаты.
5.2.1. Гуморальный иммунитет (10 мышей/группа).
Результаты представлены на фиг. 6. В данной модели на мышах было показано. что гетеросубтипическое праймирование с последующей однократной вакцинацией. А803 и его разведениями (1/2 и 1/5). индуцировали более высоких титры Ш по сравнению с простой вакциной. Для всех трех штаммов не наблюдалось различия Ш-титров между мышами. получавшими вакцину. адъювантированную полной дозой А803 или уменьшенными дозами А803.
5.2.2. Клеточный иммунитет (15 мышей/группа).
Результаты представлены на фиг. 7. Независимо от разведения А803. более высокие СБ4+Тклеточные ответы наблюдались у мышей. иммунизированных А803-адъювантной трехвалентной расщепленной вакциной. по сравнению с мышами. иммунизированными трехвалентной расщепленной простой вакциной. По сравнению с ответом. индуцированным у мышей. иммунизированных трехвалентной расщепленной вакциной. адъювантированной полной дозой А803. обычно наблюдались более низкие клеточные ответы. когда мышей иммунизировали трехвалентной расщепленной вакциной. адъювантированной более низкими дозами А803.
5.3. Краткое изложение результатов и выводы.
В заключение. усиление гуморального и клеточного ответов наблюдали у животных. праймированных гетеросубтипируемыми штаммами. при использовании А803-адъювантных вакцин по сравнению с простой вакциной. Аналогичную величину иммунного ответа наблюдали у мышей. иммунизированных полной дозой или дробными дозами адъюванта А803. Однако уменьшение дозы адъюванта было связано с обычно пониженной величиной СБ4+ Т-клеточного ответа.
- 23 015817
Пример УГ. Доклиническая оценка клеточного иммунного ответа, индуцированного адъювантными и неадъювантными расщепленными гриппозными вакцинами (содержащими различные дозы адъюванта А803 и низкую дозу антигена) у праймированных мышей С57В9/6.
6.1. Дизайн и цель эксперимента.
Эксперименты на мышах, праймированных вирусом гриппа, выполняли для того, чтобы оценить усиление посредством А803 клеточных иммунных ответов, индуцированных гриппозными вакцинами, содержащими низкую дозу антигена (0,5 мкг/штамм, 1/30 дозы, предназначенной для человека) и приготовленными с указанным адъювантом масло-в-воде. Для моделирования ситуации у человека эксперимент проводили, используя мышей, праймированных гетеросубтипируемыми штаммами.
6.1.1. Обработка/группа (табл. 13).
Группы из 15 самок мышей С57В1/6 праймировали интраназально (объем 20 мкл) в 0 сутки трехвалентным цельным вирусом гриппа, инактивированным формалином (5 мкг НА для каждого штамма). Праймирующие штаммы состояли из более ранних дрейфующих вариантов (5 мкг НА цельного инактивированного Н1Ν1 А/Ве1)1ид/262/95, Н3Ы2 А/Раиата/2007/99, В/8йаидбоид/7/97) штаммов, включенных в вакцину. Через двадцать восемь суток мышей вакцинировали однократной дозой вакцины-кандидата внутримышечно с общим объемом 50 мкл. Мышей иммунизировали композициями, содержащими только расщепленные антигены (трехвалентными расщепленными простыми), или композициями, содержащими расщепленные антигены, адъювантированные тремя дозами А803 (полной, 1/2 или 1/5). Штаммы, использованные для иммунизации, включали вирусные антигены Н1М Λ/№\ν Са1ебоша/20/99, №N2 Λ/№\ν Уотк/55/2004, В/йаидки/10/2003 (0,5 мкг/штамм, 1/30 дозы, предназначенной для человека).
Таблица 13
Г руппа | Антиген/Композиция | Другая обработка |
1 | Трехвалентный расщепленный /Простая (неадъювантная) | Гетерологическое праймирование ϋθ |
2 | Трехвалентный расщепленный / А503 | Гетерологическое праймирование ϋθ |
3 | Трехвалентный расщепленный /А803 1/2 | Г етерологическое праймирование ϋθ |
4 | Трехвалентный расщепленный/АЗОЗ 1/5 | Г етерологическое праймирование ϋθ |
5 | РВ8 | Г етерологическое праймирование ϋθ |
6.1.2. Получение вакцинных композиций.
Трехвалентный расщепленный/беспримесная.
Композиции для 50 мкл дозы готовят для немедленного применения согласно следующей последовательности: вода для инъекций + солевой буфер (10-кратно концентрированный РВ8 рН 7,4, полученный как указано в примере ГУ) + Е1иапх, клиническая серия ЭЕЬиА014 (0,5 мкг на штамм в конечной дозе).
Трехвалентный расщепленный/А803.
Композиции для дозы 50 мкл готовят для немедленного применения согласно следующей последовательности: вода для инъекций + солевой буфер (10-кратно концентрированный РВ8 рН 7,4, полученный как указано в примере ГУ) + Флюарикс, клиническая серия ЭЕЬиА014 (0,5 мкг на штамм в конечной дозе) + 25 мкл эмульсии 8В62 для полной дозы или 12,5 мкл эмульсии 8В 62 для 1/2 дозы или 5 мкл эмульсии 8В62 для 1/5 дозы. Композиции вводят в течение 1 ч после завершения приготовления.
6.1.3. Считывания (табл. 14).
Клеточный иммунный ответ испытывали через 7 суток после иммунизации с помощью внутриклеточного окрашивания цитокина.
Таблица 14
Считывание | Момент времени | I Тип образца | Метод анализа I |
Клеточный ответ | □35 | РВМС | 1СЗ |
6.2. Результаты.
6.2.1. Клеточный иммунитет.
Результаты представлены на фиг. 8. Незначительно более высокие ответы СЭ4+ Т-клеток наблюдались у мышей, иммунизированных трехвалентной расщепленной вакциной, адъювантированной А803 (полная доза или 1/2 дозы), по сравнению с мышами, иммунизированными трехвалентной расщепленной простой вакциной. По сравнению с ответом, индуцированным у мышей, иммунизированных трехвалентной расщепленной простой или адъювантированной полной дозой или половиной дозы А803 вакциной, более высокие клеточные ответы наблюдались, когда мышей иммунизировали трехвалентной расщепленной вакциной, адъювантированной 1/5 дозы А803.
6.3. Краткое изложение результатов и выводы.
В заключение, минимальное усиление ответов СЭ4+ Т-клеток наблюдали у гетеросубтипически
- 24 015817 праймированных животных при использовании А803-адъювантных вакцин по сравнению с простой вакциной. В данном эксперименте не наблюдалось ответа на дозу адъюванта, и действительно, 1/5 дозы А803 индуцировала более высокую концентрацию антигенспецифических СО4+Т-клеток, чем наблюдалось при более высоких дозах адъюванта. В целом эти данные не согласуются с другими доклиническими экспериментами и могут указывать на техническую проблему данного конкретного эксперимента.
Пример VII. Доклиническая оценка адъювантных и неадъювантных вакцин на основе расщепленного Н5Ы1 (включающих различные дозы адъюванта А803 и антигена) у мышей С57В1/6, ранее не подверженных воздействию.
7.1. Схема и цель эксперимента.
Эксперименты на мышах, ранее не подверженных воздействию Н5Ы1, выполняли, чтобы оценить усиление гуморального и клеточного иммунных ответов под влиянием А803, индуцированных вакцинами на основе расщепленного Н5Ы1, приготовленных в виде препарата с указанным адъювантом маслов-воде. В случае пандемии ожидается, что вся мировая популяция иммунологически будет представлять собой ранее не подверженную воздействию нового циркулирующего пандемического штамма гриппа. Вследствие такого, ранее не подверженного воздействию иммунного статуса для пандемической вакцины возможно потребуются две вакцинные дозы для защиты субъектов от инфекции и тяжелого заболевания, вызванного новым штаммом гриппа. Чтобы представлять данное отсутствие предшествующего воздействия, для определения иммуногенности вакцины была разработана модель на мышах, ранее не подверженных воздействию.
7.1.1. Обработка/группа (табл. 15).
Группы из 15 взрослых самок мышей С57В1/6, ранее не подверженных воздействию, иммунизировали в сутки 0 и 28 пандемической Н5Ы1 вакциной-кандидатом внутримышечно общим объемом 50 мкл. Мышей иммунизировали композициями, содержащими только расщепленные антигены Н5Ы1 (Ή5Ν1 расщепленная простая), или композициями, содержащими расщепленные антигены, адъювантированные разными дозами А803 (двойной, полной, 1/2 или 1/5). Штаммы, использованные для иммунизации, включали вирусный антиген 45Ν1 А/^еШат/1194/04 (1,5 или 0,38 мкг/штамм, соответствующие 1/10 дозы, предназначенной для человека).
Композицию с двойной дозой А803 не готовили, но делали одновременную инъекцию 50 мкл 45Ν1 расщепленной/полная доза А803 + доза 50 мкл А803.
Таблица 15
Группа | Антиген/Композиция | Доза антигена |
1 | Расщепленный НбЫЙПростая (неадъювантная) | 1,5 мкг |
2 | Расщепленный Н5Ы1/двойная доза А803 | 1,5 мкг |
3 | Расщепленный Η5Ν1/Α803 | 1,5 мкг |
4 | Расщепленный Η5Ν1/Α803 1/2 | 1,5 мкг |
5 | Расщепленный Η5Ν1/Α803 1/5 | 1,5 мкг |
6 | Расщепленный ΗδΝΙ/Простая (неадъювантная) | 0,38 мкг |
7 | Расщепленный ΗδΝΙ/двойная доза А803 | 0,38 мкг |
8 | Расщепленный Η5Ν1/Α803 | 0,38 мкг |
9 | Расщепленный Η5Ν1/Α803 1/2 | 0,38 мкг |
10 | Расщепленный Η5Ν1/Α803 1/5 | 0,38 мкг |
11 | РВ8 |
7.1.2. Получение вакцинных композиций.
Получение одного литра конечного основного буфера (РВ8 рН 7,2±0,2): к 0,800 л воды для инъекций добавить 7,699 г №С1, 0,200 КС1 г, 0,100 г МдС12х 6Н2О, 2,600 г №2НРО4х 12Н2О, 0,373 г КН2РО4. После растворения довести до 1,0 л водой для инъекций.
Расщепленный Н5Ю/простая.
Приготовление дозы 50 мкл:
Тиомерсал (количества с учетом его концентрации в штамме) и Тритон Х100 добавляли к конечному основному буферу. Твин 80 не добавляют, так как заданное значение содержания в композиции достигается посредством концентрации Твина в штамме. Конечные концентрации составляют 10 мкг/мл для тиомерсала, 368 мкг/мл для Твина 80 и 35 мкг/мл для Тритона Х100 в 1,5 мкг дозе композиции. Они составляют 10 мкг/мл для тиомерсала, 93 мкг/мл для Твина 80 и 8,9 мкг/мл для Тритона Х100 в 0,38 мкг дозе композиции. Через 5-30 мин перемешивания на магнитной мешалке добавляют 1,5 или 0,38 мкг НА (штамм 45Ν1). Композиции перемешивают в течение 30-60 мин. Проверяют рН. Инъекции осуществляют в течение 1 ч после окончания приготовления композиции.
Расщепленный Н5№/А§03.
Получение дозы 50 мкл:
Тиомерсал (количества с учетом его концентрации в штамме) и Тритон Х100 добавляют к конечно
- 25 015817 му основному буферу. Твин 80 не добавляют. так как заданное значение содержания в композиции достигается посредством концентрации Твин в штамме. Конечные концентрации составляют 10 мкг/мл для тиомерсала. 368 мкг/мл для Твина 80 и 35 мкг/мл для Тритона Х100 в 1.5 мкг дозы композиции. Они составляют 10 мкг/мл для тиомерсала. 93 мкг/мл для Твина 80 и 8.9 мкг/мл для Тритона Х100 в 0.38 мкг дозе композиции. Через 5-30 мин перемешивания на магнитной мешалке добавляли 1.5 или 0.38 мкг ΗΑ (штамм Η5Ν1). Через 30-60 мин перемешивания на магнитной мешалке добавляют 25 или 12.5 или 5 мкл эмульсии 8В62. Композиции перемешивают в течение 30-60 мин. Проверяют рН. Инъекции осуществляют в течение 1 ч после окончания приготовления композиции.
7.1.3. Считывания (табл. 16).
Гуморальный иммунный ответ оценивали через 14 суток после иммунизации (10 мышей/группа) по титрам анти-1д. 1дО1 и 1дС2Ь антител (фиг. 9 А-Р). Гуморальный иммунный ответ оценивали также через 21 день после иммунизации (10 мышей/группа) с помощью анализа ингибирования гемагглютинации анти-ШМ (фиг. 10 А-В).
Клеточный иммунный ответ испытывали через 6 суток после иммунизации (5 пулов из 3 мышей на группу) с помощью внутриклеточного окрашивания цитокина (Ю8) антигенспецифических СЭ4+ Тклеток. количественно определяемого при помощи поточной цитометрии (фиг. 11 А-В).
Таблица16
Считывание | Момент времени | Тип образца | Метод анализа |
Гуморальный ответ | Сыворотка | ЕИ8А. изотипы и ΗΙ титры | |
Клеточный ответ | ϋ34 | РВМС | 1С8 |
7.2. Результаты.
7.2.1. Гуморальный иммунный ответ: ЕЫ8А и изотипы.
Результаты представлены на фиг. 9.
Для каждой дозы расщепленной Η5Ν1 вакцины все адъювантные группы индуцировали более высокие титры анти-Н5Х11д. 1дС 1 и 1дС2Ь антител по сравнению с неадъювантной расщепленной Η5Ν1 вакциной (фиг. 9А-Р).
Для каждой дозы расщепленной Η5Ν1 вакцины; образование анти-Н5Х1 1дС1 антител было в 4-5 раз выше. чем образование анти-1д62Ь Η5Ν1 антител (фиг. 9 С-Р). При дозе 1.5 мкг ΗΑ расщепленной Η5Ν1 вакцины и комбинированной для каждой дозы адъюванта не наблюдалось различий анти-Η5N 1 1д. 1дО1 и 1д62Ь ответов антител (фиг. 9А. С и Е).
При дозе 0.38 мкг ΗΑ расщепленной Η5Ν1 вакцины. обычно были получены более высокие антиΗ5Ν1 1д титры после иммунизации расщепленной Η5Ν1 вакциной. адъювантированной двумя полными дозами. по сравнению с ответом. индуцированным расщепленной Η5Ν1 вакциной. адъювантированной А803/2 (р = 0.7315) и А803 1/5 (р = 0.9744) (фиг. 9-В). Данная тенденция также наблюдалась для антиΗ5Ν1 1дС1 антител (фиг. 9Ό). Однако сила не была достаточной для наблюдения статистически значимого различия (25% силы для 1.7-кратного различия. или 47% для 2-кратного различия).
7.2.2. Гуморальный иммунный ответ: титры ΗΙ.
С дозой 1.5 мкг ΗΑ/мышь:
Для каждой дозы адъюванта все мыши. иммунизированные А803-адъювантной расщепленной Η5Ν1 вакциной. индуцировали более высокие титры ΗΙ по сравнению с ответом. полученным у мышей. иммунизированных неадъювантной расщепленной Η5Ν1 вакциной (фиг. 10А). Не наблюдалось различия титров ΗΙ. когда расщепленную Η5Ν1 вакцину адъювантировали с диапазоном доз А803 (фиг. 10А).
С дозой 0.38 мкг ΗΑ/дозу.
Для каждой дозы адъюванта у всех мышей. иммунизированных А803-адъювантной расщепленной Η5Ν1 вакциной. индуцировались более высокие титры ΗΙ по сравнению с ответом. полученным у мышей. иммунизированных неадъювантной расщепленной Η5Ν1 вакциной (фиг. 10Б).
Значительно более высокие титры ΗΙ наблюдались в случае расщепленной Η5Ν1 вакцины. адъювантированной двумя полными дозами А803 по сравнению с ответом. полученным в случае расщепленной Η5Ν1 вакцины. адъювантированной А803/2 (р=0.032 для 4-кратного отличия) (фиг. 10Б).
Не наблюдалось различия титров ΗΙ у мышей. иммунизированных вакциной на основе расщепленного Η5Ν1. адъювантированной двумя полными дозами А803 или полной дозой А803. или мышей. иммунизированных вакциной на основе расщепленного Η5Ν1. адъювантированной А803/2 или А803/5 (фиг. 10Б).
Сравнение доз антигенов (1.5 мкг или 0.38 мкг):
Не наблюдалось различия титров ΗΙ мышей. иммунизированных любой ΗΑ дозой расщепленной Η5Ν1 вакцины. адъювантированной А803. А803/2 или А803/5. за исключением мышей. иммунизированных 1.5 мкг ΗΑ расщепленного Η5Ν1. адъювантированного А803/5. и мышей. иммунизированных 0.38 мкг ΗΑ расщепленного Η5Ν1. адъювантированного двумя полными дозами А803 (фиг. 10). Титры ΗΙ были значительно бо
- 26 015817 лее высокими после иммунизации 0,38 мкг НА расщепленного Н5Ы1, адъювантированного двумя полными дозами А803, по сравнению с более высокой дозой антигена, комбинированной с более низкой дозой адъюванта (1,5 мкг НА в случае А803/5, р=0,0193 для 4-кратного различия) (фиг. 10).
7.2.3. Клеточный иммунный ответ.
Результаты представлены на фиг. 11.
Для каждой дозы расщепленной Н5Ы1 вакцины (1,5 или 0,38 мкг) наблюдались более высокие ответы СЭ4+ Т-клеток у мышей, иммунизированных расщепленной Н5Ы1 вакциной, адъювантированной различными дозами А803, по сравнению с мышами, иммунизированными неадъювантной расщепленной Н5Ы1 вакциной (фиг. 11).
При дозе 1,5 мкг расщепленной Н5Ы1 вакцины понижение доз А803 соответствовало снижению концентрации СЭ4+ Т-клеток (фиг. 11А). Однако при дозе 0,38 мкг расщепленной Н5Ы1 вакцины у мышей, иммунизированных А803-адъювантными расщепленными Н5Ы1 вакцинами (фиг. 11В), не наблюдалось различия в ответах СЭ4+ Т-клеток между разными дозами адъюванта.
7.3. Краткое изложение результатов и выводы.
Исследования иммуногенности на мышах показали, что адъювантная расщепленная Н5Ы1 вакцина индуцировала значительно более высокие гуморальный (анти-Н5М1 БЫ8А и титры Ш) и клеточный (СИ4+Т-клетки) ответы, чем ответы, индуцированные неадъювантной расщепленной Н5Ы1 вакциной.
Не наблюдалось отсутствия влияния дозы антигена на гуморальный иммунный ответ у мышей, иммунизированных 1,5 и 0,38 мкг адъювантной расщепленной Н5Ы1 вакцины, что позволило предположить, что в данной модели в присутствии адъюванта могут требоваться даже более низкие дозы НА для наблюдения влияния дозы на ответ.
Наблюдалось значительное усиление ответов СИ4+ Т-клеток у мышей, ранее не поверженных воздействию, при использовании А803-адъювантной пандемической Н5Ы1 вакцины по сравнению с простой Н5Ы1 вакциной. Не наблюдалось влияния разведения А803, когда дозу 0,38 мкг Н5Ы1 расщепленной вакцины использовали в качестве вакцины-кандидата, в то время как наблюдалось уменьшение ответов СИ4+ Т-клеток, когда 1,5 мкг расщепленной Н5Ы1 вакцины адъювантировали пониженной дозой А803.
Как отмечалось ранее, не наблюдалось различия гуморального и клеточного иммунных ответов у мышей, иммунизированных расщепленной Н5Ы1 вакциной (при любой дозе антигена), адъювантированной полной дозой А803 или А803/2. Некоторое усиление иммунного ответа было обнаружено, когда в вакцинной композиции использовали двойную полную дозу А803 и, соответственно, было обнаружено снижение иммунного ответа, когда в вакцинной композиции использовали А803/5.
В целом, данные, представленные в данном описании изобретения, подтверждают эффективность данной новой адъювантной системы в данной вакцинной композиции.
Пример VIII. Доклиническая оценка адъювантных и неадъювантных вакцин против гриппа у праймированных свиней Ьатде \У1Ше.
8.1. Дизайн и цель эксперимента.
Эксперимент на мышах, праймированных вирусом гриппа, проводили для оценки усиления посредством А803 гуморальных ответов, индуцированных вакцинами против гриппа, приготовленных в виде препарата с указанным адъювантом масло-в-воде.
Свиней использовали, чтобы оценить диапазон доз А803 в модели на животных, близкой человеку. Свиньи демонстрируют длинный перечень биологических аналогий, что определяет это животное как физиологически наиболее близкое к человеку с очень незначительными исключениями (Иоид1а8 К, 1972). Кроме того, у свиней обычно наблюдается проявление гриппозной инфекции.
8.1.1. Обработка/группа (табл. 17).
Группы из 10 взрослых самок большой белой свиньи праймировали в сутки 0 трехвалентным цельным вирусом гриппа, инактивированным формалином (25 мкг НА для каждого штамма), интраназально, общим объемом 200 мкл. Праймирующие штаммы состояли из штаммов, гомологичных вакцинным штаммам (25 мкг НА цельного инактивированного Н1Ы1 А/Ыете Са1ебоша/20/99, Н3Ы2 А/Рапата/2007/99 и В/81апдбопд/7/97). Через двадцать восемь суток свиней вакцинировали одной дозой вакцины-кандидата внутримышечно общим объемом 500 мкл. Свиней иммунизировали композициями, содержащими только расщепленные антигены (трехвалентная расщепленная простая), или композициями, содержащими расщепленные антигены, адъювантированные диапазоном доз А803 (полная, 1/2 или 1/5). Штаммы, использованные для иммунизаций, включали вирусные антигены Н1Ы1 А/Ыете Са1ебоша/20/99, Н3Ы2 А/Рапата/2007/99 и В/81апдбопд/7/97 (15 мкг НА для штаммов НШ1 А/Ыете Са1ебоша/20/99, Н3Ы2 А/Рапата/2007/99 и 17,5 мкг штамма В/81апдбопд/7/97 в качестве одной дозы, предназначенной для человека).
Группы (10 свиней/группа):
- 27 015817
Таблица 17
Группа | Антиген/Композиция | Другая обработка |
1 | Трехвалентный расщепленный /Простая (неадъювантная) | Гетерологическое праймирование ϋθ |
2 | Трехвалентный расщепленный / А803 | Гетерологическое праймирование □0 |
3 | Трехвалентный расщепленный /А803 1/2 | Гетерологическое праймирование ОО |
4 | Трехвалентный расщепленный/АЗОЗ 1/5 | Гетерологическое праймирование □0 |
8.1.2. Получение вакцинных композиций.
Трехвалентная расщепленная/простая.
Премикс Твина 80, Тритона Х100 и Витамина Е сукцината (УЕ8) готовят для достижения конечной концентрации в вакцине 750 мкг/мл Твина 80, 110 мкг/мл Тритона Х100 и 100 мкг/мл УЕ8. В количествах, использованных в премиксе, учитывают их содержание в штаммах.
Композицию одной дозы 500 мкл получают для немедленного применения согласно следующей последовательности: вода для инъекций + солевой буфер (10-кратно концентрированный РВ8 ρΗ 7,4, полученный как указано в примере IV) + премикс, 5 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре, + 15 мкг ΗΑ штамма Η1Ν1, 10 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре, + 15 мкг ΗΑ штамма Η3Ν2, 10 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре, + 17,5 мкг ΗΑ штамма В, 15 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре. Композиции вводят в течение часа после окончания их приготовления.
Трехвалентная расщепленная /Α803.
Премикс Твина 80, Тритона Х100 и Витамина Е сукцината (АЕ8) готовят для достижения конечной концентрации в вакцине 750 мкг/мл Твина 80, 110 мкг/мл Тритона Х100 и 100 мкг/мл АЕ8. В количествах, использованных в премиксе, учитывают их содержание в штаммах.
Композицию одной дозы 500 мкл получают для немедленного применения согласно следующей последовательности: вода для инъекций + солевой буфер (10-кратно концентрированный РВ8 ρΗ 7,4 получали, как указано в примере IV) + премикс, 5 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре, + 15 мкг ΗΑ штамма Η1Ν1, 10 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре, + 15 мкг ΗΑ штамма Η3Ν2, 10 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре, + 17,5 мкг ΗΑ штамма В, 15 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре, + 250 мкл эмульсии 8В62 для полной дозы Α803 или 125 мкл эмульсии 8В62 для 1/2 дозы Α803 или 50 мкл эмульсии 8В62 для 1/5 дозы Α803, 15 мин перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре. Композиции вводят в течение часа после окончания их приготовления.
8.1.3. Считывания (табл. 18).
Гуморальный иммунный ответ на вакцинацию измеряли перед интраназальным праймированием (сутки 0), перед иммунизацией (сутки 28) и через 14 суток после иммунизации (10 свиней/группа). Образцы сыворотки тестировали посредством теста ингибирования гемагглютинации (ΗΙ).
Таблица 18
Считывание | Время контроля | Тип образца | Метод анализа |
Гуморальные ответы | □0, 028, ϋ42 | Сыворотка | ΙΗΑ |
8.2. Результаты и выводы.
8.2.1. Гуморальный иммунитет.
Результаты представлены на фиг. 12. Независимо от разведения адъюванта Α803-адъювантные трехвалентные расщепленные композиции индуцировали более сильный ΗΙ-ответ на все штаммы, чем простая трехвалентная композиция в данной модели гомологичного праймирования, хотя статистическая значимость не всегда достигалась для всех трех штаммов. Влияние дозы адъюванта наблюдалось с незначительными различиями между штаммами. Для менее иммуногенных штаммов, таких как В/8Ьаидйоид, только трехвалентная расщепленная вакцина, адъювантированная полной дозой Α803, была значимо отличной от простой вакцины в отличие от трехвалентной расщепленной вакцины, адъювантированной полной дозой Α803, пониженная доза Α803 не увеличивала ΗΙ-титры для всех трех штаммов выше, чем простая вакцина.
Claims (12)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Иммуногенная композиция, содержащая антиген или антигенную композицию и адъювантную композицию, состоящую из эмульсии масло в воде, где указанная эмульсия масло в воде содержит 0,25-1,25% (об./об.) сквалена, 0,25-1,25% (об./об.) токола и 0,1-0,7% (об./об.) эмульгатора от общего объ- 28 015817 ема композиции.
- 2. Иммуногенная композиция по п.1, где токол представляет собой α-токоферол.
- 3. Иммуногенная композиция по любому из пп.1 или 2, где эмульгатор представляет собой полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат.
- 4. Иммуногенная композиция по п.3, где полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат выбран из группы, включающей Ро1увогЬа!е® 80 или Т\уееп® 80.
- 5. Иммуногенная композиция по любому из пп.1-4, где антиген или антигенную композицию получают из вируса гриппа.
- 6. Иммуногенная композиция по любому из пп.1-5, доза которой, предназначенная для введения человеку, составляет 0,4-1,5 мл.
- 7. Иммуногенная композиция по п.6, где объем дозы составляет 0,5 мл.
- 8. Иммуногенная композиция по п.6, где объем дозы составляет 0,7 мл.
- 9. Иммуногенная композиция по п.6, где объем дозы составляет 1,0 мл.
- 10. Применение иммуногенной композиции по любому из пп.1-9 в качестве лекарственного средства для использования в профилактической терапии или терапии состояния или заболевания человека.
- 11. Применение иммуногенной композиции по любому из пп.1-9 при изготовлении лекарственного средства для использования в профилактической терапии или терапии состояния или заболевания человека.
- 12. Способ лечения или предупреждения заболевания, включающий введение пациенту, страдающему от заболевания или подверженному ему, иммуногенной композиции по любому из пп.1-9.
Applications Claiming Priority (10)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB0620336.8A GB0620336D0 (en) | 2006-10-12 | 2006-10-12 | Vaccine |
GB0620337A GB0620337D0 (en) | 2006-10-12 | 2006-10-12 | Vaccine |
GB0620816A GB0620816D0 (en) | 2006-10-19 | 2006-10-19 | vaccine |
GB0620815A GB0620815D0 (en) | 2006-10-19 | 2006-10-19 | Vaccine |
PCT/EP2006/069977 WO2007071710A2 (en) | 2005-12-22 | 2006-12-20 | Vaccine comprising streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide conjugates |
PCT/EP2006/069979 WO2007071711A2 (en) | 2005-12-22 | 2006-12-20 | Vaccine |
GB0707697A GB0707697D0 (en) | 2007-04-20 | 2007-04-20 | Vaccine |
GB0711357A GB0711357D0 (en) | 2007-06-12 | 2007-06-12 | Vaccine |
GB0712062A GB0712062D0 (en) | 2007-06-21 | 2007-06-21 | Vaccine |
PCT/EP2007/060743 WO2008043774A1 (en) | 2006-10-12 | 2007-10-10 | Vaccine comprising an oil in water emulsion adjuvant |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA200900350A1 EA200900350A1 (ru) | 2009-10-30 |
EA015817B1 true EA015817B1 (ru) | 2011-12-30 |
Family
ID=40551582
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA200900350A EA015817B1 (ru) | 2006-10-12 | 2007-10-10 | Иммуногенная композиция, содержащая адъювант в виде эмульсии "масло в воде" |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20100183667A1 (ru) |
JP (2) | JP5230632B2 (ru) |
KR (1) | KR101151202B1 (ru) |
CN (1) | CN101522218B (ru) |
AU (1) | AU2007306381B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0717219B8 (ru) |
CA (1) | CA2664619C (ru) |
CR (1) | CR10726A (ru) |
DK (1) | DK2086582T3 (ru) |
EA (1) | EA015817B1 (ru) |
ES (1) | ES2397714T3 (ru) |
HR (1) | HRP20130023T1 (ru) |
IL (1) | IL197512A (ru) |
MA (1) | MA30866B1 (ru) |
MX (1) | MX2009003325A (ru) |
NO (1) | NO20091022L (ru) |
PT (1) | PT2086582E (ru) |
WO (1) | WO2008043774A1 (ru) |
Families Citing this family (71)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4812942B2 (ja) * | 1999-02-26 | 2011-11-09 | ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル | CGモチーフを含むオリゴヌクレオチドを用いるNeisseria抗原殺菌活性の増強 |
DE10144906B4 (de) | 2001-09-12 | 2013-11-28 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh | Verfahren zur großtechnischen Herstellung von Impfstoffen |
AU2006226543B2 (en) * | 2005-03-23 | 2011-10-06 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Use of an influenza virus an oil-in-water emulsion adjuvant to induce CD4 T-cell and/or improved B-memory cell response |
JP5639760B2 (ja) | 2006-07-17 | 2014-12-10 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | インフルエンザワクチン |
US20100183667A1 (en) * | 2006-10-12 | 2010-07-22 | Glaxo Smithkline Biologicals S.A. | Vaccine Comprising an Oil in Water Emulsion Adjuvant |
KR101192127B1 (ko) | 2006-11-03 | 2012-10-17 | 쉐링-프라우 리미티드 | 개 라임병 백신 |
AR066405A1 (es) * | 2007-04-20 | 2009-08-19 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacuna |
GB0714963D0 (en) | 2007-08-01 | 2007-09-12 | Novartis Ag | Compositions comprising antigens |
EP2268309B1 (en) | 2008-03-18 | 2015-01-21 | Novartis AG | Improvements in preparation of influenza virus vaccine antigens |
BRPI0910884A2 (pt) * | 2008-04-16 | 2015-10-06 | Glaxonsmithkline Biolog S A | composição imunogênica, método para tratar ou prevenir infecção ou doença estafilocócicas, e, uso de uma composição imunogênica. |
EP2271360B1 (en) * | 2008-04-16 | 2015-09-23 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Vaccine |
CA2735404C (en) | 2008-08-28 | 2013-04-16 | Novartis Ag | Production of squalene from hyper-producing yeasts |
JP2012502972A (ja) | 2008-09-18 | 2012-02-02 | ノバルティス アーゲー | ワクチンアジュバントの組み合わせ |
US20120093860A1 (en) | 2009-02-10 | 2012-04-19 | Novartis Ag | Influenza vaccines with increased amounts of h3 antigen |
ES2552383T3 (es) | 2009-02-10 | 2015-11-27 | Novartis Ag | Regímenes de vacuna de la gripe para cepas asociadas a pandemias |
EP3173097A3 (en) | 2009-02-10 | 2017-07-12 | Seqirus UK Limited | Influenza vaccines with reduced amounts of squalene |
SG2014014385A (en) | 2009-02-17 | 2014-04-28 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Inactivated dengue virus vaccine with aluminium-free adjuvant |
WO2010109324A1 (en) | 2009-03-24 | 2010-09-30 | Novartis Ag | Combinations of meningococcal factor h binding protein and pneumococcal saccharide conjugates |
CA3154626A1 (en) | 2009-04-14 | 2010-10-21 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Compositions for immunising against staphylococcus aureus |
WO2010133964A1 (en) | 2009-05-21 | 2010-11-25 | Novartis Ag | Reverse genetics using non-endogenous pol i promoters |
KR20120039047A (ko) | 2009-07-31 | 2012-04-24 | 노파르티스 아게 | 역유전학 시스템 |
GB0918392D0 (en) | 2009-10-20 | 2009-12-02 | Novartis Ag | Diagnostic and therapeutic methods |
EP2491117B2 (en) | 2009-10-20 | 2017-06-28 | Novartis AG | Improved reverse genetics methods for virus rescue |
GB0919117D0 (en) | 2009-10-30 | 2009-12-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Process |
GB0919690D0 (en) | 2009-11-10 | 2009-12-23 | Guy S And St Thomas S Nhs Foun | compositions for immunising against staphylococcus aureus |
JP6010463B2 (ja) | 2010-01-27 | 2016-10-19 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 改変された結核抗原 |
CN102802662A (zh) | 2010-03-18 | 2012-11-28 | 诺华有限公司 | 用于脑膜炎球菌血清组b的含佐剂疫苗 |
CN102892734B (zh) | 2010-05-12 | 2015-07-22 | 诺华股份有限公司 | 制备鲨烯的改良方法 |
WO2011145081A1 (en) | 2010-05-21 | 2011-11-24 | Novartis Ag | Influenza virus reassortment method |
GB201009861D0 (en) | 2010-06-11 | 2010-07-21 | Novartis Ag | OMV vaccines |
CN103533954B (zh) | 2011-03-02 | 2015-09-09 | 诺华股份有限公司 | 含较低剂量的抗原和/或佐剂的联合疫苗 |
AU2012324398A1 (en) | 2011-10-20 | 2014-05-01 | Seqirus UK Limited | Adjuvanted influenza B virus vaccines for pediatric priming |
US20140335507A1 (en) | 2011-12-12 | 2014-11-13 | Novartis Ag | Assays for influenza virus hemagglutinins |
JP2015500864A (ja) | 2011-12-23 | 2015-01-08 | ノバルティス アーゲー | 黄色ブドウ球菌(Staphylococcusaureus)に対して免疫するための安定な組成物 |
WO2013087945A2 (en) | 2012-03-02 | 2013-06-20 | Novartis Ag | Influenza virus reassortment |
CN104159602B (zh) | 2012-03-08 | 2017-10-24 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 加强疫苗的含佐剂制剂 |
JP6435261B2 (ja) | 2012-08-31 | 2018-12-05 | ノバルティス アーゲー | Staphylococcusaureusに対する免疫化のための安定化されたタンパク質 |
EP2890395A1 (en) | 2012-08-31 | 2015-07-08 | Novartis AG | Stabilised proteins for immunising against staphylococcus aureus |
CA2882619A1 (en) | 2012-09-06 | 2014-03-13 | Novartis Ag | Combination vaccines with serogroup b meningococcus and d/t/p |
GB201218195D0 (en) | 2012-10-10 | 2012-11-21 | Istituto Zooprofilattico Sperimentale Delle Venezie | Composition |
MX2015004652A (es) | 2012-10-12 | 2015-08-05 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Antigenos de pertusis acelulares no entrelazados para uso en vacunas de combinacion. |
BR112015012762A2 (pt) | 2012-11-30 | 2017-09-12 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | antígenos de pseudomonas e combinações de antígenos |
CN105120893B (zh) | 2012-12-03 | 2018-11-13 | 诺华股份有限公司 | 流感病毒重配 |
CN112807422A (zh) | 2012-12-05 | 2021-05-18 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 免疫原性组合物 |
CN105007935A (zh) | 2012-12-18 | 2015-10-28 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 用于保护免于白喉和/或破伤风的缀合物 |
BR112015021880A2 (pt) | 2013-03-13 | 2017-09-26 | Novartis Ag | rearranjo de vírus influenza b |
CA2903345A1 (en) * | 2013-03-19 | 2014-09-25 | Biotech Tools S.A. | Allergen preparation |
BR112015028314A2 (pt) | 2013-05-10 | 2017-09-19 | Steinman Lawrence | Prevenção do risco de narcolepsia em vacinas para gripe |
JP6505084B2 (ja) * | 2013-05-14 | 2019-04-24 | ゾエティス・サービシーズ・エルエルシー | 免疫刺激性オリゴヌクレオチドを含む新規のワクチン組成物 |
DE202013005100U1 (de) | 2013-06-05 | 2013-08-26 | Novartis Ag | Influenza Virus Reassortierung |
DE202013005130U1 (de) | 2013-06-05 | 2013-09-10 | Novartis Ag | Influenza Virus Reassortierung |
JP2016521553A (ja) | 2013-06-06 | 2016-07-25 | ノバルティス アーゲー | インフルエンザウイルス再集合 |
IL283554B (en) | 2014-01-21 | 2022-08-01 | Pfizer | Capsular polysaccharides of Streptococcus pneumoniae and their conjugates |
EP3639850A1 (en) | 2014-03-26 | 2020-04-22 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Mutant staphylococcal antigens |
CA2949881A1 (en) * | 2014-05-26 | 2015-12-03 | Becton Dickinson France | Method for storing an emulsion-adjuvanted vaccine in a lubricated medical injection device |
ES2861806T3 (es) | 2014-12-02 | 2021-10-06 | Novartis Ag | Fabricación de composiciones que contienen tensioactivo |
EP3320343B1 (en) | 2015-07-07 | 2020-09-02 | Seqirus UK Limited | Method for quantifying immunogenic hemagglutinin |
WO2017109698A1 (en) | 2015-12-22 | 2017-06-29 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic formulation |
WO2018058230A1 (en) | 2016-09-27 | 2018-04-05 | Immunovaccine Technologies Inc. | Methods of using low dose volume b-cell epitope compositions for inducing an antibody immune response in human subjects |
CN106511996B (zh) * | 2016-11-04 | 2019-09-10 | 江苏省农业科学院 | 用于口蹄疫疫苗的复乳型佐剂及其制备方法 |
WO2018144438A1 (en) | 2017-01-31 | 2018-08-09 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Methods for production of capsular polysaccharide protein conjugates from streptococcus pneumoniae serotype 19f |
CN109652384B (zh) * | 2019-02-21 | 2021-10-26 | 昆明理工大学 | 一种体外培养戊型肝炎病毒的方法 |
WO2021099419A1 (en) | 2019-11-18 | 2021-05-27 | Seqirus UK Limited | Method for producing reassortant influenza viruses |
KR20210117832A (ko) * | 2020-03-20 | 2021-09-29 | 강원대학교산학협력단 | Gla-se를 포함하는 수족구병 백신 조성물 |
EP4171629A1 (en) | 2020-06-29 | 2023-05-03 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Adjuvants |
MX2023002356A (es) | 2020-08-24 | 2023-03-22 | Sanofi Pasteur Inc | Vacunas contra la covid-19 con coadyuvantes en emulsion de escualeno que contiene tocoferol. |
US20240165224A1 (en) | 2021-03-26 | 2024-05-23 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic compositions |
WO2023020994A1 (en) | 2021-08-16 | 2023-02-23 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Novel methods |
WO2023020993A1 (en) | 2021-08-16 | 2023-02-23 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Novel methods |
WO2023020992A1 (en) | 2021-08-16 | 2023-02-23 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Novel methods |
KR20240033309A (ko) * | 2022-09-05 | 2024-03-12 | 주식회사 차백신연구소 | 에멀전 제형의 면역증강제 조성물 및 이의 제조 방법 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0399843A2 (en) * | 1989-05-25 | 1990-11-28 | Chiron Corporation | Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion |
WO1995017210A1 (en) * | 1993-12-23 | 1995-06-29 | Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) | Vaccines |
US20030133944A1 (en) * | 2001-04-05 | 2003-07-17 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Vaccine composition against malaria |
WO2006100110A1 (en) * | 2005-03-23 | 2006-09-28 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Novel composition |
Family Cites Families (62)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2905287A1 (de) | 1979-02-12 | 1980-08-21 | Siemens Ag | Verfahren zur automatischen elektrochemischen endpunktsbestimmung einer titration |
US4235877A (en) | 1979-06-27 | 1980-11-25 | Merck & Co., Inc. | Liposome particle containing viral or bacterial antigenic subunit |
US4454119A (en) | 1981-06-29 | 1984-06-12 | Mitsubishi Chemical Industries Limited | Therapeutic agents |
FI69639C (fi) * | 1982-07-02 | 1986-03-10 | Orion Yhtymae Oy | Preparat foer anvaendning vid klamydia-diagnostik |
US4596556A (en) | 1985-03-25 | 1986-06-24 | Bioject, Inc. | Hypodermic injection apparatus |
FI861417A0 (fi) | 1985-04-15 | 1986-04-01 | Endotronics Inc | Hepatitis b ytantigen framstaelld med rekombinant-dna-teknik, vaccin, diagnostiskt medel och cellinjer samt foerfaranden foer framstaellning daerav. |
EP0362278A4 (en) | 1987-06-05 | 1990-05-14 | Us Health | FACTORS OF AUTOCRINE MOTILITY IN THE DIAGNOSIS AND TREATMENT OF CANCER. |
US4790824A (en) | 1987-06-19 | 1988-12-13 | Bioject, Inc. | Non-invasive hypodermic injection device |
US4940460A (en) | 1987-06-19 | 1990-07-10 | Bioject, Inc. | Patient-fillable and non-invasive hypodermic injection device assembly |
US4941880A (en) | 1987-06-19 | 1990-07-17 | Bioject, Inc. | Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly |
EP0304578B1 (en) | 1987-06-22 | 2001-10-24 | Medeva Holdings Bv | Peptide comprising hepatitis B surface antigen |
US5339163A (en) | 1988-03-16 | 1994-08-16 | Canon Kabushiki Kaisha | Automatic exposure control device using plural image plane detection areas |
US5278302A (en) | 1988-05-26 | 1994-01-11 | University Patents, Inc. | Polynucleotide phosphorodithioates |
GB8819209D0 (en) | 1988-08-12 | 1988-09-14 | Research Corp Ltd | Polypeptide & dna encoding same |
US4999403A (en) | 1988-10-28 | 1991-03-12 | Exxon Chemical Patents Inc. | Graft polymers of functionalized ethylene-alpha-olefin copolymer with polypropylene, methods of preparation, and use in polypropylene compositions |
DE68929323T2 (de) | 1988-12-16 | 2002-04-18 | De Staat Der Nederlanden Vertegenwoordigd Door De Minister Van Welzijn, Volksgezondheid En Cultuur | Pneumolysin-mutanten und pneumokokken-impfstoffe daraus |
ES2068989T3 (es) | 1989-02-04 | 1995-05-01 | Akzo Nobel Nv | Tocoles como adyuvante en vacunas. |
EP0414374B1 (en) | 1989-07-25 | 1997-10-08 | Smithkline Biologicals S.A. | Novel antigens and methods for their preparation |
US5312335A (en) | 1989-11-09 | 1994-05-17 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
US5064413A (en) | 1989-11-09 | 1991-11-12 | Bioject, Inc. | Needleless hypodermic injection device |
EP0468520A3 (en) | 1990-07-27 | 1992-07-01 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Immunostimulatory remedies containing palindromic dna sequences |
GB9118204D0 (en) | 1991-08-23 | 1991-10-09 | Weston Terence E | Needle-less injector |
ES2129461T3 (es) | 1991-11-16 | 1999-06-16 | Smithkline Beecham Biolog | Proteina hibrida entre cs de plasmodium y hbsag. |
US5383851A (en) | 1992-07-24 | 1995-01-24 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
US5569189A (en) | 1992-09-28 | 1996-10-29 | Equidyne Systems, Inc. | hypodermic jet injector |
US5334144A (en) | 1992-10-30 | 1994-08-02 | Becton, Dickinson And Company | Single use disposable needleless injector |
AU685443B2 (en) | 1993-03-23 | 1998-01-22 | Smithkline Beecham Biologicals (Sa) | Vaccine compositions containing 3-O deacylated monophosphoryl lipid A |
US5688506A (en) | 1994-01-27 | 1997-11-18 | Aphton Corp. | Immunogens against gonadotropin releasing hormone |
WO1995024176A1 (en) | 1994-03-07 | 1995-09-14 | Bioject, Inc. | Ampule filling device |
US5466220A (en) | 1994-03-08 | 1995-11-14 | Bioject, Inc. | Drug vial mixing and transfer device |
WO1995026204A1 (en) | 1994-03-25 | 1995-10-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs |
US5599302A (en) | 1995-01-09 | 1997-02-04 | Medi-Ject Corporation | Medical injection system and method, gas spring thereof and launching device using gas spring |
EP0812358A1 (en) | 1995-02-24 | 1997-12-17 | Cantab Pharmaceuticals Research Limited | Polypeptides useful as immunotherapeutic agents and methods of polypeptide preparation |
UA56132C2 (ru) | 1995-04-25 | 2003-05-15 | Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. | Композиция вакцины (варианты), способ стабилизации qs21 по отношению к гидролизу (варианты), способ приготовления вакцины |
US5730723A (en) | 1995-10-10 | 1998-03-24 | Visionary Medical Products Corporation, Inc. | Gas pressured needle-less injection device and method |
US5843464A (en) | 1995-06-02 | 1998-12-01 | The Ohio State University | Synthetic chimeric fimbrin peptides |
US5666153A (en) | 1995-10-03 | 1997-09-09 | Virtual Shopping, Inc. | Retractable teleconferencing apparatus |
US5893397A (en) | 1996-01-12 | 1999-04-13 | Bioject Inc. | Medication vial/syringe liquid-transfer apparatus |
GB9607549D0 (en) | 1996-04-11 | 1996-06-12 | Weston Medical Ltd | Spring-powered dispensing device |
ZA975326B (en) | 1996-06-18 | 1998-01-14 | Alza Corp | Device and method for enhancing transdermal flux of agents being delivered or sampled. |
US5980898A (en) | 1996-11-14 | 1999-11-09 | The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command | Adjuvant for transcutaneous immunization |
CA2271167C (en) | 1996-12-20 | 2007-01-09 | Alza Corporation | Device and method for enhancing transdermal agent flux |
US6130043A (en) | 1997-05-02 | 2000-10-10 | Abbott Laboratories | Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate |
US5993412A (en) | 1997-05-19 | 1999-11-30 | Bioject, Inc. | Injection apparatus |
JP2001510031A (ja) | 1997-07-21 | 2001-07-31 | ノース・アメリカン・ヴァクシン・インコーポレーテッド | ワクチンとしての修飾された免疫原ニューモリシン組成物 |
GB9717953D0 (en) | 1997-08-22 | 1997-10-29 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
GB9718901D0 (en) | 1997-09-05 | 1997-11-12 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
DE69838992T2 (de) | 1997-09-05 | 2008-12-24 | Glaxosmithkline Biologicals S.A., Rixensart | Öl-in-Wasser Emulsionen mit Saponinen |
US7459524B1 (en) | 1997-10-02 | 2008-12-02 | Emergent Product Development Gaithersburg Inc. | Chlamydia protein, sequence and uses thereof |
AU754264B2 (en) | 1997-11-28 | 2002-11-07 | Genset S.A. | Chlamydia trachomatis genomic sequence and polypeptides, fragments thereof and uses thereof, in particular for the diagnosis, prevention and treatment of infection |
CN1285753A (zh) | 1997-12-02 | 2001-02-28 | 鲍德杰克特疫苗公司 | 透皮给药微粒疫苗组合物 |
IT1298087B1 (it) | 1998-01-08 | 1999-12-20 | Fiderm S R L | Dispositivo per il controllo della profondita' di penetrazione di un ago, in particolare applicabile ad una siringa per iniezioni |
JP4227302B2 (ja) | 1998-04-07 | 2009-02-18 | コリクサ コーポレイション | Mycobacteriumtuberculosis抗原の融合タンパク質およびその使用 |
US6319224B1 (en) | 1999-08-20 | 2001-11-20 | Bioject Medical Technologies Inc. | Intradermal injection system for injecting DNA-based injectables into humans |
GB9923176D0 (en) * | 1999-09-30 | 1999-12-01 | Smithkline Beecham Biolog | Novel composition |
US6494865B1 (en) | 1999-10-14 | 2002-12-17 | Becton Dickinson And Company | Intradermal delivery device including a needle assembly |
JP2001316251A (ja) * | 2000-02-24 | 2001-11-13 | Fuairudo Kk | 炭素燃焼残査の超微粒子を含むスクワラン及びその製造方法 |
GB0025577D0 (en) * | 2000-10-18 | 2000-12-06 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
DE60230340D1 (de) | 2001-11-16 | 2009-01-22 | 3M Innovative Properties Co | N-Ä4-(4-Amino-2-ethyl-1H-imidazoÄ4,5-cÜchinolin-1-yl)butylÜmethanesulfonamide, diese enthaltende pharmazeutische Zusammensetzung und deren Verwendung |
EP2377552A3 (en) * | 2005-11-04 | 2013-05-15 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Influenza vaccines with reduced amount of emulsion adjuvant |
US20100183667A1 (en) * | 2006-10-12 | 2010-07-22 | Glaxo Smithkline Biologicals S.A. | Vaccine Comprising an Oil in Water Emulsion Adjuvant |
AR066405A1 (es) * | 2007-04-20 | 2009-08-19 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacuna |
-
2007
- 2007-10-10 US US12/445,090 patent/US20100183667A1/en not_active Abandoned
- 2007-10-10 EA EA200900350A patent/EA015817B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2007-10-10 DK DK07821111.7T patent/DK2086582T3/da active
- 2007-10-10 JP JP2009531831A patent/JP5230632B2/ja active Active
- 2007-10-10 PT PT78211117T patent/PT2086582E/pt unknown
- 2007-10-10 CN CN200780038231XA patent/CN101522218B/zh active Active
- 2007-10-10 ES ES07821111T patent/ES2397714T3/es active Active
- 2007-10-10 BR BRPI0717219A patent/BRPI0717219B8/pt active IP Right Grant
- 2007-10-10 MX MX2009003325A patent/MX2009003325A/es active IP Right Grant
- 2007-10-10 KR KR1020097009716A patent/KR101151202B1/ko active IP Right Grant
- 2007-10-10 CA CA2664619A patent/CA2664619C/en active Active
- 2007-10-10 WO PCT/EP2007/060743 patent/WO2008043774A1/en active Application Filing
- 2007-10-10 AU AU2007306381A patent/AU2007306381B2/en active Active
-
2009
- 2009-03-10 IL IL197512A patent/IL197512A/en active IP Right Grant
- 2009-03-10 NO NO20091022A patent/NO20091022L/no not_active Application Discontinuation
- 2009-04-17 CR CR10726A patent/CR10726A/es not_active Application Discontinuation
- 2009-05-06 MA MA31843A patent/MA30866B1/fr unknown
-
2012
- 2012-12-13 JP JP2012272452A patent/JP5767201B2/ja active Active
-
2013
- 2013-01-14 HR HRP20130023TT patent/HRP20130023T1/hr unknown
-
2015
- 2015-01-09 US US14/593,911 patent/US9700605B2/en active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0399843A2 (en) * | 1989-05-25 | 1990-11-28 | Chiron Corporation | Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion |
WO1995017210A1 (en) * | 1993-12-23 | 1995-06-29 | Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) | Vaccines |
US20030133944A1 (en) * | 2001-04-05 | 2003-07-17 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Vaccine composition against malaria |
WO2006100110A1 (en) * | 2005-03-23 | 2006-09-28 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Novel composition |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR101151202B1 (ko) | 2012-06-11 |
IL197512A (en) | 2013-10-31 |
NO20091022L (no) | 2009-04-27 |
DK2086582T3 (da) | 2013-02-04 |
ES2397714T3 (es) | 2013-03-08 |
JP5230632B2 (ja) | 2013-07-10 |
CN101522218B (zh) | 2012-09-26 |
MX2009003325A (es) | 2009-04-09 |
JP2010505907A (ja) | 2010-02-25 |
US9700605B2 (en) | 2017-07-11 |
BRPI0717219B1 (pt) | 2021-01-19 |
US20100183667A1 (en) | 2010-07-22 |
CR10726A (es) | 2009-05-25 |
PT2086582E (pt) | 2013-01-25 |
JP2013067646A (ja) | 2013-04-18 |
CA2664619A1 (en) | 2008-04-17 |
HRP20130023T1 (hr) | 2013-02-28 |
KR20090066323A (ko) | 2009-06-23 |
WO2008043774A1 (en) | 2008-04-17 |
BRPI0717219B8 (pt) | 2021-05-25 |
CA2664619C (en) | 2012-12-11 |
BRPI0717219A2 (pt) | 2015-05-26 |
AU2007306381B2 (en) | 2011-12-08 |
AU2007306381A1 (en) | 2008-04-17 |
JP5767201B2 (ja) | 2015-08-19 |
IL197512A0 (en) | 2011-08-01 |
EA200900350A1 (ru) | 2009-10-30 |
CN101522218A (zh) | 2009-09-02 |
MA30866B1 (fr) | 2009-11-02 |
US20150359863A1 (en) | 2015-12-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EA015817B1 (ru) | Иммуногенная композиция, содержащая адъювант в виде эмульсии "масло в воде" | |
KR101916787B1 (ko) | Cd4 t-세포 및/또는 개선된 b-메모리 세포 반응을 유도하는 인플루엔자 바이러스 및 수중유 에멀젼 애주번트의 용도 | |
JP5461015B2 (ja) | サポニンアジュバントを含むワクチン組成物 | |
CN101815505B (zh) | 包含来自细胞系产生的流感病毒的红血球凝聚素的病毒颗粒、组合物、制造方法和它们的应用 | |
ES2307494T3 (es) | Vacuna del virus de la gripe inactivo para su administracion via nasalu oral. | |
JP5300475B2 (ja) | 熱可逆性免疫アジュバントエマルション | |
Metzger et al. | Impact of vector-priming on the immunogenicity of a live recombinant Salmonella enterica serovar typhi Ty21a vaccine expressing urease A and B from Helicobacter pylori in human volunteers | |
Couch et al. | Improvement of inactivated influenza virus vaccines | |
ES2553113T3 (es) | Vacuna | |
EA024250B1 (ru) | Дозированная форма иммуногенного препарата против гриппа для применения у человека и содержащая её вакцина, способы их приготовления и их применение для лечения или предупреждения заболеваний, вызываемых вирусом гриппа у людей | |
JP5918870B2 (ja) | インフルエンザに対する改善されたワクチン接種 | |
UA98612C2 (ru) | Иммуногенная композиция, пригодная для человека, включающая антиген или антигенный препарат в комбинации с адъювантом, содержащим qs21 в форме липосомы и 3d-mpl | |
Cox et al. | Development of an influenza-ISCOM™ vaccine | |
EP2086582B1 (en) | Vaccine comprising an oil in water emulsion adjuvant | |
BRPI0609516A2 (pt) | uso de um vìrus de influenza ou preparação antigênica do mesmo e um adjuvante de emulsão de óleo-em-água, e, método para projetar uma vacina para doenças conhecidas por serem curadas ou tratadas por meio de uma ativação de células tcd4+ |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ KG MD TJ TM |