EA015676B1 - Композиции и способы ингибирования экспрессии гена pcsk9 - Google Patents
Композиции и способы ингибирования экспрессии гена pcsk9 Download PDFInfo
- Publication number
- EA015676B1 EA015676B1 EA200870528A EA200870528A EA015676B1 EA 015676 B1 EA015676 B1 EA 015676B1 EA 200870528 A EA200870528 A EA 200870528A EA 200870528 A EA200870528 A EA 200870528A EA 015676 B1 EA015676 B1 EA 015676B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- dsrna
- pc8k9
- gene
- sequence
- expression
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
- C12N2310/111—Antisense spanning the whole gene, or a large part of it
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/322—2'-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/332—Abasic residue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
- C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Virology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Obesity (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (дцРНК) для ингибирования экспрессии гена пропротеин-конвертазы субтилизин-кексина 9 (PCSK9), где указанная дцРНК включает в себя антисмысловую цепь, имеющую нуклеотидную последовательность длиной менее чем в 30 нуклеотидов, обычно 19-25 нуклеотидов, и, по существу, комплементарную по меньшей мере части гена PCSK9. Настоящее изобретение относится также к фармацевтической композиции, содержащей дцРНК в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, и к способам лечения заболеваний, вызываемых экспрессией гена PCSK9, с использованием указанной фармацевтической композиции.
Description
Настоящее изобретение относится к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (дцРНК) и к ее применению в опосредовании интерференции РНК для ингибирования экспрессии гена РС8К9, а также к применению дцРНК для лечения патологических состояний, которые могут быть модулированы посредством ингибирования РС8К9, таких как гиперлипидемия.
Предшествующий уровень техники
Пропротеин-конвертаза субтилизин-кексин 9 (РС8К9) является членом семейства сериновых протеаз субтилизинов. Другие восемь субтилизиновых протеаз, РС8К1-РС8К8 (также называемых РС1/3, РС2, фурин, РС4, РС5/6, РАСЕ4, РС7 и 81Р/8К1-1), представляют собой пропротеин-конвертазы, которые направляют белки широкого ряда на секреторный путь и играют определенную роль в различных биологических процессах (Ветдегои, Е. (2000), 1. Μοί. Εηάοετίηοΐ. 24, 1-22, СеикЬегд, К. (1998), 8етш. Се11 Бет. Вю1. 9, 11-17, 8е1бак, N.6. (1999), Вташ Кек. 848, 45-62, Тау1ог, Ν.Α. (2003), ЕА8ЕВ 1. 17, 1215-1227 и ΖΙιοιι. А. (1999), 1. Βίο1. Скет. 274, 20745-20748). Было высказано предположение, что РС8К9 играет определенную роль в метаболизме холестерина. Экспрессия мРНК РС8К9 ингибировалась после кормления мышей холестеринсодержащей пищей (Мах^е11, К.К (2003), 1. Б1р1б Кек. 44, 2109-2119), активируется статинами в клетках Нер62 (ПиЬис, 6. (2004), Аг1егюкс1ег. ТкготЬ. Уаке. Βίο1. 24, 1454-1459) и активируется белком, связывающимся со стеролрегулирующим элементом у трансгенных мышей (8КЕВЕ) (ΗοτΙοη, ΕΌ. (2003), Ргос. №11. Асаб. 8с1. И8А 100, 12027-12032), аналогично действию ферментов биосинтеза холестерина и рецептора липопротеина низкой плотности (БЭБ-В). Кроме того, было обнаружено, что миссценс-мутации РС8К9 ассоциируются с гиперхолестеринемией, наследуемой по аутосомнодоминантному типу (НсМаЭ) (АЫГабек М., е1 а1. (2003), №1. 6еие1, 34, 154-156, Т1ттк, К.М. (2004), Нит. 6еие1 114, 349-353, Бегеи, Т.Р. (2004), Сйи. 6еие1. 65, 419-422). РС8К9 может также имеет важное значение в определении уровней холестерина ЛНП у всего населения, поскольку, как наблюдалось у населения Японии, полиморфизм в один нуклеотид (8ΝΓ) обычно влияет на уровни холестерина (8Ηίο_)ί, К. (2004), 1. Нит. Сеие1. 49, 109-114).
Аутосомно-доминантная гиперхолистеринемия (АЭН) представляет собой моногенное заболевание, при котором у пациентов наблюдается повышение уровня общего холестерина и холестерина ЛНП и развитие ксантом сухожилий, а также наблюдается атеросклероз у недоношенных новорожденных (Кабег, Ό.Ι. (2003), 1. С1ш. ВгсекБ 111, 1795-1803). Патогенез АЭН и его рецессивной формы, аутосомнорецессивной гиперхолистеринемии (АКН) (Εοίκο, ЕС. (2003), Сигг. Орш. Είρί6ο1. 14, 121-127), обусловлен нарушением поглощения ЛНП печенью. АЭН может быть вызвана мутациями ЛНПР, которые препятствуют поглощению ЛНП, или мутациями в белке, присутствующем на ЛНП, а именно на аполипопротеине В, который связывается с ЛНПР. АКН вызывается мутациями в белке АКН, который необходим для осуществления эндоцитоза комплекса ЛНПР-ЛНП посредством его взаимодействия с клатрином. Поэтому если мутации РС8К9 являются этиологическим фактором заболеваний группы Ηс1ю1а3. то очевидно, что РС8К9 играет определенную роль в опосредуемом рецептором поглощении ЛНП.
Исследования сверхэкспрессии показали, что РС8К9 играет определенную роль в регуляции уровней ЛНПР, а следовательно, и в поглощении ЛНП печенью (Мах^е11 К.К (2004), Ргос. №11. Асаб. 8сБ И8А, 101, 7100-7105, Веи)аиие1, 8., е1 а1. (2004), 1. Вю1. Скет. 279, 48865-18875, Рагк, 8.ν. (2004), 1. Вю1. Скет. 279, 50630-50638). У мышей опосредуемая аденовирусом сверхэкспрессия мышиного или человеческого РС8К9, наблюдаемая в течение 3 или 4 дней, приводит к повышению уровней общего холестерина и холестерина ЛНП; при этом такой эффект не наблюдается у животных, не содержащих ЛНПР (Ма\\\е11 К.К (2004), Ргос. №11. Асаб. 8сБ И8А, 101, 7100-7105, Веи^аиие!, 8., е1 а1. (2904), 1. Вю1. Скет. 279, 48865-48875, Рагк, 8.XV. (2004), 1. Вю1. Скет. 279, 50630-50638). Кроме того, сверхэкспрессия РС8К9 приводит к значительному снижению уровня белка ЛНПР в печени, но не влияет на уровни мРНК ЛНПР, уровни белка 8КЕВР или на отношение ядерного белка 8КЕВР к цитоплазматическому белку 8КЕВР. Полученные результаты показали, что РС8К9 прямо или опосредованно снижает уровни белка ЛНПР по посттрансляционному механизму.
Мутации, приводящие к потере функций в РС8К9, были смоделированы на мышах (КакЫб е1 а1. (2005), РNΑ8, 102, 5374-5379) и идентифицированы у человека (Сгокеи е1 а1. (2005), №1ите Сеиекск. 37.161-165). В обоих случаях потеря функции РС8К9 приводит к снижению уровней общего холестерина и холестерина ЛНП. Результаты ретроспективных исследований, проводимых в течение 15 лет, показали, что утрата одной копии РС8К9 приводит к снижению уровня ЛНП и к увеличению степени защиты от развития сердечно-сосудистых заболеваний (Сгокеи е1 а1. 2006, Ν. Еид1. 1. Меб., 354, 1264-1272). В настоящее время имеются неопровержимые данные, которые указывают на то, что снижение уровней
- 1 015676
РС8К9 приводит к снижению уровней ЛНП.
Недавно было показано, что молекулы двухцепочечной РНК (дцРНК) блокируют экспрессию генов по высококонсервативному регуляторному механизму, известному как интерференция РНК (РНКи). В \νϋ 99/32619 (Иге е! а1.) описано применение дцРНК длиной по меньшей мере 25 нуклеотидов для ингибирования экспрессии генов у С. е1едаи8. Было также показано, что дцРНК разрушает РНК-мишень в других организмах, включая растения (см., например, νθ 99/53050, ’№а1егйои8е е! а1.; νθ 99/61631, НсИСи е! а1.), дрозофилу (Эго5орЫ1а) (см., например, Уапд, Ό., е! а1., Сигг. Бю1. (2000), 10:1191-1200) и млекопитающих (см. νθ 00/44895, Ытшег; ΌΕ 10100586.5, КгеШхег е! а1.). Такой природный механизм был положен в основу разработки нового класса фармацевтических средств для лечения расстройств, вызываемых нарушением регуляции гена или нежелательной регуляцией гена.
Несмотря на значительные успехи в области исследования интерференции РНК (РНКи) и успехи в лечении патологичесих состояний, которые могут быть модулированы негативной регуляцией экспрессии гена РС8К9, необходимость в разработке средств, которые могут ингибировать экспрессию гена РС8К9 и которые могут быть применены для лечения заболеваний, ассоциированных с экспрессией гена РС8К9, таких как гиперлипидемия, остается актуальной.
Описание сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к решению проблемы, связанной с лечением заболеваний, которые могут быть модулированы путем ингибирования пропротеин-конвертазы субтилизин-кексина 9 (РС8К9) с использованием двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) для подавления экспрессии РС8К9.
Настоящее изобретение относится к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (дцРНК), а также к композициям и к способам, применяемым в целях ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетках или у млекопитающих с использованием такой дцРНК. Настоящее изобретение также относится к композициям и к способам, применяемым для лечения патологических состояний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии гена РС8К9, таких как гиперлипидемия. дцРНК согласно изобретению содержит цепь РНК (антисмысловую цепь), имеющую область длиной менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов, и является в основном комплементарной по меньшей мере части мРНК-транскрипта гена РС8К9.
В одном из своих вариантов настоящее изобретение относится к молекулам двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК), ингибирующим экспрессию гена РС8К9. дцРНК содержит по меньшей мере две последовательности, комплементарные друг другу. дцРНК содержит смысловую цепь, включающую первую последовательность, и антисмысловую цепь, включающую вторую последовательность. Антисмысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность, в основном комплементарную по меньшей мере части мРНК, кодирующей РС8К9, где указанная область комплементарности имеет длину менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов. дцРНК после ее контактирования с клеткой, экспрессирующей РС8К9, ингибирует экспрессию гена РС8К9 по меньшей мере на 40%.
Так, например, молекулы дцРНК согласно изобретению могут состоять из первой последовательности дцРНК, выбранной из группы, состоящей из смысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2, и из второй последовательности, выбранной из группы, состоящей из антисмысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2. Молекулы дцРНК согласно изобретению могут состоять из природных нуклеотидов, либо они могут состоять по меньшей мере из одного модифицированного нуклеотида, такого как 2'-О-метилмодифицированный нуклеотид; нуклеотид, содержащий 5'-фосфортиоатную группу, и концевой нуклеотид, присоединенный к холестериловому производному. Альтернативно, модифицированный нуклеотид может быть выбран из группы, состоящей из 2'-дезокси2'-фтормодифицированного нуклеотида, 2'-дезоксимодифицированного нуклеотида, блокированного нуклеотида, неосновного нуклеотида, 2'-аминомодифицированного нуклеотида, 2'-алкилмодифицированного нуклеотида, морфолинонуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, содержащего неприродное основание. Обычно такую модифицированную последовательность получают на основе первой последовательности указанной дцРНК, выбранной из группы, состоящей из смысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2, и второй последовательности, выбранной из группы, состоящей из антисмысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2.
В другом своем варианте настоящее изобретение относится к клетке, содержащей одну из дцРНК согласно изобретению. Такой клеткой обычно является клетка млекопитающего, такая как человеческая клетка.
В другом своем варианте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, предназначенной для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в организме, обычно в организме человека, где указанная композиция содержит одну или несколько дцРНК согласно изобретению и фармацевтически примемлемый носитель или носитель для доставки.
В другом своем варианте настоящее изобретение относится к способу ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетке, где указанный способ включает следующие стадии:
(а) введение в клетку двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК), где указанная дцРНК содержит по меньшей мере две последовательности, комплементарные друг другу. дцРНК содержит
- 2 015676 смысловую цепь, включающую первую последовательность, и антисмысловую цепь, включающую вторую последовательность. Антисмысловая цепь содержит область комплементарности, которая в основном комплементарна по меньшей мере части мРНК, кодирующей РС8К9, где указанная комплементарная область имеет длину менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов, и где указанная дцРНК после ее контактирования с клеткой, экспрессирующей РС8К9, ингибирует экспрессию гена РС8К9 по меньшей мере на 40%; и (Ь) поддержание клетки, продуцированной в стадии (а), в течение определенного периода времени, достаточного для разрушения мРНК-транскрипта гена РС8К9 и тем самым ингибирования экспрессии гена РС8К9 в указанной клетке.
В другом своем варианте настоящее изобретение относится к способам лечения, предупреждения или подавления патологических состояний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии гена РС8К9, например гиперлипидемии, где указанные способы включают введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, предупреждении или подавлении, терапевтически или профилактически эффективного количества одной или нескольких дцРНК согласно изобретению.
В другом своем варианте настоящее изобретение относится к векторам для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетке, где указанные векторы содержат регуляторную последовательность, функционально присоединенную к нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере одну цепь одной из дцРНК согласно изобретению.
В другом своем варианте настоящее изобретение относится к клетке, содержащей вектор для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетке. Указанный вектор содержит регуляторную последовательность, функционально присоединенную к нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере одну цепь одной из дцРНК согласно изобретению.
Краткое описание графического материала
На фиг. 1 представлена структура липида ΝΏ-98.
На фиг. 2 представлены результаты ίη νίνο скрининга 16 киРНК, специфических к мышиному РС8К9 (АЬ-ОР-9327-АЬ-ОР-9342), направленных против различных областей ОРС мРНК РС8К9 (имеющих первый нуклеотид, соответствующий положению ОРС, как показано на графике), у мышей С57/ВЬ6 (5 животных/группу). Отношение мРНК РС8К9 к мРНК СЛРЭН в лизатах печени усредняли для каждой группы обработки и сравнивали с контрольной группой, обработанной РВ8, или с контрольной группой, обработанной неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII).
На фиг. 3 представлены результаты ίη νίνο скрининга 16 человеческих/мышиных/крысиных перекрестно-реактивных РС8К9-специфических киРНК (АЬ-ЭР-9311-АЬ-ЭР-9326), направленных против различных областей ОРС мРНК РС8К9 (имеющих первый нуклеотид, соответствующий положению ОРС, как показано на графике) у мышей С57/ВЬ6 (5 животных/группу). Отношение мРНК РС8К9 к мРНК СЛРЭН в лизатах печени усредняли для каждой группы обработки и сравнивали с контрольной группой, обработанной РВ8, или с контрольной группой, обработанной неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII).
Сайленсинг мРНК РС8К9 приводил к снижению общего уровня холестерина в сыворотке.
Наибольшая эффективность в ингибировании киРНК-транскрипта РС8К9 выражается в наиболее заметном снижении уровня холестерина (примерно на 20-30%).
На фиг. 4 представлены результаты ίη νίνο скрининга 16 киРНК, специфических к мышиному РС8К9 (АЬ-ОР-9327-АЬ-ОР-9342) у мышей С57/ВЬ6 (5 животных/группу). Общие уровни холестерина в сыворотке усредняли для каждой группы обработки и сравнивали с контрольной группой, обработанной РВ8, или с контрольной группой, обработанной неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII).
На фиг. 5 представлены результаты ίη νίνο скрининга 16 человеческих/мышиных/крысиных перекрестно-реактивных РС8К9-специфических киРНК (АЬ-ОР-9311-АЬ-ОР-9326) у мышей С57/ВЬ6 (5 животных/группу). Общие уровни холестерина в сыворотке усредняли для каждой группы обработки и сравнивали с контрольной группой, обработанной РВ8, или с контрольной группой, обработанной неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII).
На фиг. 6 проиллюстрировано сравнение результатов ίη νίΐτο и ίη νίνο, полученных для сайленсинга РС8К9.
На фиг. 7А и 7В представлены результаты, полученные ίη νίίτο для сайленсинга РС8К9 с использованием первичных гепатоцитов обезьян.
На фиг. 8 проиллюстрирована ίη νίνο активность киРНК, полученных в виде липосомных препаратов Ь№-01 и направленных против рсзк-9.
На фиг. 9 проиллюстрирована ίη νίνο активность препаратов Ь№-01, содержащих химически модифицированные родительские молекулы 9314 и 10792 в различные периоды времени. Было выявлено, что модифицированные варианты 10792 обнаруживают активность в сайленсинге ίη νίνο.
- 3 015676
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к решению проблемы, связанной с лечением заболеваний, которые могут быть модулированы путем ингибирования гена РС8К9 с использованием двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) для подавления экспрессии гена РС8К9 и тем самым для лечения таких заболеваний, как гиперлипидемия.
Настоящее изобретение относится к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (дцРНК), а также к композициям и к способам, применяемым для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетках или у млекопитающих с использованием такой дцРНК. Настоящее изобретение также относится к композициям и к способам, применяемым для лечения патологических состояний и заболевания, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии гена РС8К9. дцРНК регулирует последовательность-специфическое разрушение мРНК по механизму, известному как интерференция РНК (РНКи). дцРНК согласно изобретению включает цепь РНК (антисмысловую цепь), которая имеет область длиной менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов, и в основном комплементарна по меньшей мере части мРНК-транскрипта гена РС8К9. Применение таких дцРНК позволяет осуществлять направленное разрушение мРНК, которое приводит к транспорту натрия. С помощью клеточных анализов и анализов, проводимых на животных, авторами настоящего изобретения было продемонстрировано, что очень низкие дозы этих дцРНК могут специфически и эффективно опосредовать РНКи, что будет приводить к значительному ингибированию экспрессии гена РС8К9. Таким образом, указанные способы и композиции согласно изобретению, в которых используются эти дцРНК, могут быть применены для лечения патологических состояний, которые могут быть модулированы путем ингибирования РС8К9, например, для лечения гиперлипидемии.
Ниже подробно описан способ получения и использования дцРНК и композиций, содержащих дцРНК, для ингибирования экспрессии гена-мишени РС8К9, а также описаны композиции и способы, применяемые для лечения заболеваний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии РС8К9, таких как гиперлипидемия. Фармацевтические композиции согласно изобретению включают дцРНК, имеющую антисмысловую цепь, которая содержит область комплементарности длиной менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов, и является в основном комплементарной по меньшей мере части мРНК-транскрипта гена РС8К9, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.
В соответствии с этим в некоторых своих аспектах настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим дцРНК согласно изобретению в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем; к способам применения таких композиций для ингибирования экспрессии гена РС8К9 и к способам применения фармацевтических композиций для лечения заболеваний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии РС8К9.
I. Определения.
Для удобства ниже приводятся значения некоторых терминов и выражений, используемых в настоящем описании, в примерах и в прилагаемой формуле изобретения. Если имеется значительное различие между употреблением данного термина в других разделах настоящего описания и его определением, приводимым в этом разделе, то следует отдать предпочтение определению данного термина в этом разделе.
Каждый из О, С, А и И обычно означает нуклеотид, который содержит гуаниновое, цитозиновое, адениновое и урациловое основания соответственно. Однако при этом следует отметить, что термин рибонуклеотид или нуклеотид также может означать модифицированный нуклеотид, как будет подробно описано ниже, или молекулу-аналог, имеющую замену. Специалисту в данной области хорошо известно, что гуанин, цитозин, аденин и урацил могут быть заменены другими молекулами без какоголибо значительного изменения свойств спаривания оснований олигонуклеотида, включающего нуклеотид, имеющий такую замененную молекулу. Так, например, нуклеотид, содержащий инозин в качестве основания, может спариваться с нуклеотидами, содержащими аденин, цитозин или урацил и т.п. Следовательно, в нуклеотидных последовательностях согласно изобретению нуклеотиды, содержащие урацил, гуанин или аденин, могут быть заменены нуклеотидом, содержащим, например, инозин.
Последовательности, содержащие такие замененные молекулы, являются вариантами настоящего изобретения.
Используемый здесь термин РС8К9 означает ген полипротеин-конвертазы субтилизин-кексина 9 или его белок (также известный как ЕН3, НСНОЬАЗ, ΝΑΡί’-Ι. ΝΑΡΤΊ). Последовательности мРНК, нацеленные на РС8К9, представляют собой человеческую последовательность: ΝΜ 174936; мышиную последовательность: ΝΜ_153565 и крысиную последовательность: ΝΜ_199253.
Используемый здесь термин последовательность-мишень означает непрерывную часть нуклеотидной последовательности молекулы мРНК, образованную в процессе транскрипции гена РС8К9, включая мРНК, которая является продуктом РНК-процессинга первичного продукта транскрипции.
Используемый здесь термин цепь, содержащая последовательность означает олигонуклеотид, содержащий цепь нуклеотидов, последовательность которой описана в соответствии со стандартной номенклатурой нуклеотидов.
- 4 015676
Используемый здесь термин комплементарный, если это не оговорено особо и если он используется для описания первой нуклеотидной последовательности по сравнению со второй нуклеотидной последовательностью, означает способность олигонуклеотида или полинуклеотида, содержащего первую нуклеотидную последовательность, гибридизоваться и образовывать дуплексную структуру в определенных условиях с олигонуклеотидом или полинуклеотидом, содержащим вторую нуклеотидную последовательность, как хорошо известно специалистам. Такими условиями могут быть, например, жесткие условия, где указанные жесткие условия могут включать обработку 400 мМ ЫаС1, 40 мМ ΡΙΡΕ8, рН 6,4, 1 мМ ΕΌΤΑ, при 50 или 70°С в течение 12-16 ч с последующей промывкой. Могут быть применены и другие условия, такие как физиологически релевантные условия, которые могут возникать внутри организма. Специалист в данной области может самостоятельно определить ряд условий, наиболее подходящих для оценки комплементарности двух последовательностей в зависимости от целей применения гибридизованных нуклеотидов.
Это определение включает спаривание оснований олигонуклеотида или полинуклеотида, содержащего первую нуклеотидную последовательность, с олигонуклеотидом или полинуклеотидом, содержащим вторую нуклеотидную последовательность, по всей длине первой и второй нуклеотидных последовательностей. Такие последовательности могут называться полностью комплементарными друг другу. Однако если первую последовательность определяют как в основном комплементарную второй описанной здесь последовательности, то эти две последовательности могут быть полностью комплементарными, либо они могут образовывать одну или более, но в основном не более чем 4, 3 или 2 несоответствующих пар оснований после гибридизации, и при этом сохранять свою способность гибридизоваться в условиях, наиболее подходящих для их конечного применения. Однако если после гибридизации два олигонуклеотида образуют один или несколько одноцепочечных выступающих концов, то такие концы не должны рассматриваться как несоответствия при определении комплементарности. Так, например, дцРНК, содержащая один олигонуклеотид длиной в 21 нуклеотид и другой олигонуклеотид длиной в 23 нуклеотидов, где более длинный олигонуклеотид содержит последовательность из 21 нуклеотида, которая является полностью комплементарной более короткому олигонуклеотиду, может также называться полностью комплементарной с точки зрения цели применения настоящего изобретения.
Используемый здесь термин комплементарные последовательности может также включать пары оснований, не спаренные в соответствии с правилами Уотсона-Крика, или полностью состоять из таких пар оснований, и/или они могут включать пары оснований, образованные неприродными и модифицированными нуклеотидами в зависимости от того, насколько удовлетворяются вышеуказанные требования к их способности к гибридизации.
Используемые здесь термины комплементарный, полностью комплементарный и в основном комплементарный могут употребляться по отношению к спариванию основания смысловой цепи и антисмысловой цепи дцРНК или антисмысловой цепи дцРНК и последовательности-мишени, как будет очевидно исходя из целей их применения.
Используемый здесь термин полинуклеотид, который является, по существу, комплементарным по меньшей мере части матричной РНК (мРНК), означает полинуклеотид, в основном комплементарный непрерывной части представляющей интерес мРНК (например, кодирующей РС8К9). Так, например, полинуклеотид является комплементарным по меньшей мере части мРНК РС8К9, если его последовательность, по существу, комплементарна непрерывной части мРНК, кодирующей РС8К9.
Используемый здесь термин двухцепочечная РНК или дцРНК означает комплекс молекул рибонуклеиновой кислоты, имеющий дуплексную структуру, содержащую две антипараллельные и, по существу, комплементарные, как определено выше, цепи нуклеиновой кислоты. Две цепи, образующие дуплексную структуру, могут представлять собой различные части одной более крупной молекулы РНК, либо они могут представлять собой отдельные молекулы РНК. В случае отдельных молекул РНК такая дцРНК часто называется в литературе киРНК (короткой интерферирующей РНК). Если две цепи являются частью одной более крупной молекулы, а поэтому между З'-концом одной цепи и 5'-концом соответствующей другой цепи они соединены друг с другом непрерывной цепью нуклеотидов, образующих дуплексную структуру, то такая соединяющая цепь РНК называется шпилечной петлей, короткой шпилечной РНК или кшРНК. Если две цепи между З'-концом одной цепи и 5'-концом соответствующей другой цепи, ковалентно связанные друг с другом посредством другой цепи, т.е. цепи, не являющейся непрерывной цепью нуклеотидов, образующей дуплексную структуру, то такая соединяющая структура называется линкером. Цепи РНК могут иметь одинаковые или различные количества нуклеотидов. Максимальным числом пар оснований является число нуклеотидов в самой короткой цепи дцРНК минус какие-либо выступающие концы, присутствующие в этом дуплексе.
Помимо дуплексной структуры дцРНК может содержать один или несколько выступающих нуклеотидов. Кроме того, используемый в настоящем описании термин дцРНК может включать химические модификации рибонуклеотидов, включая основные модификации во многих положениях нуклеотидов и все типы модификаций, описанные в настоящем изобретении или известные специалистам. Все такие модификации, присутствующие в молекуле типа киРНК, входят в объем термина дцРНК, определяемого в настоящем описании и в формуле изобретения.
- 5 015676
Используемый здесь термин выступающий нуклеотид означает неспаренный нуклеотид или нуклеотиды, которые выступают из дуплексной структуры дцРНК, если З'-конец одной цепи дцРНК находится за пределами 5'-конца другой цепи или наоборот. Термины тупой или тупой конец означают, что на конце дцРНК отсутствуют неспаренные нуклеотиды, т.е. отсутствует выступающий нуклеотид. Затупленная по концам дцРНК представляет собой дцРНК, которая является двухцепочечной по всей ее длине, т.е. у любого конца этой молекулы отсутствуют выступающие нуклеотиды. Для ясности следует отметить, что при определении наличия у киРНК выступающего конца или тупого конца не рассматриваются химические кэпы или ненуклеотидные химические молекулы, конъюгированные с З'-концом или с 5'-концом киРНК.
Термин антисмысловая цепь означает цепь дцРНК, которая включает область, по существу, комплементарную последовательности-мишени. Используемый здесь термин область комплементарности означает область на антисмысловой цепи, которая, по существу, комплементарна последовательности, например последовательности-мишени, определенной в настоящем изобретении. Если область комплементарности не полностью комплементарна последовательности-мишени, то такие несоответствия являются наиболее приемлемыми в концевых областях, а если они и присутствуют, то, главным образом, в концевой области или в концевых областях, например в положениях 6, 5, 4, 3 или 2 нуклеотида 5'- и/или З'-концов.
Используемый здесь термин смысловая цепь означает цепь дцРНК, включающую область, по существу, комплементарную области антисмысловой цепи.
Термин введение в клетку, если он относится к дцРНК, означает облегчение поглощения или абсорбции в клетке, как это очевидно для специалиста в данной области. Абсорбция или поглощение дцРНК может происходить посредством природных диффузных или активных клеточных процессов, либо оно может быть осуществлено с помощью вспомогательных средств или устройств. Значения этого термина не ограничиваются клетками ίη νίΐτο; при этом, дцРНК может быть также введена в клетку, которая является частью живого организма. В таком случае, термин введение в клетку также включает доставку в организм. Так, например, для доставки ίη νίνο, дцРНК может быть инъецирована в конкретный участок, или она может быть введена системно. Введение ίη νίΐτο в клетку осуществляют методами, известными специалистам, такими как электропорация и липофекция.
Используемые здесь термины сайленсинг и ингибирование экспрессии, если они относятся к гену РС8К9, означают, по меньшей мере, частичное подавление экспрессии гена РС8К9, на что указывает снижение количества мРНК, транскрибируемого из гена РС8К9, который может быть выделен из первой клетки или группы клеток, в которой (в которых) транскрибируется ген РС8К9 и которая (которые) были обработаны так, чтобы происходило ингибирование экспрессии гена РС8К9, по сравнению со второй клеткой или группой клеток, по существу, идентичной (или идентичных) первой клетке или группе клеток, которая (или которые) не была (не были) обработана(ы) указанным способом (контрольными клетками). Степень ингибирования обычно выражают математической формулой (мРНК в контрольных клетках)-(мРНК в обработанных клетках) __ · 100% (мРНК в контрольных клетках)
Альтернативно, степень ингибирования может быть определена как уменьшение значения параметра, которое функционально связано с транскрипцией гена РС8К9, например количества белка, кодируемого геном РС8К9, и секретируемого клеткой, или числа клеток, представляющих определенный фенотип, например подверженных апоптозу. В принципе, сайленсинг гена РС8К9 может быть обнаружен в любой клетке, экспрессирующей мишень, либо конститутивно, либо с помощью генной инженерии, а также с помощью любого подходящего анализа. Однако если необходимо определить, ингибирует ли данная дцРНК экспрессию гена РС8К9 в определенной степени, а следовательно, такое определение входит в объем настоящего изобретения, то для осуществления такого определения рекомендуется проводить анализ, описанный ниже в разделе Примеры.
Так, например, в некоторых случаях экспрессию гена РС8К9 подавляют по меньшей мере примерно на 20, 25, 35 или 50% путем введения двухцепочечного олигонуклеотида согласно изобретению. В некоторых вариантах изобретения ген РС8К9 ингибируется по меньшей мере примерно на 60, 70 или 80% путем введения двухцепочечного олигонуклеотида согласно изобретению. В некоторых вариантах изобретения ген РС8К9 ингибируется по меньшей мере примерно на 85, 90 или 95% путем введения двухцепочечного олигонуклеотида согласно изобретению. В табл. 1 и 2 приводится широкий ряд величин для ингибирования экспрессии, полученных с помощью анализа ίη νίΐτο, проводимого с использованием различных молекул дцРНК РС8К9 в различных концентрациях.
Термины лечить, лечение и т.п., используемые здесь с точки зрения экспрессии РС8К9, означают ослабление или облегчение тяжести патологических состояний, которые могут быть модулированы посредством ингибирования гена РС8К9. В контексте настоящего изобретения термины лечить, лечение и т.п., если они относятся к любым другим описанным ниже состояниям (а не к патологическим состояниям, которые могут быть модулированы посредством ингибирования гена РС8К9), означают облегчение или ослабление по меньшей мере одного симптома, ассоциированного с таким состоянием, ли
- 6 015676 бо его реверсию. Так, например, если термин лечение относится к гиперлипидемии, то он включает снижение уровней липидов в сыворотке.
Используемые здесь термины терапевтически эффективное количество и профилактически эффективное количество означают количество, которое дает терапевтический эффект при лечении, предупреждении или ослаблении патологических состояний или явно выраженного симптома таких патологических состояний, которые могут быть модулированы посредством ингибирования гена РС8К9. Конкретное количество, которое является терапевтически эффективным, может быть легко определено практикующим врачом и может широко варьироваться в зависимости от факторов, известных специалистам, таких как тип патологических состояний, которые могут быть модулированы посредством ингибирования гена РС8К9, история болезни данного пациента и его возраст, стадия развития патологических состояний, которые могут быть модулированы посредством ингибирования РС8К9, и способа введения других средств для подавления патологий, которые могут быть модулированы посредством ингибирования гена РС8К9.
Используемая здесь фармацевтическая композиция включает фармакологически эффективное количество дцРНК и фармацевтически приемлемый носитель. Используемый здесь термин фармакологически эффективное количество, терапевтически эффективное количество или просто эффективное количество означает количество РНК, эффективное для достижения нужного фармакологического, терапевтического или превентивного эффекта. Так, например, если эффективным лечением заболевания считается по меньшей мере 25% снижение величины измеряемого параметра, ассоциированного с данным заболеванием или расстройством, то терапевтически эффективное количество лекарственного средства для лечения данного заболевания или расстройства представляет собой количество, необходимое для достижения по меньшей мере 25% снижения величины данного параметра.
Термин фармацевтически приемлемый носитель означает носитель для введения терапевтического средства. Такими носителями являются, но не ограничиваются ими, физиологический раствор, забуференный физиологический раствор, декстроза, вода, глицерин, этанол и их комбинации, и такие носители более подробно описаны ниже. Данный термин, в частности, исключает среду для культивирования клеток.
Используемый здесь термин трансформированная клетка означает клетку, в которую был введен вектор, способный экспрессировать молекулу дцРНК.
II. Двухцепочечная рибонуклеиновая кислота (дцРНК).
В одном из своих вариантов настоящее изобретение относится к молекулам двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК), используемый для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетках или у млекопитающих, где указанная дцРНК содержит антисмысловую цепь, включающую область комплементарности, которая является комплементарной по меньшей мере части мРНК, образованной в результате экспрессии гена РС8К9, где указанная область комплементарности имеет длину менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов, и где указанная дцРНК, после ее контактирования с клеткой, экспрессирующей указанный ген РС8К9, ингибирует экспрессию указанного гена РС8К9 по меньшей мере на 40%. Указанная дцРНК содержит две цепи РНК, которые являются достаточно комплементарными для гибридизации с образованием дуплексной структуры. Одна цепь дцРНК (антисмысловая цепь) содержит область комплементарности, которая, по существу, комплементарна, а обычно полностью комплементарна последовательности-мишени, происходящей от последовательности мРНК, образованной в процессе экспрессии гена РС8К9, а другая цепь (смысловая цепь) содержит область, которая является комплементарной антисмысловой цепи, в результате чего эти две цепи гибридизуются и, при их объединении в подходящих условиях, образуют дуплексную структуру. Обычно дуплексная структура имеет длину 15-30, чаще 18-25, еще чаще 19-24, а чаще всего 19-21 пар оснований. Аналогичным образом, область, комплементарная последовательности-мишени, имеет длину 15-30, чаще 18-25, еще чаще 19-24, а чаще всего 19-21 пар оснований. дцРНК согласно изобретению может также включать один или несколько выступающих одноцелочечных нуклеотидов. дцРНК может быть синтезирована стандартными методами, известными специалистам и подробно обсуждаемыми ниже, например с применением автоматического синтезатора ДНК, например, такого как синтезатор, поставляемый компанией Вюкеагсй, Аррйеб ВюхуЧспъ. 1пс. В предпочтительном варианте изобретения геном РС8К9 является человеческий ген РС8К9. В конкретных вариантах изобретения антисмысловая цепь дцРНК включает цепь, выбранную из смысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2, и вторую последовательность, выбранную из группы, состоящей из антисмысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2. Альтернативные антисмысловые агенты, нацеленные на последовательность-мишень, представленную в табл. 1 и 2, могут быть легко определены с использованием последовательности-мишени и фланкирующей последовательности РС8К9.
В других вариантах изобретения дцРНК содержит по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, выбранную из группы последовательностей, представленных в табл. 1 и 2. В других вариантах изобретения дцРНК содержит по меньшей мере две последовательности, выбранные из этой группы, где одна из по меньшей мере двух последовательностей комплементарна другой последовательности по меньшей мере из двух последовательностей, а одна по меньшей мере из двух последовательностей, по
- 7 015676 существу, комплементарна последовательности мРНК, продуцированной в результате экспрессии гена РС8К9. Обычно дцРНК содержит два олигонуклеотида, где один олигонуклеотид описан в табл. 1 и 2 как смысловая цепь, а второй олигонуклеотид описан в табл. 1 и 2 как антисмысловая цепь.
Специалистам в данной области хорошо известно, что дцРНК, содержащие дуплексную структуру из 20-23 пар оснований, а в частности из 21 пары оснований, является особенно эффективной в индуцировании интерференции РНК (Е1Ьа§Ыг с1 а1., ЕМВО 2001, 20:6877-6888). Однако другими исследователями было также обнаружено, что могут оказаться эффективными и более короткие или более длинные дцРНК. В описанных выше вариантах дцРНК согласно изобретению могут содержать по меньшей мере одну цепь длиной минимум 21 нуклеотид, что обусловлено природой олигонуклеотидных последовательностей, представленных в табл. 1 и 2. Разумно предположить, что более короткие дцРНК, содержащие одну из последовательностей, представленных в табл. 1 и 2, только без нескольких нуклеотидов у одного или обоих концов, могут быть также эффективными по сравнению с дцРНК, описанными выше. Следовательно, в настоящем изобретении рассматриваются дцРНК, содержащие неполную последовательность по меньшей мере из 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более смежных нуклеотидов одной из последовательностей, представленных в табл. 1 и 2, и отличающиеся по своей способности ингибировать экспрессию гена РС8К9 в ЕЛС8-анализе, описанном ниже, не более чем на 5, 10, 15, 20, 25 или 30% по сравнению с дцРНК, содержащей полноразмерную последовательность. Другие дцРНК, которые расщепляются в последовательности-мишени, представленной в табл. 1 и 2, могут быть легко получены с использованием описанной здесь последовательности РС8К9 и последовательности-мишени.
Кроме того, РНКи-агенты, представленные в табл. 1 и 2, идентифицируют сайт в мРНК РС8К9, восприимчивый к РНКи-расщеплению. Настоящее изобретение также относится к РНКи-агентам, нацеленным на последовательность, на которую нацелен один из агентов согласно изобретению. Считается, что используемый здесь второй РНКи-агент нацелен на последовательность первого РНКи-агента, если указанный второй РНКи-агент расщепляет транскрипт в любом участке мРНК, который является комплементарным антисмысловой цепи первого РНКи-агента. Такой второй агент, по существу, состоит по меньшей мере из 15 смежных нуклеотидов, происходящих от одной из последовательностей, представленных в табл. 1 и 2 и присоединенных к дополнительным нуклеотидным последовательностям, происходящим от области, смежной с выбранной последовательностью в гене РС8К9. Так, например, по меньшей мере 15 нуклеотидов 8ЕО ΙΌ N0: 1 (минус добавленные последовательности АА), объединенные со следующими 6 нуклеотидами от гена-мишени РС8К9, продуцируют одноцепочечный агент из 21 нуклеотида на основе одной из последовательностей, представленных в табл. 1 и 2.
дцРНК согласно изобретению может содержать одно или несколько несоответствий по отношению к последовательности-мишени. В предпочтительном варианте изобретения дцРНК согласно изобретению содержит не более чем 3 несоответствия. Если антисмысловая цепь дцРНК содержит несоответствия по отношению к последовательности-мишени, то предпочтительно, чтобы область несоответствий не находилась в центре области комплементарности. Если антисмысловая цепь дцРНК содержит несоответствия по отношению к последовательности-мишени, то предпочтительно, чтобы такое несоответствие ограничивалось 5 нуклеотидами, расположенными у любого конца, например 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотидом, присутствующими у 5'- или 3'-конца области комплементарности. Так, например, в случае цепи дцРНК из 23 нуклеотидов, которая комплементарна области гена РС8К9, эта дцРНК обычно не содержит каких-либо несоответствий в центральной области, состоящей из 13 нуклеотидов. Для того чтобы определить, является ли дцРНК, содержащая несоответствия по отношению к последовательности-мишени, эффективной в ингибировании экспрессии гена РС8К9, могут быть применены способы, описанные в настоящем изобретении. Очень важно, чтобы дцРНК с несоответствиями эффективно ингибировали экспрессию гена РС8К9, особенно если известно, что конкретная область комплементарности в гене РС8К9 имеет модификацию полиморфной последовательности в пределах данной популяции.
В одном из вариантов изобретения по меньшей мере на одном конце дцРНК присутствуют 1-4, а обычно 1-2 выступающих одноцепочечных нуклеотида. Было неожиданно обнаружено, что дцРНК, имеющие по меньшей мере один выступающий нуклеотид, обладают превосходными ингибирующими свойствами по сравнению со свойствами их аналогов, имеющих тупые концы. Кроме того, авторами настоящего изобретения было обнаружено, что присутствие лишь одного выступающего нуклеотида усиливает интерферирующую активность дцРНК, не оказывая при этом какого-либо влияния на ее общую стабильность. Было подтверждено, что дцРНК, имеющая только один выступающий конец, является особенно стабильной и эффективной ίη νίνο, а также в различных клетках, в средах для культивирования клеток, в крови и сыворотке. Вообще говоря, одноцепочечный выступающий конец расположен у 3'-конца антисмысловой цепи или, альтернативно, у 3'-конца смысловой цепи. дцРНК может также иметь тупой конец, обычно расположенный у 5'-конца антисмысловой цепи. Такие дцРНК обладают повышенной стабильностью и ингибирующей активностью, что позволяет вводить эти дцРНК в низких дозах, т.е. в дозах, составляющих менее чем 5 мг/кг массы тела реципиента в день. Обычно антисмысловая цепь дцРНК имеет выступающие нуклеотиды у 3'-конца, а 5'-конец является тупым. В другом варианте изобретения один или несколько нуклеотидов в выступающем конце заменены нуклеозид-тиофосфатом.
В еще одном варианте изобретения дцРНК химически модифицируют для повышения стабильно
- 8 015676 сти. Нуклеиновые кислоты согласно изобретению могут быть синтезированы и/или модифицированы методами, хорошо известными специалистам, например, как описано в публикации Сиггеп! рго!осо1к ίη пис1е1с ас1б сйет1к1гу. Веаисаде, 8.Ь. е! а1. (Ебгк.), 1о1т №Пеу & 8опк, 1пс., Ыете Уогк, Ν.Υ., И8Л, которая вводится в настоящее описание посредством ссылки. Химическими модификациями могут быть, но не ограничиваются ими, 2'-модификации; модификации в других положениях сахаров или оснований олигонуклеотида; введение неприродных оснований в олигонуклеотидную цепь; ковалентное связывание с лигандом или химической молекулой, и замена межнуклеотидных фосфатных связей другими связями, такими как тиофосфатные связи. При этом могут быть использованы более чем одна такая модификация.
Химическое связывание двух отдельных цепей дцРНК может быть достигнуто с применением любых различных хорошо известных методов, например путем введения ковалентных, ионных или водородных связей; посредством гидрофобных взаимодействий, ван-дер-ваальсовых взаимодействий или стэкинг-взаимодействий; посредством введения координационных связей металл-ион или с использованием пуриновых аналогов. В основном химическими группами, которые могут быть использованы для модификации дцРНК, являются, но не ограничиваются ими, метиленовый синий; бифункциональные группы, обычно бис-(2-хлорэтил)амин; №ацетил-№-(п-глиоксилбензоил)цистамин; 4-тиоурацил и псорален. В одном из вариантов изобретения указанным линкером является гексаэтиленгликолевый линкер. В этом случае дцРНК продуцируют посредством твердофазного синтеза, а гексаэтиленгликолевый линкер вводят в соответствии со стандартными методами (см. №1Шатк, Ό.Ι. апб К.В. Наб, Вюсйет. (1996), 35:14665-14670). В конкретном варианте изобретения 5'-конец антисмысловой цепи и З'-конец смысловой цепи химически связаны посредством гексаэтиленгликолевого линкера. В другом варианте изобретения по меньшей мере один нуклеотид дцРНК содержит фосфортиоатные или фосфордитиоатные группы. Химическая связь у концов дцРНК обычно образована трехспиральными связями. В табл. 1 и 2 приводятся примеры модифицированных РНКи-агентов согласно изобретению.
В еще одном варианте изобретения нуклеотиды у одной или обеих двух одиночных цепей могут быть модифицированы так, чтобы они предотвращали или ингибировали расщепляющую активность клеточных ферментов, например, таких как некоторые нуклеазы и т.п. Методы ингибирования расщепляющей активности клеточных ферментов, направленной против нуклеиновых кислот, известны специалистам, и такими методами являются, но не ограничиваются ими, 2'-амино-модификации, 2'-аминомодификации сахаров, 2'-Е-модификации сахаров, 2'-Е-модификации, 2'-алкил-модификации сахаров, модификации незаряженного остова, морфолиномодификации, 2'-О-метил-модификации и фосфорамидатные модификации (см., например, №адпег, ΝηΙ. Меб. (1995), 1:1116-8). Таким образом, по меньшей мере одна 2'-гидроксильная группа нуклеотидов на дцРНК заменена химической группой, обычно 2'амино- или 2'-метильной группой. Кроме того, по меньшей мере один нуклеотид может быть модифицирован так, чтобы он образовывал блокированный нуклеотид. Такой блокированный нуклеотид содержит метиленовый мостик, соединяющий 2'-кислород рибозы с 4'-углеродом рибозы. Олигонуклеотиды, содержащие указанный блокированный нуклеотид, описаны в публикации КокИкш, А.А., е! а1., Те1гайебгоп (1998), 54: 3607-3630 и ОЫка, 8. е! а1. Те1гайебгоп Ьей. (1998), 39; 5401-5404.
Введение блокированного нуклеотида в олигонуклеотид приводит к повышению аффинности по отношению к комплементарным последовательностям и увеличению температуры плавления на несколько градусов (Вгааксй, Ό.Α. апб Ό.Κ. Согеу, СИет. Вю1. (2001), 8:1-7).
Конъюгирование лиганда с дцРНК может усиливать ее абсорбцию в клетки, а также ее нацеливание на конкретную ткань или поглощение клетками конкретных типов, такими как клетки печени. В некоторых случаях гидрофобный лиганд конъюгируют с дцРНК для облегчения прямого прохождения через клеточную мембрану или поглощения клетками печени. Альтернативно, лиганд, конъюгированный с дцРНК, представляет собой субстрат для опосредуемого рецептором эндоцитоза. Такие подходы были применены для облегчения проникновения в клетку антисмысловых олигонуклеотидов, а также дцРНКагентов. Так, например, холестерин был конъюгирован с различными антисмысловыми олигонуклеотидами с получением соединений, которые являются в основном более активными, чем их неконъюгированные аналоги. См. М. Мапойагап Апбкепке & №.1с1ею Ас1б Огид Эеуе1ортеп1 2002, 12, 103. Другими липофильными соединениями, которые были конъюгированы с олигонуклеотидами, являются 1-пиренмасляная кислота, 1,3-бис-О-(гексадецил)глицерин и ментол. Одним из примеров лиганда для опосредуемого рецептором эндоцитоза является фолиевая кислота. Фолиевая кислота поступает в клетку благодаря эндоцитозу, опосредуемому фолатным рецептором. Соединения дцРНК, несущие фолиевую кислоту, могут эффективно транспортироваться в клетку посредством эндоцитоза, опосредуемого фолатным рецептором. Ь1 и сотрудники сообщают, что присоединение фолиевой кислоты к 3'-концу олигонуклеотида приводит к 8-кратному повышению уровня поглощения олигонуклеотида клетками. Ь1, 8.; Оебшшкй. Н.М.; Ниапд, Ь. Рйагт. Век. 1998, 15, 1540. Другими лигандами, которые были конъюгированы с олигонуклеотидами, являются полиэтиленгликоли, углеводные кластеры, перекрестносвязывающие агенты, конъюгаты порфирина, пептиды для доставки и липиды, такие как холестерин.
В некоторых случаях конъюгирование катионного лиганда с олигонуклеотидами приводит к повышению резистентности к нуклеазам. Репрезентативными примерами катионных лигандов являются пропиламмоний и диметилпропиламмоний. Интересно отметить, что антисмысловые олигонуклеотиды, как
- 9 015676 сообщалось, сохраняют свою высокую аффинность связывания с мРНК в том случае, если катионный лиганд распределен по всему олигонуклеотиду. См. публикацию М. Мапойагап АшЕспбс & М.1с1с1с Λοίά Эгид Эсус1ортсп1. 2002, 22, 103 и цитируемые в ней работы.
Конъюгированная с лигандом дцРНК согласно изобретению может быть синтезирована с использованием дцРНК, содержащей боковую реакционноспособную функциональную группу, такую как группа, образующаяся в результате присоединения линкерной молекулы к дцРНК. Этот реакционноспособный олигонуклеотид может непосредственно взаимодействовать с коммерчески доступными лигандами; с синтезированными лигандами, содержащими любую из различных защитных групп; или с лигандами, имеющими присоединенную к ним линкерную группу. Способы согласно изобретению облегчают синтез конъюгированной с лигандом дцРНК с использованием в некоторых предпочтительных вариантах изобретения нуклеозидных мономеров, которые были соответствующим образом конъюгированы с лигандами и которые могут быть также присоединены к твердому носителю. Такие конъюгаты лиганднуклеозид, присоединенные, но необязательно, к твердому носителю, получают в соответствии с некоторыми предпочтительными вариантами способов согласно изобретению посредством взаимодействия выбранного связывающегося с сывороткой лиганда с линкерной группой, присутствующей в 5'положении нуклеозида или олигонуклеотида. В некоторых случаях дцРНК, несущую аралкильный лиганд, присоединенный к 3'-концу дцРНК, получают, главным образом, посредством ковалентного присоединения мономерного структурного блока к стеклянному носителю с регулируемым размером пор через длинноцепочечную аминоалкильную группу. Затем нуклеотиды присоединяют к мономерному структурному блоку, связанному с твердым носителем, стандартными методами твердофазного синтеза. Таким мономерным структурным блоком может быть нуклеозид или другое органическое соединение, совместимое с твердофазным синтезом.
дцРНК, используемая в конъюгатах согласно изобретению, может быть получена подходящим и рутинным способом с применением хорошо известного метода твердофазного синтеза. Оборудование для такого синтеза поставляется несколькими компаниями, включая, например, Аррйеб Вю8у81ет8 (Ео81ег Сйу, СА.). Дополнительно или альтернативно могут быть применены любые другие методы такого синтеза, известные специалистам. Для получения других олигонуклеотидов, таких как фосфортиоаты и их алкилированные призводные, могут быть применены аналогичные методы, также известные специалистам.
Описание синтеза конкретных модифицированных олигонуклеотидов можно найти в следующих патентах США: в патентах США № 5138045 и 5218105, относящихся к олигонуклеотидам, конъюгированным с полиаминами; в патенте США № 5212295, относящемся к мономерам, используемым для получения олигонуклеотидов, имеющих хиральные фосфорные связи; в патентах США № 5378825 и 5541307, относящихся к олигонуклеотидам, имеющим модифицированные остовы; в патенте США № 5386023, относящемся к олигонуклеотидам с модифицированным остовом и к их получению посредством восстановительного связывания; в патенте США № 5457191, относящемся к модифицированным нуклеотидным основаниям, полученным на основе 3-деазапуриновой кольцевой системы и к методам их синтеза; в патенте США № 5459255, относящемся к модифицированным нуклеотидным основаниям, полученным на основе Ν-2-замещенных пуринов; в патенте США № 5521302, относящемся к способам получения олигонуклеотидов, имеющих хиральные фосфорные связи; в патенте США № 5539082, относящемся к нуклеиновым кислотам, связанным с пептидами; в патенте США № 5554746, относящемся к олигонуклеотидам, имеющим β-лактамовые остовы; в патенте США № 5571902, относящемся к методам и материалам для синтеза олигонуклеотидов; в патенте США № 5578718, относящемся к нуклеозидам, имеющим алкилтиогруппы, где указанные группы могут быть использованы в качестве линкеров или других групп, присоединенных в любом из различных положений нуклеозида; в патентах США № 5587361 и 5599797, относящихся к олигонуклеотидам, имеющим фосфортиоатные связи с высокой хиральной чистотой; в патенте США № 5506351, относящемся к способам получения 2'-Оалкилгуанозиновых и родственных соединений, включая 2,6-диаминопуриновые соединения; в патенте США № 5587469, относящемся к олигонуклеотидам, имеющим Ν-2-замещенные пурины; в патенте США № 5587470, относящемся к олигонуклеотидам, имеющим 3-деазапурины; в патентах США № 5223168 и 5608046, относящихся к конъюгированным 4'-десметил-нуклеозидным аналогам; в патентах США № 5602240 и 5610289, относящихся к олигонуклеотидным аналогам с модифицированным остовом; и в патентах США № 6262241 и 5459255, относящихся, ш!ег айа, к методам синтеза 2'-фторолигонуклеотидов.
В конъюгированной с лигандом дцРНК и в молекуле лиганда, несущей последовательностьспецифические связанные нуклеозиды согласно изобретению, олигонуклеотиды и олигонуклеозиды могут быть сконструированы на подходящем синтезаторе ДНК с использованием стандартных нуклеотидных или нуклеозидных предшественников или предшественников нуклеотидных или нуклеозидных конъюгатов, которые уже несут линкерную группу, предшественников конъюгатов лиганд-нуклеотид или лиганд-нуклеозид, которые уже несут молекулу лиганда, или структурных блоков, несущих ненуклеозидный лиганд.
При использовании предшественников нуклеотидных конъюгатов, уже несущих линкерную группу,
- 10 015676 обычно осуществляют синтез последовательность-специфических связанных нуклеозидов, а затем молекулу лиганда подвергают взаимодействию с линкерной группой, в результате чего образуется конъюгированный с лигандом олигонуклеотид. Олигонуклеотидные конъюгаты, несущие различные молекулы, такие как стероиды, витамины, липиды и репортерные молекулы, уже были описаны в литературе (см. заявку РСТ АО 93/07883, МапоНагап с1 а1.). В предпочтительном варианте изобретения олигонуклеотиды или связанные нуклеозиды согласно изобретению синтезируют на автоматическом синтезаторе с использованием фосфорамидитов, происходящих от конъюгатов лиганд-нуклеозид, помимо стандартных фосфорамидитов и нестандартных фосфорамидитов, которые являются коммерчески доступными и обычно используются в синтезе олигонуклеотидов.
Введение 2'-О-метильной группы, 2'-О-этильной группы, 2'-О-пропильной группы, 2'-О-аллильной группы, 2'-О-аминоалкильной группы или 2'-дезокси-2'-фтор-группы в нуклеозиды олигонуклеотида придает такому олигонуклеотиду повышенную способность к гибридизации. Кроме того, олигонуклеотиды, содержащие фосфортиоатные остовы, обладают повышенной стабильностью к нуклеазе. Таким образом, функционализированные связанные нуклеозиды согласно изобретению могут быть увеличены по своему размеру за счет включения любых из следующих компонентов: фосфортиоатного остова или 2'-О-метильной группы, 2'-О-этильной группы, 2'-О-пропильной группы, 2'-О-аминоалкильной группы, 2'-О-аллильной группы или 2'-дезокси-2'-фтор-группы. Краткий список некоторых олигонуклеотидных модификаций, известных специалистам, можно найти, например, в публикации заявки РСТ АО 200370918.
В некоторых вариантах изобретения функционализированные нуклеозидные последовательности согласно изобретению, имеющие аминогруппу у 5'-конца, получают с использованием синтезатора ДНК, а затем их подвергают взаимодействию с активным сложноэфирным производным выбранного лиганда. Активные производные сложных эфиров хорошо известны специалистам в данной области. Репрезентативными активными сложными эфирами являются Ν-гидроксисукцинимидоэфиры, сложные эфиры тетрафторфенола, сложные эфиры пентафторфенола и сложные эфиры пентахлорфенола. В результате взаимодействия аминогруппы и активного сложного эфира образуется олигонуклеотид, в котором выбранный лиганд присоединен к 5'-положению посредством линкерной группы. Аминогруппа у 5'-конца может быть введена с использованием 5'-амино-модификатора С6. В одном из вариантов изобретения, молекулы лиганда могут быть конъюгированы с олигонуклеотидами в 5'-положении с использованием конъюгата лиганд-нуклеозид-фосфорамидит, где указанный лиганд прямо или опосредованно присоединен к 5'-гидрокси-группе посредством линкера. Такие конъюгаты лиганд-нуклеозид-фосфорамидиты обычно вводят по окончании автоматизированной процедуры синтеза, в результате чего получают конъюгированный с лигандом олигонуклеотид, содержащий лиганд у 5'-конца.
Примерами модифицированных межнуклеозидных связей или остовов являются, например, фосфортиоаты, хиральные фосфортиоаты, фосфордитиоаты, фосфотриэфиры, аминоалкилфосфотриэфиры, метилфосфонаты и другие алкилфосфонаты, включая 3'-алкиленфосфонаты и хиральные фосфонаты, фосфинаты, фосфорамидаты, включая 3'-аминофосфорамидат и аминоалкилфосфорамидаты, тионофосфорамидаты, тионоалкилфосфонаты, тионоалкилфосфотриэфиры и боранофосфаты, имеющие нормальные 3'-5'-связи, 2'-5'-связанные аналоги этих соединений и аналоги, имеющие обратную полярность, где смежные пары нуклеозидных остатков имеют 3'-5'-5'-3'- или 2'-5'-5'-2'-связи. Могут быть также включены различные соли, смешанные соли и свободные кислоты.
Репрезентативными патентами США, относящимися к получению вышеописанных связей, содержащих атом фосфора, являются, но не ограничиваются ими, патенты США № 3687808; 4469863; 4476301; 5023243; 5177196; 5188897; 5264423; 5276019; 5278302; 5286717; 5321131; 5399676; 5405939; 5453496; 5455233; 5466677; 5476925; 5519126; 5536821; 5541306; 5550111; 5563253; 5571799; 5587361; 5625050 и 5697248, каждый из которых вводится в настоящее описание посредством ссылки.
Примерами модифицированных межнуклеозидных связей или остовов, не включающих атом фосфора (т. е. олигонуклеозидов), являются связи или остовы, образованные короткоцепочечным алкильными или циклоалкильными межсахарными связями, смешанным гетероатомом и алкильными или циклоалкильными межсахарными связями или одной или несколькими короткоцепочечными гетероатомными или гетероциклическими межсахарными связями. Такими молекулами являются молекулы, имеющие морфолино-связи (частично образованные из сахарной части нуклеозида); силоксановые остовы; сульфидные, сульфоксидные и сульфоновые остовы; формацетильные и тиоформацетильные остовы; метиленформацетильные и тиоформацетильные остовы; алкенсодержащие остовы; сульфаматные остовы; метилениминовые и метиленгидразиновые остовы; сульфонатные и сульфонамидные остовы; амидные остовы и другие остовы, имеющие смешанные группы Ν, О, 8 и СН2.
Репрезентативными патентами США, относящимися к получению вышеописанных олигонуклеозидов, являются, но не ограничиваются ими, патенты США № 5034506; 5166315; 5185444; 5214134; 5216141; 5235033; 5264562; 1264564; 5405938; 5434257; 5466677; 5470967; 5489677; 5541307; 5561225; 5596086; 5602240; 5610289; 5602240; 5608046; 5610289; 5618704; 5623070; 5663312; 5633360; 5677437 и 5677439, каждый и которых вводится в настоящее описание посредством ссылки.
В некоторых случаях олигонуклеотид может быть модифицирован нелигандной группой. Различ
- 11 015676 ные нелигандные молекулы были конъюгированы с олигонуклеотидами для повышения их активности, улучшения распределения в клетках или усиления их поглощения клетками, и процедуры получения таких конъюгатов описаны в научной литературе. Указанными нелигандными молекулами являются липидные молекулы, такие как холестерин (Ье!ктдег е! а1., Ргос. №11. Асаб. 8οί. И8А, 1989, 86:6553), холевая кислота (МапоРагап е! а1., Вюогд. Меб. СРет. Ье!!., 1994, 4:1053), тиоэфир, например гексил-8тритилтиол (МапоРагап е! а1., Αηη. Ν.Υ. Асаб. 8сг, 1992, 660:306; МапоРагап е! а1., Вюогд. Меб. СРет. Ье1, 1993, 3:2765), тиохолестерин (ОРегРаикег е! а1., №с1. Ас1бк Век., 1992, 20:533), алифатическая цепь, например додекандиол или ундециловые остатки (8а1коп-ВеРтоагак е! а1., ЕМВО 1., 1991, 10:111; КаРапоу е! а1., РЕВ8 Ье!!, 1990, 259:327; 8утагсРик е! а1., ВюсЫт1е, 1993, 75:49), фосфолипид, например ди-гексадецил-рац-глицерин или 1,2-ди-О-гексадецил-рац-глицеро-3-Н-фосфонат триэтиламмония (МапоРагап е! а1. Те!гаРебгоп Ьей., 1995, 36:3651; 8Реа е! а1., №с1. Ас1бк Век., 1990, 18:3777), полиаминовая или полиэтиленгликолевая цепь (МапоРагап е! а1., №с1еок1бек & №с1еоРбек, 1995, 14:969) или адамантануксусная кислота (МапоРагап е! а1. ТейаРебгоп Ье!!., 1995, 36:3651), пальмитиловая группа (М1кРга е! а1. ВюсР1т. ВюрРук. Ас!а, 1995, 1264:229) или октадециламиновая или гексиламино-карбонилоксихолестериновая молекула (Сгоокк е! а1., 1. РРагтасо1 Ехр. ТРег., 1996, 277:923). Репрезентативные патенты США, в которых описано получение таких олигонуклеотидных конъюгатов, перечислены выше. Типичные протоколы конъюгирования включают синтез олигонуклеотидов, несущих аминолинкер в одном или нескольких положениях последовательности. Затем аминогруппу подвергают взаимодействию с молекулой, конъюгированной с использованием соответствующих связывающих или активирующих реагентов. Реакция конъюгирования может быть проведена либо с олигонуклеотидом, еще связанным с твердым носителем, либо уже отщепленным в жидкой фазе. После очистки олигонуклеотидного конъюгата с помощью ВЭЖХ обычно получают чистый конъюгат. Использование холестеринового конъюгата является особенно предпочтительным, поскольку такая молекула может улучшать доставку в клетки печени, т.е. в место, где происходит экспрессия РС8К9.
Кодируемые вектором РНКи-агенты.
дцРНК согласно изобретению могут также экспрессироваться из рекомбинантных вирусных векторов внутри клеток ш у1уо. Рекомбинантные вирусные векторы согласно изобретению включают последовательности, кодирующие дцРНК согласно изобретению, и любой подходящий промотор для экспрессии последовательностей дцРНК. Подходящими промоторами являются, например, последовательности промоторов РНК И6 или Н1 ро1 III и промотор цитомегаловируса. Выбор других подходящих промоторов может быть осуществлен самим специалистом в данной области. Рекомбинантные вирусные векторы согласно изобретению могут также содержать индуцибельные или регуляторные промоторы для экспрессии дцРНК в конкретной ткани или в конкретной внутриклеточной среде. Использование рекомбинантных вирусных векторов для доставки дцРНК согласно изобретению в клетки ш угуо более подробно обсуждается ниже.
дцРНК согласно изобретению может экспрессироваться из рекомбинантого вирусного вектора в виде двух отдельных комплементарных молекул РНК или в виде одной молекулы РНК с двумя комплементарными областями.
При этом может быть использован любой вирусный вектор, способный включать кодирующие последовательности экспрессируемой(ых) молекулы(молекул) дцРНК, например векторы, происходящие от аденовируса (АУ); аденоассоциированного вируса (ААУ); ретровирусов (например, лентивирусов (ЬУ), рабдовирусов, вируса мышиного лейкоза); вируса герпеса и т. п. Тропизм вирусных векторов может быть модифицирован путем псевдотипирования векторов оболочечными белками или другими поверхностными антигенами, происходящими от других вирусов, или путем замены, если это необходимо, различных вирусных капсидных белков.
Так, например, лентивирусные векторы согласно изобретению могут быть псевдотипированы поверхностными белками, происходящими от вируса везикулярного стоматита (У8У), вируса бешенства, вируса Эбола, вируса Мокола и т.п. ААУ-векторы согласно изобретению могут быть получены для нацеливания на различные клетки путем конструирования векторов, экспрессирующих капсидные белки различных серотипов. Так, например, ААУ-вектор, экспрессирующий капсид серотипа 2 на геноме серотипа 2, обозначается ААУ 2/2. Такой ген капсида серотипа 2 в векторе ААУ 2/2 может быть заменен геном капсида серотипа 5 с получением вектора ААУ 2/5. Методы конструирования ААУ-векторов, которые экспрессируют капсидные белки различных серотипов, известны специалистам, см., например, публикацию ВаЫпо\\йх I. Е. е! а1. (2002), I. Упо1. 76:791-801, которая во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.
Методы отбора рекомбинантных вирусных векторов, подходящих для применения в настоящем изобретении, методы встраивания последовательностей нуклеиновой кислоты для экспрессии дцРНК в векторе и методы доставки вирусного вектора в представляющие интерес клетки известны специалистам. См., например, публикации ИотРигд В. (1995), Сепе ТРегар. 2: 301-310; Едййк М.А. (1988), Вю1есРпк.|иек 6: 608-614; МШег А.И. (1990), Нит Сепе ТРегар. 1: 5-14; Апбегкоп №.Р. (1998), №!иге 392; 25-30 и ВиРшкоп И.А. е! а1., \¥а1. Сепе!. 33: 401-406, которые во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки.
- 12 015676
Предпочтительными вирусными векторами являются векторы, происходящие от Αν и ΑΑν. В особенно предпочтительном варианте изобретения дцРНК согласно изобретению экспрессируются как две отдельные комплементарные одноцепочечные молекулы РНК из рекомбинантного ΑΑν-вектора, содержащего, например, либо промоторы РНК И6 или Н1, либо промотор цитомегаловируса (СМУ).
Αν-вектор, подходящий для экспрессии дцРНК согласно изобретению, метод конструирования рекомбинантного Αν-вектора и метод доставки вектора в клетки-мишени описаны в публикации Х1а Н. е! а1. (2002), Ыа1. БюйеЬ, 20; 1006-1010.
Подходящие ΑΑν-векторы для экспрессии дцРНК согласно изобретению, методы конструирования рекомбинантного Αν-вектора и методы доставки векторов в клетки-мишени описаны в публикациях 8ати15к1 К. е! а1. (1987), 1. νίτοί. 61: 3096-3101; ЕвЬег К.1. е! а1. (1996), 1. νίτοί., 70: 520-532; 8атикк1 К. е! а1. (1989), 1. νίτοί. 63: 3822-3826; в патенте США № 5252479; в патенте США № 5139941; в международной патентной заявке \¥О 94/13788; и в международной патентной заявке \¥О 93/24641, содержание которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.
III. Фармацевтические композиции, содержащие дцРНК.
В одном из своих вариантов настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим дцРНК, описанную в настоящем изобретении, и фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтическая композиция, содержащая дцРНК, может быть использована для лечения заболеваний или расстройств, ассоциированных с экспрессией или активностью гена РС8К9, таких как патологические состояния, которые могут быть модулированы посредством ингибирования экспрессии гена РС8К9, например, гиперлипидемия. Такие фармацевтические композиции получают исходя из способа доставки. Одним из примеров являются композиции, приготовленные для доставки в печень путем парентерального введения.
Фармацевтические композиции согласно изобретению вводят в дозах, достаточных для ингибирования экспрессии гена РС8К9. Авторами настоящего изобретения было обнаружено, что благодаря своей высокой эффективности, композиции, содержащие дцРНК согласно изобретению, могут быть введены в поразительно низких дозах. Доза в 5 мг дцРНК на килограмм массы тела реципиента в день является достаточной для ингибирования или подавления экспрессии гена РС8К9 и может быть системно введена данному пациенту.
В общих чертах, подходящая доза дцРНК составляет в пределах от 0,01 до 5,0 мг на 1 кг массы тела реципиента в день, а обычно в пределах от 1 мкг до 1 мг на 1 кг массы тела в день. Фармацевтическая композиция может быть введена один раз в день, либо дцРНК может быть введена в виде двух, трех или более субдоз через определенные интервалы времени в течение дня или даже путем непрерывного вливания или доставки с помощью препарата с регулируемым высвобождением. В этом случае для достижения общей суточной дозы количество дцРНК, содержащееся в каждой субдозе, должно быть соответствующим образом снижено. Унифицированная лекарственная форма может быть также приготовлена для доставки в течение нескольких дней, например, с использованием стандартного препарата с пролонгируемым высвобождением, который обеспечивает пролонгированное высвобождение дцРНК в течение нескольких дней. Препараты с пролонгированным высвобождением хорошо известны специалистам.
Специалисту в данной области совершенно очевидно, что на выбор дозы и времени, требуемых для эффективного лечения индивидуума, могут влиять некоторые факторы, включая, но не ограничиваясь ими, тяжесть заболевания или расстройства, предварительное лечение, общее состояние здоровья и/или возраст индивидуума, а также наличие других заболеваний. Кроме того, лечение индивидуума терапевтически эффективным количеством композиции может включать один или несколько курсов лечения.
Оценка эффективности доз и времени полужизни ίη νίνο отдельных дцРНК согласно изобретению может быть осуществлена с применением стандартных методик или на основе ίη νίνο тестирования с использованием соответствующего животного-модели, как описано в настоящем изобретении.
Прогресс в области генетических исследований на мышах позволяет создать ряд мышиных моделей для исследования различных заболеваний человека, таких как патологические состояния, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии гена РС8К9. Указанные модели используются для ίη νίνο анализа дцРНК, а также для определения терапевтически эффективной дозы.
Для введения дцРНК согласно изобретению млекопитающему может быть применен любой метод. Так, например, таким методом введения может быть прямое введение; пероральное введение или парентеральное введение (например, подкожное введение, интравентрикулярное введение, внутримышечное введение, внутрибрюшинное введение или внутривенное вливание). Введение может быть осуществлено сразу (например, путем инъекции) или в течение определенного периода времени (например, путем пролонгированного вливания или введения препаратов с пролонгированным высвобождением).
Обычно при лечении млекопитающего с гиперлипидемией, молекулы дцРНК вводят системно путем парентеральной доставки. Так, например, пациенту могут быть внутривенно введены дцРНК, которые могут быть конъюгированы или не конъюгированы, либо приготовлены в виде липосом или без использования липосом. Для этого молекула дцРНК может быть приготовлена в виде композиций, таких как стерильные и нестерильные водные растворы, безводные растворы в стандартных растворителях, таких как спирты, или растворы в жидких или твердых масляных основах. Такие растворы могут также
- 13 015676 содержать буферы, разбавители и другие подходящие добавки. Для парентерального, интратекального или интравентрикулярного введения, молекула дцРНК может быть приготовлена в виде композиций, таких как стерильные водные растворы, которые могут также содержать буферы, разбавители и другие подходящие добавки (например, усилители пенетрации, соединения-носители и другие фармацевтически приемлемые носители).
Кроме того, молекулы дцРНК могут быть введены млекопитающему биологическими или небиологическими методами, описанными, например, в патенте США № 6271359. Небиологическая доставка может быть осуществлена различными методами, включая, но не ограничиваясь ими, (1) загрузку липосом молекулой дцРНК, описанной в настоящем изобретении и (2) образование комплекса молекулы дцРНК с липидами или липосомами с получением комплексов нуклеиновая кислота - липид или нуклеиновая кислота - липосома. Липосома может состоять из катионных и нейтральных липидов, обычно используемых для трансфецирования клеток ίη νίίτο. Катионные липиды могут подвергаться реакции комплексообразования (например, с переносом заряда) с отрицательно заряженными нуклеиновыми кислотами с образованием липосом. Примерами катионных липосом являются, но не ограничиваются ими, липофектин, липофектамин, липофектак и ЭОТАР. Методы получения липосом хорошо известны специалистам. Липосомные композиции могут быть получены, например, из фосфатидилхолина, димиристоилфосфатидилхолина, дипальмитоилфосфатидилхолина, димиристоилфосфатидилглицерина или диолеилфосфатидилэтаноламина. Многие липофильные агенты являются коммерчески доступными, включая липофектин® Д^йгодеи/Ейе Τесйиο1οд^е8, СагкЬаб, СайГ.) и эффектин™ (Οία^οη. Vа1еηс^а, СайГ.). Кроме того, методы системной доставки могут быть оптимизированы с использованием коммерчески доступных катионных липидов, таких как ОПАВ или ЭОТАР, каждый из которых может быть смешан с нейтральным липидом, таким как ПОРЕ или холестерин. В некоторых случаях могут быть использованы липосомы, например, описанные в публикации ТетрШм е! а1. (№1й1ге В^есИш^^у, 15: 647-652 (1997)). В других вариантах изобретения для доставки ίη νίνο и ех νίνο могут быть использованы поликатионы, такие как полиэтиленимин (ΈοΠίΙη е! а1., Г Ат. 8ο^ №р11го1. 7: 1728 (1996)).
Дополнительную информацию, относящуюся к использованию липосом для доставки нуклеиновых кислот, можно найти в патенте США № 6271359, в публикации заявки РСТ \УО 96/40964 и в публикации Μοιτίδ^, Ό. е! а1. 2005, №11. В^есйшЕ 23(8): 1002-7.
Биологическая доставка может быть осуществлена различными методами, включая, но не ограничиваясь ими, использование вирусных векторов. Так, например, вирусные векторы (например, аденовирусные и герпесвирусные векторы) могут быть использованы для доставки молекул дцРНК в клетки печени. Стандартные методы молекулярной биологии могут быть применены для введения одной или нескольких описанных здесь дцРНК в один из множества различных вирусных векторов, предварительно полученных для доставки нуклеиновой кислоты в клетки. Такие вирусные векторы могут быть использованы для доставки одной или нескольких дцРНК в клетки, например, путем инфицирования.
дцРНК согласно изобретению могут быть приготовлены в фармацевтически приемлемом носителе или разбавителе. Термин фармацевтически приемлемый носитель (также называемый здесь наполнителем) означает фармацевтически приемлемый растворитель, суспендирующий агент или любой другой фармакологически инертный носитель. Фармацевтически приемлемые носители могут быть жидкими или твердыми и могут быть выбраны в зависимости от выбранного метода введения с учетом желаемого объема, нужной консистенции и другого подходящего способа доставки, а также от химических свойств. Типичными фармацевтически приемлемыми носителями являются, например, но не ограничиваются ими, вода; физиологический раствор; связующие агенты (например, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза); наполнители (например, лактоза и другие сахара, желатин или сульфат кальция); замасливатели (например, крахмал, полиэтиленгликоль или ацетат натрия); дезинтегрирующие агенты (например, крахмал или натрийсодержащий гликолят крахмала) и смачивающие агенты (например, лаурилсульфат натрия).
Кроме того, дцРНК, нацеленная на ген РС8К9, может быть приготовлена в виде композиций, содержащих дцРНК, смешанную, инкапсулированную, конъюгированную или как-либо иначе ассоциированную с другими молекулами, молекулярными структурами или смесями нуклеиновых кислот. Так, например, композиция, содержащая один или несколько дцРНК-агентов, нацеленных на ген РС8К9, может содержать другие терапевтические средства, например средства, снижающие уровни липидов (например, статины).
Способы лечения заболеваний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии РС8К9.
Описанные здесь способы и композиции могут быть использованы для лечения заболеваний и состояний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии гена РС8К9. Так, например, описанные здесь композиции могут быть использованы для лечения гиперлипидемии и других форм нарушений липидного обмена, таких как гиперхолистеринемия, гипертриглицеридемия, а также патологических состояний, ассоциированных с этими расстройствами, таких как болезни сердца и крови.
Способы ингибирования экспрессии гена РС8К9.
В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способу ингибирования экспрессии
- 14 015676 гена РС8К9 у млекопитающего. Такой способ включает введение композиции согласно изобретению млекопитающему для ингибирования экспрессии гена-мишени РС8К9. Благодаря своей высокой специфичности, дцРНК согласно изобретению специфически нацелены на РНК (первичные или процессированные) гена-мишени РС8К9. Композиции и способы для ингибирования экспрессии этих генов РС8К9 с использованием дцРНК могут быть применены, как описано в настоящем патенте.
В одном из вариантов изобретения указанный способ включает введение композиции, содержащей дцРНК, где указанная дцРНК содержит нуклеотидную последовательность, комплементарную по меньшей мере части РНК-транскрипта гена РС8К9 у млекопитающего, подвергаемого лечению. Если подвергаемым лечению организмом является организм млекопитающего, такого как человек, то композиция может быть введена любыми методами, известными специалистам, включая, но не ограничиваясь ими, пероральное или парентеральное введение, включая внутривенное введение, внутримышечное введение, подкожное введение, чрескожное введение и введение в дыхательные пути (с помощью аэрозоля). В предпочтительных вариантах изобретения указанные композиции вводят путем внутривенного вливания или внутривенной инъекции.
Если это не оговорено особо, то все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют общепринятые значения, понятные среднему специалисту в области, к которой относится настоящее изобретение. Хотя для осуществления настоящего изобретения или для анализов, проводимых в соответствии с настоящим изобретением, могут быть использованы методы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным здесь методам и материалам, однако предпочтительными являются методы и материалы, описанные ниже. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие упомянутые здесь работы во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки. В случае возникновения противоречий они могут быть урегулированы в соответствии с представленным описанием, включая определения. Кроме того, материалы, методы и примеры приводятся лишь в иллюстративных целях и не должны рассматриваться как ограничение настоящего изобретения.
Примеры
Прогулка по геному гена РС8К9.
Конструирование киРНК осуществляли для ее идентификации в двух отдельных процедурах отбора:
a) киРНК, нацеленных на мРНК человеческого и мышиного или крысиного РС8К9, и
b) всех человеческих реактивных киРНК с предсказанной специфичностью к гену-мишени РС8К9.
Были использованы последовательности мРНК для человеческого, мышиного и крысиного РС8К9: человеческая последовательность ΝΜ 174936.2 была использована в качестве эталонной последовательности в процессе осуществления процедуры отбора киРНК.
19-мерные фрагменты, которые являются консервативными для последовательностей мРНК, человеческих и мышиных и человеческих и крысиных РС8К9 были идентифицированы в первой стадии, в результате чего были отобраны киРНК, которые перекрестно реагируют с человеческими и мышиными мишенями, и киРНК, которые перекрестно реагируют с человеческими и крысиными мишенями.
Во второй процедуре отбора были идентифицированы киРНК, специфически нацеленные на человеческий РС8К9. Все возможные 19-мерные последовательности человеческого РС8К9 были экстрагированы и определены как кандидаты на последовательности-мишени. Последовательности, перекрестно реагирующие с человеческими и обезьяньими мишенями и с мышиными, крысиными, человеческими и обезьяньими мишенями, перечислены в табл. 1 и 2. Химически модифицированные варианты этих последовательностей и их активность в анализах ίη νίίτο и ίη νίνο также перечислены в табл. 1 и 2 и в примерах, представленных на фиг. 2-8.
Для ранговой оценки кандидатов последовательностей-мишеней и их соответствующих киРНК и для отбора подходящих последовательностей, их предсказанный потенциал взаимодействия с нерелевантными мишенями (о££-!агде! ро!еп!1а1) был взят за ранговый параметр. киРНК с низким потенциалом нерелевантного взаимодействия были определены как предпочтительные и было сделано предположение, что они являются специфичными ίη νί\Ό.
Для предсказания киРНК-специфического потенциала нерелевантного взаимодействия были сделаны следующие предположения, что:
1) положения 2-9 (в направлении 5'^3') цепи (уникальная область) могут вносить более важный вклад в потенциал нерелевантного взаимодействия, чем остальная последовательность (область за пределами уникальной области и область сайта расщепления);
2) положения 10 и 11 (в направлении 5'^3') цепи (область сайта расщепления) могут вносить более важный вклад в потенциал нерелевантного взаимодействия, чем область за пределами уникальной области;
3) положения 1 и 19 каждой цепи не являются подходящими для нерелевантных взаимодействий;
4) показатель нерелевантности может быть вычислен для каждого гена и для каждой цепи исходя из комплементарности последовательности цепи киРНК к последовательности данного гена и из положения несоответствия;
5) число предсказанных нерелевантных мишеней, а также наиболее высокий показатель нерелевантности должен рассматриваться как потенциальная нерелевантность;
- 15 015676
6) показатели нерелевантности являются более достоверными для оценки потенциала нерелевантности, чем число нерелевантных мишеней;
7) если принять во внимание возможное нарушение активности смысловой цепи в результате введения внутренних модификаций, то следует рассматривать только потенциал нерелевантных взаимодействий антисмысловой цепи.
Для идентификации потенциальных нерелевантных генов 19-мерные последовательностикандидаты были подвергнуты скринингу на гомологию с известными человеческими последовательностями мРНК.
Для вычисления показателя нерелевантности были выявлены следующие нерелевантные свойства для каждой 19-мерной исходной последовательности каждого нерелевантного гена:
число несоответствий в неуникальной области;
число несоответствий в уникальной области;
число несоответствий в области сайта расщепления.
Показатель нерелевантности вычисляли исходя из предположений 1-3 по следующей формуле:
Показатель нерелевантности=число несоответствий в уникальной области· 10+число несоответствий в сайте расщепления· 1,2+число несоответствий в неуникальной области· 1.
Самый нерелевантный ген для каждой киРНК, соответствующей исходной 19-мерной последовательности, был определен как ген с наиболее низким показателем нерелевантности. В соответствии с этим наиболее низкий показатель нерелевантности был определен как наиболее достоверная оценка нерелевантности для каждой киРНК.
Синтез дцРНК.
Источник реагентов.
Если источник реагентов конкретно не указан в настоящем изобретении, то это означает, что такой реагент может быть получен от любого поставщика реагентов для исследований в области молекулярной биологии в соответствии со стандартами качества/чистоты, установленными для применения в молекулярной биологии.
Синтез киРНК.
Одноцепочечные РНК были получены методом твердофазного синтеза в масштабе 1 мкмоль на синтезаторе Ехребйе 8909 (Аррйей Β^ο5у5ΐет5, Арр1ега ОеиЕсйктй СтЬН, ЭагтйаФ, Ссгтану) с использованием стекла с регулируемым размером пор (СРС, 500 А, ΓΓοΙίβο Вюсйепие СтЬН, НатЬигд, Сегт;ту) в качестве твердого носителя. РНК и РНК, содержащую 2'-О-метил-нуклеотиды, получали методом твердофазного синтеза с применением соответствующих фосфорамидитов и 2'-Ометилфосфорамидитов соответственно (Рюй^ Вюсйепие СтЬН, НатЬигд, Сегтану). Эти структурные блоки были введены в выбранные сайты последовательности олигорибонуклеотидной цепи стандартным химическим нуклеозид-фосфорамидитным методом, описанным в современных протоколах по химии нуклеиновых кислот, Веаисаде, 8.Ь. еΐ а1. (Ебгк.), Ιοίιη \УПеу & δοηκ, 1пс., Ыете ΥοιΈ Ν.Υ., И8А. Фосфортиоатные связи были введены путем замены раствора йодного окислителя раствором реагента Бокажа (Сйгиасйет МФ Ώαδ^ο^, ИК) в ацетонитриле (1%). Дополнительные вспомогательные реагенты были получены от компании Ма11тскгой1 Вакег (Спекйет, Сегтаиу).
Снятие защиты и очистку неочищенных олигорибонуклеотидов с помощью анионообменной ВЭЖХ проводили в соответствии со стандартными процедурами. Выходы и концентрации определяли по УФ-поглощению раствора соответствующей РНК на длине волны 260 нм с помощью спектрофотометра (ЭИ 640В, Весктап ί,’οιιίΕΓ СтЬН, ийег8сЫе1Вйе1т, Сегтаиу). Двухцепочечную РНК получали путем смешивания эквимолярного раствора комплементарных цепей в буфере для отжига (20 мМ фосфат натрия, рН 6,8; 100 мМ хлорид натрия), а затем нагревали на водяной бане при 85-90°С в течение 3 мин и охлаждали до комнатной температуры в течение 3-4 ч. Раствор гибридизованной РНК хранили при -20°С вплоть до ее использования.
Для синтеза киРНК, конъюгированных с холестерином в 3'-положении (также обозначаемых здесь <Ζ?1ιο1-3'), использовали соответствующим образом модифицированный твердый носитель. Модифицированный твердый носитель получала следующим образом.
Диэтил-2-азабутан-1,4-дикарбоксилат АА
О
н о
ДА
4,7 М водный раствор гидроксида натрия (50 мл) добавляли в перемешиваемый охлажденный льдом раствор гидрохлорида этилглицината (32,19 г, 0,23 моль) в воде (50 мл). Затем добавляли этилакрилат (23,1 г, 0,23 моль) и смесь перемешивали при комнатной температуре до завершения реакции, на что указывала ТСХ. Через 19 ч раствор распределяли с дихлорметаном (3x100 мл). Органический слой сушили безводным сульфатом натрия, фильтровали и упаривали. Остаток подвергали перегонке с получением АА (28,8 г, 61%).
- 16 015676
Этиловый эфир 3-{этоксикарбонилметил-[6-(9Н-флуорен-9-илметоксикарбониламино)гексаноил]амино}пропионовой кислоты АВ
АВ
Гтос-6-аминогексановую кислоту (9,12 г, 25,83 ммоль) растворяли в дихлорметане (50 мл) и охлаждали на льду. К полученному раствору добавляли диизопропилкарбодиимид (3,25 г, 3,99 мл, 25,83 ммоль) при 0°С. Затем добавляли диэтилазабутан-1,4-дикарбоксилат (5 г, 24,6 ммоль) и диметиламинопиридин (0,305 г, 2,5 ммоль). Раствор доводили до комнатной температуры и перемешивали еще 6 ч. Завершение реакции определяли с помощью ТСХ. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и добавляли этилацетат для осаждения диизопропилмочевины. Суспензию фильтровали. Фильтрат промывали 5% водной соляной кислотой, 5% бикарбонатом натрия и водой. Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенного продукта, который затем очищали с помощью колоночной хроматографии (50% ЕЮАС/гексан), в результате чего получали 11,87 г (88%) АВ.
Этиловый эфир 3-[(6-аминогексаноил)этоксикарбонилметиламино]пропионовой кислоты АС
АС
Этиловый эфир 3-{этоксикарбонилметил-[6-(9Н-флуорен-9-илметоксикарбониламино)гексаноил]амино }пропионовой кислоты АВ (11,5 г, 21,3 ммоль) растворяли в 20% пиперидине в диметилформамиде при 0°С. Раствор перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, а затем к остатку добавляли воду и продукт экстрагировали этилацетатом. Неочищенный продукт очищали путем его превращения в гидрохлоридную соль.
Этиловый эфир 3-({6-[17-(1,5-диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17тетрадекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-илоксикарбониламино]гексаноил}этоксикарбонилметиламино)пропионовой кислоты АО
Гидрохлоридную соль этилового эфира 3-[(6-аминогексаноил)этоксикарбонилметиламино]пропионовой кислоты АС (4,7 г, 14,8 ммоль) растворяли в дихлорметане. Суспензию охлаждали до 0°С на льду. К этой суспензии добавляли диизопропилэтиламин (3,87 г, 5,2 мл, 30 ммоль). К полученному раствору добавляли холестерилхлорформиат (6,675 г, 14,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Затем реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и промывали 10% соляной кислотой. Полученный продукт очищали флэш-хроматографией (10,3 г, 92%).
- 17 015676
Этиловый эфир 1-{6-[17-(1,5-диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17тетрадекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-илоксикарбониламино]гексаноил}-4-оксопирролидин-3карбоновой кислоты АЕ
трет-Бутоксид калия (1,1 г, 9,8 ммоль) суспендировали в 30 мл сухого толуола. Смесь охлаждали до 0°С на льду и медленно добавляли 5 г (6,6 ммоль) диэфира АО при перемешивании в течение 20 мин. В процессе добавления температуру поддерживали ниже 5°С. Перемешивание продолжали в течение 30 мин при 0°С и добавляли 1 мл ледяной уксусной кислоты, а затем сразу добавляли 4 г ЫаН2РО4-Н2О в 40 мл воды. Полученную смесь два раза экстрагировали 100 мл дихлорметана и объединенные органические экстракты два раза промывали 10 мл фосфатного буфера, а затем сушили и упаривали досуха. Остаток растворяли в 60 мл толуола, охлаждали до 0°С и экстрагировали тремя 50-миллилитровыми порциями холодного карбонатного буфера, рН 9,5. Водные экстракты доводили до рН 3 добавлением фосфорной кислоты и экстрагировали пятью 40-миллилитровыми порциями хлороформа, которые затем объединяли, сушили и упаривали досуха. Остаток очищали колоночной хроматографией с использованием 25% этилацетата/гексана, в результате чего получали 1,9 г Ь-кетоэфира (39%).
17-(1,5-Диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-тетрадекагидро-1Нциклопента[а] фенантрен-3 -иловый эфир [6-(3 -гидрокси-4-гидроксиметилпирролидин-1 -ил)-6-оксогексил] карбаминовой кислоты АР
В кипящую смесь Ь-кетоэфира АЕ (Ь,5 г, 2,2 ммоль) и борогидрида натрия (0,226 г, 6 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) по каплям в течение 1 ч добавляли метанол (2 мл). Перемешивание продолжали при температуре флегмы в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли 1н. НС1 (12,5 мл) и смесь экстрагировали этилацетатом (3x40 мл). Объединенный этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме с получением продукта, который очищали колоночной хроматографией (10% МеОН/СНС13) (89%).
- 18 015676
17-(1,5-Диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11.12,13,14,15,16,17-тетрадекагидро-1Нциклопента[а] фенантрен-3 -иловый эфир (6-{ 3 -[бис-(4-метоксифенил)фенилметоксиметил]-4-гидроксипирролидин-1-ил}-6-оксигексил)карбаминовой кислоты АС
Диол АЕ (1,25 г, 1,994 ммоль) сушили путем выпаривания с пиридином (2x5 мл) в вакууме. Затем при перемешивании добавляли безводный пиридин (10 мл) и 4,4'-диметокситритилхлорид (0,724 г, 2,13 ммоль). Реакцию осуществляли при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакцию гасили добавлением метанола. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и к остатку добавляли дихлорметан (50 мл). Органический слой промывали 1 М водным раствором бикарбоната натрия. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаточный пиридин удаляли путем выпаривания с толуолом. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (2% МеОН/хлороформ, Ш=0,5 в 5% МеОН/СНС13) (1,75 г, 95%).
Моно(4-[бис-(4-метоксифенил)фенилметоксиметил]-1-{6-[17-(1,5-диметилгексил)-10,13-диметил2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-тетрадекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3илоксикарбониламино]гексаноил}-пирролидин-3-ил)эфир янтарной кислоты АН
Соединение АС (1,0 г, 1,05 ммоль) смешивали с ангидридом янтарной кислоты (0,150 г, 1,5 ммоль) и ОМАР (0,073 г, 0,6 ммоль), а затем сушили в вакууме при 40°С в течение ночи. Смесь растворяли в безводном дихлорэтане (3 мл), добавляли триэтиламин (0,318 г, 0,440 мл, 3,15 ммоль) и раствор перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 16 ч. Затем раствор разбавляли дихлорметаном (40 мл) и промывали охлажденной льдом водной лимонной кислотой (5 мас.%, 30 мл) и водой (2x20 мл). Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали досуха. Остаток использовали в следующей стадии без очистки.
Дериватизированный холестерином СРС А1
Сукцинат АН (0,254 г, 0,242 ммоль) растворяли в смеси дихлорметана/ацетонитрила (3:2, 3 мл). К полученному раствору последовательно добавляли ОМАР (0,0296 г, 0,242 ммоль) в ацетонитриле (1,25 мл) и 2,2'-дитио-бис-(5-нитропиридин) (0,075 г, 0,242 ммоль) в ацетонитриле/дихлорэтане (3:1, 1,25 мл). К полученному раствору добавляли трифенилфосфин (0,064 г, 0,242 ммоль) в ацетонитриле (0,6 мл). Реакционная смесь приобретала ярко-оранжевую окраску. Раствор быстро перемешивали в шарнирном шейкере (5 мин). Затем добавляли длинноцепочечный алкиламин-СРС (ЬСАА-СРО) (1,5 г,
- 19 015676 мМ). Суспензию перемешивали в течение 2 ч. СРС фильтровали через воронку из спеченного стекла и последовательно промывали ацетонитрилом, дихлорметаном и эфиром. Непрореагировавшие аминогруппы маскировали с использованием ангидрида уксусной кислоты/пиридина. Конечную загрузку СРС определяли по интенсивности УФ-излучения (37 мМ/г).
Синтез киРНК, несущих группу бис-дециламида 5'-12-додекановой кислоты (обозначаемую здесь 5'-С32-) или группу 5'-холестерилового производного (обозначаемую здесь 5-С1ю1-). проводили как описано в \УО 2004/065601, за исключением того, что в случае холестерилового производного, для введения фосфортиоатной связи у 5'-конца олигомера нуклеиновой кислоты проводили стадию окисления с использованием реагента Бокажа.
Последовательности нуклеиновой кислоты представлены ниже в соответствии со стандартной номенклатурой и имеют конкретные аббревиатуры, указанные в табл. 1-1.
Таблица 1-1 Аббревиатуры нуклеотидных мономеров, используемых в репрезентативных последовательностях нуклеиновой кислоты. Следует отметить, что эти мономеры, если они присутствуют в олигонуклеотиде, связаны друг с другом 5'-3'-фосфордиэфирными связями.
Аббревиатура’ | Нуклеотид(ы) | |
Ά, | а | 2’-дезокси-аденозин-5'^фосфат, аденозин-5'фосфат |
с, | с | 2'-дезокси-цитидин-5'-фосфат, цитидин-5'фосфат |
С, | д | 2'-дезокси-гуанозин-5'-фосфат, гуанозин-5'фосфат |
т, | е | 2'-дезокси-тимидин-5'-фосфат, тимидин-5'фосфат |
и, | и | 21-дезокси-уридин-5’-фосфат, уридин-5'фосфат |
Ν, | п | любой 2'-дезокси-нуклеотид/нуклеотид (С, А, С, или Т, д, а, с или и) |
Ат | 2’-0-метиладенозин-5'-фосфат |
Ст | 2’-0-метилцитидин-5’-фосфат |
Ст | 2'-О-метилгуанозин-5’-фосфат |
Тт | 2'-0-метил-тимидин-5'-фосфат |
Цт | 2'-О-метилуридин-51-фосфат |
А£ | 2'-фтор-2 1-дезокси-аденозин-5'-фосфат |
СЕ | 21-фтор-2’-дезокси-цитидин-5'-фосфат |
СЕ | 2'-фтор-2'-дезокси-гуанозин-5'-фосфат |
ТЕ | 2'-фтор-2'-дезокси-тимидин-5 1-фосфат |
и£ | 21-фтор-2’-деэокси-уридин-5’-фосфат |
А, с, с, Т, и, а, с, 2' 3 | подчеркнуто: нуклеозид-5'-фосфортиоат |
ат, ст, дт, £т, ит | подчеркнуто: 2-0-метил-нуклеозид-5'- фосфортиоат |
а Заглавные буквы означают 2'-дезоксирибонуклеотиды (ДНК), строчные группы означают рибонуклеиды (РНК).
Скрининг киРНК РС8К9 в клетках НиН7, НерС2, Не1а и в первичных гепатоцитах обезьян выявил в высокой степени активные последовательности.
Клетки НиН-7 были получены из банка клеток 1СКВ (Японская коллекция биологических источников для исследований) (8Ыи)цки, 1арап, сак № 1СКВ0403). Клетки культивировали в среде МЕМ Дульбекко (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, са1. № Р0435), в которую были добавлены 10% фетальная телячья сыворотка (РС8) (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, са1. № 80115), 100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, сак Νο, А2213) и 2 мМ Ь-глутамина (ВюсЕгот АС,
ВегЕп, Сегтапу, сак. Νο К0282), при 37°С в атмосфере с 5% СО2 в инкубаторе с повышенной влажностью (Негаеик НЕКАсе11, Кепбго ЬаЬогакогу РгобисЦ Ьапдеп8е1Ьо1б, Сегтапу). Клетки НерС2 и клетки Не1а получали из Американской коллекции типовых культур (Кос^Е1е, Мб., сак. №, НВ-8065) и культивировали в МЕМ (С1Ьсо 1№бгодеп, КагНгцЕе, Сегтапу, сак. №, 21090-022), в которую были добавлены 10% фетальная телячья сыворотка (РС8) (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, сак. № 80115), 100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, сак. №, А2213), 1хзаменимых аминокислот (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, сак. № К-0293) и 1 мМ пирувата натрия (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, сак. № Ь-0473), при 37°С в атмосфере с 5% СО2 в инкубаторе с повышенной влажностью (Негаеик НЕКАсе11, Кепбго ЬаЬогакогу Ргобискз, Ьапдеп8е1Ьо1б, Сегтапу).
Для киРНК-трансфекции, клетки НиН7, НерС2 или Не1а высевали в 96-луночные планшеты при плотности 2,0х104 клеток/лунку и сразу трансфецировали. киРНК-трансфекцию (30 нМ для скрининга одной дозы) осуществляли с использованием липофектамина 2000 Вптбгодеп СтЬН, КагкгцЕе, Сегтапу, сак. № 11668-019), как описано производителем.
- 20 015676
Через 24 ч после трансфекции клетки НиН7 и НерС2 подвергали лизису и уровни мРНК РС8К9 оценивали с использованием набора ОнапОдепе Ехр1оге КН (Сепо§ргес!га, ЭнтЬаПоп С1гс1е Егетоп!, И8А, са! № ОС-000-02) в соответствии с протоколом. Уровни мРНК РС8К9 нормализовали по мРНК САР-ЭН. Для каждой киРНК получали восемь независимых результатов. В качестве контроля использовали киРНК-дуплексы, не являющиеся родственными гену РС8К9. Активность данного РС8К9специфического киРНК-дуплекса выражали как процент концентрации мРНК РС8К9 в обработанных клетках по отношению к концентрации мРНК РС8К9 в клетках, обработанных контрольным киРНКдуплексом.
Первичные гепатоциты собакоподобных обезьян (криоконсервированные) получали от компании 1п νίΐΐΌ ТесЬпо1од1е8, 1пс. (ВаШтоге, Мб., И8А, са! № М00305) и культивировали в среде 1п УйгоСКО СР Мебшт (са! № Ζ99029) при 37°С в атмосфере с 5% СО2 в инкубаторе с повышенной влажностью.
Для киРНК-трансфекции первичные клетки собакоподобных обезьян высевали на покрытые коллагеном 96-луночные планшеты (ЕБНег 8с1еп!Шс, са!. № 08-774-5) при плотности 3,5х104 клеток на лунку и сразу трансфецировали. киРНК-трансфекцию (восемь 2-кратных серийных разведений начиная с 30 нМ) осуществляли в дубликатах с использованием липофектамина 2000 (1пуЦгодеп СтЬН, КагНгцйе, Сегтапу, са!. № 11668-019), как описано производителем.
Через 16 ч после трансфекции среду заменяли свежей средой 1п УйгоСКО СР, содержащей смесь антибиотиков Тогребо АпбЫобс Μίχ (1п νίΙΐΌ Тесйпо1од1е8, 1пс, са!. № Ζ99000).
Через 24 ч после замены среды первичные клетки собакоподобных обезьян подвергали лизису и уровни мРНК РС8К9 оценивали с использованием набора ОнапОдепе Ехр1оге К1! (Сепо§ргес1га, ЭитЬаг!оп С1гс1е Егетоп!, И8А, са!. № ОС-000-02) в соответствии с протоколом. Уровни мРНК РС8К9 нормализовали по мРНК САРЭН. Затем нормализованные отношения РС8К9/САРЭН сравнивали с отношением РС8К9/САРЭН для контрольных клеток, обработанных только липофектамином 2000.
В табл. 1, 2 (и на фиг. 6) систематизированы результаты и приводятся примеры ш νίΙΐΌ скрининга в различных клеточных линиях при различных дозах. Сайленсинг транскрипта РС8К9 выражали как процент от остального транскрипта, присутствующего в данной дозе. В высокой степени активными последовательностями являются последовательности, в которых присутствовало менее чем 70% остаточного транскрипта после обработки данной киРНК в дозе, равной 100 нМ или менее. Очень активными последовательностями являются последовательности, в которых присутствовало менее чем 60% остаточного транскрипта после обработки данной киРНК в дозе, равной 100 нМ или менее. Активными последовательностями являются последовательности, в которых присутствовало менее чем 85% остаточного транскрипта после обработки высокой дозой (100 нМ). Репрезентативные активные киРНК, полученные в виде липидоидных препаратов, описанных ниже, были также скринированы у мышей ш уко. Последовательности, которые были активными ш уйго, также обычно обнаруживали активность ш уко (см., например, фиг. 6).
Скрининг 1п νί\Ό эффективности киРНК РС8К9.
Процедура получения препаратов.
Для получения наночастиц липид-киРНК использовали липидоид Ь№-01-4НС1 (МА 1487) (фиг. 1), холестерин (8|дта-А1бпс11) и ПЭГ-церамид С16 (ЛуапО Ро1аг Ыр1б8). Были получены маточные этаноловые растворы каждого из следующих компонентов: Ь№-01 - 133 мг/мл; холестерина - 25 мг/мл, ПЭГ-церамида С16 - 100 мг/мл. Затем маточные растворы Е№-01, холестерина и ПЭГ-церамида С16 объединяли в молярном отношении 42:48:10. Объединенный липидный раствор быстро смешивали с водной киРНК (в ацетате натрия, рН 5) так, чтобы конечная концентрация этанола составляла 35-45%, а конечная концентрации ацетата натрия составляла 100-300 мМ. Наночастицы липид-киРНК спонтанно образовывались после смешивания. В зависимости от нужного распределения частиц по размеру полученную смесь наночастиц в некоторых случаях подвергали экструзии через поликарбонатную мембрану (с отсечкой 100 нМ) на поршневом термоэкструдере (Ырех Ехйибег, №г111егп Ыр1б8, 1пс). В других случаях стадию экструзии не проводили. Затем этанол удаляли и одновременно проводили замену буфера либо путем диализа, либо путем фильтрации в тангенциальном потоке. Буфер заменяли забуференным фосфатом физиологическим раствором (РВ8), рН 7,2.
Характеризация препаратов.
Препараты, полученные либо стандартным методом, либо неэкструзионным методом, охарактеризовывали аналогичным образом. Препараты сначала охарактеризовывали путем визуального наблюдения. Эти препараты представляли собой беловатые прозрачные растворы, не содержащие агрегированных включений или осадка. Размер частиц и гранулометрический состав липидных наночастиц измеряли по динамическому рассеянию света с использованием Макегп Ζе!а8^ζе^ Nаπо Ζ8 (Макет, И8А). Частицы должны иметь размер 20-300 нм, а в идеальном случае 40-100 нм. Распределение частиц по размеру должно быть унимодальным. Общую концентрацию киРНК в данном препарате, а также наличие иммобилизованной фракции оценивали с помощью анализа на вытеснение метки-красителя. Образец препарата киРНК инкубировали с РНК-связывающим красителем КзЬодгееп (Мо1еси1аг РгоЬек) в присутствии или в отсутствие поверхностно-активного вещества, разрушающего препарат, 0,5% тритона-х100. Общее
- 21 015676 количество киРНК в данном препарате определяли по сигналу, передаваемому от образца, содержащего поверхностно-активное вещество, в соответствии со стандартной кривой.
Иммобилизованную фракцию определяли путем вычитания содержания свободной киРНК (измеренного по сигналу в отсутствие поверхностно-активного вещества) из общего содержания киРНК. Процент иммобилизованной киРНК обычно составляет >85%.
Ударная доза.
Мышам С57/ВЬ6 (5 мышей на группу, в возрасте 8-10 недель, СНаг1е5 К|уег ЬаЬога!опе8, ΜΑ) в хвостовую вену иглой 270 инъецировали ударную дозу препарата киРНК. киРНК приготавливали в Б-^-01 (а затем диализовали против РВ8) при концентрации 0,5 мг/мл, что позволяло вводить дозу 5 мг/кг в объеме 10 мкл/г массы тела. Перед введением дозы мышей помещали под инфракрасную лампу приблизительно на 3 мин для облегчения инъекции.
Через 48 ч после введения дозы мышей умерщвляли путем СО2-асфиксии. Затем из ретроорбитальной области брали 0,2 мл крови, после чего печень собирали и замораживали в жидком азоте. Сыворотку и печень хранили при -80°С.
Замороженную печень измельчали с использованием холодильника 6850/криогенной мельницы (8РЕХ Сеп1пРгер, 1пс) и порошок хранили при -80°С до проведения анализа.
Уровни мРНК РС8К9 определяли методом продуцирования разветвленных ДНК с использованием набора, поставляемого ОиапООепе Кеадеп! 8у§!ет (Оепокресйа), в соответствии с протоколом. 10-20 мг порошка замороженной печени подвергали лизису в 600 мкл 0,16 мкг/мл протеиназы К (Еркепйе, #МРКК092) в растворе для лизиса ткани и клеток (ЕркеШге, #МТС096Н) при 65°С в течение 3 ч. Затем к 90 мкл рабочего реагента для лизиса добавляли 10 мкл лизатов (1 объем маточной смеси для лизиса в двух объемах воды) и смесь инкубировали при 52°С в течение ночи на планшетах для иммобилизации Оепокресйа с наборами зондов, специфичных к мышиному РС8К9 и мышиному ОАРЭН или циклофилину В. Последовательности нуклеиновой кислоты для активатора захвата (СЕ), активатора метки (ЬЕ) и блокирующих (ВЬ) зондов отбирали из последовательностей нуклеиновой кислоты РС8К9, ОАРЭН и циклофиллина В с помощью компьютерной программы ОиапООепе РгоЬеПеыдпег 2.0 (Оепокресйа, Ртетоп!, Сайр, И8А, са!. № 00-002-02). Хемолюминесценцию считывали на устройстве У1с!от2-ЫдЬ! (Регкт Е1тег) в относительных единицах силы света. Отношение мРНК РС8К9 к мРНК ОАРЭН или циклофилина В в лизатах печени усредняли для каждой группы обработки и сравнивали с отношением для контрольной группы, обработанной РВ8, или контрольной группы, обработанной неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII).
Общий уровень холестерина в сыворотке мышей измеряли с использованием набора 8!апВю С1ю1еЧего1 Ыс.|шСо1ог (8!апВю ЬаЬога!огу, Воете, Тех., И8А) в соответствии с инструкциями производителей. Измерения проводили на счетчике ^с!ог2 1420 Мц1!йаЬе1 Соип!ег (Регкт Е1тег) на 495 нм.
Примеры киРНК РС8К9, приготовленных в липосомах Р-^-0Р тестировали ш νί\Ό в мышиной модели. Этот эксперимент проводили при дозе киРНК 5 мг/кг, и по меньшей мере 10 киРНК РС8К9 обнаруживали более чем 40% разрушенной мРНК РС8К9 по сравнению с контрольной группой, обработанной РВ8, а контрольная группа, обработанная неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII), не обнаруживала какого-либо эффекта (фиг. 2-5). Сайленсинг транскрипта РС8К9 также коррелировал со снижением уровня холестерина у этих животных (фиг. 4-5). Кроме того, между молекулами, которые были активны 1п νίΙΐΌ и 1п νίνΌ, наблюдалась значительная корреляция (фиг. 6). Последовательности, содержащие различные химические модификации, также скринировали т νίΙΐΌ (табл. 1 и 2) и ш νί\Ό. Так, например, последовательности 9314 и 9318 с меньшим числом модификаций, и варианты последовательностей 9314-(10792, 10793 и 10796); 9318-(10794, 10795, 10797) с большим числом модификаций тестировали т νίΙΐΌ (в первичных гепатоцитах обезьян) или т νί\Ό (9314 и 10792) в препарате ΡΝΓ-01. На фиг. 7 (см. также табл. 1 и 2) показано, что все родительские молекулы 9314 и 9318 и их модифицированные варианты являются активными ш νίΙΐΌ. На фиг. 8 в качестве примера показано, что родительская последовательность 9314 и последовательность 10792 с большим числом модификаций являются активными т νίνΌ, на что указывает 50-60% сайленсинг эндогенного РС8К9 у мышей. На фиг. 9 также проиллюстрирована активность других химически модифицированных вариантов родительских последовательностей 9314 и 10792.
дцРНК-экспрессирующие векторы.
В другом аспекте изобретения РС8К9-специфические молекулы дцРНК, которые модулируют активность экспрессии гена РС8К9, экспрессируются от транскрипционных единиц, встроенных в ДНКили РНК-векторы (см., например, Сои!иге, А. е! а1., ТЮ. (1996), 12:5-10; 8кШегп, А., е! а1., публикацию международной заявки РСТ νθ 00/22113, Сопгай, публикацию международной заявки РСТ νθ 00/22114, Сопгай, и патент США № 6054299). Эти трансгены могут быть введены в виде линейной конструкции, кольцевой плазмиды или вирусного вектора, которые могут быть включены в геном хозяина и могут наследоваться как интегрированный трансген. Этот трансген может быть также сконструирован так, чтобы он наследовался как внехромосомная плазмида (Оакктапп, е! а1., Ргос. №11. Асай. 8ск И8А
- 22 015676 (1995), 92:1292).
Отдельные цепи дцРНК могут транскрибироваться промоторами на двух отдельных экспрессионных векторах и котрансфецироваться в клетку-мишень. Альтернативно, каждая отдельная цепь дцРНК может транскрибироваться промоторами, которые присутствуют на одной и той же экспрессионной плазмиде. В предпочтительном варианте изобретения дцРНК экспрессируется как инвертированный повтор, связанный посредством линкерной полинуклеотидной последовательности, в результате чего дцРНК имеет структуру типа стебля и петли.
Рекомбинантными дцРНК-экспрессирующими векторами обычно являются плазмидные ДНК или вирусные векторы. дцРНК-экспрессирующие вирусные векторы могут быть сконструированы на основе вирусов, таких как, но не ограничивающихся ими, аденоассоциированный вирус (обзор см., например, Ми/ус/ка, е1 а1., Сигг. Шркк Мюго. Iттииο1. (1992), 158:97-129); аденовирус (см., например, Вегкиег, е1 а1., ВюТесктдиек (1998), 6:616, Κο^^εΜ е1 а1. (1991, 8с1еисе 252:431-434) и Κο^^εΗ е1 а1. (1992), Се11 68:143-155); или альфавирус, а также другие вирусы, известные специалистам. Ретровирусы были использованы для введения различных генов в различные клетки многих типов, включая эпителиальные клетки 1и νίΐτο или т νίνο (см., например, Едййк, е1 а1., 8с1еисе (1985), 230:1395-1398; Όπποκ аиб МиШдаи, Ргос. №а11. Асаб. 8с1. И8А (1998), 85:6460-6464; Уйтои е1 а1., 1988, Ргос. №11. Асаб. 8а. И8А 85:30143018; Аттерам е1 а1., 1990, Ргос. №11. Асаб. 8а. И8А. 87:61416145; НиЬег е1 а1., 1991, Ргос. №11. Асаб. 8а. И8А 88:8039-8043; Репу е1 а1., 1991, Ргос. №а11. Асаб. 8а. И8А 88:8377-8381; С1юу\с111и1у е1 а1., 1991, 8с1еисе 254:1802-1805; νаη Веиксесйет, е1 а1. 1992, Ргос. №11. Асаб. 8с1. И8А 89:7640-19; Кау е1 а1., 1992, Нитаи Сеие Тйегару 3:641-647; Όηί е1 а1., 1992, Ргос. №а11. Асаб. 8с1. И8А 89:10892-10895; Н\\п е1 а1., 1993, 1. 1^^1. 150:4104-4115; патент США № 4868116; патент США № 4980286; заявку РСТ УО 89/07136; заявку РСТ УО 89/02468; заявку РСТ УО 89/05345 и заявку РСТ УО 92/07573). Рекомбинантные ретровирусные векторы, способные переносить и экспрессировать гены, встроенные в геном клетки, могут быть продуцированы путем трансфекции рекомбинантного ретровирусного генома в подходящие упаковывающие клеточные линии, такие как РА317 и Рк1-СК1Р (^тейе е1 а1., 1991, Нитаи Сеие Тйегару 2:5-10; Сове е1 а1., 1984, Ргос. №а11. Асаб. 8а, И8А 81:6349). Рекомбинантные аденовирусные векторы могут быть использованы для инфицирования клеток и тканей широкого ряда у восприимчивых хозяев (например, крыс, хомячков, собак и шимпанзе) (Нки е1 а1., 1992. 1. Ιπίεαίοιικ Б1кеаке, 166:769), а также они имеют то преимущество, что для их инфицирования не требуются митотически активные клетки.
Промотором, регулирующим экспрессию дцРНК в плазмидной ДНК или в вирусном векторе согласно изобретению, может быть промотор гена эукариотической РНК-полимеразы I (например, промотор рибосомной РНК), промотор РНК-полимеразы II (например, ранний промотор СМУ или промотор актина или промотор мяРНК И1) или обычно промотор РНК-полимеразы III (например, промотор мяРНК И6 или РНК 78К) или прокариотический промотор, например промотор Т7, при условии, что экспрессионная плазмида также кодирует РНК-полимеразу Т7, необходимую для транскрипции с промотора Т7. Промотор может также направлять экспрессию трансгена в поджелудочную железу (например, последовательность, регулирующая поступление инсулина в поджелудочную железу (ВиссЫт е1 а1., 1986, Ргос. №а11. Асаб. 8а. И8А 83:2511-2515)).
Кроме того, экспрессия трансгена может соответствующим образом регулироваться, например, с использованием индуцибельной регуляторной последовательности и экспрессионных систем, таких как регуляторная последовательность, восприимчивая к некоторым физиологическим регуляторам, например уровням глюкозы в крови или гормонам (^οс11е^ιу е1 а1., 1994, РА8ЕВ 1. 8:20-24). Такими индуцибельными экспрессионными системами, подходящими для регуляции экспрессии трансгенов в клетках или у млекопитающих, являются системы регуляции под действием экдизонов, эстрогена, прогестерона, тетрациклина, химических индукторов димеризации и изопропил-бета-01-тиогалактопиранозида (ЕРТС). Специалист в данной области может самостоятельно выбрать соответствующую регуляторную/промоторную последовательность в зависимости от целей использования дцРНК-трансгена.
Обычно доставку рекомбинантных векторов, способных экспрессировать молекулы дцРНК, осуществляют, как описано ниже, и после этого они интегрируются в клетках-мишенях. Альтернативно, могут быть использованы вирусные векторы, обеспечивающие временную экспрессию молекул дцРНК. Такие векторы, при необходимости, могут быть введены повторно. После экспрессии дцРНК связываются с РНК-мишенью и модулируют ее функцию или экспрессиию. Доставка дцРНК-экспрессирующих векторов может быть системной, например, она может быть осуществлена путем внутривенного или внутримышечного введения, или путем введения в клетки-мишени, эксплантированные у пациента, с последующим введением этих клеток снова пациенту, или любыми другими методами, позволяющими осуществлять введение в нужные клетки-мишени.
дцРНК-экспрессирующие ДНК-плазмиды обычно трансфецируют в клетки-мишени в виде комплекса с катионными липидными носителями (например, олигофектамином) или с некатионными липидными носителями (например, Тгаикй-ТКО™). В настоящем изобретении также рассматриваются множественные липидные трансфекции для дцРНК-опосредуемого подавления различных областеймишеней одного гена РС8К9 или множества генов РС8К9 в течение одной недели или более. Успешное
- 23 015676 введение векторов согласно изобретению в клетки-хозяева может быть оценено различными известными методами. Так, например, временная трансфекция может быть выявлена по сигналу репортера, такого как флуоресцентный маркер, например белок, флуоресцирующий в зеленом диапазоне спектра (СЕР). Стабильная трансфекция клеток ех νίνο может быть обеспечена с использованием маркеров, которые сообщают трансфецированным клеткам резистентность к конкретным внешним факторам (например, к антибиотикам и лекарственным средствам), такую как резистентность к гигромицину В.
РС8К9-специфические молекулы дцРНК могут быть также встроены в векторы и использованы в качестве векторов, применяемых в генотерапии для лечения человека. Векторы для генотерапии могут быть доставлены индивидууму, например, путем внутривенной инъекции, местного введения (см. патент США № 5328470) или стереотаксической инъекции (см., например, Сйеп е1 а1. (1994), Ргос. №111. Асаб. 8с1. И8Л 91:3054-3057). Фармацевтический препарат векторов, применяемый в генотерапии, может включать вектор для генотерапии в приемлемом разбавителе, либо он может содержать матрицу с пролонгированным высвобождением, в которую может быть введен носитель для доставки генов. Альтернативно, если вектор для доставки полноразмерного гена, например ретровирусный вектор, может быть получен в интактной форме из рекомбинантных клеток, то такой фармацевтический препарат может включать одну или несколько клеток, продуцирующих систему доставки гена.
Специалистам в данной области очевидно, что помимо методов и композиций, конкретно описанных в настоящем изобретении, существуют и другие методы и композиции, которые могут быть применены для осуществления настоящего изобретения, полный объем которого определен в прилагаемой формуле изобретения.
Таблица 1
ПбЛОИЛНИЯВ человеческой пос ги рег№ ΝΜ_1?4936 | Последовательность смысловой Цепи ί5’· З')1 | 5ЕО ΙΠ ΝΟ: | Послелоьэтелънскть аипкМЫОЛОвой иепн(5-3'*1 | 5Еб 10 ΝΟ: | Збсодатг )Г|пита | Средний процеятостамктося мРНК* транскрипта при соответствующей мэшентрашти киЕНК в длвтх различных типов | 1СХ« в Н«рО2 [«М| | 1С50В гепатоцитах со6в№· лолобньа обезьян | |||
100 нМгНерО2 | 30 | нМ/НерО2 | 30 ЯМ? | ||||||||
2-20 | АССодсоисоАОбСосиСАТт | 1 | исАсссссисоАсоиссситт | 2 | АО- 15220 | 35 | |||||
] 5-33 | сссисдисоииссАОСгСостт | 3 | ссоссиосААСсдиСАССотт | 4 | АО- 15275 | 56 | |||||
16-34 | ссисАиссииссАбссосстт | 5 | ссссссиосААССАисАсгтг | 6 | АР15301 | 70 | |||||
30-48 | сссссссссссссиисАОип | 7 | АсиСААссюссссоссссстт | 8 | АО15276 | 42 | |||||
31-49 | соосссссссссиисАоиитг | 9 | ААСиОАДСССССОССССССТТ | 10 | АР 15302 | 32 | |||||
32-50 | ссссссссссоиисдсиисзт | 11 | СААСиСДАССОССОСССССГТ | 12 | АР- 15303 | 37 | |||||
40-58 | сссиисАсиисАОСЮисистг | В | САСАССсиСААСиСААСООТГ | 14 | АО- 15221 | 30 | |||||
43-61 | ииСАсиисАОСоисъсАССк | 15 | осисАСАССсиоААсиОААТт | 16 | АР- 15413 | 61 | |||||
82-100 | сиоАСАсиосюиссоссссп· | 17 | ссссссодсссАсисисАСтт | 18 | АР- 15304 | 70 | |||||
100-118 | сссссос асссс иссииссгт | 19 | йСААсаАсессиссссюсстт | 20 | АР- 15305 | 36 | |||||
101-119 | осссссАСбссиссииссАТт | 21 | иосААСоАСоссиссссюстт | 22 | АР- 15306 | 20 | |||||
102-120 | ссоюсАСссоиссииосАбтт | 23 | си<ХАА00АС<х?сиссс<ютт | 24 | АО- 15307 | 38 | |||||
105 123 | <зсАСоеоисоииссА<лСАСтт | 25 | сиссиссАдссАСОСоисстт | 26 | АР- 15277 | 50 | |||||
135-153 | исссАассАсюАииссосотгг | 27 | ссссюААиссиобсиоосАТхт | 28 | АР- 9526 | 74 | 89 | ||||
135-153 | □сге А Ссс А ОСАииссСгсСГВ Т | 29 | сосооААиссиоосиоосАТзт | 30 | 'АР- 9652 | 97 | |||||
136-154 | сссасю: а оз Аииссоссстат | 31 | осссосААиссисюсиссстэт | 32 | АР- 9519 | 78 | |||||
136-154 | сссА&хАОСАшкхСсСсТгТ | 33 | ссоссюААиссисссисюстц | 34 | АР9645 | 66 | |||||
138-156 | СА<зссАООАииссбСОсест5Т | 35 | осссасосААиссисасистгт | 36 | АР9523 | 55 | |||||
138-156 | сАСссАООАиииСсОсСсГзТ | 37 | {гсссссссАдиссиодсистзт | 38 | АО9649 | 60 | |||||
585-203 | АесиссиосАСАсиссисстзт | 39 | оюАСЮАсисиссАОСАСситзт | 40 | АР9569 | 112 | |||||
185-203 | АСсиссиОсАсАСиссиссТ^Т | 41 | сюАССАсисиОсАССАСситБТ | 42 | АР9695 | 102 |
- 24 015676
Положения в ч^псгмаделой ПРС-ТЛ ретХз ΜΝί_174936 | Последовательность смысловой цепя{_5’-з·^ | 8Е<2 ГО ΝΟ: | ПсхлсдоБаге.тьностъ антисмысловой пени (5-31^ | 5Е<3 ГО ΝΟ: | Эбзавчекк дупгкка | Средний процент оставшегося иРЦКтранскритттэ при соответствующей концентрации кнРМК в клетках различных типов | 1С5Ов НерО2 (иМ] | 1С50 в гепатоцитах собакоподобных обезьян (нМ| | |||
100 нМ/НерС2 | 30 яМ/НерС2 | 3 ΜΚί/Ηβρΰ | 1 30 нМ/ НеЬэ | ||||||||
205-223 | САССССААСОСиСААСЮССгТТ | 43 | ссссииоАоссииососиоп | 44 | ΑΌ15222 | 75 | |||||
208-226 | СССААСОСиСААСЮССССОТТ | 45 | сосссссиисАоссииосоп | 46 | АО- 15278 | 78 | |||||
210-228 | СААСССиСААОССОССОССТТ | 47 | ооссюсбсс^исАОСсииотт | 48 | АО- 15178 | 83 | |||||
232-250 | (зиосАССососАСссссистт | 49 | ОАСЮСссу<к;сс&оиссАСТг | 50 | АО15308 | «4 | |||||
233-251 | иссАССососАСОсесиситт | 51 | АСАбсссоиоссссюиссАТт | 52 | АО- 15223 | 67 | |||||
234-252 | ССАСС0СССАС06ССиС1АП | 53 | иАОАОСССО1<<СМ2О<51’ССТТ | 54 | АО- 15309 | 34 | |||||
235-253 | <ЗАСс<зсссАССюссисиАсп | 55 | сиАОАССсссиосососисп | 56 | АО- 15279 | 44 | |||||
236-254 | АССосасАСооссисиАСОп | 57 | ссиАОАСсссоиосососитт | 58 | АО15194 | 63 | |||||
237-255 | ссс€ссА€ссссисиАОзип | 59 | АСсиАОАСОССсиосссооп | 60 | АР- 15310 | 42 | |||||
238-256 | ссссс Асебссиои асс истт | 61 | САСсиАОАОбссоиссбсотт | 62 | Αϋ15311 | 30 | |||||
239-257 | ссосАСсоссисиАОоисип | 63 | АОАССОАОАСЮССОиОСССТТ | 64 | Αϋ- 15392 | 18 | |||||
240-258 | сосдсссссисиАОсисисп | 65 | одсАСсиАОАОСсссиосотт | 66 | АО- 15312 | 21 | |||||
248-266 | сисилосисиссисоссАОтт | 67 | СиОССбАООАСАССиАОАОГТ | 68 | Αϋ- 15313 | 19 | |||||
249-267 | исилосисиссисоссАСсп | 69 | ССиССССАСОАСАССиАОАП | 70 | АО- 15280 | 81 | |||||
250-268 | сидсизисиссисбсСАСЮАП | 71 | иссиосссАОСАбАссидотт | 72 | Αϋ- 15267 | 82 | |||||
252-270 | Асбисис<ъссссА<кЗАСАгт | 73 | иоиссиосссАООАОАСсшт | 74 | АО15314 | 32 | |||||
258-276 | ССиССССАСОАСАОСААССТТ | 75 | соииосисиссисхххЗАССП | 76 | АО15315 | 74 | |||||
300-318 | соисАОсиссАОСссюисстзт | 77 | ооАСсоссиооАСсиоАСбТгТ | 78 | АО- 9624 | 94 | |||||
300-318 | <0 исАСсиссАОСсСКи иссТ зТ | 79 | соАССОссипсАОсиоАСотзт | 80 | Αϋ9750 | 96 | |||||
301-319 | оисАСсиссАООссюисситзт | 81 | АОСАССОССиООАОСиСАСТзТ | 82 | АО- 9623 | 43 | 66 | ||||
301-319 | ОисАСсисс АОСгсССиссиТзТ | 83 | АООАССОССиООАСЗСиОАСТзТ | 84 | Αϋ- 9749 | (05 | |||||
370-388 | аососсссиоазсАОбАссп | 85 | ссиссиосссАСОСнХ'СССтт | 86 | АР- 15384 | 48 | |||||
408-426 | ссдсюиосиоазАСссиштзт | 81 | СААСОсиАОСАССАОсисстьТ | 88 | АО- 9607 | 32 | 28 | 0,20 | |||
408-426 | ССАОсиСтбибсиАСссииСТзТ | 89 | сААСКтСи АСсАСс АСгССгССТ57 | 90 | АО9733 | 78 | 73 | ||||
41М29 | осиосиосидсссискзсоитзт | 91 | АСОСААО<дСиАОСАССАССТ5Т | 92 | Αϋ· 9524 | 23 | 28 | 0.07 | |||
411-429 | СсиССцСсиАОссииСгсСиТзТ | 93 | АССсААСССиАСсАСсАОСТ:! | 94 | АО9650 | 91 | 90 | ||||
412-430 | сиссиссиАсесииосоиитзт | 95 | ААСОСААОССиАССАССАОЬТ | 96 | АР- 9520 | 23 | 32 | ||||
412-430 | сисоиосилсссииссоиитгт | 97 | ААСОСААООСиАОСАССАОТзТ | 98 | АО9520 | 23 | |||||
412-430 | сиСОиОсиАСссииСсСииТ5Т | 99 | ААССсААСССиАСсАСсАбТзТ | 100 | АО9646 | 97 | 108 | ||||
416-434 | иосиАсссииссоиисссАТзт | 101 | ПСООААСОСААООСиАССАТзТ | 102 | АО9608 | 37 | |||||
416-434 | иСсиАОссииСгсСииСсСАТзТ | 103 | иСООААСОсААСКЗСиАСсАТзТ | 104 | АО9734 | 91 | |||||
419-437 | иАсссиисссиисссАсадТзт | 105 | иссисооААСосААСОсиАТгт | 106 | АО9546 | 32 | |||||
419-437 | иАбссииСсбиисс(иА<ЗС!АТ5Т | 107 | иССиСОбААСОиААСОСиАТзТ | 108 | АО9672 | 57 | |||||
439-457 | САССОССиООСССААССАСГТ | 109 | оиосиисооссАбоссоистт | НО | АО- 15385 | 54 | |||||
447-465 | ОССССаАОСАСССОАОСАСП | 111 | оиссисоооиосииссосстт | 112 | АО- 15393 | 31 | |||||
448-466 | ССССААССАССССАОСАССП | 113 | соиосисссоиссииссостг | 114 | АО- 15316 | 37 | |||||
449-467 | ССОААССАССССАССАССОТТ | 115 | сссиасисссоиосиисйсп | 116 | АО- 15317 | 37 | |||||
458^76 | ССОАОСАССЮААССАСАОСП | 117 | осисиооиоссоиссиссоп | Н8 | АО- 15318 | 63 | |||||
484-502 | САСсосиоссссААООА исгт | 119 | САиссииоососАосооиотт | 120 | Αϋ- 15195 | 45 | |||||
486-504 | ссосиоссссААООАисссп | 121 | сослиссишхзсос Аоссо п | 122 | АО- 15224 | 57 | |||||
487-505 | сосиссоссААСОАиссоитт | 123 | АСОолиссиисюсосАоссп | 124 | АО- 15188 | 42 | |||||
489-507 | сиососсААСюлиссоисотт | 125 | есАС<ЮАиссиио<3€ССАОтт | 126 | АО- 15225 | 51 |
- 25 015676
Положения в человеческой рег)й ΝΜ.174936 | Последовательность смысловой цели (5‘-3')1 | 5ΕΩ ΙΟ ΝΟ: | Последовательность антисмысловой цепи($’-3)1 | 8Е<? ГО ΝΟ: | С&эдтаме дупгккз | Средний процент оставшегося мРНКтрлнекриптэ при соответствую щей концентрации киРНК в клетках раалил пых типов | [С50в НерО2 [нМ] | £50 в гепатоцитах сосано подо&ных обезьян (чМ) | |||
100 нМ-НерО^ | 30 «М-ЫерОЗ | нЬ№ерО2 | 30 нМ·' НеЪа | ||||||||
500-518 | лиссоиосАСгсиисссиостт | 127 | ССАСЮСААССиССАССОАЦГТ | 128 | АО15281 | 89 | |||||
509-527 | ссииоссиссюдссиАСситг | 129 | АСОиАССиСССАСОСААССТТ | 130 | дц- 15282 | 75 | |||||
542-560 | АСЗАОАСССАССиСиСССАТТ | 131 | иосоАСАсаиссюисисситт | 132 | АО- 15319 | 61 | |||||
543-561 | ссАСАСССАССисисослотт | 133 | сцссоАолооиоосисисстт | 134 | ΑΕ- Ι 5226 | 56 | |||||
544-562 | слсАсссАСсисисосАситт | 135 | АСиоссАОАОсиаосисистт | 136 | АЕ>- 15271 | 25 | |||||
549-567 | ссАСсисисосАоиСАСАотт | 137 | сисисАсисссАОАОсисогг | 138 | АО- 15283 | 25 | |||||
552-570 | ссисисоСАсисАСАССсстт | 139 | ссбСисиаАсиоссАбАС<зтт | 140 | АО- 15284 | 64 | |||||
553-571 | СиСЦСССАСиСАСАССССАТГ | 141 | иосасисицАсцсссАСАОтг | 142 | Αϋ- 15189 | 17 | |||||
554-572 | исисссАсисАСАС.спсАстг | 143 | оиосссисиоАСцоссАОАтт | 144 | АО- 15227 | 62 | |||||
555-573 | сисосАсисАОАЦсосАситзт | 145 | Асиссосисисдсисссдстуг | 146 | АО- 9547 | 31 | 29 | 0,20 | |||
555-573 | сисСоАОисАСАСсбсАсиТзТ | 147 | АоиосссисиоАсиосоАСТзт | 148 | АО9673 | 56 | 5? | ||||
558-576 | ССАЦиСАСАОСССАСибССВТ | 149 | сосАСгиссосисиоАсиссгйТ | 150 | Αϋ- 9548 | 54 | 60 | ||||
558-576 | СсАОисАСАОсСсАсиОссТзТ | 151 | салсиосссиаюАсиссткт | 152 | АО 9674 | 36 | 57 | ||||
606-624 | оос ди лссис асс аао а ιχτδΤ | 153 | САисипооисАСоидиссстьт | 154 | АО 9529 | 60 | |||||
606-624 | СССЛиАссгсДссААСАрсЦТ | 155 | одисиисоисАСЮиАиссстзт | 156 | АО- 9655 | 140 | |||||
659-6 77 | иссисдАОА иоАоиооссдтгт | 157 | иссссдсисАисииСАССАТзТ | 158 | АО- 9605 | 27 | 31 | 0,27 | |||
659-677 | иООиСААОАиОАСиСасСАТБТ | 159 | иссссАсисАисиисдСслтвТ | 160 | АО9731 | 31 | 31 | 0Д2 | |||
663-681 | СААСлислсиссссАссиотзТ | 161 | САСюиссссАазсдисиистБТ | 162 | АО- 9596 | 37 | |||||
663-681 | СААОАиОАСиСгОсОАсбаСТвТ | 163 | сАСоисоссАсиолисиистзт | 164 | АО- 9722 | 76 | |||||
704-722 | ссСАшисбАсиАСАиссАТзТ | 165 | исолисиАоисоАСлиоостзт | 166 | АО 9583 | 42 | |||||
704-722 | сссАиОисОАсиАсАисСАТвТ | 167 | исоАиоиАцисоАсАиссстгт | 168 | АО- 9709 | 104 | Ζ4 |
718-736 | диссдасАСОАсиссисиствт | 169 | сдодсюАсиссиссисоАШУг | 170 | ЛО- 9579 | 1)3 | |||||
718-736 | АисСЛССАШлАсиссисиСТзТ | 171 | сАСАССАоъссиссисоАиы | 172 | АО- 9705 | 81 | |||||
758-776 | ссдАСсисоАССссАииАСТт | |73 | оиАдиссссиссАСсиисстт | 174 | Αϋ- 15394 | 32 | |||||
759-777 | сдАСсиоадссссАиидсстт | 175 | соидлиссссцссАбсцистт | 176 | АС- 15196 | 72 | |||||
760 778 | ААСсисоАОСоаАииАссстт | 177 | сссиАлиссссиссАссиитт | 178 | Αϋ- 15197 | 85 | |||||
777 795 | сссиссАСсаиАСссоссотт | 179 | соссссоиАссцисоАСССТТ | 180 | АО- 15198 | 71 | |||||
782-800 | САСОСиАССООССОбАиСАЪТ | 181 | ислиссссссосидссоиотзТ | 182 | А0- 9609 | 66 | 71 | ||||
782-800 | сА сСС иА е^ССЮсОС А иСАТзТ | 183 | исАиссоссссцнАССоистзт | 184 | АО- 9735 | 115 | |||||
783-801 | АССОиАССОСОССОАиСААЪТ | 185 | иисдисссссссоиАсссшуг | 186 | АО9537 | 145 | |||||
783-801 | А сСгб иАссСОСсОСА110 А А ТзТ | 187 | ищАиссссссосцдссоитзт | 188 | АО9663 | 102 | |||||
784 802 | сев и а ссооосооа ис а литят | 189 | а иисд иссосссскз оассстзТ | 190 | АО- 9528 | ИЗ | |||||
784-802 | с &3 и А ссСЮ Ос СС А иС А А чТ 5 Т | 191 | диисАисссссс<к1иАССОтзТ | 192 | Αϋ- 9654 | 107 | |||||
785-803 | ссидссссоссодиаАлиАвт | 193 | идиисАиссосссоси ассп зт | 194 | 9515 | 49 | |||||
785-803 | {ЗСиАссСОСсССАиСААиАТдТ | 195 | иА и ис а иссссссо с цасстзт | 196 | Αϋ- 9641 | 92 | |||||
786-804 | СиАССССОСОСАибААЦАСТвТ | 197 | оиАиисАиссссссссцАСТхТ | 198 | Αϋ- 9514 | 57 | |||||
786 804 | СгцАссОСОсСгСАцС А АцДсТбТ | 199 | аиАиисАЦссбссссоиАсът | 200 | АО- 9640 | 89 | |||||
788-806 | АССаСССССАиаААЦАССАТ$Т | 201 | ибсилиисАиссосссскзитзт | 202 | АО- 9530 | 75 | |||||
788-806 | АссСОСсСбАибААиАСсАТ^Т | 203 | иоСиАиисАиссоссссйитгТ | 204 | АО- 9656 | 77 | |||||
789-807 | сссосгСсюдцаААидссАствт | 205 | сиссидиисАисссссссотуТ | 206 | АО- 9538 | 79 | 80 | ||||
789-807 | ссСССтсССАиОААиАссАСГаТ | 207 | сиооиАиисдцссоссссст5Т | 208 | АО- 9664 | 53 | |||||
825-843 | ссиссиосАссиоиАисистхт | 209 | ОАбдиАСАССиССАССАООТ5Т | 210 | АО- 9598 | 69 | $3 |
- 26 015676
ТТсло^чння в чедовенеской пос-та рвг№ ΝΜ.Π4936 | Последовательность емыслодок цели (У-з)1 | 5Е9 10 N0: | ПостгедовЕтепыистъ антлсмыслОЕмОЙ □етпт ГОЗ')3 | 5Е9 10 ΝΟ | Эбздечегеа: ДугШексз | Средний Процент огГавшегося мРНК транскрипта присктветсгвчощей Концентрации ккРНК вклепках различных ТНПСЬ | ГСТОв НерЙ2 [нМ] | Κ50 в гепатоцитах собакополобных обезьян (нМ) | |||
100 нМИерСЕ | 30 нМ/НерС>2 | 3 нМ/Нер5 | 30 нМг ши | ||||||||
«25-843 | ссиОбиООАОСиСиАиеисТзТ | 211 | ОАОАиАсАССиСсАСсАСОТ$Т | 212 | АО9724 | 127 | |||||
82б-«44 | сиооиаоАбоиоидисисстзЗ | 213 | ССАСАиАСАССиССАССАОТзТ | 214 | АО9625 | 58 | 88 | ||||
826-844 | сиООиССА<ЗСиСиАисиссТ5Т | 215 | <ЗС АСАиАсАССГЛ?< АСсАСГзТ | 216 | АО- 9751 | 60 | |||||
«27-845 | исоиосАСюисиАисисситвТ | 217 | АСйАСАиАСАССиССАССАТ5Т | 218 | АО- 9556 | 46 | |||||
827 845 | иООиСЮ АСОиСи АисиссиТзТ | 219 | АС0А0АиАсАССиСсАСсАТ5Т | 220 | Αϋ- 9682 | 38 | |||||
828-846 | соиооАСюисиАисиссиАТзт | 221 | илсоАОдиАСАСсиссАССТзт | 222 | АО- 9539 | 56 | 63 | ||||
828 846 | СОиССгАООиСиАисиссиАТзТ | 223 | цАйОАдАиАсАССиСсАССТзТ | 224 | АО9665 | 83 | |||||
831 849 | ссАОсисиАисиссиАСдгат | 225 | сисиАОСАСдилСАСсисстзт | 226 | АО9517 | 36 | |||||
831-849 | СИЗАССиСиАисиссиАСАсТзТ | 227 | ОиСиАССАОАиАсАССиССТ5Т | 228 | АО9643 | 40 | |||||
833-851 | дссиоиАисиссиАСАСАСгвт | 229 | ои<311сиАООАСАиАСАСсит5Г | 230 | АО- 9610 | 36 | 34 | 0,04 | |||
833-851 | АбСиСгцАисиссиЛОАсАсТзТ | 231 | биСПСиАбСАСАиАсАССиЪТ | 232 | АО- 9736 | 22 | 29 | 0,04 | |||
833-851 | АГ&СФОГиАГиОиССсиГаСЦаСГаСтт | 233 | р еиГгиГсиГаС1еАТ8АП±А1сАГсСГиТ5Т | 234 | АЭ- 14681 | 33 | |||||
«33-851 | АОСПЮиСАиГСЛЖГСЮГАОАСГАСГГ^Т | 235 | сигоигсшоабАОАСГАСГАСГсллтзт | 236 | АО1469! | 27 | |||||
833-85! | Αβ (ЗиСвА и СиСс иаОэ С а<ГТ5 Т | 237 | р-^иТвиГсиГаОТ^А^АЕиАГсАЕсСГи ГзТ | 238 | АО- 14701 | 32 | |||||
833-831 | А £.0 μ ОиАи СиСс ЩО аС аСТ $Т | 239 | оигсшсгигАаслоАигАСЕАОсги^т | 240 | АО14711 | 33 | |||||
833-851 | А^РКЭГиАГиСГиСКийОГаСГаСГТэТ | 241 | ОиОиСиаСба£АиАСАс<-иТ $Т | 242 | АО- 14721 | 22 | |||||
833-851 | АСоикииысюгжплАОАСЕАСГГзт | 243 | 0исиСиэ60аеАиАСАссиТ$Т | 244 | АО- 14731 | 21 | |||||
833-851 | А^биСиАиСиСсиаОаСаСТзТ | 245 | <ЗиСиСиаб<ла§ АиАСАссиТзТ | 246 | АО- 14741 | 22 | |||||
833-85! | СГсАкСГсиЕсАЕ'иАГдОЕсСГиОСйАПзТ | 247 | р 1<1сАГ^<гГсСГ|1А{и01аСйе.С-Г|ЯЗГТ5Т | 248 | А Ο- Ι 5087 | 37 | |||||
833-851 | с<ГАсгасгиялАи/АсссгсшюсАТзт | 249 | и1СЕсгА<юс₽лигАигаАО<зоигссп5Т | 250 | АП- 15097 | 51 | |||||
833-851 | СсАсСсисАиАёСсСиОйАТзТ | 251 | р-иС1сА^<51гСГиАп16^1£СГи<ЗГсТ8Т | 252 | АО 15107 | 26 : |
- 27 015676
Поле же нияв человечеохей гюс-тя рсгХг ΝΜ_ 174936 | Последовательность Омысдовоц цепи | 8Ер Ю ΝΟ: | £1СнУ1еДОБЙТйЛЬКМтъ антномыслофОЙ иелн (5-31^ | 5ЕР ΙΟ ΝΟ: | Утнтй дуплекса | Средний процент оставшегося мРНК· транскрипта при соответствующей концентрации киРНК т клеттйх различных типов | 1С50в НерС2 |нМ] | 1С50в гепатоцитах ссбздогтодебных обезьян (яМ) | |||
100 нМНерОЗ | 30 егМ/НерСЗ | κΜ»ΉβρΟ2 | 30 нМ. Нейэ | ||||||||
833-851 | СсАсСсПсАиАдСсС и<л£ АТ ьТ | 253 | С№ГАСИХ1€{ССАиЮАОСОи:Г1СИ5Т | 254 | АО15117 | 28 | |||||
833-85) | СйАГсСГсиГсАп^А^СкС/иОГаАГТзТ | 255 | иССАС^сСиаиОАСКл<ли®сТзТ | 256 | АО- 15127 | 33 | |||||
833-851 | СС1АСГС1СШГС(АиМОССГСШГССАТ5Т | 257 | иССАСесСиаиСАСССидсТзТ | 258 | АО15137 | 54 | |||||
833-851 | СсАсСсЪсАиА^ОсСцС^АТзТ | 259 | иССАбесСиаиСАООСи^сТзТ | 260 | Αϋ15147 | 52 | |||||
836-854 | исилисиссиАСАСАССАСТзт | 261 | сиссисисидсЮАОАиАСАЪт | 262 | АО9516 | 94 | |||||
836-854 | иСиАисиссиАСАсАссАб-ТзТ | 263 | СибСиоиСиАССАСАиАсАТ5Т | 264 | АО9642 | 105 | |||||
840-858 | исиссидбАсассАосАиАТзт | 265 | идиссиссисисиАб<ЗАаАТ&т | 266 | Αϋ- 9562 | 46 | 51 | ||||
840-858 | исиССиАОАсАссАСсАиАТ$Т | 267 | идиосибСтисиСиАСКгАОАГзТ | 26« | Αϋ- 9688 | 26 | 34 | 4,20 | |||
840-858 | ил и ГсС ήιΑ А А ГсСГаО Ге А ГиА ПьТ | 269 | р-иАЕиСГеиГдСГиСГиСГиАГвСГэСГаВТ | 270 | АО- 14677 | за | |||||
840-858 | иГСГиГСК^АСАСГАСОАОСТАПГАТзТ | 271 | υιχυίοοίυίϋουίσυίΟίυΓΑΟΟΑΟΑΤίΐ | 272 | АО- 14687 | 52 | |||||
840-85« | исЦсСиАЕАсАсСаСсАиАТзТ | 273 | р иАГиС&иГеСГиеГцСЕиАГбС&ОГаПТ | 274 | АО- 14697 | 35 | |||||
840-858 | 1>е ПсСи АцАе Ас Са<3 с Ан А Т 5Т | 275 | игдсютялссигаигсязгАООАСАТ&т | 276 | АО14707 | 58 | |||||
«40-85« | иГ<и(еС?иАа(АГсА£сСГаО£сАГиА1Т5Т | 277 | СА11ССиеОи?иСиАОСабаТ2Т | 278 | АО1л7!7 | 42 | |||||
840-858 | иязгигсгсгигАбАсглсязгАссглигАВт | 279 | иАиосивоигисиАОСа^аТзт | 280 | АО- 14727 | 50 | |||||
840-85« | ЦсисСиА^АсАсСаСсАиАТзТ | 281 | иАПССивСи’^иСиАСбайаТ'аТ | 282 | АО14737 | 32 | |||||
840-858 | ДГдСРсСЕСГМ^иБАИаиГиСГдОГГэТ | 283 | р-сСГдАГаиЬАГаСГиСТсАГяСГсСГиТзТ | 284 | АО15083 | 16 | |||||
840-85« | А(КгСгс£иях}АсигигигАппггскизт5т | 285 | СГС1СААи(АААСЛЛСГС5АССС1'СГиГГ^Т | 286 | АО15093 | 24 | |||||
840-85« | А^СсСиОйА^иииаииС^СТзТ | 287 | р-сС Г^АГаб ЬА£аС 1иС1е Αίβΰ ίς£ίυΤ$Т | 288 | АО15103 | 11 | |||||
840-858 | АеОсСиС^еиииэииСеотзт | 289 | сгстодд ЩААдсгигсоАСЮсРсгиазт | 290 | АО- 15113 | 34 | |||||
840-858 | А£«О£сСТиСГеА^и1йи£эиП1СГя(ЗП’5Т | 291 | СССААиаААсуССАСОссиТхТ | 292 | АО15123 | 19 | |||||
840-858 | АС<зсйсц1йэсА<зиюш1Аиги?сЮ(Зт$т | 293 | СС<3 ААиаААсиССАСЮссиТ зТ | 294 | АО- 15133 | 15 | |||||
840-858 | А5,<ЗсСиб§А2.иииаии€£бТзТ | 295 | СССААцаДАсиССАССссиТ5Т | 296 | АО- 15143 | 16 | |||||
841-859 | сиссиАСАСАССАССдиАСт$т | 297 | сидисгсисоисисиАСбАСТвт | 298 | Αϋ9521 | 50 | |||||
841-859 | сиесиАбЛсАссАОсАиАеТаТ | 299 | Сидисси^иоисиАССАСТзт | зею | АО9647 | 62 | |||||
842-860 | иссиА0АСАссАССАидсАТ5Т | 301 | исидисхгиссиоисиАбСАТзТ | 302 | АО9611 | 48 | |||||
842-860 | иссиА<ЗЛсАссАОсАиАсАТ&Т | 303 | иеидиссиосиснХнАсбАТЕТ | 304 | АО9737 | 68 | |||||
843-861 | ССиАС.АСАССАССлиАСАСТБГ | 305 | сисиАиссиссцсисиАсстзт | 306 | АО- 9592 | 46 | 55 | ||||
843-861 | оси АСАсАсс АСсАиАс АСТзТ | 307 | сиОиАиссиссисисиАОстзт | 308 | АО9718 | 78 | |||||
847-865 | сасассаосаидсАОАсистзТ | 309 | САсисисиАиосбооисистзт | 310 | АО9561 | 64 | |||||
847-865 | САсАссАСсАиАсАСАСиСТзТ | ЗП | сАсисисиАИСсиосиоисвт | 312 | АО9687 | 84 | |||||
855-873 | С А и АСАС АС ис АСС АССССТзТ | 313 | ссосиосисАСсссосАистт | 314 | АО9636 | 42 | 41 | 2,10 | |||
855-873 | с А и А с АС А СиС А ссАссСС ТзТ | 335 | ссссискФсАсисиоиАист?! | 316 | АО9762 | 9 | 28 | 0,40 | |||
860-878 | АСАСиСАССАСССССАААиТзТ | 317 | дииисссосисюисАсисит$т | 318 | АО9540 | 45 | |||||
860-87« | АС АС иС АссЛссб СС Л Л ЛиЪТ | 319 | Αΐ пшссссгсиоспоАсисивт | 320 | АО- 9666 | 81 | |||||
801-379 | ОАОбб АССАбСббОА АД истуг | 321 | САииисссоеиосисАСпстзТ | 322 | АО9535 | 48 | 73 | ||||
861-879 | С АС 11(3 А С£ А ссСИЗС А А А исТьТ | 323 | ОАиписссссиотисАСистзт | 324 | АО9661 | 83 | |||||
863-881 | ОиОАССАСС6<ЗОАААЦССАТ$Т | 325 | исоАиипохсюиобисАСът | 326 | АО9559 | 35 | |||||
863-881 | (лсбАссАссСгбСААДисОАТзТ | 327 | исодииисссссиооисАСтзт | 328 | АО- 9685 | 77 | |||||
865-883 | САССАССбОСААДиСбДОбТаТ | 329 | ссисслииисссаоисоист.т | 330 | АО- 9533 | 100 | |||||
865-883 | САссАссОСЮАААисСАССТзТ 1 331 | ссиссдииисссссисюистзт | 332 | АО9659 | «8 | ||||||
866-884 | АССАСССООААА иССАСССТ?! | 333 | сссиссАниисссссисситзт | 334 | АО- 9612 | 122 | |||||
866-884 | Ас< ДссССС А АДисС АСгОСТ $Т | 335 | сссисслииссссссисситзт | 336 | Αϋ9738 | 83 |
- 28 015676
Положения в человеческой ТГОС-ТМ регЛ? ЬГМ_174936 | Последовательность смысловой цепи (5-3')1 | 8ЕО П> ΝΟ: | Последовательность ЭЯГИСМЫатовоЙ иепи(5-37^ | 5Ё0 ГО ΝΟ: | Обсвичечв дуютага | Средний процент оставшегося мРНктраяскршпа при соответствующей концентрации ки₽НК в мзегках различных типов | ЮЭв Нер52 (нМ1 | 1С50в гепатоцитах собэтопозкйяых обезьян (нМ) | |||
160 нЬ4/ИерО( | 30 нМНер<3 | 3 нМ/НерО | 30 2 нН' НеЬа | ||||||||
867-885 | ССАССаОСАААиССАССССТзТ | 337 | бсссиссАииисссосиоотвТ | 33« | АО9557 | 75 | 96 | ||||
867-885 | ссАссСОаАААис<ЗАСК1СсТ5Т | 339 | осссиссАииисссосиостзт | 340 | АО9683 | 48 | |||||
875-893 | АААЬССАСЮССАСШиСАиЪТ | 341 | диОАСССиссссиссА1ги1ггзТ | 342 | АС- 9531 | 31 | 32 | 0,53 | |||
875-893 | АЛАисОАОСКгсАОССисДиТзТ | 343 | АисдсссиссссисоАииътгт | 344 | АО9657 | 23 | 29 | 0?66 | |||
875-893 | А£аАГиС1£А£еа(вСйС1Т£ОСиСйи(Т5Т | 345 | р-аиГ^ГсО&и^ГсСГиС^АЛхОГиТзГ | 346 | АС- 14673 | Й1 | |||||
$75-893 | А А А и/СГС АСОССГА 0С01ЖГА О ГГзТ | 347 | дийАСК/оплг-сгсесш^кзАигиш^ т | 348 | АС- 14683 | 56 | |||||
875-893 | АаАиСеАдСэСаОеОиСаиТ 8Ϊ | 349 | р-аиГеАГсСГсиГвСГсСТиСГбА£ииП1Т5Т | 350 | АС- 54693 | 56 | |||||
875-893 | АаАиС&А$С[£СаС£ОиСаиТ$Т | 351 | А1г1ОАСГС£С:ОгаС1С(0П5?:ГОАиг0:11П5 т | 352 | АС- 14703 | 68 | |||||
875-893 | АГщАГйС^АГзОГйСЙСГ^бгиСЦЫТъТ | 353 | ЛиОАСссООссСиССАиииТзТ | 354 | АС- 14713 | 55 | |||||
875-893 | А А А игсго АООСгСГАСОС 1ЖГА и ГТзТ | 355 | диОАОхОбссСиССАиииТвТ | 356 | АС- 14723 | 24 | |||||
875-893 | АаАиС*А§С^СаО§ОиСаиТзТ | 357 | АООАСосиСгсхСиССАиииТзТ | 358 | АО- 14733 | 34 | |||||
875-893 | СГзОйАГсСГсиГсАГиАГвОГсСГиСеГзТ | 359 | р-сА^вС(сС(йА£и01аОР^С{иСГсС^Т5Т | 360 | АС- 15079 | 85 | |||||
875-893 | СгОООГАСЮЮЮЮГАиГАООСГСЩГСТЯ | 361 | сгаоосюялашодоооогссююът | 362 | АС- 15089 | 54 | |||||
875-893 | С^сАсСсСсАиА^бсСиОТзТ | 363 | 364 | АС15099 | 70 | ||||||
875-893 | С^ОсАсСсисАиАйОсСиОТзТ | 365 | СГАОС1СеСЛ1£Аи?СА(Х!СиГОСК,ЮЪТ | 366 | АС- 15109 | 67 | |||||
875-893 | СТбОГсАГсСГсиГсАГиАГеСГсСГиОтТ | 367 | САООСсиАи8аОСОиОсс£Т5Т | 368 | АС- 15119 | 67 | |||||
$75-893 | аоосгАСГСгсгиесгАиАОСсгсшготзт | 369 | САООСсиДи^аОООибсс^ТзТ | 370 | АО- 15129 | 57 | |||||
875-893 | С^ОсАсСсисАиАёСсСиОТйТ | 371 | СДООСсиАийаСОСиОсс^ТзТ | 372 | АС- 15139 | 69 | |||||
877-895 | АисоАСОосАОбсисдиоотзТ | 373 | ссдиоАСссиосссиссАиьт | 374 | АО- 9542 | 160 | |||||
877-895 | АисОАОООсАОООисАиООТзТ | 375 | СсдиоАсссиосссиоолитзТ | 376 | АС- 9668 | 92 | | | ||||
878-896 | сОАОСОсАООСиоАиООисТзТ | 377 | САС^АисАСССиосссисоъ; | 378 | АС- 9739 | 109 | 1 | 1 | |||
880-893 | ОАОСосАССоислиооисАТзт | 379 | иоАссдиоАСССиосесистзТ | 380 . | АО- 9637 | 56 | 83 | ||||
88М98 | САСЮСсАСООисАиСОисАТзТ | 381 | иОАСсАООАСОсибсссисьт | 382 | | АО- 9763 | 79 | |||||
882-900 | ооссАОСоисАиооисАссът | 383 | ооиоАССАиоАСсеиоссстйТ | 384 | АО9630 | 82 | |||||
882-900 | 00<лсАСО6цсАи0СисАсс75Т | 385 | ооисАСсАиоАСосиоессът | 386 , | АО- 9756 | 63 | |||||
885-903 | с Аооо ио а υοοι гс лесе а сгт | 387 | оисосиОАССАУОЛССсиотзт | 388 | АО- 9593 | 55 | |||||
885-903 | сАССОисАсКЗбисАссОАсТБТ | 389 | ουοσουοΑΟοΑυοΑΟοουοΤδΤ | 390 | АО9719 | 115 | |||||
886-904 | АООсисАиосисАССоАситзт | 391 | доисосиоАССАисАССоитзт | 392 | АО- 9601 | 111 | |||||
886-904 | АССОисАиСОисАссОАсиТ5Т | 393 | АСОСООиСАСсАООАСССиТгТ | 394 | АО- 9727 | 118 | |||||
892-910 | АиООиОАСССАСШСОАОАЪТ | 395 | исисСААоиоооиСАССАотзт | 396 ! | • | 36 | 42 | 1,60 | |||
892 910 | АоОСи сАссб АсиисСАСАТ$Т | 397 | исисоААоисооиоАСсАитзт | 398 | АО9699 | 32 | 36 | 2,50 | |||
899-917 | ссоАсииссАОАлиосюссгт | 399 | <хзсАСАиисисСААоисб<згт | 400 | | АО- 15228 | 26 | |||||
921-939 | бОА<КтАСОс;сАССсосиистт | 401 | ОААОссссисссоцссисспт | 402 | АО- 15395 | 53 | |||||
993-1011 | САбСбОССООаАООССООсТвГ | 403 | ОССС’<ЗСАиСССС'ОССС/Сий75Т | 404 , | ДО9602 | 726 | |||||
993-1011 | сАбсООсс-ССОАиОссООсТзТ | 405 | оссоосАисссосссосиотзт | 406 | АО- 9723 | 94 | |||||
1020-1038 | ОООиСССАОСА 1- ОСОСАССТТ | 407 | осиососАиосисссАСсстт | 408 | АО- 15386 | 45 | |||||
1038 1056 | ссиососооосиОААсиост5Т | 409 | ОСАОЦиЦАОСАССООСАОСТзТ | 410 1 | АО- 9580 | 112 | |||||
1038-1056 | ССиОсОсОиСсисДАсиОсТзТ | 411 | ОсАОииОАСсАСОССсАСОТзТ | 412 | АО9706 | 86 | |||||
1040-1058 | ибсосоиосцслАоиоссАТгт | 4Ϊ3 | ЦОССАООи<ЗАбСАСССОСАТ5Т | 414 | | АО9581 | 35 | |||||
1040-1058 | иОсОсСгиОсисААсиОссАТзТ | 415 | иООйАСОиОАОсАСОСОсАТзТ | 416 ' | АО970? | 81 | |||||
1042-1060 | сосоиосислАсиоссААОГат | 4 !7 | оииоаСАоииоАОСАсосстзт | 41$ . | АО9543 | 51 | |||||
1042-1060 | сСсХгиОсцсААсиСссААОТьТ | 419 | сииоойАоииСАОсАССсоы | 420 1 | АО- 9669 | 97 |
- 29 015676
Положения в человеческой лоо-ти ρϋΓΛϊ ΝΜ_174936 | ПоСЛвДОВатеЛьЯйСТъ Смысловой цепи (5 . | 8Е0 ГО ΝΟ: | ПсеГКДОеатеЛЬЧйСТъ амГИСМЬюловОЙ цепи СЗ'-Л! | 8Е<Э ГО ΝΟ: | Тбййюшл* дуптюиз | Средний Процент оставшегося мРНК· транскрипта при соответствующей концентрации киРНК в клетках различных типов | 1С50в НерОЗ [тзМ] | 1С50в гепатоцитах собакоподобных обезьян (нК4) | |||
!00 {М/Нер62 | 30 нМ'НерЭ' | 3 нМ/ИерОЭ | 30 ΗλΕ МеЬа | ||||||||
1053-8071 | сисссА асооааоооса ссът | 421 | соиссссиисссииоосАст$т | 422 | АО9574 | 74 | |||||
1053-1071 | сиСссААСКЮААССЮсАсСТзТ | 423 | ссиссссиссссииобсАСТхт | 424 | АО9700 | ||||||
1057 )075 | СААСООААОСССАСССииАТТ | 425 | ПААССсиосссиисссицстт | 426 | А Ο- Ι 5320 | 26 | |||||
1058-1076 | ААОССААОСОСАСССПиАСТТ | 427 | сидАссбиосссиисссиитт | 428 | АО- 15321 | 34 | |||||
1059-1077 | АсабААоассАсаоииАсстт | 429 | осиААССсиосссииссситт | 430 | Αϋ- 15159 | 64 | |||||
1060-1078 | осюААООссАССоиидссотт | 431 | сасидАССсиосссииссстт | 432 | АО- 15167 | 86 | |||||
1061-1079 | ССААССССАССОииАССССТГ | 433 | ссссиАдссоиссссиисстт | 434 | АО- 15164 | 41 | |||||
1062-Ю80 | СААоассАСбсиилоссостт | 435 | сссосиААССоиссссиистт | 436 | АО- 15166 | 43 | |||||
1063-1081 | АА&зосАСОоииАОсаасАТт | 437 | иоссссиААССсиссссишт | 438 | АО- 15322 | 64 | |||||
1064-1082 | АбСССАСбСиидСССССАСтт | 439 | сисссссиАдсссиоссситт | 440 | АО15200 | 46 | |||||
1068-1086 | сасскз иидоссссАССсистт | 441 | с А<зссъосссси А десс истт | 442 | АО- 15213 | 27 | |||||
1069-1087 | АссбиидссаосдсссьсАТт | 443 | исАсоос'оссссиААСсСгитт | 444 | АО- 15229 | 44 | |||||
ιυ72-Κ'9Ο | оиЬАССсосАССсиСАиАСТт | 445 | сиАис-АС-с-сисссосиААСтт | 446 | АО- 15215 | 49 | |||||
1073 1091 | иилгсспслсссисАиАОСгГГ | 447 | ссидисАОссисссссидАТТ | 448 | Αϋ- 15214 | 101 | |||||
1076-1094 | ЙС<К?САССС1ГСА11АбССсиТ5Т | 449 | АОСссидисАссоисссостзт | 450 | ДО9315 | 35 | 32 | 0,98 | |||
1079-1097 | ссАССсисдиАссссисоАТзт | 451 | иссдосссидиоАС;асиост5Т | 452 | Αϋ- 9326 | 35 | 51 | ||||
1085-1 ЮЗ | исАиАбсссиссАОциилитзт | 453 | АиАААсиссдбсссиАисАТ5Т | 454 | АО9318 | 14 | 37 | 0,40 | |||
1090-1 Ю8 | сссс и ос ас иии а иисосдт^т | 455 | СССС ДАНА ААСиССАОСССТхТ | 456 | АО- 9323 | 14 | 33 | ||||
1091-1109 | сссиссАОпииАиисссААТвт | 457 | ииСССААСЛААСЪССАСССТ^Т | 458 | АО9314 | 11 | 22 | 0.04 | |||
1091-1109 | ОссиСС АС ии и АиисСбААТ $Т | 459 | ииСССААиААдСиСсАОССТгТ | 460 | АО- 10792 | О.Ю | О.Ю | ||||
1091-1109 | СкхиОСАСиииАиисССААТзТ | 461 | ииссоАдиААсиссАсссвт | 462 | АО- 10796 | 0 1 | 0.1 | ||||
1093-И1! | сисюАсиииАиисссААААТзт | 463 | и ии иссс- аа и а а дсисс асът | 464 | Αϋ- 9638 | 101 | |||||
1093-1 111 | сиОСАСиииАшлсССААААТзТ | 465 | ииииссоААиАААсиссАОТаТ | 466 | АО- 9764 | 112 | |||||
1095-1113 | ссАоиииАиисооААААСсвт | 467 | ссшииссОААСАААСисст$т | 468 | АО9525 | 53 | |||||
1095-11 13 | СС АСи ииАиисСКд АА ААС сТьГ | 469 | осиииисссААиАААсисст5т | 470 | АО- 9651 | 58 | |||||
1096-1114 | <зас иии а и и ссю а алаосстзт | 471 | оссиииисссААиААдсисткт | 472 | АО9560 | 97 | |||||
1096-1114 | С АС ии и АиисОС АА А АСссТзТ | 473 | сссиииисссААиААдсистзт | 474 | Αϋ· 9686 | 111 | |||||
] 100-1118 | ииАииссоААААосслосит5Т | 475 | АСсисссиииисссААилАът | 476 | АО9536 | 157 | |||||
1100-1118 | ииАиисОСААААСссАСсиТхТ | 477 | АбсисхкиииисссААиААТзТ | 478 | АО- 9662 | 81 | |||||
1154-1172 | сссиссссгаиоосиАСАСТгГ | 479 | СиССАСССАССССССАОССЬТ | 480 | АО9584 | 52 | 68 | ||||
1154-1172 | €ССиОСсССЮиО<К}иАсАбТ5Т | 481 | СиСиАССсАСССОСсАбСОВТ | 482 | АО- 9710 | 111 | |||||
| 1155-1173 | ссиооссооисссиАСАссгт | 4X3 | ссисиАСссАССссссАОотт | 484 | АО- 15323 | 62 | |||||
1157-1175 1 | и<юсс<юисссиАСА0сс<йТ5Т | 485 | соссисиАсссАсссоссАТ$т | 486 | АО- 9551 | 91 | |||||
Ϊ 5157-1175 | иСС сСС ОиСС Си Ас АС сем ТьТ | 487 | ССС-ССС-иАССсАСССССс АТзТ | 488 | АО- 9677 | 62 | |||||
1)58-1176 | (ХюссоиссоиАСАОСссстг | 489 | оссссисиАСССАССССССТТ | 490 | АО- 15230 | 52 | |||||
ί 1 (62-1180 | ссисисиАСАССсоссисстт | 491 | аСАссссссисидсссАСси | 492 | АО15231 | 25 | |||||
1164-1182 | илосиАСАОсссссиссистт | 493 | САССАССССССиССАСССАТТ | 494 | Αϋ- 15285 | 36 | |||||
1172-1190 | ссссссиссисААСОссостт | 495 | осссссиисАССАсссссстт | 496 | АО- 15396 | 27 | |||||
1173-1191 | ссоссиссисААсоссссстт | 497 | ОССОСССЕПСАССАСССССГТ | 498 | АВ15397 | 56 | |||||
1216 1234 | сиссиосиооисАССоси<зт5Т | 499 | САСССОиСАССАССАССАСТзТ | 500 | АО- 9600 | 112 | |||||
1216-1234 | СисСиОсиОСисАесСсиСТхТ | 501 | сАОСОСиСАСсАСсАСбАСТ^Т | 502 | АО- 9726 | 95 | |||||
1217-1235 | иссиссиссисдсссси<;ст5т | 503 | ССДССССиСАССАО€АССАТ5Г | 504 | АО- 9606 | 107 |
- 30 015676
ПйЛСгкейНяв человеческой ПОС-ΙΉ рег.чз ΝΜ_174936 | Поспедойатедьностъ емгасповои цели ГУ-З')! | 3ΕΏ !О МО: | Последовательность атггпсчислсдой цепи (5-311 | 5Е9 ю ΝΟ· | Эаничеие дуттикэ | Средний процент оставшегося мРНК1ра Искр Шла грп соответствующей концентрации киРНК в вдет? ах различных чипов | НерОЗ [нМ] | 1С50в гепатоцитах сабако подобных обезьян ГиМ) | |||
100 нМ/НерС-З | 3<1 κΚ6Ή«ρΟ2 | нМНерС2 | 30 н№ Не1_а | ||||||||
1217-1235 | исбиОсиООисАссбсибсТ 5Т | 505 | бсАОСООиСАСсАбсАССАТзТ | 506 | А1> 9732 | 105 | |||||
1223-124] | иббЬСАССбСЦССССбСААТ^Т | 507 | ииссссосАОСооиОАССАт5т | 508 | АО- 9633 | 56 | 75 | ||||
1223 124] | иСбисАссбсибссббсААТзТ | 509 | сисгСссскАОса<зиоАС<АГ<т | 5Ю | АО- 9759 | 111 | |||||
1224-1242 | осисАссосиассоссААСЪт | 511 | сииссссосАосооиоАССтзт | 512 | АО9588 | 66 | |||||
1224-1242 | С6осАссСсиОссС<ЗсААсТ5Т | 513 | оиисссоосАосссгибАСсгзт | 514 | АО9714 | 106 | |||||
1227-1245 | САссссиассссоААсиистзт | 515 | олАоииоссассАОссоистзт | 516 | АО- 9589 | 67 | 85 | ||||
1227-1245 | сАссбсибссОСсААсиисТзТ | 517 | СААоииоссоосАосаоистйТ | 518 | АО9715 | ИЗ | |||||
1229-1247 | ссоси осссссаасцсссотзт | 519 | СОбААйииОССбОСАОССЮТзТ | 520 | АО9575 | 120 | |||||
1229-1247 | йсОдиСс<ООсААсииссСТ$Т | 521 | сск^ААоиисссоогАОссотзт | 522 | Аб- 9701 | 100 | |||||
1230-124« | сосиоссоосАдсииссоовт | 523 | СССОААСи1'ОСС<ЮСАОССТ$Т | 524 | АО9563 | юз | |||||
1230-124« | сОсиОссСОсА АсииссСОТ зТ | 525 | ССбСААСсибССООсАОСС г$т | 526 | АО9689 | 81 | |||||
1231-1249 | ссиоссоссААсиоссбсстгт | 527 | сссооААоииоссоссАССТзт | 528 | Аб9594 | 89 | 95 | ||||
123М249 | СсмСссССсААс^ссООСИТ | 729 | ССС<30АА0и1ЮСС66сАССТ5Т | 530 | АО9720 | 92 | |||||
1236-1254 | соосААсиисссо<ЗАССАШ5Т | 531 | а иссисссасААОсисссстзт | 532 | АО9585 | 83 | |||||
1236-1254 | сббсААсииссООСАсСАиТаТ | 533 | АиссисссасААбиисссстгТ | 534 | АО9711 | 122 | |||||
1237-1255 | СОСА АСИиСССОСАСОА ист$т | 535 | САиссисссобААоииосстзТ | 536 | Аб- 9614 | 100 | |||||
1237-1255 | СОсААсииссСООАсОАиСТзТ | 537 | сАисоисссооААсииосстэТ | 53« | АО 9740 | 198 | |||||
1243-1261 | ииссосоАССАиоссиссстзТ | 539 | ООСАСОСАиСОиСССОСгААТзТ | 540 | АО- 9615 | Е16 | |||||
1243-1261 | ииссСгССАсСАиОссмСссТзТ | 541 | СбсАбОсАиСОиСССОСААТзТ | 542 | АО- 9741 | 130 | |||||
1248-1266 | соАСОАиоссисссисоАСТзТ | 543 | ОСАОАОССАОПСАиССиССТзТ | 544 | Аб- 9534 | 32 | 30 | ||||
1248-1266 | сбАСОАисссиоссисидстзТ | 545 | биАСАОосАОссАисаисст^т | 546 | Аб- 9534 | 32 |
1248-1266 | ССАсб АибссабссисиАсТ^Т | 547 | СиАбАбОсАССсАиСОиССТзТ | 548 | Аб9660 | 89 | 79 | ||||
1279-1297 | осисссс а ас ис а ислс а отг | 549 | сиоиолиоАСсисообАОСП | 550 | Аб- 15324 | 46 | |||||
1280-1298 | сиссссАбснслисАСАситт | 551 | АсиоисАисАСсисбосАбтт | 552 | Аб- 15232 | 19 | |||||
12814299 | исссоАсоисАиСАслсиитт | 553 | ААсиоислиодссисссбАТт | 554 | Аб- 15233 | 25 | |||||
1314-1332 | ССААСАССАОССОСиСАССТТ | 555 | ббисАССсосибсисиисбтт | 556 | АР- 15234 | 59 | |||||
1 315-1333 | СААбАССА<ЗСС<ЗбиОАСССГГ | 557 | бббисАССоссисюисниотт | 558 | Аб- 15286 | 109 | |||||
1348-1366 | АССААСииискзссосисиОтгт | 559 | САСАОСОбссААлсиисситзт | 560 | Аб9590 | 122 | |||||
7348-1366 | АссААсуииОбссОсиОиОТ5Т | 561 | сАсАбСббСсАААбииооитзт | 562 | Аб- 9716 | 114 | |||||
1350-1368 | СААсииисоссосиоиаиствт | 563 | САСАСАОСббССАААбииаТзТ | 564 | Аб- 9632 | 34 | |||||
1350-1368 | сААсиииООссСсиС|Х?аСТ5Т | 565 | сАсАрАОСОССсА ΑΑΟυυΟΤίΤ | 566 | Аб- 9758 | 96 | |||||
1360-1378 | сосисисисбАСсисиииотзт | 567 | САААбАООиССАСДСАОСОТзТ | 568 | Аб- 9567 | 41 | |||||
1360-1378 | сСкиСиСиСЮАссисиииСТзТ | 569 | сА ААОАОСиСсАсАсАОСОТ$Т | 570 | Аб- 9693 | 50 | |||||
1390-1408 | сАСАисАиисососсиссАът | 571 | иббАСЮсАссАлиоАббистзт | 572 | Аб- 9586 | 81 | 104 | ||||
1390-1408 | бАсАисАииОСибссдссАТзТ | 573 | бОбАбОсАСсААибАиоиСТ$Т | 574 | Аб9712 | 107 | |||||
1394-1412 | исАииосиоссиссАбссАТзТ | 575 | иСССиСЮАбОСАССААббАТ&Т | 576 | Аб- 9564 | 120 | |||||
1394-1412 | исАииСОиОссиссАОсСАТзТ | >77 | исосиобАббсАСсААибАТ^т | 578 | Аб- 9690 | 92 | |||||
1417-1435 | лосАсеиосииисиоисАСТйТ | 579 | б11бАСАСАААОСАООиоал$Т | 580 | Аб- 9616 | 74 | 84 | ||||
1417-1435 | АбсАссиСсдиибиОисАсТдТ | 581 | сиоАсАсАДАСсАОсиоситзт | 5«2 | Аб- 9742 | 127 | |||||
1433-1451 | САСАбАбиоабАсдисАСАТТ | 583 | сбиоАиоисссАСисисиотт | 584 | Аб- 15398 | 24 | |||||
1486 1504 | а и сс ио исиоссоАОСсоотзт | 585 | ССООСиСООСАОАСАйСАиЪТ | 556 | Аб- 9617 | 111 | |||||
]486 1504 | АиО сцбиС1гОссбА(дссОбТ$Т | 587 | ССббСиСООсАОАсАСсАиТ8Т | 58« | Аб9743 | 104 |
- 31 015676
Положения в человеческой ГОС-ТИ регАЗ ΝΜ.Ι74936 | Последовательность смысловой цели (5-3)' | 5Ер ΙΟ N0· | Поспслсвэтедьность антисмысяссой пели (5-3^1 | 8Е9 ю ΝΟ: | Эбсдаченн; Дугсккг | Средний процент оставшегося· мРНКтранскрипта При соответстъуюшей концентрации киРНК в клетках различных типов | ГСЗОв НсрС2 |нМ] | 1Сх) а гепатоцитах есбако подобных обегьам (якП | |||
1С9 нМ/Н<рО2 | 30 нМ№рО2 | нМ1НерСт2 | 30 нН/ НеБа | ||||||||
1491-1509 | <з исисссс ас-сссю асс исьт | 589 | бАССиССОбСиССССАОАСТйТ | 590 | АО- 9635 | 73 | 90 | ||||
3491-1509 | СисибссСАСссССАОсисТзТ | 591 | <ЗА(ХиссодсисоосАОАСТзт | 592 | АО- 9761 | 83 | |||||
1521-1539 | сиисАоасАОАОАсиадистхТ | 593 | олисАсисисисссисААстзт | 594 | АО- 9568 | 76 | |||||
3521-1539 | СииСАЦС^АСАСгАсиСАисТ5Т | 595 | одисАоисисиоссисААСТзт | 596 | АО- 9694 | 52 | |||||
1527-1545 | ссАОА<ЗАсиалиссАсиист5Т | 597 | оААсиоОАисАсисисисзстгт | 598 | АО 9576 | 47 | |||||
1527-1545 | ОсАОАОАсиОАиссАсиисТ$Т | 599 | оААОиоСАЦсАОисиСЕССЪТ | 600 | АГ9702 | 79 | |||||
1529-1547 | АСАСАсислиссдсиисистзт | 601 | САФААсиссАисАсисисиът | 602 | Αϋ- 9627 | 69 | |||||
1529-154? | ЛСАСАсиОАиссАсиисисТгТ | 603 | САбААсиссАисдаисисит^т | 604 | АО9753 | 127 | |||||
1543-1561 | иисисиоссААдоАцоисАТзт | 605 | иСАСАиСШбООСАСАСААТзТ | 606 | АО 9628 | ΜΙ | |||||
1543-1561 | ЦисиеиОссАААСгАгКлисАТ^Т | 607 | иа Асдисии исосАбАОААТзт | 608 | АО- 9754 | 89 | |||||
1545-1563 | сцеибссАААСАийисАиствТ | 609 | ОАисАСАисиииоосАбАОТзт | 610 | Αϋ- 9631 | 80 | |||||
Зз45-1563 | сасиСссАААСАиСисАисТзТ | 611 | САибАсАисиииобсАОАбТхт | 612 | АО 9757 | 78 | |||||
*$ЯП-МОТ | су'сдиОАССАПСсосиАсит+т | 613 | АбЦАСбсссиоюиссисАОТйТ | 614 | АО9595 | 31 | 32 | ||||
3 580-1598 | сибАООАссАбсОООиАсиЪТ | 615 | АСиАСССссиоаиссисАСТб.т | 616 | АО- 9721 | 87 | 70 | ||||
1581-1599 | иаАООАссАбсооаиАСЩтвт | 617 | САоид ссссс исс иссисАт$т | 618 | АО- 9544 | 68 | |||||
1$81-1599 | иСгАСКлАСсАСгсОООиАсиСТзТ | 619 | сАбиАССсссискиссисАТ&т | 620 | АО9670 | 67 | |||||
1666 1684 | АсисиАшаиСАссАСАалт | 621 | АбибибсиСАССАидСАоитт | 622 | АО- 15235 | 25 | |||||
1668-1686 | ъоиАисоисАОсдСАсисбтт | 623 | содаибиссиадссАиАСАтт· | 624 | АО- 15236 | 73 | |||||
3669-168? | оиАЦСсиСАОСАСАсиесстг | 625 | сссАбисибсиодссАидстт | 626 | АО- 15168 | 100 | |||||
1697-1715 | ОСА исосслс Ассссиссстт | 627 | 0<Л/АСбСсибиббССпЦССгг | 628 | АО- 15174 | 92 | |||||
1698-1716 | САиСИССАСАСКСОиСОССТТ | 629 | босбАСбссиоисбссАистт | 630 | АО- 15325 | 81 |
1806-1824 | СААбсисюисиоссообсстт | 631 | ОССССОССАбАССАССииСТТ | 632 | АО- 15326 | 65 | |||||
1815-1833 | сиоссбббсссАСААСбситзТ | 633 | АссбиисисюссссбосАот^т | 634 | АО- 9570 | 35 | 42 | ||||
1815-1833 | сиОссСККк£сАсААсСгсиТ5Т | 635 | АбсоииоиосюсссббсАстзТ | 636 | АО- 9696 | 77 | |||||
1816-1834 | иОССОбОСССАСААСССи11ТьТ | 637 | АА<ЗССШОССЮбСССО<тСАЗ‘$Т | 638 | АО- 9566 | 38 | |||||
1816-1834 | иОссСчЗбссе ДсААсСсииТ$Т | 639 | ААбсоиибьгхккхсоссА г$т | 640 | АО- 9692 | 78 | |||||
1818-1836 | ссбоосссАСААСОсиииитгт | 641 | ААААбсоиибиосюсссббт^т | 642 | АО- 9532 | 100 | |||||
1818-1836 | ссОССсгсАсААсОсииииТвТ | 643 | ААААССбъиаиосюссссютяТ | 644 | Αϋ- 9658 | 102 | |||||
1820-1838 | сюосссАСААСбсииибСгаы | 645 | ссААААосбиибиобоссст5Т | 646 | АО- 9549 | 50 | |||||
!820-1838 | ОСОсссАсААсОсииииООТзТ | 647 | СсААААбсоисаиооассстгт | 648 | АО9675 | 78 | |||||
1840-1858 | ссиоА<юсиоисиАссссдт5Г | 649 | иоосоиАбАСАСССиСАсст5Т | 650 | АО9541 | 43 | |||||
1840-1858 | ОСиОАООСиОисиАсбссАТзТ | 651 | иООСОиАОАсАСССисАССТзТ | 652 | АО- 9667 | 73 | |||||
1843-1861 | ОАОСЮисисиАССССАиистя | 653 | СААи«ыбссиАОАСАсссист5т | 654 | АО- 9550 | 36 | |||||
1Я44-1861 | б а ббб ибис” д еб ссд« ибТтТ | 655 | сАА1КХЮСиАСАсАСС€иСТ$Т | 656 | АО 9676 | ||||||
1861-1879 | сссдсюиссисмзсиасиАСТзТ | 657 | СиДОСАбОСАОСАССиСЮСЪТ | 658 | АО- 9571 | 27 | 32 | ||||
1861-1879 | 0ссА06и6сц<ксибсиАсТ5Т | 659 | биАбсАООсАОсАССибОСТ&Т | 660 | АО9697 | 74 | 89 | ||||
1862-1880 | ссАбоиссиоссиссиАсст5Т | 661 | абиАбСАОбСАбСАСсиоатгт | 662 | Αϋ9572 | 47 | 53 | ||||
1862-1880 | ссА<лбиСсиб«ибсиАссТ5Т | 663 | ООиАСсАббсАбсАССиббТхТ | 664 | Αϋ9698 | 73 | |||||
2003-2026 | дсссАСААбссбссиоиосгг | 665 | бСАСАСЮСОбсисоисббитт | 666 | АО- 15327 | 82 | |||||
2023-2041 | биосиоАСбссАСОАбоистзт | 667 | ОАСсиспиабСсисАбсАсът | 668 | Αϋ 9639 | 30 | 35 | ||||
2023-2041 | СиОсибАббссАсбАОСисТзТ | 669 | ОАСсисбиобссисАбсАсът | 670 | АО- 9765 | 82 | 74 | ||||
2024-2042 | СбСиОАОбССАСбАббиСАЪТ | 671 | ибАСсисоиобССиСАССАТзТ | 672 | Αϋ· 9518 | 31 | 35 | 0,60 |
- 32 015676
ПйЛажеНКЯВ человеческой ПО4-ТИ рег№ ЧМ 174936 | Последовательное!»· смысловой цели (5-37* | 5Е9 ΙΠ ΝΟ: | Послеютедьностъ антисмысловой цепи (5' 3 Я | 8Е0 ГО ΝΟ: | Обвятенн: душевен | Средний процент «тавхие1йся мРНК транскрипта при состаетстаующей концентрации киРНК в клетках различных типов | ГСЗОв Нер(32 [нМ] | К» в гепатоилтач собакоподобных обезьян (нМ) | |||
100 нМ/НерО2 | 30 нМ/НерО2 | нМ/НерО1 | 30 кН1 йсЪэ | ||||||||
2024-2042 | иосиОАсосслс(}АСбисАТ5Т | 673 | иодссиссиооссисАссАТзт | 674 | АО9518 | 31 | |||||
2024.2042 | иСсиСгАООсс АсОАСОисАТаТ | 675 | иоАСсисоиооссисАСсАТзТ | 676 | АО9644 | 35 | 37 | 2,60 | |||
2024-2042 | υ гесгс а йо а луг | 677 | р-иСйС1сийОйОГ§СйийАГ§СГаТ5Т | 678 | АО- 14672 | 26 | |||||
2024-2042 | и ?эсги го аоссгс) декз доои гота тбт | 679 | игсАсгсшгоюиюссгошоАасГАТзт | 680 | Αϋ- 14682 | 27 | |||||
2024 2042 | и£СцОэб£СсАсОгС£исАТ?Т | 68) | р иОГаСйийС^ОТгСГсийАГвСТаТзТ | 682 | Αϋ- 14692 | 22 | |||||
2024-2042 | 览ибаО®<кАсСа<Э^исАТ&Т | 683 | игоАСЛ^гсйэигаосюгооАосгАТат | 684 | Αϋ- 14702 | 19 | |||||
2024-2042 | и^СГиОГаСдасАГсСГаОдасАГГзТ | 685 | иОАССисСиевССиСАгсаТзТ | 686 | АО- 14712 | 25 | |||||
2024-2042 | 1ЮСГОГОАСС;€ГСГАСГОАСюи1СГАТ5Т | 687 | иСд^исСи^дССиСА^саТзТ | 688 | АО- 14722 | 18 | |||||
2024-2042 | ЫзСиОаО^СсАсОаО^ЦсАТьТ | 689 | иСгАССисйиддССиСА^саТяТ | 690 | Αϋ- 14732 | 32 | |||||
2024-2042 | Стс(}ГдС:<-АГдСГрО!сСГаС!‘г.А!т;СГТТ | 691 | р-сДГиСТсСТвСГсСГвС^иСгйСГсАТсТгТ | 692 | АО- 15078 | 86 | |||||
2024-2042 | сигсюиеаАСЮГОосгогоооАиютзт | 693 | С£Аигсгсгокхх?гогасгогаАСгсгАстг | 694 | АО· 15088 | 97 | |||||
2024-2042 | биСвисАвСеОсСвОгАиСТзТ | 0^5 | р-еАСиСйСГвС^^С^О^С^А^751 | 696 | АО- 15098 | 74 | |||||
2024-2042 | СиО£исАвСЕ<лсСяСгА11С»ТзТ | 697 | СТАиГОГОГОЮбСГСГОСОСАСГСГАС^Т | 698 | АЭ- 15108 | 67 | |||||
2024 2042 | С1иСГ8и£сАГ§С?е<ЗЙС££С15А(цбГТзТ | 699 | САиССсдССсаСиСАСсасТ&Т | 700 | АО- 15118 | 76 | |||||
2024-2042 | сигосигогАОСгоосгогосоАЪГОтзт | 701 | САиСС<£ССс£СиСАСсасТ5Т | 702 | АО- 15128 | 86 | |||||
2024-2042 | СиС^исАдСйСкСйСйАиОТ 5Т | 703 | С А иССсвОСсзСиО АСсасТвТ | 704 | АО 15138 | 74 | |||||
2ОЗО-2048 | СЮСС АССАСС ис АОССС А АТТ | 705 | иисоссиоАосисоисосстт | 706 | АО- 15237 | 30 | |||||
2035-2053 | ССАССиСАССССААССАС-иТТ | 707 | АсиооиискюсисАссссотт | 708 | АО15287 | 30 | |||||
2039-2057 | оисАбсссААССАОиосситт | 709 | АСССАсиодииосёсиоАСГт | 710 | АО- 15238 | 36 | |||||
2041-2059 | САОСССААССАОиСССиССГГ | 711 | ссАСосАсисшгиооэсиотг | 712 | АО- 15328 | 35 | |||||
2062-2080 | САСАСССАССССАОСДиССТТ | 713 | ссАиссисоссисссиоистг | 714 | АО15399 | 47 |
2072-2090 | ссАссдиссАсосииссиствт | 715 | САОСАдсссисюАиасибстзт | 716 | АО9582 | 37 | |||||
2072-2090 | ссАСсАиесАсбсН1КСи<ЗТ$Т | 717 | сАССААСГОсисодисгоисстзт | 718 | АО9708 | 81 | |||||
2118-2136 | АСОСААССАССАиООААиСТхТ | 719 | ОАииссАЦОсиссииоАСШзт | 720 | АР 9545 | Л | 43 | ||||
2! 18-2136 | дСисААССАСсАиССААисТзТ | 721 | <ЗАииссАиссоссииолсит&т | 722 | АО9671 | 15 | 33 | 2,50 | |||
2118-2136 | АО’иГсАТаСГ&М^СГаиГ^ЗГаАТиСГГгТ | 723 | р-ёАЛ1ОГсС?аи(вСГиСГси1иОГаСТиТ5Т | 724 | АР14674 | 16 | |||||
2118-2136 | АСи^ААСЮАСГОГАиГОбААиГС1Т$Т | 725 | САигогогогАиюсгоюгоплигсАсгот т | 726 | АР14684 | 26 | |||||
2118-2136 | АзисАаСг&АйСаивОаАиСТзТ | 727 | р-&АЛ]иГсСГаи%СТиСГсиТиСТзСТиТ5Т | 728 | АО- 14694 | 18 | |||||
2118-2136 | А&исАаОеАвСаивСгАиСТзТ | 729 | САигогогсгАигасгоюгсго1игаАСги1Т5 т | 730 | АР14704 | 27 | |||||
2118-2136 | АГеиТсАГаСГеД^СйиГйСТаАТиСЯ'гТ | 731 | СлииСсаиСсиССЦиОасиТзТ | 732 | АР14714 | 20 | |||||
2118-2136 | ас ргоеадсса сседоесс а а и еспуг | 733 | ОАЦиСсаиОсиССОиСвсиТяТ | 734 | АО14724 | 18 | |||||
2118-2136 | А^исАаСдД^Саи^СцАчСТ&Т | 735 | САииСсаиСсиССииСасиТзТ | 736 | АО 14734 | 18 | |||||
2118-2136 | СГсС1§СТаС1сС1иС£аи&й?Е.С£с1ЛТ&Т | 737 | р аСЙ£С5=иГаиТвА^О^и5кС£сОйТзТ | 738 | АО15080 | 29 | |||||
2118-2136 | (Х:гасс(АСгсгсюгс1Аи1Ас<ллсги1Т5Т | 739 | лесе гогеялигс ас сс и еосесессгвт | ЧД0 | АГ>- 15090 | 23 | |||||
2118-2136 | Ссб^СаСсСиСаиаОвСсЦТвТ | 741 | р-аСТ§Сй иТзЦ Г^АЕдС ίβϋ £§С£с<3 СсТэТ | 742 | АР- 15100 | 26 | |||||
2118-2136 | ОсСдСаСсСиСаиаСдСсиТаТ | 743 | АССЮГОГОГАи1САСС€гиюсгс:юс!Т5Т | 744 | АР- 15110 | 23 | |||||
2118-2136 | СГсСГ£СГаС1оС(иСГаийС^СГсиГГ5Т | 745 | АСОССиаСОаеСГОиОСсйсТзТ | 746 | АР- 15120 | 20 | |||||
2118-2136 | (К1СЮСГАСГОГОГО5С5АиГАСССГСГО1Т5Т | 747 | АСбССиаиСаеССиССсдсТаТ | 748 | АР15130 | 20 | |||||
21)8-2136 | ОсСйСаСсСиСаиаСеСсиТзТ | 749 | А00ССиаиСа1Ю£и0€с£сТзТ | 75!' | АР- 15140 | 19 | |||||
2122-2140 | ААООАССАиоаААиСССССТзТ | 751 | ссоссАииссАиссоссиитзт | 752 | АР- 9522 | 59 | |||||
2122-2140 | ААССАСсДиСОААисссОСТзТ | 753 | сссоолииссАисагссиитзТ | 754 | АР9648 | 78 | |||||
2123-2141 | АССАССАиССААОССССССТУГ | 755 | оссос<ЗАииссАиосиссш'5Т | 756 | АР9552 | 80 |
- 33 015676
Положения в I ЧЫО34Ч4СКСН тюс-ти | Последовательность смысловой цепи Х-З')' | 8Ер ΙΟ ΝΟ: | Последовательность атисмысповой цепи ί5'-3)Ι | 5ЕО Ю ΝΟ: | Обаявчени фтпаиа | Средний процент оставшегося мРНКтраКскрнПта при соответствующей концентрации кпРНК а клетках различиях типе® | 1С50в гепатоцитах соба коподобных обезьян (НМ} | ||||
рег№ ΝΜ_] 74936 | ίου пМ/НерО | 30 нМ/Нер<Э | 3 2 нМ/НерС | 30 2 чМ·' НсЬэ | 1С50в Нер62 [аМ] | ||||||
2123-2141 | АССАСсАиССААисссОСгсТзТ | 757 | сссссоАииссАиссисстчт | 758 | АО- 9678 | 76 | |||||
2125-2141 | сасса иссллисссссссстзт | 759 | сссссоосАииссАиссистзт | 760 | Αϋ- 961$ | 90 | |||||
2125-214? | ОАСкАиСОААисссССкссТзТ | 761 | сюсссссоа ииссАиосисг5Т | 762 | Αϋ- 9744 | 91 | |||||
2210-2248 | оссиАсссссиАОАСААСАтт | 763 | исиисисидссоссиАбссгг | 764 | АО- 15239 | 38 | |||||
2231-2249 | СССАССССОСаОАСААСаСТТ | 765 | сисиисссидссассидсстт | 766 | АО- 15212 | 19 | |||||
2232-2250 | ССАСССССиДСАСААСАССТТ | 767 | соисиисисидсссссиАОТТ | 768 | АО15240 | 43 | |||||
2233-2251 | идСОСССЕАСАСААСАССиТТ | 769 | АсоисииспсидсооссиАТГ | 770 | АО- 15177 | 59 | |||||
2235-2253 | сосссилбАСААСАСсиситт | 77| | АСАСсисиисисидсоссстт | 772 | Αϋ- 15179 | 13 | |||||
2236-2254 | ОССОС АС АС А АСАСси® Е-СТТ | 773 | сдсАСсисиисисидсаостт | 774 | АО- 15180 | 15 | |||||
2237-2255 | ссоилСАСААСАССиаиоигг | 775 | АСАСАСоиссисисиАСССТТ | 776 | АО- 15241 | 14 | |||||
2238-2256 | соилСАСААСАОзисисиАТт | 777 | иАСАСАсаисиисиспАсстг | 77$ | АО- 15268 | 42 | |||||
2240-2258 | САОАСААСАСОиоиССАСиТТ | 779 | АсиАсдсАСсисииоисиАтг | 780 | АО- 15242 | 21 | |||||
2241-2259 | АОАСААСАСсиоиси аосСТт | 781 | ОАсиАСАСАСсисисгаис1’тт | 7Я2 | АО- 15216 | 28 | |||||
2242-2260 | адСААСАссисиоилоисАтг | 783 | исАСЦАСАСДСоисиисистт | 784 | АО- 15176 | 35 | |||||
1 2243-2261 | АСААСАСсиоиаиАоисАотт | 785 | ссаАсилСАСАСсиаииситт | 786 | АО- 15181 | 35 | |||||
2244-2262 | СААСАССиоисиАоисАСЮтт | 787 | ссисАсилСАСАсаисиистт | 788 | Αϋ- 15243 | 22 | |||||
2247-2265 | САСОссиаиАоисАОСА<3€Тт | 789 | ссиссисАсидсАСАСсиотт | 790 | АО- 15182 | 42 | |||||
2248-2266 | АСсисисидсисАбсдСгСстт | 791 | оссиссиоАсилсАСАСОшт | 792 | АО- 35244 | 31 | |||||
2249-2267 | ссисисидсисАСЮАСссстт | 793 | ссссиссиСАсилСАСАСОтт | 794 | АО- 15387 | 23 | |||||
2251-2269 | ибисиАоисАССАОСсскютг | 795 | сссоссиссисАсилСАСАтт | 796 | АО- 15245 | 18 | |||||
2237-2275 | сисАООАСссоабАСоисАЪт | 797 | ис а со иссссос исс и с АСТ5Т | 798 | АО 9555 | 34 | |||||
2257-2275 | ОцсАССАСгссСО<ЗАсСисАТ5Т | 799 | иодссисссоосиссисАСТп* | 800 | АО9681 | 55 | I | ||||
2258-2276 | иСАОСАОСССССАССиСАСВТ | 801 | сиоАСоисссо<зсиссиОАт5т | 802 | АО9619 | 42 | 61 | ||||
2258-2276 | исАО(1АСтСсСО<ЗАсСисА<лТ4Т | 803 | сисАСсисссоосиесиоАтгТ | 804 | АО9745 | 56 | |||||
2259-2277 | САОСАССССООАСсиСАССТгТ | 805 | осиОАСоисссоссиссист$т | 806 | АО- 9620 | 44 | 77 | ||||
2259-2277 | сАСОА&хСССАсСгисАСсТгТ | 807 | ссисАссисссоссиссистгт | 808 | АО9746 | 89 | |||||
2263-2281 | АСССОСгСАСОиСАОСАСидТТ | 809 | идоиосиаАСоиссссюситт | 810 | АО- 15258 | 19 | |||||
2265-2283 | СССНСАССиСАОСАСиАСАГГ | 811 | иаидсиссиОАссиссссстт | 812 | АО- 15246 | 16 | |||||
2303-2321 | сссисАСАОсссиисссАитг | 813 | АиСЮСААССОСССиСАСССТТ | 814 | АО- 15289 | 37 | |||||
2317-2335 | сссАссиосиосс<ЮА<эсст5Т | 515 | сссиссгюсАссдсдисастзт | 816 | АО9324 | 59 | 67 | ||||
2375-2393 | сссАисссАССАисооиситт | 817 | а с ассс дисс иссоли ссстт | $18 | АО- 15329 | ЮЗ | |||||
2377-2395 | САисссАселиоссибгисстг | 819 | АСАСАСССАиССССЮСАСОТ’ | 820 | АО- 15330 | 62 | |||||
2420-2438 | АсатииААААиссиисссАТТ | 821 | исссАдссАЦиисАдАОситт | 822 | АО 15169 | 22 | |||||
2421-2439 | ссс'с ид ада уооиисссдстт | 823 | спсос.ААССлииинАААССтт | 824 | Αϋ- 15201 | 6 | |||||
2422-2440 | сиииААААиосиисссАситт | 825 | АсисосААСсАписиддАстт | 826 | АО15331 | 14 | |||||
2423-2441 | сиилААдиссиисссАсиитт | 827 | ААсиссодАССАиииилААтт | 828 | АО- 15190 | 47 | |||||
2424-2442 | иилдАдиосиисссАсиистт | 829 | СААоисссАдссАииииААтт | 830 | Αϋ- 15247 | 61 | |||||
2425-2443 | илААдиосииссоАсииситт | 831 | АСААоиссюААССАииииАТТ | 832 | АО- 15248 | 22 | |||||
2426-2444 | ААААиосииссОАСиисисгт | 833 | ОАСААсисасАлссАиииитг | 834 | АО15175 | 45 | |||||
2427-2445 | ААлиссиисссАсиисисстг | $35 | ссдСААсисссААССАииитт | 836 | «АО- 15249 | 51 | |||||
2428-2446 | АдиссииссоАсиисиссстт | «7 | СОСАСААСиСССгААССАииТТ | 338 | АО- 15250 | 96 | |||||
2431-2449 | ос и иссс леи и с исссиситт | 839 | АСАСССАСААСССССААССТТ | $40 | АО- 15400 | 12 |
- 34 015676
Положения в человеческой ПОС-1» ре1 № ΝΜ_174936 | Последовательность смысловой цепи (5-31^ | 5Е0 ГО ΝΟ: | Последовательность антисмысловой цепи ГЗ'-ЗЗ! | 5ЕО ГО ΝΟ: | Збзэечеюе дуплекса | Средний процент оставшегося мРНктранскркггга присоответствуюпмй концентрация киРНК в клетках различных типов | 1С50в НерС2 [нМ] | 1С50в гепатоцитах собакеподобных обезьян (иКО | |||
КО нМ(Нер<?2 | 30 нМ/НерИ | нМ/Нер02 | 30 нМ/ ЙеЬа | ||||||||
2457-2475 | сиссдиссссиаасАССдстт | 841 | СиСОБЮССАббССАС'СЮАОТТ | 842 | АО- 15332 | 22 | |||||
2459-2477 | сслисклСсиассАССАССгОтт | 843 | сссиссиоссАОСсслисютт | 844 | АО- 15388 | 30 | |||||
2545-2563 | бААСьсАсисАсисиоооитт | 845 | АСссАОАбисАоиоАбиистт | 846 | АО- 15333 | 20 | |||||
2549-2567 | исАсисАсисисаоиосссгт | 847 | А<ЗССАСС€АСА<Зи<ЗАби<дАТТ | 848 | АО- 15334 | 96 | |||||
2616-2634 | ииисАССАиисАААСА<юитт | 849 | АСсиоиишААаосисАААТг | 850 | АО 15335 | 75 | |||||
2622-2640 | САииСАААСАСюисОАСситт | 851 | АбсисоАССсоиицбААиотт | 852 | АО- 15183 | 16 | |||||
2623-2641 | АииСАААСАСССССАССиСТТ | 853 | САСсиссдосисииисААитт | 854 | А ΟΙ 5202 | 41 | |||||
2624-2642 | иисАААСАСсиссАСсибитт | 855 | АСАбсисбАссисииисдАТТ | 856 | АО- 15203 | 39 | |||||
2625-2643 | исдАдсАСоиссАСсиоистт | 857 | сАСАОсисбАСсисиииоАтт | 858 | АО- 15272 | 49 | |||||
2626-2644 | САААСАСюисоАбсиоиастт | 859 | осАСАОсисбАСсиоииистт | 860 | АО15217 | 16 | |||||
2627-2645 | а а а САСгсисс досисо оситт | 86! | досАСАбсисбАСсисииитт | 862 | АО- 15290 | 15 | |||||
2628-2646 | ААОАСбиссАбсиеиссистт | 863 | САССАСАОсиссдссибиип | 864 | АО 15218 | 13 | |||||
7610-264? | гдбсисПАСГ! 1бплаи?аптт | 865 | ссоАОСАСАСсисоАСсиотт | 866 | — > са <о | 13 | |||||
2631-2649 | АО<зиссА<?си<зиС!сисасстт | 867 | СССОАГСАСАОСиССАССиТТ | 868 | АО- 15336 | 40 | |||||
2633-2651 | сисбАОсисцссисбооъбтт | 869 | САСССбАОСАСАОСиССАСГТ | 870 | АО15337 | 19 | |||||
2634-2652 | исбАбсисиосиссосисстт | 871 | ССАССССАССАСАОСиСОАТГ | 872 | Αϋ15191 | 33 | |||||
2657-2675 | АСсиссисссАдиоисссбк | 873 | соссдсАиисооАОСАССцтт | 874 | АО- 15 390 | 25 | |||||
2658-2676 | ссибсисссААиоиоссодтт | 875 | исобСАСАииосюАасАОСтт | 876 | Αϋ- 15338 | 9 | |||||
2660-2678 | иссисссддисиассслистт | 877 | сдисоосАСАииссоАбСАТТ | 878 | АС15204 | 33 | |||||
2663-2681 | цсссдАисиосссАиаисстт | 879 | ссАСАиссссАСАииосоАН | 880 | АО- 15251 | 76 | |||||
2665-2683 | ссААЦоиоссодиоиссситт | 881 | АСбОАСАиссосАСАииостт | 882 | АО- 15205 | 14 |
2666-2684 | СААиоиоссоАиоисссзистт | 883 | САСооАСАисоссАСАииотт | 884 | Αϋ- 15171 | 16 | | | ||||
2667-2685 | Адиоиоссодиоиссоисютт | 885 | ссдсбСАСдисоосАСАиитт | 886 | АЕТ- 15252 | 5В | |||||
2673-2691 | ссоАиоиссоисбосАОАдтт | 887 | иисиосссАСОйАСАисоотт | 888 | АО- 15339 | 20 | |||||
2675-2693 | сАисиссоиооосАбдАистт | 889 | САиисиосссАсоодслистт | 890 | АО- 15253 | 15 | |||||
2678-2696 | а иссоиаоосдсааиолситг | 891 | АоисдиисиосссАСОСАстт | 892 | АО- 15340 | 18 | |||||
2679-2697 | иссоисбОСАбААисАсиитт | 893 | ААСиСАиисиссссдсооАТг | 894 | АО1529! | 17 | |||||
2683-2701 | исоссАСАдиоАсииииАитт | 895 | АидАААбисАЦЦсиосссАТТ | 896 | АО- 15341 | II | |||||
2694-2712 | АсиииидиисАОсисииситт | 897 | АСААОАССиСААНААДАОСГГ | 898 | АО- 3 5401 | 13 | |||||
2700-2718 | диис лососи исииссоистт | 899 | С АСХЮ А АСА АО АС СиС А А ОТТ | 900 | АО- 15342 | 30 | |||||
2704-2722 | АОСЦсиисиисссооссАОТ | 901 | СиООСАСООААСААОАОСиТТ | 902 | АО- 15343 | 21 | |||||
2705-2723 | осисс-ибииссоисссАОбп· | 903 | СС1ЮССАСОТААСААОАОСТТ | 904 | АО- 15292 | 16 | |||||
2710-2728 | υσυ иссо иоссасюсдиисгт | 905 | ОААЦСССиООСАССЮААСАТТ | 906 | АО- 55344 | 20 | |||||
τπι ι 2^29 | аиисссисссдоослиисАтт | <эт | иС-А а С.И5ГП ΙΠΓ.Γ АСОСА астт | 908 | АО- 15254 | 18 | |||||
2712-2730 | ииссаисссдаосА бссаатг | 909 | иисАдиоссиоссАСосгААТт | 910 | АО- 15345 | 18 | |||||
2715-273 3 | со ν сссасосд иисда исстт | 9П | оодоиоАлиоссиоосдсоп· | 912 | АР- 15206 | 15 | |||||
2716-2734 | оооссасюсдиисааиссотт | 913 | АбОАОиодАНОссиоссАсп | 914 | АО 15346 | 16 | |||||
2728 2746 | СААЪссислссисиссАССтт | 915 | сюиссдсАСсиоАОСАииотт | 916 | АО15347 | 62 | |||||
2743-2761 | САССААОаАСО€А<ЗОАииСТ5Т | 917 | одАиссисссиссиисоистзт | 918 | др- 9577 | 33 | 31 | ||||
2743-2761 | сАссААООАОСсАООАиисТзТ | 919 | ОААиссиоссиссиисюибът | 920 | АО9703 | 17 | 26 | ||||
2743-2761 | С ГаСЙ А (аСИ®А ίαΑ Г§0 Га 1ЯиС ГГаТ | 921 | р-§АТаиГсСГи0кСГиСГсиГиСГ8и£&Т5Т | 922 | АО- 14678 | 22 | |||||
2743-2761 | С ГАСГСЕААОС АО ОСТА ОО Аϋίϋ ГСГЪТ | 923 | САлогсгсгиксгстигс^сяликоигсте т | 924 | АР- 14688 | 23 |
- 35 015676
Пслозкнняв человеческий пос тн рег№ ΝΜ_174936 | Последовательность синелевой цепи (5 -3^ | 8Е9 ГО ΝΟ: | Последовательность антисмысловой целтэ’З')' | $ЕФ 10 ΝΟ: | ОбсптЕката д)пт*а | Средний Процент оставшегося мРНктралгехрнпта лрл «хсивепл^аощей концентрации киРНК в клетках различных типов | 1С50в НерС2 (нМ? | 1С50 В гепагошггвх собаке подобных обеаьяк (иМ1 | |||
1О0 чМ/НерО2 | 30 κΜΉβρΟ2 | нМ/Йер02 | 30 нМ/ НеЕл | ||||||||
2743-2701 | Сз€сАа<3§АяОсАйСаииСТ5Т | 925 | рндМаиГсСпяСГсСГиСГсиРпС^и^ТзТ | 926 | АО14698 | 23 | |||||
2743-2761 | СаСсАаСдАдСсАдСаииСТаТ | 927 | 0ΑΑϋί€ΐϋίυκλ2ΐΌίυκ?κ;ίυίυΐΐ;<?υϊ<3Τ$ Т | 9’8 | А Ο- Ι 4708 | 14 | |||||
2743-2761 | СГаСГсАГаСЕвА^СйАСдСйиГиСГГзТ | 929 | бААиСсиССсиССии<|®идТзТ | 930 | Αϋ- 14718 | ΪΪ | |||||
2743-2761 | СТАСГСГДАССАОССМОбдиЛзЛТП^Т | 931 | ОААиСсиЗСсиССииС£11£Т$Т | 932 | АО- 14728 | 25 | |||||
2743-2761 | СаСсАаЗеДдОсАдСаииСТзТ | 933 | СААС’СспССсиССииСтеидТЯ | 934 | АО- 14738 | 31 | |||||
2743-2761 | 935 | р-иСГсСРМ^АЕаА&иЕсСйСЕдСйгТьТ | 936 | АО- 15084 | 19 | ||||||
2743-2763 | 937 | и/СООАА17ГАААСГиК?ГСГАОО€1СП5Т | 938 | ДО- 15094 | II | ||||||
2743-2761 | СдСсидСаСиииАиисСдАТвТ | 939 | р-иСЕсО{аАГиА£аАГси£сСГаО(®СкТ5Т | 940 | АО- 15104 | 16 | |||||
2743-2761 | О §€с и дСаСиОиА иЦсСдАТ зТ | 941 | и£СКЮААиГАААСГипЗЯЗ£АСОС1С^5Т | 942 | ДО15114 | 15 | |||||
2743-2761 | СйдСЕсиГдО&ОН^иГиАЕииГсСгГеАГГаТ | 943 | иссо А Эи А АасиССАСдссТгТ | 944 | АО- 15124 | И | |||||
2743-2761 | оссгспфазсАСигилзЕАЦЕи^РЭСАТзт | 945 | иСССАаиААасиССАСдссТзТ | 946 | Αϋ- 15134 | 12 | |||||
2743-2761 | СёСсидСайиииАцисСдАТзТ | 947 | иССОАаиААасиССАОдссТзТ | 948 | АО- 15144 | 9 | |||||
2753-2771 | осАССАиисииссслиосАТТ | 9*9 | иссАисосААСАлиссисстт | 9$0 | ДР- 15391 | 7 | |||||
2704-2812 | иссАСосАСАААСАисоиик | 951 | аасс диоиииаисссиасАтт | 952 | АО15348 | 13 | |||||
2795-2813 | ссАССсАСАААСдиссииотт | 953 | са асс лисииис иссеисстт | 954 | ДО- 15349 | 8 | |||||
2797-2815 | АосюАСААдсАисаииоостт | 955 | сссААССАиоишсисеситт | 956 | АО- 15170 | 40 | |||||
2841-2859 | сссисдиссссАбсиААситт | 957 | АоииАосисоАСдисАообтт | 958 | АО 15350 | 14 | |||||
2845-2863 | САПсиссАосиААСиоиссп | 959 | ссАСАсиилссиосАОлиотт | 960 | АГ>- 15402 | 27 | |||||
2878-2896 | ссисссисдиидАоссАсстт | 961 | ссиссАШАлисАсаодостт | 962 | АО- 15293 | 27 | |||||
2881-2899 | сссшдииААшсАСссиитт | 963 | ААОСсиссАипАлисАСсатт | 964 | АО- 15351 | 14 | |||||
2882-2900 | ссиоАииАдиосАСЮсииАТт | 965 | иААбСсиссдипААисАСЮТг | 966 | АО- 15403 | И | _ |
2884-2902 | исАиидАисоАоссиилсстт | 967 | ссиААССсисслиилАисАтт | 968 | АО- 15404 | 38 | |||||
2885-2903 | ОАииААисоАООсииАбсшт | 969 | АОсиААОссиссАиидАистг | 970 | АО- 15207 | 15 | |||||
2886-2904 | АиидАиссАбосиилссиитг | 971 | ААСсиААССсиссдиидАИТг | 972 | АР- 15352 | 23 | |||||
2887-2905 | ииААиссАбссииАссииотт | 973 | АААссидАОСсиссАии аатг | 974 | АО- 15’55 | 31 | |||||
2903-2921 | ииисиооАиоосАисиАОстзт | 975 | ССиАСАиСССАС’ССАСАААТяТ | 976 | АО9603 | 123 | |||||
2903-2921 | иФИсиССАиССсАисиАОсТзТ | 977 | <тСиАСАийСсАиСсАСАААТ5Т | 97$ | АО- 9729 | 56 | |||||
2904-2922 | иисиссАисосАисилссстзт | 979 | сссиАСАиоссАиссАСААТйТ | 980 | Αϋ- 9599 | 139 | |||||
2904-2922 | ццсиОСАиССеАисиАСссТзТ | 981 | СССиАСАЦССсАиСсАОААТзТ | 982 | АО 9725 | 38 | |||||
2905-2923 | исиссА1.’сюсАисиАОссАТ5Т | 983 | иСССиАСАНОССАиССАСАТзТ | 984 | АО9621 | 77 | |||||
2905-2923 | иси ССА иООс Айс и А Осс АТ$Т | 985 | иОССиАСАиОСсАиСсАСАТ5Т | 986 | АО9747 | 63 | |||||
2925-2943 | А ССС1СС АС АС АСЮийСССТГ | 987 | осссАСсисисиссАссситт | 988 | АО- 1540ф | 32 | |||||
2926-2944 | сосиссАОАСАОсиссоссгт | 989 | оососАссисисиссАОССтт | 990 | АО- 15353 | 39 | |||||
2927-2945 | ССиСКЗАС АСАаОиОСЭСССТТ | 991 | саосссАСС’исисиссАССгг | 992 | АО 15354 | 49 | |||||
2972-2990 | ииссисАСССАСсиииАситт | 993 | АСиЛААОСиСССиСАССААТТ | 994 | АО- 15406 | 35 | |||||
2973-2991 | иссиоАОССАСсиииАсистт | 995 | ОАсилААОсисссисАССАгг | 996 | А ΟΙ 3407 | 39 | |||||
2974 2992 | ссисАСССАСсииилсиситт | 997 | АОАОилААСсиассисАбс η | 998 | АО15355 | 18 | |||||
2976-2994 | иоАбссАСсиииАсисисстт | 999 | ССАСАОСААДОСиООСиСАТТ | ΙΟΟ0 | Αβ· 15356 | 50 | |||||
2978-2996 | АсссдссиииАсисиссистт | 1001 | сАССАОАсиААА(кги<юситт | 1002 | АО- 15357 | 54 | |||||
1И1-19ТО | САссиииАсисиосисиАитг | 1003 | АиАСАССАСАСиАААССиОТТ | 1004 | АР 15269 | 23 | |||||
2987-3005 | иАсисиссисиАСсссАСстйТ | 1005 | ссисссАидСАССАСАоиАТвт | 1006 | Αϋ· 9565 | 74 | |||||
2987-3005 | иАсисиОеисиАиОссАСетзТ | 1007 | ССиССсАиАСАСеАСАСиАТ?Т | 1008 | АО 9691 | 49 | □I |
- 36 015676
Пополнил в человеческой ЛОО ГН | Последовательность смысловой цепи (5-31)^ | 5Е9 ш | ПсСЛЩГОЛЗТеЛЬНОСТЬ антжМЛЫСЛСВОЙ цепп [З’-З')! | 5ΕΩ Ю ΝΟ: | ’З&ВКМСНИ дугстака | Средний процент оставшегося мРЯКтрэнскритгта присййтвстстьуюшей концентрации клРНК в клетках различных ТИПОВ | 1С5Пв гвлатошпак собака- | ||||
рег№ ΝΜ.17-1936 | ΝΟ: | 100 -гМ.'НерС: | 30 нМ/НерО | 3 κΜΉβρΰ | 3Λ нМ' НеБа | Ю501 ЙСр<л2 [нМ] | (Сдобных обезьян (нМ) | ||||
2995-3016 | а исссдсссиоиссилосАтт | 1009 | иосиАССАСАбссиоосдитт | 1010 | АО- 15358 | 12 | |||||
3003-3021 | АсосибиосиАССААСАССп | 1011 | оиисииосиАОСАСАОсаггг | 1012 | АО- 15359 | 24 | |||||
3006-3024 | сиоиосидссААСАСССААтт | 10В | иисссисииссиАССАСАсгг | 1014 | АО- 15360 | 13 | |||||
3010-3028 | ОССАССААСАСССАААССиТТ | 1015 | Ассиииообиаииссидостт | 1016 | АО- 15219 | 19 | |||||
3038-3056 | ссАоссдисАСси лао дситт | 1017 | Асиссидосиодиоосисстт | 1018 | Αϋ· 15361 | 24 | |||||
3046-3064 | САСсилоадсисАсисссстт | 1019 | ссссдсисдоиссиАСоиотт | 1020 | АО- 15273 | 36 | |||||
3051-3069 | АбОАсиоАсисоосАсдюитг | 1021 | дсАсисссоАоисАсисситт | 1022 | АВ- 15362 | 31 | |||||
3052-3070 | асАсьсАсиссссАсиоистт | 1023 | САСАсиссссАоисАоисстт | 1024 | АО- 15192 | 20 | |||||
3074 3092 | 1кЮ11оСАисгСАСОоисисАтт | 1025 | иодоасайиосаиосАСсдтт | 1026 | АВ- 15256 | 19 | |||||
3080-3098 | АиссАсисисисАсссААСГг | 1027 | оииоосисАОАСАоиосАитт | 1028 | АО 15363 | 33 | |||||
3085-3103 | сиоисисАОССААССсоситг | 1029 | АОСоасииаосйоАСАСАСТт | 1030 | АО- 35364 | 24 | |||||
3089-3107 | СиСАСССААСССССиССАСТзТ | 1031 | оисоАССоооисоасиоАОТзт | 1032 | АВ9604 | 35 | 49 | ||||
3089-3107 | сиеАСссААсссОсиссАсТьТ | <033 | о и ос а сссиО и с о осио а 0ΤδΤ | 1034 | аО9730 | 85 | |||||
3093-3111 | сссддсссссиссАсидсстзт | 1035 | осиАсиаоАасоооииоосι«г | 1036 | АВ- 9527 | 45 | |||||
3093 3111 | ОссААсгсСсиссАсиАсйТзТ | 1037 | ооиАсиосАССОССииоостэт | 1038 | АО 9653 | 86 | |||||
3096-3114 | АлсссссиссАсидсссастт | 1039 | ссоссиАсиооАОСоооиитт | 1040 | АО- 15365 | 62 | |||||
3099-3117 | ссссиссАсидссссосАОТт | 1041 | сисссосоиАоиосАОсостг | 1042 | АЭ- 15294 | 30 | |||||
3107-3125 | СиАССССССАСОСиАСАСАТТ | 1043 | иоисидсссиссссобидстт | 1044 | АВ15173 | 12 | |||||
3108 3126 | иАСссо<?САОсаиАСАСАитт | 1045 | АиоиоиАССсиоссоссидтт | 1046 | АВ- 15366 | 21 | |||||
3109 3127 | АСХССЮСАилЗБгБАиАСАии ί ϊ | 1047 | АдиоиоиАсССийССОйоИТТ | 1ύ48 | 15367 | 11 | |||||
31103128 | сссоссАОСоилсАСАиисп | 1049 | алАиаиоиАСССиоссооотт | 1050 | АО- 15257 | 18 | |||||
3112-3130 | ссосАОСсидсАСАиисосгг | 1051 | осоАлиоиоиАСссиассатт | 1052 | АО- 15184 | 50 | |||||
3114-3132 | осАссаидсдсдиисссАСтг | 1053 | сиссОААПоиоиАССсиостт | 1054 | АО- 55185 | 12 | |||||
3115-3133 | САОСюидСАсдииссСАСстт | 1055 | оооссоАдисиоидссссотт | 1056 | АВ- 15258 | 73 | |||||
3116-3134 | АОсктидсАсдиисссАСССТТ | 1057 | ссюиосоАдиоисиАССситт | 1058 | АО- 15186 | 36 | |||||
3196-3214 | ССААСиСАСССАСАААСОСТТ | 1059 | осооиисисосисАоиисстт | 1060 | АО- 35274 | 19 | |||||
3197-3215 | СААСиСАСССАСДААСССАТТ | 1061 | иосоииисисосисАоицсгг | 1062 | АО- 15368 | 7 | |||||
3198-3216 | ААСиСАСССАСАААСбСАОТТ | 1063 | сиоссииисиоосисАОиитт | 1064 | Αϋ- 15369 | 17 | |||||
3201-3219 | ибАОССАОАААСССАОАииГГ | 1065 | АдисисссииисисасисАтт | 1066 | Αϋ- 15370 | 19 | |||||
3207-3225 | АСАдАСОСАСдиисюссистт | 1067 | сдосссААисиссоиииситт | 1068 | АО- 15259 | 38 | |||||
3210-3228 | АДЖАсдииссссиссситт | 1069 | АОсСАОСССАдисиоссиитт | 1070 | А Ο- Ι 5408 | 52 | |||||
3233-3251 | АССсААСссисиисиилсиът | 1071 | АОиААСААОдсосиисоситЕТ | 1072 | АО- 9597 | 23 | 21 | 0,04 | |||
3233-3251 | АСгссААОссцсиисииАсиТзТ | 1073 | АСиААСААСАСКХДЛЮОСиЬТ | 1074 | АВ- 9723 | 12 | 26 | ||||
3233-3251 | А^СкАСаСДсСГцСГииТсиГаАгситТ | 10/5 | р аОгиАгаО^аА^ДгвСгсиГцСГзС^ТгТ | 1076 | АО- 14080 | 15 | |||||
3233-3251 | дсс1С!ААСсгс1и(слэтик:гия;ГАСллтзт | 1077 | Αθυί·ΑΑύΑΑ0Α00€ΐυίυΐΌ0€ίυίΤ5Τ | 1078 | АО- 14690 | 18 | |||||
3233-3251 | АзСсАаСсСиСиисииАсиТзТ | 1079 | р-аОиАГаОГаА^А^сийкЗ^С^ТгТ | 1080 | АО- 14700 | 15 | |||||
3233-3251 | АёСсАаОсСиСиисииАсиТьТ | 1081 | АоигАдодАОАСосгигикюс^гат | 1082 | АО- 14710 | 15 | |||||
3233-3251 | АГ|С1сАГаОГсСГиСГииГсиГиАГсиПзТ | 1083 | АСиААааАОаеССкХоссиТзТ | 1084 | АВ- 14720 | 18 | |||||
3233-3251 | А€<277[ДАС€:С1иЮ1и£и(СП.1П,1ГАСП0:Т£Т | 1085 | доил двадоавоси иоасиТгт | 1086 | АВ- 14730 | 18 | |||||
1233-3251 | А 8СсАаСсО1Си ис Си АсСТзТ | 1087 | АСиААваАОввбСииОвсиТгТ | 1088 | АВ- 14740 | 17 | |||||
3233-3251 | шеогии&с&и/ёАГгСГасгсАГгсггзт | 1089 | р-£СГиО%и1У2ГиСГа<31£ОГаА?сСГаТ5Т | 1090 | АВ- 15086 | 55 | |||||
3233-325] | игсюиалсгсгсялоАСкэАсгсгАастт | 1091 | ОСЛЛООиГСТСПЛССАОСОААСГССАТзТ | 1092 | АВ- 15096 | 70 |
- 37 015676
Положения В человеческом ТТОС-ТИ ΝΜ.174936 | Последовательность смысловой цепи(5'-3^ | 8Е0 ГО ΝΟ: | Последовательность антткштсдовой цепи ф'-ЗЭ1 | ЗЕр ΙΟ ΝΟ: | СбозгЕчеаи дугпета | Средний Τη»цент оставшегося мРНКгранскрллти прнакпветствуюшей концентрации киРНК в клетках различных типов | 1С50в Неро: [мМ] | 1С50в гепатоштах «•бакоподобных обезьян <нМ) | |||
100 4ΪΛΉφΟ2 | 30 нМ/Нер62 | 30 нМ/ НеЬа | |||||||||
3233-3251 | иёСиисСеи&АвСаСоАвСГзТ | 1093 | р-еСкиСЦПГсСГиССаСкдСйА^СГаТзТ | 1094 | АР- 15106 | 71 | |||||
3233 3251 | иеОиЦсСси&АеОзСсАеСТзТ | 1095 | €Γίυκ5ουκ:ΐυίΐΐί€ίΑ0ϋαΑΑ^£ΑΤ3Τ | 1096 | АР- 151 16 | 73 | |||||
3233-3251 | и£8СЙ|ГЯс€Гси%АГе6ГаСк А Г&СГВТ | 1097 | ССи0СисСиса<ЭС<ЗААссаТ5Т | 1098 | АР- 15126 | 71 | |||||
3233-3251 | игсос-^1аскпзкзА<ЮАСк:гА<зсгг5Т | 1099 | ССиССш^исаОССААссаТгТ | 1ΙΟΟ | АР15136 | 56 | |||||
3233-3251 | ияОиисСси^СаСсАвСТзТ | 1101 | ССиССисСисаСгОСАДссаТаТ | 1102 | АР15146 | 72 | |||||
3242-3260 | исиисиидсиисдсссссстт | 1 юз | бССОССиСААСиААСААОАГГ | 1104 | АР- 15260 | 79 | |||||
3243-3261 | сиисуиАсиисАСссосситт | 1105 | АССССООиСААСиААСААСТТ | Н06 | АР15371 | 24 | |||||
3244-3262 | иисиилсиисАсссоосистг | 1107 | САСССОСОиОААСиААСААТТ | ) 308 | АР- 15372 | 52 | |||||
3262-3280 | соссиссисАииииоАсастт | 1109 | сссУАААААисАоадассстт | 1110 | АР- 15172 | 27 | |||||
3263-3281 | оссиссисАииииидсссстг | ИН | ССССиАлААДиСАССАОССТТ | 1112 | АР- 15295 | 22 | |||||
3264-3282 | осиссисАииииидсскюшт | шз | АССССи АААА А1Ю АСС А ССТ7 | И 14 | А Ο- Ι 5373 | 11 | |||||
3265-3283 | сиссисАиигиилссосиАТТ | 1115 | иАСССОиААААДиСАССАСТТ | 1116 | АР15163 | 18 | |||||
3266-3284 | иссисдиииииАСОссиААГТ | 1117 | иидССССМААААА иСАССАТТ | /РЗ | АО15165 | 13 | |||||
3267-3285 | сс и с а и иди и а со<х ид асгт | 1119 | сиилссссидААААиодсстт | 1120 | АР15374 | 23 | |||||
3268 3286 | сисдишиидсссаиААСАТт | ί 121 | исииАссссиАААААПСАОГг | 1122 | АР15296 | 13 | |||||
3270-3288 | САиииииАСбооиААСАситт | 1123 | АсисиилссссилААДАистт | 1124 | АО- 15261 | 20 | |||||
3271-3289 | а и и иииассссидаслсистт | 1Г25 | САсисииАссссиддАААитт | 1126 | АР- 15375 | 90 | |||||
3274-3292 | сиилссссиААСАоисАСклт | 1127 | ссисАсисиилссссилдАТТ | 1128 | АР15262 | 72 | |||||
3308-3326 | САСАССАССААССиСССиСТТ | 1129 | САССсдссиисссосисисгт | ИЗО | АР- 15376 | 14 | |||||
3310-3328 | САССАСОААССиСССиОАСТТ | 1131 | сисАССОАОсииссисюистт | 1132 | АР15377 | 19 | |||||
3312-3330 | ссАООААОсисхзоисАсиотт | 1133 | САсиСАСССАСсииссиостт | 1134 | АР15409 | 17 |
3315-3333 | скзААОсисосиОАоисАисгт | 1135 | сдисАСисАСССАОсиусстт | 1136 | АР15378 | 18 | |||||
3324-3342 | СРСАОиОАРСССАСААССАТТ | 1137 | иссиисРбссдисАсисАСТт | 1138 | АР15410 | 8 | |||||
3326 3344 | сАсисдисосАбААССАистт | 1139 | САиссиисисссАисАсистт | 1140 | АР- 15379 | 1 1 | |||||
3330-3348 | САиоССАСААССАССССиСТТ | 1141 | САОССАиссиисиссслистт | 1142 | АР- 15187 | 36 | |||||
3336-3354 | АСААССдиСССиССАСССАТТ | 1143 | исссиссдоссдиссииситт | 1144 | АР15263 | 18 | |||||
3339-3357 | дссАисссиссАСССАиссгг | 1145 | сслиоссиосАСосА исситт | 1146 | АР- 15264 | 75 | |||||
3348-3366 | ссАОссАиссААсииииистт | 1147 | САДАДАСиисслиоссисстт | 1148 | АР- 15 297 | 21 | |||||
3356-3374 | ссдАсииииисссииАисАтт | 1149 | исдиААССсАДАддсиисстт | 1150 | АР15208 | 6 | |||||
3357-3375 | СААСииииисссииАисдсгт | 1151 | оиоАиАдсссАААААоиистт | 1152 | АР- 15209 | 28 | |||||
3358-3376 | ААсиииииссоииАисАССтт | 1153 | соисАиАдсссААЛААсиитт | 1154 | АР- 15193 | 13! | |||||
3370-3388 | иАисАСССАОССсиолиистг | 1155 | СААРСАСОСсиссоислиАтт | 1156 | АР- 15380 | 88 | |||||
3378-339$ | АООссисАиисАОЮссситт | 1157 | А<юссАсисААисА<к1сситт | 1158 | АР- 15298 | 43 | |||||
ЧЧЙЧ-34Л1 | иСАЦПСАП ΙΓ.ηΓΓίΤΠΓτΓίΊιΊΤΤ | 11 59 | ССОССАППССАГИ 1ГгА ΑΙ1САТТ | ! 160 | АР15299 | 99 | |||||
3385-3403 | диисдсиснзссиакхзсАСТт | 1161 | СРССОССАССССАСиСААРТТ | 1162 | АР- 15265 | 95 | |||||
3406.3424 | осцисиААОосАНосиссютт | 1163 | ссадссАибссиидсдАОСтт | 1164 | АР15381 | 18 | |||||
3407-3425 | сиисиААСОСАиссисссетт | Н65 | ссссАССдиоссиидсААстт | 1166 | АР- 15210 | 40 | |||||
3429-3447 | С АСССгССААСА АСУС иСССГТ | 1167 | оооАСАоиисиисюсссистт | 1)68 | АР- 15270 | 83 | |||||
3440-3458 | АсисисссиссиисА0сдст5Т | 1169 | биссисААОСАассАСАсит$т | 1170 | АР- 9591 | 75 | 95 | ||||
3440-3458 | АсиОисссиссииОАСсАсТаТ | 1171 | ОиОСРсААОСАОООАсАСиТ^Т | 1172 | АР9717 | 105 | |||||
3441-3459 | сисисссиссииСАОСАССГзТ | 1173 | соиосисААсюАСюаАСАСт$т | 1174 | АР 9622 | 94 | |||||
3441-3459 | си(диСссиегииСА<ЗсАс£Т$Т | 1175 | ООиССисААССАСаСАсАСТзТ | 1176 | АР9748 | 103 |
- 38 015676
Положения в человеческой пас-ти рег№ ΝΜ_ 174936 | Последовательность смысловой цели | 5ЕР ГО ΝΟ: | Последовательность аНТНСМысЛОВОЙ ΟβϊΗί 15‘-3'}1 | ТЕО Ю ΝΟ: | Зботдоеят! дутикккэ | Средний процент оставшегося мРНК· Транскрипта гтрксротвегсгаугощей кониентраини киРНК в клетках различных тигов | 1С«в НерСг2 |нМ] | 1С50в гепатоцитах собаке* подобных Обетьян (нМ) | |||
1« йМ/Нер62 | 40 пМ41ерС2 | э ЯМ/НсрОа | 30 нМ7 Не1й | ||||||||
! 3480-3498 1 | АСАтлл/Аисииииоссиситзт | 1177 | АСАСССААААСАИААдиСиГьТ | 1178 | АО9587 | 63 | 49 | ||||
1 3480-3498 | АсАиииАиСишшСССисиТзТ | 1179 | АСАССсААААСАиАААиОиТяТ | 1180 | АО- 9713 | 22 | 25 | ||||
3480-3498 | АГсАГиЫиАСиСГии^ииГаСГйиГсиГГзТ | 1181 | р-аСбаСГсСГаАГаАГ^АЙдАГаАГиОГиТгТ | 1182 | АО- 14679 | 19 | |||||
3480-3498 | АсиЕлипллиюгиплиюккюиюшггз т | 1183 | АС АСгСЮГАА ДАО АР ίΑΑ А11 ЮС ГТяТ | 1184 | АО- 14689 | 24 | |||||
. 3480-3498 | АсАиииАиСииии§б£С1сиТ5Т | 1185 | р-абГаСГсС Га А 1аА ίβΑ £иАй А Гиб ίιΠΥΓ | 1186 | АО- 14699 | 19 | |||||
1 3480-3498 1 | АсАиРиАиСииии^СгисиТзТ | 1187 | А С АСЮЮГА АААС АС ЕААДиЮР ίΤ$Τ | 1188 | АО14709 | 21 | |||||
1 3480-3498 1 | АГсА£ииГиАГиС£ииГии^С5§иГсСГТ5Т | 1189 | АСАССсаААа^АиАААиеиТаТ | 1190 | АО- 14719 | 24 | |||||
1 3480-3498 | АСГАигигугАиюсиплиюгасаигсгияя т | 1191 | АСАССсаААа£АиАААи§иТ?Т | 1192 | АО14729 | 23 | |||||
| 3480-3498 | АсАиЦи ΑϋΟαυυυ&ΦβυεϋΤδΤ | 1193 | АСАССсаААа&диАААщ’иТзТ | 1194 | АО- 14739 | 24 | |||||
. 3480-3498 | СЛСГаиГсО^ГиСГсС^СГаСГсСтт | 1195 | р-йС&иГсС^ОГсАГдСТаСГаиГзСГсЪТ | 1196 | АО- 15085 | 74 | |||||
3480-3498 | ссюгАигс^юсюккюгасАса'сгтят | 1197 | сссллсюгассгАОСГАОдиюссшт | 1198 | АБ- 15095 | 60 | |||||
3480-3498 | ОсСаисиаСиСсСяОзСгсСЬТ | 1199 | р-8О&иГССГйСГсАГЕСТаС£эиГ§С£сТ5Т | 1200 | АО- 15105 | 33 | |||||
34Ки-349Ь | йсСаисизСи<ЗсСе<ЗаОсСТ5Т | 1201 | СССЮГСГСГССС’ЛСЮСАСАиЮССЯзТ | >202 | Αϋ- 15115 | 30 | |||||
3480-3498 | ог^аиьигвсгиогесгвойогстт | 1203 | СССССапОСаеСАСАи^сТзТ | 1204 | АО- 15125 | 54 | |||||
3480-3498 | йсю1Аигсюю<1КГс</сюоАОсюгг№ | 1205 | ОССиСаиОСа§САСАи^сТ5Т | 1206 | АО- 15135 | 51 | |||||
3480-3498 | ЙсСаисидСШлсСвСаСсСТсТ | 1207 | СССиСаиССа5САСАи£ВсТ<Г | 1208 | АО- 15145 | 49 | |||||
348Ь3499 | САиъиАисииииоооисистзТ | 1209 | С АС АССС А А А АС ли А А А С’С ТяТ | 1210 | Αϋ- 9578 | 49 | 61 | ||||
3481-3499 | сАишАисшииСОСисиСТяТ | 1211 | сАОАССсААААСАиАААиСВТ | 1212 | АО- 9704 | 111 | |||||
3485-3503 | илисииииссоисиоиссутвт | 1253 | АОСАСАСдСССААЛАСАиАТэТ | 1214 | АО9558 | 66 | |||||
3485’3503 | иАцсцуииОО6исиСиесиТ$Т | 1215 | АОСАсАСАССсААААСАиАТяТ | 1216 | АО- 9684 | 63 | |||||
35С4-3522 | сисуоииоссиииииАСлстьТ | 3 217 | СиСиАААААСССАДСАСАОТяТ | 1218 | Αϋ- 9634 | 29 | 30 | ||||
3504-3522 | сисиСииСссиииииАсАСТяТ | 1219 | СиСиДААААСЮсААсАОАСТгТ | 1220 | АО9760 | 14 | 27 | ||||
3512-3530 | ссииииидсАоссААсииитт | 1221 | АААСииСССибСААДААСОИ | 1222 | АО- 15411 | 5 | |||||
3521-3539 | АСССААсиииисиАОАСситт | 1223 | АСсисиАСАААдаиисссигг | 1224 | АО15266 | 23 | |||||
3526-3544 | АсиииьсиАОАССиззиииитт | 1225 | ААААСАССисиАСААААОитТ | 1226 | АО- 15382 | 12 | |||||
3530-3548 | и иси Аслссис υ ии и оси υτ$τ | 1227 | ААОСААААСАСОисиАСААТзТ | 1228 | АО- 9554 | 23 | 24 | ||||
3530 3548 | ни с иАС АссиСиисадСк и иТя Т | 1229 | ААСсА А ААсАСС иСиАСА АТзТ | 1230 | АО9680 | 12 | 22 | 0,10 | оде | ||
3530-3548 | иГиСй1АГеАГсС1иО(ииГииГёСп1иГГзТ | 1231 | р-аАГеСГаА :аА Гс А ίχΰ ГиСГи А1&А ГаТ$Т | 1232 | АО- 14676 | 12 | |||||
1530-3548 | и1и£сЮ1АОАСТС(июи5иплигосплигг$ Т | 1233 | ААССГААААСГАССиЮГРГАСААТяТ | 1234 | АО- 14686 | и | |||||
3530-3548 | ииСиА^АсСдОииии^СииТаТ | 1235 | р-аАТ^СГаАйАГсАГвСГиСГиАГйАйТяТ | 1236 | АО- 14696 | 12 | |||||
3530 3548 | ииСиА&А^СчбцаиияСииТзТ | 1237 | ААСС£ААААС£АОСиГС!РГАСААТ5Т | 1238 | АО- 14706 | 18 | |||||
3530-3548 | иГиС5иА5&АГсС1иО1ииЕиитЛиЪтТ | 1239 | ААСсА ааАСайСиСиА^ааТзТ | 1240 | АО- 14716 | 17 | |||||
3530-3548 | и ιυίϋΐυίΑΟ дсйлиюилб пли юс ю ги т т | 1241 | ААСсАааАСадСгиСиАдааТзТ | 1242 | АО- 54726 | 16 | |||||
3530-354« | ииСиАгАс€и<ЗиииийСи1ЕГзТ | 1243 | ААСсАааАСаёСисиАгэаТзТ | 1244 | АО- 14736 | 9 | |||||
3530-3548 | СЕаиГаС^СГсиГ&ОГайГииЬАСииПзТ | 1245 | р-аАГиАГаАГсиГсСГаС^ГсШаиГвТзТ | 1246 | Αϋ- 15082 | 27 | |||||
3530-3548 | оли £АССС5сшгао дои ю ю£а и ги гм | 1247 | ААиГАААСТиГСГСГАСССГСГСГДиЮТяТ | 1248 | АО- 15092 | 28 | |||||
3530-3548 | СаиаСвСсийОзСиииАииТзТ | 1249 | р-аДГиАТаАГсиГсСГаС^СкиТаиГёТяТ | 1250 | АО 15102 | 19 | |||||
3>30 3548 | СаиаС^СсивСэСЗиииАиит зТ | 1251 | ААигАААСгиЮЕСГАСССгсгиГАсгатят | 1252 | АО 15112 | 17 | |||||
3530-3548 | ССаиГа6Г®СГсиГв6йСГии1иА£ииГГ5Т | 1253 | А А и А А асССсаССССиаийТ яТ | 1254 | АО15122 | 56 | |||||
3530-3548 | С£Аи£АСССЯ?Ш£СС АС и ЛЛП ί а и ЯЛТяТ | 1255 | ААСААдсиСсаССССиаивТяТ | 1256 | Αϋ15132 | 39 | |||||
3530 3548 | СаИаСёСсивСаСиииАииТзТ | 1257 | ААСААасССсаСЮСССаддТ;.? | 1258 | Αϋ15)42. | 46 | |||||
3531-3549 | исилсАСсисииииссииитзт | 1259 | АААбСААААСАОСисиАСАТзТ | 1260 | АО9553 | 27 | 22 | | 0.02 | ΖΖΊ |
- 39 015676
Положения в человеческой ТЮС-ТИ рег№ | Последовательность смысловой ими (5'-3^ | 8Е0 10 N0: | Последовательность ыпиомислоьой пепн (5’·37ι | 5Ер ГО ΝΟ: | луттад | Средний процент оставшегося мРНКтранскрипга при соответствующей концентрации киРНК в клетках различны», типов | 1С50в НерО2 [нН] | 1050 в гепатоцитах ообатгоподобных обезьян (нМ) | |||
190 чМ/НсрО2 | за нМ/НерСг2 | нМ/Нср>02 | 30 нМ1 НеЪз | ||||||||
3531-3549 | иСиАСАссиСииииОсиииТзТ | 1261 | АААСсАААА«АССиСиА(дАТ$Т | 1262 | АО9679 | 17 | 21 | ||||
3531-3549 | игсигаСйсгси^и/иигиоГсиеиитт | 1263 | р-аАГа6£сА&АГаСйСГ&иГсиГаСйТ=.Т | 1264 | АО- 14675 | ;ι | |||||
3531-3549 | игсгигдсАсгсшгоишгишсосллипзггз т | 1265 | АААССГААААСГАООиГСГиЕАСАТьТ | 1266 | АО- 14685 | 19 | |||||
3531-3549 | исиа<га€си^ии11и6сЬииТ5Т | 1267 | р-аАГаСГсАГаАйСй<3^иГси£аСйТ5Т | 1268 | АО- 14695 | 12 | |||||
3531-3549 | исиаоассигииииосииитзт | 1269 | АААССГААААСГАСЮигаТЯАОАТзТ | 1270 | АО- 14705 | 16 | |||||
3531-3549 | иииЕаагасии^иьигиС'Еси’иЕитчт | 12.71 | АААОСааААсаСОисиайаТзТ | 1272 | АО- 14715 | 19 | |||||
3531-3549 | игсЕигАСАОслзгсиплигигсоигппзт т | 1273 | АААССазААсябОисиаяаТяТ | 1274 | АО- 14725 | 19 | |||||
3531-3549 | исиаОаСсиЕииииСсииИГзТ | 1275 | АААССэаААсаСОисиа8аТ5Т | 1276 | АР- 14735 | 19 | |||||
3531-3549 | и ЕсАГиА Г§0 £сС ГиСГ&А Г^СГии ЕаЭ [ΤίΤ | 1277 | р-аиГаАГаСГиС£сАГ§Сг£сСГиАГ1хСГаТзТ | 1278 | АО- 15081 | 30 | |||||
3531-3549 | и гс гао гаоссгсш гсс ас иги ю га итт | 1279 | АСГАААСЛЛСГСГАОССЕСЮГАиГОАТзТ | 1280 | АО- 15091 | 16 | |||||
3531-3549 | исАиАдСсСиСзА^иииаиТяТ | 1281 | р-аиГаАГаСГиСГсАЕ8ОГсС£иАГиСйТ5Т | 1282 | АР- 15101 | 16 | |||||
3531-3549 | исАиА^СсСиС^АзПииаиТзТ | 1283 | А^АААС^ГСГСЕАООСЕСЕиГАиЕСАТзТ | 1284 | АР15111 | и | |||||
ΙΤ+οΑήιΛΓσίΤΛ-ΓΑιΑ+οΛΡοΙ Ιίι.Γ ТЙаГ ΤίΤνΓ | 1285 | А( и ДАп>СГя«СгСГиА||^аТ^Т | 12ЯЪ | АР- 15121 | 19 | ||||||
3531-3549 | иЕСгдигАо<зсгсгигссАоигип;£Аи1Т5Т | 1287 | А и А А А сиССа^ОСС и А и^аТаТ | 1288 | АР- 15131 | 17 | |||||
3531-3549 | ПсАшДЕСсСиСдАдиииаиТгТ | 1289 | ΑϋΑ А АсиССа^СгССиАи^аТзТ | 1290 | АР- 15141 | 18 | |||||
3557-3575 | ис аас ди ли и и а и иссссотзт | 1291 | сссАСААиАААилисиисАт&т | 1292 | АР- 9626 | 97 | 68 | ||||
3557 3575 | иСААСгАиАиииАиисиСгОСТзТ | 1293 | ССсАОААцАААиАисиУсАЪТ | 1294 | АО9752 | 28 | 33 | ||||
3570-3588 | исиоосиииисиАССАииитгт | 1295 | АААиССиАСААААСССАОАТзТ | 1296 | АО- 9629 | 23 | 24 | ||||
3570-3588 | ис11ОССи1дииСиАСсАиииТзТ | 1297 | ДААиОСиАсААААССсАСАТвТ | 1298 | АО9755 | 28 | 29 | ||||
3613-3631 | АиАААААСАААСАААССИиТТ | 1299 | ААСсииисииисиииииАитт | 1300 | АО- 15412 | 21 | |||||
3617.3635 | АААСАААСАААССииСиССТТ | 1301 | оаАСААссииисииисииитт | 1302 | АО- 152! 1 | 73 |
3618-3636 | ААСАААСАААССОиОиССШТ | 1303 | а сс ас а а со συ ис и иисиитт | 1304 | АО- | | | 1 1 41 1 1 |
Г | 1 1 15300 1 } | и и κι 1 |
1 и, С, А, С - соответствующий рибонуклеотид; Т - дезокситимидин; и, с, а, д - соответствующий 2'-Ометил-рибонуклеотид; Ш, С£, АТ, С£ - соответствующий 2'-дезокси-2'-фтор-рибонуклеотид, если нуклеотиды представлены в виде последовательности, то они присоединены посредством 3'-5'фосфодиэфирных групп, нуклеотиды со вставленной буквой к присоединены посредством 3'-О-5'-Офосфотиодиэфирных групп, если перед последовательностью не стоит префикс р, то это означает, что олигонуклеотиды не содержат 5'-фосфатной группы у 5'-концевого нуклеотида, все олигонуклеотиды имеют 3'-ОН у 3'-концевого нуклеотида.
Таблица 2
Обозначение дуплекса | Последовательность смысловой цепи (5’-3’)1 | $ЕС) ΙΟΝΟ | Последовательность антисмысловой цепи(5’-3’)' | 8Е<2 ΙΟ ΝΟ | Процент оставшейся мРНК по отношению к контролю при концентрации киРНК 30 нМ |
АО-Ю792 | СссиСОАСиицАиисСбААТзТ | 1305 | ииССОДАиАААСиСсАСОСТзТ | 1306 | 15 |
АЭ-10793 | бссиССАСиииАиисСЗСЗААТбТ | 1307 | цисСбААиАААСОссАСССТйТ | 1308 | 32 |
АО-10796 | ОссиСбАСиииАиисССААТзТ | 1309 | ииссоАлилААсиссАосстзт | 1310 | 13 |
АЭ-12038 | (ЭссиООАСиииАиисСЮААТьТ | 1311 | ииССбААиАААСиССАСССТзТ | 1312 | 13 |
АО-12039 | СссиССАбиииАиисССААТзТ | 1313 | ииССОААиАААСиССАСОСТяТ | 1314 | 29 |
АО-12040 | ОссиСОАСиииАиисСЮААТзТ | 1315 | ииссСААиАААсисСАОсстзт | 1316 | 10 |
АО-12041 | СссибСЗАСиииАиисСОААТзТ | 1317 | ииссОААиАААсиссАОсстзт | 1318 | н |
АО-12042 | сссиссАсиииАиисосААТзТ | 1319 | ииССбААиАААСиССАООСТзТ | 1320 | 12 |
АО-12043 | бссиосАоицилиисссААТзТ | 1321 | ииСССААиАААСиССАСССТзТ | 1322 | 13 |
АО-12044 | оссисаАсииоАииссбААТзт | 1323 | иисССААНАААСиССАСОСТвТ | 1324 | 7 |
АР-12045 | оссисоАоииилиисасААТкт | 1325 | ииссОАлиАААсисСАОостзт | 1326 | 8 |
Αϋ-12046 | ОссиССАбиииАиисССАА | 1327 | ииССОААиАААСиССАСОСзсзи | 1328 | 13 |
АО-12047 | СссиССАСиииАиисСгСААА | 1329 | иииссоААилААсиссАсосвсви | 1330 | 17 |
АО-12048 | ОссиС6АОиииАиисОС|АААА | 1331 | ииШСССААОАААСиССАОСтСзсзи | 1332 | 43 |
АО-12049 | ОссибОАСиииАииоСгСААААС | 1333 | сиииисссААиАААсиссАсасзези | 1334 | 34 |
Αϋ-12050 | СссиССАСгиииАиисСбААТТаЬ | 1335 | ииСССААиАААСиССАСОСТТаЬ | 1336 | 16 |
АР-12051 | СссиСОАОиииАиисСО А ААТТ аЬ | 1337 | иииСССААиАААСОССАСОСТТаЬ | 1338 | 31 |
АР-12052 | ОссиСОАСиииАиисССААААТТаЬ | 1339 | ииииссбААПАААсиссАОссттаЬ | 1340 | 81 |
АР-12053 | СссиОСАСиииАиисОСААААСТТаЬ | 1341 | СииШСССААиАААСиССАСОСТТаЪ | 1342 | 46 |
- 40 015676
АО-12054 | сссиосАсиииАиисссААТзт | 1343 | ииССОААиАААСиССАСОСзсзи | 1344 | 8 |
АР-12055 | СгссиООАОиииАиисООААТьТ | 1345 | ииССОААиАААСиССАбОСзсзи | 1346 | 13 |
АО-12056 | 6сСиО^А§иииаииС§СаА | 1347 | иОССбААиАААСиССАСОСТТаЬ | 1348 | 11 |
ΑΡ· 12057 | СсСиС§А§иииаииС§ОаА | 1349 | ииСССААОАААСиССАСОСТзТ | 1350 | 8 |
АО-12058 | СсСиС§АёиииаииСё6аА | 1351 | ииССОААиАААСиСсАббСТзТ | 1352 | 9 |
АО-12059 | 6сСиСл§А§иииаииС§6аА | 1353 | иисСбААиАААСиссА0ССТ$Т | 1354 | 23 |
АО-12060 | 6сСиО§А§и ииаииС^Са А | 1355 | ШССОааиАааСиССАзяс | 1356 | 10 |
АО-12061 | СсСиО§пА§иииа1]иС§ОаАТ5Т | 1357 | ииСС(ЗааиАааСиССА£&СТ5Т | 1358 | 7 |
АР-12062 | СсСиО§А§иииаииС§СаАТТаЬ | 1359 | ЦиССбааиАааСиССА^&сТТаЬ | 1360 | 10 |
АР-12063 | СсСи(3§А§иииаииСйбаА | 1361 | ииСС6ааиАааСиССА^С5С5и | 1362 | 19 |
АО-12064 | ОсСиСЗёпА^иииаииСёОаАТзТ | 1363 | ЦиСССААиАААСиСсАббСТзТ | 1364 | 15 |
АР-12065 | ОсСиСёАвиииаииСёбаАТТаЬ | 1365 | ииССОААиАААСиСсАСбСТТаЬ | 1366 | 16 |
АО-12066 | СсСиО§А£ииС'аииС2.СаА | 1367 | ииССОААиАААСиСсАСССбСБи | 1368 | 20 |
АО-12067 | СсСиС§пА^иииаииС§0яАТ5Т | 1369 | иисссААиАААсиссАббстзт | 1370 | 17 |
АР-12068 | СсСи6§АйиииаииС^СаАТТаЬ | 1371 | ииСССААОАААСиССАСОСТТаЬ | 1372 | 18 |
АО-12069 | <ЭсС и О Α§Ό и С аЬ'иС абаА | 1373 | ииСССААиАААСиССАСССвсзи | 1374 | 13 |
АР-1233 8 | <ЗГсСГйССйА1еи£иийий)СГ§<}ГаАТ | 1375 | Р-ии£сС£§А£аи£аА£аС£йС£сА£§С£с | 1376 | 15 |
АО-12339 | <3с С и А§и ииаЬ’и С §Оа А | 1377 | Р-иикС£§А£аи£аА£аС£йС£сА£§С£с | 1378 | 14 |
АО-12340 | Ссс иСС АС иии А и исОС А А | 1379 | Р-ии£сС£ёА£аи£аА£аС(иС£сА£ёС£с | 1380 | 19 |
Αϋ-12341 | СГсСГиОСвА^иГииГаиЛСГзСГаАЯ'зТ | 1381 | Р-ии£сС£ёАйиГаА&С£иС£сА£§О£сТ5Т | 1382 | 12 |
АО-12342 | С£сС£и6£^А£§и£ии£аи£йС£§С£аА£ГзТ | 1383 | ЦиСССААиАААСиСсАСЮСТхТ | 1384 | 13 |
АР-12343 | С£сС£иС£^£§и£ии£аиШС£§6£аА£Г5Т | 1385 | иисССААиАААСиссАСОСЪТ | 1386 | 24 |
АР-12344 | О£сС£иСГ&АГ8ип1иГаий1СГеСГаАтТ | 1387 | иисссААидААсиссАссстзт | 1388 | 9 |
АО-12345 | ОГсС(иО^А£@иП1иГаи(иС^С&А£Г5Т | 1389 | ииССбААОАААСиССАСССзсзи | 1390 | 12 |
АО-12346 | ОГсСГиСГ&АГЕиГииГаитСГзСЕаАСГзТ | 1391 | ЦиСССааиАааСиССАё^сзсзи | 1392 | 13 |
АР-12347 | бссисюАоиииАииссюААТзт | 1393 | Р-ии£сС£ёАйи£аА£аС£иС£сА£§<3£сТ5Т | 1394 | И |
АР-12348 | СссиСгС АОиии АиисСС А АТ$Т | 1395 | Р.ииГсС£ёА&и£аА£аС£иСйА£ёС£сТ5Т | 1396 | 8 |
АО-12349 | ОсСиО§пА§иииаииС§6аАТ5Т | 1397 | Р-ииГсС£5А£аийА£аСГиСГ£А£е6£сТ5Т | 1398 | 11 |
АР-12350 | 6£сСГиС£ёА^и£иийи1иС£еО£аАПТаЬ | 1399 | Р-и№С£ЙА£аи£аАйС£иС£сА£§С£сТТаЬ | 1400 | 17 |
АР-12351 | ОГсСГиС^А^иГииГаийСТеСГаАГ | 1401 | Р-ии£сС£ёАйи&АйС£иС£сА£§6£с5С£8и | 1402 | 11 |
АР-12352 | 6£сСп10£§А£§иЯ1и£аи1иСГёО£аА£ | 1403 | ииСССааОАааСиССА§§с5С5и | 1404 | И |
АР-12354 | б£сС£и6£§А£§и£ии£аЧЛиС£§6£аАГ | 1405 | ииСС6ААиАААСиССАССС5£5и | 1406 | 11 |
АР-12355 | С£сС£и6Г§АГ^и£иийи£иС£§6£аАГ | 1407 | ииСССААиАААСиСсАСОСТ^Т | 1408 | 9 |
АР-12356 | 6ГсС£иС£§А^и£ии£аи£иС£§6£аА£ | 1409 | иисССААиАААСОссАСССТБТ | 1410 | 25 |
АО-12357 | ОтосСтоиОто£Ат02§итоиитоаитоиСто§ОтоаА | 1411 | ииСССааиАааСиССА§§с | 1412 | 56 |
АР-12358 | СтосСп1оиОтоцАп102д.итоиипюаигпсиСпк>§ОтоаА | 1413 | Р-ии£сС£§А£аи£аА£аС£иС£сА£§С£с | 1414 | 29 |
АО-12359 | ОтосСтоиОто§Ат02§итоиитоаитоиСтойОпюаА | 1415 | Р-ии£сСГ§А£аи£аА£аС£иС£сА£ё6£с5С£5и | 1416 | 30 |
АР-12360 | 6то<Стои6т.о§Ат02§и1ПОиитоаитоцСтоёСтоаА | 1417 | ииСССААиАААСиССАСССзо^и | 1418 | 15 |
АР-12361 | <ЗтосСтоиСто§Ат02§итоиитоаитоиСто§ОтоаА | 1419 | ииСССААиААЛСиСсАСССТзТ | 1420 | 20 |
АО-12362 | бтосСтоибтоёАт02§ип1|Оиитоаип1оиСто§СлтоаА | 1421 | иисССААиАААСиссАСССЪТ | 1422 | 51 |
АР-12363 | СтосСтоиОто2Ат02^итоиитоаитоиСто§СтоаА | 1423 | ииСС6ааиАааСиССА§£СБС8и | 1424 | 11 |
АО-12364 | ОтосСтоиСтойАтоёитоиитоаитоиСтоёОтоаАТБТ | 1425 | циСССааОАааСиССА§§сТ5Т | 1426 | 25 |
АР-12365 | СтосСпюи6то§Ато§итоиитоаитоиСто§6тоаАТзТ | 1427 | ииСССААиАААСиСсАСССТзТ | 1428 | 18 |
АР-12366 | 6тосСтоиСто5Ато§итоиишоаитоиСто§СтоаАТ5Т | 1429 | иисссААидААсиссАйсстбТ | 1430 | 23 |
АО-12367 | Сто стостоиССАСтоитоитоиАтоитоитосССА АТ&Т | 1431 | ииСС6ааиАааСиССА§£сТ5Т | 1432 | 42 |
АО-12368 | СтостостоиССАСтоитоитоиАтоитоитосССААТзТ | 1433 | ииСССААиАААСиСсАСССТзТ | 1434 | 40 |
АО-12369 | СтостостоиССАСтоитоитоиАтоитоитосССААТзТ | 1435 | иисссААиАААсиссАссстзт | 1436 | 26 |
АР-12370 | СшостосгпоиСОАСтоитоитоиАтоитоитосСбААТБТ | 1437 | Р-и£0ГСГСЮААи£АААС£и£С£С£Д6ССаБТ | 1438 | 68 |
АО-12371 | СтостостоиССАСтоитоишоиАтоитоитосССААТаТ | 1439 | Р-и£и£С£СгаААиГАААС£и£С£Г£АС6С£8С£5иГ | 1440 | 60 |
АР-12372 | СтостостоиССАСтошпоитоиАтоитоитосССААТзТ | 1441 | Р-ии£€С£ёА£аи£аА£аС£иС£сА£§С£с5С£5и | 1442 | 60 |
АО-12373 | Стостостои6САСтоитоитоиАтоито«тосССААТ$Т | 1443 | иисссААиАААсиссАСОстзт | 1444 | 55 |
АР-12374 | бскзшгасАсишшгАигигсгааААЬт | 1445 | иЮ£С£С£СААи£АААСЯЛС1С£АСЮСтТ | 1446 | 9 |
- 41 015676
АО-12375 | 0С£СШГ6ОА0иШ1ЪТАиШ£С100ААТ5Т | 1447 | иисссААиАААсиссАосстзт | 1448 | 16 |
АО-12377 | ссгсшюсАаиююгАигигсюсААЪт | 1449 | иисССААиАААСиссАбОСТзТ | 1450 | 88 |
АО-12378 | аС1СШКЮАСиШШГАиШ£СЮСААТ5Т | 1451 | ииССбааиАааСиССА^сзсзи | 1452 | 6 |
Αϋ-12379 | 6С1СШЮСАСиЮ1иГАиЮ£СЮСААТ8Т | 1453 | ииССОААиАААСиССАОССзсзи | 1454 | 6 |
АО-12380 | οϋΚίυίοοΑουίυίΕΎΑυίυίοίοαΑΑΤδΤ | 1455 | Р-ииГсСГ^АГаЕЛаАЬСГиСГсАГёОГсзСГзи | 1456 | 8 |
АО-12381 | асгсшюоАсишшгАигигсгбаААТзт | 1457 | Р-ии£сС£§А£аи£аА1аС£иС£сА1§6£<ТзТ | 1458 | 10 |
АО-12382 | 1459 | Р-игиГСЙГЮААиГАААСЛЗГСГСЕАСОСтТ | 1460 | 7 | |
АО-12383 | сссиссАоиииАиисобААТзт | 1461 | Р-иЮОСЮААШАААСЮГСГСГАСОСГГзТ | 1462 | 7 |
АО-12384 | Осси 06 А Си ни Аи исОС А АТ зТ | 1463 | Р-иЮ£С1СЮААиРАААСЮ1С1С£А6ОСГГ5Т | 1464 | 8 |
АО-12385 | бсСиО^пА^иииаииСеОгАТзТ | 1465 | Р-и£и£С£С£6ААи£АААСШ£С£СГА6ОСтТ | 1466 | 8 |
Αϋ-12386 | СГсСп1С£ёА££и£ииЙ1и£иС^6£аА£ | 1467 | Р-иШЮГСЮААШ’АААСЮГСКТАСОСГГзТ | 1468 | 11 |
АО-12387 | ссйзщюоАбаиюллАиллсгасАА | 1469 | и£иГС£СЮААи£АААСШ£С£С£АО6СГзСГзи£ | 1470 | 13 |
АО-12388 | 66ί6ίυί06Ά6συίυΐυίΆυίυί6ί0<3ΑΑ | 1471 | Р-ии&С(&АГаи£аАГаС(иС£сА£ё6й | 1472 | 19 |
АО-12389 | бСГСШ£С0АСйиШЮ1АиШ£С£0САА | 1473 | Р-ии£сС^АГаи£аАГаС£иСТсА£йСй:5СГзи | 1474 | 16 |
АО-12390 | 1475 | ииССбААиАААСиССАСЮСзсзи | 1476 | 17 | |
АО-12391 | сс1сшюоАСсиш£игАи1игскзоАА | 1477 | ииССОааиАааСиССАё^с | 1478 | 21 |
АО-12392 | оасшгббАсоишюгАишкжюАА | 1479 | ииссоААиАААсиссАасстзт | 1480 | 28 |
АО-ϊ 2393 | осйлив&йАооишялАидискюАА | 1481 | ииССОААиАААСиСсАббСТзТ | 1482 | 17 |
АО-12394 | бСГСШЮОАСОиШЮСдиШЮ^САА | 1483 | иисСОААиАААСиссАСССТзТ | 1484 | 75 |
АО-12395 | бтосСтоиСпю^АтОёитоиитоаитоиСтойОтоаАТзТ | 1485 | Р-и1и£С£С£6ААи£АААС£ТТ'С1'СГАССС£5С£5и£ | 1486 | 55 |
АО-12396 | 6тосСтои6то§Ат02ёитоиитоаипк>иСтоёОп1оаА | 1487 | Р-иЮ£С£СЮААи£АААСЮГСГСГА(ЮС£5С£5Ш | 1488 | 59 |
АО-12397 | 6ГсСй|6Г§АГёи<ии£аип|С%6ГаАГ | 1489 | Р-иШ£С£С£6ААиГАААСЮ1С1СГА66С£зСГ5иГ | 1490 | 20 |
АО-12398 | 6ГсС1и6Г§АГ^иГииГаип1СГ§6ГаА£Т8Т | 1491 | Р-иШ£С£С16ААи£АААС£ТИ'СГС£А6бС1ЕС£5и1' | 1492 | 11 |
АО-12399 | СсСи6§пАёиииаииС§0аАТ&Т | 1493 | Р-иЮ£СГС£6ААи£АААСЮЮГСГА66СГзСГзОГ | 1494 | 13 |
АО-12400 | оссиссАбиииАписбОААТзт | 1495 | Р-иШКЯЗЙЗААиГАААСЯЛСГСГАСОСГзСйиГ | 1496 | 12 |
АО-12401 | бссиССАСиииАиисбСААТзТ | 1497 | Р-иШГСГСЮААиГАААСОСГСГАбОСГзСГзиГ | 1498 | 13 |
АО-12402 | ОссиббАСиииАиисОбАА | 1499 | Р-и1и£С£СЮААи£АААС£и1С£С£А66СГ5С£5иГ | 1500 | 14 |
Αϋ-12403 | осисююсАсоиююгАишююбАА | 1501 | Р-иЮ£С(СГОААиГАААСШ1СГС£А66СГзС£зиГ | 1502 | 4 |
АО-9314 | бссибОАбииилиисббААТзт | 1503 | ииССОААОАААСиССАООСТзТ | 1504 | 9 |
1 и, С, А, С - соответствующий рибонуклеотид; Т - дезокситимидин; и, с, а, д - соответствующий 2'О-метил-рибонуклеотид; ИГ, СГ, АГ, СГ - соответствующий 2'-дезокси-2'-фтор-рибонуклеотид; тοс, тοи, тοд, тοа - соответствующий 2'-МОЕ-нуклеотид; если нуклеотиды представлены в виде последовательности, то они присоединены посредством 3'-5'-фосфодиэфирных групп; аЬ - 3'-концевой неосновный нуклеотид; нуклеотиды со вставленной буквой к присоединены посредством 3'-О-5'О-фосфотиодиэфирных групп; если перед последовательностью не стоит префикс р, то это означает, что олигонуклеотиды не содержат 5'-фосфатной группы у 5'-концевого нуклеотида; все олигонуклеотиды имеют 3'-ОН у 3'-концевого нуклеотида.
Claims (11)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Двухцепочечная рибонуклеиновая кислота (дцРНК), ингибирующая экспрессию человеческого гена РС8К9 в клетке, где указанная дцРНК содержит по меньшей мере две последовательности, комплементарные друг другу, где смысловая цепь содержит первую последовательность, а антисмысловая цепь содержит вторую последовательность, включающую в себя область комплементарности, которая, по существу, комплементарна по меньшей мере части мРНК, кодирующей РС8К9, где указанная область комплементарности составляет в длину менее 30 нуклеотидов, где указанная первая последовательность содержит 8ЕО ГО NО: 1229 и указанная вторая последовательность содержит 8ЕО ГО NО: 1230 и где указанная дцРНК в результате ее контактирования с клеткой, экспрессирующей указанную РС8К9, ингибирует экспрессию указанного гена РС8К9.
- 2. дцРНК по п.1, где указанная дцРНК содержит по меньшей мере один модифицированный нуклеотид.
- 3. дцРНК по п.2, где указанный модифицированный нуклеотид выбран из группы, состоящей из 2'О-метилмодифицированного нуклеотида; нуклеотида, содержащего 5'-фосфортиоатную группу, и концевого нуклеотида, присоединенного к холестериловому производному или бисдециламидной группе додекановой кислоты, 2'-дезокси-2'-фтормодифицированного нуклеотида, 2'-дезоксимодифицированного нуклеотида, блокированного нуклеотида, неосновного нуклеотида, 2'-аминомодифицированного нуклеотида, 2'-алкилмодифицированного нуклеотида, морфолинонуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, содержащего неприродное основание.
- 4. дцРНК по п.1, где указанная первая последовательность состоит из 8ЕО ГО NО: 1229, а указанная вторая последовательность состоит из 8ЕО ГО NО: 1230.
- 5. дцРНК по п.1, где указанная дцРНК способна вызвать снижение уровня липидов в сыворотке.
- 6. Фармацевтическая композиция для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в организме, содержащая дцРНК и фармацевтически приемлемый носитель, где указанная дцРНК содержит по меньшей мере две последовательности, комплементарные друг другу, где смысловая цепь содержит первую по- 42 015676 следовательность, а антисмысловая цепь содержит вторую последовательность, включающую в себя область комплементарности, которая, по существу, комплементарна по меньшей мере части мРНК, кодирующей РС8К9, где указанная область комплементарности составляет в длину менее 30 нуклеотидов, где указанная первая последовательность содержит 8Е^ ГО ΝΟ: 1229 и указанная вторая последовательность содержит 8Е^ ГО ΝΟ: 1230 и где указанная дцРНК в результате ее контактирования с клеткой, экспрессирующей указанный РС8К9, ингибирует экспрессию указанного гена РС8К9.
- 7. Фармацевтическая композиция по п.6, где указанная первая последовательность состоит из 8Е^ ГО ΝΟ: 1229, а указанная вторая последовательность состоит из 8Е^ ГО ΝΟ: 1230.
- 8. Фармацевтическая композиция по п.6, где указанная дцРНК способна вызвать снижение уровня липидов в сыворотке.
- 9. Способ т νίΐτο ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетке, предусматривающий:(a) введение в клетку двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) по п.1 и (b) поддержание клетки, продуцированной на стадии (а), в течение периода, достаточного для разрушения мРНК-транскрипта гена РС8К9 и тем самым ингибирования экспрессии гена РС8К9 в указанной клетке.
- 10. Способ лечения, профилактики или контролирования патологических состояний, которые могут быть опосредованы понижающей регуляцией экспрессии гена РС8К9, предусматривающий введение пациенту, в случае необходимости такого лечения, профилактики или контролирования патологического состояния, терапевтически или профилактически эффективного количества дцРНК по п.1.
- 11. Вектор для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетке, где указанный вектор содержит регуляторную последовательность, функционально присоединенную к нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере одну цепь дцРНК по п.1.
Applications Claiming Priority (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US79945806P | 2006-05-11 | 2006-05-11 | |
US81720306P | 2006-06-27 | 2006-06-27 | |
US84008906P | 2006-08-25 | 2006-08-25 | |
US82991406P | 2006-10-18 | 2006-10-18 | |
US90113407P | 2007-02-13 | 2007-02-13 | |
PCT/US2007/068655 WO2007134161A2 (en) | 2006-05-11 | 2007-05-10 | Compositions and methods for inhibiting expression of the pcsk9 gene |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA200870528A1 EA200870528A1 (ru) | 2009-06-30 |
EA015676B1 true EA015676B1 (ru) | 2011-10-31 |
Family
ID=38694697
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA200870528A EA015676B1 (ru) | 2006-05-11 | 2007-05-10 | Композиции и способы ингибирования экспрессии гена pcsk9 |
EA201100907A EA020840B1 (ru) | 2006-05-11 | 2007-05-14 | Композиции и способы ингибирования экспрессии гена pcsk9 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201100907A EA020840B1 (ru) | 2006-05-11 | 2007-05-14 | Композиции и способы ингибирования экспрессии гена pcsk9 |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (9) | US7605251B2 (ru) |
EP (8) | EP3249052B1 (ru) |
JP (4) | JP5570806B2 (ru) |
KR (2) | KR101320916B1 (ru) |
CN (2) | CN103614375A (ru) |
AU (2) | AU2007249329C1 (ru) |
CA (2) | CA2915441A1 (ru) |
EA (2) | EA015676B1 (ru) |
ES (2) | ES2392478T3 (ru) |
HK (1) | HK1183910A1 (ru) |
IL (3) | IL195181A (ru) |
NZ (2) | NZ587616A (ru) |
PL (2) | PL3578656T3 (ru) |
SG (1) | SG171676A1 (ru) |
WO (1) | WO2007134161A2 (ru) |
Families Citing this family (159)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20070173473A1 (en) * | 2001-05-18 | 2007-07-26 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of proprotein convertase subtilisin Kexin 9 (PCSK9) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
KR101531400B1 (ko) | 2003-06-27 | 2015-06-26 | 암젠 프레몬트 인코포레이티드 | 상피 성장 인자 수용체의 결실 돌연변이체 지향 항체 및 그용도 |
WO2007087113A2 (en) | 2005-12-28 | 2007-08-02 | The Scripps Research Institute | Natural antisense and non-coding rna transcripts as drug targets |
JP5570806B2 (ja) | 2006-05-11 | 2014-08-13 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | Pcsk9遺伝子の発現を阻害するための組成物および方法 |
JP5588175B2 (ja) | 2006-11-07 | 2014-09-10 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション | Pcsk9のアンタゴニスト |
EP2799547B1 (en) * | 2006-11-08 | 2016-12-21 | Veritas Bio, LLC | In Vivo Delivery of RNA to a Target Cell |
US8084437B2 (en) * | 2006-11-27 | 2011-12-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating hypercholesterolemia |
US8093222B2 (en) | 2006-11-27 | 2012-01-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating hypercholesterolemia |
US7910722B2 (en) | 2007-07-05 | 2011-03-22 | Florida State University Research Foundation | RNAi therapeutic for treatment of hepatitis C infection |
JOP20080381B1 (ar) | 2007-08-23 | 2023-03-28 | Amgen Inc | بروتينات مرتبطة بمولدات مضادات تتفاعل مع بروبروتين كونفيرتاز سيتيليزين ككسين من النوع 9 (pcsk9) |
EP2245039A4 (en) * | 2008-01-31 | 2012-06-06 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | OPTIMIZED METHODS FOR EXPORING DSRNA TO TARGET THE PCSK9 GEN |
AR070316A1 (es) | 2008-02-07 | 2010-03-31 | Merck & Co Inc | Antagonistas de pcsk9 (proproteina subtilisina-kexina tipo 9) |
AR070315A1 (es) | 2008-02-07 | 2010-03-31 | Merck & Co Inc | Anticuerpos 1b20 antagonistas de pcsk9 |
CN104975020B (zh) | 2008-02-11 | 2020-01-17 | 菲奥医药公司 | 经修饰的RNAi多核苷酸及其用途 |
KR20100132531A (ko) * | 2008-03-20 | 2010-12-17 | 쿠아크 파마수티칼스 인코퍼레이티드 | RTP801을 억제하기 위한 신규 siRNA 화합물 |
JP6209309B2 (ja) | 2008-09-22 | 2017-10-04 | アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション | サイズが減少した自己送達用RNAi化合物 |
MY188457A (en) | 2008-10-03 | 2021-12-10 | Opko Curna Llc | Treatment of apolipoprotein-a1 related diseases by inhibition of natural antisense transcript to apolipoprotein-a1 |
EP2370581B1 (en) | 2008-12-04 | 2016-08-03 | CuRNA, Inc. | Treatment of vascular endothelial growth factor (vegf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to vegf |
CN102317458B (zh) | 2008-12-04 | 2018-01-02 | 库尔纳公司 | 通过红细胞生成素(epo)天然反义转录物的抑制对epo相关疾病的治疗 |
KR101866152B1 (ko) | 2008-12-04 | 2018-06-08 | 큐알엔에이, 인크. | 종양 억제 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의해 종양 억제 유전자 관련된 질환의 치료 |
US9493774B2 (en) | 2009-01-05 | 2016-11-15 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of PCSK9 through RNAi |
WO2010090762A1 (en) | 2009-02-04 | 2010-08-12 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Rna duplexes with single stranded phosphorothioate nucleotide regions for additional functionality |
HUE026280T2 (en) | 2009-02-12 | 2016-06-28 | Curna Inc | Treatment of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) -related diseases by inhibition of natural antisense transcripts associated with BDNF \ t |
WO2010107733A2 (en) | 2009-03-16 | 2010-09-23 | Curna, Inc. | Treatment of nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2 (nrf2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to nrf2 |
JP5904935B2 (ja) | 2009-03-17 | 2016-04-20 | クルナ・インコーポレーテッド | デルタ様1ホモログ(dlk1)に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるdlk1関連疾患の治療 |
CA2761152A1 (en) | 2009-05-06 | 2010-11-11 | Opko Curna, Llc | Treatment of lipid transport and metabolism gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a lipid transport and metabolism gene |
ES2609655T3 (es) | 2009-05-06 | 2017-04-21 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con tristetraprolina (TTP) mediante inhibición de transcrito antisentido natural para TTP |
KR101742334B1 (ko) | 2009-05-08 | 2017-06-01 | 큐알엔에이, 인크. | Dmd 패밀리에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 디스트로핀 패밀리 관련된 질환의 치료 |
US8957037B2 (en) | 2009-05-18 | 2015-02-17 | Curna, Inc. | Treatment of reprogramming factor related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a reprogramming factor |
CN102549158B (zh) | 2009-05-22 | 2017-09-26 | 库尔纳公司 | 通过抑制针对转录因子e3(tfe3)的天然反义转录物来治疗tfe3和胰岛素受体底物蛋白2(irs2)相关的疾病 |
EP2435571B1 (en) | 2009-05-28 | 2016-12-14 | CuRNA, Inc. | Treatment of antiviral gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an antiviral gene |
CA2764158A1 (en) | 2009-06-01 | 2010-12-09 | Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. | Polynucleotides for multivalent rna interference, compositions and methods of use thereof |
US9051567B2 (en) * | 2009-06-15 | 2015-06-09 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Methods for increasing efficacy of lipid formulated siRNA |
CA2764832A1 (en) * | 2009-06-15 | 2010-12-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated dsrna targeting the pcsk9 gene |
KR101702689B1 (ko) | 2009-06-16 | 2017-02-06 | 큐알엔에이, 인크. | Pon1에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 파라옥소나제 1(pon1) 관련된 질환의 치료 |
CN102695797B (zh) | 2009-06-16 | 2018-05-25 | 库尔纳公司 | 通过抑制针对胶原基因的天然反义转录物来治疗胶原基因相关的疾病 |
CA2765889A1 (en) | 2009-06-24 | 2010-12-29 | Opko Curna, Llc | Treatment of tumor necrosis factor receptor 2 (tnfr2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to tnfr2 |
EP2446037B1 (en) | 2009-06-26 | 2016-04-20 | CuRNA, Inc. | Treatment of down syndrome gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a down syndrome gene |
CA2767127A1 (en) | 2009-07-01 | 2011-01-06 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Novel lipid formulations for delivery of therapeutic agents to solid tumors |
US8563528B2 (en) | 2009-07-21 | 2013-10-22 | Santaris Pharma A/S | Antisense oligomers targeting PCSK9 |
CN102712925B (zh) | 2009-07-24 | 2017-10-27 | 库尔纳公司 | 通过抑制sirtuin(sirt)的天然反义转录物来治疗sirtuin(sirt)相关性疾病 |
CN102762731B (zh) | 2009-08-05 | 2018-06-22 | 库尔纳公司 | 通过抑制针对胰岛素基因(ins)的天然反义转录物来治疗胰岛素基因(ins)相关的疾病 |
EP2464731B1 (en) | 2009-08-11 | 2016-10-05 | CuRNA, Inc. | Treatment of adiponectin (adipoq) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an adiponectin (adipoq) |
CA2771228C (en) | 2009-08-21 | 2020-12-29 | Opko Curna, Llc | Treatment of 'c terminus of hsp70-interacting protein' (chip) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to chip |
US9023822B2 (en) | 2009-08-25 | 2015-05-05 | Curna, Inc. | Treatment of 'IQ motif containing GTPase activating protein' (IQGAP) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to IQGAP |
WO2011028938A1 (en) * | 2009-09-02 | 2011-03-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods for lowering serum cholestrol in a subject using inhibition of pcsk9 |
WO2011038031A1 (en) * | 2009-09-22 | 2011-03-31 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Dual targeting sirna agents |
EP2480669B1 (en) | 2009-09-25 | 2017-11-08 | CuRNA, Inc. | Treatment of filaggrin (flg) related diseases by modulation of flg expression and activity |
EP2488210A4 (en) | 2009-10-12 | 2014-04-30 | Smith Holdings Llc | METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODULATING GENE EXPRESSION USING IN VITO OR IN VITRO-ADMINISTERED OLIGONUCLEOTIDE MEDICAMENTS |
AR079336A1 (es) * | 2009-12-11 | 2012-01-18 | Irm Llc | Antagonistas de la pro-proteina convertasa-subtilisina/quexina tipo 9 (pcsk9) |
CN102712927B (zh) | 2009-12-16 | 2017-12-01 | 库尔纳公司 | 通过抑制膜结合转录因子肽酶,位点1(mbtps1)的天然反义转录物来治疗mbtps1相关疾病 |
US20110152343A1 (en) * | 2009-12-22 | 2011-06-23 | Functional Genetics, Inc. | Protease inhibitors and broad-spectrum antiviral |
CN102869776B (zh) | 2009-12-23 | 2017-06-23 | 库尔纳公司 | 通过抑制肝细胞生长因子(hgf)的天然反义转录物而治疗hgf相关疾病 |
CN102781480B (zh) | 2009-12-23 | 2018-07-27 | 库尔纳公司 | 通过抑制解偶联蛋白2(ucp2)的天然反义转录物而治疗ucp2相关疾病 |
EP2519633B1 (en) | 2009-12-29 | 2017-10-25 | CuRNA, Inc. | Treatment of nuclear respiratory factor 1 (nrf1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to nrf1 |
CN102770540B (zh) | 2009-12-29 | 2017-06-23 | 库尔纳公司 | 通过抑制肿瘤蛋白63(p63)的天然反义转录物而治疗p63相关疾病 |
JP6083735B2 (ja) | 2009-12-31 | 2017-02-22 | カッパーアールエヌエー,インコーポレイテッド | インスリン受容体基質2(irs2)および転写因子3(tfe3)に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるインスリン受容体基質2(irs2)関連疾患の治療 |
CN102906264B (zh) | 2010-01-04 | 2017-08-04 | 库尔纳公司 | 通过抑制干扰素调节因子8(irf8)的天然反义转录物而治疗irf8相关疾病 |
CN102822342B (zh) | 2010-01-06 | 2017-05-10 | 库尔纳公司 | 通过抑制胰腺发育基因的天然反义转录物而治疗胰腺发育基因相关疾病 |
JP6027893B2 (ja) | 2010-01-11 | 2016-11-16 | カッパーアールエヌエー,インコーポレイテッド | 性ホルモン結合グロブリン(shbg)に対する天然アンチセンス転写物の阻害による性ホルモン結合グロブリン(shbg)関連疾患の治療 |
NO2529015T3 (ru) | 2010-01-25 | 2018-04-14 | ||
US8962586B2 (en) | 2010-02-22 | 2015-02-24 | Curna, Inc. | Treatment of pyrroline-5-carboxylate reductase 1 (PYCR1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to PYCR1 |
EP2553098B1 (en) | 2010-04-02 | 2017-10-11 | CuRNA, Inc. | Treatment of colony-stimulating factor 3 (csf3) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to csf3 |
KR101900962B1 (ko) | 2010-04-09 | 2018-09-20 | 큐알엔에이, 인크. | 섬유아세포 성장 인자 21 (fgf21)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 섬유아세포 성장 인자 21 (fgf21) 관련된 질환의 치료 |
CA2798218A1 (en) | 2010-05-03 | 2011-11-10 | Curna, Inc. | Treatment of sirtuin (sirt) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a sirtuin (sirt) |
TWI531370B (zh) | 2010-05-14 | 2016-05-01 | 可娜公司 | 藉由抑制par4天然反股轉錄本治療par4相關疾病 |
US8980858B2 (en) | 2010-05-26 | 2015-03-17 | Curna, Inc. | Treatment of methionine sulfoxide reductase a (MSRA) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to MSRA |
NO2576783T3 (ru) | 2010-05-26 | 2018-04-28 | ||
WO2011163499A2 (en) | 2010-06-23 | 2011-12-29 | Opko Curna, Llc | Treatment of sodium channel, voltage-gated, alpha subunit (scna) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to scna |
ES2663598T3 (es) | 2010-07-14 | 2018-04-16 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con el homólogo de discos grandes (dlg) mediante la inhibición del transcrito antisentido natural a dlg |
KR101886457B1 (ko) | 2010-10-06 | 2018-08-07 | 큐알엔에이, 인크. | 시알리다아제 4 (neu4)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 neu4 관련된 질환의 치료 |
EP2630241B1 (en) | 2010-10-22 | 2018-10-17 | CuRNA, Inc. | Treatment of alpha-l-iduronidase (idua) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to idua |
JP2013545736A (ja) * | 2010-10-29 | 2013-12-26 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | Pcsk9遺伝子の阻害のための組成物および方法 |
WO2012068340A2 (en) | 2010-11-18 | 2012-05-24 | Opko Curna Llc | Antagonat compositions and methods of use |
KR102010598B1 (ko) | 2010-11-23 | 2019-08-13 | 큐알엔에이, 인크. | Nanog에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 nanog 관련된 질환의 치료 |
MX367075B (es) | 2011-01-28 | 2019-08-05 | Sanofi Biotechnology | Anticuerpos humanos frente a pcsk9 para su uso en metodos de tratamiento de grupos concretos de pacientes. |
US20150038549A1 (en) | 2011-04-20 | 2015-02-05 | Larry J. Smith | Methods and Compositions for Modulating Gene Expression Using Components That Self Assemble in Cells and Produce RNAi Activity |
US9593330B2 (en) | 2011-06-09 | 2017-03-14 | Curna, Inc. | Treatment of frataxin (FXN) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to FXN |
AR087305A1 (es) | 2011-07-28 | 2014-03-12 | Regeneron Pharma | Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit |
WO2013036403A1 (en) | 2011-09-06 | 2013-03-14 | Curna, Inc. | TREATMENT OF DISEASES RELATED TO ALPHA SUBUNITS OF SODIUM CHANNELS, VOLTAGE-GATED (SCNxA) WITH SMALL MOLECULES |
EP2570135B1 (en) * | 2011-09-13 | 2016-01-27 | Affiris AG | PCSK9 Vaccine |
AU2013222179B2 (en) | 2012-02-24 | 2017-08-24 | Arbutus Biopharma Corporat ion | Trialkyl cationic lipids and methods of use thereof |
HUE040179T2 (hu) | 2012-03-15 | 2019-02-28 | Curna Inc | Agyi eredetû neutrotróf faktorral (Brain-derived neurotrophic factor, BDNF) összefüggõ betegségek kezelése a BDNF-fel kapcsolatos természetes antiszensz transzkriptumok gátlása révén |
US9255154B2 (en) | 2012-05-08 | 2016-02-09 | Alderbio Holdings, Llc | Anti-PCSK9 antibodies and use thereof |
RS56783B9 (sr) * | 2012-12-05 | 2021-12-31 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Sastavi pcsk9 irnk i postupci njihovih primena |
SG11201504523UA (en) | 2012-12-12 | 2015-07-30 | Broad Inst Inc | Delivery, engineering and optimization of systems, methods and compositions for sequence manipulation and therapeutic applications |
WO2014093709A1 (en) | 2012-12-12 | 2014-06-19 | The Broad Institute, Inc. | Methods, models, systems, and apparatus for identifying target sequences for cas enzymes or crispr-cas systems for target sequences and conveying results thereof |
WO2014182661A2 (en) | 2013-05-06 | 2014-11-13 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc | Dosages and methods for delivering lipid formulated nucleic acid molecules |
EP2810955A1 (en) | 2013-06-07 | 2014-12-10 | Sanofi | Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9 |
EP2862877A1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-22 | Sanofi | Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9 |
KR20160024906A (ko) | 2013-06-07 | 2016-03-07 | 사노피 바이오테크놀로지 | Pcsk9의 억제제를 투여함에 의한 죽상경화증의 억제 방법 |
WO2014204727A1 (en) | 2013-06-17 | 2014-12-24 | The Broad Institute Inc. | Functional genomics using crispr-cas systems, compositions methods, screens and applications thereof |
EP4245853A3 (en) | 2013-06-17 | 2023-10-18 | The Broad Institute, Inc. | Optimized crispr-cas double nickase systems, methods and compositions for sequence manipulation |
CN106062197A (zh) | 2013-06-17 | 2016-10-26 | 布罗德研究所有限公司 | 用于序列操纵的串联指导系统、方法和组合物的递送、工程化和优化 |
CA2915845A1 (en) * | 2013-06-17 | 2014-12-24 | The Broad Institute, Inc. | Delivery, engineering and optimization of systems, methods and compositions for targeting and modeling diseases and disorders of post mitotic cells |
CA2915842C (en) | 2013-06-17 | 2022-11-29 | The Broad Institute, Inc. | Delivery and use of the crispr-cas systems, vectors and compositions for hepatic targeting and therapy |
KR20160056869A (ko) | 2013-06-17 | 2016-05-20 | 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 | 바이러스 구성성분을 사용하여 장애 및 질환을 표적화하기 위한 crispr-cas 시스템 및 조성물의 전달, 용도 및 치료 적용 |
DK3013959T3 (da) * | 2013-06-27 | 2020-02-17 | Roche Innovation Ct Copenhagen As | Antisense-oligomerer og konjugater målrettet pcsk9 |
WO2015089462A1 (en) | 2013-12-12 | 2015-06-18 | The Broad Institute Inc. | Delivery, use and therapeutic applications of the crispr-cas systems and compositions for genome editing |
CA2932472A1 (en) | 2013-12-12 | 2015-06-18 | Massachusetts Institute Of Technology | Compositions and methods of use of crispr-cas systems in nucleotide repeat disorders |
AU2014361784A1 (en) * | 2013-12-12 | 2016-06-23 | Massachusetts Institute Of Technology | Delivery, use and therapeutic applications of the CRISPR-Cas systems and compositions for HBV and viral diseases and disorders |
WO2015089364A1 (en) | 2013-12-12 | 2015-06-18 | The Broad Institute Inc. | Crystal structure of a crispr-cas system, and uses thereof |
JP6793547B2 (ja) | 2013-12-12 | 2020-12-02 | ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド | 最適化機能CRISPR−Cas系による配列操作のための系、方法および組成物 |
US8980273B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-17 | Kymab Limited | Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA |
US9051378B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-09 | Kymab Limited | Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
US8945560B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-02-03 | Kymab Limited | Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R |
US8986694B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-24 | Kymab Limited | Targeting human nav1.7 variants for treatment of pain |
US9034332B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-05-19 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
US9045545B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-02 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting PD-L1 variants for treatment of cancer |
US8883157B1 (en) | 2013-12-17 | 2014-11-11 | Kymab Limited | Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
US8992927B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-31 | Kymab Limited | Targeting human NAV1.7 variants for treatment of pain |
US9914769B2 (en) | 2014-07-15 | 2018-03-13 | Kymab Limited | Precision medicine for cholesterol treatment |
US8986691B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-24 | Kymab Limited | Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA |
US9067998B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-30 | Kymab Limited | Targeting PD-1 variants for treatment of cancer |
US9017678B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-04-28 | Kymab Limited | Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R |
US9045548B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-02 | Kymab Limited | Precision Medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
US9023359B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-05-05 | Kymab Limited | Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
AU2014370829B2 (en) * | 2013-12-27 | 2021-03-11 | Bonac Corporation | Artificial match-type miRNA for controlling gene expression and use therefor |
GB201403775D0 (en) | 2014-03-04 | 2014-04-16 | Kymab Ltd | Antibodies, uses & methods |
US9139648B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-09-22 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting human NAV1.9 variants for treatment of pain |
US9150660B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-10-06 | Kymab Limited | Precision Medicine by targeting human NAV1.8 variants for treatment of pain |
AU2015289613B2 (en) | 2014-07-16 | 2021-07-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating patients with heterozygous familial hypercholesterolemia (heFH) |
JOP20200115A1 (ar) * | 2014-10-10 | 2017-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | تركيبات وطرق لتثبيط التعبير الجيني عن hao1 (حمض أوكسيداز هيدروكسيلي 1 (أوكسيداز جليكولات)) |
WO2016094867A1 (en) | 2014-12-12 | 2016-06-16 | The Broad Institute Inc. | Protected guide rnas (pgrnas) |
US10264976B2 (en) * | 2014-12-26 | 2019-04-23 | The University Of Akron | Biocompatible flavonoid compounds for organelle and cell imaging |
US11045488B2 (en) | 2014-12-26 | 2021-06-29 | Nitto Denko Corporation | RNA interference agents for GST-π gene modulation |
PT3236974T (pt) * | 2014-12-26 | 2020-06-01 | Nitto Denko Corp | Agentes de interferência de rna para modulação génica de gst-pi |
US10792299B2 (en) | 2014-12-26 | 2020-10-06 | Nitto Denko Corporation | Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation |
US20180002702A1 (en) | 2014-12-26 | 2018-01-04 | Nitto Denko Corporation | Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation |
CN109536474A (zh) | 2015-06-18 | 2019-03-29 | 布罗德研究所有限公司 | 降低脱靶效应的crispr酶突变 |
WO2016205759A1 (en) | 2015-06-18 | 2016-12-22 | The Broad Institute Inc. | Engineering and optimization of systems, methods, enzymes and guide scaffolds of cas9 orthologs and variants for sequence manipulation |
CN107922507B (zh) | 2015-08-18 | 2022-04-05 | 瑞泽恩制药公司 | 抗pcsk9抑制性抗体用来治疗接受脂蛋白单采的高脂血症患者 |
CN108366966A (zh) | 2015-08-24 | 2018-08-03 | 光环生物干扰疗法公司 | 用于调节基因表达的多核苷酸纳米颗粒及其用途 |
IL257486B (en) | 2015-08-25 | 2022-07-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Methods and preparations for treating disorders related to the pcsk9 gene |
CA3002744A1 (en) | 2015-10-19 | 2017-04-27 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Reduced size self-delivering nucleic acid compounds targeting long non-coding rna |
SI3529360T1 (sl) * | 2016-10-18 | 2024-08-30 | Novartis Ag | Metode za preprečevanje kardiovaskularnih dogodkov z zmanjšanjem proteinske konvertaze substilizin kexin 9 (PCSK9) |
EP3534947A1 (en) | 2016-11-03 | 2019-09-11 | Kymab Limited | Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods |
JOP20190112A1 (ar) | 2016-11-14 | 2019-05-14 | Amgen Inc | علاجات مدمجة لتصلب الشرايين، شاملة مرض قلبي وعائي تصلبي |
AU2017368050A1 (en) | 2016-11-29 | 2019-06-20 | Puretech Lyt, Inc. | Exosomes for delivery of therapeutic agents |
CN108265052B (zh) * | 2016-12-30 | 2021-05-28 | 苏州瑞博生物技术股份有限公司 | 一种小干扰核酸和药物组合物及其用途 |
JP2019508379A (ja) * | 2017-02-16 | 2019-03-28 | 日東電工株式会社 | 悪性腫瘍に対する治療方法及び治療用組成物 |
JOP20190215A1 (ar) * | 2017-03-24 | 2019-09-19 | Ionis Pharmaceuticals Inc | مُعدّلات التعبير الوراثي عن pcsk9 |
JP2021504415A (ja) | 2017-12-01 | 2021-02-15 | スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッドSuzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | 二本鎖オリゴヌクレオチド、二本鎖オリゴヌクレオチドを含む組成物および複合体ならびに調製方法と使用 |
CN110944675B9 (zh) | 2017-12-01 | 2024-08-09 | 苏州瑞博生物技术股份有限公司 | 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途 |
CN110997917B (zh) | 2017-12-01 | 2024-04-09 | 苏州瑞博生物技术股份有限公司 | 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途 |
AU2018377716A1 (en) | 2017-12-01 | 2020-04-09 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd | Nucleic acid, composition and conjugate containing same, and preparation method and use |
EP3677679A4 (en) * | 2017-12-26 | 2020-12-02 | Guangzhou Ribobio Co., Ltd. | ARNSI MOLECULE INHIBITING PCSK9 GENE EXPRESSION AND ITS APPLICATION |
CN109957565B (zh) * | 2017-12-26 | 2023-04-07 | 广州市锐博生物科技有限公司 | 一种修饰的siRNA分子及其应用 |
CN109957567B (zh) * | 2017-12-26 | 2022-09-23 | 阿格纳生物制药有限公司 | 一种抑制PCSK9基因表达的siRNA分子及其应用 |
CA3087106A1 (en) | 2017-12-29 | 2019-07-04 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | Conjugates and preparation and use thereof |
JP7357002B2 (ja) * | 2018-04-18 | 2023-10-05 | ディセルナ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 高コレステロール血症及び関連状態を治療するための、pcsk9を標的とするオリゴヌクレオチド |
JP2021533800A (ja) | 2018-08-21 | 2021-12-09 | スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッドSuzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | 核酸、当該核酸を含む薬物組成物及び複合体ならびにその使用 |
EP3862024A4 (en) | 2018-09-30 | 2022-08-17 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | SHORT INTERFERENT RNA CONJUGATE, METHOD FOR PREPARATION AND USE THEREOF |
CN111378656B (zh) * | 2018-12-28 | 2022-07-26 | 苏州瑞博生物技术股份有限公司 | 一种抑制埃博拉病毒的核酸、含有该核酸的药物组合物及其用途 |
CN115066498A (zh) * | 2020-03-16 | 2022-09-16 | 阿尔戈诺特Rna有限公司 | Pcsk9的拮抗剂 |
WO2022089486A1 (zh) * | 2020-10-28 | 2022-05-05 | 江苏柯菲平医药股份有限公司 | 抑制PCSK9基因表达的siRNA及其修饰物与应用 |
WO2023017004A1 (en) * | 2021-08-09 | 2023-02-16 | Cargene Therapeutics Pte. Ltd. | Inhibitory nucleic acids for pcsk9 |
CN113980966B (zh) * | 2021-09-29 | 2024-09-20 | 阿格纳生物制药有限公司 | 一种抑制pcsk9靶基因表达的核酸序列及其应用 |
CN117384907B (zh) * | 2023-12-11 | 2024-03-29 | 上海鼎新基因科技有限公司 | 抑制PCSK9表达的siRNA分子及其应用 |
Family Cites Families (133)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3687808A (en) | 1969-08-14 | 1972-08-29 | Univ Leland Stanford Junior | Synthetic polynucleotides |
US4469863A (en) | 1980-11-12 | 1984-09-04 | Ts O Paul O P | Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof |
US5023243A (en) | 1981-10-23 | 1991-06-11 | Molecular Biosystems, Inc. | Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same |
US4476301A (en) | 1982-04-29 | 1984-10-09 | Centre National De La Recherche Scientifique | Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon |
US5550111A (en) | 1984-07-11 | 1996-08-27 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof |
US5166315A (en) | 1989-12-20 | 1992-11-24 | Anti-Gene Development Group | Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids |
US5185444A (en) | 1985-03-15 | 1993-02-09 | Anti-Gene Deveopment Group | Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages |
US5235033A (en) | 1985-03-15 | 1993-08-10 | Anti-Gene Development Group | Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof |
US5034506A (en) | 1985-03-15 | 1991-07-23 | Anti-Gene Development Group | Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages |
US5405938A (en) | 1989-12-20 | 1995-04-11 | Anti-Gene Development Group | Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids |
EP0228458B2 (en) | 1985-07-05 | 1997-10-22 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Epithelial cells expressing foreign genetic material |
US4980286A (en) | 1985-07-05 | 1990-12-25 | Whitehead Institute For Biomedical Research | In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells |
US5139941A (en) | 1985-10-31 | 1992-08-18 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | AAV transduction vectors |
US5276019A (en) | 1987-03-25 | 1994-01-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products |
US5264423A (en) | 1987-03-25 | 1993-11-23 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products |
DE3852823T2 (de) | 1987-09-11 | 1995-05-24 | Hughes Howard Med Inst | Transduktionsveränderte fibroblasten und ihre anwendung. |
US5188897A (en) | 1987-10-22 | 1993-02-23 | Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education | Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates |
US4924624A (en) | 1987-10-22 | 1990-05-15 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof |
WO1989005345A1 (en) | 1987-12-11 | 1989-06-15 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Genetic modification of endothelial cells |
DE68927996T2 (de) | 1988-02-05 | 1997-12-04 | Hughes Howard Med Inst | Modifizierte hepatozyten und deren anwendung |
EP0406309A4 (en) | 1988-03-25 | 1992-08-19 | The University Of Virginia Alumni Patents Foundation | Oligonucleotide n-alkylphosphoramidates |
US5278302A (en) | 1988-05-26 | 1994-01-11 | University Patents, Inc. | Polynucleotide phosphorodithioates |
US5216141A (en) | 1988-06-06 | 1993-06-01 | Benner Steven A | Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages |
US5328470A (en) | 1989-03-31 | 1994-07-12 | The Regents Of The University Of Michigan | Treatment of diseases by site-specific instillation of cells or site-specific transformation of cells and kits therefor |
US5399676A (en) | 1989-10-23 | 1995-03-21 | Gilead Sciences | Oligonucleotides with inverted polarity |
US5264562A (en) | 1989-10-24 | 1993-11-23 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide analogs with novel linkages |
US5264564A (en) | 1989-10-24 | 1993-11-23 | Gilead Sciences | Oligonucleotide analogs with novel linkages |
US5177198A (en) | 1989-11-30 | 1993-01-05 | University Of N.C. At Chapel Hill | Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates |
US5223168A (en) | 1989-12-12 | 1993-06-29 | Gary Holt | Surface cleaner and treatment |
US5506351A (en) | 1992-07-23 | 1996-04-09 | Isis Pharmaceuticals | Process for the preparation of 2'-O-alkyl guanosine and related compounds |
US5587470A (en) | 1990-01-11 | 1996-12-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 3-deazapurines |
US5587361A (en) | 1991-10-15 | 1996-12-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity |
US5459255A (en) | 1990-01-11 | 1995-10-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | N-2 substituted purines |
US5578718A (en) | 1990-01-11 | 1996-11-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Thiol-derivatized nucleosides |
US5212295A (en) | 1990-01-11 | 1993-05-18 | Isis Pharmaceuticals | Monomers for preparation of oligonucleotides having chiral phosphorus linkages |
US5457191A (en) | 1990-01-11 | 1995-10-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 3-deazapurines |
US5321131A (en) | 1990-03-08 | 1994-06-14 | Hybridon, Inc. | Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling |
US5470967A (en) | 1990-04-10 | 1995-11-28 | The Dupont Merck Pharmaceutical Company | Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages |
US5489677A (en) | 1990-07-27 | 1996-02-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms |
US5618704A (en) | 1990-07-27 | 1997-04-08 | Isis Pharmacueticals, Inc. | Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling |
US5218105A (en) | 1990-07-27 | 1993-06-08 | Isis Pharmaceuticals | Polyamine conjugated oligonucleotides |
US5677437A (en) | 1990-07-27 | 1997-10-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Heteroatomic oligonucleoside linkages |
US5378825A (en) | 1990-07-27 | 1995-01-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogs |
US5610289A (en) | 1990-07-27 | 1997-03-11 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogues |
US5138045A (en) | 1990-07-27 | 1992-08-11 | Isis Pharmaceuticals | Polyamine conjugated oligonucleotides |
US5386023A (en) | 1990-07-27 | 1995-01-31 | Isis Pharmaceuticals | Backbone modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through reductive coupling |
US5602240A (en) | 1990-07-27 | 1997-02-11 | Ciba Geigy Ag. | Backbone modified oligonucleotide analogs |
US5541307A (en) | 1990-07-27 | 1996-07-30 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof |
US5623070A (en) | 1990-07-27 | 1997-04-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Heteroatomic oligonucleoside linkages |
US5608046A (en) | 1990-07-27 | 1997-03-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds |
PT98562B (pt) | 1990-08-03 | 1999-01-29 | Sanofi Sa | Processo para a preparacao de composicoes que compreendem sequencias de nucleo-sidos com cerca de 6 a cerca de 200 bases resistentes a nucleases |
US6262241B1 (en) | 1990-08-13 | 2001-07-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compound for detecting and modulating RNA activity and gene expression |
US5177196A (en) | 1990-08-16 | 1993-01-05 | Microprobe Corporation | Oligo (α-arabinofuranosyl nucleotides) and α-arabinofuranosyl precursors thereof |
US5214134A (en) | 1990-09-12 | 1993-05-25 | Sterling Winthrop Inc. | Process of linking nucleosides with a siloxane bridge |
US5561225A (en) | 1990-09-19 | 1996-10-01 | Southern Research Institute | Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages |
EP0549686A4 (en) | 1990-09-20 | 1995-01-18 | Gilead Sciences Inc | Modified internucleoside linkages |
DK0556345T3 (da) | 1990-10-31 | 1997-06-16 | Whitehead Biomedical Inst | Retrovirale vektorer,som er egnede til genterapi |
US5539082A (en) | 1993-04-26 | 1996-07-23 | Nielsen; Peter E. | Peptide nucleic acids |
EP0621944B1 (en) | 1991-07-25 | 1997-03-05 | The Whitaker Corporation | Liquid level sensor |
US5571799A (en) | 1991-08-12 | 1996-11-05 | Basco, Ltd. | (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response |
US5599797A (en) | 1991-10-15 | 1997-02-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity |
EP1331011A3 (en) | 1991-10-24 | 2003-12-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Derivatized oligonucleotides having improved uptake and other properties |
US5252479A (en) | 1991-11-08 | 1993-10-12 | Research Corporation Technologies, Inc. | Safe vector for gene therapy |
US5633360A (en) | 1992-04-14 | 1997-05-27 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation |
US5434257A (en) | 1992-06-01 | 1995-07-18 | Gilead Sciences, Inc. | Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages |
US5587308A (en) | 1992-06-02 | 1996-12-24 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services | Modified adeno-associated virus vector capable of expression from a novel promoter |
US5478745A (en) | 1992-12-04 | 1995-12-26 | University Of Pittsburgh | Recombinant viral vector system |
US5476925A (en) | 1993-02-01 | 1995-12-19 | Northwestern University | Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups |
GB9304618D0 (en) | 1993-03-06 | 1993-04-21 | Ciba Geigy Ag | Chemical compounds |
CA2159629A1 (en) | 1993-03-31 | 1994-10-13 | Sanofi | Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages |
US5571902A (en) | 1993-07-29 | 1996-11-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Synthesis of oligonucleotides |
US5625050A (en) | 1994-03-31 | 1997-04-29 | Amgen Inc. | Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics |
US6054299A (en) | 1994-04-29 | 2000-04-25 | Conrad; Charles A. | Stem-loop cloning vector and method |
US5554746A (en) | 1994-05-16 | 1996-09-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Lactam nucleic acids |
EP0832271B8 (en) | 1995-06-07 | 2005-03-02 | INEX Pharmaceuticals Corp. | Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer |
US6506559B1 (en) | 1997-12-23 | 2003-01-14 | Carnegie Institute Of Washington | Genetic inhibition by double-stranded RNA |
PT1068311E (pt) | 1998-04-08 | 2011-07-20 | Commw Scient Ind Res Org | Processos e meios de obter fenótipos modificados |
AR020078A1 (es) | 1998-05-26 | 2002-04-10 | Syngenta Participations Ag | Metodo para alterar la expresion de un gen objetivo en una celula de planta |
AU6430599A (en) | 1998-10-09 | 2000-05-01 | Cytogenix, Inc. | Enzymatic synthesis of ssdna |
AU6298899A (en) | 1998-10-09 | 2000-05-01 | Ingene, Inc. | Production of ssdna (in vivo) |
DE19956568A1 (de) | 1999-01-30 | 2000-08-17 | Roland Kreutzer | Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens |
US6271359B1 (en) | 1999-04-14 | 2001-08-07 | Musc Foundation For Research Development | Tissue-specific and pathogen-specific toxic agents and ribozymes |
DE10100586C1 (de) | 2001-01-09 | 2002-04-11 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens |
US20030229037A1 (en) * | 2000-02-07 | 2003-12-11 | Ulrich Massing | Novel cationic amphiphiles |
US20070026394A1 (en) * | 2000-02-11 | 2007-02-01 | Lawrence Blatt | Modulation of gene expression associated with inflammation proliferation and neurite outgrowth using nucleic acid based technologies |
WO2003070918A2 (en) | 2002-02-20 | 2003-08-28 | Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated | Rna interference by modified short interfering nucleic acid |
CZ308053B6 (cs) * | 2000-12-01 | 2019-11-27 | Max Planck Gesellschaft | Izolovaná molekula dvouřetězcové RNA, způsob její výroby a její použití |
US20080249040A1 (en) * | 2001-05-18 | 2008-10-09 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of sterol regulatory element binding protein 1 (SREBP1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20070173473A1 (en) * | 2001-05-18 | 2007-07-26 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of proprotein convertase subtilisin Kexin 9 (PCSK9) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20030170891A1 (en) * | 2001-06-06 | 2003-09-11 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated inhibition of epidermal growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040009216A1 (en) * | 2002-04-05 | 2004-01-15 | Rodrigueza Wendi V. | Compositions and methods for dosing liposomes of certain sizes to treat or prevent disease |
US7956176B2 (en) * | 2002-09-05 | 2011-06-07 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
DK2284266T3 (da) * | 2002-11-14 | 2014-01-13 | Thermo Fisher Scient Biosciences Inc | sIRNA-MOLEKYLE MOD TP53 |
DE10302421A1 (de) | 2003-01-21 | 2004-07-29 | Ribopharma Ag | Doppelsträngige Ribonukleinsäure mit verbesserter Wirksamkeit |
EP3450559A1 (en) | 2003-03-07 | 2019-03-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic compositions |
WO2004090108A2 (en) | 2003-04-03 | 2004-10-21 | Alnylam Pharmaceuticals | Irna conjugates |
EP1471152A1 (en) * | 2003-04-25 | 2004-10-27 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Mutations in the human PCSK9 gene associated to hypercholesterolemia |
WO2005014782A2 (en) * | 2003-06-13 | 2005-02-17 | Alnylam Europe Ag., | Double-stranded ribonucleic acid with increased effectiveness in an organism |
EP2567693B1 (en) | 2003-07-16 | 2015-10-21 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Lipid encapsulated interfering RNA |
EP1682661A2 (en) * | 2003-10-23 | 2006-07-26 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (sina) |
US20080253960A1 (en) * | 2004-04-01 | 2008-10-16 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania Center For Technology Transfer | Lipoprotein-Based Nanoplatforms |
WO2005121348A1 (en) * | 2004-06-07 | 2005-12-22 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Lipid encapsulated interfering rna |
EP1781593B1 (en) | 2004-06-07 | 2011-12-14 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Cationic lipids and methods of use |
WO2007086881A2 (en) * | 2005-02-14 | 2007-08-02 | Sirna Therapeutics, Inc. | Cationic lipids and formulated molecular compositions containing them |
TWI335352B (en) * | 2005-03-31 | 2011-01-01 | Calando Pharmaceuticals Inc | Inhibitors of ribonucleotide reductase subunit 2 and uses thereof |
US7915230B2 (en) | 2005-05-17 | 2011-03-29 | Molecular Transfer, Inc. | Reagents for transfection of eukaryotic cells |
WO2007012191A1 (en) | 2005-07-27 | 2007-02-01 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Systems and methods for manufacturing liposomes |
JP5336853B2 (ja) | 2005-11-02 | 2013-11-06 | プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド | 修飾siRNA分子およびその使用法 |
US20070218122A1 (en) | 2005-11-18 | 2007-09-20 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | siRNA silencing of influenza virus gene expression |
NZ571568A (en) * | 2006-03-31 | 2010-11-26 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Double-stranded RNA molecule compositions and methods for inhibiting expression of Eg5 gene |
JP5570806B2 (ja) * | 2006-05-11 | 2014-08-13 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | Pcsk9遺伝子の発現を阻害するための組成物および方法 |
US8598333B2 (en) * | 2006-05-26 | 2013-12-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | SiRNA silencing of genes expressed in cancer |
CA2658183A1 (en) * | 2006-07-17 | 2008-01-24 | Sirna Therapeutics Inc. | Rna interference mediated inhibition of proprotein convertase subtilisin kexin 9 (pcsk9) gene expression using short interfering nucleic acid (sina) |
AU2007303205A1 (en) | 2006-10-03 | 2008-04-10 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Lipid containing formulations |
US8084437B2 (en) | 2006-11-27 | 2011-12-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating hypercholesterolemia |
WO2008109369A2 (en) | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting tnf gene expression and uses thereof |
JOP20080381B1 (ar) * | 2007-08-23 | 2023-03-28 | Amgen Inc | بروتينات مرتبطة بمولدات مضادات تتفاعل مع بروبروتين كونفيرتاز سيتيليزين ككسين من النوع 9 (pcsk9) |
CA2710713C (en) * | 2007-12-27 | 2017-09-19 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Silencing of polo-like kinase expression using interfering rna |
CA2709875C (en) | 2008-01-02 | 2019-07-16 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Improved compositions and methods for the delivery of nucleic acids |
EP2245039A4 (en) | 2008-01-31 | 2012-06-06 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | OPTIMIZED METHODS FOR EXPORING DSRNA TO TARGET THE PCSK9 GEN |
NZ588280A (en) | 2008-03-05 | 2012-11-30 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Compositions and methods for inhibiting expression of eg5 and vegf genes |
WO2009114475A2 (en) | 2008-03-09 | 2009-09-17 | Intradigm Corporation | Compositions comprising human pcsk9 and apolipoprotein b sirna and methods of use |
PT2279254T (pt) * | 2008-04-15 | 2017-09-04 | Protiva Biotherapeutics Inc | Novas formulações lipídicas para entrega de ácido nucleico |
EA029762B1 (ru) * | 2008-10-20 | 2018-05-31 | Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. | Композиции и способы для ингибирования экспрессии транстиретина |
NO2355851T3 (ru) | 2008-11-10 | 2018-09-01 | ||
CA2746514C (en) | 2008-12-10 | 2018-11-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Gnaq targeted dsrna compositions and methods for inhibiting expression |
US8311190B2 (en) * | 2008-12-23 | 2012-11-13 | International Business Machines Corporation | Performing human client verification over a voice interface |
EP3243504A1 (en) | 2009-01-29 | 2017-11-15 | Arbutus Biopharma Corporation | Improved lipid formulation |
WO2010129709A1 (en) | 2009-05-05 | 2010-11-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid compositions |
KR20230098713A (ko) | 2009-06-10 | 2023-07-04 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 향상된 지질 조성물 |
CA2764832A1 (en) | 2009-06-15 | 2010-12-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated dsrna targeting the pcsk9 gene |
US9051567B2 (en) | 2009-06-15 | 2015-06-09 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Methods for increasing efficacy of lipid formulated siRNA |
US8563528B2 (en) | 2009-07-21 | 2013-10-22 | Santaris Pharma A/S | Antisense oligomers targeting PCSK9 |
-
2007
- 2007-05-10 JP JP2009510173A patent/JP5570806B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2007-05-10 CA CA2915441A patent/CA2915441A1/en not_active Abandoned
- 2007-05-10 CA CA2651839A patent/CA2651839C/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-05-10 CN CN201310491236.5A patent/CN103614375A/zh active Pending
- 2007-05-10 EP EP17162101.4A patent/EP3249052B1/en active Active
- 2007-05-10 EP EP21150171.3A patent/EP3872179A1/en active Pending
- 2007-05-10 PL PL19168142T patent/PL3578656T3/pl unknown
- 2007-05-10 US US11/746,864 patent/US7605251B2/en active Active
- 2007-05-10 EP EP12178667.7A patent/EP2584048B1/en active Active
- 2007-05-10 EP EP07762085A patent/EP2021507A4/en not_active Withdrawn
- 2007-05-10 SG SG201103340-4A patent/SG171676A1/en unknown
- 2007-05-10 WO PCT/US2007/068655 patent/WO2007134161A2/en active Application Filing
- 2007-05-10 ES ES09015323T patent/ES2392478T3/es active Active
- 2007-05-10 EP EP19168142.8A patent/EP3578656B1/en active Active
- 2007-05-10 NZ NZ587616A patent/NZ587616A/en not_active IP Right Cessation
- 2007-05-10 ES ES19168142T patent/ES2874149T3/es active Active
- 2007-05-10 NZ NZ572666A patent/NZ572666A/en not_active IP Right Cessation
- 2007-05-10 AU AU2007249329A patent/AU2007249329C1/en not_active Ceased
- 2007-05-10 EP EP14173646.2A patent/EP2835429B1/en active Active
- 2007-05-10 KR KR1020107013424A patent/KR101320916B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2007-05-10 PL PL09015323T patent/PL2194128T3/pl unknown
- 2007-05-10 EP EP12178664.4A patent/EP2584047B1/en active Active
- 2007-05-10 EP EP09015323A patent/EP2194128B1/en active Active
- 2007-05-10 KR KR1020087030164A patent/KR101036126B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2007-05-10 CN CN2007800248541A patent/CN101484588B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2007-05-10 EA EA200870528A patent/EA015676B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2007-05-14 EA EA201100907A patent/EA020840B1/ru not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-11-09 IL IL195181A patent/IL195181A/en active IP Right Grant
-
2009
- 2009-09-04 US US12/554,231 patent/US8222222B2/en active Active
-
2010
- 2010-05-10 JP JP2010108836A patent/JP2010246544A/ja active Pending
- 2010-11-09 AU AU2010241357A patent/AU2010241357B2/en not_active Ceased
-
2012
- 2012-05-15 US US13/472,438 patent/US8809292B2/en active Active
- 2012-05-31 IL IL220102A patent/IL220102A/en not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-09-30 HK HK13111184.8A patent/HK1183910A1/xx unknown
-
2014
- 2014-02-03 JP JP2014018817A patent/JP6034316B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2014-07-14 US US14/330,923 patent/US9260718B2/en active Active
-
2015
- 2015-11-19 JP JP2015226712A patent/JP2016027830A/ja active Pending
-
2016
- 2016-01-25 US US15/005,933 patent/US9822365B2/en active Active
-
2017
- 2017-02-20 IL IL250678A patent/IL250678A0/en unknown
- 2017-11-08 US US15/807,275 patent/US10501742B2/en active Active
-
2019
- 2019-11-05 US US16/675,035 patent/US20200318119A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-02-26 US US17/186,078 patent/US20210403917A1/en not_active Abandoned
-
2023
- 2023-03-03 US US18/116,903 patent/US20240093199A1/en active Pending
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
DOWNWARD, J. Science, medicine, and the future RNA interference, BMJ, 2004, vol. 328, pages 1245-1248. * |
GRAHAM et al. Antisense inhibition of proportein convertase subtilisin/kexin type 9 reduces serum LDL in hyperlipidemic mice. Journal of Lipid Research, 2007, vol. 48, pages 763-767. GENBANK ACCESSION NO: NM_174936. Homo sapiens proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9), mRNA. Sept, 2007, see nucleotide sequence. BASAK, A. Inhibitors of proprotein convertases. Journal of Molecular Medicine, 2005, vol. 83, pages 844, 855, see particularly Table 1 and Table 2. ELBASHIR et al. Functional anatomy of siRNAs for mediating efficient RNAi in Drosophila melanogaster embryo lysate. The Embo Journal, 2001, vol. 20, pages 6877-6888, see entire article for siRNA design. * |
LU et al. (2005) in RNA Interference Technology (Cambridge, Appasani, ed.). Delivering siRNA in vivo for functional genomics and novel therapeutics, pages 303-317. SAMARSKY et al. (2005) in RNA Interference Technology (Cambridge, Appasani, ed.). RNAi in drug development: Practical considerations, pages 384-395. * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EA015676B1 (ru) | Композиции и способы ингибирования экспрессии гена pcsk9 | |
JP5704741B2 (ja) | Eg5遺伝子発現の抑制のための組成物および方法 | |
JP5836325B2 (ja) | ウイルス感染を処置するためのdsRNA | |
CN101489566B (zh) | Aha基因的RNAi调控及其治疗性应用 | |
EA029762B1 (ru) | Композиции и способы для ингибирования экспрессии транстиретина | |
JP5431940B2 (ja) | SCAPのRNAi調節およびその治療的使用 | |
CN107201364A (zh) | 用于抑制载脂蛋白c‑iii(apoc3)基因表达的组合物与方法 | |
KR20180002688A (ko) | 인자 XII(하게만 인자)(F12), 칼리크레인 B, 혈장(플레처 인자) 1(KLKB1) 및 키니노겐 1(KNG1) iRNA 조성물 및 그의 이용 방법 | |
CN104854242A (zh) | PCSK9 iRNA组合物及其使用方法 | |
CN107287202A (zh) | 血管生成素样3(ANGPTL3)iRNA组合物及其使用方法 | |
JP2012508569A (ja) | 第vii因子遺伝子の発現を阻害するための組成物および方法 | |
AU2011200894A1 (en) | Compositions and methods for inhibiting expression of Factor V Leiden mutant gene | |
AU2012202689A1 (en) | dsRNA for treating viral infection |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
TK4A | Corrections in published eurasian patents | ||
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |