EA015676B1 - Композиции и способы ингибирования экспрессии гена pcsk9 - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (дцРНК) для ингибирования экспрессии гена пропротеин-конвертазы субтилизин-кексина 9 (PCSK9), где указанная дцРНК включает в себя антисмысловую цепь, имеющую нуклеотидную последовательность длиной менее чем в 30 нуклеотидов, обычно 19-25 нуклеотидов, и, по существу, комплементарную по меньшей мере части гена PCSK9. Настоящее изобретение относится также к фармацевтической композиции, содержащей дцРНК в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, и к способам лечения заболеваний, вызываемых экспрессией гена PCSK9, с использованием указанной фармацевтической композиции.

Description

Настоящее изобретение относится к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (дцРНК) и к ее применению в опосредовании интерференции РНК для ингибирования экспрессии гена РС8К9, а также к применению дцРНК для лечения патологических состояний, которые могут быть модулированы посредством ингибирования РС8К9, таких как гиперлипидемия.

Предшествующий уровень техники

Пропротеин-конвертаза субтилизин-кексин 9 (РС8К9) является членом семейства сериновых протеаз субтилизинов. Другие восемь субтилизиновых протеаз, РС8К1-РС8К8 (также называемых РС1/3, РС2, фурин, РС4, РС5/6, РАСЕ4, РС7 и 81Р/8К1-1), представляют собой пропротеин-конвертазы, которые направляют белки широкого ряда на секреторный путь и играют определенную роль в различных биологических процессах (Ветдегои, Е. (2000), 1. Μοί. Εηάοετίηοΐ. 24, 1-22, СеикЬегд, К. (1998), 8етш. Се11 Бет. Вю1. 9, 11-17, 8е1бак, N.6. (1999), Вташ Кек. 848, 45-62, Тау1ог, Ν.Α. (2003), ЕА8ЕВ 1. 17, 1215-1227 и ΖΙιοιι. А. (1999), 1. Βίο1. Скет. 274, 20745-20748). Было высказано предположение, что РС8К9 играет определенную роль в метаболизме холестерина. Экспрессия мРНК РС8К9 ингибировалась после кормления мышей холестеринсодержащей пищей (Мах^е11, К.К (2003), 1. Б1р1б Кек. 44, 2109-2119), активируется статинами в клетках Нер62 (ПиЬис, 6. (2004), Аг1егюкс1ег. ТкготЬ. Уаке. Βίο1. 24, 1454-1459) и активируется белком, связывающимся со стеролрегулирующим элементом у трансгенных мышей (8КЕВЕ) (ΗοτΙοη, ΕΌ. (2003), Ргос. №11. Асаб. 8с1. И8А 100, 12027-12032), аналогично действию ферментов биосинтеза холестерина и рецептора липопротеина низкой плотности (БЭБ-В). Кроме того, было обнаружено, что миссценс-мутации РС8К9 ассоциируются с гиперхолестеринемией, наследуемой по аутосомнодоминантному типу (НсМаЭ) (АЫГабек М., е1 а1. (2003), №1. 6еие1, 34, 154-156, Т1ттк, К.М. (2004), Нит. 6еие1 114, 349-353, Бегеи, Т.Р. (2004), Сйи. 6еие1. 65, 419-422). РС8К9 может также имеет важное значение в определении уровней холестерина ЛНП у всего населения, поскольку, как наблюдалось у населения Японии, полиморфизм в один нуклеотид (8ΝΓ) обычно влияет на уровни холестерина (8Ηίο_)ί, К. (2004), 1. Нит. Сеие1. 49, 109-114).

Аутосомно-доминантная гиперхолистеринемия (АЭН) представляет собой моногенное заболевание, при котором у пациентов наблюдается повышение уровня общего холестерина и холестерина ЛНП и развитие ксантом сухожилий, а также наблюдается атеросклероз у недоношенных новорожденных (Кабег, Ό.Ι. (2003), 1. С1ш. ВгсекБ 111, 1795-1803). Патогенез АЭН и его рецессивной формы, аутосомнорецессивной гиперхолистеринемии (АКН) (Εοίκο, ЕС. (2003), Сигг. Орш. Είρί6ο1. 14, 121-127), обусловлен нарушением поглощения ЛНП печенью. АЭН может быть вызвана мутациями ЛНПР, которые препятствуют поглощению ЛНП, или мутациями в белке, присутствующем на ЛНП, а именно на аполипопротеине В, который связывается с ЛНПР. АКН вызывается мутациями в белке АКН, который необходим для осуществления эндоцитоза комплекса ЛНПР-ЛНП посредством его взаимодействия с клатрином. Поэтому если мутации РС8К9 являются этиологическим фактором заболеваний группы Ηс1ю1а3. то очевидно, что РС8К9 играет определенную роль в опосредуемом рецептором поглощении ЛНП.

Исследования сверхэкспрессии показали, что РС8К9 играет определенную роль в регуляции уровней ЛНПР, а следовательно, и в поглощении ЛНП печенью (Мах^е11 К.К (2004), Ргос. №11. Асаб. 8сБ И8А, 101, 7100-7105, Веи)аиие1, 8., е1 а1. (2004), 1. Вю1. Скет. 279, 48865-18875, Рагк, 8.ν. (2004), 1. Вю1. Скет. 279, 50630-50638). У мышей опосредуемая аденовирусом сверхэкспрессия мышиного или человеческого РС8К9, наблюдаемая в течение 3 или 4 дней, приводит к повышению уровней общего холестерина и холестерина ЛНП; при этом такой эффект не наблюдается у животных, не содержащих ЛНПР (Ма\\\е11 К.К (2004), Ргос. №11. Асаб. 8сБ И8А, 101, 7100-7105, Веи^аиие!, 8., е1 а1. (2904), 1. Вю1. Скет. 279, 48865-48875, Рагк, 8.XV. (2004), 1. Вю1. Скет. 279, 50630-50638). Кроме того, сверхэкспрессия РС8К9 приводит к значительному снижению уровня белка ЛНПР в печени, но не влияет на уровни мРНК ЛНПР, уровни белка 8КЕВР или на отношение ядерного белка 8КЕВР к цитоплазматическому белку 8КЕВР. Полученные результаты показали, что РС8К9 прямо или опосредованно снижает уровни белка ЛНПР по посттрансляционному механизму.

Мутации, приводящие к потере функций в РС8К9, были смоделированы на мышах (КакЫб е1 а1. (2005), РNΑ8, 102, 5374-5379) и идентифицированы у человека (Сгокеи е1 а1. (2005), №1ите Сеиекск. 37.161-165). В обоих случаях потеря функции РС8К9 приводит к снижению уровней общего холестерина и холестерина ЛНП. Результаты ретроспективных исследований, проводимых в течение 15 лет, показали, что утрата одной копии РС8К9 приводит к снижению уровня ЛНП и к увеличению степени защиты от развития сердечно-сосудистых заболеваний (Сгокеи е1 а1. 2006, Ν. Еид1. 1. Меб., 354, 1264-1272). В настоящее время имеются неопровержимые данные, которые указывают на то, что снижение уровней

- 1 015676

РС8К9 приводит к снижению уровней ЛНП.

Недавно было показано, что молекулы двухцепочечной РНК (дцРНК) блокируют экспрессию генов по высококонсервативному регуляторному механизму, известному как интерференция РНК (РНКи). В \νϋ 99/32619 (Иге е! а1.) описано применение дцРНК длиной по меньшей мере 25 нуклеотидов для ингибирования экспрессии генов у С. е1едаи8. Было также показано, что дцРНК разрушает РНК-мишень в других организмах, включая растения (см., например, νθ 99/53050, ’№а1егйои8е е! а1.; νθ 99/61631, НсИСи е! а1.), дрозофилу (Эго5орЫ1а) (см., например, Уапд, Ό., е! а1., Сигг. Бю1. (2000), 10:1191-1200) и млекопитающих (см. νθ 00/44895, Ытшег; ΌΕ 10100586.5, КгеШхег е! а1.). Такой природный механизм был положен в основу разработки нового класса фармацевтических средств для лечения расстройств, вызываемых нарушением регуляции гена или нежелательной регуляцией гена.

Несмотря на значительные успехи в области исследования интерференции РНК (РНКи) и успехи в лечении патологичесих состояний, которые могут быть модулированы негативной регуляцией экспрессии гена РС8К9, необходимость в разработке средств, которые могут ингибировать экспрессию гена РС8К9 и которые могут быть применены для лечения заболеваний, ассоциированных с экспрессией гена РС8К9, таких как гиперлипидемия, остается актуальной.

Описание сущности изобретения

Настоящее изобретение относится к решению проблемы, связанной с лечением заболеваний, которые могут быть модулированы путем ингибирования пропротеин-конвертазы субтилизин-кексина 9 (РС8К9) с использованием двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) для подавления экспрессии РС8К9.

Настоящее изобретение относится к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (дцРНК), а также к композициям и к способам, применяемым в целях ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетках или у млекопитающих с использованием такой дцРНК. Настоящее изобретение также относится к композициям и к способам, применяемым для лечения патологических состояний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии гена РС8К9, таких как гиперлипидемия. дцРНК согласно изобретению содержит цепь РНК (антисмысловую цепь), имеющую область длиной менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов, и является в основном комплементарной по меньшей мере части мРНК-транскрипта гена РС8К9.

В одном из своих вариантов настоящее изобретение относится к молекулам двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК), ингибирующим экспрессию гена РС8К9. дцРНК содержит по меньшей мере две последовательности, комплементарные друг другу. дцРНК содержит смысловую цепь, включающую первую последовательность, и антисмысловую цепь, включающую вторую последовательность. Антисмысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность, в основном комплементарную по меньшей мере части мРНК, кодирующей РС8К9, где указанная область комплементарности имеет длину менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов. дцРНК после ее контактирования с клеткой, экспрессирующей РС8К9, ингибирует экспрессию гена РС8К9 по меньшей мере на 40%.

Так, например, молекулы дцРНК согласно изобретению могут состоять из первой последовательности дцРНК, выбранной из группы, состоящей из смысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2, и из второй последовательности, выбранной из группы, состоящей из антисмысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2. Молекулы дцРНК согласно изобретению могут состоять из природных нуклеотидов, либо они могут состоять по меньшей мере из одного модифицированного нуклеотида, такого как 2'-О-метилмодифицированный нуклеотид; нуклеотид, содержащий 5'-фосфортиоатную группу, и концевой нуклеотид, присоединенный к холестериловому производному. Альтернативно, модифицированный нуклеотид может быть выбран из группы, состоящей из 2'-дезокси2'-фтормодифицированного нуклеотида, 2'-дезоксимодифицированного нуклеотида, блокированного нуклеотида, неосновного нуклеотида, 2'-аминомодифицированного нуклеотида, 2'-алкилмодифицированного нуклеотида, морфолинонуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, содержащего неприродное основание. Обычно такую модифицированную последовательность получают на основе первой последовательности указанной дцРНК, выбранной из группы, состоящей из смысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2, и второй последовательности, выбранной из группы, состоящей из антисмысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2.

В другом своем варианте настоящее изобретение относится к клетке, содержащей одну из дцРНК согласно изобретению. Такой клеткой обычно является клетка млекопитающего, такая как человеческая клетка.

В другом своем варианте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, предназначенной для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в организме, обычно в организме человека, где указанная композиция содержит одну или несколько дцРНК согласно изобретению и фармацевтически примемлемый носитель или носитель для доставки.

В другом своем варианте настоящее изобретение относится к способу ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетке, где указанный способ включает следующие стадии:

(а) введение в клетку двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК), где указанная дцРНК содержит по меньшей мере две последовательности, комплементарные друг другу. дцРНК содержит

- 2 015676 смысловую цепь, включающую первую последовательность, и антисмысловую цепь, включающую вторую последовательность. Антисмысловая цепь содержит область комплементарности, которая в основном комплементарна по меньшей мере части мРНК, кодирующей РС8К9, где указанная комплементарная область имеет длину менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов, и где указанная дцРНК после ее контактирования с клеткой, экспрессирующей РС8К9, ингибирует экспрессию гена РС8К9 по меньшей мере на 40%; и (Ь) поддержание клетки, продуцированной в стадии (а), в течение определенного периода времени, достаточного для разрушения мРНК-транскрипта гена РС8К9 и тем самым ингибирования экспрессии гена РС8К9 в указанной клетке.

В другом своем варианте настоящее изобретение относится к способам лечения, предупреждения или подавления патологических состояний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии гена РС8К9, например гиперлипидемии, где указанные способы включают введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, предупреждении или подавлении, терапевтически или профилактически эффективного количества одной или нескольких дцРНК согласно изобретению.

В другом своем варианте настоящее изобретение относится к векторам для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетке, где указанные векторы содержат регуляторную последовательность, функционально присоединенную к нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере одну цепь одной из дцРНК согласно изобретению.

В другом своем варианте настоящее изобретение относится к клетке, содержащей вектор для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетке. Указанный вектор содержит регуляторную последовательность, функционально присоединенную к нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере одну цепь одной из дцРНК согласно изобретению.

Краткое описание графического материала

На фиг. 1 представлена структура липида ΝΏ-98.

На фиг. 2 представлены результаты ίη νίνο скрининга 16 киРНК, специфических к мышиному РС8К9 (АЬ-ОР-9327-АЬ-ОР-9342), направленных против различных областей ОРС мРНК РС8К9 (имеющих первый нуклеотид, соответствующий положению ОРС, как показано на графике), у мышей С57/ВЬ6 (5 животных/группу). Отношение мРНК РС8К9 к мРНК СЛРЭН в лизатах печени усредняли для каждой группы обработки и сравнивали с контрольной группой, обработанной РВ8, или с контрольной группой, обработанной неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII).

На фиг. 3 представлены результаты ίη νίνο скрининга 16 человеческих/мышиных/крысиных перекрестно-реактивных РС8К9-специфических киРНК (АЬ-ЭР-9311-АЬ-ЭР-9326), направленных против различных областей ОРС мРНК РС8К9 (имеющих первый нуклеотид, соответствующий положению ОРС, как показано на графике) у мышей С57/ВЬ6 (5 животных/группу). Отношение мРНК РС8К9 к мРНК СЛРЭН в лизатах печени усредняли для каждой группы обработки и сравнивали с контрольной группой, обработанной РВ8, или с контрольной группой, обработанной неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII).

Сайленсинг мРНК РС8К9 приводил к снижению общего уровня холестерина в сыворотке.

Наибольшая эффективность в ингибировании киРНК-транскрипта РС8К9 выражается в наиболее заметном снижении уровня холестерина (примерно на 20-30%).

На фиг. 4 представлены результаты ίη νίνο скрининга 16 киРНК, специфических к мышиному РС8К9 (АЬ-ОР-9327-АЬ-ОР-9342) у мышей С57/ВЬ6 (5 животных/группу). Общие уровни холестерина в сыворотке усредняли для каждой группы обработки и сравнивали с контрольной группой, обработанной РВ8, или с контрольной группой, обработанной неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII).

На фиг. 5 представлены результаты ίη νίνο скрининга 16 человеческих/мышиных/крысиных перекрестно-реактивных РС8К9-специфических киРНК (АЬ-ОР-9311-АЬ-ОР-9326) у мышей С57/ВЬ6 (5 животных/группу). Общие уровни холестерина в сыворотке усредняли для каждой группы обработки и сравнивали с контрольной группой, обработанной РВ8, или с контрольной группой, обработанной неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII).

На фиг. 6 проиллюстрировано сравнение результатов ίη νίΐτο и ίη νίνο, полученных для сайленсинга РС8К9.

На фиг. 7А и 7В представлены результаты, полученные ίη νίίτο для сайленсинга РС8К9 с использованием первичных гепатоцитов обезьян.

На фиг. 8 проиллюстрирована ίη νίνο активность киРНК, полученных в виде липосомных препаратов Ь№-01 и направленных против рсзк-9.

На фиг. 9 проиллюстрирована ίη νίνο активность препаратов Ь№-01, содержащих химически модифицированные родительские молекулы 9314 и 10792 в различные периоды времени. Было выявлено, что модифицированные варианты 10792 обнаруживают активность в сайленсинге ίη νίνο.

- 3 015676

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к решению проблемы, связанной с лечением заболеваний, которые могут быть модулированы путем ингибирования гена РС8К9 с использованием двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) для подавления экспрессии гена РС8К9 и тем самым для лечения таких заболеваний, как гиперлипидемия.

Настоящее изобретение относится к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (дцРНК), а также к композициям и к способам, применяемым для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетках или у млекопитающих с использованием такой дцРНК. Настоящее изобретение также относится к композициям и к способам, применяемым для лечения патологических состояний и заболевания, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии гена РС8К9. дцРНК регулирует последовательность-специфическое разрушение мРНК по механизму, известному как интерференция РНК (РНКи). дцРНК согласно изобретению включает цепь РНК (антисмысловую цепь), которая имеет область длиной менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов, и в основном комплементарна по меньшей мере части мРНК-транскрипта гена РС8К9. Применение таких дцРНК позволяет осуществлять направленное разрушение мРНК, которое приводит к транспорту натрия. С помощью клеточных анализов и анализов, проводимых на животных, авторами настоящего изобретения было продемонстрировано, что очень низкие дозы этих дцРНК могут специфически и эффективно опосредовать РНКи, что будет приводить к значительному ингибированию экспрессии гена РС8К9. Таким образом, указанные способы и композиции согласно изобретению, в которых используются эти дцРНК, могут быть применены для лечения патологических состояний, которые могут быть модулированы путем ингибирования РС8К9, например, для лечения гиперлипидемии.

Ниже подробно описан способ получения и использования дцРНК и композиций, содержащих дцРНК, для ингибирования экспрессии гена-мишени РС8К9, а также описаны композиции и способы, применяемые для лечения заболеваний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии РС8К9, таких как гиперлипидемия. Фармацевтические композиции согласно изобретению включают дцРНК, имеющую антисмысловую цепь, которая содержит область комплементарности длиной менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов, и является в основном комплементарной по меньшей мере части мРНК-транскрипта гена РС8К9, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.

В соответствии с этим в некоторых своих аспектах настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим дцРНК согласно изобретению в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем; к способам применения таких композиций для ингибирования экспрессии гена РС8К9 и к способам применения фармацевтических композиций для лечения заболеваний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии РС8К9.

I. Определения.

Для удобства ниже приводятся значения некоторых терминов и выражений, используемых в настоящем описании, в примерах и в прилагаемой формуле изобретения. Если имеется значительное различие между употреблением данного термина в других разделах настоящего описания и его определением, приводимым в этом разделе, то следует отдать предпочтение определению данного термина в этом разделе.

Каждый из О, С, А и И обычно означает нуклеотид, который содержит гуаниновое, цитозиновое, адениновое и урациловое основания соответственно. Однако при этом следует отметить, что термин рибонуклеотид или нуклеотид также может означать модифицированный нуклеотид, как будет подробно описано ниже, или молекулу-аналог, имеющую замену. Специалисту в данной области хорошо известно, что гуанин, цитозин, аденин и урацил могут быть заменены другими молекулами без какоголибо значительного изменения свойств спаривания оснований олигонуклеотида, включающего нуклеотид, имеющий такую замененную молекулу. Так, например, нуклеотид, содержащий инозин в качестве основания, может спариваться с нуклеотидами, содержащими аденин, цитозин или урацил и т.п. Следовательно, в нуклеотидных последовательностях согласно изобретению нуклеотиды, содержащие урацил, гуанин или аденин, могут быть заменены нуклеотидом, содержащим, например, инозин.

Последовательности, содержащие такие замененные молекулы, являются вариантами настоящего изобретения.

Используемый здесь термин РС8К9 означает ген полипротеин-конвертазы субтилизин-кексина 9 или его белок (также известный как ЕН3, НСНОЬАЗ, ΝΑΡί’-Ι. ΝΑΡΤΊ). Последовательности мРНК, нацеленные на РС8К9, представляют собой человеческую последовательность: ΝΜ 174936; мышиную последовательность: ΝΜ_153565 и крысиную последовательность: ΝΜ_199253.

Используемый здесь термин последовательность-мишень означает непрерывную часть нуклеотидной последовательности молекулы мРНК, образованную в процессе транскрипции гена РС8К9, включая мРНК, которая является продуктом РНК-процессинга первичного продукта транскрипции.

Используемый здесь термин цепь, содержащая последовательность означает олигонуклеотид, содержащий цепь нуклеотидов, последовательность которой описана в соответствии со стандартной номенклатурой нуклеотидов.

- 4 015676

Используемый здесь термин комплементарный, если это не оговорено особо и если он используется для описания первой нуклеотидной последовательности по сравнению со второй нуклеотидной последовательностью, означает способность олигонуклеотида или полинуклеотида, содержащего первую нуклеотидную последовательность, гибридизоваться и образовывать дуплексную структуру в определенных условиях с олигонуклеотидом или полинуклеотидом, содержащим вторую нуклеотидную последовательность, как хорошо известно специалистам. Такими условиями могут быть, например, жесткие условия, где указанные жесткие условия могут включать обработку 400 мМ ЫаС1, 40 мМ ΡΙΡΕ8, рН 6,4, 1 мМ ΕΌΤΑ, при 50 или 70°С в течение 12-16 ч с последующей промывкой. Могут быть применены и другие условия, такие как физиологически релевантные условия, которые могут возникать внутри организма. Специалист в данной области может самостоятельно определить ряд условий, наиболее подходящих для оценки комплементарности двух последовательностей в зависимости от целей применения гибридизованных нуклеотидов.

Это определение включает спаривание оснований олигонуклеотида или полинуклеотида, содержащего первую нуклеотидную последовательность, с олигонуклеотидом или полинуклеотидом, содержащим вторую нуклеотидную последовательность, по всей длине первой и второй нуклеотидных последовательностей. Такие последовательности могут называться полностью комплементарными друг другу. Однако если первую последовательность определяют как в основном комплементарную второй описанной здесь последовательности, то эти две последовательности могут быть полностью комплементарными, либо они могут образовывать одну или более, но в основном не более чем 4, 3 или 2 несоответствующих пар оснований после гибридизации, и при этом сохранять свою способность гибридизоваться в условиях, наиболее подходящих для их конечного применения. Однако если после гибридизации два олигонуклеотида образуют один или несколько одноцепочечных выступающих концов, то такие концы не должны рассматриваться как несоответствия при определении комплементарности. Так, например, дцРНК, содержащая один олигонуклеотид длиной в 21 нуклеотид и другой олигонуклеотид длиной в 23 нуклеотидов, где более длинный олигонуклеотид содержит последовательность из 21 нуклеотида, которая является полностью комплементарной более короткому олигонуклеотиду, может также называться полностью комплементарной с точки зрения цели применения настоящего изобретения.

Используемый здесь термин комплементарные последовательности может также включать пары оснований, не спаренные в соответствии с правилами Уотсона-Крика, или полностью состоять из таких пар оснований, и/или они могут включать пары оснований, образованные неприродными и модифицированными нуклеотидами в зависимости от того, насколько удовлетворяются вышеуказанные требования к их способности к гибридизации.

Используемые здесь термины комплементарный, полностью комплементарный и в основном комплементарный могут употребляться по отношению к спариванию основания смысловой цепи и антисмысловой цепи дцРНК или антисмысловой цепи дцРНК и последовательности-мишени, как будет очевидно исходя из целей их применения.

Используемый здесь термин полинуклеотид, который является, по существу, комплементарным по меньшей мере части матричной РНК (мРНК), означает полинуклеотид, в основном комплементарный непрерывной части представляющей интерес мРНК (например, кодирующей РС8К9). Так, например, полинуклеотид является комплементарным по меньшей мере части мРНК РС8К9, если его последовательность, по существу, комплементарна непрерывной части мРНК, кодирующей РС8К9.

Используемый здесь термин двухцепочечная РНК или дцРНК означает комплекс молекул рибонуклеиновой кислоты, имеющий дуплексную структуру, содержащую две антипараллельные и, по существу, комплементарные, как определено выше, цепи нуклеиновой кислоты. Две цепи, образующие дуплексную структуру, могут представлять собой различные части одной более крупной молекулы РНК, либо они могут представлять собой отдельные молекулы РНК. В случае отдельных молекул РНК такая дцРНК часто называется в литературе киРНК (короткой интерферирующей РНК). Если две цепи являются частью одной более крупной молекулы, а поэтому между З'-концом одной цепи и 5'-концом соответствующей другой цепи они соединены друг с другом непрерывной цепью нуклеотидов, образующих дуплексную структуру, то такая соединяющая цепь РНК называется шпилечной петлей, короткой шпилечной РНК или кшРНК. Если две цепи между З'-концом одной цепи и 5'-концом соответствующей другой цепи, ковалентно связанные друг с другом посредством другой цепи, т.е. цепи, не являющейся непрерывной цепью нуклеотидов, образующей дуплексную структуру, то такая соединяющая структура называется линкером. Цепи РНК могут иметь одинаковые или различные количества нуклеотидов. Максимальным числом пар оснований является число нуклеотидов в самой короткой цепи дцРНК минус какие-либо выступающие концы, присутствующие в этом дуплексе.

Помимо дуплексной структуры дцРНК может содержать один или несколько выступающих нуклеотидов. Кроме того, используемый в настоящем описании термин дцРНК может включать химические модификации рибонуклеотидов, включая основные модификации во многих положениях нуклеотидов и все типы модификаций, описанные в настоящем изобретении или известные специалистам. Все такие модификации, присутствующие в молекуле типа киРНК, входят в объем термина дцРНК, определяемого в настоящем описании и в формуле изобретения.

- 5 015676

Используемый здесь термин выступающий нуклеотид означает неспаренный нуклеотид или нуклеотиды, которые выступают из дуплексной структуры дцРНК, если З'-конец одной цепи дцРНК находится за пределами 5'-конца другой цепи или наоборот. Термины тупой или тупой конец означают, что на конце дцРНК отсутствуют неспаренные нуклеотиды, т.е. отсутствует выступающий нуклеотид. Затупленная по концам дцРНК представляет собой дцРНК, которая является двухцепочечной по всей ее длине, т.е. у любого конца этой молекулы отсутствуют выступающие нуклеотиды. Для ясности следует отметить, что при определении наличия у киРНК выступающего конца или тупого конца не рассматриваются химические кэпы или ненуклеотидные химические молекулы, конъюгированные с З'-концом или с 5'-концом киРНК.

Термин антисмысловая цепь означает цепь дцРНК, которая включает область, по существу, комплементарную последовательности-мишени. Используемый здесь термин область комплементарности означает область на антисмысловой цепи, которая, по существу, комплементарна последовательности, например последовательности-мишени, определенной в настоящем изобретении. Если область комплементарности не полностью комплементарна последовательности-мишени, то такие несоответствия являются наиболее приемлемыми в концевых областях, а если они и присутствуют, то, главным образом, в концевой области или в концевых областях, например в положениях 6, 5, 4, 3 или 2 нуклеотида 5'- и/или З'-концов.

Используемый здесь термин смысловая цепь означает цепь дцРНК, включающую область, по существу, комплементарную области антисмысловой цепи.

Термин введение в клетку, если он относится к дцРНК, означает облегчение поглощения или абсорбции в клетке, как это очевидно для специалиста в данной области. Абсорбция или поглощение дцРНК может происходить посредством природных диффузных или активных клеточных процессов, либо оно может быть осуществлено с помощью вспомогательных средств или устройств. Значения этого термина не ограничиваются клетками ίη νίΐτο; при этом, дцРНК может быть также введена в клетку, которая является частью живого организма. В таком случае, термин введение в клетку также включает доставку в организм. Так, например, для доставки ίη νίνο, дцРНК может быть инъецирована в конкретный участок, или она может быть введена системно. Введение ίη νίΐτο в клетку осуществляют методами, известными специалистам, такими как электропорация и липофекция.

Используемые здесь термины сайленсинг и ингибирование экспрессии, если они относятся к гену РС8К9, означают, по меньшей мере, частичное подавление экспрессии гена РС8К9, на что указывает снижение количества мРНК, транскрибируемого из гена РС8К9, который может быть выделен из первой клетки или группы клеток, в которой (в которых) транскрибируется ген РС8К9 и которая (которые) были обработаны так, чтобы происходило ингибирование экспрессии гена РС8К9, по сравнению со второй клеткой или группой клеток, по существу, идентичной (или идентичных) первой клетке или группе клеток, которая (или которые) не была (не были) обработана(ы) указанным способом (контрольными клетками). Степень ингибирования обычно выражают математической формулой (мРНК в контрольных клетках)-(мРНК в обработанных клетках) __ · 100% (мРНК в контрольных клетках)

Альтернативно, степень ингибирования может быть определена как уменьшение значения параметра, которое функционально связано с транскрипцией гена РС8К9, например количества белка, кодируемого геном РС8К9, и секретируемого клеткой, или числа клеток, представляющих определенный фенотип, например подверженных апоптозу. В принципе, сайленсинг гена РС8К9 может быть обнаружен в любой клетке, экспрессирующей мишень, либо конститутивно, либо с помощью генной инженерии, а также с помощью любого подходящего анализа. Однако если необходимо определить, ингибирует ли данная дцРНК экспрессию гена РС8К9 в определенной степени, а следовательно, такое определение входит в объем настоящего изобретения, то для осуществления такого определения рекомендуется проводить анализ, описанный ниже в разделе Примеры.

Так, например, в некоторых случаях экспрессию гена РС8К9 подавляют по меньшей мере примерно на 20, 25, 35 или 50% путем введения двухцепочечного олигонуклеотида согласно изобретению. В некоторых вариантах изобретения ген РС8К9 ингибируется по меньшей мере примерно на 60, 70 или 80% путем введения двухцепочечного олигонуклеотида согласно изобретению. В некоторых вариантах изобретения ген РС8К9 ингибируется по меньшей мере примерно на 85, 90 или 95% путем введения двухцепочечного олигонуклеотида согласно изобретению. В табл. 1 и 2 приводится широкий ряд величин для ингибирования экспрессии, полученных с помощью анализа ίη νίΐτο, проводимого с использованием различных молекул дцРНК РС8К9 в различных концентрациях.

Термины лечить, лечение и т.п., используемые здесь с точки зрения экспрессии РС8К9, означают ослабление или облегчение тяжести патологических состояний, которые могут быть модулированы посредством ингибирования гена РС8К9. В контексте настоящего изобретения термины лечить, лечение и т.п., если они относятся к любым другим описанным ниже состояниям (а не к патологическим состояниям, которые могут быть модулированы посредством ингибирования гена РС8К9), означают облегчение или ослабление по меньшей мере одного симптома, ассоциированного с таким состоянием, ли

- 6 015676 бо его реверсию. Так, например, если термин лечение относится к гиперлипидемии, то он включает снижение уровней липидов в сыворотке.

Используемые здесь термины терапевтически эффективное количество и профилактически эффективное количество означают количество, которое дает терапевтический эффект при лечении, предупреждении или ослаблении патологических состояний или явно выраженного симптома таких патологических состояний, которые могут быть модулированы посредством ингибирования гена РС8К9. Конкретное количество, которое является терапевтически эффективным, может быть легко определено практикующим врачом и может широко варьироваться в зависимости от факторов, известных специалистам, таких как тип патологических состояний, которые могут быть модулированы посредством ингибирования гена РС8К9, история болезни данного пациента и его возраст, стадия развития патологических состояний, которые могут быть модулированы посредством ингибирования РС8К9, и способа введения других средств для подавления патологий, которые могут быть модулированы посредством ингибирования гена РС8К9.

Используемая здесь фармацевтическая композиция включает фармакологически эффективное количество дцРНК и фармацевтически приемлемый носитель. Используемый здесь термин фармакологически эффективное количество, терапевтически эффективное количество или просто эффективное количество означает количество РНК, эффективное для достижения нужного фармакологического, терапевтического или превентивного эффекта. Так, например, если эффективным лечением заболевания считается по меньшей мере 25% снижение величины измеряемого параметра, ассоциированного с данным заболеванием или расстройством, то терапевтически эффективное количество лекарственного средства для лечения данного заболевания или расстройства представляет собой количество, необходимое для достижения по меньшей мере 25% снижения величины данного параметра.

Термин фармацевтически приемлемый носитель означает носитель для введения терапевтического средства. Такими носителями являются, но не ограничиваются ими, физиологический раствор, забуференный физиологический раствор, декстроза, вода, глицерин, этанол и их комбинации, и такие носители более подробно описаны ниже. Данный термин, в частности, исключает среду для культивирования клеток.

Используемый здесь термин трансформированная клетка означает клетку, в которую был введен вектор, способный экспрессировать молекулу дцРНК.

II. Двухцепочечная рибонуклеиновая кислота (дцРНК).

В одном из своих вариантов настоящее изобретение относится к молекулам двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК), используемый для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетках или у млекопитающих, где указанная дцРНК содержит антисмысловую цепь, включающую область комплементарности, которая является комплементарной по меньшей мере части мРНК, образованной в результате экспрессии гена РС8К9, где указанная область комплементарности имеет длину менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов, и где указанная дцРНК, после ее контактирования с клеткой, экспрессирующей указанный ген РС8К9, ингибирует экспрессию указанного гена РС8К9 по меньшей мере на 40%. Указанная дцРНК содержит две цепи РНК, которые являются достаточно комплементарными для гибридизации с образованием дуплексной структуры. Одна цепь дцРНК (антисмысловая цепь) содержит область комплементарности, которая, по существу, комплементарна, а обычно полностью комплементарна последовательности-мишени, происходящей от последовательности мРНК, образованной в процессе экспрессии гена РС8К9, а другая цепь (смысловая цепь) содержит область, которая является комплементарной антисмысловой цепи, в результате чего эти две цепи гибридизуются и, при их объединении в подходящих условиях, образуют дуплексную структуру. Обычно дуплексная структура имеет длину 15-30, чаще 18-25, еще чаще 19-24, а чаще всего 19-21 пар оснований. Аналогичным образом, область, комплементарная последовательности-мишени, имеет длину 15-30, чаще 18-25, еще чаще 19-24, а чаще всего 19-21 пар оснований. дцРНК согласно изобретению может также включать один или несколько выступающих одноцелочечных нуклеотидов. дцРНК может быть синтезирована стандартными методами, известными специалистам и подробно обсуждаемыми ниже, например с применением автоматического синтезатора ДНК, например, такого как синтезатор, поставляемый компанией Вюкеагсй, Аррйеб ВюхуЧспъ. 1пс. В предпочтительном варианте изобретения геном РС8К9 является человеческий ген РС8К9. В конкретных вариантах изобретения антисмысловая цепь дцРНК включает цепь, выбранную из смысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2, и вторую последовательность, выбранную из группы, состоящей из антисмысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2. Альтернативные антисмысловые агенты, нацеленные на последовательность-мишень, представленную в табл. 1 и 2, могут быть легко определены с использованием последовательности-мишени и фланкирующей последовательности РС8К9.

В других вариантах изобретения дцРНК содержит по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, выбранную из группы последовательностей, представленных в табл. 1 и 2. В других вариантах изобретения дцРНК содержит по меньшей мере две последовательности, выбранные из этой группы, где одна из по меньшей мере двух последовательностей комплементарна другой последовательности по меньшей мере из двух последовательностей, а одна по меньшей мере из двух последовательностей, по

- 7 015676 существу, комплементарна последовательности мРНК, продуцированной в результате экспрессии гена РС8К9. Обычно дцРНК содержит два олигонуклеотида, где один олигонуклеотид описан в табл. 1 и 2 как смысловая цепь, а второй олигонуклеотид описан в табл. 1 и 2 как антисмысловая цепь.

Специалистам в данной области хорошо известно, что дцРНК, содержащие дуплексную структуру из 20-23 пар оснований, а в частности из 21 пары оснований, является особенно эффективной в индуцировании интерференции РНК (Е1Ьа§Ыг с1 а1., ЕМВО 2001, 20:6877-6888). Однако другими исследователями было также обнаружено, что могут оказаться эффективными и более короткие или более длинные дцРНК. В описанных выше вариантах дцРНК согласно изобретению могут содержать по меньшей мере одну цепь длиной минимум 21 нуклеотид, что обусловлено природой олигонуклеотидных последовательностей, представленных в табл. 1 и 2. Разумно предположить, что более короткие дцРНК, содержащие одну из последовательностей, представленных в табл. 1 и 2, только без нескольких нуклеотидов у одного или обоих концов, могут быть также эффективными по сравнению с дцРНК, описанными выше. Следовательно, в настоящем изобретении рассматриваются дцРНК, содержащие неполную последовательность по меньшей мере из 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более смежных нуклеотидов одной из последовательностей, представленных в табл. 1 и 2, и отличающиеся по своей способности ингибировать экспрессию гена РС8К9 в ЕЛС8-анализе, описанном ниже, не более чем на 5, 10, 15, 20, 25 или 30% по сравнению с дцРНК, содержащей полноразмерную последовательность. Другие дцРНК, которые расщепляются в последовательности-мишени, представленной в табл. 1 и 2, могут быть легко получены с использованием описанной здесь последовательности РС8К9 и последовательности-мишени.

Кроме того, РНКи-агенты, представленные в табл. 1 и 2, идентифицируют сайт в мРНК РС8К9, восприимчивый к РНКи-расщеплению. Настоящее изобретение также относится к РНКи-агентам, нацеленным на последовательность, на которую нацелен один из агентов согласно изобретению. Считается, что используемый здесь второй РНКи-агент нацелен на последовательность первого РНКи-агента, если указанный второй РНКи-агент расщепляет транскрипт в любом участке мРНК, который является комплементарным антисмысловой цепи первого РНКи-агента. Такой второй агент, по существу, состоит по меньшей мере из 15 смежных нуклеотидов, происходящих от одной из последовательностей, представленных в табл. 1 и 2 и присоединенных к дополнительным нуклеотидным последовательностям, происходящим от области, смежной с выбранной последовательностью в гене РС8К9. Так, например, по меньшей мере 15 нуклеотидов 8ЕО ΙΌ N0: 1 (минус добавленные последовательности АА), объединенные со следующими 6 нуклеотидами от гена-мишени РС8К9, продуцируют одноцепочечный агент из 21 нуклеотида на основе одной из последовательностей, представленных в табл. 1 и 2.

дцРНК согласно изобретению может содержать одно или несколько несоответствий по отношению к последовательности-мишени. В предпочтительном варианте изобретения дцРНК согласно изобретению содержит не более чем 3 несоответствия. Если антисмысловая цепь дцРНК содержит несоответствия по отношению к последовательности-мишени, то предпочтительно, чтобы область несоответствий не находилась в центре области комплементарности. Если антисмысловая цепь дцРНК содержит несоответствия по отношению к последовательности-мишени, то предпочтительно, чтобы такое несоответствие ограничивалось 5 нуклеотидами, расположенными у любого конца, например 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотидом, присутствующими у 5'- или 3'-конца области комплементарности. Так, например, в случае цепи дцРНК из 23 нуклеотидов, которая комплементарна области гена РС8К9, эта дцРНК обычно не содержит каких-либо несоответствий в центральной области, состоящей из 13 нуклеотидов. Для того чтобы определить, является ли дцРНК, содержащая несоответствия по отношению к последовательности-мишени, эффективной в ингибировании экспрессии гена РС8К9, могут быть применены способы, описанные в настоящем изобретении. Очень важно, чтобы дцРНК с несоответствиями эффективно ингибировали экспрессию гена РС8К9, особенно если известно, что конкретная область комплементарности в гене РС8К9 имеет модификацию полиморфной последовательности в пределах данной популяции.

В одном из вариантов изобретения по меньшей мере на одном конце дцРНК присутствуют 1-4, а обычно 1-2 выступающих одноцепочечных нуклеотида. Было неожиданно обнаружено, что дцРНК, имеющие по меньшей мере один выступающий нуклеотид, обладают превосходными ингибирующими свойствами по сравнению со свойствами их аналогов, имеющих тупые концы. Кроме того, авторами настоящего изобретения было обнаружено, что присутствие лишь одного выступающего нуклеотида усиливает интерферирующую активность дцРНК, не оказывая при этом какого-либо влияния на ее общую стабильность. Было подтверждено, что дцРНК, имеющая только один выступающий конец, является особенно стабильной и эффективной ίη νίνο, а также в различных клетках, в средах для культивирования клеток, в крови и сыворотке. Вообще говоря, одноцепочечный выступающий конец расположен у 3'-конца антисмысловой цепи или, альтернативно, у 3'-конца смысловой цепи. дцРНК может также иметь тупой конец, обычно расположенный у 5'-конца антисмысловой цепи. Такие дцРНК обладают повышенной стабильностью и ингибирующей активностью, что позволяет вводить эти дцРНК в низких дозах, т.е. в дозах, составляющих менее чем 5 мг/кг массы тела реципиента в день. Обычно антисмысловая цепь дцРНК имеет выступающие нуклеотиды у 3'-конца, а 5'-конец является тупым. В другом варианте изобретения один или несколько нуклеотидов в выступающем конце заменены нуклеозид-тиофосфатом.

В еще одном варианте изобретения дцРНК химически модифицируют для повышения стабильно

- 8 015676 сти. Нуклеиновые кислоты согласно изобретению могут быть синтезированы и/или модифицированы методами, хорошо известными специалистам, например, как описано в публикации Сиггеп! рго!осо1к ίη пис1е1с ас1б сйет1к1гу. Веаисаде, 8.Ь. е! а1. (Ебгк.), 1о1т №Пеу & 8опк, 1пс., Ыете Уогк, Ν.Υ., И8Л, которая вводится в настоящее описание посредством ссылки. Химическими модификациями могут быть, но не ограничиваются ими, 2'-модификации; модификации в других положениях сахаров или оснований олигонуклеотида; введение неприродных оснований в олигонуклеотидную цепь; ковалентное связывание с лигандом или химической молекулой, и замена межнуклеотидных фосфатных связей другими связями, такими как тиофосфатные связи. При этом могут быть использованы более чем одна такая модификация.

Химическое связывание двух отдельных цепей дцРНК может быть достигнуто с применением любых различных хорошо известных методов, например путем введения ковалентных, ионных или водородных связей; посредством гидрофобных взаимодействий, ван-дер-ваальсовых взаимодействий или стэкинг-взаимодействий; посредством введения координационных связей металл-ион или с использованием пуриновых аналогов. В основном химическими группами, которые могут быть использованы для модификации дцРНК, являются, но не ограничиваются ими, метиленовый синий; бифункциональные группы, обычно бис-(2-хлорэтил)амин; №ацетил-№-(п-глиоксилбензоил)цистамин; 4-тиоурацил и псорален. В одном из вариантов изобретения указанным линкером является гексаэтиленгликолевый линкер. В этом случае дцРНК продуцируют посредством твердофазного синтеза, а гексаэтиленгликолевый линкер вводят в соответствии со стандартными методами (см. №1Шатк, Ό.Ι. апб К.В. Наб, Вюсйет. (1996), 35:14665-14670). В конкретном варианте изобретения 5'-конец антисмысловой цепи и З'-конец смысловой цепи химически связаны посредством гексаэтиленгликолевого линкера. В другом варианте изобретения по меньшей мере один нуклеотид дцРНК содержит фосфортиоатные или фосфордитиоатные группы. Химическая связь у концов дцРНК обычно образована трехспиральными связями. В табл. 1 и 2 приводятся примеры модифицированных РНКи-агентов согласно изобретению.

В еще одном варианте изобретения нуклеотиды у одной или обеих двух одиночных цепей могут быть модифицированы так, чтобы они предотвращали или ингибировали расщепляющую активность клеточных ферментов, например, таких как некоторые нуклеазы и т.п. Методы ингибирования расщепляющей активности клеточных ферментов, направленной против нуклеиновых кислот, известны специалистам, и такими методами являются, но не ограничиваются ими, 2'-амино-модификации, 2'-аминомодификации сахаров, 2'-Е-модификации сахаров, 2'-Е-модификации, 2'-алкил-модификации сахаров, модификации незаряженного остова, морфолиномодификации, 2'-О-метил-модификации и фосфорамидатные модификации (см., например, №адпег, ΝηΙ. Меб. (1995), 1:1116-8). Таким образом, по меньшей мере одна 2'-гидроксильная группа нуклеотидов на дцРНК заменена химической группой, обычно 2'амино- или 2'-метильной группой. Кроме того, по меньшей мере один нуклеотид может быть модифицирован так, чтобы он образовывал блокированный нуклеотид. Такой блокированный нуклеотид содержит метиленовый мостик, соединяющий 2'-кислород рибозы с 4'-углеродом рибозы. Олигонуклеотиды, содержащие указанный блокированный нуклеотид, описаны в публикации КокИкш, А.А., е! а1., Те1гайебгоп (1998), 54: 3607-3630 и ОЫка, 8. е! а1. Те1гайебгоп Ьей. (1998), 39; 5401-5404.

Введение блокированного нуклеотида в олигонуклеотид приводит к повышению аффинности по отношению к комплементарным последовательностям и увеличению температуры плавления на несколько градусов (Вгааксй, Ό.Α. апб Ό.Κ. Согеу, СИет. Вю1. (2001), 8:1-7).

Конъюгирование лиганда с дцРНК может усиливать ее абсорбцию в клетки, а также ее нацеливание на конкретную ткань или поглощение клетками конкретных типов, такими как клетки печени. В некоторых случаях гидрофобный лиганд конъюгируют с дцРНК для облегчения прямого прохождения через клеточную мембрану или поглощения клетками печени. Альтернативно, лиганд, конъюгированный с дцРНК, представляет собой субстрат для опосредуемого рецептором эндоцитоза. Такие подходы были применены для облегчения проникновения в клетку антисмысловых олигонуклеотидов, а также дцРНКагентов. Так, например, холестерин был конъюгирован с различными антисмысловыми олигонуклеотидами с получением соединений, которые являются в основном более активными, чем их неконъюгированные аналоги. См. М. Мапойагап Апбкепке & №.1с1ею Ас1б Огид Эеуе1ортеп1 2002, 12, 103. Другими липофильными соединениями, которые были конъюгированы с олигонуклеотидами, являются 1-пиренмасляная кислота, 1,3-бис-О-(гексадецил)глицерин и ментол. Одним из примеров лиганда для опосредуемого рецептором эндоцитоза является фолиевая кислота. Фолиевая кислота поступает в клетку благодаря эндоцитозу, опосредуемому фолатным рецептором. Соединения дцРНК, несущие фолиевую кислоту, могут эффективно транспортироваться в клетку посредством эндоцитоза, опосредуемого фолатным рецептором. Ь1 и сотрудники сообщают, что присоединение фолиевой кислоты к 3'-концу олигонуклеотида приводит к 8-кратному повышению уровня поглощения олигонуклеотида клетками. Ь1, 8.; Оебшшкй. Н.М.; Ниапд, Ь. Рйагт. Век. 1998, 15, 1540. Другими лигандами, которые были конъюгированы с олигонуклеотидами, являются полиэтиленгликоли, углеводные кластеры, перекрестносвязывающие агенты, конъюгаты порфирина, пептиды для доставки и липиды, такие как холестерин.

В некоторых случаях конъюгирование катионного лиганда с олигонуклеотидами приводит к повышению резистентности к нуклеазам. Репрезентативными примерами катионных лигандов являются пропиламмоний и диметилпропиламмоний. Интересно отметить, что антисмысловые олигонуклеотиды, как

- 9 015676 сообщалось, сохраняют свою высокую аффинность связывания с мРНК в том случае, если катионный лиганд распределен по всему олигонуклеотиду. См. публикацию М. Мапойагап АшЕспбс & М.1с1с1с Λοίά Эгид Эсус1ортсп1. 2002, 22, 103 и цитируемые в ней работы.

Конъюгированная с лигандом дцРНК согласно изобретению может быть синтезирована с использованием дцРНК, содержащей боковую реакционноспособную функциональную группу, такую как группа, образующаяся в результате присоединения линкерной молекулы к дцРНК. Этот реакционноспособный олигонуклеотид может непосредственно взаимодействовать с коммерчески доступными лигандами; с синтезированными лигандами, содержащими любую из различных защитных групп; или с лигандами, имеющими присоединенную к ним линкерную группу. Способы согласно изобретению облегчают синтез конъюгированной с лигандом дцРНК с использованием в некоторых предпочтительных вариантах изобретения нуклеозидных мономеров, которые были соответствующим образом конъюгированы с лигандами и которые могут быть также присоединены к твердому носителю. Такие конъюгаты лиганднуклеозид, присоединенные, но необязательно, к твердому носителю, получают в соответствии с некоторыми предпочтительными вариантами способов согласно изобретению посредством взаимодействия выбранного связывающегося с сывороткой лиганда с линкерной группой, присутствующей в 5'положении нуклеозида или олигонуклеотида. В некоторых случаях дцРНК, несущую аралкильный лиганд, присоединенный к 3'-концу дцРНК, получают, главным образом, посредством ковалентного присоединения мономерного структурного блока к стеклянному носителю с регулируемым размером пор через длинноцепочечную аминоалкильную группу. Затем нуклеотиды присоединяют к мономерному структурному блоку, связанному с твердым носителем, стандартными методами твердофазного синтеза. Таким мономерным структурным блоком может быть нуклеозид или другое органическое соединение, совместимое с твердофазным синтезом.

дцРНК, используемая в конъюгатах согласно изобретению, может быть получена подходящим и рутинным способом с применением хорошо известного метода твердофазного синтеза. Оборудование для такого синтеза поставляется несколькими компаниями, включая, например, Аррйеб Вю8у81ет8 (Ео81ег Сйу, СА.). Дополнительно или альтернативно могут быть применены любые другие методы такого синтеза, известные специалистам. Для получения других олигонуклеотидов, таких как фосфортиоаты и их алкилированные призводные, могут быть применены аналогичные методы, также известные специалистам.

Описание синтеза конкретных модифицированных олигонуклеотидов можно найти в следующих патентах США: в патентах США № 5138045 и 5218105, относящихся к олигонуклеотидам, конъюгированным с полиаминами; в патенте США № 5212295, относящемся к мономерам, используемым для получения олигонуклеотидов, имеющих хиральные фосфорные связи; в патентах США № 5378825 и 5541307, относящихся к олигонуклеотидам, имеющим модифицированные остовы; в патенте США № 5386023, относящемся к олигонуклеотидам с модифицированным остовом и к их получению посредством восстановительного связывания; в патенте США № 5457191, относящемся к модифицированным нуклеотидным основаниям, полученным на основе 3-деазапуриновой кольцевой системы и к методам их синтеза; в патенте США № 5459255, относящемся к модифицированным нуклеотидным основаниям, полученным на основе Ν-2-замещенных пуринов; в патенте США № 5521302, относящемся к способам получения олигонуклеотидов, имеющих хиральные фосфорные связи; в патенте США № 5539082, относящемся к нуклеиновым кислотам, связанным с пептидами; в патенте США № 5554746, относящемся к олигонуклеотидам, имеющим β-лактамовые остовы; в патенте США № 5571902, относящемся к методам и материалам для синтеза олигонуклеотидов; в патенте США № 5578718, относящемся к нуклеозидам, имеющим алкилтиогруппы, где указанные группы могут быть использованы в качестве линкеров или других групп, присоединенных в любом из различных положений нуклеозида; в патентах США № 5587361 и 5599797, относящихся к олигонуклеотидам, имеющим фосфортиоатные связи с высокой хиральной чистотой; в патенте США № 5506351, относящемся к способам получения 2'-Оалкилгуанозиновых и родственных соединений, включая 2,6-диаминопуриновые соединения; в патенте США № 5587469, относящемся к олигонуклеотидам, имеющим Ν-2-замещенные пурины; в патенте США № 5587470, относящемся к олигонуклеотидам, имеющим 3-деазапурины; в патентах США № 5223168 и 5608046, относящихся к конъюгированным 4'-десметил-нуклеозидным аналогам; в патентах США № 5602240 и 5610289, относящихся к олигонуклеотидным аналогам с модифицированным остовом; и в патентах США № 6262241 и 5459255, относящихся, ш!ег айа, к методам синтеза 2'-фторолигонуклеотидов.

В конъюгированной с лигандом дцРНК и в молекуле лиганда, несущей последовательностьспецифические связанные нуклеозиды согласно изобретению, олигонуклеотиды и олигонуклеозиды могут быть сконструированы на подходящем синтезаторе ДНК с использованием стандартных нуклеотидных или нуклеозидных предшественников или предшественников нуклеотидных или нуклеозидных конъюгатов, которые уже несут линкерную группу, предшественников конъюгатов лиганд-нуклеотид или лиганд-нуклеозид, которые уже несут молекулу лиганда, или структурных блоков, несущих ненуклеозидный лиганд.

При использовании предшественников нуклеотидных конъюгатов, уже несущих линкерную группу,

- 10 015676 обычно осуществляют синтез последовательность-специфических связанных нуклеозидов, а затем молекулу лиганда подвергают взаимодействию с линкерной группой, в результате чего образуется конъюгированный с лигандом олигонуклеотид. Олигонуклеотидные конъюгаты, несущие различные молекулы, такие как стероиды, витамины, липиды и репортерные молекулы, уже были описаны в литературе (см. заявку РСТ АО 93/07883, МапоНагап с1 а1.). В предпочтительном варианте изобретения олигонуклеотиды или связанные нуклеозиды согласно изобретению синтезируют на автоматическом синтезаторе с использованием фосфорамидитов, происходящих от конъюгатов лиганд-нуклеозид, помимо стандартных фосфорамидитов и нестандартных фосфорамидитов, которые являются коммерчески доступными и обычно используются в синтезе олигонуклеотидов.

Введение 2'-О-метильной группы, 2'-О-этильной группы, 2'-О-пропильной группы, 2'-О-аллильной группы, 2'-О-аминоалкильной группы или 2'-дезокси-2'-фтор-группы в нуклеозиды олигонуклеотида придает такому олигонуклеотиду повышенную способность к гибридизации. Кроме того, олигонуклеотиды, содержащие фосфортиоатные остовы, обладают повышенной стабильностью к нуклеазе. Таким образом, функционализированные связанные нуклеозиды согласно изобретению могут быть увеличены по своему размеру за счет включения любых из следующих компонентов: фосфортиоатного остова или 2'-О-метильной группы, 2'-О-этильной группы, 2'-О-пропильной группы, 2'-О-аминоалкильной группы, 2'-О-аллильной группы или 2'-дезокси-2'-фтор-группы. Краткий список некоторых олигонуклеотидных модификаций, известных специалистам, можно найти, например, в публикации заявки РСТ АО 200370918.

В некоторых вариантах изобретения функционализированные нуклеозидные последовательности согласно изобретению, имеющие аминогруппу у 5'-конца, получают с использованием синтезатора ДНК, а затем их подвергают взаимодействию с активным сложноэфирным производным выбранного лиганда. Активные производные сложных эфиров хорошо известны специалистам в данной области. Репрезентативными активными сложными эфирами являются Ν-гидроксисукцинимидоэфиры, сложные эфиры тетрафторфенола, сложные эфиры пентафторфенола и сложные эфиры пентахлорфенола. В результате взаимодействия аминогруппы и активного сложного эфира образуется олигонуклеотид, в котором выбранный лиганд присоединен к 5'-положению посредством линкерной группы. Аминогруппа у 5'-конца может быть введена с использованием 5'-амино-модификатора С6. В одном из вариантов изобретения, молекулы лиганда могут быть конъюгированы с олигонуклеотидами в 5'-положении с использованием конъюгата лиганд-нуклеозид-фосфорамидит, где указанный лиганд прямо или опосредованно присоединен к 5'-гидрокси-группе посредством линкера. Такие конъюгаты лиганд-нуклеозид-фосфорамидиты обычно вводят по окончании автоматизированной процедуры синтеза, в результате чего получают конъюгированный с лигандом олигонуклеотид, содержащий лиганд у 5'-конца.

Примерами модифицированных межнуклеозидных связей или остовов являются, например, фосфортиоаты, хиральные фосфортиоаты, фосфордитиоаты, фосфотриэфиры, аминоалкилфосфотриэфиры, метилфосфонаты и другие алкилфосфонаты, включая 3'-алкиленфосфонаты и хиральные фосфонаты, фосфинаты, фосфорамидаты, включая 3'-аминофосфорамидат и аминоалкилфосфорамидаты, тионофосфорамидаты, тионоалкилфосфонаты, тионоалкилфосфотриэфиры и боранофосфаты, имеющие нормальные 3'-5'-связи, 2'-5'-связанные аналоги этих соединений и аналоги, имеющие обратную полярность, где смежные пары нуклеозидных остатков имеют 3'-5'-5'-3'- или 2'-5'-5'-2'-связи. Могут быть также включены различные соли, смешанные соли и свободные кислоты.

Репрезентативными патентами США, относящимися к получению вышеописанных связей, содержащих атом фосфора, являются, но не ограничиваются ими, патенты США № 3687808; 4469863; 4476301; 5023243; 5177196; 5188897; 5264423; 5276019; 5278302; 5286717; 5321131; 5399676; 5405939; 5453496; 5455233; 5466677; 5476925; 5519126; 5536821; 5541306; 5550111; 5563253; 5571799; 5587361; 5625050 и 5697248, каждый из которых вводится в настоящее описание посредством ссылки.

Примерами модифицированных межнуклеозидных связей или остовов, не включающих атом фосфора (т. е. олигонуклеозидов), являются связи или остовы, образованные короткоцепочечным алкильными или циклоалкильными межсахарными связями, смешанным гетероатомом и алкильными или циклоалкильными межсахарными связями или одной или несколькими короткоцепочечными гетероатомными или гетероциклическими межсахарными связями. Такими молекулами являются молекулы, имеющие морфолино-связи (частично образованные из сахарной части нуклеозида); силоксановые остовы; сульфидные, сульфоксидные и сульфоновые остовы; формацетильные и тиоформацетильные остовы; метиленформацетильные и тиоформацетильные остовы; алкенсодержащие остовы; сульфаматные остовы; метилениминовые и метиленгидразиновые остовы; сульфонатные и сульфонамидные остовы; амидные остовы и другие остовы, имеющие смешанные группы Ν, О, 8 и СН₂.

Репрезентативными патентами США, относящимися к получению вышеописанных олигонуклеозидов, являются, но не ограничиваются ими, патенты США № 5034506; 5166315; 5185444; 5214134; 5216141; 5235033; 5264562; 1264564; 5405938; 5434257; 5466677; 5470967; 5489677; 5541307; 5561225; 5596086; 5602240; 5610289; 5602240; 5608046; 5610289; 5618704; 5623070; 5663312; 5633360; 5677437 и 5677439, каждый и которых вводится в настоящее описание посредством ссылки.

В некоторых случаях олигонуклеотид может быть модифицирован нелигандной группой. Различ

- 11 015676 ные нелигандные молекулы были конъюгированы с олигонуклеотидами для повышения их активности, улучшения распределения в клетках или усиления их поглощения клетками, и процедуры получения таких конъюгатов описаны в научной литературе. Указанными нелигандными молекулами являются липидные молекулы, такие как холестерин (Ье!ктдег е! а1., Ргос. №11. Асаб. 8οί. И8А, 1989, 86:6553), холевая кислота (МапоРагап е! а1., Вюогд. Меб. СРет. Ье!!., 1994, 4:1053), тиоэфир, например гексил-8тритилтиол (МапоРагап е! а1., Αηη. Ν.Υ. Асаб. 8сг, 1992, 660:306; МапоРагап е! а1., Вюогд. Меб. СРет. Ье1, 1993, 3:2765), тиохолестерин (ОРегРаикег е! а1., №с1. Ас1бк Век., 1992, 20:533), алифатическая цепь, например додекандиол или ундециловые остатки (8а1коп-ВеРтоагак е! а1., ЕМВО 1., 1991, 10:111; КаРапоу е! а1., РЕВ8 Ье!!, 1990, 259:327; 8утагсРик е! а1., ВюсЫт1е, 1993, 75:49), фосфолипид, например ди-гексадецил-рац-глицерин или 1,2-ди-О-гексадецил-рац-глицеро-3-Н-фосфонат триэтиламмония (МапоРагап е! а1. Те!гаРебгоп Ьей., 1995, 36:3651; 8Реа е! а1., №с1. Ас1бк Век., 1990, 18:3777), полиаминовая или полиэтиленгликолевая цепь (МапоРагап е! а1., №с1еок1бек & №с1еоРбек, 1995, 14:969) или адамантануксусная кислота (МапоРагап е! а1. ТейаРебгоп Ье!!., 1995, 36:3651), пальмитиловая группа (М1кРга е! а1. ВюсР1т. ВюрРук. Ас!а, 1995, 1264:229) или октадециламиновая или гексиламино-карбонилоксихолестериновая молекула (Сгоокк е! а1., 1. РРагтасо1 Ехр. ТРег., 1996, 277:923). Репрезентативные патенты США, в которых описано получение таких олигонуклеотидных конъюгатов, перечислены выше. Типичные протоколы конъюгирования включают синтез олигонуклеотидов, несущих аминолинкер в одном или нескольких положениях последовательности. Затем аминогруппу подвергают взаимодействию с молекулой, конъюгированной с использованием соответствующих связывающих или активирующих реагентов. Реакция конъюгирования может быть проведена либо с олигонуклеотидом, еще связанным с твердым носителем, либо уже отщепленным в жидкой фазе. После очистки олигонуклеотидного конъюгата с помощью ВЭЖХ обычно получают чистый конъюгат. Использование холестеринового конъюгата является особенно предпочтительным, поскольку такая молекула может улучшать доставку в клетки печени, т.е. в место, где происходит экспрессия РС8К9.

Кодируемые вектором РНКи-агенты.

дцРНК согласно изобретению могут также экспрессироваться из рекомбинантных вирусных векторов внутри клеток ш у1уо. Рекомбинантные вирусные векторы согласно изобретению включают последовательности, кодирующие дцРНК согласно изобретению, и любой подходящий промотор для экспрессии последовательностей дцРНК. Подходящими промоторами являются, например, последовательности промоторов РНК И6 или Н1 ро1 III и промотор цитомегаловируса. Выбор других подходящих промоторов может быть осуществлен самим специалистом в данной области. Рекомбинантные вирусные векторы согласно изобретению могут также содержать индуцибельные или регуляторные промоторы для экспрессии дцРНК в конкретной ткани или в конкретной внутриклеточной среде. Использование рекомбинантных вирусных векторов для доставки дцРНК согласно изобретению в клетки ш угуо более подробно обсуждается ниже.

дцРНК согласно изобретению может экспрессироваться из рекомбинантого вирусного вектора в виде двух отдельных комплементарных молекул РНК или в виде одной молекулы РНК с двумя комплементарными областями.

При этом может быть использован любой вирусный вектор, способный включать кодирующие последовательности экспрессируемой(ых) молекулы(молекул) дцРНК, например векторы, происходящие от аденовируса (АУ); аденоассоциированного вируса (ААУ); ретровирусов (например, лентивирусов (ЬУ), рабдовирусов, вируса мышиного лейкоза); вируса герпеса и т. п. Тропизм вирусных векторов может быть модифицирован путем псевдотипирования векторов оболочечными белками или другими поверхностными антигенами, происходящими от других вирусов, или путем замены, если это необходимо, различных вирусных капсидных белков.

Так, например, лентивирусные векторы согласно изобретению могут быть псевдотипированы поверхностными белками, происходящими от вируса везикулярного стоматита (У8У), вируса бешенства, вируса Эбола, вируса Мокола и т.п. ААУ-векторы согласно изобретению могут быть получены для нацеливания на различные клетки путем конструирования векторов, экспрессирующих капсидные белки различных серотипов. Так, например, ААУ-вектор, экспрессирующий капсид серотипа 2 на геноме серотипа 2, обозначается ААУ 2/2. Такой ген капсида серотипа 2 в векторе ААУ 2/2 может быть заменен геном капсида серотипа 5 с получением вектора ААУ 2/5. Методы конструирования ААУ-векторов, которые экспрессируют капсидные белки различных серотипов, известны специалистам, см., например, публикацию ВаЫпо\\йх I. Е. е! а1. (2002), I. Упо1. 76:791-801, которая во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.

Методы отбора рекомбинантных вирусных векторов, подходящих для применения в настоящем изобретении, методы встраивания последовательностей нуклеиновой кислоты для экспрессии дцРНК в векторе и методы доставки вирусного вектора в представляющие интерес клетки известны специалистам. См., например, публикации ИотРигд В. (1995), Сепе ТРегар. 2: 301-310; Едййк М.А. (1988), Вю1есРпк.|иек 6: 608-614; МШег А.И. (1990), Нит Сепе ТРегар. 1: 5-14; Апбегкоп №.Р. (1998), №!иге 392; 25-30 и ВиРшкоп И.А. е! а1., \¥а1. Сепе!. 33: 401-406, которые во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки.

- 12 015676

Предпочтительными вирусными векторами являются векторы, происходящие от Αν и ΑΑν. В особенно предпочтительном варианте изобретения дцРНК согласно изобретению экспрессируются как две отдельные комплементарные одноцепочечные молекулы РНК из рекомбинантного ΑΑν-вектора, содержащего, например, либо промоторы РНК И6 или Н1, либо промотор цитомегаловируса (СМУ).

Αν-вектор, подходящий для экспрессии дцРНК согласно изобретению, метод конструирования рекомбинантного Αν-вектора и метод доставки вектора в клетки-мишени описаны в публикации Х1а Н. е! а1. (2002), Ыа1. БюйеЬ, 20; 1006-1010.

Подходящие ΑΑν-векторы для экспрессии дцРНК согласно изобретению, методы конструирования рекомбинантного Αν-вектора и методы доставки векторов в клетки-мишени описаны в публикациях 8ати15к1 К. е! а1. (1987), 1. νίτοί. 61: 3096-3101; ЕвЬег К.1. е! а1. (1996), 1. νίτοί., 70: 520-532; 8атикк1 К. е! а1. (1989), 1. νίτοί. 63: 3822-3826; в патенте США № 5252479; в патенте США № 5139941; в международной патентной заявке \¥О 94/13788; и в международной патентной заявке \¥О 93/24641, содержание которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.

III. Фармацевтические композиции, содержащие дцРНК.

В одном из своих вариантов настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим дцРНК, описанную в настоящем изобретении, и фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтическая композиция, содержащая дцРНК, может быть использована для лечения заболеваний или расстройств, ассоциированных с экспрессией или активностью гена РС8К9, таких как патологические состояния, которые могут быть модулированы посредством ингибирования экспрессии гена РС8К9, например, гиперлипидемия. Такие фармацевтические композиции получают исходя из способа доставки. Одним из примеров являются композиции, приготовленные для доставки в печень путем парентерального введения.

Фармацевтические композиции согласно изобретению вводят в дозах, достаточных для ингибирования экспрессии гена РС8К9. Авторами настоящего изобретения было обнаружено, что благодаря своей высокой эффективности, композиции, содержащие дцРНК согласно изобретению, могут быть введены в поразительно низких дозах. Доза в 5 мг дцРНК на килограмм массы тела реципиента в день является достаточной для ингибирования или подавления экспрессии гена РС8К9 и может быть системно введена данному пациенту.

В общих чертах, подходящая доза дцРНК составляет в пределах от 0,01 до 5,0 мг на 1 кг массы тела реципиента в день, а обычно в пределах от 1 мкг до 1 мг на 1 кг массы тела в день. Фармацевтическая композиция может быть введена один раз в день, либо дцРНК может быть введена в виде двух, трех или более субдоз через определенные интервалы времени в течение дня или даже путем непрерывного вливания или доставки с помощью препарата с регулируемым высвобождением. В этом случае для достижения общей суточной дозы количество дцРНК, содержащееся в каждой субдозе, должно быть соответствующим образом снижено. Унифицированная лекарственная форма может быть также приготовлена для доставки в течение нескольких дней, например, с использованием стандартного препарата с пролонгируемым высвобождением, который обеспечивает пролонгированное высвобождение дцРНК в течение нескольких дней. Препараты с пролонгированным высвобождением хорошо известны специалистам.

Специалисту в данной области совершенно очевидно, что на выбор дозы и времени, требуемых для эффективного лечения индивидуума, могут влиять некоторые факторы, включая, но не ограничиваясь ими, тяжесть заболевания или расстройства, предварительное лечение, общее состояние здоровья и/или возраст индивидуума, а также наличие других заболеваний. Кроме того, лечение индивидуума терапевтически эффективным количеством композиции может включать один или несколько курсов лечения.

Оценка эффективности доз и времени полужизни ίη νίνο отдельных дцРНК согласно изобретению может быть осуществлена с применением стандартных методик или на основе ίη νίνο тестирования с использованием соответствующего животного-модели, как описано в настоящем изобретении.

Прогресс в области генетических исследований на мышах позволяет создать ряд мышиных моделей для исследования различных заболеваний человека, таких как патологические состояния, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии гена РС8К9. Указанные модели используются для ίη νίνο анализа дцРНК, а также для определения терапевтически эффективной дозы.

Для введения дцРНК согласно изобретению млекопитающему может быть применен любой метод. Так, например, таким методом введения может быть прямое введение; пероральное введение или парентеральное введение (например, подкожное введение, интравентрикулярное введение, внутримышечное введение, внутрибрюшинное введение или внутривенное вливание). Введение может быть осуществлено сразу (например, путем инъекции) или в течение определенного периода времени (например, путем пролонгированного вливания или введения препаратов с пролонгированным высвобождением).

Обычно при лечении млекопитающего с гиперлипидемией, молекулы дцРНК вводят системно путем парентеральной доставки. Так, например, пациенту могут быть внутривенно введены дцРНК, которые могут быть конъюгированы или не конъюгированы, либо приготовлены в виде липосом или без использования липосом. Для этого молекула дцРНК может быть приготовлена в виде композиций, таких как стерильные и нестерильные водные растворы, безводные растворы в стандартных растворителях, таких как спирты, или растворы в жидких или твердых масляных основах. Такие растворы могут также

- 13 015676 содержать буферы, разбавители и другие подходящие добавки. Для парентерального, интратекального или интравентрикулярного введения, молекула дцРНК может быть приготовлена в виде композиций, таких как стерильные водные растворы, которые могут также содержать буферы, разбавители и другие подходящие добавки (например, усилители пенетрации, соединения-носители и другие фармацевтически приемлемые носители).

Кроме того, молекулы дцРНК могут быть введены млекопитающему биологическими или небиологическими методами, описанными, например, в патенте США № 6271359. Небиологическая доставка может быть осуществлена различными методами, включая, но не ограничиваясь ими, (1) загрузку липосом молекулой дцРНК, описанной в настоящем изобретении и (2) образование комплекса молекулы дцРНК с липидами или липосомами с получением комплексов нуклеиновая кислота - липид или нуклеиновая кислота - липосома. Липосома может состоять из катионных и нейтральных липидов, обычно используемых для трансфецирования клеток ίη νίίτο. Катионные липиды могут подвергаться реакции комплексообразования (например, с переносом заряда) с отрицательно заряженными нуклеиновыми кислотами с образованием липосом. Примерами катионных липосом являются, но не ограничиваются ими, липофектин, липофектамин, липофектак и ЭОТАР. Методы получения липосом хорошо известны специалистам. Липосомные композиции могут быть получены, например, из фосфатидилхолина, димиристоилфосфатидилхолина, дипальмитоилфосфатидилхолина, димиристоилфосфатидилглицерина или диолеилфосфатидилэтаноламина. Многие липофильные агенты являются коммерчески доступными, включая липофектин® Д^йгодеи/Ейе Τесйиο1οд^е8, СагкЬаб, СайГ.) и эффектин™ (Οία^οη. Vа1еηс^а, СайГ.). Кроме того, методы системной доставки могут быть оптимизированы с использованием коммерчески доступных катионных липидов, таких как ОПАВ или ЭОТАР, каждый из которых может быть смешан с нейтральным липидом, таким как ПОРЕ или холестерин. В некоторых случаях могут быть использованы липосомы, например, описанные в публикации ТетрШм е! а1. (№1й1ге В^есИш^^у, 15: 647-652 (1997)). В других вариантах изобретения для доставки ίη νίνο и ех νίνο могут быть использованы поликатионы, такие как полиэтиленимин (ΈοΠίΙη е! а1., Г Ат. 8ο^ №р11го1. 7: 1728 (1996)).

Дополнительную информацию, относящуюся к использованию липосом для доставки нуклеиновых кислот, можно найти в патенте США № 6271359, в публикации заявки РСТ \УО 96/40964 и в публикации Μοιτίδ^, Ό. е! а1. 2005, №11. В^есйшЕ 23(8): 1002-7.

Биологическая доставка может быть осуществлена различными методами, включая, но не ограничиваясь ими, использование вирусных векторов. Так, например, вирусные векторы (например, аденовирусные и герпесвирусные векторы) могут быть использованы для доставки молекул дцРНК в клетки печени. Стандартные методы молекулярной биологии могут быть применены для введения одной или нескольких описанных здесь дцРНК в один из множества различных вирусных векторов, предварительно полученных для доставки нуклеиновой кислоты в клетки. Такие вирусные векторы могут быть использованы для доставки одной или нескольких дцРНК в клетки, например, путем инфицирования.

дцРНК согласно изобретению могут быть приготовлены в фармацевтически приемлемом носителе или разбавителе. Термин фармацевтически приемлемый носитель (также называемый здесь наполнителем) означает фармацевтически приемлемый растворитель, суспендирующий агент или любой другой фармакологически инертный носитель. Фармацевтически приемлемые носители могут быть жидкими или твердыми и могут быть выбраны в зависимости от выбранного метода введения с учетом желаемого объема, нужной консистенции и другого подходящего способа доставки, а также от химических свойств. Типичными фармацевтически приемлемыми носителями являются, например, но не ограничиваются ими, вода; физиологический раствор; связующие агенты (например, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза); наполнители (например, лактоза и другие сахара, желатин или сульфат кальция); замасливатели (например, крахмал, полиэтиленгликоль или ацетат натрия); дезинтегрирующие агенты (например, крахмал или натрийсодержащий гликолят крахмала) и смачивающие агенты (например, лаурилсульфат натрия).

Кроме того, дцРНК, нацеленная на ген РС8К9, может быть приготовлена в виде композиций, содержащих дцРНК, смешанную, инкапсулированную, конъюгированную или как-либо иначе ассоциированную с другими молекулами, молекулярными структурами или смесями нуклеиновых кислот. Так, например, композиция, содержащая один или несколько дцРНК-агентов, нацеленных на ген РС8К9, может содержать другие терапевтические средства, например средства, снижающие уровни липидов (например, статины).

Способы лечения заболеваний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии РС8К9.

Описанные здесь способы и композиции могут быть использованы для лечения заболеваний и состояний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии гена РС8К9. Так, например, описанные здесь композиции могут быть использованы для лечения гиперлипидемии и других форм нарушений липидного обмена, таких как гиперхолистеринемия, гипертриглицеридемия, а также патологических состояний, ассоциированных с этими расстройствами, таких как болезни сердца и крови.

Способы ингибирования экспрессии гена РС8К9.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способу ингибирования экспрессии

- 14 015676 гена РС8К9 у млекопитающего. Такой способ включает введение композиции согласно изобретению млекопитающему для ингибирования экспрессии гена-мишени РС8К9. Благодаря своей высокой специфичности, дцРНК согласно изобретению специфически нацелены на РНК (первичные или процессированные) гена-мишени РС8К9. Композиции и способы для ингибирования экспрессии этих генов РС8К9 с использованием дцРНК могут быть применены, как описано в настоящем патенте.

В одном из вариантов изобретения указанный способ включает введение композиции, содержащей дцРНК, где указанная дцРНК содержит нуклеотидную последовательность, комплементарную по меньшей мере части РНК-транскрипта гена РС8К9 у млекопитающего, подвергаемого лечению. Если подвергаемым лечению организмом является организм млекопитающего, такого как человек, то композиция может быть введена любыми методами, известными специалистам, включая, но не ограничиваясь ими, пероральное или парентеральное введение, включая внутривенное введение, внутримышечное введение, подкожное введение, чрескожное введение и введение в дыхательные пути (с помощью аэрозоля). В предпочтительных вариантах изобретения указанные композиции вводят путем внутривенного вливания или внутривенной инъекции.

Если это не оговорено особо, то все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют общепринятые значения, понятные среднему специалисту в области, к которой относится настоящее изобретение. Хотя для осуществления настоящего изобретения или для анализов, проводимых в соответствии с настоящим изобретением, могут быть использованы методы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным здесь методам и материалам, однако предпочтительными являются методы и материалы, описанные ниже. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие упомянутые здесь работы во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки. В случае возникновения противоречий они могут быть урегулированы в соответствии с представленным описанием, включая определения. Кроме того, материалы, методы и примеры приводятся лишь в иллюстративных целях и не должны рассматриваться как ограничение настоящего изобретения.

Примеры

Прогулка по геному гена РС8К9.

Конструирование киРНК осуществляли для ее идентификации в двух отдельных процедурах отбора:

a) киРНК, нацеленных на мРНК человеческого и мышиного или крысиного РС8К9, и

b) всех человеческих реактивных киРНК с предсказанной специфичностью к гену-мишени РС8К9.

Были использованы последовательности мРНК для человеческого, мышиного и крысиного РС8К9: человеческая последовательность ΝΜ 174936.2 была использована в качестве эталонной последовательности в процессе осуществления процедуры отбора киРНК.

19-мерные фрагменты, которые являются консервативными для последовательностей мРНК, человеческих и мышиных и человеческих и крысиных РС8К9 были идентифицированы в первой стадии, в результате чего были отобраны киРНК, которые перекрестно реагируют с человеческими и мышиными мишенями, и киРНК, которые перекрестно реагируют с человеческими и крысиными мишенями.

Во второй процедуре отбора были идентифицированы киРНК, специфически нацеленные на человеческий РС8К9. Все возможные 19-мерные последовательности человеческого РС8К9 были экстрагированы и определены как кандидаты на последовательности-мишени. Последовательности, перекрестно реагирующие с человеческими и обезьяньими мишенями и с мышиными, крысиными, человеческими и обезьяньими мишенями, перечислены в табл. 1 и 2. Химически модифицированные варианты этих последовательностей и их активность в анализах ίη νίίτο и ίη νίνο также перечислены в табл. 1 и 2 и в примерах, представленных на фиг. 2-8.

Для ранговой оценки кандидатов последовательностей-мишеней и их соответствующих киРНК и для отбора подходящих последовательностей, их предсказанный потенциал взаимодействия с нерелевантными мишенями (о££-!агде! ро!еп!1а1) был взят за ранговый параметр. киРНК с низким потенциалом нерелевантного взаимодействия были определены как предпочтительные и было сделано предположение, что они являются специфичными ίη νί\Ό.

Для предсказания киРНК-специфического потенциала нерелевантного взаимодействия были сделаны следующие предположения, что:

1) положения 2-9 (в направлении 5'^3') цепи (уникальная область) могут вносить более важный вклад в потенциал нерелевантного взаимодействия, чем остальная последовательность (область за пределами уникальной области и область сайта расщепления);

2) положения 10 и 11 (в направлении 5'^3') цепи (область сайта расщепления) могут вносить более важный вклад в потенциал нерелевантного взаимодействия, чем область за пределами уникальной области;

3) положения 1 и 19 каждой цепи не являются подходящими для нерелевантных взаимодействий;

4) показатель нерелевантности может быть вычислен для каждого гена и для каждой цепи исходя из комплементарности последовательности цепи киРНК к последовательности данного гена и из положения несоответствия;

5) число предсказанных нерелевантных мишеней, а также наиболее высокий показатель нерелевантности должен рассматриваться как потенциальная нерелевантность;

- 15 015676

6) показатели нерелевантности являются более достоверными для оценки потенциала нерелевантности, чем число нерелевантных мишеней;

7) если принять во внимание возможное нарушение активности смысловой цепи в результате введения внутренних модификаций, то следует рассматривать только потенциал нерелевантных взаимодействий антисмысловой цепи.

Для идентификации потенциальных нерелевантных генов 19-мерные последовательностикандидаты были подвергнуты скринингу на гомологию с известными человеческими последовательностями мРНК.

Для вычисления показателя нерелевантности были выявлены следующие нерелевантные свойства для каждой 19-мерной исходной последовательности каждого нерелевантного гена:

число несоответствий в неуникальной области;

число несоответствий в уникальной области;

число несоответствий в области сайта расщепления.

Показатель нерелевантности вычисляли исходя из предположений 1-3 по следующей формуле:

Показатель нерелевантности=число несоответствий в уникальной области· 10+число несоответствий в сайте расщепления· 1,2+число несоответствий в неуникальной области· 1.

Самый нерелевантный ген для каждой киРНК, соответствующей исходной 19-мерной последовательности, был определен как ген с наиболее низким показателем нерелевантности. В соответствии с этим наиболее низкий показатель нерелевантности был определен как наиболее достоверная оценка нерелевантности для каждой киРНК.

Синтез дцРНК.

Источник реагентов.

Если источник реагентов конкретно не указан в настоящем изобретении, то это означает, что такой реагент может быть получен от любого поставщика реагентов для исследований в области молекулярной биологии в соответствии со стандартами качества/чистоты, установленными для применения в молекулярной биологии.

Синтез киРНК.

Одноцепочечные РНК были получены методом твердофазного синтеза в масштабе 1 мкмоль на синтезаторе Ехребйе 8909 (Аррйей Β^ο5у5ΐет5, Арр1ега ОеиЕсйктй СтЬН, ЭагтйаФ, Ссгтану) с использованием стекла с регулируемым размером пор (СРС, 500 А, ΓΓοΙίβο Вюсйепие СтЬН, НатЬигд, Сегт;ту) в качестве твердого носителя. РНК и РНК, содержащую 2'-О-метил-нуклеотиды, получали методом твердофазного синтеза с применением соответствующих фосфорамидитов и 2'-Ометилфосфорамидитов соответственно (Рюй^ Вюсйепие СтЬН, НатЬигд, Сегтану). Эти структурные блоки были введены в выбранные сайты последовательности олигорибонуклеотидной цепи стандартным химическим нуклеозид-фосфорамидитным методом, описанным в современных протоколах по химии нуклеиновых кислот, Веаисаде, 8.Ь. еΐ а1. (Ебгк.), Ιοίιη \УПеу & δοηκ, 1пс., Ыете ΥοιΈ Ν.Υ., И8А. Фосфортиоатные связи были введены путем замены раствора йодного окислителя раствором реагента Бокажа (Сйгиасйет МФ Ώαδ^ο^, ИК) в ацетонитриле (1%). Дополнительные вспомогательные реагенты были получены от компании Ма11тскгой1 Вакег (Спекйет, Сегтаиу).

Снятие защиты и очистку неочищенных олигорибонуклеотидов с помощью анионообменной ВЭЖХ проводили в соответствии со стандартными процедурами. Выходы и концентрации определяли по УФ-поглощению раствора соответствующей РНК на длине волны 260 нм с помощью спектрофотометра (ЭИ 640В, Весктап ί,’οιιίΕΓ СтЬН, ийег8сЫе1Вйе1т, Сегтаиу). Двухцепочечную РНК получали путем смешивания эквимолярного раствора комплементарных цепей в буфере для отжига (20 мМ фосфат натрия, рН 6,8; 100 мМ хлорид натрия), а затем нагревали на водяной бане при 85-90°С в течение 3 мин и охлаждали до комнатной температуры в течение 3-4 ч. Раствор гибридизованной РНК хранили при -20°С вплоть до ее использования.

Для синтеза киРНК, конъюгированных с холестерином в 3'-положении (также обозначаемых здесь <Ζ?1ιο1-3'), использовали соответствующим образом модифицированный твердый носитель. Модифицированный твердый носитель получала следующим образом.

Диэтил-2-азабутан-1,4-дикарбоксилат АА

О

^н о

ДА

4,7 М водный раствор гидроксида натрия (50 мл) добавляли в перемешиваемый охлажденный льдом раствор гидрохлорида этилглицината (32,19 г, 0,23 моль) в воде (50 мл). Затем добавляли этилакрилат (23,1 г, 0,23 моль) и смесь перемешивали при комнатной температуре до завершения реакции, на что указывала ТСХ. Через 19 ч раствор распределяли с дихлорметаном (3x100 мл). Органический слой сушили безводным сульфатом натрия, фильтровали и упаривали. Остаток подвергали перегонке с получением АА (28,8 г, 61%).

- 16 015676

Этиловый эфир 3-{этоксикарбонилметил-[6-(9Н-флуорен-9-илметоксикарбониламино)гексаноил]амино}пропионовой кислоты АВ

АВ

Гтос-6-аминогексановую кислоту (9,12 г, 25,83 ммоль) растворяли в дихлорметане (50 мл) и охлаждали на льду. К полученному раствору добавляли диизопропилкарбодиимид (3,25 г, 3,99 мл, 25,83 ммоль) при 0°С. Затем добавляли диэтилазабутан-1,4-дикарбоксилат (5 г, 24,6 ммоль) и диметиламинопиридин (0,305 г, 2,5 ммоль). Раствор доводили до комнатной температуры и перемешивали еще 6 ч. Завершение реакции определяли с помощью ТСХ. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и добавляли этилацетат для осаждения диизопропилмочевины. Суспензию фильтровали. Фильтрат промывали 5% водной соляной кислотой, 5% бикарбонатом натрия и водой. Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенного продукта, который затем очищали с помощью колоночной хроматографии (50% ЕЮАС/гексан), в результате чего получали 11,87 г (88%) АВ.

Этиловый эфир 3-[(6-аминогексаноил)этоксикарбонилметиламино]пропионовой кислоты АС

АС

Этиловый эфир 3-{этоксикарбонилметил-[6-(9Н-флуорен-9-илметоксикарбониламино)гексаноил]амино }пропионовой кислоты АВ (11,5 г, 21,3 ммоль) растворяли в 20% пиперидине в диметилформамиде при 0°С. Раствор перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, а затем к остатку добавляли воду и продукт экстрагировали этилацетатом. Неочищенный продукт очищали путем его превращения в гидрохлоридную соль.

Этиловый эфир 3-({6-[17-(1,5-диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17тетрадекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-илоксикарбониламино]гексаноил}этоксикарбонилметиламино)пропионовой кислоты АО

Гидрохлоридную соль этилового эфира 3-[(6-аминогексаноил)этоксикарбонилметиламино]пропионовой кислоты АС (4,7 г, 14,8 ммоль) растворяли в дихлорметане. Суспензию охлаждали до 0°С на льду. К этой суспензии добавляли диизопропилэтиламин (3,87 г, 5,2 мл, 30 ммоль). К полученному раствору добавляли холестерилхлорформиат (6,675 г, 14,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Затем реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и промывали 10% соляной кислотой. Полученный продукт очищали флэш-хроматографией (10,3 г, 92%).

- 17 015676

Этиловый эфир 1-{6-[17-(1,5-диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17тетрадекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-илоксикарбониламино]гексаноил}-4-оксопирролидин-3карбоновой кислоты АЕ

трет-Бутоксид калия (1,1 г, 9,8 ммоль) суспендировали в 30 мл сухого толуола. Смесь охлаждали до 0°С на льду и медленно добавляли 5 г (6,6 ммоль) диэфира АО при перемешивании в течение 20 мин. В процессе добавления температуру поддерживали ниже 5°С. Перемешивание продолжали в течение 30 мин при 0°С и добавляли 1 мл ледяной уксусной кислоты, а затем сразу добавляли 4 г ЫаН₂РО₄-Н₂О в 40 мл воды. Полученную смесь два раза экстрагировали 100 мл дихлорметана и объединенные органические экстракты два раза промывали 10 мл фосфатного буфера, а затем сушили и упаривали досуха. Остаток растворяли в 60 мл толуола, охлаждали до 0°С и экстрагировали тремя 50-миллилитровыми порциями холодного карбонатного буфера, рН 9,5. Водные экстракты доводили до рН 3 добавлением фосфорной кислоты и экстрагировали пятью 40-миллилитровыми порциями хлороформа, которые затем объединяли, сушили и упаривали досуха. Остаток очищали колоночной хроматографией с использованием 25% этилацетата/гексана, в результате чего получали 1,9 г Ь-кетоэфира (39%).

17-(1,5-Диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-тетрадекагидро-1Нциклопента[а] фенантрен-3 -иловый эфир [6-(3 -гидрокси-4-гидроксиметилпирролидин-1 -ил)-6-оксогексил] карбаминовой кислоты АР

В кипящую смесь Ь-кетоэфира АЕ (Ь,5 г, 2,2 ммоль) и борогидрида натрия (0,226 г, 6 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) по каплям в течение 1 ч добавляли метанол (2 мл). Перемешивание продолжали при температуре флегмы в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли 1н. НС1 (12,5 мл) и смесь экстрагировали этилацетатом (3x40 мл). Объединенный этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме с получением продукта, который очищали колоночной хроматографией (10% МеОН/СНС1₃) (89%).

- 18 015676

17-(1,5-Диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11.12,13,14,15,16,17-тетрадекагидро-1Нциклопента[а] фенантрен-3 -иловый эфир (6-{ 3 -[бис-(4-метоксифенил)фенилметоксиметил]-4-гидроксипирролидин-1-ил}-6-оксигексил)карбаминовой кислоты АС

Диол АЕ (1,25 г, 1,994 ммоль) сушили путем выпаривания с пиридином (2x5 мл) в вакууме. Затем при перемешивании добавляли безводный пиридин (10 мл) и 4,4'-диметокситритилхлорид (0,724 г, 2,13 ммоль). Реакцию осуществляли при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакцию гасили добавлением метанола. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и к остатку добавляли дихлорметан (50 мл). Органический слой промывали 1 М водным раствором бикарбоната натрия. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаточный пиридин удаляли путем выпаривания с толуолом. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (2% МеОН/хлороформ, Ш=0,5 в 5% МеОН/СНС1₃) (1,75 г, 95%).

Моно(4-[бис-(4-метоксифенил)фенилметоксиметил]-1-{6-[17-(1,5-диметилгексил)-10,13-диметил2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-тетрадекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3илоксикарбониламино]гексаноил}-пирролидин-3-ил)эфир янтарной кислоты АН

Соединение АС (1,0 г, 1,05 ммоль) смешивали с ангидридом янтарной кислоты (0,150 г, 1,5 ммоль) и ОМАР (0,073 г, 0,6 ммоль), а затем сушили в вакууме при 40°С в течение ночи. Смесь растворяли в безводном дихлорэтане (3 мл), добавляли триэтиламин (0,318 г, 0,440 мл, 3,15 ммоль) и раствор перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 16 ч. Затем раствор разбавляли дихлорметаном (40 мл) и промывали охлажденной льдом водной лимонной кислотой (5 мас.%, 30 мл) и водой (2x20 мл). Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали досуха. Остаток использовали в следующей стадии без очистки.

Дериватизированный холестерином СРС А1

Сукцинат АН (0,254 г, 0,242 ммоль) растворяли в смеси дихлорметана/ацетонитрила (3:2, 3 мл). К полученному раствору последовательно добавляли ОМАР (0,0296 г, 0,242 ммоль) в ацетонитриле (1,25 мл) и 2,2'-дитио-бис-(5-нитропиридин) (0,075 г, 0,242 ммоль) в ацетонитриле/дихлорэтане (3:1, 1,25 мл). К полученному раствору добавляли трифенилфосфин (0,064 г, 0,242 ммоль) в ацетонитриле (0,6 мл). Реакционная смесь приобретала ярко-оранжевую окраску. Раствор быстро перемешивали в шарнирном шейкере (5 мин). Затем добавляли длинноцепочечный алкиламин-СРС (ЬСАА-СРО) (1,5 г,

- 19 015676 мМ). Суспензию перемешивали в течение 2 ч. СРС фильтровали через воронку из спеченного стекла и последовательно промывали ацетонитрилом, дихлорметаном и эфиром. Непрореагировавшие аминогруппы маскировали с использованием ангидрида уксусной кислоты/пиридина. Конечную загрузку СРС определяли по интенсивности УФ-излучения (37 мМ/г).

Синтез киРНК, несущих группу бис-дециламида 5'-12-додекановой кислоты (обозначаемую здесь 5'-С32-) или группу 5'-холестерилового производного (обозначаемую здесь 5-С1ю1-). проводили как описано в \УО 2004/065601, за исключением того, что в случае холестерилового производного, для введения фосфортиоатной связи у 5'-конца олигомера нуклеиновой кислоты проводили стадию окисления с использованием реагента Бокажа.

Последовательности нуклеиновой кислоты представлены ниже в соответствии со стандартной номенклатурой и имеют конкретные аббревиатуры, указанные в табл. 1-1.

Таблица 1-1 Аббревиатуры нуклеотидных мономеров, используемых в репрезентативных последовательностях нуклеиновой кислоты. Следует отметить, что эти мономеры, если они присутствуют в олигонуклеотиде, связаны друг с другом 5'-3'-фосфордиэфирными связями.

Аббревиатура’	Нуклеотид(ы)
Ά,	а	2’-дезокси-аденозин-5'^фосфат, аденозин-5'фосфат
с,	с	2'-дезокси-цитидин-5'-фосфат, цитидин-5'фосфат
С,	д	2'-дезокси-гуанозин-5'-фосфат, гуанозин-5'фосфат
т,	е	2'-дезокси-тимидин-5'-фосфат, тимидин-5'фосфат
и,	и	21-дезокси-уридин-5’-фосфат, уридин-5'фосфат
Ν,	п	любой 2'-дезокси-нуклеотид/нуклеотид (С, А, С, или Т, д, а, с или и)
Ат	2’-0-метиладенозин-5'-фосфат

Ст	2’-0-метилцитидин-5’-фосфат
Ст	2'-О-метилгуанозин-5’-фосфат
Тт	2'-0-метил-тимидин-5'-фосфат
Цт	2'-О-метилуридин-51-фосфат
А£	2'-фтор-2 1-дезокси-аденозин-5'-фосфат
СЕ	21-фтор-2’-дезокси-цитидин-5'-фосфат
СЕ	2'-фтор-2'-дезокси-гуанозин-5'-фосфат
ТЕ	2'-фтор-2'-дезокси-тимидин-5 1-фосфат
и£	21-фтор-2’-деэокси-уридин-5’-фосфат
А, с, с, Т, и, а, с, 2' 3	подчеркнуто: нуклеозид-5'-фосфортиоат
ат, ст, дт, £т, ит	подчеркнуто: 2-0-метил-нуклеозид-5'- фосфортиоат

^а Заглавные буквы означают 2'-дезоксирибонуклеотиды (ДНК), строчные группы означают рибонуклеиды (РНК).

Скрининг киРНК РС8К9 в клетках НиН7, НерС2, Не1а и в первичных гепатоцитах обезьян выявил в высокой степени активные последовательности.

Клетки НиН-7 были получены из банка клеток 1СКВ (Японская коллекция биологических источников для исследований) (8Ыи)цки, 1арап, сак № 1СКВ0403). Клетки культивировали в среде МЕМ Дульбекко (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, са1. № Р0435), в которую были добавлены 10% фетальная телячья сыворотка (РС8) (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, са1. № 80115), 100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, сак Νο, А2213) и 2 мМ Ь-глутамина (ВюсЕгот АС,

ВегЕп, Сегтапу, сак. Νο К0282), при 37°С в атмосфере с 5% СО₂ в инкубаторе с повышенной влажностью (Негаеик НЕКАсе11, Кепбго ЬаЬогакогу РгобисЦ Ьапдеп8е1Ьо1б, Сегтапу). Клетки НерС2 и клетки Не1а получали из Американской коллекции типовых культур (Кос^Е1е, Мб., сак. №, НВ-8065) и культивировали в МЕМ (С1Ьсо 1№бгодеп, КагНгцЕе, Сегтапу, сак. №, 21090-022), в которую были добавлены 10% фетальная телячья сыворотка (РС8) (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, сак. № 80115), 100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, сак. №, А2213), 1хзаменимых аминокислот (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, сак. № К-0293) и 1 мМ пирувата натрия (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, сак. № Ь-0473), при 37°С в атмосфере с 5% СО₂ в инкубаторе с повышенной влажностью (Негаеик НЕКАсе11, Кепбго ЬаЬогакогу Ргобискз, Ьапдеп8е1Ьо1б, Сегтапу).

Для киРНК-трансфекции, клетки НиН7, НерС2 или Не1а высевали в 96-луночные планшеты при плотности 2,0х10⁴ клеток/лунку и сразу трансфецировали. киРНК-трансфекцию (30 нМ для скрининга одной дозы) осуществляли с использованием липофектамина 2000 Вптбгодеп СтЬН, КагкгцЕе, Сегтапу, сак. № 11668-019), как описано производителем.

- 20 015676

Через 24 ч после трансфекции клетки НиН7 и НерС2 подвергали лизису и уровни мРНК РС8К9 оценивали с использованием набора ОнапОдепе Ехр1оге КН (Сепо§ргес!га, ЭнтЬаПоп С1гс1е Егетоп!, И8А, са! № ОС-000-02) в соответствии с протоколом. Уровни мРНК РС8К9 нормализовали по мРНК САР-ЭН. Для каждой киРНК получали восемь независимых результатов. В качестве контроля использовали киРНК-дуплексы, не являющиеся родственными гену РС8К9. Активность данного РС8К9специфического киРНК-дуплекса выражали как процент концентрации мРНК РС8К9 в обработанных клетках по отношению к концентрации мРНК РС8К9 в клетках, обработанных контрольным киРНКдуплексом.

Первичные гепатоциты собакоподобных обезьян (криоконсервированные) получали от компании 1п νίΐΐΌ ТесЬпо1од1е8, 1пс. (ВаШтоге, Мб., И8А, са! № М00305) и культивировали в среде 1п УйгоСКО СР Мебшт (са! № Ζ99029) при 37°С в атмосфере с 5% СО₂ в инкубаторе с повышенной влажностью.

Для киРНК-трансфекции первичные клетки собакоподобных обезьян высевали на покрытые коллагеном 96-луночные планшеты (ЕБНег 8с1еп!Шс, са!. № 08-774-5) при плотности 3,5х10⁴ клеток на лунку и сразу трансфецировали. киРНК-трансфекцию (восемь 2-кратных серийных разведений начиная с 30 нМ) осуществляли в дубликатах с использованием липофектамина 2000 (1пуЦгодеп СтЬН, КагНгцйе, Сегтапу, са!. № 11668-019), как описано производителем.

Через 16 ч после трансфекции среду заменяли свежей средой 1п УйгоСКО СР, содержащей смесь антибиотиков Тогребо АпбЫобс Μίχ (1п νίΙΐΌ Тесйпо1од1е8, 1пс, са!. № Ζ99000).

Через 24 ч после замены среды первичные клетки собакоподобных обезьян подвергали лизису и уровни мРНК РС8К9 оценивали с использованием набора ОнапОдепе Ехр1оге К1! (Сепо§ргес1га, ЭитЬаг!оп С1гс1е Егетоп!, И8А, са!. № ОС-000-02) в соответствии с протоколом. Уровни мРНК РС8К9 нормализовали по мРНК САРЭН. Затем нормализованные отношения РС8К9/САРЭН сравнивали с отношением РС8К9/САРЭН для контрольных клеток, обработанных только липофектамином 2000.

В табл. 1, 2 (и на фиг. 6) систематизированы результаты и приводятся примеры ш νίΙΐΌ скрининга в различных клеточных линиях при различных дозах. Сайленсинг транскрипта РС8К9 выражали как процент от остального транскрипта, присутствующего в данной дозе. В высокой степени активными последовательностями являются последовательности, в которых присутствовало менее чем 70% остаточного транскрипта после обработки данной киРНК в дозе, равной 100 нМ или менее. Очень активными последовательностями являются последовательности, в которых присутствовало менее чем 60% остаточного транскрипта после обработки данной киРНК в дозе, равной 100 нМ или менее. Активными последовательностями являются последовательности, в которых присутствовало менее чем 85% остаточного транскрипта после обработки высокой дозой (100 нМ). Репрезентативные активные киРНК, полученные в виде липидоидных препаратов, описанных ниже, были также скринированы у мышей ш уко. Последовательности, которые были активными ш уйго, также обычно обнаруживали активность ш уко (см., например, фиг. 6).

Скрининг 1п νί\Ό эффективности киРНК РС8К9.

Процедура получения препаратов.

Для получения наночастиц липид-киРНК использовали липидоид Ь№-01-4НС1 (МА 1487) (фиг. 1), холестерин (8|дта-А1бпс11) и ПЭГ-церамид С16 (ЛуапО Ро1аг Ыр1б8). Были получены маточные этаноловые растворы каждого из следующих компонентов: Ь№-01 - 133 мг/мл; холестерина - 25 мг/мл, ПЭГ-церамида С16 - 100 мг/мл. Затем маточные растворы Е№-01, холестерина и ПЭГ-церамида С16 объединяли в молярном отношении 42:48:10. Объединенный липидный раствор быстро смешивали с водной киРНК (в ацетате натрия, рН 5) так, чтобы конечная концентрация этанола составляла 35-45%, а конечная концентрации ацетата натрия составляла 100-300 мМ. Наночастицы липид-киРНК спонтанно образовывались после смешивания. В зависимости от нужного распределения частиц по размеру полученную смесь наночастиц в некоторых случаях подвергали экструзии через поликарбонатную мембрану (с отсечкой 100 нМ) на поршневом термоэкструдере (Ырех Ехйибег, №г111егп Ыр1б8, 1пс). В других случаях стадию экструзии не проводили. Затем этанол удаляли и одновременно проводили замену буфера либо путем диализа, либо путем фильтрации в тангенциальном потоке. Буфер заменяли забуференным фосфатом физиологическим раствором (РВ8), рН 7,2.

Характеризация препаратов.

Препараты, полученные либо стандартным методом, либо неэкструзионным методом, охарактеризовывали аналогичным образом. Препараты сначала охарактеризовывали путем визуального наблюдения. Эти препараты представляли собой беловатые прозрачные растворы, не содержащие агрегированных включений или осадка. Размер частиц и гранулометрический состав липидных наночастиц измеряли по динамическому рассеянию света с использованием Макегп Ζе!а8^ζе^ Nаπо Ζ8 (Макет, И8А). Частицы должны иметь размер 20-300 нм, а в идеальном случае 40-100 нм. Распределение частиц по размеру должно быть унимодальным. Общую концентрацию киРНК в данном препарате, а также наличие иммобилизованной фракции оценивали с помощью анализа на вытеснение метки-красителя. Образец препарата киРНК инкубировали с РНК-связывающим красителем КзЬодгееп (Мо1еси1аг РгоЬек) в присутствии или в отсутствие поверхностно-активного вещества, разрушающего препарат, 0,5% тритона-х100. Общее

- 21 015676 количество киРНК в данном препарате определяли по сигналу, передаваемому от образца, содержащего поверхностно-активное вещество, в соответствии со стандартной кривой.

Иммобилизованную фракцию определяли путем вычитания содержания свободной киРНК (измеренного по сигналу в отсутствие поверхностно-активного вещества) из общего содержания киРНК. Процент иммобилизованной киРНК обычно составляет >85%.

Ударная доза.

Мышам С57/ВЬ6 (5 мышей на группу, в возрасте 8-10 недель, СНаг1е5 К|уег ЬаЬога!опе8, ΜΑ) в хвостовую вену иглой 270 инъецировали ударную дозу препарата киРНК. киРНК приготавливали в Б-^-01 (а затем диализовали против РВ8) при концентрации 0,5 мг/мл, что позволяло вводить дозу 5 мг/кг в объеме 10 мкл/г массы тела. Перед введением дозы мышей помещали под инфракрасную лампу приблизительно на 3 мин для облегчения инъекции.

Через 48 ч после введения дозы мышей умерщвляли путем СО₂-асфиксии. Затем из ретроорбитальной области брали 0,2 мл крови, после чего печень собирали и замораживали в жидком азоте. Сыворотку и печень хранили при -80°С.

Замороженную печень измельчали с использованием холодильника 6850/криогенной мельницы (8РЕХ Сеп1пРгер, 1пс) и порошок хранили при -80°С до проведения анализа.

Уровни мРНК РС8К9 определяли методом продуцирования разветвленных ДНК с использованием набора, поставляемого ОиапООепе Кеадеп! 8у§!ет (Оепокресйа), в соответствии с протоколом. 10-20 мг порошка замороженной печени подвергали лизису в 600 мкл 0,16 мкг/мл протеиназы К (Еркепйе, #МРКК092) в растворе для лизиса ткани и клеток (ЕркеШге, #МТС096Н) при 65°С в течение 3 ч. Затем к 90 мкл рабочего реагента для лизиса добавляли 10 мкл лизатов (1 объем маточной смеси для лизиса в двух объемах воды) и смесь инкубировали при 52°С в течение ночи на планшетах для иммобилизации Оепокресйа с наборами зондов, специфичных к мышиному РС8К9 и мышиному ОАРЭН или циклофилину В. Последовательности нуклеиновой кислоты для активатора захвата (СЕ), активатора метки (ЬЕ) и блокирующих (ВЬ) зондов отбирали из последовательностей нуклеиновой кислоты РС8К9, ОАРЭН и циклофиллина В с помощью компьютерной программы ОиапООепе РгоЬеПеыдпег 2.0 (Оепокресйа, Ртетоп!, Сайр, И8А, са!. № 00-002-02). Хемолюминесценцию считывали на устройстве У1с!от2-ЫдЬ! (Регкт Е1тег) в относительных единицах силы света. Отношение мРНК РС8К9 к мРНК ОАРЭН или циклофилина В в лизатах печени усредняли для каждой группы обработки и сравнивали с отношением для контрольной группы, обработанной РВ8, или контрольной группы, обработанной неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII).

Общий уровень холестерина в сыворотке мышей измеряли с использованием набора 8!апВю С1ю1еЧего1 Ыс.|шСо1ог (8!апВю ЬаЬога!огу, Воете, Тех., И8А) в соответствии с инструкциями производителей. Измерения проводили на счетчике ^с!ог2 1420 Мц1!йаЬе1 Соип!ег (Регкт Е1тег) на 495 нм.

Примеры киРНК РС8К9, приготовленных в липосомах Р-^-0Р тестировали ш νί\Ό в мышиной модели. Этот эксперимент проводили при дозе киРНК 5 мг/кг, и по меньшей мере 10 киРНК РС8К9 обнаруживали более чем 40% разрушенной мРНК РС8К9 по сравнению с контрольной группой, обработанной РВ8, а контрольная группа, обработанная неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII), не обнаруживала какого-либо эффекта (фиг. 2-5). Сайленсинг транскрипта РС8К9 также коррелировал со снижением уровня холестерина у этих животных (фиг. 4-5). Кроме того, между молекулами, которые были активны 1п νίΙΐΌ и 1п νίνΌ, наблюдалась значительная корреляция (фиг. 6). Последовательности, содержащие различные химические модификации, также скринировали т νίΙΐΌ (табл. 1 и 2) и ш νί\Ό. Так, например, последовательности 9314 и 9318 с меньшим числом модификаций, и варианты последовательностей 9314-(10792, 10793 и 10796); 9318-(10794, 10795, 10797) с большим числом модификаций тестировали т νίΙΐΌ (в первичных гепатоцитах обезьян) или т νί\Ό (9314 и 10792) в препарате ΡΝΓ-01. На фиг. 7 (см. также табл. 1 и 2) показано, что все родительские молекулы 9314 и 9318 и их модифицированные варианты являются активными ш νίΙΐΌ. На фиг. 8 в качестве примера показано, что родительская последовательность 9314 и последовательность 10792 с большим числом модификаций являются активными т νίνΌ, на что указывает 50-60% сайленсинг эндогенного РС8К9 у мышей. На фиг. 9 также проиллюстрирована активность других химически модифицированных вариантов родительских последовательностей 9314 и 10792.

дцРНК-экспрессирующие векторы.

В другом аспекте изобретения РС8К9-специфические молекулы дцРНК, которые модулируют активность экспрессии гена РС8К9, экспрессируются от транскрипционных единиц, встроенных в ДНКили РНК-векторы (см., например, Сои!иге, А. е! а1., ТЮ. (1996), 12:5-10; 8кШегп, А., е! а1., публикацию международной заявки РСТ νθ 00/22113, Сопгай, публикацию международной заявки РСТ νθ 00/22114, Сопгай, и патент США № 6054299). Эти трансгены могут быть введены в виде линейной конструкции, кольцевой плазмиды или вирусного вектора, которые могут быть включены в геном хозяина и могут наследоваться как интегрированный трансген. Этот трансген может быть также сконструирован так, чтобы он наследовался как внехромосомная плазмида (Оакктапп, е! а1., Ргос. №11. Асай. 8ск И8А

- 22 015676 (1995), 92:1292).

Отдельные цепи дцРНК могут транскрибироваться промоторами на двух отдельных экспрессионных векторах и котрансфецироваться в клетку-мишень. Альтернативно, каждая отдельная цепь дцРНК может транскрибироваться промоторами, которые присутствуют на одной и той же экспрессионной плазмиде. В предпочтительном варианте изобретения дцРНК экспрессируется как инвертированный повтор, связанный посредством линкерной полинуклеотидной последовательности, в результате чего дцРНК имеет структуру типа стебля и петли.

Рекомбинантными дцРНК-экспрессирующими векторами обычно являются плазмидные ДНК или вирусные векторы. дцРНК-экспрессирующие вирусные векторы могут быть сконструированы на основе вирусов, таких как, но не ограничивающихся ими, аденоассоциированный вирус (обзор см., например, Ми/ус/ка, е1 а1., Сигг. Шркк Мюго. Iттииο1. (1992), 158:97-129); аденовирус (см., например, Вегкиег, е1 а1., ВюТесктдиек (1998), 6:616, Κο^^εΜ е1 а1. (1991, 8с1еисе 252:431-434) и Κο^^εΗ е1 а1. (1992), Се11 68:143-155); или альфавирус, а также другие вирусы, известные специалистам. Ретровирусы были использованы для введения различных генов в различные клетки многих типов, включая эпителиальные клетки 1и νίΐτο или т νίνο (см., например, Едййк, е1 а1., 8с1еисе (1985), 230:1395-1398; Όπποκ аиб МиШдаи, Ргос. №а11. Асаб. 8с1. И8А (1998), 85:6460-6464; Уйтои е1 а1., 1988, Ргос. №11. Асаб. 8а. И8А 85:30143018; Аттерам е1 а1., 1990, Ргос. №11. Асаб. 8а. И8А. 87:61416145; НиЬег е1 а1., 1991, Ргос. №11. Асаб. 8а. И8А 88:8039-8043; Репу е1 а1., 1991, Ргос. №а11. Асаб. 8а. И8А 88:8377-8381; С1юу\с111и1у е1 а1., 1991, 8с1еисе 254:1802-1805; νаη Веиксесйет, е1 а1. 1992, Ргос. №11. Асаб. 8с1. И8А 89:7640-19; Кау е1 а1., 1992, Нитаи Сеие Тйегару 3:641-647; Όηί е1 а1., 1992, Ргос. №а11. Асаб. 8с1. И8А 89:10892-10895; Н\\п е1 а1., 1993, 1. 1^^1. 150:4104-4115; патент США № 4868116; патент США № 4980286; заявку РСТ УО 89/07136; заявку РСТ УО 89/02468; заявку РСТ УО 89/05345 и заявку РСТ УО 92/07573). Рекомбинантные ретровирусные векторы, способные переносить и экспрессировать гены, встроенные в геном клетки, могут быть продуцированы путем трансфекции рекомбинантного ретровирусного генома в подходящие упаковывающие клеточные линии, такие как РА317 и Рк1-СК1Р (^тейе е1 а1., 1991, Нитаи Сеие Тйегару 2:5-10; Сове е1 а1., 1984, Ргос. №а11. Асаб. 8а, И8А 81:6349). Рекомбинантные аденовирусные векторы могут быть использованы для инфицирования клеток и тканей широкого ряда у восприимчивых хозяев (например, крыс, хомячков, собак и шимпанзе) (Нки е1 а1., 1992. 1. Ιπίεαίοιικ Б1кеаке, 166:769), а также они имеют то преимущество, что для их инфицирования не требуются митотически активные клетки.

Промотором, регулирующим экспрессию дцРНК в плазмидной ДНК или в вирусном векторе согласно изобретению, может быть промотор гена эукариотической РНК-полимеразы I (например, промотор рибосомной РНК), промотор РНК-полимеразы II (например, ранний промотор СМУ или промотор актина или промотор мяРНК И1) или обычно промотор РНК-полимеразы III (например, промотор мяРНК И6 или РНК 78К) или прокариотический промотор, например промотор Т7, при условии, что экспрессионная плазмида также кодирует РНК-полимеразу Т7, необходимую для транскрипции с промотора Т7. Промотор может также направлять экспрессию трансгена в поджелудочную железу (например, последовательность, регулирующая поступление инсулина в поджелудочную железу (ВиссЫт е1 а1., 1986, Ргос. №а11. Асаб. 8а. И8А 83:2511-2515)).

Кроме того, экспрессия трансгена может соответствующим образом регулироваться, например, с использованием индуцибельной регуляторной последовательности и экспрессионных систем, таких как регуляторная последовательность, восприимчивая к некоторым физиологическим регуляторам, например уровням глюкозы в крови или гормонам (^οс11е^ιу е1 а1., 1994, РА8ЕВ 1. 8:20-24). Такими индуцибельными экспрессионными системами, подходящими для регуляции экспрессии трансгенов в клетках или у млекопитающих, являются системы регуляции под действием экдизонов, эстрогена, прогестерона, тетрациклина, химических индукторов димеризации и изопропил-бета-01-тиогалактопиранозида (ЕРТС). Специалист в данной области может самостоятельно выбрать соответствующую регуляторную/промоторную последовательность в зависимости от целей использования дцРНК-трансгена.

Обычно доставку рекомбинантных векторов, способных экспрессировать молекулы дцРНК, осуществляют, как описано ниже, и после этого они интегрируются в клетках-мишенях. Альтернативно, могут быть использованы вирусные векторы, обеспечивающие временную экспрессию молекул дцРНК. Такие векторы, при необходимости, могут быть введены повторно. После экспрессии дцРНК связываются с РНК-мишенью и модулируют ее функцию или экспрессиию. Доставка дцРНК-экспрессирующих векторов может быть системной, например, она может быть осуществлена путем внутривенного или внутримышечного введения, или путем введения в клетки-мишени, эксплантированные у пациента, с последующим введением этих клеток снова пациенту, или любыми другими методами, позволяющими осуществлять введение в нужные клетки-мишени.

дцРНК-экспрессирующие ДНК-плазмиды обычно трансфецируют в клетки-мишени в виде комплекса с катионными липидными носителями (например, олигофектамином) или с некатионными липидными носителями (например, Тгаикй-ТКО™). В настоящем изобретении также рассматриваются множественные липидные трансфекции для дцРНК-опосредуемого подавления различных областеймишеней одного гена РС8К9 или множества генов РС8К9 в течение одной недели или более. Успешное

- 23 015676 введение векторов согласно изобретению в клетки-хозяева может быть оценено различными известными методами. Так, например, временная трансфекция может быть выявлена по сигналу репортера, такого как флуоресцентный маркер, например белок, флуоресцирующий в зеленом диапазоне спектра (СЕР). Стабильная трансфекция клеток ех νίνο может быть обеспечена с использованием маркеров, которые сообщают трансфецированным клеткам резистентность к конкретным внешним факторам (например, к антибиотикам и лекарственным средствам), такую как резистентность к гигромицину В.

РС8К9-специфические молекулы дцРНК могут быть также встроены в векторы и использованы в качестве векторов, применяемых в генотерапии для лечения человека. Векторы для генотерапии могут быть доставлены индивидууму, например, путем внутривенной инъекции, местного введения (см. патент США № 5328470) или стереотаксической инъекции (см., например, Сйеп е1 а1. (1994), Ргос. №111. Асаб. 8с1. И8Л 91:3054-3057). Фармацевтический препарат векторов, применяемый в генотерапии, может включать вектор для генотерапии в приемлемом разбавителе, либо он может содержать матрицу с пролонгированным высвобождением, в которую может быть введен носитель для доставки генов. Альтернативно, если вектор для доставки полноразмерного гена, например ретровирусный вектор, может быть получен в интактной форме из рекомбинантных клеток, то такой фармацевтический препарат может включать одну или несколько клеток, продуцирующих систему доставки гена.

Специалистам в данной области очевидно, что помимо методов и композиций, конкретно описанных в настоящем изобретении, существуют и другие методы и композиции, которые могут быть применены для осуществления настоящего изобретения, полный объем которого определен в прилагаемой формуле изобретения.

Таблица 1

ПбЛОИЛНИЯВ человеческой пос ги рег№ ΝΜ_1?4936	Последовательность смысловой Цепи ί5’· З')1	5ЕО ΙΠ ΝΟ:	Послелоьэтелънскть аипкМЫОЛОвой иепн(5-3'*1	5Еб 10 ΝΟ:	Збсодатг )Г|пита	Средний процеятостамктося мРНК* транскрипта при соответствующей мэшентрашти киЕНК в длвтх различных типов	1СХ« в Н«рО2 [«М|	1С50В гепатоцитах со6в№· лолобньа обезьян
100 нМгНерО2	30	нМ/НерО2	30 ЯМ?
2-20	АССодсоисоАОбСосиСАТт	1	исАсссссисоАсоиссситт	2	АО- 15220				35
] 5-33	сссисдисоииссАОСгСостт	3	ссоссиосААСсдиСАССотт	4	АО- 15275				56
16-34	ссисАиссииссАбссосстт	5	ссссссиосААССАисАсгтг	6	АР15301				70
30-48	сссссссссссссиисАОип	7	АсиСААссюссссоссссстт	8	АО15276				42
31-49	соосссссссссиисАоиитг	9	ААСиОАДСССССОССССССТТ	10	АР 15302				32
32-50	ссссссссссоиисдсиисзт	11	СААСиСДАССОССОСССССГТ	12	АР- 15303				37
40-58	сссиисАсиисАОСЮисистг	В	САСАССсиСААСиСААСООТГ	14	АО- 15221				30
43-61	ииСАсиисАОСоисъсАССк	15	осисАСАССсиоААсиОААТт	16	АР- 15413				61
82-100	сиоАСАсиосюиссоссссп·	17	ссссссодсссАсисисАСтт	18	АР- 15304				70
100-118	сссссос асссс иссииссгт	19	йСААсаАсессиссссюсстт	20	АР- 15305				36
101-119	осссссАСбссиссииссАТт	21	иосААСоАСоссиссссюстт	22	АР- 15306				20
102-120	ссоюсАСссоиссииосАбтт	23	си<ХАА00АС<х?сиссс<ютт	24	АО- 15307				38
105 123	<зсАСоеоисоииссА<лСАСтт	25	сиссиссАдссАСОСоисстт	26	АР- 15277				50
135-153	исссАассАсюАииссосотгг	27	ссссюААиссиобсиоосАТхт	28	АР- 9526	74	89
135-153	□сге А Ссс А ОСАииссСгсСГВ Т	29	сосооААиссиоосиоосАТзт	30	'АР- 9652		97
136-154	сссасю: а оз Аииссоссстат	31	осссосААиссисюсиссстэт	32	АР- 9519		78
136-154	сссА&хАОСАшкхСсСсТгТ	33	ссоссюААиссисссисюстц	34	АР9645		66
138-156	СА<зссАООАииссбСОсест5Т	35	осссасосААиссисасистгт	36	АР9523		55
138-156	сАСссАООАиииСсОсСсГзТ	37	{гсссссссАдиссиодсистзт	38	АО9649		60
585-203	АесиссиосАСАсиссисстзт	39	оюАСЮАсисиссАОСАСситзт	40	АР9569		112
185-203	АСсиссиОсАсАСиссиссТ^Т	41	сюАССАсисиОсАССАСситБТ	42	АР9695		102

- 24 015676

Положения в ч^псгмаделой ПРС-ТЛ ретХз ΜΝί_174936	Последовательность смысловой цепя{_5’-з·^	8Е<2 ГО ΝΟ:	ПсхлсдоБаге.тьностъ антисмысловой пени (5-31^	5Е<3 ГО ΝΟ:	Эбзавчекк дупгкка	Средний процент оставшегося иРЦКтранскритттэ при соответствующей концентрации кнРМК в клетках различных типов	1С5Ов НерО2 (иМ]	1С50 в гепатоцитах собакоподобных обезьян (нМ|
100 нМ/НерС2	30 яМ/НерС2	3 ΜΚί/Ηβρΰ	1 30 нМ/ НеЬэ
205-223	САССССААСОСиСААСЮССгТТ	43	ссссииоАоссииососиоп	44	ΑΌ15222				75
208-226	СССААСОСиСААСЮССССОТТ	45	сосссссиисАоссииосоп	46	АО- 15278				78
210-228	СААСССиСААОССОССОССТТ	47	ооссюсбсс^исАОСсииотт	48	АО- 15178				83
232-250	(зиосАССососАСссссистт	49	ОАСЮСссу<к;сс&оиссАСТг	50	АО15308				«4
233-251	иссАССососАСОсесиситт	51	АСАбсссоиоссссюиссАТт	52	АО- 15223				67
234-252	ССАСС0СССАС06ССиС1АП	53	иАОАОСССО1<<СМ2О<51’ССТТ	54	АО- 15309				34
235-253	<ЗАСс<зсссАССюссисиАсп	55	сиАОАССсссиосососисп	56	АО- 15279				44
236-254	АССосасАСооссисиАСОп	57	ссиАОАСсссоиосососитт	58	АО15194				63
237-255	ссс€ссА€ссссисиАОзип	59	АСсиАОАСОССсиосссооп	60	АР- 15310				42
238-256	ссссс Асебссиои асс истт	61	САСсиАОАОбссоиссбсотт	62	Αϋ15311				30
239-257	ссосАСсоссисиАОоисип	63	АОАССОАОАСЮССОиОСССТТ	64	Αϋ- 15392				18
240-258	сосдсссссисиАОсисисп	65	одсАСсиАОАОСсссиосотт	66	АО- 15312				21
248-266	сисилосисиссисоссАОтт	67	СиОССбАООАСАССиАОАОГТ	68	Αϋ- 15313				19
249-267	исилосисиссисоссАСсп	69	ССиССССАСОАСАССиАОАП	70	АО- 15280				81
250-268	сидсизисиссисбсСАСЮАП	71	иссиосссАОСАбАссидотт	72	Αϋ- 15267				82
252-270	Асбисис<ъссссА<кЗАСАгт	73	иоиссиосссАООАОАСсшт	74	АО15314				32
258-276	ССиССССАСОАСАОСААССТТ	75	соииосисиссисхххЗАССП	76	АО15315				74
300-318	соисАОсиссАОСссюисстзт	77	ооАСсоссиооАСсиоАСбТгТ	78	АО- 9624		94
300-318	<0 исАСсиссАОСсСКи иссТ зТ	79	соАССОссипсАОсиоАСотзт	80	Αϋ9750		96
301-319	оисАСсиссАООссюисситзт	81	АОСАССОССиООАОСиСАСТзТ	82	АО- 9623	43	66
301-319	ОисАСсисс АОСгсССиссиТзТ	83	АООАССОССиООАСЗСиОАСТзТ	84	Αϋ- 9749		(05
370-388	аососсссиоазсАОбАссп	85	ссиссиосссАСОСнХ'СССтт	86	АР- 15384				48
408-426	ссдсюиосиоазАСссиштзт	81	СААСОсиАОСАССАОсисстьТ	88	АО- 9607		32	28		0,20
408-426	ССАОсиСтбибсиАСссииСТзТ	89	сААСКтСи АСсАСс АСгССгССТ57	90	АО9733		78	73
41М29	осиосиосидсссискзсоитзт	91	АСОСААО<дСиАОСАССАССТ5Т	92	Αϋ· 9524		23	28		0.07
411-429	СсиССцСсиАОссииСгсСиТзТ	93	АССсААСССиАСсАСсАОСТ:!	94	АО9650		91	90
412-430	сиссиссиАсесииосоиитзт	95	ААСОСААОССиАССАССАОЬТ	96	АР- 9520		23	32
412-430	сисоиосилсссииссоиитгт	97	ААСОСААООСиАОСАССАОТзТ	98	АО9520		23
412-430	сиСОиОсиАСссииСсСииТ5Т	99	ААССсААСССиАСсАСсАбТзТ	100	АО9646		97	108
416-434	иосиАсссииссоиисссАТзт	101	ПСООААСОСААООСиАССАТзТ	102	АО9608		37
416-434	иСсиАОссииСгсСииСсСАТзТ	103	иСООААСОсААСКЗСиАСсАТзТ	104	АО9734		91
419-437	иАсссиисссиисссАсадТзт	105	иссисооААСосААСОсиАТгт	106	АО9546		32
419-437	иАбссииСсбиисс(иА<ЗС!АТ5Т	107	иССиСОбААСОиААСОСиАТзТ	108	АО9672		57
439-457	САССОССиООСССААССАСГТ	109	оиосиисооссАбоссоистт	НО	АО- 15385				54
447-465	ОССССаАОСАСССОАОСАСП	111	оиссисоооиосииссосстт	112	АО- 15393				31
448-466	ССССААССАССССАОСАССП	113	соиосисссоиссииссостг	114	АО- 15316				37
449-467	ССОААССАССССАССАССОТТ	115	сссиасисссоиосиисйсп	116	АО- 15317				37
458^76	ССОАОСАССЮААССАСАОСП	117	осисиооиоссоиссиссоп	Н8	АО- 15318				63
484-502	САСсосиоссссААООА исгт	119	САиссииоососАосооиотт	120	Αϋ- 15195				45
486-504	ссосиоссссААООАисссп	121	сослиссишхзсос Аоссо п	122	АО- 15224				57
487-505	сосиссоссААСОАиссоитт	123	АСОолиссиисюсосАоссп	124	АО- 15188				42
489-507	сиососсААСюлиссоисотт	125	есАС<ЮАиссиио<3€ССАОтт	126	АО- 15225				51

- 25 015676

Положения в человеческой рег)й ΝΜ.174936	Последовательность смысловой цели (5‘-3')1	5ΕΩ ΙΟ ΝΟ:	Последовательность антисмысловой цепи($’-3)1	8Е<? ГО ΝΟ:	С&эдтаме дупгккз	Средний процент оставшегося мРНКтрлнекриптэ при соответствую щей концентрации киРНК в клетках раалил пых типов	[С50в НерО2 [нМ]	£50 в гепатоцитах сосано подо&ных обезьян (чМ)
100 нМ-НерО^	30 «М-ЫерОЗ	нЬ№ерО2	30 нМ·' НеЪа
500-518	лиссоиосАСгсиисссиостт	127	ССАСЮСААССиССАССОАЦГТ	128	АО15281				89
509-527	ссииоссиссюдссиАСситг	129	АСОиАССиСССАСОСААССТТ	130	дц- 15282				75
542-560	АСЗАОАСССАССиСиСССАТТ	131	иосоАСАсаиссюисисситт	132	АО- 15319				61
543-561	ссАСАСССАССисисослотт	133	сцссоАолооиоосисисстт	134	ΑΕ- Ι 5226				56
544-562	слсАсссАСсисисосАситт	135	АСиоссАОАОсиаосисистт	136	АЕ>- 15271				25
549-567	ссАСсисисосАоиСАСАотт	137	сисисАсисссАОАОсисогг	138	АО- 15283				25
552-570	ссисисоСАсисАСАССсстт	139	ссбСисиаАсиоссАбАС<зтт	140	АО- 15284				64
553-571	СиСЦСССАСиСАСАССССАТГ	141	иосасисицАсцсссАСАОтг	142	Αϋ- 15189				17
554-572	исисссАсисАСАС.спсАстг	143	оиосссисиоАСцоссАОАтт	144	АО- 15227				62
555-573	сисосАсисАОАЦсосАситзт	145	Асиссосисисдсисссдстуг	146	АО- 9547		31	29		0,20
555-573	сисСоАОисАСАСсбсАсиТзТ	147	АоиосссисиоАсиосоАСТзт	148	АО9673		56	5?
558-576	ССАЦиСАСАОСССАСибССВТ	149	сосАСгиссосисиоАсиссгйТ	150	Αϋ- 9548		54	60
558-576	СсАОисАСАОсСсАсиОссТзТ	151	салсиосссиаюАсиссткт	152	АО 9674		36	57
606-624	оос ди лссис асс аао а ιχτδΤ	153	САисипооисАСоидиссстьт	154	АО 9529		60
606-624	СССЛиАссгсДссААСАрсЦТ	155	одисиисоисАСЮиАиссстзт	156	АО- 9655		140
659-6 77	иссисдАОА иоАоиооссдтгт	157	иссссдсисАисииСАССАТзТ	158	АО- 9605		27	31		0,27
659-677	иООиСААОАиОАСиСасСАТБТ	159	иссссАсисАисиисдСслтвТ	160	АО9731		31	31		0Д2
663-681	СААСлислсиссссАссиотзТ	161	САСюиссссАазсдисиистБТ	162	АО- 9596		37
663-681	СААОАиОАСиСгОсОАсбаСТвТ	163	сАСоисоссАсиолисиистзт	164	АО- 9722		76
704-722	ссСАшисбАсиАСАиссАТзТ	165	исолисиАоисоАСлиоостзт	166	АО 9583		42
704-722	сссАиОисОАсиАсАисСАТвТ	167	исоАиоиАцисоАсАиссстгт	168	АО- 9709		104				Ζ4

718-736	диссдасАСОАсиссисиствт	169	сдодсюАсиссиссисоАШУг	170	ЛО- 9579		1)3
718-736	АисСЛССАШлАсиссисиСТзТ	171	сАСАССАоъссиссисоАиы	172	АО- 9705		81
758-776	ссдАСсисоАССссАииАСТт	|73	оиАдиссссиссАСсиисстт	174	Αϋ- 15394				32
759-777	сдАСсиоадссссАиидсстт	175	соидлиссссцссАбсцистт	176	АС- 15196				72
760 778	ААСсисоАОСоаАииАссстт	177	сссиАлиссссиссАссиитт	178	Αϋ- 15197				85
777 795	сссиссАСсаиАСссоссотт	179	соссссоиАссцисоАСССТТ	180	АО- 15198				71
782-800	САСОСиАССООССОбАиСАЪТ	181	ислиссссссосидссоиотзТ	182	А0- 9609	66	71
782-800	сА сСС иА е^ССЮсОС А иСАТзТ	183	исАиссоссссцнАССоистзт	184	АО- 9735		115
783-801	АССОиАССОСОССОАиСААЪТ	185	иисдисссссссоиАсссшуг	186	АО9537		145
783-801	А сСгб иАссСОСсОСА110 А А ТзТ	187	ищАиссссссосцдссоитзт	188	АО9663		102
784 802	сев и а ссооосооа ис а литят	189	а иисд иссосссскз оассстзТ	190	АО- 9528		ИЗ
784-802	с &3 и А ссСЮ Ос СС А иС А А чТ 5 Т	191	диисАисссссс<к1иАССОтзТ	192	Αϋ- 9654		107
785-803	ссидссссоссодиаАлиАвт	193	идиисАиссосссоси ассп зт	194	9515		49
785-803	{ЗСиАссСОСсССАиСААиАТдТ	195	иА и ис а иссссссо с цасстзт	196	Αϋ- 9641		92
786-804	СиАССССОСОСАибААЦАСТвТ	197	оиАиисАиссссссссцАСТхТ	198	Αϋ- 9514		57
786 804	СгцАссОСОсСгСАцС А АцДсТбТ	199	аиАиисАЦссбссссоиАсът	200	АО- 9640		89
788-806	АССаСССССАиаААЦАССАТ$Т	201	ибсилиисАиссосссскзитзт	202	АО- 9530		75
788-806	АссСОСсСбАибААиАСсАТ^Т	203	иоСиАиисАиссоссссйитгТ	204	АО- 9656		77
789-807	сссосгСсюдцаААидссАствт	205	сиссидиисАисссссссотуТ	206	АО- 9538	79	80
789-807	ссСССтсССАиОААиАссАСГаТ	207	сиооиАиисдцссоссссст5Т	208	АО- 9664		53
825-843	ссиссиосАссиоиАисистхт	209	ОАбдиАСАССиССАССАООТ5Т	210	АО- 9598	69	$3

- 26 015676

ТТсло^чння в чедовенеской пос-та рвг№ ΝΜ.Π4936	Последовательность емыслодок цели (У-з)1	5Е9 10 N0:	ПостгедовЕтепыистъ антлсмыслОЕмОЙ □етпт ГОЗ')3	5Е9 10 ΝΟ	Эбздечегеа: ДугШексз	Средний Процент огГавшегося мРНК транскрипта присктветсгвчощей Концентрации ккРНК вклепках различных ТНПСЬ	ГСТОв НерЙ2 [нМ]	Κ50 в гепатоцитах собакополобных обезьян (нМ)
100 нМИерСЕ	30 нМ/НерС>2	3 нМ/Нер5	30 нМг ши
«25-843	ссиОбиООАОСиСиАиеисТзТ	211	ОАОАиАсАССиСсАСсАСОТ$Т	212	АО9724		127
82б-«44	сиооиаоАбоиоидисисстзЗ	213	ССАСАиАСАССиССАССАОТзТ	214	АО9625	58	88
826-844	сиООиССА<ЗСиСиАисиссТ5Т	215	<ЗС АСАиАсАССГЛ?< АСсАСГзТ	216	АО- 9751		60
«27-845	исоиосАСюисиАисисситвТ	217	АСйАСАиАСАССиССАССАТ5Т	218	АО- 9556		46
827 845	иООиСЮ АСОиСи АисиссиТзТ	219	АС0А0АиАсАССиСсАСсАТ5Т	220	Αϋ- 9682		38
828-846	соиооАСюисиАисиссиАТзт	221	илсоАОдиАСАСсиссАССТзт	222	АО- 9539	56	63
828 846	СОиССгАООиСиАисиссиАТзТ	223	цАйОАдАиАсАССиСсАССТзТ	224	АО9665		83
831 849	ссАОсисиАисиссиАСдгат	225	сисиАОСАСдилСАСсисстзт	226	АО9517		36
831-849	СИЗАССиСиАисиссиАСАсТзТ	227	ОиСиАССАОАиАсАССиССТ5Т	228	АО9643		40
833-851	дссиоиАисиссиАСАСАСгвт	229	ои<311сиАООАСАиАСАСсит5Г	230	АО- 9610		36	34		0,04
833-851	АбСиСгцАисиссиЛОАсАсТзТ	231	биСПСиАбСАСАиАсАССиЪТ	232	АО- 9736		22	29		0,04
833-851	АГ&СФОГиАГиОиССсиГаСЦаСГаСтт	233	р еиГгиГсиГаС1еАТ8АП±А1сАГсСГиТ5Т	234	АЭ- 14681				33
«33-851	АОСПЮиСАиГСЛЖГСЮГАОАСГАСГГ^Т	235	сигоигсшоабАОАСГАСГАСГсллтзт	236	АО1469!				27
833-85!	Αβ (ЗиСвА и СиСс иаОэ С а<ГТ5 Т	237	р-^иТвиГсиГаОТ^А^АЕиАГсАЕсСГи ГзТ	238	АО- 14701				32
833-831	А £.0 μ ОиАи СиСс ЩО аС аСТ $Т	239	оигсшсгигАаслоАигАСЕАОсги^т	240	АО14711				33
833-851	А^РКЭГиАГиСГиСКийОГаСГаСГТэТ	241	ОиОиСиаСба£АиАСАс<-иТ $Т	242	АО- 14721				22
833-851	АСоикииысюгжплАОАСЕАСГГзт	243	0исиСиэ60аеАиАСАссиТ$Т	244	АО- 14731				21
833-851	А^биСиАиСиСсиаОаСаСТзТ	245	<ЗиСиСиаб<ла§ АиАСАссиТзТ	246	АО- 14741				22
833-85!	СГсАкСГсиЕсАЕ'иАГдОЕсСГиОСйАПзТ	247	р 1<1сАГ^<гГсСГ|1А{и01аСйе.С-Г|ЯЗГТ5Т	248	А Ο- Ι 5087				37
833-851	с<ГАсгасгиялАи/АсссгсшюсАТзт	249	и1СЕсгА<юс₽лигАигаАО<зоигссп5Т	250	АП- 15097				51
833-851	СсАсСсисАиАёСсСиОйАТзТ	251	р-иС1сА^<51гСГиАп16^1£СГи<ЗГсТ8Т	252	АО 15107				26 :

- 27 015676

Поле же нияв человечеохей гюс-тя рсгХг ΝΜ_ 174936	Последовательность Омысдовоц цепи	8Ер Ю ΝΟ:	£1СнУ1еДОБЙТйЛЬКМтъ антномыслофОЙ иелн (5-31^	5ЕР ΙΟ ΝΟ:	Утнтй дуплекса	Средний процент оставшегося мРНК· транскрипта при соответствующей концентрации киРНК т клеттйх различных типов	1С50в НерС2 |нМ]	1С50в гепатоцитах ссбздогтодебных обезьян (яМ)
100 нМНерОЗ	30 егМ/НерСЗ	κΜ»ΉβρΟ2	30 нМ. Нейэ
833-851	СсАсСсПсАиАдСсС и<л£ АТ ьТ	253	С№ГАСИХ1€{ССАиЮАОСОи:Г1СИ5Т	254	АО15117				28
833-85)	СйАГсСГсиГсАп^А^СкС/иОГаАГТзТ	255	иССАС^сСиаиОАСКл<ли®сТзТ	256	АО- 15127				33
833-851	СС1АСГС1СШГС(АиМОССГСШГССАТ5Т	257	иССАСесСиаиСАСССидсТзТ	258	АО15137				54
833-851	СсАсСсЪсАиА^ОсСцС^АТзТ	259	иССАбесСиаиСАООСи^сТзТ	260	Αϋ15147				52
836-854	исилисиссиАСАСАССАСТзт	261	сиссисисидсЮАОАиАСАЪт	262	АО9516		94
836-854	иСиАисиссиАСАсАссАб-ТзТ	263	СибСиоиСиАССАСАиАсАТ5Т	264	АО9642		105
840-858	исиссидбАсассАосАиАТзт	265	идиссиссисисиАб<ЗАаАТ&т	266	Αϋ- 9562		46	51
840-858	исиССиАОАсАссАСсАиАТ$Т	267	идиосибСтисиСиАСКгАОАГзТ	26«	Αϋ- 9688		26	34		4,20
840-858	ил и ГсС ήιΑ А А ГсСГаО Ге А ГиА ПьТ	269	р-иАЕиСГеиГдСГиСГиСГиАГвСГэСГаВТ	270	АО- 14677				за
840-858	иГСГиГСК^АСАСГАСОАОСТАПГАТзТ	271	υιχυίοοίυίϋουίσυίΟίυΓΑΟΟΑΟΑΤίΐ	272	АО- 14687				52
840-85«	исЦсСиАЕАсАсСаСсАиАТзТ	273	р иАГиС&иГеСГиеГцСЕиАГбС&ОГаПТ	274	АО- 14697				35
840-858	1>е ПсСи АцАе Ас Са<3 с Ан А Т 5Т	275	игдсютялссигаигсязгАООАСАТ&т	276	АО14707				58
«40-85«	иГ<и(еС?иАа(АГсА£сСГаО£сАГиА1Т5Т	277	СА11ССиеОи?иСиАОСабаТ2Т	278	АО1л7!7				42
840-858	иязгигсгсгигАбАсглсязгАссглигАВт	279	иАиосивоигисиАОСа^аТзт	280	АО- 14727				50
840-85«	ЦсисСиА^АсАсСаСсАиАТзТ	281	иАПССивСи’^иСиАСбайаТ'аТ	282	АО14737				32
840-858	ДГдСРсСЕСГМ^иБАИаиГиСГдОГГэТ	283	р-сСГдАГаиЬАГаСГиСТсАГяСГсСГиТзТ	284	АО15083				16
840-85«	А(КгСгс£иях}АсигигигАппггскизт5т	285	СГС1СААи(АААСЛЛСГС5АССС1'СГиГГ^Т	286	АО15093				24
840-85«	А^СсСиОйА^иииаииС^СТзТ	287	р-сС Г^АГаб ЬА£аС 1иС1е Αίβΰ ίς£ίυΤ$Т	288	АО15103				11
840-858	АеОсСиС^еиииэииСеотзт	289	сгстодд ЩААдсгигсоАСЮсРсгиазт	290	АО- 15113				34
840-858	А£«О£сСТиСГеА^и1йи£эиП1СГя(ЗП’5Т	291	СССААиаААсуССАСОссиТхТ	292	АО15123				19
840-858	АС<зсйсц1йэсА<зиюш1Аиги?сЮ(Зт$т	293	СС<3 ААиаААсиССАСЮссиТ зТ	294	АО- 15133				15
840-858	А5,<ЗсСиб§А2.иииаии€£бТзТ	295	СССААцаДАсиССАССссиТ5Т	296	АО- 15143				16
841-859	сиссиАСАСАССАССдиАСт$т	297	сидисгсисоисисиАСбАСТвт	298	Αϋ9521		50
841-859	сиесиАбЛсАссАОсАиАеТаТ	299	Сидисси^иоисиАССАСТзт	зею	АО9647		62
842-860	иссиА0АСАссАССАидсАТ5Т	301	исидисхгиссиоисиАбСАТзТ	302	АО9611		48
842-860	иссиА<ЗЛсАссАОсАиАсАТ&Т	303	иеидиссиосиснХнАсбАТЕТ	304	АО9737		68
843-861	ССиАС.АСАССАССлиАСАСТБГ	305	сисиАиссиссцсисиАсстзт	306	АО- 9592	46	55
843-861	оси АСАсАсс АСсАиАс АСТзТ	307	сиОиАиссиссисисиАОстзт	308	АО9718		78
847-865	сасассаосаидсАОАсистзТ	309	САсисисиАиосбооисистзт	310	АО9561		64
847-865	САсАссАСсАиАсАСАСиСТзТ	ЗП	сАсисисиАИСсиосиоисвт	312	АО9687		84
855-873	С А и АСАС АС ис АСС АССССТзТ	313	ссосиосисАСсссосАистт	314	АО9636		42	41		2,10
855-873	с А и А с АС А СиС А ссАссСС ТзТ	335	ссссискФсАсисиоиАист?!	316	АО9762		9	28		0,40
860-878	АСАСиСАССАСССССАААиТзТ	317	дииисссосисюисАсисит$т	318	АО9540		45
860-87«	АС АС иС АссЛссб СС Л Л ЛиЪТ	319	Αΐ пшссссгсиоспоАсисивт	320	АО- 9666		81
801-379	ОАОбб АССАбСббОА АД истуг	321	САииисссоеиосисАСпстзТ	322	АО9535	48	73
861-879	С АС 11(3 А С£ А ссСИЗС А А А исТьТ	323	ОАиписссссиотисАСистзт	324	АО9661		83
863-881	ОиОАССАСС6<ЗОАААЦССАТ$Т	325	исоАиипохсюиобисАСът	326	АО9559		35
863-881	(лсбАссАссСгбСААДисОАТзТ	327	исодииисссссиооисАСтзт	328	АО- 9685		77
865-883	САССАССбОСААДиСбДОбТаТ	329	ссисслииисссаоисоист.т	330	АО- 9533		100
865-883	САссАссОСЮАААисСАССТзТ 1 331	ссиссдииисссссисюистзт	332	АО9659		«8
866-884	АССАСССООААА иССАСССТ?!	333	сссиссАниисссссисситзт	334	АО- 9612		122
866-884	Ас< ДссССС А АДисС АСгОСТ $Т	335	сссисслииссссссисситзт	336	Αϋ9738		83

- 28 015676

Положения в человеческой ТГОС-ТМ регЛ? ЬГМ_174936	Последовательность смысловой цепи (5-3')1	8ЕО П> ΝΟ:	Последовательность ЭЯГИСМЫатовоЙ иепи(5-37^	5Ё0 ГО ΝΟ:	Обсвичечв дуютага	Средний процент оставшегося мРНктраяскршпа при соответствующей концентрации ки₽НК в мзегках различных типов	ЮЭв Нер52 (нМ1	1С50в гепатоцитах собэтопозкйяых обезьян (нМ)
160 нЬ4/ИерО(	30 нМНер<3	3 нМ/НерО	30 2 нН' НеЬа
867-885	ССАССаОСАААиССАССССТзТ	337	бсссиссАииисссосиоотвТ	33«	АО9557	75	96
867-885	ссАссСОаАААис<ЗАСК1СсТ5Т	339	осссиссАииисссосиостзт	340	АО9683		48
875-893	АААЬССАСЮССАСШиСАиЪТ	341	диОАСССиссссиссА1ги1ггзТ	342	АС- 9531		31	32		0,53
875-893	АЛАисОАОСКгсАОССисДиТзТ	343	АисдсссиссссисоАииътгт	344	АО9657		23	29		0?66
875-893	А£аАГиС1£А£еа(вСйС1Т£ОСиСйи(Т5Т	345	р-аиГ^ГсО&и^ГсСГиС^АЛхОГиТзГ	346	АС- 14673				Й1
$75-893	А А А и/СГС АСОССГА 0С01ЖГА О ГГзТ	347	дийАСК/оплг-сгсесш^кзАигиш^ т	348	АС- 14683				56
875-893	АаАиСеАдСэСаОеОиСаиТ 8Ϊ	349	р-аиГеАГсСГсиГвСГсСТиСГбА£ииП1Т5Т	350	АС- 54693				56
875-893	АаАиС&А$С[£СаС£ОиСаиТ$Т	351	А1г1ОАСГС£С:ОгаС1С(0П5?:ГОАиг0:11П5 т	352	АС- 14703				68
875-893	АГщАГйС^АГзОГйСЙСГ^бгиСЦЫТъТ	353	ЛиОАСссООссСиССАиииТзТ	354	АС- 14713				55
875-893	А А А игсго АООСгСГАСОС 1ЖГА и ГТзТ	355	диОАОхОбссСиССАиииТвТ	356	АС- 14723				24
875-893	АаАиС*А§С^СаО§ОиСаиТзТ	357	АООАСосиСгсхСиССАиииТзТ	358	АО- 14733				34
875-893	СГзОйАГсСГсиГсАГиАГвОГсСГиСеГзТ	359	р-сА^вС(сС(йА£и01аОР^С{иСГсС^Т5Т	360	АС- 15079				85
875-893	СгОООГАСЮЮЮЮГАиГАООСГСЩГСТЯ	361	сгаоосюялашодоооогссююът	362	АС- 15089				54
875-893	С^сАсСсСсАиА^бсСиОТзТ	363		364	АС15099				70
875-893	С^ОсАсСсисАиАйОсСиОТзТ	365	СГАОС1СеСЛ1£Аи?СА(Х!СиГОСК,ЮЪТ	366	АС- 15109				67
875-893	СТбОГсАГсСГсиГсАГиАГеСГсСГиОтТ	367	САООСсиАи8аОСОиОсс£Т5Т	368	АС- 15119				67
$75-893	аоосгАСГСгсгиесгАиАОСсгсшготзт	369	САООСсиДи^аОООибсс^ТзТ	370	АО- 15129				57
875-893	С^ОсАсСсисАиАёСсСиОТйТ	371	СДООСсиАийаСОСиОсс^ТзТ	372	АС- 15139				69
877-895	АисоАСОосАОбсисдиоотзТ	373	ссдиоАСссиосссиссАиьт	374	АО- 9542		160
877-895	АисОАОООсАОООисАиООТзТ	375	СсдиоАсссиосссиоолитзТ	376	АС- 9668		92	|
878-896	сОАОСОсАООСиоАиООисТзТ	377	САС^АисАСССиосссисоъ;	378	АС- 9739		109	1		1
880-893	ОАОСосАССоислиооисАТзт	379	иоАссдиоАСССиосесистзТ	380 .	АО- 9637	56	83
88М98	САСЮСсАСООисАиСОисАТзТ	381	иОАСсАООАСОсибсссисьт	382 |	АО- 9763		79
882-900	ооссАОСоисАиооисАссът	383	ооиоАССАиоАСсеиоссстйТ	384	АО9630		82
882-900	00<лсАСО6цсАи0СисАсс75Т	385	ооисАСсАиоАСосиоессът	386 ,	АО- 9756		63
885-903	с Аооо ио а υοοι гс лесе а сгт	387	оисосиОАССАУОЛССсиотзт	388	АО- 9593		55
885-903	сАССОисАсКЗбисАссОАсТБТ	389	ουοσουοΑΟοΑυοΑΟοουοΤδΤ	390	АО9719		115
886-904	АООсисАиосисАССоАситзт	391	доисосиоАССАисАССоитзт	392	АО- 9601		111
886-904	АССОисАиСОисАссОАсиТ5Т	393	АСОСООиСАСсАООАСССиТгТ	394	АО- 9727		118
892-910	АиООиОАСССАСШСОАОАЪТ	395	исисСААоиоооиСАССАотзт	396 !	•		36	42		1,60
892 910	АоОСи сАссб АсиисСАСАТ$Т	397	исисоААоисооиоАСсАитзт	398	АО9699		32	36		2,50
899-917	ссоАсииссАОАлиосюссгт	399	<хзсАСАиисисСААоисб<згт	400 |	АО- 15228				26
921-939	бОА<КтАСОс;сАССсосиистт	401	ОААОссссисссоцссисспт	402	АО- 15395				53
993-1011	САбСбОССООаАООССООсТвГ	403	ОССС’<ЗСАиСССС'ОССС/Сий75Т	404 ,	ДО9602		726
993-1011	сАбсООсс-ССОАиОссООсТзТ	405	оссоосАисссосссосиотзт	406	АО- 9723		94
1020-1038	ОООиСССАОСА 1- ОСОСАССТТ	407	осиососАиосисссАСсстт	408	АО- 15386				45
1038 1056	ссиососооосиОААсиост5Т	409	ОСАОЦиЦАОСАССООСАОСТзТ	410 1	АО- 9580		112
1038-1056	ССиОсОсОиСсисДАсиОсТзТ	411	ОсАОииОАСсАСОССсАСОТзТ	412	АО9706		86
1040-1058	ибсосоиосцслАоиоссАТгт	4Ϊ3	ЦОССАООи<ЗАбСАСССОСАТ5Т	414 |	АО9581		35
1040-1058	иОсОсСгиОсисААсиОссАТзТ	415	иООйАСОиОАОсАСОСОсАТзТ	416 '	АО970?		81
1042-1060	сосоиосислАсиоссААОГат	4 !7	оииоаСАоииоАОСАсосстзт	41$ .	АО9543		51
1042-1060	сСсХгиОсцсААсиСссААОТьТ	419	сииоойАоииСАОсАССсоы	420 1	АО- 9669		97

- 29 015676

Положения в человеческой лоо-ти ρϋΓΛϊ ΝΜ_174936	ПоСЛвДОВатеЛьЯйСТъ Смысловой цепи (5 .	8Е0 ГО ΝΟ:	ПсеГКДОеатеЛЬЧйСТъ амГИСМЬюловОЙ цепи СЗ'-Л!	8Е<Э ГО ΝΟ:	Тбййюшл* дуптюиз	Средний Процент оставшегося мРНК· транскрипта при соответствующей концентрации киРНК в клетках различных типов	1С50в НерОЗ [тзМ]	1С50в гепатоцитах собакоподобных обезьян (нК4)
	!00 {М/Нер62	30 нМ'НерЭ'	3 нМ/ИерОЭ	30 ΗλΕ МеЬа
1053-8071	сисссА асооааоооса ссът	421	соиссссиисссииоосАст$т	422	АО9574		74
1053-1071	сиСссААСКЮААССЮсАсСТзТ	423	ссиссссиссссииобсАСТхт	424	АО9700
1057 )075	СААСООААОСССАСССииАТТ	425	ПААССсиосссиисссицстт	426	А Ο- Ι 5320				26
1058-1076	ААОССААОСОСАСССПиАСТТ	427	сидАссбиосссиисссиитт	428	АО- 15321				34
1059-1077	АсабААоассАсаоииАсстт	429	осиААССсиосссииссситт	430	Αϋ- 15159				64
1060-1078	осюААООссАССоиидссотт	431	сасидАССсиосссииссстт	432	АО- 15167				86
1061-1079	ССААССССАССОииАССССТГ	433	ссссиАдссоиссссиисстт	434	АО- 15164				41
1062-Ю80	СААоассАСбсиилоссостт	435	сссосиААССоиссссиистт	436	АО- 15166				43
1063-1081	АА&зосАСОоииАОсаасАТт	437	иоссссиААССсиссссишт	438	АО- 15322				64
1064-1082	АбСССАСбСиидСССССАСтт	439	сисссссиАдсссиоссситт	440	АО15200				46
1068-1086	сасскз иидоссссАССсистт	441	с А<зссъосссси А десс истт	442	АО- 15213				27
1069-1087	АссбиидссаосдсссьсАТт	443	исАсоос'оссссиААСсСгитт	444	АО- 15229				44
ιυ72-Κ'9Ο	оиЬАССсосАССсиСАиАСТт	445	сиАис-АС-с-сисссосиААСтт	446	АО- 15215				49
1073 1091	иилгсспслсссисАиАОСгГГ	447	ссидисАОссисссссидАТТ	448	Αϋ- 15214				101
1076-1094	ЙС<К?САССС1ГСА11АбССсиТ5Т	449	АОСссидисАссоисссостзт	450	ДО9315		35	32		0,98
1079-1097	ссАССсисдиАссссисоАТзт	451	иссдосссидиоАС;асиост5Т	452	Αϋ- 9326		35	51
1085-1 ЮЗ	исАиАбсссиссАОциилитзт	453	АиАААсиссдбсссиАисАТ5Т	454	АО9318		14	37		0,40
1090-1 Ю8	сссс и ос ас иии а иисосдт^т	455	СССС ДАНА ААСиССАОСССТхТ	456	АО- 9323		14	33
1091-1109	сссиссАОпииАиисссААТвт	457	ииСССААСЛААСЪССАСССТ^Т	458	АО9314		11	22		0.04
1091-1109	ОссиСС АС ии и АиисСбААТ $Т	459	ииСССААиААдСиСсАОССТгТ	460	АО- 10792					О.Ю	О.Ю
1091-1109	СкхиОСАСиииАиисССААТзТ	461	ииссоАдиААсиссАсссвт	462	АО- 10796					0 1	0.1
1093-И1!	сисюАсиииАиисссААААТзт	463	и ии иссс- аа и а а дсисс асът	464	Αϋ- 9638		101
1093-1 111	сиОСАСиииАшлсССААААТзТ	465	ииииссоААиАААсиссАОТаТ	466	АО- 9764		112
1095-1113	ссАоиииАиисооААААСсвт	467	ссшииссОААСАААСисст$т	468	АО9525		53
1095-11 13	СС АСи ииАиисСКд АА ААС сТьГ	469	осиииисссААиАААсисст5т	470	АО- 9651		58
1096-1114	<зас иии а и и ссю а алаосстзт	471	оссиииисссААиААдсисткт	472	АО9560		97
1096-1114	С АС ии и АиисОС АА А АСссТзТ	473	сссиииисссААиААдсистзт	474	Αϋ· 9686		111
] 100-1118	ииАииссоААААосслосит5Т	475	АСсисссиииисссААилАът	476	АО9536		157
1100-1118	ииАиисОСААААСссАСсиТхТ	477	АбсисхкиииисссААиААТзТ	478	АО- 9662		81
1154-1172	сссиссссгаиоосиАСАСТгГ	479	СиССАСССАССССССАОССЬТ	480	АО9584	52	68
1154-1172	€ССиОСсССЮиО<К}иАсАбТ5Т	481	СиСиАССсАСССОСсАбСОВТ	482	АО- 9710		111
| 1155-1173	ссиооссооисссиАСАссгт	4X3	ссисиАСссАССссссАОотт	484	АО- 15323				62
1157-1175 1	и<юсс<юисссиАСА0сс<йТ5Т	485	соссисиАсссАсссоссАТ$т	486	АО- 9551		91
Ϊ 5157-1175	иСС сСС ОиСС Си Ас АС сем ТьТ	487	ССС-ССС-иАССсАСССССс АТзТ	488	АО- 9677		62
1)58-1176	(ХюссоиссоиАСАОСссстг	489	оссссисиАСССАССССССТТ	490	АО- 15230				52
ί 1 (62-1180	ссисисиАСАССсоссисстт	491	аСАссссссисидсссАСси	492	АО15231				25
1164-1182	илосиАСАОсссссиссистт	493	САССАССССССиССАСССАТТ	494	Αϋ- 15285				36
1172-1190	ссссссиссисААСОссостт	495	осссссиисАССАсссссстт	496	АО- 15396				27
1173-1191	ссоссиссисААсоссссстт	497	ОССОСССЕПСАССАСССССГТ	498	АВ15397				56
1216 1234	сиссиосиооисАССоси<зт5Т	499	САСССОиСАССАССАССАСТзТ	500	АО- 9600		112
1216-1234	СисСиОсиОСисАесСсиСТхТ	501	сАОСОСиСАСсАСсАСбАСТ^Т	502	АО- 9726		95
1217-1235	иссиссиссисдсссси<;ст5т	503	ССДССССиСАССАО€АССАТ5Г	504	АО- 9606		107

- 30 015676

ПйЛСгкейНяв человеческой ПОС-ΙΉ рег.чз ΝΜ_174936	Поспедойатедьностъ емгасповои цели ГУ-З')!	3ΕΏ !О МО:	Последовательность атггпсчислсдой цепи (5-311	5Е9 ю ΝΟ·	Эаничеие дуттикэ	Средний процент оставшегося мРНК1ра Искр Шла грп соответствующей концентрации киРНК в вдет? ах различных чипов	НерОЗ [нМ]	1С50в гепатоцитах сабако подобных обезьян ГиМ)
100 нМ/НерС-З	3<1 κΚ6Ή«ρΟ2	нМНерС2	30 н№ Не1_а
1217-1235	исбиОсиООисАссбсибсТ 5Т	505	бсАОСООиСАСсАбсАССАТзТ	506	А1> 9732		105
1223-124]	иббЬСАССбСЦССССбСААТ^Т	507	ииссссосАОСооиОАССАт5т	508	АО- 9633	56	75
1223 124]	иСбисАссбсибссббсААТзТ	509	сисгСссскАОса<зиоАС<АГ<т	5Ю	АО- 9759		111
1224-1242	осисАссосиассоссААСЪт	511	сииссссосАосооиоАССтзт	512	АО9588		66
1224-1242	С6осАссСсиОссС<ЗсААсТ5Т	513	оиисссоосАосссгибАСсгзт	514	АО9714		106
1227-1245	САссссиассссоААсиистзт	515	олАоииоссассАОссоистзт	516	АО- 9589	67	85
1227-1245	сАссбсибссОСсААсиисТзТ	517	СААоииоссоосАосаоистйТ	518	АО9715		ИЗ
1229-1247	ссоси осссссаасцсссотзт	519	СОбААйииОССбОСАОССЮТзТ	520	АО9575		120
1229-1247	йсОдиСс<ООсААсииссСТ$Т	521	сск^ААоиисссоогАОссотзт	522	Аб- 9701		100
1230-124«	сосиоссоосАдсииссоовт	523	СССОААСи1'ОСС<ЮСАОССТ$Т	524	АО9563		юз
1230-124«	сОсиОссСОсА АсииссСОТ зТ	525	ССбСААСсибССООсАОСС г$т	526	АО9689		81
1231-1249	ссиоссоссААсиоссбсстгт	527	сссооААоииоссоссАССТзт	528	Аб9594	89	95
123М249	СсмСссССсААс^ссООСИТ	729	ССС<30АА0и1ЮСС66сАССТ5Т	530	АО9720		92
1236-1254	соосААсиисссо<ЗАССАШ5Т	531	а иссисссасААОсисссстзт	532	АО9585		83
1236-1254	сббсААсииссООСАсСАиТаТ	533	АиссисссасААбиисссстгТ	534	АО9711		122
1237-1255	СОСА АСИиСССОСАСОА ист$т	535	САиссисссобААоииосстзТ	536	Аб- 9614		100
1237-1255	СОсААсииссСООАсОАиСТзТ	537	сАисоисссооААсииосстэТ	53«	АО 9740		198
1243-1261	ииссосоАССАиоссиссстзТ	539	ООСАСОСАиСОиСССОСгААТзТ	540	АО- 9615		Е16
1243-1261	ииссСгССАсСАиОссмСссТзТ	541	СбсАбОсАиСОиСССОСААТзТ	542	АО- 9741		130
1248-1266	соАСОАиоссисссисоАСТзТ	543	ОСАОАОССАОПСАиССиССТзТ	544	Аб- 9534		32	30
1248-1266	сбАСОАисссиоссисидстзТ	545	биАСАОосАОссАисаисст^т	546	Аб- 9534		32

1248-1266	ССАсб АибссабссисиАсТ^Т	547	СиАбАбОсАССсАиСОиССТзТ	548	Аб9660		89	79
1279-1297	осисссс а ас ис а ислс а отг	549	сиоиолиоАСсисообАОСП	550	Аб- 15324				46
1280-1298	сиссссАбснслисАСАситт	551	АсиоисАисАСсисбосАбтт	552	Аб- 15232				19
12814299	исссоАсоисАиСАслсиитт	553	ААсиоислиодссисссбАТт	554	Аб- 15233				25
1314-1332	ССААСАССАОССОСиСАССТТ	555	ббисАССсосибсисиисбтт	556	АР- 15234				59
1 315-1333	СААбАССА<ЗСС<ЗбиОАСССГГ	557	бббисАССоссисюисниотт	558	Аб- 15286				109
1348-1366	АССААСииискзссосисиОтгт	559	САСАОСОбссААлсиисситзт	560	Аб9590		122
7348-1366	АссААсуииОбссОсиОиОТ5Т	561	сАсАбСббСсАААбииооитзт	562	Аб- 9716		114
1350-1368	СААсииисоссосиоиаиствт	563	САСАСАОСббССАААбииаТзТ	564	Аб- 9632		34
1350-1368	сААсиииООссСсиС|Х?аСТ5Т	565	сАсАрАОСОССсА ΑΑΟυυΟΤίΤ	566	Аб- 9758		96
1360-1378	сосисисисбАСсисиииотзт	567	САААбАООиССАСДСАОСОТзТ	568	Аб- 9567		41
1360-1378	сСкиСиСиСЮАссисиииСТзТ	569	сА ААОАОСиСсАсАсАОСОТ$Т	570	Аб- 9693		50
1390-1408	сАСАисАиисососсиссАът	571	иббАСЮсАссАлиоАббистзт	572	Аб- 9586	81	104
1390-1408	бАсАисАииОСибссдссАТзТ	573	бОбАбОсАСсААибАиоиСТ$Т	574	Аб9712		107
1394-1412	исАииосиоссиссАбссАТзТ	575	иСССиСЮАбОСАССААббАТ&Т	576	Аб- 9564		120
1394-1412	исАииСОиОссиссАОсСАТзТ	>77	исосиобАббсАСсААибАТ^т	578	Аб- 9690		92
1417-1435	лосАсеиосииисиоисАСТйТ	579	б11бАСАСАААОСАООиоал$Т	580	Аб- 9616	74	84
1417-1435	АбсАссиСсдиибиОисАсТдТ	581	сиоАсАсАДАСсАОсиоситзт	5«2	Аб- 9742		127
1433-1451	САСАбАбиоабАсдисАСАТТ	583	сбиоАиоисссАСисисиотт	584	Аб- 15398				24
1486 1504	а и сс ио исиоссоАОСсоотзт	585	ССООСиСООСАОАСАйСАиЪТ	556	Аб- 9617		111
]486 1504	АиО сцбиС1гОссбА(дссОбТ$Т	587	ССббСиСООсАОАсАСсАиТ8Т	58«	Аб9743		104

- 31 015676

Положения в человеческой ГОС-ТИ регАЗ ΝΜ.Ι74936	Последовательность смысловой цели (5-3)'	5Ер ΙΟ N0·	Поспслсвэтедьность антисмысяссой пели (5-3^1	8Е9 ю ΝΟ:	Эбсдаченн; Дугсккг	Средний процент оставшегося· мРНКтранскрипта При соответстъуюшей концентрации киРНК в клетках различных типов	ГСЗОв НсрС2 |нМ]	1Сх) а гепатоцитах есбако подобных обегьам (якП
1С9 нМ/Н<рО2	30 нМ№рО2	нМ1НерСт2	30 нН/ НеБа
1491-1509	<з исисссс ас-сссю асс исьт	589	бАССиССОбСиССССАОАСТйТ	590	АО- 9635	73	90
3491-1509	СисибссСАСссССАОсисТзТ	591	<ЗА(ХиссодсисоосАОАСТзт	592	АО- 9761		83
1521-1539	сиисАоасАОАОАсиадистхТ	593	олисАсисисисссисААстзт	594	АО- 9568		76
3521-1539	СииСАЦС^АСАСгАсиСАисТ5Т	595	одисАоисисиоссисААСТзт	596	АО- 9694		52
1527-1545	ссАОА<ЗАсиалиссАсиист5Т	597	оААсиоОАисАсисисисзстгт	598	АО 9576		47
1527-1545	ОсАОАОАсиОАиссАсиисТ$Т	599	оААОиоСАЦсАОисиСЕССЪТ	600	АГ9702		79
1529-1547	АСАСАсислиссдсиисистзт	601	САФААсиссАисАсисисиът	602	Αϋ- 9627		69
1529-154?	ЛСАСАсиОАиссАсиисисТгТ	603	САбААсиссАисдаисисит^т	604	АО9753		127
1543-1561	иисисиоссААдоАцоисАТзт	605	иСАСАиСШбООСАСАСААТзТ	606	АО 9628		ΜΙ
1543-1561	ЦисиеиОссАААСгАгКлисАТ^Т	607	иа Асдисии исосАбАОААТзт	608	АО- 9754		89
1545-1563	сцеибссАААСАийисАиствТ	609	ОАисАСАисиииоосАбАОТзт	610	Αϋ- 9631		80
Зз45-1563	сасиСссАААСАиСисАисТзТ	611	САибАсАисиииобсАОАбТхт	612	АО 9757		78
*$ЯП-МОТ	су'сдиОАССАПСсосиАсит+т	613	АбЦАСбсссиоюиссисАОТйТ	614	АО9595		31	32
3 580-1598	сибАООАссАбсОООиАсиЪТ	615	АСиАСССссиоаиссисАСТб.т	616	АО- 9721		87	70
1581-1599	иаАООАссАбсооаиАСЩтвт	617	САоид ссссс исс иссисАт$т	618	АО- 9544		68
1$81-1599	иСгАСКлАСсАСгсОООиАсиСТзТ	619	сАбиАССсссискиссисАТ&т	620	АО9670		67
1666 1684	АсисиАшаиСАссАСАалт	621	АбибибсиСАССАидСАоитт	622	АО- 15235				25
1668-1686	ъоиАисоисАОсдСАсисбтт	623	содаибиссиадссАиАСАтт·	624	АО- 15236				73
3669-168?	оиАЦСсиСАОСАСАсиесстг	625	сссАбисибсиодссАидстт	626	АО- 15168				100
1697-1715	ОСА исосслс Ассссиссстт	627	0<Л/АСбСсибиббССпЦССгг	628	АО- 15174				92
1698-1716	САиСИССАСАСКСОиСОССТТ	629	босбАСбссиоисбссАистт	630	АО- 15325				81

1806-1824	СААбсисюисиоссообсстт	631	ОССССОССАбАССАССииСТТ	632	АО- 15326				65
1815-1833	сиоссбббсссАСААСбситзТ	633	АссбиисисюссссбосАот^т	634	АО- 9570	35	42
1815-1833	сиОссСККк£сАсААсСгсиТ5Т	635	АбсоииоиосюсссббсАстзТ	636	АО- 9696		77
1816-1834	иОССОбОСССАСААСССи11ТьТ	637	АА<ЗССШОССЮбСССО<тСАЗ‘$Т	638	АО- 9566		38
1816-1834	иОссСчЗбссе ДсААсСсииТ$Т	639	ААбсоиибьгхккхсоссА г$т	640	АО- 9692		78
1818-1836	ссбоосссАСААСОсиииитгт	641	ААААбсоиибиосюсссббт^т	642	АО- 9532		100
1818-1836	ссОССсгсАсААсОсииииТвТ	643	ААААССбъиаиосюссссютяТ	644	Αϋ- 9658		102
1820-1838	сюосссАСААСбсииибСгаы	645	ссААААосбиибиобоссст5Т	646	АО- 9549		50
!820-1838	ОСОсссАсААсОсииииООТзТ	647	СсААААбсоисаиооассстгт	648	АО9675		78
1840-1858	ссиоА<юсиоисиАссссдт5Г	649	иоосоиАбАСАСССиСАсст5Т	650	АО9541		43
1840-1858	ОСиОАООСиОисиАсбссАТзТ	651	иООСОиАОАсАСССисАССТзТ	652	АО- 9667		73
1843-1861	ОАОСЮисисиАССССАиистя	653	СААи«ыбссиАОАСАсссист5т	654	АО- 9550		36
1Я44-1861	б а ббб ибис” д еб ссд« ибТтТ	655	сАА1КХЮСиАСАсАСС€иСТ$Т	656	АО 9676
1861-1879	сссдсюиссисмзсиасиАСТзТ	657	СиДОСАбОСАОСАССиСЮСЪТ	658	АО- 9571		27	32
1861-1879	0ссА06и6сц<ксибсиАсТ5Т	659	биАбсАООсАОсАССибОСТ&Т	660	АО9697		74	89
1862-1880	ссАбоиссиоссиссиАсст5Т	661	абиАбСАОбСАбСАСсиоатгт	662	Αϋ9572	47	53
1862-1880	ссА<лбиСсиб«ибсиАссТ5Т	663	ООиАСсАббсАбсАССиббТхТ	664	Αϋ9698		73
2003-2026	дсссАСААбссбссиоиосгг	665	бСАСАСЮСОбсисоисббитт	666	АО- 15327				82
2023-2041	биосиоАСбссАСОАбоистзт	667	ОАСсиспиабСсисАбсАсът	668	Αϋ 9639		30	35
2023-2041	СиОсибАббссАсбАОСисТзТ	669	ОАСсисбиобссисАбсАсът	670	АО- 9765		82	74
2024-2042	СбСиОАОбССАСбАббиСАЪТ	671	ибАСсисоиобССиСАССАТзТ	672	Αϋ· 9518		31	35		0,60

- 32 015676

ПйЛажеНКЯВ человеческой ПО4-ТИ рег№ ЧМ 174936	Последовательное!»· смысловой цели (5-37*	5Е9 ΙΠ ΝΟ:	Послеютедьностъ антисмысловой цепи (5' 3 Я	8Е0 ГО ΝΟ:	Обвятенн: душевен	Средний процент «тавхие1йся мРНК транскрипта при состаетстаующей концентрации киРНК в клетках различных типов	ГСЗОв Нер(32 [нМ]	К» в гепатоилтач собакоподобных обезьян (нМ)
100 нМ/НерО2	30 нМ/НерО2	нМ/НерО1	30 кН1 йсЪэ
2024-2042	иосиОАсосслс(}АСбисАТ5Т	673	иодссиссиооссисАссАТзт	674	АО9518		31
2024.2042	иСсиСгАООсс АсОАСОисАТаТ	675	иоАСсисоиооссисАСсАТзТ	676	АО9644		35	37		2,60
2024-2042	υ гесгс а йо а луг	677	р-иСйС1сийОйОГ§СйийАГ§СГаТ5Т	678	АО- 14672				26
2024-2042	и ?эсги го аоссгс) декз доои гота тбт	679	игсАсгсшгоюиюссгошоАасГАТзт	680	Αϋ- 14682				27
2024 2042	и£СцОэб£СсАсОгС£исАТ?Т	68)	р иОГаСйийС^ОТгСГсийАГвСТаТзТ	682	Αϋ- 14692				22
2024-2042	览ибаО®<кАсСа<Э^исАТ&Т	683	игоАСЛ^гсйэигаосюгооАосгАТат	684	Αϋ- 14702				19
2024-2042	и^СГиОГаСдасАГсСГаОдасАГГзТ	685	иОАССисСиевССиСАгсаТзТ	686	АО- 14712				25
2024-2042	1ЮСГОГОАСС;€ГСГАСГОАСюи1СГАТ5Т	687	иСд^исСи^дССиСА^саТзТ	688	АО- 14722				18
2024-2042	ЫзСиОаО^СсАсОаО^ЦсАТьТ	689	иСгАССисйиддССиСА^саТяТ	690	Αϋ- 14732				32
2024-2042	Стс(}ГдС:<-АГдСГрО!сСГаС!‘г.А!т;СГТТ	691	р-сДГиСТсСТвСГсСГвС^иСгйСГсАТсТгТ	692	АО- 15078				86
2024-2042	сигсюиеаАСЮГОосгогоооАиютзт	693	С£Аигсгсгокхх?гогасгогаАСгсгАстг	694	АО· 15088				97
2024-2042	биСвисАвСеОсСвОгАиСТзТ	0^5	р-еАСиСйСГвС^^С^О^С^А^751	696	АО- 15098				74
2024-2042	СиО£исАвСЕ<лсСяСгА11С»ТзТ	697	СТАиГОГОГОЮбСГСГОСОСАСГСГАС^Т	698	АЭ- 15108				67
2024 2042	С1иСГ8и£сАГ§С?е<ЗЙС££С15А(цбГТзТ	699	САиССсдССсаСиСАСсасТ&Т	700	АО- 15118				76
2024-2042	сигосигогАОСгоосгогосоАЪГОтзт	701	САиСС<£ССс£СиСАСсасТ5Т	702	АО- 15128				86
2024-2042	СиС^исАдСйСкСйСйАиОТ 5Т	703	С А иССсвОСсзСиО АСсасТвТ	704	АО 15138				74
2ОЗО-2048	СЮСС АССАСС ис АОССС А АТТ	705	иисоссиоАосисоисосстт	706	АО- 15237				30
2035-2053	ССАССиСАССССААССАС-иТТ	707	АсиооиискюсисАссссотт	708	АО15287				30
2039-2057	оисАбсссААССАОиосситт	709	АСССАсиодииосёсиоАСГт	710	АО- 15238				36
2041-2059	САОСССААССАОиСССиССГГ	711	ссАСосАсисшгиооэсиотг	712	АО- 15328				35
2062-2080	САСАСССАССССАОСДиССТТ	713	ссАиссисоссисссиоистг	714	АО15399				47

2072-2090	ссАссдиссАсосииссиствт	715	САОСАдсссисюАиасибстзт	716	АО9582		37
2072-2090	ссАСсАиесАсбсН1КСи<ЗТ$Т	717	сАССААСГОсисодисгоисстзт	718	АО9708		81
2118-2136	АСОСААССАССАиООААиСТхТ	719	ОАииссАЦОсиссииоАСШзт	720	АР 9545		Л	43
2! 18-2136	дСисААССАСсАиССААисТзТ	721	<ЗАииссАиссоссииолсит&т	722	АО9671		15	33		2,50
2118-2136	АО’иГсАТаСГ&М^СГаиГ^ЗГаАТиСГГгТ	723	р-ёАЛ1ОГсС?аи(вСГиСГси1иОГаСТиТ5Т	724	АР14674				16
2118-2136	АСи^ААСЮАСГОГАиГОбААиГС1Т$Т	725	САигогогогАиюсгоюгоплигсАсгот т	726	АР14684				26
2118-2136	АзисАаСг&АйСаивОаАиСТзТ	727	р-&АЛ]иГсСГаи%СТиСГсиТиСТзСТиТ5Т	728	АО- 14694				18
2118-2136	А&исАаОеАвСаивСгАиСТзТ	729	САигогогсгАигасгоюгсго1игаАСги1Т5 т	730	АР14704				27
2118-2136	АГеиТсАГаСГеД^СйиГйСТаАТиСЯ'гТ	731	СлииСсаиСсиССЦиОасиТзТ	732	АР14714				20
2118-2136	ас ргоеадсса сседоесс а а и еспуг	733	ОАЦиСсаиОсиССОиСвсиТяТ	734	АО14724				18
2118-2136	А^исАаСдД^Саи^СцАчСТ&Т	735	САииСсаиСсиССииСасиТзТ	736	АО 14734				18
2118-2136	СГсС1§СТаС1сС1иС£аи&й?Е.С£с1ЛТ&Т	737	р аСЙ£С5=иГаиТвА^О^и5кС£сОйТзТ	738	АО15080				29
2118-2136	(Х:гасс(АСгсгсюгс1Аи1Ас<ллсги1Т5Т	739	лесе гогеялигс ас сс и еосесессгвт	ЧД0	АГ>- 15090				23
2118-2136	Ссб^СаСсСиСаиаОвСсЦТвТ	741	р-аСТ§Сй иТзЦ Г^АЕдС ίβϋ £§С£с<3 СсТэТ	742	АР- 15100				26
2118-2136	ОсСдСаСсСиСаиаСдСсиТаТ	743	АССЮГОГОГАи1САСС€гиюсгс:юс!Т5Т	744	АР- 15110				23
2118-2136	СГсСГ£СГаС1оС(иСГаийС^СГсиГГ5Т	745	АСОССиаСОаеСГОиОСсйсТзТ	746	АР- 15120				20
2118-2136	(К1СЮСГАСГОГОГО5С5АиГАСССГСГО1Т5Т	747	АСбССиаиСаеССиССсдсТаТ	748	АР15130				20
21)8-2136	ОсСйСаСсСиСаиаСеСсиТзТ	749	А00ССиаиСа1Ю£и0€с£сТзТ	75!'	АР- 15140				19
2122-2140	ААООАССАиоаААиСССССТзТ	751	ссоссАииссАиссоссиитзт	752	АР- 9522		59
2122-2140	ААССАСсДиСОААисссОСТзТ	753	сссоолииссАисагссиитзТ	754	АР9648		78
2123-2141	АССАССАиССААОССССССТУГ	755	оссос<ЗАииссАиосиссш'5Т	756	АР9552		80

- 33 015676

Положения в I ЧЫО34Ч4СКСН тюс-ти	Последовательность смысловой цепи Х-З')'	8Ер ΙΟ ΝΟ:	Последовательность атисмысповой цепи ί5'-3)Ι	5ЕО Ю ΝΟ:	Обаявчени фтпаиа	Средний процент оставшегося мРНКтраКскрнПта при соответствующей концентрации кпРНК а клетках различиях типе®		1С50в гепатоцитах соба коподобных обезьян (НМ}
рег№ ΝΜ_] 74936	ίου пМ/НерО	30 нМ/Нер<Э	3 2 нМ/НерС	30 2 чМ·' НсЬэ	1С50в Нер62 [аМ]
2123-2141	АССАСсАиССААисссОСгсТзТ	757	сссссоАииссАиссисстчт	758	АО- 9678		76
2125-2141	сасса иссллисссссссстзт	759	сссссоосАииссАиссистзт	760	Αϋ- 961$		90
2125-214?	ОАСкАиСОААисссССкссТзТ	761	сюсссссоа ииссАиосисг5Т	762	Αϋ- 9744		91
2210-2248	оссиАсссссиАОАСААСАтт	763	исиисисидссоссиАбссгг	764	АО- 15239				38
2231-2249	СССАССССОСаОАСААСаСТТ	765	сисиисссидссассидсстт	766	АО- 15212				19
2232-2250	ССАСССССиДСАСААСАССТТ	767	соисиисисидсссссиАОТТ	768	АО15240				43
2233-2251	идСОСССЕАСАСААСАССиТТ	769	АсоисииспсидсооссиАТГ	770	АО- 15177				59
2235-2253	сосссилбАСААСАСсиситт	77|	АСАСсисиисисидсоссстт	772	Αϋ- 15179				13
2236-2254	ОССОС АС АС А АСАСси® Е-СТТ	773	сдсАСсисиисисидсаостт	774	АО- 15180				15
2237-2255	ссоилСАСААСАССиаиоигг	775	АСАСАСоиссисисиАСССТТ	776	АО- 15241				14
2238-2256	соилСАСААСАОзисисиАТт	777	иАСАСАсаисиисиспАсстг	77$	АО- 15268				42
2240-2258	САОАСААСАСОиоиССАСиТТ	779	АсиАсдсАСсисииоисиАтг	780	АО- 15242				21
2241-2259	АОАСААСАСсиоиси аосСТт	781	ОАсиАСАСАСсисисгаис1’тт	7Я2	АО- 15216				28
2242-2260	адСААСАссисиоилоисАтг	783	исАСЦАСАСДСоисиисистт	784	АО- 15176				35
1 2243-2261	АСААСАСсиоиаиАоисАотт	785	ссаАсилСАСАСсиаииситт	786	АО- 15181				35
2244-2262	СААСАССиоисиАоисАСЮтт	787	ссисАсилСАСАсаисиистт	788	Αϋ- 15243				22
2247-2265	САСОссиаиАоисАОСА<3€Тт	789	ссиссисАсидсАСАСсиотт	790	АО- 15182				42
2248-2266	АСсисисидсисАбсдСгСстт	791	оссиссиоАсилсАСАСОшт	792	АО- 35244				31
2249-2267	ссисисидсисАСЮАСссстт	793	ссссиссиСАсилСАСАСОтт	794	АО- 15387				23
2251-2269	ибисиАоисАССАОСсскютг	795	сссоссиссисАсилСАСАтт	796	АО- 15245				18
2237-2275	сисАООАСссоабАСоисАЪт	797	ис а со иссссос исс и с АСТ5Т	798	АО 9555		34
2257-2275	ОцсАССАСгссСО<ЗАсСисАТ5Т	799	иодссисссоосиссисАСТп*	800	АО9681		55			I
2258-2276	иСАОСАОСССССАССиСАСВТ	801	сиоАСоисссо<зсиссиОАт5т	802	АО9619	42	61
2258-2276	исАО(1АСтСсСО<ЗАсСисА<лТ4Т	803	сисАСсисссоосиесиоАтгТ	804	АО9745		56
2259-2277	САОСАССССООАСсиСАССТгТ	805	осиОАСоисссоссиссист$т	806	АО- 9620	44	77
2259-2277	сАСОА&хСССАсСгисАСсТгТ	807	ссисАссисссоссиссистгт	808	АО9746		89
2263-2281	АСССОСгСАСОиСАОСАСидТТ	809	идоиосиаАСоиссссюситт	810	АО- 15258				19
2265-2283	СССНСАССиСАОСАСиАСАГГ	811	иаидсиссиОАссиссссстт	812	АО- 15246				16
2303-2321	сссисАСАОсссиисссАитг	813	АиСЮСААССОСССиСАСССТТ	814	АО- 15289				37
2317-2335	сссАссиосиосс<ЮА<эсст5Т	515	сссиссгюсАссдсдисастзт	816	АО9324		59	67
2375-2393	сссАисссАССАисооиситт	817	а с ассс дисс иссоли ссстт	$18	АО- 15329				ЮЗ
2377-2395	САисссАселиоссибгисстг	819	АСАСАСССАиССССЮСАСОТ’	820	АО- 15330				62
2420-2438	АсатииААААиссиисссАТТ	821	исссАдссАЦиисАдАОситт	822	АО 15169				22
2421-2439	ссс'с ид ада уооиисссдстт	823	спсос.ААССлииинАААССтт	824	Αϋ- 15201				6
2422-2440	сиииААААиосиисссАситт	825	АсисосААСсАписиддАстт	826	АО15331				14
2423-2441	сиилААдиссиисссАсиитт	827	ААсиссодАССАиииилААтт	828	АО- 15190				47
2424-2442	иилдАдиосиисссАсиистт	829	СААоисссАдссАииииААтт	830	Αϋ- 15247				61
2425-2443	илААдиосииссоАсииситт	831	АСААоиссюААССАииииАТТ	832	АО- 15248				22
2426-2444	ААААиосииссОАСиисисгт	833	ОАСААсисасАлссАиииитг	834	АО15175				45
2427-2445	ААлиссиисссАсиисисстг	$35	ссдСААсисссААССАииитт	836	«АО- 15249				51
2428-2446	АдиссииссоАсиисиссстт	«7	СОСАСААСиСССгААССАииТТ	338	АО- 15250				96
2431-2449	ос и иссс леи и с исссиситт	839	АСАСССАСААСССССААССТТ	$40	АО- 15400				12

- 34 015676

Положения в человеческой ПОС-1» ре1 № ΝΜ_174936	Последовательность смысловой цепи (5-31^	5Е0 ГО ΝΟ:	Последовательность антисмысловой цепи ГЗ'-ЗЗ!	5ЕО ГО ΝΟ:	Збзэечеюе дуплекса	Средний процент оставшегося мРНктранскркггга присоответствуюпмй концентрация киРНК в клетках различных типов	1С50в НерС2 [нМ]	1С50в гепатоцитах собакеподобных обезьян (иКО
КО нМ(Нер<?2	30 нМ/НерИ	нМ/Нер02	30 нМ/ ЙеЬа
2457-2475	сиссдиссссиаасАССдстт	841	СиСОБЮССАббССАС'СЮАОТТ	842	АО- 15332				22
2459-2477	сслисклСсиассАССАССгОтт	843	сссиссиоссАОСсслисютт	844	АО- 15388				30
2545-2563	бААСьсАсисАсисиоооитт	845	АСссАОАбисАоиоАбиистт	846	АО- 15333				20
2549-2567	исАсисАсисисаоиосссгт	847	А<ЗССАСС€АСА<Зи<ЗАби<дАТТ	848	АО- 15334				96
2616-2634	ииисАССАиисАААСА<юитт	849	АСсиоиишААаосисАААТг	850	АО 15335				75
2622-2640	САииСАААСАСюисОАСситт	851	АбсисоАССсоиицбААиотт	852	АО- 15183				16
2623-2641	АииСАААСАСССССАССиСТТ	853	САСсиссдосисииисААитт	854	А ΟΙ 5202				41
2624-2642	иисАААСАСсиссАСсибитт	855	АСАбсисбАссисииисдАТТ	856	АО- 15203				39
2625-2643	исдАдсАСоиссАСсиоистт	857	сАСАОсисбАСсисиииоАтт	858	АО- 15272				49
2626-2644	САААСАСюисоАбсиоиастт	859	осАСАОсисбАСсиоииистт	860	АО15217				16
2627-2645	а а а САСгсисс досисо оситт	86!	досАСАбсисбАСсисииитт	862	АО- 15290				15
2628-2646	ААОАСбиссАбсиеиссистт	863	САССАСАОсиссдссибиип	864	АО 15218				13
7610-264?	гдбсисПАСГ! 1бплаи?аптт	865	ссоАОСАСАСсисоАСсиотт	866	— > са <о				13
2631-2649	АО<зиссА<?си<зиС!сисасстт	867	СССОАГСАСАОСиССАССиТТ	868	АО- 15336				40
2633-2651	сисбАОсисцссисбооъбтт	869	САСССбАОСАСАОСиССАСГТ	870	АО15337				19
2634-2652	исбАбсисиосиссосисстт	871	ССАССССАССАСАОСиСОАТГ	872	Αϋ15191				33
2657-2675	АСсиссисссАдиоисссбк	873	соссдсАиисооАОСАССцтт	874	АО- 15 390				25
2658-2676	ссибсисссААиоиоссодтт	875	исобСАСАииосюАасАОСтт	876	Αϋ- 15338				9
2660-2678	иссисссддисиассслистт	877	сдисоосАСАииссоАбСАТТ	878	АС15204				33
2663-2681	цсссдАисиосссАиаисстт	879	ссАСАиссссАСАииосоАН	880	АО- 15251				76
2665-2683	ссААЦоиоссодиоиссситт	881	АСбОАСАиссосАСАииостт	882	АО- 15205				14

2666-2684	СААиоиоссоАиоисссзистт	883	САСооАСАисоссАСАииотт	884	Αϋ- 15171				16	|
2667-2685	Адиоиоссодиоиссоисютт	885	ссдсбСАСдисоосАСАиитт	886	АЕТ- 15252				5В
2673-2691	ссоАиоиссоисбосАОАдтт	887	иисиосссАСОйАСАисоотт	888	АО- 15339				20
2675-2693	сАисиссоиооосАбдАистт	889	САиисиосссАсоодслистт	890	АО- 15253				15
2678-2696	а иссоиаоосдсааиолситг	891	АоисдиисиосссАСОСАстт	892	АО- 15340				18
2679-2697	иссоисбОСАбААисАсиитт	893	ААСиСАиисиссссдсооАТг	894	АО1529!				17
2683-2701	исоссАСАдиоАсииииАитт	895	АидАААбисАЦЦсиосссАТТ	896	АО- 15341				II
2694-2712	АсиииидиисАОсисииситт	897	АСААОАССиСААНААДАОСГГ	898	АО- 3 5401				13
2700-2718	диис лососи исииссоистт	899	С АСХЮ А АСА АО АС СиС А А ОТТ	900	АО- 15342				30
2704-2722	АОСЦсиисиисссооссАОТ	901	СиООСАСООААСААОАОСиТТ	902	АО- 15343				21
2705-2723	осисс-ибииссоисссАОбп·	903	СС1ЮССАСОТААСААОАОСТТ	904	АО- 15292				16
2710-2728	υσυ иссо иоссасюсдиисгт	905	ОААЦСССиООСАССЮААСАТТ	906	АО- 55344				20
τπι ι 2^29	аиисссисссдоослиисАтт	<эт	иС-А а С.И5ГП ΙΠΓ.Γ АСОСА астт	908	АО- 15254				18
2712-2730	ииссаисссдаосА бссаатг	909	иисАдиоссиоссАСосгААТт	910	АО- 15345				18
2715-273 3	со ν сссасосд иисда исстт	9П	оодоиоАлиоссиоосдсоп·	912	АР- 15206				15
2716-2734	оооссасюсдиисааиссотт	913	АбОАОиодАНОссиоссАсп	914	АО 15346				16
2728 2746	СААЪссислссисиссАССтт	915	сюиссдсАСсиоАОСАииотт	916	АО15347				62
2743-2761	САССААОаАСО€А<ЗОАииСТ5Т	917	одАиссисссиссиисоистзт	918	др- 9577		33	31
2743-2761	сАссААООАОСсАООАиисТзТ	919	ОААиссиоссиссиисюибът	920	АО9703		17	26
2743-2761	С ГаСЙ А (аСИ®А ίαΑ Г§0 Га 1ЯиС ГГаТ	921	р-§АТаиГсСГи0кСГиСГсиГиСГ8и£&Т5Т	922	АО- 14678				22
2743-2761	С ГАСГСЕААОС АО ОСТА ОО Аϋίϋ ГСГЪТ	923	САлогсгсгиксгстигс^сяликоигсте т	924	АР- 14688				23

- 35 015676

Пслозкнняв человеческий пос тн рег№ ΝΜ_174936	Последовательность синелевой цепи (5 -3^	8Е9 ГО ΝΟ:	Последовательность антисмысловой целтэ’З')'	$ЕФ 10 ΝΟ:	ОбсптЕката д)пт*а	Средний Процент оставшегося мРНктралгехрнпта лрл «хсивепл^аощей концентрации киРНК в клетках различных типов	1С50в НерС2 (нМ?	1С50 В гепагошггвх собаке подобных обеаьяк (иМ1
1О0 чМ/НерО2	30 κΜΉβρΟ2	нМ/Йер02	30 нМ/ НеЕл
2743-2701	Сз€сАа<3§АяОсАйСаииСТ5Т	925	рндМаиГсСпяСГсСГиСГсиРпС^и^ТзТ	926	АО14698				23
2743-2761	СаСсАаСдАдСсАдСаииСТаТ	927	0ΑΑϋί€ΐϋίυκλ2ΐΌίυκ?κ;ίυίυΐΐ;<?υϊ<3Τ$ Т	9’8	А Ο- Ι 4708				14
2743-2761	СГаСГсАГаСЕвА^СйАСдСйиГиСГГзТ	929	бААиСсиССсиССии<|®идТзТ	930	Αϋ- 14718				ΪΪ
2743-2761	СТАСГСГДАССАОССМОбдиЛзЛТП^Т	931	ОААиСсиЗСсиССииС£11£Т$Т	932	АО- 14728				25
2743-2761	СаСсАаЗеДдОсАдСаииСТзТ	933	СААС’СспССсиССииСтеидТЯ	934	АО- 14738				31
2743-2761		935	р-иСГсСРМ^АЕаА&иЕсСйСЕдСйгТьТ	936	АО- 15084				19
2743-2763		937	и/СООАА17ГАААСГиК?ГСГАОО€1СП5Т	938	ДО- 15094				II
2743-2761	СдСсидСаСиииАиисСдАТвТ	939	р-иСЕсО{аАГиА£аАГси£сСГаО(®СкТ5Т	940	АО- 15104				16
2743-2761	О §€с и дСаСиОиА иЦсСдАТ зТ	941	и£СКЮААиГАААСГипЗЯЗ£АСОС1С^5Т	942	ДО15114				15
2743-2761	СйдСЕсиГдО&ОН^иГиАЕииГсСгГеАГГаТ	943	иссо А Эи А АасиССАСдссТгТ	944	АО- 15124				И
2743-2761	оссгспфазсАСигилзЕАЦЕи^РЭСАТзт	945	иСССАаиААасиССАСдссТзТ	946	Αϋ- 15134				12
2743-2761	СёСсидСайиииАцисСдАТзТ	947	иССОАаиААасиССАОдссТзТ	948	АО- 15144				9
2753-2771	осАССАиисииссслиосАТТ	9*9	иссАисосААСАлиссисстт	9$0	ДР- 15391				7
2704-2812	иссАСосАСАААСАисоиик	951	аасс диоиииаисссиасАтт	952	АО15348				13
2795-2813	ссАССсАСАААСдиссииотт	953	са асс лисииис иссеисстт	954	ДО- 15349				8
2797-2815	АосюАСААдсАисаииоостт	955	сссААССАиоишсисеситт	956	АО- 15170				40
2841-2859	сссисдиссссАбсиААситт	957	АоииАосисоАСдисАообтт	958	АО 15350				14
2845-2863	САПсиссАосиААСиоиссп	959	ссАСАсиилссиосАОлиотт	960	АГ>- 15402				27
2878-2896	ссисссисдиидАоссАсстт	961	ссиссАШАлисАсаодостт	962	АО- 15293				27
2881-2899	сссшдииААшсАСссиитт	963	ААОСсиссАипАлисАСсатт	964	АО- 15351				14
2882-2900	ссиоАииАдиосАСЮсииАТт	965	иААбСсиссдипААисАСЮТг	966	АО- 15403				И	_

2884-2902	исАиидАисоАоссиилсстт	967	ссиААССсисслиилАисАтт	968	АО- 15404				38
2885-2903	ОАииААисоАООсииАбсшт	969	АОсиААОссиссАиидАистг	970	АО- 15207				15
2886-2904	АиидАиссАбосиилссиитг	971	ААСсиААССсиссдиидАИТг	972	АР- 15352				23
2887-2905	ииААиссАбссииАссииотт	973	АААссидАОСсиссАии аатг	974	АО- 15’55				31
2903-2921	ииисиооАиоосАисиАОстзт	975	ССиАСАиСССАС’ССАСАААТяТ	976	АО9603		123
2903-2921	иФИсиССАиССсАисиАОсТзТ	977	<тСиАСАийСсАиСсАСАААТ5Т	97$	АО- 9729		56
2904-2922	иисиссАисосАисилссстзт	979	сссиАСАиоссАиссАСААТйТ	980	Αϋ- 9599		139
2904-2922	ццсиОСАиССеАисиАСссТзТ	981	СССиАСАЦССсАиСсАОААТзТ	982	АО 9725		38
2905-2923	исиссА1.’сюсАисиАОссАТ5Т	983	иСССиАСАНОССАиССАСАТзТ	984	АО9621		77
2905-2923	иси ССА иООс Айс и А Осс АТ$Т	985	иОССиАСАиОСсАиСсАСАТ5Т	986	АО9747		63
2925-2943	А ССС1СС АС АС АСЮийСССТГ	987	осссАСсисисиссАссситт	988	АО- 1540ф				32
2926-2944	сосиссАОАСАОсиссоссгт	989	оососАссисисиссАОССтт	990	АО- 15353				39
2927-2945	ССиСКЗАС АСАаОиОСЭСССТТ	991	саосссАСС’исисиссАССгг	992	АО 15354				49
2972-2990	ииссисАСССАСсиииАситт	993	АСиЛААОСиСССиСАССААТТ	994	АО- 15406				35
2973-2991	иссиоАОССАСсиииАсистт	995	ОАсилААОсисссисАССАгг	996	А ΟΙ 3407				39
2974 2992	ссисАСССАСсииилсиситт	997	АОАОилААСсиассисАбс η	998	АО15355				18
2976-2994	иоАбссАСсиииАсисисстт	999	ССАСАОСААДОСиООСиСАТТ	ΙΟΟ0	Αβ· 15356				50
2978-2996	АсссдссиииАсисиссистт	1001	сАССАОАсиААА(кги<юситт	1002	АО- 15357				54
1И1-19ТО	САссиииАсисиосисиАитг	1003	АиАСАССАСАСиАААССиОТТ	1004	АР 15269				23
2987-3005	иАсисиссисиАСсссАСстйТ	1005	ссисссАидСАССАСАоиАТвт	1006	Αϋ· 9565		74
2987-3005	иАсисиОеисиАиОссАСетзТ	1007	ССиССсАиАСАСеАСАСиАТ?Т	1008	АО 9691		49			□I

- 36 015676

Пополнил в человеческой ЛОО ГН	Последовательность смысловой цепи (5-31)^	5Е9 ш	ПсСЛЩГОЛЗТеЛЬНОСТЬ антжМЛЫСЛСВОЙ цепп [З’-З')!	5ΕΩ Ю ΝΟ:	’З&ВКМСНИ дугстака	Средний процент оставшегося мРЯКтрэнскритгта присййтвстстьуюшей концентрации клРНК в клетках различных ТИПОВ		1С5Пв гвлатошпак собака-
рег№ ΝΜ.17-1936		ΝΟ:			100 -гМ.'НерС:	30 нМ/НерО	3 κΜΉβρΰ	3Λ нМ' НеБа	Ю501 ЙСр<л2 [нМ]	(Сдобных обезьян (нМ)
2995-3016	а исссдсссиоиссилосАтт	1009	иосиАССАСАбссиоосдитт	1010	АО- 15358				12
3003-3021	АсосибиосиАССААСАССп	1011	оиисииосиАОСАСАОсаггг	1012	АО- 15359				24
3006-3024	сиоиосидссААСАСССААтт	10В	иисссисииссиАССАСАсгг	1014	АО- 15360				13
3010-3028	ОССАССААСАСССАААССиТТ	1015	Ассиииообиаииссидостт	1016	АО- 15219				19
3038-3056	ссАоссдисАСси лао дситт	1017	Асиссидосиодиоосисстт	1018	Αϋ· 15361				24
3046-3064	САСсилоадсисАсисссстт	1019	ссссдсисдоиссиАСоиотт	1020	АО- 15273				36
3051-3069	АбОАсиоАсисоосАсдюитг	1021	дсАсисссоАоисАсисситт	1022	АВ- 15362				31
3052-3070	асАсьсАсиссссАсиоистт	1023	САСАсиссссАоисАоисстт	1024	АО- 15192				20
3074 3092	1кЮ11оСАисгСАСОоисисАтт	1025	иодоасайиосаиосАСсдтт	1026	АВ- 15256				19
3080-3098	АиссАсисисисАсссААСГг	1027	оииоосисАОАСАоиосАитт	1028	АО 15363				33
3085-3103	сиоисисАОССААССсоситг	1029	АОСоасииаосйоАСАСАСТт	1030	АО- 35364				24
3089-3107	СиСАСССААСССССиССАСТзТ	1031	оисоАССоооисоасиоАОТзт	1032	АВ9604	35	49
3089-3107	сиеАСссААсссОсиссАсТьТ	<033	о и ос а сссиО и с о осио а 0ΤδΤ	1034	аО9730		85
3093-3111	сссддсссссиссАсидсстзт	1035	осиАсиаоАасоооииоосι«г	1036	АВ- 9527		45
3093 3111	ОссААсгсСсиссАсиАсйТзТ	1037	ооиАсиосАССОССииоостэт	1038	АО 9653		86
3096-3114	АлсссссиссАсидсссастт	1039	ссоссиАсиооАОСоооиитт	1040	АО- 15365				62
3099-3117	ссссиссАсидссссосАОТт	1041	сисссосоиАоиосАОсостг	1042	АЭ- 15294				30
3107-3125	СиАССССССАСОСиАСАСАТТ	1043	иоисидсссиссссобидстт	1044	АВ15173				12
3108 3126	иАСссо<?САОсаиАСАСАитт	1045	АиоиоиАССсиоссоссидтт	1046	АВ- 15366				21
3109 3127	АСХССЮСАилЗБгБАиАСАии ί ϊ	1047	АдиоиоиАсССийССОйоИТТ	1ύ48	15367				11
31103128	сссоссАОСоилсАСАиисп	1049	алАиаиоиАСССиоссооотт	1050	АО- 15257				18
3112-3130	ссосАОСсидсАСАиисосгг	1051	осоАлиоиоиАСссиассатт	1052	АО- 15184				50
3114-3132	осАссаидсдсдиисссАСтг	1053	сиссОААПоиоиАССсиостт	1054	АО- 55185				12
3115-3133	САОСюидСАсдииссСАСстт	1055	оооссоАдисиоидссссотт	1056	АВ- 15258				73
3116-3134	АОсктидсАсдиисссАСССТТ	1057	ссюиосоАдиоисиАССситт	1058	АО- 15186				36
3196-3214	ССААСиСАСССАСАААСОСТТ	1059	осооиисисосисАоиисстт	1060	АО- 35274				19
3197-3215	СААСиСАСССАСДААСССАТТ	1061	иосоииисисосисАоицсгг	1062	АО- 15368				7
3198-3216	ААСиСАСССАСАААСбСАОТТ	1063	сиоссииисиоосисАОиитт	1064	Αϋ- 15369				17
3201-3219	ибАОССАОАААСССАОАииГГ	1065	АдисисссииисисасисАтт	1066	Αϋ- 15370				19
3207-3225	АСАдАСОСАСдиисюссистт	1067	сдосссААисиссоиииситт	1068	АО- 15259				38
3210-3228	АДЖАсдииссссиссситт	1069	АОсСАОСССАдисиоссиитт	1070	А Ο- Ι 5408				52
3233-3251	АССсААСссисиисиилсиът	1071	АОиААСААОдсосиисоситЕТ	1072	АО- 9597		23	21		0,04
3233-3251	АСгссААОссцсиисииАсиТзТ	1073	АСиААСААСАСКХДЛЮОСиЬТ	1074	АВ- 9723		12	26
3233-3251	А^СкАСаСДсСГцСГииТсиГаАгситТ	10/5	р аОгиАгаО^аА^ДгвСгсиГцСГзС^ТгТ	1076	АО- 14080				15
3233-3251	дсс1С!ААСсгс1и(слэтик:гия;ГАСллтзт	1077	Αθυί·ΑΑύΑΑ0Α00€ΐυίυΐΌ0€ίυίΤ5Τ	1078	АО- 14690				18
3233-3251	АзСсАаСсСиСиисииАсиТзТ	1079	р-аОиАГаОГаА^А^сийкЗ^С^ТгТ	1080	АО- 14700				15
3233-3251	АёСсАаОсСиСиисииАсиТьТ	1081	АоигАдодАОАСосгигикюс^гат	1082	АО- 14710				15
3233-3251	АГ|С1сАГаОГсСГиСГииГсиГиАГсиПзТ	1083	АСиААааАОаеССкХоссиТзТ	1084	АВ- 14720				18
3233-3251	А€<277[ДАС€:С1иЮ1и£и(СП.1П,1ГАСП0:Т£Т	1085	доил двадоавоси иоасиТгт	1086	АВ- 14730				18
1233-3251	А 8СсАаСсО1Си ис Си АсСТзТ	1087	АСиААваАОввбСииОвсиТгТ	1088	АВ- 14740				17
3233-3251	шеогии&с&и/ёАГгСГасгсАГгсггзт	1089	р-£СГиО%и1У2ГиСГа<31£ОГаА?сСГаТ5Т	1090	АВ- 15086				55
3233-325]	игсюиалсгсгсялоАСкэАсгсгАастт	1091	ОСЛЛООиГСТСПЛССАОСОААСГССАТзТ	1092	АВ- 15096				70

- 37 015676

Положения В человеческом ТТОС-ТИ ΝΜ.174936	Последовательность смысловой цепи(5'-3^	8Е0 ГО ΝΟ:	Последовательность антткштсдовой цепи ф'-ЗЭ1	ЗЕр ΙΟ ΝΟ:	СбозгЕчеаи дугпета	Средний Τη»цент оставшегося мРНКгранскрллти прнакпветствуюшей концентрации киРНК в клетках различных типов	1С50в Неро: [мМ]	1С50в гепатоштах «•бакоподобных обезьян <нМ)
100 4ΪΛΉφΟ2	30 нМ/Нер62		30 нМ/ НеЬа
3233-3251	иёСиисСеи&АвСаСоАвСГзТ	1093	р-еСкиСЦПГсСГиССаСкдСйА^СГаТзТ	1094	АР- 15106				71
3233 3251	иеОиЦсСси&АеОзСсАеСТзТ	1095	€Γίυκ5ουκ:ΐυίΐΐί€ίΑ0ϋαΑΑ^£ΑΤ3Τ	1096	АР- 151 16				73
3233-3251	и£8СЙ|ГЯс€Гси%АГе6ГаСк А Г&СГВТ	1097	ССи0СисСиса<ЭС<ЗААссаТ5Т	1098	АР- 15126				71
3233-3251	игсос-^1аскпзкзА<ЮАСк:гА<зсгг5Т	1099	ССиССш^исаОССААссаТгТ	1ΙΟΟ	АР15136				56
3233-3251	ияОиисСси^СаСсАвСТзТ	1101	ССиССисСисаСгОСАДссаТаТ	1102	АР15146				72
3242-3260	исиисиидсиисдсссссстт	1 юз	бССОССиСААСиААСААОАГГ	1104	АР- 15260				79
3243-3261	сиисуиАсиисАСссосситт	1105	АССССООиСААСиААСААСТТ	Н06	АР15371				24
3244-3262	иисиилсиисАсссоосистг	1107	САСССОСОиОААСиААСААТТ	) 308	АР- 15372				52
3262-3280	соссиссисАииииоАсастт	1109	сссУАААААисАоадассстт	1110	АР- 15172				27
3263-3281	оссиссисАииииидсссстг	ИН	ССССиАлААДиСАССАОССТТ	1112	АР- 15295				22
3264-3282	осиссисАииииидсскюшт	шз	АССССи АААА А1Ю АСС А ССТ7	И 14	А Ο- Ι 5373				11
3265-3283	сиссисАиигиилссосиАТТ	1115	иАСССОиААААДиСАССАСТТ	1116	АР15163				18
3266-3284	иссисдиииииАСОссиААГТ	1117	иидССССМААААА иСАССАТТ	/РЗ	АО15165				13
3267-3285	сс и с а и иди и а со<х ид асгт	1119	сиилссссидААААиодсстт	1120	АР15374				23
3268 3286	сисдишиидсссаиААСАТт	ί 121	исииАссссиАААААПСАОГг	1122	АР15296				13
3270-3288	САиииииАСбооиААСАситт	1123	АсисиилссссилААДАистт	1124	АО- 15261				20
3271-3289	а и и иииассссидаслсистт	1Г25	САсисииАссссиддАААитт	1126	АР- 15375				90
3274-3292	сиилссссиААСАоисАСклт	1127	ссисАсисиилссссилдАТТ	1128	АР15262				72
3308-3326	САСАССАССААССиСССиСТТ	1129	САССсдссиисссосисисгт	ИЗО	АР- 15376				14
3310-3328	САССАСОААССиСССиОАСТТ	1131	сисАССОАОсииссисюистт	1132	АР15377				19
3312-3330	ссАООААОсисхзоисАсиотт	1133	САсиСАСССАСсииссиостт	1134	АР15409				17

3315-3333	скзААОсисосиОАоисАисгт	1135	сдисАСисАСССАОсиусстт	1136	АР15378				18
3324-3342	СРСАОиОАРСССАСААССАТТ	1137	иссиисРбссдисАсисАСТт	1138	АР15410				8
3326 3344	сАсисдисосАбААССАистт	1139	САиссиисисссАисАсистт	1140	АР- 15379				1 1
3330-3348	САиоССАСААССАССССиСТТ	1141	САОССАиссиисиссслистт	1142	АР- 15187				36
3336-3354	АСААССдиСССиССАСССАТТ	1143	исссиссдоссдиссииситт	1144	АР15263				18
3339-3357	дссАисссиссАСССАиссгг	1145	сслиоссиосАСосА исситт	1146	АР- 15264				75
3348-3366	ссАОссАиссААсииииистт	1147	САДАДАСиисслиоссисстт	1148	АР- 15 297				21
3356-3374	ссдАсииииисссииАисАтт	1149	исдиААССсАДАддсиисстт	1150	АР15208				6
3357-3375	СААСииииисссииАисдсгт	1151	оиоАиАдсссАААААоиистт	1152	АР- 15209				28
3358-3376	ААсиииииссоииАисАССтт	1153	соисАиАдсссААЛААсиитт	1154	АР- 15193				13!
3370-3388	иАисАСССАОССсиолиистг	1155	СААРСАСОСсиссоислиАтт	1156	АР- 15380				88
3378-339$	АООссисАиисАОЮссситт	1157	А<юссАсисААисА<к1сситт	1158	АР- 15298				43
ЧЧЙЧ-34Л1	иСАЦПСАП ΙΓ.ηΓΓίΤΠΓτΓίΊιΊΤΤ	11 59	ССОССАППССАГИ 1ГгА ΑΙ1САТТ	! 160	АР15299				99
3385-3403	диисдсиснзссиакхзсАСТт	1161	СРССОССАССССАСиСААРТТ	1162	АР- 15265				95
3406.3424	осцисиААОосАНосиссютт	1163	ссадссАибссиидсдАОСтт	1164	АР15381				18
3407-3425	сиисиААСОСАиссисссетт	Н65	ссссАССдиоссиидсААстт	1166	АР- 15210				40
3429-3447	С АСССгССААСА АСУС иСССГТ	1167	оооАСАоиисиисюсссистт	1)68	АР- 15270				83
3440-3458	АсисисссиссиисА0сдст5Т	1169	биссисААОСАассАСАсит$т	1170	АР- 9591	75	95
3440-3458	АсиОисссиссииОАСсАсТаТ	1171	ОиОСРсААОСАОООАсАСиТ^Т	1172	АР9717		105
3441-3459	сисисссиссииСАОСАССГзТ	1173	соиосисААсюАСюаАСАСт$т	1174	АР 9622		94
3441-3459	си(диСссиегииСА<ЗсАс£Т$Т	1175	ООиССисААССАСаСАсАСТзТ	1176	АР9748		103

- 38 015676

Положения в человеческой пас-ти рег№ ΝΜ_ 174936	Последовательность смысловой цели	5ЕР ГО ΝΟ:	Последовательность аНТНСМысЛОВОЙ ΟβϊΗί 15‘-3'}1	ТЕО Ю ΝΟ:	Зботдоеят! дутикккэ	Средний процент оставшегося мРНК· Транскрипта гтрксротвегсгаугощей кониентраини киРНК в клетках различных тигов	1С«в НерСг2 |нМ]	1С50в гепатоцитах собаке* подобных Обетьян (нМ)
1« йМ/Нер62	40 пМ41ерС2	э ЯМ/НсрОа	30 нМ7 Не1й
! 3480-3498 1	АСАтлл/Аисииииоссиситзт	1177	АСАСССААААСАИААдиСиГьТ	1178	АО9587		63	49
1 3480-3498	АсАиииАиСишшСССисиТзТ	1179	АСАССсААААСАиАААиОиТяТ	1180	АО- 9713		22	25
3480-3498	АГсАГиЫиАСиСГии^ииГаСГйиГсиГГзТ	1181	р-аСбаСГсСГаАГаАГ^АЙдАГаАГиОГиТгТ	1182	АО- 14679				19
3480-3498	АсиЕлипллиюгиплиюккюиюшггз т	1183	АС АСгСЮГАА ДАО АР ίΑΑ А11 ЮС ГТяТ	1184	АО- 14689				24
. 3480-3498	АсАиииАиСииии§б£С1сиТ5Т	1185	р-абГаСГсС Га А 1аА ίβΑ £иАй А Гиб ίιΠΥΓ	1186	АО- 14699				19
1 3480-3498 1	АсАиРиАиСииии^СгисиТзТ	1187	А С АСЮЮГА АААС АС ЕААДиЮР ίΤ$Τ	1188	АО14709				21
1 3480-3498 1	АГсА£ииГиАГиС£ииГии^С5§иГсСГТ5Т	1189	АСАССсаААа^АиАААиеиТаТ	1190	АО- 14719				24
1 3480-3498	АСГАигигугАиюсиплиюгасаигсгияя т	1191	АСАССсаААа£АиАААи§иТ?Т	1192	АО14729				23
| 3480-3498	АсАиЦи ΑϋΟαυυυ&ΦβυεϋΤδΤ	1193	АСАССсаААа&диАААщ’иТзТ	1194	АО- 14739				24
. 3480-3498	СЛСГаиГсО^ГиСГсС^СГаСГсСтт	1195	р-йС&иГсС^ОГсАГдСТаСГаиГзСГсЪТ	1196	АО- 15085				74
3480-3498	ссюгАигс^юсюккюгасАса'сгтят	1197	сссллсюгассгАОСГАОдиюссшт	1198	АБ- 15095				60
3480-3498	ОсСаисиаСиСсСяОзСгсСЬТ	1199	р-8О&иГССГйСГсАГЕСТаС£эиГ§С£сТ5Т	1200	АО- 15105				33
34Ки-349Ь	йсСаисизСи<ЗсСе<ЗаОсСТ5Т	1201	СССЮГСГСГССС’ЛСЮСАСАиЮССЯзТ	>202	Αϋ- 15115				30
3480-3498	ог^аиьигвсгиогесгвойогстт	1203	СССССапОСаеСАСАи^сТзТ	1204	АО- 15125				54
3480-3498	йсю1Аигсюю<1КГс</сюоАОсюгг№	1205	ОССиСаиОСа§САСАи^сТ5Т	1206	АО- 15135				51
3480-3498	ЙсСаисидСШлсСвСаСсСТсТ	1207	СССиСаиССа5САСАи£ВсТ<Г	1208	АО- 15145				49
348Ь3499	САиъиАисииииоооисистзТ	1209	С АС АССС А А А АС ли А А А С’С ТяТ	1210	Αϋ- 9578	49	61
3481-3499	сАишАисшииСОСисиСТяТ	1211	сАОАССсААААСАиАААиСВТ	1212	АО- 9704		111
3485-3503	илисииииссоисиоиссутвт	1253	АОСАСАСдСССААЛАСАиАТэТ	1214	АО9558		66
3485’3503	иАцсцуииОО6исиСиесиТ$Т	1215	АОСАсАСАССсААААСАиАТяТ	1216	АО- 9684		63
35С4-3522	сисуоииоссиииииАСлстьТ	3 217	СиСиАААААСССАДСАСАОТяТ	1218	Αϋ- 9634		29	30
3504-3522	сисиСииСссиииииАсАСТяТ	1219	СиСиДААААСЮсААсАОАСТгТ	1220	АО9760		14	27
3512-3530	ссииииидсАоссААсииитт	1221	АААСииСССибСААДААСОИ	1222	АО- 15411				5
3521-3539	АСССААсиииисиАОАСситт	1223	АСсисиАСАААдаиисссигг	1224	АО15266				23
3526-3544	АсиииьсиАОАССиззиииитт	1225	ААААСАССисиАСААААОитТ	1226	АО- 15382				12
3530-3548	и иси Аслссис υ ии и оси υτ$τ	1227	ААОСААААСАСОисиАСААТзТ	1228	АО- 9554		23	24
3530 3548	ни с иАС АссиСиисадСк и иТя Т	1229	ААСсА А ААсАСС иСиАСА АТзТ	1230	АО9680		12	22		0,10	оде
3530-3548	иГиСй1АГеАГсС1иО(ииГииГёСп1иГГзТ	1231	р-аАГеСГаА :аА Гс А ίχΰ ГиСГи А1&А ГаТ$Т	1232	АО- 14676				12
1530-3548	и1и£сЮ1АОАСТС(июи5иплигосплигг$ Т	1233	ААССГААААСГАССиЮГРГАСААТяТ	1234	АО- 14686				и
3530-3548	ииСиА^АсСдОииии^СииТаТ	1235	р-аАТ^СГаАйАГсАГвСГиСГиАГйАйТяТ	1236	АО- 14696				12
3530 3548	ииСиА&А^СчбцаиияСииТзТ	1237	ААСС£ААААС£АОСиГС!РГАСААТ5Т	1238	АО- 14706				18
3530-3548	иГиС5иА5&АГсС1иО1ииЕиитЛиЪтТ	1239	ААСсА ааАСайСиСиА^ааТзТ	1240	АО- 14716				17
3530-3548	и ιυίϋΐυίΑΟ дсйлиюилб пли юс ю ги т т	1241	ААСсАааАСадСгиСиАдааТзТ	1242	АО- 54726				16
3530-354«	ииСиАгАс€и<ЗиииийСи1ЕГзТ	1243	ААСсАааАСаёСисиАгэаТзТ	1244	АО- 14736				9
3530-3548	СЕаиГаС^СГсиГ&ОГайГииЬАСииПзТ	1245	р-аАГиАГаАГсиГсСГаС^ГсШаиГвТзТ	1246	Αϋ- 15082				27
3530-3548	оли £АССС5сшгао дои ю ю£а и ги гм	1247	ААиГАААСТиГСГСГАСССГСГСГДиЮТяТ	1248	АО- 15092				28
3530-3548	СаиаСвСсийОзСиииАииТзТ	1249	р-аДГиАТаАГсиГсСГаС^СкиТаиГёТяТ	1250	АО 15102				19
3>30 3548	СаиаС^СсивСэСЗиииАиит зТ	1251	ААигАААСгиЮЕСГАСССгсгиГАсгатят	1252	АО 15112				17
3530-3548	ССаиГа6Г®СГсиГв6йСГии1иА£ииГГ5Т	1253	А А и А А асССсаССССиаийТ яТ	1254	АО15122				56
3530-3548	С£Аи£АСССЯ?Ш£СС АС и ЛЛП ί а и ЯЛТяТ	1255	ААСААдсиСсаССССиаивТяТ	1256	Αϋ15132				39
3530 3548	СаИаСёСсивСаСиииАииТзТ	1257	ААСААасССсаСЮСССаддТ;.?	1258	Αϋ15)42.				46
3531-3549	исилсАСсисииииссииитзт	1259	АААбСААААСАОСисиАСАТзТ	1260	АО9553		27	22	| 0.02	ΖΖΊ

- 39 015676

Положения в человеческой ТЮС-ТИ рег№	Последовательность смысловой ими (5'-3^	8Е0 10 N0:	Последовательность ыпиомислоьой пепн (5’·37ι	5Ер ГО ΝΟ:	луттад	Средний процент оставшегося мРНКтранскрипга при соответствующей концентрации киРНК в клетках различны», типов	1С50в НерО2 [нН]	1050 в гепатоцитах ообатгоподобных обезьян (нМ)
190 чМ/НсрО2	за нМ/НерСг2	нМ/Нср>02	30 нМ1 НеЪз
3531-3549	иСиАСАссиСииииОсиииТзТ	1261	АААСсАААА«АССиСиА(дАТ$Т	1262	АО9679		17	21
3531-3549	игсигаСйсгси^и/иигиоГсиеиитт	1263	р-аАГа6£сА&АГаСйСГ&иГсиГаСйТ=.Т	1264	АО- 14675				;ι
3531-3549	игсгигдсАсгсшгоишгишсосллипзггз т	1265	АААССГААААСГАООиГСГиЕАСАТьТ	1266	АО- 14685				19
3531-3549	исиа<га€си^ии11и6сЬииТ5Т	1267	р-аАГаСГсАГаАйСй<3^иГси£аСйТ5Т	1268	АО- 14695				12
3531-3549	исиаоассигииииосииитзт	1269	АААССГААААСГАСЮигаТЯАОАТзТ	1270	АО- 14705				16
3531-3549	иииЕаагасии^иьигиС'Еси’иЕитчт	12.71	АААОСааААсаСОисиайаТзТ	1272	АО- 14715				19
3531-3549	игсЕигАСАОслзгсиплигигсоигппзт т	1273	АААССазААсябОисиаяаТяТ	1274	АО- 14725				19
3531-3549	исиаОаСсиЕииииСсииИГзТ	1275	АААССэаААсаСОисиа8аТ5Т	1276	АР- 14735				19
3531-3549	и ЕсАГиА Г§0 £сС ГиСГ&А Г^СГии ЕаЭ [ΤίΤ	1277	р-аиГаАГаСГиС£сАГ§Сг£сСГиАГ1хСГаТзТ	1278	АО- 15081				30
3531-3549	и гс гао гаоссгсш гсс ас иги ю га итт	1279	АСГАААСЛЛСГСГАОССЕСЮГАиГОАТзТ	1280	АО- 15091				16
3531-3549	исАиАдСсСиСзА^иииаиТяТ	1281	р-аиГаАГаСГиСГсАЕ8ОГсС£иАГиСйТ5Т	1282	АР- 15101				16
3531-3549	исАиА^СсСиС^АзПииаиТзТ	1283	А^АААС^ГСГСЕАООСЕСЕиГАиЕСАТзТ	1284	АР15111				и
	ΙΤ+οΑήιΛΓσίΤΛ-ΓΑιΑ+οΛΡοΙ Ιίι.Γ ТЙаГ ΤίΤνΓ	1285	А( и ДАп>СГя«СгСГиА||^аТ^Т	12ЯЪ	АР- 15121				19
3531-3549	иЕСгдигАо<зсгсгигссАоигип;£Аи1Т5Т	1287	А и А А А сиССа^ОСС и А и^аТаТ	1288	АР- 15131				17
3531-3549	ПсАшДЕСсСиСдАдиииаиТгТ	1289	ΑϋΑ А АсиССа^СгССиАи^аТзТ	1290	АР- 15141				18
3557-3575	ис аас ди ли и и а и иссссотзт	1291	сссАСААиАААилисиисАт&т	1292	АР- 9626		97	68
3557 3575	иСААСгАиАиииАиисиСгОСТзТ	1293	ССсАОААцАААиАисиУсАЪТ	1294	АО9752		28	33
3570-3588	исиоосиииисиАССАииитгт	1295	АААиССиАСААААСССАОАТзТ	1296	АО- 9629		23	24
3570-3588	ис11ОССи1дииСиАСсАиииТзТ	1297	ДААиОСиАсААААССсАСАТвТ	1298	АО9755		28	29
3613-3631	АиАААААСАААСАААССИиТТ	1299	ААСсииисииисиииииАитт	1300	АО- 15412				21
3617.3635	АААСАААСАААССииСиССТТ	1301	оаАСААссииисииисииитт	1302	АО- 152! 1				73

3618-3636	ААСАААСАААССОиОиССШТ	1303	а сс ас а а со συ ис и иисиитт	1304 | АО- | |	1 1 41 1 1
Г				1 1 15300 1 }	и и κι 1

¹ и, С, А, С - соответствующий рибонуклеотид; Т - дезокситимидин; и, с, а, д - соответствующий 2'-Ометил-рибонуклеотид; Ш, С£, АТ, С£ - соответствующий 2'-дезокси-2'-фтор-рибонуклеотид, если нуклеотиды представлены в виде последовательности, то они присоединены посредством 3'-5'фосфодиэфирных групп, нуклеотиды со вставленной буквой к присоединены посредством 3'-О-5'-Офосфотиодиэфирных групп, если перед последовательностью не стоит префикс р, то это означает, что олигонуклеотиды не содержат 5'-фосфатной группы у 5'-концевого нуклеотида, все олигонуклеотиды имеют 3'-ОН у 3'-концевого нуклеотида.

Таблица 2

Обозначение дуплекса	Последовательность смысловой цепи (5’-3’)1	$ЕС) ΙΟΝΟ	Последовательность антисмысловой цепи(5’-3’)'	8Е<2 ΙΟ ΝΟ	Процент оставшейся мРНК по отношению к контролю при концентрации киРНК 30 нМ
АО-Ю792	СссиСОАСиицАиисСбААТзТ	1305	ииССОДАиАААСиСсАСОСТзТ	1306	15
АЭ-10793	бссиССАСиииАиисСЗСЗААТбТ	1307	цисСбААиАААСОссАСССТйТ	1308	32
АО-10796	ОссиСбАСиииАиисССААТзТ	1309	ииссоАлилААсиссАосстзт	1310	13
АЭ-12038	(ЭссиООАСиииАиисСЮААТьТ	1311	ииССбААиАААСиССАСССТзТ	1312	13
АО-12039	СссиССАбиииАиисССААТзТ	1313	ииССОААиАААСиССАСОСТяТ	1314	29
АО-12040	ОссиСОАСиииАиисСЮААТзТ	1315	ииссСААиАААсисСАОсстзт	1316	10
АО-12041	СссибСЗАСиииАиисСОААТзТ	1317	ииссОААиАААсиссАОсстзт	1318	н
АО-12042	сссиссАсиииАиисосААТзТ	1319	ииССбААиАААСиССАООСТзТ	1320	12
АО-12043	бссиосАоицилиисссААТзТ	1321	ииСССААиАААСиССАСССТзТ	1322	13
АО-12044	оссисаАсииоАииссбААТзт	1323	иисССААНАААСиССАСОСТвТ	1324	7
АР-12045	оссисоАоииилиисасААТкт	1325	ииссОАлиАААсисСАОостзт	1326	8
Αϋ-12046	ОссиССАбиииАиисССАА	1327	ииССОААиАААСиССАСОСзсзи	1328	13
АО-12047	СссиССАСиииАиисСгСААА	1329	иииссоААилААсиссАсосвсви	1330	17
АО-12048	ОссиС6АОиииАиисОС|АААА	1331	ииШСССААОАААСиССАОСтСзсзи	1332	43
АО-12049	ОссибОАСиииАииоСгСААААС	1333	сиииисссААиАААсиссАсасзези	1334	34
Αϋ-12050	СссиССАСгиииАиисСбААТТаЬ	1335	ииСССААиАААСиССАСОСТТаЬ	1336	16
АР-12051	СссиСОАОиииАиисСО А ААТТ аЬ	1337	иииСССААиАААСОССАСОСТТаЬ	1338	31
АР-12052	ОссиСОАСиииАиисССААААТТаЬ	1339	ииииссбААПАААсиссАОссттаЬ	1340	81
АР-12053	СссиОСАСиииАиисОСААААСТТаЬ	1341	СииШСССААиАААСиССАСОСТТаЪ	1342	46

- 40 015676

АО-12054	сссиосАсиииАиисссААТзт	1343	ииССОААиАААСиССАСОСзсзи	1344	8
АР-12055	СгссиООАОиииАиисООААТьТ	1345	ииССОААиАААСиССАбОСзсзи	1346	13
АО-12056	6сСиО^А§иииаииС§СаА	1347	иОССбААиАААСиССАСОСТТаЬ	1348	11
ΑΡ· 12057	СсСиС§А§иииаииС§ОаА	1349	ииСССААОАААСиССАСОСТзТ	1350	8
АО-12058	СсСиС§АёиииаииСё6аА	1351	ииССОААиАААСиСсАббСТзТ	1352	9
АО-12059	6сСиСл§А§иииаииС§6аА	1353	иисСбААиАААСиссА0ССТ$Т	1354	23
АО-12060	6сСиО§А§и ииаииС^Са А	1355	ШССОааиАааСиССАзяс	1356	10
АО-12061	СсСиО§пА§иииа1]иС§ОаАТ5Т	1357	ииСС(ЗааиАааСиССА£&СТ5Т	1358	7
АР-12062	СсСиО§А§иииаииС§СаАТТаЬ	1359	ЦиССбааиАааСиССА^&сТТаЬ	1360	10
АР-12063	СсСи(3§А§иииаииСйбаА	1361	ииСС6ааиАааСиССА^С5С5и	1362	19
АО-12064	ОсСиСЗёпА^иииаииСёОаАТзТ	1363	ЦиСССААиАААСиСсАббСТзТ	1364	15
АР-12065	ОсСиСёАвиииаииСёбаАТТаЬ	1365	ииССОААиАААСиСсАСбСТТаЬ	1366	16
АО-12066	СсСиО§А£ииС'аииС2.СаА	1367	ииССОААиАААСиСсАСССбСБи	1368	20
АО-12067	СсСиС§пА^иииаииС§0яАТ5Т	1369	иисссААиАААсиссАббстзт	1370	17
АР-12068	СсСи6§АйиииаииС^СаАТТаЬ	1371	ииСССААОАААСиССАСОСТТаЬ	1372	18
АО-12069	<ЭсС и О Α§Ό и С аЬ'иС абаА	1373	ииСССААиАААСиССАСССвсзи	1374	13
АР-1233 8	<ЗГсСГйССйА1еи£иийий)СГ§<}ГаАТ	1375	Р-ии£сС£§А£аи£аА£аС£йС£сА£§С£с	1376	15
АО-12339	<3с С и А§и ииаЬ’и С §Оа А	1377	Р-иикС£§А£аи£аА£аС£йС£сА£§С£с	1378	14
АО-12340	Ссс иСС АС иии А и исОС А А	1379	Р-ии£сС£ёА£аи£аА£аС(иС£сА£ёС£с	1380	19
Αϋ-12341	СГсСГиОСвА^иГииГаиЛСГзСГаАЯ'зТ	1381	Р-ии£сС£ёАйиГаА&С£иС£сА£§О£сТ5Т	1382	12
АО-12342	С£сС£и6£^А£§и£ии£аи£йС£§С£аА£ГзТ	1383	ЦиСССААиАААСиСсАСЮСТхТ	1384	13
АР-12343	С£сС£иС£^£§и£ии£аиШС£§6£аА£Г5Т	1385	иисССААиАААСиссАСОСЪТ	1386	24
АР-12344	О£сС£иСГ&АГ8ип1иГаий1СГеСГаАтТ	1387	иисссААидААсиссАссстзт	1388	9
АО-12345	ОГсС(иО^А£@иП1иГаи(иС^С&А£Г5Т	1389	ииССбААОАААСиССАСССзсзи	1390	12
АО-12346	ОГсСГиСГ&АГЕиГииГаитСГзСЕаАСГзТ	1391	ЦиСССааиАааСиССАё^сзсзи	1392	13
АР-12347	бссисюАоиииАииссюААТзт	1393	Р-ии£сС£ёАйи£аА£аС£иС£сА£§<3£сТ5Т	1394	И

АР-12348	СссиСгС АОиии АиисСС А АТ$Т	1395	Р.ииГсС£ёА&и£аА£аС£иСйА£ёС£сТ5Т	1396	8
АО-12349	ОсСиО§пА§иииаииС§6аАТ5Т	1397	Р-ииГсС£5А£аийА£аСГиСГ£А£е6£сТ5Т	1398	11
АР-12350	6£сСГиС£ёА^и£иийи1иС£еО£аАПТаЬ	1399	Р-и№С£ЙА£аи£аАйС£иС£сА£§С£сТТаЬ	1400	17
АР-12351	ОГсСГиС^А^иГииГаийСТеСГаАГ	1401	Р-ии£сС£ёАйи&АйС£иС£сА£§6£с5С£8и	1402	11
АР-12352	6£сСп10£§А£§иЯ1и£аи1иСГёО£аА£	1403	ииСССааОАааСиССА§§с5С5и	1404	И
АР-12354	б£сС£и6£§А£§и£ии£аЧЛиС£§6£аАГ	1405	ииСС6ААиАААСиССАССС5£5и	1406	11
АР-12355	С£сС£и6Г§АГ^и£иийи£иС£§6£аАГ	1407	ииСССААиАААСиСсАСОСТ^Т	1408	9
АР-12356	6ГсС£иС£§А^и£ии£аи£иС£§6£аА£	1409	иисССААиАААСОссАСССТБТ	1410	25
АО-12357	ОтосСтоиОто£Ат02§итоиитоаитоиСто§ОтоаА	1411	ииСССааиАааСиССА§§с	1412	56
АР-12358	СтосСп1оиОтоцАп102д.итоиипюаигпсиСпк>§ОтоаА	1413	Р-ии£сС£§А£аи£аА£аС£иС£сА£§С£с	1414	29
АО-12359	ОтосСтоиОто§Ат02§итоиитоаитоиСтойОпюаА	1415	Р-ии£сСГ§А£аи£аА£аС£иС£сА£ё6£с5С£5и	1416	30
АР-12360	6то<Стои6т.о§Ат02§и1ПОиитоаитоцСтоёСтоаА	1417	ииСССААиАААСиССАСССзо^и	1418	15
АР-12361	<ЗтосСтоиСто§Ат02§итоиитоаитоиСто§ОтоаА	1419	ииСССААиААЛСиСсАСССТзТ	1420	20
АО-12362	бтосСтоибтоёАт02§ип1|Оиитоаип1оиСто§СлтоаА	1421	иисССААиАААСиссАСССЪТ	1422	51
АР-12363	СтосСтоиОто2Ат02^итоиитоаитоиСто§СтоаА	1423	ииСС6ааиАааСиССА§£СБС8и	1424	11
АО-12364	ОтосСтоиСтойАтоёитоиитоаитоиСтоёОтоаАТБТ	1425	циСССааОАааСиССА§§сТ5Т	1426	25
АР-12365	СтосСпюи6то§Ато§итоиитоаитоиСто§6тоаАТзТ	1427	ииСССААиАААСиСсАСССТзТ	1428	18
АР-12366	6тосСтоиСто5Ато§итоиишоаитоиСто§СтоаАТ5Т	1429	иисссААидААсиссАйсстбТ	1430	23
АО-12367	Сто стостоиССАСтоитоитоиАтоитоитосССА АТ&Т	1431	ииСС6ааиАааСиССА§£сТ5Т	1432	42
АО-12368	СтостостоиССАСтоитоитоиАтоитоитосССААТзТ	1433	ииСССААиАААСиСсАСССТзТ	1434	40
АО-12369	СтостостоиССАСтоитоитоиАтоитоитосССААТзТ	1435	иисссААиАААсиссАссстзт	1436	26
АР-12370	СшостосгпоиСОАСтоитоитоиАтоитоитосСбААТБТ	1437	Р-и£0ГСГСЮААи£АААС£и£С£С£Д6ССаБТ	1438	68
АО-12371	СтостостоиССАСтоитоишоиАтоитоитосССААТаТ	1439	Р-и£и£С£СгаААиГАААС£и£С£Г£АС6С£8С£5иГ	1440	60
АР-12372	СтостостоиССАСтошпоитоиАтоитоитосССААТзТ	1441	Р-ии£€С£ёА£аи£аА£аС£иС£сА£§С£с5С£5и	1442	60
АО-12373	Стостостои6САСтоитоитоиАтоито«тосССААТ$Т	1443	иисссААиАААсиссАСОстзт	1444	55
АР-12374	бскзшгасАсишшгАигигсгааААЬт	1445	иЮ£С£С£СААи£АААСЯЛС1С£АСЮСтТ	1446	9

- 41 015676

АО-12375	0С£СШГ6ОА0иШ1ЪТАиШ£С100ААТ5Т	1447	иисссААиАААсиссАосстзт	1448	16
АО-12377	ссгсшюсАаиююгАигигсюсААЪт	1449	иисССААиАААСиссАбОСТзТ	1450	88
АО-12378	аС1СШКЮАСиШШГАиШ£СЮСААТ5Т	1451	ииССбааиАааСиССА^сзсзи	1452	6
Αϋ-12379	6С1СШЮСАСиЮ1иГАиЮ£СЮСААТ8Т	1453	ииССОААиАААСиССАОССзсзи	1454	6
АО-12380	οϋΚίυίοοΑουίυίΕΎΑυίυίοίοαΑΑΤδΤ	1455	Р-ииГсСГ^АГаЕЛаАЬСГиСГсАГёОГсзСГзи	1456	8
АО-12381	асгсшюоАсишшгАигигсгбаААТзт	1457	Р-ии£сС£§А£аи£аА1аС£иС£сА1§6£<ТзТ	1458	10
АО-12382		1459	Р-игиГСЙГЮААиГАААСЛЗГСГСЕАСОСтТ	1460	7
АО-12383	сссиссАоиииАиисобААТзт	1461	Р-иЮОСЮААШАААСЮГСГСГАСОСГГзТ	1462	7
АО-12384	Осси 06 А Си ни Аи исОС А АТ зТ	1463	Р-иЮ£С1СЮААиРАААСЮ1С1С£А6ОСГГ5Т	1464	8
АО-12385	бсСиО^пА^иииаииСеОгАТзТ	1465	Р-и£и£С£С£6ААи£АААСШ£С£СГА6ОСтТ	1466	8
Αϋ-12386	СГсСп1С£ёА££и£ииЙ1и£иС^6£аА£	1467	Р-иШЮГСЮААШ’АААСЮГСКТАСОСГГзТ	1468	11
АО-12387	ссйзщюоАбаиюллАиллсгасАА	1469	и£иГС£СЮААи£АААСШ£С£С£АО6СГзСГзи£	1470	13
АО-12388	66ί6ίυί06Ά6συίυΐυίΆυίυί6ί0<3ΑΑ	1471	Р-ии&С(&АГаи£аАГаС(иС£сА£ё6й	1472	19
АО-12389	бСГСШ£С0АСйиШЮ1АиШ£С£0САА	1473	Р-ии£сС^АГаи£аАГаС£иСТсА£йСй:5СГзи	1474	16
АО-12390		1475	ииССбААиАААСиССАСЮСзсзи	1476	17
АО-12391	сс1сшюоАСсиш£игАи1игскзоАА	1477	ииССОааиАааСиССАё^с	1478	21
АО-12392	оасшгббАсоишюгАишкжюАА	1479	ииссоААиАААсиссАасстзт	1480	28
АО-ϊ 2393	осйлив&йАооишялАидискюАА	1481	ииССОААиАААСиСсАббСТзТ	1482	17
АО-12394	бСГСШЮОАСОиШЮСдиШЮ^САА	1483	иисСОААиАААСиссАСССТзТ	1484	75
АО-12395	бтосСтоиСпю^АтОёитоиитоаитоиСтойОтоаАТзТ	1485	Р-и1и£С£С£6ААи£АААС£ТТ'С1'СГАССС£5С£5и£	1486	55
АО-12396	6тосСтои6то§Ат02ёитоиитоаипк>иСтоёОп1оаА	1487	Р-иЮ£С£СЮААи£АААСЮГСГСГА(ЮС£5С£5Ш	1488	59
АО-12397	6ГсСй|6Г§АГёи<ии£аип|С%6ГаАГ	1489	Р-иШ£С£С£6ААиГАААСЮ1С1СГА66С£зСГ5иГ	1490	20
АО-12398	6ГсС1и6Г§АГ^иГииГаип1СГ§6ГаА£Т8Т	1491	Р-иШ£С£С16ААи£АААС£ТИ'СГС£А6бС1ЕС£5и1'	1492	11
АО-12399	СсСи6§пАёиииаииС§0аАТ&Т	1493	Р-иЮ£СГС£6ААи£АААСЮЮГСГА66СГзСГзОГ	1494	13
АО-12400	оссиссАбиииАписбОААТзт	1495	Р-иШКЯЗЙЗААиГАААСЯЛСГСГАСОСГзСйиГ	1496	12
АО-12401	бссиССАСиииАиисбСААТзТ	1497	Р-иШГСГСЮААиГАААСОСГСГАбОСГзСГзиГ	1498	13

АО-12402	ОссиббАСиииАиисОбАА	1499	Р-и1и£С£СЮААи£АААС£и1С£С£А66СГ5С£5иГ	1500	14
Αϋ-12403	осисююсАсоиююгАишююбАА	1501	Р-иЮ£С(СГОААиГАААСШ1СГС£А66СГзС£зиГ	1502	4
АО-9314	бссибОАбииилиисббААТзт	1503	ииССОААОАААСиССАООСТзТ	1504	9

¹ и, С, А, С - соответствующий рибонуклеотид; Т - дезокситимидин; и, с, а, д - соответствующий 2'О-метил-рибонуклеотид; ИГ, СГ, АГ, СГ - соответствующий 2'-дезокси-2'-фтор-рибонуклеотид; тοс, тοи, тοд, тοа - соответствующий 2'-МОЕ-нуклеотид; если нуклеотиды представлены в виде последовательности, то они присоединены посредством 3'-5'-фосфодиэфирных групп; аЬ - 3'-концевой неосновный нуклеотид; нуклеотиды со вставленной буквой к присоединены посредством 3'-О-5'О-фосфотиодиэфирных групп; если перед последовательностью не стоит префикс р, то это означает, что олигонуклеотиды не содержат 5'-фосфатной группы у 5'-концевого нуклеотида; все олигонуклеотиды имеют 3'-ОН у 3'-концевого нуклеотида.

Claims (11)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Двухцепочечная рибонуклеиновая кислота (дцРНК), ингибирующая экспрессию человеческого гена РС8К9 в клетке, где указанная дцРНК содержит по меньшей мере две последовательности, комплементарные друг другу, где смысловая цепь содержит первую последовательность, а антисмысловая цепь содержит вторую последовательность, включающую в себя область комплементарности, которая, по существу, комплементарна по меньшей мере части мРНК, кодирующей РС8К9, где указанная область комплементарности составляет в длину менее 30 нуклеотидов, где указанная первая последовательность содержит 8ЕО ГО NО: 1229 и указанная вторая последовательность содержит 8ЕО ГО NО: 1230 и где указанная дцРНК в результате ее контактирования с клеткой, экспрессирующей указанную РС8К9, ингибирует экспрессию указанного гена РС8К9.
2. 2. дцРНК по п.1, где указанная дцРНК содержит по меньшей мере один модифицированный нуклеотид.
3. 3. дцРНК по п.2, где указанный модифицированный нуклеотид выбран из группы, состоящей из 2'О-метилмодифицированного нуклеотида; нуклеотида, содержащего 5'-фосфортиоатную группу, и концевого нуклеотида, присоединенного к холестериловому производному или бисдециламидной группе додекановой кислоты, 2'-дезокси-2'-фтормодифицированного нуклеотида, 2'-дезоксимодифицированного нуклеотида, блокированного нуклеотида, неосновного нуклеотида, 2'-аминомодифицированного нуклеотида, 2'-алкилмодифицированного нуклеотида, морфолинонуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, содержащего неприродное основание.
4. 4. дцРНК по п.1, где указанная первая последовательность состоит из 8ЕО ГО NО: 1229, а указанная вторая последовательность состоит из 8ЕО ГО NО: 1230.
5. 5. дцРНК по п.1, где указанная дцРНК способна вызвать снижение уровня липидов в сыворотке.
6. 6. Фармацевтическая композиция для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в организме, содержащая дцРНК и фармацевтически приемлемый носитель, где указанная дцРНК содержит по меньшей мере две последовательности, комплементарные друг другу, где смысловая цепь содержит первую по

   - 42 015676 следовательность, а антисмысловая цепь содержит вторую последовательность, включающую в себя область комплементарности, которая, по существу, комплементарна по меньшей мере части мРНК, кодирующей РС8К9, где указанная область комплементарности составляет в длину менее 30 нуклеотидов, где указанная первая последовательность содержит 8Е^ ГО ΝΟ: 1229 и указанная вторая последовательность содержит 8Е^ ГО ΝΟ: 1230 и где указанная дцРНК в результате ее контактирования с клеткой, экспрессирующей указанный РС8К9, ингибирует экспрессию указанного гена РС8К9.
7. 7. Фармацевтическая композиция по п.6, где указанная первая последовательность состоит из 8Е^ ГО ΝΟ: 1229, а указанная вторая последовательность состоит из 8Е^ ГО ΝΟ: 1230.
8. 8. Фармацевтическая композиция по п.6, где указанная дцРНК способна вызвать снижение уровня липидов в сыворотке.
9. 9. Способ т νίΐτο ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетке, предусматривающий:

   (a) введение в клетку двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) по п.1 и (b) поддержание клетки, продуцированной на стадии (а), в течение периода, достаточного для разрушения мРНК-транскрипта гена РС8К9 и тем самым ингибирования экспрессии гена РС8К9 в указанной клетке.
10. 10. Способ лечения, профилактики или контролирования патологических состояний, которые могут быть опосредованы понижающей регуляцией экспрессии гена РС8К9, предусматривающий введение пациенту, в случае необходимости такого лечения, профилактики или контролирования патологического состояния, терапевтически или профилактически эффективного количества дцРНК по п.1.
11. 11. Вектор для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетке, где указанный вектор содержит регуляторную последовательность, функционально присоединенную к нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере одну цепь дцРНК по п.1.