EA015676B1 - Композиции и способы ингибирования экспрессии гена pcsk9 - Google Patents

Композиции и способы ингибирования экспрессии гена pcsk9 Download PDF

Info

Publication number
EA015676B1
EA015676B1 EA200870528A EA200870528A EA015676B1 EA 015676 B1 EA015676 B1 EA 015676B1 EA 200870528 A EA200870528 A EA 200870528A EA 200870528 A EA200870528 A EA 200870528A EA 015676 B1 EA015676 B1 EA 015676B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
dsrna
pc8k9
gene
sequence
expression
Prior art date
Application number
EA200870528A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200870528A1 (ru
Inventor
Памела Тан
Биргит Брамлаге
Мария Франк-Каменетски
Кевин Фитцжеральд
Акин Акинк
Виктор Е. Котелянски
Original Assignee
Элнилэм Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Элнилэм Фармасьютикалз, Инк.
Publication of EA200870528A1 publication Critical patent/EA200870528A1/ru
Publication of EA015676B1 publication Critical patent/EA015676B1/ru

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06Antihyperlipidemics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10Type of nucleic acid
    • C12N2310/11Antisense
    • C12N2310/111Antisense spanning the whole gene, or a large part of it
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10Type of nucleic acid
    • C12N2310/14Type of nucleic acid interfering N.A.
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/31Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315Phosphorothioates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/32Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/3212'-O-R Modification
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/32Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/3222'-R Modification
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/33Chemical structure of the base
    • C12N2310/332Abasic residue
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/35Nature of the modification
    • C12N2310/351Conjugate
    • C12N2310/3515Lipophilic moiety, e.g. cholesterol

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (дцРНК) для ингибирования экспрессии гена пропротеин-конвертазы субтилизин-кексина 9 (PCSK9), где указанная дцРНК включает в себя антисмысловую цепь, имеющую нуклеотидную последовательность длиной менее чем в 30 нуклеотидов, обычно 19-25 нуклеотидов, и, по существу, комплементарную по меньшей мере части гена PCSK9. Настоящее изобретение относится также к фармацевтической композиции, содержащей дцРНК в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, и к способам лечения заболеваний, вызываемых экспрессией гена PCSK9, с использованием указанной фармацевтической композиции.

Description

Настоящее изобретение относится к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (дцРНК) и к ее применению в опосредовании интерференции РНК для ингибирования экспрессии гена РС8К9, а также к применению дцРНК для лечения патологических состояний, которые могут быть модулированы посредством ингибирования РС8К9, таких как гиперлипидемия.
Предшествующий уровень техники
Пропротеин-конвертаза субтилизин-кексин 9 (РС8К9) является членом семейства сериновых протеаз субтилизинов. Другие восемь субтилизиновых протеаз, РС8К1-РС8К8 (также называемых РС1/3, РС2, фурин, РС4, РС5/6, РАСЕ4, РС7 и 81Р/8К1-1), представляют собой пропротеин-конвертазы, которые направляют белки широкого ряда на секреторный путь и играют определенную роль в различных биологических процессах (Ветдегои, Е. (2000), 1. Μοί. Εηάοετίηοΐ. 24, 1-22, СеикЬегд, К. (1998), 8етш. Се11 Бет. Вю1. 9, 11-17, 8е1бак, N.6. (1999), Вташ Кек. 848, 45-62, Тау1ог, Ν.Α. (2003), ЕА8ЕВ 1. 17, 1215-1227 и ΖΙιοιι. А. (1999), 1. Βίο1. Скет. 274, 20745-20748). Было высказано предположение, что РС8К9 играет определенную роль в метаболизме холестерина. Экспрессия мРНК РС8К9 ингибировалась после кормления мышей холестеринсодержащей пищей (Мах^е11, К.К (2003), 1. Б1р1б Кек. 44, 2109-2119), активируется статинами в клетках Нер62 (ПиЬис, 6. (2004), Аг1егюкс1ег. ТкготЬ. Уаке. Βίο1. 24, 1454-1459) и активируется белком, связывающимся со стеролрегулирующим элементом у трансгенных мышей (8КЕВЕ) (ΗοτΙοη, ΕΌ. (2003), Ргос. №11. Асаб. 8с1. И8А 100, 12027-12032), аналогично действию ферментов биосинтеза холестерина и рецептора липопротеина низкой плотности (БЭБ-В). Кроме того, было обнаружено, что миссценс-мутации РС8К9 ассоциируются с гиперхолестеринемией, наследуемой по аутосомнодоминантному типу (НсМаЭ) (АЫГабек М., е1 а1. (2003), №1. 6еие1, 34, 154-156, Т1ттк, К.М. (2004), Нит. 6еие1 114, 349-353, Бегеи, Т.Р. (2004), Сйи. 6еие1. 65, 419-422). РС8К9 может также имеет важное значение в определении уровней холестерина ЛНП у всего населения, поскольку, как наблюдалось у населения Японии, полиморфизм в один нуклеотид (8ΝΓ) обычно влияет на уровни холестерина (8Ηίο_)ί, К. (2004), 1. Нит. Сеие1. 49, 109-114).
Аутосомно-доминантная гиперхолистеринемия (АЭН) представляет собой моногенное заболевание, при котором у пациентов наблюдается повышение уровня общего холестерина и холестерина ЛНП и развитие ксантом сухожилий, а также наблюдается атеросклероз у недоношенных новорожденных (Кабег, Ό.Ι. (2003), 1. С1ш. ВгсекБ 111, 1795-1803). Патогенез АЭН и его рецессивной формы, аутосомнорецессивной гиперхолистеринемии (АКН) (Εοίκο, ЕС. (2003), Сигг. Орш. Είρί6ο1. 14, 121-127), обусловлен нарушением поглощения ЛНП печенью. АЭН может быть вызвана мутациями ЛНПР, которые препятствуют поглощению ЛНП, или мутациями в белке, присутствующем на ЛНП, а именно на аполипопротеине В, который связывается с ЛНПР. АКН вызывается мутациями в белке АКН, который необходим для осуществления эндоцитоза комплекса ЛНПР-ЛНП посредством его взаимодействия с клатрином. Поэтому если мутации РС8К9 являются этиологическим фактором заболеваний группы Ηс1ю1а3. то очевидно, что РС8К9 играет определенную роль в опосредуемом рецептором поглощении ЛНП.
Исследования сверхэкспрессии показали, что РС8К9 играет определенную роль в регуляции уровней ЛНПР, а следовательно, и в поглощении ЛНП печенью (Мах^е11 К.К (2004), Ргос. №11. Асаб. 8сБ И8А, 101, 7100-7105, Веи)аиие1, 8., е1 а1. (2004), 1. Вю1. Скет. 279, 48865-18875, Рагк, 8.ν. (2004), 1. Вю1. Скет. 279, 50630-50638). У мышей опосредуемая аденовирусом сверхэкспрессия мышиного или человеческого РС8К9, наблюдаемая в течение 3 или 4 дней, приводит к повышению уровней общего холестерина и холестерина ЛНП; при этом такой эффект не наблюдается у животных, не содержащих ЛНПР (Ма\\\е11 К.К (2004), Ргос. №11. Асаб. 8сБ И8А, 101, 7100-7105, Веи^аиие!, 8., е1 а1. (2904), 1. Вю1. Скет. 279, 48865-48875, Рагк, 8.XV. (2004), 1. Вю1. Скет. 279, 50630-50638). Кроме того, сверхэкспрессия РС8К9 приводит к значительному снижению уровня белка ЛНПР в печени, но не влияет на уровни мРНК ЛНПР, уровни белка 8КЕВР или на отношение ядерного белка 8КЕВР к цитоплазматическому белку 8КЕВР. Полученные результаты показали, что РС8К9 прямо или опосредованно снижает уровни белка ЛНПР по посттрансляционному механизму.
Мутации, приводящие к потере функций в РС8К9, были смоделированы на мышах (КакЫб е1 а1. (2005), РNΑ8, 102, 5374-5379) и идентифицированы у человека (Сгокеи е1 а1. (2005), №1ите Сеиекск. 37.161-165). В обоих случаях потеря функции РС8К9 приводит к снижению уровней общего холестерина и холестерина ЛНП. Результаты ретроспективных исследований, проводимых в течение 15 лет, показали, что утрата одной копии РС8К9 приводит к снижению уровня ЛНП и к увеличению степени защиты от развития сердечно-сосудистых заболеваний (Сгокеи е1 а1. 2006, Ν. Еид1. 1. Меб., 354, 1264-1272). В настоящее время имеются неопровержимые данные, которые указывают на то, что снижение уровней
- 1 015676
РС8К9 приводит к снижению уровней ЛНП.
Недавно было показано, что молекулы двухцепочечной РНК (дцРНК) блокируют экспрессию генов по высококонсервативному регуляторному механизму, известному как интерференция РНК (РНКи). В \νϋ 99/32619 (Иге е! а1.) описано применение дцРНК длиной по меньшей мере 25 нуклеотидов для ингибирования экспрессии генов у С. е1едаи8. Было также показано, что дцРНК разрушает РНК-мишень в других организмах, включая растения (см., например, νθ 99/53050, ’№а1егйои8е е! а1.; νθ 99/61631, НсИСи е! а1.), дрозофилу (Эго5орЫ1а) (см., например, Уапд, Ό., е! а1., Сигг. Бю1. (2000), 10:1191-1200) и млекопитающих (см. νθ 00/44895, Ытшег; ΌΕ 10100586.5, КгеШхег е! а1.). Такой природный механизм был положен в основу разработки нового класса фармацевтических средств для лечения расстройств, вызываемых нарушением регуляции гена или нежелательной регуляцией гена.
Несмотря на значительные успехи в области исследования интерференции РНК (РНКи) и успехи в лечении патологичесих состояний, которые могут быть модулированы негативной регуляцией экспрессии гена РС8К9, необходимость в разработке средств, которые могут ингибировать экспрессию гена РС8К9 и которые могут быть применены для лечения заболеваний, ассоциированных с экспрессией гена РС8К9, таких как гиперлипидемия, остается актуальной.
Описание сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к решению проблемы, связанной с лечением заболеваний, которые могут быть модулированы путем ингибирования пропротеин-конвертазы субтилизин-кексина 9 (РС8К9) с использованием двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) для подавления экспрессии РС8К9.
Настоящее изобретение относится к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (дцРНК), а также к композициям и к способам, применяемым в целях ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетках или у млекопитающих с использованием такой дцРНК. Настоящее изобретение также относится к композициям и к способам, применяемым для лечения патологических состояний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии гена РС8К9, таких как гиперлипидемия. дцРНК согласно изобретению содержит цепь РНК (антисмысловую цепь), имеющую область длиной менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов, и является в основном комплементарной по меньшей мере части мРНК-транскрипта гена РС8К9.
В одном из своих вариантов настоящее изобретение относится к молекулам двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК), ингибирующим экспрессию гена РС8К9. дцРНК содержит по меньшей мере две последовательности, комплементарные друг другу. дцРНК содержит смысловую цепь, включающую первую последовательность, и антисмысловую цепь, включающую вторую последовательность. Антисмысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность, в основном комплементарную по меньшей мере части мРНК, кодирующей РС8К9, где указанная область комплементарности имеет длину менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов. дцРНК после ее контактирования с клеткой, экспрессирующей РС8К9, ингибирует экспрессию гена РС8К9 по меньшей мере на 40%.
Так, например, молекулы дцРНК согласно изобретению могут состоять из первой последовательности дцРНК, выбранной из группы, состоящей из смысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2, и из второй последовательности, выбранной из группы, состоящей из антисмысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2. Молекулы дцРНК согласно изобретению могут состоять из природных нуклеотидов, либо они могут состоять по меньшей мере из одного модифицированного нуклеотида, такого как 2'-О-метилмодифицированный нуклеотид; нуклеотид, содержащий 5'-фосфортиоатную группу, и концевой нуклеотид, присоединенный к холестериловому производному. Альтернативно, модифицированный нуклеотид может быть выбран из группы, состоящей из 2'-дезокси2'-фтормодифицированного нуклеотида, 2'-дезоксимодифицированного нуклеотида, блокированного нуклеотида, неосновного нуклеотида, 2'-аминомодифицированного нуклеотида, 2'-алкилмодифицированного нуклеотида, морфолинонуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, содержащего неприродное основание. Обычно такую модифицированную последовательность получают на основе первой последовательности указанной дцРНК, выбранной из группы, состоящей из смысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2, и второй последовательности, выбранной из группы, состоящей из антисмысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2.
В другом своем варианте настоящее изобретение относится к клетке, содержащей одну из дцРНК согласно изобретению. Такой клеткой обычно является клетка млекопитающего, такая как человеческая клетка.
В другом своем варианте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, предназначенной для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в организме, обычно в организме человека, где указанная композиция содержит одну или несколько дцРНК согласно изобретению и фармацевтически примемлемый носитель или носитель для доставки.
В другом своем варианте настоящее изобретение относится к способу ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетке, где указанный способ включает следующие стадии:
(а) введение в клетку двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК), где указанная дцРНК содержит по меньшей мере две последовательности, комплементарные друг другу. дцРНК содержит
- 2 015676 смысловую цепь, включающую первую последовательность, и антисмысловую цепь, включающую вторую последовательность. Антисмысловая цепь содержит область комплементарности, которая в основном комплементарна по меньшей мере части мРНК, кодирующей РС8К9, где указанная комплементарная область имеет длину менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов, и где указанная дцРНК после ее контактирования с клеткой, экспрессирующей РС8К9, ингибирует экспрессию гена РС8К9 по меньшей мере на 40%; и (Ь) поддержание клетки, продуцированной в стадии (а), в течение определенного периода времени, достаточного для разрушения мРНК-транскрипта гена РС8К9 и тем самым ингибирования экспрессии гена РС8К9 в указанной клетке.
В другом своем варианте настоящее изобретение относится к способам лечения, предупреждения или подавления патологических состояний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии гена РС8К9, например гиперлипидемии, где указанные способы включают введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, предупреждении или подавлении, терапевтически или профилактически эффективного количества одной или нескольких дцРНК согласно изобретению.
В другом своем варианте настоящее изобретение относится к векторам для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетке, где указанные векторы содержат регуляторную последовательность, функционально присоединенную к нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере одну цепь одной из дцРНК согласно изобретению.
В другом своем варианте настоящее изобретение относится к клетке, содержащей вектор для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетке. Указанный вектор содержит регуляторную последовательность, функционально присоединенную к нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере одну цепь одной из дцРНК согласно изобретению.
Краткое описание графического материала
На фиг. 1 представлена структура липида ΝΏ-98.
На фиг. 2 представлены результаты ίη νίνο скрининга 16 киРНК, специфических к мышиному РС8К9 (АЬ-ОР-9327-АЬ-ОР-9342), направленных против различных областей ОРС мРНК РС8К9 (имеющих первый нуклеотид, соответствующий положению ОРС, как показано на графике), у мышей С57/ВЬ6 (5 животных/группу). Отношение мРНК РС8К9 к мРНК СЛРЭН в лизатах печени усредняли для каждой группы обработки и сравнивали с контрольной группой, обработанной РВ8, или с контрольной группой, обработанной неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII).
На фиг. 3 представлены результаты ίη νίνο скрининга 16 человеческих/мышиных/крысиных перекрестно-реактивных РС8К9-специфических киРНК (АЬ-ЭР-9311-АЬ-ЭР-9326), направленных против различных областей ОРС мРНК РС8К9 (имеющих первый нуклеотид, соответствующий положению ОРС, как показано на графике) у мышей С57/ВЬ6 (5 животных/группу). Отношение мРНК РС8К9 к мРНК СЛРЭН в лизатах печени усредняли для каждой группы обработки и сравнивали с контрольной группой, обработанной РВ8, или с контрольной группой, обработанной неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII).
Сайленсинг мРНК РС8К9 приводил к снижению общего уровня холестерина в сыворотке.
Наибольшая эффективность в ингибировании киРНК-транскрипта РС8К9 выражается в наиболее заметном снижении уровня холестерина (примерно на 20-30%).
На фиг. 4 представлены результаты ίη νίνο скрининга 16 киРНК, специфических к мышиному РС8К9 (АЬ-ОР-9327-АЬ-ОР-9342) у мышей С57/ВЬ6 (5 животных/группу). Общие уровни холестерина в сыворотке усредняли для каждой группы обработки и сравнивали с контрольной группой, обработанной РВ8, или с контрольной группой, обработанной неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII).
На фиг. 5 представлены результаты ίη νίνο скрининга 16 человеческих/мышиных/крысиных перекрестно-реактивных РС8К9-специфических киРНК (АЬ-ОР-9311-АЬ-ОР-9326) у мышей С57/ВЬ6 (5 животных/группу). Общие уровни холестерина в сыворотке усредняли для каждой группы обработки и сравнивали с контрольной группой, обработанной РВ8, или с контрольной группой, обработанной неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII).
На фиг. 6 проиллюстрировано сравнение результатов ίη νίΐτο и ίη νίνο, полученных для сайленсинга РС8К9.
На фиг. 7А и 7В представлены результаты, полученные ίη νίίτο для сайленсинга РС8К9 с использованием первичных гепатоцитов обезьян.
На фиг. 8 проиллюстрирована ίη νίνο активность киРНК, полученных в виде липосомных препаратов Ь№-01 и направленных против рсзк-9.
На фиг. 9 проиллюстрирована ίη νίνο активность препаратов Ь№-01, содержащих химически модифицированные родительские молекулы 9314 и 10792 в различные периоды времени. Было выявлено, что модифицированные варианты 10792 обнаруживают активность в сайленсинге ίη νίνο.
- 3 015676
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к решению проблемы, связанной с лечением заболеваний, которые могут быть модулированы путем ингибирования гена РС8К9 с использованием двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) для подавления экспрессии гена РС8К9 и тем самым для лечения таких заболеваний, как гиперлипидемия.
Настоящее изобретение относится к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (дцРНК), а также к композициям и к способам, применяемым для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетках или у млекопитающих с использованием такой дцРНК. Настоящее изобретение также относится к композициям и к способам, применяемым для лечения патологических состояний и заболевания, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии гена РС8К9. дцРНК регулирует последовательность-специфическое разрушение мРНК по механизму, известному как интерференция РНК (РНКи). дцРНК согласно изобретению включает цепь РНК (антисмысловую цепь), которая имеет область длиной менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов, и в основном комплементарна по меньшей мере части мРНК-транскрипта гена РС8К9. Применение таких дцРНК позволяет осуществлять направленное разрушение мРНК, которое приводит к транспорту натрия. С помощью клеточных анализов и анализов, проводимых на животных, авторами настоящего изобретения было продемонстрировано, что очень низкие дозы этих дцРНК могут специфически и эффективно опосредовать РНКи, что будет приводить к значительному ингибированию экспрессии гена РС8К9. Таким образом, указанные способы и композиции согласно изобретению, в которых используются эти дцРНК, могут быть применены для лечения патологических состояний, которые могут быть модулированы путем ингибирования РС8К9, например, для лечения гиперлипидемии.
Ниже подробно описан способ получения и использования дцРНК и композиций, содержащих дцРНК, для ингибирования экспрессии гена-мишени РС8К9, а также описаны композиции и способы, применяемые для лечения заболеваний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии РС8К9, таких как гиперлипидемия. Фармацевтические композиции согласно изобретению включают дцРНК, имеющую антисмысловую цепь, которая содержит область комплементарности длиной менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов, и является в основном комплементарной по меньшей мере части мРНК-транскрипта гена РС8К9, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.
В соответствии с этим в некоторых своих аспектах настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим дцРНК согласно изобретению в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем; к способам применения таких композиций для ингибирования экспрессии гена РС8К9 и к способам применения фармацевтических композиций для лечения заболеваний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии РС8К9.
I. Определения.
Для удобства ниже приводятся значения некоторых терминов и выражений, используемых в настоящем описании, в примерах и в прилагаемой формуле изобретения. Если имеется значительное различие между употреблением данного термина в других разделах настоящего описания и его определением, приводимым в этом разделе, то следует отдать предпочтение определению данного термина в этом разделе.
Каждый из О, С, А и И обычно означает нуклеотид, который содержит гуаниновое, цитозиновое, адениновое и урациловое основания соответственно. Однако при этом следует отметить, что термин рибонуклеотид или нуклеотид также может означать модифицированный нуклеотид, как будет подробно описано ниже, или молекулу-аналог, имеющую замену. Специалисту в данной области хорошо известно, что гуанин, цитозин, аденин и урацил могут быть заменены другими молекулами без какоголибо значительного изменения свойств спаривания оснований олигонуклеотида, включающего нуклеотид, имеющий такую замененную молекулу. Так, например, нуклеотид, содержащий инозин в качестве основания, может спариваться с нуклеотидами, содержащими аденин, цитозин или урацил и т.п. Следовательно, в нуклеотидных последовательностях согласно изобретению нуклеотиды, содержащие урацил, гуанин или аденин, могут быть заменены нуклеотидом, содержащим, например, инозин.
Последовательности, содержащие такие замененные молекулы, являются вариантами настоящего изобретения.
Используемый здесь термин РС8К9 означает ген полипротеин-конвертазы субтилизин-кексина 9 или его белок (также известный как ЕН3, НСНОЬАЗ, ΝΑΡί’-Ι. ΝΑΡΤΊ). Последовательности мРНК, нацеленные на РС8К9, представляют собой человеческую последовательность: ΝΜ 174936; мышиную последовательность: ΝΜ_153565 и крысиную последовательность: ΝΜ_199253.
Используемый здесь термин последовательность-мишень означает непрерывную часть нуклеотидной последовательности молекулы мРНК, образованную в процессе транскрипции гена РС8К9, включая мРНК, которая является продуктом РНК-процессинга первичного продукта транскрипции.
Используемый здесь термин цепь, содержащая последовательность означает олигонуклеотид, содержащий цепь нуклеотидов, последовательность которой описана в соответствии со стандартной номенклатурой нуклеотидов.
- 4 015676
Используемый здесь термин комплементарный, если это не оговорено особо и если он используется для описания первой нуклеотидной последовательности по сравнению со второй нуклеотидной последовательностью, означает способность олигонуклеотида или полинуклеотида, содержащего первую нуклеотидную последовательность, гибридизоваться и образовывать дуплексную структуру в определенных условиях с олигонуклеотидом или полинуклеотидом, содержащим вторую нуклеотидную последовательность, как хорошо известно специалистам. Такими условиями могут быть, например, жесткие условия, где указанные жесткие условия могут включать обработку 400 мМ ЫаС1, 40 мМ ΡΙΡΕ8, рН 6,4, 1 мМ ΕΌΤΑ, при 50 или 70°С в течение 12-16 ч с последующей промывкой. Могут быть применены и другие условия, такие как физиологически релевантные условия, которые могут возникать внутри организма. Специалист в данной области может самостоятельно определить ряд условий, наиболее подходящих для оценки комплементарности двух последовательностей в зависимости от целей применения гибридизованных нуклеотидов.
Это определение включает спаривание оснований олигонуклеотида или полинуклеотида, содержащего первую нуклеотидную последовательность, с олигонуклеотидом или полинуклеотидом, содержащим вторую нуклеотидную последовательность, по всей длине первой и второй нуклеотидных последовательностей. Такие последовательности могут называться полностью комплементарными друг другу. Однако если первую последовательность определяют как в основном комплементарную второй описанной здесь последовательности, то эти две последовательности могут быть полностью комплементарными, либо они могут образовывать одну или более, но в основном не более чем 4, 3 или 2 несоответствующих пар оснований после гибридизации, и при этом сохранять свою способность гибридизоваться в условиях, наиболее подходящих для их конечного применения. Однако если после гибридизации два олигонуклеотида образуют один или несколько одноцепочечных выступающих концов, то такие концы не должны рассматриваться как несоответствия при определении комплементарности. Так, например, дцРНК, содержащая один олигонуклеотид длиной в 21 нуклеотид и другой олигонуклеотид длиной в 23 нуклеотидов, где более длинный олигонуклеотид содержит последовательность из 21 нуклеотида, которая является полностью комплементарной более короткому олигонуклеотиду, может также называться полностью комплементарной с точки зрения цели применения настоящего изобретения.
Используемый здесь термин комплементарные последовательности может также включать пары оснований, не спаренные в соответствии с правилами Уотсона-Крика, или полностью состоять из таких пар оснований, и/или они могут включать пары оснований, образованные неприродными и модифицированными нуклеотидами в зависимости от того, насколько удовлетворяются вышеуказанные требования к их способности к гибридизации.
Используемые здесь термины комплементарный, полностью комплементарный и в основном комплементарный могут употребляться по отношению к спариванию основания смысловой цепи и антисмысловой цепи дцРНК или антисмысловой цепи дцРНК и последовательности-мишени, как будет очевидно исходя из целей их применения.
Используемый здесь термин полинуклеотид, который является, по существу, комплементарным по меньшей мере части матричной РНК (мРНК), означает полинуклеотид, в основном комплементарный непрерывной части представляющей интерес мРНК (например, кодирующей РС8К9). Так, например, полинуклеотид является комплементарным по меньшей мере части мРНК РС8К9, если его последовательность, по существу, комплементарна непрерывной части мРНК, кодирующей РС8К9.
Используемый здесь термин двухцепочечная РНК или дцРНК означает комплекс молекул рибонуклеиновой кислоты, имеющий дуплексную структуру, содержащую две антипараллельные и, по существу, комплементарные, как определено выше, цепи нуклеиновой кислоты. Две цепи, образующие дуплексную структуру, могут представлять собой различные части одной более крупной молекулы РНК, либо они могут представлять собой отдельные молекулы РНК. В случае отдельных молекул РНК такая дцРНК часто называется в литературе киРНК (короткой интерферирующей РНК). Если две цепи являются частью одной более крупной молекулы, а поэтому между З'-концом одной цепи и 5'-концом соответствующей другой цепи они соединены друг с другом непрерывной цепью нуклеотидов, образующих дуплексную структуру, то такая соединяющая цепь РНК называется шпилечной петлей, короткой шпилечной РНК или кшРНК. Если две цепи между З'-концом одной цепи и 5'-концом соответствующей другой цепи, ковалентно связанные друг с другом посредством другой цепи, т.е. цепи, не являющейся непрерывной цепью нуклеотидов, образующей дуплексную структуру, то такая соединяющая структура называется линкером. Цепи РНК могут иметь одинаковые или различные количества нуклеотидов. Максимальным числом пар оснований является число нуклеотидов в самой короткой цепи дцРНК минус какие-либо выступающие концы, присутствующие в этом дуплексе.
Помимо дуплексной структуры дцРНК может содержать один или несколько выступающих нуклеотидов. Кроме того, используемый в настоящем описании термин дцРНК может включать химические модификации рибонуклеотидов, включая основные модификации во многих положениях нуклеотидов и все типы модификаций, описанные в настоящем изобретении или известные специалистам. Все такие модификации, присутствующие в молекуле типа киРНК, входят в объем термина дцРНК, определяемого в настоящем описании и в формуле изобретения.
- 5 015676
Используемый здесь термин выступающий нуклеотид означает неспаренный нуклеотид или нуклеотиды, которые выступают из дуплексной структуры дцРНК, если З'-конец одной цепи дцРНК находится за пределами 5'-конца другой цепи или наоборот. Термины тупой или тупой конец означают, что на конце дцРНК отсутствуют неспаренные нуклеотиды, т.е. отсутствует выступающий нуклеотид. Затупленная по концам дцРНК представляет собой дцРНК, которая является двухцепочечной по всей ее длине, т.е. у любого конца этой молекулы отсутствуют выступающие нуклеотиды. Для ясности следует отметить, что при определении наличия у киРНК выступающего конца или тупого конца не рассматриваются химические кэпы или ненуклеотидные химические молекулы, конъюгированные с З'-концом или с 5'-концом киРНК.
Термин антисмысловая цепь означает цепь дцРНК, которая включает область, по существу, комплементарную последовательности-мишени. Используемый здесь термин область комплементарности означает область на антисмысловой цепи, которая, по существу, комплементарна последовательности, например последовательности-мишени, определенной в настоящем изобретении. Если область комплементарности не полностью комплементарна последовательности-мишени, то такие несоответствия являются наиболее приемлемыми в концевых областях, а если они и присутствуют, то, главным образом, в концевой области или в концевых областях, например в положениях 6, 5, 4, 3 или 2 нуклеотида 5'- и/или З'-концов.
Используемый здесь термин смысловая цепь означает цепь дцРНК, включающую область, по существу, комплементарную области антисмысловой цепи.
Термин введение в клетку, если он относится к дцРНК, означает облегчение поглощения или абсорбции в клетке, как это очевидно для специалиста в данной области. Абсорбция или поглощение дцРНК может происходить посредством природных диффузных или активных клеточных процессов, либо оно может быть осуществлено с помощью вспомогательных средств или устройств. Значения этого термина не ограничиваются клетками ίη νίΐτο; при этом, дцРНК может быть также введена в клетку, которая является частью живого организма. В таком случае, термин введение в клетку также включает доставку в организм. Так, например, для доставки ίη νίνο, дцРНК может быть инъецирована в конкретный участок, или она может быть введена системно. Введение ίη νίΐτο в клетку осуществляют методами, известными специалистам, такими как электропорация и липофекция.
Используемые здесь термины сайленсинг и ингибирование экспрессии, если они относятся к гену РС8К9, означают, по меньшей мере, частичное подавление экспрессии гена РС8К9, на что указывает снижение количества мРНК, транскрибируемого из гена РС8К9, который может быть выделен из первой клетки или группы клеток, в которой (в которых) транскрибируется ген РС8К9 и которая (которые) были обработаны так, чтобы происходило ингибирование экспрессии гена РС8К9, по сравнению со второй клеткой или группой клеток, по существу, идентичной (или идентичных) первой клетке или группе клеток, которая (или которые) не была (не были) обработана(ы) указанным способом (контрольными клетками). Степень ингибирования обычно выражают математической формулой (мРНК в контрольных клетках)-(мРНК в обработанных клетках) __ · 100% (мРНК в контрольных клетках)
Альтернативно, степень ингибирования может быть определена как уменьшение значения параметра, которое функционально связано с транскрипцией гена РС8К9, например количества белка, кодируемого геном РС8К9, и секретируемого клеткой, или числа клеток, представляющих определенный фенотип, например подверженных апоптозу. В принципе, сайленсинг гена РС8К9 может быть обнаружен в любой клетке, экспрессирующей мишень, либо конститутивно, либо с помощью генной инженерии, а также с помощью любого подходящего анализа. Однако если необходимо определить, ингибирует ли данная дцРНК экспрессию гена РС8К9 в определенной степени, а следовательно, такое определение входит в объем настоящего изобретения, то для осуществления такого определения рекомендуется проводить анализ, описанный ниже в разделе Примеры.
Так, например, в некоторых случаях экспрессию гена РС8К9 подавляют по меньшей мере примерно на 20, 25, 35 или 50% путем введения двухцепочечного олигонуклеотида согласно изобретению. В некоторых вариантах изобретения ген РС8К9 ингибируется по меньшей мере примерно на 60, 70 или 80% путем введения двухцепочечного олигонуклеотида согласно изобретению. В некоторых вариантах изобретения ген РС8К9 ингибируется по меньшей мере примерно на 85, 90 или 95% путем введения двухцепочечного олигонуклеотида согласно изобретению. В табл. 1 и 2 приводится широкий ряд величин для ингибирования экспрессии, полученных с помощью анализа ίη νίΐτο, проводимого с использованием различных молекул дцРНК РС8К9 в различных концентрациях.
Термины лечить, лечение и т.п., используемые здесь с точки зрения экспрессии РС8К9, означают ослабление или облегчение тяжести патологических состояний, которые могут быть модулированы посредством ингибирования гена РС8К9. В контексте настоящего изобретения термины лечить, лечение и т.п., если они относятся к любым другим описанным ниже состояниям (а не к патологическим состояниям, которые могут быть модулированы посредством ингибирования гена РС8К9), означают облегчение или ослабление по меньшей мере одного симптома, ассоциированного с таким состоянием, ли
- 6 015676 бо его реверсию. Так, например, если термин лечение относится к гиперлипидемии, то он включает снижение уровней липидов в сыворотке.
Используемые здесь термины терапевтически эффективное количество и профилактически эффективное количество означают количество, которое дает терапевтический эффект при лечении, предупреждении или ослаблении патологических состояний или явно выраженного симптома таких патологических состояний, которые могут быть модулированы посредством ингибирования гена РС8К9. Конкретное количество, которое является терапевтически эффективным, может быть легко определено практикующим врачом и может широко варьироваться в зависимости от факторов, известных специалистам, таких как тип патологических состояний, которые могут быть модулированы посредством ингибирования гена РС8К9, история болезни данного пациента и его возраст, стадия развития патологических состояний, которые могут быть модулированы посредством ингибирования РС8К9, и способа введения других средств для подавления патологий, которые могут быть модулированы посредством ингибирования гена РС8К9.
Используемая здесь фармацевтическая композиция включает фармакологически эффективное количество дцРНК и фармацевтически приемлемый носитель. Используемый здесь термин фармакологически эффективное количество, терапевтически эффективное количество или просто эффективное количество означает количество РНК, эффективное для достижения нужного фармакологического, терапевтического или превентивного эффекта. Так, например, если эффективным лечением заболевания считается по меньшей мере 25% снижение величины измеряемого параметра, ассоциированного с данным заболеванием или расстройством, то терапевтически эффективное количество лекарственного средства для лечения данного заболевания или расстройства представляет собой количество, необходимое для достижения по меньшей мере 25% снижения величины данного параметра.
Термин фармацевтически приемлемый носитель означает носитель для введения терапевтического средства. Такими носителями являются, но не ограничиваются ими, физиологический раствор, забуференный физиологический раствор, декстроза, вода, глицерин, этанол и их комбинации, и такие носители более подробно описаны ниже. Данный термин, в частности, исключает среду для культивирования клеток.
Используемый здесь термин трансформированная клетка означает клетку, в которую был введен вектор, способный экспрессировать молекулу дцРНК.
II. Двухцепочечная рибонуклеиновая кислота (дцРНК).
В одном из своих вариантов настоящее изобретение относится к молекулам двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК), используемый для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетках или у млекопитающих, где указанная дцРНК содержит антисмысловую цепь, включающую область комплементарности, которая является комплементарной по меньшей мере части мРНК, образованной в результате экспрессии гена РС8К9, где указанная область комплементарности имеет длину менее чем 30 нуклеотидов, а обычно 19-24 нуклеотидов, и где указанная дцРНК, после ее контактирования с клеткой, экспрессирующей указанный ген РС8К9, ингибирует экспрессию указанного гена РС8К9 по меньшей мере на 40%. Указанная дцРНК содержит две цепи РНК, которые являются достаточно комплементарными для гибридизации с образованием дуплексной структуры. Одна цепь дцРНК (антисмысловая цепь) содержит область комплементарности, которая, по существу, комплементарна, а обычно полностью комплементарна последовательности-мишени, происходящей от последовательности мРНК, образованной в процессе экспрессии гена РС8К9, а другая цепь (смысловая цепь) содержит область, которая является комплементарной антисмысловой цепи, в результате чего эти две цепи гибридизуются и, при их объединении в подходящих условиях, образуют дуплексную структуру. Обычно дуплексная структура имеет длину 15-30, чаще 18-25, еще чаще 19-24, а чаще всего 19-21 пар оснований. Аналогичным образом, область, комплементарная последовательности-мишени, имеет длину 15-30, чаще 18-25, еще чаще 19-24, а чаще всего 19-21 пар оснований. дцРНК согласно изобретению может также включать один или несколько выступающих одноцелочечных нуклеотидов. дцРНК может быть синтезирована стандартными методами, известными специалистам и подробно обсуждаемыми ниже, например с применением автоматического синтезатора ДНК, например, такого как синтезатор, поставляемый компанией Вюкеагсй, Аррйеб ВюхуЧспъ. 1пс. В предпочтительном варианте изобретения геном РС8К9 является человеческий ген РС8К9. В конкретных вариантах изобретения антисмысловая цепь дцРНК включает цепь, выбранную из смысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2, и вторую последовательность, выбранную из группы, состоящей из антисмысловых последовательностей, представленных в табл. 1 и 2. Альтернативные антисмысловые агенты, нацеленные на последовательность-мишень, представленную в табл. 1 и 2, могут быть легко определены с использованием последовательности-мишени и фланкирующей последовательности РС8К9.
В других вариантах изобретения дцРНК содержит по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, выбранную из группы последовательностей, представленных в табл. 1 и 2. В других вариантах изобретения дцРНК содержит по меньшей мере две последовательности, выбранные из этой группы, где одна из по меньшей мере двух последовательностей комплементарна другой последовательности по меньшей мере из двух последовательностей, а одна по меньшей мере из двух последовательностей, по
- 7 015676 существу, комплементарна последовательности мРНК, продуцированной в результате экспрессии гена РС8К9. Обычно дцРНК содержит два олигонуклеотида, где один олигонуклеотид описан в табл. 1 и 2 как смысловая цепь, а второй олигонуклеотид описан в табл. 1 и 2 как антисмысловая цепь.
Специалистам в данной области хорошо известно, что дцРНК, содержащие дуплексную структуру из 20-23 пар оснований, а в частности из 21 пары оснований, является особенно эффективной в индуцировании интерференции РНК (Е1Ьа§Ыг с1 а1., ЕМВО 2001, 20:6877-6888). Однако другими исследователями было также обнаружено, что могут оказаться эффективными и более короткие или более длинные дцРНК. В описанных выше вариантах дцРНК согласно изобретению могут содержать по меньшей мере одну цепь длиной минимум 21 нуклеотид, что обусловлено природой олигонуклеотидных последовательностей, представленных в табл. 1 и 2. Разумно предположить, что более короткие дцРНК, содержащие одну из последовательностей, представленных в табл. 1 и 2, только без нескольких нуклеотидов у одного или обоих концов, могут быть также эффективными по сравнению с дцРНК, описанными выше. Следовательно, в настоящем изобретении рассматриваются дцРНК, содержащие неполную последовательность по меньшей мере из 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более смежных нуклеотидов одной из последовательностей, представленных в табл. 1 и 2, и отличающиеся по своей способности ингибировать экспрессию гена РС8К9 в ЕЛС8-анализе, описанном ниже, не более чем на 5, 10, 15, 20, 25 или 30% по сравнению с дцРНК, содержащей полноразмерную последовательность. Другие дцРНК, которые расщепляются в последовательности-мишени, представленной в табл. 1 и 2, могут быть легко получены с использованием описанной здесь последовательности РС8К9 и последовательности-мишени.
Кроме того, РНКи-агенты, представленные в табл. 1 и 2, идентифицируют сайт в мРНК РС8К9, восприимчивый к РНКи-расщеплению. Настоящее изобретение также относится к РНКи-агентам, нацеленным на последовательность, на которую нацелен один из агентов согласно изобретению. Считается, что используемый здесь второй РНКи-агент нацелен на последовательность первого РНКи-агента, если указанный второй РНКи-агент расщепляет транскрипт в любом участке мРНК, который является комплементарным антисмысловой цепи первого РНКи-агента. Такой второй агент, по существу, состоит по меньшей мере из 15 смежных нуклеотидов, происходящих от одной из последовательностей, представленных в табл. 1 и 2 и присоединенных к дополнительным нуклеотидным последовательностям, происходящим от области, смежной с выбранной последовательностью в гене РС8К9. Так, например, по меньшей мере 15 нуклеотидов 8ЕО ΙΌ N0: 1 (минус добавленные последовательности АА), объединенные со следующими 6 нуклеотидами от гена-мишени РС8К9, продуцируют одноцепочечный агент из 21 нуклеотида на основе одной из последовательностей, представленных в табл. 1 и 2.
дцРНК согласно изобретению может содержать одно или несколько несоответствий по отношению к последовательности-мишени. В предпочтительном варианте изобретения дцРНК согласно изобретению содержит не более чем 3 несоответствия. Если антисмысловая цепь дцРНК содержит несоответствия по отношению к последовательности-мишени, то предпочтительно, чтобы область несоответствий не находилась в центре области комплементарности. Если антисмысловая цепь дцРНК содержит несоответствия по отношению к последовательности-мишени, то предпочтительно, чтобы такое несоответствие ограничивалось 5 нуклеотидами, расположенными у любого конца, например 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотидом, присутствующими у 5'- или 3'-конца области комплементарности. Так, например, в случае цепи дцРНК из 23 нуклеотидов, которая комплементарна области гена РС8К9, эта дцРНК обычно не содержит каких-либо несоответствий в центральной области, состоящей из 13 нуклеотидов. Для того чтобы определить, является ли дцРНК, содержащая несоответствия по отношению к последовательности-мишени, эффективной в ингибировании экспрессии гена РС8К9, могут быть применены способы, описанные в настоящем изобретении. Очень важно, чтобы дцРНК с несоответствиями эффективно ингибировали экспрессию гена РС8К9, особенно если известно, что конкретная область комплементарности в гене РС8К9 имеет модификацию полиморфной последовательности в пределах данной популяции.
В одном из вариантов изобретения по меньшей мере на одном конце дцРНК присутствуют 1-4, а обычно 1-2 выступающих одноцепочечных нуклеотида. Было неожиданно обнаружено, что дцРНК, имеющие по меньшей мере один выступающий нуклеотид, обладают превосходными ингибирующими свойствами по сравнению со свойствами их аналогов, имеющих тупые концы. Кроме того, авторами настоящего изобретения было обнаружено, что присутствие лишь одного выступающего нуклеотида усиливает интерферирующую активность дцРНК, не оказывая при этом какого-либо влияния на ее общую стабильность. Было подтверждено, что дцРНК, имеющая только один выступающий конец, является особенно стабильной и эффективной ίη νίνο, а также в различных клетках, в средах для культивирования клеток, в крови и сыворотке. Вообще говоря, одноцепочечный выступающий конец расположен у 3'-конца антисмысловой цепи или, альтернативно, у 3'-конца смысловой цепи. дцРНК может также иметь тупой конец, обычно расположенный у 5'-конца антисмысловой цепи. Такие дцРНК обладают повышенной стабильностью и ингибирующей активностью, что позволяет вводить эти дцРНК в низких дозах, т.е. в дозах, составляющих менее чем 5 мг/кг массы тела реципиента в день. Обычно антисмысловая цепь дцРНК имеет выступающие нуклеотиды у 3'-конца, а 5'-конец является тупым. В другом варианте изобретения один или несколько нуклеотидов в выступающем конце заменены нуклеозид-тиофосфатом.
В еще одном варианте изобретения дцРНК химически модифицируют для повышения стабильно
- 8 015676 сти. Нуклеиновые кислоты согласно изобретению могут быть синтезированы и/или модифицированы методами, хорошо известными специалистам, например, как описано в публикации Сиггеп! рго!осо1к ίη пис1е1с ас1б сйет1к1гу. Веаисаде, 8.Ь. е! а1. (Ебгк.), 1о1т №Пеу & 8опк, 1пс., Ыете Уогк, Ν.Υ., И8Л, которая вводится в настоящее описание посредством ссылки. Химическими модификациями могут быть, но не ограничиваются ими, 2'-модификации; модификации в других положениях сахаров или оснований олигонуклеотида; введение неприродных оснований в олигонуклеотидную цепь; ковалентное связывание с лигандом или химической молекулой, и замена межнуклеотидных фосфатных связей другими связями, такими как тиофосфатные связи. При этом могут быть использованы более чем одна такая модификация.
Химическое связывание двух отдельных цепей дцРНК может быть достигнуто с применением любых различных хорошо известных методов, например путем введения ковалентных, ионных или водородных связей; посредством гидрофобных взаимодействий, ван-дер-ваальсовых взаимодействий или стэкинг-взаимодействий; посредством введения координационных связей металл-ион или с использованием пуриновых аналогов. В основном химическими группами, которые могут быть использованы для модификации дцРНК, являются, но не ограничиваются ими, метиленовый синий; бифункциональные группы, обычно бис-(2-хлорэтил)амин; №ацетил-№-(п-глиоксилбензоил)цистамин; 4-тиоурацил и псорален. В одном из вариантов изобретения указанным линкером является гексаэтиленгликолевый линкер. В этом случае дцРНК продуцируют посредством твердофазного синтеза, а гексаэтиленгликолевый линкер вводят в соответствии со стандартными методами (см. №1Шатк, Ό.Ι. апб К.В. Наб, Вюсйет. (1996), 35:14665-14670). В конкретном варианте изобретения 5'-конец антисмысловой цепи и З'-конец смысловой цепи химически связаны посредством гексаэтиленгликолевого линкера. В другом варианте изобретения по меньшей мере один нуклеотид дцРНК содержит фосфортиоатные или фосфордитиоатные группы. Химическая связь у концов дцРНК обычно образована трехспиральными связями. В табл. 1 и 2 приводятся примеры модифицированных РНКи-агентов согласно изобретению.
В еще одном варианте изобретения нуклеотиды у одной или обеих двух одиночных цепей могут быть модифицированы так, чтобы они предотвращали или ингибировали расщепляющую активность клеточных ферментов, например, таких как некоторые нуклеазы и т.п. Методы ингибирования расщепляющей активности клеточных ферментов, направленной против нуклеиновых кислот, известны специалистам, и такими методами являются, но не ограничиваются ими, 2'-амино-модификации, 2'-аминомодификации сахаров, 2'-Е-модификации сахаров, 2'-Е-модификации, 2'-алкил-модификации сахаров, модификации незаряженного остова, морфолиномодификации, 2'-О-метил-модификации и фосфорамидатные модификации (см., например, №адпег, ΝηΙ. Меб. (1995), 1:1116-8). Таким образом, по меньшей мере одна 2'-гидроксильная группа нуклеотидов на дцРНК заменена химической группой, обычно 2'амино- или 2'-метильной группой. Кроме того, по меньшей мере один нуклеотид может быть модифицирован так, чтобы он образовывал блокированный нуклеотид. Такой блокированный нуклеотид содержит метиленовый мостик, соединяющий 2'-кислород рибозы с 4'-углеродом рибозы. Олигонуклеотиды, содержащие указанный блокированный нуклеотид, описаны в публикации КокИкш, А.А., е! а1., Те1гайебгоп (1998), 54: 3607-3630 и ОЫка, 8. е! а1. Те1гайебгоп Ьей. (1998), 39; 5401-5404.
Введение блокированного нуклеотида в олигонуклеотид приводит к повышению аффинности по отношению к комплементарным последовательностям и увеличению температуры плавления на несколько градусов (Вгааксй, Ό.Α. апб Ό.Κ. Согеу, СИет. Вю1. (2001), 8:1-7).
Конъюгирование лиганда с дцРНК может усиливать ее абсорбцию в клетки, а также ее нацеливание на конкретную ткань или поглощение клетками конкретных типов, такими как клетки печени. В некоторых случаях гидрофобный лиганд конъюгируют с дцРНК для облегчения прямого прохождения через клеточную мембрану или поглощения клетками печени. Альтернативно, лиганд, конъюгированный с дцРНК, представляет собой субстрат для опосредуемого рецептором эндоцитоза. Такие подходы были применены для облегчения проникновения в клетку антисмысловых олигонуклеотидов, а также дцРНКагентов. Так, например, холестерин был конъюгирован с различными антисмысловыми олигонуклеотидами с получением соединений, которые являются в основном более активными, чем их неконъюгированные аналоги. См. М. Мапойагап Апбкепке & №.1с1ею Ас1б Огид Эеуе1ортеп1 2002, 12, 103. Другими липофильными соединениями, которые были конъюгированы с олигонуклеотидами, являются 1-пиренмасляная кислота, 1,3-бис-О-(гексадецил)глицерин и ментол. Одним из примеров лиганда для опосредуемого рецептором эндоцитоза является фолиевая кислота. Фолиевая кислота поступает в клетку благодаря эндоцитозу, опосредуемому фолатным рецептором. Соединения дцРНК, несущие фолиевую кислоту, могут эффективно транспортироваться в клетку посредством эндоцитоза, опосредуемого фолатным рецептором. Ь1 и сотрудники сообщают, что присоединение фолиевой кислоты к 3'-концу олигонуклеотида приводит к 8-кратному повышению уровня поглощения олигонуклеотида клетками. Ь1, 8.; Оебшшкй. Н.М.; Ниапд, Ь. Рйагт. Век. 1998, 15, 1540. Другими лигандами, которые были конъюгированы с олигонуклеотидами, являются полиэтиленгликоли, углеводные кластеры, перекрестносвязывающие агенты, конъюгаты порфирина, пептиды для доставки и липиды, такие как холестерин.
В некоторых случаях конъюгирование катионного лиганда с олигонуклеотидами приводит к повышению резистентности к нуклеазам. Репрезентативными примерами катионных лигандов являются пропиламмоний и диметилпропиламмоний. Интересно отметить, что антисмысловые олигонуклеотиды, как
- 9 015676 сообщалось, сохраняют свою высокую аффинность связывания с мРНК в том случае, если катионный лиганд распределен по всему олигонуклеотиду. См. публикацию М. Мапойагап АшЕспбс & М.1с1с1с Λοίά Эгид Эсус1ортсп1. 2002, 22, 103 и цитируемые в ней работы.
Конъюгированная с лигандом дцРНК согласно изобретению может быть синтезирована с использованием дцРНК, содержащей боковую реакционноспособную функциональную группу, такую как группа, образующаяся в результате присоединения линкерной молекулы к дцРНК. Этот реакционноспособный олигонуклеотид может непосредственно взаимодействовать с коммерчески доступными лигандами; с синтезированными лигандами, содержащими любую из различных защитных групп; или с лигандами, имеющими присоединенную к ним линкерную группу. Способы согласно изобретению облегчают синтез конъюгированной с лигандом дцРНК с использованием в некоторых предпочтительных вариантах изобретения нуклеозидных мономеров, которые были соответствующим образом конъюгированы с лигандами и которые могут быть также присоединены к твердому носителю. Такие конъюгаты лиганднуклеозид, присоединенные, но необязательно, к твердому носителю, получают в соответствии с некоторыми предпочтительными вариантами способов согласно изобретению посредством взаимодействия выбранного связывающегося с сывороткой лиганда с линкерной группой, присутствующей в 5'положении нуклеозида или олигонуклеотида. В некоторых случаях дцРНК, несущую аралкильный лиганд, присоединенный к 3'-концу дцРНК, получают, главным образом, посредством ковалентного присоединения мономерного структурного блока к стеклянному носителю с регулируемым размером пор через длинноцепочечную аминоалкильную группу. Затем нуклеотиды присоединяют к мономерному структурному блоку, связанному с твердым носителем, стандартными методами твердофазного синтеза. Таким мономерным структурным блоком может быть нуклеозид или другое органическое соединение, совместимое с твердофазным синтезом.
дцРНК, используемая в конъюгатах согласно изобретению, может быть получена подходящим и рутинным способом с применением хорошо известного метода твердофазного синтеза. Оборудование для такого синтеза поставляется несколькими компаниями, включая, например, Аррйеб Вю8у81ет8 (Ео81ег Сйу, СА.). Дополнительно или альтернативно могут быть применены любые другие методы такого синтеза, известные специалистам. Для получения других олигонуклеотидов, таких как фосфортиоаты и их алкилированные призводные, могут быть применены аналогичные методы, также известные специалистам.
Описание синтеза конкретных модифицированных олигонуклеотидов можно найти в следующих патентах США: в патентах США № 5138045 и 5218105, относящихся к олигонуклеотидам, конъюгированным с полиаминами; в патенте США № 5212295, относящемся к мономерам, используемым для получения олигонуклеотидов, имеющих хиральные фосфорные связи; в патентах США № 5378825 и 5541307, относящихся к олигонуклеотидам, имеющим модифицированные остовы; в патенте США № 5386023, относящемся к олигонуклеотидам с модифицированным остовом и к их получению посредством восстановительного связывания; в патенте США № 5457191, относящемся к модифицированным нуклеотидным основаниям, полученным на основе 3-деазапуриновой кольцевой системы и к методам их синтеза; в патенте США № 5459255, относящемся к модифицированным нуклеотидным основаниям, полученным на основе Ν-2-замещенных пуринов; в патенте США № 5521302, относящемся к способам получения олигонуклеотидов, имеющих хиральные фосфорные связи; в патенте США № 5539082, относящемся к нуклеиновым кислотам, связанным с пептидами; в патенте США № 5554746, относящемся к олигонуклеотидам, имеющим β-лактамовые остовы; в патенте США № 5571902, относящемся к методам и материалам для синтеза олигонуклеотидов; в патенте США № 5578718, относящемся к нуклеозидам, имеющим алкилтиогруппы, где указанные группы могут быть использованы в качестве линкеров или других групп, присоединенных в любом из различных положений нуклеозида; в патентах США № 5587361 и 5599797, относящихся к олигонуклеотидам, имеющим фосфортиоатные связи с высокой хиральной чистотой; в патенте США № 5506351, относящемся к способам получения 2'-Оалкилгуанозиновых и родственных соединений, включая 2,6-диаминопуриновые соединения; в патенте США № 5587469, относящемся к олигонуклеотидам, имеющим Ν-2-замещенные пурины; в патенте США № 5587470, относящемся к олигонуклеотидам, имеющим 3-деазапурины; в патентах США № 5223168 и 5608046, относящихся к конъюгированным 4'-десметил-нуклеозидным аналогам; в патентах США № 5602240 и 5610289, относящихся к олигонуклеотидным аналогам с модифицированным остовом; и в патентах США № 6262241 и 5459255, относящихся, ш!ег айа, к методам синтеза 2'-фторолигонуклеотидов.
В конъюгированной с лигандом дцРНК и в молекуле лиганда, несущей последовательностьспецифические связанные нуклеозиды согласно изобретению, олигонуклеотиды и олигонуклеозиды могут быть сконструированы на подходящем синтезаторе ДНК с использованием стандартных нуклеотидных или нуклеозидных предшественников или предшественников нуклеотидных или нуклеозидных конъюгатов, которые уже несут линкерную группу, предшественников конъюгатов лиганд-нуклеотид или лиганд-нуклеозид, которые уже несут молекулу лиганда, или структурных блоков, несущих ненуклеозидный лиганд.
При использовании предшественников нуклеотидных конъюгатов, уже несущих линкерную группу,
- 10 015676 обычно осуществляют синтез последовательность-специфических связанных нуклеозидов, а затем молекулу лиганда подвергают взаимодействию с линкерной группой, в результате чего образуется конъюгированный с лигандом олигонуклеотид. Олигонуклеотидные конъюгаты, несущие различные молекулы, такие как стероиды, витамины, липиды и репортерные молекулы, уже были описаны в литературе (см. заявку РСТ АО 93/07883, МапоНагап с1 а1.). В предпочтительном варианте изобретения олигонуклеотиды или связанные нуклеозиды согласно изобретению синтезируют на автоматическом синтезаторе с использованием фосфорамидитов, происходящих от конъюгатов лиганд-нуклеозид, помимо стандартных фосфорамидитов и нестандартных фосфорамидитов, которые являются коммерчески доступными и обычно используются в синтезе олигонуклеотидов.
Введение 2'-О-метильной группы, 2'-О-этильной группы, 2'-О-пропильной группы, 2'-О-аллильной группы, 2'-О-аминоалкильной группы или 2'-дезокси-2'-фтор-группы в нуклеозиды олигонуклеотида придает такому олигонуклеотиду повышенную способность к гибридизации. Кроме того, олигонуклеотиды, содержащие фосфортиоатные остовы, обладают повышенной стабильностью к нуклеазе. Таким образом, функционализированные связанные нуклеозиды согласно изобретению могут быть увеличены по своему размеру за счет включения любых из следующих компонентов: фосфортиоатного остова или 2'-О-метильной группы, 2'-О-этильной группы, 2'-О-пропильной группы, 2'-О-аминоалкильной группы, 2'-О-аллильной группы или 2'-дезокси-2'-фтор-группы. Краткий список некоторых олигонуклеотидных модификаций, известных специалистам, можно найти, например, в публикации заявки РСТ АО 200370918.
В некоторых вариантах изобретения функционализированные нуклеозидные последовательности согласно изобретению, имеющие аминогруппу у 5'-конца, получают с использованием синтезатора ДНК, а затем их подвергают взаимодействию с активным сложноэфирным производным выбранного лиганда. Активные производные сложных эфиров хорошо известны специалистам в данной области. Репрезентативными активными сложными эфирами являются Ν-гидроксисукцинимидоэфиры, сложные эфиры тетрафторфенола, сложные эфиры пентафторфенола и сложные эфиры пентахлорфенола. В результате взаимодействия аминогруппы и активного сложного эфира образуется олигонуклеотид, в котором выбранный лиганд присоединен к 5'-положению посредством линкерной группы. Аминогруппа у 5'-конца может быть введена с использованием 5'-амино-модификатора С6. В одном из вариантов изобретения, молекулы лиганда могут быть конъюгированы с олигонуклеотидами в 5'-положении с использованием конъюгата лиганд-нуклеозид-фосфорамидит, где указанный лиганд прямо или опосредованно присоединен к 5'-гидрокси-группе посредством линкера. Такие конъюгаты лиганд-нуклеозид-фосфорамидиты обычно вводят по окончании автоматизированной процедуры синтеза, в результате чего получают конъюгированный с лигандом олигонуклеотид, содержащий лиганд у 5'-конца.
Примерами модифицированных межнуклеозидных связей или остовов являются, например, фосфортиоаты, хиральные фосфортиоаты, фосфордитиоаты, фосфотриэфиры, аминоалкилфосфотриэфиры, метилфосфонаты и другие алкилфосфонаты, включая 3'-алкиленфосфонаты и хиральные фосфонаты, фосфинаты, фосфорамидаты, включая 3'-аминофосфорамидат и аминоалкилфосфорамидаты, тионофосфорамидаты, тионоалкилфосфонаты, тионоалкилфосфотриэфиры и боранофосфаты, имеющие нормальные 3'-5'-связи, 2'-5'-связанные аналоги этих соединений и аналоги, имеющие обратную полярность, где смежные пары нуклеозидных остатков имеют 3'-5'-5'-3'- или 2'-5'-5'-2'-связи. Могут быть также включены различные соли, смешанные соли и свободные кислоты.
Репрезентативными патентами США, относящимися к получению вышеописанных связей, содержащих атом фосфора, являются, но не ограничиваются ими, патенты США № 3687808; 4469863; 4476301; 5023243; 5177196; 5188897; 5264423; 5276019; 5278302; 5286717; 5321131; 5399676; 5405939; 5453496; 5455233; 5466677; 5476925; 5519126; 5536821; 5541306; 5550111; 5563253; 5571799; 5587361; 5625050 и 5697248, каждый из которых вводится в настоящее описание посредством ссылки.
Примерами модифицированных межнуклеозидных связей или остовов, не включающих атом фосфора (т. е. олигонуклеозидов), являются связи или остовы, образованные короткоцепочечным алкильными или циклоалкильными межсахарными связями, смешанным гетероатомом и алкильными или циклоалкильными межсахарными связями или одной или несколькими короткоцепочечными гетероатомными или гетероциклическими межсахарными связями. Такими молекулами являются молекулы, имеющие морфолино-связи (частично образованные из сахарной части нуклеозида); силоксановые остовы; сульфидные, сульфоксидные и сульфоновые остовы; формацетильные и тиоформацетильные остовы; метиленформацетильные и тиоформацетильные остовы; алкенсодержащие остовы; сульфаматные остовы; метилениминовые и метиленгидразиновые остовы; сульфонатные и сульфонамидные остовы; амидные остовы и другие остовы, имеющие смешанные группы Ν, О, 8 и СН2.
Репрезентативными патентами США, относящимися к получению вышеописанных олигонуклеозидов, являются, но не ограничиваются ими, патенты США № 5034506; 5166315; 5185444; 5214134; 5216141; 5235033; 5264562; 1264564; 5405938; 5434257; 5466677; 5470967; 5489677; 5541307; 5561225; 5596086; 5602240; 5610289; 5602240; 5608046; 5610289; 5618704; 5623070; 5663312; 5633360; 5677437 и 5677439, каждый и которых вводится в настоящее описание посредством ссылки.
В некоторых случаях олигонуклеотид может быть модифицирован нелигандной группой. Различ
- 11 015676 ные нелигандные молекулы были конъюгированы с олигонуклеотидами для повышения их активности, улучшения распределения в клетках или усиления их поглощения клетками, и процедуры получения таких конъюгатов описаны в научной литературе. Указанными нелигандными молекулами являются липидные молекулы, такие как холестерин (Ье!ктдег е! а1., Ргос. №11. Асаб. 8οί. И8А, 1989, 86:6553), холевая кислота (МапоРагап е! а1., Вюогд. Меб. СРет. Ье!!., 1994, 4:1053), тиоэфир, например гексил-8тритилтиол (МапоРагап е! а1., Αηη. Ν.Υ. Асаб. 8сг, 1992, 660:306; МапоРагап е! а1., Вюогд. Меб. СРет. Ье1, 1993, 3:2765), тиохолестерин (ОРегРаикег е! а1., №с1. Ас1бк Век., 1992, 20:533), алифатическая цепь, например додекандиол или ундециловые остатки (8а1коп-ВеРтоагак е! а1., ЕМВО 1., 1991, 10:111; КаРапоу е! а1., РЕВ8 Ье!!, 1990, 259:327; 8утагсРик е! а1., ВюсЫт1е, 1993, 75:49), фосфолипид, например ди-гексадецил-рац-глицерин или 1,2-ди-О-гексадецил-рац-глицеро-3-Н-фосфонат триэтиламмония (МапоРагап е! а1. Те!гаРебгоп Ьей., 1995, 36:3651; 8Реа е! а1., №с1. Ас1бк Век., 1990, 18:3777), полиаминовая или полиэтиленгликолевая цепь (МапоРагап е! а1., №с1еок1бек & №с1еоРбек, 1995, 14:969) или адамантануксусная кислота (МапоРагап е! а1. ТейаРебгоп Ье!!., 1995, 36:3651), пальмитиловая группа (М1кРга е! а1. ВюсР1т. ВюрРук. Ас!а, 1995, 1264:229) или октадециламиновая или гексиламино-карбонилоксихолестериновая молекула (Сгоокк е! а1., 1. РРагтасо1 Ехр. ТРег., 1996, 277:923). Репрезентативные патенты США, в которых описано получение таких олигонуклеотидных конъюгатов, перечислены выше. Типичные протоколы конъюгирования включают синтез олигонуклеотидов, несущих аминолинкер в одном или нескольких положениях последовательности. Затем аминогруппу подвергают взаимодействию с молекулой, конъюгированной с использованием соответствующих связывающих или активирующих реагентов. Реакция конъюгирования может быть проведена либо с олигонуклеотидом, еще связанным с твердым носителем, либо уже отщепленным в жидкой фазе. После очистки олигонуклеотидного конъюгата с помощью ВЭЖХ обычно получают чистый конъюгат. Использование холестеринового конъюгата является особенно предпочтительным, поскольку такая молекула может улучшать доставку в клетки печени, т.е. в место, где происходит экспрессия РС8К9.
Кодируемые вектором РНКи-агенты.
дцРНК согласно изобретению могут также экспрессироваться из рекомбинантных вирусных векторов внутри клеток ш у1уо. Рекомбинантные вирусные векторы согласно изобретению включают последовательности, кодирующие дцРНК согласно изобретению, и любой подходящий промотор для экспрессии последовательностей дцРНК. Подходящими промоторами являются, например, последовательности промоторов РНК И6 или Н1 ро1 III и промотор цитомегаловируса. Выбор других подходящих промоторов может быть осуществлен самим специалистом в данной области. Рекомбинантные вирусные векторы согласно изобретению могут также содержать индуцибельные или регуляторные промоторы для экспрессии дцРНК в конкретной ткани или в конкретной внутриклеточной среде. Использование рекомбинантных вирусных векторов для доставки дцРНК согласно изобретению в клетки ш угуо более подробно обсуждается ниже.
дцРНК согласно изобретению может экспрессироваться из рекомбинантого вирусного вектора в виде двух отдельных комплементарных молекул РНК или в виде одной молекулы РНК с двумя комплементарными областями.
При этом может быть использован любой вирусный вектор, способный включать кодирующие последовательности экспрессируемой(ых) молекулы(молекул) дцРНК, например векторы, происходящие от аденовируса (АУ); аденоассоциированного вируса (ААУ); ретровирусов (например, лентивирусов (ЬУ), рабдовирусов, вируса мышиного лейкоза); вируса герпеса и т. п. Тропизм вирусных векторов может быть модифицирован путем псевдотипирования векторов оболочечными белками или другими поверхностными антигенами, происходящими от других вирусов, или путем замены, если это необходимо, различных вирусных капсидных белков.
Так, например, лентивирусные векторы согласно изобретению могут быть псевдотипированы поверхностными белками, происходящими от вируса везикулярного стоматита (У8У), вируса бешенства, вируса Эбола, вируса Мокола и т.п. ААУ-векторы согласно изобретению могут быть получены для нацеливания на различные клетки путем конструирования векторов, экспрессирующих капсидные белки различных серотипов. Так, например, ААУ-вектор, экспрессирующий капсид серотипа 2 на геноме серотипа 2, обозначается ААУ 2/2. Такой ген капсида серотипа 2 в векторе ААУ 2/2 может быть заменен геном капсида серотипа 5 с получением вектора ААУ 2/5. Методы конструирования ААУ-векторов, которые экспрессируют капсидные белки различных серотипов, известны специалистам, см., например, публикацию ВаЫпо\\йх I. Е. е! а1. (2002), I. Упо1. 76:791-801, которая во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.
Методы отбора рекомбинантных вирусных векторов, подходящих для применения в настоящем изобретении, методы встраивания последовательностей нуклеиновой кислоты для экспрессии дцРНК в векторе и методы доставки вирусного вектора в представляющие интерес клетки известны специалистам. См., например, публикации ИотРигд В. (1995), Сепе ТРегар. 2: 301-310; Едййк М.А. (1988), Вю1есРпк.|иек 6: 608-614; МШег А.И. (1990), Нит Сепе ТРегар. 1: 5-14; Апбегкоп №.Р. (1998), №!иге 392; 25-30 и ВиРшкоп И.А. е! а1., \¥а1. Сепе!. 33: 401-406, которые во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки.
- 12 015676
Предпочтительными вирусными векторами являются векторы, происходящие от Αν и ΑΑν. В особенно предпочтительном варианте изобретения дцРНК согласно изобретению экспрессируются как две отдельные комплементарные одноцепочечные молекулы РНК из рекомбинантного ΑΑν-вектора, содержащего, например, либо промоторы РНК И6 или Н1, либо промотор цитомегаловируса (СМУ).
Αν-вектор, подходящий для экспрессии дцРНК согласно изобретению, метод конструирования рекомбинантного Αν-вектора и метод доставки вектора в клетки-мишени описаны в публикации Х1а Н. е! а1. (2002), Ыа1. БюйеЬ, 20; 1006-1010.
Подходящие ΑΑν-векторы для экспрессии дцРНК согласно изобретению, методы конструирования рекомбинантного Αν-вектора и методы доставки векторов в клетки-мишени описаны в публикациях 8ати15к1 К. е! а1. (1987), 1. νίτοί. 61: 3096-3101; ЕвЬег К.1. е! а1. (1996), 1. νίτοί., 70: 520-532; 8атикк1 К. е! а1. (1989), 1. νίτοί. 63: 3822-3826; в патенте США № 5252479; в патенте США № 5139941; в международной патентной заявке \¥О 94/13788; и в международной патентной заявке \¥О 93/24641, содержание которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.
III. Фармацевтические композиции, содержащие дцРНК.
В одном из своих вариантов настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим дцРНК, описанную в настоящем изобретении, и фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтическая композиция, содержащая дцРНК, может быть использована для лечения заболеваний или расстройств, ассоциированных с экспрессией или активностью гена РС8К9, таких как патологические состояния, которые могут быть модулированы посредством ингибирования экспрессии гена РС8К9, например, гиперлипидемия. Такие фармацевтические композиции получают исходя из способа доставки. Одним из примеров являются композиции, приготовленные для доставки в печень путем парентерального введения.
Фармацевтические композиции согласно изобретению вводят в дозах, достаточных для ингибирования экспрессии гена РС8К9. Авторами настоящего изобретения было обнаружено, что благодаря своей высокой эффективности, композиции, содержащие дцРНК согласно изобретению, могут быть введены в поразительно низких дозах. Доза в 5 мг дцРНК на килограмм массы тела реципиента в день является достаточной для ингибирования или подавления экспрессии гена РС8К9 и может быть системно введена данному пациенту.
В общих чертах, подходящая доза дцРНК составляет в пределах от 0,01 до 5,0 мг на 1 кг массы тела реципиента в день, а обычно в пределах от 1 мкг до 1 мг на 1 кг массы тела в день. Фармацевтическая композиция может быть введена один раз в день, либо дцРНК может быть введена в виде двух, трех или более субдоз через определенные интервалы времени в течение дня или даже путем непрерывного вливания или доставки с помощью препарата с регулируемым высвобождением. В этом случае для достижения общей суточной дозы количество дцРНК, содержащееся в каждой субдозе, должно быть соответствующим образом снижено. Унифицированная лекарственная форма может быть также приготовлена для доставки в течение нескольких дней, например, с использованием стандартного препарата с пролонгируемым высвобождением, который обеспечивает пролонгированное высвобождение дцРНК в течение нескольких дней. Препараты с пролонгированным высвобождением хорошо известны специалистам.
Специалисту в данной области совершенно очевидно, что на выбор дозы и времени, требуемых для эффективного лечения индивидуума, могут влиять некоторые факторы, включая, но не ограничиваясь ими, тяжесть заболевания или расстройства, предварительное лечение, общее состояние здоровья и/или возраст индивидуума, а также наличие других заболеваний. Кроме того, лечение индивидуума терапевтически эффективным количеством композиции может включать один или несколько курсов лечения.
Оценка эффективности доз и времени полужизни ίη νίνο отдельных дцРНК согласно изобретению может быть осуществлена с применением стандартных методик или на основе ίη νίνο тестирования с использованием соответствующего животного-модели, как описано в настоящем изобретении.
Прогресс в области генетических исследований на мышах позволяет создать ряд мышиных моделей для исследования различных заболеваний человека, таких как патологические состояния, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии гена РС8К9. Указанные модели используются для ίη νίνο анализа дцРНК, а также для определения терапевтически эффективной дозы.
Для введения дцРНК согласно изобретению млекопитающему может быть применен любой метод. Так, например, таким методом введения может быть прямое введение; пероральное введение или парентеральное введение (например, подкожное введение, интравентрикулярное введение, внутримышечное введение, внутрибрюшинное введение или внутривенное вливание). Введение может быть осуществлено сразу (например, путем инъекции) или в течение определенного периода времени (например, путем пролонгированного вливания или введения препаратов с пролонгированным высвобождением).
Обычно при лечении млекопитающего с гиперлипидемией, молекулы дцРНК вводят системно путем парентеральной доставки. Так, например, пациенту могут быть внутривенно введены дцРНК, которые могут быть конъюгированы или не конъюгированы, либо приготовлены в виде липосом или без использования липосом. Для этого молекула дцРНК может быть приготовлена в виде композиций, таких как стерильные и нестерильные водные растворы, безводные растворы в стандартных растворителях, таких как спирты, или растворы в жидких или твердых масляных основах. Такие растворы могут также
- 13 015676 содержать буферы, разбавители и другие подходящие добавки. Для парентерального, интратекального или интравентрикулярного введения, молекула дцРНК может быть приготовлена в виде композиций, таких как стерильные водные растворы, которые могут также содержать буферы, разбавители и другие подходящие добавки (например, усилители пенетрации, соединения-носители и другие фармацевтически приемлемые носители).
Кроме того, молекулы дцРНК могут быть введены млекопитающему биологическими или небиологическими методами, описанными, например, в патенте США № 6271359. Небиологическая доставка может быть осуществлена различными методами, включая, но не ограничиваясь ими, (1) загрузку липосом молекулой дцРНК, описанной в настоящем изобретении и (2) образование комплекса молекулы дцРНК с липидами или липосомами с получением комплексов нуклеиновая кислота - липид или нуклеиновая кислота - липосома. Липосома может состоять из катионных и нейтральных липидов, обычно используемых для трансфецирования клеток ίη νίίτο. Катионные липиды могут подвергаться реакции комплексообразования (например, с переносом заряда) с отрицательно заряженными нуклеиновыми кислотами с образованием липосом. Примерами катионных липосом являются, но не ограничиваются ими, липофектин, липофектамин, липофектак и ЭОТАР. Методы получения липосом хорошо известны специалистам. Липосомные композиции могут быть получены, например, из фосфатидилхолина, димиристоилфосфатидилхолина, дипальмитоилфосфатидилхолина, димиристоилфосфатидилглицерина или диолеилфосфатидилэтаноламина. Многие липофильные агенты являются коммерчески доступными, включая липофектин® Д^йгодеи/Ейе Τесйиο1οд^е8, СагкЬаб, СайГ.) и эффектин™ (Οία^οη. Vа1еηс^а, СайГ.). Кроме того, методы системной доставки могут быть оптимизированы с использованием коммерчески доступных катионных липидов, таких как ОПАВ или ЭОТАР, каждый из которых может быть смешан с нейтральным липидом, таким как ПОРЕ или холестерин. В некоторых случаях могут быть использованы липосомы, например, описанные в публикации ТетрШм е! а1. (№1й1ге В^есИш^^у, 15: 647-652 (1997)). В других вариантах изобретения для доставки ίη νίνο и ех νίνο могут быть использованы поликатионы, такие как полиэтиленимин (ΈοΠίΙη е! а1., Г Ат. 8ο^ №р11го1. 7: 1728 (1996)).
Дополнительную информацию, относящуюся к использованию липосом для доставки нуклеиновых кислот, можно найти в патенте США № 6271359, в публикации заявки РСТ \УО 96/40964 и в публикации Μοιτίδ^, Ό. е! а1. 2005, №11. В^есйшЕ 23(8): 1002-7.
Биологическая доставка может быть осуществлена различными методами, включая, но не ограничиваясь ими, использование вирусных векторов. Так, например, вирусные векторы (например, аденовирусные и герпесвирусные векторы) могут быть использованы для доставки молекул дцРНК в клетки печени. Стандартные методы молекулярной биологии могут быть применены для введения одной или нескольких описанных здесь дцРНК в один из множества различных вирусных векторов, предварительно полученных для доставки нуклеиновой кислоты в клетки. Такие вирусные векторы могут быть использованы для доставки одной или нескольких дцРНК в клетки, например, путем инфицирования.
дцРНК согласно изобретению могут быть приготовлены в фармацевтически приемлемом носителе или разбавителе. Термин фармацевтически приемлемый носитель (также называемый здесь наполнителем) означает фармацевтически приемлемый растворитель, суспендирующий агент или любой другой фармакологически инертный носитель. Фармацевтически приемлемые носители могут быть жидкими или твердыми и могут быть выбраны в зависимости от выбранного метода введения с учетом желаемого объема, нужной консистенции и другого подходящего способа доставки, а также от химических свойств. Типичными фармацевтически приемлемыми носителями являются, например, но не ограничиваются ими, вода; физиологический раствор; связующие агенты (например, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза); наполнители (например, лактоза и другие сахара, желатин или сульфат кальция); замасливатели (например, крахмал, полиэтиленгликоль или ацетат натрия); дезинтегрирующие агенты (например, крахмал или натрийсодержащий гликолят крахмала) и смачивающие агенты (например, лаурилсульфат натрия).
Кроме того, дцРНК, нацеленная на ген РС8К9, может быть приготовлена в виде композиций, содержащих дцРНК, смешанную, инкапсулированную, конъюгированную или как-либо иначе ассоциированную с другими молекулами, молекулярными структурами или смесями нуклеиновых кислот. Так, например, композиция, содержащая один или несколько дцРНК-агентов, нацеленных на ген РС8К9, может содержать другие терапевтические средства, например средства, снижающие уровни липидов (например, статины).
Способы лечения заболеваний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии РС8К9.
Описанные здесь способы и композиции могут быть использованы для лечения заболеваний и состояний, которые могут быть модулированы путем ингибирования экспрессии гена РС8К9. Так, например, описанные здесь композиции могут быть использованы для лечения гиперлипидемии и других форм нарушений липидного обмена, таких как гиперхолистеринемия, гипертриглицеридемия, а также патологических состояний, ассоциированных с этими расстройствами, таких как болезни сердца и крови.
Способы ингибирования экспрессии гена РС8К9.
В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способу ингибирования экспрессии
- 14 015676 гена РС8К9 у млекопитающего. Такой способ включает введение композиции согласно изобретению млекопитающему для ингибирования экспрессии гена-мишени РС8К9. Благодаря своей высокой специфичности, дцРНК согласно изобретению специфически нацелены на РНК (первичные или процессированные) гена-мишени РС8К9. Композиции и способы для ингибирования экспрессии этих генов РС8К9 с использованием дцРНК могут быть применены, как описано в настоящем патенте.
В одном из вариантов изобретения указанный способ включает введение композиции, содержащей дцРНК, где указанная дцРНК содержит нуклеотидную последовательность, комплементарную по меньшей мере части РНК-транскрипта гена РС8К9 у млекопитающего, подвергаемого лечению. Если подвергаемым лечению организмом является организм млекопитающего, такого как человек, то композиция может быть введена любыми методами, известными специалистам, включая, но не ограничиваясь ими, пероральное или парентеральное введение, включая внутривенное введение, внутримышечное введение, подкожное введение, чрескожное введение и введение в дыхательные пути (с помощью аэрозоля). В предпочтительных вариантах изобретения указанные композиции вводят путем внутривенного вливания или внутривенной инъекции.
Если это не оговорено особо, то все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют общепринятые значения, понятные среднему специалисту в области, к которой относится настоящее изобретение. Хотя для осуществления настоящего изобретения или для анализов, проводимых в соответствии с настоящим изобретением, могут быть использованы методы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным здесь методам и материалам, однако предпочтительными являются методы и материалы, описанные ниже. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие упомянутые здесь работы во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки. В случае возникновения противоречий они могут быть урегулированы в соответствии с представленным описанием, включая определения. Кроме того, материалы, методы и примеры приводятся лишь в иллюстративных целях и не должны рассматриваться как ограничение настоящего изобретения.
Примеры
Прогулка по геному гена РС8К9.
Конструирование киРНК осуществляли для ее идентификации в двух отдельных процедурах отбора:
a) киРНК, нацеленных на мРНК человеческого и мышиного или крысиного РС8К9, и
b) всех человеческих реактивных киРНК с предсказанной специфичностью к гену-мишени РС8К9.
Были использованы последовательности мРНК для человеческого, мышиного и крысиного РС8К9: человеческая последовательность ΝΜ 174936.2 была использована в качестве эталонной последовательности в процессе осуществления процедуры отбора киРНК.
19-мерные фрагменты, которые являются консервативными для последовательностей мРНК, человеческих и мышиных и человеческих и крысиных РС8К9 были идентифицированы в первой стадии, в результате чего были отобраны киРНК, которые перекрестно реагируют с человеческими и мышиными мишенями, и киРНК, которые перекрестно реагируют с человеческими и крысиными мишенями.
Во второй процедуре отбора были идентифицированы киРНК, специфически нацеленные на человеческий РС8К9. Все возможные 19-мерные последовательности человеческого РС8К9 были экстрагированы и определены как кандидаты на последовательности-мишени. Последовательности, перекрестно реагирующие с человеческими и обезьяньими мишенями и с мышиными, крысиными, человеческими и обезьяньими мишенями, перечислены в табл. 1 и 2. Химически модифицированные варианты этих последовательностей и их активность в анализах ίη νίίτο и ίη νίνο также перечислены в табл. 1 и 2 и в примерах, представленных на фиг. 2-8.
Для ранговой оценки кандидатов последовательностей-мишеней и их соответствующих киРНК и для отбора подходящих последовательностей, их предсказанный потенциал взаимодействия с нерелевантными мишенями (о££-!агде! ро!еп!1а1) был взят за ранговый параметр. киРНК с низким потенциалом нерелевантного взаимодействия были определены как предпочтительные и было сделано предположение, что они являются специфичными ίη νί\Ό.
Для предсказания киРНК-специфического потенциала нерелевантного взаимодействия были сделаны следующие предположения, что:
1) положения 2-9 (в направлении 5'^3') цепи (уникальная область) могут вносить более важный вклад в потенциал нерелевантного взаимодействия, чем остальная последовательность (область за пределами уникальной области и область сайта расщепления);
2) положения 10 и 11 (в направлении 5'^3') цепи (область сайта расщепления) могут вносить более важный вклад в потенциал нерелевантного взаимодействия, чем область за пределами уникальной области;
3) положения 1 и 19 каждой цепи не являются подходящими для нерелевантных взаимодействий;
4) показатель нерелевантности может быть вычислен для каждого гена и для каждой цепи исходя из комплементарности последовательности цепи киРНК к последовательности данного гена и из положения несоответствия;
5) число предсказанных нерелевантных мишеней, а также наиболее высокий показатель нерелевантности должен рассматриваться как потенциальная нерелевантность;
- 15 015676
6) показатели нерелевантности являются более достоверными для оценки потенциала нерелевантности, чем число нерелевантных мишеней;
7) если принять во внимание возможное нарушение активности смысловой цепи в результате введения внутренних модификаций, то следует рассматривать только потенциал нерелевантных взаимодействий антисмысловой цепи.
Для идентификации потенциальных нерелевантных генов 19-мерные последовательностикандидаты были подвергнуты скринингу на гомологию с известными человеческими последовательностями мРНК.
Для вычисления показателя нерелевантности были выявлены следующие нерелевантные свойства для каждой 19-мерной исходной последовательности каждого нерелевантного гена:
число несоответствий в неуникальной области;
число несоответствий в уникальной области;
число несоответствий в области сайта расщепления.
Показатель нерелевантности вычисляли исходя из предположений 1-3 по следующей формуле:
Показатель нерелевантности=число несоответствий в уникальной области· 10+число несоответствий в сайте расщепления· 1,2+число несоответствий в неуникальной области· 1.
Самый нерелевантный ген для каждой киРНК, соответствующей исходной 19-мерной последовательности, был определен как ген с наиболее низким показателем нерелевантности. В соответствии с этим наиболее низкий показатель нерелевантности был определен как наиболее достоверная оценка нерелевантности для каждой киРНК.
Синтез дцРНК.
Источник реагентов.
Если источник реагентов конкретно не указан в настоящем изобретении, то это означает, что такой реагент может быть получен от любого поставщика реагентов для исследований в области молекулярной биологии в соответствии со стандартами качества/чистоты, установленными для применения в молекулярной биологии.
Синтез киРНК.
Одноцепочечные РНК были получены методом твердофазного синтеза в масштабе 1 мкмоль на синтезаторе Ехребйе 8909 (Аррйей Β^ο5у5ΐет5, Арр1ега ОеиЕсйктй СтЬН, ЭагтйаФ, Ссгтану) с использованием стекла с регулируемым размером пор (СРС, 500 А, ΓΓοΙίβο Вюсйепие СтЬН, НатЬигд, Сегт;ту) в качестве твердого носителя. РНК и РНК, содержащую 2'-О-метил-нуклеотиды, получали методом твердофазного синтеза с применением соответствующих фосфорамидитов и 2'-Ометилфосфорамидитов соответственно (Рюй^ Вюсйепие СтЬН, НатЬигд, Сегтану). Эти структурные блоки были введены в выбранные сайты последовательности олигорибонуклеотидной цепи стандартным химическим нуклеозид-фосфорамидитным методом, описанным в современных протоколах по химии нуклеиновых кислот, Веаисаде, 8.Ь. еΐ а1. (Ебгк.), Ιοίιη \УПеу & δοηκ, 1пс., Ыете ΥοιΈ Ν.Υ., И8А. Фосфортиоатные связи были введены путем замены раствора йодного окислителя раствором реагента Бокажа (Сйгиасйет МФ Ώαδ^ο^, ИК) в ацетонитриле (1%). Дополнительные вспомогательные реагенты были получены от компании Ма11тскгой1 Вакег (Спекйет, Сегтаиу).
Снятие защиты и очистку неочищенных олигорибонуклеотидов с помощью анионообменной ВЭЖХ проводили в соответствии со стандартными процедурами. Выходы и концентрации определяли по УФ-поглощению раствора соответствующей РНК на длине волны 260 нм с помощью спектрофотометра (ЭИ 640В, Весктап ί,’οιιίΕΓ СтЬН, ийег8сЫе1Вйе1т, Сегтаиу). Двухцепочечную РНК получали путем смешивания эквимолярного раствора комплементарных цепей в буфере для отжига (20 мМ фосфат натрия, рН 6,8; 100 мМ хлорид натрия), а затем нагревали на водяной бане при 85-90°С в течение 3 мин и охлаждали до комнатной температуры в течение 3-4 ч. Раствор гибридизованной РНК хранили при -20°С вплоть до ее использования.
Для синтеза киРНК, конъюгированных с холестерином в 3'-положении (также обозначаемых здесь <Ζ?1ιο1-3'), использовали соответствующим образом модифицированный твердый носитель. Модифицированный твердый носитель получала следующим образом.
Диэтил-2-азабутан-1,4-дикарбоксилат АА
О
н о
ДА
4,7 М водный раствор гидроксида натрия (50 мл) добавляли в перемешиваемый охлажденный льдом раствор гидрохлорида этилглицината (32,19 г, 0,23 моль) в воде (50 мл). Затем добавляли этилакрилат (23,1 г, 0,23 моль) и смесь перемешивали при комнатной температуре до завершения реакции, на что указывала ТСХ. Через 19 ч раствор распределяли с дихлорметаном (3x100 мл). Органический слой сушили безводным сульфатом натрия, фильтровали и упаривали. Остаток подвергали перегонке с получением АА (28,8 г, 61%).
- 16 015676
Этиловый эфир 3-{этоксикарбонилметил-[6-(9Н-флуорен-9-илметоксикарбониламино)гексаноил]амино}пропионовой кислоты АВ
АВ
Гтос-6-аминогексановую кислоту (9,12 г, 25,83 ммоль) растворяли в дихлорметане (50 мл) и охлаждали на льду. К полученному раствору добавляли диизопропилкарбодиимид (3,25 г, 3,99 мл, 25,83 ммоль) при 0°С. Затем добавляли диэтилазабутан-1,4-дикарбоксилат (5 г, 24,6 ммоль) и диметиламинопиридин (0,305 г, 2,5 ммоль). Раствор доводили до комнатной температуры и перемешивали еще 6 ч. Завершение реакции определяли с помощью ТСХ. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и добавляли этилацетат для осаждения диизопропилмочевины. Суспензию фильтровали. Фильтрат промывали 5% водной соляной кислотой, 5% бикарбонатом натрия и водой. Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенного продукта, который затем очищали с помощью колоночной хроматографии (50% ЕЮАС/гексан), в результате чего получали 11,87 г (88%) АВ.
Этиловый эфир 3-[(6-аминогексаноил)этоксикарбонилметиламино]пропионовой кислоты АС
АС
Этиловый эфир 3-{этоксикарбонилметил-[6-(9Н-флуорен-9-илметоксикарбониламино)гексаноил]амино }пропионовой кислоты АВ (11,5 г, 21,3 ммоль) растворяли в 20% пиперидине в диметилформамиде при 0°С. Раствор перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, а затем к остатку добавляли воду и продукт экстрагировали этилацетатом. Неочищенный продукт очищали путем его превращения в гидрохлоридную соль.
Этиловый эфир 3-({6-[17-(1,5-диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17тетрадекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-илоксикарбониламино]гексаноил}этоксикарбонилметиламино)пропионовой кислоты АО
Гидрохлоридную соль этилового эфира 3-[(6-аминогексаноил)этоксикарбонилметиламино]пропионовой кислоты АС (4,7 г, 14,8 ммоль) растворяли в дихлорметане. Суспензию охлаждали до 0°С на льду. К этой суспензии добавляли диизопропилэтиламин (3,87 г, 5,2 мл, 30 ммоль). К полученному раствору добавляли холестерилхлорформиат (6,675 г, 14,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Затем реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и промывали 10% соляной кислотой. Полученный продукт очищали флэш-хроматографией (10,3 г, 92%).
- 17 015676
Этиловый эфир 1-{6-[17-(1,5-диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17тетрадекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-илоксикарбониламино]гексаноил}-4-оксопирролидин-3карбоновой кислоты АЕ
трет-Бутоксид калия (1,1 г, 9,8 ммоль) суспендировали в 30 мл сухого толуола. Смесь охлаждали до 0°С на льду и медленно добавляли 5 г (6,6 ммоль) диэфира АО при перемешивании в течение 20 мин. В процессе добавления температуру поддерживали ниже 5°С. Перемешивание продолжали в течение 30 мин при 0°С и добавляли 1 мл ледяной уксусной кислоты, а затем сразу добавляли 4 г ЫаН2РО42О в 40 мл воды. Полученную смесь два раза экстрагировали 100 мл дихлорметана и объединенные органические экстракты два раза промывали 10 мл фосфатного буфера, а затем сушили и упаривали досуха. Остаток растворяли в 60 мл толуола, охлаждали до 0°С и экстрагировали тремя 50-миллилитровыми порциями холодного карбонатного буфера, рН 9,5. Водные экстракты доводили до рН 3 добавлением фосфорной кислоты и экстрагировали пятью 40-миллилитровыми порциями хлороформа, которые затем объединяли, сушили и упаривали досуха. Остаток очищали колоночной хроматографией с использованием 25% этилацетата/гексана, в результате чего получали 1,9 г Ь-кетоэфира (39%).
17-(1,5-Диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-тетрадекагидро-1Нциклопента[а] фенантрен-3 -иловый эфир [6-(3 -гидрокси-4-гидроксиметилпирролидин-1 -ил)-6-оксогексил] карбаминовой кислоты АР
В кипящую смесь Ь-кетоэфира АЕ (Ь,5 г, 2,2 ммоль) и борогидрида натрия (0,226 г, 6 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) по каплям в течение 1 ч добавляли метанол (2 мл). Перемешивание продолжали при температуре флегмы в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли 1н. НС1 (12,5 мл) и смесь экстрагировали этилацетатом (3x40 мл). Объединенный этилацетатный слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме с получением продукта, который очищали колоночной хроматографией (10% МеОН/СНС13) (89%).
- 18 015676
17-(1,5-Диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11.12,13,14,15,16,17-тетрадекагидро-1Нциклопента[а] фенантрен-3 -иловый эфир (6-{ 3 -[бис-(4-метоксифенил)фенилметоксиметил]-4-гидроксипирролидин-1-ил}-6-оксигексил)карбаминовой кислоты АС
Диол АЕ (1,25 г, 1,994 ммоль) сушили путем выпаривания с пиридином (2x5 мл) в вакууме. Затем при перемешивании добавляли безводный пиридин (10 мл) и 4,4'-диметокситритилхлорид (0,724 г, 2,13 ммоль). Реакцию осуществляли при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакцию гасили добавлением метанола. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и к остатку добавляли дихлорметан (50 мл). Органический слой промывали 1 М водным раствором бикарбоната натрия. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаточный пиридин удаляли путем выпаривания с толуолом. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (2% МеОН/хлороформ, Ш=0,5 в 5% МеОН/СНС13) (1,75 г, 95%).
Моно(4-[бис-(4-метоксифенил)фенилметоксиметил]-1-{6-[17-(1,5-диметилгексил)-10,13-диметил2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-тетрадекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3илоксикарбониламино]гексаноил}-пирролидин-3-ил)эфир янтарной кислоты АН
Соединение АС (1,0 г, 1,05 ммоль) смешивали с ангидридом янтарной кислоты (0,150 г, 1,5 ммоль) и ОМАР (0,073 г, 0,6 ммоль), а затем сушили в вакууме при 40°С в течение ночи. Смесь растворяли в безводном дихлорэтане (3 мл), добавляли триэтиламин (0,318 г, 0,440 мл, 3,15 ммоль) и раствор перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 16 ч. Затем раствор разбавляли дихлорметаном (40 мл) и промывали охлажденной льдом водной лимонной кислотой (5 мас.%, 30 мл) и водой (2x20 мл). Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали досуха. Остаток использовали в следующей стадии без очистки.
Дериватизированный холестерином СРС А1
Сукцинат АН (0,254 г, 0,242 ммоль) растворяли в смеси дихлорметана/ацетонитрила (3:2, 3 мл). К полученному раствору последовательно добавляли ОМАР (0,0296 г, 0,242 ммоль) в ацетонитриле (1,25 мл) и 2,2'-дитио-бис-(5-нитропиридин) (0,075 г, 0,242 ммоль) в ацетонитриле/дихлорэтане (3:1, 1,25 мл). К полученному раствору добавляли трифенилфосфин (0,064 г, 0,242 ммоль) в ацетонитриле (0,6 мл). Реакционная смесь приобретала ярко-оранжевую окраску. Раствор быстро перемешивали в шарнирном шейкере (5 мин). Затем добавляли длинноцепочечный алкиламин-СРС (ЬСАА-СРО) (1,5 г,
- 19 015676 мМ). Суспензию перемешивали в течение 2 ч. СРС фильтровали через воронку из спеченного стекла и последовательно промывали ацетонитрилом, дихлорметаном и эфиром. Непрореагировавшие аминогруппы маскировали с использованием ангидрида уксусной кислоты/пиридина. Конечную загрузку СРС определяли по интенсивности УФ-излучения (37 мМ/г).
Синтез киРНК, несущих группу бис-дециламида 5'-12-додекановой кислоты (обозначаемую здесь 5'-С32-) или группу 5'-холестерилового производного (обозначаемую здесь 5-С1ю1-). проводили как описано в \УО 2004/065601, за исключением того, что в случае холестерилового производного, для введения фосфортиоатной связи у 5'-конца олигомера нуклеиновой кислоты проводили стадию окисления с использованием реагента Бокажа.
Последовательности нуклеиновой кислоты представлены ниже в соответствии со стандартной номенклатурой и имеют конкретные аббревиатуры, указанные в табл. 1-1.
Таблица 1-1 Аббревиатуры нуклеотидных мономеров, используемых в репрезентативных последовательностях нуклеиновой кислоты. Следует отметить, что эти мономеры, если они присутствуют в олигонуклеотиде, связаны друг с другом 5'-3'-фосфордиэфирными связями.
Аббревиатура’ Нуклеотид(ы)
Ά, а 2’-дезокси-аденозин-5'^фосфат, аденозин-5'фосфат
с, с 2'-дезокси-цитидин-5'-фосфат, цитидин-5'фосфат
С, д 2'-дезокси-гуанозин-5'-фосфат, гуанозин-5'фосфат
т, е 2'-дезокси-тимидин-5'-фосфат, тимидин-5'фосфат
и, и 21-дезокси-уридин-5’-фосфат, уридин-5'фосфат
Ν, п любой 2'-дезокси-нуклеотид/нуклеотид (С, А, С, или Т, д, а, с или и)
Ат 2’-0-метиладенозин-5'-фосфат
Ст 2’-0-метилцитидин-5’-фосфат
Ст 2'-О-метилгуанозин-5’-фосфат
Тт 2'-0-метил-тимидин-5'-фосфат
Цт 2'-О-метилуридин-51-фосфат
А£ 2'-фтор-2 1-дезокси-аденозин-5'-фосфат
СЕ 21-фтор-2’-дезокси-цитидин-5'-фосфат
СЕ 2'-фтор-2'-дезокси-гуанозин-5'-фосфат
ТЕ 2'-фтор-2'-дезокси-тимидин-5 1-фосфат
и£ 21-фтор-2’-деэокси-уридин-5’-фосфат
А, с, с, Т, и, а, с, 2' 3 подчеркнуто: нуклеозид-5'-фосфортиоат
ат, ст, дт, £т, ит подчеркнуто: 2-0-метил-нуклеозид-5'- фосфортиоат
а Заглавные буквы означают 2'-дезоксирибонуклеотиды (ДНК), строчные группы означают рибонуклеиды (РНК).
Скрининг киРНК РС8К9 в клетках НиН7, НерС2, Не1а и в первичных гепатоцитах обезьян выявил в высокой степени активные последовательности.
Клетки НиН-7 были получены из банка клеток 1СКВ (Японская коллекция биологических источников для исследований) (8Ыи)цки, 1арап, сак № 1СКВ0403). Клетки культивировали в среде МЕМ Дульбекко (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, са1. № Р0435), в которую были добавлены 10% фетальная телячья сыворотка (РС8) (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, са1. № 80115), 100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, сак Νο, А2213) и 2 мМ Ь-глутамина (ВюсЕгот АС,
ВегЕп, Сегтапу, сак. Νο К0282), при 37°С в атмосфере с 5% СО2 в инкубаторе с повышенной влажностью (Негаеик НЕКАсе11, Кепбго ЬаЬогакогу РгобисЦ Ьапдеп8е1Ьо1б, Сегтапу). Клетки НерС2 и клетки Не1а получали из Американской коллекции типовых культур (Кос^Е1е, Мб., сак. №, НВ-8065) и культивировали в МЕМ (С1Ьсо 1№бгодеп, КагНгцЕе, Сегтапу, сак. №, 21090-022), в которую были добавлены 10% фетальная телячья сыворотка (РС8) (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, сак. № 80115), 100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, сак. №, А2213), 1хзаменимых аминокислот (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, сак. № К-0293) и 1 мМ пирувата натрия (ВюсЕгот АС, ВегЕп, Сегтапу, сак. № Ь-0473), при 37°С в атмосфере с 5% СО2 в инкубаторе с повышенной влажностью (Негаеик НЕКАсе11, Кепбго ЬаЬогакогу Ргобискз, Ьапдеп8е1Ьо1б, Сегтапу).
Для киРНК-трансфекции, клетки НиН7, НерС2 или Не1а высевали в 96-луночные планшеты при плотности 2,0х104 клеток/лунку и сразу трансфецировали. киРНК-трансфекцию (30 нМ для скрининга одной дозы) осуществляли с использованием липофектамина 2000 Вптбгодеп СтЬН, КагкгцЕе, Сегтапу, сак. № 11668-019), как описано производителем.
- 20 015676
Через 24 ч после трансфекции клетки НиН7 и НерС2 подвергали лизису и уровни мРНК РС8К9 оценивали с использованием набора ОнапОдепе Ехр1оге КН (Сепо§ргес!га, ЭнтЬаПоп С1гс1е Егетоп!, И8А, са! № ОС-000-02) в соответствии с протоколом. Уровни мРНК РС8К9 нормализовали по мРНК САР-ЭН. Для каждой киРНК получали восемь независимых результатов. В качестве контроля использовали киРНК-дуплексы, не являющиеся родственными гену РС8К9. Активность данного РС8К9специфического киРНК-дуплекса выражали как процент концентрации мРНК РС8К9 в обработанных клетках по отношению к концентрации мРНК РС8К9 в клетках, обработанных контрольным киРНКдуплексом.
Первичные гепатоциты собакоподобных обезьян (криоконсервированные) получали от компании 1п νίΐΐΌ ТесЬпо1од1е8, 1пс. (ВаШтоге, Мб., И8А, са! № М00305) и культивировали в среде 1п УйгоСКО СР Мебшт (са! № Ζ99029) при 37°С в атмосфере с 5% СО2 в инкубаторе с повышенной влажностью.
Для киРНК-трансфекции первичные клетки собакоподобных обезьян высевали на покрытые коллагеном 96-луночные планшеты (ЕБНег 8с1еп!Шс, са!. № 08-774-5) при плотности 3,5х104 клеток на лунку и сразу трансфецировали. киРНК-трансфекцию (восемь 2-кратных серийных разведений начиная с 30 нМ) осуществляли в дубликатах с использованием липофектамина 2000 (1пуЦгодеп СтЬН, КагНгцйе, Сегтапу, са!. № 11668-019), как описано производителем.
Через 16 ч после трансфекции среду заменяли свежей средой 1п УйгоСКО СР, содержащей смесь антибиотиков Тогребо АпбЫобс Μίχ (1п νίΙΐΌ Тесйпо1од1е8, 1пс, са!. № Ζ99000).
Через 24 ч после замены среды первичные клетки собакоподобных обезьян подвергали лизису и уровни мРНК РС8К9 оценивали с использованием набора ОнапОдепе Ехр1оге К1! (Сепо§ргес1га, ЭитЬаг!оп С1гс1е Егетоп!, И8А, са!. № ОС-000-02) в соответствии с протоколом. Уровни мРНК РС8К9 нормализовали по мРНК САРЭН. Затем нормализованные отношения РС8К9/САРЭН сравнивали с отношением РС8К9/САРЭН для контрольных клеток, обработанных только липофектамином 2000.
В табл. 1, 2 (и на фиг. 6) систематизированы результаты и приводятся примеры ш νίΙΐΌ скрининга в различных клеточных линиях при различных дозах. Сайленсинг транскрипта РС8К9 выражали как процент от остального транскрипта, присутствующего в данной дозе. В высокой степени активными последовательностями являются последовательности, в которых присутствовало менее чем 70% остаточного транскрипта после обработки данной киРНК в дозе, равной 100 нМ или менее. Очень активными последовательностями являются последовательности, в которых присутствовало менее чем 60% остаточного транскрипта после обработки данной киРНК в дозе, равной 100 нМ или менее. Активными последовательностями являются последовательности, в которых присутствовало менее чем 85% остаточного транскрипта после обработки высокой дозой (100 нМ). Репрезентативные активные киРНК, полученные в виде липидоидных препаратов, описанных ниже, были также скринированы у мышей ш уко. Последовательности, которые были активными ш уйго, также обычно обнаруживали активность ш уко (см., например, фиг. 6).
Скрининг 1п νί\Ό эффективности киРНК РС8К9.
Процедура получения препаратов.
Для получения наночастиц липид-киРНК использовали липидоид Ь№-01-4НС1 (МА 1487) (фиг. 1), холестерин (8|дта-А1бпс11) и ПЭГ-церамид С16 (ЛуапО Ро1аг Ыр1б8). Были получены маточные этаноловые растворы каждого из следующих компонентов: Ь№-01 - 133 мг/мл; холестерина - 25 мг/мл, ПЭГ-церамида С16 - 100 мг/мл. Затем маточные растворы Е№-01, холестерина и ПЭГ-церамида С16 объединяли в молярном отношении 42:48:10. Объединенный липидный раствор быстро смешивали с водной киРНК (в ацетате натрия, рН 5) так, чтобы конечная концентрация этанола составляла 35-45%, а конечная концентрации ацетата натрия составляла 100-300 мМ. Наночастицы липид-киРНК спонтанно образовывались после смешивания. В зависимости от нужного распределения частиц по размеру полученную смесь наночастиц в некоторых случаях подвергали экструзии через поликарбонатную мембрану (с отсечкой 100 нМ) на поршневом термоэкструдере (Ырех Ехйибег, №г111егп Ыр1б8, 1пс). В других случаях стадию экструзии не проводили. Затем этанол удаляли и одновременно проводили замену буфера либо путем диализа, либо путем фильтрации в тангенциальном потоке. Буфер заменяли забуференным фосфатом физиологическим раствором (РВ8), рН 7,2.
Характеризация препаратов.
Препараты, полученные либо стандартным методом, либо неэкструзионным методом, охарактеризовывали аналогичным образом. Препараты сначала охарактеризовывали путем визуального наблюдения. Эти препараты представляли собой беловатые прозрачные растворы, не содержащие агрегированных включений или осадка. Размер частиц и гранулометрический состав липидных наночастиц измеряли по динамическому рассеянию света с использованием Макегп Ζе!а8^ζе^ Nаπо Ζ8 (Макет, И8А). Частицы должны иметь размер 20-300 нм, а в идеальном случае 40-100 нм. Распределение частиц по размеру должно быть унимодальным. Общую концентрацию киРНК в данном препарате, а также наличие иммобилизованной фракции оценивали с помощью анализа на вытеснение метки-красителя. Образец препарата киРНК инкубировали с РНК-связывающим красителем КзЬодгееп (Мо1еси1аг РгоЬек) в присутствии или в отсутствие поверхностно-активного вещества, разрушающего препарат, 0,5% тритона-х100. Общее
- 21 015676 количество киРНК в данном препарате определяли по сигналу, передаваемому от образца, содержащего поверхностно-активное вещество, в соответствии со стандартной кривой.
Иммобилизованную фракцию определяли путем вычитания содержания свободной киРНК (измеренного по сигналу в отсутствие поверхностно-активного вещества) из общего содержания киРНК. Процент иммобилизованной киРНК обычно составляет >85%.
Ударная доза.
Мышам С57/ВЬ6 (5 мышей на группу, в возрасте 8-10 недель, СНаг1е5 К|уег ЬаЬога!опе8, ΜΑ) в хвостовую вену иглой 270 инъецировали ударную дозу препарата киРНК. киРНК приготавливали в Б-^-01 (а затем диализовали против РВ8) при концентрации 0,5 мг/мл, что позволяло вводить дозу 5 мг/кг в объеме 10 мкл/г массы тела. Перед введением дозы мышей помещали под инфракрасную лампу приблизительно на 3 мин для облегчения инъекции.
Через 48 ч после введения дозы мышей умерщвляли путем СО2-асфиксии. Затем из ретроорбитальной области брали 0,2 мл крови, после чего печень собирали и замораживали в жидком азоте. Сыворотку и печень хранили при -80°С.
Замороженную печень измельчали с использованием холодильника 6850/криогенной мельницы (8РЕХ Сеп1пРгер, 1пс) и порошок хранили при -80°С до проведения анализа.
Уровни мРНК РС8К9 определяли методом продуцирования разветвленных ДНК с использованием набора, поставляемого ОиапООепе Кеадеп! 8у§!ет (Оепокресйа), в соответствии с протоколом. 10-20 мг порошка замороженной печени подвергали лизису в 600 мкл 0,16 мкг/мл протеиназы К (Еркепйе, #МРКК092) в растворе для лизиса ткани и клеток (ЕркеШге, #МТС096Н) при 65°С в течение 3 ч. Затем к 90 мкл рабочего реагента для лизиса добавляли 10 мкл лизатов (1 объем маточной смеси для лизиса в двух объемах воды) и смесь инкубировали при 52°С в течение ночи на планшетах для иммобилизации Оепокресйа с наборами зондов, специфичных к мышиному РС8К9 и мышиному ОАРЭН или циклофилину В. Последовательности нуклеиновой кислоты для активатора захвата (СЕ), активатора метки (ЬЕ) и блокирующих (ВЬ) зондов отбирали из последовательностей нуклеиновой кислоты РС8К9, ОАРЭН и циклофиллина В с помощью компьютерной программы ОиапООепе РгоЬеПеыдпег 2.0 (Оепокресйа, Ртетоп!, Сайр, И8А, са!. № 00-002-02). Хемолюминесценцию считывали на устройстве У1с!от2-ЫдЬ! (Регкт Е1тег) в относительных единицах силы света. Отношение мРНК РС8К9 к мРНК ОАРЭН или циклофилина В в лизатах печени усредняли для каждой группы обработки и сравнивали с отношением для контрольной группы, обработанной РВ8, или контрольной группы, обработанной неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII).
Общий уровень холестерина в сыворотке мышей измеряли с использованием набора 8!апВю С1ю1еЧего1 Ыс.|шСо1ог (8!апВю ЬаЬога!огу, Воете, Тех., И8А) в соответствии с инструкциями производителей. Измерения проводили на счетчике ^с!ог2 1420 Мц1!йаЬе1 Соип!ег (Регкт Е1тег) на 495 нм.
Примеры киРНК РС8К9, приготовленных в липосомах Р-^-0Р тестировали ш νί\Ό в мышиной модели. Этот эксперимент проводили при дозе киРНК 5 мг/кг, и по меньшей мере 10 киРНК РС8К9 обнаруживали более чем 40% разрушенной мРНК РС8К9 по сравнению с контрольной группой, обработанной РВ8, а контрольная группа, обработанная неродственной киРНК (фактора свертывания крови VII), не обнаруживала какого-либо эффекта (фиг. 2-5). Сайленсинг транскрипта РС8К9 также коррелировал со снижением уровня холестерина у этих животных (фиг. 4-5). Кроме того, между молекулами, которые были активны 1п νίΙΐΌ и 1п νίνΌ, наблюдалась значительная корреляция (фиг. 6). Последовательности, содержащие различные химические модификации, также скринировали т νίΙΐΌ (табл. 1 и 2) и ш νί\Ό. Так, например, последовательности 9314 и 9318 с меньшим числом модификаций, и варианты последовательностей 9314-(10792, 10793 и 10796); 9318-(10794, 10795, 10797) с большим числом модификаций тестировали т νίΙΐΌ (в первичных гепатоцитах обезьян) или т νί\Ό (9314 и 10792) в препарате ΡΝΓ-01. На фиг. 7 (см. также табл. 1 и 2) показано, что все родительские молекулы 9314 и 9318 и их модифицированные варианты являются активными ш νίΙΐΌ. На фиг. 8 в качестве примера показано, что родительская последовательность 9314 и последовательность 10792 с большим числом модификаций являются активными т νίνΌ, на что указывает 50-60% сайленсинг эндогенного РС8К9 у мышей. На фиг. 9 также проиллюстрирована активность других химически модифицированных вариантов родительских последовательностей 9314 и 10792.
дцРНК-экспрессирующие векторы.
В другом аспекте изобретения РС8К9-специфические молекулы дцРНК, которые модулируют активность экспрессии гена РС8К9, экспрессируются от транскрипционных единиц, встроенных в ДНКили РНК-векторы (см., например, Сои!иге, А. е! а1., ТЮ. (1996), 12:5-10; 8кШегп, А., е! а1., публикацию международной заявки РСТ νθ 00/22113, Сопгай, публикацию международной заявки РСТ νθ 00/22114, Сопгай, и патент США № 6054299). Эти трансгены могут быть введены в виде линейной конструкции, кольцевой плазмиды или вирусного вектора, которые могут быть включены в геном хозяина и могут наследоваться как интегрированный трансген. Этот трансген может быть также сконструирован так, чтобы он наследовался как внехромосомная плазмида (Оакктапп, е! а1., Ргос. №11. Асай. 8ск И8А
- 22 015676 (1995), 92:1292).
Отдельные цепи дцРНК могут транскрибироваться промоторами на двух отдельных экспрессионных векторах и котрансфецироваться в клетку-мишень. Альтернативно, каждая отдельная цепь дцРНК может транскрибироваться промоторами, которые присутствуют на одной и той же экспрессионной плазмиде. В предпочтительном варианте изобретения дцРНК экспрессируется как инвертированный повтор, связанный посредством линкерной полинуклеотидной последовательности, в результате чего дцРНК имеет структуру типа стебля и петли.
Рекомбинантными дцРНК-экспрессирующими векторами обычно являются плазмидные ДНК или вирусные векторы. дцРНК-экспрессирующие вирусные векторы могут быть сконструированы на основе вирусов, таких как, но не ограничивающихся ими, аденоассоциированный вирус (обзор см., например, Ми/ус/ка, е1 а1., Сигг. Шркк Мюго. Iттииο1. (1992), 158:97-129); аденовирус (см., например, Вегкиег, е1 а1., ВюТесктдиек (1998), 6:616, Κο^^εΜ е1 а1. (1991, 8с1еисе 252:431-434) и Κο^^εΗ е1 а1. (1992), Се11 68:143-155); или альфавирус, а также другие вирусы, известные специалистам. Ретровирусы были использованы для введения различных генов в различные клетки многих типов, включая эпителиальные клетки 1и νίΐτο или т νίνο (см., например, Едййк, е1 а1., 8с1еисе (1985), 230:1395-1398; Όπποκ аиб МиШдаи, Ргос. №а11. Асаб. 8с1. И8А (1998), 85:6460-6464; Уйтои е1 а1., 1988, Ргос. №11. Асаб. 8а. И8А 85:30143018; Аттерам е1 а1., 1990, Ргос. №11. Асаб. 8а. И8А. 87:61416145; НиЬег е1 а1., 1991, Ргос. №11. Асаб. 8а. И8А 88:8039-8043; Репу е1 а1., 1991, Ргос. №а11. Асаб. 8а. И8А 88:8377-8381; С1юу\с111и1у е1 а1., 1991, 8с1еисе 254:1802-1805; νаη Веиксесйет, е1 а1. 1992, Ргос. №11. Асаб. 8с1. И8А 89:7640-19; Кау е1 а1., 1992, Нитаи Сеие Тйегару 3:641-647; Όηί е1 а1., 1992, Ргос. №а11. Асаб. 8с1. И8А 89:10892-10895; Н\\п е1 а1., 1993, 1. 1^^1. 150:4104-4115; патент США № 4868116; патент США № 4980286; заявку РСТ УО 89/07136; заявку РСТ УО 89/02468; заявку РСТ УО 89/05345 и заявку РСТ УО 92/07573). Рекомбинантные ретровирусные векторы, способные переносить и экспрессировать гены, встроенные в геном клетки, могут быть продуцированы путем трансфекции рекомбинантного ретровирусного генома в подходящие упаковывающие клеточные линии, такие как РА317 и Рк1-СК1Р (^тейе е1 а1., 1991, Нитаи Сеие Тйегару 2:5-10; Сове е1 а1., 1984, Ргос. №а11. Асаб. 8а, И8А 81:6349). Рекомбинантные аденовирусные векторы могут быть использованы для инфицирования клеток и тканей широкого ряда у восприимчивых хозяев (например, крыс, хомячков, собак и шимпанзе) (Нки е1 а1., 1992. 1. Ιπίεαίοιικ Б1кеаке, 166:769), а также они имеют то преимущество, что для их инфицирования не требуются митотически активные клетки.
Промотором, регулирующим экспрессию дцРНК в плазмидной ДНК или в вирусном векторе согласно изобретению, может быть промотор гена эукариотической РНК-полимеразы I (например, промотор рибосомной РНК), промотор РНК-полимеразы II (например, ранний промотор СМУ или промотор актина или промотор мяРНК И1) или обычно промотор РНК-полимеразы III (например, промотор мяРНК И6 или РНК 78К) или прокариотический промотор, например промотор Т7, при условии, что экспрессионная плазмида также кодирует РНК-полимеразу Т7, необходимую для транскрипции с промотора Т7. Промотор может также направлять экспрессию трансгена в поджелудочную железу (например, последовательность, регулирующая поступление инсулина в поджелудочную железу (ВиссЫт е1 а1., 1986, Ргос. №а11. Асаб. 8а. И8А 83:2511-2515)).
Кроме того, экспрессия трансгена может соответствующим образом регулироваться, например, с использованием индуцибельной регуляторной последовательности и экспрессионных систем, таких как регуляторная последовательность, восприимчивая к некоторым физиологическим регуляторам, например уровням глюкозы в крови или гормонам (^οс11е^ιу е1 а1., 1994, РА8ЕВ 1. 8:20-24). Такими индуцибельными экспрессионными системами, подходящими для регуляции экспрессии трансгенов в клетках или у млекопитающих, являются системы регуляции под действием экдизонов, эстрогена, прогестерона, тетрациклина, химических индукторов димеризации и изопропил-бета-01-тиогалактопиранозида (ЕРТС). Специалист в данной области может самостоятельно выбрать соответствующую регуляторную/промоторную последовательность в зависимости от целей использования дцРНК-трансгена.
Обычно доставку рекомбинантных векторов, способных экспрессировать молекулы дцРНК, осуществляют, как описано ниже, и после этого они интегрируются в клетках-мишенях. Альтернативно, могут быть использованы вирусные векторы, обеспечивающие временную экспрессию молекул дцРНК. Такие векторы, при необходимости, могут быть введены повторно. После экспрессии дцРНК связываются с РНК-мишенью и модулируют ее функцию или экспрессиию. Доставка дцРНК-экспрессирующих векторов может быть системной, например, она может быть осуществлена путем внутривенного или внутримышечного введения, или путем введения в клетки-мишени, эксплантированные у пациента, с последующим введением этих клеток снова пациенту, или любыми другими методами, позволяющими осуществлять введение в нужные клетки-мишени.
дцРНК-экспрессирующие ДНК-плазмиды обычно трансфецируют в клетки-мишени в виде комплекса с катионными липидными носителями (например, олигофектамином) или с некатионными липидными носителями (например, Тгаикй-ТКО™). В настоящем изобретении также рассматриваются множественные липидные трансфекции для дцРНК-опосредуемого подавления различных областеймишеней одного гена РС8К9 или множества генов РС8К9 в течение одной недели или более. Успешное
- 23 015676 введение векторов согласно изобретению в клетки-хозяева может быть оценено различными известными методами. Так, например, временная трансфекция может быть выявлена по сигналу репортера, такого как флуоресцентный маркер, например белок, флуоресцирующий в зеленом диапазоне спектра (СЕР). Стабильная трансфекция клеток ех νίνο может быть обеспечена с использованием маркеров, которые сообщают трансфецированным клеткам резистентность к конкретным внешним факторам (например, к антибиотикам и лекарственным средствам), такую как резистентность к гигромицину В.
РС8К9-специфические молекулы дцРНК могут быть также встроены в векторы и использованы в качестве векторов, применяемых в генотерапии для лечения человека. Векторы для генотерапии могут быть доставлены индивидууму, например, путем внутривенной инъекции, местного введения (см. патент США № 5328470) или стереотаксической инъекции (см., например, Сйеп е1 а1. (1994), Ргос. №111. Асаб. 8с1. И8Л 91:3054-3057). Фармацевтический препарат векторов, применяемый в генотерапии, может включать вектор для генотерапии в приемлемом разбавителе, либо он может содержать матрицу с пролонгированным высвобождением, в которую может быть введен носитель для доставки генов. Альтернативно, если вектор для доставки полноразмерного гена, например ретровирусный вектор, может быть получен в интактной форме из рекомбинантных клеток, то такой фармацевтический препарат может включать одну или несколько клеток, продуцирующих систему доставки гена.
Специалистам в данной области очевидно, что помимо методов и композиций, конкретно описанных в настоящем изобретении, существуют и другие методы и композиции, которые могут быть применены для осуществления настоящего изобретения, полный объем которого определен в прилагаемой формуле изобретения.
Таблица 1
ПбЛОИЛНИЯВ человеческой пос ги рег№ ΝΜ_1?4936 Последовательность смысловой Цепи ί5’· З')1 5ЕО ΙΠ ΝΟ: Послелоьэтелънскть аипкМЫОЛОвой иепн(5-3'*1 5Еб 10 ΝΟ: Збсодатг )Г|пита Средний процеятостамктося мРНК* транскрипта при соответствующей мэшентрашти киЕНК в длвтх различных типов 1СХ« в Н«рО2 [«М| 1С50В гепатоцитах со6в№· лолобньа обезьян
100 нМгНерО2 30 нМ/НерО2 30 ЯМ?
2-20 АССодсоисоАОбСосиСАТт 1 исАсссссисоАсоиссситт 2 АО- 15220 35
] 5-33 сссисдисоииссАОСгСостт 3 ссоссиосААСсдиСАССотт 4 АО- 15275 56
16-34 ссисАиссииссАбссосстт 5 ссссссиосААССАисАсгтг 6 АР15301 70
30-48 сссссссссссссиисАОип 7 АсиСААссюссссоссссстт 8 АО15276 42
31-49 соосссссссссиисАоиитг 9 ААСиОАДСССССОССССССТТ 10 АР 15302 32
32-50 ссссссссссоиисдсиисзт 11 СААСиСДАССОССОСССССГТ 12 АР- 15303 37
40-58 сссиисАсиисАОСЮисистг В САСАССсиСААСиСААСООТГ 14 АО- 15221 30
43-61 ииСАсиисАОСоисъсАССк 15 осисАСАССсиоААсиОААТт 16 АР- 15413 61
82-100 сиоАСАсиосюиссоссссп· 17 ссссссодсссАсисисАСтт 18 АР- 15304 70
100-118 сссссос асссс иссииссгт 19 йСААсаАсессиссссюсстт 20 АР- 15305 36
101-119 осссссАСбссиссииссАТт 21 иосААСоАСоссиссссюстт 22 АР- 15306 20
102-120 ссоюсАСссоиссииосАбтт 23 си<ХАА00АС<х?сиссс<ютт 24 АО- 15307 38
105 123 <зсАСоеоисоииссА<лСАСтт 25 сиссиссАдссАСОСоисстт 26 АР- 15277 50
135-153 исссАассАсюАииссосотгг 27 ссссюААиссиобсиоосАТхт 28 АР- 9526 74 89
135-153 □сге А Ссс А ОСАииссСгсСГВ Т 29 сосооААиссиоосиоосАТзт 30 'АР- 9652 97
136-154 сссасю: а оз Аииссоссстат 31 осссосААиссисюсиссстэт 32 АР- 9519 78
136-154 сссА&хАОСАшкхСсСсТгТ 33 ссоссюААиссисссисюстц 34 АР9645 66
138-156 СА<зссАООАииссбСОсест5Т 35 осссасосААиссисасистгт 36 АР9523 55
138-156 сАСссАООАиииСсОсСсГзТ 37 {гсссссссАдиссиодсистзт 38 АО9649 60
585-203 АесиссиосАСАсиссисстзт 39 оюАСЮАсисиссАОСАСситзт 40 АР9569 112
185-203 АСсиссиОсАсАСиссиссТ^Т 41 сюАССАсисиОсАССАСситБТ 42 АР9695 102
- 24 015676
Положения в ч^псгмаделой ПРС-ТЛ ретХз ΜΝί_174936 Последовательность смысловой цепя{_5’-з·^ 8Е<2 ГО ΝΟ: ПсхлсдоБаге.тьностъ антисмысловой пени (5-31^ 5Е<3 ГО ΝΟ: Эбзавчекк дупгкка Средний процент оставшегося иРЦКтранскритттэ при соответствующей концентрации кнРМК в клетках различных типов 1С5Ов НерО2 (иМ] 1С50 в гепатоцитах собакоподобных обезьян (нМ|
100 нМ/НерС2 30 яМ/НерС2 3 ΜΚί/Ηβρΰ 1 30 нМ/ НеЬэ
205-223 САССССААСОСиСААСЮССгТТ 43 ссссииоАоссииососиоп 44 ΑΌ15222 75
208-226 СССААСОСиСААСЮССССОТТ 45 сосссссиисАоссииосоп 46 АО- 15278 78
210-228 СААСССиСААОССОССОССТТ 47 ооссюсбсс^исАОСсииотт 48 АО- 15178 83
232-250 (зиосАССососАСссссистт 49 ОАСЮСссу<к;сс&оиссАСТг 50 АО15308 «4
233-251 иссАССососАСОсесиситт 51 АСАбсссоиоссссюиссАТт 52 АО- 15223 67
234-252 ССАСС0СССАС06ССиС1АП 53 иАОАОСССО1<<СМ2О<51’ССТТ 54 АО- 15309 34
235-253 <ЗАСс<зсссАССюссисиАсп 55 сиАОАССсссиосососисп 56 АО- 15279 44
236-254 АССосасАСооссисиАСОп 57 ссиАОАСсссоиосососитт 58 АО15194 63
237-255 ссс€ссА€ссссисиАОзип 59 АСсиАОАСОССсиосссооп 60 АР- 15310 42
238-256 ссссс Асебссиои асс истт 61 САСсиАОАОбссоиссбсотт 62 Αϋ15311 30
239-257 ссосАСсоссисиАОоисип 63 АОАССОАОАСЮССОиОСССТТ 64 Αϋ- 15392 18
240-258 сосдсссссисиАОсисисп 65 одсАСсиАОАОСсссиосотт 66 АО- 15312 21
248-266 сисилосисиссисоссАОтт 67 СиОССбАООАСАССиАОАОГТ 68 Αϋ- 15313 19
249-267 исилосисиссисоссАСсп 69 ССиССССАСОАСАССиАОАП 70 АО- 15280 81
250-268 сидсизисиссисбсСАСЮАП 71 иссиосссАОСАбАссидотт 72 Αϋ- 15267 82
252-270 Асбисис<ъссссА<кЗАСАгт 73 иоиссиосссАООАОАСсшт 74 АО15314 32
258-276 ССиССССАСОАСАОСААССТТ 75 соииосисиссисхххЗАССП 76 АО15315 74
300-318 соисАОсиссАОСссюисстзт 77 ооАСсоссиооАСсиоАСбТгТ 78 АО- 9624 94
300-318 <0 исАСсиссАОСсСКи иссТ зТ 79 соАССОссипсАОсиоАСотзт 80 Αϋ9750 96
301-319 оисАСсиссАООссюисситзт 81 АОСАССОССиООАОСиСАСТзТ 82 АО- 9623 43 66
301-319 ОисАСсисс АОСгсССиссиТзТ 83 АООАССОССиООАСЗСиОАСТзТ 84 Αϋ- 9749 (05
370-388 аососсссиоазсАОбАссп 85 ссиссиосссАСОСнХ'СССтт 86 АР- 15384 48
408-426 ссдсюиосиоазАСссиштзт 81 СААСОсиАОСАССАОсисстьТ 88 АО- 9607 32 28 0,20
408-426 ССАОсиСтбибсиАСссииСТзТ 89 сААСКтСи АСсАСс АСгССгССТ57 90 АО9733 78 73
41М29 осиосиосидсссискзсоитзт 91 АСОСААО<дСиАОСАССАССТ5Т 92 Αϋ· 9524 23 28 0.07
411-429 СсиССцСсиАОссииСгсСиТзТ 93 АССсААСССиАСсАСсАОСТ:! 94 АО9650 91 90
412-430 сиссиссиАсесииосоиитзт 95 ААСОСААОССиАССАССАОЬТ 96 АР- 9520 23 32
412-430 сисоиосилсссииссоиитгт 97 ААСОСААООСиАОСАССАОТзТ 98 АО9520 23
412-430 сиСОиОсиАСссииСсСииТ5Т 99 ААССсААСССиАСсАСсАбТзТ 100 АО9646 97 108
416-434 иосиАсссииссоиисссАТзт 101 ПСООААСОСААООСиАССАТзТ 102 АО9608 37
416-434 иСсиАОссииСгсСииСсСАТзТ 103 иСООААСОсААСКЗСиАСсАТзТ 104 АО9734 91
419-437 иАсссиисссиисссАсадТзт 105 иссисооААСосААСОсиАТгт 106 АО9546 32
419-437 иАбссииСсбиисс(иА<ЗС!АТ5Т 107 иССиСОбААСОиААСОСиАТзТ 108 АО9672 57
439-457 САССОССиООСССААССАСГТ 109 оиосиисооссАбоссоистт НО АО- 15385 54
447-465 ОССССаАОСАСССОАОСАСП 111 оиссисоооиосииссосстт 112 АО- 15393 31
448-466 ССССААССАССССАОСАССП 113 соиосисссоиссииссостг 114 АО- 15316 37
449-467 ССОААССАССССАССАССОТТ 115 сссиасисссоиосиисйсп 116 АО- 15317 37
458^76 ССОАОСАССЮААССАСАОСП 117 осисиооиоссоиссиссоп Н8 АО- 15318 63
484-502 САСсосиоссссААООА исгт 119 САиссииоососАосооиотт 120 Αϋ- 15195 45
486-504 ссосиоссссААООАисссп 121 сослиссишхзсос Аоссо п 122 АО- 15224 57
487-505 сосиссоссААСОАиссоитт 123 АСОолиссиисюсосАоссп 124 АО- 15188 42
489-507 сиососсААСюлиссоисотт 125 есАС<ЮАиссиио<3€ССАОтт 126 АО- 15225 51
- 25 015676
Положения в человеческой рег)й ΝΜ.174936 Последовательность смысловой цели (5‘-3')1 5ΕΩ ΙΟ ΝΟ: Последовательность антисмысловой цепи($’-3)1 8Е<? ГО ΝΟ: С&эдтаме дупгккз Средний процент оставшегося мРНКтрлнекриптэ при соответствую щей концентрации киРНК в клетках раалил пых типов [С50в НерО2 [нМ] £50 в гепатоцитах сосано подо&ных обезьян (чМ)
100 нМ-НерО^ 30 «М-ЫерОЗ нЬ№ерО2 30 нМ·' НеЪа
500-518 лиссоиосАСгсиисссиостт 127 ССАСЮСААССиССАССОАЦГТ 128 АО15281 89
509-527 ссииоссиссюдссиАСситг 129 АСОиАССиСССАСОСААССТТ 130 дц- 15282 75
542-560 АСЗАОАСССАССиСиСССАТТ 131 иосоАСАсаиссюисисситт 132 АО- 15319 61
543-561 ссАСАСССАССисисослотт 133 сцссоАолооиоосисисстт 134 ΑΕ- Ι 5226 56
544-562 слсАсссАСсисисосАситт 135 АСиоссАОАОсиаосисистт 136 АЕ>- 15271 25
549-567 ссАСсисисосАоиСАСАотт 137 сисисАсисссАОАОсисогг 138 АО- 15283 25
552-570 ссисисоСАсисАСАССсстт 139 ссбСисиаАсиоссАбАС<зтт 140 АО- 15284 64
553-571 СиСЦСССАСиСАСАССССАТГ 141 иосасисицАсцсссАСАОтг 142 Αϋ- 15189 17
554-572 исисссАсисАСАС.спсАстг 143 оиосссисиоАСцоссАОАтт 144 АО- 15227 62
555-573 сисосАсисАОАЦсосАситзт 145 Асиссосисисдсисссдстуг 146 АО- 9547 31 29 0,20
555-573 сисСоАОисАСАСсбсАсиТзТ 147 АоиосссисиоАсиосоАСТзт 148 АО9673 56 5?
558-576 ССАЦиСАСАОСССАСибССВТ 149 сосАСгиссосисиоАсиссгйТ 150 Αϋ- 9548 54 60
558-576 СсАОисАСАОсСсАсиОссТзТ 151 салсиосссиаюАсиссткт 152 АО 9674 36 57
606-624 оос ди лссис асс аао а ιχτδΤ 153 САисипооисАСоидиссстьт 154 АО 9529 60
606-624 СССЛиАссгсДссААСАрсЦТ 155 одисиисоисАСЮиАиссстзт 156 АО- 9655 140
659-6 77 иссисдАОА иоАоиооссдтгт 157 иссссдсисАисииСАССАТзТ 158 АО- 9605 27 31 0,27
659-677 иООиСААОАиОАСиСасСАТБТ 159 иссссАсисАисиисдСслтвТ 160 АО9731 31 31 0Д2
663-681 СААСлислсиссссАссиотзТ 161 САСюиссссАазсдисиистБТ 162 АО- 9596 37
663-681 СААОАиОАСиСгОсОАсбаСТвТ 163 сАСоисоссАсиолисиистзт 164 АО- 9722 76
704-722 ссСАшисбАсиАСАиссАТзТ 165 исолисиАоисоАСлиоостзт 166 АО 9583 42
704-722 сссАиОисОАсиАсАисСАТвТ 167 исоАиоиАцисоАсАиссстгт 168 АО- 9709 104 Ζ4
718-736 диссдасАСОАсиссисиствт 169 сдодсюАсиссиссисоАШУг 170 ЛО- 9579 1)3
718-736 АисСЛССАШлАсиссисиСТзТ 171 сАСАССАоъссиссисоАиы 172 АО- 9705 81
758-776 ссдАСсисоАССссАииАСТт |73 оиАдиссссиссАСсиисстт 174 Αϋ- 15394 32
759-777 сдАСсиоадссссАиидсстт 175 соидлиссссцссАбсцистт 176 АС- 15196 72
760 778 ААСсисоАОСоаАииАссстт 177 сссиАлиссссиссАссиитт 178 Αϋ- 15197 85
777 795 сссиссАСсаиАСссоссотт 179 соссссоиАссцисоАСССТТ 180 АО- 15198 71
782-800 САСОСиАССООССОбАиСАЪТ 181 ислиссссссосидссоиотзТ 182 А0- 9609 66 71
782-800 сА сСС иА е^ССЮсОС А иСАТзТ 183 исАиссоссссцнАССоистзт 184 АО- 9735 115
783-801 АССОиАССОСОССОАиСААЪТ 185 иисдисссссссоиАсссшуг 186 АО9537 145
783-801 А сСгб иАссСОСсОСА110 А А ТзТ 187 ищАиссссссосцдссоитзт 188 АО9663 102
784 802 сев и а ссооосооа ис а литят 189 а иисд иссосссскз оассстзТ 190 АО- 9528 ИЗ
784-802 с &3 и А ссСЮ Ос СС А иС А А чТ 5 Т 191 диисАисссссс<к1иАССОтзТ 192 Αϋ- 9654 107
785-803 ссидссссоссодиаАлиАвт 193 идиисАиссосссоси ассп зт 194 9515 49
785-803 {ЗСиАссСОСсССАиСААиАТдТ 195 иА и ис а иссссссо с цасстзт 196 Αϋ- 9641 92
786-804 СиАССССОСОСАибААЦАСТвТ 197 оиАиисАиссссссссцАСТхТ 198 Αϋ- 9514 57
786 804 СгцАссОСОсСгСАцС А АцДсТбТ 199 аиАиисАЦссбссссоиАсът 200 АО- 9640 89
788-806 АССаСССССАиаААЦАССАТ$Т 201 ибсилиисАиссосссскзитзт 202 АО- 9530 75
788-806 АссСОСсСбАибААиАСсАТ^Т 203 иоСиАиисАиссоссссйитгТ 204 АО- 9656 77
789-807 сссосгСсюдцаААидссАствт 205 сиссидиисАисссссссотуТ 206 АО- 9538 79 80
789-807 ссСССтсССАиОААиАссАСГаТ 207 сиооиАиисдцссоссссст5Т 208 АО- 9664 53
825-843 ссиссиосАссиоиАисистхт 209 ОАбдиАСАССиССАССАООТ5Т 210 АО- 9598 69 $3
- 26 015676
ТТсло^чння в чедовенеской пос-та рвг№ ΝΜ.Π4936 Последовательность емыслодок цели (У-з)1 5Е9 10 N0: ПостгедовЕтепыистъ антлсмыслОЕмОЙ □етпт ГОЗ')3 5Е9 10 ΝΟ Эбздечегеа: ДугШексз Средний Процент огГавшегося мРНК транскрипта присктветсгвчощей Концентрации ккРНК вклепках различных ТНПСЬ ГСТОв НерЙ2 [нМ] Κ50 в гепатоцитах собакополобных обезьян (нМ)
100 нМИерСЕ 30 нМ/НерС>2 3 нМ/Нер5 30 нМг ши
«25-843 ссиОбиООАОСиСиАиеисТзТ 211 ОАОАиАсАССиСсАСсАСОТ$Т 212 АО9724 127
82б-«44 сиооиаоАбоиоидисисстзЗ 213 ССАСАиАСАССиССАССАОТзТ 214 АО9625 58 88
826-844 сиООиССА<ЗСиСиАисиссТ5Т 215 <ЗС АСАиАсАССГЛ?< АСсАСГзТ 216 АО- 9751 60
«27-845 исоиосАСюисиАисисситвТ 217 АСйАСАиАСАССиССАССАТ5Т 218 АО- 9556 46
827 845 иООиСЮ АСОиСи АисиссиТзТ 219 АС0А0АиАсАССиСсАСсАТ5Т 220 Αϋ- 9682 38
828-846 соиооАСюисиАисиссиАТзт 221 илсоАОдиАСАСсиссАССТзт 222 АО- 9539 56 63
828 846 СОиССгАООиСиАисиссиАТзТ 223 цАйОАдАиАсАССиСсАССТзТ 224 АО9665 83
831 849 ссАОсисиАисиссиАСдгат 225 сисиАОСАСдилСАСсисстзт 226 АО9517 36
831-849 СИЗАССиСиАисиссиАСАсТзТ 227 ОиСиАССАОАиАсАССиССТ5Т 228 АО9643 40
833-851 дссиоиАисиссиАСАСАСгвт 229 ои<311сиАООАСАиАСАСсит5Г 230 АО- 9610 36 34 0,04
833-851 АбСиСгцАисиссиЛОАсАсТзТ 231 биСПСиАбСАСАиАсАССиЪТ 232 АО- 9736 22 29 0,04
833-851 АГ&СФОГиАГиОиССсиГаСЦаСГаСтт 233 р еиГгиГсиГаС1еАТ8АП±А1сАГсСГиТ5Т 234 АЭ- 14681 33
«33-851 АОСПЮиСАиГСЛЖГСЮГАОАСГАСГГ^Т 235 сигоигсшоабАОАСГАСГАСГсллтзт 236 АО1469! 27
833-85! Αβ (ЗиСвА и СиСс иаОэ С а<ГТ5 Т 237 р-^иТвиГсиГаОТ^А^АЕиАГсАЕсСГи ГзТ 238 АО- 14701 32
833-831 А £.0 μ ОиАи СиСс ЩО аС аСТ $Т 239 оигсшсгигАаслоАигАСЕАОсги^т 240 АО14711 33
833-851 А^РКЭГиАГиСГиСКийОГаСГаСГТэТ 241 ОиОиСиаСба£АиАСАс<-иТ $Т 242 АО- 14721 22
833-851 АСоикииысюгжплАОАСЕАСГГзт 243 0исиСиэ60аеАиАСАссиТ$Т 244 АО- 14731 21
833-851 А^биСиАиСиСсиаОаСаСТзТ 245 <ЗиСиСиаб<ла§ АиАСАссиТзТ 246 АО- 14741 22
833-85! СГсАкСГсиЕсАЕ'иАГдОЕсСГиОСйАПзТ 247 р 1<1сАГ^<гГсСГ|1А{и01аСйе.С-Г|ЯЗГТ5Т 248 А Ο- Ι 5087 37
833-851 с<ГАсгасгиялАи/АсссгсшюсАТзт 249 и1СЕсгА<юс₽лигАигаАО<зоигссп5Т 250 АП- 15097 51
833-851 СсАсСсисАиАёСсСиОйАТзТ 251 р-иС1сА^<51гСГиАп16^1£СГи<ЗГсТ8Т 252 АО 15107 26 :
- 27 015676
Поле же нияв человечеохей гюс-тя рсгХг ΝΜ_ 174936 Последовательность Омысдовоц цепи 8Ер Ю ΝΟ: £1СнУ1еДОБЙТйЛЬКМтъ антномыслофОЙ иелн (5-31^ 5ЕР ΙΟ ΝΟ: Утнтй дуплекса Средний процент оставшегося мРНК· транскрипта при соответствующей концентрации киРНК т клеттйх различных типов 1С50в НерС2 |нМ] 1С50в гепатоцитах ссбздогтодебных обезьян (яМ)
100 нМНерОЗ 30 егМ/НерСЗ κΜ»ΉβρΟ2 30 нМ. Нейэ
833-851 СсАсСсПсАиАдСсС и<л£ АТ ьТ 253 С№ГАСИХ1€{ССАиЮАОСОи:Г1СИ5Т 254 АО15117 28
833-85) СйАГсСГсиГсАп^А^СкС/иОГаАГТзТ 255 иССАС^сСиаиОАСКл<ли®сТзТ 256 АО- 15127 33
833-851 СС1АСГС1СШГС(АиМОССГСШГССАТ5Т 257 иССАСесСиаиСАСССидсТзТ 258 АО15137 54
833-851 СсАсСсЪсАиА^ОсСцС^АТзТ 259 иССАбесСиаиСАООСи^сТзТ 260 Αϋ15147 52
836-854 исилисиссиАСАСАССАСТзт 261 сиссисисидсЮАОАиАСАЪт 262 АО9516 94
836-854 иСиАисиссиАСАсАссАб-ТзТ 263 СибСиоиСиАССАСАиАсАТ5Т 264 АО9642 105
840-858 исиссидбАсассАосАиАТзт 265 идиссиссисисиАб<ЗАаАТ&т 266 Αϋ- 9562 46 51
840-858 исиССиАОАсАссАСсАиАТ$Т 267 идиосибСтисиСиАСКгАОАГзТ 26« Αϋ- 9688 26 34 4,20
840-858 ил и ГсС ήιΑ А А ГсСГаО Ге А ГиА ПьТ 269 р-иАЕиСГеиГдСГиСГиСГиАГвСГэСГаВТ 270 АО- 14677 за
840-858 иГСГиГСК^АСАСГАСОАОСТАПГАТзТ 271 υιχυίοοίυίϋουίσυίΟίυΓΑΟΟΑΟΑΤίΐ 272 АО- 14687 52
840-85« исЦсСиАЕАсАсСаСсАиАТзТ 273 р иАГиС&иГеСГиеГцСЕиАГбС&ОГаПТ 274 АО- 14697 35
840-858 1>е ПсСи АцАе Ас Са<3 с Ан А Т 5Т 275 игдсютялссигаигсязгАООАСАТ&т 276 АО14707 58
«40-85« иГ<и(еС?иАа(АГсА£сСГаО£сАГиА1Т5Т 277 СА11ССиеОи?иСиАОСабаТ2Т 278 АО1л7!7 42
840-858 иязгигсгсгигАбАсглсязгАссглигАВт 279 иАиосивоигисиАОСа^аТзт 280 АО- 14727 50
840-85« ЦсисСиА^АсАсСаСсАиАТзТ 281 иАПССивСи’^иСиАСбайаТ'аТ 282 АО14737 32
840-858 ДГдСРсСЕСГМ^иБАИаиГиСГдОГГэТ 283 р-сСГдАГаиЬАГаСГиСТсАГяСГсСГиТзТ 284 АО15083 16
840-85« А(КгСгс£иях}АсигигигАппггскизт5т 285 СГС1СААи(АААСЛЛСГС5АССС1'СГиГГ^Т 286 АО15093 24
840-85« А^СсСиОйА^иииаииС^СТзТ 287 р-сС Г^АГаб ЬА£аС 1иС1е Αίβΰ ίς£ίυΤ$Т 288 АО15103 11
840-858 АеОсСиС^еиииэииСеотзт 289 сгстодд ЩААдсгигсоАСЮсРсгиазт 290 АО- 15113 34
840-858 А£«О£сСТиСГеА^и1йи£эиП1СГя(ЗП’5Т 291 СССААиаААсуССАСОссиТхТ 292 АО15123 19
840-858 АС<зсйсц1йэсА<зиюш1Аиги?сЮ(Зт$т 293 СС<3 ААиаААсиССАСЮссиТ зТ 294 АО- 15133 15
840-858 А5,<ЗсСиб§А2.иииаии€£бТзТ 295 СССААцаДАсиССАССссиТ5Т 296 АО- 15143 16
841-859 сиссиАСАСАССАССдиАСт$т 297 сидисгсисоисисиАСбАСТвт 298 Αϋ9521 50
841-859 сиесиАбЛсАссАОсАиАеТаТ 299 Сидисси^иоисиАССАСТзт зею АО9647 62
842-860 иссиА0АСАссАССАидсАТ5Т 301 исидисхгиссиоисиАбСАТзТ 302 АО9611 48
842-860 иссиА<ЗЛсАссАОсАиАсАТ&Т 303 иеидиссиосиснХнАсбАТЕТ 304 АО9737 68
843-861 ССиАС.АСАССАССлиАСАСТБГ 305 сисиАиссиссцсисиАсстзт 306 АО- 9592 46 55
843-861 оси АСАсАсс АСсАиАс АСТзТ 307 сиОиАиссиссисисиАОстзт 308 АО9718 78
847-865 сасассаосаидсАОАсистзТ 309 САсисисиАиосбооисистзт 310 АО9561 64
847-865 САсАссАСсАиАсАСАСиСТзТ ЗП сАсисисиАИСсиосиоисвт 312 АО9687 84
855-873 С А и АСАС АС ис АСС АССССТзТ 313 ссосиосисАСсссосАистт 314 АО9636 42 41 2,10
855-873 с А и А с АС А СиС А ссАссСС ТзТ 335 ссссискФсАсисиоиАист?! 316 АО9762 9 28 0,40
860-878 АСАСиСАССАСССССАААиТзТ 317 дииисссосисюисАсисит$т 318 АО9540 45
860-87« АС АС иС АссЛссб СС Л Л ЛиЪТ 319 Αΐ пшссссгсиоспоАсисивт 320 АО- 9666 81
801-379 ОАОбб АССАбСббОА АД истуг 321 САииисссоеиосисАСпстзТ 322 АО9535 48 73
861-879 С АС 11(3 А С£ А ссСИЗС А А А исТьТ 323 ОАиписссссиотисАСистзт 324 АО9661 83
863-881 ОиОАССАСС6<ЗОАААЦССАТ$Т 325 исоАиипохсюиобисАСът 326 АО9559 35
863-881 (лсбАссАссСгбСААДисОАТзТ 327 исодииисссссиооисАСтзт 328 АО- 9685 77
865-883 САССАССбОСААДиСбДОбТаТ 329 ссисслииисссаоисоист.т 330 АО- 9533 100
865-883 САссАссОСЮАААисСАССТзТ 1 331 ссиссдииисссссисюистзт 332 АО9659 «8
866-884 АССАСССООААА иССАСССТ?! 333 сссиссАниисссссисситзт 334 АО- 9612 122
866-884 Ас< ДссССС А АДисС АСгОСТ $Т 335 сссисслииссссссисситзт 336 Αϋ9738 83
- 28 015676
Положения в человеческой ТГОС-ТМ регЛ? ЬГМ_174936 Последовательность смысловой цепи (5-3')1 8ЕО П> ΝΟ: Последовательность ЭЯГИСМЫатовоЙ иепи(5-37^ 5Ё0 ГО ΝΟ: Обсвичечв дуютага Средний процент оставшегося мРНктраяскршпа при соответствующей концентрации ки₽НК в мзегках различных типов ЮЭв Нер52 (нМ1 1С50в гепатоцитах собэтопозкйяых обезьян (нМ)
160 нЬ4/ИерО( 30 нМНер<3 3 нМ/НерО 30 2 нН' НеЬа
867-885 ССАССаОСАААиССАССССТзТ 337 бсссиссАииисссосиоотвТ 33« АО9557 75 96
867-885 ссАссСОаАААис<ЗАСК1СсТ5Т 339 осссиссАииисссосиостзт 340 АО9683 48
875-893 АААЬССАСЮССАСШиСАиЪТ 341 диОАСССиссссиссА1ги1ггзТ 342 АС- 9531 31 32 0,53
875-893 АЛАисОАОСКгсАОССисДиТзТ 343 АисдсссиссссисоАииътгт 344 АО9657 23 29 0?66
875-893 А£аАГиС1£А£еа(вСйС1Т£ОСиСйи(Т5Т 345 р-аиГ^ГсО&и^ГсСГиС^АЛхОГиТзГ 346 АС- 14673 Й1
$75-893 А А А и/СГС АСОССГА 0С01ЖГА О ГГзТ 347 дийАСК/оплг-сгсесш^кзАигиш^ т 348 АС- 14683 56
875-893 АаАиСеАдСэСаОеОиСаиТ 8Ϊ 349 р-аиГеАГсСГсиГвСГсСТиСГбА£ииП1Т5Т 350 АС- 54693 56
875-893 АаАиС&А$С[£СаС£ОиСаиТ$Т 351 А1г1ОАСГС£С:ОгаС1С(0П5?:ГОАиг0:11П5 т 352 АС- 14703 68
875-893 АГщАГйС^АГзОГйСЙСГ^бгиСЦЫТъТ 353 ЛиОАСссООссСиССАиииТзТ 354 АС- 14713 55
875-893 А А А игсго АООСгСГАСОС 1ЖГА и ГТзТ 355 диОАОхОбссСиССАиииТвТ 356 АС- 14723 24
875-893 АаАиС*А§С^СаО§ОиСаиТзТ 357 АООАСосиСгсхСиССАиииТзТ 358 АО- 14733 34
875-893 СГзОйАГсСГсиГсАГиАГвОГсСГиСеГзТ 359 р-сА^вС(сС(йА£и01аОР^С{иСГсС^Т5Т 360 АС- 15079 85
875-893 СгОООГАСЮЮЮЮГАиГАООСГСЩГСТЯ 361 сгаоосюялашодоооогссююът 362 АС- 15089 54
875-893 С^сАсСсСсАиА^бсСиОТзТ 363 364 АС15099 70
875-893 С^ОсАсСсисАиАйОсСиОТзТ 365 СГАОС1СеСЛ1£Аи?СА(Х!СиГОСК,ЮЪТ 366 АС- 15109 67
875-893 СТбОГсАГсСГсиГсАГиАГеСГсСГиОтТ 367 САООСсиАи8аОСОиОсс£Т5Т 368 АС- 15119 67
$75-893 аоосгАСГСгсгиесгАиАОСсгсшготзт 369 САООСсиДи^аОООибсс^ТзТ 370 АО- 15129 57
875-893 С^ОсАсСсисАиАёСсСиОТйТ 371 СДООСсиАийаСОСиОсс^ТзТ 372 АС- 15139 69
877-895 АисоАСОосАОбсисдиоотзТ 373 ссдиоАСссиосссиссАиьт 374 АО- 9542 160
877-895 АисОАОООсАОООисАиООТзТ 375 СсдиоАсссиосссиоолитзТ 376 АС- 9668 92 |
878-896 сОАОСОсАООСиоАиООисТзТ 377 САС^АисАСССиосссисоъ; 378 АС- 9739 109 1 1
880-893 ОАОСосАССоислиооисАТзт 379 иоАссдиоАСССиосесистзТ 380 . АО- 9637 56 83
88М98 САСЮСсАСООисАиСОисАТзТ 381 иОАСсАООАСОсибсссисьт 382 | АО- 9763 79
882-900 ооссАОСоисАиооисАссът 383 ооиоАССАиоАСсеиоссстйТ 384 АО9630 82
882-900 00<лсАСО6цсАи0СисАсс75Т 385 ооисАСсАиоАСосиоессът 386 , АО- 9756 63
885-903 с Аооо ио а υοοι гс лесе а сгт 387 оисосиОАССАУОЛССсиотзт 388 АО- 9593 55
885-903 сАССОисАсКЗбисАссОАсТБТ 389 ουοσουοΑΟοΑυοΑΟοουοΤδΤ 390 АО9719 115
886-904 АООсисАиосисАССоАситзт 391 доисосиоАССАисАССоитзт 392 АО- 9601 111
886-904 АССОисАиСОисАссОАсиТ5Т 393 АСОСООиСАСсАООАСССиТгТ 394 АО- 9727 118
892-910 АиООиОАСССАСШСОАОАЪТ 395 исисСААоиоооиСАССАотзт 396 ! 36 42 1,60
892 910 АоОСи сАссб АсиисСАСАТ$Т 397 исисоААоисооиоАСсАитзт 398 АО9699 32 36 2,50
899-917 ссоАсииссАОАлиосюссгт 399 <хзсАСАиисисСААоисб<згт 400 | АО- 15228 26
921-939 бОА<КтАСОс;сАССсосиистт 401 ОААОссссисссоцссисспт 402 АО- 15395 53
993-1011 САбСбОССООаАООССООсТвГ 403 ОССС’<ЗСАиСССС'ОССС/Сий75Т 404 , ДО9602 726
993-1011 сАбсООсс-ССОАиОссООсТзТ 405 оссоосАисссосссосиотзт 406 АО- 9723 94
1020-1038 ОООиСССАОСА 1- ОСОСАССТТ 407 осиососАиосисссАСсстт 408 АО- 15386 45
1038 1056 ссиососооосиОААсиост5Т 409 ОСАОЦиЦАОСАССООСАОСТзТ 410 1 АО- 9580 112
1038-1056 ССиОсОсОиСсисДАсиОсТзТ 411 ОсАОииОАСсАСОССсАСОТзТ 412 АО9706 86
1040-1058 ибсосоиосцслАоиоссАТгт 4Ϊ3 ЦОССАООи<ЗАбСАСССОСАТ5Т 414 | АО9581 35
1040-1058 иОсОсСгиОсисААсиОссАТзТ 415 иООйАСОиОАОсАСОСОсАТзТ 416 ' АО970? 81
1042-1060 сосоиосислАсиоссААОГат 4 !7 оииоаСАоииоАОСАсосстзт 41$ . АО9543 51
1042-1060 сСсХгиОсцсААсиСссААОТьТ 419 сииоойАоииСАОсАССсоы 420 1 АО- 9669 97
- 29 015676
Положения в человеческой лоо-ти ρϋΓΛϊ ΝΜ_174936 ПоСЛвДОВатеЛьЯйСТъ Смысловой цепи (5 . 8Е0 ГО ΝΟ: ПсеГКДОеатеЛЬЧйСТъ амГИСМЬюловОЙ цепи СЗ'-Л! 8Е<Э ГО ΝΟ: Тбййюшл* дуптюиз Средний Процент оставшегося мРНК· транскрипта при соответствующей концентрации киРНК в клетках различных типов 1С50в НерОЗ [тзМ] 1С50в гепатоцитах собакоподобных обезьян (нК4)
!00 {М/Нер62 30 нМ'НерЭ' 3 нМ/ИерОЭ 30 ΗλΕ МеЬа
1053-8071 сисссА асооааоооса ссът 421 соиссссиисссииоосАст$т 422 АО9574 74
1053-1071 сиСссААСКЮААССЮсАсСТзТ 423 ссиссссиссссииобсАСТхт 424 АО9700
1057 )075 СААСООААОСССАСССииАТТ 425 ПААССсиосссиисссицстт 426 А Ο- Ι 5320 26
1058-1076 ААОССААОСОСАСССПиАСТТ 427 сидАссбиосссиисссиитт 428 АО- 15321 34
1059-1077 АсабААоассАсаоииАсстт 429 осиААССсиосссииссситт 430 Αϋ- 15159 64
1060-1078 осюААООссАССоиидссотт 431 сасидАССсиосссииссстт 432 АО- 15167 86
1061-1079 ССААССССАССОииАССССТГ 433 ссссиАдссоиссссиисстт 434 АО- 15164 41
1062-Ю80 СААоассАСбсиилоссостт 435 сссосиААССоиссссиистт 436 АО- 15166 43
1063-1081 АА&зосАСОоииАОсаасАТт 437 иоссссиААССсиссссишт 438 АО- 15322 64
1064-1082 АбСССАСбСиидСССССАСтт 439 сисссссиАдсссиоссситт 440 АО15200 46
1068-1086 сасскз иидоссссАССсистт 441 с А<зссъосссси А десс истт 442 АО- 15213 27
1069-1087 АссбиидссаосдсссьсАТт 443 исАсоос'оссссиААСсСгитт 444 АО- 15229 44
ιυ72-Κ'9Ο оиЬАССсосАССсиСАиАСТт 445 сиАис-АС-с-сисссосиААСтт 446 АО- 15215 49
1073 1091 иилгсспслсссисАиАОСгГГ 447 ссидисАОссисссссидАТТ 448 Αϋ- 15214 101
1076-1094 ЙС<К?САССС1ГСА11АбССсиТ5Т 449 АОСссидисАссоисссостзт 450 ДО9315 35 32 0,98
1079-1097 ссАССсисдиАссссисоАТзт 451 иссдосссидиоАС;асиост5Т 452 Αϋ- 9326 35 51
1085-1 ЮЗ исАиАбсссиссАОциилитзт 453 АиАААсиссдбсссиАисАТ5Т 454 АО9318 14 37 0,40
1090-1 Ю8 сссс и ос ас иии а иисосдт^т 455 СССС ДАНА ААСиССАОСССТхТ 456 АО- 9323 14 33
1091-1109 сссиссАОпииАиисссААТвт 457 ииСССААСЛААСЪССАСССТ^Т 458 АО9314 11 22 0.04
1091-1109 ОссиСС АС ии и АиисСбААТ $Т 459 ииСССААиААдСиСсАОССТгТ 460 АО- 10792 О.Ю О.Ю
1091-1109 СкхиОСАСиииАиисССААТзТ 461 ииссоАдиААсиссАсссвт 462 АО- 10796 0 1 0.1
1093-И1! сисюАсиииАиисссААААТзт 463 и ии иссс- аа и а а дсисс асът 464 Αϋ- 9638 101
1093-1 111 сиОСАСиииАшлсССААААТзТ 465 ииииссоААиАААсиссАОТаТ 466 АО- 9764 112
1095-1113 ссАоиииАиисооААААСсвт 467 ссшииссОААСАААСисст$т 468 АО9525 53
1095-11 13 СС АСи ииАиисСКд АА ААС сТьГ 469 осиииисссААиАААсисст5т 470 АО- 9651 58
1096-1114 <зас иии а и и ссю а алаосстзт 471 оссиииисссААиААдсисткт 472 АО9560 97
1096-1114 С АС ии и АиисОС АА А АСссТзТ 473 сссиииисссААиААдсистзт 474 Αϋ· 9686 111
] 100-1118 ииАииссоААААосслосит5Т 475 АСсисссиииисссААилАът 476 АО9536 157
1100-1118 ииАиисОСААААСссАСсиТхТ 477 АбсисхкиииисссААиААТзТ 478 АО- 9662 81
1154-1172 сссиссссгаиоосиАСАСТгГ 479 СиССАСССАССССССАОССЬТ 480 АО9584 52 68
1154-1172 €ССиОСсССЮиО<К}иАсАбТ5Т 481 СиСиАССсАСССОСсАбСОВТ 482 АО- 9710 111
| 1155-1173 ссиооссооисссиАСАссгт 4X3 ссисиАСссАССссссАОотт 484 АО- 15323 62
1157-1175 1 и<юсс<юисссиАСА0сс<йТ5Т 485 соссисиАсссАсссоссАТ$т 486 АО- 9551 91
Ϊ 5157-1175 иСС сСС ОиСС Си Ас АС сем ТьТ 487 ССС-ССС-иАССсАСССССс АТзТ 488 АО- 9677 62
1)58-1176 (ХюссоиссоиАСАОСссстг 489 оссссисиАСССАССССССТТ 490 АО- 15230 52
ί 1 (62-1180 ссисисиАСАССсоссисстт 491 аСАссссссисидсссАСси 492 АО15231 25
1164-1182 илосиАСАОсссссиссистт 493 САССАССССССиССАСССАТТ 494 Αϋ- 15285 36
1172-1190 ссссссиссисААСОссостт 495 осссссиисАССАсссссстт 496 АО- 15396 27
1173-1191 ссоссиссисААсоссссстт 497 ОССОСССЕПСАССАСССССГТ 498 АВ15397 56
1216 1234 сиссиосиооисАССоси<зт5Т 499 САСССОиСАССАССАССАСТзТ 500 АО- 9600 112
1216-1234 СисСиОсиОСисАесСсиСТхТ 501 сАОСОСиСАСсАСсАСбАСТ^Т 502 АО- 9726 95
1217-1235 иссиссиссисдсссси<;ст5т 503 ССДССССиСАССАО€АССАТ5Г 504 АО- 9606 107
- 30 015676
ПйЛСгкейНяв человеческой ПОС-ΙΉ рег.чз ΝΜ_174936 Поспедойатедьностъ емгасповои цели ГУ-З')! 3ΕΏ !О МО: Последовательность атггпсчислсдой цепи (5-311 5Е9 ю ΝΟ· Эаничеие дуттикэ Средний процент оставшегося мРНК1ра Искр Шла грп соответствующей концентрации киРНК в вдет? ах различных чипов НерОЗ [нМ] 1С50в гепатоцитах сабако подобных обезьян ГиМ)
100 нМ/НерС-З 3<1 κΚ6Ή«ρΟ2 нМНерС2 30 н№ Не1_а
1217-1235 исбиОсиООисАссбсибсТ 5Т 505 бсАОСООиСАСсАбсАССАТзТ 506 А1> 9732 105
1223-124] иббЬСАССбСЦССССбСААТ^Т 507 ииссссосАОСооиОАССАт5т 508 АО- 9633 56 75
1223 124] иСбисАссбсибссббсААТзТ 509 сисгСссскАОса<зиоАС<АГ<т АО- 9759 111
1224-1242 осисАссосиассоссААСЪт 511 сииссссосАосооиоАССтзт 512 АО9588 66
1224-1242 С6осАссСсиОссС<ЗсААсТ5Т 513 оиисссоосАосссгибАСсгзт 514 АО9714 106
1227-1245 САссссиассссоААсиистзт 515 олАоииоссассАОссоистзт 516 АО- 9589 67 85
1227-1245 сАссбсибссОСсААсиисТзТ 517 СААоииоссоосАосаоистйТ 518 АО9715 ИЗ
1229-1247 ссоси осссссаасцсссотзт 519 СОбААйииОССбОСАОССЮТзТ 520 АО9575 120
1229-1247 йсОдиСс<ООсААсииссСТ$Т 521 сск^ААоиисссоогАОссотзт 522 Аб- 9701 100
1230-124« сосиоссоосАдсииссоовт 523 СССОААСи1'ОСС<ЮСАОССТ$Т 524 АО9563 юз
1230-124« сОсиОссСОсА АсииссСОТ зТ 525 ССбСААСсибССООсАОСС г$т 526 АО9689 81
1231-1249 ссиоссоссААсиоссбсстгт 527 сссооААоииоссоссАССТзт 528 Аб9594 89 95
123М249 СсмСссССсААс^ссООСИТ 729 ССС<30АА0и1ЮСС66сАССТ5Т 530 АО9720 92
1236-1254 соосААсиисссо<ЗАССАШ5Т 531 а иссисссасААОсисссстзт 532 АО9585 83
1236-1254 сббсААсииссООСАсСАиТаТ 533 АиссисссасААбиисссстгТ 534 АО9711 122
1237-1255 СОСА АСИиСССОСАСОА ист$т 535 САиссисссобААоииосстзТ 536 Аб- 9614 100
1237-1255 СОсААсииссСООАсОАиСТзТ 537 сАисоисссооААсииосстэТ 53« АО 9740 198
1243-1261 ииссосоАССАиоссиссстзТ 539 ООСАСОСАиСОиСССОСгААТзТ 540 АО- 9615 Е16
1243-1261 ииссСгССАсСАиОссмСссТзТ 541 СбсАбОсАиСОиСССОСААТзТ 542 АО- 9741 130
1248-1266 соАСОАиоссисссисоАСТзТ 543 ОСАОАОССАОПСАиССиССТзТ 544 Аб- 9534 32 30
1248-1266 сбАСОАисссиоссисидстзТ 545 биАСАОосАОссАисаисст^т 546 Аб- 9534 32
1248-1266 ССАсб АибссабссисиАсТ^Т 547 СиАбАбОсАССсАиСОиССТзТ 548 Аб9660 89 79
1279-1297 осисссс а ас ис а ислс а отг 549 сиоиолиоАСсисообАОСП 550 Аб- 15324 46
1280-1298 сиссссАбснслисАСАситт 551 АсиоисАисАСсисбосАбтт 552 Аб- 15232 19
12814299 исссоАсоисАиСАслсиитт 553 ААсиоислиодссисссбАТт 554 Аб- 15233 25
1314-1332 ССААСАССАОССОСиСАССТТ 555 ббисАССсосибсисиисбтт 556 АР- 15234 59
1 315-1333 СААбАССА<ЗСС<ЗбиОАСССГГ 557 бббисАССоссисюисниотт 558 Аб- 15286 109
1348-1366 АССААСииискзссосисиОтгт 559 САСАОСОбссААлсиисситзт 560 Аб9590 122
7348-1366 АссААсуииОбссОсиОиОТ5Т 561 сАсАбСббСсАААбииооитзт 562 Аб- 9716 114
1350-1368 СААсииисоссосиоиаиствт 563 САСАСАОСббССАААбииаТзТ 564 Аб- 9632 34
1350-1368 сААсиииООссСсиС|Х?аСТ5Т 565 сАсАрАОСОССсА ΑΑΟυυΟΤίΤ 566 Аб- 9758 96
1360-1378 сосисисисбАСсисиииотзт 567 САААбАООиССАСДСАОСОТзТ 568 Аб- 9567 41
1360-1378 сСкиСиСиСЮАссисиииСТзТ 569 сА ААОАОСиСсАсАсАОСОТ$Т 570 Аб- 9693 50
1390-1408 сАСАисАиисососсиссАът 571 иббАСЮсАссАлиоАббистзт 572 Аб- 9586 81 104
1390-1408 бАсАисАииОСибссдссАТзТ 573 бОбАбОсАСсААибАиоиСТ$Т 574 Аб9712 107
1394-1412 исАииосиоссиссАбссАТзТ 575 иСССиСЮАбОСАССААббАТ&Т 576 Аб- 9564 120
1394-1412 исАииСОиОссиссАОсСАТзТ >77 исосиобАббсАСсААибАТ^т 578 Аб- 9690 92
1417-1435 лосАсеиосииисиоисАСТйТ 579 б11бАСАСАААОСАООиоал$Т 580 Аб- 9616 74 84
1417-1435 АбсАссиСсдиибиОисАсТдТ 581 сиоАсАсАДАСсАОсиоситзт 5«2 Аб- 9742 127
1433-1451 САСАбАбиоабАсдисАСАТТ 583 сбиоАиоисссАСисисиотт 584 Аб- 15398 24
1486 1504 а и сс ио исиоссоАОСсоотзт 585 ССООСиСООСАОАСАйСАиЪТ 556 Аб- 9617 111
]486 1504 АиО сцбиС1гОссбА(дссОбТ$Т 587 ССббСиСООсАОАсАСсАиТ8Т 58« Аб9743 104
- 31 015676
Положения в человеческой ГОС-ТИ регАЗ ΝΜ.Ι74936 Последовательность смысловой цели (5-3)' 5Ер ΙΟ N0· Поспслсвэтедьность антисмысяссой пели (5-3^1 8Е9 ю ΝΟ: Эбсдаченн; Дугсккг Средний процент оставшегося· мРНКтранскрипта При соответстъуюшей концентрации киРНК в клетках различных типов ГСЗОв НсрС2 |нМ] 1Сх) а гепатоцитах есбако подобных обегьам (якП
1С9 нМ/Н<рО2 30 нМ№рО2 нМ1НерСт2 30 нН/ НеБа
1491-1509 <з исисссс ас-сссю асс исьт 589 бАССиССОбСиССССАОАСТйТ 590 АО- 9635 73 90
3491-1509 СисибссСАСссССАОсисТзТ 591 <ЗА(ХиссодсисоосАОАСТзт 592 АО- 9761 83
1521-1539 сиисАоасАОАОАсиадистхТ 593 олисАсисисисссисААстзт 594 АО- 9568 76
3521-1539 СииСАЦС^АСАСгАсиСАисТ5Т 595 одисАоисисиоссисААСТзт 596 АО- 9694 52
1527-1545 ссАОА<ЗАсиалиссАсиист5Т 597 оААсиоОАисАсисисисзстгт 598 АО 9576 47
1527-1545 ОсАОАОАсиОАиссАсиисТ$Т 599 оААОиоСАЦсАОисиСЕССЪТ 600 АГ9702 79
1529-1547 АСАСАсислиссдсиисистзт 601 САФААсиссАисАсисисиът 602 Αϋ- 9627 69
1529-154? ЛСАСАсиОАиссАсиисисТгТ 603 САбААсиссАисдаисисит^т 604 АО9753 127
1543-1561 иисисиоссААдоАцоисАТзт 605 иСАСАиСШбООСАСАСААТзТ 606 АО 9628 ΜΙ
1543-1561 ЦисиеиОссАААСгАгКлисАТ^Т 607 иа Асдисии исосАбАОААТзт 608 АО- 9754 89
1545-1563 сцеибссАААСАийисАиствТ 609 ОАисАСАисиииоосАбАОТзт 610 Αϋ- 9631 80
Зз45-1563 сасиСссАААСАиСисАисТзТ 611 САибАсАисиииобсАОАбТхт 612 АО 9757 78
*$ЯП-МОТ су'сдиОАССАПСсосиАсит+т 613 АбЦАСбсссиоюиссисАОТйТ 614 АО9595 31 32
3 580-1598 сибАООАссАбсОООиАсиЪТ 615 АСиАСССссиоаиссисАСТб.т 616 АО- 9721 87 70
1581-1599 иаАООАссАбсооаиАСЩтвт 617 САоид ссссс исс иссисАт$т 618 АО- 9544 68
1$81-1599 иСгАСКлАСсАСгсОООиАсиСТзТ 619 сАбиАССсссискиссисАТ&т 620 АО9670 67
1666 1684 АсисиАшаиСАссАСАалт 621 АбибибсиСАССАидСАоитт 622 АО- 15235 25
1668-1686 ъоиАисоисАОсдСАсисбтт 623 содаибиссиадссАиАСАтт· 624 АО- 15236 73
3669-168? оиАЦСсиСАОСАСАсиесстг 625 сссАбисибсиодссАидстт 626 АО- 15168 100
1697-1715 ОСА исосслс Ассссиссстт 627 0<Л/АСбСсибиббССпЦССгг 628 АО- 15174 92
1698-1716 САиСИССАСАСКСОиСОССТТ 629 босбАСбссиоисбссАистт 630 АО- 15325 81
1806-1824 СААбсисюисиоссообсстт 631 ОССССОССАбАССАССииСТТ 632 АО- 15326 65
1815-1833 сиоссбббсссАСААСбситзТ 633 АссбиисисюссссбосАот^т 634 АО- 9570 35 42
1815-1833 сиОссСККк£сАсААсСгсиТ5Т 635 АбсоииоиосюсссббсАстзТ 636 АО- 9696 77
1816-1834 иОССОбОСССАСААСССи11ТьТ 637 АА<ЗССШОССЮбСССО<тСАЗ‘$Т 638 АО- 9566 38
1816-1834 иОссСчЗбссе ДсААсСсииТ$Т 639 ААбсоиибьгхккхсоссА г$т 640 АО- 9692 78
1818-1836 ссбоосссАСААСОсиииитгт 641 ААААбсоиибиосюсссббт^т 642 АО- 9532 100
1818-1836 ссОССсгсАсААсОсииииТвТ 643 ААААССбъиаиосюссссютяТ 644 Αϋ- 9658 102
1820-1838 сюосссАСААСбсииибСгаы 645 ссААААосбиибиобоссст5Т 646 АО- 9549 50
!820-1838 ОСОсссАсААсОсииииООТзТ 647 СсААААбсоисаиооассстгт 648 АО9675 78
1840-1858 ссиоА<юсиоисиАссссдт5Г 649 иоосоиАбАСАСССиСАсст5Т 650 АО9541 43
1840-1858 ОСиОАООСиОисиАсбссАТзТ 651 иООСОиАОАсАСССисАССТзТ 652 АО- 9667 73
1843-1861 ОАОСЮисисиАССССАиистя 653 СААи«ыбссиАОАСАсссист5т 654 АО- 9550 36
1Я44-1861 б а ббб ибис” д еб ссд« ибТтТ 655 сАА1КХЮСиАСАсАСС€иСТ$Т 656 АО 9676
1861-1879 сссдсюиссисмзсиасиАСТзТ 657 СиДОСАбОСАОСАССиСЮСЪТ 658 АО- 9571 27 32
1861-1879 0ссА06и6сц<ксибсиАсТ5Т 659 биАбсАООсАОсАССибОСТ&Т 660 АО9697 74 89
1862-1880 ссАбоиссиоссиссиАсст5Т 661 абиАбСАОбСАбСАСсиоатгт 662 Αϋ9572 47 53
1862-1880 ссА<лбиСсиб«ибсиАссТ5Т 663 ООиАСсАббсАбсАССиббТхТ 664 Αϋ9698 73
2003-2026 дсссАСААбссбссиоиосгг 665 бСАСАСЮСОбсисоисббитт 666 АО- 15327 82
2023-2041 биосиоАСбссАСОАбоистзт 667 ОАСсиспиабСсисАбсАсът 668 Αϋ 9639 30 35
2023-2041 СиОсибАббссАсбАОСисТзТ 669 ОАСсисбиобссисАбсАсът 670 АО- 9765 82 74
2024-2042 СбСиОАОбССАСбАббиСАЪТ 671 ибАСсисоиобССиСАССАТзТ 672 Αϋ· 9518 31 35 0,60
- 32 015676
ПйЛажеНКЯВ человеческой ПО4-ТИ рег№ ЧМ 174936 Последовательное!»· смысловой цели (5-37* 5Е9 ΙΠ ΝΟ: Послеютедьностъ антисмысловой цепи (5' 3 Я 8Е0 ГО ΝΟ: Обвятенн: душевен Средний процент «тавхие1йся мРНК транскрипта при состаетстаующей концентрации киРНК в клетках различных типов ГСЗОв Нер(32 [нМ] К» в гепатоилтач собакоподобных обезьян (нМ)
100 нМ/НерО2 30 нМ/НерО2 нМ/НерО1 30 кН1 йсЪэ
2024-2042 иосиОАсосслс(}АСбисАТ5Т 673 иодссиссиооссисАссАТзт 674 АО9518 31
2024.2042 иСсиСгАООсс АсОАСОисАТаТ 675 иоАСсисоиооссисАСсАТзТ 676 АО9644 35 37 2,60
2024-2042 υ гесгс а йо а луг 677 р-иСйС1сийОйОГ§СйийАГ§СГаТ5Т 678 АО- 14672 26
2024-2042 и ?эсги го аоссгс) декз доои гота тбт 679 игсАсгсшгоюиюссгошоАасГАТзт 680 Αϋ- 14682 27
2024 2042 и£СцОэб£СсАсОгС£исАТ?Т 68) р иОГаСйийС^ОТгСГсийАГвСТаТзТ 682 Αϋ- 14692 22
2024-2042 览ибаО®<кАсСа<Э^исАТ&Т 683 игоАСЛ^гсйэигаосюгооАосгАТат 684 Αϋ- 14702 19
2024-2042 и^СГиОГаСдасАГсСГаОдасАГГзТ 685 иОАССисСиевССиСАгсаТзТ 686 АО- 14712 25
2024-2042 1ЮСГОГОАСС;€ГСГАСГОАСюи1СГАТ5Т 687 иСд^исСи^дССиСА^саТзТ 688 АО- 14722 18
2024-2042 ЫзСиОаО^СсАсОаО^ЦсАТьТ 689 иСгАССисйиддССиСА^саТяТ 690 Αϋ- 14732 32
2024-2042 Стс(}ГдС:<-АГдСГрО!сСГаС!‘г.А!т;СГТТ 691 р-сДГиСТсСТвСГсСГвС^иСгйСГсАТсТгТ 692 АО- 15078 86
2024-2042 сигсюиеаАСЮГОосгогоооАиютзт 693 С£Аигсгсгокхх?гогасгогаАСгсгАстг 694 АО· 15088 97
2024-2042 биСвисАвСеОсСвОгАиСТзТ 0^5 р-еАСиСйСГвС^^С^О^С^А^751 696 АО- 15098 74
2024-2042 СиО£исАвСЕ<лсСяСгА11С»ТзТ 697 СТАиГОГОГОЮбСГСГОСОСАСГСГАС^Т 698 АЭ- 15108 67
2024 2042 С1иСГ8и£сАГ§С?е<ЗЙС££С15А(цбГТзТ 699 САиССсдССсаСиСАСсасТ&Т 700 АО- 15118 76
2024-2042 сигосигогАОСгоосгогосоАЪГОтзт 701 САиСС<£ССс£СиСАСсасТ5Т 702 АО- 15128 86
2024-2042 СиС^исАдСйСкСйСйАиОТ 5Т 703 С А иССсвОСсзСиО АСсасТвТ 704 АО 15138 74
2ОЗО-2048 СЮСС АССАСС ис АОССС А АТТ 705 иисоссиоАосисоисосстт 706 АО- 15237 30
2035-2053 ССАССиСАССССААССАС-иТТ 707 АсиооиискюсисАссссотт 708 АО15287 30
2039-2057 оисАбсссААССАОиосситт 709 АСССАсиодииосёсиоАСГт 710 АО- 15238 36
2041-2059 САОСССААССАОиСССиССГГ 711 ссАСосАсисшгиооэсиотг 712 АО- 15328 35
2062-2080 САСАСССАССССАОСДиССТТ 713 ссАиссисоссисссиоистг 714 АО15399 47
2072-2090 ссАссдиссАсосииссиствт 715 САОСАдсссисюАиасибстзт 716 АО9582 37
2072-2090 ссАСсАиесАсбсН1КСи<ЗТ$Т 717 сАССААСГОсисодисгоисстзт 718 АО9708 81
2118-2136 АСОСААССАССАиООААиСТхТ 719 ОАииссАЦОсиссииоАСШзт 720 АР 9545 Л 43
2! 18-2136 дСисААССАСсАиССААисТзТ 721 <ЗАииссАиссоссииолсит&т 722 АО9671 15 33 2,50
2118-2136 АО’иГсАТаСГ&М^СГаиГ^ЗГаАТиСГГгТ 723 р-ёАЛ1ОГсС?аи(вСГиСГси1иОГаСТиТ5Т 724 АР14674 16
2118-2136 АСи^ААСЮАСГОГАиГОбААиГС1Т$Т 725 САигогогогАиюсгоюгоплигсАсгот т 726 АР14684 26
2118-2136 АзисАаСг&АйСаивОаАиСТзТ 727 р-&АЛ]иГсСГаи%СТиСГсиТиСТзСТиТ5Т 728 АО- 14694 18
2118-2136 А&исАаОеАвСаивСгАиСТзТ 729 САигогогсгАигасгоюгсго1игаАСги1Т5 т 730 АР14704 27
2118-2136 АГеиТсАГаСГеД^СйиГйСТаАТиСЯ'гТ 731 СлииСсаиСсиССЦиОасиТзТ 732 АР14714 20
2118-2136 ас ргоеадсса сседоесс а а и еспуг 733 ОАЦиСсаиОсиССОиСвсиТяТ 734 АО14724 18
2118-2136 А^исАаСдД^Саи^СцАчСТ&Т 735 САииСсаиСсиССииСасиТзТ 736 АО 14734 18
2118-2136 СГсС1§СТаС1сС1иС£аи&й?Е.С£с1ЛТ&Т 737 р аСЙ£С5=иГаиТвА^О^и5кС£сОйТзТ 738 АО15080 29
2118-2136 (Х:гасс(АСгсгсюгс1Аи1Ас<ллсги1Т5Т 739 лесе гогеялигс ас сс и еосесессгвт ЧД0 АГ>- 15090 23
2118-2136 Ссб^СаСсСиСаиаОвСсЦТвТ 741 р-аСТ§Сй иТзЦ Г^АЕдС ίβϋ £§С£с<3 СсТэТ 742 АР- 15100 26
2118-2136 ОсСдСаСсСиСаиаСдСсиТаТ 743 АССЮГОГОГАи1САСС€гиюсгс:юс!Т5Т 744 АР- 15110 23
2118-2136 СГсСГ£СГаС1оС(иСГаийС^СГсиГГ5Т 745 АСОССиаСОаеСГОиОСсйсТзТ 746 АР- 15120 20
2118-2136 (К1СЮСГАСГОГОГО5С5АиГАСССГСГО1Т5Т 747 АСбССиаиСаеССиССсдсТаТ 748 АР15130 20
21)8-2136 ОсСйСаСсСиСаиаСеСсиТзТ 749 А00ССиаиСа1Ю£и0€с£сТзТ 75!' АР- 15140 19
2122-2140 ААООАССАиоаААиСССССТзТ 751 ссоссАииссАиссоссиитзт 752 АР- 9522 59
2122-2140 ААССАСсДиСОААисссОСТзТ 753 сссоолииссАисагссиитзТ 754 АР9648 78
2123-2141 АССАССАиССААОССССССТУГ 755 оссос<ЗАииссАиосиссш'5Т 756 АР9552 80
- 33 015676
Положения в I ЧЫО34Ч4СКСН тюс-ти Последовательность смысловой цепи Х-З')' 8Ер ΙΟ ΝΟ: Последовательность атисмысповой цепи ί5'-3)Ι 5ЕО Ю ΝΟ: Обаявчени фтпаиа Средний процент оставшегося мРНКтраКскрнПта при соответствующей концентрации кпРНК а клетках различиях типе® 1С50в гепатоцитах соба коподобных обезьян (НМ}
рег№ ΝΜ_] 74936 ίου пМ/НерО 30 нМ/Нер<Э 3 2 нМ/НерС 30 2 чМ·' НсЬэ 1С50в Нер62 [аМ]
2123-2141 АССАСсАиССААисссОСгсТзТ 757 сссссоАииссАиссисстчт 758 АО- 9678 76
2125-2141 сасса иссллисссссссстзт 759 сссссоосАииссАиссистзт 760 Αϋ- 961$ 90
2125-214? ОАСкАиСОААисссССкссТзТ 761 сюсссссоа ииссАиосисг5Т 762 Αϋ- 9744 91
2210-2248 оссиАсссссиАОАСААСАтт 763 исиисисидссоссиАбссгг 764 АО- 15239 38
2231-2249 СССАССССОСаОАСААСаСТТ 765 сисиисссидссассидсстт 766 АО- 15212 19
2232-2250 ССАСССССиДСАСААСАССТТ 767 соисиисисидсссссиАОТТ 768 АО15240 43
2233-2251 идСОСССЕАСАСААСАССиТТ 769 АсоисииспсидсооссиАТГ 770 АО- 15177 59
2235-2253 сосссилбАСААСАСсиситт 77| АСАСсисиисисидсоссстт 772 Αϋ- 15179 13
2236-2254 ОССОС АС АС А АСАСси® Е-СТТ 773 сдсАСсисиисисидсаостт 774 АО- 15180 15
2237-2255 ссоилСАСААСАССиаиоигг 775 АСАСАСоиссисисиАСССТТ 776 АО- 15241 14
2238-2256 соилСАСААСАОзисисиАТт 777 иАСАСАсаисиисиспАсстг 77$ АО- 15268 42
2240-2258 САОАСААСАСОиоиССАСиТТ 779 АсиАсдсАСсисииоисиАтг 780 АО- 15242 21
2241-2259 АОАСААСАСсиоиси аосСТт 781 ОАсиАСАСАСсисисгаис1’тт 7Я2 АО- 15216 28
2242-2260 адСААСАссисиоилоисАтг 783 исАСЦАСАСДСоисиисистт 784 АО- 15176 35
1 2243-2261 АСААСАСсиоиаиАоисАотт 785 ссаАсилСАСАСсиаииситт 786 АО- 15181 35
2244-2262 СААСАССиоисиАоисАСЮтт 787 ссисАсилСАСАсаисиистт 788 Αϋ- 15243 22
2247-2265 САСОссиаиАоисАОСА<3€Тт 789 ссиссисАсидсАСАСсиотт 790 АО- 15182 42
2248-2266 АСсисисидсисАбсдСгСстт 791 оссиссиоАсилсАСАСОшт 792 АО- 35244 31
2249-2267 ссисисидсисАСЮАСссстт 793 ссссиссиСАсилСАСАСОтт 794 АО- 15387 23
2251-2269 ибисиАоисАССАОСсскютг 795 сссоссиссисАсилСАСАтт 796 АО- 15245 18
2237-2275 сисАООАСссоабАСоисАЪт 797 ис а со иссссос исс и с АСТ5Т 798 АО 9555 34
2257-2275 ОцсАССАСгссСО<ЗАсСисАТ5Т 799 иодссисссоосиссисАСТп* 800 АО9681 55 I
2258-2276 иСАОСАОСССССАССиСАСВТ 801 сиоАСоисссо<зсиссиОАт5т 802 АО9619 42 61
2258-2276 исАО(1АСтСсСО<ЗАсСисА<лТ4Т 803 сисАСсисссоосиесиоАтгТ 804 АО9745 56
2259-2277 САОСАССССООАСсиСАССТгТ 805 осиОАСоисссоссиссист$т 806 АО- 9620 44 77
2259-2277 сАСОА&хСССАсСгисАСсТгТ 807 ссисАссисссоссиссистгт 808 АО9746 89
2263-2281 АСССОСгСАСОиСАОСАСидТТ 809 идоиосиаАСоиссссюситт 810 АО- 15258 19
2265-2283 СССНСАССиСАОСАСиАСАГГ 811 иаидсиссиОАссиссссстт 812 АО- 15246 16
2303-2321 сссисАСАОсссиисссАитг 813 АиСЮСААССОСССиСАСССТТ 814 АО- 15289 37
2317-2335 сссАссиосиосс<ЮА<эсст5Т 515 сссиссгюсАссдсдисастзт 816 АО9324 59 67
2375-2393 сссАисссАССАисооиситт 817 а с ассс дисс иссоли ссстт $18 АО- 15329 ЮЗ
2377-2395 САисссАселиоссибгисстг 819 АСАСАСССАиССССЮСАСОТ’ 820 АО- 15330 62
2420-2438 АсатииААААиссиисссАТТ 821 исссАдссАЦиисАдАОситт 822 АО 15169 22
2421-2439 ссс'с ид ада уооиисссдстт 823 спсос.ААССлииинАААССтт 824 Αϋ- 15201 6
2422-2440 сиииААААиосиисссАситт 825 АсисосААСсАписиддАстт 826 АО15331 14
2423-2441 сиилААдиссиисссАсиитт 827 ААсиссодАССАиииилААтт 828 АО- 15190 47
2424-2442 иилдАдиосиисссАсиистт 829 СААоисссАдссАииииААтт 830 Αϋ- 15247 61
2425-2443 илААдиосииссоАсииситт 831 АСААоиссюААССАииииАТТ 832 АО- 15248 22
2426-2444 ААААиосииссОАСиисисгт 833 ОАСААсисасАлссАиииитг 834 АО15175 45
2427-2445 ААлиссиисссАсиисисстг $35 ссдСААсисссААССАииитт 836 «АО- 15249 51
2428-2446 АдиссииссоАсиисиссстт «7 СОСАСААСиСССгААССАииТТ 338 АО- 15250 96
2431-2449 ос и иссс леи и с исссиситт 839 АСАСССАСААСССССААССТТ $40 АО- 15400 12
- 34 015676
Положения в человеческой ПОС-1» ре1 № ΝΜ_174936 Последовательность смысловой цепи (5-31^ 5Е0 ГО ΝΟ: Последовательность антисмысловой цепи ГЗ'-ЗЗ! 5ЕО ГО ΝΟ: Збзэечеюе дуплекса Средний процент оставшегося мРНктранскркггга присоответствуюпмй концентрация киРНК в клетках различных типов 1С50в НерС2 [нМ] 1С50в гепатоцитах собакеподобных обезьян (иКО
КО нМ(Нер<?2 30 нМ/НерИ нМ/Нер02 30 нМ/ ЙеЬа
2457-2475 сиссдиссссиаасАССдстт 841 СиСОБЮССАббССАС'СЮАОТТ 842 АО- 15332 22
2459-2477 сслисклСсиассАССАССгОтт 843 сссиссиоссАОСсслисютт 844 АО- 15388 30
2545-2563 бААСьсАсисАсисиоооитт 845 АСссАОАбисАоиоАбиистт 846 АО- 15333 20
2549-2567 исАсисАсисисаоиосссгт 847 А<ЗССАСС€АСА<Зи<ЗАби<дАТТ 848 АО- 15334 96
2616-2634 ииисАССАиисАААСА<юитт 849 АСсиоиишААаосисАААТг 850 АО 15335 75
2622-2640 САииСАААСАСюисОАСситт 851 АбсисоАССсоиицбААиотт 852 АО- 15183 16
2623-2641 АииСАААСАСССССАССиСТТ 853 САСсиссдосисииисААитт 854 А ΟΙ 5202 41
2624-2642 иисАААСАСсиссАСсибитт 855 АСАбсисбАссисииисдАТТ 856 АО- 15203 39
2625-2643 исдАдсАСоиссАСсиоистт 857 сАСАОсисбАСсисиииоАтт 858 АО- 15272 49
2626-2644 САААСАСюисоАбсиоиастт 859 осАСАОсисбАСсиоииистт 860 АО15217 16
2627-2645 а а а САСгсисс досисо оситт 86! досАСАбсисбАСсисииитт 862 АО- 15290 15
2628-2646 ААОАСбиссАбсиеиссистт 863 САССАСАОсиссдссибиип 864 АО 15218 13
7610-264? гдбсисПАСГ! 1бплаи?аптт 865 ссоАОСАСАСсисоАСсиотт 866 — > са <о 13
2631-2649 АО<зиссА<?си<зиС!сисасстт 867 СССОАГСАСАОСиССАССиТТ 868 АО- 15336 40
2633-2651 сисбАОсисцссисбооъбтт 869 САСССбАОСАСАОСиССАСГТ 870 АО15337 19
2634-2652 исбАбсисиосиссосисстт 871 ССАССССАССАСАОСиСОАТГ 872 Αϋ15191 33
2657-2675 АСсиссисссАдиоисссбк 873 соссдсАиисооАОСАССцтт 874 АО- 15 390 25
2658-2676 ссибсисссААиоиоссодтт 875 исобСАСАииосюАасАОСтт 876 Αϋ- 15338 9
2660-2678 иссисссддисиассслистт 877 сдисоосАСАииссоАбСАТТ 878 АС15204 33
2663-2681 цсссдАисиосссАиаисстт 879 ссАСАиссссАСАииосоАН 880 АО- 15251 76
2665-2683 ссААЦоиоссодиоиссситт 881 АСбОАСАиссосАСАииостт 882 АО- 15205 14
2666-2684 СААиоиоссоАиоисссзистт 883 САСооАСАисоссАСАииотт 884 Αϋ- 15171 16 |
2667-2685 Адиоиоссодиоиссоисютт 885 ссдсбСАСдисоосАСАиитт 886 АЕТ- 15252
2673-2691 ссоАиоиссоисбосАОАдтт 887 иисиосссАСОйАСАисоотт 888 АО- 15339 20
2675-2693 сАисиссоиооосАбдАистт 889 САиисиосссАсоодслистт 890 АО- 15253 15
2678-2696 а иссоиаоосдсааиолситг 891 АоисдиисиосссАСОСАстт 892 АО- 15340 18
2679-2697 иссоисбОСАбААисАсиитт 893 ААСиСАиисиссссдсооАТг 894 АО1529! 17
2683-2701 исоссАСАдиоАсииииАитт 895 АидАААбисАЦЦсиосссАТТ 896 АО- 15341 II
2694-2712 АсиииидиисАОсисииситт 897 АСААОАССиСААНААДАОСГГ 898 АО- 3 5401 13
2700-2718 диис лососи исииссоистт 899 С АСХЮ А АСА АО АС СиС А А ОТТ 900 АО- 15342 30
2704-2722 АОСЦсиисиисссооссАОТ 901 СиООСАСООААСААОАОСиТТ 902 АО- 15343 21
2705-2723 осисс-ибииссоисссАОбп· 903 СС1ЮССАСОТААСААОАОСТТ 904 АО- 15292 16
2710-2728 υσυ иссо иоссасюсдиисгт 905 ОААЦСССиООСАССЮААСАТТ 906 АО- 55344 20
τπι ι 2^29 аиисссисссдоослиисАтт <эт иС-А а С.И5ГП ΙΠΓ.Γ АСОСА астт 908 АО- 15254 18
2712-2730 ииссаисссдаосА бссаатг 909 иисАдиоссиоссАСосгААТт 910 АО- 15345 18
2715-273 3 со ν сссасосд иисда исстт оодоиоАлиоссиоосдсоп· 912 АР- 15206 15
2716-2734 оооссасюсдиисааиссотт 913 АбОАОиодАНОссиоссАсп 914 АО 15346 16
2728 2746 СААЪссислссисиссАССтт 915 сюиссдсАСсиоАОСАииотт 916 АО15347 62
2743-2761 САССААОаАСО€А<ЗОАииСТ5Т 917 одАиссисссиссиисоистзт 918 др- 9577 33 31
2743-2761 сАссААООАОСсАООАиисТзТ 919 ОААиссиоссиссиисюибът 920 АО9703 17 26
2743-2761 С ГаСЙ А (аСИ®А ίαΑ Г§0 Га 1ЯиС ГГаТ 921 р-§АТаиГсСГи0кСГиСГсиГиСГ8и£&Т5Т 922 АО- 14678 22
2743-2761 С ГАСГСЕААОС АО ОСТА ОО Аϋίϋ ГСГЪТ 923 САлогсгсгиксгстигс^сяликоигсте т 924 АР- 14688 23
- 35 015676
Пслозкнняв человеческий пос тн рег№ ΝΜ_174936 Последовательность синелевой цепи (5 -3^ 8Е9 ГО ΝΟ: Последовательность антисмысловой целтэ’З')' $ЕФ 10 ΝΟ: ОбсптЕката д)пт*а Средний Процент оставшегося мРНктралгехрнпта лрл «хсивепл^аощей концентрации киРНК в клетках различных типов 1С50в НерС2 (нМ? 1С50 В гепагошггвх собаке подобных обеаьяк (иМ1
1О0 чМ/НерО2 30 κΜΉβρΟ2 нМ/Йер02 30 нМ/ НеЕл
2743-2701 Сз€сАа<3§АяОсАйСаииСТ5Т 925 рндМаиГсСпяСГсСГиСГсиРпС^и^ТзТ 926 АО14698 23
2743-2761 СаСсАаСдАдСсАдСаииСТаТ 927 0ΑΑϋί€ΐϋίυκλ2ΐΌίυκ?κ;ίυίυΐΐ;<?υϊ<3Τ$ Т 9’8 А Ο- Ι 4708 14
2743-2761 СГаСГсАГаСЕвА^СйАСдСйиГиСГГзТ 929 бААиСсиССсиССии<|®идТзТ 930 Αϋ- 14718 ΪΪ
2743-2761 СТАСГСГДАССАОССМОбдиЛзЛТП^Т 931 ОААиСсиЗСсиССииС£11£Т$Т 932 АО- 14728 25
2743-2761 СаСсАаЗеДдОсАдСаииСТзТ 933 СААС’СспССсиССииСтеидТЯ 934 АО- 14738 31
2743-2761 935 р-иСГсСРМ^АЕаА&иЕсСйСЕдСйгТьТ 936 АО- 15084 19
2743-2763 937 и/СООАА17ГАААСГиК?ГСГАОО€1СП5Т 938 ДО- 15094 II
2743-2761 СдСсидСаСиииАиисСдАТвТ 939 р-иСЕсО{аАГиА£аАГси£сСГаО(®СкТ5Т 940 АО- 15104 16
2743-2761 О §€с и дСаСиОиА иЦсСдАТ зТ 941 и£СКЮААиГАААСГипЗЯЗ£АСОС1С^5Т 942 ДО15114 15
2743-2761 СйдСЕсиГдО&ОН^иГиАЕииГсСгГеАГГаТ 943 иссо А Эи А АасиССАСдссТгТ 944 АО- 15124 И
2743-2761 оссгспфазсАСигилзЕАЦЕи^РЭСАТзт 945 иСССАаиААасиССАСдссТзТ 946 Αϋ- 15134 12
2743-2761 СёСсидСайиииАцисСдАТзТ 947 иССОАаиААасиССАОдссТзТ 948 АО- 15144 9
2753-2771 осАССАиисииссслиосАТТ 9*9 иссАисосААСАлиссисстт 9$0 ДР- 15391 7
2704-2812 иссАСосАСАААСАисоиик 951 аасс диоиииаисссиасАтт 952 АО15348 13
2795-2813 ссАССсАСАААСдиссииотт 953 са асс лисииис иссеисстт 954 ДО- 15349 8
2797-2815 АосюАСААдсАисаииоостт 955 сссААССАиоишсисеситт 956 АО- 15170 40
2841-2859 сссисдиссссАбсиААситт 957 АоииАосисоАСдисАообтт 958 АО 15350 14
2845-2863 САПсиссАосиААСиоиссп 959 ссАСАсиилссиосАОлиотт 960 АГ>- 15402 27
2878-2896 ссисссисдиидАоссАсстт 961 ссиссАШАлисАсаодостт 962 АО- 15293 27
2881-2899 сссшдииААшсАСссиитт 963 ААОСсиссАипАлисАСсатт 964 АО- 15351 14
2882-2900 ссиоАииАдиосАСЮсииАТт 965 иААбСсиссдипААисАСЮТг 966 АО- 15403 И _
2884-2902 исАиидАисоАоссиилсстт 967 ссиААССсисслиилАисАтт 968 АО- 15404 38
2885-2903 ОАииААисоАООсииАбсшт 969 АОсиААОссиссАиидАистг 970 АО- 15207 15
2886-2904 АиидАиссАбосиилссиитг 971 ААСсиААССсиссдиидАИТг 972 АР- 15352 23
2887-2905 ииААиссАбссииАссииотт 973 АААссидАОСсиссАии аатг 974 АО- 15’55 31
2903-2921 ииисиооАиоосАисиАОстзт 975 ССиАСАиСССАС’ССАСАААТяТ 976 АО9603 123
2903-2921 иФИсиССАиССсАисиАОсТзТ 977 <тСиАСАийСсАиСсАСАААТ5Т 97$ АО- 9729 56
2904-2922 иисиссАисосАисилссстзт 979 сссиАСАиоссАиссАСААТйТ 980 Αϋ- 9599 139
2904-2922 ццсиОСАиССеАисиАСссТзТ 981 СССиАСАЦССсАиСсАОААТзТ 982 АО 9725 38
2905-2923 исиссА1.’сюсАисиАОссАТ5Т 983 иСССиАСАНОССАиССАСАТзТ 984 АО9621 77
2905-2923 иси ССА иООс Айс и А Осс АТ$Т 985 иОССиАСАиОСсАиСсАСАТ5Т 986 АО9747 63
2925-2943 А ССС1СС АС АС АСЮийСССТГ 987 осссАСсисисиссАссситт 988 АО- 1540ф 32
2926-2944 сосиссАОАСАОсиссоссгт 989 оососАссисисиссАОССтт 990 АО- 15353 39
2927-2945 ССиСКЗАС АСАаОиОСЭСССТТ 991 саосссАСС’исисиссАССгг 992 АО 15354 49
2972-2990 ииссисАСССАСсиииАситт 993 АСиЛААОСиСССиСАССААТТ 994 АО- 15406 35
2973-2991 иссиоАОССАСсиииАсистт 995 ОАсилААОсисссисАССАгг 996 А ΟΙ 3407 39
2974 2992 ссисАСССАСсииилсиситт 997 АОАОилААСсиассисАбс η 998 АО15355 18
2976-2994 иоАбссАСсиииАсисисстт 999 ССАСАОСААДОСиООСиСАТТ ΙΟΟ0 Αβ· 15356 50
2978-2996 АсссдссиииАсисиссистт 1001 сАССАОАсиААА(кги<юситт 1002 АО- 15357 54
1И1-19ТО САссиииАсисиосисиАитг 1003 АиАСАССАСАСиАААССиОТТ 1004 АР 15269 23
2987-3005 иАсисиссисиАСсссАСстйТ 1005 ссисссАидСАССАСАоиАТвт 1006 Αϋ· 9565 74
2987-3005 иАсисиОеисиАиОссАСетзТ 1007 ССиССсАиАСАСеАСАСиАТ?Т 1008 АО 9691 49 □I
- 36 015676
Пополнил в человеческой ЛОО ГН Последовательность смысловой цепи (5-31)^ 5Е9 ш ПсСЛЩГОЛЗТеЛЬНОСТЬ антжМЛЫСЛСВОЙ цепп [З’-З')! 5ΕΩ Ю ΝΟ: ’З&ВКМСНИ дугстака Средний процент оставшегося мРЯКтрэнскритгта присййтвстстьуюшей концентрации клРНК в клетках различных ТИПОВ 1С5Пв гвлатошпак собака-
рег№ ΝΜ.17-1936 ΝΟ: 100 -гМ.'НерС: 30 нМ/НерО 3 κΜΉβρΰ 3Λ нМ' НеБа Ю501 ЙСр<л2 [нМ] (Сдобных обезьян (нМ)
2995-3016 а исссдсссиоиссилосАтт 1009 иосиАССАСАбссиоосдитт 1010 АО- 15358 12
3003-3021 АсосибиосиАССААСАССп 1011 оиисииосиАОСАСАОсаггг 1012 АО- 15359 24
3006-3024 сиоиосидссААСАСССААтт 10В иисссисииссиАССАСАсгг 1014 АО- 15360 13
3010-3028 ОССАССААСАСССАААССиТТ 1015 Ассиииообиаииссидостт 1016 АО- 15219 19
3038-3056 ссАоссдисАСси лао дситт 1017 Асиссидосиодиоосисстт 1018 Αϋ· 15361 24
3046-3064 САСсилоадсисАсисссстт 1019 ссссдсисдоиссиАСоиотт 1020 АО- 15273 36
3051-3069 АбОАсиоАсисоосАсдюитг 1021 дсАсисссоАоисАсисситт 1022 АВ- 15362 31
3052-3070 асАсьсАсиссссАсиоистт 1023 САСАсиссссАоисАоисстт 1024 АО- 15192 20
3074 3092 1кЮ11оСАисгСАСОоисисАтт 1025 иодоасайиосаиосАСсдтт 1026 АВ- 15256 19
3080-3098 АиссАсисисисАсссААСГг 1027 оииоосисАОАСАоиосАитт 1028 АО 15363 33
3085-3103 сиоисисАОССААССсоситг 1029 АОСоасииаосйоАСАСАСТт 1030 АО- 35364 24
3089-3107 СиСАСССААСССССиССАСТзТ 1031 оисоАССоооисоасиоАОТзт 1032 АВ9604 35 49
3089-3107 сиеАСссААсссОсиссАсТьТ <033 о и ос а сссиО и с о осио а 0ΤδΤ 1034 аО9730 85
3093-3111 сссддсссссиссАсидсстзт 1035 осиАсиаоАасоооииоосι«г 1036 АВ- 9527 45
3093 3111 ОссААсгсСсиссАсиАсйТзТ 1037 ооиАсиосАССОССииоостэт 1038 АО 9653 86
3096-3114 АлсссссиссАсидсссастт 1039 ссоссиАсиооАОСоооиитт 1040 АО- 15365 62
3099-3117 ссссиссАсидссссосАОТт 1041 сисссосоиАоиосАОсостг 1042 АЭ- 15294 30
3107-3125 СиАССССССАСОСиАСАСАТТ 1043 иоисидсссиссссобидстт 1044 АВ15173 12
3108 3126 иАСссо<?САОсаиАСАСАитт 1045 АиоиоиАССсиоссоссидтт 1046 АВ- 15366 21
3109 3127 АСХССЮСАилЗБгБАиАСАии ί ϊ 1047 АдиоиоиАсССийССОйоИТТ 1ύ48 15367 11
31103128 сссоссАОСоилсАСАиисп 1049 алАиаиоиАСССиоссооотт 1050 АО- 15257 18
3112-3130 ссосАОСсидсАСАиисосгг 1051 осоАлиоиоиАСссиассатт 1052 АО- 15184 50
3114-3132 осАссаидсдсдиисссАСтг 1053 сиссОААПоиоиАССсиостт 1054 АО- 55185 12
3115-3133 САОСюидСАсдииссСАСстт 1055 оооссоАдисиоидссссотт 1056 АВ- 15258 73
3116-3134 АОсктидсАсдиисссАСССТТ 1057 ссюиосоАдиоисиАССситт 1058 АО- 15186 36
3196-3214 ССААСиСАСССАСАААСОСТТ 1059 осооиисисосисАоиисстт 1060 АО- 35274 19
3197-3215 СААСиСАСССАСДААСССАТТ 1061 иосоииисисосисАоицсгг 1062 АО- 15368 7
3198-3216 ААСиСАСССАСАААСбСАОТТ 1063 сиоссииисиоосисАОиитт 1064 Αϋ- 15369 17
3201-3219 ибАОССАОАААСССАОАииГГ 1065 АдисисссииисисасисАтт 1066 Αϋ- 15370 19
3207-3225 АСАдАСОСАСдиисюссистт 1067 сдосссААисиссоиииситт 1068 АО- 15259 38
3210-3228 АДЖАсдииссссиссситт 1069 АОсСАОСССАдисиоссиитт 1070 А Ο- Ι 5408 52
3233-3251 АССсААСссисиисиилсиът 1071 АОиААСААОдсосиисоситЕТ 1072 АО- 9597 23 21 0,04
3233-3251 АСгссААОссцсиисииАсиТзТ 1073 АСиААСААСАСКХДЛЮОСиЬТ 1074 АВ- 9723 12 26
3233-3251 А^СкАСаСДсСГцСГииТсиГаАгситТ 10/5 р аОгиАгаО^аА^ДгвСгсиГцСГзС^ТгТ 1076 АО- 14080 15
3233-3251 дсс1С!ААСсгс1и(слэтик:гия;ГАСллтзт 1077 Αθυί·ΑΑύΑΑ0Α00€ΐυίυΐΌ0€ίυίΤ5Τ 1078 АО- 14690 18
3233-3251 АзСсАаСсСиСиисииАсиТзТ 1079 р-аОиАГаОГаА^А^сийкЗ^С^ТгТ 1080 АО- 14700 15
3233-3251 АёСсАаОсСиСиисииАсиТьТ 1081 АоигАдодАОАСосгигикюс^гат 1082 АО- 14710 15
3233-3251 АГ|С1сАГаОГсСГиСГииГсиГиАГсиПзТ 1083 АСиААааАОаеССкХоссиТзТ 1084 АВ- 14720 18
3233-3251 А€<277[ДАС€:С1иЮ1и£и(СП.1П,1ГАСП0:Т£Т 1085 доил двадоавоси иоасиТгт 1086 АВ- 14730 18
1233-3251 А 8СсАаСсО1Си ис Си АсСТзТ 1087 АСиААваАОввбСииОвсиТгТ 1088 АВ- 14740 17
3233-3251 шеогии&с&и/ёАГгСГасгсАГгсггзт 1089 р-£СГиО%и1У2ГиСГа<31£ОГаА?сСГаТ5Т 1090 АВ- 15086 55
3233-325] игсюиалсгсгсялоАСкэАсгсгАастт 1091 ОСЛЛООиГСТСПЛССАОСОААСГССАТзТ 1092 АВ- 15096 70
- 37 015676
Положения В человеческом ТТОС-ТИ ΝΜ.174936 Последовательность смысловой цепи(5'-3^ 8Е0 ГО ΝΟ: Последовательность антткштсдовой цепи ф'-ЗЭ1 ЗЕр ΙΟ ΝΟ: СбозгЕчеаи дугпета Средний Τη»цент оставшегося мРНКгранскрллти прнакпветствуюшей концентрации киРНК в клетках различных типов 1С50в Неро: [мМ] 1С50в гепатоштах «•бакоподобных обезьян <нМ)
100 4ΪΛΉφΟ2 30 нМ/Нер62 30 нМ/ НеЬа
3233-3251 иёСиисСеи&АвСаСоАвСГзТ 1093 р-еСкиСЦПГсСГиССаСкдСйА^СГаТзТ 1094 АР- 15106 71
3233 3251 иеОиЦсСси&АеОзСсАеСТзТ 1095 €Γίυκ5ουκ:ΐυίΐΐί€ίΑ0ϋαΑΑ^£ΑΤ3Τ 1096 АР- 151 16 73
3233-3251 и£8СЙ|ГЯс€Гси%АГе6ГаСк А Г&СГВТ 1097 ССи0СисСиса<ЭС<ЗААссаТ5Т 1098 АР- 15126 71
3233-3251 игсос-^1аскпзкзА<ЮАСк:гА<зсгг5Т 1099 ССиССш^исаОССААссаТгТ 1ΙΟΟ АР15136 56
3233-3251 ияОиисСси^СаСсАвСТзТ 1101 ССиССисСисаСгОСАДссаТаТ 1102 АР15146 72
3242-3260 исиисиидсиисдсссссстт 1 юз бССОССиСААСиААСААОАГГ 1104 АР- 15260 79
3243-3261 сиисуиАсиисАСссосситт 1105 АССССООиСААСиААСААСТТ Н06 АР15371 24
3244-3262 иисиилсиисАсссоосистг 1107 САСССОСОиОААСиААСААТТ ) 308 АР- 15372 52
3262-3280 соссиссисАииииоАсастт 1109 сссУАААААисАоадассстт 1110 АР- 15172 27
3263-3281 оссиссисАииииидсссстг ИН ССССиАлААДиСАССАОССТТ 1112 АР- 15295 22
3264-3282 осиссисАииииидсскюшт шз АССССи АААА А1Ю АСС А ССТ7 И 14 А Ο- Ι 5373 11
3265-3283 сиссисАиигиилссосиАТТ 1115 иАСССОиААААДиСАССАСТТ 1116 АР15163 18
3266-3284 иссисдиииииАСОссиААГТ 1117 иидССССМААААА иСАССАТТ /РЗ АО15165 13
3267-3285 сс и с а и иди и а со<х ид асгт 1119 сиилссссидААААиодсстт 1120 АР15374 23
3268 3286 сисдишиидсссаиААСАТт ί 121 исииАссссиАААААПСАОГг 1122 АР15296 13
3270-3288 САиииииАСбооиААСАситт 1123 АсисиилссссилААДАистт 1124 АО- 15261 20
3271-3289 а и и иииассссидаслсистт 1Г25 САсисииАссссиддАААитт 1126 АР- 15375 90
3274-3292 сиилссссиААСАоисАСклт 1127 ссисАсисиилссссилдАТТ 1128 АР15262 72
3308-3326 САСАССАССААССиСССиСТТ 1129 САССсдссиисссосисисгт ИЗО АР- 15376 14
3310-3328 САССАСОААССиСССиОАСТТ 1131 сисАССОАОсииссисюистт 1132 АР15377 19
3312-3330 ссАООААОсисхзоисАсиотт 1133 САсиСАСССАСсииссиостт 1134 АР15409 17
3315-3333 скзААОсисосиОАоисАисгт 1135 сдисАСисАСССАОсиусстт 1136 АР15378 18
3324-3342 СРСАОиОАРСССАСААССАТТ 1137 иссиисРбссдисАсисАСТт 1138 АР15410 8
3326 3344 сАсисдисосАбААССАистт 1139 САиссиисисссАисАсистт 1140 АР- 15379 1 1
3330-3348 САиоССАСААССАССССиСТТ 1141 САОССАиссиисиссслистт 1142 АР- 15187 36
3336-3354 АСААССдиСССиССАСССАТТ 1143 исссиссдоссдиссииситт 1144 АР15263 18
3339-3357 дссАисссиссАСССАиссгг 1145 сслиоссиосАСосА исситт 1146 АР- 15264 75
3348-3366 ссАОссАиссААсииииистт 1147 САДАДАСиисслиоссисстт 1148 АР- 15 297 21
3356-3374 ссдАсииииисссииАисАтт 1149 исдиААССсАДАддсиисстт 1150 АР15208 6
3357-3375 СААСииииисссииАисдсгт 1151 оиоАиАдсссАААААоиистт 1152 АР- 15209 28
3358-3376 ААсиииииссоииАисАССтт 1153 соисАиАдсссААЛААсиитт 1154 АР- 15193 13!
3370-3388 иАисАСССАОССсиолиистг 1155 СААРСАСОСсиссоислиАтт 1156 АР- 15380 88
3378-339$ АООссисАиисАОЮссситт 1157 А<юссАсисААисА<к1сситт 1158 АР- 15298 43
ЧЧЙЧ-34Л1 иСАЦПСАП ΙΓ.ηΓΓίΤΠΓτΓίΊιΊΤΤ 11 59 ССОССАППССАГИ 1ГгА ΑΙ1САТТ ! 160 АР15299 99
3385-3403 диисдсиснзссиакхзсАСТт 1161 СРССОССАССССАСиСААРТТ 1162 АР- 15265 95
3406.3424 осцисиААОосАНосиссютт 1163 ссадссАибссиидсдАОСтт 1164 АР15381 18
3407-3425 сиисиААСОСАиссисссетт Н65 ссссАССдиоссиидсААстт 1166 АР- 15210 40
3429-3447 С АСССгССААСА АСУС иСССГТ 1167 оооАСАоиисиисюсссистт 1)68 АР- 15270 83
3440-3458 АсисисссиссиисА0сдст5Т 1169 биссисААОСАассАСАсит$т 1170 АР- 9591 75 95
3440-3458 АсиОисссиссииОАСсАсТаТ 1171 ОиОСРсААОСАОООАсАСиТ^Т 1172 АР9717 105
3441-3459 сисисссиссииСАОСАССГзТ 1173 соиосисААсюАСюаАСАСт$т 1174 АР 9622 94
3441-3459 си(диСссиегииСА<ЗсАс£Т$Т 1175 ООиССисААССАСаСАсАСТзТ 1176 АР9748 103
- 38 015676
Положения в человеческой пас-ти рег№ ΝΜ_ 174936 Последовательность смысловой цели 5ЕР ГО ΝΟ: Последовательность аНТНСМысЛОВОЙ ΟβϊΗί 15‘-3'}1 ТЕО Ю ΝΟ: Зботдоеят! дутикккэ Средний процент оставшегося мРНК· Транскрипта гтрксротвегсгаугощей кониентраини киРНК в клетках различных тигов 1С«в НерСг2 |нМ] 1С50в гепатоцитах собаке* подобных Обетьян (нМ)
1« йМ/Нер62 40 пМ41ерС2 э ЯМ/НсрОа 30 нМ7 Не1й
! 3480-3498 1 АСАтлл/Аисииииоссиситзт 1177 АСАСССААААСАИААдиСиГьТ 1178 АО9587 63 49
1 3480-3498 АсАиииАиСишшСССисиТзТ 1179 АСАССсААААСАиАААиОиТяТ 1180 АО- 9713 22 25
3480-3498 АГсАГиЫиАСиСГии^ииГаСГйиГсиГГзТ 1181 р-аСбаСГсСГаАГаАГ^АЙдАГаАГиОГиТгТ 1182 АО- 14679 19
3480-3498 АсиЕлипллиюгиплиюккюиюшггз т 1183 АС АСгСЮГАА ДАО АР ίΑΑ А11 ЮС ГТяТ 1184 АО- 14689 24
. 3480-3498 АсАиииАиСииии§б£С1сиТ5Т 1185 р-абГаСГсС Га А 1аА ίβΑ £иАй А Гиб ίιΠΥΓ 1186 АО- 14699 19
1 3480-3498 1 АсАиРиАиСииии^СгисиТзТ 1187 А С АСЮЮГА АААС АС ЕААДиЮР ίΤ$Τ 1188 АО14709 21
1 3480-3498 1 АГсА£ииГиАГиС£ииГии^С5§иГсСГТ5Т 1189 АСАССсаААа^АиАААиеиТаТ 1190 АО- 14719 24
1 3480-3498 АСГАигигугАиюсиплиюгасаигсгияя т 1191 АСАССсаААа£АиАААи§иТ?Т 1192 АО14729 23
| 3480-3498 АсАиЦи ΑϋΟαυυυ&ΦβυεϋΤδΤ 1193 АСАССсаААа&диАААщ’иТзТ 1194 АО- 14739 24
. 3480-3498 СЛСГаиГсО^ГиСГсС^СГаСГсСтт 1195 р-йС&иГсС^ОГсАГдСТаСГаиГзСГсЪТ 1196 АО- 15085 74
3480-3498 ссюгАигс^юсюккюгасАса'сгтят 1197 сссллсюгассгАОСГАОдиюссшт 1198 АБ- 15095 60
3480-3498 ОсСаисиаСиСсСяОзСгсСЬТ 1199 р-8О&иГССГйСГсАГЕСТаС£эиГ§С£сТ5Т 1200 АО- 15105 33
34Ки-349Ь йсСаисизСи<ЗсСе<ЗаОсСТ5Т 1201 СССЮГСГСГССС’ЛСЮСАСАиЮССЯзТ >202 Αϋ- 15115 30
3480-3498 ог^аиьигвсгиогесгвойогстт 1203 СССССапОСаеСАСАи^сТзТ 1204 АО- 15125 54
3480-3498 йсю1Аигсюю<1КГс</сюоАОсюгг№ 1205 ОССиСаиОСа§САСАи^сТ5Т 1206 АО- 15135 51
3480-3498 ЙсСаисидСШлсСвСаСсСТсТ 1207 СССиСаиССа5САСАи£ВсТ<Г 1208 АО- 15145 49
348Ь3499 САиъиАисииииоооисистзТ 1209 С АС АССС А А А АС ли А А А С’С ТяТ 1210 Αϋ- 9578 49 61
3481-3499 сАишАисшииСОСисиСТяТ 1211 сАОАССсААААСАиАААиСВТ 1212 АО- 9704 111
3485-3503 илисииииссоисиоиссутвт 1253 АОСАСАСдСССААЛАСАиАТэТ 1214 АО9558 66
3485’3503 иАцсцуииОО6исиСиесиТ$Т 1215 АОСАсАСАССсААААСАиАТяТ 1216 АО- 9684 63
35С4-3522 сисуоииоссиииииАСлстьТ 3 217 СиСиАААААСССАДСАСАОТяТ 1218 Αϋ- 9634 29 30
3504-3522 сисиСииСссиииииАсАСТяТ 1219 СиСиДААААСЮсААсАОАСТгТ 1220 АО9760 14 27
3512-3530 ссииииидсАоссААсииитт 1221 АААСииСССибСААДААСОИ 1222 АО- 15411 5
3521-3539 АСССААсиииисиАОАСситт 1223 АСсисиАСАААдаиисссигг 1224 АО15266 23
3526-3544 АсиииьсиАОАССиззиииитт 1225 ААААСАССисиАСААААОитТ 1226 АО- 15382 12
3530-3548 и иси Аслссис υ ии и оси υτ$τ 1227 ААОСААААСАСОисиАСААТзТ 1228 АО- 9554 23 24
3530 3548 ни с иАС АссиСиисадСк и иТя Т 1229 ААСсА А ААсАСС иСиАСА АТзТ 1230 АО9680 12 22 0,10 оде
3530-3548 иГиСй1АГеАГсС1иО(ииГииГёСп1иГГзТ 1231 р-аАГеСГаА :аА Гс А ίχΰ ГиСГи А1&А ГаТ$Т 1232 АО- 14676 12
1530-3548 и1и£сЮ1АОАСТС(июи5иплигосплигг$ Т 1233 ААССГААААСГАССиЮГРГАСААТяТ 1234 АО- 14686 и
3530-3548 ииСиА^АсСдОииии^СииТаТ 1235 р-аАТ^СГаАйАГсАГвСГиСГиАГйАйТяТ 1236 АО- 14696 12
3530 3548 ииСиА&А^СчбцаиияСииТзТ 1237 ААСС£ААААС£АОСиГС!РГАСААТ5Т 1238 АО- 14706 18
3530-3548 иГиС5иА5&АГсС1иО1ииЕиитЛиЪтТ 1239 ААСсА ааАСайСиСиА^ааТзТ 1240 АО- 14716 17
3530-3548 и ιυίϋΐυίΑΟ дсйлиюилб пли юс ю ги т т 1241 ААСсАааАСадСгиСиАдааТзТ 1242 АО- 54726 16
3530-354« ииСиАгАс€и<ЗиииийСи1ЕГзТ 1243 ААСсАааАСаёСисиАгэаТзТ 1244 АО- 14736 9
3530-3548 СЕаиГаС^СГсиГ&ОГайГииЬАСииПзТ 1245 р-аАГиАГаАГсиГсСГаС^ГсШаиГвТзТ 1246 Αϋ- 15082 27
3530-3548 оли £АССС5сшгао дои ю ю£а и ги гм 1247 ААиГАААСТиГСГСГАСССГСГСГДиЮТяТ 1248 АО- 15092 28
3530-3548 СаиаСвСсийОзСиииАииТзТ 1249 р-аДГиАТаАГсиГсСГаС^СкиТаиГёТяТ 1250 АО 15102 19
3>30 3548 СаиаС^СсивСэСЗиииАиит зТ 1251 ААигАААСгиЮЕСГАСССгсгиГАсгатят 1252 АО 15112 17
3530-3548 ССаиГа6Г®СГсиГв6йСГии1иА£ииГГ5Т 1253 А А и А А асССсаССССиаийТ яТ 1254 АО15122 56
3530-3548 С£Аи£АСССЯ?Ш£СС АС и ЛЛП ί а и ЯЛТяТ 1255 ААСААдсиСсаССССиаивТяТ 1256 Αϋ15132 39
3530 3548 СаИаСёСсивСаСиииАииТзТ 1257 ААСААасССсаСЮСССаддТ;.? 1258 Αϋ15)42. 46
3531-3549 исилсАСсисииииссииитзт 1259 АААбСААААСАОСисиАСАТзТ 1260 АО9553 27 22 | 0.02 ΖΖΊ
- 39 015676
Положения в человеческой ТЮС-ТИ рег№ Последовательность смысловой ими (5'-3^ 8Е0 10 N0: Последовательность ыпиомислоьой пепн (5’·37ι 5Ер ГО ΝΟ: луттад Средний процент оставшегося мРНКтранскрипга при соответствующей концентрации киРНК в клетках различны», типов 1С50в НерО2 [нН] 1050 в гепатоцитах ообатгоподобных обезьян (нМ)
190 чМ/НсрО2 за нМ/НерСг2 нМ/Нср>02 30 нМ1 НеЪз
3531-3549 иСиАСАссиСииииОсиииТзТ 1261 АААСсАААА«АССиСиА(дАТ$Т 1262 АО9679 17 21
3531-3549 игсигаСйсгси^и/иигиоГсиеиитт 1263 р-аАГа6£сА&АГаСйСГ&иГсиГаСйТ=.Т 1264 АО- 14675
3531-3549 игсгигдсАсгсшгоишгишсосллипзггз т 1265 АААССГААААСГАООиГСГиЕАСАТьТ 1266 АО- 14685 19
3531-3549 исиа<га€си^ии11и6сЬииТ5Т 1267 р-аАГаСГсАГаАйСй<3^иГси£аСйТ5Т 1268 АО- 14695 12
3531-3549 исиаоассигииииосииитзт 1269 АААССГААААСГАСЮигаТЯАОАТзТ 1270 АО- 14705 16
3531-3549 иииЕаагасии^иьигиС'Еси’иЕитчт 12.71 АААОСааААсаСОисиайаТзТ 1272 АО- 14715 19
3531-3549 игсЕигАСАОслзгсиплигигсоигппзт т 1273 АААССазААсябОисиаяаТяТ 1274 АО- 14725 19
3531-3549 исиаОаСсиЕииииСсииИГзТ 1275 АААССэаААсаСОисиа8аТ5Т 1276 АР- 14735 19
3531-3549 и ЕсАГиА Г§0 £сС ГиСГ&А Г^СГии ЕаЭ [ΤίΤ 1277 р-аиГаАГаСГиС£сАГ§Сг£сСГиАГ1хСГаТзТ 1278 АО- 15081 30
3531-3549 и гс гао гаоссгсш гсс ас иги ю га итт 1279 АСГАААСЛЛСГСГАОССЕСЮГАиГОАТзТ 1280 АО- 15091 16
3531-3549 исАиАдСсСиСзА^иииаиТяТ 1281 р-аиГаАГаСГиСГсАЕ8ОГсС£иАГиСйТ5Т 1282 АР- 15101 16
3531-3549 исАиА^СсСиС^АзПииаиТзТ 1283 А^АААС^ГСГСЕАООСЕСЕиГАиЕСАТзТ 1284 АР15111 и
ΙΤ+οΑήιΛΓσίΤΛ-ΓΑιΑ+οΛΡοΙ Ιίι.Γ ТЙаГ ΤίΤνΓ 1285 А( и ДАп>СГя«СгСГиА||^аТ^Т 12ЯЪ АР- 15121 19
3531-3549 иЕСгдигАо<зсгсгигссАоигип;£Аи1Т5Т 1287 А и А А А сиССа^ОСС и А и^аТаТ 1288 АР- 15131 17
3531-3549 ПсАшДЕСсСиСдАдиииаиТгТ 1289 ΑϋΑ А АсиССа^СгССиАи^аТзТ 1290 АР- 15141 18
3557-3575 ис аас ди ли и и а и иссссотзт 1291 сссАСААиАААилисиисАт&т 1292 АР- 9626 97 68
3557 3575 иСААСгАиАиииАиисиСгОСТзТ 1293 ССсАОААцАААиАисиУсАЪТ 1294 АО9752 28 33
3570-3588 исиоосиииисиАССАииитгт 1295 АААиССиАСААААСССАОАТзТ 1296 АО- 9629 23 24
3570-3588 ис11ОССи1дииСиАСсАиииТзТ 1297 ДААиОСиАсААААССсАСАТвТ 1298 АО9755 28 29
3613-3631 АиАААААСАААСАААССИиТТ 1299 ААСсииисииисиииииАитт 1300 АО- 15412 21
3617.3635 АААСАААСАААССииСиССТТ 1301 оаАСААссииисииисииитт 1302 АО- 152! 1 73
3618-3636 ААСАААСАААССОиОиССШТ 1303 а сс ас а а со συ ис и иисиитт 1304 | АО- | | 1 1 41 1 1
Г 1 1 15300 1 } и и κι 1
1 и, С, А, С - соответствующий рибонуклеотид; Т - дезокситимидин; и, с, а, д - соответствующий 2'-Ометил-рибонуклеотид; Ш, С£, АТ, С£ - соответствующий 2'-дезокси-2'-фтор-рибонуклеотид, если нуклеотиды представлены в виде последовательности, то они присоединены посредством 3'-5'фосфодиэфирных групп, нуклеотиды со вставленной буквой к присоединены посредством 3'-О-5'-Офосфотиодиэфирных групп, если перед последовательностью не стоит префикс р, то это означает, что олигонуклеотиды не содержат 5'-фосфатной группы у 5'-концевого нуклеотида, все олигонуклеотиды имеют 3'-ОН у 3'-концевого нуклеотида.
Таблица 2
Обозначение дуплекса Последовательность смысловой цепи (5’-3’)1 $ЕС) ΙΟΝΟ Последовательность антисмысловой цепи(5’-3’)' 8Е<2 ΙΟ ΝΟ Процент оставшейся мРНК по отношению к контролю при концентрации киРНК 30 нМ
АО-Ю792 СссиСОАСиицАиисСбААТзТ 1305 ииССОДАиАААСиСсАСОСТзТ 1306 15
АЭ-10793 бссиССАСиииАиисСЗСЗААТбТ 1307 цисСбААиАААСОссАСССТйТ 1308 32
АО-10796 ОссиСбАСиииАиисССААТзТ 1309 ииссоАлилААсиссАосстзт 1310 13
АЭ-12038 (ЭссиООАСиииАиисСЮААТьТ 1311 ииССбААиАААСиССАСССТзТ 1312 13
АО-12039 СссиССАбиииАиисССААТзТ 1313 ииССОААиАААСиССАСОСТяТ 1314 29
АО-12040 ОссиСОАСиииАиисСЮААТзТ 1315 ииссСААиАААсисСАОсстзт 1316 10
АО-12041 СссибСЗАСиииАиисСОААТзТ 1317 ииссОААиАААсиссАОсстзт 1318 н
АО-12042 сссиссАсиииАиисосААТзТ 1319 ииССбААиАААСиССАООСТзТ 1320 12
АО-12043 бссиосАоицилиисссААТзТ 1321 ииСССААиАААСиССАСССТзТ 1322 13
АО-12044 оссисаАсииоАииссбААТзт 1323 иисССААНАААСиССАСОСТвТ 1324 7
АР-12045 оссисоАоииилиисасААТкт 1325 ииссОАлиАААсисСАОостзт 1326 8
Αϋ-12046 ОссиССАбиииАиисССАА 1327 ииССОААиАААСиССАСОСзсзи 1328 13
АО-12047 СссиССАСиииАиисСгСААА 1329 иииссоААилААсиссАсосвсви 1330 17
АО-12048 ОссиС6АОиииАиисОС|АААА 1331 ииШСССААОАААСиССАОСтСзсзи 1332 43
АО-12049 ОссибОАСиииАииоСгСААААС 1333 сиииисссААиАААсиссАсасзези 1334 34
Αϋ-12050 СссиССАСгиииАиисСбААТТаЬ 1335 ииСССААиАААСиССАСОСТТаЬ 1336 16
АР-12051 СссиСОАОиииАиисСО А ААТТ аЬ 1337 иииСССААиАААСОССАСОСТТаЬ 1338 31
АР-12052 ОссиСОАСиииАиисССААААТТаЬ 1339 ииииссбААПАААсиссАОссттаЬ 1340 81
АР-12053 СссиОСАСиииАиисОСААААСТТаЬ 1341 СииШСССААиАААСиССАСОСТТаЪ 1342 46
- 40 015676
АО-12054 сссиосАсиииАиисссААТзт 1343 ииССОААиАААСиССАСОСзсзи 1344 8
АР-12055 СгссиООАОиииАиисООААТьТ 1345 ииССОААиАААСиССАбОСзсзи 1346 13
АО-12056 6сСиО^А§иииаииС§СаА 1347 иОССбААиАААСиССАСОСТТаЬ 1348 11
ΑΡ· 12057 СсСиС§А§иииаииС§ОаА 1349 ииСССААОАААСиССАСОСТзТ 1350 8
АО-12058 СсСиС§АёиииаииСё6аА 1351 ииССОААиАААСиСсАббСТзТ 1352 9
АО-12059 6сСиСл§А§иииаииС§6аА 1353 иисСбААиАААСиссА0ССТ$Т 1354 23
АО-12060 6сСиО§А§и ииаииС^Са А 1355 ШССОааиАааСиССАзяс 1356 10
АО-12061 СсСиО§пА§иииа1]иС§ОаАТ5Т 1357 ииСС(ЗааиАааСиССА£Т5Т 1358 7
АР-12062 СсСиО§А§иииаииС§СаАТТаЬ 1359 ЦиССбааиАааСиССА^&сТТаЬ 1360 10
АР-12063 СсСи(3§А§иииаииСйбаА 1361 ииСС6ааиАааСиССА^С5С5и 1362 19
АО-12064 ОсСиСЗёпА^иииаииСёОаАТзТ 1363 ЦиСССААиАААСиСсАббСТзТ 1364 15
АР-12065 ОсСиСёАвиииаииСёбаАТТаЬ 1365 ииССОААиАААСиСсАСбСТТаЬ 1366 16
АО-12066 СсСиО§А£ииС'аииС2.СаА 1367 ииССОААиАААСиСсАСССбСБи 1368 20
АО-12067 СсСиС§пА^иииаииС§0яАТ5Т 1369 иисссААиАААсиссАббстзт 1370 17
АР-12068 СсСи6§АйиииаииС^СаАТТаЬ 1371 ииСССААОАААСиССАСОСТТаЬ 1372 18
АО-12069 <ЭсС и О Α§Ό и С аЬ'иС абаА 1373 ииСССААиАААСиССАСССвсзи 1374 13
АР-1233 8 <ЗГсСГйССйА1еи£иийий)СГ§<}ГаАТ 1375 Р-ии£сС£§А£аи£аА£аС£йС£сА£§С£с 1376 15
АО-12339 <3с С и А§и ииаЬ’и С §Оа А 1377 Р-иикС£§А£аи£аА£аС£йС£сА£§С£с 1378 14
АО-12340 Ссс иСС АС иии А и исОС А А 1379 Р-ии£сС£ёА£аи£аА£аС(иС£сА£ёС£с 1380 19
Αϋ-12341 СГсСГиОСвА^иГииГаиЛСГзСГаАЯ'зТ 1381 Р-ии£сС£ёАйиГаА&С£иС£сА£§О£сТ5Т 1382 12
АО-12342 С£сС£и6£^А£§и£ии£аи£йС£§С£аА£ГзТ 1383 ЦиСССААиАААСиСсАСЮСТхТ 1384 13
АР-12343 С£сС£иС£^£§и£ии£аиШС£§6£аА£Г5Т 1385 иисССААиАААСиссАСОСЪТ 1386 24
АР-12344 О£сС£иСГ&АГ8ип1иГаий1СГеСГаАтТ 1387 иисссААидААсиссАссстзт 1388 9
АО-12345 ОГсС(иО^А£@иП1иГаи(иС^С&А£Г5Т 1389 ииССбААОАААСиССАСССзсзи 1390 12
АО-12346 ОГсСГиСГ&АГЕиГииГаитСГзСЕаАСГзТ 1391 ЦиСССааиАааСиССАё^сзсзи 1392 13
АР-12347 бссисюАоиииАииссюААТзт 1393 Р-ии£сС£ёАйи£аА£аС£иС£сА£§<3£сТ5Т 1394 И
АР-12348 СссиСгС АОиии АиисСС А АТ$Т 1395 Р.ииГсС£ёА&и£аА£аС£иСйА£ёС£сТ5Т 1396 8
АО-12349 ОсСиО§пА§иииаииС§6аАТ5Т 1397 Р-ииГсС£5А£аийА£аСГиСГ£А£е6£сТ5Т 1398 11
АР-12350 6£сСГиС£ёА^и£иийи1иС£еО£аАПТаЬ 1399 Р-и№С£ЙА£аи£аАйС£иС£сА£§С£сТТаЬ 1400 17
АР-12351 ОГсСГиС^А^иГииГаийСТеСГаАГ 1401 Р-ии£сС£ёАйи&АйС£иС£сА£§6£с5С£8и 1402 11
АР-12352 6£сСп10£§А£§иЯ1и£аи1иСГёО£аА£ 1403 ииСССааОАааСиССА§§с5С5и 1404 И
АР-12354 б£сС£и6£§А£§и£ии£аЧЛиС£§6£аАГ 1405 ииСС6ААиАААСиССАССС5£5и 1406 11
АР-12355 С£сС£и6Г§АГ^и£иийи£иС£§6£аАГ 1407 ииСССААиАААСиСсАСОСТ^Т 1408 9
АР-12356 6ГсС£иС£§А^и£ии£аи£иС£§6£аА£ 1409 иисССААиАААСОссАСССТБТ 1410 25
АО-12357 ОтосСтоиОто£Ат02§итоиитоаитоиСто§ОтоаА 1411 ииСССааиАааСиССА§§с 1412 56
АР-12358 СтосСп1оиОтоцАп102д.итоиипюаигпсиСпк>§ОтоаА 1413 Р-ии£сС£§А£аи£аА£аС£иС£сА£§С£с 1414 29
АО-12359 ОтосСтоиОто§Ат02§итоиитоаитоиСтойОпюаА 1415 Р-ии£сСГ§А£аи£аА£аС£иС£сА£ё6£с5С£5и 1416 30
АР-12360 6то<Стои6т.о§Ат02§и1ПОиитоаитоцСтоёСтоаА 1417 ииСССААиАААСиССАСССзо^и 1418 15
АР-12361 <ЗтосСтоиСто§Ат02§итоиитоаитоиСто§ОтоаА 1419 ииСССААиААЛСиСсАСССТзТ 1420 20
АО-12362 бтосСтоибтоёАт02§ип1|Оиитоаип1оиСто§СлтоаА 1421 иисССААиАААСиссАСССЪТ 1422 51
АР-12363 СтосСтоиОто2Ат02^итоиитоаитоиСто§СтоаА 1423 ииСС6ааиАааСиССА§£СБС8и 1424 11
АО-12364 ОтосСтоиСтойАтоёитоиитоаитоиСтоёОтоаАТБТ 1425 циСССааОАааСиССА§§сТ5Т 1426 25
АР-12365 СтосСпюи6то§Ато§итоиитоаитоиСто§6тоаАТзТ 1427 ииСССААиАААСиСсАСССТзТ 1428 18
АР-12366 6тосСтоиСто5Ато§итоиишоаитоиСто§СтоаАТ5Т 1429 иисссААидААсиссАйсстбТ 1430 23
АО-12367 Сто стостоиССАСтоитоитоиАтоитоитосССА АТ&Т 1431 ииСС6ааиАааСиССА§£сТ5Т 1432 42
АО-12368 СтостостоиССАСтоитоитоиАтоитоитосССААТзТ 1433 ииСССААиАААСиСсАСССТзТ 1434 40
АО-12369 СтостостоиССАСтоитоитоиАтоитоитосССААТзТ 1435 иисссААиАААсиссАссстзт 1436 26
АР-12370 СшостосгпоиСОАСтоитоитоиАтоитоитосСбААТБТ 1437 Р-и£0ГСГСЮААи£АААС£и£С£С£Д6ССаБТ 1438 68
АО-12371 СтостостоиССАСтоитоишоиАтоитоитосССААТаТ 1439 Р-и£и£С£СгаААиГАААС£и£С£Г£АС6С£8С£5иГ 1440 60
АР-12372 СтостостоиССАСтошпоитоиАтоитоитосССААТзТ 1441 Р-ии£€С£ёА£аи£аА£аС£иС£сА£§С£с5С£5и 1442 60
АО-12373 Стостостои6САСтоитоитоиАтоито«тосССААТ$Т 1443 иисссААиАААсиссАСОстзт 1444 55
АР-12374 бскзшгасАсишшгАигигсгааААЬт 1445 иЮ£С£С£СААи£АААСЯЛС1С£АСЮСтТ 1446 9
- 41 015676
АО-12375 0С£СШГ6ОА0иШ1ЪТАиШ£С100ААТ5Т 1447 иисссААиАААсиссАосстзт 1448 16
АО-12377 ссгсшюсАаиююгАигигсюсААЪт 1449 иисССААиАААСиссАбОСТзТ 1450 88
АО-12378 аС1СШКЮАСиШШГАиШ£СЮСААТ5Т 1451 ииССбааиАааСиССА^сзсзи 1452 6
Αϋ-12379 6С1СШЮСАСиЮ1иГАиЮ£СЮСААТ8Т 1453 ииССОААиАААСиССАОССзсзи 1454 6
АО-12380 οϋΚίυίοοΑουίυίΕΎΑυίυίοίοαΑΑΤδΤ 1455 Р-ииГсСГ^АГаЕЛаАЬСГиСГсАГёОГсзСГзи 1456 8
АО-12381 асгсшюоАсишшгАигигсгбаААТзт 1457 Р-ии£сС£§А£аи£аА1аС£иС£сА1§6£<ТзТ 1458 10
АО-12382 1459 Р-игиГСЙГЮААиГАААСЛЗГСГСЕАСОСтТ 1460 7
АО-12383 сссиссАоиииАиисобААТзт 1461 Р-иЮОСЮААШАААСЮГСГСГАСОСГГзТ 1462 7
АО-12384 Осси 06 А Си ни Аи исОС А АТ зТ 1463 Р-иЮ£С1СЮААиРАААСЮ1С1С£А6ОСГГ5Т 1464 8
АО-12385 бсСиО^пА^иииаииСеОгАТзТ 1465 Р-и£и£С£С£6ААи£АААСШ£С£СГА6ОСтТ 1466 8
Αϋ-12386 СГсСп1С£ёА££и£ииЙ1и£иС^6£аА£ 1467 Р-иШЮГСЮААШ’АААСЮГСКТАСОСГГзТ 1468 11
АО-12387 ссйзщюоАбаиюллАиллсгасАА 1469 и£иГС£СЮААи£АААСШ£С£С£АО6СГзСГзи£ 1470 13
АО-12388 66ί6ίυί06Ά6συίυΐυίΆυίυί6ί0<3ΑΑ 1471 Р-ии&С(&АГаи£аАГаС(иС£сА£ё 1472 19
АО-12389 бСГСШ£С0АСйиШЮ1АиШ£С£0САА 1473 Р-ии£сС^АГаи£аАГаС£иСТсА£йСй:5СГзи 1474 16
АО-12390 1475 ииССбААиАААСиССАСЮСзсзи 1476 17
АО-12391 сс1сшюоАСсиш£игАи1игскзоАА 1477 ииССОааиАааСиССАё^с 1478 21
АО-12392 оасшгббАсоишюгАишкжюАА 1479 ииссоААиАААсиссАасстзт 1480 28
АО-ϊ 2393 осйлив&йАооишялАидискюАА 1481 ииССОААиАААСиСсАббСТзТ 1482 17
АО-12394 бСГСШЮОАСОиШЮСдиШЮ^САА 1483 иисСОААиАААСиссАСССТзТ 1484 75
АО-12395 бтосСтоиСпю^АтОёитоиитоаитоиСтойОтоаАТзТ 1485 Р-и1и£С£С£6ААи£АААС£ТТ'С1'СГАССС£5С£5и£ 1486 55
АО-12396 6тосСтои6то§Ат02ёитоиитоаипк>иСтоёОп1оаА 1487 Р-иЮ£С£СЮААи£АААСЮГСГСГА(ЮС£5С£5Ш 1488 59
АО-12397 6ГсСй|6Г§АГёи<ии£аип|С%6ГаАГ 1489 Р-иШ£С£С£6ААиГАААСЮ1С1СГА66С£зСГ5иГ 1490 20
АО-12398 6ГсС1и6Г§АГ^иГииГаип1СГ§6ГаА£Т8Т 1491 Р-иШ£С£С16ААи£АААС£ТИ'СГС£А6бС1ЕС£5и1' 1492 11
АО-12399 СсСи6§пАёиииаииС§0аАТ&Т 1493 Р-иЮ£СГС£6ААи£АААСЮЮГСГА66СГзСГзОГ 1494 13
АО-12400 оссиссАбиииАписбОААТзт 1495 Р-иШКЯЗЙЗААиГАААСЯЛСГСГАСОСГзСйиГ 1496 12
АО-12401 бссиССАСиииАиисбСААТзТ 1497 Р-иШГСГСЮААиГАААСОСГСГАбОСГзСГзиГ 1498 13
АО-12402 ОссиббАСиииАиисОбАА 1499 Р-и1и£С£СЮААи£АААС£и1С£С£А66СГ5С£5иГ 1500 14
Αϋ-12403 осисююсАсоиююгАишююбАА 1501 Р-иЮ£С(СГОААиГАААСШ1СГС£А66СГзС£зиГ 1502 4
АО-9314 бссибОАбииилиисббААТзт 1503 ииССОААОАААСиССАООСТзТ 1504 9
1 и, С, А, С - соответствующий рибонуклеотид; Т - дезокситимидин; и, с, а, д - соответствующий 2'О-метил-рибонуклеотид; ИГ, СГ, АГ, СГ - соответствующий 2'-дезокси-2'-фтор-рибонуклеотид; тοс, тοи, тοд, тοа - соответствующий 2'-МОЕ-нуклеотид; если нуклеотиды представлены в виде последовательности, то они присоединены посредством 3'-5'-фосфодиэфирных групп; аЬ - 3'-концевой неосновный нуклеотид; нуклеотиды со вставленной буквой к присоединены посредством 3'-О-5'О-фосфотиодиэфирных групп; если перед последовательностью не стоит префикс р, то это означает, что олигонуклеотиды не содержат 5'-фосфатной группы у 5'-концевого нуклеотида; все олигонуклеотиды имеют 3'-ОН у 3'-концевого нуклеотида.

Claims (11)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Двухцепочечная рибонуклеиновая кислота (дцРНК), ингибирующая экспрессию человеческого гена РС8К9 в клетке, где указанная дцРНК содержит по меньшей мере две последовательности, комплементарные друг другу, где смысловая цепь содержит первую последовательность, а антисмысловая цепь содержит вторую последовательность, включающую в себя область комплементарности, которая, по существу, комплементарна по меньшей мере части мРНК, кодирующей РС8К9, где указанная область комплементарности составляет в длину менее 30 нуклеотидов, где указанная первая последовательность содержит 8ЕО ГО NО: 1229 и указанная вторая последовательность содержит 8ЕО ГО NО: 1230 и где указанная дцРНК в результате ее контактирования с клеткой, экспрессирующей указанную РС8К9, ингибирует экспрессию указанного гена РС8К9.
  2. 2. дцРНК по п.1, где указанная дцРНК содержит по меньшей мере один модифицированный нуклеотид.
  3. 3. дцРНК по п.2, где указанный модифицированный нуклеотид выбран из группы, состоящей из 2'О-метилмодифицированного нуклеотида; нуклеотида, содержащего 5'-фосфортиоатную группу, и концевого нуклеотида, присоединенного к холестериловому производному или бисдециламидной группе додекановой кислоты, 2'-дезокси-2'-фтормодифицированного нуклеотида, 2'-дезоксимодифицированного нуклеотида, блокированного нуклеотида, неосновного нуклеотида, 2'-аминомодифицированного нуклеотида, 2'-алкилмодифицированного нуклеотида, морфолинонуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, содержащего неприродное основание.
  4. 4. дцРНК по п.1, где указанная первая последовательность состоит из 8ЕО ГО NО: 1229, а указанная вторая последовательность состоит из 8ЕО ГО NО: 1230.
  5. 5. дцРНК по п.1, где указанная дцРНК способна вызвать снижение уровня липидов в сыворотке.
  6. 6. Фармацевтическая композиция для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в организме, содержащая дцРНК и фармацевтически приемлемый носитель, где указанная дцРНК содержит по меньшей мере две последовательности, комплементарные друг другу, где смысловая цепь содержит первую по
    - 42 015676 следовательность, а антисмысловая цепь содержит вторую последовательность, включающую в себя область комплементарности, которая, по существу, комплементарна по меньшей мере части мРНК, кодирующей РС8К9, где указанная область комплементарности составляет в длину менее 30 нуклеотидов, где указанная первая последовательность содержит 8Е^ ГО ΝΟ: 1229 и указанная вторая последовательность содержит 8Е^ ГО ΝΟ: 1230 и где указанная дцРНК в результате ее контактирования с клеткой, экспрессирующей указанный РС8К9, ингибирует экспрессию указанного гена РС8К9.
  7. 7. Фармацевтическая композиция по п.6, где указанная первая последовательность состоит из 8Е^ ГО ΝΟ: 1229, а указанная вторая последовательность состоит из 8Е^ ГО ΝΟ: 1230.
  8. 8. Фармацевтическая композиция по п.6, где указанная дцРНК способна вызвать снижение уровня липидов в сыворотке.
  9. 9. Способ т νίΐτο ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетке, предусматривающий:
    (a) введение в клетку двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) по п.1 и (b) поддержание клетки, продуцированной на стадии (а), в течение периода, достаточного для разрушения мРНК-транскрипта гена РС8К9 и тем самым ингибирования экспрессии гена РС8К9 в указанной клетке.
  10. 10. Способ лечения, профилактики или контролирования патологических состояний, которые могут быть опосредованы понижающей регуляцией экспрессии гена РС8К9, предусматривающий введение пациенту, в случае необходимости такого лечения, профилактики или контролирования патологического состояния, терапевтически или профилактически эффективного количества дцРНК по п.1.
  11. 11. Вектор для ингибирования экспрессии гена РС8К9 в клетке, где указанный вектор содержит регуляторную последовательность, функционально присоединенную к нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере одну цепь дцРНК по п.1.
EA200870528A 2006-05-11 2007-05-10 Композиции и способы ингибирования экспрессии гена pcsk9 EA015676B1 (ru)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US79945806P 2006-05-11 2006-05-11
US81720306P 2006-06-27 2006-06-27
US84008906P 2006-08-25 2006-08-25
US82991406P 2006-10-18 2006-10-18
US90113407P 2007-02-13 2007-02-13
PCT/US2007/068655 WO2007134161A2 (en) 2006-05-11 2007-05-10 Compositions and methods for inhibiting expression of the pcsk9 gene

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200870528A1 EA200870528A1 (ru) 2009-06-30
EA015676B1 true EA015676B1 (ru) 2011-10-31

Family

ID=38694697

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200870528A EA015676B1 (ru) 2006-05-11 2007-05-10 Композиции и способы ингибирования экспрессии гена pcsk9
EA201100907A EA020840B1 (ru) 2006-05-11 2007-05-14 Композиции и способы ингибирования экспрессии гена pcsk9

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201100907A EA020840B1 (ru) 2006-05-11 2007-05-14 Композиции и способы ингибирования экспрессии гена pcsk9

Country Status (15)

Country Link
US (9) US7605251B2 (ru)
EP (8) EP3249052B1 (ru)
JP (4) JP5570806B2 (ru)
KR (2) KR101320916B1 (ru)
CN (2) CN103614375A (ru)
AU (2) AU2007249329C1 (ru)
CA (2) CA2915441A1 (ru)
EA (2) EA015676B1 (ru)
ES (2) ES2392478T3 (ru)
HK (1) HK1183910A1 (ru)
IL (3) IL195181A (ru)
NZ (2) NZ587616A (ru)
PL (2) PL3578656T3 (ru)
SG (1) SG171676A1 (ru)
WO (1) WO2007134161A2 (ru)

Families Citing this family (159)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070173473A1 (en) * 2001-05-18 2007-07-26 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of proprotein convertase subtilisin Kexin 9 (PCSK9) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
KR101531400B1 (ko) 2003-06-27 2015-06-26 암젠 프레몬트 인코포레이티드 상피 성장 인자 수용체의 결실 돌연변이체 지향 항체 및 그용도
WO2007087113A2 (en) 2005-12-28 2007-08-02 The Scripps Research Institute Natural antisense and non-coding rna transcripts as drug targets
JP5570806B2 (ja) 2006-05-11 2014-08-13 アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド Pcsk9遺伝子の発現を阻害するための組成物および方法
JP5588175B2 (ja) 2006-11-07 2014-09-10 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション Pcsk9のアンタゴニスト
EP2799547B1 (en) * 2006-11-08 2016-12-21 Veritas Bio, LLC In Vivo Delivery of RNA to a Target Cell
US8084437B2 (en) * 2006-11-27 2011-12-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
US8093222B2 (en) 2006-11-27 2012-01-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
US7910722B2 (en) 2007-07-05 2011-03-22 Florida State University Research Foundation RNAi therapeutic for treatment of hepatitis C infection
JOP20080381B1 (ar) 2007-08-23 2023-03-28 Amgen Inc بروتينات مرتبطة بمولدات مضادات تتفاعل مع بروبروتين كونفيرتاز سيتيليزين ككسين من النوع 9 (pcsk9)
EP2245039A4 (en) * 2008-01-31 2012-06-06 Alnylam Pharmaceuticals Inc OPTIMIZED METHODS FOR EXPORING DSRNA TO TARGET THE PCSK9 GEN
AR070316A1 (es) 2008-02-07 2010-03-31 Merck & Co Inc Antagonistas de pcsk9 (proproteina subtilisina-kexina tipo 9)
AR070315A1 (es) 2008-02-07 2010-03-31 Merck & Co Inc Anticuerpos 1b20 antagonistas de pcsk9
CN104975020B (zh) 2008-02-11 2020-01-17 菲奥医药公司 经修饰的RNAi多核苷酸及其用途
KR20100132531A (ko) * 2008-03-20 2010-12-17 쿠아크 파마수티칼스 인코퍼레이티드 RTP801을 억제하기 위한 신규 siRNA 화합물
JP6209309B2 (ja) 2008-09-22 2017-10-04 アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション サイズが減少した自己送達用RNAi化合物
MY188457A (en) 2008-10-03 2021-12-10 Opko Curna Llc Treatment of apolipoprotein-a1 related diseases by inhibition of natural antisense transcript to apolipoprotein-a1
EP2370581B1 (en) 2008-12-04 2016-08-03 CuRNA, Inc. Treatment of vascular endothelial growth factor (vegf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to vegf
CN102317458B (zh) 2008-12-04 2018-01-02 库尔纳公司 通过红细胞生成素(epo)天然反义转录物的抑制对epo相关疾病的治疗
KR101866152B1 (ko) 2008-12-04 2018-06-08 큐알엔에이, 인크. 종양 억제 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의해 종양 억제 유전자 관련된 질환의 치료
US9493774B2 (en) 2009-01-05 2016-11-15 Rxi Pharmaceuticals Corporation Inhibition of PCSK9 through RNAi
WO2010090762A1 (en) 2009-02-04 2010-08-12 Rxi Pharmaceuticals Corporation Rna duplexes with single stranded phosphorothioate nucleotide regions for additional functionality
HUE026280T2 (en) 2009-02-12 2016-06-28 Curna Inc Treatment of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) -related diseases by inhibition of natural antisense transcripts associated with BDNF \ t
WO2010107733A2 (en) 2009-03-16 2010-09-23 Curna, Inc. Treatment of nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2 (nrf2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to nrf2
JP5904935B2 (ja) 2009-03-17 2016-04-20 クルナ・インコーポレーテッド デルタ様1ホモログ(dlk1)に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるdlk1関連疾患の治療
CA2761152A1 (en) 2009-05-06 2010-11-11 Opko Curna, Llc Treatment of lipid transport and metabolism gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a lipid transport and metabolism gene
ES2609655T3 (es) 2009-05-06 2017-04-21 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con tristetraprolina (TTP) mediante inhibición de transcrito antisentido natural para TTP
KR101742334B1 (ko) 2009-05-08 2017-06-01 큐알엔에이, 인크. Dmd 패밀리에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 디스트로핀 패밀리 관련된 질환의 치료
US8957037B2 (en) 2009-05-18 2015-02-17 Curna, Inc. Treatment of reprogramming factor related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a reprogramming factor
CN102549158B (zh) 2009-05-22 2017-09-26 库尔纳公司 通过抑制针对转录因子e3(tfe3)的天然反义转录物来治疗tfe3和胰岛素受体底物蛋白2(irs2)相关的疾病
EP2435571B1 (en) 2009-05-28 2016-12-14 CuRNA, Inc. Treatment of antiviral gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an antiviral gene
CA2764158A1 (en) 2009-06-01 2010-12-09 Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. Polynucleotides for multivalent rna interference, compositions and methods of use thereof
US9051567B2 (en) * 2009-06-15 2015-06-09 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Methods for increasing efficacy of lipid formulated siRNA
CA2764832A1 (en) * 2009-06-15 2010-12-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated dsrna targeting the pcsk9 gene
KR101702689B1 (ko) 2009-06-16 2017-02-06 큐알엔에이, 인크. Pon1에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 파라옥소나제 1(pon1) 관련된 질환의 치료
CN102695797B (zh) 2009-06-16 2018-05-25 库尔纳公司 通过抑制针对胶原基因的天然反义转录物来治疗胶原基因相关的疾病
CA2765889A1 (en) 2009-06-24 2010-12-29 Opko Curna, Llc Treatment of tumor necrosis factor receptor 2 (tnfr2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to tnfr2
EP2446037B1 (en) 2009-06-26 2016-04-20 CuRNA, Inc. Treatment of down syndrome gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a down syndrome gene
CA2767127A1 (en) 2009-07-01 2011-01-06 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for delivery of therapeutic agents to solid tumors
US8563528B2 (en) 2009-07-21 2013-10-22 Santaris Pharma A/S Antisense oligomers targeting PCSK9
CN102712925B (zh) 2009-07-24 2017-10-27 库尔纳公司 通过抑制sirtuin(sirt)的天然反义转录物来治疗sirtuin(sirt)相关性疾病
CN102762731B (zh) 2009-08-05 2018-06-22 库尔纳公司 通过抑制针对胰岛素基因(ins)的天然反义转录物来治疗胰岛素基因(ins)相关的疾病
EP2464731B1 (en) 2009-08-11 2016-10-05 CuRNA, Inc. Treatment of adiponectin (adipoq) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an adiponectin (adipoq)
CA2771228C (en) 2009-08-21 2020-12-29 Opko Curna, Llc Treatment of 'c terminus of hsp70-interacting protein' (chip) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to chip
US9023822B2 (en) 2009-08-25 2015-05-05 Curna, Inc. Treatment of 'IQ motif containing GTPase activating protein' (IQGAP) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to IQGAP
WO2011028938A1 (en) * 2009-09-02 2011-03-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for lowering serum cholestrol in a subject using inhibition of pcsk9
WO2011038031A1 (en) * 2009-09-22 2011-03-31 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Dual targeting sirna agents
EP2480669B1 (en) 2009-09-25 2017-11-08 CuRNA, Inc. Treatment of filaggrin (flg) related diseases by modulation of flg expression and activity
EP2488210A4 (en) 2009-10-12 2014-04-30 Smith Holdings Llc METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODULATING GENE EXPRESSION USING IN VITO OR IN VITRO-ADMINISTERED OLIGONUCLEOTIDE MEDICAMENTS
AR079336A1 (es) * 2009-12-11 2012-01-18 Irm Llc Antagonistas de la pro-proteina convertasa-subtilisina/quexina tipo 9 (pcsk9)
CN102712927B (zh) 2009-12-16 2017-12-01 库尔纳公司 通过抑制膜结合转录因子肽酶,位点1(mbtps1)的天然反义转录物来治疗mbtps1相关疾病
US20110152343A1 (en) * 2009-12-22 2011-06-23 Functional Genetics, Inc. Protease inhibitors and broad-spectrum antiviral
CN102869776B (zh) 2009-12-23 2017-06-23 库尔纳公司 通过抑制肝细胞生长因子(hgf)的天然反义转录物而治疗hgf相关疾病
CN102781480B (zh) 2009-12-23 2018-07-27 库尔纳公司 通过抑制解偶联蛋白2(ucp2)的天然反义转录物而治疗ucp2相关疾病
EP2519633B1 (en) 2009-12-29 2017-10-25 CuRNA, Inc. Treatment of nuclear respiratory factor 1 (nrf1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to nrf1
CN102770540B (zh) 2009-12-29 2017-06-23 库尔纳公司 通过抑制肿瘤蛋白63(p63)的天然反义转录物而治疗p63相关疾病
JP6083735B2 (ja) 2009-12-31 2017-02-22 カッパーアールエヌエー,インコーポレイテッド インスリン受容体基質2(irs2)および転写因子3(tfe3)に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるインスリン受容体基質2(irs2)関連疾患の治療
CN102906264B (zh) 2010-01-04 2017-08-04 库尔纳公司 通过抑制干扰素调节因子8(irf8)的天然反义转录物而治疗irf8相关疾病
CN102822342B (zh) 2010-01-06 2017-05-10 库尔纳公司 通过抑制胰腺发育基因的天然反义转录物而治疗胰腺发育基因相关疾病
JP6027893B2 (ja) 2010-01-11 2016-11-16 カッパーアールエヌエー,インコーポレイテッド 性ホルモン結合グロブリン(shbg)に対する天然アンチセンス転写物の阻害による性ホルモン結合グロブリン(shbg)関連疾患の治療
NO2529015T3 (ru) 2010-01-25 2018-04-14
US8962586B2 (en) 2010-02-22 2015-02-24 Curna, Inc. Treatment of pyrroline-5-carboxylate reductase 1 (PYCR1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to PYCR1
EP2553098B1 (en) 2010-04-02 2017-10-11 CuRNA, Inc. Treatment of colony-stimulating factor 3 (csf3) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to csf3
KR101900962B1 (ko) 2010-04-09 2018-09-20 큐알엔에이, 인크. 섬유아세포 성장 인자 21 (fgf21)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 섬유아세포 성장 인자 21 (fgf21) 관련된 질환의 치료
CA2798218A1 (en) 2010-05-03 2011-11-10 Curna, Inc. Treatment of sirtuin (sirt) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a sirtuin (sirt)
TWI531370B (zh) 2010-05-14 2016-05-01 可娜公司 藉由抑制par4天然反股轉錄本治療par4相關疾病
US8980858B2 (en) 2010-05-26 2015-03-17 Curna, Inc. Treatment of methionine sulfoxide reductase a (MSRA) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to MSRA
NO2576783T3 (ru) 2010-05-26 2018-04-28
WO2011163499A2 (en) 2010-06-23 2011-12-29 Opko Curna, Llc Treatment of sodium channel, voltage-gated, alpha subunit (scna) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to scna
ES2663598T3 (es) 2010-07-14 2018-04-16 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con el homólogo de discos grandes (dlg) mediante la inhibición del transcrito antisentido natural a dlg
KR101886457B1 (ko) 2010-10-06 2018-08-07 큐알엔에이, 인크. 시알리다아제 4 (neu4)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 neu4 관련된 질환의 치료
EP2630241B1 (en) 2010-10-22 2018-10-17 CuRNA, Inc. Treatment of alpha-l-iduronidase (idua) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to idua
JP2013545736A (ja) * 2010-10-29 2013-12-26 アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド Pcsk9遺伝子の阻害のための組成物および方法
WO2012068340A2 (en) 2010-11-18 2012-05-24 Opko Curna Llc Antagonat compositions and methods of use
KR102010598B1 (ko) 2010-11-23 2019-08-13 큐알엔에이, 인크. Nanog에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 nanog 관련된 질환의 치료
MX367075B (es) 2011-01-28 2019-08-05 Sanofi Biotechnology Anticuerpos humanos frente a pcsk9 para su uso en metodos de tratamiento de grupos concretos de pacientes.
US20150038549A1 (en) 2011-04-20 2015-02-05 Larry J. Smith Methods and Compositions for Modulating Gene Expression Using Components That Self Assemble in Cells and Produce RNAi Activity
US9593330B2 (en) 2011-06-09 2017-03-14 Curna, Inc. Treatment of frataxin (FXN) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to FXN
AR087305A1 (es) 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
WO2013036403A1 (en) 2011-09-06 2013-03-14 Curna, Inc. TREATMENT OF DISEASES RELATED TO ALPHA SUBUNITS OF SODIUM CHANNELS, VOLTAGE-GATED (SCNxA) WITH SMALL MOLECULES
EP2570135B1 (en) * 2011-09-13 2016-01-27 Affiris AG PCSK9 Vaccine
AU2013222179B2 (en) 2012-02-24 2017-08-24 Arbutus Biopharma Corporat ion Trialkyl cationic lipids and methods of use thereof
HUE040179T2 (hu) 2012-03-15 2019-02-28 Curna Inc Agyi eredetû neutrotróf faktorral (Brain-derived neurotrophic factor, BDNF) összefüggõ betegségek kezelése a BDNF-fel kapcsolatos természetes antiszensz transzkriptumok gátlása révén
US9255154B2 (en) 2012-05-08 2016-02-09 Alderbio Holdings, Llc Anti-PCSK9 antibodies and use thereof
RS56783B9 (sr) * 2012-12-05 2021-12-31 Alnylam Pharmaceuticals Inc Sastavi pcsk9 irnk i postupci njihovih primena
SG11201504523UA (en) 2012-12-12 2015-07-30 Broad Inst Inc Delivery, engineering and optimization of systems, methods and compositions for sequence manipulation and therapeutic applications
WO2014093709A1 (en) 2012-12-12 2014-06-19 The Broad Institute, Inc. Methods, models, systems, and apparatus for identifying target sequences for cas enzymes or crispr-cas systems for target sequences and conveying results thereof
WO2014182661A2 (en) 2013-05-06 2014-11-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc Dosages and methods for delivering lipid formulated nucleic acid molecules
EP2810955A1 (en) 2013-06-07 2014-12-10 Sanofi Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9
EP2862877A1 (en) 2013-10-18 2015-04-22 Sanofi Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9
KR20160024906A (ko) 2013-06-07 2016-03-07 사노피 바이오테크놀로지 Pcsk9의 억제제를 투여함에 의한 죽상경화증의 억제 방법
WO2014204727A1 (en) 2013-06-17 2014-12-24 The Broad Institute Inc. Functional genomics using crispr-cas systems, compositions methods, screens and applications thereof
EP4245853A3 (en) 2013-06-17 2023-10-18 The Broad Institute, Inc. Optimized crispr-cas double nickase systems, methods and compositions for sequence manipulation
CN106062197A (zh) 2013-06-17 2016-10-26 布罗德研究所有限公司 用于序列操纵的串联指导系统、方法和组合物的递送、工程化和优化
CA2915845A1 (en) * 2013-06-17 2014-12-24 The Broad Institute, Inc. Delivery, engineering and optimization of systems, methods and compositions for targeting and modeling diseases and disorders of post mitotic cells
CA2915842C (en) 2013-06-17 2022-11-29 The Broad Institute, Inc. Delivery and use of the crispr-cas systems, vectors and compositions for hepatic targeting and therapy
KR20160056869A (ko) 2013-06-17 2016-05-20 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 바이러스 구성성분을 사용하여 장애 및 질환을 표적화하기 위한 crispr-cas 시스템 및 조성물의 전달, 용도 및 치료 적용
DK3013959T3 (da) * 2013-06-27 2020-02-17 Roche Innovation Ct Copenhagen As Antisense-oligomerer og konjugater målrettet pcsk9
WO2015089462A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 The Broad Institute Inc. Delivery, use and therapeutic applications of the crispr-cas systems and compositions for genome editing
CA2932472A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods of use of crispr-cas systems in nucleotide repeat disorders
AU2014361784A1 (en) * 2013-12-12 2016-06-23 Massachusetts Institute Of Technology Delivery, use and therapeutic applications of the CRISPR-Cas systems and compositions for HBV and viral diseases and disorders
WO2015089364A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 The Broad Institute Inc. Crystal structure of a crispr-cas system, and uses thereof
JP6793547B2 (ja) 2013-12-12 2020-12-02 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド 最適化機能CRISPR−Cas系による配列操作のための系、方法および組成物
US8980273B1 (en) 2014-07-15 2015-03-17 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
US9051378B1 (en) 2014-07-15 2015-06-09 Kymab Limited Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US8945560B1 (en) 2014-07-15 2015-02-03 Kymab Limited Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R
US8986694B1 (en) 2014-07-15 2015-03-24 Kymab Limited Targeting human nav1.7 variants for treatment of pain
US9034332B1 (en) 2014-07-15 2015-05-19 Kymab Limited Precision medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US9045545B1 (en) 2014-07-15 2015-06-02 Kymab Limited Precision medicine by targeting PD-L1 variants for treatment of cancer
US8883157B1 (en) 2013-12-17 2014-11-11 Kymab Limited Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US8992927B1 (en) 2014-07-15 2015-03-31 Kymab Limited Targeting human NAV1.7 variants for treatment of pain
US9914769B2 (en) 2014-07-15 2018-03-13 Kymab Limited Precision medicine for cholesterol treatment
US8986691B1 (en) 2014-07-15 2015-03-24 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
US9067998B1 (en) 2014-07-15 2015-06-30 Kymab Limited Targeting PD-1 variants for treatment of cancer
US9017678B1 (en) 2014-07-15 2015-04-28 Kymab Limited Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R
US9045548B1 (en) 2014-07-15 2015-06-02 Kymab Limited Precision Medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US9023359B1 (en) 2014-07-15 2015-05-05 Kymab Limited Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
AU2014370829B2 (en) * 2013-12-27 2021-03-11 Bonac Corporation Artificial match-type miRNA for controlling gene expression and use therefor
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
US9139648B1 (en) 2014-07-15 2015-09-22 Kymab Limited Precision medicine by targeting human NAV1.9 variants for treatment of pain
US9150660B1 (en) 2014-07-15 2015-10-06 Kymab Limited Precision Medicine by targeting human NAV1.8 variants for treatment of pain
AU2015289613B2 (en) 2014-07-16 2021-07-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating patients with heterozygous familial hypercholesterolemia (heFH)
JOP20200115A1 (ar) * 2014-10-10 2017-06-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc تركيبات وطرق لتثبيط التعبير الجيني عن hao1 (حمض أوكسيداز هيدروكسيلي 1 (أوكسيداز جليكولات))
WO2016094867A1 (en) 2014-12-12 2016-06-16 The Broad Institute Inc. Protected guide rnas (pgrnas)
US10264976B2 (en) * 2014-12-26 2019-04-23 The University Of Akron Biocompatible flavonoid compounds for organelle and cell imaging
US11045488B2 (en) 2014-12-26 2021-06-29 Nitto Denko Corporation RNA interference agents for GST-π gene modulation
PT3236974T (pt) * 2014-12-26 2020-06-01 Nitto Denko Corp Agentes de interferência de rna para modulação génica de gst-pi
US10792299B2 (en) 2014-12-26 2020-10-06 Nitto Denko Corporation Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation
US20180002702A1 (en) 2014-12-26 2018-01-04 Nitto Denko Corporation Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation
CN109536474A (zh) 2015-06-18 2019-03-29 布罗德研究所有限公司 降低脱靶效应的crispr酶突变
WO2016205759A1 (en) 2015-06-18 2016-12-22 The Broad Institute Inc. Engineering and optimization of systems, methods, enzymes and guide scaffolds of cas9 orthologs and variants for sequence manipulation
CN107922507B (zh) 2015-08-18 2022-04-05 瑞泽恩制药公司 抗pcsk9抑制性抗体用来治疗接受脂蛋白单采的高脂血症患者
CN108366966A (zh) 2015-08-24 2018-08-03 光环生物干扰疗法公司 用于调节基因表达的多核苷酸纳米颗粒及其用途
IL257486B (en) 2015-08-25 2022-07-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc Methods and preparations for treating disorders related to the pcsk9 gene
CA3002744A1 (en) 2015-10-19 2017-04-27 Rxi Pharmaceuticals Corporation Reduced size self-delivering nucleic acid compounds targeting long non-coding rna
SI3529360T1 (sl) * 2016-10-18 2024-08-30 Novartis Ag Metode za preprečevanje kardiovaskularnih dogodkov z zmanjšanjem proteinske konvertaze substilizin kexin 9 (PCSK9)
EP3534947A1 (en) 2016-11-03 2019-09-11 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods
JOP20190112A1 (ar) 2016-11-14 2019-05-14 Amgen Inc علاجات مدمجة لتصلب الشرايين، شاملة مرض قلبي وعائي تصلبي
AU2017368050A1 (en) 2016-11-29 2019-06-20 Puretech Lyt, Inc. Exosomes for delivery of therapeutic agents
CN108265052B (zh) * 2016-12-30 2021-05-28 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种小干扰核酸和药物组合物及其用途
JP2019508379A (ja) * 2017-02-16 2019-03-28 日東電工株式会社 悪性腫瘍に対する治療方法及び治療用組成物
JOP20190215A1 (ar) * 2017-03-24 2019-09-19 Ionis Pharmaceuticals Inc مُعدّلات التعبير الوراثي عن pcsk9
JP2021504415A (ja) 2017-12-01 2021-02-15 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッドSuzhou Ribo Life Science Co., Ltd. 二本鎖オリゴヌクレオチド、二本鎖オリゴヌクレオチドを含む組成物および複合体ならびに調製方法と使用
CN110944675B9 (zh) 2017-12-01 2024-08-09 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
CN110997917B (zh) 2017-12-01 2024-04-09 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
AU2018377716A1 (en) 2017-12-01 2020-04-09 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd Nucleic acid, composition and conjugate containing same, and preparation method and use
EP3677679A4 (en) * 2017-12-26 2020-12-02 Guangzhou Ribobio Co., Ltd. ARNSI MOLECULE INHIBITING PCSK9 GENE EXPRESSION AND ITS APPLICATION
CN109957565B (zh) * 2017-12-26 2023-04-07 广州市锐博生物科技有限公司 一种修饰的siRNA分子及其应用
CN109957567B (zh) * 2017-12-26 2022-09-23 阿格纳生物制药有限公司 一种抑制PCSK9基因表达的siRNA分子及其应用
CA3087106A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Conjugates and preparation and use thereof
JP7357002B2 (ja) * 2018-04-18 2023-10-05 ディセルナ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 高コレステロール血症及び関連状態を治療するための、pcsk9を標的とするオリゴヌクレオチド
JP2021533800A (ja) 2018-08-21 2021-12-09 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッドSuzhou Ribo Life Science Co., Ltd. 核酸、当該核酸を含む薬物組成物及び複合体ならびにその使用
EP3862024A4 (en) 2018-09-30 2022-08-17 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. SHORT INTERFERENT RNA CONJUGATE, METHOD FOR PREPARATION AND USE THEREOF
CN111378656B (zh) * 2018-12-28 2022-07-26 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种抑制埃博拉病毒的核酸、含有该核酸的药物组合物及其用途
CN115066498A (zh) * 2020-03-16 2022-09-16 阿尔戈诺特Rna有限公司 Pcsk9的拮抗剂
WO2022089486A1 (zh) * 2020-10-28 2022-05-05 江苏柯菲平医药股份有限公司 抑制PCSK9基因表达的siRNA及其修饰物与应用
WO2023017004A1 (en) * 2021-08-09 2023-02-16 Cargene Therapeutics Pte. Ltd. Inhibitory nucleic acids for pcsk9
CN113980966B (zh) * 2021-09-29 2024-09-20 阿格纳生物制药有限公司 一种抑制pcsk9靶基因表达的核酸序列及其应用
CN117384907B (zh) * 2023-12-11 2024-03-29 上海鼎新基因科技有限公司 抑制PCSK9表达的siRNA分子及其应用

Family Cites Families (133)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
EP0228458B2 (en) 1985-07-05 1997-10-22 Whitehead Institute For Biomedical Research Epithelial cells expressing foreign genetic material
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
US5139941A (en) 1985-10-31 1992-08-18 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV transduction vectors
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
DE3852823T2 (de) 1987-09-11 1995-05-24 Hughes Howard Med Inst Transduktionsveränderte fibroblasten und ihre anwendung.
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
WO1989005345A1 (en) 1987-12-11 1989-06-15 Whitehead Institute For Biomedical Research Genetic modification of endothelial cells
DE68927996T2 (de) 1988-02-05 1997-12-04 Hughes Howard Med Inst Modifizierte hepatozyten und deren anwendung
EP0406309A4 (en) 1988-03-25 1992-08-19 The University Of Virginia Alumni Patents Foundation Oligonucleotide n-alkylphosphoramidates
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5328470A (en) 1989-03-31 1994-07-12 The Regents Of The University Of Michigan Treatment of diseases by site-specific instillation of cells or site-specific transformation of cells and kits therefor
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
US5264562A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
US5223168A (en) 1989-12-12 1993-06-29 Gary Holt Surface cleaner and treatment
US5506351A (en) 1992-07-23 1996-04-09 Isis Pharmaceuticals Process for the preparation of 2'-O-alkyl guanosine and related compounds
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5578718A (en) 1990-01-11 1996-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Thiol-derivatized nucleosides
US5212295A (en) 1990-01-11 1993-05-18 Isis Pharmaceuticals Monomers for preparation of oligonucleotides having chiral phosphorus linkages
US5457191A (en) 1990-01-11 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5218105A (en) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5378825A (en) 1990-07-27 1995-01-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5138045A (en) 1990-07-27 1992-08-11 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5386023A (en) 1990-07-27 1995-01-31 Isis Pharmaceuticals Backbone modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through reductive coupling
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
PT98562B (pt) 1990-08-03 1999-01-29 Sanofi Sa Processo para a preparacao de composicoes que compreendem sequencias de nucleo-sidos com cerca de 6 a cerca de 200 bases resistentes a nucleases
US6262241B1 (en) 1990-08-13 2001-07-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compound for detecting and modulating RNA activity and gene expression
US5177196A (en) 1990-08-16 1993-01-05 Microprobe Corporation Oligo (α-arabinofuranosyl nucleotides) and α-arabinofuranosyl precursors thereof
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
EP0549686A4 (en) 1990-09-20 1995-01-18 Gilead Sciences Inc Modified internucleoside linkages
DK0556345T3 (da) 1990-10-31 1997-06-16 Whitehead Biomedical Inst Retrovirale vektorer,som er egnede til genterapi
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
EP0621944B1 (en) 1991-07-25 1997-03-05 The Whitaker Corporation Liquid level sensor
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
US5599797A (en) 1991-10-15 1997-02-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
EP1331011A3 (en) 1991-10-24 2003-12-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Derivatized oligonucleotides having improved uptake and other properties
US5252479A (en) 1991-11-08 1993-10-12 Research Corporation Technologies, Inc. Safe vector for gene therapy
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
US5587308A (en) 1992-06-02 1996-12-24 The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services Modified adeno-associated virus vector capable of expression from a novel promoter
US5478745A (en) 1992-12-04 1995-12-26 University Of Pittsburgh Recombinant viral vector system
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
CA2159629A1 (en) 1993-03-31 1994-10-13 Sanofi Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages
US5571902A (en) 1993-07-29 1996-11-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of oligonucleotides
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
US6054299A (en) 1994-04-29 2000-04-25 Conrad; Charles A. Stem-loop cloning vector and method
US5554746A (en) 1994-05-16 1996-09-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Lactam nucleic acids
EP0832271B8 (en) 1995-06-07 2005-03-02 INEX Pharmaceuticals Corp. Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US6506559B1 (en) 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
PT1068311E (pt) 1998-04-08 2011-07-20 Commw Scient Ind Res Org Processos e meios de obter fenótipos modificados
AR020078A1 (es) 1998-05-26 2002-04-10 Syngenta Participations Ag Metodo para alterar la expresion de un gen objetivo en una celula de planta
AU6430599A (en) 1998-10-09 2000-05-01 Cytogenix, Inc. Enzymatic synthesis of ssdna
AU6298899A (en) 1998-10-09 2000-05-01 Ingene, Inc. Production of ssdna (in vivo)
DE19956568A1 (de) 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens
US6271359B1 (en) 1999-04-14 2001-08-07 Musc Foundation For Research Development Tissue-specific and pathogen-specific toxic agents and ribozymes
DE10100586C1 (de) 2001-01-09 2002-04-11 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens
US20030229037A1 (en) * 2000-02-07 2003-12-11 Ulrich Massing Novel cationic amphiphiles
US20070026394A1 (en) * 2000-02-11 2007-02-01 Lawrence Blatt Modulation of gene expression associated with inflammation proliferation and neurite outgrowth using nucleic acid based technologies
WO2003070918A2 (en) 2002-02-20 2003-08-28 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated Rna interference by modified short interfering nucleic acid
CZ308053B6 (cs) * 2000-12-01 2019-11-27 Max Planck Gesellschaft Izolovaná molekula dvouřetězcové RNA, způsob její výroby a její použití
US20080249040A1 (en) * 2001-05-18 2008-10-09 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of sterol regulatory element binding protein 1 (SREBP1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20070173473A1 (en) * 2001-05-18 2007-07-26 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of proprotein convertase subtilisin Kexin 9 (PCSK9) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20030170891A1 (en) * 2001-06-06 2003-09-11 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of epidermal growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20040009216A1 (en) * 2002-04-05 2004-01-15 Rodrigueza Wendi V. Compositions and methods for dosing liposomes of certain sizes to treat or prevent disease
US7956176B2 (en) * 2002-09-05 2011-06-07 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
DK2284266T3 (da) * 2002-11-14 2014-01-13 Thermo Fisher Scient Biosciences Inc sIRNA-MOLEKYLE MOD TP53
DE10302421A1 (de) 2003-01-21 2004-07-29 Ribopharma Ag Doppelsträngige Ribonukleinsäure mit verbesserter Wirksamkeit
EP3450559A1 (en) 2003-03-07 2019-03-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic compositions
WO2004090108A2 (en) 2003-04-03 2004-10-21 Alnylam Pharmaceuticals Irna conjugates
EP1471152A1 (en) * 2003-04-25 2004-10-27 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Mutations in the human PCSK9 gene associated to hypercholesterolemia
WO2005014782A2 (en) * 2003-06-13 2005-02-17 Alnylam Europe Ag., Double-stranded ribonucleic acid with increased effectiveness in an organism
EP2567693B1 (en) 2003-07-16 2015-10-21 Protiva Biotherapeutics Inc. Lipid encapsulated interfering RNA
EP1682661A2 (en) * 2003-10-23 2006-07-26 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (sina)
US20080253960A1 (en) * 2004-04-01 2008-10-16 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Center For Technology Transfer Lipoprotein-Based Nanoplatforms
WO2005121348A1 (en) * 2004-06-07 2005-12-22 Protiva Biotherapeutics, Inc. Lipid encapsulated interfering rna
EP1781593B1 (en) 2004-06-07 2011-12-14 Protiva Biotherapeutics Inc. Cationic lipids and methods of use
WO2007086881A2 (en) * 2005-02-14 2007-08-02 Sirna Therapeutics, Inc. Cationic lipids and formulated molecular compositions containing them
TWI335352B (en) * 2005-03-31 2011-01-01 Calando Pharmaceuticals Inc Inhibitors of ribonucleotide reductase subunit 2 and uses thereof
US7915230B2 (en) 2005-05-17 2011-03-29 Molecular Transfer, Inc. Reagents for transfection of eukaryotic cells
WO2007012191A1 (en) 2005-07-27 2007-02-01 Protiva Biotherapeutics, Inc. Systems and methods for manufacturing liposomes
JP5336853B2 (ja) 2005-11-02 2013-11-06 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド 修飾siRNA分子およびその使用法
US20070218122A1 (en) 2005-11-18 2007-09-20 Protiva Biotherapeutics, Inc. siRNA silencing of influenza virus gene expression
NZ571568A (en) * 2006-03-31 2010-11-26 Alnylam Pharmaceuticals Inc Double-stranded RNA molecule compositions and methods for inhibiting expression of Eg5 gene
JP5570806B2 (ja) * 2006-05-11 2014-08-13 アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド Pcsk9遺伝子の発現を阻害するための組成物および方法
US8598333B2 (en) * 2006-05-26 2013-12-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. SiRNA silencing of genes expressed in cancer
CA2658183A1 (en) * 2006-07-17 2008-01-24 Sirna Therapeutics Inc. Rna interference mediated inhibition of proprotein convertase subtilisin kexin 9 (pcsk9) gene expression using short interfering nucleic acid (sina)
AU2007303205A1 (en) 2006-10-03 2008-04-10 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Lipid containing formulations
US8084437B2 (en) 2006-11-27 2011-12-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
WO2008109369A2 (en) 2007-03-02 2008-09-12 Mdrna, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting tnf gene expression and uses thereof
JOP20080381B1 (ar) * 2007-08-23 2023-03-28 Amgen Inc بروتينات مرتبطة بمولدات مضادات تتفاعل مع بروبروتين كونفيرتاز سيتيليزين ككسين من النوع 9 (pcsk9)
CA2710713C (en) * 2007-12-27 2017-09-19 Protiva Biotherapeutics, Inc. Silencing of polo-like kinase expression using interfering rna
CA2709875C (en) 2008-01-02 2019-07-16 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Improved compositions and methods for the delivery of nucleic acids
EP2245039A4 (en) 2008-01-31 2012-06-06 Alnylam Pharmaceuticals Inc OPTIMIZED METHODS FOR EXPORING DSRNA TO TARGET THE PCSK9 GEN
NZ588280A (en) 2008-03-05 2012-11-30 Alnylam Pharmaceuticals Inc Compositions and methods for inhibiting expression of eg5 and vegf genes
WO2009114475A2 (en) 2008-03-09 2009-09-17 Intradigm Corporation Compositions comprising human pcsk9 and apolipoprotein b sirna and methods of use
PT2279254T (pt) * 2008-04-15 2017-09-04 Protiva Biotherapeutics Inc Novas formulações lipídicas para entrega de ácido nucleico
EA029762B1 (ru) * 2008-10-20 2018-05-31 Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. Композиции и способы для ингибирования экспрессии транстиретина
NO2355851T3 (ru) 2008-11-10 2018-09-01
CA2746514C (en) 2008-12-10 2018-11-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Gnaq targeted dsrna compositions and methods for inhibiting expression
US8311190B2 (en) * 2008-12-23 2012-11-13 International Business Machines Corporation Performing human client verification over a voice interface
EP3243504A1 (en) 2009-01-29 2017-11-15 Arbutus Biopharma Corporation Improved lipid formulation
WO2010129709A1 (en) 2009-05-05 2010-11-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid compositions
KR20230098713A (ko) 2009-06-10 2023-07-04 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 향상된 지질 조성물
CA2764832A1 (en) 2009-06-15 2010-12-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated dsrna targeting the pcsk9 gene
US9051567B2 (en) 2009-06-15 2015-06-09 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Methods for increasing efficacy of lipid formulated siRNA
US8563528B2 (en) 2009-07-21 2013-10-22 Santaris Pharma A/S Antisense oligomers targeting PCSK9

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DOWNWARD, J. Science, medicine, and the future RNA interference, BMJ, 2004, vol. 328, pages 1245-1248. *
GRAHAM et al. Antisense inhibition of proportein convertase subtilisin/kexin type 9 reduces serum LDL in hyperlipidemic mice. Journal of Lipid Research, 2007, vol. 48, pages 763-767. GENBANK ACCESSION NO: NM_174936. Homo sapiens proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9), mRNA. Sept, 2007, see nucleotide sequence. BASAK, A. Inhibitors of proprotein convertases. Journal of Molecular Medicine, 2005, vol. 83, pages 844, 855, see particularly Table 1 and Table 2. ELBASHIR et al. Functional anatomy of siRNAs for mediating efficient RNAi in Drosophila melanogaster embryo lysate. The Embo Journal, 2001, vol. 20, pages 6877-6888, see entire article for siRNA design. *
LU et al. (2005) in RNA Interference Technology (Cambridge, Appasani, ed.). Delivering siRNA in vivo for functional genomics and novel therapeutics, pages 303-317. SAMARSKY et al. (2005) in RNA Interference Technology (Cambridge, Appasani, ed.). RNAi in drug development: Practical considerations, pages 384-395. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN103614375A (zh) 2014-03-05
AU2010241357B2 (en) 2012-09-13
WO2007134161A3 (en) 2008-02-21
CA2651839C (en) 2016-02-09
US20110230542A1 (en) 2011-09-22
AU2007249329A1 (en) 2007-11-22
EP2021507A4 (en) 2009-10-28
US20160348117A1 (en) 2016-12-01
JP5570806B2 (ja) 2014-08-13
EP3249052A1 (en) 2017-11-29
IL195181A (en) 2013-02-28
PL3578656T3 (pl) 2021-08-02
EP3249052B1 (en) 2019-04-10
KR101036126B1 (ko) 2011-05-23
EP2584047A1 (en) 2013-04-24
ES2392478T3 (es) 2012-12-11
US9260718B2 (en) 2016-02-16
CA2915441A1 (en) 2007-11-22
EP2835429B1 (en) 2017-12-13
WO2007134161A8 (en) 2009-05-07
KR20090016021A (ko) 2009-02-12
CA2651839A1 (en) 2007-11-22
AU2010241357A1 (en) 2010-12-02
JP2009536827A (ja) 2009-10-22
EA201100907A1 (ru) 2012-03-30
JP2014079258A (ja) 2014-05-08
US20130331430A1 (en) 2013-12-12
EP2835429A1 (en) 2015-02-11
IL220102A (en) 2017-03-30
AU2007249329B2 (en) 2010-10-14
CN101484588B (zh) 2013-11-06
EP2584048B1 (en) 2014-07-23
EP2584048A1 (en) 2013-04-24
US7605251B2 (en) 2009-10-20
PL2194128T3 (pl) 2012-12-31
EA200870528A1 (ru) 2009-06-30
US8222222B2 (en) 2012-07-17
AU2007249329C1 (en) 2011-03-24
US20080113930A1 (en) 2008-05-15
US20200318119A1 (en) 2020-10-08
US20240093199A1 (en) 2024-03-21
EP2194128A1 (en) 2010-06-09
WO2007134161A2 (en) 2007-11-22
KR20100085186A (ko) 2010-07-28
US9822365B2 (en) 2017-11-21
EP2584047B1 (en) 2014-11-19
JP2016027830A (ja) 2016-02-25
IL195181A0 (en) 2009-08-03
US8809292B2 (en) 2014-08-19
JP6034316B2 (ja) 2016-11-30
IL220102A0 (en) 2012-07-31
ES2874149T3 (es) 2021-11-04
US20180216115A1 (en) 2018-08-02
US20140350075A1 (en) 2014-11-27
IL250678A0 (en) 2017-04-30
NZ587616A (en) 2012-03-30
EP3872179A1 (en) 2021-09-01
EP3578656B1 (en) 2021-01-06
EP2021507A2 (en) 2009-02-11
SG171676A1 (en) 2011-06-29
JP2010246544A (ja) 2010-11-04
CN101484588A (zh) 2009-07-15
US20210403917A1 (en) 2021-12-30
US10501742B2 (en) 2019-12-10
EP3578656A1 (en) 2019-12-11
KR101320916B1 (ko) 2013-10-23
EA020840B1 (ru) 2015-02-27
HK1183910A1 (en) 2014-01-10
NZ572666A (en) 2010-11-26
EP2194128B1 (en) 2012-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA015676B1 (ru) Композиции и способы ингибирования экспрессии гена pcsk9
JP5704741B2 (ja) Eg5遺伝子発現の抑制のための組成物および方法
JP5836325B2 (ja) ウイルス感染を処置するためのdsRNA
CN101489566B (zh) Aha基因的RNAi调控及其治疗性应用
EA029762B1 (ru) Композиции и способы для ингибирования экспрессии транстиретина
JP5431940B2 (ja) SCAPのRNAi調節およびその治療的使用
CN107201364A (zh) 用于抑制载脂蛋白c‑iii(apoc3)基因表达的组合物与方法
KR20180002688A (ko) 인자 XII(하게만 인자)(F12), 칼리크레인 B, 혈장(플레처 인자) 1(KLKB1) 및 키니노겐 1(KNG1) iRNA 조성물 및 그의 이용 방법
CN104854242A (zh) PCSK9 iRNA组合物及其使用方法
CN107287202A (zh) 血管生成素样3(ANGPTL3)iRNA组合物及其使用方法
JP2012508569A (ja) 第vii因子遺伝子の発現を阻害するための組成物および方法
AU2011200894A1 (en) Compositions and methods for inhibiting expression of Factor V Leiden mutant gene
AU2012202689A1 (en) dsRNA for treating viral infection

Legal Events

Date Code Title Description
TK4A Corrections in published eurasian patents
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU