EA015509B1 - Микробное масло, способ его получения и пищевой или кормовой продукт, содержащий его - Google Patents

Микробное масло, способ его получения и пищевой или кормовой продукт, содержащий его Download PDF

Info

Publication number
EA015509B1
EA015509B1 EA200500046A EA200500046A EA015509B1 EA 015509 B1 EA015509 B1 EA 015509B1 EA 200500046 A EA200500046 A EA 200500046A EA 200500046 A EA200500046 A EA 200500046A EA 015509 B1 EA015509 B1 EA 015509B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
oil
temperature
stage
cells
pasteurization
Prior art date
Application number
EA200500046A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200500046A1 (ru
Inventor
Альберт Схап
Данил Веркулин
Original Assignee
ДСМ АйПи ЭССЕТС Б.В.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=30001870&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA015509(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by ДСМ АйПи ЭССЕТС Б.В. filed Critical ДСМ АйПи ЭССЕТС Б.В.
Publication of EA200500046A1 publication Critical patent/EA200500046A1/ru
Publication of EA015509B1 publication Critical patent/EA015509B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23D—EDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS, COOKING OILS
    • A23D9/00—Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23D—EDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS, COOKING OILS
    • A23D9/00—Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils
    • A23D9/007—Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils characterised by ingredients other than fatty acid triglycerides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23D—EDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS, COOKING OILS
    • A23D9/00—Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils
    • A23D9/02—Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils characterised by the production or working-up
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/158—Fatty acids; Fats; Products containing oils or fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L31/00—Edible extracts or preparations of fungi; Preparation or treatment thereof
    • A23L31/10—Yeasts or derivatives thereof
    • A23L31/15—Extracts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
    • A23L33/12—Fatty acids or derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/67—Vitamins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/92—Oils, fats or waxes; Derivatives thereof, e.g. hydrogenation products thereof
    • A61K8/925—Oils, fats or waxes; Derivatives thereof, e.g. hydrogenation products thereof of animal origin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9706—Algae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9728—Fungi, e.g. yeasts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
    • A61L2/02—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor using physical phenomena
    • A61L2/04—Heat
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C57/00—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C57/02—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms with only carbon-to-carbon double bonds as unsaturation
    • C07C57/03—Monocarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B1/00—Production of fats or fatty oils from raw materials
    • C11B1/10—Production of fats or fatty oils from raw materials by extracting
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/005—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor after treatment of microbial biomass not covered by C12N1/02 - C12N1/08
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6432—Eicosapentaenoic acids [EPA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6434—Docosahexenoic acids [DHA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6463—Glycerides obtained from glyceride producing microorganisms, e.g. single cell oil
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Раскрывается усовершенствованный способ пастеризации микробных клеток. Способ включает три стадии, первую стадию нагревания, вторую стадию плато, на которой клетки выдерживают при максимальной и постоянной температуре, и третью стадию охлаждения. Скорость нагревания составляет по меньшей мере 0,5°C/мин, а скорость охлаждения по меньшей мере -0,5°C/мин. Максимальная температура на стадии плато составляет от 70 до 85°C. При представлении протокола пастеризации в виде графика зависимости времени (t, мин) от температуры (T, °C) получают трапецию, имеющую площадь менее 13000°C∙мин. Указанный способ приводит к получению менее окисленного масла, имеющего значение перекисного числа (POV) менее 1,5 и значение анизидинового числа (AnV) менее 1,0.

Description

Область изобретения
Настоящее изобретение относится к способу пастеризации микробных клеток, который включает нагревание клеток при температуре в пределах от 40 до 70°С, не более чем в течение 30 мин. Скорость нагревания во время проведения способа пастеризации может составлять по меньшей мере 0,5°С/мин. Способ пастеризации может включать три стадии, а именно стадию нагревания, стадию плато (где клетки выдерживают при постоянной температуре) и стадию охлаждения. Если представить протокол пастеризации графически, то площадь под кривой зависимости времени (в минутах) от температуры (°С) составляет меньше 13000°С-мин. После пастеризации можно экстрагировать полиненасыщенную жирную кислоту (ΡϋΕΆ), такую как арахидоновая кислота, или масло из микробных клеток. Масло может иметь низкое значение перекисного числа (РОУ) и/или низкое значение анизидинового числа (ЛиУ).
Введение
Полиненасыщенные жирные кислоты, или ΡϋΕΆ, распространены в природе, и самые разнообразные ΡϋΕΆ продуцируются различными одноклеточными микроорганизмами (водорослями, грибами и т.д.). Одной особенно важной РИГА является арахидоновая кислота (АКА), которая представляет одну из ряда полиненасыщенных кислот с длинной цепью (ЕС-РИГА). В химическом отношении арахидоновая кислота представляет собой цис-5,8,11,14-эйкозатетраеновую кислоту (20:4) и относится к семейству (п6) ЬС-РИГА.
Арахидоновая кислота является одним из основных предшественников самых разнообразных биологически активных веществ, известных под общим названием эйкозаноиды, группы, включающей простагландины, тромбоксаны и лейкотриены. Также арахидоновая кислота является одним из компонентов липидной фракции женского молока, и полагают, что она является необходимой для оптимального развития нервной системы младенцев. Арахидоновая кислота имеет широкий ряд различных применений, включая применение в детских молочных смесях, продуктах питания и кормах для животных.
Заявка АО-А-97/37032 (СМ-Вгосабе5) относится к получению РИГА-содержащего масла из пастеризованной биомассы микробных клеток. Однако не раскрывается быстрое нагревание до, или охлаждение от, температуры, при которой проводят пастеризацию. Кроме того, не придается значения общему количеству энергии, используемой во время проведения способа пастеризации.
Обе заявки АО-А-00/15045 и АО-А-01/67886 относятся к применению грибов Мисога1е§ при получении продуктов питания. Первый из данных документов относится к необходимости снижения содержания РНК перед включением клеток в продукты питания, и предлагается использовать стадию нагревания. Можно провести одну пастеризацию или тепловой шок. Во втором документе предлагается исключить проведение стадии нагревания в целях снижения содержания РНК и заменить на выдерживание клеток грибов в ферментере и созревание.
Международная заявка на патент № РСТ/ЕР01/08 902 относится к способу получения масляных смесей объединением неочищенного ω6 и неочищенного ω3, содержащего РИГА масла, с получением масляной смеси и затем очисткой неочищенной смеси масел.
Известны способы, включающие нагревание биомассы или микробных клеток. Также известно из заявки № АО-А-97/37032, что микробные клетки можно пастеризовать перед экстракцией из них РИГА в виде масла. Однако авторы настоящего изобретения установили, что с помощью нового способа пастеризации можно улучшить качество масла, которое экстрагируют из пастеризованных клеток. В частности, полученное масло в меньшей степени окисляет или окисляется и имеет низкие значения перекисного числа (РОУ) и/или анизидинового числа (АпУ). Кроме того, заявители установили, что данный новый способ пастеризации является более эффективным, поскольку для его проведения требуется меньше энергии. Следовательно, способ является преимущественным, поскольку с его помощью можно не только улучшить качество масла, но и снизить его стоимость, поскольку требуются меньшие затраты энергии.
Краткое описание фигур
Фиг. 1 представляет график зависимости температуры (°С) от времени (мин) для трех протоколов проведения пастеризации (А и С по изобретению, В представлен для сравнения).
Фиг. 2 - график зависимости температуры (°С) от времени (мин) для пастеризации при трех различных температурных плато (40, 70 и 85°С).
Фиг. 2 и 4 - графики зависимости значения АпУ (и РОУ для фиг. 3) от времени (час).
Фиг. 5 - график зависимости РОУ (мэкв/кг) и АпУ от температуры (°С) для пастеризации при двух значениях времени (выдерживания/плато) (8 и 300 с).
Фиг. 6 и 7 - графики зависимости температуры (°С) от времени (мин) при двух значениях времени (выдерживания/плато) (8 с - для фиг. 6, 5 мин - для фиг. 7) при пяти различных значениях температуры (60, 80, 100, 120 и 140°С).
Описание изобретения
Следовательно, настоящее изобретение обеспечивает усовершенствованный способ пастеризации микробных клеток. Помимо меньших затрат энергии способ пастеризации по изобретению позволяет получать продукт лучшего качества.
- 1 015509
Таким образом, первый аспект настоящего изобретения относится к способу пастеризации микробных клеток, где способ включает нагревание клеток при температуре (включающей) в пределах от 40 до (60 или) 70°С в течение не более 30 мин или нагревание клеток со скоростью по меньшей мере 0,5°С/мин. Следовательно, данный аспект обеспечивает быстрое нагревание микробных клеток во время пастеризации, и подобная высокая скорость нагревания ранее не была раскрыта в данной области. Несмотря на то, что в данной области представлены значения температуры пастеризации, не оценивается или не обсуждается скорость нагревания или тот факт, что данный параметр является важным, и относительно высокая скорость пастеризации может обеспечить преимущества. Фактически высокие значения скорости нагревания являются противоинтуитивными, поскольку можно ожидать, что они приводят к окислению или разрушению иным путем РИУЛ или масла, которое можно экстрагировать из клеток.
Второй аспект настоящего изобретения относится к способу пастеризации микробных клеток, где способ включает протокол пастеризации, включающий (по меньшей мере) три стадии. Они представляют собой: (первую) стадию нагревания, (вторую) стадию плато (при которой микробные клетки выдерживают при желаемой температуре, или где клетки выдерживают при постоянной и/или максимальной температуре) и (третью) стадию охлаждения. Данный аспект изобретения относится к протоколу трехстадийной пастеризации. Если данный протокол представить в виде графика зависимости времени от температуры, то получится трапеция.
Третий аспект изобретения относится к способу пастеризации микробных клеток, где способ включает применение такого протокола пастеризации, что площадь под кривой зависимости времени (мин) от температуры (°С) составляет менее 13000°С-мин. На графике зависимости времени от температуры площадь представляет количество энергии, затрачиваемой на нагревание клеток во время проведения способа пастеризации. Было установлено, что быстрое нагревание и/или быстрое охлаждение (которые соответствуют первой и третьей стадиям второго аспекта, соответственно) могут обеспечить преимущества такие, как лучшее качество масла. Кроме того, количество энергии, необходимой для проведения способа пастеризации, можно снизить по сравнению со способами пастеризации, описанными в данной области. Следовательно, данный третий аспект относится к затрате энергии, необходимой для проведения способа пастеризации.
Четвертый аспект изобретения относится к способу пастеризации микробных клеток, где способ включает (нагревание клеток и далее) выдерживание клеток при повышенной температуре (Т, °С) в течение времени (1, мин), например, на стадии плато, где значение произведения 1Т (т.е. умножение параметров времени и температуры, например, во время стадии плато) находится в пределах от 140 до 100800°С-мин. Как очевидно, понятно, что данный четвертый аспект аналогичен второму аспекту в том отношении, что он включает стадию плато. В данном случае клетки можно выдерживать при постоянной или максимальной температуре. Следовательно, произведение 1Т может представлять собой площадь под кривой зависимости времени от температуры для данной стадии плато.
Первый аспект - быстрое нагревание
В данном аспекте клетки нагревают таким образом, что температура клеток изменяется от 40 до 70°С (или 60°С) в течение не более 30 мин (например, не более 15 мин). Предпочтительно время, необходимое для нагревания от 40 до 70°С, занимает не более 40-50 мин. Альтернативно или дополнительно клетки нагревают со скоростью по меньшей мере 0,5°С/мин. Конечно, микробные клетки могут стартовать (или начать нагреваться) при температуре ниже 40°С. Например, клетки могут находиться при комнатной или окружающей температуре. Клетки могут находиться при температуре ферментации такой, как 30±5°С. Таким образом, клетки могут находиться при температуре в пределах от 20 до 40°С, такой как 23-27°С (или от 25-29°С до 32-37°С), когда начинается нагревание (пастеризация). В некоторых случаях микробные клетки можно охладить, например, после окончания ферментации. Таким образом, клетки могут иметь (на старте) температуру в пределах от 5 до 10°С, например от 7 до 9°С, когда начинается нагревание.
Микробные клетки можно нагревать таким образом, чтобы их температура была выше (60°С или) 70°С. Таким образом, это значение может быть не конечной температурой микробных клеток во время пастеризации. Фактически клетки можно нагревать до температуры выше (60°С или) 70°С. Температура может повышаться до значения в пределах от 70 до 90°С, 110 или 130°С, например от 75 до 87°С и оптимально от 78 до 84°С. Следовательно, максимальная температура во время пастеризации может находиться в данных пределах, но для некоторых воплощений может достигать 100, 120 или 140°С. Предпочтительно клетки поддерживаются или выдерживаются при данной (максимальной) температуре.
Следовательно, очевидно понятно, что клетки можно нагревать при температуре ниже или начиная от 40 до температуры 70°С или выше. Пределы от 40 до 70°С могут обеспечить выстрел в более широком пределе значений температуры нагревания, для которого можно (и, следовательно, рассчитать) определить период времени (и, следовательно, скорость).
Можно рассчитать, что нагревание (от 40 до 70°С в течение 30 мин) соответствует скорости 1°С/мин. Однако скорость может быть несколько ниже, чем это требуется, и в первом аспекте быстрое
- 2 015509 нагревание означает, что скорость нагревания является выше 0,5°С/мин. Предпочтительно скорость составляет по меньшей мере 0,6, 1,0 или даже 1,5°С/мин. Однако предусматриваются особенно высокие значения скорости нагревания в зависимости от оборудования и объема, или массы микробных клеток, которые подвергаются нагреванию. Так, значения скорости нагревания выше 2,0 или даже 2,5°С/мин также находятся в объеме изобретения.
Особенно высокие значения скорости нагревания можно получить с использованием специального оборудования. Оно позволяет достичь высокой температуры в короткий период времени и таким образом свести до минимума любое окисление или разрушение РИТА, или масла из микробных клеток, которые затем можно выделить. Так, может иметь место нагревание до максимальной температуры, равной 140, 150 или даже 160°С. Предпочтительно нагревание проводят до температуры от 100 до 180°С, например от 120 до 160°С, предпочтительно от 130 до 150°С. При использовании быстрых нагревателей данные значения температуры можно обеспечить особенно быстро, например в течение менее одной минуты (30 с). Подобных значений температуры можно достичь в течение 20, 30, 40 и 50 с или обеспечить в течение 150, 175, 200, 225 или 250 с. Однако данных значений температуры можно достичь так очень быстро, например, в течение 2, 4, 6, 8 или 10 с, например, при использовании инфузионного нагревателя или при использовании относительно небольших проб. Таким образом, можно достичь значений скорости нагревания до 50, 100, 150 и даже 200°С в минуту. Также возможны несколько меньшие значения скорости нагревания от 5-10°С до 50-60°С в минуту, например от 15 до 45°С/мин.
Было установлено, что подобное быстрое нагревание во время быстрой пастеризации является не только более эффективным и требующим меньших затрат энергии, но оказалось, что оно является по меньшей мере одним фактором, ответственным за получение масла из микробных клеток лучшего качества (при экстракции из клеток после пастеризации).
Второй аспект - протокол трехстадийной пастеризации
Первой стадией может быть стадия нагревания. Она фактически соответствует быстрому нагреванию, описанному в первом аспекте изобретения, и следовательно, все признаки и характеристики первого аспекта применимы к первой стадии (нагреванию) второго аспекта с соответствующими, необходимыми изменениями.
Второй стадией является период, когда клетки находятся на плато (при температуре). Так, клетки можно выдерживать при определенной желаемой температуре (с допуском плюс или минус 1, 2, 5 или даже 10°С) для желаемого периода времени. Таким образом, клетки выдерживают при постоянной температуре. Предпочтительно данная температура (или пределы температуры) на стадии плато является максимальной температурой, достигаемой во время пастеризации. Температура на стадии плато (и/или максимальная температура во время пастеризации) предпочтительно составляет по меньшей мере 70°С. Она может быть ниже 90 или 100°С, преимущественно в пределах от 70 до 85°С, например от 70 до 77°С. Альтернативно она может находиться в пределах 80-160°С, например 100-140°С.
Продолжительность стадии плато или период времени, при котором клетки выдерживают при желаемой или максимальной температуре, может составлять от 5 с до 90 мин, например от 1 или 10 до 80 мин, например от 20 до 70 мин. Оптимально данный период времени составляет от 40 или 50 до 60 или 70 мин, например, от 45 до 65 мин, преимущественно от 55 до 63 мин. Также возможны короткие периоды времени от 8 с до 5 мин.
Третьей стадией является стадия охлаждения.
Предпочтительно клетки охлаждают до температуры, которая является аналогичной или находится в пределах, указанных для начала нагревания (или первой стадии). Предпочтительно микробные клетки охлаждают и/или нагревают линейно (на первой и/или третьей стадиях соответственно), т.е. при построении графика зависимости времени от температуры режим охлаждения или нагревания представляет (примерно) прямую линию. Клеткам дают возможность охладиться, или их можно охладить активно, например, при использовании теплообменника или охлаждающих веществ, например, (понижая) до окружающей температуры или комнатной температуры, или ниже.
Предпочтительно скорость охлаждения составляет по меньшей мере 0,4°С/мин, 0,6°С/мин, 1,0°С/мин или 1,5°С/мин. Данные значения представляют достижимые скорости охлаждения, когда клеткам самим дают возможность охладиться. Однако возможны более высокие значения скорости охлаждения, особенно, если применяется активное охлаждение. Так, являются достижимыми скорости охлаждения, равные по меньшей мере 2,0°С/мин, 2,5°С/мин, 3,0°С/мин и даже 3,5°С/мин. Однако возможны более высокие значения скорости охлаждения, такие как выше 5°С/мин, например от 7°С/мин или 10°С/мин до 50°С/мин или 60°С/мин, предпочтительно от 15°С/мин до 45°С/мин.
Предпочтительная скорость нагревания и/или охлаждения предпочтительно поддерживается по меньшей мере на уровне 10°С/мин, 20°С/мин или 30°С/мин, хотя в некоторых воплощениях ее можно достичь по меньшей мере в пределах от 40°С/мин до 50°С/мин.
Очевидно, понятно, что при быстрой стадии нагревания и быстрой стадии охлаждения количество энергии, используемой при пастеризации, уменьшается. Данное обстоятельство приводит не только к
- 3 015509 экономии затрат, но также может не оказывать отрицательного влияния на качество (конечное) масла из микробных клеток, фактически оно оказывает положительное действие на масло.
Третий аспект - площадь под кривой зависимости времени от температуры (затраты энергии)
Из второго аспекта становится очевидным, что, если протокол пастеризации по изобретению представить в виде графика зависимости времени от температуры, то он имеет форму трапеции. Первая (нагревание) и третья (охлаждение) стадии могут быть треугольной по форме, в то время как средняя или вторая (плато) стадия (предмет четвертого аспекта) представляет (как правило) прямоугольник. Площадь под кривой зависимости времени от температуры представляет количество энергии, вложенной в систему. При разделении протокола пастеризации на три части можно высчитать площадь графика и, следовательно, затраты энергии.
В третьем аспекте площадь под кривой зависимости времени (в мин) от температуры (в °С) составляет ниже 13000°С-мин. Однако достигаются значения ниже и возможны значения ниже 11000, 10000, 9000, 8000 и даже 1000°С-мин. В предпочтительных аспектах изобретения данные значения могут составлять не более 7000, 6000 или 800°С-мин. На представленном графике время отложено на оси х (или горизонтальной оси, или абсциссе), и 0°С представляет исходную точку. Температура, следовательно, будет откладываться на оси у (или вертикальной оси, или ординате), и 0°С представляет исходную точку.
После нагревания микробных клеток до температуры пастеризации они могут охладиться сами (или их можно охладить). Как правило, клетки охлаждают до комнатной или окружающей температуры или, по меньшей мере, до температуры ниже 30°С.
Следовательно, имеется период времени не только для нагревания клеток до температуры в пределах от 30°С до 60°С, но также период времени для охлаждения клеток от 60°С до 30°С. Можно суммировать два периода времени для получения общего периода нагревания и охлаждения в пределах 30°С-60°С и обратно до 30°С. Предпочтительно данный общий период времени составляет менее 150 мин, например менее 120 или 100 мин. Однако при меньших пробах можно достичь более коротких периодов времени, и общий период времени (от 30 до 60°С и обратно до 30°С) может составлять менее 70, 50 и даже 30 мин.
Четвертый аспект - протокол пастеризации со стадий плато
Данный протокол может быть одним по второму аспекту, где имеется (например, первая) стадия нагревания и (например, вторая) стадия охлаждения и средняя стадия плато (например, вторая или средняя, или промежуточная). Однако это не является обязательным, и предусматриваются для включения другие протоколы пастеризации. Четвертый аспект относится к предпочтительным признакам данной стадии плато. Все признаки и характеристики второго (и других) аспектов относятся к четвертому аспекту с соответствующими, необходимыми изменениями.
Все клетки поддерживают и выдерживают при определенной желаемой температуре (с допуском плюс или минус 1°С, 2°С, 5°С или даже 10°С) для температуры (Т, °С) в течение времени (1, мин). Данные два параметра можно перемножить с получением произведения 1Т. Оно преимущественно составляет от 140 или 280 до 50000 или 100800°С-мин. Предпочтительно данное произведение равняется от 500, 1000, 2000 или 3000 или даже 6000 до 10000, 18000 или 25000°С-мин. Оптимальное значение произведения 1Т находится в пределах от 2000 до 6000, например от 3000 до 5000, оптимально от 4000 до 4500°С-мин. В некоторых воплощениях произведение 1Т составляет от 13 до 900, например от 100 или 200 до 700 или 800, оптимально от 300 или 400 до 600 или 700°С-мин.
Таким образом, аналогично третьему аспекту, понятно, что произведение 1Т представляет собой площадь под кривой зависимости времени от температуры клеток при их выдерживании при повышенной температуре. Таким образом, произведение 1Т фактически представляет площадь под кривой только для стадии плато (но не стадии нагревания или охлаждения).
Экстракция ΡϋΕΑ
Пятый аспект настоящего изобретения относится к способу получения РИГА из микробных клеток, где способ включает пастеризацию клеток по одному из первого, второго, третьего или четвертого аспектов изобретения, описанных ранее, и экстракцию и/или выделение РИГА из пастеризованных клеток.
Шестой аспект настоящего изобретения относится к маслу из микробных клеток, которое может содержать по меньшей мере 40% арахидоновой кислоты (АКА) и/или может иметь содержание триглицеридов, равное по меньшей мере 90%. Масло может иметь значение РОУ менее 2,5, 1,5, 0,8, 0,6 или даже 0,5, и/или значение АпУ менее 1,0. Масло готовят способом по пятому аспекту.
Полиненасыщенные жирные кислоты (РИГА) и масла из микробных клеток
РИГА может представлять собой одну РИГА или две, или более различных РИГА. Каждая РИГА может происходить из семейства п-3 или п-6. Предпочтительно это С18, С20 или С22 РИГА. Она может представлять собой РИГА по меньшей мере с 18 атомами углерода и/или по меньшей мере с 3 или 4 двойными связями. РИГА можно обеспечить в виде свободной жирной кислоты, соли, в виде эфира жирной кислоты (например, метилового или этилового эфира), в виде фосфолипида и/или в виде моно-, диили триглицерида.
- 4 015509
Подходящие (п-3 и п-6) РИГА включают докозагексаеновую кислоту (ИНА, 22:6 Ω 3), соответственно из водорослей или грибов, таких как (динофлагеллаты) СгурШесоДишпп или (грибы) ТйтаийосйуРтит;
γ-линоленовую кислоту (СЬА, 18:3 Ω 6);
α-линоленовую кислоту (АЬА, 18:3 Ω 3); конъюгированную линоленовую кислоту (октадекадиеновую кислоту, СЬА); дигомо-'-линоленовую кислоту (ΌΟΕΑ, 20:3 Ω 6);
арахидоновую кислоту (АКА, 20:4 Ω 6); и эйкозапентаеновую кислоту (ЕРА, 20:5 Ω 3).
Предпочтительные РИГА включают арахидоновую кислоту (АКА), докозагексаеновую кислоту (ОНА), эйкозапентаеновую кислоту (ЕРА) и/или γ-линоленовую кислоту (СЬА). В частности, АКА является предпочтительной.
РИЕА могут продуцироваться клетками, пастеризованными способом по изобретению, такими как микробные клетки. Последние могут представлять собой бактерии, водоросли, грибы или дрожжи. Грибы являются предпочтительными, предпочтительно порядка Мисога1е8, например МотйетеИа, Рйусотусе§, В1аке§1еа, АкретдШик, Тйгаи81осйу1пит, Ру1Ыит или ЕШоторйШога. Предпочтительным источником АКА является МотИетейа а1рша, В1аке§1еа йткрота, АкретдШик 1етгеи8 или Ру1Ыит шыДюкит. Водоросли могут представлять собой динофлагеллаты и/или включают РогрйупДщт. ИйжсЫа или СтурШесоДшшт (например, СгурШесоДтшт сойпи). Дрожжи включают таковые, относящиеся к родам РюЫа или 8ассйатотусек, такие как РюЫа сИеш. Бактерии могут быть представителями рода РторюшЬас1етшт. Масло из микробных клеток может быть жидким (при комнатной температуре).
Предпочтительно, чтобы большая часть РИГА находилась в виде триглицеридов. Так предпочтительно, чтобы по меньшей мере 50%, например по меньшей мере 60% или оптимально по меньшей мере 70%, РИГА находилось в виде триглицеридов. Однако количество триглицеридов может быть выше, например, оно может составлять по меньшей мере 85%, предпочтительно по меньшей мере 90%, оптимально по меньшей мере 95 или 98% масла. Из данных триглицеридов предпочтительно, чтобы по меньшей мере 40%, например по меньшей мере 50% и оптимально по меньшей мере 60% РИГА находилось в αположении глицерина (находящегося в скелете триглицерида), также известного как 1- или 3-положение. Предпочтительно, чтобы по меньшей мере 20%, например по меньшей мере 30%, оптимально по меньшей мере 40% РИГА находилось в β (2)-положении.
Масло из микробных клеток может содержать по меньшей мере 10, 35, 40 или 45% или более желаемой РИГА, такой как арахидоновая кислота. Оно может иметь содержание триглицеридов по меньшей мере 90%. Предпочтительно масло из микробных клеток имеет содержание триглицеридов в пределах от 90 до 100%, например по меньшей мере 96%, предпочтительно по меньшей мере 98%, более предпочтительно по меньшей мере 99% и оптимально выше 99,5%. Как правило, масло из микробных клеток будет иметь содержание эйкозапентаеновой кислоты (ЕРА) ниже 5%, предпочтительно ниже 1% и более предпочтительно ниже 0,5%. Масло может иметь содержание каждой С20, С20:з, С22:0 и/или С24:0 полиненасыщенной жирной кислоты (РИГА) на уровне менее 5%, менее 2%, менее 1%. Содержание свободных жирных кислот (ГГА) может составлять < 0,4, 0,2 или 0,1. Масло может включать незначительно или совсем не включать СЬА и/или ЭСБА.
Масло из микробных клеток может быть неочищенным маслом. Его можно экстрагировать из клеток с использованием растворителя, такого как двуокись углерода в сверхкритическом состоянии, гексан или изопропанол.
Способ пастеризации
Как правило, пастеризацию проводят после окончания ферментации. В предпочтительном воплощении пастеризация будет завершать ферментацию, поскольку тепло во время пастеризации будет приводить к гибели клеток. Следовательно, пастеризации можно подвергать ферментационный бульон (или клетки в жидкой (водной) среде), хотя, ей можно подвергать микробную биомассу, полученную из бульона. В последнем случае пастеризация может иметь место, пока еще микробные клетки находятся в ферментере. Предпочтительно пастеризация имеет место перед любой последующей обработкой микробных клеток, например грануляционным измельчением (например, экструзией) или замешиванием.
Предпочтительно протокол пастеризации является достаточным для ингибирования или инактивации одного или более ферментов, которые могут оказывать отрицательное влияние или разрушать РИГА или масло из микробных клеток, например липазы.
По окончании ферментации ферментационный бульон можно профильтровать или обработать иначе для удаления воды или водной жидкости. После удаления воды можно получить плотный осадок из биомассы. Если пастеризация не имела место, то затем обезвоженные клетки (или плотный осадок из биомассы) можно подвергнуть пастеризации.
Способ экстракции ΡϋΕΑ
Затем можно экстрагировать РИГА (или масло, как правило, содержащее РИГА) из (пастеризованных) микробных клеток. Предпочтительно его экстрагируют из (например, высушенных) гранул (напри
- 5 015509 мер, экструдатов), содержащих клетки. Экстракцию можно проводить с использованием растворителя. Предпочтительно используют неполярный растворитель, например С1-8, предпочтительно С2-6алкан, например гексан. Можно применять двуокись углерода (в жидкой форме, например, в суперкритическом состоянии).
Предпочтительно растворителю дают просочиться через высушенные гранулы. Подходящие методы грануляции и экструзии микроорганизмов и последующая экстракция масла из микробных клеток, содержащего РИЕА, описана в заявке \УО-А-97/37032.
Растворителем извлекают неочищенное масло, содержащее РИЕЛ. Данное масло можно использовать в таком состоянии без дополнительной обработки или его можно подвергнуть одной или более стадиям рафинирования. Однако, как правило, неочищенное масло содержит растворитель, такой как растворитель, используемый для экстракции масла (например, гексан или спирт, такой как изопропиловый спирт), или масло, не подвергнутое одной (или предпочтительно всем) последующей стадии рафинирования. Подходящие методы рафинирования описаны в заявке на международный патент № РСТ/ЕР01/08902 (содержание данного документа и всех других, представленных здесь, включено здесь в виде ссылки). Например, масло можно подвергнуть одной или более стадиям рафинирования, которые могут включать обработку кислотой или дегуммирование, обработку щелочью или удаление свободных жирных кислот, отбеливание или удаление пигментов, фильтрацию, фракционирование охлаждением (или охлаждение, например, для удаления насыщенных триглицеридов), дезодорацию (или удаление свободных жирных кислот) и/или осветление фильтрованием (или удаление нерастворимых в масле веществ). Все данные стадии очистки описаны подробнее в РСТ/ЕР01/08902 и их можно применять на стадиях, описанных в настоящей заявке с соответствующими необходимыми изменениями.
Полученное масло особенно подходит для пищевых целей и его можно добавлять к продуктам питания (для человека) или кормам (для животных). Примеры включают молоко, детские молочные смеси, лечебные напитки, хлеб и корм для животных.
Микробные клетки
Клетки микробов (или микроорганизмов), используемые в настоящем изобретении, могут быть любыми из описанных ранее, особенно в разделе, посвященном РИЕЛ и маслам из микробных клеток. Они могут включать или способны продуцировать, РИЕЛ или масло, и соответственно содержащее РИЕЛ масло можно экстрагировать или выделить из клеток. Они могут находиться в нитчатной форме, как грибы или бактерии, или в виде единичных клеток, подобно дрожжам, водорослям и бактериям. Клетки могут включать микроорганизмы, такие как дрожжи, грибы, бактерии или водоросли. Предпочтительными грибами являются таковые, относящиеся к порядку Мисога1е§, например, гриб может представлять таковой родов Могйегейа, Рйусотусек, В1аке§1еа или АкрегдШик. Предпочтительными грибами являются виды Мой1еге11а а1рта, В1аке§1еа 1г1зрога и АкрегдШш 1еггеи8.
В отношении дрожжей, то предпочтительно они представляют таковые, относящиеся к родам РюЫа (например, вид Р1сЫа сйетш) или §ассйаготусе§.
Бактерии могут быть представителями рода РгорюшЬас1епит.
Если клетки происходят из водорослей, то предпочтительно это динофлагеллаты, и/или они относятся к роду СтурШесобшшт. Предпочтительными являются водоросли вида СтурШесобшшт сойии.
Нагревание
Его можно проводить нагреванием (клеток) непосредственно или опосредованно. Если нагревание является непосредственным, то его можно проводить пропусканием пара в ферментер. При опосредованном способе можно воздействовать на среду посредством теплообменника, стенок ферментера или нагревательных спиралей, или внешнего теплообменника, такого как пластинчатый теплообменник.
Как правило, пастеризация имеет место в ферментере, в котором проводят ферментацию. Однако для некоторых микроорганизмов (таких как бактерии) часто является предпочтительным вначале удалить клетки из резервуара и затем проводить пастеризацию. Пастеризация может иметь место перед другими обработками микроорганизмов, например высушиванием или грануляцией.
В результате пастеризации, как правило, погибает большая часть или, если не все, микроорганизмы. После пастеризации погибает по меньшей мере 95, 96 или даже 98% всех микроорганизмов, т.е. которые становятся нежизнеспособными.
Подкисление
В некоторых случаях желательно уменьшить риск роста пастеризованных клеток. При этом одной возможностью является подкисление клеток подходящей кислотой. Таким образом, для предупреждения роста микроорганизмов может быть желательным довести клетки до значения рН в пределах 3-4. Однако можно использовать более широкие пределы рН в зависимости от клеток, и, таким образом, рН можно довести до 2-5, оптимально до предела примерно от 3,3 до 3,7.
Подкисление клеток можно проводить перед пастеризацией. Однако предпочтительно проводить его после.
Значение рН можно установить любыми способами или любой подходящей кислотой. Предпочтительно проводить его с использованием фосфорной кислоты, такой как 85%, или разбавленная 55% или 33% фосфорная кислота.
- 6 015509
Перекисное число (РОУ)
Предпочтительно значение РОУ масла из микробных клеток находится в пределах от 4 до 8 или 12, особенно для неочищенного масла. Однако РОУ может быть не более 3,0, 2,5 или 2,0. Однако можно получить значительно более низкие значения РОУ при использовании способа по изобретению, и данные значения могут быть ниже 1,5 или ниже 1,0. Можно получить значения ниже 0,8 или 0,6 и даже ниже 0,4. Значения РОУ (из воплощений) находятся в пределах от 1,3 (или 0,8) до 0,4. Перекисное число РОУ обычно выражается в виде мэкв/кг.
Анизидиновое число (АпУ)
Данное число является показателем содержания альдегидов. Предпочтительно значение анизидинового числа масла из микробных клеток составляет от 5, 6, 7 или 10 до 15, 20 или 25, особенно для неочищенного масла. Преимущественно АпУ равняется не более 20, например не более 15. Оно может составлять не более 10 или даже не более 5. Предпочтительно значение РОУ и/или АпУ относится в большей мере к неочищенному маслу, чем рафинированному. Значения АпУ (в предпочтительных примерах) находятся в пределах от 15 до 5, необязательно от 12 до 7.
Неочищенные масла по сравнению с рафинированными
Некоторые различия между данными двумя маслами представлены ниже. Каждое неочищенное или рафинированное масло может иметь один или более признаков в последующей таблице соответственно для неочищенного или рафинированного масла. Как правило, неочищенное масло содержит антиоксидант (например, токоферол, аскорбилпальмитат).
Соединение Предпочтительно (для неочищенного масла) Неочищенное ма ело Рафинированное масло
Неомыляющиеся вещества < 3,5% (мае./мае) 2, 5% (мае./мае) 1,8 (мас./мас)
Растворитель (например, гексан) < 2000 млн'1 100-2000 млн’1 Не детектируется или > 1 млн'1
Фосфолипиды, % 2-3,5 0, 05
Свободные < 1% 0,2% 0,08%
жирные кислоты, такие как олеиновая кислота
ρον ζ 10 мэкв/кг 6 мэкв/кг 1,4 мэкв/кг
Нерастворимые вещества < 0,5% 0,1%
Фосфор < 1000 мг/кг 5 мг/кг -
Кремний < 500 млн’1 100 млн’1 2 4 млн1
Мышьяк < 0,5 мг/кг < 0,04 мг/кг < 0,5 мг/кг
Кадмий < 0,2 мг/кг <'0г02 мг/кг < 0,1 мг/кг
Ртуть < 0/4 мг/кг < 0/4 мг/кг < 0,04 мг/кг
Свинец < 0,1 мг/кг < 0,1 мг/кг < 0,1 мг/кг
Медь <0,2 мг/кг < 0,2 мг/кг < 0,02 мг/кг
Влага и летучие вещества <1, 0% 0,5 < 0/02%
Фосфатиды (Р/млн'1) 50-100 < 10
Соответственно неочищенное масло по настоящему изобретению может иметь один или более следующих признаков:
(a) содержание неомыляющихся веществ от 2,0 до 3,5% (мас./мас.);
(b) содержание растворителя (например, гексана) от 10, 50 или 100 млн-1 до 1000, 1500 или 2000 млн-1;
(c) содержание свободных жирных кислот от 0,1 или 0,2 до 1%, например 0,2-0,6% или 0,3-0,5%;
(ά) значение РОУ от 2, 3, 4 или 6 до 10;
(е) содержание фосфора по меньшей мере 2, 3 или 5 мг/кг;
(1) содержание кремния от 50 или 100 млн-1 до 500 млн-1; и/или (д) содержание воды менее 1 или от 0,5 до 1 или 2%.
- 7 015509
Применения масел и РИГА
Шестой аспект изобретения относится к композиции, содержащей масло по пятому аспекту, и где является подходящим одно или более других (дополнительных) веществ. Композиция может представлять собой продукт питания и/или пищевую добавку для животных или людей. В воплощениях по изобретению, которые предназначены для потребления человеком, масла могут быть обеспечены как подходящие для потребления человеком, как правило, рафинированием или очисткой масла, полученного из микробных клеток.
Композиция может представлять собой детскую молочную смесь или продукт питания (для человека). В данном случае состав молочной смеси можно скорректировать таким образом, что она будет включать аналогичные количества липидов или РИГА, которые имеются в обычном женском молоке. Это может включать смешивание масла из микробных клеток по изобретению с другими маслами для получения соответствующей композиции.
Композиция может представлять собой корм или добавку для животных и рыб. Подобные корма и добавки можно скармливать любым сельскохозяйственным животным, в частности овцам, крупному рогатому скоту и птице. Кроме того, корма или добавки можно скармливать водным организмам, предназначенным для разведения, например рыбам и панцирным водным животным. Таким образом, композиция может содержать одно или более кормовых веществ или ингредиентов для подобных животных.
Масло по изобретению можно продавать непосредственно как масло и в соответствующей упаковке, как правило, в разовых алюминиевых бутылях, покрытых изнутри эпоксифенольным лаком и продутых азотом. Масло может содержать один или более антиоксидантов (например, токоферол, витамин Е, пальмитат), каждый, например, в концентрации от 50 до 800 млн-1, например от 100 до 700 млн-1.
Подходящие композиции могут включать фармацевтическую или ветеринарную композиции, например, для перорального введения, или косметические композиции. Масло можно принимать как таковое или можно инкапсулировать, например, в оболочку и, таким образом, оно может быть в виде капсул. Оболочка или капсулы могут содержать желатин и/или глицерин. Композиция может включать другие ингредиенты, например флаворанты (например, флаворанты с запахом и вкусом лимона и лайма), или фармацевтически приемлемый или приемлемый для ветеринарии носитель или наполнитель.
Предпочтительные признаки и характеристики одного аспекта изобретения применимы к другому аспекту с соответствующими, необходимыми изменениями.
Далее изобретение будет описано с помощью примеров при обращении к последующим примерам, которые представлены для иллюстрации и не предназначены для ограничения объема изобретения.
Пример 1.
Полагают, что окисление во время получения масла из микробных клеток, содержащего РИГА, происходит в результате ферментативной активности. Пастеризацию рассматривали в качестве способа, снижающего вероятность окисления во время обработки микробных клеток для получения из них масла. Было установлено, что степень стабилизации зависит от условий пастеризации.
Следовательно, проводили ряд опытов для определения того, какие условия пастеризации могут оказывать влияние на уровень окисления и, в частности, значение перекисного числа (РОУ) масла. Перекисное число определяли с использованием стандартной методики, подробно описанной в АОС8:С68-53.
При постановке опытов следовали следующему протоколу: ферментация, хранение, пастеризация, экстракция (масла из микробных клеток), анализ масла.
Грибы МотйегеИа а1рта культивировали в ферментере. Ферментацию проводили в течение примерно 148 ч. М. а1рта продуцировали РИГА, называемую арахидоновой кислотой (АВА). Биомассу извлекали из ферментера и хранили (при температуре ниже -18°С).
Пробы биомассы М. а1р1па отбирали из ферментационного бульона при ее сохранении в ферментере и сразу же замораживали.
Тестировали различные протоколы пастеризации. Пастеризацию проводили при трех различных значениях температуры, а именно 40, 70 и 85°С. Затем следовали три стадии с первой стадией быстрого нагревания с последующей стадией плато (второй или средней стадией) при желаемой температуре, которая была максимальной используемой температурой. Затем следовала стадия быстрого охлаждения (третья). Различные пробы биомассы находились на средней стадии (плато) в течение трех различных временных периодов, а именно 1, 2 и 24 ч.
После пастеризации получали масло из микробных клеток с использованием влажной экстракции. Данную пробу биомассы фильтровали, отжимали (под давлением) и экстрагировали масло.
Затем масло из микробных клеток анализировали, в основном определяли перекисное число (РОУ) с использованием метода АОС8. В некоторых пробах определяли содержание АВА. Результаты анализа показывали, что масло, полученное из микробных клеток, содержало примерно 420 г АВА на кг.
Подробный протокол Ферментации и экстракции проб л ферментационного бульона извлекали из ферментера и фильтровали (фильтр Зейтца, 2 л, Г-ГА10). Затем полученный осадок промывали 600 мл деминерализованной воды. Сырой осадок высу
- 8 015509 шивали в течение 1 мин и затем отжимали (с использованием аппарата НАИСО™, тинктурный пресс СОАО21, 300-400 атм) при 400 бар. Затем сырой экструдат использовали для экстракции масла из микробных клеток при помощи 500 мл гексана (Мегск) при комнатной температуре (20-25°С) в течение 1 ч с использованием устройства Ш1га Тиггах™. Затем гексан сливали. Затем оставшийся осадок промывали 250 мл свежей порции гексана (при перемешивании в течение 30 мин) при комнатной температуре. Гексан сливали и затем добавляли к ранее используемой для экстракции порции гексана.
Затем экстракт фильтровали с использованием стеклянного фильтра в комбинации со стеклянным фильтром СТА. Затем гексан выпаривали с использованием аппарата К.о1ауарот из прозрачного экстракта примерно при 50°С в течение примерно 15 мин. Затем масло переносили в герметичные стаканы и каждый стакан с пробой продували азотом в течение 30 с. Затем стаканы с пробами закрывали и хранили при -18°С.
Протоколы пастеризации
Тестировали три различных протокола (А, В и С). Каждый состоял из трех стадий, первой стадии нагревания, второй стадии плато (при максимальной температуре) и третьей стадии охлаждения. В табл. 1 представлены протоколы трех режимов пастеризации.
Таблица 1
время (Ь, мим) Температура (Т, ’С1 на время [1) стадия Изменение температуры на стадии (’С) Время на стадию (мин) площадь под кривой Скорость нагрева* мин/ охлаждения (вС/мин) Время для прохождения 40’С/70вС (мин) Объединенный период 40®с70*С-40*С (мин) Плошадь под кривой зависимости х от Т (“С'мин)
Режим Ά 0 75 235 210 25 70 70 25 Нагревание Пастеризация Охлаждение 45 0 45 ΐ магр.=75 ΐ ластер.=60 С охл.=75 1687,5 4200 1687,5 0,6 0 0,6 50 50 100 7575
Режим В (вне объема изобретения, для сравнения) О 102 162 360 25 72 72 23 Нагревание Пастеризация Охлаждение 46 0 46 Ъ кагр.»102 ΐ ластер.=60 Ь охл-»198 4896 4320 4752 0,46 0 0,22 65,11 135 200,11 13966
Режим С 0 25 85 105 7 70 70 8 Нагревание Пастеризация Охлаждение 63 0 62 х нагр.»25 1 пастер.»60 с охл.=20 787, 5 4200 620 2,52 0 3,10 11,90 9, 68 21,58 5607,5
Дополнительно три режима пастеризации А, В и С представлены графически на фиг. 1. Очевидно, понятно, что можно рассчитать площадь под кривой зависимости температуры (Т, °С) от времени (1, мин) для каждой из трех стадий для каждого режима и затем суммировать с получением общей площади под кривой для каждого из трех режимов. Данные расчеты дополнительно приведены в табл. 1 выше.
Перекисное число (РОУ) определяли для масел, полученных в результате экстракции из клеток после проведения трех протоколов пастеризации А, В и С. Значения РОУ экстрагированных масел соответственно составляли 8,7, 14,3 и 2,4. Режим В имел низкую скорость нагревания и низкую скорость охлаждения, и его включали только для сравнения. В результате он дал наиболее высокое значение РОУ, равное 14,3.
В противоположность оба режима А и С находились в объеме изобретения. Режим А имел более высокую скорость нагревания и скорость охлаждения на первой и третьей стадиях по сравнению с режимом В. Предпочтительно по изобретению скорости нагревания и охлаждения представляют, по меньшей мере, таковые, представленные для режима А. Режим А давал значение РОУ, равное 8,7.
Однако наилучшие результаты получали с режимом С, при котором значение РОУ составляло только 2,4. Как можно видеть из фиг. 1, в данном случае была очень быстрая стадия нагревания и быстрая стадия охлаждения (третья).
Пример 2.
Опыты проводили аналогично примеру 1, за исключением того, что значения температуры пастеризации находились в более широких пределах, а именно составляли 40°С (для сравнения), 70 и 85°С. Режим температуры (°С) в зависимости от времени (мин) представлен на фиг. 2 и в табл. 2 ниже. Кривая в основном одинакова для всех четырех проб, но, конечно, с увеличением плато пастеризации (от 1 до 4 или 24 ч) соответственно.
Таблица 2
40°С 70°С 85°С
Время Температура Время Температура Время Температура
0 10,0 0 8,0 0 7,0
10 27,0 10 55,0 10 40,0
20 40,1 17 70,0 20 66,0
- 9 015509
25 40, 0 77 68,2 30 79,0
40 41, 4 82 44,3 40 83,5
50 41, 0 87 31, 3 100 79,8
80 38,7 92 21, 8 105 55,3
85 27, 5 97 16, 0 110 38,7
90 19, 3 102 9,7 115 26, 3
95 14,5 120 21,0
100 9,7 125 15,2
110 7,5 130 11,3
Тестировали пробы из двух различных ферментаций (обе с М. а1рша) различной продолжительности. Пробы № 11-20 в табл. 3 имели несколько более длительную ферментацию, где примерно 2 м3 бульона переносили в инокуляционный ферментер и ферментацию проводили в течение 48 ч без дополни тельного внесения глюкозы.
После пастеризации пробы обрабатывали, начиная с фильтрования под давлением азота примерно 1 бар. Затем полученный осадок промывали производственной водой (примерно 0,6 от начального объема бульона). Обезвоживание проводили с использованием пресса для отжима фруктов под давлением поршня 300-400 бар. Затем добавляли 500 мл свежей порции гексана и перемешивали в течение 1 мин с использованием устройства И11га Тиггах в течение 1 мин. Затем проводили экстракцию в течение 1 ч при комнатной температуре. После фильтрования полученный осадок промывали 250 мл свежей порции гексана и полученный растворитель выпаривали в вакууме при 60-70°С. Затем продували азотом и хранили при -18°С.
Результаты представлены в табл. 3, в которой показаны первое и второе значения перекисного числа и среднее из данных двух значений, а также значение анизидинового числа (АпУ). На фиг. 3 и 4 также показано уменьшение РОУ и АпУ (соответственно для более короткой и более продолжительной ферментации).
Таблица 3
Номер пробы Температура пастеризации (°С) Время пастеризации (ч) ρονι Ρθν2 ΡθναρεΒΗ. Αην
1 - 0 6,0 5,4 5,7 25,7
2 40 1 8,8 8,5 8,6 25, 9
3 40 4 3,8 3,8 3,8 27,1
4 40 24 2,1 2,2 2,1 21,0
5 70 1 2,2 2,2 30,2
6 70 3,5 1, 1 1, 1 1,1 33,5
7 70 22 0,7 0,7 1,0 15, 9
8 85 1 1,2 1,2 1,2 25, 9
9 85 3,3 0,7 0,8 0,7 27,1
10 85 20,5 0,5 0,5 0,5 12, 9
11 - 0 5,9 5,4 5,6 39,3
12 40 1 9, 9 10, 1 10,0 38,7
13 40 4 4,8 4,5 4,6 40,7
14 40 24 2,5 3,0 2,8 32,3
15 70 1 2,7 2,8 2,7 40, 3
16 70 3,5 1,6 1,7 1,3 32,7
17 70 22 1,0 0,9 1,3 14,5
18 85 1 1,8 1,8 1,8 39, 7
19 85 3,3 1,1 1,1 1,1 32,4
20 85 20,5 0,9 1,0 0,9 16, 1
Из данных таблицы следует, что без пастеризации РОУ составляло 5,6 или 5,7. Пастеризация при 40°С снижала значение РОУ, но требовался относительно длительный период времени (такой как 24 ч) при температуре пастеризации для снижения значения РОУ до приемлемого значения, равного 2,1.
Использование более высоких значений температуры приводило к значительно лучшему результату. Например, при пастеризации только в течение 1 ч при 70°С значение РОУ составляло 2,2 по сравнению с РОУ, равному 2,1 и соответствующему 24 ч при 40°С. Еще более лучшие результаты получали при более высоких значениях температуры, так при 85°С в течение 1 ч значение РОУ равнялось только 1,2. Данные фигуры представлены для более короткой ферментации, хотя аналогичные результаты получали с клетками, выросшими при более длительной ферментации.
Так, на фиг. 3 и 4 графически представлено изменение значений РОУ и АпУ в зависимости от различий во времени пастеризации. Как и предполагалось, более длительная пастеризация приводила к более низким значениям АпУ и РОУ. Однако большое значение имело использование относительно более
- 10 015509 высокой температуры во время пастеризации. Заметное снижение АпУ и РОУ обнаруживали при увеличении температуры пастеризации (Тпаст) до 70°С, и еще более низкие значения соответствовали температуре 85°С. Верхние три линии, обозначенные крестиками, кружками и звездочками, показывают значения АпУ, в то время как нижние три линии, обозначенные ромбами, квадратами и треугольниками, представляют значения РОУ.
В табл. 4 ниже представлено рассчитанное произведение 1Т (в °С-мин) для девяти различных протоколов пастеризации (три различных температуры на стадии плато и три различных периода времени). Фактически данное произведение представляет площадь под кривой (зависимости времени 1, мин от температуры Т, °С) для стадии плато (после стадии нагревания, но перед стадией охлаждения).
Таблица 4
Температура (Т, °С) 40 70 85
Время (Г, ч/мин)
1(60) 2,400 4,200 5,100
4(240) 9, 600 16,800 20,400
24 (1440) 57,600 100,800 122,400
Пример 3.
Последующие опыты по пастеризации проводили с использованием ферментационного бульона, проводя ферментацию в промышленном масштабе, с использованием гриба М. а1рша, приведенного в качестве примера выше. Транспортировали непастеризованный бульон (800 л) и хранили при 4°С. Затем бульон переносили в резервуар с перемешиванием емкостью 700 л и проводили 10 различных протоколов пастеризации.
Первое, пастеризацию проводили при пяти различных (максимальных) значениях температуры, а именно 140, 120, 100, 80 и 60°С со временем выдерживания (плато) (при максимальной температуре), равным 8 с. Второе, пастеризацию проводили при 140, 120, 100, 80 и 60°С при времени выдерживания (плато) при максимальной температуре, равном 300 с.
Отбирали пробы (2 л) и затем сразу же замораживали при -18°С. Отбирали стерильные пробы (200 мл) и замораживали, и из проб экстрагировали неочищенное, содержащее АВА, масло.
Пробу ферментационного бульона (1,7 л) фильтровали под давлением Ν2 1 бар. Осадок промывали 0,6 объемами конденсационной воды и отжимали примерно в течение 5 мин под давлением 400 кг/см2. Затем к влажному осадку добавляли н-гексан (500 мл) и перемешивали с использованием устройства ИПта Тиггах при 24000 об/мин. Масло экстрагировали при комнатной температуре (примерно 21 °С) в течение примерно 110 мин. Суспензию фильтровали под вакуумом при использовании фильтра для сред ОР/А Ватман. Осадок промывали 250 мл свежей порции гексана. Гексан выпаривали в течение 15 мин на водяной бане при температуре примерно 60-70°С. Затем полученное масло переносили в герметичные стаканы, которые продували азотом в течение 30 с и затем закрывали и хранили до анализа при -18°С.
На фиг. 5, 6 и 7 представлены данные последующего анализа. На фиг. 6 и 7 показаны кривые зависимости времени от температуры для двух серий опытов, в первой время стадии плато (выдерживания) составляло 8 с, и во второй время стадии плато (выдерживания) составляло 5 мин, соответственно каждое для 5 значений температуры. Как следует из графиков, горизонтальная средняя линия (представляющая 8 с или 5 мин) показывает стадию плато.
На фиг. 5 представлены полученные значения РОУ и АпУ для всех 10 режимов пастеризации. Как следует из этих данных, более низкие значения РОУ получали при значительно более высокой температуре и более длительный период выдерживания (5 мин) соответствовал наиболее низким значениям РОУ.

Claims (26)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Микробное масло, которое содержит по меньшей мере 35% требуемой полиненасыщенной жирной кислоты РИРА и которое имеет анизидиновое число АпУ ниже 25.
  2. 2. Масло по п.1, которое содержит по меньшей мере 40% указанной РИРА.
  3. 3. Масло по п.1 или 2, в котором указанная требуемая РИРА является арахидоновой кислотой АВА.
  4. 4. Масло по п.1 или 2, которое имеет анизидиновое число от 5 до 25.
  5. 5. Масло по п.1 или 2, в котором АпУ масла составляет не выше 20.
  6. 6. Масло по п.4, в котором АпУ масла составляет не выше 15.
  7. 7. Масло по любому из пп.1-6, которое имеет содержание триглицеридов по меньшей мере 90%.
  8. 8. Масло по любому из пп.1-7, имеющее пероксидное число (РОУ) не выше 3,0.
  9. 9. Масло по п.8, имеющее РОУ не выше 2,0.
  10. 10. Масло по любому из пп.1-9, продуцируемое грибом.
  11. 11. Масло по п.10, в котором гриб является грибом рода Мой1еге11а.
  12. 12. Масло по п.11, в котором гриб является грибом вида Мой1еге11а а1рша.
  13. 13. Масло по любому из пп.1-12, которое является неочищенным маслом.
    - 11 015509
  14. 14. Масло по п.13, подвергнутое одной или более стадиям рафинирования.
  15. 15. Масло по п.14, в котором стадии рафинирования включают обработку кислотой или дегуммирование, обработку щёлочью или удаление свободных жирных кислот, отбеливание или удаление пигментов, фильтрацию, фракционирование охлаждением, дезодорацию и/или осветление фильтрованием.
  16. 16. Масло по п.14 или 15, добавляемое в пищевые продукты для человека или в корма для животных.
  17. 17. Масло по п.14 или 15, добавляемое в смесь для детского питания.
  18. 18. Пищевой или кормовой продукт, содержащий масло по любому из пп.14 или 15.
  19. 19. Продукт по п.18, который является смесью для детского питания.
  20. 20. Продукт по п.18, который является кормовой композицией для животных, в частности морских животных.
  21. 21. Способ получения микробного масла по любому из пп.1-13, включающий пастеризацию клеток и экстрагирование или выделение микробного масла из подвергнутых пастеризации клеток, в котором пастеризация является, по меньшей мере, трёхстадийным процессом, то есть на первой стадии клетки нагреваются от температуры ниже 40°С до температуры выше 60°С, при этом температура клеток проходит диапазон с 40 по 60°С не более чем за 30 мин; на второй стадии, которая проводится при постоянной температуре, поддерживается повышенная температура Т, °С, по меньшей мере 60°С, в течение некоторого времени 1, мин, при этом 1Т продукта составляет от 140 до 100800°С-мин, а на третьей стадии осуществляется охлаждение.
  22. 22. Способ по п.21, в котором температура клеток на первой стадии тепловой обработки проходит диапазон с 40 по 60°С не более чем за 15 мин.
  23. 23. Способ по п.21 или 22, в котором 1Т продукта на стадии поддержания постоянной температуры составляет от 500 до 10000°С-мин.
  24. 24. Способ по любому из пп.21-23, в котором температура на стадии поддержания постоянной температуры составляет по меньшей мере 70°С.
  25. 25. Способ по п.24, в котором температура на стадии поддержания постоянной температуры составляет от 100 до 140°С.
  26. 26. Способ по любому из пп.21-25, в котором клетки на третьей стадии охлаждаются со скоростью по меньшей мере ~0,6°С/мин.
EA200500046A 2002-06-19 2003-06-20 Микробное масло, способ его получения и пищевой или кормовой продукт, содержащий его EA015509B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP02254262 2002-06-19
EP02258713 2002-12-18
PCT/EP2003/006553 WO2004001021A1 (en) 2002-06-19 2003-06-20 Pasteurisation process for microbial cells and microbial oil

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200500046A1 EA200500046A1 (ru) 2005-06-30
EA015509B1 true EA015509B1 (ru) 2011-08-30

Family

ID=30001870

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201100701A EA030476B1 (ru) 2002-06-19 2003-06-20 Неочищенное масло, полученное из mortierella alpina, и пищевой продукт, содержащий его
EA200500046A EA015509B1 (ru) 2002-06-19 2003-06-20 Микробное масло, способ его получения и пищевой или кормовой продукт, содержащий его

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201100701A EA030476B1 (ru) 2002-06-19 2003-06-20 Неочищенное масло, полученное из mortierella alpina, и пищевой продукт, содержащий его

Country Status (17)

Country Link
US (7) US7517953B2 (ru)
EP (10) EP1513922B2 (ru)
JP (7) JP2005529621A (ru)
KR (7) KR102254453B1 (ru)
CN (11) CN101837136B (ru)
AT (1) ATE419330T1 (ru)
AU (1) AU2003245978A1 (ru)
BR (1) BRPI0311906B1 (ru)
CA (2) CA2489911C (ru)
DE (1) DE60325590D1 (ru)
DK (2) DK3111767T3 (ru)
EA (2) EA030476B1 (ru)
ES (2) ES2712854T3 (ru)
HK (2) HK1203856A1 (ru)
IL (2) IL165530A (ru)
MX (1) MXPA04012913A (ru)
WO (1) WO2004001021A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2747879C2 (ru) * 2015-08-25 2021-05-17 ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. Композиции из рафинированного масла и способы их изготовления

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ303446B6 (cs) 2000-01-19 2012-09-19 Martek Biosciences Corporation Zpusob získávání lipidu z mikroorganismu
ES2712854T3 (es) * 2002-06-19 2019-05-16 Dsm Ip Assets Bv Aceite microbiano y procedimientos para su procesamiento
ES2393831T3 (es) * 2008-08-29 2012-12-28 Fructa&Co S.R.L. Procedimiento para producir el envasado de pulpa o puré de fruta o verdura
DE102009003147A1 (de) 2009-05-15 2010-11-18 Zf Lenksysteme Gmbh Verfahren zum Betrieb eines Lenksystems in einem Fahrzeug
US8993841B2 (en) * 2009-06-08 2015-03-31 Basf Plant Science Company Gmbh Fatty acid elongation components and uses thereof
US8637298B2 (en) * 2009-06-16 2014-01-28 E I Du Pont De Nemours And Company Optimized strains of yarrowia lipolytica for high eicosapentaenoic acid production
WO2011054800A1 (en) * 2009-11-03 2011-05-12 Dsm Ip Assets B.V. Composition comprising cells and a polyunsaturated fatty acid having at least 20 carbon atoms (lc-pufa)
US8921060B2 (en) * 2009-11-10 2014-12-30 Basf Se Health-beneficial preparation and production method
AU2011261455B2 (en) 2010-06-01 2016-03-24 Dsm Ip Assets B.V. Extraction of lipid from cells and products therefrom
CN102589145A (zh) * 2012-03-27 2012-07-18 鲁东大学 一种具有巴氏杀菌消毒功能的电热水器电路
EP2826384A1 (de) 2013-07-16 2015-01-21 Evonik Industries AG Verfahren zur Trocknung von Biomasse
NZ721417A (en) 2013-12-20 2022-07-01 Dsm Ip Assets Bv Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
SG10201911379QA (en) * 2013-12-20 2020-01-30 Dsm Ip Assets Bv Process for extracting lipids for use in production of biofuels
EP3083545B1 (en) 2013-12-20 2023-08-02 DSM IP Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
MX2016008228A (es) 2013-12-20 2016-11-28 Dsm Ip Assets Bv Procedimiento para la obtención de aceite microbiano a partir de células microbianas.
CA2934491C (en) 2013-12-20 2023-09-26 Dsm Ip Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
CN105925627B (zh) * 2014-03-14 2019-08-13 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 微生物油及其制备方法
CN105713936B (zh) * 2014-03-14 2019-05-10 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 微生物油的制备方法
CA2958457C (en) 2014-10-02 2022-10-25 Evonik Industries Ag Process for producing a pufa-containing biomass which has high cell stability
CN106793803B (zh) 2014-10-02 2021-03-09 赢创运营有限公司 通过挤压含pufa的生物质来制备含pufa的饲料的方法
EP3200604B1 (de) 2014-10-02 2021-11-03 Evonik Operations GmbH Verfahren zur herstellung eines futtermittels
US11464244B2 (en) 2014-10-02 2022-10-11 Evonik Operations Gmbh Feedstuff of high abrasion resistance and good stability in water, containing PUFAs
US11946017B2 (en) 2016-07-13 2024-04-02 Evonik Operations Gmbh Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
WO2018032115A1 (en) 2016-08-19 2018-02-22 Gueguen Celine Methods and uses of dissolved organic material fractions for binding metal ions
US11352651B2 (en) 2016-12-27 2022-06-07 Evonik Operations Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
US11053139B2 (en) 2017-04-07 2021-07-06 Noblegen Inc. Methods and uses of encapsulated exudates and dried euglena biomass for binding metal
RU2769461C2 (ru) * 2017-08-10 2022-03-31 ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. Способ двойного центрифугирования для очистки питательного масла
EP3470502A1 (en) 2017-10-13 2019-04-17 Evonik Degussa GmbH Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
CN107418982B (zh) * 2017-09-25 2020-05-08 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种低氯丙醇微生物油脂及其制备方法
EP3527664A1 (en) 2018-02-15 2019-08-21 Evonik Degussa GmbH Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
RU2760575C1 (ru) 2018-05-15 2021-11-29 Эвоник Оперейшнс Гмбх Способ выделения липидов из содержащей липиды биомассы с помощью гидрофобного диоксида кремния
US11976253B2 (en) 2018-05-15 2024-05-07 Evonik Operations Gmbh Method of isolating lipids from a lysed lipids containing biomass by emulsion inversion
CN108753457A (zh) * 2018-08-03 2018-11-06 梁云 提高微生物油脂稳定性和安全性的方法
EP3856358A2 (en) * 2018-11-02 2021-08-04 Firmenich SA Prevention of the oxidation of perfumery raw materials and food raw materials
CN113574045A (zh) * 2019-03-14 2021-10-29 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 从微生物细胞组合物中获得脂质的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0522470A1 (en) * 1991-07-11 1993-01-13 Idemitsu Petrochemical Co., Ltd. Triglyceride-containing dry cell fragments and method of preparing them
WO1997037032A2 (en) * 1996-03-28 1997-10-09 Gist-Brocades B.V. Preparation of microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
EP0986960A1 (en) * 1998-09-15 2000-03-22 Dsm N.V. Mucorales fungi for use in preparation of textured products for foodstuffs
US6255505B1 (en) * 1996-03-28 2001-07-03 Gist-Brocades, B.V. Microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
EP1178103A1 (en) * 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Purifying crude pufa oils

Family Cites Families (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE150627C (ru) 1903-05-19
US3106571A (en) 1955-10-14 1963-10-08 Thomas C Fisher Physico-mechanical process of obtaining high quality cocoanut oil
US3642958A (en) 1968-05-14 1972-02-15 Stauffer Chemical Co Isobutoxy-s-(4-chlorophenyl) ethylphosphonodithioate
DE1923529A1 (de) 1968-05-29 1969-12-04 Ingtech Zentralbuero Veb Verfahren zur Aufarbeitung eines mikroorganismenhaltigen Produktes
GB1411450A (en) 1972-12-19 1975-10-22 British Petroleum Co Process for the purification of a micro-organism product
GB1466853A (en) 1973-05-22 1977-03-09 Simon Rosedowns Ltd Extraction
US3958027A (en) 1974-06-14 1976-05-18 Simon-Rosedowns Limited Extraction
US4056638A (en) 1975-06-16 1977-11-01 E. I. Du Pont De Nemours And Company Dielectric drying of fungal material and resultant textured product
DD150627A1 (de) 1980-05-07 1981-09-09 Klaus Triems Verfahren zur gewinnung und loesungsmittelextraktion von feststoffen
US4526902A (en) * 1983-10-24 1985-07-02 Century Laboratories, Inc. Combined fatty acid composition for treatment or prophylaxis of thrombo-embolic conditions
EP0155420B1 (en) 1984-02-09 1988-03-23 The Agency of Industrial Science and Technology A method for the preparation of a fungal body and a lipid rich in gamma-linolenic acid therefrom
US5411873A (en) 1984-05-29 1995-05-02 Genencor, Inc. Process for producing heterologous polypeptides
JPS6114607U (ja) 1984-06-29 1986-01-28 友和産業株式会社 コイル端面包装用押板
IT1180935B (it) 1984-12-14 1987-09-23 Vittorio Bertoli Pompa volumetrica,in particolare per prodotti alimentari fluidi contenenti parti solide
JPS6244170A (ja) † 1985-08-19 1987-02-26 Agency Of Ind Science & Technol モルテイエレラ属糸状菌体の超臨界流体による抽出方法
JPH0716424B2 (ja) 1985-10-01 1995-03-01 ライオン株式会社 アラキドン酸含有脂質の製造方法
US4944954A (en) 1986-04-23 1990-07-31 Epe Incorporated Vegetable oil extraction process
JPH0741767B2 (ja) 1986-07-31 1995-05-10 株式会社ブリヂストン 重荷重用空気入りラジアルタイヤ
JPH0756091B2 (ja) 1986-08-05 1995-06-14 株式会社豊田自動織機製作所 リング精紡機における尻巻糸の規制方法並びに装置
EP0276541B2 (en) 1987-01-28 1998-08-26 Suntory Limited Process for production of arachidonic acid
JPS6438007A (en) 1987-04-28 1989-02-08 Lion Corp Skin external preparation
JP2746371B2 (ja) 1987-12-21 1998-05-06 サントリー株式会社 ビスホモ−γ−リノレン酸及びこれを含有する脂質の製造方法
JPH01207257A (ja) 1988-02-15 1989-08-21 Nippon Oil & Fats Co Ltd α−リノレン酸の分離法
JPH0213388A (ja) 1988-06-30 1990-01-17 Lion Corp 不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法
JPH062068B2 (ja) 1988-07-06 1994-01-12 出光石油化学株式会社 ω６系不飽和脂胞酸含有リン脂質の製造法
US5340594A (en) 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Food product having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US5130242A (en) 1988-09-07 1992-07-14 Phycotech, Inc. Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
JPH02142486A (ja) 1988-11-25 1990-05-31 Lion Corp 不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法
JP2664452B2 (ja) 1988-12-23 1997-10-15 サントリー株式会社 魚貝類用餌料
US5935828A (en) 1989-05-01 1999-08-10 Opta Food Ingredients, Inc. Enzymatic production of monoglycerides containing omega-3 unsaturated fatty acids
US5407957A (en) 1990-02-13 1995-04-18 Martek Corporation Production of docosahexaenoic acid by dinoflagellates
US5244921A (en) 1990-03-21 1993-09-14 Martek Corporation Eicosapentaenoic acids and methods for their production
DK95490D0 (da) 1990-04-18 1990-04-18 Novo Nordisk As Fremgangsmaade til fremstilling af triglycerid og triglyceridsammensaetning
EP1787532A3 (en) 1991-01-24 2010-03-31 Martek Biosciences Corporation Microbial oil mixtures and uses thereof
PH11992043811B1 (en) 1991-01-24 2002-08-22 Martek Corp Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
US5658767A (en) * 1991-01-24 1997-08-19 Martek Corporation Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
FR2674865A1 (fr) 1991-04-02 1992-10-09 Bioprox Ste Angevine Biotechno Procede de preparation d'un concentre liquide d'acide lactique concentre obtenu et son utilisation dans l'industrie alimentaire.
GB9111900D0 (en) 1991-06-03 1991-07-24 Efamol Holdings Fatty acid compositions
US5112803A (en) † 1991-06-21 1992-05-12 International Flavors & Fragrances Inc. Octalactone-containing composition, fermentation process for producing same and organoleptic uses thereof
JPH0517796A (ja) * 1991-07-11 1993-01-26 Idemitsu Petrochem Co Ltd トリグリセリドの回収方法
JP2956909B2 (ja) † 1991-11-15 1999-10-04 エフ・ホフマン−ラ ロシユ アーゲー 海産油の安定化
DE4219360C2 (de) 1992-06-12 1994-07-28 Milupa Ag Verfahren zur Gewinnung von Lipiden mit einem hohen Anteil von langkettig-hochungesättigten Fettsäuren
JPH061996A (ja) * 1992-06-17 1994-01-11 Asahi Denka Kogyo Kk 油脂のエステル交換方法
JPH0663082A (ja) * 1992-08-19 1994-03-08 Tokai Konetsu Kogyo Co Ltd 医療廃棄物処理方法
JP3354608B2 (ja) 1992-11-16 2002-12-09 サントリー株式会社 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法
AU673700B2 (en) 1993-01-27 1996-11-21 Scotia Holdings Plc Triglycerides
JPH0731871A (ja) 1993-05-18 1995-02-03 Canon Inc 膜構造物
EP2140863A1 (en) 1993-06-09 2010-01-06 Martek Biosciences Corporation Use of docosahexaenoic acid for the manufacture of a medicament for the treatment of neurological disorders
US5411872A (en) 1993-09-08 1995-05-02 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transfected cell selection
JP2746074B2 (ja) 1993-09-22 1998-04-28 富士電機株式会社 アモルファスシリコン太陽電池の製造方法
JPH07188692A (ja) 1993-12-27 1995-07-25 Ikeda Shiyokuken Kk 高度不飽和脂肪酸類含有組成物の過酸化物除去方法
JP3071088B2 (ja) 1994-03-02 2000-07-31 昭和産業株式会社 油脂の製造方法及びそのために使用する微生物
JP3369306B2 (ja) 1994-05-18 2003-01-20 大日本印刷株式会社 個人情報記録媒体を発行するシステムに個人情報を配給する装置
DK0789751T3 (da) * 1994-10-31 2002-11-04 Morton Coutts Ltd Pasteurisering og fermentering af et fermenterbart ekstrakt
DE69604491T3 (de) * 1995-06-07 2008-09-25 Danisco A/S Methode zur verbesserung der eigenschaften von mehlteig, sowie zusammensetzung zur teigverbesserung und verbesserte nahrungsmittel
JPH0936492A (ja) 1995-07-24 1997-02-07 Rohm Co Ltd 半導体レーザー素子及びその製造方法
DK0906414T4 (en) 1996-03-28 2015-11-16 Dsm Ip Assets Bv PROCESS FOR THE PREPARATION OF A granular MICROBIAL BIOMASS AND ISOLATION OF VALUABLE COMPOUNDS THENCE
JP3792309B2 (ja) † 1996-08-30 2006-07-05 サントリー株式会社 不飽和脂肪酸含有油脂の製造方法
JP4633204B2 (ja) † 1996-10-11 2011-02-16 サントリーホールディングス株式会社 アラキドン酸含有食用油脂およびそれを含有する食品
DK0960943T3 (en) † 1996-12-27 2014-02-24 Suntory Holdings Ltd MEDIA FOR CULTIVATION OF MICRO-ORGANISMS AND METHOD FOR PRODUCING unsaturated fatty acids or lipids containing DEM
US6391596B1 (en) † 1997-09-25 2002-05-21 Cp Kelco U.S., Inc. High viscosity xanthan and process for preparing same
ID27421A (id) * 1998-06-17 2001-04-05 Dsm Nv Asam arakidonat (ara) mikrobial untuk digunakan pada makanan laut
JP2000069987A (ja) * 1998-08-28 2000-03-07 Suntory Ltd アラキドン酸含有脂質並びにジホモ−γ−リノレン酸含有脂質の製造方法
CN1326344A (zh) * 1998-10-15 2001-12-12 Dsm公司 Pufa增补剂
NO311041B1 (no) * 1999-12-22 2001-10-01 Norsk Hydro As Stabilisering av pigmenter og flerumettede oljer og oljekonsentrater
EP1133926A1 (en) 2000-03-17 2001-09-19 Dsm N.V. Foodstuffs containing mucorales fungi
EP1178118A1 (en) † 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Isolation of microbial oils
CA2484334C (en) 2002-05-03 2013-01-22 Martek Biosciences Corporation High-quality lipids and methods for producing by enzymatic liberation from biomass
ES2712854T3 (es) * 2002-06-19 2019-05-16 Dsm Ip Assets Bv Aceite microbiano y procedimientos para su procesamiento
CN103357199B (zh) 2003-12-30 2019-02-01 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 脱气方法
JP4849806B2 (ja) † 2005-02-08 2012-01-11 日本水産株式会社 新規な菌体処理方法を用いた高度不飽和脂肪酸の製造方法
FR3005154B1 (fr) 2013-04-26 2015-05-15 Commissariat Energie Atomique Four a chauffage par induction electromagnetique, utilisation du four pour la fusion d'un melange de metal(ux) et d'oxyde(s) representatif d'un corium
JP6342925B2 (ja) 2016-02-08 2018-06-13 ファナック株式会社 射出成形セルおよび射出成形セル管理システム

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0522470A1 (en) * 1991-07-11 1993-01-13 Idemitsu Petrochemical Co., Ltd. Triglyceride-containing dry cell fragments and method of preparing them
WO1997037032A2 (en) * 1996-03-28 1997-10-09 Gist-Brocades B.V. Preparation of microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
US6255505B1 (en) * 1996-03-28 2001-07-03 Gist-Brocades, B.V. Microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
EP0986960A1 (en) * 1998-09-15 2000-03-22 Dsm N.V. Mucorales fungi for use in preparation of textured products for foodstuffs
EP1178103A1 (en) * 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Purifying crude pufa oils

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JAREONKITMONGKOL S. ET AL.: "PRODUCTION OF DIHOMO-GAMMA-LINOLENIC ACID BY A DELTA5-DESATURASE DEFECTIVE MUTANT OF MORTIERELLA ALPINA 1S-4", APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, WASHINGTON, DC, US, vol. 58, no. 7, 1 July 1992 (1992-07-01), pages 2196-2200, XP000676362, ISSN: 0099-2240, the whole document *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2747879C2 (ru) * 2015-08-25 2021-05-17 ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. Композиции из рафинированного масла и способы их изготовления

Also Published As

Publication number Publication date
US11083808B2 (en) 2021-08-10
MXPA04012913A (es) 2005-03-31
US9457108B2 (en) 2016-10-04
CN104162176A (zh) 2014-11-26
KR20130114749A (ko) 2013-10-17
CN101837138A (zh) 2010-09-22
EP1513941A2 (en) 2005-03-16
EP2255667A1 (en) 2010-12-01
EP2258207A1 (en) 2010-12-08
IL202364A0 (en) 2010-06-30
KR20180081845A (ko) 2018-07-17
KR101435707B1 (ko) 2014-09-01
ES2712854T3 (es) 2019-05-16
US8895708B2 (en) 2014-11-25
ES2320645T3 (es) 2009-05-27
EA030476B1 (ru) 2018-08-31
KR102254453B1 (ko) 2021-05-21
DK3111767T3 (da) 2019-08-26
EP1513922B2 (en) 2015-09-23
DK1513922T4 (en) 2016-01-11
JP2010187676A (ja) 2010-09-02
US20170081684A1 (en) 2017-03-23
CN101837138B (zh) 2014-05-28
US7517953B2 (en) 2009-04-14
JP6665147B2 (ja) 2020-03-13
CN101837137A (zh) 2010-09-22
CN1662642B (zh) 2010-05-26
DE60325590D1 (de) 2009-02-12
JP2016028588A (ja) 2016-03-03
CN1662642A (zh) 2005-08-31
JP2018069079A (ja) 2018-05-10
CN101837140A (zh) 2010-09-22
HK1203856A1 (en) 2015-11-06
CA2489911C (en) 2019-02-26
JP2013240350A (ja) 2013-12-05
KR101965078B1 (ko) 2019-08-07
EP2269467A1 (en) 2011-01-05
IL165530A (en) 2010-11-30
US20120283461A1 (en) 2012-11-08
ATE419330T1 (de) 2009-01-15
JP6214270B2 (ja) 2017-10-18
CN101837139A (zh) 2010-09-22
CN104138606A (zh) 2014-11-12
EP3111767A1 (en) 2017-01-04
KR20200084063A (ko) 2020-07-09
CN101837135B (zh) 2014-09-24
EP1513922B1 (en) 2008-12-31
KR20170016030A (ko) 2017-02-10
CA3030068A1 (en) 2003-12-31
EP3750406A1 (en) 2020-12-16
EP1513922A1 (en) 2005-03-16
US8217151B2 (en) 2012-07-10
EP2255666A1 (en) 2010-12-01
CN109010854A (zh) 2018-12-18
BRPI0311906B1 (pt) 2017-02-21
DK1513922T3 (da) 2009-05-04
US20050220958A1 (en) 2005-10-06
CN101837135A (zh) 2010-09-22
CA2489911A1 (en) 2003-12-31
KR20050013584A (ko) 2005-02-04
BR0311906A (pt) 2005-04-05
KR101726477B1 (ko) 2017-04-12
KR20110017017A (ko) 2011-02-18
AU2003245978A1 (en) 2004-01-06
IL165530A0 (en) 2006-01-15
EP3111767B1 (en) 2018-11-21
ES2320645T5 (es) 2016-01-26
US20140316151A1 (en) 2014-10-23
US20120316354A1 (en) 2012-12-13
HK1204296A1 (en) 2015-11-13
JP2019162116A (ja) 2019-09-26
JP2005529621A (ja) 2005-10-06
CN101837137B (zh) 2014-09-24
EP1970438A1 (en) 2008-09-17
WO2004001021A1 (en) 2003-12-31
CN109010853A (zh) 2018-12-18
CN101837136B (zh) 2014-05-28
JP2013078590A (ja) 2013-05-02
EP2270191A1 (en) 2011-01-05
EA200500046A1 (ru) 2005-06-30
EA201100701A1 (ru) 2014-08-29
EP1513941B1 (en) 2016-01-13
CA3030068C (en) 2022-09-13
US10493174B2 (en) 2019-12-03
US20090285969A1 (en) 2009-11-19
CN101837139B (zh) 2014-05-28
CN101837136A (zh) 2010-09-22
KR20110014267A (ko) 2011-02-10
US20200046862A1 (en) 2020-02-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11083808B2 (en) Pasteurisation process for microbial cells and microbial oil
EA039406B1 (ru) Способ пастеризации микробных клеток и масла из микробных клеток

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM