EA015147B1 - Стабилизированные препараты антител к бета-амилоидному пептиду и их применение - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение предусматривает препараты для поддержания стабильности Аβ-связывающих полипептидов, например антител против Аβ. Типичные препараты включают агент, регулирующий тоничность, такой как маннит, и буферный агент или аминокислоту, такую как гистидин. Другие типичные препараты включают антиоксидант в количестве, достаточном для ингибирования образования побочных продуктов, например образования высокомолекулярных пептидных агрегатов, низкомолекулярных фрагментов, получающихся в результате деградации полипептида, и их смесей. Препараты по изобретению, необязательно, содержат агент, регулирующий тоничность, такой как маннит, и буферный агент или аминокислоту, такую как гистидин. Препараты пригодны для введения несколькими различными способами.

Description

Предпосылки создания изобретения

Болезнь Альцгеймера (ΑΟ) является нейродегенеративным заболеванием, характеризующимся наличием амилоидных бляшек, нейрофибриллярных клубков и значительной недостаточности нейронов. β-Амилоидный белок (также называемый Ав-пептид), основной компонент сенильных бляшек, участвует в патогенезе болезни Альцгеймера (8е1кое (1989), Се11. 58: 611-612; Нагбу (1997), Тгепбк Ыеиго8С1. 20: 154-159). Показано, что β-амилоид проявляет как непосредственную токсичность в отношении культивированных нейронов (Ьогепхо апб Уаикиег (1996), Αηη. ΝΥ Асаб. 8с1. 777: 89-95), так и токсичность, опосредованную различными медиаторами (Кой е! а1. (1990), Вгаш Векеагсй, 533: 315-320; Майкоп е! а1. (1992), 1. №игокс1еисек, 12: 376-389). Кроме того, исследования на ίη νί\Ό моделях, включая мышиную модель линии ΡΌΑΡΡ и крысиную модель, позволили связать β-амилоид с изучением недостаточности, изменённой когнитивной функцией и ингибированием долговременной потенциации в гиппокампе (Сйеп е! а1. (2000), №йиге. 408: 975-985; \УаЫ1 е! а1. (2002), №йиге. 416: 535-539). Поэтому основное внимание сосредоточено на терапевтических средствах, которые изменяют уровни β-амилоида, чтобы, теоретически, уменьшить тяжесть или даже аннулировать само заболевание.

Одна методология лечения АО, которая недавно появилась в результате успешных исследований на мышах ΡΏΑΡΡ и крысах в качестве экспериментальных моделей, заключается в иммунизации индивидуумов для того, чтобы предоставить иммуноглобулины, такие как антитела (как в случае пассивной иммунизации, при которой терапевтические иммуноглобулины вводят субъекту), или для генерации иммуноглобулинов (активная иммунизация, при которой иммунная система субъекта активируется, продуцируя иммуноглобулины к вводимому антигену), специфичных к β-амилоиду. В свою очередь, эти антитела способствуют снижению массы бляшек, предупреждая агрегацию β-амилоида (8о1ошоп е! а1. (1997), №игоЬю1о§у, 94: 4109-4112) или стимулируя микроглиальные клетки к фагоцитозу и удалению бляшек (Вагб е! а1. (2000), №йиге Мебюше, 6: 916-919). Кроме того, например, гуманизированное 1дС₁ моноклональное антитело к Αβ-пептиду (гуманизированное антитело 3Ώ6) может эффективно лечить ΑΟ с помощью селективного связывания Αβ-пептида.

Для того чтобы белок, и в частности антитело, оставался биологически активным, препарат должен сохранять интактной конформационную целостность, по меньшей мере, коровой последовательности аминокислот белка, в то же время предупреждая расщепление многочисленных функциональных групп белка. Пути деградации белков могут включать химическую нестабильность (т.е. любой процесс, который включает модификацию белка за счёт образования или расщепления связи, что приводит к новой химической частице) или физическую нестабильность (т.е. изменения в структуре высшего порядка белка). Химическая нестабильность может являться результатом дезамидирования, рацемизации, гидролиза, окисления, β-элиминирования или дисульфидного обмена. Физическая нестабильность может возникать, например, в результате денатурации, агрегации, осаждения (преципитации) или адсорбции. Общий обзор об устойчивости белковых фармацевтических препаратов см., например, Мапшпд, е! а1. (1989), Ρйа^тасеиΐ^са1 Векеагсй, 6: 903-918. Кроме того, желательно поддерживать устойчивость, когда полипептиды-носители не входят в состав препарата.

Хотя возможная нестабильность белков встречается часто, невозможно предсказать конкретно результаты нестабильности для конкретного белка. Любая такая нестабильность теоретически может привести к образованию полипептидного побочного продукта или производного, обладающего пониженной активностью, повышенной токсичностью и/или повышенной иммуногенностью. Действительно, преципитация (осаждение) полипептида может привести к тромбозу, негомогенности лекарственной формы и иммунным реакциям. Таким образом, безопасность и эффективность любого фармацевтического препарата полипептида прямо связаны с его стабильностью.

Следовательно, продолжает существовать необходимость в препаратах, которые не только сохраняют стабильность и биологическую активность биологических полипептидов, например Аβ-связывающих полипептидов, при хранении и доставке, но также пригодны для терапевтического введения различными способами.

- 1 015147

Сущность изобретения

Настоящее изобретение включает препараты, созданные с целью придать стабильность и сохранить биологическую активность введённого биологически активного белка, в частности белков или полипептидов, связывающих Άβ, таких, например, как антитела к Άβ или их фрагменты или участки. Кроме того, изобретение предусматривает полипептидные препараты, например, такие как стабилизированные жидкие полипептидные препараты, устойчивые к образованию нежелательных полипептидных побочных продуктов.

Целостность антигенсвязывающих полипептидов для терапевтического применения особенно важна, так как, если полипептид образует побочные продукты, например полученные при стоянии агрегаты или фрагменты, являющиеся результатом расщепления, биоактивность может быть утрачена, при этом ставится под угрозу терапевтическая активность молекулы на стандартную дозу. Кроме того, существует острая необходимость стабилизировать терапевтические полипептиды, предполагаемые для специализированных функций, для доставки и применения по определённым биологическим показаниям, например для лечения нейродегенеративных состояний, при которых полипептид должен преодолеть гематоэнцефалический барьер (ВВВ) и связать целевой антиген.

В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает стабилизированный препарат, включающий по меньшей мере один Άβ-связывающий полипептид, по меньшей мере один агент, регулирующий тоничность, причём этот агент присутствует в количестве, достаточном для того, чтобы сделать препарат пригодным для введения, и по меньшей мере один буферный агент в количестве, достаточном для поддержания физиологически приемлемого рН. Препарат может быть лиофилизированным или жидким препаратом. Некоторые препараты включают по меньшей мере один антиоксидант, например, такой как аминокислотный антиоксидант, например, такой как метионин. В некоторых препаратах агентом, регулирующим тоничность, является маннит или ЫаС1. В некоторых препаратах по меньшей мере один буферный агент представляет собой сукцинат, фосфат натрия или аминокислоту, такую как гистидин. Предпочтительные препараты включают также по меньшей мере один стабилизатор, например, такой как полисорбат 80. В некоторых препаратах стабилизатор представляет собой полисорбат 80, антиоксидантом является метионин, агентом, регулирующим тоничность, является маннит, сорбит или ЫаС1, а буферным агентом является гистидин. В некоторых препаратах по меньшей мере один Άβ-связывающий полипептид выбирают из группы, состоящей из антитела к Άβ-пептиду, Ρν фрагмента антитела к Άβ-пептиду, РаЬ фрагмента антитела к Άβ-пептиду, Р(аЬ')₂ фрагмента антитела к Άβ-пептиду, Рб фрагмента антитела к Άβ-пептиду, одноцепочечного антитела к Άβ (κοΡν). фрагмента однодоменного антитела к Άβ (ОаЬ), полипептида со структурой бета-складчатого листа, включающего по меньшей мере одну гипервариабельную область антитела (СОЯ) из антитела к Άβ, неглобулярного полипептида, включающего по меньшей мере одну СОК. область антитела из антитела к Άβ. В некоторых препаратах по меньшей мере один Άβ-связывающий полипептид представляет собой антитело к Άβ, например, такое, которое специфически связывается с эпитопом внутри остатков 1-7, 1-5, 3-7, 3-6, 13-28, 15-24, 16-24, 16-21, 19-22, 33-40, 33-42 Άβ, или его фрагмент РаЬ, Р(аЬ')₂ или Ρν. Типичные антитела к Άβ специфически связываются с эпитопом внутри остатков 1-10 Άβ, например внутри остатков 1-7, 1-5, 3-7 или 3-6 Άβ. Другие иллюстративные антитела против Άβ специфически связываются с эпитопом внутри остатков 13-28 Άβ, например внутри остатков 16-21 или 19-22 Άβ. Ещё одни типичные антитела против Άβ специфически связываются с С-концевым эпитопом Άβ, например, таким как 33-40 или 33-42 Άβ. Предпочтительные антитела против Άβ включают гуманизированное антитело против Άβ, например гуманизированное 3Ό6 антитело, гуманизированное 10Ό5 антитело, гуманизированное 12В4 антитело, гуманизированное 266 антитело, гуманизированное 12Ά11 антитело или гуманизированное 15С11 антитело.

В некоторых препаратах антитело против Άβ связывает непрерывный эпитоп, который включает остатки внутри 1-7 и внутри 13-28 аминокислотных остатков Άβ. В некоторых препаратах антитело является биспецифическим антителом или антителом, полученным по способу, описанному в опубликованной Международной патентной заявке XVО 03/070760. В некоторых таких препаратах эпитоп представляет собой непрерывный эпитоп. В предпочтительных препаратах антитело против Άβ представляет собой гуманизированное 3Ό6 антитело, гуманизированное 10Ό5 антитело, гуманизированное 12В4 антитело, гуманизированное 266 антитело, гуманизированное 12Ά11 антитело или гуманизированное 15С11 антитело.

Изотип антитела может представлять собой 1дМ, 1§6₁, 1§С₂, 1§6₃, 1§С₄ или любой другой фармацевтически приемлемый изотип. В предпочтительных препаратах изотип представляет собой человеческий 1дС| или человеческий 1§С₄. В некоторых жидких препаратах концентрация антитела против Άβ составляет примерно 0,1-60 мг/мл, примерно 40-60 мг/мл, примерно 50 мг/мл, примерно 30 мг/мл, примерно 17-23 мг/мл, примерно 20 мг/мл, примерно 17 мг/мл, примерно 10 мг/мл, примерно 5 мг/мл, примерно 2 мг/мл или около 1 мг/мл, предпочтительно около 17-23 мг/мл.

- 2 015147

В некоторых препаратах по меньшей мере один агент, регулирующий тоничность, представляет собой Ό-маннит, и он присутствует в концентрации около 1-10% вес./об., около 2-6% вес./об. или предпочтительно около 4% вес./об. В некоторых препаратах по меньшей мере один буферный агент представляет собой гистидин, и он присутствует в концентрации около 0,1-25 мМ, около 5-15 мМ, предпочтительно около 5 мМ или около 10 мМ. В других препаратах по меньшей мере один буферный агент представляет собой сукцинат, и он присутствует в концентрации около 0,1-25 мМ, например около 10 мМ. В некоторых препаратах антиоксидантом является метионин, и он присутствует в концентрации около 0,1-25 мМ, около 5-15 мМ или предпочтительно около 10 мМ. В предпочтительных препаратах стабилизатором является полисорбат 80, и он присутствует в концентрации около 0,001-0,01% вес./об., около 0,005-0,01% вес./об. или около 0,005% вес./об. рН препарата около 5-7, около 5,5-6,5, около 6,0-6,5, около 6,2, около 6,0 или около 5,5, предпочтительно около 6,0.

Предпочтительный препарат имеет рН около 6,0-6,5 и включает антитело против Άβ, которое специфически связывается с эпитопом внутри остатков, выбранных из группы, состоящей из остатков 1-7, 1-5, 3-7, 3-6, 13-28, 15-24, 16-24, 16-21, 19-22, 33-40 и 33-42 Άβ, например Ό-маннит в концентрации около 2-6% вес./об., например гистидин в концентрации около 0,1-25 мМ, метионин в концентрации около 0,1-25 мМ и стабилизатор. Предпочтительно стабилизатор представляет собой полисорбат 80 в концентрации около 0,001-0,01% вес./об.

Препарат может представлять собой стабилизированный жидкий полипептидный препарат, созданный таким образом, чтобы обеспечить стабильность и сохранить биологическую активность введённого полипептида. Препарат включает терапевтически активный Άβ-связывающий полипептид и антиоксидант в количестве, достаточном для уменьшения образования побочного продукта полипептида в процессе хранения препарата.

Некоторые из жидких полипептидных препаратов стабилизированы против образования нежелательных побочных продуктов, таких как высокомолекулярные полипептидные агрегаты, низкомолекулярные продукты деградации полипептида или их смеси.

В препаратах, в которых терапевтический антигенсвязывающий полипептид представляет собой антитело, типичными высокомолекулярными агрегатами, количество которых должно быть сведено к минимуму, являются, например, комплексы антитело:антитело, комплексы антитело: фрагмент антитела, комплексы фрагмент антитела: фрагмент антитела или их смеси. В целом, молекулярная масса высокомолекулярных комплексов или побочных продуктов выше молекулярной массы мономера антигенсвязывающего полипептида, например в случае 1дС антитела, более примерно 150 кДа. В таких препаратах антитела типичные низкомолекулярные полипептидные продукты деградации, количество которых должно быть сведено к минимуму, представляют собой, например, комплексы, состоящие из лёгкой цепи антитела, тяжёлой цепи антитела, комплекса лёгкой цепи антитела и тяжёлой цепи антитела или их смеси. В целом, молекулярная масса низкомолекулярных комплексов или побочных продуктов ниже молекулярной массы мономера антигенсвязывающего полипептида, например в случае 1дС антитела, менее примерно 150 кДа.

Предпочтительный стабилизированный препарат антитела против Άβ включает метионин в качестве антиоксиданта в количестве, достаточном для ингибирования образования нежелательных побочных продуктов, агент, регулирующий тоничность, например, в количестве, достаточном для того, чтобы сделать препарат пригодным для введения, и, например, аминокислоту или её производное в количестве, достаточном для поддержания физиологически подходящего рН.

Некоторые препараты являются устойчивыми в замороженном состоянии. Препарат может быть пригоден для парентерального, внутривенного, внутримышечного, подкожного, интракраниального или эпидурального введения, предпочтительно для внутривенного или подкожного введения. Некоторые препараты могут быть пригодны для нацеленной доставки в мозг или цереброспинальную жидкость субъекта. Препарат может практически не содержать консервантов. Некоторые препараты устойчивы по меньшей мере в течение примерно 12 месяцев, по меньшей мере в течение примерно 18 месяцев, по меньшей мере в течение примерно 24 месяцев или по меньшей мере в течение примерно 30 месяцев. Некоторые препараты устойчивы при температуре примерно от -80 до 40°С, примерно от 0 до 25°С, примерно от 0 до 10°С, предпочтительно примерно от -80 до -50°С или примерно от 2 до 8°С.

Некоторые препараты устойчивы по меньшей мере в течение примерно 12 месяцев при температуре выше температуры замерзания, примерно до 10°С и имеют рН около 5,5-6,5. Такой препарат включает, по меньшей мере одно антитело против Άβ в примерной концентрации 1-30 мг/мл, маннит в примерной концентрации 4% вес./об. или №С1 в примерной концентрации 150 мМ, гистидин или сукцинат в примерной концентрации 5-10 мМ и 10 мМ метионина. Один такой препарат имеет рН около 6,0, содержит 1 мг/мл антитела к Άβ, около 10 мМ гистидина и около 4% вес./об. маннита. Другие препараты устойчивы по меньшей мере в течение 24 месяцев при температуре около 2-8°С и включают полисорбат 80 в примерной концентрации 0,001-0,01 вес./об. Некоторые из таких препаратов имеют рН около 6,0-6,5 и включают около 10 мМ гистидина, около 4% вес./об. маннита и около 1 мг/мл, около 2 мг/мл или около 5 мг/мл Άβ-антитела. Другие такие препараты включают около 10 мМ гистидина, около 4% вес./об. ман

- 3 015147 нита, около 0,005% вес./об. полисорбата 80 и около 10 мг/мл, около 30 мг/мл или 30 мг/мл антитела к Αβ предпочтительно при рН около 6,0-6,2.

В этих препаратах антитело против Αβ предпочтительно представляет собой гуманизированное 3Ό6 антитело, гуманизированное 10Ό5 антитело, гуманизированное 12В4 антитело, гуманизированное 266 антитело, гуманизированное 12А11 антитело или гуманизированное 15С11 антитело. Один такой препарат имеет рН около 6,0-6,5 и включает около 10 мМ гистидина, около 4% вес./об. маннита и около 2-20 мг/мл антитела против Ав, выбранного из группы, состоящей из гуманизированного 3Ό6 антитела, гуманизированного 10Ό5 антитела, гуманизированного 12В4 антитела, гуманизированного 12А11 антитела. Другой такой препарат имеет рН около 6,0-6,5 и включает 10 мМ гистидина, около 150 мМ №1С1 и около 2-20 мг/мл антитела против Ав, выбранного из группы, состоящей из гуманизированного 12В4 антитела и гуманизированного 12А11 антитела. Ещё один такой препарат имеет рН около 6,0-6,5 и включает около 10 мМ гистидина, около 4% вес./об. маннита и около 2-20 мг/мл антитела против Ав, выбранного из группы, состоящей из гуманизированного 266 антитела и гуманизированного 15А11 антитела.

Предпочтительный препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 24 месяцев при температуре около 2-8°С, имеет рН около 5,5-6,5 и включает примерно 2-23 мг/мл, предпочтительно около 17-23 мг/мл гуманизированного 3Ό6 антитела, около 10 мМ гистидина и около 10 мМ метионина. Предпочтительно препарат дополнительно включает около 4% вес./об. маннита. Препарат предпочтительно включает полисорбат 80 в примерной концентрации 0,001-0,01% вес./об., более предпочтительно около 0,005% вес./об. полисорбата 80. В таких препаратах гуманизированное 3Ό6 антитело может присутствовать в примерной концентрации 20-23 мг/мл.

Другой препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 24 месяцев при температуре около 2-8°С, имеет рН около 5,5-6,5 и включает примерно 2-23 мг/мл гуманизированного 3Ό6 антитела, около 10 мМ сукцината, около 10 мМ метионина, около 4% вес./об. маннита и около 0,005% вес./об. полисорбата 80. В некоторых таких препаратах примерная концентрация гуманизированного 3Ό6 антитела составляет 20-23 мг/мл.

Другой предпочтительный препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 24 месяцев при температуре около 2-8°С, имеет рН около 6,0-6,5 и включает примерно 2-30 мг/мл гуманизированного 266 антитела, около 10 мМ гистидина и около 10 мМ метионина. Некоторые из таких препаратов дополнительно включают около 4% вес./об. маннита. Некоторые из таких препаратов включают полисорбат 80 в примерной концентрации 0,001-0,01% вес./об., например около 0,005% вес./об. полисорбата 80. В некоторых таких препаратах гуманизированное антитело 266 присутствует в примерной концентрации около 17-23 мг/мл или около 20-23 мг/мл.

Ещё один препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 24 месяцев при температуре около 2-8°С, имеет рН около 6,0-6,5 и включает примерно 2-20 мг/мл гуманизированного 266 антитела, около 10 мМ сукцината, около 10 мМ метионина, около 4% вес./об. маннита и около 0,005% вес./об. полисорбата.

Другой предпочтительный препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 24 месяцев при температуре около 2-8°С, имеет рН около 6,0-6,5 и включает примерно 2-30 мг/мл гуманизированного 12А11 антитела, около 10 мМ гистидина и около 10 мМ метионина. Некоторые из таких препаратов дополнительно включают около 150 мМ ЫаС1. Такие препараты могут включать полисорбат 80 в примерной концентрации 0,001-0,01% вес./об., например около 0,005% вес./об. полисорбата 80. В некоторых таких препаратах гуманизированное антитело 12А11 присутствует в примерной концентрации около 17-23 мг/мл или около 20-23 мг/мл.

Ещё один препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 24 месяцев при температуре около 2-8°С, имеет рН около 6,0-6,5 и включает примерно 2-20 мг/мл гуманизированного 12А11 антитела, около 5 мМ гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% вес./об. маннита и около 0,005% вес./об. полисорбата 80.

Изобретение также предусматривает препарат, устойчивый после оттаивания от температуры, примерно -(50-80)°С, имеет рН около 6,0 и включает около 40-60 мг/мл антитела против Ав, около 1-2 мг/мл гистидина, около 1-2 мг/мл метионина и около 0,05 мг/мл полисорбата 80. Предпочтительно маннит исключён. Предпочтительно антитело Ав является гуманизированным 3Ό6 антителом или гуманизированным 266 антителом.

Настоящее изобретение также предусматривает жидкий препарат, включающий антитело против Ав, маннит и гистидин. В некоторых из таких препаратов антитело против Ав присутствует в примерной концентрации 1-30 мг/мл. Предпочтительно маннит присутствует в количестве, достаточном для сохранения изотоничности препарата. Предпочтительно гистидин присутствует в количестве, достаточном для поддержания физиологически пригодного рН.

- 4 015147

Один такой препарат включает около 20 мг/мл антитела против Αβ, около 10 мМ Ь-гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% маннита и имеет рН около 6,0.

Другой такой препарат включает около 30 мг/мл антитела против Ав, около 10 мМ сукцината, около 10 мМ метионина, около 6% маннита и имеет рН около 6,2.

Ещё один такой препарат включает около 20 мг/мл антитела против Ав, около 10 мМ Ь-гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% маннита, около 0,005% полисорбата 80 и имеет рН около 6,0.

Другой такой препарат включает около 10 мг/мл антитела против Ав, около 10 мМ сукцината, около 10 мМ метионина, около 10% маннита, около 0,005% полисорбата 80 и имеет рН около 6,5.

Другой такой препарат включает около 5-20 мг/мл антитела против Ав, около 5-10 мМ Ь-гистидина, около 10 мМ метионина, около 10% маннита, около 4% маннита, около 0,005% полисорбата 80 и имеет рН около 6,0-6,5.

Ещё один такой препарат включает около 5-20 мг/мл антитела против Ав, около 5-10 мМ Ь-гистидина, около 10 мМ метионина, около 150 мМ №С1. около 0,005% полисорбата 80 и имеет рН около 6,0-6,5.

Настоящее изобретение также предусматривает препарат, пригодный для внутривенного введения, который включает около 20 мг/мл антитела против Ав, около 10 мМ Ь-гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% маннита и имеет рН около 6,0. Предпочтительно такой препарат включает около 0,005% полисорбата 80.

Изобретение предусматривает способ повышения стабильности антигенсвязывающего полипептида, например антитела, в жидком фармацевтическом препарате, в котором в противном случае при хранении наблюдалось бы образование полипептидного побочного продукта в жидком препарате. Соответственно, способ включает введение в препарат антиоксиданта, например метионина или его аналога, в количестве, достаточном для уменьшения образования побочного продукта.

Настоящее изобретение также предусматривает способ поддержания стабильности препарата гуманизированного антитела против Ав, который должен храниться при температуре около -(50-80)°С с последующим хранением при температуре около 2-8°С, включающий:

(ί) объединение (смешивание) около 40-60 мг/мл гуманизированного антитела против Ав, около 1-2 мг/мл Ь-гистидина, около 1-2 мг/мл метионина и около 0,05 мг/мл полисорбата 80;

(ίί) доведение рН примерно до 6;

(ίίί) фильтрование в криососуд и замораживание;

(ίν) оттаивание;

(ν) добавление маннита или №1С1 и разбавителя в количествах, достаточных для получения в результате конечной концентрации около 4% маннита или около 150 мМ ЫаС1, около 2-20 мг/мл гуманизированного антитела к Ав; около 5-10 мМ гистидина; около 10 мМ метионина и около 0,005% полисорбата 80;

(νί) фильтрование;

(νίί) перенос в стеклянный флакон и герметизация;

(νίίί) хранение при температуре около 2-8°С.

Настоящее изобретение также предусматривает набор, включающий контейнер с препаратом по данному описанию и инструкции по применению.

Настоящее изобретение также предусматривает фармацевтическую стандартную лекарственную форму, включающую примерно 10-250 мг антитела против Ав, около 4% маннита или около 150 мМ №1С'Т около 5-10 мМ гистидина или сукцината и около 10 мМ метионина. Некоторые из таких фармацевтических стандартных лекарственных форм включают около 0,001-0,1% полисорбата 80. Некоторые из таких фармацевтических стандартных лекарственных форм включают около 40-60 мг, около 60-80 мг, около 80-120 мг, около 120-160 мг или около 160-240 мг антитела против Ав. Некоторые из таких препаратов до момента введения пациенту можно хранить в стеклянном флаконе (ампуле) при температуре около 2-8°С.

Кроме того, настоящее изобретение предусматривает терапевтический продукт, включающий стеклянный флакон (ампулу) с препаратом, содержащим около 10-250 мг антитела против Ав, около 4% маннита или около 150 мМ ЫаС1, около 5-10 мМ гистидина и около 10 мМ метионина. Некоторые из таких терапевтических продуктов дополнительно включают маркировку для применения, включая инструкции по применению подходящего объёма, необходимого для получения дозы около 0,15-5 мг/кг веса пациента. Обычно флакон (ампула, пузырёк) представляет собой флакон (ампулу, пузырёк) на 1, 2, 5, 10, 25 или 50 мл. Доза некоторых из таких терапевтических продуктов составляет около 0,5-3 мг/кг, предпочтительно около 1-2 мг/кг. В некоторых таких терапевтических продуктах концентрация антитела против Ав равна примерно 10-60 мг/мл, предпочтительно около 20 мг/мл. Терапевтический продукт предпочтительно включает около 0,005% полисорбата 80. Препарат некоторых таких терапевтических продуктов предназначен для подкожного введения или внутривенного введения.

- 5 015147

Настоящее изобретение также предусматривает способ профилактического или терапевтического лечения заболевания, характеризующегося отложениями Άβ-пептида, которое включает внутривенное или подкожное введение стандартной дозы фармацевтического препарата по данному описанию.

Другие признаки и преимущества данного изобретения будут очевидны из нижеприведённого подробного описания и формулы изобретения.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 дано схематическое изображение теоретически ожидаемой структуры 1дС антитела и приблизительных положений внутрицепных и межцепных дисульфидных связей, сайтов гликозилирования (обозначены шестигранником), гипервариабельных областей (СПЯ), каркасных областей (затенённые) и константных областей.

На фиг. 2 изображены полные аминокислотные последовательности лёгкой и тяжёлой цепей гуманизированного 3Ό6 антитела против Άβ, вариант 2 (Ηπ3Ό6.ν2), последовательности 8ЕО ΙΌ N0: 1 и 8Е0 ΙΌ N0: 2 соответственно. Гипервариабельные области (СОЯ) лёгкой цепи, т.е. СЭКЕ СПЯ2 и СПЯ3, находятся соответственно в положениях остатков 24-39, 55-61 и 94-102 (верхняя панель). Гипервариабельные области (СПЯ) тяжёлой цепи, т.е. СПЯ1, СПЯ2 и СПЯ3, находятся соответственно в положениях остатков 40-44, 50-65 и 99-108 (нижняя панель). Ожидаемые внутримолекулярные дисульфидные связи иллюстрируются с помощью соединений включённых цистеиновых остатков. Цистеиновые остатки, предположительно образующие внутримолекулярные дисульфидные связи, подчеркнуты и связь показана. Связанный с Ν-концом консенсусный сайт гликозилирования тяжёлой цепи антитела указан курсивом в положениях остатков 299-301 (нижняя панель). Ожидаемый С-концевой лизин в тяжёлой цепи показан в скобках.

На фиг. 3 графически изображён ожидаемый срок хранения препаратов антитела (в присутствии или в отсутствие полисорбата 80 (Р880)), полученных по настоящему изобретению и хранящихся при 5°С.

На фиг. 4 графически изображён ожидаемый срок хранения препаратов антитела (в присутствии или в отсутствие Р880), полученных по настоящему изобретению и хранящихся при 25°С.

На фиг. 5 графически изображён ожидаемый срок хранения препаратов антитела (в присутствии или в отсутствие Р880), полученных по настоящему изобретению и хранящихся при 40°С.

На фиг. 6 графически изображена прогнозированная деградация препаратов с Р880, полученных по настоящему изобретению и хранящихся при 5°С.

На фиг. 7 графически изображён анализ методом эксклюзионной по размеру хроматографии (8ЕС) препаратов с Р880, полученных по настоящему изобретению, хранящихся при 5°С и повторно обработанных с целью свести к минимуму меру изменчивости анализа.

На фиг. 8 графически изображено предсказание расщепления препаратов без Р880, изготовленных в соответствии с настоящим изобретением и хранящихся при 5°С.

На фиг. 9 изображена хроматограмма, которая показывает, что присутствие Р880 сдвигает побочные продукты, обнаруживаемые в стабилизированном полипептидном препарате, от высокомолекулярных к низкомолекулярным, не изменяя профиль мономерного антитела.

На фиг. 10 графически изображено образование нежелательных побочных продуктов в полипептидном препарате, содержащем 1§С₄, в частности высокомолекулярных полипептидных агрегатов, при добавлении антиоксиданта, такого как свободный метионин.

На фиг. 11 графически изображено ингибирование образования нежелательных побочных продуктов в полипептидном препарате, содержащем 1§С₂, в частности высокомолекулярных полипептидных агрегатов, при добавлении антиоксиданта, такого как свободный метионин.

Подробное описание изобретения

Для чёткого понимания описания и формулы изобретения ниже представлены следующие определения.

Применяемый в данном описании термин амилоидогенное заболевание включает любое заболевание, ассоциированное (или вызванное) с образованием или отложением нерастворимых амилоидных фибрилл. Типичные амилоидогенные заболевания включают, но без ограничения, системный амилоидоз, болезнь ^ьцгеймера, диабет зрелого возраста, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, лобновисочная деменция и прионные трансмиссивные губчатые (спонгиформные) энцефалопатии (куру и болезнь Кройтцфельда-Якоба у людей и почесуха и В8Е (коровье бешенство) у овец и крупного рогатого скота соответственно). Различные амилоидогенные заболевания определяются или характеризуются природой полипептидного компонента отложений фибрилл. Например, у субъекта или больного болезнью Лльцгеймера β-амилоидный белок (например, дикого типа, вариант или усечённый (процессированный) β-амилоидный белок) является типичным полипептидным компонентом амилоидного отложения. Соответственно, болезнь ^ьцгеймера является примером заболевания, характеризующегося отложениями Άβ, или заболевания, ассоциированного с отложениями Άβ, например, в мозге субъекта или пациента.

- 6 015147

Термины β-амилоидный белок, β-амилоидный пептид, β-амилоид, Άβ и Άβ-пептид применяются в данном описании взаимозаменяемо.

Термин Άβ-связывающий полипептид включает полипептиды, способные специфически связываться с Άβ-пептидом (пептидами) или с эпитопом (эпитопами) внутри указанных Άβ-пептидов. Как правило, Άβ-связывающие полипептиды содержат, по меньшей мере, функциональный участок иммуноглобулина или иммуноглобулиноподобного домена, например рецептор, который содержит одну или более вариабельных областей или гипервариабельных областей (СОВ), которые сообщают полипептиду свойство специфического связывания. Предпочтительные антигенсвязывающие полипептиды включают антитела, например 1дМ, 1§6₁, 1§С₂, 1дС₃ или 1д6₄.

Термин антитело относится к молекулам иммуноглобулинов и иммунологически активным участкам молекул иммуноглобулинов (молекул, которые содержат сайт связывания антигена, который специфически связывает антиген), включая моноклональные антитела (в том числе полноразмерные моноклональные антитела), поликлональные антитела, полиспецифические антитела (например, биспецифические антитела), химерные антитела, СЭВ-привитые антитела, гуманизированные антитела, человеческие антитела и одноцепочечные антитела (8сРу8).

Выражение моноклональное антитело или композиция моноклонального антитела по данному описанию относится к популяции молекул антитела, которые содержат только один вид антигенсвязывающего сайта, способного распознавать и связываться с конкретным эпитопом целевого антигена, например эпитоп(ы) Άβ. Таким образом, композиция моноклонального антитела, как правило, выявляет специфичность и аффинность единичного связывания с конкретным целевым антигеном, в отношении которого она является иммунореагирующей.

Термин одноцепочечное антитело относится к белку, имеющему структуру из двух полипептидных цепей, состоящую из тяжёлой и лёгкой цепей, причём указанные цепи стабилизированы, например, межцепными пептидными линкерами, которые способны специфически связывать антиген. Методы получения одноцепочечных антител, специфических к целевому антигену, описаны, например, в патенте ^Ά 4946778.

Термин фрагмент антитела включает Р(аЬ')₂ фрагменты, РаЬ фрагменты, РаЬ' фрагменты, Ρά фрагменты, Ρν фрагменты и фрагменты однодоменного антитела (ИЛЬз). Иммунологически активные участки иммуноглобулинов включают, например, Р(аЬ) и Р(аЬ')2 фрагменты. Методы конструирования РаЬ фрагментов описаны, например, Низе, с( а1. (1989), 8с1сисс. 246: 1275-1281). Другие фрагменты антител можно получать методами, известными в уровне техники, включая, но без ограничения:

(ί) фрагмент Р(аЬ')₂, получаемый расщеплением молекулы антитела с помощью пепсина;

(ίί) фрагмент РаЬ, получаемый восстановлением дисульфидных мостиков фрагмента Р(аЬ')₂;

(ίίί) фрагмент РаЬ', получаемый обработкой молекулы антитела папаином и восстановителем; и (ίν) фрагменты Ρν.

Различные фрагменты можно также получать известными в уровне техники методами рекомбинантной ДНК (генетической инженерии). Άнтитела нечеловеческого происхождения можно гуманизировать методами, описанными, например, в патенте СШЛ 5225539. В одном методе СИВ нечеловеческого происхождения вводят в человеческое антитело или в консенсусную последовательность каркаса антитела. Затем для модулирования аффинности или иммуногенности можно ввести дальнейшие изменения в каркас антитела.

Термин домен относится к глобулярной области полипептида тяжёлой или лёгкой цепи, содержащей иммуноглобулиновую складку. Иммуноглобулиновая складка состоит из структуры β-складчатого листа (вторичная структура) и включает единственную дисульфидную связь. Далее домены называются в данном описании константные или вариабельные, в зависимости от относительного отсутствия разнообразия (изменчивости, вариантов) внутри доменов различных членов класса в случае константного домена или заметного разнообразия (изменчивости) внутри доменов различных членов класса в случае вариабельного домена. Домены антитела или полипептида часто в уровне техники с равным основанием (взаимозаменяемо) называют области антитела или полипептида. Константные домены лёгкой цепи антитела с равным основанием (взаимозаменяемо) называют константные области лёгкой цепи, константные домены лёгкой цепи, Сь области или Сь домены. Константные домены тяжёлой цепи антитела с равным основанием (взаимозаменяемо) называют константные области тяжёлой цепи, константные домены тяжёлой цепи, С_Н области или С_Н домены. Вариабельные домены лёгкой цепи антитела с равным основанием (взаимозаменяемо) называют вариабельные области лёгкой цепи, вариабельные домены лёгкой цепи, Уь области или У|, домены. Вариабельные домены тяжёлой цепи антитела с равным основанием (взаимозаменяемо) называют вариабельные области тяжёлой цепи, вариабельные домены тяжёлой цепи, У_Н области или У_Н домены.

- 7 015147

Термин область может также относиться к части или к участку цепи антитела или домена цепи антитела (например, к части или к участку тяжёлой или лёгкой цепи антитела или к части или участку константного или вариабельного домена по данному описанию), а также к более дискретным частям или участкам указанных цепей или доменов. Например, лёгкая и тяжёлая цепи или вариабельные домены лёгкой и тяжёлой цепей включают гипервариабельные области или СОЯ, вкрапленные среди каркасных областей или ЕЯ по данному описанию.

Термин антитело против Ав (антитело к Ав) включает антитела (и их фрагменты), способные связывать эпитоп(ы) Ав-пептида. Антитела против Ав включают, например, антитела к Ав, описанные в опубликованной патентной заявке США № 20030165496 А1, опубликованной патентной заявке США № 20040087777 А1, опубликованной Международной патентной заявке № XVО 02/46237 А3 и опубликованной Международной патентной заявке № νθ 04/080419 А2. Другие антитела против Ав описаны, например, в опубликованных Международных патентных заявках № νθ 03/077858 А2 и νθ 04/108895 А2, каждая из них озаглавлена Гуманизированные антитела, которые распознают бетаамилоидный пептид, опубликованной Международной патентной заявке № νθ 03/016466 А2, озаглавленной Антитела против Ав, опубликованной Международной патентной заявке № νθ 0162801 А2, озаглавленной Гуманизированные антитела, которые блокируют амилоидный бета-пептид, опубликованной Международной патентной заявке № νθ 02/088306 А2, озаглавленной Гуманизированные антитела, и опубликованной Международной патентной заявке № νθ 03/070760 А2, озаглавленной Антитела против Ав и их применение.

Термин фрагмент относится к части или к участку антитела или цепи антитела, содержащим меньше аминокислотных остатков, чем интактное или полноразмерное антитело или интактная или полноразмерная цепь антитела. Фрагменты можно получать химической или ферментативной обработкой интактного или полноразмерного антитела или интактной или полноразмерной цепи антитела. Фрагменты можно также получать методами рекомбинантной ДНК. Примеры фрагментов включают ЕаЬ, ЕаЬ', Е(аЬ')₂, ЕаЬс и/или Εν фрагменты.

Термин антигенсвязывающий фрагмент относится к полипептидному фрагменту иммуноглобулина или антитела, который связывает антиген или конкурирует с интактным антителом, из которого он образован, за специфическое связывание антигена.

Термин конформация относится к третичной структуре белка или полипептида, такого, например, как антитело, цепь антитела, его домен или область. Например, выражение конформация лёгкой (или тяжёлой) цепи относится к третичной структуре вариабельной области лёгкой (или тяжёлой) цепи, а выражение конформация антитела или конформация фрагмента антитела относится к третичной структуре антитела или его фрагмента.

Термин специфическое связывание антитела означает, что антитело проявляет заметную аффинность к конкретному антигену или эпитопу и, как правило, не проявляет значительной перекрёстной реактивности. В типичных вариантах изобретения антитело не проявляет перекрёстной реактивности (кросс-реактивности) (например, не реагирует перекрёстно с не-Ав-пептидами или с отдалёнными или далёкими эпитопами на Ав). Заметное (значительное) или предпочтительное связывание включает связывание с аффинностью по меньшей мере 10^-6, 10^-7, 10^-8, 10^-9 или 10^-10 М. Предпочтительна аффинность более чем 10^-7 М, более предпочтительна аффинность более чем 10^-8 М. Предполагается также, что в объём настоящего изобретения входят значения, промежуточные между представленными в данном описании значениями, а предпочтительная аффинность связывания может быть указана как интервал аффинностей, например 10^-6-10^-10 М, предпочтительно 10^-7-10^-10 М, более предпочтительно, 10^-8-10^-10 М. Антитело, которое не проявляет заметной перекрёстной реактивности, представляет собой антитело, которое не связывается заметно с нежелательной частицей (нежелательным объектом) (например, с нежелательньм белком, полипептидом или пептидом). Например, антитело, которое специфически связывается с Ав, будет заметно связывать Ав, но не будет в значительной степени реагировать с не-Ав-белками или пептидами (например, не-Ав-белками или пептидами, входящими в состав бляшек). Антитело, специфическое к конкретному эпитопу, не будет заметно перекрёстно реагировать с удалёнными или отличными эпитопами на том же самом белке или пептиде. Специфическое связывание можно определить любым общепризнанным в уровне техники методом определения такого связывания. Предпочтительно специфическое связывание определяют по методу Скетчарда или методами конкурентного связывания.

Связывающие фрагменты получают методами рекомбинантной ДНК или ферментативным или химическим расщеплением интактных иммуноглобулинов. Фрагменты для связывания (связывающиеся фрагменты) включают ЕаЬ, ЕаЬ', Е(аЬ')₂, ЕаЬс, Εν, единичные цепи и одноцепочечные антитела. Под иммуноглобулином или антителом, отличным от биспецифических или бифункциональных иммуноглобулинов или антител, понимают иммуноглобулин или антитело, имеющие идентичные сайты связывания. Биспецифическое или бифункциональное антитело представляет собой искусственное гибридное антитело, имеющее две различные пары тяжёлая/лёгкая цепь и два различных сайта связывания. Биспецифические антитела можно получать различными методами, включая слияние гибридом или свя

- 8 015147 зывание ЕаЬ' фрагментов. См., например, 8опдк1У11а1 & ЬасЬтапп, С1т. Ехр. 1ттипо1. 79: 315-321 (1990); Кок!е1пу е! а1., 1. 1ттипо1. 148, 1547-1553 (1992).

Антиген представляет собой молекулу (например, белковую, полипептидную, пептидную молекулу, молекулу углеводорода или малую молекулу), содержащую антигенную детерминанту, с которой специфически связывается антитело.

Термин эпитоп или антигенная детерминанта относится к сайту на антигене, с которой иммуноглобулин или антитело (или их антигенсвязывающий фрагмент) специфически связывается. Эпитопы могут образовываться из соседних аминокислот или несоседних (непрерывных) аминокислот, оказавшихся рядом (наложившихся) за счёт третичной структуры-фолдинга белка. Эпитопы, образованные из непрерывных (соседних) аминокислот, обычно сохраняются при экспозиции с денатурирующими растворителями, тогда как эпитопы, образованные за счёт третичного фолдинга, обычно утрачиваются при обработке денатурирующими растворителями. Эпитоп, как правило, включает по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислот в уникальной пространственной конформации. Методы определения пространственной конформации эпитопов включают, например, рентгеновскую кристаллографию (рентгеноструктурный анализ (РСА)) и 2-мерный ядерный магнитный резонанс, см., например, Ерйоре Марртд Ρ^о!осо1к ш МеЙюбк т Мо1еси1аг Вю1оду, уо1. 66, С.Е. Мотк, Еб. (1996).

Термин стабилизированный препарат или стабилизированный жидкий полипептидный препарат включает препараты, находящийся в которых полипептид практически сохраняет свою физическую и химическую природу (идентичность) и целостность при стоянии. Различные аналитические методы измерения стабильности белка доступны в уровне техники и представлены в данном описании (обзор в Ρер!^бе апб Ρ^о!е^и Эгад Эейуегу, 247-301, Утсеп! Ьее Еб., Магсе1 Эеккег, 1пс., Νονν Υо^к, Ν.Υ., Ριώκ. (1991) и Допек, Α. Α6υ. Эгад Эейуегу Веу. 10: 29-90 (1993)). Стабильность можно измерять при выбранной температуре для выделенного периода времени. Для быстрого тестирования препарат можно хранить при более высокой или прогрессивной (ускоряющей) температуре, например при 40°С, в течение от 2 недель до 1 месяца или более, в это время измеряется стабильность. В типичных вариантах изобретения препарат устойчив к образованию побочных продуктов сложного полипептида, например высокомолекулярных продуктов агрегации, низкомолекулярных продуктов деградации (разложения) или фрагментации или их смесей.

Термин стабильность (устойчивость) относится к промежутку времени, в течение которого молекула данного вида, такого как антитело, сохраняет свою первоначальную химическую природу, например первичную, вторичную и/или третичную структуру.

Термин побочный продукт включает нежелательные продукты, которые снижают или уменьшают долю терапевтического полипептида в данном препарате. Типичные побочные продукты включают агрегаты терапевтического полипептида, фрагменты терапевтического полипептида (например, получающиеся при деградации полипептида в процессе дезамидирования или гидролиза) или их смеси.

Термин высокомолекулярные полипептидные агрегаты включает агрегаты терапевтического полипептида, фрагментов терапевтического полипептида (например, полученных при деградации полипептида, например, гидролизом) или их смесей, которые затем подвергаются агрегации. Обычно высокомолекулярные агрегаты представляют собой комплексы, молекулярная масса которых выше молекулярной массы терапевтического мономерного полипептида. В случае антитела, например 1дС антитела, молекулярная масса таких агрегатов выше примерно 150 кДа. Однако в случае других терапевтических полипептидов, например одноцепочечных антител, молекулярная масса которых обычно составляет 25 кДа, такие агрегаты обычно имеют молекулярную массу более 25 кДа.

Термин низкомолекулярный продукт деградации (распада, разложения) полипептида включает, например, фрагменты терапевтического полипептида, например, получающиеся при дезамидировании или гидролизе. Обычно низкомолекулярные продукты деградации представляют собой комплексы с молекулярной массой ниже молекулярной массы терапевтического мономерного полипептида. В случае антитела, например 1дС антитела, молекулярная масса таких продуктов деградации ниже примерно 150 кДа. Однако в случае других терапевтических полипептидов, например одноцепочечных антител, молекулярная масса которых обычно составляет 25 кДа, такие агрегаты обычно имеют молекулярную массу ниже 25 кДа.

Термин способ (путь) введения (способ применения) включает общепринятые в уровне техники способы применения (введения) для доставки терапевтического полипептида, например, такие как парентеральный, внутривенный, внутримышечный, подкожный, интракраниальный или эпидуральный. Для введения терапевтического полипептида при лечении нейродегенеративного заболевания могут быть желательны внутривенный, эпидуральный или интракраниальный способы введения.

Термин лечение (обработка) по данному описанию определяется как применение или введение терапевтического агента пациенту или применение или введение терапевтического агента в выделенную ткань или клеточную линию пациента, у которого наблюдаются заболевание, симптомы заболевания или предрасположенность к заболеванию, с целью излечения, заживления, облегчения, задержки, ослабления, изменения, ликвидации, смягчения, улучшения состояния или воздействия на заболевание, симптомы заболевания или предрасположенность к заболеванию.

- 9 015147

Термин эффективная доза или эффективная дозировка определяется как количество, достаточное для достижения или, по меньшей мере, частичного достижения заданного эффекта.

Термин терапевтически эффективная доза определяется как количество, достаточное для излечения или, по меньшей мере, частичного подавления заболевания и его осложнений у пациента, уже страдающего этим заболеванием. Количества, эффективные для этого применения, зависят от тяжести инфекции и общего состояния собственной иммунной системы пациента.

Термин пациент (больной) включает человека и других млекопитающих субъектов, которые получают либо профилактическое, либо терапевтическое лечение.

Термин стандартная лекарственная форма (или унифицированная лекарственная форма) по данному описанию относится к физически дискретной единице (дискретному элементу), пригодной (пригодному) в качестве однократной дозы для приёма пациентами, проходящими лечение, причём каждая единица содержит заданное количество активного соединения, рассчитанное таким образом, чтобы вызывать нужный терапевтический эффект, вместе с требующимся фармацевтическим носителем, разбавителем или эксципиентом. Характеристика стандартных лекарственных форм по изобретению диктуется уникальными свойствами активного соединения, конкретным ожидаемым терапевтическим эффектом и ограничениями, свойственными технике приготовления лекарственного средства из активного соединения для лечения пациентов, и непосредственно зависит от всех этих факторов.

Действительные уровни доз активного ингредиента (например, Άβ-полипептидов) в препаратах по настоящему изобретению могут меняться таким образом, чтобы получать количество активного ингредиента, эффективное для достижения заданного терапевтического ответа для конкретного пациента, конкретной композиции и конкретного способа введения, при этом не будучи токсичным для пациента. Выбранный уровень дозы зависит от различных фармакокинетических факторов, включая активность конкретных используемых композиций по настоящему изобретению, способа введения, времени введения, скорости экскреции конкретного используемого соединения, длительности лечения, другие лекарства, соединения и/или материалы, используемые в комбинации с конкретными применяемыми композициями, возраст, пол, вес, условия, общее состояние здоровья и медицинский анамнез пациента, проходящего лечение, и подобные факторы, общеизвестные в медицине.

Термин разбавитель по данному описанию относится к раствору, пригодному для изменения или создания типичной или подходящей концентрации или подходящих концентраций по данному описанию.

Краткий обзор

Настоящее изобретение предусматривает препараты полипептидов, связывающих Άβ-пептид, в частности антитела против Άβ, а также их участки и/или фрагменты. В некоторых аспектах изобретение предусматривает стабилизированные жидкие полипептидные препараты для терапевтического применения. В частности, изобретение предусматривает стабилизацию Άβ-связывающих полипептидов, например антител и их антигенсвязывающих фрагментов, для применения в лечении амилоидогенных заболеваний и/или нарушений. В частности, изобретение предусматривает препараты, стабилизированные таким образом, что активный терапевтический полипептид активен в течение длительного периода времени и его можно вводить различными способами. Это особенно важно в случае тех Άβ-связывающих полипептидов (например, антител), которые предназначены для лечения амилоидогенных заболеваний и/или нарушений. В других аспектах изобретение предусматривает единственно устойчивый препарат антитела, который устойчив к различным стрессам, таким как замерзание, лиофилизация, нагревание и/или реконструкция (реконституция, восстановление). Кроме того, типичные препараты по настоящему изобретению способны сохранять стабильность, биологическую активность, чистоту и качество антитела в течение длительного периода времени (например, в течение времени хранения препарата один год или более) и даже при неблагоприятных температурах. Кроме того, типичные препараты по настоящему изобретению пригодны для введения субъекту или пациенту (например, внутривенного введения субъекту или пациенту), например человеку, страдающему амилоидогенным заболеванием или нарушением, или человеку, у которого прогнозируется амилоидогенное заболевание или нарушение.

- 10 015147

Препараты.

В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает стабилизированный препарат, включающий Αβ-связывающий полипептид, агент, регулирующий тоничность, причём этот агент, регулирующий тоничность, присутствует в количестве, достаточном для создания стабилизированного препарата, пригодного для внутривенной инфузии, и аминокислоту или её производное, причём аминокислота или её производное присутствует в количестве, достаточном для поддержания физиологически приемлемого рН. В типичном варианте настоящее изобретение предусматривает стабилизированный препарат, включающий антитело против Ав-пептида, маннит и гистидин.

В одном варианте настоящее изобретение предусматривает стабилизированный препарат, включающий Ав-связывающий полипептид, агент, регулирующий тоничность, причём этот агент, регулирующий тоничность, присутствует в количестве, достаточном для создания препарата, пригодного для внутривенной инфузии, и аминокислоту или её производное, причём аминокислота или её производное присутствует в количестве, достаточном для поддержания физиологически приемлемого рН. В типичном варианте агентом, регулирующим тоничность, является маннит. В другом типичном варианте аминокислота представляет собой гистидин.

В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает стабилизированный препарат, включающий Ав-связывающий полипептид; Ав-связывающие полипептиды, пригодные для стабилизации в препарате по изобретению, включают антитела и их фрагменты и, в частности, антитела, способные связывать терапевтическую мишень, вовлечённую в амилоидогенное заболевание или нарушение. Соответственно, терапевтические полипептиды стабилизированы по изобретению для того, чтобы избежать образования побочных продуктов, обычно высокомолекулярных агрегатов, низкомолекулярных фрагментов, полученных деградацией, или их смесей с помощью добавления антиоксидантов в достаточном количестве с тем, чтобы ингибировать образование таких побочных продуктов. Антиоксиданты включают метионин и его аналоги в концентрациях, достаточных для получения заданного ингибирования нежелательных побочных продуктов, обсуждаемых ниже. Необязательно, стабилизированные полипептидные препараты по изобретению дополнительно содержат агент, регулирующий тоничность, причём этот агент, регулирующий тоничность, присутствует в количестве, достаточном для создания стабилизированного препарата, пригодного для нескольких различных способов применения, например для внутривенной инфузии, и аминокислоту или её производное, причём аминокислота или её производное присутствует в количестве, достаточном для поддержания физиологически приемлемого рН. В типичном варианте настоящее изобретение предусматривает стабилизированный препарат, включающий антитело против Ав, метионин, маннит и гистидин.

В одном варианте настоящее изобретение предусматривает стабилизированный жидкий препарат, включающий терапевтически активный Ав-связывающий полипептид, отличающийся тем, что полипептид при хранении может образовывать побочный продукт, и антиоксидант, причём антиоксидант присутствует в количестве, достаточном для уменьшения образования побочного продукта при стоянии препарата. В типичном варианте изобретения антиоксидант представляет собой метионин или его аналог.

В некоторых вариантах изобретения Ав-связывающий полипептид выбирают из группы, состоящей из антитела, Ρν фрагмента антитела, Рай фрагмента антитела, Р(аЬ')₂ фрагмента антитела, Рб фрагмента антитела, одноцепочечного антитела к Ав (8θΡν), фрагмента однодоменного антитела (ЭаЬ), полипептида со структурой в-складчатого листа, включающего по меньшей мере одну гипервариабельную область антитела (СЭР), и неглобулярного полипептида, включающего по меньшей мере одну гипервариабельную область антитела.

В типичных вариантах изобретения Ав-связывающий полипептид присутствует в концентрации около 0,1-60 мг/мл.

В других типичных вариантах препараты по настоящему изобретению включают Ав-связывающий полипептид в примерной концентрации 30 мг/мл.

В других типичных вариантах препараты по настоящему изобретению включают Ав-связывающий полипептид в примерной концентрации 20 мг/мл.

В других примерах осуществления изобретения препараты по изобретению включают Ав-связывающий полипептид в примерной концентрации 17 мг/мл.

В примерах осуществления изобретения Ав-связывающий полипептид представляет собой антитело к Ав. В некоторых вариантах настоящего изобретения антитело к Ав выбирают из группы, состоящей из гуманизированного 3Ό6 антитела, гуманизированного 10Ό5 антитела, гуманизированного 12В4 антитела, гуманизированного 266 антитела, гуманизированного 12А11 антитела и гуманизированного 15С11 антитела.

В примерах осуществления настоящего изобретения антитело против Ав связывает эпитоп, включающий аминокислотные остатки Ав-пептида, выбранные из группы, состоящей из аминокислотных остатков 1-7, 1-5, 3-7, 3-6, 13-28, 16-21, 19-22, 33-40 и 33-42.

- 11 015147

В некоторых вариантах настоящего изобретения антитело против (к) Ав является антителом субтипа, выбранного из группы, состоящей из человеческого 1дС1, 1дС₂, 1дС₃ и 1дС₄. В конкретном варианте настоящего изобретения антитело против Ав является человеческим иммуноглобулином субтипа ΙβΟ|.

Ав-полипептид может образовывать побочный продукт, выбранный из группы, состоящей из высокомолекулярного полипептидного агрегата, низкомолекулярного продукта деградации полипептида и их комбинаций. Высокомолекулярные агрегаты могут включать комплексы антитело:антитело, комплексы антитело: фрагмент антитела, комплексы фрагмент антитела: фрагмент антитела или их комбинации. Низкомолекулярные полипептидные продукты деградации могут включать лёгкую цепь антитела, тяжёлую цепь антитела, комплекс лёгкой и тяжёлой цепей антитела, фрагмент антитела и их комбинации.

В одном варианте настоящего изобретения жидкий препарат по настоящему изобретению включает Ав-связывающий полипептид, маннит и гистидин. В типичном варианте настоящего изобретения Ав-связывающий полипептид представляет собой антитело к (против) Ав. В некоторых вариантах настоящего изобретения антитело к Ав выбирают из группы, состоящей из гуманизированного 3Ό6 антитела, гуманизированного 10Ό5 антитела, гуманизированного 12В4 антитела, гуманизированного 266 антитела, гуманизированного 12А11 антитела и гуманизированного 15С11 антитела. В других примерах осуществления настоящего изобретения антитело против Ав связывает эпитоп, включающий аминокислотные остатки Ав-пептида, выбранные из группы, состоящей из аминокислотных остатков 1-7, 1-5, 3-7, 3-6, 13-28, 16-21, 19-22, 33-40 и 33-42. В некоторых вариантах настоящего изобретения антитело против (к) Ав является антителом субтипа, выбранного из группы, состоящей из ΙβΟ₁, 1дС₂, 1дС₃ и 1дС₄. В конкретном варианте настоящего изобретения антитело против Ав является иммуноглобулином субтипа 1§О1.

В типичных вариантах настоящего изобретения антитело против Ав присутствует в примерной концентрации 0,1-200 мг/мл. В других примерах осуществления настоящего изобретения антитело против Ав присутствует в примерной концентрации около 20 мг/мл.

В некоторых вариантах настоящего изобретения препараты по настоящему изобретению включают маннит в количестве, достаточном для поддержания изотоничности препарата. В примерах вариантов настоящего изобретения маннит присутствует в количестве около 2-10% вес./об. В других примерах вариантов настоящего изобретения маннит присутствует в количестве около 4% вес./об. Ещё в одних примерах вариантов настоящего изобретения маннит присутствует в количестве около 6% вес./об. В других примерах вариантов настоящего изобретения маннит присутствует в количестве около 10% вес./об.

В некоторых вариантах настоящего изобретения препараты по настоящему изобретению включают гистидин в количестве, достаточном для сохранения физиологически приемлемого рН. В примерах вариантов настоящего изобретения гистидин присутствует в примерной концентрации 0,1-25 мМ. В других примерах вариантов настоящего изобретения гистидин присутствует в примерной концентрации 10 мМ.

В одном варианте настоящего изобретения препараты по настоящему изобретению включают сукцинат в концентрации около 0,1-25 мМ. В примере варианта настоящего изобретения сукцинат присутствует в концентрации около 10 мМ.

В некоторых вариантах настоящего изобретения препараты по настоящему изобретению дополнительно включают антиоксидант. В примерах вариантов настоящего изобретения антиоксидант представляет собой метионин или его аналог. В одном варианте настоящего изобретения метионин или его аналог присутствует в концентрации около 0,1-25 мМ. В другом варианте изобретения метионин или его аналог присутствует в концентрации около 10 мМ.

В некоторых вариантах изобретения препарат дополнительно включает стабилизатор. В примерах вариантов настоящего изобретения стабилизатор представляет собой полисорбат 80. В некоторых вариантах изобретения полисорбат 80 присутствует в количестве 0,001-0,01% вес./об. В других вариантах изобретения полисорбат 80 присутствует в количестве около 0,005%. Ещё в одних вариантах настоящего изобретения полисорбат 80 присутствует в примерном количестве около 0,01% вес./об.

В некоторых вариантах изобретения препарат имеет рН около 5-7. В примерах вариантов настоящего изобретения препарат имеет рН около 5,5. В другом примере варианта препарат имеет рН около 6,0. Ещё в одном примере варианта изобретения препарат имеет рН около 6,2. В других примерах вариантов изобретения препарат имеет рН около 6,5.

В некоторых вариантах изобретения препарат устойчив к замораживанию. В других вариантах настоящего изобретения препарат пригоден для внутривенного введения. В примере варианта настоящего изобретения препарат пригоден для внутримышечного или подкожного введения. В примере варианта изобретения препарат применим для доставки к мозгу субъекта.

В некоторых вариантах настоящего изобретения препарат пригоден для доставки в цереброспинальную жидкость субъекта. В других вариантах изобретения препарат практически не содержит консервантов.

В некоторых вариантах настоящего изобретения препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 12 месяцев. В некоторых вариантах препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 18 месяцев. В некоторых вариантах препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 24 месяцев.

- 12 015147

В некоторых вариантах настоящего изобретения препарат устойчив по меньшей мере в течение примерно 30 месяцев.

В примерах вариантов настоящего изобретения препарат устойчив при температуре примерно от -80 до 40°С. В некоторых примерах вариантов изобретения препарат устойчив при температуре примерно от 0 до 25°С. Предпочтительно препарат устойчив при температуре примерно от 2 до 8°С.

В конкретном варианте настоящего изобретения препарат, пригодный для внутривенного введения, включает около 20 мг/мл антитела против Άβ, около 10 мМ Ь-гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% маннита и имеет рН около 6,0. В другом конкретном варианте изобретения препарат, пригодный для внутривенного введения, включает около 30 мг/мл антитела против Άβ, около 10 мМ Ь-гистидина, около 10 мМ метионина, около 6% маннита и имеет рН около 6,2. Предпочтительный препарат, пригодный для внутривенного введения, включает около 20 мг/мл антитела против Άβ, около 10 мМ Ь-гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% маннита, около 0,005% полисорбата 80 и имеет рН около 6,0. В другом примере варианта настоящего изобретения препарат, пригодный для внутривенного введения, включает около 10 мг/мл антитела против Άβ, около 10 мМ Ь-гистидина, около 10 мМ метионина, около 10% маннита, около 0,005% полисорбата 80 и имеет рН около 6,5.

В некоторых вариантах вышеуказанных препаратов по настоящему изобретению антитело против Άβ выбирают из группы, состоящей из гуманизированного 3Ό6 антитела, гуманизированного 10Ό5 антитела, гуманизированного 12В4 антитела, гуманизированного 266 антитела, гуманизированного 12Ά11 антитела или гуманизированного 15С11 антитела. Один такой препарат имеет рН около 6,0-6,5 и включает около 10 мМ гистидина, около 4% вес./об. маннита и около 2-20 мг/мл антитела против Άβ, выбранного из группы, состоящей из гуманизированного 3Ό6 антитела, гуманизированного 10Ό5 антитела, гуманизированного 12В4 антитела, гуманизированного 12Ά11 антитела. В некоторых препаратах антитело против Άβ связывает эпитоп внутри аминокислотных остатков, выбранных из группы, состоящей из аминокислотных остатков 1-7, 1-5, 3-7, 3-6, 13-28, 16-21, 19-22, 33-40 и 33-42 Άβ-пептида. В некоторых препаратах антитело против Άβ связывает непрерывный эпитоп, который включает остатки внутри остатков 1-7, внутри остатков 13-28 Άβ-пептида. В некоторых таких препаратах антитело является биспецифическим антителом или антителом, полученным по методу, описанному в опубликованной Международной патентной заявке XVО 03/070760. В некоторых таких препаратах эпитоп представляет собой непрерывный эпитоп.

В другом аспекте настоящего изобретения фармацевтическая стандартная лекарственная форма включает эффективное количество препарата по любому из вышеприведенных вариантов изобретения для лечения заболевания у пациента путём введения лекарственной формы пациенту. В одном примере варианта изобретения фармацевтическая стандартная лекарственная форма представляет собой контейнер, содержащий препарат по настоящему изобретению. В одном примере варианта изобретения контейнер представляет собой флакон (ампулу, пузырёк), содержащий около 1-2000 мг Άβ-связывающего полипептида. В другом варианте изобретения флакон (ампула, пузырёк) содержит около 50-1500 мг Άβ-связывающего полипептида. Ещё в одном примере варианта изобретения флакон (ампула, пузырёк) содержит около 5-50 мг Άβ-связывающего полипептида.

В примерах вариантов настоящего изобретения флакон (пузырёк, ампула) имеет объём около 2-100 мл. В других вариантах изобретения объём флакона (пузырька, ампулы) составляет около 2-10 мл.

В некоторых вариантах изобретения фармацевтическая стандартная лекарственная форма по настоящему изобретению пригодна для внутривенного вливания пациенту.

Также в настоящем описании представлены наборы, включающие фармацевтическую стандартную лекарственную форму по данному описанию и инструкцию по применению. В одном варианте настоящего изобретения контейнер, содержащий фармацевтическую стандартную лекарственную форму, представляет собой контейнер с прикреплённой этикеткой с руководством по применению. В одном примере варианта изобретения контейнер снабжён этикеткой с руководством по профилактическому применению. В другом примере варианта изобретения контейнер снабжён этикеткой с руководством по терапевтическому применению.

Настоящее изобретение предусматривает способ повышения стабильности Άβ-связывающего полипептида в жидком фармацевтическом препарате, причём полипептид демонстрирует образование побочного продукта при хранении в жидком препарате, этот способ включает введение в препарат антиоксиданта в количестве, достаточном для уменьшения количества образующегося побочного продукта полипептида. В примерах вариантов изобретения Άβ-связывающий полипептидный компонент выбирают из группы, состоящей из антитела, Εν фрагмента антитела, ЕаЬ фрагмента антитела, Е(аЬ')₂ фрагмента антитела, Еб фрагмента антитела, одноцепочечного антитела (8θΓν), фрагмента однодоменного антитела (ЬаЬ). полипептида со структурой β-складчатого листа, включающего по меньшей мере одну гипервариабельную область антитела (ΟΌΒ), неглобулярного полипептида, включающего по меньшей мере одну СЭЕ область антитела. В одном варианте изобретения побочный продукт выбирают из группы, состоящей из высокомолекулярного полипептидного агрегата, низкомолекулярного продукта деградации полипептида и их комбинаций. В другом варианте изобретения антиоксидант выбирают из группы, состоя

- 13 015147 щей из метионина и его аналога.

В некоторых вариантах изобретения способ получения препарата по любому из вышеприведённых вариантов настоящего изобретения включает объединение (смешение) эксципиентов препарата. В примере варианта изобретения способ приготовления препарата по любому из вышеприведённых вариантов изобретения включает объединение (смешение, комбинирование) Άβ-связывающего полипептида с одним или более разбавителем, причём один или более разбавителей включают эксципиенты препарата.

В примере варианта изобретения способ приготовления фармацевтической стандартной лекарственной формы включает объединение препарата по любому из вышеприведённых вариантов изобретения в подходящем контейнере. В другом примере варианта изобретения способ приготовления препарата по любому из вышеприведённых вариантов изобретения включает объединение раствора, содержащего Άβ-связывающий полипептид, и по меньшей мере часть эксципиентов препарата с разбавителем, содержащим остальные эксципиенты.

Полипептиды для применения в стабилизированных препаратах по изобретению.

Полипептид, из которого готовят препарат по изобретению, представленный в данном описании, получают общепринятыми в уровне техники методами, которые включают, например, синтетические методы (такие как методы рекомбинантной ДНК и пептидный синтез или комбинация этих методов), или их можно выделять из эндогенных источников полипептида. В некоторых вариантах изобретения выбранный полипептид представляет собой антигенсвязывающий полипептид, более предпочтительно антитело и, в частности, антитело против (к) Άβ. Методы получения антигенсвязывающего полипептида и, в частности, антител описаны ниже.

Поликлональные антитела.

Поликлональные антитела можно получать иммунизацией подходящего субъекта иммуногеном. Титр антитела в иммунизированном субъекте можно контролировать во времени стандартными методами, такими как твёрдофазный иммуноферментный анализ (ЕЫ8А) с применением иммобилизованного целевого антигена. При желании молекулы антитела, нацеленные на целевой антиген, можно выделять из организма млекопитающего (например, из крови) и очищать далее общепринятыми методами, такими как метод хроматографии на протеин Ά-сефарозе, при этом получают антитело, например фракцию 1дС. Через соответствующее время после иммунизации, когда титры антитела против антигена наиболее высоки, клетки, продуцирующие антитело, можно получать от субъекта и использовать для получения моноклональных антител стандартными методами, такими как метод гибридом, впервые описанный КоЫет апб М1151еш (1975), Ыа!иге, 256: 495-497 (см. также, Вгсшп е! а1. (1981), 1. 1ттипо1. 127: 539-46; Вгсшп е! а1. (1980), 1. Бю1. Сйет. 255: 4980-83; Уе11 е! а1. (1976), Ргос. Ыа!1. Асаб. δα. И8А, 76: 2927-31 и Уе11 е! а1. (1982), Ιη!. 1. Сапсег, 29: 269-75). О получении химерных поликлональных антител см. ВиесЫет е! а1., патент США 6420113.

Моноклональные антитела.

Доя получения моноклонального антитела можно использовать любые протоколы, используемые для слияния лимфоцитов и иммортализованных клеточных линий (см., например, С. Сайте е! а1. (1977), Ма!ите, 266: 550-52; Сейет е! а1. 8отайс Се11 Сепе!, цитируется выше; Ьетпет, Уа1е 1. Вю1. Меб., цитируется выше; Кеппе111. Мопос1опа1 АпйЬоб1ев, цитируется выше). Кроме того, рядовой специалист понимает, что существует множество вариантов таких методов, которые также могут применяться. Обычно бессмертная линия клеток (например, клеточная линия миеломы) происходит из того же вида млекопитающего, что и лимфоциты. Например, мышиные гибридомы можно получать слиянием лимфоцитов мыши, иммунизированной иммуногенным препаратом по настоящему изобретению, с иммортализованной мышиной клеточной линией. Предпочтительные бессмертные клеточные линии представляют собой клеточные линии мышиной миеломы, чувствительные к культуральной среде, содержащей гипоксантин, аминоптерин и тимидин (НАТ среда). Любую из ряда клеточных линий миеломы можно использовать в качестве партнёра по слиянию в соответствии со стандартными методами, например клеточные линии миеломы Р3-Л81/1-Ад4-1, Р3-х63-Ад8.653 или 8р2/О-Ад14. Эти клеточные линии миеломы можно получить из АТСС. Обычно НАТ-чувствительные клетки мышиной миеломы сливают с мышиными спленоцитами, используя полиэтиленгликоль (ПЭГ, РЕС). Клетки гибридомы, полученные в результате слияния, затем выбирают, используя среду НАТ, которая убивает неслитые или непродуктивно слитые клетки миеломы (неслитые спленоциты умирают через несколько дней, так как они не трансформируются). Клетки гибридомы, продуцирующие моноклональное антитело по изобретению, детектируют скринингом супернатантов гибридомных культур на антитела, которые связывают целевой антиген, например Άβ, стандартным методом ЕЬ18А.

- 14 015147

Рекомбинантные антитела.

В качестве альтернативы получению гибридом, секретирующих моноклональные антитела, моноклональное антитело можно идентифицировать и выделять скринингом комбинаторной библиотеки рекомбинантных иммуноглобулинов (например, фаг-дисплейной библиотеки антител) с использованием целевого антигена, чтобы тем самым выделить членов библиотеки иммуноглобулина, которые связывают целевой антиген. Наборы для создания и скрининга фаг-дисплейных библиотек выпускаются промышленностью (например, ЯесотЬшап! РНадс АпбЬобу 8ук!ет, от Рйагтааа, номер по каталогу 27-9400-01; и 8шГ2АР™ РНаде Э|5р1ау Κι!, от 8!та!адепе, номер по каталогу 240612). Кроме того, примеры методов и реагентов, особенно пригодные для создания и скрининга дисплейной библиотека антител, можно найти, например, в Ьабпег е! а1., патент США 5223409; Капд е! а1. опубликованная Международная патентная заявка РСТ νθ 92/18619; Эо^ег е! а1. опубликованная

Международная	патентная	заявка	РСТ	νο	91/17271;	νΐπίο·	е!	а1.	опубликованная
Международная	патентная	заявка	РСТ	νο	92/20791;	Магк1апб	е!	а1.	опубликованная
Международная	патентная	заявка	РСТ	νο	92/15679;	ВгеШшд	е!	а1.	опубликованная
Международная	патентная	заявка	РСТ	νο	93/01288;	МсСаГГеПу	е!	а1.	опубликованная
Международная	патентная	заявка	РСТ	νο	92/01047;	Саггагб	е!	а1.	опубликованная
Международная	патентная	заявка	РСТ	νο	92/09690;	Ьабпег	е!	а1.	опубликованная

Международная патентная заявка РСТ νθ 90/02809; Ецсйб е! а1. (1991), Вю/Тесйпо1о§у, 9: 1370-1372; Нау е! а1. (1992), Нит. АпбЬоб. НуЬпботак, 3: 81-85; Нике е! а1. (1989), 8с1епсе, 246: 1275-1281; СпГГйЬб е! а1. (1993), ЕМВО 1. 12: 725-734; Наиктк е! а1. (1992), 1. Мо1. Вю1. 226: 889-896; С1агккоп е! а1. (1991), Ыа!иге, 352: 624-628; Сгат е! а1. (1992), Ргос. Ыаб. Асаб. δα. И8А, 89: 3576-3580; Саггаб е! а1. (1991), Вю/Тескпо1о§у, 9: 1373-1377; НоодепЬоот е! а1. (1991), Ыис. Ас1б. Яек. 19: 4133-4137; ВагЬак е! а1. (1991), Ргос. Ыа!1. Асаб. δα. И8А, 88: 7978-7982 и МсС’аГГеПу е! а1. (1990), Ыа!ше, 348: 552554.

Химерные и гуманизированные антитела.

Кроме того, рекомбинантные антитела, такие как химерные и гуманизированные моноклональные антитела, содержащие участки как человеческого, так и нечеловеческого происхождения, которые можно получать стандартными методами рекомбинантной ДНК, входят в объём изобретения.

Термин гуманизированный иммуноглобулин или гуманизированное антитело относится к иммуноглобулину или антителу, которые включают по меньшей мере одну гуманизированную цепь иммуноглобулина или антитела (т.е. по меньшей мере одну гуманизированную лёгкую или тяжёлую цепь).

Термин гуманизированная цепь иммуноглобулина или гуманизированная цепь антитела (т.е. гуманизированная лёгкая цепь иммуноглобулина или гуманизированная тяжёлая цепь иммуноглобулина) относится к цепи иммуноглобулина или антитела (т. е. лёгкой или тяжёлой цепи соответственно), имеющей вариабельную область, которая включает вариабельную каркасную область, главным образом (в основном, практически), человеческого иммуноглобулина или антитела и гипервариабельные области (СЭЯ) (например, по меньшей мере одна область СОЯ, предпочтительно две области СОЯ, более предпочтительно три области СОЯ), главным образом, иммуноглобулина или антигена нечеловеческого происхождения и дополнительно включает константные области (например, по меньшей мере одну константную область или её участок в случае лёгкой цепи и три константные области в случае тяжёлой цепи).

Выражение гуманизированная вариабельная область (например, гуманизированная вариабельная область лёгкой цепи или гуманизированная вариабельная область тяжёлой цепи) относится к вариабельной области, которая включает вариабельную каркасную область, главным образом, (из) человеческого иммуноглобулина или антитела и гипервариабельные области (СОЯ), главным образом, иммуноглобулина или антигена нечеловеческого происхождения.

Выражение главным образом (практически), (из) человеческого иммуноглобулина или антитела или главным образом, (практически) человеческий означает, что при выравнивании с аминокислотной последовательностью человеческого иммуноглобулина или антитела с целью сравнения область по меньшей мере на 80-90%, 90-95% или на 95-99% идентична (имеет идентичность по меньшей мере 80-90%, 90-95% или 95-99%) (т.е. имеет идентичность локальной последовательности) человеческой последовательности каркасной или константной области, что делает возможными, например, консервативные замены, замены консенсусной последовательности, замены зародышевой линии, обратные мутации и т. п. Введение консервативных замен, замен консенсусной последовательности, замен зародышевой линии, обратных мутаций и т.п. часто называют оптимизацией гуманизированного антитела или цепи. Выражение главным образом (практически, в основном) (из) иммуноглобулина или антитела нечеловеческого происхождения или главным образом (практически, в основном) нечеловеческий означает наличие последовательности иммуноглобулина или антитела по меньшей мере на 80-95%, предпочтительно по меньшей мере на 90-95%, более предпочтительно на 96, 97, 98 или 99% идентичной последовательности иммуноглобулина или антитела организма нечеловеческого происхождения, например отличного от человека млекопитающего.

- 15 015147

Соответственно, все области или остатки гуманизированного иммуноглобулина или антитела или гуманизированной цепи иммуноглобулина или антитела, за исключением СЭЯ, практически (в основном) идентичны соответствующим областям или остаткам одной или более последовательностей нативного человеческого иммуноглобулина.

Выражение соответствующая область или соответствующий остаток относится к области или остатку на второй аминокислотной или нуклеотидной последовательности, которые занимают то же самое (т.е. эквивалентное) положение, что и область или остаток на первой аминокислотной или нуклеотидной последовательности, когда первая и вторая последовательности оптимально выравниваются с целью сравнения.

Термин значительная (заметная) идентичность означает, что две полипептидные последовательности при оптимальном выравнивании, таком как с помощью программ САР или ΒΕ8ΤΡΙΤ с применением средневзвешенных значений гэпов (пробелов) по умолчанию, имеют идентичность последовательностей по меньшей мере 50-60%, предпочтительно идентичность последовательностей по меньшей мере 60-70%, более предпочтительно идентичность последовательностей по меньшей мере 70-80%, более предпочтительно идентичность последовательностей по меньшей мере 80-90%, ещё более предпочтительно идентичность последовательностей по меньшей мере 90-95% и ещё более предпочтительно идентичность последовательностей по меньшей мере 95% или более (например, идентичность последовательностей 99% или более).

Термин практическая идентичность (практически идентичный) означает, что две полипептидные последовательности при оптимальном выравнивании, таком как с помощью программ САР или ΒΕ8ΤΡΙΤ с применением средневзвешенных значений гэпов (пробелов) по умолчанию, имеют идентичность последовательностей по меньшей мере 80-90%, предпочтительно идентичность последовательностей по меньшей мере 90-95% и более предпочтительно идентичность последовательностей по меньшей мере 95% или более (например, идентичность последовательностей 99% или более). Для сравнения последовательностей обычно одна последовательность служит в качестве эталонной последовательности, с которой сравниваются тестируемые последовательности. При использовании алгоритма сравнения последовательностей тестируемая и эталонная последовательности вводятся в компьютер, при необходимости задаются координаты последовательностей и устанавливаются параметры программы 'Алгоритм последовательности. Затем, используя алгоритм сравнения последовательностей, рассчитывают процент идентичности последовательностей для тестируемой (тестируемых) последовательности (последовательностей) относительно эталонной последовательности, исходя из заданных (установленных) параметров программы.

Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения можно проводить, например, используя алгоритм локальной гомологии (алгоритм построения локального выравнивания) СмитаВатермана (8тЬ11 & Уа!егтап, Αάν. Арр1. Ма!Ь. 2: 482 (1981)), алгоритм построения глобального выравнивания Нидельмана-Вунша (№ееб1етап & УипксЬ, 1. Мо1. Βίο1. 48: 443 (1970)), поиск подобия методом Пирсона и Липмана (Реагкоп & Ыртаи, Ргос. №111. Асаб. 8с1. И8А, 85: 2444 (1988), компьютеризованную реализацию этих алгоритмов (САР, ΒΕ8ΤΡΙΤ, ΡΑ8ΤΑ и ΤΡΑ8ΤΑ в пакете программ ХУбсопбп Сепебск 8оП\таге Раскаде, Сепебск Сотри!ег Сгоир, 575 8аеисе Ότ., Маб1коп, XVI) или визуальное изучение (см. в общем АикиЬе1 е! а1., Ситгеп! Рго!осо1к ίη Мо1еси1аг РЫоду). Примером алгоритма, пригодного для определения идентичности последовательностей и подобия последовательностей в процентах, является алгоритм Β^Α8Τ. описанный в А1!ксЬи1 е! а1., ί. Мо1. Рю1. 215: 403 (1990). Программа для осуществления Β^Α8Τ анализов общедоступна через №абопа1 Сеп!ег Гог Β^ο!есЬηο1οду 1пТоттабоп (на Интернет-сервере №абопа1 1пкб1и!ек оГ Неа1!Ь Νί,’ΒΙ). Обычно для проведения сравнения последовательностей можно использовать параметры программы по умолчанию, хотя можно также использовать специальные параметры пользователя. Для аминокислотных последовательностей программа Β^Α8ΤР по умолчанию использует длину слова (V) 3, ожидание (Е) 10 и матрицу Β^Ο8υМ62 (см. НешкоГГ &НешкоГГ, Ргос. №111. Асаб. 8с1. И8А, 89: 10915 (1989)).

Предпочтительно положения остатков, не являющихся идентичными, различаются консервативными аминокислотными заменами. С целью классификации аминокислотных замен в качестве консервативных или неконсервативных аминокислоты делят на следующие группы:

группа I (гидрофобные боковые цепи): Ьеи, Ме!, А1а, Уа1, Ьеи, 11е;

группа II (нейтральные гидрофильные боковые цепи): Сук, 8ет, Τ6τ;

группа III (кислые боковые цепи): Акр, С1и;

группа IV (основные боковые цепи): Акп, С1п, Н1к, Ьук, Агд; группа V (остатки, влияющие на ориентацию цепи): С1у, Рго; группа VI (ароматические боковые цепи): Τιρ.Τ\τ. РЬе.

Консервативные замены включают замены аминокислотами того же класса. Неконсервативные замены представляют собой замену члена одного из этих классов на член другого класса.

- 16 015147

Предпочтительно гуманизированные иммуноглобулины или антитела связывают антиген с аффинностью, превышающей аффинность соответствующего негуманизированного антитела в 3, 4 или 5 раз. Например, если негуманизированное антитело обладает аффинностью связывания 10^-9 М, величина аффинности связывания гуманизированных антител будет равна по меньшей мере 3х10^-8 М, 4х10^-8 М, 5х10^-8 М или 10^-9 М. При описании связывающих свойств цепи иммуноглобулина или антитела цепь можно описывать на основании её способности направлять (нацеливает) на связывание антигена (с антигеном), например Αβ. Говорят, что цепь направляет на связывание антигена, когда она сообщает интактному иммуноглобулину (или его антигенсвязывающему фрагменту) свойство специфического связывания или аффинность связывания. Говорят, что мутация (например, обратная мутация) существенно влияет на способность тяжёлой или лёгкой цепи направлять связывание с антигеном, если она изменяет (например, понижает) аффинность связывания интактного иммуноглобулина или антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента), содержащего указанную цепь по меньшей мере на порядок по сравнению с аффинностью антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента), содержащего эквивалентную цепь, в которой отсутствует указанная мутация. Мутация несущественно влияет (например, снижает) на способность тяжёлой или лёгкой цепи направлять связывание с антигеном, если она изменяет (например, понижает) аффинность связывания интактного иммуноглобулина или антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента), содержащего указанную цепь, только в 2, 3 или 4 раза по сравнению с аффинностью антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента), содержащего эквивалентную цепь, в которой отсутствует указанная мутация.

Термин химерный иммуноглобулин или химерное антитело относится к иммуноглобулину или антителу, вариабельные области которого образованы из первого вида, а константные области происходят из второго вида. Химерные иммуноглобулины или антитела можно конструировать, например, генетической инженерией (методами рекомбинантной ДНК) при использовании сегментов гена иммуноглобулина, принадлежащих к различным видам. Не предполагается, что термины гуманизированный иммуноглобулин или гуманизированное антитело охватывают химерные иммуноглобулины или антитела, определяемые ниже. Хотя гуманизированные иммуноглобулины или антитела являются химерными по своей конструкции (т.е. содержат области более чем из одного вида белка), они включают дополнительные признаки (т.е. вариабельные области, содержащие донорные СОЯ остатки и акцепторные каркасные остатки), не обнаруживаемые в химерных иммуноглобулинах или антителах по определению в данном описании.

Такие химерные и гуманизированные моноклональные антитела можно получать методами рекомбинантной ДНК, известными в уровне техники, например методами, описанными в ЯоЬткои е! а1. Международная патентная заявка РСТ/И886/02269; Акта, е! а1. Европейская патентная заявка 184187; ТашдисЫ, М., Европейская патентная заявка 171496; Моггкоп е! а1. Европейская патентная заявка 173494; №иЬегдег е! а1. опубликованная Международная патентная заявка РСТ νθ 86/01533; СаЬШу е! а1. Патент СШΆ 4816567; СаЬШу е! а1. Европейская патентная заявка 125023; Вейег е1 а1. (1988), 8с1епсе, 240: 1041-1043; Ыи е! а1. (1987), Ргос. N311. Асаб. 8с1. И8А, 84: 3439-3443; Ыи е! а1. (1987), 1. 1ттипо1. 139: 3521-3526; 8ип е! а1. (1987), Ргос. Асаб. 8с1. И8А, 84: 214-218; МкЫтига е! а1. (1987), Сапс. Яек. 47: 999-1005; Vооб е! а1. (1985), №!иге, 314: 446-449 и 8Каи е! а1. (1988), 1. №!1. Сапсег 1пз!. 80: 1553-1559); Моггкоп, 8.Ь. (1985), 8с1епсе, 229: 1202-1207; 01 е! а1. (1986), ВюТесйшдиек, 4: 214; νίπ^ι· патент СШΆ 5225539; 1опе§ е! а1. (1986), №!иге, 321: 522525; УеШоеуап е! а1. (1988), 8с1епсе, 239: 534 и Ве1б1ег е! а1. (1988), 1. 1ттипо1. 141: 4053-4060.

Человеческие антитела из трансгенных животных и фаговый дисплей.

В настоящее время можно получать трансгенных животных (например, мышей), способных после иммунизации продуцировать полный спектр человеческих антител в отсутствие продуцирования эндогенного иммуноглобулина. Например, было описано, что гомозиготная делеция гена шарнирной области тяжёлой цепи антитела Ни) у химерных мышей и мышей с мутацией в зародышевой линии приводит к полному ингибированию продуцирования эндогенного антитела. Перенос набора генов зародышевой линии человеческого иммуноглобулина в таких мышей с мутацией в зародышевой линии приводит к продуцированию человеческих антител при контрольном заражении антигеном.

Полностью человеческие антитела могут также быть получены из фаг-дисплейных библиотек (НоодепЬоот е! а1., I Мо1. Вю1., 222: 581-597 (1991)). Химерные поликлональные антитела можно также получать из фаг-дисплейных библиотек (ВиесЫег е! а1., патент СШΆ 6420113).

- 17 015147

Биспецифические антитела, полипептиды-слитое антитело и одноцепочечные антитела.

Биспецифические антитела (ВзАЬз) представляют собой антитела, обладающие специфичностью связывания по меньшей мере к двум эпитопам. Такие антитела можно получать из полноразмерных антител или фрагментов антител (например, Р(аЬ')2 биспецифических антител). Способы получения биспецифических антител известны в уровне техники. Традиционное получение полноразмерных биспецифических антител основано на коэкспрессии двух пар тяжёлая-лёгкая цепь иммуноглобулина, где две цепи имеют различные специфичности (МШйст с! а1., Манге, 305: 537-539 (1983)). Вследствие произвольного набора тяжёлой и лёгкой цепей иммуноглобулина эти гибридомы (квадромы) продуцируют теоретическую смесь молекул различных антител (см. Международную патентную заявку XVО 93/08829 и Тгаипссксг с! а1., ЕМВО 1. 10: 3655-3659 (1991)).

Биспецифические антитела также включают сшитые антитела или гетероконъюгаты антител (гетероконъюгатные антитела). Например, одно из антител в гетероконъюгате может быть связано с авидином, другое с биотином или другой полезной нагрузкой. Гетероконъюгатные антитела можно получать любыми подходящими методами сшивания (перекрёстного связывания). Подходящие сшивающие агенты общеизвестны в уровне техники и раскрываются в патенте СШΆ 4676980, наряду с различными методами сшивания.

Ещё в одном варианте изобретения антитело может быть слито химическими или генетическими методами с полезной нагрузкой, такой как реактивная (реакционноспособная), детектируемая или функциональная частица, например иммунотоксин, для получения полипептида, продукта слияния антитела. Такие полезные нагрузки включают, например, иммунотоксины, химиотерапевтические агенты и радиоизотопы, все они общеизвестны в уровне техники.

Одноцепочечные антитела также пригодны для стабилизации по изобретению. Фрагменты содержат вариабельный домен тяжёлой цепи (У_Н), связанный с вариабельным доменом лёгкой цепи (У_ь) линкером, который способствует тому, что каждая вариабельная область связана с другой, и воссоздают антигенсвязывающий карман исходного (родительского) антитела, из которого получают области У_ъ и У_Н. См. бгиЬсг с! а1., 1. 1ттипо1., 152: 5368 (1994).

Понятно, что любые из вышеприведённых полипептидных молекул, индивидуально или в комбинации, пригодны для приготовления в виде стабилизированных препаратов по изобретению.

Άнτиτела против Άβ.

Как правило, препараты по настоящему изобретению включают ряд антител для лечения амилоидогенных заболеваний, в частности болезни Άльцгеймера, с помощью нацеливания на Άβ-пептид.

Термины Άβ-антитело, антитело против Άβ и анти Άβ (антитело к Άβ) в данном описании используются взаимозаменяемо в отношении антитела, которое связывается с одним или более эпитопов или антигенных детерминант человеческого амилоидного белка-предшественника (АРР), Άβ-белка или обоих. Типичные эпитопы или антигенные детерминанты могут находиться внутри АРР, но предпочтительно находятся внутри Άβ-пептида АРР. Существует множество изоформ АРР, например АРР⁶⁹⁵, АРР и АРР . Άминокислотам в АРР присвоены номера в соответствии с последовательностью изоформы АРР⁷⁷⁰ (см., например, инвентарный номер в СспВапк Р05067). Примерами известных специфических изотипов АРР, существующих в настоящее время в организме человека, являются полипептид из 695 аминокислот, описанный Капд с!. а1. (1987), Ма!игс, 325: 733-736, который назван нормальным АРР; полипептид из 751 аминокислоты, описанный Роп!с с! а1. (1988), Ма!игс, 331: 525-527 (1988) и Тап/ί с! а1. (1988), Ыа!игс, 331: 528-530; и полипептид из 770 аминокислот, описанный КйадисЫ с!. а1. (1988), Маигс, 331: 530-532. В результате протеолитического процессинга АРР под действием различных секретаз ίπ νίνο или ίπ δίΐιι Άβ обнаруживается как в короткой форме длиной 40 аминокислот, так и в длинной форме протяжённостью 42-43 аминокислоты. Короткая форма, Аβ₄₀, состоит из остатков 672-711 АРР. Длинная форма, например Άβ42 или Άβ43, состоит из остатков 672-713 или 672-714 соответственно. Участок гидрофобного домена АРР находится на карбоксиконце Άβ и может быть ответственен за способность Άβ к агрегации, в частности в длинной форме. Άβ-пептид может находиться в жидкостях организма или может выделяться из жидкостей организма человека и других млекопитающих, например цереброспинальной жидкости, включая как здоровых индивидуумов, так и индивидуумов, страдающих амилоидогенными нарушениями.

Термины β-амилоидный белок, β-амилоидный пептид, β-амилоид, Άβ и Άβ-пептид употребляются в данном описании взаимозаменяемо. Άβ-пептид (например, Άβ₃9, Άβ₄₀, Άβ₄₁, Άβ₄₂ и Άβ₄₃) представляет собой внутренний фрагмент ~4-кДа из 39-43 аминокислот АРР. Например, Άβ₄₀ состоит из остатков 672-711 АРР, а Άβ₄₂ состоит из остатков 672-713 АРР. Άβ-пептиды включают пептиды, получающиеся в результате расщепления секретазой АРР и синтетических пептидов, имеющих такую же или практически такую же последовательность, что и продукты расщепления; Άβ-пептиды могут происходить из различных источников, например тканей, клеточных линий или жидкостей организма (например, сыворотки или цереброспинальной жидкости). Например, Άβ может происходить из АРРэкспрессирующих клеток, таких как клетки яичников китайского хомячка (СНО), стабильно трансфецируемых с помощью АРР-_Г^_Р5, как описано, например, в ΧνηΡΙι с! а1. (2002), Ма!игс, 416, р. 535-539. Пре

- 18 015147 парат Αβ можно получать из тканевых источников (см., например, Юпъоп-ХУоой с1 а1. (1997), Ргос. №111. Асай. 8с1. И8Л, 94: 1550) или же Ав-пептиды можно синтезировать методами, общеизвестными специалистам в данной области техники, см., например, Ие1Й8 с1 а1., 8уи!йейс Рерййек: А Икег'к Сшйс. ей. СгаШ. \¥.Н. Ргеетаи & Со., Ыете Уогк, ΝΥ, 1992, р. 77). Следовательно, пептиды можно синтезировать, используя автоматические методы твёрдофазного синтеза по Меррифильду с α-аминогруппой, защищенной либо ΐ-Вос, либо Р-тос группой, используя защищенные аминогруппы в боковых цепях, например на синтезаторе модели Аррйей Вюкуйешк Рерййе 8уп1ке51хег Мойе1 430А или 431. Более протяжённые пептидные антигены можно синтезировать, используя общеизвестные методы рекомбинантной ДНК. Например, полинуклеотид, кодирующий пептид или слитый пептид, можно синтезировать или молекулярно клонировать и ввести в подходящий вектор экспрессии для трансфекции и гетерологичной экспрессии подходящей клеткой-хозяином. Ав-пептид также относится к родственным Ав-последовательностям, которые получаются в результате мутаций в Ав-области нормального гена.

Типичные эпитопы или антигенные детерминанты, с которыми связывается Ав-антитело, могут находиться внутри человеческого амилоидного белка-предшественника (АРР), но предпочтительно находятся в Ав-пептиде АРР. Типичные эпитопы или антигенные детерминанты внутри Ав локализованы внутри Ν-конца, центральной области или С-конца Ав. Ν-концевой эпитоп представляет собой эпитоп, или антигенную детерминанту, локализованный (локализованную) внутри Ν-конца или включающий (включающую) Ν-конец Ав-пептида. Типичные Ν-концевые эпитопы включают остатки внутри аминокислот 1-10 или 1-12 Ав, предпочтительно из остатков 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7, 2-6, 2-7, 3-6 или 3-7 Ав₄₂. Другие примеры Ν-концевых эпитопов начинаются в остатках 1-3 и заканчиваются в остатках 7-11 Ав. Другие примеры Ν-концевых эпитопов включают остатки 2-4, 5, 6, 7 или 8 Ав, остатки 3-5, 6, 7, 8 или 9 Ав или остатки 4-7, 8, 9 или 10 Ав₄₂. Центральные эпитопы представляют собой эпитопы, или антигенные детерминанты, содержащие остатки, локализованные внутри центрального или среднего участка Ав-пептида. Примеры центральных эпитопов включают остатки внутри аминокислот 13-28 Ав, предпочтительно из остатков 14-27, 15-26, 16-25, 17-24, 18-23 или 19-22 Ав. Другие примеры центральных эпитопов включают остатки внутри аминокислот 16-24, 16-23, 16-22, 16-21, 18-21, 19-21, 19-22, 19-23 или 19-24 Ав. С-концевые эпитопы, или антигенные детерминанты, локализованы внутри С-конца или включая С-конец Ав-пептида и включают остатки внутри аминокислот 33-40, 33-41 или 33-42 Ав. С-Концевые эпитопы представляют собой эпитопы, или антигенные детерминанты, содержащие остатки внутри С-конца Ав-пептида (например, примерно внутри аминокислот 30-40 или 30-42 Ав). Другие примеры С-концевых эпитопов, или антигенных детерминант, включают остатки 33-40 или 33-42 Ав.

Когда говорят, что антитело связывается с эпитопом внутри заданных остатков, таких как Ав 3-7, это означает, что антитело специфически связывается с полипептидом, содержащим заданные (определённые) остатки (т.е. Ав 3-7 в данном примере). Данное антитело необязательно контактирует с каждым остатком внутри Ав 3-7. Не каждая единичная аминокислотная замена или делеция внутри Ав 3-7 необязательно значительно влияет на аффинность связывания. В различных вариантах изобретения Ав-антитело является специфическим в отношении концов. Применяемый в данном описании термин специфический к концу (в отношении конца, конец-специфический) относится к антителу, которое специфически связывается с Ν-концевыми или С-концевыми остатками Ав-пептида, но не распознаёт те же остатки, присутствующие в более протяжённом варианте Ав, содержащем эти остатки, или в АРР. В различных вариантах изобретения антитело Ав является С-конец-специфическим (специфическим к С-концу). Применяемый в данном описании термин С-конец-специфический (специфический к С-концу) означает, что антитело специфически распознаёт свободный С-конец Ав-пептида. Примеры Ав-антител, специфических к С-концу, включают Ав-антитела, которые распознают Ав-пептид, заканчивающийся остатком 40, но не распознают Ав-пептид, заканчивающийся остатком 41, 42 и/или 43; распознают Ав-пептид, заканчивающийся остатком 42, но не распознают Ав-пептид, заканчивающийся остатком 40, 41 и/или 43; и т.д.

В одном варианте изобретения Ав-антитело может представлять собой 3Ό6 антитело или его вариант или 10Ό5 антитело или его вариант, они оба описаны в опубликованной патентной заявке США № 20030165496 А1, в опубликованной патентной заявке США № 20040087777 А1, опубликованной в Международной патентной заявке № XVО 02/46237 А3 и опубликованной Международной патентной заявке № νθ 04/080419 А2. Описание антител 3Ό6 и 10Ό5 можно также найти в опубликованной Международной патентной заявке № νθ 02/088306 А2 и в опубликованной Международной патентной заявке № νθ 02/088307 А2. Дополнительные антитела 3Ό6 описаны в патентной заявке США № 11/303478 и Международной патентной заявке № РСТ/И805/45614. 3Ό6 представляет собой моноклональное антитело (шАЬ), которое специфически связывается с Ν-концевым эпитопом, локализованным в человеческом в-амилоидном пептиде, конкретно с остатками 1-5. Для сравнения, 10Ό5 является шАЬ, которое специфически связывается с Ν-концевым эпитопом, локализованным в человеческом в-амилоидном пептиде, конкретно с остатками 3-6. Клеточная линия,

- 19 015147 продуцирующая моноклональное антитело 3Ό6 (ВВ96 3Ό6.32.2.4), депонирована в Американской коллекции типовых культур (АТСС), Мапаккак, νΑ 20108, υδΑ, 8 апреля 2003 г. согласно Будапештскому договору под номером РТА-5130. Клеточная линия, продуцирующая моноклональное антитело 10Ό5 (ВВ44 10Ό5.19.21), депонирована в АТСС 8 апреля 2003 г. согласно Будапештскому договору под номером РТА-5129.

Примерами вариантных 3Ό6 антител являются антитела, имеющие, например, гуманизированную лёгкую цепь, содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные как 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 3 или 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 5, и гуманизированную тяжёлую цепь, содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные как 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 4 или 8ЕЦ Ш ΝΟ: 6.

Другими примерами вариантных 3Ό6 антител являются антитела, имеющие, например, гуманизированную аминокислотную последовательность лёгкой цепи, представленную как 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 7, и гуманизированную аминокислотную последовательность тяжёлой цепи, представленную как 8ЕЦ Ш ΝΟ: 8.

Примерами вариантных 10Ό5 антител являются антитела, имеющие, например, гуманизированную лёгкую цепь, содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные как 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 9 или 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 11, и гуманизированную тяжёлую цепь, содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные как 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 10 или 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 12. Другими примерами вариантных 10Ό5 антител являются антитела, имеющие, например, гуманизированную аминокислотную последовательность лёгкой цепи, представленную как 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 13, и гуманизированную аминокислотную последовательность тяжёлой цепи, представленную как 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 14. Такие вариантные антитела подробнее описаны в Международной патентной заявке ΧΥΟ 02/088306 Α2.

В другом варианте изобретения антитело может являться 12В4 антителом или его вариантом, описанным в опубликованной патентной заявке США № 20040082762 Α1 и в опубликованной Международной патентной заявке № ΧΥΟ 03/077858 Α2. 12В4 представляет собой тΑЬ, которое специфически связывается с Ν-концевым эпитопом, локализованным в человеческом β-амилоидном пептиде, конкретно с остатками 3-7.

Примерами вариантных 12В4 антител являются антитела, имеющие, например, гуманизированную лёгкую цепь (или лёгкую цепь), содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные как 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 15 или 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 17, и гуманизированную тяжёлую цепь, содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные как 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 16, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 18 или 8Еф ΙΌ ΝΟ: 19.

Ещё в одном варианте изобретения антитело может представлять собой 12А11 антитело или его вариант, описанные в опубликованной патентной заявке США № 20050118651 А1, в патентной заявке США № 11/303478, в опубликованной Международной патентной заявке № ΧΥΟ 04/108895 А2 и в Международной патентной заявке № ΡСТ/υ805/45614. 12А11 представляет собой тΑЬ, которое специфически связывается с Ν-концевым эпитопом, локализованным в человеческом β-амилоидном пептиде, конкретно с остатками 3-7.

Примерами вариантных 12А11 антител являются антитела, имеющие, например, гуманизированную лёгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность вариабельной области, представленную как 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 20, и гуманизированную тяжёлую цепь, содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные как 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 21, 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 22, 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 23, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 24, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 25, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 26, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 27, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 28, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 29, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 30, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 31, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 32, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 33, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 34, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 35, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 36, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 37, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 38, 8Еф ΙΌ ΝΟ: 39, 8Еф Ш ΝΟ: 40 или 8Еф ΙΌ ΝΟ: 41.

Ещё в одном варианте изобретения антитело может представлять собой 6С6 антитело или его вариант, описанные в патентной заявке США № 11/304986 и в Международной патентной заявке № ΡСТ/υ805/45515, озаглавленной Гуманизированные антитела, распознающие бета-амилоидный пептид. 6С6 представляет собой тΑЬ, которое специфически связывается с Ν-концевым эпитопом, локализованным в человеческом β-амилоидном пептиде, конкретно с остатками 3-7. Клеточная линия, продуцирующая антитело 6С6, депонирована 1 ноября 2005 г. в АТСС по условиям Будапештского договора под регистрационным номером РТА-7200.

Ещё в одном варианте изобретения антитело может представлять собой 2Н3 антитело, описанное в патентной заявке США № 11/304986 и в Международной патентной заявке № ΡСТ/υ805/45515, озаглавленной Гуманизированные антитела, распознающие бета-амилоидный пептид. 2Н3 представляет собой тΑЬ, которое специфически связывается с Ν-концевым эпитопом, локализованным в человеческом β-амилоидном пептиде, конкретно с остатками 2-7.

Ещё в одном варианте изобретения антитело может представлять собой антитело 15С11 или его вариант, описанные в патентной заявке США № 11/304986 и в Международной патентной заявке № ΡСТ/υ805/45515, озаглавленной Гуманизированные антитела, распознающие бета-амилоидный пептид. 15С11 представляет собой тΑЬ, которое специфически связывается с центральным эпитопом, локализованным в человеческом β-амилоидном пептиде, конкретно с остатками 19-22.

- 20 015147

Ещё в одном варианте изобретения антитело может представлять собой антитело 266, описанное в опубликованной патентной заявке США № 20050249725 А1 и в опубликованной Международной патентной заявке № \¥О 01/62801 А2; антитело 266 представляет собой тАЬ, которое специфически связывается с центральным эпитопом, локализованным в человеческом β-амилоидном пептиде, конкретно с остатками 16-24. Клеточная линия, продуцирующая моноклональное антитело 266, депонирована в АТСС 20 июля 2004 г. по условиям Будапештского договора и имеет регистрационный номер РТА-6123.

Примерами вариантных 266 антител являются антитела, имеющие, например, гуманизированную лёгкую цепь, содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные 8ЕО Ш N0: 42 или 8Е0 Ш N0: 44, и гуманизированную тяжёлую цепь, содержащую аминокислотные последовательности вариабельной области, представленные как 8Е0 Ш N0: 43 или 8Е0 Ш N0: 45. Другими примерами вариантных 266 антител являются антитела, имеющие, например, гуманизированную аминокислотную последовательность лёгкой цепи, представленную как 8Е0 Ш N0: 46, и гуманизированную аминокислотную последовательность тяжёлой цепи, представленную как 8Е0 Ш N0: 47. Такие вариантные антитела подробнее описаны в опубликованной патентной заявке США № 20050249725 А1 и в опубликованной Международной патентной заявке \¥0 01/62801 А2.

Ещё в одном варианте изобретения антитело может представлять собой 2В1 антитело или его вариант, описанное в патентной заявке США № 11/304986 и в Международной патентной заявке № РСТ/и805/45515, озаглавленной Гуманизированные антитела, распознающие бета-амилоидный пептид; 2В1 представляет собой тАЬ, которое специфически связывается с центральным эпитопом, локализованным в человеческом β-амилоидном пептиде, конкретно с остатками 19-23.

Ещё в одном варианте изобретения антитело может представлять собой 1С2 антитело или его вариант, описанное в патентной заявке США № 11/304986 и в Международной патентной заявке № РСТ/И805/45515, озаглавленной Гуманизированные антитела, распознающие бета-амилоидный пептид; 1С2 представляет собой тАЬ, которое специфически связывается с центральным эпитопом, локализованным в человеческом β-амилоидном пептиде, конкретно с остатками 16-23.

Ещё в одном варианте изобретения антитело может представлять собой 9С8 антитело или его вариант, описанное в патентной заявке США № 11/304986 и в Международной патентной заявке № РСТ/и805/45515, озаглавленной Гуманизированные антитела, распознающие бета-амилоидный пептид; 9С8 представляет собой тАЬ, которое специфически связывается с центральным эпитопом, локализованным в человеческом β-амилоидном пептиде, конкретно с остатками 16-21.

Клеточные линии, продуцирующие антитела 2В1, 1С2 и 9С8, депонированы 1 ноября 2005 г. в АТСС согласно Будапештскому договору под регистрационными номерами РТА-7202, РТА-7199 и РТА-7201 соответственно.

Антитела, которые специфически связываются с С-концевыми эпитопами, локализованными в β-амилоидном пептиде, для применения по настоящему изобретению включают, но без ограничения, 369.2В, описанное в патенте США № 5786180, озаглавленном Моноклональное антитело 369.2В, специфическое к β А4 пептиду. Подробное описание антител для применения в настоящем изобретении можно найти, например, в Викк1ете е! а1. (Ат. 1. Ра!йо1. 165(3): 987-95 (2004)); Вагб е! а1. (РNА8, 100(4): 2023-8 (2003)); Ка|ко\\кк1 е! а1. (1. Вю1. Скет. 276(22): 18748-56 (2001)); батек е! а1. (Агт. XV Асаб. 8οΐ. 920: 274-84 (2000)); Вагб е! а1. (№11. Меб. 6(8): 916-9 (2000)) и в Международной патентной заявке № XV 0 03015691 А2, озаглавленной Обеспечение быстрого улучшения познавательной способности у субъекта с болезнью Альцгеймера, синдромом Дауна, церебральной амилоидной ангиопатией или умеренным когнитивным нарушением заключается во введении антитела против А бета. Более подробное описание фрагментов антитела для применения в настоящем изобретении можно найти, например, в Ва1ек е! а1. (АЬк!тас1 Р4-396, р. 8587, представленном на постерной сессии Р4: Тйетареибск апб Тйетареибс 8!та1ед1ек-Тйегареибс 8!та1ед1ек, Ату1о1б-Вакеб) и 2атеет е! а1. (АЬйтас! Р4-420, р. 8593, представленном на постерной сессии Р4: Тйетареибск апб Тйетареибс 8!та1ед1ек-Тйегареибс 81та1ед1ек, Ату1о1б-Вакеб).

Антитела для применения в настоящем изобретении можно получать методами рекомбинантной ДНК или синтетическими методами. Например, антитело можно получать в культуре рекомбинантных клеток, используя, например, СНО клетки, N14 3Т3 клетки, РЕР.С'6® клетки, N80 клетки, УЕР0 клетки, фибробласты эмбрионов цыплят или ВНК клетки. Кроме того, в настоящем изобретении рассматриваются антитела с минорными модификациями, которые сохраняют первичное функциональное свойство связывать Аβ-пептид. В конкретном варианте изобретения антитело является гуманизированным антителом 3Ό6 против Аβ-пептида, которое селективно связывает Аβ-пептид. Более конкретно, гуманизированное антитело 3Ό6 против Аβ-пептида создано для специфического связывания с ХН₂-концевым эпитопом, например аминокислотными остатками 1-5, локализованными в человеческом β-амилоидном 1-40 или 1-42 пептиде, находящемся в бляшечных отложениях в мозге (например, в мозге пациентов, страдающих болезнью Альцгеймера).

- 21 015147

На фиг. 1 представлено схематическое изображение предсказанной структуры типичного гуманизированного антитела против Ав-пептида. Полные аминокислотные последовательности лёгкой и тяжёлой цепей Η3Ό6ν2, предсказанные исходя из ДНК последовательности соответствующих экспрессирующих векторов, показаны на фиг. 2 (где остатки нумеруются, начиная с остатка 1, с ИН₂-конца лёгкой и тяжёлой цепей) и в 8ЕО Ш N0: 1 и 8Е0 Ш N0: 2 соответственно. Последний аминокислотный остаток, кодированный последовательностью ДНК тяжёлой цепи, Ьук⁴⁴⁹, не наблюдается в зрелой секретированной форме 1ι3Ό6ν2 и, не ограничиваясь какой-либо единственной теорией, следует отметить, что он, повидимому, удаляется во время внутриклеточного процессирования под действием СНО клеточных протеаз. Следовательно, СООН-конец тяжёлой цепи Η3Ό6ν2, необязательно, представляет собой С1у⁴⁴⁸. Процессирование СООН-концевого лизина наблюдалось в рекомбинантных антителах и антителах из плазмы и, очевидно, не влияет на их функцию (Натк (1995), I. СЬгота!одг. А. 705: 129-134). Очищенное 1ι3Ό6ν2 после трансляции модифицируют, добавляя Ν-связанные гликаны к Рс участку тяжёлой цепи, как известно, содержащему единичный консенсусный сайт Ν-гликозилирования. Сайт Ν-гликозилирования визуализирует три основные биантенные нейтральные олигосахаридные структуры, наблюдаемые обычно в аналогичном сайте Ν-гликозилирования 1дС белков млекопитающих.

Другим примером гуманизированного антитела против Ав-пептида является вариант 1 гуманизированного антитела 3Ό6 (Ρπ3Ό6ν1), имеющий последовательность, представленную на фиг. 2, за исключением замены Ό^Υ в положении 1 лёгкой цепи.

В различных вариантах настоящего изобретения антитело против Ав (например, гуманизированное антитело 3Ό6 против Ав-пептида) присутствует в концентрации примерно 0,1-100 мг/мл, примерно 0,1-75 мг/мл, примерно 0,1-50 мг/мл, примерно 0,1-40 мг/мл, примерно 0,1-30 мг/мл, примерно 10-20 мг/мл, примерно 20-30 мг/мл или выше, например примерно вплоть до 100 мг/мл, примерно до 200 мг/мл, примерно до 500 мг/мл или около 1000 мг/мл или более. Предпочтительно антитело против Ав присутствует в концентрации около 17-23 мг/мл. В различных вариантах изобретения антитело против Ав присутствует в концентрации около 1, 2, 5, 10, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или 30 мг/мл. В конкретном варианте изобретения антитело (например, гуманизированное антитело 3Ό6 против Ав-пептида) присутствует в концентрации около 17 мг/мл. В другом конкретном варианте изобретения антитело (например, гуманизированное антитело 3Ό6 против Ав-пептида) присутствует в концентрации около 20 мг/мл. В другом конкретном варианте изобретения антитело (например, гуманизированное антитело 3Ό6 против Ав-пептида) присутствует в концентрации около 30 мг/мл. Предполагаются, что интервалы, промежуточные между вышеприведёнными концентрациями, например около 12-17 мг/мл, также входят в объём настоящего изобретения. Например, предполагается, что включены интервалы с комбинациями некоторых из вышеприведённых величин в качестве как верхнего, так и/или нижнего пределов.

Эксципиенты.

В различных вариантах настоящее изобретение предусматривает препарат, который может включать различные эксципиенты, включая, но без ограничения, буфер, антиоксидант, агент, регулирующий тоничность, и стабилизатор. Кроме того, препараты могут содержать дополнительный агент для корректировки рН (например, НС1) и разбавитель (например, воду). В другом варианте изобретения для корректировки рН можно использовать различные формы гистидина. Частично эксципиенты служат для поддержания стабильности и биологической активности антитела (например, за счёт сохранения подходящей конформации белка) и/или для поддержания рН.

Буферный агент.

В различных аспектах настоящего изобретения препараты включают буферный агент (буфер). Буфер служит для поддержания физиологически приемлемого значения рН. Кроме того, буфер может служить для повышения изотоничности и химической устойчивости (стабильности) препарата. Как правило, препарат должен иметь физиологически приемлемое значение рН. В различных вариантах настоящего изобретения препарат имеет рН около 5-7, около 5,5-6,5, предпочтительно около 6,0-6,5. В конкретном варианте изобретения препарат имеет рН около 6,0. Предполагается также, что в объём изобретения входят интервалы, промежуточные между вышеприведёнными уровнями рН, например около рН 5,2-6,3, предпочтительно 6,0 или 6,2. Например, предполагается, что включены интервалы величин, использующих комбинацию любых из вышеприведённых значений в качестве верхних и/или нижних пределов. Значение рН можно, при необходимости, корректировать известными в уровне техники методами. Например, при необходимости, для доведения рН до заданных уровней можно добавлять НС1 или различные формы гистидина.

Буфер может включать, но без ограничения, сукцинат (натрия или калия), гистидин, фосфат (натрия или калия), трис-(трис-(гидроксиметил)аминометан), диэтаноламин, цитрат, другие органические кислоты и их смеси. В предпочтительном варианте изобретения буфер представляет собой гистидин (например, Ь-гистидин). В другом конкретном варианте изобретения буфер представляет собой сукцинат. В другом варианте изобретения препарат включает аминокислоту, такую как гистидин, который присутствует в количестве, достаточном для поддержания физиологически приемлемого рН препарата. Гистидин

- 22 015147 является примером аминокислоты, обладающей буферной способностью в пределах физиологического значения рН. Буферными свойствами гистидин обязан своей имидазольной группе. В одном примере варианта изобретения буфером является Ь-гистидин (основание) (например, С₆Н₉Ы₃О₂, М.в. 155.15). В другом варианте изобретения буфер представляет собой Ь-гистидин моногидрохлорид моногидрат (например, С₆Н₉Ы₃О₂-НС1-Н₂О, М.в. 209.63). В другом примере варианта изобретения буфер представляет собой смесь Ь-гистидина (основания) и Ь-гистидина моногидрохлорида моногидрата.

В одном варианте изобретения концентрация буфера (например, Ь-гистидина или сукцината) составляет около 0,1-50 мМ, около 0,1-40 мМ, около 0,1-30 мМ, около 0,1-25 мМ, около 0,1-20 мМ или около 5-15 мМ, предпочтительно 5 или 10 мМ. В различных вариантах изобретения буфер может присутствовать в концентрации около 6, 7, 8, 9, 11, 12, 13, 14 или 15 мМ. В конкретном варианте изобретения буфер присутствует в примерной концентрации 10 мМ. Предполагается, что интервалы, промежуточные между вышеуказанными концентрациями, например 12-17 мМ, являются частью данного изобретения. Например, предполагается, что включены интервалы величин, использующих комбинацию любых из вышеприведённых значений в качестве верхних и/или нижних пределов. В некоторых вариантах изобретения буфер присутствует в количестве, достаточном для поддержания физиологически приемлемого значения рН.

Агент, регулирующий тоничность.

В различных аспектах настоящего изобретения препарат включает агент, регулирующий тоничность. Отчасти агент, регулирующий тоничность, способствует поддержанию изотоничности препарата и поддержанию уровней белка. Отчасти агент, регулирующий тоничность, способствует сохранению уровня, соотношения или доли терапевтически активного полипептида, присутствующего в препарате. Применяемый в данном описании термин тоничность относится к поведению биологических компонентов в жидкой среде или в растворе. Осмотическое давление изотонических растворов такое же, что и осмотическое давление плазмы крови, и, следовательно, их можно вливать внутривенно субъекту, не изменяя осмотического давления плазмы крови субъекта. Действительно, в одном варианте изобретения агент, регулирующий тоничность, присутствует в количестве, достаточном для того, чтобы сделать препарат пригодным для внутривенного вливания (инфузии). Часто агент, регулирующий тоничность, служит также в качестве наполнителя. Собственно агент может способствовать тому, что белок преодолевает различные воздействия, такие как замораживание и сдвиг.

Агент, регулирующий тоничность, может включать, но без ограничения, СаС1₂, ЫаС1, МдС1₂, лактозу, сорбит, сахарозу, маннит, трегалозу, раффинозу, полиэтиленгликоль, гидроксиэтил крахмал, глицин и их смеси. В предпочтительном варианте изобретения агент, регулирующий тоничность, представляет собой маннит (например, Ό-маннит, например, С₆Н;₄О₆, М.в. 182.17).

В одном варианте изобретения агент, регулирующий тоничность, присутствует в концентрации примерно 2-6% вес./об. или примерно 3-5% вес./об. В другом варианте изобретения агент, регулирующий тоничность, присутствует в концентрации примерно 3,5-4,5% вес./об. В другом варианте изобретения агент, регулирующий тоничность, присутствует в концентрации примерно 20-60 мг/мл, примерно 30-50 мг/мл или примерно 35-45 мг/мл. Предпочтительно агент, регулирующий тоничность, присутствует в концентрации примерно 4 или примерно 40 мг/мл. В другом конкретном варианте изобретения агент, регулирующий тоничность, присутствует в примерной концентрации 6% вес./об. Ещё в одном конкретном варианте изобретения агент, регулирующий тоничность, присутствует в примерной концентрации 10% вес./об.

Также предполагается, что интервалы концентраций, промежуточные между вышеприведёнными значениями, например около 3,2-4,3% вес./об. или 32-43 мг/мл, являются частью данного изобретения. Например, предполагается, что включены интервалы величин, использующих комбинацию любых из вышеприведённых значений в качестве верхних и/или нижних пределов. Агент, регулирующий тоничность, должен присутствовать в количестве, достаточном для поддержания тоничности препарата.

Антиоксидант.

В различных аспектах настоящего изобретения препарат включает антиоксидант таким образом, чтобы частично сохранить препарат (например, предупреждая окислением).

Антиоксидант может включать, но без ограничения, ОЬЛ (гамма-линоленовую кислоту)-липоевую кислоту, ОНА (докозагексаеновую кислоту)-липоевую кислоту, ОЬА-токоферол, ди-ОЬА-3,3'-тиодипропионовую кислоту и, как правило, любую из кислот, таких как ОЬА, ЭСЬА (дигомо-гамма-линоленовая кислота), АА (арахидоновая кислота), 8А (салициловая кислота), ЕРА (эйкозапентаеновая кислота) или ЭН А (докозагексаеновая кислота) с любым природным или синтетическим антиоксидантом, с которым они могут быть связаны химической связью. Эти антиоксиданты включают фенольные антиоксиданты (например, эвгенол, карнозиновую кислоту, кофеиновую кислоту, ВНТ (бутилированный гидроксианизол), галловую кислоту, токоферолы, токотриенолы и флавоноидные антиоксиданты (такие как мирецитин и физетин), полиены (например, ретиноевую кислоту), ненасыщенные стеролы (например, Д⁵-авеностерол), сераорганические соединения (например, аллицин), терпены (например, гераниол, абиетиновая кислота) и аминокислотные антиоксиданты (например, метионин, цистеин, карнозин). В одном

- 23 015147 варианте изобретения антиоксидантом является аскорбиновая кислота. Предпочтительно антиоксидантом является метионин или его аналог, например селенометионин, гидроксиметилбутановая кислота, этионин или трифторметионин.

В одном варианте изобретения антиоксидант (например, метионин, такой как Ь-метионин, например СН₃8СН₂СН₂СН(НН₂)СО₂Н, М.в. 149.21) присутствует в концентрации примерно 0,1-50 мМ, примерно 0,1-40 мМ, примерно 0,1-30 мМ, примерно 0,1-20 мМ или примерно 5-15 мМ. В различных вариантах изобретения антиоксидант может присутствовать в концентрации 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 мМ. Предпочтительно концентрация антиоксиданта составляет 10 мМ. В другом предпочтительном варианте изобретения концентрация антиоксиданта составляет 15 мМ. Предполагается, что интервалы, промежуточные между вышеприведёнными концентрациями, например около 12-17 мМ, также являются частью настоящего изобретения. Например, предполагается, что включены интервалы величин, использующих комбинацию любых из вышеприведённых значений в качестве верхних и/или нижних пределов. В некоторых вариантах изобретения антиоксидант должен присутствовать в количестве, достаточном для сохранения препарата, частично за счёт предупреждения окисления.

Стабилизатор.

В различных аспектах настоящего изобретения препарат включает стабилизатор, также известный как поверхностно-активное вещество (сурфактант). Стабилизаторы представляют собой химические соединения, которые взаимодействуют с биологическими молекулами и/или основными фармацевтическими эксципиентами в препарате и стабилизируют их. В некоторых вариантах изобретения стабилизаторы можно использовать в сочетании с пониженной температурой хранения. Стабилизаторы обычно защищают белок от влияния поверхности раздела воздух/раствор и раствор/поверхность, которое, иначе, могло вызвать агрегацию белка.

Стабилизатор может включать, но без ограничения, глицерин, полисорбаты, такие как полисорбат 80, дикарбоновые кислоты, янтарная кислота, адипиновая кислота, фумаровая кислота, фталевая кислота и их комбинации. В предпочтительном варианте изобретения стабилизатором является полисорбат 80.

В одном варианте изобретения концентрация стабилизатора (например, полисорбата 80) равна примерно 0,001-0,01% вес./об., примерно 0,001-0,009% вес./об. или примерно 0,003-0,007% вес./об. Предпочтительно концентрация стабилизатора равна примерно 0,005% вес./об. В другом конкретном варианте изобретения стабилизатор присутствует в примерной концентрации около 0,01% вес./об. Предполагается, что интервалы, промежуточные между вышеприведёнными концентрациями, например около 0,002-0,006% вес./об., также являются частью настоящего изобретения. Например, предполагается, что включены интервалы величин, использующих комбинацию любых из вышеприведённых значений в качестве верхних и/или нижних пределов. Стабилизатор должен присутствовать в количестве, достаточном для стабилизации Άβ-связывающего полипептида (например, антитела против Άβ).

Другие фармацевтически приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы, такие как носители, эксципиенты или стабилизаторы, описанные в Кетшдоп'з Рйаттасеибса1 8с1епсе§ 16'¹' ебШоп, Οδοί, А. Еб. (1980), могут быть включены в состав препарата при условии, что они не оказывают вредного воздействия на заданные характеристики препарата. В конкретном варианте изобретения препарат практически не содержит консервантов, в то время как в альтернативных вариантах изобретения консерванты можно добавлять по мере необходимости. Например, криопротектанты или лиопротектанты (вещества, защищающие при лиофилизации) можно включать, например, если препарат будет лиофилизированным.

В различных аспектах настоящего изобретения препараты, необязательно, включают некоторые или все описанные выше классы эксципиентов. В одном аспекте препараты по настоящему изобретению включают Άβ-связывающий полипептид (например, антитело против Άβ), маннит и гистидин. В конкретных вариантах изобретения препараты могут включать антиоксидант, такой как метионин, и/или стабилизатор, такой как полисорбат 80. В некоторых вариантах изобретения препарат имеет рН около 6,0. В другом аспекте препарат включает Άβ-связывающий полипептид (например, антитело против Άβ), маннит, гистидин и метионин. Ещё в одном аспекте препарат включает Άβ-связывающий полипептид (например, антитело против Άβ), маннит, гистидин, метионин и полисорбат 80. В конкретном аспекте изобретения препарат включает 20 мг/мл Άβ-связывающего полипептида (например, антитела против Άβ), около 10 мМ гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% маннита и имеет рН около 6,0. В другом аспекте изобретения препарат включает 20 мг/мл Άβ-связывающего полипептида (например, антитела против Άβ), 10 мМ гистидина, 10 мМ метионина, 4% вес./об. маннита, 0,005% вес./об. полисорбата 80 и имеет рН около 6,0. Предпочтительный препарат включает около 17-23 мг/мл гуманизированного 3Ό6 антитела, около 10 мМ гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% вес./об. маннита, около 0,005% полисорбата 80 и имеет рН около 5,5-6,5. Другой предпочтительный препарат включает около 10-30 мг/мл гуманизированного 266 антитела, около 10 мМ гистидина или сукцината, около 10 мМ метионина, около 4% вес./об. маннита или сорбита и имеет рН около 5,5-6,5. Ещё один предпочтительный препарат включает около 10-30 мг/мл гуманизированного 12Ά11 антитела, около 5 мМ гистидина, около 10 мМ метионина, около 4% маннита или 150 мМ ЫаС1, и имеет рН около 5,5-6,5. Другой препарат стабилен по меньшей мере в течение примерно 12 месяцев при температуре выше температуры замерзания,

- 24 015147 примерно до 10°С, имеет рН около 5,5-6,5 и включает по меньшей мере одно антитело против Άβ в концентрации около 1-30 мг/мл, маннит в концентрации около 4% вес./об. или ЫаС1 в концентрации около 150 мМ, около 5-10 мМ гистидина или сукцината и 10 мМ метионина. Предпочтительно препарат также включает полисорбат в концентрации около 0,001-0,01% вес./об.

Примеры вариантов настоящего изобретения предусматривают концентрированные препараты Άβ-связывающего полипептида (например, антитела против Άβ), часто пригодного в качестве объёмной лекарственной формы. Кроме того, примеры вариантов настоящего изобретения устойчивы к замораживанию, лиофилизации и/или реконституции (восстановлению). Кроме того, примеры вариантов настоящего изобретения стабильны по меньшей мере в течение примерно 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 месяцев. В конкретных вариантах препараты по настоящему изобретению стабильны по меньшей мере в течение примерно 12 месяцев, по меньшей мере около 18 месяцев, по меньшей мере около 24 месяцев или по меньшей мере около 30 месяцев.

Согласно изобретению препарат может храниться при температурах примерно -80-40°С, примерно 0-25°С, примерно 0-15°С или примерно 0-10°С, предпочтительно примерно при 2-8°С. В различных вариантах изобретения препарат может храниться примерно при 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10°С. В конкретном варианте изобретения препарат хранится примерно при 5°С. Как правило, препарат устойчив и сохраняет биологическую активность в этих интервалах. Предполагается, что интервалы, промежуточные между вышеприведёнными температурами, например около 2-17°С, также являются частью настоящего изобретения. Например, предполагается, что включены интервалы величин, использующих комбинацию любых из вышеприведённых значений в качестве верхних и/или нижних пределов.

Препараты по настоящему изобретению пригодны для доставки различными методами. В некоторых вариантах изобретения препарат вводят парентерально, например внутривенно или внутримышечно. Кроме того, можно направлять доставку препарата в мозг (например, таким образом, что антитело может проникать через гематоэнцефалический барьер) или цереброспинальную жидкость. В конкретном варианте изобретения препарат вводят внутривенно.

Эффективные дозы препаратов по настоящему изобретению варьируются в зависимости от множества различных факторов, включая способы введения, нацеленный сайт, физиологическое состояние пациента, является пациент человеком или животным, другие вводимые лекарства и является ли лечение профилактическим или терапевтическим. Обычно пациентом является человек, но можно также лечить нечеловеческих млекопитающих, включая трансгенных млекопитающих. Для оптимизации безопасности и эффективности необходимо титровать дозы.

Типичные дозы для пассивной иммунизации с помощью антитела составляют примерно 0,0001-100 мг/кг, примерно 0,01-5 мг/кг, примерно 0,15-3 мг/кг, примерно 0,5-2 мг/кг, предпочтительно примерно 1-2 мг/кг массы тела хозяина. В некоторых типичных вариантах изобретения дозы могут быть около 0,5; 0,6; 0,7; 0,75; 0,8; 0,9; 1,0; 1,2; 1,25; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,75; 1,8; 1,9 или 2,0 мг/кг. Другие типичные дозы для пассивной иммунизации равны около 1-20 мг/кг. В некоторых примерах вариантов изобретения дозы могут быть около 5, 10, 15 или 20 мг/кг. Такие дозы можно вводить субъектам ежедневно, через день, еженедельно или по любой другой схеме, определённой эмпирическим анализом. Типичное лечение включает введение многократных доз в течение продолжительного периода, например по меньшей мере в течение 6 месяцев. Другие типичные схемы лечения включают введение один раз в две недели, или один раз в месяц, или один раз в 3-6 месяцев. Типичные схемы применения включают 1-10 мг/кг или 15 мг/кг ежедневно, 30 мг/кг через день или 60 мг/кг еженедельно. В некоторых способах два или более моноклональных антитела с различными специфичностями связывания вводят одновременно, в этом случае доза каждого вводимого антитела находится в указанных пределах.

Άнтитело обычно вводят в виде многократных доз. Интервалы между единичными дозами могут составлять неделю, месяц или год. Интервалы могут также быть нерегулярными по показаниям уровней антитела к Άβ в крови пациента. В некоторых способах дозу корректируют таким образом, чтобы достичь концентрации антитела в плазме 1-1000 мкг/мл, а в некоторых способах 25-300 мкг/мл. Или же, антитело можно вводить в виде препарата пролонгированного действия, в этом случае требуется реже вводить препарат. Доза и частота меняются в зависимости от периода полужизни антитела в организме пациента. Вообще, у человеческих антител наблюдается наиболее продолжительный период полужизни, затем идут гуманизированные антитела, химерные антитела и нечеловеческие антитела.

Доза и частота введения могут меняться в зависимости от того, является ли лечение профилактическим или терапевтическим. При профилактическом применении препараты, содержащие настоящие антитела или их коктейль, вводят пациенту ещё не на стадии заболевания с целью повышения сопротивляемости организма пациента. Такое количество определяется как профилактически эффективная доза. При таком применении точные количества опять зависят от состояния здоровья пациента и общего иммунитета, но обычно находятся в интервале 0,1-0,25 мг на дозу, в основном 0,5-2,5 мг на дозу. Относительно низкую дозу вводят через относительно нечастые интервалы в течение продолжительного периода времени. Некоторые пациенты продолжают получать лечение всю оставшуюся жизнь.

- 25 015147

При некоторых терапевтических применениях требуются относительно высокие дозы (например, от около 0,5 или 1 до примерно 200 мг/кг антитела на дозу (например, 0,5, 1, 1,5, 2, 5, 10, 20, 25, 50 или 100 мг/кг), при этом чаще всего применяют дозы 5-25 мг/кг) через относительно короткие интервалы до уменьшения или прекращения прогрессирования заболевания и предпочтительно до тех пор, пока у пациента не будет наблюдаться частичное или полное уменьшение интенсивности симптомов заболевания. Затем пациенту можно назначать профилактический режим.

Особенно предпочтительно создавать препараты по изобретению в стандартной лекарственной форме для простоты введения и однородности дозировки. Препараты по изобретению могут быть в виде капсул, ампул, в лиофилизированном виде или в упаковке для многократного приёма. Термин контейнер относится к чему-либо, например к держателю, резервуару (ёмкости) или сосуду, в который объект (изделие) или жидкость могут помещаться или содержаться, например, для хранения. Стандартная лекарственная форма может содержать любой препарат по данному описанию, включая суспензии, растворы и эмульсии активного ингредиента вместе с агентами, составляющими рецептуру, такими как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. В типичном варианте изобретения фармацевтическую стандартную лекарственную форму можно добавлять в мешок для внутривенного вливания (например, мешок на 50, 100, или 250, или 500 мл) с подходящим разбавителем, например стерильной апирогенной водой или физиологическим солевым раствором, перед тем как вводить её пациенту, например внутривенным вливанием. В случае некоторых фармацевтических стандартных лекарственных форм перед добавлением в мешок для внутривенной инфузии может потребоваться реконституция подходящим разбавителем, в особенности в случае лиофилизированных форм. В типичных вариантах изобретения фармацевтическая стандартная лекарственная форма представляет собой контейнер, содержащий препарат по данному описанию. Например, контейнер может представлять собой стеклянную, типа Ι, ампулу (пробирку) на 10 мл. Обычно контейнер должен сохранять стерильность и стабильность препарата. Например, пробирка может быть закрыта латексной пробкой. Кроме того, в различных вариантах изобретения контейнер можно сделать таким образом, чтобы легко было извлечь около 100 мг препарата или активного ингредиента (например, для разового применения). Или же контейнер может применяться для больших количеств препарата или активного ингредиента, например около 10-5000 мг, около 100-1000 мг и около 100-500 мг, около 40-250 мг, около 60-80 мг, около 80-120 мг, около 120-160 мг или интервалы между ними, например около 100-200 мг. Предполагается, что интервалы, промежуточные между вышеприведёнными количествами, например около 25-195 мг, также являются частью настоящего изобретения. Например, предполагается, что включены интервалы величин, использующих комбинацию любых из вышеприведённых значений в качестве верхних и/или нижних пределов. В конкретном варианте изобретения препарат часто поступает в виде жидкости в стандартной лекарственной форме.

В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает набор, включающий фармацевтическую стандартную лекарственную форму (например, контейнер с препаратом по данному описанию) и инструкции по применению. Соответственно, контейнер и набор можно создать таким образом, чтобы обеспечить достаточное количество препарата для многократного применения. В различных вариантах изобретения набор может дополнительно содержать разбавитель. Разбавитель может включать эксципиенты, по отдельности или вместе. Например, разбавитель может включать модификатор тоничности, такой как маннит, буферный агент, такой как гистидин, стабилизатор, такой как полисорбат 80, антиоксидант, такой как метионин, и/или их комбинации. Разбавитель может содержать другие эксципиенты, например защитное средство при лиофилизации (лиопротектант), если специалист в данной области техники сочтёт это необходимым.

Дополнительные применимые варианты изобретения представлены в разделе Сущность изобретения.

Данное изобретение далее иллюстрируется с помощью примеров, которые не следует рассматривать как ограничивающие. Содержание всех ссылочных материалов, патентов и опубликованных патентных заявок, приводимых на всём протяжении данного описания, а также на фигурах, вводится в данное описание в качестве ссылки.

- 26 015147

Примеры

Как правило, в практике применения настоящего изобретения, если не указано иначе, используют традиционные методы химии, молекулярной биологии, методы рекомбинантной ДНК, иммунологии (в частности, например, методы антител) и стандартные методы получения полипептидов. См., например, 8атЬгоок, Ргйксй апй МатаШ, Мо1сси1аг С1ошпд: Со1й 8рппд НагЬог ЬаЬога!огу Ргсзз (1989); АпйЬойу Епдтссппд Рго!осо1§ (МсШойз т Мо1сси1аг Вю1о§у), 510, Раи1, 8., Нитапа Рг (1996); АпйЬойу Епдтссппд: А Ргасйса1 Арргоасй (Ргас!1са1 Арргоасй 8спс5, 169), МсСаГГсПу, Ей., 1г1 Рг (1996); Ап^ЬоФсз: А ЬаЬога!огу Мапиа1, Наг1оте с! а1., С.8.Н.Ь. Ргсзз, РиЬ. (1999); и Сштсп! Рго!осок ш Мо1сси1аг В1о1оду, сйз. Аи^иЬ^ с! а1., 1оЬп \νίΚ\· & 8опз (1992).

Пример I. Клонирование и экспрессия гуманизированного антитела против Άβ.

Примером антитела для препарата в соответствии со способами настоящего изобретения является 3Ό6. 3Ό6 тАЬ является специфическим к Ν-концу Άβ-пептида, и было показано, что оно опосредует фагоцитоз (например, индуцируют фагоцитоз) амилоидной бляшки. 3Ό6 не распознаёт секретированный АРР или полноразмерный АРР, но детектирует только Άβ вид с аминоконцевой аспарагиновой кислотой. Следовательно, 3Ό6 является специфическим в отношении конца антителом. Клеточная линия, обозначенная ВВ96 3Ό6.32.2.4, продуцирующая антитело 3Ό6, имеющая в ΆТСС регистрационный номер РТΆ-5130, депонирована 8 апреля 2003 г. Клонирование, характеристики и гуманизация 3Ό6 антитела описаны в опубликованной патентной заявке СШΆ № 20030165496 А1. Коротко говоря, гуманизацию мышиного моноклонального антитела против Άβ-пептида (обозначенного как т3Э6) проводят, выделяя последовательности ДНК вариабельных областей лёгкой и тяжёлой цепей т3Э6 (У_ъ и У_Н) обратной транскрипцией-полимеразной цепной реакцией (ОТ-ПЦР, ВТ-РСВ). На основании последовательностей ДНК У_ъ и У_Н т3Э6 идентифицируют гомологичные человеческие каркасные области. Чтобы гарантировать, что гуманизированное антитело сохраняет способность взаимодействовать с Άβ-пептидным антигеном, в гуманизированной 3Ό6 последовательности сохраняют важные остатки мышиной У_ъ и У_Н каркасной последовательности, чтобы сохранить общую структуру областей константного домена (СОВ) применительно к человеческим последовательностям каппа лёгкой цепи и 1дС| тяжёлой цепи. Последовательности ДНК, кодирующие гуманизированные 3Ό6 У_ъ и У_Н последовательности, идентифицированные этим способом (включая 5'-последовательность сигнального пептида и 3'-интронную последовательность в донорном сайте сплайсинга), получают отжигом синтезированных перекрывающих ДНК олигонуклеотидов с последующими ДНК-полимеразными реакциями достройки. Целостность каждой из гуманизированных последовательностей вариабельной области контролируют секвенированием ДНК. На фиг. 1 схематически представлена предсказанная структура гуманизированного антитела 3Ό6 против Άβ-пептида, названного 1ι3Ω6ν2. На фиг. 2 определяются полные аминокислотные последовательности лёгкой и тяжёлой цепей 1ι3Ω6ν2.

Гуманизированное антитело 3Ό6 экспрессируется трансфекцией линии клеток-хозяев яичников китайского хомячка (СНО) при использовании плазмид экспрессии, кодирующих гены лёгкой и тяжёлой цепей антитела против Άβ. СНО клетки, экспрессирующие антитело, выделяют стандартными методами селекции лекарства с помощью метотрексата/амплификации гена. Отбирают клональную СНО клеточную линию, имеющую фенотипы с заданными продуктивностью и ростом, и применяют для установления экспрессирующей антитело линии клеток, используя химически определённую (с определённым химическим составом) среду, не содержащую компонентов животного или человеческого происхождения.

Пример II. Получение лекарственного вещества гуманизированного антитела против Лβ.

Процесс получения полипептида начинается с оттаивания исходной культуры клональных клеток, устойчиво экспрессирующих антитело против Άβ-пептида. Клетки культивируют в среде с определённым химическим составом, не содержащей животных или человеческих белков. Затем культуры выращивают и используют для инокуляции (внесения посевного материала) биореактора, который, в свою очередь, используют для инокуляции многократных циклов промышленного биореактора. Промышленный биореактор работает в режиме с периодической подпиткой. В конце производственного цикла урожай в кондиционированной среде осветляют микрофильтрацией, получая препарат для последующего процессинга.

Процессы очистки состоят из стадий стандартной хроматографии с последующей фильтрацией. Очищенное антитело концентрируют ультрафильтрацией и диафильтрацией переводят в буфер для препарата, не содержащий полисорбат 80. Необязательно, полисорбат 80 (растительного происхождения) добавляют в пул ретентата после ультрафильтрации/диафильтрации с последующей фильтрацией для удерживания бактерий. Лекарственное вещество хранят в замороженном состоянии при -80°С и выдерживают для дальнейшей переработки в лекарственный продукт, включая стабилизированные жидкие препараты по данному описанию.

- 27 015147

Пример III. Приготовление препарата антитела и плацебо.

Получают две партии лекарственного продукта антитела. Начальную партию получают смешением (компаундированием) лекарственного вещества с получением не содержащего животных и человеческих белков препарата, содержащего 20 мг активного вещества антитела против Ав-пептида на 1 мл, 10 мМ гистидина, 10 мМ метионина, 4% маннита, 0,005% полисорбата 80, рН 6. В асептических условиях пузырьки (ампулы) заполняют лекарственным продуктом, по 100 мг активного вещества антитела против Ав/пузырёк (ампула). Пузырёк (ампула) с конечным лекарственным продуктом не содержит консервантов и предполагается только для одноразового пользования.

Вторую партию лекарственного продукта получают аналогично с применением буфера для препарата без полисорбата 80.

Пример IV. Анализ стабильности препарата, содержащего и не содержащего полисорбат 80.

Стабильность и в особенности физико-химическую целостность (такая как агрегация, дезамидирование, гидролиз и/или перегруппировка дисульфидной связи) препарата оценивают следующими общеизвестными в уровне техники методами: внешний вид; рН; концентрация белка (А280); ЕЫ8А, отчасти, в качестве теста на биоактивность; электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата (808-РАСЕ), отчасти, в качестве теста на агрегацию; эксклюзионная (ситовая)-высокоэффективная жидкостная хроматография (8ЕС-ВЭЖХ), отчасти, в качестве теста на агрегацию и стабильность в целом; катионообменная высокоэффективная жидкостная хроматография (СЕХ-ВЭЖХ), отчасти, в качестве теста на дезамидирование и стабильность в целом и пептидное картирование. Этими методами оценивают регенерацию и целостность препарата в условиях тестирования при различных температурах.

Анализ внешнего вида препарата проводят для того, чтобы определить качество препарата в различные временные точки. Визуально анализируют прозрачность, цвет и присутствие (макро)частиц. Например, анализируют степень опалесценции в сравнении с эталонной суспензией. Анализ внешнего вида препаратов, приготовленных в присутствии и в отсутствие полисорбата 80, в соответствии с настоящим изобретением показывает, что оба препарата являются годными после хранения при температурах -80, 5, 25 и 40°С в каждой из следующих временных точек: начальная, 1, 2, 3, 6, 9 и 12 месяцев.

Проверку величины рН проводят для определения поддержания рН препарата в приемлемом интервале около 5,5-6,5. Анализ рН препаратов, приготовленных в присутствии и в отсутствие полисорбата 80, в соответствии с настоящим изобретением показывает, что оба препарата являются годными после хранения при температурах -80, 5, 25 и 40°С в каждой из следующих временных точек: начальная, 1, 2, 3, 6, 9 и 12 месяцев. В целом рН нигде не опускается ниже 5,8 и не превышает 6,2.

Анализ концентрации белка с помощью А280 осуществляют для определения поддержания концентрации белка в препарате в приемлемом интервале около 17-23 мг/мл. Анализ концентрации белка в препаратах, приготовленных в присутствии и в отсутствие полисорбата 80, в соответствии с настоящим изобретением показывает, что оба препарата являются годными после хранения при температурах -80, 5, 25 и 40°С в каждой из следующих временных точек: начальная, 1, 2, 3, 6, 9 и 12 месяцев. За исключением концентраций белка, немного превышающих 23 мг/мл в препарате, не содержащем полисорбата 80, при хранении при 5, 25 и 40°С во временной точке 3 месяца концентрация белка остаётся в приемлемых пределах. Соответственно, анализ концентрации белка не показывает заметной потери белка, даже в условиях форсированного (ускоренного) режима, в особенности для препаратов с полисорбатом 80. Кроме того, не удаётся продемонстрировать заметное изменение концентрации белка в зависимости от времени или температуры после начальной временной точки.

Сохранение биологической активности проверяют, отчасти, методами ЕЫ8А. Биологическую активность анализируют в единицах связывания (ВИ)/мг, причём приемлемой активностью является >2500 Ви/мг или 50% (т.е. 5000 ВИ/мг равно 100%). Анализ методом ЕЫ8А препаратов, приготовленных в присутствии и в отсутствие полисорбата 80, в соответствии с настоящим изобретением показывает, что оба препарата в целом являются годными после хранения при температурах -80, 5, 25 и 40°С в каждой из следующих временных точек: начальная, 1, 2, 3, 6, 9 и 12 месяцев. За исключением биологической активности немного ниже 50% во временной точке 12 месяцев для обоих препаратов при хранении при 40°С биологическая активность в других случая остаётся в приемлемых пределах.

8ЕС-ВЭЖХ анализ проводят в качестве теста на агрегацию, чистоту и стабильность в целом. Циклы 8ЕС-ВЭЖХ с применением в качестве подвижной фазы буфера, содержащего двухосновный фосфат натрия, показали, что препарат годен, если 8ЕС-ВЭЖХ анализ определяет содержание !дС мономера >90%, при сравнении с высокомолекулярным продуктом и низкомолекулярным продуктом. 8ЕС-ВЭЖХ анализ препаратов, приготовленных в присутствии и в отсутствие полисорбата 80, в соответствии с настоящим изобретением показывает, что оба препарата в целом являются годными после хранения при температурах -80, 5, 25 и 40°С в каждой из следующих временных точек: начальная, 1, 2, 3, 6, 9 и 12 месяцев. За исключением процентного содержания мономера ниже 90% в обоих препаратах, хранившихся при 40°С, в каждой временной точке начиная с 6 месяцев и позже (где анализ выявляет по меньшей мере более 10% низкомолекулярного продукта в обоих препаратах в каждой временной точке) процентное содержание мономера в других случаях находится в приемлемых пределах. В целом 8ЕС-ВЭЖХ анализ показы

- 28 015147 вает, что профили высокомолекулярных и низкомолекулярных соединений во времени отличаются в образцах, содержащих и не содержащих полисорбат 80, мономерная форма антитела в целом остаётся постоянной, например во временной точке 12 месяцев, когда препарат хранится при 5°С.

Анализ методом СЕХ-ВЭЖХ проводят в качестве теста на аминирование и стабильность в целом. Циклы СЕХ-ВЭЖХ с применением в качестве подвижной фазы буфера, содержащего №С1, дают профиль элюции и время удерживания преобладающих пиков, которые анализируют как аналогичные или не аналогичные стандартным профилям эталонов. Анализ СЕХ-ВЭЖХ препаратов, приготовленных в присутствии и в отсутствие полисорбата 80, в соответствии с настоящим изобретением показывает, что оба препарата в целом являются годными после хранения при температурах -80, 5, 25 и 40°С в каждой из следующих временных точек: начальная, 1, 2, 3, 6, 9 и 12 месяцев. За исключением профиля элюции и времени удерживания преобладающих пиков, не аналогичных эталонным пикам в обоих препаратах, хранившихся при 40°С, в каждой временной точке начиная с 3 месяцев и позже, преобладающие пики в других случаях аналогичны эталонным пикам.

В целом анализ препаратов с полисорбатом 80, хранившихся при 5°С, позволяет сделать следующие особенно важные заключения:

1) опалесценция, рН, ЕЫ8А, СЕХ-ВЭЖХ, 8ЕС-ВЭЖХ и 8Ό8-ΡΑ6Ε анализы, все, показывают минимальные изменения в препарате через 9 месяцев;

2) препараты, хранившиеся при 5°С, выглядят скорее как эталонные образцы через 9 месяцев, нежели как ускоренные образцы;

3) пептидное картирование показывает изменения при 5°С;

4) тенденция, наблюдающаяся в данных 8ЕС-ВЭЖХ при 5°С, позволяет прогнозировать стабильность в течение по меньшей мере 17,2 месяцев (см. фиг. 6), однако, если исключить изменчивость (вариабельность) колонки, прибора и буфера, данные позволяют предсказать стабильность более чем в течение 30 месяцев (см. фиг. 7). Кроме того, ускоренные образцы с полисорбатом 80, хранившиеся при 25°С, признаны годными через 9 месяцев (фиг. 4).

Кроме того, анализ препаратов без полисорбата, хранившихся при 5°С, позволяет сделать следующие особенно важные заключения:

1) опалесценция, рН и ЕЬ18А анализы, все, показывают минимальные изменения в препарате через 9 месяцев;

2) результаты анализов методами СЕХ-ВЭЖХ и 8Ό8-ΡΑΟΕ показывают данные, сравнимые с эталонными образцами или с контролем или с образцом, хранившимся при -80°С, во временной точке 9 месяцев;

3) анализ 8ЕС-ВЭЖХ показывает минорные изменения через 9 месяцев, хотя более заметные изменения наблюдаются при повышенных (ускоренных) температурах;

4) тенденция, наблюдающаяся в данных 8ЕС-ВЭЖХ при 5°С, позволяет прогнозировать стабильность в течение по меньшей мере 18 месяцев, даже при вариабельности результатов анализа (см. фиг. 8).

На фиг. 3-5 графически показаны прогнозы относительно сроков хранения препаратов (содержащих и не содержащих Ρ880), приготовленных по данному изобретению и хранящихся при 5, 25 и 40°С соответственно. В общем на фиг. 3-5 показано, что хранение препаратов по настоящему изобретению при повышенных температурах уменьшает предполагаемый срок хранения. На фиг. 3, в частности, показано, что препарат имеет предполагаемый срок хранения по меньшей мере 18 ч, когда препарат хранится при 5°С. Фиг. 4 показывает, что хранение препарата при комнатной температуре (25°С) может снижать срок хранения примерно до 12 месяцев. Далее, фиг. 5 показывает, что хранение препарата при 40°С может снижать срок хранения примерно до 4 месяцев.

Пример V. Исследование стабильности при использовании метионина в качестве антиоксиданта

Проводятся исследования по определению влияния метионина на сохранение стабильности антитела и препаратов антитела. Анализ методом 8ЕС-ВЭЖХ проводят после 6 месяцев хранения при различных температурах на четырёх образцах антитела (с применением 1дС₄ антитела против СЭ22): препарат антитела с 20 мМ сукцината при рН 6,0; препарат антитела с 20 мМ сукцината и 10 мМ метионина; препарат антитела с 20 мМ сукцината при 0,01% Ρ880 и препарат антитела с 20 мМ сукцината, 10 мМ метионина и 0,01% Ρ880. В целом результаты показывают, что метионин желаемым образом снижает образование высокомолекулярного продукта (НМ^). Кроме того, метионин снижает зависимое от температуры повышение процентного содержания НМ\У (см. фиг. 10).

Кроме того, исследование стабильности в зависимости от рН (при рН 5,8, 6,0 и 6,2) проводят через 6 месяцев хранения при различных температурах (5 и 40°С) на четырёх следующих образцах антитела (1дС₂ антитело против В7.2):

(1) образец, включающий антитело, 10 мМ гистидина, 150 мМ №С1;

(2) образец, включающий антитело, 10 мМ гистидина, 150 мМ №1С1 и 0,01% Ρ880;

(3) образец, включающий антитело, 10 мМ гистидина, 150 мМ №1С1 и 10 мМ метионина;

(4) образец, включающий антитело, 10 мМ гистидина, 150 мМ №С1, 10 мМ метионина и 0,01% Ρ880.

- 29 015147

Проводят анализ методом 8ЕС-ВЭЖХ. Результаты показывают, что метионин снижает зависящее от температуры увеличение процентного содержания побочного продукта (например, НМУ побочных продуктов) в указанном интервале рН, например примерно при рН от 5,8 до 6,2 (см. фиг. 11). Как показано на фиг. 11, в образцах, содержащих метионин, наблюдается низкое количество продуктов агрегации при хранении при 40°С в течение 6 недель, аналогичное количеству продуктов агрегации в образцах, хранящихся при 5°С в течение 6 месяцев.

Пример VI. Диализ эксципиентов ^С₃ антитела дифференциальной сканирующей калориметрией.

Основной целью белкового лекарственного препарата является стабилизация белка в его нативной, биологически активной форме. Обычно это можно осуществить скринингом различных эксципентов в основном препарате и мониторингом их влияния на молекулярную массу и активность молекулы. Эти параметры являются показателями стабильности. Другой мерой стабильности является тепловая (термическая) денатурация, которую можно контролировать различными биофизическими методами. Обычно повышенную стабильность белка определяют высокие температуры плавления, денатурации или разложения. Соответственно, контролируют тепловые (термические) свойства типичного моноклонального антитела в присутствии различных эксципиентов с помощью ДР-капиллярного дифференциального сканирующего калориметра (УР-СарШагу О1ГГегеп(1а1 §сапшпд Са1опте!ет). Конкретно, определяют кажущиеся (средние) величины Т_пл (Τ^ препаратов, содержащих 10 мМ гистидина (рН 6) с различными эксципиентами. Показано, что некоторые эксципиенты обеспечивают повышенную или пониженную тепловую (термическую) стабильность. Так как повышенную стабильность белка объясняют высокой температурой плавления, предполагалось, что особенно желательными эксципиентами в образцах будут эксципиенты, сообщающие повышенную ^2 (Т_пл2) или Τ^ (Т_пл3) по сравнению с контрольными значениями Τ^/1^3 (Т_пл2/Т_пл3) (соответственно 74,9 и 83,4°С), см. таблицу.

Исходя из этого, сделан вывод, что эксципиенты, такие как глюкоза (с концентрацией в препарате 4 или 10%), сахароза (с концентрацией в препарате 4 или 10%) и маннит (с концентрацией в препарате 4 или 10%), особенно хорошо стабилизируют жидкий полипептидный препарат, в частности препарат антитела ^С.

Результаты анализа эксципиентов

Эксципиент	Концентрация	Т№1*	Тлл.2*	т^з*
Гистидин (Контроль)	10 мМ	-	74.9	83.4
ΝπΟ	10 мМ	69.3	74.8	82.9
	100 мМ	67.9	74.4	82.4
	500 мМ	66.5	74.5	81.9
	1М	65.4	74.9	82.3
СаС'Ь	10 мМ	68.7	74.6	82.7
	100 мМ	68.5	74.5	82.4
Метионин	30 мМ	•	74.5	83.7
Витамин С	-30 мМ	52.2	68.7	-
Полисорбат 20	0.005%		74.5	83.7
	0.01%		74.5	83.8
	0.1%		74.4	83.7
Полисорбат 80	0.005%		74.6	83.8
	0.01%		74.5	83.7
	0.1%		74.5	83.7
Глюкоза	0.5%		74.7	83.8
	2%		74.9	83.9
	4%		75.0	84.3
	10%		75.8	84.9
Сахароза	0.5%		74.6	83.6
	2%		74.8	83.8
	4%		75.0	83.9
	10%		75.5	84.4
Сорбит	0.5%		74.8	83.6
	2%		75.0	83.8
	4%		75.2	84.1
	10%		75.9	84.8
Маннит	0.5%		74.8	83.6
	2%		74.9	83.8
	4%		75.2	84.1
	10% | -	75.9	84.8
* В контрольном образце (10 мМ гистидина, рН 6.0) наблюдается два переходя, Тги1.2 а Тпл.З. Более ранний переход (Т„л.1) наблюдается в присутствии некоторых эксципиентов.

Эквиваленты.

Специалисты в данной области техники определят или смогут подтвердить с помощью лишь обычных экспериментов многие эквиваленты конкретных вариантов изобретения по данному описанию. Предполагается, что такие эквиваленты охватываются нижеприведённой формулой изобретения.

- 30 015147

Перечень последовательностей <110> ЭЛАН ФАРМА ИНТЕРНЭШНЛ ЛИМИТЕД и ВАЙЕТ <120> Препарат антитела против А бета пептида <130> ЕЬП-О46РС <140> .РСТ/и52006/002837 <141> 2006-01-27 <150> 60/648,631 <151> 2005-01-28 <160> 47 <170> Ра£еп£1п ν<5Γ5Ϊοη 3.3 <210> 1 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая конструкция <400> 1

Азр 1

Уа1

Уа1

Мер

ТЬг С1п Зег Рго 5

Ьеи

Зег 10

Ьеи

Рго

Уа1

ТЬг

Рго 15

С1у

С1и

Рго

А1а

Зег

Не

Зет

Суз

Ьуз

Зег

Зег

С1п

Зег

Ьеи

Ьеи

Азр

Зет

20

25

30

Азр

С1у

Ьуз

ТЬг

Туг

Ьеи

Азп

Тгр

Ьеи

Ьеи

С1п

Ьуз

Рго

С1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго

С1п

Агд

Ьеи

Не

Туг

Ьеи

Уа1

Зег

Ьуз

Ьеи

Азр

Зег

С1у

ν&ι

Рго

50

55

60

Αερ

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег

С1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

Не

65

70

75

80

Зег

Агд

ν£1

61и

А1а

О1и

Азр

7а1

С1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

Тгр

С1п

С1у

85

90

95

ТЬг

ΗΪ3

РНе

Рго

Агд

ТЬг

РЬе

<31у

С1п

О1у

ТЬг

Ьуз

Уа1

С1и

Не

Ьуз

100

105

110

Ахд

ТЬг

ν&ι

А1а

А1а

Рго

Зег

Уа1

Рке

Не

РЬе

Рго

Рго

Зег

Айр

С1и

115

120

125

Θΐη

Ьеи

Ьуз

Зег

С1у

ТЬг

А1а

Зег

ν&ι

Уа1

Суз

Ьеи

Ьеи

Азп

Азп

РЬе

130

13 5

140

Туг

Рго

Агд

С1и

А1а

Ьуз

А7а1

С1п

Тгр

Ьуе

Уа1

Аер

Азп

А1а

Ьеи

С1п

145

150

155

160

- 31 015147

Зег 165

С1у

Азп

Зег

С1п

С1и

Зег

νβΐ

ТЬг

С1и 170

С1п

Азр

Зех

Ьуз

Азр 175

Зег

ТЬг 130

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Зег

ТЬг

Ьеи

ТЬг 185

Ьеи

Зех

Ьуз

А1а

Азр 190

Туг

С1и

Ьуз 195

ΗΪ3

Ьуз

ν&ι

Туг

А1а

Суз

С1и 200

Уа1

ТЬх

Н1з

С1п

С1у 205

ьеи

Зег

Зег

Рго

Уа1

ТИг

ьу$

Зег

РЬе

Азп

Ахд

<31у

<31и

Суз

210 215 <210> 2 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 2

Зег

61у

61у

С1у 10

Ьеи Уа1

61п

Рхо

01у 15

С1у

61и 1

Уа1

31п Ьеи

Ьеи С1и 5

Зег

Ьеи

Ахд

Ьеи

Зех

Суз

А1а

А1а

Зех

С1у

РЬе

ТЬх

РЬе

Зех

Азп

Тух

20

25

30

61у

МоГ

Зех

Φχτ·»

Уа1

Д угг

С1п

А1а

Рхо

61у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

Тт

\7я 1

• ·— 3

* — £“

35

40

45

А1а

Зег

Не

Агд

Зех

61у

С1у

С1у

Агд

ТЬг

Тух

Тух

Зег

Азр

Азп

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬх

Не

Зег

Ахд

Азр

Азп

Зех

Ьуз

АЗП

ТЬх

Ьеи

Тух

65

70

75

80

Ьеи

С1п

МеЬ

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

01 и

Азр

ТЬх

А1а

νβΐ

Туг

Тух

Суз

85

90

95

Уа1

Агд

Туг

Азр

ΗΪ3

Тух

Зег

С1у

Зег

Зег

Азр

Тух

Тгр

С1у

С1п

<31у

100

105

но

ТЬг

Ьеи

ν&ι

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

А1а

Зег

ТЬг

Ьуз

О1у

Рго

Зег

Уа1

РЬе

115

120

125

Рго

Ьеи

А1а

Рго

Зех

Зех

Ьуз

Зег

ТЬх

Зег

О1у

Е1у

ТЬг

А1а

А1а

ьеи

130

135

140

61у

Суз

Ьеи

Ца!

Ьуз

Азр

Туг

РЬе

Рго

<31и

Рго

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Тгр

145

150

155

160

Азп

Зех

С1у

А1а

Ьеи

ТЬх

Зег

С1у

Уа1

Н1з

ТЬх

РЬе

Рго

А1а

Уа1

Ьеи

165

170

175

σΐη

Зег

Зег

<31у

Ьеи

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Зех

Уа1

Уа1

ТЬг

Уа1

Рго

Зег

180

185

190

- 32 015147

5ег 195

Зег

Ьеи

<ЗЬу ТЬг СЬп ТЬг

Туг Не Суз Азп 7а1 200

Авп 205

Н1з

Ьув

Рго

Зег

Азп

ТЬг

Ьуз

ν&ι

Азр

Ьув

Ьуз

УаЬ

СЬи

Рго

Ьуз

Зег

Суз

Азр

Ьуз

210

215

220

ТНг

Н1Б

ТЬг

Суз

Рго

Рго

Сув

Рго

А1а

Рго

С1и

Ьеи

Ьеи

СЬу

СЬу

Рго

225

230

235

240

Зег

Уа1

РЬе

Ьеи

РЬе

Рго

Рго

Ьув

Рго

Ьуз

Авр

ТНг

Ьеи

меь

Не

Зег

245

250

255

Агд

ТЬг

Рго

С1и

Уа1

ТНг

Сув

УаЬ

УаЬ

УаЬ

Азр

Уа1

Зег

НЬв

СЬи

Авр

260

265

270

Рго

С1и

УаЬ

Ьуз

РЬе

Авп

Тгр

Туг

УаЬ

Авр

С1у

Уа1

СЬи

УаЬ

НЬз

Авп

275

280

2 85

А1а

Ьуз

ТЬг

Ьуз

Рго

Агд

СЬи

СЬи

СЬп

Туг

Азп

5ег

ТЬг

Туг

Агд

УаЬ

290

295

300

УаЬ

Зег

у&ь

Ьеи

ТЬг

УаЬ

Ьеи

Н1В

СЬп

Авр

Тгр

Ьеи

Азп

СЬу

Ьуз

СЬи

305

310

315

320

Туг

Ьуз

Сув

Ьуз

уаь

Зег

Авп

Ьув

АЬа

Ьеи

Рго

А1а

Рго

ЬЬе

СЬи

Ьуз

325

330

335

ТЬг

Не

Зег

Ьуз

А1а

Ьуз

СЬу

СЬп

Рго

Агд

О1и

Рго

СЬп

УаЬ

Туг

ТЬг

340

345

350

Ьеи

Рго

Рго

Зег

Агд

СЬи

СЬи

МеЬ

ТЬг

Ьуз

Азп

С1п

УаЬ

Зег

Ьеи

ТЬг

355

360

365

Суз

Ьеи

УаЬ

Ьуз

СЬу

РЬе

Туг

Рго

Зег

Авр

Не

А1а

УаЬ

СЬи

Тгр

СЬи

370

375

З&О

Зег

Авп

СЬу

О1п

Рго

СЬи

Азп

Азп

Туг

Ьув

ТЪг

ТИг

Рго

Рго

УаЬ

Ьеи

385

390

395

400

Аер

Зег

Азр

О1у

Зег

РЬе

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

Ьуз

Ьеи

ТЬг

УаЬ

Авр

Ьув

405

410

415

Зег

Агд

Тгр

О1п

СЬп

СЬу

Авп

УаЬ

РЬе

Зег

Суз

Зег

УаЬ

МеЬ

Н1з

СЬи

420

425

430

АЬа

Ьеи

Н1з

Азп

НЬз

Туг

ТЬг

СЬп

ьув

Зег

Ьеи

Бел

Ьеи

Зег

Рго

СЬу

435 440 445

Ьуз <2Ю> 3 <211> 113 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

- 33 015147 <223> Синтетическое гуманизированное антитело <220>

<221> ИОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (1) <223> Азр или Тут <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (7) <223> Зег или ТЬг <22 0>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (10} <223> Зет или ТНг <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (15) <223> Ьеи, Не или Уа1 <220>

<221> МОДИФИЦИРОВ АН НИЙ.ОСТАТОК <222> (50) <223> Агд или Ьуз <220>

<221> МОДИФИЦИ₽ОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (38} <223> ’’а1 или Ьеи <220>

<221> ЫОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (109) <223> Уа1 или Ьеи <400> 3

Хаа Уа1 Уа1 Мез ТЬг Б1п Хаа Рго Ьеи Хаа Ьеи Рго 7а1

ТЬг

Хаа 15

01у

1

5

10

Б1п

Рго

А1а

Зег

Не

Зег

Суз

Ьуз

Зег

Зег

<31п

зег

Ьеи

Ьеи

Азр

Зег

20

25

30

Авр

Б1у

Ьуз

ТНг

Туг

ьеи

Авп

Тгр

Ьеи

Б1п

Б1п

Агд

Рго

Б1у

Б1П

5ег

35

40

45

Рго

Хаа

Агд

Ьеи

Не

Туг

Ьеи

νπΐ

Зег

Ьуз

Ьеи

Азр

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РНе

Зег

Б1у

Зег

<31у

Зег

С1у

ТНг

Азр

РЬе

ТНг

Ьеи

Ьуз

Не

65

70

75

80

Зет

Агд

Х7а1

СЯи

А1а

Б1и

Азр

Хаа

С1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

Тгр

С1п

С1у

85

90

95

ТЬг

Н1з

РЬе

Рго

Агд

ТЬг

РНе

О1у

С1у

Б1у

ТЬг

Ьуз

Хаа

Б1и

11е

Ьуз

100

105

110

- 34 015147

Агд <210> 4 <211> 119 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <220>

<221> МОДИФИЦИРОЕАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (3) <22 3> С1п, Ьуз или Агд <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ--ОСТАТОК <222> (78) <223> Зег или ТНг <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (87) <223> Алд или Ьуз <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (88) <223> А1а, Зег или ТНг <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ—ОСТАТОК <222> (114) <223> Ьеи, Тпг, Не или Уа1 <400> 4

С1и Уа1 Хаа Ьеи Уа1

С1и

Зег С1у

01у

<31у Ьеи Са1 10

О1п

Рго

01у 15

С1у

1

5

Зег

ьеи

Агд

ьеи

Зег

Суз

А1а

С1у

Зех

С1у

РЬе

ТНг

РЬе

Зег

Азп

Туг

20

25

30

С1у

Мее

Бег

Тгр

Уа1

Агд

<31п

А1а

Рго

С1у

Ьуо

01у

Ьеи

С1и

Тгр

Уа1

35

40

45

А1а

Бег

Не

Алд

Зег

С1у

С1у

С1у

Агд

ТЬл

Тух

Тух

Зег

Азр

Аеп

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

Р11е

Ткг

Не

Зег

Агд

01и

Азп

А1а

Ьуе

Азп

Хаа

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

О1п

Ме£

Азп

Зех

Ьеи

Хаа

Хаа

О1и

Азр

ТНг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

Уа1

Агд

Туг

Азр

ΗΪΞ

Туг

Зех

С1у

Зег

Бег

Авр

Туг

Тгр

01у

С1п

01у

- 35 015147

100 105 110

Ткг Хая ν&1 Ткг \7а1 Зег Зег

115 <210> 5 <211> 113 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело

<400> 5

Уа1

ТЬг

Ьеи 15

О1у

Айр 1

Уа1 Уа1

Мек Ткг 5

С1п

Зег

Рго

Ьеи

Бег 10

Ьеи

Рго

С1п

Рго

А1а

Зег

Не

Зег

Суз

Ьуз

Зег

Зег

С1п

Зег

Ьеи

Ьеи

Азр

Зег

20

25

30

Азр

С1у

Ъуе

ТЬг

Туг

Ьеи

Азп

Тгр

Ьеи

С1п

С1п

Агд

Рго

О1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго

Агд

Агд

Ьеи

Не

Туг

Ьеи

Уа1

Зег

Ьуз

Ьеи

Азр

Зег

<31у

Уа1

Рго

50

55

60

АЗР

Агд

РЬе

Зег

Б1у

Зег

С1у

Зег

С1у

Ткг

Айр

Рке

Ткг

Ьеи

Ьуз

11е

65

70

75

80

Зег

Агд

νβΐ

С1и

А1а

01и

Азр

Уа1

С1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

Тгр

С1п

С1у

85

90

95

ТЬг

Н1з

Рке

Рго

Агд

Ткг

Рке

С1у

<31у

О1у

Ткг

Ьуз

Уа1

С1и

Не

ьуз

100

105

но

Агд <210> 6 <211> 119 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 6

С1и 1

Уа1

С1п Ьеи \7а1 5

<31и Зег

01у

О1у

С1у 10

Ьеи

Уа1

О1п

Рго

С1у 15

СХу

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

С1у

Зег

СХу

Рке

ТЬг

Рке

Зег

Азп

Туг

20

25

30

С1у

Мек

Зег

Тгр

Уа1

Агд

βΐη

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

Тгр

νοί

35

40

45

А1а

Зег

11е

Агд

Зег

<31у

О1у

С1у

Агд

ТЬг

Туг

туг

Зег

Азр

Азп

УаХ

- 36 015147

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Бег

Агд

<31и

Азп

А1а

Ьуз

Азп

Зег

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

МеЕ

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

С1и

Азр

ТНг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суе

85

90

95

ν&ι

Агд

Туг

Азр

Н1е

Туг

Зег

О1у

Зег

Зег

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

(?1п

100

105

110

Ткг

Ьеи

νδΐ

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

115 <210> 7 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 7

Азр 1

Уа1 Уа1

МеГ

ТЫ 5

С1п

Зег Рго

Ьеи Зег Ьеи 10

Рго Уа1

Ткг Ьеи С1у 15

(31п

Рго

А1а

Зег

Не

Зег

Суз

Ьуз

Зег

Зег

С1п

Зег

Ьеи

Ьеи

Азр

Зег

20

25

30

Азр

С1у

Ьуз

ТЬг

Туг

Ьеи

Азп

Тгр

Ьеи

<21п

С1п

Агд

Рго

О1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго

Агд

Агд

Ьеи

11е

Туг

Ьеи

ν&ι

Зег

Ьув

Ьеи

Азр

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег

<31у

5ег

61у

ТЬг

Азр

РЬе

Ткг

Ьеи

ьуз

Не

65

70

75

80

Зег

Агд

νβΐ

С1и

А1а

С1и

АВр

Уа1

(31у

Уа1

Туг

Туг

Суз

Тгр

С1п

С1у

85

ЭО

95

ТЬг

Н1е

РЬе

Рго

Агд

ТЬг

Рке

С1у

С1у

(31у

Ткг

Ьуз

ν&ι

С1и

11е

Ьуз

100

105

но

Агд

тЬг

Уа1

А1а

А1а

Рго

Зег

ν&1

РЬе

Не

РЬе

Рго

Рго

Зег

Азр

<31и

115

120

125

С1п

ьеи

Ьуз

Зег

С1у

ТЬг

А1а

Зег

Уа1

ν&1

Суз

Ьеи

Ьеи

Азп

Азп

Рке

130

135

140

Туг

Рго

Агд

61и

А1а

Ьуз

Уа1

С1П

Тгр

Ьуз

ν&ι

Азр

Азп

А1а

Ьеи

С1п

145

150

155

160

Зег

01у

Азп

Зег

О1п

С1и

Зег

νπΐ

ТЫ

С1и

С1п

Азр

Зег

Ьуз

Азр

Зег

165

170

175

ТЬг

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Зег

Ткг

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Зеп

Ьуз

А1а

Азр

Туг

С1и

- 37 015147

			180					185			190
Ьу5	Н1Б	Ьуз	Уа1	Туг	А1а	Суз	С1и	Уай ТЬг	ΗΪ5	С1п С1у	Ьеи Зег Зег
		195					200			205
Рго	Уа1	ТЬг	Ьуз	Зег	РНе	Азп	Агд	61у С1и	Суз

210 215 <210> 8 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 8

С1и 1

Уай

С1п

Ьеи Уай 5

Сйи Зег С1у

Сйу Сйу 10

Ьеи

Уай

С1п

Рго

61у 15

С1У

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

61у

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Азп

Туг

20

25

30

Сйу

Меб

Зег

Тгр

Уай

Агд

С1п

А1а

Рго

61у

Ьуз

Сйу

Ьеи

(31и

Тгр

Уай

35

40

45

Айа

Зег

Не

Агд

Зег

61у

01у

С1У

Агд

ТЬг

Тут

Туг

8ег

Азр

Азп

Уа1

50

55

60

Ьуз

Сйу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

С1и

Азп

Айа

Ьуз

Агп

Зег

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

МеС

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

Сйи

Азр

ТЬг

Айа

νδΐ

Туг

Туг

Суз

85

90

95

Уай

Агд

Туг

Азр

ΗΪ3

Туг

Зег

Сйу

Бег

Зег

Азр

Туг

Тгр

Сйу

С1п

61у

100

105

110

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

А1а

Бег

ТЬг

ьуз

61у

РГО

Зег

Уай

РЬе

115

120

125

Рго

Ьеи

А1а

Рго

Зег

Бег

Ьуз

Зег

ТЬг

Зег

Сйу

Сйу

ТЬг

А1а

Айа

Ьеи

13 0

135

140

С1у

Суз

Ьеи

Уа!

Ьуз

Азр

Туг

РЬе

Рго

С1и

РГО

Уай

ТЬг

Уай

Зег

Тгр

145

150

155

йбО

АЗП

Зег

Сйу

А1а

Ьеи

ТЬг

Зег

Сйу

Уа1

ΗΪ5

ТЬг

РЬе

Рго

Айа

Уай

Ьеи

165

170

175

С1п

Зег

Зег

Сйу

Ьеи

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Зег

Уай

Уа1

ТЬг

Уай

Рго

Зег

180

185

190

Зег

Зег

Ьеи

Сйу

ТЬг

С1п

ТЬг

Туг

Не

Суз

Азп

Уа1

Аеп

Нйз

Ьуз

Рго

195

200

205

Зег

Азп

ТЬг

Ьуз

Уай

Азр

Ьуз

Ьуз

Уа1

е1и

Рго

Ьуз

5ег

Суз

Азр

Ьуз

- 38 015147

210 215 220

ТЬг ΗΪΞ 225

ТЬг

Суз

Рго

Рго Сув 230

Рго

А1а

Рго 61и Ьеи 235 .

Ьеи

61у

61у

Рго 240

Зег

Уа1

РЬе

Ьеи

РЬе 245

Рго

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз 250

Азр

ТЬг

Ьеи

МеЕ

Не 255

Зег

Агд

ТЬг

Рго

61и 260

νβΐ

ТЬг

Суз

Уа1

Уа1 265

Уа1

Аер

Уа1

Зег

ΗΪΒ 270

61и

Азр

Рго

61 и

Уа1 275

Ьув

РЬе

Аеп

Тгр

Туг 2 80

Уа1

Азр

61у

Уа1

С1и 285

Уа1

ΗΪ3

Азп

А1а

Ьуз 290

ТЬг

Ьуз

Рго

Агд

61и 295

61и

61п

Туг

Азп

Зег 300

ТЬг

Туг

Агд

Уа1

Уа1 305

Зег

Уа1

Ьеи

ТЬг

Уа1 310

Ьеи

Н1з

С1п

Азр

Тгр 315

Ьеи

Азп

61у

Ьуз

61и 320

Туг

Ьув

Суз

Ьуз

Уа1 325

Зег

Азп

Ьуз

А1а

Ьеи 330

Рго

А1а

Рго

Не

С1и 335

Ьуз

ТЬг

Не

Зег

Ьуз 340

А1а

Ьуз

С1у

61п

РГО 345

Агд

61и

Рго

С1п

Уа1 350

Тух

ТЬг

Ьеи

Рго

Рго 355

Зег

Агд

Авр

С1и

Ьеи 360

ТЬг

Ьуз

Авп

С1п

Уа1 365

Зег

Ьеи

ТЬг

Суз

Ьеи 370

Уа1

Ьув

61у

РЬе

Тут- 375

Рго

Зег

Азр

Не

А1а 3 80

Уа1

61и

Тгр

61и

Зег 385

Азп

61у

С1п

Рго

С1и 390

Азп

Азп

Туг

Ьув

ТЬг 395

ТЬг

Рго

Рго

Уа1

Ьеи 400

Азр

Зег

Азр

61у

Зег 405

РЬе

РЬе

Ьеи

Туг

Зег 410

Ьуз

Ьеи

ТЬг

Уа1

Азр 415

Ьуз

Зег

Агд

Тгр

С1п 42 0

61п

С1у

Азп

Уа1

РЬе 425

Зег

Суз

Зег

Уа1

МеЕ 430

ΗΪ3

61и

А1а

Ьеи

ΗΪ5 435

Азп

Н13

Туг

ТЬг

61п 440

Ьув

Зег

Ьеи

Зег

Ьеи 445

Зег

Рго

С1у

Ьуз <210> 9 <211> 113 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ„ОСТАТОК <222> (3) <223> Уа1 или Ьеи

- 39 015147 <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (7) <223> Зег или ТЬг <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (14) <223> ТЬг или Зег <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (17) <2231- Е1П, Авр или Авп <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (30) <223 > Не или Уа1 <220>

<221> МОДИФИЦИРОЕАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (50) <223> Агд или Ьуз <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (83) <223> Уа1 или Ьеи <220>

<221> МОШКЕЗ <222> (105) <223> С1у или А1а <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (109) <223> 7а1 или Ьеи <400> 9

Авр 1

Уа1

Хаа

МеЕ

ТЬг 5

С1п

Хаа

Рго

Ъеи

Зег Ъеи Рго 10

Уа1

Хаа

Ьеи 15

С1у

хаа

Рго

А1а

Зег

11е

Зег

Сув

Агд

Зег

Зег

61п

Азп

11е

Хаа

Ηίε

Зег

20

25

30

Азп

С1у

Азп

ТЬг

Туг

Ьеи

С1и

Тгр

Туг

Ъеи

51п

Ьуз

Рго

С1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго

Хаа

Ьеи

Ъеи

11е

Туг

Ъуз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег

С1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьув

11е

65

70

75

80

Зег

Агд

Уа1

<31и

А1а

С1и

Авр

Хаа

01у

Уа1

Туг

Туг

Суз

РЬе

<31п

С1у

- 40 015147

90 95

Зег Н1з Уа1 Рго Ьеи Ткг Рке С1у Хаа С1у Ткг Ьуз Хаа 61и Не Ьуз

100 105 110

Агд <210> 10 <211> 123 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ-ОСТАТОК <222> (1| <223> С1п или 01ч <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ-ОСТАТОК <222> (2) <223> Уа1 или А1а <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (64) <223> Зег или Ткг <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ-ОСТАТОК <222> (77) <223> Ьуа или Агд <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ-ОСТАТОК <222> (78) <223> Зег или Ткг <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ-ОСТАТОК <222> (83) <223> ТЬг или Зег <220 <221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ-ОСТАТОК <222> (84) <223> Мек, Не или Ьеи <220>

<221'-* МОДИФИЦИРОВАННЫЙ-ОСТАТОК <222> (86) <223> Азп, Зег или Ткг <220 <221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ-ОСТАТОК

- 41 015147 <222> (87) <22 3> Мек, 7а1 или Ъеи <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (118) <223> Ьеи или Зег <400> 10

хаа 1

Хаа Ткг Ьеи Ьуз б!и Зег С1у Рго Уа1

Ьеи

Уа1

Ъуз

Рго

Ткг 15

61и

5

10

Ткг

Ьеи

Ткг

Ьеи

Ткг

Суз

Ткг

Рке

Зег

61у

Рке

Зег

Ъеи

Зег

Ткг

Зег

20

25

30

С1у

Мек

<31у

7а1

бег

Тгр

Х1е

Асд

0111

Рго

Рго

<31у

Ъуз

А1а

Ьеи

С1и

35

40

45

Тгр

Ьеи

А1а

Н1в

Не

Туг

Тгр

Азр

Азр

Азр

ьуз

Агд

Туг

Азп

Рго

Хаа

50

55

60

Ьеи

ьуз

Зег

Агд

Ьеи

Ткг

Не

Зег

Ьуз

Азр

ТЬг

Зег

Хаа

Хаа

С1п

Уа1

65

70

75

80

Уа1

Ьеи

Хаа

Хаа

Ткг

Хаа

Хаа

Азр

Рго

Уа1

Азр

Ткг

А1а

Ткг

Тус

туг

85

90

95

Суз

Уа1

Агд

Агд

Рго

Не

Ткг

Рго

ν&ι

Ьеи

Уа1

Азр

А1а

Мек

А5Р

Туг

100

105

110

Тгр

С1у

01п

С1у

Ткг

Хаа

Уа1

Ткг

Уа1

Зег

Зег

115 120 <210> 11 <211> 113 <212> БЕЛОК

<213> Искусственная

последовательность

<220>

<223> Синтетическое

гуманизированное антитело

<400> 11

Азр

νβΐ

Уа1

Мек

ТНг

61п

Зег

Рго

Ъеи

Зег

ьеи

Рго

Уа1

Ткг

Ьеи

С1у

1

5

10

15

С1п

Рго

А1а

Зег

11е

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

С1п

Азп

Не

11е

ΗίΒ

Зег

20

25

30

Азп

С1у

Азп

ТЬг

Туг

Ьеи

С1и

Тгр

Туг

Ьеи

С1п

Ъуз

Рго

С1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго

Агд

Ьеи

Ьеи

Не

Туг

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Агд

Рке

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег

С1У

Зег

С1у

Ткг

Авр

Рке

ткг

Ьеи

Ьуз

Не

70 75 80

- 42 015147

Зег	Агд Уа1	С1и	А1а	61и	Азр	Уа1 61у Уа1 туг	Туг	Суз	РЬе	61п	С1у
			85			90				95
Зег	Ηίβ Уа1	Рго	Ьеи	ТЫ	РЬе	С1у 61у 61у ТЬг	Ьуз	Уа1	Е1и	Пе	Ьуз

100 105 ПО

Агд <210> 12 <211> 123 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело

<400> 12

61и

Зег 61у Рго

Уа1 10

Ьеи

Уа1

Ьуз

Рго

ТЬг 15

61и

61 η 1

Уа1

ТЬг Ьеи Ьуз 5

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Ьеи

ты

Суз

ТЬг

РЬе

Зег

61у

РЬе

Зег

Ьеи

Зег

ТЬг

Зег

20

25

30

61у

С1у

ν&1

Зег

Тгр

11е

Агд

С1п

Рго

Рго

С1у

Ьуз

А1а

Ьеи

61и

35

40

45

Тгр

Ьеи

А1а

Η1Ξ

Пе

Туг

Тгр

Азр

Азр

Азр

Ьуз

Агд

Тут

Азп

Рго

Зег

50

55

60

Ьеи

Ьуз

Зег

Агд

Ьеи

ТЫ

11е

Бег

Ьуз

Азр

ТЬг

Зег

Ьуз

Зег

61п

Уа1

65

70

75

80

Уа1

Ьеи

ТЬг

МеГ

ТЫ

Азп

Мек

Азр

Рго

Уа1

Азр

ТЬг

А1а

ТЬг

Туг

Туг

85

90

95

Суз

Уа1

Агд

Агд

Рго

11е

ТЬг

Рго

Уа1

Ьеи

Уа1

Азр

А1а

Мек

Авр

Туг

100

105

110

Тгр

О1п

С1п

О1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЫ

Уа1

Зег

Зег

115

120

<210> 13 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 13

Азр 7а1 1

Уа1 Мек

Тпг С1п 5

Зег

РГО

Ьеи

Зег Ьеи 10

РГО

Уа1

ТЫ

Ьеи 15

С1у

61п

Рго

А1а

Зег

Пе

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

01п

Азп

11е

11е

Нхз

Зег

25 30

- 43 015147

Азп О1у

Азп 35

ТНх Туг Ьеи

О1и

Тхр 40

Тух

Ьеи

61п

Ьуз

Рго 45

Й1у

С1п

Зег

Рго

Агд

Ьеи

Ьеи

Не

Тух

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РНе

Зег

Е1у

Уа1

Рго

50

55

60

Авр

Агд

РНе

Зег

С1у

Зег

С1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РИе

ТНг

Ьеи

Ьув

Не

65

70

75

80

Зег

Агд

Уа1

С1и

А1а

С1и

Азр

Уа1

С1у

Уа1

Тух

Туг

Суз

РНе

01п

61у

85

90

95

Зех

ΗΪΞ

Уа1

Рго

ьеи

ТНг

РЪе

61у

С1у

С1у

ТЬг

Ьуз

Уа1

С1и

Не

Ьуз

100

105

110

Агд

ТНг

Уа1

А1а

А1а

Рго

Зег

Уа1

РНе

Не

РНе

Рго

Рхо

Зех

Азр

С1и

115

120

125

С1п

Ьеи

Ьуз

Зег

<31у

ТЬг

А1а

Зег

Уа1

Уа1

Суз

Ьеи

Ьеи

Азп

Азп

РНе

130

135

140

Тух

Рго

Агд

С1у

А1а

Ьуз

ν31

01п

Тгр

Ьуз

Уа1

Азр

Азп

А1а

Ьеи

С1п

145

150

155

160

Зег

С1у

Азп

Зег

С1п

С1и

Зег

νβΐ

ТНг

С1и

С1п

Азр

Зег

Ьуз

Азр

Зег

165

170

175

Тух

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Зег

ТНг

ьеи

ТНг

Ьеи

Зег

Ьуз

А1а

Авр

Туг

С1и

180

185

190

Ьув

Н1В

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Суз

С1и

Уа1

ТНг

Н1з

О1п

б1у

Ьеи

Зег

Зег

195

200

205

Рго

Уа1

тЬх

Ьуз

Зет

РНе

Азп

Агд

С1у

С1и

Суз

210 215 <210> 14 <211> 453 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 14

С1и 1

Уа1

тИх

Ьеи

Ьуз 5

Б1и

Зег

61у

Рго

Уа1 10

Ьеи

νδΐ

Ьуз

Рго

тНг 15

С1и

ТНг

Ьеи

ТЬг

Ьеи 20

ТЬг

Сув

ТНх

РНе

Зег 25

С1у

РНе

5ег

Ьеи

5ег 30

ТЬг

Зег

С1у

Меь

<31у 35

Уа1

5ег

Тгр

Не

Ахд 40

С1п

Рхо

Рго

С1у

Ьуз 45

А1а

Ьеи

С1и

Тгр

Ьеи

А1а

Нхз

Не

Туг

Тгр

Азр

Азр

Авр

Ьуз

Агд

Туг

Азп

Рго

Зег

55 60

- 44 015147

Ьеи Ьуз 65

Зег Агд Ьеи ТЬг 70

Ые

Зег

Ьуе

Авр ТЬг 75

Зег

ьув

Зег

СЬп

УаЬ 80

Уа1

ьеи

ТЬг

МеЬ

ТЬг 85

Азп

МеС

АВр

Рго

УаЬ 90

Авр

ТЬх

АЬа

ТЬх

Тух 95

Туг

Сув

УаЬ

Агд

Ахд 100

Рго

Ые

ТЬг

Рго

Уа1 105

Ьеи

УаЬ

Азр

АЬа

МеС ыо

Аар

Туг

Тгр

СЬу

С1п 115

бЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг 120

УаЬ

Зех

Зег

АЬа

Зех 125

ТЬг

Ьув

61у

Рго

Зег 130

УаЬ

РЬе

Рго

ьеи

А1а 135

Рго

Зег

Зег

Ьув

Зег 140

ТЬг

Зег

СЬу

СЬу

ТЬг 145

АЬа

АЬа

Ьеи

С1у

Сув 15С

Ьеи 1

УаЬ

Ьуз

Авр

Туг 155

РЬе

Рхо

СЬи

Рхо

УаЬ 160

ТЬг

Уа1

Зег

Тгр

Азп 165

Зег

СЬу

АЬа

Ьеи

ТЬг 170

Зег

СЬу

УаЬ

НЬз

ТЬх 175

РЬе

Рго

АЬа

УаЬ

Ьеи 180

СЬп

Зег

Зег

СЬу

Ьеи 185

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Зег 190

УаЬ

УаЬ

ТЬг

Уа1

Рго 195

Зег

Зег

Зег

Ьеи

еьу 200

ТЬг

СЬп

ТЬг

Туг

Ые 205

Суз

Азп

УаЬ

Авп

ΗΪ5 210

Ьуз

РГО

Зег

Азп

ТЬг 215

Ьуз

УаЬ

Авр

Ьуз

Ьуз 22 0

УаЬ

СЬи

Рго

Ьуз

Зег 225

Суз

Азр

Ьуз

тЬг

ΗΪ3 230

тЬг

Суз

Рго

Рго

Суз 235

Рго

АЬа

Рго

СЬи

ьеи 240

Ьеи

<31у

СЬу

Рго

Зег 245

УаЬ

РЬе

Ьеи

РЬе

Рго 250

Рхо

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр 255

ТЬх

Ьеи

мес

Ые

Зег 260

Агд

ТЬг

Рго

СЬи

УаЬ 265

ТЬг

Сув

УаЬ

УаЬ

УаЬ 270

Авр

УаЬ

бег

НЬз

СЬи 275

Азр

Рго

СЬи

УаЬ

Ьуз 280

РЬе

Азп

Тгр

Тух

УаЬ 285

Азр

сьу

УаЬ

01и

УаЬ 290

Н1з

Азп

АЬа

Ьуз

ТЬг 295

ьув

Рго

Ахд

СЬи

СЬи 300

СЬп

Тух

Авп

Зех

ТЬг 305

Туг

Агд

УаЬ

УаЬ

Зег 310

УаЬ

Ьеи

ТЬх

УаЬ

Ьеи 315

НЬз

СЬп

Азр

Тхр

Ьеи 320

Азп

61У

Ьуз

СЬи

Туг 325

Ьуз

Суз

Ьуз

УаЬ

Зег 330

Авп

Ьуз

АЬа

Ьеи

Рхо 335

АЬа

Рго

Не

СЬи

Ьуз 340

ТЬг

Ые

Зег

Ьуз

АЬа 345

Ьув

СЬу

СЬп

Рго

Ахд 350

СЬи

Рхо

СЬп

УаЬ

Туг 355

ТЬг

Ьеи

Рго

Рго

Зег 360

Ахд

Азр

СЬи

Ьеи

ТЬг 365

Ьуз

Аап

СЬп

УаЬ

Зег

Ьеи

ТЬг

Сув

Ьеи

УаЬ

Ьув

СЬу

РЬе

Тух

Рго

Зег

Авр

Ые

А1а

- 45 015147

370 375 380

νβΐ 3 85

С1и

Тгр

С1и

Зег

Азп 390

С1у

С1п

Рго

С1п

АЗП 395

АЗП

Туг

ьуз

ТЬг

Туг 400

Рго

Рго

νβΐ

Ьеи

Азр 405

Зег

Азр

61у

Зег

Иге 410

рЬе

Ьеи

туг

Зег

Ьуз 415

Ьеи

И1Г

Уа1

Азр

Ьуз 420

Зег

Агд

Тгр

е1п

Е1п 425

□1у

АЗП

Уа1

РЬе

Зег 430

Суз

Зег

Уа1

МеЬ

Н1з 435

О1и

А1а

Ьеи

ΗΪ3

Αδη 440

Ηίδ

туг

Т11Г

<31п

Ьуз 445

Зег

Ьеи

Зег

Ьеи

Зег

Рго

61у

Ьуз

450 <210> 15 <211> 132 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <22 0> ' <223?· Синтетическое гуманизированное антитело <220?

<221> СИГНАЛЬНАЯ <222> (1) .. (20) <220?

<221> таЬ_пептид <222> (21) .. (132) <400> 15

Мес Агд -20

Ьеи

Рго

А1а

С1п Ьеи Ьеи С1у Ьеи Ьеи Мс-Ь

Ьеи

Тгр Уа1

Зег -5

-15

-10

С1у

Зег

Зег

С1у -1

Азр 1

νβΐ

Уа1

МеЪ

ТЬг 5

б1п

Зег

Рго

Ьеи

Зег 10

Ьеи

Рго

Уа1

ТЬг

Рго 15

С1у

О1и

Рго

А1а

Зег 20

11е

Зег

Суз

Агд

Зег 25

Зег

С1п

Аеп

11е

Уа1 30

Н1з

Зег

Азп

С1у

АЗП 35

ТЙГ

Туг

Ьеи

Б1и

Тгр 40

Туг

Ьеи

С1п

Ьуз

Рго 45

С1у

С1п

Зег

Рго

С1п 50

Ьеи

Ьеи

Ые

Туг

Ьуз 55

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе 60

Зег

б1у

Уа1

Рго

Азр 65

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег 70

<31у

Зег

<31у

ТЬг

Азр 75

РИе

Τ11Γ

Ьеи

Ьуз

Ые 80

Зег

Агд

Уа1

Е1и

А1а 85

Е1и

Азр

Уа1

С1у

Уа1 90

Туг

Тут

Суз

РАе

□1п

С1у

Зег

Нгз

Уа1

Рго

Ьеи

ТЬг

Р1ге

61у

αΐη

(31у

ТЬг

Ьуз

100 105

- 46 015147

Ьеи 61и 11е Ьуз

110 <210> 16 <211> 142 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <220>

<221> СИГНАЛЬНАЯ <222> (1) . . (19) <220* <221> гоак_пептид <222> (20). . (142) <400* 16

Мек

ьуз

ΗΪ3

Ьеи Тгр -15

РЬе

РЬе Ьеи Ьеи Ьеи Уа! А1а А1а Рго Агд

Тгр

-10

-5

V»!

Ьеи

Зег

61п

Уа1

61X1

Ьеи

61П

61и

Зег

Б1у

РГО

С1у

Ьеи

Уа1

Ьуз

-1

1

5

10

Рго

Зег

<31и

Ткг

Ьеи

Зег

Ьеи

ТЬг

Суз

ТНг

РЬе

Бег

61у

РЬе

Бег

Ьеи

15

20

25

Зег

ТЬг

Азп

С1у

Мек

С1у

Уа1

Зег

Тгр

Не

Агд

01п

Рго

Рго

61 у

Ьуз

30

35

40

45

<31у

Ьеи

С1и

Тгр

Ьеи

А1а

Н1з

Не

Туг

Тгр

Азр

61и

Азр

Ьуз

Агд

Туг

50

55

60

Азп

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Зег

Агд

Ьеи

ТЬг

Не

Зег

Ьуз

Азр

ТЬг

Зег

Ьуз

65

70

75

Азп

С1п

Уа1

Зег

Ьеи

Ьуз

Ьеи

Зег

Зег

Уа1

ТЬг

А1а

А1а

Азр

ТЬг

А1а

80

85

90

Уа1

Туг

Туг

Суз

А1а

Агд

Агд

Агд

Не

Не

Туг

Азр

ν&1

Б1и

Азр

Туг

95

100

105

Р11е

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

61у

ТЬг

ТЬг

Уа1

ТНг

Уа1

Зег

Зег

110

115

120

<210>	17
<211>	131
<212>	БЕЛОК
<213>	Миз шизсийиз
<22 0>
<221>	СИГНАЛЬНАЯ
<222>	(1) · (19)

- 47 015147 <22 0>

<221> так_пептид <222> (20) . . (131) <400> 17

Мек Ьуз Ьеи Рго

Уа1 Агд Ьеи Ьеи Уа1 Ьеи МеЬ

Рке

Тгр

Не Рго А1а -5

-15

-10

Зег

Зег

Зег

Азр

Уа1

Ьеи

Мек

Ткг

С1п

ТЬг

Рго

Ьеи

Зег

Ьеи

Рго

ν&1

-1

1

5

10

Зег

Ьеи

С1у

Азр

С1п

А1а

Зег

11е

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

С1п

А5П

Не

15

20

25

Уа1

ΗΪ5

Зег

Αβη

С1у

Азп

ТЬг

Туг

Ьеи

С1и

Тгр

Туг

Ьеи

С1п

Ьуз

Рго

30

35

40

45

61у

αΐη

Зег

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

Не

Туг

Ьуз

Уа1

5ег

Азп

Агд

РЬе

Зег

50

55

60

С1у

Уа1

Рго

Азр

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег

<31у

Зег

С1у

Ткг

Азр

РЬе

ТЬг

65

70

75

Ьеи

Ьуз

Не

Зег

Агд

ν&ι

С1и

А1а

С1и

Азр

Ьеи

С1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

80

85

90

Рке

С1п

С1у

Зег

Η1Ξ

\7а1

Рго

Ьеи

Ткг

РЬе

С1у

А1а

С1у

Тк.'

Ьуз

Ьеи

100 105

С1и Ьеи Ьуз

110 <210> 18 <211> 142 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <220>

<221> СИГНАЛЬНАЯ <222> (1)..(19) <220>

<221> шаС_пептид <222> (20) .. (142) <400> 18

Мек

Ьуз

ΗΪΞ

Ьеи

Тгр -15

Рке

Рке

Ьеи

Ьеи

Ьеи -10

Уа1

А1а

А1а

Рго

Агд -5

Тгр

Уа1

Ьеи

Зег -1

С1п 1

Ьеи

С1п

Ьеи

С1п 5

С1и

Зег

С1у

Рго

С1у 10

Ьеи

ν^ι

Ьуз

Рго

Зег

С1и

Ткг

Ьеи

Зег

Ьеи

Ткг

Суз

Ткг

Рке

Зег

С1у

Рке

Зег

Ьеи

- 48 015147

15

20

25

Зег

ТЬг

Азп

СЬу

Мер

СЬу

νοί

Зег

Тгр

Не

Агд

СЬп

Рго

Рго

61у

Ьуз

30

35

40

45

(ЗЬу

Ьеи

СЬи

Тгр

11е

С1у

НЬз

Не

Туг

Тгр

Авр

С1и

Азр

Ьуз

Агд

Туг

50

55

60

Азп

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Зег

Агд

УаЬ

ТЬг

Не

Зег

Ьуз

Авр

ТЬг

Зег

Ьуз

65

70

75

Азп

СЬп

РЬе

Зег

Ьеи

Ьуз

Ьеи

Зег

Зег

УаЬ

ТЬг

А1а

А1а

Азр

ТЬг

АЬа

80

85

90

ν»ι

Туг

Туг

Суз

А1а

Агд

Агд

Агд

Не

Не

Туг

Авр

Уа1

01и

Азр

Туг

95

100

105

РЬе

Азр

туг

Тгр

<31у

СЬп

01у

ТЬг

ТЬг

7а1

ТЬг

УаЬ

Зег

Зег

НО 115 120 <210> 19 <211> 142 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <220>

<221> СИГНАЛЬНАЯ <222> (1).. (19} <220>

<221> таЬ_пептид <222> (20) . . (142) <400> 19

Меь Ьуз

Н18

Ьеи

Тгр РЬе РЬе Ьеи Ьеи Ьеи 17аЬ АЬа АЬа Рго Агд

Тгр

-15

-10

-5

νβΐ

Ьеи

Зег

СЬп

Ьеи

СЬп

Ьеи

СЬп

СЬи

Зег

СЬу

Рго

СЬу

ьеи

УаЬ

Ьуз

-1

1

5

10

Рго

Зег

СЬи

ТЬг

ьеи

Зег

Ьеи

ТЫ

Суз

ТЫ

РЬе

Зег

СЬу

РЬе

Зег

Ьеи

15

20

25

Зег

ТЬг

Азп

СЬу

Мер

СЬу

УаЬ

Зег

Тгр

11е

Агд

СЬп

Рго

Рго

СЬу

Ьуз

30

35

40

45

бЬу

Ьеи

СЬи

Тгр

ьеи

СЬу

НЬз

Не

туг

Тгр

Азр

СЬи

Азр

Ьуз

Агд

Туг

50

55

60

Азп

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Зег

Агд

Уа1

ТЬг

Не

Зег

Ьуз

Азр

ТЬг

Зег

Ьуз

65

70

75

Азп

βΐη

УаЬ

Зег

Ьеи

Ьуз

Ьеи

Зег

Зег

УаЬ

ты

АЬа

АЬа

АЗр

ТЬг

АЬа

80

85

90

- 49 015147

Уа1

Туг

Туг

Суз

А1а

Агд

Агд

Агд

Не

Не

Туг

Авр

Уа1

С1и Азр Туг

95

100

105

РЬе

Азр

Туг

Тгр

С1у

61п

Е1у

ТЬг

ТЬг

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

но

115

120

<210> 20 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 20

Авр

Уа1

Уа1

Меб

ТЬг

С1п

Зег

Рго

Ьеи

Зег

Ьеи

Рго

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

1

5

10

15

С1и

Рго

А1а

Зег

11е

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

61п

8ег

11е

Уа1

ΗΪΒ

Зег

20

25

30

АЗП

С1у

Азп

ТЬг

Туг

Ьеи

С1и

Тгр

Туг

Ьеи

С1п

Ьуз

Рго

61у

С1п

Зег

35

40

45

Рго

<31п

Ьеи

Ьеи

11е

Туг

Ьув

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег

С1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

11е

65

70

75

80

Зег

Агд

Уа1

(31и

А1а

С1и

Азр

Уа1

С1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

РЬе

С1п

Зег

85

90

95

Зег

Н1з

Уа1

Рго

Ьеи

ТЬг

РЬе

<31у

61п

<31у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

<31и

11е

Ьуз

100

105

но

<210> 21 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 21

С1п 1

Уа1

С1п

Ьеи νΉ1 5

С1и

Зег С1у

Б1у

С1у 7а1 10

ν&ι

С1п

Рго

61у 15

Агд

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

РЬе

Зег

<31у

РЬе

Зег

Ьеи

Зег

ТЬг

Зег

20

25

30

61у

МеИ

Зег

Уа1

С1у

Тгр

11е

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

61у

Ьеи

С1и

35

40

45

Тгр

Ьеи

А1а

ΗΪ3

Не

Тгр

Тгр

Азр

Азр

Авр

Ьуз

Туг

Туг

Авп

Рго

Зег

50

55

60

Ьеи

Ьуз

Зег

Агд

Ьеи

ТЬг

11е

Зег

Ьуз

Азр

ТЬг

5ег

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

65

70

75

80

Туг

Ьеи

01п

Меб

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

<31и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

туг

- 50 015147

9095

Суз А1а Агд Агд ТЬг ТЬг ТЬг А1а Азр Туг РЬе А1а Туг Тгр С1у С1п

100 105110

С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег

115120 <210> 22 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 22

С1п 1	Уа1	С1п	Ъеи	Уа1 5	Е1и	Зег	О1у
Зег	Ъеи	Агд	Ъеи 20	Зег	Суз	А1а	РЬе
С1у	МеЕ	Зег 35	Уа1	С1у	Тгр	Не	Агд 40
Тгр	Уа1 50	А1а	ΗΪΒ	11е	Тгр	Тгр 55	Азр
Ъеи 65	Ъуз	Зег	Агд	РЬе	ТЬг 70	Не	Зег
туг	Ъеи	С1п	МеЕ	Азп 85	Зег	Ьеи	Агд
Суз	А1а	Агд	Агд 100	Ткг	ТЬг	ТЪг	А1а
С1у	ТЬг	ТЬг 115	Уа1	ТЬг	νθΐ	Зег	Зег 120

С1у	С1у 10	Уа1	Уа1	С1п	Рго	01у 15	Агд
Зег 25	О1У	РЬе	ТЬг	Ьеи	Зег 30	ТЬг	Зег
С1п	А1а	Рго	С1у	Ьуз 45	С1у	Ьеи	01и
Авр	Авр	Ьуз	Туг 60	Туг	Азп	Рго	Зег
Ьуз	Азр	ТЬг 75	Зег	Ьуэ	Азп	ТЬг	Ъеи 80
А1а	01и 90	Азр	ТЬг	А1а	Уа1	Туг 95	Туг
Авр 105	Туг	РЬе	А1а	Туг	Тгр 110	С1у	С1п

<210> 23 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 23

С1п 1

Уа1

01п

Ьеи Уа1 5

С1и Зег 01у С1у 01у 10

Уа1

7а1

С1п

Рго

01у 15

Агд

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Сув

А1а

РЬе

Зег

61у

РЬе

ТЬг

Ьеи

Зег

ТЬг

Зег

25 30

- 51 015147

С1у

МеЬ

Зег 35

'7а 1

С1у

Тгр

11е

Агд 40

С1п

А1а

Рго

61у

Ьуз 45

С1у

Ьеи

С1и

Тгр

ν&ι 50

А1а

Н15

Не

Тгр

Тгр 55

Адр

Азр

Азр

Ьуз

Туг 60

Туг

Азп

Рго

Зег

Ьеи 65

Ьуз

Зег

Агд

РЬе

Ткг 70

11е

Зег

Ьуз

Азр

Азп 75

Зег

Ьуз

Азп

ткг

Ьеи 80

Туг

Ьеи

С1п

Мек

Азп 85

Зег

Ьеи

Агд

А1а

61и 90

Азр

Ткг

А1а

Уа1

Туг 95

Туг

Суз

А1а

Агд

Агд 100

ТЫ

Ткг

ТЬг

А1а

Азр 105

Туг

Рке

А1а

Туг

Тгр 110

<31у

<31п

О1у

Ткг

Ткг

Уа1

ТЫ

Уа1

Бег

Зег

115 120 <210> 24 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело

<400> 24

51у О1у С1у Уа1 Уа1 Б1п Рго С1у

Агд

61п Уа1 1

01п

Ьеи

Ца1 5

<31и

Бег

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Рке

Зег

61у

Рке

ТЫ

Ьеи

Зег

Ткг

Зег

20

25

30

<31у

Мек

Зег

Уа1

Й1у

Тгр

11е

Агд

61п

А1а

Рго

Й1у

Ьуз

<31у

Ьеи

С1и

35

40

45

тгр

Уа1

А1а

Н1з

11е

Тгр

Тгр

Азр

Азр

Азр

Ьуз

Туг

Туг

Азп

Рго

Бег

50

55

60

Ьеи

Ьуз

Зег

Агд

Рке

Ткг

11е

Бег

Агд

Азр

Азп

Зег

Ьуз

АЗП

Ткг

Ьеи

65

70

75

80

Туг

Ьеи

О1п

МеГ

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

С1и

Азр

Ткг

А1а

Уа1

Туг

Туг

85

90

95

Суз

А1а

Агд

Агд

Ткг

Ткг

Ткг

А1а

Азр

Туг

Рке

А1а

Туг

Тгр

С1у

Б1п

100

105

110

61У

Ткг

Ткг

Уа1

Ткг

Уа1

Зег

Зег

115

120

<210> 25 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

- 52 015147 <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 25

С1п 1

Уа1

0111

Уа1 5

Б1и

Зех 31у Я1у Б1у 10

νβΐ

Уа1

Б1п

Рго

Б1у 15

Ахд

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

РЬе

Зех

О1у

РЬе

ТЬг

ьеи

Зех

ТЬх

Зех

20

25

30

Б1у

Мер

Зег

Уа1

С1у

Тгр

Не

Ахд

С1п

А1а

Рхо

С1у

ьуз

С1У

Ьеи

(31и

35

40

45

Тгр

ьеи

А1а

ΗΪ5

Не

Тгр

Тхр

Азр

Азр

Азр

Ьуз

Тух

Туг

Азп

Рго

Зег

50

55

60

Ьеи

Ьуз

Зег

Ахд

РЬе

ТЬх

Т1е

Зех

Ьуз

Азр

Азп

Зех

Ьуз

Азп

ТЬх

Ьеи

65

70

75

80

Туг

Ьеи

С1п

Меб

Азп

Зех

Ьеи

Агд

А1а

Б1и

Азр

ТЬх

А1а

Уа1

Туг

Тут

85

90

95

Суз

А1а

Ахд

Агд

ТЬх

ТЫ

ТЬх

А1а

АЗр

Туг

РЬе

А1а

Тух

Тхр

Б1у

Б1п

100

105

110

С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг '/а1 Зег Зег

115 120 <210> 26 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело

<400> 26

С1и

Зех С1у

С1у

С1у ν&1 Уа1 10

61п

Рхо

С1у Агд 15

С1п Уа1 1

С1п Ьеи

Уа1 5

Зех

Ьеи

Ахд

Ьеи

Зех

Суз

А1а

РЬе

Зех

Б1у

РЬе

ТЬх

Ьеи

Зег

ТЬх

Зех

20

25

30

61у

Меб

Зех

Уа1

С1у

Тгр

11е

Ахд

С1п

А1а

Рхо

С1у

Ьуз

Б1у

Ьеи

С1и

35

40

45

Тхр

Ьеи

А1а

ΗΪ3

11е

Тхр

Тхр

Азр

Азр

Азр

Ьуз

Тух

Тух

Азп

Рхо

Зех

50

55

60

Ьеи

Ьуз

Зех

Агд

Ьеи

ТЬх

Не

Зех

ьуз

Азр

ТЬх

Зег

Ьуз

Азп

ТЬх

Уа1

65

70

75

80

Туг

ьеи

Б1п

Меб

Азп

Зех

Ьеи

Агд

А1а

О1и

Азр

ТЬх

А1а

Уа1

Туг

Туг

85

90

95

Суз

А1а

Ахд

Ахд

ТЬг

ТЬг

ТЬг

А1а

Авр

Туг

РЬе

А1а

Тух

Тгр

С1у

б!п

100

105

110

- 53 015147 у Тйг ТЬг Уа1 ТЬг Са1 Зег Зег

115 120 <210> 27 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 27

С1п 1

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1 5

С1и

Зег

01у С1у

С1у 10

Уа1

Уа1

βΐη

Рго

61у 15

Агд

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи 20

Зех

Суз

А1а

РЬе

Зег 25

С1у

РКе

Зег

Ьеи

Зег 30

ТЬг

Зег

б1у

МеЕ

Зег 35

Уа1

С1у

Тгр

11е

Агд 40

С1п

А1а

Рго

О1у

Ьув 45

<31у

Ьеи

<31и

тгр

Уа1 50

А1а

Н1в

Не

Тхр

Тгр 55

Авр

Азр

Азр

Ьув

Туг 60

Туг

Азп

Рго

Зег

Ьеи 65

Ьув

Зег

Агд

Ьеи

ТЬг 70

Не

Зег

Ьуз

Азр

ТЬг 75

Зег

Ьув

Авп

ТЬг

Уа1 80

Туг

Ьеи

С1п

МеЕ

Азп 85

Зег

Ьеи

Агд

А1а

01и 90

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг 95

Тух

Сув

А1а

Агд

Агд 100

ТЬг

ТЬг

ТЬг

А1а

Азр 105

Туг

РЬе

А1а

Туг

Тгр 110

С1у

С1п

С1у

ТЬг

ТЬг 115

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег 120

<210> 28 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 28

<31п 1

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1 5

С1и

Зег

<31у

С1у

С1у 10

Уа1

Уа1

С1п

Рго

С1у 15

Агд

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи 20

Зег

Суз

А1а

РЬе

Зег 25

С1у

РЬе

Зег

Ьеи

Зег 30

ТЬг

Зег

61у

ме£

Зег 35

Уа1

61у

Тгр

Не

Агд 40

(31п

А1а

Рго

С1у

Ьув 45

С1у

Ьеи

<31и

Тгр

Ьеи

А1а

Н18

Не

Тгр

Тгр

Азр

Азр

Азр

Ьуз

Туг

Тут

Азп

Рго

Зег

- 54 015147

55 60

Ьеи 65

Ьуз

Зег

Агд

РЬе

ТЫ 70

11е

Зег

Ьуз

Азр

Т11Г 75

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1 80

Туг

Ьеи

С1п

Мек

Азп 85

Зег

Ьеи

Агд

А1а

Е1и 90

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг 95

Туг

Суз

А1а

Агд

Агд 100

ТЬг

ТЬг

ТЬг

А1а

Азр 105

Туг

РЬе

А1а

Туг

Тгр 110

С1у

С1п

С1у

ТЫ

ТЫ

Уа1

ТЫ

Уа1

Зег

Зег

115 120 <210> 29 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 29

<31п Уа1 1

61п

Ьеи Уа1 5

С1и

Зег С1у С1у 01у 10

Уа1

Уа1

С1п

Рго

Е1у 15

Агд

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

РЬе

Зег

61у

РЬе

Зег

Ьеи

Зег

ТЫ

Зег

20

25

30

С1у

Мек

Зег

Уа1

С1у

Тгр

11е

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

61у

Ьеи

Е1и

35

40

45

Тгр

Ьеи

А1а

Н13

11е

Тгр

Тгр

Азр

Азр

Азр

Ьуз

Туг

Тух

Азп

Рго

Зег

50

55

-

60

Ьеи

Ьуз

Зех

Агд

Ьеи

ТЫ

Не

Зег

Ьуз

Аер

ты

Зег

Ьуз

Азп

ТЫ

Ьеи

65

70

75

80

Туг

Ьеи

О1п

Мек

Азп.

Зег

Ьеи

Агд

А1а

С1и

Азр

ТЫ

А1а

Уа1

Туг

Туг

85

90

95

Суз

А1а

Агд

Агд

ТЬг

ТЫ

ТЬг

А1а

Азр

Туг

РЬе

А1а

Туг

Тгр

С31у

С1п

100

105

110

<31у ТЫ ТЫ Уа1 ТЫ Уа1 Зег Зег

115 120 <210> 30 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 30

- 55 015147

<31п 1

Уай

Сйп

Ьеи

Уа1 5

Сйи

Зег

Сйу

Сйу

Сйу Уа1 10

Уай С1п Рго

Сйу 15

Агд

Зег

Ьеи

Агд

ьеи

Зег

Суз

А1а

РЬе

Зег

Сйу

РЬе

ТЬг

Ьеи

Зег

ТНг

Зег

20

25

30

С1у

Мек

Зег

Уа1

Сйу

Тгр

11е

Агд

Сйп

Айа

Рго

Сйу

Ьуз

Сйу

Ьеи

Сйи

35

40

45

Тгр

Уа1

А1а

Ηίε

Не

Тгр

Тгр

Азр

Азр

Азр

Ьуз

Туг

Туг

Азп

Рго

Зег

50

55

60

Ьеи

Ьув

Зег

Агд

Ьеи

ТНг

11е

Зег

Ьуз

Азр

ТЬг

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

Уай

65

70

75

80

Туг

Ьеи

Сйп

Мек

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

01и

Азр

Таг

Айа

Уай

Туг

Туг

85

90

95

Сув

А1а

Агд

Агд

ТЬг

ТНг

ТНг

Айа

Азр

Туг

РЬе

Айа

Туг

Тгр

Сйу

Сйп

100

105

110

С1у

ТЬг

ТЬг

Уай

ТЬх

Уа1

Зег

Зег

115 120 <210> 31 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело

<400> 31

Сйп Рго

Сйу 15

Агд

Сйп Уай 1

С1п

Ьеи Уай 5

С1и

Зег Сйу

Сйу

Сйу 10

Уай

Уа1

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

Айа

РЬе

Зег

сйу

РЬе

ТНг

Ьеи

Зег

ТНг

Зег

20

25

30

Сйу

Мек

Зег

Уа1

Сйу

Тгр

1йе

Агд

Сйп

Айа

Рго

Сйу

Ьуз

Сйу

Ьеи

Сйи

35

40

45

Тгр

Ьеи

Айа

Н1з

Т1е

Тгр

Тгр

Азр

Азр

Азр

Ьуз

Туг

Туг

Азп

Рго

Зех

50

55

60

Ьеи

Ьуз

Зег

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Ьуз

Азр

ТНг

Зег

Ьуз

Азп

ТЬх

Уай

65

70

75

80

Туг

Ьеи

Сйп

Мек

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Айа

Сйи

Азр

ТНг

Айа

Уай

Тух

Тух

85

90

95

Суз

Айа

Агд

Агд

ТЬг

ТНг

ТЬг

Айа

Азр

Туг

РНе

А1а

Тух

Тгр

Сйу

Сйп

100

105

110

Сйу

ТЬг

ТНг

Уай

ТЬг

Уай

Зег

Зег

115

120

- 56 015147 <210> 32 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 32

С1п 1

Л7а1 <31η

Ьеи

Уа1 <21и 5

Зег С1у С1у 61у 10

Уа1 Уа1

С1п

Рго

С1у 15

Агд

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

РЬе

Зег

б1у

РЬе

ТЬг

Ьеи

Зег

ТЬг

Зег

20

25

30

С1у

МеС

Зег

Уа1

01у

Тгр

Не

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

01у

Ьеи

С1и

35

40

45

Тгр

Ьеи

А1а

ΗΪ3

Не

Тгр

Тгр

Азр

Азр

Азр

Ьуз

Туг

Туг

Азп

Рго

Зег

50

55

60

Ьеи

Ьуз

Зег

Агд

Ьеи

ТНг

11е

Зег

Ьуз

Азр

ТЬг

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

Ьеи

65

70

75

80

Туг

Ьеи

С1п

МеЬ

Азп

Зег

Ъеи

Агд

А1а

61и

Азр

ТЬг

А1а

νβΐ

Туг

Туг

85

90

95

Суз

А1а

Агд

Агд

ТЬг

ТЬг

ТЬг

А1а

Азр

Туг

РЬе

А1а

Туг

Тгр

С1у

61п

100

105

110

61у

ТЬг

ТЬг

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

Уа1

115

120

<210> 33 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 33

С1п 7а1 С1п Ьеи ’/а!

С1и

Зег

<31у С1у <31у Уа1 Уа1 С1п Рго С1у

Агд

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ъеи

Зег

Суз

А1а

РЬе

Зег

(31у

РЬе

Зег

Ьеи

5ег

ТЬг

Зег

20

23

30

<31у

МеЬ

Зег

Уа1

С1у

Тгр

Не

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

35

40

45

Тгр

Уа1

А1а

Н1з

11е

Тгр

Тгр

Азр

Азр

Азр

Ьуз

Туг

Тух

Азп

Рго

Зег

50

55

60

Ьеи

Ъуз

Зег

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Ъуз

Азр

ТЬг

Зег

Ъуз

Азп

ТЬг

Уа1

65

70

75

80

- 57 015147

Туг

Ьеи

е1п

Мек

Азп 85

Зег

Ьеи

Агд

А1а

<31и 90

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Тут 95

Туг

Сув

А1а

Агд

Агд 100

ТЬг

ТЬг

ТЬг

А1а

Азр 105

Туг

Рке

А1а

Туг

Тгр 110

С1у

С1п

С1у

ТЬг

ТЬг

Уа1

ТЬг

Уа1

бег

Зег

Уа1

115 120 <210> 34 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 34

61п 1

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1 5

С1и

Зег

С1у

С1у О1у 10

Уа1

Уа1

σΐιι Рго

С1у 15

Агд

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Рке

Зег

61у

Рке

Зег

Ьеи

Зег

Ткг

Зег

20

25

30

61у

Мек

Зег

Уа1

<Э1у

Тгр

11е

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

35

40

45

Тгр

Уа1

А1а

Н1Б

11е

Тгр

Тгр

Азр

Азр

Абр

Ьуз

Туг

Туг

Азп

Рго

Зег

50

55

60

Ьеи

Ьуз

Зег

Агд

Ьеи

Ткг

Ые

Зег

Ьуз

Азр

Ткг

Зег

Ьуз

Азп

Ткг

Ьеи

65

70

75

80

Туг

Ьеи

С1п

Мек

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

61и

Азр

Ткг

А1а

Уа1

Туг

Туг

85

90

95

Суз *А1а

Агд

Агд

Ткг

ТЬг

Ткг

А1а

Азр

Туг

Рке

А1а

Туг

Тгр

(31у

<Э1п

100

105

110

С1у Ткг

Ткг

Уа1

ткг

Уа1

Зег

Зег

115 120 <210> 35 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 35

31п Уа1 <Э1п 1

Ьеи Уа1 5

С1и

Зег

С1у С1у

С1у Уа1 10

Уа1

С1п Рго С1у 15

Агд

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Рке

Зег

С1у Рке

Зег

Ьеи

Зег

Ткг

Зег

- 58 015147

СХу	Мек	Зег 35	Уа1	СХу	Тгр	Не	Агд 40
Тгр	Ьеи 50	А1а	Н1з	Не	Тгр	Тгр 55	Азр
Ьеи 65	Ьуз	Зег	Агд	РЬе	ТЬг 70	11е	Зег
Туг	Ьеи	С1п	Мек	Азп 85	Зег	Ьеи	Агд
Суз	АХа	Агд	Агд 100	ТЬг	ТЬг	ТЬг	А1а
61у	ТНг	ТЬг 115	УаХ	ТЬг	Уа1	Зег	Зег 120

25					30
<Э1п	А1а	Рго	С1у	Ьуз 45	61у	Ьеи	С1и
Азр	Азр	Ьуз	Туг 60	Туг	Азп	Рго	Зег
Ьуз	Азр	ТЬг 75	Зег	Ьуз	Азп	ТЬг	Ьеи 80
А1а	С1и 90	Азр	ТЬг	А1а	Уа1	Туг 95	Туг
Азр 105	Туг	РЬе	А1а	Туг	Тгр 110	С1у	61п

<210> 36 <211> 120 <212> БЕЛОК ' <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 36

С1п 1

УаХ

СХп

Ьеи

Уа1 5

СХи

Зег С1у

С1у СХу Уа1 10

Уа1

С1п

Рго

СХу 15

Агд

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

РЬе

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

Ьеи

Зег

ТЬг

Зег

20

25

30

61у

Мек

Зег

УаХ

С1у

Тгр

11е

Агд

СХп

А1а

Рго

С1у

Ьуз

СХу

Ьеи

С1и

35

40

45

Тгр

Уа1

А1а

Н1з

11е

Тгр

Тгр

Азр

Азр

Азр

Ьуз

Туг

Туг

Азп

Рго

Зег

50

55

60

Ьеи

Ьуз

Зег

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Ьуз

Азр

Ткг

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

65

70

75

80

Туг

ьеи

СХп

мек

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

85

90

95

Суз

А1а

Агд

Агд

ТЬг

ТЬг

ТЬг

А1а

Азр

Туг

РЬе

А1а

Туг

Тгр

С1у

СХп

100

105

110

СХу

ТЬг

ТЬг

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

115 - 120 <210> 37 <211> 120 <212> БЕЛОК

- 59 015147 <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 37

С1п 1

Уа1

С1п

Ъеи

Уа1 5

С1и

Зег С1у С1у

(31у 10

Уа1 Уа1

С1п

Рго

(31у Агд 15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суя

А1а

РЬе

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

Ьеи

Зег

ТЬг

Зег

20

25

30

61у

Мек

Зег

Уа1

С1у

Тгр

11е

Агд

61п

А1а

Рго

е1у

Ьув

О1у

ьеи

61и

35

40

45

Тгр

Уа1

А1а

Ηίθ

Не

Тгр

Тгр

Авр

Авр

Азр

Ьув

Туг

Туг

Азп

Рго

Зег

50

55

60

ьеи

Ьуз

Зег

Агд

ьеи

ТЬг

Не

Зег

Г,уз

Аэр

ТЬг

Зег

Ьув

Азп

ТЬг

Ьеи

65

70

75

80

Туг

Ьеи

βΐη

Мек

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

61и

Авр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

85

90

95

Суз

А1а

Агд

Агд

ТЬг

ТЬг

ТЫ

А1а

Азр

Туг

РЬе

А1а

Туг

Тгр

С1у

С1п

100

105

НО

61у

ТЬг

ТЬг

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

115 120 <210> 38 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 38

61п. Уа1 1

С1п Ьеи Уа1 5

С1и

Зег

61у <31у

С1у Са1 10

Уа1

С1п

Рго

б1у 15

Агд

Зег

Ъеи

Агд

Ъеи

Зег

Суз

А1а

РЬе

Зег

<31у

РЬе

ТЬг

Ьеи

Зег

ТЬг

Зег

20

25

30

О1у

Мек

Зег

Уа1

С1у

Тгр

Не

Агд

Е1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

О1и

35

40

45

Тгр

Ьеи

А1а

Η1Ξ

Не

Тгр

Тгр

Азр

Азр

Азр

Ьуз

Туг

Туг

Азп

Рго

Зег

50

55

60

Ьеи

Ьув

Зег

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Ьув

Азр

ТЬг

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

Ьеи

65

70

75

80

Туг

Ьеи

С1п

Мек

Азп

Зег

Ъеи

Агд

А1а

61и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

85

90

95

- 60 015147

Суз АЬа Агд Агд ТЬг ТЬх ТЬг АЬа Азр Туг РЬе АЬа Туг Тгр С1у СЬп

100 105 110

С1у ТЬг ТЬг УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег

115 120 <210> 39 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 39

СЬп 1

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ 5

СЬи Зех СЬу СЬу СЬу УаЬ УаЬ СЬп Рго 10

СЬу 15

Агд

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

РЬе

Зег

ОЬу

РЬе

Зег

Ьеи

Зех

ТЬх

Зех

20

25

30

СЬу

МеС

Зег

УаЬ

СЬу

Тгр

Ые

Агд

СЬп

АЬа

Рхо

СЬу

Ьуз

С1у

Ьеи

СЬи

35

40

45

Тгр

УаЬ

АЬа

НЬз

Ые

Тгр

Тгр

Азр

Азр

Азр

Ьуз

Тух

Тух

Азп

Рхо

Зех

50

55

60

Ьеи

Ьуз

Зег

Агд

РЬе

ТЬх

Ые

Зег

Ьуз

Азр

ТЬг

Зег

Ьуз

Азп

ТЬх

ьеи

65

70

75

80

Туг

Ьеи

СЬп

МеЬ

Азп

Зег

Ьеи

Агд

АЬа

СЬи

Азр

ТЬх

АЬа

Уа1

Тух

тух

90 95

Суз АЬа Агд Агд ТЬг ТЬх ТЬх АЬа Азр Туг РЬе АЬа Туг Тгр 61у СЬп

100 105 110

СЬу ТЬг ТЬх УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зех
	115	120
<210> <2Ы> <212>	40 120 БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 40

СЬп

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зех

СЬу

СЬу

61у

Уа1

νβΐ

СЬп

Рхо

СЬу

Ахд

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

ьеи

Зег

Суз

АЬа

РЬе

Зег

СЬу

РЬе

ТЬг

ьеи

Зех

ТЬх

Зех

20

25

30

СЬу

МеС

Зех

УаЬ

СЬу

тгр

УаЬ

Агд

С1п

АЬа

РГО

СЬу

ьуз

СЬу

Ьеи

СЬи

35

40

45

Тгр

Ьеи

АЬа

НЬз

Ые

Тхр

Тхр

Азр

Азр

Азр

Ьуз

Тух

Туг

Азп

Рго

Зег

50

55

60

- 61 015147

Ьеи

Буе

Зег

Агд

Ьеи

ТЬг

Не

Зег

Буе

Азр

ТЬг

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

65

70

75

80

Туг

Беи

СЬп

МеС

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

СЬи

Аер

ТЬг

АЬа

ν&1

Туг

Туг

85

90

95

Суз

А1а

Агд

Агд

ТЬг

ТЬг

ТЬг

АЬа

Аер

Туг

РЬе

А1а

Туг

Тгр

СЬу

СЬп

100

105

110

СЬу

ТЬг

ТЬг

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

Зег

115 120 <210> 41 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 41

сьп 1

УаЬ

СЬп Ьеи

Уа1 5

СЬи

Зег

СЬу СЬу С Ту УаЬ 10

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу 15

Агд

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи 20

Зег

Суз

АЬа

РЬе

Зег 25

СЬу

РЬе

Зег

Ьеи

Зег 30

ТЬг

Зег

СЬу

Мес

Зег 35

УаЬ

СЬу

Тгр

Не

Агд 40

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз 45

СЬу

Ьеи

СЬи

Тгр

Ьеи 50

АЬа

ΗΪ3

11е

Тгр

Тгр 55

Азр

Азр

Азр

Ьуз

Туг 60

Туг

Азп

Рго

Зег

Ьеи 65

Ьуз

Зег

Агд

Ьеи

ТЬг 70

Не

Зег

Ьуз

Азр

Азп 75

Зег

Ьуз

Авп

ТЬг

УаЬ 80

Туг

Ьеи

СЬп

МеС

Азп 85

Зег

ьеи

Агд

АЬа

СЬи 90

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг 95

Туг

Суз

АЬа

Агд

Агд ЬОО

ТЬг

ТЬг

ТЬг

АЬа

Авр Ь05

Туг

РЬе

АЬа

Туг

Тгр ИО

СЬу

СЬп

СЬу ТЬг ТЬг УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег

115 120 <210> 42 <211> 113 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (2) <223> Ча! или Не <220>

- 62 015147 <221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (7) <22 3> Зег или ТЬг <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (14) <223? ТЬг или Зег <220>

< 2 21 > МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (15) <223> Ьеи или Рго <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (30) <223? 11е или 7а1 <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (50) <223> Агд, С1п или Ьуз <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ.ОСТАТОК <222? (88) <223> Уа1 или Ьеи <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ—ОСТАТОК <222> (105) <223> <31п или С1у <220>

<221? МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (108) <223> Ьуз или Агд <220?

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222? (109) <223> Уа1 или Ьеи <400> 42

Азр 1

Хаа

Уа1

МеЬ

ТЬг 5

С1п

Хаа

Рго

Ьеи

Зег 10

Ьеи

Рго

Уа1

Хаа

Хаа 15

О1у

С1п

Рго

А1а

Зег 20

11е

Зег

Суз

Агд

Зег 25

Зег

С1п

Зег

Ьеи

Хаа 30

Туг

Зег

Азр

С1у

Азп 35

А1а

Туг

Ьеи

ΗΪΒ

Тгр 40

РЬе

Ьеи

С1п

Ьуз

Рго 45

01у

01п

Зег

Рго

Хаа 50

Ьеи

Ьеи

11е

Туг

Ьуз 55

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе 60

Зег

С1у

Уа1

Рго

Азр

Агд

РЬе

Зег

01у

Зег

61у

Зег

61у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

11е

- 63 015147

70 75 80

Зег Агд

Уа1 С1и. А1а 61и 85

Азр

Хаа С1у Уа1 90

Туг Туг Суз

Зег С1п Зег 95

ТЬг

Н1з

Уа1

Рго

Тгр

ТЬг

РЬе

(31у Хаа

С1у

ТЬг

Хаа

Хаа

С1и

Не

Ьуз

100

105

110

Агд <210> 43 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <220>

<222> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (1) <223> С1и или С1п <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (7) <223> Зег или Ьеи <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (46) <223> 01и, ’7а1, Азр или Зег <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ—ОСТАТОК <222> (63) <223> ТНг или Зег <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (75) <223> А1а, Зег, 7а 1 или ТЬг <22 0>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (76) <223> Ьуз или Агд <22 0>

<221> МОДИФИЦИРОВАННЫЙ_ОСТАТОК <222> (89) <223> (31и или Азр <220>

<221> МОДИФИЦИРОВАННИ? ОСТАТОК <222> (107) <223> Ьеи или ТЬг

- 64 015147 <400> 43

Хаа Уа1 1

61п ьеи Уа1 5

С1и Хаа О1у 61у

С1у Ьеи 7а1 10

С1п

Рго

С1у 15

С1у

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

А1а

Зег

(31у

Рке

Ткг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

Зег

Мек

Зег

Тгр

Уа1

Агд

О1п

А1а

Рго

О1у

Ьуз

С1у

Ьеи

Хаа

Ьеи

Уа1

35

40

45

А1а

(31п

Не

Азп

Зег

Уа1

61у

Азп

Зег

Ткг

Туг

Туг

Рго

Азр

Хаа

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

Рке

Ткг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

Хаа

Хаа

Азп

Ткг

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

61п

Мек

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

хаа

АЗр

Ткг

А1а

νβΐ

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Зег

<31у

Азр

Туг

Тгр

<31у

61п

Й1у

Ткг

Хаа

Уа1

Ткг

Уа1

Зег

Зег

100 105 НО <210> 44 <211> 113 <212> БЕЛОК

<213> Искусственная

последовательность

<22 и>

<22 3 > Синтетическое

гуманизированное антитело

<400> 44

Азр

Уа1

Уа1

Мек

ТЬг

С1п

Зег

Рго

Ьеи

Зег

Ьеи

Рго

7а1

ТЬг

Ьеи

С1у

1

5

10

15

С1п

Рго

А1а

Зег

11е

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

О1п

Зег

Ьеи

Не

Туг

Зег

20

25

30

Азр

С1у

Азп

А1а

Туг

Ьеи

Н1з

Тгр

Рке

Ьеи

Θΐη

Ьуз

Рго

61у

С1п

Зег

35

40

45

Рго

Агд

Ьеи

Ьеи

Не

Туг

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

(

Азр

Агд

Рке

Зег

О1у

Зег

61у

Зег

С1у

Ткг

Азр

Рке

ТЬг

Ьеи

Ьуз

Не

65

70

75

80

Зег

Агд

Уа1

61и

А1а

С1и

Азр

Уа1

61у

Уа1

ткг

Туг

Суз

Зег

С1п

Зег

85

90

95

ткг

ΗΪ3

Уа1

Рго

Тгр

Ткг

Рке

61у

С1п

С1у

Ткг

Ьуз

Уа1

Й1и

11е

Ьуз

100

105

110

Агд <210> 45

- 65 015147 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 45

Сйи Уа1 С1п Ьеи Уай Сйи Зег Сйу Сйу Сйу Ьеи Уай

Сйп Рго

Сйу 15

Сйу

1

5

10

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

Айа

Айа

Зег

Сйу

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

Зег

Мек

Зег

Тгр

Уай

Алд

Сйп

Айа

Рго

Сйу

Ьуз

Сйу

Ьеи

Сйи

Ьеи

Уай

35

40

45

Айа

Сйп

Не

АЗП

Зег

Уай

Сйу

Азп

Зег

ТЬх

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

Уай

50

55

60

Ьуз

Сйу

Агд

РНе

ТНг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

Айа

Ьуз

Азп

ТЬг

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

Мек

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Айа

Сйи

Азр

ТНг

Айа

Уай

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Зег

Сйу

Азр

Туг

Тгр

Сйу

Сйп

61у

ТЬх

ьеи

Уай

ТЬг

Уай

Зег

Зег

100 105 110 <210> 46 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <22 0>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 46

Азр 1

Уай

Уай

Мек

ТЬг Сйп Зег 5

Рго Ьеи

Зег 10

Ьеи Рго Уай

ТЬх

Ьеи <31 у 15

Сйп

Рго

Айа

Зел

Не

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

Сйп

Зег

Ьеи

Не

Туг

Зег

20

25

30

Азр

Сйу

Азп

Айа

Туг

Ьеи

Нйз

Тгр

РЬе

Ьеи

Сйп

Ьуз

Рго

Сйу

Сйп

Зег

35

40

45

Рго

Агд

Ьеи

Ьеи

Не

туг

Ьуз

Уай

Зег

Азп

Агд

РЬе

Бег

Сйу

Уай

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

Сйу

Зег

Сйу

Зег

Сйу

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬх

Ьеи

Ьуз

Не

65

70

75

80

Зег

Агд

Уай

Сйи

Айа

Сйи

Азр

Уа1

Сйу

Уай

Туг

Туг

Суз

Зех

Сйп

Зег

85

90

95

ТЬх

Нйз

Уай

Рго

Тгр

ТЬх

РЬе

Сйу

Сйп

Сйу

ТЬг

Ьуз

Уай

Сйи

Не

Ьуз

- 66 015147

100

105

110

Агд

ТЬг

Уа1

А1а

А1а

Рго

Зег

Уа1

РЬе

11е

РЬе

Рго

Рго

Зег

Азр

61и

115

120

125

С1п

Ьеи

Ьуз

Зег

С1у

ТЬг

А1а

Зег

Уа1

Уа1

Суз

Ьеи

Ьеи

Азп

Азп

РЬе

130

135

140

Туг

Рго

Агд

61и

А1а

Ьуз

νβΐ

<31п

Тгр

Ьуз

Уа1

Азр

Азп

А1а

Ьеи

О1п

145

150

155

160

Зег

61 у

АЗП

Зег

С1п

О1и

Зег

Уа1

ТЬг

С1и

61п

Азр

Бег

ьуз

Азр

Зег

165

170

175

ТНг

Туг

Бег

Ьеи

Бег

Зег

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Зег

Ьуз

А1а

Азр

Туг

61и

180

185

190

Ьуз

ΗΪΞ

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Суз

61и

Уа1

ТЬг

Н1з

<3111

С1у

Ьеи

Бег

Зег

195

200

205

Рго

Уа1

ТЬг

Ьуэ

Зег

РЬе

Азп

Агд

С1у

61и

Суз

210 215 <210> 47 <211> 442 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическое гуманизированное антитело <400> 47

61и 1

Уа1

<31п Ьеи

Уа1 61и Зег 61у 61у С1у Ьеи Уа1

С1п

Рго

<31у 15

61у

5

10

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

А1а

Зег

61у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

Зег

Мег

Зег

Тгр

Уа1

Агд

С1п

А1а

Рго

61у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

Ьеи

Уа1

35

40

45

А1а

С1п

Не

Азп

Зег

ναΐ

61у

Азп

Зег

ТЬг

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

Уа1

50

55

60

Ьуз

61у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Авп

ТЬг

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

61п

МеС

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Тух

Сув

85

90

95

А1а

Зег

С1у

Аэр

Туг

Тгр

61у

С1п

О1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

100

105

110

А1а

Зег

ТЬг

Ьуз

<31у

Рго

Зег

ν&1

РЬе

Рго

Ьеи

А1а

Рго

Зег

Бег

Ьув

115

120

125

Зег

ТЬг

Зег

С1у

61у

ТЬг

А1а

А1а

Ьеи

С1у

Суз

Ьеи

Уа1

ьуз

Азр

Туг

- 67 015147

130

135

140

РЬе

Рго

С1и

Рго

Уа1

ТЬг

Уа1

Бег

Тгр

Авп

Зег

<31у

А1а

Ьеи

ТЬг

Бег

145

150

155

160

С1у

Уа1

Н1в

ТНг

РЬе

Рго

А1а

Уа1

Ьеи

С1п

Зег

Зег

01у

Ьеи

Туг

Зег

165

170

175

Ьеи

Бег

Бег

Уа1

Уа1

ТЬг

Уа1

Рго

Бег

Бег

Зег

Ьеи

01у

ТЬг

О1п

ТЬг

180

185

190

Туг

Не

Суз

АЗП

¥а!

Азп

ΗΪ3

Ьув

Рго

Зег

Азп

ТЬг

Ьув

Уа1

Азр

Ьуз

195

200

205

Ьуз

7а1

С1и

Рго

Ьуз

Бег

Суз

Азр

Ьуз

ТЬг

ΗΪΒ

ТЬг

Суз

Рго

Рго

Суз

210

215

220

Рго

А1а

Рго

С1и

Ьеи

Ьеи

С1у

01у

Рго

Зег

Уа1

РЪе

Ьеи

Рке

Рго

РГО

225

230

235

240

Ьув

Рго

Ьуз

Авр

ТЬг

Ьеи

МеЕ

11е

Бег

Агд

ТЬг

Рго

01и

Уа1

ТЬг

Сув

245

250

255

Уа1

Уа1

Уа1

Азр

Уа1

Бег

Ηί3

С1и

Авр

Рго

С1и

Уа1

Ьуз

РЬе

Авп

Тгр

260

265

270

Туг

Уа1

Авр

61У

Уа1

01и

Уа1

ΗΪΒ

Азп

А1а

Ьуз

ТЬг

Ьув

Рго

Агд

01и

275

280

285

61и

01п

Туг

Авп

Зег

ТЬг

Туг

Агд

Уа1

Уа1

Зег

7а1

Ьеи

ТЬг

Уа1

Ьеи

290

295

300

ΗΪΒ

О1п

Азр

Тгр

Ьеи

Азп

01у

Ьув

61и

туг

Ьув

Суз

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

305

310

315

320

Ьуз

А1а

Ьеи

Рго

А1а

Рго

Не

С1и

Ьуз

ТЬг

Не

Бег

Ьув

А1а

Ьуз

01у

325

330

335

С1п

Рго

Агд

С1и

Рго

<31п

Уа1

Туг

ТЬг

Ьеи

Рго

Рго

Зег

Агд

Азр

<31и

340

345

350

Ьеи

ТЬг

Ьуз

Авп

01п

Уа1

Зег

Ьеи

ТЬг

Сув

Ьеи

Уа1

Ьув

С1у

РЬе

Туг

355

360

365

Рго

Бег

Авр

Не

А1а

Уа1

01и

Тгр

С1и

Зег

Азп

<31у

61п

Рго

С1и

Азп

370

375

3 80

Азп

Туг

ьуз

ТЬг

ТЬг

Рго

Рго

Уа1

ьеи

Авр

Бег

Авр

С1у

Зег

РЬе

РЬе

385

390

395

400

Ьеи

Туг

Бег

Ьуз

Ьеи

ТЬг

Уа1

Авр

Ьув

Зег

Агд

Тгр

О1п

61η

С1у

Азп

405

410

415

Уа1

рЬе

Бег

Сув

Бег

Уа1

МеЕ

Н1з

С1и

А1а

Ьеи

Н1е

Авп

ΗΪ3

Туг

ТЬг

42 0

425

430

С1п

Ьуз

Зег

Ьеи

Зег

Ьеи

Бег

Рго

С1у

Ьув

435 440

Claims (75)

1. ФОРМУЛЛ ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Стабилизированный препарат, содержащий:

   (a) гуманизированный вариант моноклонального антитела 3Ό6 ΆΤ^-ΡΤΆ-5130 в концентрации около 1-30 мг/мл;

   (b) гистидин в концентрации около 0,1-25 мМ;

   (c) маннит в концентрации около 1-10% вес./об., причем рН препарата составляет около 5,5-6,5.
2. 2. Препарат по п.1, дополнительно содержащий 0,001-0,01% вес./об. полисорбата.
3. 3. Препарат по п.2, отличающийся тем, что он содержит гуманизированное антитело 3Ό6 в концентрации 17-23 мг/мл и гистидин в концентрации 10 мМ.
4. 4. Препарат по п.3, отличающийся тем, что он содержит полисорбат в концентрации 0,005% вес./об. и маннит в концентрации 4% вес./об.
5. 5. Препарат по п.3, отличающийся тем, что он содержит полисорбат в концентрации 0,005% вес./об. и маннит в концентрации 10% вес./об.
6. 6. Препарат по п.4, дополнительно содержащий 10 мМ метионина.
7. 7. Препарат по п.5, дополнительно содержащий 10 мМ метионина.
8. 8. Препарат по п.1, отличающийся тем, что гуманизированное антитело 3Ό6 имеет лёгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕР ΙΌ N0: 1, и тяжёлую цепь, содержащую аминокислотные остатки 1-448 последовательности 8ЕР ΙΌ N0: 2.
9. 9. Препарат по п.8, отличающийся тем, что он содержит гуманизированное антитело 3Ό6 в концентрации 15-25 мг/мл.
10. 10. Препарат по п.9, отличающийся тем, что он содержит гистидин в концентрации 8-12 мМ.
11. 11. Препарат по п.10, отличающийся тем, что он содержит маннит в концентрации 4-6% вес./об.
12. 12. Препарат по п.11, отличающийся тем, что его рН равен 5,8-6,2.
13. 13. Препарат по п.1, отличающийся тем, что гуманизированное антитело 3Ό6 содержит вариабельную область в лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8 Ер ΙΌ N0: 3 или 8ЕР ΙΌ N0: 5, и вариабельную область в тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕО ΙΌ N0: 4 или 8ЕО ΙΌ N0: 6.
14. 14. Препарат по п.1, отличающийся тем, что гуманизированное антитело 3Ό6 содержит лёгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕР ΙΌ N0: 7, и тяжёлую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕР ΙΌ N0: 8.
15. 15. Препарат по п.1, дополнительно содержащий 2-6% вес./об. сахарозы.
16. 16. Стабилизированный препарат, включающий в себя:

    (a) гуманизированный вариант моноклонального антитела 3Ό6 ΆΤ^-ΡΤΆ-5130, содержащего лёгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕР ΙΌ N0: 1, и тяжёлую цепь, содержащую аминокислотные остатки 1-448 последовательности 8ЕР ΙΌ N0: 2, в концентрации 20 мг/мл;

    (b) Ь-гистидин в концентрации 10 мМ;

    (c) Ό-маннит в концентрации 4% вес./об.;

    (б) Ь-метионин в концентрации 10 мМ; а также (е) полисорбат 80 в концентрации 0,005% вес./об., причем рН препарата равен 6,0.
17. 17. Стабилизированный препарат, содержащий:

    (a) гуманизированный вариант моноклонального антитела 3Ό6 ΆΤ^-ΡΤΆ-5130 в концентрации 40-100 мг/мл;

    (b) гистидин в концентрации 0,1-25 мМ;

    (c) полисорбат в концентрации около 0,001-0,01% вес./об., причем рН препарата равен 5,5-6,5.
18. 18. Препарат по п.17, отличающийся тем, что он содержит гуманизированное антитело 3Ό6 в концентрации 50 мг/мл и гистидин в концентрации 10 мМ.
19. 19. Препарат по п.18, отличающийся тем, что он содержит полисорбат в концентрации 0,005% вес./об.
20. 20. Препарат по п.19, дополнительно содержащий 10 мМ метионина.
21. 21. Препарат по п.17, отличающийся тем, что гуманизированное антитело 3Ό6 представляет собой гуманизированное антитело 3Ό6 в версии, имеющей лёгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕР ΙΌ N0: 1, и тяжёлую цепь, содержащую аминокислотные остатки 1-448 последовательности 8ЕР ΙΌ N0: 2.
22. 22. Препарат по п.21, отличающийся тем, что гуманизированное антитело 3Ό6 присутствует в концентрации 30-50 мг/мл.
23. 23. Препарат по п.22, отличающийся тем, что он содержит гистидин в концентрации 8-12 мМ.
24. 24. Препарат по п.23, отличающийся тем, что он содержит полисорбат в концентрации 0,005% вес./об.
25. 25. Препарат по п.24, отличающийся тем, что его рН равен 5,8-6,2.

    - 69 015147
26. 26. Препарат по п.17, отличающийся тем, что гуманизированное антитело 3Ό6 содержит вариабельную область в лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 3 или 8ЕЦ ГО N0: 5, и вариабельную область в тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС) ГО N0: 4 или 8ЕО ГО N0: 6.
27. 27. Препарат по п.17, отличающийся тем, что гуманизированное антитело 3Ό6 включает лёгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 7, и тяжёлую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 8.
28. 28. Препарат по п.17, дополнительно содержащий 2-6% вес./об. сахарозы.
29. 29. Стабилизированный препарат, включающий в себя:

    (a) гуманизированный вариант моноклонального антитела 3Ό6 АТСС-РТА-5130, содержащего лёгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 1, и тяжёлую цепь, содержащую аминокислотные остатки 1-448 последовательности 8ЕЦ ГО N0: 2, в концентрации 50 мг/мл;

    (b) Ь-гистидин в концентрации 10 мМ;

    (c) полисорбат 80 в концентрации 0,005% вес./об.;

    (б) Ь-метионин в концентрации 10 мМ, причем рН препарата равен 6,0.
30. 30. Стабилизированная лекарственная форма, содержащая:

    (a) гуманизированный вариант моноклонального антитела 3Ό6 АТСС-РТА-5130 в количестве 10-250 мг при концентрации 1-30 мг/мл;

    (b) гистидин в концентрации 0,1-25 мМ;

    (c) маннит в концентрации 1-10% вес./об., причем лекарственная форма имеет рН 5,5-6,5.
31. 31. Лекарственная форма по п.30, дополнительно содержащая 0,001-0,01% вес./об. полисорбата.
32. 32. Лекарственная форма по п.31, отличающаяся тем, что она содержит гуманизированное антитело 3Ό6 в концентрации 17-23 мг/мл и гистидин в концентрации 10 мМ.
33. 33. Лекарственная форма по п.32, отличающаяся тем, что она содержит полисорбат в концентрации 0,005% вес./об. и маннит в концентрации 4% вес./об.
34. 34. Лекарственная форма по п.32, отличающаяся тем, что она содержит полисорбат в концентрации 0,005% вес./об. и маннит в концентрации 10% вес./об.
35. 35. Лекарственная форма по п.33, дополнительно содержащая 10 мМ метионина.
36. 36. Лекарственная форма по п.34, дополнительно содержащая 10 мМ метионина.
37. 37. Лекарственная форма по п.30, отличающаяся тем, что содержание в ней гуманизированного антитела 3Ό6 составляет 40-60 мг.
38. 38. Лекарственная форма по п.30, отличающаяся тем, что содержание в ней гуманизированного антитела 3Ό6 составляет 60-80 мг.
39. 39. Лекарственная форма по п.30, отличающаяся тем, что содержание в ней гуманизированного антитела 3Ό6 составляет 80-120 мг.
40. 40. Лекарственная форма по п.30, отличающаяся тем, что содержание в ней гуманизированного антитела 3Ό6 составляет 120-160 мг.
41. 41. Лекарственная форма по п.30, отличающаяся тем, что содержание в ней гуманизированного антитела 3Ό6 составляет 160-250 мг.
42. 42. Лекарственная форма по п.30, отличающаяся тем, что гуманизированное антитело 3Ό6 представляет собой гуманизированное антитело 3Ό6 в версии, имеющей лёгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 1, и тяжёлую цепь, содержащую аминокислотные остатки 1-448 последовательности 8ЕЦ ГО N0: 2.
43. 43. Лекарственная форма по п.30, отличающаяся тем, что гуманизированное антитело 3Ό6 включает в себя вариабельную область в лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 3 или 8ЕЦ ГО N0: 5, и вариабельную область в тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 4 или 8ЕЦ ГО N0: 6.
44. 44. Лекарственная форма по п.30, отличающаяся тем, что гуманизированное антитело 3Ό6 включает в себя лёгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 7, и тяжёлую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 8.
45. 45. Лекарственная форма по п.30, дополнительно содержащая 2-6% вес./об. сахарозы.
46. 46. Стабилизированная лекарственная форма, включающая в себя:

    (a) 100 мг гуманизированного варианта моноклонального антитела 3Ό6 АТСС-РТА-5130, содержащего лёгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 1, и тяжёлую цепь, содержащую аминокислотные остатки 1-448 последовательности 8ЕЦ ГО N0: 2, в концентрации 20 мг/мл;

    (b) Ь-гистидин в концентрации 10 мМ;

    (c) Ό-маннит в концентрации 4% вес./об.;

    (б) Ь-метионин в концентрации 10 мМ; а также (е) полисорбат 80 в концентрации 0,005% вес./об.,

    - 70 015147 причем рН лекарственной формы равен 6,0.
47. 47. Фармацевтическое средство, включающее в себя:

    (а) ампулу, содержащую стабилизированный препарат гуманизированного антитела 3Ό6, причем препарат содержит:

    (ί) гуманизированный вариант моноклонального антитела 3Ό6 АТСС-РТА-5130 в количестве 10-250 мг при концентрации 1-30 мг/мл, (ίί) гистидин в концентрации 0,1-25 мМ и (ίίί) маннит в концентрации 1-10% вес./об., причем рН препарата равен 5,5-6,5;

    (Ь) этикетку с инструкцией по применению надлежащего объёма, необходимого для получения дозы антитела 0,15-5 мг/кг веса пациента.
48. 48. Средство по п.47, отличающееся тем, что доза составляет 0,5-3 мг/кг.
49. 49. Средство по п.47, отличающееся тем, что доза составляет 1-2 мг/кг.
50. 50. Средство по п.47, отличающееся тем, что препарат дополнительно содержит 0,001-0,01% вес./об. полисорбата.
51. 51. Средство по п.50, отличающееся тем, что препарат содержит гуманизированное антитело 3Ό6 в концентрации 17-23 мг/мл и гистидин в концентрации 10 мМ.
52. 52. Средство по п.51, отличающееся тем, что препарат содержит полисорбат в концентрации 0,005% вес./об. и маннит в концентрации 4% вес./об.
53. 53. Средство по п.51, отличающееся тем, что препарат содержит полисорбат в концентрации 0,005% вес./об. и маннит в концентрации 10% вес./об.
54. 54. Средство по п.52, отличающееся тем, что препарат дополнительно содержит 10 мМ метионина.
55. 55. Средство по п.53, отличающееся тем, что препарат дополнительно содержит 10 мМ метионина.
56. 56. Средство по п.47, составляет 40-60 мг.
57. 57. Средство по п.47, составляет 60-80 мг.
58. 58. Средство по п.47, составляет 80-120 мг.
59. 59. Средство по п.47, составляет 120-160 мг.
60. 60. Средство по п.47, составляет 160-250 мг.
61. 61. Средство по п.47, отличающееся тем, гуманизированное антитело 3Ό6 в версии, имеющей лёгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕО ΙΌ N0: 1, и тяжёлую цепь, содержащую аминокислотные остатки 1-448 последовательности 8ЕО ΙΌ N0: 2.
62. 62. Средство по п.47, отличающееся тем, что гуманизированное антитело 3Ό6 включает в себя вариабельную область в лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕР ΙΌ N0: 3 или 8ЕР ΙΌ N0: 5, и вариабельную область в тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС) Ш N0: 4 или 8ЕО ГО N0: 6.
63. 63. Средство по п.47, отличающееся тем, что гуманизированное антитело 3Ό6 включает в себя лёгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8 Ер ΙΌ N0: 7, и тяжёлую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕР ΙΌ N0: 8.
64. 64. Средство отличающееся тем, отличающееся тем, отличающееся тем, отличающееся тем, отличающееся тем, что что что что что что содержание содержание содержание содержание содержание нем нем нем нем нем гуманизированного гуманизированного гуманизированного гуманизированного гуманизированного антитела антитела антитела антитела антитела

    3Ό6

    3Ό6

    3Ό6

    3Ό6

    3Ό6 гуманизированное антитело 3Ό6 представляет собой по п.47, отличающееся тем, что препарат дополнительно содержит 2-6% вес./об. сахарозы.
65. 65. Средство по п.47, отличающееся тем, что препарат предназначен для подкожного введения.
66. 66. Средство по п.47, отличающееся тем, что препарат предназначен для внутривенного введения.
67. 67. Терапевтический продукт, включающий в себя:

    (a) стеклянную ампулу, содержащую стабилизированный препарат гуманизированного антитела 3Ό6, причем препарат содержит:

    (ί) 100 мг гуманизированного варианта моноклонального антитела 3Ό6 АТСС-РТА-5130, содержащего лёгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕР ΙΌ N0: 1, и тяжёлую цепь, содержащую аминокислотные остатки 1-448 последовательности 8ЕР ΙΌ N0: 2, (ίί) Ь-гистидин в концентрации 10 мМ, (ίίί) Ό-маннит в концентрации 4% вес./об., (ίν) Ь-метионин в концентрации 10 мМ, (ν) полисорбат 80 в концентрации 0,005% вес./об., причем рН препарата равен 6,0;

    (b) этикетку с инструкцией по применению надлежащего объёма, необходимого для получения дозы антитела 0,5-3 мг/кг веса пациента.
68. 68. Применение препарата по любому пп.1-29 для приготовления фармацевтического средства для

    - 71 015147 лечения или профилактики амилоидогенных заболеваний.
69. 69. Применение по п.68 для приготовления лекарственного средства для внутривенного введения пациенту.
70. 70. Применение по п.68 для приготовления лекарственного средства для подкожного введения пациенту.
71. 71. Способ приготовления стабилизированного препарата, включающий:

    (a) смешивание 40-60 мг/мл гуманизированного варианта моноклонального антитела 3Б6 ЛТСС-РТЛ-5130 с 1-2 мг/мл Ь-гистидина и 0,05 мг/мл полисорбата 80 с получением препарата;

    (b) доведение рН препарата до 6,0;

    (c) фильтрование препарата в криососуд;

    (й) замораживание препарата при температуре от -50 до -80°С.
72. 72. Способ по п.71, отличающийся тем, что он дополнительно включает:

    (с) размораживание препарата;

    (Г) разбавление препарата маннитом, количество которого достаточно для получения конечных концентраций: 2-20 мг/мл антитела, 4% вес./об. маннита, 10 мМ гистидина, 0,005% полисорбата 80;

    (д) фильтрование разбавленного препарата;

    (1) запечатывание отфильтрованного препарата в стеклянную ампулу с получением стерильного продукта;

    (ΐ) хранение стерильного продукта при температуре 2-8°С.
73. 73. Способ по п.71, отличающийся тем, что гуманизированное антитело 3Б6 представляет собой гуманизированное антитело 3Б6 в версии, имеющей лёгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8Ер Ιϋ ΝΟ: 1, и тяжёлую цепь, содержащую аминокислотные остатки 1-448 последовательности 8Ер Ιϋ ΝΟ: 2.
74. 74. Способ по п.71, отличающийся тем, что гуманизированное антитело 3Б6 включает в себя вариабельную область в лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8Ер Ιϋ ΝΟ: 3 или 8Ер Ιϋ ΝΟ: 5, и вариабельную область в тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8Ер Ιϋ ΝΟ: 4 или 8Ер Ιϋ ΝΟ: 6.
75. 75. Способ по п.71, отличающийся тем, что гуманизированное антитело 3Б6 включает в себя лёгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8Ер Ιϋ ΝΟ: 7, и тяжёлую цепь, содержащую аминокислотную последовательность 8Ер Ιϋ ΝΟ: 8.