EA012065B1 - Способ получения экстракта из листьев плюща и полученный этим способом экстракт - Google Patents

Abstract

В изобретении описаны способ получения из листьев плюща экстракта, содержащего действующие вещества гедеракозид С и α-гедерин, а также полученные этим способом экстракты. В соответствии с предлагаемым в изобретении способом сначала подготавливают первый, богатый α-гедерином экстракт, а затем подготавливают второй, богатый гедеракозидом С экстракт. На последней стадии оба экстракта смешивают между собой с получением экстракта с отрегулированным содержанием в нем гедеракозида С и отрегулированным содержанием α-гедерина.

Description

Настоящее изобретение относится к способу получения экстракта из листьев плюща, а также к полученному этим способом экстракту.

Экстракты из листьев плюща благодаря наличию у них спазмолитического, отхаркивающего и антиобструктивного действия в настоящее время успешно используются прежде всего для терапии заболеваний дыхательных путей. Наличие подобного действия у экстрактов из листьев плюща обусловлено главным образом содержанием в таких экстрактах терапевтически важных компонентов, которые относятся к классу тритерпеновых сапонинов. Основными сапонинами при этом являются биодесмозидный гедеракозид С и образующийся из него в результате гидролиза сложного эфира α-гедерин. Другим сапонином, который можно обнаружить в экстрактах из листьев плюща, является гедерагенин.

Экстракты из листьев плюща, получаемые различными методами, часто обладают по этой причине различающейся между собой эффективностью. Подобные различия обусловлены тем, что содержание тех или иных компонентов в экстракте зависит не только от естественного состава исходного сырья, но и от конкретного метода получения экстракта.

По результатам последних исследований было установлено, что α-гедерин представляет собой собственно активное вещество, содержащееся в листьях плюща, и способствует спазмолитическому действию на бронхи (бронхоспазмолизу), поскольку это вещество в результате связывания с βадренорецепторами и тем самым запуска соответствующих каскадов вызывает расслабление гладкой мускулатуры бронхиальной системы.

Экстракты из растительных материалов, прежде всего сухие экстракты, а также разнообразные методы получения таких экстрактов широко представлены в литературе, посвященной фармации и прежде всего приготовлению лекарственных средств.

Один из способов получения сухих экстрактов из растительных материалов известен, например, из заявки ΌΕ 10112168 А1. Описанный в этой заявке способ должен обеспечивать возможность регулирования содержания в экстракте липофильных и гидрофильных веществ. Для этого растительный материал предлагается подвергать по меньшей мере двум экстракционным обработкам растворителями, обладающими различной липофильностью, и по отдельности выделять из них экстракты. Полученные экстракты сушат отдельно друг от друга и затем смешивают между собой в требуемой пропорции. Таким путем можно регулировать содержание в экстракте липофильных и гидрофильных веществ. Такой способ в принципе должен быть пригоден и для получения сухих экстрактов из плюща (Нейега йеНх).

Однако в указанной публикации не описаны ни экстракт с целенаправленно отрегулированным в нем содержанием α-гедерина и/или гедеракозида С, ни способ, которым можно было бы получать подобный экстракт.

Помимо этого из заявки ΌΕ 3025223 А1 известны фармацевтическая композиция на основе экстрактов плюща и способ их получения, при этом в состав фармацевтической композиции входит в качестве действующего вещества экстракт, содержащий 90 или 60% гедерасапонина С или α-гедерин. Подобный экстракт получают с применением ацетона и метанола. Для превращения гедерасапонина С, соответственно гедеракозида С в α-гедерин и получения тем самым экстракта, содержащего только α-гедерин, 90%-ный экстракт согласно указанной заявке подвергают омылению гидроксидом натрия или гидроксидом калия.

Однако и в этой публикации не описан способ, которым можно было бы получать экстракт с отрегулированным на любую величину содержанием в нем α-гедерина и гедеракозида С.

Вместе с тем для обеспечения воспроизводимого терапевтического действия целесообразно располагать экстрактами из плюща с задаваемым содержанием в них действующих веществ.

Недостаток применявшихся до настоящего времени экстрактов состоит далее в необходимости их многократного введения в организм для обеспечения вызываемого α-гедерином немедленного и длительно сохраняющегося спазмолитического действия на бронхи. Возможная причина этого состоит в недостаточной биодоступности α-гедерина, поскольку, например, уже к моменту приема экстрактов в них содержится мало α-гедерина. С другой стороны, и исходно присутствующий в экстракте α-гедерин сравнительно быстро резорбируется ίη νίνο, чем для достижения терапевтического действия обусловлена необходимость многократного введения в организм содержащих его экстрактов.

Исходя из вышеизложенного, в основу настоящего изобретения была положена задача разработать способ получения экстракта, а также предложить экстракт, который обеспечивал бы быструю биодоступность α-гедерина и ее сохранение на неизменном уровне в течение более длительного периода времени.

Положенная в основу изобретения задача решается с помощью способа получения экстракта из листьев плюща с регулируемым содержанием в экстракте гедеракозида С и α-гедерина, заключающегося в том, что

а) подготавливают первый, богатый α-гедерином экстракт,

б) подготавливают второй, богатый гедеракозидом С экстракт и

в) первый и второй экстракты смешивают между собой с получением экстракта с отрегулированным содержанием в нем гедеракозида С и отрегулированным содержанием α-гедерина.

- 1 012065

Предлагаемый в изобретении способ позволяет получать экстракт, который содержит, во-первых, α-гедерин в качестве биологически активного вещества с немедленно наступающим действием и, вовторых, гедеракозид С, который ίη νίνο превращается в α-гедерин. При этом первый экстракт значительно обогащен α-гедерином, а второй экстракт - гедеракозидом С.

Первый экстракт можно получать, например, способом, при осуществлении которого исходный материал, например высушенное лекарственное растительное сырье, сначала измельчают, затем подвергают ферментации и после этого подвергают предварительному набуханию, например, в смеси спирта с водой, в частности в 30%-ном этаноле, и экстракционной обработке. В завершение экстракт можно подвергать, например, выпариванию в пленочном выпарном аппарате и распылительной сушке. В зависимости от требуемого содержания α-гедерина в экстракте ферментации можно подвергать все количество высушенного лекарственного растительного сырья и таким путем превращать весь присутствующий в нем гедеракозид С в α-гедерин. В другом варианте ферментации можно также подвергать только часть лекарственного растительного сырья, а остальную его часть примешивать только для предварительного набухания в этаноле, получая таким путем экстракт, который лишь значительно обогащен α-гедерином.

Под ферментацией согласно настоящему изобретению подразумевается разложение, соответственно превращение присутствующих в исходном материале компонентов в другие вещества при добавлении к исходному материалу ферментационной среды, например воды, с согласованием при необходимости определенных параметров, например времени и температуры, с особенностями процесса ферментации. Такая новая стадия ферментации предоставляет возможность целенаправленного получения богатых α-гедерином экстрактов.

Листья плюща можно при этом использовать, например, в виде высушенного лекарственного растительного сырья. Преимущество, связанное с применением при приготовлении лекарственного средства высушенного лекарственного растительного сырья, состоит благодаря лучшей его сохраняемости в большем при определенных условиях удобстве работы с ним, чем со свежесобранными лекарственными растениями. Сказанное, однако, не исключает возможности применения при получении предлагаемого в изобретении экстракта свежих листьев плюща.

Высушенные лекарственные растения и их части называют в фармации лекарственным растительным сырьем. Подобные представленные в виде лекарственного растительного сырья лекарственные растения применяют либо в неизменном, либо в измельченном виде.

Второй экстракт можно получать, например, способом, при осуществлении которого высушенное лекарственное растительное сырье сразу же после его измельчения смешивают с экстрагентом, например 30%-ным этанолом, и подвергают экстракционной обработке традиционными методами. В другом варианте измельченное лекарственное растительное сырье можно перед экстракционной обработкой этанолом обрабатывать горячим водяным паром. По результатам проведенных экспериментов было установлено, что подобная обработка позволяет повысить в экстракте содержание гедеракозида С, соответственно стабилизировать его содержание относительно исходного содержания в лекарственном растительном сырье и понизить содержание α-гедерина. Таким путем получают экстракты, которые можно использовать на стадии б) предлагаемого в изобретении способа в качестве второго, богатого гедеракозидом С экстракта. Такая новая стадия обработки паром предоставляет возможность целенаправленного получения богатых гедеракозидом С экстрактов.

На стадии а) предлагаемого в изобретении способа наиболее предпочтительно использовать богатый α-гедерином экстракт с содержанием α-гедерина по меньшей мере 3%, прежде всего 5%.

На стадии б) предлагаемого в изобретении способа предпочтительно далее использовать богатый гедеракозидом С экстракт с содержанием гедеракозида С по меньшей мере 5%, прежде всего по меньшей мере 10%, и содержанием α-гедерина менее 2%.

При этом на стадии в) предлагаемого в изобретении способа предпочтительно получать экстракт с содержанием гедеракозида С, составляющим от примерно 3 до примерно 10%, прежде всего составляющим примерно 6,5%, и содержанием α-гедерина, составляющим от примерно 1 до примерно 7%, прежде всего составляющим примерно 4,0%.

Положенная в основу изобретения задача решается также с помощью экстракта, полученного предлагаемым в изобретении способом. Положенная в основу изобретения задача решается прежде всего с помощью полученного предлагаемым в изобретении способом экстракта из листьев плюща с отрегулированным содержанием гедеракозида С, составляющим от примерно 3 до примерно 10%, прежде всего составляющим примерно 6,5%, и содержанием α-гедерина, составляющим от примерно 1 до примерно 7%, прежде всего составляющим примерно 4,0%.

Преимущество предлагаемого в изобретении экстракта благодаря отрегулированному содержанию в нем обоих вышеуказанных действующих веществ состоит в том, что действующее вещество α-гедерин после введения экстракта, в котором он изначально присутствует как таковой, начинает быстро поступать в организм. Наряду с этим содержащийся в экстракте помимо α-гедерина гедеракозид С резорбируется ίη νίνο с задержкой во времени, соответственно постепенно превращается в α-гедерин, и поэтому после израсходования всего исходно присутствующего в экстракте α-гедерина в организм продолжает

- 2 012065 поступать превращенный из гедеракозида С α-гедерин. Связанное с этим преимущество заключается в увеличении продолжительности терапевтического действия экстракта, соответственно содержащего его лекарственного средства.

Этот эффект был подтвержден экспериментально. В этом отношении удалось установить, что при применении предлагаемого в изобретении экстракта, содержание в котором обоих действующих веществ - α-гедерина и гедеракозида С - было отрегулировано на значение, находящееся в указанном выше оптимальном интервале, концентрация α-гедерина в плазме крови быстро нарастала и сохранялась на постоянном уровне. Сравнительный же экстракт с более высоким содержанием гедеракозида С и более низким содержанием α-гедерина в отличие от предлагаемого в изобретении экстракта для достижения сопоставимых с ним значений концентрации α-гедерина в плазме крови требовалось вводить в организм гораздо чаще. В соответствии с этим применение предлагаемого в изобретении нового экстракта позволяет уже после однократного его введения в организм достичь такой концентрации α-гедерина в плазме крови, которой достаточно для обеспечения и длительного сохранения спазмолитического действия на бронхи.

При этом наиболее предпочтительно применять полученный предлагаемым в изобретении способом экстракт с содержанием гедеракозида С около 6,5% и содержанием α-гедерина около 4,0%.

Настоящее изобретение относится далее к применению предлагаемого в нем экстракта для получения лекарственного средства, предназначенного прежде всего для лечения заболеваний дыхательных путей, а также к лекарственному средству, содержащему предлагаемый в изобретении экстракт.

Предлагаемые в изобретении экстракты с отрегулированным содержанием в них гедеракозида С и α-гедерина наиболее предпочтительны для применения в качестве лекарственных средств благодаря возможности достижения с их помощью воспроизводимого терапевтического действия, а также благодаря первоначальному немедленному, а затем сохраняющемуся на протяжении более длительного периода времени постоянному поступлению в организм α-гедерина, представляющего собой обладающее спазмолитическим действием биологически активное вещество.

В соответствии с этим предлагаемое в изобретении лекарственное средство можно использовать для лечения заболеваний дыхательных путей, таких как инфекционно-воспалительные заболевания дыхательных путей, например пневмония, трахеит, бронхит и др., а также обструктивные и рестриктивные заболевания легких, такие как хронический бронхит, бронхиальная астма, бронхоэктазия и др., т. е. можно применять при заболеваниях дыхательных путей, при которых желательно обеспечить расслабление затронутой болезнью мускулатуры.

Лекарственное средство может быть представлено в виде капсул, таблеток, драже, суппозиториев, гранулята, порошка, растворов, паст, эмульсий, аэрозольных составов, мазей и масел. Наиболее предпочтительны при этом пероральные лекарственные формы. Лекарственное средство может также содержать вспомогательные вещества, традиционно используемые в технологии приготовления лекарственных средств. Целый ряд пригодных для применения в этих целях веществ описан, например, у А. К1ЬЬе, НапбЬоок οί Рйаттасеибса1 Ехс1р1еп18, 3-е изд., изд-во Атепсап Рйагтасеибса1 Аккоаайоп апб рйаттасеиПса1 Рге§8, 2000.

Другие преимущества изобретения вытекают из рассмотренного ниже примера его осуществления, иллюстрируемого прилагаемыми к описанию графическими материалами, на которых показана схема гидролиза гедеракозида С до α-гедерина.

Очевидно, что рассмотренные выше и представленные в последующем описании отличительные признаки изобретения можно использовать не только в их указанной в каждом конкретном случае комбинации, но и в иных сочетаниях между собой или даже индивидуально, не выходя при этом за объем настоящего изобретения.

Пример.

1. Характеристики резорбции содержащихся в листьях плюща веществ ίη νίνο (при исследовании на крысах)

По результатам исследования резорбции с использованием системы биофармацевтической классификации (СБК) было установлено, что α-гедерину присущи средние показатели всасывания (10-90%). При тех же условиях гедеракозид С не проникал сквозь мембраны, в связи с чем возможную резорбцию гедеракозида С потребовалось исследовать в пересчете на α-гедерин. С этой целью исследования резорбции проводили на крысах.

Ниже описана методика, в соответствии с которой исследовали влияние, которое введение двух различных экстрактов оказывает на концентрацию α-гедерина в плазме. Помимо этого исследовали изменение концентрации α-гедерина в плазме при однократном введении экстракта в организм в сравнении с многократным его введением в организм и при взятии проб крови в различные моменты времени после введения экстракта, а также определяли квоту резорбции α-гедерина. В экспериментах использовали два экстракта, распределение сапонинов в которых представлено ниже в табл. 1.

- 3 012065

Таблица 1. Распределение сапонинов в экстрактах

	Содержание гедеракозида С [%]	Содержание а-гедерина [%]
Экстракт А	14,5	0,9
Экстракт Б	6,5	4,0

Для внутривенного введения необходимое количество экстракта растворяли в 11%-ном (по массе) этаноле, полученный раствор фильтровали и вводили путем инъекции. При этом раствор экстракта стремились вводить в объеме, равном 2 мл (соответствующая доза: 25 мг на кг веса тела). Через 5 мин после инъекции у животных брали пробы крови. Объем каждой пробы должен был составлять примерно по 2 мл цельной крови, к которой для замедления ее свертывания добавляли ЭДТК.

Для перорального введения приготавливали суспензии экстрактов в глицерине. Животным в глотку вводили примерно по 2 мл этих суспензий (соответствующие дозы: 1000 и 166,66 мг на кг веса тела). Через 1 и 3 ч после каждого последнего введения у животных брали по 2 мл крови. Вес животных составлял в среднем около 200 г, а объем крови равнялся примерно 20 мл.

Результаты анализов приведены ниже в табл. 2.

Таблица 2. Обзорные данные о пути введения экстрактов и концентрации α-гедерина в плазме

Тип пробы	Путь введения	Вводимый экстракт	Вводимая доза [мг/кг веса тела]	Момент взятия крови	Концентрация α-гедерина в плазме [мкг/мл]
Слепая проба	не вводили	-	-	-	0,0
Сравнительная	внутривенно	А	25	через 5 мин после введения	2,3
Проба	однократно перорально	А	1000	через 1 ч после введения	3,3
Проба	однократно перорально	А	1000	через 3 ч после введения	6,3
Проба	перорально дважды в день в течение 3-х дней	А	166,66	через 1 ч после последнего введения	20,8
Сравнительная	внутривенно	Б	25	через 5 мин после введения	10,0
Проба	однократно перорально	Б	1000	через 1 ч после введения	11,1
Проба	однократно перорально	Б	1000	через 3 ч после введения	14,4
Проба	перорально дважды в день в течение 3-х дней	Б	166,66	через 1 ч после последнего введения	14,9

Гедеракозид С не удалось обнаружить ни в одной пробе. Из приведенных выше в табл. 2 данных следует, что при многократном введении экстракта с меньшим содержанием в нем α-гедерина измеренная концентрация α-гедерина в плазме была выше, чем при сравнительном введении экстракта с большим содержанием в нем α-гедерина. Этот результат удалось объяснить путем пересчета полученных значений, результаты которого представлены ниже в табл. 3.

- 4 012065

Таблица 3. Квоты резорбции при введении экстракта А (содержащего 14,5% гедеракозида С и 0,9% α-гедерина)

Тип введения/время взятия крови	Концентрация α-гедерина в плазме [мкг/мл]	Максимально достижимая концентрация (теоретическая)	Квота резорбции (%]	Максимально достижимый уровень в крови при рассмотрении общего содержания сапонинов [мкг/мл]	Квота резорбции [%]
Однократное введение/через 1 ч после введения	з.з	90	3,7	980	0,33
Однократное введение/через 3 ч после введения	6,3	90	7,0	980	0,64
Многократное введение'через 1 ч после введения	20,8	90	23,1	980	2,12

Общее содержание сапонинов рассчитывается с учетом молярных масс обоих компонентов и указано в пересчете на α-гедерин. В данном случае общее содержание сапонинов в экстракте А составляло 9,8% в пересчете на α-гедерин. Объем крови принимали при этом равным 20 мл.

Результаты расчетов для экстракта Б приведены ниже в табл. 4.

Таблица 4. Квоты резорбции при введении экстракта Б (содержащего 6,5% гедеракозида С и 4,0% α-гедерина)

Тип введения/время взятия крови	Концентрация α-гедерина в плазме [мкг/мл]	Максимально достижимая концентрация (теоретическая)	Квота резорбции [%]	Максимально достижимый уровень в крови при рассмотрении общего содержания сапонинов [мкг/мл]	Квота резорбции [%]
Однократное введение/через 1 ч после введения	11,1	400	2,8	800	1,38
Однократное введение/через 3 ч после введения	14,4	400	3,6	800	1,80
Многократное введение/через 1 ч после введения	14,9	400	3,7	800	1,86

Общее содержание сапонинов рассчитывается с учетом молярных масс обоих компонентов и указано в пересчете на α-гедерин. В данном случае общее содержание сапонинов в экстракте Б составляло 9,8% в пересчете на α-гедерин. Объем крови принимали при этом равным 20 мл.

Резюмируя сказанное выше, можно констатировать, что при многократном введении богатого αгедерином и бедного α-гедерином экстрактов концентрация α-гедерина в плазме достигает сопоставимых между собой уровней. Однако с учетом содержания гедеракозида С в обоих экстрактах и вычисленного общего содержания обоих сапонинов в пересчете на α-гедерин оба экстракта лишь незначительно различаются между собой. Основываясь на этих результатах, следует исходить из того, что ίη νίνο происходит отщепление находящегося в положении С28 остатка сахара от гедеракозида С с образованием резорбируемого α-гедерина. Этот процесс, т.е. превращение гедеракозида С в α-гедерин, графически проиллюстрирован на прилагаемой к описанию схеме.

Результаты экспериментов, подтверждающие наличие у α-гедерина в отличие от гедеракозида С спазмолитической активности ίη νίίτο, и обнаружение в плазме α-гедерина, а не гедеракозида С, позволяют исходить из того, что концентрация α-гедерина в крови в значительной мере коррелирует с подтвержденным многими клиническими исследованиями терапевтическим действием.

Поэтому при применении оптимизированного в отношении терапевтического действия экстракта концентрация α-гедерина в плазме в принципе всегда должна быстро достигать одного и того же уровня, который сохраняется и при многократном введении экстракта в организм. Этому условию удовлетворяет экстракт Б, уже через один час после введения которого в организм концентрация α-гедерина в плазме в отличие от экстракта А достигает уровня, сопоставимого с концентрацией α-гедерина в плазме после многократного введения экстракта в организм. Экстракт Б с содержанием гедеракозида С, равным 6,5%, и содержанием α-гедерина, равным 4,0%, отличался быстрым наступлением действия и воспроизводимостью терапевтического действия.

С учетом сказанного выше оптимальные для терапевтического действия пределы содержания гедеракозида С и α-гедерина в экстракте можно исходя из экстракта Б ограничить следующими значениями:

- 5 012065 гедеракозид С: 5-8%, α-гедерин: 3-5%.

2. Получение оптимизированного экстракта из листьев плюща

Отличительная особенность оптимизированного экстракта из листьев плюща состоит в том, что он имеет во всех партиях единообразный в определенных пределах состав в пересчете на его компоненты гедеракозид С и α-гедерин. При этом содержание гедеракозида С в таком экстракте должно лежать в пределах от 50 до 80 мг/г, а содержание α-гедерина - в пределах от 30 до 50 мг/г. Для соблюдения указанных спецификаций между собой смешивали несколько экстрактов. Однако экстракты, получаемые традиционным способом, лишь условно пригодны для применения в подобных процессах смешения изза часто недостаточно высокого содержания в них соответствующего действующего вещества.

Ниже описаны методы экстракции, каждый из получаемых которыми экстрактов из листьев плюща отличается высоким содержанием одного из двух гедеросапонинов, соответственно другой из которых одновременно с этим содержится в экстракте лишь в исключительно малых количествах.

а) Получение богатого α-гедерином экстракта

При экстракционной обработке листьев плюща этим методом необходимой предпосылкой для регулирования соотношения между гедеракозидом С и α-гедерином является целенаправленное отщепление в процессе экстракции находящегося в положении С28 остатка сахара от гедеракозида С. Поскольку превращение гедеракозида С в α-гедерин, по существу, происходит количественно, в качестве исходного материала для получения богатого α-гедерином экстракта пригодна практически любая партия листьев плюща.

После проверки качества продукции отделом контроля качества и получения от него разрешения на выпуск продукции часть лекарственного растительного сырья (листья плюща ΌΛΟ) подвергали интенсивному измельчению в мельнице и затем измельченный материал просеивали через сито для гарантированного отсеивания тех кусочков, размер которых превышал максимально допустимый размер, равный 2x2 мм. Просеянный материал дополнительно проверяли визуально на наличие в нем более крупных кусочков и посторонних примесей.

К измельченному образцу добавляли водный компонент в количестве, приходящемся на 6 частей экстрагента (этанол в концентрации 30% (мас.)). Эту смесь ферментировали в течение 60 мин при 30°С, периодически перемешивая ее.

После этого добавляли 96%-ный этанол в количестве, приходящемся на 6 частей экстрагента, и смесь гомогенизировали путем ее перемешивания.

После 6-часовой стадии предварительного набухания элюат отделяли, а оставшееся лекарственное растительное сырье перколировали остальными 6 частями экстрагента.

Объединенные элюаты для удаления из них мелких частичек лекарственного растительного сырья еще раз фильтровали и гомогенизировали, после чего сушили в пленочном выпарном аппарате при температуре 55°С и давлении 150 мбар до получения сгущенной массы. Эту массу гомогенизировали и затем подвергали распылительной сушке при температуре в интервале от 45 до 60°С, получая сухой экстракт из листьев плюща.

Для проверки этого способа получения экстракта получали следующие экстракты. Из листьев плюща с 3,91%-ным содержанием в них гедеракозида С и 0,20%-ным содержанием α-гедерина получали один экстракт традиционным способом (измельчение высушенного образца с непосредственным последующим смешением с 30 мас.% этанола и экстракцией) и один экстракт новым способом. Результаты хроматографического анализа этих экстрактов на содержание в них α-гедерина и гедеракозида С приведены ниже в табл. 5.

Таблица 5. Содержание α-гедерина и гедеракозида С в экстрактах

	а-Гедерин (%)	Г едеракозид С (%)	Общее содержание сапонинов, рассчитанное в виде гедеракозида С (%)
Традиционный способ	0,53	8,68	9,54
Новый способ	4,74	0	7,71

Из приведенных в таблице данных следует, что при экстракции новым способом содержащийся в листьях плюща гедеракозид С удалось полностью превратить в α-гедерин.

Поскольку и общее содержание сапонинов, рассчитанное в виде гедеракозида С, имеет тот же порядок величин, зная соответствующую концентрацию сапонинов в лекарственном растительном сырье и учитывая коэффициент обогащения экстракта α-гедерином, равный примерно 2-3, можно оценить конечное содержание α-гедерина в экстракте.

В соответствии с этим для превращения в α-гедерин только некоторой части содержащегося в лекарственном растительном сырье гедеракозида С ферментации в воде можно подвергать только определенную долю лекарственного растительного сырья, не изменяя при этом все остальные параметры процесса экстракции. После 60-минутной ферментации этого некоторого количества лекарственного расти

- 6 012065 тельного сырья к нему затем для 6-часового предварительного набухания добавляют остальное количество лекарственного растительного сырья и этанол. Зная соответствующую концентрацию сапонинов в лекарственном растительном сырье и учитывая коэффициент обогащения экстракта α-гедерином, равный примерно 2-3, можно оценить конечное содержание α-гедерина в экстракте.

Таким образом, с помощью предлагаемого в изобретении способа за счет предусмотренной в нем стадии ферментации можно целенаправленно варьировать состав сухого экстракта из листьев плюща без значительных затрат времени и средств. Целенаправленное регулирование содержания α-гедерина в сухом экстракте, соответственно лекарственном средстве положительно сказывается на эффективности экстракта, учитывая помимо прочего многочисленные публикации о действенности α-гедерина.

б) Получение из листьев плюща сухих экстрактов с повышенным содержанием в них гедеракозида С

В данном случае при экстракционной обработке листьев плюща необходимой предпосылкой для регулирования соотношения между гедеракозидом С и α-гедерином является целенаправленное подавление в процессе экстракции отщепления находящегося в положении С28 остатка сахара от гедеракозида С. При выборе партии лекарственного растительного сырья необходимо следить за тем, чтобы на переработку попадали листья с низким содержанием в них α-гедерина. При этом рекомендуется использовать листья с содержанием в них α-гедерина менее 0,5% в пересчете на высушенное лекарственное растительное сырье.

Анализ гомогенного образца листьев плюща показал следующее содержание в них обоих сапонинов:

гедеракозид С: 6,37%, α-гедерин: 0,85%.

Из такого лекарственного растительного сырья получали по три экстракта проведением экстракции в соответствии со следующей методикой.

г высушенного и измельченного до кусочков размером около 3x3 мм лекарственного растительного сырья в течение нескольких секунд обрабатывали горячим водяным паром. После этого обработанное таким путем лекарственное растительное сырье в течение примерно 6 ч подвергали предварительному набуханию в присутствии 18 г экстрагента (этанол в концентрации 30 мас.% Оставшееся после слива мисцеллы лекарственное растительное сырье дополнительно перколировали 18 г экстрагента. Эту мисцеллу сушили в вакуумном сушильном шкафу. В другом варианте сушку можно проводить, например, в пленочном выпарном аппарате при температуре 55°С и давлении 150 мбар с последующей распылительной сушкой при 45-60°С.

Температуру в процессе экстракции предпочтительно поддерживать в интервале от примерно 20 до примерно 40°С, прежде всего на уровне примерно 30°С. Соотношение между лекарственным растительным сырьем и экстрагентом составляет при этом, например, 1:12.

Результаты анализа полученных таким путем экстрактов приведены ниже в табл. 6.

Таблица 6. Содержание гедеракозида С и α-гедерина в обработанных паром экстрактах

Образец	Содержание гедеракозида С (%)	Содержание а-гедерина (%)	Содержание гедерасапонинов, рассчитанное в виде гедеракозида С (%)
Исходное лекарственное растительное сырье	6,37	0,85	7,75
Обработанный паром экстракт 1	14,33	0,85	15,71
Обработанный паром экстракт 2	14,26	0,85	15,64
Обработанный паром экстракт 3	14,57	0,71	15,72

Согласно приведенным в таблице данным содержание α-гедерина в полученном по описанной выше методике сухом экстракте из листьев плюща соответствовало максимально содержавшемуся в исходных листьях количеству α-гедерина. В целом же таким путем получили стабильные при хранении экстракты с высоким содержанием в них гедеракозида С и очень низким содержанием α-гедерина. При применении партий листьев плюща с содержанием α-гедерина ниже 0,5% максимальное содержание αгедерина в полученном экстракте также можно принять равным 0,5%.

в) Смешение обоих обогащенных экстрактов

Описанными в пп.2а) и 2б) методами экстракции из листьев плюща можно получать экстракты, каждый из которых обогащен только одним из двух гедерасапонинов.

Из обоих обогащенных тем или иным гедерасапонином экстрактов в завершение приготавливают смесь с получением готового специального экстракта с содержанием в нем гедеракозида С в пределах от

- 7 012065 до 8% и содержанием α-гедерина в пределах от 3 до 5%.

Пример.

часть экстракта А с содержанием α-гедерина около 7,5% + часть экстракта Б с содержанием гедеракозида С около 13,0% и содержанием α-гедерина 0,5% экстракт с содержанием гедеракозида 6,5% и содержанием α-гедерина 4,0%.

Очевидно, что это уравнение каждый раз необходимо согласовывать с конкретным содержанием гедерасапонинов в обоих обогащенных ими экстрактах, однако в принципе концентрацию гедерасапонинов можно также отрегулировать в обоих обогащенных ими экстрактах на указанные выше в примере значения смешением между собой различных экстрактов с различной степенью обогащения их одним или другим гедерасапонином.

В соответствии со сказанным выше полученный предлагаемым в изобретении способом экстракт можно использовать для приготовления на его основе лекарственного средства, которое уже при однократном его применении обеспечивает очень быстрое поступление в организм собственно действующего вещества (α-гедерина). Одновременно с этим высокое содержание в лекарственном средстве гедеракозида С позволяет длительно поддерживать высокий уровень α-гедерина в плазме крови, поскольку гедеракозид С непрерывно превращается в организме в α-гедерин.

Тем самым отпадает необходимость в многократном приеме лекарственного средства, что улучшает соблюдение пациентом режима и схемы лечения. Одним из показаний к применению экстрактов плюща являются заболевания дыхательных путей, часто встречающиеся у детей. Поскольку дети зачастую неохотно принимают лекарства, предлагаемое в изобретении лекарственное средство позволяет достичь необходимого терапевтического эффекта при менее частом его применении.

Claims (9)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ получения из листьев плюща экстракта для лечения заболеваний дыхательных путей, содержащего действующие вещества гедеракозид С и α-гедерин, заключающийся в том, что:

   а) подготавливают первый, богатый α-гедерином экстракт, для этого содержащийся в природном плюще гедеракозид С превращают в α-гедерин;

   б) подготавливают второй, богатый гедеракозидом С экстракт, для этого создают препятствия или ограничения для превращения гедеракозида С в α-гедерин и

   в) первый и второй экстракты смешивают между собой с получением экстракта с отрегулированным содержанием в нем гедеракозида С и отрегулированным содержанием α-гедерина, при этом содержание α-гедерина в богатом им экстракте составляет по меньшей мере 3%, содержание гедеракозида С в богатом им экстракте составляет по меньшей мере 5%, а отрегулированное содержание гедеракозида С в экстракте, полученном на этапе (в), составляет от примерно 3 до примерно 10%, а содержание α-гедерина - от примерно 1 до примерно 7%.
2. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что содержание α-гедерина в богатом им экстракте составляет по меньшей мере 5%.
3. 3. Способ по одному из пп.1 и 2, отличающийся тем, что содержание гедеракозида С в богатом им экстракте составляет по меньшей мере 10%, а содержание α-гедерина составляет менее 2%.
4. 4. Способ по одному из пп.1-3, отличающийся тем, что отрегулированное содержание гедеракозида С в получаемом на стадии в) экстракте составляет около 6,5%, а отрегулированное содержание αгедерина - около 4,0%.
5. 5. Экстракт, полученный способом по одному из пп.1-4.
6. 6. Экстракт по п.5, отличающийся тем, что содержание в нем гедеракозида С составляет по меньшей мере 4%, а содержание α-гедерина составляет по меньшей мере 2%.
7. 7. Экстракт по п.5 или 6, отличающийся тем, что содержание в нем гедеракозида С составляет 6,5%, а содержание α-гедерина - 4,0%.
8. 8. Применение экстракта по одному из пп.5-7 для получения лекарственного средства для лечения заболеваний дыхательных путей.
9. 9. Лекарственное средство для лечения заболеваний дыхательных путей, содержащее экстракт по одному из пп.5-7.