DK175760B1 - 11beta-substituerede progesteronanaloger - Google Patents

Description

i DK 175760 B1

Den foreliggende opfindelse angår generelt steroidområdet og narmere bestemt hidtil ukendte 11/5-subst i tuerede 19-norproge-steronanaloger, som besidder ant i progesta't i ona 1 eller progestational aktivitet.

5

Oer er blevet foretaget mange tidligere forsøg i løbet af de sidste få tiår på at fremstille steroider med antihormonal aktivitet. Dette har været rimeligt successfuldt for så vidt angår antiøstrogener og antiandrogener. Opdagelsen af effektive 10 antiprogestationale og antiglucocorticoide steroider har imidlertid vist sig at være en overordentlig stor opgave for steroidkemikeren. Det har imidlertid været alment erkendt i nogle år, at antiprogestationale steroider ville finde bred anvendelighed til befolkningsregulering, mens antiglucocorticoider 15 ville være overordentligt værdifulde ved behandling af f.eks. Cushings syndrom og andre tilstande, som er karakteriseret ved umådeholden stor endogen produktion af cortison. I det sidste tiår er der, i høj grad takket være indsatsen af Teutsch et al. i Roussel-Uclaf-gruppen i Frankrig, blevet syntetiseret 20 en ny serie af 19-nortestosteronderivater med stærk affinitet for progesteron- og glucocorticoidreceptorer og med markant ant iprogestationa1 og antiglucocorticoid aktivitet in vivo. Denne vigtige opdagelse afslørede eksistensen af en lomme i progesteron/cortison-receptorerne, som er i stand til at huse 25 en stor Ιΐβ-substituent på udvalgte 19-nortestosteronderiva-ter. Ved passende udvælgelse af en sådan substituent blev der opnået steroider med anti hormona 1e egenskaber.

Pionerundersøgelserne af Teutsch et al. af syntesen af anti-30 progestationa1e og antiglucocorticoide steroider er opsummeret i et nyere tidsskrift (6. Teutsch i Adrenal Steroid Antagonism, udgiver Μ. K. Agarwal, Walter de Gruyter og Co., Berlin, 1984 side 43-75), hvori beskrives det arbejde, der førte til opdagelsen af RU-38.486 (I), det første steroid af denne type, 35 der blev udvalgt til klinisk udvikling. Se fig. 1. RU-38.486 eller mefipriston viste sig at være et effektivt antiprogesta-tionalt/kontragestativt middel ved indgivelse i de tidlige fa-

I DK 175760 B1 I

I i

I ser af graviditet (IPPF Medical Bulletin 20, nr. 5, 1986). Ud I

over disse antiprogestationale egenskaber havde mefipriston en I

meget signifikant antiglucocorticoid aktivitet og blev med I

success anvendt af Nieman et al., (J. Cl in. Endocrinology Me- I

H 5 tab., 61:536, 1985) ved behandling af Cushings syndrom. I lig- I

H hed med langt de fleste steroidhormonanaloger udviser mefipri- I

ston endvidere en række biologiske egenskaber. Således udviser I

H mefipriston f.eks. vækstinhi berende egenskaber overfor østro- I

gen-ufølsomme T470co-human-brystcancercel1 er (Horwitz, Endo- I

I 10 crinology, 116:2236, 1985). Eksperimentelle vidnesbyrd anty- I

der, at de metaboliske produkter hidrørende fra mefipriston I

H bidrager til dets antiprogestationale og antiglucocorticoide I

egenskaber (Heikinheimo et al., J. Steroid Biochem., 26:279, I

I 1987). I

I 15 I

Der er blevet foretaget en række forsøg blandt forskellige I

fagfolk på at modificere mefi pristonstrukturen med henblik på I

at opnå adskillelse af den antiprogestationale aktivitet og I

den antiglucocorticoide aktivitet. Således har Schering-grup- I

I 20 pen (Steroids 44:349-519, 1984) beskrevet mefipristonanaloger I

med betegnelsen ZK 98.299 (II) og ZK 98.734 (III). Se fig. 1. I

Mefipriston er det mest aktive antiglucocorticoidsteroid i I

forhold til dets antigestagene styrke, mens steroid (III) er I

det mindst aktive. Steroid (II) har en mellemposition i denne I

25 henseende. I

H Sammenligning af de kontragestative egenskaber hos disse tre I

H antiprogestationale steroider (Elger et al., J. Steroid Bio- I

chem., 25:835, 1986) har ikke kun afsløret forskellige endo- I

I 30 krinologiske profiler, men har angivet den kritiske betydning I

I af forholdet mellem antiglucocorticoid til antiprogestational I

aktivitet til den biologiske aktivitet. Det synes således I

I uundgåeligt, at det vil være nødvendigt at udvikle en serie af I

beslægtede strukturer, der udviser en graduering af antiproge- I

35 stationale/antiglucocorticoide egenskaber med henblik på at I

tilvejebringe kontragestative/antiglucocorticoide/antitumor- I

I produkter bestemt til specifikke, kliniske situationer. Uhel- I

3 DK 175760 B1 digvis har området endnu ikke nået det trin, hvor nøjagtige forudsigelser af biologiske egenskaber på basis af kemiske strukturer kan foretages, således at en grad af impiri er uundgåelig.

5

Der fortsætter med at være et behov for udviklingen af hidtil ukendte steroider med varierende grader af antiprogestationale og antiglucocorticoide aktiviteter.

EP-A-0 129 499 beskriver 13of-alkyl-l 7/3-(3-acyloxypropyl)gonaner med en αεί 0 konfiguration ved C/D ringforbindelsesstedet.

FR-A-2 586 021 beskriver forbindelser med en 3-ceto-A-4,9-19-nor-steroidstruktur, som kan have antiandrogene, antiprogestomimetiske eller progestomimetiske egenskaber.

15

Steroids 44, 1984, side 349-372 beskriver steroider med antiprogestationale og antiglucocorticoide aktiviteter.

Beskrivelse af opfindelsen 20

Det er følgelig et formål med den foreliggende opfindelse at tilvejebringe hidtil ukendte steroidforbindelser med antiprogestationale og/eller antiglucocorticoide egenskaber. I

Det er også et formål med opfindelsen at tilvejebringe hidtil ukendte steroider med 25 progestational såvel som antiprogestational aktivitet.

i

Disse og andre formål, som vil blive åbenlyse ud fra den følgende beskrivelse, opnås j ved de foreliggende 11 /3-aryl-19-nor-progesteronforbindelser med formlen CH, * * T^Vl co .

30 a* w* -------------

I DK 175760 B1 I

I 4 i

I hvor I

I (i) (1) R1 er 0C(0)CH3 eller 0C(0)R5, hvor R5 er C2.8alkyl, C2.8alkenyl, C2.8alkynyl el- I

I ler aryl, R2 er H, R3 er H, CMalkyl, C^alkenyl eller C^alkynylj R4 er H, CH3, F eller I

I 5 Cl, R6 er H, (CH3)2N, CH30, CH3CO, CH3S, CH3SO, CH3S02 og X er O eller I

I NOCH3; eller - I

I (i) (2) R1 er C^alkenyl eller C2^alkynyl, R2 er H, R3 er H, CMalkyl, C^alkenyl eller I

I C^alkynyl, R4 er H, CH3, F eller Cl, R6 er H, (CH3)2N, CH30, CH3CO, CH3S, CH3SO, I

I 10 CH3S02 og X er O eller NOCH3; eller I

I (i) (3) R1 er CMalkyl, R2 er H, R3 er H, CMalkyl, C^alkenyl eller C^alkynyl, R4 er Η, I

I CH3, F eller Cl, R6 er H, CH3CO, CH30, (CH3)2N, CH3S, CH3SO, CH3S02 og X er O I

I eller NOCH3; eller I

I 15 I

I (i) (4) R1 er H eller CMalkyl, R2 er H, R3 er CMalkyl, C2^alkenyl eller C^alkynyl, R4 I

I er H, CH3, F eller Cl, R6 er H, (CH3)2N, CH30, CH3CO, CH3S, CH3SO, CH3S02, og X I

I er O eller NOCH3; eller I

I 20 (ii) R1 og R2 taget sammen er en carbon-carbonbinding, R3 er H, CMalkyl, C^alkenyl I

I eller C^alkynyl, R4 er H, CH3, F eller Cl, R6 er H, (CH3)2N, CH30, CH3CO, CH3S, I

I CH3SO eller CH3S02, og X er O eller NOCH3; eller I

I (iii) R1 og R3 taget sammen er -CH2- eller -N=N-CH2-, R2 er H, R4 er H, CH3, F eller I

I 25 Cl, R6 er H, (CH3)2N, CH30, CH3CO, CH3S, CH3SO eller CH3S02, og X er O eller

I NOCH3; eller I

(iv) R2 og R3 taget sammen er =CH2, R1 er H, CMalkyl, C2^alkenyl eller C^alkynyl, I

2

I R4 er H, CH3, F eller Cl, R6 er H, (CH3)2N, CH30, CH3CO, CH3S, CH3SO eller I

3

I 30 CH3S02, og X er O eller NOCH3. I

5 DK 175760 B1

Kort beskrivelse af tegningerne

En mere fuldstændig forståelse af opfindelsen og mange af de ledsagende fordele derved vil let opnås, efterhånden som opfindelsen bedre forstås ved reference til den føl-5 gende. detaljerede beskrivelse ved betragtning sammen med den ledsagende tegning, hvor: -° fig. 1 viser strukturerne af de kendte forbindelser ZK 95.890, ZK 98.734 og ZK 98.299, og 10 fig. 2 strukturerne af forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse.

Bedste måde at udøve opfindelsen 15 Forskning inden for dette område har beskæftiget sig med 11β-aryl-19-nortestosteronanaloger, hvori 17/J-s t i 11 i ngen (eller 17asti11 ingen i de inverterede forbindelser, såsom III) er substitueret med en hydroxylgruppe. Ifølge den foreliggende opfindelse tilvejebringes for det første hidtil ukendte 11β-ary1-19-norprogesteronanaloger, hvori 17ø-sti 11 i ngen er sub-20 stitueret med en acetylgruppe. De resulterende forbindelser er generelt karakteriserede ved stærk bindingsaffinitet til pro-. gesteron- og glucocorticoidreceptorerne. Forskning indenfor denne serie af strukturer har imidlertid endnu ikke gjort det muligt at forudsige naturen af den biologiske aktivitet på basis af strukturen og bindingsaffiniteten til progesteron- og 25 glucocorticoidreceptorerne. I modsætning til kendt teknik, hvori det anvises, at i lip-aryl-19-nortestoster6nserierne fører en Ιΐβ-aryl sUbstituent, f.eks. 11β-(4-N,N-di methylami-nophenyl ), til antiprogestationa1 aktivitet, har det således overraskende vist sig i Ιΐβ-ary1-19-norprogesteronerne ifølge den foreliggende opfindelse at stærk binding til progesteron-30 receptoren kan føre til enten antiprogestational eller progestational aktivitet in vivo. Således udviser 17a-acetoxystruk-turerne IV (fig. 2) (Ri = OAc, R2 = R3 = H, R4 = H eller CH3,

I DK 175760 B1 I

I 6 I

B R6 = Μβ2Ν, X = D) og 16a-ethylstrukturerne IV (R* = R2 = H, R3 I

I = Et, R4 = H eller CH3, R6 = Me2N, X = 0) begge stærk binding I

til progesteronreceptoren. De førstnævnte forbindelser bloke- I

B rer virkningen af progesteron ved administration in vivo, I

B 5 hvorimod de sidstnævnte forbindelser overraskende viser kraf- B

B tig progestational aktivitet in vivo. B

B I 19-progesteronserierne er der endvidere ikke altid den for- B

B ventede sammenhæng mellem binding til progesteronreceptoren og B

B 10 in vivo aktiviteten. Således bindes Δ-16-forbindelsen IV B

B (Rl,R2 = dobbeltbinding, R3 = r4 - h, R6 = Μβ2Ν, X = 0) rela- B

B tivt svagt til progesteronreceptoren, men ved anvendelse in B

B vivo udviser den stærk antiprogestational aktivitet. B

B 15 De Ιΐβ-substituerede norprogesteronanaloger ifølge den fore- B

B 1iggende opf i ndel se omfatter forbi ndel ser med de nedenfor vi - B

B ste strukturer A-C. B

B CHa CHj B

B 1 R« ^ i B

I 20 r3 I

B B

I I

I ^ ^ I

B I

I I

B 35 Forbindelserne med struktur A indeholder alle en 160-hydrogen- B

I substituent (R2) og en 17/3-acety 1 subst i tuent. Ιδα-substituen- B

I ten (R3) kan være hydrogen, Cj_4 alkyl, C2-4 alkenyl eller I

DK 175760 B1 I

C2-4 alkynyl. 17a-substituenten (R1) kan være methyl, C2-4 I

alkyl, C2-4 alkenyl, C2-4 alkynyl, hydroxyl, 0C{0)CH3 (0-ace- I

tyl) eller 0C(0)R5, hvor R5 er C2-e alkyl, C2-e alkenyl, C2_g I

alkynyl eller aryl. 17a- og 16o-subst i tuenterne R1 og R3 kan I

5 alternativt tilsammen være -CH2- eller -N=N-CH2-. I

Foretrukne forbindelser med struktur A er sådanne, hvori R6 er I

N,N-di methyl ami no eller acetyl. Yderligere foretrukne forbin- I

delser er sådanne, hvori R* er hydrogen eller methyl, og Ri er I

10 en acetoxy- eller C2-g alkynylgruppe. Specifikke eksempler på I

forbindelser med struktur A er 17a-acetoxy-6a-methy1-110-(4- I

N,N-di methyl aminophenyl)-19-norpregna-4,9-dien-3,20-dion, 17α- I

acetoxy-11/8- (4-N,N-di methy lami nophenyl)-19-norpregna-4,9-dien- I

3.20- dion, 16a-ethyl-llb-(4-N,N-dimethylaminophenyl}-19-nor- I

IS pregna-4,9-dien-3,20-dion, 16a-ethy1-6a-methy1-11β—(4-N,N-di - I

methylaminophenyl)-19-norpregna-4,9-dien-3,20-dion, 17a-ethy- I

ny1-ΙΙβ-(4-N,N-dimethylaminophenyl)-19-norpregna-4,9-dien- I

3.20- dion, ll/3-(4-N,N-dimethylaminophenyl)-19-norpregna-4,9- I

dien-3,20-dion, 11/3-(4-acetylphenyl)-19-norpregna-4,9-dien- I

20 3,20-dion, 17a-acetoxy-110-(4-acetylphenyl)-19-norpregna-4,9- I

dien-3,20-dion og 17a-ethynyl-11/3-( 4-acety 1 phenyl)-19-norpregna-4,9-dien-3,20-dion.

Forbindelser med struktur B udviser en carbon-carbon dobbelt-25 binding mellem C16 og C17. R3, R*, R6 og X kan være hvilke som helst af de ovenfor definerede grupper. Foretrukne forbindelser med struktur B er forbindelser, hvori R6 er en N,N-dime-thylamino- eller en acetylgruppe. Yderligere foretrukne forbindelser med struktur B er sådanne, hvori R3 er H, og R4 er H 30 eller CH3. Specifikke eksempler på sådanne forbindelser omfatter ll/3-(4-N,N-dimethylaminophenyl) -19-nor pr egna-4,9,16-trien- 3.20- dion og ll/3-(4-acetylphenyl)-19-norpregna-4,9,16-trien- 3.20- dion.

35 I forbindelser med struktur C er R3 og R3 tilsammen en =CH2-gruppe. Foretrukne eksempler omfatter forbindelser, hvori Ri er acetoxy eller C2-8 alkynyl, R* er hydrogen eller methyl, og R6 r di methyl ami no eller acetyl.

DK 175760 B1 I

I 8 I

H Foretrukne arylgrupper for R® i forbindelserne A-C har formlen I

-C6H4-R6, hvori R® har den samme betydning som defineret oven- I

I I

H 5 Steroider med progestational, antiprogestational og/eller an- I

ti glucocorticoid aktivitet finder anvendelse ved reguler i ngaf I

fertilitet hos mennesker og ikke-humane pattedyr, såsom prima- I

ter, kæledyr og 1 andbrugsdyr, og ved behandling af medicinske I

tilstande hos dyr eller mennesker, hvori disse aktiviteter er I

I 10 gavnlige. Således kan de være anvendelige ved behandling af I

tilstande, såsom Cushings syndrom, gi aukom, endometri ose, præ- I

menstruelt syndrom og cancer, ud over deres anvendelse til I

I forplantningskontrol. I

I 15 Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse kan indgives I

I ved en række metoder. Således kan sådanne produkter ifølge op- I

H findelsen, som er aktive via den orale vej, indgives i opløs- I

I ninger, suspensioner, emulsioner, tabletter, herunder sublin- I

I guale og intrabukkale tabletter, bløde gelatinekapsler, herun- I

I 20 der opløsninger, der anvendes i bløde gelatinekapsler, vandige I

suspensioner eller oliesuspensioner, emulsioner, piller, su- I

I getabletter, pastiller, tabletter, sirupper eller eliksirer og I

lignende. Produkter ifølge opfindelsen, som er aktive ved pa- I

renteral administration, kan indgives ved depot injektion, im- I

I 25 plantationsformer, herunder Silastic® og bionedbrydelige im- I

I plantationsformer, intramuskul ære og intravenøse injektioner. I 1

Præparater kan fremstilles ifølge en hvilken som helst metode, I

I som er kendt inden for området til fremstilling af farmaceuti- I

I 30 ske præparater, og sådanne præparater kan indeholde et eller I

I flere midler valgt blandt sødemidler, aromamidler, farvemidler I

I og konserveringsmidler. Tabletter indeholdende den aktive be- I

I standdel i blanding med ikke-toksiske, farmaceutisk acceptable I

I excipienser, som er egnede til fremstilling af tabletter, er I

I 35 acceptable. Disse excipienser kan f.eks. være inerte fortyn- I

I dingsmidler, såsom calciumcarbonat, natriumcarbonat, lactose, I

I calciumphosphat eller natriumphosphat; granulerings- og spræn- I

9 DK 175760 B1 gemidler, såsom majsstivelse eller alginsyre; bindemidler, såsom stivelse, gelatine eller akacie; og gi i ttem idler, såsom magnesiumstearat, stearinsyre eller talkum. Tabletter kan være uovertrukne eller kan være overtrukne ved hjælp af kendte tek-5 nikker for at forsinke henfald og adsorption i mavetarmkanalen og derved tilvejebringe en vedholdende virkning i et længere tidsrum. F.eks. kan der anvendes et tidsforsinkende materiale, såsom glycerylmonostearat eller glyceryldistearat alene eller sammen med en voksart.

10

Formuleringer til oral anvendelse kan også fremstilles i form af hårde gelatinekapsler, hvori den aktive bestanddel er blandet med et inaktivt, fast fortyndingsmiddel, f.eks. calcium-carbonat, calciumphosphat eller kaolin, eller i form af bløde 15 gelatinekapsler, hvori den aktive bestanddel er blandet med vand eller et oliemedium, såsom jordnøddeolie, flydende paraffin eller olivenolie.

Vandige suspensioner ifølge opfindelsen indeholder de aktive 20 materialer i blanding med excipienser, som er egnede til fremstilling af vandige suspensioner. Sådanne excipienser omfatter et suspenderingsmiddel, såsom natriumcarboxymethylcellulose, methylcellulose, hydroxypropylmethy1 cel 1ulose, natriumalginat, polyvinylpyrrolidon, tragantgummi og akaciegummi, og disperge-25 rings- eller befugtningsmidler, såsom naturligt forekommende phosphatid (f.eks. lecithin), et kondensationsprodukt af et alkylenoxid med en fedtsyre (f.eks. polyoxyethylenstearat), et kondensationsprodukt af ethylenoxid med en langkædet, alifa-tisk alkohol (f.eks. heptadecaethy1enoxycetano1), et kondensa-30 tionsprodukt af ethylenoxid med en partiel ester, som er afledt fra en fedtsyre og en hexitol (f.eks. polyoxyethylensorbitol-monooleat) eller et kondensationsprodukt af ethylenoxid med en partiel ester, som er afledt fra fedtsyre og hexitolanhydrid (f.eks. polyoxyethylensorbitanmonooleat). Den vandige suspen-35 sion kan også indeholde et eller flere konserveringsmidler, såsom ethyl- eller n-propyl-p-hydroxybenzoat, et eller flere farvemidler, et eller flere aromamidler samt et eller flere

I DK 175760 B1 I

I

H sødemidler, såsom saccharose, aspartam eller saccharin. Øjen- I

formuleringer, som det er kendt indenfor området, skal ind- I

H stilles til osmotisk tryk. I

H 5 Oliesuspensioner kan formuleres ved at suspendere dert aktive I

bestanddel i en vegetabilsk olie, såsom arachisolie, oliven- I

olie, sesamolie eller kokosnødolie, eller i en mineralolie, I

såsom flydende paraffin. Oliesuspensionerne kan indeholde et I

fortykkelsesmiddel, såsom bivoks, hårdt paraffin eller cetyl- I

10 alkohol. Sødemidler kan tilsættes for at give et velsmagende I

oralt præparat. Oisse præparater kan konserveres ved tilsæt- I

ning af et antioxidationsmiddel, såsom ascorbinsyre. I

Dispergerbare pulvere og granule ifølge opfindelsen, som er I

15 egnet til fremstilling af en vandig suspension ved tilsætning I

af vand, kan formuleres ud fra de aktive bestanddele i blanding I

med et dispergerings-, suspenderings- og/eller befugtningsmid- I

del samt.et eller flere konserveringsmidler. Eksempler på eg- I

nede dispergerings- eller befugtningsmidler og suspenderings- I

I 20 midler er sådanne, som er beskrevet ovenfor. Yderligere exci- I

I pienser, f.eks. søde-, aroma- og farvemidler, kan også være I

I til stede. I

Oefarmaceutiske præparater ifølge opfindelsen kan også være i I

I 25 form af olie-i-vand-emulsioner. Oliefasen kan være en vegeta- I

I bilsk olie, såsom olivenolie eller arachisolie, en mineral- I

I olie, såsom flydende paraffin, eller en blanding af disse. Eg- I

I nede emulgeringsmidler omfatter naturligt forekommende gum- I

I miarter, såsom akaciegummi og tragantgummi, naturligt forekom- I

30 mende phosphati der, såsom sojabønnelecithin, estere af partielle I

I estere, som hidrører fra fedtsyrer og hexitolanhydrider, såsom I

I sorbitanmonooleat, og kondensationsprodukter af disse partielle I

I estere med ethylenoxid, såsom polyoxyethylensorbitanmonooleat. I

I Emulsionen kan også indeholde søde- og aromamidler. I

I 35 I

I Sirupper og eliksirer kan formuleres med sødemidler, såsom I

I glycerol, sorbitol eller saccharose. Sådanne formuleringer kan I

I 1 I

I I

I I

DK 175760 B1

U

også indeholde et demu1 ger ingsmiddel (eng: demulcent), et konserveringsmiddel, et aroma- eller farvemiddel.

De farmaceutiske præparater ifølge opfindelsen kan være i form 5 af et sterilt injektionspræparat, såsom en steril, injicerbar vandig emulsion eller oliesuspension. Denne suspension kan formuleres ifølge kendt teknik under anvendelse af sådanne velegnede dispergerings- eller befugtningsmidler og suspenderingsmidler, som er omtalt ovenfor. Det sterile injektionspræ-10 parat kan også være en steril, injicerbar opløsning eller suspension i et ikke-toksisk parenteralt acceptabelt fortyndingsmiddel eller opløsningsmiddel, såsom en opløsning af 1,3-butan-diol. Blandt de acceptable vehikler og opløsningsmidler, som kan anvendes, er vand og Ringers opløsning, en i sotonisk na-15 triumchloridopløsning. Sterile, ikke-flygtige olier kan desuden konventionelt anvendes som et opløsningsmiddel eller suspenderingsmedium. Til dette formål kan der anvendes en hvilken som helst mild, ikke-flygtig olie, herunder syntetiske monoeller diglycerider. Endvidere kan fedtsyrer, såsom oleinsyre, 20 ligeledes anvendes ved fremstilling af injektionspræparater.

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse kan også indgives i form af suppositorier til rektal administration af lægemidlet. Disse præparater kan fremstilles ved blanding af 2 5 lægemidlet med en egnet, ikke-irriterende exe i pi ens, som er fast ved stuetemperatur, men flydende ved rektale temperaturer og derfor vil smelte i rektum til frigivelse af lægemidlet. Sådanne materialer er kakaosmør og polyethylenglycoler.

30 Præparaterne kan også indgives intranasalt, intraoku1 ært, in-travaginalt og intrarektalt, indbefattende suppositorier, insufflations-, pulver- og aerosolformuleringer.

Produkter ifølge opfindelsen, som fortrinsvis indgives via den 35 topiske vej, kan indgives som applikatorsticks, opløsninger, suspensioner, emulsioner, geler, cremer, salver, pastaer, geleer, penslinger, pulvere og aerosoler.

DK 175760 B1 I

Produkter med antiglucocorticoid aktivitet er af særlig værdi I

i patologiske tilstande, som er karakteriseret ved overflod af I

endogent glucocorticoid, såsom Cushings syndrom, hirsutisme og I

især i forbindelse med adrenogenitalt syndrom, okkulære til- I

5 stande i forbindelse med glucocorticoidoverskud, såsom glau- I

kom, stresssymptomer forbundet med overmåde glucocorticoidse- I

kretion og lignende. I

Produkter med progestational aktivitet er af særlig værdi som I

10 progestationale midler, ovulationsinhibitorer, menstruations- I

regulerende midler, svangerskabsforbyggende midler, midler til I

synkronisering af fertile perioder hos kvæg, midler mod endo- I

metriose og lignende. Ved anvendelse til svangerskabsforebyg- I

gende formål kan de hensigtsmæssigt være blandet med østrogene H

15 midler, såsom f.eks. ethynylestradiol eller estradiolestere. I

Produkter med ant i progestational aktivitet er karakteriseret I

ved at antagonisere progesterone virkninger. Som sådan er de I

af særlig værdi til regulering af hormonale uregelmæssigheder H

20 i menstruationscyklus og til synkronisering af fertile peri- I

oder hos kvæg. I

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan anvendes til regulering I

af fertilitet under hele forplantningscyklusen. De er af sær-

25 lig værdi som postcoitale svangerskabsforebyggende midler, til I

at gøre livmoderen ugunstig for implantation og som "en gang

om måneden" svangerskabsforebyggende midler. De kan anvendes I

sammen med prostaglandiner, oxytociner og lignende. I

30 En yderligere vigtig anvendelighed for produkterne ifølge op- I

findelsen ligger i deres evne til at nedsætte vækst af hormon- I

afhængige cancere. Sådanne cancere omfatter nyrecancer, bryst- I

cancer, endometriecancer, ovar i alcancer og prostatacancer, som I

er karakteriseret ved at besidde progesteronreceptorer og kan I

35 forventes at reagere på produkterne ifølge den foreliggende I

opfindelse. Andre anvendeligheder af antiprogestationale mid- I

ler omfatter behandling af fibrocystisk sygdom i brystet. Vis- I

13 DK 175760 B1 se cancere og især melanomer kan reagere gunstigt' på cortico-id/anticorticoid-terapi.

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse kan indgives 5 til et hvilket sora helst varmblodet pattedyr, såsom mennesker, kæledyr og landbrugsdyr. Kæledyr omfatter hunde, katte etc. Landbrugsdyr omfatter køer, heste, grise, får, geder etc.

Mængden af aktiv bestanddel, som kan kombineres med et bære-10 materiale, til fremstilling af en enkelt doseringsform vil variere afhængigt af den behandlede sygdom, pattedyrarten og den særlige administrationsmåde. F.eks. kan en enhedsdosis af steroidet fortrinsvis indeholde mellem 0,1 mg og 1 g af den aktive bestanddel. En mere foretrukken enhedsdosis er mellem 15 0,001 og 0,5 g. Det vil imidlertid forstås, at det specifikke dosisniveau for enhver, pågældende patient vil afhænge af en række faktorer, herunder aktiviteten af den specifikke forbindelse, der anvendes, alderen, legemsvægten, den generelle sundhedstilstand, kønnet og diæten hos det individ, der be-20 handles; administrationstiden og administrationsvejen; ekskre-tionshastigheden; andre lægemidler, som tidligere er blevet administreret; og alvorligheden af den pågældende sygdom, som undergår terapi, som det er velkendt blandt fagfolk indenfor området.

25

Andre træk ved opfindelsen vil blive åbenlyse ud fra den følgende beskrivelse af eksempler på udførelsesformer, som er givet til i 111ustration af opfindelsen, og som ikke er tilsigtet at virke begrænsende derfor.

30 35

I DK 175760 B1 I

I 14 I

I EKSEMPLER I

I Eksempel 1. Syntese af 6a-roethyl-17g-acetoxv-l16-(4-N.N-di me- I

thvlaminophenvl)-19-norpreqna-4,9-dien-3.20-dion. I

I 5 I

H 6o-methyl-17a-hydroxy-pregna-l,4-dien-3,20-dion (37,72 g, 0,11 I

mol) blev opløst i 1 1 frisk destilleret tetrahydrofuran og I

400 ml tør methanol. Opløsningen blev afkølet på et isbad ved I

0°C. Natriumborhydrid (3,6 g, 0,09 mol) blev tilsat i én por- I

I 10 tion, og blandingen blev omrørt ved 0-5°C i 6 timer. Reakti- I

I onsblandingen blev fortyndet med isvand (100 ml), og methanol I

blev fjernet under reduceret tryk. Den resulterende, tykke

rest blev delt mellem chloroform og vand. Chloroformekstrak- I

terne (500 ml x 4) blev tørret over Na2S04 (vandfrit), filtre- I

15 ret og koncentreret til opnåelse af 42 g råt 6a-methyl-17a, I

H 20/3 (a)-di hydroxy-pregna-1,4-di en-3-on. Produktet viste sig at I

være en blanding af 20/3- og 20a-ol i et forhold på 85:15 base- I

ret på Ih NMR analyse. Til 20/3-ol: *H NMR (C0C13, 60 MHz) δ I

I 0,83 (s, 3, I8-CH3), 1,0 (d, 3, J = 6 Hz, 6-CH3), 1,18 (d, 3, I

I 20 J * 6 Hz, 21-CH3), 4,0 (m, 1, 20-H), 6,05 (bs, 1, 4-H), 6,15 I

(dd, 1, J = 12, 2 Hz, 2-H), 7,1 (d, 1, J = 12 Hz, 1-H). I

H

Til en flammetørret, trehalset, rundbundet 2 1 kolbe, som var I

udstyret med svaler og tilsætningstragt, blev sat tetrahydro- I

25 furan (900 ml), biphenyl (45 g, 0,29 mol) og diphenylmethan I

H (50 ml, 0,285 mol). Blandingen blev opvarmet til tilbagesva- I

I ling, og lithiumtråd (3,5 g, 0,50 mol) blev tilsat i én por- H

I tion. Den resulterende, blågrønne opløsning af komplekset I

I blev opvarmet ved skånsom tilbagesvaling i 16 timer. Yderlige- H

I 30 re 0,5 g lithiumtråd blev tilsat for at holde en mørkeblå H

I farve. Diolen (26 g, 0,076 mol) i 170 ml THF blev derefter I

tilsat dråbevist med en sådan hastighed, at den blå farve blev I

fastholdt under tilsætningen. Reaktionsblandingen blev kogt I

I under ti 1 bagesval ing i yder1igere 45 min. Overskydende biphe- I

I 35 ny 11 ithiumkompleks blev forsigtigt stoppet med methanol i et

I isbad. Efter fortynding med vand (200 ml), blev THF fjernet H

under reduceret tryk, og produktet blev ekstraheret med CHCI3 15 DK 175760 B1 (500 ml x 3). CHCl3-ekstrakterne blev kombineret, tørret over natriumsulfat (vandfrit), filtreret og koncentreret til dannelse af 118 g af råproduktet. Den vandige fase blev syrnet med HCl-opløsning (10 vol./vol.%) og ekstraheret med CHC13 5 (500 ml x 2). CHC13-ekstrakten blev tørret over Na2S04 (vand frit), filtreret og koncentreret til dannelse af 4,5 g forholdsvis rent 6a-methy1-19-norpregna-l,3,5(10)-trien-3,17a,200-(a)-triol. 118 g af det rå reaktionsprodukt blev oprenset ved Si02~søjlekromatografi under anvendelse af et gradientsystem 10 (n-hexan-CH2Cl2 til 5% acetone-Ch^Cl2) til dannelse af yderligere 11,2 g af produktet: smp= 175-179eC; *H NMR (250 MHz, C0C13) 6 0,82 (s, 3, 18-CH3), 1,17 (d, 3, J = 6,4 Hz, 21-CH3), 1,28 (d, 3, J = 6,8 Hz, 6a-CH3), 4,0 (m, 1, 20-H), 6,61 (dd, 1, J = 8,5, 2,6 Hz, 2-H), 6,76 (d, 1, J 2,6 Hz, 4-H), 7,11 15 (d, 1, J » 8,5 Hz,l-H), beregnet masse for C2iH3q03: 330, 2095, fundet: 330,2197.

Anal. beregnet for C21H30O3: c. 76,32; H. 9,15. Fundet: C, 76,82; H, 9,40.

20

Det ovennævnte, rå phenoliske produkt (6,5 g, 0,02 mol) blev opløst i 500 ml methanol og behandlet med kaliumcarbonat (15,0 g, 0,10 mol) og iodmethan (20 ml, 0,32 mol). Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 48 timer. Methanol blev fjernet 25 under reduceret tryk, og resten blev fortyndet med vand og syrnet med 10 vol./vol.% HCl-opløsning. Produktet blev ekstraheret med CHCl3 (300 ml x 3). Den kombinerede CHCl3-ekstrakt blev vasket med vand, tørret over natriumsulfat (vandfrit), filtreret og koncentreret til opnåelse af 7,0 g af råt reak-30 tionsprodukt. SiO2~søj1ekromatograf i (CH2CI2 til 5% acetone-CH2C12) gav tre fraktioner: f rakt ion A (4,0 g) viste sig at være 6a-methyl-3-roethoxy- 19-norpregna-l ,3,5(10)-trien-17a,20/3-(a)-diol. Fraktion B (0,74 g) viste sig at være 20a-hydroxy-isomeren heraf, og fraktion C (0,54 g) var den udvundne ud-35 gangsphenol. For 200-ol : smp = 145-147°C; Ih NMR (250 MHz, CDC13) δ 0,82 (S. 3, I8-CH3), 1,20 (d, 3, J = 6,3 Hz, 21-CH3), 1,30 (d, 3, J = 7,0 Hz, 6a-CH3), 2,79 (s, 3, 0CH3, 4,06 (m, 1,

I DK 175760 B1 I

I 16 I

I 20-H), 6,73 (dd, 1, J = 8,7, 2,7 Hz, 2-H), 6,82 (d, 1, J = 2,7 I

Hz, 4-H), 7,20 (d, 1, J = 8,7 Hz, 1-H); beregnet masse for I

I C22H32°3: 344,2355. Fundet 344,2355. Anal. beregnet for I

I C22H32O3: C, 77,16; H, 8,83. Fundet C, 77,14: H, 8,88. For I

I 5 20a-ol: srop= 150-151eC; *H NMR (250 MHz, CDC13) 5 0,75 (S, 3,

I I8-CH3), 1,22 (d, 3, J = 6,4 Hz, 2I-CH3), 1,30 (d, 3, J = 6,9 I

I HZ, 6a-CH3), 3,79 (s, 3, OCH3), 3,85 (m, 1, 20-H), 6,70 (dd, J I

I = 8,7, 2,7 Hz, 2-H), 6,82 (d, 1, J = 2,7 Hz, 4-H), 7,20 (d, 1, I

I J * 8,6 Hz, 1-H). I

I 10 I

I Flydende ammoniak (35 ml) blev kondenseret i en flammetørret, I

I trehalset, rundbundet kolbe, som var udstyret med en Dewar- H

I svaler og en tilsætningstragt. Lithiumtråd (150 mg, 21,6 mmol) I

I blev tilsat, og den resulterende blålige opløsning af Li/NH3- I

I 15 kompleksopløsningen blev omrørt ved -78eC i 1 time. Den oven- I

nævnte methylether (380 mg, 1,11 mmol) i 2,0 ml tørt THF og I

I 1,0 ml t-butanol blev tilsat dråbevist. Den blå farve blev I

I fastholdt under tilsætningen. Den resulterende blanding blev I

I omrørt ved -78eC i yderligere 45 min. og stoppet forsigtigt I

I 20 med methanol, indtil den blå farve svandt. Overskydende ammo- I

I niak blev afdampet under en langsom nitrogenstrøm. Resten blev I

I fortyndet med vand og neutraliseret med 10 vol./vol.% HCl-op- I

I løsning. Produktet blev ekstraheret med CHC13 (50 ml x 3). I

I CHCl3~ekstrakten blev tørret over Na2S04 (vandfrit), filtreret I

I 25 og koncentreret til opnåelse af 380 mg råt 6a-methy1-3-methoxy- I

I 19-norpregna-2,5(10)-dien-17a,200-diol. *H NMR (60 MHz) δ 0,80 I

I (s, 3, I8-CH3), 1,0 (d, 3, J = 6,4 Hz, 6a-CH3), 1.2 (d, J = 6 I

I Hz. 21-CH3), 3,5 (s, 3, 3-OCH3), 4,0 (m, 1, 20-H), 4,6 (bs, 1, I

I I

I 30 I

I Uden yderligere oprensning blev det rå Birch-reduktionsprodukt I

I opløst i 40 ml methanol og behandlet med oxalsyre (250 mg i I

I 1,5 ml H2O). Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 5

I timer, hvorefter opløsningsmidlet blev fjernet under tryk, og I

I 35 produktet blev ekstraheret med CHCI3 (50 ml x 3). CHCl3~eks- I

I trakten blev tørret over Na2S04 (vandfrit), filtreret og kon- I

I centreret til dannelse af 350 mg af det rå, hydrolyserede pro- I

17 DK 175760 B1 dukt. Søjlekromatografi (Si03; gradient fra CH2C12 til 5% ace-tone-CH2Cl2) gav 120 mg 6a-methyl-17a,200-dihydroxy-19-nor-pregn-5(10)-en-3-on: *H NMR (250 MHz, CDC13) δ 0,82 (s, 3, I8-CH3), 0,99 (d, 3, J = 6,9 Hz, 6a-CH3, 1,18 (d. 3, J = 6,2 5 Hz, 21-CH3), 2,4 (bs, 2, 4-H), 4,0 (m, 1, 20-H).

Oprenset 6a-methyl-17a,208-dihydroxy-19-norpregna-5(10)-en-3-on (8,31 g, 0,025 mol) i 450 ml tørt pyridin blev afkølet på et isbad og behandlet med pyridiniumhydrobromidperbromid (9,30 10 g, 0,028 mol). Efter blandingen var omrørt ved stuetemperatur i 24 timer, blev den udhældt i iskold natriumsu1fi topiøsning (500 ml, 10 vægt/vol.%) og ekstraheret med CHC13 (400 ml x 3). CHCl3-ekstrakten blev vasket med fortyndet NaHC03-opløsning (5 vægt/vol.%), tørret over Na2S04 (vandfrit), filtreret og kon-15 centreret til dannelse af 8,5 g råt reaktionsprodukt. Søjle kromatografi (Si02; gradient fra 0Η2012 til 5¾ acetone i CH2 C12) gav 5,8 g 6a-methy1-17a,200-dihydroxy-19-norpregna-4,9-dien-3-on: smp= 201-203eC; *H NMR (250 MHz, CDC13), δ 0,97 (s, 3, 18-CH3), 1,13 (d. J * 6,5 Hz, 6o-CH3), 1,19 (d, 3, J =

20 6,2 Hz, 21-CH3), 4,08 (m, 1, 20-H), 5,8 (bs, 1, 4-H), IR

(CHC13) 3550-3400; (-0H), 1665 (konjugeret 3-C=0) cm-1; UV

(MeOH) Xmax 305 nm; MS beregnet masse for C2iH3o03 330,2195; Fundet 330,2194; Anal. beregnet for C21H3003* C, 76,33; H, 9,15. Fundet: C, 76,35; H, 9,17.

25

Til en omrørt opløsning af CH2Cl2 (150 ml) og oxalylchlorid (4,5 ml, 0,050 mol) blev sat DMSO (9,0 ml, 0,12 mol) ved -60*C i et tøris-CHCl3-bad. Blandingen blev omrørt i 5 min., og den ovennævnte forbindelse (5,7 g, 0,017 mol) i 60 ml methylen-30 chlorid blev tilsat i løbet af 5 min., og omrøring blev fortsat i yderligere 30 min. Triethylamin (25 ml, 0,175 mol) blev tilsat, og reaktionsblandingen blev omrørt i 15 min. og fik derefter lov at varme kort til stuetemperatur. Vand (150 ml) blev derefter tilsat, og det vandige lag blev genekstraheret 35 med CH2Cl2 (300 ml x 2). De organiske lag blev kombineret, vasket med mættet NaC1-opløsning, tørret, filtreret og koncentreret til dannelse af 5,8 g råt reaktionsprodukt. Søjlekroma-

I DK 175760 B1 I

I I

I tografi (Si02, CH^C^ -♦ 10% acetone i Ch^C^) gav 5,1 g 6a-me- I

I thy 1-17a-hydroxy-19-norpregna-4,9(10)-dien-3,20-dion. Omkry- I

stal 1 iser i ng fra MeOH gav hvide krystaller med smp= 230-232*C; I

I NMR (CDC13, 60 MHz) δ 0,78 (s, 3, I8-CH3), 1,10 (d, 3, J = I

I 5 6,5 Hz, 6a-CH3 ) , 2,25 (s, 3, 21-CH3), 5,85 (bs, 1, 4-H), IR I

I (CHCI3) 1700 (20-0=0), 1665 (konjugeret 3-0=0) em"*; UV (MeOH) I

λ|„3Χ 305 nm; Beregnet masse for 021^28^35 328,2038. Fundet I

I 328,2038; Anal. beregnet for C21H28O3: C, 76,79; H, 8,59. I

Fundet C, 76,87; H, 8,64. I

I 10 I

H Til en opløsning af den ovennævnte dion (5,8 g, 0,018 mol) i I

450 ml tørt benzen blev sat ethylenglycol (24,0 ml) og p-tolu- I

ensulfonsyre (500 mg). Blandingen blev opvarmet til tilbage- I

svaling, og i alt 150 ml benzen blev afdesti1 leret i løbet af I

15 et tidsrum på 3 timer. Reaktionsblandingen blev udhældt i is- I

H vand og ekstraheret med ethylacetat (300 ml x 3). Den orga- I

niske fase blev vasket med vand, tørret over natriumsulfat I

(vandfrit), filtreret og koncentreret. Den rå rest blev kroma- I

I tograferet over Si02 (100% CH2C12 - 2% acetone-CH2Cl2) til op- I

I 20 nåelse af 4,6 g 6a-methy1-3,3,20,20-bis-{ethylendioxy)-19-nor- I

pregna-5(10),9(ll)-dien-17a-ol sammen med 1,0 g 6ø-methy1-3,3, I

I 20,20-bis-(ethylendioxy)-19-norpregna-5(10),9(ll)-dien-17a-ol. I

I For 6a-methy 1 - 3,20-diketalen·. smp=157-158°C, *Η NMR (CDC13 , I

I 250 MHz) δ 0,78 (s, 3, I8-CH3); 0,99 (d, 3, J = 6,8 Hz, I

I 25 6a-CH3), 1,37 (s, 3, 21-CH3), 3,98 (m, 8, 3,3,20,20-b i sketa- I

ler), 5,57 (bs, 1, 11-H), Beregnet masse for C25H36°5: I

416,2563. Fundet 416,2564; Anal. beregnet for 025H3gOg: C, I

I 72,08; H, 8,71. Fundet C, 72,14; H, 8,75. I

30 Til en opløsning af den ovennævnte bisketal (3,2 g, 7,7 mmol) I

i 75 ml methylenchlorid/hexan (1:3) blev sat m-chlorperbenzoe- I

syre (1,62 g, 80%) ved 0°C. Blandingen blev omrørt ved 0°C i I

10 min. og derefter fortyndet med natriumdicarbonatopløsning I

(25 ml, 5 vægt/vol.%). Den vandige fase blev ekstraheret med I

35 CH2C12 (50 ml x 2). Den kombinerede organiske fase blev vasket I

med mættet natr i urnehl or i dopløsning, tørret over natriumsulfat I I

(vandfrit), filtreret og koncentreret til dannelse af 3,4 g rå I

19 DK 175760 B1 epoxider, som hovedsageligt bestod af 5a,10a-epoxid, hvilket blev afsløret ved TLC og *H NMR analyser: 1H NMR (CDC13, 60 MHz) 6 0,75 (s, 3, I8-CH3), 0,95 (d, 3, J * 6,0 Hz, 6a-CH3), 1,30 (s, 3, 2I-CH3), 3,8-4,0 (m, 8, 3, 20-ketaler), 5,8 (m, 1, 5 11-H).

Det rå epoxid (3,4 g, 7,43 mmol) i tørt tetrahydrofuran (25 ml) blev dråbevist sat til en Grignård-opløsning af p-N,N-di-methylaminophenylmagnesiumbromid i nærværelse af dimethylsul-10 fidkuprobromidkompleks (1,8 g, 8,6 mmol). Gr ignard-blandingen blev fremstillet af p-brom-N,N-dimethylani1 in (14,0 g, 70 mmol) og magnesium (1,4 g, 57 mmol) i 150 ml frisk destilleret tetrahydrofuran. Efter reaktionsblandingen var omrørt ved stuetemperatur og under nitrogen i 30 min., blev den udhældt i 15 mættet ammoni umch 1 or i dop 1 øsn i ng (350 ml) og omrørt i 20 min. Ekstraktion med ethylacetat (500 ml x 3) og afdampning af opløsningsmidlet gav en blålig rest, som først blev oprenset ved Al2Ο3-søj1ekromatografi til tilvejebringelse af 3,7 g halvop-renset produkt. Ved gentaget si 1 icagelsøj1ekromatografi op-20 nåedes 1,95 g 6a-methyl-110-(4-N,N-dimethylaminophenyl )-3,3,-

20,20-bi s(ethy1endioxy)-19-norpregn-9-en-5a-ol. Omkrystal 1 i sering fra Me0H/CH2Cl2 gav 1,2 g nåle: smp=227^228eC; *H NMR

(250 MHz, COCI3) δ 0,46 (s, 3, I8-CH3), 1,06 (d, 3, J = 6,6

Hz, 6a-CH3) , 1,38 (s, 3, 21-CH3), 2,89 (s, 6, -N(CH3)2), 25 3,8-4,0 (m, 8, 3, 20-diethy 1enketa 1-H) , 4,19 (d, 1, J = 6,2

Hz, lla-H), 6,62 (d, 2, J = 8,8 Hz, aromatisk H ortho til -N(CH3)2), 7,06 (d, 2, J = 8,8 Hz, aromati sk-H, meta til -N(CH3)2) ; Beregnet for C33H4706N: C, 71,58; H, 8,56; N, 2,53. Fundet: C, 71,70; H, 8,59; N, 2,51.

30

Phosphorsyre (85%, 6,5 ml) blev dråbevist sat til eddikesyre-anhydrid (18 ml) på et isbad. Blandingen blev omrørt ved 5-10eC i 30 min. og fortyndet med eddikesyre (20 ml). Den resulterende blanding blev opvarmet til stuetemperatur og omrørt 35 i 1 time. Den ovennævnte 17a-hydroxy-3,20-diketa1 (680 mg, 1,52 mmol) i tørt dioxan (4,0 ml) blev sat til phosphorsyre/ eddikesyreanhydrid/eddikesyre-opløsningen (8,0 ml). Blandingen

I DK 175760 B1 I

I 20 I

I blev øjeblikkeligt forvandlet til en mørkeblå opløsning. Ace- I

I tyleringens fremadskriden blev omhyggeligt overvåget ved om- I

I vendt fase-HPLC-analyser. Reaktionsblandingen blev omrørt ved I

I stuetemperatur i 8 timer og fortyndet med vand efterfulgt af I

5 neutralisering med natriumbicarbonatopløsning (5 vægt/vol.%). I

I Produktet blev ekstraheret med ethylacetat (200 ml x 3). Den I

I organiske fase blev tørret over natriumsulfat (vandfrit), fil- I

I treret og koncentreret til dannelse af 750 mg råt reaktions- I

produkt, som blev oprenset ved Al2Ο3-søjlekromatografi efter- I

10 fulgt af gentaget omvendt fase-søj1ekromatografi under anven- I

I delse af en "RP-C8" (Lobar størrelse B)-søj1e og 20% H20 i Me- I

I OH som elueringsopløsningsmiddelsystemet. Hver enkelt opsam- I

lede fraktion blev overvåget ved hjælp af en analytisk "Zor- I

bax-ODS" (4,5 mm x 25 cm)-søjle med det samme opløsningsmid- I

15 delsystem. Fraktionerne, som udviste en renhed på mere end I

H 95%, blev kombineret, og opløsningsmiddel blev afdampet. Yder- I

I ligere omkrystallisering fra Me0H/H20 tilvejebragte 110 mg I

hvide krystaller af 6a-methyl-17a-acetoxy-llj5-(4-N,N-dimethyl- I

H aminophenyl)-19-norpregna-4,9-dien-3,20-dion. Den største for- I

20 urenende forbindelse, der blev fundet både i moderluden og i I

I de overlappende fraktioner, var 6/3-methyl isomeren. For 6a-me- I

I thylisomeren: smp*189-190,5°C; NMR (250 MHz, CDCI3) 6 0,35 I

I (s, 3, I8-CH3), 1,24 (d, 3, J = 5,5 Hz, 6oc-CH3), 2,09 (s, 3, I

I 17O-0AC), 2,12 (s, 3, 2I-CH3), 2,9 (s, 6, -N(CH3)2), 4,40 (d, I

I 25 1, J = 7,2 Hz, lla-H), 5,89 (bs, 1, 4-H), 6,62 (d, 2, J = 8,8 I

I Hz aromatisk-H, ortho til -N(CH3)2), 6,96 (d, 2, J = 8,8 Hz I

aromatisk-H, meta til -N(CH3)2); Beregnet masse for C31H3g04N: I

489,2879. Fundet 489,2878; IR (CHC13), 1730 (17o-C»0), 1720 I

I (20-C=0), 1655 (konjugeret 3-C=0) cm"l; UV (MeOH) Xmax 302 nm I

30 (dienon), 264 nm (aromatisk gruppe); Anal. beregnet for I

C31H3904N: C, 76,04; H, 8,02; N, 2,86. Fundet: C, 76,10; Η, I

I 8,03; N, 2,84. I

I 35 I

21 DK 175760 B1

Eksempel 2. Syntese af 17a-acetoxv-lie-f4-N.N-dimethvlaminophe-nyl)-19-norpreqna-4.9-dien-3.20-dion 3-methoxy-19-norpregna-l,3,5(10), 17(20)-tetraen (Krubiner og 5 Oliveto, 1966) (1,0 g, 0,0034 mol) i tørt pyn'din (15 ml) blev behandlet med osmiumtetroxid (1,0 g). Den resulterende mørkebrune opløsning blev omrørt ved stuetemperatur i 2 timer, og en opløsning af natriumbisulfit (1,8 g i 30 ml H20) og pyridin (20 ml) blev tilsat, og blandingen blev omrørt i yderligere 15 10 min.

Produktet blev ekstraheret med ethylacetat, og den kombinerede, organiske fase blev vasket med vand, tørret over natriumsulfat (vandfrit), filtreret og koncentreret. Flashkromato-15 grafi (Si02; 10% acetone i CH2C12) tilvejebragte 0,82 g 3-me-thoxy-19-norpregna-l,3,5(10)-trien-17a,20a-diol: *H NMR (0DC13, 250 MHz) δ 0,76 (s, 3, I8-CH3), 1,23 (d, 3, J * 6,3 Hz, 21-H), 3,77 (s, 3, OMe), 3,87 (q, 1, J = 6,3 Hz, 20-H), 6,62 (d, 1, J * 2,8 HZ, 4-H), 6,70 (dd, 1, J = 8,5, 2,8 Hz, 2-H), 7,20 (d, 20 1, J = 8,5 HZ, 1-H).

Ved reduktion med lithium i ammoniak efterfulgt af oxalsyrebehandling som beskrevet i eksempel 1 blev den ovennævnte me-thylether (760 mg) omdannet til 3-methoxy-19-norpregna-2,5(10)-25 dien-17a,20a-diol og derefter til 17a,20a-di hydroxy-19-nor-5(10)-pregnen-3-on. *H NMR ( 90 MHz CDC13) , δ 0,80 (s, 3, I8-CH3), 1,2 (d, 3, J = 6,5 Hz, 21-H), 2,4 (bs, 2, 4-H), 4,0 (m, 1, 20-H).

30 Pyridiniumhydrobromidperbromid (1,5 mmol) som i eksempel 1 omdannende denne forbindelse til 230 mg 17a,20(a)-dihydroxy-19-norpregna-4,9-dien-3-on. *H NMR (CDC13, 90 MHz) δ 0,95 (s, 3, I8-CH3), 1,15 (d, 3, J = 6,5 HZ, 21-H), 4,1 (m, 1, 20-H), 5,7 (s, 1, 4-H).

Oxidation af den ovennævnte diol (210 mg) med oxalylchlorid og dimethy1su1foxid som i eksempel 1 gav 17a-hydroxy-19-norpreg- 35

I DK 175760 B1 I

I 22 I

I na-4,9-dien-3,20-dion: Ih NMR (CDC13, 90 MHz) δ 0,87 (s, 3, I

I 18-CH3), 2,25 (s, 3, 21-H) , 5,70 (bs, 1, 4-H); IR (CHC Ί 3) 1700 I

I (20-C=0), 1665 (konjugeret 3-C=0) cm“l. Denne forbindelse blev I

I omdannet til 190 mg 3,3,20,20-bi s-(ethy1 end ioxy)-19-norpregna- I

I 5 5(10)9, (11)-dien-17ct-ol ved den i eksempel 1 beskrevne proce- I

I dure: Ih NMR (CDC13, 90 MHz) δ 1,35 (s, 3, 21-H), 0,80 (s, 3, I

I I8-CH3). 3,98 (m, 8, 3,20-ketaler), 5,6 (bs, 1, 11-H). I

I Den ovennævnte bisketal (175 mg) blev epoxideret med meta- I

I 10 chlorperbenzoesyre ved proceduren ifølge eksempel 1 til op- I

I nåel se af rå 5a,10a-epoxy-3,3,20,20-bi s-(ethylendioxy)-19- I

I norpregn— 9(11)-en-17a-ol (25), som undergik kobberkatalyseret I

I Grignard-addition som beskrevet i eksempel 1 til tilvejebrin- I

I gelse af 100 mg 3,3,20,20-bis(ethylendioxy)-11/5-(4,N,N-dime- I

I 15 thyl ami nophenyl)-19-norpregn-9-en-5a,17a-diol: *H NMR (CDC13, I

I 90 MHz) δ 0,46 (s, 3, I8-CH3), 1,38 (s, 3, 21-H), 2,89 (s, 6, I

I -N(CH3)2), 3,8 (m, 8, 3,20-ketaler), 4,78 (bt, 1, 11α-Η), I

I 6,6-7,1 (tn, 4, aromat i sk-H) . I

20 Behandling af denne forbindelse med eddikesyreanhydrid/phos- I

phorsyre som beskrevet i eksempel 1 tilvejebragte 17a-acetoxy- I

I 11β-(4-Ν,N-di methy1 am inopheny 1)-19-norpregna-4,9-dien-3,20-dion, I

I som blev omkrystalliseret fra Me0H/H20 til dannelse af 25 mg I

I af slutproduktet: smp=118-12i°C; *H NMR (CDC13, 250 MHz) δ I

I 25 0,36 (s, 3, I8-CH3), 2,09 (s, 3, 17a-0Ac), 2,13 (s, 3, 21-CH3), I

I 2,9 (s, 6, -N(CH3)2), 4,39 (d, 1, J * 7,0 Hz, lla-H), 5,77 (s, I

1, 4-H), 6,6 (d, 2, J = 8,6 Hz, aromatisk ortho-H til -N(CH3)2)» I

6,9 (d, 2, J - 8,6 Hz, aromatisk meta-H til N(CH3)2; IR I

I (CHCI3) 1730 (20-0=0), 1660 (3-konjugeret C=0) cm_l; UV I

30 (MeOH), Xmax, 261 nm; Anal. beregnet for C3oH37N04: C, 75,76; I

H, 7,84; N, 2,94. Fundet C, 74,18; H, 7,75; N, 2,81, I

I 35 I

23 DK 175760 B1

Eksempel 3. Syntese af βα-methvl-16a-ethvl-ilfl-(4-N,N-dimethvl-am i nophenvl)-19-norpreana-4.9-dien-3.20-dion.

6a-methyl-3-methoxy-l9-norpregna-l,3,5(10)-trien-17a,20/3-diol 5 (900 mg, 2,6 mmol) i 30 ml THF blev behandlet med HsIOg-op- løsning (400 mg i 10 ml THF). Reaktionsblandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 45 min. og filtreret gennem en kort, neutral aluminiumoxidsøjle. Filtratet og THF-vaskevæskerne blev kombineret og koncentreret til dannelse af 750 mg produkt. Om-10 krystallisering fra methanol gav 450 mg 3-methoxy6a-methy1 -l,3,5(10)estratrien-17-on: smp = 108-109eC; Ih NMR (CDC13, 90 MHz) 6 0,88 (S, 3, I8-CH3), 1,3 (d, 3, J = 6,5 Hz, 6a-Me), 3,75 (s, 3, 3-0Me), 6,8-7,2 (m, 3, aromatisk H); IR (CHC13) 1740 cm"1 (17-C=0); Anal. beregnet for C20H26O2: C, 80,5; H, 15 8,78. Fundet C, 80,59; H, 8,80.

En opløsning af den ovennævnte 6a-methylestron-3-methy1 ether (5,2 g, 0,017 mol) i tørt toluen blev hurtigt sat til en om-rørt opløsning af ethylidentriphenylphosphoran, som var frisk 20 fremstillet ud fra 6,3 g NaH i 100 ml 0MS0 og ethyltriphenyl-phosphoniumiodid (54,8 g, 0,13 mol). Reaktionsblandingen blev omrørt ved 60°C i 18 timer og blev derefter udhældt på is. Produktet blev taget op med ethylacetat. Den kombinerede, organiske fase blev tørret over natriumsulfat, filtreret og kon-25 centreret til dannelse af 8,5 g råt produkt, som blev oprenset ved Si02-søjlekromatografi (hexan - CH2CI2, 1:1) til dannelse af 4,8 g 3-methoxy-6a-methy1 -19-norpregna-l,3,5{10),17(20)-te-traen. IH NMR (COCI3, 90 MHz) δ 0,89 (s, 3, I8-CH3): 1,3 (d, 3, J = 6,5 Hz, 6a-CH3), 1,6 (d, 3, J = 7 Hz, 21-H), 3,8 (s, 3,

30 OMe), 5,1 (m, 1, 20-H), 6,8-7,2 (m, 3, aromat isk-H) ; IR

(CHC13), ingen C=0.

En opløsning af den ovennævnte olefin (500 mg, 1,61 mmol) og hematoporfyrin (22 mg) i 20 ml pyridin blev behandlet med en 35 fin oxygenstrøm under samtidig belysning med en 22 W fluorescenslampe. Efter 4,5 time blev 5 ml eddikesyreanhydrid tilsat, og reaktionsblandingen fik lov at henstå ved stuetemperatur i

I DK 175760 B1 I

I 24 I

I 45 min. og blev derefter opvarmet ved 60eC i yderligere 30 I

I min. Efter fortynding med vand blev produktet ekstraheret med I

I methylenchlorid, og den organiske fase blev vasket grundigt I

I med IN HC1 og derefter med 5% natriumbicarbonatopløsning. Ef-

I 5 ter tørring blev methy1enchloridopløsningen opslæmmet med 15 g H

I neutralt aluminiumoxid og filtreret. Det koncentrerede, rå re- I

I aktionsprodukt blev yderligere oprenset ved Si02~søjlekroma- I

I tografi (15% acetone i CH2CI2) til opnåelse af 350 mg 3-metho- I

xy-6a-methy 1-19-norpregna-l,3,5(10),16-tetraen-20-on: smp=106- I

I 10 109eC; !h NMR (CDC13, 90 MHz) δ 0,90 (s, 3, I8-CH3), 1,29 (d, I

I 3, J = 6,5 Hz, 6a-CH3), 2,23 (s, 3, 21-H), 3,75 (S, 3, OMe), I

I 6,7 (m, 3, 2, 4 & 16-H), 7,15 (d, 1, J = 7 Hz, 1-H): IR I

I (CHC13) 1670 (konjugeret 20-C=0) cm"1. I

I 15 Ethylmagnesiumbromid (12,5 ml, 25 mmol) 2 M i THF blev sat til I

I en suspension af Me2S»CuBr-kompleks (2,4 g, 0,0177 mol) i 80 I

I ml THF ved 0eC under N2. Den resulterende blå opløsning af I

I komplekset blev omrørt ved 0eC i 20 min. og blev derefter sat H

I til en kold opløsning af det ovennævnte tetraen (1,5 g, 0,0046 I

20 mol) i 40 ml THF. Reaktionsblandingen blev omrørt i 30 min. I

ved 0®C og derefter fortyndet med 1 N HC1 -opløsning (15 ml). I

I Produktet blev ekstraheret med ethylacetat. Den organiske fase I

blev tøret, filtreret og koncentreret til dannelse af 2,0 g I

I råt reaktionsprodukt. Søjlekromatografi (Si02; 2% acetone i . I

25 CH2Cl2) gav 1,5 g 3-methoxy-6a-methy1-16a-ethy1-19-norpregna- ! I

I 1,3,5(10)-trien-20-on; !h NMR (CDCI3, 250 MHz) δ 7,18 (d, 1, J I

I = 8,6 Hz, 1-H); 6,75 (ro, 2, 2 & 4-H), 3,78 (s, 3, OMe), 2,15 I

(s, 3, 21-H), 1,30 (d, 3, J = 6,8 Hz, 6a-CH3), 0,85 (t, 3, 3 = I

I 7 Hz, 16-CH2CH3), 0,65 (s, 3, I8-CH3); IR (CHC13) 1702 (20- I

30 C=0) cm-1. I

Den ovennævnte 20-ketoforbi ndel se (7,0 g, 0,020 mol) i THF I

I (250 ml) og methanol (80 ml) blev afkølet til 0'C i et isbad I

og behandlet med natriumborhydrid (1,0 g, 0,027 mol). Blandin- , I

H 35 gen blev omrørt ved 0*C i 6,5 time og blev derefter forsigtigt I

udhældt i knust is. Produktet blev ekstraheret med ethylace- I

tat. Den organiske ekstrakt blev tørret, filtreret og koncen- I

25 DK 175760 B1 ! treret til dannelse af 7,3 g råprodukt, som blev oprenset ved Si02-søjlekromatografi (2¾ acetone i CH2CI2) til tilvejebringelse af 6,8 g 3-methoxy-6a-methyl-16a-ethy1-19-norpregna-l,3,5 (10)-trien-20/3(a)-ol : *H NMR (CDC13, 250 MHz) 6 0,82 (s, 3, 5 I8-CH3), 0,90 (t, 3, J = 7,2 Hz, 16-CH2CH3), 1,22 (d, 3, J = 6,3 Hz, 6a-CH3), 1,30 (d, 3, J = 6,8 Hz, 21-H), 2,9 {m, 1, 20-H), 3,78 (s, 3, 3-OMe), 6,7 (dd, 1, J = 8,5, 2,7 Hz, 2-H), 6,8 (d, 1, J 2,7 Hz, 4-H) , 7,20 (d, 1, J = 8,5 Hz, 1-H).

10 Ved at følge proceduren i eksempel 1 til behandling med lithium i flydende ammoniak blev det ovennævnte steroid (4,0 g, 0,0113 mol) omdannet til 3,95 g rå , 3-methoxy-6a-methyl16a-ethy 1 -19-norpregna-2,5 (10)-d i en-20/3 (a)-ol, som efter behandling med oxalsyre ved den i eksempel 1 beskrevne procedure 15 gav 2,85 g 60-methyl-16a-ethyl-20/3(a)-hydroxy-19-nor-5(10) -pregnen-3-on: *H NMR (C0C13, 250 MHz) δ 0,82 (s, 3, 18-CH3), 0,89 (t, 3, J = 7,0 Hz, 16-CH2CH3), 1,0 (d, 3, J = 6,9 Hz, 6a-CH3), 1,20 (d, 3, J = 6,2 Hz, 21-H), 3,8 (m, 1, 20-H).

20 Behandling af den sidstnævnte (220 mg) med pyridiniumhydrobro-midperbromid ved den i eksempel 1 beskrevne procedure gav 22 mg 20a-isomer og 150 mg 20£-isomer af 20-hydroxy-6a-methyl-16c-ethyl-19-norpregna-4,9-dien-3-on. For 20/3-01,- *H NMR (CDC13 , 250 MHz) 6 0,88 (t, 3, J= 7,0 Hz, 16-CH2CH3), 0,97 (s, 25 3, I8-CH3), 1,15 (d, 3, J = 6,5 Hz, 6a-CH3), 1,22 (d, 3, J = 6,2 Hz, 21-H), 3,8 (m, 1, 20-H), 5,8 (S, 1, 4-H): IR (CHC13) 3400 (-OH), 1660 (konjugeret 3-C=0), cm-1; Anal. beregnet for C23H34°2; c' 80,65; H, 10,00. Fundet: C, 79,36; H, 9,95. For 20a-ol: *H NMR (CDC13, 250 MHz) 6 0,86 (s, 3, I8-CH3), 0,91 30 (t, 3, J = 7,2 Hz, 16-CH2CH3). 1,15 (d, 3, J = 6,5 Hz, 6o-CH3), 1,26 (d, 3, J = 6,2 Hz, 21-H), 3,8 (m, 1, 20-H), 5,8 (S, 1, 4-H).

Oxidation af den ovennævnte 20-ol (230 mg) med oxalylchlorid 35 og dimethy1su1foxid ved den i eksempel 1 beskrevne procedure tilvejebragte 165 mg 6a-methy1-16a-ethy1-19-norpregna-4,9-di -en-3,20-dion: smp=l 18-119° C; *H NMR (CDC13, 250 MHz) δ 0,80

I DK 175760 B1 I

I 26 I

I (s, 3, I6-CH3), 0,82 (t, 3, J = 7,1 Hz, 16-CH2CH3), 1,15 (d, I

I 3, 6,5 Hz, 6a- CH3) , 2,15 (s, 3, 21-H), 5,8 (s, 1, 4-H): IR I

I (CHC13; 1705 (20-C=0), 1665 (konjugeret 3-C=0) cm“l ; Anal. be- I

I regnet for C23H32O2: C, 81,13; H, 9,47. Fundet: C, 81,01; Η, I

I 5 9,48. I

I Den sidstnævnte forbindelse (410 mg, 1,2 mmol) blev omdannet I

I med ethylenglycol og p-toluensulfonsyre ved proceduren ifølge I

I eksempel 1 til 3,3,20,20-bis-(ethylendioxy)-6a-methy1-16α- I

I 10 ethyl-19-norpregna-5(10),9(ll)-dien (320 mg): *H NMR (CDC13, I

I 90 MHz) δ 0,80 (s, 3, 18-CH3), 0,85 (t, 3, J = 7 Hz, 16-CH2- I

I CH3), 1,1 (d, 3, J = 6,5 Hz, 6a-CH3) , 2,1 (s, 3, 21-H), I

I 3,8-4,0 (m, 8, 3,20-keta1 er), 5,5 (bs, 1, 11-H). I

15 Epoxidering af bisketalen (305 mg, 0,71 mmol) med m-chlorperben- I

zoesyre (220 mg, 1,28 mmol) efterfulgt af proceduren ifølge I

eksempel l til kobberkatalyseret Grignard-addition gav 1,2 g I

I mørkeblå rest, som indeholdt 3,3,20,20-{ethylendioxy)-6a-me- I

thyl-16a-ethy1-11β-(4-N,N-dimethylaminophenyl)-19-nor-9-preg- I

I 20 nen-5a-ol . I

Uden yderligere oprensning blev det ovennævnte materiale be- I

handlet med 70% vandig eddikesyre og derefter opvarmet ved I

H 50°C i 40 min. Reaktionsblandingen blev udhældt i isvand og I

25 neutraliseret med 10 vægt/vol.% NaHC03-opløsning. Produktet I

H blev ekstraheret med CH2C12, tørret over natriumsulfat (vand- I

H frit), filtreret og koncentreret til opnåelse af 240 mg mørke- I

blåt, fast stof. Søjlekromatografi (Si02; 5% acetone-CH2Cl2) I

tilvejebragte 42 mg af et enkelt plet (TLC)-materiale. En I

H 30 HPLC-analyse (Zorbax-ODS 4,6 mm x 25 cm, 15% H20 i MeOH) vi- I

ste, at produktet bestod af 6a- og 60-methylisomerer i et om- I

trentligt forhold på 2:1. Præparativ Rp-C18 søjlekromatografi I

(20% H20 i MeOH) tilvejebragte 7,0 mg 6a-methyl-16a-ethyl-ll£- I

(4-N,N-dimethylaminophenyl)-19-norpregna-4,9-dien-3,20-dion og I

35 2,5 mg 6/3-methy 1 -16a-ethyl -1 l/S-(4-N, N-di methyl ami nophenyl)-19- I

H norpregna-4,9-dien-3,20-di on sammen med 15 mg uopløst bi an- I

ding. For 6a-methylforbindelsen: smp=95-98°C; *H NMR (CDC13, I

27 DK 175760 B1 250 MHz) 6 0,36 (s, 3, 18-CH3), 0,82 (t, 3, J = 7,2 Hz, 16-CH2CH3), 1,22 (d, 3, J * 6,5 Hz, 6a-CH3), 2,16 (s, 3, 21-H), 2,9 (s, 6, N(CH3)2), 4,32 (d, 1, J = 6,7 Hz, llo-H), 5,88 (s, 1, 4-H), 6,6 (d, 2, 0 = 8,7 Hz, aromatisk-H ortho til 5 N(CH3)2) , 6,98 (d, 2, J = 8,7 Hz, aromatisk-H meta til N (CH3 ) 2 ) - I« {CHC13 ) 1702 (20-0 = 0), 1660 (konjugeret 3-C=0) cm" I; UV (MeOH) Xmax 301, 260 nm; MS beregnet. 459,3137. Fun-, det: 459,3141; Anal. beregnet for C3jH4iN02; C, 80,99; H, 8,92; N, 3,04. Fundet: C, 80,18; H, 9,02; N, 2,94. For 6/3-me-10 thyl isomeren: *H NMR (C0C13, 250 MHz) 6 0.39 (s, 3, 18-CH3), 0,82 (t, 3, J = 7,2 Hz, 16-CH2CH3), 1,28 (d, 3, J = 7,1 Hz,

6p-CH3), 2,17 (s, 3, 21-H), 2,9 (s, 6, N(CH3)2), 4,33 (d, 1, J

= 6,7 Hz, lla-H), 5,78 (s, 1, 4-H), 6,6 (d, 2, J = 8,7 Hz, aro- matisk-H ortho til N(CH3)2), 6,98 (d, 2, J * 8,7 Hz, aroma- 15 tisk-H meta til -N(CH3)2).

Eksempel 4. Syntese af 16a-ethvl-lUS-(4-N,N-dimethvlaminophe-nv1)-19-norpreqna-4,9-dien-3,20-dion.

20 En opløsning af natriumhydrid (0,27 g, 11,3 mmol) i vandfrit di methy1su1foxid (15 ml) blev opvarmet ved 75°C i 1 time. Reaktionsblandingen blev derefter afkølet til stuetemperatur, og en opløsning af ethyltriphenylphosphoniumiodid (4,6 g, 11,3 mmol) i di methy1su1foxid (10 ml) blev langsomt tilsat. Efter 25 omrøring ved stuetemperatur i 15 min. blev en opløsning af 3,3-ethylendioxy-110-(4-N,N-di methy1 ami nopheny1 - 5a-hydroxyestr- 9-en-17-on (fremstillet ifølge Cook et al., US patentansøgning serie nr. 908.288) (1,0 g, 2,2 mmol) i vandfrit toluen (25 ml) tilsat dråbevist, og reaktionsblandingen blev efterfølgende 30 opvarmet ved 80*C i 2 timer. Opløsningen blev forsigtigt udhældt i isvand (250 ml) og ekstraheret med methy1ench1 or id (3 x 150 ml). De kombinerede ekstrakter blev vasket med vand (2 x 50 ml) og saltopløsning. Fjernelse af det tørrede (Na2S04) opløsningsmiddel i vakuum gav råproduktet, som blev oprenset ved 35 eluering fra silicagel (50 g) under anvendelse af 1:1 ether-hexan indeholdende 0,1% Et3N til dannelse af 0,69 g (68%) 3,3-ethy lend i oxy-11/3- (4-N, N-di met hyl am i nopheny 1 )-19-norpregna-9,-

I DK 175760 B1 I

I I

I 17(20)-dien-5a-ol : smp=174-177eC; IR (CHC13) 3600 cm‘l. 1H NMR I

I {CDC13, 250 MHz) 6 0,56 (s, 3, 18-H), 2,91 (s, 6, NMe2), 3,98 I

I (m, 4, 0CH2CH20), 4,19 (in, s, 11-H), 4,29 (s, 1, 5-0H), 5,08 I

I (m, 1, 20-H), 6,50 (d, J = 9 Hz, 2, ArH ortho til NMe2), 7,09 I

I ® (d, J = 9 Hz, 2, ArH meta til NMe2). Massespektrum: m/z krævet I

I for C3øH4jN03: 463,3086. Fundet: 463,3085. Anal. beregnet for I

I C30H41N03: C, 77,71; H 8,91; N, 3,02. Fundet:C, 77,45; Η, I

I 8,93; N, 2,95. I

I 10 Oxygengas blev langsomt boblet igennem en opløsning af den I

ovennævnte olefin (0,33 g, 0,7 mmol) og hematoporfyrin (15 mg) I

i pyridin (7 ml), mens opløsningen blev bestrålet med en I

f 1 uorescens 1 ampe (25 w), som var anbragt 7 cm fra reaktions- I

. kolben. Efter 3 dage blev gennembobli ngen med oxygen afbrudt. I

I5 Til reaktionsblandingen blev derefter sat eddikesyreanhydrid I

I (3 ml), og opløsningen blev omrørt ved stuetemperatur i 2 ti- I

H mer. Opløsningsmidlerne blev derpå fjernet i vakuum ved stue- I

temperatur, og resten blev elueret fra silicagel (50 g) under I

anvendelse af 2% acetone i methylenchlorid, som indeholdt 0,1% I

I 20 Et3N, til dannelse af 140 mg uændret udgangsmateriale. Fortsat I

eluering med 4% acetone i methylenchlorid, som indeholdt 0,1% I

Et3N, gav 3,3-ethylendioxy-llø-(4-N,N-dimethy1aminophenyl)-5α- I

hydroxy-19-norpregna-9,16-dien-20-on (55 mg, 30% baseret på I

udvundet udgangsmateriale) som krystaller; smp=225-228°C; IR I

I 25 (CHC13) 3600, 1675, cm-1; 1H NMR (CDC13, 250 MHz) 6 0,59 (s, I

I 3, 18-H), 2,24 (s, 3, 21-H), 2,90 (s, 6, NMe2) , 3,98 (m, 4, I

0CH2CH20), 4,18 (m, 1, 11-H), 4,37 (s, 1, 5-OH), 6,65 (d, J = I

I 9 Hz, 2, ArH ortho til NMe2), 6,67 (tydelig s, 1, 16-H), 7,10 I

(d, J * 9 Hz, 1 ArH meta til NMe2). Massespektrum: m/z krævet I

I 30 for C30H39N04 (M+-18); 459,2773. Fundet: 459,2774. Anal. be- I

I regnet for C30H39N04 · 1/4 H20: C, 74,88; H, 8,24; N, 2,90. I

I Fundet: C, 74,72; H, 8,31; N, 2,86. I

Til en kold (0°C), omrørt suspension af kobberbromid-dimethyl- I

33 sulfidkompleks (120 mg, 0,58 mmol) i vandfrit tetrahydrofuran I

(1 ml) blev langsomt sat 0,4 ml (2,0 molær, 0,8 mmol) ethyl- I

magnesiumbromid i tetrahydrofuran. Efter omrøring ved 0eC i % I

29 DK 175760 B1 time, blev Grignard-komplekset hurtigt sat til en kold (0eC), omrørt opløsning af ovennævnte, umættede keton (16 mg, 0,034 mmol) i tetrahydrofuran (0,5 ml). Efter omrøring ved 0eC i 2 timer blev reaktionsblandingen dråbevist sat til en kold (0eC), 5 hurtigt omrørt opløsning af 3 N saltsyre (1 ml). Efter omrø ring ved stuetemperatur i 2 timer blev blandingen udhældt i en mættet opløsning af natriumbicarbonat (10 ml) og ekstraheret med ethylacetat (3 x 25 ml). De kombinerede ekstrakter blev vasket med vand (2 x 50 ml) og saltopløsning. Fjernelse af det 10 tørrede (Na2S04) opløsningsmiddel i vakuum gav råproduktet,

som blev oprenset ved eluering fra en omvendt fase C-8-søjle (størrelse B, E. M. Merck) under anvendelse af 85% vandig methanol til opnåelse af 11 mg (80%) 16a-ethyl-llj8-(4-N,N-dime-thylaminophenyl)-19-norpregna-4,9-dien-3,20-dion som off-white 15 krystaller: smp=168-171eC; IR (CHC13) 1720, 1680 cm"l, *H NMR

(CDC13, 250 MHz) δ 0,36 (s, 3, 18-H), 0,82 (t, 3, J * 7 Hz, CH2CH3), 2,16 (s, 3, 21-H), 2,91 (s, 6, NMe2), 4,32 (m, 1, 11-H), 5,76 (s, 1, 4-H), 6,64 (d, J = 9 Hz, 2, ArH ortho til NMe2), 6,98 (d, J = 9 Hz, ArH meta til NMe2). Massespektrum: 20 m/z krævet for C3QH3gN02; 445,2981. Fundet: 445,2977. Anal.

beregnet for C30H3gN02: C, 80,85; H, 8,82; N, 3,14. Fundet: C, 80,75; H, 8,85; N, 3,09.

Eksempel 5. Syntese af llfi-(4-N,N-dimethvlaminophenvl)-19-nor-2 5 preqna-4.9.16-trien-3,20-dion.

Til en kold (0eC), omrørt opløsning af saltsyre (3 N, 1 ml) blev langsomt sat en opløsning af 3,3-et hy 1 end i oxy-11/3-( 4-N , N-dimethylaminophenyl)-5a-hydroxy-19-norpregna-5,I6dien-20-on 30 (23 mg, 0,05 mmol) i tetrahydrof uran (2 ml). Efter omrøring ved stuetemperatur i 2 timer blev reaktionsblandingen udhældt i en mættet opløsning af natriumbicarbonat (10 ml) og ekstraheret med methylenchlorid (3 x 20 ml). De kombinerede ekstrakter blev vasket med vand (2 x 20 ml) og saltopløsning. Fjer-35 nelse af det tørrede (Na2S04) opløsningsmiddel i vakuum gav råproduktet, som blev oprenset ved eluering fra silicagel (0,5 g under anvendelse af 1% acetone-methylenchlorid indeholdende

I DK 175760 B1 I

I 30 I

I 0,1¾ Et3N) til opnåelse af 12 mg (50¾) 11β-(4-N,N-dimethylami- I

I nopheny1)-19-norpregna-4,9,16-1ri en-3,20-di on som et skum; IR I

I (CHC13 1675 cm"1; *H NMR (CDC13, 250 MHz) δ 0,66 (S, 3, 18-H), I

I 2,26 (s, 3, 21-H), 2,91 (s, 6, NMe2), 4,28 <m, 1, 11-H), 5,75 I

5 (s, 1, 4-H), 6,60 (d, J = 9 Hz, 2, ArH ortho til NMe2), 6,68 I

I (tydelig s, 1, 16-H), 7,06 (d, J = 9 Hz, 2, ArH meta til I

ΝΜβ2). Massespektrum: m/z krævet for C28H33N02; 415,2511. I

I Fundet: 415,2513. I

I 10 Eksempel 6. Syntese af llg-(4-M.N-dimethylaminophenvl)19-nor- I

I preqna-4,9-dien-3,20-dion. I

H 3,3-ethylendioxy-llg-(4-N,N-dimethylami nophenyl -5a-hydroxy- I

I 19-norpregna-9,16-dien-3,20-dion i ethanolopløsning blev re- I

I 15 duceret med hydrogen i nærværelse af 5¾ palladium på trækul. I

Efter at ét mol hydrogen per mol steroid var taget op, blev I

opløsningen filtreret og behandlet med saltsyre i ethanol som I

I beskrevet i eksempel 1. Inddampm'ng efterlod en rest, som blev I

oprenset ved kromatografi til opnåelse af llg-(4-N,N-dimethyl- I

H 20 aminophenyl)-19-norpregna-4,9-dien-3,20-dion. I

Eksempel 7. Syntese af 118-(4-N,N-dimethylaminophenv1)-19-nor- I

I preana-4,9,17(20)-trien-3-on. I

25 3,3-ethylendioxy-llg-(4-N,N-diroethylaminophenyl)-19-norpregna- I

9,17(20)-dien-5a-ol blev behandlet med saltsyre i ethanol som I

beskrevet i eksempel 1 og oprenset ved kromatografi til dan- I

nelse af 11β-(4-N,N-dimethylaminophenyl)-19-norpregna-4,9,17- I

(20)-trien-3-on. I

I 30 I

35 I

31 DK 175760 B1

Eksempel 8. Syntese af 1lfl-(4-acetv1 phenyl-19-nororeqna-4.9.16-tr-i en-3,20-di on .

Ved at følge den i eksempel 1 beskrevne procedure -til syntese 5 ' af 6a-methyl-118-(4-N,N-dimethylaminopheny1)-3,3,20,20-bis- (ethylendioxy)-19-norpregn-9-en-5a,17a-diol ud fra 6a-methy1-3,3- 20,20-bi s(ethylend ioxy)-l9-norpregna-5{10),9(ll)-dien-17a-ol, men ved at erstatte 2-(4-brommagnesiumphenyl)-2,5,5-triroethyl- 1.3- dioxan med p-N,N-dimethylaminophenylmagnesiumbromid blev 10 3,3-(ethylendioxy)estra-5(10),9(11)-dien-17-on omdannet til 3.3- ethy1 endioxy-5a-hydroxy-11β-[4-(2,5,5-trimethyl-1,3-di -oxan-2-yl)phenyl]estr-9-en-17-on. Den sidstnævnte forbindelse blev underkastet de i eksempel 4 beskrevne procedurer til omdannelse af 3,3-ethylendioxy-llJ3-(4-N,N-dimethylaminophenyl )- 15 5o-hydroxy-9-estren-17-on til 3,3-ethy lendioxy-11/3-(4-N , N-d i -methylaminopheny1)-5a-hydroxy-19-norpregna-9,l6-dien-20-on efterfulgt af syrehydrolyse som beskrevet i eksempel 5 til dannelse af 11β-(4-acetylphenyl)-19-norpregna-4,9,16-trien-3,20-dion med et smeltepunkt på ca. 194-l97eC, Massespektrum: m/z 20 krævet for C28H30°3: 414,2195. Fundet: 414,2189.

Eksempel 9. In vitro binding til receptorer.

In vitro aktiviteten hos de omhandlede forbindelser blev be-25 stemt ved at måle bindingsaffiniteterne (RBA) hos disse forbindelser i forhold til progesteron til progesteronreceptoren i cytosol opnået fra østrogen-præpareret, umoden kaninuterus og ved at måle RBA i forhold til dexamethason til glucocorti-coidreceptoren fra thymus hos adrenalektomiserede rotter.

30 Disse undersøgelser blev udført ved procedurerne ifølge J. R.

Reel et al.. Fertility and Sterility, 31, 552 (1979) (progesteron) og G.P. Chrousos et al., Endocrinology, 107, 472 (1980) (glucocorticoid). Resultaterne er vist i tabel 1.

35

I DK 175760 B1 I

I i

TABEL 1 I

I Relativ receptorbindingsaktivitet I

I 5 I

I I

I 10 Forbinde!se Progestin RBAa G1ucocort.RBAb P-RBA/G-RBAC I

I R_l R_2 I

I -OAc -H -H 47 198 0,24 I

-OAC -H 0-CH3 43. 242 0,18 I

I -OAC -Η β-CH3 15 ND I

I 15 -OH -Η -H 15 41 0,37 I

-OH -H a-CH3 46 175 0,26 I

I -H -Et -H 80 124 0.65 I

I -H -Et ct-CH3 61 246 0,42 I

I -H -Et /J-CH3 48 106 0,45 I

I 20 -Δ1 * - -H 8 ND - I

a Relativ evne til at fortrænge tritium-mærket progesteron fra I

receptoren i uterincytosol fra østrogen-præparerede, umodne I

hunkaniner i forhold til progesteron ( = 100). I

b Relativ evne til at fortrænge tritium-mærket dexamethason fra I

25 receptoren i thymus hos adrenalektom i serede rotter i forhold I

til dexamethason ( = 100). I

c forhold mellem RBA-værdier mellem progesteronreceptor (P-RBA) I

og glucocorticoidreceptor (G-RBA). I

30 Eksempel 10. In vivo antiproqestational aktivitet. I

Den antiprogestationale aktivitet hos forbindelserne blev un- I

dersøgt efter både intrauterin og oral administration. I hvert I

tilfælde blev forbindelsen undersøgt for sin evne til at in- I

H 35 hibere det endometrierespons, der skyldes subkutan administra- I

H tion af progesteron til østrogen-præparerede, umodne hunkani- I

ner. Metoden, der blev anvendt til intrauterinundersøgelsen, I

33 DK 175760 B1 er beskrevet af D.A. McGinty et al., se Endocrinology, 24, 829 (1939). Til oral administration af testforbindelserne var den anvendte metode analog med den af Clauberg. Se Clauberg, Zentr. Gynakol., 54, 2757 (1930) som modificeret af McPhail, 5 J, Physiol. (London), 83, 145 (1935).

Resultaterne af intrauterinundersøgelserne er givet i tabel 2. Hver aktive forbindelse blev karakteriseret ved en dosisafhæn-'gig evne til at blokere den progestationale virkning af samti-10 digt indgivet progesteron. Når den procentvise inhi bering blev afbildet mod log af dosen, blev der opnået et lineært forhold. Lineær regressionsanalyse muliggjorde beregning af EDgg- og EDgø-værdier (de doser, der kræves til henholdsvis 50% og 90% inhibering af progesteronvirkningen). Den faktiske dosis, som 15 gav en inhibering på 90% eller mere, er også givet, selv om denne værdi muligvis er mindre akkurat end de beregnede værdier, som er baseret på dosis-respons-kurven. Disse resultater stemmer overhovedet ikke godt overens med in vitro bindingsundersøgelserne. Eftersom man ved den intrauterine administra-20 tion undgår de fleste lægemiddelmetaboliserende systemer i legemet, især 1everen, forventes intrinsic-aktiviteten at stemme rimeligt godt overens med bindingsaktiviteten til receptoren ifølge for tiden gældende hypoteser vedrørende receptorbinding. Selv om 17a-acetoxyforbindelserne binder godt og også 25 udviser kraftig antiprogestationa1 aktivitet, har Δ-16-forbin-delsen imidlertid endnu kraftigere aktivitet, selvom dens RBA var mindre end en fjerdedel af værdien for 17a-acetoxy-forbin-delserne. Endnu mere overraskende var manglen på antiprogesta-tional aktivitet hos 16a-ethylforbindelserne, selvom de udvi-30 ste den stærkeste binding til progesteronreceptoren.

17a-acetoxyforbindelserne udviste også stærk antiprogestational aktivitet ved oral indgivelse, som det er vist i tabel 3 for 17a-acetoxy-6a-methyl-ll|3- (4-N,N-dimethylaminophenyl) -19-35 norpregna-4,9-dien-3,20-dion.

I DK 175760 B1 I

I 34 I

I TABEL 2 I

Opsummering af anti-McGinty-aktivitet I

I I

I Forbindelse ED50(M9)a EDgp(μ g)a EDg0(Mg)b I

I R2 R3 I

I 8a -OAc -Η -H 0,41 1,2 2,0 I

I 8b -OAC -H a-CH3 0,54 1,9 2,0

I 19 -H -Et -H - - >>80c I

I 15a -H -Et 0-CH3 >>10c I

15 23 -Δ16- -h 0,26 0,81 1,0 I

I RU - 48 6 0,28d 0,87d 1,Od I

a Fra % inhibering* a +b* ln dosis. I

b Faktisk dosis, der giver £90% inhibering.

c Ingen inhibering ved den undersøgte dosis. I

20 d Variable resultater. Disse data er fra det bedste forsøg. I

I TABEL 3 I

Oral antiprogestational aktivitet (anti-Clauberg) af 17a-acet- I

oxy-6o-methyl-118-(4-N,N-diroethylaminophenyl)-19-nor-pregna- I

I 25 4,9-dien-3,20-dion(15) I

Total oral Total SC Vægt af McPhail- % I

H dosis dosis af uterus indeks inhibering*5 I

Na (mg) proqesteron(mg) (g t SD) (0-41_____ I

30 6 0,0 0,0 1,98 t 0,40 0 I

I 6 0,0 0,8 3,06 i 0,45 3,96 ± 0,04 I

I 6 1,0 0,8 3,26 ± 0,34 3,46 ± 0,12 12,7 ± 3,0 I

6 5,0 0,8 2,14 ± 0,22 1,92 i 0,48 51,6 i 12,2 I

I 5 10,0_0,8 2.24 i 0.27 1,30 t 0,24 67,2 ± 6.1 , I

35 a Antal kaniner. i I

Hk i

H ° Baseret på ændring i McPhai1-indeks. I I

35 DK 175760 B1 TABEL 4

Progestational aktivitet (McGinty-bestemme 1 se) a 10 R. Oos i s itq) _McPha i 1- i ndeks_ Højre Horn Venstre Horn (Kontrol) (behandlet) -H 2,0 0 3,0 ± 0,32 4,0 0 3,7 ± 0,12 15 8,0 0 3,6 ± 0,10 a-CH3 20,0 0 3,8 ± 0,12 40.0 0 3,9 i 0,12 80.0 0 3,8 i 0,12 20 Eksempel 11. Progestational aktivitet in vivo.

16a-ethylforbindelserne, som ikke viste nogen antiprogesta-tional aktivitet, blev undersøgt for progestational aktivitet i intrauterinundersøgelsen. Ved denne undersøgelse behandles 25 østrogen-præparerede, umodne hunkaniner ved injektion af testforbindelsen i venstre uterushorn, mens det højre horn lades ubehandlet som en kontrol. Hvert horn bedømmes derefter for endometrieproli feration ved hjælp af McPhai1-indekset. Som det fremgår af tabel 4, er disse forbindelser kraftigt vir-30 kende progestationale midler. Dette er et fuldstændigt uventet resultat, eftersom alle eksempler indenfor området, der kendes, viser, at forbindelser, som bindes til progesteronre-ceptoren og indeholder en 110-(4-N,N-dimethy1aminophenyl) -substi tuent udviser ant i progestational aktivitet. Det angiver 35 et muligt behov for omvurdering af de for tiden gældende hypoteser med hensyn til virkningen af denne substituent på antagonistaktivitet mod agonistaktivitet.

I DK 175760 B1 I

I I

Adskillige modifikationer og variationer af den foreliggende H

I opfindelse er naturligvis muligt i lyset af de ovenstående an- I

I visninger. Det skal derfor forstås, at inden for rammerne af

I de foreliggende krav, kan opfindelsen udøves i praksis på an- H

I 5 den måde, end det specifikt er angivet heri.

I I

I 15 I

i i

I 25 I

i I

i I

Claims (21)

1. 30 CH3SO eller CH3S02, og X er O eller NOCH3; eller I DK 175760 B1 I I 38 I (iii) Rl og R3 taget sammen er -CH2- eller -N=N-CH2-, R2 er H, R4 er H, CH3, F eller I I Cl, R6 er H, (CH3)2N, CH30, CH3CO, CH3S, CH3SO eller CH3S02, og X er O eller I I NOCH3; eller I I 5 (iv) R2 og R3 taget sammen er =CH2, R1 er H, CMalkyl} C^alkenyl eller C2^alkynyl, I I R4 er H, CH3, F eller Cl, R6 er H, (CH3)2N, CH30, CH3CO, CH3S, CH3SO eller I I CH3S02, og X er O eller NOCH3. I
2. 2. Norprogesteron ifølge krav 1 med formlen I I 10 ch, I a* 1 I I I I R* I
3. 15 I I hvori R1 er 0C(0)CH3 eller 0C(0)R5, R5 er C2.8alkyl, C^alkenyl, C2.8alkynyl eller I I aryl, R2 er H, R3 er H, CMa]kyl, C^alkenyl eller C^alkynyl, R4 er H, CH3> F eller Cl, I I R6 er H, (CH3)2N, CH30, CH3CO, CH3S, CH3SO, CH3S02s og X er O eller NOCH3. I I 20 3. Norprogesteron ifølge krav 1 med formlen: R6 .. I I 25 I I i hvori R1 er C2^alkynyl, og R2, R3, R4 og R6 har den i krav 1 angivne betydning. I
4. 4. Norprogesteron ifølge krav 2 eller 3, hvori R6 er Ν,Ν-dimethylamino eller ace- I I I I 30 I DK 175760 B1 39
5. 5. Norprogesteron ifølge ethvert af kravene 2 til 4, hvori R4 er hydrogen eller methyl.
6. 6. Norprogesteron ifølge krav 1, hvori nævnte norprogesteron er 17a-acetoxy- 5 6a-methyl-11 /3-(4-N,N-dimethylaminophenyl)-19-norpregne-4,9-dien-3 ,20-dion, 17a - acetoxy-11 /3-(4-N,N-dimethyl aminophenyl)-19-norpregna-4,9-dien-3,20-dion, 16a- ethyl-1 l/3-(4-N,N-dimethylaminophenyl)-l 9-norpregna-4,9-dien-3,20-dion, 16o-ethyl-6a-methyl-11 /3-(4-N,N-dimethylaminophenyl): 19-norpregna-4,9-dien-3,20-dion, 17a-ethynyl-11 /3-(4-N,N-dimethylaminophenyl)-19-norpregna-4,9-dien-3,20-dion, 11 /3-(4-10 acetylphenyl)-19-norpregna-4,9-dren-3,20-dion, 17a-acetoxy-l l/3-(4-acetylphenyl)- 19-norpregna-4,9-dien-3,20-dion eller 17a-ethynyl-11 /3-(4-acetylphenyl)-19-norpreg-na-4,9-di en-3,20-dion.
7. 7. Norprogesteron ifølge krav 1 med formlen:
8. 15 R‘ - f"> 20 R* hvori R3. R4, R6 og X er som angivet i (ii).
9. 8. Norprogesteron ifølge krav 7, hvori R6 er Ν,Ν-dimethylamino eller acetyl. 25
10. 9. Norprogesteron ifølge krav 7, hvori nævnte norprogesteron er 1 l/8-(4-N,N-di-methylaminophenyl)-19-norpregna-4,9,16-trien-3,20-dion eller 11 /3-(4-acetylphenyl)-19-norpregna-4,9,16-trien-3,20-dion. 30 I DK 175760 B1 I I 40 I
11. 10. Norprogesteron ifølge krav 1 med formlen: I I r< ^ f3 I I I I . I I hvori R* og R3 taget sammen er -CH2- eller -N=N-CH2-, R2 er H og R4, R6 og X er I som angivet i (iii). H I I
12. 11. Norprogesteron ifølge krav 10, hvori R4 er hydrogen eller methyl og R6 er di- I I methyl amino eller acetyl. I
13. 12. Norprogesteron ifølge krav 1 med formlen: I I 15 R* f*3 I I Υ5ι fv I I I I hvori R1, R4, R6 og X er som angivet i (iv). H
14. 13. Norprogesteron ifølge krav 12, hvori R1 er acetoxy eller C2.8alkynyl, R4 er hy- I drogen eller methyl og R6 er dimethylamino eller acetyl. I I I
15. 14. Sammensætning til fremkaldelse af en anti-glucocorticoid antihormonal reak- H I tion hos et menneske eller ikke-humant pattedyr med behov derfor, omfattende en anti- I I glucocorticoid mængde af et norprogesteron ifølge krav 1, idet nævnte norprogesteron I I har en bindingsaffinitet for gliicocorticoidreceptoren og har anti-glucocorticoid aktivi- I I 30 tet hos nævnte menneske eller ikke-humane pattedyr. I DK 175760 B1 41
16. 15. Sammensætning ifølge krav 14, hvori nævnte mængde er en enhedsdosis mellem 0,1 milligram og 1,0 gram.
17. 16. Sammensætning ifølge krav 14, hvori nævnte menneske eller ikke-humane 5 pattedyr udviser Cushing's syndrom eller glaucoma.
18. 17. Sammensætning til fremkaldelse af en progestational hormonal reaktion hos et menneske eller ikke-humant pattedyr med behov derfor, omfattende en progestional mængde af et norprogesteron ifølge krav 1, idet nævnte norprogesteron har en bin- 10 dingsaffinitet for progesteronreceptoren og besidder progestational aktivitet hos nævnte menneske eller ikke-humane pattedyr.
19. 18. Sammensætning ifølge krav 17, hvori nævnte mængde er en enhedsdosis mellem 0,1 milligram og 1,0 gram. 15
20. 19. Sammensætning, som fremkalder en anti-progestational reaktion hos et menneske eller ikke-humant pattedyr, omfattende en anti-progestational mængde af et norprogesteron ifølge krav 1, idet nævnte norprogesteron har en bindingsaffinitet for progesteronreceptoren og besidder anti-progestational aktivitet hos nævnte menneske 20 eller ikke-humane pattedyr.
21. 20. Sammensætning ifølge krav 19, hvori nævnte mængde er en enhedsdosis mellem 0,1 milligram og 2,0 gram. 25 I 1