CZ2003270A3

CZ2003270A3 - 16 alfa-Methyl- nebo -ethylsubstituované estrogeny

Info

Publication number: CZ2003270A3
Application number: CZ2003270A
Authority: CZ
Inventors: Jordi Mestres; Hubert Jan Jozef Loozen; Gerrit Herman Veeneman
Original assignee: Akzo Nobel N. V.
Priority date: 2000-07-28
Filing date: 2001-07-23
Publication date: 2003-06-18
Also published as: KR20030029640A; ES2241854T3; HRP20030060A2; EP1307471A1; EP1307471B1; US20100029603A1; CA2416311C; IL153934A; BR0112791A; DE60110606T2; ATE294812T1; HUP0301592A2; PE20020331A1; IL153934A0; WO2002010188A1; CN1220696C; AU2001282016B2; PL366235A1; JP2004505093A; NO20030419L

Description

Oblast techniky

Vynález se týká steroidních sloučenin, substituovaných v poloze 16alfa-methylovou nebo ethylovou skupinou a použití takových látek pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení chorob, zprostředkovaných přes receptor estrogenu.

Dosavadní stav techniky

Steroidní sloučeniny s estrogenním účinkem mají své dlouhodobé použití při léčení různých chorob a při antikoncepci. Přes dlouhé používání těchto látek by bylo stále ještě zapotřebí mít k dispozici účinnější, bezpečnější a hospodárnější sloučeniny. Tato potřeba je čím dál naléhavější vzhledem k prodlužování lidského věku. Jde zejména o problémy starších žen, u nichž se snižuje koncentrace estrogenů, což má negativní důsledky na kostní tkáň a na funkci srdce a cév. Pro léčení estrogenními látkami jsou k dispozici vysoce účinné 16alfa-substituované estrogenní steroidy, popsané například v publikaci Fevig a další, Steroids 51, s. 471497, 1988 a v dokumentech DE 2757157, US 3704253 a také v publikaci Takikawa a další, Res. Steroids, sv. 7, s. 291299, 1977. 7alfa, llbeta-disubstituované estrogeny jsou známé z publikace Tedesco a další, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, sv. 7, č. 22, s. 2919-2924, 1997, avšak další zlepšení v tomto oboru je stále možné. Objev podtypů receptorů pro estrogeny, zejména alfa-podtypu (ER a) a beta-podtypu (ER β) poskytuje možnost selektivnější aktivace specifického podtypu receptorů, takže je možno některé poruchy účinněji léčit při menším výskytu vedlejších účinků. 16alfa-methylestrogeny jsou specificky popsány v publikaci González a další, Steroids sv. 40, 171-187, 1982, avšak sloučeniny s konfigurací 16beta nemají obecně příznivý selektivní účinek.

Vynález je založen na objevu látek, které jsou neočekávaně selektivní pro receptor estrogenu podtypu alfa.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří 16alfa-methyl- nebo -ethylsubstituované estrogeny obecného vzorce 1

kde kruh, naznačený přerušovanými čarami (kruh A) je plně nasycený, plně aromatický nebo jde o nasycený kruh s Δ5-10 dvojnou vazbou,

R¹ znamená Cl-C3alkyl nebo C2-C3alkenyl, přičemž každá z těchto skupin je popřípadě substituována jedním nebo větším počtem atomů halogenu,

R² znamená Cl-C4alkyl, C2-C4alkenyl nebo methylenovou skupinu, přičemž každá z těchto skupin je popřípadě substituována jedním nebo větším počtem atomů halogenu, ·· ···· ·· ···· ·· ···· • · ··· ··· · • · · · · ···· φ • · ···· ···· ····· «··· ····

R³ znamená methyl nebo ethyl.

Vazby v polohách 3 a 7, pro něž není ve vzorci stereochemie specifikována, mohou být nezávisle v poloze alfa nebo beta vzhledem ke steroidní struktuře. Je zřejmé, že v případě, že R² znamená methylenovou skupinu, nebude vazba v poloze 11 v konfiguraci beta.

Výhodným atomem halogenu ve významu R² je atom chloru nebo fluoru.

Výhodným významem pro symbol R² je Cl-C2alkyl nebo vinyl.

Do rozsahu vynálezu spadají také prekursory svrchu uvedených účinných látek.

Prekursor je definován jako sloučenina, která se v organismu příjemce transformuje na sloučeninu obecného vzorce 1. Tyto látky mohou vznikat například tak, že hydroxyskupiny, znázorněné ve vzorci mohou být substituovány alkyl*oxyskupinou, alkenyl*oxyskupinou, acyl*oxyskupinou, aroyloxyskupinou, alk*oxykarbonyloxyskupinou, sulfonylovou skupinou nebo fosfátovou skupinou, přičemž délka uhlíkového řetězce ve skupinách, označených (*) není kritická, aroylovou skupinou je obecně fenyl, pyridinyl nebo pyrimidyl.

Výhodnými prekursory jsou estery karboxylových kyselin nebo alkylethery na jedné nebo obou hydroxylových skupinách, velmi výhodnými sloučeninami jsou estery karboxylových kyselin o dvou až šesti atomech uhlíku, například estery kyseliny (iso)butanové nebo • · · · • · ·· · · · ··· ·

Cl-C4alkyletheru. Délka alkylových, alkenylových a acylových skupin se volí v závislosti na požadovaných vlastnostech prekursorů, přičemž látky s delším řetězcem, například deriváty kyseliny laurové nebo kapronové jsou vhodnější pro pomalejší uvolňování a pro depotní prostředky. Je známo, že substituenty uvedeného typu jsou hydrolyzovány spontánně nebo působením enzymů na volné hydroxylové skupiny na struktuře sloučeniny. Biologická účinnost těchto prekursorů je srovnatelná s účinností sloučenin, na něž se tyto látky mění v organismu příjemce. Účinná látka, na níž se prekursor mění, se obvykle označuje jako původní látka. Nástup účinku a jeho trvání a také distribuce prekursorů v organismu mohou však být odlišné od vlastností původní látky. Pro jiné typy prekursorů je možno uvést, že hydroxylové skupiny ve vzorci 1 mohou být do své polohy uvedeny metabolickým systémem příjemce. Tyto hydroxylové skupiny jsou podstatné pro afinitu k receptorům estrogenu. To znamená, že sloučeniny obecného vzorce 1 bez jedné nebo obou hydroxylových skupin jsou rovněž organismem přebudovávány na účinné látky a je možno je rovněž označit za prekursory.

Alkyl znamená v průběhu přihlášky zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem, například methyl, ethyl, propyl, butyl nebo sek.butyl.

Alkenyl znamená rovněž skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem, například ethenyl, 2-butenyl a podobně.

Atom halogenu znamená v průběhu přihlášky atom fluoru, chloru, bromu a jodu.

• · · to • to ·· ··· ·

Aroyl znamená arylkarbonylovou skupinu, například benzoyl.

Aryl znamená mono- nebo polycyklický, homo- nebo heterocyklický aromatický kruhový systém.

Acyl znamená alkylkarbonylovou skupinu.

Profil selektivní účinnosti sloučenin podle vynálezu k receptorům estrogenu činí tyto látky vhodnými pro použití k léčebným účelům. Jde o zlepšené estrogenní látky v tom smyslu, že je možno užít tyto sloučeniny zejména k ovlivnění receptorů estrogenu, například pro antikoncepční účely nebo také při léčení nebo prevenci benigní hypertrofie prostaty, onemocnění srdce a cév, obtíže po menopauze, při osteoporóze, při potlačování nádorů, závislých na estrogenech nebo při některých poruchách centrálního nervového systému, jako je deprese nebo Alzheimerova choroba.

Vynález se také týká použití uvedených derivátů pro výrobu farmaceutického prostředku, určeného pro selektivní ovlivnění receptorů estrogenu. Jde zejména o aktivaci alfa-podtypu uvedených receptorů. Farmaceutický prostředek tohoto typu je možno užít pro léčení chorob, vznikajících přes receptor estrogenu, jako jsou obtíže v přechodu a mimoto je tyto prostředky obecně možno použít k substituční léčbě, HRT. Farmaceutický prostředek podle vynálezu se aplikuje do organismu, v němž jsou přítomny oba podtypy receptorů. Jde tedy o selektivní aktivaci jednoho z přítomných receptorů sloučeninami podle vynálezu, použitými ve vhodném množství. Prostředky jsou • · • · · ·

zvláště vhodné pro léčení obtíží v přechodu a pro léčení osteoporózy, jde tedy o substituční hormonální léčbu.

Organismem, na který je možno tímto způsobem selektivně působit, může být organismus člověka nebo jiného živočicha, obvykle půjde o ženu nebo samici, u níž bude zapotřebí zvýšit koncentraci estrogenů.

Součást podstaty vynálezu tvoří také farmaceutický prostředek, který jako svou účinnou složku obsahuje deriváty obecného vzorce 1 ve směsi s farmaceuticky přijatelnými pomocnými látkami.

Vynález se zvláště týká použití sloučenin podle vynálezu pro výrobu farmaceutického prostředku, určeného pro antikoncepci. V těchto případech se sloučeniny podle vynálezu podávají ve vhodném množství ve směsi progestogenu a estrogenů, tak jak se k tomuto účelu běžně podávají, přičemž jako estrogeny se použijí ve směsi svrchu popsané deriváty.

Sloučeniny podle vynálezu je možno připravit různými postupy, známými v organické chemii steroidních látek. Methylovou nebo ethylovou skupinu do polohy 16alfa ve steroidní struktuře je možno snadno zavést podle literárních údajů. Obvykle je možno vytvořit na atomu uhlíku v poloze 16 anion tak, že se na C-17-ketony působí příslušnými bázemi, například solemi alkalických kovů s organickými sekundárními aminy, jako diisopropylaminem nebo hexamethyldisilazanem. Na tyto anionty se pak působí alkylačními činidly, například alkylhalogenidy za vzniku požadovaných 16alfa-alkylovaných steroidních sloučenin. Alkylací je možno uskutečnit také jinými způsoby,

44 4 například tak, že se C17-karbonylsteroid převede na odpovídající hydrazon s následnou tvorbou C16-aniontu a alkylaci, načež se uvolní karbonylová skupina odštěpením hydrazonu. Anion v poloze 16 je možno vytvořit také konjugovanou redukcí steroidního Al5-en-17-onu působením alkalických kovů. Další způsoby syntézy budou ilustrovány v následujících schématech a v příkladové části.

Prekursory typu esterů je možno připravit esterifikací sloučenin s volnými hydroxylovými skupinami působením příslušných acylchloridů v pyridinu.

Způsoby výroby farmaceutických prostředků jsou popsány v souhrnné publikaci Gennaro a další,

Remmíngton's Pharmaceutical Sciences, 18. vyd. Mack publishing company, 1990, zvláště část 8: Pharmaceutical Preparátions and Their Manufacture, další poznatky je možno získat například v příručce Handbook of Pharmaceutical Excípíents, 2. vydání, Ed. A. Wade a P. J. Waller, American Pharmaceutical Association, Washington, The Pharmaceutical Press, Londýn 1994. Směs sloučeniny podle vynálezu a farmaceuticky přijatelných pomocných látek je možno lisovat na pevné lékové formy, například pilulky nebo tablety, plnit do kapslí nebo zpracovat na čípky. Při použití vhodných kapalin je možno sloučeniny podávat také ve formě injekčních prostředků jako roztoky, suspenze nebo emulze nebo ve formě spreye, například na nosní sliznici. Při výrobě lékových forem, například tablet, je možno použít běžné přísady, například plniva, barviva, polymerní pojivá a podobně. Obecně je možno použít jakékoliv farmaceuticky přijatelné přísady, které neinterferují s funkcí použité účinné látky. Sloučeniny podle vynálezu je také možno zpracovat na různé typy ·· ···· ···· • · ··· ·· · • · · · · ···· · • · · · · · · · · · ···· 9 ·· 99 99 99 implantátů, na vaginální pesary, náplasti, gely a jakékoliv další prostředky pro zpomalené nebo prodloužené uvolňování účinné látky.

Z vhodných nosičů, které je možno použít při výrobě farmaceutických prostředků je možno uvést laktózu, škrob, deriváty celulózy a podobně nebo směsi těchto látek ve vhodných množstvích.

Takto připravené farmaceutické prostředky je možno ve vhodných lékových formách podávat člověku nebo jiným živočichům při léčení svrchu popsaných chorobných stavů. Vhodné dávky sloučenin podle vynálezu se budou pohybovat v rozmezí, obvyklém pro estrogenní sloučeniny, půjde například o 0,01 až 100 mg pro jednotlivé podání.

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

V následujících reakčních schématech 1 a 2 jsou sloučeniny označeny číslovanými strukturními vzorci.

Příklad 1 ·· 4·4· ·· 4 4 · 4

4· 4 4 4 4 • · · · · 4 4

44 44 44

NMR spektra byla zaznamenávána v roztocích v CDC1₃ spektrometrem při 400 MHz.

·« ···· ·· «··· «· «··· • · · · · · · 9 • · · · · · · · · · • · · · · · · 9 9 9

Sloučenina 2

Roztok 13 ml terč.butyldimethylsilylchloridu ve 20 ml diethyletheru se po kapkách přidá ke směsi 15 g llbeta-methyldienolonu vzorce 1 a 14 g imidazolu ve 150 ml DMF při teplotě 0 °C. Směs se míchá 2 hodiny, po této době je reakce ukončena. Přidá se voda a produkt se extrahuje ethylacetátem. Takto získaný materiál se čistí průchodem přes krátký sloupec oxidu křemičitého, čímž se získá 17 g sloučeniny vzorce 2. R_f = 0,56 (heptan a ethylacetát 7:3), NMR δ 1,1 (d, 3, 11β CH₃j , 0,91 (s, 3, 18-CH₃) , 3,55 (m, 1, 17CCH) , 5,80 (m, 1, H4), 6,21 (s, 2, H6,H7).

Sloučenina 3

K roztoku 20,5 g steroidu vzorce 2 a 2 g octanu mědnatého v 500 ml bezvodého THF se po kapkách přidá při teplotě -30 °C v průběhu 3/4 hodiny 40 ml 22% roztoku methylmagnesiumchloridu v THF. Reakční směs se ještě 1/2 hodiny míchá a pak se vlije do roztoku 30 ml koncentrované kyseliny sírové ve 100 ml vody. Směs se míchá ještě dalších 16 hodin, pak se přidá 19 g octanu sodného a produkt se extrahuje ethylacetátem. 17alfa-isomer se čistí chromatografii na oxidu křemičitém, čímž se získá 8,5 g čisté sloučeniny vzorce 3. Rf = 0,45 (heptan a ethylacetát 1:1), Rf 7P-isomeru = 0,42. NMR δ 1,07 (d, 3, 1ΐβ-ΟΗ₃) , 0,88 (s, 3, 18-CH₃) , 0,78 (d, 3,

7a-CH₃) .

·· ·«·· «· ·«·· ·· ···· ·· ·*· toto· to «· ··· ··· • · to * · ···· · • · ···· ···· ···· · ·· ·· ·· ··

Sloučenina 4

Směs 5,5 g sloučeniny vzorce 3, 15 ml pyridinu,

4,7 ml anhydridu kyseliny octové a 40 mg DMAP se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Pak se přidá voda a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje 2N HCl k odstranění pyridinu a pak vodou. Odparek, získaný po zahuštění roztoku se použije jako takový v následujícím stupni. R_f = 0,59 (heptan a ethylacetát 1:1), NMR δ 1,06 (d, 3, 1ΐβ-ΟΗ₃) , 0,92 (s, 3, 18-CH₃) ,

0,78 (d, 3, 7a-CH₃) , 2,04 (s, 3, acetát), 4,56 (dd, 1,

H17a) 5,84 (široký s, 1, H4) .

Sloučenina 5

K roztoku 6,2 g sloučeniny vzorce 4 ve 180 ml bezvodého acetonitrilu se přidá 1,6 g LiBr a pak 8 g CuBr₂. Směs se míchá 2 hodiny, po této době aromatizační reakce ukončena. Směs se zředí 40 0 ml vody a extrahuje se ethylacetátem. Organická vrstva se promyje vodou a 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se a odpaří. Chromatografickým čištěním se získá 4,2 g sloučeniny vzorce 5. Rf = 0,67 (heptan a ethylacetát

1:1) ,	NMR δ	0,84 (d,	3, Ιΐβ-CHs) , 0,93 1	(s, 3, I8-CH3),
0,81	(d, 3,	7ct-CH₃) ,	2,05 (s, 3, acetát^	), 4,64 (dd, 1,
H17a)	6,52	(d, 1, H4	), 6,62 (AB, 1, H2)	, 7,03 (AB, 1,

Hl) .

Sloučenina 6

K roztoku 4,2 g sloučeniny vzorce 5 ve 2 0 ml DMF se přidá při teplotě 0 °C celkem 1,7 g imidazolu a pak ještě ··-»·

• 94 4 • * 4 • · · 4 • · · 4 ·· ··«· •4 ·4·»

2,2 g TBDMS-Cl. Směs se míchá několik hodin při teplotě místnosti a po ukončení silylace se vlije do 10 ml vody. Produkt se extrahuje ethylacetátem. Získaný produkt se nechá projít krátkým sloupcem oxidu křemičitého, čímž se získá 4,5 g sloučeniny vzorce 6. Rf = 0,77 (heptan a ethylacetát 7:3), NMR δ 0,84 (d, 3, 11β-Οί₃) , 0,94 (s, 3, 18-CH₃) , 0,80 (d, 3, 7a-CH₃) , 0,98 (s, 9, terč . C₄H₉Si) , 0,18 (s, 6,Si(CH₃)2), 2,06 (s, 3, acetát), 4,64 (dd, 1, H17a) 6,49 (d, 1, H4) , 6,59 (AB, 1, H2) , 7,00 (AB, 1,

Hl) .

Sloučenina 7

Roztok 5,4 g sloučeniny vzorce 6 v 70 ml THF se po kapkách za míchání přidá k suspenzi 400 g LiAlH₄ ve 20 ml THF. Směs se 15 minut míchá, po této době je redukce ukončena a ke směsí se přidá nejprve 1,1 ml nasyceného Na₂SO₄ a pak ještě 8 g Na₂SO₄, načež se směs zfiltruje přes vrstvu celitu a odpaří, čímž se získá 4,5 g sloučeniny vzorce 7. R_f = 0,50 (heptan a ethylacetát 7:3), NMR δ 0,85 (d, 3, 1ΐβ-ΟΗ₃) , 0,90 (s, 3, I8-CH3),

0,80 (d, 3, 7a-CH₃), 0,97 (s, 9, terč. C₄H₉Si) , 0,18 (s, 6, Si(CH₃)₂), 3,70 (dd, 1, H17ot) .

Sloučenina 8

K roztoku 4,5 g sloučeniny vzorce 7 a 3,4 g NMO v 50 ml acetonu se přidá 100 mg TPAP. Směs se 1 hodinu míchá, po této době je oxidace ukončena. K reakční směsi se přidá 5 g silikagelu a pak ještě 90 ml heptanu. Směs se 15 minut míchá a pak se zfiltruje přes celit. Filtrát ·· ···· ©* ·©··

9999

9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9

99 99 99 99 se odpaří a nechá se projít krátkým sloupcem oxidu křemičitého, čímž se získá 3,7 g sloučeniny vzorce 8.

R_f = 0,66 (heptan a ethylacetát 7:3), NMR δ 0,86 (2xd, 6, 7α+11β-ΟΗ₃) , 1,01 (s, 3, 18-CH₃), 0,98 (s, 9, terč . C₄H₉Si) , 0,19 (s, 6, Si(CH₃)₂), 6,53, (d, 1, H4) ,

6,62 (AB, 1, H2), 7,01 (AB, 1, Hl).

Sloučenina 9a

Roztok 1 g steroidu vzorce 8 a 0,64 ml DMPU ve 20 ml bezvodého THF se po kapkách přidá při teplotě -45 °C k roztoku 2,66 ml 1M LiHMDS v 10 ml THF. Směs se míchá ještě 1/2 hodiny při -45 °C, pak se přidá 0,20 ml methyljodidu a směs se míchá při teplotě -20 °C až do ukončení alkylace, obvykle 1/2 hodiny. Pak se přidá 200 ml 10% vodného roztoku chloridu amonného a produkt se extrahuje ethylacetátem. Po dalším čištění materiálu chromatografií se získá 0,88 g 16alfa-alkylované sloučeniny vzorce 9a. Rf = 0,70 (heptan a ethylacetát 7:3), NMR δ 0,86 (2xd, 6, 7CC+11 b+llp-CH₃) , 1,05 (s, 3, 18-CH₃), 0,97 (s, 9 terč . C₄H₉Si) , 0,19 (s, 6, Si(CH₃)₂), 1,14 (d, 3, 16cíCH₃) 6,53 (d, 1, H4), 6,62 (AB, 1, H2),

7,01 (AB, 1, Hl).

Sloučenina 9b

Postupuje se stejným způsobem jako při přípravě sloučeniny vzorce 9a, avšak jako alkylační činidla se užije 0,25 ml ethyljodidu. Reakční směs se míchá několik hodin při teplotě místnosti až do úplného ukončení. Po chromatografii se získá 0,84 g sloučeniny vzorce 9b. Rf = 0,75 (heptan a ethylacetát 7:3). NMR δ 0,86 (2xd, 6, ♦ 4 • 4

7α+1ΐβ-0Η₃) , 1,05 (s, 3, 19-CH₃) , 0,97 (s, 9 terč . C₄H₉Si) , 0,96 (t, 3, 16aCH₃CH₂-), 0,19 (s, 6, Si(CH₃)₂) 6,53 (d,

1, H4), 6,62 (AB, 1, H2), 7,01 (AB, 1, Hl).

Sloučenina 10a

Roztok acetylidu lithného se připraví tak, že se po kapkách přidá 10,3 ml 1,6M roztoku BuLi/hexan k roztoku 0,67 ml 1,2-dibromethenu ve 2 0 ml bezvodého THF při teplotě -60 °C. Směs se míchá ještě 1/2 hodiny, pak se přidá roztok 0,88 g sloučeniny vzorce 9a v 10 ml THF a reakční směs se postupně zahřeje na teplotu místnosti.

Pak se směs ještě 1 hodinu míchá po této době je reakce ukončena a směs se vlije do 10% vodného roztoku chloridu amonného. Produkt se extrahuje ethylacetátem a čistí chromatografií, čímž se získá 790 mg sloučeniny vzorce 10a. Rf = 0,23 (heptan a ethylacetát 9:1). NMR δ 0,80 (d, 3, 7ccCH₃) , 0,87 (d, 3, 1ΐβ<2Η₃) , 1,05 (s, 3, 19-CH₃) , 0,97 (s, 9, terč. C₄H₉Si) , 0,19 (s, 6, SÍ(CH₃)₂), 1,20 (d, 3,

16aCH₃) 2,68 (s, 1, acetylen).

Sloučenina 10b

Postupuje se obdobným způsobem jako při výrobě sloučeniny vzorce 10a, avšak užije se 0,84 g sloučeniny vzorce 9b, čímž se získá 710 ml sloučeniny vzorce 10b. Rf = 0,24 (heptan a ethylacetát 9:1). NMR δ 0,79 (d, 3,

7aCH₃) , 0,88 (d, 3, 11β(2Η₃) , 0,98 (t, 3, 16a CH₃CH₂-) ,

0,96 (s, 9 terč. C4H9S1) , 0,19 (s, 6, Si(CH₃)₂), 2,65 (s,

1, acetylen).

• · · · ·· · · ·· ··

Sloučenina 11a

K roztoku 790 mg sloučeniny vzorce 10a v 1 ml THF se přidá 2,5 ml 1M TBAF v THF. Směs se 10 minut míchá, po této době jsou ochranné skupiny úplně odstraněny. Přidá se voda, produkt se extrahuje ethylacetátem, a pak se čisti přes krátký sloupec oxidu křemičitého. Získaný materiál se rozetře se směsí heptanu a diisopropyletheru 1:1, čímž se získá 480 mg v podstatě čisté sloučeniny vzorce 11a. Rf = 0,31 (heptan a ethylacetát 7:3), teplota tání 204 až 205 °C. NMR δ 0,81 (d, 3, 7aCH₃) , 0,88 (d, 3, 1ΐβΟΗ₃) , 1,05 (s, 3, 18-CH₃) , 1,20 (d, 3, 16aCH₃) 2,69 (s, 1, acetylen).

Sloučenina 11b

Sloučenina vzorce 11b se připraví obdobným způsobem jako sloučenina vzorce 11a při použití 710 mg sloučeniny vzorce 10b. Výsledný produkt se vysráží ze směsi ethanolu a vody, čímž se získá 430 mg v podstatě čisté sloučeniny vzorce 11b. Rf = 0,30 (heptan a ethylacetát 7:3) . NMR δ 0,80 (d, 3, 7ccCH₃) , 0,88 (d, 3, 1ΐβ<2Η₃) , 1,00 (t, 3, 16a CH₃CH₂-), 1,06 (s, 3, 18-CH₃) 2,65 (s, 1, acetylen).

Příklad 2

Syntéza (3α,Ιΐβ,16a,17β) -16- methyl-11-(2-propenyl)-19-norpregn-5(10)-en-20-in-3,17-diolu (sloučenina vzorce 27) je popsána v následujícím schématu 2.

φφφφ φφφφ φφφφ

Schéma 2

• · · · · · · · · · ·· • · ··· · · · · • · · · · · ····

..... ·· ·* ·* ·*

Sloučenina 13

K roztoku 17,3 g Cul a 3,84 g LÍCI v 250 ml bezvodého THF se přidá při teplotě -70 °C celkem 90,6 ml 1M roztoku allylmagnesiumbromidu diethyletheru. Směs se ještě 20 minut míchá a pak se přidá 11,4 ml trimethylchlorsilanu a pak ještě roztok 7,5 g steroidni sloučeniny vzorce 12 ve 100 ml THF. Celou dobu se reakční směs udržuje na teplotě nižší než -60 °C. Směs se ještě 1 hodinu míchá a pak se reakce zastaví vlitím do nasyceného vodného roztoku chloridu amonného. Produkt se extrahuje ethylacetátem a pak se čistí chromatografii na sloupci, čímž se získá 6,25 g sloučeniny vzorce 13 ve formě bezbarvého oleje. NMR 5,20 (m, CH allyl), 5,0 (CH₂, allyl), 3,04 (m, Hll).

Sloučenina 14

K roztoku 9,6 g sloučeniny vzorce 13 ve směsí 100 ml methanolu a 30 ml methylenchloridu, obsahující 800 mg NaOH se přidá 0,4 g hydroborátu sodného při teplotě 0 až 5 °C. Směs se 1,5 hodiny míchá, po této době je reakce ukončena a ke směsi se na půl hodiny přidá 20 ml acetonu. Pak se reakční směs vlije do vody a extrahuje se ethylacetátem, čímž se získá 9,5 g sloučeniny vzorce 14. NMR 3,59 (t, CHOH) , 2,98 (m, Hll), 0,92 (s, CH₃) .

Sloučenina 15

K roztoku 9,5 g sloučeniny vzorce 14 ve 100 ml acetonu se přidá 8 ml 6N HCl. Směs se 2 hodiny míchá a pak se neutralizuje přidáním hydrogenuhličitanu sodného, načež se odpaří na malý objem, zředí vodou a extrahuje • · · · • · • · · · · · · * · * • · ···· ···· ···· · ·· ·· ·· ·· ethylacetátem. Tímto způsobem se získá 8,2 g sloučeniny vzorce 15 jako bezbarvý amorfní materiál. NMR 5,68 (m,

H4), 3,10 (m, Hll), 3,65 (m, CHOH).

Sloučenina 16

Roztok 8,2 g sloučeniny vzorce 15 ve 100 ml bezvodého THF se přidá k 500 ml kapalného amoniaku při teplotě -70 °C. Vzniklá směs se smísí s přibližně 500 mg kovového lithia, které se přidává tak dlouho, až modré zbarvení reakční směsi přetrvává alespoň 15 minut. Pak se reakce zastaví přidáním chloridu amonného.

Odparek, který zbývá po odpaření amoniaku, se zředí vodou a roztok se extrahuje ethylacetátem.

Chromatografickým čištěním se získá 4,0 g sloučeniny vzorce 16 ve formě bezbarvého oleje. R_f = 0,55 (heptan a ethylacetát 1:1). NMR 2,80 (ab, CH₂ při C₄) , 0,93 (s,

CH₃) .

Sloučenina 17

K roztoku 4,0 g sloučeniny vzorce 16 v 80 ml methanolu se přidá 6 ml trimethylorthomravenčanu a pak ještě 0,8 g kyseliny toluensulfonové. Směs se 2 hodiny míchá, po této době je ketalizace ukončena. Ke směsi se přidá 6 ml pyridinu a směs se odpaří na malý objem.

Roztok se zředí vodou a extrahuje se ethylacetátem. Tímto způsobem se po odpaření extraktu získá 4,7 g téměř čisté sloučeniny vzorce 17, tle, Rf = 0,78 (heptan a ethylacetát 1:1). NMR 3,22, 3,25 (2x s, OCH₃) .

• ·

Sloučenina 18

K roztoku 33 g sloučeniny vzorce 17 v 50 ml acetonu se přidá 6 g molekulárního síta 4A a pak ještě 3,2 g N-methylmorfolin-N-oxidu a 150 mg tetrapropylamoniumperoxyruthenátu. Směs se 1 hodinu míchá, pak se ke směsi přidá 5 g silikagelu a 50 ml heptanu a směs se míchá ještě 5 minut. Pak se směs zfiltruje při použití pomocného prostředku hyflo, zahustí se, extrahuje se ethylacetátem, extrakt se promyje vodou a odpaří. Odparek se nechá projít krátkým sloupcem oxidu křemičitého, čímž se získá 2,9 g sloučeniny vzorce 18. R_f = 0,52 (heptan a ethylacetát 7:3). NMR 1,02 (s, CH₃) .

Sloučenina 19

Lithiumacetylid byl pro ethinylaci připraven z dibromethenu a butyllithia.

K roztoku 0,74 ml 1,2-dibromethenu ve 20 ml THF se při teplotě -70 °C přidá 11 ml 1,6M roztoku BuLi v hexanu. Směs se 15 minut míchá a pak se přidá roztok 800 mg sloučeniny vzorce 18 ve 2 ml THF. Směs se nechá zteplat na teplotu místnosti v průběhu 15 minut a po dalším stání 15 minut při teplotě místnosti se reakce zastaví přidáním vody a produkt se extrahuje ethylacetátem. Směs se odpaří a produkt se nechá projít krátkým sloupcem silikagelu, čímž se získá 810 mg sloučeniny vzorce 19 jako bílá amorfní pevná látka. R_f = 0,48 (heptan a ethylacetát 7:3), R_f pro výchozí materiál = 0,52. NMR 2,61 (s, acetylen).

Sloučenina 20

K suspenzi 3,2 g sloučeniny vzorce 19 v 60 ml ethanolu se přidá 0,16 g kyseliny šúavelové v 16 ml vody. Směs se míchá 2,5 hodiny a postupně se stává homogenní. Pak se k reakční směsi přidá hydrogenuhličitan sodný a směs se odpaří na malý objem. Přidá se voda a produkt se extrahuje ethylacetátem. Takto izolovaný surový produkt se nechá projít krátkým sloupcem silikagelu a nechá se vykrystalizovat z diisopropyletheru, čímž se získá 2,3 g sloučeniny vzorce 20 s teplotou tání 136 °C. Rf = 0,66 (heptan a ethylacetát 1:1). NMR 2,78 (ab, 2, H4) , 2,61 (s, acetylen).

Sloučeniny 21, 22

K roztoku 1 g sloučeniny vzorce 20 ve 12 ml THF se přidá 1,6 g lithium-tri-terč.butoxyaluminiumhydridu. Směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti, pak se přidá voda a směs se neutralizuje přidáním 2N roztoku HCl. Produkt se extrahuje ethylacetátem a čistí chromatografií na silikagelu (heptan a ethylacetát 8:2 jako aluční činidlo). Tímto způsobem se získá 0,56 g 3P~alkoholu vzorce 21 s teplotou tání 121 až 123 °C a 0,24 g

3a-alkoholu vzorce 22 s teplotou tání 84 až 87 °C. Rf = 0,53 pro sloučeninu vzorce 21 a 0,45 pro sloučeninu vzorce 22 (heptan a ethylacetát 1:1). NMR (3αΟΗ), 3,82 (m, CHOH), (3β0Η), 4,08 (m, CHOH).

·· ··· · • · · · ··· · • · · · * · · · • · · · 0 ♦ · · · · • · · · · · ····

Sloučenina 23

K roztoku lithiumhexamethyldisilazidu (připravenému z 1,9 ml 1,6M roztoku BuLi v hexanu a 0,71 ml hexamethyldisilazanu ve 4 ml bezvodého THF) se při teplotě -40 °C přidá 1 g sloučeniny vzorce 18 a 0,7 ml DMPU v 5 ml THF. Směs se 1/2 hodiny míchá při teplotě -40 °C a pak se injekční stříkačkou přidá 225 μΐ methyljodidu. Pak se směs míchá ještě 1/2 hodiny při teplotě -40 °C, po této době je reakce ukončena. Směs se zředí vodou a extrahuje se ethylacetátem. Chromatografií takto izolovaného surového produktu se získá 1,3 g sloučeniny vzorce 23. Rf = 0,43 (heptan a ethylacetát 8:2). NMR 1,10 (d, 3, 16aCH₃) , 1,06 (s, 3, CH₃), 3,23 (2x s, 6, OCH₃) , 5,0 (m, 2, allyl CH₂) , 5,78 (m, 1, allyl

CH) .

Sloučenina 24

Způsobem, popsaným pro přípravu sloučeniny vzorce 19 se 1,3 g sloučeniny vzorce 23 převede na požadovanou sloučeninu 24, která se získá ve výtěžku 1,2 g. Rf = 0,46 (heptan a ethylacetát 7:3) Rf = 0,55, NMR 2,66 (s, 1, acetylen) , 1,06 (s, 3, CH₃) , 1, 17 (d, 3, 16aCH₃) .

Sloučenina 25

K roztoku 800 mg sloučeniny vzorce 24 ve 20 ml ethanolu se přidá roztok 80 mg kyseliny šúavelové v 5 ml vody. Směs se 1 hodinu míchá a pak se neutralizuje přidáním hydrogenuhličitanu sodného. Pak se směs zředí vodou a extrahuje se ethylacetátem, čímž se získá 0,7 g sloučeniny vzorce 25 ve formě krystalické pevné látky. Rf ♦ · · ···

= 0,47 (heptan a ethylacetát 7:3) . NMR 2,78 (AB, 2, H4) , 1,08 (s, 3, CH₃) , 1,18 (d, 3, 16ccCH₃) , 2,67 (s, 1, acetylen).

Sloučeniny 26, 27

K roztoku 725 mg sloučeniny vzorce 25 ve 20 ml směsi ethanolu a THF v poměru 1:1 se přidá 130 mg hydroborátu sodného. Směs se 1 hodinu míchá a pak se přidají 2 ml acetonu k rozrušení přebytku reakčního činidla. Po 15 minutách se směs vlije do vody a produkt se extrahuje ethylacetátem. Takto získaný materiál se čistí chromatografíi na silikagelu při použití směsi methylenchloridu a acetonu nebo směsi hexanu a ethylacetátu jako elučního činidla. Tímto způsobem se získá 300 mg sloučeniny vzorce 27 (3a-0H) a 75 mg sloučeniny vzorce 26 (3β-ΟΗ). Rf pro sloučeninu vzorce 26 = 0,47 (methylenchlorid a aceton 95:5), Rf pro sloučeninu vzorce 27 = 0,54 (methylenchlorid a aceton 95:5). NMR (27) 3,82 (m, 1, 3βΗ), 2,75 (s, 1, acetylen), 1,06 (s, 3, CH₃) , 1,17 (d, 3, 16aCH₃) , (26) 4,07 (m, 1, 3βΗ) , 2,76 (s, 1, acetylen), 5,01 (m, 2, CH₂ allyl), 5,78 (m, 1, CHallyl).

Příklad 3

Sloučeniny podle vynálezu byly podrobeny zkouškám na svou účinnost na receptor estrogenu při vazných zkouškách a při transaktivační zkoušce.

Stanovení kompetitivní vazby na lidský receptor estrogenu v citoplasmě, a to na receptor alfa nebo beta z • · ·4 4· • · · 4 4 4 4 4

4 4 4 4 44·· 4

44444 44 44 44 44 rekombinantních buněk CHO se užívá k určení relativní afinity (poměrů účinnosti) pro danou zkoumanou látku na receptorech estrogenu, přítomných v citosolu rekombinantních buněk vaječníků čínského křečka, CHO, jde o buňky po stabilní stransfekci lidským receptorem estrogenu alfa (hERa) nebo beta (hERP), provádí se srovnáni s účinností estradiolu E₂.

Estrogenní a antiestrogenní účinnost sloučenin se stanoví biologickou zkouškou in vitro při použití rekombinantních buněk vaječníků čínského křečka, CHO po stabilní transfekci lidským receptorem alfa (hERa) nebo beta (hERP) estrogenu, krysím promotorem oxytocinu RO a reportérovým genem pro luciferázu LUC. Estrogenní účinnost (poměr účinnosti) zkoumané látky pří stimulaci transaktivace enzymu luciferázy přes receptory estrogenu hERa nebo hERP se srovnává s účinností standardního estrogenu estradiolu. Antiestrogenní účinnost (poměr účinností) zkoumané látky při inhibici transaktivace enzymu luciferázy přes receptory estrogenu hERa nebo hERp estrogenem estradiolem se srovnává se standardní látkou ICI 164.384, chemicky jde o (7α,17β)-N-butyl-3,17-dihydroxy-N-methylestra-1,3,5(10)-trien-7-undekanamid.

Výsledky

Kvantitativní parametr pro selektivitu agonistického účinku se získá tak, že se agonistická účinnost pro ER a v procentech dělí agonístíckou účinnosti pro ER β v procentech. Sloučenina vzorce 11a má selektivitu •· 9 99 9 ··*· •4 4444 • 4 444 444 4

4 9 9 9 9 9 9 9 4

4 4444 4444

4444 4 44 44 44 44 agonistického účinku pro receptor alfa estrogenu více než 86krát vyšší než pro receptor beta. Sloučenina vzorce 26 má selektivitu agonistického účinku pro ER alfa 59krát vyšší než pro ER beta. Sloučenina vzorce 27 má selektivitu agonistického účinku 88,3krát vyšší.

Zastupuj e:

i φφ ΦΦΦ·

2(/ Ζοΰΐϊ -Ζ/ο

Φ · ···· · · ···· • φφφ · φ* φφ» Φ·· • φφφ φφφφ · φ φ φ · · ···· φφ φφ Φ· φφ ··

Claims

PATENTOVÉ

NÁROKY

1. I6alfa-methyl obecného vzorce 1 nebo

-ethylsubst i tuované estrogeny kde kruh, naznačený přerušovanými čarami (kruh A) je plné nasycený, plně aromatický nebo jde o nasycený kruh s Δ5-10 dvojnou vazbou,

R¹ znamená Cl-C3alkyl nebo C2-C3alkenyl, přičemž každá z těchto skupin je popřípadě substituována jedním nebo větším počtem atomů halogenu,

R² znamená Cl-C4alkyl, C2-C4alkenyl nebo methylenovou skupinu, přičemž každá z těchto skupin je popřípadě substituována jedním nebo větším počtem atomů halogenu, R³ znamená methyl nebo ethyl.
2. Estrogeny podle nároku 1, obecného vzorce 1, v němž se atomy halogenu ve významu R¹ a R² volí z atomů chloru nebo fluoru.
3. Estrogeny podle nároku 1 nebo 2, obecného vzorce 1, v němž R² znamená Cl-C2alkyl nebo vinyl.

• »44
4 4

4

4

4444 • · 44 4·

4 4 • · 4

4. Estrogeny podle nároku 1, obecného vzorce 1, pro použití k léčebným účelům.
5. Použití estrogenů podle nároku 4 obecného vzorce 1, pro výrobu farmaceutického prostředku, určeného pro selektivní ovlivnění receptorů alfa estrogenu.
6. Použití estrogenů podle nároku 4 pro výrobu farmaceutického prostředku, určeného pro antikoncepci nebo substituční hormonální léčení.
7. Způsob selektivní aktivace receptorů estrogenu podtypu alfa, vyznačující se tím, že se podávají estrogeny podle nároku 1.
8. Způsob antikoncepce nebo substitučního léčení hormonálními látkami, vyznačující se tím, že se podávají estrogenu podle nároku 1.
9. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se t í m, že jako účinnou složku obsahuje estrogeny podle nároku 1, obecného vzorce 1 ve směsi s farmaceuticky přijatelnými pomocnými látkami.

Zastupuj e: