DK174386B1

DK174386B1 - Bicycliske imino-alfa-carboxylsyreestere, fremgangsmåde til deres fremstilling ved adskillelse af racemiske blandinger deraf, eventuelt i form af deres hydrochlorid- eller tosylatsalt samt diastereomert salt i form af en beskyttet N-acyleret, ......

Info

Publication number: DK174386B1
Application number: DK198400415A
Authority: DK
Inventors: Volker Teetz; Hansjoerg Urbach; Rainer Henning; Rolf Geiger; Dietrich Langner
Original assignee: Aventis Pharma Gmbh
Priority date: 1983-01-31
Filing date: 1984-01-30
Publication date: 2003-01-27
Also published as: AU566589B2; IL70830A; AU2393384A; PT78036B; MA20020A1; NO166641C; NO166641B; HU191120B; GR82650B; ES8501759A1; NO840350L; EP0115345A1; ES529272A0; JPH0517439A; HUT34159A; CA1317067C; FI840350A0; CA1283249C; DK41584A; JPH0788358B2

Description

i DK 174386 B1

Opfindelsen angår en fremgangsmåde til adskillelse af racemiske blandinger af bicycliske imino-a-carboxylsyre-estere i komponenterne med formlen la og Ib 5 p2 2 T ? C B2 B A—/ coon KOOC \-/B<

10 A 7 ”"H

Η H

(Ib) 15 hvor substituenterne har de nedenfor angivne betydninger eller det tilsvarende hydrochlorid- eller tosylatsalt.

Racematadskillelsen af aminosyrer via krystallisation af diastereoisomere salte er en meget benyttet fremgangsmåde (oversigt: Boyle, Quart, Rev., 25 (1971) 323). For det meste 2 0 anvendes N-acylerede aminosyrer,* saltene krystalliseres med alkaloidbaser, og de ensartede diastereoisomere salte adskilles, f.eks. ved ekstraktion af N-acylaminosyrerne fra opløsningen, som er gjort sur (J. Amer. Chem. Soc., 71 (1949) 2541, 3251). Man kan også gå frem på omvendt måde 25 og krystallisere aminosyreestere eller -amider med optisk aktive syrer (Chem. Ber., 8j> (1953) 1524).

Hertil anvender man eksempelvis optisk aktive forbindelser, f.eks. 10-camphersulfonsyre, abietinsyre eller vinsyre eller disses O-derivater. Denne fremgangsmåde 30 er frem for alt hensigtsmæssig, når optisk aktive aminosyreestere skal anvendes som udgangsforbindelser til videre synteser. I dette tilfælde er det ufordelagtigt først at fremstille en N-acylforbindelse, derpå at foretage racematadskillelsen via saltdannelse med optisk aktive 35 baser, at spalte acylgruppen fra og derpå at forestre den frie aminosyre.

2 DK 174386 B1

Der er hidtil ikke beskrevet en egnet fremgangsmåde til adskillelse af racemiske blandinger af bicycliske amino-α-carboxylsyreestere. Den eksperimentelle undersøgelse har vist, at alle gængse syrer er uegnede til racematadskillel-5 sen. Til octahydroindol-2-carboxylsyre kendes der fra EP patentansøgning nr. 37.231 en fremgangsmåde, ifølge hvilken racematets N-benzoylforbindelse kan adskilles via saltet med optisk aktivt a-phenylethylamin. Af de nævnte årsager er denne fremgangsmåde imidlertid uøkonomisk, når esterne 10 er nødvendige som mellemprodukt til videre synteser.

Det har nu overraskende vist sig, at N-acyl-derivater af optisk aktive R- eller S-aminosyrer, som indeholder en phenylkerne, f.eks. S-phenylalanin, tyrosin eller tyrosin-0-derivater, er egnede som chirale partnere for de bicycliske 15 imino-a-carboxylsyreestere. Derved udfældes fra egnede opløsningsmidler for det meste (S,S)- eller (R,R)-saltene spontant, mens (S,R)- og (R,S) saltene forbliver i opløsningen. Allerede i ét skridt kan der opnås en mere end 95%'s berigelse, og en enkelt omkrystallisation giver i højt ud-20 bytte de optisk ensartede salte, som på kendt måde kan adskilles .

Opfindelsen angår følgelig en fremgangsmåde til adskillelse af racemiske blandinger af bicycliske imino-a-carboxylsyreestere i komponenterne med formlerne la og Ib 25 B2 C C B2 B —/ cooa rooc \—L B 1 35

H

(la) (Ib) 3 DK 174386 B1 i hvilke R står for en aliphatisk gruppe med 1-6 C-atomer, en alicyclisk gruppe med 4-10 C-atomer, en aromatisk gruppe med 6-12 C-atomer, eller 5 en araliphatisk gruppe med 7-15 C-atomer, som eventuelt kan være substitueret med NC>2, a) A og B1 betyder hydrogen, og 2 B og C danner tilsammen en kæde med formlen ”(CH2^n~ med n = 3, 4, 5 eller 6 eller en kæde med 10 formlen -(CH2)p-CH=CH-(CH2)g- med (p+q) =1, 2, 3 eller 4, eller 2 b) C og B betyder hydrogen, og A og B1 danner tilsammen en kæde med formlen “(CH2^n“ med n = 3, 4, 5 eller 6 eller en kæde med formlen 15 -(CH,) -CH=CH-(CH,) - med (p+q) = 1, 2, 3 eller 4, eller c) A og C betyder hydrogen, og 1 2 B og B danner tilsammen en kæde med formlen -(CH2)m-med m = 4, 5, 6 eller 7, 20 eller det tilsvarende hydrochlorid- eller tosylatsalt, ved krystallisation af diastereomere salte, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at man til en racemisk blanding af forbindelser med formel la eller Ib sætter en N-acyleret, optisk aktiv R- eller S-aminocarboxylsyre, som 25 indeholder en phenylkerne, og hvis aminofunktion og eventuelt tilstedeværende, frie hydroxyfunktioner eventuelt er beskyttet, hvorefter de dannede salte omkrystalliseres fra et aprotisk organisk opløsningsmiddel eller en alkohol med op til 6 C-atomer, de udfældede, optisk ensartede diastereomere 30 salte adskilles på i og for sig kendt måde, og enantiomerene med formlen la eller Ib isoleres, eventuelt i form af deres hydrochlorid- eller tosylatsalt.

Foretrukken er racematadskillelsen af forbindelser med formlen la eller Ib, hvor 35 a) A og B1 betyder hydrogen, og og C danner tilsammen en kæde med formlen 4 DK 174386 B1 (0¾) n“ n = 3, 4, 5 eller 6 eller en kæde med formlen - (CH2) p-CH=CH-(CH2) q- med (p+q) = 1, 2, 3 eller 4, eller b) C og B2 betyder hydrogen, og 5 A og B1 danner tilsammen en af ovenstående under a) definerede kæder.

En særlig foretrukken fremgangsmådevariant er ejendommelig ved, at man udskiller saltene af racemiske, bi-cycliske estere med formlerne la og Ib, i hvilke de to bro-10 hoved-hydrogenatomer er i cis-konfiguration, og COOR-gruppen er i endo-stilling i forhold til det bicycliske ringsystem, på krystallinsk form.

På tale som imino-a-carboxylsyreestere kommer først og fremmest hydrogenolytisk eller hydrolytisk spaltelige 15 estere med aliphatiske, alicycliske eller araliphatiske alkoholer, som de f.eks. er beskrevet i Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Bd. XV/1, Stuttgart 1974, s. 314-427, eller af Bodanszky et al. I "Peptide Synthesis", 2. oplag (1976), John Wiley & Sons. Foretrukne er estere med formlen 20 la + Ib, i hvilke R står for alkyl med 1-6 C-atomer, cyclo-alkyl med 4-8 C-atomer eller aralkyl med 7-13 C-atomer, som eventuelt kan være substitueret med N02, især alkylestere med op til 4 alkyl-C-atomer, og aralkylestere, f.eks. benzyl-, nitrobenzyl- eller benzhydrylestere.

25 På tale som N-acylerede aminocarboxylsyrer, som indeholder en phenylkerne, kommer eksempelvis derivater af R-eller S-phenylalanin, -C-phenylglycin, -β-phenyl-a-amino--smørsyre, -3,4-dihydroxyphenyialanin, -β-phenylserin og -tyrosin. Foretrukne er N-acyl-derivater af R- eller 30 S-phenylalanin, -C-phenylglycin og -tyrosin.

Anvendelige som N-acyl-beskyttelsesgrupper er f.eks. de i Houben-Weyl, Bd. XV/1, side 46-305, eller i Bodanszky et al., "Peptide Synthesis", 2. oplag (1976),

John Wiley & Sons,beskrevne gængse NH^-beskyttelses-35 grupper. Foretrukne er alkanoyl med 1-6 C-atomer, især formyl, tert.butoxycarbonyl og benzyloxycarbonyl.

5 DK 174386 B1

Eventuelt tilstedeværende frie OH-grupper kan eventuelt være O-alkylerede med alkyl med 1-6 C-atomer, især methyl, ethyl eller tert.butyl, med benzyl eller andre i peptid-kemien gængse OH-beskyttelsesgrupper (jfr. f.eks. Houben-5 -Weyl, Bd. XV/1, eller Bodanszky et al., "Peptide Synthesis", 2. oplag (1976), John Wiley & Sons),

Som opløsningsmidler anvendes fortrinvis aprotiske, organiske opløsningsmidler såsom estere, ethylacetat, cyclo-hexan og tetrahydrofuran, men også alkoholer med op til 6 10 C-atomer kan anvendes.

Octahydroindol-2-carboxylsyre er kendt fra US-patentskrift nr.4.350.704. DE-offentliggørelsesskrift nr. 32 26 768 omhandler 2-azabicyclo(3,3,0]octan-3-carboxylsyre, og 2,3,3a,4,5,7a-hexahydro[IH]rndol-2-carboxylsyre er gen-15 stand for DE-offentliggørelsesskrift nr. 32 10 496, ligesom octahydroisoindol-1-carboxylsyre samt 3-azabicyclo[3,3,0]oc-tan-4-carboxylsyre er genstand for DE-offentliggørelses-skrift nr. 32 11 676.

Racemiske bicycliske cis,endo-imino-a-carboxylsyrer 20 med formlen la + Ib, i hvilke C og B2 betyder hydrogen, og A og B1 tilsammen betyder den ovenfor under b) nævnte kæde, kan eksempelvis fremstilles ud fra enaminer af en cycloal-kanon, som omsættes med N-acylerede S-halogen-or-amino-carb-oxylsyreestere med formlen IV, 25 X’ \ ch2 I (IV)

^ CH

30 Y’-HtJ XC00R4 hvor X' står for en nucleofug gruppe, fortrinsvis chlor eller brom, Y1 står for alkanoyl med 1-5 C-atomer, aroyl med 7-9 C-atomer eller andre i peptidkemien gængse, surt fraspaltelige beskyttelsesgrupper, og R4 står for alkyl med 35 1-5 C-atomer eller aralkyl med 7-9 C-atomer, eller med acrylsyreestere med formlen V, 6 DK 174386 B1 COOR4 CK2 = C (V) NH-Y' 5 hvor Y1 og R4 har ovenstående betydning, til forbindelser med formlen VI, B1 COOR4 10 \-ch2 - C (VI) A^0 nh'y'

A ^ O

hvor A, B1, R4 og Y1 har ovenstående betydning, som cycli-15 seres til forbindelser med formlen Vila eller b ved hjælp af stærke syrer under acrylamid- og esterspaltning B1 20 (Vila)

COOR

B1·.

25 A -^O^COOH (VIIbl i

H

hvor A og B1 har ovenstående betydninger, og derpå overføres disse ved katalytisk hydrogenering i nærværelse af over-30 gangsmetalkatalysatorer eller ved reduktion med boran-amin-komplekser eller komplekse borhydrider i lavere alkoholer til forbindelser med formlerne la og Ib, i hvilke R står for hydrogen, og forestres til forbindelser med formlerne la og Ib, i hvilke R har den ovenfor definerede betydning.

35 Racemiske bicycliske imino-a-carboxylsyrer med form lerne la og Ib, i hvilke A og betyder hydrogen, og og 7 DK 174386 B1

C tilsammen betyder den ovenfor under a) nævnte kæde, kan eksempelvis fremtilles ud fra forbindelser med formlen VIII

E2 C

H-\—L H

/ \ (VIII) zr i

H

i hvilken brohoved H-atomerne er cis- eller trans-orien- 2 10 teret i forhold til hinanden, og B og c har ovenstående betydning.

Forbindelser med formlen VIII med n = 1 er kendt fra R. Griot, Helv. Chim. Acta, £2, 67 (1959), og sådanne med n = 2 er kendt fra C.M. Rice et al., J. Org. Chem., 15 21, 1687 (1955).

Disse forbindelser med formlen VIII acyleres på kendt måde, idet en aliphatisk eller aromatisk acyl-gruppe, fortrinsvis en acetyl- eller benzoylgruppe, bindes til nitrogenatomet, og -de opnåede N-acylerede forbindelser oxideres 20 anodisk i en aliphatisk alkohol, fortrinsvis en alkohol med 1-4 C-atomer, især methanol, i nærværelse af et ledende salt og fortrinsvis ved temperaturer i området fra 0°C til +40°C under dannelse af en forbindelse med formlen IX

25 0 ir c K_\_Z H (IX) OK3 \ 30 Acyl hvori B2 og C har ovenstående betydning, og R5 betyder (C^-C4)-alkyl (analogt med Liebigs Ann. Chem., 1978. s. 1719).

Den opnåede forbindelse med den almene formel IX omsættes ifølge Tetrahedron Letters, 1981, s. 141, med 35 trimethylsilylcyanid i et carbonhydrid, halogencarbonhydrid, i ether eller i THF ved temperaturer i området fra -60°C til +20°C, fortrinsvis -40°C til + 0°C i nærværelse af 8 DK 174386 B1 en Lewis-syre, såsom ZnCl2, SnCl2, SnCl4, TiCl4,

BF^-etherat, fortrinsvis BF3-etherat, og den opnåede forbindelse med formlen X

n 2 5 B c (X) •'tf:, \

Acyl 10 hvori brohoved H-atomerne er i cis- eller trans-stilling i forhold til hinanden, idet CN-gruppen er i cis-stilling 2 til brohoved-H-atornet på C-atom (4+n), og hvori η, B og C har den ovennævnte betydning, efter rensning og adskillelse 15 af diastereomerblandingen ved hjælp af omkrystallisation eller søjlechromatografi gennem indvirkning af syrer eller baser på kendt måde hydrolyseres til en forbindelse med formlerne la og Ib med R = hydrogen, og sidstnævnte forestres. Som syre til den sure hydrolyse af nitril-20 gruppen anvendes især HC1 eller HBr. Forestringerne gennemføres her som i det følgende ifølge de i aminosyrekemien gængse fremgangsmåder.

Opfindelsen angår endvidere hidtil ukendte optisk ensartede, bicycliske imino-a-carboxylsyreestere med formlen 25 I'a eller I'b, som er ejendommelige ved, at de to brohoved-hydrogenatomer er i cis-konfiguration, COOR-gruppen er i endo-stilling i forhold til det bicycliske ringsystem, det til COOR-gruppe α-stillede C-atom har R- eller S-konfigura-tion, R betyder alkyl med 1-6 C-atomer, cycloalkyl med 4-8 30 C-atomer eller aralkyl med 7-13 C-atomer, som eventuelt kan være substitueret med NO2, og 35 9 DK 174386 B1 a) A og B^ betyder hydrogen, og 2 B og C danner tilsammen en kæde med formlen me<^ n = e^er 6 eller en kæde med formlen -(CH~) -CH=CH-(CH-) - med (p+q) = 1, 5 2, 3 eller 4, eller 2 b) C og B betyder hydrogen, og A og B1 danner tilsammen en af de ovenstående under a) definerede kæder med n = 3, 5 eller 6 eller (p+q) =1, 2, 3 eller 4, samt disses hydrochlorid-10 eller tosylatsalte.

Opfindelsen angår endvidere et diastereomert salt af en forbindelse med formlen l'a eller I'b, som er ejendommelig ved, at det diastereomere salt er i form af en N-acyleret, optisk aktiv R- eller S-aminocarboxylsyre, som indeholder 15 en phenylkerne, og som er beskyttet med alkanoyl med 1-6 C-atomer, tert.butoxycarbonyl, benzyloxycarbonyl eller andre i peptidkemien gængse NH2-beskyttelsesgrupper, og eventuelt tilstedeværende, frie OH-funktioner i de N-acylerede aminosyrer eventuelt er beskyttet med alkyl med 1-6 C-atomer, 20 benzyl eller andre i peptidkemien gængse OH-beskyttelses-grupper.

De optisk rene forbindelser med formlen la eller Ib er anvendelige ved en fremgangsmåde til fremtilling af optisk rene forbindelser med de almene formler Ila eller Ilb 25 1 o b' b- c \/ / 35 CCOi! (Ila)

Λ XNX ^ H

30 I Y

I * * . 1

0 = c - CH - HH - CH - £CH^7 - C - X

I 1 r i

1 2 R CC^IT Z

10 DK 174386 B1

B1 B2 C

(iib)

A COOH

5 1 » .· I

O = C - CH - HH - CH - ZCH_7 - C - '( ‘i j ? i R co2rz z 10 i hvilke de med en stjerne (*-) markerede carbonatomer hver gang uafhængigt af hinanden kan udvise R- eller S-konfigurationen, a) A og betyder hydrogen, og 2 B og C danner tilsammen en kæde med formlen 15 -(C^) - med n = 3, 4, 5 eller 6 eller en kæde med formlen - (CHj)p-CH-CH-(CH2> - med (p+q) = 1, 2, 3 eller 4, eller 2 b) C og B betyder hydrogen, og A og danner tilsammen en kæde med formlen 20 -(CI^^- mec^ n = ^ eller 6 eller en kæde med formlen -(CI^)p-CH=CH-(CH2)g- med (p+q) =1, 2, 3 eller 4, eller c) A og C betyder hydrogen, og 1 2 B og B danner tilsammen en kæde med formlen 25 -(CH2)m~ med m = 4, 5, 6 eller 7, r = 0 eller 1, = hydrogen, en eventuelt substitueret aliphatisk gruppe med 1-6 C-atomer, en eventuelt substitueret alicyclisk gruppe med 3-9 C-atomer, en eventuelt substitueret ali-30 cyclisk-aliphatisk gruppe med 4-11 C-atomer, en eventuelt substitueret aromatisk gruppe med 6-12 C-atomer, som også kan være delvist hydrogeneret, en eventuelt substitueret araliphatisk gruppe med 7-15 C-atomer, en eventuelt substitueret aroylaliphatisk gruppe med 8-13 C-atomer, 35 en eventuelt substitueret mono- eller bicyclisk hetero- cyclisk gruppe med 5-7 eller 8-10 ringatomer, hvoraf 11 DK 174386 B1 1-2 ringatoraer er svovl- eller oxygenatomer og/eller hvoraf 1-4 ringatomer er nitrogenatomer, eller en sidekæde af en naturligt forekommende, eventuelt beskyttet aminosyre, 2 5 R = hydrogen, en eventuelt substitueret aliphatisk gruppe med 1-6 C-atomer eller en eventuelt substitueret aliphatisk gruppe med 7-15 C-atomer, Y = hydrogen eller hydroxy, Z = hydrogen eller 10 Y og Z = tilsammen oxygen, og

X = en aliphatisk gruppe med 1-6 C-atomer, en alicyclisk gruppe med 5-9 C-atomer, en eventuelt substitueret aromatisk gruppe med 6-12 C-atomer eller indoyl, ved en fremgangsmåde, ved hvilken man omsætter optisk rene 15 forbindelser med formlen la eller Ib, i hvilke R, A, B1, B2 og C har ovennævnte betydning, med optisk rene forbindelser med formlen III

* * y HOOC - CH - NH - CH - [CH01 - C - X (III)

20 I, I ? 2 Γ I

R C02R Z

35 hvilken de to C-atomer, som er markeret med en stjerne (*), 2 udviser (S,R), (R,S), (R,R) eller fortrinsvis (S,S) konfi- X 2 25 guration, og r, R , R , X, Y og Z har ovennævnte betydning, i nærværelse af et kondensationsmiddel eller eventuelt som aktiv ester, derpå fraspaltes gruppen R ved hydrogenolyse eller hydrolyse, og de optisk rene forbindelser med formlerne Ila og Ilb overøres eventuelt i fysiologisk 30 tålelige salte.

Ved en foretrukken udførelsesform for denne fremgangsmåde fremstilles forbindelser med formlerne Ila eller Ilb, i hvilke r = 0 eller 1, 12 DK 174386 B1 R^· = hydrogen eller C^-Cg-alkyl, som eventuelt kan være substitueret med amino, C^-Cg-acylamino eller benzoyl-amino, C^-Cg-alkenyl, Cg-C^-cycloalkyl, Cg-Cg-cycloalke-nyl, C5-c^-cycloalkyl-(C-^-C^)-alkyl, aryl eller delvist 5 hydrogeneret aryl med 6-12 C-atomer, som hver gang kan være substitueret med C^-C4~alkyl, C1-C2~ulkoxy eller halogen, Cg-C^-aryl- ) -alkyl eller C^-C^^-aroyl-(C^-C2)-alkyl, hvor begge kan være substitueret i arylgruppen som ovenfor defineret, en 10 mono- eller bicyclisk heterocyclisk gruppe med henholds vis 5-7 og 8-10 ringatomer, hvoraf 1-2 ringatomer er svovl- eller oxygenatomer, og/eller hvoraf 1-4 ringatomer er nitrogenatomer, eller en eventuelt beskyttet sidekæde af en naturligt forekommende aminosyre, 2 15 R = hydrogen, C^-Cg-alkyl, C-^-Cg-alkenyl eller Cg-C12--aryl-(C^-C4)-alkyl, Y = hydrogen eller hydroxy, Z = hydrogen, eller Y og Z = tilsammen oxygen, og 20 x = C-^-Cg-alkyl , C2-Cg-alkenyl, C^-Cg-cycloalkyl,

Cg-C^-aryl, som kan være mono-, di- eller trisub-stitueret med C^-C^-alkylamino, di-(C^-C4)-alkylamino, C^-C4-alkyl, C^-C^-alkoxy, hydroxy, halogen, nitro, amino og/eller methylendioxy, eller 3-indolyl.

25 Foretrukken er fremstillingen af S,S,S-forbindelserne med formlen Ila.

Ved aryl skal der her og i det følgende fortrinsvis forstås eventuelt substitueret phenyl eller naphthyl. Alkyl kan være ligekædet eller forgrenet.

30 Ved en mono- eller bicyclisk heterocyclisk gruppe med henholdsvis 5-7 og 8-10 ringatomer, i hvilken ringatomerne har de ovenfor nævnte betydninger, forstås eksempelvis thienyl, benzolb]-thienyl, furyl, pyranyl, benzofuryl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyrimidinyl, 35 pyridazinyl, indazolyl, isoindolyl, indolyl, pyrinyl, quinolizinyl, isoquinolinyl, phthalazinyl, naphthydridinyl, 13 DK 174386 B1 quinoxalinyl, quinazolyl, cinnolinyl, pteridinyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl eller isothiazolyl. Disse grupper kan også vare delvist eller fuldstændigt hydrogeneret.

Såfremt står for en sidekæde af en beskyttet 5 naturligt forekommende α-aminosyre, f.eks, beskyttet eller eventuelt substitueret Ser, Thr, Asp, Asn, Glu, Gin, Arg,

Lys, Hyl, Cys, Orn, Cit, Tyr, Trp, His eller Hyp, foretrækkes der som beskyttelsesgrupper de i peptidkemien gængse grupper (jfr. Houben-Weyl, Bd. XV/1 og XV/2). I 10 tilfælde af, at b} betyder den beskyttede lysin-sidekæde, foretrækkes de kendte amino-beskyttelsesgrupper, men især C-^-Cg-alkanoyl. Foretrukne O-beskyttelsesgrupper for tyrosin er methyl eller ethyl.

Ved de hidtil kendte fremgangsmåder, hvor der gås uu 15 fra stereoisomere blandinger, og som tjente til fremstilling af stereoisomere blandinger af forbindelser med formlerne Ila eller Ilb, var det nødvendigt at adskille reaktionsblandingen ved besværlige separationsprocesser for at få den ønskede optisk rene stereoisomer med formlen Ila eller Ilb. 20 Ved omsætning af de optisk ensartede imino-a-carb- oxylsyreestere med formlen la eller Ib med optisk ensartede forbindelser med formlen III er den direkte syntese af optisk ensartede forbindelser med formlen Ila eller Ilb blevet mulig. De ønskede forbindelser med formlerne Ila eller Ilb 25 fås i høje udbytter uden anvendelse af besværlige adskillelsesmetoder .

Forbindelser med formlen III er beskrevet i de foran nævnte dokumenter, eller de er kendte fra EP-offentliggø-relsesskrift nr. 46.953. Omsætningen af en forbindelse med 30 formlen III med l-(2of,3aft, 7aS)-octahydro- [IH] -indol-2-carboxylsyre -tert.butylester og den følgende fraspaltning af en tert.butylester, hvilket resulterer i et tilsvarende oc-tahydroindol-derivat med formlen Ilb, er kendt fra EP-of-fentliggørelsesskrift nr. 37.231.

35 Denne omsætning er imidlertid begrænset til omsætning af en forbindelse med formlen la eller Ib, hvor C og 14 DK 174386 B1 hver især betyder H, og A + B1 er (CH2)4/ hvilken forbindelse hidtil kun har kunnet fremtilles på omstændig måde via N-benzoylforbindelsen, krystallisation af de diastereomere salte med S-ar-phenylethylamin, frigørelse af N-benzoylfor-5 bindeisen, fraspaltning af benzoylgruppen og forestring.

Overførelsen af denne reaktionsfølge på forbindelser med formlen la og Ib er hidtil ikke lykkedes. Også adskillelsen af racemiske blandinger af forbindelser med formlen Ila og IIb ved adskillelse af gængse diastereoisomere salte 10 med optisk aktive carboxyl- eller sulfosyrer lykkes ikke.

Først ved den her omhandlede fremgangsmåde er forbindelserne med formlen la og Ib blevet tilgængelige for efterfølgende reaktioner.

Fremgangsmåden til omdannelse af forbindelser med 15 formel la eller Ib til forbindelser med formel Ila eller IIb er særlig økonomisk, da forbindelser med formlen III ifølge DE-offentliggørelsesskrift nr. 32 26 768 kan fremstilles direkte på optisk ren form på simpel måde. Ifølge den deri beskrevne teknik må disse mellemprodukter imidlertid 20 omsættes med endnu en racemisk aminosyre og overføres i et yderligere oprensningstrin i en optisk ren forbindelse med den almene formel Ila eller Ilb.

Den ovenfor beskrevne fremgangsmåde, som fortrinsvis gennemføres med S,S-forbindelser med formlen III, udgør 25 følgelig den langt mest økonomiske fremgangsmåde til fremstilling af forbindelser med formel Ila eller Ilb, da man ved alle andre kendte fremgangsmåder må finde sig i høje tab ved chromatografi eller krystallisation af delvis komplekse stereoisomerblandinger.

30 Kondensationstrinnet sker ifølge en af de gængse, næsten racemiseringsfrit forløbende fremgangsmåder til peptidsyntese, som er beskrevet i f.eks. Houben-Weyl, Bd. XV, eller i "The Peptide, Analyses, Synthesis, Biology, Vol. 1,

Major Methods of Peptide Bond Formation, Part A", Gross, 35 Meierhofer, Academic Press N.Y. (1979). Særlig fordelagtig er DCC/HOBt-metoden, ifølge Chem. Ber., 103 (1979), side 15 DK 174386 B1 788-798. Herved skal der tages hensyn til, at reaktionsdygtige funktionelle grupper i gruppen R1 skal beskyttes forbigående ifølge kendte metoder fra peptidkemien (f.eks. Houben-Weyl, Bd. XV, eller Bodanszky et al. i "Peptide Syn-5 thesis", 2. Auflage (1976), John Wiley & Sons).

De optisk ensartede forbindelser med formlen Ila eller Ilb fås på i og for sig kendt måde ved fraspaltning af R og eventuelt R2 i højt udbytte uden anvendelse af besværlige adskillelsesmetoder.

10 Forbindelserne med formlen Ila eller Ilb og deres salte besidder en langvarig, intensiv blodtryksænkende virkning. De er stærke hæmmere af det angiotensinomdannende enzym (ACE) og kan anvendes til bekæmpelse af forhøjet blodtryk, der skyldes forskellige årsager. ACE-inhibitorer af 15 denne type kendes f.eks. fra US-patentskrift nr. 4.344.949 og EP-offentiiggørelsesskrifter nr. 49.658, nr. 46.953, nr. 50.850 og nr. 79.022.

Det er også muligt at kombinere disse forbindelser med andre blodtryksænkende, karudvidende eller diuretisk 20 aktive forbindelser. Typiske repræsentanter for disse klasser af aktive forbindelser er f.eks. beskrevet i Erhardt-Ruschig, Arzneimittel, 2. Auflage, Weinhein, (1972). Anvendelsen kan ske intravenøst, subcutant eller peroralt.

Ved oral indgivning ligger doseringen sædvanligvis 25 ved 1-500 mg, fortrinsvis ved 1-100 mg, i hver enkelt dosis til en voksen patient med normalvægt . I alvorlige tilfælde kan doserne forhøjes, da der hidtil ikke er observeret toksiske egenskaber. Også en nedsættelse af dosen er mulig og fremfor alt rimelig, når der samtidig indgives diuretika.

30 Forbindelserne kan gives oralt eller parenteralt i passende farmaceutisk tilberedning. Til en oral anvendelsesform blandes de aktive forbindelser med de dertil gængse tilsætningsstoffer, f.eks. bærestoffer, stabilisatorer eller indifferente fortyndingsmidler, og bringes ved gængse metoder 35 på en egnet indgivelsesform, såsom tabletter, dragées, stikkapsler, vandige, alkoholiske eller oliebaserede suspensioner 16 DK 174386 B1 eller vandige, alkoholiske eller oliebaserede opløsninger.

Som indifferent bærer kan f.eks. anvendes gummiarabicum, magnesiumcarbonat, kaliumphosphat, mælkesukker, glucose eller stivelse, især majsstivelse. Derved kan tilberedningen 5 ske som både tørt eller fugtigt granulat. Som olieagtige bærestoffer eller opløsningsmidler kommer eksempelvis vegetabilske eller animalske olier i betragtning, såsom solsikkeolie eller levertran.

Til den subcutane eller intravenøse anvendelse bringes 10 de aktive forbindelser eller deres fysiologisk tålelige salte om ønsket sammen med de dertil gængse substanser, såsom opløsningsformidlere, emulgatorer eller yderligere hjælpestoffer, i opløsning, suspension eller emulsion. Som opløsningsmiddel for de aktive forbindelser og de tilsvarende 15 fysiologisk tålelige salte kommer eksempelvis følgende på tale: vand, fysiologiske kogsaltopløsninger eller alkoholer, f.eks. ethanol, propandiol eller glycerol, desuden også sukkeropløsninger, såsom glucose- eller mannitolopløsninger, eller en blanding af de forskellige nævnte opløsningsmidler 20 eller opløsninger.

De følgende eksempler belyser opfindelsen, idet eksempel 1-12 illustrerer fremstillingen af forbindelser med formel la eller Ib, og eksempel 13-17 illustrerer disses omdannelse til biologisk aktive forbindelser med formel Ila 25 eller Ilb.

Eksempel 1 (1S,3S,5S)-2-Azabicyclo[3.3.0]octan-3-carboxylsyre-benzyl- ester-hydrochlorid (forkortelse (S)~Aoc-OBzl-KCl)_ 30 (A) 2-Acetylamino-3-(2-oxo-cyclopentyl)-propion- _syremethylester_ 269 g 3-chlor-2-acetyl-amino-propionsyremethylester og 257 g cyclopentenopyrrolidin holdes i 24 timer ved stuetemperatur i 1,5 liter DMF. Der koncentreres i vakuum, 35 remanensen optages i lidt vand, med koncentreret saltsyre indstilles pH på 2, og der ekstraheres 2 gange med hver 17 DK 174386 B1 gang 4 liter ethylacetat. Ved koncentreringen af den organiske fase bliver der en lysegul olie tilbage.

Udbytte: 290 g.

1H-NMR: 2,02 (s,3H); 3,74 (s,3H); 4,4-4,8 (CDCl^

5 Analyse: C Η N

beregnet: 58,1 7,54 6,16 fundet: 58,5 7,2 6,5 (B) cis,endo-2-Azabicyclo-[3.3.0]-octan-3-carboxyΙ- ΙΟ _syre-hydrochlor id______ 270 g af det under (A) fremstillede acetylamino-derivat koges under tilbagesvaling i 1,5 liter 2N saltsyre i 45 minutter. Der koncentreres i vakuum, remanensen optages i iseddike, der tilsættes 5 g Pt/'C (10% Pt) og hydrogeneres 15 ved 500 kPa. Efter filtrering koncentreres, og remanensen krystalliseres fra en blanding af chloroform og diisopropyl-ether.

Smeltepunkt: 205-209°C.

Udbytte: 150 g.

20 (IS,3S,5S)-2-Azabicyclo[3.3.0]octan-3-carboxylsyre-benzyl-ester-hydrochlorid (forkortelse (S)-Aoc-OBzl-HCl)_

(C) Racemisk Aoc-qbzI-HCI

1,2 liter (11,5 mol) benzylalkohol nedkøles til -10°C.

25 Under køling og omrøring dryppes 126 ml (1,73 mol) thionyl-chlorid til, og derpå indføres under omrøring ved -10°C 126,5 g (0,66 mol) rå Aoc.HCl, og der efteromrøres i 30 minutter ved denne temperatur. Derpå får temperaturen lov til langsomt at stige til 20-25°C, idet produktet opløses 30 under omrøring inden for 5 timer. Efter henstand natten over får den brune opløsning lov til at løbe ud i 4,0 liter diisopropylether. Efter 1 time frafiltreres de udfældede krystaller, og de vaskes med diisopropylether og tørres i vakuum. Fra de forenede diisopropyletheropløsninger udfældes 35 der i løbet af natten et yderligere bundfald.

Udbytte. 168,5 g (90,6%).

18 DK 174386 B1

(D) (S)-Aoc-OBlz,Z-Phe-OH

166.0 g (0,589 mol) racemlsk Aoc-OBzl*HCl suspenderes i 500 ml methylenchlorid og rystes grundigt med 25 g (0,625 mol) NaOH i 250 ml vand. Der indtræder en opløsnings-5 proces. Efter kort tid skiller den først dannede emulsion sig. Man skiller methylenchloridfasen fra, vasker med 100 ml 0,1N NaOH og 2 gange med hver gang 50 ml vand og ekstraherer de forenede vandige faser 2 gange med hver gang 100 ml methylenchlorid. De samlede methylenchlorid-10 faser tørres over natriumsulfat og koncentreres skånsomt i vandstrålevakuum. Den tilbageblevne olie optages straks i 100 ml ethylacetat, og en opløsning af 117,6 g (0,39 mol) N-benzyloxycarbonyl-S~phenylalanin (Z-Phe-OH) i 200 ml ethylacetat tilsættes. Kolben vaskes efter med 100 ml 15 ethylacetat. Til den klare opløsning sættes under omrøring ved stuetemperatur 1600 ml cyclohexan (= 4-dobbelt volumen-mængde). Efter udrivning begynder krystallisationen, som fuldstændiggøres ved henstand i kølerum natten over.

Det krystallinske bundfald filtreres fra, vaskes med 250 ml 20 ethylacetat/cyclohexan i forholdet 1:4 og tørres.

Udbytte: 133,6 g (S)-Aoc-0Bzl*Z-Phe-OH (50,9%, svarende til 102% af teorien).

Smeltepunkt: 101-103°C. [a]^ = -5,3° (c = 1, methanol).

25 Efter omkrystallisation fra en blanding af ethyl- acd^t og cyclohexan i forholdet 1:1 fås for Z-Phe-OH-saltet følgende data:

Smeltepunkt: 103-104°C. [a]^ “ ~6,1° (c = 1, methanol).

20 (E) (S)-Aoc-OBzl*HCl 63.0 g (0,142 mol) af det ifølge (D) opnåede Z-Phe-OH-salt opløses i 300 ml methylenchlorid og rystes godt med 6,0 g (0,15 mol) NaOH i ca. 150 ml vand. Faseadskillelsen kræver nogen tid på grund af lidt uopløst ma- 35 teriale. Methylenchloridfasen skilles fra, den vaskes med 50 ml 0,1 N NaOH, to gange med hver gang 50 ml vand og tør- 19 DK 174386 B1 res. Der koncentreres til ca. 100 ml, fortyndes med 10O ml diisopropylether, og under omrøring tilsættes 25 ml 6 N HC1 i ether. Efter 1 time filtreres, bundfaldet vaskes med diisopropylether og tørres.

5 Udbytte: 32,5 g (81,3%).

Smeltepunkt: 185-186°C.

[a]p° : -42,5° (c = 1, vand).

Den basiske vandfase befries i vakuum for methylen-10 chlorid og gøres sur med koncentreret HCl. Det udfældede Z-Phe-OH vaskes med vand og tørres.

På den beskrevne måde fås R-forbindelsen fra raethylenchlorid-moderluden fra eksempel 1 (D) samt yderligere Z-Phe-OH.

% DK 174386 B1 20

X

- o o o pH vø in cn n p >. p

υ CN CN rH

-p rH rr <0* eo + + +

PCM Q

0 O

•r «i 05 υ υ υ • o o o Ωι cn m iø p ε σι æ oo

Ji W pH rH rH

3 Λ II I

Ό O o on m o in σι oo oo

MK pH pH rH

α

P rH

3 « O O 0 oooooo 0 pH o cn cm cn σ» o o p co cm «· CQ — » p P p P r v p

E CM rH CJl OrHOOlOllD CO

fio ρΗττγη μ· ·<3· ^j· p cn π \ø OCM Q I I I I I I I I I + 1 7 u υ u o o o u u W »XJ O 0 0 0000 o CMioun m in m p n

Oioooo co co oo a> m

• pH pH rH pH pH pH pH pH

Qj III I I I I I

E pH «Τ CN T "O' P CO CM

w cn co co cooooor-- m

årHrHrH pHpHpHpH pH

P

P E c S KB

>1 0 0) o o o

COH^CU) P P P rH rH pH rH 0] 10 rH

OOOOOUOOOO L> ω ηβχχχχβχεηε-· b r*i <0 r cn s o 01 0) p Σ.

0) P

EP O 0 0 o« o o o o po o o o m p in O OOCMO’O' «· O' O' r- m ». p •Η'-' *> 1. *» ·* CN ·· * t - Γθ f*·* o miOiOrTPOPPPP rr 0)0 + + I + + I I + I I Π ΡΙΜΟ oi r~i P g w *2ι υ υ υ ο υ u o u υ <0 oooooooooo o η· io in -ctt oio m o *r c- oo

Q & p O O O ro cm O o <N O O

H PPPPPPPPPP p

CO I I I I I I I I 1 I I

ιητίΡΙΝΟΟιηΗίΓ-ίΝιΟ Γ-

ΡΟ oo CM CM O O CM O O

P P PP PP P p p p *—t Ό \ N SS p. p P pppppjjpijjj 7j

i § j3£gj3gj3 3!aJ3£S S 3 5 S S

©o i ΐχ « H ji liS ¢5 « "5 -¾ S

"p G P TZ* U <D CuuS U O S U S) & o nhl O-HO) >1 Oi O l5£ |J i? o [g S S ΰ Si

oco jBp.pt> 22 22-5 22-S

II it 8 It I Is. A s k |t It

Qdl H[) hhO1 h a øg1 g ^

X

o

B x XI BB XI XX X

0> 0000)00 00)00 o p i i i Λ il ι ι χ i i i >< οιαίφο,ρρρ—α,ωα) ai

W XXXI cn >1 > P I X X X

B Λ CUB X E-* ¢-) 3 Μ X CU CU X

I 1 II II ICQOOI I I

N N NN NN N—XIN N N , ρ >—1

0) P P P P P P .—I i—) I i—I p p rH

P B >1 >1 >1 >1 >H >1 >, >, O >. >, >1 C

co xnnnnnnnpnn x n

» PcacccccPcc p X

0) O) 0)0) 0)0) OJ (D-HOIO) 0) , ε b cqo mm m χ z x ra ε y I lo p o I χ ??

° o S

CXOhhhhhhhhm O·

H PppHHHHHHHHH M »p i—I

E <0 >. H H HH HH Η Η Η Η H >i>,iP

P η υ ω x X x x x x x x x x x NE>, o GPU) <0 p ai o o e-1 0) CQ Eti £h c 1 i a 11 11 CO CHfOM-inor-COcnOP CM , x P P p 11 SH cn

ω O O

N fri Eh 21 DK 174386 B1 På analog måde fremstilles [cis-endo]-imino-a~ -carboxylsyreesterne fra tabel I og underkastes en racematspaltning. i denne tabel er deres optisk aktive krystallisationspartnere, opløsningsmidler, udbytter og 5 egenskaber af saltene og af slutprodukterne i form af ester-hydrochlorider eller tosylater anført.

Forklaringer til tabel I

10 H

(XI) _ og spejlbilleder

'COOR

-· 1 Η H

15

H

Un) og spejlbilleder

'-COOR

Η H

25 H

/v t t t ^ Jjt og spejlbilleder

0/.....COOR

il \

Η H

30

Ud fra esterne kan de frie iminocarboxylsyrer fremstilles ved forsæbning eller hydrogenolyse.

35 DK 174386 B1 22

Eksempel 13 N-(lS-Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl-2-cis,endo--azabicyclo[3♦3.0]octan-3S-carboxylsyre_ (A) N- (lS-Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl- 5 -cis,endo-2-azabicyclo[3.3.0]octan-3S-carboxy1- _syrebenzylester_ 14 g af det ifølge eksempel 1E fremstillede benzyl-esterhydrochlorid overføres ved udrystning af den vandige alkaliske opløsning med diethylether i den frie ester, 10 som efter afdestillering af etheren bringes til at reagere med 6,7 g HOBt, 13,8 g N-(lS-carbethoxy-3--phenylpropyl)-S-alanin og 10,2 g dicyclohexylcarbodiimid i 200 ml dimethylformamid. Efter 3 timers omrøring ved stuetemperatur skilles der fra det udfældede dicyclohexyl-15 urinstof ved sugning, der koncentreres og optages i 1 liter ethylacetat, derefter udrystes der med 3 x 500 ml 5%'s NaHC03-opløsning. Den organiske fase koncentreres.

Der fås 22,4 g (90%) produkt i form af olie.

20 ^H-NMR af S,S,S-forbindelsen, karakteristiske signaler: 1,20 (d,3H), 1,27 (t,2H), 4,17 (q,3H), 5,13 (s,2H), 7,18 (s,5H), 7,32 <s,5H) (CDC13)

Analyse: C Η N

25 C3QH38N205 beregnet 71,1 7,56 5,53 fundet 70,8 7,8 5,7 (B) N- (lS-Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl--cis,endo-2-azabicyclo[3.3.0]octan-3-S- 30 _ -carboxylsyre_ 8,0 g af S,S,S-benzylesteren fra eksempel E opløses i 100 ml ethanol og afbenzyleres hydrogenolytisk under tilsætning af 0,5 g 10%’s Pd/C ved normaltryk. Denne reaktion kan også foretages under tryk med en samtidig 35 forkortelse af reaktionstiden. Efter optagelse af den beregnede mængde hydrogen filtreres der fra katalysatoren, 23 DK 174386 B1 og der koncentreres i vakuum. Zwitterionen udkrystalliserer i næsten kvantitativt udbytte fra ether. Smeltepunkt: 110-112°C (sønderdeling).

Ved tilsætning af en ækvivalent mængde saltsyre 5 kan der fås et hydrochlorid (sønderdeling fra 120°C).

Analyse: C Η N

^23H32N2^5 bere9net 66,3 7,7 6,73 fundet 66,1 7,8 6,6 10 De opnåede ^H-NMR- og massespektre er i overens stemmelse med den angivne struktur.

[a]D = +15,6°C (c = 1, methanol).

Eksempel 14 15 N-(lS-Carbethoxy-2-benzoyl-ethyl)-O-ethyl-S-tyrosyl--cis,endo-2-azabicyclo[3.3.0]-octan-3S-carboxylsyre (A) N-(lS-Carbethoxy-3-benzoyl-ethyl)-0-ethyl- _-S-tyrosyl-benzyles ter___________ 24 g benzoylacrylsyre-ethylester i 100 ml ethanol 20 omsættes med 30 g O-ethyl-S-tyrosin-benzylester i nærværelse af 0,5 ml triethylamin, og efter koncentrering af opløsningen og digerering af remanensen med diethylether/petroleums- ether i forholdet 1:1 og tørring i vakuum fås 42 g R, S,S-forbindelse. Diastereomeradskillelse ved chromato-25 grafi på silicagel i systemet eddikeester/cyclohexan i forholdet 1:3.

Udbytte: 17 g af S,S-forbindeIsen.

(B) N-(lS-Carbethoxy-3-benzoy1-ethyl)-Q-ethyl-S-tyrosin 30 17 g af den forbindelse, der fås ifølge (A), hydrogeneres i 800 ml eddikesyre med 4 g Pd/C (10%'s) ved 10.000 kPa og stuetemperatur. Udbytte efter chromatografi på silicagel i en blanding af ethylacetat og cyclohexan i forholdet 1:3 som opløsningsmiddel og tørring af ind-35 dampningsremanensen: 12 g tyndtlags-chromatografisk næsten ensartet titelforbindelse. Smp, 205-213°C.

24 DK 174386 B1

Analyse: C23H29N05 (399,5) beregnet C 69,15 H 7,31 N 3,50 fundet C 69,5 H7,4 N3,3 (C) N-(lS-Carbethoxy-3-benzoyl-ethyl)-O-ethyl-S-5 -tyrosy1-c is-endo-2-azabicyclo[3.3.0]octan- ___-3S-carboxylsyre_

Analogt raed eksempel 13A omsættes 8 g af den frie benzylester, som fås ifølge eksempel 1E og efter ud-rystning med diethylether fra basisk opløsning, med 8 g 10 af den ifølge eksempel 14B opnåede forbindelse ved hjælp af 4,4 g dicyclohexylcarbodiimid i nærværelse af 2,7 g 1-hydroxybenzotriazol, og herved fås 14,3 g olieagtig benzylester som mellemprodukt.

og massespektret er i overensstemmelse med 15 den angivne struktur.

Benzylesteren hydrogeneres katalytisk i 50 ml ethanol under normaltryk på Pd/C. Efter frafiltrering af katalysatoren og afdestillering af opløsningsmidlet bliver der en fast remanens tilbage, som digereres med 20 en blanding af diethylether og petroleumsether og tørres. Udbytte: 11,2 g.

Eksempel 15 N-(lS-Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-O-methyl-S-tyrosyl- 25 -cis,endo-2-azabicyclo[3.3,0]octan-3S-carboxylsyre_

Man arbejder som beskrevet i eksempel 14, men i det med (A) analoge trin anvendes O-methyl-S-tyrosin- -benzylester, og der fås titelforbindelsen, hvis ^H-NMR- “spektrum er i overensstemmelse med den angivne struktur.

30 1H-NMR (CDC13)x 1,2-3,0 (m,15H); 1,27 (t,3H),* 1,4 (t,3H),' 3,0-4,3 (m,4H); 3,8-4,2 (m,4H),* 6,5-7,1 (2d, 4H) ,* 7,3 (s,5H) .

35 25 DK 174386 B1

Eksempel 16 N-(lS-Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl-spiro[4.5]- -2-azadecan-3S-carboxylsyre_________ (A) 1-(Diethoxyethyl)-cyclohexancarbonitril 5 Til 312 ml (0,5 mol) af en 15%'s opløsning af n-butyllithium i hexan dryppes ved -10°C under beskyttelsesgas 51,7 ml (0,5 mol) vandfri diethylamin.

Der omrøres i 20 minutter, og derpå afkøles til -70°C.

I løbet af 30 minutter tildryppes 54,6 g cyclohexancarbo-10 nitril, efter yderligere 30 minutter tilsættes indenfor 1 time 98,5 g bromacetaldehyd-diethylacetal, og blandingen henstilles i 24 timer ved lav temperatur. Der opvarmes til stuetemperatur, der tilsættes 100 g is, og der ekstra-heres tu gange med -500 ml ethylaceLaL , deri organiske 15 fase tørres over natriumsulfat, der koncentreres i vakuum, og remanensen underkastes vakuumdestillation.

Udbytte: 90 g (ca. 80% af teorien), kp. 78-79°C ved 1070 kPa.

20 (B) 1-Aminoethyl-l-(diethyloxyethyl)-cyclohexan 90 g diethyloxyethyl-cyclohexancarbonitril opløses i 1 liter ethanol, og der tilsættes 60 g natrium. Efter opløsning af metallet tilsættes 100 ml vand, og opløsningsmidlet fjernes i stor udstrækning i vakuum.

25 Der sættes 300 ml vand til remanensen, og der ekstra- heres med 3 x 200 ml ether. Etherfasen tørres over natriumsulfat, koncentreres og destilleres i vakuum.

Udbytte: 83 g (ca. 90% af teorien), kp. 69-72°C ved 1070 kPa.

30 (C) Spiro[4.5]-2-azadecan-3-carbonitril 80,2 g aminomethyl-diethyloxyethyl-cyclohexan indrøres under beskyttelsesgas (N2 eller Ar) i en blanding af 300 ml ethanol og 300 ml 1 N saltsyre i ca. 1 time.

35 Efter fuldstændig spaltning af udgangsproduktet afkøles

til 0°C, og opløsningen bringes ved tilsætning af 2 N

26 DK 174386 B1 natriumhydroxidopløsning hurtigt på pH 5. Man tilsætter straks 300 ml iseddike (pH ca. 3), afkøler til -10°C og tilsætter 17,5 g natriumcyanid. Reaktionsbeholderen lukkes og henstilles i ca. 5 timer ved stuetemperatur.

5 Ved hjælp af tyndtlagschromatografi (system ethylacetat/ petroleumsether i forholdet 2:1) kontrolleres det, om omsætningen er fuldstændig (Schiff'sk base Rf - 0,6-0,7; aminonitril = 0,28) og man inddamper reaktionsopløsningen til tørhed. Det rå aminonitril videreforarbejdes 10 straks ifølge eksempel 16D eller E.

(D) Spiro[4,5]-2-azadecan-3-carboxylsyre

Til halvdelen af det i eksempel 16C opnåede aminonitril sættes 250 ml 4N saltsyre, og der opvarmes 15 i 4 timer under tilbagesvaling. Spor af udsivende blåsyre uskadeliggøres på egnet måde (udfrysning, absorption i basisk jern-(II)-saltopløsning). Opløsningen neutraliseres, bringes til tørhed og ekstraheres gentagne gange med n-butanol. Afdampningsremanensen fra 20 den organiske fase a) krystalliseres til indvinding af hydrochloridet fra chloroform-diisopropylether, og om nødvendigt omkrystalliseres én gang til fra en blanding med ethanol, eller 25 b) renses ved udrøring med ionbytter, f.eks.

IR 45 (OH-form) (1\mberlite ®") i en vandig opløsning, og efter fjernelse af vandet udkrystalliseres zwitter-ionen fra en blanding af ethanol og ether.

Udbytte ifølge a): 31-32 g (82%) 30 Smp. 205°C (sønderdeling), hydrochlorid (E) Spiro[4.5]-2-aza-decan-3-carboxylsyrebenzylester- _hydrochlorid________

Halvdelen af det i eksempel 16c opnåede aminosyre-35 nitril optages i 70 ml benzylalkohol. Ved stuetemperatur ledes i 5 minutter en langsom HCl-gasstrøm gennem opløsningen, 27 DK 174386 B1 som holdes i 2 - 3 timer ved stuetemperatur, der koncentreres godt i vakuum, der tilsættes vandig natriumbicarbonatopløsning, indtil pH 8,5 nås, og benzylesteren ekstraheres i ethylacetat. Den organiske 5 fase tørres, og der tilsættes en ækvivalent mængde etherisk saltsyre og koncentreres. Remanensen udkrystalliserer fra diisopropylether og kan omkrystalliseres fra methylen-chlorid/diisopropylether.

Udbytte: 43 g (ca. 80%) O Smp. 145°C (sønderdeling).

(F) Spiro[4.5]-2-azadecan-3S-carboxylsyrebenzyl- _ester-hydrochlor id_______

Det racemiskc hydrochlcrid, som fås ifølge eksempel 15 16E, underkastes analogt med eksemplerne ID og E en racemat spaltning .

(G) N- (lS-Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl--spiro[4.5]-2-azanonan-3S-carboxylsyre-benzyl- 20 _ ester _ 15,6 g spiro[4.5]-2-azanonan-3S-carboxylsyre-benzylester-hydrochlorid, 6,7 g 1-hydroxybenzotriazol og 13,8 g (S,S)-N-(l-carbethoxy-3-phenyl-propyl)-alanin opløses i 200 ml DMF og bringes til at reagere med 25 10,2 g dicyclohexylcarbodiimid i løbet af natten.

Tilsætning af tertiære baser, f.eks. 6,4 ml N-ethylmorpho-lin, forhøjer kun udbyttet uvæsentligt. Der filtreres fra det udfældede DC-urinstof, filtratet koncentreres i vakuum, der optages i ethylacetat, udrystes med 30 vandig natriumbicarbonatopløsning, den vandige fase tørres over fast natriumsulfat, og der koncentreres på ny. ^H-NMR-spektret (i CDCl^) bekræfter strukturen.

35 28 DK 174386 B1 (H) N- (lS-Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl- _-spiro[4.5]-2-azanonan-3S-carboxylsyre_

Den i eksempel 16G opnåede benzylester optages i 200 ml methanol og afbenzyleres hydrogenolytisk med 5 1 g Pd/C (10% Pd). Efter afsluttet hydrogenoptagelse filtreres, og der koncentreres i vakuum. Under tilsætning af pentan kan der i vakuum fås et fast, hygroskopisk skum af det zwitterioniske dipeptidderivat.

[ajp1 = 38,3° (c = 1, methanol) 10

Eksempel 17 N-(lS-Carbethoxy-3-phenyl-prppyl)-S-alanyl-cis,endo-2,3,3a, 4,5,7a-hexahydro [ IH] indol-2S-carboxyIsyre_ ....

(A) cis-2,3,3a,4,5,7a-Hexahydro[lH]indol-2S- 15 _-carboxylsyremethylester-hydrochlorid_

Racemisk cis-2,3,3a,4,5,7a-hexahydro[IH]indol--2-carboxylsyremethylester-hydrochlorid (kan opnås analogt med den i DE-offentliggørelsesskrift nr. 32 10 496 beskrevne fremgangsmåde) underkastes analogt med eksemp-20 lerne ID og E en racematspaltning.

[a]D = +68,4° (c = 1, H20).

(B) N-(lS-Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl--cis,endo-2,3,3a,4,5,7a-hexahydro[IH]indol- 25 __ -2S-carboxylsyre-hydrochlorid_

Man får titelforbindelsen analogt med den i eksemplerne 13A og B beskrevne fremgangsmåde.

1H-NMR-data 0,9 - 3,0 (m, 17 H)J 3,4 - 4,9 (m, 6 H)) 30 5,2 - 6,0 (m, 2 H); 7,2 (s, 5 H).

35

Claims

29 DK 174386 B1

1. Fremgangsmåde til adskillelse af racemiske blandinger af bicycliske imino-a-carboxylsyreestere i komponenterne med formlen la og Ib 5 B2 C C B2 -V7 ,„c'yJ ΑΧ ΧΛ, 1 i Η H C la) C Ib) 15 i hvilke R står for en aliphatisk gruppe med 1-6 C-atomer, en alicyclisk gruppe med 4-10 C-atomer, 20 en aromatisk gruppe med 6-12 C-atomer, eller en arallphatisk gruppe med 7-15 C-atomer, som eventuelt kan være substitueret med N02, a) A og B1 betyder hydrogen, og B og C danner tilsammen en kæde med formlen -(Cl^) - 25 med n = 3, 4, 5 eller 6 eller en kæde med formlen -(CH_) -CH=CH-(CH_) - med (p+q) =1, 2, z p 2 q 3 eller 4, eller 2 b) C og B betyder hydrogen, og A og danner tilsammen en kæde med formlen -(CH_) - 2 n 30 med n = 3, 4, 5 eller 6 eller en kæde med formlen “(CH ) -CH=CH-(CH~) - med (p+q) = 1, 2, 3 eller 4, 2 p 2 q eller c) A og C betyder hydrogen, og 1 2 B og B danner tilsammen en kæde med formlen — <CH_) - 2 m 35 med m = 4, 5, 6 eller 7, eller det tilsvarende hydrochlorid- eller tosylatsalt 30 DK 174386 B1 ved krystallisation af diastereomere salte, kendetegnet ved, at man til en racemisk blanding af forbindelser med formel la eller Ib sætter en N-acyleret, optisk aktiv R- eller S-aminocarboxylsyre, som indeholder en phenylkerne, 5 og hvis aminofunktion og eventuelt tilstedeværende, frie hydroxyfunktioner eventuelt er beskyttet, hvorefter de dannede salte omkrystalliseres fra et aprotisk organisk opløsningsmiddel eller en alkohol med op til 6 C-atomer, de udfældede, optisk ensartede diastereomere salte adskilles på i 10 og for sig kendt måde, og enantiomerene med formlen la eller Ib isoleres, eventuelt i form af deres hydrochlorid- eller tosylatsalt

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der fremstilles forbindelser med formlen la 15 eller Ib, hvor a) !\ og B1 betyder hydrogen, og 2 B og C danner tilsammen en kæde med formlen -(CH2) -med n = 3, 4, 5 eller 6 eller en kæde med formlen -(CH2)p-CH=CH-(CH2)q- med (p+q) =1, 2, 3 eller 4, eller 20 b) C og B2 betyder hydrogen, og A og danner tilsammen én af de ovenstående, under a) definerede kæder.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at man udskiller saltene af racemiske estere med formlen 25 ia eller Ib, i hvilke de to brohoved-hydrogenatomer er i cis-konfiguration, og COOR-gruppen er i endo-stilling i forhold til det bicycliske ringsystem» på krystallinsk form.

4. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3, kendetegnet ved, at der fremstilles 30 forbindelser med formel la og Ib, hvor R står for alkyl med 1-6 C-atomer, cycloalkyl med 4-8 C-atomer eller aralkyl med 7-13 C-atomer, som eventuelt kan være substitueret med NO2·

5. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-4, kendetegnet ved, at aminofunktionen i 35 de til saltdannelsen anvendte N-acylerede R- eller S-amino-carboxylsyrer er beskyttet med alkanoyl med 1-6 C-atomer, 31 DK 174386 B1 tert.butoxycarbonyl, benzyloxycarbonyl eller andre i peptidkemien gængse N^-beskyttelsesgrupper, og eventuelt tilstedeværende, frie OH-funktioner i de N-acylerede aminosyrer eventuelt er beskyttet med alkyl med 1-6 C-atomer, benzyl 5 eller andre i peptidkemien gængse OH-beskyttelsesgrupper.

6. Bicycliske imino-Q'-carboxylsyreestere med formlen I 1a eller I 1b B2 C C B2 10 bA / \ /b1 Xx. x\ Λ Ή Η . Η i i Η H 15 (11 a) (I’b) kendetegnet ved, at de to brohoved-hydrocenatomer 20 er i cis-konfiguration, COOR-gruppen er- i endo-stilling i forhold til det bicycliske ringsystem, det i forhold til COOR-gruppen cr-stillede C-atom har R- eller S - konf igurat ion, A, B1, B2 og C har de i krav 2 angivne betydninger, og R har de i krav 4 angivne betydninger, samt disses hydrochio-25 rid- eller tosylatsalte.

7. Forbindelse ifølge krav 6 eller 7, k e n d e -tegnet ved, at det til COOR-gruppen α-stillede C-atom er i S-konfiguration.

8. Cis,endo-2-azabicyclo[3.3.0]octan-3S-carboxyl -30 syreester, hvor R har den i krav 4 angivne betydning.

9. Cis,endo-2-azabicyclo[3.3.0]octan-3S-carboxyl-syrebenzylester.

10. Cis,endo-octanhydro[IH]indol-2S-carboxylsyreester, hvor R har den i krav 4 angivne betydning.

11. Cis,endo-octahydro[IH]indol-23-carboxylsyrebenzy1 - ester. 32 DK 174386 B1

12. Diastereomert salt af en forbindelse med formlen I'a eller I'b angivet i krav 6, kendetegnet ved, at det diastereomere salt er i form af en N-acyleret, optisk aktiv R- eller S-aminocarboxylsyre, som indeholder en phe-5 nylkerne, og som er beskyttet som angivet i krav 5.