DK171644B1 - 2-Biheterocyklothiopenemderivater samt mellemprodukt til disses fremstilling - Google Patents

Description

DK 171644 B1

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte 2-biheterocy-klothiosubstituerede penemderivater og farmaceutisk acceptable salte deraf med en fremragende antibiotisk virkning samt mellemprodukter til fremstilling af sådanne penemderivater.

5 I almindelighed fremkaldes infektionssygdomme af patogene mikroorganismer, der er fastholdt i en bestemt del af det 10 levende legeme og formerer sig deri og deltager i lokale reaktioner, når mikroorganismen tilfældigt trænger ind i det levende legeme osv. En af de effektive terapier mod infektionssygdomme er at indgive et antibiotikum til patienter, der lider af en sådan sygdom. Som sådanne effektive antibiotika, 15 der konventionelt har været anvendt i vidt omfang, har der været kendt sådanne som penicilliner og cephalosporiner med et bredt antibakterielt spektrum, og disse antibiotika har i vidt omfang været anvendt til behandling af forskellige typer af infektionssygdomme, og de har udvist en fremragende 20 virkning.

Således udryddes i de fleste tilfælde de patogene mikroorganismer ved indvirkning af et kemoterapeutisk middel, og patienterne kommer sig. Det er imidlertid velkendt, at en mikro-25 organisme, der forårsager den tilsvarende infektionssygdom i visse tilfælde erhverver resistens mod lægemidlet, hvilket, hvis lægemidlet anvendes i et længere tidsrum, bliver et uundgåeligt problem inden for kemoterapien.

30 Som følge heraf har antibiotika, såsom penicilliner og cephalosporiner ikke i tilstrækkelig grad været tilfredsstillende med hensyn til det antibakterielle spektrum, den antibakterielle aktivitet, adfærden i legemet, hvori antibiotikummet indgives eller sikkerheden, på grund af forekomsten af resistente bakte-35 rier under en langvarig og vidt udbredt anvendelse deraf.

2 DK 171644 B1

Under disse omstændigheder er et antibiotikum betegnet thie-namycin blevet udviklet (se J.P. fremlagte patentansøgning nr. 73191/76), som udviser virksomhed mod bakterier, der er resistente over for penicilliner og cephalosporiner, og der er 5 derefter blevet udført omfattende forskning med henblik på syntese af carbapenemderivater og andre penemderivater med en skeletstruktur, der ligner strukturen af carbapenem. Imidlertid har disse konventionelt udviklede eller syntetiserede carbapenem- eller penem-antibiotika ikke været tilfredsstil-10 lende som følge af forskellige ulemper, såsom at de er fysisk kemisk ustabile og let udsættes for enzymatisk sønderdeling af enzymer, såsom dehydropeptidase i nyren og yderligere har de en ganske lav og utilstrækkelig opløselighed i vand. Der er således endnu ikke udviklet et eneste højt værdifuldt eller 15 effektivt lægemiddel.

Som nævnt ovenfor er dét ganske effektivt at anvende antibiotika til behandling af infektionssygdomme. Imidlertid giver det vanskeligheder, når der fremkommer resistente bakterier, 2ø hvilket er et uundgåeligt problem, der er involveret ved kemo terapi under anvendelse af antibiotika. Dvs. at de antibiotika, der konventionelt er udviklet, gradvist er blevet utilstrækkelige med hensyn til deres antibakterielle spektrum forbundet med forekomsten af resistente bakterier. Dette problem møder 2'5 man også i tilfælde af penicilliner og cephalosporiner, som har været forventet at have forholdsvis bredt antibak-terielt spektrum, og som anvendes i vidt omfang.

Der er således et stort behov for udviklingen af et nyt læge-3ø middel, der er effektivt over for de bakterier, der er resis tente over for de ovennævnte antibiotika, og som har et bredt antibakterielt spektrum, og forskellige typer af materialer er hidtil blevet foreslået. Imidlertid tilfredsstiller ingen af dem de ovennævnte krav til sådanne nye lægemidler.

35 DK 171644 B1 3

Det er formålet med den foreliggende opfindelse at tilvejebringe hidtil ukendte penemderivater, der er uventet effektive mod bakterier, der er resistente over for kendte penicilliner og cephalosporiner, og som har fremragende fysisk-5 kemiske egenskaber.

Det er endvidere formålet med den foreliggende opfindelse at tilvejebringe hidtil ukendte mellemprodukter til brug ved fremstilling af sådanne hidtil ukendte penemderivater.

10

De hidtil ukendte penemderivater ifølge opfindelsen er 2-bi-heterocyklothiosubstituerede penemderivater med den almene formel (I) : 15 Oi "YrsYs~R3 0>-N ^cOjRa <!> 20 hvor R2 og R3 har de i krav 1 angivne betydninger eller farmaceutisk acceptable salte deraf.

Fra GB 2.121.792A, DK 166.152B og EP 138.539A1 kendes tilsva-25 rende forbindelser, hvori gruppen R3 er en monocyklisk, helt eller delvis mættet heteroring med et eller to nitrogenatomer i ringen. Ved et sammenlignings forsøg med en repræsentant for disse kendte forbindelser ses en forbedret antibakteriel aktivitet hos de 2-biheterocyklothiosubstituerede penemforbin-30 delser ifølge opfindelsen, idet disse giver en 8 til 64 gange større aktivitet mod pseudomonas.

Penemderivaterne repræsenteret med den almene formel (I) ifølge den foreliggende opfindelse udviser et ekstremt bredt anti-35 bakterielt spektrum, og de har således en kraftig antibakteriel virkning mod grampositive og gramnegative bakterier og aerobe DK 171644 B1 4 og anaerobe bak'terier såvel som bakterier, der er resistente overfor penicilliner og cephalosporiner. Desuden har penem-derivaterne ifølge den foreliggende opfindelse en bemærkelsesværdig opløselighed i vand og en god fysisk-kemisk stabili-5 tet, og desuden udsættes de næsten aldrig for sønderdeling af enzymer, såsom dehydropeptidase I i nyren eller -lactamase. De kan således på effektiv måde anvendes som antibakte-riel lægemiddel, da de har et bredt antibakterielt spektrum og en høj biokemisk stabilitet og sikkerhed.

10 COOR2 kan være en carboxylatanion i afhængighed af typen af substituent R3 i derivatet ifølge opfindelsen, hvilket svarer til det tilfælde, hvor carboxylgruppen placeret i penems 15 3-stilling er i form af en carboxylatanion, som modion til R^. Hvis f.eks. R^ er et kvaternært nitrogen, der indeholdes i en heterocyklisk ring, kan carboxylgruppen i 3-stillingen være i form af en carboxylatanion, der er modion. Hvis endvidere derivaterne er salte med stærke syrer, dvs. med andre ord, 20 når modionen til det kvaternære nitrogen er en kraftig syres anion, kan R2 være hydrogen og i dette tilfælde vil derivaterne derfor have de karakteristiske egenskaber, som hvis det havde været en betainforbindelse (kvaternær ammoniumforbindelse). Således kan syreadditionssaltene af forbindelser med formlen 25 (I) repræsenteres med følgende almene formel: 30 o '-COoRz hvori X er en syre? anion.

COOR2 kan, hvis R3 er en basisk gruppe, være enten en carboxylgruppe eller en carboxylatanion i afhængighed af de 35 betingelser, der omgiver forbindelsen (navnlig pH), eller COORj kan være i en ligevægtstilstand mellem disse to tilstande. Dette betyder, at derivatet kan være i form af en såkaldt DK 171644 B1 5 zwitterion, og det vil derfor forstås, at forbindelserne med formlen (I) indbefatter sådanne forbindelser med en zwitter-ionisk struktur.

5 Foretrukne eksempler på penemderivaterne ifølge opfindelsen er sådanne, hvori substituenten er et medlem valgt fra gruppen bestående af grupper med formlen: 1°

\cP

ti 15 hvor A er nitrogen eller carbon og R^ har den samme betydning, som defineret ovenfor, og hvor R^ fortrinsvis er valgt fra gruppen bestående af _Ch3, -CH2CH3, -(CH2)3CH3, -CH2-<^ , 20 » -ch2ch2f, -ch2ch2-ci, -ch2cn, -ch2-c=ch, -ch2-c-ch3/ o

II

-CH2CONHCH3 , "CH2CON(CH3)2, -ch2ch2conh2, -ch2cnh2, -ch2coch2cooch3/ -ch2cooch3, -ch2cooh, -ch2co-^o^, 25 -CH2-@, -CH2-<o)-F.

Blandt penemderivaterne med formel (I) omfatter dem, hvori substituenten R^ indeholder et eller flere asymmetriske carbon-30 atomer, stereoisomerer. Når der f.eks. er et asymmetrisk carbon- atom i R^, vil der findes to isomerer. I så fald vil den ene af dem i det følgende blive betegnet som "isomer A" og den anden som "isomer B". Når endvidere i det tilfælde, hvor R3 har et asymmetrisk carbonatom såvel som en substituent R^,

35 vil der findes stillingsisomerer udover stereoisomerer. I

så fald udtrykkes de som "isomer A" til "isomer D" osv.

6 DK 171644 B1 I den almene formel I foretrækkes det, at den steriske konfiguration af carbonatomet i 5-stillingen vil være R-kon-figuration, hvilket svarer til konfigurationen hos naturligt penicillin. De mest foretrukne er sådanne, hvori den steriske 5 konfiguration af carbonatomet i 6-stilling, hvortil l-hydro-xyethylgruppen er bundet, er i S-konfiguration, og hvori den steriske konfiguration af carbonatomet i 8-stilling, hvortil hydroxylgruppen er bundet, er i R-konfiguration, sådan som det er tilfældet for thienamycin.

10

Desuden er den mest foretrukne substituent R2 hydrogen eller en anion-ladning. Grupper, såsom p-nitrobenzyl og allyl kan fortrinsvis anvendes som beskyttelsesgruppen for car-boxylgruppen i forbindelsen (I), når denne skal fremstilles.

15

Forbindelsen ifølge opfindelsen og visse mellemprodukter dertil kan endvidere foreligge i form af tautomere former. Opfindelsen skal således også forstås som omfattende sådanne tautomere former, selvom de her angivne strukturelle formler 20 ikke er beskrevet til at indbefatte sådanne strukturer.

Som de foretrukne eksempler på R3 kan nævnes sådanne som: 25 30 35 DK 171644 B1 7 ; CD;-CD; <X>;CD;<%S> -/¾ :

<j5 ;CDK:CD

NH2 CH3 ;CD;

Ci CFa a>; VOJ-CH ;0^‘CH3;{^t¾c^0§)©Cl·¾:Aβ; (^On-CHXH^H, · <f^Jo)l-CH2CHCH * ^iON-CHa * 2 2 , V-N-—/ , V-'N-^y , <^Ton®-ch2coch3 * / JOVn-ch2conh2 · -\~)k V^N^y , V-N^y , Yo) N-Ci-Hs DK 171644 B1 8

De mest foretrukne penemderivater ifølge opfindelsen er sådanne, der er repræsenteret med en af formlerne: .... - 10 hvor Rj er H, eller hvor COOR2 betyder en carboxylat-anion, R4 er -CH3, -C2H5/ -CH2CN, -CH2~C=CH, -CH2-CO-CH3 eller -CH2~ 15 CO-NH2; 0^ ^C0zR2 eller 0 CO2R2 hvor R2 er hydrogen eller COOR2 er en carboxylat-anion, 25 som COOR2, og R4 er methyl; 30 0>-N kC02R2 Neller 0^ ^C02R2 hvor R2 er H eller COOR2 er en carboxylat-anion som COOR2# 35 og R4 er en methylgruppe.

DK 171644 B1 9

Salte af forbindelsen med formlen (I) ifølge opfindelsen indbefatter ugiftige salte af carboxylsyrederivater (i formel (I), COOR2 = COOH), f.eks. metalsalte, såsom natriumsalte, ‘ kaliumsalte, aluminiumsalte og magnesiumsalte; ammoniumsalte; salte med en ugiftig amin, såsom triethylamin, procain, benzyl-amin eller andre aminer, der anvendes til at danne salte med penicilliner og cephalosporiner. De mest foretrukne salte er natriumsalte og kaliumsalte.

^ Idet penemderivaterne ifølge opfindelsen også indbefatter en basisk gruppe, er det også muligt at danne farmaceutisk acceptable syreadditionssalte med f.eks. mineralsyrer, såsom saltsyre, brombrintesyre, phosphorsyre og svovlsyre og organiske syrer, såsom eddikesyre, citronsyre, ravsyre, ascorbinsyre og methansulfonsyre. Forbindelsen med formel (I) ifølge opfindelsen kan være i en solvateret form i forskelligt omfang, f.eks. som hydrater, og sådanne falder også inden for den foreliggende opfindelses rammer.

^ Forbindelserne ifølge opfindelsen kan kombineres med en farmaceutisk bærer, stabilisator, opløseliggørende midler og hjælpemidler, der konventionelt anvendes i overensstemmelse med en hvilken som helst kendt teknik til fremstilling af præparater.

25

De farmaceutiske præparater indeholdende en aktiv forbindelse ifølge opfindelsen kan indgives på forskellige måder, såsom ved oral indgift, intravenøs indsprøjtning, intramuskulær indsprøjtning: eller parenteral indgift. De er fortrinsvis i form af en enhedsdosis, der er vel-30 egnet til en særlig indgiftsmåde. De kan derfor være i form af tabletter, piller, kapsler, granulater, injektionspræparater, suppositorier eller lignende i sig selv kendte præparatformer.

Den daglige dosis af forbindelsen ifølge opfindelsen ligger sædvanligvis inden for området fra 250 mg til 3000 mg til ^ et voksent menneske, som får en indgift i delte doser. Imidlertid kan den anvendte dosis variere i afhængighed af sådanne faktorer som alder, køn og de under behandling værende tilstande.

DK 171644 B1 10

For nogle af forbindelserne ifølge opfindelsen er den anti-bakterielle virkning bestemt ved suppefortyndingsmetoden i Muller-Hinton-suppe, hvor 10^/ml bakterier podes og inkuberes ved 37°C i 18 timer. De opnåede resultater er opstillet i 5 følgende tabel I: TABEL I: Mindste inhiberende koncentration (MIC: yg/ml) 1-0 Undersøgt forbindelse

Afprøvet bakterie “ A B Sch 34343 ___(sammenligning) E. coli, NIHJ =0,05 0,1 0,39 15____

Ent. cloacae, 03400 0,39 0,2 0,78

Ser. marcescens, 10104 0,78 0,78 3,13

Ps. aeruginosa, 32233 25 0,78 100 S. aureus, 209P =0,05 =0,05 0,1 A: (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo- 25 [2,l-c]-l,2,4-triazol-6-yl)-thio]-2-penem-3-carboxylsyre (isomer A, B).

B: (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[(6,7-dihydro-2-methyl- 5H-pyrrolo[ 1,2-c]ixnida2olium-7-yl )-thio]-2-penem-3-car-30 boxylat (isomer A).

Sch 34343: Udviklet og foreslået af Schering Company repræsenteret med formlen: 35

OH

^ ^-Sv^S-CHaCHaCONHz N ^CC)2Na DK 171644 B1 11 hvilken forbindelse har været kendt som en effektiv penem-forbindelse over hvilken, der er rapporteret fremragende resultater ved klinisk afprøvning.

5 Penemderivaterne ifølge opfindelsen kan på effektiv og let måde fremstilles ved en metode som den, der er beskrevet i følgende reaktionsskema.

**^1 'C "jT* ^ Første trin ^ —R5

0^ ^ ^CO-R ’ oxidation i-, n__IL

0^ C02R2’ (IV) (II) 15

Andet trin (substitution)^ Tredje trin (eventuelt)^ HS-R^ (III) fjernelse af en eller OH flere beskyttelsesgrupper s S_R med indføring af substi- ^ V 3 tuenten R4 eller omvendt.

20 s?—N-L

C02R2 (I) 25 (i) Første trin:

Udgangsmaterialet med formel (IV) er et penemderivat, der let kan fremstilles ved en kendt metode (se f.eks. J. Am.

Chem. Soc., 1982, 104, 6138) eller en forbedret metode deraf, i formlen (IV) er R2en esterrest, som beskrevet ovenfor ved definitionen af R2» og R^ repræsenterer en organisk gruppe, f.eks. en alkyl-gruppe, fortrinsvis C^_g-alkyl, såsom ethyl, n-propyl eller isopropyl, en arylgruppe, såsom phenyl eller tolyl eller en ^ aralkylgruppe, såsom benzyl, methylbenzyl, chlorbenzyl eller phenethyl.

DK 171644 B1 12

Penemderivatet (IV) oxideres i et passende medium med et oxidationsmiddel, såsom perbenzoesyre, m-chlorperbenzoesyre, pereddikesyre, hydrogenperoxid, selendioxid, ozon eller natrium-metaperjodsyre (eng: sodium metaperidic acid), fortrinsvis 5 m-chlorperbenzoesyre, til dannelse af sulfoxidderivater (II) i et højt udbytte (i formlen II betyder en bølget pil forbundet til svovlatomet, at den resulterende forbindelse omfatter en blanding af stereoisomerer). Det resulterende sulfoxidderivat sammensat af blandede isomerer kan hensigtsmæssigt 10 anvendes i det efterfølgende trin uden at gennemføre adskillelse af isomererne. Som det opløsningsmiddel, der kan anvendes til denne reaktion kan nævnes sådanne som halogenerede hydro-carboner, f.eks. dichlormethan, chloroform eller carbontetra-chlorid; alkoholer, såsom methanol eller ethanol; ketoner, 15 såsom acetone eller methylethylketon; eddikesyre, pyridin, Ν,Ν-dimethylformamid (i det følgende betegnet som DMF), acet-amid, dimethylsulfoxid (i det følgende betegnet som DMSO), vand, phosphatpuffer eller blandinger deraf. Foretrukne eksempler indbefatter opløsningsmidler, der ikke har skadelig virk-20 ning på reaktanterne og reaktionsprodukterne. Det første trin kan gennemføres ved en temperatur fra -50°C til 50°C, men det foretrækkes at gennemføre reaktionen ved ganske milde temperaturbetingelser, såsom fra -30°C til stuetemperatur.

Det første trin fortsættes i almindelighed i 5 minutter til 25 4 timer, men det er sædvanligvis tilstrækkeligt at fortsætte reaktionen i 30 minutter til 1 time.

(ii) Andet trin: I dette trin underkastes sulfoxidderivatet (II) vundet i det første trin en substitutionsreaktion med en thiolforbindelse (III) (hvor har den ovenfor angivne betydning) eller et syreadditionssalt eller reaktionsdygtigt derivat deraf. I dette trin kan der som reaktionsmedium anvendes et organisk 35 opløsningsmiddel, såsom DMF, DMSO, tetrahydrofuran (i det følgende betegnet som THF), hexamethylphosphotriamid. (i det følgende betegnet som HMPA) eller en blanding deraf, som ikke DK 171644 B1 13 påvirker reaktanterne og produkterne. Reaktionstemperaturen ligger sædvanligvis inden for rammerne fra -50°C til stuetemperatur, fortrinsvis -30°C til 0°C. Idet reaktionsperioden almindeligvis falder inden for rammerne fra 15 minutter til 5 2 timer, ligger den især fra 30 minutter til 1 time.

Reaktionsdygtigheden hos thiolforbindelsen (III) kan forbedres ved, at den foreligger sammen med en base under reaktionsproceduren, og på denne måde forløber reaktionen med god hastighed ^ og et godt udbytte. Naturligvis kan reaktionen imidlertid også forløbe uden en base. Som en sådan base kan nævnes sådanne som alkylaminer, f.eks. triethylamin eller diisopropylethyl-amin; alicykliske aminer, såsom 1,8-diaza-bicyklo[5,4,0]-7-undecen (i det følgende betegnet som DBU) og N-methylmorpholin; ^ uorganiske baser, såsom hydroxider og carbonater af natrium og kalium; metalalkoholater, såsom kalium-tert-butoxid og natriummethoxid; natriumamid og natriumhydrid og blandt andre anvendes fortrinsvis diisopropylethylamin og DBU.

20

Eksempler på reaktionsdygtige derivater af thiolforbindelsen (III) indbefatter thiolatforbindelser repræsenteret med den almene formel (III1): MS-R, (III’) 25 3 hvor M er et alkalimetal, og R^ har den ovenfor angivne betydning. Ved denne substitutionsreaktion anvendes thiolforbindelsen med formel (III) eller et syreadditionssalt deraf eller et aktivt derivat deraf i almindelighed i en mængde fra 1 til 30 3 ækvivalenter i forhold til sulfoxidderivatet (II), fortrinsvis 1 til 2 ækvivalenter. Basen anvendes fortrinsvis i en mængde, der er ækvivalent med mængden af thiolforbindelse (III). Når thiolforbindelsen (III) er et syreadditionssalt deraf, kan der forventes fremragende resultater ved anvendelse af basen 35 i en overskydende mængde således, at den tilsatte syre kan neutraliseres.

14 DK 171644 Bl

Produktet vundet ved den ovennævnte substitutionsreaktion kan isoleres ved anvendelse af en hvilken som helst konventionel efterbehandlingsteknik.

5 (iii) Tredje trin:

Hvis det resulterende produkt har en substitueret beskyttelsesgruppe, kan denne gruppe efterfølgende fjernes. Fjernelse af beskyttelsesgruppen kan gennemføres ved reduktiv sønder-10 deling ved hydrogenering, ved kemisk reduktion, ved hydrolyse nied en syre, med en base eller med et enzym eller lignende.

Når R2 i formlen (I) er en estergruppe, navnlig p-nitrobenzyl, benzhydryl, 2-naphthylmethyl eller lignende, kan fjernelse 15 af beskyttelsesgruppen på effektiv måde gennemføres med katalytisk reduktion under anvendelse af palladium både på carbon, platinoxid eller en hvilken som helst anden kendt katalysator til opnåelse af penemderivater repræsenteret med formlen (I), hvori COOR2 er en carboxylgruppe eller en carboxyl-anion.

20 i dette trin kan der som reaktionsopløsningsmiddel anvendes sådanne som dioxan, THF, vand, en puffer eller en blanding deraf, især vandholdigt’THF, vandholdigt dioxan eller en blanding af phosphatpuffer og THF, og reaktionen gennemføres under et hydrogentryk på 1 til 4 atm.ved en temperatur fra 0 til 25 50°C, fortrinsvis fra 10 til 30°C i 30 minutter til 16 timer, fortrinsvis 1 til 4 timer. Hvis R2 i formlen (I) er en p-nitro-benzylgruppe, kan fjernelse af beskyttelsesgruppen gennemføres ved at omsætte produktet med en vandig ammoniumchloridopløs-ning og jernpulver i et vandopløseligt opløsningsmiddel, såsom 30 THF eller dioxan? hvis R2 er en allylgruppe, kan den fjernes ved at omsætte produktet med tetrakistriphenylphosphinpalladium (0), triphenylphosphin og 2-ethylhexansyre i et aprotisk opløsningsmiddel, såsom THF eller methylenchlorid, og således kan det omhandlede produkt, hvori C00R2 er carboxyl eller carboxy-35 lat-anion, fremstilles i afhængighed af det pågældende tilfælde.

DK 171644 B1 15

Nogle af produkterne, der vindes ved substitutionsreaktionen (trin (ii) ) kan senere være vanskelige at isolere fra hinanden som følge af deres egenskaber. Hvis man således ønsker at opnå forbindelser med formlen (I), hvori COOR2 er en carboxyl-5 gruppe eller en carboxylat-anion, kan der ofte opnås gode resultater ved at fjerne beskyttelsesgruppen i den samme reaktionsbeholder, som blev anvendt til at gennemføre reaktionen uden isolering af mellemproduktet, der blev vundet ved substitutionsreaktionen eller fjernelse af det, efter at produktet 10 har været underkastet en simpel almindeligt anvendt efterbehandling. Dette er en særligt simpel metode og giver et fremragende udbytte og'fremragende kvalitet af det vundne produkt. Desuden gør metoden det muligt at danne det omhandlede produkt i stor målestok uden at anvende komplicerede 15 operationer.

Som det fremgår ovenfor, kan det resulterende produkt i det tredje trin yderligere underkastes indføring af substituenten R4 efter behov til opnåelse af penemderivater (I), hvori R^ 20 er en kvaternær nitrogenholdig heterocyklisk gruppe. Indføring af R^ kan gennemføres ved en hvilken som helst konventionel teknik, f.eks. alkyleririg, hvor der anvendes konventionelle alkyleringsmidler, såsom C^g-alkylhalogenider, f.eks. methyl-jodid eller ethyljodid, bromfluorethan, dimethylsulfat eller 25 diethylsulfat eller ved en anden identisk teknik under anvendel se af f.eks. et halogenid af den tilsvarende gruppe R^. Endvidere er foretrukne opløsningsmidler til alkyleringsreaktionen acetone, acetonitril, THF eller dioxan eller blandinger deraf. Imidlertid kan forbindelsen med substituenten R4 fremstilles 30 ved en anden fremgangsmåde end det tredje trin under anvendelse af et råmateriale HS-R^ (III), hvori R4 i forvejen er indført.

Når R^ i formlen (I) er en kvaternær nitrogenholdig heterocyklisk gruppe, kan de omhandlede forbindelser opnås i godt 35 udbytte ved alkylering af produktet fra trin (ii) og derefter fjernelse af beskyttelsesgruppen efter behov.

DK 171644 B1 16

De således fremstillede forbindelser med formlen (I) kan isoleres og renses ved en hvilken som helst konventionel teknik. Produktet kan således f.eks. isoleres ved ekstraktion og koncentration, og derefter kan det renses ved omkrystallisation, 5 genudfældning og/eller kromatografi. I almindelighed kan forbindelserne med formel (I) krystalliseres til rensning af forbindelserne. Til dette formål er det effektivt eller foretrukket at omdanne forbindelsen til en saltform deraf. I så fald behøver saltet ikke at være et ugiftigt syreadditionssalt. Produk-10 tet kan således først krystalliseres som et toksisk salt for at rense det, hvorefter syren fjernes eller det toksiske salt omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt (dette kan ske ved udskiftning af modioner, når der er tale. om et kvaternært ammoniumsalt), hvorved de omhandlede forbindelser kan frem-15 stilles med høj renhed.

Estere, der kan forventes at blive metaboliseret i det levende legeme kan fremstilles i overensstemmelse med en metode, der sædvanligvis anvendes til dannelse af estere af penicilliner 20 eller cephalosporiner, hvilke metoder omfatter forestring af forbindelserne med formlen (I), hvori substituenten COOR2 er en carboxylgruppe eller en carboxylat-anion.

Ved den foreliggende opfindelse er de allerede beskrevne thiol-25 forbindelser, der repræsenteres med den almene formel (III) også hidtil ukendte forbindelser, og de er nyttige som mellemprodukter til fremstilling af penemderivater med formlen (I). Opfindelsen angår således også sådanne mellemprodukter, som er ejendommelige ved det i_krav 7's kendetegnende del angivne.

30

Opfindelsen skal nu forklares nærmere under henvisning til de efterfølgende illustrerende eksempler.

I de følgende eksempler og referenceeksempler anvendes for 35 enkelthedens skyld følgende forkortelser.

PNB: p-nitrobenzyl PMB: p-methoxybenzyl DK 171644 B1 17

Me: methyl Et: ethyl

Ar: phenyl Ts: p-toluensulfonsyrerest BOC: tert-butoxycarbonyl 5 EKSEMPEL 1

Syntese af isomererne A og B af (5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazol-7-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxy1 syre: 10 15 (1) Fremstilling af p-nitrobenzyl-(5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-di-hydro-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazol-7-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)- 2-penem-3-carboxylat: 20 256 mg p-nitrobenzyl-(5R, 6S, 8R)-2-ethylsulfinyl-6-(1-hydroxyethyl ) -2-penem-3-carboxy lat opløstes i 2 ml DMF og afkøledes til -40°C. Til den vundne opløsning sattes derefter under omrøring 440 mg 6,7-dihydro-7-mercapto-5H-pyrrolo[1,2-c]imida-25 zol-trifluormethansulfonat (vundet som beskrevet i det efter følgende referenceeksempel 1) i 2 ml DMF og 0,54 ml diiso-propylethylamiri, og opløsningen omrørtes i 30 minutter. Til reaktionsopløsningen sattes 100 ml ethylacetat, og der vaskedes med vand, derefter med en mættet vandig natriumchloridopløsning, 30 der tørredes over Na2SO^, hvorefter der koncentreredes under vakuum. Den resulterende remanens rensedes med kromatografi under anvendelse af en kolonne pakket med 10 g silicagel (elue-ringsmiddel: en blanding af chloroform og methanol i rumfangsforholdet 96:4), og den ønskede forbindelse vandtes som en 35 gul olie (udbytte 290 mg).

DK 171644 B1 18 N.M.R. δ (CDClj) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3), 2,40 — 3,00 (IH, m), 5 3,00~3,50 (IH, m), 3,70~3,90 (IH, m, Cg-H), 4,00 — 4,40 (3H, m) , 4,70^-4,90 (IH, m), 5,30 (2H, AB , „J = 14 Hz, -OCH-Ar), 10 " ά 5,78 (IH, brs, Cg-H), 6,96 og 6,99 (IH, s, /L, N ), n il ^ 7,48 (IH, s, γΗ ), 15 7,57 (2H, d, J = 9 Hz), 2 x ArH), 8,15 (2H, d, J = 9 Hz, 2 x ArH).

(2) Syntese af (5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-c]- 20 imidazol-7-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylsyre (isomer A og B):

Den i trin (1) vundne forbindelse (145 mg) opløstes i en blanding af 10 ml THF og 10 ml phosphatpuffer (pH 7), der tilsattes 2 5 150 mg 10% palladium på carbon og reduceredes katalytisk i 2 timer under et hydrogentryk på 1 atm. Katalysatoren filtreredes fra, og filtratet og vaskevæsken vaskedes med ether. Den vandige fase koncentreredes til et rumfang på ca. 20 ml og rensedes ved søjle-^ kromatografi på en kolonne pakket med Diaion HP-20 (kolonnestørrelse: 20x300 mm). Fraktioner elueret med vand kastedes bort, og fraktioner (udvisende UV-absorptionsbånd ved λ max = 324 nm) elueret med 5% THF-vand kombineredes og koncentreredes under vakuum. Det vundne koncentrat underkastedes højtryksvæskekromatografi (HPLC) [bærer: Nucleosil 7C^g (10x300 mm); opløsningsmiddel: 5% acetonitril-vand; strømningshastighed: 5 ml/min.], og fraktioner indeholdende det ønskede produkt, svarende til en retentionstid på 10 minutter og 13,5 minutter udvandtes, hvorved der vandtes et lys* 19· DK 171644 B1 gult pulver af den ønskede forbindelse efter inddampning under vakuum og frysetørring.

Isomer A: Udbytte 19 mg 5 I.R. (KBr skive) cm 1770, 1580 U.V. λ max (H2O) nm: 250 (sh), 324 N.M.R. 6 (D20) ppm: 10 1,39 (3H, d, J = 6 Hz, -CH-j), 2,6^3,05 (IH, m), 3,1^3,6 (IH, m),‘ 4,04 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,19 **4,63 (3H, m) 4,80 (HOD), 4,99^5,17 (IH, m) , 5.81 (IH, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,44 (IH, s-, imidazol-H), 8,61 (IH, s, imidazol-H), 15 HPLC (retentionstid): 10 min.

Isomer B: Udbytte 22 mg 20 I.R. (KBr skive) cm *: 1770, 1580 U.V. λ max (H20) nm: 258, 324 N.M.R. 6 (D20) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3), 2,60/^3,00 (IH, m), 25 3,05** 3,51 (IH, m), 4,02 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,17*/ 4,63 (3H, m) , 4,80 (HOD), 4,97*/5,13 (IH, m) , 5.81 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 7,48 (IH, s, imidazol-H), 8,63 (IH, s, imidazol-H) 30 HPLC (retensionstid): 13,5 min.

EKSEMPEL 2

Syntese af (5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-2-methyl-5H-pyrrolo-35 [1,2-c]imidazolium-7-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3- carboxylat (isomer A og B): DK 171644 Bl 20 0H /^, 0H 5

Den i eksempel 1 trin (1) vundne forbindelse (145 mg) opløstes i en blanding af THF (3 ml) og acetone (10 ml), og til opløsningen sattes der 0,37 ml methyl jodid, og reaktionsopløsningen holdtes ved 5°C i 30 timer. Reaktionsopløsningen ind-10 dampedes under nedsat tryk, og remanensen vaskedes med ether og tørredes. Det resulterende pulver opløstes i et blandet opløsningsmiddel beståénde af 10 ml THF og 10 ml vand, hvorpå der tilsattes 2,5 g ammoniumchlorid og 1,24 g jernpulver (100 mesh) under omrøring og isafkøling, og der omrørtes kraftigt 15 il time ved denne temperatur. De dannede uopløselige bestanddele filtreredes fra, og filtratet vaskedes med ethylacetat.

Den vandige fase inddampedes til et rumfang på ca. 20 ml og rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af Diaion HP-20 (20x400 mm). Efter fjernelse af fraktionen elueret med 20 150 ml vand, blev fraktioner elueret med 5% THF-vand udvundet, koncentreret under nedsat tryk, underkastet HPLC [bærer: Nucleo-sil 7C^g (10x300 mm); opløsningsmiddel: 7% acetonitril-vandj strømningshastighed: 4 ml/min.], og de fraktioner, der indeholdt de ønskede produkter udvandtes svarende til en reten-25 tionstid på henholdsvis 11 og 13,5 minutter. På denne måde vandtes den ovennævnte forbindelse som et lysegult pulver efter inddampning under vakuum og frysetørring.

Isomer A: Udbytte 14 mg 30 I.R. (KBr skive) cm"1: 1760, 1580 U.V. λ max (H20) nm: 250 (sh), 325 N.M.R. δ (D20) ppm: 35 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3), 2,63~3,02 (IH, m) , 3,08~3,55 (IH, m) , 3,96 (3H, s, -NCH^) , 4,04 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,16^4,60 (3H, m), DK 171644 B1 21 4,80 (HOD), 4,96^5,13 (IH, m) , 5,79 (IH, d, J = 2 Hz-,

Cj.—H), 7,47 (IH, s, imidazol-H), 8,70 (IH, s, imidazol-H), HP.LC (retentionstid) : 11 minutter.

5

Isomer B: Udbytte 17 mg I.R. (KBr skive) cm 1760, 1595 U.V. λ max (H2O) nm: 260, 325 10 N.M.R. δ (D2O) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3), 2,55^-2,90 (IH, m) , 3,0 0 ~· 3,5 0 (IH, m), 3,96 (3H, s, -NCH3), · 4,02 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,16-^4,60 (3H, m), 15 4,80 (HOD), 4,95-^5,12 (IH, m) , 5,80 (IH, d, J = 2Hz, C^-H), 7,51 (IH, s, imidazol-H), 8,70 (IH, s, imidazol-H) HPLC (retentionstid): 13,5 minutter.

20 EKSEMPEL 3

Syntese af (5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-2-(2-oxopropyl)-5H-pyr-rolo[1,2-c]imidazolium-7-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylat (isomerer A og B): N 3nr ^ Y5^ ° 30 ^—N-^ * n^—N-^ θ 0^ COzPNB 0 CO*

Det i eksempel 1 trin (1) vundne produkt (200 mg) opløstes i 15 ml acetone og omrørtes i 4 timer efter tilsætning af 35 0,69 ml bromacetone. Efter afdampning af opløsningsmidlet vaskedes den vundne remanens med ether og tørredes. Det resulterende faste stof opløstes i 25 ml af en 50%'s blanding af DK 171644 B1 22 THF-vand, blandedes med 3,6 g ammoniumchlorid og 1,8 g jernpulver og omrørtes i halvanden time under isafkøling. Opløsningen inddampedes til ca. 5 ml under nedsat tryk efter fjernelse af uopløselige bestanddele ved filtrering. Koncentratet 5 førtes gennem en kolonne pakket med Diaion HP-20 (fremstilles og sælges af MITSUBISHI CHEMICAL INDUSTRIES LTD.), og fraktionen elueret med 5% THF-vand rensedes yderligere ved HPLC til opnåelse af de ønskede forbindelser.

10 Betingelser for HPLC: Bærer: Nucleosil 7C^g (10x300 mm)

Strømningshastighed: 3,6 5 irrl/min.

Opløsningsmiddel: 7% acetonitril-vand.

15

Isomer A: Udbytte 45 mg I.R. (KBr skive) cm 3410, 2940, 1770, 1590, 1360 U.V. λ max (H20) nm: 248 (sh), 325 20 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,33 (3H, d, J = 6,6' Hz, -CH3) , 2,36 (3H, s), 2,6^3,0 (IH, m) , 3,0^3,6 (IH, m) , 3,99 (IH, dd, J = 1,4 Hz, 6,1 Hz, C6-H), 4,29 (IH, t, J = 6,1 Hz, Cg-H), 25 4,3-4,8 (2H, m) , 4,74 (DOH), 4,8^5,1 (IH, m) , 5,35 {2H, s), 5,73 (IH, d, J = 1,4 Hz, Cg-H), 7,37 (IH, s, sidekæde C^-H), 8,67 (IH, s, sidekæde C^-H) HPLC (retentionstid): 19 minutter.

30

Isomer B: Udbytte 54 mg I.R. (KBr skive) cm"1: 3400, 2960, 1765, 1590, 1360 U.V. λ max (H20) nm: 259 (sh), 324 35 N.M.R. δ (D20) ppm: DK 171644 B1 23 1,33 (3H, d, J = 6,3 Hz, -CH-j), 2,37 (3H, s), 2,5-2,9 (IH, m), 2,9-3,5 (IH, m), 3,97 (IH, dd, J = 1,4 Hz, 6,1 Hz, Cg-H), 4,29(1H, t, J = 6,1 Hz, Cg-H), 4,3~4,7 (2H, m) , 4,74 (DOH) , 5 4,9-5,3 (IH, m), 5,36 (2H, s), 5,73 (IH, d, J = 1,4 Hz), 7,41 (IH, s, sidekæde C^-H), 8,69 (IH, s, sidekæde C^-H) HPLC (retentionstid): 24 minutter.

10 EKSEMPEL 4

Syntese af (5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-2-(cyklopropyl-methyl )-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazolium-7-yl)thio]-6-(1-hydroxy-15 ethyl)-2-penem-3-carboxylat (blanding af isomer A og B): »H 0 OK jf<

Λ-rvKJ VW

COsPNB^ 25

Produktet (195 mg) vundet i overensstemmelse med den fremgangsmåde, der er beskrevet i eksempel 1-(1) opløstes i 15 ml acetone. Til opløsningen sattes 1,45 g cyklopropylcarbonyl-jodid (se J. Am. Chem. Soc., 1962, 86, 2247), og der omrørtes i 24 timer, hvorefter der tilsattes 0,73 g cyklopropylcarbonyl-jodid og omrørtes i 24 timer. Efter at opløsningsmidlet var filtreret fra,vaskedes remanensen med ether og tørredes. Det resulterende faste stof opløstes i 25 ml 50% THF-vand, og der tilsattes 3,5 g ammoniumchlorid og 1,7 g jernpulver og 33 omrørtes i halvanden time under isafkøling. Opløsningen koncentreredes til ca. 5 ml under nedsat tryk efter fjernelse af uopløselige bestanddele ved filtrering. Koncentratet førtes DK 171644 B1 24 gennem en kolonne pakket med Diaion HP-20, og fraktionen elueret med 5% THF-vand rensedes yderligere ved HPLC [bærer: Nucleosil 7Ci8» opløsningsmiddel: 10% acetonitril; strømningshastighed: 4,75 ml/min.], hvorved der vandtes 92 mg af den ønskede forbin-5 delse.

I.R. (KBr skive) cm-1: 3360, 3110, 2950, 1765, 1580, 1440, 1350, 1280, 1120 U.V. λ max (H20) nm: 250 (sh), 325 10 N.M.R. δ (D20) ppm: 0,3^0,6 (2H, m), 0,6^1,0 (2H, m), 1,2~1,5 (IH, m), 1,33 (3H, d, J = 6,3 Hz, -CH3), 2,4~3,0 (IH, m), 3,0~3,5 (IH, m), 3,98 (IH, d, J = 6,1 Hz, 15 C6~H), 4,07 (2H, d, J = 7,4 Hz), 4,3^4,7 (2H, m) , 4,74 (DOH), 4,9~5,2 (IH, m) , 5,73 (IH, brs, C5~H), 7,52 (0,5 H, s, sidekæde C^-H), 7,56 (0,5 H, s, sidekæde C^-H), 8,76 (IH, s, sidekæde C-^-H) 20 HPLC (retentionstid): 20 minutter.

EKSEMPEL 5

Syntese af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[(2-cyanomethyl-25 6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazolium-7-yl)thio]-2-penem- 3-carboxylat (isomer A og B):

0H ς J$> OH

O^N—^C(^PNB S»?

Fremgangsmåderne i eksempel 3 blev gentaget bortset fra, at 35 der tilsattes 20 ækvivalenter bromacetonitril i stedet for bromacetone ved 0 til 5°C, og reaktionen fortsattes i 20 timer, og på denne måde vandtes de ovennævnte ønskede forbindelser 25 DK 171644 B1 efter den samme efterbehandling, hvor HPLC-betingelserne var som følger: Bærer: Nucleosil 7C^g (10x300 mm) 5 Opløsningsmiddel: 7% acetonitril-vand Strømningshastighed: 5 ml/min.

Isomer A: Udbytte 39% 10 I.R. (KBr skive) cm-1: 1765, 1590 N.M.R. 6 (D2O) ppm: 2,67^3,05 og 3,13~3,50 (hver IH, hver mr -CH2CH2^$), 4.07 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 15 4,10^4,70 (3H, m, Cg-H, -CHj-fl^ ), 4,80 (HOD), 5,02^5,20 (IH, m, -S-CHCH2-), 5,56 (2H, s, -CH2CN), 5,81 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 7,75 (IH, s, imidazol-ring-H), 9,07 (IH, s, imidazolring-H) 20 HPLC (retentionstid): 9 minutter.

Isomer B: Udbytte 43% I.R. (KBr skive) cm 1765, 1595 25 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,38 (3H, d,‘ J - 6 Hz, -CHg), 2,54^2,95 og 3,04/^3,52 (hver IH, hver m, -CH^CH^"^), 4,04 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,20^4,70 (3H, m, Cg-H, 30 -CH2N^)» 4,80 (HOD), 5,00/^5,18 (IH, m, -S-iHCH2-), 5,56 (2H, s, -CH2CN), 5,82 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 7,79 (IH, s, imidazolring-H), 9,07 (IH, s, imidazolring-H) HPLC (retentionstid): 11,5 min.

35 DK 171644 B1 26 EKSEMPEL 6

Syntese af natrium-(5R, 6S, 8R)-6-( 1-hydroxyethyl)-2-[(2-car-boxylatmethyl-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazolium-7-yl)-5 thio]-2-penem-3-carboxylat (isomer A og B): S s_/^ OH Γ®> Na® 10 'VrY^J—Λ^5·ysaj o^-^Vnb 0M-Aco* I overensstemmelse med de procedurer, der er beskrevet i eksem-15 pel 3 bortset fra, at der sattes 5 ækvivalenter p-nitrobenzyl-ester af bromeddikesyre til ved 10°C i stedet for bromacetone, og reaktionen fortsattes i 3 dage, vandtes de ovennævnte forbindelser efter den identiske efterbehandling, hvor betingelserne for HPLC var som følger: 20 Bærer: Nucleosil 7C^g (10x300 mm)

Opløsningsmiddel: 5% méthanol-vand Strømningshastighed: 5 ml/min.

25 Isomer A: Udbytte 19% U-V. λ max (^0) nm: 250 (sh), 325 N.M.R. 6 (D2O) ppm: 30 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH ), 2,60^-3,04 og 3,68/^3,58 (hver IH, hver m, -CHjCi^R^), 4,05 (IH, dd, J = 2,6 Hz, C£-H), 4,16^4,64 (3H, m, CQ-H, -CH-N^), 4,80 (HOD), O ft ° ^ i 4,88 (2H, s, -CH^O®), 5,00^-5,20 (IH, m, -S-CH-C^), 5,80 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 7,50 (IH, s, imidazol-ring-H), 8,77 (IH, s, imidazolring-H) HPLC (retentionstid): 7,5 minutter.

Isomer B: Udbytte 20% 27 DK 171644 B1 U.V. λ max (H20) nm: 255 (sh), 325 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,56 2,94 og 3,05 3,50 (hver IH, hver m, -CH2CH2N^ ), 4,03 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,16 4,64 (3H, m, Cg-H, -CH2N^ ), 4,80 (HOD), 4,88 (2H, s, -CH-CO®), 4,99 5,18 (IH, m, 10 ~ Δ Δ -S-CHCH2-), 5,80 (IH, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,55 (IH, s, imidazolring-H), 8,77 (IH, s, imidazolring-H) HPLC (retentionstid): 8,5 minutter.

15 EKSEMPEL 7

Syntese af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)— 2—C(2-allyl-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazolium-7-yl)thio]-2-penem-3-carboxylat (blanding af isomerer A og B): 20

X 5 s X} OH

U COzPNB oy-H-KCQe

Procedurerne i eksempel 3 blev gentaget bortset fra, at der sattes 20 ækvivalenter allylbromid til i stedet for bromace-30 o tone ved 0 til 5 C, og at reaktionen gennemførtes i 20 timer, og de ovennævnte forbindelser vandtes efter identisk efterbehandling, hvor HPLC gennemførtes under følgende betingelser: Bærer: Nucleosil 7C.0 (10x300 mm) 35 . 18

Opløsningsmiddel: 10% acetonitril-vand

Strømningshastighed: 6 ml/min.

Blanding af isomerer A og B: Udbytte 34% 28 DK 171644 B1 U.V. λ max (H20) nm: 253 (sh), 324 N.M.R. δ (D2O) ppm: 5 1,32 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,50~3,00 og 3,00~3,50 (hver IH, hver m, -CH-CHØ ^ ), 3,90^4,05 (IH, m, * ©

Cg-H), 4,10-^4,60 {3H, m, Cg-H, ), 4,80 (HOD), 4,80^4,96 (2H, m, -CH2CH=CH2), 4,96^5,14 10 (IH, m, -SCHCH2-), 5,20~5,60 (2H, m, -CH2CH2=CH2), 5,77 (IH, d, J = 2 Hz, C5-H), 5,84~6,36 (IH, m, -CH2CH=CH2), 7,51 og 7,56 (hver 1/2 H, hver s, imidazolring-H), 8,79 (IH, s, imidazolring-H) 15 HPLC (retentionstid): 9,7 og 10,2 minutter.

EKSEMPEL 8

Syntese af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[(6,7-di-20 hydro-2-propargyl-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazolium-7-yl)thio]- 2-penem-3-carboxylat (isomerer A og B):

0H 0 OH

25 ''YcT5'^ Λ-τν^ 0 N CO2PNB ^cof

Ifølge eksempel 3, bortset fra at der anvendtes 20 ækvivalenter propargylbromid i stedet for bromacetone, og at der gennem-30 førtes reaktion i 17 timer ved stuetemperatur, vandtes de ovennævnte forbindelser efter identisk efterbehandling med HPLC gennemført under følgende betingelser: Bærer: Nucleosil 7C^g (10x300 mm) 35 Opløsningsmiddel: 10% acetonitril-vand Strømningshastighed: 6 ml/min.

Isomer A: Udbytte 20% 29 DK 171644 B1 U.V. λ max (H20) nm: 250 (sh), 324 N.M.R. δ (D20) ppm: 5 1.38 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,68^3,05 og 3,10~3,58 (hver 3H, hver m, -CH2CH2N^ , -C=CH), 4,06 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,16~4,65 (3H, m, Cg-H, -CH2C=CH), 5,80 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 7,68 (IH, s, imidazol-10 ring-H), 8,96 (IH, s, imidazolring-H) HPLC (retentionstid): 7,6 min.

Isomer B: Udbytte 23% 15 U.V. λ max (H20) nm: 257, 324 N.M.R. δ (D20) ppm: 1.38 (3H, d, J = 6 Hz, Cg-H), 2,57*^3,00 og 20 3,00^*3,53 (hver 3H, hver m, -CH2CH2N^ , -C=CH), 4,04 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cc-H), 4,20^/4,70 (3H, m,

φ O

Cg-H, -CH2N^ ), 4,80 (HOD), 5,00*^5,25 (3H, m, SCHCH2-, -CH2C=CH), 5,82 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 7,71 (IH, s, imidazolring-H), 8,97 (IH, s, imidazolring-H) 25 HPLC (retentionstid): 8,6 minutter EKSEMPEL 9

Syntese af (5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-2-(methoxy-carbonylmethyl)-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazolium-7-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylat (isomerer A og B):

Vr^Vsr^ CftM' -N ^ * rJ N V Θ 0 CO2PNB ϋ C02 DK 171644 B1 30

Produktet (150 mg) vundet ifølge eksempel 1—(1) opløstes i acetone (12 ml), der tilsattes 0,57 ml methylbromacetat og omrørtes i 96 timer. Efter afdampning af opløsningsmidlet vaskedes den resulterende remanens med ether og tørredes.

5 Det vundne faste stof opløstes i 50% THF-vand (23 ml), der tilsattes 3,1 g ammoniumchlorid og 1,6 g jernpulver og omrørtes i 2 timer under isafkøling. De uopløselige bestanddele fjernedes ved filtrering før koncentrering af filtratet til et rumfang på ca. 5 ml. Koncentratet førtes først gennem en kolonnepakke 10 med Diaion HP-20 og derefter rensedes fraktionen elueret med 5% THF-vand ved hjælp af HPLC for at opnå den ønskede forbindelse. Betingelserne for HPLC var som følger: Bærer: Nucleosil 7C^g (10x300 mm) 15 Opløsningsmiddel: 10% acetonitril-vand Strømningshastighed: 3,65 ml/min.

Isomer A: Udbytte 7 mg 20 I.R. (KBr skive) cm-1: 3400, 1760, 1590, 1360 U.V. λ max (H20) nm: 248 (sh), 322 N.M.R. <5 (DjO) ppm: 1,43 (3H, d, J = 6 Hz, -CHg), 2,5^3,0 (IH, m) , 25 3,0~3,6 (IH, m), 3,86 (3H, s, -COOCHg), 3,95 (IH, d, J = 6 Hz, C6-H), 4,29 (IH, t, J = 6 Hz, Cg-H), 4,3^4,7 (2H, m), 4,74 (DOH), 4,9^5,2 (IH, m) , 5,20 (2H, s), 5,83 (IH, brs, C^-H), 7,56 (IH, s, sidekæde C^-H), 8,81 (IH, s, sidekæde C~-H) 30 HPLC (retentionstid): 9 min.

Isomer B: Udbytte 14 mg 35 I.R. (KBr skive) cm-1: 3400, 1760, 1590, 1370 U.V. λ max (H20)nm: 259 (sh), 325 DK 171644 B1 31 N.M.R. <S (D20) ppm: 1,33 (3H, d, J = 6,3 Hz, -CH3), 2,4~3,0 (IH, m) , 3,0~3,5 (IH, m) , 3,86 (3H, s, -COOCH3), 3,96 (IH, 5 d, J = 6,3 Hz, Cg-H), 4,29 (IH, t, J = 6,3 Hz, Cg-H), 4,4~4,7 (2H, m), 4,74 (DOH), 4,9~5,2 (IH, m) , 5,20 (2H, s), 5,73 (IH, brs, C5~H), 7,55 (IH, s, sidekæde C^-H), 8,81 (IH, s, sidekæde C3~H) HPLC (retentionstid): 16 min.

. EKSEMPEL 10

Syntese af (5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-2-(carbamoylmethyl)-15 5H-pyrrolo[1,2-c]imidazolium-7-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)- 2-penem-3-carboxylat (isomerer A og B): “ Vt^ 1 N-^ N-Θ u CO2PNB 0 CO2 25 196 mg af penemderivatet fremstillet i overensstemmelse med den fremgangsmåde, der er beskrevet i eksempel 1—(1) opløstes i 15 ml acetone, der tilsattes jodacetamid (1,48 g) og omrørtes i 23 timer. Opløsningsmidlet fjernedes under vakuum, 30 og den resulterende remanens vaskedes med ether og tørredes. Det vundne faste stof opløstes i 50% THF-vand (25 ml), der tilsattes ammoniumchlorid (3,6 g) og jernpulver (1,8 g) og omrørtes i 1 1/2 time under isafkøling. Efter fjernelse af uopløselige bestanddele fra reaktionsopløsningen ved filtre-35 ring kondenseredes det resulterende filtrat til ca. 5 ml, og det førtes gennem en kolonne pakket med Diaion HP-20. De kombinerede fraktioner elueret med 5% THF-vand rensedes yderligere ved HPLC, som gennemførtes under følgende betingelser: DK 171644 B1 32 Bærer: Nucleosil 7C^g (10x300 mm)

Opløsningsmiddel: 7% acetonitril-vand Strømningshastighed: 3,65 ml/min.

g På denne måde fremstilledes de ønskede isomerer.

Isomer A: Udbytte 45 mg I.R. (KBr skive) cm-1: 3380, 1760, 1680, 1580, 1360, 1290, 10 1120 U.V. λ max (H20) nm:· 248 (sh), 326 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,31 (3H, d, J = 6,4 Hz, -CH3), 2,5^3,0 (IH, m), 15 3,0~3,6 (IH, m), 3,99 (IH, dd, J = 1,3 Hz, 5,9 Hz,

Cg-H), 4,1^4,6 (2H, m) , 4,26 (IH, t, J = 5,9 Hz,

Cg-H), 4,74 (DOH), 4,9~5,2 (IH, m) , 5,08 (2H, s), 5,72 (IH, d, J = 1,3 Hz, Cg-H), 7,46 (IH, s, sidekæde C^-H), 8,77 (IH, s, sidekæde Cg-H) 20 HPLC (retentionstid): 11 min.

Isomer B: Udbytte 57 mg 25 I.R. (KBr skive) cm 3380, 1765, 1695, 1590, 1370, 1295, 1130 U.V. λ max (H20) nm: 256 (sh), 324 N.M.R. δ (D20) ppm: 30 1,30 (3H, d, J = 6,4 Hz, -CHg) , 2,4~2,9 (IH, m), 2,9~3,5 (IH, m), 3,95 (IH, dd, J = 1,5 Hz, 5,9 Hz,

Cg-H), 4,1~4,6 (2H, m), 4,26 (IH, t, J = 5,9 Hz,

Cg-H), 4,74 (DOH), 4,9~5,2 (IH, m) , 5,09 (2H, s), 5,71 (IH, d, J = 1,5 Hz, Cg-H), 7,50 (IH, s, sidekæde 35 C1-H), 8,78 (IH, s, sidekæde Cg-H) HPLC (retentionstid): 16 min.

DK 171644 Bl 33 EKSEMPEL 11

Syntese af (5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-2-benzyl-5H-pyrrolo-[1,2-c]imidazolium-7-yl)thio]-6-(l-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylat (blanding af isomerer A og B): 10 IN-N-Θ 0 CO2PNB 0 C02 I overensstemmelse med de fremgangsmåder, der er beskrevet i eksempel 3, bortset fra at der blev anvendt 20 ækvivalenter benzylbromid i stedet for bromacetone, og at reaktionen fortsattes i 18 timer, vandtes den ønskede forbindelse i et udbytte på 60% efter efterbehandling, hvor der gennemførtes HPLC under følgende betingelser: 20 Bærer: Nucleosil 7Clg (10x300 mm)

Opløsningsmiddel: 15% acetonitril-vand Strømningshastighed: 5,9 ml/min.

I.R. (KBr skive) cm-1: 3420, 1770, 1590, 1450, 1360, 1285 25 U.V. λ max (H20) nm: 253 (sh), 325 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,31 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,5^3,0 (IH, m) , 3,0^3,5 (IH, m), 3,75 og 3,89 (hver 0,5 H, hver d, 30 J = 5,9 Hz, Cg-H), 4,1^4,6 (3H, m, Cg-H, sidekæde C5-H), 4,74 (DOH) , 4,9^5,1 (IH, m) , 5,41 (2H, s), 5,49 og 5,60 (hver 0,5 H, hver brs, Cg-H), 7,48 (6H, brs, sidekæde C^-H, Ar-H), 8,78 og 8,82 (hver 0,5 H, hver s, sidekæde C3~H) 35 HPLC (retentionstid): 16 min. (isomer A) 17 min. (isomer B) DK 171644 Bl 34 EKSEMPEL 12a

Syntese af (5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-2-ethyl-5H-pyrrolo-[1,2-c]imidazolium-7-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylat (isomer A og B): OH 0 W 6 —N ^ N V θ 0 CO2PNB 0 CO2 p-nitrobenzyl-(5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-c]-imidazol-7-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylat (161 mg) opløstes i 15 ml acetone og derefter tilsattes der 0,53 ml ethyl jodid 3 gange hver 24. time, hvorefter der omrør-tes i 48 timer. Opløsningsmidlet afdestilleredes før den resul-2o terende remanens, vaskedes med ether og tørredes. Det vundne faste stof opløstes i 25 ml 50% THF-vand, der tilsattes 3,2 g ammoniumchlorid og 1,6 g jernpulver og omrørtes i 70 minutter under isafkøling. De uopløselige bestanddele filtreredes fra før inddampning af filtratet til ca. 5 ml under nedsat 25 tryk. Koncentratet førtes gennem en kolonne af Diaion HP-20, og fraktionerne elueret med 5% THF-vand rensedes yderligere ved HPLC gennemført under følgende betingelser: Bærer: Nucleosil 7C^g (10x300 mm) 30 Opløsningsmiddel: 10% acetonitril-vand Strømningshastighed: 3,65 ml /min.

og på denne måde vandtes de ønskede forbindelser (isomer A og B) : 35 DK 171644 B1 35

Isomer A: Udbytte 32 mg I.R. (KBr skive) cm-1: 3400, 1765, 1580, 1445, 1360, 1280, 1120 5 U.V. λ max (H20) nm: 248 (SH), 324 N.M.R. 6 (D20) PPm: 1,34 (3H, d, J = 6,1 Hz, CH3),‘ 1,52 (3H, t, J = 7,2 Hz), 2,6^3,0 (IH, m), 3,0~3,5 (IH, m), 4,00 (IH, d , 10 J = 5,9 Hz, C6-H), 4,W4,7 (3H, m), 4,26 (2H, q, J = 7,2 Hz), 4,74· (DOH), 4,9~5,1 (IH, s, sidekæde, C^-H.),5,75 (IH, s, C5~H), 7,50 (IH, s, sidekæde C^-H), 8,71 (IH, s, sidekæde C^-H) HPLC (retentionstid): 13 min.

Isomer B: Udbytte 44 mg I.R. (KBr skive) cm-1: 3420, 1765, 1590, 1440, 1360, 20 1285, 1120 U.V. λ max (H20) nm: 258 (sh), 324 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,33 (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3), 1,52 (3H, t, J = 7,2 Hz), 25 2,5~2,9 (IH, m) , 2,9^3,5 (IH, m), 3,97 (IH, d, J = 5,9 Hz, Cg-H), 4,1^4,7 (3H, m) , 4,26 (2H, q, J = 7,2 Hz); 4,74 (DOH), 4,9~5,1 (IH, m), 5,77 (IH, s, C5-H), 7,54 (IH, s, sidekæde C^-H), 8,71 (IH, s, sidekæde C^-H) 30 HPLC {retentionstid): 15 min.

EKSEMPEL 12b 35 Syntese af (5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-2-(3-methoxycarbo-nyl-2-oxopropyl)-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazolium-7-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylat (isomer A og B): DK 171644 B1 36

0H 0H

^T_!Ts^y>^

c COaPNB N 0 CO? ,N

5 CPy:0CHi02Me

Ifølge de procedurer, der er beskrevet i eksempel 3, bortset fra at der anvendtes 10 ækvivalenter methylbromacetoacetat i stedet for bromacetone, og reaktionstiden gennemførtes ved 10 stuetemperatur i 5 timer, vandtes den ønskede forbindelse efter efterbehandling gennemført som beskrevet i eksempel 1-(2), hvor HPLC gennemførtes under følgende betingelser: , _ Bærer: Nucleosil 7C,Q (10x300 mm) 15 lo

Opløsningsmiddel: 10% acetonitril-vand Strømningshastighed: 6 ml/min.

Isomer A: Udbytte 10% 20 U.V. λ max (H20) nm: 250 (sh), 325 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH.,), 2,60^3,10 og 3,10^3,65 25 (hver 2H, hver m, -CH2CH2n£^ ), 3,83 og 3,86 (hver 3H, hver s, C02CH3), 3,96^4,10 (IH, m, Cg-H), 4,17^4,70 (-3H, m) , 4,80 (HOD), 5,80 (IH, brs,

Cg-H), 7,44 og 7,56 (hver IH, hver s, imidazol-ring-H), 8,76 og 8,82 (hver IH, hver s, imidazolring-H) 30 HPLC (retentionstid): 14,5 min.

Isomer B: Udbytte 12% 35 U.V. λ max (H20) nm: 255 (sh), 324 N.M.R. δ (D20) ppm: DK 171644 Bl 37 1,39 (3H, d, J = 6 Hz, CH ), 2,60^3,00 og 3,10/^3,60 (hver IH, hver m, -CH2CH2N^ ), 3,85 og 3,88 (hver 3H, hver s, CC>2CH3), 3,95~4,10 (IH, m, Cg-H)r 4,24^4-,75 (3H, m), 4,80 (HOD), 5,76^-5,84 (IH, m,

Cc-H), 7,48 og 7,64 (hver IH, hver s, imidazol 5 3 ring-H), 8,80 og 8,84 (hver IH, hver s, imidazol-ring-H) HPLC (retentionstid): 18,8 min.

10 EKSEMPEL 12c

Syntese af (5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-2-(4-fluorbenzyl)-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazolium-7-yl)-thio]-6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylat (en blanding af isomer A og B): 0H °1H /^1 25 Ifølge de fremgangsmåder, der er beskrevet i eksempel 3, bortset fra at der anvendtes 10 ækvivalenter 4-fluorbenzylbromid i stedet for bromacetone, og at reaktionstiden gennemførtes ved stuetemperatur i 17 timer, vandtes den ønskede forbindelse efter en efterbehandling gennemført i overensstemmelse med 3ø eksempel 1-(2), hvor HPLC gennemførtes under følgende betingelser: Bærer: Nucleosil 7C^g (10x300 mm)

Opløsningsmiddel: 20% acetonitril-vand 35 Strømningshastighed: 6 ml/min.

DK 171644 ΒΊ 38

Blanding af isomer A og B: Udbytte 43% U.V. λ max (H2O) nm: 255 (sh), 324 N.M.R. <$ (D20) ppm: 5 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH^), 2,52^-2,97 og 3,08^3,52 (hver 2H, hver m, ), 3,82 og 3,96 (hver IH, hver dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,20^4,75 (3H, m) , 4,80 (HOD), 4,92~5,12 (IH, m) , 5,44 (2H, s, 10 -CH2Ar), 5,55 og 5,65 (hver IH, hver s, C5~H), 7,12^7,64 (5H, m, 4 x ArH, imidazolring-H), 8,82 og 8,85 (hver IH, hver s, imidazolring-H) HPLC (retentionstid): 14,5 min. og 15 min.

15 EKSEMPEL 13

Syntese af (5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-methyl-5H-pyrrolo-[1,2-c]-1,2,4-triazolium-7-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)-2-pe-20 nem-3-carboxylat (isomerer A og B og en blanding af isomerer C og D):

nu 0 °,H ^ °H

^S-rsYs'E' _► 25 0>~N^røWi CC? ^ (1) Syntese af p-nitrobenzylester af (5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[2,l-c]-l,2,4-triazol-7-yl)thio]-6-30 (1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylsyre:

Thiolderivatet (361 mg) vundet ved den fremgangsmåde, der er beskrevet i det følgende i referenceeksempel 1, behandledes i overensstemmelse med proceduren i eksempel 1—(1) til 35 dannelse af den ovennævnte ønskede forbindelse (udbytte: 207 mg).

DK 171644 Bl 39 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 1,40 (3Ή, d, J = 6 Hz, CH3), 2,5^3,0 (IH, m, pyrrolring Cg-H), 3,0-^3,6 (IH, m, pyrrolring Cg-H), 5 3,6^4,5 (4H, m, pyrrolring C5~H2» Cg-H °9 Cg-H), 4,85 (IH, dd, J = 8, 4 Hz, pyrrolring C7~H), 5,25 og 5,39 (IH, ABq, J = 14 Hz, C02H2Ar), 5,31 og 5,43 (IH, ABq, J = 14 Hz, C02CH2Ar), 7,63 og 7,65 (hver IH, hver d, J = 9 Hz, ArH), 8,20 (IH, s, triazolring Cg-H), 10 8,22 og 8,24 (hver IH, hver d, J = 9 Hz, ArH) (2) Syntese af (5R, 6S', 8R)-2-[ (6,7-dihydro-methyl-5H-pyrrolo-[1,2-c]-l,2,4-triazolium-7-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylat (isomerer A og B og en blanding af 15 isomerer C og D):

Forbindelsen (340 mg) vundet ved trin (1) ovenfor behandledes i overensstemmelse med de procedurer, der er beskrevet i eksempel 2 til opnåelse af de ovennævnte ønskede forbindelser.

20 Rensningen gennemførtes ifølge HPLC, som gennemførtes under følgende betingelser: Bærer: Nucleosil 7C^g (10x300 mm)

Opløsningsmiddel: 5% acetonitril-vand 25 Strømningshastighed: 3,65 mi/min.

Isomer A: Udbytte 8 mg I.R. (KBr skive) cm 1775, 1600 30 U.V. λ max (H20) nm: 257, 327 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,33 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,9~3,3 (IH, m, pyrrolring Cg-H), 3,3^3,9 (IH, m, pyrrolring Cg-H), 35 4,04 (IH, dd, J = 6, 2 Hz, Cg-H), 4,16 (3H, s, NCH3), 4,1-^4,7 (3H, m, pyrrolring C5~H2 og Cg-H), 5,18 (IH, dd, J = 10, 5 Hz, pyrrolring C7_H), 5,76 (IH, d, DK 171644 B1 40 J = 2 Hz, Cg-H), 8,80 (lH, s, triazolring Cg-H) HPLC (retentionstid): 12,1 min.

Isomer B: Udbytte 20 mg I.R. (KBr skive) cm 1775, 1600 U.V. λ max (H20) nm: 261, 328 N.M.R. δ (DgO) ppm: 10 1,33 (3H, d, J =· 6 Hz, CHg ), 2,9^3,3 (IH, m, pyrrolring Cg-H), 3,3~3,9 (IH, m, pyrrolring Cg-H), 4,04 (IH, dd, J = 6, 2 Hz, Cg-H), 4,18 (3H, s, NCH3), 4,1^4,7 (3H, m, pyrrolring Cg-H2 og CQ-H), 5,18 15 (IH, dd, J = 10, 5 Hz, pyrrolring C7~H), 5,76 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 8,80 (lH, s, triazolring Cg-H) HPLC (retentionstid): 13,5 min.

2q Blanding af isomer C og D: Udbytte 91 mg I.R. (KBr skive) cm-1: 1775, 1600 U.V. λ max (H2<0) nm: 253, 326 N.M.R. δ (D20) ppm: 25 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CHg), 2,6~3,1 (IH, m, pyrrolring Cg-H) > 3,1^3,7 (IH, m, pyrrolring Cg-H), 4,07 (1,5 H, s, NCHg), 4,08 (1,5 H, s, NCH3), 4,0-^4,8 (4H, m, pyrrolring Cg-H2, Cg-H og Cg-H), 5,12 (IH, 30 dd, J = 10, 5 Hz, pyrrolring C?-H), 5,80 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H) HPLC (retentionstid): 16,2 og 16,6 min.

35 DK 171644 B1 41 EKSEMPEL 14

Syntese af natrium-(5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-3-trifluor-methyl-5H-pyrrolo[2,l-c]-l,2,4-triazol-6-yl)thio]-6-(1-hydroxy-5 ethyl)-2-penem-3-carboxylat (isomer A og B):

VrYs-E% Vr'Y5"^'1^. Vor 10 VVojPNB <f~" COjKa (1) Syntese af p-nitrobenzylester af (5R, 6Sr 8R)-2-[(6,7-di-hydro-3-trifluormethyl-5H-pyrrolo[2,l-c]-l,2,4-triazol- 15 6-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylsyre:

Et thiolderivat (231 mg) fremstillet i overensstemmelse med de procedurer, der er forklaret nærmere i det følgende i referenceeksempel 2, behandledes i overensstemmelse med de proce-20 durer, der er beskrevet i eksempel 1—(1) til dannelse af den ovenfor beskrevne forbindelse.

N.M.R. δ (CDC13) ppm: 25 1,40 (3H, d, J = 6 Hz, CH^), 3,0^3,4 (IH, m, pyrrol ring C^-H), 3,4-^3,7 (IH, m, pyrrolring C^-H), 3,84 (IH, m, Cg-H), 4,1^4,5 (2H, m, pyrrolring Cg-H og Cg-H), 4,5^4,9 (2H, m, pyrrolring C5-H2), 5,20 og 5,48 (hver 2H, hver AB^, J = 14 Hz, 30 C02CHAr), 7,60 (2H, d, J = 9 Hz, ArH), 8,24 (2H, d, J = 9 Hz, ArH) (2) Syntese af natrium-(5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-3-trifluor--methyl-5H-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4-triazol-6-yl)thio]-6-(1- 35 hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylat (isomerer A og B):

Produktet (59 mg) vundet i det ovenfor angivne trin (1) anvend- DK 171644 Bl 42 tes, og procedurerne ligesom dem, der er beskrevet i eksempel 1-(2), blev gentaget til opnåelse af de ovennævnte forbindelser. Produkterne rensedes ved HPLC under følgende betingelser : 5 Bærer: Nucleosil (10x300 mm)

Opløsningsmiddel: 5% acetonitril-vand Strømningshastighed: 3,65 ml/min.

10 Isomer A: Udbytte 13 mg I.R. (KBr skive) cm-^: 1770, 1595 U.V. X max (H20) nm: 256, 323 N.M.R. δ (D20) ppm: 15 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 3,09 (IH, dd, J = 18, 5 Hz, pyrrolring C7~H), 3,68 (IH, dd, J = 18, 7 Hz, pyrrolring C^-H), 3,99 (IH, dd, J = 7, 2 Hz, Cg-H), 4,2^4,7 (4H, m, pyrrolring Cg-H2, pyrrolring Cg-H og 20 Cg-H), 5,76 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H) HPLC (retentionstid): 15,4 min.

Isomer B: Udbytte 13 mg 25 I.R. (KBr skive) cm 1760, 1590 U.V. X max (H26) nm: 252, 324 N.M.R. 6 (D20) ppm: 30 1,40 (3H, d, J = 6 Hz, CHg), 3,28 (IH, dd, J = 18, 5 Hz, pyrrolring C^-H), 3,78 (IH, dd, J = 18, 7 Hz, pyrrolring C?-H), 4,00 (IH, dd, J = 7, 2 Hz, Cg-H), 4,2~4,7 (4H, m, pyrrolring Cg-H2, pyrrolring Cg-H og Cg-H), 5,76 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H) HPLC (retentionstid): 18,6 min.

35 43 DK 171644 B1

Ved anvendelse af de samme fremgangsmåder, som beskrevet ovenfor, fremstilledes følgende forbindelser: (a) En blanding af isomerer A og B af (5R, 6S, 8R)-2-[(3-amino-5 6,7-dihydro-5H-pyrrolo[2,l-c]-l,2,4-triazol-7-yl)-thio]- 6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylsyre:

10 X e c-O

—r^sYs γ-Λ

J-n-A

o CQH N

15 HPLC (retentionstid): 8 min.

Betingelser for HPLC: 20 Bærer: Nucleosil 7C^g (10x300 mm)

Opløsningsmiddel: 5% methanol-vand Strømningshastighed: 4 ml/min.

I.R. (KBr skive) cm 1776 25 30 35 DK 171644 B1 44 N.M.R. 6 (D20) ppm: 1,40 (3H, d, J = 6 Hz, CH3) , 2,60^-3,20 og 3,20~3,65 (hver IH, hver m, -CH2CH2N), 3,95^4,50 (4H, m, Cg-H, 5 Cg-H, -CH2N), 4,80 (HOD), 5,80 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H) (b) En blanding af isomerer A og B af (5R, 6S, 8R)-2-[(3-chlor- 6,7-dihydro-5H-pyrrolo[2,l-c]-l,2,4-triazol-7-yl)-thio]- 6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylsyre: 10 „ OXX w

15 cr cOzH

HPLC (retentionstid): 17 min.

20

Betingelser: Bærer: Nucleosil 7C^g (10x300 mm)

Opløsningsmiddel: 5% acetonitril-vand Strømningshastighed: 4 ml/min.

25 I.R. (KBr skive) cm 1770 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, CHg ) , 2,60^.3,80 (2H, m, -CH2CH2N), 30 3,85~4,40 (4H, m, Cg-H, Cg-H, -CH2N), 4,80 (HOD), 5,78 (IH, d, J = 2 Hz, C5-H) (c) Isomerer A og B af (5R, 6S, 8R)-2-[(2-amino-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[2,l-b]-l,2,4-triazol-7-yl)-thio]-6-(1-hydroxy- 35 ethyl)-2-penem-3-carboxylsyre: DK 171644 B1 45 °H ^ '^r~i's υ$Λλ 5 ^ n-yn O CO2H ^nH2

Isomer A: 10 I.R. (KBr skive) cm 1767 N.M.R. δ (D20) ppm: ♦ 1.35 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,55^3,60 (2H, m, CH2CH2N), 15 3,85^-4,50 (4H, m, C5-H, Cg-H, CH2N), 4,80 (HOD), 5,75 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H) HPLC (retentionstid): 12 min.

20 Betingelser: Nucleosil 7C^g (10x300 mm ) 3% acetonitril-vand 4 ml/min.

Isomer B: 25 I.R. (KBr skive) cm 1770 N.M.R. δ (D20) ppm: 1.36 (3H, d, J = 6 Hz, CHg), 2,60^-3,60 (2H, m, CH2CH2N), 30 3,85^4,40 (4H, m, Cg-H, Cg-H, -CH2N), 4,80 (HOD), 5,90 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H) HPLC (retentionstid): 13 min.

35 (d) Isomerer A og B af (5R, 6S, 8R)-2-[(2-chlor-6,7-dihydro- 5H-pyrrolo[2,1—b]—1,2,4-triazol-7-yl)-thio]-6-(1-hydroxy-ethyl)-2-penem-3-carboxylsyre: DK 171644 B1 46 s 0 \l

Isomer A: I.R. (KBr skive) cm 1770 10 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,40 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,60—3,00 og 3,20~3,62 (hver IH, hver m, CH2CH2N), 4,80 (HOD), 5,78 (IH, d, J = 2 Hz, C5~H) 15 HPLC (retentionstid): 14 min.

Betingelser: Nucleosil 7C^g (10x300 mm) 5% acetonitril-vand 20 4 ml/min.

Isomer B: I.R. (KBr skive) cm ^: 1770 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,35 (3H, d, J = 6 Hz, CHg), 2,65~3,05 og 3,18^-3,60 (hver IH, hver m, CH2CH2N), 3,85^4,55 (4H, m, C^-H, CQ-H, -CH„-N), 4,80 (HOD), 5,78 (IH, d, J = 2 Hz, C.-H) 30 8 2 5 HPLC (retentionstid): 16 min.

(e) (Isomerer A og B af (5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyr-rolo[1,2-c]-thiazolium-6-yl)-thio]-6-(1-hydroxyethyl)-55 2-penem-3-carboxylat: DK 171644 B1 47 o^~N ^-cof 5

Isomer A: I.R. (KBr skive) cm"1: 3430, 1765, 1590, 1370, 1280, 1260 U.V. λ max (H20) nm: 249, 323 10 N.M.R. δ (D20) ppm: 1.31 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3), 3,0^3,8 (2H, m) , 3,97 (IH, dd, J = 1,1 Hz, 6,4 Hz, Cg-H), 4,27 (IH, t, J = 6,4 Hz, Cg-H), 4,2~5,2 (3H, m) , 4,74 (DOH), 5,75 (IH, d, J = 1,1 15 Hz, Cg-H), 7,85 (IH, s, sidekæde Cg-H), 9,84 (IH, s, side kæde Cg-H) HPLC (retentionstid): 14 min.

20 Betingelser: Nucleosil 7Cgg (10x300 mm) 5% acetonitril-vand 3,65 ml/min.

Isomer B: 25 I.R. (KBr skive) cm 3420, 1770, 1580, 1370, 1280, 1260 U.V. λ max (H20) nm: 249, 323 N.M.R. δ (D_0) ppm: 30 1.31 (3H, d, J = 6,2 Hz, CHg), 3,0^-3,8 (2H, m), 4,01 (IH, dd, J = 1,1 Hz, 6,4 Hz, Cg-H), 4,27 (IH, t, J = 6,4 Hz, Cg-H), 4,2~5,2 (3H, m) , 4,74 (DOH), 5,77 (IH, d, J = 1,1 Hz, Cg-H), 7,86 (IH, s, sidekæde Cg-H), 9,84 ^ (IH, s, sidekæde Cg-H) HPLC (retentionstid): 17 min.

DK 171644 B1 48 (f) En blanding af isomerer A og B af (5R, 6S, 8R)-2-[(5,6-dihydro-4H-pyrrolo[1,2-c]-1,2,3-triazol-4-yl)-thio]-6- (1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylsyre: 5 |Τ\|

Z s wV

0A~H-Kqqm 10 I.R. (KBr skive) cm'1: 3400, 1765, 1585, 1380 U.V. λ max (H20) nm: 253, 324 N.M.R. δ (D2O) ppm: 1,34 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,6~3,2 (IH, m) , 3,2~3,7 15 (IH, m) , 3,8^4,1 (IH, m, Cg-H), 4,27 (IH, t, J = 6 Hz,

Cg-H), 4,3 ~ 5,2 (3H, m), 4,74 (DOH), 5,72 (IH, brs, Cg-H), 7,75 (0,5H, s, sidekaede Cg-H), 7,79 (0,5H, s, sidekæde c3-h) HPLC (retentionstid): 16,5 min.

Betingelser: Nucleosil 7C^g (10x300 mm) 3% acetonitril-vand 3,65 ml/min.

25 (g) Isomerer A og B af (5R, 6S, 8R)-2-[(5,6-dihydro-2-methyl-4H-pyrrolo[1,2-c]-l,2,3-triazolium-4-yl)-thio]-6-(1-hydroxyethyl )-2-penem-3-carboxylat: 30 φ9Η3 iy 0H c ς_Ai/ -ν5γ^ 3S ISOmer Λ: I.R. (KBr skive) cm 1765 49 DK 171644 B1 U.V. λ max (H20) nm: 325 N.M.R. δ (D2°) ppm: 1.34 (3H, d, J = 5,9 Hz, CH3), 2,6-3,2 (IH, m) , 5 3,2-3,8 (IH, m), 3,9-4,1 (IH, n^Cg-H), 4,1-4,9 (3H, m), 4,35 (3H, s, CH3), 4,74 (DOH) , 4,9-5,3 (IH, m), 5,77 (IH, d, J = 1,2 Hz, Cg-H), 8,51 (IH, s, sidekaede C^-H) 10 HPLC (retentionstid): 14 min.

Betingelser: Nucleosil 7C^g (10x300 mm) 5% acetonitril-vand 3,65 ml/min.

15

Isomer B: I.R. (KBr skive) cm 1765 U.V. X max (H20) nm: 326 20 N.M.R. δ (D20) ppm: 1.34 (3H, d, J = 6,3 Hz, CHg), 2,6-3,1 (IH, m) , 3,2-3,8 (IH, m), 3,9-4,1 (IH, m!, Cg-H), 4,1-5,0 (3H, m), 4,36 (3H, s, CH3) , 4,74 (DOH), 5,0-5,3 25 (IH, m), 5,81 (IH, d, J = 1,2 Hz, Cg-H), 8,58 (IH, s, sidekæde C^-H) HPLC (retentionstid): 18 min.

(h) Isomerer A og B af (5R, 6S, 8R)-2-[(5,6-dihydro-4H-pyrrolo-[1,2-c]pyrazol-4-yl)-thio]-6-(1-hydroxyethyl)-2-penem- 3-carboxylsyre:

0>-N VCOzH

35 0H £> DK 171644 B1 50

Isomer A: I.R. {KBr skive) cm'1: 3380, 2950, 1760, 1580, 13-65 U.V. λ max (H„0) nm: 252 (sh), 324 5 Δ N.M.R. δ (D20) ppm: 1.26 (3H, d, J * 5,9 Hz, CH3), 2,4-2,9 (IH, m), 2.9- 3,5 (IH, m) , 3,8~4,0 (IH, m, Cg-H), 4,0-4,8 (4H, m), 4,74 (.DOH), 5,65 (IH, brs, Cc-H), 6,29 (IH, 10 5 brs, sidekæde C^-H), 7,55 (IH, brs, sidekæde C^-H) HPLC (retentionstid): 20 min.

Betingelser: De samme, som er beskrevet i (g) 15

Isomer B: I.R. (KBr skive) cm-1: 3390, 2950, 1760, 1590, 1370 U.V. λ max (HnO) nm: 253 (sh), 324 20 „ , 2 N.M.R. δ (D20) ppm: 1.26 (3H, d, J = 5,9 Hz, CH3), 2,4-2,9 (IH, m) , 2.9- 3,5 (IH, m), 3,8-4,0 (IH, m, Cg-H), 4,0-4,8 (4H, m), 5,63 (IH, brs, C--H), 6,27 (IH, brs, side-kæde C3~H), 7,55 (IH, brs, sidekæde C2~H) HPLC (retentionstid): 24 min.

3Q EKSEMPEL 15

Isomerer A og B af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2- [(5,6,7,8-tetrahydroimidazo[1,2-a]pyridin-7-yl)-thio]-2-pe-nem-3-carboxylsyre:

C^^CO^NB 0i^^C02PNB ^C0,H

DK 171644 Bl 51 (1) Syntese af p-nitrobenzylester af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxy-ethyl)— 2—[(5,6,7,8-tetrahydroimidazo[1,2-a]pyridin-7-yl)-thio]-2-penem-3-carboxylsyre: ^ Et thiolderivat (292 mg) vundet som beskrevet senere i referenceeksempel 10 anvendtes, og procedurerne ligesom dem, der er beskrevet i eksempel 1-(1) blev gentaget til opnåelse af den ovennævnte forbindelse i et udbytte på 185 mg: 10 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH^), 1,9^2,6 (2H, m, pyridin-ring 2,6^-3,5 (2H, m, pyridinring Cg-H2), 3,5<—-3,9 (2H, m, pyridinring Cy-H og Cg-H), ^ 3,9^4,3 (3H, m, pyridinring C5-H2 og Cg-H), 5,12 og 5,42 (hver 2H, hver AB^, J = 14 Hz, C02CH2Ar), 5,70 (IH, d, J = 2 Hz, C^-H), 6,75 (IH, brs, imidazolring C^-H), 6,92 (IH, brs, imidazolring C2-H), 7,53 (2H, d, J = 9 Hz, ArH), 8,12 (2H, d, J = 9 Hz, ArH) 20 (2) Syntese af isomerer A og B af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxy-ethyl) — 2—[(5,6,7,8-tetrahydroimidazo[1,2-a]pyridin-7-yl)-thio]-2-penem-3-carboxylsyre: 25

Procedurerne ifølge eksempel 1—(2) blev gentaget under anven-^ delse af produktet (71 mg) vundet i ovennævnte trin (1) til dannelse af de omhandlede forbindelser (isomerer A og B).

Isomer A: Udbytte 13 mg 30 I.R. (KBr skive) cm-1: 1770, 1590 U.V. λ max (H20) nm: 260, 322 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, CH^), 2,1~2,6 (2H, m, pyridinring Cg-H2), 3,13 (IH, dd, J = 18, 7 Hz, pyridinring 35 52 DK 171644 B1

Cg-H), 3,60 (IH, dd, J = 18, 5 Hz, pyridinring Cg-H), 4,01 (IH, dd, J = 7, 2 Hz, Cg-H), 4,0^.4,5 (4H, m, pyridinring Cg-H2, pyridinring C7~H og Cg-H), 4.80 (HOD), 5,75 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 7,35 (2H, s, 5 imidazolring C2~H og C^-H) HPLC (retentionstid): 22,7 min.

Betingelser: Nucleosil 7C^g (10x300 mm) 10 5% acetonitril-vand 3,65 ml/min.

Isomer B: Udbytte 15 mg 15 I.R. (KBr skive) cm-1: 1770, 1590 U.V. λ max (H20) nm: 258, 322 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, CHg) , 2,1~2,6 (2H, m, pyridin-20 ring Cg-H2), 3,17 (IH, dd, J = 18, 7 Hz, pyridinring

Cg-H), 3,63 (IH, dd, J = 18, 6 Hz, pyridinring Cg-H), 4,00 (IH, dd, J = 7, 2 Hz, Cg-H), 4,0~4,5 (4H, m, pyridinring Cg-H2, pyridinring C^-H og Cg-H), 4.80 (HOD), 5,78 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 7,35 (2H, s, imidazolring C2~H og Cg-H) HPLC (retentionstid): 27,7 min.

EKSEMPEL 16 30

Syntese af blanding af isomererne A og B af (5R, 6S, 8R)- 6-(1-hydroxyethyl)-2-[(1-methyl-5,6,7,8-tetrahydroimidazo-[1,2-a]pyridinium-7-yl)-thio]-2-penem-3-carboxylat: 35 DK 171644 Bl 53

Me >^γγ5γ5-<^ QJ-n ^-cOjPNB * cr~N ^".cdi

Der anvendtes den i eksempel 15 vundne forbindelse (114 mg), og den omhandlede forbindelse (udbytte 33 mg) vandtes i over-10 ensstemmelse med de procedurer, der er angivet i eksempel 2.

I.R. (KBr skive) cm-1: 1770, 1585 N.M.R. δ (D2®^ ppm: 15 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CHg) 2,1^2,7 (2H, m, pyridin- ring Cg-^)» 3,0^4,4 (7H, m, pyridinring Cg-H2# pyridinring ΟγΗ, pyridinring Cg-H2# Cg-H og Cg-H), 3,80 (3H, s, NCHg), 4,80 (HOD), 5,80 (IH, s, C^-H), 7,42 (2H, s, imidazolring C2~H og C^-H) 20 HPLC (retentionstid): 14,4 min.

Betingelser: Nucleosil 7Clg (10x300 mm) 7% acetonitril-vand 25 3,65 ml/min.

EKSEMPEL 17

Syntese af (5R, 6S, 8R) — 6—(1-hydroxyethyl)-2-[(5,6,7,8-tetra-50 hydro-1,2,4-triazol[4,3-a]pyridin-7-yl)-thio]-2-penem-3-car boxyl syre (blanding af isomerer A og B): „ Vf* -

“^cQjPNB o^~N ^COzPNB 0^ ^COaH

DK 171644 B1 54 (1) Syntese af p-nitrobenzylester af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxy-ethyl)-2-[(5,6,7,8-tetrahydro-l,2,4-triazol[4, 3-a]pyridin- 7-y1)-thio]-2-penem-3-carboxylsyre: 5 Thiolderivatet (213 mg) vundet som beskrevet nedenfor i referenceeksempel 11 omsattes og behandledes i overensstemmelse med de procedurer, der er beskrevet i eksempel 1-(1) til opnåelse af den omhandlede forbindelse (udbytte: 186 mg).

10 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 1,40 (3H, d, J = 6 Hz, CH^), 2,0^2,6 (2H, m, pyridin-ring Cg-H2), 3,0^4,0 (4H, m, pyridinring Cg-H2, pyridinring C^-H og Cg-H), 4,0^4,4 (3H, m, 15 pyridinring Cg-H2 og Cg-H), 5,20 og 5,48 (hver 2H, hver ABq, J = 14 Hz, C02CH2Ar), 5,88 (0,5 H, d, J = 2 Hz, C5-H), 5,91 (0,5 H, J = 2 Hz, Cg-H), 7,60 (2H, d, J = 9 Hz, ArH), 8,12 (IH, s, triazolring C^-H), 8,24 (2H, d, J = 9 Hz, ArH) 20 (2) Syntese af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[(5,6,7,8-tetrahydro-1,2,4-triazol[4,3-a]pyridin-7-yl)-thio]-2-pe-nem-3-carboxylsyre (blanding af isomerer A og B): 3 Produktet (70 mg) vundet i trin (1) ovenfor behandledes i overensstemmelse med de procedurer, der er beskrevet i eksempel 1-(2), hvorved der vandtes det omhandlede produkt i et udbytte på 29 mg.

I.R. (KBr skive) cm 1765, 1595 U.V. λ max (H20) nm: 258, 322 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,38 {3H, d, J = 6 Hz, CH^), 2,1^2,6 (2H, m, pyridin-35 ring Cg-H), 2,9^3,6 (2H, m, pyridinring Cq-H2), 4,00 (IH, dd, J = 6, 2 Hz, Cg-H), 4,0^4,5 (4H, m, pyridinring Cg-H2, pyridinring C^-H og Cg-H), DK 171644 B1 55 4,80 (HOD), 5,80 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 8,48 (IH, s, triazolring C^-H) HPLC (retentionstid): 14,2 og 15,2 min.

5

Betingelser: Nucleosil 7C1Q (10x300 mm) 3% acetonitril-vand 3,65 ml/min.

10 EKSEMPEL 18

Syntese af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[(methyl-5,6,7,8-tetrahydro-1,2,4-triazol[4,3-a]pyridinium-7-yl)-thio]-2-pe-nem-3-carboxylat (blanding af isomerer A og B; isomerer C 15 og D): 20 ^\C02PNB * 0^ TCf!

De procedurer, der er beskrevet i eksempel 2, blev gentaget under anvendelse af produktet (116 mg) opnået i eksempel 17 ^ til dannelse af de omhandlede forbindelser:

Blanding af isomerer A og B: Udbytte 15 mg I.R. (KBr skive) cm-1: 1760, 1580 30 U.V. λ max (H20) nm: 255, 323 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH^), 2,1^4,6 (9H, m, pyridin-ring Cg-H2, pyridinring Cg-H2, pyridinring C5-H2, 35 pyridinring Cg-H og Cg-H), 4,04 (3H, s, NCHg), 4,86 (HOD), 5,80 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 8,80 (IH, s, triazolring Cg-H) DK 171644 B1 56 HPLC (retentionstid): 14,4 min.

Betingelser: Nucleosil 7C^g (10x300 mm) 5% acetonitril-vand 5 3,65 ml/min.

Isomer C: Udbytte 7 mg I.R. (KBr skive) cm-1: 1765, 1590 10 u.V. λ max (H20) nm: 258, 323 N.M.R. 6 (D20) ppm: 1,39 (3H, d, J = 6 Hz, CH^), 2,2-^2,7 (2H, m, pyridin-ring Cg-H2), 3,32 (IH, dd, J = 18, 7 Hz, pyridinring 15 Cg-H), 3,68 (IH, dd, J = 18, 5 Hz, pyridinring Cg-H), 4,03 (IH, dd, J = 6,2Hz, Cg-H), 4,16 (3H, s, NCH3), 4,2^4,6 (4H, m, pyridinring Cg-H2, pyridinring C?-H og Cg-H), 4,80 (HOD), 5,83 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H) 20 HPLC (retentionstid): 21,2 min.

Isomer D: Udbytte 6 mg I.R. (KBr skive) cm-1: 1765, 1590 25 U.V. λ max (H20) nm: 260, 322 N.M.R. 6 (D20) ppm: 1.36 (3H, d, J = 6 Hz, CH^), 2,3<v2,6 (2H, m, pyridinring Cg-H2), 3,21 (IH, dd, J = 18, 7 Hz, pyridinring Cg-H), 3,68 (IH, dd, J = 18, 5 Hz, pyridinring Cg-H), 4,06 (IH, dd, J = 6, 2 Hz, Cg-H), 4,16 (3H, s, NCHg), 4,0^4,6 (4H, m, pyridinring Cg-H2, pyridinring C?-H og Cg-H), 4,80 (HOD), 5,80 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H) ^ HPLC (retentionstid): 29,6 min.

57 DK 171644 B1

Referenceeksempel A:

Syntese af 6,7-dihydro-7-mercapto-5H-pyrrolo[l,2-c]imidazol- trifluormethan-sulfonat: 5 |-1

Jj _s·.·.—· CF3SO3H

H HCt S-N

10 (1) Ethyl-3-(imidazol-4-yl)-3-(p-methoxybenzylthio)-propionat: 3 g ethylester af urocansyre-hydrochlorid (3-(lH-imidazol-4-yl)-2-propensyreethylester-hydrochlorid; W. Hubball og F.L. Pyman, ^ J. Chem. Soc., 1928, 26) blev gjort alkalisk med en vandig opløsning af natriumbicarbonat og mættet med NaCl og ekstra-heredes med chloroform og tørredes over Na2S04- Opløsningen koncentreredes til 50 ml under nedsat tryk, der tilsattes 3,1 g p-methoxybenzylmercaptan og 3,44 g DBU og omrørtes i 20 24 timer ved stuetemperatur under argon. Opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk, remanensen rensedes med søjlekromatografi under anvendelse af 40 g silicagel og ben- zen/ethylacetat i rumfangsforholdet 1:1 som elueringsmiddel, hvorved der opnåedes 4,8 g af den ovennævnte forbindelse.

25 N.M.R. δ (CDClj) ppm: 1,18 (3H, t, J = 6 Hz), 2,83~3,00 (2H, m) , 3,60 (2H, 3Q s), 3,76 (3H, s), 4,07 (2H, q, J = 6 Hz), 4,23 (IH, t, J = 6 Hz), 6,13 (IH, brs), 6,75 (2H, d, J = 9 Hz), 6,86 (IH, s), 7,13 (2H, d, J = 9 Hz), 7,53 (IH, s) (2) 3-(imidazol-4-y1)-3-(p-methoxybenzylthio)propanol: 4,8 g af den i trin (1) ovenfor vundne forbindelse opløstes i 50 ml THF, afkøledes til 0~5°C, der tilsattes 0,33 g lithium- 35 58 DK 171644 B1 borhydrid og omrørtes i 17 timer ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk, der tilsattes chloroform, vand og ammoniumchlorid til den vundne remanens, og den organiske fase skiltes fra. Den organiske fase tørredes 5 over Na2S0^, og opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk. Den i overskriften angivne forbindelse opnåedes efter rensning af remanensen ved at føre den gennem en kolonne pakket med 50 g silicagel og under eluering af produktet med chloro-form/methanol i rumfangsforholdet 95:5 (udbytte 1,98 g).

10 N.M.R. (CDC13) ppm: 1,90—2,30 (2H, m) , 3,50 (2H, s), 3,69 (3H, s), 3,94 (IH, t, J = 6 Hz), 6,69 (2H, d, J = 9 Hz), 6,81 (IH, s), 15 7,06 (2H, d, J = 9 Hz), 7,49 (IH, s) (3) 3-(imidazol-4-yl)-3-(p-methoxybenzylthio)-propylchlorid: 1,2 g af den i trin (2) ovenfor vundne forbindelse opløstes ^ i et blandet opløsningsmiddel bestående af 30 ml THF og 30 ml carbontetrachlorid, der tilsattes 2,26 g triphenylphosphin og omrørtes i 17 timer ved 50°C. Reaktionsblandingen underkastedes destillation under nedsat tryk, og den resulterende remanens rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af 25 30 g silicagel og med benzen/methanol i rumfangsforholdet 97:3 som elueringsmiddel. På denne måde opnåedes den ovennævnte forbindelse i et udbytte på 0,41 g.

N.M.R. δ (CDC1,) ppm:

30 J

2,15~2,50 (2H, m), 3,55 (2H, s), 3,74 (3H, s), 4,00 (IH, t, J = 6 Hz), 6,74 (2H, d, J = 9 Hz), 6,86 (IH, s), 7,12 (2H, d, J = 9 Hz), 7,57 (IH, s) 35 DK 171644 B1 59 (4) 6,7-dihydro-7-(p-methoxybenzylthio)-5H-pyrrolo[1,2-c]-imidazol: 400 mg af forbindelsen opnået i det foregående trin (3) opløs-5 tes i 10 ml acetone, der tilsattes 2.Og natriumjodid og omrørtes i 17 timer ved stuetemperatur. Blandingen opvarmedes yderligere til kogning under tilbagesvaling i 8 timer, og opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk. Til remanensen sattes chloroform, vand og natriumcarbonat (3 g), den organiske fase isoleredes, tørredes over Na2S0^, og opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk. Remanensen rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af 10 g silicagel og chloro-form/methanol i rumfangsforholdet 99:1 som elueringsmiddel, hvorved der opnåedes den ovennævnte forbindelse i et udbytte 15 på 250 mg.

N.M.R. 6 (CDC13) ppm: 2,27~2,60 (IH, m) , 2,65~3,15 (IH, m), 3,70 (2H, 20 s), 3,75 (3H, s), 3,80^4,20 (3H, m) , 6,76 (IH, s), 6,78 (2H, d, J = 9 Hz), 7,18 (2H, d, J = 9 Hz), 7,34 (IH, s) (5) 6,7-dihydro-7-mercapto-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazol-trifluor- methan-sulfonat: 25 PM8S"Y% —^ «SU- 30 . N ^

Til 6,7-dihydro-7-p-methoxybenzylthio-5H-pyrrolo[1,2-c]imi-dazol (400 mg) opnået i trin (4) ovenfor sattes der 1,5 ml anisol 9 ml trifluoreddikesyre og 0,36 ml trifluormethansulfonsyre, og der omrørtes i 30 minutter ved stuetemperatur. Reaktionsopløsningen koncentreredes under nedsat tryk og koncentreredes yderligere efter tilsætning af 20 ml xylen. Disse proce- DK 171644 B1 60 durer blev gentaget 2 gange, og den resulterende remanens vaskedes med ether. Etheren fjernedes ved dekantering, der tørredes under nedsat tryk til opnåelse af den omhandlede forbindelse i et udbytte på 440 mg.

5 N.M.R. δ (DjO) ppm: 2,50~2,80 (IH, m), 3,00^*3,43 (IH, m) , 4,20/^4,70 (3H, m), 4,80 (HOD), 7,33 (IH, 2), 8,60 (IH, s) 10

Referenceeksempel 1:

Syntese af 6,7-dihydro-7-mercapto-5H-pyrrolo[2,l-c]-l,2,4-triazoltrifluormethan-sulfonat: 15

N—N N-N

20

Under anvendelse af 6,7-dihydro-7-p-methoxybenzylthio-5H-pyr-rolo[2,1-c]-1,2,4-triazol (280 mg) blev procedurerne i referenceeksempel A gentaget til opnåelse af den ovennævnte forbindelse (udbytte: 361 mg, transparent farveløs olie).

25 N.M.R. δ (DMSO-dg + D20) ppm: 1,8^2,6 (IH, m) , 3,0^-3,6 (IH, m), 4,1 *>^4,5 (2H, m), 4,65 (IH, dd, J = 8, 4 Hz), 9,50 (IH, s) 30

Referenceeksempel 2

Syntese af 6,7-dihydro-6-mercapto-3-trifluormethyl-5H-pyrrolo-[2,l-c]-l,2,4-triazol-trifluormethansulfonat: rCt—* jzft·"·50·" xCFi HS·^/ xCFo 61 DK 171644 B1

Ifølge de procedurer, der er beskrevet i referenceeksempel A opnåedes den ovenfor beskrevne forbindelse som en lysegul olie (231 mg) ud fra 6,7-dihydro-6-p-methoxybenzylthio-3-tri-fluormethyl-5H-pyrrol[2,l-c]-l,2,4-triazol (116 mg).

5 N.M.R. δ (D20) ppm: 3,08 (IH, dd, J = 18, 7 Hz), 3,68 (IH, dd, J = 18, 7 Hz), 4,1~4,7 (3H, m) , 4,80 (HOD) 10

De følgende forbindelser fremstilledes også i overensstemmelse med de procedurer, der er beskrevet i referenceeksempel A.

f5 Referenceeksempel 3: 3-amino-6,7-dihydro-7-mercapto-5H-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4-triazol-trifluormethansulfonat: 2° -y

Η$χΛχΝΝ^ΝΗ2 -CFjSOaH

\-N

25

Referenceeksempel 4: 3-chlor-6,7-dihydro-7-mercapto-5H-pyrrolo[2,l-c]-l,2,4-tria- zol-trifluormethansulfonat: 30 ^:r ·«» 35 DK 171644 B1 62 N.M.R. δ (D20) ppm: 2,50^22,95 og 3,15^3,60 (IH, m), 4,05^4,80 (3H, m, 4,80 (HOD) 5

Referenceeksempel 5: 2-amino-6,7-dihydro-7-mercapto-5H-pyrrolo[2,1-b]-1,2,4-triazol-trifluormethansulfonat: 10

HS \Jl -C^SOjH

i, ' NH* N.M.R. δ (D20) ppm: 2,60^2,90 og 3,18^3,60 (IH, m), 4,10^4,75 (3H, m), 4,80 (HOD) 20

Referenceeksempel 6: 2-chlor-6,7-dihydro-7-mercapto-5H-pyrrolo[2,1-b]-l, 2,4-triazol-trifluormethansulfonat: 25

· CF3SO3H

30 C i N.M.R. δ (E^O) ppm: 2,49^2,80 og 3,10-^3,50 (IH, m) , 4,05^4,58 (3H, 35 m), 4,80 (HOD) DK 171644 B1 63

Referenceeksempel 7: 6,7-dihydro-6-mercapto-5H-pyrrol[1,2-c]thiazoliumtrifluor-methansulfonat: 5

HS

OCcF3S0?

to W

N.M.R. δ (D20) ppm: 3,15 (IH, dd), 3,70 (IH, dd), 4,2/^5,2 (3H, m), 4,74 15 (DOH), 7,84 (IH, d, J = 1,9 Hz), 9,83 (IH, d, J = 19,0 Hz)

Referenceeksempel 8: 5.6- dihydro-4-mercapto-4H-pyrrolo[1,2-c]-l,2,3-triazoltri-20 fluormethansulfonat: „ ·εΓ*5°·Η

^ N

N.M.R. 6 (D20) ppm: 30 2,5~3,1 (IH, m), 3,2~3,7 (IH, m) , 4,4^5,1 (3H, m), 4,74 (DOH), 8,20 (IH,s)

Referenceeksempel 9: 5.6- dihydro-4-mercapto-4H-pyrrolo[1,2-b]pyrazoltrifluormethansulf onat : DK 171644 B1 64 rk

5 HS X· N-SFaSChH

N.M.R. 6 (D20) ppm: 10 2,4^3,0 (IH, m), 3,0^/3,6 (IH, m), 4,1^4,8 (3H, m), 4,74 (DOH), 6,55 (IH, d, J = 3 Hz), 7,98 (IH, d, J = 3 Hz)

Referenceeksempel 10: 15

Syntese af 7-mercapto-5,6,7,8-tetrahydroimidazo[1,2-a]pyridin-trifluormethansulfonat:

PMB-S-^~^N^_^ H . CF3SO3 H

25 Under anvendelse af 7-p-methoxybenzylthio-5,6,7,8-tetrahydro-imidazo[l,2-a]pyridin (249 mg) fremstilledes den ovennævnte forbindelse i overensstemmelse med de procedurer, der er beskrevet i referenceeksempel A. Udbyttet deraf var 292 mg (transparent farveløs olie).

30

Referenceeksempel 11:

Syntese af 7-mercapto-5,6,7,8-tetrahydro-l,2,4-triazol[4,3-a]-pyridintrifluormethansulfonat:

/—<ji1 y~(NJ

PMB-S-( yr ? HSA^N .CF3SO3H

DK 171644 B1 65

Ved at gå ud fra 307 mg 7-p-methoxybenzylthio-5,6,7,8-tetra-hydro-1,2,4-triazol[4,3-a]pyridin og ved at gentage procedurer ligesom dem, der er beskrevet i referenceeksempel A, opnåedes 435 mg af den ovennævnte forbindelse som et transpa-5 rent farveløs olieagtigt produkt.

N.M.R. δ (D20 + DMSO-dg) ppm: 2,1~2,7 (2H, m), 3,31 (IH, dd, J = 18, 7 Hz), 3,80 10 (IH, dd, J = 18, 7 Hz), 3,6^3,9 (IH, m) , 4,4~4,6 (2H, m), 9,19 (IH, s) EKSEMPEL 19 15 Syntese af (5R, 6S, 8R)-2-[(2,3-dihydro-lH-indolizinium-l-yl)-thio]-6-(1-hydroxyethyl)-penem-3-carboxylat:

Oh) 9 T ς ” Λ-jfY Jo) 0«^ ^co2pnb 0^ co2 25 i DMF (3 ml) opløstes der 180 mg p-nitrobenzy1-(5R, 6S, 8R)-2- ethylsulfinyl-6-(1-hydroxyethyl)-penem-3-carboxylat (fremstillet ifølge eksempel 1 i den fremlagte japanske patentansøgning nr. 56987/1985) og 271 mg 2,3-dihydro-l-mercapto-lH-indoli-zinium-trifluormethansulfonat, og der tilsattes 108 mg diiso-30 propylethylamin i nitrogenatmosfære under afkøling til -40°C og omrørtes i 30 minutter ved denne temperatur. Reaktionsvæsken udhældtes i ether, underkastedes centrifugering, og den ovenstående væske fjernedes ved dekantering. Bundfaldene opløstes i 50% THF-vand (40 ml), der tilsattes 4,16 g ammonium-35 chlorid og 2,08 g jernpulver under isafkøling og omrørtes kraftigt i 50 minutter ved denne temperatur. Reaktionsopløs-ningen filtreredes med "Celite" ^ (fremstilles og sælges af 66 DK 171644 B1

Johns-Manville), filtratet koncentreredes under nedsat tryk og vaskedes med ethylacetat. Vandfasen koncentreredes under vakuum, og det resulterende koncentrat rensedes ved at føre det gennem en kolonnepakke med Diaion HP-20 (1,8 cm x 22 cm). 5 Fraktionerne elueret med 350 ml vand kastedes bort, og fraktionerne elueret med 5% THF-vand koncentreredes under vakuum, rensedes ved HPLC [bærer: Nucleosil 7C^g (10 mm x 300 mm), opløsningsmiddel: 7% acetonitril-vand, strømningshastighed: 3,65 ml/min.], og der frysetørredes til opnåelse af den oven-10 nævnte forbindelse som et lysegult pulver (udbytte: 30 mg).

I.R. (KBr skive) cm 1760, 1590 U.V. λ max (H20) nm: 265, 325 N.M.R. δ (D20) ppm: 15 1,33 (3H, d, J = 6 Hz, CH-j), 2,48^2,92 (IH, m, indoliziniumring C2~H), 2,92^3,40 (IH, m, indoliziniumring C2~H), 3,95^5,20 (5H, m, indoliziniumring C^-H og C3~H2, Cg-H -pg Cg-H), 20 4,80 (HOD), 5,64 (1/3 H, d, J = 2 Hz, Cg-H), 5,76 (2/3 H, d, J = 2 Hz, Cg-H), 7,92*v.8,32 (2H, m, indoliziniumring Cg-H og Cg-H), 8,58 (IH, dt, J = 1, 7 Hz, indoliziniumring C^-H), 8,88 (IH, dd, J = 1, 7 Hz, indoliziumring C,--H) 25 HPLC (retentionstid): 13,0 min. og 13,6 min.

Grundstofanalyse (%) (som ci6Hi6N2°4S2'H2°*

30 C Η N

Beregnet: 49,98 4,72 7,29

Fundet: 50,22 4,75 7,38 35 DK 171644 B1 67 EKSEMPEL 20

Fremstilling af (5R, 6S, 8R)-2-[(2,3-dihydro-lH-indolizinium-2-yl)-thio]-6-(1-hydroxyethyl)-penem-3-carboxylat: 5 0H °_r T s ,s-L aQ) Λγ5γ ' —@ 10 0,^—N ^COzPNB 0^- COz

Ved at følge fremgangsmåden ligesom dem, der er beskrevet i eksempel 19, fremstilledes det ovenfor angivne produkt som et lysegult pulver under anvendelse af 2,3-dihydro-2-mercap-to-lH-indoliziniumtrifluormethansulfonat.

15

Isomer A: U.V. λ max (H2O) nm: 264, 322 HPLC (retentionstid): 11,7 min.

20 Bærer: Nucleosil 7C^g (lOx 300 mm)

Opløsningsmiddel: 7% acetonitril-vand Strømningshastighed: 3,65 ml/min.

Isomer B: U.V. λ max (H2O) nm: 264, 322 HPLC (retentionstid): 13,4 min.

30 EKSEMPEL 21

Fremstilling af (5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[l,2-a]-imidazol-7-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)-penem-3-carboxylsyre: U COzPNB COzPNB COzH ^ 68 DK 171644 B1 (1) Syntese af p-nitrobenzyl-(5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2 — [{6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-a]imidazol-7-yl)thio]-pe-nem-3-carboxylat: 5 p-nitrobenzyl-(5R, 6S, 8R)-2-ethylsulfinyl-6-(1-hydroxyethyl)-penem-3-carboxylat (190 mg) og 6,7-dihydro-7-mercapto-5H-pyr-rolo[1,2-a]imidazoltrifluormethansulfonat (261 mg) opløstes i 5 ml DMF, der tilsattes 232 mg diisopropylethylamin under afkøling af opløsningen til -50°C og omrørtes i 30 minutter 10 ved denne temperatur. Reaktionsopløsningen fortyndedes med ethylacetat, og opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk efter vask og tørring over MgSO^. Remanensen rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af 18 g silicagel (chloroform: methanol i rumfangsforholdet 5:1), og den ovennævnte 15 karamelagtige forbindelse blev opnået i et udbytte på 178 mg.

N.M.R. δ (CDCl^) ppm: 20 1,40 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,6^3,5 (2H, m, pyrrolin- ring · 3,7^4,4 (4H, m, pyrrolinring C5“H2'

Cg-H og Cg-H), 4,80 (IH, dd, J = 4, 7 Hz, pyrrolinring C7~H), 5,18 og 5,36 (hver 0,5 H, hver ABq, J = 14 Hz, COjC^Ar), 5,28 og 5,41 (hver 0,5 H, hver ABq, 25 J = 14 Hz, C02CH2Ar), 5,75 (0,5 H, d, J = 2 Hz, Cg-H), 5,98 (0,5 H, d, J = 2 Hz, Cg-H), 6,92 (0,5 H, d, J = 2 Hz, imidazolring-H), 6,96 (0,5 H, d, J = 2 Hz, imidazol-ring-H), 7,16 (IH, d, J = 2 Hz, imidazolring-H), 7,58 (IH, d, J = 9 Hz, ArH), 7,64 (IH, d, J = 9 Hz, ArH), 8,16 30 (IH, d, J = 9 Hz, ArH), 8,24 (IH, d, J = 9 Hz, ArH).

(2) Syntese af (5R, 6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-a]-imidazol-7-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)-penem-3-carboxyl- syre:

Forbindelsen (178 mg) vundet i trin (1) ovenfor opløstes i en blanding af THF (15 ml) og phosphatpuffer (15 ml, pH 7,0), 35 DK 171644 B1 69 der tilsattes 200 mg 10% palladium-carbon for at gennemføre katalytisk reaktion ved stuetemperatur i 2 timer. Efter fjernelse af katalysatoren ved filtrering kombineredes det resulterende filtrat og vaskevæske, og kombinationen koncen-5 treredes og vaskedes med ethylacetat. Den vandige fase koncentreredes, og koncentratet rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af Diaion HP-20 (1,8 cm x 20 cm). Efter fjernelse af fraktionerne elueret med 50 ml vand blev fraktioner elueret med 150 ml vand og 80 ml 5% THF-vand kombineret, kon-centreret, renset ved HPLC (bærer: Nucleosil 7C^g (10x300 mm), opløsningsmiddel: 5% acetonitril-vand, strømningshastighed: 3,65 ml/min.] og frysetørret til opnåelse af 58 mg af det omhandlede produkt som et farveløst pulver.

I.R. (KBr skive) cm-1: 1760, 1580 U.V. λ max (H20) nm: 325 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,33 (1,5 H, d, J = 6 Hz, CH3), 1,36 (1,5 H, d, J = 6 Hz, ^ CH^), 2,8^-3,1 (IH, m, pyrrolinring Cg-H), 3,1-^-3,5 (IH, m, pyrrolinring Cg-H), 4,0^4,6 (4H, m, pyrrolinring Cg-H2, Cg-H og Cg-H), 4,80 (HOD), 5,66 (0,5 H, d, J = 2 Hz, Cg-H), 5,73 (0,5 H, d, J = 2 Hz, C_-H), 7,2^7,4 (2H, m, imidazolring-H) 25 HPLC (retentionstid): 13,6 min.

EKSEMPEL 22 30 (1) Syntese af p-nitrobenzyl-(5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)- 2-[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-a]imidazol-6-yl)thio]-2-penem-3-carboxylat: HSOd)'crøw

Cn-JT > 0^-N ^COzPNB

0' "^COzPNB DBU 0 DK 171644 B1 70 p-nitrobenzyl-(5R, 6S, 8R)-2-ethylsulfinyl-6-(1-hydroxyethyl)-penem-carboxylat (213 mg) opløstes i en blanding af acetoni-tril (5 ml) og THF (2 ml) og afkøledes til -40°C til -50°C.

Til opløsningen sattes en opløsning af 6,7-dihydro-6-mercapto-5 5H-pyrrolo[1,2-a]imidazol-trifluormethansulfonat (390 mg) i THF (3 ml) og i DBU (410 mg), og der omrørtes i 20 minutter ved samme temperatur som nævnt ovenfor. Efter at reaktionen var tilendebragt tilsattes der 30 ml ethylacetat, der vaskedes med vand og mættet natriumchloridopløsning, tørres over Na2S04 10 og koncentreredes under nedsat tryk. Den resulterende remanens førtes gennem en kolonne pakket med 15 g silicagel og elueredes med chloroform/methanol i rumfangsforholdet 19:1, og fraktionerne indeholdende det ønskede produkt opsamledes og koncentreredes. På denne måde opnåedes 225 mg af den ønskede forbinr 15 delse som en gullig olie.

N.M.R. <5 (CDC13) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,8^3,7 (2H, m, 20 « I γΝ\ -CH?-r \ ), 3,7~4,7 (5H, m, -SCH-CH--N—V , Cfi-H, VK*/

Cg-H), 5,32 (2H, ABq, J = 14 Hz, -COO-CH2-), 5,76 (IH, d, J = 2 Hz, C^-H), 6,87 og 7,05 (hver IH, hver d, 25 J = 1 Hz, imidazolring-H), 7,59 og 8,18 (hver 2H, hver d, J = 9 Hz, -CgH4NC>2) TLC (tyndtlagskromatografi), Rf: 0,4

Betingelser: Silicagelplade (Merck: tykkelse 0,25 mm)

Fremkalderopløsningsmiddel: chloroform/methanol i rumfangsforholdet 9:1).

(2) Syntese af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[(6,7-dihydro-35 5H-pyrrolo[1,2-a]imidazol-6-yl)thio]-2-penem-3-carboxyl- syre (isomerer A og B): DK 171644 B1 71

5 oJ~®-^CO^PNB "* 0^~N ^C02H

Forbindelsen (84 mg) opnået i ovennævnte trin (1) opløstes i en blanding af THF (5 ml) og phosphatpuffer (5 ml, pH 7), 10 der tilsattes 10% palladium-carbon (160 mg) til gennemførelse af katalytisk reduktion ved stuetemperatur i 3 timer under 1 atm. hydrogen. Efter fjernelse af katalysatoren ved filtrering fortyndedes filtratet med vand og vaskedes med et blandet opløsningsmiddel af ether/ethylacetat i rumfangsforholdet 15 1:1. Den vandige fase koncentreredes til ca. 30 ml under nedsat tryk og førtes gennem en kolonne pakket med Diaion HP-20 (1,8 cm x 22 cm) for at rense produktet. Fraktionerne elueret med 100 ml vand kastedes bort, mens fraktionerne elueret med 5% THF-vand (udvisende maksimal U.V. absorption ved ca. 320 nm) opsamledes og koncentreredes. Koncentratet underkastedes HPLC [bærer: Nucleosil 7C^g (10 x 30 mm), opløsningsmiddel: 5% acetonitril-vand, strømningshastighed: 4 ml/min.], og fraktionerne indeholdende den omhandlede forbindelse og med en retentionstid på 14 min. opsamledes, koncentreredes under nedsat 3 tryk og frysetørredes til opnåelse af den ovennævnte forbindelse (lysegult pulver, udbytte 24 mg).

I.R. (KBr skive) cm 3400, 1765, 1585 U.V. λ max (H2O) nm: 323 30 N.M.R. δ (D20) ppm: l, 37 (3H, d, J = 6 Hz, CH^), 3,2 og 3,6 (hver IH, hver m, -CH2-^~ ), 4,02 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), / ^ i ^ 4,1~4,5 (4H, m, -SCH-CH2-N, Cg-H), 4,80 (HOD), 5,79 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 7,22 (2H, brs, imidazolring-H).

DK 171644 B1 72

Produktet rensedes ved HPLC [bærer: C^g-octadecylsilan (SSC-ODS-762 fremstillet af Senshu Kagaku, Co.f Ltd.), 20 x 300 mm, opløsningsmiddel: 6% acetonitril-vand, strømningshastighed: 10 ml/min.], og de fraktioner, der indeholder den ^ omhandlede forbindelse udviser retentionstider på henholdsvis 15 minutter og 16,5 minutter. På denne måde vandtes isomerer A og B som lysegult pulver efter frysetørring.

Isomer A: 10 N.M.R. δ (D2O) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,96—3,23 (IH, m) , 3,46—3,80 (IH, m), 4,00 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 15 4,10 — 4,50 (2H, m), 4,50—4,75 (2H, m) , 4,80 (HOD), 5,80 (IH, d, J = 2 Hz, C^-H), 7,30 (2H, s, imidazolring-H) HPLC (retentionstid): 15 min.

Isomer B: N.M.R. δ (D2O) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 3,14 — 3,44 (IH, m), 25 3,63 — 3,93 (IH, m) , 3,99 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,10^-4,50 (2H, m) , 4,80 (HOD), 5,78 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 7,35 (2H, s, imidazolring-H) HPLC (retentionstid): 16,5 min.

30 EKSEMPEL 23

Syntese af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[(6,7-dihydro-l-methyl-5H-pyrrolo[1,2-a]imidazolium-6-yl)thio]-2-penem-3-carboxylat: 73 DK 171644 B1 ch3 u ch3i X—\\-Il ii) Fe/vandig NH.Cl L_M-li s 0^N VCCy>NB 4 VCof

Forbindelsen (220 mg) vundet i trin (1) i eksempel 22 disper-geredes i en blanding af acetone (3 ml) og THF (5 ml), og der tilsattes 0,84 ml methyljodid under isafkøling og omsattes 10 ved 3°C i 16 timer. Reaktionsopløsningen koncentreredes til tørhed under nedsat tryk, og den resulterende remanens vaskedes med ether og tørredes. Det resulterende pulver opløstes i en blandet væske bestående af 20 ml THF og 20 ml vand, der tilsattes 4,4 g ammoniumchlorid og 2,2 g (100 mesh) jernpulver 15 og omrørtes kraftigt i 1 time. De opløselige bestanddele fjernedes ved filtrering under anvendelse af "Celite" Θ (Johns-

Manville), filtratet fortyndedes med vand, vaskedes med en blandet væske af ethylacetat/ether i forholdet 1:1, hvorefter vandfasen koncentreredes til 30 ml under nedsat tryk og rense-20 des ved, at koncentratet blev f>ørt gennem en kolonne pakket med Diaion HP-20 (1,8 cm x 23 cm). Efter fjernelse af fraktionerne elueret med 100 ml vand opsamledes fraktionerne elueret med 5% THF-vand og koncentreredes under nedsat tryk. Koncentratet underkastedes derefter HPLC [bærer: Nucleosil 7C.„ (10 x 300 mm), opløsningsmiddel: 3% acetonitril-vand, strømningshastighed: 4 ml/min], og fraktionerne indeholdende den omhandlede forbindelse og udvisende en retentionstid på 23 minutter opsamledes, koncentreredes under vakuum og tørredes til opnåelse af den omhandlede forbindelse i form af et lyse-gult pulver i et udbytte på 54 mg.

I.R. {KBr skive) cm-1: 3400, 1770, 1590 U.V. λ max (H2O) nm: 324 N.M.R. δ (D-0) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH-CH-j), 3,4 (2H, brm, 35 DK 171644 B1 74 Φ ✓ -CH2-^2“ ), 3,83 (3H, s, N-CH3), 4,01 (IH, dd, 3 = 2, / 6 Hz, Cg-H), 4,2^4,5 (4H, m, -S-CH-CH^N, Cg-N) , 4,80 (HOD), 5,79 (IH, d, J = 2 Hz, C5~H), 7,43 (2H, s, 5 imidazoliumring-H).

EKSEMPEL 24

Syntese af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[(6,7-dihydro-10 5H-pyrrolo[1,2-c]imidazol-6-yl)thio]-2-penem-3-carboxylsyre (isomerer A og B).

Ψ 9 9H OH

15 Vys'd

0>—N Or ^COzPNB * 0^"N ^COaH

(1) Syntese af p-nitrobenzyl-(5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-20 2-[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazol-6-yl)thio]-2- penem-3-carboxylat: p-nitrobenzyl-(5R, 6S, 8R)-2-ethylsulfinyl-6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylat (213 mg) opløstes i en blanding af THF (4 ml) og acetonitril (3 ml) og omrørtes ved -50 C. Til opløsningen sattes en opløsning af 6,7-dihydro-6-mercapto-5H-pyrrolo-[1,2-c]imidazoltrifluormethansulfonat (360 mg) opnået i referenceeksempel 16-(6), i THF (3 ml) og 380 mg DBU, og blandingen omrørtes i 15 minutter ved -50°C. Der sattes 30 ml ethylacetat til reaktionsvæsken og vaskedes med vand, derefter med mættet natriumchloridopløsning, hvorefter der tørredes over Na2S0^ og koncentreredes under nedsat tryk. Den vundne remanens rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af 10 g silicagel (elueringsmiddel CHCl~:CH_OH i rumfangsforholdet 35 ^ ^ 19:1), og på denne måde vandtes den omhandlede forbindelse i et udbytte på 94 mg i form af en gul olie (hvoraf en del størknede).

DK 171644 B1 75 N.M.R. δ (CDCl^) ppm: 1,39 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,8~3,6 (2H, m), 3,81 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,0^4,6 (4H, m) , 5,33 5 (2H, ABq, J = 14 Hz, -OCH^Ar), 5,76 (IH, d, J = 2 Hz,

H

C--H), 6,76 (IH, s, -N N), 7,45 (IH, s, -N N), 5 N/ V"

H

7,60 (2H, d, J = 9 Hz, 2 x ArH), 8,20 (2H, d, J = 9 Hz, 10 2 x ArH) (2) Syntese af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[(6,7-dihydro- 5H-pyrrolo[1,2-c]imidazol-6-yl)thio]-2-penem-3-carboxyl- syre (isomerer A og B): 15

Forbindelsen (94 mg) vundet i det foregående trin (1) opløstes i en blanding af THF (7 ml) og phosphatpuffer (7 ml, pH 7), og der tilsattes 180 mg 10% palladium-carbon til at gennemføre katalytisk reduktion ved stuetemperatur i 4,5 timer under 20 atm. hydrogen. Katalysatoren fjernedes ved filtrering, hvorefter filtratet fortyndedes med vand og vaskedes med en blanding i forholdet 1:1 af ether og ethylacetat. Den vandige fase koncentreredes til 30 ml og førtes gennem en kolonnepakke med Diaion HP-20 (1,8 cm x 23 cm) for at rense det. Efter 25 fjernelse af fraktionerne elueret med 100 ml vand blev frak-- tionerne elueret med 5% acetonitril-vand og udvisende maksimal U.V.-absorption ved 323 nm kombineret og koncentreret under nedsat tryk. Koncentratet rensedes yderligere ved HPLC [bærer:

Nucleosil 7C^g (10 x 300 mm), opløsningsmiddel: 5% acetonitril- vand, strømningshastighed: 4 ml/min.], og fraktioner udvisende en retentionstid på henholdsvis 16 min. og 21 min. opsamledes, koncentreredes under vakuum og frysetørredes til opnåelse af de omhandlede isomerer, henholdsvis A og B, som lysegult pulver.

35

Isomer A: Udbytte 13 mg I.R. (KBr skive) cm-1: 3400, 1765, 1620, 1580 DK 171644 B1 76 U.V. λ max (H20) nm: 323 N.M.R. δ (D20) ppm: 1/37 (3H, d, J = 6 Hz, CH3) , 3,0~3,8 (2H, m) , 4,01 5 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,20^-4,50 (4H, m), 4,80 (HOD), 5,79 (IH, d, J * 2 Hz, Cg-H), 7,11 (IH, s, imidazolring-H), 8,37 (IH, s, imidazolring-H) HPLC (retentionstid): 16 min.

10

Isomer B: Udbytte 10 mg I.R. (KBr skive): cm 3400, 1765, 1585 U.V. X max (H20) nm: 323 15 N.M.R. 6 (D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,9~3,80 (2H, m), 4,01 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,20^.4,60 (4H, m), 4,80 (HOD), 5,78 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 7,11 (IH, s, imidazolring-H), 8,36 (IH, s, imidazolring-H) HPLC (retentionstid): 21 min.

EKSEMPEL 25 25

Syntese af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[(6,7-dihydro-2-methyl-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazolium-6-yl)thio]-2-penem-3-carboxylat (isomerer A og B): N ^COaPNB * 0^~N TO®

Forbindelsen (60 mg) vundet i trin (1) i eksempel 24 opløstes i 4 ml acetone, og der tilsattes 0,5 ml methyl jodid og henstilledes i 3 dage ved 3°C. Reaktionsopløsningen blev ind- DK 171644 B1 77 dampet til tørhed under nedsat tryk, og den resulterende remanens vaskedes med ether og tørredes. Det vundne pulver opløstes i en blanding af 10 ml THF og 10 ml vand, og der tilsattes 1,2 g ammoniumchlorid og 600 mg jernpulver (100 mesh) og om-·* rørtes kraftigt i 1 time. De uojiøselige bestanddele filtreredes fra under anvendelse af "Celite" ®, filtratet fortyndedes med vand, vaskedes med en blanding i forholdet 1:1 af ethyl-acetat og ether, og den vandige fase koncentreredes til 20 ml under nedsat tryk. Koncentratet rensedes ved søjlekroma-*0 tografi under anvendelse af Diaion HP-20 (1,8 cm x 20 cm), og fraktionerne elueret med 100 ml vand kastedes bort før man opsamlede fraktioner elueret med 5% THF-vand, som koncentreredes under nedsat tryk. Det resulterende koncentrat underkastedes yderligere HPLC [bærer: Nucleosil 7C^g (10 x 300 mm), opløsningsmiddel: 5% acetonitril-vand, strømningshastighed: 4 ml/min.], og fraktionerne med retentionstider på henholdsvis 18 min. og 24 min. opsamledes, hvilket gav de omhandlede isomerer henholdsvis A og B som lysegult pulver.

2t* Isomer A: Udbytte 9 mg I.R. (KBr skive) cm-1: 1760, 1725, 1670, 1640, 1580 U.V. λ max (H2O) nm: 323 N.M.R. δ (D-0) ppm: 25 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CHg), 3,22 (IH, dd, J = 18, 4 Hz), 3,68 (IH, dd, J = 18, 7 Hz), 3,94 (3H, s, =NCH3), 4,01 (IH, dd, J = 7, 2 Hz, Cg-H), 4,20^4,70 (4H, m) , 4,80 (HOD), 5,78 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 7,23 (IH, s, imidazoliumring-H), 8,64 (IH, s, imidazoliumring-H) HPLC (retentionstid): 18 min.

Isomer B: Udbytte 6 mg 35 I.R. (KBr skive) cm 1765, 1590 U.V. λ max (H2O) nm: 323 DK 171644 Bl 78 N.M.R. δ (D2O) ppm: 1/37 (3H/ d, J = 6 Hz, CH,), 3,12 (IH, dd, J = 18, 4 Hz), 3 Φ 3,64 (IH, dd, J = 18, 7 Hz), 3,94 (3H, s, =NCH3), 5 4,20^4,70 (4H, m), 4,80 (HOD), 5,78 (IH, d, J = 2 Hz, C^-H), 7,24 (IH, s, imidazoliumring-H), 8,64 (IH, s, imidazoliumring-H) HPLC (retentionstid): 24 min.

10 EKSEMPEL 26

Syntese af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[(6,7-dihydro- 1- hydroxy-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazol-6-yl)thio]-2-penem-3-car-15 boxylsyre:

OH

OH 0 OH 0H

A-rVs'Et_.^prV5 20 0^ C°2PNB 0^-N ^C02PNB 51 0^“N ''COaH 1 35

Syntese af p-nitrobenzyl-(5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2 — C(6,7-dihydro-l-hydroxy-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazol-6-yl)- thio]-2-penem-3-carboxylat: 25

Ved at anvende fremgangsmåderne ligesom dem, der er beskrevet i trin (1) i eksempel 22, fremstilledes den ovennævnte forbindelse under anvendelse af 170 mg p-nitrobenzyl-(5R, 6S, 8R)- 2- ethylsulfiny1-6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylat, 300 mg (6,7-dihydro-l-hydroxy-6-mercapto-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazol vundet i trin (8) i referenceeksempel 17 og 396 mg DBU. Udbytte: 195 mg.

N.M.R. δ (CDC13-CD30D) ppm: 1,35 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 5,35 (2H, ABq, J = 14 Hz, DK 171644 B1 79 OCH2Ar), 5,72 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 7,64 (2H, d, J = 9 Hz, 2 x ArH), 8,23 (2H, d, J = 9 Hz, 2 x ArH), 8,23 (IH, s, imidazolring-H) 5 (2) Syntese af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[(6,7-dihydro- 1- hydroxy-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazol-6-yl)thio]-2-penem- 3-carboxylsyre:

Ved at følge fremgangsmåderne ligesom dem, der er beskrevet 10 i trin (2) i eksempel 22, opnåedes den ovennævnte forbindelse (udbytte: 36 mg) ved anvendelse af 195 mg af forbindelsen vundet i det foregående trin (1) og 300 mg 10% palladium-carbon- I.R. (KBr skive) cm"1: 3400, 1760, 1650, 1580 15 U.V. λ max (H20) nm: 323 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,60 (2H, m), 4,00-^4,40 (5H, m), 4,80 (HOD), 5,78 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H), 8,32 20 (IH, s, imidazolring-H) HPLC (retentionstid): 13 min.

Betingelser: Bærer: Nucleosil 7C^g (10 x 300 mm)

Opløsningsmiddel: 1% acetonitril-vand Strømningshastighed: 4 ml/min.

EKSEMPEL 27 (1) Syntese af p-nitrobenzyl-(5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)- 2- [(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[2,l-c]-l,2,4-triazol-6-yl)-thio]-2-penem-3-carboxylat: “ -Vv« “CO"" ^CQPNB DBD qJ-X ^οο,ρνβ DK 171644 B1 80 p-nitrobenzyl-(5R, 6S, 8R)-2-ethylsulfinyl-6-(1-hydroxyethyl)-penem-3-carboxylat (170 mg) opløstes i en blanding af 2 ml acetonitril og 2 ml THF og afkøledes til -30°C. Til den afkølede opløsning sattes en opløsning af 6,7-dihydro-6-mercapto-5 5H-pyrrolo[2,l-c]-l,2,4-triazoltrifluormethansulfonat ‘ (250 mg) i 2 ml acetonitril og 244 mg DBU, og der omrørtes i 20 minutter ved den nævnte temperatur. Efter at reaktionen var tilendebragt tilsattes der 30 ml ethylacetat, der vaskedes med vand og derpå med en mættet vandig natriumchloridopløsning, 10 der tørredes over Ν3250^ og koncentreredes under nedsat tryk. Den vundne remanens underkastedes søjlekromatografi under anvendelse af 15 g silicagel, idet der blev elueret med anvendelse af methanol indeholdende chloroform (idet polariteten deraf gradvist blev forøget ved at ændre blandingsforholdet 15 mellem CHCl^ og CH^OH fra 19:1 til 4:1). Fraktionerne indeholdende den ønskede forbindelse opsamledes og koncentreredes under nedsat tryk til opnåelse af den ønskede forbindelse i et udbytte på 147 mg i form af en gullig olie.

20 N.M.R. 6 (CDC13 + CD30D) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 3,0~3,9 (3H, m), 4,0-4,8 (4H, m), 5,34 (2H, ABq, J = 14 Hz, -COOCH2~), 5,77 (IH, d, J = 2 Hz, C5~H), 7,61 og 8,21 (hver 2H, hver d, J = 9 Hz, -CgH^NOy, 8,18 (IH, s, triazolring-H) TLC: Rf = 0,3 [silicagelplade (Merck), tykkelse 0,25 mm; fremkalderopløsningsmiddel: chloroform/methanol i rumfangsforholdet 4:1].

30 (2) Syntese af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[(6,7-di- hydro-5H-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4-triazol-6-yl)thio]-2-penem- 3-carboxylsyre (isomerer A og B):

35 0H OH /-"pA

^VfVKX/_^ >wsy s_CGn

N ^co2pnb 0^~N TOzH

DK 171644 B1 81

Forbindelsen (141 mg) vundet i det foregående trin (1) opløstes i en blanding af THF (6 ml) og phosphatpuffer (pH 7,0, 6 ml), og der tilsattes 200 mg 10% palladium-carbon for at gennemføre katalytisk reduktion ved stuetemperatur i 3,5 timer under 1 atm. hydrogen. Efter at katalysatoren var filtreret fra, fortyndedes filtratet med vand, og den vandige fase vaskedes med en blanding i forholdet 1:1 af ether og ethylacetat. Den vandige fase koncentreredes til 30 ml og rensedes ved at føre den gennem en kolonne pakket med Diaion HP-20 (1,8 cm x 20 cm). Fraktionerne elueret med 100 ml vand kastedes bort, og dem, der elueredes med 5% THF-vand, opsamledes og koncentreredes under nedsat tryk. Koncentratet underkastedes yderligere HPLC [bærer: Nucleosil 7C^g (10 x 300 mm), opløsningsmiddel: 3% acetonitril-vand, strømningshastighed: 4 ml/min.], og de frak-^ tioner, der udviste en retentionstid på 11 min. opsamledes, koncentreredes under nedsat tryk og frysetørredes til opnåelse af 30 mg af den omhandlede forbindelse i form af et farveløst pulver.

20 -1 Δ I.R. (KBr skive) cm : 3400, 1760, 1580 U.V. λ max (H20) nm: 323 N.M.R. 6 (D20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 7 Hz, CH.J, 3,0^3,8 (2H, m, 25 5 ), 4,00 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), / 4,2^-4,4 (m), 4,80 (HOD), 5,77 (IH, d, J = 2 Hz, C5~H), 8,44 (IH, s, triazolring-H) 30

Produktet rensedes yderligere ved HPLC [Bærer: ODS (20 x 300 mm), opløsningsmiddel: 3% acetonitril-vand, strømningshastighed: 10 ml/min.], og der opsamledes de fraktioner, der udviste en retentionstid på 12,3 min. og 13 min., hvilket gav isomererne henholdsvis A og B efter frysetørring i form af lysegult pulver.

DK 171644 B1 82

Isomer A: N.M.R. 6 (02®^ PPm: 1.36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 3,00-^3,32 (IH, m), 5 3,50~3,83 (IH, m), 4,00 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,10-^4,50 (2H, m), 4,80 (HOD), 5,77 (IH, d, J = 2 Hz,

Cg-H), 8,44 (IH, s, triazolring-H)

Isomer B: 10 N.M.R. δ (D2O) ppm: 1.36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,96-^3,22 (IH, m), 3,46-^3,78 (IH, m), 4,00 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 15 4,13-^4,50 (2H, m), 4,80 (HOD), 5,77 (IH, d, J = 2 Hz,

Cg-H), 8,44 (IH, s, triazolring-H) EKSEMPEL 28 20 Syntese af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[(6,7-dihydro-N-methyl-5H-pyrrolo[2,l-c]-l,2,4-triazolium-6-yl)thio]-2-pe-nem-3-carboxylat (blanding af isomererne A og B og isomerer C og D): ” vy^ ^C02PNB U) Fe/ vandig NH4Q oJ_N- 30 Forbindelsen (400 mg) vundet i trin (1) i eksempel 27 behandledes i overensstemmelse med de procedurer, der er beskrevet i eksempel 23 og underkastedes HPLC [bærer: Nucleosil 7C^g (10 x 300 mm), opløsningsmiddel: 5% acetonitril-vand, strømningshastighed: 5 ml/min.] for at isolere og rense produktet.

35 Således adskiltes de tre fraktioner udvisende retentionstider på henholdsvis 7,8 og 8,4, 9,7 og 13,5 minutter, hvilket gav den omhandlede blandede isomer A, B og isomererne C og D efter DK 171644 B1 83 frysetørring i form af et gult pulver.

Blandet isomer A, B: Udbytte 35 mg 5 I.R. (KBr skive) cm 3400, 1770, 1640, 1580 U.V. λ max (H20) nm: 323 N.M.R. δ (D2°) ppm: 1.36 (3H, d, J = 6 Hz, CH-j), 3,3~4,0 (2H, m) , 4,06 10 (3H, s, N-CH3), 4,80 (HOD), 5,80 (IH, d, J = 2 Hz, C^-H), 8,76 (IH, s, triazoliumring-H)

Isomer C: Udbytte 36 mg U.V. λ max (H20) nm: 323 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 3,25^3,56 (IH, m) , 3,71~4,10 (2H, m) , 4,18 (3H, s, N-CH3), 4,80 (HOD), 20 5,81 (IH, d, J = 2 Hz, Cg-H)

Isomer D: Udbytte 38 mg U.V. λ max (H20) nm: 323 25 N.M.R. δ (D20) ppm: 1.37 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 3,15~3,45 (IH, m) , 3,63~4,10 (2H, m) , 4,18 (3H, s, N-CH3), 4,80 (HOD), 5,81 (IH, d, J = 2 Hz, Cc-H) 30 5 EKSEMPEL 29

Syntese af (5R, 6S, 8R)-2-[(3-amino-6,7-dihydro-5H-pyrrolo-[2,1-c]-1,2,4-triazol-6-yl)thio]-6-(l-hydroxyethyl)-penem-3-carboxylsyre: DK 171644 B1 84 OH 9 X ς cV"TN\l _>>γγ5γ^-υί«/ 0J—N—*LC02pNB CT N έΟϊΗ NHz 5 p-nitrobenzyl-(5R, 6S, 8R)-2-ethylsulfinyl-6-(1-hydroxyethyl)-penem-3-carboxylat (70 mg) og 3-amino-6,7-dihydro-6-mercapto-5H-pyrrolo[2,l-c]-l,2,4-triazol-trifluormethansulfonat (100 mg) opløstes i 2 ml DMF, og der tilsattes 85 mg diisopropylethyl-10 amin under afkøling til -50°C, og der omrørtes i 30 minutter ved denne temperatur. Reaktionsopløsningen udhældtes i ether, og den ovenstående væske fjernedes ved dekantering. Bundfaldene opløstes i en blanding af THF (15 ml) og phosphatpuffer (pH 7,0, 15 ml), og der tilsattes 10% palladium-carbon (100 15 mg) for at gennemføre katalytisk reduktion ved stuetemperatur i fem timer. Efter fjernelse af katalysator ved filtrering blev filtratet og vaskevæsken koncentreret under nedsat tryk og vasket med ethyl acetat. Den vandige fase koncentreredes, og koncentratet rensedes ved at føre den gennem en kolonne 20 pakket med Diaion HP-20 (1,8 x 18 cm). På dette trin blev fraktionerne elueret med 130 ml vand kastet bort, og fraktionerne elueret med 5% THF-vand, kombineredes, koncentreredes og rensedes ved HPLC [bærer: Nucleosil 7C^g (10 x 300 mm), opløsningsmiddel: 3% acetonitril-vand, strømningshastighed: 3,65 25 ml/min.]. Efter frysetørring vandtes 24 mg af det ønskede produkt i form af et farveløst pulver.

I.R. (KBr skive) cm 1760, 1675 U.V. λ max (H20) nm: 253, 323 30 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,36 {9/5H, d, J = 6 Hz, CH3), 1,40 (6/5H, d, J = 6 Hz.

CH^), 3,1^3,5 (IH, m, pyrrolinring C^-H).

3,50^4,0 (IH, m, pyrrolinring C^-H), 4,0-^5,0 35 (5H, m, pyrrolinring Cg-H2, pyrrolinring C^-H,

Cg-H og Cg-H), 4,80 (HOD), 5,80 (IH, d, J = 1 Hz, Cg-H) DK 171644 B1 85 HPLC (retentionstid): 23,2 og 28,8 min.

EKSEMPEL 30 5 Syntese af (5R, 6S, 8R)-2-[(2,3-dihydro-lH-pyrazolo[1,2-a]- pyrazolium-2-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylat: 0H 9 nu -'Vr'Y5-'' — ΎτγΚΐ®> 10 0^~N ^COaPNB 0J-N-

Ifølge de procedurer, der er beskrevet i eksempel 19, bortset fra anvendelsen af 2,3-dihydro-2-mercapto-lH-pyrazolo[1,2-a]-pyrazolium-trifluormethansulfonat, fremstilledes den ovennævnte 15 forbindelse i form af et lysegult pulver.

I.R. (KBr skive) cm 1775, 1595 U.V. λ max (H2O) nm: 250, 323 N.M.R. δ (D20) ppm: 20 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 4,03 (IH, dd, J = 2, 6 Hz, CH3), 4,15~4,43 (IH, m, Cg-H) , 5,80 (IH, d, J = 2 Hz, C^-H), 6,97 (IH, t, J = 3 Hz, pyrazolium-H i 6-stilling), 8,28 (2H, d, J = 3 Hz, pyrazolium-H i 5- og 7-stilling) 25 HPLC (retentionstid): 13 min.

Betingelser: Bærer: Nucleosil 7C^g (10 x 300 mm)

Opløsningsmiddel: 3% acetonitril-vand 3® Strømningshastighed: 5 ml/min.

EKSEMPEL 31

Syntese af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[{4-methylpyrroli-35 zidinium-l-yl)thio]-2-penem-3-carboxylat (isomerer A og B): DK 171644 B1 86

OH O OH

A-rs ys'e'_Λτγ-Ο^ 5 o^~H ^COjPNB q^~H-^ Θ ^-/ COz p-nitrobenzyl-(5R, 6S, 8R)-2-ethylsulfinyl-6-{1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylat (150 mg) og l-mercapto-4-methylpyrrolizi-dinium-trifluormethansulfonat (215 mg) opløstes i 4 ml DMF, og der tilsattes 130 mg diisopropylethylamin under omrøring og afkøling til -40°C, og der omrørtes i 1 time under argonatmosfære. Til reaktionsblandingen sattes der ether, og ether-fasen fjernedes. Remanensen opløstes i en blanding af THF 15 (20 ml) og phosphatpuffer (pH 7,0, 20 ml), og der tilsattes 200 mg platinoxid og underkastedes reduktion under 4 atm. hydrogen i 1 time. Den vandige fase koncentreredes under nedsat tryk, koncentratet underkastedes søjlekromatografi under anvendelse af Diaion HP-20 (20 x 300 mm), fraktionerne elueret 20 med 5% THF-vand opsamledes, koncentreredes under nedsat tryk og rensedes ved HPLC [bærer: Nucleosil 7C^g (10 x 300 mm), opløsningsmiddel: 5% acetonitril-vand, strømmningshastighed: 5 ml/min.]. Således opnåedes den omhandlede forbindelse som et lysegult pulver efter frysetørring.

25

Isomer A: Udbytte 15 mg I.R. (KBr skive) cm 1765, 1590 U.V. λ max (HjO) nm: 258, 323 30 N.M.R. 6 (D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH-.), 1,90~2,90 (6H, m) , 3,29 0 (3H, s, =NCH3), 3,40~4,60 (8H, m) , 4,80 (HOD), 5,80 (IH, d, J = 2 Hz, C5-H) 35 HPLC (retentionstid): 12 min.

DK 171644 B1 87

Isomer B: Udbytte 22 mg I.R. (KBr skive) cm'1: 1760, 1590 U.V. X max (H20) nm: 258, 324 5 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH-.), 1,90~3,10 (6H, m), 3,32 φ ^ (3H, s, =NCH3), 3,50~4,50 (8H, m), 4,80 (HOD), 5,80 (IH, d, J = 2 Hz, C5-H) 10 HPLC (retentionstid): 17,5 min.

EKSEMPEL 32

Syntese af (5R, 6S, 8R)-2-[(4-(2-fluorethyl)pyrrolizidinium-l-yl)thio]-6-(1-hydroxyethyl)-2-penem-3-carboxylat (isomerer A og B): ’ r Ψ 20 X^s^s-e, _ 0Xn ^C02pNB 0X-N—Ly

Fremgangsmåderne ligesom dem, der er beskrevet i eksempel 25 31, blev gentaget under anvendelse af 4-(2-fluorethyl)-1-mer-capto-pyrrolizidinium-trifluormethansulfonat, og det omhandlede produkt vandtes som et lysegult pulver.

Isomer A: 30 I.R. (KBr skive) cm 1: 1770, 1595 U.V. λ max (H20) nm: 255, 323 N.M.R. δ (D20) ppm: 35 1,36 ( 3H, d, J = 6 Hz, CHy 1,90~2,80 (6H, m) , 3,20~4,50 (10H, m) , 4,80 (HOD), 5,20-^5,40 (IH, DK 171644 B1 88 m), 5,80 (IH, d, J = 2 Hz, C5-H) HPLC (retentionstid): 10,5 min.

5 Betingelser: Bærer: Nucleosil 7C^g (10 x 300 mm)

Opløsningsmiddel: 7% acetonitril-vand Strømningshastighed: 5 ml/min.

Isomer B: 10 I.R. (KBr skive) cm 1770, 1590 U.V. λ max (H20) nm: 255, 323 N.M.R. δ (D20) ppm: 15 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CHg), 1,80—3,00 (6H, m) , 3,50 — 4,50 (10H, m) , 4,80 (HOD), 5,20 — 5,40 (IH, m), 5,80 (IH, d, J = 2 Hz, C5«H) HPLC (retentionstid): 12,5 min.

20 EKSEMPEL 33

Syntese af (5R, 6S, 8R)-6-(1-hydroxyethyl)-2-[(4-methylpyrro- lizidinium-2-yl)thio]-2-penem-3-carboxylat (isomerer A og B): 25 OH 9 . OH /'-τ'Λ _^vrsYs‘ 0J-N ^(.θ2ρΝΒ 0J-N kCQ| CH3 30

Ved gennemføring af de procedurer, der er beskrevet i eksempel 31, bortset fra at der anvendtes 2-mercapto-4-methylpyrro-lizidiniumtrifluormethansulfonat, vandtes de ovennævnte isomerer som et lysegult pulver.

35 89 DK 171644 B1

Isomer A: I.R. (KBr skive) cm-1: 1765, 1590 U.V. λ max (H20) nm: 250, 322 5 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH-J, 1,80~2,70 (6H, m), 3,30

0 J

3H, s, =NCH3), 3,55—3,80 (3H, m), 3,90—4,45 (5H, m), 4,80 (HOD), 5,78 (IH, d, J = 2 Hz, C5~H) 10 HPLC (retentionstid): 11,5 min.

Betingelser: Bærer: Nucleosil 7C^g (10 x 300 mm)

Opløsningsmiddel: 5% acetonitril-vand 15 Strømningshastighed: 5 ml/min.

Isomer B: U.V. λ max (H20) nm: 250, 323 20 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH-.), 1,80—2,60 (6H, m) , J ø 2,70—3,10 (IH, m), 3,24 (3H, s, =NCH3), 3,40 — 4,40 (7H, m), 4,80 (HOD), 5,76 (IH, d, J = 2 Hz, C5~H) 25 HPLC (retentionstid): 15 min.

Referenceeksempel· 12 30 Syntese af 2,3-dihydro-l-mercapto-lH-indoliziniumtrifluor-methansulfonat: “ ό*χΓ......

DK 171644 B1 90 (1) Ethylpicolinoylacetat:

Natriumhydrid suspenderedes i 200 ml DMF, og en blandet opløsning af ethylpicolinat (20 g) og ethylacetat (17,5 g) opløst 5 i 150 ml DMF ved en badtemperatur på 50°C tilsattes dråbevis i løbet af 30 minutter. Reaktionsopløsningen isafkøledes efter omrøring i 30 minutter ved en temperatur på 50°C, og der tilsattes dråbevis 13,0 g eddikesyre.

10 Reaktionsopløsningen fortyndedes med ethylacetat, vaskedes med vand og tørredes over MgSO^, hvorefter opløsningsmidlet afdestilleredes under vakuum. Den ovennævnte forbindelse vandtes i et udbytte på 21,2 g.

15 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 1,23 (3H, t, J = 7 Hz), 4,16 (2H, s), 4,16 (2H, q, J = 7 Hz), 7,40 (IH, ddd, J = 1, 7, 7> Hz), 7,77 (IH, dd, J = 1, 7 Hz), 7,95 (IH, ddd, J = 1, 7, 7 Hz), 8,58 (IH, dd, J = 1, 20 7 Hz) (2) Ethyl-3-hydroxy-3-(2-pyridyl)propionat:

Forbindelsen (21,0 g) vundet i trin (1) opløstes i 300 ml 25 ethanol, og der tilsattes 2,1 g natriumborhydnd under is-afkøling og omrøring, og der omrørtes yderligere i 30 minutter ved denne temperatur.

Reaktionsopløsningen neutraliseredes med 0,5 N saltsyre under 30 isafkøling, og opløsningsmidlet destilleredes af under vakuum. Remanensen fordeles mellem vand og ethylacetat, ethylacetat-fasen vaskes med vand, tørres over MgS04 og opløsningsmidlet afdestilleredes under vakuum. Remanensen rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af 150 g silicagel [Eluerings-35 middel: benzen/ethylacetat i rumfangsforholdet 1:1], og på denne måde vandtes den ovennævnte forbindelse i et udbytte på 14,6 g.

DK 171644 B1 91 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 1,14 (3H, t, J = 7 Hz), 2,61 (IH, dd, J = 8, 17 Hz), 2,80 (IH, dd, J = 5, 17 Hz), 4,04 (2H, q, J = 7 Hz), 4,30 (IH, 5 m), 5,05 (IH, m), 7,04 (IH, dt, J = 1, 7 Hz), 7,27 (IH, dd, J = 1, 7 Hz), 7,55 (IH, dt, J = 1, 7 Hz), 8,36 (IH, dd, J = 1, 7 Hz) (3) Ethyl-3-benzoy1thio-3-(2-pyridyl)propionat: 10

Triphenylphosphin (37,6 g) opløstes i 400 ml THF, og der tilsattes 25,0 g diethylazodicarboxylat under isafkøling, og der omrørtes fortsat i 30 minutter ved denne temperatur. En blandet opløsning bestående af en opløsning af forbindelsen 15 (14,0 g) vundet i trin (2) i 100 ml THF og 16,0 g thiobenzoe- syre sattes til reaktionsopløsningen og omrørtes i 2 timer ved denne temperatur. Reaktionsopløsningen inddampedes til tørhed under vakuum, og remanensen fordeltes mellem ethylacetat og en vandig opløsning af 5% natriumbicarbonat. Ethylacetat-20 laget vaskedes med vand, tørredes over MgSO^, og derefter afdestilleredes opløsningsmidlet under vakuum. De udfældede krystaller vaskedes med isopropylether. Remanensen rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af en kolonne pakket med 500 g silicagel [elueringsmiddel: benzen/ethylacetat i 25 rumfangsforholdet 10:1]. Den resulterende remanens rensedes en gang mere ved søjlekromatografi under anvendelse af en kolonnepakke med 300 g silicagel [elueringsmiddel: benzen/ethylacetat i rumfangsforholdet 10:1], og derved vandtes den ovennævnte forbindelse i et udbytte på 15,2 g.

30 N.M.R. δ (CDCl^) ppm: 1,17 (3H, t, J = 7 Hz), 3,12 (IH, dd, J = 7, 15 Hz), 3,44 (IH, dd, J = 8, 15 Hz), 4,08 (2H, q, J = 7 Hz), 5,38 (IH, 35 dd, J = 8, 15 Hz), 7,1^7,8 <6H, m) , 7,8^8,0 (2H, m) , 8,56 (IH, dd, J = 1, 7 Hz) DK 171644 B1 92 (4) Ethyl-3-p-methoxybenzy1thio-3-(2-pyridyl)propionat:

Forbindelsen (5,55 g) vundet i trin (3) opløstes i 80 ml methanol, og der tilsattes 0,95 g natriummethoxid under isafkøling og omrørtes i 2,5 timer ved denne temperatur. Der sattes eddikesyre (1,06 g) til reaktionsopløsningen, og opløsningen inddampedes til tørhed under vakuum.

Remanensen fordeltes mellem 5% vandig opløsning af natriumbi-carbonat og ethylacetat, ethylacetatfasen tørredes over MgSO^ og derefter afdestilleredés opløsningsmidlet under vakuum.

Det resulterende olieagtige materiale (5,02 g) opløstes i 150 ml benzen, der tilsattes 2,76 g p-methoxybenzylchlorid og 2,68 g DBU og omrørtes i 1 time ved stuetemperatur. Reaktions-opløsningen vaskedes med vand og tørredes over MgS04, hvorefter opløsningsmidlet afdestilleredes under vakuum. Remanensen rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af en kolonne pakket med 150 g silicagel [eluering: benzen/ethylacetat i rumfangsforholdet 10:1], og den ovennævnte forbindelse vandtes 20 i et udbytte pa 3,26 g.

N.M.R. δ (CDC13) ppm: 1.12 (3H, t, J = 7 Hz), 2,88 (IH, dd, J = 7, 16 Hz), 25 3.13 (IH, dd, J = 9, 16 Hz),. 3,60 (2H, s), 3,76 (3H, s), 4,03 (2H, q, J = 7 Hz), 4,28 (IH, dd, J = 7, 9 Hz), 6,76 (2H, d, J = 9 Hz), 7,13 (2H, d, J = 9 Hz), 7,0^-7,4 (2H, m), 7,57 (IH, dt, J = 2, 8 Hz), 8,48 (IH, dd, J = 2, 7 Hz) ^ (5) 3-p-methoxybenzylthio-3-(2-pyridyl)propanol:

Lithiumaluminiumhydrid (1,07 g) suspenderes i 150 ml ether, der tilsattes dråbevis dertil en opløsning af forbindelsen (9,34 g) vundet i trin (4) i 70 ml ether under argonatmosfære, ^ og der opvarmedes til kogning under tilbagesvaling i 1,5 time.

En vandig opløsning af 20% ammoniumchlorid (50 ml) tilsattes forsigtigt til reaktionsopløsningen under isafkøling og filtreredes med "Cerite"®· Efter at etherfasen var vasket med DK 171644 B1 93 vand og tørret over MgSO^ afdestilleredes opløsningsmidlet under vakuum. Remanensen rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af 70 g silicagel (elueringsmiddel: ethylacetat), og den ovennævnte forbindelse vandtes i et udbytte på 7,36 g.

5 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 2,0^2,3 (2H, m), 3,56 {2H, s), 3,5^3,8 (2H, m) , 3,78 (3H, s), 4,08 (IH, t, J = 7 Hz), 6,80 (2H, d, J = 10 9 Hz),7,15 (2H, d, J = 9 Hz), 7,1~7,5 (2H, m), 7,68 (IH, dt, J = 2, 8 Hz), 8,54 (IH, dd, J = 2, 7 Hz) (6) 2,3-dihydro-l-(p-methoxybenzylthio)-lH-indolizinium-p-to-luensulfonat: 15

Forbindelsen (7,86 g) vundet i trin (5) opløstes i 50 ml pyridin, der tilsattes 7,10 g p-toluensulfonylchlorid og omrørtes i 4,5 timer under isafkøling. Der sattes 100 ml vand til reaktionsopløsningen, opløsningen indstilledes til pH 9,2 med 20 en vandig opløsning af IN natriumhydroxid, og der ekstraheredes kontinuerligt med ether til fjernelse af pyridin. Vandfasen vaskedes med benzen og ethylacetat, og pH-værdien indstilledes til 1,8 ved tilsætning af koncentreret saltsyre, og der inddampedes til tørhed under vakuum. Der sattes ethanol til rema-25 nensen, og de uopløselige materialer filtreredes fra. Efter at filtratet var affarvet med aktivt carbon koncentreredes filtratet, og det udhældtes i ether. Den ovenstående væske fjernedes, og bundfaldene tørredes således, at den ovennævnte forbindelse vandtes i et udbytte på 9,56 g.

30 N.M.R. 6 (DMSO-dg) ppm: 2,26 (3H, s), 2,2—2,6 (IH, m) , 2,6~3,1 (IH, m), 3,70 (2H, s), 3,90 (3H, s), 3,9 (IH, m), 4,83 (2H, 35 m), 6,82 (2H, d, J = 9 Hz),,7,06 (2H, d, J = 9 Hz), 7,23 (2H, d, J * 9 Hz), 7,46 (2H, d, J = 9 Hz), 7,8^8,1 (2H, m), 8,41 (IH, dt, J = 1,8 Hz), 8,91 (IH, dd, J = 1, 7 Hz) DK 171644 B1 94 (7) 2,3-dihydro-l-mercapto-lH-indoliziniumtrifluormethansul-fonat:

Forbindelsen (8,29 g) vundet i trin (6) og 10,14 g anisol 5 opløstes i 50 ml trifluoreddikesyre, og der tilsattes 4,55 g trifluormethansulfonsyre under isafkøling, og der omrørtes i 30 minutter ved samme temperatur og derefter i 1,5 time ved stuetemperatur. Reaktionsopløsningen inddampedes til tørhed under vakuum, og remanensen vaskedes med henholdsvis hexan, 10 isopropylether og ether. Remanensen opløstes i methanol og udhældtes i ether under omrøring, og den ovenstående væske fjernedes. Bundfaldene tørredes, og den ovennævnte forbindelse vandtes på denne måde i et udbytte på 4,20 g.

15 N.M.R. δ (DMSO-dg) ppm: 2,N2,5 (IH, m), 2,6~3,2 (IH, m) , 4,5^5,1 (3H, m), 7,9~8,2 (2H, m), 8,40 (IH, dt, J = 1, 8 Hz), 8,91 (IH, dd, J = 1, 7 Hz) 20

Referenceeksempel 13

Syntese af 2, 3-dihydro-2-mercapto-lH-indoliziniumtrifluor- methansulfonat: 25 [ojf S —>.....HSK~Xo] (l) Ethyl-2-hydroxy-3-(2-pyridyl)propionat:

Den ovennævnte forbindelse vandtes ved at omsætte 4,31 g ethyl-2-pyridyl-pyruvat (syntetiseret ved den metode, der er beskrevet i Chem. Pharm. Bull., 1972, 20, 1628) og ved at under-*** kaste produktet efterbehandling ved proceduren ligesom, den, der er beskrevet i trin (2) i referenceeksempel 12. (Udbytte: 3,84 g).

DK 171644 B1 95 N.M.R. δ (CDCl^) ppm: 1,22 (3H, t, J = 7 Hz), 3,18 (IH, dd, J = 7, 14 Hz), 3,25 (IH, dd, J = 4, 14 Hz), 4,17 (2H, q, J = 7 Hz), 4,60 (IH, 5 dd, J = 4, 7 Hz), 4,87 (IH, brs), 7,0^7,2 (2H, m) , 7,56 (IH, dt, J = 2, 7 Hz), 8,41 (IH, dd, J = 1, 6 Hz) (2) Ethyl-2-benzoylthio-3-(2-pyridyl)propionat: 10 Den ovennævnte forbindelse vandtes ved at omsætte forbindelsen (3,96 g) vundet i trin (1) og underkaste produktet efterbehandling i overensstemmelse med de procedurer, der er beskrevet i trin (3) i referenceeksempel 12 (udbytte: 5,92 g).

15 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 1,17 (3H, t, J = 7 Hz), 3,39 (IH, dd, J = 7, 15 Hz), 3,50 (IH, dd, J = 7, 15 Hz), 4,15 (2H, q, J = 7 Hz), 4,88 (IH, t, J = 7 Hz), 7,0~7,6 (6H, m) , 7,86 (2H, m), 8,46 (IH), 20 dd, J = 1, 6 Hz) (3) Ethyl-2-p-methoxybenzylthio-3-(2-pyridyl)propionat:

Den ovennævnte forbindelse vandtes ved at omsætte forbindelsen 2·* (5,90 g) vundet i trin (2) og underkaste produktet efterbehand ling på den måde, der er beskrevet i trin (4) i referenceeksempel 12 (udbytte: 4,76 g).

N.M.R. δ (CDC1.) ppm: 30 1,21 (3H, t, J = 7 Hz), 3,10 (IH, dd, J = 7, 15 Hz), 3,27 (IH, dd, J = 8, 15 Hz), 3,75 (3H, s), 3,77 (2H, s), 3,7~3,9 (IH, m), 4,12 (2H, q, J = 7 Hz), 6,76 (2H, d, J = 9 Hz), 6,9^7,3 (4H, m), 7,50 (IH, dt, J = 2, 8 Hz), 35 8,40 (IH, dd, J = 1, 6 Hz) DK 171644 Bl 96 (4) 2-p-methoxybenzylthio-3-(2-pyridyl)propanol:

Den ovennævnte forbindelse vandtes ved at omsætte forbindelsen (994 mg) vundet i trin (3) og underkaste produktet efterbe-5 handling på den måde, der er beskrevet i trin (5) i referenceeksempel 12 (udbytte: 694 mg).

N.M.R. S (CDCl^) ppm: 10 3,0~3,5 (2H, m), 3,5~4,3 (3H, m) , 3,64 (2H, s), 3,76 (3H, s), 6,76 (2H, d, J = 9 Hz), 7,0^7,3 (2H, m) , 7,12 (2H, d, J = 9 Hz), 7,54 (IH, dt, J = 2, 7 Hz), 8,40 (IH, dd, J = 2, 7 Hz) 15 (5)2,3-dihydro-2-(p-methoxybenzylthio)-lH-indoliziniumchlorid:

Forbindelsen (0,8 g) vundet i trin (4) opløstes i 40 ml carbon-tetrachlorid, der tilsattes 1,45 g triphenylphosphin og opvarmedes til kogning under tilbagesvaling i 20 timer. Efter 20 afkøling fjernedes den ovenstående væske ved dekantering, den sortblå olie skiltes fra og fordeltes mellem vand og ethyl-acetat. Efter at vandfasen var vasket med chloroform fem gange og affarvet med aktivt carbon inddampedes til tørhed under vakuum, og den ovennævnte forbindelse vandtes således i et 25 udbytte på 0,53 g.

N.M.R. δ (DMSO-dg) ppm: 3,2^3,7 (2H, m), 3,77 (3H, s), 3,97 (2H, s), 30 3,7~4,0 (IH, m), 4,83 (IH, dd, J = 5, 13 Hz), 5,10 (IH, dd, J = 7, 13 Hz), 6,92 (2H, d, J = 9 Hz), 7,32 (2H, d, J = 9 Hz), 7,8^8,2 (2H, m) , 8,54 (IH, dt, J = 1, 8 Hz), 9,00 (IH, dd, J = 1, 7 Hz) 3-> (6) 2,3-dihydro-2-mercapto-lH-indoliziniumtrifluormethansul- fonat: DK 171644 B1 97

Den ovennævnte forbindelse vandtes ved at omsætte forbindelsen (535 mg) vundet i trin (5) og underkaste produktet efterbehandling på den måde, der er beskrevet i trin (7) i referenceeksempel 12 (udbytte: 520 mg).

5 N.M.R. δ (D20) ppm: 3,2-4,4 (3H, m), 4,7^5,0 (IH, m) , 5,1-^5,4 (IH, m), 7,7~8,1 (2H, m) , 8,52 (IH, dt, J = 2, 8 Hz), 8,84 10 (IH, dd, J = 2, 8 Hz)

Referenceeksempel 14

Syntese af 6,7-dihydro-7-mercapto-5H-pyrrolo[1,2-a]imidazol-15 trifluormethansulfonat:

PMB-S-/~}n ........—»HS-ONyCFsSkH

OEt n-J

20 (1) 6,7-dihydro-7-p-methoxybenzylthio-5H-pyrrolo[1,2-a]imi-dazol: 2-ethoxy-3-p-ethoxybenzylthio-l-pyrrolin (531 mg) (syntetise-25 ret ifølge den metode, der er beskrevet i japansk fremlagt patentansøgning nr. 56987/1985), 315 mg aminoacetaldehyd-di-methylacetal og 180 mg eddikesyre opløstes i 30 ml ethanol og opvarmedes til kogning under tilbagesvaling i 1 time. Reaktionsopløsningen inddampedes til tørhed under vakuum, og rema-3° nensen fordeltes mellem benzen og 40 ml vand indeholdende 4 ml IN vandig natriumhydroxidopløsning, benzenfasen vaskedes med vand og tørredes over MgSO^, hvorefter opløsningsmidlet afdampedes under vakuum til opnåelse af 700 mg af et farveløst transparent olieagtigt materiale. Det olieagtige materiale 35 opløstes i 30 ml benzen, der tilsattes 1,14 g p-toluensulfon-syre (hydrat) og opvarmedes til kogning under tilbagesvaling 1 time. Reaktionsopløsningen afkøledes, vaskedes med en 5% DK 171644 B1 98 vandig natriumbicarbonatopløsning og vand og tørredes, hvorefter opløsningsmidlet afdestilleredes. Remanensen rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af en kolonne pakket med 20 g silicagel [elueringsmiddel: chloroform/methanol i 5 rumfangsforholdet 19:1], hvorved den ovennævnte forbindelse vandtes i form af en farveløs og transparent olie. Forbindelsen krystalliserede under henstand i et køleskab (smp.

= 65~-73°C, udbytte: 0,53 g).

10 I.R. (KBr skive) cm 1600, 1500, 1240 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 2,2~2,5 (IH, m), 2,6~3,0 (IH, m) , 3,76 (3H, s), 3,7-^4,2 (5H, m), 6,79 (2H, d, J = 9 Hz), 6,83 (IH, d, 15 J = 2 Hz), 7,05 (IH, d, J = 2 Hz), 7,29 (2H, d, J * 9 Hz) (2) 6,7-dihydro-7-mercapto-5H-pyrrolo[1,2-a]imidazoltrifluor-methansulfonat: 20 Den ovennævnte forbindelse vandtes ved at omsætte forbindelsen (0,50 g) vundet i trin (1) og underkaste produktet en efterbehandling ligesom den, der er beskrevet i trin (7) i referenceeksempel 12 (udbytte: 0,56 g).

25 N.M.R. δ (DMSO-dg + D20) ppm: 2,0^-2,7 (IH, m), 3,0~3,6 (IH, m), 4,24 (2H, m), 4,70 (IH, dd, J = 4, 7 Hz), 7,65 (2H, brs)

Referenceeksempel 15

Syntese af 6,7-dihydro-6-mercapto-5H-pyrrolo[1,2-a]imidazoltrif luormethansul fonat : 35 0

HO^H-*..... >hs^CX!!)'CF3S03H

DK 171644 B1 99 (1) 4-benzoylthio-2-pyrrolidon:

Triphenylphosphin (10,5 g) opløstes i 50 ml THF, og der tilsattes under isafkøling en opløsning af 6,97 g diethylazodi-ethyl carboxyl at i THF (3 ml). Efter 30 minutter tilsattes der 30 ml THF, og en suspension af 4-hydroxy-2-pyrrolidon (2,02 g) [syntetiseret ved den fremgangsmåde, der er beskrevet i Pellegata et al., "Synthesis", 615 (1978)] og thiobenzoesyre (4,71 ml) i 80 ml.THF dråbevis dertil i løbet af 20 minutter. Opløsningen omrørtes yderligere i 1,5 time ved stuetemperatur og koncentreredes under vakuum. Koncentratet opløstes i ethyl-acetat og vaskedes med 5% vandig natriumbicarbonatopløsning og derefter med en mættet vandig opløsning af NaCl, og der tørredes over Na^SO. og koncentreredes under vakuum. Remanensen 15 ^ 4 rensedes ved kromatografi under anvendelse af 120 g silicagel [elueret med et blandet opløsningsmiddel sammensat af benzen og ethylacetat, hvori blandingsforholdet gradvist ændredes fra 1:1 til 1:4 og til 1:9], og den ovennævnte forbindelse vandtes i form af et gult pulver (smp. 110^112°C, udbytte 20 3,47 g).

I.R. (KBr skive) cm-1: 1690, 1650 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 25 2,41 (IH, dd, J = 6, 18 Hz), 2,93 (IH, dd, J = 9, 18 Hz), 3,43 (IH, dd, J = 5, 10 Hz), 3,99 (IH, dd, J = 8, 10 Hz), 4,4 (IH, m), 6,8 (IH, br), 7,4~8,0 (5H, m) (2) 4-(p-methoxybenzylthio)-2-pyrrolidon: 30

Metallisk natrium (0,37 g) opløstes i 30 ml methanol under isafkøling og afkøledes derefter til -10°C, og der tilsattes en opløsning af forbindelsen (3,43 g) vundet i trin (1) i methanol (30 ml), og der omrørtes i 1 time ved denne temperatur. 35

Efter tilsætning af 2,51 g p-methoxybenzylchlond til reaktionsopløsningen ved samme temperatur, omrørtes opløsningen i 1,5 time ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet afdestilleredes under vakuum, der tilsattes ethylacetat og vaskedes med DK 171644 B1 100 vand, og der vaskedes yderligere med 5% vandig natriumbicarbo-natopløsning, 10% vandig citronsyreopløsning og en mættet vandig natriumchloridopløsning. Opløsningen tørredes over Na2SO^ og koncentreredes under vakuum. Remanensen førtes gennem ^ en kolonne pakket med 160 g silicagel til rensning. Der elue-redes først med et blandet opløsningsmiddel af benzen/ethyl-acetat i rumfangsforholdet 1:1 (mængden af ethylacetat øgedes gradvist) og derefter med rent ethylacetat. Fraktionerne indeholdende den ønskede forbindelse kombineredes og koncentre-redes til opnåelse af den ovennævnte farveløse krystallinske forbindelse (smp. = 95~96°C, udbytte: 2,69 g).

I.R. (KBr skive) cm-1: 3240, 1670, 1610, 1510 N.M.R. δ (CDClt) ppm: 15 2,16 (IH, dd, J = 7, 18 Hz), 2,64 (IH, dd, J = 8, 18 Hz), 3,2~3,6 (3H, m), 3,73 (2H, s), 3,80 (3H, s), 6,1 (IH, br), 6,85 og 7,27 (hver 2H, hver d, J = 9 Hz) 20 (3 ) 2-ethoxy-4-(p-methoxybenzylthio)-1-pyrrolin:

Meerweins reagens [se, H. Meerwein, "Organic Synthesis", Coll, bind V, side 1080] fremstillet ud fra 2,75 ml epichlorhydrin og 5,89 ml BF2(C2H^)20 opløstes i 30 ml vandfrit dichlormethan og derefter tilsattes forbindelsen (2,37 g) vundet i trin (2) under isafkøling, og der omrørtes en time ved stuetemperatur. Opløsningen blev gjort alkalisk ved tilsætning af 5% vandig natriumcarbonatopløsning, og der ekstraheredes med dichlormethan. Efter at den organiske fase var vasket med 30 vand og tørret over Na2SO^ koncentreredes fasen under vakuum. Remanensen rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af en kolonne pakket med 50 g silicagel [elueringsmiddel:ben-zen/ethylacetat i rumfangsforholdet 1:1]. Fraktionerne indeholdende den ovennævnte forbindelse kombineredes og koncentre-35 redes under vakuum, hvorved den ovennævnte forbindelse vandtes i form af en lysebrun olie i et udbytte på 1,97 g.

DK 171644 B1 101 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 1,28 (3H, t, J = 7 Hz), 2,6 (2H, m), 3,4^3,9 (5H, m), 3,77 (3H, s), 4,17 (2H, q, J = 7 Hz), 6,82 og 7,21 5 (hver 2H, hver d, j: = 9 Hz) (4) 6,7-dihydro-6-p-methoxybenzylthio-5H-pyrrolo[1,2-a]imidazol: 2-ethoxy-4-p-methoxybenzylthio-l-pyrolin (930 mg) og 552 mg 10 aminoacetaldehyddimethylacetal opløstes i 50 ml methanol og opvarmedes til kogning under tilbagesvaling i 1 time efter tilsætning af 315 mg eddikesyre. Der tilsattes ethylacetat og vand efter afkøling, og opløsningen blev gjort alkalisk med 1 N vandig natriumhydroxidopløsning før der blev fore-15 taget fordeling mellem de to faser. Ethylacetatfasen vaskedes med vand og en mættet vandig natriumchloridopløsning, hvorefter fasen tørredes over Na2SO^ og koncentreredes under vakuum. Remanensen opløstes i 70 ml benzen, der tilsattes 1 g p-toluen-sulfonsyremonohydrat og opvarmedes til kogning under tilbage-20 svaling i 3 timer. Opløsningsmidlet afdestilleredes, hvorefter der tilsattes vand og ethylacetat til remanensen, og opløsningsmidlet blev gjort alkalisk med en 5% vandig natriumbicarbonat-opløsning, før der blev gennemført fordeling. Efter at ethylacetatf asen var vasket med vand og tørret over Na2SO^ koncen-25 treredes fasen under vakuum. Remanensen rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af en kolonne; pakket med 25 g silicagel [elueringsmiddel: chloroform/methanol i rumfangsforholdet 19:1], og fraktionerne indeholdende den ovennævnte forbindelse kombineredes og koncentreredes under vakuum, hvorved man vandt den ovennævnte forbindelse i form af en brun olie i et udbytte på 731 mg.

N.M.R. 6 (CDC13) ppm: 35 2,6~3,4 (2H, m), 3,5^4,2 (m), 3,77 (2H, s), 3,80 (3H, s), 6,79 og 7,02 (hver IH, J = 1 Hz), 6,85 og 7,24 (hver 2H, J = 9 Hz) DK 171644 Bl 102 (5) 6,7-dihydro-6-mercapto-5H-pyrrolo[l,2-a]imidazoltrifluor-methansulfonat:

Forbindelsen (354 mg) vundet i det foregående trin (4) opløstes 5 i en blanding af 0,5 ml anisol og 4 ml trifluoreddikesyre, der tilsattes 0,12 ml trifluormethansulfonsyre under isafkøling, hvorefter materialet blev bragt tilbage til stuetemperatur og omrørt i 30 minutter ved denne temperatur. Reaktionsopløsningen underkastedes efterbehandling på den måde, der er be-10 skrevet i referenceeksempel 12-(7), hvorved man vandt den ovennævnte forbindelse i form af en brun olie i et udbytte på 390 mg.

N.M.R. δ (D20) ppm: 15 3,1^3,9 (3H, m), 4,1^-4,6 (2H, m), 4,80 (HOD), 7,43 (2H, s)

Referenceeksempel 16 20

Syntese af 6,7-dihydro-6-mercapto-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazol-trifluormethansulfonat:

25 0 ci .......->HS-COcf^H

H

(1) 3-(imidazol-4-yl)-2-p-methoxybenzylthiopropionsyre: 30 2-chlor-3-(imidazol-4-ylJpropionsyre (6,01 g) fremstillet ud fra L-histidin ifølge den metode, der er beskrevet i Physiol. Chem., 1942, 276, 126) opløstes i 50 ml vand indeholdende 3,0 g NaOH, og der tilsattes 5,3 g p-methoxybenzylmercaptan 35 og omrørtes i 3 dage ved stuetemperatur. Reaktionsopløsningen vaskedes med benzen, derefter indstilledes den vandige fases pH-værdi til 3 til 4 ved tilsætning af eddikesyre, og den 103 DK 171644 B1 vandige fase koncentreredes under nedsat tryk. De udfældede krystaller filtreredes fra, vaskedes med ethanol og ether, og således vandtes den ovennævnte forbindelse i form af farveløse nåle (smp. 85^88°C, udbytte 5,8 g).

5 I.R. (KBr skive) cm-1: 3500^2500,1580, 1510 N. M.R. δ (NaOD) ppm: 2,92 (2H, m), 3,43 (IH, dd, J = 7, 8 Hz), 3,70 (2H, s), 10 3,81 (3H, s), 6,82 (IH, d, J = 1 Hz), 6,93 (2H, d, J = 9 Hz), 7,27 (2H, d, J = 9 Hz), 7,58 (IH, d, J = 1 Hz) (2) Methyl-3-(imidazol-4-yl)-2-p-methoxybenzylthiopropionat: 30 ml methanol afkøledes til -10°C, og der tilsattes dråbevis O, 47 ml thionynchlorid under omrøring, og der omrørtes i yderligere 10 min. Til denne opløsning sattes 1,46 g af forbindelsen vundet i ovennævnte trin (1), og der omrørtes i 1 time ved stuetemperatur. Opløsningen koncentreredes under nedsat tryk, og efter der tilsattes benzen til den resulterende remanens, og opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk, tilsattes der en 5% natriumbicarbonatopløsning til remanensen, som derefter ekstraheredes med chloroform. Ekstrakten tørredes over Na-SO., opløsningsmidlet afdestilleredes under 25 λ 4 nedsat tryk, og på denne måde vandtes den ovennævnte forbindelse i et udbytte på 0,98 g.

N.M.R. δ (CDC13) ppm: 30 J 3,03 (2H, m), 3,54 (IH, dd, J = 6, 8 Hz), 3,70 (2H, s), 3,79 (3H, s), 6,82 (3H, s), 7,22 (2H, d, J = 9 Hz), 7,51 (IH, d, J = 1 Hz) (3) 3-(imidazol-4-yl)-2-(p-methoxybenzylthio)propanol:

Forbindelsen (720 mg) vundet i det foregående trin (2) opløstes i 15 ml isopropanol, der tilsattes 780 mg calciumchlorid 35 DK 171644 B1 104 og 180 mg natriumborhydrid og omrørtes i 5 timer ved stuetemperatur. Til reaktionsopløsningen sattes der ethylacetat, og der vaskedes med vand og mættet vandig natriumchloridopløs-ning, hvorefter der tørredes over Na2S04, og der blev foretaget 5 søjlekromatografi under anvendelse af en lille mængde silicagel før afdestillation af opløsningsmidlet under nedsat tryk til opnåelse af 566 mg af det ovennævnte produkt.

N.M.R. δ (CDC13) ppm: 10 2,93 (3H, m), 3,64 (2H, m), 3,68 (2H, s), 3,77 (3H, s), 6,76 (IH, d, J = 1 Hz), 6,81 (2H, d, J = 9 Hz), 7,20 (2H, d, J = 9 Hz), 7,50 (IH, d, J = 1 Hz) 15 Massespektrometrisk analyse (m/e): 279 (M++l) (4) 4-(2-chlor-3-p-methoxybenzylthiopropyl)imidazol:

Forbindelsen (560 mg) vundet i overnævnte trin (3) opløstes 20 i et blandet opløsningsmiddel sammensat af 20 ml THF og 10 ml carbontetrachlorid, og der tilsattes 630 mg triphenylphos-phin og opvarmedes til kogning under tilbagesvaling i 2,5 timer. Efter afkøling af opløsningen tilsattes der triethylamin, og opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk, og 25 den resulterende remanens rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af 15 g silicagel og chloroform/methanol i rumfangsforholdet 9:1 som elueringsmiddel til opnåelse af 234 mg af den ovennævnte forbindelse.

30 N.M.R. 6 {CDC13) ppm: 2,79 (2H, d, J = 6 Hz), 3,14 (2H, m), 3,72 (2H, s), 3,78 (3H, s), 4,22 (IH, m), 6,82 (2H, d, J = 9 Hz), 6,87 (IH, d, J = 1 Hz), 7,21 (2H, d, J = 9 hz), 7,56 (IH, d, J = 35 1 Hz), 7,80 (IH, brs) 105 DK 171644 B1 (5) 6,7-dihydro-6-p-methoxybenzylthio-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazol:

Forbindelsen (2,21 g) vundet i trin (4) opløstes i 40 ml acetone, og der tilsattes 11,1 g natriumjodid cg opvarmedes til 5 kogning under tilbagesvaling i 24 timer. Opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk, der sattes chloroform til remanensen og vaskedes med fortyndet vandig opløsning af natriumhydroxid og en mættet natriumchloridopløsning. Opløsningen tørredes over Na2S04, opløsningsmidlet afdestilleredes under 10 nedsat tryk, og remanensen rensedes ved at føre den gennem en kolonne pakket med 60 g silicagel under eluering med chloro-form/methanol i rumfangsforholdet 19:1, hvorved der vandtes 0,89 g af den ovennævnte forbindelse.

15 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 2,6~3,4 (2H, m), 3,77 (2H, s), 3,8 (3H, s), 3,5~4,25 (3H, m) , 6,70 (IH, s), 6,86 (2H, d, J = 9 Hz), 7,25 (2H, d, J = 9 Hz), 7,42 (IH, s) 20

Massespektrometrisk analyse (m/e): 260 (M+) (6) 6,7-dihydro-6-mercapto-5H-pyrrolo[1,2-c]imidazoltrifluor- methansulfonat: 25

Forbindelsen (323 mg) vundet i ovennævnte trin (5) opløstes i en blanding af 0,4 ml anisol og 4 ml trifluoreddikesyre, og der tilsattes under isafkøling 0,12 ml trifluormethansulfon-syre og omrørtes i 30 minutter ved stuetemperatur. Opløsnings-3° midlet afdestilleredes under nedsat tryk. Derefter blev der sat xylen til remanensen, og opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk, hvilket blev gentaget nogle få gange. Den vundne remanens vaskedes med ether til opnåelse af 360 mg af den ovennævnte forbindelse.

TLC: Rf = 0,05 35 DK 171644 Bl 106 [Under anvendelse af en silicagelplade (Merck), tykkelse 0,25 mm; fremkalderopløsningsmiddel: chloroform/methanol i rumfangsforholdet 9:1; farvet purpur med natriumnitroprussid] 5 N.M.R. 6 (D20) ppm: 2,9^,3,9 (3H, m), 4,2~4,6 (2H, m), 4,80 (HOD), 7,24 (IH, s), 8,65 (IH, s) 10 Referenceeksempel 17

Syntese af 6,7-dihydro-l-hydroxy-6-mercapto-5H-pyrrolo[1,2-c]-imidazol:

is H0_ 0H

.......> HS^T^h ^"COaEi '

80C

20 (1) l-t-butoxycarbonyl-2-ethoxycarbonyl-4-oxopyrrolidin:

Ethylesteren af 1-t-butoxycarbonyl-L-hydroxy-prolin (7,77 g) opløstes i 30 ml DMSO, og der tilsattes 18,4 g dicyklohexyl-25 carbodiimid og 2,4 ml pyridin, og der tilsattes dråbevis 1,2 ml trifluoreddikesyre ved stuetemperatur under omrøring. Blandingen omrørtes i 2 timer ved denne temperatur, hvorefter der sattes ethylacetat til reaktionsblandingen, og de uopløselige bestanddele filtreredes fra. Filtratet vaskedes med vand, tørredes over Na2S04, og opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk. Remanensen førtes gennem en kolonne -pakket med 120 g silicagel og elueredes med benzen/ethylacetat i rumfangsforholdet 98:2 og på denne måde vandtes den ovennævnte forbindelse i et udbytte på 7,1 g.

35 107 DK 171644 B1 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 1,28 (3H, t, J = 6 Hz), 1,48 (9H, s), 2,40—3,13 (2H, m), 3,86 (2H, s), 4,18 (2H, q, J = 6 hz), 4,65—4,85 5 (IH, m) (2) l-t-butoxycarbonyl-2-ethoxycarbonyl-4-hydroxypyrrolidin:

Forbindelsen (9,4 g) vundet i det foregående trin (1) opløstes 10 i methanol (100 ml), der tilsattes 0,7 g natriumborhydrid ved en temperatur fra 0 til 5°C og omrørtes i 30 minutter ved denne temperatur. Derefter afdampedes opløsningsmidlet under nedsat tryk, og der tilsattes ethylacetat, vand og ammo-niumchlorid til remanensen, og den organiske fase isoleredes.

15 Efter vask med vand og mættet vandig natriumchloridopløsning og tørring over Na2S04 afdestilleredes opløsningsmidlet under nedsat tryk, hvorved den ovennævnte forbindelse vandtes i et udbytte på 9,4 g.

20 (3) l-t-butoxycarbonyl-2-ethoxycarbonylpyrrolidin-4-yl-tosylat:

Forbindelsen (9,5 g) vundet i trin (2) opløstes i 100 ml pyri-din, afkøledes til 0-5°C, og der tilsattes 10,5 p-toluensul-fonylchlorid under omrøring, hvorefter der fortsat omrørtes 25 i 17 timer ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk. Derefter tilsattes der ethylacetat, der vaskedes med vand og tørredes over Na2S04, og opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk. Den resulterende remanens førtes gennem en kolonne pakket med 150 g silicagel, og der 30 elueredes med en blanding af benzen og ethylacetat i forholdet 95:5 som elueringsmiddel til opnåelse af det ovennævnte produkt i et udbytte på 13,4 g.

N.M.R. δ (CDCl^) ppm: 1,23 (3H, t, J = 6 Hz), 1,43 (9H, s), 2,20 — 2,53 (5H, m), 3,50-^3,65 (2H, m) , 3,95 — 4,45 (3H, m), 35 DK 171644 B1 108 4,86^5,10 (IH, m), 7,25 (2H, d, J = 9 Hz), 7,66 (2H, d, J = 9 Hz) (4) l-t-butoxycarbonyl-2-ethoxycarbonyl-4-p-methoxybenzylthio- 5 pyrrolidin: 13 g af forbindelsen opnået i trin (3) opløstes i 300 ml benzen, hvorefter der tilsattes 9,7 g p-methoxybenzylmercaptan og 9,6 g DBU til opløsningen, og blandingen opvarmedes til kogning 10 under tilbagesvaling i 7 timer i en argonatmosfære. Efter afdampning af opløsningsmidlet under nedsat tryk rensedes den vundne remanens ved søjlekromatografi under anvendelse af 300 g silicagel og en blanding i forholdet 95:5 af benzen og ethylacetat som elueringsmiddel til opnåelse af det oven-15 nævnte produkt i et udbytte på 10,3 g.

N.M.R. δ (CDC13) ppm: 1,25 (3H, t, J = 6 Hz), 1,42 (9H, s), 1,70—2,60 (2H, m), 20 3,00^3,30 (2H, m), 3,67 (2H, s), 3,77 (3H, s), 4,00~4,30 (3H, m), 6,78 (2H, d, J = 9 Hz), 7,16 (2H, d, J = 9 Hz) (5) l-t-butoxycarbonyl-2-carbamoyl-4-p-methoxybenzylthiopyrro- 25 lidin: 1,76 g af forbindelsen fremstillet i det foregående trin (4) opløstes i 30 ml methanol, der tilsattes 30 ml 30% vandig ammoniak og omrørtes i 40 timer ved 40-45°C i et forseglet rør. Reaktionsblandingen ekstraheredes med ethylacetat, vaskedes med en 10% vandig citronsyreopløsning og en mættet vandig natriumchloridopløsning, og opløsningsmidlet afdampedes under nedsat tryk efter tørring med Na2S04- Den vundne remanens førtes gennem en kolonne pakket med 30 g silicagel og elueredes med en blanding i forholdet 9:1 af chloroform og methanol for at rense produktet, og på denne måde vandtes 1,00 g af den ovenfor nævnte forbindelse.

DK 171644 B1 109 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 1,45 (9H, s), 1,80^2,80 (2H, m) , 3,20^.3,70 (3H, m), 3,73 (2H, s), 3,79 (3H, s), 4,30 (IH, m), 6,84 5 (2H, d, J = 9 Hz), 7,23 (2H, d, J = 9 Hz) (6) 2-carbamoyl-4-p-methoxybenzylthiopyrrolidin:

Til en blanding af forbindelsen (1,00 g) vundet i det ovenfor ^ angivne trin (5) og 1,0 ml anisol sattes der 7 ml trifluor- eddikesyre, og der omrørt'es i 40 minutter ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet afdampedes under nedsat tryk, og der sattes ether til remanensen, som vaskedes. Remanensen opløstes i fortyndet saltsyreopløsning og vaskedes med ether. Den vandige ^ fase blev gjort alkalisk ved tilsætning af en fortyndet vandig natriumhydroxidopløsning, og der ekstraheredes med chloroform. Efter tørring over Na2SO^ og afdestillation af opløsningsmidlet under nedsat tryk vandtes 0,59 g af den ovenfor angivne forbindelse i form af et hvidt fast stof.

20 I.R. (KBr skive) cm"1: 3400~- 2800, 1650, 1515 N. M.R. 6 (CDC13) ppm: 2,20 (2H, m), 2,90 (2H, m), 3,20 (IH, m), 3,69 (2H, 25 s), 3,80 (3H, s), 3,90 (lH,.m), 6,84 (2H, d, J = 9 Hz), 7,22 (2H, d, J = 9 Hz) (7) 6,7-dihydro-l-hydroxy-6-p-methoxybenzylthio-5H-pyrrolo- [1,2-c]imidazol: 30 O, 59 g af forbindelsen vundet i det foregående trin (6) opløstes i 30 ml ethanol, og der tilsattes 1,96 g ethylester af orthomyresyre og 8 mg p-toluensulfonsyrehydrat, og der kogtes under tilbagesvaling i 3 timer. Efter fjernelse af opløsningsmidlet rensedes remanensen ved at føre den gennem en kolonne pakket med 20 g silicagel under eluering med en blanding af chloroform og methanol i rumfangsforholdet 49:1, hvorved man DK 171644 B1 110 vandt den ovenfor angivne forbindelse i et udbytte på 278 mg.

N. M.R. δ (CDCl,) ppm: 5 2,60^/3,35 (2H, m), 3,72 (2H, s), 3,80 (3H, s), 6,85 (2H, d, J = 9 Hz), 7,23 (2H, d, J = 9 Hz), 8,16 (IH, s) (8) 6,7-dihydro-l-hydroxy~6-mercapto-5H-pyrrolo[ 1,2-c]imidazol: 10

Til 358 mg af produktet fra ovennævnte trin (7) sattes der O, 5 ml anisol og 4 ml trifluoreddikesyre, og der tilsattes 0,1 ml trifluormethansulfonsyre og omrørtes i 3 timer ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet afdampedes under nedsat tryk, ^ der tilsattes xylen og afdestilleredes under nedsat tryk, idet denne procedure blev gentaget flere gange. Produktet vaskedes derefter med petroleumsether og tørredes under nedsat tryk til opnåelse af den ovennævnte forbindelse i et udbytte på 390 mg.

20 TLC: Rf = 0,2 [Silacagelplade (Merck), tykkelse 0,25 mm, fremkalderopløsningsmiddel: CHC12· CH^OH i rumfangsforholdet 9:1, farvet purpur med natriumnitroprussid] 25 N.M.R. δ (D20 + DMSO-dg) ppm: 2,9^3,35 (2H, m) , 4,2^4,5 (2H, m) , 7,25 (IH, s), 8,36 (IH, s) 30

Referenceeksempel 18

Syntese af 6,7-dihydro-6-mercapto-5H-pyrrolo[ 2,l~c]-l,2,4-triazoltrifluormethansulfonat: 35 HSx

PMB_sn. —-.....— OwCF3S03H

^N^OEt \=^ 111 DK 171644 B1 (1) 6,7-dihydro-6-p-methoxybenzylthio-5H-pyrrolo[2,l-c]-l,2,4-triazol:

Til en opløsning af 2-ethoxy-4-p-methoxybenzylthio-l-pyrrolin ^ (1,06 g) i 50 ml ethanol sattes der 0,36 g formylhydrazin, og der opvarmedes til 80°C under argonatmosfære under omrøring. Efter 1,5 timer tilsattes der yderligere 0,24 g formylhydrazin, og der omrørtes under opvarmning i 30 minutter ved den samme temperatur. Derefter tilsattes der 0,6 g eddikesyre, der omrørtes i 30 minutter ved denne temperatur og derefter afkøledes der til stuetemperatur. Til det afkølede produkt sattes der ethylacetat og 5% vandig natriumcarbonatopløsning for at fordele produktet mellem disse to væskefaser. Den resulterende organiske fase vaskedes med mættet natriumchlorid-opløsning, tørredes over Na2SC>4, og opløsningsmidlet afdestil-leredes under nedsat tryk til opnåelse af det ønskede produkt.

Massespektrometrisk analyse (m/e): 279 (M+) N.M.R. δ (CDC1-.) ppm: 20 2,3~3,0 (2H, m) , 3,3 (2H, m) , 3,7 (IH, m) , 3,79 (3H, s), 6,83 (2H, d, J = 9 Hz), 7,21(2H, d, J = 9 Hz), 7,85 og 8,34 (hver 0,5 H, hver s) 25

Til den resulterende remanens sattes der 20 ml eddikesyre, der opvarmedes til 100°C i 4 timer. Efter afkøling udhældtes reaktionsvæsken i isvand og underkastedes ekstraktion med ethylacetat efter neutralisation deraf med natriumcarbonat.

Den organiske fase vaskede, tørredes over Na-SO. og koncen- 30 1 treredes under nedsat tryk. Derefter underkastedes den vundne remanens søjlekromatografi under anvendelse af 20 g silica- gel og en blanding af CHCl^ og CH^OH i rumfangsforholdet 9:1 som et elueringsmiddel, og der vandtes 516 mg af den ønskede forbindelse i form af et brunt fast stof.

35 DK 171644 Bl 112 I.R. (KBr skive) cm”1: 1600, 1520, 1500 N.M.R. δ (CDC12) ppm: 2,7~3,4 (2H, ddd) , 3,80 (2H, s), 3,81 (3H, s), 3,8~4,2 (3H, m), 6,86 (2H, d, J = 9 Hz), 7,24 (2H, d, J = 9 Hz), 8,02 (IH, s)

Massespektrometrisk analyse (m/e): 261 (M+) 10 (2) 6,7-dihydro-6-mercapto-5H-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4-triazol: 210 mg af forbindelsen vundet i det foregående trin (1) opløstes i en blanding af 0,5 ml anisol og 4 ml trifluoreddike-syre, og der tilsattes 0,09 ml trifluormethansulfonsyre under isafkøling, og der omrørtes i 20 minutter ved stuetemperatur. Reaktionsvæsken koncentreredes under nedsat tryk, der tilsattes 20 ml xylen og koncentreredes. På samme måde tilsattes xylen, og der koncentreredes, idet disse procedurer blev gentaget 2 gange. Remanensen vaskedes med ether under omrøring, 20 og etheren fjernedes ved dekantering. Vaskeproceduren med ether blev gentaget 2 gange, og der koncentreredes under nedsat tryk til opnåelse af den ovennævnte forbindelse i form af en brun olie i et udbytte på 250 mg.

25 N.M.R. δ Ppm: 3,1~4,0 (3H, m), 4,2~4,6 (2H, m), 9,23 (IH, s) Referenceeksempel 19

Syntese af 3-amino-6,7-dihydro-6-mercapto-5H-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4-triazoltrifluormethansulfonat:

35 /-M

pmb-s<3 —>.....-^HS^YN

nh2-cf3so3h 113 DK 171644 B1 (1) 4-p-methoxybenzylthio-2-thiosemicarbazonopyrrolidin:

En opløsning af 900 mg 2-ethoxy-4-p-methoxybenzylthio-l-pyrro-lin og 433 mg thiosemicarbazidhydrochlorid i 30 ml ethanol ** opvarmedes til kogning under tilbagesvaling i 1 1/2 time.

Reaktionsopløsningen inddampedes til tørhed under nedsat tryk, og derefter fordeltes remanensen mellem ethylacetat og 5% vandig natriumhydroxidopløsning, og den organiske fase tørredes over Na2SC>4 før opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk. Den resulterende remanens førtes gennem en kolonne pakket med 25 g silicagel, og der elueredes med ethylacetat og på denne måde opnåedes 230 mg af den ovennævnte forbindelse i form af et farveløst skum.

15 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 2,3^3,0 (2H, m), 3,2~3,5 (2H, m) , 3,72 (2H, s), 3,80 (3H, s), 3,70~4,0 (IH, m), 6,85 (2H, d, J = 9 Hz), 7,23 (2H, d, J = 9 Hz) 20

Massespektrometrisk analyse (m/e): 311 (M+ + 1) (2) 4-p-methoxybenzylthio-2-(3-methylisothiosemicarbazido)- 1-pyrrolin: 25

Forbindelsen (230 mg) fremstillet i det foregående trin (1) opløstes i 20 ml ethanol, der tilsattes 312 mg methyl jodid og omrørtes ved stuetemperatur i fem timer. Reaktionsopløsningen inddampedes til tørhed under nedsat tryk, den resulterende remanens fordeltes mellem ethylacetat og 30 ml vand indeholdende 2 ml vandig opløsning af 1 N NaOH, og den organiske fase vaskedes og tørredes over Na2S04 før afdestillering af opløsningsmidlet. På denne måde opnåedes 195 mg af det ovennævnte produkt i form af en lysegul olie.

35 DK 171644 B1 114 N.M.R. 6 (CDC13) ppm: 2,40 {3H, s), 2,48 (IH, dd, J = 8, 16 Hz), 2,85 (IH, dd, J = 8, 16 Hz), 3,2^3,7 (3H, m), 3,75 (2H, s), 3,80 5 {3H, s), 5,05 (2H, brs), 5,75 (IH, brs), 6,84 (2H, d, J = 9 Hz), 7,24 (2H, d, 9 Hz) -f

Massespektrometrisk analyse (m/e): 324 (M ) 10 (3) 3-amino-6,7-dihydro-6-(p-methoxybenzylthio)-5H-pyrrolo- [2,l-c]-l,2,4-triazol: 190 mg af forbindelsen vundet i det foregående trin (2) opløstes i et blandet opløsningsmiddel bestående af 4 ml ethanol 15 og 2 ml 1 N vandig natriumhydroxidopløsning, og der opvarmedes til tilbagesvalingskogning i 30 minutter. Efter afkøling filtreredes de udskilte krystaller fra og vaskedes med vand, ethanol og ether til opnåelse af 98 mg af den ovennævnte forbindelse.

20

Smp. : 245-248°C (sønderdeling) N.M.R. δ (DMSO-dg) ppm: 2,7~4,1 (5H, m), 3,76 (3H, s), 3,81 (2H, s), 5,64 25 (IH, s), 6,88 (2H, d, J = 9 Hz), 7,28 (2H, d, J = 9 Hz), 8,32 (IH, s)

Elementanalyse (%): (for C^H^gN^OS) 30

C Η N

Beregnet: 56,50 5,85 20,27

Fundet: 56,31 5,74 20,00 ^ (4) 3-amino-6,7-dihydro-6-mercapto-5H-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4- triazoltrifluormethansulfonat: 115 DK 171644 B1

Ved anvendelse af fremgangsmåderne ligesom dem, der er beskrevet i referenceeksempel 12 (trin (7)) behandledes og efterbehandledes forbindelsen (94 mg) vundet i overnævnte trin (3) til opnåelse af 100 mg af det ovennævnte produkt.

5 N.M.R. δ (D2O) ppm: 2,8^3,1 (IH, m), 3,4-^3,6 (IH, m) , 3,8~M,0 (IH, m), 4,2~4,6 (2H, m) , 4,80 (HOD) 10

Referenceeksempel· 20

Syntese af 2,3-dihydro-2-mercapto-lH-pyrazolo[1,2-a]pyrazo- liumtrifluormethansulfonat: 15 \ + PMBSH— .....—>hs_<C-N-2^CF3S0* 20 (1) l-chlor-2-hydroxy-3-p-methoxybenzylthiopropan: 2,78 ml epichlorhydrin og 2,78 ml p-methoxybenzylmercaptan opvarmedes og omrørtes ved 120 til 130°C i 3 timer. Efter afkøling rensedes produktet ved søjlekromatografi under anvendelse af 100 g silicagel og benzen som elueringsmiddel til opnåelse af 1,44 g af den ovennævnte forbindelse.

N.M.R. δ (CDC13) ppm: 2,40^2,80 (2H, m) , 2,84 (IH, brs), 3,50-^3,64 (2H, m), 3,70 (2H, s), 3,78 (3H, s), 6,85 (2H, d, J = 9 Hz), 7,25 (2H, d, J = 9 Hz) 35 116 DK 171644 B1 (2) 1,2-epoxy-3-p-methoxybenzylthiopropan:

Til forbindelsen (1,44 g) vundet i det foregående trin (1) sattes en opløsning af 0,28 g NaOH i 1,8 ml vand, og der omrør-

C

tes ved stuetemperatur i 17 timer. Til reaktionsopløsningen sattes dichlormethan, der vaskedes, tørredes over Na2S04 og derefter afdestilleredes opløsningsmidlet under nedsat tryk. Remanensen rensedes ved at føre den gennem en kolonne pakket med 20 g silicagel, og der elueredes med chloroform til opnåelse ^ af 0,54 g af den ovennævnte forbindelse.

N.M.R. δ (CDC13) ppm: 2,45~2,85 (4H, m) , 2,96~3,20 (IH, m) , 3,76 (2H, f5 s), 3,79 (3H, s), 6,85 (2H, d, J = 9 Hz), 7,27 (2H, d, J = 9 Hz) (3) 1-(2-hydroxy-3-p-methoxybenzylthiopropyl)pyrazol: 20

Forbindelsen (500 mg) vundet i det foregående trin (2) og 190 mg pyrazol opløstes i 2,5 ml DMF, og der tilsattes 665 mg kaliumcarbonat og omrørtes ved 90°C i 7 timer. Opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk, og remanensen rensedes ved at føre den gennem en kolonne pakket med 20 g silicagel, 25 og der elueredes med chloroform/methanol i rumfangsforholdet· 99:1 til opnåelse af 660 mg af den ovennævnte forbindelse.

N.M.R. δ ( CDC1 ) ppm: 30 -3 2,32-^2,52 (2H, m) , 3,70 (2H, s), 3,78 (3H, s), 3,80--4,28 (3H, m), 6,26 (IH, t, J = 3 Hz), 6,82 (2H, d, J = 9 Hz), 7,20 (2H, d, J = 9 Hz), 7,41 og 7,53 (hver IH, hver d, J = 3 Hz) 35 DK 171644 B1 117 (4) l-(3-chlor-2-p-methoxybenzylthiopropyl)pyrazol: 600 mg af forbindelsen fremstillet i det foregående trin (3) opløstes i 6 ml carbontetrachlorid, og der tilsattes 680 mg triphenylphosphin og omrørtes i 17 timer ved 50-60°C. Efter fjernelse af opløsningsmidlet ved inddampning under nedsat tryk rensedes den vundne remanens ved søjlekromatografi under anvendelse af 15 g silicagel og chloroform som elueringsmiddel til opnåelse af 48.0 mg af den ovennævnte forbindelse.

10 N.M.R. 6 (CDC13) ppm: 3,10 — 3,63 (5H/ m), 3,79 (3H, s), 4,10—4,60 (2H, m), 6,26 (IH, t, J = 3 Hz), 6,82 (2H, d, J = 9 Hz), 7,20 ^ (2H, d, J = 9 Hz), 7,45 og 7,56 (hver IH, hver d, J = 3 Hz) (5) 2,3-dihydro-2-p-methoxybenzylthio-lH-pyrazolo[1,2-a]pyra-zoliumjodid: 20

Forbindelsen (0,46 g) vundet i trin (4) opløstes i 40 mg acetone, og der tilsattes 1,3 g kaliumjodid, hvorefter der opvarmedes til tilbagesvalingskogning i 30 timer. Opløsnings-^ midlet fjernedes ved destillation under nedsat tryk, og der tilsattes ether til remanensen, og etherfasen fjernedes, og der tilsattes chloroform til de dannede bundfald, hvorefter de uopløselige bestanddele fjernedes ved filtrering. Det resulterende filtrat koncentreredes under nedsat tryk, og på denne ^ måde opnåedes den ovennævnte forbindelse i et udbytte på 0,28 g· N.M.R. 6 (CDC13) ppm: 35 3,82 (3H, s), 3,93 (2H, m), 4,35 — 4,70 (3H, m) , 5,00—5,35 (2H, m) , 6,70—7,00 (3H, m) , 7,33 (2H, m), 8,37 (2H, d, J = 3 Hz) DK 171644 B1 118 ( 6 ) 2,3-dihydro-2-mercapto-lH-pyrazolo[ 1,2-a]pyrazoliumtri-fluormethansul fonat:

Forbindelsen (0,28 g) vundet i trin (5) opløstes i en blanding ^ af 0,5 ml anisol og 4 ml trifluoreddikesyre, og der tilsattes 0,5 ml trifluormethansulfonsyre og omrørtes ved stuetemperatur i 1 time. Efter at opløsningsmidlet var afdestilleret under nedsat tryk tilsattes xylen til remanensen, og opløsningen koncentreredes under nedsat tryk, hvilket blev gentaget nogle ^ få gange. Den ovennævnte forbindelse vandtes efter vask af remanensen med petroleumsether i et udbytte på 0,2 g.

N.M.R. <5 PPm: 15 4,40^4,70 (3H, m) , 4,80 (HOD), 6,92 (IH, t, J = 3 Hz), 8,26 (2H, d, J = 3 Hz)

Referenceeksempel 21 20

Syntese af l-mercapto-4-methylpyrrolizidiniumtrifluormethansulf onat: VN>\rn u-*......^HS^C^CHa 25 I C°2H Y 7 CFaSOa®

B0C

(1) Ethyl-3-(l-t-butoxycarbonylpyrrolidin-2-yl)-3-oxopropionat: 30 Til 9 ml ethanol sattes 0,57 g magnesium, og der tilsattes yderligere 1,5 ml carbontetrachlorid og omrørtes i 2 timer ved stuetemperatur. Til blandingen sattes en opløsning af 6,75 g monoethylmalonat i 30 ml THF, og opløsningsmidlet af-destilleredes under nedsat tryk, da reaktionsopløsningen var 35 blevet transparent. Adskilt herfra opløstes 6,45 g N-t-butoxy-carbonylprolin i 50 ml THF, der tilsattes 5,35 g carbonyldi-imidazol under omrøring ved stuetemperatur, og derefter omrørtes 119 DK 171644 B1 der ved denne temperatur i 30 minutter. Til blandingen sattes den ovenfor opnåede THF-opløsning af magnesiumkompleks, og der omrørtes ved stuetemperatur i 2 timer. Ethylacetat sattes til reaktionsopløsningen, hvorefter der vaskedes med 1 N HC1, 5 mættet vandig natriumbicarbonatopløsning og vand i den nævnte rækkefølge, hvorefter der tørredes over Na2SO^, og opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk. Den vundne remanens førtes gennem en kolonne pakket med 100 g silicagel og derefter elueredes der med en blanding af benzen og ethylacetat 10 i rumfangsforholdet 95:5 til opnåelse af det ovennævnte rensede produkt i et udbytte på 6 g.

N.M.R. 6 (CDCl^) ppm: 15 1,26 (3H, t, J = 6 Hz), 1,45 (9H, s), 1,70^2,30 (4H, m), 3,30^-3,63 (4H, m), 4,16 (2H, q, J = 6 Hz), 4,10*^4,45 (IH, m) (2) Ethyl-3-(l-t-butoxycarbonylpyrrolidin-2-yl)-3-hydroxy-20 propionat:

Forbindelsen (3 g) vundet i det foregående trin (1) opløstes i 30 ml methanol, der afkøledes til 0 til 5°C og tilsattes under omrøring 200 mg natriumborhydrid og omrørtes ved stue-25 temperatur i 1 time. Til blandingen sattes 2 g ammoniumchlorid og vand, der ekstraheredes med chloroform, vaskedes med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørredes over Na2SO^, og opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk. Den resulterende remanens førtes gennem en kolonne pakket med 50 30 g silicagel og elueredes med chloroform/methanol i rumfangsforholdet 99:1 til opnåelse af det ovennævnte rensede produkt i et udbytte på 3 g.

N.M.R. δ (CDC13) ppm: 1,26 (3H, t, J = 6 Hz), 1,47 (9H, s), 1,60^-2,10 (4H, m) , 2,33~2,53 (2H, m), 3,10—3,60 (2H, m), 3,75-^4,10 (IH, m), 4,13 (2H, q, J = 6 Hz) 35 DK 171644 B1 120 (3) Ethyl-β-ίl-t-butoxycarbonylpyrrolidin-2-yl)acrylat:

Forbindelsen (2,87 g) vundet i det foregående trin (2) opløstes i 20 ml pyridin, der tilsattes under isafkøling og omrøring 5 3,9 g p-toluensulfonylchlorid og omrørtes i 17 timer ved stue temperatur. Efter yderligere omrøring i en time ved 60 til 70°C afdestilleredes opløsningsmidlet, der sattes ethylacetat til remanensen, vaskedes med vand, tørredes over Na2SC>4, og opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk. Den resul-10 terende remanens rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af 50 g silicagel og et blandet opløsningsmiddel sammensat af benzen og ethylacetat i rumfangsforholdet 95:5 til opnåelse af et råt tosylderivat af den ovennævnte forbindelse. Tosyl-derivatet opløstes i 50 ml chloroform, og der tilsattes 1,5 15 g DBU, før der opvarmedes til kogning under tilbagesvaling i 20 minutter. Derefter afdestilleredes opløsningsmidlet under nedsat tryk, der sattes ethylacetat til remanensen, vaskedes med vand, 0,5 N HC1 og mættet vandig natriumchloridopløsning i den nævnte rækkefølge og tørredes over Na2S04- Den oven-20 nævnte forbindelse (2 g) opnåedes på denne måde efter fjernelse af opløsningsmidlet ved destillation under nedsat tryk.

N.M.R. δ (CDC13) ppm: 25 1,26 (3H, t, J = 6 Hz), 1,43 (9H, s), 1,60^-2,20 (4H, m), 3,30^3,55 (2H, m), 4,16 (2H, q, J = 6 Hz), 5,77 (IH, d, J = 15 Hz), 6,77 (IH, dd, J = 6, 15 Hz) (4) Ethyl-3-(l-t-butoxycarbonylpyrrolidin-2-yl)-3-p-methoxy- 30 benzylthiopropionat:

Forbindelsen (2 g) vundet i det foregående trin (3) opløstes i 30 ml chloroform, der tilsattes 1,6 g p-methoxybenzylmercap-tan og 1,6 g DBU og omrørtes i 17 timer ved stuetemperatur. Remanensen vundet efter fjernelse af opløsningsmidlet ved destillation gennemført under nedsat tryk rensedes ved at føre den gennem en kolonne pakket med 50 g silicagel og elue- DK 171644 B1 121 ring med benzen/ethylacetat i rumfangsforholdet 98:2 til opnåelse af det ovennævnte produkt i et udbytte på 2,52 g.

N.M.R. δ (CDC1,) ppm: 5 1,23 (3H, t, J = 6 Hz), 1,46 (9H, s), 1,65—2,10 (4H, m), 2,42 — 2,66 (2H, m) , 3,10—3,70 (3H, m) , 3,74 (5H, s), 3,96--4,30 (3H, m), 6,75 (2H, d, J = 9 Hz), 7,10—7,30 (2H, m) 10 (5) 3-(l-t-butoxycarbonylpyrrolidin-2-yl)-3-p-methoxybenzylthio-propanol:

Forbindelsen (2,52 g) opnået i trin (4) opløstes i 40 ml THF, og der tilsattes 0,2 g natriumborhydrid under isafkøling og omrørtes i 17 timer ved stuetemperatur. Til reaktionsblandingen sattes ammoniumchlorid og vand under omrøring og isafkøling, og derefter ekstraheredes der med ethylaceatat. Den organiske fase isoleredes, vaskedes med en vandig mættet natriumchlorid- 20 opløsning, tørredes over Na2S04, og opløsningsmidlet afdes-tilleredes under nedsat tryk. Remanensen rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af 20 g silicagel og chloroform som elueringsmiddel til opnåelse af 2,14 g af den ovennævnte forbindelse.

25 N.M.R. δ (CDCl^) ppm: 1,47 (9H, s), 1,50 — 2,20 (7H, m) , 3,10—3,80 (6H, m), 3,74 (3H, s), 3,80—4,20 (IH, m), 6,76 (2H, d, 30 J = 9 Hz), 7,10—7,30 (2H, m) (6) 3-(l-t-butoxycarbonylpyrrolidin-2-yl)-3-p-methoxybenzyl-thiopropyltosylat: 33 Forbindelsen (2,64 g) vundet i trin (5) opløstes i 30 ml pyridin og der tilsattes 1,98 g p-toluensulfonylchlorid under isafkøling og omrørtes i 17 timer ved den samme temperatur. Op DK 171644 B1 122 løsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk, der tilsattes ethylacetat til remanensen, vaskedes med vand, tørredes over Na2SC>4, og opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk. Den derved opnåede remanens rensedes ved at føre den gennem en kolonne pakketmed 40 g silicagel, og produktet elueredes med et blandet opløsningsmiddel sammensat af benzen/ethylacetat i rumfangsforholdet 98:2, og derved opnåedes 2,68 g af den ovennævnte forbindelse.

10 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 1,47 (9H, s), 1,50—2,20 (6H, m) , 2,43 (3H, s), 3,10—3,73 (5H, m) , 3,77 (3H, s), 3,80 —4,30 (3H, m), 6,75 (2H, d, J = 9 Hz), 7,03—7,40 (4H, m) , 7,72 15 (2H, d, J = 9 Hz) (7) 3-p-methoxybenzylthio-3-(pyrrolidin-2-ylJpropyltosylat-trifluoracetat: 20

Til 2,68 g af forbindelsen fremstillet i det foregående trin (6) sattes der 3 ml anisol, og der tilsattes yderligere 10 ml trifluoreddikesyre under isafkøling og omrøring, og der omrørtes yderligere i 30 minutter ved den nævnte temperatur.

Til remanensen vundet efter afdestillation af opløsningsmidlet 25 under nedsat tryk sattes toluen, og opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk. Efter vask af remanensen med petro-leumsether og fjernelse af opløsningsmidlet opnåedes den ovennævnte forbindelse i et udbytte på 2,7 g.

N.M.R. 6 (CDCl^) ppm: 1,45 — 2,30 (6H, m) , 2,42 (3H, s), 2,70 — 3,60 (4H, m), 3,63 (2H, s), 3,77 (3H, s), 4,00—4,25 (2H, m), 6,75 (2H, d, J = 9 Hz), 7,02^7,40 (4H, m), 7,73 (2H, d, J = 9 Hz) DK 171644 B1 123 (8) 1-p-methoxybenzylthiopyrrolizidin:

Forbindelsen (2,7 g) vundet i trin (7) opløstes i 20 ml DMF, der tilsattes 1,73 g kaliumcarbonat og omrørtes i 17 timer 5 ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk efter omrøring i 2 timer ved 80°C. Til remanensen sattes chloroform, der vaskedes med vand, tørredes over Na2SO^ og derefter afdampedes opløsningsmidlet under nedsat tryk. Remanensen rensede.s ved søjlekromatografi under anvendelse ^ af 15 g silicagel og et blandet opløsningsmiddel sammensat af chloroform/methanol i rumfangsforholdet 95:5 til opnåelse af det ovennævnte produkt i et udbytte på 0,9 g.

N.M.R. 6 (CDC1,) ppm: 15 3 1,50 — 2,30 (6H, m), 2,30—3,60 (6H, m) , 3,64 (2H, s), 3,74 (3H, s), 6,75 (2H, d, J = 9 Hz), 7,15 (2H, d, J = 9 Hz) 20 (9) l-p-methoxybenzylthio-4-methylpyrrolizidinium^odid:

Forbindelsen (260 mg) vundet i trin (8) opløstes i 5 ml acetone, og der tilsattes 710 mg methyljodid, og reaktionsblandingen henstilledes ved stuetemperatur i 48 timer. Reaktionsblandingen koncentreredes under nedsat tryk, og remanensen vaskedes med ether til opnåelse af den ovennævnte forbindelse i et udbytte på 400 mg.

(10) l-mercapto-4-methylpyrolizidiniumtrifluormethansulfonat:

Til forbindelsen (400 mg) vundet i det foregående trin (9) sattes 0,7 ml anisol og 4 ml trifluoreddikesyre, og der tilsattes dråbevis under omrøring ved stuetemperatur 0,5 ml trifluor-methansulfonsyre og omrørtes yderligere i 30 minutter ved den samme temperatur. Efter fjernelse af opløsningsmidlet ved afdampning dispergeredes den resulterende remanens i xylen DK 171644 B1 124 og destilleredes under nedsat tryk (denne operation blev gentaget tre gange). Remanensen vaskedes med ether og tørredes til opnåelse af 300 mg af den ovennævnte forbindelse.

5 N.M.R. δ (D20) ppm: 1,90 — 2,80 (6H, m), 3,23 og 3,28 (hver 3H, hver s), 3,30 — 4,15 (6H, m) , 4,80 (HOD)

Referenceeksempel 22

Syntese af 4-(2-fluorethyl)-l-mercaptopyrrolizidiniumtrifluor-methansulfonat:

15 F

.....

20 (1) 4-(2-fluorethyl)-1-p-methoxybenzylthiopyrrolizidimxum-bromid:

Produktet (1-p-methoxybenzylthiopyrrolizidin: 263 mg) vundet i trin (8) i referenceeksempel 21 opløstes i 5 ml acetone, 25 der tilsattes 64 0 mg l-brom-2-f.luorethan og henstilledes i 4 dage. Opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk, den resulterende remanens vaskedes med ether og tørredes til opnåelse af den ovennævnte forbindelse i et udbytte på 390 mg.

30 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 1,60—2,40 ( 6H, m) , 2,80 — 4,20 (13H, m) , 4,60 — 4,80 (IH, m), 5,15 — 5,35 (IH, m), 6,84 (2H, 35 d, J = 9 Hz), 7,20—7,40 (2H, m) DK 171644 B1 125 (2) 4-(2-fluorethyl)-1-mercaptopyrrolizidiniumtrifluormethan-sulfonat:

Til forbindelsen (390 mg) vundet i det foregående trin (1) sattes der 0,7 ml anisol og 4 ml trifluoreddikesyre, og der tilsattes dråbevis ved stuetemperatur under omrøring 0,5 ml trifluormethansulfonsyre og omrørtes yderligere i 30 minutter ved denne temperatur. Opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk, der sattes xylen til den resulterende remanens, ^ og opløsningsmidlet blev atter afdestilleret under vakuum. Remanensen vaskedes med ether og tørredes til opnåelse af 330 mg af den ovennævnte forbindelse.

N.M.R. δ (D„0) ppm: 15 ^ 1,80—2,80 (6H, m), 3,20^-4,20 (8H, m), 4,80 (HOD), 5,10—5,30 (IH, m)

Referenceeksempel 23 20

Syntese af 2-mercapto-4-methyl-pyrrolizidiniumtrifluormethan-sulfonat: PMB-S^_ 25 / \ ->......

Sl^COzEt • CH3

B0C

(1) l-t-butoxycarbonyl-4-p-methoxybenzylthiopyrrolidin-2-yl- methanol: 30

Forbindelsen (4,3 g) vundet i trin (4) i referenceeksempel 17 opløstes i 50 ml THF, og der tilsattes 0,2 g natriumbor-hydrid og omrørtes ved stuetemperatur i 17 timer. Derefter tilsattes vand og ammoniumchlorid og ekstraheredes med ethyl-acetat. Opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk efter tørring over Na2S04- Remanensen rensedes ved at føre 126 DK 171644 B1 den gennem en kolonne pakket med 60 g silicagel og eluering af produktet med chloroform til opnåelse af den ovennævnte forbindelse i et udbytte på 3,8 g.

5 N.M.R. δ (CDC13) ppm: 1,46 (9H, s), 1,80 — 2,10 (2H, m), 3,06—3,65 (5H, m), 3,68 (2H, s), 3,78 (3H, s), 3,90—4,30 (IH, m), 6,78 (2H, d, J = 9 Hz), 7,18 (2H, d, J = 9 Hz) 10 (2) 2-ethoxycarbonyl-3-(l-t-butoxycarbonyl-4-p-methoxybenzyl-thiopyrrolidin-2-yl)propionitril:

Triphenylphosphin (1,2 g) opløstes i 9 ml THF, og der tilsattes ^ 0,78 g diethylazodicarboxylat under isafkøling og omrøring og omrørtes yderligere i 30 minutter ved denne temperatur.

Til reaktionsopløsningen sattes forbindelsen (1,06 g) vundet i trin (1), 0,34 g ethylcyanoacetat og 0,63 g 2,6-di-t-butyl-phenol i 6 ml THF, og der omrørtes i 2 timer ved stuetemperatur.

20

Remanensen opnået efter afdestillering af opløsningsmidlet under nedsat tryk rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af 40 g silicagel og benzen/ethylacetat i rumfangsforholdet 95:5 som elueringsmiddel til opnåelse af 0,65 g af den ovennævnte forbindelse.

25 N.M.R. δ (CDC12) ppm: 1,32 (3H, t, J = 6 Hz), 1,45 (9H, s), 1,80^2,23 (4H, m), 3,00—3,60 (4H, m) , 3,72 (2H, s), 3,80 (3H, s), 30 3,93—4,40 (3H, m) , 6,84 (2H, d, J * 9 Hz), 7,23 (2H, d, J = 9 Hz) (3) 3-(l-t-butoxycarbonyl-4-p-methoxybenzylthiopyrrolidin-2-yl)- propionitril:

Forbindelsen (4,55 g) vundet i trin (2) opløstes i 11 ml ethanol, og der tilsattes 15 ml 1 N NaOH ved 0 til 5°C og omrørtes 35 DK 171644 B1 127 i 1 time ‘ved stuetemperatur. Til opløsningen sattes vand, der vaskedes med ether, vandfasen syrnedes med HC1, og der ekstraheredes med ethylacetat. Ekstrakten tørredes over Na2SC>4 og derefter afdestilleredes opløsningsmidlet under nedsat 5 tryk. Den opnåede remanens opløstes i 50 ml xylen, og der opvarmedes til kogning under tilbagesvaling i 2 timer. Remanensen opnået efter afdestillering af opløsningsmidlet under nedsat tryk rensedes ved at føre den gennem en kolonne pakket med 50 g silicagel og eluering af produktet med benzen/ethyl-acetat i rumfangsforholdet 95:5 til opnåelse af den ovennævnte forbindelse i et udbytte på 3,4 g.

N.M.R. δ (CDCl^) ppm: 15 1,46 (9 H, s), 1,50^-2,50 (6H, m) , 2,90~3,60 (3H, m), 3,68 (2H, s), 3,76 (3H, s), 3,80~4,30 (IH, m), 6,78 (2H, d, J = 9 Hz), 7,18 (2H, d, J = 9 Hz) (4) 3-(l-t-butoxycarbonyl-4-methoxybenzylthiopyrrolidin-2-yl)- 20 propionsyre:

Til forbindelsen (3,4 g) vundet i det foregående trin (3) sattes en blandet opløsning af 50% vandig ethanolopløsning (30 ml) og KOH (4,5 g), og der opvarmedes til kogning under 25 tilbagesvaling i 6 timer. Opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk, der sattes vand til remanensen, syrnedes med HC1 og ekstraheredes med ethylacetat. Ekstraktens opløsningsmiddel afdestilleredes under nedsat tryk efter tørring over Na^SO.. Remanensen rensedes ved søjlekromatografi under 30 ^ 4 anvendelse af 25 g silicagel og chloroform/methanol i rumfangsforholdet 99:1 som elueringsmiddel til opnåelse af 2,9 g af den ovennævnte forbindelse.

N.M.R. 6 (CDC1,) ppm: 35 5 1,46 (9H, s), 1,50~2,15 (4H, m), 2,15/^2,45 (2H, m), 3,00~3,60 (3H, m) , 3,68 (2H, s), 3,78 (3H, s), DK 171644 B1 128 6,75 (2H, d, J = 9 Hz), 7,15 (2H, d, J = 9 Hz), 9,30 (IH, brs) (5) 3-(l-t-butoxycarbonyl-4-p-methoxybenzylthiopyrrolidin- ** 2-yl) propanol:

Forbindelsen (2,9 g) vundet i det foregående trin (4) opløstes i 30 rnl THF, og der tilsattes 1,13 ml triethylamin, afkøledes til -10°C og tilsattes dråbevis 0,77 g methylchlorcarbonat under omrøring. Blandingen omrørtes i 30 minutter ved 0-5°C og i yderligere 30 minutter ved 50°C og derefter filtreredes bundfaldene fra. Til filtratet sattes der 0,15 g lithiumbor-hydrid og omrørtes i 2 timer ved stuetemperatur. Reaktions-væsken koncentreredes under nedsat tryk, der tilsattes ethyl-^ acetat, vand og ammoniumchlorid og derefter skiltes den organiske fase fra og den vaskedes med mættet vandig natriumchlorid-opløsning, tørredes over Na2S0^, og opløsningsmidlet afdes-tilleredes til opnåelse af 2,6 g af den ovennævnte forbindelse.

20 N.M.R. δ (CDCl^) ppm: 1,46 (9H, s), 1,50^2,20 (6H, m) , 3,00^3,70 (5H, m), 3,70 (2H, s), 3,78 (3H, s), 6,79 (2H, d, J = 9 Hz), 7,16 (2H, d, J = 9 Hz) 25 (6) 3-(l-t-butoxycarbonyl-4-p-methoxybenzylthiopyrrolidin-2-yl)propyltosylat:

Forbindelsen (2,6 g) vundet i det ovennævnte trin (5) opløstes 30 i 20 ml pyridin, og der tilsattes 2,8 g p-toluensulfonylchlorid og omrørtes i 17 timer ved 0 til 5°C. Opløsningsmidlet afdes-tilleredes under nedsat tryk, og derefter sattes der ethyl-acetat til remanensen, og der vaskedes med vand. Opløsnings-^ midlet i den organiske fase destilleredes fra under nedsat af fasen over Na2S0^. Den resulterende remanens rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af 50 g silica- DK 171644 B1 129 gel og benzen/ethylacetat i rumfangsforholdet 98:2 som elue-ringsmiddel til opnåelse af 1,4 g af den ovennævnte forbindelse.

N.M.R. δ (CDCl^) ppm:

5 J

1,42 (9H, s), 1,40~2,00 (6H, m), 2,42 (3H, s), 2,80/^3,60 (3H, m), 3,67 (2H, s), 3,76 (3H, s), 3,85~4,23 (3H, m) , 6,78 (2H, d, J = 9 Hz), 7,10/^7,35 (4H, m), 7,72 (2H, d, J = 9 Hz) 10 (7) 2-p-methoxybenzylthiopyrrolizidin:

Til en blanding af forbindelsen (1,4 g) vundet i det foregående trin (6) og 1,5 ml anisol sattes 5 ml trifluoreddikesyre ^ under isafkøling og omrøring, og der omrørtes yderligere i 30 ihinutter ved denne temperatur. Opløsningsmidlet af destilleredes under nedsat tryk, og remanensen vaskedes med ether. Remanensen opløstes i 10 ml DMF, og der tilsattes 0,95 g ka-liumcarbonat og omrørtes i 17 timer ved stuetemperatur. Opløs- 20 ningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk, og der tilsattes chloroform, vaskedes med vand, tørredes over og opløs ningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk. Remanensen førtes gennem en kolonne; pakketmed 15 g silicagel og elueredes med chloroform/methanol i rumfangsforholdet 95:5 til opnåelse 25 af den ovennævnte rensede forbindelse i et udbytte på 0,47 g· N.M.R. 6 (CDC13) ppm: 30 1,50/^2,20 (6H, m), 2,26~2,60 (IH, m), 2,80/^3,30 (4H, m), 3,69 (2H, s), 3,78 (3H, s), 6,78 (2H, d, J = 9 Hz), 7,18 (2H, d, J = 9 Hz) ^ (8) 2-p-methoxybenzylthio-4-methylpyrrolizidiniumjodid: 400 mg af forbindelsen vundet i trin (7) opløstes i 7 ml acetone, og der tilsattes 0,47 ml methyljodid og henstilledes DK 171644 B1 130 i 2 dage ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk, remansen vaskedes med ether flere gange og tørredes til opnåelse af den ovennævnte forbindelse i et udbytte på 600 mg.

5 (9) 2-mercapto-4-methylpyrrolizidiumtrifluormethansulfonat:

Til en blanding af forbindelsen (600 mg) vundet i det foregående trin (8), 1 ml anisol og 6 ml trifluoreddikesyre sattes 0,7 ml trifluormethansulfonsyre ved stuetemperatur under omrøring, og der omrørtes yderligere i 1 time ved denne temperatur. Opløsningsmidlet afdestilleredes under nedsat tryk, og remanensen vaskedes gentagne gange med petroleumsether, og derved opnåedes den ovennævnte forbindelse i form af et *-5 olieagtigt materiale i et udbytte på 450 mg.

N.M.R. δ (D2O) ppm: 1,70 —-2,60 ( 6H, m) , 3,23 (3H, s), 3,25^4,40 (6H, 20 m), 4,80 (HOD) EKSEMPEL 34

Syntese af (5R, 6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-2-(N-methy1 carbamoy1me-25 thyl)-5H-pyrrolo[l,2-c]imidazolium-7-yl)thio]-6-(l-hydroxyet-hyl)-2-penem-3-carboxylat (isomer a og isomer B):

Forbindelsen (171 mg) opnået i ekSempel 2.C1} opiøstes i 15 ml vandfri acetone, og 1,06 g N-methylbroroacetamid tilsattes ved 30 stuetemperatur. Blandingen omrortes ved stuetemperatur i 40 timer og efter tilsætning af 0,53 g N-methylbromacetamid omrør tes den resulterende blanding i yderligere 22 timer. Reaktionsblandingen koncentreredes, 0g remanensen vaskedes med diethylether to gange og tørredes til opnåelse af 298 mg gult 35 gummiagtigt stof. Dette opløstes i 25 ml 50% vand-tetrahydro-furan og 3,40 g ammoniumchlorid tilsattes. 1,70 g jernpulver (100 mesh) sattes til blandingen under kraftig omrøring under 131 DK 171644 B1 stuetemperatur, og den resulterende blanding omrørtes i 10 minutter ved stuetemperatur og yderligere 90 minutter under isafkøling. Det uopløselige stof fjernedes ved filtrering under anvendelse af celite. Filtratet koncentreredes til ca. 5 5 ml under nedsat tryk og rensedes ved søjlekromatografi under anvendelse af 35 ml Diaion HP-20. Efter fjernelse af den fraktion, der flød ud med 150 ml vand blev den fraktion, der elue-redes med 100 ml 5% THF-vand, opsamlet. Fraktionen koncentreredes til ca. 5 ml under nedsat tryk og rensedes ved HPLC (op-10 løsningsmiddel: 7% acetonitri 1/vand, strømningshastighed: 3,65 ml/minut). Fraktioner svarende til en retentionstid på 16 minutter og 21 minutter opsamledes, og hver fraktion koncentreredes under nedsat tryk og frysetørredes til opnåelse af henholdsvis 33 mg af den omhandlede isomer A og 33 mg af den om- , handlede isomer B. i o

Isomer A

IR (KBr skive) cm"*: 3370, 1765, 1680, 1590, 1370, 1290 UV λ max (H20) nm: 248 (sh), 324 20 NMR S (D20) ppm: 1,27 (3H, d, J = 6,3 Hz, -CH3), 2,5-3,0 (lH,m), 2,76 (3H, s, -NH-CH3), 3,0-3,6 (IH, m), 3,95 (IH, dd, J = 1,3 Hz, 5,9 Hz, C6-H), 25 4,23 (IH, t, J = 5,9 Hz C8-H), 4,3-4,6 (2H, m) 4.74 (HOD), 4,9-5,1 (IH, m), 4,99 (2H, s, -CH2-C0-), 5,67 (IH, d, J = 1,3 Hz, C5-H), 7,42 (IH, s) 8.74 (IH, s) 30

Isomer B

IR (KBr skive) cnr*: 3370, 1775, 1685, 1595, 1370, 1295 UV λ max (H20) nm: 258 (sh.), 325 NMR δ (020) ppm: 35 132 DK 171644 B1 1.27 (3H, d, J = 6,3 Hz, -CH3), 2,4-2,9 (IH, m) 2,76 (3 H, s, -NHCH3), 2,9-3,4 (IH, m) 3,95 (IH, dd, J = 1,5 Hz), 6,1 Hz), 4.27 (IH, t, J = 6,1 Hz, C8-H), 4,3-4,6 (2H, m) 5 4,74 (HOD), 4,9-5,1 (IH, m), 5,00 (2H, s, -CH2-C0-) 5,68 (IH, d, J = 1,5 Hz, C5-H), 7,44 (IH, s), 8,75 (IH, s) EKSEMPEL 35 10 Syntese af (5R,6S,8R)-2-[(6,7-di hydro-2-(N-ethylcarbamoyl methyl)- 5H-pyrrolo[l,2-C]imidazoli um-7-y1)thio]-6-(l-hydroxyet-hyl)-2-penem-3-carboxy1 at (isomer A og isomer B).

Ved en tilsvarende fremgangsmåde som i eksempel 34 under an-15 vendelse af N-ethy1 bromaeetam id opnåedes de omhandlede i some-rer A og B i et udbytte på henholdsvis 37 mg og 38 mg. Betingelserne for HPLC var de samme som i eksempel 33, og retentionstiden for isomer A var 25 minutter og for isomer B 31 minutter .

20

Isomer A

IR (KBr skive) cm“l: 3380, 2980, 1775, 1680, 1595, 1450, 1370, 1290 UV λ max (H20) nm: 250 (sh), 324 25 NMR 8 (D20) ppm: 1.10 (3H, t, J = 7,3 Hz, -CH2'CH3), 1,28 (3H, d, J = 6,3 Hz, -CH3), 2,5-3,0 (IH, m), 3,24 (2H, q, J = 7,3 Hz, CH2-cH3>' 30 3,0-3,4 (IH, m), 3,95 (IH, dd, J s *'3 Hz, 5,9 Hz, C6-H), 4,23 (IH, t, J = 5,9 HZ, C8-H), “*,3-4,6 (2H, m) 4.74 (HOD), 4,9-5,1 (IH, m), 4,98 (2H, s, -CH2-C0-), 5,69 (IH, d, J = 1,3 Hz, C5-H), 7'42 UH, s) 8.74 (IH, s) 35 133 DK 171644 B1

Isomer B

IR (KBr skive) cm-*: 3400, 2970, 1775, 1675, 1590, 1440, 1365, 5 1290 UV λ max (H20) nm: 258 (sh.), 324 NMR δ (D20) PPm: 1,12 (3H, t, J = 7,2 HZ, -CH2-CH3), 10 1,29 (3H, d, J = 6,4 Hz, -CH3), 2,4-2,9 (lH,m), 3,25 (2 H, q, J = 7,2 Hz, -CH2-CH3), 2,9-3,4 (IH, m), 3,93 (IH, dd, J = 1,3 HZ, 5,9 Hz, C6-H), 4,24 (IH, t, J = 5,9 Hz, C8-H), 4,3-4,6 (2H, m) 4.74 (HOD), 4,9-5,1 (IH, m), 4,99 (2H, s, -CH2-C0-), 15 5,69 (IH, d, J = 1,3 Hz, C5-H), 7,45 (IH, s) 8.74 (IH, s) EKSEMPEL 36

Syntese af (5R,6S,8R)-2-[{6,7-dihydro-2-(N-dimethyIcarbamoyl- 20 methyl)-5H-pyrrolo[l,2-C]imidazolium-7-yl)thio]-6-(1-hydroxy-ethy1)-2-penem-3-carboxy1 at (isomer A og isomer B):

Ved en tilsvarende fremgangsmåde som i eksempel 34 opnåedes de omhandlede isomerer A og B i et udbytte på henholdvis 17 mg og 25 40 mg. Betingelserne for HPLC var de samme som i eksempel 34, og retentionstiden for isomer A var 19,5 minutter og 22,5 minutter for isomer B.

Isomer A

30 , IR (KBr skive) curl·. 3400, 3130, 2970, 1775, 1660, 1585, 1360, 1280 35 134 DK 171644 Bl UV λ max (H20) nm: 247 (sh), 325 NMR δ (D20) ΡΡΠ>: 1,34 (3 H, d, J = 5,4 Hz, -CH 3), 2,5-3,5 (2H, m), CH3 5 f 1 3,01 (3H, s, -N ), 3,13 (3H, s, -N ), \CH3 \ 4.00 (IH, d, C g-H), 4,1-4,6 (3H, m), 4,74 (HOD), 4.9- 5,1 (IH, m), 5,31 (2H, s, CH2CO-), 5,74 (IH, br, S, C5-H}, 7,42 (IH, s), 8,73 (IH, s) 10

Isomer 6 IR (KBr Skive) cm-1: 3400, 3130, 2970, 1775, 1650, 1590, 1360, 1285 UV λ max (H20) nm: 256 (sh.), 325 15 NMR 6 (D20) ppm: 1,32 (3H, d, J = 6,1 Hz, -CH3), 2,5-3,5 (2H, m), CH3 / / 3.01 (3H, S, -N ), 3,13 (3H, s, -N ), 2 0 ^ \C H 3 3,97 (IH, d, Cg-H), 4,1-4,6 (3H, m), 4,74 (HOD), 4.9- 5,1 (IH, m), 5,30 (2H, s, CH2CO-), 5,73 (IH, br, s, C5-H), 7,43 (IH, s), 8,72 (IH, s) EKSEMPEL 37 25

Syntese af (5R,6S,8R)-2-[(2-(2-carbamoylethyl)-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[l,2-C]imidazolium-7-yl)thio]-6-(l-hydroxyethyl)-2-pe-nem-3-carboxy1 at (isomer A og isomer B):

Ved tilsvarende fremgangsmåder som i eksempel 34 opnåedes iso-30 mererne A og B i et udbytte på henholdsvis 16 mg og 23 mg. Betingelserne for HRLC var de samme som i eksempel 34, og retentionstiderne var for isomer A 12 minutter og 17 minutter for isomer B.

35 Isomer A

IR (KBr skive) cm‘l: 3350, 1765, 1670, 1575, 1360, 1285 UV λ max (H20) nm: 214, 250 (sh), 325 NMR 6 (D20) ppm: 135 DK 171644 B1 1,34 (3H , d, J = 6,4 Hz, -CH 3)* 2,6-3,6 (2H, m) , 2,92 (2H , t, J = 6,4 Hz, -CH2"C°-)» 4,00 (IH, dd, J = 1,3 Hz, 5,9 Hz, CgH), 4,1-4,7 (5H, m), 4,74 (HOD), 4,95-5,1 (IH, m), 5,73 (IH, d, J = 1,3 Hz), C5-H), 5 7,49 (IH, s), 8,74 (IH, s)

Isomer B

IR (KBr skive) cm"l: 3370, 1775, 1675, 1585, 1360, 1290 UV λ max (H20) nm: 215, 260 (sh.)> 324 10 NMR 5 (D20) PPm: 1,33 (3H, d, J = 6,4 Hz, -CH3), 2,5-3,5 (2H, m), 2,90 (2H, t, J = 6,2 Hz, -CH2-CO), 3,98 (IH, d, J = 5,9 Hz, -ΟβΗ)* 4,1-4,7 (5H, m), 15 4,74 (HOD), 4,9-5,1 (IH, m), 5,76 (IH, br.s, C5-H), 7,53 (IH, S), 8,74 (IH, s) EKSEMPEL 38

Syntese af (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-2-phenacyl-5H-pyrrolo-O 0 [1,2-C]imidazolium-7-yl)thi o]-6-(1-hydroxyethy1)-2-penem-3-carboxylat (blanding af isomer A og isomer B).

Ved en tilsvarende fremgangsmåde som i eksempel 34 opnåedes en blanding af isomer A og isomer B i et udbytte på 54 mg.

25

Betingelser for HPLC:

Kolonne: Nucleosil 7Ci8 (10 mm X 300 mm)

Opløsningsmiddel: 20% acetonitri 1/vand Strømningshastighed: 3,6 ml/min.

o n

Retentionstid: 14 minutter.

IR (KBr skive) cm-l: 3400, 1770, 1690, 1590, 1450, 1360 UV λ max (H20) nm: 250 (sh), 324 NMR δ (D20) ppm: 1,28 (3H, d, J = 6,6 Hz, -CH3), 2,3-3,0 (IH, m), 3,0-3,5 (IH, m), 3,93 (IH, d, J = 6,5 Hz, C6-H), 4,23 (IH, t, J = 6,5 Hz, C8H), 4,3-4,7 (2H, m).

35 136 DK 171644 Bl 4,74 (HOD), 5,0-5,2 (IH, m), 5,68 (IH, s, C5-H), 6,00 (2 H, s, -CH2-CO-), 7,48 (IH, s), 7,5-7,9 (3H, m), 8,10 (2H, d, J = 7,0 Hz), 8,79 (IH, s) EKSEMPEL 39 5

Syntese af (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-2-(l-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-5H-pyrrolo[l,2-C]inndazolium-7-yl)thio]-6-(l-hy-droxyethy1)-2-penem-3-carboxy1 at (isomer A og isomer B).

10 Ifølge tilsvarende metoder som i eksempel 34 opnåedes de omhandlede isomerer A og B i et udbytte på henholdsvis 22 mg og 25 mg.

Betingelse for HPLC: 15 Kolonne: Nucleosil 7Ci3

Opløsningsmiddel: aceton itri 1/vand (1:9)

Strømningshastighed: 5 ml/min.

Retentionstid: 14 minutter (isomer A) 17 minutter (isomer B) 20

Isomer A

UV λ max (H2O) nu): 325 NMR δ (D20) ppm: 25 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3), 2,70-3,00 (IH, m), 3,10-3,60 (IH, m), 4,02 (IH, dd, J = 2 Hz, 6 Hz, C6-H), 4,10 (3H, s, J = 7,3 Hz, CH3), 4,20-4,70 (3H, m), 4,80 (H0D), 5,76 (IH, d, J = 2 Hz, C5-H), 6,03 (2H, s, - C 2"S) , 7,72 (IH, s), 9,08 (IH, s) 30

Isomer B

UV λ max (H2°) nm= 258 (sh.), 325 NMR δ (02°) PPm: 35 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,56-2,90 (IH, m), 3,00-3,50 (IH, m), 4,00 (IH, dd, J = 2 Hz, 6 Hz), 4,08 (3 H, S, CH3), 4,20-4,70 (3H, m), 4,80 (HOD), 137 DK 171644 B1 5.76 (IH, d, J = 2 Hz), 6,04 (2H, s, -CH2-S-), 7.77 (IH, s), 9,08 (IH, s) _ Biolocn «ir «anrmp-ηΐ -i gninqsf orsøq

Der er foretaget en sammenligning mellem repræsentanter for de 2-biheterocyklothiosubstituerede penemderivater ifølge opfindelsen og en repræsentant for en monoheterocyklothiosubstitue-ret penemforbindelse kendt fra EP 138.539 med følgende formel

OH

i M o

_I^S

15 1_N \^NH

° COONa

Ved sammenligningen bestemtes forbindelsernes antibakterielle 2o aktivitet. De opnåede resultater fremgår af følgende tabel: 25 30 35 138 DK 171644 B1

i M 1 I

-C Η O σι co ro H

Gi W Γ0 C- H « o · % *> >* ^ C) o o o o ro v

M

u w M__ Σ

OJ O CO co H

r< Η Η Η C"- C*- - O ‘ o

· O O O O V

4J m v Λ %

β H

4J--— β

G) O

y H O O ID 0Ί H

g ι-l CN LD ro ' 0 · .. o •X ^ ta o o h o v

m ΰ X

-S . w C o-- tt) Λ!

>-l φ CO O O 00 VOH

tt) h cn t" in Λ α) · - - - »o

ή tn o o o o HV

S H X

5 s W

•H >W___ φ ·Η u 01 " in o σ co σ\Η Ό H ro Γ- to - β ® - -o

•H "tooo O OV

ε I ύ ti β w _ (U *rl — Ό Λ

_ t-l ro O O ID CO

S o h fN in r- <H

0 tu - - οι ta o o η o o u * v e w 0)--

U

01 (NJ O O 00 00

0) H CN t" C" H

XI ------ tn o o o o o M v

a> S

Jj _ -H " ~ — ' > •η <r> u v M in o σι co

(0 co H ro r- o rH

to - ~ •π h o o o in o

tt) cu OJ V

-Η ΛΛ

iH

tt) --- M ° rt ® o η *H o< Η M ro tn »p-ι Γ; ® o β m σι β uio-® m o 5 m x ® υ O Ott

”· rt m ® ra C

A S5 O ® -H

® U Gi CQ

-U - o β G 2 .. ®-ΗίΗ®^βΓΟ®

_j >rH u go ®ro U

fl) GO H ro CM 3 η β U · o CN rt flj (¾ X) β H · ro

H «w · β ® W

mi ω ω co ft co i IL — .. 1 . . .....

139 DK 171644 Bl 00 o uo uo

(N H CN Ln Lf) H

V H ** 4» **>

• O O H H O

m v v

M

. w M---- Π . o ao

tQ t" H CN Γ' OH

X fS - ' ' Φ o o o un o

• V CN V

Φ m tn £

H W

S-- 4-1 *rl

H

<D

Q in O 0> CD H

H CN CN H Γ- HH

Φ - Ό · o o o cn o a o v

-Η M

Λ H

_____ o ft

CN

CN O O O O

H CN CN ' H

• - - -. unto O O O CN O

Μ V

w Φ •H ·* μ m ~ ft Φ C ns σ\ V b <U CD o Μ K 0) O O cn

at m ro to C

Λ IS υ φ -H

ns u Cn cd 4-> - O ^ 3 3 Φ η ho π5 S-c m Φ

> η Uo B o d)co M

SO N< Η ns CN 3 Μ o · H · O CN Π3 ft 4-> o S-ι H · m 44 · c d) cn < W M CO Λ to DK 171644 B1 140

CD

to o σι co ro

• CM ro S· HH

CD - - - X o o o ro o

W V

CO O O ID CO

ro ro cm in r- h «. <. «·, ** <

• O O H O O

O V

X

• W

M__ a

o in o σ\ U5 co H

X co h ro m r- Φ - - - - o

• O O Η O V

Φ a

O) X

H ω S__ <u

H

M

Φ

10 Φ O O ID CO

H m cm cm in c~ h Φ s Ό · O O H o o do v

•Η AJ

A ω Μ__ Ο h

CO

CO Ο O ID <Τν Η CM LO CO Η

O O Ο Η O O

Λ! V

Η φ Η " Μ α - Λ ω a ns σ\ 4J Η) φ C0 ο

X Κ Φ υ Ο CM

(β Η (β 01 G

Λ 25 U φ -Η ns υ σι w 4J - ο μ 3 3 φ-Η ι—ι ο π3 ^ Μ ro Ο) > -η U o ε ο Ο) co Μ SO Ο* Η Π3 CM 3

MU · CO · Ο CM IC

ft DO ΜΗ · ro

•Μ · 3 0) OT

C w ω ot Pj ot

Claims (5)

10 R4 ippR\ # On5/ , OPN f Q^ji _ 15 hvor betyder hydrogen, halogen, amino, hydroxyl, alkyl med fra 1 til 4 carbonatomer, cyklopropylmethyl, cy-klobutylmethyl, 2-propen-l-yl, 2-propyn-l-yl, 2-halogenethyl, 2 0 trifluormethyl, phenylmethyl, 4-halogenphenylmethyl, cyanome- thyl, carboxymethyl, alkyloxycarbonylmethyl med fra 1 til 4 carbonatomer i alkyldelen, alkyloxycarbonylmethylcarbonyl- ' methyl med fra 1 til 4 carbonatomer i alkyldelen, acetyl- methyl, benzoylmethyl, carbamoylmethyl, 2-carbamoylethyl, N- 2 5 alkylcarbamoylmethyl eller 2-(N-alkylcarbamoyl)-ethyl med fra 1 til 3 carbonatomer i alkyldelen, N,N-dialkylcarbamoylmethyl eller 2-(Ν,Ν-dialkylcarbamoyl)-ethyl med fra 1 til 3 carbonatomer i alkyldelen eller N-methyltetrazolyl-5-yl-thiome- thyl; eller farmaceutisk acceptable salte deraf. 30

2. J , Y-N--/ , VYkC/ 30 V-N-J? , i

35 N ® DK 171644 B1 . €&:€&: CT>: Q>. ζΡ ; Q5

10 R<i r^>®N/4· i^>N'w. rVs^N^ k^N-^ , f QJj©^ # 15 hvor R4 betyder hydrogen, halogen, amino, hydroxyl, alkyl med fra 1 til 4 carbonatomer, cyklopropylmethyl, cy-klobutylmethyl, 2-propen-l-yl, 2-propyn-l-yl, 2-halogenethyl, 20 trifluormethyl, phenylmethyl, 4-halogenphenylmethyl, cyanome- thyl, carboxymethyl, alkyloxycarbonylmethyl med fra 1 til 4 carbonatomer i alkyldelen, alkyloxycarbonylmethylcarbonyl- ' methyl med fra 1 til 4 carbonatomer i alkyldelen, acetyl- methyl, benzoylmethyl, c a rbamoy1methyl, 2-carbamoylethyl, N-25 alkylcarbamoylmethyl eller 2-(N-alkylcarbamoyl)-ethyl med fra 1 til 3 carbonatomer i alkyldelen, N,N-dialkylcarbamoylmethyl eller 2-(N,N-dialkylcarbamoyl)-ethyl med fra 1 til 3 carbonatomer i alkyldelen eller N-methyltetrazolyl-5-yl-thiome- thyl; eller farmaceutisk acceptable salte deraf. 30

8. Mellemprodukt ifølge krav 7, kendetegnet ved, at saltet er et alkalimetalsalt.

9. Mellemprodukt ifølge krav 7, kendetegnet ved, at 35 R3 er en gruppe med formlen: DK 171644 B1

2. Penemderivat ifølge krav l, kendetegnet ved, at det er et (5R, 6S, 8R)-penemderivat. 35

143 DK 171644 B1

3. Penemderivat ifølge krav 2, kendetegnet ved, at -COOR2 betyder en carboxylatanion, og at R3 er en gruppe med formlen: 5 b 4 hvor A er et nitrogenatom eller et carbonatom, og R har den 10 i krav 1 angivne betydning.

4. Penemderivat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det har en af de almene formler (la): 15 - «> hvor R2 er H, eller hvor CCOR2 betyder en carboxylatanion, og R4 er ~CH3, -CH2CN, -CHj-CsCH, -CH2-CO-CH3, -CHjCONHj eller 25 -CH2CH3.

5. Penemderivat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det har en af formlerne (Ib); 0^-N VCqzR2 eller CT CO2R2 hvor R2 er H, eller hvor COOR2 betyder en carboxylatanion, og er methyl. 35 DK 171644 Bl

6. Penemderivat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det har en af de almene formler (Ic): OH OH _ _ 1 Λΐίχ'Χϊφ'1'"' n-ryO^ici 0>-N-Neller ^0^2 hvor R- er hydrogen, eller C00Ro betyder en carboxylat- 10 . 1 anion, og R4 er methyl.

7. Mellemprodukt til fremstilling af penemderivater, kendetegnet ved den almene formel (III): 15 hs-r3 (III) hvor R3 er en bi'cykloheterocyklisk gruppe med en af formlerne 20

5 O hvor A er nitrogen eller carbon, og R4 har den i krav 7 an-10 givne betydning. 15 20 25 30 35