FI87218C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara penemderivat - Google Patents

Description

8721 8

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten penemjohdannais-ten valmistamiseksi Tämän keksinön kohteena on menetelmä uusien, erinomaisen antibioottisen aktiivisuuden omaavien penemjohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti sopivien suolojen valmistamiseksi.

Infektiotauteja aiheuttavat yleensä patogeeniset mikro-organismit, jotka kiinnittyvät elävän kehon määrättyyn osaan ja leviävät siinä ja aiheuttavat paikallisia reaktioita tunkeu-tuessaan sattumalta elävään kehoon jne. Eräs tehokas tapa hoitaa infektiotauteja on antaa antibioottia tällaista tautia sairastaville potilaille. Tällaisina tehokkaina, tavanomaisesti laajalti käytettyinä antibiotteina tunnetaan penisilliini- ja kefalosporiiniantibiootit, joilla on laaja antibakteerinen spektri ja näitä antibiootteja onkin käytetty laajalti erityyppisten infektiosairauksien hoitoon ja niillä on erinomainen teho.

Siten useimmissa tapauksissa patogeeniset mikro-organismit hävitetään perinpohjin kemoterapeuttisen aineen vaikutuksella ja potilaat paranevat. Kuitenkin on hyvin tunnettua, että mikro-organismi, joka aiheuttaa vastaavan infektiotaudin, tulee toisinaan resistentiksi lääkeaineen suhteen, ja siitä syystä, jos sitä käyteään pitkään, tästä tulee väistämätön ongelma kemoterapiassa.

Tästä syystä antibiootit, kuten penisilliini- ja kefalosporiiniantibiootit eivät ole olleet riittävän tyydyttäviä an-ι-ibakteerin spektrin, antibioottisen aktiivisuuden, kehossa vaikuttavan käyttäytymisen tai turvallisuuden suhteen, koska bakteerista tulee resistentti pitkään kestävän ja laajalle levinneen käytön johdosta.

Tällaisissa olosuhteissa on kehitetty antibiootti, jota nimitetään tienamysiiniksi (ks. JP-hakemusjulkaisu 73191/76) ja joka on herkkä bakteerien suhteen, jotka ovat resistenttejä penisilliinien ja kefalosporiini-antibioottien suhteen, 2 8721 8 ja sitten on suoritettu tarmokkaasti tutkimuksia karbapenem-johdannaisten ja muiden samankaltaisen runkorakenteen omaa-vien penem-johdannaisten synteesin suhteen. Kuitenkin nämä tavanomaisesti kehitetyt tai syntetisoidut karbapenem- tai penem-antibiootit eivät ole tyydyttäviä erilaisten haittojen johdosta, kuten siksi, että ne ovat fysikokemiallisesti epästabiileja ja ne kärsivät helposti entsyymien, kuten dehyd-ropeptidaasin aiheuttamasta entsymaattisesti hajaantumisesta munuaisissa. Niillä on edelleen melko alhainen ja riittämätön liukenevuus veteen. Siten ei ole vielä kehitetty edes yhtä ainoata erittäin arvokasta tai tehokasta lääkeainetta.

Kuten yllä mainittiin, on melko tehokasta käyttää antibiootteja hoidettaessa infektiotauteja. Kuitenkin on olemassa eräs vaikeus, kuten resistenttien bakteerien esiintyminen, joka on väistämätön ongelma antibiootteja käyttävässä kemo-terapiassa. S.o. tavanomaisesti kehitetyistä antibiooteista on tullut asteittain riittämättömiä niiden antibakteerisen spektrin suhteen resistenttien bakteerien esiintymisen johdosta. Tämä ongelma esiintyy myös penisiillinien ja kefalo-sporiiniantibioottien kohdalla, joilla on oletettu olevan suhteellisen laaja antibakteerinen spektri ja joita käytetään laajalti.

Siten on olemassa suuri tarve kehittää uusi lääkeaine, joka tehoaa näihin yllä mainittujen antibioottien suhteen resis-tentteihin bakteereihin ja jolla on laaja antibakteerinen spektri ja tähän mennessä on esitetty erityyppisiä aineita. Kuitenkaan mikään näistä ei täytä tämän uuden lääkeaineen yllä mainittuja vaatimuksia.

Tämän keksinnön tarkoituksena on saada aikaan uusia penem-johdannaisia, jotka tehoavat penisilliinien ja kefalo-sporiini-antibioottien suhteen resistentteihin bakteereihin ja joilla on erinomaiset fysikokemialliset ominaisuudet.

Tämän keksinnön tehtävänä on siten saada aikaan menetelmä uusien penemjohdannaisten valmistamiseksi.

3 87218

Yllä mainitut Ja muut tämän keksinnön tehtävät voidaan toteuttaa uusilla, seuraavan yleisen kaavan (I)

Rl\__/Sv^/S"R3 jT I <I> o ^COzRi mukaisilla penemjohdannaisillä ja niiden farmaseuttisesti sopivilla suoloilla, jossa kaavassa Rl merkitsee l-hydroksietyyliryhmää, COOR2 merkitsee karboksyyliryhmää tai karboksylaattianionia ja R2 voi olla poistettava suojaryhmä, ja R3 merkitsee substituoitua tai substituoimatonta bisyklo-heterosyklistä ryhmää, joka on jokin seuraavista ryhmistä: €T?:€Ö‘:Ci>: «?: €p: 4 87218 GC^CQ;CjO; Ct>; ® R4 Ra Α^Νχ^ rVNsNv A^nJ^ G®/: 0> ’. CfeN.

joissa kaavoissa R4 edustaa vetyatomia, metyyliryhmää, etyyliryhmää, 2-fluori-etyyliryhmää, propyyliryhmää, syklopropyylimetyyliryhmää, allyyliryhmää, propargyyliryhmää, bentsyyliryhmää, 4-fluoribentsyyliryhmää, asetyylimetyyliryhmää, karbamo-yylimetyyliryhmää, N-metyylikarbamoyylimetyyliryhmää, N,N-dimetyylikarbamoyylimetyyliryhmää, N-etyylikarbamo-yylimetyyliryhmää, 2-karbamoyylietyyliryhmää, karboksyyli-metyyliryhmää, karboksylaattimetyyliryhmää, metoksikarbo-nyylimetyyliryhmää, 3-metoksikarbonyyli-2-oksopropyyli-ryhmää, fenasyyliryhmää, syanometyyliryhmää, trifluori-metyyliryhmää, aminoryhmää, klooriatomia, hydroksyyli-ryhmää tai l-metyylitetratsol-5-yylitiometyyliryhmää.

Tämän keksinnön mukaisilla yleisen kaavan (I) mukaisilla penem-johdannaisilla on erittäin laaja antibakteerinen 5 8721 8 spektri ja siten niillä on voimakas antibakteerinen vaikutus gram-positiivisia ja gram-negatiivisia bakteereja ja aerobisia ja anaerobisia bakteereja samoin kuin penisilliinien ja kefalosporiiniantibioottien suhteen resistenttejä bakteereita vastaan. Lisäksi tämän keksinnön mukaiset penemjohdannai-set liukenevat hyvin veteen ja niillä on hyvä fysikokemial-linen stabiilius ja edelleen ne tuskin hajaantuvat entsyymien, kuten munuaisten dehydropeptidaasin tai p-laktamaasin vaikutuksessa. Siten niitä voidaan käyttää tehokkaasti anti-bakteerisena lääkeaineena, koska niillä on laaja antibakteerinen spektri ja erittäin hyvä biokemiallinen stabiilius ja turvallisuus.

Yleisessä kaavassa (I) tämän keksinnön mukaisia etusijalla olevia penem-johdannaisia tai niiden suoloja ovat sellaiset, joissa on seuraavat substituentit Rj, R2 ja R3. Ennen kaikkea Ri merkitsee vetyä, Ci_g-alkyyliryhmää, kuten metyyliä, etyyliä, n-propyyliä, isopropyyliä tai n-butyyliä, jossa voi olla hydroksyyliryhmä. R2 merkitsee ensisijassa vetyä, suoraa tai haarautunutta, 1-4 hiiliatomia sisältävää Ci_g-alkyyliä, kuten metyyliä, etyyliä, isobutyyliä, tert-butyyliä, alempaa alkoksi-Ci_6~alkyyliä, kuten metoksimetyy-liä, metoksietyyliä, alempaa alifaattista asyylioksimetyyliä, kuten pivaloyylioksimetyyliä, ftalidyyliä, 5-Ci_6-alkyyli- 1,3-dioksol-2-on-4-yylimetyyliä. Substituentti R2 voi toimia myös suojaryhmänä karboksyyliryhmälle valmistettaessa tämän keksinnön mukaisia johdannaisia ja se voi olla lievissä olosuhteissa helposti poistettavissa oleva esteritähde, esimerkiksi aralkyyli, kuten o-nitrobentsyyli, p-nitrobentsyyli, bentshydryyli tai 2-naftyylimetyyli, alkyyli tai Ci_g-alkyyli-silyyli, kuten trimetyylisilyyli.

Lisäksi COOR2 voi olla karboksylaattianioni tämän keksinnön mukaisen johdannaisen substituentin R3 tyypin mukaan, mikä vastaa tapausta, jossa penemin 3-asemassa oleva karboksyyli-ryhmä on karboksylaattianionin muodossa R3*.n vastaionina. Esimerkiksi, jos R3 on kvaternaarisen typen sisältävä hete-rosyklinen rengas, 3-aseman karboksyyliryhmä voi olla sen 6 8721 8 vastaionina olevan karboksylaattianionin muodossa. Lisaksi, jos johdannaiset ovat suoloja, jotka on muodostettu vahvojen happojen kanssa, toisin sanoen, kun kvaternaarisen typen vastaioni on vahvan hapon anioni, R2 voi olla vety, ja tästä syystä tMssa tapauksessa johdannaisilla on luonteenomaiset ominaisuudet ikäänkuin se olisi betaiiniyhdiste (kva-ternaarinen ammoniumyhdiste). Siten yhdisteiden (I) happoad-ditiosuoloilla on on seuraava yleinen kaava:

Ri\____^S-R3 yx-x * 0 vC0zRz jossa X“ merkitsee hapon anionia.

Kun taas silloin, kun R3 on emäksinen ryhmä, COOR2 voi olla joko karboksyyli- tai karboksylaattianioni yhdisteitä ympäröivän ympäristön olosuhteden (etenkin pH-arvon) mukaan, tai COOR2 voi olla näiden kahden tilan välisessä tasapainotilassa. Tämä tarkoittaa sitä, että johdannainen voi olla niin kutsutun kahtaisionin (zwitter-ionin) muodossa ja siitä syystä tulisi olla selvää, että kaavan (I) mukainen yhdiste sisältää sellaiset yhdisteet, joissa on kahtaisionirakenne.

Substituentin R4 edullisiin esimerkkeihin kuuluvat seuraavat: 7 87218 -CH3, -CH2CH3, - (CH2) 3CH3, -ch2-<(] , -ch2ch2f, -ch2ch2-ci, -ch2och3, -ch2ch2och3, -ch2ch2nh2, -CH2CH2-N//S| , -CH2-N J , -CH2CH2-N/\ f -ch2ch2-n 0, V 0K-^ H^0 π -CH2CH2-N ^NH, -CH2CH2N NH, -CH2CH2-N t?H , -CH2-<^/=0f

-' H

-C~\H, -CH?CN, -CH2CH2CN, -CH2-C5CH, -CH2CSC-CH3, 0 ” f -CH 2ch 2oh , -ch2-c!-ch3, -ch2conhch3, -CH2CON(CH3)2/ s 0 ll It -ch2ch2conh2, -ch2-cnh2, -ch2cnh2, -ch2conhconh2, /s /—v -CH2C0N I , -CH2C0N ^IH, -CH2CQN^ ^ -CH2C0N_NH,

X

-CH2C0N_NH, -CH2C0NH0H, -CH2CONHOCH3, -CH2COCH2COOCH3, -ch2coch=ch2, -ch2coch2oh, -ch2coch2cn, -ch2coch2conh2, -ch2coch2nh2, -ch2cho, -ch2cooch3, -ch2cooh, -ch2coconh2, -CH2COCOOCH3, -CH2COCOOH, -CH2COCHO, -CH2S02NH2/ -CH2SCH3, -CH2SOCH3, -C32S02CH3, -ch2conhso2ch3, -ch2conhso2nh2, -CH2S02NHC0CH3, -CH^O^o), -CH2C0n(2r,WHi-CH2C0NH-^O^, -CH2-(o> , -C52-^q)-P, -CH2CH2-0-(o^-F, -CH2n(Oy, -CI)2-<0>' 'C22^' -CH2-\^5' -CH2<0) , -CH2^|), ' 'CH2<§) ' 'CH2\°0' -CH2^g) /tf-tf CH3 -CH2-K°>. -CS 2-S<0> -caj-5-^oJ , -c:-:2-s-(o) , -ch2ch2-w^>, -CH2cs,-'ft^o'_s.

c h j 8721 8 8 TämAn keksinnön mukaisten penem-johdannaisten parhaimpina pidettyjä esimerkkejä ovat sellaiset, joissa substituentti R3 on valittu ryhmästä, johon kuuluvat kaavojen & mukaiset ryhmät, joissa A on typpi tai hiili ja R4 merkitsee samaa kuin yllä.

Keksinnön mukaisista penem-johdannaisista etenkin etusijalla ovat ne, joissa on seuraavat bisykloheterosykliset ryhmät (R3), joissa m on 1: OS ;0^;,€G"r;.€Ör. ; Θ : erj-erj^cb; €b': Φ 9 8721 8 C^:C^:a?:05 ; a>a?;Cp: Co.· θ R< R4 02/: CO ; CfcN.

Niissä kaavan (I) mukaisissa penem-johdannaisissa on stero-isomeerejä, joissa on substituentti R3, j0]^a sisältää yhden tai useamman asymmetrisen hiiliatomin. Esimerkiksi kun R3 sisältää yhden asymmetrisen hiiliatomin, tulisi kahden isomeerin olla läsnä. Sitten toisesta niistä käytetään seuraa-vassa nimitystä "isomeeri A" ja toisesta nimitystä "isomeeri B". Lisäksi silloin, kun R3 sisältää yhden asymmetrisen hiiliatomin samoin kuin substituentti R4, voi olla läsnä muita paikkaisomeerejä kuin stereoisomeerejä. Tällaisessa tapauksessa niistä käytetään nimityksiä "isomeeri A" - "isomeeri D" jne.

Yleisessä kaavassa (I) etenkin 5-asetnan hiiliatomin steeri-sen konfiguraation tulisi olla R-konfiguraatiossa, mikä vastaa luonnollisen penisilliinin konfiguraatiota ja substi-tuentin Rj etusijalla olevina esimerkkeinä tulisi mainita vety ja l-hydroksi-etyyli. Etenkin etusijalla ovat sellai- 8721a 10 set, joissa 6-aseman hiiliatomin eteerinen konfiguraatio, johon Ri, kuten 1-hydroksietyyli-ryhmä on sidottu, on S-kon-figuraatiossa ja että 8-aseman hiiliatomin steerinen konfiguraatio, johon hydroksyyliryhmä on liitetty, on R-konfigu-raatiossa kuten tienamysiinissä.

Edelleen etenkin etusijalla olevana substituenttina R2 on vety tai anionivaraus ja esteritähteiden parhaimpina pidettyjä esimerkkejä ovat pivaloyylioksimetyyli, ftalidyyli, 5-metyyli-l,3-dioksolan-2-on-4-yyli-metyyli. Ryhmiä, kuten p-nitrobentsyyliä, alyyliä käytetään mielummin yhdisteen (I) karboksyyliryhmän suojaryhmänä valmistettaessa yhdistettä (I).

Lisäksi tämän keksinnön mukainen yhdiste ja määrätyt sen välituotteet voivat esiintyä tautomeerin muodossa. Siitä syystä tähän keksintöön kuuluvat myös tällaiset tautomeeri-set muodot, vaikkakin tässä esitetyn rakennekaavan ei ole esitetty sisältävän tällaisia rakenteita. Esimerkkeinä näistä voidaan mainita seuraavat:

Cj°):<3: CO; CO; -CO: CO :CE> :

\—N

CO ;CO“';Cl> :Cl°>»·; NHa CHa

Cl cf3 η 87218 ;CP: ;0^^0^™:02&’ϊ°**': /^T0N-CH.CH=CH2 * ( ToY-CHzChCH · ( I0N-CH3 ' v^fj-zy 7 2 , \^n^y , x^N^y ^TO{J*-CH2C0CH3 · ^Jo)hCH2C0NH2 * '—ΝΌ2Η5

Siten tämän keksinnön mukaisia erityisesti etusijalla olevia penem-johdannaisia ovat sellaiset, jotka voidaan esittää seuraavilla yleisillä kaavoilla «a) jossa R2 on H tai COOR2 merkitsee karboksylaattianionia, R4 on -CH3, -CH2CN, -CH2-C=CH, -CH2-CO-CH3 tai -CH2-CO-NH2,

i2 8721 S

0H ^ „ °H

jossa R2 on vety tai se merkitsee karboksylaattianionia ku- ten COOR2 ja R4 on metyyli, ja

OH OH

jossa R2 °n H tai se merkitsee karboksylaattianionia kuten COOR2 ja R4 on metyyliryhmä.

Tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden (i) suoloja ovat kar-boksyylihappojohdannaisen ei-toksiset suolat (kaavassa (I) C00R2*C00H), esimerkiksi metallisuolat, kuten natrium—, kalium-, aluminium—, magnesiumsuola, ammoniumsuola, suolat, jotka on muodostettu ei—toksisten amiinien, kuten trietyyli-amiinin, prokaiinin, bentsyyliamiinin ja muiden amiinien kanssa, joita käytetään suolojen muodostamiseksi penisilliinien ja kefalosporiinien kanssa. Etusijalla suoloista ovat natrium- ja kaliumsuolat.

Koska tämän keksinnön mukaiset penem-johdannaiset sisältävät myös emäksisen ryhmän, ovat myös farmaseuttisesti sopivat happoadditiosuolat mahdollisia, jotka on muodostettu esimerkiksi mineraalihappojen, kuten kloorivetyhapon, bromivetyha-pon, fosforihapon, rikkihapon, orgaanisten happojen, kuten etikkahapon, sitruunahapon, meripihkahapon, askorbiinihapon, metaanisulfonihapon kanssa. Tämän keksinnön mukainen yhdiste (I) voi olla eri asteisesti solvatoituneessa muodossa, esimerkiksi hydraattina ja ne kaikki kuuluvat myös tämän keksinnön piiriin.

,, 8721 8 13 Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan yhdistää farmaseuttisten kantoaineiden, stabilointiaineiden, liukoiseksi tekevien aineiden, tavanomaisesti käytettyjen apuaineiden kanssa minkä tahansa tunnetun valmistustekniikan mukaisesti.

Tämän keksinnön mukaiset farmaseuttiset valmisteet voidaan antaa eri tavoin, kuten oraalisesti, intravenöösisenä injektiona, intramuskuläärisenä injektiona tai parenteraalisesti. Ne ovat mieluummin yksikköannoksen muodossa, joka sopii erityiseen antotapaan. Tästä syystä ne voivat olla tablettien, pillereiden, kapseleiden, rakeiden, injektioiden, supposito-rioiden tai vastaavien muodossa. Tämän keksinnön mukaisen yhdisteen päivittäinen annos on yleensä 250 mg - 3.000 mg, jotka on jaettu osiin. Kuitenkin annos voi vaihdella riippuen erilaisista tekijöistä, kuten iästä, sukupuolesta, hoidettavasta tilasta.

Eräillä tämän keksinnön mukaisilla yhdisteillä suoritettiin antibakteerisen aktiivisuuden määritys liemi-laimennusmene-telmän avulla, jolloin käytettiin Muller-Hinton-lientä, johon kylvettiin 10^/ml bakteereita, minkä jälkeen inkubointi suoritetiin 37°C:ssa 18 tunnin ajan. Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa I:

Taulukko I: minimiestokonsentraatio (MIC: J^g/ml)

Testattu bakteeri Tutkittu yhdiste_ A B Sch 34343 ____(vertailu) E. coli , NIHJ__X0,05__0^1__0,39_

Ent. Cloacae, 03400__0,39__0,2__0,78_

Ser. Marcescens, 10104__0,78__0,78__3,13_

Ps. aeruginosa, 32233__25__0,78__100_ S. aureus, 209P <0,05 <0,05 pfi_ A: (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyr- rolo[2,1-c]-1,2,4-tr iätso1-6-yyli)-tio]-2-penem-3-karbok-syylihappo (isomeerit A, B) 14 8 7 21 8 B: (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2-[(6,7-dihydro-2-metyy-li-5H-pyrrolo[l,2-c]imidatsolium-7-yyli)-tio]-2-penem-3-karboksylaatti (isomeeri A)

Sch 34343: kehittänyt ja ehdottanut Scheering Company, sen kaava on seuraava:

OH

^S-CHzCHzOCONHz n_t VCOzNa ja se tunnetaan tehokkaana penem-yhdisteenä ja siitä on esitetty erinomaisia kliinisiä testaustuloksia.

Tämän keksinnön mukaiset penem-johdannaiset voidaan valmistaa tehokkaasti ja helposti seuraavassa reaktiokaaviossa esitetyn menetelmän mukaisesti: 0 ensimmäinen vaihe Rs N ^C02R2 hapetus 0>~N-Km D' υ tU2r\2 (IV) (II> toinen vaihe (substituutio)' kolmas vaihe (valinnainen „ HS-R3 (III) (suojaryhmän poisto, R4- substituenttien liittäminen tai päinvastoin)

Ri\_^S\^S-R3 0 ^~N ^COaRa (I) 15 8 721 8 (i) Ensimmäinen vaihe: Lähtöaine (IV), joka on eräs penem-johdannainen, voidaan valmistaa helposti tunnetun menetelmän mukaisesti (ks. esim. J. Am. Chem. Soc., 1982, 104, 6138) tai siitä parannetun menetelmän mukaisesti. Kaavassa (IV) substituentilla on yllä määritellyt merkitykset, R2' on yllä substituentin R2 määritelmän yhteydessä esitetty esteritähde ja R5 merkitsee orgaanista ryhmää, esimerkiksi alkyyliä, edullisesti alempaa alkyyli, kuten etyyliä, n-propyyliä tai iso-propyyliä, aryy-liä, kuten fenyyliä tai tolyyliä, aralkyyliä, kuten bentsyy-liä, metoksibentsyyliä, klooribentsyyliä tai fenetyyliä.

Penem-johdannainen (IV) hapetetaan sopivassa väliaineessa hapetusaineella, kuten perbentsoehapolla, m-klooriperbent-soehapolla, peretikkahapolla, vetyperoksidilla, seleniumdi-oksidilla, otsonilla tai natriummetaperjodihapolla, mieluummin m-klooriperbentsoehapolla sulfoksidijohdannaisten (II) muodostamiseksi suurella saannolla (kaavassa (II) aaltomainen nuoli, joka on liitetty rikkiatomiin, merkitsee sitä, että saatava yhdiste käsittää stereoisomeerien seoksen). Saatava sulfoksidijohdannainen, joka koostu sekaisomeereis-tä, voidaan käyttää sopivasti seuraavassa toisessa vaiheessa erottamatta isomeerejä. Liuottimena, jota voidaan käyttää tässä reaktiossa, voidaan mainita halogenoidut hiilivedyt, esimerkiksi dikloorimetaani, kloroformi, hiilitetrakloridi, alkoholit, kuten metanoli, etanoli, ketonit, kuten asetoni, metyylietyyliketoni, etikkahappo, pyridiini, N,N-dimetyyli-formamidi (seuraavassa lyhennettynä DMF), asetamidi, dimetyy-lisulfoksidi (seuraavassa lyhennettynä DMSO), vesi, fosfaattipuskuri ja näiden seokset. Parhaimpia liuottimia ovat sellaiset, jotka eivät vaikuta haitallisesti lähtöaineisiin eikä reaktiotuotteisiin. Ensimmäinen vaihe voidaan suorittaa -50...50°C:n lämpötilassa, mutta mieluummin reaktio suoritetaan melko lievissä lämpötilaolosuhteissa, kuten -30°C:n ja huoneenlämpötilan välillä olevissa lämpötiloissa. Ensimmäinen vaihe kestää yleensä 5 minuutista 4 tuntiin, mutta tavallisesti reaktioajaksi riittää 30 min. - 1 tunti.

(ii) Toinen vaihe: 16 87218 Tässä vaiheessa ensimmäisestä vaiheesta saatu sulfoksidijohdannainen (II) alistetaan substituutioreaktioon tioliyhdis-teen (III) (jossa R3 on sama kuin yllä on määritelty) tai sen happoadditiosuolan tai reaktiivisen johdannaisen kanssa. Tässä vaiheessa reaktioväliaineena voidaan käyttää orgaanista liuotinta, kuten DMF:ä, DMSOrta, tetrahydrofuraania (seu-raavassa lyhennettynä THF), heksametyylifosfotriamidia (seu-raavassa lyhennettynä HMPA) tai niiden seosta, jotka eivät vaikuta haitallisesti lähtöaineisiin eikä tuotteisiin. Reak-tiolämpötila on yleensä -50°C:n ja huoneenlämpötilan välillä, edullisesti se on -30°C...0°C. Reaktioaika on yleensä 15 minuutista 2 tuntiin, etenkin 30 min. - 1 tunti.

Tioliyhdisteen (III) reaktiivisyyttä voidaan parantaa käyttämällä emästä reaktiotoimenpiteissä ja siten reaktio etenee nopeasti ja hyvällä saannolla. Kuitenkin on selvää, että reaktio voidaan suorittaa ilman emästä. Tällaisenä emäksenä voidaan mainita alkyyliamiinit, esimerkiksi tri-etyyliamiini, di-isopropyylietyyliamiini, alisykliset amiinit, kuten 1,8-diatsabisyklo[5,4,0]-7-undekeeni (seuraavassa lyhennettynä DBU), N-metyylimorfoliini, epäorgaaniset emäkset, kuten natriumin ja kaliumin hydroksidi ja karbonaatti, metallialkoholaatit, kuten natrium-tert-butoksidi, natrium-metoksidi, natriumamidi, natriumhydridi ja mm. di-isopropyyli-etyyliamiinia ja DB(J:ta käytetään mieluimmin.

Tioliyhdisteiden (III) reaktiivisista johdannaisista mainittakoon yleisen kaavan (III') MS-R3 dll') mukaiset tiolaattiyhdisteet, joissa M on alkalimetalli ja substituentin R3 merkitys on määritelty yllä. Tässä substi-tuutioreaktiossa kaavan (III) mukaista tioliyhdistettä tai sen happoadditiosuolaa tai aktiivista johdannaista käytetään yleensä 1-3 ekvivalenttia suhteessa sulfoksidijohdannaiseen (II), mieluummin 1-2 ekvivalenttia. Emästä käytetään 17 8721 8 mieluummin ekvivalenttisena määränä tioliyhdisteen (III) määrän suhteen. Kun tioliyhdiste (III) on sen happoadditio-suola, erinomainen tulos saadaan käyttämällä emästä ylimääränä siten, että lisätty happo voidaan neutraloida.

Yllä olevasta substituutioreaktiosta saatava tuote voidaan eristää jonkin tavanomaisen jälkikäsittelymenetelmän mukaisesti.

(iii) Kolmas vaihe:

Jos muodostuvassa substituoidussa tuotteessa on suojaryhmä, tämä ryhmä voidaan mahdollisesti poistaa. Suojaryhmän poisto voidaan suorittaa pelkistävän hajottamisen mukaisesti hyd-raamalla, kemiallisen pelkistyksen avulla, hydrolysoimalla hapolla, emäksellä tai entsyymillä tai vastaavalla.

Kun R2 kaavassa (I) on esteritähde, etenkin p-nitrobentsyy-li, bentshydryyli, 2-naftyylimetyyli tai vastaava, suojaryhmän poisto voidaan suorittaa tehokkaasti katalyyttisen pelkistyksen avulla käyttämällä palladium-hiiltä, platinaoksi-dia tai jotain muuta tunnettua katalysaattoria kaavan (I) mukaisten penem-johdannaisten valmistamiseksi, joissa COOR2 on karboksyyliryhmä tai karboksylaattianioni. Tässä vaiheessa reaktioliuottimena voidaan käyttää dioksaania, THF:ä, vettä, puskuria tai niiden seosta, etenkin vettä sisältävää THF:ä, vettä sisältävää dioksaania, fosfaattipuskuri-THF-seosta ja reaktio suoritetaan 1-4 atmosfäärin vetypainees-sa, 0 - 50°C:n, mieluummin 10 - 30°C:n lämpötilassa 30 minuutin - 16 tunnin, etenkin 1-4 tunnin kuluessa. Jos R2 kaavassa (I) on p-nitrobentsyyliryhmä, suojaryhmän poisto suoritetaan saattamalla tuote reagoimaan ammoniumkloridin vesiliuoksen ja rautajauheen kanssa veteen liukenevassa liuottimessa, kuten THFissä, dioksaanissa, jos taas R2 on allyyliryhmä, se voidaan poistaa saattamalla tuote reagoimaan tetrakistrifenyylifosfiinipalladiumin (0), trifenyyli-fosfiinin ja 2-etyyliheksaanihapon kanssa aproottisessa liuottimessa, kuten THF:ssä, metyleenikloridissä; kun R2 on 1Θ 8721 8 2,2,2-trikloorietyyliryhmä, se voidaan poistaa myös pelkistämällä tuote sinkki jauheella ja siten voidaan valmistaa aiottu tuote, jossa COOR2 on karboksyyli tai karboksylaatti-anioni tapauksesta riippuen.

Muutamia substituutioreaktiosta (vaihe (ii )) saatavia tuotteita voi olla vaikea eristää toisistaan niiden ominaisuuksien johdosta. Tästä syystä, jos aiotaan saada yhdisteitä (I), joissa COOR2 on karboksyyli tai karboksylaattianioni, hyvä tulos voidaan saada poistamalla suojaryhmä samassa reaktorissa, jossa suoritetaan reaktio, eristämättä substituutioreaktiosta saatavaa välituotetta tai poistamalla se sen jälkeen, kun tuote on alistettu yksinkertaiseen tavanomaisesti käytettyyn jälkikäsittelyyn. Tämä on erittäin yksinkertainen menetelmä ja se tuottaa saadun tuotteen erinomaisen saannon ja laadun. Lisäksi se mahdollistaa kohdetuotteen muodostamisen suuressa mittakaavassa ilman monimutkaisia toimintoja.

Kuten yllä olevasta nähdään, kolmannesta vaiheesta saatava tuote voidaan alistaa vielä substituentin R4 liitäntään tarpeen mukaan niiden penem-johdannaisten (I) tuottamiseksi, joissa R3 on kvaternaarinen, typen sisältävä heterosyklinen ryhmä. Substituentin R4 liitäntä voidaan saada aikaan jonkin tavanomaisen menetelmän mukaisesti, esimerkiksi alkyloimalla tavanomaisilla alkylointiaineilla, kuten alemmilla alkyyli-halideilla, esimerkiksi metyylijodidilla, etyylijodidilla, bromifluorietaanilla, dimetyylisulfaatilla tai dietyylisul-faatilla, ja muiden vastaavien menetelmien mukaisesti käyttämällä esimerkiksi vastaavan substituentin R4 halidia. Lisäksi alkylointireaktion esimerkkiliuottimina mainittakoon asetoni, asetonitriili, THF, diokeaani ja niiden seokset. Kuitenkin yhdiste, jossa on substituentti R4, voidaan valmistaa jollakin muulla menetelmällä kuin kolmannella vaiheella käyttämällä raaka-ainetta HS-R3 (III), johon R4 on liitetty alustavasti.

Kun R3 kaavassa (I) on kvaternaarinen, typen sisältävä heterosyklinen ryhmä, kohdeyhdisteet voidaan saada hyvällä saan- 19 8721 8 nolla alkyloimalla vaiheen (ii) tuote ja poistamalla sitten tarpeen mukaan suojaryhmät.

Näin valmistetut kaavan (I) mukaiset kohdeyhdisteet voidaan eristää ja puhdistaa jonkin tavanomaisen menetelmän mukaisesti. S.o. tuote eristetään esimerkiksi uuttamalla ja konsentroimalla ja sitten se voidaan puhdistaa uudelleenkitey-tyksen, uudelleensaostamisen, kromatografiän avulla. Yleensä yhdisteet (I) voidaan kiteyttää niiden puhdistamiseksi. Tähän tarkoitukseen on tehokasta tai edullista muuntaa yhdiste sen suolamuotoon. Tässä tapauksessa suolan ei tarvitse olla ei-toksinen happoadditiosuola. Tuote kiteytetään ensin toksisena suolan puhdistusta varten ja happo poistetaan tai toksinen suola vaihdetaan farmaseuttisesti sopivaksi suolaksi (tämä voidaan saada aikaan vaihtamalla vastaionit kvater-näärisen ammoniumsuolan ollessa kyseessä), jolloin voidaan valmistaa erittäin puhtaita kohdeyhdisteitä.

Esterit, joiden voidaan odottaa metabolisoituvan elävässä kehossa, voidaan valmistaa menetelmän mukaisesti, jota tavallisesti käytetään penisilliinien tai kefalosporiinien es-tereiden muodostamiseksi, missä menetelmässä esteröidään yhdisteet (I), joissa substituentti COOR2 on karboksyyli tai karboksylaattianioni.

Tässä keksinnössä yleisen kaavan (III) mukaiset, jo esitetyt tioliyhdisteet ovat samoin uusia yhdisteitä ja niitä voidaan käyttää väliyhdisteinä kaavan (I) mukaisten penem-johdannaisten valmistamiseksi. Tästä syystä on selvää, että nämä väliyhdisteet kuluvat myös tämän keksinnön piiriin.

Keksintöä selitetään nyt yksityiskohtaisesti viitaten oheisiin havainnollistaviin esimerkkeihin.

Seuraavissa esimerkeissä ja vertailuesimerkeissä käytetään yksinkertaisuuden vuoksi seuraavia lyhenteitä: 20 87218 PNB: p-nitrobentsyyli PMB: p-metoksibentsyyli

Me: metyyli Et: etyyli

Ar: fenyyli

Ts: p-tolueenisulfonihappotähde BOC: tert-butoksikarbonyyli

Esimerkki 1 (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-5-pyrrolo[l,2-c]-imidatsol-7-yy-li)tio]-6-(l-hydroksietyyli)-2-penem-3-karboksyylihapon isomeerien A ja B synteesi: (1) p-nitrobentsyyli-(5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo-[1,2-c]imidatsol-7-yyli)tio]-6-(1-hydroksietyy1i)-2-penem- 3-karboksylaatin valmistus: 265 mg p-nitrobentsyyli-(5R,6S,8R)-2-etyylisulfinyyli-6-(l-hydroksietyyli)-2-penem-3-karboksylaattia liuotetaan 2 ml:aan DMP:ä ja jäähdytetään 40°C:seen. Sitten saatuun liuokseen lisätään sekoittaen 440 mg 6,7-dihydro-7-merkapto-5H-pyrrolo-[l,2-c)-imidatsoli-trifluorimetaanisulfonaattia (saatu vertailuesimerkin 1 mukaisesti), joka on 2 ml:ssa DMF:ä ja 0,54 ml:ssa di-isopropyylietyyliamiinia, ja liuosta sekoitetaan 30 minuutin ajan. Reaktioliuokseen lisätään 100 ml etyyliasetaattia ja pestään vedellä, sitten kyllästetyllä vesipitoisella natriumkloridiliuoksella, kuivataan Na2S04:n päällä ja konsentroidaan tyhjössä. Saatu jäännös puhdistetaan kromatografoimalla käyttämällä pylvästä, jossa on 10 g piihappogeeliä (eluointiaine: kloroformi/metanoli-seos, 96:4) ja otsikkoyhdiste saadaan keltaisena öljynä (saanto: 290 mg).

21 8721 8 NMR ^(CDCI3) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3) , 2,40^3,00 (1H, m), 3,00^ 3,50 (1H, m), 3,70~3,90 (1H, m, C6~H), 4,00^4,40 (3H, m), 4,70 rw 4,90 (1H, m), 5,30 (2H, ABq, J = 14 Hz, -OCH2Ar), 5,78 (1H, brs, C5-H), _, 6,96 ja 6,99 UH, s, 'Sf'S ),

yi-N

7,48 (1H, s, )r

•-N

7,57 (2H, d, J = 9 Hz, 2 x ArH), 8,15 (2H, d, J = 9 Hz, 2 x ArH) .

(2) (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-5-pyrrolo[1,2-c]imidatsol-7-yyli)tio]-6-(1-hydroksietyyli)-2-penem-3-karboksyylihapon (isomeerien A ja B) synteesi:

Vaiheessa (1) saatu yhdiste (145 mg) liuotetaan seokseen, jossa on 10 ml THF:ä ja 10 ml fosfaattipuskuria (pH 7), lisätään 150 mg 10 %:sta palladiumhiiltä ja pelkistetään ka-talyyttisesti 2 tunnin kuluessa 1 atmosfäärin vetypaineessa. Katalysaattori suodatetaan pois ja suodos ja pesuneste pestään eetterillä. Vesifaasi konsentroidaan n. 20 ml:aan ja puhdistetaan kromatografoimalla pylväällä, jossa on Diaion Ion HP-20:tä (pylvään koko: 20 x 300 mm). Vedellä eluoidut fraktiot heitetään pois ja fraktiot (UV-absorptiokaista 'Snax :ssä = 324 nm), jotka on eluoitu 5 %:sella THF-vedellä, yhdistetään ja konsentroidaan tyhjössä. Saatu konsentraatti alistetaan korkeapainenestekromatografiaan (HPLC) [kantoaine: Nucleosil 7Cig (10 x 300 mm), liuotin: 5 %:nen asetonitriili-vesi, virtausnopeus: 5 ml/min.] ja otetaan talteen otsikko-yhdisteen sisältävät fraktiot, jotka vastaavat 10 ja 13,5 minuutin retentioaikaa ja jotka tuottavat otsikkoyhdisteen vaaleankeltaisena jauheena tyhjössä suoritetun haihduttamisen ja lyofilisoinnin jälkeen.

Isomeeri A, saanto 19 mg IR (KBr-tabletti) cm"1: 1770, 1580 UV Xmax (H20): 250 (sh), 324 22 8721 a NMR ^(D20) ppm: 1,39 (3H, d, J = 6Hz, -CH3) , 2,6^ 3,05 (1H, m), 3,1 3,6 (1H, m), 4,04 (1H, dd, J = 2, 6 Hz, C6-H), 4,19^4,63 (3H, m) , 4,80 (HOD), 4,99^5,17 (1H, m) , 5.81 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,44 (1H, s, imidatsoli-H), 8,61 (1H, s, imidatsoli-H) HPLC (retentioaika): 10 min.

Isomeeri B, saanto 22 mg IR (KBr-tabletti) cm"!: 1770, 1580 uv ^max <H20) nm: 258, 324 NMR ^(D20) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3) , 2,60 ^3,00 (1H, m), 3,05 ^ 3,51 (1H, m), 4,02 (lH, dd, J = 2, 6 Hz, C6-H), 4,17 4,63 (3H, m) , 4,80 (HOD), 4,97^5,13 (1H, m) , 5.81 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,48 (lH, s, imidatsoli-H), 8,63 (lH, s, imidatsoli-H) HPLC (retentioaika): 13,5 min.

Esimerkki 2 (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-2-metyyli-5H-pyrrolo[l,2-c]imi-datsolium-7-yyli)tio]-6-(1-hydroksietyyli)-2-penem-3-karbok-sylaatin (isomeerin A ja B) synteesi: 0 COaPNB N 0 CO? 8 CHa

Esimerkin 1 vaiheessa (1) saatu yhdiste (145 mg) liuotetaan THF:n (3 ml) ja asetonin (10 ml) seokseen, liuokseen lisätään 0,37 ml metyylijodidia ja annetaan seistä 5°C:ssa 30 tunnin ajan. Reaktioliuos haihdutetaan alennetussa paineessa ja jäännös pestään eetterillä ja kuivataan. Saatu jauhe liuotetaan sekaliuottimeen, jossa on THF:ä (10 ml) ja vettä (10 ml), sitten lisätään sekoittaen jää jäähdytyksessä 2,5 g ammoniumkloridia ja 1,24 g rautajauhetta (silmäkoko 100) ja sekoitetaan voimakkaasti tunnin ajan tässä lämpötilassa. Liuokenematon suodatetaan pois ja suodos pestään etyyli- 23 8721 8 asetaatilla. Vesifaasi haihdutetaan n. 20 ml:aan ja puhdistetaan kromatografoimalla käyttämällä pylvästä, jossa on Diaion HP-20:tä (20 x 400 mm). Fraktion poistamisen jälkeen, joka eluoitiin 150 ml:11a vettä, fraktiot, jotka eluoitiin 5 %:sella THF-vedellä, otetaan talteen, konsentroidaan alennetussa paineessa, alistetaan HPLC-kromatografointiin (kantoaine: Nucleosil 7Ci8 (10 x 300 mm), liuotin: 7 %:nen asetonitriili-vesi, virtausnopeus: 4 ml/min.) ja otetaan talteen fraktiot, joiden retentioaika on 11 ja vastaavasti 13,5 min. ja jotka sisältävät kohdeyhdisteet. Näin saadaan yllä mainittu yhdiste vaaleankeltaisena jauheena tyhjössä suoritetun haihdutuksen ja lyofilisoinnin jälkeen.

Isomeeri A: saanto 14 mg IR (KBr-tabletti) cm-1: 1760, 1580 UV Amax (H2O) nm: 250 (sh), 325 NMR <S(D20) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3), 2,63^3,02 (1H, m), 3,08 ^3,55 (1H, m), 3,96 (3H, s, -NCH3) , 4,04 (1H, dd, J = 2, 6 Hz, C6-H), 4,16 4,60 (3H, m), 4,80 (HOD), 4,96 00 5,13 (1H, m), 5,79 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,47 (1H, 3, imidatsoli-H), 8,70 (1H, s, imidatsoli-H) HPLC (retentioaika): 11 min.

Isomeeri B: saanto 17 mg IR (KBr-tabletti) cm-1: 1760, 1595 UV Amax <H20) nm: 260, 325 NMR & (D20) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3) , 2,55^2,90 (1H, m), 3,00 ^ 3,50 (1H, m), 3,96 (3H, s, -NCH3), 4,02 (1H, dd, J = 2, 6 Hz, C6-H), 4,16 - 4,60 (3H, m), 4,80 (HOD), 4,95oo5,12 (1H, m), 5,80 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,51 (1H, s, imidatsoli-H), 8,70 (1H, s, imidatsoli-H) HPLC (retentioaika): 13,5 min.

24 8721 8

Esimerkki 3 (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-2-(2-oksopropyyli)-5H-pyrrolo-[1,2-c]imidatsolium-7-yyli)tio]-6-(1-hydroksietyyli)-2-pe-nem-3-karboksylaatin (isomeerin A ja B) synteesi: X, S YK? aJ-N-^ -> a>-N-^ 0 COaPNB u C02

Esimerkin 1 vaiheessa (1) saatu tuote (200 mg) liuotetaan asetoniin (15 ml) ja sekoitetaan 4 tunnin ajan sen jälkeen, kun on lisätty 0,69 ml bromiasetonia. Liuottimen haihduttamisen jälkeen saatu jäännös pestään eetterillä ja kuivataan. Saatu kiintoaine liuotetaan 25 ml:aan 50%:sta THF-vesi-seos-ta, lisätään 3,6 g ammoniumkloridia ja 1,8 g rautajauhetta ja sekoitetaan 1,5 tunnin ajan jääjäähdytyksessä. Liuos haihdutetaan n. 5 ml:aan alennetussa paineessa sen jälkeen, kun liukenemattomat aineet on poistettu suodattamalla. Kon-sentraatti johdetaan pylvään läpi, jossa on Diaion HP-20:tä (jota valmistaa ja myy Mitsubishi Chemical Industries Ltd.) ja fraktio, joka eluoitiin 5 %:sella THF-vedellä, puhdistetaan vielä HPLC:llä, jolloin saadaan otsikkoyhdiste.

HLPC:n olosuhteet: kantoaine: Nucleosil 7Ci8 x 300 mm) virtausnopeus: 3,65 ml/min. liuotin: 7%:nen asetonitriili-vesi

Isomeeri A: saanto 45 mg IR (KBr-tabletti) cm-1: 3410, 2940, 1770, 1590, 1360 UV ^max <H20): 248 (sh), 325 NMR &(D20) ppm: 1,33 (3H, d, J = 6,6 Hz, -CH3), 2,36 (3H, s), 2,6 ru3,Q (1H, m), 3,0^3,6 (1H, m), 3,99 (1H, dd, J = 1,4 Hz, 6,1 Hz, Cfi-H), 4,29 ( 1H, t, .) = 6,1 Hz, Cg-H), 4,3^ 25 8721 8 4,8 (2H, m), 4,74 (DOH), 4,3^5,1 (1H, m), 5,35 (2H, s), 5.73 (lH, d, J = 1,4 Hz, C5-H), 7,37 (1H, s, sivuketju C^-H), 8,67 (1H, s, sivuketju C3-H) HPLC (retentioaika): 19 min.

Isomeeri B: saanto 54 mg IR (KBr-tabletti) cm"1: 3400, 2960, 1765, 1590, 1360 UV Ämax (H20) nm: 259 (sh), 324 NMR £ (D20) ppm: 1,33 (3H, d, J = 6,3 Hz, -CH3), 2,37 (3H, s), 2,5 f\j 2,9 (1H, m), 2,9/\j 3,5 (lH, m), 3,97 (1H, dd, J = 1,4 Hz, 6,1 Hz, C6-H), 4,29 (lH, t, J = 6,1 Hz, Cg-H), 4,3 4,7 (2H, m), 4,74 (DOH), 4,9 5,3 (lH, m), 5,36 (2H, s), 5.73 (lH, d, J = 1,4 Hz), 7,41 (1H, s, sivuketju C]_-H), 8,69 (1H, s, sivuketju C3-H), HPLC (retentioaika): 24 min.

Esimerkki 4 (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-2-syklopropyylikarbinyyli)-5H-pyrrolof1,2-c]imidatsolium-7-yyli)tio]-6-(1-hydroksietyyli)- 2-penem-3-karboksylaatin (isomeerin A ja B) synteesi:

Vr^ N-^ —* n>-N-k q 0 CO2PNB 0 CO2

Esimerkin 1-(1) mukaisesti saatu saatu tuote (195 mg) liuotetaan asetoniin (15 ml). Liuokseen lisätään 1,45 g syklo-propyylikarbonyylijodidia (ks. j. Am. Chem. Soc., 1962, 86, 2247) ja sekoitetaan 24 tunnin ajan, sitten lisätään 0,73 g syklopropyylikarbinyylijodidia ja sekoitetaan 24 tunnin ajan. Sen jälkeen kun liuotin on suodatettu pois, jäännös pestään eetterillä ja kuivataan. Saatu kiintoaine liuotetaan 25 ml:aan THF-vesi-seosta ja lisätään 3,5 g ammoniumkloridia ja 1,7 g rautajauhetta ja sekoitetaan 1,5 tunnin ajan jää- 8721a 26 jäähdytyksessä. Liuos konsentroidaan n. 5 ml:aan alennetussa paineessa sen jälkeen, kun liukenemattomat aineet on suodatettu pois. Konsentraatti johdetaan pylvään läpi, jossa on Diaion HP-20:tä ja fraktio, joka on eluoitu 5 %:sella THF-vedellä, puhdistetaan edelleen HPLC:llä (kantoaine: Nucleo-sil 7Ciq» liuotin: 10 %:nen asetonitriili, virtausnopeus: 4,75 ml/min.), jolloin saadaan 92 mg otsikkoyhdistettä.

IR (KBr-tabletti) cm-1: 3360, 3110, 2950, 1765, 1580, 1440, 1350, 1280, 1120 UV r^max <H20> nm: 250 <sh>f 325 NMR % (D2O) ppm: 0,3^0,6 (2H, m), 0,6/^1,0 (2H, m), 1,2^ 1,5 (1H, m), 1,33 (3H, d, J = 6,3 Hz, -CH3), 2,4^3,0 (1H, m), 3,0 rN-7 3,5 (1H, m), 3,98 (1H, d, J = 6,1 Hz, Cg-H), 4,07 (2H, d, J = 7,4 Hz), 4,3 4,7 (2H, m), 4,74 (DOH) , 4,9^ 5,2 (1H, m), 5,73 (1H, brs, C5-H), 7,52 <0,5H, s, sivuketju-Ci~H), 7,56 (0,5H, s, sivuketju-C^-H), 8,76 (1H, s, sivuket-ju-C3-H) HPLC (retentioaika): 20 min.

Esimerkki 5 (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2-[(2-syanometyyli-6,7-di-hydro-5H-pyrrolo[1,2-c]imidatsolium-7-yyli)tio]-2-penem-3-karboksylaatin (isomeerin A ja B) synteesi:

Γο> rON

J-H ^COjPNB J-J-L θ U 2 0^^ ^C02

Esimerkin 3 toimenpiteet suoritetaan sillä erotuksella, että lisätään 20 ekvivalenttia bromiasetonitriiliä bromiasetonin sijasta 0 - 5°C:ssa ja reaktiota jatketaan 20 tunnin ajan ja näin saadaan yllä mainitut otsikkoyhdisteet samanlaisen jälkikäsittelyn jälkeen, jossa HLPC-olosuhteet olivat seuraa-vat: 27 8721 8

Jcantoaine: Nucleosil 7Ciq (10' x 300 mm) liuotin: 7 %:nen asetonitriili-vesi virtausnopeus: 5 ml/min.

Isomeeri A: saanto 39 % IR (KBr-tabletti) cm"l; 1765, 1590 NMR £(D20) ppm: 2,67 3,05 ja 3,13 aj 3,50 (1H, m, -CH2CH2N^), 4,07 (1H, dd, J = 2, 6 Hz, C6“H), 4,10^4,70 (3H, m, Ce-H, -CH2-#Of 4'80 (HOD), 5,02^5,20 (1H, m, -S-CHCH2-), 5,56 (2H, s, -CH2CN), 5,81 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,75 (1H, s, imidatsolirengas-H), 9,07 (1H, s, imidatsolirengas-H ) HPLC (retentioaika): 9 min.

Isomeeri B: saanto 43 % IR (KBr-tabletti) cm“l; 1765, 1595 NMR S(D20) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3), 2,542,95 ja 3,04 ^3,52 (1H, m, -CH2CH2N®=) , 4,04 (1H, dd, J = 2, 6 Hz, C6"H), 4,20 4,70 (3H, m, Cg-H, -CH2N®^), 4,80 (HOD), 5,00 - 5,18 (1H, m, -S-CHCH2-), 5,56 (2H, s, -CH2CN), 5,82 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,79 (1H, s, imidatsolirengas-H), 9,07 (1H, s, imidatsolirengas-H) HPLC (retentioaika): 11,5 min.

Esimerkki 6

Natrium-(5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2-[(2-karboksylaat-timetyyli-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-c]imidatsolium-7-yyli)-tio]-2-penem-3-karboksylaatin (isomeerin A ja B) synteesi:

qJ-H vCaPNB ΓΊ_JT

2 o^n—vcoe

Esimerkissä 3 esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti sillä 28 87218 erotuksella, että lisätään 5 ekvivalenttia bromietikkahapon p-nitrobentsyyliesteriä 10°C:ssa bromiasetonin sijasta, ja reaktiota jatketaan 3 päivän ajan, saadaan yllä mainitut yhdisteet samanlaisen jälkikäsittelyn jälkeen, jossa HLPC:n olosuhteet olivat seuraavat: kantoaine: Nucleosil 7Cig (10 x 300 mm) liuotin: 5 %:nen metanoli-vesi virtausnopeus: 5 ml/min.

Isomeeri A: saanto 19 % UV '\nax (H20) nm: 250 (sh), 325 NMR E(D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH3) , 2,60 rxJ 3,04 ja 3,68^3,58 (1H, m, -CH2CH2N®0, 4,05 (1H, dd, J = 2,6 Hz, C6"H), 4,16^4,64 (3H, m, Cg-H, -CH2N®^>, 4,80 (HOD), 4,88 (2H, s, -CH2C02®), 5,00 ro 5,20 (1H, m, -S-CH-CH2-), 5,80 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,50 (1H, s, imidatsolirengas-H), 8,77 (1H, s, imidatsolirengas-H) HPLC (retentioaika): 7,5 min.

Isomeeri B: saanto 20 % UV Xmax (H20) nm: 255 (sh), 325 NMR ^(D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3), 2,56 ^>2,94 ja 3,05 ^3,50 (1H, m, -CH2CH2t#^) , 4,03 (1H, dd, J = 2, 6 Hz, C6-H), 4,16^4,64 (3H, m, Cg-H, -CH2N®=), 4,80 (HOD), 4,88 (2H, s, -CH2C02e), 4,99 ro 5,18 (1H, m, -S-CHCH2-), 5,80 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,55 (1H, s, imidatsolirengas-H), 8,77 (1H, s, imidatsolirengas-H) HPLC (retentioaika): 8,5 min.

Esimerkki 7: (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2-f(2-allyyli-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-c]imidatsolium-7-yyli)-tio]-2-penem-3-kar-boksylaatin (isomeerin A ja B seoksen) synteesi: 8721« 29 -Vy^. Vr^ 0 COzPNB QJ-n-KCQe

Esimerkissä 3 esitetyt toimenpiteet toistetaan sillä erotuksella, että lisätään 20 ekvivalenttia aryylibromidia bromia-setonin sijasta 0 - 5°C:ssa ja että reaktio suoritetaan 20 tunnin kuluessa, joilloin saadaan yllä mainittu yhdiste samanlaisen jälkikäsittelyn jälkeen, jossa HLPC:n olosuhteet olivat seuraavat: kantoaine: Nucleosil 7C^g (10 x 300 mm) liuotin: 10 %:nen asetonitriili-vesi virtausnopeus: 6 ml/min.

Isomeerien A ja B seos: saanto 34 % UV \nax (H20): 253 (sh), 324 NMR %(D20) ppm: 1,32 (3H, d, J = 6Hz, -CH3) , 2,50 ^ 3,00 ja 3,00 3,50 (1H, m, -CH2CH^) , 3,90 ckJ 4,05 (1H, m, Cg-H), 4,10 4,60 (3H, m, C8-H, -CH2N®^) , 4,80 (HOD) , 4,80^4,96 (2H, -CH2CH=CH2), 4,96^5,14 (1H, m, -SCHCH2-), 5,20f\J5,60 (2H, m, -CH2CH=CH2), 5,77 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 5,84 λ-> 6,36 (1H, m, -CH2CH=CH2), 7,51 ja 7,56 (1/2H, s, imidatsoli-rengas-H), 8,79 (1H, s, imidatsolirengas-H) HPLC (retentioaika): 9,7 ja 10,2 min.

Esimerkki 8: (5R,6S,8R)-6-(l-hydroksietyyli)-2-[6,7-dihydro-2-propargyy-li-5H-pyrrolo[1,2-c]imidatsolium-7-yyli)tio]-2-penem-3-kar-boksylaatin (isomeerin A ja B) synteesi: 30 8721 «

Ψ s JL S

>wsys\j A-^yS-O

o^"N co2pnb oXN^co?

Esimerkin 3 toimenpiteet suoritetaan sillä erotuksella, että lisätään 20 ekvivalenttia propargyylibromidia bromiasetonin ja reaktio suoritetaan 17 tunnin kuluessa huoneenlämpötilassa, jolloin saadaan yllä mainitut yhdisteet samanlaisen jälkikäsittelyn jälkeen, jossa HLPC-olosuhteet olivat seuraa-vat: kantoaine: Nucleosil 7Cig (10 x 300 mm) liuotin: 10 %:nen asetonitriili-vesi virtausnopeus: 6 ml/min.

Isomeeri A: saanto 20 % UV ^max (H20) nm: 250 (sh), 324 NMR &(D20) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,68rv3,05 ja 3,10^3,58 (3H, m, -CH2CH2N®^, -C=CH), 4,06 (1H, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,16 4,65 (3H, m, C8-H, -CH2C=CH) , 5,80 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,68 (1H, s, imidatsolirengas-H), 8,96 (1H, s, imidatsolirengas-H) HPLC (retentioaika): 7,6 min.

Isomeeri B: saanto 23 % UV A max (H20) nm: 25 7 , 324 NMR % (D20) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, Cg-H), 2,57rv3,00 ja 3,00^3,53 (3H, m, -CH2CH2N®^, -C=CH), 4,04 (1H, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H) , 4,20(^4,70 (3H, m, Cg-H, -CH2N^) , 4,80 (HOD), 5,00 rv 5,25 (3H, m, -S-CHCH2-, -CH2c=CH), 5,82 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,71 (1H, s, imidatsolirengas-H), 8,97 (1H, s, imidatsolirengas-H) HPLC (retentioaika): 8,6 min.

31 8721 8

Esimerkki 9: (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-2-(metoksikarbonyylimetyyli)-5H-pyrrolo 11,2-c]imidatsolium-7-yyli)-tio]-6-(1-hydroksietyyli )-2-penem-3-karboksylaatin (isomeerin A ja B) synteesi: vA/' 0^ COzPNB 0 COz

Esimerkin 1-(1) mukaan saatu tuote (150 mg) liuotetaan asetoniin (12 ml), lisätään 0,57 ml metyylibromiasetaattia ja sekoitetaan 96 tunnin ajan. Liuottimen haihduttamisen jälkeen saatava jäännös pestään eetterillä ja kuivataan. Saatu kiintoaine liuotetaan 50 %:seen THF-veteen, lisätään 3,1 g ammoniumkloridia ja 1,6 g rautajauhetta ja sekoitetaan 2 tunnin ajan jää jäähdytyksessä. Liukenemattomat aineet poistetaan suodattamalla, minkä jälkeen suodos konsentroidaan n. 5 ml:aan. Konsentraatti johdetaan ensin pylvään läpi, jossa on Diaion HP-20:tä ja sitten fraktio, joka on eluoitu 5 %:sella THF-vedellä, puhdistetaan HPLC:llä otsikkoyhdis-teen valmistamiseksi. HPLC:n olosuhteet olivat seuraavat: kantoaine: Nucleosil 7Ciq (10 x 300 mm) liuotin: 10 %:nen asetonitriili-vesi virtausnopeus: 3,65 ml/min.

Isomeeri A: saanto 7 mg IR (KBr-tabletti) cm-·*·: 3400, 1760, 1580, 1360 UV Ä-max (h20) nm: 248 322 NMR S (D2O) ppm: 1,43 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3 ) , 2,5r\J3,0 (1H, m), 3,0^3,6 (1H, m), 3,86 (3H, s, -COOCH3) , 3,95 (1H, dd, J = 6 Hz, Cg-H), 4,29 (1H, t, J = 6 Hz, C8-H), 4,3^ 4,7 (2H, m), 4,74 (DOH), 4,9^5,2 (1H, m), 5,20 (2H, s), 5,83 (1H, brs, C5-H), 7,56 (1H, s, sivuketju-Ci-H), 8,81 (1H, s, sivuketju-C3-H) HPLC (retentioaika): 9 min.

32 8721 H

Isomeeri B: saanto 14 mg IR (KBr-tabletti) cm-1: 3400, 1760, 1590, 1370 UV \max (H20) nm: 259 (sh), 325 NMR %(D20) ppm: 1,33 (3H, d, J = 6,3 Hz, -CH3), 2,4^3,0 (1H, m), 3,0 ^ 3,5 (1H, m), 3,86 (3H, s, -COOCH3), 3,96 (1H, d, J = 6,3 Hz, Cg-H) , 4,29 (1H, t, J = 6,3 Hz, C8“H), 4,4 4,7 (2H, m), 4,74 (DOH), 4,9^»5,2 (1H, m), 5,20 (2H, s), 5,73 (1H, brs, C5-H), 7,55 (1H, s, sivuketju-C^-H), 8,81 (1H, s, sivuketju-C3~H) HPLC (retentioaika): 16 min.

Esimerkki 10: (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-2-(karbamoyylimetyyli)-5H-pyrro-lo[1,2-c]imidatsolium-7-yyli)tio]-6-(1-hydroksietyyli)-2-pe-nem-3-karboksylaatin (isomeerin A ja B) synteesi: /—-n— NH2

Vv^Vr·^ —N ^ N 0 0 CO2PNB 0 C02

Esimerkissä 1-(1) esitetyn menetelmän mukaisesti valmistettu penem-johdannainen (196 mg) liuotetaan asetoniin (15 ml), lisätään jodiasetamidia (1,48 g) ja sekoitetaan 23 tunnin ajan. Liuotin poistetaan tyhjössä ja saatava jäännös pestään eetterillä ja kuivataan. Saatu kiintoaine liuotetaan 50 %:seen THF-vesi-seokseen (25 ml), johon lisätään ammo-niumkloridia (3,6 g) ja rautajauhetta (1,8 g) ja sekoitetaan 1,5 tunnin ajan jää jäähdytyksessä. Sen jälkeen kun liukenemattomat aineet on poistettu reaktioliuoksesta suodattamalla, saatava suodos kondensoidaan 5 ml:aan ja johdetaan pylvään läpi, jossa on Diaion HP-20:tä. Yhdistetyt fraktiot, jotka eluoidaan 5 %:sella THF-vedellä, puhdistetaan vielä HPLC:llä, joka suoritetaan seuraavissa olosuhteissa: kantoaine: Nucleosil 7C\g (10 x 300 mm) 33 8721 8 liuotin: 7 %:nen asetonitriili-vesi virtausnopeus: 3,65 ml/min.

Näin saadaan kohdeisomeerit.

Isomeeri A: saanto 45 mg IR (KBr-tabletti) cm-1: 3380, 1760, 1680, 1580, 1360, 1290, 1120 uv ^max (H20): 248 (sh), 326 NMR ^ (D20) ppm: 1,31 (3H, d, J = 6,4 Hz, -CH3), 2,5 nj 3,0 (1H, m), 3,0 r^3,6 (1H, m), 3,99 (1H, dd, J = 1,3 Hz, 5,9 Hz, C6-H), 4,1^ 4,6 (2H, m), 4,26 (1H, t, J = 5,9 Hz, C8-H),

4,74 (DOH) , 4,9 5,2 (1H, m), 5,08 (2H, s), 5,72 (1H, d, J

= 1,3 Hz, C5-H), 7,46 (1H, s, sivuketju C^-H), 8,77 (1H, s, sivuketju C3-H) HPLC (retentioaika): 11 min.

Isomeeri B: saanto 57 mg IR (KBr-tabletti) cm-1: 3380, 1765, 1695, 1590, 1370, 1295, 1130 UV Amax (H20) nm: 256 (sh), 324 NMR & (D20) ppm: 1,30 (3H, d, J = 6,4 Hz, -CH3), 2,4 r\J 2,9 (1H, m), 2,9 r\j 3,5 (1H, m), 3,95 (1H, dd, J = 1,5 Hz, 5,9 Hz, Cg-H), 4,1/V4,6 (2H, m), 4,26 (1H, t, J = 5,9 Hz.

C8-H), 4,74 (DOH), 4,9^5,2 (1H, m), 5,09 (2H, s), 5,71 (1H, d, J = 1,5 Hz, C5-H), 7,50 (1H, s, sivuketju Οχ-Η), 8,78 (1H, s, sivuketju C3-H), HPLC (retentioaika): 16 min.

Esimerkki 11: (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-2-bentsyyli-5H-pyrrolo[1,2-c]imi-datsolium-7-yyli)tio]-6-(1-hydroks ietyyli)-2-penem-3-karbok-sylaatin (isomeerin A ja B seoksen)synteesi: „ 87213 34 Λ-fY^ ηχ—N-^ ^ θ 0 COaPNB ϋ C02

Esimerkin 3 toimenpiteiden mukaisesti sillä erotuksella, että lisätään 20 ekvivalenttia bentsyylibromidia bromiaseto-nin sijasta ja että reaktio suoritetaan 18 tunnin kuluessa, saadaan otsikkoyhdiste (saanto 60 %) samanlaisen jälkikäsittelyn jälkeen, jossa HLPC-olosuhteet oivat seuraavat: kantoaine: Nucleosil 7Ciq (10 x 300 mm) liuotin: 15 %:nen asetonitriili-vesi virtausnopeus: 5,9 ml/min.

IR (KBr-tabletti) cm-1: 3420, 1770, 1590, 1450, 1360, 1285 UV \vax (H20) nm: 253 (sh), 325 NMR % (D2O) ppm: 1,31 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,5^3,0 (1H, m), 3,0 ^3,5 (1H, m), 3,75 ja 3,89 (0,5H, d, J = 5,9 Hz, C6“H), 4,11^1 4,6 (3H, m, Cq-H, sivuketju-C5~H), 4,74 (DOH), 4,9 5,1 (1H, m), 5,41 (2H, s), 5,49 ja 5,60 (0,5H, brs, C5-H), 7,48 (6H, brs, sivuketju-C^-H, Ar-H), 8,78 ja 8,82 (0,5H, 3, sivuketju-C3~H) HPLC (retentioaika): 16 min. (isomeeri A) 17 min. (isomeeri B) 35 8721 8

Esimerkki 12a; (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-etyyli-5H-pyrrolo[1,2-c]imidat-solium-7-yyli)-tio]-6-(1-hydroksietyyli)-2-penem-3-karbok-sylaatin (isomeerin A ja B) synteesi:

Vr^Vjs-5 N ^ —N-θ U COaPNB 0 C0f p-nitrobentsyyli-(5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2- c]imidatsol-7-yyli)tio]-6-(1-hydorksietyyli)-2-penem-3-kar-boksylaattia (161 mg) liuotetaan asetoniin (15 ml) ja tämän jälkeen lisätään 0,53 ml etyylijodidia kolme kertaa joka 24. tunti, sitten sekoitetaan 48 tunnin ajan. Liuotin tislataan pois ja sitten saatu jäännös pestään eetterillä ja kuivataan. Saatu kiintoaine liuotetaan 25 ml:aan 50 %:sta THF-vesi-seosta, lisätään 3,2 g ammoniumkloridia ja 1,6 g rauta-jauhetta ja sekoitetaan 70 minuutin ajan jää jäähdytyksessä. Liukenemattomat aineet suodatetaan pois ja suodos haihdutetaan n. 5 ml:aan alennetussa paineessa. Konsentraatti johdetaan pylvään läpi, jossa on Diaion HP-20:tä ja 5 %:sella THF-vedellä eluoidut fraktiot puhdistetaan vielä HPLC:llä seu-raavissa olosuhteissa: kantoaine: Nucleosil 7C]^g (10 x 300 mm) liuotin: 10 %:nen asetonitriili-vesi virtausnopeus: 3,65 ml/min.

ja näin saadaan otsikkoyhdisteet (isomeeri A ja B):

Isomeeri A: saanto 32 mg IR (KBr-tabletti) cm'1: 3400, 1765, 1580, 1445, 1360, 1280, 1120 UV ^max (H20): 248 (sh), 324 NMR <S (&20) PPm: 1*34 ( 311, d, ,! = 6,1 Hz, -CH3), 1,52 ( 3H, t, J = 7,2 Hz), 2,6^3,0 (1H, m), 3,0 rxj 3,5 (1H, m), 4,00 (1H, 36 8721 8 d, J = 5,9 Hz, C6-H), 4,1 rvj 4,7 (3H, m), 4,26 (2H, q, J = 7.2 Hz), 4,74 (DOH), 4,9 ru 5,1 (1H, s, sivuketju C5-H), 5,75 (1 H, s, C5-H), 7,50 (1H, s, sivuketju-Ci-H), 8,71 (1H, s, sivuketju C3-H) HPLC (retentioaika): 13 min.

Isomeeri B: saanto 44 mg IR (KBr-tabletti) cm-1: 3420, 1765, 1590, 1440, 1360, 1285, 1120 UV λ-max (H20) nm: 258 (sh), 324 NMR % (D20) ppm: 1,33 (3H, d, J = 6,4 Hz, -CH3), 1,52 (3H, t, J = 7,2 Hz), 2,5r\->2,9 (1H, m), 2,9^3,5 (1H, m) , 3,97 (1H, d, J = 5,9 Hz, C6-H), 4,1^ 4,7 (3H, m) , 4,26 (2H, q, J = 7.2 Hz), 4,74 (DOH), 4,9^5,1 (1H, m) , 5,77 (1H, s, C5-H) , 7,54 (1H, s, sivuketju Ci-H), 8,71 (1H, s, sivuketju C3-H), HPLC (retentioaika): 15 min.

Esimerkki 12b: (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-2-(3-metoksikarbonyyli-2-oksopro-pyyli)-5H-pyrrolo[1,2-c]imidatsolium-7-yyli)tio]-6-(1-hyd-roksietyyli)-2-penem-3-karboksylaatin (isomeerin A ja B) synteesi: °H OH /-

Ys^yN. Vs V \ J-n—l lo> 0J-n—kθ L®>

0 COsPNB^N 0 CO? ,N

C^COCHjCO^e

Esimerkin 3 mukaisesti sillä erotuksella, että käytetään 10 ekvivalenttia metyylibromiasetoasetaattia bromiasetonin sijasta ja reaKtio suoritetaan huoneenlämpötilassa 5 tunnin kuluessa, saadaan otsikkoyhdiste esimerkin 1—(2) mukaisen jälkikäsittelyn jälkeen, jossa HLPC suoritetaan seuraavissa olosuhteissa: kantoaine: Nucleosil 7C^8 (10 x 300 mm) 37 8721 8 liuotin: 10 %:nen asetonitriili-vesi virtausnopeus: 6 ml/min.

Isomeeri A: saanto 10 % UV ^max (H20) nm: 250 (sh), 325 NMR δ (D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6Hz, -CH3), 2,6^3,10 ja 3,10^3,65 (2H, m, -CH2CH2N®^) , 3,83 ja 3,86 (3H, s, C02CH3), 3,96(^4,10 (1H, m, Cg-H), 4,17ixj4,70 (3H, m), 4,80 (HOD), 5,80 (1H, brs, C5-H), 7,44 ja 7,56 (1H, s, imidatsolirengas-H), 8,76 ja 8,82 (1H, s, imidatsolirengas-H) HPLC (retentioaika): 14,5 min.

Isomeeri B: saanto 12 % UV ^max (H20) nm: 255 (sh), 324 NMR S(D20) ppm: 1,39 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3) , 2,60r\J3,00 ja 3,10 ^ 3,60 (1H, m, -CH2CH2N^i.) , 3,85 ja 3,88 (3H, s, C02CH3), 3,95 4,10 (1H, m, Cg-H), 4,80 (HOD), 5,76 5,84 (1H, m, C5-H), 7,48 ja 7,64 (1H, s, imidatsolirengas-H) HPLC (retentioaika): 18,8 min.

Esimerkki 12c: (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-2-(4-fluoribentsyyli)-5-pyrrolo-[1,2-c]imidatsolium-7-yyli)-tio]-6-hydroksietyyli)-2-penem- 3-karboksylaatin ((isomeerin A ja B seoksen) synteesi:

Esimerkissä 3 esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti sillä erotuksella, että käytetään 10 ekvivalenttia 4-fluoribent-syylibromidia bromiasetonin sijasta ja että reaktio suoritetaan huoneenlämpötilassa 217 tunnin kuluessa, saadaan otsik-

8721 B

38 koyhdiste esimerkin 1-(2) mukaisen jälkikäsittelyn jälkeen, jossa HLPC:n olosuhteet ovat seuraavat: kantoaine: Nucleosil 7C].8 (10 x 300 mm) liuotin: 20 %:nen asetonitriili-vesi virtausnopeus: 6 ml/min.

Isomeerien A ja B seos: saanto 43 % UV Ämax (H20) nm: 255 (sh), 324 NMR S (D20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,52^2,97 ja 3,08 f'-' 3,52 (2H, m, -CH2CH2tf%) , 3,82 ja 3,96 (1H, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H) , 4,20 iNJ 4,75 (3H, m), 4,80 (HOD) , 4,92^5,12 (1H, m), 5,44 (2H, s, -CH2Ar), 5,55 ja 5,65 (1H, s, C5-H), 7,12^7,64 (5H, m, 4 x ArH, imidatsolirengas-H), 8,82 ja 8,85 (1H, s, imidatsolirengas-H) HPLC (retentioaika): 14,5 ja 15 min.

Esimerkki 13: (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-metyyli-5H-pyrrolo[1,2-c1-1,2,4-triatsolium-7-yyli)-tio]—6 —(1-hydroksietyyli)-2-penem-3-kar-boksylaatin (isomeerin A ja B ja isomeerien C ja D seoksen) synteesi:

OH 0 OH OH

(1) (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-5-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4-triat-sol-7-yyli)tio]—6—(1-hydroksietyyli)-2-penem-3-karboksyyli-hapon p-nitrobentsyyliesterin synteesi:

Alla vertailuesimerkissä 1 esitetyllä menetelmällä saatu tiolijohdannainen (361 mg) käsitellään esimerkin 1—(1) menetelmien mukaisesti yllä mainitun otsikkoyhdisteen muodostamiseksi (saanto: 207 mg).

NMRS^O) ppm: 1,40 (3H, d, J = 6Hz, -CH3) , 2,5/^3,0 (1H, m, pyrrolirengas Cg-H), 3,0 rw3,6 (1H, m, pyrrolirengas 39 87218

Cg-H), 3,6<νι4,5 (4H, m, pyrrolirengas C5-H2, Cg-H ja Cg-H), 4,85 (1H, dd, J = 8, 4 Hz, pyrrolirengas C7-H), 5,25 ja 5,39 (1H, ABq, J = 14 Hz, C02H2Ar), 5,31 ja 5,43 (1H, ABq, J = 14 Hz, C02CH2Ar), 7,63 ja 7,65 (1H, d, J = 9 Hz, ArH), 8,20 (1H, s, triatsolirengas C3-H), 8,22 ja 8,24 (1H, d, J = 9 Hz, ArH).

(2) (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-metyyli-5H-pyrrolo[2,1-c]- l, 2,4-triatsolium-7-yyli)tio]-6-(1-hydroksietyyli)-2-penem- 3-karboksylaatin (isomeerin A ja B ja isomeerien C ja D seoksen ) syntees i:

Yllä vaiheessa (1) saatu yhdiste (340 mg) käsitellään esimerkissä 2 esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti, jolloin saadaan kohdeyhdisteet. Puhdistus suoritetaan HLPC:n mukaisesti seuraavissa olosuhteissa: kantoaine: Nucleosil 7Cig (10 x 300 mm) liuotin: 5 %:nen asetonitriili-vesi virtausnopeus: 3,65 ml/min.

Isomeeri A: saanto 8 mg IR (KBr-tabletti) cm-3: 1775, 1600 UV \max <h20) nm: 257» 327 NMR δ (D20) ppm: 1,33 (3H, d, J = 6Hz, -CH3), 2,9 ^>3,3 (1H, pyrrolirengas Cg-H), 3,3 3,9 (1H, m, pyrrolirengas Cg-H), 4,04 (1H, dd, J = 6, 2 Hz, Cg-H), 4,16 (3H, s, NCH3), 4,1^ 4,7 (3H, m, pyrrolirengas C5-H2 ja Cg-H), 5,18 (1H, dd, J = 10, 5 Hz, pyrrolirengas C7-H), 5,76 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 8,80 (1H, s, triatsolirengas C3-H) HLPC (retentioaika): 12,1 min.

Isomeeri B: saanto 20 mg IR (KBr-tablettti) cm-l; 1775, igoo UV λmax (H20) nm: 261, 328 NMR S (D2O) ppm: 1,33 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3) , 2,9 aj3,3 (1H, m, pyrrolirengas Cg-H), 3,3 ro 3,9 (1H, m, pyrrolirengas 40 8721 8

Cg-H), 4,04 UH, dd, J = 6, 2 Hz, Cg-H), 4,18 (3H, s, NCH3), 4,1^4,7 (3H, m, pyrrolirengas C5-H2 ja Cg-H), 5,18 (1H, dd, J = 10, 5 Hz, pyrrolirengas C7-H), 5,76 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 8,80 UH, s, triatsolirengas C3-H), HPLC (retentioaika): 13,5 min,

Isomeerien C ja D seos: saanto 91 mg IR (KBr-tabletti) cm-1: 1775, 1600 UV Amax (H20): 253, 326 NMR ^ (D20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3), 2,6/^3,1 (1H, m, pyrrolirengas Cg-H), 3,1^3,7 (1H, m, pyrrolirengas Cg-H), 4,07 (1,5 H, s, NCH3), 4,08 (1,5 H, s, NCH3), 4,0/^ 4,8 (4H, m, pyrrolirengas C5-H2, Cg-H ja Cg-H), 5,12 (1H, dd, J = 10, 5 Hz, pyrrolirengas C7-H), 5,80 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H) HPLC (retentioaika): 16,2 ja 16,6 min.

Esimerkki 14:

Natrium-(5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-3-trifluorimetyyli-5H-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4-triatsol-6-yyli)tio]—6 — (1-hydroksi-etyyli)-2-penem-3-karboksylaatin (isomeerin A ja B) synteesi : 0>-N—^COePNB —KQQzNa (1) (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-3-trifluorimetyyli-5-pyrrolo-[2,1-c]-1,2,4-triatsol-6-yyli)-tio]-6-hydroksietyyli)-2-pe-nem-3-karboksyylihapon p-nitrobentsyyliesterin synteesi:

Vertailuesimerkissä 2 lähemmin esitetyn menetelmän mukaisesti valmistettu tiolijohdannainen (231 mg) käsitellään esimerkissä 1-(1) esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti yllä esitetyn otsikkoyhdisteen valmistamiseksi.

NMR J (CDCl3) ppm: 1,40 ( 3H, d, J = 6 Hz, CH3) , 3,0^3,4 (1H, m, pyrrolirengas C7-H), 3,4^3,7 (1H, m, pyrrolirengas 4i 8 7218 C7“H), 3,84 (1H, m, Cg-H), 4,1 4,5 (2H, m, pyrrolirengas

Cg-H ja Cg-H), 4,5^ 4,9 (2H, m, pyrrolirengas C5-H2), 5,20 ja 5,48 (2H, ABq, J = 14 Hz, CO2CHAD, 7,60 (2H, d, J = 9 Hz, ArH), 8,24 (2H, d, J = 9 Hz, ArH).

(2) Natrium-(5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-3-trifluorimetyyli-5H-pyrrolo[ 2,1-c]-1,2,4-triatsol-6-yyli )-tio]-6-(1-hydrok-sietyyli)-2-penem-3-karboksylaatin (isomeerien A ja B) synteesi : Käytetään vaiheessa (1) saatua tuotetta (59 mg) ja suoritetaan esimerkissä 1—(2) esitetyt toimenpiteet yllä mainittujen yhdisteiden muodostamiseksi. Tuotteet puhdistetaan HPLC:llä seuraavissa olosuhteissa: kantoaine: Nucleosil 70^8 ilO x 300 mm) liuotin: 5 %:nen asetonitriili-vesi virtausnopeus: 3,65 ml/min.

Isomeeri A: saanto 13 mg IR (KBr-tabletti) cm-1: 1770, 1595 UV λ-max <H20) nm: 256, 323 NMR ^ (D20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3), 3,09 (1H, dd, J = 18, 5 Hz, pyrrolirengas C7-H), 3,68 (1H, dd, J = 18, 7 Hz, pyrrolirengas C7-H), 3,99 (1H, dd, J = 7, 2 Hz, Cg-H), 4,2rv 4,7 (4H, m, pyrrolirengas C5-H2, pyrrolirengas Cg-H ja Cg-H), 5,76 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H) HPLC (retentioaika): 15,4 min.

Isomeeri B: saanto 13 mg IR (KBr-tabletti) cm“l: 1760, 1590 UV Xmax (H20) nm: 252, 324 NMR (D20) Ppm: 1,40 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3) , 3,28 (1H, dd, J = 18, 5 Hz, pyrrolirengas C7-H), 3,78 (1H, dd, J = 18, 7 Hz, pyrrolirengas C7-H), 4,00 (1H, dd, J = 7, 2 Hz, Cg-H), 4,2fV 4,7 (4H, m, pyrrolirengas C5-H2, pyrrolirengas Cg-H ja Cg-H), 5,76 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H) HPLC (retentioaika): 18,6 min, 42 8721 8

Yllä esitettyjen menetelmien mukaisesti valmistetaan seuraa-vat yhdisteet: (a ) (5R,6S,8R)-2-[(3-amino-6,7-dihydro-5H-pyrroloI2,1-c]- 1.2.4- triatsol-2-yyli)-tio]-6-(l-hydroksietyyli)-2-penem- 3-karboksyylihapon isomeerien A ja B seos OH /--.

vN

rJ- N—^ Lhm

0 COtf N

HLPC (retentioaika): 8 min.

HLPC:n olosuhteet: kantoaine: Nucleosil 7Ci8 (10 x 300 mm) liuotin: 5 %:nen metanoli-vesi virtausnopeus: 4 ml/min.

IR (KBr-tabletti) cm-1: 1776 NMR S (d20) ppm: 1,40 (3H, d, J = 6Hz, -CH3) , 2,60rv>3,20 ja 3,20^3,65 (1H, m, -CH2CH2N), 3,95rv4,50 <4H, m, C6-H, C8“H, -CH2-N), 4,80 (HOD), 5,80 (1H, d, J - 2 Hz, C5-H) (b) (5R,6S,8R)-2-[(3-kloori-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[2,1-c]- 1.2.4- triatsol-7-yyli)tio]-6-(1-hydroksietyyli)-2-penem-3-karboksyylihapon isomeerien A ja B seos: °LH ΓΛ

N—^ N-N

(r C02H

HLPC (retentioaika): 17 min. olosuhteet: kantoaine: Nucleosil 7C^a (1° x 300 mm) liuotin: 5 %:nen asetonitrii1i-vesi virtausnopeus: 4 ml/min.

43 8721 8 IR (KBr-tabletti) cm-1: 1770 NMR &(D20) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3), 2,60 0^3,80 (2H, m, -CH2CH2N), 3,85^4,40 (4H, m, Cg-H, Cg-H, -CH2N), 4,80 (HOD), 5,78 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), c) (5R,6S,8R)-2-[(2-amino-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[2,1—b) — 1.2.4- triatsol-7-yyli)tio]-6-(1-hydroksietyyli)-2-penem-3-karboksylaatin isomeerit A ja B: °IH _/~Ί

xS-r'sYs vA

n<J—N—A. n^n 0 COaH ^\NH2

Isomeeri A: IR (KBr-tabletti) cm-1: 1767 NMR δ (D20) ppm: 1,35 (3H, d, J = 6Hz, -CH3) , 2,550^3,60 (2H, CH2CH2N), 3,85 (\J 4,50 (4H, m, C5“H' Cg-H, CH2N), 4,80 (HOD), 5,75 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H) HLPC (retentioaika): 12 min, olosuhteet: Nucleosil 7C^g (10 x 300 mm) 3 %:nen asetonitriili-vesi 4 ml/min.

Isomeeri B: IR (KBr-tabletti) cm-1: 1770 NMR S(D20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3), 2,60 AJ 3,60 (2H, CH2CH2N), 3,85 4,40 (4H, m, C6-H, Cg-H, -CH2N), 4,80 (HOD), 5,90 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H) HPLC (retentioaika): 13 min.

(d) (5R,6S,8R)-2-[(2-kloori-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[2,1—b]— 1.2.4- triatsol-2-yyli)tio]-6-(1-hydroksietyyli)-2-penem-3-karboksyylihapon isomeerit A ja B: 44 87218 O CO2H ''Ql

Isomeeri A: IR (KBr-tabletti) cm-1: 1770 NMR £>(D20) ppm: 1,40 (3H, d, J = 6Hz, -CH3), 2,60^*3,00 ja 3,20 ^ 3,62 (1H, m, -CH2CH2N), 4,80 (HOD), 5,78 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H) HLPC (retentioaika): 14 min. olosuhteet: Nucleosil 7C]_8 <10 x 300 mm) 5 %:nen asetonitriili-vesi 4 ml/min.

Isomeeri B: IR (KBr-tabletti) cm-1: 1770 NMR S (D20) ppm: 1,35 (3H, d, J = 6Hz, -CH3), 2,65^3,05 ja 3,18^*3,60 (1H, m, CH2CH2N), 3,85^4,55 (4H, m, C5-H, C8~H, -CH2N), 4,80 (HOD), 5,78 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H) HLPC (retentioaika): 16 min.

(e) (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-c)tiatsolium- 6-yyli)tio]-6-(1-hydroksietyyli)-2-penem-3-karboksylaatin isomeerit A ja B:

°,H /-jU

>γγ5γ5ΛΧ> o^~N ^cof

Isomeeri A: IR (KBr-tabletti) cm-1: 3430, 1765, 1590, 1370, 1280, 1260 w ^max (H20); 249, 323 8721 8 45 NMR S>(D20) ppm: 1,31 (3H, d, J = 6,2 Hz, -CH3), 3,0^3,8 (2H, m), 3,97 (1H, dd, J = 1,1 Hz, 6,4 Hz, Cg-H), 4,27 (1H, t, J = 6,4 Hz, Cg-H), 4,2 5,2 (3H, m), 4,74 (DOH), 5,75 (1H, d, J = 1,1 Hz, C5-H), 7,85 (1H, s, sivuketju C^-H), 9.84 (1H, s, sivuketju C3-H) HPLC (retentioaika): 14 min. olosuhteet: Nucleosil 7Cig (10 x 300 mm) 5 %:nen asetonitriili-vesi 3,65 ml/min.

Isomeeri B: IR (KBr-tabletti) cm-1: 3420, 1770, 1580, 1370, 1280, 1260 UvAmax (H20): 249, 323 NMR ^ (D20) ppm: 1,31 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3), 3,0/^3,8 (2H, m), 4,01 (1H, dd, J = 1,1 Hz, 6,4 Hz, Cg-H), 4,27 (1H, t, J = 6,4 Hz, Cg-H), 4,2 rv» 5,2 (3H, m), 4,74 (DOH), 5,77 (1H, d, J = 1,1 Hz, C5-H), 7,86 (1H, s, sivuketju C^-H), 9.84 (1H, s, sivuketju C3-H) HLPC (retentioaika): 17 min.

(f) (5R,6S,8R)-2-[(5,6-dihydro-4H-pyrrolo[1,2-c]-1,2,3-triatsol-4-yyli)tio]-6-(1-hydroksietyyli )-2-penem-3-karbok-syylihapon isomeerien A ja B seos:

fX

0^~N ^COzH

IR (KBr-tabletti) cm-1: 3400, 1765, 1585, 1380 UvXmax (H20) : 253, 324 NMR S (D20) ppm: 1,34 (3H, d, J = 6Hz, -CH3), 2,6 IV) 3,2 (1H, m), 3,2 (\j 3,7 (1H, m), 3,8^4,1 (iH, m, Cg-H), 4,27 (1H, t, J = 6 Hz, Cg-H), 4,3 hJ 5,2 (3H, m), 4,74 (DOH), 5,72 (1H, brs, C5-H), 7,75 (0,5H, s, sivuketju C3-H), 7,79 (0,5H, s, sivuketju C3-H) 46 8721 8 HLPC (retentioaika): 16,5 min. olosuhteet: Nucleosil 7Ci8 (10 x 300 mm) 3 %:nen asetonitriili-vesi 3.65 ml/min.

(g) (5R,6S,8R)-2-[(5,6-dihydro-2-metyyli-4H-pyrrolo[1,2-c]-1,2,3triatsolium-4-yyli)tio]-6-(1-hydroksietyyli)-2-penem- 3-karboksylaatin isomeerit A ja B: CHa

VsyS-O

0J-N—^coe

Isomeeri A: IR (KBr-tabletti) cm“l: 1765 uv \max (h20) nm: 325 NMR & (D20) ppm: 1,34 (3H, d, J = 5,9 Hz, CH3), 2,6^3,2 (1H, m), 3,2 (\J 3,8 (1H, m) , 3,9^ 4,1 (1H, m, C6-H), 4,1^ 4,9 (3H, m), 4,35 (3H, s, CH3) , 4,74 (DOH), 4,9^5,3 (1H, m), 5,77 (1H, d, J = 1,2 Hz, C5-H), 8,51 (1H, s, sivuketju C3-H) HLPC (retentioaika): 14 min. olosuhteet: Nucleosil 7Cig (10 x 300 mm) 5 %:nen asetonitriili-vesi 3.65 ml/min.

Isomeeri B: IR (KBr-tabletti) cm“l: 1765 UV f^max (H20) nm: 326 NMR S (D2o) ppm: 1,34 ( 3H, d, J = 6,3 Hz, -CH3), 2,6^3,1 (1H, m), 3,2^3,8 (1H, m), 3,9^4,1 (1H, m, C6-H), 4,1^ 5,0 (3H, m), 4,36 (3H, s, CH3), 4,74 (DOH), 5,0^5,3 (1H, m), 5,81 (1H, d, J = 1,2 Hz, C5-H), 8,58 (lH, s, sivuketju 47 8721 8 C3-H) HPLC (retentioaika): 18 min.

(h) (5R,6S,8R)-2-[(5,6-dihydro-4H-pyrrolo[1,2-b]pyratsol-4-yyli)tio]-6-(1-hydroksietyyli)-2-penem-3-karboksyylihapon isomeerit A ja B:

Vr5-^"

Cr~N ^cOaH

Isomeeri A: IR (KBr-tabletti) cm-1: 3380, 2950, 1760, 1580, 1365 UV Λ max (H20) nm: 252 (sh), 324 NMR S (D20) ppm: 1,26 (3H, d, J = 5,9 Hz, CH3), 2,4^2,9 (1H, m), 2,9 CJ 3,5 (1H, m) , 3,8 r\J 4,0 (1H, m, C6-H), 4,0 4.8 (4H, m), 4,74 (DOH), 5,65 (1H, brs, C5-H), 6,29 (1H, brs, sivuketju C3-H), 7,55 (1H, brs, sivuketju C2-H) HLPC (retentioaika): 20 min.

olosuhteet: samat kuin kohdassa (g)

Isomeeri B: IR (KBr-tabletti) cm-1: 3390, 2950, 1760, 1590, 1370 UV Xmax <h20) nm: 253 (sh), 324 NMR S (D20) ppm: 1,26 (3H, d, J = 5,9 Hz, CH3), 2,4^J2,9 (1H, m), 2,9^3,5 (1H, m), 3,8/\J 4,0 (1H, m, C6"H), 4,0 4.8 (4H, m), 5,63 (1H, brs, C5-H), 6,27 (1H, brs, sivuketju C3—H), 7,55 (1H, brs, sivuketju C2-H) HLPC (retentioaika): 24 min.

46 8721 8

Esimerkki 15; (5R,6S, 8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2-[(5,6,7,8-tetrahydroimi-datso[l,2-a]pyridin-7-yyli)tio]-2-penem-3-karboksyylihapon isomeerit A ja B:

OH 9 OH AS OH AS

Av5·" VrAvA

0^"N ^COjPNB 0^N Ao^NB Q^~H ^COzH

(1) (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2-[(5,6,7,8-tetrahydro-imidatso[1,2-a]pyridin-7-yyli)tio]2-penem-3-karboksyylihapon p-nitrobentsyyliesterin synteesi: Käytetään vertailuesimerkissä 10 saatua tiolijohdannaista (292 mg) ja suoritetaan samat toimenpiteet kuin esimerkissä 1—(1) kohdeyhdisteen valmistamiseksi (saanto: 185 mg): NMR &(CDCl3) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 1,9 2,6 (2H, m, pyridiinirengas Cg-H2), 2,6^3,5 (2H, m, pyridiini-rengas Cs-^), 3,5(^3,9 (2H, m, pyridiinirengas C7-H ja Cg-H), 3,9^4,3 (3H, m, pyridiinirengas C5-H2 ja Cg-H), 5,12 ja 5,42 (2H, ABq, J = 14 Hz, C02CH2Ar), 5,70 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 6,75 (1H, brs, imidatsolirengas C3-H), 6,92 (1H, brs, imidatsolirengas C2-H), 7,53 (2H, d, J = 9 Hz,

ArH), 8,12 (2H, d, J = 9 Hz, ArH).

(2) (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2-[(5,6,7,8-tetrahydro-imidätsoli[1,2-1]pyridin-7-yyli)tio]-2-penem-3-karboksyyli-hapon isomeerien A ja B synteesi:

Toistetaan esimerkissä 1—(2) esitetyt toimenpiteet käyttämällä yllä vaiheessa (1) saatua tuotetta (71 mg) otsikkoyh-disteiden muodostamiseksi (isomeerit A ja B).

Isomeeri A: saanto 13 mg IR (KBr-tabletti) cm-1: 1770, 1590 uvAax (H20) nm: 260 , 322 NMR β (D2O) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6Hz, CH3), 2,1 f\J 2,6 (2H, 49 8721 8 m, pyridiinirengas C5-H2), 3,13 (1H, dd, J = 18, 7 Hz, pyri-diinirengas Cg-H), 3,60 (1H, dd, J = 18, 5 Hz, pyridiinirengas Cg-H), 4,01 (1H, dd, J = 7, 2 Hz, C6-H), 4,0 4,5 (4H, m, pyridiinirengas C5-H2, pyridiinirengas C7-H ja Cg-H), 4,80 (HOD), 5,75 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,35 (2H, s, imi-datsolirengas C2-H ja C3-H) HLPC (retentioaika): 22,7 min. olosuhteet: Nucleosil 7C]_g (10 x 300 mm) 5 %:nen asetonitriili-vesi 3,65 ml/min.

Isomeeri B: saanto 15 mg IR (KBr-tabletti) cm-1: 1770, 1590 UvXmax <«2°» nm: 258, 322 NMR δ (D20) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, CH3 ) , 2,1^ 2,60 (2H, m, pyridiinirengas C5-H2), 3,17 (1H, dd, J = 18, 7 Hz, pyridiinirengas C8-H2), 3,63 (1H, dd, J = 18, 6 Hz, pyridiinirengas Cg-H), 4,00 (1H, dd, J = 7, 2 Hz, Cg-H), 4,0^4,5 (4H, m, pyridiinirengas C5-H2, pyridiinirengas C7-H ja Cg-H), 4,80 (HOD), 5,78 (lH, d, J 2 Hz, C5-H), 7,35 (2H, s, imidatsolirengas C2-H ja C3-H) HPLC: retentioaika): 27,7 min.

Esimerkki 16: (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2-[(l-metyyli-5,6,7,8-tet-rahydroimidatsoli[1,2-a]pyridinium-7-yyli)tio J-2-penem-3-karboksylaatin isomeerien A ja B seoksen synteesi:

Me qJ~h ^co2pnb * cr~N ^ccd Käytetään esimerkissä 15 saatua yhdistettä (114 mg) ja ot-sikkoyhdiste (saanto: 33 mg) saadaan käyttämällä esimerkin 2 toimenpiteitä.

50 87218 IR (KBr-tabletti) cm”1: 1770, 1585 NMR S (D20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,1N2,7 (2H, m, pyridiinirengas Cg-H2), 3,0aJ 4,4 (7H, m, pyridiinirengas C5-H2/ pyridiinirengas C7-H, pyridiinirengas Cq-H2» Cg-H ja Cg-H), 3,80 (3H, s, NCH3), 4,80 (HOD), 5,80 (1H, s, C5-H), 7,42 (2H, s, imidatsolirengas 02-Η ja C3-H) HLPC (retentioaika): 14,4 min. olosuhteet: Nucleosil 7Ciq (10 x 300 mm) 7 %:nen asetonitriili-vesi 3,65 ml/min.

Esimerkki 17: (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli )-2-[(5,6,7,8-tetrahydro- 1.2.4- triatsolo[4,3-a]pyridin-7-yyli)tio]-2-penem-3-karbok-syylihapon (isomeerien A ja B) synteesi: OH 9 OH —/4* OH _Λν ΛγΥ5'Ε' _ 0J-H-Ac02pNB 0>-N-kCOzpN0 0>-N—^ο0ζΗ (1) (5R,6S,8R)-6-(1-hydroks ietyyli)-2-[(5,6,7,8-tetrahydro- 1.2.4- triatsolo[4,3-a]pyridin-7-yyli)tio]-2-penem-3-karbok-syylihapon p-nitrobentsyyliesterin synteesi:

Vertailuesimerkissä 15 esitetty tiolijohdannainen (213 mg) saatetaan reagoimaan ja käsitellään esimerkissä 1—(1) esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti otsikkoyhdisteen (saanto: 186 mg) muodostamiseksi.

NMR 6 (CDC13) ppm: 1,40 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,0 Y 2,60 (2H, m, pyridiinirengas Cg-H2)» 3,0 4,0 (4H, m, pyridiini rengas Cg-H2* pyridiinirengas C7-H ja Cg-H), 4,0/^4,4 (3H, m, pyirdiinirengas C5-H2 ja Cg-H), 5,20 ja 5,48 (2H, ABq, J = 14 Hz, C02CH2Ar), 5,88 (0,5H, d, J = 2 Hz, C5-H), 5,91 (0,5 H, d, J - 2 Hz, Cij-H), 7,60 (2H, d, J = 9 Hz, ArH) , 8,L2 (LH, s, triatsolirengas C3-H), 8,24 (2H, d, J = 9 Hz, ArH) 51 8721 8 (2) (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli )-2-[(5,6,7,8-tetrahydro- l, 2,4-triatsolo[4,3-a]pyridin-7-yyli)tio]-2-penem-3-karbok-syylihapon (isomeerien A ja B seoksen) synteesi:

Yllä vaiheessa (1) saatu tuote (70 mg) käsitellään esimerkissä 1—(2) esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti ja näin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 29 mg).

IR (KBr-tabletti) cm-1: 1765, 1595 UV λ max (H20) nm: 258, 322 NMR S (D20) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, CH3) , 2,lf>J2,6 (2H, m, pyridiinirengas Cg-H), 2,9 CO 3,6 (2H, m, pyridiinirengas C8-H2), 4,00 (1H, dd, J = 6, 2 Hz, Cg-H), 4,0fV4,5 (4H, m, pyridiinirengas C5-H2, pyridiinirengas C7-H ja Cg-H), 4,80 (HOD), 5,80 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 8,48 (1H, s, triatsoli-rengas C3-H) HLPC (retentioaika): 14,2 ja 15,2 min. olosuhteet: Nucleosil 7Ci8 (10 x 300 mm) 3 %:nen asetonitriili-vesi 3,65 ml/min.

Esimerkki 18: (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2-[(metyyli-5,6,7,8-tetra-hydro-1,2,4-triatsolof 4,3-a]pyridinium-7-yyli)tio]-2-penem- 3-karboksylaatin (isomeerien A ja B, isomeerien C ja D seoksen) synteesi: γ<>·

0^N ^co2pnb * cr41 tcH

Toistetaan esimerkin 2 toimenpiteet käyttämällä esimerkissä 17 saatua tuotetta (116 mg) otsikkoyhdisteiden valmistamiseksi :

Isomeerien A ja B seos: saanto 15 mg IR (KBr-tabletti) cm"1: 1760, 1580 uv^max (h2o) nm; 255 ^ 323 52 8721 8 NMR &<D20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3) , 2,1Μ4,6 (9H, m, pyridiinirengas Cg-H2, pyridiinirengas Cg-H2, pyridiini-rengas C5~H2, pyridiinirengas C7-H, Cg-H ja Cg-H), 4,04 (3H, s, NCH3), 4,86 (HOD), 5,80 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 8,80 (1H, s, triatsolirengas C3-H) HLPC (retentioaika): 14,4 min, olosuhteet: Nucleosil 7Cig (10 x 300 mm) 5 %:nen asetonitriili-vesi 3,65 ml/min,

Isomeeri C: saanto 7 mg IR (KBr-tabletti) cm”^·: 1765, 1590 UvXmax (H20) nm: 258, 323 NMR & (D20) ppm: 1,39 (3H, d, J = 6 Hz, CH 3) , 2,2^2,7 (2H, m, pyridiinirengas C0-H2), 3,32 (1H, dd, J = 18, 7 Hz, pyridiinirengas Cg-H), 3,68 (1H, dd, J = 18, 5 Hz, pyridiiniren gas Cg-H ), 4,03 (1H, dd, J = 6, 2 Hz, C6-H), 4,16 (3H, s, NCH3), 4,2 4,6 (4H, m, pyridiinirengas C5-H2, pyridiini rengas C7-H ja Cg-H), 4,80 (HOD), 5,83 (lH, d, J = 2 Hz, C5-H) HPLC (retentioaika): 21,2 min.

Isomeeri D: saanto 6 mg IR (KBr-tabletti) cm~l: 1765, 1590 UvAmax <H20) nm: 260, 322 NMR δ (D20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3) , 2,3^2,6 (2H, m, pyridiinirengas Cg-H2), 3,21 (1H, dd, J = 18, 7 Hz, pyridiinirengas Cg-H), 3,68 (1H, dd, J = 18, 5 Hz, pyridiiniren gas Cg-H), 4,06 (1H, dd, J = 6, 2 Hz, Cg-H), 4,16 (3H, s, NCH3), 4,0 rv 4,6 (4H, m, pyridiinirengas C5-H2, pyridiinirengas C7-H ja Cg-H), 4,80 (HOD), 5,80 (lH, d, J = 2 Hz, C5-H) HLPC (retentioaika): 29,6 min.

53 8721 8

Vertailuesimerkki A: 6,7-dihydro-7-merkapto-5H-pyrrolo[1,2-c]imidatsoli-trifluo-rimetaanisulfonaatin synteesi: . /C02Et

^1* —>· · · —'CF3503H

H HC£ 11_n (1) Etyyli-3-(imidatsol-4-yyli)-3-(p-metoksibentsyylitio)-propionaatti: 3 g urokaanihappo·hydrokloridin etyyliesteriä (W. Hubball ja F.L. Pyman, J. Chem. Soc., 1928, 26) alkalisoidaan natriumbikarbonaatin vesiliuoksella, kyllästetään NaClUla ja uutetaan kloroformilla, minkä jälkeen se kuivataan Na2SC>4:n päällä. Liuos konsentroidaan 50 ml:aan alennetussa paineessa, siihen lisätään 3,1 g p-metoksibentsyylimerkaptaania ja 3,44 g DBU:ta ja sekoitetaan 24 tunnin ajan huoneenlämpö-tilassa argonkaasuvirtauksessa. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, jäännös puhdistetaan pylväskromatografi-alla käyttämällä 40 g piihappogeeliä ja eluointtina bent-seenini-etyyliasetaattia (1:1), jolloin saadaan 4,8 g otsik-koyhdistettä.

NMR δ (CDCl)) ppm: L,18 (3H, t, J = 6 Hz), 2,83^3,00 (2H, m), 3,60 (2H, s), 3,76 (3H, s), 4,07 (2H, q, J = 6 Hz), 4,23 (1H, t, J = 6 Hz), 6,13 (1H, brs), 6,75 (2H, d, J = 9 Hz), 6,86 (1H, s), 7,13 (2H, d, J = 9 Hz), 7,53 (1H, s), (2) 3-(imidätso1-4-yyli)-3-(p-metoksibentsyylitio)propanoli: 4,8 g vaiheessa (1) saatua yhdistettä liuotetaan 50 ml:aan THF:ä, jäähdytetään 0...5°C:seen, lisätään 0,33 g litiumboro-hydridiä ja sekoitetaan 17 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, saatuun jäännökseen lisätään kloroformia, vettä ja ammoniumkloridia, 8721 3 54 minkä jälkeen erotetaan orgaaninen faasi. Orgaaninen faasi kuivataan Na2S04:n päällä ja liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Jäännös puhdistetaan pylväällä, jossa on 50 g piihappogeeliä, ja eluoimalla kloroformi-metanolilla (95:5), jolloin saadaan otsikkoyhdiste (saanto (1,98 g).

NMR & (CDCI3) ppm: 1,90(^2,30 (2H, m), 3,50 (2H, s), 3,69 (3H, s), 3,94 (1H, t, J = 6 Hz), 6,69 (2H, d, J = 9 Hz), 6,81 (1H, s), 7,06 (2H, d, J = 9 Hz), 7,49 (1H, s), (3) 3-(imidatsol-4-yyli)-3-(p-metoksibentsyylitio)propyyli-kloridi: 1,2 g vaiheessa (2) saatua yhdistettä liuotetaan sekaliuot-timeen, jossa on THF:ä (30 ml) ja hiilitetrakloridia (30 ml), siihen lisätään 2,26 g trifenyylifosfiinia ja seosta sekoitetaan 17 tunnin ajan 50°C:ssa. Reaktioseos tislataan alennetussa paineessa ja muodostunut jäännös puhdistetaan pylväskromatografiällä käyttämällä 30 g piihappogeeliä ja eluointiaineena bentseeni-metanolia (97:3). Näin saadaan otsikkoyhdiste saannon ollessa 0,41 g.

NMR 6 (CDCI3) ppm: 2,15^2,50 (2H, m), 3,55 (2H, s), 3,74 (3H, s), 4,00 (1H, t, J = 6 Hz), 6,74 (2H, d, J = 9 Hz), 6,86 (1H, s), 7,12 (2H, d, J = 9 Hz), 7,57 (1H, s), (4) 6,7-dihydro-7-(p-metoksibentsyylitio)-5H-pyrrolotl,2-c]-imidatsoli: 400 mg edellä olevassa vaiheessa (3) saatua yhdistettä liuotetaan 10 ml:aan asetonia, lisätään 2,0 g natriumjodidia ja sekoitetaan 17 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Seosta kuumennetaan palautus jäähdyttäen vielä 8 tunnin ajan ja liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Jäännökseen lisätään kloroformia, vettä ja natriumkarbonaattia (3 g), orgaaninen faasi eristetään, kuivataan Na2SC>4:n päällä ja liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Jäännös puhdistetaan pyl-väskromatografiän avulla käyttämällä 10 g piihappogeeliä ja eluointiaineena kloroformi-metanolia (99:1), jolloin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 250 mg).

55 8721 8 NMR 6 (CDC13) ppm: 2,27^2,60 (1H, m), 2,65 ro 3,15 (1H, m), 3,70 (2H, s), 3,75 (3H, s), 3,80^4,20 (3H, m), 6,76 (1H, s), 6,78 (2H, d, J = 9 Hz), 7,18 (2H, d, J = 9 Hz), 7,34 (1H, s), (5) 6,7-dihydro-7-merkapto-5H-pyrrolo[1,2-c]imidatsoli- trifluori-metaanisulfonaatti:

1 I—I

PMBS —* HS YNVCF3S°3H

400 mg:aan yllä esitetyssä (4)-vaiheessa saatua 6,7-dihydro** 7-p-metoksibentsyylitio-5H-pyrrolo[1,2-c]imidatsolia lisätään anisolia (1,5 ml), trifluorietikkahappoa (9 ml) ja trifluorimetaanisulfonihappoa (0,36 ml). Sekoitetaan 30 minuuttia huoneenlämpötilassa. Reaktioliuosta konsentroidaan alennetussa paineessa ja sitä lisäkonsentroidaan ksyleeni-lisäyksen (20 ml) jälkeen. Nämä toimenpiteet toistetaan kahdesti ja tuloksena saatava jäännös pestään eetterillä. Eetteri poistetaan dekantoimalla, jäännös kuivataan alennetussa paineessa, jolloin muodostuu aiottua tuotetta 440 mg:n saannolla.

NMR δ(D2O) ppm: 2,50^2,80 (1H, m), 3,00r^>3,43 (lH, m), 4,20/vJ4,70 (3H, m), 4,80 (HOD), 7,33 (1H, 2), 8,60 (1H, s).

56 8721 H

Vertailuesimerkki 1 6.7- dihydro-7-merkapto-5H-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4-triatsoli-trifluorimetaanisulfonaatin synteesi:

PMB-S'N^1 ^ ‘CF3S°3H

N—N Vt/ Käyttämällä 6,7-dihydro-7-p-metoksibentsyylitio-5H-pyrrolo-[2,l-c]-l,2,4-triatsolia (280 mg) toistetaan vertailuesimer-kin A toimenpiteet, jolloin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 361 mg, läpinäkyvä väritön öljy).

NMR δ (DMSO-d6 + D20) ppm: l,8r\J2,6 (1H, m), 3,0 rv 3,6 (1H, m), 4,1^4,5 (2H, m), 4,65 (1H, dd, J = 8, 4 Hz), 9,50 (1H, s).

Vertailuesimerkki 2: 6.7- dihydro-6-merkapto-3-tr ifluorimetyyli-5H-pyrrolo[2,1-c]- 1,2,4-triatsoli-trifluorimetaanisulfonaatin synteesi:

Jk Jk

rtl-^ rX-t'CFmM

Vertailuesimerkissä A esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti saadaan yllä esitetty yhdiste vaaleankeltaisena öljynä (231 mg) 6,7-dihydro-6-p-metoksibentsyylitio-3-trifluori-metyyli-5H-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4-triatsolista (116 mg).

NMR S (DMSO-dg + D20) ppm: 1,8^2,6 (1H, m, C6-H), 3,0 rvJ

3,6 (1H, m, C6-H), 4,1^4,5 (2H, m, C5-H), 4,65 (1H, dd, J = 8, 4 Hz, C7-H), 9,50 (1H, s, C3-H).

Seuraavat yhdisteet valmistetaan myös vertailuesimerkissä A esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti: 57 8721 8

Vertailuesimerkki 3; 3-amino-6,7-dihydro-7-merkapto-5H-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4-triatsoli-trifluorimetaanisulfonaatti

hs/n3vNH2 OF3SO3H

Vertailuesimerkki 4; 3-kloori-6,7-dihydro-7-merkapto-5H-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4-triatsoli-trifluorimetaanisulfonaatti sL Jk X*

Η5/\^ ^ -CFaSCbH

NMR δ (D2O) ppm: 2,50 OJ 2,95 ja 3,15 3,60 (1H, m, Cg-H),

4,05 ΓΜ 4,80 (3H, m, C5-C2, C7-H), 4,80 HOD

Vertailuesimerkki 5: 2-amino-6,7-dihydro-7-merkapto-5H-pyrrolo[2,1-b]-1,2,4-triatsoli-trifluorimetaanisulfonaatti

HS --CFa^H

: "^ΝΗ2 NMR 8 (D20) ppm: 2,60 FVJ 2,90 ja 3,18 /ν' 3,60 (1H, m, C6-H) , 4,10 ru 4,75 (3H, m, C5-H2, C7-H), 4,80 (HOD) 8721 8 58

Vertailuesimerkki 6: 2-kloori-6,7-dihydro-7-merkapto-5H-pyrrolo[2,1-b]-1,2,4-triatsoli-trifluorimetäänisulfonaatti:

-CFaSOaH

NMR S (D2O) ppm: 2,49 0^2,80 ja 3,10 0^3,50 (1H, m, Cg-H), 4,05 OJ 4,58 (3H, m, C5-H2, Cy-H), 4,80 (HOD)

Vertailuesimerkki 7: 6,7-dihydro-6-merkapto-5H-pyrrolo[1,2-c]tiätsolium-tr ifluo-rimetaanisulfonaatti:

HS

\^CF3S0^ NMR δ (D20) ppm: 3,15 (1H, dd, C7-H), 3,70 (1H, dd, C7-H), 4,2^5,2 (3H, m, C5-H2, Cg-H), 4,74 (DOH) , 7,84 (1H, d, J = 1,9 Hz, C]_-H) , 9,83 (1H, d, J = 1,9 Hz, C3-H) 59 8721 8

Vertailuesimerkki 8: 5.6- dihydro-4-merkapto-4H-pyrrolo[1,2-c]-1,2,3-triatsoli-trifluorimetaanisulfonaatti:

HS^VS · CFjSOsH “ N

NMR S (D2O) ppm: 2,5(^3,1 (1H, C5-H), 3,2 rv 3,7 (1H, m, C5-H), 4,4 5,1 (3H, m, C4-H, Cg-H), 4,74 (DOH), 8,20 (1H, s, C3-H)

Vertailuesimerkki 9: 5.6- dihydro-4-merkapto-4H-pyrrolo[1,2-b]pyratsoli-trifluorimetaanisulfonaatti :

X"X

HS X"' N-SFaSOsH

NMR δ (D2O) ppm: 2,4(^3,0 (1H, m, C5-H), 3,0^3,6 (1H, m, C5-H), 4,1^4,8 (3H, m, C4-H, Cg-H), 4,74 (DOH), 6,55 (1H, d, J = 3 Hz, C3-H), 7,98 (1H, d, J = 3 Hz, C2-H) 60 8721 8

Vertailuesimerkki 10; 7-merkapto-5,6,7,8-tetrahydroimidatso[1,2-a]pyridiini-tri-fluorimetaanisulfonaatia synteesi:

PMB-S-/~~^N __^ H . CF3SO3 H

Käyttämällä 7-p-metoksibentsyylitio-5,6,7,8-tetrahydroimi-datso[l,2-a]pyridiiniä (249 mg) valmistetaan otsikkoyhdiste vertailuesimerkissä A esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti. Saanto on 292 mg (läpikuultava väritön öljy).

Vertailuesimerkki 11; 7-merkapto-5,6,7,8-tetrahydro-l,2,4-triätsolo[4,3-a]pyridii-ni-trifluorimetaanisulfonaatin synteesi:

PMB-s/^jr" ; HS-^_/NJ.CF3503H

Lähtemällä 307 mg:sta 7-p-metoksibentsyylitio-5,6,7,8-tetrahydro-l, 2,4-triatsolo[4,3-a]pyridiiniä toistetaan samat toimenpiteet kuin vertailuesimerkissä A ja saadaan 435 mg otsikkoyhdistettä läpikuultavana värittömänä öljyisenä tuotteena.

NMR δ (D20 + DMS0-d6) ppm: 2,1^ 2,7 (2H, m, Cg-H2), 3,31 ·'·; (1H, dd, J = 18, 7 Hz, C8-H), 3,80 (1H, dd, J = 18, 7 Hz,

Cq-H), 3,6rvJ 3,9 (1H, m, C7-H), 4,4r\j4,6 (2H, m, C5-H2), 9,19 (1H, s, C3-H) 8721 ft 61

Esimerkki 19: (5R,6S,8R)-2-[(2,3-dihydro-lH-indolitsinium-l-yyli)tio]-6-(1-hydroksietyyli)-penem-3-karboksylaatin synteesi: OH 0 OH /\ 0A—N ^C02pNB Vco® DMFtään (3 ml) liuotetaan 180 mg p-nitrobentsyyli-(5R,6S,8R)-2-etyylisulfinyyli-6-(1-hydroksietyyli)-penem-3-karboksylaattia (valmistettu japanilaisessa hakemusjulkaisussa 56978/1985 esitetyn esimerkin 1 mukaisesti) ja 271 mg 2,3-dihydro-l-merkapto-lH-indolitsinium-trifluorimetaani-sulfonaattia, lisätään 108 mg di-isopropyylietyyliamiinia typpiatmosfäärissä jäähdyttäen samalla -40°C:ssa ja sekoitetaan 30 minuutin ajan tässä lämpötilassa. Reaktioliuos kaadetaan eetteriin, sentrifugoidaan ja emäliuos poistetaan dekantoimalla. Sakat liuotetaan 50 %:seen THF-veteen (40 ml), lisätään 4,16 g ammoniumkloridia ja 2,08 g rautajauhet-ta jää jäähdytyksessä ja sekoitetaan voimakkaasti 50 minuutin ajan tässä lämpötilassa. Reaktioliuos suodatetaan Celite®:llä (valmistaa ja myy Johns-Manville), suodos konsentroidaan alennetussa paineessa ja pestään etyyliasetaatilla. Vesifaa-si konsentroidaan tyhjössä ja saatu konsentraatti puhdistetaan pylvään läpi, jossa on Daiain HP-20:tä (1,3 cm x 22 cm). Fraktiot, jotka eluoituvat 350 ml:11a vettä, heitetään pois, fraktiot, jotka eluoituvat 5 %:sella THF-vedellä, konsentroidaan tyhjössä ja puhdistetaan HPLCillä (kantoaine: :·/ Nucleosil 7Cig (10 x 300 mm), liuotin: 7 %:nen asetonitriili- ... vesi virtausnopeus: 3,65 ml/min.) ja lyofilisoidaan, jolloin saadaan otsikkoyhdiste vaaleankeltaisena jauheena (saanto: 1 30 mg) .

IR (KBr-tabletti) cm-1: 1760, 1590 ' · UV Xmax (H20) nm: 265, 325 NMR δ (D20) ppm: 1,33 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,48^2,92 62 87218 (1H, m, indolitsiniumrengas C2-H), 2,92 (\J 3,40 (1H, m, indo-litsiniumrengas C2-H), 3,95/^5,20 (5H, m, indolitsiniumren-gas Ci-H ja C3-H2, C6-H ja C8-H), 4,80 (HOD), 5,64 (1/3H, d, J = 2 Hz, C5-H), 5,76 (2/3H, d, J * 2 Hz, C5-H), 7,92/^8,32 (2H, m, indolitsiniumrengas Cg-H ja C3-H), 8,58 (1H, dt, J = 1, 7 Hz, indolitsiniumrengas C7-H), 8,88 (1H, dd, J = 1, 7 Hz, indolitsiniumrengas, C5-H) HLPC (retentioaika): 13,0 min, ja 13,6 min.

Alkuaineanalyysi (%) (C16H16N2O4S2.H2O) laskettu: C 49,98, H 4,72, N 7,29 löydetty: C 50,22, H 4,75, N 7,38

Esimerkki 20: (5R,6S,8R)-2-[(2,3-dihydro-lH-indolitsinium-2-yyli)tio]- 6-(1-hydroksietyyli)-penem-3-karboksylaatin synteesi: N—^COaPNB N ^cof . Esimerkissä 19 esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti valmis tetaan otsikkoyhdiste vaaleankeltaisena jauheena käyttämällä 2,3-dihydro-2-merkapto-lH-indolitsinium-trifluorimetaanisul-fonaattia.

Isomeeri A: • · UV Xmax <H20) nm: 264' 322 HLPC (retentioaika): 11,7 min. kantoaine: Nucleosil 7Ciq (10 x 300 mm) liuotin: 7 %:nen asetonitriili-vesi virtausnopeus: 3,65 ml/min.

Isomeeri B: UV λmax (H2O) nm: 2.64, 3.22 HPLC (retentioaika): 13,4 min.

63 8721 8

Esimerkki 21; (5R,6S, 8R)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1, 2-a]imidatsol-7-yyli)-tio]-6-(1-hydroksietyyli)-penem-3-karboksyylihapon synteesi: (1) p-nitrobentsyyli-(5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-a]imidatsol-7-yyli)tio]-penem- 3-karboksylaatin synteesi: p-nitrobentsyyli-(5Rf 6 S,8R)-2-etyylisulf inyyli-6-(1-hydrok-sietyyli)-penem-karboksylaattia (190 mg) ja 6,7-dihydro-7-merkapto-5H-pyrrolo[1,2-a]imidatsoli-trifluorimetaanisulfo-naattia (261 mg) liuotetaan 5 mlzaan DMF:ä, lisätään 232 mg di-isopropyylietyyliamiinia jäähdyttämällä samalla liuosta -50°C:ssa ja sekoitetaan 30 minuutin ajan tässä lämpötilassa. Reaktioliuos laimennetaan etyyliasetaatilla ja liuotin tislataan pois alennetussa paineessa sen jälkeen, kun liuos on pesty ja kuivattu MgSC>4:n päällä. Jäännös puhdistetaan pylväskromatografiän avulla käyttämällä 18 g piihappogeeliä (kloroformi:metanoli = 5:1) ja saadaan karamellimäinen ot-sikkoyhdiste (saanto: 178 mg).

NMR & (CDCI3) ppm: 1,40 (3H, d, J = 6 Hz, CH3) , 2,6^3,5 (2H, m, pyrroliinirengas Cg-H2), 3,7(V 4,4 (4H, m, pyrrolii-nirengas C5-H2, Cg-H ja Cg-H), 4,80 (1H, dd, 4, 7 Hz, pyrroliinirengas C7-H), 5,18 ja 5,36 (0,5H, ABq, J = 14 Hz, C02CH2Ar), 5,28 ja 5,41 (0,5 H, ABq, 14 Hz, C02CH2Ar), 5,75 (0,5H, d, J = 2 Hz, C5-H), 5,98 (0,5H, d, J = 2 Hz, C5-H), 6,92 (0,5H, d, J = 2 Hz, imidatsolirengas-H), 6,96 (0,5H, d, J = 2 Hz, imidatsolirengas-H), 7,16 (1H, d, J = 2 Hz, imidatsolirengas-H), 7,58 (1H, d, J = 9 Hz, ArH), 7,64 (1H, d, J « 9 Hz, ArH), 8,16 (1H, d, J = 9 Hz, ArH), 8,24 (1H, d, J = 9 Hz, ArH) 8721 a 64 (2) (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-a]imidatsol- 7-yyli)tio1-6-(1-hydroksietyyli)-penem-3-karboksyylihapon synteesi:

Yllä vaiheessa (1) saatu yhdiste (178 mg) liuotetaan THF:n (15 ml) ja fosfaattipuskurin (15 ml, pH 7,0) seokseen, lisätään 200 mg 10 %:sta palladium-hiiltä katalyyttisen pelkistyksen suorittamiseksi huoneenlämpötilassa kahden tunnin kuluessa. Katalysaattori poistetaan suodattamalla, saatu suodos ja pesuneste yhdistetään, konsentroidaan ja pestään etyyliasetaatilla. Vesifaasi konsentroidaan ja konsentraatti puhdistetaan pylväskromatografiän avulla käyttämällä Daiaion HP-20:tä (1,8 cm x 20 cm). Poistetaan fraktiot, jotka on eluoitu 50 ml:11a vettä, fraktiot, jotka on eluoitu 150 ml:11a vettä ja 80 ml:11a 5 %:sta THF-vettä, yhdistetään, konsentroidaan, puhdistetaan HPLC:llä (kantoaine: Nucleosil 7Ci3 (10 x 300 mm), liuotin: 5%:nen asetonitriili-vesi, virtausnopeus: 3,65 ml/min.) ja lyofilisoidaan, jolloin saadaan 58 mg otsikkoyhdistettä värittömänä jauheena.

IR (KBr-tabletti) cm-1: 1760, 1580 CJvXmax (h20) nm: 325 NMR 6 (D20) ppm: 1,33 (1,5H, d, J = 6 Hz, CH3), 1,36 (1,5H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,8 3,1 (1H, m, pyrroliinirengas Cg-H), 3,1 ^ 3,5 (1H, m, pyrroliinirengas Cg-H), 4,0 4,6 (4H, m, pyrroliinirengas C5-H2, Cg-H ja Cg-H), 4,80 (HOD), 5,66 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 5,73 (0,5H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,2 7,4 (2H, m, imidatsolirengas-H) HLPC (retentioaika): 13,6 min.

65 8721 8

Esimerkki 22: (1) p-nitrobentsyyli-(5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2- t(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-a]imidatsol-6-yyli)tio]-2-penem--3-karboksylaatin synteesi: 0^ VCOipNB DBU 0 p-nitrobentsyyli-(5R,6S,8R)-2-etyylisulfinyyli-6-(1-hydrok-sietyyli)-penemkarboksylaatti (213 mg) liuotetaan asetonit-riilin (5 ml) ja THF:n (2 ml) seokseen ja jäähdytetään -40...-50°C:seen. Liuokseen lisätään liuos, jossa on 6,7-dihydro-6-merkapto-5H-pyrrolo[l,2-a]imidatsolitrifluori-metaanisulfonaattia (390 mg) THF:ssä (3 ml) ja DBUrssa (410 mg), ja sekoitetaan 20 minuutin ajan yllä mainitussa lämpötilassa. Reaktion päätyttyä lisätään 30 ml etyyliasetaattia, pestään vedellä ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella, kuivataan Na2S04:n päällä ja konsentroidaan alennetussa paineessa.

Saatu jäännös puhdistetaan pylväällä, jossa on 15 g pii-happogeeliä, ja eluoidaan kloroformi-metanolilla (19:1) ja otsikkotuotteen sisältävät fraktiot yhdistetään ja konsentroidaan. Näin saadaan 225 mg otsikkoyhdistettä kellertävänä öljynä.

NMR S (CDCI3) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, CH3) , 2,8rv3,7 (2H, m, -CH2 -f >) » ' 1 // 3,7 4,7 (5H, m, -S-CH-CH2-N^ , C6-H, C3-H), 5,32 (2H, ABq, J = 14 Hz, -COO-CH2-), 5,76 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 6,87 ja 7,05 (1H, d, J = 1 Hz, imidatsolirengas-H), 7,59 ja 8,18 (2H, d, J = 9 Hz, -C6H4N02) TLC (ohutkerroskromagrafia), Rf: 0,4

Olosuhteet: piihappogeelilevy (Merck: 0,25 mm paksu)

Kehitysliuotin: kloroformi-metanoli (9:1 til./til.) (2) (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyr-rolo[1,2-a]imidatsol-6-yyli)tio]-2-penem-3-karboksyylihapon 8721 8 66 (isomeerien A ja B) synteesi: 0J-tt ^co2pnb " cr~N ^co2h

Yllä vaiheessa (1) saatu tuote (84 mg) liuotetaan THF:n (5 ml) ja fosfaattipuskurin (5 ml, pH 7) seokseen, lisätään 10 %:sta palladium-hiiltä (160 mg) katalyyttisen pelkistyksen suorittamiseksi huoneenlämpötilassa 3 tunnin kuluessa 1 atmosfäärin vetypaineessa. Katalysaattori poistetaan suodattamalla, suodos laimennetaan vedellä ja pestään eetteri-etyy-liasetaatti-seoksella (1:1). Vesifaasi konsentroidaan n. 30 ml:aan alennetussa paineessa ja johdetaan tuotteen puhdistamiseksi pylvään läpi, jossa on Diaion HP-20:tä (1,8 cm x 22 cm). Poistetaan fraktiot, jotka on eluoitu 100 ml:lla vettä, kun taas fraktiot, jotka on eluoitu 5 %:sella THF-vedellä (joiden maksimaalinen UV-absorptio on n. 320 nm:ssä), kerätään ja konsentroidaan. Konsentraatti puhdistetaan HPLC:llä (kantoaine: Nucleosil 7Cig (10 x 30 mm), liuotin: 5 %:nen asetonitriili-vesi, virtausnopeus: 4 ml/min.) ja otsikkoyh-disteen sisältävät fraktiot, joiden retentioaika on 14 min., kerätään, konsentroidaan alennetussa paineessa ja lyofili-soidaan, jolloin saadaan otsikkoyhdiste (vaaleankeltainen jauhe, saanto: 24 mg).

IR (KBr-levy) cm-1: 3400, 1765, 1585 UV λ max (H20) nm: 323 NMR $(D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 3,2 ja 3,6 (kumpikin 1H, kumpiinkin m, -CH2-^ ), 4,02 (1H, dd, J = 2,6 Hz, Cg-H), 4,1 Λ 4,5 (4H, m, -SCH-CH2-N, Cq-H), 4,80 (HOD), 5,79 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,22 (2H, brs, imidatsolirengas-H), 67 87218

Tuote puhdistetaan HPLCrllä (kantoaine: C3g-oktadekyylisliaanilla (SSC-ODS-762, valmistaja Senshu Kagaku Co., Ltd.) 20 x 300 mm, liuotin: 6 %:nen asetonitriili-vesi, virtausnopeus: 10 ml/min.) ja otsikkoyhdisteen sisältävät fraktiot, joiden retentioaika on 15 min. ja vast. 16,5 min.. Näin saadaan isomeerit A ja B vaaleankeltaisena jauheena lyofilisoinnin jälkeen.

Isomeeri A: NMR 8 (D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,96 rv/ 3,23 (1H, m), 3,46^3,80 (1H, m), 4,00 (1H, dd, J = 2, 6 Hz, C6-H), 4,10^4,50 (2H, m), 4,50^4,75 (2H, m), 4,80 (HOD), 5,80 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,30 (2H, s, imidatsolirengas- H) HPLC (retentioaika): 15 min.

Isomeeri B: NMR S (D20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 3,140J 3,44 (1H, m), 3,633,93 (1H, m), 3,99 (1H, dd, J = 2, 6 Hz, C6-H), 4,10 rv-/ 4,50 (2H, m), 4,80 (HOD), 5,78 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,35 (2H, s, imidatsolirengas-H) HPLC (retentioaika): 16,5 min.

Esimerkki 23: (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)—2—[(6,7-dihydro-l-metyyli-5H-pyrrolo[1,2-a]imidatsolium-6-yyli)tio]-2-penem-3-karbok-sylaatin synteesi: M CH3

t) CH3I

0>^—^CQ^PNB 0>N^kcoe

Yllä esimerkin 22 vaiheessa (1) saatu yhdiste (220 mg) dis-pergoidaan asetonin (3 ml) ja THF:n (5 ml) seokseen, lisätään 0,84 ml metyylijodidia jää jäähdytyksessä ja annetaan 8721 8 68 reagoida 3°C;ssa 16 tunnin ajan. Reaktioliuos konsentroidaan kuiviin alennetussa paineessa ja saatu jäännös pestään eetterillä ja kuivataan. Saatu jauhe liuotetaan sekanes-teeseen, jossa on 20 ml THF:ää ja 20 ml vettä, lisätään 4,4 g ammoniumkloridia ja 2,2 g (silmäkoko 100) rautajauhetta ja sekoitetaan voimakkaasti tunnin ajan. Liukenemattomat poistetaan suodattamalla (Celite®, Johns-Manville), suodos laimennetaan vedellä, pestään etyyliasetaatti-eetteri-seoksella (1:1), sitten vesifaasi konsentroidaan 30 ml:aan alennetussa paineessa ja konsentraatti puhdistetaan pylväällä, jossa on Daiaion HP-20:tä (1,8 cm x 23 cm). Poistetaan fraktiot, jotka on eluoitu 100 mlslla vettä, ja fraktiot, jotka on eluoi-tu 5 %:sella THF-vedellä, kerätään ja konsentroidaan alennetussa paineessa. Konsentraatti puhdistetaan HPLC:llä (kanto-aine: Nucleosil 7Ci8 (10 x 300 mm), liuotin: 3 %:nen aseto-nitriili-vesi, virtausnopeus: 4 ml/min.) ja otsikkoyhdisteen sisältävät fraktiot, joiden retentioaika on 23 min., kerätään, konsentroidaan tyhjössä ja kuivataan, jolloin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 54 mg, vaaleankeltainen jauhe).

IR (KBr-tabletti) cm-1: 3400, 1770, 1590 UV Amax <H20) nm: 324 NMR δ (D20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH-CH3), 3,4 (2H, © / N- brm, -CH2-^ ), 3,83 (3H, s, N-CH3), 4,01 (1H, dd, J = 2, /N- t 6 Hz, Cg-H), 4,2 4,5 (4H, m, -S-CH-CH2-N, Cg-N), 4,80 (HOD), 5,79 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,43 (2H, s, imidatso-liumrengas-H).

Esimerkki 24: (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)—2—[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo-[1,2-c]imidatsol-6-yyli)tio]-2-penem-3-karboksyylihapon (isomeerien A ja B) synteesi: 69 87 21 8 OH O OH OH __

0>-N LC02pN8 0^N kC02pNB > 0J-N ‘kCOiH

(1) p-nitrobentsyyli-6-(1-hydroksietyyli)-2[(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-c]imidatsol-6-yyli)tio]-2-penem-3-karboksy-laatin synteesi: p-nitrobentsyyli-(5R,6S,8R)-2-etyylisulfinyyli-6-(1-hydrok-sietyyli)-2-penem-karboksylaattia (213 mg) liuotetaan THF:n (4 ml) ja asetonitriilin (3 ml) seokseen ja sekoitetaan -50°C:ssa. Liuokseen lisätään liuos, jossa on 6,7-dihydro- 6-merkapto-5H-pyrrolo[1,2-c]imidatsoli-trifluorimetaanisul-fonaattia (360 mg), joka on saatu vertailuesimerkissä 16-(6), THF:ssä (3 ml) ja 380 mg DBU:ta, ja seosta sekoitetaan 15 minuutin ajan -50°C:ssa. Reaktioliuokseen lisätään etyyliasetaattia (30 ml) ja pestään vedellä, sitten kyllästetyllä NaCl-liuoksella, kuivataan Na2S04in päällä ja konsentroidaan alennetussa paineessa. Saatu jäännös puhdistetaan pylväskromatografiän avulla käyttämällä 10 g piihappo-geeliä (eluentti = CHClj'.C^OH, 19:1 til./til.) ja näin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 94 mg) keltaisena öljynä (osa siitä kiinteytyy).

NMR S (CDCI3) ppm: 1,39 (3H, d, J = 6 Hz, CH3) , 2(8ru3,6 (2H, m), 3,81 (1H, dd, J = 2,6 Hz, C6-H), 4,0 PJ4,6 (4H, m), 5,33 (2H, ABq, J = 14 Hz, -OCH2Ar), 5,76 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 6,76 (1H, s, -N^^N), 7,45 (1H, s,-N^^N), 7,60

H

(2H, d, J = 9 Hz, 2 x ArH), 8,20 (2H, d, J = 9”ηζ, 2 x ArH).

(2) (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2-[(6,7-dihydro-5H-pyr-rolo[l,2-c]imidatsol-6-yyli)tio]-6-2-penem-3-karboksyylihapon (isomeerien A ja B) synteesi:

Yllä vaiheessa (1) saatu yhdiste (94 mg) liuotetaan THF:n (7 ml) ja Eosfaattipuskurin (7 ml, pH 7) seokseen, lisätään 70 8721 8 180 mg 10 %:sta palladium-hiiltä katalyyttisen pelkistyksen suorittamiseksi huoneenlämpötilassa 4,5 tunnin aikana 1 atmosfäärin vetypaineessa. Katalysaattori poistetaan suodattamalla, sitten suodos laimennetaan vedellä ja pestään eetterin ja etyyliasetaatin 1:1-seoksella. Vesifaasi konsentroidaan 30 ml:aan ja puhdistetaan pylväskromatografiän avulla käyttämällä Diaion HP-20:tä (1,8 cm x 23 20 cm). Poistetaan fraktiot, jotka on eluoitu 100 ml:lla vettä, ja fraktiot, jotka on eluoitu 5 %:sella asetonitriili-vedellä ja joiden maksimaalinen UV-absorptio on 323 nm:ssä, yhdistetään ja konsentroidaan alennetussa paineessa. Konsentraatti puhdistetaan edelleen HPLC:llä (kantoaine: Nucleosil 7Cig (10 x 300 mm), liuotin: 5 %:nen asetonitriili-vesi, virtausnopeus: 4 ml/min.), fraktiot, joiden retentioaika on 16 min. ja 21 min., kerätään, konsentroidaan tyhjössä ja lyofilisoidaan, jolloin saadaan otsikkoisomeerit A ja B vaaleankeltaisena jauheena.

Isomeeri A: saanto 13 mg IR (KBr-tabletti) cm-1: 3400, 1765, 1620, 1580 UvX.max <h20) ““s 323 NMR S (D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 3,00^3,8 (2H, m), 4,01 (1H, dd, J = 2, 6 Hz, C6-H), 4,20r\J4,50 (4H, m), 4.80 (HOD), 5,79 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,11 (1H, s, imi-datsolirengas-H), 8,37 (1H, s, imidatsolirengas-H) HPLC (retentioaika): 16 min.

Isomeeri B: saanto 10 mg IR (KBr-tabletti) cm-^-: 3400, 1775, 1585 uv^max (H20) nm: 323 NMR δ (D20) ppm: 1,37 (3H, d, j = 6 Hz, CH3), 2,9^3,80 (2H, m) 4,01 (1H, dd, J = 2, 6 Hz, C6-H), 4,20^4,60 (4H, m) 4.80 (HOD), 5,78 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,11 (1H, s, imidatsolirengas-H), 8,36 (1H, s, imidatsolirengas-H) HPLC (retentioaika): 21 min.

71 8721 8

Esimerkki 25: (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli )-2-[(6,7-dihydro-2-metyyli-5H-pyrrolo[l,2-c]imidatsolium-6-yyli)tio]-2-penem-3-karbok-sylaatin (isomeerien A ja B) synteesi: 0>N—i^C02pNB — QJ-n—KCQe

Yllä esimerkin 24 vaiheessa (1) saatu yhdiste (60 mg) liuotetaan 4 ml:aan asetonia, lisätään 0,5 ml metyylijodidia ja annetaan seistä kolmen päivän ajan 3°C:ssa. Reaktioliuos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa ja saatava jäännös pestään eetterillä ja kuivataan. Saatava jauhe liuotetaan THF:n (10 ml) ja veden (10 ml) seokseen, lisätään 1,2 g ammoniumkloridia ja 600 mg rautajauhetta (silmäkoko 100) ja sekoitetaan voimakkaasti tunnin ajan. Liukenemattomat poistetaan suodattamalla (Celite®), suodos laimennetaan vedellä, pestään etyyliasetaatti-eetteri-seoksella (1:1), ja vesifaa-si konsentroidaan 20 ml:aan alennetussa paineessa. Konsent-raatti puhdistetaan pylväskromatografiän avulla käyttämällä Daiaion HP-20:tä (1,8 cm x 20 cm), poistetaan fraktiot, jotka on eluoitu 100 ml:lla vettä, ja fraktiot, jotka on eluoi-tu 5 %:sella THF-vedellä, kerätään ja konsentroidaan alennetussa paineessa. Saatava konsentraatti puhdistetaan edelleen HPLC: llä (kantoaine: Nucleosil 7C]_s (10 x 300 mm), liuotin: 5 %:nen asetonitriili-vesi, virtausnopeus: 4 ml/min.) ja fraktiot, joiden retentioaika on 18 min. ja vastaavasti 24 min., tuottavat otsikkoisomeerit A ja B vaaleankeltaisena jauheena.

Isomeeri A: saanto l) mg IR (KBr-tabletti) cm-1-: L760, 1725, L670, 1640, 1580 ϋνλ-max (H2O) nm: 323 NMR 6 (D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH3) , 3,22 (1H, dd, 72 8721 8 J = 18, 4 Hz), 3,68 (1H, dd, J = 18, 7 Hz), 3,94 (3H, s, =!$CH3), 4,01 UH, dd, J = 7, 2 Hz, C6-H), 4,20/^4,70 (4H, m), 4,80 (HOD), 5,78 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,23 (1H, s, imidatsoliumrengas-H), 8,64 (1H, s, imidatsoliumrengas-H) HPLC (retentioaika): 18 min.

Isomeeri B: saanto 6 mg IR (KBr-tabletti) cm“l; 1765, 1590 UV^max <h2°> 323 NMR & (D2O) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 3,12 (1H, dd, J = 18, 4 Hz), 3,64 (1H, dd, J = 18, 7 Hz), 3,94 (3H, s, =N%i3), 4,20 4,70 (4H, m), 4,80 (HOD), 5,78 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,24 (1H, s, imidatsoliumrengas-H), 8,64 (1H, s, imidatsoliumrengas-H) HPLC (retentioaika): 24 min.

Esimerkki 26: (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli )-2-[(6,7-dihydro-l-hydroksyy-li-5H-pyrrolo- [1,2-c]imidatsol-6-yyli)tio]-2-penem-3-kar-boksyylihapon synteesi:

OH

OH 9 OH OH

ys wN

0^N~^C0^NB -^cOjPNB ο^“Ν—Νθ2Η (1) p-nitrobentsyyli-(5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2[(6,7-dihydro-l-hydroksyyli-5H-pyrrolo[l,2-c]imidatsol-6-yyli)-tio]-2-penem-3-karboksylaatin synteesi:

Kohdeyhdiste valmistetaan esimerkin 22 (L)-vaihoen toimenpiteitä noudattamalla käyttämällä 170 mg p-nitrobent-syyli-(5R,6S,8R)-2etyylisulf inyyli-6-(1-hydroksietyyli)--2-penem-karboksylaattia, 300 mg 6,7-dihydro-l-hydroksi-6-merkapto-5H-pyrrolo[1,2-c]imidatsolia, joka on saatu vertai-luesimerkin 17 vaiheessa (8), ja 396 mg DBU:ta. Saanto: 195 mg.

73 8721 8 NMR <S (CDCI3-CD3OD) ppm: 1,35 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 5,35 (2H, ABq, J = 14 Hz, OCH2Ar), 5,72 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,64 (2H, d, J = 9 Hz, 2 x ArH), 8,23 (2H, d, J = 9 Hz, 2 x ArH), 8,23 (1H, s, imidatsolirengas-H) (2) (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli )-2-[(6,7-dihydro-l-hyd-roksyyli-5H-pyrrolo[l,2-c]imidatsol-6-yyli)tio]-2-penem-3-karboksyylihapon synteesi:

Esimerkin 22 vaiheessa (2) esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti valmistetaan otsikkoyhdiste (saanto: 36 mg) käyttämällä 195 mg edellisessä vaiheessa (1) saatua yhdistettä ja 300 mg 10 %:sta palladium-hiiltä.

IR (KBr-tabletti) cm-·*-: 3400, 1760 , 1650, 1580 UV iVmax <H20> nm: 323 NMR 8(D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 2,60 (2H, m), 4,00 ro 4,40 (5H, m), 4,80 (HOD), 5,78 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 5,78 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 8,32 (1H, s, imidatso-lirengas-H) HLPC (retentioaika): 13 min. olosuhteet: kantoaine: Nucleo-sil 7Ci8 (10 x 300 mm) liuotin: 1 %:nen asetonitriili-vesi virtausnopeus: 4 ml/min.

Esimerkki 27: (1) p-nitrobentsyyli-(5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2-t(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4-triatsol-6-yyli)tio]- 2-penem-3-karboksylaatin synteesi:

XnV* ν^γκϊ>

0J-N—1Lc02pN6 DBU qJ-N—1^COlPNB

p-nitrobentsyyli-(5R,6 S,8R)-2-etyylisulfinyyli-6-(1-hydrok-sietyyli)-penem-karboksylaattia (170 mg) liuotetaan aseto-nitriilin (2 ml) ja THF:n (2 ml) seokseen ja jäähdytetään -30°C:seen. Jäähdytettyyn liuokseen lisätään liuos, jossa on 74 8721 8 6,7-dihydro-6-merkapto-5H-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4-triatsoli-trifluorimetaanisulfonaattia (250 mg) asetonitriilissä (2 ml) ja DBUrssa (244 mg), ja sekoitetaan 20 minuutin ajan tässä lämpötilassa. Reaktion päätyttyä lisätään 30 ml etyyliasetaattia, pestään vedellä, sen jälkeen NaCl:n kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivataan Na2SC>4:n päällä ja konsentroidaan alennetussa paineessa. Saatu jäännös puhdistetaan pyl-väskromatografiän avulla käyttämällä 15 g piihappogeeliä ja eluointi suoritetaan käyttämällä kloroformia sisältävää me-tanolia (sen polaarisuutta lisätään asteittain muuttamalla CHCl3:n ja CH3OH:n välistä sekoitussuhdetta arvosta 19:1 arvoon 4:1). Otsikkoyhdisteen sisältävät fraktiot kerätään ja konsentroidaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan ot-sikkoyhdi3te (saanto: 147 mg) kellertävänä öljynä.

NMR 6 (CDCI3 + CD3OD) ppm: 1,36 ((3H, d, J = 6 Hz, CH3), 3,0 - 3,9 (3H, m), 4,0ίυ 4,8 <4H, m), 5,34 (2H, ABq, J = 14 Hz, -COOCH2-), 5,77 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 7,61 ja 8,21 (2H, d, J = 9 Hz, -C6H4NO2), 8,18 (1H, s, triatsolirengas-H) TLC: Rf = 0,3 (piihappogeelilevy (Merck), paksuus 0,25 mm, kehitysliuotin: kloroformi-metanoli (4:1)) (2) (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)—2—[(6,7-dihydro-5H-pyr- rolo[2,l-c]-l,2,4-triatsol-6-yyli)tio]-2-penem-3-karboksyy-lihapon (isomeerien A ja B) synteesi:

^COaPNB 0 N CO2H

Edellisessä vaiheessa (1) saatu yhdiste (141 mg) liuotetaan THF:n (6 ml) ja fosfaattipuskurin (pH 7,0, 6 ml) seokseen, lisätään 200 mg 10 %:sta palladium-hiiltä katalyyttisen pelkistyksen suorittamiseksi huoneenlämpötilassa 3,5 tunnin kuluessa 1 atmosfäärin vetypaineessa. Katalysaattori poistetaan suodattamalla, suodos laimennetaan vedellä ja vesifaasi pestään eetterin ja etyyliasetaatin 1:1-seoksella. Vesifaasi 75 8721 8 konsentroidaan 30 mlraan ja puhdistetaan pylväällä, jossa on Diaion HP-20:tä (1,8 cm x 20 cm). Poistetaan fraktiot, jotka on eluoitu 100 ml:11a vettä, ja fraktiot, jotka on eluoi-tu 5 %:sella THF-vedellä, kerätään ja konsentroidaan alennetussa paineessa. Konsentraatti puhdistetaan edelleen HPLCillä (kantoaine: Nucleosil 7Ci8 (10 x 300 mm), liuotin: 3 %:nen asetonitriili-vesi, virtausnopeus: 4 ml/min.), fraktiot, joiden retentioaika on 11 min., kerätään, konsentroidaan alennetussa paineessa ja lyofilisoidaan, jolloin saadaan 30 mg otsikkotuotetta värittömänä jauheena.

IR (KBr-tabletti) cm-1: 3400, 1760, 1580 (JVi^max (H20) nm: 323 NMR δ (020) ppm: N- 1,36 (1,5H, d, J = 6 Hz, CH3) , 3,0r\J3,8 (2H, m, -CH2—^ , ^N- 4,00 (1H, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,2 4,4 (m), 4,80 (HOD), 5,77 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 8,44 (1H, s, triatsolirengas- H)

Tuote puhdistetaan edelleen HPLC:llä (kantoaine: ODS (20 x 300 mm), liuotin: 3 %:nen asetonitriili-vesi, virtausnopeus: 10 ml/min.) ja kerätään fraktiot, joiden retentioaika on 12,3 min. ja 13 min., jotka tuottava isomeerit A ja B lyofi-lisoinnin jälkeen vaaleankeltaisena jauheena.

Isomeeri A: NMR δ (D20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 3,00/^3,32 (1H, m), 3,50/^3,83 (1H, m), 4,00 (1H, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,10 4,50 (2H, m), 4,80 (HOD), 5,77 (1H, d, J = 2

Hz, C5-H), 8,44 (1H, s, triatsolirengas-H)

Isomeeri B: NMR δ (d20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3) , 2,96^3,22 (1H, m), 3,46^3,78 (1H, m), 4,00 (1H, dd, J = 2, 6 Hz, Cg-H), 4,13^4,50 (2H, m), 4,80 (HOD), 5,77 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 8,44 (1H, s, triatsolirengas-H) 76 87218

Esimerkki 28: (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2-[(6,7-dihydro-N-metyyli-5H-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4-triatsolium-6-yyli)tio]-2-penem-3-karboksylaatin (isomeerien A ja B seoksen ja isomeerien C ja D) synteesi:

Cr TOzPNB U) Fe/aq· NH<C1 QJ~N-^ e

Yllä esimerkin 27 vaiheessa (1) saatu yhdiste (400 mg) käsitellään esimerkissä 23 esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti ja puhdistetaan HPLC:llä (kantoaine: Nucleosil 7Ci8 (10 x 300 mm), liuotin: 5 %:nen asetonitriili-vesi, virtausnopeus: 5 ml/min.) tuotteen eristämiseksi ja puhdistamiseksi. Näin erotetaan kolme fraktiota, joiden retentioajat ovat 7,8, 8,4 ja 13,5 min. ja jotka tuottavat isomeerien A, B seoksen ja isomeerit C ja D lyofilisoinnin jälkeen keltaisena jauheena.

Sekaisomeeri A, B: saanto 35 mg IR (KBr-tabletti) cm-1: 3400, 1770, 1640, 1580 UV λ max <**20) nm: 323 NMR & (D2O) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 3,3oo 4,0 (2H, m), 4,06 (3H, s, N-CH3), 4,80 (HOD), 5,80 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 8,76 (1H, triatsoliumrengas^H)

Isomeeri C: saanto 36 mg UV max (H2O) nm: 323 NMR (D2O) ppm: 1,38 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 3,25 00 3,56 (1H, m), 3,710^4,10 (2H, m), 4,18 (3H, s, N-CH3), 4,80 (HOD), 5,81 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H)

Isomeeri D: saanto 38 mg UV λ max (H2O) nm: 323 NMR δ (D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 3,15003,45 8721 8 77 (1H, m), 3,63 4,10 (2H, m), 4,18 <3H, s, N-CH3), 4,80 (HOD), 5,81 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H)

Esimerkki 29: (5R,6S,8R)-2-[(3-amino-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[2,1-c ]-1,2,4-triatsol-6-yyli)tio]-6-(1-hydroksietyyli)-penem-3-karbok-syy1ihapon synteesi: oh 9 9H /~>*N\

/^^SYS-Et _>^w'sys'vXyN

0J—N ^-C02PNB CT N tOzH NHz p-nitrobentsyyli-(5R,6S,8R)-2-etyylisulfinyyli-6-(1-hydroksietyyli )-penem-3-karboksylaattia (70 mg) ja 3-amino-6,7-di-hydro-6-merkapto-5H-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4-triatsoli* trifluori-metaanisulfonaattia (100 mg) liuotetaan DMF:ään (2 ml), lisätään di-isopropyylietyyliamiinia (85 mg) jäähdyttämällä samalla -50°C:seen ja sekoitetaan 30 minuutin ajan tässä lämpötilassa. Reaktioliuos kaadetaan eetteriin ja emäliuos poistetaan dekantoimalla. Sakat liuotetaan THF:n (15 ml) ja fosfaattipuskurin (pH 7,0, 15 ml) seokseen, ja lisätään 10 %:sta palladium-hiiltä (100 mg) katalyyttisen pelkistyksen suorittamiseksi huoneenlämpötilassa viiden tunnin kuluessa. Katalysaattori poistetaan suodattamalla, suodos ja pesuneste konsentroidaan alennetussa paineessa ja pestään etyyliasetaatilla. Vesifaasi konsentroidaan ja konsentraatti puhdistetaan pylväällä, jossa on Diaion HP-20:tä (1,8 cm x 20 cm). Tässä vaiheessa poistetaan fraktiot, jotka on eluoi-tu 130 ml :11a vettä, ja fraktiot, jotka on eluoitu 5 %:sella THF-vedellä, yhdistetään, konsentroidaan ja puhdistetaan HPLC:llä (kantoaine: Nucleosil 7C±q (10 x 300 mm), liuotin: 3 %:nen asetonitriili-vesi, virtausnopeus: 3,65 ml/min.).

Lyofilisoinnin jälkeen saadaan 24 mg otsikkotuotetta värittömänä jauheena.

IR (KBr-tabletti) cm~l: 1760, 1675 uv ^max (H20) nm: 253, 323 8721 8 78 NMR &(D20) ppm: 1,36 (9/5H, d, J = 6 Hz, CH3), 1,40 (6/5H, d, J = 6 Hz, CH3), 3,1^3,5 (1H, m, pyrroliinirengas C7-H), 3,50fV 4,0 (1H, m, pyrroliinirengas C7-H), 4,0/^5,0 (5H, m, pyrroliinirengas C5-H2, pyrroliinirengas Cg-H, Cg-H ja Cg-H), 4,80 (HOD), 5,80 (1H, d, J = 1 Hz, C5-H) HPLC (retentioaika): 23,2 ja 28,8 min,

Esimerkki 30: (5R,6S,8R)-2-[(2,3-dihydro-lH-pyratsolo[1,2-a Jpyratsolium- 2-yyli)tio J-6-(1-hydroksietyyli)-2-penem-karboksylaatin synteesi: 0>-N ^COzPNB 0J- N-kcof

Toimitaan esimerkissä 19 esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti sillä erotuksella, että käytetään 2,3-dihydro-2-mer-kapto-lH-pyratsolo[1,2-a]pyratsolium·trifluorimetaanisulfo-naattia. Saadaan otsikkoyhdiste vaaleankeltaisena jauheena.

IR (KBr-tabletti) cm-1: 1775, 1595 UvAmax (H20) nm: 250 , 323 NMR <S (D20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 4,03 (1H, dd, J - 2, 6 Hz, CH3), 4,15 4,43 (1H, m, C8-H), 5,80 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 6,97 (1H, t, J = 3 Hz, pyratsolium-H 6-ase-massa), 8,28 (2H, d, J = 3 Hz, pyratsolium-H 5- ja 7-asemas-sa).

HPLC (retentioaika): 13 min, olosuhteet: kantoaine: Nucleosil 7C3g (10 x 300 mm) liuotin: 3 %:nen asetonitriili-vesi virtausnopeus: 5 ml/min, 79 8721 8

Esimerkki 31: (5R,6S,8R)-6-(l-hydroksietyyli)—2—[(4-metyylipyrrolitsidi-nium-l-yyli)tio]-2-penem-3-karboksylaatin (isomeerien A ja B) synteesi: °H 9 OH .u

-V<Ys'Et _rN

0>-N ^c02pNB qJ-H-K. k/ C02 p-nitrobentsyyli-(5R,6S,8R)-2-etyylisulf inyyli-6-(1-hydrok-sietyyli)-2-penem-3-karboksylaattia (150 mg) ja 1-merkapto- 4-metyylipyrrolitsidinium-trifluorimetaanisulfonaattia (215 mg) liuotetaan 4 mitään DMF:ää, lisätään 130 mg di-isopro-pyylietyyliamiinia sekoittaen ja jäähdyttäen -40°C:ssa tunnin ajan argonatmosfäärissä. Reaktioseokseen lisätään eetteriä ja eetterifaasi poistetaan. Jäännös liuotetaan THF:n (20 ml) ja fosfaattipuskurin (pH 7,0, 20 ml) seokseen, lisätään 200 mg platinaoksidia ja pelkistetään 4 atmosfäärin vetypai-neessa tunnin ajan. Vesifaasi konsentroidaan alennetussa paineessa, konsentraatti puhdistetaan pylväskromatografiän avulla käyttämällä Daiaion HP-20:tä (1,8 cm x 20 cm), kerätään fraktiot, jotka on eluoitu 5 %:sella THF-vedellä, konsentroidaan alennetussa paineessa ja puhdistetaan HPLC:llä (kantoaine: Nucleosil 7C^g (10 x 300 mm), liuotin: 5 %:nen asetonitriili-vesi, virtausnopeus: 5 ml/min.). Näin saadaan otsikkoyhdiste vaaleankeltaisena jauheena lyofilisoinnin jälkeen.

Isomeeri A: saanto 15 mg IR (KBr-tabletti) cm-1: 1765, 1590 uv^max (H20) nm: 258, 323 NMR δ (D20) ppm: 1,37 (3 H, d, J = 6 Hz, CH3), 1,90 M 2,90 (6H, m), 3,29 (3H, s, =N@CH3) , 3,407\J4,60 (8H, m), 4,80 (HOD), 5,80 (IH, d, J = 2 Hz, C5-H) HPLC (retentioaika): 12 min.

so 87218

Isomeeri B: saanto 22 mg IR (KBr-tabletti) cm-1: 1760, 1590 UV λmax (H2O) nm: 258, 324 NMR <5 (D2O) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH3) , 1,90/^3,10 (6H, m), 3,32 (3H, s, =N@CH3), 3,50r^4,50 (8H, m), 4,80 (HOD), 5,80 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H) HPLC (retentioaika): 17,5 min.

Esimerkki 32: (5R,6S,8R)-2-[(4-(2-fluorietyyli)-pyrrolitsidinium-l-yyli)-tio]-6-(l-hydroksietyyli)-2-penem-3-karboksylaatin (isomeerien A ja B) synteesi: 0H ' r °H r 0>-N-kc02pNB o·^-^ C0f ^

Esimerkin 31 toimenpiteiden mukaisesti käyttämällä 4-(2-fluorietyyli)-l-merkaptopyrrolitsidinium-trifluorimetaani-sulfonaattia saadaan otsikkoyhdiste vaaleankeltaisena jauheena.

Isomeeri A: IR (KBr-tabletti) cm"-1-: 1770, 1595 uv ^max (H20) nm: 255, 323 NMR S (D2O) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3) , l,90rO2,80 (6H, m), 3,20/^4,50 (10H, m), 4,80 (HOD), 5,20/^5,40 (1H, m), 5,80 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H) HPLC (retentioaika): 10,5 min.

olosuhteet: kantoaine: Nucleosil 7C;l8 <10 x 200 mm), liuotin: 7 %:nen asetonitriili-vesi, virtausnopeus: 5 ml/min.

Isomeeri B: 81 8721 8 IR (KBr-tabletti) cm-3-: 1770, 1590 trvAniax (H20) nm: 255, 323 NMR <S (D20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3), 1,80rv 3,00 (6H, m), 3,50<^ 4,50 (10H, m), 4,80 (HOD), 5,20~ 5,40 (1H, m), 5,80 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H) HPLC (retentioaika): 12,5 min.

Esimerkki 33: (5R,6S,8R)-6-(1-hydroksietyyli)-2-[(4-metyylipyrrolitsidi-nium-2-yyli)tio]-2-penem-3-karboksylaatin (isomeerien A ja B) synteesi: OH 9 OH /-'-τ-'Λ A-rsrs~El 0^ n ^co2pnb 0J~H Yo! CH3

Esimerkissä 31 esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti sillä erotuksella, että käytetään 2-merkapto-4-metyylipyrrolitsi-dinium*tr ifluorimetaanisulfonaattia, saadaan otsikkoisomeerit vaaleankeltaisena jauheena.

Isomeeri A: IR (KBr-tabletti) cm-1: 1765, 1590 uv λ-max <h20) nm: 250' 322 NMR 6 (D20) ppm: 1,37 (3H, d, J = 6 Hz, CH3) , 1,80^2,70 (6H, m), 3,30 (3H, s, =N®CH3), 3,55^3,80 (3H, m), 3,90 4,45 (5H, m), 4,80 (HOD), 5,78 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H) HPLC (retentioaika): 11,5 min.

olosuhteet: kantoaine: Nucleosil 7Cig (10 x 300 mm) liuotin: 5 %:nen asetonitriili-vesi virtausnopeus: 5 ml/min.

Isomeeri B: UV Amax (H20) nm: 250, 323 NMR 6 (D20) ppm: 1,36 (3H, d, J = 6 Hz, CH3) , 1,80 rvJ 2,60 82 8721 8 (6H, m), 2,700-» 3,10 (1H, m), 3,24 (3H, s, =N$:H3), 3,40rv> 4,40 (7H, m), 4,80 (HOD), 5,76 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H) HPLC (retentioaika): 15 min.

Vertailuesimerkki 12: 2,3-dihydro-l-merkapto-lH-indolitsinium-trifluorimetaani-sulfonaatin synteesi: O] —»-------Θ ^N^COit y-N CF3SO3 (1) Etyylipikolinoyyliasetaatti:

Natriumhydridiä suspendoidaan 200 ml:aan DMF:ää ja lisätään tipoittain 50°C:n haudelämpötilassa 30 minuutin kuluessa seos, jossa on etyylipikolinaattia (20 g) ja etyyliasetaattia (17,5 g) 150 ml:ssa DMF:ää. Reaktioliuosta sekoitetaan 30 minuutin ajan 50°C:ssa ja jäähdytetään jäällä ja lisätään etikkahappoa (13,0 g).

Reaktioliuos laimennetaan etyyliasetaatilla, pestään vedellä ja kuivataan MgS04:n päällä, sitten liuotin tislataan pois tyhjössä. Saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 21,2 g).

NMR δ(CDCI3) ppm: 1,23 (3H, t, J = 7 Hz), 4,16 (2H, s), 4,16 (2H, q, J = 7 Hz), 7,40 (1H, ddd, J = 1, 7, 7 Hz), 7,77 (1H, dd, J = 1, 7 Hz), 7,95 (1H, ddd, J = 1, 7, 7 Hz), 8,58 (1H, dd, J = 1, 7 Hz), (2) Etyyli-3-hydroksyyli-3-(2-pyridyyli Jpropionaatti:

Vaiheessa (1) saatu yhdiste (21,0 g) liuotetaan 300 ml:aan etanolia ja lisätään natriumboorihydridiä (2,1 g) jääjäähdy-tyksessä ja sekoittaen, ja sekoitetaan vielä 30 minuutin ajan tässä lämpötilassa. Reaktioliuos neutraloidaan 0,5 N kloorivetyhapolla jää jäähdytyksessä ja liuotin tislataan 83 87213 pois tyhjössä. Jäännös jaetaan veden ja etyyliasetaatin välillä, etyyliasetaattifaasi pestään vedellä, kuivataan MgSOipn päällä ja liuotin tislataan pois tyhjössä. Jäännös puhdistetaan pylväskromatografiän avulla käyttämällä 150 g piihappogeeliä (eluentti: bentseeni/etyyliasetaatti 1:1) ja näin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 14,6 g).

NMR 6 (CDCI3) ppm: 1,14 <3H, t, J = 7 Hz), 2,61 (1H, dd, J = 8, 17 Hz), 2,80 (1H, dd, J = 5, 17 Hz), 4,04 (2H, q, J = 7 Hz), 4,30 (1H, m), 5,05 (1H, m), 7,04 (1H, dt, J = 1, 7 Hz), 7,27 (1H, dd, J = 1, 7 Hz), 7,55 (1H, dt, J = 1, 7 Hz), 8,36 (1H, dd, J = 1, 7 Hz) (3) Etyyli-3-bentsoyylitio-3-(2-pyridyyli)propionaatti:

Trifenyylifosfiiniä (37,6 g) liuotetaan 400 ml:an THF:ää, lisätään dietyyliatsodikarboksylaattia (25,0 g) jää jäähdytyksessä ja sekoitetaan jatkuvasti 30 minuutin ajan tässä lämpötilassa. Liuos, joka koostuu vaiheessa (2) saadun yhdisteen (14,0 g) liuoksesta, joka on 100 ml:ssa THF:ä, ja tiobentsoehaposta (16,0 g), lisätään reaktioliuokseen ja sekoitetaan 2 tunnin ajan tässä lämpötilassa. Reaktioliuos haihdutetaan kuiviin tyhjössä ja jäännös jaetaan etyyliasetaatin ja 5 %:sen natriumbikarbonaatin vesipitoisen liuoksen välillä. Etyyliasetaattikerros pestään vedellä, kuivataan MgSC>4:n päällä ja sitten liuotin tislataan pois tyhjössä. Saostuneet kiteet pestään isopropyylieetterillä. Jäännös puhdistetaan pylväskromatografiän avulla käyttämällä pylvästä, jossa on 500 g piihappogeeliä (eluentti: bentseeni/etyyliasetaatti 10:1). Saatu jäännös puhdistetaan kerran vielä pylväskromatografiän avulla käyttämällä pylvästä, jossa on 300 g piihappogeeliä (eluentti: bentseeni/etyyliasetaatti 10:1), jolloin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 15,2 g).

NMR 6 (CDCI3) ppm: 1,17 (3H, t, J = 7 Hz), 3,12 (1H, dd, J = 7, 15 Hz), 3,44 (1H, dd, J = 8, 15 Hz), 4,08 (2H, q, J = 7 Hz), 5,38 (1H, dd, J = 8, 15 Hz) , 7,1 r\j 7,8 (6H, m) , 7,8 rsj 8,0 (2H, m), 8,56 (1H, dd, J = 1, 7 Hz).

84 8721 8 (4) Etyyli-3-p-metoksibentsyylitio-3-(2-pyridyyli)propio-naatti:

Vaiheessa (3) saatu yhdiste (5.55 g) liuotetaan 80 ml:aan metanolia, lisätään natriummetoJcsidia (0,95 g) jää jäähdytyksessä ja sekoitetaan 2,5 tunnin ajan tässä lämpötilassa. Reaktioliuokseen lisätään etikkahappoa (1,06 g) ja liuos haihdutetaan kuiviin tyhjössä. Jäännös jaetaan natriumbikarbonaatin 5 Itsen vesiliuoksen ja etyyliasetaatin välillä, etyyliasetaattifaasi kuivataan MgSO^n päällä ja sitten liuotin tislataan pois tyhjössä. Saatu öljyinen aine (5,02 g) liuotetaan 150 ml:aan bentseeniä, lisätään p-metoksibent-syylikloridia (2,76 g) ja DBU:ta (2,68 g) ja sekoitetaan tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Reaktioliuos pestään vedellä ja kuivataan MgSC>4:n päällä, sitten liuotin tislataan pois tyhjössä. Jäännös puhdistetaan pylväskromatogra-fian avulla käyttämällä pylvästä, jossa on 150 g piihappo-geeliä (eluentti: bentseeni/etyyliasetaatti 10:1) ja näin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 3,26 g).

NMR δ(CDCI3) ppm: 1,12 (3H, t, J = 7 Hz), 2,88 (1H, dd, J = 7, 16 Hz), 3,13 (1H, dd, J = 9, 16 Hz), 3,60 (2H, s), 3,76 (3H, s), 4,03 (2H, q, J = 7 Hz), 4,28 (1H, dd, J = 7, 9 Hz), 6,76 (2H, d, J = 9 Hz), 7,13 (2H, d, J = 9 Hz), 7,0^7,4 (2H, m), 7,57 (1H, dt, J = 2, 8 Hz), 8,48 (1H, dd, J = 2, 7 HZ) (5) 3-p-metoksibentsyylitio-3-(2-pyridyyli)propanoli:

Litiumaluminiumhydridiä (1,07 g) suspendoidaan 150 ml:aan eetteriä, lisätään tipoittain argonatmosfäärissä liuos, jossa on vaiheessa (4) saatu yhdiste (9,34 g) 70 ml:ssa eetteriä, ja kuumennetaan palautus jäähdyttäen 1,5 tunnin ajan. Reaktioliuokseen lisätään varovasti ammoniumkloridin 20 %:nen vesiliuos (50 ml) jää jäähdytyksessä ja suodatetaan (Celite®). Eetterifaasi pestään vedellä ja kuivataan MgSC>4:n päällä ja liuotin tislataan pois tyhjössä. Jäännös puhdistetaan pylväskromatografiällä käyttämällä 70 g piihap- 8721 3 85 pogeeliä (eluointi: etyyliasetaatti) ja näin saadaan otsik-koyhdiste (saanto: 7,36 g) NMR 6 (CDC13) ppm: 2,0^2,3 (2H, m), 3,56 (2H, s), 3,5r^ 3,8 (2H, m), 3,78 (3H, s), 4,08 (1H, t, J = 7 Hz), 6,80 (2H, d, J = 9 Hz), 7,15 (2H, d, J = 9 Hz), 7,1^7,5 <2H, m), 7,68 (1H, dt, J = 2, 8 Hz), 8,54 (1H, dd, J = 2, 7 Hz).

(6) 2,3-dihydro-l-(p-metoksibentsyylitio)-lH-indolitsinium-p-tolueenisulfonaatti:

Vaiheessa (5) saatu yhdiste (7,86 g) liuotetaan 50 mlzaan pyridiiniä, lisätään p-tolueenisulfonyylikloridia (7,10 g) ja sekoitetaan 4,5 tunnin ajan jää jäähdytyksessä. Reaktio-liuokseen lisätään 100 ml vettä, liuos saatetaan pH-arvoon 9,2 natriumhydroksidin 1 N vesiliuoksella ja uutetaan keskeytymättä eetterillä pyridiinin poistamiseksi. Vesifaasi pestään bentseenillä ja etyyliasetaatilla ja sen pH saatetaan arvoon 1,8 lisäämällä konsentroitua kloorivetyhappoa ja haihdutetaan kuiviin tyhjössä. Jäännökseen lisätään etanolia, liukenemattomat aineet suodatetaan pois. Suodoksesta poistetaan väri aktiivihiilellä, minkä jälkeen suodos konsentroidaan ja kaadetaan eetteriin. Emäliuos poistetaan ja sakat kuivataan, niin että saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 9,56 ; g)· NMR £ (DMSO-d6) ppm: 2,26 (3H, s), 2,2/^2,6 (1H, m), 2,6^ 3,1 (1H, m), 3,70 (2H, s), 3,90 (3H, s), 3,9 (1H, m), 4,83 (2H, m), 6,82 (2H, d, J = 9 Hz), 7,06 (2H, d, J * 9 Hz), 7,23 (2H, d, J = 9 Hz), 7,46 (2H, d, J = 9 Hz), 7,8^ 8,1 (2H, m), 8,41 (1H, dt, J = 1,8 Hz), 8,91 (lH, dd, J = 1, 7 Hz), (7) 2,3-dihydro-l-merkapto-lH-indolitsinium-trifluorimetaa-nisulfonaatti:

Vaiheessa (6) saatu yhdiste (8,29 g) ja anisolia (10,14 g) liuotetaan 50 ml:aan tr ifluorietikkahappoa, lisätään tri-fluorimetaanisulfonihappoa (4,55 g) jääjäähdytyksessä ja se- « 87218 oo koitetaan 30 minuutin ajan samassa lämpötilassa ja sitten 1.5 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Reaktioliuos haihdutetaan kuiviin tyhjössä, jäännös pestään heksaanilla, isopro-pyylieetterillä ja vastaavasti eetterillä. Jäännös liuotetaan metanoliin ja kaadetaan eetteriin sekoittaen ja sakan yllä oleva neste poistetaan. Sakat kuivataan, jolloin saadaan aiottu yhdiste (saanto: 4,20 g).

NMR 5(DMSO-d6) ppm: 2,1^2,5 (1H, m), 2,6^3,2 (1H, m), 4.5 5,1 (3H, m), 7,9 8,2 (2H, m), 8,40 (1H, dt, J = 1, 8 Hz), 8,91 (1H, dd, J = 1, 7 Hz)

Vertailuesimerkki 13: 2,3-dihydro-2-merkapto-lH-indolitsinium-trifluorimetaani-sulfonaatin synteesi: rSi | —.....

S^-COaE, A"^F,S0f (1) Etyyli-2-hydroksyyli-3-(2-pyridyyli)propionaatti:

Otsikkoyhdiste saadaan saattamalla 4,31 g etyyli-2-pyridyyli-pyruvaattia (syntetisoitu julkaisussa Chem. Pharm. Bull., 1972, 20.' 1628 esitetyn menetelmän mukaisesti) reagoimaan ja tuote jälkikäsitellään vertailuesimerkin 12 vaiheessa (2) esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti (saanto: 3,84 g).

NMR δ (CDCI3) ppm: 1,22 (3H, t, J = 7 Hz), 3,18 (1H, dd, J = 7, 14 Hz), 3,25 (1H, dd, J = 4, 14 Hz), 4,17 (2H, q, J = 7 Hz), 4,60 (1H, dd, J = 4, 7 Hz), 4,87 (1H, brs), 7,0 nJ 7,2 (2H, m), 7,56 (1H, m, dt, J = 2, 7 Hz), 8,41 (1H, dd, J = 1, f 6 Hz), (2) Etyy1i-2-bentsoyylitio-3-(2-pyridyyli)propionaatti:

Otsikkoyhdiste saadaan saattamalla reagoimaan vaiheessa (1) saatu yhdiste (3,96 g) ja jälkikäsittelemällä tuote vertai- 87 8721 8 luesimerkin 12 vaiheessa (3) esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti (saanto: 5,92 g).

NMR δ (CDC13) ppm: 1,17 (3H, t, j = 7 Hz), 3,39 (1H, dd, J = 7, 15 Hz), 3,50 (1H, dd, J = 7, 15 Hz), 4,15 (2H, q, J = 7 Hz), 4,88 (1H, t, J = 7 Hz), 7,0^ 7,6 (6H, m), 7,86 (2H, m), 8,46 (1H, dd, J =1, 6 Hz), (3) Etyyli-2-p-metoksibentsyylitio-3-(2-pyridyyli)propio-naatti:

Otsikkoyhdiste saadaan saattamalla reagoimaan vaiheessa (2) saatu yhdiste (5,90 g) ja jälkikäsittelemällä tuote vertai-luesimerkin 12 vaiheessa (4) esitetyn menetelmän mukaisesti (saanto: 4,76 g).

NMR S (CDCI3) ppm: 1,21 (3H, t, J = 7 Hz), 3,10 (1H, dd, J = 7, 15 Hz), 3,27 (1H, dd, J = 8, 15 Hz), 3,75 (3H, s), 3,77 (2H, s), 3,7 3,9 (1H, m), 4,12 (2H, q, J = 7 Hz), 6,76 (2H, d, J = 9 Hz), 6,9 ^ 7,3 (4H, m), 7,50 (1H, dt, J - 2, 8

Hz), 8,40 (1H, dd, J = 1, 6 Hz), (4) 2-p-metoksibentsyylitio-3-(2-pyridyyli)propanoli:

Otsikkoyhdiste saadaan saattamalla reagoimaan vaiheessa (3) saatu yhdiste (994 mg) ja jälkikäsittelemällä tuote vertai-luesimerkin vaiheessa (5) esitetyn menetelmän mukaisesti (saanto: 694 mg).

NMR (CDCI3) ppm: 3,0 3,5 (2H, m), 3,5 4,3 (3H, m), 3,64 (2H, s), 3,76 (3H, 3), 6,76 (2H, d, J = 9 Hz), 7,0 7,3 <2H, m), 7,12 (2H, d, J = 9 Hz), 7,54 (1H, dt, J = 2, 7 Hz), 8,40 (1H, dd, J = 2, 7 Hz), (5) 2,3-dihydro-2-(p-metoksibentsyylitio)-lH-indolitsinium-kloridi:

Vaiheessa (4) saatu yhdiste (0,8 g) liuotetaan 40 ml:aan hiilitetrakloridia, lisätään trifenyylifosfiiniä (1,45 g) ja kuumennetaan palautus jäähdyttäen 20 tunnin ajan. Jäähtymisen 88 8721 8 jälkeen supernatantti neste poistetaan dekantoimalla ja mus-tansininen eronnut öljy jaetaan veden ja etyyliasetaatin välillä. Vesifaasi pestään viisi kertaa kloroformilla ja siitä poistetaan väri aktiivihiilellä, minkä jälkeen se haihdutetaan kuiviin tyhjössä, jolloin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 0,53 g).

NMR δ (DMSO-dg) ppm: 3,2n^3,7 (2H, m), 3,77 (3H, s), 3,97 (2H, s), 3,7 4,0 (1H, m), 4,83 (1H, dd, J = 5, 13 Hz), 5,10 (1H, dd, J = 7, 13 Hz), 6,92 (2H, d, J = 9 Hz), 7,32 (2H, d, J = 9 Hz), 7,8^8,2 (2H, m), 8,54 (1H, dt, J = 1, 8 Hz), 9,00 (1H, dd, J = 1, 7 Hz), (6) 2,3-dihydro-2-merkapto-lH-indolitsinium-trifluorimetaa-nisulfonaatti:

Otsikkoyhdiste saadaan saattamalla reagoimaan vaiheessa (5) 3aatu yhdiste (535 mg) ja jälkikäsittelemällä tuote vertai-luesimerkin 12 vaiheessa (7) esitetyn menetelmän mukaisesti (saanto: 520 mg).

NMR & (D2O) ppm: 3,2 w 4,4 (3H, m), 4,7 5,0 (1H, m), 5,1/^ 5,4 (1H, m), 7,7 8,1 (2H, m), 8,52 (1H, dt, J = 2, 8 Hz), .8,84 (1H, dd, J = 2, 8 Hz ) , . : Vertailuesimerkki 14: 6,7-dihydro-merkapto-5H-pyrrolo[1,2-a]imidatsoli-trifluori-metaanisulfonaatin synteesi:

:J: PHB-S-\”}n .►......^HS-On\CF3S03H

Qct N—' (1) 6,7-dihydro-7-p-metoksibentsyylitio-5H-pyrrolo[l,2-a]-imidatsoli: 8721 8 89 2-etoksi-3-p-etoksibentsyylitio-l-pyrroliiniä (531 mg) (syntetisoitu JP-hakemusjulkaisussa 56987/1985 esitetyn menetelmän mukaisesti), aminoasetaldehydidimetyyliasetaalia (315 mg) ja etikkahappoa (180 mg) liuotetaan 30 ml jaan etanolia ja kuumennetaan palautusjäähdyttäen tunnin ajan. Reak-tioliuos haihdutetaan kuiviin tyhjössä, jäännös jaetaan bentseenin ja natriumhydroksidin 1 N vesiliuoksen (40 ml) välillä, bentseenifaasi pestään vedellä ja kuivataan MgSC>4:n päällä ja tämän jälkeen liuotin tislataan pois tyhjössä, jolloin saadaan 700 mg väritöntä ja läpikuultavaa öljyistä ainetta, öljyinen aine liuotetaan 30 ml:aan bentseeniä, lisätään 1,14 g p-tolueenisulfonihappoa (hydraatti) ja kuumennetaan palautusjäähdyttäen tunnin ajan. Reaktioliuos jäähdytetään, pestään natriumbikarbonaatin 5 %:sella vesiliuoksella ja vedellä ja kuivataan, minkä jälkeen liuotin tislataan pois. Jäännös puhdistetaan pylväskromatografiällä käyttämällä pylvästä, jossa on 20 g piihappogeeliä (eluointi: kloro-formi/metanoli 19:1), jolloin saadaan otsikkoyhdiste värittömänä ja läpikuultavana öljynä. Yhdiste kiteytyy seistessään jääkaapissa (sp. = 65...73°C, saanto: 0,53 g).

IR (KBr-tabletti) cm-1: 1600, 1500, 1240 NMR δ (CDCI3) ppm: 2,2^2,5 (1H, m), 2,6/~3,0 (1H, m), 3,76 (3H, s), 3,7^ 4,2 (5H, m), 6,79 (2H, d, J = 9 Hz), 6,83 (1H, d, J = 2 Hz), 7,05 (1H, d, J = 2 Hz), 7,29 (2H, d, J = 9 Hz ) , (2) 6,7-dihydro-7-merkapto-5H-pyrrolo[1,2-a]imidatsoli-tri-fluorimetaanisulfonaatti:

Otsikkoyhdiste saadaan saattamalla reagoimaan vaiheessa (1) saatu yhdiste (0,50 g) ja jälkikäsittelemällä tuote vertai-luesimerkin 12 vaiheessa (7) esitetyn menetelmän mukaisesti (saanto: 0,56 g).

NMR S (DMSO-dg + D20) ppm: 2,0^2,7 (1H, m), 3,0 /v/ 3,6 (1H, m), 4,24 (2H, m), 4,70 (1H, dd, J = 4, 7 Hz), 7,65 (2H, brs) , 90 8721 8

Vertailuesimerkki 15: 6,7-dihydro-6-merkapto-5H-pyrrolo[1,2-a]imidatsoli-trifluo-rimetaanisulfonaatin synteesi: 0

hoOh —.......^HS^C0'CF3S°3H

(1) 4-bentsoyylitio-2-pyrrolidoni:

Trifenyylifosfiiniä (10,5 g) liuotetaan 50 ml:aan THF:ää ja lisätään jää jäähdytyksessä dietyyliatsodietyylikarboksylaa-tin (6,97 g) THF- (3 ml) liuosta. 30 minuutin kuluttua lisätään 30 ml THF:ää ja lisätään tipoittain 20 minuutin kuluessa suspensio, jossa on 4-hydroksi-2-pyrrolidonia (2,02 g) (syntetisoitu julkaisussa Pellegata et ai., "Synthesis", 615 (1978) esitetyn menetelmän mukaisesti) ja tiobentsoehappoa (4.71 ml) 80 mlzssa THF:ää. Liuosta sekoitetaan edelleen puolentoista tunnin ajan huoneenlämpötilassa ja konsentroidaan tyhjössä. Konsentraatti liuotetaan etyyliasetaattiin ja pestään natriumbikarbonaatin 5 %:sella vesiliuoksella, minkä jälkeen se kyllästetyllä NaCl:n vesiliuoksella, kuivataan Na2SC>4:n päällä ja konsentroidaan tyhjössä. Jäännös puhdistetaan kromatografiän avulla käyttämällä 120 g piihappo-geeliä (eluointi bentseenin ja etyyliasetaatin seoksella, jossa sekoitussuhdetta muutetaan asteittain arvosta 1:1 arvoon 1:4 ja arvoon 1:9) ja näin saadaan otsikkoyhdiste keltaisena jauheena (sp. = 110 rwll2°C, saanto: 3.47 g).

IR (KBr-tabletti) cm'1: 1690, 1650 NMR δ (CDCI3) ppm: 2,41 (1H, dd, J = 6, 18 Hz), 2,93 (1H, dd, J = 9, 18 Hz), 3,43 (1H, dd, J = 5, 10 Hz), 3,99 (1H, dd, J = 8, 10 Hz), 4,4 (1H, m), 6,8 (1H, br), 7,4^8,0 (5H, m), (2) 4-(p-metoksibentsyylitio)-2-pyrrolidoni: 9i 8721 8

Natriummetallia (0,37 g) liuotetaan 30 mlsaan metanolia jää-jäähdytyksessä, sitten jäähdytetään -10eC:seen, lisätään liuos, jossa on vaiheessa (1) saatua yhdistettä (3,43 g) metanolissa (30 ml), ja sekoitetaan tunnin ajan tässä lämpötilassa. Tähän reaktioliuokseen lisätään tässä samassa lämpötilassa p-metoksibentsyylikloridia (2,51 g), minkä jälkeen liuosta sekoitetaan 1,5 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin tislataan pois tyhjössä, lisätään etyyliasetaattia ja pestään vedellä ja edelleen natriumbikarbonaatin 5%:sella vesiliuoksella, sitruunahapon 10%jsella vesiliuoksella ja kyllästetyllä NaCl:n vesiliuoksella. Liuos kuivataan Na2S04:n päällä ja konsentroidaan tyhjössä. Jäännös johdetaan sen puhdistamiseksi pylvään läpi, jossa on 160 g piihappogeeliä. Eluointi suoritetaan bentseeni-etyyliase-taatti-seoksella (1:1) (etyyliasetaatin määrää lisätään asteittain) ja sitten puhtaalla etyyliasetaatilla. Otsikko-yhdisteen sisältävät fraktiot yhdistetään ja konsentroidaan niin, että saadaan otsikkoyhdiste värittömänä kiteisenä tuotteena (sp. = 95 ^ 96°C, saanto: 2,69 g).

IR (KBr-tabletti) cm“l; 3240, 1670, 1610, 1510 NMR0(CDCl3) ppm: 2,16 (1H, dd, J = 7, 18 Hz), 2,64 (1H, dd, J = 8, 18 Hz), 3,2 rw3,6 (3H, m), 3,73 (2H, s), 3,80 (3H, s), 6,1 (1H, br), 6,85 ja 7,27 (2H, d, J = 9 Hz), (3) 2-etoksi-4-(p-metoksibentsyylitio)-l-pyrrollini:

Meerwein-reagenssia (ks. H. Meerwein, "Organic Synthesis", Coll. Voi. V, s. 1080), joka on valmistettu epikloorihydrii-nistä (2,75 ml) ja BF3(C2H5)2O:sta (5,89 ml), liuotetaan 30 ml:aan vedetöntä dikloorimetaania, sitten siihen lisätään vaiheessa (2) saatua yhdistettä (2,37 g) jää jäähdytyksessä ja sekoitetaan tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Liuos tehdään alkaliseksi lisäämällä natriumkarbonaatin 5 %:sta vesi-liuosta ja sitä uutetaan dikloorimetaanilla. Orgaaninen faasi pestään vedellä ja kuivataan Na2S04:n päällä, minkä jälkeen faasi konsentroidaan tyhjössä. Jäännös puhdistetaan pylväskromatografiän avulla käyttämällä pylvästä, jossa on 87218 92 50 g piihappogeeliä (eluointi: bentseeni/etyyliasetaatti 1:1). Otsikkoyhdisteen sisältävät fraktiot yhdistetään ja konsentroidaan tyhjössä, niin että saadaan otsikkoyhdiste vaaleanruskeana öljynä (saanto: 1,97 g).

NMR 8 (CDC13) ppm: 1,28 (3H, t, J = 7 Hz), 2,6 (2H, m), 3,4 - 3,9 (5H, m), 3,77 (3H, s), 4,17 (2H, q, J = 7 Hz), 6,82 ja 7,21 (2H, d, J = 9 Hz), (4) 6,7-dihydro-6-p-metoksibentsyylitio-5H-pyrrolo[1,2-a]-imidätsoli: 2-etoksi-4-p-metoksibentsyylitio-l-pyrroliiniä (930 mg) ja aminoasetaldehydi-dimetyyliasetaalia (552 mg) liuotetaan 50 ml:aan metanolia ja kuumennetaan palautusjäähdyttäen tunnin ajan sen jälkeen, kun on lisätty etikkahappoa (315 mg). Lisätään etyyliasetaattia ja vettä jäähtymisen jälkeen ja liuos tehdään alkaliseksi natriumhydroksidin 1 N vesiliuoksella ennen sen jakamista näiden välillä. Etyyliasetaatti-faasi pestään vedellä ja NaCl:n kyllästetyllä vesiliuoksella, sitten faasi kuivataan Na2SC>4:n päällä ja konsentroidaan tyhjössä. Jäännös liuotetaan 70 ml:aan bentseeniä, lisätään p-tolueenisulfonihappomonohydraattia (lg) ja kuumennetaan palautusjäähdyttäen kolmen tunnin ajan. Liuotin tislataan pois tyhjössä, sitten jäännökseen lisätään vettä ja etyyliasetaattia ja liuotin tehdään alkaliseksi natriumbikarbonaatin 5 %:sella vesiliuoksella, minkä jälkeen suoritetaan jako. Etyyliasetaattifaasi pestään vedellä ja kuivataan Na2SC>4:n päällä, minkä jälkeen faasi konsentroidaan tyhjössä. Jäännös puhdistetaan pylväskromatografiän avulla käyttämällä pylvästä, jossa on 25 g piihappogeeliä (eluentti: kloroformi/metanoli 19:1) ja otsikkoyhdisteen sisältävät fraktiot yhdistetään ja konsentroidaan tyhjössä, jolloin saadaan otsikkoyhdiste ruskeana öljynä (saanto: 731 mg).

NMR &(CDC13) ppm: 2,6^3,4 (2H, m), 3,5 rJ 4,2 (m), 3,77 (2H, s), 3,80 (3H, s), 6,79 ja 7,02 (1H, J = 1 Hz), 6,85 ja 7,24 (2H, J = 9 Hz), 8721 8 93 (5) 6,7-dihydro-6-merkapto-5H-pyrrolo[1,2-aJ imidatsoli-tri-fluorimetaanisulfonaatti:

Edellä olevassa vaiheessa (4) saatu yhdiste (354 mg) liuotetaan seokseen, jossa on anisolia (0,5 ml) ja trifluori-etikkahappoa (4 ml), lisätään 0,12 ml trifluorimetaanisulfo-nihappoa jääjäähdytyksessä, sitten saatetaan takaisin huoneenlämpötilaan ja sekoitetaan 30 minuutin ajan tässä lämpötilassa. Reaktioliuos jälkikäsitellään vertailuesimerkissä 12-(7) esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti, jolloin saadaan otsikkoyhdiste ruskeana öljynä (saanto: 390 mg).

NMR s (D2°) ppm: 3,1 f"'-' 3,9 (3H, m), 4,1 rJ 4,6 (2H, m), 4,80 (HOD), 7,43 (2H, s).

Vertailuesimerkki 16: 6,7-dihydro-6-merkapto-5H-pyrrolo[1,2-c]imidatsoli-trifluo-rimetaanisulfonaatin synteesi:

^COgH

0 u -►·------^s<X>cf^

H

(1) 3-(imidatsol-4-yyli)-2-p-metoksibentsyylitio-propioni-happo: 2- kloori-3-(imidatsol-4-yyli)-2-p-metoksibentsyylitio-pro-pionihappoa (6,01 g) (valmistettu L-histidiinistä julkaisussa Physiol. Chem., 1942, 276, 126 esitetyn menetelmän mukaisesti) liuotetaan 50 ml:aan vettä, joka sisältää 3,0 g NaOH:ta, lisätään 5,3 g p-metoksibentsyylimerkaptaania ja sekoitetaan kolmen päivän ajan huoneenlämpötilassa. Reaktio-liuos pestään bentseenillä, vesifaasin pH saatetaan arvoon 3- 4 lisäämällä etikkahappoa ja vesifaasi konsentroidaan alennetussa paineessa. Saostuneet kiteet suodatetaan pois, pestään etanolilla ja eetterillä ja näin saadaan otsikko-yhdiste värittöminä neulasina (sp. = 85 - 88°C, saanto: 5,8 g).

94 8 721 8 IR (KBr-tabletti) cm-1: 3500 - 2500, 1580, 1510 NMR δ (NaOD) ppm: 2,92 (2H, m), 3,43 (1H, dd, J = 7, 8 Hz), 3.70 (2H, s), 3,81 (3H, s), 6,82 (1H, d, J = 1 Hz), 6,93 (2H, d, J = 9 Hz), 7,27 (2H, d, J = 9 Hz), 7,58 (1H, d, J = 1 Hz), (2) metyyli-3-(imidatsol-4-yyli)-2-p-metoksibentsyylitio-propionaatti: 30 ml metanolia jäähdytetään -10°C:seen, lisätään tipoittain sekoittaen 0,47 ml tionyylikloridia ja sekoitetaan edelleen 10 minuutin ajan. Tähän liuokseen lisätään 1,46 g vaiheessa (1) saatua yhdistettä ja sekoitetaan tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Liuos konsentroidaan alennetussa paineessa, lisätään jäännökseen bentseeniä ja tislataan liuotin pois alennetussa paineessa, minkä jälkeen jäännökseen lisätään natriumbikarbonaatin 5 %:sta vesiliuosta, sitten se uutetaan kloroformilla. Uute kuivataan Na2SC>4:n päällä, liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, jolloin saadaan otsikko-yhdiste (saanto: 0,98 g).

NMR <5 (CDCI3) ppm: 3,03 (2H, m), 3,54 (1H, dd, J = 6, 8 Hz), 3.70 (2H, s), 3,79 (3H, s), 6,82 (3H, m), 7,22 (2H, d, J = 9 Hz), 7,51 (1H, d, J = 1 Hz).

! (3) 3-(imidatsol-4-yyli)-2-(p-metoksibentsyylitio)propanoli:

Edellisessä vaiheessa saatu yhdiste (720 mg) liuotetaan 15 ml:aan isopropanolia, lisätään 780 mg kalsiumkloridia ja 180 mg natriumborohydridiä ja sekoitetaan viiden tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Reaktioliuokseen lisätään etyyliasetaattia, se pestään vedellä ja NaCl:n kyllästetyllä vesi-liuoksella, sitten se kuivataan Na2S04:n päällä ja kroma-. . tografoidaan pylväällä käyttämällä pieni määrä piihappogee- liä, minkä jälkeen liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, jolloin saadaan 566 mg otsikkoyhdistettä.

NMR S(CDC13) ppm: 2,93 (3H, m), 3,64 (2H, m), 3,68 (2H, s), 3,77 (3H, s), 6,76 (1H, d, J = 1 Hz), 6,81 (2H, d, J = 9 Hz), 7,20 (2H, d, J = 9 Hz), 7,50 (1H, d, J = 1 Hz), 87218 95

Massaspektrometrinen analyysi (m/e): 279 (M++l).

(4) 4-(2-kloori-3-p-metoksibentsyylitiopropyyli)imidatsoli:

Yllä esitetyssä vaiheessa (3) saatu yhdiste (560 mg) liuotetaan sekaliuottimeen, joka koostuu 20 ml:sta THF:ää ja 10 ml:sta hiilitetrakloridia, lisätään 630 mg trifenyylifosfii-niä ja kuumennetaan palautusjäähdyttäen 2,5 tunnin ajan. Liuoksen jäähdyttämisen jälkeen lisätään trietyyliamiinia, liuotin tislataan pois alennetussa paineessa ja saatava jäännös puhdistetaan pylväskromatografiän avulla käyttämällä 15 g piihappogeeliä ja eluointiin kloroformi-metanolia (19.1), jolloin saadaan 234 mg otsikkoyhdistettä.

NMR 8 (CDCI3) ppm: 2,79 (2H, d, J = 6 Hz), 3,14 (2H, m), 3,72 (2H, s), 3,78 (3H, s), 4,22 (1H, m), 6,82 (2H, d, J = 9 Hz), 6,87 (1H, d, J = 1 Hz), 7,21 (2H, d, J = 9 Hz), 7,56 (1H, d, J = 1 Hz), 7,80 (1H, brs), (5) 6,7-dihydro-6-p-metoksibentsyylitio-5H-pyrrolo[l,2-c]-imidatsoli:

Vaiheessa (4) saatu yhdiste (2,21 g) liuotetaan 40 ml:aan asetonia, lisätään 11,1 g natriumjodidia ja kuumennetaan palautusjäähdyttäen 24 tunnin ajan. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, jäännökseen lisätään kloroformia ja se pestään NaOH:n laimennetulla vesiliuoksella ja NaCl:n kyllästetyllä vesiliuoksella. Liuos kuivataan Na2SC>4:n päällä, liuotin tislataan pois alennetussa paineessa ja jäännös puhdistetaan johtamalla se pylvään läpi, jossa on 60 g piihappogeeliä, ja eluoimalla kloroformi-metanolilla (19:1), jolloin saadaan 0,89 g otsikkoyhdistettä.

NMR 8 (CDCI3) ppm: 2,6w 3,4 (2H, m), 3,77 (2H, s), 3,8 (3H, s), 3,5 rv) 4,25 (3H, m), 6,70 (1H, s), 6,86 (2H, d, J = 9 Hz), 7,25 (2H, d, J = 9 Hz), 7,42 (1H, s),

Massaspektrometrinen analyysi (m/e): 260 (M+) (6) 6,7-dihydro-6-merkapto-5H-pyrrolo[1,2-c]imidatsoli-tri-fluorimetaanisulfonaatti: 96 8721 8

Yllä esitetyssä vaiheessa (5) saatu yhdiste (323 mg) liuotetaan seokseen, jossa on anisolia (0,4 ml) ja trifluorietik-kahappoa (4 ml), lisätään 0,12 ml trifluorimetaanisulfoni-happoa jääjäähdytyksessä ja sekoitetaan 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Sitten jäännökseen lisätään ksyleeniä ja liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, mikä toistetaan muutamia kertoja. Saatu jäännös pestään eetterillä, jolloin saadaan 360 mg otsikkoyhdistettä.

TLC: Rf = 0,05 (piihappogeelilevy (Merck), paksuus 0,25 mm, kehitysliuotin: kloroformi-metanoli (l:l-seos), värjätty purppuranpunaiseksi natriumnitroprussidilla).

NMR 6 (D2O) ppm: 2,9 ^ 3,9 (3H, m), 4,2 4,6 (2H, m), 4,80 (HOD), 7,24 (1H, s), 8,65 (1H, S),

Vertailuesimerkki 17: 6,7-dihydro-l-hydroksyyli-6-merkapto-5H-pyrrolot1,2-c]imi-datsolin synteesi:

HQ^ OH

ΓΛχ.—>.....—* hs^Cn^n

B0C

(1) l-t-butoksikarbonyyli-2-etoksikarbonyyli-4-oksopyrroli-diini: 1-t-butoksikarbonyyli-L-hydroksiproliinin etyyliesteriä (7,77 g) liuotetaan DMSO:hon (30 ml), lisätään disyklohek-syylikarbodi-imidiä (18,4 g) ja 2,4 ml pyridiiniä ja lisätään 1,2 ml trifluorietikkahappoa tipoittain huoneenlämpö tilassa sekoittaen. Seosta sekoitetaan kahden tunnin ajan huoneenlämpötilassa, sitten reaktioliuokseen lisätään etyyliasetaattia ja liukenemattomat aineet suodatetaan pois. Suodos pestään vedeLlä, kuivataan Na2SC>4:n päällä ja käytet- 8721 8 97 ty liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Jäännös johdetaan pylvään läpi, jossa on 120 g piihappogeeliä, ja eluoidaan bentseeni-etyyliasetaatilla (98:2), jolloin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 7,1 g).

NMR δ (CDC13). ppm: 1,28 (3H, t, J = 6 Hz), 1,48 (9H, s), 2,40 ^ 3,13 (2H, m), 3,86 <2H, s), 4,18 (2H, q, J = 6 Hz), 4,65 ^ 4,85 (1H, m), (2) l-t-butoksikarbonyyli-2-etoksikarbonyyli-4-hydroksipyr-rolidiini:

Edellisessä vaiheessa (1) saatu yhdiste (9,4 g) liuotetaan metanoliin (100 ml), lisätään 0,7 g natriumboorihydridiä 0 -5°C:n lämpötilassa ja sekoitetaan 30 minuutin ajan tässä lämpötilassa. Sitten liuotin haihdutetaan alennetussa paineessa, jäännökseen lisätään etyyliasetaattia, vettä ja am-moniumkloridia ja orgaaninen faasi eristetään. Se pestään vedellä ja NaCl:n kyllästetyllä vesiliuoksella ja kuivataan Na2S04:n päällä, minkä jälkeen liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, jolloin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 9,4 g).

(3) l-t-butoksikarbonyyli-2-etoksikarbonyylipyrrolidin-4-yyli-tosylaatti:

Vaiheessa (2) saatu yhdiste (9,5 g) liuotetaan pyridiiniin (100 ml), jäähdytetään 0 - 5°C:seen, lisätään p-tolueenisul-fonyylikloridia (10,5 g) sekoittaen ja sitten sekoitetaan keskeytymättä 17 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Sitten lisätään etyyliasetaattia, pestään vedellä, kuivataan Na2SC>4:n päällä ja liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Saatu jäännös johdetaan pylvään läpi, jossa on 150 g piihappogeeliä, ja eluoidaan bentseenin ja etyyliasetaatin 95:5-seoksella, jolloin saadaan yllä mainittu yhdiste (saanto: 13,4 g).

NMR 8 (CDCI3) ppm: 1,23 (3H, t, J = 6 Hz), 1,43 (9H, s), 2,20 <^2,53 (5H, m), 3,5 0 3,65 (2H, m), 3,95 4,45 (3H, 98 8721 8 m), 4,86 5,10 (1H, m), 7,25 (2H, d, J = 9 Hz), 7,66 (2H, d, J = 9 Hz), (4 ) 1-t-butoksikarbonyyli-2-etoksikarbonyyli-4-p-metoksi-bentsyylitio-pyrrolidiini: 13 g vaiheessa (3) saatua yhdistettä liuotetaan 300 ml:aan bentseeniä, sitten liuokseen lisätään 9,7 g p-metoksibent-syylimerkaptaania ja 9,6 g DBU:ta ja seosta kuumennetaan palautus jäähdyttäen 7 tunnin ajan argoniatmosfäärissä. Liuotin haihdutetaan alennetussa paineessa, saatu jäännös puhdistetaan pylväskromatografiän avulla käyttämällä 300 g piihappo-geeliä ja bentseenin ja etyyliasetaatin 95:5-seosta eluent-tina, jolloin saadaan yllä mainittu tuote (saanto: 10,3 g).

NMR 6 (CDCI3) ppm: 1,25 (3H, t, J = 6 Hz), 1,42 (9H, s), 1.70 2,60 (2H, m), 3,00^3,30 (2H, m), 3,67 (2H, s), 3,77 (3H, s) , 4,00 4,30 (3H, m) , 6,78 (2H, d, J = 9 Hz) , 7,16 (2H, d, J = 9 Hz), (5) l-t-butoksikarbonyyli-2-karbamoyyli-4-p-metoksibentsyy-litiopyrrolidiini: 1,76 g edellisessä vaiheessa (4) valmistettua yhdistettä liuotetaan 30 ml:aan metanolia, lisätään 30 ml ammoniakin 30 %:sta vesiliuosta ja sekoitetaan 40 tunnin ajan 40... 45°C:ssa suljetussa putkessa. Reaktioseos uutetaan etyyliasetaatilla, pestään sitruunahapon 10 %:sella vesiliuoksella ja kyllästetyllä NaCl:n vesiliuoksella, kuivatetaan Na2S(>4:n päällä ja liuotin haihdutetaan alennetussa paineessa. Saatu jäännös johdetaan pylvään läpi, jossa on 30 g piihappogeeliä, ja eluoidaan kloroformin ja metanolin 9:1-seoksella tuotteen puhdistamiseksi, joi Loin saadaan 1,00 q otsikkoyhdistettä.

NMR 6 (CDCI3) ppm: 1,45 (9H, s), 1,80^2,80 (2H, m), 3,20^ 3.70 (3H, m), 3,73 (2H, s), 3,79 (3H, s), 4,30 (1H, m), 6,84 (2H, d, J = 9 Hz), 7,23 (2H, d, J = 9 Hz), (6) 2-karbamoyyli-4-p-metoksibentsyylitiopyrrolidiini: 87218 99

Seokseen, jossa on yllä esitetyssä vaiheessa (5) saatua yhdistettä (1.00 g) ja anisolia (1,0 ml), lisätään 7 ml tri-fluorietikkahappoa ja sekoitetaan 40 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin haihdutetaan alennetussa paineessa, sitten jäännökseen lisätään eetteriä ja pestään. Jäännös liuotetaan laimeaan kloorivetyhappoliuokseen ja pestään eetterillä. Vesifaasi tehdään alkaliseksi lisäämällä NaOH:n laimeaa vesiliuosta ja uutetaan kloroformilla. Kuivataan Na2SC>4sn päällä ja tislataan liuotin pois alennetussa paineessa, jolloin saadaan 0,59 g otsikkoyhdistettä valkoisena kiintoaineena.

IR (KBr-tabletti) cm-1: 3400, 2800, 1650, 1515 NMR δ (CDCI3) ppm: 2,20 (2H, m), 2,90 (2H, m), 3,20 (1H, m), 3,69 (2H, s), 3,80 (3H, s), 3,90 (1H, m), 6,84 <2H, d, J « 9 Hz) , 7,22 (2H, d, J = 9 Hz), (7) 6,7-dihydro-l-hydroksi-6-p-metoksibentsyylitio-5H-pyrro-lo[1,2-c]imidatsoli: 0,59 g edellisessä vaiheessa saatua yhdistettä liuotetaan 30 ml:aan etanolia, lisätään 1,96 g ortomuurahaishapon etyyliesteriä ja 8 mg p-tolueenihappohydraattia ja kuumennetaan palautus jäähdyttäen kolmen tunnin ajan. Liuotin poistetaan, minkä jälkeen jäännös johdetaan pylvään läpi, jossa on 20 g piihappogeeliä, ja eluoidaan kloroformin ja metano-lin seoksella (49:1), jolloin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 278 mg).

NMR <S (CDCI3) ppm: 2,60^3,35 (2H, m), 3,72 (2H, s), 3,80 (3H, s), 6,85 (2H, d, J = 9 Hz), 7,23 (2H, d, J = 9 Hz), 8,16 (1H, s).

(8) 6,7-dihydro-l-hydroksyyli-6-merkapto-5H-pyrrolo[1,2-c]-imidatsoli: 358 mg:aan yllä vaiheessa (7) saatua tuotetta lisätään 0,5 ml anisolia ja 4 ml trifluorietikkahappoa ja lisätään vielä 0,1 ml trifluorimetaanisulfonihappoa ja sekoitetaan kolmen 100 8721 8 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin haihdutetaan pois alennetussa paineessa, lisätään sitten ksyleeniä ja tislataan pois alennetussa paineessa, jolloin näitä toimenpiteitä toistetaan useita kertoja. Tuote pestään sitten petrolieet-terillä ja kuivataan alennetussa paineessa, jolloin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 390 mg).

TLC: Rf = 0,2 (piihappogeelilevy (Merck), paksuus 0,25 mm, kehitysliuotin: CHCl3:CH30H (9:1), värjätty purppuranpunaiseksi natriumnitroprussidilla).

NMR S (D20 + DMSO-dg) ppm: 2,9 ^3,35 (2H, m), 4,2 4,5 (2H, m), 7,25 <1H, s), 8,36 (1H, s),

Vertailuesimerkki 18: 6,7-dihydro-6-merkapto-5H-pyrrolo[2,l-c]-l,2,4-triatsoli-trifluorimetaanisulfonaatin synteesi: HS.

PMB'5>^ -►.....— ^N*N>Et V-rf (1) 6,7-dihydro-6-p-metoksibentsyylitio-5H-pyrrolo[2,1-c]- 1,2,4-triatsoli:

Liuokseen, jossa on 2-etoksi-4-p-metoksibentsyylitio-l-pyr-roliiniä (1,06 g) etanolissa (50 ml), lisätään 0,36 g for-myylihydratsiiniä ja kuumennetaan 80°C:seen argonatmosfäärissä sekoittaen. 1,5 tunnin kuluttua lisätään vielä 0,24 g formyylihydratsiiniä ja sekoitetaan kuumentaen 30 minuutin ajan samassa lämpötilassa. Sitten lisätään 0,6 g etikkahap-poa, sekoitetaan 30 minuutin ajan samassa lämpötilassa ja sitten jäähdytetään huoneenlämpötilaan. Jäähdytettyyn tuotteeseen lisätään etyyliasetaattia ja natriumkarbonaatin 5 %:sta vesiliuosta tuotteen jakamiseksi näiden kahden nesteen välillä. Muodostuva orgaaninen faasi pestään NaCl:n 87218 101 kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivataan Na2S04:n päällä ja liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, jolloin saadaan otsikkoyhdiste.

Massaspektrometrinen analyysi (m/e): 279 (M+) NMR 6 (CDCI3) ppm: 2,3^3,0 (2H, m), 3,3 (2H, m), 3,7 (1H, m), 3,79 (3H, s), 6,83 <2H, d, J = 9 Hz), 7,21 (2H, d, J = 9 Hz), 7,85 ja 8,34 (0,5H, s),

Saatuun jäännökseen lisätään 20 ml etikkahappoa ja se kuumennetaan 100°C:ssa neljän tunnin ajan. Jäähtymisen jälkeen reaktioliuos kaadetaan jääveteen, neutraloidaan natriumkarbonaatilla ja uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi pestään, kuivataan Na2S04:n päällä ja konsentroidaan alennetussa paineessa. Sitten saatu jäännös kromatografoidaan pylväällä käyttämällä 20 g piihappogeeliä ja CHCljsn ja CHjOHrn seosta (9:1) eluenttina, jolloin saadaan 516 mg otsikkoyh-distettä ruskeana kiintoaineena.

IR (KBr-tabletti) cm“l; 1600, 1520, 1500 NMR & (CDCI3) ppm: 2,7 ^ 3,4 (2H, ddd), 3,80 (2H, s), 3,81 (3H, s), 3,8 ^ 4,2 (3H, m), 6,86 (2H, d, J = 9 Hz), 7,24 (2H, d, J = 9 Hz), 8,02 (1H, s).

Massaspektrometrinen analyysi (m/e): 261 (M+) (2) 6,7-dihydro-6-merkapto-5H-pyrrolo[2,l-c]-l,2,4-triatso-li: 210 mg edellisessä vaiheessa saatua yhdistettä liuotetaan anisolin (0,5 ml) ja trifluorietikkahapon (4 ml) seokseen, johon lisätään 0,09 ml tr ifluorimetaanisulfonihappoa jää-jäähdytyksessä, minkä jälkeen sitä sekoitetaan 20 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Reaktioliuos konsentroidaan alennetussa paineessa, siihen lisätään 20 ml ksyleeniä ja se konsentroidaan. Lisätään vielä ksyleeniä ja konsentroidaan ja nämä toimenpiteet toistetaan kahdesti. Jäännös pestään eetterillä seikoittaen ja eetteri poistetaan dekantoimalla.

8721 8 102

Pesu eetterillä toistetaan kahdesti ja konsentroidaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan otsikkoyhdiste ruskeana öljynä (saanto: 250 mg).

NMR δ (D20) ppm: 3,1~ 4,0 (3H, m), 4,2 4,6 (2H, m), 9,23 (1H, s),

Vertailuesimerkki 19: 3-amino-6,7-dihydro-6-merkapto-5H-pyrrolo[2,1-c]-1,2,4-triatsoli-trifluorimetaanisulfonaatin synteesi: .OEt

PHB-S^3 —*.....“* HS_<CX/N

nh2-cf3so3h (1) 4-p-metoksibentsyylitio-2-tiosemikarbatsonopyrrolidiini: Liuosta, jossa on 2-etoksi-4-p-metoksibentsyylitio-l-pyrro-liiniä (900 mg) ja tiosemikarbatsidi-hydrokloridia (433 mg) etanolissa (30 ml), kuumennetaan palautusjäähdyttäen 1,5 tunnin ajan. Reaktioliuos haihdutetaan sitten kuiviin alennetussa paineessa, sitten jäännös jaetaan etyyliasetaatin ja natriumhydroksidin 5 %:sen vesiliuoksen välillä ja orgaaninen faasi kuivataan Na2S04:n päällä, minkä jälkeen liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Saatu jäännös johdetaan pylvään läpi, jossa on 25 g piihappogeeliä, ja eluoidaan etyyliasetaatilla ja näin saadaan 230 mg otsikkoyhdistettä värittömänä vaahtona.

NMR S (CDC13) pprn: 2,3 ~ 3,0 (2H, m), 3,2^3,5 (2H, m), 3,72 (2H, s), 3,80 (3H, s), 3,70^ 4,0 (1H, m), 6,85 (2H, d, J = 9 Hz), 7,23 (2H, d, J = 9 Hz).

(2) 4-p-metoksibentsyylitio-2-(3-metyyli-isotiosemikarbat-sido)-1-pyrroliini:

Edellisessä vaiheessa (1) saatu yhdiste liuotetaan etanoliin (20 ml), liuokseen lisätään 312 mg metyylijodidia ja sitä sekoitetaan huoneenlämpötilassa viiden tunnin ajan. Reaktio- 8721 8 103 liuos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa, saatu jäännös jaetaan etyyliasetaatin ja 2 ml NaOH:n 1 N vesiliuosta sisältävän veden (30 ml) välillä. Orgaaninen faasi pestään ja kuivataan Na2S04:n päällä, minkä jälkeen liuotin tislataan pois. Näin saadaan 195 mg yllä mainittua yhdistettä vaaleankeltaisena öljynä.

NMR S (CDCI3) ppm: 2,40 (3H, s), 2,48 (1H, dd, J = 8, 16 Hz), 2,85 (1H, dd, J = 8, 16 Hz), 3,2^3,7 (3H, m), 3,75 (2H, s), 3,80 (3H, s), 5,05 (2H, brs), 5,75 (1H, brs), 6,84 (2H, d, J = 9 Hz), 7,24 (2H, d, J = 9 Hz),

Massaspektrometrinen analyysi (m/e): 324 (M+).

(3) 3-amino-6,7-dihydro-6-(p-metoksibentsyylitio)-5H-pyr-rolo[2,1-c]-1,2,4-triatsoli: 190 mg edellisessä vaiheessa (2) saatua yhdistettä liuotetaan seokseen, jossa on etanolia (4 ml) ja NaOH:n IN vesi-liuosta (2 ml), ja saatua seosta kuumennetaan palautusjäähdyttäen 30 minuutin ajan. Jäähtymisen jälkeen eronneet kiteet suodatetaan pois ja pestään vedellä, etanolilla ja eetterillä, jolloin saadaan 98 mg otsikkoyhdistettä.

Sp.: 245 - 248°C (haj. ) .

NMR <S (DMS0-d6) ppm: 2,7^4,1 (5H, m), 3,76 (3H, s), 3,81 (2H, s), 5,64 (1H, s), 6,88 (2H, d, J = 9 Hz), 7,28 (2H, d, J = 9 Hz), 8,32 (1H, s),

Alkuaineanalyysi (%), (CL3H15N4OS): laskettu: C 56,50, H 5,85, N 20,27 löydetty: C 56,31, H 5,74, N 20,00 (4) 3-amino-6,7-dihydro-6-merkapto-5H-pyrrolo[2,l-c]-l,2,4-triatsoli-trimetaanisulfonaatti:

Vertailuesimerkissä 12 (vaihe 7) esitettyjen toimenpiteiden mukaisesti käsitellään ja jälkikäsitellään yllä esitetyssä vaiheessa (3) saatu yhdiste (94 mg), jolloin saadaan 100 mg otsikkoyhdistettä.

104 8721 8 NMR 8 (D20) ppm: 2,8 ~ 3,1 (1H, m) , 3,4 3,6 (1H, m), 3,8^ 4,0 (1H, m), 4,2/v 4,6 (2H, m), 4,80 (HOD),

Vertailuesimerkki 20: 2,3-dihydro-2-merkapto-lH-pyratsolo[1,2-c]pyratsolium-tri-fluorimetaanisulfonaatin synteesi: C£ \+ PMBSH— .....—»HS-<^V>-CF3S03® (1) l-kloori-2-hydroksyyli-3-p-metoksibentsyylitiopropaani: 2,78 ml epikloorihydriiniä ja 2,78 ml p-metoksibentsyylimer-kaptaania kuumennetaan sekoittaen 120 - 130°C:ssa kolmen tunnin ajan. Jäähtymisen jälkeen tuote puhdistetaan pylväs-kromatografiän avulla käyttämällä 100 g piihappogeeliä ja eluointiin bentseeniä, jolloin saadaan 1,44 g otsikkoyhdis-tettä.

NMR &(CDCl3) ppm: 2,40^ 2,80 (2H, m), 2,84 (1H, brs), 3,50 - 3,64 (2H, m), 3,70 (2H, s), 3,78 (3H, s), 6,85 (2H, d, J -9 Hz), 7,25 (2H, d, J = 9 Hz), (2) 1,2-epoksi-3-p-metoksibentsyylitiopropaani:

Edellisessä vaiheessa (1) saatuun yhdisteeseen (1,44 g) lisätään NaOH:n (0,28 g) vedessä (1,8 ml) oleva liuos ja sekoitetaan huoneenlämpötilassa 17 tunnin ajan. Reaktioliuok-seen lisätään dikloorimetaania, pestään, kuivataan Na2SC>4:n päällä ja sitten liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Jäännös puhdistetaan johtamalla se pylvään läpi, jossa on 20 g piihappogeeliä, ja eluoimalla kloroformilla, jolloin saadaan 0,54 g otsikkoyhdistettä.

NMR S (CDCI3) ppm: 2,45^2,85 (4H, m), 2,96^3,20 (1H, m), 3,76 (2H, s), 3,79 (3H, s), 6,85 (2H, d, J = 9 Hz), 7,27 (2H, d, J = 9 Hz ) , 8721 8 105 (3) 1-(2-hydroksi-3-p-metoksibentsyylitiopropyyli)pyratsoli:

Edellisessä vaiheessa (2) saatu yhdiste (500 mg) ja pyratso-lia (190 mg) liuotetaan DMF:ään (2,5 ml), lisätään 655 mg kaliumkarbonaattia ja sekoitetaan 90°C:ssa seitsemän tunnin ajan. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa ja jäännös puhdistetaan johtamalla se pylvään läpi, jossa on 20 g piihappogeeliä, ja eluoimalla kloroformi-metanolilla (99:1), jolloin saadaan 660 mg otsikkoyhdistettä.

NMR (CDCI3) ppm: 2,32^2,52 (2H, m), 3,70 (2H, s), 3H, s), 3,80 r\J 4,28 (3H, m), 6,26 (1H, t, J = 3 Hz), 6,82 (2H, d, J = 9 Hz), 7,20 (2H, d, J = 9 Hz), 7,41 ja 7,53 (1H, d, J = 3 Hz ) , (4) 1-(3-kloori-2-p-metoksibentsyylitiopropyyli)pyratsoli: 600 mg edellisessä vaiheessa (3) valmistettua yhdistettä liuotetaan 6 ml saan hiilitetrakloridia, lisätään 680 mg trifenyylifosfiiniä ja sekoitetaan 17 tunnin ajan 50 -60°C:ssa. Liuotin poistetaan haihduttamalla alennetussa paineessa, minkä jälkeen saatu jäännös puhdistetaan pylväskro-matografian avulla käyttämällä 15 g piihappogeeliä ja eluenttina bentseeniä, jolloin saadaan 480 mg otsikkoyhdistettä .

NMR 6(CDCl3) ppm: 3,10^3,63 (5H, m), 3,79 (3H, s), 4,10 4,60 (2H, m), 6,26 (1H, t, J = 3 Hz), 6,82 (2H, d, J = 9 Hz), 7,20 (2H, d, J = 9 Hz), 7,45 ja 7,56 (1H, d, J = 3 Hz), (5) 2,3-dihydro-2-p-metoksibentsyylitio-lH-pyratsolo[1,2-a)-pyratsolium-jodidi:

Vaiheessa (4) saatu yhdiste (0,46 g) liuotetaan asetoniin (40 mg) ja lisätään 1,3 g kaliumjodidia, sitten kuumennetaan palautusjäähdyttäen 30 tunnin ajan. Liuotin poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa, jäännökseen lisätään eetteriä, eetterifaasi poistetaan ja muodostuneisiin sakkoihin lisätään kloroformia, minkä jälkeen liukenemattomat osat poistetaan suodattamalla. Saatu suodos konsentroidaan alen- 8721.8 106 netussa paineessa ja näin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 0,28 g).

NMR 6 (CDC13) ppm: 3,82 (3H, s), 3,93 (2H, m), 4,35 0^4,70 (3H, m), 5,00^ 5,35 (2H, m), 6,70 ^ 7,00 (3H, m), 7,33 (2H, m), 8,37 (2H, d, J = 3 Hz), (6) 2,3-dihydro-2-merkapto-lH-pyratsolo[1,2-a]pyratsolium-trifluorimetäänisulfonaatti:

Vaiheessa (5) saatu yhdiste (0,28 g) liuotetaan seokseen, jossa on anisolia (0,5 ml) ja trifluorietikkahappoa (4 ml), lisätään 0,5 ml tr ifluorimetaanisulfonaattia ja sekoitetaan huoneenlämpötilassa tunnin ajan. Liuotin poistetaan alennetussa paineessa, jäännökseen lisätään ksyleeniä ja konsentroidaan alennetussa paineessa, jolloin näitä toimenpiteitä toistetaan muutaman kerran. Jäännös pestään petrolieetteril-lä, minkä jälkeen saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 0,2 g).

NMR δ (D20) ppm: 4,40^ 4,70 (3H, m), 4,80 (HOD), 6,92 (1H, t, J = 3 Hz), 8,26 (2H, d, J = 3 Hz),

Vertailuesimerkki 21: l-merkapto-4-metyylipyrrolitsidinium-trifluorimetaanisulfo-naatin synteesi: / \ —».....—>hsQ> ^N^COzH V_) CF*S0*

B0C

(1) etyyli-3-(l-t-butoksikarbonyylipyrrolidin-2-yyli)-3-ok-so-propionaa11 i: ‘ '· 9 ml:aan etanolia lisätään 0,57 g magnesiumia, sitten lisä tään 1,5 ml hiilitetrakloridia ja sekoitetaan kahden tunnin . . ajan huoneenlämpötilassa. Seokseen lisätään liuos, jossa on monoetyylimalonaattia (6,75 g) THF:ssä (30 ml), ja liuotin 8721 8 107 tislataan pois alennetussa paineessa, kun reaktioliuoksesta tulee läpikuultava. N-t-butoksikarbonyyliproliinia (6,45 g) liuotetaan THF:ään (50 ml), lisätään 5,35 g karbonyylidi-imidatsolia sekoittaen huoneenlämpötilassa ja sitten sekoitetaan tässä lämpötilassa 30 minuutin ajan. Seokseen lisätään yllä saadun magnesiumkompleksin THF-liuosta ja sekoitetaan huoneenlämpötilassa kahden tunnin ajan. Lisätään etyyliasetaattia reaktioliuokseen, sitten pestään IN HCl:llä, kyllästetyllä natriumbikarbonaatin vesipitoisella liuoksella ja vedellä tässä järjestyksessä, kuivataan Na2SC>4:n päällä ja liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Muodostunut jäännös johdetaan pylvään läpi, jossa on 100 g piihappogee-liä, ja sitten eluoidaan bentseenin ja etyyliasetaatin seoksella (95:5), jolloin saadaan puhdistettu otsikkoyhdiste (saanto: 6 g).

NMR (CDCI3) ppm: 1,26 (3H, t, J = 6 Hz), 1,45 (9H, s), 1,70 2,30 (4H, m), 3,30 3,63 ( 4H, m), 4,16 (2H, q, J = 6

Hz), 4,10 ^ 4,45 <1H, m).

(2) Etyyli-3-(l-t-butoksikarbonyylipyrrolidin-2-yyli)-3-hyd-roksipropionaatti:

Edellisessä vaiheessa (1) saatu yhdiste (3 g) liuotetaan me-tanoliin (30 ml), jäähdytetään 0 - 5°C:seen, lisätään sekoittaen 200 mg natriumboorihydridiä ja sekoitetaan huoneenlämpötilassa tunnin ajan. Seokseen lisätään 2 g ammoniumklo-ridia ja vettä, uutetaan kloroformilla, pestään kyllästetyllä vesipitoisella NaCl-liuoksella, kuivataan Na2SC>4:n päällä ja liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Saatu jäännös johdetaan pylvään läpi, jossa on 50 g piihappogeeliä ja eluoidaan kloroformi-metanolilla (99:1), jolloin saadaan puhdistettu otsikkoyhdiste (saanto: 3 g).

NMR &(CDC13) ppm: 1,26 (3H, t, J = 6 Hz), 1,47 (9H, s), 1,60 ^ 2,10 (4H, m), 2,33^ 2,53 (2H, m), 3,10^ 3,60 (2H, m), 3,75^ 4,10 (1H, m), 4,13 (2H, q, J = 6 Hz).

( 3 ) Etyyli-/!- (l-t-butoksi.<arbonyylipyrrolidin-2-yyli )akry-laatti: 108 8721 8

Edellisessä vaiheessa (2) saatu yhdiste (2,87 g) liuotetaan pyridiiniin (20 ml), lisätään jääjäähdytyksessä ja sekoittaen 3,9 g p-tolueenisulfonyylikloridia ja sekoitetaan 17 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Sekoitetaan vielä tunnin ajan 60 - 70°C:ssa, minkä jälkeen liuotin tislataan pois, jäännökseen lisätään etyyliasetaattia, pestään vedellä, kuivataan Na2SC>4:n päällä ja liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Saatava jäännös puhdistetaan pylväskromatogra£ian avulla käyttämällä 50 g piihappogeeliä ja sekaliuosta, joka koostuu bentseenistä ja etyyliasetaatista (95:5), jolloin saadan otsikkoyhdisteen raaka tosyylijohdannainen. Tosyyli-johdannainen liuotetaan 50 ml:aan kloroformia ja lisätään 1,5 g DBUsta, minkä jälkeen kuumennetaan palautusjäähdyttäen 20 minuutin ajan. Sitten liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, jäännökseen lisätään etyyliasetaattia, pestään vedellä, 0,5 N HCl:llä ja kyllästetyllä vesipitoisella NaCl-liuoksella tässä järjestyksessä ja kuivataan Na2SC>4:n päällä. Poistetaan liuotin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saadaan otsikkoyhdiste (2 g).

NMR S (CDCI3) ppm: 1,26 (3H, t, J = 6 Hz), 1,43 (9H, s), 1,60 2,20 (4H, m), 3,30(^ 3,55 (2H, m), 4,16 (2H, q, J = 6

Hz), 5,77 (1H, d, J = 15 Hz), 6,77 (1H, dd, J = 6, 15 Hz), (4) Etyyli-3-(l-t-butoksikarbonyylipyrrolidin-2-yyli)-3-p-metoksibentsyylitiopropionaatti:

Edellisessä vaiheessa (3) saatu yhdiste (2 g) liuotetaan kloroformiin (30 ml), lisätään 1,6 g p-metoksibentsyylimer-kaptaania ja 1,6 g DBU:ta ja sekoitetaan 17 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin poistetaan tislaamalla alennetussa paineessa, minkä jälkeen jäännös puhdistetaan johtamalla se pylvään läpi, jossa on 50 g piihappogeeliä, ja eluoimalla bentseeni-etyyliasetaatilla (98:2), jolloin saadaan otsikko-yhdiste (saanto: 2,52 g).

NMR S(CDCl3) ppm: 1,23 (3H, t, J = 6 Hz), 1,46 (9H, s), 1,65 2,LO (4H, m), 2,42 v 2,66 (2H, in), 3,10 a/ 3,70 (3H, 8721 8 109 m), 3,74 (5H, s), 3,96^4,30 (3H, m), 6,75 (2H, d, J = 9 Hz), 7,10 ** 7,30 (2H, m) , (5 ) 3 - (1-t-butoksikarbonyylipyrrolidin-2-yyli) -3-p-metoksi-bentsyylitio-propanoli:

Vaiheessa (4) saatu yhdiste (2,52 g) liuotetaan THFiään (40 ml), lisätään 0,2 g natriumborohydridiä jääjäähdytyksessä ja sekoitetaan 17 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Reaktio-seokseen lisätään ammoniumkloridia ja vettä sekoittaen ja jääjäähdytyksessä ja sitten uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi eristetään, pestään kyllästetyllä NaClsn vesi-liuoksella, kuivataan Na2SC>4:n päällä ja liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Jäännös puhdistetaan pylväskro-matografian avulla käyttämällä 20 g piihappogeeliä ja elu-ointiin kloroformia, jolloin saadaan 2,14 g otsikkoyhdis-tettä.

NMR & (CDCI3) ppm: 1,47 (9H, s), 1,50/^2,20 (7H, m), 3,10^ 3,80 (6 H, m), 3,74 (3H, s), 3,80^ 4,20 (1H, m), 6,76 (2H, d, J = 9 Hz), 7,10^7,30 (2H, m).

(6) 3-(l-t-butoksikarbonyylipyrrolidin-2-yyli)-3-p-metoksi-bentsyylitiopropyyli-tosylaatti:

Vaiheessa (5) saatu yhdiste (2,64 g) liuotetaan 30 mlraan pyridiiniä, lisätään 1,98 g p-tolueenisulfonyylikloridia jää jäähdytyksessä ja sekoitetaan 17 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, jäännökseen lisätään etyyliasetaattia, pestään vedellä, kuivataan Na2S04:n päällä ja liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Näin saatu jäännös puhdistetaan johtamalla se pylvään läpi, jossa on 40 g piihappogeeliä, ja eluoimalla tuote sekaliuottimella, joka koostuu bentseenistä ja etyyliasetaatista (98:2), jolloin saadaan 2,68 g otsikkoyhdistet-tä.

NMR £ (CDCI3) ppm: 1,47 (9H, 3), 1,50/^ 2,20 (6H, m), 2,43 (3H, s), 3,10 rv-/ 3,73 (5H, m), 3,77 (3H, s), 3,80^4,30 (3H, 8721 8 110 m), 6,75 (2H, d, J = 9 Hz), 7,03 7,40 (4H, m), 7,72 (2H, d, J = 9 Hz).

(7) 3-p-metoksibentsyylitio-3-(pyrrolidin-2-yyli)-propyyli-tosylaatti-trifluoriasetaatti: 2,68 g:aan edellisessä vaiheessa (6) valmistettua yhdistettä lisätään 3 ml anisolia ja edelleen 10 ml trifluorietikkahap-poa jää jäähdytyksessä ja sekoittaen ja sekoitetaan vielä 30 minuutin ajan tässä lämpötilassa. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, minkä jälkeen saatuun liuokseen lisätään tolueenia ja liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Jäännös pestään petrolieetterillä ja liuotin poistetaan, minkä jälkeen saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 2,7 g).

NMR & (CDCI3) ppm: 1,45Γθ2,30 (6H, m), 2,42 (3H, s), 2,70 rO

3,60 (4H, m), 3,63 (2H, s), 3,77 (3H, s), 4,00/^4,25 (2H, m), 6,75 (2H, d, J = 9 Hz), 7,02 ^7,40 (4H, m), 7,73 (2H, d, J = 9 Hz).

(8) 1-p-metoksibentsyylitiopyrrolitsidiini:

Vaiheessa (7) saatu yhdiste (2,7 g) liuotetaan DMF:ään (20 ml), lisätään 1,73 g kaliumkarbonaattia ja sekoitetaan 17 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Sekoitetaan kahden tunnin ajan 80°C:ssa, minkä jälkeen liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Jäännökseen lisätään kloroformia, pestään vedellä, kuivataan Na2SC>4:n päällä ja sitten liuotin haihdutetaan alennetussa paineessa. Jäännös puhdistetaan pylväs-kromatografiän avulla käyttämällä 15 g piihappogeeliä ja se-kaliuotinta, joka koostuu kloroformista ja metanolista (95:5), jolloin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 0,9 g).

NMR S (CDCI3) ppm: 1,50/^2,30 (6H, m), 2,30^3,60 (6H, m), 3,64 (2H, s), 3,74 (3H, s), 6,75 (2H, d, J = 9 Hz), 7,15 (2li, d, J = 9 Hz ) .

(9) l-p-metoksibentsyylitio-4-metyylipyrrolitsidinium-jodi-di: 111 87218

Vaiheessa (8) saatu yhdiste (260 mg) liuotetaan 5 ml:aan asetonia, lisätään 710 mg metyylijodidia ja annetaan seistä huoneenlämpötilassa 48 tunnin ajan. Reaktioseos konsentroidaan alennetussa paineessa ja jäännös pestään eetterillä, jolloin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 400 mg).

(10) l-merkapto-4-metyylipyrrolitsidinium-trifluorimetaani-sulfonaatti:

Edellisessä vaiheessa (9) saatuun yhdisteeseen (400 mg) lisätään 0,7 ml anisolia ja 4 ml trifluorietikkahappoa, lisätään tipoittain 0,5 ml trifluorimetaanisulfonihappoa huoneenlämpötilassa sekoittaen ja sekoitetaan edelleen 30 minuutin ajan samassa lämpötilassa. Liuotin poistetaan haihduttamalla, saatu jäännös dispergoidaan ksyleeniin ja tislataan alennetussa paineessa (tämä toistetaan kaksi tai kolme kertaa). Jäännös pestään eetterillä ja kuivataan, jolloin saadaan 300 mg otsikkoyhdistettä.

NMR S (CDCI3) ppm: 1,90 2,80 (6H, m), 3,23 ja 3,28 (3H, s), 3,30(^4,15 (6H, m), 4,80 (HOD),

Vertailuesimerkki 22: 4-(2-trifluorietyyli)-1-merkapto-pyrrolitsidinium-trifluori-metaanisulfonaatin synteesi: PMB-S .....—HS<^CF3S0f (1) 4-(2-fluorietyyli)-1-p-metoksibentsyylitiopyrrolitsidi-nium-bromidi:

Vertailuesimerkin 21 vaiheessa (8) saatu tuote (1-p-metoksi-bentsyylitiopyrrolitsidiini, 263 mg) liuotetaan 5 ml:aan asetonia, lisätään 640 mg l-bromi-2-fluorietaania ja annetaan seistä neljän päivän ajan. Liuotin tislataan pois alen- 8721 8 112 netussa paineessa, saatu jäännös pestään eetterillä ja kuivataan, jolloin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 390 mg).

NMR S (CDCI3) ppm: 1,60 ^ 2,40 (6H, m), 2,80~4,20 (13H, m), 4,60^-4,80 (1H, m), 5,15^-5,35 (1H, m), 6,84 (2H, d, J = 9 Hz), 7,20 r** 7,40 (2H, m), (2) 4-(2-fluorietyyli)-l-merkaptopyrrolitsidinium-trifluori-metaanisulfonaatti:

Edellisessä vaiheessa (1) saatuun yhdisteeseen (390 mg) lisätään 0,7 ml anisolia ja 4 ml trifluorietikkahappoa, lisätään tipoittain 0,5 ml trifluorimetaanisulfonihappoa huoneenlämpötilassa sekoittaen ja sekoitetaan edelleen 30 minuutin ajan tässä lämpötilassa. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, lisätään ksyleeniä saatuun jäännökseen ja liuotin tislataan jälleen pois tyhjössä. Jäännös pestään eetterillä ja kuivataan, jolloin saadaan 330 mg otsikkoyh-distettä.

NMR S (D20) ppm: 1,80^2,80 (6H, m), 3,20 ^4,20 (8H, m), 4,80 (HOD), 5,10~ 5,30 (1H, m).

Vertailuesimerkki 23: 2-merkapto-4-metyylipyrrolitsidinium-trifluorimetaanisul-fonaatti: PMB-S N_ / \ ->.....

Sl^COzEt ^^CraSOa® I CH3

B0C

(1) l-t-butoksikarbonyyli-4-p-metoksibentsyylitiopyrrolidin- 2-yyli-metanoli:

Vertailuesimerkin 17 vaiheessa (4) saatu yhdiste (4,3 g) liuotetaan 50 mitään THF:ää, lisätään 0,2 g natriumborohyd-ridiä ja sekoitetaan 17 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Lisätään vettä ja ammoniumkloridia ja uutetaan etyyliasetaa- 8721 8 113 tiliä. Kuivataan Na2S04:n päällä, minkä jälkeen liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Jäännös puhdistetaan johtamalla se pylvään läpi, jossa on 60 g piihappogeeliä, ja eluoimalla kloroformilla, jolloin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 3.8 g).

NMR S (CDC13) ppm: 1,46 (9H, s), 1,80 w 2,10 (2H, m), 3,06/^ 3,65 (5H, m), 3,68 (2H, s), 3,78 (3H, s), 3,90/^4,30 (1H, m), 6,78 (2H, d, J = 9 Hz), 7,18 (2H, d, J = 9 Hz).

(2) 2-etoksikarbonyyli-3-(l-t-butoksikarbonyyli-4-p-metoksi-bentsyylitiopyrrolidin-2-yyli)propionitriili:

Trifenyylifosfiiniä (1,2 g) liuotetaan THF:ään (9 ml), lisätään 0,78 g dietyyliatsodikarboksylaattia jää jäähdytyksessä ja sekoittaen ja sekoitetaan edelleen 30 minuutin ajan tässä lämpötilassa. Reaktioliuokseen lisätään vaiheessa (1) saatua yhdistettä (1,06 g), etyylisyanoasetaattia (0,34 g) ja 2,6-di-t-butyylifenolia (0,63 g) THF:ssä (6 ml) ja sekoitetaan kahden tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, minkä jälkeen saatu jäännös puhdistetaan pylväskromatografiän avulla käyttämällä 40 g piihappogeeliä ja bentseeni-etyyliasetaattia (95:5) eluent-tina, jolloin saadaan 0,65 g yllä mainittua yhdistettä.

NMR β(CDCI3) ppm: 1,32 (3H, t, J = 6 Hz), 1,45 (9H, s), 1,80^2,23 (4H, m), 3,00/^3,60 (4H, m), 3,72 (2H, s), 3,80 (3H, s), 3,93/^4,40 (3H, m), 6,84 (2H, d, J = 9 Hz), 7,23 (2H, d, J = 9 Hz) .

(3) 3-(1-t-butoksikarbonyyli-4-p-metoksibentsyylitiopyrro-lidin-2-yyli)-propionitriili:

Vaiheessa (2) saatu yhdiste (4,55 g) liuotetaan 11 ml:aan etanolia, lisätään 15 ml 1 N NaOH:ta 0 - 5°C:ssa ja sekoitetaan tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Liuokseen lisätään vettä, pestään eetterillä, vesifaasi tehdään happamaksi HCl:lla ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute kuivataan Na2SC>4:n päällä ja sitten liuotin tislataan pois alennetussa 114 8721 8 paineessa. Näin saatu jäännös liuotetaan 50 ml:aan ksyleeniä ja kuumennetaan palautusjäähdyttäen kahden tunnin ajan. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, ja näin saatu jäännös puhdistetaan johtamalla se pylvään läpi, jossa on 50 g piihappogeeliä, ja eluoimalla tuote bentseeni-etyyliase-taatilla (95:5 til./til.), jolloin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 3,4 g).

NMR & (CDCI3) ppm: 1,46 (9H, s), 1,50^2,50 (6H, m), 2,90^ 3,60 (3H, m), 3,68 (2H, s), 3,76 (3H, s), 3,80-^4,30 (1H, m), 6,78 (2H, d, J = 9 Hz), 7,18 (2H, d, J = 9 Hz), (4) 3-(l-t-butoksikarbonyyli-4-metoksibentsyylitiopyrroli-din-2-yyli)propionihappo:

Edellisessä vaiheessa (3) saatuun yhdisteeseen (3,4 g) lisätään seos, jossa on etanolin 50 %:nen vesiliuosta (30 ml) ja KOH:ta (4,5 g), ja kuumennetaan palautus jäähdyttäen 6 tunnin ajan. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, jäännökseen lisätään vettä, se tehdään happamaksi HCl:llä ja sitä uutetaan etyyliasetaatilla. Uutteen liuotin tislataan pois alennetussa paineessa sen jälkeen, kun se on kuivattu Na2SC>4:n päällä. Jäännös puhdistetaan pylväskromatografiän avulla käyttämällä 25 g piihappogeeliä ja eluointiin kloro-formi-metanolia (99:1), jolloin saadaan 2,9 g otsikko-yhdistettä.

NMR δ(CDCI3) ppm: 1,46 (9H, s), 1,50^2,15 (4H, m), 2,15^ 2,45 (2H, m), 3,00 ~ 3,60 (3H, m), 3,68 (2H, s), 3,78 (3H, s), 6,75 (2H, d, J = 9 Hz), 7,15 (2H, d, J = 9 Hz), 9,30 (1H, brs).

(5) 3-(l-t-butoksikarbonyyli-4-p-metoksibentsyylitiopyrro-lidin-2-yyli)propanoli:

Edellisessä vaiheessa (4) saatu yhdiste (2,9 g) liuotetaan THF:ään (30 ml), liuokseen lisätään 1,13 ml trietyyliamiinia, se jäähdytetään -10°C:seen ja siihen lisätään tipoittain sekoittaen 0,77 g metyylikloorikarbonaattia. Seosta sekoite- 8721 8 115 taan 30 minuutin ajan 0 - 5°C:ssa ja edelleen 30 minuutin ajan 50°C:ssa ja sitten sakat suodatetaan pois. Suodokseen lisätään 0,15 g litiumborohydridiä ja sekoitetaan kahden tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Reaktioneste konsentroidaan alennetussa paineessa, lisätään etyyliasetaattia, vettä ja ammoniumkloridia, sitten orgaaninen faasi erotetaan, pestään NaCl:n kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivataan Na2S04:n päällä ja sitten liuotin tislataan pois, jolloin saadaan 2,6 g otsikkoyhdistettä.

NMR & (CDC13) ppm: 1,46 (9H, s), 1,50^ 2,20 (6H, m), 3,00^ 3,70 (5H, m), 3,70 (2H, s), 3,78 (3H, s), 6,79 (2H, d, J = 9 Hz), 7,16 (2H, d, J = 9 Hz), (6) 3-(1-t-butoksikarbonyyli-p-metoksibentsyylitiopyrroli-din-2-yyli)propyylitosylaatti:

Yllä esitetyssä vaiheessa (5) saatu yhdiste (2,6 g) liuotetaan 20 mlsaan pyridiiniä, lisätään 2,8 g p-tolueenisulfo-nyylikloridia ja sekoitetaan 17 tunnin ajan 0 - 5°C:ssa. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, sitten jäännökseen lisätään etyyliasetaattia ja pestään vedellä. Orgaaninen faasi kuivataan Na2S04:n päällä, minkä jälkeen faasin liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Saatava jäännös puhdistetaan pylväskromatografiän avulla käyttämällä 50 g piihappogeeliä ja bentseeni-etyyliasetaattia (98:2 til./til.) eluenttina, jolloin saadaan 1,4 g otsikkoyhdistettä.

NMR δ (CDCI3) ppm: 1,42 (9H, s), 1,40 2,00 (6H, m), 2,42 (3H, s), 2,80 3,60 (3H, m), 3,67 (2H, s), 3,76 (3H, s), 3,85 4,23 (3H, m), 6,78 (2H, d, J = 9 Hz), 7,10 ^7,35 (4H, m), 7,72 (2H, d, J = 9 Hz ) , (7) 2-p-metoksibentsyylitiopyrrolitsidiini :

Yllä esitetyssä vaiheessa (6) saadun yhdisteen (1,4 g) ja anisolin (1,5 ml) seokseen lisätään 5 ml trifluorietikkahap-poa jää jäähdytyksessä ja sekoittaen ja sekoitusta jatketaan 116 8721 8 30 minuutin ajan tässä lämpötilassa. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa ja jäännös pestään eetterillä. Jäännös liuotetaan DMF:ään (10 ml), lisätään 0,95 g kaliumkarbonaattia ja sekoitetaan 17 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, lisätään kloroformia, pestään vedellä, kuivataan Na2S04:n päällä ja liuotin tislataan pois alennetussa paineessa. Jäännös johdetaan pylvään läpi, jossa on 15 g piihappogeeliä, ja eluoidaan kloro-formi-metanolilla (95:5), jolloin saadaan puhdistettu otsik-koyhdiste (saanto: 0,47 g).

NMR S (CDCI3) ppm: 1,50 2,20 (6H, m), 2,26^2,60 (1H, m), 2,80<^3,30 (4H, m), 3,69 (2H, s), 3,78 (3H, s), 6,78 (2H, d, J = 9 Hz), 7,18 (2H, d, J = 9 Hz), (8) 2-p-metok3ibentsyylitio-4-metyylipyrrolitsidinium-jodidi: 400 mg vaiheessa (7) saatua yhdistettä liuotetaan 7 ml:aan asetonia, lisätään 0,47 ml metyylijodidia ja annetaan seistä kahden päivän ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa, jäännös pestään useita kertoja eetterillä ja kuivataan, jolloin saadaan otsikkoyhdiste (saanto: 600 mg).

(9) 2-merkapto-4-metyylipyrrolitsidinium-trifluorimetaani-sulfonaatti:

Vaiheessa (8) saadun yhdisteen (600 mg), anisolin (1 ml) ja trifluorietikkahapon (6 ml) seokseen lisätään 0,7 ml tri-fluorimetaanisulfonihappoa huoneenlämpötilassa sekoittaen ja sekoitetaan edelleen tunnin ajan tässä lämpötilassa. Liuotin tislataan pois alennetussa paineessa jäännös pestään uudestaan petrolieetterillä ja näin saadaan otsikkoyhdiste öljyisenä aineena (saanto: 450 mg).

NMR <S (CDC13) ppm: 1,70 ^2,60 (6H, m), 3,23 (3H, s), 3,25 4,40 (6H, m), 4,80 (HOD) , 8721 8 117

Esimerkki 34: (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-2-(N-metyylikarbamoyylimetyyli)--5H-pyrrolo(1,2-C)imidatsolium-7-yyli)tio]-6-(1-hydroksi-etyyli)-2-penem-3-karboksylaatin synteesi (isomeeri A ja isomeeri B:

Esimerkissä 1-(1) saatu yhdiste (171 mg) liuotettiin 15 ml saan vedetöntä asetonia ja 1,06 g N-metyylibromiasetamidia lisättiin siihen huoneenlämpötilassa. Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 40 tunnin ajan, siihen lisättiin 0,53 g N-metyylibromiasetamidia, minkä jälkeen saadun seoksen sekoitusta jatkettiin vielä 22 tunnin ajan. Reaktioseos konsentroitiin ja jäännös pestiin kahdesti dietyylieetterillä ja kuivatettiin, jolloin saatiin 298 mg keltaista, kumimaista ainetta. Tämä liuotettiin 25 mlsaan vesi-tetrahydrofuraanin 50 %:sta seosta ja liuokseen lisättiin 3,40 g ammoniumklori-dia. Seokseen lisättiin 1,70 g rautajauhetta (100 mesh) voimakkaasti sekoittaen huoneenlämpötilassa, minkä jälkeen saatua seosta sekoitettiin 10 minuuttia huoneenlämpötilassa ja vielä 90 minuuttia jää jäähdytyksessä. Liukenematon aines poistettiin piimaa-suodatuksella (celite). Suodos konsentroitiin noin 5 ml:n tilavuuteen alennetussa paineessa ja se puhdistettiin pylväskromatografiän avulla käyttämällä 35 ml Diaion HP-20:tä. Ensin poistettiin se fraktio, joka saatiin virtaamaan ulos pylväästä 150 ml:11a vettä, minkä jälkeen kerättiin 100 ml:11a 5 % THF-vettä eluoitu fraktio. Tämä konsentroitiin noin 5 ml:n tilavuuteen alennetussa paineessa ja puhdistettiin HPLC:llä (liuottimena käytettiin 7 %:sta asetonitriili-vesi-seosta, virtausmäärä: 3,65 ml/min). 16 ja 21 minuutin retentioaikoja vastaavat fraktiot kerättiin ja jokainen fraktio konsentroitiin alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 33 mg halutta A-isomeeriä ja vastaavasti 33 mg haluttua B-isomeeriä.

Isomeeri A

118 87218 IR (KBr-tabletti) cm-1: 3370, 1765, 1680, 1590, 1370, 1290 UV Amax (H20) nm: 280(sh), 324 NMR S (D20) ppm: 1.27 (3H, d, J = 6,3 Hz, -CH3), 2,5^3,0 (1H, m) 2.76 (3H, s, -NH-CH3), 3,0 ^ 3,6 (1H, m) 3.95 (1H, dd, J = 1,3 Hz, 5,9 Hz, C6-H) 4,23 (1H, t, J = 5,9 Hz C0-H), 4,3~^4,6 (2H, m) 4.74 (HOD), 4,9^5,1 (1H, m) 4,99 <2H, s -CH2-CO-), 5.67 (1H, d, J = 1,3 Hz, C5-H), 7,42 (1H, s) 8.74 (1H, s)

Isomeeri B

IR (KBr-tabletti) cm-1: 3370, 1775, 1685, 1595, 1370, 1295 UV λmax (H20) nm: 258<sh), 325 NMR S (D20) ppm: 1.27 (3H, d, J = 6,3 Hz, -CH3) , 2,4^2,9 (1H, m) 2.76 (3H, s, -NH-CH3), 2,9^3,4 (1H, m) 3.95 (1H, dd, J = 1,5 Hz, 6,1 Hz) 4.27 (1H, t, J = 6,1 Hz Cg-H), 4,3^4,6 (2H, m) 4.74 (HOD), 4,9^ 5,1 (1H, m), 5,00 (2H, s -CH2-CO-), 5.68 (1H, d, J = 1,5 Hz, C5-H), 7,44 (1H, s) 8.75 (1H, s)

Esimerkki 35: (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-2-(N-dimetyylikarbamoyylimetyyli)--5H-pyrrolo(1,2-C)imidatsolium-7-yyli)tio]-6-(1-hydroksi-etyyli)-2-penem-3-karboksylaatin synteesi (isomeeri A ja isomeeri B:

Esimerkin 34 menettelyä vastaavalla tavalla saatiin haluttuja A-ja B-isomeerejä 17 mg:n ja vastaavasti 40 mg:n saannoilla. HPLC-ajon olosuhteet olivat samat kuin esimerkissä 34 ja A-isomeerin retentioaika oli 19,5 minuuttia ja B-isomeerin vastaavasti 22,5 minuuttia.

8721 8

Isomeeri A

119 IR (KBr-tabletti) cm"!; 3400, 3130, 2970, 1775, 1660, 1585, 1360, 1280 UV λ max (H2O) nm: 247(sh), 325 NMR δ (D20) ppm: 1,34 (3H, d, J = 6,4 Hz, -CH3), 2,5r\^3,5 (2H, m) / /CH3 3,01 (3H, s, -N ), 3,13 (3H, s, -N ), \:h3 \ 4.00 (1H, d, Cg-H), 4,lrv^4,6 (3H, m), 4.74 (HOD), 4,9^5,1 (1H, m), 5.31 (2H, s CH2-CO-), 5.74 (1H, br, s, C5-H), 7,42 (1H, s), 8,73 (1H, s)

Isomeeri B

IR (KBr-tabletti) cm-1: 3400, 3130, 2970, 1775, 1660, 1590, 1360, 1285 UV Amax (H20) nm: 256(sh), 325 NMR δ (D20 ) ppm: 1.32 (3H, d, J = 6,1 Hz, -CH3), 2,5^3,5 (2H, m) /C«3 / 3.01 (3H, s, -N ), 3,13 (3H, s, -N ), : ; : ^ N"CH3 3,97 (1H, d, -CHgH), 4,lr\j4,6 (3H, m), 4.74 (HOD), 4,9 r\j 5,1 (1H, m), 5,30 (2H, s -CH2-CO-), 5,73 (1H, br, s, C5-H), 7,43 (1H, s), 8,72 (1H, s)

Esimerkki 36: (5R,6S,8R)-2-[(2-(2-karbamoyylietyl-6,7-dihydro-5H-pyrrolo-(1,2-C)imidatsolium-7-yyli)tio]-6-(l-hydroksietyyli)--2-penem-3-karboksylaatin synteesi (isomeeri A ja isomeeri B:

Esimerkin 34 menettelyä vastaavalla tavalla saatiin halutut A- ja B-isomeerit 16 mg:n ja vastaavasti 23 mg:n saannoilla. HPLC-ajon olosuhteet olivat samat kuin esimerkissä 34 ja A-isomeerin retentioaika oli 12 minuuttia ja B-isomeerin vastaavasti 17 minuuttia.

8721 8 120

Isomeeri A

IR (KBr-tabletti) cm“l: 3350, 1765, 1670, 1575, 1360, 1285 UV λmax (H20) nm: 214, 250(sh), 325 NMR S (D20) ppm: 1,34 (3H, d, J = 6,4 Hz, -CH3), 2,6^3,6 (2H, m) 2,92 (2H, t, J = 6,4 Hz, -CH2-CO-), 4,00 (1H, dd, J = 1,3 Hz, 5,9 Hz CgH), 4,1~>4,7 (5H, m) 4.74 (HOD), 4,95^5,1 (1H, m), 5,73 UH, d, J = 1,3 Hz, C5-H), 7,49 UH, s), 8,74 UH, s)

Isomeeri B

IR (KBr-tabletti) cm-1: 3370, 1775, 1675, 1585, 1360, 1290 UV Λmax (H20) nm: 215, 260(sh), 324 NMR δ (D20) ppm: 1,33 ( 3H, d, J = 6,4 Hz, -CH3), 2,5 r\j 3,5 (2H, m) 2,90 (2H, t, J = 6,2 Hz, -CH2-CO)/ 3,98 UH, d, J = 5,9 Hz, -CgH), 4,1^4,7 (5H, m), 4.74 (HOD), 4,9 5,1 (1H, m), 5,76 UH, br.s CH5-H), 7,53 UH, s), 8,74 UH, s)

Esimerkki 37: (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-2-fenasyyli-5H-pyrrolo(1,2-0--imidatsolium-7-yyli)tio]-6-(1-hydroks ietyyli)-2-penem--3-karboksylaatin synteesi (A- ja B-isomeerien seos):

Esimerkin 34 menettelyä vastaavalla tavalla saatiin A- ja B-isomeerien seos 54 mg:n saannolla.

HPLC-ajon olosuhteet:

Kolonni: Nucleosil 7Cis UO mm X 300 mm)

Liuotin: 20 % asetonitriili-vesi Virtausmäärä: 3,65 ml/min Retentioaika: 14 minuuttia IR (KBr-tabletti) cm-l; 3400, 1770, 1690, 1590, 1450, 1360 ÖV ληβχ (H20) nm: 250(sh), 324 NMR 6 (D20) ppm: 1,28 (3H, d, J = 6,6 Hz, -CH3)^ 2,3sks3,0 (1H, m), 8721 8 121 3.0 rv 3,5 (1H, m), 3,93 (1H, d, J = 6,5 Hz, Cg-H), 4,23 (1H, t, J = 6,5 Hz, CgH), 4,3^4,7 (2H, m), 4,74 (HOD), 5,0r^5,2 (1H, m), 5,68 (1H, s, C5-H), 6.00 (2H, s, -CH2-CO-), 7,48 (1H, s), 7,5^7,9 (3H, m), 8.10 (2H, d, J = 7,0 Hz), 8,79 (1H, s)

Esimerkki 38: (5R,6S,8R)-2-[(6,7-dihydro-2-(1-metyylitetrazol-5-yylitio--metyyli)-5H-pyrrolo(l,2-C)imidatsolium-7-yyli)tio]-6--(1-hydroksietyyli)-2-penem-3-karboksylaatin synteesi (isomeeri A ja isomeeri B:

Esimerkin 34 menettelyä vastaavalla tavalla saatiin halutut A- ja B-isomeerit 22 mg:n ja vastaavasti 25 mg:n saannoilla. HPLC-ajon olosuhteet:

Kolonni: Nucleosil ICiq Liuotin: asetonitriili-vesi (1:9)

Virtausmäärä: 5 ml/min

Retentioaika: 14 minuuttia (A-isomeeri) 17 minuuttia (B-isomeeri)

Isomeeri A: UV λmax (H2O) nm: 325 NMR <S (D2O) ppm: 1.37 (3H, d, J = 6 Hz, -CH3) , 2,70^3,00 (lH, m), 3,10^3,60 (1H, m), 4,02 (1H, dd, J = 2 Hz, 6 Hz, C6-H), 4.10 (3H, s, J = 7,3 Hz, CH3) , 4,20^4,70 (3H, m) 4,80 (HOD), 5,76 (1H, d, J = 2 Hz, C5-H), 6,03 (2H, s, -C2-S), 7,72 (1H, s), 9,08 (lH, s)

Isomeeri B: UV λ max <ll20) mn: ^58 (sh), 325 NMR <S (D2O) ppm: 1.38 (3H, d, J = 6 Hz, CH3) , 2,56r\j 2,90 (1H, m), 3,00^3,50 (1H, m), 4,00 (1H, dd, J = 2 Hz, 6 Hz), 4,08 (3H, s, CH3), 4,20/^4,70 (3H, m), 4,80 (HOD), 8721 8 122 5.76 (1H, d, J = 2 Hz), 6,04 (2H, s, -C2~S-), 7.77 (1H, s), 9,08 (1H, s)

Claims (8)

8721 8 123

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten yleiskaavan I mukaisten penemjohdannaisten ja niiden suolojen valmistamiseksi, Ri S 5~ R 3 J 1 I m

0. N ^-cOjRz jossa kaavassa Rl merkitsee l-hydroksietyyliryhmää, COOR2 merkitsee karboksyyliryhmää tai karboksylaattianionia ja R2 voi olla poistettava suojaryhmä, ja R3 merkitsee substituoitua tai substituoimatonta bisyklo-heterosyklistä ryhmää, joka on jokin seuraavista ryhmistä: '.’j"'; €C>‘€T?;€t>; CO": €f>: 87218 124 α&α#α?:€0: ;€p; CÖ; θ 'r4 I K4 R4 K'fl'yk. |VvN- · r'rVN^i US/ G> , U&N · joissa kaavoissa R4 edustaa vetyatomia, metyyliryhmää, etyyliryhmää, 2-fluori-etyyliryhmää, propyyliryhmää, syklopropyylimetyyliryhmää, allyyliryhmää, propargyyliryhmää, bentsyyliryhmää, 4-fluoribentsyyliryhmää, asetyylimetyyliryhmää, karbamo-yylimetyyliryhmää, N-metyylikarbamoyylimetyyliryhmää, Ν,Ν-dimetyylikarbamoyylimetyyliryhmää, N-etyylikarbamo-yylimetyyliryhmää, 2-karbamoyylietyyliryhmää, karboksyyli-metyyliryhmää, karboksylaattimetyyliryhmää, metoksikarbo-nyylimetyyliryhmää, 3-metoksikarbonyyli-2-oksopropyyli-ryhmää, fenasyyliryhmää, syanometyyliryhmää, trifluori-metyyliryhmää, aminoryhmää, klooriatomia, hydroksyyli-ryhmää tai l-metyylitetratsol-5-yylitiometyyliryhmää, 8721 8 125 tunnettu siitä, että yleisen kaavan (II) O Rt~\ ^5—Ri _l , (II) 0^N SflaRi mukainen yhdiste, jossa kaavassa Rl merkitsee samaa kuin yllä, R21 merkitsee samoja suojaryhmiä kuin R2 ja R5 on Ci_g-alkyyli, fenyyli, tolyyli, bentsyyli, metyyli-bentsyyli, klooribentsyyli tai fenetyyli, saatetaan reagoimaan yleisen kaavan (III) HS-R3 (III) mukaisen tioliyhdisteen kanssa, jota tioliyhdistettä on 1-3 kertaa molaarisesti ekvivalenttinen määrä ja jossa kaavassa III R3 merkitsee samaa kuin yllä, mahdollisesti sellaisen emäksen läsnäollessa, joka on tri-etyyliamiini, di-isopropyylietyyliamiini, 1,8-diatsabisyklo- 7-undekeeni, N-metyylimorfoliini, natriumhydroksidi, natriumkarbonaatti, kaliumhydroksidi, kaliumkarbonaatti, kalium-tert-butoksidi, natriummetoksidi, natriumamidi tai natriumhydridi, liuottimessa, joka on Ν,Ν-dimetyyliformamidi, dimetyyli-sulfoksidi, tetrahydrofuraani, heksametyylifosfotriamidi, tai näiden seos, lämpötilan ollessa -50°C...huoneenlämpötila 15 min...2 tunnin ajan, minkä jälkeen mahdollisesti poistetaan suojaryhmä ja alky-loidaan reaktiotuote tai alkyloidaan reaktiotuote ja poistetaan sitten suojaryhmä.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä penem-johdannai-sen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että käytetään tiolin reaktiivista kaavan 87218 126 MS-R3 mukaista johdannaista (jossa kaavassa M on alkalimetalli ja R3 merkitsee samaa kuin yllä) yllä esitetyn tioliyhdisteen (III) sijasta.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä penemjohdannaisen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että yhdiste (II) on tuote, joka on saatu hapettamalla yleisen kaavan (IV) ^COzRz UV) mukainen yhdiste, jossa kaavassa R^, R2' ja R5 merkitsevät samaa kuin yllä.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä penem-johdannai-sen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että R^ on 1-hydroksietyyliryhmä.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä penemjohdannai-sen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että yleiskaavoissa (I) ja (III) R3 on jokin seuraavista ryhmistä: .✓.VR4 ,/Nx 1-»$ joissa A on typpi- tai hiiliatomi ja R4 merkitsee samaa kuin yllä.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä penemjohdannai-sen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että valmistetaan yleisen kaavan (Ia) mukainen penemjohdannainen 87218 127 N?-R4 f s S_A A—Γ V tal .-1 (la) * ^0021½ 0 CO2R2 jossa kaavassa R2 on H tai se merkitsee karboksylaattianio-nia kuten COOR2 ja R4 on -CH3, -CH2CN, -CH2-C=CH, -CH2CONH2.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä penemjohdannai-sen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että valmistetaan yleisen kaavan (Ib) mukainen penemjohdannaisella pu OH _ xVrsvsX^iNofR4 tai Cr~^ ^ CO2R2 (Ib) jossa kaavassa R2 on H tai se merkitsee karboksylaattianio-nia kuten COOR2 ja R4 on metyyli.

8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä penemjohdannai-sen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että valmistetaan yleisen kaavan (Ie) mukainen penemjohdannainen OH OH .-O ApR4 —r"Cj'Y'~ \ [O/ π ; \ IV/ Π ! Vn/(Ic) 0^-N-kcc,qyVM tai 0^-.J kCo2R2 jossa kaavassa R2 on H tai se merkitsee karboksylaattianio-nia kuten COOR2 ja R4 on metyyli. 87218 128