DK167091B1

DK167091B1 - Fremgangsmaade til fremstilling af et dyrefoderpraeparat indeholdende tryptophan og threonin

Info

Publication number: DK167091B1
Application number: DK312287A
Authority: DK
Inventors: Yoshimi Nagano; Hiroshi Fukushi; Takafumi Tosa; Masajyoshi Naruse; Shigeho Ikeda
Original assignee: Ajinomoto Kk
Priority date: 1986-06-20
Filing date: 1987-06-19
Publication date: 1993-08-30
Also published as: DK312287D0; NL193132B; BE1000940A3; SE8702534L; SE466184B; US4777051A; FR2600235B1; DK312287A; SE8702534D0; NL193132C; FR2600235A1; NL8701156A

Description

i DK 167091 B1

Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af et dyrefoderpræparat indeholdende tryptophan eller threonin.

Tryptophan og threonin (Trp hhv. Thr i den forelig-5 gende beskrivelse) er essentielle aminosyrer til dyr, som kan fremstilles ved kemiske eller biokemiske fremgangsmåder.

En af de biokemiske fremgangsmåder, som kan anvendes til fremstilling af disse aminosyrer, er en kendt fremgangsmåde, ved hvilken en mikroorganisme, der danner tryptophan 10 eller threonin, dyrkes med sukker m.m. som hoved-carbonkilde og ammoniak m.m. som hovednitrogenkilde. Trp eller Thr isoleres fra dyrkningsvæsken og underkastes derpå krystallisation for at isolere Trp eller Thr i krystalform. Krystallerne tørres på en konisk tørrer eller en fluidiseret tørrer og 15 anvendes i dyrefoder.

Selv om den kendte teknik har erkendt, at Trp eller Thr kan sættes til et dyrefoder i en renset form, har der ikke været beskrevet noget med hensyn til en fremgangsmåde, ved hvilken en opløsning indeholdende store 20 mængder urenheder tørres direkte uden isolering og rensning af Trp eller Thr til fremstilling af et dyrefoderpræparat .

Selv om tilsætningen af Trp eller Thr i en rå form, som ikke er isoleret eller renset, kan anses for ønskelig, 25 da præparatet, hvortil Trp eller Thr skal sættes, selv er særdeles vagt defineret, og disse aminosyrer, selv når Trp eller Thr tilsættes i forening med urenheder, såsom sukkerarter, salte, organiske syrer osv., stadig kan udvise deres ernæringskarakteristika på en lignende måde som 30 de isolerede og rensede typer, er der en række problemer forbundet med fremstilling af et præparat af urent Trp eller Thr. Når en uren opløsning af Trp eller Thr tørres med en gængs forstøvningstørrer, hvor urenhederne er mikroskopiske urenheder, såsom sukkerarter, salte, or*-35 ganiske syrer osv., bliver en stor mængde Trp eller Thr og andre 2 DK 167091 B1 materialer siddende på apparatvæggen eller på en fraskil-lelsescyklon. Således kan normal tørring ikke udføres under disse betingelser. Når urent Trp eller Thr tørres i en tromletørrer, sker der sønderdeling på grund af 5 varmedegeneration. Da vandindholdet i produktet desuden forøges, formindskes stabiliteten, og der forekommer andre problemer, såsom ringe blandbarhed med dyrefoderarter, baseret på pulverets fysiske egenskaber, såsom kohæsivitet osv. Selv om der på den anden side eksisterer 10 andre tørringsmetoder, som kan være forenelige med urene opløsninger af Trp eller Thr, såsom frysetørring, vakuumtørring osv., og som kan formindske varmedegeneration, er der stadig et økonomisk problem, da produktionsomkostningerne ved anvendelse af disse metoder er ganske høje.

15 Der har derfor været behov for en metode til fremstil ling af et dyrefoderpræparat ved tørring af en uren eller rå Trp- eller Thr-opløsning, som kan give et produkt, som har fremragende stabilitet og fysiske pulveregenskaber, med minimal sønderdeling på grund af varmedegeneration og med 20 en lav udgift.

Ifølge den foreliggende opfindelse opfyldes dette behov med en fremgangsmåde til fremstilling af et dyrefoderpræparat indeholdende tryptophan eller threonin, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at en opløsning indehol-25 dende tryptophan eller threonin i en mængde på 5-95 vægt-% forstøvningstørres til et vandindhold på 5-15 vægt-%, og at de forstøvningstørrede partikler afsættes på et bånd og tørres med varm luft til dannelse af et granulat, som har et vandindhold på ca. 4 vægt-% eller mindre.

30 Der er i forbindelse med den foreliggende opfindelse blevet foretaget dybtgående studier af metoder til tørring af forskellige Trp- eller Thr-opløsninger, såsom mikroorganisme-dyrkningsmedier, harpiksadsorptionseluater osv., og som et resultat har det vist sig, at der ved behandling af 35 opløsningerne på den omhandlede måde kan fremstilles et produkt, som har fremragende stabilitet og fysiske pulver- 3 DK 167091 B1 egenskaber, ved en lav udgift. Den foreliggende opfindelses formål er således opfyldt.

Trp- eller Thr-opløsningen ifølge den foreliggende opfindelse kan være enhver opløsning indeholdende 5-95%, 5 fortrinsvis 20-60 vægt-%, baseret på opløsningens faststofindhold, Trp eller Thr. Sådanne opløsninger omfatter dyrkningsmedier af mikroorganismer, et cellefrit præparat af et dyrkningsmedium af mikroorganismer, harpiksadsorp-tionseluater, krystallisationsmoderlud, enzymatiske re-10 aktionsblandinger osv.

Med et "dyrkningsmedium af mikroorganismer" menes et flydende medium anvendt til propagering af enhver mikroorganisme, som anvender Trp eller Thr til vasksten eller producerer Trp eller Thr under væksten. Thr eller 15 Trp kan sættes direkte til mediet før eller under dyrkning af mikroorganismen, eller Thr eller Trp kan produceres af mikroorganismen selv, således at koncentrationen af den ene eller begge disse aminosyrer forøges i mediet i sammenligning med det oprindelige dyrkningsmedium. Eksem-20 pier på specifikke egnede mikroorganismedyrkningsmedier findes i de efterfølgende eksempler. Mediet, som kan anvendes ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse, kan indeholde mikroorganismecellerne eller kan være et cellefrit præparat, hvori mikroorganismecellerne er 25 blevet fjernet ved enhver gængs metode inden for teknikken.

Med "harpiksadsorptionseluat" menes et eluat indeholdende materiale, som i begyndelsen adsorberes på en harpiks, hvor det adsorberede materiale stammer fra en opløsning indeholdende Trp eller Thr, og harpiksen er i stand 30 til at adsorbere disse aminosyrer. Opløsningen indeholdende Thr eller Trp, som ledes over harpiksen, er ikke specielt begrænset og kan generelt være enhver opløsning, som indeholder disse aminosyrer. Specifikke eksempler på harpiks-adsorptionseluater findes i de efterfølgende eksempler.

35 Med "krystallisationsmoderlud" menes en opløsning indeholdende Thr eller Trp, som har været anvendt til kry- 4 DK 167091 B1 stallisation af den ene eller begge disse aminosyrer derfra.

Det er kendt, at sådan en opløsning har noget restindhold af Thr eller Trp samt andre urenheder.

Med "enzymatiske reaktionsblandinger" menes et 5 flydende medium indeholdende ét eller flere enzymer samt frit Thr eller Trp, og er ikke på anden måde specielt begrænset. Eksempler på sådanne enzymer kan være rensede eller delvis rensede enzymer involveret i biosyntesen af Thr eller Trp.

10 Når Trp- eller Thr-opløsningen indeholder en organisk syre, såsom mælkesyre, som normalt er indeholdt i fermenteringsvæsker, men som ikke afdamper under tørringstrinnet, vil produktets hygroskopicitet forøges. I sådan et tilfælde kan produktets hygroskopicitet formindskes ved til-15 sætning af calciumhydroxid for at indstille opløsningens pH-værdi på 8-10, fortrinsvis 8,5-9,5, og tørring af den fremkomne opløsning.

Hvis opløsningen har et Trp- eller Thr-indhold på mindre end 5 vægt-%, baseret på opløsningens faststofind-20 hold, er den praktiske værdi af anvendelse af sådan en opløsning lav i betragtning af udgiften, hvorimod fordelene ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse formindskes, hvis Thr- eller Trp-indholdet er mere end 95 vaegt-%.

25 Trp- eller Thr-opløsningen kan koncentreres som påkrævet i en sådan grad, at faststofindholdet i opløsningen er 30-70 vægt-%, fortrinsvis 40-60 vægt-%. Koncentreringen gennemføres fortrinsvis ved så lav en temperatur og et tryk som muligt for at forhindre varmedegenera-30 tion eller nedbrydning af Trp eller Thr osv. under forløbet af koncentreringen.

Fremgangsmåden gennemføres i to trin. Det første trin er et forstøvningstørringstrin, hvori Trp- eller Thr--opløsningen forstøves i et forstøvningstørringskammer for 35 at bringe forstøvningsgranulatet i en halvtør tilstand. Det andet trin er gennemførelse af et luftstrøm-lag-tørringstrin, 5 DK 167091 B1 hvori forstøvningsgranulatet afsættes på f.eks. et transportbånd af en meshsigtetype til dannelse af en måtte med en passende tykkelse, og granulatet tørres med varm luft, indtil granulatet har et vandindhold på ca. 4 vægt-% eller mindre.

5 Det således dannede granulat afkøles derpå til dannelse af et produkt.

Selv om driftsbetingelserne kan variere afhængigt af opløsningens koncentration og mængden af urenheder, reguleres den mængde stamopløsning, som skal tilføres, og varmluft-10 temperaturen generelt sådan, at de forstøvede partikler danner en granuløs måtte med en tykkelse på 5-30 mm på båndet. Hvis tilførselsmængden og varmlufttemperaturen ikke er passende, og partiklerne afsat på måtten ikke har det passende vandindhold og viskositet, vil partiklerne 15 være for tæt pakkede og vil således forhindre udluftning af luften, hvorimod hvis vandindholdet er for højt og viskositeten derfor er for høj, der sker integrering af partiklerne, og dette forhindrer også udluftning af tørringsluften. Følgelig reguleres vandindholdet af forstøv-20 ningsgranulatet dannet ved forstøvningstørring til 5-15%, fortrinsvis 7-9%. Desuden gennemføres tørringen af det afsatte forstøvningsgranulat under milde betingelser under anvendelse af varm luft ved så lav en temperatur som muligt, fortrinsvis 50-80°C, over et langvarigt tidsrum.

25 Apparatet til gennemførelse af tørringen kan for trinsvis være en kommercielt tilgængelig filtermåttetørrer.

Ved anvendelse af en filtermåttetørrer kan den ovenfor beskrevne forstøvningstørring og luftstrømslagtørring gennemføres kontinuerligt. Derfor er det muligt effektivt 30 at tørre Trp- eller Thr-opløsningen indeholdende urenheder, såsom hygroskopiske sukkerarter, salte, organiske syrer osv., såsom dyrkningsmedier til mikroorganismer, harpiks- adsorptionseluater, krystallisationsmoderlud, enzymatiske reaktionsblandinger osv. Filtermåttetørreren muliggør 35 øjeblikkelig tørring ved en høj temperatur ved en forstøvningstørringsmetode i en tørringsperiode med konstant hastighed i begyndelses-tørringsperioden, hvorved vandind- 6 DK 167091 B1 holdet hurtigt fjernes fra den behandlede opløsning med en høj varmeeffekt, og derefter foretages mild tørring ved en lav temperatur over et langvarigt tidsrum ved en luftstrømslagtørringsmetode under anvendelse af et net-5 formet transportbånd i tørringsperioden med formindsket hastighed. Derfor kan selv de materialer, som er mest modtagelige for varmedegeneration, såsom Trp- og Thr-op-løsninger, tørres sådan, at varmedegeneration er ubetydelig.

10 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen illustreres i de følgende eksempler.

Eksempler 15 Eksempel 1

Et podningsmedium, som har den i tabel I angivne sammensætning, sættes i en mængde på 3 kl (kiloliter) til en steriliseret podningsbeholder (tank). Derpå tilsættes 3 liter af en præ-podningsvæske, i hvilken ATCC 20 21269, beskrevet i japansk patentansøgning nr. 3036/1980, i forvejen er dyrket, og dyrkningen gennemføres med en be-luftning på 1/2 V Vm (volumen luft pr. volumen dyrkningsmedium pr. min.), ved en omdrejning på 180 omdrejninger pr. minut (opm) og ved en temperatur på 31,5°C i 24 timer. Når 25 cellernes vækst i podningsbeholderen (tanken) når den i forvejen bestemte cellemængde, steriliseres 57 kl af hovedmediet i tabel I med et kontinuerligt steriliseringsapparat, overføres til en hoved-dyrkningstank, og dyrkningen gennemføres med en beluftning på 1/2 V Vm, en omdrejning på 82 30 opm og en temperatur på 31,5°C. Til pH-regulering af dyrkningsvæsken anvendes ammoniakvand. Efter at dyrkningen er nået halvvejs, tilføres kontinuerligt en glucoseopløsning, og der fås 70 kl af en fermenteringsvæske indeholdende 20 g/liter threonin.

35 70 kl af denne fermenteringsvæske koncentreres 3-5 gange under anvendelse af et LTV-fordampningsapparat (Long 7 DK 167091 B1

Tube Vertical Evaporator) under betingelser med formindsket tryk og en produkttemperatur på 60®C eller derunder, hvorved fås 20 kl af koncentratet.

Dette koncentrat tørres med en filtermåttetørrer, 5 "Model FMD-20", til et vandindhold på 2,5%. Tørringen gennemføres med en tilførselsmængde af stamopløsningen på 450 liter/time og en varmlufttemperatur på 115°C til minimering af varmedegeneration og til dannelse af et granuløst produkt.

10 Det således dannede granuløse threoninpræparat har mere eller mindre det samme threoninindhold baseret på den totale faststofmængde deri som threoninindholdet baseret på den totale faststofmængde i fermenteringsvæsken, har undergået næsten ingen varmedegeneration og viser næsten 15 heller ikke nogen forøgelse i graden af misfarvning.

Tabel I

Podnings- Hoved—

Bestanddel_medium__medium_ 20

Glucose 3 g/dl 13 g/dl

Urinstof 9/3 g/dl 4,5 g/dl KH2P04 °'15 Sr/dl 0,15 g/dl

MgS04*7H20 0,04 g/dl o,04 g/dl 25 FeS04*7H20 1 mg/dl i mg/dl

MnS04-4H20 1 mg/dl 1 mg/dl

Thiamin-hydrochlorid 1000 pg/i χοοο ug/1

Biotin 100 ug/1 100 pg/i

Sojabønneprotein-saltsyre-hydrolysat 0,5 ml/dl 1,0 ml/dl 30 Antiskummiddel - 20 mg/dl pH-Værdi (neutraliseret med KOH) 7,2 η 2 35 DK 167091 B1 8 0

Eksempel 2 2 kl af threoninfermenteringsvæsken dannet i eksempel 1 indstilles til en pH-værdi på 1 med saltsyre, derpå fjernes cellerne ved, at væsken centrifugeres i en 5 centrifugalseparator, og 1,2 kl af den celle-frie væske sættes til en harpikssøjle pakket med 1,2 kl af en kation-bytterharpiks med en hastighed på 1,2 kl/time. 1,2 kl vand presses derigennem og derpå foretages tilbagevaskning med 2,4 kl vand. Derefter tilføres 2,4 kl IN ammoniakvand med 10 en hastighed på 1,2 kl/time, hvorved fås 1,8 kl af et threonineluat.

Dette eluat koncentreres 3 gange, hvorved fås 600 liter af det koncentrerede eluat. Koncentreringen gennemføres under anvendelse af et LTV-koncentreringsapparat 15 under betingelserne formindsket tryk og en produkttemperatur på 60°C eller derunder.

Dette koncentrat tørres på lignende måde som i eksempel 1 under anvendelse af en filtermåttetørrer, "Model FMD-20", til et vandindhold på 2,0% til dannelse 20 af et granuløst produkt uden varmedegeneration.

Eksempel 3

Et podningsmedium, som har den i tabel II angivne sammensætning, sættes i en mængde på 3 kl til en sterili-25 seret podningsbeholder (tank). Dertil sættes 3 liter af en præ-podningsvæske, i hvilken FERM BP-202, beskrevet i japansk patentans. nr. 094391/1983, i forvejen er dyrket, og dyrkningen gennemføres med en beluftning på 1/2 V Vm, ved en omdrejning på 180 opm og ved en temperatur på 31,5°C i 30 ca. 24 timer. Når cellernes vækst i dyrkningsbeholderen (tanken) når den i forvejen bestemte cellemængde, steriliseres 57 kl af hovedmediet angivet i tabel II med et kontinuerligt steriliseringsapparat, overføres til en hoveddyrkningstank og dyrkes med en beluftning på 1/2 V Vm, ved 35 en omdrejning på 82 opm og ved en temperatur på 31,5°C.

pH-Reguleringen af dyrkningsvæsken gennemføres med ammoniakvand. Når dyrkningen er nået halvvejs, tilføres kontinuerligt 0 en sukkeropløsning, hvorved fås 70 kl af en fermenterings- væske indeholdende 2 g/dl tryptophan.

9 DK 167091 B1

Tabel II 5

Podnings- Hoved-Be s tanddel_medium_ medium

Glucose 3,0 g/dl 138 g/dl 10 kh2P04 0/05 g/dl 0,1 g/dl

MgS04*7H20 0,04 g/dl 0,04 g/dl

MnS04-4H20 0,001 g/dl 0,001 g/dl

FeS04-7H20 0,001 g/dl 0,001 g/dl NH4C1 0,3 g/dl 1 g/dl 15 rnA 0,25 g/dl (KC1) 0,2 g/dl

Soj abønneprotein-saltsyre- hydrolysat 65 mg/dl 0,1 g/dl

Antiskummiddel (sojabønneolie) 0,001 g/dl 0,01 ml/dl pH-Værdi (neutraliseret med 20 KOH) 7,0 7,0 5 kl af den ovenfor beskrevne tryptophanfermente-ringsvæske indstilles til en pH-værdi på 2, derpå fjernes 25 cellerne ved, at væsken centrifugeres i en centrifugalseparator, og den celle-frie væske sættes til en har pikssøjle pakket med 1,4 kl kationbytterharpiks med en hastighed på 1,4 kl. 1,4 kl vand presses derigennem, og tilbagevaskning gennemføres med 2,8 kl vand. 15 kl 0,2 N 30 ammoniakvand tilføres med en hastighed på 1,4 kl/time, hvorved fås 13 kl af et tryptophaneluat.

Dette eluat indstilles til en pH-værdi på 5 med saltsyre, koncentreres og krystalliseres, hvorved fås 68 kg tryptophankrystaller og 1,2 kl af en krystallisations-35 moderlud.

Denne krystallisationsmoderlud tørres på lignende måde som i eksempel 1 under anvendelse af en filtermåtte- 10 DK 167091 B1 o tørrer, "Model FMD-20", til et vandindhold på 2,0% til dannelse af et granuløst produkt uden varmedegeneration.

Eksempel 4 5 Under anvendelse af koncentratet af threoninharpiks- eluatet anvendt i eksempel 2 gennemføres et tørringsforsøg med en forstøvningstørrer og en tromletørrer.

Når tørringen gennemføres med forstøvningstørreren, klæber det tørrede produkt fast til produktseparatoγιο cyklonen, og det er umuligt at gennemføre normal tørring.

Selv om tørring på den anden side er mulig i en vis grad med tromletørreren, forøges produktets vandindhold til 5,7%, og også varmedegeneration er voldsom.

Derfor bedømmes produkterne tørret med filtermåtte-15 tørrer og tromletørrer for varmedegeneration, og resultaterne er vist i tabel III.

Tabel III

20 Bedømt produkt Ai

Harpikseluatkoncentrat 1,1

Produkt tørret med filtermåttetørrer 1,3 25

Produkt tørret med tromletørrer 3,5 (Ai: Absorbans ved 420 nm af 5 g af de faste stoffer for- 3 tyndet med vand til 100 cm ).

30

Det kan ses, at produktet tørret med filtermåtte-tørrer har meget lav varmedegeneration.

35 11 DK 167091 B1 o

Eksempel 5 I 70 kl af threonin-fermenteringsvæsken dannet i eksempel 1 opløses 350 kg calciumhydroxid til indstilling af pH-værdien på 9. Denne opløsning koncentreres under 5 de samme betingelser som i eksempel 1, og derefter gennemføres tørringen ved en filtermåttetørrer-metode (FMD).

Hygroskopiciteten af det således dannede threonin-præparat sammenlignes med produktet i eksempel 1. Resultaterne er vist i tabel V.

10

Tabel V

Absorberet vandindhold 15 Prøve (%) ved 40°C, RH 70%

Threonin-tørret produkt ifølge eksempel 1 20 20

Threonin-tørret produkt ifølge eksempel 5 10 25 Det kan ses, at hygroskopiciteten er blevet forbedret ved tilsætningen af calciumhydroxid.

Eksempel 6

Til et basalt dyrefoder, som har et indhold af råt 30 protein på 12%, fremstillet ved tilsætning af mineraler, såsom calciumphosphat, natriumchlorid osv., en vitaminblanding, 0,3% L-Lys*HCl og 0,1% DL-methionin som aminosyrer til en blanding af 87,0% majs og 9,5% affedtet sojabønne, sættes enten prøven fremstillet i eksempel 2 35 i en mængde svarende til 0,1% L-threonin eller prøven fremstillet i eksempel 3 i en mængde svarende til 0,04% L-tryptophan, og ernæringseffekten på opdrættede grise DK 167091 B1 0 12 testes. Resultaterne er vist i tabel IV.

5 Tabel IV

Forsøgsgruppe 1 23

Tilsætning

Ingen Rent L-Trp (0,04%) af produkt •(0 Prøve tilsætning Rent L-Thr (0,1%) iflg. opf.

Vægtforøgelse pr. dag (g) 430 620 621 15 Mængde foder indtaget pr. dag (kg) 1,20 1,50 1,50

Foderbehovsrate 3,04 2,42 2,42 20 (Trp: tryptophan; Thr: threoninj produkt ifølge opfindelsen: 0,04% som L-Trp og 0,1% som L-Thr) .

25 Forsøgsmetode

Under anvendelse af 8 opdrættede grise (4 kastrerede hangrise og 4 hungrise) pr. gruppe måles ændringen i den gennemsnitlige vægtforøgelse, når der fodres i 28 dage (ud fra en begyndelses-kropsvægt på 18-35 kg) .

30 Produktet ifølge den foreliggende opfindelse, i lighed med det der inkorporerer rent tryptophan og rent threonin, udviser forbedring af vægtforøgelsen pr. dag og af foderbehovsraten.

35

Claims

1. Fremgangsmåde til fremstilling af et dyrefoderpræparat indeholdende tryptophan eller threonin, kendetegnet ved, at en opløsning indeholdende tryptophan 5 eller threonin i en mængde på 5-95 vægt-% forstøvningstørres til et vandindhold på 5-15 vægt-%, og at de forstøvningstørrede partikler afsættes på et bånd og tørres med varm luft til dannelse af et granulat, som har et vandindhold på ca. 4 vægt-% eller mindre.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg net ved, at der anvendes et dyrkningsmedium af en mikroorganisme som tryptophan- eller threonin-opløsningen.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der anvendes et harpiksadsorptionseluat 15 som tryptophan- eller threonin-opløsningen.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegne t ved, at der anvendes en krystallisationsmoderlud som tryptophan- eller threonin-opløsningen.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg- 20 net ved, at der anvendes en enzymatisk reaktionsblanding som tryptophan- eller threonin-opløsningen.

6. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at de forstøvningstørrede partikler afsættes på et bånd i en tykkelse på 5-30 mm.

7. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg net ved, at forstøvningstørringen gennemføres til et vandindhold på 7-9%.

8. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at tørringen af de forstøvningstørrede partikler 30 gennemføres under anvendelse af varm luft ved en temperatur på 50-800C.

9. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at opløsningens pH-værdi indstilles på 8-10 ved tilsætning af calciumhydroxid.

10. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg net ved, at tryptophan- eller threonin-indholdet er 20-60 vægt-%.