JPS61111698A - トリプトフアンの製造方法 - Google Patents
トリプトフアンの製造方法Info
- Publication number
- JPS61111698A JPS61111698A JP23036084A JP23036084A JPS61111698A JP S61111698 A JPS61111698 A JP S61111698A JP 23036084 A JP23036084 A JP 23036084A JP 23036084 A JP23036084 A JP 23036084A JP S61111698 A JPS61111698 A JP S61111698A
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- Japan
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- tryptophan
- methanol
- indole
- glycine
- culture
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は高収率にトリプトファンを酵素的生合成する方
法に関するものである。
法に関するものである。
更に詳細には、本発明は、グリシン、メタノールおよび
インドールを原料として、セリン経路を有するメタノー
ル資化性菌の培養物または培養物から分離した培養菌体
または培養菌体の処理物およびトリプトファン・シンタ
ーゼの存在下で、酵素作用によ！Ｄ Ｌ −） ＩＪブ
トファンを高収率に製造する方法に関するものである。
インドールを原料として、セリン経路を有するメタノー
ル資化性菌の培養物または培養物から分離した培養菌体
または培養菌体の処理物およびトリプトファン・シンタ
ーゼの存在下で、酵素作用によ！Ｄ Ｌ −） ＩＪブ
トファンを高収率に製造する方法に関するものである。
（従来の技術）
近年、Ｌ−）！Ｊブトファンは医薬用のみならず飼料添
加物としての効果が世の注目を集めるに至り、工業的規
模による安価な本物質生産の期待が高まってきている。
加物としての効果が世の注目を集めるに至り、工業的規
模による安価な本物質生産の期待が高まってきている。
トリプトファンの製造法に関しては、合成法、発酵法ま
たは酵素法などの方法が知られている。
たは酵素法などの方法が知られている。
しかし、工業的実施においては原料面、収率面、工程面
などで尚幾多の欠点が指摘されているが、なかでも酵素
的生合成における収率の低さは重大な欠点となっている
。
などで尚幾多の欠点が指摘されているが、なかでも酵素
的生合成における収率の低さは重大な欠点となっている
。
（発明が解決しようとする問題点）
本発明者らは、収率を高めた酵素的生合成によるＬ−ト
リプトファンの新しい製造法に関して鋭意研究を重ねた
結果、セリン経路を有するメタノ−ル資化性菌の培黄物
または培養菌体または培養菌体の処理物およびトリプト
ファン・シンターゼの存在下で、グリシン、メタノール
およびインドールを反応させるとＬ −） １．１ブイ
フアンが高収率で生成することを見出し、この知見に基
づいて本発明を完成した。
リプトファンの新しい製造法に関して鋭意研究を重ねた
結果、セリン経路を有するメタノ−ル資化性菌の培黄物
または培養菌体または培養菌体の処理物およびトリプト
ファン・シンターゼの存在下で、グリシン、メタノール
およびインドールを反応させるとＬ −） １．１ブイ
フアンが高収率で生成することを見出し、この知見に基
づいて本発明を完成した。
（問題点を解決するための手段）
本発明に使用するセリン経路を有するメタノール資化性
菌としては、例えばプロタミノバクタ−・ルバー（Ｐｒ
ｏｔａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ ｒｕｂｅｒ）ＰｒＮＲ−
１（ＦＥＢＭＰ−７８７８）、シュードモナス（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ） ＡＭｌ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ 、
８１．４６５−４６９Ｃ１９６１））などが用いられ
、トリプトファン・シンターゼを生産する微生物として
は、例えばエシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ
ａ ｃｏｌｉ）ＡＴＣＣ２７３２５、ノイロスポラ・ク
ラッテ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｅｒａｓｓａ）ＡＴＣ
Ｃ１４６９２などが用いられる。
菌としては、例えばプロタミノバクタ−・ルバー（Ｐｒ
ｏｔａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ ｒｕｂｅｒ）ＰｒＮＲ−
１（ＦＥＢＭＰ−７８７８）、シュードモナス（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ） ＡＭｌ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ 、
８１．４６５−４６９Ｃ１９６１））などが用いられ
、トリプトファン・シンターゼを生産する微生物として
は、例えばエシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ
ａ ｃｏｌｉ）ＡＴＣＣ２７３２５、ノイロスポラ・ク
ラッテ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｅｒａｓｓａ）ＡＴＣ
Ｃ１４６９２などが用いられる。
これらの微生物を培養するだめの培地組成としては、炭
素源、窒素源、無機物およびその他の微量栄養素が用い
られる。プロタミノバクタ−属に属する微生物を培養す
るための炭素源としては、メタノールが０．５〜３％の
濃度で用いられる。トリプトファン・シンターゼを生産
する微生物の場合は、炭素源としてグルコース、グリセ
ロール、フラクトース、シュクロース、マルトース、マ
ンノース、澱粉、澱粉加水分解液、糖蜜などの種々の炭
水化物が使用できる。また培地に少量のトリプトファン
を添加するのが好都合でその添加量はお＼よそ、培地中
に０．１〜０．５重量％になるような量である。
素源、窒素源、無機物およびその他の微量栄養素が用い
られる。プロタミノバクタ−属に属する微生物を培養す
るための炭素源としては、メタノールが０．５〜３％の
濃度で用いられる。トリプトファン・シンターゼを生産
する微生物の場合は、炭素源としてグルコース、グリセ
ロール、フラクトース、シュクロース、マルトース、マ
ンノース、澱粉、澱粉加水分解液、糖蜜などの種々の炭
水化物が使用できる。また培地に少量のトリプトファン
を添加するのが好都合でその添加量はお＼よそ、培地中
に０．１〜０．５重量％になるような量である。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸
アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢酸アンモニウムな
どの各種の無機および有機アンモニウム塩類あるいは肉
エキス、酵母エキス、コーン・スチープ・リカー、カゼ
イン加水分解物、フィツシュミールあるいはその消化物
、脱脂大豆粕あるいはその消化物などの天然有機窒素源
が使用可能である。
アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢酸アンモニウムな
どの各種の無機および有機アンモニウム塩類あるいは肉
エキス、酵母エキス、コーン・スチープ・リカー、カゼ
イン加水分解物、フィツシュミールあるいはその消化物
、脱脂大豆粕あるいはその消化物などの天然有機窒素源
が使用可能である。
更に無機物として、燐酸第一水素カリウム、燐酸第二水
素カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸
第一鉄なども必要に応じて使用すると好都合である。
素カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸
第一鉄なども必要に応じて使用すると好都合である。
培養は振盪培養あるいは通気撹拌深部培養などの好気的
条件下で行なう。培養温度は２０〜５０℃であシ、培養
中の声は中性附近に維持することが望ましい。培養期間
は通常１〜５日間である。
条件下で行なう。培養温度は２０〜５０℃であシ、培養
中の声は中性附近に維持することが望ましい。培養期間
は通常１〜５日間である。
かくして得られた２種の微生物の培養液を混合したもの
は、グリシン、メタノールおよびインドールからＬ−ト
リプトファンを生成する酵素系を含有するものでちゃ、
従って菌体を除去することなく、これにグリシン、メタ
ノールおよびインドールを加えて反応せしめてもよく、
また、培養液から遠心分離等によシ採取した生菌体、そ
の乾燥菌体または生菌体を磨砕、自己消化、音波処理等
によシ得た菌体処理物またはこれらの菌体の抽出物よシ
得られる酵素区分または菌体もしくは酵素区分を固定化
した菌体処理物を、グリシン、メタノールおよびインド
ール讐溶解もしくは懸濁せしめた水性溶媒中に加えて反
応せしめてもよい。
は、グリシン、メタノールおよびインドールからＬ−ト
リプトファンを生成する酵素系を含有するものでちゃ、
従って菌体を除去することなく、これにグリシン、メタ
ノールおよびインドールを加えて反応せしめてもよく、
また、培養液から遠心分離等によシ採取した生菌体、そ
の乾燥菌体または生菌体を磨砕、自己消化、音波処理等
によシ得た菌体処理物またはこれらの菌体の抽出物よシ
得られる酵素区分または菌体もしくは酵素区分を固定化
した菌体処理物を、グリシン、メタノールおよびインド
ール讐溶解もしくは懸濁せしめた水性溶媒中に加えて反
応せしめてもよい。
反応における反応原料および基質等の使用量には特に制
限はなく、またこの種の反応において通常採用される温
度、−などの条件をそのま＼採用することができる。
限はなく、またこの種の反応において通常採用される温
度、−などの条件をそのま＼採用することができる。
反応液中に生成したＬ −） ！Ｊブトファンを単離す
るには、イオン交換樹脂、活性炭等による吸脱着処理等
の常法によ）行なう。その他公知の濃縮法、沈澱法によ
ってもＬ −ト！Ｊブト７アンを回収することができる
。
るには、イオン交換樹脂、活性炭等による吸脱着処理等
の常法によ）行なう。その他公知の濃縮法、沈澱法によ
ってもＬ −ト！Ｊブト７アンを回収することができる
。
本発明に使用する原料であるグリシン、メタノールおよ
びインドールはいづれも工業上安価に製造される原料で
あシ、これらの原料を用いて酵素作用によりＬ−ト！Ｊ
ブトファンを製造する本発明は産業上極めて有利なＬ−
トリプトファンの製造方法を提供するものである。
びインドールはいづれも工業上安価に製造される原料で
あシ、これらの原料を用いて酵素作用によりＬ−ト！Ｊ
ブトファンを製造する本発明は産業上極めて有利なＬ−
トリプトファンの製造方法を提供するものである。
（実施例）
次に実施例によシ本発明を更に詳細に説明するが、実施
例における生成したＬ −） ＋７プト７アンの定性確
認は、ペーパークロマトグラム上のＬ−トリプトファン
のＲｆ値、紫外部吸収値、エールリッヒ試薬による発色
により行ない、また、定量は液体クロマトグラフィーで
行なった。
例における生成したＬ −） ＋７プト７アンの定性確
認は、ペーパークロマトグラム上のＬ−トリプトファン
のＲｆ値、紫外部吸収値、エールリッヒ試薬による発色
により行ない、また、定量は液体クロマトグラフィーで
行なった。
実施例１゜
プロタミノバクタ−・ルバーＰｒ ＮＲ−１（ＦＥＢＭ
Ｐ−７８７８）を５００−の坂ロフラスコ中の第１表に
示す組成の培地１００ｔｎｔに接種し、３０℃で４８時
間振盪培養を行なった。
Ｐ−７８７８）を５００−の坂ロフラスコ中の第１表に
示す組成の培地１００ｔｎｔに接種し、３０℃で４８時
間振盪培養を行なった。
第 １ 表
ＮＨ４Ｈ，Ｐｏ、 ４ Ｐ／を
藷ｔｐｏ、 ２ ｔ／１
Ｎａ２ＨＰＯ４’１２Ｈ２０３ｆ／！。
Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈｔ０ ０，２ ｔ／１ＣａＣＩｔ・２
Ｈｔ０ １０ ’Ｐ／ｌＦｌ！５Ｏ４−７ＨｔＯ５ｒａ
ｙ／ｌ ＭｎＳＯ４６ｎＨ２Ｏ５’Ｓ’／Ｌ ＣｏＳＯ４・７Ｈ１Ｏ１”Ｆ／Ｌ ＺＩＩＳＯ４・７Ｈ２００，１’８ ＩＩＩＰ／ＬＮａ
２Ｍｏ０４ ・２Ｈ１００，２３”Ｐ／ＬＨ，ＢＯ８ｃ
Ｌ２８−１１９／１ Ｃｕ８０４ ＨｓＨ，ｏ ０．０１６”Ｐ／１Ｍｅｔ
ｈａｎｏ１ １０ ｍ１ ｐＨ７，０ 培養終了後、遠心分離して湿菌体を得た。
Ｈｔ０ １０ ’Ｐ／ｌＦｌ！５Ｏ４−７ＨｔＯ５ｒａ
ｙ／ｌ ＭｎＳＯ４６ｎＨ２Ｏ５’Ｓ’／Ｌ ＣｏＳＯ４・７Ｈ１Ｏ１”Ｆ／Ｌ ＺＩＩＳＯ４・７Ｈ２００，１’８ ＩＩＩＰ／ＬＮａ
２Ｍｏ０４ ・２Ｈ１００，２３”Ｐ／ＬＨ，ＢＯ８ｃ
Ｌ２８−１１９／１ Ｃｕ８０４ ＨｓＨ，ｏ ０．０１６”Ｐ／１Ｍｅｔ
ｈａｎｏ１ １０ ｍ１ ｐＨ７，０ 培養終了後、遠心分離して湿菌体を得た。
一方、トリプトファン・シンターゼ生産菌株であるエシ
ェリヒア・；すＡＴＣＣ２７５２５を５００−の坂ロア
２スコ中の第２表に示す組成の培地１０〇−に接種し、
６０℃で２４時間振盪培養を行なった。
ェリヒア・；すＡＴＣＣ２７５２５を５００−の坂ロア
２スコ中の第２表に示す組成の培地１０〇−に接種し、
６０℃で２４時間振盪培養を行なった。
第 ２ 表
肉エキス ’＋ｏｔ／ｌ
はプトン ５？／を
酵母エキス １１／１
ＩＧ（、ＰＯ，２ｆ／１
ｐＨ７，０
培養終了後、遠心分離して湿菌体を得た。
次に第３表に示す組成の反応液を用いて、！１０”Ｃ１
ｐＨ７，０で２４時間反応を行なった。
ｐＨ７，０で２４時間反応を行なった。
第 ３ 表
グリシン １ チ
メタノール １ ％
インドール ０．１チ
プロタミノパクタ一湿菌体 ４ ％
エシェリヒア湿菌体 ４ チ
燐酸バッファーでｐＨ１Ｏに調整
反応終了後、液体クロマトグラフィーでＬ−）リプドア
アンの生成量を測定したところｏ、 ｓ ｔ７ｔであっ
た。また、第３表に示す組成の反応液からメタノールを
除外して、同様の反応を行なった場合のＬ −） ！ｊ
ブトファンの生成量は０．１ｒ／Ａと非常に僅かな量で
あった。
アンの生成量を測定したところｏ、 ｓ ｔ７ｔであっ
た。また、第３表に示す組成の反応液からメタノールを
除外して、同様の反応を行なった場合のＬ −） ！ｊ
ブトファンの生成量は０．１ｒ／Ａと非常に僅かな量で
あった。
実施例２゜
トリプトファン・シンターゼ生産菌株としてノイロスポ
ラ・クラッテＡＴＣＣ１４５９２を第４表に示す組成の
培地で培養した他は実施例１と同様の操作を行なった。
ラ・クラッテＡＴＣＣ１４５９２を第４表に示す組成の
培地で培養した他は実施例１と同様の操作を行なった。
第 ４ 表
はプトン ５？／を
酵母エキス ３
麦芽エキス ３
グルコース １０
ｐＨ６，５
反応終了後、Ｌ−トリプトファンの生成量を測定したと
ころ、０．５ ？／ｌであった。
ころ、０．５ ？／ｌであった。
（発明の効果）
本発明では、トリプトファン・シンターゼによるグリシ
ンとインドールからのＬ−トリプトファン生合成系にメ
タノールとセリン経路を有するメタノール資化性菌の酵
素系を添加して酵素反応させることによって、Ｌ−トリ
プトファンの収率を顕著に高めたものである。
ンとインドールからのＬ−トリプトファン生合成系にメ
タノールとセリン経路を有するメタノール資化性菌の酵
素系を添加して酵素反応させることによって、Ｌ−トリ
プトファンの収率を顕著に高めたものである。
Claims (2)
- （１）セリン経路を有するメタノール資化性菌の培養物
又は分離菌体もしくはこれらの処理物、およびトリプト
ファン・シンターゼの存在下でグリシン、メタノールお
よびインドールを反応せしめることを特徴とするＬ−ト
リプトファンの製造方法。 - （２）セリン経路を有するメタノール資化性菌がプロタ
ミノバクター（Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ）属に
属する菌である特許請求の範囲第１項記載のＬ−トリプ
トファンの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23036084A JPS61111698A (ja) | 1984-11-02 | 1984-11-02 | トリプトフアンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23036084A JPS61111698A (ja) | 1984-11-02 | 1984-11-02 | トリプトフアンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61111698A true JPS61111698A (ja) | 1986-05-29 |
| JPH0545237B2 JPH0545237B2 (ja) | 1993-07-08 |
Family
ID=16906635
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23036084A Granted JPS61111698A (ja) | 1984-11-02 | 1984-11-02 | トリプトフアンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61111698A (ja) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5282786A (en) * | 1975-12-27 | 1977-07-11 | Asahi Chem Ind Co Ltd | Preparation of l-serine by fermentation |
| JPS542397A (en) * | 1977-06-02 | 1979-01-09 | Yoshiki Tani | Llserine producing method |
| JPS5546718A (en) * | 1978-09-05 | 1980-04-02 | Gen Electric | Liquid crystal display and producing same |
| JPS5939296A (ja) * | 1982-08-30 | 1984-03-03 | Mitsubishi Petrochem Co Ltd | 微生物を利用するｌ−トリプトフアンの製造法 |
-
1984
- 1984-11-02 JP JP23036084A patent/JPS61111698A/ja active Granted
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5282786A (en) * | 1975-12-27 | 1977-07-11 | Asahi Chem Ind Co Ltd | Preparation of l-serine by fermentation |
| JPS542397A (en) * | 1977-06-02 | 1979-01-09 | Yoshiki Tani | Llserine producing method |
| JPS5546718A (en) * | 1978-09-05 | 1980-04-02 | Gen Electric | Liquid crystal display and producing same |
| JPS5939296A (ja) * | 1982-08-30 | 1984-03-03 | Mitsubishi Petrochem Co Ltd | 微生物を利用するｌ−トリプトフアンの製造法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0545237B2 (ja) | 1993-07-08 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |