JPS6043393A - Ｌ−フエニルアラニンの製法 - Google Patents
Ｌ−フエニルアラニンの製法Info
- Publication number
- JPS6043393A JPS6043393A JP15141583A JP15141583A JPS6043393A JP S6043393 A JPS6043393 A JP S6043393A JP 15141583 A JP15141583 A JP 15141583A JP 15141583 A JP15141583 A JP 15141583A JP S6043393 A JPS6043393 A JP S6043393A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- phenylalanine
- ammonia
- reaction
- lyase activity
- bacterial cells
- Prior art date
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- Granted
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はＬ−フェニルアラニンの製法に関するし一フェ
ニルアラニンは必須アミノ酸の一つであり、栄養上又は
医薬上有用な物質である。
ニルアラニンは必須アミノ酸の一つであり、栄養上又は
医薬上有用な物質である。
微生物の生産する酵素を用いて、桂皮酸とアンモニア又
はアンモニア供与体からＩ、−フェニルアラニンを製造
する方法は知られている（英国特許第１４８９４１８号
公報、特開昭５３−９６３８８１公報、特開昭５６−２
６１９７号公報など）。
はアンモニア供与体からＩ、−フェニルアラニンを製造
する方法は知られている（英国特許第１４８９４１８号
公報、特開昭５３−９６３８８１公報、特開昭５６−２
６１９７号公報など）。
しかしながら、これらの公報に記載されている方法は、
まだ満足すべきものではない。
まだ満足すべきものではない。
本発明者らは桂皮酸とアンモニアとから効率良＜ ｒ−
−フェニルアラニンを製造する方法について種々検討し
た結果、Ｌ−フェニルアラニンアンモニアリアーゼ活性
含有物及び界面活性剤の存在下、又は該ｉ、−フェニル
アラニンアンモニアリアーゼ活性含有物の界面活性剤処
理物の存在下に、桂皮酸とアンモニアもしくはアンモニ
ア供与体とを水性培地中で反応せしめるにより効率よく
、Ｌ−フェニルアラニンが製造されることを見い出した
。
−フェニルアラニンを製造する方法について種々検討し
た結果、Ｌ−フェニルアラニンアンモニアリアーゼ活性
含有物及び界面活性剤の存在下、又は該ｉ、−フェニル
アラニンアンモニアリアーゼ活性含有物の界面活性剤処
理物の存在下に、桂皮酸とアンモニアもしくはアンモニ
ア供与体とを水性培地中で反応せしめるにより効率よく
、Ｌ−フェニルアラニンが製造されることを見い出した
。
１ス下に本発明の詳細な説明する。
本発明に用いられる微生物としては、Ｌ−フェニルアラ
ニンアンモニアリアーゼ活性を有スる微生物であれば、
いずれでも使用される。その具体例としては、ロド！・
ルラ・ルブラＡＴＣＣ２０２５Ｂ、ロドトルラ・テキセ
ンシスＴＦＯ９３２−１ロｌ゛トルう・グルチニスＩ
ＦＯＯ５５９、スポロボロマイセス・ロゼウスｒＦＯ１
０４０゜等があげられる。
ニンアンモニアリアーゼ活性を有スる微生物であれば、
いずれでも使用される。その具体例としては、ロド！・
ルラ・ルブラＡＴＣＣ２０２５Ｂ、ロドトルラ・テキセ
ンシスＴＦＯ９３２−１ロｌ゛トルう・グルチニスＩ
ＦＯＯ５５９、スポロボロマイセス・ロゼウスｒＦＯ１
０４０゜等があげられる。
上記微生物を培養するための培地としては、炭素源、窒
素源、無機物等を程よく含有しておれば合成培地、天然
培地のいずれも使用可能である。
素源、無機物等を程よく含有しておれば合成培地、天然
培地のいずれも使用可能である。
炭素源としては、グルコース、シュークロース。
廃糖蜜などの糖類、グリセロール、ソルビトール。
マンニトール等の糖アルコール類が使用できる。
種無機及び有機のアンモニウム化合物、尿素などの窒素
化合物、ペプトン、酵母エキス、カゼイン加水分解物、
脱脂大豆あるいはその消化物等の窒性 素堕機物質等が使用できる。無機物としては、ナトリウ
ム、カリウム、マンガン、マグネシウム。
化合物、ペプトン、酵母エキス、カゼイン加水分解物、
脱脂大豆あるいはその消化物等の窒性 素堕機物質等が使用できる。無機物としては、ナトリウ
ム、カリウム、マンガン、マグネシウム。
カルシウム、銅等の金属の塩類や燐酸、硫酸、硝酸、塩
酸等の塩類が使用できる。
酸等の塩類が使用できる。
培養は、例えば、ｐＨ５〜８．２０〜４０℃で１〜５日
間行なう。
間行なう。
ついで、得られた上記微生物の培養液、菌体（例えば、
洗浄菌体、乾燥菌体）又はその処理物（例えば、菌体摩
砕物、菌体の自己消化物、菌体の超音波処理物、菌体を
例えばアクリルアミドゲルまたはカラギーナンゲル等に
より固定化したもの）ヲ桂皮酸とアンモニア又はアンモ
ニア供与体に、界面活性剤の存在下に作用させるか、ま
たは界面活性剤と接触させた、上記微生物の培養液、菌
体または菌体の処理物を桂皮酸とアンモニアまたはアン
モニア供与体に作用させ、Ｌ−フェニルアラニンを生成
させる。
洗浄菌体、乾燥菌体）又はその処理物（例えば、菌体摩
砕物、菌体の自己消化物、菌体の超音波処理物、菌体を
例えばアクリルアミドゲルまたはカラギーナンゲル等に
より固定化したもの）ヲ桂皮酸とアンモニア又はアンモ
ニア供与体に、界面活性剤の存在下に作用させるか、ま
たは界面活性剤と接触させた、上記微生物の培養液、菌
体または菌体の処理物を桂皮酸とアンモニアまたはアン
モニア供与体に作用させ、Ｌ−フェニルアラニンを生成
させる。
（３）
桂皮酸の濃度としては０．０５〜１モル、アンモニア又
はアンモニア供与体の濃度としては１〜１０モルの範囲
である。原料の桂皮酸、アンモニア又はアンモニア供与
体は一括又は間歇的に供給する。
はアンモニア供与体の濃度としては１〜１０モルの範囲
である。原料の桂皮酸、アンモニア又はアンモニア供与
体は一括又は間歇的に供給する。
アンモニア供与体としては、酢酸アンモニウム。
塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム等のアンモニウム
塩があげられる。
塩があげられる。
使用される界面活性剤としては、両性界面活性剤として
、例えばアルキルグリシン［日本油脂製（以下同様）商
品名、アノンＬＧ］、陽イオン界面活性剤として、オク
タデシルトリメチルアンモニウムクロリド（商品名カチ
オンＡＢ）、ポリオキシエチレンオクタデシルアミン（
商品名ナイミーンＳ−２１５）、非イオン界面活性剤と
して、ポリオキシエチレンオクチルフェノールエーテル
（商品名ノニオンＨＳ−２０４・５）、ポリオキシエチ
レンソルビタンモノステアレート（商品名ノニオン５Ｔ
−２２１）などがあげられるが、特にその中でも両性界
面活性剤のアルキルグリシンが好ましい。
、例えばアルキルグリシン［日本油脂製（以下同様）商
品名、アノンＬＧ］、陽イオン界面活性剤として、オク
タデシルトリメチルアンモニウムクロリド（商品名カチ
オンＡＢ）、ポリオキシエチレンオクタデシルアミン（
商品名ナイミーンＳ−２１５）、非イオン界面活性剤と
して、ポリオキシエチレンオクチルフェノールエーテル
（商品名ノニオンＨＳ−２０４・５）、ポリオキシエチ
レンソルビタンモノステアレート（商品名ノニオン５Ｔ
−２２１）などがあげられるが、特にその中でも両性界
面活性剤のアルキルグリシンが好ましい。
反応液に添加する場合の添加量は界面活性剤により異な
るが、反応液に対して０．０５〜１０ ｕ／Ｖ％、好ま
しくは０．５〜ＩＯＷ／Ｖ％である。これらは、直接反
応液に加えるか、又は、水溶液と（４） して添加することができる。
るが、反応液に対して０．０５〜１０ ｕ／Ｖ％、好ま
しくは０．５〜ＩＯＷ／Ｖ％である。これらは、直接反
応液に加えるか、又は、水溶液と（４） して添加することができる。
反応は通常、温度２０〜４５℃、好ましくは２５〜３５
℃、ｐＨ８〜１１、好ましくは９〜ＩＯで５〜７０時間
行う。反応後、反応液から生成したし一フェニルアラニ
ンの分離は通常のイオン交換樹脂法、沈澱法等により行
うことができる。
℃、ｐＨ８〜１１、好ましくは９〜ＩＯで５〜７０時間
行う。反応後、反応液から生成したし一フェニルアラニ
ンの分離は通常のイオン交換樹脂法、沈澱法等により行
うことができる。
以下に実施例を示す。
実施例１゜
ロドトルラ・ルブラＡＴＣＣ２０２５８を酵母エキス１
．０ｇ、ペプトン１．０ｇ、食塩０．５ｇおよびＬ−フ
ェニルアラニン０．０５ ｇを含む培地１００１で、２
８℃で１７時間振とう培養した。該培養液から遠心分離
して得た菌体を０．９％冷食塩水で洗浄の後、遠心分離
して洗浄菌体を得た。該菌体に予め調製したアンモニア
２．８Ｍおよび桂皮酸１５０ｍＭを含をする基質液（ｐ
Ｈ＝１０）１０ｍｌを加え、さらに第１表に示す界面活
性剤の１０％水溶液を第１表に示す様に加えて３０℃で
５時間反応した。反応後、反応混合物を遠心分離して、
その上澄液をペーパークロマトグラフィー〔展開溶媒；
ｎ−ブタノール：酢酸：水−５：２：２（Ｖ／Ｖ））で
分析して、フェニルアラニン生成量を測定した。その結
果を第１表に示す。
．０ｇ、ペプトン１．０ｇ、食塩０．５ｇおよびＬ−フ
ェニルアラニン０．０５ ｇを含む培地１００１で、２
８℃で１７時間振とう培養した。該培養液から遠心分離
して得た菌体を０．９％冷食塩水で洗浄の後、遠心分離
して洗浄菌体を得た。該菌体に予め調製したアンモニア
２．８Ｍおよび桂皮酸１５０ｍＭを含をする基質液（ｐ
Ｈ＝１０）１０ｍｌを加え、さらに第１表に示す界面活
性剤の１０％水溶液を第１表に示す様に加えて３０℃で
５時間反応した。反応後、反応混合物を遠心分離して、
その上澄液をペーパークロマトグラフィー〔展開溶媒；
ｎ−ブタノール：酢酸：水−５：２：２（Ｖ／Ｖ））で
分析して、フェニルアラニン生成量を測定した。その結
果を第１表に示す。
第１表
注）表中の数字はフェニルアラニン生成量（■／ｍｌ）
を示す。
を示す。
実施例２゜
実施例１と同様に培養して得た培養液２００ｍ１を実施
例１と同様の処理をして、洗浄菌体を得た。
例１と同様の処理をして、洗浄菌体を得た。
該菌体に予め調製したアンモニア８Ｍおよび桂皮酸３０
０ｍＭを含有スル基質液（ｐ）ｌ＝ＩＯ）１０ｍｌを加
え、アノンＬ Ｇ添加又は無添加の条件下、３０℃で反
応を行い、フェニルアラニン生成量を経時的に調べた。
０ｍＭを含有スル基質液（ｐ）ｌ＝ＩＯ）１０ｍｌを加
え、アノンＬ Ｇ添加又は無添加の条件下、３０℃で反
応を行い、フェニルアラニン生成量を経時的に調べた。
その結果を第２表に示す。
た後、遠心分離し、更に、０．９％冷食塩水１０ｍ１で
洗浄し、遠心分離して、アノンＬ Ｇ処理菌体を得た。
洗浄し、遠心分離して、アノンＬ Ｇ処理菌体を得た。
この菌体およびアノンＬＧ未処理菌体を用いて、アンモ
ニア２．８Ｍおよび桂皮酸１５０ｍＭを含有する基質液
（ｐＨ＝ＩＯ）を用いて、３０℃で反応した。その結果
を第５表に示す。
ニア２．８Ｍおよび桂皮酸１５０ｍＭを含有する基質液
（ｐＨ＝ＩＯ）を用いて、３０℃で反応した。その結果
を第５表に示す。
第５表
アノンＬＧ処理 ５．３ ８．７ １３．８ １６．２
アノンＬＧの効果は、基質液に添加するだけではなく、
予め菌体と接触させることによっても、その効果を発揮
しうる。
アノンＬＧの効果は、基質液に添加するだけではなく、
予め菌体と接触させることによっても、その効果を発揮
しうる。
実施例６゜
ｆ１１
実施１と同様の処理で、３００ｍ１の培養液から△
ロドトルラ・ルブラＡＴＣＣ２０２５８の洗浄菌体を採
取し、これをアノンＬ ０２％水溶液２０１で室温下、
３０分間、接触処理した。このアノンＬＧ処理菌体を常
法通りにに一カラギーナンで固定化して、固定化菌体を
得た。この固定化菌体に、鍼 アンモニア２．８Ｍおよび桂皮ノ、１５０ｍＭを含有す
る基質液（ｐＨ＝ １０） ３０ｎ＋１を加えて３０℃
で４８時間反応さ（、経時的にＬ−フェニルアラニンの
生成量を調べた。比較として、上述と同様の培養液から
得た洗浄菌体およびアノン処理していない固定化菌体を
用いて、同一条件で反応させた。その結果を第６表に示
す。
取し、これをアノンＬ ０２％水溶液２０１で室温下、
３０分間、接触処理した。このアノンＬＧ処理菌体を常
法通りにに一カラギーナンで固定化して、固定化菌体を
得た。この固定化菌体に、鍼 アンモニア２．８Ｍおよび桂皮ノ、１５０ｍＭを含有す
る基質液（ｐＨ＝ １０） ３０ｎ＋１を加えて３０℃
で４８時間反応さ（、経時的にＬ−フェニルアラニンの
生成量を調べた。比較として、上述と同様の培養液から
得た洗浄菌体およびアノン処理していない固定化菌体を
用いて、同一条件で反応させた。その結果を第６表に示
す。
第 ６ 表
固定化菌体 １．６ ２．８ ７．７ １０．０（テノ
ン１．Ｇ処理） 〃０．８ １，２ １．２ １．３ （アノン未処理）
ン１．Ｇ処理） 〃０．８ １，２ １．２ １．３ （アノン未処理）
Claims (1)
- Ｌ−フェニルアラニンアンモニアリアーゼ活性を有する
微生物の培養物、菌体もしくはその処理物（以下「Ｌ−
フェニルアラニンアンモニアリアーゼ活性含有物」とい
う）及び界面活性剤の存在下、又は該Ｌ−フェニルアラ
ニンアンモニアリアーゼ活性含有物の界面活性剤処理物
の存在下に、桂皮酸とアンモニアもしくはアンモニア供
与体とを水性培地中で反応せしめてＬ−フェニルアラニ
ンを生成せしめ、これを採取することを特徴とするし一
フェニルアラニンの製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15141583A JPS6043393A (ja) | 1983-08-19 | 1983-08-19 | Ｌ−フエニルアラニンの製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15141583A JPS6043393A (ja) | 1983-08-19 | 1983-08-19 | Ｌ−フエニルアラニンの製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6043393A true JPS6043393A (ja) | 1985-03-07 |
| JPH0347839B2 JPH0347839B2 (ja) | 1991-07-22 |
Family
ID=15518109
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15141583A Granted JPS6043393A (ja) | 1983-08-19 | 1983-08-19 | Ｌ−フエニルアラニンの製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6043393A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61247395A (ja) * | 1985-04-23 | 1986-11-04 | Mitsui Toatsu Chem Inc | Ｌ−フェニルアラニンの製造法 |
| US5981239A (en) * | 1997-09-24 | 1999-11-09 | Great Lakes Chemical Corp. | Synthesis of optically active phenylalanine analogs using Rhodotorula graminis |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5626197A (en) * | 1979-08-09 | 1981-03-13 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | Preparation of l-phenylalanine |
-
1983
- 1983-08-19 JP JP15141583A patent/JPS6043393A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5626197A (en) * | 1979-08-09 | 1981-03-13 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | Preparation of l-phenylalanine |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61247395A (ja) * | 1985-04-23 | 1986-11-04 | Mitsui Toatsu Chem Inc | Ｌ−フェニルアラニンの製造法 |
| JPH0468917B2 (ja) * | 1985-04-23 | 1992-11-04 | Mitsui Toatsu Chemicals | |
| US5981239A (en) * | 1997-09-24 | 1999-11-09 | Great Lakes Chemical Corp. | Synthesis of optically active phenylalanine analogs using Rhodotorula graminis |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0347839B2 (ja) | 1991-07-22 |
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